KR20190126350A - 2'-푸코실락토스 결정화 방법 및 관련 조성물 - Google Patents

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Abstract

본 명세서는, 올리고당, 구체적으로 인간 모유 올리고당, 더 구체적으로는 2'-푸코실락토스("2'-FL")의 결정화 방법에 관한 것이다. 본 명세서는 또한 이러한 방법을 이용해서 제조된 조성물(예를 들어, 결정질 생성물)에 관한 것이다.

Description

2'-푸코실락토스 결정화 방법 및 관련 조성물
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2017년 3월 6일에 출원된 미국 가출원 제62/467,571호, 2017년 4월 21일에 출원된 유럽 특허 출원 제17167564.8호, 및 2018년 2월 19일에 출원된 미국 가출원 제62/632,180호에 대한 우선권을 주장한다. 이들 출원 각각은 본 명세서에 그 전문이 참조로 통합된다.
기술분야
본 명세서는, 올리고당, 구체적으로 인간 모유 올리고당, 더 구체적으로는 2'-푸코실락토스("2'-FL")의 결정화 방법에 관한 것이다. 본 명세서는 또한 이러한 방법을 이용해서 제조된 조성물(예를 들어, 결정질 생성물)에 관한 것이다.
인간 모유 올리고당은 영양 및 치료법 측면에서 중요하다. 가장 중요한 인간 모유 올리고당 중 하나는 2'-푸코실락토스(2'-O-푸코실락토스 또는 "2'-FL"로도 알려져 있음)이다. 이 올리고당은 인간 모유에서 발견되는 가장 풍부한 올리고당이고, 프리바이오틱, 항균, 항바이러스, 면역 체계 증진 및 두뇌 개발 증진 효과를 포함하여 여러 유용한 생물학적 역할이 있다고 여겨진다. 이러한 유용성으로 인해 2'-FL은 식품, 건강 보조 식품 및 의약품과 특히 영아용 조제 분유에 포함시키기에 잠재적으로 매력적인 성분이 된다. 그러나, 2'-FL의 대량 생산을 위한 경제적으로 실현 가능한 공정의 개발은 계속해서 과제로 남아있다.
2'-FL의 합성에 관한 최근의 많은 접근방법들은 락토스로부터 2'-FL을 생산하는 미생물 발효 공정을 포함한다. 이러한 접근방법이 성공한 적도 있지만, 일반적으로 이러한 공정들은 다른 성분들, 예컨대 락토스, 원하는 2'-FL(예를 들어, 디푸코실락토스("DiFL")) 이외의 올리고당류, 단당류, 아미노산류, 폴리펩티드류, 단백질류, 1가염 및 2가염, 유기산류, 핵산류 등을 흔히 포함하는 복합적인 혼합 생성물을 생성한다. 따라서, 이용 가능한 2'-FL 생성물을 제공하는 효과적이고, 신뢰성 있는, 경제적으로 실현 가능한 하류 정제 공정에 대한 요구가 지속되고 있다.
2'-FL을 정제하는 하나의 기술은 결정화이다. 그러나, 상용되는 냉각 결정화 기술은 2'-FL의 독특한 결정화 특성으로 인해 일반적으로 2'-FL에 적용할 수 없다. 2'-FL의 포화 수성 시럽은 저온에서 낮은 점도를 나타내지만(이는 보통 결정화가 바로 일어날 수 있다는 의미임), 매우 과포화 된 수성 2'-FL 시럽조차도 일반적으로 저온에서 안정하다.
이러한 문제를 극복하기 위해, 몇몇 기술자들은 결정화를 강제하기 위해 유기 용매의 첨가를 수반하는 기술을 보고하였다. 예를 들어, Kuhn, R. 외 Chemische Berichte, vol. 88(8), pp. 1135-1146 (1955);Kuhn, R.외, Chemische Berichte, vol. 89(11), p. 2513 (1956); WO2011/150939; WO2015/188834; 및 WO201695924 참조. 그러나, 2'-FL을 결정화하기 위해 유기 용매를 사용하는 것에 관한 많은 잠재적인 단점들이 있다. 예를 들어, 유기 용매 자체의 비용도 단점에 포함된다. 유기 용매는 또한 유해한 배출물, 폐기물 및/또는 오염 물질을 만들어낼 수 있다. 결정화 이후 용매를 회수하기 위해서는 특수 장비가 종종 요구된다. 경우에 따라, 이러한 용매 회수와 관련된 용매 손실이 있다. 몇몇 용매들은, 폭발이나 다른 안전상의 이유들로 인해 특수 장비가 또한 필요하다. 그리고 결정질 생성물 내에 잔류 용매가 남아있는 경우에도 용매의 사용은 또한 문제가 될 수 있다. 극미량의 일부 유기 용매 조차도 맛, 냄새, 색깔 및/또는 식품 안전성에 악영향을 미칠 수 있다.
이에 따라, 2'-FL을 정제하기 위한 효과적이고, 신뢰성 있고, 경제적으로 실현 가능한 하류 공정, 특히 유기 용매를 사용할 필요가 없는 수성 결정화에 대한 요구가 지속적으로 존재한다.
간략하게, 본 명세서는 일반적으로 2'-FL을 결정화하는 방법뿐만 아니라 이러한 방법을 사용하여 생산된 조성물을 개시한다.
특히, 본 명세서는 2'-FL과 적어도 하나 이상의 다른 탄수화물을 포함하는 수성 출발 용액으로부터 결정질 2'-FL을 제조하는 방법을 부분적으로 개시한다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 출발 용액을 2'-FL에 대해 과포화 상태로 농축시키는 단계, 그런 다음 과포화 용액의 온도를 60℃보다 높게 한 상태에서 과포화 용액에서 2'-FL 결정을 침전시키는 단계를 포함한다. 이 방법에서, 과포화 용액은 2'-FL 결정 침전시 1 (중량)% 이하의 유기 용매를 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 출발 용액을 2'-푸코실락토스에 대해 과포화 상태로 농축시키는 단계, 그런 다음 과포화 용액의 온도를 적어도 40℃로 하면서 과포화 용액에서 2'-푸코실락토스 결정을 침전시키는 단계를 포함한다. 이 방법에서, 출발 용액은 2'-푸코실락토스 농도가 70 내지 95%인(여기서 백분율은 고성능 액체 크로마토그래피를 이용하여 얻은 정규화 피크 면적 농도에 상응함) 건조 고형분 함량을 갖는다. 또한, 과포화 용액은 2'-푸코실락토스 결정 침전시 1 (중량)% 이하의 유기 용매를 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 출발 용액을 2'-푸코실락토스에 대해 과포화 상태로 농축시키는 단계, 그런 다음 과포화 용액의 온도를 적어도 40℃로 하면서 과포화 용액에서 2'-푸코실락토스 결정을 침전시키는 단계를 포함한다. 이 방법에서, 출발 용액은 2'-푸코실락토스 농도가 약 98% 미만인(여기서 백분율은 고성능 액체 크로마토그래피를 이용하여 얻은 정규화 피크 면적 농도에 상응함) 건조 고형분 함량을 갖는다. 또한, 과포화 용액은 2'-푸코실락토스 결정 침전시 1 (중량)% 이하의 유기 용매를 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 출발 용액을 2'-푸코실락토스에 대해 과포화 상태로 농축시키는 단계, 그런 다음 과포화 용액의 온도를 적어도 40℃로 하면서 과포화 용액에서 2'-푸코실락토스 결정을 침전시키는 단계를 포함한다. 이 방법에서, 출발 용액은 2'-푸코실락토스 농도가 약 95% 미만인(여기서 백분율은 고성능 액체 크로마토그래피를 이용하여 얻은 정규화 피크 면적 농도에 상응함) 건조 고형분 함량을 갖는다. 또한, 과포화 용액은 2'-푸코실락토스 결정 침전시 1 (중량)% 이하의 유기 용매를 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 출발 용액을 2'-푸코실락토스에 대해 과포화 상태로 농축시키는 단계, 그런 다음 과포화 용액의 온도를 적어도 40℃로 하면서 과포화 용액에서 2'-푸코실락토스 결정을 침전시키는 단계를 포함한다. 이 방법에서, 과포화 용액은 2'-푸코실락토스 결정 침전시 1 (중량)% 이하의 유기 용매를 포함한다. 또한, 결정질 2'-푸코실락토스 생성물은 (유럽 약전 모세관 융점 측정법(the European Pharmacopoeia capillary melting point method)을 이용하여 1℃/분의 가열 속도로 측정시) 융점이 약 230℃ 내지 약 239℃이다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 출발 용액을 2'-푸코실락토스에 대해 과포화 상태로 농축시키는 단계, 그런 다음 과포화 용액의 온도를 적어도 40℃로 하면서 과포화 용액에서 2'-푸코실락토스 결정을 침전시키는 단계를 포함한다. 이 방법에서, 과포화 용액은 2'-푸코실락토스 결정 침전시 1 (중량)% 이하의 유기 용매를 포함한다. 또한, 결정질 2'-푸코실락토스 생성물은 CuKa 방사선을 이용하여 측정한 것에 기초하여, 16.98±0.20, 13.65±0.20 및 18.32±0.20의 2Θ 각도에서 X-선 분말 회절 반사(X-ray powder diffraction reflection)를 나타낸다.
본 명세서는 또한 비정질 2'-FL의 제조방법을 부분적으로 개시한다. 상기 방법은 상기 기술된(또는 본 명세서의 다른 곳에 기술된) 결정화 방법에 따라 결정질 2'-FL을 제조하는 단계와, 정제된 2'-FL용액을 형성하기 위해 결정질 2'-FL을 용매에(예를 들어, 물 등) 용해시키는 단계, 및 정제된 2'-FL 용액에서 비정질 2'-FL을 침전시키는 단계를 포함한다.
본 명세서는 또한 식품, 건강 보조 식품 또는 의약품의 제조방법을 부분적으로 개시한다.
일부 구현예에서, 식품, 건강 보조 식품 또는 의약품을 제조하는 방법은 상기 기술된(또는 본 명세서의 다른 곳에 기술된) 결정화 방법에 따라 결정질 2'-FL을 제조하는 단계, 그런 다음 결정질 2'-FL을 식품, 건강 보조 식품 또는 의약품에 적합한 하나 이상의 성분과 혼합하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, 식품, 건강 보조 식품 또는 의약품을 제조하는 방법은 상기 기술된(또는 본 명세서의 다른 곳에 기술된) 결정화 방법에 따라 결정질 2'-FL을 제조하는 단계와, 결정질 2'-FL을 용매(예를 들어, 물 등)에 용해시키는 단계, 그리고 용해된 2'-FL을 식품, 건강 보조 식품 또는 의약품에 적합한 하나 이상의 성분과 혼합하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, 식품, 건강 보조 식품 또는 의약품을 제조하는 방법은 앞서 기술된 바대로(또는 본 명세서의 다른 곳에 기술된 바와 같이) 비정질 2'-FL을 제조하는 단계, 그런 다음 비정질 2'-FL을 식품, 건강 보조 식품 또는 의약품에 적합한 하나 이상의 성분과 혼합하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, 식품, 건강 보조 식품 또는 의약품을 제조하는 방법은 앞서 기술된 바대로(또는 본 명세서의 다른 곳에 기술된 바와 같이) 비정질 2'-FL을 제조하는 단계와, 비정질 2'-FL을 용매(예를 들어, 물 등)에 용해시키는 단계, 그리고 용해된 2'-FL을 식품, 건강 보조 식품 또는 의약품에 적합한 하나 이상의 성분과 혼합하는 단계를 포함한다.
본 명세서는 또한 영아용 조제 분유의 제조방법을 부분적으로 개시한다.
일부 구현예에서, 영아용 조제 분유를 제조하는 방법은 상기 기술된(또는 본 명세서의 다른 곳에 기술된) 결정화 방법에 따라 결정질 2'-FL을 제조하는 단계, 그런 다음 결정질 2'-FL을 하나 이상의 영아용 조제 분유 성분과 혼합하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, 영아용 조제 분유를 제조하는 방법은 상기 기술된(또는 본 명세서의 다른 곳에 기술된) 결정화 방법에 따라 결정질 2'-FL을 제조하는 단계와, 결정질 2'-FL을 용매(예를 들어, 물 등)에 용해시키는 단계, 그리고 용해된 2'-FL을 하나 이상의 영아용 조제 분유 성분과 혼합하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, 영아용 조제 분유를 제조하는 방법은 앞서 기술된 바대로(또는 본 명세서의 다른 곳에 기술된 바와 같이) 비정질 2'-FL을 제조하는 단계, 그런 다음 비정질 2'-FL을 하나 이상의 영아용 조제 분유 성분과 혼합하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, 영아용 조제 분유를 제조하는 방법은 앞서 기술된 바대로(또는 본 명세서의 다른 곳에 기술된 바와 같이) 비정질 2'-FL을 제조하는 단계와, 비정질 2'-FL을 용매(예를 들어, 물 등)에 용해시키는 단계, 그리고 용해된 2'-FL을 하나 이상의 영아용 조제 분유 성분과 혼합하는 단계를 포함한다.
본 명세서는 또한 상기 기술된(또는 본 명세서의 다른 곳에 기술된) 결정화 방법으로부터 얻어지는 결정질 2'-FL 생성물을 부분적으로 개시한다.
본 명세서는 또한 비정질 2'-FL을 제조하기 위해 상기 기술된(또는 본 명세서의 다른 곳에 기술된) 방법으로부터 얻어지는 비정질 2'-FL을 부분적으로 개시한다.
본 명세서는 또한 상기 기술된(또는 본 명세서의 다른 곳에 기술된) 식품, 건강 보조 식품 또는 의약품을 제조하는 방법에 의해 제조되는 식품, 건강 보조 식품 또는 의약품을 부분적으로 개시한다.
본 명세서는 또한 상기 기술된(또는 본 명세서의 다른 곳에 기술된) 영아용 조제 분유를 제조하는 방법으로부터 얻어지는 영아용 조제 분유를 부분적으로 개시한다.
본 명세서의 지침에 관한 추가적인 이점들은 본 명세서를 읽음으로써 당업자에게 명백해질 것이다.
본 발명을 실시하기 위한 구체적인 내용은 다른 당업자가 본 발명을 숙지하고 특정 용도의 요건들에 가장 적합할 수 있는 다양한 형태로 본 발명을 응용할 수 있도록, 오로지 다른 당업자에게 본 발명, 그 원리 및 그의 실제 응용예를 숙지시키기 위한 것이다. 본 발명을 실시하기 위한 구체적인 내용 및 이의 구체적인 실시예들이 특정한 구현예들을 나타내지만, 이는 단지 예시를 위한 것이다. 본 명세서는 따라서, 설명된 구현예에 국한되지 않으며, 다양하게 변형될 수 있다.
본 명세서는 2'-FL 함유 용액에서 2'-FL을 결정화하는 방법에 대한 것이다. 일반적으로, 이러한 방법은 2'-FL 함유 용액을 2'-FL에 대해 과포화 상태로 만드는 단계, 그런 다음 2'-FL에 대해 적어도 약 1%의 결정 수율을 갖는 결정화 덩어리가 얻어질 때까지 용액을 증발시켜 용액으로부터 2'-FL을 결정화시키는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, 2'-FL 결정화가 일어나는 용액은 예를 들어, 동물 모유(예를 들어, 인간 모유 등)나 동물 모유 유래 성분과 같은 천연 공급원을 포함한다. 일부 구현예에서, 2'-FL 결정화가 일어나는 용액은 화학 합성에 의해 제조된다 또 다른 구현예에서, 2'-FL 함유 용액은 미생물 발효 공정으로부터 얻어진다. 예를 들어, 2'-FL 공급원은 세균이나 효모와 같은 재조합 미생물을 이용한 미생물 발효를 통해 얻은 발효액일 수 있다. 일부 이러한 구현예에서, 미생물은 효모이다. 다른 구현예에서, 미생물은 세균이다. 일부 구현예에서, 미생물은 대장균(Escherichia coli)이다. 일부 구현예에서, 발효는 합성 배지에서 일어난다.
결정화 전에, 2'-FL의 공급원(예를 들어, 발효액)은 하나 이상의 정제 공정을 거칠 수 있다. 예를 들어 일부 구현예에서, 2'-FL 공급원(예를 들어, 발효액)은 세포 바이오매스를 제거하기 위한 세포 원심 분리, 침전 또는 하나 이상의 다른 공정을 거친다. 일부 구현예에서, 2'-FL 공급원(예를 들어, 발효액)은 한외 여과를 거친다. 이것은, 예를 들어, 단백질류, 핵산류 및 지질 다당류와 같은 거대한 생체 분자를 제거하는 데 도움이 될 수 있다. 일부 구현예에서, 2'-FL 공급원(예를 들어, 발효액)은 나노 여과(nanofiltration)를 거친다. 이것은, 예를 들어, 미네랄과 다양한 작은 생체 분자도 제거하면서 수분량을 줄여 2'-FL을 농축시키는 데 도움이 될 수 있다. 일부 구현예에서, 2'-FL 공급원(예를 들어, 발효액)은 겔-여과 크로마토그래피와 같은 크로마토그래피로 분리를 거친다. 일부 구현예에서, 2'-FL 공급원(예를 들어, 발효액)은 정밀 여과를 거친다. 이것은, 예를 들어, 미생물 오염을 제거하는 데 도움이 될 수 있다. 일부 구현예에서, 2'-FL 공급원(예를 들어, 발효액)은 양이온 교환, 음이온 교환, 이온 교환 수지, 혼합 층 이온 교환 및/또는 전기 투석을 거친다. 이것은, 예를 들어, 하전된 작은 분자, 염, 미량의 금속을 제거하는 데 도움이 될 수 있다. 일부 구현예에서, 2'-FL 공급원(예를 들어, 발효액)은, 예를 들어, 분말 활성탄과의 접촉 또는 숯 여과에 의한 탈색을 거친다. 일부 구현예에서, 2'-FL 공급원(예를 들어, 발효액)은 증발을 거친다. 이것은, 예를 들어, 물을 제거하여 2'-FL을 농축시키는 데 도움이 될 수 있다. 일부 구현예에서, 2'-FL 공급원(예를 들어, 발효액)은 결정화 전에 상기 정제 단계 중 2가지 이상의 조합을 거친다. 이러한 구현예들은 공정의 다른 지점에서 여러 가지의 단계를 반복하는 것뿐만 아니라, 단계들을 다양한 순서로 이용하는 것을 포함할 수 있다.
예를 들어, 일부 구현예에서, 2'-FL 공급원은 발효액이며, 이 용액이 결정화를 위한 과포화 상태가 되기 전에 한외 여과, 양이온 교환, 음이온 교환, 혼합 층 이온 교환 및 분말 활성탄을 거친다. 일부 구현예에서, 2'-FL 공급원은 발효액이며, 이 용액이 결정화를 위한 과포화 상태가 되기 전에 원심 분리, 한외 여과, 양이온 교환, 음이온 교환, 혼합 층 이온 교환 및 분말 활성탄을 거친다. 일부 구현예에서, 2'-FL 공급원은 발효액이며, 이 용액이 결정화를 위한 과포화 상태가 되기 전에 한외 여과, 나노 여과, 양이온 교환, 음이온 교환, 혼합 층 이온 교환 및 분말 활성탄을 거친다. 일부 구현예에서, 2'-FL 공급원은 발효액이며, 이 용액이 결정화를 위한 과포화 상태가 되기 전에 원심 분리, 한외 여과, 나노 여과, 양이온 교환, 음이온 교환, 혼합 층 이온 교환 및 분말 활성탄을 거친다. 일부 구현예에서, 2'-FL 공급원은 발효액이며, 이 용액이 결정화를 위한 과포화 상태가 되기 전에 한외 여과, 나노 여과, 선택적 정밀 여과, 선택적 이온 제거(예를 들어, 이온 교환 수지 및/또는 전기 투석 등), 선택적 전-농축(예를 들어, 증발 또는 나노 여과 등), 탈색(예를 들어, 숯 여과), 정밀 여과, 및 선택적 나노 여과를 거친다.
일부 구현예에서, 전결정화 정제 단계에서 생성된 시럽의 건조 고형분 함량 중 2'-FL의 농도(또는 "순도")는 99% 미만이다. 일부 구현예에서, 전결정화 정제 단계에서 생성된 시럽의 건조 고형분 함량 중 2'-FL의 농도는 98% 미만이다. 일부 구현예에서, 전결정화 정제 단계에서 생성된 시럽의 건조 고형분 함량 중 2'-FL의 농도는 약 95% 미만이다. 일부 구현예에서, 전결정화 정제 단계에서 생성된 시럽의 건조 고형분 함량 중 2'-FL의 농도는 약 91% 미만이다. 일부 구현예에서, 전결정화 정제 단계에서 생성된 시럽의 건조 고형분 함량 중 2'-FL의 농도는 약 90% 미만이다. 일부 구현예에서, 전결정화 정제 단계에서 생성된 시럽의 건조 고형분 함량 중 2'-FL의 농도는 약 85% 미만이다. 일부 구현예에서, 전결정화 정제 단계에서 생성된 시럽의 건조 고형분 함량 중 2'-FL의 농도는 약 80% 미만이다. 일부 구현예에서, 전결정화 정제 단계에서 생성된 시럽의 건조 고형분 함량 중 2'-FL의 농도는 약 75% 미만이다.
일부 구현예에서, 전결정화 정제 단계에서 생성된 시럽의 건조 고형분 함량 중 2'-FL의 농도는 적어도 약 50%이다. 일부 구현예에서, 전결정화 정제 단계에서 생성된 시럽의 건조 고형분 함량 중 2'-FL의 농도는 적어도 약 55%이다. 일부 구현예에서, 전결정화 정제 단계에서 생성된 시럽의 건조 고형분 함량 중 2'-FL의 농도는 적어도 약 60%이다. 일부 구현예에서, 전결정화 정제 단계에서 생성된 시럽의 건조 고형분 함량 중 2'-FL의 농도는 적어도 약 65%이다. 일부 구현예에서, 전결정화 정제 단계에서 생성된 시럽의 건조 고형분 함량 중 2'-FL의 농도는 적어도 약 70%이다. 일부 구현예에서, 전결정화 정제 단계에서 생성된 시럽의 건조 고형분 함량 중 2'-FL의 농도는 적어도 약 75%이다. 일부 구현예에서, 전결정화 정제 단계에서 생성된 시럽의 건조 고형분 함량 중 2'-FL의 농도는 적어도 약 80%이다. 일부 구현예에서, 전결정화 정제 단계에서 생성된 시럽의 건조 고형분 함량 중 2'-FL의 농도는 적어도 약 85%이다. 일부 구현예에서, 전결정화 정제 단계에서 생성된 시럽의 건조 고형분 함량 중 2'-FL의 농도는 적어도 약 90%이다. 일부 구현예에서, 전결정화 정제 단계에서 생성된 시럽의 건조 고형분 함량 중 2'-FL의 농도는 적어도 약 95%이다.
일부 구현예에서, 전결정화 정제 단계에서 생성된 시럽의 건조 고형분 함량 중 2'-FL의 농도는 약 60% 내지 약 95%이다. 일부 구현예에서, 전결정화 정제 단계에서 생성된 시럽의 건조 고형분 함량 중 2'-FL의 농도는 약 60% 내지 약 90%이다. 일부 구현예에서, 전결정화 정제 단계에서 생성된 시럽의 건조 고형분 함량 중 2'-FL의 농도는 약 65% 내지 약 95%이다. 일부 구현예에서, 전결정화 정제 단계에서 생성된 시럽의 건조 고형분 함량 중 2'-FL의 농도는 약 65% 내지 약 90%이다. 일부 구현예에서, 전결정화 정제 단계에서 생성된 시럽의 건조 고형분 함량 중 2'-FL의 농도는 약 70% 내지 약 95%이다. 일부 구현예에서, 전결정화 정제 단계에서 생성된 시럽의 건조 고형분 함량 중 2'-FL의 농도는 약 70% 내지 약 90%이다. 일부 구현예에서, 전결정화 정제 단계에서 생성된 시럽의 건조 고형분 함량 중 2'-FL의 농도는 약 70% 내지 약 85%이다. 일부 구현예에서, 전결정화 정제 단계에서 생성된 시럽의 건조 고형분 함량 중 2'-FL의 농도는 약 70% 내지 약 80%이다. 일부 구현예에서, 전결정화 정제 단계에서 생성된 시럽의 건조 고형분 함량 중 2'-FL의 농도는 약 70% 내지 약 75%이다. 일부 구현예에서, 전결정화 정제 단계에서 생성된 시럽의 건조 고형분 함량 중 2'-FL의 농도는 약 75% 내지 약 95%이다. 일부 구현예에서, 전결정화 정제 단계에서 생성된 시럽의 건조 고형분 함량 중 2'-FL의 농도는 약 80% 내지 약 95%이다. 일부 구현예에서, 전결정화 정제 단계에서 생성된 시럽의 건조 고형분 함량 중 2'-FL의 농도는 약 85% 내지 약 95%이다. 일부 구현예에서, 전결정화 정제 단계에서 생성된 시럽의 건조 고형분 함량 중 2'-FL의 농도는 약 90% 내지 약 95%이다.
상기 2'-FL의 농도 백분율은 고성능 액체 크로마토그래피("HPLC")를 이용하여 얻은 정규화 피크 면적 농도(또는 "순도")에 상응한다.
일부 구현예에서, 2'-FL은 2'-FL과 적어도 하나 이상의 다른 탄수화물이 포함된 용액으로부터 결정화된다. 예를 들어, 2'-FL 용액이 효소법이나 발효법으로 유도되는 경우, 이 용액은 예를 들어 락토스, 2'-FL(예를 들어, 디푸코실락토스("DiFL")) 이외의 올리고당류, 단당류, 아미노산류, 폴리펩티드류, 단백질류, 1가염 및 2가염, 유기산류, 핵산류 등으로 이루어진 복합 혼합물을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 용액 중 2'-FL 이외의 총 탄수화물 농도는 적어도 약 1%이다. 일부 구현예에서, 용액 중 2'-FL 이외의 총 탄수화물 농도는 적어도 약 2%이다. 예를 들어 일부 구현예에서, 용액 중 2'-FL 이외의 총 탄수화물 농도는 적어도 약 5%이다. 일부 구현예에서, 용액 중 DiFL의 농도는 적어도 약 1%이다. 일부 구현예에서, 용액 중 DiFL의 농도는 적어도 약 2%이다. 일부 구현예에서, 용액 중 DiFL의 농도는 적어도 약 5%이다. 일부 구현예에서, 용액 중 DiFL의 농도는 적어도 약 7%이다. 일부 구현예에서, 용액 중 DiFL의 농도는 약 1% 내지 약 20%이다. 일부 구현예에서, 용액 중 DiFL의 농도는 약 2% 내지 약 20%이다. 일부 구현예에서, 용액 중 DiFL의 농도는 약 2% 내지 약 18%이다. 일부 구현예에서, 용액 중 DiFL의 농도는 약 5% 내지 약 18%이다. 일부 구현예에서, 용액 중 DiFL의 농도는 약 2% 내지 약 10%이다. 일부 구현예에서, 용액 중 DiFL의 농도는 약 5% 내지 약 10%이다. 일부 구현예에서, 용액 중 DiFL의 농도는 약 10% 내지 약 18%이다. 일부 구현예에서, 용액 중 락토스의 농도는 약 0.1% 이하이다. 일부 구현예에서, 용액 중 락토스의 농도는 적어도 약 0.1%이다. 일부 구현예에서, 용액 중 락토스의 농도는 적어도 약 2%이다. 일부 구현예에서, 용액 중 락토스의 농도는 적어도 약 5%이다. 일부 구현예에서, 용액 중 락토스의 농도는 약 0.1% 내지 약 15%이다. 일부 구현예에서, 용액 중 락토스의 농도는 약 0.1% 내지 약 0.5%이다. 일부 구현예에서, 용액 중 락토스의 농도는 약 1% 내지 약 12%이다. 일부 구현예에서, 용액 중 락토스의 농도는 약 2% 내지 약 12%이다. 일부 구현예에서, 용액 중 락토스의 농도는 약 5% 내지 약 12%이다. 일부 구현예에서, 용액 중 락토스의 농도는 약 2% 내지 약 15%이다. 일부 구현예에서, 용액 중 락토스의 농도는 약 5% 내지 약 15%이다. 이들 백분율은 HPLC를 사용해 얻은 정규화 피크 면적 농도(또는 "순도")에 상응한다.
일반적으로, 용액은 결정화 전에 과포화 상태가 된다. 일부 구현예에서, 용액은 약 1.0을 초과하는 2'-FL 과포화 상태가 된다. 일부 구현예에서, 용액은 약 1.05 내지 약 1.8의 2'-FL 과포화 상태가 된다. 일부 구현예에서, 용액은 약 1.1 내지 약 1.7의 2'-FL 과포화 상태가 된다. 일부 구현예에서, 용액은 약 1.1 내지 약 1.5의 2'-FL 과포화 상태가 된다. 일부 구현예에서, 용액은 약 1.2 내지 약 1.7의 2'-FL 과포화 상태가 된다. 일부 구현예에서, 용액은 약 1.3 내지 약 1.7의 2'-FL 과포화 상태가 된다. 일부 구현예에서, 용액은 약 1.3 내지 약 1.5의 2'-FL 과포화 상태가 된다. 본 명세서에서, 달리 언급이 없으면, "과포화(supersaturation)" 와 "과포화 된(supersaturated)" 이라는 용어는 2'-FL의 용해도에 대한 측정된 2'-FL 함량의 무차원 비율(dimensionless ratio)이며, 다음의 식으로부터 산출된다.
Figure pct00001
여기서, s는 과포화이며, 2'-FL의 함량과 2'-FL 용해도의 측정 단위는 g/물 100g이다. 다른 온도에서의 2'-FL 용해도는 실시예 15에 제공되어 있다.
일부 구현예에서, 용액은 건조 고형분 함량을 적어도 약 50 (중량)%까지 증가시킴으로써 과포화 상태가 된다. 일부 이러한 구현예에서, 건조 고형분 함량을 적어도 약 55 (중량)%까지 증가시킨다. 일부 이러한 구현예에서, 건조 고형분 함량을 적어도 약 60 (중량)%까지 증가시킨다. 일부 이러한 구현예에서, 건조 고형분 함량을 적어도 약 65 (중량)%까지 증가시킨다. 일부 이러한 구현예에서, 건조 고형분 함량을 약 80 (중량)%까지 증가시킨다. 일부 이러한 구현예에서, 건조 고형분 함량을 약 78 (중량)%까지 증가시킨다. 일부 이러한 구현예에서, 건조 고형분 함량을 약 75 (중량)%까지 증가시킨다. 일부 이러한 구현예에서, 건조 고형분 함량을 약 50 (중량)% 내지 약 80 (중량)%까지 증가시킨다. 일부 구현예에서, 건조 고형분 함량을 약 55 (중량)% 내지 약 78 (중량)%까지 증가시킨다. 일부 구현예에서, 건조 고형분 함량을 약 60 (중량)% 내지 약 75 (중량)%까지 증가시킨다. 일부 구현예에서, 건조 고형분 함량을 약 65 (중량)% 내지 약 75 (중량)%까지 증가시킨다. 일부 이러한 구현예에서, 건조 고형분 함량을 약 60 (중량)%까지 증가시킨다.
일부 구현예에서, 용액을 증발시켜 2'-FL에 대해 과포화 된 상태가 되게 한다. 일부 이러한 구현예에서, 증발(또는 적어도 일부 증발)은 대기압에서 수행된다. 일부 구현예에서, 증발(또는 적어도 일부 증발)은 더 낮은 압력에서 수행된다. 일부 구현예에서, 증발(또는 적어도 일부 증발)은 약 250 mbar 이하의 압력에서 수행된다. 일부 구현예에서, 증발(또는 적어도 일부 증발)은 약 120 mbar 내지 약 250 mbar의 압력에서 수행된다. 일부 구현예에서, 증발(또는 적어도 일부 증발)은 약 130 mbar 내지 약 220 mbar의 압력에서 수행된다. 일부 구현예에서, 증발(또는 적어도 일부 증발)은 약 150 mbar 내지 약 210 mbar의 압력에서 수행된다.
일반적으로, 증발이 수행되는 온도는 예를 들어 압력에 따라 달라지게 된다. 일부 구현예에서, 증발 온도는 해당 압력에서의 용액의 비점이다. 일부 구현예에서, 증발 온도는 적어도 약 40℃이다. 일부 구현예에서, 증발 온도는 적어도 약 45℃이다. 일부 구현예에서, 증발 온도는 적어도 약 50℃이다. 일부 구현예에서, 증발 온도는 적어도 약 55℃이다. 일부 구현예에서, 증발 온도는 적어도 약 60℃이다. 일부 구현예에서, 증발 온도는 60℃보다 높다. 일부 구현예에서, 증발 온도는 약 100℃ 이하이다. 일부 구현예에서, 증발 온도는 약 90℃ 이하이다. 일부 구현예에서, 증발 온도는 약 80℃ 이하이다. 일부 구현예에서, 증발 온도는 약 75℃ 이하이다. 일부 구현예에서, 증발 온도는 약 70℃ 이하이다(약 70℃보다 높은 온도는 증발에 유리할 수 있지만, 이러한 온도의 이용은 원하지 않는 생성물 분해 및/또는 색 발현을 야기할 수 있음). 일부 구현예에서, 증발 온도는 약 45℃ 내지 약 80℃이다. 일부 구현예에서, 증발 온도는 약 50℃ 내지 약 80℃이다. 일부 구현예에서, 증발 온도는 약 55℃ 내지 약 80℃이다. 일부 구현예에서, 증발 온도는 약 60℃ 내지 약 80℃이다. 일부 구현예에서, 증발 온도는 60℃보다 높고 약 80℃ 이하이다. 일부 구현예에서, 증발 온도는 약 60℃ 내지 약 75℃이다. 일부 구현예에서, 증발 온도는 60℃보다 높고 약 75℃ 이하이다. 일부 구현예에서, 증발 온도는 약 65℃ 내지 약 75℃이다. 일부 구현예에서, 증발 온도는 약 40℃ 내지 약 70℃이다. 일부 구현예에서, 증발 온도는 약 45℃ 내지 약 70℃이다. 일부 구현예에서, 증발 온도는 약 50℃ 내지 약 70℃이다. 일부 구현예에서, 증발 온도는 약 55℃ 내지 약 70℃이다. 일부 구현예에서, 증발 온도는 약 60℃ 내지 약 70℃이다. 일부 구현예에서, 증발 온도는 60℃보다 높고 약 70℃ 이하이다.
일부 구현예에서, 과포화 용액으로부터 2'-FL 결정 형성을 개시하기 위해 시딩(seeding)이 사용된다. 일부 이러한 구현예에서, 시딩은 과포화 용액에 시드 결정을 첨가하여 이루어진다. 일부 이러한 구현예에서, 시드 결정은 미립자 2'-FL 분말을 포함한다. 일부 구현예에서, 시드 결정은 무수 2'-FL 시드 결정을 포함한다.
시드 결정은, 예컨대, 본 명세서에서 언급된 것들을 포함하는 다양한 방법에 의해 제조될 수 있다. 일부 구현예에서, 건조 시드를 분쇄하여 더 작은 입자 크기를 얻는다. 시드 결정은 또한 현탁액 형태로 사용될 수 있다.
원하는 양의 시드 결정은, 예를 들어, 시드 결정의 크기에 따라 달라질 수 있다.
일부 구현예에서, 사용되는 건조 시드 결정의 양은 2'-FL 결정화 덩어리를 기준으로 미립자 2'-FL의 약 0.001 (중량)% 내지 약 1 (중량)%인 양이다.
일부 구현예에서, 시드 결정 현탁액이 사용되고, 시드 결정 현탁액의 양은 2'-FL 결정화 덩어리를 기준으로 미립자 2'-FL의 약 1 (중량)% 내지 약 30 (중량)%인 양이다.
일부 구현예에서, 결정화는 과포화 용액에 2'-FL 시드 결정을 첨가하지 않고 개시된다. 일부 이러한 구현예에서, 예를 들어, 시딩은 자발적인 시딩 또는 초음파 시딩을 사용하여 수행된다.
일반적으로, 적정 과포화가 달성되었을 때 결정화 개시(예를 들어, 시드 결정의 첨가)가 수행된다. 일부 구현예에서, 2'-FL 과포화가 약 1.0보다 클 때 결정화 개시(예를 들어, 시드 결정의 첨가)가 수행된다. 일부 구현예에서, 2'-FL 과포화가 약 1.05 내지 약 1.8일 때 결정화 개시(예를 들어, 시드 결정의 첨가)가 수행된다. 일부 구현예에서, 2'-FL 과포화가 약 1.1 내지 약 1.7일 때 결정화 개시(예를 들어, 시드 결정의 첨가)가 수행된다. 일부 구현예에서, 2'-FL 과포화가 약 1.1 내지 약 1.5일 때 결정화 개시(예를 들어, 시드 결정의 첨가)가 수행된다. 일부 구현예에서, 2'-FL 과포화가 약 1.2 내지 약 1.7일 때 결정화 개시(예를 들어, 시드 결정의 첨가)가 수행된다. 일부 구현예에서, 2'-FL 과포화가 1.3 내지 약 1.7일 때 결정화 개시(예를 들어, 시드 결정의 첨가)가 수행된다. 일부 구현예에서, 2'-FL 과포화가 약 1.3 내지 약 1.5일 때 결정화 개시(예를 들어, 시드 결정의 첨가)가 수행된다.
일부 구현예에서, 시럽의 건조 고형분 함량이 적어도 약 60 (중량)%일 때 결정화 개시(예를 들어, 시드 결정의 첨가)가 수행된다. 일부 구현예에서, 시럽의 건조 고형분 함량이 적어도 약 65 (중량)%일 때 결정화 개시(예를 들어, 시드 결정의 첨가)가 수행된다. 일부 구현예에서, 시럽의 건조 고형분 함량이 약 80 (중량)% 이하일 때 결정화 개시(예를 들어, 시드 결정의 첨가)가 수행된다. 일부 구현예에서, 시럽의 건조 고형분 함량이 약 75 (중량)% 이하일 때 결정화 개시(예를 들어, 시드 결정의 첨가)가 수행된다. 일부 구현예에서, 시럽의 건조 고형분 함량이 약 60 (중량)% 내지 약 80 (중량)%일 때 결정화 개시(예를 들어, 시드 결정의 첨가)가 수행된다. 일부 구현예에서, 시럽의 건조 고형분 함량이 약 65 (중량)% 내지 약 80 (중량)%일 때 결정화 개시(예를 들어, 시드 결정의 첨가)가 수행된다. 일부 구현예에서, 시럽의 건조 고형분 함량이 약 65 (중량)% 내지 약 77 (중량)%일 때 결정화 개시(예를 들어, 시드 결정의 첨가)가 수행된다. 일부 구현예에서, 시럽의 건조 고형분 함량이 약 65 (중량)% 내지 약 75 (중량)%일 때 결정화 개시(예를 들어, 시드 결정의 첨가)가 수행된다. 일부 구현예에서, 시럽의 건조 고형분 함량이 약 65 (중량)% 내지 약 70 (중량)%일 때 결정화 개시(예를 들어, 시드 결정의 첨가)가 수행된다. 일부 구현예에서, 시럽의 건조 고형분 함량이 약 70 (중량)% 내지 약 76 (중량)%일 때 결정화 개시(예를 들어, 시드 결정의 첨가)가 수행된다.
일단 결정화가 개시되면, 결정화는 일반적으로 용액의 비점에서 수행될 수 있다.
일부 구현예에서, 결정화의 적어도 일부(또는 전체)는 대기압에서 수행된다.
일부 구현예에서, 결정화의 적어도 일부는 대기압보다 낮은 압력에서 수행된다. 일부 이러한 구현예에서, 결정화(또는 적어도 일부 결정화)는 약 250 mbar 이상의 압력에서 수행된다. 일부 구현예에서, 결정화(또는 적어도 일부 결정화)는 약 50 mbar 내지 약 250 mbar의 압력에서 수행된다. 일부 구현예에서, 결정화(또는 적어도 일부 결정화)는 약 50 mbar 내지 약 120 mbar의 압력에서 수행된다. 일부 구현예에서, 결정화(또는 적어도 일부 결정화)는 약 120 mbar 내지 약 250 mbar의 압력에서 수행된다. 일부 구현예에서, 결정화(또는 적어도 일부 결정화)는 약 130 mbar 내지 약 220 mbar의 압력에서 수행된다. 일부 구현예에서, 결정화(또는 적어도 일부 결정화)는 약 150 mbar 내지 약 210 mbar의 압력에서 수행된다. 일부 구현예에서, 결정화(또는 적어도 일부 결정화)는 약 170 mbar 내지 약 205 mbar의 압력에서 수행된다.
일부 구현예에서, 결정화의 적어도 약 50%가 전술한 대기압보다 낮은 범위에서 수행된다. 일부 구현예에서, 결정화의 적어도 약 75%가 전술한 대기압보다 낮은 범위에서 수행된다. 일부 구현예에서, 결정화의 적어도 약 90%가 전술한 대기압보다 낮은 범위에서 수행된다. 일부 구현예에서, 결정화의 적어도 약 95%가 전술한 대기압보다 낮은 범위에서 수행된다. 일부 구현예에서, 결정화의 적어도 약 98%가 전술한 대기압보다 낮은 범위에서 수행된다. 일부 구현예에서, 결정화의 적어도 약 99%가 전술한 대기압보다 낮은 범위에서 수행된다. 일부 구현예에서, 전체 결정화가 전술한 대기압보다 낮은 범위에서 수행된다.
일부 구현예에서, 결정화의 적어도 일부가 해당 압력에서의 용액의 비점에서 수행된다. 일부 구현예에서, 결정화 동안의 온도는 약 20℃ 아래로 내려가지 않는다. 일부 구현예에서, 결정화의 적어도 일부가 적어도 약 40℃의 온도에서 수행된다. 일부 구현예에서, 결정화의 적어도 일부가 적어도 약 45℃의 온도에서 수행된다. 일부 구현예에서, 결정화의 적어도 일부가 적어도 약 50℃의 온도에서 수행된다. 일부 구현예에서, 결정화의 적어도 일부가 적어도 약 55℃의 온도에서 수행된다. 일부 구현예에서, 결정화의 적어도 일부가 적어도 약 60℃의 온도에서 수행된다. 일부 구현예에서, 결정화의 적어도 일부가 60℃보다 높은 온도에서 수행된다. 일부 구현예에서, 결정화의 적어도 일부가 약 100℃ 이하의 온도에서 수행된다. 일부 구현예에서, 결정화의 적어도 일부가 약 90℃ 이하의 온도에서 수행된다. 일부 구현예에서, 결정화의 적어도 일부가 약 80℃ 이하의 온도에서 수행된다. 일부 구현예에서, 결정화의 적어도 일부가 약 75℃ 이하의 온도에서 수행된다. 일부 구현예에서, 결정화의 적어도 일부가 약 70℃ 이하의 온도에서 수행된다(약 70℃보다 높은 온도는 결정화에 유리할 수 있지만, 이러한 온도의 이용은 원하지 않는 생성물 분해 및/또는 색 발현을 야기할 수 있음). 일부 구현예에서, 결정화의 적어도 일부가 약 45℃ 내지 약 80℃의 온도에서 수행된다. 일부 구현예에서, 결정화의 적어도 일부가 약 50℃ 내지 약 80℃의 온도에서 수행된다. 일부 구현예에서, 결정화의 적어도 일부가 약 55℃ 내지 약 80℃의 온도에서 수행된다. 일부 구현예에서, 결정화의 적어도 일부가 약 60℃ 내지 약 80℃의 온도에서 수행된다. 일부 구현예에서, 결정화의 적어도 일부가 60℃보다 높고 약 80℃ 이하인 온도에서 수행된다. 일부 구현예에서, 결정화의 적어도 일부가 약 60℃ 내지 약 75℃의 온도에서 수행된다. 일부 구현예에서, 결정화의 적어도 일부가 60℃보다 높고 약 75℃ 이하인 온도에서 수행된다. 일부 구현예에서, 결정화의 적어도 일부가 약 65℃ 내지 약 75℃의 온도에서 수행된다. 일부 구현예에서, 결정화의 적어도 일부가 약 40℃ 내지 약 70℃의 온도에서 수행된다. 일부 구현예에서, 결정화의 적어도 일부가 약 45℃ 내지 약 70℃의 온도에서 수행된다. 일부 구현예에서, 결정화의 적어도 일부가 약 50℃ 내지 약 70℃의 온도에서 수행된다. 일부 구현예에서, 결정화의 적어도 일부가 약 55℃ 내지 약 70℃의 온도에서 수행된다. 일부 구현예에서, 결정화의 적어도 일부가 약 60℃ 내지 약 70℃의 온도에서 수행된다. 일부 구현예에서, 결정화의 적어도 일부가 60℃보다 높고 약 70℃ 이하인 온도에서 수행된다.
일부 구현예에서, 결정화의 적어도 약 50%가 전술한 온도 범위에서 수행된다. 일부 구현예에서, 결정화의 적어도 약 75%가 전술한 온도 범위에서 수행된다. 일부 구현예에서, 결정화의 적어도 약 90%가 전술한 온도 범위에서 수행된다. 일부 구현예에서, 결정화의 적어도 약 95%가 전술한 온도 범위에서 수행된다. 일부 구현예에서, 결정화의 적어도 약 98%가 전술한 온도 범위에서 수행된다. 일부 구현예에서, 결정화의 적어도 약 99%가 전술한 온도 범위에서 수행된다. 일부 구현예에서, 전체 결정화가 전술한 온도 범위에서 수행된다.
일부 구현예에서, 결정화의 pH는 약 4 내지 약 11이다. 일부 구현예에서, 결정화의 적어도 일부가 진행되는 동안 pH는 약 4 내지 약 8이다. 일부 구현예에서, 결정화의 적어도 일부가 진행되는 동안 pH는 약 5 내지 약 7이다. 일부 구현예에서, 결정화의 적어도 일부가 진행되는 동안 pH는 약 5 내지 약 6이다. 일부 구현예에서, 전체 결정화가 진행되는 동안 pH는 약 7 이하이다. 일부 구현예에서, 전체 결정화가 진행되는 동안 pH는 약 5 내지 약 7이다. 일부 구현예에서, 전체 결정화가 진행되는 동안 pH는 약 5 내지 약 6이다.
결정화가 진행되는 동안, 결정 덩어리는 일반적으로 기계적으로 혼합된다. 일부 구현예에서, 혼합하는 단계는 결정화 덩어리의 전체 부피에 걸쳐 균질성을 최대화하도록 최적으로 배치된다. 이는 일반적으로 전체 결정화 부피에 걸쳐 열과 물질의 바람직한 전달 및 과포화 변동폭의 감소를 가능하게 한다. 일부 구현예에서, 이는 전통적인 회전형 혼합기 블레이드를 사용하여 달성된다. 일반적으로, 혼합의 강도는 과도한 미립자 형성을 방지하도록 조절된다.
결정화가 진행되는 동안, 일반적으로 결정 현탁액은 충분한 정도의 결정화 (수율, 모액의 2'-FL 순도 감소 및/또는 결정 크기)가 이루어질 때까지 비등(boiling)과 증발을 거친다. 일부 구현예에서, 증발에 의한 결정화는 약 1시간 내지 약 50시간 동안 지속된다. 일부 구현예에서, 증발에 의한 결정화는 약 2시간 내지 약 40시간 동안 지속된다. 일부 구현예에서, 증발에 의한 결정화는 약 2시간 내지 약 30시간 동안 지속된다. 일부 구현예에서, 증발에 의한 결정화는 약 2시간 내지 약 20시간 동안 지속된다. 일부 구현예에서, 증발에 의한 결정화는 약 2시간 내지 약 15시간 동안 지속된다. 일부 구현예에서, 증발에 의한 결정화는 약 2시간 내지 약 5시간 동안 지속된다.
일반적으로 약 1% 내지 약 80%의 2'-FL 결정 수율을(이 수율은 비등 직후 2'-FL의 결정 수율임) 달성하는 것이 바람직하다. 일부 구현예에서, 목표 수율은 효과적인 결정 분리, 세척, 및 건조를 감안한 최대 결정화 수율이다. 보다 구체적으로, 낮은 결정 수율은 제조 능력 및 효율에서 손실을 유발하기 때문에 일반적으로 바람직하지 않다. 그러나, 결정 수율의 증가는 생성물 현탁액의 점도를 증가시킨다. 높은 점도는 결과적으로 결정 분리에 어려움을 야기할 수 있다(일부 경우에는, 결정 분리를 방지하기도 함). 따라서 일부 구현예에서, 목표 수율은 비용 효율적인 분리를 감안한 점도에 상응하는 최대 수율이다.
일부 구현예에서, 2'-FL에 대해 약 1% 내지 약 80%의 결정 수율을 가지는 결정화 덩어리가 수득된다. 일부 구현예에서, 2'-FL에 대해 약 30% 내지 약 80%의 결정 수율을 가지는 결정화 덩어리가 수득된다. 일부 구현예에서, 2'-FL에 대해 약 50% 내지 약 80%의 결정 수율을 가지는 결정화 덩어리가 수득된다. 일부 구현예에서, 2'-FL에 대해 약 55% 내지 약 75%의 결정 수율을 가지는 결정화 덩어리가 수득된다. 일부 구현예에서, 2'-FL에 대해 약 60% 내지 약 75%의 결정 수율을 가지는 결정화 덩어리가 수득된다. 상기 결정 수율은 비등 직후의 수율을 나타낸다.
일부 구현예에서, 주 결정 집단의 결정 크기는(결정의 가장 큰 치수) 적어도 약 1 μm이다. 일부 구현예에서, 주 결정 집단의 결정 크기는 적어도 약 5 μm이다. 일부 구현예에서, 주 결정 집단의 결정 크기는 적어도 약 10 μm이다. 일부 구현예에서, 주 결정 집단의 결정 크기는 적어도 약 20 μm이다. 일부 구현예에서, 주 결정 집단의 결정 크기는 적어도 약 30 μm이다. 일부 구현예에서, 주 결정 집단의 결정 크기는 약 10000 μm 이하이다. 일부 구현예에서, 주 결정 집단의 결정 크기는 약 5000 μm 이하이다. 일부 구현예에서, 주 결정 집단의 결정 크기는 약 1000 μm 이하이다. 일부 구현예에서, 주 결정 집단의 결정 크기는 약 500 μm 이하이다. 일부 구현예에서, 주 결정 집단의 결정 크기는 약 300 μm 이하이다. 일부 구현예에서, 주 결정 집단의 결정 크기는 약 200 μm 이하이다. 일부 구현예에서, 주 결정 집단의 결정 크기는 약 1 μm 내지 약 10000 μm의 범위이다. 일부 구현예에서, 주 결정 집단의 결정 크기는 약 10 μm 내지 약 500 μm의 범위이다. 일부 구현예에서, 주 결정 집단의 결정 크기는 약 30 μm 내지 약 200 μm의 범위이다. 일부 구현예에서, 주 결정 집단의 결정 크기는 약 30 μm 내지 약 100 μm의 범위이다. 일부 구현예에서, 주 결정 집단의 결정 크기는 약 100 μm 내지 약 200 μm의 범위이다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "주 결정 집단(main crystal population)" 은 결정화 덩어리의 현미경 이미지를 육안으로 보고 판단한 것이다. 비정상적으로 작거나 비정상적으로 큰 이상치 결정은 무시한다.
일부 구현예에서, 증발에 의한 결정화와 동시에 추가 원료 액체가 2'-FL 용액에 첨가되어 결정기 내 2'-FL 용액 수준을 증가시키고/증가시키거나 2'-FL 용액의 건조 물질 함량을 증가시킨다. 일부 구현예에서, 추가 원료 액체는 연속적으로 첨가된다. 일부 구현예에서, 추가 원료 액체는 회분식으로 첨가된다.
일부 구현예에서, 2'-FL 함유 용액은 결정화와 동시에 냉각된다. 일부 구현예에서, 결정화는 조합된 비등 및 냉각 단계를 포함한다. 이러한 단계에서, 온도는 예를 들어 시딩점 온도보다 약 10℃ 내지 약 20℃ 낮은 온도까지 감소될 수 있다. 일부 이러한 구현예에서, 냉각 속도는 약 1℃/시간 내지 약 5℃/시간이다.
일부 구현예에서, 증발에 의한 결정화가 종료되면, 결정 덩어리는 덩어리가 냉각되기 전에 혼합된다. 일부 이러한 구현예에서, 혼합은 예를 들어 대기압에서, 약 40℃ 내지 약 75℃의 온도에서 수행된다. 일부 이러한 구현예에서, 혼합은 예를 들어 대기압에서, 약 40℃ 내지 약 70℃의 온도에서 수행된다. 일부 구현예에서, 혼합은 예를 들어 대기압에서, 약 45℃ 내지 약 70℃의 온도에서 수행된다. 일부 구현예에서, 혼합은 예를 들어 대기압에서, 약 50℃ 내지 약 70℃의 온도에서 수행된다. 일부 구현예에서, 혼합은 예를 들어 대기압에서, 약 55℃ 내지 약 70℃의 온도에서 수행된다. 일부 구현예에서, 혼합은 예를 들어 대기압에서, 약 60℃ 내지 약 70℃의 온도에서 수행된다. 일부 구현예에서, 혼합은 예를 들어 대기압에서, 60℃보다 높고 70℃ 이하의 온도에서 수행된다. 일부 구현예에서, 혼합은 약 0.5시간 내지 약 30시간 동안 지속된다.
일부 구현예에서, 증발에 의한 결정화가 종료되면, 결정화 덩어리의 온도는 실온까지 내려간다. 일부 구현예에서, 증발에 의한 결정화가 종료되면, 결정화 덩어리의 온도는 약 20℃까지 내려간다. 일부 구현예에서, 2'-FL 함량이 낮을 때 더 긴 냉각 기간을 사용한다.
일부 구현예에서, 냉각은 최대 약 3일의 기간에 걸쳐 수행된다. 일부 구현예에서, 냉각은 약 1일 내지 약 3일의 기간에 걸쳐 수행된다. 일부 구현예에서, 냉각은 약 1시간 내지 약 30시간의 기간에 걸쳐 수행된다.
일부 구현예에서, 냉각 속도는 약 1℃/시간 내지 약 5℃/시간이다.
일부 구현예에서, 증발에 의한 결정화가 진행되는 동안 결정화 덩어리의 겉보기 점도는 약 3 Pa-s 내지 약 200 Pa-s이다. 일부 구현예에서, 증발에 의한 결정화가 진행되는 동안 결정화 덩어리의 겉보기 점도는 약 5 Pa-s 내지 약 200 Pa-s이다. 일부 구현예에서, 증발에 의한 결정화가 진행되는 동안 결정화 덩어리의 겉보기 점도는 약 5 Pa-s 내지 약 100 Pa-s이다. 일부 구현예에서, 증발에 의한 결정화가 진행되는 동안 결정화 덩어리의 겉보기 점도는 약 50 Pa-s 내지 약 100 Pa-s이다. 일부 구현예에서, 증발에 의한 결정화가 진행되는 동안 결정화 덩어리의 겉보기 점도는 약 5 Pa-s 내지 약 50 Pa-s이다. 일부 구현예에서, 증발에 의한 결정화가 진행되는 동안 결정화 덩어리의 겉보기 점도는 약 5 Pa-s 내지 약 30 Pa-s이다. 이러한 범위 내의 점도는 결정화된 물질의 효과적인 분리에 일반적으로 적합하다. 결정화 덩어리의 점도가 지나치게 높아져서 효과적인 분리를 할 수 없는 경우, 예를 들어, 결정화 덩어리의 과포화를 감소시킴으로써 결정화 덩어리의 점도를 감소시킬 수 있다. 결정화 덩어리의 과포화는, 예를 들어, 결정화 덩어리의 온도를 높이고/높이거나 물 또는 2'-FL 함유 용액으로 결정화 덩어리를 희석함으로써 감소될 수 있다.
결정은, 예를 들어, 원심 분리, 여과, 경사 분리 등에 의해 분리될 수 있다. 일부 구현예에서, 결정의 분리는 원심 분리를 포함한다.
분리 후에, 결정을 예를 들어 뜨거운 공기와 접촉시켜 일반적으로 건조시킨다. 일부 구현예에서, 결정을 분리 후에 세척한다. 일부 구현예에서, 결정을 물로 세척하고 나서, 예를 들어 뜨거운 공기와 접촉시켜 건조시킨다. 일부 구현예에서, 얻어진 결정 분획의 수분 함량은 약 1 (중량)% 미만이다. 일부 구현예에서, 얻어진 결정 분획의 수분 함량은 약 0.5 (중량)% 미만이다. 수분 함량은 건조시 중량 손실 또는 Karl Fisher 적정에 의해 측정될 수 있다.
일부 구현예에서, 결정질 생성물에 대한 고액분리("SLS")를 수행하여 미량의 단백질 및 DNA, 아미노산류, 탄소화물 불순물, 미량 원소와 같은 미세 불순물을 제거한다.
일부 구현예에서, 이러한 방법으로 얻어진 결정 분획의 2'-FL 함량은 적어도 약 85%이다. 일부 구현예에서, 얻어진 결정 분획의 2'-FL 함량은 적어도 약 90%이다. 일부 구현예에서, 얻어진 결정 분획의 2'-FL 함량은 적어도 약 91%이다. 일부 구현예에서, 얻어진 결정 분획의 2'-FL 함량은 적어도 약 92%이다. 일부 구현예에서, 얻어진 결정 분획의 2'-FL 함량은 적어도 약 93%이다. 일부 구현예에서, 얻어진 결정 분획의 2'-FL 함량은 적어도 약 94%이다. 일부 구현예에서, 얻어진 결정 분획의 2'-FL 함량은 적어도 약 95%이다. 일부 구현예에서, 얻어진 결정 분획의 2'-FL 함량은 적어도 약 96%이다. 일부 구현예에서, 얻어진 결정 분획의 2'-FL 함량은 적어도 약 97%이다. 일부 구현예에서, 얻어진 결정 분획의 2'-FL 함량은 적어도 약 98%이다. 일부 구현예에서, 얻어진 결정 분획의 2'-FL 함량은 적어도 약 99%이다. 일부 구현예에서, 얻어진 결정 분획의 2'-FL 함량은 적어도 약 99.5%이다. 일부 구현예에서, 얻어진 결정 분획의 2'-FL 함량은 적어도 약 99.9%이다. 이들 백분율은 HPLC를 이용하여 얻은 정규화 피크 면적 농도 또는 순도에 상응한다.
일부 구현예에서, 이러한 방법으로 얻어진 결정의 융점은 약 230℃ 내지 약 239℃이다. 일부 구현예에서, 이러한 방법으로 얻어진 결정의 융점은 약 230℃ 내지 약 232℃이다. 일부 구현예에서, 이러한 방법으로 얻어진 결정의 융점은 약 230℃ 내지 약 231℃이다. 일부 구현예에서, 이러한 방법으로 얻어진 결정의 융점은 약 232℃ 내지 약 239℃이다. 일부 구현예에서, 이러한 방법으로 얻어진 결정의 융점은 약 232℃ 내지 약 238℃이다. 일부 구현예에서, 이러한 방법으로 얻어진 결정의 융점은 약 233℃ 내지 약 238℃이다. 일부 구현예에서, 이러한 방법으로 얻어진 결정의 융점은 약 234℃ 내지 약 237℃이다. 일부 구현예에서, 이러한 방법으로 얻어진 결정의 융점은 236℃ 미만이다. 일부 구현예에서, 이러한 방법으로 얻어진 결정의 융점은 적어도 약 233℃이고 236℃ 미만이다. 일부 구현예에서, 이러한 방법으로 얻어진 결정의 융점은 적어도 약 234℃이고 236℃ 미만이다. 일부 구현예에서, 이러한 방법으로 얻어진 결정의 융점은 약 233℃ 내지 235℃이다. 상기 융점은 유럽 약전 모세관 융점 측정법을 이용하여 1℃/분의 가열 속도로 측정된 융점에 상응한다.
일부 구현예에서, 얻어진 결정은 국제 특허 출원 공개 제WO2011/150939호에 인용된 결정질 형태에 대해 WO2011/150939에서 논의된 X-선 분말 회절 스펙트럼(X-ray powder diffraction spectra)을 "결정질 2'-O-푸코실락토스 다형체 II"로서 나타낸다.
일부 구현예에서, 얻어진 결정은 CuKa 방사선을 이용하여 측정한 것에 기초하여, 16.98±0.20, 13.65±0.20 및 18.32±0.20의 2Θ 각도에서 X-선 분말 회절 반사(X-ray powder diffraction reflection)를 나타낸다. 일부 구현예에서, 얻어진 결정은 CuKa 방사선을 이용하여 측정한 것에 기초하여, 16.98±0.20, 13.65±0.20, 18.32±0.20 및 21.70±0.20의 2Θ 각도에서 X-선 분말 회절 반사를 나타낸다. 일부 구현예에서, 얻어진 결정은 CuKa 방사선을 이용하여 측정한 것에 기초하여, 16.98±0.20, 13.65±0.20, 18.32±0.20, 21.70±0.20 및 15.22±0.20의 2Θ 각도에서 X-선 분말 회절 반사를 나타낸다. 일부 구현예에서, 얻어진 결정은 CuKa 방사선을 이용하여 측정한 것에 기초하여, 16.98±0.20, 13.65±0.20, 18.32±0.20, 21.70±0.20, 15.22±0.20 및 20.63±0.20의 2Θ 각도에서 X-선 분말 회절 반사를 나타낸다. 일부 구현예에서, 얻어진 결정은 CuKa 방사선을 이용하여 측정한 것에 기초하여, 16.98±0.20, 13.65±0.20, 18.32±0.20, 21.70±0.20, 15.22±0.20, 20.63±0.20 및 11.94±0.20의 2Θ 각도에서 X-선 분말 회절 반사를 나타낸다.
일부 구현예에서, 재결정화는 2'-FL 순도를 높이기 위해 1회 이상 수행된다. 재결정화는 예를 들어, 물(보통 초순수)에 2'-FL 결정을 용해시키고, 생성된 용액을 2'-FL에 대해 (예를 들어, 증발에 의해서) 과포화 상태로 만들고, 전술한 증발에 의한 결정화(crystallization-by-evaporation) 방법론을 이용하여 결정화 시켜 수행될 수 있다.
일부 구현예에서, 수율은 초기 결정화에 의해 생성된 모액을 결정화 시킴으로써 증가된다. 이러한 결정화는 예를 들어, 모액을 2'-FL에 대해 (예를 들어, 증발에 의해서) 과포화 상태로 만들고, 앞서 설명된 증발에 의한 결정화 방법론을 이용하여 결정화 시켜서 수행될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 설명된 방법의 2'-FL 결정질 생성물은 식품(예를 들어, 인간 또는 애완동물 식품), 건강 보조 식품 또는 의약품에 포함된다. 일부 구현예에서, 결정질 생성물은 인간 이유식(예를 들어 영아용 조제 분유)에 포함된다. 일부 이러한 구현예에서, 2'-FL은 다른 식품, 건강 보조 식품 또는 의약품의 성분과 혼합된다. 영아용 조제 분유에 포함될 때, 예를 들어, 2'-FL은 예컨대 무지방 우유, 탄수화물 공급원(예를 들어, 락토스), 단백질 공급원(예를 들어, 농축 유청 단백질), 지방 공급원(예를 들어, 고올레산 홍화유), 비타민, 미네랄 등과 같은 다른 영아용 조제 분유 성분들과 혼합될 수 있다. 일부 구현예에서, 영아용 조제 분유 내의 2'-FL 농도는 일반적으로 인간 모유에 존재하는 2'-FL 농도와 거의 같은 농도이다.
일반적으로, 이러한 방법은 무수 결정질 생성물을 제조하는데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, Karl Fischer 적정에 의해 측정했을 때, 건조 2'-FL 결정 생성물의 수분 함량은 1.0 (중량)% 미만이다. 일부 이러한 구현예에서, 건조 2'-FL 결정 생성물의 수분 함량은 0.9 (중량)% 미만이다. 일부 구현예에서, 건조 2'-FL 결정 생성물의 수분 함량은 0.8 (중량)% 미만이다. 일부 구현예에서, 건조 2'-FL 결정 생성물의 수분 함량은 0.7 (중량)% 미만이다. 일부 구현예에서, 건조 2'-FL 결정 생성물의 수분 함량은 0.6 (중량)% 미만이다. 일부 구현예에서, 건조 2'-FL 결정 생성물의 수분 함량은 0.5 (중량)% 미만이다. 일부 구현예에서, 건조 2'-FL 결정 생성물의 수분 함량은 0.4 (중량)% 미만이다. 일부 구현예에서, 건조 2'-FL 결정 생성물의 수분 함량은 0.3 (중량)% 미만이다. 일부 구현예에서, 건조 2'-FL 결정 생성물의 수분 함량은 0.2 (중량)% 미만이다. 일부 구현예에서, 건조 2'-FL 결정 생성물의 수분 함량은 0.1 (중량)% 미만이다. 일부 구현예에서, Karl Fischer 적정에 의해 측정했을 때, 건조 2'-FL 결정 생성물에서는 수분이 검출되지 않는다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 설명된 방법의 2'-FL 결정질 생성물은 의도된 용도를 위해 다른 물리적 형태로 전환된다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 결정질 생성물은 물 또는 다른 용매에 용해되거나 현탁되어 용액이나 현탁액을 형성하는데, 이는 결과적으로 식품(예를 들어 영아용 조제 분유), 건강 보조 식품 또는 의약품에 포함(되거나 이의 제조에 달리 사용)된다. 다른 구현예에서, 결정질 생성물은 물 또는 다른 용매에 용해되어 용액을 형성하고, 이는 차후에 분무 건조되어 비정질 2'-FL 조성물을 형성하며, 이는 결과적으로 식품(예를 들어 영아용 조제 분유), 건강 보조 식품 또는 의약품에 포함(되거나 이의 제조에 달리 사용)된다.
일부 구현예에서, 2'-FL 생성물이 식품, 건강 보조 식품 또는 의약품에 포함될 때, 2'-FL의 양은 프리바이오틱, 항균, 항바이러스, 면역 체계 증진 및/또는 두뇌 개발 증진 효과와 같은 이점을 효과적으로 전달할 수 있는 양이다.
본 명세서에서 설명된 결정화를 위해 유기 용매가 용액 내에 존재할 필요는 없다.
일부 구현예에서, 알코올(예를 들어, 메탄올, 에탄올 등)은 2'-FL이 결정화되는 용액에 첨가되지 않는다. 일부 구현예에서, 용액이 2'-FL에 대해 과포화 되는 동안 알코올은 첨가되지 않는다. 일부 구현예에서, 용액을 2'-FL에 대해 과포화로 만들기 위해 증발시키는 동안 알코올은 첨가되지 않는다. 일부 구현예에서, 2'-FL 결정화가 일어나는 동안 알코올은 첨가되지 않는다. 일부 구현예에서, 용액이 2'-FL에 대해 과포화 되는 동안 용액에 존재하는 임의의 알코올 전체 농도는 약 1 (중량)% 이하이다. 일부 구현예에서, 용액을 2'-FL에 대해 과포화로 만들기 위해 증발시키는 동안 용액에 존재하는 임의의 알코올 전체 농도는 1 (중량)% 이하이다. 일부 구현예에서, 2'-FL 결정화가 일어나는 동안 용액에 존재하는 임의의 알코올 전체 농도는 약 1 (중량)% 이하이다. 일부 구현예에서, 용액이 2'-FL에 대해 과포화 되는 동안 용액에 존재하는 임의의 알코올 전체 농도는 약 0.1 (중량)% 이하이다. 일부 구현예에서, 용액을 2'-FL에 대해 과포화로 만들기 위해 증발시키는 동안 용액에 존재하는 임의의 알코올 전체 농도는 0.1 (중량)% 이하이다. 일부 구현예에서, 2'-FL 결정화가 일어나는 동안 용액에 존재하는 임의의 알코올 전체 농도는 약 0.1 (중량)% 이하이다. 일부 구현예에서, 용액이 2'-FL에 대해 과포화 되는 동안 용액은 본질적으로 알코올로 구성되지 않는다. 일부 구현예에서, 용액을 2'-FL에 대해 과포화로 만들기 위해 증발시키는 동안 용액은 본질적으로 알코올로 구성되지 않는다. 일부 구현예에서, 2'-FL 결정화가 일어나는 동안 용액은 본질적으로 알코올로 구성되지 않는다. 여기서, "본질적으로 알코올로 구성되지 않는다" 라는 구문은 용액 내에 (알코올이 존재하는 경우) 존재하는 알코올의 양이 결정화에 중대한 영향을 미치기에 충분하지 않음을 의미한다.
일부 구현예에서, 2'-FL이 결정화되는 용액에 유기산 용매(예를 들어, 아세트산)는 첨가되지 않는다. 일부 구현예에서, 용액이 2'-FL에 대해 과포화 되는 동안 유기산 용매는 첨가되지 않는다. 일부 구현예에서, 용액을 2'-FL에 대해 과포화로 만들기 위해 증발시키는 동안 유기산 용매는 첨가되지 않는다. 일부 구현예에서, 2'-FL 결정화가 일어나는 동안 유기산 용매는 첨가되지 않는다. 일부 구현예에서, 용액이 2'-FL에 대해 과포화 되는 동안 용액에 존재하는 임의의 유기산 용매 전체 농도는 약 1 (중량)% 이하이다. 일부 구현예에서, 용액을 2'-FL에 대해 과포화로 만들기 위해 증발시키는 동안 용액에 존재하는 임의의 유기산 용매 전체 농도는 1 (중량)% 이하이다. 일부 구현예에서, 2'-FL 결정화가 일어나는 동안 용액에 존재하는 임의의 유기산 용매 전체 농도는 약 1 (중량)% 이하이다. 일부 구현예에서, 용액이 2'-FL에 대해 과포화 되는 동안 용액에 존재하는 임의의 유기산 용매 전체 농도는 약 0.1 (중량)% 이하이다. 일부 구현예에서, 용액을 2'-FL에 대해 과포화로 만들기 위해 증발시키는 동안 용액에 존재하는 임의의 유기산 용매 전체 농도는 0.1 (중량)% 이하이다. 일부 구현예에서, 2'-FL 결정화가 일어나는 동안 용액에 존재하는 임의의 유기산 용매 전체 농도는 약 0.1 (중량)% 이하이다. 일부 구현예에서, 용액이 2'-FL에 대해 과포화 되는 동안 용액은 본질적으로 유기산 용매로 구성되지 않는다. 일부 구현예에서, 용액을 2'-FL에 대해 과포화로 만들기 위해 증발시키는 동안 용액은 본질적으로 유기산 용매로 구성되지 않는다 일부 구현예에서, 2'-FL 결정화가 일어나는 동안 용액은 본질적으로 유기산 용매로 구성되지 않는다 여기서, "본질적으로 유기산 용매로 구성되지 않는다" 라는 구문은 용액 내에 (유기산 용매가 존재하는 경우) 존재하는 유기산 용매의 양이 결정화에 중대한 영향을 미치기에 충분하지 않음을 의미한다.
일부 구현예에서, 유기 용매는 2'-FL이 결정화 되는 용액에 첨가되지 않는다. 일부 구현예에서, 용액이 2'-FL에 대해 과포화 되는 동안 유기 용매는 첨가되지 않는다. 일부 구현예에서, 용액을 2'-FL에 대해 과포화로 만들기 위해 증발시키는 동안 유기 용매는 첨가되지 않는다. 일부 구현예에서, 2'-FL 결정화가 일어나는 동안 유기 용매는 첨가되지 않는다. 일부 구현예에서, 용액이 2'-FL에 대해 과포화 되는 동안 용액에 존재하는 임의의 유기 용매 전체 농도는 약 1 (중량)% 이하이다. 일부 구현예에서, 용액을 2'-FL에 대해 과포화로 만들기 위해 증발시키는 동안 용액에 존재하는 임의의 유기 용매 전체 농도는 1 (중량)% 이하이다. 일부 구현예에서, 2'-FL 결정화가 일어나는 동안 용액에 존재하는 임의의 유기 용매 전체 농도는 약 1 (중량)% 이하이다. 일부 구현예에서, 용액이 2'-FL에 대해 과포화 되는 동안 용액에 존재하는 임의의 유기 용매 전체 농도는 약 0.1 (중량)% 이하이다. 일부 구현예에서, 용액을 2'-FL에 대해 과포화로 만들기 위해 증발시키는 동안 용액에 존재하는 임의의 유기 용매 전체 농도는 0.1 (중량)% 이하이다. 일부 구현예에서, 2'-FL 결정화가 일어나는 동안 용액에 존재하는 임의의 유기 용매 전체 농도는 약 0.1 (중량)% 이하이다. 일부 구현예에서, 용액이 2'-FL에 대해 과포화 되는 동안 용액은 본질적으로 유기 용매로 구성되지 않는다. 일부 구현예에서, 용액을 2'-FL에 대해 과포화로 만들기 위해 증발시키는 동안 용액은 본질적으로 유기 용매로 구성되지 않는다. 일부 구현예에서, 2'-FL 결정화가 일어나는 동안 용액은 본질적으로 유기 용매로 구성되지 않는다. 여기서, "본질적으로 유기 용매로 구성되지 않는다" 라는 구문은 용액 내에 (유기 용매가 존재하는 경우) 존재하는 유기 용매의 양이 결정화에 중대한 영향을 미치기에 충분하지 않음을 의미한다.
실시예
다음의 실시예들은 단지 예시적인 것이며, 임의의 방식으로 본 명세서의 나머지 부분에 한정되는 것은 아니다.
하기의 실시예에서, 다음의 정의가 사용된다:
"[1]"로 확인되는 값은 HPLC(미국 매사추세츠주 월섬 소재 Thermo Fisher Scientific사의 CarboPac PA100)을 이용하여 얻은 정규화 피크 면적 순도 또는 농도를 나타낸다. 이는 피크의 전체 면적에 대한 피크 면적의 백분율이다.
"[2]"로 확인되는 값은 순도 값에서 계산된 2'-FL 수율을 나타낸다.
"[3]"으로 확인되는 값은 Karl Fischer 적정에 의해 측정된 건조 고형분 함량("DS")을 나타낸다.
"[4]"로 확인되는 값은 Karl Fischer 적정을 이용하여 측정된 초기 건조 고형분 함량 및 증발되거나 첨가된 물의 양에 기초한 물질 수지로부터 계산된 건조 고형분 함량을 나타낸다.
"[5]"로 확인되는 값은 건조시 중량 손실에 의해 측정된 수분 함량을 나타낸다.
"[6]"으로 확인되는 값은 현미경 이미지에서 측정한 결정 크기 측정치를(예를 들어, 결정의 가장 큰 치수 측정치) 나타낸다. 비정상적으로 작거나 비정상적으로 큰 이상치 결정은 무시한다.
"[7]"로 확인되는 값은 동일한 설탕 분석 방법을 위한 국제 위원회(International Commission for Uniform Process of Sugar Analysis, "ICUMSA")의 설탕 색상 등급 제도에 따른 설탕 색상을 나타낸다.
"[8]"로 확인되는 값은 2'-FL에 대한 과포화 비율을 나타내며, 이는 용액 중 2'-FL 농도(g/물 100 g)와 동일 온도에서의 2'-FL의 수용해도(g/물 100 g) 사이의 비율로서 정의된다.
"[9]"로 확인되는 값은 유럽 약전 모세관 융점 측정법을 이용하여 1℃/분의 가열 속도로 측정된 융점이다.
"[10]"으로 확인되는 값은 HPLC(미국 매사추세츠주 밀퍼드 소재 Waters사의 X-Bridge Amide HILIC column)을 이용하여 얻은 정규화 피크 면적 순도 또는 농도를 나타낸다. 이것은 전체 피크 면적에 대한 피크 면적의 백분율이다.
약어 "HPLC"는 고성능 액체 크로마토그래피를 나타낸다.
약어 "DiFL"은 디푸코실락토스를 나타낸다.
실시예 1: 2'-FL 시드 결정 제조의 예시
90.4%[1]의 2'-FL 농도, 8.9%[1]의 DiFL 농도, 및 0.2%[1]의 락토스 농도를 가진 수성 원료 용액을 증발시켜 84.4%[3]의 DS를 얻었다(Rotavapor R-151 증발기). 그런 다음, 앵커 교반기를 사용해 손으로 용액을 혼합하여 에탄올(279 g)을 시럽(415 g)에 첨가하였다. 얻어진 용액을 60℃에서 2.3시간 동안 회전하는 Rotavapor 병에 방치하였다. 이 시간 동안, 물(10 g)을 2번(총 20 g) 첨가하여 용액을 희석시켰다. 첫 번째 물 첨가는 에탄올 첨가 후 1.0시간 후에 이루어졌고, 두 번째 물 첨가는 에탄올 첨가 후 1.6시간 후에 이루어졌다.
얻어진 시럽의 일부(306 g)를 유리 반응기로 옮겼다. 에탄올(71 g)을 60℃에서 첨가하였다. 결정이 형성되기 시작하였다. 결정화 용액을 60℃에서 1.2시간 동안 교반하고, 계속 교반하면서 1시간 이내에 55℃까지 냉각시키고, 15시간 이내에 15℃까지 추가로 냉각시켰다. 냉각 후에, 얻어진 결정 덩어리를 15℃에서 3.9시간 동안 지속적으로 교반하였다.
결정 덩어리를 용기(basket) 직경이 22.5 cm인 회분식 원심 분리기에서 원심 분리하였다. 이 원심 분리를 위해, 500 rpm 회전 속도의 가속 단계에서 343 g의 결정 덩어리를 원심 분리기 상에 첨가하였다. 2000 rpm 회전 속도에서 세척수(75 mL)를 첨가한 다음, 3500 rpm의 회전 속도로 5분 동안 연속하여 원심 분리하였다. 얻어진 원심 분리된 결정(85 g)은 50℃의 가열 챔버에서 3.4시간 동안 건조시켰다. 건조 후 수분 함량은 0.8%[3]였다.
여기에서 예시된 방법에 따라 제조된 결정을 실시예 2에서 사용하였다. 사용하기 전에, 결정을 에탄올로 세척하고, 건조한 다음, 자기 재질 분쇄기에서 분쇄함으로써 결정 구조를 파괴하여 2차 핵 생성을 개시할 불규칙한 형상의 입자를 얻었다. 세척된 결정은 94.0%[1]의 2'-FL 순도를 가졌다.
실시예 2: 실시예 1에 따라 제조된 시드 결정을 이용한 시드 결정의 제조
90.7%[1]의 2'-FL 농도, 9.3%[1]의 DiFL 농도, 및 0.1% 미만[1]의 락토스 농도를 가진 수성 원료 용액을 증발시켜 82.9%[3]의 DS를 얻었다(Rotavapor R-151 증발기). 얻어진 시럽(683 g)을 유리 반응기로 옮기고, (실시예 1에 따라 제조된) 2'-FL 건조 시드 결정 0.29 g을 55℃에서 시딩하였다.
시딩된 시럽을 55℃로 유지시키면서 교반하였다. 에탄올을 두 번에 나누어 첨가하였다. 즉 제1 할당분(610 g)은 시딩 후 0.9시간이 지난 후 0.3시간 이내에 첨가하고, 제2 할당분(221 g)은 시딩 후 2.3시간이 지난 후 첨가하였다. 그런 다음, 결정화 용액을 교반하면서 17시간 이내에 55℃에서 15℃까지 냉각시켰다. 15℃까지 냉각시킨 후, 15℃에서 0.9시간 동안 연속 교반하였다. 얻어진 결정 덩어리(1416 g)를 100 mL의 세척수와 함께 원심 분리하였다(회분식 원심 분리기, 용기 직경 22.5 cm, 3500 rpm, 5분). 총 557 g의 결정 케이크를 얻었다. 이 중 241 g을 60℃의 가열 챔버에서 2.3시간 동안 건조시켰다. 건조 후 수분 함량은 0.8%[3]였다.
이 방법에 따라 제조된 결정을 결과적으로 하기의 실시예 3에서 시드 결정으로서 사용하였다. 사용하기 전에, 결정을 에탄올로 세척하고, 건조한 다음, 자기 재질 분쇄기로 분쇄하였다. 세척된 결정은 91.6%[1]의 2'-FL 순도를 가졌다.
실시예 3: 2'-FL 결정화의 예시
89.3%[1]의 2'-FL 농도, 9.5%[1]의 DiFL 농도, 및 0.1% 미만[1]의 락토스 농도를 가진 수성 원료 용액을 증발시켜 61.0%[4]의 DS를 얻었다(Rotavapor R-151 증발기). 그런 다음, 시럽(1540 g)에 (실시예 2에 기술된 제조물인) 2'-FL 건조 시드 결정 0.5 g을 57℃ 온도에서 시딩하였다(과포화 비율 1.01[8]). 이를 통해 아주 작은 결정이 형성되었다. 결과적으로, 시딩된 시럽을 64℃의 온도 및 130 mbar 내지 180 mbar의 압력에서 2.8시간 동안 계속 비등시켰다. 그런 다음, 시럽에 DS가 67.2%[4]인 2'-FL 건조 시드 결정 0.5 g을 65℃의 온도에서 2차 시딩하였다(과포화 비율 1.27[8]). 2차 시딩 후에, 결정화가 일어났다. 65℃의 온도 및 175 mbar의 압력에서 3.3시간 동안 비등 결정화를 지속하였다.
72.8%[3]의 DS를 가진, 얻어진 결정 덩어리를 실온(21.5℃)까지 냉각시킨 다음, 회전하는 Rotavapor 병에 밤새(18시간) 방치하였다. 첫 번째 시딩으로부터 21.5시간 후에, 덩어리 중 소량의 시료를 세척 없이 원심 분리하여(Hettich Rotanta 460R 원심 분리기, 2500 rpm, 10분) 결정 함량을 확인하였다. 결정 케이크의 2'-FL 순도는 96.7%[1]이었고, 모액의 2'-FL 순도는 85.6%[1]이었다. 이는 2'-FL 수율 36%[2]에 상응한다. 덩어리의 점도는 3.2 Pa-s이었다.
결정 덩어리를 65℃까지 가열하고, 결정 덩어리의 DS가 81.5%[3]가 될 때까지 170 mbar 압력의 진공 하에서 4.4시간 동안 비등 결정화를 지속하였다. 덩어리 중 소량의 시료를 세척 없이 원심 분리하였다. 이를 통해, 97.2%[1]의 결정 케이크 2'-FL 순도, 73.5%[1]의 모액 2'-FL 순도, 72%[2]의 원심 분리 2'-FL 수율, 및 67.9%[3]의 모액 DS를 얻었다. 주 결정 집단의 결정 크기는 30~60 μm[6]이었다.
결정 덩어리에 초순수를 첨가하여 79.5%[4]의 DS가 되도록 희석시킨 다음, 22.5 cm의 용기 직경을 가지는 회분식 원심 분리기로 원심 분리하였다. 여기서, 693 g의 결정 덩어리를 스탠딩 원심 분리기에 첨가하였다. 그런 다음, 회전 속도가 2000 rpm인 가속 단계 동안에 세척수(50 mL)를 첨가하였다. 원심 분리 시간은 3500 rpm의 회전 속도로 5분 동안 지속되었다. 2'-FL 원심 분리 수율은 54%[2]이었다. 모액의 2'-FL 순도는 79.5%[1]이었고, 건조되지 않은 케이크의 수분 함량은 5.7%[5]이었다.
원심 분리 후의 결정 케이크(274 g)를 60℃의 가열 챔버에서 2시간 동안 건조시킨 다음, 데시케이터에서 냉각시켰다. 건조시킨 결정은 100.0%[1]의 2'-FL 순도와, 236.8-237.5℃의 융점, ICUMSA 22에 상응하는 색상 및 0.3%[3]의 수분 함량을 가졌다.
원심 분리 후의 건조되지 않은 결정 케이크(30 g)를 에탄올로 세척하고, 건조시킨 다음 자기 재질 분쇄기로 분쇄하여 실시예 5, 7, 8, 10, 12, 및 13을 위한 시드 결정을 제조하였다.
실시예 4: 실시예 3의 원심 분리 모액으로부터 2'-FL의 결정화
79.5%[1]의 2'-FL 농도, 17.9%[1]의 DiFL 농도, 및 0.1% 미만[1]의 락토스 농도를 가진 실시예 3의 원심 분리 모액을 73℃의 온도 및 200 mbar의 압력에서 증발시켰다(Rotavapor R-151 증발기). DS가 74.9%[4]이었을 때, 자발적인 핵 형성에 의해 결정이 형성되었다(과포화 비율 1.55[8]). DS가 72.6%[4]로 되도록 시럽을 희석시키고, 43℃에서 1.2시간 동안 비진공 상태로 방치하였다. 그런 다음, 73℃의 온도 및 175~180 mbar의 압력에서 4.8시간 동안 시럽을 연속 비등시켰다. 83.2%[3]의 DS를 가진, 얻어진 결정 덩어리를 유리 병으로 옮기고, 60℃의 온도에서 69시간 동안 가열 챔버 내에 방치하였다. 자발적인 핵 형성이 시작된 지 74시간 후에, 덩어리 중 소량의 시료를 세척 없이 원심 분리하여(Hettich Rotanta 460R 원심 분리기, 2500 rpm, 10분) 2'-FL 순도가 95.7%[1]인 결정질 케이크와 2'-FL 순도가 51.5%[1]인 모액을 얻었다. 이는 2'-FL 수율 76%[2]에 상응한다. 주 결정 집단의 결정 크기는 40~100 μm[6]이었다.
결정 덩어리(165 g)를 회분식 원심 분리기를 사용해 세척 없이 원심 분리하였다(용기 직경 22.5 cm, 3500 rpm, 3분). 2'-FL 원심 분리 수율은 76%[2]이었다. 원심 분리 후 (60℃에서 2.4시간) 건조시킨 결정은 93.2%[1]의 2'-FL 순도와 ICUMSA 157[7] 색상 및 0.5%[3]의 수분 함량을 가졌다. 모액은 2'-FL 순도가 53.9%[1]이었고, ICUMSA 609[7] 색상을 띠었다.
실시예 5: 결정 석출과 동시에 새로운 원료의 사용
87.3%[1]의 2'-FL 농도, 10.1%[1]의 DiFL 농도, 및 0.2%[1]의 락토스 농도를 가진 수성 원료 시럽을 증발시켜 67.7%[4]의 DS를 얻었다(Luwa 박막 증발기 NL3-210/1600/10). 이 시점에서, 1149 g의 시럽을 Rotavapor R-153 증발기로 옮기고, 61℃의 온도에서 0.83 g의 2'-FL 건조 시드(실시예 3에서 얻은 결정임)를 시딩하였다(과포화 비율 1.30[8]). 시딩된 시럽을 65℃의 온도 및 150~165 mbar의 압력에서 5.1시간 동안 비등시킴과 동시에, 새로운 원료 액체(58.3%[4]의 DS, 총 1443 g)를 5~40분 간격으로 소량씩(대략 30~120 g) 결정 덩어리에 첨가하였다. 그 후에, 결정 덩어리의 DS는 80.3%[3]이었다. 덩어리 중 소량의 시료를 세척 없이 원심 분리하여(Hettich Rotanta 460R 원심 분리기, 2500 rpm, 10분) 2'-FL 순도가 96.1%[1]인 결정질 케이크와, 2'-FL 순도가 75.2%[1]인 모액을 얻었는데, 이는 64%[2]의 2'-FL 수율에 상응한다. 주 결정 집단의 결정 크기는 30~60 μm[6]이었다.
결정 덩어리(1332 g)를 75 mL의 세척수와 함께 원심 분리시켰다(회분식 원심 분리기, 용기 직경 22.5 cm, 3500 rpm, 5분). 2'-FL 원심 분리 수율은 53%[2]이었다. 원심 분리 후 (60℃에서 8~17시간) 건조시킨 결정의 2'-FL 순도는 97.8%[1]이었다. 색상은 ICUMSA 67[7]을 띠었고, 수분 함량은 0.1%[3]이었다. 모액은 2'-FL 순도가 78.1%[1]이었고, ICUMSA 93[7] 색상을 띠었다.
실시예 6: 결정 침전과 동시에 물을 첨가하여 실시예 5의 원심 분리 모액으로부터 2'-FL의 결정화
78.1%[1]의 2'-FL 농도, 17.6%[1]의 DiFL 농도, 및 0.3%[1]의 락토스 농도를 가진 실시예 5의 원심 분리 모액을 67℃의 온도와 200 mbar의 압력에서 증발시켰다(Rotavapor R-151 증발기). DS가 75.5%[4]이었을 때, 자발적인 핵 형성에 의해 결정이 형성되었다(과포화 비율 1.65[8]). 시럽을 희석시켜 72.6%[4]의 DS를 얻고, 67℃에서 1시간 동안 비진공 상태로 방치하였다. 그런 다음, 65~67℃의 온도 및 200 mbar의 압력에서 5.2시간 동안 시럽을 지속적으로 비등시킴과 동시에, 초순수(총 약 500 g)를 덩어리에 소량씩 추가하였다.
자발적인 핵 형성이 시작된 지 6.2시간 후에, 결정 덩어리의 DS는 81.8%[3]가 되었다. 덩어리 중 소량의 시료를 세척 없이 원심 분리하여(Hettich Rotanta 460R 원심 분리기, 2500 rpm, 10분) 2'-FL 순도가 91.9%[1]인 결정질 케이크와 2'-FL 순도가 59.0%[1]인 모액을 얻었다. 이는 2'-FL 수율 68%[2]에 상응한다. 주 결정 집단의 결정 크기는 30~80 μm[6]이었다.
결정 덩어리(371 g)를 30 mL의 세척수와 함께 원심 분리시켰다(회분식 원심 분리기, 용기 직경 22.5 cm, 3500 rpm, 5분). 2'-FL 원심 분리 수율은 54%[2]이었다. 원심 분리 후 (60℃에서 2시간) 건조시킨 결정의 2'-FL 순도는 93.4%[1]이었다. 색상은 ICUMSA 100[7]을 띠었고, 수분 함량은 0.9%[3]이었다. 모액은 2'-FL 순도가 65.4%[1]이었고, ICUMSA 287[7] 색상을 띠었다.
실시예 7: 2'-FL 결정화의 예시
89.9%[1]의 2'-FL 농도, 8.5%[1]의 DiFL 농도, 및 0.1%[1] 미만의 락토스 농도를 가지는 수성 원료 시럽을 증발시켜 65.6%[3]의 DS를 얻었다(Luwa 박막 증발기 NL3-210/1600/10). 얻어진 시럽(8141 g)을 Rotavapor R-153 증발기로 옮기고, 68℃의 온도에서 2.7 g의 2'-FL 건조 시드(실시예 3에서 얻은 결정임)를 시딩하였다(과포화 비율 1.17[8]). 연속하여 같은 온도에서 1.2시간 동안 혼합하였다. 그 후에, 5.3시간 이내에 3단계에 걸쳐 시딩된 시럽을 증발시키되, 각 단계에서, 시럽을 0.9~1.2시간 동안 (67~72℃ 및 190~200 mbar) 진공 하에서 먼저 비등시키고, 이어서 대기압에서 0.6~0.9시간 동안 (67~72℃로) 혼합하는 방식으로 증발시켜 80.4%[3]의 DS를 얻었다. 얻어진 결정 덩어리를 6 L의 혼합 탱크로 옮기고, 69℃에서 밤새(19시간) 방치하였다. 덩어리 중 소량의 시료를 세척 없이 원심 분리함으로써(Hettich Rotanta 460R 원심 분리기, 2500 rpm, 10분) 결정화의 진행을 모니터링하였다. 결과를 표 1에 요약하였다.
얻어진 결정 덩어리를 DS 덩어리 1 kg당 62~82 mL와 동등한 양의 세척수와 함께 3회분으로 나누어 원심 분리시켰다(회분식 원심 분리기, 용기 직경 22.5 cm, 3500 rpm, 5분). 건조되지 않고 합쳐진 케이크의 수분 함량은 4.4%[5]이었다. 원심 분리 후 (60℃에서 2시간) 건조시킨 결정의 2'-FL 순도는 100.0%[1]이었다. 색상은 ICUMSA 462[7]을 띠었고, 수분 함량은 0.9%[3]이었다. 주 결정 집단의 결정 크기는 30~100 μm[6]이었다.
Figure pct00002
실시예 8: 실시예 7의 장비 세척 회수물 및 모액으로부터 2'-FL 결정화의 예시
실시예 7의 장비를 세척하여 회수한 희석된 결정 덩어리와 조합된 모액으로서, 87.4%[1]의 2'-FL 농도, 11.1%[1]의 DiFL 농도, 및 0.1% 미만[1]의 락토스 농도를 가진 원심 분리 모액을 증발시켜 65.1%[4]의 DS를 얻었다(Rotavapor R-153 증발기). 시럽(4812 g)에 1.75 g의 2'-FL 건조 시드 결정(실시예 3에서 얻어진 결정임)을 65℃의 온도에서 시딩하였다(과포화 비율 1.13[8]). 그런 다음, 시딩된 시럽을 68~70℃의 온도 및 190~195 mbar의 압력에서 6.1시간 동안 비등시켰다. 얻어진 결정 덩어리의 DS는 80.8%[3]이었다. 덩어리 중 소량의 시료를 세척 없이 원심 분리하여(Hettich Rotanta 460R 원심 분리기, 2500 rpm, 10분) 2'-FL 순도가 96.5%[1]인 결정질 케이크와 2'-FL 순도가 76.7%[1]인 모액을 얻었다. 이는 2'-FL 수율 60%[2]에 상응한다.
결정 덩어리를 68℃의 온도에서 회전하는 Rotavapor 병에 밤새(18시간) 방치하였다. 시딩하고 23시간 후에, 덩어리 중 소량의 시료를 세척 없이 원심 분리하여(Hettich Rotanta 460R 원심 분리기, 2500 rpm, 10분) 2'-FL 순도가 97.3%[1]인 결정질 케이크 및 2'-FL 순도가 69.7%[1]인 모액을 얻었다. 이는 2'-FL 수율 71%[2]에 상응한다. 주 결정 집단의 결정 크기는 30~80 μm[6]이었다.
얻어진 결정 덩어리를 DS 덩어리 1 kg당 61~75 mL와 동등한 양의 세척수와 함께 2회분으로 나누어 원심 분리시켰다(회분식 원심 분리기, 용기 직경 22.5 cm, 3500 rpm, 5분). 건조되지 않고 합쳐진 케이크의 수분 함량은 3.7%[5]이었다. 원심 분리 후 (60℃에서 2.2시간) 건조시킨 결정의 2'-FL 순도는 97.1%[1]이었다. 색상은 ICUMSA 389[7]을 띠었고, 수분 함량은 0.5%[3]이었다.
실시예 9: 결정질 덩어리 시딩을 사용한 2'-FL 결정화의 예시
실시예 8의 장비를 세척하여 회수한 희석된 결정 덩어리와 조합된 모액으로서, 82.5%[1]의 2'-FL 농도, 15.9%[1]의 DiFL 농도, 및 0.1% 미만[1]의 락토스 농도를 가진 원심 분리 모액을 증발시켜 74.7%[4]의 DS를 얻었다(Rotavapor R-153 증발기). 시럽(2455 g)에 실시예 8에서 얻어진 모액 83 g을(작은 결정을 포함함) 67℃의 온도에서 시딩하였다(과포화 비율 1.67[8]). 시딩된 시럽을 66~68℃의 온도 및 190~200 mbar의 압력에서 4.1시간 동안 비등시켰다. 얻어진 결정 덩어리의 DS는 85.5%[3]이었다. 덩어리 중 소량의 시료를 세척 없이 원심 분리하여(Hettich Rotanta 460R 원심 분리기, 2500 rpm, 10분) 2'-FL 순도가 95.7%[1]인 결정질 케이크 및 2'-FL 순도가 61.8%[1]인 모액을 얻었다. 이는 2'-FL 수율 71%[2]에 상응한다.
얻어진 결정 덩어리를 66℃의 온도에서 회전하는 Rotavapor 병에 밤새(17시간) 방치하였다. 시딩하고 21시간 후에, 덩어리 중 소량의 시료를 세척 없이 원심 분리하여(Hettich Rotanta 460R centrifuge, 2500 rpm, 10분) 2'-FL 순도가 94.0%[1]인 결정질 케이크 및 2'-FL 순도가 54.0%[1]인 모액을 얻었다. 이는 2'-FL 수율 81%[2]에 상응한다. 주 결정 집단의 결정 크기는 80~200 μm[6]이었다.
얻어진 결정 덩어리를 DS 덩어리 1 kg당 71 mL와 동등한 양의 세척수와 함께 원심 분리시켰다(회분식 원심 분리기, 용기 직경 22.5 cm, 3500 rpm, 5분). 건조되지 않고 합쳐진 케이크의 수분 함량은 3.4%[5]이었다. 원심 분리 후 (60℃에서 2시간) 건조시킨 결정의 2'-FL 순도는 100.0%[1]이었다. 색상은 ICUMSA 35[7]를 띠었고, 수분 함량은 0.2%[3]이었다.
실시예 10 결정질 덩어리 시딩을 이용한, 고 락토스 용액으로부터의 2'-FL 결정화의 예시
84.5%[1]의 2'-FL 농도, 7.9%[1]의 DiFL 농도, 및 6.0%[1]의 락토스 농도를 가진 수성 원료 용액을 증발시켜 69.6%[3]의 DS를 얻었다(Rotavapor R-153 증발기). 용액을 두 부분으로 나누었다: 한 부분(1394 g)은 시딩 덩어리를 제조하는 데 사용하였고, 다른 한 부분은 실제 원료 용액(10640 g)으로서 사용하였다.
시딩 덩어리용 시럽에 0.5 g의 2'-FL 건조 시드(실시예 3에서 얻어진 결정임)를 68℃의 온도에서 시딩하였다(과포화 비율 1.32[8]). 시딩된 시럽을 65~68℃의 온도 및 190 mbar의 압력에서 5시간 동안 비등시켰다. 84.5%[3]의 DS를 가진, 얻어진 시딩 덩어리를 55℃의 온도에서 회전하는 Rotavapor 병에 밤새(19시간) 방치하였다.
시딩 덩어리를 시딩하고 24시간 후에, 실제 원료 용액을 시딩 덩어리와 65℃에서 혼합하였다(과포화 비율 1.32[8]). 시럽을 68℃의 온도 및 190~200 mbar의 압력에서 9.6시간 동안 비등시켰다. 80.7%[3]의 DS를 가진, 얻어진 시딩 덩어리를 68℃에서 회전하는 Rotavapor 병에 밤새(16시간) 방치하였다.
실제 원료 용액을 시딩하고 24시간 후에, 덩어리 중 소량의 시료를 세척 없이 원심 분리하여(Hettich Rotanta 460R 원심 분리기, 2500 rpm, 10분) 2'-FL 순도가 97.5%[1]인 결정질 케이크와 2'-FL 순도가 65.3%[1]인 모액을 얻었다. 이는 2'-FL 수율 69%[2]에 상응한다. 주 결정 집단의 결정 크기는 100~200 μm[6]이었다.
결정 덩어리를 DS 덩어리 1 kg당 68~83 mL와 동등한 양의 세척수와 함께 6회분으로 나누어 원심 분리시켰다(회분식 원심 분리기, 용기 직경 22.5 cm, 3500 rpm, 5분). 6회분 전체에 대한 평균 2'-FL 원심 분리 수율은 56%[2]이었다. 원심 분리 후 (40℃에서 18시간 및 60℃에서 1시간) 건조시킨 결정의 평균 2'-FL 순도는 99.0%[1]이었고, 융점은 234.4~235.9℃[9]이었으며, 평균 색상은 ICUMSA 63[7], 그리고 수분 함량은 0.6%[3]이었다. 모액의 2'-FL 순도는 71.0%[1]이었고, ICUMSA 850[7] 색상을 띠었다.
실시예 11: 실시예 10의 장비 세척 회수물 및 모액으로부터 2'-FL 결정화의 예시
실시예 10의 장비를 세척하여 회수된 희석된 결정 덩어리와 조합한 모액으로서, 72.4%[1]의 2'-FL 농도, 14.0%[1]의 DiFL 농도, 및 10.6%[1]의 락토스 농도를 가지는 원심 분리 모액을 증발시켜 70.3%[3]의 DS를 얻었다 (Rotavapor R-153 증발기). 시럽(6119 g)에 실시예 10에서 얻어진 1767 g의 결정 덩어리를 65℃의 온도에서 시딩하였다(과포화 비율 1.19[8]). 시딩된 시럽을 67~71℃의 온도 및 180~190 mbar의 압력에서 5.4시간 동안 비등시켰다. 얻어진 결정 덩어리의 DS는 85.1%[3]이었다.
얻어진 결정 덩어리를 68℃에서 회전하는 Rotavapor 병에 밤새(18시간) 방치하였다. 시딩하고 24시간 후에, 덩어리 중 소량의 시료를 세척 없이 원심 분리하여(Hettich Rotanta 460R centrifuge, 2500 rpm, 10분) 2'-FL 순도가 94.1%[1]인 결정질 케이크 및 2'-FL 순도가 46.5%[1]인 모액을 얻었다. 이는 2'-FL 수율 76%[2]에 상응한다. 주 결정 집단의 결정 크기는 100~200 μm[6]이었다.
결정 덩어리를 DS 덩어리 1 kg당 70~87 mL와 동등한 양의 세척수와 함께 4회분으로 나누어 원심 분리시켰다(회분식 원심 분리기, 용기 직경 22.5 cm, 3500 rpm, 10분). 평균 2'-FL 원심 분리 수율은 55%[2]이었다. 원심 분리 후 (40℃에서 18시간 및 60℃에서 1시간) 건조시킨 결정의 평균 2'-FL 순도는 97.9%[1]이었다. 색상은 ICUMSA 204[7]를 띠었고, 수분 함량은 0.8%[3]이었다. 모액은 2'-FL 순도가 59.4%[1]이었고, ICUMSA 1409[7] 색상을 띠었다.
실시예 12: 2'-FL 재결정화의 예시
97.9%[1]의 2'-FL 농도, 0.9%[1]의 DiFL 농도, 및 1.3%[1]의 락토스 농도를 가지는, 실시예 11에서 얻어진 2'-FL 결정(1842 g)을 초순수에 용해시켰다. 얻어진 용액은 증발시켜 65.1%[3]의 DS를 얻고(Rotavapor R-153 증발기), 60℃의 온도에서 0.88 g의 2'-FL 건조 시드(실시예 3에서 얻은 결정임)를 시딩하였다(과포화 비율 1.30[8]). 시딩된 시럽을 64~65℃의 온도 및 180 mbar의 압력에서 4.7시간 동안 비등시켰다. 얻어진 결정 덩어리의 DS는 77.8%[3]이었다.
얻어진 결정 덩어리를 64℃에서 회전하는 Rotavapor 병에 밤새(19시간) 방치하였다. 시딩하고 24시간 후에, 덩어리 중 소량의 시료를 세척 없이 원심 분리하여(Hettich Rotanta 460R centrifuge, 2500 rpm, 10분) 2'-FL 순도가 99.7%[1]인 결정질 케이크 및 2'-FL 순도가 95.5%[1]인 모액을 얻었다. 이는 2'-FL 수율 55%[2]에 상응한다. 주 결정 집단의 결정 크기는 30~100 μm[6]이었다.
결정 덩어리를 DS 덩어리 1 kg당 71 mL와 동등한 양의 세척수와 함께 원심 분리시켰다(회분식 원심 분리기, 용기 직경 22.5 cm, 3500 rpm, 5분). 건조되지 않고 합쳐진 케이크의 수분 함량은 5.8%[5]이었다. 원심 분리 후 (40℃에서 21시간 및 60℃에서 1시간) 건조시킨 결정의 2'-FL 순도는 100.0%[1]이었다. 색상은 ICUMSA 142[7]를 띠었고, 수분 함량은 0.1%[3]이었다.
실시예 13: 2'-FL 결정화의 예시
89.6%[1]의 2'-FL 농도, 8.8%[1]의 DiFL 농도, 및 0.1% 미만[1]의 락토스 농도를 가지는 수성 원료 용액을 증발시켜 67.5%[3]의 DS를 얻었다 (Rotavapor R-153 증발기). 얻어진 시럽(1343 g)에 0.44 g의 2'-FL 건조 시드(실시예 3에서 얻어진 결정임)를 61℃의 온도에서 시딩하였다(과포화 비율 1.32[8]). 시딩된 시럽을 64~65℃의 온도 및 180 mbar의 압력에서 5.5시간 동안 비등시켰다. 얻어진 결정 덩어리의 DS는 81.4%[3]이었다.
얻어진 결정 덩어리를 66℃에서 회전하는 Rotavapor 병에 밤새(23시간) 방치하였다. 시딩하고 26시간 후에, 덩어리 중 소량의 시료를 세척 없이 원심 분리하여(Hettich Rotanta 460R centrifuge, 2500 rpm, 10분) 2'-FL 순도가 98.1%[1]인 결정질 케이크 및 2'-FL 순도가 76.1%[1]인 모액을 얻었다. 이는 2'-FL 수율 67%[2]에 상응한다. 주 결정 집단의 결정 크기는 30~100 μm[6]이었다.
결정 덩어리를 DS 덩어리 1 kg당 75 mL와 동등한 양의 세척수와 함께 원심 분리시켰다(회분식 원심 분리기, 용기 직경 22.5 cm, 3500 rpm, 5분). 건조되지 않고 합쳐진 케이크의 수분 함량은 4.6%[5]이었다. 원심 분리 후 (40℃에서 19시간 및 60℃에서 1시간) 건조시킨 결정의 2'-FL 순도는 100.0%[1]이었다. 융점은 233.2~234.1℃였고, 색상은 ICUMSA 47[7]을 띠었으며, 수분 함량은 0.1%[3]이었다.
실시예 14: 저농도 2'-FL 용액으로부터 2'-FL 결정화의 예시
60.5%[10]의 2'-FL 농도, 20.7%[10]의 DiFL 농도, 및 15.1%[10]의 락토스 농도를 가지는 수성 원료 용액을 증발시켜 약 75%의 DS를 얻었다. 그런 다음, 시럽에 2'-FL 건조 시드 결정을 DS 시럽 1 kg당 약 0.18 g과 동등한 양으로 약 65℃의 온도에서 시딩하였다(과포화 비율 약 1.3[8]). 연속하여 같은 온도에서 약 0.5시간 동안 혼합하였다. 그 후에, 약 20시간 이내에서 65~70℃의 온도에서 시딩된 시럽을 증발시켜 약 81.5%의 DS를 얻었다.
얻어진 결정 덩어리를 75℃에서 약 6시간 동안 지속적으로 혼합한 다음, DS 덩어리 1 kg당 약 60 mL와 동등한 양의 세척수와 함께 원심 분리시켰다. 평균 2'-FL 원심 분리 수율은 17.2%이었고, 원심 분리된 결정의 평균 2'-FL 순도는 97.4%[10]이었다.
실시예 15: 물에 대한 2'-FL의 용해도
실시예 9의 건조된 2'-FL 결정과 초순수를 100 mL 실험 용기에 넣고 칭량하였다. 항온 수조를 이용하여 특정 온도(25℃, 40℃, 50℃, 60℃, 또는 70℃)에 맞도록 용기를 템퍼링하였다. 자석 교반기로 내용물을 적어도 16시간 동안 연속 교반하여 용해도 평형에 도달시켰다. 평형에서의 결정 함량이 대략 10~20 vol%가 되도록 실험하는 동안 2'-FL 결정을 첨가하였다.
시스템이 평형에 도달한 이후, 결정을 침전시켜 모액을 분리하였다. 모액의 2'-FL 농도는 Karl Fischer 적정에 의해 확인하였다. 결과를 표 2에 요약하였다.
Figure pct00003
실시예 16: 결정질 2'-FL로부터 비정질 2'-FL의 제조
물에 용해된 결정질 2'-FL의 용액을 분무 건조시켜 분말 형태의 비정질 2'-FL을 얻었다. 2'-FL 용액은 표 3에 기재된 특성을 가졌다.
Figure pct00004
분무기 휠이 장착된 SPX Anhydro CSD Type 70(부피=약 43 m3) (덴마크 소보르그 소재) 병렬 분무 건조기를 사용하여 2'-FL 용액을 분무 건조시켰다. 2'-FL 용액을 79 kg/시간의 초기 속도로 분무 건조기에 공급하였고, 분무 건조를 하는 초기 3시간의 과정에 걸쳐 115 kg/시간으로 속도를 증가시켰다. 분무 건조기 설정은 표 4에 기재된 바와 같았다.
Figure pct00005
건조 과정을 457분 동안 지속하였다.
얻어진 건조 2'-FL 분말은 표 5에 기재된 특성을 가졌다.
Figure pct00006
Jolting Stampf Volumeter(STAV 203, J. Engelsmann AG), 250 mL 측정용 실린더 및 공학 저울을 이용하여 분말 70g의 벌크 밀도를 측정하였다. 분말의 수분 함량은 Karl-Fischer 적정을 이용하여 측정하였다.
"포함한다(comprise, comprises)" 및 "포함하는(comprising)"이라는 용어는 배타적이기보다는 포괄적으로 해석되어야 한다. 이러한 해석은 본 출원 당시에 미국 특허법에 따라 이들 용어에 부여된 해석과 동일하다.
단수형은, 그 문맥에서 달리 지시되지 않는 한, 복수의 지시 대상을 포함하는 것이다. 따라서, 예를 들어 "미생물"의 존재에 대한 언급은 그 문맥에서 달리 지시되지 않는 한 복수의 미생물의 존재를 배제하지 않는다.
본 명세서에서 인용된 임의의 참조 문헌은 본 명세서에 참조로 포함된다.

Claims (51)

  1. 2'-푸코실락토스와 적어도 하나 이상의 다른 탄수화물을 포함하는 수성 출발 용액으로부터 결정질 2'-푸코실락토스를 제조하는 방법으로서,
    상기 출발 용액을 2'-푸코실락토스에 대해 과포화 상태로 농축시키는 단계, 및
    상기 과포화 용액의 온도를 60℃보다 높게 한 상태에서 상기 과포화 용액에서 2'-푸코실락토스 결정을 침전시키는 단계를 포함하고,
    상기 과포화 용액은 2'-푸코실락토스 결정 침전시 1 (중량)% 이하의 유기 용매를 포함하는, 방법.
  2. 제1항에 있어서, 상기 과포화 용액은 2'-푸코실락토스 결정 침전시 0.1 (중량)% 미만의 유기 용매를 포함하는, 방법.
  3. 제1항에 있어서, 상기 과포화 용액은 2'-푸코실락토스 결정 침전시 본질적으로 유기 용매로 이루어지지 않는, 방법.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 출발 용액은 2'-푸코실락토스 농도가 98% 미만인(여기서 백분율은 고성능 액체 크로마토그래피를 이용하여 얻은 정규화 피크 면적 농도에 상응함) 건조 고형분 함량을 갖는, 방법.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 출발 용액은 2'-푸코실락토스 농도가 60 내지 95%인(여기서 백분율은 고성능 액체 크로마토그래피를 이용하여 얻은 정규화 피크 면적 농도에 상응함) 건조 고형분 함량을 갖는, 방법.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 출발 용액은 2'-푸코실락토스 농도가 70 내지 95%인(여기서 백분율은 고성능 액체 크로마토그래피를 이용하여 얻은 정규화 피크 면적 농도에 상응함) 건조 고형분 함량을 갖는, 방법.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 출발 용액은 2'-푸코실락토스 농도가 91% 미만인(여기서 백분율은 고성능 액체 크로마토그래피를 이용하여 얻은 정규화 피크 면적 농도에 상응함) 건조 고형분 함량을 갖는, 방법.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 적어도 하나 이상의 다른 탄수화물은 디푸코실락토스를 포함하고,
    상기 출발 용액은 디푸코실락토스 농도가 1% 이상인(여기서 백분율은 고성능 액체 크로마토그래피를 이용하여 얻은 정규화 피크 면적 농도에 상응함) 건조 고형분 함량을 갖는, 방법.
  9. 제8항에 있어서, 상기 출발 용액은 디푸코실락토스 농도가 5% 이상인(여기서 백분율은 고성능 액체 크로마토그래피를 이용하여 얻은 정규화 피크 면적 농도에 상응함) 건조 고형분 함량을 갖는, 방법.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 적어도 하나 이상의 다른 탄수화물은 락토스를 포함하고,
    상기 출발 용액은 락토스 농도가 0.1% 이상인(여기서 백분율은 고성능 액체 크로마토그래피를 이용하여 얻은 정규화 피크 면적 농도에 상응함) 건조 고형분 함량을 갖는, 방법.
  11. 제10항에 있어서, 상기 출발 용액은 락토스 농도가 5% 이상인(여기서 백분율은 고성능 액체 크로마토그래피를 이용하여 얻은 정규화 피크 면적 농도에 상응함) 건조 고형분 함량을 갖는, 방법.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 과포화 용액의 온도를 60℃보다 높게 한 상태에서 상기 과포화 용액에 유기 용매가 첨가되지 않는, 방법.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 과포화 용액에서 2'-푸코실락토스 결정을 침전시키는 단계는 상기 과포화 용액에 시드 결정을 첨가하는 단계를 포함하는, 방법.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 출발 용액은 발효로부터 유래되는, 방법.
  15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 출발 용액은 발효산물로부터 미생물을 분리하는 단계를 포함하는 방법에 의해 형성되는, 방법.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 출발 용액은 0.1 (중량)% 미만의 유기 용매를 포함하는, 방법.
  17. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 출발 용액은 유기 용매를 본질적으로 포함하지 않는, 방법.
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 출발 용액을 과포화 상태로 농축하기 전에 상기 출발 용액에 유기 용매가 첨가되지 않는, 방법.
  19. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 출발 용액을 과포화 상태로 농축하는 동안 상기 출발 용액에 유기 용매가 첨가되지 않는, 방법.
  20. 2'-푸코실락토스와 적어도 하나 이상의 다른 탄수화물을 포함하는 수성 출발 용액으로부터 결정질 2'-푸코실락토스를 제조하는 방법으로서,
    상기 출발 용액을 2'-푸코실락토스에 대해 과포화 상태로 농축시키는 단계, 및
    상기 과포화 용액의 온도를 적어도 40℃로 하면서 상기 과포화 용액에서 2'-푸코실락토스 결정을 침전시키는 단계를 포함하고,
    상기 출발 용액은 2'-푸코실락토스 농도가 70% 내지 95%인(여기서 백분율은 고성능 액체 크로마토그래피를 이용하여 얻은 정규화 피크 면적 농도에 상응함) 건조 고형분 함량을 갖고;
    상기 과포화 용액은 2'-푸코실락토스 결정 침전시 1 (중량)% 이하의 유기 용매를 포함하는, 방법.
  21. 2'-푸코실락토스와 적어도 하나 이상의 다른 탄수화물을 포함하는 수성 출발 용액으로부터 결정질 2'-푸코실락토스를 제조하는 방법으로서,
    상기 출발 용액을 2'-푸코실락토스에 대해 과포화 상태로 농축시키는 단계, 및
    상기 과포화 용액의 온도를 적어도 40℃로 하면서 상기 과포화 용액에서 2'-푸코실락토스 결정을 침전시키는 단계를 포함하고,
    상기 출발 용액은 2'-푸코실락토스 농도가 98% 미만인(여기서 백분율은 고성능 액체 크로마토그래피를 이용하여 얻은 정규화 피크 면적 농도에 상응함) 건조 고형분 함량을 갖고;
    상기 과포화 용액은 2'-푸코실락토스 결정 침전시 1 (중량)% 이하의 유기 용매를 포함하는, 방법.
  22. 제21항에 있어서, 상기 출발 용액은 2'-푸코실락토스 농도가 95% 미만인(여기서 백분율은 고성능 액체 크로마토그래피를 이용하여 얻은 정규화 피크 면적 농도에 상응함) 건조 고형분 함량을 갖는, 방법.
  23. 제20항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 출발 용액은 2'-푸코실락토스 농도가 91% 미만인(여기서 백분율은 고성능 액체 크로마토그래피를 이용하여 얻은 정규화 피크 면적 농도에 상응함) 건조 고형분 함량을 갖는, 방법.
  24. 제20항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 적어도 하나 이상의 다른 탄수화물은 디푸코실락토스를 포함하고,
    상기 출발 용액은 디푸코실락토스 농도가 1% 이상인(여기서 백분율은 고성능 액체 크로마토그래피를 이용하여 얻은 정규화 피크 면적 농도에 상응함) 건조 고형분 함량을 갖는, 방법.
  25. 제24항에 있어서, 상기 출발 용액은 디푸코실락토스 농도가 5% 이상인(여기서 백분율은 고성능 액체 크로마토그래피를 이용하여 얻은 정규화 피크 면적 농도에 상응함) 건조 고형분 함량을 갖는, 방법.
  26. 제20항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 적어도 하나 이상의 다른 탄수화물은 락토스를 포함하고,
    상기 출발 용액은 락토스 농도가 0.1% 이상인(여기서 백분율은 고성능 액체 크로마토그래피를 이용하여 얻은 정규화 피크 면적 농도에 상응함) 건조 고형분 함량을 갖는, 방법.
  27. 제26항에 있어서, 상기 출발 용액은 락토스 농도가 5% 이상인(여기서 백분율은 고성능 액체 크로마토그래피를 이용하여 얻은 정규화 피크 면적 농도에 상응함) 건조 고형분 함량을 갖는, 방법.
  28. 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 결정질 2'-푸코실락토스는 (유럽 약전 모세관 융점 측정법을 이용하여 1℃/분의 가열 속도로 측정시) 융점이 약 230℃ 내지 약 239℃인, 방법.
  29. 2'-푸코실락토스와 적어도 하나 이상의 다른 탄수화물을 포함하는 수성 출발 용액으로부터 결정질 2'-푸코실락토스를 제조하는 방법으로서,
    상기 출발 용액을 2'-푸코실락토스에 대해 과포화 상태로 농축시키는 단계, 및
    상기 과포화 용액의 온도를 적어도 40℃로 하면서 상기 과포화 용액에서 2'-푸코실락토스 결정을 침전시키는 단계를 포함하고,
    상기 과포화 용액은 2'-푸코실락토스 결정 침전시 1 (중량)% 이하의 유기 용매를 포함하고;
    상기 결정질 2'-푸코실락토스는 (유럽 약전 모세관 융점 측정법을 이용하여 1℃/분의 가열 속도로 측정시) 융점이 약 230℃ 내지 약 239℃인, 방법.
  30. 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 결정질 2'-푸코실락토스는 (유럽 약전 모세관 융점 측정법을 이용하여 1℃/분의 가열 속도로 측정시) 융점이 약 232℃ 내지 약 239℃인, 방법.
  31. 제1항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 결정질 2'-푸코실락토스는 (유럽 약전 모세관 융점 측정법을 이용하여 1℃/분의 가열 속도로 측정시) 융점이 약 233℃ 내지 약 238℃인, 방법.
  32. 제1항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 결정질 2'-푸코실락토스는 CuKa 방사선을 이용하여 측정한 것에 기초하여, 16.98±0.20, 13.65±0.20 및 18.32±0.20의 2Θ 각도에서 X-선 분말 회절 반사(X-ray powder diffraction reflection)를 나타내는, 방법.
  33. 2'-푸코실락토스와 적어도 하나 이상의 다른 탄수화물을 포함하는 수성 출발 용액으로부터 결정질 2'-푸코실락토스를 제조하는 방법으로서,
    상기 출발 용액을 2'-푸코실락토스에 대해 과포화 상태로 농축시키는 단계, 및
    상기 과포화 용액의 온도를 적어도 40℃로 하면서 상기 과포화 용액에서 2'-푸코실락토스 결정을 침전시키는 단계를 포함하고,
    상기 과포화 용액은 2'-푸코실락토스 결정 침전시 1 (중량)% 이하의 유기 용매를 포함하고;
    상기 결정질 2'-푸코실락토스는 CuKa 방사선을 이용하여 측정한 것에 기초하여, 16.98±0.20, 13.65±0.20 및 18.32±0.20의 2Θ 각도에서 X-선 분말 회절 반사를 나타내는, 방법.
  34. 비정질 2'-푸코실락토스의 제조 방법으로서,
    제1항 내지 제33항 중 어느 한 항의 방법에 따라 결정질 2'-푸코실락토스를 제조하는 단계,
    상기 결정질 2'-푸코실락토스를 용매에 용해시켜서 정제된 2'-푸코실락토스 용액을 형성하는 단계, 및
    상기 정제된 2'-푸코실락토스 용액에서 비정질 2'-푸코실락토스를 침전시키는 단계를 포함하는 방법.
  35. 제34항에 있어서, 상기 정제된 2'-푸코실락토스 용액에서 비정질 2'-푸코실락토스를 침전시키는 단계는 분무 건조 단계를 포함하는, 방법.
  36. 식품, 건강 보조 식품 또는 의약품의 제조 방법으로서,
    제1항 내지 제33항 중 어느 한 항의 방법에 따라 결정질 2'-푸코실락토스를 제조하는 단계, 및
    상기 결정질 2'-푸코실락토스를 식품, 건강 보조 식품 또는 의약품에 적합한 하나 이상의 성분과 혼합하는 단계를 포함하는 방법.
  37. 식품, 건강 보조 식품 또는 의약품의 제조 방법으로서,
    제1항 내지 제33항 중 어느 한 항의 방법에 따라 결정질 2'-푸코실락토스를 제조하는 단계,
    상기 결정질 2'-푸코실락토스를 용매에 용해시키는 단계, 및
    상기 용해된 2'-푸코실락토스를 식품, 건강 보조 식품 또는 의약품에 적합한 하나 이상의 성분과 혼합하는 단계를 포함하는 방법.
  38. 식품, 건강 보조 식품 또는 의약품의 제조 방법으로서,
    제34항 또는 제35항의 방법에 따라 비정질 2'-푸코실락토스를 제조하는 단계, 및
    상기 비정질 2'-푸코실락토스를 식품, 건강 보조 식품 또는 의약품에 적합한 하나 이상의 성분과 혼합하는 단계를 포함하는 방법.
  39. 식품, 건강 보조 식품 또는 의약품의 제조 방법으로서,
    제34항 또는 제35항의 방법에 따라 비정질 2'-푸코실락토스를 제조하는 단계,
    상기 비정질 2'-푸코실락토스를 용매에 용해시키는 단계, 및
    상기 용해된 2'-푸코실락토스를 식품, 건강 보조 식품 또는 의약품에 적합한 하나 이상의 성분과 혼합하는 단계를 포함하는 방법.
  40. 영아용 조제 분유의 제조 방법으로서,
    제1항 내지 제33항 중 어느 한 항의 방법에 따라 결정질 2'-푸코실락토스를 제조하는 단계, 및
    상기 결정질 2'-푸코실락토스를 하나 이상의 영아용 조제 분유 성분과 혼합하는 단계를 포함하는 방법.
  41. 영아용 조제 분유의 제조 방법으로서,
    제1항 내지 제33항 중 어느 한 항의 방법에 따라 결정질 2'-푸코실락토스를 제조하는 단계,
    상기 결정질 2'-푸코실락토스를 용매에 용해시키는 단계, 및
    상기 용해된 2'-푸코실락토스를 하나 이상의 영아용 조제 분유 성분과 혼합하는 단계를 포함하는 방법.
  42. 영아용 조제 분유의 제조 방법으로서,
    제34항 또는 제35항의 방법에 따라 비정질 2'-푸코실락토스를 제조하는 단계, 및
    상기 비정질 2'-푸코실락토스를 하나 이상의 영아용 조제 분유 성분과 혼합하는 단계를 포함하는 방법.
  43. 영아용 조제 분유의 제조 방법으로서,
    제34항 또는 제35항의 방법에 따라 비정질 2'-푸코실락토스를 제조하는 단계,
    상기 비정질 2'-푸코실락토스를 용매에 용해시키는 단계, 및
    상기 용해된 2'-푸코실락토스를 하나 이상의 영아용 조제 분유 성분과 혼합하는 단계를 포함하는 방법.
  44. 제40항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 하나 이상의 영아용 조제 분유 성분은 무지방 우유, 탄수화물 원료, 단백질 원료, 지방 원료, 비타민 및/또는 미네랄을 포함하는, 방법.
  45. 제40항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 하나 이상의 영아용 조제 분유 성분은 락토스, 농축 유청 단백질 및/또는 고올레산 홍화유를 포함하는, 방법.
  46. 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항의 방법으로부터 얻어진 결정질 2'-푸코실락토스 생성물.
  47. 제46항에 있어서, 상기 결정질 2'-푸코실락토스 생성물은 93% 이상의(상기 백분율은 HPLC 분석을 이용한 피크의 전체 면적에 대한 2'-푸코실락토스에 상응하는 피크 면적의 비율임) 2'-푸코실락토스 순도를 갖는, 결정질 2'-푸코실락토스 생성물.
  48. 제46항에 있어서, 상기 결정질 2'-푸코실락토스 생성물은 98% 이상의(상기 백분율은 HPLC 분석을 이용한 피크의 전체 면적에 대한 2'-푸코실락토스에 상응하는 피크 면적의 비율임) 2'-푸코실락토스 순도를 갖는, 결정질 2'-푸코실락토스 생성물.
  49. 제34항 또는 제35항의 방법으로부터 얻어진 비정질 2'-푸코실락토스.
  50. 제36항 내지 제39항 중 어느 한 항의 방법으로부터 얻어진 식품, 건강 보조 식품 또는 의약품.
  51. 제40항 내지 제45항 중 어느 한 항의 방법으로부터 얻어진 영아용 조제 분유.
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