KR20190123167A

KR20190123167A - 플라티필론을 포함하는 아토피 피부염의 예방 또는 치료용 조성물

Info

Publication number: KR20190123167A
Application number: KR1020180046978A
Authority: KR
Inventors: 김상현; 송경식; 장용현; 이소영; 정나희; 최영애; 김미령; 유주희
Original assignee: 경북대학교 산학협력단
Priority date: 2018-04-23
Filing date: 2018-04-23
Publication date: 2019-10-31
Also published as: KR102068612B1

Abstract

본 발명은 플라티필론을 포함하는 아토피 피부염의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것으로, 스테로이드성 약물이 나타내는 부작용이 없어 장기간 사용이 가능할 뿐만 아니라, 면역글로불린 E 및 G2a 수치를 저하시키고, 염증매개물질인 히스타민의 분비 및 염증성 사이토카인의 발현을 억제하는 효과가 우수하여 아토피 피부염의 예방 또는 치료에 유용하게 활용될 수 있다.

Description

플라티필론을 포함하는 아토피 피부염의 예방 또는 치료용 조성물{Composition comprising Platyphyllone for Preventing or Treating Atopic Dermatitis}

본 발명은 플라티필론을 포함하는 아토피 피부염의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.

최근 산업발달에 따른 신규 환경오염물질 및 인조섬유의 대량 보급에 따른 실내 생활화학물질의 증가로 인하여 피부질환이 크게 증가하고 있다. 특히 생활환경의 변화로 인하여 실내의 카펫에 서식하는 진드기, 습도 저하에 따라 증가하는 먼지, 애완동물의 털, 꽃가루, 새로운 과일 및 음식, 식품첨가물 등의 면역 과민반응을 유발하는 다양한 알레르겐(allergen)에 노출될 기회가 점차 커지고 있다.

유전인자 및 환경인자가 관여하여 발병하는 면역성 질환인 아토피 피부염(atopic dermatitis)은 전 세계적으로 널리 분포하는 질환으로써, 영, 유아기, 특히 생후 2개월 전후에 시작되는데, 이 중 90% 이상이 5세 전에 증상을 보인다. 아토피 피부염은 만성적으로 건조하며 소양감이 심하고 반복적으로 재발되며, 각종 자극에 의해 쉽게 유발된다. 많은 경우에는 1~2주 간격으로 재발하며, 적절한 관리를 하지 않으면 삼출을 동반한 홍반성 발진의 아급성 병변, 가죽과 같이 두꺼워진 태선화의 만성병변으로 진행된다.

최근 아토피 피부염과 같은 알레르기성 질환에 대한 연구가 활발히 진행되고 있으나, 효과적인 알레르기성 질환의 치료 약물의 개발은 아직까지 미비한 실정이다. 현재, 아토피 피부염의 치료를 위하여 면역요법과 약물요법이 시행되고 있으나 그 원인이 아직 확실히 규명되지 않았고, 특별한 치료제가 없어 증상이 심각한 경우 스테로이드제제(부신피질호르몬제)가 사용된다. 그러나, 이러한 스테로이드제제를 지속적으로 투여하게 되면 부신 기능의 저하를 초래하여 여러 가지 부신피질호르몬제에 의한 부작용이 나타나므로, 스테로이드 제제는 장기간 사용에 부적합하다.

이와 같은 아토피 피부염 치료제의 한계로 인하여, 많은 경우 체질개선, 민간요법 또는 한방치료를 병행하여 임상증상의 완화 및 치료효과를 기대하고 있으나, 장기적으로 부작용이 없이 사용할 수 있는 아토피 피부염 치료제의 개발로는 이루어지지 못한 실정이다.

이에, 본 발명자들은 부작용 없이 효과적으로 사용할 수 있는 아토피 피부염 치료제에 대한 연구를 수행하여 본 발명을 완성하였다.

대한민국 특허등록 제10-1756020호

본 발명의 목적은 플라티필론(platyphyllone)을 포함하는, 아토피 피부염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 플라티필론을 포함하는, 아토피 피부염 개선용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 일 양상은 플라티필론(platyphyllone)을 포함하는, 아토피 피부염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

본 명세서에서, '아토피 피부염'은 만성적으로 재발하는 심한 가려움증이 동반되는 피부습진 질환을 의미한다.

아토피 피부염에 대하여 병리학적 검사에서의 조직검사 소견은 병변의 단계에 따라 다르지만, 대체로 만성이 되면 표피가 두꺼워지고 여러 면역반응에 관여하는 세포의 침윤이 관찰되는 것이다. 특히, 면역 반응을 담당하는 비장 세포의 수 및 항원제시 능력이 비정상적으로 증가한다. 또한, 아토피 피부염에 의해 비만세포의 수가 증가하므로, 탈과립 상태를 나타내어 히스타민 수치가 높게 나타나며, 혈청 면역글로불린 E가 증가하고, 만성화가 진행되면 혈청 면역글로불린 G2a의 수치가 높아진다.

본 발명의 약학적 조성물에 포함되는 플라티필론은 5-하이드록시-1,7-비스(4-하이드록시페닐)헵탄-3-온(5-hydroxy-1,7-bis(4-hydroxyphenyl)heptan-3-one)으로써, 비만세포의 활성화를 통해 분비되는 염증매개물질인 히스타민 및 아토피 피부염과 관련된 염증성 사이토카인의 발현을 억제하고, 면역글로불린 E 및 면역글로불린 G2a의 수치를 저하시키는 것으로 확인되었다. 따라서, 플라티필론은 아토피 피부염의 예방 또는 치료에 유용하게 활용할 수 있다.

아토피 피부염을 유발할 수 있는 알레르겐은 실내의 카펫에 서식하는 진드기, 습도 저하에 따라 증가하는 먼지, 애완동물의 털, 꽃가루, 과일, 음식 및/또는 식품첨가물 등 면역 과민반응을 유발하는 것일 수 있다.

본 발명의 일 구체예에 따르면, 상기 아토피 피부염은 진드기에 의해 유발된 것일 수 있다.

본 발명의 일 구체예에 따르면, 상기 진드기는 집먼지진드기(house dust mite)일 수 있다.

집먼지진드기(house dust mite)는 인간이 거주하는 지역에서 서식하는 절지동물로써, 사람의 인설을 먹고 서식하며, 주로 도시형 가옥의 침대매트리스, 카펫, 가구 등에 다량으로 존재하며, 전 세계적으로 알레르기질환의 병인에 가장 중요한 알레르겐으로 알려져 있다. 집먼지진드기의 소화기관에는 여려가지 소화효소가 존재하고, 이는 집먼지진드기가 배설하는 대변을 통해 공기 중으로 퍼져서, 이를 흡입하면 아토피 소인이 있는 사람에서 과민반응의 발생한다. 집먼지진드기 유래 알레르겐에 반복 노출 시 재채기, 콧물과 같은 비염증상, 혹은 천명, 호흡곤란과 같은 천식 증상, 가려움증과 같은 아토피성 피부염 증상이 유발된다.

집먼지진드기는 예를 들어, 유럽집먼지진드기(Dermatophagoides pteronyssinus) 또는 북아메리카집먼지진드기(Dermatophagoides farinae)일 수 있다. 유럽집먼지진드기 유래 알레르겐으로써는 Der p1, Der p2, Der p3, Der p4, Der p6, Der p9, 및 Der p15 등이 있으며, 북아메리카집먼지진드기 유래 알레르겐으로써는 Der f1, Der f2, Der f11, 및 Der f18 등이 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 집먼지진드기를 포함한 알레르겐에 의해 활성화되는 사이토카인인 TNF-α, IFN-γ, IL-4, IL-13, IL-31 및 IL-17A의 발현을 억제시키기 때문에, 집먼지진드기에 의한 아토피 피부염을 효과적으로 예방 또는 치료할 수 있다.

본 발명의 일 구체예에 따르면, 상기 집먼지진드기는 더마토파고이데스 파리내(Dermatophagoides farinae)일 수 있다.

본 발명의 일 구체예에 따른 약학적 조성물은 약학적으로 허용되는 담체를 포함할 수 있다. 본 발명의 일 구체예에 따른 약학적 조성물에 포함되는 약학적으로 허용되는 담체는 약제의 제조시에 통상적으로 이용되는 것으로써, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 트레할로스, 히알루론산, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 일 구체예에 따른 약학적 조성물은 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다. 적합한 약학적으로 허용되는 담체 및 제제는 Remington's Pharmaceutical Sciences (22th ed., 2013)에 상세히 기재되어 있다.

본 발명의 일 구체예에 따른 약학적 조성물은 하나 이상의 아토피 피부염에 활성을 나타내는 물질과 함께 투여될 수 있다.

또한, 본 발명의 일 구체예에 따른 약학적 조성물은 아토피 피부염의 치료를 위하여 단독으로, 또는 수술, 호르몬 치료, 약물치료 및/또는 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 그 제형의 제제화에 필요하고 적절한 각종 기제 및/또는 첨가물을 포함할 수 있으며, 그 효과를 떨어트리지 않는 범위 내에서 비이온 계면활성제, 실리콘 폴리머, 체질안료, 향료, 방부제, 살균제, 산화 안정화제, 유기 용매, 이온성 또는 비이온성 증점제, 유연화제, 산화방지제, 자유 라디칼 파괴제, 불투명화제, 안정화제, 에몰리언트(emollient), 실리콘, α-히드록시산, 소포제, 보습제, 비타민, 곤충 기피제, 향료, 보존제, 계면활성제, 소염제, 물질 P 길항제, 충전제, 중합체, 추진제, 염기성화 또는 산성화제, 또는 착색제 등 공지의 화합물을 더 포함하여 제조될 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하게 처방될 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물의 투여량은 성인 기준으로 0.001~1000㎎/kg일 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 비경구, 예를 들어, 경피 투여할 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 비경구 투여 시 다양한 제형으로 투여될 수 있는데, 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제 등일 수 있으며, 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드, 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.

본 발명의 일 구체예에 따르면, 상기 조성물은 겔, 페이스트, 연고, 산제, 유제 및 에어로졸로 이루어진 군에서 선택되는 제형일 수 있다.

본 발명의 다른 양상은 플라티필론을 포함하는 아토피 피부염 개선용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 화장료 조성물은 아토피 피부염에 의해 나타나는 부종, 홍반, 발적 및/또는 부종 등의 증상을 완화할 수 있으므로, 아토피 피부염을 가진 대상자에서 미용 목적으로 피부 상태를 유지하거나 개선하기 위하여 유용하게 활용될 수 있다.

본 발명의 일 구체예에 따른 플라티필론을 포함하는 화장료 조성물은, 예를 들어, 크림, 에멀션, 무수의 조성물, 수성 분산액, 기름, 우유, 발삼(balsams), 폼, 로션, 젤, 크림 젤, 히드로알콜 용액, 히드로글리콜릭 용액, 도포제, 비누, 샴푸, 유연제, 세럼(serum), 다당류막, 연고, 무스, 포마드, 파우더, 막대기, 연필, 스프레이와 같은 임의의 고체, 액체 또는 반-고체 제제로 제시될 수 있다.

또한, 본 발명의 일 구체예에 따른 플라티필론을 포함하는 화장료 조성물은, 예를 들어, 히드로겔, 접착용 패치, 비-접착용 패치, 마이크로전자 패치 또는 얼굴 마스크와 같은 다른 종류의 고체 용구에 당해 분야의 기술자에게 알려진 사용 기술을 사용하여 포함될 수 있거나, 메이크업 파운데이션, 예를 들어, 유체 파운데이션 및 콤팩트 파운데이션, 메이크업 제거용 로션, 메이크업 제거용 우유, 컨실러, 아이섀도, 립스틱, 립 프로텍터, 립 글로스 및 파우더와 같은 기타 메이크업 제품에 포함될 수 있다.

본 발명의 일 구체예에 따르면, 상기 화장료 조성물은 화장수, 겔, 로션, 연고, 크림, 팩, 에멀젼, 에센스, 패치 및 분무제로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 제형일 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 그 제형의 제제화에 필요하고 적절한 각종 기제 및/또는 첨가물을 포함할 수 있으며, 그 효과를 떨어뜨리지 않는 범위 내에서 비이온 계면활성제, 실리콘 폴리머, 체질안료, 향료, 방부제, 살균제, 산화 안정화제, 유기 용매, 이온성 또는 비이온성 증점제, 유연화제, 산화방지제, 자유 라디칼 파괴제, 불투명화제, 안정화제, 에몰리언트(emollient), 실리콘, α-히드록시산, 소포제, 보습제, 비타민, 곤충 기피제, 향료, 보존제, 계면활성제, 소염제, 물질 P 길항제, 충전제, 중합체, 추진제, 염기성화 또는 산성화제, 또는 착색제 등 공지의 화합물을 더 포함하여 제조될 수 있다.

본 발명의 일 구체예에 따른 플라티필론을 포함하는 화장료 조성물은 플라티필론의 경피 흡수를 증가시키는 물질, 예를 들어, 디메틸설폭사이드, 디메틸아세트아미드, 디메틸포름아미드, 계면활성제, 아존(azone)(1-도데실아자시클로헵탄-2-온), 알콜, 요소, 에톡시디글리콜, 아세톤, 프로필렌 글리콜 또는 폴리에틸렌 글리콜을 포함할 수 있으나, 이에 한정하지는 않는다. 더 나아가, 플라티필론의 보다 큰 침투를 위하여 이온삼투요법, 초음파 치료, 전기천공, 마이크로전자 패치, 기계적 압력, 삼투압 경도, 폐색성 치료, 미세주입법 또는 예를 들어, 산소압에 의한 주사와 같은 압력 방식에 의한 무바늘주사 또는 이들의 임의의 조합과 같은 방식에 의하여 적용될 수 있다.

본 발명의 아토피 피부염의 예방 또는 치료용 조성물은 스테로이드성 약물이 나타내는 부작용이 없어 장기간 사용이 가능할 뿐만 아니라, 면역글로불린 E 및 G2a 수치를 저하시키고, 염증매개물질인 히스타민 및 염증성 사이토카인의 발현을 억제하는 효과가 우수하여 아토피 피부염의 예방 또는 치료에 유용하게 활용될 수 있다.

도 1은 아토피 피부염 동물 모델의 제작 및 플라티필론 처리 스케줄을 나타낸 것이다. 집먼지 진드기 추출물(DFE)및 2,4-디니트로클로로벤젠(DNCB)을 처리하여 아토피 피부염을 유도하였으며, 실험물질로는 플라티필론(platyphyllone)을, 양성대조군으로는 덱사메타손(Dexa)을 사용하였다.
도 2는 아토피 피부염 동물 모델에서 플라티필론의 농도별 처리에 따른 개선효과를 나타낸 사진이다.
도 3은 아토피 피부염(AD) 동물 모델에서 대조군(Con), 플라티필론 처리군 및 덱사메타손(Dexa) 처리군의 귀 두께를 처리 일자별로 나타낸 그래프이다.
도 4는 아토피 피부염 동물 모델에서 플라티필론의 농도별 처리에 따른 면역글로불린 E의 수치 감소효과를 나타낸 그래프이다.
도 5는 아토피 피부염 동물 모델에서 플라티필론의 농도별 처리에 따른 면역글로불린 G2a의 수치 감소효과를 나타낸 그래프이다.
도 6은 아토피 피부염 동물 모델에서 플라티필론의 농도별 처리에 따른 히스타민의 분비 억제효과를 나타낸 그래프이다.
도 7은 아토피 피부염 동물 모델에서 플라티필론의 농도별 처리에 따른 염증성 사이토카인의 발현 억제효과를 나타낸 그래프이다.

이하 하나 이상의 구체예를 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나, 이들 실시예는 하나 이상의 구체예를 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.

1. 자작나무로부터 플라티필론의 추출

1-1. 자작나무 추출물 제조

대구약령시에서 구입한 자작나무 10kg을 메탄올로 6시간 환류추출하고, 여과지를 이용하여 잔사를 제거하고, 여액을 감압농축기로 농축하여 메탄올 엑스 321.4g을 얻었다. 이를 적당량의 물에 분산시키고, 동일한 양의 헥산, 디클로로메탄, 초산에틸, 부탄올로 순차적으로 분배하여 각 유기용매 가용성 분획을 얻었다. 이중 디클로로메탄 가용성 분획(49.6g)을 실리카겔 컬럼크로마토그라피(Merck Art. 7734, 9.0×82cm, 디클로로메탄:메탄올=100:1 내지 1:1)을 통해 총 25개의 분획으로 나누었다. 이 중 6번째 분획 1361mg에 대하여 역상크로마토그라피(3×30cm, 물:메탄올=4:1 내지 1:9)하여 20mg의 추출물(플라티필론)을 수득하였다.

1-2. 플라티필론의 확인

1-1에서 제조한 추출물을 동정하기 위하여 ¹H-NMR(CD₃OD, 400MHz) 및 ¹³C-NMR(CD₃OD, 100MHz)을 수행하였다.

¹H-NMR에서, δ6.99(4H, d, J=8.4Hz), 6.68(4H, dd, J=8.4Hz), 4.00(1H, quintet, J=6.4Hz), 2.73(4H, m), 2.53(4H, m), 1.65(2H, dd, J=8.0Hz)의 피크를 확인하였으며, ¹³C-NMR에서, δ210.5, 155.2, 132.6, 131.8, 128.8, 114.7, 66.8, 49.8, 44.9, 39.0, 30.0, 28.4의 피크를 확인하였다.

¹H-NMR 및 ¹³C-NMR을 종합하여 판단한 결과, 1-1에서 제조한 추출물은 플라티필론임을 확인하였다.

2. 플라티필론 의 아토피 피부염 억제 효과 검증

2-1. 아토피 피부염 동물 모델 제작 및 플라티필론 처리

플라티필론의 아토피 피부염(atopic dermatitis) 억제 효과를 확인하기 위하여, 아토피 피부염 마우스모델을 제작하였다.

구체적으로, 6주령 BALB/c 암컷 마우스(일본 SLC Inc. 구입)를 사용하였고, 실험 시작 전 7일간의 적응기를 가졌다. 아토피 피부염의 유도를 위해 집먼지 진드기 추출물(house dust mite (Dermatophagoides farinae) extract: DFE) 및 2,4-디니트로클로로벤젠(2,4-dinitrochlorobenzene: DNCB)을 사용하였다. 4주 동안 마우스의 귀에 반창고를 사용하여 동일한 힘과 횟수로 스트립핑(stripping)을 3회 반복한 후 AOO(아세톤/올리브 오일, 1:3)에 녹인 DNCB(1%)를 매주 월요일에 마우스 귀의 앞뒤 면에 20㎕/ear로 도포하고 매주 금요일 DFE를 10mg/ml으로 녹인 용액을 마우스 귀의 앞뒤 면에 20㎕/ear로 도포하여 24시간 뒤인 화요일과 토요일마다 귀 두께를 측정하였으며, 이에 대한 방법은 도 1에 나타내었다.

유도 2주차부터 3주 동안 플라티필론을 농도별로 귀에 도포하였으며, 실험 그룹은 하기와 같이 나누었다.

1: 정상 그룹

2: 아토피 피부염 유발(DFE/DNCB 20㎕/ear) 그룹

3: 아토피 피부염 유발 + 플라티필론(0.1㎍/ear) 그룹

4: 아토피 피부염 유발 + 플라티필론(1㎍/ear) 그룹

5: 아토피 피부염 유발 + 플라티필론(10㎍/ear) 그룹

6: 아토피 피부염 유발 + 양성대조군(덱사메타손(Dexamethasone: Dexa) 1μg/ear) 그룹

2-2. 플라티필론 에 의한 아토피 피부염 모델의 귀 두께 감소 효과 확인

2.1에서 제작한 동물 모델의 귀 두께를 플라티필론 처리 후 1, 2, 5, 9, 12, 16, 19, 23 및 26일째에 측정한 결과, 플라티필론의 도포에 의해 농도 의존적으로 아토피 피부염에 의한 귀 두께가 감소하는 것을 확인하였다(도 2 및 도 3).

2-3. 플라티필론 의 아토피 피부염 모델에서의 혈청 면역글로불린 E 및 면역글로불린 G2a의 수치 감소 효과 확인

아토피 피부염에서 증가하는 면역글로불린 E 및 면역글로불린 G2a에 대한 플라티필론의 수치 감소 효과를 확인하였다.

2.1에서 제작한 동물 모델의 4주간의 실험 종료 후 마우스를 희생시킨 뒤 채혈한 다음 2,000g에서 15분간 원심 분리하여 혈청을 분리하고, BD Biosciences의 ELISA 키트를 사용하여 면역글로불린 E와 면역글로불린 G2a의 수치를 측정하였다.

구체적으로, 코팅 버퍼(coating buffer)(1L 증류수에 8.40g NaHCO₃, 3.56g Na₂CO_3,pH9.5)에 포획 항체(Anti-mouse IgE, anti-mouse IgG2a)를 각각 1:250으로 희석시킨 뒤, 각 웰에 100㎕씩 분주하고, 실온에서 3시간 동안 반응시키고, 워싱 버퍼(wash buffer)(0.05% Tween-20 PBS)로 3회 세척하였다. 그 다음 assay 희석액(PBS 중 10% FBS)을 각 웰 당 200㎕씩 분주한 뒤 실온에서 1시간 반응시키고 이를 다시 워싱 버퍼로 3회 세척하였다. 그 다음 마우스 혈청을 assay 희석액에 1:100으로 희석하여 100㎕씩 각 웰 당 분주한 뒤 실온에서 2시간 반응시키고 5회 세척한 뒤 검출 항체(Biotin rat-anti mouse IgE, Bioninylated-anti-mouse IgG2a)와 효소 시약(enzyme reagent)(SAv-HRP)을 각각 1:250으로 assay 희석액에 희석하여 각 웰 당 100㎕씩을 가하여 1시간 동안 실온에서 반응시킨 후 각각 1분 동안 7회 세척하였다. 마지막으로, 기질 용액(substrate solution)을 100㎕씩 분주하고 빛을 차단한 뒤 30분 방치한 다음 50㎕의 정지액(stop solution)을 처리한 후 ELISA 판독기로 450nm에서 흡광도를 측정하였다.

그 결과, 플라티필론은 농도 의존적으로 혈청 면역글로불린 E 및 면역글로불린 G2a의 수치를 감소시키는 것을 확인하였다(도 4 및 도 5).

2-4. 플라티필론 의 아토피 피부염 모델에서의 히스타민 분비에 대한 억제 효과 확인

아토피 피부염에서 증가하는 히스타민 분비에 대한 플라티필론의 분비 억제 효과를 확인하였다.

2.1에서 제작한 동물 모델의 4주간의 실험 종료 후 마우스를 희생시킨 뒤 채혈한 다음 2,000g에서 15분간 원심 분리하여 혈청을 분리하였다. 에펜돌프 튜브에 혈청을 취하여 PBS에 1:1로 희석한 뒤 0.1M HCl 390㎕와 60% 과염소산 용액 10㎕를 혼합한 후에 원심분리(12,000g, 20분)하였다. 상층액 200㎕를 취해 5M NaOH 용액 100㎕, n-부탄올 800㎕, 5M NaCl 100㎕을 혼합한 튜브에 넣고 이를 진탕한 후에 원심분리(12,000g, 20분)를 수행하였다. 상기 튜브에서 부탄올 층 500㎕를 취해 0.1M HCl 200㎕, n-헵테인 500㎕를 첨가하여 혼합하여 다시 원심분리(12,000g, 20분)를 수행하고, 수득된 수층 150㎕에 1M NaOH 40㎕ 및 1% o-프탈알데히드 용액(Sigma) 10㎕를 가하여 혼합하고 5분 동안 방치하였다. 그 후, 방출파장(emission) 440nm 및 여기파장(excitation) 360nm에서 형광강도를 형광분석기(RF-5301 PC, Shimadzu)를 이용하여 측정하였다.

그 결과, 플라티필론은 농도 의존적으로 혈청 히스타민의 분비를 억제함을 확인하였다(도 6).

2-5. 플라티필론의 아토피 피부염 모델에서의 염증성 사이토카인의 발현에 대한 억제 효과 확인

아토피 피부염에서 증가하는 염증성 사이토카인의 발현에 대한 플라티필론의 억제 효과를 확인하였다.

2.1에서 제작한 동물 모델의 4주간의 실험 종료 후 마우스를 희생시킨 뒤, 귀 조직을 얻어, 귀 조직내에서 발현된 염증성 사이토카인의 발현을 측정하였다.

구체적으로, Maxime RT PreMix(Random primer, iNtRON Biotechnology)를 사용하여 cDNA를 합성하고, 각 튜브 당 2㎕의 cDNA, 각각 1㎕의 센스 및 안티센스 프라이머(GenoTech Crop)(표 1) 용액(0.4μM), 12.5㎕의 SYBR Premix Ex Taq(Takarabio), 8.5㎕의 dH₂O를 함께 혼합하여 총 25㎕가 되도록 하였다. TNF-α, IFN-γ, IL-4, IL-13, IL-31 및 IL-17A mRNA의 발현을 qPCR을 수행한 후, TP850 소프트웨어를 사용하여 분석하였다.

프라이머		프라이머 염기서열(5'→3')	서열번호
TNF-α	forward	AAGCCTGTAGCCCACGTCGTA	서열번호 1
TNF-α	reverse	GGCACCACTAGTTGGTTGTCTTTG	서열번호 2
IFN-γ	forward	TCAAGTGGCATAGATGTGGAAGAA	서열번호 3
IFN-γ	reverse	TGGCTCTGCAGGATTTTCATG	서열번호 4
IL-4	forward	ACAGGAGAAGGGACGCCAT	서열번호 5
IL-4	reverse	GAAGCCGTACAGACGAGCTCA	서열번호 6
IL-13	forward	GGGACATGGTTTGCTGCCTA	서열번호 7
IL-13	reverse	AGACAGGAGTGTTGCTCTGG	서열번호 8
IL-31	forward	TCGGTCATCATAGCACATCTGGAG	서열번호 9
IL-31	reverse	GCACAGTCCCTTTGGAGTTAAGTC	서열번호 10
IL-17A	forward	TCCCTCTGTGATCTGGGAAG	서열번호 11
IL-17A	reverse	CTCGACCCTGAAAGTGAAGG	서열번호 12

그 결과, 플라티필론은 농도 의존적으로 염증성 사이토카인의 발현을 억제함을 확인하였다(도 7).

이제까지 본 발명에 대하여 그 실시예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.

<110> Kyungpook National University Industry-Academic Cooperation Foundation <120> Composition comprising Platyphyllone for Preventing or Treating Atopic Dermatitis <130> PN180063 <160> 12 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TNF-a_forward <400> 1 aagcctgtag cccacgtcgt a 21 <210> 2 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TNF-a_reverse <400> 2 ggcaccacta gttggttgtc tttg 24 <210> 3 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IFN-gamma_forward <400> 3 tcaagtggca tagatgtgga agaa 24 <210> 4 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IFN-gamma_reverse <400> 4 tggctctgca ggattttcat g 21 <210> 5 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IL-4_forward <400> 5 acaggagaag ggacgccat 19 <210> 6 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IL-4_reverse <400> 6 gaagccgtac agacgagctc a 21 <210> 7 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IL-13_forward <400> 7 gggacatggt ttgctgccta 20 <210> 8 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IL-13_reverse <400> 8 agacaggagt gttgctctgg 20 <210> 9 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IL-31_forward <400> 9 tcggtcatca tagcacatct ggag 24 <210> 10 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IL-31_reverse <400> 10 gcacagtccc tttggagtta agtc 24 <210> 11 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IL-17A_forward <400> 11 tccctctgtg atctgggaag 20 <210> 12 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IL-17A_reverse <400> 12 ctcgaccctg aaagtgaagg 20

Claims

플라티필론(platyphyllone)을 포함하는 아토피 피부염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
제 1 항에 있어서, 상기 아토피 피부염은 진드기에 의해 유발된 것인 아토피 피부염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
제 2 항에 있어서, 상기 진드기는 더마토파고이데스 파리내(Dermatophagoides farinae)인 것인 아토피 피부염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
플라티필론(platyphyllone)을 포함하는 아토피 피부염 개선용 화장료 조성물.
제 4 항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 화장수, 겔, 로션, 연고, 크림, 팩, 에멀젼, 에센스, 패치 및 분무제로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 제형인 것인 아토피 피부염 개선용 화장료 조성물.