KR20190095943A - 고갈 활성을 갖는 인간화 cxcr3 항체 및 이의 사용 방법 - Google Patents

고갈 활성을 갖는 인간화 cxcr3 항체 및 이의 사용 방법 Download PDF

Info

Publication number
KR20190095943A
KR20190095943A KR1020197020841A KR20197020841A KR20190095943A KR 20190095943 A KR20190095943 A KR 20190095943A KR 1020197020841 A KR1020197020841 A KR 1020197020841A KR 20197020841 A KR20197020841 A KR 20197020841A KR 20190095943 A KR20190095943 A KR 20190095943A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
ser
gly
leu
thr
val
Prior art date
Application number
KR1020197020841A
Other languages
English (en)
Inventor
윌리엄 에이치. 브론디크
류인 추
티모시 디. 코너스
성해 박
화웨이 추
미셸 유드
Original Assignee
사노피
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 사노피 filed Critical 사노피
Publication of KR20190095943A publication Critical patent/KR20190095943A/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2866—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for cytokines, lymphokines, interferons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/195—Chemokines, e.g. RANTES
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/10—Immunoglobulins specific features characterized by their source of isolation or production
    • C07K2317/14—Specific host cells or culture conditions, e.g. components, pH or temperature
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/40—Immunoglobulins specific features characterized by post-translational modification
    • C07K2317/41—Glycosylation, sialylation, or fucosylation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/524—CH2 domain
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/72—Increased effector function due to an Fc-modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

인간화 CXCR3 항체, 및 CXCR3-연관된 장애, 예컨대 제1형 진성 당뇨병(T1D), 구체적으로 신규 발병 T1D, 및 건선을 치료하기 위한 항체의 사용 방법이 제공된다. 특정 실시 형태에서, 항-CXCR3 항체는 표면 상에서 CXCR3을 발현하는 세포에 대하여 향상된 이펙터 기능을 갖는 인간화 항-인간 CXCR3 항체이다. 이 항체를 코딩하는 핵산 서열, 및 이 항체를 포함하는 제약 조성물이 또한 제공된다.

Description

고갈 활성을 갖는 인간화 CXCR3 항체 및 이의 사용 방법
인간화 항-CXCR3 항체 및 CXCR3 신호전달과 연관된 장애, 예컨대 제1형 진성 당뇨병(1형 진성 당뇨병; T1D) 및 건선을 치료하기 위한 항체의 사용 방법이 본원에서 제공된다.
제1형 당뇨병은 포도당 항상성을 유지하기에 충분한 인슐린을 생성하지 못하는 것을 특징으로 한다. 이 장애는 췌장 β-세포의 자가면역-매개된 파괴에 의해 야기되는 것으로 생각된다. 제1형 당뇨병과 연관된 자가면역은 B 및 T 자가면역성 림프구 둘 다의 참여를 수반한다. 제1형 당뇨병의 발생은 자가반응성 T 세포에 의해 매개될 수 있으며, 이는 활성화 T 세포로 침윤된 소도를 보여주는 T1D 진단 시점 근처에서 수득된 조직 생검체에 의해 입증되는 바와 같다(문헌[Bottazzo et al., N Engl J Med 313: 353-60 (1985)]; 문헌[Hanninen et al., J Clin Invest 90: 1901-10 (1992)]; 문헌[Itoh et al., J Clin Invest 92: 2313-22 (1993)]; 문헌[Imagawa, et al., Diabetes 50: 1269-73 (2001)]; 문헌[Wilcox et al., Clinical and Experimental Immunology, 155: 173-181 (2009)]; 문헌[Rowe et al. Semin Immunopathol 3:29-43 (2011)]; 문헌[Coppieters et al., J. Exp. Med. 209: 51-60 (2012)]).
제1형 당뇨병(T1D)은 유년기에서 가장 일반적인 만성 질환 중 하나로서, 이는 20세 미만의 청년에서의 모든 당뇨병 사례 중 85% 이상을 차지한다(문헌[Pediatrics. 2006 Oct;118(4):1510-8; 문헌[Diabetes Res Clin Pract. 2008 Nov;82(2):247-55]). 전 세계적으로 T1D의 발생률이 매년 3% 증가할 것으로 예상되는 것이 관심사이며, 이때 매해 86,000명의 청소년이 새롭게 진단된다(문헌[Diabetologia. 2012 Aug;55(8):2142-7]).
건선은 두꺼운 은색 인설 및 가려운 건성 적색 반(patch)을 특징으로 하는 흔한 만성 피부병이다. 이것은 때때로 관절염(건선성 관절염)으로 나타나거나 관절염(건선성 관절염)을 동반한다. 건선은 또한 면역계의 과활성 T 세포에 의해 야기되는 것으로 생각된다.
C-X-C 모티프 케모카인 수용체 3(CXCR3)은 주로 항원 경험(기억), 이펙터 및 활성화 T 세포 상에서 발현되는 케모카인 수용체이며, 이러한 T 세포 하위세트를 그의 일차 리간드인 CXCL9(MIG), CXCL10(IP-10), 및 CXCL11(I-TAC)에 반응하여 조직 염증 부위로 모집하는 데 관여한다. CXCR3 및 CXCL10은 인간 T1D 환자에서 발현된다(문헌[Uno et al., Endocr J 57: 991-96 (2010)]; 문헌[Roep et al., Clin Exp Immunol 159: 338-43 (2003)]; 문헌[Tanaka et al., Diabetes 58: 2285-2291 (2009)]). 이러한 환자에서, CXCL10은 소도 내의 잔존 인슐린-생성 베타 세포에서 발현된다. CXCR3은 소도를 둘러싸고 있는 침입 T 세포 상에서 발현된다. 유사한 발현 패턴이 제1형 당뇨병의 마우스 모델인 비-비만성 당뇨(non-obese diabetic, NOD) 마우스에서 재현되었다(문헌[Morimoto et al., J Immunol 173: 7017-24 (2004)]; 문헌[Li et al., World J Gastroenterol 11(30): 4750-2 (2005)]; 문헌[Sarkar et al., Diabetes 61(2):436-46 (2012)]).
CXCR3은 진피 CD3+ 림프구 및 형질세포양 수지상 세포에 의해 발현되며, 그의 케모카인 리간드, CXCL10 및 CXCL9는 건선 병변에서 상향조절된다(문헌[Rottman et al., Lab Invest 81(3): 335-47 (2001)]; 문헌[Chen et al., Arch Dermatol Res 302(2): 113-23 (2010)]).
또한 CXCR3은, 특정 유형의 염증 조직에 존재하는 침윤 T 세포 상에서 발현되는 반면, CXCL9, CXCL10 및 CXCL11은 종종 염증 병변 내의 국소 세포에 의해 생성된다.
CXCR3의 상향조절은 다양한 자가면역 장애에 관련되었다. CXCR3 발현은 항원에 의한 활성화시에 상향조절된다(대체로 나이브(naive) T 세포에서는 부재함). CXCR3은 이러한 세포(T 헬퍼 1(Th1) 세포를 포함함)를 그의 일차 리간드에 응답하여 조직 염증 부위로 모집한다. 랑게르한스(Langerhans)의 소도에서의 베타 세포는 CXCL9 및 CXCL10을 발현하며(문헌[Frigerio at al., Nat Med 8: 1414-20 (2002)), 췌장을 침윤한 T 세포는 CXCR3을 발현한다(문헌[Christen et al., J Immunol 171: 6838-45 (2003)]; 문헌[Van Halteren at al., Diabetologia 48: 75-82 (2005)]; 문헌[Uno et al., Endocr J 57: 991-96 (2010)]; 문헌[Roep et al., Clin Exp Immunol 159: 338-43 (2003)]; 문헌[Tanaka et al., Diabetes 58: 2285-2291 (2009)]; 문헌[Sarkar et al., Diabetes 61(2):436-46 (2012)]). Youd 등의 미국 특허 제8,865,870호에는 항-CXCR3 항체가 개시되어 있다.
현재, T1D에 대한 승인된 비-인슐린 치료 옵션이 없다. 질환 과정을 변화시키도록 T1D 및 건선을 잠재적으로 치료하기 위하여 에이전트(agent)를 연구하고 있는 중이다. 그럼에도 불구하고, T1D는 유의한 만성 질환 부담을 지니며, 전 세계적으로 주요한 공중 보건상의 관심사로 남아있다. T1D, 건선 및 CXCR3-관련 장애의 진행을 감소시키거나 치료하기 위한 추가적인 에이전트에 대한 필요성이 존재한다.
인간 CXCR3에 특이적으로 결합하는 인간화 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 본원에서 제공된다. 특정 실시 형태에서, 본원에서 제공된 항-CXCR3 항체는 CXCR3-발현 세포의 고갈을 유도하는 능력을 갖거나, 또는 CXCR3-발현 세포의 고갈을 유도하는 능력이 향상되게 조작되어 CXCR3-연관 질환 및 장애를 치료할 수 있다. CXCR3에 특이적으로 결합하는 인간화 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 투여함으로써 T1D를 치료하는 방법이 본원에서 제공된다. CXCR3에 특이적으로 결합하는 인간화 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 투여하는 단계를 포함하는 건선의 치료 방법이 본원에서 제공된다.
일부 실시 형태에서, 본원에서 제공된 인간화 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 (VH의 D-영역 잔기를 제외한 VH 및 VL 사슬의 모든 잔기들을 비교할 때) 적어도 0.885의 배선성 점수(germinality score)를 갖거나 (IMTG로 결정할 경우 단지 프레임워크 영역의 잔기들을 비교할 때) 적어도 0.950의 배선성 점수를 갖는다. 일부 실시 형태에서, 본원에 제공된 인간화 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 적어도 1 x 10-9 M의 KD를 갖는다. 일부 실시 형태에서, 본원에 제공된 인간화 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 7 x 10-5 1/Ms 미만의 kd를 갖는다. 일부 실시 형태에서, 본원에서 제공된 인간화 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 (VH의 D-영역 잔기를 제외한 VH 및 VL 사슬의 모든 잔기들을 비교할 때) 적어도 0.885의 배선성 점수, 또는 (IMTG로 결정할 경우 단지 프레임워크 영역의 잔기들을 비교할 때) 적어도 0.950의 배선성 점수 및 적어도 1 x 10-9 M의 KD를 갖는다. 일부 실시 형태에서, 본원에서 제공된 인간화 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 (VH의 D-영역 잔기를 제외한 VH 및 VL 사슬의 모든 잔기들을 비교할 때) 적어도 0.885의 배선성 점수, 또는 (IMTG로 결정할 경우 단지 프레임워크 영역의 잔기들을 비교할 때) 적어도 0.950의 배선성 점수, 적어도 1 x 10-9 M의 KD, 및 7 x 10-5 1/Ms 미만의 kd를 갖는다.
특정 실시 형태에서, 특정한 경쇄 가변 영역이 특정한 중쇄 가변 영역과 쌍을 형성한 것을 포함하는 인간화 CXCR3 항체가 제공된다. 특정 실시 형태에서, 본원에 제공된 인간화 CXCR3 항체는 표면 상에서 인간 CXCR3을 발현하는 세포에 대한 향상된 이펙터 기능을 부여하는 변이형 인간 IgG1 Fc 영역을 포함한다.
제1 양태에서, 중쇄 가변 영역(VH)을 갖는 중쇄(HC) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 갖는 경쇄(LC)를 포함하는 인간화 항-인간 C-X-C 모티프 케모카인 수용체 3(CXCR3) 항체, 또는 이의 제약 제형이 본원에서 제공된다.
제1 양태의 일 실시 형태에서, 본원에 제공된 인간화 항-인간 CXCR3 항체의 VH 및 VL은 표 1에 나타낸 서열 쌍의 아미노산 서열을 포함하며, HC는 다음 서열 번호 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 인간 IgG1 Fc 영역을 추가로 포함한다: 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 또는 11.
[표 1]
Figure pct00001
제1 양태의 또 다른 실시 형태에서, 본원에 제공된 인간화 항-인간 CXCR3 항체의 VH는 서열 번호 20의 아미노산 서열을 포함하며, VL은 서열 번호 24의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 인간화 인간 IgG1 Fc 영역은 서열 번호 2, 또는 서열 번호 9, 또는 서열 번호 10, 또는 서열 번호 11의 아미노산 서열을 포함한다.
제1 양태의 또 다른 실시 형태에서, 본원에 제공된 인간화 항-인간 CXCR3 항체의 VH는 서열 번호 18의 아미노산 서열을 포함하며, VL은 서열 번호 22의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항체는 인간 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 인간 IgG1 Fc 영역은 서열 번호 2, 또는 서열 번호 9, 또는 서열 번호 10, 또는 서열 번호 11의 아미노산 서열을 포함한다.
제1 양태의 다른 실시 형태에서, 본원에 제공된 인간화 항-인간 CXCR3 항체의 HC 및 LC는 표 2에 나타낸 서열 번호 쌍의 아미노산 서열을 포함한다.
[표 2]
Figure pct00002
제1 양태의 또 다른 실시 형태에서, 본원에 제공된 인간화 항-인간 CXCR3 항체의 HC는 감소된 푸코스 함량을 갖는 인간 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제공된 인간화 항-인간 CXCR3 항체는 당화 억제제를 함유하는 배지에서 배양되는 숙주 세포에서 생성된다. 일 실시 형태에서, 당화 억제제는 키푸넨신이다.
제2 양태에서, 중쇄 가변 영역(VH)을 갖는 중쇄(HC) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 갖는 경쇄(LC)를 포함하는 인간화 항-인간 CXCR3 항체를 코딩하는 핵산이 본원에서 제공된다.
제3 양태에서, 대상체에서 CXCR3 발현 세포를 고갈시키는 방법에서 사용하기 위한 인간화 항-인간 CXCR3 항체 또는 이의 제약 조성물이 본원에 제공되며, 여기서, 인간화 항-인간 CXCR3 항체는 중쇄 가변 영역(VH)을 갖는 중쇄(HC) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 갖는 경쇄(LC)를 포함한다. 일부 실시 형태에서, CD4+ T-세포가 고갈된다. 일부 실시 형태에서, CD8+ T-세포가 고갈된다. 일부 실시 형태에서, CD4+ 및 CD8+ T 세포가 고갈된다. 일부 실시 형태에서, CD4+ 기억 T-세포가 고갈된다. 일부 실시 형태에서, CD8+ 기억 T-세포가 고갈된다. 일부 실시 형태에서, CD4+ 기억 T-세포 및 CD8+ 기억 T-세포가 고갈된다. 일 실시 형태에서, 대상체는 T-세포-매개 자가면역 질환을 갖는다. 또 다른 실시 형태에서, 대상체는 신규 발병 제1형 진성 당뇨병이 있다. 또 다른 실시 형태에서, 대상체는 건선이 있다.
제4 양태에서, T-세포-매개 자가면역 질환을 치료하는 방법에서 사용하기 위한 인간화 항-인간 CXCR3 항체 또는 이의 제약 조성물이 본원에 제공되며, 여기서, 인간화 항-인간 CXCR3 항체는 중쇄 가변 영역(VH)을 갖는 중쇄(HC) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 갖는 경쇄(LC)를 포함한다. 일 실시 형태에서, T-세포-매개 질환은 신규 발병 제1형 진성 당뇨병이다. 또 다른 실시 형태에서, T-세포-매개 질환은 건선이다.
제5 양태에서, T-세포-매개 자가면역 질환을 치료하는 방법이 본원에 제공되며, 본 방법은 이를 필요로 하는 대상체에게 중쇄 가변 영역(VH)을 갖는 중쇄(HC) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 갖는 경쇄(LC)를 포함하는 인간화 항-인간 CXCR3 항체를 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시 형태에서, T-세포-매개 자가면역 질환은 신규 발병 제1형 진성 당뇨병이다. 일부 실시 형태에서, T-세포-매개 자가면역 질환은 건선이다.
제6 양태에서, T-세포-매개 자가면역 질환을 치료하는 방법이 본원에 제공되며, 본 방법은 이를 필요로 하는 대상체에게 중쇄 가변 영역(VH)을 갖는 중쇄(HC) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 갖는 경쇄(LC)를 포함하는 인간화 항-인간 CXCR3 항체를 투여하기 위한 설명서를 제공하는 단계를 포함한다. 일부 실시 형태에서, T-세포-매개 자가면역 질환은 신규 발병 제1형 진성 당뇨병이다. 일부 실시 형태에서, T-세포-매개 자가면역 질환은 건선이다.
제7 양태에서, T-세포-매개 자가면역 질환을 치료하기 위한 키트가 본원에 제공되며, 이는 중쇄 가변 영역(VH)을 갖는 중쇄(HC) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 갖는 경쇄(LC)를 포함하는 인간화 항-인간 CXCR3 항체, 및 인간화 항-인간 CXCR3을 이를 필요로 하는 인간 대상체에게 투여하기 위한 설명서를 포함한다.
본원에 제공된 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 및 제7 양태의 일부 실시 형태에서, 인간화 항-인간 CXCR3 항체의 VH 및 VL은 표 1에 나타낸 서열 쌍의 아미노산 서열을 포함하며, HC는 서열 번호 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 또는 11의 아미노산 서열을 포함하는 인간 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 또 다른 실시 형태에서, VH는 서열 번호 20의 아미노산 서열을 포함하며, VL은 서열 번호 24의 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 실시 형태에서, VH는 서열 번호 20의 아미노산 서열을 포함하며, VL은 서열 번호 24의 아미노산 서열을 포함하며, 인간 IgG1 Fc 영역은 서열 번호 2, 또는 서열 번호 9, 또는 서열 번호 10, 또는 서열 번호 11의 아미노산 서열을 포함한다.
본원에 제공된 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 및 제7 양태의 다른 실시 형태에서, VH는 서열 번호 18의 아미노산 서열을 포함하며, VL은 서열 번호 22의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 인간화 인간 IgG1 Fc 영역은 서열 번호 2, 또는 서열 번호 9, 또는 서열 번호 10, 또는 서열 번호 11의 아미노산 서열을 포함한다.
본원에 제공된 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 및 제7 양태의 다른 실시 형태에서, 항체의 HC 및 LC는 표 2에 나타낸 서열 쌍의 아미노산 서열을 포함한다.
본원에 제공된 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 및 제7 양태의 다른 실시 형태에서, 본원에 제공된 인간화 항-인간 CXCR3 항체의 HC는 감소된 푸코스 함량을 갖는 인간 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제공된 인간화 항-인간 CXCR3 항체는 당화 억제제를 함유하는 배지에서 배양되는 숙주 세포에서 생성된다. 일부 실시 형태에서, 당화 억제제는 키푸넨신이다.
도 1은 다음과 같이 항체를 처리한 후 혈중 다양한 T 세포 하위세트의 양을 나타내는 일련의 6개의 그래프이다: "햄스터 CXCR3-173"(햄스터 항-마우스 CXCR3), "CXCR3 mIgG2a Dab"(이펙터 기능을 제거하기 위한 돌연변이로 마우스 IgG2a 불변 영역이 치환되도록 조작된 햄스터 CXCR3-173), "CXCR3 mIgG2a WT"(마우스 야생형 IgG2a 불변 영역이 치환되도록 조작된 햄스터 CXCR3-173), "CXCR3 mIgG1-agly"(N297G 돌연변이로 마우스 IgG1 불변 영역이 치환되도록 조작된 햄스터 CXCR3-173), 및 "비처리"(비처리 대조군을 나타냄).
도 2a는 표면 플라즈몬 공명(Biacore) 결합 분석법으로 측정되는 바와 같이, 재조합 마우스 FcγRI(mFcRI)에 의한 다양한 Fc-조작된 버전의 CXCR3-173의 결합성을 도시한 일련의 6개의 그래프이다. BMP5, 항-BMP5 mIgG1 아이소타입 대조군; mIgG1 agly, N297G 돌연변이로 마우스 IgG1 불변 영역이 치환되도록 조작된 CXCR3-173; mIgG2a WT, 마우스 야생형 IgG2a 불변 영역이 치환되도록 조작된 CXCR3-173; mIgG2a Dab, 이펙터 기능을 제거하기 위한 돌연변이로 마우스 IgG2a 불변 영역이 치환되도록 조작된 CXCR3-173; mIgG3, 마우스 야생형 IgG3 불변 영역이 치환되도록 조작된 CXCR3-173; 햄스터 CXCR3, 모 햄스터 mAb CXCR3-173.
도 2b는 Biacore 결합 분석법으로 측정되는 바와 같이, 재조합 마우스 FcγRIIb(mFcRIIb)에 의한 다양한 Fc-조작된 버전의 CXCR3-173의 결합성을 도시한 일련의 6개의 그래프이다. 항체 명칭은 도 2a에 대한 것과 동일하다.
도 2c는 Biacore 결합 분석법으로 측정되는 바와 같이, 재조합 마우스 FcγRIII(mFcRIII)에 의한 다양한 Fc-조작된 버전의 CXCR3-173의 결합성을 도시한 일련의 6개의 그래프이다. 항체 명칭은 도 2a에 대한 것과 동일하다.
도 2d는 Biacore 결합 분석법으로 측정되는 바와 같이, 재조합 마우스 FcγRIV(mFcRIV)에 의한 다양한 Fc-조작된 버전의 CXCR3-173의 결합성을 도시한 일련의 6개의 그래프이다. 다양한 항체 명칭은 도 2a에 대한 것과 동일하다.
도 3a는 조작된 인간 IgG1 불변 영역을 포함하는 항-인간 CXCR3 항체에 있어서의 구조-이펙터 기능 특성이 요약된 표이다.
도 3b는 표시된 농도 및 5:1의 이펙터:표적(E:T) 비에서의 다양한 항-인간 CXCR3 항체에 의한 CHO-인간 CXCR3 표적 세포의 시험관 내에서의 항체-의존성 세포 독성(ADCC)-매개 용해를 도시한 막대 그래프이다. 이펙터 세포는 단일 공여체 유래의 자연 살해((NK) 세포이다. IgG, 인간 IgG1 아이소타입 대조군. 테스트된 항-인간 CXCR3 mAb는 클론 4(CXCR3 CL4), 클론 12(CXCR3 CL12), 클론 82(CXCR3 CL82), 클론 135(CXCR3 CL135), 53Hu37, 및 53Hu37의 조작된 Fc 변이체 M1, M2, 및 M3(도 3a에서 설명된 바와 같음)이었다. Kif, 키푸넨신 처리. ALEM, 알렘투주맙.
도 3c는 표시된 농도 및 3:1의 이펙터:표적 세포(E:T) 비에서의 다양한 항체에 의한 CHO-인간 CXCR3 표적 세포의 시험관 내에서의 ADCC-매개 용해를 도시한 막대 그래프이다. 이펙터 세포는 NK-유사 세포주(NK92-CD16V) 유래의 것이다. IgG, 인간 IgG1 아이소타입 대조군. 테스트된 항-인간 CXCR3 mAb는 53Hu37 및 조작된 Fc 변이체 M1(도 3a에서와 같음)이었다. CXCR3 CL4, 항-인간 CXCR3 mAb 클론 4. Kif, 키푸넨신-처리. ALEM은 알렘투주맙이다.
도 4는 인간 FcγRIIa(rhFcγRIIa), 인간 FcγRIII-F158(rhFcγRIII-F158), 인간 FcγRIII-V158(rhFcγRIII-V158), 및 마우스 FcγRIV(rmFcγRIV)에 대하여 결합 친화력, KD를 나타내는 표시된 변이체 및 53Hu37에 대한 Biacore 데이터가 요약된 표이다. M1~M3은 도 3a에서 설명된 바와 같으며, kif 탈푸코실화 53Hu37이다.
도 5a는 체중 1 kg당 2 mg의 용량으로 투여되는 표시된 항체로 처리된 시노몰구스 원숭이에서의 생체 내에서의 표시된 T-세포 하위세트의 고갈을 도시한 일련의 6개의 그래프이다. M1: 53Hu37의 S239D/I332E 변이체; Kif: 탈푸코실화 53Hu37; Veh: 비히클 대조군. CXCR3 항체 군의 경우 N = 8. 비히클 군의 경우 N = 6.
도 5b는 체중 1 kg당 2 mg의 용량으로 투여되는 단회 용량의 표시된 항체를 이용하여 표시된 시간의 양만큼 사전에 처리된 시노몰구스 원숭이의 혈청 중 표시된 항체의 농도를 평가한 조합된 약동학적 데이터를 도시한 그래프이다. 테스트된 항-인간 CXCR3 mAb는 53Hu37, 키푸넨신-처리된 53Hu37(53Hu37 kif), 및 53Hu37의 M1 변이체(53Hu37 M1)였다.
도 6은 서열 번호 및 상응하는 서열을 나타내는 표이다.
이제 본 발명에 따른 특정한 예시적 실시 형태에 관하여 상세하게 설명될 것이며, 그 특정한 예는 첨부된 도면에 예시된다.
인간 CXCR3에 특이적으로 결합하는 인간화 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 본원에서 제공된다. 특정 실시 형태에서, 본원에서 제공된 항-CXCR3 항체는 CXCR3-발현 세포의 고갈을 유도하는 능력을 갖거나, 또는 CXCR3-발현 세포의 고갈을 유도하는 능력이 향상되게 조작되어 CXCR3-연관 질환 및 장애를 치료한다. 일부 실시 형태에서, T1D을 치료하기 위하여 CXCR3을 표적화하는 치료법이 개시되며, 일부 실시 형태에서, 건선을 치료하기 위하여 CXCR3을 표적화하는 치료법이 개시된다.
항체
본원에서 사용되는 바와 같이, "항체"라는 용어는 디술피드 결합에 의해 상호연결된 2개의 중(H)쇄 및 2개의 경(L)쇄인 4개의 폴리펩티드 사슬과, 이의 다량체(예를 들어, IgM)를 포함하는 면역글로불린 분자를 지칭한다. 각각의 중쇄는 중쇄 가변 영역(VH 또는 VH로 약칭됨) 및 중쇄 불변 영역(CH 또는 CH)을 포함한다. 중쇄 불변 영역은 3개의 도메인, CH1, CH2 및 CH3을 포함한다. 중쇄의 Fc 부분은 CH2 및 CH3을 포함한다.
각각의 경쇄는 경쇄 가변 영역(VL로 약칭됨) 및 경쇄 불변 영역(CL 또는 CL)을 포함한다. 경쇄 불변 영역은 1개의 도메인(CL1)을 포함한다.
VH 및 VL 영역은, 프레임워크 영역(FR)으로 칭해지는 보다 보존된 영역이 산재된, 상보성 결정 영역(CDR)으로 칭해지는 초가변성의 영역으로 더 세분될 수 있다. 각각의 VH 및 VL은 다음 순서로 아미노-말단에서 카르복시-말단으로 배열되는 3개의 CDR과 4개의 FR로 구성된다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, 및 FR4.
본원에서 사용되는 바와 같이, 항체의 "항원 결합 단편"이라는 용어는 항원에 특이적으로 결합하여 복합체를 형성하는 임의의 자연적으로 발생하는, 효소에 의해 수득가능한, 합성 또는 유전자 조작된 폴리펩티드 또는 당단백질을 포함한다. 항체의 항원 결합 단편은, 예를 들어 항체 가변 도메인 및 선택적으로 항체 불변 도메인을 코딩하는 DNA의 조작 및 발현을 수반하는 단백질 분해적 절단 또는 재조합 유전 공학 기술과 같은 임의의 적합한 표준 기술을 사용하여 전체 항체 분자로부터 유래될 수 있다. 항원 결합 부분의 비제한적인 예는 다음을 포함한다: (i) Fab 단편; (ii) F(ab')2 단편; (iii) Fd 단편; (iv) Fv 단편; (v) 단쇄 Fv(scFv) 분자; (vi) dAb 단편; 및 (vii) 항체의 초가변 영역을 모방하는 아미노산 잔기를 포함하는 최소 인식 단위(예를 들어 단리된 상보성 결정 영역(CDR)). 다른 조작된 분자, 예컨대 이중특이성, 삼중특이성, 사중특이성 항체, 및 미니바디(minibody)도 "항원 결합 단편"이라는 표현 내에 포함된다.
특정 실시 형태에서, CXCR3 항체 또는 항원 결합 단편은 적어도 하나의 항원 결합 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항체 또는 단편은 다중 특이적이고, 2개 이상(예컨대, 2, 3, 4, 5개 이상)의 항원 결합 도메인을 포함하여, 항체 또는 단편이 고친화도로 CXCR3 및 적어도 하나의 다른 항원에 결합할 수 있거나, 또는 동일하거나 상이한 에피토프에서 2개 이상의 CXCR3 분자와 결합할 수 있다. 항원 결합 부분은 항원에 특이적으로 결합하는 능력을 보유하는 항체의 하나 이상의 단편을 포함할 수 있다. 이러한 단편들은 모 항체로부터의 또는 모 항체의 변이체로부터의 중쇄 및/또는 경쇄 가변 영역을 포함할 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "항원"이라는 용어는 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 의해 인식되는 결합 부위 또는 에피토프를 지칭한다.
"에피토프" 또는 "항원 결정기"는 항체의 항원 결합 도메인과의 특이적인 상호작용에 책임이 있는 항원 분자의 부분이다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 관련하여 "결합하다"는 항체와 항원의 항체 조합 부위들 사이의 비공유적 상호작용에 의해, 동족 항원과의 하나 이상의 비공유 결합을 형성하는 항체 또는 항원 결합 단편의 능력을 지칭한다. 항원은 단리된 항원일 수 있거나, 세포 표면 상의 폴리펩티드의 맥락에서와 같이, 또 다른 엔티티(entity)와 회합되어 제시될 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "특이적으로 결합하다"라는 용어는 적어도 약 1 x 10-6 M, 1 x 10-7 M, 1 x 10-8 M, 1 x 10-9 M, 1 x 10-10 M, 1 x 10-11 M, 1 x 10-12 M, 또는 그 이상의 Kd로 항원에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 능력을 지칭한다. 특정 실시 형태에서, 상기 용어는 비특이적 항원에 대한 친화도보다 적어도 2배 더 높은 친화도로 항원에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 능력을 지칭한다. 그러나, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열이 관련된 2가지 이상의 항원(예를 들어, 인간 및 시노몰구스 CXCR3)에 특이적으로 결합할 수 있음이 이해될 것이다. 비특이적 결합은 대개 낮은 친화도를 가지며, 중간 내지 높은 결합능을 갖는다. 필요할 경우, 비특이적 결합은 결합 조건을 변화시킴으로써 특이적 결합에 실질적으로 영향을 주지 않으면서 감소될 수 있다. 이러한 조건들은 본 기술 분야에 공지되어 있고, 일상적인 기술을 사용하는 당업자라면 적절한 조건을 선택할 수 있다. 조건들은 대개 항체의 농도, 용액의 이온 강도, 온도, 결합을 위해 고려되는 시간, 및 혈청 알부민 및 밀크 카제인과 같은 차단 분자의 농도의 측면에서 정의된다.
친화 상수는 항체 반응에 대한 동역학적 표준 방법, 예를 들어 면역분석법(예를 들어 ELISA), 또는 표면 플라즈몬 공명(SPR)에 의해 결정될 수 있다. 결합 속도의 실시간 탐지 및 모니터링을 위한 기구류 및 방법은 공지되어 있으며, 구매가능하다(예를 들어, Biacore 2000, Biacore Ab(스웨덴 웁살라), 및 GE Healthcare Life Sciences).
본원에서 사용되는 바와 같이, "상보성 결정 영역" 또는 "CDR"은 항체의 항원 결합 부위를 함께 형성하는 항체 또는 항원 결합 단편의 각각의 가변 영역 내의 복수의 부분들 중 하나를 지칭한다. 각각의 가변 영역 도메인은 CDR1, CDR2 및 CDR3으로 칭해지는 3개의 CDR을 포함한다. 따라서, 가변 중쇄 도메인(VH)은 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하며, 가변 경쇄 도메인(VL)은 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 포함한다. 상기 3개의 CDR은 선형 아미노산 서열을 따라서 비연접성이지만, 폴딩된 폴리펩티드 내에서는 근접하여 있다. CDR들은 가변 도메인의 베타 시트의 평행한 가닥들을 연결시키는 루프 내에 위치한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "프레임워크(FR) 아미노산 잔기"라는 용어는 Ig 사슬의 프레임워크 영역 내의 아미노산을 지칭한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, "프레임워크 영역" 또는 "FR 영역"이라는 용어는, 가변 영역의 일부이지만 CDR의 일부는 아닌 아미노산 잔기를 포함한다. 따라서, 가변 영역 프레임워크는 길이가 약 100~120개 아미노산 사이이지만, CDR의 외부의 아미노산만을 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "동일성 %" 또는 "동일성 퍼센트"라는 용어는 두 서열을 특정 영역에 걸쳐 비교함에 있어서 두 서열이 동일 위치에 특정된 수의 동일 잔기를 가짐을 의미한다. "유사성 %" 또는 "유사성 퍼센트"라는 용어는 유사한 의미를 갖지만, 두 서열 사이의 동일 아미노산의 수에 더하여, 아미노산이 동일하지 않고 보존적으로 치환된 것인 경우도 고려된다. 동일성 %는 공지된 컴퓨터 알고리즘, 예컨대 BLASTP, BLASTN, 및 FASTA 프로그램을 이용하여 결정될 수 있으며(문헌[Altschul, SF, et al., J Mol Biol 215: 403 (1990)]), 이는 예를 들어, 문헌[Pearson et al., Proc Natl Acad Sci USA 85: 2444 (1988)]에서와 같이 디폴트 파라미터(default parameter)를 사용한다. 예를 들어, NCBI(National Center for Biotechnology Information) 데이터베이스의 BLAST 기능을 이용하여 동일성을 결정할 수 있다.
특정 실시 형태에서, 본원에서 제공된 항체는 인간화 항체이다. "인간화 항체"는 원하는 항원에 결합하고, 비-인간 종(예를 들어, 마우스 항체) 유래의 하나 이상의 CDR을 가지고, 인간 면역글로불린 분자로부터의 프레임워크 영역 및/또는 불변 도메인의 적어도 약간의 부분을 가지는 항체 분자이다. 공지된 인간 Ig 서열은 예를 들어, ncbi.nlm.nih.gov/entrez-/query.fcgi; atcc.org/phage/hdb.html; sciquest.com; abcam.com; antibodyresource.com/onlinecomp.html; 및 문헌[Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, U.S. Dept. Health (1983)]에 개시되어 있다. 임포트된 인간 서열은 면역원성의 감소 또는 결합성, 친화성, 온-속도(on-rate), 오프-속도(off-rate), 친화력, 특이성, 반감기, 또는 임의의 다른 적합한 특징의 감소, 향상 또는 변경에 사용될 수 있으며, 이는 본 기술 분야에 공지된 바와 같다. 항체 인간화를 위한 본 기술 분야에서 인식된 방법은 문헌[Jones et al., Nature 321: 522 (1986)]; 문헌[Verhoeyen et al., Science 239: 1534 (1988)]; 문헌[Sims et al., J Immunol 151: 2296 (1993)]; 문헌[Chothia and Lesk, J Mol Biol 196: 901 (1987)]; 문헌[Carter et al., Proc Natl Acad Sci USA 89: 4285 (1992)]; 문헌[Presta et al., J Immunol 151: 2623 (1993)]; 미국 특허 제5,589,205호; 미국 특허 제5,565,332호; 미국 특허 제6,180,370호; 미국 특허 제6,632,927호; 미국 특허 제7,241,877호; 미국 특허 제7,244,615호; 미국 특허 제7,244,832호; 미국 특허 제7,262,050호; 및 미국 특허 공개 제2004/0236078호(2004년 4월 30일자로 출원)에 기술되어 있으며, 이들은 그 전체가 본원에 참고로 포함된다.
특정 실시 형태에서, 본원에서 제공된 인간화 항체에서의 특정 프레임워크 잔기는, 항원 결합성을 변경시키기 위하여, 예를 들어 개선시키기 위하여, CDR 공여 항체로부터의 상응하는 잔기로 치환되었으며, 예를 들어, 마우스 항-인간 CXCR3 항체로부터의 프레임워크 잔기로 치환되었다. 이러한 프레임워크 치환은 항원 결합에 중요한 프레임워크 잔기를 식별하기 위한 CDR 및 프레임워크 잔기의 상호작용의 모델링 및 특정 위치에서 특이한 프레임워크 잔기를 식별하기 위한 서열 비교에 의해 식별되었다. 일부 실시 형태에서, 4D 인간화를 이용하여 본 발명의 인간화 항체 변이체를 제조하였다. 4D 인간화에서 사용된 방법에 대해서, (본원에 그 전체가 참고로 포함된) 국제 공개 제2009/032661호, 예컨대, 단락 [0037]~[0044]를 참조한다. 간략하게, 4D 인간화는 다음을 포함할 수 있다: a) 인간화될 가변 도메인의 3D 모델을 구축하는 단계; b) 상기 도메인의 3D 모델의 분자 동역학 시뮬레이션을 이용하여 가변 도메인에서 가요성 잔기를 식별하는 단계; c) 3D 모델의 분자 동역학 궤적을 49개의 인간 생식세포계열의 분자 동역학 궤적과 비교함으로써 가장 가까운 인간 생식세포계열을 식별하는 단계; 및 d) CDR의 부분이 아닌 가요성 잔기를 그들의 인간 생식세포계열 카운터파트(단계 (c)에서 식별됨)로 돌연변이시키는 단계.
일부 실시 형태에서, 표 1에 개시된 VH 및 VL 서열을 포함하는 인간화 CXCR3 항체, 또는 이의 항원 결합 단편이 제공된다.
일부 실시 형태에서, 표 2에 개시된 중쇄(HC) 및 경쇄(LC) 서열을 포함하는 인간화 CXCR3 항체, 또는 이의 항원 결합 단편이 제공된다.
항체의 이펙터 기능 / 고갈 활성
특정 실시 형태에서, 본원에 개시된 항-CXCR3 항체는 CXCR3-발현 세포의 고갈을 유도하는 능력을 갖거나, 또는 CXCR3-발현 세포의 고갈을 유도하는 능력이 향상되게 조작되어 CXCR3-연관 질환 및 장애를 치료할 수 있다. 본원에 개시된 항체에 의해 고갈될 수 있는 CXCR3-발현 세포는 CD4+ T 세포 및/또는 CD8+ T 세포를 포함할 수 있다. 본원에 개시된 항체에 의해 고갈될 수 있는 CXCR3-발현 세포는 CD4+ 기억 T 세포 및/또는 CD8+ 기억 T 세포를 포함할 수 있다. 본원에서 사용되는 바와 같이, CXCR3+ 세포(즉, 세표 표면 상에서 CXCR3을 발현하는 세포)와 관련하여 "고갈"은 이러한 세포를 세포 집단으로부터 제거하는 것을 지칭한다. 고갈에 대한 언급은 완전 고갈 또는 부분 고갈을 포함한다. 또한, 고갈은 영구적이거나 일시적일 수 있으며, 크기 및/또는 위치 면에서 다양한 정도의 것일 수 있다. 고갈은 아폽토시스 또는 괴사에 의한 것과 같이, 세포사의 결과일 수 있다. 고갈은, 본원에서 제공된 항체 또는 항원 결합 단편에의 노출 전후, 또는 본원에서 제공된 항체 또는 항원 결합 단편의 부재 및 존재 하에, 본 기술 분야에 공지된 임의의 방법(예를 들어, 유세포 분석법, 면역조직화학 등)을 사용하여 집단에서의 CXCR3+ 세포의 수의 측정에 의해 평가될 수 있다. 본원에서 제공된 항체 또는 항원 결합 단편에의 노출 후, CXCR3+ 세포는 적어도 또는 대략 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 그 이상만큼 고갈될 수 있다.
특정 실시 형태에서, 인간화 항-인간 CXCR3 항체는, 야생형 Fc 영역, 예를 들어 야생형 인간 IgG1 Fc를 포함하는 상응하는 인간화 항-인간 CXCR3 항체와 비교하여 표면 상에서 인간 CXCR3을 발현하는 세포에 대하여 향상된 이펙터 기능을 나타낸다. 본원에서 사용되는 바와 같이, "향상된 이펙터 기능"은, 동일한 조건 하에서, 동일한 항원 특이성 및 야생형 인간 IgG1 Fc 영역을 갖는 기준 항체와 비교하여, 적합한 표적 세포에 대하여 항체-의존성 세포 독성(ADCC), 보체-매개 세포독성(CDC), 또는 항체-의존성 세포-매개 식작용(ADCP) 중 임의의 하나 이상을 유도하는 항체의 측정가능하게 증가된 능력을 지칭한다. 특정 실시 형태에서, 기준 항체는 변이형 인간 Fc 영역을 포함한다. 특정 실시 형태에서, 이펙터 기능은 ADCC, ADCP, 또는 CDC, 또는 이들의 임의의 조합이다. 특정 실시 형태에서, 이펙터 기능은 ADCC, 또는 CDC이거나, 또는 ADCC 및 CDC 둘 다이다. 특정 실시 형태에서, 이펙터 기능은 ADCC이다. 특정 실시 형태에서, 이펙터 기능은 CDC이다. 특정 실시 형태에서, 이펙터 기능은 ADCC 및 CDC 둘 다이다. 특정 실시 형태에서, 이펙터 기능은 ADCP이다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "변이형 인간 IgG1 Fc 영역"은 야생형 인간 IgG1 Fc와 비교하여 하나 이상의 아미노산 돌연변이 또는 아미노산 변형을 포함하도록 조작되거나 변형된 인간 IgG1 Fc 영역을 지칭한다. 특정 실시 형태에서, 야생형 인간 IgG1 Fc 영역은 다음의 아미노산 서열을 포함한다:
Figure pct00003
특정 실시 형태에서, 변이형 인간 IgG1 Fc 영역은 하기 아미노산 치환 중 적어도 하나를 포함한다: G236A, S239D, S267E, H268F, S324T, I332E(Eu 넘버링), 또는 이들의 임의의 조합. 특정 실시 형태에서, 변이형 인간 IgG1 Fc 영역은 하기 아미노산 치환 세트 중 적어도 하나를 포함한다: S239D/I332E, G236A/S267E/H268F/S324T/I332E, 및 S239D/H268F/S324T/I332E(Eu 넘버링). 특정 실시 형태에서, 변이형 인간 IgG1 Fc 영역은 아미노산 치환 S239D/I332E를 포함한다. 다른 실시 형태에서, 변이형 인간 IgG1 Fc 영역은 아미노산 치환 G236A/S267E/H268F/S324T/I332E를 포함한다. 또 다른 실시 형태에서, 변이형 인간 IgG1 Fc 영역은 아미노산 치환 S239D/H268F/S324T/I332E를 포함한다.
예를 들어, 특정 실시 형태에서, 변이형 인간 IgG1 Fc 영역은 서열 번호 3, 4, 5, 6, 7 또는 8의 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시 형태에서, 변이형 인간 IgG1 Fc 영역은 서열 번호 3~8 중 임의의 하나 이상과 적어도 90% 동일한 서열을 포함하되, 단, 각각의 경우에, 명시된 아미노산 치환은 유지된다. 다양한 실시 형태에서, 변이형 인간 IgG1 Fc 영역은 서열 번호 3~8 중 임의의 하나 이상과 적어도 90% 동일한, 적어도 91% 동일한, 적어도 92% 동일한, 적어도 93% 동일한, 적어도 94% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 96% 동일한, 적어도 97% 동일한, 적어도 98% 동일한, 또는 적어도 99% 동일한 서열을 포함하되, 단, 각각의 경우에, 명시된 아미노산 치환은 유지된다.
특정 실시 형태에서, 변이형 인간 IgG1 Fc 영역은 하기 아미노산 치환 세트 중 적어도 하나를 포함한다: S239D/I332E, G236A/S267E/H268F/S324T/I332E, 및 S239D/H268F/S324T/I332E(Eu 넘버링). 예를 들어, 특정 실시 형태에서, 변이형 인간 IgG1 Fc 영역은 서열 번호 9, 10, 또는 11의 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시 형태에서, 적어도 하나의 아미노산 치환은 S239D/I332E(Eu 넘버링)이다. 다른 실시 형태에서, 적어도 하나의 아미노산 치환은 G236A/S267E/H268F/S324T/I332E(Eu 넘버링)이다. 특정 실시 형태에서, 적어도 하나의 아미노산 치환은 S239D/H268F/S324T/I332E(Eu 넘버링)이다.
특정 실시 형태에서, 본원에서 제공된 인간화 항-CXCR3 항체의 변이형 인간 IgG1 Fc 영역은 서열 번호 9~11 중 어느 하나와 적어도 90% 동일한 서열을 포함하되, 단, 각각의 경우에, 명시된 아미노산 치환 및 향상된 이펙터 기능은 유지된다. 다양한 실시 형태에서, 변이형 인간 IgG1 Fc 영역은 서열 번호 9~11 중 임의의 하나 이상과 적어도 90% 동일한, 적어도 91% 동일한, 적어도 92% 동일한, 적어도 93% 동일한, 적어도 94% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 96% 동일한, 적어도 97% 동일한, 적어도 98% 동일한, 또는 적어도 99% 동일한 서열을 포함하되, 단, 각각의 경우에, 명시된 아미노산 치환은 유지된다.
CDR 변이체:
전술한 실시 형태에 더하여, 6개의 CDR을 포함하는 항-CXCR3 항체가 본원에서 제공되며, 여기서, VH는
(i) 서열 번호 12, 서열 번호 35, 및 서열 번호 14;
(ii) 서열 번호 12, 서열 번호 35, 및 서열 번호 45;
(iii) 서열 번호 12, 서열 번호 36, 및 서열 번호 45;
(iv) 서열 번호 12, 서열 번호 37, 및 서열 번호 14;
(v) 서열 번호 12, 서열 번호 37, 및 서열 번호 45;
(vi) 서열 번호 12, 서열 번호 37, 및 서열 번호 46
(vii) 서열 번호 12, 서열 번호 38, 및 서열 번호 14;
(viii) 서열 번호 12, 서열 번호 38, 및 서열 번호 45;
(ix) 서열 번호 12, 서열 번호 39, 및 서열 번호 14;
(x) 서열 번호 12, 서열 번호 39, 및 서열 번호 47;
(xi) 서열 번호 12, 서열 번호 40, 및 서열 번호 14;
(xii) 서열 번호 12, 서열 번호 13, 및 서열 번호 45;
(xiii) 서열 번호 12, 서열 번호 13, 및 서열 번호 46;
(xiv) 서열 번호 12, 서열 번호 13, 및 서열 번호 48;
(xv) 서열 번호 12, 서열 번호 13, 및 서열 번호 49;
(xvi) 서열 번호 12, 서열 번호 13, 및 서열 번호 50;
(xvii) 서열 번호 12, 서열 번호 13, 및 서열 번호 51;
(xviii) 서열 번호 12, 서열 번호 13, 및 서열 번호 52;
(xix) 서열 번호 12, 서열 번호 13, 및 서열 번호 53;
(xx) 서열 번호 12, 서열 번호 13, 및 서열 번호 54;
(xxi) 서열 번호 12, 서열 번호 13, 및 서열 번호 55;
(xxii) 서열 번호 12, 서열 번호 13, 및 서열 번호 56;
(xxiii) 서열 번호 12, 서열 번호 13, 및 서열 번호 57;
(xxiv) 서열 번호 12, 서열 번호 13, 및 서열 번호 58;
(xxv) 서열 번호 12, 서열 번호 13, 및 서열 번호 59;
(xxvi) 서열 번호 12, 서열 번호 13, 및 서열 번호 60;
(xxvii) 서열 번호 12, 서열 번호 13, 및 서열 번호 61;
(xxviii) 서열 번호 12, 서열 번호 13, 및 서열 번호 62;
(xxix) 서열 번호 12, 서열 번호 13, 및 서열 번호 63;
(xxx) 서열 번호 12, 서열 번호 13, 및 서열 번호 64;
(xxxi) 서열 번호 12, 서열 번호 13, 및 서열 번호 65;
(xxxii) 서열 번호 12, 서열 번호 13, 및 서열 번호 66;
(xxxiii) 서열 번호 34, 서열 번호 13, 및 서열 번호 14;
(xxxiv) 서열 번호 12, 서열 번호 41, 및 서열 번호 14;
(xxxv) 서열 번호 12, 서열 번호 41, 및 서열 번호 46;
(xxxvi) 서열 번호 12, 서열 번호 42, 및 서열 번호 14;
(xxxvii) 서열 번호 12, 서열 번호 42, 및 서열 번호 45;
(xxxviii) 서열 번호 12, 서열 번호 43, 및 서열 번호 14;
(xxxix) 서열 번호 12, 서열 번호 44, 및 서열 번호 14;
(xl) 서열 번호 12, 서열 번호 41, 및 서열 번호 14; 또는
(xli) 서열 번호 12, 서열 번호 13, 및 서열 번호 68의 아미노산 서열을 갖는 CDR을 포함하고;
VL은
(i) 서열 번호 69, 서열 번호 16, 및 서열 번호 17;
(ii) 서열 번호 70, 서열 번호 16, 및 서열 번호 17;
(iii) 서열 번호 71, 서열 번호 16, 및 서열 번호 17;
(iv) 서열 번호 71, 서열 번호 16, 및 서열 번호 75;
(v) 서열 번호 72, 서열 번호 16, 및 서열 번호 17;
(vi) 서열 번호 73, 서열 번호 16, 및 서열 번호 17;
(vii) 서열 번호 74, 서열 번호 16, 및 서열 번호 17;
(viii) 서열 번호 15, 서열 번호 16, 및 서열 번호 75;
(ix) 서열 번호 15, 서열 번호 16, 및 서열 번호 76;
(x) 서열 번호 15, 서열 번호 16, 및 서열 번호 77;
(xi) 서열 번호 15, 서열 번호 16, 및 서열 번호 78; 또는
(xii) 서열 번호 15, 서열 번호 16, 및 서열 번호 79의 아미노산 서열을 갖는 CDR을 포함한다.
전술한 실시 형태에 더하여, 6개의 CDR을 포함하는 항-CXCR3 항체가 본원에서 제공되며, 여기서, VH는
(i) 서열 번호 12, 서열 번호 35, 및 서열 번호 14;
(ii) 서열 번호 12, 서열 번호 35, 및 서열 번호 45;
(iii) 서열 번호 12, 서열 번호 36, 및 서열 번호 45;
(iv) 서열 번호 12, 서열 번호 37, 및 서열 번호 14;
(v) 서열 번호 12, 서열 번호 37, 및 서열 번호 45;
(vi) 서열 번호 12, 서열 번호 37, 및 서열 번호 46;
(vii) 서열 번호 12, 서열 번호 38, 및 서열 번호 14;
(viii) 서열 번호 12, 서열 번호 38, 및 서열 번호 45;
(ix) 서열 번호 12, 서열 번호 39, 및 서열 번호 14;
(x) 서열 번호 12, 서열 번호 39, 및 서열 번호 47; 또는
(xi) 서열 번호 12, 서열 번호 40, 및 서열 번호 14의 아미노산 서열을 갖는 CDR을 포함하고;
VL은
(i) 서열 번호 69, 서열 번호 16, 및 서열 번호 17;
(ii) 서열 번호 70, 서열 번호 16, 및 서열 번호 17;
(iii) 서열 번호 71, 서열 번호 16, 및 서열 번호 17;
(iv) 서열 번호 71, 서열 번호 16, 및 서열 번호 100;
(v) 서열 번호 72, 서열 번호 16, 및 서열 번호 17;
(vi) 서열 번호 73, 서열 번호 16, 및 서열 번호 17;
(vii) 서열 번호 74, 서열 번호 16, 및 서열 번호 17;
(viii) 서열 번호 15, 서열 번호 16, 및 서열 번호 75;
(ix) 서열 번호 15, 서열 번호 16, 및 서열 번호 76;
(x) 서열 번호 15, 서열 번호 16, 및 서열 번호 77;
(xi) 서열 번호 15, 서열 번호 16, 및 서열 번호 78; 또는
(xii) 서열 번호 15, 서열 번호 16, 및 서열 번호 79의 아미노산 서열을 갖는 CDR을 포함한다.
전술한 실시 형태에 더하여, 6개의 CDR을 포함하는 항-CXCR3 항체가 본원에서 제공되며, 여기서, VH는
(xii) 서열 번호 12, 서열 번호 13, 및 서열 번호 45;
(xiii) 서열 번호 12, 서열 번호 13, 및 서열 번호 46;
(xiv) 서열 번호 12, 서열 번호 13, 및 서열 번호 48;
(xv) 서열 번호 12, 서열 번호 13, 및 서열 번호 49;
(xvi) 서열 번호 12, 서열 번호 13, 및 서열 번호 50;
(xvii) 서열 번호 12, 서열 번호 13, 및 서열 번호 51;
(xviii) 서열 번호 12, 서열 번호 13, 및 서열 번호 52;
(xix) 서열 번호 12, 서열 번호 13, 및 서열 번호 53;
(xx) 서열 번호 12, 서열 번호 13, 및 서열 번호 54;
(xxi) 서열 번호 12, 서열 번호 13, 및 서열 번호 55; 또는
(xxii) 서열 번호 12, 서열 번호 13, 및 서열 번호 56의 아미노산 서열을 갖는 CDR을 포함하고;
VL은
(i) 서열 번호 69, 서열 번호 16, 및 서열 번호 17;
(ii) 서열 번호 70, 서열 번호 16, 및 서열 번호 17;
(iii) 서열 번호 71, 서열 번호 16, 및 서열 번호 17;
(iv) 서열 번호 71, 서열 번호 16, 및 서열 번호 75;
(v) 서열 번호 72, 서열 번호 16, 및 서열 번호 17;
(vi) 서열 번호 73, 서열 번호 16, 및 서열 번호 17;
(vii) 서열 번호 74, 서열 번호 16, 및 서열 번호 17;
(viii) 서열 번호 15, 서열 번호 16, 및 서열 번호 75;
(ix) 서열 번호 15, 서열 번호 16, 및 서열 번호 76;
(x) 서열 번호 15, 서열 번호 16, 및 서열 번호 77;
(xi) 서열 번호 15, 서열 번호 16, 및 서열 번호 78; 또는
(xii) 서열 번호 15, 서열 번호 16, 및 서열 번호 79의 아미노산 서열을 갖는 CDR을 포함한다.
전술한 실시 형태에 더하여, 6개의 CDR을 포함하는 항-CXCR3 항체가 본원에서 제공되며, 여기서, VH는
(xxiii) 서열 번호 12, 서열 번호 13, 및 서열 번호 57;
(xxiv) 서열 번호 12, 서열 번호 13, 및 서열 번호 58;
(xxv) 서열 번호 12, 서열 번호 13, 및 서열 번호 59;
(xxvi) 서열 번호 12, 서열 번호 13, 및 서열 번호 60;
(xxvii) 서열 번호 12, 서열 번호 13, 및 서열 번호 61;
(xxviii) 서열 번호 12, 서열 번호 13, 및 서열 번호 62;
(xxix) 서열 번호 12, 서열 번호 13, 및 서열 번호 63;
(xxx) 서열 번호 12, 서열 번호 13, 및 서열 번호 64;
(xxxi) 서열 번호 12, 서열 번호 13, 및 서열 번호 65; 또는
(xxxii) 서열 번호 12, 서열 번호 13, 및 서열 번호 66의 아미노산 서열을 갖는 CDR을 포함하고;
VL은
(i) 서열 번호 69, 서열 번호 16, 및 서열 번호 17;
(ii) 서열 번호 70, 서열 번호 16, 및 서열 번호 17;
(iii) 서열 번호 71, 서열 번호 16, 및 서열 번호 17;
(iv) 서열 번호 71, 서열 번호 16, 및 서열 번호 75;
(v) 서열 번호 72, 서열 번호 16, 및 서열 번호 17;
(vi) 서열 번호 73, 서열 번호 16, 및 서열 번호 17;
(vii) 서열 번호 74, 서열 번호 16, 및 서열 번호 17;
(viii) 서열 번호 15, 서열 번호 16, 및 서열 번호 75;
(ix) 서열 번호 15, 서열 번호 16, 및 서열 번호 76;
(x) 서열 번호 15, 서열 번호 16, 및 서열 번호 77;
(xi) 서열 번호 15, 서열 번호 16, 및 서열 번호 78; 또는
(xii) 서열 번호 15, 서열 번호 16, 및 서열 번호 79의 아미노산 서열을 갖는 CDR을 포함한다.
전술한 실시 형태에 더하여, 6개의 CDR을 포함하는 항-CXCR3 항체가 본원에서 제공되며, 여기서, VH는
(xxxiii) 서열 번호 34, 서열 번호 13, 및 서열 번호 14;
(xxxiv) 서열 번호 12, 서열 번호 41, 및 서열 번호 14;
(xxxv) 서열 번호 12, 서열 번호 41, 및 서열 번호 71;
(xxxvi) 서열 번호 12, 서열 번호 42, 및 서열 번호 14;
(xxxvii) 서열 번호 12, 서열 번호 42, 및 서열 번호 70;
(xxxviii) 서열 번호 12, 서열 번호 43, 및 서열 번호 14;
(xxxix) 서열 번호 12, 서열 번호 44, 및 서열 번호 14;
(xl) 서열 번호 12, 서열 번호 41, 및 서열 번호 14; 또는
(xli) 서열 번호 12, 서열 번호 13, 및 서열 번호 68의 아미노산 서열을 갖는 CDR을 포함하고;
VL은
(i) 서열 번호 69, 서열 번호 16, 및 서열 번호 17
(ii) 서열 번호 70, 서열 번호 16, 및 서열 번호 17;
(iii) 서열 번호 71, 서열 번호 16, 및 서열 번호 17;
(iv) 서열 번호 71, 서열 번호 16, 및 서열 번호 75;
(v) 서열 번호 72, 서열 번호 16, 및 서열 번호 17;
(vi) 서열 번호 73, 서열 번호 16, 및 서열 번호 17;
(vii) 서열 번호 74, 서열 번호 16, 및 서열 번호 17;
(viii) 서열 번호 15, 서열 번호 16, 및 서열 번호 75;
(ix) 서열 번호 15, 서열 번호 16, 및 서열 번호 76;
(x) 서열 번호 15, 서열 번호 16, 및 서열 번호 77;
(xi) 서열 번호 15, 서열 번호 16, 및 서열 번호 78; 또는
(xii) 서열 번호 15, 서열 번호 16, 및 서열 번호 79의 아미노산 서열을 갖는 CDR을 포함한다.
전술한 실시 형태에 더하여,
서열 번호 80, 서열 번호 81, 서열 번호 82, 서열 번호 83, 서열 번호 84, 서열 번호 85, 서열 번호 86, 서열 번호 87, 서열 번호 88, 서열 번호 89, 또는 서열 번호 90의 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함하는 항-CXCR3 항체가 본원에서 제공된다.
전술한 실시 형태에 더하여,
서열 번호 91, 서열 번호 92, 서열 번호 93, 서열 번호 95, 서열 번호 96, 서열 번호 97, 서열 번호 98, 서열 번호 99, 서열 번호 100, 또는 서열 번호 101의 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함하는 항-CXCR3 항체가 본원에서 제공된다.
전술한 실시 형태에 더하여,
서열 번호 102, 서열 번호 103, 서열 번호 104, 서열 번호 105, 서열 번호 106, 서열 번호 107, 서열 번호 108, 서열 번호 109, 서열 번호 110, 또는 서열 번호 111로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함하는 항-CXCR3 항체가 본원에서 제공된다.
전술한 실시 형태에 더하여,
서열 번호 112, 서열 번호 113, 서열 번호 114, 서열 번호 115, 서열 번호 116, 서열 번호 117, 서열 번호 118, 서열 번호 119, 서열 번호 120, 서열 번호 121, 또는 서열 번호 122의 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함하는 항-CXCR3 항체가 본원에서 제공된다.
전술한 실시 형태에 더하여,
서열 번호 123, 서열 번호 124, 서열 번호 125, 서열 번호 126, 서열 번호 127, 서열 번호 128, 서열 번호 129, 서열 번호 130, 서열 번호 131, 서열 번호 132, 서열 번호 133, 또는 서열 번호 134의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 항-CXCR3 항체가 본원에서 제공된다.
특정 실시 형태에서, 항-인간 CXCR3 항체는 각각 표 3에 예시된 아미노산 서열을 포함하는 VH/VL 쌍을 포함한다. (표시된 변화(들)는 각각 상응하는 53Hu37 VH 또는 VL 서열(서열 번호 20, 및 서열 번호 24)과 관련된다):
[표 3]
Figure pct00004
Figure pct00005
중화 항체
특정 실시 형태에서, 본원에서 제공된 인간화 항-인간 CXCR3 항체는 CXCR3 중화 항체이다. 특정한 예시적인 실시 형태에서, CXCR3 항체는 향상된 이펙터 기능에 더하여 중화 활성을 갖는다. CXCR3 중화와 CXCR3+ 세포 고갈의 조합된 효과는 CXCR3-매개된 효과, 예를 들어 T 세포의 모집을 감소시키거나 제거하는 것이 바람직할 때마다 유리할 수 있다.
"CXCR3 중화 항체"는 CXCR에 결합하고, CXCR3에 결합한 CXCR3 리간드로부터 기인한 전형적인 생리학적 및 유전적 반응과 같은 수용체의 활성을 차단한다. 중화 활성은 완전(100% 중화)하거나 부분적, 예컨대, 대략 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 95(또는 그 사이의 임의의 백분율) 이상의 중화일 수 있고, 항체의 농도, 친화도 및 에피토프와, 중화 활성을 평가하기 위해 사용되는 특정 분석법과 같은 당업자에게 공지된 다양한 요인에 의존할 것이다. CXCR3 중화 항체의 중화 활성은, 예컨대, 리간드 결합, GTP 결합, 칼슘 이동, 세포 주화성, 및/또는 수용체 내재화의 억제를 측정하는 분석법에 의해 나타낼 수 있다. 중화 항체, 특히 CXCR3 중화 항체의 활성을 결정하기 위한 많은 분석법이 당업자에게 공지되어 있으며, 특정 항체가 중화하는지를 규명하기 위해 용이하게 수정될 수 있다.
예를 들어, 일부 실시 형태에서, 항-CXCR3 항체의 중화 활성은 실질적으로 클론 49801에 의해 생성되고 R&D Systems®에 의해 판매되는 항체(카탈로그 번호 MAB160)에 대한 패키지 인서트에 기재된 바와 같은 주화성 분석법에 의해 평가될 수 있다. 중화 용량 50(ND50)은 특정한 rhCXCL11 농도에서, 반응성 세포주에서의 세포 표면 CXCR3-매개 재조합 인간 CXCL11(rhCXCL11) 반응의 최대 억제의 1/2을 생성하는 데 요구되는 항체의 농도로 정의된다. hCXCR3으로 형질감염된 BaF/3 세포의 rhCXCL11 유도 주화성을 차단하는 항체의 능력을 측정하기 위해, 7 ng/mL의 rhCXCL11을 96웰 주화성 챔버(NeuroProbe, 미국 메릴랜드주 캐빈 존)의 하부 구획에 첨가한다. 그 후, 주화성 챔버를 PVP 무함유 폴리카르보네이트 필터(5 μm의 기공 크기)를 사용하여 조립한다. 항체의 계대 희석액(예컨대, 0.001 내지 10000 μg/mL) 및 0.25x106개의 세포/웰을 챔버의 상부 웰에 첨가한다. 5% CO2-가습 인큐베이터에서 37℃에서 3시간 동안 인큐베이션한 후, 챔버를 분해하고, 하부 챔버로 이동한 세포를 작업 플레이트로 옮기고, 예를 들어, 레사주린(Resazurin) 형광을 사용하여 정량화한다.
문헌[Colvin et al., Mol Cell Biol 26: 5838-49 (2006)]에는, 특정 실시 형태에서, 중화 항-CXCR3 항체의 중화 활성을 결정하기 위해 사용될 수 있는 추가적인 분석법이 기술되어 있다. 간략하게, CXCR4를 기능적으로 발현하는 쥐과 전 B 세포(pre-B-cell) 백혈병 세포주인 300-19 세포가 사용될 수 있다. 형질감염 후, 이 주는 다른 케모카인 수용체, 예컨대, 인간 CXCR3을 기능적으로 발현할 수 있다(예컨대, 본원에 참고로 포함된 미국 특허 공개 제2010/0061983호의 단락 201 내지 209를 참조한다). 인간 CXCR3을 발현하는 300-19 세포는 10% 소 태아 혈청(FBS)을 함유하는 완전 RPMI 배지에서 성장시킬 수 있다. 후보 중화 CXCR3 항체의 존재 하에 CXCR3 리간드의 CXCR3에 대한 결합을 평가하기 위해, 150 μL의 총 부피의 결합 완충액(0.5% BSA, 5 mM MgCl2, 1 mM CaCl2, 50 mM HEPES, pH 7.4) 중 400,000개의 CXCR3/300-19 세포를 96웰 조직 배양 플레이트에 넣는다. 총 0.04 nM의 125I 표지된 CXCL10(New England Nuclear, 미국 매사추세츠주 보스턴) 또는 CXCL11(Amersham Biosciences, 미국 뉴저지주 피스카타웨이) 및 5 x 106 nM 내지 500 nM의 비표지 CXCL10 또는 CXCL11(Peprotech, 미국 뉴저지주 로키 힐)을 세포에 첨가하고 실온에서 진탕하면서 90분간 인큐베이션할 수 있다. 상기 세포를 0.3% 폴리에틸렌이민에 사전 침지된 96웰 필터 플레이트(Millipore, 미국 매사추세츠주 빌레리카) 상으로 옮기고, 0.5 M NaCl이 보충된 200 μL의 결합 완충액으로 3회 세척한다. 플레이트를 건조시키고, Wallac Microbeta 섬광 계수기(Perkin-Elmer Life Sciences, 미국 매사추세츠주 보스턴)에서 섬광 유체의 첨가 후 방사능을 측정한다. CXCL9의 결합성을 CXCL10 및 CXCL11과 유사하게 평가할 수 있다.
특정 실시 형태에서, 본원에 개시된 항체는 CXCR3을 발현하는 세포 내로의 칼슘 유동을 방지하거나 감소시킬 수 있다. 일부 실시 형태에서, CXCR3/300-19 세포와 같은 세포에서 칼슘 유동이 탐지될 수 있다. 대략 5 x 106개의 세포를 1% 소 혈청 알부민(BSA)을 포함하는 2 mL의 RPMI 배지에 현탁시킨다. 15 마이크로그램의 Fura-2(Molecular Probes, 미국 오리건주 유진)를 첨가하고 세포를 37℃에서 20분간 인큐베이션시킨다. 세포를 PBS에서 2회 세척하고, 2 mL의 칼슘 유동 완충액(145 mM NaCl, 4 mM KCl, 1 mM NaHPO4, 1.8 mM CaCl2, 25 mM HEPES, 0.8 mM MgCl2, 및 22 mM 글루코스)에 재현탁한다. 형광 판독은 37℃에서 DeltaRAM 형광계(Photon Technology International, 미국 뉴저지주 로렌스빌)에서 측정한다. 케모카인(예컨대, CXCL9, CXCL10, 또는 CXCL11)의 첨가 전후에, 세포내 칼슘 농도가 340 nm 및 380 nm에서의 순차적인 여기에 반응하여 510 nm에서 방출된 여기 형광 강도로서 기록되고 340 nm에서의 형광 대 380 nm에서의 형광의 상대적인 비로서 제시된다.
특정 실시 형태에서, CXCR3 중화는 수용체 내재화의 감소를 측정함으로써 평가될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 수용체 내재화 분석법은 약 2 x 105개의 세포, 예를 들면, CXCR3/300-19 세포를 다양한 농도의 CXCL10, CXCL11, 또는 CXCL9와 함께 1% BSA를 포함하는 RPMI 배지에서 37℃에서 30분간 인큐베이션함으로써 수행될 수 있다. 그 후, 세포를 빙냉 유세포 분석용 염색 완충액으로 세척하고, 그 후 PE-콘쥬게이션된 CXCR3 항체를 사용하여 CXCR3의 표면 발현에 대해 분석할 수 있다.
임의의 위의 분석법에 의해 평가된 바와 같이, 중화 항-CXCR3 항체는, 특정 실시 형태에서, 대략 0.01, 0.02, 0.05, 0.1, 0.2, 0.5, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 40, 50, 또는 100 μg/mL의 ND50을 가질 수 있다. 특정 실시 형태에서, ND50은 0.5 내지 12 μg/mL, 더 구체적인 실시 형태에서, 1 내지 6 μg/mL일 수 있다.
본원에서 제공된 항체 또는 항원 결합 단편에 의한 세포의 이동, 모집, 또는 축적의 억제는 당업자에게 공지된 임의의 방법에 의해 평가될 수 있다. 예를 들어 이러한 방법은, 세포의 하나 이상의 집단에서 또는 체내 또는 기관 내의 하나 이상의 위치에서, CXCR3+ 세포와 같은 세포의 수를 평가하기 위한, 면역조직화학, 유세포 분석법, RT-PCR 등에 의한 생검체의 분석을 포함할 수 있다. 세포의 이동, 모집, 또는 축적은 본원에서 제공된 항체 또는 항원 결합 단편의 부재 하에서의 세포의 이동, 모집, 또는 축적과 비교하여 적어도 또는 대략 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%만큼, 또는 이보다 더 많이 억제될 수 있다.
뉴클레오티드 서열
본원에 개시된 아미노산 서열을 코딩하는 뉴클레오티드 서열이 또한 본원에서 제공된다. 일부 실시 형태에서, 뉴클레오티드 서열은 시험관 내에서 및/또는 생체 내에서 CXCR3+ 세포를 고갈시킬 수 있는 항체 또는 단편을 코딩한다. 특정 실시 형태에서, 뉴클레오티드 서열은 세포에서의 항-CXCR3 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 발현(예컨대, 포유동물 세포에서의 발현)을 위한 발현 벡터의 제조에 사용될 수 있다.
특정 실시 형태에서, 본원에 개시된 아미노산 서열을 코딩하는 폴리뉴클레오티드와 실질적으로 동일한 폴리뉴클레오티드가 또한 본원에서 개시된다. 실질적으로 동일한 서열은 다형성 서열, 즉 대안적인 서열 또는 대립유전자(집단에서)일 수 있다. 실질적으로 동일한 서열은 또한, 침묵 돌연변이를 포함하는 서열을 포함하는 돌연변이가 유발된 서열을 포함할 수 있다. 돌연변이는 하나 이상의 뉴클레오티드 잔기의 변화, 하나 이상의 뉴클레오티드 잔기의 결실, 또는 하나 이상의 추가적인 뉴클레오티드 잔기의 삽입을 포함할 수 있다. 실질적으로 동일한 서열은 또한 핵산 코드의 축퇴성(degeneracy)으로 인해, 본원에 개시된 아미노산 서열에서 임의의 주어진 아미노산 위치에서 동일한 아미노산을 코딩하는 다양한 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다. 실질적으로 동일한 서열 내에는 시험관 내에서 및/또는 생체 내에서 CXCR3+ 세포를 고갈시키는 능력을 보유하는 항체의 사슬(들)을 코딩하는 서열도 포함된다.
특정 실시 형태에서, 본원에 제공된 핵산은 본원에 제공된 CXCR3-발현 세포를 고갈시킬 수 있는 항체 또는 단편에서의 사슬(들)의 아미노산 서열을 코딩하거나, 또는 핵산은 엄격한 조건 하에서, 이 항체 또는 이의 항원 결합 단편에서의 사슬(들)의 아미노산 서열을 코딩하는 핵산에 혼성화될 수 있다.
특정 실시 형태에서, 항-CXCR3 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 도메인의 아미노산 서열을 코딩하고, 이 항체의 중쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열과 적어도 약 80~100%(예를 들어, 약 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%)(또는 그 사이의 임의의 백분율) 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드 서열이 본원에 개시된다. 특정 실시 형태에서, 폴리뉴클레오티드 서열은 항체의 중쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열에 대하여 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 돌연변이(부가, 결실 및 보존적 치환과 같은 치환을 포함함)를 가지는 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다.
특정 실시 형태에서, 항-CXCR3 항체 또는 단편의 VL 도메인의 아미노산 서열을 코딩하고, 이 항체의 경쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열과 적어도 약 80~100%(예를 들어, 약 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%)(또는 그 사이의 임의의 백분율) 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드 서열이 본원에 개시된다. 특정 실시 형태에서, 폴리뉴클레오티드 서열은 항체의 경쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열에 대하여 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 돌연변이(부가, 결실 및 보존적 치환과 같은 치환을 포함함)를 가지는 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다.
특정 실시 형태에서, VH 아미노산 서열과 적어도 약 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%(또는 그 사이의 임의의 백분율) 동일하고 VL 아미노산 서열과 적어도 약 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%(또는 그 사이의 임의의 백분율) 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드 서열이 본원에 개시되며, 여기서 뉴클레오티드 서열들은 본원에 개시된 임의의 항체의 중쇄 및 경쇄 아미노산 서열을 코딩한다.
개시된 폴리뉴클레오티드들은 본 기술 분야에 공지된 임의의 방법에 의해 수득될 수 있다. 예를 들어, 항체의 뉴클레오티드 서열이 공지되어 있을 경우, 항체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드가 화학적으로 합성된 올리고뉴클레오티드로부터 조립될 수 있다. 이는, 예를 들어, 항체를 코딩하는 서열의 부분들을 함유하는 중첩 올리고뉴클레오티드들의 합성, 이러한 올리고뉴클레오티드들의 어닐링(annealing) 및 라이게이션(ligation), 및 그 후, 라이게이션된 올리고뉴클레오티드들의 PCR에 의한 증폭을 수반할 수 있다. 개시된 폴리뉴클레오티드는 또한 임의의 다른 적합한 핵산 공급원, 예컨대 항체 cDNA 라이브러리, 또는 항체를 발현하는 임의의 조직 또는 세포(예컨대, 항체를 발현시키기 위해 선발된 하이브리도마 세포)로부터 단리된 cDNA 라이브러리로부터 생성될 수 있다.
항-CXCR3 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 발현
본원에서 제공된 인간화 항-CXCR3 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 코딩하는 핵산의 조작 후, 코딩 핵산은 전형적으로, 원하는 양의 코딩된 항체, 또는 이의 이의 항원 결합 단편을 생성하는 데 사용될 수 있는 숙주 세포 내로의 도입을 위한 발현 벡터 내에 삽입된다. 발현에 적합한 벡터는 본 기술 분야에 공지되어 있다. 적합한 숙주 세포는, 예컨대, CHO, COS, Sf9 및/또는 다른 인간 또는 비인간 세포주를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 숙주 세포는 배양 배지에서 배양될 때 벡터 상의 핵산을 일시적이거나 안정적으로 발현함으로써 본원에 개시된 항체 또는 단편을 생성하기 위한 방법을 제공한다.
본원에서 "벡터" 또는 "발현 벡터"라는 용어는 원하는 유전자를 세포 내로 도입하여 발현시키기 위한 비히클을 설명하기 위하여 사용된다. 당업자에게 공지된 바와 같이, 이러한 벡터는 예를 들어 플라스미드, 파지, 바이러스 및 레트로바이러스를 포함한다. 일반적으로, 적합한 벡터는 선발 마커, 원하는 유전자의 클로닝을 돕기에 적절한 제한효소 부위 및 진핵 또는 원핵 세포로 진입하고/하거나 상기 세포에서 복제하는 능력을 포함할 수 있다.
다수의 발현 벡터 시스템이 본원에서 제공된 항-CXCR3 항체의 발현 목적에 이용될 수 있다. 예를 들어, 한 부류의 벡터는 소 유두종 바이러스, 폴리오마 바이러스, 아데노바이러스, 백시니아 바이러스, 배큘로바이러스, 레트로바이러스(RSV, MMTV 또는 MOMLV) 또는 SV40 바이러스와 같은 동물 바이러스로부터 유래된 DNA 요소를 이용한다. 다른 것들은 내부 리보솜 결합 부위를 갖는 폴리시스트론 시스템의 사용을 수반한다. 추가적으로, DNA가 세포의 염색체 내로 통합된 세포를 형질감염된 숙주 세포의 선발을 가능하게 하는 하나 이상의 마커를 도입함으로써 선발할 수 있다. 이러한 마커는 영양요구성 숙주에 독립영양을 제공하거나, 살생물제(예를 들어, 항생제) 내성, 또는 구리와 같은 중금속에 대한 내성을 제공할 수 있다. 선발가능한 마커 유전자는 발현될 DNA 서열에 직접 연결되거나 공동형질전환에 의해 동일한 세포 내로 도입될 수 있다. 추가적인 요소가 또한 mRNA의 최적 합성을 위해 필요할 수 있다. 이러한 요소들은 신호 서열, 스플라이싱 신호와, 전사 프로모터, 인핸서, 및 종결 신호를 포함할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 클로닝된 가변 영역 유전자는 위에서 논의된 바와 같이 중쇄 및 경쇄 불변 영역 유전자를 따라 발현 벡터 내에 삽입된다. 일부 실시 형태에서, 중쇄 및 경쇄 불변 영역은 인간의 것이다.
다른 실시 형태에서, 본원에서 제공된 항-CXCR3 항체, 또는 이의 항원 결합 단편은 폴리시스트론 구축물을 사용하여 발현될 수 있다. 이러한 발현 시스템에서, 다수의 관심 유전자 생성물, 예를 들어, 항체의 중쇄 및 경쇄가 단일 폴리시스트론 구축물로부터 생성될 수 있다. 이러한 시스템은 유리하게는 진핵 숙주 세포 내에서 상대적으로 높은 수준의 본원에 제공된 폴리펩티드를 제공하기 위해 내부 리보솜 유입점(internal ribosome entry site, IRES)을 사용한다. 양립가능한 IRES 서열이 미국 특허 제6,193,980호에 개시되어 있으며, 이는 본원에 참고로 포함된다. 당업자는 상기 발현 시스템이 본 출원에 개시된 전체 범위의 폴리펩티드를 효과적으로 생성시키기 위해 이용될 수 있음을 인지할 것이다.
일단 항체, 또는 이의 항원 결합 단편을 코딩하는 벡터 또는 DNA 서열이 준비되면, 발현 벡터는 적절한 숙주 세포 내로 도입될 수 있다. 즉, 숙주 세포가 형질전환될 수 있다. 숙주 세포 내로의 플라스미드의 도입은 당업자에게 잘 알려진 다양한 기술에 의해 성취될 수 있다. 이것은 형질감염(전기영동 및 전기천공을 포함함), 원형질 융합, 인산칼슘 침전법, 세포와 엔벨로핑된(enveloped) DNA의 융합, 미세주입, 및 온전한 바이러스를 이용한 감염을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 문헌[Ridgway, A. A. G. "Mammalian Expression Vectors" Chapter 24.2, pp. 470-472 Vectors, Rodriguez and Denhardt, Eds. (Butterworths, Boston, Mass. 1988)]을 참조한다. 일부 실시 형태에서, 숙주 내로의 플라스미드 도입은 전기천공을 통한 것이다. 형질전환된 세포를 코딩된 아미노산 서열, 예를 들어 항체 경쇄 및 중쇄의 생성에 적절한 조건 하에 성장시키며, 코딩된 아미노산 서열의 생성에 대하여 분석한다. 예시적인 분석 기술은 효소 결합 면역흡착 분석법(ELISA), 방사면역측정법(RIA), 유세포 분석법, 면역조직화학법 등을 포함한다.
"숙주 세포"는 재조합 핵산 기술을 사용하여 구축되고 적어도 하나의 이종 단백질을 코딩하는 벡터가 도입된 세포를 지칭한다. 재조합 숙주로부터의 폴리펩티드의 단리를 위한 공정의 설명에서, "세포" 및 "세포 배양물"이라는 용어는, 명백하게 다르게 명시되지 않는 한, 코딩된 단백질, 예를 들어 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 공급원을 나타내기 위해 상호교환가능하게 사용된다. 환언하면, "세포"로부터의 폴리펩티드의 회수는 전체 세포 스핀 다운, 또는 배지 및 현탁된 세포 둘 다를 함유하는 세포 배양물로부터의 회수를 의미할 수 있다.
일 실시 형태에서, 항체 발현에 사용되는 숙주 세포주는 포유동물 기원이며, 당업자는 숙주 세포에서 발현되는 요망되는 유전자 생성물에 최고로 적합한 특정 숙주 세포주를 결정할 수 있다. 예시적 숙주 세포주는 DG44 및 DUXB11(차이니즈 햄스터 난소 세포주, DHFR 마이너스), HELA(인간 자궁경부 암종), CVI(원숭이 신장 세포주), COS(SV40 T 항원을 갖는 CVI의 유도체), R1610(차이니즈 햄스터 섬유모세포), BALBC/3T3(마우스 섬유모세포), SP2/O(마우스 골수종), BFA-1c1BPT(소 내피세포), RAJI(인간 림프구), 293(인간 신장)을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 일 실시 형태에서, NS0 세포가 사용될 수 있다. 일부 실시 형태에서, CHO 세포가 사용된다. 숙주 세포주는 전형적으로 상업적 서비스인 아메리칸 티슈 컬쳐 컬렉션(American Tissue Culture Collection) 또는 공개된 문헌으로부터 이용가능하다.
일 실시 형태에서, 세포주는 세포주에서 발현된 항체의 변경된 당화, 예를 들어, 비푸코실화(afucosylation)를 제공한다(예를 들어, PER.C6.RTM.(Crucell) 또는 FUT8-넉-아웃 CHO 세포주(Potelligent.RTM.Cells)(Biowa, 미국 뉴저지주 프린스턴)). 대안적으로, 세포는 N-글리칸의 초기 프로세싱에 요구되는 하나 이상의 글리코시다아제가 결핍될 수 있고/있거나 배양 조건이 이러한 글리코시다아제 중 하나 이상의 활성을 억제하도록 하는 것일 수 있다. 예를 들어, 세포는 하나 이상의 글리코시다아제, 예컨대 알파-글루코시다아제 I, 알파-글루코시다아제 II, 및 알파-만노시다아제 I이 결핍될 수 있다. 게다가, 또는 대안적으로, 조작된 세포는 하나 이상의 글리코시다아제, 예컨대 알파-글루코시다아제 I, 알파-글루코시다아제 II, 및 알파-만노시다아제 I의 억제제와 접촉될 수 있다. 특정 실시 형태에서, 억제제는 알파-만노시다아제 I의 억제제, 예를 들어, 알파-만노시다아제 I 특이적 억제제, 키푸넨신이다. 키푸넨신 및 기타 억제제를 이용하여 숙주 세포를 배양하는 예시적인 방법이 미국 특허 제8,071,336호에 개시되어 있으며, 이는 그 전체가 본원에 참고로 포함된다. 특정 실시 형태에서, 키푸넨신 처리는 적어도 50%의 Man5-9(GlcNAc)2 N-글리칸을 갖는 항체를 생성하며, 여기서, Man8 및 Man9-함유 N-글리칸이 함께 주요 종이다.
시험관 내 생성은 많은 양의 요망되는 폴리펩티드를 제공하는 규모 확대를 가능하게 한다. 조직 배양 조건 하에서의 포유동물 세포 배양을 위한 기술은 본 기술 분야에 공지되어 있으며, 이는, 예를 들어, 공기부양 반응기 또는 연속 교반 반응기 중에서의 균일 현탁 배양, 또는, 예를 들어, 중공 섬유, 마이크로캡슐 내, 아가로스 마이크로비드 또는 세라믹 카트리지 상에서의 고정되거나 포획된(entrapped) 세포 배양을 포함한다. 필요하고/하거나 요망되는 경우, 폴리펩티드의 용액은 통상적인 크로마토그래피 방법, 예를 들어, 겔 여과, 이온-교환 크로마토그래피, DEAE-셀룰로스 상에서의 크로마토그래피 및/또는 (면역-) 친화성 크로마토그래피에 의해 정제될 수 있다.
본원에서 제공된 항-CXCR3 항체, 또는 이의 단편을 코딩하는 핵산은 또한 박테리아 또는 효모 또는 식물 세포와 같은 비-포유동물 세포에서 발현될 수 있다. 이와 관련하여, 다양한 단세포 비-포유동물 미생물, 예를 들어, 박테리아, 즉, 배양 또는 발효에서 성장될 수 있는 것들이 본원에서 제공된 항체 및 이의 항원 결합 단편의 발현에 또한 사용될 수 있음이 인지될 것이다. 적합한 박테리아는 장내세균과의 일원, 예를 들어, 에스케리키아 콜라이(Escherichia coli) 또는 살모넬라(Salmonella); 바실루스과, 예를 들어, 바실루스 서틸리스(Bacillus subtilis); 폐렴구균; 연쇄구균, 및 헤모필루스 인플루엔자의 주를 포함한다. 박테리아에서 발현되는 경우, 폴리펩티드가 봉입체의 일부가 될 수 있음이 추가로 인지될 것이다. 폴리펩티드는 단리되어야 하고, 정제되어야 하고, 그 후 기능성 분자로 조립되어야 한다.
원핵생물에 더하여, 진핵생물 미생물이 또한 사용될 수 있다. 사카로마이세스 세레비지에(Saccharomyces cerevisiae), 또는 일반적인 제빵 효모가 진핵생물 미생물 중에서 가장 일반적으로 사용되지만, 다수의 다른 주가 일반적으로 이용가능하다. 사카로마이세스에서의 발현을 위해, 플라스미드 YRp7, 예를 들어, 문헌[Stinchcomb et al., Nature, 282:39 (1979)]; 문헌[Kingsman et al., Gene, 7:141 (1979)]; 문헌[Tschemper et al., Gene, 10:157 (1980)]에서의 플라스미드 YRp7이 일반적으로 사용된다. 이러한 플라스미드는 이미 트립토판에서 성장하는 능력이 결여된 효모의 돌연변이주, 예를 들어, ATCC 번호 44076 또는 PEP4-1에 대한 선발 마커를 제공하는 TRP1 유전자를 함유한다(문헌[Jones, Genetics, 85:12 (1977)]). 효모 숙주 세포 게놈의 특징으로서의 Trpl 손상의 존재는 이후에 트립토판의 부재 하에서의 성장에 의해 형질전환을 검출하기 위한 효과적인 환경을 제공한다.
제약 조성물 및 투여 방법
본원에 개시된 인간화 항-인간 CXCR3 항체, 및 제약상 허용가능한 담체를 포함하는 제약 조성물이 본원에서 제공된다.
본원에서 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 제조 방법 및 이의 대상체에의 투여 방법은 당업자에게 잘 알려져 있거나 당업자에 의해 쉽게 결정된다. 항체 또는 이의 단편의 투여 경로로는 경구, 비경구(예컨대 정맥내, 근육내, 복강내, 또는 피하) 투여, 흡입에 의한 투여, 또는 국소 투여가 있다. 일부 실시 형태에서, 본원에서 제공된 항체는 정맥내 투여용으로 제형화된다. 일부 실시 형태에서, 주사에 적합한 제약 조성물은 완충제(예를 들어, 아세테이트, 포스페이트 또는 시트레이트 완충제), 계면활성제(예를 들어, 폴리소르베이트), 선택적으로 안정화제(예를 들어, 인간 알부민) 등을 포함한다.
주사용 용도에 적합한 제약 조성물은 살균 수성 용액(수용성인 경우) 또는 분산액 및 살균 주사용 용액 또는 분산액의 즉석 제조를 위한 살균 분말을 포함한다. 담체는, 예를 들어, 물, 에탄올, 폴리올(예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 및 액체 폴리에틸렌 글리콜 등), 및 이들의 적합한 혼합물을 함유하는 용매 또는 분산 매질일 수 있다. 적절한 유동성은, 예를 들어, 코팅, 예를 들어, 레시틴의 사용, 분산액의 경우에서 필요한 입자 크기의 유지 및 계면활성제의 사용에 의해 유지될 수 있다. 미생물의 작용의 예방은 다양한 항균제 및 항진균제, 예를 들어, 파라벤, 클로로부탄올, 페놀, 아스코르브산, 티메로살 등에 의해 달성될 수 있다. 많은 경우에, 조성물 내에 등장화제, 예를 들어, 당류, 폴리알코올, 예를 들어, 만니톨, 소르비톨 또는 염화나트륨을 포함하는 것이 바람직할 것이다. 주사용 조성물의 흡수 연장은 조성물 내에 흡수를 지연시키는 에이전트, 예를 들어, 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴을 포함시킴으로써 발생될 수 있다.
임의의 경우, 살균 주사용 용액은, 본원에 나열된 성분들 중 하나 또는 상기 성분들의 조합물과 함께, 적절한 용매 내로 활성 화합물(예컨대, 단독의 또는 다른 활성제와 조합된 항체)을 요구되는 양으로 혼입시키고, 요구될 경우, 그 후 여과 살균함으로써 제조될 수 있다. 일반적으로, 분산액은 기본 분산 매질 및 상기 열거된 성분으로부터의 필요한 다른 성분을 함유하는 살균 비히클에 활성 화합물을 혼입시킴으로써 제조된다. 살균 주사용 용액의 제조를 위한 살균 분말의 경우, 바람직한 제조 방법으로는 활성 성분 + 이전에 살균 여과된 용액으로부터의 임의의 추가의 요망되는 성분의 분말을 생성하는 진공 건조 및 동결-건조가 있다. 주사용 제제는 본 기술 분야에 공지된 방법에 따라 무균 조건 하에서 프로세싱되고, 용기, 예컨대 앰풀, 백, 병, 시린지 또는 바이알 내로 충전되고, 밀봉된다. 상기 제조 물품은 바람직하게는 관련 조성물이 자가면역 또는 신생물성 장애를 앓고 있거나 상기 자가면역 또는 신생물성 장애에 걸리기 쉬운 대상체의 치료에 유용함을 나타내는 라벨 또는 패키지 인서트를 가질 것이다.
전술된 병태를 치료하기 위한 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 용량은 투여의 수단, 표적 부위, 환자의 생리학적 상태, 환자가 인간인지 또는 동물인지의 여부, 투여되는 다른 약, 및 치료가 예방적인지 또는 치료적인지의 여부를 포함하는 많은 다른 요인들에 따라 달라진다. 대개, 환자는 인간이지만, 트랜스제닉 포유동물을 포함하는 비-인간 포유동물들도 또한 치료될 수 있다.
일부 실시 형태에서, 용량은 예를들어 숙주 체중 1 kg당 약 0.0001 내지 100 mg, 또는 0.01 내지 5 mg의 범위일 수 있다.
대상체는 매일, 격일, 매주 또는 실험적 분석에 의해 결정된 임의의 다른 일정에 따라 상기 용량이 투여될 수 있다. 본원에서 제공된 항체, 또는 이의 항원 결합 단편은 다회 투여될 수 있다. 단회 투여량 사이의 간격은, 예컨대, 매일, 주간, 월간 또는 연간이 될 수 있다. 간격은 또한 환자에서 폴리펩티드 또는 표적 분자의 혈중 수준을 측정함으로써 지시되는 바와 같이 불규칙할 수 있다.
본원에서 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 선택적으로 (예컨대, 예방적 또는 치료적) 치료를 필요로 하는 장애 또는 병태를 치료하는 데 사용되는 다른 에이전트와 조합하여 투여될 수 있다. 바람직한 추가적인 에이전트는 본 기술 분야에 알려진 것이고, 특정 장애에 대하여 표준적으로 투여된다.
CXCR3-연관된 질환 또는 장애의 치료 방법
본원에서 제공된 CXCR3 항체, 또는 이의 항원 결합 단편은 CXCR3 활성의 길항에 유용하다. 일부 실시 형태에서, 항체 및 항원 결합 단편은 CXCR3이 하나 이상의 리간드, 예컨대 CXCL9, CXCL10, 및/또는 CXCL11에 결합하는 것을 저해하고/하거나; CXCR3+ 세포의 (예컨대 염증 부위로의) 이동, 축적, 모집, 또는 침윤을 억제하고/하거나; CXCR3+ 세포를 고갈시키기 위한 방법에서 사용된다. 일부 실시 형태에서, 항체 및 항원 결합 단편은 생체 내에서 CXCR3+ 세포를 고갈시키기 위한 방법에서 사용된다. CXCR3+ 세포는 CXCR3+/CD4+ T 세포, CXCR3+/CD8+ T 세포, 및 CXCR3+/CD19+ B 세포 하위세트를 포함하지만, 이에 한정되지 않는다.
특정 실시 형태에서, CXCR3-연관된 질환 또는 장애의 치료 방법이 제공되며, 본 방법은 이를 필요로 하는 대상체에게 하나 이상의 CXCR3 항체, 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 제약 조성물을 투여하는 단계에 의한 것이다. 일 실시 형태에서, T-세포-매개 자가면역 질환의 진행의 감소 또는 치료 방법이 제공된다. 본 방법은 이를 필요로 하는 대상체에게 본원에 개시된 인간화 항-인간 CXCR3 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 투여함으로써 T-세포-매개 자가면역 질환의 진행의 감소 또는 치료를 행하는 단계를 포함한다. 특정 실시 형태에서, T-세포-매개 자가면역 질환은 신규 발병 제1형 진성 당뇨병이다. 다른 실시 형태에서, T-세포-매개 자가면역 질환은 건선이다. 일부 실시 형태에서, 이를 필요로 하는 대상체는 CXCR3-연관된 질환 또는 T-세포-매개 자가면역 질환으로 진단되었거나, CXCR3-연관된 질환 또는 T-세포-매개 자가면역 질환이 잘 발병하는 대상체를 포함하는데, 이는 본원에 기술된 바와 같다.
본원에 제공된 방법에 의해 치료받을 대상체는 인간 또는 기타 포유동물을 포함할 수 있다. 일 실시 형태에서, 대상체는 인간이다. 다양한 실시 형태에서, 대상체는 예방적으로 또는 일탈적인 CXCR3 활성과 연관된 임의의 병태 또는 CXCR3 신호전달의 방해가 치료적으로 유익할 수 있는 임의의 병태의 발병 후 치료받을 수 있다.
일부 실시 형태에서, 대상체는 예방적으로 또는 T1D의 발병 후 치료받을 수 있다. 일부 실시 형태에서, 대상체는 본원에 제공된 방법을 이용하여 T1D의 발병 전에 예방적으로 치료받을 수 있다. 일부 실시 형태에서, 신규 발병 T1D를 갖는 대상체는 본원에 제공된 방법을 이용하여 치료받을 수 있다.
"신규 발병 T1D를 갖는 대상체"는, 당뇨병이 임상적으로 진단된 때의 대상체의 연령에 상관없이(예를 들어, 성인, 청년, 태아, 또는 배아 대상체를 포함함), 췌장의 β-세포로부터의 인슐린-생성 능력이 감소되었지만 여전히 검출가능한 인슐린-생성 능력을 갖는 임의의 대상체이다. 가장 전형적으로, 인간 대상체는 대상체가 청년일 때, 예를 들어 0~18세일 때 신규 발병 T1D를 갖는 것으로 임상적으로 진단된다. 특정 실시 형태에서, 신규 발병 T1D를 갖는 대상체는 바람직하게는 T1D가 최초로 임상 진단된지 약 6개월 내에(예를 들어, 약 1일, 1주, 2주, 3주, 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 6개월, 또는 그 사이의 임의의 시점 내에) 치료를 받을 것이다. 다른 실시 형태에서, 대상체는 T1D가 최초로 임상 진단된지 6개월 초과의 시간 후 치료를 받을 수 있으며, 여기서, 대상체는 최소의, 그러나 측정가능한, 약 0.2 nmol/L 이상(예를 들어, 적어도 약 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.8, 또는 1.0 nmol/L)의 기초 혈청중 C-펩티드 수준을 보유한다. 일부 실시 형태에서, 치료는 본원에 개시된 항체 중 하나 이상을 포함하는 하나 이상의 용량의 투여를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 대상체는 예방적으로 또는 건선의 발병 후 치료받을 수 있다. 일부 실시 형태에서, 대상체는 본원에 제공된 방법을 이용하여 건선의 발병 전에, 또는 건선의 플레어(flare) 전에 예방적으로 치료받을 수 있다. 일부 실시 형태에서, 활성 건선을 갖는 대상체는 본원에 제공된 방법을 이용하여 치료받을 수 있다.
"활성 건선을 갖는 대상체"는 건선의 특징적인, 임상적으로 유의한 피부, 손발톱, 또는 관절 병변을 갖는 임의의 대상체이다. 특정 실시 형태에서, "활성 건선을 갖는 대상체"는 건선의 특징적인 임상적으로 유의한 피부 병변을 갖는 임의의 대상체이다. 특정 실시 형태에서, "활성 건선을 갖는 대상체"는 건선의 특징적인 임상적으로 유의한 손발톱 병변을 갖는 임의의 대상체이다. 특정 실시 형태에서, "활성 건선을 갖는 대상체"는 건선에 기인하는 임상적으로 유의한 관절염, 즉, 건선성 관절염을 갖는 임의의 대상체이다.
실시예
항체, 조성물, 및 방법을 하기 실시예로 추가로 예시하는데, 실시예는 추가로 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다. 서열 목록, 도면들 및 모든 참고 문헌들의 내용, 본 출원 전체에 걸쳐 인용된 특허들 및 공개된 특허 출원들은 명백하게 참고로 본원에 포함된다.
실시예 1: 인간화 항-CXCR3 단클론 항체의 생성
항-CXCR3 단클론 항체를 국제 공개 제2013/109974호에 기술된 바와 같이 생성하였다. 인간화 클론 53 단클론 항체를 하기에 설명된 바와 같이 생성하였다.
CXCR3-발현 세포의 고갈을 유도할 수 있는 인간화 버전의 클론 53을 제조하였다. 표 4에 나타낸 바와 같은 VH 및 VK 서열을 갖는 인간화 클론 53 단클론 항체를 생성하였다.
각각의 인간화 변이체의 배선성 지수 점수를 표 4에 나타냈다. 중쇄를 IGHV3-23*03/IGHJ4*03 생식세포 계열 서열과 비교하고; 경쇄를 IGKV1-9*01/IGKJ2*01 생식세포 계열 서열과 비교한다.
[표 4]
Figure pct00006
본원에서 제공된 각각의 인간화 단클론 항체의 결합 특성이 표 5에 예시되어 있다.
[표 5]
Figure pct00007
표 6은 클론 53(53), 키메라 클론53 (Ch53) 및 인간화 버전의 클론 53(53Hu1-53Hu20)의 결합 특성 및 배선성을 나타낸다.
[표 6]
Figure pct00008
상기 데이터가 나타내는 바와 같이, 본원에서 제공된 인간화 항체는 유의하게 개선된 결합 특성을 갖는 한편 유리한 배선성 지수를 갖는다.
실시예 2: CDR 최적화
많은 VH CDR 및/또는 VL CDR 변이체를 제조하였다. 재조합 인간 CXCR3에의 결합 친화성을 Biacore를 이용하여 측정하였다. 적어도 53Hu37에 대해서만큼 강한 결합성을 가진 돌연변이체를 표 3에 나타낸다.
실시예 3: CXCR3-173은 고갈 항체이다.
햄스터 항-마우스 CXCR3 단클론(클론 CXCR3-173)을 전임상 실험에서 대리 항체로서 이용하였다. CXCR3-173은 이전에 생체내에서 CD4+ T 세포를 고갈시키지 않는 차단 항체로서 개시되었다. (문헌[Uppaluri et al., Transplantation 86:137-47 (2008)] 참조).
항체의 이펙터 기능을 테스트하기 위하여 햄스터 CXCR3-173 mAb의 하기 Fc 변이체를 제조하였다: 마우스 IgG1의 비당화된 N297G 변이체(CXCR3 mIgG1 agly); 야생형 마우스 IgG2a 키메라(CXCR3 mIgG2a WT); 고갈 능력을 없애도록 변형된 마우스 IgG2a 키메라(CXCR3 mIgG2a Dab); 및 야생형 마우스 IgG3(CXCR3 mIgG3).
8 내지 10주령 C57BL/6 마우스(Jackson Laboratories, n = 5/군)에게 단회 5 mg/kg 정맥내 용량 항체를 투여한 후 하기 마커를 이용한 유세포 분석법 분석을 위해 24h 후에 혈액을 수집하였다: TCRab, CD4, 및 CD8에 의한 CD4 및 CD8 T 세포; TCRab, CD4, CD8, CD62L 및 CD44에 의한 기억 CD4 및 CD8 T 세포.혈액 1 마이크로리터당 총 세포를 결정하기 위하여 제조사의 프로토콜에 따라 카운트 브라이트 비드(Count Bright bead)(Invitrogen)를 이용하여 세포를 정량하였다.
전체 T 림프구 및 T 림프구 하위세트에서의 게이팅 결과를 도 1에 나타낸다. 상기 도면에 나타낸 대로, 햄스터 CXCR3-173을 마우스에 투여할 경우 놀랍게도 CD4+ 및 CD8+ 기억 T 세포를 고갈시킴이 처음으로 입증되었다.
실시예 4: CXCR3-173의 Fc 변이체의 이펙터 기능
Biacore 3000 장비를 이용하여 항체 포획 접근법을 이용하여 CXCR3-173의 Fc-조작된 버전의 마우스 Fcγ 수용체 결합성을 평가하였다. 재조합 단백질 A/G (Pierce)를 아민 화학을 이용하여 CM5 센서 칩에 공유적으로 고정시켰다. CXCR3-173 항체를 HBS-EP 완충액에서 5 ㎍/mL로 희석시키고 10 μL/min의 유량으로 30초 동안 단백질 A/G 칩에 주입하였다. R&D Systems로부터의 재조합 마우스 FcγRI (CD64), FcγRIIb(CD32), FcγRIII(CD16), 및 FcγIV(CD16-2)를 HBS-EP 완충액에서 300 nM로부터 3.7 nM까지 3배 희석시키고 30 μL/min의 유량으로 포획된 항체에 이중으로 주입하였다. 표면을 글리신 2.0(GE Healthcare)으로 재생시켰다. 결합 반응을 단백질 A/G 포획의 RU 양에 대하여 정규화시켰다. 결과를 도 2a~2d에 나타낸다.
상기 도면에 나타낸 대로, 야생형 쥐과 IgG2a 아이소타입을 갖도록 변형된 햄스터 CXCR3-173은 4가지 재조합 마우스(rm) Fcγ 수용체 모두에 결합하지만, dAB 돌연변이가 이 결합을 상당히 감소시킨다. 야생형 쥐과 IgG3 아이소타입을 갖도록 변형된 CXCR3-173도 4가지 재조합 마우스 Fcγ 수용체 모두에 결합한다. 원래의 비변형 햄스터 CXCR3-173은 IgG2a 아이소타입 변이체보다 rmFcγRIIb 및 rmFcγRIII에 더 잘 결합하며, 비당화된 mIgG1 아이소타입 변이체는 어떤 rmFcγR에도 결합하지 않는다.
실시예 5: 시험관 내에서의 이펙터 기능
인간화 항-CXCR3 mAb 및 그의 Fc-조작된 버전을 일련의 ADCC 분석에서 연구하였다. 인간화 항-CXCR3 mAb의 Fc-조작된 버전을 표준 방법을 이용하여 제조하였다. 탈푸코실화된 버전은 인간화 mAb를 발현하는 세포를 키푸넨신의 존재 하에서 배양함으로써 제조하였다.
ADCC 분석은 일차 인간 NK 세포 또는 발린 다형성을 가진 CD16을 과발현하는 NK9.2 세포주(Conkwest)를 이펙터 세포로서 이용하고 인간 CXCR3을 과발현하는 CHO 형질감염된 세포(A 아이소형)를 표적 세포로 이용하여 수행하였다.
일차 NK 세포가 이펙터로서 사용된 분석의 경우, NK 세포는 정상 공여자의 류코팩(leucopak)으로부터 정제하여 IL-2에서 24h 동안 배양한 후, 크롬으로 하룻밤 라벨링된 CHO-인간 CXCR3 표적 세포와 5:1의 E:T 비로 플레이팅하였다. 배양물을 3시간 동안 조직 배양 인큐베이터에서 인큐베이션한 후 세척하고 1% 트리톤-X로 용해시킨 후 감마 카운터에서 상청액을 판독하였다.
NK9.2 세포가 이펙터로서 이용된 분석의 경우, NK9.2 세포를 제조사의 권장사항에 따라 IL-2에서 2주 동안 증식시켰다. 분석일에, NK9.2 세포(70,000 세포)를 칼세인 AM(Invitrogen)으로 라벨링하고 적절하게 희석된 항체와 함께 30분 동안 인큐베이션하여 항체를 표적 세포 상의 CXCR3에 결합시켰다. NK 세포를 3:1의 이펙터 대 표적 세포 비로 플레이팅하고 배양물을 조직 배양 인큐베이터에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 세포를 배양 기간의 마지막에 트리톤 X-100으로 용해시키고 M5 플레이트 판독기(492 nm 여기 및 515 nm 방출)를 이용하여 플레이트를 판독하였다.
인간 IgG1(Sigma)을 음성 대조군으로 이용하였으며 알렘투주맙(단클론 항-CD52 항체)으로 처리된 CD52-과발현 CHO 세포의 용해가 용해에 대한 양성 대조군으로 작용하였다. 신호는 임의 형광 단위(AFU)로 표현된다. 독성 퍼센트는 (실험적 용해 - 자발적 용해)/(최대 용해 - 자발적 용해) x 100%에 의해 표현된다.
인간 IgG1 Fc를 가진 인간화 항-CXCR3 mAb 53Hu37 및 Fc-조작된 버전을 ADCC 분석에서 테스트하였다. Fc-조작된 버전 M1(S239D/D332E(EU 표기법), M2 (G236A/S267E/H268F/S324T/I332E(EU 표기법), "AEFTE"), 및 M3 (S239D/H268F/S324T/I332E(EU 표기법), "DFTE")은 ADCC 또는 CDC 활성 향상을 가능하게 하는 아미노산 변화를 함유한다. 네 번째의 Fc-조작된 버전을 야생형 항체를 만드는 세포주의 키푸넨신 처리에 의해 생성하였다.
항-인간 CXCR3 클론인 클론 4(CXCR3 CL4), 클론 12(CXCR3 CL12), 클론 82 (CXCR3 CL82), 클론 135(CXCR3 CL135)를 또한 테스트하였다. 독립적인 실험에서, 상이한 이펙터 세포, 이펙터:표적(E:T) 비 및 항체의 농도를 이용하여 분석을 실시하였다. 대표적인 결과를 도 3b 및 도 3c에 나타낸다.
도 3a에는 53Hu37의 M1, M2, M3, 및 탈푸코실화 버전의 이펙터 기능이 요약되어 있다. 도 3b는 일차 NK 세포를 이펙터로서 이용하는 분석의 결과를 보여준다. 도 3c는 NK9.2 세포를 이펙터로서 이용하는 분석의 결과를 보여준다.
실시예 6: Fcγ 수용체 결합
Biacore T200 장비를 이용하여 인간화 항-CXCR3 mAb 53Hu37 및 53Hu37의 Fc-조작된 버전의 인간 및 마우스 Fcγ 수용체 결합 친화성을 평가하였다. Sigma로부터의 단백질 A를 아민 화학을 이용하여 CM5 시리즈 S 칩에 고정시켰다. 항체를 단백질 A 칩 내로 주입하고, 여러 농도의 재조합 인간 및 마우스 Fcγ 수용체(R&D Systems)를 포획된 항체 내로 주입하였다. 광범위한 농도의 수용체를 이용하여 저 친화성 결합자 및 고 친화성 결합자를 스패닝하였다(1.2 nM 내지 5 μM). 각 샘플을 이중으로 주입하였다. 결합 센서그램을 1:1 동역학적 결합 모델에 피팅시켰다. 정량적 결과는 도 4에 요약되어 있다.
도 4에 나타낸 대로, M1 및 M3 Fc-조작된 버전은 hFcγRIII 및 mFcγRIV 둘 다에 대해 개선된 친화성을 가졌으며, M2는 hFcγRIIa에의 증가된 결합성을 가졌으며, 키푸넨신-처리된 53Hu37은 Fc-조작된 버전에 비하여 hFcγRIII 및 mFcγRIV에서 적당한 증가를 나타냈다.
실시예 7:
시노몰구스 원숭이에게 체중 1 kg당 2 mg의 53Hu37, M1 변이체, 또는 키푸넨신-처리된 버전(n = 8/항체 처리군), 또는 비히클 대조군(n = 6)의 단회 정맥내 주입을 제공하였다. 주입 전 및 주입한지 1일 후, 3일 후, 7일 후, 및 14일 후에 혈액 샘플을 수집하고 전체 T 세포 및 T-세포 하위세트에 대해 유세포 분석법에 의해 분석하였다. 유세포 분석법을 위해, 적혈구를 용해시키고 전체 및 기억 CD4 및 CD8 T 세포를 확인하기 위하여 하기 마커에 대한 항체로 세포를 염색하였다: CD3(클론 SP34-2), CD4(클론 OKT4), CD8a(클론 RPA-T8), CD45RA(클론 5H9), CCR7(클론 G043H7), 및 CXCR3(클론 1C6). 카운트 브라이트 비드(Invitrogen)를 이용하여 세포를 정량하여 세포/마이크로리터(세포/μL)를 결정하였다. 데이터는 시간이 지남에 따른 군의 각 세포 하위세트에 있어서의 처리전 혈액의 값의 평균 백분율로서 나타내진다. 주입 후 14일에 각 처리군의 하위세트로부터 수득한 비장 샘플의 조직학적 특성을, 항-인간 CXCR3 클론 4 항체 및 적절한 이차 항체를 이용하여 CXCR3에 대해 고정 샘플 섹션을 염색함으로써 연구하였다. 결과를 도 5a~5c에 나타낸다. 펩티드 ELISA를 이용하여, 투여된 항체의 순환 농도를 측정하여, 혈액 샘플로부터의 혈청을 또한 약동학적 특성에 대해 분석하였다.
상기 도면에 나타낸 대로, 53Hu37, 53Hu37의 M1 버전, 및 Kif-처리된 53Hu37은 이펙터 메모리 CD4 T 세포를 감소시켰으며 53Hu37, Hu37의 M1 버전, 및 Kif-처리된 53Hu37은 이펙터 메모리 CD8+ T 세포를 감소시켰다. 또한, 53Hu37의 M1 버전, 및 Kif-처리된 53Hu37은 항체의 단회 정맥내 주입 후 14일에 비장에서 CXCR3 염색을 극적으로 감소시켰다.
실시예 8: 생화학적 분석
열 안정성, 전단 스트레스 및 바이러스 불활성화에 대한 안정성, 동결-해동 스트레스에 대한 안정성, 교반 스트레스에 대한 안정성 및 pH 안정성을 53Hu37, M1 버전 및 키푸넨신-처리된 53Hu37에 대해 측정하였다.
시차 주사 열량법(DSC)
고처리 VP-DSC(Microcal)를 이용하여 샘플을 분석하였다. 샘플을 상응하는 완충액으로 대략 0.5 mg/mL로 희석하고 96웰 플레이트 상에 로딩하였다. 스캔 파라미터는 25℃의 시작 온도 및 100℃의 최종 온도로 이루어졌다. 200℃/h의 스캔 속도를 이용하였다.
탁도
5 nm 증분으로 340~360 nm에서 샘플 흡광도를 Spectramax Plus(Molecular Devices)에서 측정하였으며 값을 평균하여 최종 탁도 측정값을 수득하였다. 150~200 μL의 재료로 96웰 UV 평판 플레이트를 이용하였다. 샘플 첨가 전에 플레이트를 사전 판독하고 샘플 값에 경로 체크(Path check)를 적용하였다. 탁도의 정도를 분류하기 위하여 문헌["A Turbidimetric Method to Determine Visual Appearances of Protein Solutions" by Brigitte Eckhardt, Technology Applications Vol. 48, No. 2 Mar.-Apr. 1994]에 기초한 탁도 표준의 UV 흡광도로부터 수득한 값과 샘플을 비교하였다.
크기 배제 크로마토그래피(SEC)
HP1100 또는 1200 시리즈 시스템은 SWXL 가드 컬럼과 결합된 TSK SWXL 크기 배제 컬럼이 구비되었다. 20 mM 인산나트륨, 500 mM NaCl, pH 6.0의 이동상을 이용하여 35분 동안 샘플을 러닝시켰다. 0.5 mL/min의 유량을 이용하였다. 50 ㎍을 주입하고 UV 신호를 280 nm에서 모니터하였다.
열-유도 상대적 응집 경향(TI-RAP)
0.2 mg/mL 항-인간 CXCR3 항체(개별 또는 항체 혼합물)를 PBS 완충액 및 10 mM 히스티딘 및 9% 수크로스 완충액에서 5℃(대조군), 64℃, 67℃, 70℃, 또는 73℃에서 10분 동안 인큐베이션함으로써 온도-유도 응집을 생성하였다. 열 인큐베이션 후, 샘플을 5℃에서 2분 동안 7000 x g에서 원심분리하여 불용성 단백질 침전물을 제거하고 양이온 교환 크로마토그래피(CEX)에 의해 상청액을 분석하였다. 가용성 단량체의 퍼센트(및 상대적 응집 경향)는 대조군(5℃) 샘플의 피크 면적을 이용하여 열 스트레스를 받은 샘플의 크로마토그래피 피크 면적을 정규화함으로써 계산하였다.
교반-유도 상대적 응집 경향(AI-RAP)
교반-유도 상대적 응집 경향의 경우, 5℃의 PBS 완충액 및 10 mM 히스티딘 내에 0.2 mg/mL 최종 단백질 농도의 항-인간 CXCR3 항체를 함유한 용액 및 0 및 0.01% 폴리소르베이트 80을 가진 9% 수크로스 완충액은 5℃에서 격렬한 교반 스트레스를 가하였다. 항-인간 CXCR3 항체의 용액을 총 24h의 기간 동안 VX-2500 Multi-Tube Vortexer(VWR, 미국 펜실베이니아주 웨스트 체스터)로부터의 최고 속도에서 교반시켰다.
CEX 분석을 위하여 소량의 샘플 분취액을 꺼냄으로써 연구 전체에 걸쳐서 다양한 시점을 분석하였다. 샘플 분액을 2분 동안 7000 x g(5℃)에서 원심분리하여 불용성 침전물을 제거하고 상청액을 CEX에 의해 분석하였다. 가용성 단량체의 퍼센트(및 상대적 응집 경향)는 대조군(0 h) 샘플의 피크 면적을 이용하여 교반된 샘플의 크로마토그래피 피크 면적을 정규화함으로써 계산하였다.
양이온 교환 크로마토그래피(CEX)
25℃에서 ProPac WCX-10 분석 컬럼(약한 양이온 교환, 4 × 250 mm, Thermo Scientific)을 이용하는 Agilent 1290 infinity HPLC 시스템에서 CEX 분석을 수행하였다. 20 마이크로그램 단백질 샘플을 컬럼 상에 로딩하고 0.8 mL/min의 유량으로 분석하였다. 컬럼을 완충액 A(20 mM 아세트산나트륨, 0.0025% 소듐 아지드, pH 5.2)로 평형화시키고 단백질을 40분에 걸쳐서 0에서 100%까지의 선형 구배의 완충액 B(20 mM 아세트산나트륨, 1 M 염화나트륨, 0.0025% 소듐 아지드, pH 5.2)로 용출시켰다. 280 nm에서의 흡광도를 측정하고 280 nm 흡광도 피크를 적분하여 단백질 피크 면적을 결정하였다.
실험 설계
pH/온도 스트레스
각 클론으로부터의 재료의 일부를 Slide-A-Lyzers(Thermo Scientific PN 66810)를 이용하여 pH 5.0의 20 mM 인산나트륨 및 pH 7.0의 인산나트륨 내로 투석시켰다. 상응하는 완충액을 이용하여 이 재료를 희석시키고 Millex GV 필터(Millipore PN SLGV033RB)를 이용하여 대략 2 mg/mL로 여과시켰다. pH 5 및 pH 7의 인산나트륨 중의 샘플을 37℃에 보관한 후 3주 및 5주에 테스트하였다.
동결-해동 스트레스
표시된 항-인간 CXCR3 항체를 Slide-A-Lyzers(Thermo Scientific PN 66810)를 이용하여 pH 6.0의 20 mM 인산나트륨 내로 투석시켰다. 상응하는 완충액을 이용하여 이 재료를 희석시키고 Millex GV 필터(Millipore PN SLGV033RB)를 이용하여 대략 1 mg/mL로 여과시켰다. 동결-해동 스트레스 샘플을 총 5회 -80℃에서 동결시키고 실온에서 해동시켰다. 1 및 3회의 동결-해동 사이클 후, 선발 분석에 의한 테스트를 위해 재료를 제거하였다. 완전한 분석 테스트는 최종 동결-해동 후에 수행하였다.
전단 스트레스
항체 샘플을 Slide-A-Lyzers(Thermo Scientific PN 66810)을 이용하여 pH 6.0의 20 mM 인산나트륨 내로 투석시켰다. 상응하는 완충액을 이용하여 이 재료를 희석시키고 Millex GV 필터(Millipore PN SLGV033RB)를 이용하여 대략 1 mg/mL로 여과시켰다. 전단 스트레스 샘플을 총 50회 200 μL 피펫으로 반복적으로 피펫팅하였다.
모크(mock) 바이러스 불활성화모크(mock) 바이러스 불활성화
항체 샘플을 Slide-A-Lyzers(Thermo Scientific PN 66810)을 이용하여 pH 6.0의 20 mM 인산나트륨 내로 투석시켰다. 상응하는 완충액을 이용하여 이 재료를 희석시키고 Millex GV 필터(Millipore PN SLGV033RB)를 이용하여 대략 1 mg/mL로 여과시켰다. 바이러스 불활성화 샘플을 1 N HCl을 이용하여 pH 3.5까지 되게 하고 실온에서 100분 동안 그 pH에서 유지하였다. 유지 기간에 이어서, 샘플을 1 N NaOH를 이용하여 다시 pH 7.2까지 되게 하고 100분 동안 유지하였다. 그 후 1 N HCl을 이용하여 샘플을 pH 6.0까지 되게 하고 테스트하였다.
결과
시차 주사 열량측정법
M1 버전(D/E 돌연변이체)은 Kif 버전보다 약간 덜 안정한 것으로 밝혀졌으며, Kif 버전은 53Hu37보다 약간 덜 안정하였다.
전단 스트레스:
M1 버전(D/E 돌연변이체)은 53Hu37 및 Kif 버전보다 약간 덜 안정한 것으로 밝혀졌으며, 후자의 두 가지는 대략 동등하게 안정하였다.
바이러스 불활성화 스트레스:
M1 버전(D/E 돌연변이체)은 Kif 버전보다 더 안정한 것으로 밝혀졌으며, 둘 다 53Hu37보다 덜 안정하였다.
동결-해동 스트레스:
M1 버전(D/E 돌연변이체), Kif 버전, 및 53Hu37은 대략 동등한 것으로 밝혀졌다.
교반-유도 상대적 응집 경향:
모든 버전의 항체의 대략 80%가 교반 2시간 이내에 침전되었지만, pH 5.5에서, M1 버전(D/E 돌연변이체)이 다른 두 버전보다 상대적으로 더 안정하였다.
응집체 형성:
pH 5.0에서의 대조(비가속화) 조건 하에서, M1 버전(D/E 돌연변이체) 및 53Hu37은 5주의 기간에 걸쳐서 본질적으로 안정하였지만, Kif 버전은 유백색이 되었으며; 동일한 이 패턴이 가속화 조건 하에서 발견되었다. pH 7.0에서의 대조(비가속화) 조건 하에서, 세 가지 항체 버전은 5주의 기간에 걸쳐서 대략 동일하였다. 가속화된 조건 하에서, DE 돌연변이체는 53Hu37 보다 약간 더 안정하였으며, 53Hu37은 Kif 버전보다 더 안정하였다.
전술된 실시예들은 예시하고자 하는 것으로서 어떠한 방식으로도 본 발명을 제한하지 않는다. 개시된 화합물 및 방법들의 다른 실시 형태들이 본 명세서의 숙고 및 본원에 개시된 화합물 및 방법의 실시에 의해 당업자에게 명백해질 것이다.
SEQUENCE LISTING <110> SANOFI <120> HUMANIZED CXCR3 ANTIBODIES WITH DEPLETING ACTIVITY AND METHODS OF USE THEREOF <130> 597559: SA9-195PC <150> 62/437,867 <151> 2016-12-22 <150> EP 17305042.8 <151> 2017-01-21 <160> 141 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 368 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Val Leu Glu Val Ser Asp His Gln Val Leu Asn Asp Ala Glu Val 1 5 10 15 Ala Ala Leu Leu Glu Asn Phe Ser Ser Ser Tyr Asp Tyr Gly Glu Asn 20 25 30 Glu Ser Asp Ser Cys Cys Thr Ser Pro Pro Cys Pro Gln Asp Phe Ser 35 40 45 Leu Asn Phe Asp Arg Ala Phe Leu Pro Ala Leu Tyr Ser Leu Leu Phe 50 55 60 Leu Leu Gly Leu Leu Gly Asn Gly Ala Val Ala Ala Val Leu Leu Ser 65 70 75 80 Arg Arg Thr Ala Leu Ser Ser Thr Asp Thr Phe Leu Leu His Leu Ala 85 90 95 Val Ala Asp Thr Leu Leu Val Leu Thr Leu Pro Leu Trp Ala Val Asp 100 105 110 Ala Ala Val Gln Trp Val Phe Gly Ser Gly Leu Cys Lys Val Ala Gly 115 120 125 Ala Leu Phe Asn Ile Asn Phe Tyr Ala Gly Ala Leu Leu Leu Ala Cys 130 135 140 Ile Ser Phe Asp Arg Tyr Leu Asn Ile Val His Ala Thr Gln Leu Tyr 145 150 155 160 Arg Arg Gly Pro Pro Ala Arg Val Thr Leu Thr Cys Leu Ala Val Trp 165 170 175 Gly Leu Cys Leu Leu Phe Ala Leu Pro Asp Phe Ile Phe Leu Ser Ala 180 185 190 His His Asp Glu Arg Leu Asn Ala Thr His Cys Gln Tyr Asn Phe Pro 195 200 205 Gln Val Gly Arg Thr Ala Leu Arg Val Leu Gln Leu Val Ala Gly Phe 210 215 220 Leu Leu Pro Leu Leu Val Met Ala Tyr Cys Tyr Ala His Ile Leu Ala 225 230 235 240 Val Leu Leu Val Ser Arg Gly Gln Arg Arg Leu Arg Ala Met Arg Leu 245 250 255 Val Val Val Val Val Val Ala Phe Ala Leu Cys Trp Thr Pro Tyr His 260 265 270 Leu Val Val Leu Val Asp Ile Leu Met Asp Leu Gly Ala Leu Ala Arg 275 280 285 Asn Cys Gly Arg Glu Ser Arg Val Asp Val Ala Lys Ser Val Thr Ser 290 295 300 Gly Leu Gly Tyr Met His Cys Cys Leu Asn Pro Leu Leu Tyr Ala Phe 305 310 315 320 Val Gly Val Lys Phe Arg Glu Arg Met Trp Met Leu Leu Leu Arg Leu 325 330 335 Gly Cys Pro Asn Gln Arg Gly Leu Gln Arg Gln Pro Ser Ser Ser Arg 340 345 350 Arg Asp Ser Ser Trp Ser Glu Thr Ser Glu Ala Ser Tyr Ser Gly Leu 355 360 365 <210> 2 <211> 255 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 1 5 10 15 Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr 20 25 30 His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser 35 40 45 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 50 55 60 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 65 70 75 80 Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 85 90 95 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 100 105 110 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 115 120 125 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr 130 135 140 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 145 150 155 160 Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 165 170 175 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 180 185 190 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 195 200 205 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 210 215 220 Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 225 230 235 240 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 245 250 255 <210> 3 <211> 255 <212> PRT <213> Synthetic Polypeptide <400> 3 Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 1 5 10 15 Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr 20 25 30 His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Ala Gly Pro Ser 35 40 45 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 50 55 60 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 65 70 75 80 Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 85 90 95 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 100 105 110 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 115 120 125 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr 130 135 140 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 145 150 155 160 Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 165 170 175 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 180 185 190 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 195 200 205 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 210 215 220 Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 225 230 235 240 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 245 250 255 <210> 4 <211> 255 <212> PRT <213> Synthetic Polypeptide <400> 4 Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 1 5 10 15 Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr 20 25 30 His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Asp 35 40 45 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 50 55 60 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 65 70 75 80 Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 85 90 95 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 100 105 110 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 115 120 125 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr 130 135 140 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 145 150 155 160 Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 165 170 175 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 180 185 190 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 195 200 205 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 210 215 220 Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 225 230 235 240 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 245 250 255 <210> 5 <211> 255 <212> PRT <213> Synthetic Polypeptide <400> 5 Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 1 5 10 15 Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr 20 25 30 His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser 35 40 45 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 50 55 60 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Glu His Glu Asp Pro 65 70 75 80 Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 85 90 95 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 100 105 110 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 115 120 125 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr 130 135 140 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 145 150 155 160 Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 165 170 175 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 180 185 190 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 195 200 205 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 210 215 220 Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 225 230 235 240 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 245 250 255 <210> 6 <211> 255 <212> PRT <213> Synthetic Polypeptide <400> 6 Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 1 5 10 15 Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr 20 25 30 His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser 35 40 45 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 50 55 60 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Phe Glu Asp Pro 65 70 75 80 Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 85 90 95 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 100 105 110 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 115 120 125 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr 130 135 140 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 145 150 155 160 Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 165 170 175 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 180 185 190 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 195 200 205 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 210 215 220 Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 225 230 235 240 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 245 250 255 <210> 7 <211> 255 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 7 Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 1 5 10 15 Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr 20 25 30 His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser 35 40 45 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 50 55 60 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 65 70 75 80 Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 85 90 95 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 100 105 110 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 115 120 125 Lys Cys Lys Val Thr Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr 130 135 140 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 145 150 155 160 Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 165 170 175 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 180 185 190 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 195 200 205 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 210 215 220 Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 225 230 235 240 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 245 250 255 <210> 8 <211> 255 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 8 Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 1 5 10 15 Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr 20 25 30 His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser 35 40 45 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 50 55 60 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 65 70 75 80 Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 85 90 95 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 100 105 110 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 115 120 125 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Glu Glu Lys Thr 130 135 140 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 145 150 155 160 Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 165 170 175 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 180 185 190 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 195 200 205 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 210 215 220 Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 225 230 235 240 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 245 250 255 <210> 9 <211> 255 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 9 Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 1 5 10 15 Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr 20 25 30 His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Asp 35 40 45 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 50 55 60 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 65 70 75 80 Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 85 90 95 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 100 105 110 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 115 120 125 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Glu Glu Lys Thr 130 135 140 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 145 150 155 160 Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 165 170 175 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 180 185 190 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 195 200 205 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 210 215 220 Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 225 230 235 240 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 245 250 255 <210> 10 <211> 255 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 10 Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 1 5 10 15 Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr 20 25 30 His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Ala Gly Pro Ser 35 40 45 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 50 55 60 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Glu Phe Glu Asp Pro 65 70 75 80 Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 85 90 95 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 100 105 110 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 115 120 125 Lys Cys Lys Val Thr Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Glu Glu Lys Thr 130 135 140 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 145 150 155 160 Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 165 170 175 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 180 185 190 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 195 200 205 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 210 215 220 Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 225 230 235 240 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 245 250 255 <210> 11 <211> 255 <212> PRT <213> Synthetic Polypeptide <400> 11 Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 1 5 10 15 Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr 20 25 30 His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Asp 35 40 45 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 50 55 60 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Phe Glu Asp Pro 65 70 75 80 Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 85 90 95 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 100 105 110 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 115 120 125 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Glu Glu Lys Thr 130 135 140 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 145 150 155 160 Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 165 170 175 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 180 185 190 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 195 200 205 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 210 215 220 Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 225 230 235 240 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 245 250 255 <210> 12 <211> 8 <212> PRT <213> Synthetic Polypeptide <400> 12 Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr Ala 1 5 <210> 13 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 13 Ile Ser His Gly Gly Thr Tyr Thr 1 5 <210> 14 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 14 Ala Arg His Pro Ile Tyr Ser Gly Asn Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 1 5 10 15 <210> 15 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 15 Ser Gly Val Asn Tyr 1 5 <210> 16 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 16 Phe Thr Ser 1 <210> 17 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 17 Gln Gln Phe Thr Ser Ser Pro Tyr Thr 1 5 <210> 18 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 18 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Ser His Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Pro Ile Tyr Ser Gly Asn Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 19 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 19 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser His Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Pro Ile Tyr Ser Gly Asn Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 20 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 20 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser His Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Pro Ile Tyr Ser Gly Asn Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 21 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 21 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Gly Val Asn Tyr Leu 20 25 30 Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Trp Ile Tyr 35 40 45 Phe Thr Ser Thr Leu Ala Pro Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Asn Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu 65 70 75 80 Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Thr Ser Ser Pro Tyr Thr 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 22 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 22 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Gly Val Asn Tyr Leu 20 25 30 Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Trp Ile Tyr 35 40 45 Phe Thr Ser Thr Leu Ala Pro Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Asn Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu 65 70 75 80 Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Thr Ser Ser Pro Tyr Thr 85 90 95 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 23 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 23 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Gly Val Asn Tyr Leu 20 25 30 Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Trp Ile Tyr 35 40 45 Phe Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Asn Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu 65 70 75 80 Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Thr Ser Ser Pro Tyr Thr 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 24 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 24 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Gly Val Asn Tyr Leu 20 25 30 Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Trp Ile Tyr 35 40 45 Phe Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Asn Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu 65 70 75 80 Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Thr Ser Ser Pro Tyr Thr 85 90 95 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 25 <211> 452 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 25 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser His Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Pro Ile Tyr Ser Gly Asn Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly 115 120 125 Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly 130 135 140 Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val 145 150 155 160 Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe 165 170 175 Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val 180 185 190 Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val 195 200 205 Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys 210 215 220 Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu 225 230 235 240 Leu Gly Gly Pro Asp Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 245 250 255 Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 260 265 270 Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 275 280 285 Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser 290 295 300 Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu 305 310 315 320 Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala 325 330 335 Pro Glu Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro 340 345 350 Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln 355 360 365 Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala 370 375 380 Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 385 390 395 400 Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu 405 410 415 Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 420 425 430 Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 435 440 445 Leu Ser Pro Gly 450 <210> 26 <211> 452 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 26 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser His Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Pro Ile Tyr Ser Gly Asn Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly 115 120 125 Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly 130 135 140 Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val 145 150 155 160 Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe 165 170 175 Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val 180 185 190 Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val 195 200 205 Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys 210 215 220 Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu 225 230 235 240 Leu Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 245 250 255 Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 260 265 270 Glu Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 275 280 285 Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser 290 295 300 Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu 305 310 315 320 Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Thr Asn Lys Ala Leu Pro Ala 325 330 335 Pro Glu Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro 340 345 350 Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln 355 360 365 Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala 370 375 380 Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 385 390 395 400 Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu 405 410 415 Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 420 425 430 Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 435 440 445 Leu Ser Pro Gly 450 <210> 27 <211> 452 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 27 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser His Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Pro Ile Tyr Ser Gly Asn Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly 115 120 125 Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly 130 135 140 Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val 145 150 155 160 Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe 165 170 175 Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val 180 185 190 Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val 195 200 205 Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys 210 215 220 Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu 225 230 235 240 Leu Gly Gly Pro Asp Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 245 250 255 Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 260 265 270 Ser Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 275 280 285 Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser 290 295 300 Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu 305 310 315 320 Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Thr Asn Lys Ala Leu Pro Ala 325 330 335 Pro Glu Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro 340 345 350 Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln 355 360 365 Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala 370 375 380 Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 385 390 395 400 Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu 405 410 415 Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 420 425 430 Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 435 440 445 Leu Ser Pro Gly 450 <210> 28 <211> 452 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 28 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser His Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Pro Ile Tyr Ser Gly Asn Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly 115 120 125 Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly 130 135 140 Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val 145 150 155 160 Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe 165 170 175 Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val 180 185 190 Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val 195 200 205 Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys 210 215 220 Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu 225 230 235 240 Leu Gly Gly Pro Asp Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 245 250 255 Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 260 265 270 Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 275 280 285 Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser 290 295 300 Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu 305 310 315 320 Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala 325 330 335 Pro Glu Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro 340 345 350 Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln 355 360 365 Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala 370 375 380 Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 385 390 395 400 Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu 405 410 415 Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 420 425 430 Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 435 440 445 Leu Ser Pro Gly 450 <210> 29 <211> 452 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 29 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser His Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Pro Ile Tyr Ser Gly Asn Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly 115 120 125 Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly 130 135 140 Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val 145 150 155 160 Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe 165 170 175 Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val 180 185 190 Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val 195 200 205 Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys 210 215 220 Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu 225 230 235 240 Leu Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 245 250 255 Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 260 265 270 Glu Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 275 280 285 Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser 290 295 300 Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu 305 310 315 320 Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Thr Asn Lys Ala Leu Pro Ala 325 330 335 Pro Glu Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro 340 345 350 Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln 355 360 365 Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala 370 375 380 Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 385 390 395 400 Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu 405 410 415 Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 420 425 430 Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 435 440 445 Leu Ser Pro Gly 450 <210> 30 <211> 452 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 30 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser His Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Pro Ile Tyr Ser Gly Asn Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly 115 120 125 Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly 130 135 140 Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val 145 150 155 160 Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe 165 170 175 Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val 180 185 190 Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val 195 200 205 Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys 210 215 220 Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu 225 230 235 240 Leu Gly Gly Pro Asp Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 245 250 255 Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 260 265 270 Ser Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 275 280 285 Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser 290 295 300 Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu 305 310 315 320 Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Thr Asn Lys Ala Leu Pro Ala 325 330 335 Pro Glu Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro 340 345 350 Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln 355 360 365 Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala 370 375 380 Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 385 390 395 400 Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu 405 410 415 Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 420 425 430 Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 435 440 445 Leu Ser Pro Gly 450 <210> 31 <211> 452 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 31 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Ser His Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Pro Ile Tyr Ser Gly Asn Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly 115 120 125 Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly 130 135 140 Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val 145 150 155 160 Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe 165 170 175 Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val 180 185 190 Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val 195 200 205 Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys 210 215 220 Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu 225 230 235 240 Leu Gly Gly Pro Asp Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 245 250 255 Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 260 265 270 Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 275 280 285 Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser 290 295 300 Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu 305 310 315 320 Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala 325 330 335 Pro Glu Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro 340 345 350 Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln 355 360 365 Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala 370 375 380 Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 385 390 395 400 Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu 405 410 415 Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 420 425 430 Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 435 440 445 Leu Ser Pro Gly 450 <210> 32 <211> 452 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 32 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Ser His Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Pro Ile Tyr Ser Gly Asn Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly 115 120 125 Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly 130 135 140 Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val 145 150 155 160 Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe 165 170 175 Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val 180 185 190 Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val 195 200 205 Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys 210 215 220 Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu 225 230 235 240 Leu Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 245 250 255 Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 260 265 270 Glu Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 275 280 285 Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser 290 295 300 Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu 305 310 315 320 Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Thr Asn Lys Ala Leu Pro Ala 325 330 335 Pro Glu Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro 340 345 350 Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln 355 360 365 Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala 370 375 380 Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 385 390 395 400 Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu 405 410 415 Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 420 425 430 Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 435 440 445 Leu Ser Pro Gly 450 <210> 33 <211> 452 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 33 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Ser His Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Pro Ile Tyr Ser Gly Asn Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly 115 120 125 Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly 130 135 140 Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val 145 150 155 160 Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe 165 170 175 Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val 180 185 190 Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val 195 200 205 Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys 210 215 220 Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu 225 230 235 240 Leu Gly Gly Pro Asp Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 245 250 255 Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 260 265 270 Ser Phe Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 275 280 285 Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser 290 295 300 Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu 305 310 315 320 Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Thr Asn Lys Ala Leu Pro Ala 325 330 335 Pro Glu Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro 340 345 350 Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln 355 360 365 Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala 370 375 380 Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 385 390 395 400 Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu 405 410 415 Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 420 425 430 Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 435 440 445 Leu Ser Pro Gly 450 <210> 34 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 34 Gly Phe Thr Phe Arg Ser Tyr Ala 1 5 <210> 35 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 35 Ile Ser His Lys Gly Thr Tyr Thr 1 5 <210> 36 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 36 Ile Ser His Lys Gly Lys Tyr Thr 1 5 <210> 37 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 37 Ile Ser His Arg Gly Thr Tyr Thr 1 5 <210> 38 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 38 Ile Ser His Arg Gly Arg Tyr Thr 1 5 <210> 39 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 39 Ile Ser Arg Gly Gly Thr Tyr Thr 1 5 <210> 40 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 40 Ile Ser Ser Gly Gly Thr Tyr Thr 1 5 <210> 41 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 41 Ile Ser His Gly Gly Lys Tyr Thr 1 5 <210> 42 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 42 Ile Ser His Gly Gly Arg Tyr Thr 1 5 <210> 43 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 43 Ile Ser His Gly Gly Trp Tyr Thr 1 5 <210> 44 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 44 Ile Ser His Gly Gly Tyr Tyr Thr 1 5 <210> 45 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 45 Ala Arg His Pro Ile Tyr Ser Gly Phe Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 1 5 10 15 <210> 46 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 46 Ala Arg His Pro Ile Tyr Ser Gly Trp Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 1 5 10 15 <210> 47 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 47 Ala Arg His Pro Ile Tyr Ser Gly Gln Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 1 5 10 15 <210> 48 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 48 Ala Arg His Pro Ile Tyr Ala Gly Asn Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 1 5 10 15 <210> 49 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 49 Ala Arg His Pro Ile Tyr Cys Gly Asn Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 1 5 10 15 <210> 50 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 50 Ala Arg His Pro Ile Tyr Asp Gly Asn Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 1 5 10 15 <210> 51 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 51 Ala Arg His Pro Ile Tyr Glu Gly Asn Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 1 5 10 15 <210> 52 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 52 Ala Arg His Pro Ile Tyr Phe Gly Asn Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 1 5 10 15 <210> 53 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 53 Ala Arg His Pro Ile Tyr Gly Gly Asn Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 1 5 10 15 <210> 54 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 54 Ala Arg His Pro Ile Tyr His Gly Asn Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 1 5 10 15 <210> 55 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 55 Ala Arg His Pro Ile Tyr Ile Gly Asn Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 1 5 10 15 <210> 56 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 56 Ala Arg His Pro Ile Tyr Lys Gly Asn Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 1 5 10 15 <210> 57 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 57 Ala Arg His Pro Ile Tyr Leu Gly Asn Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 1 5 10 15 <210> 58 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 58 Ala Arg His Pro Ile Tyr Met Gly Asn Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 1 5 10 15 <210> 59 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 59 Ala Arg His Pro Ile Tyr Asn Gly Asn Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 1 5 10 15 <210> 60 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 60 Ala Arg His Pro Ile Tyr Pro Gly Asn Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 1 5 10 15 <210> 61 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 61 Ala Arg His Pro Ile Tyr Gln Gly Asn Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 1 5 10 15 <210> 62 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 62 Ala Arg His Pro Ile Tyr Arg Gly Asn Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 1 5 10 15 <210> 63 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 63 Ala Arg His Pro Ile Tyr Thr Gly Asn Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 1 5 10 15 <210> 64 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 64 Ala Arg His Pro Ile Tyr Val Gly Asn Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 1 5 10 15 <210> 65 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 65 Ala Arg His Pro Ile Tyr Trp Gly Asn Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 1 5 10 15 <210> 66 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 66 Ala Arg His Pro Ile Tyr Tyr Gly Asn Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 1 5 10 15 <210> 67 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 67 Ile Ser His Gly Gly Arg Tyr Thr 1 5 <210> 68 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 68 Ala Arg His Pro Ile His Ser Gly Asn Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 1 5 10 15 <210> 69 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 69 Ser Gly Val Ile Tyr 1 5 <210> 70 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 70 Ser Gly Val Lys Tyr 1 5 <210> 71 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 71 Ser Gly Val Arg Tyr 1 5 <210> 72 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 72 Ser Gly Val Ser Tyr 1 5 <210> 73 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 73 Ser Gly Val Trp Tyr 1 5 <210> 74 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 74 Ser Gly Val Tyr Tyr 1 5 <210> 75 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 75 Gln Gln Phe Thr Arg Ser Pro Tyr Thr 1 5 <210> 76 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 76 Gln Gln Phe Thr Ser Lys Pro Tyr Thr 1 5 <210> 77 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 77 Gln Gln Phe Lys Ser Ser Pro Tyr Thr 1 5 <210> 78 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 78 Gln Gln Phe Arg Ser Ser Pro Tyr Thr 1 5 <210> 79 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 79 Gln Gln Phe Tyr Ser Ser Pro Tyr Thr 1 5 <210> 80 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 80 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser His Lys Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Pro Ile Tyr Ser Gly Asn Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 81 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 81 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser His Lys Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Pro Ile Tyr Ser Gly Phe Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 82 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 82 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser His Lys Gly Lys Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Pro Ile Tyr Ser Gly Phe Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 83 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 83 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser His Arg Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Pro Ile Tyr Ser Gly Asn Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 84 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 84 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser His Arg Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Pro Ile Tyr Ser Gly Phe Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 85 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 85 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser His Arg Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Pro Ile Tyr Ser Gly Trp Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 86 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 86 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser His Arg Gly Arg Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Pro Ile Tyr Ser Gly Asn Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 87 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 87 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser His Arg Gly Arg Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Pro Ile Tyr Ser Gly Phe Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 88 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 88 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser Arg Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Pro Ile Tyr Ser Gly Asn Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 89 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 89 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser Arg Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Pro Ile Tyr Ser Gly Gln Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 90 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 90 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Pro Ile Tyr Ser Gly Asn Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 91 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 91 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser His Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Pro Ile Tyr Ser Gly Phe Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 92 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 92 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser His Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Pro Ile Tyr Ser Gly Trp Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 93 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 93 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser His Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Pro Ile Tyr Ala Gly Asn Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 94 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 94 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser His Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Pro Ile Tyr Cys Gly Asn Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 95 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 95 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser His Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Pro Ile Tyr Asp Gly Asn Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 96 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 96 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser His Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Pro Ile Tyr Glu Gly Asn Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 97 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 97 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser His Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Pro Ile Tyr Phe Gly Asn Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 98 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 98 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser His Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Pro Ile Tyr Gly Gly Asn Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 99 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 99 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser His Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Pro Ile Tyr His Gly Asn Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 100 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 100 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser His Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Pro Ile Tyr Ile Gly Asn Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 101 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 101 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser His Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Pro Ile Tyr Lys Gly Asn Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 102 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 102 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser His Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Pro Ile Tyr Leu Gly Asn Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 103 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 103 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser His Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Pro Ile Tyr Met Gly Asn Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 104 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 104 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser His Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Pro Ile Tyr Asn Gly Asn Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 105 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 105 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser His Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Pro Ile Tyr Pro Gly Asn Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 106 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 106 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser His Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Pro Ile Tyr Gln Gly Asn Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 107 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 107 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser His Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Pro Ile Tyr Arg Gly Asn Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 108 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 108 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser His Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Pro Ile Tyr Thr Gly Asn Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 109 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 109 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser His Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Pro Ile Tyr Val Gly Asn Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 110 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 110 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser His Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Pro Ile Tyr Trp Gly Asn Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 111 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 111 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser His Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Pro Ile Tyr Tyr Gly Asn Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 112 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 112 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser His Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Pro Ile Tyr Ser Gly Asn Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 113 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 113 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser His Gly Gly Lys Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Pro Ile Tyr Ser Gly Asn Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 114 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 114 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser His Gly Gly Lys Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Pro Ile Tyr Ser Gly Trp Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 115 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 115 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser His Gly Gly Arg Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Pro Ile Tyr Ser Gly Asn Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 116 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 116 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser His Gly Gly Arg Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Pro Ile Tyr Ser Gly Phe Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 117 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 117 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser His Gly Gly Trp Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Pro Ile Tyr Ser Gly Asn Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 118 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 118 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser His Gly Gly Tyr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Pro Ile Tyr Ser Gly Asn Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 119 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 119 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser His Gly Gly Thr Lys Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Pro Ile Tyr Ser Gly Asn Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 120 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 120 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser His Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Pro Ile His Ser Gly Asn Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 121 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 121 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Arg Ile Ser His Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Pro Ile Tyr Ser Gly Asn Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 122 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 122 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser His Gly Gly Thr Tyr Thr Trp Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Pro Ile Tyr Ser Gly Asn Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 123 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 123 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Gly Val Ile Tyr Leu 20 25 30 Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Trp Ile Tyr 35 40 45 Phe Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Asn Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu 65 70 75 80 Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Thr Ser Ser Pro Tyr Thr 85 90 95 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 124 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 124 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Gly Val Lys Tyr Leu 20 25 30 Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Trp Ile Tyr 35 40 45 Phe Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Asn Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu 65 70 75 80 Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Thr Ser Ser Pro Tyr Thr 85 90 95 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 125 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 125 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Gly Val Arg Tyr Leu 20 25 30 Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Trp Ile Tyr 35 40 45 Phe Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Asn Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu 65 70 75 80 Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Thr Ser Ser Pro Tyr Thr 85 90 95 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 126 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 126 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Gly Val Arg Tyr Leu 20 25 30 Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Trp Ile Tyr 35 40 45 Phe Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Asn Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu 65 70 75 80 Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Thr Arg Ser Pro Tyr Thr 85 90 95 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 127 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 127 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Gly Val Ser Tyr Leu 20 25 30 Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Trp Ile Tyr 35 40 45 Phe Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Asn Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu 65 70 75 80 Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Thr Ser Ser Pro Tyr Thr 85 90 95 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 128 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 128 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Gly Val Trp Tyr Leu 20 25 30 Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Trp Ile Tyr 35 40 45 Phe Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Asn Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu 65 70 75 80 Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Thr Ser Ser Pro Tyr Thr 85 90 95 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 129 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 129 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Gly Val Tyr Tyr Leu 20 25 30 Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Trp Ile Tyr 35 40 45 Phe Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Asn Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu 65 70 75 80 Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Thr Ser Ser Pro Tyr Thr 85 90 95 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 130 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 130 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Gly Val Asn Tyr Leu 20 25 30 Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Trp Ile Tyr 35 40 45 Phe Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Asn Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu 65 70 75 80 Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Thr Arg Ser Pro Tyr Thr 85 90 95 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 131 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 131 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Gly Val Asn Tyr Leu 20 25 30 Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Trp Ile Tyr 35 40 45 Phe Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Asn Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu 65 70 75 80 Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Thr Ser Lys Pro Tyr Thr 85 90 95 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 132 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 132 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Gly Val Asn Tyr Leu 20 25 30 Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Trp Ile Tyr 35 40 45 Phe Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Asn Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu 65 70 75 80 Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Lys Ser Ser Pro Tyr Thr 85 90 95 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 133 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 133 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Gly Val Asn Tyr Leu 20 25 30 Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Trp Ile Tyr 35 40 45 Phe Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Asn Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu 65 70 75 80 Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Arg Ser Ser Pro Tyr Thr 85 90 95 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 134 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 134 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Gly Val Asn Tyr Leu 20 25 30 Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Trp Ile Tyr 35 40 45 Phe Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Asn Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu 65 70 75 80 Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Tyr Ser Ser Pro Tyr Thr 85 90 95 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 135 <211> 213 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 135 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Gly Val Asn Tyr Leu 20 25 30 Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Trp Ile Tyr 35 40 45 Phe Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Asn Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu 65 70 75 80 Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Thr Ser Ser Pro Tyr Thr 85 90 95 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro 100 105 110 Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr 115 120 125 Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys 130 135 140 Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu 145 150 155 160 Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser 165 170 175 Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala 180 185 190 Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe 195 200 205 Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 136 <211> 213 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 136 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Gly Val Asn Tyr Leu 20 25 30 Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Trp Ile Tyr 35 40 45 Phe Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Asn Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu 65 70 75 80 Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Thr Ser Ser Pro Tyr Thr 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro 100 105 110 Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr 115 120 125 Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys 130 135 140 Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu 145 150 155 160 Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser 165 170 175 Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala 180 185 190 Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe 195 200 205 Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 137 <211> 213 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 137 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Gly Val Asn Tyr Leu 20 25 30 Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Trp Ile Tyr 35 40 45 Phe Thr Ser Thr Leu Ala Pro Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Asn Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu 65 70 75 80 Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Thr Ser Ser Pro Tyr Thr 85 90 95 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro 100 105 110 Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr 115 120 125 Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys 130 135 140 Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu 145 150 155 160 Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser 165 170 175 Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala 180 185 190 Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe 195 200 205 Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 138 <211> 213 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 138 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Gly Val Asn Tyr Leu 20 25 30 Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Trp Ile Tyr 35 40 45 Phe Thr Ser Thr Leu Ala Pro Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Asn Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu 65 70 75 80 Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Thr Ser Ser Pro Tyr Thr 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro 100 105 110 Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr 115 120 125 Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys 130 135 140 Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu 145 150 155 160 Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser 165 170 175 Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala 180 185 190 Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe 195 200 205 Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 139 <211> 452 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 139 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser His Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Pro Ile Tyr Ser Gly Asn Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly 115 120 125 Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly 130 135 140 Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val 145 150 155 160 Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe 165 170 175 Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val 180 185 190 Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val 195 200 205 Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys 210 215 220 Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu 225 230 235 240 Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 245 250 255 Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 260 265 270 Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 275 280 285 Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser 290 295 300 Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu 305 310 315 320 Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala 325 330 335 Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro 340 345 350 Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln 355 360 365 Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala 370 375 380 Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 385 390 395 400 Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu 405 410 415 Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 420 425 430 Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 435 440 445 Leu Ser Pro Gly 450 <210> 140 <211> 452 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 140 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Ser His Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Pro Ile Tyr Ser Gly Asn Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly 115 120 125 Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly 130 135 140 Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val 145 150 155 160 Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe 165 170 175 Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val 180 185 190 Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val 195 200 205 Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys 210 215 220 Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu 225 230 235 240 Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 245 250 255 Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 260 265 270 Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 275 280 285 Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser 290 295 300 Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu 305 310 315 320 Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala 325 330 335 Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro 340 345 350 Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln 355 360 365 Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala 370 375 380 Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 385 390 395 400 Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu 405 410 415 Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 420 425 430 Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 435 440 445 Leu Ser Pro Gly 450 <210> 141 <211> 452 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Peptide <400> 141 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser His Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Pro Ile Tyr Ser Gly Asn Tyr Gln Gly Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly 115 120 125 Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly 130 135 140 Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val 145 150 155 160 Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe 165 170 175 Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val 180 185 190 Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val 195 200 205 Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys 210 215 220 Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu 225 230 235 240 Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 245 250 255 Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 260 265 270 Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 275 280 285 Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser 290 295 300 Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu 305 310 315 320 Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala 325 330 335 Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro 340 345 350 Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln 355 360 365 Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala 370 375 380 Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 385 390 395 400 Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu 405 410 415 Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 420 425 430 Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 435 440 445 Leu Ser Pro Gly 450

Claims (19)

  1. T-세포-매개 자가면역 질환을 갖는 대상체에서 CXCR3 발현 세포를 고갈시키는 방법에 사용하기 위한, 중쇄(HC) 및 경쇄(LC)를 포함하는 인간화 항-인간 CXCR3 항체로서,
    a) HC는 서열 번호 25의 아미노산 서열을 포함하며, LC는 서열 번호 135의 아미노산 서열을 포함하거나,
    b) HC는 서열 번호 26의 아미노산 서열을 포함하며, LC는 서열 번호 135의 아미노산 서열을 포함하거나,
    c) HC는 서열 번호 27의 아미노산 서열을 포함하며, LC는 서열 번호 135의 아미노산 서열을 포함하거나,
    d) HC는 서열 번호 139의 아미노산 서열을 포함하며, LC는 서열 번호 135의 아미노산 서열을 포함하거나,
    e) HC는 서열 번호 31의 아미노산 서열을 포함하며, LC는 서열 번호 137의 아미노산 서열을 포함하거나,
    f) HC는 서열 번호 32의 아미노산 서열을 포함하며, LC는 서열 번호 137의 아미노산 서열을 포함하거나,
    g) HC는 서열 번호 32의 아미노산 서열을 포함하며, LC는 서열 번호 137의 아미노산 서열을 포함하거나,
    h) HC는 서열 번호 140의 아미노산 서열을 포함하며, HC는 서열 번호 137의 아미노산 서열을 포함하는, 인간화 항-인간 CXCR3 항체.
  2. 제1항에 있어서, T-세포-매개 자가면역 질환은 신규 발병 제1형 진성 당뇨병인 인간화 항-인간 CXCR3 항체.
  3. 제2항에 있어서, T-세포-매개 자가면역 질환은 건선인 인간화 항-인간 CXCR3 항체.
  4. 중쇄 가변 영역(VH)을 갖는 중쇄(HC) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 갖는 경쇄(LC)를 포함하는 인간화 항-인간 C-X-C 모티프 케모카인 수용체 3(CXCR3) 항체로서,
    a) VH 및 VL은 각각 서열 번호 20/24, 18/22, 80/130, 81/24, 82/130, 82/24, 83/126, 83/130, 83/24, 84/126, 84/24, 85/24, 86/126, 87/126, 87/133, 87/24, 88/24, 89/24, 90/126, 91/126, 91/130, 92/130, 92/24, 93/126, 94/126, 95/126, 96/126, 97/126, 98/126, 99/126, 100/126, 101/126, 102/126, 103/126, 104/126, 105/126, 106/126, 107/126, 108/126, 109/126, 110/126, 111/126, 121/24, 113/130, 113/24, 114/130, 115/126, 115/130, 115/24, 116/126, 116/130, 116/24, 117/126, 118/126, 20/123, 20/124, 20/125, 20/126, 20/127, 20/128, 20/129, 20/130, 20/131, 20/132, 20/133, 20/134, 119/126, 122/126, 및 120/130으로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열 쌍의 아미노산 서열을 포함하며,
    b) 중쇄는 서열 번호 9, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 10, 및 11로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 인간 IgG1 Fc 영역을 포함하는, 인간화 항-인간 CXCR3 항체.
  5. 제4항에 있어서, VH는 서열 번호 20의 아미노산 서열을 포함하며, VL은 서열 번호 24의 아미노산 서열을 포함하는 인간화 항-인간 CXCR3 항체.
  6. 제4항에 있어서, VH는 서열 번호 18의 아미노산 서열을 포함하며, VL은 서열 번호 22의 아미노산 서열을 포함하는 인간화 항-인간 CXCR3 항체.
  7. 제5항 또는 제6항에 있어서, 인간 IgG1 Fc 영역은 서열 번호 2, 9, 10, 및 11로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 인간화 항-인간 CXCR3 항체.
  8. 제4항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,
    a) HC는 서열 번호 25의 아미노산 서열을 포함하며, LC는 서열 번호135의 아미노산 서열을 포함하거나,
    b) HC는 서열 번호 26의 아미노산 서열을 포함하며, LC는 서열 번호135의 아미노산 서열을 포함하거나,
    c) HC는 서열 번호 27의 아미노산 서열을 포함하며, LC는 서열 번호 135의 아미노산 서열을 포함하거나,
    d) HC는 서열 번호 139의 아미노산 서열을 포함하며, LC는 서열 번호 135의 아미노산 서열을 포함하거나,
    e) HC는 서열 번호 31의 아미노산 서열을 포함하며, LC는 서열 번호 137의 아미노산 서열을 포함하거나,
    f) HC는 서열 번호 32의 아미노산 서열을 포함하며, LC는 서열 번호 137의 아미노산 서열을 포함하거나,
    g) HC는 서열 번호 32의 아미노산 서열을 포함하며, LC는 서열 번호 137의 아미노산 서열을 포함하거나,
    h) HC는 서열 번호 140의 아미노산 서열을 포함하며, HC는 서열 번호 137의 아미노산 서열을 포함하는 인간화 항-인간 CXCR3 항체.
  9. 제4항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, HC는 감소된 푸코스 함량을 갖는 인간 IgG1 Fc 영역을 포함하는 인간화 항-인간 CXCR3 항체.
  10. 제4항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 당화 억제제의 존재 하에 배양되는 숙주 세포에서 생성된 인간화 항-인간 CXCR3 항체.
  11. 제10항에 있어서, 당화 억제제는 키푸넨신인 인간화 항-인간 CXCR3 항체.
  12. 제4항 내지 제11항 중 어느 한 항의 인간화 항-인간 CXCR3 항체, 및 제약상 허용가능한 담체를 포함하는 제약 조성물.
  13. T-세포-매개 자가면역 질환을 치료하는 방법에 사용하기 위한, 제4항 내지 제12항 중 어느 한 항에 따른 인간화 항-인간 CXCR3 항체, 또는 제15항에 따른 제약 조성물.
  14. 제13항에 있어서, T-세포-매개 자가면역 질환은 신규 발병 제1형 진성 당뇨병인 인간화 항-인간 CXCR3 항체 또는 이의 제약 조성물.
  15. 제13항에 있어서, T-세포-매개 자가면역 질환은 건선인 인간화 항-인간 CXCR3 항체 또는 이의 제약 조성물.
  16. 대상체에서 CXCR3 발현 세포를 고갈시키는 방법에 사용하기 위한, 제4항 내지 제11항 중 어느 한 항에 따른 인간화 항-인간 CXCR3 항체, 또는 제15항에 따른 제약 조성물.
  17. 제16항에 있어서, 대상체는 T-세포-매개 자가면역 질환을 갖는 인간화 항-인간 CXCR3 항체 또는 이의 제약 조성물.
  18. 제16항에 있어서, T-세포-매개 자가면역 질환은 신규 발병 제1형 진성 당뇨병인 인간화 항-인간 CXCR3 항체 또는 이의 제약 조성물.
  19. 제16항에 있어서, T-세포-매개 자가면역 질환은 건선인 인간화 항-인간 CXCR3 항체 또는 이의 제약 조성물.
KR1020197020841A 2016-12-22 2017-12-21 고갈 활성을 갖는 인간화 cxcr3 항체 및 이의 사용 방법 KR20190095943A (ko)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201662437867P 2016-12-22 2016-12-22
US62/437,867 2016-12-22
EP17305042 2017-01-13
EP17305042.8 2017-01-21
PCT/US2017/068003 WO2018119299A1 (en) 2016-12-22 2017-12-21 Humanized cxcr3 antibodies with depleting activity and methods of use thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20190095943A true KR20190095943A (ko) 2019-08-16

Family

ID=57868191

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020197020841A KR20190095943A (ko) 2016-12-22 2017-12-21 고갈 활성을 갖는 인간화 cxcr3 항체 및 이의 사용 방법

Country Status (8)

Country Link
US (1) US20180214542A1 (ko)
EP (1) EP3559033A1 (ko)
JP (1) JP2020504744A (ko)
KR (1) KR20190095943A (ko)
CN (1) CN110914298A (ko)
TW (1) TW201837053A (ko)
UY (1) UY37544A (ko)
WO (1) WO2018119299A1 (ko)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2019356521A1 (en) * 2018-10-09 2021-04-15 Monash University Methods of treating inflammation
AU2020262231A1 (en) * 2019-04-23 2021-12-16 Sanofi Stable, low-viscosity antibody formulations and uses thereof
US11655302B2 (en) 2019-06-10 2023-05-23 Sanofi Anti-CD38 antibodies and formulations

Family Cites Families (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
GB8928874D0 (en) 1989-12-21 1990-02-28 Celltech Ltd Humanised antibodies
US5859205A (en) 1989-12-21 1999-01-12 Celltech Limited Humanised antibodies
US6800738B1 (en) 1991-06-14 2004-10-05 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
ES2136092T3 (es) 1991-09-23 1999-11-16 Medical Res Council Procedimientos para la produccion de anticuerpos humanizados.
JP2826272B2 (ja) 1993-10-26 1998-11-18 タイガースポリマー株式会社 中空樹脂成形品の製造装置及び製造方法
GB9524973D0 (en) 1995-12-06 1996-02-07 Lynxvale Ltd Viral vectors
US6140064A (en) 1996-09-10 2000-10-31 Theodor-Kocher Institute Method of detecting or identifying ligands, inhibitors or promoters of CXC chemokine receptor 3
US8388955B2 (en) * 2003-03-03 2013-03-05 Xencor, Inc. Fc variants
JP5583908B2 (ja) * 2005-10-21 2014-09-03 ジェンザイム・コーポレーション 増強されたａｄｃｃ活性を伴う抗体に基づく治療薬
MX2010001975A (es) 2007-08-29 2010-03-10 Sanofi Aventis Anticuerpos anti-cxcr5 humanizados, derivados de los mismos y su uso.
JP6352812B6 (ja) 2012-01-20 2018-08-08 ジェンザイム・コーポレーション 抗ｃｘｃｒ３抗体
WO2014186842A1 (en) * 2013-05-22 2014-11-27 Monash University Antibodies and uses thereof
SG11201701382PA (en) * 2014-08-22 2017-03-30 Sorrento Therapeutics Inc Antigen binding proteins that bind cxcr3

Also Published As

Publication number Publication date
TW201837053A (zh) 2018-10-16
CN110914298A (zh) 2020-03-24
EP3559033A1 (en) 2019-10-30
WO2018119299A1 (en) 2018-06-28
US20180214542A1 (en) 2018-08-02
JP2020504744A (ja) 2020-02-13
UY37544A (es) 2018-07-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7142618B2 (ja) イヌ化抗体
EP3464362B1 (en) Anti-4-1bb antibodies and their uses
CA3092456C (en) Anti-tigit antibody and use thereof
TWI754800B (zh) 新型抗ox40/pd-l1雙特異性抗體分子、新型抗vegf/gitr雙特異性抗體分子及其用途
JP2021087440A (ja) ヒトｉｌ−４受容体に対する高親和性ヒト抗体
EP2374818B1 (en) High affinity antibodies to human IL-6 receptor
US20240002515A1 (en) Methods and antibodies for modulation of immunoresponse
CN110407941B (zh) Cd39的高亲和力抗体及其用途
EP3216804A2 (en) Anti-cd25 antibodies and their uses
US20150010538A1 (en) Anti-cd25 antibodies and their uses
TW201335188A (zh) 抗－ｃｘｃｒ３抗體
US20210246210A1 (en) Dimers and use thereof
CN114728065A (zh) 针对cd3和bcma的抗体和自其制备的双特异性结合蛋白
KR20220071264A (ko) 항-pd-l1 항원 결합 단백질 및 이의 응용
KR20190095943A (ko) 고갈 활성을 갖는 인간화 cxcr3 항체 및 이의 사용 방법
WO2022171080A1 (zh) 抗cd112r抗体及其用途
US20180244787A1 (en) Anti-human cxcr3 antibodies for treatment of vitiligo
KR20190095942A (ko) 백반증의 치료를 위한 항-인간 cxcr3 항체
CN115521378B (zh) Pd-l1抗体及其用途
WO2022247826A1 (zh) 靶向pd-l1和cd73的特异性结合蛋白
US20240091262A1 (en) Mage-a4 peptide dual t cell engagers
WO2023138638A1 (zh) 抗tigit和pd-l1的双特异性抗原结合蛋白及其用途
CA3194457A1 (en) Caninized antibodies to canine interleukin-31 receptor alpha
TW202241958A (zh) 抗ｐｄ－ｌ１抗體及其應用
EA042982B1 (ru) Моноклональные антитела против участка бета-цепи trbv9 человека