KR20190090672A

KR20190090672A - 더덕 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 항염증용 조성물 또는 천식 예방 또는 치료용 조성물

Info

Publication number: KR20190090672A
Application number: KR1020180037941A
Authority: KR
Inventors: 부희옥; 김학현; 이문순; 권수정; 나오시 도마에
Original assignee: 주식회사 웰파이토
Priority date: 2018-04-02
Filing date: 2018-04-02
Publication date: 2019-08-02
Also published as: KR102072907B1

Abstract

본 발명은 더덕 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 항염증용 조성물 또는 천식 예방 또는 치료용 조성물 및 식품 조성물에 관한 것으로, 본 발명의 더덕 추출물 또는 이의 분획물은 독성이 없으면서도, 염증관련 인자인 질소산화물(NO)생성 억제, IL-1β, IL-6, TNF-α의 생성을 억제하므로, 항염증 또는 천식의 예방 또는 치료에 있어 유용하게 사용할 수 있다.

Description

더덕 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 항염증용 조성물 또는 천식 예방 또는 치료용 조성물{Composition comprising an extract or a fraction of Codonopsis lanceolata for prevention and treatment of anti-inflammatory or asthma}

본 발명은 더덕 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 항염증용 조성물 또는 천식 예방 또는 치료용 조성물 및 식품 조성물에 관한 것이다.

염증은 외부로부터 박테리아나 바이러스와 같은 외부 항원이 체내로 침입하거나 세포나 조직이 어떠한 원인에 의하여 손상 받았을 때 그 손상에 대한 조직 반응을 일컫는다. 염증세포는 종양의 개시, 증진에서 DNA 손상을 야기하는 활성 질소 및 산소종과 같은 다양한 염증전 매개인자를 방출한다. 염증은 크게 급성염증(acute inflammatory)과 만성염증(chronic inflammatory)으로 나뉘며, 만성적으로 염증반응이 일어날 경우 염증전 사이토카인과 케모카인이 과도하게 방출되어 주변 조직 손상과 더불어 종양세포의 내습, 전이, 이전 그리고 혈관신생을 증진시켜 종양의 성장을 돕는다.

이렇듯 최근 분자생물학의 발달과 더불어 염증성 질환을 사이토카인 등의 분자 수준에서 이해하고자 하는 시도가 이루어지고 있으며, 이러한 질환에 영향을 주는 인자들도 하나씩 규명되고 있다. 이러한 인자 중에서, 질소 산화물(NO; nitric oxide)은 염증 매개인자로서 병원성 DNA를 손상시키는 방어작용을 함으로써 항상성을 유지하는 역할을 한다(Kou and Schroder, Ann Sur 221, 220-235, 1995). NO는 질소산화물 합성효소(NOS)의 이성질체인, nNOS(neuronal NOS), eNOS(endothelial NOS) 및 iNOS(inducible NOS)의 3가지 주요 NOS에 의해 L-아르기닌(L-arginine)으로부터 생성된다. 이 중 iNOS에 의해 과다 생성된 NO는, 초산화물(superoxide)과 반응하여 퍼옥시니트라이트(peroxynitrite)를 형성하고, 이는 강력한 산화제로 작용하여 세포에 손상을 입힘으로써 염증성 자극에 의해 대식세포를 활성화시킨다. 다양한 자극과 염증 매개인자에 의해 활성화된 대식세포는 tumor necrosis factor-alpha(TNF-α), interleukin-1β(IL-1β), prostaglandin E2(PGE2) 등의 다른 염증관련 인자를 생성하고 다른 면역세포들을 염증부위로 유도하고, 또한 NF-κB를 활성화시켜 염증반응, 암, 동맥경화 등 만성질환에 관여하는 것으로 알려져 있다(Lawrence et al., Nat Med., 7, 1291-1297, 2001).

상술한 염증반응에 관여하는 인자의 세포내 수준을 조절하여 염증성 질환을 치료하려는 연구가 활발히 진행되고 있는데, 초기에는 화학적 물질을 이용하여 상기 인자들의 세포내 수준을 조절하고자 하였으나, 부작용이 심하다는 단점이 있어, 최근에는 부작용이 없거나 매우 낮은 수준으로 나타나는 천연물 유래의 물질을 이용하여 상기 인자들의 세포내 수준을 조절하려는 연구가 활발히 진행되고 있다.

이에 본 발명자들은, 인체에 부작용을 유발하지 않으면서 염증성 질환 치료에 유용한 천연물질을 찾고자 노력한 결과, 더덕 추출물 또는 이의 분획물이 독성을 나타내지 않으면서 염증성 질환의 예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있음을 확인하고 본 발명을 완성하였다.

한국등록특허 10-1487065호

본 발명의 목적은 더덕(Codonopsis lanceolata) 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 항염증용 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 더덕(Codonopsis lanceolata) 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 천식 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 더덕(Codonopsis lanceolata) 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 항염증용 건강식품 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 더덕(Codonopsis lanceolata) 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 항염증용 건강기능식품 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 더덕(Codonopsis lanceolata) 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 천식 예방 또는 개선용 건강식품 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 더덕(Codonopsis lanceolata) 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 천식 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위하여,

본 발명은 더덕(Codonopsis lanceolata) 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 항염증용 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 더덕(Codonopsis lanceolata) 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 천식 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

나아가, 본 발명은 더덕(Codonopsis lanceolata) 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 항염증용 건강식품 조성물을 제공한다.

더 나아가, 본 발명은 더덕(Codonopsis lanceolata) 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 항염증용 건강기능식품 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 더덕(Codonopsis lanceolata) 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 천식 예방 또는 개선용 건강식품 조성물을 제공한다.

나아가, 본 발명은 더덕(Codonopsis lanceolata) 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 천식 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.

본 발명의 더덕 추출물 또는 이의 분획물은 독성이 없으면서도, 염증관련 인자인 질소산화물(NO)생성 억제, IL-1β, IL-6, TNF-α의 생성을 억제하므로, 항염증 또는 천식의 예방 또는 치료에 있어 유용하게 사용할 수 있다.

도 1은 더덕 추출물 및 이의 분획을 나타낸 것이다.
도 2는 RAW264.7 세포에서 더덕 추출물의 세포 생존율을 측정한 결과이다.
도 3은 RAW264.7 세포에서 더덕 에탄올 추출 농도에 따른 NO생성 저해를 나타낸 결과이다.
도 4는 RAW264.7 세포에서 더덕 에탄올 추출 농도에 따른 IL-1β의 생성 억제를 나타낸 결과이다.
도 5는 RAW264.7 세포에서 더덕에탄올 추출 농도에 따른 IL-6의 생성 억제를 나타낸 결과이다.
도 6은 RAW264.7 세포에서 더덕 에탄올 추출 농도에 따른 TNF-α의 생성 억제를 나타낸 결과이다.
도 7은 RAW264.7 세포에서 더덕 분획물의 NO생성 저해를 나타낸 결과이다.
도 8은 RAW264.7 세포에서 더덕 분획물의 IL-1β의 생성 억제를 나타낸 결과이다.
도 9는 RAW264.7 세포에서 더덕 분획물의 IL-6의 생성 억제를 나타낸 결과이다.
도 10은 RAW264.7 세포에서 더덕 분획물의 TNF-α의 생성 억제를 나타낸 결과이다.
도 11은 천식모델 마우스의 폐조직에서 더덕 추출물의 세포생존율을 나타낸 결과이다(a, vehicle control; b, asthma induction; c, dexamethasone; d, 50 mg/kg/day C. lanceolata e, 250 mg/kg/day C. lanceolata f, 500 mg/kg/day C. lanceolata.)
도 12는 천식모델 마우스의 면역염색된 폐조직에서 더덕 추출물의 T세포(CD3) 관련 인자를 억제를 나타낸 결과이다(a, vehicle control; b, asthma induction; c, dexamethasone; d, 50 mg/kg/day C. lanceolata e, 250 mg/kg/day C. lanceolata f, 500 mg/kg/day C. lanceolata.)
도 13은 천식모델 마우스의 면역염색된 폐조직에서 더덕 추출물의 T세포(CD4) 관련 인자를 (a, vehicle control; b, asthma induction; c, dexamethasone; d, 50 mg/kg/day C. lanceolata e, 250 mg/kg/day C. lanceolata f, 500 mg/kg/day C. lanceolata.)
도 14는 천식모델 마우스의 면역염색된 폐조직에서 더덕 추출물의 T세포(CD8) 관련 인자를 (a, vehicle control; b, asthma induction; c, dexamethasone; d, 50 mg/kg/day C. lanceolata e, 250 mg/kg/day C. lanceolata f, 500 mg/kg/day C. lanceolata.)
도 15는 천식모델 마우스의 면역염색된 폐조직에서 더덕 추출물의 T세포(CD19) 관련 인자를 (a, vehicle control; b, asthma induction; c, dexamethasone; d, 50 mg/kg/day C. lanceolata e, 250 mg/kg/day C. lanceolata f, 500 mg/kg/day C. lanceolata.)

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

더덕( Codonopsis lanceolata ) 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 항염증용 또는 천식 예방 또는 치료용 약학적 조성물

본 발명은 더덕(Codonopsis lanceolata) 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 항염증용 또는 천식 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명에서 용어, "추출물(extract)"은 생약을 적절한 침출액으로 짜내고 침출액을 증발시켜 농축한 제제를 의미하는 것으로, 이에 제한되지는 않으나, 추출처리에 의해 얻어지는 추출액, 추출액의 희석액 또는 농축액, 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 이들의 조정제물 또는 정제물일 수 있다. 상기 더덕(Codonopsis lanceolata) 추출물은 통상의 기술 분야에 공지된 일반적인 추출방법, 분리 및 정제방법을 이용하여 제조할 수 있다. 상기 추출방법으로는, 이에 제한되지는 않으나, 바람직하게 열탕 추출, 열수 추출, 냉침 추출, 환류 냉각 추출 또는 초음파 추출 등의 방법을 사용할 수 있다.

본 발명에서, 추출용매는 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올 또는 이들의 혼합 용매 등을 사용할 수 있으며, 바람직하게는 에탄올을 사용할 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 있어서, 용매로서 30%, 50%, 70% 및 100% 에탄올을 이용하여 더덕 추출물을 제조하였다.

본 발명의 더덕(Codonopsis lanceolata) 추출물 또는 이의 분획물은 임상 투여시에 경구 및 비경구의 여러 가지 제형으로 투여될 수 있으며, 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 제조된다.

경구투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환자, 산제, 과립제, 캡슐제, 트로키제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 하나 이상의 본 발명의 더덕(Codonopsis lanceolata) 추출물 또는 이의 분획물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로스(sucrose), 락토오스(lactose) 또는 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한, 단순한 부형제 외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구 투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제 또는 시럽제 등이 해당되는데, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.

비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁용제, 유제, 동결건조제제, 좌제 등이 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세롤, 젤라틴 등이 사용될 수 있다.

또한, 본 발명의 더덕(Codonopsis lanceolata) 추출물 또는 이의 분획물의 인체에 대한 효과적인 투여량은 환자의 나이, 몸무게, 성별, 투여형태, 건강상태 및 질환 정도에 따라 달라질 수 있으며, 일반적으로 약 0.001-100 mg/kg/일이며, 바람직하게는 0.01-35 mg/kg/일이다. 몸무게가 70㎏인 성인 환자를 기준으로 할 때, 일반적으로 0.07-7000 mg/일이며, 바람직하게는 0.7-2500 ㎎/일이며, 의사 또는 약사의 판단에 따라 일정시간 간격으로 1일 1회 내지 수회로 분할 투여할 수도 있다.

더덕( Codonopsis lanceolata ) 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 항염증용 또는 천식 예방 또는 개선용 건강기능성식품 및 건강식품 조성물

본 발명의 더덕(Codonopsis lanceolata) 추출물 또는 이의 분획물을 건강기능식품 및 건강식품으로 사용하는 경우, 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 본 발명의 더덕(Codonopsis lanceolata) 추출물 또는 이의 분획물을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 드링크제, 육류, 소시지, 빵, 비스킷, 떡, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 알코올 음료 및 비타민 복합제, 유제품 및 유가공 제품 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강기능식품 및 건강식품을 모두 포함한다.

본 발명에 따른 더덕(Codonopsis lanceolata) 추출물 또는 이의 분획물을 함유하는 건강기능식품 및 건강식품 조성물은 식품에 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 더덕(Codonopsis lanceolata) 추출물 또는 이의 분획물의 혼합량은 그의 사용 목적(예방 또는 개선용)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 건강기능식품 및 건강식품 중의 상기 조성물의 양은 전체 식품 중량의 0.1 내지 90 중량부로 가할 수 있다. 그러나 건강 유지를 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 더덕(Codonopsis lanceolata) 추출물 또는 이의 분획물은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.

본 발명의 건강기능식품 및 건강식품 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 본 발명 더덕(Codonopsis lanceolata) 추출물 또는 이의 분획물을 함유하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트라이톨 등의 당알코올이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 건강기능식품 및 건강식품 조성물 100 당 일반적으로 약 1 내지 20 g, 바람직하게는 약 5 내지 12 g이다.

상기 외에 본 발명의 더덕(Codonopsis lanceolata) 추출물 또는 이의 분획물을 함유하는 건강기능식품 및 건강식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 건강기능식품 및 건강식품 조성물은 천연 과일쥬스 및 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다.

이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 더덕(Codonopsis lanceolata) 추출물 또는 이의 분획물을 함유하는 건강기능식품 및 건강식품 조성물 100 중량부 당 0.1 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

이하, 본 발명을 하기의 실시예에 의하여 더욱 상세하게 설명한다. 단, 하기의 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기의 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.

<실시예 1> 더덕 추출물 제조

더덕 뿌리를 선별하여 세척하고 동결건조하여 5mm 크기로 세절한 후, 열수, 30%, 50%, 70% 및 100% 주정알코올로 3회 반복 상온 추출한 다음, 추출물을 감압 농축하여 분말화한 시료를 -20℃에 보관하면서 실험분석에 사용하였다.

<실시예 2> 더덕 분획물 제조

더덕 뿌리를 선별하여 세척한 다음 동결건조 후, 30% 주정알코올로 3회 반복 상온 추출한 다음, 감압 농축하여 추출물을 얻었다. 또한 농축한 추출물을 동결건조한 분말을 n-hexane, Methylene chloride, Ethyl acetate, Butyl alcohol, D.W. 등의 용매별로 3회 반복하여 분획추출을 행한 다음, 추출액을 감압농축기로 완전히 농축하여 분획물을 얻었다.(도 1참조)

<준비예 1> RAW 264.7 대식세포 배양

RAW 264.7 cell을 10% fetal bovine serum (FBS)이 포함된 DMEM 배지를 사용하였으며, RAW 264.7 cell은 24 well plate에 2x10⁵를 분주하고 5% CO_2,37℃에서 배양하였다. 이를 현미경으로 관찰하여 세포가 분화된 것을 확인한 후 시험에 사용하였다.

<실험예 1> 더덕 추출물의 세포생존율 측정 (MTT assay)

RAW 264.7 대식세포에 대한 더덕 추출물의 독성을 확인하기 위하여 MTT assay를 실행하였다. 즉, 계대 배양중인 RAW264.7 세포를96 well plate에 세포수를 조정한 다음 더덕 추출물을 첨가하고 1시간 배양 후 LPS 1 ㎍/㎖을 각 well에 처리하였으며, 4시간 후 10% SDS (0.1 N HCL)100 ㎕를 처리하여 18시간 동안 빛을 차단하며 반응시켰다. ELISA reader를 이용해서 각 well의 흡광도를 570 nm 에서 측정하고 대조군의 흡광도와 비교하여 세포생존율을 백분율로 환산하였다.

그 결과 도 2에서와 같이, 더덕 추출물은 세포 독성을 나타내지 않았다.

<실험예 2> 더덕 추출물의 항염증 활성 측정

<실험예 2-1> 대식세포에서의 NO 생성 측정

RAW264.7 세포 1×106 cell/㎖를 5% FBS를 함유한 DMEM에 부유한 후 세포 부유액을 12well plate에 800㎕씩 부착시킨 후 시료를 처리하고 대식세포 자극제인 LPS를 1 ㎍/㎖의 농도로 처리하였다 24시간후에 배양 상등액100 ㎕를 취하여 96 well plate로 옮긴 후100 ㎕ Griess Reagent(Sigma)를 넣고 10분간 실온에서 빛을 차단한 상태로 반응시킨 후 ELISA reader를 사용하여 540nm에서 흡광도를 측정하였다. Sodium nitrite표준 검량선으로부터 대식세포가 분비하는 nitric oxide를 계산하였다.

NO 생성 저해효과는 100% 추출물에서 가장 높게 나타났지만, 30%~70% 추출물과 큰 차이를 보이지는 않았다(도 3참조).

<실험예 2-2> 더덕 추출물의 Cytokines (IL-1β, IL-6, TNF-α)의 생성 측정

Cytokine을 측정하기 위하여 6-well plate에 cell을 분주하고 더덕 추출물을 처치한 다음, 1시간 후에 LPS를 처치하였다. LPS 처치 후 6~12시간 배지를 수거하여 cytokine을 측정하였다. 수거된 배지는 측정 전까지 -70℃에서 보관하였다. IL-1β, IL-6, TNF-α는 ELISA Kit (Pierce endogen, Rockford, IL, USA)를 사용하여 측정하였다.

마우스 대식세포에서 LPS 처리에 의한 염증반응으로 유도된 IL-1β 분비에 미치는 영향을 보면, 추출용매인 에탄올농도가 높을수록 그 억제능이 높게 나타났다. 그리고 IL-6 분비 저해능에 있어서는 추출농도 간에 큰 차이를 보이지는 않았지만 분비를 억제함을 알 수 있었다(도 4 및 도 5 참조).

TNF-α 분비에 미치는 영향을 살펴본 결과, 추출용매인 에탄올농도가 높을수록 그 저해능이 높게 나타났으며, 대체적으로 20% 정도 TNF-α 분비를 억제함을 알 수 있었다(도 6 참조)

<실험예 3> 더덕 분획별 추출물의 항염증 활성 측정

상기 실험예 2과 동일 한 방법으로 더덕 분획물의 항염증 활성을 측정하였다.

그 결과, 더덕 추출물의 분획별 항염증 효능을 보면, 실험한 모든 염증관련 인자에서 Ethyl acetate 분획과 n-hexane 분획에서 다른 분획에서보다 상대적으로 억제 효능이 높게 나타났으며, 전체적으로 더덕 분획 추출물은 항염증 효능이 있는 것으로 사료되었다(도 7, 8, 9, 10 참조).

<실험예 4> 더덕 추출물의 항 천식 활성 측정

제주지역 재배더덕 뿌리를 세척하고 동결건조하여 5mm 크기로 세절한 후, 30% 주정알코올로 추출, 농축하여 분말화한 시료를 50℃에 보관하면서 실험에 사용하였다.

더덕 추출물의 allergy 천식 및 면역에 대한 효능을 실험적으로 규명하고자 ovalbumin으로 유도한 천식모델 마우스의 기관지 폐포세척액(bronchoalveolar lavage fluid, BALF) 내의 알러지와 관련된 면역물질인 CD3+T cell, CD4+T cell, CD8+T cell, CD19+B cell의 변화를 관찰하고, 면역조직화학적 분석을 행하였다.

파라핀을 제거한 조직절편을 3% 과산화수소가 포함된 메탄올에 10분간 처리하여 조직 내 peroxidase를 제거하였다. 또한 Antigen retrieval은 끓는 물을 이용하여 구연산나트륨 완충액 (0.1M)으로 처리하였다. 슬라이드를 정상적인 혈청과 함께 배양하여 비특이적 결합을 차단한 다음, CD4 (14-9766, eBioscience, San Diego, CA, USA), CD8 (sc-18913, Santa Cruz Biotechnology, Dallas, TX, USA), CD19 (250585, Abbiotec, San Diego, CA, USA) 등과 같은 primary antibody (1:100에서 1:200으로 희석한)로 1시간 동안 배양하였다. 그 후 비오틴이 부착된 2차 항체와 horseradish peroxidase-conjugated streptavidin를 함께 2시간 동안 배양되었다. 시그널은 3,3-diaminobenzidine tetrahydrochloride 기질의 발색액을 사용하여 검색하였고, 세포들은 Mayer’s hematoxylin으로 대조 염색하였다. 양성으로 염색된 세포 수를 측정하기 위해 실험동물 1마리 당 3개 별도로 면역염색된 폐 절편 (n=8 per group)을 5개 무작위로 선택된 비중복 영역 (x200배)에서 세포를 계수하였다.

BALF 내 면역세포에 미치는 영향을 조사한 결과, 알레르기 반응이 활발할 때 증가하는 CD3+T cell, CD4+T cell, CD8+T cell, CD19+B cell은 농도의존적으로 감소하는 결과를 보여 더덕 추출물이 항알레르기 및 항염증의 효능이 있어 기관지천식에 유효한 것으로 생각되었다(도 11, 12, 13, 14, 15 참조).

이제까지 본 발명에 대하여 그 바람직한 실시예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특히 청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.

Claims

더덕(Codonopsis lanceolata) 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 천식 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
제 1항에 있어서,
상기 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올 또는 이들의 혼합 용매로 추출한 것을 특징으로 하는 조성물.
제 1항에 있어서,
상기 분획물은 더덕 추출물을 노말헥산(n-hexane), 디클로로메탄(Methylene chloride), 에틸아세테이트(Ethyl acetate) 및 부탄올(Butyl alcohol)을 이용하여 순차적으로 계통분획하여 얻은, 노말헥산 분획물, 디클로로메탄 분획물, 에틸아세테이트 분획물, 부탄올 분획물 및 물 분획물 중 어느 하나 이상을 포함하는 조성물.
제 1항에 있어서,
상기 더덕 추출물 또는 분획물은 염증성 사이토카인인 종양 괴사 인자-알파(TNF-α; Tumor Necrosis Factor-α), 인터류킨 6(IL-6; interleukin 6) 또는 인터류킨 1 베타(IL-1β; interleukin 1 beta) 및 일산화질소(NO)의 생성을 억제하는 것을 특징으로 하는 조성물.
더덕(Codonopsis lanceolata) 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 천식 예방 또는 개선용 건강식품 조성물.
더덕(Codonopsis lanceolata) 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 천식 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.