KR20190142394A - 항-tigit 항체 단독의, 및 프로그램화된 사멸 수용체 1 (pd-1) 항체와 조합된 항-tigit 항체의 안정한 제제 및 그의 사용 방법 - Google Patents

항-tigit 항체 단독의, 및 프로그램화된 사멸 수용체 1 (pd-1) 항체와 조합된 항-tigit 항체의 안정한 제제 및 그의 사용 방법 Download PDF

Info

Publication number
KR20190142394A
KR20190142394A KR1020197035375A KR20197035375A KR20190142394A KR 20190142394 A KR20190142394 A KR 20190142394A KR 1020197035375 A KR1020197035375 A KR 1020197035375A KR 20197035375 A KR20197035375 A KR 20197035375A KR 20190142394 A KR20190142394 A KR 20190142394A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
ser
thr
gly
leu
val
Prior art date
Application number
KR1020197035375A
Other languages
English (en)
Inventor
알납 데
차크라바르티 나추 나라시만
Original Assignee
머크 샤프 앤드 돔 코포레이션
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=64016405&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=KR20190142394(A) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by 머크 샤프 앤드 돔 코포레이션 filed Critical 머크 샤프 앤드 돔 코포레이션
Publication of KR20190142394A publication Critical patent/KR20190142394A/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39591—Stabilisation, fragmentation
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/20—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing sulfur, e.g. dimethyl sulfoxide [DMSO], docusate, sodium lauryl sulfate or aminosulfonic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/22—Heterocyclic compounds, e.g. ascorbic acid, tocopherol or pyrrolidones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/547—Chelates, e.g. Gd-DOTA or Zinc-amino acid chelates; Chelate-forming compounds, e.g. DOTA or ethylenediamine being covalently linked or complexed to the pharmacologically- or therapeutically-active agent
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/08—Solutions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2809—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against the T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2818—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD28 or CD152
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A61K2039/507—Comprising a combination of two or more separate antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Abstract

본 발명은 Ig 및 ITIM 도메인을 가지는 T 세포 면역수용체 (TIGIT)에 대한 항체의 안정한 제제로서, 임의적으로는, 항-인간 프로그램화된 사멸 수용체 1 (PD-1) 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 추가로 함유하는 것인 안정한 제제에 관한 것이다. 본 발명의 제제를 이용하여 각종 암 및 만성 감염을 치료하는 방법을 또한 제공한다.

Description

항-TIGIT 항체 단독의, 및 프로그램화된 사멸 수용체 1 (PD-1) 항체와 조합된 항-TIGIT 항체의 안정한 제제 및 그의 사용 방법
본 발명은 치료 항체의 제제, 및 각종 장애 치료에서의 그의 용도에 관한 것이다. 한 측면에서, 본 발명은 Ig 및 ITIM 도메인을 가지는 T 세포 면역수용체 (TIGIT)에 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함하는 제제에 관한 것이다. 또 다른 측면에서, 상기 제제는 항-인간 프로그램화된 사멸 수용체 1 (PD-1) 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 추가로 포함한다. 본 발명의 제제를 이용하여 각종 암 및 만성 감염을 치료하는 방법 또한 제공한다.
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2017년 5월 2일에 출원된 U.S.S.N 62/500,278의 이익을 주장하며, 이는 그 내용 전문이 본원에서 참조로 포함된다.
전자적으로 제출된 서열 목록에 관한 언급
본 출원의 서열 목록은 파일명이 "24453WOPCT-SEQTXT-01MAY2018.TXT"이고, 작성일이 2018년 5월 1일이고, 크기가 227 Kb인, ASCII 포맷형 서열 목록으로서 EFS-Web을 통해 전자적으로 제출된 것이다. EFS-Web을 통해 제출된 본 서열 목록은 본 명세서의 일부이며, 그 전문이 본원에서 참조로 포함된다.
인간용 항체 약물은 그의 불변 도메인의 아미노산 서열에서, 또는 가변 도메인 내의 그의 프레임워크 서열에서 다소 상이할 수 있지만, 상기 항체 약물은 전형적으로는 CDR 서열에서 가장 극적인 차이를 보인다. 비록 동일한 단백질, 동일한 폴리펩티드, 또는 심지어는 잠재적으로 동일한 에피토프에 결합하는 항체라도 완전히 상이한 CDR 서열을 포함할 수 있다. 인간용 치료 항체는 또한 예컨대, 인간화 항체에서와 같이, 인간 생식계열 항체 서열로부터, 또는 비-인간 (예컨대, 설치류) 생식계열 항체 서열로부터 수득될 수 있고, 이는 잠재적인 CDR 서열에서의 추가의 다양성을 유도한다. 이러한 서열 차이는 용액 중 상이한 안정성 및 용액 파라미터에 대한 상이한 반응성을 초래한다. 추가로, 아미노산 배열의 작은 변화 또는 하나 또는 수개의 아미노산 잔기의 변이가 극적으로 상이한 항체 안정성 및 서열 특이적 분해 경로에 대한 감수성을 초래할 수 있다. 그 결과, 현재는 항체 안정성을 최적화시키는 데 필요한 용액 조건을 예측할 수 없다. 최적의 용액 제제를 결정하기 위해서는 각 항체는 개별적으로 연구되어야 한다 (Bhambhani et al. (2012) J. Pharm. Sci. 101:1120).
항체는 또한 예를 들어, 다른 치료 단백질, 예컨대, 호르몬 및 시토카인과 비교하였을 때, 상대적으로 고분자량인 단백질이다 (~150,000 Da). 그 결과, 빈번하게는 원하는 몰 농도의 약물을 달성하기 위해서는 비교적 높은 중량의 양으로 항체를 투약하여야 한다. 추가로, 대개는 항체 약물을 피하로 투여하는 것이 바람직할 수 있는데, 그 이유는 피하 투여는 자기 투여가 가능하기 때문이다. 자기 투여는 예컨대, 정맥내 투여를 위해 의료 시설에 방문하는 것과 연관된 시간 및 비용을 면할 수 있게 한다. 피하 전달은 실제로 단일 주사시 주사 부위에 전달될 수 있는 용액의 부피, 일반적으로 약 1 내지 1.5 ml에 의해 제한한다. 피하 자기 투여는 전형적으로는 환자가 주사 전에 약물을 재현탁시켜야 할 필요성을 없애기 위해 동결건조된 형태보다는 약물의 액체 용액 제제로 미리 충전된 시린지 또는 자기주사기를 사용하여 달성된다. 항체 약물은 확실한 효능 및 일관된 투약을 위해서는 보관 동안 안정적이어야 하는 바, 이에, 선택되는 제제가 무엇이든 간에, 바람직한 특성, 예컨대, 고농도, 투명성 및 허용되는 점성을 지지하고, 또한 전형적인 보관 조건하에서 허용가능하게 긴 저장 기간 동안에 걸쳐 상기 특성 및 약물 효능을 유지하는 것이 중요하다.
TIGIT (Ig 및 ITIM 도메인을 가지는 T 세포 면역수용체)는 주로 활성화된 T 세포 및 NK 세포 상에서 발현되는 면역조정 수용체이다. TIGIT는 또한 VSIG9; VSTM3; 및 WUCAM으로도 공지되어 있다. 그의 구조는 하나의 세포외 면역글로불린 도메인, 타입 1 막횡단 영역 및 2개의 ITIM 모티프를 나타낸다. TIGIT는, T 세포 상의 양성 (CD226) 및 음성 (TIGIT) 면역조정 수용체 및 APC 상에서 발현되는 리간드 (CD155 및 CD112)로 이루어진 공자극 네트워크의 일부를 형성한다.
TIGIT의 구조에서 중요한 특징은 그의 세포질 테일 도메인에 면역수용체 티로신 기반 억제 모티프 (ITIM)가 존재한다는 것이다. PD-1 및 TIGIT와 같이, TIGIT의 세포질 영역 중의 ITIM 도메인은 티로신 포스파타제, 예컨대, SHP-1 및 SHP-2를 동원하고, 이어서, T 세포 수용체 (TCR) 서브유니트 상의 면역수용체 티로신-기반 활성화 모티프 (ITAM)에서는 티로신 잔기의 탈인산화가 이루어지는 것으로 예측된다. 그러므로, 종양 세포 또는 TAMS에 의해 발현되는 리간드 CD155 및 CD112의 수용체에 의한 TIGIT의 라이게이션이, 효과적인 항-종양 면역을 증가시키는 데 필수적인 TCR 신호전달 및 T 세포 활성화를 억제시키는 원인이 될 수 있다. 따라서, TIGIT에 특이적인 길항제 항체가 CD155 및 CD112 유도된, T 세포 반응 억제를 억제시킬 수 있고, 항-종양 면역을 증강시킬 수 있다.
예컨대, 각종 암 및 감염성 질환 치료를 위한 제약용 항-TIGIT 항체의 안정한 제제 뿐만 아니라, 항-인간 PD-1 항체와 함께 공동으로 제제화되는 항-TIGIT 항체의 안정한 제제가 요구되고 있다. 바람직하게, 상기 제제는 장기간의 저장 수명을 보일 것이고, 보관 및 수송시 안정적일 것이며, 바람직하게는 시린지 중 자기 투여용 약물의 보관에 전형적인 조건하에서, 즉, 냉장고 온도에서 수개월 내지 수년 동안 안정성을 나타냄에 따라, 상응하는 약물 제품을 위한 장기간 저장 수명을 얻게 될 것이다.
한 측면에서, 본 발명은 항-TIGIT 항체, 또는 그의 항원 결합 단편, comprising (i) 항-TIGIT 항체, 또는 그의 항원 결합 단편; (ii) 완충제, (iii) 비환원성 당; (iv) 비이온성 계면활성제; 및 (v) 항산화제를 포함하는, 항-TIGIT 항체, 또는 그의 항원 결합 단편의 제제를 포함한다. 한 실시양태에서, 제제는 항-PD-1 항체, 예컨대, 펨브롤리주맙 또는 니볼루맙을 추가로 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 제제는 킬레이터를 포함한다.
본 발명의 한 실시양태에서, 제제는 (i) 약 10 mg/ml 내지 약 200 mg/ml의 항-TIGIT 항체, 또는 그의 항원 결합 단편; (ii) 약 5 mM 내지 약 20 mM 완충제; (iii) 약 6% 중량/부피 (w/v) 내지 약 8% (w/v) 비환원성 당; (iv) 약 0.01% (w/v) 내지 약 0.10% (w/v) 비이온성 계면활성제; 및 (v) 약 1 mM 내지 약 20 mM 항산화제를 포함한다. 한 실시양태에서, 제제는 항-PD-1 항체, 예컨대, 펨브롤리주맙 또는 니볼루맙을 추가로 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 제제는 킬레이터를 추가로 포함한다. 한 실시양태에서, 제제의 pH는 4.5 - 6.5이다. 특정 실시양태에서, 제제의 pH는 약 pH 5.5 내지 약 pH 6.2이다. 추가의 실시양태에서, 제제의 pH는 약 pH 5.6 내지 약 pH 6.0이다. 또 다른 실시양태에서, 제제의 pH는 약 5.7이다. 또 다른 실시양태에서, 제제의 pH는 약 5.8이다. 또 다른 실시양태에서, 제제의 pH는 약 5.9이다. 또 다른 실시양태에서, 제제의 pH는 약 6.0이다. 또 다른 실시양태에서, 제제의 pH는 약 6.1이다. 또 다른 실시양태에서, 제제의 pH는 약 6.2이다.
제제의 한 실시양태에서, 완충제는 L-히스티딘 완충제 또는 아세트산 나트륨 이고, 비환원성 당은 수크로스이고, 비이온성 계면활성제는 폴리소르베이트 80이고, 항산화제는 메티오닌, 또는 그의 제약상 허용되는 염이다. 한 실시양태에서, 항산화제는 L-메티오닌이다. 또 다른 실시양태에서, 항산화제는 L-메티오닌의 제약상 허용되는 염, 예컨대, 예를 들어, 메티오닌 HCl이다.
또 다른 실시양태에서, 제제는 (i) 약 10 mg/ml 내지 약 200 mg/ml의 항-TIGIT 항체, 또는 그의 항원 결합 단편; (ii) 약 5 mM 내지 약 20 mM의 L-히스티딘 완충제 또는 약 5 mM 내지 약 20 mM의 아세트산 나트륨 완충제; (iii) 약 6% w/v 내지 약 8% w/v 수크로스; (iv) 약 0.01% (w/v) 내지 약 0.10% (w/v) 폴리소르베이트 80; 및 (v) 약 1 mM 내지 약 20 mM L-메티오닌을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 제제는 항-PD-1 항체, 예컨대, 펨브롤리주맙 또는 니볼루맙을 추가로 포함한다. 한 실시양태에서, 제제는 킬레이터를 추가로 포함한다. 한 실시양태에서, 킬레이터는 약 1 μM 내지 약 50 μM의 양으로 존재한다. 한 실시양태에서, 킬레이터는 DTPA이다. 또 다른 실시양태에서, 킬레이터는 EDTA이다. 한 실시양태에서, 완충제는 L-히스티딘 완충제이다. 한 실시양태에서, 제제는 약 8 mM 내지 약 12 mM의 L-히스티딘 완충제를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 제제는 약 5 mM 내지 약 10 mM의 L-메티오닌을 포함한다. 추가의 실시양태에서, 제제는 대략 0.02% (w/v)의 중량비로 폴리소르베이트 80을 포함한다. 한 실시양태에서, 항-TIGIT 제제는 약 7% (w/v)의 중량비로 수크로스를 포함한다. 상기 실시양태들 중 임의의 것에서, 메티오닌은 L-메티오닌이다.
제제의 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 농도는 약 10 mg/ml 내지 약 100 mg/ml이다. 또 다른 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 농도는 약 10 mg/ml, 12.5 mg/ml, 15 mg/ml, 20 mg/ml, 25 mg/ml, 50 mg/ml, 75 mg/ml 또는 100 mg/ml이다. 한 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 농도는 약 20 mg/ml이다. 한 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 농도는 약 25 mg/ml이다. 한 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 농도는 약 50 mg/ml이다. 한 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 농도는 약 75 mg/ml이다. 한 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 농도는 약 100 mg/ml이다.
한 측면에서, 약 20 mg/ml의 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 10 mM L-히스티딘 완충제, 약 7% w/v 수크로스, 약 0.02% w/v 폴리소르베이트 80, 및 약 10 mM L-메티오닌을 포함하는 제제를 제공한다.
한 측면에서, 약 25 mg/ml의 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 10 mM L-히스티딘 완충제, 약 7% w/v 수크로스, 약 0.02% w/v 폴리소르베이트 80, 및 약 10 mM L-메티오닌을 포함하는 제제를 제공한다.
한 측면에서, 약 50 mg/ml의 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 10 mM L-히스티딘 완충제, 약 7% w/v 수크로스, 약 0.02% w/v 폴리소르베이트 80, 및 약 10 mM L-메티오닌을 포함하는 제제를 제공한다.
한 측면에서, 약 75 mg/ml의 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 10 mM L-히스티딘 완충제, 약 7% w/v 수크로스, 약 0.02% w/v 폴리소르베이트 80, 및 약 10 mM L-메티오닌을 포함하는 제제를 제공한다.
한 측면에서, 약 100 mg/ml의 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 10 mM L-히스티딘 완충제, 약 7% w/v 수크로스, 약 0.02% w/v 폴리소르베이트 80, 및 약 10 mM L-메티오닌을 포함하는 제제를 제공한다.
상기 제제 중 임의의 것의 한 측면에서, 제제의 pH는 약 5.4 내지 약 6.2이다. 또 다른 측면에서, 제제의 pH는 약 5.5 - 6.2이다. 또 다른 실시양태에서, 제제의 pH는 약 5.8 - 6.1이다. 또 다른 실시양태에서, pH는 약 5.8이다. 한 실시양태에서, pH는 5.9이다. 또 다른 실시양태에서, pH는 6.0이다. 추가의 실시양태에서, pH는 6.1이다.
상기 제제 중 임의의 것의 한 측면에서, 제제는 항-PD1 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함한다. 한 실시양태에서, 항-PD1 항체는 펨브롤리주맙이다. 또 다른 측면에서, 항-PD1 항체는 니볼루맙이다.
또 다른 측면에서, 제제는 킬레이터를 추가로 포함할 수 있다. 한 실시양태에서, 킬레이터는 DTPA이다. 한 실시양태에서, 킬레이터는 EDTA이다. 한 측면에서, 킬레이터는 약 1μM 내지 약 50 μM의 양으로 존재한다. 한 실시양태에서, 제제는 약 5 μM의 킬레이터를 포함한다. 한 실시양태에서, 제제는 약 10 μM의 킬레이터를 포함한다. 한 실시양태에서, 제제는 약 15 μM의 킬레이터를 포함한다. 한 실시양태에서, 제제는 약 20 μM의 킬레이터를 포함한다. 한 실시양태에서, 제제는 약 25 μM의 킬레이터를 포함한다. 한 실시양태에서, 제제는 약 30 μM의 킬레이터를 포함한다. 한 실시양태에서, 제제는 약 35 μM의 킬레이터를 포함한다. 한 실시양태에서, 제제는 약 40 μM의 킬레이터를 포함한다. 한 실시양태에서, 제제는 약 45 μM의 킬레이터를 포함한다. 한 실시양태에서, 제제는 약 50 μM의 킬레이터를 포함한다. 한 실시양태에서, 킬레이트화제는 DTPA이며, 이는 상기 언급된 양 중 임의의 양으로 존재한다. 또 다른 실시양태에서, 킬레이트화제는 EDTA이며, 이는 상기 언급된 양 중 임의의 양으로 존재한다.
한 실시양태에서, 제제는 유리 바이알에 함유되어 있다. 또 다른 실시양태에서, 제제는 주사 장치에 함유되어 있다. 또 다른 실시양태에서, 제제는 액체 제제이다. 한 측면에서, 제제는 적어도 -70℃ 미만으로 냉동된다. 또 다른 실시양태에서, 제제는 동결건조된 제제로부터의 재구성된 액제이다.
특정 실시양태에서, 제제는 냉장 온도 (2-8℃)에서 적어도 3개월, 바람직하게, 6개월, 및 더욱 바람직하게, 1년, 및 더욱더 바람직하게, 최대 2년까지 안정적이다. 제제의 한 실시양태에서, 5℃에서 12개월 후, 크기 배제 크로마토그래피에 의해 측정 시, 항-TIGIT 항체의 단량체(%)는 ≥90%이다. 제제의 또 다른 실시양태에서, 5℃에서 12개월 후, 크기 배제 크로마토그래피에 의해 측정 시, 항-TIGIT 항체의 단량체(%)는 ≥95%이다. 제제의 또 다른 실시양태에서, 5℃에서 12개월 후, 환원된 CE-SDS에 의해 측정 시, 항-TIGIT 항체의 중쇄 및 경쇄(%)는 ≥90%이다. 제제의 또 다른 실시양태에서, 5℃에서 12개월 후, 환원된 CE-SDS에 의해 측정 시, 항-TIGIT 항체의 중쇄 및 경쇄(%)는 ≥95%이다. 제제의 또 다른 실시양태에서, 5℃에서 12개월 후, 비환원된 CE-SDS에 의해 측정 시, 항-TIGIT 항체의 무손상 IgG(%)는 ≥90%이다. 제제의 또 다른 실시양태에서, 5℃에서 12개월 후, 비환원된 CE-SDS에 의해 측정 시, 항-TIGIT 항체의 무손상 IgG(%)는 ≥95%이다.
상기 기술된 제제 중 임의의 것의 한 측면에서, 제제는 3개의 경쇄 CDR 및 3개의 중쇄 CDR을 포함하는 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편으로서, 여기서, 경쇄 CDR은 서열식별번호(SEQ ID NO) 111의 CDRL1 또는 그의 변이체, 서열식별번호 112의 CDRL2 또는 그의 변이체, 서열식별번호 113의 CDRL3 또는 그의 변이체를 포함하고, 중쇄 CDR은 서열식별번호 108의 CDRH1 또는 그의 변이체, 서열식별번호 154의 CDRH2 또는 그의 변이체, 및 서열식별번호 110의 CDRH3 또는 그의 변이체를 포함하는 것인 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함한다. 상기 기술된 제제 중 임의의 것의 한 측면에서, 제제는 3개의 경쇄 CDR 및 3개의 중쇄 CDR을 포함하는 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편으로서, 여기서, 경쇄 CDR은서열식별번호 111의 CDRL1, 서열식별번호 112의 CDRL2, 서열식별번호 113의 CDRL3을 포함하고, 중쇄 CDR은 서열식별번호 108의 CDRH1, 서열식별번호 154의 CDRH2, 및 서열식별번호 110의 CDRH3을 포함하는 것인 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함한다. 또 다른 측면에서, 제제는 서열식별번호 148을 포함하는 중쇄 가변 영역 또는 그의 변이체 및 서열식별번호 152를 포함하는 경쇄 가변 영역 또는 그의 변이체를 포함하는 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함한다. 또 다른 측면에서, 제제는 서열식별번호 148을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호 152를 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함한다. 한 측면에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열식별번호 291의 아미노산 서열을 포함하는 인간 중쇄 IgG1 불변 도메인 또는 그의 변이체, 및 서열식별번호 293의 아미노산 서열을 포함하는 인간 카파 경쇄 불변 도메인 또는 그의 변이체를 추가로 포함한다. 한 측면에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열식별번호 291의 아미노산 서열을 포함하는 인간 중쇄 IgG1 불변 도메인, 및 서열식별번호 293의 아미노산 서열을 포함하는 인간 카파 경쇄 불변 도메인을 추가로 포함한다. 또 다른 측면에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열식별번호 292의 아미노산 서열을 포함하는 인간 중쇄 IgG4 불변 도메인, 및 서열식별번호 293의 아미노산 서열을 포함하는 인간 카파 경쇄 불변 도메인을 추가로 포함한다. 또 다른 측면에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열식별번호 292의 아미노산 서열을 포함하는 인간 중쇄 IgG4 불변 도메인 또는 그의 변이체, 및 서열식별번호 293의 아미노산 서열을 포함하는 인간 카파 경쇄 불변 도메인 또는 그의 변이체를 추가로 포함한다.
한 측면에서, 본 발명은 (i) 항-TIGIT 항체, 또는 그의 항원 결합 단편; (ii) 항-인간 PD-1 항체, 또는 그의 항원 결합 단편, (ii) 완충제, (iii) 비환원성 당; (iv) 비이온성 계면활성제; 및 (v) 항산화제를 포함하는, 항-TIGIT 항체, 또는 그의 항원 결합 단편 및 항-인간 PD-1 항체, 또는 그의 항원 결합 단편의 복합 제제를 제공한다. 한 실시양태에서, 복합 제제는 킬레이터를 추가로 포함한다. 한 실시양태에서, 킬레이터는 EDTA이다. 또 다른 실시양태에서, 킬레이터는 DTPA이다. 복합 제제의 한 실시양태에서, 항-인간 PD-1 항체 대 항-TIGIT 항체의 비 1:2이다. 복합 제제의 한 실시양태에서, 항-인간 PD-1 항체 대 항-TIGIT 항체의 비 1:1이다. 복합 제제의 한 실시양태에서, 항-인간 PD-1 항체 대 항-TIGIT 항체의 비 2:1이다.
본 발명의 한 실시양태에서, 복합 제제는 (i) 약 1 mg/ml 내지 약 200 mg/ml의 항-TIGIT 항체, 또는 그의 항원 결합 단편; (ii) 약 1 mg/ml 내지 약 200 mg/ml의 항-인간 PD-1 항체 (iii) 약 5 mM 내지 약 20 mM 완충제; (iv) 약 6% 중량/부피 (w/v) 내지 약 8% (w/v) 비환원성 당; (v) 약 0.01% (w/v) 내지 약 0.10% (w/v) 비이온성 계면활성제; 및 (vi) 약 1 mM 내지 약 20 mM 항산화제를 포함한다. 한 실시양태에서, 복합 제제는 킬레이터를 추가로 포함한다. 한 실시양태에서, 킬레이터는 약 1 μM 내지 약 50 μM의 양으로 존재한다. 한 실시양태에서, 킬레이터는 DTPA이다. 또 다른 실시양태에서, 킬레이터는 EDTA이다. 복합 제제의 한 실시양태에서, 항-인간 PD-1 항체 대 항-TIGIT 항체의 비 1:2이다. 복합 제제의 한 실시양태에서, 항-인간 PD-1 항체 대 항-TIGIT 항체의 비 1:1이다. 복합 제제의 한 실시양태에서, 항-인간 PD-1 항체 대 항-TIGIT 항체의 비 2:1이다. 한 실시양태에서, 복합 제제의 pH는 4.5 - 6.5이다. 특정 실시양태에서, 제제의 pH는 약 pH 5.5 내지 약 pH 6.2이다. 추가의 실시양태에서, 제제의 pH는 약 pH 5.8-6.0이다.
복합 제제의 한 실시양태에서, 완충제는 L-히스티딘 완충제 또는 아세트산 나트륨 완충제이고, 비환원성 당은 수크로스이고, 비이온성 계면활성제는 폴리소르베이트 80이고, 항산화제는 L-메티오닌이다. 또 다른 실시양태에서, 복합 제제는 (i) 약 1 mg/ml 내지 약 100 mg/ml의 항-TIGIT 항체, 또는 그의 항원 결합 단편; (ii) 약 1 mg/ml 내지 약 100 mg/ml의 항-인간 PD-1 항체 또는 그의 항원 결합 단편; (iii) 약 5 mM 내지 약 20 mM의 L-히스티딘 또는 약 5 mM 내지 약 20 mM의 아세트산 나트륨 완충제; (iv) 약 6% w/v 내지 약 8% w/v 수크로스; (v) 약 0.01% w/v 내지 약 0.10% w/v 폴리소르베이트 80; 및 (vi) 약 1 mM 내지 약 20 mM L- 메티오닌을 포함한다. 한 실시양태에서, 복합 제제는 임의적으로 킬레이터를 포함한다. 한 실시양태에서, 킬레이터는 약 1 μM 내지 약 50 μM의 양으로 존재한다. 한 실시양태에서, 킬레이터는 DTPA이다. 또 다른 실시양태에서, 킬레이터는 EDTA이다. 복합 제제의 한 실시양태에서, 완충제는 L-히스티딘 완충제이다. 한 실시양태에서, 복합 제제는 약 8 mM 내지 약 12 mM의 L-히스티딘 완충제를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 복합 제제는 약 5 mM 내지 약 10 mM의 L-메티오닌을 포함한다. 추가의 실시양태에서, 복합 제제는 대략 0.02% w/v의 중량비로 폴리소르베이트 80을 포함한다. 한 실시양태에서, 복합 제제는 약 7% (w/v)의 중량비로 수크로스를 포함한다.
복합 제제의 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 농도는 약 1 mg/ml 내지 약 100 mg/ml이다. 복합 제제의 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 농도는 약 10 mg/ml 내지 약 100 mg/ml이다. 또 다른 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 농도는 약 10 mg/ml이다. 또 다른 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 농도는 약 12.5 mg/ml이다. 또 다른 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 농도는 약 20 mg/ml이다. 또 다른 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 농도는 약 25 mg/ml이다. 또 다른 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 농도는 약 50 mg/ml이다. 또 다른 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 농도는 약 75 mg/ml이다. 또 다른 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 농도는 약 100 mg/ml, 또는 100 mg/ml이다.
복합 제제의 일부 실시양태에서, 항-인간 PD-1 항체의 농도는 약 1 mg/ml 내지 약 100 mg/ml이다. 복합 제제의 한 실시양태에서, 항-인간 PD-1 항체의 농도는 약 10 mg/ml 내지 약 100 mg/ml이다. 또 다른 실시양태에서, 항-인간 PD-1 항체의 농도는 20 mg/ml이다. 또 다른 실시양태에서, 항-인간 PD-1 항체의 농도는 25 mg/ml이다.
한 실시양태에서, 복합 제제는 약 20 mg/ml의 항-PD1 항체, 약 20 mg/ml의 항-TIGIT 항체, 10 mM L-히스티딘 완충제, 약 7% w/v 수크로스, 약 0.02% w/v 폴리소르베이트 80, 및 약 10 mM L-메티오닌을 포함한다.
한 실시양태에서, 복합 제제는 약 25 mg/ml의 항-PD1 항체, 약 25 mg/ml의 항-TIGIT 항체, 10 mM L-히스티딘 완충제, 약 7% w/v 수크로스, 약 0.02% w/v 폴리소르베이트 80, 및 약 10 mM L-메티오닌을 포함한다.
한 실시양태에서, 복합 제제는 약 50 mg/ml의 항-PD1 항체, 약 50 mg/ml의 항-TIGIT 항체, 10 mM L-히스티딘 완충제, 약 7% w/v 수크로스, 약 0.02% w/v 폴리소르베이트 80, 및 약 10 mM L-메티오닌을 포함한다.
상기 기술된 제제 중 임의의 것의 한 측면에서, 제제는 제제는 3개의 경쇄 CDR 및 3개의 중쇄 CDR을 포함하는 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편으로서, 여기서, 경쇄 CDR은 서열식별번호 111의 CDRL1 또는 그의 변이체, 서열식별번호 112의 CDRL2 또는 그의 변이체, 서열식별번호 113의 CDRL3 또는 그의 변이체를 포함하고, 중쇄 CDR은 서열식별번호 108의 CDRH1 또는 그의 변이체, 서열식별번호 154의 CDRH2 또는 그의 변이체, 및 서열식별번호 110의 CDRH3 또는 그의 변이체를 포함하는 것인 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함한다. 상기 기술된 제제 중 임의의 것의 한 측면에서, 제제는 3개의 경쇄 CDR 및 3개의 중쇄 CDR을 포함하는 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편으로서, 여기서, 경쇄 CDR은서열식별번호 111의 CDRL1, 서열식별번호 112의 CDRL2, 서열식별번호 113의 CDRL3을 포함하고, 중쇄 CDR은 서열식별번호 108의 CDRH1, 서열식별번호 154의 CDRH2, 및 서열식별번호 110의 CDRH3을 포함하는 것인 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함한다. 또 다른 측면에서, 제제는 서열식별번호 148을 포함하는 중쇄 가변 영역 또는 그의 변이체 및 서열식별번호 152를 포함하는 경쇄 가변 영역 또는 그의 변이체를 포함하는 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함한다. 또 다른 측면에서, 제제는 서열식별번호 148을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호 152를 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함한다. 한 측면에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열식별번호 291의 아미노산 서열을 포함하는 인간 중쇄 IgG1 불변 도메인 또는 그의 변이체, 및 서열식별번호 293의 아미노산 서열을 포함하는 인간 카파 경쇄 불변 도메인 또는 그의 변이체를 추가로 포함한다. 한 측면에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열식별번호 291의 아미노산 서열을 포함하는 인간 중쇄 IgG1 불변 도메인, 및 서열식별번호 293의 아미노산 서열을 포함하는 인간 카파 경쇄 불변 도메인을 추가로 포함한다. 또 다른 측면에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열식별번호 292의 아미노산 서열을 포함하는 인간 중쇄 IgG4 불변 도메인 또는 그의 변이체, 및 서열식별번호 293의 아미노산 서열을 포함하는 인간 카파 경쇄 불변 도메인 또는 그의 변이체를 추가로 포함한다. 또 다른 측면에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열식별번호 292의 아미노산 서열을 포함하는 인간 중쇄 IgG4 불변 도메인, 및 서열식별번호 293의 아미노산 서열을 포함하는 인간 카파 경쇄 불변 도메인을 추가로 포함한다.
상기 기술된 제제 중 임의의 것의 한 측면에서, 항-인간 PD-1 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 3개의 경쇄 CDR 및 3개의 중쇄 CDR을 포함하고, 여기서, 경쇄 CDR은 서열식별번호 1의 CDRL1 또는 그의 변이체, 서열식별번호 2의 CDRL2 또는 그의 변이체, 서열식별번호 3의 CDRL3 또는 그의 변이체를 포함하고, 중쇄 CDR은 서열식별번호 6의 CDRH1 또는 그의 변이체, 서열식별번호 7의 CDRH2 또는 그의 변이체, 및 서열식별번호 8의 CDRH3 또는 그의 변이체를 포함한다. 상기 기술된 제제 중 임의의 것의 한 측면에서, 항-인간 PD-1 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 3개의 경쇄 CDR 및 3개의 중쇄 CDR을 포함하고, 여기서, 경쇄 CDR은 서열식별번호 1의 CDRL1, 서열식별번호 2의 CDRL2, 서열식별번호 3의 CDRL3을 포함하고, 중쇄 CDR은 서열식별번호 6의 CDRH1, 서열식별번호 7의 CDRH2, 및 서열식별번호 8의 CDRH3을 포함한다. 또 다른 측면에서, 제제는 서열식별번호 4를 포함하는 경쇄 가변 영역 또는 그의 변이체 및 서열식별번호 9를 포함하는 중쇄 가변 영역 또는 그의 변이체를 포함하는 항-인간 PD1 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함한다. 또 다른 측면에서, 제제는 서열식별번호 4를 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열식별번호 9를 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항-인간 PD1 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함한다. 또 다른 측면에서, 제제는 서열식별번호 5를 포함하는 경쇄, 및 서열식별번호 10을 포함하는 중쇄를 포함하는 항-인간 PD1 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함한다. 또 다른 측면에서, 제제는 서열식별번호 5를 포함하는 경쇄 또는 그의 변이체, 및 서열식별번호 10을 포함하는 중쇄 또는 그의 변이체를 포함하는 항-인간 PD1 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함한다. 상기 기술된 제제 중 임의의 것의 한 측면에서, 항-인간 PD-1 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 펨브롤리주맙이다. 또 다른 측면에서, 항-인간 PD-1 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 니볼루맙이다.
상기 기술된 복합 제제 중 임의의 것의 한 측면에서, 제제는 (i) 3개의 경쇄 CDR 및 3개의 중쇄 CDR을 포함하는 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편으로서, 여기서, 경쇄 CDR은서열식별번호 111의 CDRL1, 서열식별번호 112의 CDRL2, 서열식별번호 113의 CDRL3을 포함하고, 중쇄 CDR은 서열식별번호 108의 CDRH1, 서열식별번호 154의 CDRH2, 및 서열식별번호 110의 CDRH3을 포함하는 것인 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 및 (ii) 3개의 경쇄 CDR 및 3개의 중쇄 CDR을 포함하는 항-인간 PD-1 항체 또는 그의 항원 결합 단편으로서, 여기서, 경쇄 CDR은 서열식별번호 1의 CDRL1, 서열식별번호 2의 CDRL2, 서열식별번호 3의 CDRL3을 포함하고, 중쇄 CDR은 서열식별번호 6의 CDRH1, 서열식별번호 7의 CDRH2, 및 서열식별번호 8의 CDRH3을 포함하는 것인 항-인간 PD-1 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함한다.
상기 복합 제제 중 임의의 것의 한 측면에서, 제제는 (i) 서열식별번호 148을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호 152를 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 및 (ii) 서열식별번호 4를 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열식별번호 9를 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항-인간 PD1 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함한다.
상기 복합 제제 중 임의의 것의 또 다른 측면에서, 제제는 (i) 서열식별번호 148을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하고, 서열식별번호 291의 아미노산 서열을 포함하는 인간 중쇄 IgG1 불변 도메인을 추가로 포함하고, 서열식별번호 152를 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하고, 서열식별번호 293의 아미노산 서열을 포함하는 인간 카파 경쇄 불변 도메인을 추가로 포함하는 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 및 (ii) 서열식별번호 5를 포함하는 경쇄, 및 서열식별번호 10을 포함하는 중쇄를 포함하는 항-인간 PD1 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함한다.
상기 복합 제제 중 임의의 것의 또 다른 측면에서, 제제는 (i) 서열식별번호 148을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하고, 서열식별번호 292의 아미노산 서열을 포함하는 인간 중쇄 IgG1 불변 도메인을 추가로 포함하고, 서열식별번호 152를 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하고, 서열식별번호 293의 아미노산 서열을 포함하는 인간 카파 경쇄 불변 도메인을 추가로 포함하는 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 및 (ii) 서열식별번호 5를 포함하는 경쇄, 및 서열식별번호 10을 포함하는 중쇄를 포함하는 항-인간 PD1 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함한다.
상기 기술된 제제 중 임의의 것의 한 실시양태에서, 제제는 유리 바이알에 함유되어 있다. 또 다른 실시양태에서, 제제는 주사 장치에 함유되어 있다. 또 다른 실시양태에서, 제제는 액체 제제이다. 한 측면에서, 제제는 적어도 -70℃ 미만으로 냉동된다. 또 다른 실시양태에서, 제제는 동결건조된 제제로부터의 재구성된 액제이다.
본 발명은 유효량의 본원에 기술된 항-TIGIT 제제 또는 복합 제제를 투여하는 단계를 포함하는, 만성 감염 또는 암 치료를 필요로 하는 포유동물 대상체 (예컨대, 인간)에서 만성 감염 또는 암을 치료하는 방법을 제공한다.
도 1은 다양한 보관 조건에서의 9개월에 걸친 제제의 pH 안정성을 보여주는 것이다.
도 2는 다양한 보관 조건에서의 9개월에 걸친 제제의 폴리소르베이트 80 농도 안정성을 보여주는 것이다.
도 3은 다양한 보관 조건에서의 9개월에 걸친 제제에 대한, ELISA 안정성 데이터에 의한 효능을 보여주는 것이다.
도 4는 다양한 보관 조건에서의 9개월에 걸친 제제에 대한, UP-SEC 안정성 데이터에 의한 단량체(%)를 보여주는 것이다.
도 5는 다양한 보관 조건에서의 9개월에 걸친 제제에 대한, UP-SEC 안정성 데이터에 의한 고분자량 (HMW) 종(%)을 보여주는 것이다.
도 6은 다양한 보관 조건에서의 9개월에 걸친 제제에 대한, UP-SEC 안정성 데이터에 의한 저분자량 (LMW) 종(%)을 보여주는 것이다.
도 7은 다양한 보관 조건에서의 9개월에 걸친 제제에 대한, CE-SDS 환원성 안정성 데이터에 의한 중쇄 + 경쇄의 순도(%)를 보여주는 것이다.
도 8은 다양한 보관 조건에서의 9개월에 걸친 제제에 대한, CE-SDS 비환원성 안정성 데이터에 의한 무손상 IgG의 순도(%)를 보여주는 것이다.
한 측면에서, 본 발명은 메티오닌을 포함하는 항-TIGIT 항체 및 그의 항원 결합 단편을 포함하는 제제를 제공한다. 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 및 메티오닌을 포함하는 항-인간 PD-1 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 복합 제제 또한 제공한다. 각 경우에서, 제제 및 복합 제제는 임의적으로 킬레이트화제를 포함한다.
I. 정의 및 약어
본 명세서 및 첨부된 청구범위 전역에 걸쳐 사용되는 바, 하기 약어가 적용된다:
API 활성 제약 성분
CDR 달리 명시되지 않는 한, 카파트 넘버링 체계(Kabat numbering system)를 사용하여 정의된, 면역글로불린 가변 영역 중의 상보성 결정 영역
CHO 차이니즈 햄스터 난소
CI 신뢰 구간
DTPA 디에틸렌트리아민펜타아세트산
EC50 50% 효능 또는 결합을 초래하는 농도
ELISA 효소 결합 면역흡착 검정법
FFPE 포르말린 고정된, 파라핀 포매된
FR 프레임워크 영역
HRP 호스래디쉬 퍼옥시다제
HNSCC 두부경부 편평세포 암종
IC50 50% 억제를 초래하는 농도
IgG 면역글로불린 G
IHC 면역조직화학법 또는 면역조직화학적
mAb 모노클로날 항체
MES 2-(N-모르폴리노)에탄술폰산
NCBI 미국 국립 생물학 정보 센터(National Center for Biotechnology Information)
NSCLC 비소세포 폐암
PCR 중합효소 연쇄 반응
PD-1 프로그램화된 사멸 1 (프로그램화된 세포 사멸-1 및 프로그램화된 사멸 수용체 1로도 공지되어 있다)
PD-L1 프로그램화된 세포 사멸 1 리간드 1
PD-L2 프로그램화된 세포 사멸 1 리간드 2
PS80 폴리소르베이트 80
TNBC 삼중 음성 유방암
VH 면역글로불린 중쇄 가변 영역
VK 면역글로불린 카파 경쇄 가변 영역
VL 면역글로불린 경쇄 가변 영역
v/v 부피/부피
WFI 주사용수
w/v 중량/부피.
이에, 본 발명이 보다 용이하게 이해될 수 있도록, 특정 기술 용어 및 과학 용어가 하기에서 구체적으로 정의된다. 본 명세서의 다른 곳에서 구체적으로 정의되지 않는 한, 본원에서 사용된 모든 다른 기술 용어 및 과학 용어는 본 발명이 속하는 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 통상적으로 이해되는 의미를 갖는다.
본 명세서 전역에 걸쳐 및 첨부된 청구범위에서, 단수 형태는 문맥상 달리 명백하게 지시되지 않는 한, 복수의 지시 대상을 포함한다.
"또는"이라고 언급하는 것은 문맥상 명시된 가능성 중 하나를 명백하게 지시하지 않는 한, 두 가능성 중 하나 또는 그 둘 모두를 지시한다. 일부 경우에서, "및/또는"은 두 가능성 중 하나 또는 그 둘 모두를 강조하기 위해 사용된다.
본원에서 사용되는 바, 암을 "치료하다" 또는 "치료하는"이란, 면역 병태 또는 암성 병태를 앓거나, 암 또는 병원성 감염 (예컨대, 바이러스성, 박테리아성, 진균성 감염) 진단을 받은 대상체에게 본 발명의 제제를 투여하여 적어도 하나의 긍정적인 치료 효과, 예컨대 예를 들어, 암 세포수 감소, 종양 크기 축소, 주변 기관 내로의 암 세포 침윤 속도 감소, 또는 종양 전이 또는 종양 성장 속도 감소를 달성하는 것을 의미한다. "치료"는 하기: 항종양 면역 반응을 유도/증가시키는 것, 병원체, 독소 및/또는 자기 항원에 대한 면역 반응을 자극시키는 것, 바이러스 감염에 대한 면역 반응을 자극시키는 것, 하나 이상의 종양 마커의 개수를 감소시키는 것, 종양 세포의 성장 또는 생존을 억제시키는 것, 하나 이상의 암성 병변 또는 종양을 제거하거나, 또는 그의 크기를 축소시키는 것, 하나 이상의 종양 마커의 수준을 감소시키는 것, 암의 중증도 또는 지속 기간을 호전시키거나, 감소시키는 것, 유사한 비치료 환자에서의 예상 생존 기간과 비교하여 환자의 생존 기간을 연장시키는 것 중 하나 이상의 것을 포함할 수 있다.
"면역 병태" 또는 "면역 장애"는 예컨대, 병적 염증, 염증성 장애, 및 자가면역 장애 또는 질환을 포함한다. "면역 병태"는 또한 감염, 지속성 감염, 및 증식성 병태, 예컨대, 면역계에 의한 근절에 저항하는 감염, 종양, 및 암을 비롯한, 암, 종양, 및 혈관신생을 지칭한다. "암성 병태"로는 예컨대, 암, 암 세포, 종양, 혈관신생, 및 전암성 병태, 예컨대, 이형성증을 포함한다.
암에서의 긍정적인 치료 효과는 다수의 방식으로 측정될 수 있다 (문헌 [W. A. Weber, J. Nucl . Med. 50:1S-10S (2009)] 참조). 예를 들어, 종양 성장 억제와 관련하여, NCI 표준에 따르면, T/C ≤ 42%가 최소 수준의 항-종양 활성이다. T/C < 10%는 높은 항-종양 활성 수준으로 간주되며, T/C (%) = 치료된 것의 중간 종양 부피/대조군의 중간 종양 부피 × 100이다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 제제의 투여에 의해 달성된 치료는 무진행 생존 (PFS), 무질환 생존 (DFS) 또는 전체 생존기간 (OS) 중 임의의 것이다. "종양 진행까지의 시간"으로도 지칭되는 PFS는 치료 동안의 및 치료 후의 암이 성장하지 않는 시간의 길이를 나타내고, 환자가 완전 관해 또는 부분 관해를 경험한 시간의 양 뿐만 아니라, 환자가 안정 병변을 경험한 시간의 양을 포함한다. DFS는 치료 동안 및 치료 후에 환자가 병이 없는 상태를 유지하는 시간의 길이를 지칭한다. OS는 나이브한 또는 치료받지 않은 개체 또는 환자와 비교하여 기대 수명에서의 연장을 지칭한다. 본 발명의 제제, 치료 방법, 및 용도의 실시양태가 모든 환자에서 긍정적인 치료 효과를 달성하는 데 효과적이지 않을 수 있지만, 관련 기술분야에 공지된 임의의 통계 검정, 예컨대, 스튜던츠 t 검정, 카이2-검정, 만(Mann) 및 휘트니(Whitney)에 따른 U-검정, 크루스칼-왈리스(Kruskal-Wallis) 검정 (H-검정), 존키어-테르프트라(Jonckheere-Terpstra)-검정 및 윌콕슨(Wilcoxon)-검정에 의해 결정되는 바와 같이, 통계적으로 유의한 수의 대상체에서는 효과적이어야 한다.
"환자"라는 용어 (대안적으로 본원에서 "대상체" 또는 "개체"로 지칭된다)는 본 발명의 제제로 치료될 수 있는 포유동물 (예컨대, 래트, 마우스, 개, 고양이, 토끼) 및 가장 바람직하게는 인간을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 환자는 성인 환자이다. 다른 실시양태에서, 환자는 소아 환자이다.
"항체"는 원하는 생물학적 활성을 나타내는 항체의 임의의 형태를 지칭한다. 따라서, 이는 가장 넓은 의미로 사용되고, 구체적으로 모노클로날 항체 (전장 모노클로날 항체 포함), 폴리클로날 항체, 인간화, 완전 인간 항체, 키메라 항체를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. "모체 항체"는 의도된 용도를 위한 항체의 변형, 예컨대, 인간 치료용 항체로서 사용하기 위한 항체의 인간화 이전에 면역계를 항원에 노출시켜 수득된 항체이다.
일반적으로, 기본 항체 구조 단위는 사량체를 포함한다. 각 사량체는 폴리펩티드 쇄의 2개의 동일한 쌍을 포함하며, 각 쌍은 1개의 "경쇄" (약 25 kDa) 및 1개의 "중쇄" (약 50-70 kDa)를 갖는다. 각 쇄의 아미노-말단 부분은 주로 항원 인식을 담당하는 약 100개 내지 110개 또는 그 초과의 아미노산의 가변 영역을 포함한다. 각 경쇄/중쇄 쌍의 가변 영역이 항체 결합 부위를 형성한다. 따라서, 일반적으로, 무손상 항체는 2개의 결합 부위를 가진다. 중쇄의 카르복시-말단 부분은 주로 이펙터 기능을 담당하는 불변 영역을 규정할 수 있다. 전형적으로, 인간 경쇄는 카파 및 람다 경쇄로 분류된다. 추가로, 인간 중쇄는 전형적으로 뮤, 델타, 감마, 알파, 또는 엡실론으로 분류되고, 각각 IgM, IgD, IgG, IgA, 및 IgE로서 항체의 이소타입을 규정한다. 경쇄 및 중쇄 내에서, 가변 및 불변 영역은 약 12개 이상의 아미노산의 "J" 영역에 의해 연결되며, 중쇄는 또한 약 10개 초과의 아미노산의 "D" 영역을 포함한다. 일반적으로, 문헌 [Fundamental Immunology Ch. 7 (Paul, W., ed., 2nd ed. Raven Press, N.Y. (1989)]을 참조한다.
전형적으로, 중쇄 및 경쇄 둘 모두의 가변 도메인은 비교적 보존된 프레임워크 영역 (FR) 내에 위치하는, 상보성 결정 영역 (CDR)으로도 불리는 3개의 초가변 영역을 포함한다. CDR은 통상적으로 프레임워크 영역에 의해 정렬되며, 이는 특이적 에피토프에 결합하는 것을 가능하게 한다. 일반적으로, 경쇄 및 중쇄 가변 도메인 둘 모두는 N-말단에서 C-말단으로 FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 및 FR4를 포함한다. 아미노산을 각 도메인에 할당하는 것은 일반적으로, 문헌 [Sequences of Proteins of Immunological Interest, Kabat, et al.; National Institutes of Health, Bethesda, Md. ; 5th ed.; NIH Publ. No. 91-3242 (1991)]; [Kabat (1978) Adv. Prot . Chem. 32:1-75]; [Kabat, et al., (1977) J. Biol . Chem. 252:6609-6616]; [Chothia, et al., (1987) J Mol . Biol. 196:901-917] 또는 [Chothia, et al., (1989) Nature 342:878-883]의 정의에 따른다.
명시된 표적 단백질에 "특이적으로 결합하는" 항체는 다른 단백질에 비해 그 표적에 대해 우선적인 결합을 나타내는 항체이나, 이 특이성이 절대적인 결합 특이성을 요구하는 것은 아니다. 항체는 그의 결합이, 예컨대, 가양성과 같은 원치 않는 결과를 생성하지 않으면서, 샘플 중 표적 단백질의 존재를 결정하는 경우, 그의 의도된 표적에 대해 "특이적"인 것으로 간주된다. 본 발명에 유용한 항체 또는 그의 결합 단편은 비-표적 단백질과의 친화도보다 적어도 2배 더 큰, 바람직하게는 적어도 10배 더 큰, 더욱 바람직하게는 적어도 20배 더 큰, 가장 바람직하게는 적어도 100배 더 큰 친화도로 표적 단백질에 결합할 것이다. 본원에서 사용되는 바, 항체가 주어진 아미노산 서열, 예컨대, 성숙 인간 TIGIT 또는 인간 PD-1의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드에는 결합하지만, 그 서열이 결핍되어 있는 단백질에는 결합하지 않는다면, 항체는 그 서열을 포함하는 폴리펩티드에 특이적으로 결합하는 것으로 지칭된다.
"키메라 항체"는, 중쇄 및/또는 경쇄의 일부가 특정한 종 (예컨대, 인간)으로부터 유래되거나, 특정한 항체 부류 또는 하위부류에 속하는 항체의 상응하는 서열과 동일하거나 상동성이고, 나머지 쇄(들)는 또 다른 종 (예컨대, 마우스)으로부터 유래되거나, 또 다른 항체 부류 또는 하위부류에 속하는 항체의 상응하는 서열과 동일하거나, 상동성인 항체 뿐만 아니라, 이들이 원하는 생물학적 활성을 나타내는 한 이러한 항체의 단편을 지칭한다.
본원에서 사용되는 바 "공동 제제화된" 또는 "복합 제제" 또는 "복합제제" 또는 "공동제제화된"은, 개별적으로 제제화되고, 보관된 후, 투여 전에 혼합되거나, 또는 별개로 투여되는 것이 아니라, 함께 제제화되고, 조합된 생성물로서 단일 바이알 또는 베쓸 (예를 들어, 주사 장치)에 보관된 적어도 2개의 상이한 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 지칭한다. 한 실시양태에서, 복합 제제는 2개의 상이한 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 함유한다.
"제약상 유효량의" 또는 "유효량의"라는 용어는 질환 또는 병태를 치료하는 데 충분한, 환자에게 도입되는 치료 조성물 또는 제제의 양을 의미한다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 환자의 특징, 예컨대, 연령, 체중 등에 따라 달라질 수 있다는 것을 이해할 것이다.
물질 또는 조성물의 양 (예컨대, mM, 또는 M), 제제 성분의 비율 (v/v 또는 w/v), 용액/제제의 pH, 또는 방법에서 단계를 특징화하는 파라미터의 값 등을 수식할 때, "약"이라는 용어는 예를 들어, 물질 또는 조성물의 제조, 특징화 및/또는 사용에 관여하는 전형적인 측정, 취급 및 샘플링 방법을 통해; 상기 방법에서의 기계상의 오류를 통해; 조성물을 제조 또는 사용하는 데, 또는 방법을 수행하는 데 사용되는 성분의 제조, 공급원, 또는 순도에서의 차이를 통해 발생할 수 있는 수량의 변동을 지칭한다. 특정 실시양태에서, "약"은 ± 0.1%, 0.5%, 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 또는 10%의 변동을 의미할 수 있다.
본원에서 사용되는 바, "x% (w/v)"는 x g/100 ml와 같다 (예를 들어, 5% w/v는 50 mg/ml이다).
본 발명의 제제는 재구성되었을 때, 또는 액체 형태로 생물학적으로 활성인 항체 및 그의 단편을 포함한다.
"암", "암성," 또는 "악성"이라는 용어는 전형적으로 비조절된 세포 성장을 특징으로 하는 포유동물에서의 생리학적 병태를 지칭하거나 기술한다. 암의 예로는 암종, 림프종, 백혈병, 모세포종 및 육종을 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 상기 암의 더욱 특정한 예로는 편평세포 암종, 골수종, 소세포 폐암, 비소세포 폐암, 신경교종, 호지킨 림프종, 비호지킨 림프종, 위장암 (위장관암), 신암, 난소암, 간암, 림프모구성 백혈병, 림프구성 백혈병, 결장직장암, 자궁내막암, 신장암, 전립선암, 갑상선암, 흑색종, 연골육종, 신경모세포종, 췌장암, 다형성 교모세포종, 자궁경부암, 뇌암, 위암, 방광암, 간세포암, 유방암, 결장 암종, 및 두부경부 암을 포함한다.
"코티아(Chothia)"는 문헌 [Al-Lazikani et al., JMB 273:927-948 (1997)]에 기술된 항체 넘버링 체계를 의미한다.
본원에서 사용되는 바, "카바트(Kabat)"는 엘빈 A. 카바트(Elvin A. Kabat)에 의해 개척된 면역글로불린 정렬 및 넘버링 체계를 의미한다 ((1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md.).
본원에서 사용되었을 때, "성장 억제제"란, 시험관내 또는 생체내에서 세포, 특히, 본원에서 확인된 유전자 중 임의의 것을 과다발현하는 암 세포의 성장을 억제시키는 화합물 또는 조성물을 지칭한다. 따라서, 성장 억제제는 S기에서 상기 유전자를 과다발현하는 세포의 비율을 유의적으로 감소시키는 것이다. 성장 억제제의 예로는 (S기 이외의 단계에서) 세포 주기 진행을 차단하는 작용제, 예컨대, G1 정지 및 M기 정지를 유도하는 작용제를 포함한다. 고전적인 M기 차단제로는 빈카 (빈크리스틴 및 빈블라스틴) 탁산, 및 토포 II 억제제, 예컨대, 독소루비신, 에피루비신, 다우노루비신, 및 에토포시드를 포함한다. G1을 정지시키는 상기 작용제는 또한 예를 들어, DNA 알킬화제, 예컨대, 다카르바진, 메클로레타민, 및 시스플라틴과 같이, S기 정지로까지 확산된다. 추가 정보는 문헌 [The Molecular Basis of Cancer, Mendelsohn and Israel, eds., Chapter 1, entitled "Cell cycle regulation, oncogens, and antineoplastic drugs" by Murakami et al. (WB Saunders: Philadelphia, 1995)]에서 살펴볼 수 있다.
"TIGIT 결합 단편," "그의 항원 결합 단편,", "그의 결합 단편" 또는 "그의 단편"이라는 용어는 항원 (인간 TIGIT)에 결합하고, 그의 활성을 억제하는 (예컨대, 인간 TIGIT가 그의 천연 리간드에 결합하는 것을 차단하는) 그의 생물학적 활성을 여전히 실질적으로 유지하는 항체의 단편 또는 유도체를 포함한다. 따라서, "항체 단편" 또는 TIGIT 결합 단편이라는 용어는 전장 항체의 일부분, 일반적으로는 그의 항원 결합 영역 또는 가변 영역을 지칭한다. TIGIT 항체 단편의 예로는 Fab, Fab', F(ab')2, 및 Fv 단편을 포함한다. 전형적으로, 결합 단편 또는 유도체는 그의 TIGIT 억제 활성의 적어도 10%를 유지한다. 일부 실시양태에서, 비록 원하는 생물학적 효과를 발휘하도록 충분한 친화력이 있는 임의의 결합 단편이 유용하기는 하겠지만, 결합 단편 또는 유도체는 그의 TIGIT 억제 활성의 적어도 25%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99% 또는 100% (또는 그 초과)를 유지한다. 일부 실시양태에서, 항원 결합 단편은 비관련 항원과의 친화도보다 적어도 2배 더 큰, 바람직하게, 적어도 10배 더 큰, 더욱 바람직하게, 적어도 20배 더 큰, 및 가장 바람직하게, 적어도 100배 더 큰 친화도로 그의 항원에 결합한다. 한 실시양태에서, 항체는 예컨대, 스캐차드 분석에 의해 측정 시, 약 약 109 ℓ/mol 초과의 친화도를 가진다 (Munsen et al. (1980) Analyt . Biochem. 107:220-239). 또한, TIGIT 결합 단편은 실질적으로는 그의 생물학적 활성을 변경시키지 않는 보존적 아미노산 치환을 가지는 변이체를 포함할 수 있는 것으로 의도된다.
"PD-1 결합 단편," "그의 항원 결합 단편,", "그의 결합 단편" 또는 "그의 단편"이라는 용어는 항원 (인간 PD-1)에 결합하고, 그의 활성을 억제하는 (예컨대, PD-1이 PDL1 및 PDL2에 결합하는 것을 차단하는) 그의 생물학적 활성을 여전히 실질적으로 유지하는 항체의 단편 또는 유도체를 포함한다. 따라서, "항체 단편" 또는 PD-1 결합 단편이라는 용어는 전장 항체의 일부분, 일반적으로는 그의 항원 결합 영역 또는 가변 영역을 지칭한다. 항체 단편의 예로는 Fab, Fab', F(ab')2, 및 Fv 단편을 포함한다. 전형적으로, 결합 단편 또는 유도체는 그의 PD-1 억제 활성의 적어도 10%를 유지한다. 일부 실시양태에서, 비록 원하는 생물학적 효과를 발휘하도록 충분한 친화력이 있는 임의의 결합 단편이 유용하기는 하겠지만, 결합 단편 또는 유도체는 그의 PD-1 억제 활성의 적어도 25%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99% 또는 100% (또는 그 초과)를 유지한다. 일부 실시양태에서, 항원 결합 단편은 비관련 항원과의 친화도보다 적어도 2배 더 큰, 바람직하게, 적어도 10배 더 큰, 더욱 바람직하게, 적어도 20배 더 큰, 및 가장 바람직하게, 적어도 100배 더 큰 친화도로 그의 항원에 결합한다. 한 실시양태에서, 항체는 예컨대, 스캐차드 분석에 의해 측정 시, 약 약 109 ℓ/mol 초과의 친화도를 가진다 (Munsen et al. (1980) Analyt . Biochem. 107:220-239). 또한, PD-1 결합 단편은 실질적으로는 그의 생물학적 활성을 변경시키지 않는 보존적 아미노산 치환을 가지는 변이체를 포함할 수 있는 것으로 의도된다.
"인간 항체"는 인간 면역글로불린 단백질 서열만을 포함하는 항체를 지칭한다. 인간 항체가 마우스, 마우스 세포, 또는 마우스 세포로부터 유래된 하이브리도마에서 생산되는 경우, 이는 뮤린 탄수화물 쇄를 함유할 수 있다. 유사하게, "마우스 항체" 또는 "래트 항체"는 각각 마우스 또는 래트 면역글로불린 서열만을 포함하는 항체를 지칭한다.
"인간화 항체"는 비-인간 (예컨대, 뮤린) 항체 뿐만 아니라, 인간 항체로부터의 서열을 함유하는 항체의 형태를 지칭한다. 상기 항체는 비-인간 면역글로불린으로부터 유래된 최소 서열을 함유한다. 일반적으로, 인간화 항체는 적어도 1개, 및 전형적으로 2개의 가변 도메인 모두를 실질적으로 포함할 것이고, 여기서, 모든 또는 실질적으로 모든 초가변 루프는 비인간 면역글로불린의 것들에 해당하고, 모든 또는 실질적으로 모든 FR 영역은 인간 면역글로불린 서열의 것이다. 인간화 항체는 또한 임의적으로 면역글로불린 불변 영역 (Fc)의 적어도 일부, 전형적으로, 인간 면역글로불린의 것을 포함할 것이다. 친화도를 증가시키기 위해, 인간화 항체의 안정성을 증가시키기 위해, 또는 다른 이유를 위해 특정 아미노산 치환도 포함될 수 있지만, 설치류 항체의 인간화 형태는 일반적으로 모체 설치류 항체의 동일한 CDR 서열을 포함할 것이다.
본 발명의 항체는 변경된 이펙터 기능을 제공하도록 Fc 영역이 변형된 (또는 차단된) 항체를 또한 포함한다. 예컨대, 미국 특허 번호 5,624,821; WO2003/086310; WO2005/120571; WO2006/0057702; 문헌 [Presta (2006) Adv . Drug Delivery Rev. 58:640-656]을 참조한다. 상기 변형은 면역계의 다양한 반응을 증진 또는 억제시키는 데 사용될 수 있고, 가능하게는 진단 및 요법에서의 유익한 효과가 있을 수 있다. Fc 영역의 변경은 아미노산 변이 (치환, 결실 및 삽입), 글리코실화 또는 탈글리코실화, 및 다중 Fc 부가를 포함한다. Fc에 대한 변이는 치료 항체에서의 항체 반감기를 또한 변경시킬 수 있고, 더 긴 반감기는 동반하여 편의성을 증가시키고, 물질 사용을 감소시키면서, 투약 빈도 감소시킬 것이다. 문헌 [Presta (2005) J. Allergy Clin . Immunol .116:731 at 734-35]를 참조한다.
"완전 인간 항체"란, 인간 면역글로불린 단백질만을 포함하는 항체를 지칭한다. 완전 인간 항체가 마우스, 마우스 세포, 또는 마우스 세포로부터 유래된 하이브리도마에서 생산되는 경우, 이는 뮤린 탄수화물 쇄를 함유할 수 있다. 유사하게, "마우스 항체"는 각각 마우스 면역글로불린 서열만을 포함하는 항체를 지칭한다. 완전 인간 항체는 인간에서, 인간 면역글로불린 생식계열 서열을 가지는 트랜스제닉 동물에서, 파지 디스플레이에 의해 또는 다른 분자 생물학적 방법에 의해 생성될 수 있다.
"초가변 영역"은 항원-결합을 담당하는 항체의 아미노산 잔기를 지칭한다. 초가변 영역은 "상보성 결정 영역" 또는 "CDR"로부터의 아미노산 잔기 (예컨대, 카바트 넘버링 체계에 의해 결정된 바와 같은, 경쇄 가변 도메인 내의 24-34 (CDRL1), 50-56 (CDRL2) 및 89-97 (CDRL3) 및 중쇄 가변 도메인 내의 잔기 31-35 (CDRH1), 50-65 (CDRH2) 및 95-102 (CDRH3) ((Kabat et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md.)), 및/또는 "초가변 루프"로부터의 잔기 (즉, 경쇄 가변 도메인 내의 26-32 (L1), 50-52 (L2) 및 91-96 (L3) 및 중쇄 가변 도메인 내의 26-32 (H1), 53-55 (H2) 및 96-101 (H3) (Chothia and Lesk (1987) J. Mol. Biol. 196: 901-917)를 포함한다. 본원에서 사용되는 바, "프레임워크" 또는 "FR" 잔기라는 용어는 본원에서 CDR 잔기로서 정의된 초가변 영역 잔기 이외의 이들 가변 도메인 잔기를 지칭한다. CDR 및 FR 잔기는 문헌 [Kabat. Kabat et al. (1987) Sequences of Proteins of Immunological Interest, National Institutes of Health, Bethesda Md.]의 표준 서열 정의에 따라 결정된다.
"보존적으로 변형된 변이체" 또는 "보존적 치환"은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 아미노산 치환을 지칭하고, 심지어, 폴리펩티드의 필수 영역에서도, 일반적으로 생성된 분자의 생물학적 활성을 변경시키지 않으면서 이루어질 수 있다. 바람직하게는 상기 예시적인 치환은 하기의 표 1에 기재된 것에 따라 이루어진다:
<표 1>
예시적인 보존적 아미노산 치환
Figure pct00001
추가로, 관련 기술분야의 통상의 기술자는 일반적으로, 폴리펩티드의 비-필수 영역 내의 단일 아미노산 치환이 생물학적 활성을 실질적으로 변경시키지 않는다는 것을 인지하고 있다. 예컨대, 문헌 [Watson et al. (1987) Molecular Biology of the Gene, The Benjamin/Cummings Pub. Co., p. 224 (4th Edition)]을 참조한다.
명세서 및 청구범위 전역에 걸쳐 사용된 바와 같이, "~으로 본질적으로 이루어진다" 또는 변형, 예컨대, "~으로 본질적으로 이루어지다" 또는 "~으로 본질적으로 이루어지는"이라는 어구는 임의의 언급된 요소들 또는 요소들 군의 포함, 및 명시된 투여 요법, 방법 또는 조성물의 기본적인 또는 신규 성질을 실질적으로 변화시키지 않는, 언급된 요소들과 성질이 유사하거나, 상이한 다른 요소들의 임의적인 포함을 가리킨다. 비제한적인 예로서, 언급된 아미노산 서열로 본질적으로 이루어지는 결합 화합물은 결합 화합물의 성질에 본질적으로 영향을 미치지 않는 하나 이상의 아미노산 (하나 이상의 아미노산 잔기의 치환 포함)을 또한 포함할 수 있다.
"포함하는," 또는 변형, 예컨대 "포함한다(comprise)", "포함한다(comprises)" 또는 "~로 구성된다"는 언어 또는 필요한 함축을 표현하기 위해 문맥상 달리 요구되지 않는 한, 명세서 및 청구범위 전역에 걸쳐 포괄적인 의미로, 즉, 언급된 특징의 존재를 명시하지만, 본 발명의 임의의 실시양태의 작용 또는 유용성을 실질적으로 증진시킬 수 있는 추가적인 특징의 존재 또는 추가를 배제하지 않도록 사용된다.
"단리된 항체" 및 "단리된 항체 단편"은 정제 상태를 지칭하고, 이러한 맥락에서, 명명된 분자는 다른 생물학적 분자, 예컨대, 핵산, 단백질, 지질, 탄수화물, 또는 다른 물질, 예컨대, 세포 파편 및 성장 배지가 실질적으로 없는 것을 의미한다. 일반적으로, "단리된"이라는 용어는 이러한 물질, 또는 물, 완충제, 또는 염이 본원에 기재된 바와 같은 결합 화합물의 실험적 또는 치료적 사용을 실질적으로 방해하는 양으로 존재하지 않는 한, 이러한 물질의 완전한 부재, 또는 물, 완충제, 또는 염의 부재를 지칭하도록 의도되지 않는다.
본원에서 사용된 바, "모노클로날 항체" 또는 "mAb" 또는 "Mab"는 실질적으로 동종인 항체의 집단을 지칭하며, 즉, 집단을 포함하는 항체 분자는 미량으로 존재할 수 있는 가능한 자연적으로 발생된 돌연변이를 제외한 아미노산 서열에서 동일하다. 대조적으로, 통상적인 (폴리클로날) 항체 제조는 전형적으로, 상이한 에피토프에 대해 종종 특이적인 그의 가변 도메인, 특히 그의 CDR에서 상이한 아미노산 서열을 갖는 다수의 상이한 항체를 포함한다. 수식어 "모노클로날"은 항체의 실질적으로 동종인 집단으로부터 수득되는 바와 같은 항체의 특징을 나타내고, 임의의 특정한 방법에 의해 항체의 생산을 요구하는 것으로서 해석되어서는 안된다. 예를 들어, 본 발명에 따라 사용하고자 하는 모노클로날 항체는 문헌 [Kohler et al. (1975) Nature 256: 495]에 의해 최초로 기술된 하이브리도마 방법에 의해 제조될 수 있거나, 또는 재조합 DNA 방법에 의해 제조될 수 있다 (예컨대, 미국 특허 번호 4,816,567 참조). "모노클로날 항체"는 또한 예를 들어, 문헌 [Clackson et al. (1991) Nature 352: 624-628] 및 [Marks et al. (1991) J. Mol . Biol. 222: 581-597]에 기재된 기술을 사용하여 파지 항체 라이브러리로부터 단리될 수 있다. 또한, 문헌 [Presta (2005) J. Allergy Clin . Immunol. 116:731]을 참조한다.
암 진단을 받은, 또는 암에 걸린 것으로 의심되는 대상체에 적용될 때의 "종양"은 임의의 크기의 악성 또는 잠재적 악성 신생물 또는 조직 종괴를 지칭하고, 원발성 종양 및 속발성 신생물을 포함한다. 고형 종양은 통상적으로 낭 또는 액체 영역을 함유하지 않는 조직의 비정상적 성장 또는 종괴이다. 고형 종양의 여러 유형은 이들을 형성하는 세포 유형에 대해 명명된다. 고형 종양의 예로는 육종, 암종, 및 림프종이 있다. 백혈병 (혈액암)은 일반적으로 고형 종양을 형성하지 않는다 (National Cancer Institute, Dictionary of Cancer Terms).
"종양 크기"라는 용어는 종양의 길이 및 너비로 측정될 수 있는 종양의 전체 크기를 지칭한다. 관련 기술분야에 공지된 다양한 방법에 의해, 예컨대, 예를 들어, 대상체로부터의 절제시 예컨대, 캘리퍼를 사용하여, 또는 신체 내에 있는 동안 영상화 기술, 예컨대, 골 스캔, 초음파, CT 또는 MRI 스캔을 사용하여 종양(들)의 치수를 측정함으로써 종양 크기를 측정할 수 있다.
본원에서 사용되는 바, "가변 영역" 또는 "V 영역"이란, 상이한 항체 사이에 서열이 가변적인 IgG 쇄의 절편을 의미한다. 이는 경쇄에서 카바트 잔기 109 및 중쇄에서 113까지 연장된다.
"완충제"라는 용어는 본 발명의 제제의 용액 pH를 허용가능한 범위 내에서 유지시키거나, 또는 본 발명의 동결건조된 제제의 경우, 동결건조 이전에 허용가능한 용액 pH를 제공하는 작용제를 포함한다.
"동결건조," "동결건조된" 및 "냉동-건조된"이라는 용어는 건조시키고자 하는 물질을 먼저 냉동시킨 후, 이어서, 진공 환경에서 승화에 의해 얼음 또는 냉동 용매를 제거하는 프로세스를 지칭한다. 보관시 동결건조된 제품의 안정성을 증강시키기 위해 부형제를 예비-동결건조된 제제 중에 포함시킬 수 있다.
"제약 제제"라는 용어는 활성 성분이 효과적이게 하는 것과 같은 형태이고, 제제가 투여될 대상체에게 독성인 추가적인 성분을 함유하지 않는 제제를 지칭한다. "제제" 및 "제약 제제"라는 용어는 전역에 걸쳐 상호교환적으로 사용된다.
"제약상 허용되는"이란, 부형제 (비히클, 첨가제) 및 조성물이, 사용되는 활성 성분을 유효량으로 제공하기 위해 대상체에게 합리적으로 투여될 수 있고, "일반적으로 안전한 것으로 간주되고," 예컨대, 생리적으로 허용되며, 전형적으로, 인간에게 투여되었을 때, 알레르기 반응 또는 원치않는 유사 반응, 예컨대, 위경련 등을 일으키지 않는다는 것을 지칭한다. 또 다른 실시양태에서, 상기 용어는 동물용으로 및 더욱 특히, 인간용으로, 연방 또는 주 정부의 규제 기관의 승인을 받은, 또는 미국 약전(U.S. Pharmacopeia) 또는 또 다른 일반적으로 인정되는 약전에 열거되어 있는 분자 엔티티 및 조성물을 지칭한다.
"재구성된" 제제는 재구성된 제제 내에 단백질이 분산되도록 동결건조된 단백질 제제를 희석제에 용해시킴으로써 제조된 것이다. 재구성된 제제는 투여, 예컨대, 비경구 투여에 적합하고, 임의적으로는 피하 투여에 적합할 수 있다.
"재구성 시간"은 용액으로 동결건조 제제를 입자가 없는 투명한 용액으로 재수화시키는 데 필요한 시간이다.
"안정한" 제제는 내부의 단백질이 보관시 이의 물리적 안정성 및/또는 화학적 안정성 및/또는 생물학적 활성을 본질적으로 유지하는 것이다. 단백질 안정성을 측정하기 위한 다양한 분석 기술이 관련 기술분야에서 이용가능하고, 문헌 [Peptide and Protein Drug Delivery, 247-301, Vincent Lee Ed., Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., Pubs. (1991)] 및 [Jones, A. Adv. Drug Delivery Rev. 10:29-90 (1993)]에 리뷰되어 있다. 선택된 기간에 대해 선택된 온도에서 안정성을 측정할 수 있다. 예를 들어, 한 실시양태에서, 안정한 제제는 냉장 온도 (2-8℃)에서 적어도 12개월 동안 유의적인 변화가 관찰되지 않는 제제이다. 또 다른 실시양태에서, 안정한 제제는 냉장 온도 (2-8℃)에서 적어도 18개월 동안 유의적인 변화가 관찰되지 않는 제제이다. 또 다른 실시양태에서, 안정한 제제는 실온 (23-27℃)에서 적어도 3개월 동안 유의적인 변화가 관찰되지 않는 제제이다. 또 다른 실시양태에서, 안정한 제제는 실온 (23-27℃)에서 적어도 6개월 동안 유의적인 변화가 관찰되지 않는 제제이다. 또 다른 실시양태에서, 안정한 제제는 실온 (23-27℃)에서 적어도 12개월 동안 유의적인 변화가 관찰되지 않는 제제이다. 또 다른 실시양태에서, 안정한 제제는 실온 (23-27℃)에서 적어도 18개월 동안 유의적인 변화가 관찰되지 않는 제제이다. 항체 제제의 안정성에 대한 기준은 하기와 같다. 전형적으로, SEC-HPLC에 의해 측정시, 항체 단량체의 10% 이하, 바람직하게, 5%가 분해된다. 전형적으로, 제제는 시각적 분석에 의해 무색이거나, 또는 투명 내지 약간 유백색이다. 전형적으로, 제제의 농도, pH 및 오스몰 농도의 변화가 +/-10%를 초과하지 않는다. 효능은 전형적으로 대조군 또는 참조의 60-140%, 바람직하게, 80-120% 이내이다. 전형적으로, 예를 들어, HP-SEC에 의해 측정 시, 10% 이하, 바람직하게, 5%의 항체 클리핑, 즉, 저분자량 종(%)이 관찰된다. 전형적으로, 예를 들어, HP-SEC에 의해 측정 시, 10% 이하, 바람직하게, 5% 이하의 항체 응집, 즉, 고분자량 종(%)이 관찰된다.
색상 및/또는 투명도의 육안 검사시 또는 UV 광 산란, 크기 배제 크로마토그래피 (SEC) 및 동적 광 산란에 의해 측정시, 항체가 응집, 침전 및/또는 변성의 유의한 증가를 보이지 않았다면, 항체는 제약 제제에서 "그의 물리적 안정성을 유지"하는 것이다. 단백질 3차 구조를 결정하는 형광 분광법 및 단백질 2차 구조를 결정하는 FTIR에 의해 단백질 형상의 변화를 평가할 수 있다.
항체가 유의적인 화학적 변경을 보이지 않았다면, 항체는 제약 제제에서 "그의 화학적 안정성을 유지"하는 것이다. 단백질의 화학적으로 변경된 형태를 검출 및 정량함으로써 화학적 안정성을 사정할 수 있다. 종종 단백질의 화학 구조를 변경시키는 분해 프로세스로는 가수분해 또는 클리핑 (예컨대, 크기 배제 크로마토그래피 및 SDS-PAGE와 같은 방법에 의해 평가), 산화 (예컨대, 질량 분광법 또는 MALDI/TOF/MS와 함께 펩티드 맵핑에 의한 것과 같은 방법에 의해 평가), 탈아미드화 (예컨대, 이온 교환 크로마토그래피, 모세관 등전 포커싱, 펩티드 맵핑, 이소아스파르트산 측정과 같은 방법에 의해 평가), 및 이성질체화 (이소아스파르트산 함량 측정, 펩티드 맵핑 등에 의해 평가)를 포함한다.
주어진 시간에 항체의 생물학적 활성이 제약 제제가 제조된 시점에 나타난 생물학적 활성의 미리 정해진 범위 내에 있다면, 항체는 제약 제제에서 "그의 생물학적 활성을 유지"하는 것이다. 예를 들어, 항원 결합 검정법에 의해 항체의 생물학적 활성을 측정할 수 있다.
"등장성"이라는 용어는 관심 제제의 삼투압이 인간 혈액과 본질적으로 동일하다는 것을 의미한다. 일반적으로 등장성 제제는 삼투압이 약 270-328 mOsm일 것이다. 약간 저장성인 삼투압은 250-269 mOsm이고, 약간 고장성인 삼투압은 328-350 mOsm이다. 예를 들어, 증기압 또는 빙동(ice-freezing) 유형 삼투압 측정기를 사용하여 삼투압을 측정할 수 있다.
II. 본 발명의 제제 및 본 발명의 복합 제제.
한 측면에서, 본 발명은 활성 제약 성분으로서 인간 TIGIT에 특이적으로 결합하는 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함하는 생물학적 제제를 제공한다. 상기 제제 중 메티오닌 포함은 항-TIGIT 항체의 Fc 영역에 존재하는 메티오닌 잔기, 및 서열식별번호 110의 CDRH3을 포함하는 항-TIGIT 항체의 예에서, 트립토판의 산화를 감소시킨다. 상기 제제는 킬레이터, 예컨대, DTPA를 추가로 포함할 수 있고, 이는 산화를 추가로 감소시킬 수 있다.
한 측면에서, 본 발명은 또한 항-PD-1 항체와 함께 항-TIGIT 항체로 이루어진 복합 제제를 제공한다. 펨브롤리주맙의 주요 분해 경로는 퍼옥시다제 스트레스시 중쇄 CDR3 중의 메티오닌 105 (Met105) (예컨대, 서열식별번호 10의 M105)의 산화, 및 광 노출시 Met105 및 Fc 메티오닌 잔기의 산화를 포함하였다. 펨브롤리주맙은 시험된 분해 수준에 대한 대부분의 스트레스 조건하에서 그의 생체활성을 유지하였다. 그러나, 표면 플라즈몬 공명 (SPR)에 의하면, 퍼옥시다제 스트레스를 받은 샘플의 경우, PD-1에 대한 친화도 감소가 관찰되었다. 노출된 메티오닌 잔기 또는 항체의 CDR 중의 메티오닌 잔기는 산화를 통해 항체의 생물학적 활성에 영향을 줄 수 있는 잠재능을 가지고 있다. 메티오닌 첨가는 펨브롤리주맙 중쇄 CDR 내의 Met105의 산화를 감소시킬 수 있다.
항-PD-1 항체 및 그의 항원 결합 단편
한 측면에서, 본 발명은 활성 제약 성분 (PD-1 API)으로서 인간 PD-1에 특이적으로 결합하는 항-인간 PD-1 항체 또는 그의 항원 결합 단편 (예컨대, 인간 또는 인간화 항-PD-1 항체)과 함께 공동 제제화된 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함하는 안정한 생물학적 제제 뿐만 아니라, 본 발명의 제제를 사용하는 방법을 제공한다. 본 발명의 복합 제제 및 방법에서 임의의 항-PD-1 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 사용될 수 있다. 특정 실시양태에서, PD-1 API는 펨브롤리주맙 및 니볼루맙으로부터 선택되는 항-PD-1 항체이다. 구체적인 실시양태에서, 항-PD-1 항체는 펨브롤리주맙이다. 대안적 실시양태에서, 항-PD-1 항체는 니볼루맙이다. 하기 표 2는 예시적인 항-인간 PD-1 항체인 펨브롤리주맙 및 니볼루맙에 대한 아미노산 서열을 제공한다. 본 발명의 복합 제제 및 방법에서 유용한 대안적 PD-1 항체 및 항원 결합 단편은 하기 표 3에 제시되어 있다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 복합 제제에서 사용하기 위한 항-인간 PD-1 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3으로 이루어진 3개의 경쇄 CDR 및/또는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3으로 이루어진 3개의 중쇄 CDR을 포함한다.
본 발명의 한 실시양태에서, CDRL1은 서열식별번호 1 또는 서열식별번호 1의 변이체이고, CDRL2는 서열식별번호 2 또는 서열식별번호 2의 변이체이고, CDRL3은 서열식별번호 3 또는 서열식별번호 3의 변이체이다.
한 실시양태에서, CDRH1은 서열식별번호 6 또는 서열식별번호 6의 변이체이고, CDRH2는 서열식별번호 7 또는 서열식별번호 7의 변이체이고, CDRH3은 서열식별번호 8 또는 서열식별번호 8의 변이체이다.
한 실시양태에서, 3개의 경쇄 CDR은 서열식별번호 1, 서열식별번호 2, 및 서열식별번호 3이고, 3개의 중쇄 CDR은 서열식별번호 6, 서열식별번호 7 및 서열식별번호 8이다.
본 발명의 대안적 실시양태에서, CDRL1은 서열식별번호 11 또는 서열식별번호 11의 변이체이고, CDRL2는 서열식별번호 12 또는 서열식별번호 12의 변이체이고, CDRL3은 서열식별번호 13 또는 서열식별번호 13의 변이체이다.
한 실시양태에서, CDRH1은 서열식별번호 16 또는 서열식별번호 16의 변이체이고, CDRH2는 서열식별번호 17 또는 서열식별번호 17의 변이체이고, CDRH3은 서열식별번호 18 또는 서열식별번호 18의 변이체이다.
한 실시양태에서, 3개의 경쇄 CDR은 서열식별번호 1, 서열식별번호 2, 및 서열식별번호 3이고, 3개의 중쇄 CDR은 서열식별번호 6, 서열식별번호 7 및 서열식별번호 8이다.
대안적 실시양태에서, 3개의 경쇄 CDR은 서열식별번호 11, 서열식별번호 12, 및 서열식별번호 13이고, 3개의 중쇄 CDR은 서열식별번호 16, 서열식별번호 17 및 서열식별번호 18이다.
본 발명의 추가 실시양태에서, CDRL1은 서열식별번호 21 또는 서열식별번호 21의 변이체이고, CDRL2는 서열식별번호 22 또는 서열식별번호 22의 변이체이고, CDRL3은 서열식별번호 23 또는 서열식별번호 23의 변이체이다.
추가의 또 다른 실시양태에서, CDRH1은 서열식별번호 24 또는 서열식별번호 24의 변이체이고, CDRH2는 서열식별번호 25 또는 서열식별번호 25의 변이체이고, CDRH3은 서열식별번호 26 또는 서열식별번호 26의 변이체이다.
또 다른 실시양태에서, 3개의 경쇄 CDR은 서열식별번호 21, 서열식별번호 22, 및 서열식별번호 23이고, 3개의 중쇄 CDR은 서열식별번호 24, 서열식별번호 25 및 서열식별번호 26이다.
본 발명의 일부 항-인간 PD-1 항체 및 항원 결합 단편은 경쇄 가변 영역 및 중쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호 4 또는 서열식별번호 4의 변이체를 포함하고, 중쇄 가변 영역은 서열식별번호 9 또는 서열식별번호 9의 변이체를 포함한다. 추가 실시양태에서, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호 14 또는 서열식별번호 14의 변이체를 포함하고, 중쇄 가변 영역은 서열식별번호 19 또는 서열식별번호 19의 변이체를 포함한다. 추가 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 서열식별번호 27 또는 서열식별번호 27의 변이체를 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호 28 또는 서열식별번호 28의 변이체, 서열식별번호 29 또는 서열식별번호 29의 변이체, 또는 서열식별번호 30 또는 서열식별번호 30의 변이체를 포함한다. 상기 실시양태에서, 변이체 경쇄 또는 중쇄 가변 영역 서열은 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 아미노산 치환을 제외하면, 참조 서열과 동일하다. 일부 실시양태에서, 치환은 프레임워크 영역 내에 (즉, CDR 바깥쪽에) 위치한다. 일부 실시양태에서, 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 아미노산 치환은 보존적 치환이다.
본 발명의 복합 제제의 한 실시양태에서, 항-인간 PD-1 항체 또는 항원 결합 단편은 서열식별번호 4를 포함하거나, 또는 그로 이루어진 경쇄 가변 영역 및 서열식별번호 9를 포함하거나, 또는 그로 이루어진 중쇄 가변 영역을 포함한다. 추가 실시양태에서, 항-인간 PD-1 항체 또는 항원 결합 단편은 서열식별번호 14를 포함하거나, 또는 그로 이루어진 경쇄 가변 영역 및 서열식별번호 19를 포함하거나, 또는 그로 이루어진 중쇄 가변 영역을 포함한다. 본 발명의 제제의 한 실시양태에서, 항-인간 PD-1 항체 또는 항원 결합 단편은 서열식별번호 28를 포함하거나, 또는 그로 이루어진 경쇄 가변 영역 및 서열식별번호 27를 포함하거나, 또는 그로 이루어진 중쇄 가변 영역을 포함한다. 추가 실시양태에서, 항-인간 PD-1 항체 또는 항원 결합 단편은 서열식별번호 29를 포함하거나, 또는 그로 이루어진 경쇄 가변 영역 및 서열식별번호 27을 포함하거나, 또는 그로 이루어진 중쇄 가변 영역을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 서열식별번호 30을 포함하거나, 또는 그로 이루어진 경쇄 가변 영역 및 서열식별번호 27을 포함하거나, 또는 그로 이루어진 중쇄 가변 영역을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명의 복합 제제는 항-인간 PD-1 항체, 또는 상기 기술된 VL 도메인 또는 VH 도메인 중 하나와 적어도 95%, 90%, 85%, 80%, 75% 또는 50%의 서열 상동성을 가지는 VL 도메인 및/또는 VH 도메인을 가지고, PD-1에 특이적인 결합을 보이는 항원 결합 단백질을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명의 복합 제제의 항-인간 PD-1 항체 또는 항원 결합 단백질은 최대 1, 2, 3, 4, 또는 5개 또는 그 초과의 아미노산 치환을 가지는 VL 및 VH 도메인을 포함하고, PD-1에 특이적인 결합을 보인다.
상기 실시양태 중 임의의 것에서, PD-1 API는 인간 PD-1에 특이적으로 결합하는 전장 항-PD-1 항체 또는 그의 항원 결합 단편일 수 있다. 특정 실시양태에서, PD-1 API은 IgM, IgG, IgD, IgA, 및 IgE를 비롯한, 임의 부류의 면역글로불린으로부터 선택되는 전장 항-PD-1 항체이다. 바람직하게, 항체는 IgG 항체이다. IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4를 비롯한, IgG의 임의의 이소타입이 사용될 수 있다. 상이한 불변 도메인은 본원에 제공된 VL 및 VH 영역에 첨부될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 항체 (또는 단편)의 특정의 의도된 용도가 변경된 이펙터 기능을 요구하는 것이라면, IgG1 이외의 다른 중쇄 불변 도메인이 사용될 수 있다. IgG1 항체가 긴 반감기, 및 예컨대, 보체 활성화 및 항체-의존적 세포성 세포독성과 같은 이펙터 기능을 제공하지만, 상기 활성이 항체의 모든 용도에 바람직하지 않을 수 있다. 상기 경우에, 예를 들어, IgG4 불변 도메인이 사용할 수 있다.
본 발명의 실시양태에서, PD-1 API는 서열식별번호 5에 기재된 아미노산 잔기의 서열을 포함하거나, 또는 그로 이루어진 경쇄, 및 서열식별번호 10에 기재된 아미노산 잔기의 서열을 포함하거나, 또는 그로 이루어진 중쇄를 포함하는 항-PD-1 항체이다. 대안적 실시양태에서, PD-1 API는 서열식별번호 15에 기재된 아미노산 잔기의 서열을 포함하거나, 또는 그로 이루어진 경쇄, 및 서열식별번호 20에 기재된 아미노산 잔기의 서열을 포함하거나, 또는 그로 이루어진 중쇄를 포함하는 항-PD-1 항체이다. 추가 실시양태에서, PD-1 API는 서열식별번호 32에 기재된 아미노산 잔기의 서열을 포함하거나, 또는 그로 이루어진 경쇄, 및 서열식별번호 31에 기재된 아미노산 잔기의 서열을 포함하거나, 또는 그로 이루어진 중쇄를 포함하는 항-PD-1 항체이다. 추가 실시양태에서, PD-1 API는 서열식별번호 33에 기재된 아미노산 잔기의 서열을 포함하거나, 또는 그로 이루어진 경쇄, 및 서열식별번호 31에 기재된 아미노산 잔기의 서열을 포함하거나, 또는 그로 이루어진 중쇄를 포함하는 항-PD-1 항체이다. 추가의 또 다른 실시양태에서, PD-1 API는 서열식별번호 34에 기재된 아미노산 잔기의 서열을 포함하거나, 또는 그로 이루어진 경쇄, 및 서열식별번호 31에 기재된 아미노산 잔기의 서열을 포함하거나, 또는 그로 이루어진 중쇄를 포함하는 항-PD-1 항체이다. 본 발명의 일부 복합 제제에서, PD-1 API는 펨브롤리주맙 또는 펨브롤리주맙 바이오시밀러(biosimilar)이다. 본 발명의 일부 복합 제제에서, PD-1 API는 니볼루맙 또는 니볼루맙 바이오시밀러이다.
보통, 본 발명의 항-PD-1 항체 및 항원 결합 단편의 아미노산 서열 변이체, 및 항-TIGIT 항체 및 항원 결합 단편은 참조 항체 또는 항원 결합 단편의 아미노산 서열 (예컨대 중쇄, 경쇄, VH, VL, 또는 인간화 서열)과 적어도 75%의 아미노산 서열 동일성, 더욱 바람직하게, 적어도 80%, 더욱 바람직하게, 적어도 85%, 더욱 바람직하게, 적어도 90%, 및 가장 바람직하게, 적어도 95, 98, 또는 99%의 아미노산 서열 동일성을 가지는, 아미노산 서열을 가질 것이다. 서열에 관한 동일성 또는 상동성은 본원에서 서열 동일성(%)이 최대치에 도달하도록 서열을 정렬하고, 필요할 경우, 갭을 도입한 후에 항-PD-1 잔기와 동일한 후보 서열 내의 아미노산 잔기의 백분율로서 정의되고, 이때 임의의 보존적 치환은 서열 동일성의 일부로 간주되지 않는다. N-말단, C-말단, 또는 내부 연장, 결실, 또는 항체 서열 내로의 삽입은 서열 동일성 또는 상동성에 영향을 미치는 것으로 해석되지 않을 것이다.
서열 동일성은 두 서열이 최적으로 정렬되었을 때, 두 폴리펩티드의 아미노산이 등가 위치에서 동일한 정도를 지칭한다. 서열 동일성은, 알고리즘의 파라미터가 전체 길이의 각 참조 서열에 대해 각 서열 사이가 가장 크게 매칭되도록 선택되는 것인 BLAST 알고리즘을 사용하여 측정될 수 있다. 하기 참조문헌은 서열 분석을 위해 자주 사용되는 BLAST 알고리즘에 관한 것이다: 문헌 [BLAST ALGORITHMS: Altschul, S.F., et al., (1990) J. Mol. Biol. 215:403-410]; [Gish, W., et al., (1993) Nature Genet. 3:266-272]; [Madden, T.L., et al., (1996) Meth. Enzymol. 266:131-141]; [Altschul, S.F., et al., (1997) Nucleic Acids Res. 25:3389-3402]; [Zhang, J., et al., (1997) Genome Res. 7:649-656]; [Wootton, J.C., et al., (1993) Comput. Chem. 17:149-163]; [Hancock, J.M. et al., (1994) Comput. Appl. Biosci. 10:67-70]; [ALIGNMENT SCORING SYSTEMS: Dayhoff, M.O., et al., "A model of evolutionary change in proteins." in Atlas of Protein Sequence and Structure, (1978) vol. 5, suppl. 3. M.O. Dayhoff (ed.), pp. 345-352, Natl. Biomed. Res. Found., Washington, DC]; [Schwartz, R.M., et al., "Matrices for detecting distant relationships." in Atlas of Protein Sequence and Structure, (1978) vol. 5, suppl. 3." M.O. Dayhoff (ed.), pp. 353-358, Natl. Biomed. Res. Found., Washington, DC]; [Altschul, S.F., (1991) J. Mol. Biol. 219:555-565]; [States, D.J., et al., (1991) Methods 3:66-70]; [Henikoff, S., et al., (1992) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:10915-10919]; [Altschul, S.F., et al., (1993) J. Mol. Evol. 36:290-300]; [ALIGNMENT STATISTICS: Karlin, S., et al., (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:2264-2268]; [Karlin, S., et al., (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-5877]; [Dembo, A., et al., (1994) Ann. Prob. 22:2022-2039]; 및 [Altschul, S.F. "Evaluating the statistical significance of multiple distinct local alignments." in Theoretical and Computational Methods in Genome Research (S. Suhai, ed.), (1997) pp. 1-14, Plenum, New York].
유사하게, 경쇄 부류 또한 본원의 조성물 및 방법에서 사용될 수 있다. 구체적으로, 카파, 람다, 또는 그의 변이체가 본 조성물 및 방법에서 유용하다.
<표 2>
예시적인 PD-1 항체 서열
Figure pct00002
Figure pct00003
<표 3>
본 발명의 복합 제제, 방법 및 용도에서 유용한 추가의 PD-1 항체 및 항원 결합 단편.
Figure pct00004
본 발명의 복합 제제의 일부 실시양태에서, PD-1 API (즉, 항-PD-1 항체 또는 그의 항원 결합 단편)는 약 25 mg/mL 내지 약 100 mg/mL의 농도로 존재한다. 대안적 실시양태에서, API는 약 10 mg/mL, 약 25 mg/mL, 약 50 mg/mL, 약 75 mg/mL, 또는 약 100 mg/mL의 농도로 존재한다.
항-TIGIT 항체 및 그의 항원 결합 단편
한 측면에서, 본 발명은 활성 제약 성분 (TIGIT API)으로서 인간 TIGIT에 특이적으로 결합하는 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편 (예컨대, 인간 또는 인간화 항-TIGIT 항체)을 포함하는 생물학적 제제 뿐만 아니라, 본 발명의 제제를 사용하는 방법을 제공한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 또한 (i) 인간 TIGIT에 특이적으로 결합하는 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편 (예컨대, 인간 또는 인간화 항-TIGIT 항체) 및 (ii) 인간 PD-1에 특이적으로 결합하는 항-인간 PD-1 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함하는 생물학적 복합 제제를 제공한다. 본 발명의, 복합 제제를 비롯한 제제 및 방법에서 임의의 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 사용될 수 있다. 예시적인 항-TIGIT 항체 서열은 하기 표 4 및 5에 기재되어 있다.
<표 4>
예시적인 항-TIGIT 항체
Figure pct00005
Figure pct00006
Figure pct00007
Figure pct00008
Figure pct00009
Figure pct00010
Figure pct00011
Figure pct00012
Figure pct00013
Figure pct00014
Figure pct00015
Figure pct00016
Figure pct00017
Figure pct00018
Figure pct00019
Figure pct00020
Figure pct00021
Figure pct00022
Figure pct00023
Figure pct00024
Figure pct00025
Figure pct00026
일부 실시양태에서 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3으로 이루어진 3개의 경쇄 CDR 및/또는 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3으로 이루어진 3개의 중쇄 CDR을 포함한다.
한 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열식별번호 35를 포함하는 CDRH1, 서열식별번호 36을 포함하는 CDRH2, 서열식별번호 37, 103, 104, 105, 106, 107, 또는 160 중 임의의 것을 포함하는 CDRH3, 서열식별번호 38을 포함하는 CDRL1, 서열식별번호 39, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 또는 69 중 임의의 것을 포함하는 CDRL2, 및 서열식별번호 40, 98, 99, 100, 101, 102, 또는 162 중 임의의 것을 포함하는 CDRL3을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열식별번호 81을 포함하는 CDRH1, 서열식별번호 82를 포함하는 CDRH2, 서열식별번호 83을 포함하는 CDRH3, 서열식별번호 84를 포함하는 CDRL1, 서열식별번호 85를 포함하는 CDRL2, 및 서열식별번호 86을 포함하는 CDRL3을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열식별번호 108을 포함하는 CDRH1, 서열식별번호 109, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 154, 155 또는 167 중 임의의 것을 포함하는 CDRH2, 서열식별번호 110, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186 또는 187 중 임의의 것을 포함하는 CDRH3, 서열식별번호 111을 포함하는 CDRL1, 서열식별번호 112, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142 또는 168 중 임의의 것을 포함하는 CDRL2, 및 서열식별번호 113의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL3을 포함한다.
한 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열식별번호 35를 포함하는 CDRH1, 서열식별번호 36을 포함하는 CDRH2, 서열식별번호 37을 포함하는 CDRH3, 서열식별번호 38을 포함하는 CDRL1, 서열식별번호 39를 포함하는 CDRL2, 및 서열식별번호 40의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL3을 포함한다.
한 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열식별번호 108을 포함하는 CDRH1, 서열식별번호 109, 154 또는 145 중 어느 하나를 포함하는 CDRH2, 서열식별번호 110을 포함하는 CDRH3, 서열식별번호 111을 포함하는 CDRL1, 서열식별번호 112를 포함하는 CDRL2, 및 서열식별번호 113의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL3을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열식별번호 108의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, 서열식별번호 154를 포함하는 CDRH2, 서열식별번호 110을 포함하는 CDRH3, 서열식별번호 111을 포함하는 CDRL1, 서열식별번호 112를 포함하는 CDRL2, 및 서열식별번호 113을 포함하는 CDRL3을 포함한다.
한 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 가변 중쇄 영역 및 가변 경쇄 가변 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열식별번호 41을 포함하는 가변 중쇄 영역 및 서열식별번호 42를 포함하는 가변 경쇄 영역을 포함한다.
한 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열식별번호 87을 포함하는 가변 중쇄 영역, 및 서열식별번호 88을 포함하는 가변 경쇄 영역을 포함한다.
한 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열식별번호 114를 포함하는 가변 중쇄 영역 및 서열식별번호 115를 포함하는 가변 경쇄 영역을 포함한다.
한 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열식별번호 43-58, 65-75 및 87 중 임의의 것을 포함하는 가변 중쇄 영역, 및 서열식별번호 59-64, 76-80 및 88 중 어느 하나를 포함하는 가변 경쇄 영역을 포함한다.
한 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열식별번호 144-149 중 임의의 것을 포함하는 가변 중쇄 영역 및 서열식별번호 150-153 중 임의의 것을 포함하는 가변 경쇄 영역을 포함한다.
한 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열식별번호 148을 포함하는 가변 중쇄 영역 및 서열식별번호 152를 포함하는 가변 경쇄 영역을 포함한다.
한 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열식별번호 147을 포함하는 가변 중쇄 영역 및 서열식별번호 150을 포함하는 가변 경쇄 영역을 포함한다.
한 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열식별번호 148을 포함하는 가변 중쇄 영역 및 서열식별번호 153을 포함하는 가변 경쇄 영역을 포함한다.
한 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열식별번호 163을 포함하는 가변 중쇄 영역 및 서열식별번호 165를 포함하는 가변 경쇄 영역을 포함한다.
한 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열식별번호 169를 포함하는 가변 중쇄 영역 및 서열식별번호 171을 포함하는 가변 경쇄 영역을 포함한다.
한 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열식별번호 164를 포함하는 가변 중쇄 영역 및 서열식별번호 166을 포함하는 가변 경쇄 영역을 포함한다.
한 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열식별번호 170을 포함하는 가변 중쇄 영역 및 서열식별번호 172를 포함하는 가변 경쇄 영역을 포함한다.
<표 5>
항-TIGIT 항체의 예시적인 서열
Figure pct00027
Figure pct00028
Figure pct00029
Figure pct00030
Figure pct00031
Figure pct00032
Figure pct00033
Figure pct00034
Figure pct00035
한 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 또는 항원 결합 단편은 서열식별번호 188을 포함하는 CDRH1, 서열식별번호 189를 포함하는 CDRH2, 서열식별번호 190, 220, 221, 또는 222 중 임의의 것을 포함하는 CDRH3, 서열식별번호 191을 포함하는 CDRL1, 서열식별번호 192를 포함하는 CDRL2, 및 서열식별번호 193, 232, 233, 234, 235, 236, 또는 237 중 임의의 것을 포함하는 CDRL3을 포함한다.
한 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열식별번호 204를 포함하는 CDRH1, 서열식별번호 205, 256, 257, 258, 259, 260, 261, 262, 또는 263 중 임의의 것을 포함하는 CDRH2, 서열식별번호 206을 포함하는 CDRH3, 서열식별번호 207을 포함하는 CDRL1, 서열식별번호 208을 포함하는 CDRL2, 및 서열식별번호 209를 포함하는 CDRL3을 포함한다.
한 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 가변 중쇄 영역 및 가변 경쇄 가변 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열식별번호 194를 포함하는 가변 중쇄 영역 및 서열식별번호 195를 포함하는 가변 경쇄 영역을 포함한다.
한 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열식별번호 196을 포함하는 가변 중쇄 영역 및 서열식별번호 200을 포함하는 가변 경쇄 영역을 포함한다.
한 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열식별번호 210을 포함하는 가변 중쇄 영역 및 서열식별번호 211을 포함하는 가변 경쇄 영역을 포함한다.
한 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열식별번호 212를 포함하는 가변 중쇄 영역 및 서열식별번호 216을 포함하는 가변 경쇄 영역을 포함한다.
한 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열식별번호 197, 198, 199, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 및 231 중 임의의 것을 포함하는 가변 중쇄 영역, 및 서열식별번호 201, 202, 203, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245, 246, 247, 248, 249, 250, 251, 252, 253, 254, 및 255 중 임의의 것을 포함하는 가변 경쇄 영역을 포함한다.
한 실시양태에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열식별번호 213, 214, 215, 264, 265, 266, 267, 268, 269, 270, 271, 272, 273, 274, 275, 276, 277, 278, 279, 280, 281, 282, 283, 284, 285, 및 286 중 임의의 것을 포함하는 가변 중쇄 영역, 및 서열식별번호 217, 218, 및 219 중 임의의 것을 포함하는 가변 경쇄 영역을 포함한다.
본원에 기술된 제제에서 사용될 수 있는 추가의 항-TIGIT 항체는 예를 들어, PCT 국제 출원 번호 WO 2016/106302; WO 2016/011264; 및 WO 2009/126688에 개시된 것을 포함한다.
<표 6>
예시적인 중쇄 서열
Figure pct00036
상기 언급된 실시양태 중 임의의 것에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 상기 기술된 가변 중쇄 중 임의의 것 및 임의의 인간 중쇄 불변 도메인을 포함하는 항체이다. 한 실시양태에서, 본 발명의 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 IgG 이소형의 것이고, 인간 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 인간 중쇄 불변 도메인을 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 인간 중쇄 IgG1 불변 도메인 (서열식별번호 291) 또는 그의 변이체를 포함하고, 여기서, 변이체는 최대 20개의 변형된 아미노산 치환을 포함하는 것이다. 한 실시양태에서, 본 발명의 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열식별번호 291의 아미노산 서열을 포함하는 인간 중쇄 IgG1 불변 도메인을 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 인간 중쇄 IgG1 불변 도메인을 포함하고, 여기서, IgG1 불변 도메인은 아푸코실화된 것이다. 한 실시양태에서, 본 발명의 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 인간 중쇄 IgG4 불변 도메인 또는 그의 변이체를 포함하고, 여기서, 변이체는 최대 20개의 변형된 아미노산 치환을 포함하는 것이다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명의 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 (EU 넘버링 체계를 사용하여) 228번 위치의 아미노산이 Ser에서 Pro로 치환된 것인, 인간 중쇄 IgG4 불변 도메인을 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열식별번호 292의 아미노산 서열을 포함하는 인간 중쇄 IgG4 불변 도메인을 포함한다.
상기 언급된 실시양태 중 임의의 것에서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 상기 기술된 가변 경쇄 중 임의의 것 및 인간 경쇄 불변 도메인을 포함할 수 있다. 한 실시양태에서, 본 발명의 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 인간 카파 경쇄 불변 도메인 또는 그의 변이체를 포함하고, 여기서, 변이체는 최대 20개의 변형된 아미노산 치환을 포함하는 것이다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명의 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 인간 람다 경쇄 불변 도메인 또는 그의 변이체를 포함하고, 여기서, 변이체는 최대 20개의 변형된 아미노산 치환을 포함하는 것이다. 한 실시양태에서, 본 발명의 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열식별번호 293의 아미노산 서열을 포함하는 인간 카파 경쇄 불변 도메인을 포함한다.
제제
본 발명의 제제는 항체 응집체 (고분자량 종) 및 미립자, 고분자량 및 저분자량 종의 형성을 최소화시키고, 메티오닌 잔기의 산화를 최소화시키고, 항체가 확실하게 시간 경과에 따라 생물학적 활성을 그대로 유지할 수 있게 한다.
한 측면에서, 본 발명은 항-TIGIT 항체, 또는 그의 항원 결합 단편의 다양한 제제를 포함한다. 예를 들어, 본 발명은 (i) 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편, (ii) 완충제 (예컨대, L-히스티딘 또는 아세테이트), (iii) 비환원성 당 (예컨대, 수크로스); (iv) 비이온성 계면활성제 (예컨대, 폴리소르베이트 80); 및 (v) 항산화제 (예컨대, L-메티오닌)를 포함하는 제제를 포함한다. 한 실시양태에서, 제제는 항-PD1 항체를 추가로 포함한다. 한 실시양태에서, 제제는 킬레이터를 추가로 포함한다. 한 실시양태에서, 킬레이터는 약 1 μM 내지 약 50 μM의 양으로 존재한다. 한 실시양태에서, 킬레이터는 디에틸렌트리아민펜타아세트산 (DTPA)이다. 또 다른 실시양태에서, 킬레이터는 EDTA이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 또한 항-TIGIT 항체, 또는 그의 항원 결합 단편 및 항-인간 PD-1 항체, 또는 그의 항원 결합 단편의 다양한 복합 제제를 포함한다. 한 실시양태에서, 제제는 (i) 항-TIGIT 항체, 또는 그의 항원 결합 단편, (ii) 항-인간 PD-1 항체 또는 그의 항원 결합 단편, (iii) 완충제 (예컨대, L-히스티딘 또는 아세테이트), (iv) 비환원성 당 (예컨대, 수크로스), (v) 비이온성 계면활성제 (예컨대, 폴리소르베이트 80), 및 (vi) 항산화제 (예컨대, L-메티오닌)를 포함한다. 한 실시양태에서, 제제는 킬레이터를 추가로 포함한다. 한 실시양태에서, 킬레이터는 약 1 μM 내지 약 50 μM의 양으로 존재한다. 한 실시양태에서, 킬레이터는 디에틸렌트리아민펜타아세트산 (DTPA)이다. 또 다른 실시양태에서, 킬레이터는 EDTA이다.
본 발명의 제약 제제는 완충제를 포함할 수 있다.
본 발명의 제약 제제 및 방법에서 유용한 완충제로는 숙시네이트 (숙신산나트륨 또는 숙신산칼륨), L-히스티딘, 포스페이트 (인산나트륨 또는 인산칼륨), 트리스 (트리스(히드록시메틸) 아미노메탄), 디에탄올아민, 시트르레이트 (시트르산나트륨), 아세테이트 (아세트산나트륨) 등을 포함한다. 본 발명의 한 실시양태에서, 완충제는 제제 중에 약 1-20 mM (1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 및 20 mM)의 농도로 존재한다. 본 발명의 구체적인 실시양태에서, 완충제는 완충제는 히스티딘, 예컨대, L-히스티딘 완충제이다.
본 발명의 완충제의 pH는 약 4.5 내지 약 6.5; 약 5.0 - 6.2; 약 5.5 - 6.0 범위이고; 바람직하게, pH는 약 5.8이다. 예시적인 제제에 이르렀을 때, pH 범위 5.0-6.0의 히스티딘 및 아세테이트 완충제가 적합성에 대해 연구되었다. 예컨대, "pH는 pH 5.5 내지 6.0"과 같이, pH 값이 범위로 언급될 때, 상기 범위는 언급된 값을 포함하는 것으로 의도된다. 예를 들어, 약 5.0 내지 약 6.0 범위는 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 및 6.0을 포함한다. 달리 명시되지 않는 한, pH는 본 발명의 동결건조된 제제의 재구성 이후의 pH를 지칭한다. pH는 전형적으로 표준 유리 벌브 pH 측정기를 이용하여 25℃에서 측정된다. 본원에서 사용되는 바, "pH X의 히스티딘 완충제"를 포함하는 용액이란, pH X이고, 히스티딘 완충제를 포함하는 용액을 지칭하고, 즉, pH는 상기 용액의 pH를 지칭하는 것으로 의도된다.
본 발명의 한 실시양태에서, 본 발명의 한 실시양태에서, 항-TIGIT 제제, 및 항-TIGIT 및 항-인간 PD-1로 이루어진 복합 제제는 비환원성 당을 포함한다. 본원에서 사용되는 바, "비환원성 당"은 유리 알데히드 기 또는 유리 케톤 기를 함유하지 않거나, 또는 그를 함유하도록 전환될 수 없기 때문에, 환원제로서 작용할 수 없는 당이다. 비환원성 당의 예로는 이당류, 예컨대, 수크로스 및 트레할로스를 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 본 발명의 한 실시양태에서, 비환원성 당은 약 1-10% (w/v) (1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10% (w/v))의 양으로 존재한다. 또 다른 실시양태에서, 비환원성 당은 약 6% (w/v) 내지 약 8% (w/v) (6, 7, 또는 8% (w/v))의 양으로 존재한다. 추가의 실시양태에서, 비환원성 당은 약 6% (w/v)의 양으로 존재한다. 추가의 실시양태에서, 비환원성 당은 약 7% (w/v)의 양으로 존재한다. 추가의 실시양태에서, 비환원성 당은 약 8% (w/v)의 양으로 존재한다. 한 실시양태에서, 비환원성 당 수크로스, 트레할로스, 또는 라피노스이다. 또 다른 실시양태에서, 비환원성 당은 수크로스이다. 추가의 실시양태에서, 수크로스는 6-8% w/v로 존재한다. 한 실시양태에서, 수크로스는 약 6% (w/v)로 존재한다. 한 실시양태에서, 수크로스는 약 7% (w/v)로 존재한다. 한 실시양태에서, 수크로스는 약 8% (w/v)로 존재한다.
본 발명의 제제는 또한 계면활성제를 포함한다. 본원에서 사용되는 바, 계면활성제는 사실상 양쪽성인 표면 활성제이다. 계면활성제는 안정성을 제공하기 위해, 응집을 감소시키고/거나, 방지하기 위해, 또는 프로세싱 조건 동안, 예컨대, 정제, 여과, 냉동 건조, 수송, 보관 및 전달 동안 단백질 손상을 막고/거나, 억제시키기 위해 본원의 제제에 첨가될 수 있다. 본 발명에서, 계면활성제는 활성 성분(들)에 추가의 안정성을 제공하는 데 유용할 수 있다.
본 발명의, 복합 제제를 비롯한 제제에서 유용할 수 있는 비이온성 계면활성제로는 폴리소르베이트-20 (폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노라우레이트), 폴리소르베이트-40 (폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노팔미테이트), 폴리소르베이트-60 (폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노스테아레이트), 및 폴리소르베이트-80 (폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레에이트)을 포함하는 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르 (트윈(Tween)® (유니케마 아메리카 LLC(Uniquema Americas LLC: 미국 델라웨어주 윌밍톤))이라는 상표명으로 시판되는 폴리소르베이트); 폴리옥시에틸렌 알킬 에테르, 예컨대, Brij® 58 (유니케마 아메리카 LLC: 미국 델라웨어주 윌밍톤) 및 Brij® 35; 폴록사머 (예컨대, 폴록사머 188); 트리톤(Triton)® X-100 (유니온 카파이드 코포레이션(Union Carbide Corp.: 미국 텍사스주 휴스톤)) 및 트리톤® X-114; NP40; 스팬(Span) 20, 스팬 40, 스팬 60, 스팬 65, 스팬 80 및 스팬 85; 에틸렌 및 프로필렌 글리콜의 공중합체 (예컨대, 비이온성 계면활성제의 플루로닉(pluronic)® 시리즈, 예컨대, 플루로닉® F68, 플루로닉® 10R5, 플루로닉® F108, 플루로닉® F127, 플루로닉® F38, 플루로닉® L44, 플루로닉® L62 (바스프 코포레이션(BASF Corp.: Ludwigshafen: 독일 루드빅샤펜)); 및 소듐 도데실 술페이트 (SDS)를 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 한 실시양태에서, 비이온성 계면활성제는 폴리소르베이트 80 또는 폴리소르베이트 20이다. 한 실시양태에서, 비이온성 계면활성제는 폴리소르베이트 20이다. 또 다른 실시양태에서, 비이온성 계면활성제는 폴리소르베이트 80이다.
본 발명의 제제에 포함되는 비이온성 계면활성제의 양은 원하는 기능을 수행하기에 충분한 양, 즉, 제제 중 활성 제약 성분 (즉, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 또는 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편 및 항-인간 PD-1 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 그 둘 모두)을 안정화시키는 데 필요한 최소량이다. 비이온성 계면활성제에 대하여 열거된 모든 백분율은 w/v%로 열거된다. 전형적으로, 계면활성제는 약 0.008% w/v 내지 약 0.1% w/v의 농도로 존재한다. 본 발명의 본 측면의 일부 실시양태에서, 계면활성제는 제제 중 약 0.01% 내지 약 0.1%; 약 0.01% 내지 약 0.09%; 약 0.01% 내지 약 0.08%; 약 0.01% 내지 약 0.07%; 약 0.01% 내지 약 0.06%; 약 0.01% 내지 약 0.05%; 약 0.01% 내지 약 0.04%; 약 0.01% 내지 약 0.03%, 약 0.01% 내지 약 0.02%, 약 0.015% 내지 약 0.04%; 약 0.015% 내지 약 0.03%, 약 0.015% 내지 약 0.02%, 약 0.02% 내지 약 0.04%, 약 0.02% 내지 약 0.035%, 또는 약 0.02% 내지 약 0.03%의 양으로 존재한다. 구체적인 실시양태에서, 계면활성제는 약 0.02%의 양으로 존재한다. 대안적 실시양태에서, 계면활성제는 약 0.01%, 약 0.015%, 약 0.025%, 약 0.03%, 약 0.035%, 또는 약 0.04%의 양으로 존재한다.
본 발명의 예시적인 실시양태에서, 계면활성제는 폴리소르베이트 20 및 폴리소르베이트 80으로 이루어진 군으로부터 선택되는 비이온성 계면활성제이다. 바람직한 실시양태에서, 계면활성제는 폴리소르베이트 80이다.
구체적인 실시양태에서, 본 발명의, 복합 제제를 비롯한 제제는 약 0.01% w/v 내지 약 0.04% w/v 폴리소르베이트 80을 포함한다. 추가의 실시양태에서, 본원에 기술된 제제는 약 0.008% w/v, 약 0.01% w/v의 양으로 폴리소르베이트 80을 포함한다. 한 실시양태에서, 폴리소르베이트 80의 양은 약 0.015 w/v%이다. 또 다른 실시양태에서, 폴리소르베이트 80의 양은 약 0.02% w/v이다. 추가의 실시양태에서, 폴리소르베이트 80의 양은 약 0.025% w/v이다. 또 다른 실시양태에서, 폴리소르베이트 80의 양은 약 0.03% w/v이다. 추가의 실시양태에서, 폴리소르베이트 80의 양은 약 0.035% w/v이다. 또 다른 실시양태에서, 폴리소르베이트 80의 양은 약 0.04% w/v이다. 추가의 실시양태에서, 폴리소르베이트 80의 양은 약 0.045% w/v이다. 특정 실시양태에서, 본 발명의 제제는 약 0.02% w/v 폴리소르베이트 80을 포함한다.
본 발명의, 복합 제제를 비롯한 제제는 또한 항산화제로서 메티오닌, 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함한다. 한 실시양태에서, 메티오닌은 L-메티오닌이다. 또 다른 실시양태에서, 메티오닌은 L-메티오닌의 제약상 허용되는 염, 예컨대, 예를 들어, 메티오닌 HCl이다. 본 발명의 한 실시양태에서, 메티오닌은 제제 중에 약 1-20 mM (1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 및 20 mM)의 농도로 존재한다. 또 다른 실시양태에서, 메티오닌은 약 5 mM 내지 약 10 mM (5, 6, 7, 8, 9 및 10 mM)로 존재한다. 또 다른 실시양태에서, 메티오닌은 약 10 mM로 존재한다.
본 발명의, 복합 제제를 비롯한 제제는 또한 킬레이트화제를 추가로 포함할 수 있다. 본 발명의 한 실시양태에서, 킬레이트화제는 제제 중에 약 5-30 μM (예컨대, 5, 10, 15, 20, 25, 또는 30 μM)의 농도로 존재한다. 한 실시양태에서, 킬레이트화제는 DTPA이다. 또 다른 실시양태에서, 킬레이트화제는 EDTA이다.
동결건조된 제약 조성물
치료 단백질의 동결건조된 제제는 여러 장점을 제공한다. 동결건조된 제제는 일반적으로 용액 제제보다 더 우수한 화학적 안정성을 제공하고, 따라서, 증가된 반감기를 제공한다. 또한 동결건조된 제제는 임상 인자, 예컨대, 투여 또는 투약 경로에 따라 상이한 농도에서 재구성될 수 있다. 예를 들어, 동결건조된 제제는 피하 투여용으로 필요한 경우 고농도로 (즉, 작은 부피로), 또는 정맥내로 투여되는 경우에는 더 낮은 농도로 재구성될 수 있다. 특정 대상체에 대해 높은 용량의 투약이 요구된다면, 특히 주사 부피가 최소화되어야 하는 경우에 피하 투여된다면, 높은 농도 또한 필요할 수 있다. 상기의 한 동결건조된 항체 제제는 미국 특허 번호 6,267,958에 개시되어 있으며, 상기 특허는 그 전문이 본원에서 참조로 포함된다. 또 다른 치료 단백질의 동결건조된 제제는 미국 특허 번호 7,247,707에 개시되어 있으며, 상기 특허는 그 전문이 본원에서 참조로 포함된다.
전형적으로, 동결건조된 제제는 고농도의 약물 제품 (DP, 예시적인 실시양태에서, 인간화 항-PD-1 항체 펨브롤리주맙, 또는 그의 항원 결합 단편)의 재구성을 예상하고, 즉, 낮은 부피의 물 중에서의 재구성을 예상하고 제조된다. 그 후, 이어서, 물 또는 등장성 완충제로 희석하는 것이 DP를 더 낮은 농도로 희석하는 데 쉽게 사용될 수 있다. 전형적으로, 예컨대, 피하 투여를 위해 높은 DP 농도로 재구성될 때, 거의 등장성인 제제를 초래할 수준으로 부형제가 본 발명의 동결건조된 제제 내에 포함된다. 더 낮은 DP 농도를 제공하도록 더 큰 부피의 물에서 재구성되는 것은 재구성된 액제의 장성을 필연적으로 감소시키겠지만, 그러한 감소는 비-피하 투여, 예컨대, 정맥내 투여에서는 거의 중요하지 않을 수도 있다. 더 낮은 DP 농도에서 등장성을 원하는 경우, 동결건조된 분제를 표준의 낮은 부피의 물에서 재구성시킨 후, 등장성 희석제, 예컨대, 0.9% 염화나트륨으로 추가로 희석할 수 있다.
본 발명의 동결건조된 제제는 예비-동결건조 액제의 동결건조 (냉동-건조)에 의해 형성된다. 냉동-건조는 제제를 냉동시키고, 이어서, 1차 건조에 적합한 온도에서 물을 승화시킴으로써 달성된다. 상기 조건하에서, 생성물 온도는 제제의 공융점 또는 붕괴 온도 미만이다. 전형적으로, 1차 건조에 대한 선반 온도는 적합한 압력, 전형적으로는 약 50 내지 250 mTorr 범위의 압력에서 약 -30 내지 25℃ 범위일 것이다 (단, 생성물이 1차 건조 동안 냉동 상태 그대로 유지된다). 제제, 샘플을 보유하는 용기 (예컨대, 유리 바이알)의 크기 및 유형, 및 액체의 부피가 건조에 필요한 시간을 좌우할 것이고, 이는 수시간 내지 수일 (예컨대, 40-60 hr) 범위일 수 있다. 2차 건조 단계는, 주로 사용된 단백질의 유형 및 용기의 유형 및 크기에 따라, 약 0-40℃에서 수행될 수 있다. 2차 건조 시간은 생성물 내의 원하는 잔류 수분 수준에 의해 좌우되고, 전형적으로는 적어도 약 5시간이 소요된다. 전형적으로, 동결건조된 제제의 수분 함량은 약 5% 미만이고, 바람직하게는 약 3% 미만이다. 압력은 1차 건조 단계 동안 사용된 것과 동일할 수 있다. 냉동-건조 조건은 제제 및 바이알 크기에 따라 달라질 수 있다.
일부 경우에서, 전이 단계를 피하기 위해 단백질의 재구성이 수행되는 용기 내에서 단백질 제제를 동결건조시키는 것이 바람직할 수 있다. 이러한 경우, 용기는, 예를 들어, 3, 5, 10, 20, 50 또는 100 cc 바이알일 수 있다.
본 발명의 동결건조된 제제는 투여 전에 재구성된다. 단백질은 약 약 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 75, 80, 90 또는 100 mg/mL 또는 그 초과의 농도, 예컨대, 150 mg/mL, 200 mg/mL, 250 mg/mL, 또는 300 mg/mL up 내지 약 500 mg/mL인 농도로 재구성될 수 있다. 한 실시양태에서, 재구성 후의 단백질 농도는 약 10-300 mg/ml이다. 한 실시양태에서, 재구성 후의 단백질 농도는 약 20-250 mg/ml이다. 한 실시양태에서, 재구성 후의 단백질 농도는 약 150-250 mg/ml이다. 한 실시양태에서, 재구성 후의 단백질 농도는 약 180-220 mg/ml이다. 한 실시양태에서, 재구성 후의 단백질 농도는 약 50-150 mg/ml이다. 한 실시양태에서, 재구성 후의 단백질 농도는 약 100 mg/ml이다. 한 실시양태에서, 재구성 후의 단백질 농도는 약 75 mg/ml이다. 한 실시양태에서, 재구성 후의 단백질 농도는 약 50 mg/ml이다. 한 실시양태에서, 재구성 후의 단백질 농도는 약 25 mg/ml이다. 높은 단백질 농도는 재구성된 제제의 피하 전달이 의도되는 경우에 특히 유용하다. 그러나, 다른 투여 경로, 예컨대, 정맥내 투여를 위해, 더 낮은 단백질 농도가 바람직할 수 있다 (예컨대, 약 5-50 mg/mL).
재구성은 비록 원하는 경우에는 다른 온도도 사용될 수 있지만, 확실하게 완전히 수화될 수 있도록 하기 위해 일반적으로는 약 25℃의 온도에서 수행된다. 재구성에 필요한 시간은, 예컨대, 희석제의 유형, 부형제(들)의 양 및 단백질에 좌우될 것이다. 예시적인 희석제로는 멸균수, 주사용 정균수 (BWFI), pH 완충 용액 (예컨대, 포스페이트 완충처리된 용액), 멸균성 식염수, 링거 용액 또는 덱스트로스 용액을 포함한다.
액체 제약 조성물
액체 항체 제제는 액체 형태의 약물 물질 (예컨대, 항-인간화 PD-1) (예컨대, 수성 제약 제제 중의 펨브롤리주맙)을 취하고, 정제 프로세스의 마지막 단계로서 그의 완충제를 원하는 완충제로 교환함으로써 제조될 수 있다. 본 실시양태에서는 동결건조 단계가 없다. 최종 완충제 중 약물 물질은 원하는 농도로 농축된다. 부형제, 예컨대, 수크로스및 폴리소르베이트 80이 약물 물질에 첨가되고, 적절한 완충제를 사용하여 최종 단백질 농도로 희석한다. 제제화된 최종 약물 물질을 0.22 ㎛ 필터를 사용하여 여과하고, 최종 용기 (예컨대, 유리 바이알) 내로 충전한다.
III. 사용 방법
본 발명은 또한 대상체에게 유효량의, 본 발명의 제제 중 임의의 것; 즉, 본원에 기술된 임의의 제제를 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 암을 치료하는 방법에 관한 것이다. 본 방법의 일부 구체적인 실시양태에서, 제제는 정맥 투여를 통해 대상체에게 투여된다. 다른 실시양태에서, 제제는 피하 투여를 통해 대상체에게 투여된다. 한 실시양태에서, 본 발명은 인간 환자에게 본 발명의 임의의 제제를 투여하는 단계를 포함하는, 인간 환자에서 암을 치료하는 방법을 포함한다.
본 발명의 방법 중 임의의 것에서, 암은 흑색종, 폐암, 두부경부암, 방광암, 유방암, 위장암, 다발성 골수종, 간세포암, 림프종, 신암, 중피종, 난소암, 식도암, 항문암, 담도암, 결장직장암, 자궁경부암, 갑상선암, 침샘암, 전립선암 (예컨대, 호르몬 불응성 전립선 선암종), 췌장암, 결장암, 식도암, 간암, 갑상선암, 교모세포종, 신경교종, 및 다른 신생물성 악성 종양으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
일부 실시양태에서, 폐암은 비소세포 폐암이다.
대안적 실시양태에서, 폐암은 소세포 폐암이다.
일부 실시양태에서, 림프종은 호지킨 림프종이다.
다른 실시양태에서, 림프종은 비호지킨 림프종이다. 특정 실시양태에서, 림프종은 종격동 큰 B 세포 림프종이다.
일부 실시양태에서, 유방암은 삼중 음성 유방암이다.
추가 실시양태에서, 유방암은 ER+/HER2- 유방암이다.
일부 실시양태에서, 방광암은 요로암이다.
일부 실시양태에서, 두부경부 암은 비인두암이다. 일부 실시양태에서, 암은 갑상선암이다. 다른 실시양태에서, 암은 침샘암이다. 다른 실시양태에서, 암은 두부경부 편평세포 암종이다.
한 실시양태에서, 본 발명은 인간 환자에게 본 발명의 제제를 투여하는 단계를 포함하는, 인간 환자에서 전이성 비소세포 폐암 (NSCLC)을 치료하는 방법을 포함한다. 구체적인 실시양태에서, 환자는 PD-L1 발현율이 높은 종양 [(종양 비율 점수 (TPS) ≥50%)]을 앓고 있고, 이전에 백금 함유 화학요법으로 치료받은 적이 없는 환자이다. 다른 실시양태에서, 환자는 PD-L1 발현을 보이는 종양 (TPS ≥1%)을 앓고 있고, 이전에 백금 함유 화학요법으로 치료받은 환자이다. 또 다른 실시양태에서, 환자는 PD-L1 발현을 보이는 종양 (TPS ≥1%)을 앓고 있고, 이전에 백금 함유 화학요법으로 치료받은 적이 없는 환자이다. 구체적인 실시양태에서, 환자는 백금 함유 화학요법을 받았을 때, 또는 그 이후에 질환 진행을 보인 환자이다. 특정 실시양태에서, PD-L1 TPS는 FDA 승인 검사에 의해 측정된다. 특정 실시양태에서, 환자의 종양은 EGFR 또는 ALK 게놈 이상을 보이지 않는 것이다. 특정 실시양태에서, 환자의 종양은 EGFR 또는 ALK 게놈 이상을 보이고, 항-PD-1 항체, 또는 그의 항원 결합 단편을 받기 전, EGFR 또는 ALK 이상(들)에 대한 치료를 받았을 때, 또는 그 이후에 질환 진행을 보인 환자이다.
일부 실시양태에서, 암은 높은 수준의 현미부수체 불안정성 (MSI-H)의 전이성 결장직장암이다.
일부 실시양태에서, 암은 높은 수준의 현미부수체 불안정성 (MSI-H)의 전이성 결장직장암이다.
일부 실시양태에서, 암은 높은 수준의 현미부수체 불안정성 (MSI-H)의 고형 종양이다.
일부 실시양태에서, 암은 돌연변이 부담이 높은 고형 종양이다.
일부 실시양태에서, 암은 흑색종, 비소세포 폐암, 재발성 또는 불응성 고전적 호지킨 림프종, 두부경부 편평세포 암종, 요로암, 식도암, 위암, 및 간세포암으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
상기 치료 방법의 다른 실시양태에서, 암은 혈액암이다. 특정 실시양태에서, 혈액암은 급성 림프모구성 백혈병 (ALL), 급성 골수성 백혈병 (AML), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 만성 골수성 백혈병 (CML), 미만성 큰 B 세포 림프종 (DLBCL), EBV-양성 DLBCL, 원발성 종격동 큰 B 세포 림프종, T 세포/조직구 우월성 큰 B 세포 림프종, 소포성 림프종, 호지킨 림프종 (HL), 외투막 세포 림프종 (MCL), 다발성 골수종 (MM), 골수성 세포 백혈병-1 단백질 (Mcl-1), 골수이형성 증후군 (MDS), 비호지킨 림프종 (NHL), 또는 소림프구성 림프종 (SLL)이다.
생검 또는 수술 물질 내의 종양-침윤성 림프구의 존재와 관련하여 개선된 무질환 생존 및 전체 생존을 나타내는 악성 종양, 예컨대, 흑색종, 결장직장암, 간암, 신장암, 위/식도암, 유방암, 췌장암 및 난소암이 본원에 기술된 방법 및 치료에 포함된다. 상기 암 하위유형은 T 림프구에 의한 면역 제어에 대해 감수성인 것으로 공지되어 있다. 추가로, 본원에 기술된 항체를 사용하여 성장이 억제될 수 있는 불응성 또는 재발성 악성종양도 포함된다.
본원에 기술된 제제를 이용한 치료가 이로울 수 있는 추가적인 암으로는 예를 들어, 카포시 육종, 간암, 비인두암, 림프종, 자궁경부암, 외음부암, 항문암, 음경암 및 구강암에 대해 인과 관계로 관련된 것으로 공지된 인간 면역결핍 바이러스, 간염 바이러스 클래스 A, B 및 C, 엡스타인 바(Epstein Barr) 바이러스, 인간 유두종 바이러스와 같은 바이러스로의 지속적인 감염과 연관된 것들이 포함된다.
제제는 감염 및 감염성 질환을 예방 또는 치료하는 데에도 또한 사용될 수 있다. 따라서, 본 발명은 포유동물 대상체에게 유효량의 본 발명의 제제를 투여하는 단계를 포함하는, 포유동물 대상체에서 만성 감염을 치료하는 방법을 제공한다. 본 방법의 일부 구체적인 실시양태에서, 제제는 정맥내 투여를 통해 대상체에게 투여된다. 다른 실시양태에서, 제제는 피하 투여에 의해 대상체에게 투여된다.
상기 작용제는 병원체, 독소 및 자기-항원에 대한 면역 반응을 자극시키도록 단독으로, 또는 백신과 함께 조합하여 사용될 수 있다. 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 인간 면역결핍 바이러스, 간염 바이러스 클래스 A, B 및 C, 엡스타인 바 바이러스, 인간 시토메갈로바이러스, 인간 유두종 바이러스, 및 헤르페스 바이러스를 포함하나, 이에 제한되지 않는, 인간에게 감염성인 바이러스에 대한 면역 반응을 자극시키는 데 사용될 수 있다. 길항제 항-PD-1 항체 또는 항체 단편은 박테리아 또는 진균 기생물, 및 다른 병원체로의 감염에 대한 면역 반응을 자극시키는 데 사용될 수 있다. B형 및 C형 간염 및 HIV로의 바이러스 감염이 특히 만성 바이러스성 감염인 것으로 간주된다.
본 발명의 제제는 하나 이상의 "추가 치료제"와 함께 조합하여 환자에게 투여될 수 있다. 추가 치료제는 생체치료제 (VEGF, EGFR, Her2/neu, VEGF 수용체, 다른 성장 인자 수용체, CD20, CD40, CD-40L, OX-40, 4-1BB, 및 ICOS에 대한 항체를 포함하나, 이에 제한되지 않음), 면역원성 작용제 (예를 들어, 약독화된 암성 세포, 종양 항원, 항원 제시 세포, 예컨대, 종양 유래 항원 또는 핵산이 펄싱된 수지상 세포, 면역 자극 시토카인 (예를 들어, IL-2, IFNα2, GM-CSF), 및 예컨대, 제한하는 것은 아니지만, GM-CSF와 같은 면역 자극 시토카인을 코딩하는 유전자로 형질감염된 세포)일 수 있다.
상기 언급된 바와 같이, 본 발명의 방법의 일부 실시양태에서, 본 방법은 추가 치료제를 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 특정 실시양태에서, 추가 치료제는 항-LAG3 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 항-GITR 항체, 또는 그의 항원 결합 단편, 항-CTL4 항체, 또는 그의 항원 결합 단편, 항-CD27 항체 또는 그의 항원 결합 단편이다. 한 실시양태에서, 추가 치료제는 IL-12를 발현하는 뉴캐슬병 바이러스 벡터이다. 추가 실시양태에서, 추가 치료제는 디나시클립이다. 또 다른 추가 실시양태에서, 추가 치료제는 STING 효능제이다.
적합한 투여 경로로는 예를 들어, 근육내, 피하 뿐만 아니라, 경막내, 직접적인 뇌실내, 정맥내, 복강내 전달을 비롯한, 비경구 전달을 포함한다. 다양한 통상적인 방식으로, 예컨대, 복강내, 비경구, 동맥내 또는 정맥내 주사에 의해 약물을 투여할 수 있다. 용액의 부피가 제한되어야 하는 투여 모드 (예컨대, 피하 투여)의 경우, 동결건조된 제제는 고농도로 재구성될 수 있어야 한다.
추가 치료제의 투여량을 선택하는 것은 엔티티의 혈청 또는 조직 교체율, 증상 수준, 엔티티의 면역원성, 및 치료받는 개체 내의 표적 세포, 조직 또는 기관의 접근가능성을 비롯한 수개의 인자에 의존한다. 추가 치료제의 투여량은 허용가능한 수준의 부작용을 제공하는 양이어야 한다. 따라서, 각 추가 치료제 (예컨대, 생체치료제 또는 화학요법제)의 투약량 및 투야 빈도는 부분적으로는 특정 치료제, 치료되는 암의 중증도, 및 환자 특징에 의존할 것이다. 항체, 시토카인, 및 소분자의 적절한 용량을 선택하는 것에서의 가이던스가 이용가능하다. 예컨대, 문헌 [Wawrzynczak (1996) Antibody Therapy, Bios Scientific Pub. Ltd, Oxfordshire, UK]; [Kresina (ed.) (1991) Monoclonal Antibodies, Cytokines and Arthritis, Marcel Dekker, New York, NY]; [Bach (ed.) (1993) Monoclonal Antibodies and Peptide Therapy in Autoimmune Diseases, Marcel Dekker, New York, NY]; [Baert et al. (2003) New Engl . J. Med . 348:601-608]; [Milgrom et al. (1999) New Engl. J. Med . 341:1966-1973]; [Slamon et al. (2001) New Engl . J. Med . 344:783-792]; [Beniaminovitz et al. (2000) New Engl . J. Med . 342:613-619]; [Ghosh et al. (2003) New Engl . J. Med . 348:24-32]; [Lipsky et al. (2000) New Engl. J. Med . 343:1594-1602]; [Physicians' Desk Reference 2003 (Physicians' Desk Reference, 57th Ed)]; [Medical Economics Company; ISBN: 1563634457; 57th edition (November 2002)]을 참조한다. 적절한 투여량 요법은 예컨대, 치료에 영향을 미치는 것으로 관련 기술분야에 공지되어 있거나, 의심되거나, 또는 치료에 영향을 미칠 것으로 예측되는 파라미터 또는 인자를 사용하여, 임상의에 의해 결정될 수 있고, 이는 예를 들어, 환자의 임상 병력 (예컨대, 기존 요법), 치료하고자 하는 암의 유형 및 병기, 및 조합 요법에서 치료제 중 하나 이상의 것에 대한 반응의 바이오마커에 의존할 것이다
다양한 참고문헌이 추가 치료제에 대한 제약상 허용되는 담체 또는 부형제의 선택을 용이하게 하는 데 이용가능하다. 예컨대, 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences and U.S . Pharmacopeia: National Formulary, Mack Publishing Company, Easton, PA (1984)]; [Hardman et al. (2001) Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, McGraw-Hill, New York, NY]; [Gennaro (2000) Remington : The Science and Practice of Pharmacy, Lippincott, Williams, and Wilkins, New York, NY]; [Avis et al. (eds.) (1993) Pharmaceutical Dosage Forms: Parenteral Medications, Marcel Dekker, NY; Lieberman, et al. (eds.) (1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets, Marcel Dekker, NY]; [Lieberman et al. (eds.) (1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Disperse Systems, Marcel Dekker, NY]; [Weiner and Kotkoskie (2000) Excipient Toxicity and Safety, Marcel Dekker, Inc., New York, NY]을 참조한다.
제약 항체 제제는 연속 주입에 의해, 또는 예컨대, 1일, 주당 1-7회, 1주일, 2주일, 3주일, 1개월, 2개월 등의 간격의 투약으로 투여될 수 있다. 바람직한 투약 프로토콜은 유의적인 비바람직한 부작용을 피하는 최대 용량 또는 투약 빈도를 수반하는 것이다. 총 1주 용량은 일반적으로 적어도 0.05 ㎍/kg (체중), 0.2 ㎍/kg (체중), 0.5 ㎍/kg (체중), 1 ㎍/kg (체중), 10 ㎍/kg (체중), 100 ㎍/kg (체중), 0.2 mg/kg (체중), 1.0 mg/kg (체중), 2.0 mg/kg (체중), 10 mg/kg (체중), 25 mg/kg (체중), 50 mg/kg (체중) 또는 그 초과이다. 예컨대, 문헌 [Yang et al. (2003) New Engl . J. Med . 349:427-434]; [Herold et al. (2002) New Engl . J. Med. 346:1692-1698]; [Liu et al. (1999) J. Neurol . Neurosurg . Psych. 67:451-456]; [Portielji et al. (20003) Cancer Immunol . Immunother . 52:133-144]을 참조한다. 소분자 치료제, 예컨대, 펩티드 모방체, 천연 생성물, 또는 유기 화학물질의 원하는 용량은 몰/kg 기준으로 항체 또는 폴리펩티드에 대한 것과 대략적으로 동일하다.
본 발명의 실시양태는 또한 (a) 요법 (예컨대, 인체에서의 요법); (b) 약물; (c) 항종양 면역 반응 유도, 또는 그의 증가 유도; (d) 환자에서 하나 이상의 종양 마커의 개수 감소; (e) 종양 또는 혈액암의 성장 중단 또는 지연; (f) PD-1 관련 질환 또는 항-TIGIT 관련 질환의 진행 중단 또는 지연; (g) 암 진행 중단 또는 지연; (h) PD-1 관련 질환 또는 항-TIGIT 질환의 안정화; (i) 종양 세포의 성장 또는 생존 억제; (j) 하나 이상의 암성 병변 또는 종양 제거, 또는 그의 크기 축소; (k) PD-1 관련 질환 또는 항-TIGIT 질환의 진행, 발병 또는 중증도 감소; (l) PD-1 관련 질환 또는 항-TIGIT 관련 질환, 예컨대, 암의 임상 증상의 중증도 또는 지속 기간 감소, (m) 유사한 비치료 환자에서의 예상 생존 기간 대비 환자의 생존 기간 연장, n) 암성 병태 또는 다른 PD-1 관련 질환 또는 항-TIGIT 관련 질환의 완전 또는 부분 관해 유도, o) 암 치료; 또는 p) 만성 감염 치료에 (i) 사용, (ii) 그를 위한 약물 또는 조성물로서의 사용, 또는 (iii) 그를 위한 약물의 제조에의 사용을 위한, 본원에 기술된 하나 이상의 생물학적 제제를 포함한다.
일반 방법
분자 생물학의 표준 방법은 문헌 [Sambrook, Fritsch and Maniatis (1982 & 1989 2nd Edition, 2001 3rd Edition) Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY]; [Sambrook and Russell (2001) Molecular Cloning, 3 rd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY]; [Wu (1993) Recombinant DNA, Vol. 217, Academic Press, San Diego, CA)]에 기술되어 있다. 표준 방법은 또한 박테리아 세포에서의 클로닝 및 DNA 돌연변이유발 (Vol 1), 포유동물 세포 및 효모에서의 클로닝 (Vol 2), 당접합체 및 단백질 발현 (Vol 3), 및 생물정보학 (Vol 4)을 기재하는 문헌 [Ausbel, et al. (2001) Current Protocols in Molecular Biology, Vols.1-4, John Wiley and Sons, Inc. New York, NY]에 제시되어 있다.
면역침전, 크로마토그래피, 전기영동, 원심분리, 및 결정화를 비롯한, 단백질 정제를 위한 방법이 기술되어 있다 (Coligan, et al. (2000) Current Protocols in Protein Science, Vol. 1, John Wiley and Sons, Inc., New York). 화학적 분석, 화학적 변형, 번역후 변형, 융합 단백질 제조, 단백질의 글리코실화가 기술되어 있다 (예컨대, 문헌 [Coligan, et al. (2000) Current Protocols in Protein Science, Vol. 2, John Wiley and Sons, Inc., New York]; [Ausubel, et al. (2001) Current Protocols in Molecular Biology, Vol. 3, John Wiley and Sons, Inc., NY, NY, pp. 16.0.5-16.22.17]; [Sigma-Aldrich, Co. (2001) Products for Life Science Research, St. Louis, MO; pp. 45-89]; [Amersham Pharmacia Biotech (2001) BioDirectory, Piscataway, N.J., pp. 384-391] 참조). 폴리클로날 및 모노클로날 항체의 제조, 정제, 및 단편화가 기술되어 있다 ([Coligan, et al. (2001) Current Protocols in Immunology, Vol. 1, John Wiley and Sons, Inc., New York]; [Harlow and Lane (1999) Using Antibodies, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY]; [Harlow and Lane, 상기 문헌 동일]). 리간드/수용체 상호작용을 특징화하기 위한 표준 기술이 이용가능하다 (예컨대, 문헌 [Coligan, et al. (2001) Current Protocols in Immunology, Vol. 4, John Wiley, Inc., New York] 참조).
모노클로날, 폴리클로날, 및 인간화 항체가 제조될 수 있다 (예컨대, [Sheperd and Dean (eds.) (2000) Monoclonal Antibodies, Oxford Univ. Press, New York, NY]; [Kontermann and Dubel (eds.) (2001) Antibody Engineering, Springer-Verlag, New York; Harlow and Lane (1988) Antibodies A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, pp. 139-243]; [Carpenter, et al. (2000) J. Immunol. 165:6205; He, et al. (1998) J. Immunol. 160:1029]; [Tang et al. (1999) J. Biol. Chem. 274:27371-27378]; [Baca et al. (1997) J. Biol . Chem. 272:10678-10684]; [Chothia et al. (1989) Nature 342:877-883]; [Foote and Winter (1992) J. Mol . Biol . 224:487-499]; 미국 특허 번호 6,329,511 참조).
인간화에 대한 대안은 파지 상에 디스플레이된 인간 항체 라이브러리 또는 트랜스제닉 마우스의 인간 항체 라이브러리를 사용하는 것이다 ([Vaughan et al. (1996) Nature Biotechnol. 14:309-314]; [Barbas (1995) Nature Medicine 1:837-839]; [Mendez et al. (1997) Nature Genetics 15:146-156]; [Hoogenboom and Chames (2000) Immunol . Today 21:371-377]; [Barbas et al. (2001) Phage Display: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York]; [Kay et al. (1996) Phage Display of Peptides and Proteins: A Laboratory Manual, Academic Press, San Diego, CA]; [de Bruin et al. (1999) Nature Biotechnol . 17:397-399]).
항원의 정제는 항체의 생성에 필수적이지는 않다. 동물은 관심 항원을 보유하는 세포로 면역화될 수 있다. 이어서, 비장세포는 면역화된 동물로부터 단리될 수 있고, 비장세포는 골수종 세포주와 융합되어 하이브리도마를 생성할 수 있다 (예컨대, 문헌 [Meyaard et al. (1997) Immunity 7:283-290]; [Wright et al. (2000) Immunity 13:233-242]; [Preston et al., 상기 문헌 동일]; [Kaithamana et al. (1999) J. Immunol . 163:5157-5164] 참조).
항체는, 예컨대, 소형 약물 분자, 효소, 리포솜, 폴리에티렌 글리콜 (PEG)에 접합될 수 있다. 항체는 치료, 진단, 키트 또는 다른 목적에 유용하고, 예컨대, 염료, 방사성동위원소, 효소, 또는 금속, 예컨대, 콜로이드성 금에 커플링된 항체를 포함한다 (예컨대, 문헌 [Le Doussal et al. (1991) J. Immunol. 146:169-175]; [Gibellini et al. (1998) J. Immunol. 160:3891-3898]; [Hsing and Bishop (1999) J. Immunol. 162:2804-2811]; [Everts et al. (2002) J. Immunol. 168:883-889] 참조).
형광 활성화 세포 분류 (FACS)를 비롯한, 유세포 분석법에 대한 방법이 이용가능하다 (예컨대, 문헌 [Owens, et al. (1994) Flow Cytometry Principles for Clinical Laboratory Practice, John Wiley and Sons, Hoboken, NJ]; [Givan (2001) Flow Cytometry , 2 nd ed.]; [Wiley-Liss, Hoboken, NJ; Shapiro (2003) Practical Flow Cytometry, John Wiley and Sons, Hoboken, NJ] 참조). 예컨대, 진단 시약으로서 사용하기 위한, 핵산 프라이머 및 프로브를 비롯한, 핵산, 폴리펩티드, 및 항체를 변형시키는 데 적합한 형광 시약이 이용가능하다 ([Molecular Probesy (2003) Catalogue, Molecular Probes, Inc., Eugene, OR]; [Sigma-Aldrich (2003) Catalogue, St. Louis, MO]).
면역계 조직학의 표준 방법이 기술되어 있다 (예컨대, 문헌 [Muller-Harmelink (ed.) (1986) Human Thymus: Histopathology and Pathology, Springer Verlag, New York, NY]; [Hiatt, et al. (2000) Color Atlas of Histology, Lippincott, Williams, and Wilkins, Phila, PA]; [Louis, et al. (2002) Basic Histology: Text and Atlas, McGraw-Hill, New York, NY] 참조).
예컨대, 항원 단편, 리더 서열, 단백질 폴딩, 기능적 도메인, 글리코실화 부위, 및 서열 정렬을 결정하기 위한 소프트웨어 패키지 및 데이터베이스가 이용가능하다 (예컨대, 진뱅크(GenBank), 벡터 NTI® 스위트(Vector NTI® Suite) (인포르맥스, 인크(Informax, Inc: 미국 메릴랜드주 베데스다)); GCG 위스콘신 패키지(GCG Wisconsin Package) (악셀리스, 인크.(Accelrys, Inc.: 미국 캘리포니아주 샌디에고); 데시퍼(DeCypher)® (타임로직 코포레이션(TimeLogic Corp.: 미국 네바다주 크리스탈 베이); 문헌 [Menne, et al. (2000) Bioinformatics 16: 741-742]; [Menne, et al. (2000) Bioinformatics Applications Note 16:741-742]; [Wren, et al. (2002) Comput . Methods Programs Biomed . 68:177-181]; [von Heijne (1983) Eur. J. Biochem . 133:17-21]; [von Heijne (1986) Nucleic Acids Res. 14:4683-4690] 참조).
분석 방법
제품 안정성을 평가하기에 적합한 분석 방법으로는 크기 배제 크로마토그래피 (SEC), 동적 광 산란 시험 (DLS), 시차 주사 열량계 (DSC), 이소-asp 정량화, 효능, 340 nm에서의 UV, UV 분광법 및 FTIR을 포함한다. SEC ([J. Pharm. Scien., 83:1645-1650, (1994)]; [Pharm. Res., 11:485 (1994)]; [J. Pharm. Bio. Anal., 15:1928 (1997)]; [J. Pharm. Bio. Anal., 14:1133-1140 (1986)])는 제품 내의 단량체 비율(%)을 측정하고, 가용성 응집체의 양에 대한 정보를 제공한다. DSC ([Pharm. Res., 15:200 (1998)]; [Pharm. Res., 9:109 (1982)])는 단백질 변성 온도 및 유리 전이 온도에 대한 정보를 제공한다. DLS (American Lab., November (1991))는 평균 확산 계수를 측정하고, 가용성 및 불용성 응집체의 양에 대한 정보를 제공한다. 340 nm에서의 UV는 340 nm에서의 산란된 광 강도를 측정하고, 가용성 및 불용성 응집체의 양에 관한 정보를 제공한다. UV 분광법은 278 nm에서의 흡광도를 측정하고, 단백질 농도에 대한 정보를 제공한다. FTIR ([Eur. J. Pharm. Biopharm., 45:231 (1998)]; [Pharm. Res., 12:1250 (1995)]; [J. Pharm. Scien., 85:1290 (1996)]; [J. Pharm. Scien., 87:1069 (1998)])은 아미드 1 영역에서의 IR 스펙트럼을 측정하고, 단백질 2차 구조에 대한 정보를 제공한다.
이소퀀트 이소아스파르테이트 검출 시스템(Isoquant Isoaspartate Detection System) (프로메가(Promega))을 사용하여 샘플 내의 이소-asp 함량을 측정한다. 키트는 단백질 이소아스파르틸 메틸트랜스퍼라제 (PIMT) 효소를 사용하여 표적 단백질 내의 이소아스파르트산 잔기의 존재를 특이적으로 검출한다. PIMT는 알파-카르복실 위치에서 메틸기를 S-아데노실-L-메티오닌으로부터 이소아스파르트산으로 전달하는 것을 촉매화하여, 프로세스에서 S-아데노실-L-호모시스테인 (SAH)이 생성된다. 이는 상대적으로 소분자이며, 키트 내에 제공되는 SAH HPLC 표준을 사용하여 역상 HPLC에 의해 일반적으로 단리 및 정량화될 수 있다.
항체가 그의 항원에 결합할 수 있는 그의 능력에 의해 항체의 효능 또는 바이오아이덴티티(bioidentity)를 측정할 수 있다. 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 임의의 방법, 예를 들어, 면역검정법, 예컨대, ELISA (효소-결합 면역흡착 검정법)에 의해 항체의 그의 항원에의 특이적인 결합을 정량화할 수 있다.
본원에서 언급된 모든 공개문헌은 본 발명과 관련하여 사용될 수 있는 방법 및 물질을 기술 및 개시하기 위한 목적으로 참조로 포함된다.
첨부 도면을 참조로 하여 본원에서 본 발명의 상이한 실시양태를 기술하지만, 본 발명은 상기 정확한 실시양태로 제한되는 것은 아니며, 그 안에서 첨부된 청구범위에서 정의된 본 발명의 범주 또는 정신으로부터 벗어남 없이 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 다양하게 변경 및 변형될 수 있다는 것을 이해하여야 한다.
실시예
실시예 1
항- TIGIT 제제 완충제 스크리닝
(1) 생물리적/생화학적으로 영향을 받기 쉬운 성질; (2) 예비-제제화 (pH, 염 및 완충제) 조건 및 (3) 전체 플랫폼 제제와의 양립성을 평가하기 위해 각 항-TIGIT 항체는 하기 CDR: 서열식별번호 108의 HCDR1, 서열식별번호 154의 HCDR2, 서열식별번호 110의 HCDR3, 서열식별번호 111의 LCDR1, 서열식별번호 112의 LCDR2, 및 서열식별번호 113의 LCDR3을 가지는 3가지 항-TIGIT 항체에 대해 고처리량 제제 개발 연구를 수행하였다. 더욱 큰 응집체에 대한 대용물로서 혼탁도 (A350)에 대해 UV/Vis 분광 광도법에 의해, 고분자량 종의 형성을 검출하기 위해 크기 배제 크로마토그래피 (UP-SEC)에 의해, 스트레스가 분자 표면의 전하 분포에 미치는 효과를 측정하기 위해 모세관 등전 포커싱 (cIEF)에 의해, 중쇄 또는 경쇄의 단백질분해 절단을 검출하기 위해 소듐 도데실 술페이트 모세관 전기영동 (CE-SDS), 육안으로 보이지 않는 응집체를 검출하기 위해 육안으로 보이지 않는 입자 분석에 의해 샘플을 분석하였다.
고처리량 제제 스크린은 3가지 완충제 종: pH 값이 5.0 내지 6.2 범위인 아세테이트 완충제, pH 값이 5.6 내지 6.8 범위인 시트레이트 완충제 및 pH 값이 5.0 내지 6.8 범위인 L-히스티딘 완충제의 선택으로 제제화된 1 mg/mL 항-TIGIT 항체로 구성되었다. 따라서, 5.0 내지 6.8 범위의 pH 값 및 0-150 mM NaCl의 이온 강도에 대해 조사하였다. 50℃에서 10일 동안 샘플에 스트레스를 가하고, 시차 주사 형광법 (DSF)을 이용하여 열 안정성, 크기 배제 크로마토그래피 (UP-SEC)를 이용하여 콜로이드성 안정성, 구아바(Guava) (육안으로 보이지 않는 것에 관한 특징화 검정법에 기반한 유세포 분석법)를 이용한 응집 성향, 혼탁도 (A350 측정), 전하 변이체 프로파일 (cIEF), 및 캘리퍼를 이용하여 단편화 프로파일에 대해 분석하였다.
연구로부터 얻을 결과에 기초하여, 단백질에 최대 안정성을 부여한 제제는 pH 범위가 5.6 내지 6.2인 10 mM L-히스티딘이었다. pH 범위가 5.6 내지 6.2인 10 mM L-히스티딘은 UP-SEC에 의해 모니터링된 바, (다른 완충제 및 pH 조건하의 -2.0 내지 -5.0% 범위의 SEC 메인(SEC Main)과 비교하여) -1.63 내지 -1.85% 범위의 ΔSEC 메인을 보이는, 최소의 응집을 보였다 (데이터는 제시되지 않음). cIEF 프로파일은 주요 종 및 염기성 종의 상대적인 피크 면적의 감소를 나타내었고, 50℃에서 10일 경과 후 샘플에 대해 산성 변이체의 상대적인 피크 면적의 증가가 관찰되었다(cIEF 메인 -9.0 내지 -11.3% 범위) (데이터는 제시되지 않음). 승온에의 노출시 염기성 변이체의 감소 및 산성 변이체의 증가는 mAb에 대해 일반적으로 발생하는 것이다. 염 첨가는 연구된 조성물 전체에서 단백질의 안정성을 감소시켰다.
실시예 2
항- TIGIT 제제 pH 범위 연구
본 연구에서는 하기 CDR: 서열식별번호 108의 HCDR1, 서열식별번호 154의 HCDR2, 서열식별번호 110의 HCDR3, 서열식별번호 111의 LCDR1, 서열식별번호 112의 LCDR2, 및 서열식별번호 113의 LCDR3을 가지는 항-TIGIT 항체를 50 mg/mL 농도로 10 mM L-히스티딘 완충제 중에서 시험하였다. (안정제 및 비이온성 장성 개질제로서) 7% (w/v) 수크로스를 제제에 첨가하여 분자의 벌크 안정성을 증가시켰다. 항-TIGIT 항체를 10 mM L-히스티딘 완충제, 7% 수크로스 중 pH 5.5, pH 6.0 및 pH 6.5로 제제화하였다. 상기 제제의 안정성을 하기와 같이 평가하였다:
(1) 차광 상태에서 가속 열 및 보관 안정성 조건 (5℃, 25℃ 및 40℃에서 최대 6개월)하에서 분자의 안정성을 모니터링하였다.
(2) 냉동-해동 스트레스 및 교반 스트레스에 대한 안정성 연구도 수행하였다.
(3) 제제 중 PS-80의 농도를 사정하기 위해 다양한 농도의 폴리소르베이트 80 (PS-80)을 함유하는 제제에서 교반 연구를 수행하였다.
(4) 제제에서 L-메티오닌의 요건을 평가하기 위해 광 스트레스 연구를 수행하였다.
물질 및 방법
열 안정성 연구 (3개월)
50 mg/mL 항-TIGIT 항체를 10 mM L-히스티딘 완충제, 7% 수크로스, 0.2 mg/mL 폴리소르베이트 80 중 pH 5.5, pH 6.0 또는 pH 6.5로 제제화하였다. 생성된 제제를 멸균 여과하고, 2R 바이알에 충전시키고, 클로로부틸 스토퍼 마개로 막고, 실과 함께 알루미늄 캡으로 캡핑하였다. 5℃ (주변 습도), 25℃ (60% 상대 습도) 및 40℃/ (75% 상대 습도)에서 안정성 연구를 수행하였다. UP-SEC, HP-IEX, cIEF (선택 샘플), MFI, CE-SDS (비환원된 "NR" 및 환원된 "R"), 환원된 펩티드 맵핑 (MFI 및 환원된 펩티드 맵핑은 선택된 시점에 수행하였다)을 이용하여 샘플을 분석하였다.
10 mM L-히스티딘 완충제, 7% 수크로스, 0.2 mg/ml PS-80 중 pH 6.0으로 제제화된 25 mg/ml 항-TIGIT 항체에 대한 1개월 열 안정성 연구를 셋업하였다. 생성된 제제를 멸균 여과하고, 2R 바이알에 충전시키고, 클로로부틸 스토퍼 마개로 막고, 알루미늄 실로 캡핑하였다. 5℃ (주변 습도), 25℃ (60% 상대 습도) 및 40℃/ (75% 상대 습도)에서 1개월 동안 안정성 연구를 수행하였다. UP-SEC, cIEF, 및 CE-SDS (NR 및 R)를 이용하여 샘플을 분석하였다.
교반 안정성 연구
50 mg/mL 항-TIGIT 항체를 10 mM L-히스티딘 완충제, 7% 수크로스, pH 6.0에서 다양한 농도의 폴리소르베이트 80 (0, 0.1, 및 0.2 mg/mL)을 이용하여 제제화하였다. 생성된 제제를 멸균 여과하고, 2R 바이알에 충전시키고 (1.2 mL 충전 부피), 클로로부틸 스토퍼 마개로 막고, 실과 함께 알루미늄 캡으로 캡핑하였다. 샘플을 수평 위치에서 18-22℃에서 최대 7일 동안 300 RPM으로 교반시켰다. UP-SEC, MFI, CE-SDS (NR 및 R)를 이용하여 샘플을 분석하였다.
냉동-해동 안정성
50 mg/mL 항-TIGIT 항체를 10 mM L-히스티딘 완충제, 7% 수크로스, 0.2 mg/mL 폴리소르베이트 80, pH 6.0에서 제제화하였다. 생성된 제제를 멸균 여과하고, 2R 바이알에 충전시키고, 클로로부틸 스토퍼 마개로 막고, 실과 함께 알루미늄 캡으로 캡핑하였다. 샘플에 대해 -80℃ 내지 18-22℃에서 5회의 냉동-해동 사이클을 수행하였다 (냉동 조건에서 적어도 24시간 및 완전히 해동될 때까지 실온에서). UP-SEC, MFI, CE-SDS (NR 및 R)를 이용하여 샘플을 분석하였다.
광 스트레스 안정성 연구
초기 개발 연구에서는 광 스트레스하에서 쉽게 산화되는 것으로서, 노출된 트립토판 잔기 뿐만 아니라, 일부 메티오닌이 존재한다고 나타났다. ICH 광 스트레스 조건 가시광 (CWF, 0.1x ICH, 0.2x ICH, 0.5x ICH, 1x ICH)하의 L-메티오닌을 함유 및 함유하지 않는 제제 (제제 1: 10 mM L-히스티딘 완충제, 7% 수크로스, 0.2 mg/mL 폴리소르베이트 80, pH 6.0 및 제제 2: 10 mM L-히스티딘 완충제, 10 mM L-메티오닌, 7% 수크로스, 0.2 mg/mL 폴리소르베이트 80, pH 6.0)에서의 연구를 셋업하였다. UP-SEC, cIEF, CE-SDS (NR 및 R) 및 환원된 펩티드 맵핑을 이용하여 샘플을 분석하였다.
결과
열 안정성 결과
50 mg/ml 제제: 시험된 안정성을 나타내는 검정법에서 모두 5℃에서 모든 pH 값에서 3개월 경과 후에도 어떤 유의적인 변화도 관찰되지 않았다 (데이터는 제시되지 않음). 25℃ 및 40℃에서, pH 5.5 및 pH 6.0은 유사한 안정성을 보였고, 상기 조건은 pH 6.5보다 더욱 안정적이었다 (데이터는 제시되지 않음). 25℃ 및 40℃에서의 UP-SEC, CE-SDS (NR) 및 cIEF 검정법에 따르면, pH 6.5에서의 분해율은 pH 5.5 및 pH 6.0에서 관찰된 것보다 상대적으로 높았고, 또한 벤치마크 분자와 비교하였을 때에도 상대적으로 높았다. 그러므로, pH 범위가 5.5 내지 6.0 (pI 8.7)이 적합한 것으로 간주되었다. 모든 온도 및 pH 값에서 3개월 경과 후에도 항-TIGIT 항체에 대해 어떤 산화, 탈아미드화 또는 이성질체화도 관찰되지 않았다.
25 mg/ml 제제: 시험된 검정법 모두 25℃ 및 40℃에서 분해가 관찰되었다. 분해율은 50 mg/ml 조건과 유사한 것으로 나타났다 (상기 참조).
교반 안정성 연구
폴리소르베이트 80을 함유하지 않은 제제에서는 7일 종료 시점에 육안으로 관찰되는 입자가 관찰되었다. 육안으로 보이지 않는 입자 분석 결과, 0.2 mg/mL 농도의 폴리소르베이트 80을 함유한 제제에서 10 ㎛ 이상의 입자가 유의적으로 감소된 것으로 나타났다. 다른 검정법을 사용하였을 때에는 샘플 간의 유의적인 차이는 관찰되지 않았다.
냉동-해동 안정성
시험된 모든 검정법에서 5회의 냉동-해동 사이클 이후 분자의 안정성에서 어떤 변화도 관찰되지 않았다.
광 스트레스 안정성 연구
UP-SEC, cIEF, CE-SDS (NR 및 R)에 의해 시험하였을 때, 두 제제 샘플 모두 0.5x ICH 이상으로 광 스트레스에 노출시킨 경우, 분해가 관찰되었다. 0.5x ICH 미만으로 셋업된 조건에서는 두 제제 모두 유의적인 분해를 보이지 않았다. 0.5x 이상의 광 스트레스 조건하에서의 환원된 펩티드 맵핑 데이터는 트립토판 및 메티오닌 잔기의 산화를 보였다. 제제 중 10 mM L-메티오닌은 메티오닌 잔기의 산화 수준은 감소시켰지만, 트립토판 산화 수준에는 어떤 영향도 미치지 않았다.
결론
상기 결과에 따르면, 10 mM L-히스티딘 완충제, 10 mM L-메티오닌, 7% 수크로스, 0.2 mg/mL 폴리소르베이트 80 pH 5.5-6.0이 안정성을 부여하여 냉장 조건하에서의 저장 수명을 지원하는 데 적절한 것으로 간주된다.
실시예 3
추가의 pH 연구
(5.0 내지 6.5 범위의) 상이한 pH의 6개의 10 mM 히스티딘 완충제 중에서 하기 CDR: 서열식별번호 108의 HCDR1, 서열식별번호 154의 HCDR2, 서열식별번호 110의 HCDR3, 서열식별번호 111의 LCDR1, 서열식별번호 112의 LCDR2, 및 서열식별번호 113의 LCDR3을 가지고, IgG1 백본 상에 있는 항-TIGIT 항체를 제제화하였다. 2~8℃, 25℃ 및 40℃에서 8주 동안에 걸쳐 상이한 제제에서의 열 안정성을 연구하였다.
Figure pct00037
10 mM L-히스티딘 완충제를 10 mM L-히스티딘-HCl 완충제로 적정함으로써 상이한 pH (5.0~6.5)의 히스티딘 완충제를 제조하였다. 항-TIGIT 항체에 대해 4℃ 및 4500 rpm~5000 rpm (각 라운드에서 105~260 min)인 조건하에서 원심분리 장치를 사용하여 4 내지 5 라운드의 한외여과를 거쳐 상이한 pH를 가지는 6개의 상이한 히스티딘 완충제로 완충제 교환을 수행하였다. 완충제 교환 후, 특정량의 수크로스 및 폴리소르베이트 80 스톡액 (1%, w/w)을 상이한 pH의 용액에 첨가하여 표적량에 도달하게 만들고, 적절한 양의 상응하는 히스티딘 완충제도 첨가하여 항체 농도가 약 50 mg/ml가 되도록 조정하였다.
이어서, 0.22 ㎛ 막 필터를 이용하여 제제를 무균 방식으로 여과하였다. T0, 4주 (4W) 및 8주 (8W) 열 안정성 연구를 위해 3 mL의 각 샘플을 무균 방식으로 6 mL 유리 바이알 내로 충전시켰다. 2주 (2W) 열 안정성 연구를 위해 1 mL의 각 샘플을 무균 방식으로 6 mL 유리 바이알 내로 충전시켰다. 충전된 바이알을 충전 직후 마개로 막고, 크림핑하여 실링하였다. 상기의 모든 단계는 생물안전 후드에서 수행하였다. 상기 바이알을 커버 박스 안에 넣고, 열 안정성 연구를 위해 상이한 온도 조건에서 보관하였다.
결과 및 논의
모든 샘플의 외관은 모든 조건에서 4주 이내에는 동일하게 그대로 유지되었다.
그러나, 8주 경과 후, 2~8℃ 및 25℃에서의 샘플은 약간 누르스름한 색을 보였고, 40℃에서의 샘플은 더 진한 누르스름한 색을 보였다. 연구 기간 동안 모든 샘플은 약간 유백색을 띠었고, 육안으로 관찰되는 입자는 없었다. 연구 동안 모든 샘플의 단백질 농도의 상당한 변화는 관찰되지 않았다.
단량체의 백분율(%), 고분자량 종 (HMW), 및 후기 용출 피크 (LMW 종)의 백분율(%)도 측정하여 크기 배제 크로마토그래피 (SEC)에 의해 샘플의 콜로이드성 안정성을 순도에 대해 사정하였다. TSK겔(TSKGel) G3000SWXL 크기 배제 크로마토그래피 칼럼 (300 Х 7.8 mm, 5 ㎛)이 장착된 애질런트 1260 인피니티(Agilent 1260 Infinity) 시스템을 사용하여 분석을 수행하였다. 이동상은 50 mM PB, 300 mM NaCl, pH 7.0 ± 0.2이었고, 유속은 1.0 mL/min으로 설정하였다. 주입을 위해 샘플을 10 mg/mL로 희석시키고, UV 검출기를 이용하여 280 nm에서 검출하였다.
UPSEC 데이터는 하기 표에 제시되어 있다:
Figure pct00038
상기 표에 제시된 바와 같이, SEC 주요 피크(%)는 모든 샘플에서 2~8℃에서는 안정적이었지만, 25℃ 및 40℃에서는 주요 피크(%)의 유의적인 감소가 관찰되었다. 샘플에서의 주요 피크(%)의 감소율은 25℃에서보다 40℃에서 더 빨랐다. 40℃에서 8주 동안, HMW%는 pH 6.2 및 6.5 샘플에서는 더 큰 반면, LMW%는 pH 5.0 및 5.3 샘플에서 더 컸다.
제제의 화학적 안정성을 평가하기 위해, 모세관 등전 포커싱 (cIEF)을 수행하여 화학적 안정성을 평가하고, 시간 경과에 따른 전하 변이체 프로파일의 변화를 모니터링하였다. 간략하면, 20 ㎕ (2.0 mg/mL)의 참조 표준 또는 샘플을 0.5 ㎕의 pI 5.85 마커, 0.5 ㎕의 pI 9.77 마커, 1 ㎕의 파마라이트(Pharmalyte) 3-10, 0.5 ㎕의 파마라이트 5-8, 0.5 ㎕의 파마라이트 8-10.5, 35 ㎕의 1% 메틸 셀룰로스, 37.5㎕의 8 M 우레아와 혼합하였다. 최종 부피가 100 ㎕가 될 때까지 정제수를 첨가하였다. 이어서, 플루오로카본 코팅된 전체 칼럼 검출 모세관이 장착된 iCE-3 모세관 등전 포커싱 분석기를 이용하여 혼합물을 분석하였다. 2 단계: (1) 1.5 kV에서 1 min 동안, 및 (2) 3 kV에서 8 min 동안 포커싱을 수행하였다. 실험 동안, 자동 샘플러 트레이는 5℃로 유지시켰다.
산성 변이체, 주요 피크(%), 및 염기성 변이체(%) 수준을 평가하는 cIEF 데이터는 하기 표에 있다.
Figure pct00039
상기 표에서 알 수 있는 바와 같이, 2~8℃에서 cIEF 주요 피크(%), 산성 피크(%) 및 염기성 피크(%)는 모든 샘플에서 배교적 안정적이고, 유사하였다.
2~8℃에서, cIEF 주요 염기성 피크(%) 또한 증가하였고; pH 5.0 및 5.3 완충제 샘플에서의 증가가 다른 샘플에서의 증가보다 더 컸다. 25℃에서, 주요 피크(%), 산성 피크(%) 및 염기성 피크(%)는 처음 2주 이내의 기간 동안은 안정적이었지만, 4주 이후에는 약간 변화하였으며, 여기서, 주요 피크(%)는 감소된 반면, 산성 피크(%)는 그에 따라 증가되었다. 상이한 제제에서이 변화율은 유사하였다. 40℃에서는 심지어 2주 후에도 모든 제제에서 주요 피크(%)의 유의적인 감소, 및 산성 피크(%)의 주목할 만한 증가가 관찰되었지만, 변화 정도는 각 제제에서 유사하였다. 염기성 피크(%) 또한 증가하였고; pH 5.0 및 5.3 완충제 샘플에서의 증가가 다른 샘플에서의 증가보다 더 컸다.
제제의 순도를 평가하기 위해, 비환원된 캘리퍼 분석을 수행하였다. 간략하면, 구입한 샘플 완충제를 20 대 1의 부피비로 10% 소듐 도데실 술페이트 (SDS) 용액과 혼합하고, 100 mM N-에틸말레이미드 용액을 0.7 대 20의 부피비로 혼합 용액에 첨가하였다 (샘플 변성 용액으로 지칭). 표준 또는 샘플을 먼저 1 mg/mL로 희석하고, 2 ㎕의 희석된 표준 또는 샘플을 7 ㎕의 샘플 변성 용액과 혼합하였다. 혼합물을 70℃에서 10 min 동안 인큐베이션시켰다. 인큐베이션된 용액에 35 ㎕의 정제수를 첨가하고, 분석을 위해 42 ㎕의 혼합된 용액을 96 웰 플레이트로 옮겨 놓았다. HT 안티바디 아날리시스(HT Antibody Analysis) 200 검정법을 이용하여 랩칩(LabChip) GX II HT로 샘플 플레이트를 분석하였다.
순도(%)를 평가하는 비환원된 캘리퍼 분석 데이터는 하기 표에 제시되어 있다:
Figure pct00040
상기 표에 제시된 바와 같이 - 2~8℃에서 8주 동안, 각 제제의 캘리퍼_비환원된 순도는 비교적 안정적이었다. 25℃에서 8주 동안, 각 제제의 순도는 약간 감소하였다. 40℃에서, 순도는 유의적으로 감소하였으며, 특히, 샘플이 pH 5.0 및 5.3 완충제에 있을 때, 감소는 다른 것보다 훨씬 더 빠르게 나타났다. 연구 동안 분자 크기는 안정적이었다 (데이터는 제시되지 않음).
제제의 순도를 추가로 평가하기 위해, 환원된 캘리퍼 분석 또한 수행하였다. 간략하면, 구입한 샘플 완충제를 20 대 1의 부피비로 10% SDS 용액과 혼합하고, 1 M 디티오트레이톨 용액을 0.7 대 20의 부피비로 혼합 용액에 첨가하였다 (샘플 변성 용액으로 지칭). 표준 또는 샘플을 먼저 1 mg/mL로 희석하고, 2 ㎕의 희석된 표준 또는 샘플을 7 ㎕의 샘플 변성 용액과 혼합하였다. 혼합물을 70℃에서 10 min 동안 인큐베이션시켰다. 인큐베이션된 용액에 35 ㎕의 정제수를 첨가하고, 분석을 위해 42 ㎕의 혼합된 용액을 96 웰 플레이트로 옮겨 놓았다. HT 안티바디 아날리시스 200 검정법을 이용하여 랩칩 GX II HT로 샘플 플레이트를 분석하였다.
순도(%)를 평가하는 환원된 캘리퍼 분석 데이터는 하기 표에 제시되어 있다:
Figure pct00041
상기에서 알 수 있는 바와 같이, 2~8℃ 및 25℃에서 8주 동안, 각 제제의 캘리퍼_환원된 순도는 비교적 안정적이었다. 40℃에서는 모든 제제에서 캘리퍼_R 순도의 뚜렷한 감소가 관찰되었다. pH 5.0 완충제에서, 샘플의 순도 감소가 가장 크게 나타났고, 그 다음은 pH 5.3 완충제에서의 샘플이었다. pH 5.6, 5.9 및 6.2 완충제에서의 감소율은 유사하지만, 더 느린 것으로 나타났다. pH 6.5 완충제에서의 샘플의 순도는 가장 느린 감소를 보였다. 순도 감소는 가능하게는 본 연구에서 경쇄 (LC)%는 안정적인 반면, 중쇄 (HC)%는 감소하였기 때문인 것으로 보였다. 항체 경쇄 및 중쇄 크기는 8W 동안에 걸쳐 모든 샘플에서 안정적이었다.
실시예 4
메티오닌 무함유 항- TIGIT 제제
하기 CDR: 서열식별번호 108의 HCDR1, 서열식별번호 154의 HCDR2, 서열식별번호 110의 HCDR3, 서열식별번호 111의 LCDR1, 서열식별번호 112의 LCDR2, 및 서열식별번호 113의 LCDR3을 가지는 항-TIGIT 항체를 50 mg/mL 농도로 5.0 내지 6.5 범위의 pH하에 10 mM L-히스티딘 완충제, 7% 수크로스, 0.2 mg/mL PS-80 중에서 시험하였다. 차광 상태에서 가속 열 및 보관 안정성 조건하에서 분자의 안정성을 모니터링하였다. 열 안정성 이외에도, 냉동-해동 안정성, 교반 안정성, 광 스트레스 안정성 연구 또한 수행하였다. UP-SEC, cIEF, CE-SDS, MFI 및 환원된 펩티드 맵핑을 포함한 안정성을 시험하였다.
결과
열 안정성 연구 (8주)
시험된 안정성을 나타내는 검정법에서 모두 항-TIGIT 항체는 5℃에서 시험된 모든 영향을 받기 쉬운 성질에 있어서 안정적이었다. UP-SEC, 캘리퍼 CE-SDS, cIEF, MFI를 사용하여 관찰된 바, 분해율은 25℃에서보다 40℃에서 더 높았다. 25℃ 및 40℃에서는 하기 결과가 주목할 만하였다:
UP-SEC: 5.0 내지 6.5의 모든 pH 값에 대해 단량체(%) 감소가 관찰되었다. 더 낮은 pH 값 (5.0 및 5.3)에서의 주요 피크 감소는 주로 저분자량 (LMW) 종(%)의 증가 때문인 반면, pH 6.5에서의 단량체(%) 감소는 주로 고분자량 (HMW) 종(%)의 증가 때문이었다. 단량체(%) 감소는 가속 안정성 8주 후 pH 6.5에서 가장 높았다 (데이터는 제시되지 않음)
cIEF: 25℃ 및 40℃에서 5.0 내지 6.5의 모든 pH 값에 대해 cIEF 주요 피크 감소가 관찰되었다. 더 높은 pH 값 (6.3-6.5)에서의 주요 피크 감소는 주로 산성 변이체의 증가 때문인 반면, pH 5.0 및 5.3에서의 주요 피크 감소는 산성 변이체 뿐만 아니라, 염기성 변이체, 둘 모두의 증가 때문이었다 (데이터는 제시되지 않음).
CE-SDS (캘리퍼): 비환원된 CE-SDS 주요 피크 감소는 단편화된 종의 존재에 기인하여 주로 40℃에서 관찰되었다. 더 낮은 pH 값 (5.0 및 5.3)의 제제는 나머지 pH 값의 것보다 상대적으로 더 높은 단편화율을 보였다.
환원된 CE-SDS (캘리퍼) 분석 결과, 5℃ 및 25℃에서 8주 동안, 각 제제의 순도는 비교적 안정적이었다. 40℃에서는 모든 제제에서 순도의 뚜렷한 감소가 관찰되었다. pH 5.0 완충제에서, 샘플의 순도 감소가 가장 크게 나타났고, 그 다음은 pH 5.3 완충제에서의 샘플이었다.
MFI: 육안으로 보이지 않는 입자 증가는 40℃에서 모든 제제에서 관찰되었다. 육안으로 보이지 않는 입자의 증가는 완충제의 나머지와 비교하였을 때, pH 6.3 및 6.5에서 가장 높게 일어났다.
환원된 펩티드 맵핑: 확인된 영향을 받기 쉬운 성질 중에서, 초기 샘플과 비교하였을 때, M254만이 40℃에서 8주 경과 후 산화의 상대적인 증가를 보였다.
결론: 10 mM L-히스티딘 완충제, 7% 수크로스, 0.2 mg/mL PS-80, pH 5.6-6.3이 8주 동안의 항-TIGIT 항체의 보관 안정성을 적절하게 지원하였다.
교반 안정성 연구
(10 mM L-히스티딘 완충제, 7% 수크로스, pH 5.8 및 0, 0.1, 0.2 및 0.3 mg/mL PS-80 중 어느 하나 중의) 50 mg/mL 항-TIGIT 제제를 18-22℃에서 100 RPM으로 최대 7일 동안 가볍게 교반시켰을 때, 가용성 응집체, 하전된 변이체, 단편화 또는 육안으로 보이지 않는 입자에서는 어떤 변화도 관찰되지 않았다.
냉동-해동 안정성
(10 mM L-히스티딘 완충제, 7% 수크로스, 0.2 mg/mL PS-80, pH 5.8 중의) 50 mg/mL의 항-TIGIT 항체에 대해 5회의 냉동/해동 사이클을 수행하였을 때(-80℃에서 2시간 동안 냉동 및 실온에서 1시간 동안 해동), 가용성 응집체, 하전된 변이체, 단편화 또는 육안으로 보이지 않는 입자에서는 어떤 변화도 관찰되지 않았다.
광 스트레스 안정성 연구
50 mg/ml 제제에 48시간 동안 가시광 스트레스 (5000 lx)를 가하였다. 상기 조건하에, ~0.2x ICH 조건 (12H 광 노출)하에서는 가용성 응집체, 하전된 변이체, 육안으로 보이지 않는 입자, pH, 농도, 단편화 및 산화가 최소로 변하였다. ~1x (48H 광 노출) 조건하에서는 가용성 응집체, 산성 변이체, 단편화, 육안으로 보이지 않는 입자 및 메티오닌 산화가 증가하였다.
결론
상기 연구에 기초하면, 10 mM L-히스티딘 완충제, 7% 수크로스, 0.2 mg/mL PS-80 pH 5.3-6.3이 항-TIGIT 항체의 안정성을 지원할 수 있었다. 극심한 광 스트레스에의 노출시 메티오닌 산화가 관찰되었다. 실시예 2에서 언급된 바와 같이, 10 mM L-메티오닌 첨가가 메티오닌 잔기의 산화를 감소시킨다.
실시예 5
폴리소르베이트 80 스크리닝
하기 CDR: 서열식별번호 108의 HCDR1, 서열식별번호 154의 HCDR2, 서열식별번호 110의 HCDR3, 서열식별번호 111의 LCDR1, 서열식별번호 112의 LCDR2, 및 서열식별번호 113의 LCDR3을 가지는 항-TIGIT 항체를, (하기 제시되는 바와 같은) 상이한 농도의 PS-80과 함께 pH 5.8, 10 mM L-히스티딘 완충제로 이루어진 네개(4개)의 제제로 제제화하였다. 20℃에서 7일 기간에 걸쳐 교반 또는 비교반 조건에서 상이한 제제에서의 단백질 안정성을 연구하였다.
Figure pct00042
실험실 규모 TFF 완충제 교환 시스템을 이용하여 제제를 10 mM L-히스티딘 완충제 중에서 pH 5.8로 제제화하였다. 이어서, 폴리소르베이트 80 함량이 상이한, 제제화된 단백질을 0.22 ㎛ 막 필터를 이용하여 무균 방식으로 여과하였다. 이어서, 2 mL의 각 샘플을 무균 방식으로 6 mL 유리 바이알 내로 충전시켰다. 충전된 바이알을 충전 직후 마개로 막고, 크림핑하여 실링하였다. 샘플을 교반군 및 비교반군으로 나누었다. 교반군에서, 상기 바이알을 커버 박스로 옮겨 놓은 후, 이어서, 온도 조절 장치 진탕기 안에 넣고, 20℃에서 100 rpm으로 최대 7일 동안 교반하였다. 비교반군에서, 상기 바이알을 커버 박스로 옮겨 놓고, 온도 조절 장치 진탕기 안에 넣되, 단, 진탕기를 20℃에서 최대 7일 동안 움직이지 않고 그대로 유지시켰다.
3 및 7일 후, 교반 또는 비교반된 상이한 제제에서의 항체 안정성을 연구하였다.
고분자량 종 (HMW 또는 응집체), 단량체(%), 및 LMW (저분자량 종) 수준을 평가하는 UPSEC 데이터는 하기 표에 있다:
Figure pct00043
알 수 있는 바와 같이, 폴리소르베이트 80 함량이 교반 또는 비교반 조건하에서 SEC 순도에 유의적인 영향을 미치지는 못했다. 폴리소르베이트 80 함량이 최대 7일 동안 교반 또는 비교반 조건하에서 pI, cIEF 검정법에서 주요 피크, 산성 피크, 및 염기성 피크의 비율에 유의적인 영향을 미치지는 못했다.
Figure pct00044
하기 표에 제시된 바와 같이, 폴리소르베이트 80 함량이 최대 7일 동안 교반 또는 비교반에서 캘리퍼_비환원된 순도에 유의적인 영향을 미치지는 못했다.
Figure pct00045
환원된 캘리퍼 분석 또한 수행하였다. PS-80 함량이 7일 동안 교반 또는 비교반 조건하에서 캘리퍼_환원된 순도에 유의적인 영향을 미치지는 못했다.
Figure pct00046
육안으로 보이지 않는 입자를 측정하기 위해, 약 1500 ㎕의 각 샘플을 유리 바이알 용기로부터 취하고, 사용자의 매뉴얼에 따라 마이크로플로우 영상화 (MFI)에 의해 시험하였다. 1~2 ㎛, 2~ 5 ㎛, 5~10 ㎛, 10~25 ㎛ 및 >25 ㎛를 포함하는, 상이한 크기 범위의 입자 농도가 기록되었다 (하기 참조). 폴리소르베이트 80 함량이 최대 7일 동안 교반 또는 비교반 조건하에서 입자 농도에 유의적인 영향을 미치지는 못했다.
Figure pct00047
실시예 6
킬레이터 첨가
본 연구에서는 20 uM 또는 50 uM DTPA의 존재 또는 부재하에서 10 mM L-히스티딘 완충제 (pH=5.8), 0.02% (w/v) 폴리소르베이트 80, 10 mM L-메티오닌 ("L-Met"), 7% w/v 수크로스 중의 하기 CDR: 서열식별번호 108의 HCDR1, 서열식별번호 154의 HCDR2, 서열식별번호 110의 HCDR3, 서열식별번호 111의 LCDR1, 서열식별번호 112의 LCDR2, 및 서열식별번호 113의 LCDR3을 가지는 항-TIGIT 항체의 안정성을 비교하였다.
3개의 제제를 바이알 내로 충전시키고, 차광 상태에서 5℃ (주변 습도), 25℃ (60% 상대 습도), 및 40℃ (75% 상대 습도)에서 18주 동안 안정성에 대해 수행하였다.
Figure pct00048
단량체의 백분율(%) 뿐만 아니라, 고분자량 종 (HMW) 및 후기 용출 피크 (LMW 종)의 백분율(%)도 측정하여 크기 배제 크로마토그래피 (SEC)에 의해 샘플의 콜로이드성 안정성을 순도에 대해 사정하였다. %HMW (응집체), 단량체(%), 및 %LMW 수준을 평가하는 UPSEC 데이터는 하기 표에 있다:
Figure pct00049
상기 표에 제시되어 있는 바와 같이, 5℃, 25℃ 및 40℃에서 3개의 제제 모두 최대 18주 시점 동안 %HMW 피크 및 %LMW 피크가 증가하는 성향 (및 그 결과, 단량체 피크(%) 감소)을 보인 것으로 나타났다. 40℃와 비교하였을 때, 25℃에서는 두 제제 모두 더 작은 변화는 있었지만, 유사한 경향을 보였다. 5℃에서는 실질적인 변화는 관찰되지 않았다. 제제 2 (20 uM DTPA) 및 제제 3 (50 uM DTPA)과 비교하였을 때, 제제 1은 %HMW 및 %LMW에 있어 더욱 큰 증가를 보인다. 추가로, 제제 1은 제제 2 및 3과 비교하였을 때, 단량체(%)에 있어 더욱 큰 감소를 보였다. HP-IEX 분석시에서 유사한 결과가 관찰되었다 (데이터는 제시되지 않음).
DTPA가 제제를 산화 스트레스로부터 보호할 수 있는지 여부를 평가하기 위해, 3개의 제제를 바이알 내로 충전시키고, 광 (0.5X ICH 및 1X ICH)에 노출시켰다. 하기 표에서 알 수 있는 바와 같이, 제제 1은 제제 2 (20 uM DTPA) 및 제제 3 (uM DTPA)과 비교하여 M254, M430 및 W104 (산화에 감수성인 메티오닌 및 트립토판)의 산화(%)에 있어 더욱 큰 증가를 보인다. 따라서, DTPA는 항-TIGIT 항체 제제의 안정성을 추가로 개선시킬 수 있다.
Figure pct00050
Figure pct00051
실시예 7
항- TIGIT 항체 제제의 장기간 안정성
본 실시예는 하기와 같이 L-히스티딘 완충제, L-메티오닌, 수크로스, 폴리소르베이트 80 및 주사용수 중에서 제제화된 항-TIGIT 항체에 대한 장기간 안정성 데이터를 기술한다:
Figure pct00052
용액을 탄성중합체 마개 및 알루미늄 실이 있는 USP 타입 1 유리 바이알에 충전시켰다. 이어서, 바이알을 3개의 상이한 보관 조건: 5℃ (주변 습도), 25℃ (60% 상대 습도), 및 40℃ (75% 상대 습도)에서 인큐베이션시켰다. 모든 보관 조건에 대하여 시점 0, 1개월, 3개월, 6개월째, 9개월째 (5℃ 및 25℃ 보관 조건), 12개월째 (5℃ 및 25℃ 보관 조건), 18개월째 (5℃ 보관 조건), 24개월째 (5℃ 보관 조건) 및 36개월째 (5℃ 조건)에 데이터를 수집한다.
결과
본 결과는 5℃에서 18개월 동안 권고된 장기간 조건에서 보관되었을 때의 항-TIGIT 항체의 전반적인 물리적 및 화학적 안정성을 입증한다. 권고된 보관 조건하에서는 관찰된 측정가능한 효능 손실은 없었고, 순도는 지정 사양 범위 내에 있었다. 결과는 하기 표에 제시되어 있다:
Figure pct00053
Figure pct00054
Figure pct00055
단백질 농도
모든 시점 및 조건에 대한 단백질 농도 안정성 데이터는 보관 시간 또는 조건의 함수로서 어떤 주목할 만한 변화를 보이지 않았고, 모든 결과는 45 - 55 mg/ml의 허용 기준 범위 내에 있었다.
pH
5℃, 25℃, 및 40℃ 조건에서 pH의 유의적인 변화는 없었다. 도 1은 시점 0에서부터 9개월까지의 pH 데이터를 나타낸 것이다.
폴리소르베이트 80
5℃의 권고된 보관 조건에서의 폴리소르베이트 80 함량은 9개월째 및 18개월째에 0.13 mg/ml로 약간 감소되었다 (18개월 데이터는 제시되지 않음). 25℃ (가속) 및 40℃ (스트레스를 받은 상태)에서 폴리소르베이트 80은 감소하는 성향을 보인 것으로 관찰되었다. 40℃에서, 폴리소르베이트 80 농도는 6개월째에 0.06 mg/ml로 감소되었고, 25℃에서 폴리소르베이트 80 농도는 9개월째에는 0.07 mg/ml로 감소되었다. 최대 9개월 동안의 폴리소르베이트 80 농도 데이터는 도 2에 제시되어 있다.
ELISA에 의한 결합 효능
관찰된 ELISA 결합 결과에서는 어느 시점 또는 조건에서도 뚜렷한 성향은 없었다. 최대 9개월 동안의 효능 데이터는 도 3에 제시되어 있다.
UP-SEC에 의한 순도
최대 9개월 동안의 UP-SEC에 의한 순도에 대한 데이터는 하기에서 단량체(%)에 대해서는 도 4에, 고분자량 종(%)에 대해서는 도 5에, 및 저분자량 종(%)에 대해서는 도 6에 도시되어 있다.
5℃의 권고된 보관 조건에서, 단량체(%)는 약간 감소되고, 상응하여 고분자량 종(%)은 약간 증가하고, 18개월 간에 걸쳐 안정적이다. 초기부터 18개월째까지 저분자량 종(%)은 0.4%인 정량 한계 미만이다 (< QL). 25℃ 조건에서, 단량체(%)는 초기부터 12개월째까지 감소하였고, 그에 상응하여 고분자량 종(%)은 증가하였다. 9 및 12개월째, 저분자량 종(%)은 QL 초과인 것으로 보고되었다.
40℃의 스트레스를 받은 조건에서, 단량체(%)는 98.7%에서 93.8%로 감소하였고, 그에 상응하여 고분자량 종은 1.33%에서 2.63%로 증가하였고, 저분자량 종은 <QL에서 3.53%로 증가하였다. 이러한 결과는 보관 조건을 고려하면, 예상 밖의 결과는 아니었다.
환원된 및 비환원 된 CD-SDS
도 7 및 8은 환원된 및 비환원된 CD-SDS에 의해 측정된 최대 9개월 동안의 순도 데이터를 보여주는 것이다. 5℃의 장기간 보관 조건에서 환원된 (중쇄 및 경쇄(%)) 또는 비환원된 (무손상 IgG(%)) CE-SDS에서의 주목할 만한 성향은 없었고, 그 결과는 GMP 약물 제품 허용 기준인 ≥ 90.0% 범위 내에 있었다. 가속 25℃ 조건에서, 비환원된 조건의 경우, 감소하는 성향이 관찰되었다. 환원된 CE-SDS 조건의 경우에도 또한 감소하는 성향이 관찰되었다. 환원된 및 비환원된 CE-SDS, 둘 모두의 경우에서, 최대 9개월 시점까지의 모든 결과는 GMP 허용 기준 범위 내에 있었다. 40℃의 스트레스를 받은 조건에서, 6개월째에, 환원된 및 비환원된 CD-SDS 결과, 둘 모두 GMP 약물 제품에 대해 설정된 ≥ 90.0% 허용 기준 미만이었다. 비환원된 CE-SDS 결과는 3개월째에는 88.9% 결과를 보이며 지정 사양 범위에서 벗어났고, 이어서, 6개월째에는 추가로 79.6%로 감소하였다. 환원된 CE-SDS의 경우, 중쇄 및 경쇄(%)는 3개월째 94.2%에서 6개월째 87.7%로 감소하였다. 40℃에서의 이러한 감소는 조건의 성질을 고려하면, 예상하지 못했던 것은 아니었다.
HP- IEX에 의한 전하 변이체
5℃에서 (장기간 보관), 산성 변이체(%)는 초기에 21.46%에서부터 9개월째 22.49%로 약간 증가하고, 그에 상응하여 총 주요 값은 68.8%에서부터 9개월째 67.1%로 약간 감소한다. 염기성 변이체(%)는 9개월째에 약간 증가하기 시작하여, 6개월째 10.15%에서부터 9개월째 10.38%로 증가한다. 25℃에서 (가속), 총 주요 값은 초기 시점에 68.8%에서부터 9개월째에 47.6%로 감소하였다. 총 주요 값이 감소함에 따라, 그에 상응하여 산성 변이체는 21.46%에서 39.86%로 증가하였고, 염기성 변이체는 9.70%에서 11.51%로 약간 증가한 것이 관찰되었다. 40℃에서 (스트레스를 받은 상태), 총 주요 값은 6개월째에 10.1%로 상당히 감소하였고, 그에 따라 그에 상응하여 산성 변이체는 80.02%로 및 염기성 변이체는 9.95%로 상당히 증가하였다.
미립자 물질
미립자 물질을 mHIAC에 의해 측정하였다. 초기부터 9개월째까지의 5℃ 조건에서의 결과는 ≥ 10 ㎛인 경우, 용기당 ≤ 6,000개의 입자 및 ≥ 25 ㎛인 경우, 용기당 ≤ 600개의 입자인 허용 기준보다 훨씬 낮은 값이었다. 25℃에서, ≥ 10 ㎛인 입자는 초기 시점에 용기당 13개의 입자에서부터 9개월째 용기당 460개의 입자로 증가한 것으로 보고되었다. ≥ 25 ㎛ 미립자의 경우, 입자는 감소하였으며, 여기서, 9개월째 용기당 3개의 입자라는 결과를 보였다. 모든 시점에서의 25℃ 데이터는 ≥ 10 ㎛ 및 ≥ 25 ㎛ 분석, 둘 모두에 대해 허용 기준 범위 내에 있었다. 40℃ 조건에서의 데이터는 9개월째 용기당 8,258개의 입자로, ≥ 10 ㎛ 입자의 급격한 증가를 보였다. 이러한 결과는 용기당 ≤600개의 입자라는 허용 기준에서 벗어난 것이었다. ≥ 25 ㎛ 입자의 결과는 ≥ 25 ㎛ 허용 기준 (용기당 ≤600개의 입자)을 충족시키면서 9개월 안정성 시점에 용기당 124개의 입자로 증가하였다.
혼탁도
350 nm에서의 분광 흡광도로부터 혼탁도를 측정하였다. 보다 긴 장기간의 보관 조건하에 보관 조건 5℃에서는 최대 9개월 시점까지 주목할 만한 변화는 없었다. 25℃ 조건에서, 3개월째 결과는 0.163 AU로, 약간 증가하고, 9개월째까지 결과는 0.196 AU로 계속해서 증가한다. 40℃에서, 0.188 AU에서 1개월째를 시작으로 더욱 현저한 증가를 보인 후, 이어서, 9개월째까지 0.453 AU로 크게 증가한다.
결론
본 데이터에 기초하면, 18개월째 시험일에 안정성 연구 과정 동안 5℃의 보관 조건에서는 pH, 단백질 농도, 외관 및 육안으로 관찰되는 입자 (데이터는 제시되지 않음) 및 효능 및 미립자 물질 (데이터는 제시되지 않음)에 있어 어떤 주요 변화 또는 성향도 관찰되지 않았다. 단, 예외적으로, 색상이 약간 짙어졌고, PS-80 함량이 0.13 mg/ml로 감소하였으며, 5℃에서의 어떤 안정성 시험에서도 주목할 만한 변화 또는 성향도 관찰되지 않았다.
5℃에서의 장기간 안정성에 대한 데이터에 기초하면, L-히스티딘 완충제, 수크로스, 폴리소르베이트 80 및 L-메티오닌을 함유하는 항-TIGIT 제제의 예상 저장 수명은 30개월이다. 킬레이터를 추가로 포함하는 제제는 관찰된 폴리소르베이트 80의 분해를 감소시키는 것으로 예상된다.
실시예 8
항- TIGIT 항체 및 항-PD-1 항체의 복합 제제
두 항체를 단일 제제로 공동 제제화하는 것이 환자에게 더욱 편리하고, 두 항체를 함께 투약하는 것에 대한 순응도를 증가시킨다. 두 항체를 단일 제제로 공동 제제화하는 것이 환자에게 더욱 편리하고, 두 항체를 함께 투약하는 것에 대한 순응도를 증가시킨다. IgG1 백본 상에 하기 CDR: 서열식별번호 108의 HCDR1, 서열식별번호 154의 HCDR2, 서열식별번호 110의 HCDR3, 서열식별번호 111의 LCDR1, 서열식별번호 112의 LCDR2, 및 서열식별번호 113의 LCDR3을 가지는 항-TIGIT 항체를 펨브롤리주맙과 함께 공동 제제화하였다. (하기 제시된) 단백질-단백질 상호작용에 기초하면, (하기 제시된) 복합 제제는 pH 5.0-6.0에 걸쳐 안정적인 것으로 나타났다. 그러므로, pH 5.0, 5.5 및 6.0에서 복합 제제 (P1T1)를 선택하였고, 2개의 대조군 (PD1 항체 및 항-TIGIT 항체)과 함께 5℃, 25℃ 및 40℃의 추가의 열 안정성에 대해 평가하였다.
Figure pct00056
제제를 하기와 같이 액체 제제로서 제조하였다:
Figure pct00057
각각의 제제를 2R 바이알 내에 1 mL로 충전시켰다. 육안 검사, 단백질 농도, 마이크로플로우 영상화 (MFI) (미립자 평가), 혼합 모드 크기 배제 크로마토그래피 (SEC) (응집 평가), IEX (전하 변이체 평가), 및 UP-SEC (응집 평가)에 의해 안정성을 측정할 것이다. 열 안정성 프로토콜은 하기와 같다:
Figure pct00058
상이한 복합 제제의, 콜로이드성 및 열 안정성을 나타내는 단백질-단백질 상호작용을 측정하였다. 확산 상호작용 파라미터 (KD) 값이 양의 값으로 나타나는 (KD>0), 반발 단백질-단백질 상호작용은 응집 성향이 낮은 안정한 제제를 나타낸다. 복합 제제의 Kd가 반발 및 안정화 단백질-단백질 상호작용을 나타내는 양의 KD 값을 가지는 것으로 나타났는 바, 이는 응집 성향은 더 낮고, 안정적인 복합 제제라는 것을 시사할 것이다.
확산 상호작용 파라미터 (KD) 값이 양의 값 또는 KD >0인 것에 기초하여, 공동 제제화되었을 때, 항체는 단일 항체 제제와 유사하게, 함께 공동 제제화되었을 때, 작용하여 우수한 반응을 보일 것으로 예상된다.
SEQUENCE LISTING <110> Narasimhan, Chakravarthy Nachu De, Arnab <120> STABLE FORMULATIONS OF ANTI-TIGIT ANTIBODIES ALONE AND IN COMBINATION WITH PROGRAMMED DEATH RECEPTOR 1 (PD-1) ANTIBODIES AND METHODS OF USE THEREOF <130> 24453 <150> 62/500,278 <151> 2017-05-02 <160> 293 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 1 Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr Leu His 1 5 10 15 <210> 2 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 2 Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser 1 5 <210> 3 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 3 Gln His Ser Arg Asp Leu Pro Leu Thr 1 5 <210> 4 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 4 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser Thr Ser 20 25 30 Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro 35 40 45 Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg 85 90 95 Asp Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 5 <211> 218 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 5 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser Thr Ser 20 25 30 Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro 35 40 45 Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg 85 90 95 Asp Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 100 105 110 Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln 115 120 125 Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr 130 135 140 Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser 145 150 155 160 Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr 165 170 175 Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 180 185 190 His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro 195 200 205 Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 6 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 6 Asn Tyr Tyr Met Tyr 1 5 <210> 7 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 7 Gly Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn Glu Lys Phe Lys 1 5 10 15 Asn <210> 8 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 8 Arg Asp Tyr Arg Phe Asp Met Gly Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 9 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 9 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Val Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Asn Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Ser Ser Thr Thr Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Lys Ser Leu Gln Phe Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Asp Tyr Arg Phe Asp Met Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 10 <211> 447 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 10 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Val Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Asn Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Ser Ser Thr Thr Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Lys Ser Leu Gln Phe Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Asp Tyr Arg Phe Asp Met Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro 210 215 220 Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 435 440 445 <210> 11 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 11 Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 12 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 12 Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr 1 5 <210> 13 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 13 Gln Gln Ser Ser Asn Trp Pro Arg Thr 1 5 <210> 14 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 14 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Ser Asn Trp Pro Arg 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 15 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 15 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Ser Asn Trp Pro Arg 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 16 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 16 Asn Ser Gly Met His 1 5 <210> 17 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 17 Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Arg Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 18 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 18 Asn Asp Asp Tyr 1 <210> 19 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 19 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Asp Cys Lys Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Asn Ser 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Arg Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Thr Asn Asp Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 100 105 110 Ser <210> 20 <211> 440 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 20 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Asp Cys Lys Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Asn Ser 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Arg Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Thr Asn Asp Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 100 105 110 Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser 115 120 125 Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp 130 135 140 Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr 145 150 155 160 Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr 165 170 175 Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys 180 185 190 Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp 195 200 205 Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala 210 215 220 Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro 225 230 235 240 Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val 245 250 255 Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val 260 265 270 Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln 275 280 285 Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln 290 295 300 Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly 305 310 315 320 Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro 325 330 335 Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr 340 345 350 Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser 355 360 365 Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr 370 375 380 Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr 385 390 395 400 Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe 405 410 415 Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys 420 425 430 Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 435 440 <210> 21 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 21 Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser Gly Phe Ser Tyr Leu His 1 5 10 15 <210> 22 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 22 Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser 1 5 <210> 23 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 23 Gln His Ser Trp Glu Leu Pro Leu Thr 1 5 <210> 24 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 24 Ser Tyr Tyr Leu Tyr 1 5 <210> 25 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 25 Gly Val Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Ser Glu Lys Phe Lys 1 5 10 15 Ser <210> 26 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 26 Arg Asp Ser Asn Tyr Asp Gly Gly Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 27 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 27 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Val Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Asn Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Ser Ser Thr Thr Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Lys Ser Leu Gln Phe Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Asp Tyr Arg Phe Asp Met Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 28 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 28 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser Thr Ser 20 25 30 Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro 35 40 45 Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg 85 90 95 Asp Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 29 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 29 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser Thr Ser 20 25 30 Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro 35 40 45 Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser 65 70 75 80 Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg 85 90 95 Asp Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 30 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 30 Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser Thr Ser 20 25 30 Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro 35 40 45 Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ala Phe Thr Leu Lys Ile Ser 65 70 75 80 Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Leu Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg 85 90 95 Asp Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 31 <211> 447 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 31 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Val Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Asn Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Ser Ser Thr Thr Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Lys Ser Leu Gln Phe Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Asp Tyr Arg Phe Asp Met Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro 210 215 220 Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 435 440 445 <210> 32 <211> 218 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 32 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser Thr Ser 20 25 30 Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro 35 40 45 Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg 85 90 95 Asp Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 100 105 110 Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln 115 120 125 Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr 130 135 140 Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser 145 150 155 160 Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr 165 170 175 Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 180 185 190 His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro 195 200 205 Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 33 <211> 218 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 33 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser Thr Ser 20 25 30 Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro 35 40 45 Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser 65 70 75 80 Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg 85 90 95 Asp Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 100 105 110 Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln 115 120 125 Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr 130 135 140 Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser 145 150 155 160 Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr 165 170 175 Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 180 185 190 His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro 195 200 205 Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 34 <211> 218 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 34 Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser Thr Ser 20 25 30 Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro 35 40 45 Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ala Phe Thr Leu Lys Ile Ser 65 70 75 80 Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Leu Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg 85 90 95 Asp Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 100 105 110 Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln 115 120 125 Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr 130 135 140 Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser 145 150 155 160 Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr 165 170 175 Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 180 185 190 His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro 195 200 205 Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 35 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 35 Ser Asp Tyr Trp Gly 1 5 <210> 36 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 36 Phe Ile Thr Tyr Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 37 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 37 Met Pro Ser Phe Ile Thr Leu Ala Ser Leu Ser Thr Trp Glu Gly Tyr 1 5 10 15 Phe Asp Phe <210> 38 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 38 Lys Ala Ser Gln Ser Ile His Lys Asn Leu Ala 1 5 10 <210> 39 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 39 Tyr Ala Asn Ser Leu Gln Thr 1 5 <210> 40 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 40 Gln Gln Tyr Tyr Ser Gly Trp Thr 1 5 <210> 41 <211> 127 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 41 Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Ser Ser Ile Ala Ser Asp 20 25 30 Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Lys Phe Pro Gly Asn Lys Met Glu Trp Met 35 40 45 Gly Phe Ile Thr Tyr Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe Leu 65 70 75 80 Gln Leu His Ser Val Thr Thr Asp Asp Thr Ala Thr Tyr Ser Cys Ala 85 90 95 Arg Met Pro Ser Phe Ile Thr Leu Ala Ser Leu Ser Thr Trp Glu Gly 100 105 110 Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Pro Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 42 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 42 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Leu Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Leu Asn Cys Lys Ala Ser Gln Ser Ile His Lys Asn 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Leu Gly Glu Ala Pro Lys Phe Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Ala Asn Ser Leu Gln Thr Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Val Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Gly Trp Thr 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Leu Lys 100 105 <210> 43 <211> 127 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 43 Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Asp 20 25 30 Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Phe Ile Thr Tyr Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Met Pro Ser Phe Ile Thr Leu Ala Ser Leu Ser Thr Trp Glu Gly 100 105 110 Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 44 <211> 127 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 44 Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Asp 20 25 30 Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Phe Ile Thr Tyr Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Met Pro Ser Phe Ile Thr Leu Ala Ser Leu Ser Thr Trp Glu Gly 100 105 110 Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 45 <211> 127 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 45 Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Asp 20 25 30 Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Phe Ile Thr Tyr Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Met Pro Ser Phe Ile Thr Leu Ala Ser Leu Ser Thr Trp Glu Gly 100 105 110 Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 46 <211> 127 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 46 Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ser Ser Ile Ser Ser Asp 20 25 30 Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Phe Ile Thr Tyr Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Met Pro Ser Phe Ile Thr Leu Ala Ser Leu Ser Thr Trp Glu Gly 100 105 110 Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 47 <211> 127 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 47 Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Asp 20 25 30 Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Phe Ile Thr Tyr Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu His Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Met Pro Ser Phe Ile Thr Leu Ala Ser Leu Ser Thr Trp Glu Gly 100 105 110 Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 48 <211> 127 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 48 Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Asp 20 25 30 Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Phe Ile Thr Tyr Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu His Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Met Pro Ser Phe Ile Thr Leu Ala Ser Leu Ser Thr Trp Glu Gly 100 105 110 Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 49 <211> 127 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 49 Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ser Ser Ile Ser Ser Asp 20 25 30 Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Phe Ile Thr Tyr Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu His Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Met Pro Ser Phe Ile Thr Leu Ala Ser Leu Ser Thr Trp Glu Gly 100 105 110 Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 50 <211> 127 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 50 Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ser Ser Ile Ser Ser Asp 20 25 30 Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Phe Ile Thr Tyr Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Ile Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu His Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Met Pro Ser Phe Ile Thr Leu Ala Ser Leu Ser Thr Trp Glu Gly 100 105 110 Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 51 <211> 127 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 51 Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Asp 20 25 30 Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Phe Ile Thr Tyr Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Met Pro Ser Phe Ile Thr Leu Ala Ser Leu Ser Thr Trp Glu Gly 100 105 110 Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 52 <211> 127 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 52 Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Asp 20 25 30 Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Phe Ile Thr Tyr Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Met Pro Ser Phe Ile Thr Leu Ala Ser Leu Ser Thr Trp Glu Gly 100 105 110 Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 53 <211> 127 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 53 Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Asp 20 25 30 Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Phe Ile Thr Tyr Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Met Pro Ser Phe Ile Thr Leu Ala Ser Leu Ser Thr Trp Glu Gly 100 105 110 Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 54 <211> 127 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 54 Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Ser Ser Ile Ser Ser Asp 20 25 30 Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Phe Ile Thr Tyr Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Met Pro Ser Phe Ile Thr Leu Ala Ser Leu Ser Thr Trp Glu Gly 100 105 110 Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 55 <211> 127 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 55 Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Asp 20 25 30 Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Phe Ile Thr Tyr Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu His Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Met Pro Ser Phe Ile Thr Leu Ala Ser Leu Ser Thr Trp Glu Gly 100 105 110 Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 56 <211> 127 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 56 Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ser Asp 20 25 30 Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Phe Ile Thr Tyr Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu His Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Met Pro Ser Phe Ile Thr Leu Ala Ser Leu Ser Thr Trp Glu Gly 100 105 110 Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 57 <211> 127 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 57 Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Ser Ser Ile Ser Ser Asp 20 25 30 Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Phe Ile Thr Tyr Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu His Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Met Pro Ser Phe Ile Thr Leu Ala Ser Leu Ser Thr Trp Glu Gly 100 105 110 Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 58 <211> 127 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 58 Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Ser Ser Ile Ser Ser Asp 20 25 30 Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Phe Ile Thr Tyr Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu His Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Met Pro Ser Phe Ile Thr Leu Ala Ser Leu Ser Thr Trp Glu Gly 100 105 110 Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 59 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 59 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Ile His Lys Asn 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Ala Asn Ser Leu Gln Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Gly Trp Thr 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 60 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 60 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Ile His Lys Asn 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Phe Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Ala Asn Ser Leu Gln Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Gly Trp Thr 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 61 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 61 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Ile His Lys Asn 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Phe Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Ala Asn Ser Leu Gln Thr Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Gly Trp Thr 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 62 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 62 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Ile His Lys Asn 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Ala Asn Ser Leu Gln Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Gly Trp Thr 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 63 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 63 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Ile His Lys Asn 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Phe Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Ala Asn Ser Leu Gln Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Gly Trp Thr 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 64 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 64 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Ile His Lys Asn 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Phe Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Ala Asn Ser Leu Gln Thr Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Gly Trp Thr 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 65 <211> 129 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 65 Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ser Ser Ile Ala Ser Asp 20 25 30 Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Phe Ile Thr Tyr Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Met Pro Ser Phe Ile Thr Leu Ala Ser Leu Ser Thr Trp Glu Gly 100 105 110 Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala 115 120 125 Ser <210> 66 <211> 127 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 66 Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ser Ser Ile Ala Ser Asp 20 25 30 Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Phe Ile Thr Tyr Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Met Pro Ser Phe Ile Thr Leu Ala Ser Leu Ser Thr Trp Glu Gly 100 105 110 Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 67 <211> 127 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 67 Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ser Ser Ile Ala Ser Asp 20 25 30 Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Lys Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Phe Ile Thr Tyr Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Met Pro Ser Phe Ile Thr Leu Ala Ser Leu Ser Thr Trp Glu Gly 100 105 110 Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 68 <211> 127 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 68 Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ser Ser Ile Ala Ser Asp 20 25 30 Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Lys Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Phe Ile Thr Tyr Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Met Pro Ser Phe Ile Thr Leu Ala Ser Leu Ser Thr Trp Glu Gly 100 105 110 Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 69 <211> 127 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 69 Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ser Ser Ile Ala Ser Asp 20 25 30 Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Met Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Phe Ile Thr Tyr Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Met Pro Ser Phe Ile Thr Leu Ala Ser Leu Ser Thr Trp Glu Gly 100 105 110 Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 70 <211> 127 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 70 Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ser Ser Ile Ala Ser Asp 20 25 30 Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Lys Pro Pro Gly Lys Lys Met Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Phe Ile Thr Tyr Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Met Pro Ser Phe Ile Thr Leu Ala Ser Leu Ser Thr Trp Glu Gly 100 105 110 Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 71 <211> 127 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 71 Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ser Ser Ile Ala Ser Asp 20 25 30 Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Phe Ile Thr Tyr Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Met Pro Ser Phe Ile Thr Leu Ala Ser Leu Ser Thr Trp Glu Gly 100 105 110 Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 72 <211> 127 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 72 Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ser Ser Ile Ala Ser Asp 20 25 30 Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Lys Pro Pro Gly Lys Lys Met Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Phe Ile Thr Tyr Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Met Pro Ser Phe Ile Thr Leu Ala Ser Leu Ser Thr Trp Glu Gly 100 105 110 Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 73 <211> 127 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 73 Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Ser Ser Ile Ala Ser Asp 20 25 30 Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Phe Ile Thr Tyr Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Met Pro Ser Phe Ile Thr Leu Ala Ser Leu Ser Thr Trp Glu Gly 100 105 110 Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 74 <211> 127 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 74 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Ser Ser Ile Ala Ser Asp 20 25 30 Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Phe Ile Thr Tyr Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Met Pro Ser Phe Ile Thr Leu Ala Ser Leu Ser Thr Trp Glu Gly 100 105 110 Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 75 <211> 127 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 75 Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Pro Gly 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Ser Ser Ile Ala Ser Asp 20 25 30 Tyr Trp Gly Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Phe Ile Thr Tyr Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Met Pro Ser Phe Ile Thr Leu Ala Ser Leu Ser Thr Trp Glu Gly 100 105 110 Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 76 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 76 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Ile His Lys Asn 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Ala Asn Ser Leu Gln Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Gly Trp Thr 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 77 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 77 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Ile His Lys Asn 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Phe Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Ala Asn Ser Leu Gln Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Gly Trp Thr 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 78 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 78 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Ile His Lys Asn 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Ala Asn Ser Leu Gln Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Gly Trp Thr 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 79 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 79 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Ile His Lys Asn 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Phe Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Ala Asn Ser Leu Gln Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Gly Trp Thr 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 80 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 80 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Ile His Lys Asn 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Ala Asn Ser Leu Gln Thr Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Gly Trp Thr 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 81 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 81 Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp Tyr Ala Trp Asn 1 5 10 <210> 82 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 82 Tyr Ile Ser Asn Ser Gly Ser Ala Ser Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 83 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 83 Leu Ile Tyr Tyr Asp Tyr Gly Gly Ala Met Asn Phe 1 5 10 <210> 84 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 84 Lys Ala Ser Gln Gly Val Ser Thr Thr Val Ala 1 5 10 <210> 85 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 85 Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr 1 5 <210> 86 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 86 Gln His Tyr Tyr Ser Thr Pro Trp Thr 1 5 <210> 87 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 87 Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp 20 25 30 Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Trp 35 40 45 Met Gly Tyr Ile Ser Asn Ser Gly Ser Ala Ser Tyr Asn Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Ser Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe 65 70 75 80 Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Thr Leu Ile Tyr Tyr Asp Tyr Gly Gly Ala Met Asn Phe Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 88 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 88 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Gly Val Ser Thr Thr 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Val Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Tyr Ser Thr Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 89 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 89 Tyr Ala Ser Asn Leu Gln Thr 1 5 <210> 90 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 90 Tyr Ala Ser Ser Leu Gln Thr 1 5 <210> 91 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 91 Tyr Ala Ser Thr Leu Gln Thr 1 5 <210> 92 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 92 Tyr Ala Thr Thr Leu Gln Thr 1 5 <210> 93 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 93 Tyr Ala Ser Tyr Leu Gln Thr 1 5 <210> 94 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 94 Tyr Ala Asn Gln Leu Gln Thr 1 5 <210> 95 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 95 Tyr Ala Gly Ser Leu Gln Thr 1 5 <210> 96 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 96 Tyr Ala Ser Gln Leu Gln Thr 1 5 <210> 97 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 97 Tyr Ala Asp Ser Leu Gln Thr 1 5 <210> 98 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 98 Gln Gln Tyr Tyr Ser Gly Phe Thr 1 5 <210> 99 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 99 Gln Gln Tyr Tyr Ser Gly Tyr Thr 1 5 <210> 100 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 100 Gln Gln Tyr Tyr Ser Gly Ile Thr 1 5 <210> 101 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 101 Gln Gln Tyr Tyr Ser Gly Val Thr 1 5 <210> 102 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 102 Gln Gln Tyr Tyr Ser Gly Leu Thr 1 5 <210> 103 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 103 Met Pro Ser Phe Ile Thr Leu Ala Ser Leu Ser Thr Phe Glu Gly Tyr 1 5 10 15 Phe Asp Phe <210> 104 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 104 Met Pro Ser Phe Ile Thr Leu Ala Ser Leu Ser Thr Tyr Glu Gly Tyr 1 5 10 15 Phe Asp Phe <210> 105 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 105 Met Pro Ser Phe Ile Thr Leu Ala Ser Leu Ser Thr Ile Glu Gly Tyr 1 5 10 15 Phe Asp Phe <210> 106 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 106 Met Pro Ser Phe Ile Thr Leu Ala Ser Leu Ser Thr Val Glu Gly Tyr 1 5 10 15 Phe Asp Phe <210> 107 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 107 Met Pro Ser Phe Ile Thr Leu Ala Ser Leu Ser Thr Leu Glu Gly Tyr 1 5 10 15 Phe Asp Phe <210> 108 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 108 Ser Tyr Val Met His 1 5 <210> 109 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 109 Tyr Ile Asp Pro Tyr Asn Asp Gly Ala Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 110 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 110 Gly Gly Pro Tyr Gly Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 111 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 111 Arg Ala Ser Glu His Ile Tyr Ser Tyr Leu Ser 1 5 10 <210> 112 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 112 Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu 1 5 <210> 113 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 113 Gln His His Phe Gly Ser Pro Leu Thr 1 5 <210> 114 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 114 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Val Met His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Asp Pro Tyr Asn Asp Gly Ala Lys Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Pro Tyr Gly Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Ala Gly 100 105 110 Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 115 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 115 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu His Ile Tyr Ser Tyr 20 25 30 Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val 35 40 45 Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Gly Thr Tyr Tyr Cys Gln His His Phe Gly Ser Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Ala Gly Thr Thr Leu Glu Leu Lys 100 105 <210> 116 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 116 Tyr Ile Asp Pro Tyr Asn Arg Gly Ala Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Gly 1 5 10 15 <210> 117 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 117 Tyr Ile Asp Pro Tyr Asn Leu Gly Ala Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Gly 1 5 10 15 <210> 118 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 118 Tyr Ile Asp Pro Tyr Asn Lys Gly Ala Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Gly 1 5 10 15 <210> 119 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 119 Tyr Ile Asp Pro Tyr Asn Phe Gly Ala Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Gly 1 5 10 15 <210> 120 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 120 Tyr Ile Asp Pro Tyr Asn Ser Gly Ala Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Gly 1 5 10 15 <210> 121 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 121 Tyr Ile Asp Pro Tyr Asn Tyr Gly Ala Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Gly 1 5 10 15 <210> 122 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 122 Tyr Ile Asp Pro Tyr Asn Val Gly Ala Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Gly 1 5 10 15 <210> 123 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 123 Tyr Ile Asp Pro Tyr Asn Asp Arg Ala Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 124 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 124 Tyr Ile Asp Pro Tyr Asn Asp Asn Ala Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 125 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 125 Tyr Ile Asp Pro Tyr Asn Asp Gln Ala Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 126 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 126 Tyr Ile Asp Pro Tyr Asn Asp Glu Ala Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 127 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 127 Tyr Ile Asp Pro Tyr Asn Asp Leu Ala Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 128 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 128 Tyr Ile Asp Pro Tyr Asn Asp Lys Ala Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 129 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 129 Tyr Ile Asp Pro Tyr Asn Asp Ser Ala Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 130 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 130 Tyr Ile Asp Pro Tyr Asn Asp Tyr Ala Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 131 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 131 Tyr Ile Asp Pro Tyr Asn Asp Val Ala Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 132 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 132 Ala Ala Lys Thr Leu Ala Glu 1 5 <210> 133 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 133 Tyr Ala Lys Thr Leu Ala Glu 1 5 <210> 134 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 134 Trp Ala Lys Thr Leu Ala Glu 1 5 <210> 135 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 135 Ser Ala Lys Thr Leu Ala Glu 1 5 <210> 136 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 136 Thr Ala Lys Thr Leu Ala Glu 1 5 <210> 137 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 137 Ile Ala Lys Thr Leu Ala Glu 1 5 <210> 138 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 138 Val Ala Lys Thr Leu Ala Glu 1 5 <210> 139 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 139 Asn Asn Lys Thr Leu Ala Glu 1 5 <210> 140 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 140 Asn Ile Lys Thr Leu Ala Glu 1 5 <210> 141 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 141 Asn Leu Leu Thr Leu Ala Glu 1 5 <210> 142 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 142 Asn Thr Lys Thr Leu Ala Glu 1 5 <210> 143 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 143 Asn Val Lys Thr Leu Ala Glu 1 5 <210> 144 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 144 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Val Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Asp Pro Tyr Asn Asp Gly Ala Lys Tyr Ser Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Leu Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Pro Tyr Gly Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 145 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 145 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Val Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Asp Pro Tyr Asn Asp Gly Ala Lys Tyr Ser Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ala Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Pro Tyr Gly Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 146 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 146 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Val Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Asp Pro Tyr Asn Asp Gly Ala Lys Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Leu Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Pro Tyr Gly Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 147 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 147 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Val Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Asp Pro Tyr Asn Asp Gly Ala Lys Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Pro Tyr Gly Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 148 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 148 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Val Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Asp Pro Tyr Asn Asp Gly Ala Lys Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Pro Tyr Gly Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 149 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 149 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Val Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Asp Pro Tyr Asn Asp Gly Ala Lys Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Val Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Pro Tyr Gly Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 150 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 150 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu His Ile Tyr Ser Tyr 20 25 30 Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His His Phe Gly Ser Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 151 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 151 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu His Ile Tyr Ser Tyr 20 25 30 Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His His Phe Gly Ser Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 152 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 152 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu His Ile Tyr Ser Tyr 20 25 30 Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His His Phe Gly Ser Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 153 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 153 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu His Ile Tyr Ser Tyr 20 25 30 Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His His Phe Gly Ser Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 154 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 154 Tyr Ile Asp Pro Tyr Asn Asp Gly Ala Lys Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 155 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 155 Tyr Ile Asp Pro Tyr Asn Asp Gly Ala Lys Tyr Ser Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 156 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 156 Gln Val Gln Leu Met Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Gln Pro Ser Gln 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Pro Leu Thr Ser Tyr 20 25 30 Thr Val His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Ala Ile Trp Ser Ser Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Asn Ile Asn Arg Asp Ser Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu 65 70 75 80 Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Phe Cys Thr 85 90 95 Lys Ser Gly Trp Ala Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Val Met Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 157 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 157 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Leu Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Leu Asn Cys Ile Ala Ser Gln Asn Ile Tyr Lys Ser 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Leu Lys Leu Gly Glu Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asn Ala Asn Ser Leu Gln Ala Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ala Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Val Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Ser Gly Gly Tyr Thr 85 90 95 Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 100 105 <210> 158 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 158 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Lys Ile Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Ala Trp Val Arg Leu Ala Pro Gln Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Ser Ile Ser Tyr Glu Gly Ser Arg Thr His Tyr Gly Asp Ser Val 50 55 60 Arg Gly Arg Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Pro Lys Asn Ile Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Gly Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg His Thr Gly Thr Leu Asp Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Ile Val Ser Ser 115 <210> 159 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 159 Asn Ile Val Met Ala Gln Ser Pro Lys Ser Met Ser Ile Ser Ala Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Met Asn Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Asp Asn Asn 20 25 30 Ile Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Phe Tyr Ala Ser Asn Arg Tyr Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Gly Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Lys Ser Val Gln Ala 65 70 75 80 Glu Asp Ala Ala Phe Tyr Tyr Cys Gln Arg Ile Tyr Asn Phe Pro Thr 85 90 95 Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 160 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (13)..(13) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (13)..(13) <223> protein <400> 160 Met Pro Ser Phe Ile Thr Leu Ala Ser Leu Ser Thr Xaa Glu Gly Tyr 1 5 10 15 Phe Asp Phe <210> 161 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> protein <400> 161 Tyr Ala Xaa Xaa Leu Gln Thr 1 5 <210> 162 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> protein <400> 162 Gln Gln Tyr Tyr Ser Gly Xaa Thr 1 5 <210> 163 <211> 127 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (9)..(9) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12)..(12) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15)..(15) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (17)..(17) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (23)..(23) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (25)..(25) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (27)..(27) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (30)..(30) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (37)..(37) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (39)..(39) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (43)..(43) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (44)..(44) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (45)..(45) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (48)..(48) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (67)..(67) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (68)..(68) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (70)..(70) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (71)..(71) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (79)..(79) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (81)..(81) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (83)..(83) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (87)..(87) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (88)..(88) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (92)..(92) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (94)..(94) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (110)..(110) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (119)..(119) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (122)..(122) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (123)..(123) <223> protein <400> 163 Glu Val Gln Leu Gln Xaa Ser Gly Xaa Gly Leu Xaa Lys Pro Xaa Xaa 1 5 10 15 Xaa Leu Ser Leu Thr Cys Xaa Val Xaa Gly Xaa Ser Ile Xaa Ser Asp 20 25 30 Tyr Trp Gly Trp Xaa Arg Xaa Xaa Pro Gly Xaa Xaa Xaa Glu Trp Xaa 35 40 45 Gly Phe Ile Thr Tyr Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Xaa Xaa Ile Xaa Xaa Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Xaa Leu 65 70 75 80 Xaa Leu Xaa Ser Val Thr Xaa Xaa Asp Thr Ala Xaa Tyr Xaa Cys Ala 85 90 95 Arg Met Pro Ser Phe Ile Thr Leu Ala Ser Leu Ser Thr Xaa Glu Gly 100 105 110 Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Xaa Gly Thr Xaa Xaa Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 164 <211> 127 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (9)..(9) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12)..(12) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15)..(15) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (23)..(23) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (25)..(25) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (27)..(27) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (30)..(30) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (37)..(37) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (39)..(39) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (44)..(44) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (45)..(45) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (48)..(48) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (67)..(67) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (71)..(71) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (83)..(83) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (88)..(88) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (110)..(110) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (122)..(122) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (123)..(123) <223> protein <400> 164 Glu Val Gln Leu Gln Xaa Ser Gly Xaa Gly Leu Xaa Lys Pro Xaa Xaa 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Xaa Val Xaa Gly Xaa Ser Ile Xaa Ser Asp 20 25 30 Tyr Trp Gly Trp Xaa Arg Xaa Xaa Pro Gly Lys Xaa Xaa Glu Trp Xaa 35 40 45 Gly Phe Ile Thr Tyr Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Xaa Thr Ile Ser Xaa Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Xaa Ser Val Thr Ala Xaa Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Met Pro Ser Phe Ile Thr Leu Ala Ser Leu Ser Thr Xaa Glu Gly 100 105 110 Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Xaa Xaa Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 165 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (21)..(21) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (42)..(42) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (43)..(43) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (46)..(46) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (52)..(52) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (53)..(53) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (58)..(58) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (77)..(77) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (83)..(83) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (87)..(87) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (95)..(95) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (105)..(105) <223> protein <400> 165 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Xaa Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Xaa Xaa Cys Lys Ala Ser Gln Ser Ile His Lys Asn 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Xaa Gly Xaa Xaa Pro Lys Xaa Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Ala Xaa Xaa Leu Gln Thr Gly Xaa Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Xaa Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Xaa Ala Thr Tyr Xaa Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Gly Xaa Thr 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Xaa Lys 100 105 <210> 166 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <220> <221> misc_feature <222> (43)..(43) <223> protein <220> <221> misc_feature <222> (46)..(46) <223> protein <220> <221> misc_feature <222> (52)..(52) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (53)..(53) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (56)..(56) <223> protein <220> <221> misc_feature <222> (58)..(58) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (62)..(62) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (63)..(63) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (68)..(68) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (83)..(83) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (95)..(95) <223> protein <400> 166 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Ile His Lys Asn 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Xaa Pro Lys Xaa Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Ala Xaa Xaa Leu Gln Thr Gly Xaa Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Xaa Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Gly Xaa Thr 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 167 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8)..(8) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12)..(12) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (13)..(13) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> protein <400> 167 Tyr Ile Asp Pro Tyr Asn Xaa Xaa Ala Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe Xaa 1 5 10 15 Gly <210> 168 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> protein <220> <221> misc_feature <222> (2)..(2) <223> protein <400> 168 Xaa Xaa Lys Thr Leu Ala Glu 1 5 <210> 169 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (9)..(9) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(11) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12)..(12) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (20)..(20) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (38)..(38) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (44)..(44) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (56)..(56) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (57)..(57) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (61)..(61) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (62)..(62) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (65)..(65) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (67)..(67) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (68)..(68) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (72)..(72) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (74)..(74) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (76)..(76) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (79)..(79) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (85)..(85) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (87)..(87) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (89)..(89) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (91)..(91) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (92)..(92) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (104)..(104) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (111)..(111) <223> protein <400> 169 Glu Val Gln Leu Xaa Gln Ser Gly Xaa Glu Xaa Xaa Lys Pro Gly Xaa 1 5 10 15 Ser Val Lys Xaa Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Val Met His Trp Val Xaa Gln Xaa Pro Gly Gln Xaa Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Asp Pro Tyr Asn Xaa Xaa Ala Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe 50 55 60 Xaa Gly Xaa Xaa Thr Leu Thr Xaa Asp Xaa Ser Xaa Ser Thr Xaa Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Xaa Leu Xaa Ser Xaa Asp Xaa Xaa Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Pro Tyr Gly Xaa Tyr Phe Asp Val Trp Gly Xaa Gly 100 105 110 Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 170 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (44)..(44) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (56)..(56) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (57)..(57) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (61)..(61) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (62)..(62) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (65)..(65) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (72)..(72) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (74)..(74) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (76)..(76) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (79)..(79) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (85)..(85) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (89)..(89) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (92)..(92) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (104)..(104) <223> protein <400> 170 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Xaa 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Val Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Xaa Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Asp Pro Tyr Asn Xaa Xaa Ala Lys Tyr Xaa Xaa Lys Phe 50 55 60 Xaa Gly Arg Val Thr Leu Thr Xaa Asp Xaa Ser Xaa Ser Thr Xaa Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Xaa Leu Arg Ser Xaa Asp Thr Xaa Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Pro Tyr Gly Xaa Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 171 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (9)..(9) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (17)..(17) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (18)..(18) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (43)..(43) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (45)..(45) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (48)..(48) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (50)..(50) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (51)..(41) <223> protein <220> <221> misc_feature <222> (51)..(51) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (70)..(70) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (72)..(72) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (74)..(74) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (76)..(76) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (83)..(83) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (84)..(84) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (100)..(100) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (103)..(103) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (106)..(106) <223> protein <400> 171 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Xaa Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Xaa Xaa Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu His Ile Tyr Ser Tyr 20 25 30 Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Xaa Gly Lys Xaa Pro Xaa Leu Leu Xaa 35 40 45 Tyr Xaa Xaa Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Xaa Phe Xaa Leu Xaa Ile Xaa Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Xaa Xaa Thr Tyr Tyr Cys Gln His His Phe Gly Ser Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Xaa Gly Thr Xaa Leu Glu Xaa Lys 100 105 <210> 172 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (43)..(43) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (50)..(50) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (51)..(51) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (70)..(70) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (83)..(83) <223> protein <400> 172 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu His Ile Tyr Ser Tyr 20 25 30 Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Xaa Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Xaa Xaa Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Xaa Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Xaa Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His His Phe Gly Ser Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 173 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> protein <400> 173 Gly Gly Pro Tyr Gly Xaa Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 174 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 174 Gly Gly Pro Tyr Gly Ala Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 175 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 175 Gly Gly Pro Tyr Gly Asp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 176 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 176 Gly Gly Pro Tyr Gly Glu Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 177 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 177 Gly Gly Pro Tyr Gly Phe Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 178 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 178 Gly Gly Pro Tyr Gly Gly Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 179 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 179 Gly Gly Pro Tyr Gly Ile Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 180 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 180 Gly Gly Pro Tyr Gly Lys Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 181 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 181 Gly Gly Pro Tyr Gly Asn Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 182 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 182 Gly Gly Pro Tyr Gly Gln Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 183 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 183 Gly Gly Pro Tyr Gly Arg Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 184 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 184 Gly Gly Pro Tyr Gly Ser Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 185 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 185 Gly Gly Pro Tyr Gly Thr Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 186 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 186 Gly Gly Pro Tyr Gly Val Tyr Phe Asp Val Ser Glu Gln Ile Asp 1 5 10 15 <210> 187 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 187 Gly Gly Pro Tyr Gly Tyr Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 188 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 188 Gly Ala Trp Met Asp 1 5 <210> 189 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 189 Glu Ile Arg Thr Lys Val Asn Asn His Ala Thr Asn Tyr Gly Glu Ser 1 5 10 15 Val Lys Gly <210> 190 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 190 Ala Leu Tyr Asp Gly Phe Tyr Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 191 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 191 Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Gly Tyr Leu Tyr 1 5 10 <210> 192 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 192 Gly Thr Ser Thr Leu Ala Ser 1 5 <210> 193 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 193 His Gln Trp Ser Ser Phe Pro Tyr Thr 1 5 <210> 194 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 194 Glu Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Met Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gly Ala 20 25 30 Trp Met Asp Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Glu Ile Arg Thr Lys Val Asn Asn His Ala Thr Asn Tyr Gly Glu 50 55 60 Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ser 65 70 75 80 Val Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Ser Gly Ile Tyr 85 90 95 Tyr Cys Arg Gly Ala Leu Tyr Asp Gly Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 195 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 195 Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Asn Leu Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Gly 20 25 30 Tyr Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Leu Trp 35 40 45 Ile Tyr Gly Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Met Glu 65 70 75 80 Ala Glu Asp Ala Ala Ser Tyr Phe Cys His Gln Trp Ser Ser Phe Pro 85 90 95 Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Met Lys 100 105 <210> 196 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (33)..(33) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (34)..(34) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (76)..(76) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (79)..(79) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (80)..(80) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (85)..(85) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (86)..(86) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (87)..(87) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (93)..(93) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (104)..(104) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (105)..(105) <223> protein <400> 196 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gly Ala 20 25 30 Xaa Xaa Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Glu Ile Arg Thr Lys Val Asn Asn His Ala Thr Asn Tyr Gly Glu 50 55 60 Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Xaa Ser Lys Xaa Xaa 65 70 75 80 Val Tyr Leu Gln Xaa Xaa Xaa Leu Arg Ala Glu Asp Xaa Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Arg Gly Ala Leu Tyr Xaa Xaa Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 197 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 197 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gly Ala 20 25 30 Trp Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Glu Ile Arg Thr Lys Val Asn Asn His Ala Thr Asn Tyr Gly Glu 50 55 60 Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Thr 65 70 75 80 Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Arg Gly Ala Leu Tyr Asp Gly Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 198 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 198 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gly Ala 20 25 30 Trp Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Glu Ile Arg Thr Lys Val Asn Asn His Ala Thr Asn Tyr Gly Glu 50 55 60 Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ser 65 70 75 80 Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Arg Gly Ala Leu Tyr Asp Gly Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 199 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 199 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gly Ala 20 25 30 Trp Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Glu Ile Arg Thr Lys Val Asn Asn His Ala Thr Asn Tyr Gly Glu 50 55 60 Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr 65 70 75 80 Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Arg Gly Ala Leu Tyr Asp Gly Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 200 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (20)..(20) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (46)..(46) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (48)..(48) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (59)..(59) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (79)..(79) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (84)..(84) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (92)..(92) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (107)..(107) <223> protein <400> 200 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Xaa Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Gly 20 25 30 Tyr Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Xaa Leu Xaa 35 40 45 Ile Tyr Gly Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Xaa Pro Ala Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Xaa Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Xaa Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln Xaa Ser Ser Phe Pro 85 90 95 Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Xaa Lys 100 105 <210> 201 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 201 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Gly 20 25 30 Tyr Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Lys Leu Trp 35 40 45 Ile Tyr Gly Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln Trp Ser Ser Phe Pro 85 90 95 Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 202 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 202 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Gly 20 25 30 Tyr Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Trp 35 40 45 Ile Tyr Gly Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln Trp Ser Ser Phe Pro 85 90 95 Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 203 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 203 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Gly 20 25 30 Tyr Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Trp 35 40 45 Ile Tyr Gly Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln Trp Ser Ser Phe Pro 85 90 95 Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 204 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 204 Glu Phe Thr Met His 1 5 <210> 205 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 205 Gly Leu Lys Pro Asp Asn Gly Gly Ile Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 206 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 206 Gly Ala Tyr Tyr Arg Tyr Asp Ala Asp Tyr 1 5 10 <210> 207 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 207 Lys Ala Ser Gln Asp Val Lys Thr Ala Val Ala 1 5 10 <210> 208 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 208 Ser Ala Ser Tyr Arg Asn Thr 1 5 <210> 209 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 209 Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Phe Thr 1 5 <210> 210 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 210 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 20 25 30 Thr Met His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gly Leu Lys Pro Asp Asn Gly Gly Ile Ser Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Ala Thr Leu Ala Val Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Ala Tyr Tyr Arg Tyr Asp Ala Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 115 <210> 211 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 211 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Lys Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Asn Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Asp Ser Val Gln Ala 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 100 105 <210> 212 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(11) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12)..(12) <223> protein <220> <221> misc_feature <222> (24)..(24) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (30)..(30) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (33)..(33) <223> protein <220> <221> misc_feature <222> (34)..(34) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (37)..(37) <223> protein <220> <221> misc_feature <222> (38)..(38) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (47)..(47) <223> protein <220> <221> misc_feature <222> (55)..(56) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (61)..(61) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (62)..(62) <223> protein <220> <221> misc_feature <222> (74)..(74) <223> protein <220> <221> misc_feature <222> (77)..(77) <223> protein <220> <221> misc_feature <222> (81)..(81) <223> protein <220> <221> misc_feature <222> (91)..(91) <223> protein <220> <221> misc_feature <222> (105)..(106) <223> protein <400> 212 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Xaa Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 20 25 30 Thr Xaa His Trp Val Xaa Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gly Leu Lys Pro Asp Xaa Xaa Gly Ile Ser Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Xaa Ser Thr Xaa Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Xaa Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Xaa Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Ala Tyr Tyr Arg Tyr Xaa Xaa Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 213 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 213 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 20 25 30 Thr Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gly Leu Lys Pro Asp Asn Gly Gly Ile Ser Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Thr Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Ala Tyr Tyr Arg Tyr Asp Ala Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 214 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 214 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 20 25 30 Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gly Leu Lys Pro Asp Asn Gly Gly Ile Ser Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Ala Tyr Tyr Arg Tyr Asp Ala Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 215 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 215 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 20 25 30 Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gly Leu Lys Pro Asp Asn Gly Gly Ile Ser Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Ala Tyr Tyr Arg Tyr Asp Ala Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 216 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (55)..(55) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (56)..(56) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (60)..(60) <223> protein <220> <221> MISC_FEATURE <222> (73)..(73) <223> protein <400> 216 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Lys Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Xaa Xaa Gly Val Pro Xaa Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Xaa Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 217 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 217 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Lys Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Asn Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 218 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 218 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Lys Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Asn Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 219 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 219 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Lys Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Asn Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 220 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 220 Ala Leu Tyr Glu Gly Phe Tyr Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 221 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 221 Ala Leu Tyr Asp Ala Phe Tyr Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 222 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 222 Ala Leu Tyr Asp Ser Phe Tyr Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 223 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 223 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gly Ala 20 25 30 Trp Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Glu Ile Arg Thr Lys Val Asn Asn His Ala Thr Asn Tyr Gly Glu 50 55 60 Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Thr 65 70 75 80 Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Arg Gly Ala Leu Tyr Glu Gly Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 224 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 224 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gly Ala 20 25 30 Trp Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Glu Ile Arg Thr Lys Val Asn Asn His Ala Thr Asn Tyr Gly Glu 50 55 60 Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Thr 65 70 75 80 Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Arg Gly Ala Leu Tyr Asp Ala Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 225 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 225 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gly Ala 20 25 30 Trp Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Glu Ile Arg Thr Lys Val Asn Asn His Ala Thr Asn Tyr Gly Glu 50 55 60 Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Thr 65 70 75 80 Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Arg Gly Ala Leu Tyr Asp Ser Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 226 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 226 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gly Ala 20 25 30 Trp Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Glu Ile Arg Thr Lys Val Asn Asn His Ala Thr Asn Tyr Gly Glu 50 55 60 Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ser 65 70 75 80 Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Arg Gly Ala Leu Tyr Asp Glu Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 227 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 227 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gly Ala 20 25 30 Trp Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Glu Ile Arg Thr Lys Val Asn Asn His Ala Thr Asn Tyr Gly Glu 50 55 60 Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ser 65 70 75 80 Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Arg Gly Ala Leu Tyr Asp Ala Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 228 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 228 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gly Ala 20 25 30 Trp Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Glu Ile Arg Thr Lys Val Asn Asn His Ala Thr Asn Tyr Gly Glu 50 55 60 Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ser 65 70 75 80 Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Arg Gly Ala Leu Tyr Asp Ser Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 229 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 229 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gly Ala 20 25 30 Trp Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Glu Ile Arg Thr Lys Val Asn Asn His Ala Thr Asn Tyr Gly Glu 50 55 60 Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr 65 70 75 80 Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Arg Gly Ala Leu Tyr Glu Gly Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 230 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 230 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gly Ala 20 25 30 Trp Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Glu Ile Arg Thr Lys Val Asn Asn His Ala Thr Asn Tyr Gly Glu 50 55 60 Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr 65 70 75 80 Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Arg Gly Ala Leu Tyr Asp Ala Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 231 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 231 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gly Ala 20 25 30 Trp Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Glu Ile Arg Thr Lys Val Asn Asn His Ala Thr Asn Tyr Gly Glu 50 55 60 Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr 65 70 75 80 Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Arg Gly Ala Leu Tyr Asp Ser Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 232 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 232 His Gln Ala Ser Ser Phe Pro Tyr Thr 1 5 <210> 233 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 233 His Gln Asp Ser Ser Phe Pro Tyr Thr 1 5 <210> 234 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 234 His Gln Glu Ser Ser Phe Pro Tyr Thr 1 5 <210> 235 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 235 His Gln Phe Ser Ser Phe Pro Tyr Thr 1 5 <210> 236 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 236 His Gln Gly Ser Ser Phe Pro Tyr Thr 1 5 <210> 237 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 237 His Gln His Ser Ser Phe Pro Tyr Thr 1 5 <210> 238 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 238 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Gly 20 25 30 Tyr Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Lys Leu Trp 35 40 45 Ile Tyr Gly Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln Ala Ser Ser Phe Pro 85 90 95 Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 239 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 239 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Gly 20 25 30 Tyr Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Lys Leu Trp 35 40 45 Ile Tyr Gly Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln Asp Ser Ser Phe Pro 85 90 95 Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 240 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 240 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Gly 20 25 30 Tyr Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Lys Leu Trp 35 40 45 Ile Tyr Gly Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln Glu Ser Ser Phe Pro 85 90 95 Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 241 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 241 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Gly 20 25 30 Tyr Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Lys Leu Trp 35 40 45 Ile Tyr Gly Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln Phe Ser Ser Phe Pro 85 90 95 Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 242 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 242 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Gly 20 25 30 Tyr Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Lys Leu Trp 35 40 45 Ile Tyr Gly Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln Gly Ser Ser Phe Pro 85 90 95 Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 243 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 243 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Gly 20 25 30 Tyr Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Lys Leu Trp 35 40 45 Ile Tyr Gly Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln His Ser Ser Phe Pro 85 90 95 Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 244 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 244 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Gly 20 25 30 Tyr Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Trp 35 40 45 Ile Tyr Gly Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln Ala Ser Ser Phe Pro 85 90 95 Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 245 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 245 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Gly 20 25 30 Tyr Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Trp 35 40 45 Ile Tyr Gly Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln Asp Ser Ser Phe Pro 85 90 95 Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 246 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 246 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Gly 20 25 30 Tyr Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Trp 35 40 45 Ile Tyr Gly Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln Glu Ser Ser Phe Pro 85 90 95 Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 247 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 247 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Gly 20 25 30 Tyr Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Trp 35 40 45 Ile Tyr Gly Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln Phe Ser Ser Phe Pro 85 90 95 Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 248 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 248 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Gly 20 25 30 Tyr Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Trp 35 40 45 Ile Tyr Gly Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln Gly Ser Ser Phe Pro 85 90 95 Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 249 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 249 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Gly 20 25 30 Tyr Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Trp 35 40 45 Ile Tyr Gly Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln His Ser Ser Phe Pro 85 90 95 Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 250 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 250 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Gly 20 25 30 Tyr Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Trp 35 40 45 Ile Tyr Gly Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln Ala Ser Ser Phe Pro 85 90 95 Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 251 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 251 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Gly 20 25 30 Tyr Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Trp 35 40 45 Ile Tyr Gly Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln Asp Ser Ser Phe Pro 85 90 95 Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 252 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 252 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Gly 20 25 30 Tyr Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Trp 35 40 45 Ile Tyr Gly Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln Glu Ser Ser Phe Pro 85 90 95 Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 253 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 253 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Gly 20 25 30 Tyr Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Trp 35 40 45 Ile Tyr Gly Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln Phe Ser Ser Phe Pro 85 90 95 Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 254 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 254 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Gly 20 25 30 Tyr Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Trp 35 40 45 Ile Tyr Gly Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln Gly Ser Ser Phe Pro 85 90 95 Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 255 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 255 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Gly 20 25 30 Tyr Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Trp 35 40 45 Ile Tyr Gly Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln His Ser Ser Phe Pro 85 90 95 Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 256 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 256 Gly Leu Lys Pro Asp Gln Gly Gly Ile Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 257 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 257 Gly Leu Lys Pro Asp Asp Gly Gly Ile Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 258 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 258 Gly Leu Lys Pro Asp Asn Ala Gly Ile Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 259 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 259 Gly Leu Lys Pro Asp Thr Gly Gly Ile Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 260 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 260 Gly Leu Lys Pro Asp Ser Gly Gly Ile Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 261 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 261 Gly Leu Lys Pro Asp Gly Gly Gly Ile Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 262 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 262 Gly Leu Lys Pro Asp Asn Ser Gly Ile Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 263 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 263 Gly Leu Lys Pro Asp Asn Thr Gly Ile Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 264 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 264 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 20 25 30 Thr Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gly Leu Lys Pro Asp Gln Gly Gly Ile Ser Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Thr Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Ala Tyr Tyr Arg Tyr Asp Ala Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 265 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 265 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 20 25 30 Thr Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gly Leu Lys Pro Asp Asp Gly Gly Ile Ser Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Thr Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Ala Tyr Tyr Arg Tyr Asp Ala Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 266 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 266 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 20 25 30 Thr Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gly Leu Lys Pro Asp Asn Ala Gly Ile Ser Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Thr Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Ala Tyr Tyr Arg Tyr Asp Ala Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 267 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 267 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 20 25 30 Thr Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gly Leu Lys Pro Asp Thr Gly Gly Ile Ser Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Thr Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Ala Tyr Tyr Arg Tyr Asp Ala Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 268 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 268 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 20 25 30 Thr Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gly Leu Lys Pro Asp Ser Gly Gly Ile Ser Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Thr Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Ala Tyr Tyr Arg Tyr Asp Ala Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 269 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 269 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 20 25 30 Thr Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gly Leu Lys Pro Asp Gly Gly Gly Ile Ser Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Thr Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Ala Tyr Tyr Arg Tyr Asp Ala Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 270 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 270 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 20 25 30 Thr Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gly Leu Lys Pro Asp Asn Ser Gly Ile Ser Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Thr Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Ala Tyr Tyr Arg Tyr Asp Ala Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 271 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 271 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 20 25 30 Thr Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gly Leu Lys Pro Asp Asn Thr Gly Ile Ser Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Thr Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Ala Tyr Tyr Arg Tyr Asp Ala Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 272 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 272 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 20 25 30 Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gly Leu Lys Pro Asp Gln Gly Gly Ile Ser Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Ala Tyr Tyr Arg Tyr Asp Ala Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 273 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 273 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 20 25 30 Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gly Leu Lys Pro Asp Asp Gly Gly Ile Ser Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Ala Tyr Tyr Arg Tyr Asp Ala Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 274 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 274 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 20 25 30 Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gly Leu Lys Pro Asp Asn Ala Gly Ile Ser Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Ala Tyr Tyr Arg Tyr Asp Ala Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 275 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 275 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 20 25 30 Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gly Leu Lys Pro Asp Thr Gly Gly Ile Ser Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Ala Tyr Tyr Arg Tyr Asp Ala Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 276 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 276 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 20 25 30 Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gly Leu Lys Pro Asp Ser Gly Gly Ile Ser Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Ala Tyr Tyr Arg Tyr Asp Ala Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 277 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 277 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 20 25 30 Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gly Leu Lys Pro Asp Gly Gly Gly Ile Ser Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Ala Tyr Tyr Arg Tyr Asp Ala Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 278 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 278 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 20 25 30 Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gly Leu Lys Pro Asp Asn Ser Gly Ile Ser Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Ala Tyr Tyr Arg Tyr Asp Ala Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 279 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 279 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 20 25 30 Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gly Leu Lys Pro Asp Asn Thr Gly Ile Ser Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Ala Tyr Tyr Arg Tyr Asp Ala Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 280 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 280 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 20 25 30 Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gly Leu Lys Pro Asp Gln Gly Gly Ile Ser Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Ala Tyr Tyr Arg Tyr Asp Ala Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 281 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 281 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 20 25 30 Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gly Leu Lys Pro Asp Asp Gly Gly Ile Ser Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Ala Tyr Tyr Arg Tyr Asp Ala Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 282 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 282 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 20 25 30 Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gly Leu Lys Pro Asp Asn Ala Gly Ile Ser Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Ala Tyr Tyr Arg Tyr Asp Ala Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 283 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 283 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 20 25 30 Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gly Leu Lys Pro Asp Thr Gly Gly Ile Ser Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Ala Tyr Tyr Arg Tyr Asp Ala Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 284 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 284 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 20 25 30 Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gly Leu Lys Pro Asp Ser Gly Gly Ile Ser Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Ala Tyr Tyr Arg Tyr Asp Ala Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 285 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 285 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 20 25 30 Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gly Leu Lys Pro Asp Gly Gly Gly Ile Ser Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Ala Tyr Tyr Arg Tyr Asp Ala Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 286 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 286 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 20 25 30 Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gly Leu Lys Pro Asp Asn Ser Gly Ile Ser Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Ala Tyr Tyr Arg Tyr Asp Ala Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 287 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 287 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 20 25 30 Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gly Leu Lys Pro Asp Asn Thr Gly Ile Ser Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Ala Tyr Tyr Arg Tyr Asp Ala Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 288 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 288 Ser Ser Thr Thr Ala Gln Val Asn Trp Glu Gln Gln Asp Gln Leu 1 5 10 15 <210> 289 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 289 Ile Tyr His Thr Tyr Pro Asp Gly Thr 1 5 <210> 290 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 290 Gly Arg Ile Phe Leu 1 5 <210> 291 <211> 330 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein IgG1 <400> 291 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu 225 230 235 240 Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 292 <211> 325 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 292 Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr 1 5 10 15 Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro 20 25 30 Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val 35 40 45 His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser 50 55 60 Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr 65 70 75 80 Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val 85 90 95 Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe 100 105 110 Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 115 120 125 Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 130 135 140 Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 145 150 155 160 Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser 165 170 175 Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu 180 185 190 Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser 195 200 205 Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro 210 215 220 Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln 225 230 235 240 Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala 245 250 255 Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 260 265 270 Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu 275 280 285 Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 290 295 300 Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 305 310 315 320 Leu Ser Leu Gly Lys 325 <210> 293 <211> 105 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> protein <400> 293 Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu 1 5 10 15 Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro 20 25 30 Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly 35 40 45 Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr 50 55 60 Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His 65 70 75 80 Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val 85 90 95 Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 100 105

Claims (30)

  1. (i) 약 10 mg/ml 내지 약 200 mg/ml의 항-TIGIT 항체, 또는 그의 항원 결합 단편;
    (ii) 약 5 mM 내지 약 20 mM 완충제;
    (iii) 약 6% 중량/부피 (w/v) 내지 약 8% (w/v) 비환원성 당;
    (iv) 약 0.01% (w/v) 내지 약 0.10% (w/v) 비이온성 계면활성제; 및
    (v) 약 1 mM 내지 약 20 mM 항산화제를 포함하는 제제.
  2. 제1항에 있어서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 서열식별번호(SEQ ID NO) 111의 CDRL1, 서열식별번호 112의 CDRL2, 서열식별번호 113의 CDRL3을 포함하는 3개의 경쇄 CDR 및 서열식별번호 108의 CDRH1, 서열식별번호 154의 CDRH2, 및 서열식별번호 110의 CDRH3을 포함하는 3개의 중쇄 CDR을 포함하는 것인 제제.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 서열식별번호 148을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열식별번호 152를 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 것인 제제.
  4. 제3항에 있어서, 항-TIGIT 항체가 (i) 서열식별번호 291의 아미노산 서열을 포함하는 인간 중쇄 IgG1 불변 도메인 및 서열식별번호 293의 아미노산 서열을 포함하는 인간 카파 경쇄 불변 도메인; 또는 (ii) 서열식별번호 292의 아미노산 서열을 포함하는 인간 중쇄 IgG4 불변 도메인 및 서열식별번호 293의 아미노산 서열을 포함하는 인간 카파 경쇄 불변 도메인을 포함하는 것인 제제.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 제제의 pH가 5.3 내지 6.2인 제제.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 완충제가 L-히스티딘 완충제이고, 비환원성 당이 수크로스이고, 비이온성 계면활성제가 폴리소르베이트 80이고, 항산화제가 L-메티오닌이고, 제제는
    (i) 약 10 mg/ml 내지 약 200 mg/ml의 항- TIGIT 항체, 또는 그의 항원 결합 단편;
    (ii) 약 5 mM 내지 약 20 mM의 L-히스티딘 완충제;
    (iii) 약 6% (w/v) 내지 약 8% (w/v) 수크로스;
    (iv) 약 0.01% (w/v) 내지 약 0.10% (w/v) 폴리소르베이트 80; 및
    (v) 약 1 mM 내지 약 20 mM L-메티오닌을 포함하는 것인 제제.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 약 8 mM 내지 약 12 mM의 L-히스티딘 완충제를 포함하는 제제.
  8. 제6항 또는 제7항에 있어서, 약 5 mM 내지 약 10 mM L-메티오닌을 포함하는 제제.
  9. 제6항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 약 0.02% w/v의 중량비로 폴리소르베이트 80을 포함하는 제제.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 약 10 mg/ml 내지 약 100 mg/ml의 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함하는 제제.
  11. 제10항에 있어서, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 농도가 약 10 mg/ml, 12.5 mg/ml, 25 mg/ml, 50 mg/ml, 75 mg/ml 또는 100 mg/ml인 제제.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 약 25 mg/mL의 항-TIGIT 항체, 10 mM L-히스티딘 완충제, 약 7% w/v 수크로스, 약 0.02% 폴리소르베이트 80, 및 약 10 mM L-메티오닌을 포함하는 제제.
  13. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 약 50 mg/mL의 항-TIGIT 항체, 10 mM L-히스티딘 완충제, 약 7% w/v 수크로스, 약 0.02% 폴리소르베이트 80, 및 약 10 mM L-메티오닌을 포함하는 제제.
  14. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 약 75 mg/mL의 항-TIGIT 항체, 10 mM L-히스티딘 완충제, 약 7% w/v 수크로스, 약 0.02% 폴리소르베이트 80, 및 약 10 mM L-메티오닌을 포함하는 제제.
  15. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 약 100 mg/mL의 항-TIGIT 항체, 10 mM L-히스티딘 완충제, 약 7% w/v 수크로스, 약 0.02% 폴리소르베이트 80, 및 약 10 mM L-메티오닌을 포함하는 제제.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 제제의 pH가 약 5.5 - 6.3인 제제.
  17. 제16항에 있어서, 제제의 pH가 약 5.8-6.0인 제제.
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 항-PD1 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 추가로 포함하는 제제.
  19. 제18항에 있어서, 항-인간 PD-1 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 서열식별번호 1, 서열식별번호 2 및 서열식별번호 3의 3개의 경쇄 CDR 및 서열식별번호 6, 서열식별번호 7 및 서열식별번호 8의 3개의 중쇄 CDR을 포함하는 것인 제제.
  20. 제18항 또는 제19항에 있어서, 항-인간 PD-1 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 서열식별번호 4에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄 영역, 및 서열식별번호 9에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄 영역을 포함하는 것인 제제.
  21. 제16항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 제제가 펨브롤리주맙인 항-인간 PD-1 항체를 포함하는 것인 제제.
  22. 제18항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 항-PD1 항체 대 항-TIGIT 항체의 비가 1:1인 제제.
  23. 제18항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 약 20 mg/ml의 항-PD1 항체, 약 20 mg/ml의 항-TIGIT 항체, 10 mM L-히스티딘 완충제, 약 7% w/v 수크로스, 약 0.02% w/v 폴리소르베이트 80, 및 약 10 mM L-메티오닌을 포함하는 제제.
  24. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 킬레이터를 추가로 포함하는 제제.
  25. 제24항에 있어서, 킬레이터가 DTPA인 제제.
  26. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 제제가 유리 바이알 또는 주사 장치에 함유되어 있는 것인 제제.
  27. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 액체 제제이거나, 적어도 -70℃ 미만으로 냉동되거나, 또는 동결건조된 제제로부터의 재구성된 액제인 제제.
  28. 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 5℃에서 12개월 후:
    (i) 크기 배제 크로마토그래피에 의해 측정 시, 항-TIGIT 항체의 단량체(%)가 ≥95%이고/거나;
    (ii) 환원된 CE-SDS에 의해 측정 시, 항-TIGIT 항체의 중쇄 및 경쇄(%)가 ≥90%이고/거나;
    (iii) 환원된 CE-SDS에 의해 측정 시, 항-TIGIT 항체의 중쇄 및 경쇄(%)가 ≥95%이고/거나;
    (iv) 비환원된 CE-SDS에 의해 측정 시, 항-TIGIT 항체의 무손상 IgG(%)가 ≥90%이고/거나;
    (v) 비환원된 CE-SDS에 의해 측정 시, 항-TIGIT 항체의 무손상 IgG(%)가 ≥95%인 제제.
  29. 유효량의 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항의 제제를 투여하는 단계를 포함하는, 암 또는 만성 감염 치료를 필요로 하는 인간 환자에서 암 또는 만성 감염을 치료하는 방법.
  30. 암 치료용 또는 만성 감염 치료용 의약 제조를 위한 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항의 제제의 용도.
KR1020197035375A 2017-05-02 2018-05-01 항-tigit 항체 단독의, 및 프로그램화된 사멸 수용체 1 (pd-1) 항체와 조합된 항-tigit 항체의 안정한 제제 및 그의 사용 방법 KR20190142394A (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201762500278P 2017-05-02 2017-05-02
US62/500,278 2017-05-02
PCT/US2018/030516 WO2018204405A1 (en) 2017-05-02 2018-05-01 Stable formulations of anti-tigit antibodies alone and in combination with programmed death receptor 1 (pd-1) antibodies and methods of use thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20190142394A true KR20190142394A (ko) 2019-12-26

Family

ID=64016405

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020197035375A KR20190142394A (ko) 2017-05-02 2018-05-01 항-tigit 항체 단독의, 및 프로그램화된 사멸 수용체 1 (pd-1) 항체와 조합된 항-tigit 항체의 안정한 제제 및 그의 사용 방법

Country Status (16)

Country Link
US (1) US20200354453A1 (ko)
EP (1) EP3618855A4 (ko)
JP (2) JP7402693B2 (ko)
KR (1) KR20190142394A (ko)
CN (1) CN110603052A (ko)
AU (1) AU2018261080A1 (ko)
BR (1) BR112019022698A2 (ko)
CA (1) CA3061050A1 (ko)
CL (1) CL2019003145A1 (ko)
CO (1) CO2019012356A2 (ko)
IL (1) IL270175B2 (ko)
MA (1) MA50661A (ko)
MX (1) MX2019013033A (ko)
RU (1) RU2019138519A (ko)
SG (2) SG10202111905PA (ko)
WO (1) WO2018204405A1 (ko)

Families Citing this family (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DK2170959T3 (da) 2007-06-18 2014-01-13 Merck Sharp & Dohme Antistoffer mod human programmeret dødsreceptor pd-1
US10766957B2 (en) * 2015-08-14 2020-09-08 Merck Sharp & Dohme Corp Anti-TIGIT antibodies
EP3618863B1 (en) 2017-05-01 2023-07-26 Agenus Inc. Anti-tigit antibodies and methods of use thereof
CA3060581A1 (en) 2017-05-02 2018-11-08 Merck Sharp & Dohme Corp. Formulations of anti-lag3 antibodies and co-formulations of anti-lag3 antibodies and anti-pd-1 antibodies
AU2019232625A1 (en) * 2018-03-07 2020-09-17 Pfizer Inc. Anti-PD-1 antibody compositions
WO2020097141A1 (en) * 2018-11-07 2020-05-14 Merck Sharp & Dohme Corp. Stable formulations of programmed death receptor 1 (pd-1) antibodies and methods of use thereof
US20220110872A1 (en) * 2018-12-14 2022-04-14 Morphosys Ag Antibody formulations
MX2021013850A (es) * 2019-06-13 2022-01-07 Green Cross Corp Anticuerpo contra tigit y uso del mismo.
US20220273796A1 (en) * 2019-07-19 2022-09-01 Ichnos Sciences SA Lyophilized antibody formulation
CN112741804A (zh) * 2019-10-31 2021-05-04 上海君实生物医药科技股份有限公司 含有抗pd-l1抗体的稳定制剂
CA3168600A1 (en) * 2020-01-21 2021-07-29 Innovent Biologics (Suzhou) Co., Ltd. Recombinant fully human anti-tigit monoclonal antibody formulation, method for preparing same and use thereof
US20210252146A1 (en) * 2020-01-24 2021-08-19 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Stable antibody formulation
CN114507284B (zh) * 2020-05-09 2023-05-26 华博生物医药技术（上海）有限公司 抗tigit的抗体、其制备方法和应用
EP4168118A1 (en) 2020-06-18 2023-04-26 Genentech, Inc. Treatment with anti-tigit antibodies and pd-1 axis binding antagonists
CN111718415B (zh) * 2020-07-03 2021-02-23 上海洛启生物医药技术有限公司 一种抗tigit纳米抗体及其应用
TW202216778A (zh) 2020-07-15 2022-05-01 美商安進公司 Ｔｉｇｉｔ及ｃｄ１１２ｒ阻斷
AR125753A1 (es) 2021-05-04 2023-08-09 Agenus Inc Anticuerpos anti-tigit, anticuerpos anti-cd96 y métodos de uso de estos
WO2023001303A1 (zh) * 2021-07-23 2023-01-26 中山康方生物医药有限公司 药物组合物及用途
WO2023010094A2 (en) 2021-07-28 2023-02-02 Genentech, Inc. Methods and compositions for treating cancer
TW202321308A (zh) 2021-09-30 2023-06-01 美商建南德克公司 使用抗ｔｉｇｉｔ抗體、抗ｃｄ３８抗體及ｐｄ—１軸結合拮抗劑治療血液癌症的方法
CN114106182B (zh) * 2022-01-26 2022-05-17 中山康方生物医药有限公司 抗tigit的抗体及其用途
WO2023198116A1 (en) * 2022-04-14 2023-10-19 Beigene Switzerland Gmbh Stable high concentration arginine formulations containing pd-1 antibody and methods of use thereof
WO2023240058A2 (en) 2022-06-07 2023-12-14 Genentech, Inc. Prognostic and therapeutic methods for cancer
WO2024030458A2 (en) * 2022-08-04 2024-02-08 Merck Sharp & Dohme Llc Methods for determining one or more critical quality attributes of co-formulated antibodies

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2081553B1 (en) * 2006-10-06 2020-08-12 Amgen Inc. Stable antibody formulations
CA2765220A1 (en) * 2009-07-14 2011-01-20 Biogen Idec Ma Inc. Methods for inhibiting yellow color and peroxide formation in a composition
EP2399604A1 (en) * 2010-06-25 2011-12-28 F. Hoffmann-La Roche AG Novel antibody formulation
CN103429264A (zh) * 2011-03-31 2013-12-04 默沙东公司 针对人程序性死亡受体pd-1的抗体的稳定制剂和有关的治疗
US20140227250A1 (en) * 2012-08-23 2014-08-14 Merck Sharp & Dohme Corp. Stable formulations of antibodies to tslp
KR20160030936A (ko) 2013-07-16 2016-03-21 제넨테크, 인크. Pd-1 축 결합 길항제 및 tigit 억제제를 사용한 암을 치료하는 방법
IL250583B (en) 2014-08-19 2022-07-01 Merck Sharp & Dohme Anti-tigit antibodies
TWI708786B (zh) * 2014-12-23 2020-11-01 美商必治妥美雅史谷比公司 針對ｔｉｇｉｔ之抗體
EP3349792A1 (en) 2015-09-14 2018-07-25 Compass Therapeutics LLC Compositions and methods for treating cancer via antagonism of the cd155/tigit pathway and tgf-
US20190010224A1 (en) * 2015-12-22 2019-01-10 Merck Sharp & Dohme Corp. Formulations of engineered anti-il-10 antibodies

Also Published As

Publication number Publication date
SG11201909941QA (en) 2019-11-28
JP2020518600A (ja) 2020-06-25
CA3061050A1 (en) 2018-11-08
BR112019022698A2 (pt) 2020-05-19
JP7402693B2 (ja) 2023-12-21
CN110603052A (zh) 2019-12-20
SG10202111905PA (en) 2021-12-30
IL270175B1 (en) 2023-05-01
EP3618855A1 (en) 2020-03-11
EP3618855A4 (en) 2021-02-17
US20200354453A1 (en) 2020-11-12
AU2018261080A1 (en) 2019-11-07
RU2019138519A3 (ko) 2021-08-30
RU2019138519A (ru) 2021-06-02
WO2018204405A1 (en) 2018-11-08
IL270175A (ko) 2019-12-31
MA50661A (fr) 2020-08-05
CL2019003145A1 (es) 2020-07-10
IL270175B2 (en) 2023-09-01
MX2019013033A (es) 2020-02-05
JP2024016177A (ja) 2024-02-06
CO2019012356A2 (es) 2020-01-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7402693B2 (ja) 単独のおよびプログラム死受容体１（ｐｄ－１）抗体と組み合わされた抗ｔｉｇｉｔ抗体の安定な製剤、ならびにその使用方法
KR102624564B1 (ko) 항-ctla4 항체 단독의, 및 프로그램화된 사멸 수용체 1 (pd-1) 항체와 조합된 항-ctla4 항체의 안정한 제제 및 그의 사용 방법
US20240052036A1 (en) Formulations of anti-lag3 antibodies and co-formulations of anti-lag3 antibodies and anti-pd-1 antibodies
KR102031020B1 (ko) 인간 프로그램화된 사멸 수용체 pd-1에 대한 항체의 안정한 제제 및 관련된 치료
KR20190142392A (ko) 프로그램화된 사멸 수용체 1 (pd-1) 항체의 안정한 제제 및 그의 사용 방법
US20230365692A1 (en) Stable formulations of programmed death receptor 1 (pd-1) antibodies and hyaluronidase variants and fragments thereof and methods of use thereof
WO2023211873A2 (en) Pharmaceutical formulations of an anti-ilt4 antibody or antigen-binding fragment thererof and methods of use

Legal Events

Date Code Title Description
E902 Notification of reason for refusal