JP2024016177A - 単独のおよびプログラム死受容体1(pd-1)抗体と組み合わされた抗tigit抗体の安定な製剤、ならびにその使用方法 - Google Patents

単独のおよびプログラム死受容体1(pd-1)抗体と組み合わされた抗tigit抗体の安定な製剤、ならびにその使用方法 Download PDF

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Abstract

【課題】様々ながんおよび慢性感染症を処置するための抗TIGIT抗体の安定な製剤、および処置する方法を提供する。【解決手段】(i)約10mg/mlから約200mg/mlの抗TIGIT抗体またはその抗原結合性断片;(ii)約5mMから約20mMのバッファー;(iii)約6%から約8%重量/体積(w/v)の非還元糖;(iv)約0.01%から約0.10%(w/v)の非イオン性界面活性剤;および(v)約1mMから約20mMの抗酸化剤を含む製剤とする。【選択図】図1

Description

本発明は、治療抗体の製剤および様々な障害の処置におけるその使用に関する。1つの
態様において、本発明は、IgおよびITIMドメインを有するT細胞免疫受容体(TI
GIT)に結合する抗体またはその抗原結合性断片を含む製剤に関する。別の態様におい
て、かかる製剤は、抗ヒトプログラム死受容体1(PD-1)抗体またはその抗原結合性
断片をさらに含む。また、様々ながんおよび慢性感染症を本発明の製剤で処置する方法も
提供される。
関連出願の相互参照
本出願は、2017年5月2日に出願されたU.S.S.N62/500,278の利
益を主張するものであり、その内容は参照によりその全体が本明細書中に組み込まれる。
電子的に提出される配列表の参照
本出願の配列表は、ファイル名が「24453WOPCT-SEQTXT-01MAY
2018.TXT」、作成日が2018年5月1日およびサイズが227KbであるAS
CII形式の配列表として、EFS-Web経由で電子的に提出される。EFS-Web
経由で提出される本配列表は明細書の一部であり、参照によりその全体が本明細書中に組
み込まれる。
ヒトにおける使用のための抗体医薬は、それらの定常ドメインのアミノ酸配列が、また
は可変ドメイン内のそれらのフレームワーク配列がいくらか異なったものであり得るが、
典型的にはCDR配列が最も劇的に異なる。同じタンパク質、同じポリペプチドあるいは
潜在的に同じエピトープに結合する抗体であっても、完全に異なるCDR配列を含み得る
。ヒトにおける使用のための治療抗体はまた、ヒト生殖細胞系列抗体配列から、または例
えばヒト化抗体などにおいて非ヒト(例として齧歯類)生殖細胞系列抗体配列から得るこ
ともでき、このことは潜在的なCDR配列のなおさらなる多様性につながる。これらの配
列の相違は、溶液中での異なる安定性および溶液パラメータへの異なる応答性をもたらす
。加えて、アミノ酸配列の小さな変化または1もしく複数個のアミノ酸残基の変化は、劇
的に異なった抗体安定性および配列特異的分解経路への感受性をもたらすことができる。
結果として、現在、抗体安定性の最適化に必要な溶液の条件を予測することは可能ではな
い。各抗体は、最適な溶液配合を決定するために個々に試験されなければならない。Bh
ambhani et al.(2012) J.Pharm.Sci. 101:11
20。
抗体はまた、例えば他の治療タンパク質、例えばホルモンおよびサイトカインなどと比
べて相対的に高分子量のタンパク質(約150,000Da)でもある。結果として、所
望の薬剤モル濃度を達成するために相対的に多い重量の抗体医薬を投薬することがしばし
ば必要とされる。加えて、自己投与が可能になることから、皮下に抗体医薬を投与するこ
とが時に望ましい。自己投与は、例として静脈内への投与のための医療機関来診に関連し
た時間および費用を回避する。皮下への送達は、単回注射において実際に注射部位に送達
することができる溶液の量により制限され、これは一般に約1から1.5mlである。皮
下への自己投与は、注射前に患者が薬剤を再懸濁する必要をなくすため、典型的には凍結
乾燥形態よりむしろ薬剤の液体溶液製剤を充填したプレフィルドシリンジまたはオートイ
ンジェクターを用いて達成される。抗体医薬は効力および一貫した投薬量を確実にするた
めに保存中に安定でなければならないため、選ばれた製剤がどのようなものであっても望
ましい特性、例えば高濃度、透明性および許容可能な粘度などを支持すること、ならびに
また、これらの特性および薬剤の効力を典型的な保存条件下で許容可能な長期の保存期間
にわたって維持することが重大な意味を持つ。
TIGIT(IgおよびITIMドメインを有するT細胞免疫受容体)は、主として活
性化されたT細胞およびNK細胞上で発現する免疫調節性受容体である。TIGITは、
VSIG9;VSTM3;およびWUCAMとしても知られる。その構造は、1つの細胞
外免疫グロブリンドメイン、I型膜貫通領域および2つのITIMモチーフを示す。TI
GITは、T細胞上の正の免疫調節性受容体(CD226)および負の免疫調節性受容体
(TIGIT)ならびにAPC上に発現するリガンド(CD155およびCD112)か
らなる共刺激ネットワークの一部を形成する。
TIGITの構造における重要な特徴は、その細胞質側末端ドメイン中の免疫受容体チ
ロシンベース阻害モチーフ(ITIM)の存在である。PD-1およびTIGITと同様
に、TIGITの細胞質領域内のITIMドメインは、チロシンホスファターゼ、例えば
SHP-1およびSHP-2などを、ならびにその後の、T細胞受容体(TCR)サブユ
ニット上の免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ(ITAM)内のチロシン残基の脱
リン酸化をリクルートすると予測されている。したがって、腫瘍細胞またはTAMSが発
現する受容体-リガンドCD155およびCD112によるTIGITの連結は、TCR
シグナル伝達の抑制およびT細胞活性化に寄与し得て、これは有効な抗腫瘍免疫を開始す
るために必須である。それゆえに、TIGITに特異的なアンタゴニスト抗体は、CD1
55およびCD112誘導性のT細胞応答抑制を阻害し、抗腫瘍免疫を増強することがで
きた。
医薬的使用のための、例として様々ながんおよび感染性疾患を処置するための抗TIG
IT抗体の安定な製剤への、同様に抗ヒトPD-1抗体と合剤化(co-formula
ted)された抗TIGIT抗体の安定な製剤へのニーズが存在する。好ましくは、かか
る製剤は長期の保存期間を呈し、保存および輸送時に安定であり、好ましくは、自己投与
のための薬剤の保存に典型的な条件下、すなわちシリンジ中での冷蔵庫温度で数ヶ月から
数年にわたって安定性を呈し、このことは対応する医薬品の長期の保存期間をもたらす。
Bhambhani et al.(2012) J.Pharm.Sci. 101:1120
1つの態様において、本発明は、(i)抗TIGIT抗体またはその抗原結合性断片;
(ii)バッファー、(iii)非還元糖;(iv)非イオン性界面活性剤;および(v
)抗酸化剤を含む、抗TIGIT抗体またはその抗原結合性断片の製剤を包含する。ある
実施形態において、製剤は、抗PD-1抗体、例としてペンブロリズマブまたはニボルマ
ブをさらに含む。別の実施形態において、製剤は、キレーターを含む。
本発明のある実施形態において、製剤は、(i)約10mg/mlから約200mg/
mlの抗TIGIT抗体またはその抗原結合性断片;(ii)約5mMから約20mMの
バッファー;(iii)約6%から約8%重量/体積(w/v)の非還元糖;(iv)約
0.01%から約0.10%(w/v)の非イオン性界面活性剤;および(v)約1mM
から約20mMの抗酸化剤を含む。ある実施形態において、製剤は、抗PD-1抗体、例
としてペンブロリズマブまたはニボルマブをさらに含む。別の実施形態において、製剤は
キレーターをさらに含む。1つの実施形態において、製剤のpHは4.5~6.5の間で
ある。特定の実施形態において、製剤のpHは約pH5.5から約pH6.2である。さ
らなる実施形態において、製剤のpHは約pH5.6から約pH6.0である。別の実施
形態において、製剤のpHは約5.7である。別の実施形態において、製剤のpHは約5
.8である。別の実施形態において、製剤のpHは約5.9である。別の実施形態におい
て、製剤のpHは約6.0である。別の実施形態において、製剤のpHは約6.1である
。別の実施形態において、製剤のpHは約6.2である。
製剤の1つの実施形態において、バッファーはL-ヒスチジンバッファーまたは酢酸ナ
トリウムであり、非還元糖はスクロースであり、非イオン性界面活性剤はポリソルベート
80であり、抗酸化剤はメチオニンまたは薬学的に許容されるその塩である。1つの実施
形態において、抗酸化剤はL-メチオニンである。別の実施形態において、抗酸化剤はL
-メチオニンの薬学的に許容される塩、例えばメチオニンHClなどである。
別の実施形態において、製剤は、(i)約10mg/mlから約200mg/mlの抗
TIGIT抗体またはその抗原結合性断片;(ii)約5mMから約20mMのL-ヒス
チジンバッファーまたは約5mMから約20mMの酢酸ナトリウムバッファー;(iii
)約6%から約8% w/vのスクロース;(iv)約0.01%から約0.10%(w
/v)のポリソルベート80;および(v)約1mMから約20mMのL-メチオニンを
含む。別の実施形態において、製剤は抗PD-1抗体、例としてペンブロリズマブまたは
ニボルマブをさらに含む。ある実施形態において、製剤はキレーターをさらに含む。1つ
の実施形態において、キレーターは約1μMから約50μMの量で存在する。1つの実施
形態において、キレーターはDTPAである。別の実施形態において、キレーターはED
TAである。1つの実施形態において、バッファーはL-ヒスチジンバッファーである。
1つの実施形態において、製剤は約8mMから約12mMのL-ヒスチジンバッファーを
含む。別の実施形態において、製剤は約5mMから約10mMのL-メチオニンを含む。
さらなる実施形態において、製剤はポリソルベート80を約0.02%(w/v)の重量
比で含む。1つの実施形態において、抗TIGIT製剤はスクロースを約7%(w/v)
の重量比で含む。これらの実施形態のいずれかにおいて、メチオニンはL-メチオニンで
ある。
製剤の実施形態において、抗TIGIT抗体またはその抗原結合性断片の濃度は、約1
0mg/mlから約100mg/mlである。別の実施形態において、抗TIGIT抗体
またはその抗原結合性断片の濃度は、約10mg/ml、12.5mg/ml、15mg
/ml、20mg/ml、25mg/ml、50mg/ml、75mg/mlまたは10
0mg/mlである。1つの実施形態において、抗TIGIT抗体またはその抗原結合性
断片の濃度は、約20mg/mlである。1つの実施形態において、抗TIGIT抗体ま
たはその抗原結合性断片の濃度は、約25mg/mlである。1つの実施形態において、
抗TIGIT抗体またはその抗原結合性断片の濃度は、約50mg/mlである。1つの
実施形態において、抗TIGIT抗体またはその抗原結合性断片の濃度は、約75mg/
mlである。1つの実施形態において、抗TIGIT抗体またはその抗原結合性断片の濃
度は、約100mg/mlである。
1つの態様において、約20mg/mlの抗TIGIT抗体またはその抗原結合性断片
、10mMのL-ヒスチジンバッファー、約7% w/vのスクロース、約0.02%
w/vのポリソルベート80および約10mMのL-メチオニンを含む製剤が提供される
1つの態様において、約25mg/mlの抗TIGIT抗体またはその抗原結合性断片
、10mMのL-ヒスチジンバッファー、約7% w/vのスクロース、約0.02%
w/vのポリソルベート80および約10mMのL-メチオニンを含む製剤が提供される
1つの態様において、約50mg/mlの抗TIGIT抗体またはその抗原結合性断片
、10mMのL-ヒスチジンバッファー、約7% w/vのスクロース、約0.02%
w/vのポリソルベート80および約10mMのL-メチオニンを含む製剤が提供される
1つの態様において、約75mg/mlの抗TIGIT抗体またはその抗原結合性断片
、10mMのL-ヒスチジンバッファー、約7% w/vのスクロース、約0.02%
w/vのポリソルベート80および約10mMのL-メチオニンを含む製剤が提供される
1つの態様において、約100mg/mlの抗TIGIT抗体またはその抗原結合性断
片、10mMのL-ヒスチジンバッファー、約7% w/vのスクロース、約0.02%
w/vのポリソルベート80および約10mMのL-メチオニンを含む製剤が提供され
る。
上の製剤のいずれかの1つの態様において、製剤のpHは約5.4から約6.2である
。別の態様において、製剤のpHは約5.5~6.2である。別の実施形態において、製
剤のpHは約5.8~6.1である。別の実施形態において、pHは約5.8である。1
つの実施形態において、pHは5.9である。別の実施形態において、pHは6.0であ
る。さらなる実施形態において、pHは6.1である。
上の製剤のいずれかの1つの態様において、製剤は抗PD1抗体またはその抗原結合性
断片を含む。1つの実施形態において、抗PD1抗体はペンブロリズマブである。別の態
様において、抗PD1抗体はニボルマブである。
別の態様において、製剤はキレーターをさらに含み得る。1つの実施形態において、キ
レーターはDTPAである。1つの実施形態において、キレーターはEDTAである。1
つの態様において、キレーターは約1μMから約50μMの量で存在する。1つの実施形
態において、製剤は約5μMのキレーターを含む。1つの実施形態において、製剤は約1
0μMのキレーターを含む。1つの実施形態において、製剤は約15μMのキレーターを
含む。1つの実施形態において、製剤は約20μMのキレーターを含む。1つの実施形態
において、製剤は約25μMのキレーターを含む。1つの実施形態において、製剤は約3
0μMのキレーターを含む。1つの実施形態において、製剤は約35μMのキレーターを
含む。1つの実施形態において、製剤は約40μMのキレーターを含む。1つの実施形態
において、製剤は約45μMのキレーターを含む。1つの実施形態において、製剤は約5
0μMのキレーターを含む。1つの実施形態において、キレート剤は、上述の量のいずれ
かで存在するDTPAである。別の実施形態において、キレート剤は、上述の量のいずれ
かで存在するEDTAである。
1つの実施形態において、製剤はガラスバイアルの中に含有される。別の実施形態にお
いて、製剤は注入デバイスの中に含有される。別の実施形態において、製剤は液体製剤で
ある。1つの態様において、製剤は少なくとも-70℃未満まで凍結されている。別の実
施形態において、製剤は凍結乾燥製剤からの再構成溶液である。
ある種の実施形態において、製剤は、冷蔵温度(2~8℃)で少なくとも3ヶ月間、好
ましくは6ヶ月間、より好ましくは1年間、なおより好ましくは2年までの間を通して安
定である。製剤の1つの実施形態において、5℃で12ヶ月後、サイズ排除クロマトグラ
フィーにより決定される抗TIGIT抗体の%モノマーは≧90%である。製剤の別の実
施形態において、5℃で12ヶ月後、サイズ排除クロマトグラフィーにより決定される抗
TIGIT抗体の%モノマーは≧95%である。製剤の別の実施形態において、5℃で1
2ヶ月後、還元CE-SDSにより決定される抗TIGIT抗体の%重鎖および軽鎖は≧
90%である。製剤の別の実施形態において、5℃で12ヶ月後、還元CE-SDSによ
り決定される抗TIGIT抗体の%重鎖および軽鎖は≧95%である。製剤の別の実施形
態において、5℃で12ヶ月後、非還元CE-SDSにより決定される抗TIGIT抗体
の%インタクトIgGは≧90%である。製剤の別の実施形態において、5℃で12ヶ月
後、非還元CE-SDSにより決定される抗TIGIT抗体の%インタクトIgGは≧9
5%である。
上記製剤のいずれかの1つの態様において、製剤は、3つの軽鎖CDRおよび3つの重
鎖CDRを含む抗TIGIT抗体またはその抗原結合性断片を含み、ここで軽鎖CDRは
配列番号111またはそのバリアントのCDRL1、配列番号112またはそのバリアン
トのCDRL2、配列番号113またはそのバリアントのCDRL3を含み、重鎖CDR
は配列番号108またはそのバリアントのCDRH1、配列番号154またはそのバリア
ントのCDRH2および配列番号110またはそのバリアントのCDHR3を含む。上記
製剤のいずれかの1つの態様において、製剤は、3つの軽鎖CDRおよび3つの重鎖CD
Rを含む抗TIGIT抗体またはその抗原結合性断片を含み、ここで軽鎖CDRは配列番
号111のCDRL1、配列番号112のCDRL2、配列番号113のCDRL3を含
み、重鎖CDRは配列番号108のCDRH1、配列番号154のCDRH2および配列
番号110のCDHR3を含む。別の態様において、製剤は、配列番号148またはその
バリアントを含む重鎖可変領域および配列番号152またはそのバリアントを含む軽鎖可
変領域を含む抗TIGIT抗体またはその抗原結合性断片を含む。別の態様において、製
剤は、配列番号148を含む重鎖可変領域および配列番号152を含む軽鎖可変領域を含
む抗TIGIT抗体またはその抗原結合性断片を含む。1つの態様において、抗TIGI
T抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号291またはそのバリアントのアミノ酸配
列を含むヒト重鎖IgG1定常ドメインおよび配列番号293またはそのバリアントのア
ミノ酸配列を含むヒトカッパ軽鎖定常ドメインをさらに含む。1つの態様において、抗T
IGIT抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号291のアミノ酸配列を含むヒト重
鎖IgG1定常ドメインおよび配列番号293のアミノ酸配列を含むヒトカッパ軽鎖定常
ドメインをさらに含む。別の態様において、抗TIGIT抗体またはその抗原結合性断片
は、配列番号292のアミノ酸配列を含むヒト重鎖IgG4定常ドメインおよび配列番号
293のアミノ酸配列を含むヒトカッパ軽鎖定常ドメインをさらに含む。別の態様におい
て、抗TIGIT抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号292またはそのバリアン
トのアミノ酸配列を含むヒト重鎖IgG4定常ドメインおよび配列番号293またはその
バリアントのアミノ酸配列を含むヒトカッパ軽鎖定常ドメインをさらに含む。
1つの態様において、本発明は、(i)抗TIGIT抗体またはその抗原結合性断片;
(ii)抗ヒトPD-1抗体またはその抗原結合性断片、(ii)バッファー、(iii
)非還元糖;(iv)非イオン性界面活性剤;および(v)抗酸化剤を含む、抗TIGI
T抗体またはその抗原結合性断片および抗ヒトPD-1抗体またはその抗原結合性断片の
合剤(co-formulation)を提供する。ある実施形態において、合剤はキレ
ーターをさらに含む。1つの実施形態において、キレーターはEDTAである。別の実施
形態において、キレーターはDTPAである。合剤の1つの実施形態において、抗TIG
IT抗体に対する抗ヒトPD-1抗体の比は、1:2である。合剤の1つの実施形態にお
いて、抗TIGIT抗体に対する抗ヒトPD-1抗体の比は、1:1である。合剤の1つ
の実施形態において、抗TIGIT抗体に対する抗ヒトPD-1抗体の比は、2:1であ
る。
本発明のある実施形態において、合剤は、(i)約1mg/mlから約200mg/m
lの抗TIGIT抗体またはその抗原結合性断片;(ii)約1mg/mlから約200
mg/mlの抗ヒトPD-1抗体 (iii)約5mMから約20mMのバッファー;(
iv)約6%から約8%重量/体積(w/v)の非還元糖;(v)約0.01%から約0
.10%(w/v)の非イオン性界面活性剤;および(vi)約1mMから約20mMの
抗酸化剤を含む。ある実施形態において、合剤はキレーターをさらに含む。1つの実施形
態において、キレーターは、約1μMから約50μMの量で存在する。1つの実施形態に
おいて、キレーターはDTPAである。別の実施形態において、キレーターはEDTAで
ある。
合剤の1つの実施形態において、抗TIGIT抗体に対する抗ヒトPD-1抗体の比は、
1:2である。合剤の1つの実施形態において、抗TIGIT抗体に対する抗ヒトPD-
1抗体の比は、1:1である。合剤の1つの実施形態において、抗TIGIT抗体に対す
る抗ヒトPD-1抗体の比は、2:1である。1つの実施形態において、合剤のpHは4
.5~6.5の間である。特定の実施形態において、製剤のpHは約pH5.5から約p
H6.2である。さらなる実施形態において、製剤のpHは約pH5.8~6.0である
合剤の1つの実施形態において、バッファーはL-ヒスチジンバッファーまたは酢酸ナ
トリウムバッファーであり、非還元糖はスクロースであり、非イオン性界面活性剤はポリ
ソルベート80であり、抗酸化剤はL-メチオニンである。別の実施形態において、合剤
は、(i)約1mg/mlから約100mg/mlの抗TIGIT抗体またはその抗原結
合性断片;(ii)約1mg/mlから約100mg/mlの抗ヒトPD-1抗体または
その抗原結合性断片;(iii)約5mMから約20mMのL-ヒスチジンまたは約5m
Mから約20mMの酢酸ナトリウムバッファー;(iv)約6%から約8% w/vのス
クロース;(v)約0.01%から約0.10%(w/v)のポリソルベート80;およ
び(vi)約1mMから約20mMのL-メチオニンを含む。ある実施形態において、合
剤はキレーターを含んでもよい。1つの実施形態において、キレーターは約1μMから約
50μMの量で存在する。1つの実施形態において、キレーターはDTPAである。別の
実施形態において、キレーターはEDTAである。合剤の1つの実施形態において、バッ
ファーはL-ヒスチジンバッファーである。1つの実施形態において、合剤は約8mMか
ら約12mMのL-ヒスチジンバッファーを含む。別の実施形態において、合剤は約5m
Mから約10mMのL-メチオニンを含む。さらなる実施形態において、合剤はポリソル
ベート80を約0.02% w/vの重量比で含む。1つの実施形態において、合剤はス
クロースを約7%(w/v)の重量比で含む。
合剤の実施形態において、抗TIGIT抗体またはその抗原結合性断片の濃度は、約1
mg/mlから約100mg/mlである。合剤の実施形態において、抗TIGIT抗体
またはその抗原結合性断片の濃度は、約10mg/mlから約100mg/mlである。
別の実施形態において、抗TIGIT抗体またはその抗原結合性断片の濃度は、約10m
g/mlである。別の実施形態において、抗TIGIT抗体またはその抗原結合性断片の
濃度は、約12.5mg/mlである。別の実施形態において、抗TIGIT抗体または
その抗原結合性断片の濃度は、約20mg/mlである。別の実施形態において、抗TI
GIT抗体またはその抗原結合性断片の濃度は、約25mg/mlである。別の実施形態
において、抗TIGIT抗体またはその抗原結合性断片の濃度は、約50mg/mlであ
る。別の実施形態において、抗TIGIT抗体またはその抗原結合性断片の濃度は、約7
5mg/mlである。別の実施形態において、抗TIGIT抗体またはその抗原結合性断
片の濃度は、約または100mg/mlである。
合剤のいくつかの実施形態において、抗ヒトPD-1抗体の濃度は、約1mg/mlか
ら約100mg/mlである。合剤の1つの実施形態において、抗ヒトPD-1抗体の濃
度は、約10mg/mlから約100mg/mlである。別の実施形態において、抗ヒト
PD-1抗体の濃度は、20mg/mlである。別の実施形態において、抗ヒトPD-1
抗体の濃度は、25mg/mlである。
1つの実施形態において、合剤は、約20mg/mlの抗PD1抗体、約20mg/m
lの抗TIGIT抗体、10mMのL-ヒスチジンバッファー、約7% w/vのスクロ
ース、約0.02% w/vのポリソルベート80および約10mMのL-メチオニンを
含む。
1つの実施形態において、合剤は、約25mg/mlの抗PD1抗体、約25mg/m
lの抗TIGIT抗体、10mMのL-ヒスチジンバッファー、約7% w/vのスクロ
ース、約0.02% w/vのポリソルベート80および約10mMのL-メチオニンを
含む。
1つの実施形態において、合剤は、約50mg/mlの抗PD1抗体、約50mg/m
lの抗TIGIT抗体、10mMのL-ヒスチジンバッファー、約7% w/vのスクロ
ース、約0.02% w/vのポリソルベート80および約10mMのL-メチオニンを
含む。
上記製剤のいずれかの1つの態様において、製剤は、3つの軽鎖CDRおよび3つの重
鎖CDRを含む抗TIGIT抗体またはその抗原結合性断片を含み、ここで軽鎖CDRは
配列番号111またはそのバリアントのCDRL1、配列番号112またはそのバリアン
トのCDRL2、配列番号113またはそのバリアントのCDRL3を含み、重鎖CDR
は配列番号108またはそのバリアントのCDRH1、配列番号154またはそのバリア
ントのCDRH2および配列番号110またはそのバリアントのCDHR3を含む。上記
製剤のいずれかの1つの態様において、製剤は、3つの軽鎖CDRおよび3つの重鎖CD
Rを含む抗TIGIT抗体またはその抗原結合性断片を含み、ここで軽鎖CDRは配列番
号111のCDRL1、配列番号112のCDRL2、配列番号113のCDRL3を含
み、重鎖CDRは配列番号108のCDRH1、配列番号154のCDRH2および配列
番号110のCDHR3を含む。別の態様において、製剤は、配列番号148またはその
バリアントを含む重鎖可変領域および配列番号152またはそのバリアントを含む軽鎖可
変領域を含む抗TIGIT抗体またはその抗原結合性断片を含む。別の態様において、製
剤は、配列番号148を含む重鎖可変領域および配列番号152を含む軽鎖可変領域を含
む抗TIGIT抗体またはその抗原結合性断片を含む。1つの態様において、抗TIGI
T抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号291またはそのバリアントのアミノ酸配
列を含むヒト重鎖IgG1定常ドメインおよび配列番号293またはそのバリアントのア
ミノ酸配列を含むヒトカッパ軽鎖定常ドメインをさらに含む。1つの態様において、抗T
IGIT抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号291のアミノ酸配列を含むヒト重
鎖IgG1定常ドメインおよび配列番号293のアミノ酸配列を含むヒトカッパ軽鎖定常
ドメインをさらに含む。別の態様において、抗TIGIT抗体またはその抗原結合性断片
は、配列番号292またはそのバリアントのアミノ酸配列を含むヒト重鎖IgG4定常ド
メインおよび配列番号293またはそのバリアントのアミノ酸配列を含むヒトカッパ軽鎖
定常ドメインをさらに含む。別の態様において、抗TIGIT抗体またはその抗原結合性
断片は、配列番号292のアミノ酸配列を含むヒト重鎖IgG4定常ドメインおよび配列
番号293のアミノ酸配列を含むヒトカッパ軽鎖定常ドメインをさらに含む。
上記製剤のいずれかの1つの態様において、抗ヒトPD-1抗体またはその抗原結合性
断片は3つの軽鎖CDRおよび3つの重鎖CDRを含み、ここで軽鎖CDRは配列番号1
またはそのバリアントのCDRL1、配列番号2またはそのバリアントのCDRL2、配
列番号3またはそのバリアントのCDRL3を含み、重鎖CDRは配列番号6またはその
バリアントのCDRH1、配列番号7またはそのバリアントのCDRH2および配列番号
8またはそのバリアントのCDHR3を含む。上記製剤のいずれかの1つの態様において
、抗ヒトPD-1抗体またはその抗原結合性断片は3つの軽鎖CDRおよび3つの重鎖C
DRを含み、ここで軽鎖CDRは配列番号1のCDRL1、配列番号2のCDRL2、配
列番号3のCDRL3を含み、重鎖CDRは配列番号6のCDRH1、配列番号7のCD
RH2および配列番号8のCDHR3を含む。別の態様において、製剤は、配列番号4ま
たはそのバリアントを含む軽鎖可変領域および配列番号9またはそのバリアントを含む重
鎖可変領域を含む抗ヒトPD1抗体またはその抗原結合性断片を含む。別の態様において
、製剤は、配列番号4を含む軽鎖可変領域および配列番号9を含む重鎖可変領域を含む抗
ヒトPD1抗体またはその抗原結合性断片を含む。別の態様において、製剤は、配列番号
5を含む軽鎖および配列番号10を含む重鎖を含む抗ヒトPD1抗体またはその抗原結合
性断片を含む。別の態様において、製剤は、配列番号5またはそのバリアントを含む軽鎖
および配列番号10またはそのバリアントを含む重鎖を含む抗ヒトPD1抗体またはその
抗原結合性断片を含む。上記製剤のいずれかの1つの態様において、抗ヒトPD-1抗体
またはその抗原結合性断片はペンブロリズマブである。別の態様において、抗ヒトPD-
1抗体またはその抗原結合性断片はニボルマブである。
上記合剤のいずれかの1つの態様において、製剤は、(i)3つの軽鎖CDRおよび3
つの重鎖CDRを含む抗TIGIT抗体またはその抗原結合性断片であって、軽鎖CDR
が配列番号111のCDRL1、配列番号112のCDRL2、配列番号113のCDR
L3を含み、重鎖CDRが配列番号108のCDRH1、配列番号154のCDRH2お
よび配列番号110のCDHR3を含む、前記抗体またはその抗原結合性断片、ならびに
(ii)3つの軽鎖CDRおよび3つの重鎖CDRを含む抗ヒトPD-1抗体またはその
抗原結合性断片であって、軽鎖CDRが配列番号1のCDRL1、配列番号2のCDRL
2、配列番号3のCDRL3を含み、重鎖CDRが配列番号6のCDRH1、配列番号7
のCDRH2および配列番号8のCDHR3を含む、前記抗体またはその抗原結合性断片
を含む。
上の合剤のいずれかの1つの態様において、製剤は、(i)配列番号148を含む重鎖
可変領域および配列番号152を含む軽鎖可変領域を含む抗TIGIT抗体またはその抗
原結合性断片、ならびに(ii)配列番号4を含む軽鎖可変領域および配列番号9を含む
重鎖可変領域を含む抗ヒトPD1抗体またはその抗原結合性断片を含む。
上の合剤のいずれかの別の態様において、製剤は、(i)配列番号148を含む重鎖可
変領域を含み、配列番号291のアミノ酸配列を含むヒト重鎖IgG1定常ドメインをさ
らに含み、配列番号152を含む軽鎖可変領域を含み、配列番号293のアミノ酸配列を
含むヒトカッパ軽鎖定常ドメインをさらに含む抗TIGIT抗体またはその抗原結合性断
片、ならびに(ii)配列番号5を含む軽鎖および配列番号10を含む重鎖を含む抗ヒト
PD1抗体またはその抗原結合性断片を含む。
上の合剤のいずれかの別の態様において、製剤は、(i)配列番号148を含む重鎖可
変領域を含み、配列番号292のアミノ酸配列を含むヒト重鎖IgG1定常ドメインをさ
らに含み、配列番号152を含む軽鎖可変領域を含み、配列番号293のアミノ酸配列を
含むヒトカッパ軽鎖定常ドメインをさらに含む抗TIGIT抗体またはその抗原結合性断
片、ならびに(ii)配列番号5を含む軽鎖および配列番号10を含む重鎖を含む抗ヒト
PD1抗体またはその抗原結合性断片を含む。
上記製剤のいずれかの1つの実施形態において、製剤はガラスバイアルの中に含有され
る。別の実施形態において、製剤は注入デバイスの中に含有される。別の実施形態におい
て、製剤は液体製剤である。1つの態様において、製剤は少なくとも-70℃未満まで凍
結されている。別の実施形態において、製剤は凍結乾燥製剤からの再構成溶液である。
本発明は、有効量の本明細書中に記載の抗TIGIT製剤または合剤を投与することを
含む、その必要がある哺乳動物対象(例としてヒト)における慢性感染症またはがんを処
置する方法を提供する。
図1は、様々な保存条件で9ヶ月にわたる製剤のpH安定性を示す。 図2は、様々な保存条件で9ヶ月にわたる製剤のポリソルベート80濃度安定性を示す。 図3は、様々な保存条件で9ヶ月にわたる製剤のELISAによる力価の安定性データを示す。 図4は、様々な保存条件で9ヶ月にわたる製剤のUP-SECによるモノマー(%)の安定性データを示す。 図5は、様々な保存条件で9ヶ月にわたる製剤のUP-SECによる高分子量(HMW)種(%)の安定性データを示す。 図6は、様々な保存条件で9ヶ月にわたる製剤のUP-SECによる低分子量(LMW)種(%)の安定性データを示す。 図7は、様々な保存条件で9ヶ月にわたる製剤の還元CE-SDSによる純度 重鎖+軽鎖(%)の安定性データを示す。 図8は、様々な保存条件で9ヶ月にわたる製剤の非還元CE-SDSによる純度 インタクトIgG(%)の安定性データを示す。
1つの態様において、本発明は、メチオニンを含む、抗TIGIT抗体およびその抗原
結合性断片を含む製剤を提供する。また、メチオニンを含む、抗TIGIT抗体またはそ
の抗原結合性断片および抗ヒトPD-1抗体またはその抗原結合性断片の合剤も提供され
る。各々の場合において、製剤および合剤はキレート剤を含んでもよい。
I.定義および略語
本明細書および添付の特許請求の範囲の全体を通じて用いられるとき、次の略語が適用
される:
API 医薬品有効成分
CDR 特に指示がないかぎり、Kabatナンバリングシステムを用いて定義され
る、免疫グロブリン可変領域中の相補性決定領域
CHO チャイニーズハムスター卵巣
CI 信頼区間
DTPA ジエチレントリアミン五酢酸
EC50 50%の効力または結合をもたらす濃度
ELISA 酵素結合免疫吸着アッセイ
FFPE ホルマリン固定パラフィン包埋
FR フレームワーク領域
HRP 西洋ワサビペルオキシダーゼ
HNSCC 頭頸部扁平上皮癌
IC50 50%の阻害をもたらす濃度
IgG 免疫グロブリンG
IHC 免疫組織化学または免疫組織化学的
mAb モノクローナル抗体
MES 2-(N-モルフォリノ)エタンスルホン酸
NCBI 国立生物工学情報センター(National Center for B
iotechnology Information)
NSCLC 非小細胞肺がん
PCR ポリメラーゼ連鎖反応
PD-1 プログラム死1(別名 プログラム細胞死-1およびプログラム死受容体1

PD-L1 プログラム細胞死1リガンド1
PD-L2 プログラム細胞死1リガンド2
PS80 ポリソルベート80
TNBC トリプルネガティブ乳がん
免疫グロブリン重鎖可変領域
VK 免疫グロブリンカッパ軽鎖可変領域
免疫グロブリン軽鎖可変領域
v/v 体積あたり体積
WFI 注射用水
w/v 体積あたり重量
本発明がより容易に理解され得るように、ある種の技術用語および科学用語が下に具体
的に定義される。本書類中のどこかで具体的に定義されないかぎり、本明細書中で用いら
れる全ての他の技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者により通例
的に理解される意味を持つ。
本明細書の全体を通じておよび添付の特許請求の範囲の中で用いられるとき、単数形「
a」、「an」および「the」は、文脈が明らかに他を指示しないかぎり、複数形の言
及を包含する。
「または」への言及は、文脈が指し示された可能なもののうちの1つを明らかに指示し
ないかぎり、いずれかまたは両方の可能なものを指し示す。いくつかの場合において、「
および/または」は、いずれかまたは両方の可能なものを強調するために採用された。
本明細書中で用いられる、がんを「処置する」または「処置すること」は、少なくとも
1つの肯定的な治療効果、例えば、がん細胞の数の低減、腫瘍サイズの低減、末梢器官へ
のがん細胞の浸潤速度の低減、または腫瘍転移もしくは腫瘍増殖の速度の低減などを達成
するために、本発明の製剤を、免疫状態もしくはがん状態を持つ対象またはがんもしくは
病原体性感染症(例としてウイルス、細菌、真菌)と診断された対象に投与することを意
味する。「処置」は、次のものの1または複数を包含し得る:抗腫瘍免疫応答を誘導/向
上させること、病原体、毒素および/または自己抗原に対する免疫応答を刺激すること、
ウイルス感染に対する免疫応答を刺激すること、1または複数の腫瘍マーカーの数を減少
させること、腫瘍細胞の増殖または生存を阻害すること、1または複数のがん性病変また
は腫瘍を除去することまたはそのサイズを低減させること、1または複数の腫瘍マーカー
のレベルを減少させること、寛解させること、がんの重症度または持続期間を低減させる
こと、同様の未処置の患者における予想生存期間と比べて患者の生存期間を延ばすこと。
「免疫状態」または「免疫障害」は、例として病理学的炎症、炎症性障害および自己免
疫性の障害または疾患を包含する。「免疫状態」とはまた、感染症、持続性感染症および
増殖性状態、例えばがん、腫瘍および血管新生などをいい、免疫系による根絶に抵抗する
感染症、腫瘍およびがんを包含する。「がん状態」としては、例としてがん、がん細胞、
腫瘍、血管新生、および前がん状態、例えば異形成などが挙げられる。
がんにおける肯定的な治療効果は、いくつかの方法で測定することができる(W.A.
Weber,J.Nucl.Med. 50:1S-10S(2009)を参照されたい
)。例えば、腫瘍増殖阻害に関して、NCI標準によると、T/C≦42%が抗腫瘍活性
の最小レベルである。T/C<10%は、高い抗腫瘍活性レベルと考えられ、ここでT/
C(%)=処置された腫瘍体積の中央値/対照の腫瘍体積の中央値×100である。いく
つかの実施形態において、本発明の製剤の投与により達成される処置は、無増悪生存期間
(PFS)、無病生存期間(DFS)または全生存期間(OS)のいずれかである。PF
Sは、「腫瘍無増悪期間(Time to Tumor Progression)」と
も呼ばれ、がんが増殖しない処置中および処置後の期間を指し示し、患者が完全奏功また
は部分奏功を経験した時間、同様に患者が安定疾患を経験した時間を包含する。DFSと
は、患者が無病のままである処置中および処置後の期間をいう。OSとは、ナイーブまた
は未処置の個体または患者と比べた平均余命の延長をいう。本発明の製剤、処置方法およ
び使用のある実施形態は、あらゆる患者における肯定的な治療効果の達成に有効でないこ
ともあるが、当該技術分野で知られている任意の統計的検定、例えばStudentのt
検定、chi検定、MannおよびWhitneyによるU検定、Kruskal-W
allis検定(H-検定)、Jonckheere-Terpstra検定ならびにW
ilcoxon検定などにより決定される統計的に有意な数の対象においては、そうであ
ろう。
用語「患者」(あるいは本明細書中で「対象」または「個体」と呼ばれる)とは、本発
明の製剤で処置されることが可能な哺乳動物(例としてラット、マウス、イヌ、ネコ、ウ
サギ)をいい、最も好ましくはヒトである。いくつかの実施形態において、患者は、成人
の患者である。他の実施形態において、患者は、小児の患者である。
用語「抗体」とは、所望の生物学的活性を呈する任意の形態の抗体をいう。それゆえに
、これは最も広い意味で用いられ、具体的には、限定されるものではないが、モノクロー
ナル抗体(完全長のモノクローナル抗体を包含する)、ポリクローナル抗体、ヒト化抗体
、完全ヒト抗体およびキメラ抗体に及ぶ。「親抗体」は、意図される使用のための抗体の
改変に先立って、例えばヒト治療抗体としての使用のための抗体のヒト化などに先立って
、免疫系の抗原への曝露により得られる抗体である。
一般的に、基本的な抗体構造単位はテトラマーを含む。各テトラマーは2つの同一のポ
リペプチド鎖ペアを包含し、各ペアは1つの「軽」鎖(約25kDa)および1つの「重
」鎖(約50~70kDa)を持つ。各鎖のアミノ末端部分は、主として抗原認識に関与
する約100から110個以上のアミノ酸からなる可変領域を包含する。各軽鎖/重鎖ペ
アの可変領域は、抗体結合部位を形成する。それゆえに、一般的に、インタクトな抗体は
2つの結合部位を持つ。重鎖のカルボキシ末端部分は、主としてエフェクター機能に関与
する定常領域を規定し得る。典型的に、ヒトの軽鎖は、カッパ軽鎖およびラムダ軽鎖に分
類される。さらに、ヒト重鎖は典型的にミュー、デルタ、ガンマ、アルファまたはイプシ
ロンに分類され、それぞれ抗体のアイソタイプをIgM、IgD、IgG、IgAおよび
IgEと規定する。軽鎖および重鎖内で、可変領域および定常領域は約12個以上のアミ
ノ酸からなる「J」領域により連結され、重鎖はまた約10個以上のアミノ酸からなる「
D」領域も包含する。全般的に、Fundamental Immunology Ch
.7(Paul,W.,ed.,2nd ed. Raven Press,N.Y.(
1989)を参照されたい。
典型的に、重鎖および軽鎖両方の可変ドメインは、相補性決定領域(CDR)とも呼ば
れる3つの高頻度可変領域を含み、これらは比較的保存されたフレームワーク領域(FR
)内に位置する。CDRは通常フレームワーク領域と並んでおり、特異的なエピトープへ
の結合を可能にする。一般的に、N末端からC末端までに、軽鎖および重鎖両方の可変ド
メインは、FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3およびFR4を含む
。各ドメインへのアミノ酸の割り当ては、一般に、Sequences of Prot
eins of Immunological Interest,Kabat,et
al.;National Institutes of Health,Bethes
da,Md.;5th ed.;NIH Publ.No.91-3242(1991)
;Kabat(1978) Adv.Prot.Chem.32:1-75;Kabat
,et al.,(1977) J.Biol.Chem.252:6609-6616
;Chothia,et al.,(1987) J.Mol.Biol.196:90
1-917またはChothia,et al.,(1989) Nature 342
:878-883の定義に従う。
特定の標的タンパク質「に特異的に結合する」抗体は、他のタンパク質と比べてその標
的への優先的な結合を呈する抗体であるが、この特異性は絶対的な結合特異性を必要とし
ない。抗体は、その結合が試料中の標的タンパク質の存在を、例として望まれない結果、
例えば偽陽性などを生じることなく決定するならば、その意図された標的に「特異的」で
あると考えられる。本発明において有用な抗体またはその結合性断片は、非標的タンパク
質とのアフィニティーよりも少なくとも2倍強い、好ましくは少なくとも10倍強い、よ
り好ましくは少なくとも20倍強い、および最も好ましくは少なくとも100倍強いアフ
ィニティーを有して、標的タンパク質に結合する。本明細書中で用いられるとき、所与の
アミノ酸配列、例として成熟ヒトTIGITまたはヒトPD-1のアミノ酸配列を含むポ
リペプチドに結合するがその配列を欠いたタンパク質に結合しない場合、抗体は、その配
列を含むポリペプチドに特異的に結合するといわれる。
「キメラ抗体」とは、重鎖および/または軽鎖のある部分は特定の種(例としてヒト)
に由来する抗体または特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体中の対応する配
列と同一または相同であるが、鎖(複数可)の残部は別の種(例としてマウス)に由来す
る抗体または別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一ま
たは相同である抗体をいい、同様に、それらが所望の生物学的活性を呈するかぎり、かか
る抗体の断片をもいう。
本明細書中で用いられる「合剤化される(co-formulated)」または「合
剤(co-formulation)」または「合剤(coformulation)」
または「合剤化される(coformulated)」とは、個々に製剤化、保存され、
次いで投与前に混合されるか別々に投与されるのではなく、単一のバイアルまたは容器(
例えば注入デバイス)中で一緒に製剤化され、配合物(combined produc
t)として保存される、少なくとも2つの異なる抗体またはその抗原結合性断片をいう。
1つの実施形態において、合剤は2つの異なる抗体またはその抗原結合性断片を含有する
用語「薬学的有効量」または「有効量」は、それによって疾患または状態を処置するた
めに十分な治療組成物または製剤が患者に導入される量を意味する。当業者は、このレベ
ルが患者の特質、例えば年齢、体重などに応じて変動し得ることを認識する。
用語「約」とは、物質もしくは組成物の量(例としてmMまたはM)、製剤構成成分の
パーセンテージ(v/vまたはw/v)、溶液/製剤のpH、または方法中のステップを
特徴付けるパラメータの値などを修飾するとき、例えば、物質または組成物の調製、特性
評価および/または使用に関与する典型的な測定、操作およびサンプリング手法を通じて
;これらの手法における器差を通じて;組成物を作製もしくは使用するためまたは手法を
実施するために採用される成分の製造、供給源または純度の差を通じてなどで生じ得る数
量の変動をいう。ある種の実施形態において、「約」は、±0.1%、0.5%、1%、
2%、3%、4%、5%または10%の変動を意味することができる。
本明細書中で用いられるとき、「x %(w/v)」はx g/100mlと等しい(
例えば5% w/vは50mg/mlと等しい)。
本発明の製剤は、再構成時にまたは液体形態で生物学的に活性がある抗体およびその断
片を包含する。
用語「がん」、「がん性の」または「悪性」とは、典型的に未制御の細胞増殖を特徴と
する哺乳動物における生理的状態をいう、または記載する。がんの例としては、限定され
るものではないが、癌腫、リンパ腫、白血病、芽腫および肉腫が挙げられる。かかるがん
のより特定の例としては、扁平上皮癌、骨髄腫、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、神経膠
腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、胃腸(消化管)がん、腎臓がん、卵巣がん
、肝臓がん、リンパ芽球性白血病、リンパ性白血病、結腸直腸がん、子宮内膜がん、腎臓
がん、前立腺がん、甲状腺がん、メラノーマ、軟骨肉腫、神経芽細胞腫、膵臓がん、多形
神経膠芽腫、子宮頸がん、脳がん、胃がん、膀胱がん、肝がん、乳がん、結腸癌腫および
頭頸部がんが挙げられる。
「Chothia」は、Al-Lazikani et al.,JMB 273:9
27-948(1997)中に記載される抗体ナンバリングシステムを意味する。
本明細書中で用いられる「Kabat」は、Elvin A.Kabat((1991
) Sequences of Proteins of Immunological
Interest,5th Ed. Public Health Service,
National Institutes of Health,Bethesda,M
d.)により開発された免疫グロブリンのアラインメントおよびナンバリングシステムを
意味する。
「増殖阻害剤」とは、本明細書中で用いられるとき、インビトロまたはインビボのいず
れかにおいて、細胞、特に本明細書中で同定される遺伝子のいずれかを過剰発現するがん
細胞の増殖を阻害する化合物または組成物をいう。それゆえに、増殖阻害剤は、S期にお
いてかかる遺伝子を過剰発現する細胞のパーセンテージを顕著に低減するものである。増
殖阻害剤の例としては、細胞周期の進行を(S期以外のところで)遮断する剤、例えばG
1停止およびM期停止を誘導する剤などが挙げられる。古典的なM期ブロッカーとしては
、ビンカ類(ビンクリスチンおよびビンブラスチン)、タキサン類およびトポII阻害剤
、例えばドキソルビシン、エピルビシン、ダウノルビシンおよびエトポシドなどが挙げら
れる。G1を停止させる剤はまたS期停止にまで波及し、例えば、DNAアルキル化剤、
例えばダカルバジン、メクロレタミンおよびシスプラチンなどがある。さらなる情報は、
The Molecular Basis of Cancer、Mendelsohn
およびIsrael編の1章に、Murakamiらによる“Cell cycle r
egulation, oncogens, and antineoplastic
drugs”というタイトルで見出すことができる(WB Saunders:フィラデ
ルフィア、1995年)。
用語「TIGIT結合性断片」、「その抗原結合性断片」、「その結合性断片」または
「その断片」は、抗原(ヒトTIGIT)に結合してその活性を阻害する(例としてヒト
TIGITのその天然のリガンドへの結合を遮断する)というその生物学的活性をなお実
質的に保持した抗体の断片または誘導体を包含する。それゆえ、用語「抗体断片」または
TIGIT結合性断片とは、完全長抗体の部分、一般にその抗原結合性領域または可変領
域をいう。TIGIT抗体断片の例としては、Fab、Fab’、F(ab’)およ
びFv断片が挙げられる。典型的に、結合性断片または誘導体は、そのTIGIT阻害活
性の少なくとも10%を保持する。所望の生物学的効果を発揮するために十分なアフィニ
ティーを有する任意の結合性断片が有用であるが、いくつかの実施形態において、結合性
断片または誘導体はそのTIGIT阻害活性の少なくとも25%、50%、60%、70
%、80%、90%、95%、99%または100%(またはそれより多い)を保持する
。いくつかの実施形態において、抗原結合性断片は、その抗原に、無関係の抗原とのアフ
ィニティーよりも少なくとも2倍強い、好ましくは少なくとも10倍強い、より好ましく
は少なくとも20倍強い、最も好ましくは少なくとも100倍強いアフィニティーを有し
て結合する。1つの実施形態において、抗体は、例としてスキャチャード解析により決定
されるアフィニティーが約10リットル/molよりも強い。Munsen et a
l.(1980) Analyt.Biochem. 107:220-239。また、
TIGIT結合性断片はその生物活性を実質的に変えない保存的アミノ酸置換を持つバリ
アントを包含することができることも意図される。
用語「PD-1結合性断片」、「その抗原結合性断片」、「その結合性断片」または「
その断片」は、抗原(ヒトPD-1)に結合してその活性を阻害する(例としてヒトPD
-1のPDL1およびPDL2への結合を遮断する)というその生物学的活性をなお実質
的に保持した抗体の断片または誘導体を包含する。それゆえ、用語「抗体断片」またはP
D-1結合性断片とは、完全長抗体の部分、一般にその抗原結合性領域または可変領域を
いう。抗体断片の例としては、Fab、Fab’、F(ab’)およびFv断片が挙
げられる。典型的に、結合性断片または誘導体は、そのPD-1阻害活性の少なくとも1
0%を保持する。所望の生物学的効果を発揮するために十分なアフィニティーを有する任
意の結合性断片が有用であるが、いくつかの実施形態において、結合性断片または誘導体
はそのPD-1阻害活性の少なくとも25%、50%、60%、70%、80%、90%
、95%、99%または100%(またはそれより多い)を保持する。いくつかの実施形
態において、抗原結合性断片は、その抗原に、無関係の抗原とのアフィニティーよりも少
なくとも2倍強い、好ましくは少なくとも10倍強い、より好ましくは少なくとも20倍
強い、最も好ましくは少なくとも100倍強いアフィニティーを有して結合する。1つの
実施形態において、抗体は、例としてスキャチャード解析により決定されるアフィニティ
ーが約10リットル/molよりも強い。Munsen et al.(1980)
Analyt.Biochem. 107:220-239。また、PD-1結合性断片
はその生物活性を実質的に変えない保存的アミノ酸置換を持つバリアントを包含すること
ができることも意図される。
「ヒト抗体」とは、ヒト免疫グロブリンタンパク質配列のみを含む抗体をいう。ヒト抗
体は、マウス、マウス細胞またはマウス細胞に由来するハイブリドーマ中で産生された場
合はマウスの糖鎖を含有し得る。同様に、「マウス抗体」または「ラット抗体」とは、そ
れぞれマウスまたはラットの免疫グロブリン配列のみを含む抗体をいう。
「ヒト化抗体」とは、非ヒト(例としてマウス)抗体からの、同様にヒト抗体からの配
列を含有する抗体の形態をいう。かかる抗体は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小限
の配列を含有する。一般的に、ヒト化抗体は、少なくとも1つ、典型的には2つの可変ド
メインの実質的に全てを含み、ここで非ヒト免疫グロブリンのそれに相当する高頻度可変
ループの全てまたは実質的に全て、およびFR領域の全てまたは実質的に全ては、ヒト免
疫グロブリン配列のそれである。ヒト化抗体はまた、免疫グロブリン定常領域(Fc)の
少なくとも部分を、典型的にヒト免疫グロブリンのそれを含んでもよい。齧歯類抗体のヒ
ト化形態は、一般に、親の齧歯類抗体と同じCDR配列を含むが、ヒト化抗体のアフィニ
ティーを向上させるため、安定性を向上させるため、または他の理由のためにある種のア
ミノ酸置換が包含され得る。
本発明の抗体はまた、変化したエフェクター機能を提供するためにFc領域が改変(ま
たはブロック)された抗体を包含する。例として、米国特許第5,624,821号;W
O2003/086310;WO2005/120571;WO2006/005770
2;Presta (2006) Adv.Drug Delivery Rev. 5
8:640-656を参照されたい。かかる改変は、免疫系の様々な反応を亢進または抑
制するために用いることができ、診断および治療において潜在的な有益効果を有する。F
c領域の変化としては、アミノ酸の変更(置換、欠失および挿入)、グリコシル化または
脱グリコシル化、および複数のFcを加えることが挙げられる。Fcへの変更はまた、治
療抗体における抗体半減期を変えることもでき、より長い半減期は投薬をより低頻度にし
、同時に利便性を向上させ、材料の使用を減らす。Presta (2005) J.
Allergy Clin. Immunol.116:731 at 734-35を
参照されたい。
「完全ヒト抗体」とは、ヒト免疫のグロブリンタンパク質配列のみを含む抗体をいう。
完全ヒト抗体は、マウス、マウス細胞またはマウス細胞に由来するハイブリドーマ中で産
生された場合はマウスの糖鎖を含有し得る。同様に、「マウス抗体」とは、マウスの免疫
グロブリン配列のみを含む抗体をいう。完全ヒト抗体は、ヒトにおいて、ヒト免疫グロブ
リン生殖細胞系列配列を持つトランスジェニック動物において、ファージディスプレイま
たは他の分子生物学的方法によって作成され得る。
「高頻度可変領域」とは、抗原結合に関与する抗体のアミノ酸残基をいう。高頻度可変
領域は、「相補性決定領域」もしくは「CDR」からのアミノ酸残基(例としてKaba
tナンバリングシステム(Kabat et al.(1991) Sequences
of Proteins of Immunological Interest,5
th Ed. Public Health Service,National In
stitutes of Health,Bethesda,Md.)により測定される
軽鎖可変ドメイン中の残基24~34(CDRL1)、50~56(CDRL2)および
89~97(CDRL3)ならびに重鎖可変ドメイン中の残基31~35(CDRH1)
、50~65(CDRH2)および95~102(CDRH3))ならびに/または「高
頻度可変ループ」からのアミノ酸残基(すなわち軽鎖可変ドメイン中の残基26~32(
L1)、50~52(L2)および91~96(L3)ならびに重鎖可変ドメイン中の2
6~32(H1)、53~55(H2)および96~101(H3)(Chothia
and Lesk (1987) J.Mol.Biol. 196:901-917)
を含む。本明細書中で用いられるとき、用語「フレームワーク」または「FR」の残基と
は、本明細書中でCDR残基として規定される高頻度可変領域残基以外のそれらの可変ド
メイン残基をいう。CDRおよびFRの残基は、Kabatの標準的な配列定義に従って
決定される。Kabat et al.(1987) Sequences of Pr
oteins of Immunological Interest,Nationa
l Institutes of Health,Bethesda Md。
「保存的改変バリアント」または「保存的置換」とは、当業者に知られているアミノ酸
の置換をいい、一般に、ポリペプチドの必須領域においてさえも得られる分子の生物学的
活性を変えることなくなされ得る。かかる例示的な置換は、好ましくは、次の表1中に記
載されるものに従ってなされる。
表1.例示的な保存的アミノ酸置換
Figure 2024016177000002

加えて、当業者は、一般的に、ポリペプチドの非必須領域における単一のアミノ酸置換
は生物学的活性を実質的に変えないことを認識する。例としてWatson et al
.(1987) Molecular Biology of the Gene,Th
e Benjamin/Cummings Pub.Co.,p.224(4th Ed
.)を参照されたい。
本明細書および特許請求の範囲の全体を通じて用いられる句「から本質的になる(co
nsists essentially of)」またはバリエーション、例えば「から
本質的になる(consist essentially of)」または「から本質的
になること(consisting essentially of)」などは、任意の
列挙された要素または要素の群を含めること、および定められた投薬レジメン、方法また
は組成物の基本的なまたは新規の特性を実質的に変化させない、列挙された要素と性質が
類似したまたは異なる他の要素を含めてもよいことを指し示す。限定されない例として、
列挙されたアミノ酸配列から本質的になる結合性化合物は、結合性化合物の特性に実質的
に影響しない1または複数のアミノ酸をも包含し得て、これは1または複数のアミノ酸残
基の置換を包含する。
「を含むこと(comprising)」またはバリエーション、例えば「を含む(c
omprise)」、「を含む(comprises)」または「を含む(compri
sed of)」などは、明示的な言語または必然的な暗示のために文脈が他のものを必
要としないかぎり、本明細書および特許請求の範囲の全体を通じて包含的な意味で、すな
わち、述べられた特徴の存在を特定するが本発明の実施形態のいずれかの作用または有用
性を実質的に高め得るさらなる特徴の存在または追加を排除せずに用いられる。
「単離された抗体」および「単離された抗体断片」とは精製状態をいい、かかる文脈に
おいて、指名された分子が他の生物学的分子、例えば核酸、タンパク質、脂質、炭水化物
または他の物質、例えば細胞デブリおよび増殖培地などを実質的に含まないことを意味す
る。一般に、用語「単離された」は、本明細書中に記載される結合性化合物の実験的また
は治療的な使用を実質的に妨げる量で存在しないかぎり、かかる物質の完全な不存在、ま
たは水、バッファーもしくは塩の不存在を指すことは意図されない。
本明細書中で用いられる「モノクローナル抗体」または「mAb」または「Mab」と
は、実質的に均一な抗体の集団をいい、すなわちその集団を構成する抗体分子のアミノ酸
配列は、少量存在し得る潜在的な自然発生変異以外は同一である。対照的に、従来の(ポ
リクローナル)抗体調製物は、典型的に、それらの可変ドメイン、とりわけそれらのCD
Rの中に異なるアミノ酸配列を持つ数多くの異なる抗体を包含し、これらはしばしば異な
るエピトープに対して特異的である。修飾語「モノクローナル」は、実質的に均一な抗体
集団から得られるものとしての抗体の特質を指し示し、何かしらの特定の方法による抗体
産生が必要であると解釈されるものではない。例えば、本発明に従って用いられるモノク
ローナル抗体は、Kohler et al.(1975) Nature 256:4
95により最初に記載されたハイブリドーマ法により作製され得て、または組換えDNA
法により作製され得る(例として米国特許No.4,816,567を参照されたい)。
「モノクローナル抗体」はまた、ファージ抗体ライブラリーから、例えばClackso
n et al.(1991) Nature 352:624-628およびMark
s et al.(1991) J.Mol.Biol. 222:581-597中に
記載される技術を用いて単離され得る。Presta(2005) J.Allergy
Clin.Immunol. 116:731も参照されたい。
がんと診断されたまたはがんを持つ疑いのある対象に適用される「腫瘍」とは、任意の
サイズの悪性または潜在的に悪性の新生物または組織塊をいい、原発性腫瘍および二次性
新生物を包含する。固形腫瘍は、通常は嚢胞または液体の領域を含有しない組織の異常増
殖物または塊である。異なるタイプの固形腫瘍が、それらを形成する細胞のタイプによっ
て命名されている。固形腫瘍の例は、肉腫、癌腫およびリンパ腫である。白血病(血液の
がん)は、一般に固形腫瘍を形成しない(National Cancer Insti
tute,Dictionary of Cancer Terms)。
用語「腫瘍サイズ」とは、腫瘍の長さおよび幅として測定することができる腫瘍の全体
サイズをいう。腫瘍サイズは、当該技術分野で知られている種々の方法により、例として
、対象から摘出した時に腫瘍(複数可)の寸法を例としてキャリパーを用いて測定するこ
とにより、または体内にある間にイメージング技術、例として骨スキャン、超音波、CT
またはMRIスキャンを用いることなどによって、決定され得る。
本明細書中で用いられる「可変領域」または「V領域」は、異なる抗体間で配列が可変
であるIgG鎖のセグメントを意味する。これは、軽鎖中のKabat残基109および
重鎖中の113に及ぶ。
用語「バッファー」は、本発明の製剤の溶液pHを許容可能な範囲内で維持する剤、ま
たは本発明の凍結乾燥製剤の場合は凍結乾燥前に許容可能な溶液pHを与える剤を包含す
る。
用語「凍結乾燥」、「凍結乾燥された(lyophilized)」および「凍結乾燥
された(freeze-dried)」とは、乾燥される材料を最初に凍結し、次いで氷
または凍結した溶媒を真空環境中で昇華により取り除くプロセスをいう。保存の際の凍結
乾燥品の安定性を高めるため、添加剤が予備凍結乾燥製剤(pre-lyophiliz
ed formulation)の中に包含され得る。
用語「医薬製剤」とは、活性成分が有効であることを可能にするような形態であって、
製剤が投与される対象にとって毒性である付加的な構成成分を含有しない調合剤をいう。
用語「製剤」および「医薬製剤」は全体を通じて交換可能に用いられる。
「薬学的に許容される」とは、採用された有効用量の活性成分を提供するために対象に
適度に投与することができ、かつ「一般に安全と認められる」、例として生理学的に耐容
できて、ヒトに投与されたときにアレルギー反応または同様の不都合な反応、例えば急性
胃蠕動などを典型的に生じない添加剤(媒体、添加物)および組成物をいう。別の実施形
態において、この用語は、連邦政府もしくは州政府の規制当局により承認された、または
米国薬局方もしくは動物、より詳細にはヒトにおける使用のために一般に認知されている
別の薬局方に収載された分子実体および組成物をいう。
「再構成」製剤は、タンパク質が再構成製剤中に分散するよう、凍結乾燥タンパク質製
剤を希釈剤中に溶解することにより調製されたものである。再構成製剤は投与、例として
非経口投与に適しており、皮下投与に適していてもよい。
「再構成時間」は、凍結乾燥製剤が溶液と再水和して粒子のない清澄な溶液になるため
に必要とされる時間である。
「安定な」製剤は、保存の際にその中のタンパク質がその物理的安定性および/または
化学的安定性および/または生物学的活性を本質的に保持するものである。タンパク質の
安定性を測定するための様々な分析技術が当該技術分野において利用可能であり、Pep
tide and Protein Drug Delivery,247-301,V
incent Lee Ed.,Marcel Dekker,Inc.,New Yo
rk,N.Y.,Pubs.(1991)およびJones,A. Adv.Drug
Delivery Rev. 10:29-90(1993)中にレビューされている。
安定性は、選択された温度で選択された期間、測定することができる。例えば、1つの実
施形態において、安定な製剤は、冷蔵温度(2~8℃)で少なくとも12ヶ月間、顕著な
変化が観察されない製剤である。別の実施形態において、安定な製剤は、冷蔵温度(2~
8℃)で少なくとも18ヶ月間、顕著な変化が観察されない製剤である。別の実施形態に
おいて、安定な製剤は、室温(23~27℃)で少なくとも3ヶ月間、顕著な変化が観察
されない製剤である。別の実施形態において、安定な製剤は、室温(23~27℃)で少
なくとも6ヶ月間、顕著な変化が観察されない製剤である。別の実施形態において、安定
な製剤は、室温(23~27℃)で少なくとも12ヶ月間、顕著な変化が観察されない製
剤である。別の実施形態において、安定な製剤は、室温(23~27℃)で少なくとも1
8ヶ月間、顕著な変化が観察されない製剤である。抗体製剤のための安定性の判断基準は
次のとおりである。典型的に、SEC-HPLCにより測定される抗体モノマーの10%
以下、好ましくは5%以下しか分解されていない。典型的に、製剤は、視覚分析によると
無色、または透明からわずかに乳白色である。典型的に、製剤の濃度、pHおよび浸透圧
は+/-10%以下しか変化しない。力価は、典型的に、対照または参照の60~140
%、好ましくは80~120%の範囲内である。典型的に、抗体のクリッピング、すなわ
ち例えばHP-SECにより決定される%低分子量種が10%以下、好ましくは5%以下
しか観察されない。典型的に、抗体の凝集、すなわち例えばHP-SECにより決定され
る%高分子量種が10%以下、好ましくは5%以下しか観察されない。
抗体は、色および/もしくは清澄性の視覚試験での、またはUV光散乱、サイズ排除ク
ロマトグラフィー(SEC)および動的光散乱により測定される凝集、沈殿および/また
は変性が顕著な増加を示さないならば、医薬製剤において「その物理的安定性を保持して
いる」。タンパク質構造の変化は、タンパク質3次構造を決定する蛍光分光法により、お
よびタンパク質2次構造を決定するFTIR分光法により評価することができる。
抗体は、顕著な化学的変化を示さないならば、医薬製剤において「その化学的安定性を
保持している」。化学的安定性は、タンパク質形態の化学的変化を検出および定量するこ
とにより査定することができる。タンパク質の化学構造をしばしば変える分解プロセスと
しては、加水分解またはクリッピング(例えばサイズ排除クロマトグラフィーおよびSD
S-PAGEなどの方法により評価される)、酸化(例えば質量分析またはMALDI/
TOF/MSを伴うペプチドマッピングなどの方法により評価される)、脱アミド化(例
えばイオン交換クロマトグラフィー、キャピラリー等電点電気泳動、ペプチドマッピング
、イソアスパラギン酸測定などの方法により評価される)および異性化(イソアスパラギ
ン酸含量を測定すること、ペプチドマッピングなどにより評価される)が挙げられる。
抗体は、所与の時点における抗体の生物学的活性が、医薬製剤が調製された時点で呈さ
れた生物学的活性の予め決められた範囲内であれば、医薬製剤において「その生物学的安
定性を保持している」。抗体の生物学的活性は、例えば抗原結合アッセイにより決定する
ことができる。
用語「等張」は、対象の製剤がヒト血液と本質的に同じ浸透圧を持つことを意味する。
等張性製剤の浸透圧は、一般に約270~328mOsmである。わずかに低張な圧は2
50~269であり、わずかに高張な圧は328~350mOsmである。浸透圧は、例
えば蒸気圧または氷凍結型の浸透圧計を用いて測定することができる。
II.本発明の製剤および合剤
1つの態様において、本発明は、ヒトTIGITに特異的に結合する抗TIGIT抗体
またはその抗原結合性断片を医薬品有効成分として含む、生物学的製剤を提供する。かか
る製剤中にメチオニンを含ませることは、抗TIGIT抗体のFc領域中のメチオニン残
基、および配列番号110のCDRH3を含む抗TIGIT抗体の例においてはトリプト
ファン(tryoptophan)の酸化を低減させる。かかる製剤はキレーター、例え
ばDTPAなどをさらに含み得て、これは酸化をさらに低減させることができる。
1つの態様において、本発明はまた、抗TIGIT抗体と抗PD-1抗体との合剤を提
供する。ペンブロリズマブの主要な分解経路は、過酸化物ストレスの際の重鎖CDR3中
のメチオニン105(Met105)(例として配列番号10のM105)の酸化、なら
びに光に曝露されたときのMet105およびFcメチオニン残基の酸化を包含していた
。ペンブロリズマブは、試験された分解レベルのための最大のストレス条件下でその生物
活性を維持した。しかしながら、表面プラスモン共鳴(SPR)により、過酸化物ストレ
スを受けた試料について、PD-1に対するアフィニティーの低減が観察された。抗体の
露出したメチオニン残基またはCDR中のメチオニン残基は、酸化を通じて抗体の生物学
的活性に影響を与える可能性がある。メチオニンの添加は、ペンブロリズマブ重鎖CDR
内のMet105の酸化を低減させることが可能である。
抗PD-1抗体およびその抗原結合性断片
1つの態様において、本発明は、医薬品有効成分(PD-1 API)としてのヒトP
D-1に特異的に結合する抗ヒトPD-1抗体またはその抗原結合性断片(例としてヒト
またはヒト化抗PD-1抗体)と合剤化された抗TIGIT抗体またはその抗原結合性断
片を含む安定な生物学的製剤、同様に本発明の製剤を用いるための方法を提供する。任意
の抗PD-1抗体またはその抗原結合性断片を、本発明の合剤および方法において用いる
ことができる。特定の実施形態において、PD-1 APIは、ペンブロリズマブおよび
ニボルマブから選択される抗PD-1抗体である。具体的な実施形態において、抗PD-
1抗体はペンブロリズマブである。代替的実施形態において、抗PD-1抗体はニボルマ
ブである。表2は、例示的な抗ヒトPD-1抗体であるペンブロリズマブおよびニボルマ
ブのアミノ酸配列を提供する。本発明の合剤および方法において有用な代替的PD-1抗
体および抗原結合性断片は、表3中に示される。
いくつかの実施形態において、本発明の合剤における使用のための抗ヒトPD-1抗体
またはその抗原結合性断片は、CDRL1、CDRL2およびCDRL3の3つの軽鎖C
DRならびに/またはCDRH1、CDRH2およびCDRH3の3つの重鎖CDRを含
む。
本発明の1つの実施形態において、CDRL1は配列番号1または配列番号1のバリア
ントであり、CDRL2は配列番号2または配列番号2のバリアントであり、CDRL3
は配列番号3または配列番号3のバリアントである。
1つの実施形態において、CDRH1は配列番号6または配列番号6のバリアントであ
り、CDRH2は配列番号7または配列番号7のバリアントであり、CDRH3は配列番
号8または配列番号8のバリアントである。
1つの実施形態において、3つの軽鎖CDRは配列番号1、配列番号2および配列番号
3であり、3つの重鎖CDRは配列番号6、配列番号7および配列番号8である。
本発明の代替的実施形態において、CDRL1は配列番号11または配列番号11のバ
リアントであり、CDRL2は配列番号12または配列番号12のバリアントであり、C
DRL3は配列番号13または配列番号13のバリアントである。
1つの実施形態において、CDRH1は配列番号16または配列番号16のバリアント
であり、CDRH2は配列番号17または配列番号17のバリアントであり、CDRH3
は配列番号18または配列番号18のバリアントである。
1つの実施形態において、3つの軽鎖CDRは配列番号1、配列番号2および配列番号
3であり、3つの重鎖CDRは配列番号6、配列番号7および配列番号8である。
代替的実施形態において、3つの軽鎖CDRは配列番号11、配列番号12および配列
番号13であり、3つの重鎖CDRは配列番号16、配列番号17および配列番号18で
ある。
本発明のさらなる実施形態において、CDRL1は配列番号21または配列番号21の
バリアントであり、CDRL2は配列番号22または配列番号22のバリアントであり、
CDRL3は配列番号23または配列番号23のバリアントである。
なお別の実施形態において、CDRH1は配列番号24または配列番号24のバリアン
トであり、CDRH2は配列番号25または配列番号25のバリアントであり、CDRH
3は配列番号26または配列番号26のバリアントである。
別の実施形態において、3つの軽鎖CDRは配列番号21、配列番号22および配列番
号23であり、3つの重鎖CDRは配列番号24、配列番号25および配列番号26であ
る。
本発明のいくつかの抗ヒトPD-1抗体および抗原結合性断片は、軽鎖可変領域および
重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、軽鎖可変領域は配列番号4または配
列番号4のバリアントを含み、重鎖可変領域は配列番号9または配列番号9のバリアント
を含む。さらなる実施形態において、軽鎖可変領域は配列番号14または配列番号14の
バリアントを含み、重鎖可変領域は配列番号19または配列番号19のバリアントを含む
。さらなる実施形態において、重鎖可変領域は配列番号27または配列番号27のバリア
ントを含み、軽鎖可変領域は配列番号28もしくは配列番号28のバリアント、配列番号
29もしくは配列番号29のバリアント、または配列番号30もしくは配列番号30のバ
リアントを含む。かかる実施形態において、バリアントの軽鎖または重鎖可変領域配列は
、1、2、3、4または5個のアミノ酸置換を除いて参照配列と同一である。いくつかの
実施形態において、フレームワーク領域の中(すなわちCDRの外側)にある。いくつか
の実施形態において、1、2、3、4または5個のアミノ酸置換は保存的置換である。
本発明の合剤の1つの実施形態において、抗ヒトPD-1抗体または抗原結合性断片は
、配列番号4を含むまたはこれからなる軽鎖可変領域および配列番号9を含むまたはこれ
からなる重鎖可変領域を含む。さらなる実施形態において、抗ヒトPD-1抗体または抗
原結合性断片は、配列番号14を含むまたはこれからなる軽鎖可変領域および配列番号1
9を含むまたはこれからなる重鎖可変領域を含む。本発明の製剤の1つの実施形態におい
て、抗ヒトPD-1抗体または抗原結合性断片は、配列番号28を含むまたはこれからな
る軽鎖可変領域および配列番号27を含むまたはこれからなる重鎖可変領域を含む。さら
なる実施形態において、抗ヒトPD-1抗体または抗原結合性断片は、配列番号29を含
むまたはこれからなる軽鎖可変領域および配列番号27を含むまたはこれからなる重鎖可
変領域を含む。別の実施形態において、抗体または抗原結合性断片は、配列番号30を含
むまたはこれからなる軽鎖可変領域および配列番号27を含むまたはこれからなる重鎖可
変領域を含む。
別の実施形態において、本発明の合剤は、上記のVドメインまたはVドメインのう
ちの1つと少なくとも95%、90%、85%、80%、75%または50%の配列相同
性を有するVドメインおよび/またはVドメインを持ち、PD-1への特異的結合を
呈する抗ヒトPD-1抗体または抗原結合性タンパク質を含む。別の実施形態において、
本発明の合剤の抗ヒトPD-1抗体または抗原結合性タンパク質は、1、2、3、4もし
くは5個まで、またはそれより多くのアミノ酸置換を持つVおよびVドメインを含み
、PD-1への特異的結合を呈する。
上の実施形態のいずれかにおいて、PD-1 APIは、ヒトPD-1に特異的に結合
する完全長の抗PD-1抗体またはその抗原結合性断片であり得る。ある種の実施形態に
おいて、PD-1 APIは、IgM、IgG、IgD、IgAおよびIgEを包含する
免疫グロブリンの任意の分類から選択される完全長の抗PD-1抗体である。好ましくは
、抗体はIgG抗体である。IgG、IgG、IgGおよびIgGを包含するI
gGの任意のアイソタイプを用いることができる。異なる定常ドメインが本明細書中で提
供されるVおよびV領域に付加され得る。例えば、本発明の抗体(または断片)の特
定の用途がエフェクター機能の変化を求めることであったなら、IgG1以外の重鎖定常
ドメインが用いられ得る。IgG1抗体は長い半減期ならびに例えば補体活性化および抗
体依存性細胞傷害などのエフェクター機能を提供するが、かかる活性は抗体のあらゆる使
用のためには望ましくないこともある。かかる例においては、例えばIgG4定常ドメイ
ンが用いられ得る。
本発明の実施形態において、PD-1 APIは、配列番号5に記載のアミノ酸残基の
配列を含むまたはこれからなる軽鎖および配列番号10に記載のアミノ酸残基の配列を含
むまたはこれからなる重鎖を含む抗PD-1抗体である。代替的実施形態において、PD
-1 APIは、配列番号15に記載のアミノ酸残基の配列を含むまたはこれからなる軽
鎖および配列番号20に記載のアミノ酸残基の配列を含むまたはこれからなる重鎖を含む
抗PD-1抗体である。さらなる実施形態において、PD-1 APIは、配列番号32
に記載のアミノ酸残基の配列を含むまたはこれからなる軽鎖および配列番号31に記載の
アミノ酸残基の配列を含むまたはこれからなる重鎖を含む抗PD-1抗体である。付加的
な実施形態において、PD-1 APIは、配列番号33に記載のアミノ酸残基の配列を
含むまたはこれからなる軽鎖および配列番号31に記載のアミノ酸残基の配列を含むまた
はこれからなる重鎖を含む抗PD-1抗体である。なお付加的な実施形態において、PD
-1 APIは、配列番号34に記載のアミノ酸残基の配列を含むまたはこれからなる軽
鎖および配列番号31に記載のアミノ酸残基の配列を含むまたはこれからなる重鎖を含む
抗PD-1抗体である。本発明のいくつかの合剤において、PD-1 APIは、ペンブ
ロリズマブまたはペンブロリズマブのバイオシミラーである。本発明のいくつかの合剤に
おいて、PD-1 APIはニボルマブまたはニボルマブのバイオシミラーである。
通常、本発明の抗PD-1抗体および抗原結合性断片ならびに抗TIGIT抗体および
抗原結合性断片のアミノ酸配列バリアントは、参照抗体または抗原結合性断片(例として
重鎖、軽鎖、V、Vまたはヒト化配列)のアミノ酸配列と少なくとも75%、より好
ましくは少なくとも80%、より好ましくは少なくとも85%、より好ましくは少なくと
も90%、最も好ましくは少なくとも95、98または99%のアミノ酸配列同一性を持
つアミノ酸配列を持つ。配列に関する同一性または相同性は、本明細書中では、配列を並
べ、最大パーセント配列同一性を達成するために必要ならばギャップを導入し、配列同一
性の一部としてあらゆる保存的置換を考慮しなかった後の、抗PD-1の残基と同一であ
る候補配列中のアミノ酸残基のパーセンテージとして定義される。抗体配列のN末端、C
末端または内部の伸長、欠失または挿入のいずれも配列同一性または相同性に影響を与え
るものと解釈されるものではない。
配列同一性とは、2つのポリペプチドのアミノ酸が、2つの配列を最適に並べたときに
対応する位置で同じである度合をいう。配列同一性は、BLASTアルゴリズムを用いて
決定することができ、ここで、このアルゴリズムのパラメーターは、それぞれの参照配列
の全長にわたって、それぞれの配列間に最大マッチを与えるように選択される。次の参考
文献は、配列解析のためにしばしば用いられるBLASTアルゴリズムに関する:BLA
ST ALGORITHMS:Altschul,S.F.,et al.,(1990
) J.Mol.Biol. 215:403-410;Gish,W.,et al.
,(1993) Nature Genet. 3:266-272;Madden,T
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141;Altschul,S.F.,et al.,(1997) Nucleic
Acids Res. 25:3389-3402;Zhang,J.,et al.,
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.,et al.,(1993) Comput.Chem. 17:149-163;
Hancock,J.M. et al.,(1994) Comput.Appl.B
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.5,suppl.3.”M.O.Dayhoff(ed.),pp.353-358,
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Karlin,S.,et al.,(1993) Proc.Natl.Acad.S
ci.USA 90:5873-5877;Dembo,A.,et al.,(199
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ce of multiple distinct local alignments
.” in Theoretical and Computational Meth
ods in Genome Research(S.Suhai,ed.),(199
7) pp.1-14,Plenum,New York。
同じく、軽鎖のいずれの分類も、本明細書中の組成物および方法において用いることが
できる。具体的には、カッパ、ラムダまたはそれらのバリアントは、本発明の組成物およ
び方法において有用である。
表2.例示的なPD-1抗体配列
Figure 2024016177000003
Figure 2024016177000004
表3.本発明の合剤、方法および使用において有用であるさらなるPD-1抗体および抗
原結合性断片
Figure 2024016177000005
本発明の合剤のいくつかの実施形態において、PD-1 API(すなわち抗PD-1
抗体またはその抗原結合性断片)は、約25mg/mLから約100mg/mLの濃度で
存在する。代替的実施形態において、APIは、約10mg/mL、約25mg/mL、
約50mg/mL、約75mg/mLまたは約100mg/mLの濃度で存在する。
抗TIGIT抗体およびその抗原結合性断片
1つの態様において、本発明は、医薬品有効成分(TIGIT API)としてのヒト
TIGITに特異的に結合する抗TIGIT抗体またはその抗原結合性断片(例としてヒ
トまたはヒト化抗TIGIT抗体)を含む生物学的製剤、同様に本発明の製剤を用いるた
めの方法を提供する。
別の態様において、本発明はまた、(i)ヒトTIGITに特異的に結合する抗TIG
IT抗体またはその抗原結合性断片(例としてヒトまたはヒト化抗TIGIT抗体)、お
よび(ii)ヒトPD-1に特異的に結合する抗ヒトPD-1抗体またはその抗原結合性
断片を含む生物学的合剤を提供する。任意の抗TIGIT抗体またはその抗原結合性断片
を、合剤を包含する本発明の製剤および方法において用いることができる。例示的な抗T
IGIT抗体の配列は、下で表4および5の中に記載される。
表4 例示的な抗TIGIT抗体
Figure 2024016177000006
Figure 2024016177000007
Figure 2024016177000008
Figure 2024016177000009
Figure 2024016177000010
Figure 2024016177000011
Figure 2024016177000012
Figure 2024016177000013
Figure 2024016177000014
Figure 2024016177000015
Figure 2024016177000016
Figure 2024016177000017
Figure 2024016177000018
Figure 2024016177000019
Figure 2024016177000020
Figure 2024016177000021
Figure 2024016177000022
Figure 2024016177000023
Figure 2024016177000024
Figure 2024016177000025
Figure 2024016177000026
Figure 2024016177000027
Figure 2024016177000028
いくつかの実施形態において、抗TIGIT抗体またはその抗原結合性断片は、CDR
L1、CDRL2およびCDRL3の3つの軽鎖CDRならびに/またはCDRH1、C
DRH2およびCDRH3の3つの重鎖CDRを含む。
1つの実施形態において、抗TIGIT抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号3
5を含むCDRH1、配列番号36を含むCDRH2、配列番号:37、103、104
、105、106、107または160のいずれかを含むCDRH3、配列番号38を含
むCDRL1、配列番号:39、89、90、91、92、93、94、95、96、9
7または69のいずれかを含むCDRL2、および配列番号:40、98、99、100
、101、102または162のいずれかを含むCDRL3を含む。
別の実施形態において、抗TIGIT抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号81
を含むCDRH1、配列番号82を含むCDRH2、配列番号83を含むCDRH3、配
列番号84を含むCDRL1、配列番号85を含むCDRL2、および配列番号86を含
むCDRL3を含む。
別の実施形態において、抗TIGIT抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号10
8を含むCDRH1、配列番号:109、116、117、118、119、120、1
21、122、123、124、125、126、127、128、129、130、1
31、154、155または167のいずれかを含むCDRH2、配列番号:110、1
73、174、175、176、177、178、179、180、181、182、1
83、184、185、186または187のいずれかを含むCDRH3、配列番号11
1を含むCDRL1、配列番号:112、132、133、134、135、136、1
37、138、139、140、141、142または168のいずれかを含むCDRL
2、および配列番号113のアミノ酸配列を含むCDRL3を含む。
1つの実施形態において、抗TIGIT抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号3
5を含むCDRH1、配列番号36を含むCDRH2、配列番号37を含むCDRH3、
配列番号38を含むCDRL1、配列番号39を含むCDRL2、および配列番号40の
アミノ酸配列を含むCDRL3を含む。
1つの実施形態において、抗TIGIT抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号1
08を含むCDRH1、配列番号109、154または145のいずれか1つを含むCD
RH2、配列番号110を含むCDRH3、配列番号111を含むCDRL1、配列番号
112を含むCDRL2、および配列番号113のアミノ酸配列を含むCDRL3を含む
別の実施形態において、抗TIGIT抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号10
8のアミノ酸配列を含むCDRH1、配列番号154を含むCDRH2、配列番号110
を含むCDRH3、配列番号111を含むCDRL1、配列番号112を含むCDRL2
、および配列番号113を含むCDRL3を含む。
1つの実施形態において、抗TIGIT抗体またはその抗原結合性断片は、可変重鎖領
域および可変軽鎖可変領域を含む。1つの実施形態において、抗TIGIT抗体またはそ
の抗原結合性断片は、配列番号41を含む可変重鎖領域および配列番号42を含む可変軽
鎖領域を含む。
1つの実施形態において、抗TIGIT抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号8
7を含む可変重鎖領域および配列番号88を含む可変軽鎖領域を含む。
1つの実施形態において、抗TIGIT抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号1
14を含む可変重鎖領域および配列番号115を含む可変軽鎖領域を含む。
1つの実施形態において、抗TIGIT抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号:
43~58、65~75および87のいずれかを含む可変重鎖領域ならびに配列番号:5
9~64、76~80および88のいずれか1つを含む可変軽鎖領域を含む。
1つの実施形態において、抗TIGIT抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号:
144~149のいずれかを含む可変重鎖領域および配列番号:150~153のいずれ
かを含む可変軽鎖領域を含む。
1つの実施形態において、抗TIGIT抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号1
48を含む可変重鎖領域を含む可変重鎖領域および配列番号152を含む可変軽鎖領域を
含む。
1つの実施形態において、抗TIGIT抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号1
47を含む可変重鎖領域および配列番号150を含む可変軽鎖領域を含む。
1つの実施形態において、抗TIGIT抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号1
48を含む可変重鎖領域および配列番号153を含む可変軽鎖領域を含む。
1つの実施形態において、抗TIGIT抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号1
63を含む可変重鎖領域および配列番号165を含む可変軽鎖領域を含む。
1つの実施形態において、抗TIGIT抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号1
69を含む可変重鎖領域および配列番号171を含む可変軽鎖領域を含む。
1つの実施形態において、抗TIGIT抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号1
64を含む可変重鎖領域および配列番号166を含む可変軽鎖領域を含む。
1つの実施形態において、抗TIGIT抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号1
70を含む可変重鎖領域および配列番号172を含む可変軽鎖領域を含む。
表5:例示的な抗TIGIT抗体配列
Figure 2024016177000029
Figure 2024016177000030
Figure 2024016177000031
Figure 2024016177000032
Figure 2024016177000033
Figure 2024016177000034
Figure 2024016177000035
Figure 2024016177000036
Figure 2024016177000037
1つの実施形態において、抗TIGIT抗体または抗原結合性断片は、配列番号188
を含むCDRH1、配列番号189を含むCDRH2、配列番号:190、220、22
1または222のいずれかを含むCDRH3、配列番号191を含むCDRL1、配列番
号192を含むCDRL2、および配列番号:193、232、233、234、235
、236または237のいずれかを含むCDRL3を含む。
1つの実施形態において、抗TIGIT抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号2
04を含むCDRH1、配列番号:205、256、257、258、259、260、
261、262または263のいずれかを含むCDRH2、配列番号206を含むCDR
H3、配列番号207を含むCDRL1、配列番号208を含むCDRL2、および配列
番号209を含むCDRL3を含む。
1つの実施形態において、抗TIGIT抗体またはその抗原結合性断片は、可変重鎖領
域および可変軽鎖可変領域を含む。1つの実施形態において、抗TIGIT抗体またはそ
の抗原結合性断片は、配列番号194を含む可変重鎖領域および配列番号195を含む可
変軽鎖領域を含む。
1つの実施形態において、抗TIGIT抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号1
96を含む可変重鎖領域および配列番号200を含む可変軽鎖領域を含む。
1つの実施形態において、抗TIGIT抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号2
10を含む可変重鎖領域および配列番号211を含む可変軽鎖領域を含む。
1つの実施形態において、抗TIGIT抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号2
12を含む可変重鎖領域および配列番号216を含む可変軽鎖領域を含む。
1つの実施形態において、抗TIGIT抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号:
197、198、199、223、224、225、226、227、228、229、
230および231のいずれかを含む可変重鎖領域、ならびに配列番号:201、202
、203、238、239、240、241、242、243、244、245、246
、247、248、249、250、251、252、253、254および255のい
ずれかを含む可変軽鎖領域を含む。
1つの実施形態において、抗TIGIT抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号:
213、214、215、264、265、266、267、268、269、270、
271、272、273、274、275、276、277、278、279、280、
281、282、283、284、285および286のいずれかを含む可変重鎖領域、
ならびに配列番号:217、218および219のいずれかを含む可変軽鎖領域を含む。
本明細書中に記載される製剤において用いられ得るさらなる抗TIGIT抗体としては
、例えばPCT国際出願No.WO2016/106302;WO2016/01126
4;およびWO2009/126688中に開示されているものが挙げられる。
表6:例示的な重鎖配列
Figure 2024016177000038
上述の実施形態のいずれかにおいて、抗TIGIT抗体またはその抗原結合性断片は、
上記の可変重鎖のいずれかおよび任意のヒト重鎖定常ドメインを含む抗体である。1つの
実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合性断片はIgGアイソタイプであり
、ヒトIgG1、IgG2、IgG3またはIgG4のヒト重鎖定常ドメインを含む。1
つの実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、ヒト重鎖IgG1定
常ドメイン(配列番号291)またはそのバリアントを含み、ここでバリアントは20個
までの改変アミノ酸置換を含む。1つの実施形態において、本発明の抗体またはその抗原
結合性断片は、配列番号291のアミノ酸配列を含むヒト重鎖IgG1定常ドメインを含
む抗体である。1つの実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、フ
コシル化されていないヒト重鎖IgG1定常ドメインを含む。1つの実施形態において、
本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、ヒト重鎖IgG4定常ドメインまたはそのバ
リアントを含み、ここでバリアントは20個までの改変アミノ酸置換を含む。別の実施形
態において、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、228位(EUナンバリングス
キームを用いる)のアミノ酸がSerからProに置換されているヒト重鎖IgG4定常
ドメインを含む。1つの実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、
配列番号292のアミノ酸配列を含むヒト重鎖IgG4定常ドメインを含む。
上述の実施形態のいずれかにおいて、抗TIGIT抗体またはその抗原結合性断片は、
上記の可変軽鎖のいずれかおよびヒト軽鎖定常ドメインを含むことができる。1つの実施
形態において、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、ヒトカッパ軽鎖定常ドメイン
またはそのバリアントを含み、ここでバリアントは20個までの改変アミノ酸置換を含む
。別の実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、ヒトラムダ軽鎖定
常ドメインまたはそのバリアントを含み、ここでバリアントは20個までの改変アミノ酸
置換を含む。1つの実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、配列
番号293のアミノ酸配列を含むヒトカッパ軽鎖定常ドメインを含む。
製剤
本発明の製剤は、抗体凝集物(高分子量種)および微粒子、高分子量種および低分子量
種の形成を最小限にし、メチオニン残基の酸化を最小限にし、抗体が生物学的活性を長い
時間保持することを確保する。
1つの態様において、本発明は、抗TIGIT抗体またはその抗原結合性断片の様々な
製剤を包含する。例えば、本発明は、(i)抗CTLA4抗体またはその抗原結合性断片
、(ii)バッファー(例としてL-ヒスチジンまたは酢酸塩)、(iii)非還元糖(
例としてスクロース);(iv)非イオン性界面活性剤(例としてポリソルベート80)
;および(v)抗酸化剤(例としてL-メチオニン)を含む製剤を包含する。1つの実施
形態において、製剤は抗PD1抗体をさらに含む。1つの実施形態において、製剤はキレ
ーターをさらに含む。1つの実施形態において、キレーターは、約1μMから約50μM
の量で存在する。1つの実施形態において、キレーターはジエチレントリアミン五酢酸(
DTPA)である。別の実施形態において、キレーターはEDTAである。
別の態様において、本発明はまた、抗TIGIT抗体またはその抗原結合性断片および
抗ヒトPD-1抗体またはその抗原結合性断片の様々な合剤を包含する。1つの実施形態
において、製剤は、(i)抗TIGIT抗体またはその抗原結合性断片、(ii)抗ヒト
PD-1抗体またはその抗原結合性断片、(iii)バッファー(例としてL-ヒスチジ
ンまたは酢酸塩)、(iv)非還元糖(例としてスクロース)、(v)非イオン性界面活
性剤(例としてポリソルベート80)、および(vi)抗酸化剤(例としてL-メチオニ
ン)を含む。1つの実施形態において、製剤はキレーターをさらに含む。1つの実施形態
において、キレーターは、約1μMから約50μMの量で存在する。1つの実施形態にお
いて、キレーターはジエチレントリアミン五酢酸(DTPA)である。別の実施形態にお
いて、キレーターはEDTAである。
本発明の医薬製剤は、バッファーを包含し得る。
本発明の医薬製剤および方法において有用であるバッファーとしては、コハク酸塩(コ
ハク酸ナトリウムまたはコハク酸カリウム)、L-ヒスチジン、リン酸塩(リン酸ナトリ
ウムまたはリン酸カリウム)、Tris(トリス(ヒドロキシメチル)アミノメタン)、
ジエタノールアミン、クエン酸塩(クエン酸ナトリウム)、酢酸塩(酢酸ナトリウム)な
どが挙げられる。本発明のある実施形態において、バッファーは、製剤中に約1~20m
M(1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16
、17、18、19および20mM)の濃度で存在する。本発明の具体的な実施形態にお
いて、バッファーは、ヒスチジン、例としてL-ヒスチジンバッファーである。
本発明のバッファーのpHは、約4.5から約6.5まで;約5.0~6.2;約5.
5~6.0の範囲内であり、好ましくはpHは約5.8である。例示的な製剤にたどり着
く際、ヒスチジン、およびpH範囲が5.0~6.0の酢酸塩バッファーが適性を調査さ
れた。pH値の範囲が、例えば「pH5.5から6.0の間のpH」などと挙げられると
き、範囲は、挙げられた値を包含することが意図される。例えば、約5.0から約6.0
までの範囲は、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5
.8、5.9および6.0を包含する。凍結乾燥製剤の場合、特に指示がない限り、pH
は、本発明の凍結乾燥製剤の再構成後のpHを指す。pHは、典型的に、25℃で、標準
的なガラスバルブのpHメーターを用いて測定される。本明細書中で用いられるとき、「
pH Xのヒスチジンバッファー」を含む溶液とは、pH Xであってヒスチジンバッフ
ァーを含む溶液を指し、すなわちpHは溶液のpHを指すことが意図される。
本発明のある実施形態において、抗TIGIT製剤ならびに抗TIGITおよび抗ヒト
PD-1の合剤は、非還元糖を含む。本明細書中で用いられるとき、「非還元糖」は、遊
離のアルデヒド基または遊離のケトン基を含有しないまたは含有するように変換すること
ができないため、還元剤として作用することができない糖である。非還元糖の例としては
、限定されるものではないが、二糖、例えばスクロースおよびトレハロースなどが挙げら
れる。本発明のある実施形態において、非還元糖は約1~10%(w/v)(1、2、3
、4、5、6、7、8、9または10%)の量で存在する。別の実施形態において、非還
元糖は約6%から約8%(w/v)(6、7または8%)の量で存在する。さらなる実施
形態において、非還元糖は約6%(w/v)の量で存在する。さらなる実施形態において
、非還元糖は約7%(w/v)の量で存在する。さらなる実施形態において、非還元糖は
約8%(w/v)の量で存在する。1つの実施形態において、非還元糖はスクロース、ト
レハロースまたはラフィノースである。別の実施形態において、非還元糖はスクロースで
ある。さらなる実施形態において、スクロースは6~8% w/vで存在する。1つの実
施形態において、スクロースは約6%(w/v)で存在する。1つの実施形態において、
スクロースは約7%(w/v)で存在する。1つの実施形態において、スクロースは約8
%(w/v)で存在する。
本発明の製剤はまた、界面活性剤を含む。本明細書中で用いられるとき、界面活性剤は
、自然状態で両親媒性である表面活性剤(surface active agent)
である。界面活性剤は、安定性を与えるため、凝集を低減させるおよび/もしくは防ぐた
め、または処理状態、例えば精製、ろ過、凍結乾燥、輸送、保存および送達などの際のタ
ンパク質のダメージを防ぐおよび/もしくは抑制するため、本明細書中の製剤に加えられ
得る。本発明において、界面活性剤は、活性成分(複数可)にさらなる安定性を与えるた
めに有用であり得る。
合剤を包含する本発明の製剤において有用であり得る非イオン性界面活性剤としては、
限定されるものではないが、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル(ポリソルベ
ート、商品名Tween(登録商標)の下で販売されている(Uniquema Ame
ricas LLC,Wilmington,DE))、これはポリソルベート-20(
ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート)、ポリソルベート-40(ポリオキシエ
チレンソルビタンモノパルミテート)、ポリソルベート-60(ポリオキシエチレンソル
ビタンモノステアレート)およびポリソルベート-80(ポリオキシエチレンソルビタン
モノオレエート)を包含する;ポリオキシエチレンアルキルエーテル、例えばBrij(
登録商標)58(Uniquema Americas LLC,Wilmington
,DE)およびBrij(登録商標)35など;ポロキサマー(例としてポロキサマー1
88);Triton(登録商標)X-100(Union Carbide Corp
.,Houston,TX)およびTriton(登録商標)X-114;NP40;ス
パン20、スパン40、スパン60、スパン65、スパン80およびスパン85;エチレ
ンおよびプロピレングリコールのコポリマー(例として非イオン性界面活性剤のplur
onic(登録商標)シリーズ、例えばpluronic(登録商標)F68、plur
onic(登録商標)10R5、pluronic(登録商標)F108、pluron
ic(登録商標)F127、pluronic(登録商標)F38、pluronic(
登録商標)L44、pluronic(登録商標)L62など(BASF Corp.,
Ludwigshafen,Germany);ならびにドデシル硫酸ナトリウム(SD
S)が挙げられる。1つの実施形態において、非イオン性界面活性剤は、ポリソルベート
80またはポリソルベート20である。1つの実施形態において、非イオン性界面活性剤
はポリソルベート20である。別の実施形態において、非イオン性界面活性剤はポリソル
ベート80である。
本発明の製剤の中に包含される非イオン性界面活性剤の量は、所望の機能を発揮するた
めに十分な量、すなわち医薬品有効成分(すなわち抗TIGIT抗体もしくはその抗原結
合性断片、または抗TIGIT抗体もしくはその抗原結合性断片および抗ヒトPD-1抗
体もしくはその抗原結合性断片の両方)を製剤中で安定化するために必要な最少量である
。非イオン性界面活性剤の全てのパーセンテージは、w/v %として挙げられる。典型
的に、界面活性剤は、約0.008%から約0.1% w/vの濃度で存在する。本発明
のこの態様のいくつかの実施形態において、界面活性剤は、製剤中に、約0.01%から
約0.1%;約0.01%から約0.09%;約0.01%から約0.08%;約0.0
1%から約0.07%;約0.01%から約0.06%;約0.01%から約0.05%
;約0.01%から約0.04%;約0.01%から約0.03%、約0.01%から約
0.02%、約0.015%から約0.04%;約0.015%から約0.03%、約0
.015%から約0.02%、約0.02%から約0.04%、約0.02%から約0.
035%、または約0.02%から約0.03%の量で存在する。具体的な実施形態にお
いて、界面活性剤は約0.02%の量で存在する。代替的実施形態において、界面活性剤
は、約0.01%、約0.015%、約0.025%、約0.03%、約0.035%ま
たは約0.04%の量で存在する。
本発明の例示的な実施形態において、界面活性剤は、ポリソルベート20およびポリソ
ルベート80よりなる群から選択される非イオン性界面活性剤である。好ましい実施形態
において、界面活性剤はポリソルベート80である。
具体的な実施形態において、合剤を包含する本発明の製剤は、約0.01%から約0.
04% w/vのポリソルベート80を含む。さらなる実施形態において、本明細書中に
記載される製剤は、ポリソルベート80を約0.008% w/v、約0.01% w/
vの量で含む。1つの実施形態において、ポリソルベート80の量は約0.015 w/
v%である。別の実施形態において、ポリソルベート80の量は約0.02% w/vで
ある。さらなる実施形態において、ポリソルベート80の量は約0.025% w/vで
ある。別の実施形態において、ポリソルベート80の量は約0.03% w/vである。
さらなる実施形態において、ポリソルベート80の量は約0.035% w/vである。
別の実施形態において、ポリソルベート80の量は約0.04% w/vである。さらな
る実施形態において、ポリソルベート80の量は約0.045% w/vである。特定の
実施形態において、本発明の製剤は約0.02% w/vのポリソルベート80を含む。
合剤を包含する本発明の製剤はまた、メチオニンまたは薬学的に許容されるその塩を抗
酸化剤として含む。1つの実施形態において、メチオニンはL-メチオニンである。別の
実施形態において、メチオニンはL-メチオニンの薬学的に許容される塩、例えばメチオ
ニンHClなどである。本発明のある実施形態において、メチオニンは製剤中に約1~2
0mM(1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、
16、17、18、19および20mM)の濃度で存在する。別の実施形態において、メ
チオニンは約5mMから約10mM(5、6、7、8、9および10mM)存在する。別
の実施形態において、メチオニンは約10mM存在する。
合剤を包含する本発明の製剤はまた、キレート剤をさらに含み得る。本発明のある実施
形態において、キレート剤は、製剤中に約5~30μM(例として5、10、15、20
、25または30μM)の濃度で存在する。1つの実施形態において、キレート剤はDT
PAである。別の実施形態において、キレート剤はEDTAである。別の実施形態におい
て、キレート剤(chelating agen)はEDTAである。
凍結乾燥医薬組成物
治療タンパク質の凍結乾燥製剤は、いくつかの利点を提供する。凍結乾燥製剤は、一般
的に、溶液製剤よりも良好な化学的安定性を供与し、それゆえに半減期の増加を供与する
。凍結乾燥製剤はまた、臨床的要因、例えば投与経路または投薬量などに応じて異なる濃
度で再構成され得る。例えば、凍結乾燥製剤は、皮下投与のために必要ならば高濃度(す
なわち少量)で、または静脈内に投与するならば低濃度で再構成され得る。高濃度はまた
、特定の対象のために高い投薬量が必要とされる場合に、とりわけ注射量を最小限にしな
ければならない皮下に投与する場合に必要なことがある。1つのかかる凍結乾燥抗体製剤
は米国特許第6,267,958号に開示され、この文献は参照によりその全体が本明細
書中に組み込まれる。別の治療タンパク質の凍結乾燥製剤は米国特許第7,247,70
7号に開示され、この文献は参照によりその全体が本明細書中に組み込まれる。
典型的に、凍結乾燥製剤は、医薬品(DP、例示的な実施形態においてヒト化抗PD-
1抗体ペンブロリズマブまたはその抗原結合性断片)を高濃度で再構成することを予想し
て、すなわち少量の水で再構成することを予想して調製される。DPをより低い濃度へと
希釈するため、続いて水または等張バッファーでの希釈をその後に容易に用いることがで
きる。典型的に、添加剤は、本発明の凍結乾燥製剤中に、例として皮下投与のための高D
P濃度での再構成時におおよそ等張の製剤をもたらすレベルで包含される。より低いDP
濃度を与えるためのより多い量の水での再構成は、再構成溶液の張性を必然的に低減させ
るが、かかる低減は非皮下投与、例として静脈内投与においてほとんど重要ではないであ
ろう。より低いDP濃度での等張性が望まれる場合、凍結乾燥粉末が標準的な少量の水で
再構成され、次いで等張性希釈剤、例えば0.9%塩化ナトリウムなどでさらに希釈され
得る。
本発明の凍結乾燥製剤は、予備凍結乾燥溶液(pre-lyophilization
solution)の凍結乾燥(lyophilization)(凍結乾燥(fre
eze-drying))により形成される。凍結乾燥(freeze-drying)
は、製剤を凍結させ、続いて1次乾燥に適した温度で水を昇華させることによって達成さ
れる。この条件下で、品温は、製剤の共融点または崩壊温度未満である。典型的に、1次
乾燥のための棚温度は、典型的に約50から250mTorrまでの範囲である好適な圧
力で、約-30から25℃までの範囲である(1次乾燥中に製品は凍ったままであること
を前提とする)。製剤、試料を保持する容器(例としてガラスバイアル)のサイズおよび
タイプ、ならびに液体の体積は、乾燥に必要とされる時間を規定し、これは2、3時間か
ら数日(例として40~60時間)に及ぶことがある。2次乾燥段階は、主に容器のタイ
プおよびサイズ、ならびに採用されるタンパク質のタイプに応じて、約0~40℃で行わ
れ得る。2次乾燥時間は、製品中の所望の残存水分含量レベルにより規定され、典型的に
少なくとも約5時間かかる。典型的に、凍結乾燥製剤の水分含量は、約5%未満、好まし
くは約3%未満である。圧力は1次乾燥ステップの際に採用されたものと同じであり得る
。凍結乾燥(freeze-drying)条件は、製剤およびバイアルサイズに応じて
変動することがある。
いくつかの例において、移動ステップを避けるため、タンパク質の再構成が行われる容
器の中でタンパク質製剤を凍結乾燥することが望ましいものであり得る。この例における
容器は、例えば3、5、10、20、50または100ccのバイアルであり得る。
本発明の凍結乾燥製剤は、投与前に再構成される。タンパク質は、約10、15、20
、25、30、40、50、60、75、80、90もしくは100mg/mLの濃度で
、またはより高い濃度、例えば150mg/mL、200mg/mL、250mg/mL
もしくは300mg/mL、最大で約500mg/mLなどで再構成され得る。1つの実
施形態において、再構成後のタンパク質濃度は、約10~300mg/mlである。1つ
の実施形態において、再構成後のタンパク質濃度は、約20~250mg/mlである。
1つの実施形態において、再構成後のタンパク質濃度は、約150~250mg/mlで
ある。1つの実施形態において、再構成後のタンパク質濃度は、約180~220mg/
mlである。1つの実施形態において、再構成後のタンパク質濃度は、約50~150m
g/mlである。1つの実施形態において、再構成後のタンパク質濃度は、約100mg
/mlである。1つの実施形態において、再構成後のタンパク質濃度は、約75mg/m
lである。1つの実施形態において、再構成後のタンパク質濃度は、約50mg/mlで
ある。1つの実施形態において、再構成後のタンパク質濃度は、約25mg/mlである
。高いタンパク質濃度は、再構成製剤の皮下送達が意図される場合にとりわけ有用である
。しかしながら、他の投与経路、例えば静脈内投与などの場合、より低いタンパク質濃度
が望まれることもある(例として約5~50mg/mL)。
再構成は一般に、完全な水和を確実にするために約25℃の温度で行われるが、所望な
らば他の温度を採用してもよい。再構成に必要とされる時間は、例として希釈剤のタイプ
、添加剤(複数可)およびタンパク質の量に依存する。例示的な希釈剤としては、滅菌水
、注射用静菌水(BWFI)、pH緩衝溶液(例としてリン酸緩衝生理食塩水)、滅菌生
理食塩水溶液、リンガー液またはブドウ糖溶液が挙げられる。
液体医薬組成物
液体抗体製剤は、精製プロセスの最終ステップとして、液体形態である薬剤物質(例と
して抗ヒト化PD-1)(例として水性医薬製剤中のペンブロリズマブ)を取り、それを
所望のバッファーへとバッファー交換することにより作製することができる。この実施形
態において、凍結乾燥ステップはない。最終バッファー中の薬剤物質は、所望の濃度まで
濃縮される。添加剤、例えばスクロースおよびポリソルベート80などが薬剤物質に加え
られ、これは適切なバッファーを用いて最終タンパク質濃度まで希釈される。製剤化され
た最終の薬剤物質は0.22μmフィルターを用いてろ過され、最終容器(例としてガラ
スバイアル)の中に充填される。
III.使用方法
本発明はまた、対象におけるがんを処置する方法であって、有効量の本発明の製剤のい
ずれか;すなわち本明細書中に記載されるいずれかの製剤を対象に投与することを含む前
記方法に関する。この方法のいくつかの具体的な実施形態において、製剤は、静脈内投与
を通じて対象に投与される。他の実施形態において、製剤は、皮下投与により対象に投与
される。1つの実施形態において、本発明は、本発明のいずれかの製剤を患者に投与する
ことを含む、ヒト患者におけるがんを処置する方法を含む。
本発明の方法のいずれかにおいて、がんは、メラノーマ、肺がん、頭頸部がん、膀胱が
ん、乳がん、胃腸がん、多発性骨髄腫、肝細胞がん、リンパ腫、腎臓がん、中皮腫、卵巣
がん、食道がん、肛門がん、胆道がん、結腸直腸がん、子宮頸がん、甲状腺がん、唾液腺
がん(salivary cancer)、前立腺がん(例としてホルモン不応性前立腺
癌)、膵臓がん、結腸がん、食道がん、肝臓がん、甲状腺がん、神経膠芽腫、神経膠腫お
よび他の新生物性悪性腫瘍よりなる群から選択することができる。
いくつかの実施形態において、非小細胞肺がん中の肺がん。
代替的実施形態において、肺がんは、小細胞肺がんである。
いくつかの実施形態において、リンパ腫は、ホジキンリンパ腫である。
他の実施形態において、リンパ腫は、非ホジキンリンパ腫である。特定の実施形態にお
いて、リンパ腫は、縦隔大細胞型B細胞リンパ腫である。
いくつかの実施形態において、乳がんは、トリプルネガティブ乳がんである。
さらなる実施形態において、乳がんは、ER+/HER2-乳がんである。
いくつかの実施形態において、膀胱がんは、尿路上皮がんである。
いくつかの実施形態において、頭頸部がんは、鼻咽頭がんである。いくつかの実施形態
において、がんは、甲状腺がんである。他の実施形態において、がんは、唾液腺がんであ
る。他の実施形態において、がんは頭頸部の扁平上皮癌である。
1つの実施形態において、本発明は、本発明の製剤を患者に投与することを含む、ヒト
患者における転移性非小細胞肺がん(NSCLC)を処置する方法を含む。具体的な実施
形態において、患者は、PD-L1高発現[(腫瘍比率スコア(TPS)≧50%)]の
腫瘍を持ち、以前に白金含有化学療法で処置されていない。他の実施形態において、患者
は、PD-L1を発現した(TPS≧1%)腫瘍を持ち、以前に白金含有化学療法で処置
されている。なお他の実施形態において、患者は、PD-L1を発現した(TPS≧1%
)腫瘍を持ち、以前に白金含有化学療法で処置されていない。具体的な実施形態において
、患者は、白金含有化学療法を受けた際またはその後に疾患が進行した。ある種の実施形
態において、PD-L1 TPSは、FDAの承認を受けた試験により決定される。ある
種の実施形態において、患者の腫瘍はEGFRまたはALKのゲノム異常を持たない。あ
る種の実施形態において、患者の腫瘍はEGFRまたはALKのゲノム異常を持ち、抗P
D-1抗体またはその抗原結合性断片を受ける前にEGFRまたはALK異常(複数可)
のための処置を受けた際またはその後に疾患が進行した。
いくつかの実施形態において、がんは、高レベルのマイクロサテライト不安定性(MS
I-H)を有する転移性結腸直腸がんである。
いくつかの実施形態において、がんは、高レベルのマイクロサテライト不安定性(MS
I-H)を有する転移性結腸直腸がんである。
いくつかの実施形態において、がんは、高レベルのマイクロサテライト不安定性(MS
I-H)を有する固形腫瘍である。
いくつかの実施形態において、がんは、高い変異負荷(mutational bur
den)を有する固形腫瘍である。
いくつかの実施形態において、がんは、メラノーマ、非小細胞肺がん、再発または難治
性の古典的ホジキンリンパ腫、頭頸部扁平上皮癌、尿路上皮がん、食道がん、胃がんおよ
び肝細胞がんよりなる群から選択される。
上の処置方法の他の実施形態において、がんは、血液悪性腫瘍である。ある実施形態に
おいて、血液悪性腫瘍は、急性リンパ芽球性白血病(ALL)、急性骨髄性白血病(AM
L)、慢性リンパ性白血病(CLL)、慢性骨髄性白血病(CML)、びまん性大細胞型
B細胞リンパ腫(DLBCL)、EBV陽性DLBCL、原発性縦隔大細胞型B細胞リン
パ腫、T細胞/組織球豊富型大細胞型B細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、ホジキンリンパ
腫(HL)、マントル細胞リンパ腫(MCL)、多発性骨髄腫(MM)、骨髄細胞白血病
-1タンパク質(Mcl-1)、骨髄異形成症候群(MDS)、非ホジキンリンパ腫(N
HL)または小リンパ球性リンパ腫(SLL)である。
生検または外科材料中の腫瘍浸潤リンパ球の存在と関係した無病生存期間および全生存
期間の改善を実証する悪性腫瘍、例としてメラノーマ、結腸直腸がん、肝臓がん、腎臓が
ん、胃/食道がん、乳がん、膵臓がんおよび卵巣がんは、本明細書中に記載される方法お
よび処置の範囲に含まれる。かかるがんのサブタイプは、Tリンパ球による免疫制御を受
けやすいことが知られている。加えて、本明細書中に記載される抗体を用いて増殖が阻害
され得る不応性または再発性の悪性腫瘍も包含される。
本明細書中に記載される製剤での処置から利益を得ることができるさらなるがんとして
は、例えばカポジ肉腫、肝臓がん、鼻咽頭がん、リンパ腫、子宮頸がん、外陰部がん、肛
門がん、陰茎がんおよび口腔がんの原因として関係することが知られているウイルスの持
続性感染、例えばヒト免疫不全ウイルス、A型、B型およびC型肝炎ウイルス、エプスタ
イン・バーウイルス、ヒトパピローマウイルスなどの持続性感染に関連したものが挙げら
れる。
製剤はまた、感染症および感染性疾患を予防または処置するために用いることもできる
。それゆえに、本発明は、有効量の本発明の製剤を対象に投与することを含む、哺乳動物
対象における慢性感染症を処置するための方法を提供する。この方法のいくつかの具体的
な実施形態において、製剤は、静脈内投与を通じて対象に投与される。他の実施形態にお
いて、製剤は、皮下投与により対象に投与される。
これらの剤は、病原体、毒素および自己抗原への免疫応答を刺激するために、単独で、
またはワクチンと組み合わせて用いることができる。抗体またはその抗原結合性断片は、
限定されるものではないが、ヒト免疫不全ウイルス、A型、B型およびC型肝炎ウイルス
、エプスタイン・バーウイルス、ヒトサイトメガロウイルス、ヒトパピローマウイルスお
よびヘルペスウイルスといった、ヒトに対して感染性であるウイルスへの免疫応答を刺激
するために用いることができる。アンタゴニスト抗PD-1抗体または抗体断片は、細菌
または真菌の寄生生物および他の病原体の感染への免疫応答を刺激するために用いること
ができる。B型およびC型肝炎ウイルスならびにHIVのウイルス感染症は、慢性ウイル
ス感染症と考えられるものの中にある。
本発明の製剤は、1または複数の「付加的治療剤」と組み合わせて患者に投与され得る
。付加的治療剤は、生物療法剤(限定されるものではないがVEGF、EGFR、Her
2/neu、VEGF受容体、他の増殖因子受容体、CD20、CD40、CD-40L
、OX-40、4-1BBおよびICOSに対する抗体が挙げられる)、免疫原性剤(例
えば、減弱されたがん細胞、腫瘍抗原、腫瘍由来抗原または核酸をパルスした抗原提示細
胞、例えば樹状細胞など、免疫刺激性サイトカイン(例えば、IL-2、IFNα2、G
M-CSF)、および、例えば限定されるものではないがGM-CSFなどの免疫刺激性
サイトカインをコードする遺伝子をトランスフェクトした細胞)であり得る。
上述のように、本発明の方法のいくつかの実施形態において、方法は、付加的治療剤を
投与することをさらに含む。特定の実施形態において、付加的治療剤は、抗LAG3抗体
またはその抗原結合性断片、抗GITR抗体またはその抗原結合性断片、抗CTL4抗体
またはその抗原結合性断片、抗CD27抗体またはその抗原結合性断片である。1つの実
施形態において、付加的治療剤は、IL-12を発現するニューカッスル病ウイルスベク
ターである。さらなる実施形態において、付加的治療剤はジナシクリブである。なおさら
なる実施形態において、付加的治療剤は、STINGアゴニストである。
好適な投与経路としては、例えば、筋肉内、皮下、同様に髄腔内、直接的脳室内、静脈
内、腹腔内といった非経口送達が挙げられ得る。薬剤は、種々の慣用的方法、例えば腹腔
内、非経口、動脈内または静脈内注入などで投与することができる。溶液量を制限しなけ
ればならない投与様式(例として皮下投与)は、高濃度での再構成を可能にするために凍
結乾燥製剤を必要とする。
付加的治療剤の投薬量の選択は、その物の血清または組織代謝回転速度、症候のレベル
、その物の免疫原性、および処置される個体中の標的細胞、組織または器官のアクセス性
といったいくつかの因子に依存する。付加的治療剤の投薬量は、許容されるレベルの副作
用を提供する量であるべきである。したがって、各々の付加的治療剤(例として生物療法
剤または化学療法剤)の投薬量および投薬頻度は、各別の治療剤、処置されるがんの重症
度および患者特質に部分的に依存する。抗体、サイトカインおよび低分子の適切な用量選
択におけるガイダンスが利用可能である。例として、Wawrzynczak(1996
) Antibody Therapy,Bios Scientific Pub.L
td,Oxfordshire,UK;Kresina(ed.)(1991) Mon
oclonal Antibodies,Cytokines and Arthrit
is,Marcel Dekker,New York,NY;Bach(ed.)(1
993) Monoclonal Antibodies and Peptide T
herapy in Autoimmune Diseases,Marcel Dek
ker,New York,NY;Baert et al.(2003) New E
ngl.J.Med. 348:601-608;Milgrom et al.(19
99) New Engl.J.Med. 341:1966-1973;Slamon
et al.(2001) New Engl.J.Med. 344:783-79
2;Beniaminovitz et al.(2000) New Engl.J.
Med. 342:613-619;Ghosh et al.(2003) New
Engl.J.Med. 348:24-32;Lipsky et al.(2000
) New Engl.J.Med. 343:1594-1602;Physicia
ns’ Desk Reference 2003(Physicians’ Desk
Reference,57th Ed);Medical Economics Co
mpany;ISBN:1563634457;57th edition(Novem
ber 2002)を参照されたい。適切な投薬レジメンの決定は、臨床医によって、例
として当該技術分野において処置に影響することが知られているもしくは影響すると思わ
れている、または処置に影響すると予測されるパラメーターまたは因子を用いて行われ得
て、これは、例えば患者の病歴(例として前治療)、処置されるがんのタイプおよびステ
ージ、ならびに組み合わせ治療における1または複数の治療剤への応答のバイオマーカー
に依存する。
付加的治療剤のための薬学的に許容される担体または添加剤の選択を容易にするために
、様々な参考文献が利用可能である。例として、Remington’s Pharma
ceutical Sciences and U.S. Pharmacopeia:
National Formulary,Mack Publishing Compa
ny,Easton,PA(1984);Hardman et al.(2001)
Goodman and Gilman’s The Pharmacological
Basis of Therapeutics,McGraw-Hill,New Y
ork,NY;Gennaro(2000) Remington:The Scien
ce and Practice of Pharmacy,Lippincott,W
illiams,and Wilkins,New York,NY;Avis et
al.(eds.)(1993) Pharmaceutical Dosage Fo
rms:Parenteral Medications,Marcel Dekker
,NY;Lieberman,et al.(eds.)(1990) Pharmac
eutical Dosage Forms:Tablets,Marcel Dekk
er,NY;Lieberman et al.(eds.)(1990) Pharm
aceutical Dosage Forms:Disperse Systems,
Marcel Dekker,NY;Weiner and Kotkoskie(20
00) Excipient Toxicity and Safety,Marcel
Dekker,Inc.,New York,NYを参照されたい。
医薬抗体製剤は、連続的注入により、または例として1日、週に1~7回、1週間、2
週間、3週間、毎月、隔月などの間隔での投薬により投与することができる。好ましい投
薬プロトコールは、著しい望ましくない副作用を回避した最大投薬量または投薬頻度を伴
うものである。1週間の総投薬量は、一般に、少なくとも0.05μg/kg、0.2μ
g/kg、0.5μg/kg、1μg/kg、10μg/kg、100μg/kg、0.
2mg/kg、1.0mg/kg、2.0mg/kg、10mg/kg、25mg/kg
、50mg/kg体重またはそれより多い。例として、Yang et al.(200
3) New Engl.J.Med. 349:427-434;Herold et
al.(2002) New Engl.J.Med. 346:1692-1698
;Liu et al.(1999) J.Neurol.Neurosurg.Psy
ch. 67:451-456;Portielji et al.(20003) C
ancer Immunol.Immunother. 52:133-144を参照さ
れたい。低分子治療薬、例としてペプチド模倣薬、天然物または有機化合物の所望の用量
は、抗体またはポリペプチドに関して、モル/kgベースでほぼ同じである。
本発明の実施形態はまた、(a)治療(例としてヒトの身体の治療);(b)薬;(c
)抗腫瘍免疫応答の誘導もしくは向上 (d)患者における1もしくは複数の腫瘍マーカ
ーの数を減少させること;(e)腫瘍もしくは血液がんの増殖を停止もしくは遅延させる
こと;(f)PD-1関連疾患もしくは抗TIGIT関連疾患の進行を停止もしくは遅延
させること;(g)進行がんを停止もしくは遅延させること;(h)PD-1関連疾患も
しくは抗TIGIT疾患の安定化;(i)腫瘍細胞の増殖もしくは生存を阻害すること;
(j)1もしくは複数のがん性病変もしくは腫瘍を除去することもしくはそのサイズを低
減させること;(k)PD-1関連疾患もしくは抗TIGIT疾患の進行、発症もしくは
重症度を低減させること;(l)PD-1関連疾患もしくは抗TIGIT関連疾患、例え
ばがんなどの臨床症候の重症度もしくは持続期間を低減させること (m)同様の未処置
の患者における予想生存期間と比べて患者の生存期間を延ばすこと n)がん性状態もし
くは他のPD-1関連もしくは抗TIGIT関連疾患の完全寛解もしくは部分寛解を誘導
すること、o)がんの処置、またはp)慢性感染症の処置について、(i)これらにおけ
る使用のための、(ii)これらのための薬物もしくは組成物としての使用のための、ま
たは(iii)これらのための薬物の調製における使用のための、本明細書中に記載され
る1または複数の生物学的製剤を包含する。
一般的方法
分子生物学における標準的方法は、Sambrook,Fritsch and Ma
niatis(1982&1989 2nd Edition,2001 3rd Ed
ition) Molecular Cloning,A Laboratory Ma
nual,Cold Spring Harbor Laboratory Press
,Cold Spring Harbor,NY;Sambrook and Russ
ell(2001) Molecular Cloning,3rd ed.,Cold
Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spr
ing Harbor,NY;Wu(1993) Recombinant DNA,V
ol.217,Academic Press,San Diego,CA)に記載され
ている。標準的な方法はまた、Ausbel,et al.(2001) Curren
t Protocols in Molecular Biology,Vols.1-
4,John Wiley and Sons,Inc.New York,NY中にも
出ており、これは細菌細胞およびDNA突然変異誘発(Vol.1)、哺乳動物細胞およ
び酵母におけるクローニング(Vol.2)、複合糖質およびタンパク質の発現(Vol
.3)およびバイオインフォマティクス(Vol.4)を記載している。
免疫沈降、クロマトグラフィー、電気泳動、遠心分離および結晶化を包含するタンパク
質精製方法は、記載されている(Coligan,et al.(2000) Curr
ent Protocols in Protein Science,Vol.1,J
ohn Wiley and Sons,Inc.,New York)。化学分析、化
学修飾、翻訳後修飾および融合タンパク質の生産、タンパク質のグリコシル化は、記載さ
れている(例としてColigan,et al.(2000) Current Pr
otocols in Protein Science,Vol.2,John Wi
ley and Sons,Inc.,New York;Ausubel,et al
.(2001) Current Protocols in Molecular B
iology,Vol.3,John Wiley and Sons,Inc.,NY
,NY,pp.16.0.5-16.22.17;Sigma-Aldrich,Co.
(2001) Products for Life Science Researc
h,St.Louis,MO;pp.45-89;Amersham Pharmaci
a Biotech(2001) BioDirectory,Piscataway,
N.J.,pp.384-391を参照されたい)。ポリクローナル抗体およびモノクロ
ーナル抗体の生産、精製および断片化は、記載されている(Coligan,et al
.(2001) Current Protocols in Immunology,
Vol.1,John Wiley and Sons,Inc.,New York;
Harlow and Lane(1999) Using Antibodies,C
old Spring Harbor Laboratory Press,Cold
Spring Harbor,NY;上のHarlow and Lane)。リガンド
/受容体相互作用の特性評価のための標準的技術は、利用可能である(例としてColi
gan,et al.(2001) Current Protocols in Im
munology,Vol.4,John Wiley,Inc.,New Yorkを
参照されたい)。
モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体およびヒト化抗体は、調製することができる
(例としてSheperd and Dean(eds.) (2000) Monoc
lonal Antibodies,Oxford Univ.Press,New Y
ork,NY;Kontermann and Dubel(eds.) (2001)
Antibody Engineering,Springer-Verlag,Ne
w York;Harlow and Lane(1988) Antibodies
A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor L
aboratory Press,Cold Spring Harbor,NY,pp
.139-243;Carpenter,et al.(2000) J.Immuno
l. 165:6205;He,et al.(1998) J.Immunol. 1
60:1029;Tang et al.(1999) J.Biol.Chem. 2
74:27371-27378;Baca et al.(1997) J.Biol.
Chem. 272:10678-10684;Chothia et al.(198
9) Nature 342:877-883;Foote and Winter(1
992) J.Mol.Biol. 224:487-499;U.S.Pat.No.
6,329,511を参照されたい)。
ヒト化の代替法は、ファージ上にディスプレイされたヒト抗体ライブラリーまたはトラ
ンスジェニックマウスにおけるヒト抗体ライブラリーを用いることである(Vaugha
n et al.(1996) Nature Biotechnol. 14:309
-314;Barbas(1995) Nature Medicine 1:837-
839;Mendez et al.(1997) Nature Genetics
15:146-156;Hoogenboom and Chames(2000) I
mmunol.Today 21:371-377;Barbas et al.(20
01) Phage Display:A Laboratory Manual,Co
ld Spring Harbor Laboratory Press,Cold S
pring Harbor,New York;Kay et al.(1996) P
hage Display of Peptides and Proteins:A
Laboratory Manual,Academic Press,San Die
go,CA;de Bruin et al.(1999) Nature Biote
chnol. 17:397-399)。
抗原の精製は、抗体作製に必要ではない。動物に目的抗原を有する細胞を免疫すること
ができる。脾臓細胞を次いで免疫動物から単離し、脾臓細胞をミエローマ細胞株と融合す
ることでハイブリドーマを生産することができる(例としてMeyaard et al
.(1997) Immunity 7:283-290;Wright et al.
(2000) Immunity 13:233-242;上のPreston et
al.;Kaithamana et al.(1999) J.Immunol. 1
63:5157-5164を参照されたい)。
抗体は、例として低分子薬、酵素、リポソーム、ポリエチレングリコール(PEG)と
コンジュゲートさせることができる。抗体は、治療剤、診断剤、キットまたは他の目的の
ために有用であり、例として色素、放射性同位体、酵素、または金属、例として金コロイ
ドと結合した抗体を包含する(例としてLe Doussal et al.(1991
) J.Immunol. 146:169-175;Gibellini et al
.(1998) J.Immunol. 160:3891-3898;Hsing a
nd Bishop(1999) J.Immunol. 162:2804-2811
;Everts et al.(2002) J.Immunol. 168:883-
889を参照されたい)。
蛍光活性化細胞分取(FACS)を包含するフローサイトメトリー法は、利用可能であ
る(例としてOwens,et al.(1994) Flow Cytometry
Principles for Clinical Laboratory Pract
ice,John Wiley and Sons,Hoboken,NJ;Givan
(2001) Flow Cytometry,2nd ed.;Wiley-Lis
s,Hoboken,NJ;Shapiro(2003) Practical Flo
w Cytometry,John Wiley and Sons,Hoboken,
NJを参照されたい)。例として診断剤としての使用のための、核酸プライマーおよびプ
ローブを包含する核酸、ポリペプチドならびに抗体の修飾に適した蛍光試薬は、利用可能
である(Molecular Probesy(2003) Catalogue,Mo
lecular Probes,Inc.,Eugene,OR;Sigma-Aldr
ich(2003) Catalogue,St.Louis,MO)。
免疫系の組織学の標準的方法は、記載されている(例としてMuller-Harme
link(ed.) (1986) Human Thymus:Histopatho
logy and Pathology,Springer Verlag,New Y
ork,NY;Hiatt,et al.(2000) Color Atlas of
Histology,Lippincott,Williams,and Wilki
ns,Phila,PA;Louis,et al.(2002) Basic His
tology:Text and Atlas,McGraw-Hill,New Yo
rk,NYを参照されたい)。
例として抗原性断片、リーダー配列、タンパク質フォールディング、機能ドメイン、グ
リコシル化部位および配列アラインメントを決定するためのソフトウェアパッケージおよ
びデータベースは、利用可能である(例としてGenBank,Vector NTI(
登録商標) Suite(Informax,Inc.,Bethesda,MD);G
CG Wisconsin Package(Accelrys,Inc.,San D
iego,CA);DeCypher(登録商標)(TimeLogic Corp.,
Crystal Bay,Nevada);Menne,et al.(2000) B
ioinformatics 16:741-742;Menne,et al.(20
00) Bioinformatics Applications Note 16:
741-742;Wren,et al.(2002) Comput.Methods
Programs Biomed. 68:177-181;von Heijne(
1983) Eur.J.Biochem. 133:17-21;von Heijn
e(1986) Nucleic Acids Res. 14:4683-4690を
参照されたい)。
分析方法
製品の安定性を評価するのに適した分析方法としては、サイズ排除クロマトグラフィー
(SEC)、動的光散乱試験(DLS)、示差走査型熱量計(DSC)、iso-asp
定量、力価、340nmにおけるUV、UV分光法およびFTIRが挙げられる。SEC
(J.Pharm.Scien.,83:1645-1650,(1994);Phar
m.Res.,11:485(1994);J.Pharm.Bio.Anal.,15
:1928(1997);J.Pharm.Bio.Anal.,14:1133-11
40(1986))は、製品中のパーセントモノマーを測定し、可溶性凝集物の量の情報
を与える。DSC(Pharm.Res.,15:200(1998);Pharm.R
es.,9:109(1982))は、タンパク質変性温度およびガラス転移温度の情報
を与える。DLS(American Lab.,November(1991))は、
平均拡散係数を測定し、可溶性および不溶性の凝集物の量の情報を与える。340nmに
おけるUVは、340nmでの散乱光強度を測定し、可溶性および不溶性の凝集物の量に
ついての情報を与える。UV分光法は、278nmにおける吸光度を測定し、タンパク質
濃度の情報を与える。FTIR(Eur.J.Pharm.Biopharm.,45:
231(1998);Pharm.Res.,12:1250(1995);J.Pha
rm.Scien.,85:1290(1996);J.Pharm.Scien.,8
7:1069(1998))は、アミドI領域におけるIRスペクトルを測定し、タンパ
ク質2次構造の情報を与える。
試料中のiso-asp含量は、Isoquant Isoaspartate De
tection System(Promega)を用いて測定される。このキットは、
標的タンパク質中のイソアスパラギン酸残基の存在を特異的に検出するため、酵素タンパ
ク質イソアスパルチルメチルトランスフェラーゼ(PIMT)を用いる。PIMTは、S
-アデノシル-L-メチオニンからアルファ-カルボキシル位のイソアスパラギン酸への
メチル基の転移を触媒し、このプロセスの中でS-アデノシル-L-ホモシステイン(S
AH)を生成する。これは比較的低分子であり、通常、単離され、キット中に備えられた
SAH HPLC標準物質を用いて逆相HPLCにより定量することができる
抗体の力価または生物学的同一性は、その抗原に結合する能力により測定することがで
きる。抗体のその抗原への特異的結合は、当業者に知られている任意の方法、例えばイム
ノアッセイ、例えばELISA(酵素結合免疫吸着アッセイ)などにより定量することが
できる。
本明細書中で言及される全ての刊行物は、本発明に関連して用いられ得る方法論および
材料を記載し開示する目的のために、参照により組み込まれる。
付随する図面を参照して本明細書中の発明の異なる実施形態を記載していることから、
本発明はまさにそれらの実施形態に限定されないこと、ならびにそれらにおける様々な変
更および改変が、当業者によって、添付の特許請求の範囲中に規定される本発明の範囲ま
たは趣旨から逸脱することなく実行され得ることが理解されるものである。
実施例1
抗TIGIT製剤バッファーのスクリーニング
ハイスループットの製剤開発試験を、次のCDR:配列番号108のHCDR1、配列
番号154のHCDR2、配列番号110のHCDR3、配列番号111のLCDR1、
配列番号112のLCDR2および配列番号113のLCDR3を各々持つ3つの抗TI
GIT抗体について実施し、(1)生物物理学的/生化学的傾向;(2)予備製剤(pH
、塩およびバッファー)条件、および(3)プラットフォーム製剤との適合性にわたって
評価した。試料を、より大きな凝集物のサロゲートとしての濁度(A350)のUV/可
視光分光分析、高分子量種の形成を検出するためのサイズ排除クロマトグラフィー(UP
-SEC)、分子表面の電荷分布に対するストレスの効果を測定するためのキャピラリー
等電点電気泳動(cIEF)、重鎖または軽鎖のタンパク質分解切断を検出するための還
元性ドデシル硫酸ナトリウムキャピラリー電気泳動(CE-SDS)、視認できない凝集
物を検出するための視認閾値以下粒子分析(sub-visible particle
analysis)によって分析した。
ハイスループット製剤スクリーニングは、3つのバッファー種:5.0から6.2まで
の範囲のpH値を有する酢酸塩バッファー、5.6から6.8までの範囲のpH値を有す
るクエン酸塩バッファーおよび5.0から6.8までの範囲のpH値を有するL-ヒスチ
ジンバッファーを選択して製剤化された1mg/mLの抗TIGIT抗体を含んでいた。
それゆえに、5.0から6.8までの範囲のpH値および0~150mM NaClのイ
オン強度を調べた。試料に50℃で10日間ストレスを負荷し、示差走査蛍光(DSF)
を用いて熱安定性を、サイズ排除クロマトグラフィー(UP-SEC)を用いてコロイド
安定性を、Guava(視認閾値以下特性評価アッセイに基づくフローサイトメトリー)
を用いて凝集性向を、濁度(A350測定)を、電荷バリアントプロファイル(cIEF
)を、およびCaliperを用いて断片化プロファイルを分析した。
試験から得られた結果に基づくと、タンパク質に最大の安定性を付与した製剤は、pH
範囲が5.6から6.2の10mM L-ヒスチジンであった。pH範囲が5.6から6
.2の10mM L-ヒスチジンは、UP-SECによりモニターされた凝集が最も少な
く、-1.63から-1.85%の間の範囲のΔSECメインを有していた(他のバッフ
ァーおよびpH条件における-2.0から-5.0%までの範囲のSECメインと比べた
もの)(データは示されない)。cIEFプロファイルは、メインおよび塩基性種の相対
的ピーク面積の減少および酸性バリアントの相対的ピーク面積の増加が50℃で10日後
の試料で際立っていたことを示した(-9.0から-11.3%の間の範囲のcIEFメ
イン)(データは示されない)。高温への曝露の際の塩基性バリアントの減少および酸性
バリアントの増加は、mAbの場合、通例的に起こることである。塩の添加は、試験され
た組成物の全体にわたってタンパク質の安定性を低減させた。
実施例2
抗TIGIT製剤のpH範囲の試験
この試験において、次のCDR:配列番号108のHCDR1、配列番号154のHC
DR2、配列番号110のHCDR3、配列番号111のLCDR1、配列番号112の
LCDR2および配列番号113のLCDR3を持つ抗TIGIT抗体を、10mM L
-ヒスチジンバッファー中50mg/mLの濃度で試験した。7%(w/v)スクロース
を製剤に加えて分子のバルク安定性を向上させた(安定剤および非イオン性張性調整物質
として)。抗TIGIT抗体を、pH5.5、pH6.0およびpH6.5の10mM
L-ヒスチジンバッファー、7%スクロース中で製剤化した。かかる製剤の安定性を次の
ように評価した。
(1)分子の安定性を、光から保護された、加速された熱および保存安定性条件下(5℃
、25℃および40℃で6ヶ月までの間)でモニターした。
(2)凍結融解ストレスおよび撹拌ストレスへの安定性試験も実行した。
(3)撹拌試験は、様々な濃度のポリソルベート80(PS-80)を含有する製剤中で
実行し、製剤中のPS-80の濃度を査定した。
(4)光ストレス試験を実行し、製剤中のL-メチオニンの必要性を評価した。
材料と方法
熱安定性試験(3ヶ月)
50mg/mL 抗TIGIT抗体を、pH5.5、pH6.0またはpH6.5の1
0mM L-ヒスチジンバッファー、7%スクロース、0.2mg/mLポリソルベート
80中で製剤化した。得られた製剤を滅菌ろ過し、2Rバイアル中に充填し、クロロブチ
ル栓で栓をして、シール付きアルミニウムキャップで蓋をした。安定性試験は、5℃(環
境湿度)、25℃(60%相対湿度)および40℃/(75%相対湿度)で実施した。試
料を、UP-SEC、HP-IEX、cIEF(選択試料)、MFI、CE-SDS(非
還元「NR」および還元「R」)、還元ペプチドマッピングを用いて分析した(MFIお
よび還元ペプチドマッピングは選択時点で実施した)。
10mM L-ヒスチジンバッファー、7%スクロース、0.2mg/ml PS-8
0、pH6.0中で製剤化された25mg/mlの抗TIGIT抗体について、1ヶ月の
熱安定性試験を設定した。得られた製剤を滅菌ろ過し、2Rバイアル中に充填し、クロロ
ブチル栓で栓をして、アルミニウムシールで蓋をした。安定性試験は、5℃(環境湿度)
、25℃(60%相対湿度)および40℃/(75%相対湿度)で1ヶ月間実施した。試
料を、UP-SEC、cIEFおよびCE-SDS(NRおよびR)を用いて分析した。
撹拌安定性試験
50mg/mL 抗TIGIT抗体を、様々なポリソルベート80濃度(0、0.1お
よび0.2mg/mL)を有する10mM L-ヒスチジンバッファー、7%スクロース
、pH6.0中で製剤化した。得られた製剤を滅菌ろ過し、2Rバイアル中に充填し(1
.2mLの充填量)、クロロブチル栓で栓をして、シール付きアルミニウムキャップで蓋
をした。試料を、18~22℃で7日までの間、水平位置において300RPMで撹拌し
た。試料を、UP-SEC、MFIおよびCE-SDS(NRおよびR)を用いて分析し
た。
凍結融解安定性
50mg/mL 抗TIGIT抗体を、10mM L-ヒスチジンバッファー、7%ス
クロース、0.2mg/mLポリソルベート80、pH6.0中で製剤化した。得られた
製剤を滅菌ろ過し、2Rバイアル中に充填し、クロロブチル栓で栓をして、シール付きア
ルミニウムキャップで蓋をした。試料を、-80℃から18~22℃(凍結条件で少なく
とも24時間、および完全に融解するまで室温)での5回の凍結融解サイクルに供した。
試料を、UP-SEC、MFIおよびCE-SDS(NRおよびR)を用いて分析した。
光ストレス安定性試験
初期の開発試験は、露出したトリプトファン残基、同様に光ストレス下で酸化されやす
いいくつかのメチオニンの存在を指し示した。試験は、ICH光ストレス条件の可視光(
CWF、0.1×ICH、0.2×ICH、0.5×ICH、1×ICH)下で、L-メ
チオニンを含むおよび含まない製剤(製剤1:10mM L-ヒスチジンバッファー、7
%スクロース、0.2mg/mLポリソルベート80、pH6.0および製剤2:10m
M L-ヒスチジンバッファー、10mM L-メチオニン、7%スクロース、0.2m
g/mLポリソルベート80、pH6.0)において設定した。試料を、UP-SEC、
cIEF、CE-SDS(NRおよびR)および還元ペプチドマッピングを用いて分析し
た。
結果
熱安定性の結果
50mg/ml製剤:試験された全ての安定性指示アッセイについて、5℃では、3ヶ
月後、全てのpH値において顕著な変化は観察されなかった(データは示されない)。2
5℃および40℃では、pH5.5およびpH6.0は同様の安定性を示し、これらの条
件はpH6.5より安定であった(データは示されない)。25℃および40℃でのUP
‐SEC、CE‐SDS(NR)およびcIEFアッセイのpH6.5での分解速度は、
pH5.5およびpH6.0で見られるものよりも相対的に大きく、ベンチマーク分子と
比べたときも相対的に大きかった。したがって、5.5から6.0のpH範囲(8.7の
pI)は好適であると考えられた。3ヶ月後、全ての温度およびpH値において、酸化、
脱アミド化または異性化は抗TIGIT抗体について観察されなかった。
25mg/ml製剤:試験された全てのアッセイについて、25℃および40℃で分解
が観察された。分解速度は、50mg/ml条件と同様であることが見出された(上を参
照されたい)。
撹拌安定性試験
ポリソルベート80を含有しない製剤は、7日終了時に視認できる粒子を示した。視認
閾値以下粒子分析は、10μm以上の粒子が0.2mg/mLポリソルベート80濃度を
含有する製剤において有意に低減したことを示した。試料間の有意差は、他のアッセイを
用いては見られなかった。
凍結融解安定性
試験したアッセイの全てにおいて、5回の凍結融解サイクル後、分子の安定性に変化は
見られなかった。
光ストレス安定性試験
UP-SEC、cIEF、CE-SDS(NRおよびR)で試験したとき、両製剤の試
料を0.5×ICH以上の光ストレスに曝露した場合に分解が観察された。0.5×IC
H未満の条件設定では、両製剤とも顕著な分解を示さなかった。0.5×以上の光ストレ
ス条件下での還元ペプチドマッピングのデータは、トリプトファンおよびメチオニン残基
の酸化を示した。製剤中の10mM L-メチオニンは、メチオニン残基の酸化レベルを
低減させたが、トリプトファンの酸化レベルには影響しなかった。
結論
前述のことに基づくと、10mM L-ヒスチジンバッファー、10mM L-メチオ
ニン、7%スクロース、0.2mg/mLポリソルベート80 pH5.5~6.0は、
冷凍条件下で保存期間を支持するための安定性を付与するのに適切であると考えられる。
実施例3
さらなるpHの試験
IgG1骨格上に次のCDR:配列番号108のHCDR1、配列番号154のHCD
R2、配列番号110のHCDR3、配列番号111のLCDR1、配列番号112のL
CDR2および配列番号113のLCDR3を持つ抗TIGIT抗体を、異なるpH(5
.0から6.5までの範囲)を有する6つの10mM ヒスチジンバッファー中で製剤化
した。異なる製剤の熱安定性を、2~8℃、25℃および40℃で8週間にわたって試験
した。
Figure 2024016177000039
異なるpH(5.0~6.5)のヒスチジンバッファーを、10mM L-ヒスチジン
バッファーを10mM L-ヒスチジン-HClバッファー中に滴定することにより調製
した。抗TIGIT抗体を、4℃および4500rpm~5000rpm(各ラウンドで
105~260分)の条件下で遠心分離装置を用いた4から5ラウンドの限外ろ過を通じ
て、pHが異なる6つの異なるヒスチジンバッファーにバッファー交換した。バッファー
交換後、特定量のスクロースおよびポリソルベート80ストック溶液(1%、w/w)を
異なるpHの溶液に加えて標的量に到達させ、適当量の対応するヒスチジンバッファーを
同様に加えて抗体濃度を約50mg/mlに調整した。
製剤を次いで、0.22μmメンブレンフィルターで無菌的にろ過した。3mLの各試
料を、T0、4週間(4W)および8週間(8W)の熱安定性試験のために6mLガラス
バイアルの中に無菌的に充填した。1mLの各試料を2週間(2W)の熱安定性試験のた
めに6mLガラスバイアルの中に無菌的に充填した。充填したバイアルに栓をし、充填直
後にクリンプオーバーシールした。上の全てのステップは、バイオセーフティフードの中
で実施した。これらのバイアルをカバー付きボックスの中に入れ、熱安定性試験のために
異なる温度条件で保存した。
結果および考察
全ての試料の外観は、全ての条件で4週間以内に同じままであった。しかしながら、8
週間後、2~8℃および25℃の試料はわずかな黄色味を示し、40℃の試料はより深い
黄色味を示した。試験期間中、全ての試料はわずかに乳白色であって、視認できる粒子を
含まなかった。試験中、全ての試料のタンパク質濃度に相当な変化は見られなかった。
試料のコロイド安定性を、モノマーのパーセンテージ、高分子量種(HMW)および遅
く溶出するピーク(LMW種)のパーセンテージである純度についてのサイズ排除クロマ
トグラフィー(SEC)によって査定した。分析は、TSKGel G3000SWXL
サイズ排除クロマトグラフィーカラム(300×7.8mm、5μm)を有するAgil
ent 1260 Infinityシステムを用いて実施した。移動相は50mM P
B、300mM NaCl、pH7.0±0.2であり、流速は1.0mL/分に設定し
た。試料を注入用に10mg/mLに希釈し、UV検出器を用いて280nmで検出した
UPSECデータは下の表中に記載される。
Figure 2024016177000040
上の表中に示されるように、SECメインピーク%は、全ての試料において2~8℃で
安定であったが、25℃および40℃では顕著なメインピーク%の減少が観察された。メ
インピーク%の減少速度は、25℃よりも40℃の試料において速かった。40℃で8週
間では、HMW%はpH6.2および6.5の試料においてより大きかったが、LMW%
はpH5.0および5.3の試料でより大きかった。
製剤の化学的安定性を評価するため、キャピラリー等電点電気泳動(cIEF)を実施
して、化学的安定性を評価し、経時的な電荷バリアントプロファイルの変化をモニターし
た。簡潔には、20μL(2.0mg/mL)の参照標準物質または試料を、0.5μL
のpI 5.85マーカー、0.5μLのpI 9.77マーカー、1μLのPharm
alyte 3-10、0.5μLのPharmalyte 5-8、0.5μLのPh
armalyte 8-10.5、35μLの1%メチルセルロース、37.5μLの8
M尿素と混合した。精製水を加えて100μLの最終容量とした。混合物を次いで、フル
オロカーボンコーティングされた全カラム検出キャピラリーを備えたiCE-3キャピラ
リー等電点電気泳動分析装置で分析した。フォーカシングは、(1)1.5kVで1分間
、および(2)3kVで8分間の2つのステップによって行った。実験中、オートサンプ
ラートレイを5℃で維持した。
酸性バリアント、%メインピークおよび%塩基性バリアントのレベルを評価するための
cIEFデータは下の表中にある。
Figure 2024016177000041
上の表中に見られるように、2~8℃では、cIEFメインピーク%、酸性ピーク%お
よび塩基性ピーク%は比較的安定であって、全ての試料において同等であった。
2~8℃では、cIEFメイン塩基性ピーク%も増加し;pH5.0および5.3のバ
ッファー試料における増加は、他の試料におけるものよりも大きかった。25℃では、メ
インピーク%、酸性ピーク%および塩基性ピーク%は最初の2週間以内は安定であったが
、4週間後にわずかに変化し、メインピーク%は減少したが酸性ピーク%は対応して増加
した。異なる製剤における変化速度は同等であった。40℃では、メインピーク%の顕著
な減少および酸性ピーク%の注目すべき増加が全ての製剤において2週間後であっても見
出されたが、変化の程度は各製剤において同様であった。塩基性ピーク%も増加し;pH
5.0および5.3のバッファー試料における増加は、他の試料におけるものよりも大き
かった。
製剤の純度を評価するため、非還元Caliper分析を行った。簡潔には、購入した
試料バッファーを1に対して20の体積比で10%ドデシル硫酸ナトリウム(SDS)溶
液と混合し、100mMのN-エチルマレイミド溶液を20に対して0.7の体積比で混
合溶液に加えた(試料変性溶液と呼ぶ)。標準物質または試料を最初に1mg/mLに希
釈し、2μLの希釈した標準物質または試料を7μLの試料変性溶液と混合した。混合物
を70℃で10分間インキュベートした。35μLの精製水をインキュベートした溶液に
加え、42μLの混合溶液を分析のために96ウェルプレートに移した。サンプルプレー
トを、HT Antibody Analysis 200アッセイを用いて、LabC
hip GX II HTで分析した。
%純度を評価するための非還元Caliper分析データは下の表中に示される。
Figure 2024016177000042
上の表中に示されるように、2~8℃で8週間では、各製剤におけるCaliper_
非還元純度は比較的安定であった。25℃で8週間では、各製剤における純度はわずかに
減少した。40℃では、純度は、特に試料がpH5.0および5.3のバッファー中にあ
る場合に顕著に低下し、この減少は他のそれよりも大いに速かった。試験中、分子サイズ
は安定であった(データは示されない)。
製剤の純度をさらに評価するため、還元Caliper分析も行った。簡潔には、購入
した試料バッファーを1に対して20の体積比で10% SDS溶液と混合し、1Mジチ
オスレイトール溶液を20に対して0.7の体積比で混合溶液に加えた(試料変性溶液と
呼ぶ)。標準物質または試料を最初に1mg/mLに希釈し、2μLの希釈した標準物質
または試料を7μLの試料変性溶液と混合した。混合物を70℃で10分間インキュベー
トした。35μLの精製水をインキュベートした溶液に加え、42μLの混合溶液を分析
のために96ウェルプレートに移した。サンプルプレートを、HT Antibody
Analysis 200アッセイを用いて、LabChip GX II HTで分析
した。
%純度を評価するための還元Caliper分析データは下の表中に示される。
Figure 2024016177000043
上に見られるように、2~8℃および25℃で8週間では、各製剤におけるCalip
er_還元純度は比較的安定であった。40℃では、全ての製剤においてCaliper
_R純度の明らかな低下が見出された。pH5.0バッファー中の試料の純度が最も大き
く減少し、その後にpH5.3バッファー中の試料が続いた。pH5.6、5.9および
6.2のバッファー中での減少速度は同等であったがより遅かった。pH6.5バッファ
ー中の試料の純度が最も遅く減少した。純度の低下は、おそらく重鎖(HC)%の減少の
ためであり、試験中、軽鎖(LC)%は安定であった。抗体の軽鎖および重鎖のサイズは
、8週間にわたって全試料において安定であった。
実施例4
メチオニンを含まない抗TIGIT製剤
次のCDR:配列番号108のHCDR1、配列番号154のHCDR2、配列番号1
10のHCDR3、配列番号111のLCDR1、配列番号112のLCDR2および配
列番号113のLCDR3を持つ抗TIGIT抗体を、pH範囲が5.0~6.5である
10mM L-ヒスチジンバッファー、7%スクロース、0.2mg/mL PS-80
中、50mg/mLの濃度で試験した。分子の安定性を、光から保護された、加速された
熱および保存安定性条件下でモニターした。熱安定性に加えて、凍結融解安定性、撹拌安
定性、光ストレス安定性の試験も実行した。UP-SEC、cIEF、CE-SDS、M
FIおよび還元ペプチドマッピングを包含して安定性を試験した。
結果
熱安定性試験(8週間)
試験された全ての安定性指示アッセイについて、抗TIGIT抗体は、5℃では試験さ
れた全ての傾向について安定であった。UP-SEC、Caliper CE-SDS、
cIEF、MFIを用いて観察された分解速度は、25℃よりも40℃で大きかった。2
5℃および40℃では、次の結果が目立った。
UP-SEC:5.0から6.5までの全てのpH値について、モノマー%の低下が観
察された。より低いpH値(5.0および5.3)では、メインピークの低下は主として
%低分子量(LMW)種の増加によるものであったが、pH6.5での%モノマーの低下
は主として%高分子量(HMW)種の増加によるものであった。%モノマーの低下は、p
H6.5で8週間の加速安定性の後に最も大きかった(データは示されない)。
cIEF:25℃および40℃で5.0~6.5までの全てのpH値について、cIE
Fメインピークの低下が観察された。より高いpH値(6.3~6.5)では、メインピ
ークの低下は主に酸性バリアントの増加によるものであったが、pH5.0および5.3
では、メインピークの低下は酸性バリアントおよび塩基性バリアントの両方の増加による
ものであった(データは示されない)。
CE-SDS(Caliper):断片化種の存在による非還元CE-SDSのメイン
ピーク低下が主に40℃で観察された。より低いpH値(5.0および5.3)の製剤は
、残りのpH値のものよりも相対的に大きい断片化速度を示した。
還元CE-SDS(Caliper)分析は、5℃および25℃で8週間では、各製剤
における純度は比較的安定であることを明らかにした。40℃では、全ての製剤において
純度の明らかな低下が見出された。pH5.0バッファー中の試料の純度が最も大きく減
少し、その後にpH5.3バッファー中の試料が続いた。
MFI:40℃で全ての製剤について、視認できない粒子の増加が観察された。pH6
.3および6.5は、残りのバッファーと比較して、視認できない粒子の増加が最も大き
かった。
還元ペプチドマッピング:確認された傾向のなかで、M254のみが、開始時試料と比
較して40℃で8週間後に酸化の相対的な増加を示した。
結論:10mM L-ヒスチジンバッファー、7%スクロース、0.2mg/mL P
S-80、pH5.6~6.3は、抗TIGIT抗体の保存安定性を8週間にわたって適
切に支持した。
撹拌安定性試験
50mg/mLの抗TIGIT製剤(10mM L-ヒスチジンバッファー、7%スク
ロース、pH5.8、ならびに0、0.1、0.2および0.3mg/mL PS-80
のいずれか)を18~22℃で7日までの間、100RPMで穏やかに撹拌した場合、可
溶性凝集物、荷電バリアント、断片化または視認できない粒子に変化は観察されなかった
凍結融解安定性
50mg/mLの抗TIGIT抗体(10mM L-ヒスチジンバッファー、7%スク
ロース、0.2mg/mL PS-80、pH5.8中のもの)を5回の凍結/融解サイ
クル(-80℃で2時間凍結し、室温で1時間融解)に供した場合、可溶性凝集物、荷電
バリアント、断片化または視認できない粒子に変化は観察されなかった。
光ストレス安定性試験
50mg/ml製剤を、48時間、可視光ストレス(5000lx)下に供した。これ
らの条件下、約0.2×ICH条件(12Hの光曝露)下では、可溶性凝集物、荷電バリ
アント、視認できない粒子、pH、濃度、断片化および酸化にごくわずかな変化があった
。約1×(48H露光)条件下では、可溶性凝集物、酸性バリアント、断片化、視認でき
ない粒子およびメチオニン酸化が増加した。
結論
これらの試験に基づくと、10mM L-ヒスチジンバッファー、7%スクロース、0
.2mg/mL PS-80 pH5.3~6.3は、抗TIGIT抗体の安定性を支持
することができた。重度の光ストレスに曝露するとメチオニン酸化が観察された。実施例
2中で述べたように、10mM L-メチオニンの添加は、メチオニン残基の酸化を低減
させる。
実施例5
ポリソルベート80のスクリーニング
次のCDR:配列番号108のHCDR1、配列番号154のHCDR2、配列番号1
10のHCDR3、配列番号111のLCDR1、配列番号112のLCDR2および配
列番号113のLCDR3を持つ抗TIGIT抗体を、異なるPS-80濃度(下に示さ
れる)を有するpH5.8、10mM L-ヒスチジンバッファーの4つの製剤へと製剤
化した。異なる製剤におけるタンパク質安定性を、撹拌を伴うまたは伴わない条件で、2
0℃で7日の期間にわたって試験した。
Figure 2024016177000044
製剤は、実験室スケールのTFFバッファー交換システムを用いて、pH5.8の10
mM L-ヒスチジンバッファーで製剤化した。異なるポリソルベート80含量を有する
製剤化タンパク質を次いで、0.22μmメンブレンフィルターで無菌的にろ過した。2
mLの各試料を次いで、6mLガラスバイアルの中に無菌的に充填した。充填したバイア
ルに栓をし、充填直後にクリンプオーバーシールした。試料を撹拌群と非撹拌群に分けた
。撹拌群においては、これらのバイアルをカバー付きボックスに移し、次いでサーモスタ
ットシェーカーに入れ、100rpm、20℃で7日までの間、撹拌した。非撹拌群にお
いては、これらのバイアルをカバー付きボックスに移し、サーモスタットシェーカーに入
れたが、シェーカーを7日までの間、20℃で静置した。
撹拌を伴うまたは伴わない異なる製剤における抗体安定性を、3日および7日後に試験
した。
高分子量種(HMWまたは凝集物)、%モノマーおよびLMW(低分子量種)のレベル
を評価するためのUPSECデータは下の表中にある。
Figure 2024016177000045
見られるように、ポリソルベート80含量は、撹拌を伴う条件においても伴わない条件
においても、SEC純度に対する顕著な影響を生じなかった。ポリソルベート80含量は
、7日間までの撹拌を伴う条件においても伴わない条件においても、pI、cIEFアッ
セイにおけるメインピーク、酸性ピークおよび塩基性ピークのパーセンテージに顕著に影
響を与えなかった。
Figure 2024016177000046
下の表中に示されるように、ポリソルベート80含量は、7日間までの撹拌を伴っても
伴わなくても、Caliper_非還元純度に顕著な影響を与えなかった。
Figure 2024016177000047
還元Caliper分析も行った。PS-80含量は、7日間の撹拌を伴っても伴わな
くても、Caliper_還元純度に顕著な影響を与えなかった。
Figure 2024016177000048
視認できない粒子を測定するため、約1500μLの各試料をガラスバイアル容器から
取り出し、ユーザマニュアルに従ってマイクロフローイメージング(MFI)によって試
験した。1~2μm、2~5μm、5~10μm、10~25μmおよび>25μmを包
含する異なる粒径範囲の粒子の濃度が報告された(下を参照されたい)。ポリソルベート
80含量は、7日間までの撹拌を伴っても伴わなくても、粒子濃度に顕著な影響を与えな
かった。
Figure 2024016177000049
実施例6
キレーターの添加
この試験では、20uMまたは50uMのDTPAの存在下または不存在下での、10
mM L-ヒスチジンバッファー(pH=5.8)、0.02%(w/v)ポリソルベー
ト80、10mM L-メチオニン(「L-Met」)、7% w/vスクロース中の次
のCDR:配列番号108のHCDR1、配列番号154のHCDR2、配列番号110
のHCDR3、配列番号111のLCDR1、配列番号112のLCDR2および配列番
号113のLCDR3を持つ抗TIGIT抗体の安定性を比較した。
3つの製剤をバイアルの中に充填し、5℃(環境湿度)、25℃(60%相対湿度)お
よび40℃(75%相対湿度)で18週間、光から保護して安定性について実施した。
Figure 2024016177000050
試料のコロイド安定性を、純度についてのサイズ排除クロマトグラフィー(SEC)に
よって査定し、ここでモノマーのパーセンテージ、同様に高分子量種(HMW)および遅
く溶出するピーク(LMW種)のパーセンテージを決定した。%HMW(凝集物)、%モ
ノマーおよび%LMWのレベルを評価するためのUPSECデータは下の表中にある。
Figure 2024016177000051
上の表中に示されるように、5℃、25℃および40℃では、3つ全ての製剤が18週
時点までの間、%HMWピークおよび%LMWピークの増加(ならびに結果としての%モ
ノマーピークの減少)の傾向を示した。25℃では、両製剤は同様の傾向を示したが、4
0℃と比べて変化は小さかった。5℃では、実質的な変化は観察されなかった。製剤1は
、製剤2(20uM DTPA)および製剤3(50uM DTPA)と比べて、%HM
Wおよび%LMWのより大きな増加を示す。加えて、製剤1は、製剤2および3と比べて
、%モノマーのより大きな減少を示した。同様の結果がHP-IEX分析で見られた(デ
ータは示されない)。
DTPAが製剤を酸化ストレスから保護することができるかを評価するため、3つの製
剤をバイアルの中に充填し、光(0.5×ICHおよび1×ICH)に曝露した。下の表
中に見られるように、製剤1は、製剤2(20uM DTPA)および製剤3(50uM
DTPA)と比べて、M254、M430およびW104(酸化されやすいメチオニン
およびトリプトファン)の%酸化のより大きな増加を示す。それゆえに、DTPAは、抗
TIGIT抗体製剤の安定性をさらに改善することができる。
Figure 2024016177000052
Figure 2024016177000053
実施例7
抗TIGIT抗体製剤の長期安定性
この例は、L-ヒスチジンバッファー、L-メチオニン、スクロース、ポリソルベート
80および注射用水中で次のように製剤化された抗TIGIT抗体についての長期安定性
データを記載するものである。
Figure 2024016177000054
溶液を、エラストマーの栓およびアルミニウムシールを有するUSPタイプ1ガラスバ
イアルの中に充填した。バイアルを次いで3つの異なる保存条件:5℃(環境湿度)、2
5℃(60%相対湿度)および40℃(75%相対湿度)でインキュベートした。データ
は、全ての保存条件について0時、1ヶ月、3ヶ月、6ヶ月に、ならびに9ヶ月(5℃お
よび25℃の保存条件)、12ヶ月(5℃および25℃の保存条件)、18ヶ月(5℃の
保存条件)、24ヶ月(5℃の保存条件)および36ヶ月(5℃の保存条件)に収集する
結果
結果は、5℃で18ヶ月間の推奨長期条件で保存した場合の抗TIGIT抗体の全体的
な物理的および化学的安定性を実証する。測定可能な力価喪失は観察されず、推奨保存条
件下での純度は規格内であった。結果は次の表中に記載される。
Figure 2024016177000055
Figure 2024016177000056
Figure 2024016177000057
タンパク質濃度
全ての時点および条件についてのタンパク質濃度の安定性データは、保存時間または条
件に応じた注目すべき変化を何ら呈さず、全ての結果は45~55mg/mlの許容基準
内であった。
pH
5℃、25℃および40℃の条件について、pHに顕著な変化はなかった。図1は、時
点0から9ヶ月までのpHデータを示す。
ポリソルベート80
5℃の推奨保存条件でのポリソルベート80含量は、9ヶ月および18ヶ月で0.13
mg/mlにわずかに減少した(18ヶ月のデータは示されない)。ポリソルベート80
の減少傾向は、25℃(加速)および40℃(ストレス負荷)で観察された。40℃では
ポリソルベート80濃度は6ヶ月で0.06mg/mlに減少し、25℃ではポリソルベ
ート80濃度は9ヶ月で0.07mg/mlに減少した。9ヶ月までのポリソルベート8
0濃度データが図2中に記載される。
ELISAによる結合力価
得られたELISAの結果には、いずれの時点または条件においても明らかな傾向はな
かった。9ヶ月までの力価データが図3中に記載される。
UP-SECによる純度
UP-SECによる純度のデータは、9ヶ月まで、%モノマーについて図4、%高分子
量種について図5、%低分子量種について図6中に図示される。
5℃の推奨保存条件では、18ヶ月間の安定性にわたって、%モノマーがわずかに減少
し、対応して%高分子量種がわずかに増加する。開始時から18ヶ月までの%低分子量種
は、0.4%に等しい定量限界未満(<QL)である。25℃の条件では、%モノマーは
開始時から12ヶ月まで減少し、対応して%高分子量種は増加した。9ヶ月および12ヶ
月で、%低分子量種はQLを上回って報告された。
40℃のストレス負荷条件では、%モノマーは98.7%から93.8%に減少し、対
応して高分子量種は1.33%から2.63%に、低分子量種は<QLから3.53%に
増加した。この結果は、保存条件の性質を考えると予想外ではなかった。
還元および非還元のCD-SDS
図7および8は、還元および非還元CD-SDSによって決定された9ヶ月までの純度
データを示す。5℃の長期保存条件では、還元CE-SDS(%重鎖および軽鎖)または
非還元CE-SDS(%インタクトIgG)において注目すべき傾向はなく、結果は≧9
0.0%のGMP医薬品許容基準内であった。加速された25℃条件では、非還元条件に
ついて減少傾向が観察された。還元CE-SDS条件についても減少傾向が観察された。
還元および非還元CE-SDSの両方について、9ヶ月時点までの全ての結果はGMP許
容基準内であった。40℃のストレス負荷条件では、6ヶ月において、還元および非還元
CE-SDSの両方の結果は、GMP医薬品のために設定された≧90.0%の許容基準
未満であった。非還元CE-SDSの結果は、3ヶ月で規格から外れて88.9%の結果
となり、次いで6ヶ月でさらに79.6%に減少した。還元CE-SDSについては、%
重鎖および%軽鎖が3ヶ月で94.2%から6ヶ月で87.7%に減少した。この減少は
、条件の性質を考慮すると、40℃では予想外ではなかった。
HP-IEXによる電荷バリアント
5℃(長期保存)では、%酸性バリアントが21.46%の開始時から22.49%の
9ヶ月までわずかに増加し、対応して総メインが68.8%から9ヶ月で67.1%にわ
ずかに減少する。%塩基性バリアントは、9ヶ月でわずかに増加し始め、6ヶ月で10.
15%から9ヶ月で10.38%に増加する。25℃(加速)では、総メインは開始時点
の68.8%から9ヶ月で47.6%に減少した。総メインの減少と共に、対応した酸性
バリアントの21.46%から39.86%への増加が観察され、塩基性バリアントの9
.70%から11.51%へのわずかな増加が観察された。40℃(ストレス負荷)では
、6ヶ月で10.1%への総メインの相当な減少があり、対応して酸性バリアントの80
.02%への、および塩基性バリアントの9.95%への相当な増加を伴った。
微粒子状物質
微粒子状物質は、mHIACにより測定した。5℃条件での結果は、開始時から9ヶ月
まで、≧10μmの粒子について容器あたり≦6000個および≧25μmの粒子につい
て容器あたり≦600個という許容基準を十分に下回った。25℃では、≧10μmの粒
子の、開始時点での容器あたり13個の粒子から9ヶ月で容器あたり460個の粒子への
増加が報告された。≧25μmの微粒子については粒子が減少し、9ヶ月で容器あたり3
個の粒子という結果であった。25℃についての全ての時点のデータは、≧10μmおよ
び≧25μm両方の分析について許容基準内であった。40℃条件でのデータは、9ヶ月
で容器あたり8258個の粒子という、≧10μmの粒子の劇的な増加を示した。この結
果は容器あたり≦600個の粒子という許容基準から外れていた。≧25μmの粒子の結
果は、9ヶ月の安定性時点で容器あたり124個の粒子に増加し、これは≧25μmの許
容基準(容器あたり≦600個の粒子)を満たす。
濁度
濁度は、350nmでの分光光度計の吸光度から決定した。長期保存条件の5℃では、
9ヶ月時点まで注目すべき変化はなかった。25℃条件では、3ヶ月で結果が0.163
AUとわずかに増加し、9ヶ月まで結果が0.196AUと増加し続ける。40℃では、
1ヶ月で0.188AUで始まり、その後、9ヶ月で0.453AUに大きく増加する、
より著しい増加がある。
結論
データに基づくと、18ヶ月の試験日において、pH、タンパク質濃度、外観および視
認できる粒子(データは示されない)ならびに力価および微粒子状物質(データは示され
ない)についての安定性試験の過程にわたって、5℃の保存条件で大きな変化または傾向
は観察されなかった。呈色のわずかな増加およびPS-80含量の0.13mg/mlへ
の減少を除いて、5℃でのいずれの安定性試験についても注目すべき変化または傾向は観
察されなかった。
5℃の長期安定性についてのデータに基づくと、L-ヒスチジンバッファー、スクロー
ス、ポリソルベート80およびL-メチオニンを含有する抗TIGIT製剤は、予想保存
期間が30ヶ月である。キレーターをさらに含む製剤は、観察されたポリソルベート80
の分解を低減させることが予想される。
実施例8
抗TIGIT抗体および抗PD-1抗体の合剤
単一の製剤中の2つの抗体の合剤は患者にとってより好都合であり、2つの抗体を一緒
に投薬することのコンプライアンスを向上させる。単一の製剤中の2つの抗体の合剤は患
者にとってより好都合であり、2つの抗体を一緒に投薬することのコンプライアンスを向
上させる。IgG1骨格上に次のCDR:配列番号108のHCDR1、配列番号154
のHCDR2、配列番号110のHCDR3、配列番号111のLCDR1、配列番号1
12のLCDR2および配列番号113のLCDR3を持つ抗TIGIT抗体をペンブロ
リズマブと合剤化した。タンパク質-タンパク質相互作用(下に示される)に基づくと、
合剤(下に示される)はpH5.0~6.0にわたって安定であることが見出された。し
たがって、pH5.0、5.5および6.0の合剤(P1T1)を選び、2つの対照(P
D1抗体および抗TIGIT抗体)と一緒に、5℃、25℃および40℃でのさらなる熱
安定性について評定した。
Figure 2024016177000058
製剤を、次のような液体製剤として調製した。
Figure 2024016177000059
各製剤を、2Rバイアル中に1mL充填した。安定性を、目視検査、タンパク質濃度、
マイクロフローイメージング(Microwflow Imaging)(MFI)(微
粒子の評価)、混合モードのサイズ排除クロマトグラフィー(SEC)(凝集の評価)、
IEX(電荷バリアントの評価)およびUP-SEC(凝集の評価)により測定する。熱
安定性プロトコールは次のとおりである。
Figure 2024016177000060
コロイドおよび熱安定性を指し示すタンパク質-タンパク質相互作用を、異なる合剤に
ついて測定した。プラスの拡散相互作用パラメーター(K)値、K>0により指し示
される反発的なタンパク質-タンパク質相互作用は、凝集性向が低い安定な製剤を指し示
す。合剤のKdは、反発的かつ安定性のタンパク質-タンパク質相互作用を指し示すプラ
スのK値を持つことが見出され、このことは凝集物がより少ない性向および安定な合剤
を指し示す。
プラスの拡散相互作用パラメーター(K)つまりK>0に基づくと、抗体は合剤化
されたとき、単独の抗体製剤と同様に、一緒に合剤化されたときに良好に挙動すると予想
される。

Claims (30)

  1. (i)約10mg/mlから約200mg/mlの抗TIGIT抗体またはその抗原結
    合性断片;
    (ii)約5mMから約20mMのバッファー;
    (iii)約6%から約8%重量/体積(w/v)の非還元糖;
    (iv)約0.01%から約0.10%(w/v)の非イオン性界面活性剤;および
    (v)約1mMから約20mMの抗酸化剤
    を含む製剤。
  2. 抗TIGIT抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号111のCDRL1、配列番
    号112のCDRL2、配列番号113のCDRL3を含む3つの軽鎖CDR、ならびに
    配列番号108のCDRH1、配列番号154のCDRH2および配列番号110のCD
    HR3を含む3つの重鎖CDRを含む、請求項1の製剤。
  3. 抗TIGIT抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号148を含む重鎖可変領域お
    よび配列番号152を含む軽鎖可変領域を含む、請求項1または2の製剤。
  4. 抗TIGIT抗体が、(i)配列番号291のアミノ酸配列を含むヒト重鎖IgG1定
    常ドメインおよび配列番号293のアミノ酸配列を含むヒトカッパ軽鎖定常ドメイン;ま
    たは(ii)配列番号292のアミノ酸配列を含むヒト重鎖IgG4定常ドメインおよび
    配列番号293のアミノ酸配列を含むヒトカッパ軽鎖定常ドメインを含む、請求項3の製
    剤。
  5. 製剤のpHが5.3から6.2の間である、請求項1~4のいずれか一項の製剤。
  6. バッファーがL-ヒスチジンバッファーであり、
    非還元糖がスクロースであり、
    非イオン性界面活性剤がポリソルベート80であり、
    抗酸化剤がL-メチオニンである、請求項1~5のいずれか一項の製剤であって、
    (i)約10mg/mlから約200mg/mlの抗TIGIT抗体またはその抗原結合
    性断片;
    (ii)約5mMから約20mMのL-ヒスチジンバッファー;
    (iii)約6%から約8%(w/v)のスクロース;
    (iv)約0.01%から約0.10%(w/v)のポリソルベート80;および
    (v)約1mMから約20mMのL-メチオニン
    を含む、前記製剤。
  7. 約8mMから約12mMのL-ヒスチジンバッファーを含む、請求項1~6のいずれか
    の製剤。
  8. 約5mMから約10mMのL-メチオニンを含む、請求項6~7のいずれかの製剤。
  9. ポリソルベート80を約0.02% w/vの重量比で含む、請求項6~8のいずれか
    の製剤。
  10. 約10mg/mlから約100mg/mlの抗TIGIT抗体またはその抗原結合性断
    片を含む、請求項1~9のいずれかの製剤。
  11. 抗TIGIT抗体またはその抗原結合性断片の濃度が、約10mg/ml、12.5m
    g/ml、25mg/ml、50mg/ml、75mg/mlまたは100mg/mlで
    ある、請求項10の製剤。
  12. 約25mg/mLの抗TIGIT抗体、
    10mMのL-ヒスチジンバッファー、
    約7% w/vのスクロース、
    約0.02%のポリソルベート80および
    約10mMのL-メチオニン
    を含む、請求項1~11のいずれかの製剤。
  13. 約50mg/mLの抗TIGIT抗体、
    10mMのL-ヒスチジンバッファー、
    約7% w/vのスクロース、
    約0.02%のポリソルベート80および
    約10mMのL-メチオニン
    を含む、請求項1~11のいずれかの製剤。
  14. 約75mg/mLの抗TIGIT抗体、
    10mMのL-ヒスチジンバッファー、
    約7% w/vのスクロース、
    約0.02%のポリソルベート80および
    約10mMのL-メチオニン
    を含む、請求項1~11のいずれかの製剤。
  15. 約100mg/mLの抗TIGIT抗体、
    10mMのL-ヒスチジンバッファー、
    約7% w/vのスクロース、
    約0.02%のポリソルベート80および
    約10mMのL-メチオニン
    を含む、請求項1~11のいずれかの製剤。
  16. 製剤のpHが約5.5~6.3である、請求項1~15のいずれかの製剤。
  17. 製剤のpHが約5.8~6.0である、請求項16の製剤。
  18. 抗PD1抗体またはその抗原結合性断片をさらに含む、請求項1~17のいずれかの製
    剤。
  19. 抗ヒトPD-1抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号1、配列番号2および配列
    番号3の3つの軽鎖CDRならびに配列番号6、配列番号7および配列番号8の3つの重
    鎖CDRを含む、請求項18の製剤。
  20. 抗ヒトPD-1抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号4に記載のアミノ酸配列を
    含む可変軽領域(variable light region)および配列番号9に記
    載のアミノ酸配列を含む可変重領域(variable heavy region)を
    含む、請求項18~19のいずれかの製剤。
  21. ペンブロリズマブである抗ヒトPD-1抗体を含む、請求項16~19のいずれかの製
    剤。
  22. 抗TIGIT抗体に対する抗PD1抗体の比が1:1である、請求項18~21のいず
    れかの製剤。
  23. 約20mg/mlの抗PD1抗体、
    約20mg/mlの抗TIGIT抗体、
    10mMのL-ヒスチジンバッファー、
    約7% w/vのスクロース、
    約0.02% w/vのポリソルベート80および
    約10mMのL-メチオニン
    を含む、請求項18~22のいずれかの製剤。
  24. キレーターをさらに含む、請求項1~23のいずれかの製剤。
  25. キレーターがDTPAである、請求項24の製剤。
  26. ガラスバイアルまたは注入デバイス中に含有される、請求項1~25のいずれかの製剤
  27. 液体製剤である、少なくとも-70℃未満まで凍結されている、または凍結乾燥製剤か
    らの再構成溶液である、請求項1~26のいずれかの製剤。
  28. 5℃で12ヶ月後に:
    (i)サイズ排除クロマトグラフィーにより決定される抗TIGIT抗体の%モノマーが
    ≧95%であり;
    (ii)還元CE-SDSにより測定される抗TIGIT抗体の%重鎖および軽鎖が≧9
    0%であり;
    (iii)還元CE-SDSにより測定される抗TIGIT抗体の%重鎖および軽鎖が≧
    95%であり;
    (iv)非還元CE-SDSにより測定される抗TIGIT抗体の%インタクトIgGが
    ≧90%であり;および/または
    (v)非還元CE-SDSにより測定される抗TIGIT抗体の%インタクトIgGが≧
    95%
    である、請求項1~27のいずれかの製剤。
  29. 有効量の請求項1~28のいずれか一項の製剤を投与することを含む、その必要がある
    ヒト患者におけるがんまたは慢性感染症を処置する方法。
  30. がんを処置するためまたは慢性感染症を処置するための薬物の調製のための、請求項1
    ~28のいずれかの製剤の使用。
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