KR20190136786A - 대장암의 예방 또는 치료용 약학 조성물 - Google Patents

대장암의 예방 또는 치료용 약학 조성물 Download PDF

Info

Publication number
KR20190136786A
KR20190136786A KR1020180062929A KR20180062929A KR20190136786A KR 20190136786 A KR20190136786 A KR 20190136786A KR 1020180062929 A KR1020180062929 A KR 1020180062929A KR 20180062929 A KR20180062929 A KR 20180062929A KR 20190136786 A KR20190136786 A KR 20190136786A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
extract
ginseng
fdy003
colon cancer
pharmaceutical composition
Prior art date
Application number
KR1020180062929A
Other languages
English (en)
Other versions
KR102085774B1 (ko
Inventor
이대연
Original Assignee
이대연
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 이대연 filed Critical 이대연
Priority to KR1020180062929A priority Critical patent/KR102085774B1/ko
Publication of KR20190136786A publication Critical patent/KR20190136786A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR102085774B1 publication Critical patent/KR102085774B1/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/28—Asteraceae or Compositae (Aster or Sunflower family), e.g. chamomile, feverfew, yarrow or echinacea
    • A61K36/282—Artemisia, e.g. wormwood or sagebrush
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/105—Plant extracts, their artificial duplicates or their derivatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/06—Fungi, e.g. yeasts
    • A61K36/062—Ascomycota
    • A61K36/066—Clavicipitaceae
    • A61K36/068—Cordyceps
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/35—Caprifoliaceae (Honeysuckle family)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2200/00—Function of food ingredients
    • A23V2200/30—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health
    • A23V2200/308—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health having an effect on cancer prevention
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)

Abstract

본 발명은 인진호, 동충하초 및 금은화의 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 대장암의 예방 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것이다. 구체적으로, 본 발명의 인진호, 동충하초 및 금은화의 혼합 추출물은 한약재 단독 추출물에 비하여 우수한 대장암 세포 증식 억제 효과를 가지며, 우수한 항산화 활성을 가지고, 대장암 세포에서 항산화, 세포사멸 유도, 암 억제 단백질인 p21의 발현 증가 및 p53의 활성화를 통하여 세포증식을 억제하고, 대장암 마우스 모델에서 항산화 활성을 통하여 종양 생성을 억제함으로써, 대장암의 예방, 치료 또는 개선용 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

Description

대장암의 예방 또는 치료용 약학 조성물{Pharmaceutical composition for prevention or treatment of colon cancer}
본 발명은 인진호, 동충하초 및 금은화의 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 대장암의 예방 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.
대장암은 전세계적으로 연간 약 100만 명의 환자가 발생하고 53만 명이 사망하는 난치성 질환으로, 2010년 미국에서 약 10만 명이 대장암으로 진단되고, 약 5만 명이 사망할 것으로 추정된다. 최근에는 서구화된 식습관으로 인해 아시아에서도 그 발병률이 증가하는 추세이며, 우리나라에서도 전체 암 발생의 12.7%로 3위를 차지할 정도로 빠른 속도로 증가하고 있다. 대장암의 발생은 유전적 소인과 식이 요인, 흡연이나 음주 또는 신체활동과 같은 생활 방식, 및 비만과 인슐린 저항성 등의 대사 질환이 관련되어 있다. 식이 요인과 관련하여 대장암을 발병시키는 주요 원인으로는 과도한 동물성 지방, 당분, 알코올 섭취와 섬유소, 항산화 비타민, 야채나 과일의 섭취 부족 등이 알려져 있다.
세포사멸(apoptosis)은 세포 내부에 프로그램된 신호를 따라 여러 유전자 및 단백질들의 발현과 활성이 조절되어 일어나는 능동적인 죽음이다. 세포사멸은 생명체의 초기 발생 단계의 여러 형태적 변화 과정과 면역계 또는 신경계의 기능적 자가 조직화 과정에서 중요한 역할을 담당하며, 항상성 유지를 위한 세포 수 조절, 손상된 세포의 제거 및 감염에 대한 방어 기전으로 작용한다. 다만, 이러한 세포사멸의 비정상적인 억제는 암의 원인이 될 수 있어, 암세포의 세포사멸을 유도하는 것은 대부분의 항암제가 암세포 증식억제 효과를 나타내는 주요 작용 기전이 된다.
활성산소(reactive oxygen species, ROS) 혹은 활성산소종은 산소원자를 포함한, 화학적으로 반응성이 있는 분자이며, 짝지어지지 않은 전자때문에 반응성이 매우 높다. 활성산소는 산소의 정상적인 대사작용에 의해서 자연스럽게 발행하며, 세포신호와 항상성에 중요한 역할을 한다. 세포는 활성산소의 항상성을 조절하기 위하여 활성산소를 생성하는 유전자들과 이를 효과적으로 제거하는 항산화 유전자를 가지고 있으며, 이를 조절하는 정교한 기전을 가지고 있다. 한편, 암은 초기 진행, 증식 및 전이의 세 단계로 진행되는데, 활성산소는 암의 초기 진행 단계에서 DNA 손상 또는 유전자 발현 이상을 초래하고, 증식 단계에서 비정상적인 유전자 발현 및 세포 간의 신호전달 과정 변화를 유도하며, 전이 단계에서 더 많은 유전자 발현을 조절함으로써 암의 진행에 관여한다. 따라서, 활성산소를 제거하는 것 또한 항암제 개발의 표적이 될 수 있다.
이에, 본 발명자들은 오랜 기간 사용되어 인체에 안전한 천연물을 이용하여 대장암 치료제를 개발하던 중, 본 발명에 따른 인진호, 동충하초 및 금은화 혼합 추출물이 각 한약재 단독 추출물에 비하여 우수한 대장암 세포 증식 억제 효과를 가지며, 우수한 항산화 활성을 가지고, 대장암 세포에서 항산화, 세포사멸 유도, 암 억제 단백질인 p21의 발현 증가 및 p53의 활성화를 통하여 세포증식을 억제하고, 대장암 마우스 모델에서 항산화 활성을 통하여 종양 생성을 억제함을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.
대한민국 등록특허 제10-1834485호
Inpyo Choi, Hanyang Med Rev, 33, 118-122, 2013.
본 발명의 목적은 본 발명은 인진호, 동충하초 및 금은화의 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 대장암의 예방, 치료 또는 개선용 조성물을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 인진호, 동충하초 및 금은화의 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 대장암의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 인진호, 동충하초 및 금은화의 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 대장암의 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공한다.
본 발명의 인진호, 동충하초 및 금은화의 혼합 추출물은 한약재 단독 추출물에 비하여 우수한 대장암 세포 증식 억제 효과를 가지며, 우수한 항산화 활성을 가지고, 대장암 세포에서 항산화, 세포사멸 유도, 암 억제 단백질인 p21의 발현 증가 및 p53의 활성화를 통하여 세포증식을 억제하고, 대장암 마우스 모델에서 항산화 활성을 통하여 종양 생성을 억제함으로써, 대장암의 예방, 치료 또는 개선용 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 인진호, 금은화 및 동충하초의 단독, 2종 혼합 및 3종 혼합 추출물의 대장암 세포 증식 억제 효과를 비교한 결과 그래프이다.
도 2는 인진호, 금은화 및 동충하초 혼합 추출물(FDY003)의 대장암 세포 증식 억제 효과를 나타낸 결과 그래프이다.
도 3은 인진호, 금은화 및 동충하초 혼합 추출물(FDY003) 및 갈산(gallic acid)의 DPPH 라디칼 소거능을 측정한 결과 그래프이다.
도 4는 인진호, 금은화 및 동충하초 혼합 추출물(FDY003)의 대장암 세포 내(A) 및 세포 외(B)에서의 DPPH 라디칼 소거능을 측정한 결과 그래프이다.
도 5는 인진호, 금은화 및 동충하초 혼합 추출물(FDY003)의 대장암 세포 내 지질과산화 억제 효과를 나타낸 결과 그래프이다.
도 6은 인진호, 금은화 및 동충하초 혼합 추출물(FDY003)의 대장암 세포 내 Bax 발현 증가(A), caspase-3 활성화 유도(B), p21 발현 증가(C) 및 p53 활성화 유도(D) 효과를 웨스턴 블롯으로 분석한 결과를 나타낸 것이다(A 내지 D: 각 인자의 밴드 강도(intensity)를 정량한 그래프; E: 대표 블롯 이미지).
도 7은 대장암 마우스의 종양 크기를 측정한 결과 그래프이다.
도 8는 대장암 마우스의 종양 크기를 측정한 결과 그래프이다.
도 9는 대장암 마우스의 혈청 내 지질과산화 정도를 측정한 결과 그래프이다.
도 10은 대장암 마우스의 혈청의 DPPH 라디칼 소거능을 측정한 결과 그래프이다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은 인진호, 동충하초 및 금은화의 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 대장암의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
상기 인진호는 국화과에 속하는 사철쑥(Artemisia capillaris Thungerg)의 지상부를 건조시킨 것으로서, 봄에 채취한 것인 면인진(綿茵蔯) 또는 가을에 채취한 것인 인진호(茵蔯蒿)를 사용할 수 있다.
상기 동충하초는 매각균과에 속하는 동충하초균(Cordyceps sinensis Sacc)이 박쥐나방과 곤충의 유충에서 기생하여 자란 자실체와 유충의 몸체를 포함하여 당업계에 알려진 모든 종류의 동충하초를 사용할 수 있다. 구체적으로, 상기 동충하초는 중국동충하초(C. sinensis), 밀리타리스 동충하초(C. misinensis), 붉은동충하초(C. militaris), 매미동충하초(C. sobolifera), 벌동충하초(C. sphecocephala), 노랑다발 동충하초(C. bassiana), 또는 눈꽃동충하초(Paecilomyces japonica) 등을 사용할 수 있다.
상기 금은화는 인동과에 속하는 인동덩굴(Lonicera japonica Thunberg)의 꽃봉오리 또는 막 피기 시작한 꽃을 건조시킨 것을 사용할 수 있다.
상기 추출물은 하기의 단계를 포함하는 제조방법에 의해 제조될 수 있다:
1) 인진호, 동충하초 및 금은화 혼합물에 추출용매를 가하여 추출물을 제조하는 단계;
2) 단계 1)의 추출물을 여과하는 단계; 및
3) 단계 2)의 여과된 여과물을 감압농축한 후 건조하는 단계.
상기 추출용매는 물, 알코올 또는 이의 혼합물일 수 있다. 상기 알코올은 C1 내지 C4의 저급 알코올일 수 있고, 구체적으로, 상기 저급 알코올은 에탄올 또는 메탄올일 수 있다. 상기 추출용매는 추출에 사용되는 한약재의 총 중량 1 g당 1 내지 50 ㎖의 양으로 첨가될 수 있다.
상기 추출방법은 진탕추출, Soxhlet 추출 또는 환류추출일 수 있다. 이때, 추출 시간은 1 내지 50시간, 10 내지 40시간 또는 15 내지 30시간일 수 있다. 상기 추출은 3 내지 5회 반복 추출할 수 있다. 본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 반복 추출은 상기 단계 1)에서 70% 에탄올을 사용하여 추출하고, 상기 단계 3)의 농축액에 80% 에탄올을 첨가한 후 여과 및 농축하고, 상기 농축액에 90% 에탄올을 첨가한 후 여과 및 농축하고, 상기 농축액에 정제수를 첨가한 후 여과 및 농축하는 단계로 이루어질 수 있다.
한편, 상기 단계 3)의 감압농축은 진공감압농축기 또는 진공회전증발기를 이용할 수 있다. 또한, 상기 건조는 감압건조, 진공건조, 비등건조, 분무건조 또는 동결건조일 수 있고, 구체적으로는 동결건조일 수 있다.
상기 추출물은 인진호, 동충하초 및 금은화를 0.1 내지 20 : 0.1 내지 20 : 1의 중량비로 혼합하여 추출하는 것이 바람직하며, 더 바람직하게는 0.5 내지 4 : 0.5 내지 4 : 1의 중량비로 혼합하여 추출할 수 있고, 가장 바람직하게는 1 내지 2 : 1 내지 2 : 1의 중량비로 혼합하여 추출할 수 있다. 또한, 상기 추출물은 약재를 혼합하여 추출하거나, 각각의 약재 추출물을 혼합하여 제조될 수 있다.
상기 추출물은 갈근, 감수, 감초, 건강, 건지황, 건칠, 결명자, 계지, 고량강, 고삼, 교이, 구절초, 단삼, 당귀, 당삼, 대조, 도인, 두충, 마황, 만삼, 맥문동, 목통, 몰약, 박하, 반하, 백두옹, 복분자, 부자, 비파엽, 사상자, 산초, 상황버섯, 생강, 석고, 선복화, 세신, 소맥, 속단, 숙지황, 시호, 오가피, 오공, 오수유, 용골, 우슬, 유백피, 육계, 육두구, 인삼, 자감초, 자소엽, 작약, 지구자, 지실, 천궁, 청호, 침향, 택란, 포공영, 하고초, 하엽, 한련초, 행인, 현초, 형개, 호도, 홍삼, 홍화, 홍화자, 황기, 희렴으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상을 더 혼합하여 추출할 수 있다.
본 발명의 구체적인 실시예에서, 본 발명자들은 인진호, 동충하초 및 금은화의 혼합 추출물(FDY003)을 제조한 뒤, 상기 FDY003이 각 한약재 단독 추출물에 비하여 우수한 대장암 세포 증식 억제 효과를 가지며(도 1 참조), 우수한 항산화 활성을 가지고, 대장암 세포에서 항산화, 세포사멸 유도, 암 억제 단백질인 p21의 발현 증가 및 p53의 활성화를 통하여 세포증식을 억제하고(도 2 내지 6 참조), 대장암 마우스 모델에서 항산화 활성을 통하여 종양 생성을 억제함을 확인하였다(도 7 내지 10 참조). 따라서, FDY003은 대장암의 예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 약학 조성물은 조성물 전체 중량에 대하여 유효성분인 인진호, 동충하초 및 금은화 혼합물의 추출물을 10 내지 95 중량%로 포함할 수 있다. 또한, 본 발명의 약학 조성물은 상기 유효성분 이외에 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1종 이상 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 생물학적 제제에 통상적으로 사용되는 담체, 희석제, 부형제 또는 이의 혼합물을 포함할 수 있다. 약학적으로 허용가능한 담체는 조성물을 생체 내에 전달하는데 적합한 것이면 모두 사용할 수 있다. 구체적으로, 상기 담체는 Merck Index, 13th ed., Merck & Co. Inc.에 기재된 화합물, 식염수, 멸균수, 링거액, 덱스트로스 용액, 말토덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 또는 이의 혼합물일 수 있다. 또한, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등과 같은 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다.
상기 조성물을 제제화하는 경우, 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 첨가할 수 있다.
본 발명의 조성물은 경구용 제제 또는 비경구용 제제로 제형화될 수 있다. 경구용 제제로는 고형 제제 및 액상 제제가 포함될 수 있다. 상기 고형 제제는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 또는 트로키제일 수 있고, 이러한 고형 제제는 상기 조성물에 적어도 하나 이상의 부형제를 첨가하여 조제할 수 있다. 상기 부형제는 전분, 탄산칼슘, 수크로스, 락토오스, 젤라틴 또는 이의 혼합물일 수 있다. 또한, 상기 고형 제제는 윤활제를 포함할 수 있고, 그 예로는 마그네슘 스티레이트, 탈크등이 있다. 한편, 상기 액상 제제는 현탁제, 내용액제, 유제 또는 시럽제일 수 있다. 이때, 상기 액상 제제에는 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등과 같은 부형제가 포함될 수 있다.
상기 비경구용 제제는 주사제, 좌제, 호흡기 흡입용 분말, 스프레이용 에어로졸제, 파우더 및 크림 등을 포함할 수 있다. 상기 주사제는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁용제, 유제 등을 포함할 수 있다. 이때, 비수성용제 또는 현탁용제로서는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름이나, 에틸올레이트와 같이 주사가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 조성물은 목적하는 방법에 따라 경구 또는 비경구로 투여될 수 있다. 비경구 투여는 복강내, 직장내, 피하, 정맥, 근육내 또는 흉부내 주사 방식을 포함할 수 있다.
상기 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여될 수 있다. 이는 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 환자의 민감도, 투여 시간, 투여 경로, 치료기간, 동시에 사용되는 약물 등에 따라 달라질 수 있다. 그러나, 바람직한 효과를 위해서, 본 발명에 따른 약학 조성물에 포함되는 유효성분의 양은 0.0001 내지 100 ㎎/㎏, 구체적으로 0.001 내지 10 ㎎/㎏일 수 있다. 상기 투여는 하루에 1회 내지 수회일 수 있다.
본 발명의 조성물은 단독 또는 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있다. 병용 투여시, 투여는 순차적 또는 동시일 수 있다.
또한, 본 발명은 인진호, 동충하초 및 금은화의 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 대장암의 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공한다.
상기 인진호는 국화과에 속하는 사철쑥(Artemisia capillaris Thungerg)의 지상부를 건조시킨 것으로서, 봄에 채취한 것인 면인진(綿茵蔯) 또는 가을에 채취한 것인 인진호(茵蔯蒿)를 사용할 수 있다.
상기 동충하초는 매각균과에 속하는 동충하초균(Cordyceps sinensis Sacc)이 박쥐나방과 곤충의 유충에서 기생하여 자란 자실체와 유충의 몸체를 포함하여 상술한 바와 같이 당업계에 알려진 모든 종류의 동충하초를 사용할 수 있다.
상기 금은화는 인동과에 속하는 인동덩굴(Lonicera japonica Thunberg)의 꽃봉오리 또는 막 피기 시작한 꽃을 건조시킨 것을 사용할 수 있다.
상기 추출물은 상술한 바와 같은 제조방법에 의해 제조될 수 있다.
상기 추출물은 인진호, 동충하초 및 금은화를 0.1 내지 20 : 0.1 내지 20 : 1의 중량비로 혼합하여 추출하는 것이 바람직하며, 더 바람직하게는 0.5 내지 4 : 0.5 내지 4 : 1의 중량비로 혼합하여 추출할 수 있고, 가장 바람직하게는 1 내지 2 : 1 내지 2 : 1의 중량비로 혼합하여 추출할 수 있다. 또한, 상기 추출물은 약재를 혼합하여 추출하거나, 각각의 약재 추출물을 혼합하여 제조될 수 있다.
상기 추출물은 갈근, 감수, 감초, 건강, 건지황, 건칠, 결명자, 계지, 고량강, 고삼, 교이, 구절초, 단삼, 당귀, 당삼, 대조, 도인, 두충, 마황, 만삼, 맥문동, 목통, 몰약, 박하, 반하, 백두옹, 복분자, 부자, 비파엽, 사상자, 산초, 상황버섯, 생강, 석고, 선복화, 세신, 소맥, 속단, 숙지황, 시호, 오가피, 오공, 오수유, 용골, 우슬, 유백피, 육계, 육두구, 인삼, 자감초, 자소엽, 작약, 지구자, 지실, 천궁, 청호, 침향, 택란, 포공영, 하고초, 하엽, 한련초, 행인, 현초, 형개, 호도, 홍삼, 홍화, 홍화자, 황기, 희렴으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상을 더 혼합하여 추출할 수 있다.
본 발명의 구체적인 실시예에서, 본 발명자들은 인진호, 동충하초 및 금은화의 혼합 추출물(FDY003)을 제조한 뒤, 상기 FDY003이 각 한약재 단독 추출물에 비하여 우수한 대장암 세포 증식 억제 효과를 가지며(도 1 참조), 우수한 항산화 활성을 가지고, 대장암 세포에서 항산화, 세포사멸 유도, 암 억제 단백질인 p21의 발현 증가 및 p53의 활성화를 통하여 세포증식을 억제하고(도 2 내지 6 참조), 대장암 마우스 모델에서 항산화 활성을 통하여 종양 생성을 억제함을 확인하였다(도 7 내지 10 참조). 따라서, FDY003은 대장암의 예방 또는 개선에 유용하게 사용될 수 있다.
본 발명의 조성물은 식품에 그대로 첨가하거나, 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있다. 이때, 첨가되는 유효성분의 함량은 목적에 따라 결정될 수 있고, 일반적으로는 전체 식품 중량의 0.01 내지 90 중량부일 수 있다.
건강기능식품의 형태 및 종류는 특별히 제한되지 않는다. 구체적으로, 상기 건강기능식품은 정제, 캅셀, 분말, 과립, 액상 및 환의 형태일 수 있다. 상기 건강기능식품은 추가성분으로서 여러 가지 향미제, 감미제 또는 천연 탄수화물을 포함할 수 있다. 상기 감미제는 천연 또는 합성 감미제일 수 있고, 천연 감미제의 예로는 타우마틴, 스테비아 추출물 등이 있다. 한편, 합성 감미제의 예로는 사카린, 아스파르탐 등이 있다. 또한, 상기 천연 탄수화물은 모노사카라이드, 디사카라이드, 폴리사카라이드, 올리고당 및 당알코올 등일 수 있다.
본 발명의 건강기능식품은 상기 서술한 추가성분 외에, 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙스탄 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올 등을 더 포함할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합으로 사용될 수 있다. 상기 첨가제의 비율은 본 발명의 조성물의 100 중량부당 0.01 내지 0.1 중량부의 범위에서 선택될 수 있다.
이하, 본 발명을 하기 실시예에 의해 상세히 설명한다.
단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐, 본 발명이 이들에 의해 한정되는 것은 아니다.
실시예 1. 한약재 혼합 추출물(FDY003)의 제조
건조된 사철쑥(Artemisia capillaris Thungerg)의 지상부(인진호), 동충하초(Cordyceps sinensis Sacc) 및 건조된 인동덩굴(Lonicera japonica Thunberg)의 꽃봉오리(금은화)를 경동시장에서 구입하였다. 상기 인진호 6.25 g, 동충하초 6.25 g 및 금은화 4.16 g를 70% 에탄올 500 ㎖에 넣고 85℃에서 3시간 동안 추출하여, 추출액을 포어 사이즈 1 ㎛의 여과지로 여과하고, 여과액을 감압농축하였다. 상기 농축액에 80% 에탄올 200 ㎖를 첨가하여 교반한 후, 포어 사이즈 1 ㎛의 여과지로 여과한 후 감압농축하고, 상기 농축액에 90% 에탄올 200 ㎖를 첨가하여 교반한 후, 포어 사이즈 1 ㎛의 여과지로 여과한 후 감압농축하였다. 다시 상기 농축액에 정제수 100 ㎖를 첨가하고, 포어 사이즈 1 ㎛의 여과지로 여과하고, 포어 사이즈 0.6 ㎛의 여과지로 다시 한번 더 여과하였다. 상기 여과액을 동결건조하여 최종 혼합 추출물(FDY003)을 수득하였다.
비교예 1. 인진호, 동충하초 및 금은화 단독 추출물들의 제조
인진호, 동충하초 및 금은화를 각각 50 g씩 준비하여 모두 분쇄하였다. 각 약재의 분말을 이용하여 상기 실시예 1에 기재된 것과 동일한 방법으로 각 추출물을 제조하였다.
비교예 2. 2종 한약재 혼합 추출물들의 제조
인진호, 동충하초 및 금은화를 각각 분쇄한 후, 금은화 20 g과 인진호 30 g을 혼합하고, 인진호 25 g과 동충하초 25 g을 혼합하고, 금은화 20 g과 동충하초 30 g을 혼합하였다. 각 한약재 혼합 분말을 이용하여 상기 실시예 1에 기재된 것과 동일한 방법으로 각 2종 한약재 혼합 추출물들을 제조하였다.
실시예 2. in vitro 실험을 위한 추출물 시료들의 제조
상기 실시예 1, 비교예 1 및 비교예 2에서 수득한 추출물 시료들을 각각 10 mg/㎖로 증류수에 용해시킨 후, 0.45 ㎛ 폴리에테르설폰 필터(polyethersulfone (PES) filter)로 여과하여 고농축 원액을 제조하였다.
실험예 1. 인진호, 금은화 및 동충하초 단독, 2종 혼합 추출물 및 FDY003의 대장암 세포 증식 억제 효과 비교
인진호, 금은화 및 동충하초 단독 추출물들과 상기 각 한약재의 2종 혼합 추출물들에 비하여 FDY003이 대장암에 대하여 우수한 항암 효과를 나타내는지 조사하고자, 상기 실시예 1, 비교예 1 및 비교예 2의 추출물에 의한 사람 대장암 세포주(Colo205 세포, 한국세포주은행, 대한민국)의 증식 억제 효과를 MTT(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltertrazolium) 분석법으로 비교하였다.
구체적으로, Colo205 세포를 96-웰 플레이트에 1 ×106 개/웰로 배양하고, 상기 실시예 2에서 제조한 각 약물들을 최종 농도가 1, 5, 10 또는 15 ㎍/㎖가 되도록 RPMI(Roswell Park MemoCial Institute) 1640 배지에 희석하여 세포에 처리하였다. 24시간 동안 배양한 후, 각 웰에 MTT 용액을 최종 농도 5 ㎎/㎖가 되도록 첨가하고 4시간 동안 37℃에서 배양하였다. 이후, 배지를 제거하고 DMSO(dimethyl sulfoxide)를 첨가하여 생성된 포르마잔(formazan)을 용해시키고, ELLISA 리더를 이용하여 흡광도를 측정하였다. 약물이 포함되지 않은 배지만을 처리한 대조군의 흡광도에 대한 비율로 각 약물 처리군의 세포생존율을 계산하였다.
그 결과, 각 약물의 단독 추출물 중 동충하초 추출물의 대장암 세포 증식 억제 효과가 가장 높았으나, 동충하초에 인진호 또는 금은화를 혼합한 추출물의 경우 세포 증식 억제 효과가 오히려 감소하였다. 그러나, 동충하초, 인진호 및 금은화를 모두 혼합한 추출물인 FDY003은 가장 높은 대장암 세포 증식 억제 효과를 보였다(도 1). 이는 상기 3종 한약재의 추출물을 혼합할 경우 상기 구성 한약재 중 2종 한약재의 혼합 추출물에 비하여 예측할 수 없는 현저한 대장암 세포 증식 억제 효과를 보임을 제시한다.
실험예 2. FDY003의 대장암 세포 증식 억제 효과 확인
상기 실험예 1에서 확인한 바에 따라, 대장암 세포 증식 억제 효과가 가장 좋은 FDY003에 대하여 더 넓은 농도 범위에서의 대장암 세포 증식 억제 효과를 확인하고자, MTT 분석을 수행하였다.
구체적으로, Colo205 세포에 상기 실시예 2에서 제조한 FDY003을 최종 농도가 0.1, 0.5, 1, 5, 10 또는 50 ㎍/㎖가 되도록 처리한 것을 제외하고는 상기 실험예 1에 기재된 것과 동일한 방법으로 MTT 분석을 수행하였다.
그 결과, FDY003은 0.1 ㎍/㎖ 이상의 농도에서 농도 의존적으로 대장암 증식 억제 효과를 나타냈다(도 2).
실험예 3. FDY003의 라디칼 소거능 확인
상기 실험예 1 및 2에서 확인한 FDY003의 대장암에 대한 항암효과가 FDY003의 항산화 효과에 기인하는지 조사하기 위하여, FDY003의 DPPH(2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl) 라디칼 소거능을 측정하였다.
구체적으로, 각 추출물 100 μL와 에탄올에 용해시킨 500 ㎍/㎖의 DPPH 100 ㎕을 혼합하여 30분간 37℃, 암소에서 반응 시킨 후, ELISA 리더를 이용하여 540 nm에서 흡광도를 측정하였다.
그 결과, FDY003은 1000 ㎍/㎖까지 농도 의존적인 DPPH 라디칼 소거능을 보였으며, FDY003 1000 ㎍/㎖의 라디칼 소거능은 양성대조군인 갈산(gallic acid) 10 ㎍/㎖의 라디칼 소거능과 유사한 수준으로 나타났다(도 3).
실험예 4. FDY003의 대장암 세포 내외에서의 라디칼 소거능 확인
FDY003의 DPPH 라디칼 소거능이 대장암 세포에서도 나타나는지 확인하기 위하여, Colo205 세포에 상기 실시예 2에서 제조한 FDY003을 농도별로 처리한 후, 세포 및 세포 배양액을 수득하여 세포 내외에서의 DPPH 라디칼 소거능을 측정하였다.
구체적으로, Colo205 세포를 100 mm 디쉬에 1 ×106 개/디쉬로 배양하고, 상기 FDY003을 최종 농도가 0.5, 1 또는 5 ㎍/㎖가 되도록 RPMI 1640 배지에 희석하여 세포에 처리하였다. 24시간 동안 배양한 후, 세포 및 세포 배양액을 수득하여, DPPH ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay) 키트(Cat. #. EU3110, Fine test, 중국)로 제조사의 설명서에 따라 세포 내외에서의 DPPH 라디칼 소거능을 측정하였다.
그 결과, FDY03은 0.5 및 1 ㎍/㎖ 농도에서 대조군에 비하여 유의적인 세포 내 DPPH 라디칼 소거능을 나타냈으며, 0.5 내지 5 ㎍/㎖ 농도에서 대조군에 비하여 유의적인 세포 외 DPPH 라디칼 소거능을 나타냈다(도 4A 및 4B).
실험예 5. FDY003의 대장암 세포 내 지질과산화 억제 효과 확인
FDY003의 항산화 효과를 조사하기 위하여, Colo205 세포에 상기 실시예 2에서 제조한 FDY003을 농도별로 처리한 후, 세포를 수득하여 세포 내 지질과산화 정도를 측정하였다.
구체적으로, Colo205 세포를 100 mm 디쉬에 1 ×106 개/디쉬로 배양하고, 상기 FDY003을 최종 농도가 0.5, 1 또는 5 ㎍/㎖가 되도록 RPMI 1640 배지에 희석하여 세포에 처리하였다. 24시간 동안 배양한 후, 세포를 수득하여, TBARS(thiobarbituric acid reactive substances) ELISA 키트(Cat. #. MBS480427, Mybiosource, 미국)로 제조사의 설명서에 따라 세포 내 지질과산화 정도를 측정하였다.
그 결과, FDY003은 0.5 내지 5 ㎍/㎖ 농도에서 대조군에 비하여 유의적이며, 농도 의존적인 지질과산화 억제 효과를 나타내었다(도 5).
실험예 6. FDY003의 대장암 세포사멸 유도 효과 확인
상기 실험예 1 및 2에서 확인한 FDY003의 대장암에 대한 항암효과가 FDY003의 세포사멸 유도 효과에 기인하는지 조사하기 위하여, Colo205 세포에 상기 실시예 2에서 제조한 FDY003을 농도별로 처리한 후, 세포를 수득하여 Bax 단백질의 발현 및 caspase-3의 절단에 의한 활성화 정도를 웨스턴 블롯으로 분석하였다.
구체적으로, Colo205 세포를 100 mm 디쉬에 1 ×106 개/디쉬로 배양하고, FDY003을 최종 농도가 0.5, 1 또는 5 ㎍/㎖가 되도록 RPMI 1640 배지에 희석하여 세포에 처리하였다. 24시간 동안 배양한 후, 세포를 회수하여 원심분리 후, 상층액을 제거하고, 프로테아제 억제제(protease inhibitor) 및 포스파타제 억제제(phosphatase inhibitor)가 포함된 RIPA 용해 버퍼로 세포를 파쇄하였다. 세포 파쇄물을 원심분리하여 상층액을 회수하고, 단백질을 정량한 후 SDS-PAGE(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis) 젤에서 전기영동하고, 분리된 단백질을 멤브레인으로 이동시켰다. 멤브레인을 1차 항체(항-Bax, Cat. #. ab53154, Abcam, 미국; 항-caspase-3, Cat. #. ab13585, Abcam; 항-cleaved caspase-3, Cat. #. ab49822, Abcam; 또는 항-베타-액틴(β-actin), Cat. #. ab8227, Abcam)와 반응시킨 후, HRP(horseradish peroxidase)가 결합된 2차 항체와 반응시켰다. 이후, ECL(enhanced chemiluminescence) 버퍼로 HRP 접합체를 검출하여 블롯 이미지를 분석하였다.
그 결과, FDY003은 0.5 내지 5 ㎍/㎖ 농도에서 Bax의 발현을 증가시키고, 총 caspase-3 대비 절단된 caspase-3의 발현은 증가시켜 caspase-3의 활성화를 유도하였다(도 6A, 6B 및 6E).
실험예 7. FDY003의 대장암 세포 내 p53 활성화 및 p21 단백질 발현 증가 효과 확인
상기 실험예 1 및 2에서 확인한 FDY003의 대장암에 대한 항암효과가 FDY003의 종양 억제 단백질인 p21의 발현 증가 및 p53의 활성화 유도 효과에 기인하는지 조사하기 위하여, Colo205 세포에 상기 실시예 2에서 제조한 FDY003을 농도별로 처리한 후, 세포를 수득하여 p21 단백질의 발현 정도 및 p53 단백질의 인산화에 의한 활성화 정도를 웨스턴 블롯으로 분석하였다.
구체적으로, 상기 실험예 6에 기재된 것과 동일한 방법으로 Colo205 세포를 배양 및 회수하고, 1차 항체로 항-p21(Cat. #. ab109520, Abcam), 항-p53(Cat. #. ab1101, Abcam) 또는 항-베타-액틴 항체를 사용하고 이들에 대응되는 적절한 HRP가 결합된 2차 항체를 사용한 것을 제외하고는 상기 실험예 6에 기재된 것과 동일한 방법으로 웨스턴 블롯 분석을 수행하였다.
그 결과, FDY003은 0.5 내지 5 ㎍/㎖ 농도에서 농도 의존적으로 p21의 발현을 증가시키고, 총 p53 대비 인산화된 p53의 발현은 증가시켜 p53의 활성화를 유도하였다(도 6C 내지 6E).
실시예 3. 대장암 마우스 모델의 제작
3-1. Colo205 세포주의 준비
동결된 대장암 세포주(Colo205 세포)를 열에 의해 불활성화된 소 태아 혈청(fetal bovine serum, Cat. #. 16000-044, Gibco, 미국)이 10%로 포함된 RPMI 1640 배지(Cat. #. 22400-089, Gibco)를 이용하여 해동 후, 5% 이산화탄소 및 37℃ 조건의 인큐베이터에서 배양하였다. 배양 배지에서 부유 상태에 있는 세포를 수득하여 튜브에 옮기고, 플라스크에 남아있는 부착 세포를 인산염 완충액(phosphate-buffered saline, PBS)으로 세척하고, 0.25% 트립신-EDTA(ethylenediaminetetraacetic acid, Cat. #. 25200-056, Gibco)를 첨가하여 분리한 후, 상기 부유 세포가 있는 튜브에 첨가하였다. 상기 튜브를 1,000 rpm으로 5분간 원심분리한 후, 상층액을 버리고 새로운 배지로 다시 현탁한 후, 세포 갯수를 카운팅하여 5.0 ×107 개/㎖의 농도로 준비하였다.
3-2. Colo205 세포주 접종에 의한 대장암 마우스 모델의 제작
5주령의 암컷 누드 마우스(Athymic nude mouse, 새론바이오, 대한민국)를 입수하여 7일간 순화하였다. 마우스의 등을 70% 알코올로 소독한 후, 상기 실시예 3-1에서 준비한 Colo205 세포를 26 게이지 니들(26 gauge needle) 주사기를 이용하여 마리 당 0.1 ㎖씩 피하투여하였다. 종양 크기가 약 100 내지 150 mm3에 도달하였을 때, 측정한 종양 크기가 최대한 균일하게 분포하도록 군 분리를 하였다.
실험예 8. FDY003의 대장암 마우스 모델에서의 항암 효과 확인
상기 실험예들에서 확인한 세포 수준에서의 FDY003의 대장암에 대한 항암 효과를 동물 모델에서 확인하고자, 대장암 마우스 모델을 이용하였다.
8-1. 약물 투여 일정
상기 실시예 3에서 제작한 대장암 마우스에 멸균생리식염수(대한약품공업(주), 대한민국) 5 ㎖ 또는 양성대조군인 이리노테칸(irinotecan) 20 mg/kg/5 ㎖를 매주 2회씩 4주간 복강투여하고, 약물투여군은 FDY003 0.2 mg/kg/5 ㎖를 매주 2회씩 4주간 정맥투여하였다. 정맥투여는 마우스를 보정틀에 넣어 보정 후, 31 게이지(gauge)의 인슐린 주사기를 이용하여 꼬리정맥을 통해 투여하는 방식으로 하였다.
8-2. FDY003 투여가 마우스 체중에 미치는 영향 확인
전체 실험 과정에서, 마우스 체중을 군 분리 및 약물 투여 개시일에 측정한 이후, 주 1회씩 측정하였고, 부검일에 최종 측정하였다.
실험기간 내 마우스 체중
날짜(일) 군 별 마우스의 평균 체중a(g)
대조군 이리노테칸 투여군 FDY003 투여군
0 17.00 ± 1.10 16.66 ± 1.24 16.40 ± 0.96
7 18.41 ± 1.46 17.10 ± 1.14* 17.61 ± 1.04
14 17.98 ± 1.45 16.93 ± 1.29 17.18 ± 1.11
21 16.51 ± 1.66 17.54 ± 1.74 16.62 ± 1.34
28 16.63 ± 1.63 17.42 ± 2.01 16.29 ± 1.58
(a평균 ± 표준편차, 대조군과 비교하여 *p < 0.05)
그 결과, 양성대조군인 이리노테칸 투여군은 약물 투여 후 7일째에 대조군에 비하여 유의하게 체중이 감소하였다가 회복되었으나, FDY003 투여군은 4주 동안 대조군에 비하여 유의한 체중 차이를 보이지 않았다(표 1).
8-3. FDY003 투여에 의한 종양 성장 억제 효과 확인
전체 실험 과정에서, 종양 크기를 군 분리 및 약물 투여 개시일에 측정한 이후, 주 2회씩 측정하였다. 캘리퍼스(calipers)를 이용하여 종양의 장축 및 단축을 측정하고, 다음의 계산식을 이용하여 종양 크기를 산출하였다:
종양 크기 = (a × b)2/2 (a: 장축; b: 단축).
그 결과, FDY003 투여군의 경우, 투여 개시 후 14일째부터 대조군에 비하여 유의하게 종양 크기가 작아졌다(도 7 및 8).
8-4. FDY003 투여에 의한 항산화 효과 확인
상기 실험예 8-3에서 확인한 FDY003의 대장암 종양 성장 억제 효과가 FDY003의 항산화 효과에 기인한 것인지 조사하기 위하여, 상기 마우스의 부검일에 채혈하여 혈청 내 지질과산화 정도 및 DPPH 라디칼 소거능을 측정하였다.
8-4-1. 마우스 혈액 채취 및 혈청의 분리
상기 마우스의 부검일에 후대정맥으로부터 채혈을 실시한 다음, 혈액을 응고 촉진제(clot activator)가 첨가된 진공 채혈관(vacutainer tube)에 주입하고, 약 15 내지 20분간 실온에 방치하여 응고시켰다. 응고된 혈액을 5,000 rpm으로 10분간 원심분리하여 혈청을 분리하였다. 혈청 시료는 분석 전까지 -70℃ 이하로 설정되어 있는 초저온 냉동고(deep freezer)에 보관하였다.
8-4-2. FDY003 투여에 의한 혈청 내 지질과산화 억제 효과 확인
상기 실험예 8-4-1에서 수득한 마우스 혈청으로 Lipid peroxidation 키트(Cat. #. K739, Biovision, 미국)를 이용하여 제조사의 설명서에 따라 지질과산화 정도를 측정하였다.
그 결과, FDY003 투여군에서 대조군에 비하여 유의하게 혈청 내 지질과산화가 억제되었다(도 9).
8-4-3. FDY003을 투여한 마우스 혈청의 DPPH 라디칼 소거능 확인
상기 실험예 8-4-1에서 수득한 마우스 혈청의 DPPH 라디칼 소거능을 측정하였다. 에탄올에 녹인 0.2 mM DPPH 용액 80 ㎕를 상기 각 마우스 혈청 또는 DMSO 20 ㎕에 첨가하여 상온에서 10분간 반응시킨 후, ELISA 리더로 492 nm에서 흡광도를 측정하였다. 각 시료의 색은 자체 흡광도를 측정한 후 보정하였으며, DMSO를 대조군으로 하여 하기의 식에 의해 각 시료의 DPPH 라디칼 소거능을 계산하였다:
라디칼 소거능(%) = (1 - A/B) ×100 (A: 시료의 흡광도; B: 대조군의 흡광도).
그 결과, FDY003을 투여한 마우스의 혈청에서 대조군에 비하여 유의하게 DPPH 라디칼 소거능이 증가하였다(도 9).
상기 실험예 8-1 내지 8-4를 통하여 FDY003이 대장암 마우스 모델에서 체중 에 영향을 미치지 않고, 항산화 효과를 통하여 종양 생성을 억제함을 확인하였다.
실시예 4. 한약재 추출물들의 제조
칡(Pueraria lobata Ohwi)의 뿌리(갈근), 감수(Euphorbia kansui Liou ex Wang)의 덩이뿌리, 감초(Glycyrrhiza uralensis Fischer)의 뿌리 및 뿌리줄기, 건조된 생강(Zingiber officinale Roscoe)의 뿌리줄기(건강), 건조된 지황(Rehmannia glutinosa (Gaertner) Liboschitz ex Steudel)의 뿌리(건지황), 옻나무(Rhus verniciflua Stokes)의 상처에서 흘러나온 수액을 건조한 덩어리(건칠), 결명차(Cassia tora Linne)의 잘 익은 씨(결명자), 육계(Cinnamomum cassia Presl)의 어린 가지(계지), 고량강(Alpinia officinarum Hance)의 뿌리줄기, 고삼(Sophora flavescens Solander ex Aiton)의 뿌리, 벼(Oryza sativa Linne)의 씨를 맥아가루로 당화시켜 농축한 것(교이), 구절초(Chrysanthemum zawadskii Herbich var. latilobum (Maxim.) Kitamura)의 전초, 단삼(Salvia miltiorrhiza Bunge)의 뿌리, 참당귀(Angelica gigas Nakai)의 뿌리(당귀), 소화당삼(Codonopsis pilosula Nannfeldt var. modesta L. T. Shen)의 뿌리(당삼), 대추나무(Zizyphus jujuba Miller var. inermis Rehder)의 잘 익은 열매(대조), 복숭아나무(Prunus persica Batsch)의 잘 익은 씨(도인), 두충(Eucommia ulmoides Oliver)의 줄기껍질, 초마황(Ephedra sinica Stapf)의 줄기(마황), 만삼(Codonopsis pilosula Nannfeldt)의 뿌리, 맥문동(Liriope platyphylla Wang et Tang)의 뿌리의 팽대부, 으름덩굴(Akebia quinata Decaisne)의 줄기(목통), 몰약수(Commiphora myrrha Engler)에서 얻은 고무수지(몰약), 박하(Mentha arvensis Linne var. piperascens Malinvaud ex Holmes)의 지상부, 반하(Pinellia ternata Breitenbach)의 덩이줄기, 할미꽃(Pulsatilla koreana Nakai)의 뿌리(백두옹), 복분자딸기(Rubus coreanus Miquel)의 채 익지 않은 열매(복분자), 오두(Aconitum carmichaeli Debeaux)의 자근(子根)(부자), 비파나무(Eriobotrya japonica Lindley)의 잎(비파엽), 벌사상자(Cnidium monieri (L). Cussion)의 열매(사상자), 초피나무(Zanthoxylum piperitum De Candolle)의 잘 익은 열매껍질(산초), 상황버섯(Phellinus linteus), 생강(Zingiber officinale Roscoe)의 신선한 뿌리줄기, 석고(Gypsum Fibrosum), 금불초(Inula japonica Thunberg)의 꽃(선복화), 민족도리풀(Asiasarum heterotropoides F. Maekawa var. mandshuricum F. Maekawa)의 뿌리 및 뿌리줄기(세신), 밀(Triticum aestivum var. vulgare)의 여문 씨(소맥), 천속단(Dipsacus asperoides C. Y. Cheng et T. M. Ai)의 뿌리(속단), 지황(Rehmannia glutinosa Liboschitz ex Steudel)의 뿌리를 포제가공한 것(숙지황), 시호(Bupleurum falcatum Linne)의 뿌리, 오갈피나무(Acanthopanax sessiliflorum Seeman)의 뿌리껍질 및 줄기껍질(오가피), 왕지네(Scolopendra subspinipes mutilans Linne Koch)의 몸체(오공), 오수유(Evodia rutaecarpa Bentham)의 열매, 용골(Fossilia Ossis Mastodi), 쇠무릎(Achyranthes japonica Nakai)의 뿌리(우슬), 왕느릅나무(Ulmus macrocarpa Hance)의 주피를 제거한 수피(유백피), 육계(Cinnamomum cassia Presl)의 줄기껍질, 육두구(Myristica fragrans Houttuyn)의 잘 익은 씨, 인삼(Panax ginseng C. A. Meyer)의 뿌리, 감초(Glycyrrhiza uralensis Fischer)의 뿌리 및 뿌리줄기를 포제가공한 것(자감초), 차즈기(Perilla frutescens Britton var. acuta Kudo)의 잎 및 끝가지(자소엽), 작약(Paeonia lactiflora Pallas)의 뿌리, 헛개나무(Hovenia dulcis Thunb.)의 열매자루가 달린 열매 또는 씨(지구자), 탱자나무(Poncirus trifoliata Rafinesque)의 익지 않은 열매(지실), 천궁(Cnidium officinale Makino)의 뿌리줄기, 개똥쑥(Artemisia annua Linne)의 지상부(청호), 침향나무(Aquilaria agallocha Roxburgh)의 수지가 침착된 수간목(침향), 쉽싸리(Lycopus lucidus Turczaininov)의 꽃이 피기 전의 지상부(택란), 민들레(Taraxacum platycarpum H. Dahlstedt)의 전초(포공영), 꿀풀(Prunella vulgaris Linne var. lilacina Nakai)의 꽃대(하고초), 연꽃(Nelumbo nucifera Gaertner)의 잎(하엽), 한련초(Eclipta prostrata Linne)의 전초, 살구나무(Prunus armeniaca Linne var. ansu Maximowicz)의 잘 익은 씨(행인), 이질풀(Geranium thunbergii Siebold et Zuccarini)의 지상부(현초), 형개(Schizonepeta tenuifolia Briquet)의 꽃이삭, 호도나무(Juglans regia Linne)의 씨(호도), 인삼(Panax ginseng C. A. Meyer)의 뿌리를 찐 것(홍삼), 잇꽃(Carthamus tinctorius Linne)의 꽃(홍화) 및 열매(홍화자), 황기(Astragalus membranaceus Bunge)의 뿌리, 및 털진득찰(Siegesbeckia pubescens Makino)의 지상부(희렴)를 경동시장에서 구입하여 준비하였다. 상기 각 약재를 분쇄하여 상기 실시예 1에 기재된 것과 동일한 방법으로 각 추출물을 제조하고, 상기 실시예 2에 기재된 것과 동일한 방법으로 in vitro 실험을 위한 추출물 시료들을 제조하였다.
실험예 9. 한약재 추출물들의 대장암 세포 증식 억제 효과 확인
상기 실험예 1 내지 8에서 확인한 대장암에 대한 항암 효과를 갖는 FDY003 외에도 대장암에 대한 항암 효과를 갖는 한약재 소재를 발굴하고자, 상기 실시예 4에서 제조한 한약재 추출물들의 대장암 세포 증식 억제 효과를 MTT 분석법으로 조사하였다.
구체적으로, Colo205 세포에 상기 실시예 4에서 제조한 한약재 추출물들을 최종 농도가 10 ㎍/㎖가 되도록 처리한 것을 제외하고는 상기 실험예 1에 기재된 것과 동일한 방법으로 MTT 분석을 수행하였다.
한약재 추출물들의 대장암 세포 증식 억제 효과
약재명 세포생존율(%) 약재명 세포생존율(%) 약재명 세포생존율(%)
갈근 89.35 반하 87.01 인삼 89.05
감수 90.91 백두옹 86.37 자감초 90.04
감초 89.48 복분자 89.69 자소엽 90.47
건강 88.63 부자 87.09 작약 89.07
건지황 89.77 비파엽 90.17 지구자 92.57
건칠 86.19 사상자 90.92 지실 88.04
결명자 91.87 산초 90.48 천궁 88.92
계지 90.33 상황버섯 88.04 청호 90.57
고량강 89.10 생강 89.94 침향 83.39
고삼 92.36 석고 99.53 택란 90.88
교이 88.92 선복화 84.10 포공영 90.31
구절초 95.33 세신 90.91 하고초 93.47
단삼 87.11 소맥 90.76 하엽 90.51
당귀 91.20 속단 90.29 한련초 90.96
당삼 89.25 숙지황 91.37 행인 89.39
대조 90.83 시호 87.94 현초 91.58
도인 90.40 오가피 90.91 형개 96.58
두충 89.06 오공 93.08 호도 89.47
마황 89.43 오수유 89.76 홍삼 89.18
만삼 89.38 용골 93.18 홍화 88.03
맥문동 91.28 우슬 93.14 홍화자 88.57
목통 90.65 유백피 96.17 황기 90.96
몰약 93.10 육계 90.85 희렴 90.98
박하 87.72 육두구 93.18
그 결과, 상기 71종 한약재 추출물들은 10 ㎍/㎖에서 최대 약 17%의 대장암 세포 증식 억제 효과를 보였다(표 2).
결론적으로, 상기 실시예 및 실험예를 통하여, 인진호, 동충하초 및 금은화 혼합 추출물(FDY003)이 우수한 항산화 활성을 가지고, 대장암 세포에서 항산화, 세포사멸 유도, 암 억제 단백질인 p21의 발현 증가 및 p53의 활성화를 통하여 세포증식을 억제하고, 대장암 마우스 모델에서 항산화 활성을 통하여 종양 생성을 억제함을 확인하였다. 따라서, FDY003은 대장암의 예방, 치료 또는 개선에 유용하게 사용될 수 있다.

Claims (8)

  1. 인진호, 동충하초 및 금은화의 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 대장암의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 추출물은 물, C1 내지 C4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출된, 약학 조성물.
  3. 제2항에 있어서, 상기 저급 알코올은 에탄올 또는 메탄올인, 약학 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 상기 추출물은 갈근, 감수, 감초, 건강, 건지황, 건칠, 결명자, 계지, 고량강, 고삼, 교이, 구절초, 단삼, 당귀, 당삼, 대조, 도인, 두충, 마황, 만삼, 맥문동, 목통, 몰약, 박하, 반하, 백두옹, 복분자, 부자, 비파엽, 사상자, 산초, 상황버섯, 생강, 석고, 선복화, 세신, 소맥, 속단, 숙지황, 시호, 오가피, 오공, 오수유, 용골, 우슬, 유백피, 육계, 육두구, 인삼, 자감초, 자소엽, 작약, 지구자, 지실, 천궁, 청호, 침향, 택란, 포공영, 하고초, 하엽, 한련초, 행인, 현초, 형개, 호도, 홍삼, 홍화, 홍화자, 황기, 희렴으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상을 더 혼합하여 추출한, 약학 조성물.
  5. 인진호, 동충하초 및 금은화의 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 대장암의 예방 또는 개선용 건강기능식품.
  6. 제5항에 있어서, 상기 추출물은 물, C1 내지 C4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출된, 건강기능식품.
  7. 제6항에 있어서, 상기 저급 알코올은 에탄올 또는 메탄올인, 건강기능식품.
  8. 제5항에 있어서, 상기 추출물은 갈근, 감수, 감초, 건강, 건지황, 건칠, 결명자, 계지, 고량강, 고삼, 교이, 구절초, 단삼, 당귀, 당삼, 대조, 도인, 두충, 마황, 만삼, 맥문동, 목통, 몰약, 박하, 반하, 백두옹, 복분자, 부자, 비파엽, 사상자, 산초, 상황버섯, 생강, 석고, 선복화, 세신, 소맥, 속단, 숙지황, 시호, 오가피, 오공, 오수유, 용골, 우슬, 유백피, 육계, 육두구, 인삼, 자감초, 자소엽, 작약, 지구자, 지실, 천궁, 청호, 침향, 택란, 포공영, 하고초, 하엽, 한련초, 행인, 현초, 형개, 호도, 홍삼, 홍화, 홍화자, 황기, 희렴으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상을 더 혼합하여 추출한, 건강기능식품.
KR1020180062929A 2018-05-31 2018-05-31 대장암의 예방 또는 치료용 약학 조성물 KR102085774B1 (ko)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020180062929A KR102085774B1 (ko) 2018-05-31 2018-05-31 대장암의 예방 또는 치료용 약학 조성물

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020180062929A KR102085774B1 (ko) 2018-05-31 2018-05-31 대장암의 예방 또는 치료용 약학 조성물

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20190136786A true KR20190136786A (ko) 2019-12-10
KR102085774B1 KR102085774B1 (ko) 2020-03-06

Family

ID=69002515

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020180062929A KR102085774B1 (ko) 2018-05-31 2018-05-31 대장암의 예방 또는 치료용 약학 조성물

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR102085774B1 (ko)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2022010035A1 (ko) * 2020-07-06 2022-01-13 주식회사 얼라셀바이오 생약 추출물을 포함하는 항암용 약학적 조성물
KR102517944B1 (ko) * 2022-04-06 2023-04-06 한경수 복방 한방 추출물을 유효성분으로 함유하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 건강 기능 식품

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20050001730A (ko) * 2003-06-26 2005-01-07 진주버섯영농조합 암예방 및 치료용 조성물
KR20110073717A (ko) * 2009-12-24 2011-06-30 정세헌 기능성 식품 및 이의 제조방법
KR101834485B1 (ko) 2012-12-05 2018-03-05 한국생명공학연구원 카르보닐기 환원효소 １ 단백질의 발현 또는 활성 억제제를 포함하는 대장암 예방, 치료 또는 전이 억제용 약학적 조성물

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20050001730A (ko) * 2003-06-26 2005-01-07 진주버섯영농조합 암예방 및 치료용 조성물
KR20110073717A (ko) * 2009-12-24 2011-06-30 정세헌 기능성 식품 및 이의 제조방법
KR101834485B1 (ko) 2012-12-05 2018-03-05 한국생명공학연구원 카르보닐기 환원효소 １ 단백질의 발현 또는 활성 억제제를 포함하는 대장암 예방, 치료 또는 전이 억제용 약학적 조성물

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Inpyo Choi, Hanyang Med Rev, 33, 118-122, 2013.
Plant Resources. 1999. Vol.2, No.1, pp.31-41.* *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2022010035A1 (ko) * 2020-07-06 2022-01-13 주식회사 얼라셀바이오 생약 추출물을 포함하는 항암용 약학적 조성물
KR102517944B1 (ko) * 2022-04-06 2023-04-06 한경수 복방 한방 추출물을 유효성분으로 함유하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 건강 기능 식품

Also Published As

Publication number Publication date
KR102085774B1 (ko) 2020-03-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR101360231B1 (ko) 생약 추출물을 포함하는 간암 예방 또는 치료용 약학적 조성물
KR102400607B1 (ko) 혼합 생약 추출물을 포함하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 건강기능식품
KR100860080B1 (ko) 항염, 항알레르기 및 항천식 활성을 갖는 꼬리풀속 식물추출물을 함유하는 약학조성물
KR102085774B1 (ko) 대장암의 예방 또는 치료용 약학 조성물
KR100919852B1 (ko) 해방풍 추출물을 유효성분으로 함유하는 부종 또는 피부염예방 및 치료용 조성물
KR101360232B1 (ko) 생약 추출물을 포함하는 신장암 예방 또는 치료용 약학적 조성물
KR20160056007A (ko) 황칠나무 추출물을 포함하는 염증성 질환의 치료 및 예방용 조성물
KR101345653B1 (ko) 산두근 추출물을 포함하는 아세틸콜린에스터라제 활성 저해용 조성물
KR101027555B1 (ko) 혼합 생약 추출물을 유효성분으로 함유하는 간보호 및간염의 예방 및 치료용 조성물
KR20200066910A (ko) 생약 추출물을 유효성분으로 포함하는 항암용 조성물
KR101833776B1 (ko) 지모와 두릅의 복합 추출물을 함유하는 탈모 방지 및 발모 개선용 조성물
KR101514284B1 (ko) 땃두릅나무 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 암 예방 및 치료용 약학적 조성물
KR101360233B1 (ko) 생약 추출물을 포함하는 폐암 예방 또는 치료용 약학적 조성물
KR101816200B1 (ko) 한약재 유래의 간 질환의 예방 또는 치료용 생약조성물
KR20140083493A (ko) 참모자반 추출물 또는 괭생이모자반 추출물을 유효성분으로 함유하는 항비만용 조성물
KR101508561B1 (ko) 귀리를 포함하는 혼합 생약재 추출물을 함유하는 당뇨병의 예방 또는 치료용 약학조성물
KR102689265B1 (ko) 목서 추출물을 포함하는 골다공증 예방 또는 치료용 약학 조성물
KR102682338B1 (ko) 두충 추출물 및 진피 추출물을 포함하는 위장 장애의 예방, 개선 또는 치료용 조성물
KR102617383B1 (ko) 석류, 마 및 둥굴레의 혼합 추출물을 이용한 항비만용 조성물 및 그 제조방법
KR102682331B1 (ko) 두충 추출물 및 홍삼 추출물을 포함하는 위장 장애의 예방, 개선 또는 치료용 조성물
KR101209646B1 (ko) 야베스 추출물을 포함하는 면역세포증가 또는 암세포 전이 억제 또는 간염 바이러스 증식 억제용 약학적 조성물
KR101195447B1 (ko) 당뇨병 예방 및 치료용 생약조성물
KR20050107362A (ko) 유근피 추출물을 포함하는 건강 증진용 식품
KR20180078435A (ko) 식욕부진 개선용 건강기능식품 조성물 및 식욕부진 예방 또는 치료용 약학 조성물
KR101914738B1 (ko) 흑삼 꽃봉오리 및 흑삼 지근의 고형물을 함유하는 치매 예방 또는 개선용 조성물.

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant