KR20190088467A - 화장료 용도의 아니고잔토스 플라비두스 추출물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 특히 미세 라인 및 주름의 출현을 줄이고, 피부를 리프팅하고, 매끄럽게 하고, 탄력 있게 하고, 재구조화거나 재형성하기 위해 노화 방지제로서의 아니고잔토스 플라비두스 추출물의 용도에 관한 것이다.

Description

화장료 용도의 아니고잔토스 플라비두스 추출물
본 발명은 화장품 분야, 특히 노화 방지 화장제(cosmetic agents)에 관한 것이다.
피부는 외부의 공격으로부터 생물체를 보호하는 첫 번째 장벽이다. 이 기관은 여러 층의 조직으로 구성되어 있다. 이는 피부의 가장 바깥쪽 부분인 표피, 진피, 섬유아세포와 세포외 기질로 구성되고 피부 응집력 및 영양 기능을 수행하는 결합 조직, 및 지방세포로 구성된 피하 조직으로 구분된다.
표피는 여러 세포층의 각질형성세포(keratinocyte)로 이루어져 있다. 이는 그 중에서도, 특히 피부 줄기세포를 함유하는, 기저층이라고 하는, 표피의 배엽(germ layer), 여러 층의 다각형 세포로 이루어진 유극층(spiny layer; Stratum spinosum), 세포질내 봉입체를 함유하는 하나 내지 세 개 층의 편평 세포로 이루어진 과립층(granular layer; Stratum granulosum), 케라토하이알린 과립(keratohyalin granule) 및, 마지막으로, 각질형성세포의 마지막 분화 단계에 해당하는, 각질세포(corneocyte)라고 하는 각질이 풍부한 무핵세포로 이루어진 각질층(horny layer; Stratum corneum)으로 구분된다.
각질층의 가장 바깥쪽 세포는 박리(desquamation)로 알려진 과정에 따라 연속적으로 제거되어 하층의 세포로 대체된다. 각질층의 세포 재생은, 각질세포의 형태로 각질층에 도달할 때까지, 표피의 기저층의 세포가 표피의 다양한 지층을 통해 분화하고 점차적으로 이동하는 세포 성숙 과정에 기초한다.
피부 노화는 노화의 정상적인 현상으로 인한 것이든 자외선 노출과 같은 외부 요인에 의해 강화되든지 간에 피부의 모든 층의 위축을 유발하는, 세포 분화 및/또는 재생 피부의 기능 장애를 포함한다. 조직학적 관점에서, 그 중에서도, 진피의 질의 저하, 특히 표피의 두께 감소 및 세포외 기질의 일관성의 손실이 관찰된다. 따라서, 세포외 매트릭스에서 콜라겐 섬유가 적어지고 덜 규칙적이며, I형 콜라겐에 대한 III형 콜라겐의 비율이 증가한다는 것이 관찰되었다. 유두 진피의 탄력 섬유의 수 또한 감소하고 망상 진피의 탄력 섬유가 변한다. 심미적인 관점에서, 이러한 변화는 피부의 외관과 역학적 특성의 변형을 가져오는데, 피부는 덜 매끄러워지고, 더욱 거칠어지고, 미세 굴곡(microrelief)이 더욱 뚜렷해지며, 시간이 지나면 깊은 주름을 형성하는 미세 라인을 나타낼 수 있다. 피부는 또한 탄력, 긴장성 및 견고성의 손실을 나타내고, 이는 특히 얼굴이나 목에서 조직의 처짐 또는 늘어짐 및 주름의 강화를 유발할 수 있다. 피부 노화는 안색의 균일성에 영향을 줄 수 있으며 색소반(pigment spot)의 출현으로 이어질 수 있다.
피부 늘어짐을 예방하거나 약화시키려는 수많은 노화 방지 화장품이 시중에 나와 있다.
그럼에도 불구하고, 현재 피부 노화로 인한, 특히 피부 늘어짐과 관련된 변화를 예방하거나 치료하기 위한 새로운 노화 방지 활성제에 대한 필요성이 여전히 남아 있다.
본 발명은 노화 방지제로서의 아니고잔토스 플라비두스(Anigozanthos flavidus) 추출물의 화장료 용도에 관한 것이다. 특히, 아니고잔토스 플라비두스 추출물은 피부를 위한 주름 방지, 스무딩(smoothing), 토닝(toning), 재구조화(restructuring), 또는 재형성(remodeling)을 위한 제제로 사용할 수 있다.
일반적으로, 아니고잔토스 플라비두스 추출물은 피부 노화의 하나 이상의 징후를 예방, 지연 및/또는 치료하기 위한 의도로 화장료 조성물에 활성제로서 존재한다. 피부 노화의 징후는, 피부, 특히 입술 또는 눈꺼풀에서의 미세 라인 및/또는 주름의 출현, 피부, 특히 목에서의 위축(withering) 또는 처짐(sagging), 피부 밀도의 손실, 피부 견고성(firmness)의 손실, 피부 긴장성(tonicity)의 손실, 피부 탄력의 손실, 피부 수축성(contractility)의 손실, 피부 유지력(maintenance)의 손실, 피부 처짐, 피부의 매끄러운 외관의 변화, 피부 거칠기의 증가 및 얼굴 윤곽의 변화로 이루어진 군에서 선택될 수 있다.
아니고잔토스 플라비두스 추출물은 아니고잔토스 플라비두스의 지상부(aerial part), 예를 들어 꽃, 잎, 줄기 및 이들의 조합으로부터 수득될 수 있다. 일부 실시형태에서, 아니고잔토스 플라비두스 추출물은 극성 용매, 바람직하게는 고온 조건 하에서 추출에 의해 수득된다.
상기한 바와 같이, 아니고잔토스 플라비두스 추출물은 화장료 조성물에 활성제로서 존재할 수 있다. 상기 화장료 조성물은 바람직하게 비타민, 선 필터(sun filter) 및 선스크린(sunscreen), 노화 또는 주름 방지제, 산화 방지제, 리프팅제(lifting agent), 퍼밍제(firming agent), 반점 방지제, 홍조 방지제, 슬리밍제(slimming agent), 탈수제, 보습제, 진정제, 스크러빙(scrubbing) 또는 박피제(exfoliating agent), 소광제(matting agent), 피지 조절제, 라이트닝(lightening) 활성제, 셀프-태닝(self-tanning) 활성제, 태닝 촉진제 및 이들의 조합으로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 추가 화장제를 포함할 수 있다.
일부 실시형태에서, 화장료 조성물은 수용액, 수성-알코올성 용액, 수중유(O/W) 또는 유중수(W/O) 또는 다중(삼중: W/O/W또는 O/W/O) 에멀젼, 나노에멀젼(nanoemulsion), 특히 100 nm 미만의 액적 크기를 갖는 O/W 나노에멀젼, 소구체(spherule)에 의한 수성상 중의 지방상의 수성 겔 또는 분산액, 현탁액, 바람직하게는 수성 또는 수성-알코올성 배지 내의 현탁액, 리포좀 현탁액, 분말, 로션, 우유, 크림, 고약, 겔, 폼 및 연고로 이루어진 군에서 선택된다. 화장료 조성물은 화장품, 메이크업 제품 또는 신체 위생 제품, 예를 들어 로션, 우유, 세럼(serum), 수성 또는 유성 겔, 에멀젼, 크림, 특히 데이 크림(day cream) 또는 나이트 크림(night cream), 크림-겔, 스킨케어 워터, 연고, 밤(balm), 파운데이션, 스프레이, 아이섀도우, 스틱, 립스틱, 글로스, 립밤, 폼, 탈취제, 영양 마스크, 샤워 젤, 및 박피 또는 스크러빙 제품에서 선택될 수 있다.
본 발명은 또한 노화의 징후의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 화장료 조성물에 관한 것으로, 상기 조성물은 특히 위에서 정의한 아니고잔토스 플라비두스 추출물 및 하나 이상의 약학적으로 허용되는 부형제를 포함한다. 추가 양태에 따르면, 본 발명은 "전구체" 조성물, 즉 화장료 조성물의 제조를 위한 조성물로서, 조성물은,
- 10% 내지 50%, 바람직하게는 20% 내지 40%의 아니고잔토스 플라비두스 추출물, 바람직하게는 아니고잔토스 플라비두스 액체 추출물,
- 바람직하게는 수성 용매, 유기 용매, 바람직하게는 에탄올, 프로판디올, 부틸렌 글리콜, 글리세롤 또는 이소프로판올과 같은 저급 알코올, 친유성제 및 이들의 혼합물에서 선택되는 50% 내지 90%, 바람직하게는 60% 내지 80%의 담체, 및
- 선택적으로, 바람직하게는 pH 조절제, 산화 방지제, 보존제, 안정화제, 벡터화제(vectorizing agent), 증점제, 유화제, 친수성 또는 친유성 겔화제, 향료, 광물유 또는 유기 오일 및 이들의 조합에서 선택되는 0.1% 내지 30%의 화장용으로 허용되는 추가 부형제를 포함하며,
백분율은 상기 조성물의 총 중량에 대한 중량 백분율을 나타낸다.
예를 들어, 화장료 조성물의 제조를 위한 상기 조성물은,
- 20% 내지 40%의 아니고잔토스 플라비두스의 수성 추출물, 및
- 60% 내지 80%의 글리세롤을 포함하고,
백분율은 상기 조성물의 총 중량에 대한 중량 백분율을 나타낸다.
본 발명의 목적은 또한 본 발명에 따른 화장료 조성물을 제조하기 위한 공정으로서, 공정은 본 발명에 따른 "전구체" 조성물을 화장료의 관점에서 하나 이상의 허용되는 부형제 및/또는 화장 효과를 갖는 하나 이상의 추가 활성제와 혼합하는 단계를 포함한다.
도 1은 TGF-β로 배양된 또는 "추출물"이라고 하는 0.1% 농도의 조성물로 배양된 섬유아세포에 의해 생성된, 대조군에 대해 백분율로서 표시된 I형 프로콜라겐(procollagen I)의 양을 나타낸다(실시예 1). "추출물" 조성물은 5 중량%의 아니고잔토스 플라비두스 꽃의 수성 추출물, 35 중량% 미만의 물, 및 50 중량% 이상의 글리세롤을 함유한다.
도 2는 소태아혈청(fetal calf serum, FCS)으로 배양된, 0.2% 농도의 "추출물" 조성물(추출물 0.2%)로 배양된, 그리고 0.1% 농도의 "추출물" 조성물(추출물 0.1%)의 존재 하에 배양된 섬유아세포에 의해 생성된, 대조군에 대해 백분율로 표시된 테나신-X(Tenascin-X)의 양을 나타낸다(실시예 2).
도 3A 내지 도 3C는 주름의 바닥(BW)로부터의 인간 섬유아세포의 수축력에 대한 "추출물"의 효과에 관한 결과를 나타낸다(실시예 4). 도 3A는 0.1%(v/v)의 "추출물" 조성물의 존재 하에, 0.2%(v/v)의 "추출물" 조성물의 존재 하에, 그리고 활성제의 부재(대조군(-)) 하에 24 시간 동안 BW 섬유아세포에 의해 가해진 수축력의 변화를 나타낸다.
도 3B의 막대 그래프는 도 3A의 곡선의 곡선하 면적(area under the curve, AUC)에 해당한다. 도 3C의 막대 그래프는 도 3A의 곡선에 대한 최대 수축력에 해당한다.
BW: 활성제가 없는 BW 섬유아세포(음성 대조군), 활성제 0.1%: 0.1%(v/v)의 "추출물" 조성물의 존재 하에 배양된 BW 섬유아세포; 및 활성제 0.2%: 0.2%(v/v)의 "추출물" 조성물의 존재 하에 배양된 BW 섬유아세포.
도 4는 주름의 바닥으로부터의 섬유아세포 내의 α-SM 액틴 섬유의 면역표지 이미지를 보여준다: (A): 대조군; (B): 0.2%의 "추출물"로 배양 후; 및 (C): 0.1%의 "추출물"로 배양 후.
도 5A 및 5B는 "추출물" 조성물(활성제 0.2%)(캥거루 포(Kangaroo Paw) 0.2%)의 존재 하에서 및 상기 조성물의 부재(대조군) 하에 시간의 경과에 따라 비세포성 피부 등가물에 의해 가해진 수축력을 나타낸다.
도 6은 2%의 "추출물"을 함유하는 크림(크림 B)과 비교한 위약 크림(크림 A)으로 처리한 얼굴의 눈가 주름의 깊이 변화를 나타낸다(추출물의 적용 1 시간 이후 및 처리 28일 후).
아니고잔토스 플라비두스는 주로 호주 남서부에서 발견되는 하에모도룸과(Haemodoraceae)의 고유 식물종이다. 이 식물은 대체로 노란색이나 빨간색을 띠고 캥거루 발을 연상시키는 꽃이 특징이다. 출원인이 알고 있는 바로는, 아니고잔토스 플라비두스 추출물은 화장품에서 기껏해야, 예를 들어, 샴푸 조성물과 같은 컨디셔닝제로 사용되어 왔다. 아니고잔토스 플라비두스 추출물에 대한 화장 생물학적 활성은 보고된 바가 없는 것으로 보인다.
본 출원인은 아니고잔토스 플라비두스의 수성 추출물을 제조하고 이 추출물의 생물학적 활성을 연구하였다.
놀랍게도, 본 출원인은 아니고잔토스 플라비두스 추출물이 피부의 세포외 기질의 조직과 조성에 핵심적인 역할을 하는 생물학적 표적에 활성을 보이는 것을 증명하였다. 실시예에 예시한 바와 같이, 아니고잔토스 플라비두스 추출물은 진피 섬유아세포에 의한 I형 프로콜라겐의 합성을 자극하고 각질형성세포에 의한 XVII형 콜라겐의 합성을 증가시킬 수 있다. 본 출원인은 또한 아니고잔토스 플라비두스 추출물이 탄력 섬유의 구조와 안정성 및 피부의 세포외 기질의 콜라겐 섬유의 조직에 핵심적인 역할을 하는 당단백질인 테나신-X의 합성을 자극할 수 있는 것을 증명하였다. 아니고잔토스 플라비두스 추출물은 또한 섬유아세포에서 액틴 알파2(알파 평활근 액틴(alpha-smooth muscle actin, α-SMA)로도 알려짐)의 합성을 자극하고, 결과적으로 주름의 바닥으로부터의 섬유아세포가 생성하는 수축력을 증가시킨다. 아니고잔토스 플라비두스 추출물은 비세포성 피부 등가물에 의해 가해지는 수축력을 증가시킬 수 있는 것으로 밝혀졌으며, 이는 물리적 작용을 통해 진피의 섬유에 대한 추출물의 즉각적인 수축 효과를 나타낸다.
본 출원인은 또한 0.6 중량%의 아니고잔토스 플라비두스의 수성 추출물을 함유하는 데이 크림의 노화 방지 효과를 평가하기 위한 임상 시험을 수행하였다. 이러한 시험 결과, 아니고잔토스 플라비두스 추출물은 장기간 동안 주름의 깊이를 현저히 줄임으로써 피부에 수축-재형성 효과를 나타냄을 증명하였다. 아니고잔토스 플라비두스 추출물은 즉각적인 수축 효과를 나타내며, 이는 피부에 적용한 후 몇 분만에 관찰할 수 있다.
이러한 결과와 관련하여, 아니고잔토스 플라비두스 추출물은 따라서 피부 노화의 징후를 예방 또는 치료하기 위한 노화 방지제로서 화장품 분야에 적용할 있다. 아니고잔토스 플라비두스 추출물은 또한 피부를 다시 조여주고 단기간 동안 피부 외관 또는 피부 유지력을 개선하기 위해 즉시-작용 수축제로서 그 응용을 찾을 수 있다.
피부 세포외 기질의 조직, 응집력 및 탄력성에 관여하는 몇 가지 주요 단백질의 합성에 대한 작용으로 인해, 아니고잔토스 플라비두스 추출물은 세포외 기질, 특히 노화 피부 또는 나이든 피부에서 진피의 재구축과 재구성을 촉진하기 위해 사용될 수 있다. 일반적으로, 아니고잔토스 플라비두스 추출물은 피부 늘어짐을 치료 또는 예방하거나, 피부 탄력을 개선하거나, 또는 피부 주름 및 미세 라인을 치료 또는 예방하기 위해 사용될 수 있다. 따라서, 아니고잔토스 플라비두스 추출물은 수축제 또는 리프팅제로서 또는 피부 재형성 및 재구조화를 위한 제제로서 사용될 수 있다. 특히, 아니고잔토스 플라비두스 추출물은 피부 탄력 손실 및/또는 피부의 세포외 기질의 변화, 예를 들어, 탄력 섬유와 같은 세포외 기질 성분의 질적 또는 양적 변화로 인한 세포외 기질의 파괴와 관련된 피부의 비-병리학적 변화를 치료 또는 예방하기 위한 화장제로서 사용될 수 있다.
- 본 발명에 따른 아니고잔토스 플라비두스 추출물의 용도
제 1 양태에 따르면, 본 발명은 아니고잔토스 플라비두스 추출물의 비-치료적인 화장료 용도에 관한 것이다. 아니고잔토스 플라비두스 추출물은 화장제, 특히 노화 방지제로서 사용될 수 있다.
본 발명의 맥락에서, 아니고잔토스 플라비두스 추출물은 아니고잔토스 플라비두스의 지상부, 예를 들어 잎, 꽃, 줄기 및 이들의 조합으로부터 수득된 추출물을 말한다. 특정 실시형태에서, 아니고잔토스 플라비두스 추출물은 아니고잔토스 플라비두스의 꽃 및/또는 줄기로부터 수득된 추출물이다. 아니고잔토스 플라비두스 추출물은 임의의 추출 기술로 수득될 수 있다. 바람직하게, 아니고잔토스 플라비두스 추출물은 극성 용매로 추출하여 제조된다. 일반적으로, 극성 용매는 물, 알코올, 에스테르, 케톤 및 이들의 혼합물로부터 선택될 수 있다. 에스테르의 예로서, 에틸 아세테이트, 프로필 아세테이트 및 부틸 아세테이트를 언급할 수 있다. 알코올은 메탄올, 에탄올, n-프로판올, 이소프로판올, 메탄올 및 글리세롤과 같은 폴리올을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 케톤의 예로서, 아세톤, 시클로헥사논 또는 메틸 에틸 케톤을 언급할 수 있다.
특정 실시형태에서, 추출 용매는 물, 알코올 및 수성-알코올성 혼합물 예를 들어 물/에탄올, 물/메탄올 또는 물/글리세롤 혼합물로부터 선택된다. 일부 특정 실시형태에서, 추출 용매는 물이다.
극성 용매를 사용하는 추출은 본 기술 분야의 숙련자에게 공지된 임의의 방법, 예를 들어, 달임(decoction), 우려냄(infusion), 온침(maceration), 삼출(percolation) 또는 침출(leaching)에 의해 수행될 수 있다. 예를 들어, 아니고잔토스 플라비두스 추출물은 수중 또는 수성 알코올 혼합물에서 열 추출에 의해 수득될 수 있다. 적절한 열 추출 기법은 달임이다.
"달임"라는 용어는 효율적인 추출을 얻기에 적합한 시간 동안 수중에서 식물 재료를 끓이는 것을 의미한다.
추출 단계는 동결, 건조, 동결 건조, 분쇄 또는 이들의 조합과 같은 하나 이상의 처리를 거친 아니고잔토스 플라비두스의 식물 재료에 대해 수행될 수 있다. 일부 실시형태에서, 추출은 분쇄 단계를 거친 신선한 또는 건조된 식물 재료에 대해 수행된다. 추출의 끝에서, 추출물은 예를 들어 원심분리 및/또는 여과에 의해 액상으로부터 식물 재료를 분리할 수 있는 임의의 방법에 의해 회수될 수 있다.
예를 들어, 아니고잔토스 플라비두스 추출물은,
- 아니고잔토스 플라비두스의 지상부, 일반적으로 꽃과 줄기를 건조 및 분쇄하여 식물 재료를 제조하는 단계와,
- 극성 용매, 일반적으로 물 또는 수성-알코올성 혼합물로, 바람직하게는 고온 조건 하에, 예를 들어, 달임에 의해 식물 재료를 추출하는 단계, 및
- 바람직하게는 여과에 의해 고형 식물 재료를 제거하는 단계를 포함하는 공정에 의해 수득될 수 있다.
아니고잔토스 플라비두스 추출물을 제조하는 공정은 추출 및/또는 여과 단계의 마지막에 하나 이상의 추가 단계를 포함할 수 있다. 공정은 예를 들어 pH 조절제, 안정화제 및/또는 화장용으로 허용되는 담체 또는 지지체를 첨가함으로써 추출물을 제형화하는 단계, 추출물을 농축하는 단계 또는 추출물을 건조하는 단계를 포함할 수 있다.
추가의 또는 대안적인 실시형태에서, 아니고잔토스 플라비두스 추출물은 플라보노이드, 폴리페놀 및 탄수화물을 포함한다. 플라보노이드는 추출물의 건조 물질에 대해 나린진 당량(naringin equivalent)으로 1% 내지 15%, 예를 들어 5% 내지 15% 또는 1% 내지 8%에 해당할 수 있고; 폴리페놀은 추출물의 건조 물질에 대해 클로로겐산 당량 중량으로 5% 내지 30%, 예를 들어 5% 내지 25%, 12% 내지 20%, 10% 내지 30% 또는 15% 내지 20%에 해당할 수 있고; 당류는 추출물의 건조 물질에 대해 글루코오스 당량 중량으로 35% 내지 65%, 예를 들어 35% 내지 55%, 40% 내지 60% 또는 40% 내지 50%에 해당할 수 있다. 폴리페놀, 플라보노이드 및 당 함량은 클로로겐산(Folin-Ciocalteu방법), 나린진(Zhishen 등의 방법, Food Chemistry, 1999, 64, 555-559) 및 글루코오스(Bachelier 등의 방법, Cah. OSTRUM.sec., Pudol. Vo.IV, 3-1966)로부터 수득한 표준 물질을 사용하는 비색법(colorimetry)에 의해 각각 결정된다.
추출 공정의 마지막에 수득된 아니고잔토스 플라비두스 추출물은 0.1 중량% 내지 40 중량%, 바람직하게는 0.1 중량% 내지 10 중량%, 예를 들어 0.1 중량% 내지 4 중량%의 건조 물질 함량을 포함할 수 있다.
특정 실시형태에서, 아니고잔토스 플라비두스 추출물은 추출물의 건조 물질에 대해 1 중량% 미만의 페룰산을 포함한다. 바람직하게, 아니고잔토스 플라비두스 추출물은 페룰산이 없다.
특정 실시형태에서, 아니고잔토스 플라비두스 추출물은 다음 특징 중 하나 이상(예를 들어, 둘, 셋, 넷, 다섯 또는 모두)을 특징으로 한다:
- 아니고잔토스 플라비두스 추출물은 극성 용매를 사용하는 추출, 바람직하게는 수중 또는 수성-알코올성 혼합물에서 달임에 의해 아니고잔토스 플라비두스의 지상부로부터 수득되고;
- 아니고잔토스 플라비두스 추출물은 0.1 중량% 내지 10 중량%의 건조 물질 함량을 포함하고;
- 플라보노이드는 추출물의 건조 물질에 대해 나린진 당량 중량으로 5% 내지 15%, 예를 들어 7% 내지 13%에 해당하고;
- 당은 추출물의 건조 물질에 대해 글루코오스 당량 중량으로 35% 내지 65%, 예를 들어 40% 내지 60%에 해당하고;
- 폴리페놀은 추출물의 건조 물질에 대해 클로로겐산 당량 중량으로 5% 내지 25%, 예를 들어 10% 내지 20%에 해당하고; 및/또는
- 아니고잔토스 플라비두스 추출물은 추출물의 건조 물질에 대해 관련하여 1 중량% 미만의 페룰산을 포함한다.
본 발명에 따른 용도에서, 아니고잔토스 플라비두스 추출물은 액체 형태, 예를 들어 수중 또는 물/글리세롤 혼합물과 같은 수성-알코올성 혼합물에 존재할 수 있다. 다른 실시형태에서, 아니고잔토스 플라비두스 추출물은 건조 고형 형태, 일반적으로 분말 형태일 수 있다. 아니고잔토스 플라비두스의 건조 추출물은 임의의 공지된 기술, 예를 들어 분무 건조, 증발 또는 동결 건조에 의해 추출 용매를 제거함으로써 수득될 수 있다.
추가적인 예로서, 아니고잔토스 플라비두스 추출물은 말토덱스트린과 같은 고형 담체에 흡수된 형태일 수 있다.
특정 실시형태에서, 아니고잔토스 플라비두스 추출물은 수중 또는 수성-알코올성 혼합물, 바람직하게는 물/글리세롤 혼합물 중의 액체 추출물이다. 상기 수성-알코올성 혼합물은 1/9 내지 9/1, 바람직하게는 1/9 내지 2/1 범위의 물/알코올 부피비에 해당할 수 있다.
본 발명의 목적상, "노화 방지제"라는 용어는 피부 노화의 징후를 예방 또는 치료할 수 있는 생물학적 활성을 갖는 화장료 활성제를 의미하는 것으로 의도된다.
"피부 노화의 징후를 예방하는"이라는 표현은 피부 노화 징후의 출현을 지연 또는 예방하는 것을 의미한다.
"피부 노화의 징후를 치료하는"이라는 표현은 피부 노화 징후의 발달을 감소, 축소, 약화, 교정 또는 둔화시키는 것을 의미한다.
"피부 노화의 징후"라는 표현은 연대기적(연대기적 노화) 및/또는 광-유도(광-노화(photo-aging))인지 여부에 관계없이 노화로 인한 피부의 시각적 외관 또는 역학적 특성의 비-병리학적 변화 또는 변형을 의미한다. 피부 노화의 징후는 따라서 피부의 외관 또는 역학적 특성의 비-병리학적 변화 또는 변형을 의미한다.
따라서, 노화의 징후는 피부, 특히 표피의 박화(thinning), 미세 굴곡의 출현, 입술과 눈꺼풀을 포함하는 피부 상의 미세 라인 및/또는 주름의 출현, 피부 위축 또는 처짐, 피부 광채 손실, 칙칙한 안색, 피부 상의 색소반, 눈 아래의 다크 서클, 피부 밀도의 손실, 피부 견고성의 손실, 피부 긴장성의 손실, 피부 수축성의 손실, 피부 탄력의 손실, 피부의 매끄러운 외관의 변화, 피부 거칠기의 증가 및 얼굴 윤곽의 변화를 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 본 발명의 목적상, "피부(skin)" 및 "피부의(cutaneous)"라는 용어는 특히 입술과 눈꺼풀을 포함하는 얼굴 피부, 목 피부 및 손 피부와 같은 인체 피부의 임의의 부분을 말한다.
위에 제시한 바와 같이, 아니고잔토스 플라비두스 추출물은 세포외 매트릭스의 구조 및 피부 탄력과 관련된 다양한 주요 단백질의 합성을 촉진할 수 있다.
따라서, 아니고잔토스 플라비두스 추출물은 피부의 역학적 특성, 특히 피부의 유연성, 탄력, 견고성 또는 긴장성의 변화를 개선, 복원 또는 예방하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, 아니고잔토스 플라비두스 추출물은 노화 피부 또는 나이든 피부의 역학적 특성의 변화를 개선, 복원 또는 예방하기 위해 사용될 수 있다.
"노화 피부"라는 용어는 40 세 이상의 남성 또는 여성의 피부를 의미하며 노화로 인한 탄력 손실을 나타낸다.
특정 실시형태에서, 본 발명에 따른 추출물은 피부의 역학적 특성의 변화, 특히 피부 탄력 손실과 관련된 피부 노화의 징후를 치료 또는 예방하기 위해 사용된다. 아니고잔토스 플라비두스 추출물은 따라서 피부를 스무딩하거나, 팽창시키거나, 리프팅 또는 재리프팅(relifting)하거나, 재구조화하거나, 재형성하기 위한 제제로 사용될 수 있다. 아니고잔토스 플라비두스 추출물은 피부의 즉시 수축을 위한 제제로 사용될 수 있다.
"스무딩를 위한 제제(agent for smoothing)"라는 표현은 입술을 포함하여 피부의 미세 굴곡을 감소 및/또는 교정할 수 있는 화장제를 의미하며, 상기 미세 굴곡은 주름 또는 미세 라인의 형태로 존재한다.
"리프팅 또는 재리프팅을 위한 제제(agent for lifting or relifting)"라는 표현은 피부에 수축 작용을 발휘할 수 있는 화장제를 의미하며, 이로 인해 피부의 외관이 개선되고 주름이 덜 보이게 된다.
"피부 재형성을 위한 제제(agent for remodeling the skin)"라는 표현은 피부 탄력 손실 또는 피부의 늘어짐 이후, 특히 얼굴 윤곽선과 목에서 피부의 불규칙한 외관을 감소시킬 수 있는 제제를 의미한다.
"리프팅제(lifting agent)"라는 용어는 피부의 미세 굴곡을 부드럽게 하기 위해 피부에 수축 효과를 발휘할 수 있는 화장제를 의미한다.
"재구조화제(restructuring agent)"라는 용어는 세포외 매트릭스의 탄력 섬유 손실 또는 변화 또는 세포외 기질의 콜라겐 손실 또는 변화와 같은 노화로 인한 피부의 세포외 매트릭스의 변화를 예방 또는 치료할 수 있는 화장제를 의미한다.
"즉시 수축제(immediate tensioning agent) 또는 즉효 수축제(immediate-effect tensioning agent)"라는 표현은 피부 탄력을 증가시키고 및/또는 피부의 외관 또는 유지력을 개선하기 위해 피부에 수축 효과를 발휘할 수 있는 화장제를 의미하며, 이 효과는 피부 적용 이후 일반적으로 몇 분(예를 들어, 5 분) 내지 1 시간 이내에 볼 수 있다.
예를 들어, 아니고잔토스 플라비두스 추출물은 피부, 특히 입술 또는 눈꺼풀에서의 미세 라인 및/또는 주름의 출현, 피부, 예를 들어, 목에서의 위축, 피부의 처짐 또는 늘어짐, 피부 밀도의 손실, 피부 견고성의 손실, 피부 긴장성의 손실, 피부 탄력의 손실, 피부의 늘어짐, 피부의 매끄러운 외관의 변화, 피부 거칠기의 증가 및 얼굴 윤곽의 변화를 예방 또는 치료하기 위해 사용될 수 있다. 아니고잔토스 플라비두스 추출물은 성숙한 또는 노화된 피부에 더욱 젊은 모습을 제공하고 및/또는 노화 피부 또는 나이든 피부의 안색 또는 광채를 개선하기 위해 사용될 수 있다.
아니고잔토스 플라비두스 추출물은 노화로 인해 손상된 피부의 세포외 기질을 재구조화 또는 재구성하기 위한 미용 목적으로 사용될 수 있다. 특히, 아니고잔토스 플라비두스 추출물은 피부의 세포외 기질의 조직에 관여하는 단백질의 합성을 자극하기 위한 미용 목적으로 사용될 수 있다. "피부의 세포외 기질의 조직에 관여하는 단백질"이라는 표현은 콜라겐, 엘라스틴 또는 피브릴린과 같은 세포외 기질을 구성하는 단백질, 또는 테나신-X와 같은 세포외 기질을 구성하는 단백질의 발현 또는 조직에 관여하는 단백질을 의미한다. 일부 실시형태에서, 아니고잔토스 플라비두스 추출물은 피부, 바람직하게는 노화 피부에서 I형 프로콜라겐, XVII형 콜라겐 및 테나신-X으로부터 선택된 단백질의 합성을 자극하기 위한 화장제로서 사용된다 또 다른 실시형태에서, 아니고잔토스 플라비두스 추출물은 노화 피부 또는 나이든 피부의 진피 섬유아세포의 수축력을 증가시키기 위한 화장제로 사용된다. 또 다른 실시형태에서, 아니고잔토스 플라비두스 추출물은 진피의 대사를 자극하기 위해 사용된다.
일부 실시형태에서, 아니고잔토스 플라비두스 추출물은 화장 효과를 갖는 활성제와 함께 사용된다. 이러한 제제는 아래에 기재되어 있으며, 그 중에서도, 주름 방지제, 노화 방지제, 산화 방지제, 보습제, 리프팅제 및 퍼밍제를 포함한다.
본 발명에 따른 용도에서, 아니고잔토스 플라비두스 추출물은 피부에 적용된다. 상기 추출물은 바람직하게는 피부에 적용하기 위한 조성물 내에 화장제로 서 존재한다. 상기 조성물은 일반적으로 화장료 조성물이다.아니고잔토스 플라비두스 추출물은 일반적으로 상기 화장료 조성물의 총 중량에 대해 0.0001 중량% 내지 10 중량%, 바람직하게는 0.001 중량% 내지 5 중량%, 더욱 바람직하게는 0.005 중량% 내지 3 중량%에 해당한다. 예를 들어, 아니고잔토스 플라비두스 추출물은 화장료 조성물의 0.01 중량% 내지 3.0 중량%, 예를 들어 0.6 중량%에 해당한다. 아니고잔토스 플라비두스 추출물은 액체 추출물의 형태로, 건조 추출물의 형태로, 또는 본 명세서에서 후술되는 바와 같이 "전구체" 조성물의 형태로 화장료 조성물에 첨가될 수 있다.
상기 화장료 조성물은 하나 이상의 화장용으로 허용되는 부형제 및 선택적으로 화장 효과를 갖는 하나 이상의 추가 활성제를 포함할 수 있다. 일반적으로, 상기 화장료 조성물은,
- 0.0001% 내지 10%의 아니고잔토스 플라비두스 추출물,
- 0% 내지 20%의 하나 이상의 추가 활성제, 및
- 70% 내지 99.9999%의 하나 이상의 화장용으로 허용되는 부형제를 포함하고,
백분율은 화장료 조성물의 총 중량에 대한 중량 백분율을 나타낸다
일부 실시형태에서, 상기 화장료 조성물은
- 0.001 중량% 내지 5 중량%의 아니고잔토스 플라비두스 추출물,
- 0.001% 내지 10%의 하나 이상의 추가 활성제, 및
- 85% 내지 99.998%의 하나 이상의 화장용으로 허용되는 부형제를 포함한다.
다른 실시형태에서, 상기 화장료 조성물은,
- 0.01 중량% 내지 5 중량%의 아니고잔토스 플라비두스 추출물,
- 0.01% 내지 10%의 하나 이상의 추가 활성제, 및
- 85% 내지 99.98%의 하나 이상의 화장용으로 허용되는 부형제를 포함한다.
아니고잔토스 플라비두스 추출물은 액체 형태로 존재하는 것이 바람직하다.
추가의 또는 대안적인 실시형태에서, 화장료 조성물은 아니고잔토스 플라비두스 추출물로부터 건조 물질의 0.001 중량% 내지 10 중량%, 예를 들어 0.005 중량% 내지 1 중량% 또는 0.005 중량% 내지 0.5 중량%를 포함한다.
"화장 효과를 갖는 활성 성분", "화장 효과를 갖는 활성제" 또는 "화장 효과를 갖는 화장료 또는 활성제"라는 표현은 피부 또는 피부 부속 기관에 적어도 하나의 화장 효과를 발휘할 수 있는 화합물을 의미한다. "화장 효과"라는 용어는 피부 또는 입술과 같은 점막의 외관을 수정 및/또는 개선하거나, 외부 공격(태양, 바람, 습기, 건조, 화학 제품)에 대해 피부 등을 보호하거나, 또는 피부 등의 노화와 관련된 현상을 예방 및/또는 교정하는 것을 목표로 하는 비-치료적 효과를 의미한다.
따라서, 일부 실시형태에서, 아니고잔토스 플라비두스 추출물은 화장 효과를 갖는 추가 활성 성분을 또한 포함하는 화장료 조성물에 존재할 수 있다. 화장 효과를 갖는 활성 성분은 비타민, 선 필터 및 선스크린, 노화 방지제, 홍조 방지제, 산화 방지제, 퍼밍제, 보습제, 진정제, 스크러빙 또는 박피제, 소광제, 피지 조절제, 라이트닝 활성제, 반점 방지제, 슬리밍제, 탈수제, 셀프-태닝 활성제, 태닝 촉진제 및 이들의 조합으로 이루어진 군에서 선택될 수 있다. 특히, 화장료 조성물은 토코페롤 및/또는 아마인 추출물과 같은 식물 추출물, 비브리오 엑소폴리사카라이드(Vibrio exopolysaccharide) 추출물, 또는 트리플루오로아세틸 트리펩타이드-2와 같은 펩타이드를 포함할 수 있다.
바람직하게, 화장료 조성물은 주름 방지제, 홍조 방지제, 산화 방지제, 보습 활성제, 진정제, 피지 조절제, 반점 방지제, 선 필터 또는 선스크린, 및 이들의 조합으로 이루어진 군에서 선택되는 활성제를 포함할 수 있다. 더욱 바람직하게, 화장 효과를 갖는 추가 활성제는 주름 방지제, 산화 방지제, 보습제, 퍼밍제 및 이들의 조합에서 선택된다.
보습제의 예로서, 요소, 피돌산(PCA) 및 이의 유도체, 특히 아르기닌 PCA, 키토산 PCA, 구리 염(구리 PCA), 마그네슘 염(마그네슘 PCA), 나트륨 염(나트륨 PCA), 또는 아연 염, 에틸헥실 PCA, 글루콘산 칼슘, 히알루론산 및 이의 염 및 다른 글리코사미노글리칸, 프록토오스, 글루코오스, 이소말토오스, 락토오스, 트레할로오스, 폴리덱스트로오스, 자당(수크로오스), 말티톨, 만니톨, 소르비톨, 자일리톨 및 다른 탄수화물 및 유도체, PEG-7, PEG-8, PEG-10, PEG-12 또는 PEG-14와 같은 폴리에틸렌 글리콜, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 부틸렌 글리콜, 베타인, 시트룰린, 콜라겐 및 이의 유도체, 히스티딘, 실크 가수 분해물, 케라틴 가수 분해물 또는 콩 가수 분해물, 폴리사카라이드 및/또는 폴리페놀이 풍부한 식물 추출물, 예를 들어 알로에 추출물, 수레국화(켄타우레아 시아누스(Centaurea cyanus)) 및 이들의 조합을 언급할 수 있다
노화 방지제의 예로서, 아스코르브산 및 이의 유도체, 예를 들어, 마그네슘 아스코르빌 포스페이트, 글리코사미노글리칸 및 이의 유도체, 시아테아(Cyathea) 폴리사카라이드, 콜라겐, 아마인(Linum usitatissimum) 추출물, 카프로오일 테트라펩타이드 -3 및 트리플루오로아세틸 트리펩타이드-2, 마디풀(Polygonum aviculare) 추출물, 갈조류, 특히 아스코필럼 노도섬(Ascophyllum nodosum) 추출물, 양치류, 특히 시아테아 쿠밍기이(Cyathea cumingii) 추출물을 언급할 수 있다
진정제의 예로서, 알란토인, 알로에 추출물, 자작나무(예를 들어, 베툴라 알바(Betula alba)) 추출물, 윌로우허브(예를 들어, 에필로비움 안구스티폴리움(Epilobium angustifolium)) 추출물, 밤나무(예를 들어, 카스타네아 사티바(Castanea sativa) 추출물, 수레국화(예를 들어, 켄타우레아 시아누스(Centaurea cyanus)) 추출물, 병풀(예를 들어, 센텔라 아시아티카(Centella asiatica)) 추출물, 쇠뜨기(예를 들어, 에퀴세툼 아르벤스(Equisetum arvense)) 추출물, 회향(예를 들어, 포에니쿨룸 불가레(Foeniculum vulgare)) 추출물, 풍년화(예를 들어, 하마멜리스 비르기니아나(Hamamelis virginiana)) 추출물, 아이비(예를 들어, 헤데라 헬릭스(Hedera helix)) 추출물, 하비스커스 삽다립파(Habiscus sabdariffa) 추출물,백합(예를 들어, 릴리움 칸디둠(Lilium candidum)) 추출물, 아욱(예를 들어, 말바 실베스트리스(Malva sylvestris)) 추출물, 레몬 밤(예를 들어, 멜리사 오피시날리스(Melissa officinalis)) 추출물, 골무꽃(예를 들어, 스쿠텔라리아 바이칼렌시스(Scutellaria baicalensis)) 추출물, 미모사(예를 들어, 미모사 테누이플로(Mimosa tenuiflora)) 추출물, 양지꽃(예를 들어, 포텐틸라 에렉타(Potentilla erecta)) 추출물, 올리고당 추출물 또는 올리고당, 예를 들어, 아마, 팔미토일 트리펩타이드-8과 같은 펩타이드 및 이들의 조합을 언급할 수 있다.
산화 방지제의 예로서, HMR(히드록시메틸 레조르시놀(hydroxymethyl resorcinol)), 아스코르브산 및 이의 유도체, 비타민 B9, 히스티딘 히드로클로라이드, 또는 윌로우허브(예를 들어, 에필로비움 안구스티폴리움(Epilobium angustifolium)) 추출물을 언급할 수 있다. 산화 방지 효과를 갖고 비타민 유형의 활성 성분은 일반적으로 화장료 조성물의 총 중량에 대해 적어도 1 중량%으로 사용된다.
피지 조절제의 예로서, 아마씨 리그난(flax lignan), 쌀가루, 글루콘산 아연, 사르코신, 계피나무 추출물, 아보카도 추출물 및 이들의 조합을 언급할 수 있다.
홍조 방지제의 예로서, 사포닌, 플라보노이드, 루스코게닌(ruscogenin), , 에스쿨로시드(esculoside) 및 이들을 함유하는 추출물, 예를 들어, 루스쿠스(Ruscus) 추출물 및 일부 에센셜 오일, 예를 들어, 라벤더 또는 로즈메리를 언급할 수 있다.
반점 방지제의 예로서, 감초(글리시리자 글라브라(Glycyrrhiza glabra)) 추출물, 잭프루트(아르토카르푸스 헤테로필루스(Artocarpus heterophyllus)) 추출물, 토대황(R. 옥시덴탈리스(R.occidentalis)), 감귤류에 속하는 식물 추출물, 레스베라트롤, 올리고 펩타이드-68, 노나펩타이드-1과 같은 펩타이드, 코지산, 마그네슘 아스코르빌 포스페이트 및 이들의 조합을 언급할 수 있다.
화장료 조성물에 존재하는 화장용으로 허용되는 부형제(들)는 희석제, 분산제, 겔화제, 피부 연화제, 다중양이온성(polycationic) 폴리머 또는 인지질과 같은 벡터화제, 검, 수지, 용매, 특히 저급 알코올, 특히 에탄올, 이소프로판올, 디프로필렌 글리콜, 부틸렌 글리세롤, 프로판디올, 글리세롤, 소르비톨, 및 프로필렌 글리콜, 변성 및 중합 전분, 이산화 티타늄 또는 금속 스테아레이트와 같은 충전재, 보존제, 에센셜 오일, 진주광택제(pearlescent agent), 염료, 냄새 흡수제, pH 조절제 또는 중화제, 윤활제, 증점제, 음이온성, 양이온성, 양친성 또는 비이온성 계면활성제를 포함하는 계면활성제, 보습제, 습윤제, 향료, 유기 또는 산화철과 같은 무기 안료, 식물 유래 오일 또는 지방, 동물 유래 지방과 같은 오일제, 바세린, 실리콘 오일(사이클로메치콘)과 같은 합성 오일, 지방 알코올 에스테르, 플루오로 오일, 왁스, 변형 점토, 벤톤, 지방산의 금속염, 실리카, 폴리에틸렌, 운모, 보존제, 항균제, 미네랄, 샘물 또는 플로럴 워터와 같은 담체, 및/또는 화장품 또는 제약 분야에서의 제형화에 일반적으로 사용되는 기타 물질에서 선택될 수 있다.
아니고잔토스 플라비두스 추출물은 모든 유형의 화장료 조성물에 포함될 수 있다. 바람직하게, 국소 투여에 적합한 형태, 특히 피부 적용에 적합한 형태를 갖는 화장료 조성물이다. 상기 화장료 조성물은 수중유(O/W) 또는 유중수(W/O) 또는 다중(삼중: W/O/W 또는 O/W/O) 에멀젼, 나노에멀젼, 특히 100 nm 미만의 액적 크기를 갖는 O/W 나노에멀젼, 수성 겔 또는 분산액 또는 분말의 수성 또는 수성-알코올성 용액의 형태일 수 있다. 본 발명에 따른 화장료 조성물은 로션, 우유, 크림, 고약, 폼, 용액 또는 연고의 형태일 수 있다. 보다 일반적으로, 본 발명에 따른 조성물은 또한 모든 유형의 화장품 형태일 수 있다. 이는 화장용 케어 제품 또는 메이크업 또는 신체 위생 제품, 예를 들어 로션, 우유, 세럼, 수성 또는 유성 겔, 에멀젼, 크림, 크림-겔, 스킨케어 워터, 연고, 밤(balm), 파운데이션, 스프레이, 아이섀도우, 스틱, 립스틱, 글로스, 폼, 탈취제, 영양 마스크, 샤워 젤, 또는 박피 또는 스크러빙 제품일 수 있다. 비제한적인 예시로서, 아니고잔토스 플라비두스 노화 피부 또는 나이든 피부를 위한 데이 크림에서 노화 방지, 재리프팅 또는 재형성제로서 존재할 수 있다. 아니고잔토스 플라비두스 추출물은 얼굴이나 목을 위한 재생용 세럼에서 노화 방지제로서 존재할 수 있다. 추가적인 예로서, 아니고잔토스 플라비두스 추출물은 손, 목 또는 가슴을 위한 케어 크림에서 스무딩 또는 재형성 활성제로서 존재할 수 있다.
특정 실시형태에서, 아니고잔토스 플라비두스 추출물은 벡터화제와 함께 화장료 조성물에 존재한다. 일부 실시형태에서, 아니고잔토스 플라비두스 추출물은 벡터화 시스템에 의해 제형화된다. 벡터화 시스템은 미셀(micelle), 단층 또는 다층 리포좀을 포함하는 리포좀, 니오좀(niosome), 에토좀(ethosome), 층상 시스템, 나노좀(nanosome), 지질 또는 고분자성 소포체, 천연일 수 있고 아닐 수 있는 중합체의 마이크로- 또는 나노입자, 하이드로겔로 이루어진 군에서 선택될 수 있다. 바람직하게, 아니고잔토스 플라비두스 추출물은 리포좀 및 층상 시스템에서 선택되는 벡터화 시스템에 캡슐화된다. 본 발명을 구현하기 위한 리포좀 및 층상 시스템의 특정 예는, 그 중에서도, 특히 프랑스 특허 출원 제 1358589호 및 제 1262303호에 기재되어 있다.
본 발명에 따른 추가 목적은 화장용으로 유효한 양의 아니고잔토스 플라비두스 추출물을, 바람직하게는 국소 경로에 의해 대상에 투여하는 단계를 포함하는, 상기 대상에서 피부 노화의 징후를 치료 또는 예방하기 위한 화장 방법이다. 아니고잔토스 플라비두스 추출물은 일반적으로 치료할 피부, 예를 들어, 얼굴, 목 또는 손에 적용된다. 바람직하게, 아니고잔토스 플라비두스 추출물은 상기한 바와 같은 화장료 조성물에 존재하며, 따라서 화장료 조성물의 형태, 예를 들어, 크림 형태로 적용된다. 상기한 바와 같이, 피부 노화의 징후는 피부의 역학적 특성의 변화, 특히 피부 탄력 손실에 기인할 수 있다. 바람직하게, 본 발명에 따른 화장 방법은 주름 및/또는 미세 라인의 출현, 피부 상의 색소반의 출현, 피부의 위축, 피부의 처짐 또는 늘어짐, 피부 밀도의 손실, 피부 견고성의 손실, 피부 긴장성의 손실, 피부 탄력의 손실, 피부의 늘어짐, 피부의 매끄러운 외관의 변화, 피부 거칠기의 증가, 얼굴 윤곽의 변화, 및 이들의 조합에서 선택되는 피부 노화의 징후를 치료 또는 예방하는 목적을 갖는다.
본 발명의 목적은 화장용으로 유효한 양의 아니고잔토스 플라비두스 추출물을, 바람직하게는 국소 경로에 의해 대상에 투여하는 단계를 포함하는, 피부, 바람직하게는 노화 피부에서 즉각적인 수축 효과를 나타내기 위한 화장 방법이다. 아니고잔토스 플라비두스 추출물은 일반적으로 치료할 피부, 예를 들어, 얼굴, 목 또는 손에 적용된다.
본 발명에 따른 또 다른 목적은 피부의 세포외 매트릭스를 재구성 또는 재구조화하고, 및/또는 피부, 바람직하게는 노화 피부에서 I형 프로콜라겐, XVII형 콜라겐 및 테나신-X로부터 선택된 단백질의 합성을 자극하고, 및/또는 노화 피부의 진피 섬유아세포의 수축력을 증가시키기 위한 화장 방법으로서, 상기 방법은 화장용으로 유효한 양의 아니고잔토스 플라비두스 추출물을, 바람직하게는 국소적으로 대상에 투여하는 단계를 포함한다. 또 다른 실시형태에서, 아니고잔토스 플라비두스 추출물은 진피의 대사를 자극하거나 진피를 재구성 또는 재구조화하기 위해 사용된다.
본 발명에 따른 화장 방법 및 용도에서, 아니고잔토스 플라비두스 추출물의 투여될 투여량 및 투여 빈도는 목적하는 화장 효과, 대상의 특성, 특히 이들의 성별, 연령 및 피부 유형에 따라 변한다. 일반적으로, 아니고잔토스 플라비두스 추출물은 치료할 부위에 하루에 한두 번, 일반적으로 아침 및/또는 저녁에, 여러 주 또는 몇 달 동안, 예를 들어, 적어도 3 개월 동안 적용될 수 있다. 치료할 부위는 일반적으로 손, 목, 얼굴 또는 눈 주위, 입술 주위, 및 코 주름과 같은 얼굴 부분으로 구성된 군에서 선택된다. 아니고잔토스 플라비두스 추출물은 후술되는 바와 같이 화장료 조성물의 형태로 적용될 수 있다. 상기 화장료 조성물은 일반적으로 0.001 중량% 내지 10 중량%, 예를 들어 0.01 중량% 내지 5 중량%의 추출물을 함유한다.
예를 들어, 얼굴에서 노화 방지 효과를 얻기 위해, 환자는 아침과 저녁에 0.1 중량%의 아니고잔토스 플라비두스 추출물의 1 g 내지 2 g의 투여량의 화장료 조성물을 얼굴에 도포할 수 있다.
대상은 일반적으로 30 세 이상, 바람직하게는 40 세 이상 또는 45 세 이상의 여성 또는 남성일 수 있다. 예를 들어, 대상은 45 세 이상의 여성일 수 있다.
- 본 발명에 따른 추가 목적
추가 양태에 따르면, 본 발명의 목적은 또한 아니고잔토스 플라비두스 추출물을 함유하는 화장료 조성물이다. 일반적으로, 상기 화장료 조성물은,
- 0.0001% 내지 10%의 아니고잔토스 플라비두스 추출물,
- 0% 내지 20%의 하나 이상의 추가 활성제, 및
- 70% 내지 99.9999%의 하나 이상의 화장용으로 허용되는 부형제를 포함하고,
백분율은 화장료 조성물의 총 중량에 대한 중량 백분율을 나타낸다
일부 실시형태에서, 상기 화장료 조성물은,
- 0.001 중량% 내지 5 중량%의 아니고잔토스 플라비두스 추출물,
- 0.001% 내지 10%의 하나 이상의 추가 활성제, 및
- 85% 내지 99.998%의 하나 이상의 화장용으로 허용되는 부형제를 포함한다.
다른 실시형태에서, 상기 화장료 조성물은,
- 0.01 중량% 내지 5 중량%의 아니고잔토스 플라비두스 추출물,
- 0.01% 내지 10%의 하나 이상의 추가 활성제, 및
- 85% 내지 99.98%의 하나 이상의 화장용으로 허용되는 부형제를 포함한다.
추가 활성제 및 약학적으로 허용되는 부형제는 상기한 바와 같다는 것은 말할 나위도 없다. 마찬가지로, 화장료 조성물은 상기한 바와 같이 임의의 유형일 수 있다.
특히, 아니고잔토스 플라비두스 추출물은 액체 추출물의 형태일 수 있다.
추가의 또는 대안적인 실시형태에서, 화장료 조성물은 0.001 중량% 내지 10 중량%, 예를 들어 0.005 중량% 내지 1 중량%의 아니고잔토스 플라비두스 추출물의 건조 물질을 포함한다.
추가 양태에 따르면, 본 발명의 목적은 화장료 조성물에 혼입되는 조성물이다. 따라서, 이 조성물은 "전구체" 조성물에 해당한다.
바람직하게, 화장료 조성물의 제조를 위한 이 조성물은,
- 10% 내지 50%, 바람직하게는 20% 내지 40%의 아니고잔토스 플라비두스 추출물,
- 50% 내지 90%, 바람직하게는 60% 내지 80%의 담체로서, 바람직하게는 수성 용매, 유기 용매, 바람직하게는 에탄올, 프로판디올, 부틸렌 글리콜, 글리세롤 또는 이소프로판올과 같은 저급 알코올, 친유성제 및 이들의 혼합물에서 선택되는 담체, 및
- 선택적으로, 0.01% 내지 30%의 화장용으로 허용되는 추가 부형제로서, 바람직하게는 pH 조절제, 완충제, 벡터화제, 산화 방지제, 보존제, 안정화제, 증점제, 유화제, 친수성 또는 친유성 겔화제, 향료, 광물유 또는 유기 오일 및 이들의 조합에서 선택되는 추가 부형제를 포함하며,
백분율은 조성물의 총 중량에 대한 중량 백분율을 나타낸다.
아니고잔토스 플라비두스 추출물은 상기한 바와 같을 수 있다는 것은 말할 나위도 없다. 예를 들어, 아니고잔토스 플라비두스 추출물은 극성 용매를 사용하여 아니고잔토스 플라비두스의 지상부로부터 수득될 수 있다. 일부 실시형태에서, 아니고잔토스 플라비두스 추출물은, 예를 들어 수중 또는 물/글리세롤 혼합물과 같은 수성-알코올성 혼합물 중의 액체 추출물이다.
특정 실시형태에서, 화장료 조성물의 제조를 위한 조성물은,
- 20% 내지 40%의 아니고잔토스 플라비두스의 수성 추출물, 및
- 60% 내지 80%의 글리세롤을 포함하고,
백분율은 조성물의 총 중량에 대한 중량 백분율을 나타낸다
"전구체" 조성물은 또한 완충제 또는 구연산과 같은 pH 조절제를 포함할 수 있다. 일반적으로, 본 발명에 따른 "전구체" 조성물은 3.0 내지 4.5, 일반적으로 대략 3.9의 pH를 갖는다.
추가의 또는 대안적인 실시형태에서, "전구체" 조성물은 0.01 중량% 내지 10 중량%, 예를 들어 0.05 중량% 내지 5 중량%, 또는 0.1 중량% 내지 1 중량%의 아니고잔토스 플라비두스 추출물의 건조 물질을 포함한다.
본 발명의 목적은 또한 화장료 조성물의 제조를 위한 상기 "전구체" 조성물의 용도이다. 상기 최종 화장료 또는 약제학적 조성물은 특히 본 발명에 따른 화장료 용도 중 어느 하나의 실시에 특히 적합하고, 상기한 특징 중 어느 하나를 가질 수 있다는 것은 말할 나위도 없다.
"전구체" 조성물은 최종 화장료 조성물 또는 약제학적 조성물의 총 중량에 대해 0.001 중량% 내지 50 중량%, 바람직하게는 0.01 중량% 내지 10 중량%, 예를 들어 0.5 중량% 내지 5 중량%, 또는 1.5 중량% 내지 2.5 중량%의 양으로 화장료 조성물에 존재할 수 있다.
상기 화장료 조성물은 본 발명에 따른 "전구체" 조성물을 화장료의 관점에서 하나 이상의 부형제 및/또는 화장 효과를 갖는 하나 이상의 추가 활성제와 혼합함으로써 수득될 수 있다.
본 발명에 따른 추가 목적은 본 발명에 따른 화장료 조성물을 제조하기 위한 공정으로서, 공정은 아니고잔토스 플라비두스 추출물 또는 "전구체" 조성물이 하나 이상의 화장용으로 허용되는 부형제 및/또는 화장 효과를 갖는 하나 이상의 추가 활성제와 혼합되는 단계를 포함한다.
본 발명의 목적은 또한 본 발명에 따른 "전구체" 조성물을 제조하기 위한 방법으로서, 방법은,
a) 아니고잔토스 플라비두스의 식물 기질, 바람직하게는 아니고잔토스 플라비두스의 지상부로부터의 식물 기질을 건조 및 분쇄에 의해 공급하는 단계,
b) 액체 추출물을 수득하기 위해 극성 용매를 사용하여 식물 기질을 추출한 후 여과하는 단계,
c) 여과로 수득한 액체 추출물에 화장용으로 허용되는 담체를 첨가하는 단계,
d) 선택적으로, 화장용으로 허용되는 부형제를 여액에 첨가하는 단계, 및
e) 선택적으로, pH를 조절하는 단계를 포함하고,
단계 c), d) 및 e)는 임의의 순서로 수행될 수 있다.
일부 실시형태에서, 화장용으로 허용되는 담체는 글리세롤 및/또는 물을 포함한다.
추출 단계는 상기한 바와 같이, 예를 들어 극성 용매로서 물 또는 수성-알코올성 혼합물을 사용하여 수행될 수 있다.
본 발명의 다른 양태 및 이점은 예시적이고 결코 제한적인 것으로 간주되어서는 안 되는 다음 실시예를 읽을 때 드러날 것이다.
실시예
다음의 실시예는 이하에서 "추출물"이라고 하는 조성물을 사용하여 수행되었으며, 상기 "추출물" 조성물은,
- 약 1.6 중량%의 고형물을 함유하는 30 중량%의 아니고잔토스 플라비두스 꽃 또는 줄기의 수성 추출물, 및
- 70 중량%의 글리세롤을 포함한다.
본 발명의 목적상, 이는 "전구체" 조성물이다.
실시예 1: 인간 진피 섬유아세포에 의한 I형 프로콜라겐의 합성에 대한 아니고잔토스 플라비두스 추출물의 효과
- 배경
콜라겐은 피부의 역학적 특성에 매우 관여하는 단백질 군을 구성한다. I형 프로콜라겐은 결합 조직의 주요 성분인 I형 콜라겐의 전구체이다. 나이가 들면, 피부의 콜라겐 함량이 감소하고, 그 결과 주름이나 미세한 라인이 피부에 형성된다.
이 연구의 목적은 아니고잔토스 플라비두스 추출물이 인간 피부 섬유아세포에 의한 프로콜라겐의 합성에 미치는 영향을 밝히는 것이었다.
- 프로토콜
"추출물" 조성물은 0.1% 및 0.05%(v/v)의 농도로 시험하였다. TGF-β를 양성 대조군으로 선택하고 10 ng/ml에서 시험하였다. 음성 대조군은 "추출물" 조성물 또는 TGF-β로 처리하지 않은 세포에 해당한다
섬유아세포를 사람의 진피에서 분리하고, 10%의 소태아혈청, 1%의 항생제(페니실린/스트렙토마이신) 및 1%의 L-글루타민이 보충된 특정 DMEM 배지에서 37℃, 5% CO2 및 95% 습도로 유지하였다.
완전한 DMEM 배지에서 마이크로플레이트당 2.5 x 104 세포를 접종하였다. 세포를 배양기에 24 시간 동안 방치하였다. 이어서, 배양 배지를 무혈청 DMEM으로 대체하였다. 마이크로플레이트를 배양기에서 24 시간 동안 더 방치하여 세포 정지에 도달하였다.
"추출물" 조성물 또는 TGF-β를 원하는 농도로 첨가하였다. 마이크로플레이트를 24 시간 동안 더 배양하였다. 배양의 종료 시점에 상등액을 제거하고ELISA(MK101Z, Ozyme)로 분석하여 I형 프로콜라겐을 정량화하였다.
- 결과
얻어진 결과를 도 1에 나타내었다. 도 1은 처리하지 않은 세포와 비교하여 처리된 세포에서의 I형 프로콜라겐 합성의 활성화 비율을 나타낸다.
"추출물" 조성물 또는 TGF-β로 처리된 섬유아세포는 처리되지 않은 세포보다 많은 양의 I형 프로콜라겐을 생성하였다. I형 콜라겐 합성에 대한 "추출물" 조성물의 효과는 용량 의존적이다. 아니고잔토스 플라비두스 추출물은 진피 섬유아세포에서 I형 프로콜라겐을 자극한다.
실시예 2: 인간 피부 섬유아세포에 의한 테나신-X 합성에 대한 아니고잔토스 플라비두스 추출물의 효과
테나신-X는 세포외기질(ECM)의 탄력 섬유의 구조와 안정성을 모두 조절하는 단백질이다. 또한 콜라겐 섬유의 조직에 관여한다. 테나신-X는 결합 조직의 강도와 탄성에 중요한 역할을 한다. 테나신-X의 유전적 결핍은 엘러스-단로스(Ehlers-Danlos) 증후군으로 알려진 유전병을 일으킬 수 있다.
이 연구의 목적은 인간 피부 섬유아세포에 의한 테나신-X 합성에 대한 "추출물" 조성물의 효과를 밝히는 것이었다.
- 배경
"추출물" 조성은 0.2% 및 0.1%(v/v)에서 시험하였다. 10% 소태아혈청을 양성 대조군으로 사용하였다. 음성 대조군은 추출물 또는 소태아혈청으로 처리하지 않은 세포에 해당한다.
섬유아세포를 인간 복부 진피에서 분리하고, 10%의 소태아혈청, 1%의 항생제(페니실린/스트렙토마이신) 및 1%의 L-글루타민이 보충된 특정 DMEM 배지에서 37℃, 5% CO2 및 95% 습도로 유지하였다.
완전한 DMEM 배지에서 마이크로플레이트당 2.5 x 104 세포를 접종하였다. 세포를 배양기에 24 시간 동안 방치하였다. 이어서, 배양 배지를 무혈청 DMEM으로 대체하였다. 마이크로플레이트를 배양기에서 24 시간 동안 더 방치하여 세포 정지에 도달하였다.
"추출물" 조성물 또는 소태아혈청을 원하는 농도로 첨가하였다. 첨가 후, 세포를 24 시간 동안 더 배양하였다. 배양의 종료 시점에 상등액을 제거하고 ELISA로 분석하여 테나신-X를 정량화하였다. 동시에, 배양의 종료 시점에 세포 용해물에 함유된 단백질을 브래드포드(Bradford)방법으로 정량화하였다.
- 결과
얻어진 결과는 p 값이 0.05 미만인 경우 스튜던트t-검정을 실시하였다. 그 결과를 도 2에 나타내었다. 도 2는 각각의 실험 조건에 대해, 단백질 총량에 대한 백분율로 표시된, 배지 중에 존재하는 테나신-X의 양을 나타낸다. "추출물" 조성물은 음성 대조군(미처리 세포)에 비해 테나신-X의 양을 용량 의존적으로 증가시킨다는 것에 주목해야 한다. 다시 말해서, 아니고잔토스 플라비두스 추출물은 인간 섬유아세포에서 테나신-X를 자극한다.
실시예 3: 인간 각질형성세포에 의한 XVII형 콜라겐 합성에 대한 아니고잔토스 플라비두스 추출물의 효과
XVII형 콜라겐은 표피 부착에 관련된 세포내 및 세포외 성분 간의 결합을 유지하는 데 필수적인 역할을 하는 막관통 단백질이다.
이 연구의 목적은 인간 각질형성세포에 의한 XVII형 콜라겐 합성에 대한 "추출물" 조성물의 효과를 밝히는 것이었다.
- 프로토콜
"추출물" 조성물은 0.4%(v/v)의 농도로 시험하였다. TGF-β를 양성 대조군으로 선택하고 10 ng/ml에서 시험하였다. 음성 대조군은 추출물 또는 TGF-β로 처리하지 않은 세포에 해당한다.
각질형성세포를 인간 상피 세포주에서 분리하고, 10%의 소태아혈청, 1%의 항생제(페니실린/스트렙토마이신) 및 1%의 L-글루타민이 보충된 DMEM에서 37℃, 5% CO2 및 95% 습도로 유지하였다.
완전한 DMEM 배지에서 마이크로플레이트당 5 x 104 세포를 접종하고, 배양기에 24 시간 동안 방치하였다. 이어서, 배양 배지를 1%의 소태아혈청, 1%의 항생제 및 1%의 L- 글루타민을 포함하는 DMEM으로 대체하였다. 마이크로플레이트를 배양기에서 24 시간 더 배양하였다.
배양의 종료 시점에, "추출물" 조성물 또는 TGF-β를 원하는 농도로 첨가하였다. 마이크로플레이트를 24 시간 동안 더 배양하였다.
1/100로 희석된 항-XVII형 콜라겐 항체를 사용하여 XVII형 콜라겐을 검출하고 면역표지에 의해 정량화하였고, 플루오레세인에 결합된 2차 항체로 나타내었다. 형광 강도는 XVII형 콜라겐 발현수준에 해당한다. 이미지는 이미지 J 소프트웨어를 사용하여 처리하였다.
- 결과
형광 측정값을 음성 대조군에 대해 측정된 형광 강도의 측정값에 대해 표준화하였다. "추출물" 조성물로 배양된 세포에 대한 형광 강도의 + 27%의 증가를 관찰하였고, 이는 처리되지 않은 세포와 비교하여 XVII형 콜라겐 발현의 증가를 보여준다. TGF-β(양성 대조군)를 사용한 배양은 음성 대조군에 비해 형광 신호의 257% 증가를 가져왔다.
요약하면, 아니고잔토스 플라비두스 추출물은 인간 각질형성세포에 의한 XVII형 콜라겐 합성을 자극한다.
실시예 4: 추출물의 수축 효과 평가: 주름의 바닥으로부터의 섬유아세포에 의해 생성된 수축력의 정량화 및 α-SM 액틴의 정량화
GlasBoxPlusTM 시스템을 사용하면, 주름의 바닥으로부터의 섬유아세포에서 수득한 피부 "등가물"에 대한 화장료 활성제의 수축 효과를 정량화할 수 있다. 주름의 바닥으로부터의 섬유아세포는 인접한 주름지지 않은 피부에 비해 수축력이 덜 생긴다. 또한, GlasBoxPlusTM 시스템에서 수축력 측정 후 피부 등가물에서 α-SM 액틴의 면역표지를 수행할 수 있다. 이 연구의 목적은 추출물이 섬유아세포 수축력에 미치는 영향과 세포의 가소성, 이동성 및 운동성에 관여하는 α-SM 액틴의 합성에 미치는 영향을 증명하기 위한 것이었다.
- 프로토콜
- 섬유아세포 배양
주름지지 않은 피부 높이에서 그리고 주름 내에서 주름 제거 수술(수술 폐기물: 63 세 여성)로부터 2 mm 직경의 생검을 채취하였다.
종래의 외식(explantation)기술을 사용하여 건강한 피부(HF)와 주름의 바닥(BW)에서 섬유아세포를 추출하였다. 외식편을 10%의 소태아혈청(FCS), 40 mg/l의 겐타마이신 및 2 mg/l의 펀지존(fungizone)이 보충된 둘베코 수정 이글 배지(Dulbecco's modified Eagle's medium)에서 37℃, 습한 환경 및 5% CO2의 존재 하에 배양하였다. 서서히(약 10일 동안에 걸쳐), 섬유아세포는 외식편의 외부로 이동하였다. 배양 배지는 일주일에 두 번 교체하였다. 섬유아세포가 충분한 양으로 존재할 때, 이들은 트립신-EDTA의 작용 하에 분리되고, 계대 배양되며 동일한 배양 조건 하에서 증폭된다.
- GlasBox PlusTM 시스템 및 수축력 측정
피부 등가물은 여덟 개의 직사각형 셀 구성된 배양 접시에서 성장한다. 각각 하나에 두 개의 유연한 슬라이드가 배치되고, 이들의 하부는 피부 등가물이 중합될 때 부착되는 그리드로 구성된다. 피부 등가물은 두 개의 슬라이드 사이에서 성장하여 중앙이 약간 쪼그라든 직사각형을 형성한다. 종래의 역학에서 이러한 형상은 "디아볼로(diabolo)" 형상이라 한다.
섬유아세포에 의해 발생한 수축력의 영향 하에 슬라이드가 왜곡된다. 이들의 왜곡은 광섬유를 통해 측정된다. 이 왜곡은 피부 등가물 내에서 발생된 힘에 비례한다. 측정은 PC 수집 카드와 적절한 소프트웨어를 사용하여 실시간으로 수행된다.
포화상태에서, 단층 배양된 섬유아세포는 트립신 처리된 후, 말라세즈(Malassez) 슬라이드를 사용하여 계수하여 세포 현탁액을 8 x 105 세포/ml가 되게 하였다. 6배 부피의 1.76X 배지(DMEMc, NaHCO3, NaOH, 항생제, FCS), 1배 부피의 래트 꼬리 I형 콜라겐 (2mg/ml) 및 1배 부피의 세포 현탁액(8 x 105 세포/ml)를 혼합하여 피부 등가물 생성 배지를 제조하였다.
혼합물을 GlasBoxPlusTM의 직사각형 셀에 부었다. 겔은 37℃에서 몇 분 내에 형성되었다. "추출물" 조성물(배지 중 최종 농도: 0.1% 및 0.2%(V/V)) 또는 TGF-β1(양성 대조군)을 함유하는 다양한 배양 배지 또는 조성물이 없는 배양 배지(음성 대조군)를 첨가하고, 등장력(isometric force)을 24 시간 동안 측정하였다.
- α-SM 액틴의 표지
α-SM 액틴 섬유의 면역표지는 항-α-SM 액틴 마우스 단일클론 항체의 사용을 통해 수행하였다. FITC에 결합된 항-마우스 2차 항체는 면역표지를 수행하고 탐색하는 것을 가능하게 한다. 핵은 훼히스트(Hoechst) 염료로 염색하였다. 관찰은 488 nm에서의 공초점 현미경 및 705 nm에서의 2-광자 여기 현미경에 의해 수행하였다.
피부 등가물 조각은 5 mm 직경의 생검 펀치를 사용하여 수득하였다. 피부 등가물은 차가운 아세톤에 넣어서 투과시켰다. PBS로 세척한 후, 과산화수소 수용액을 첨가하여 내인성 퍼옥시다제를 제거하였다. PBS로 세척한 후, 피부 등가물을 글리신 용액에 넣어 고정제의 알데하이드기로 인한 배경 잡음을 제거하였다. 그리고 나서, 2차 항체로 인한 비특이적 결합을 차단할 수 있는 차단 용액에 피부 등가물을 넣었다. 조직을 1차 항체 내에 밤새 방치하였다. PBS로 세척한 후, 2 차 항체를 첨가하였다. 1시간 배양하고 PBS로 세척한 후, 핵을 훼히스트 염료로 10 분 동안 염색하였다.
PBS로 세척한 후, 피부 등가물을 Eukitt에 의해 슬라이드와 커버 슬립 사이에 장착하였다. 슬라이드를 x40 배에서 공초점 현미경(Zeiss LSM510 NLO)으로 관찰하고 사진을 찍었다.
- 통계 분석
수축력에 대한 연구를 위해, 이원 분산 분석을 수행하였고, 필요한 경우 피셔 검증(Fisher test)을 수행하였다. 유의성은 p<0.05일 때만 유지하였다. 곡선하 면적(AUC)은 기울기(수축률)와 최대 수축률로 계산하였으며, 이들 모두는 GraphPad Prism® 5 소프트웨어로 계산하였다. 이들 데이터에 대해 일원 분산 변이 분석을 수행하였고, 필요한 경우 피셔 검증을 수행하였다. 유의성은 p<0.05일 때만 유지하였다.
- 결과
주름(BW)의 바닥에서 섬유아세포에 의해 생성된 수축력은 건강한 섬유아세포(HF)에 의해 생성된 수축력에 비해 현저히 작다. AUC(시간의 경과에 따른 수축력을 나타내는 곡선하 면적) 및 최대 수축이 HF 섬유아세포에 비해 BW 섬유아세포에 대해 유의하게 감소되는 것이 관찰되었다(데이터는 도시되지 않음). TGF-β1을 이용한 섬유아세포의 배양은 BW 섬유아세포 및 HF 섬유아세포 모두에서 AUC 및 최대 수축력에서 유의한 증가를 유도한다.
"추출물" 조성물을 이용한 배양은 BW 섬유아세포 군의 수축력을 크게 증가시키고; 최대 수축력과 AUC가 크게 증가한다. 이러한 결과는 도 3A, 3B 및 3C에 예시되어 있다. "추출물" 조성물은 또한 HF 섬유아세포에서 수축력을 전반적으로 증가시키지만 관찰된 증가는 BW 섬유아세포에서 얻은 것보다 작다. 면역표지 실험은 "추출물" 조성물이 BW 섬유아세포에 의한 α-SM 액틴의 발현을 자극한다는 것을 증명한다(도 4 참조).
아니고잔토스 플라비두스 추출물은 주름진 피부로부터 섬유아세포의 수축력을 상당히 그리고 분명히 자극한다. 따라서, 노화 피부 또는 나이든 피부에 수축 및 리프팅 효과를 발휘한다.
실시예 5: 추출물의 즉각적인 물리적 수축 효과 평가
GlasBoxPlusTM 시스템을 사용하면, 생성된 수축력을 측정하여 비세포성 피부 등가물에 대한 추출물의 즉각적인 수축 효과를 정량화할 수도 있었다.
- 프로토콜
- GlasBox PlusTM 시스템 및 수축력 측정
비세포성 피부 등가물은 여덟 개의 직사각형 세포로 구성된 배양 접시에서 중합한다. 각각 하나에 두 개의 유연한 슬라이드가 배치되고, 이들의 하부는 비세포성 피부 등가물이 중합될 때 부착되는 그리드로 구성된다. 추출물의 존재 또는 부재 하에 콜라겐 겔의 중합은 슬라이드의 왜곡을 유발하는 힘을 생성한다. 이 왜곡은 광섬유를 통해 측정된다. 이는 비세포성 피부 등가물 내에서 발생하는 힘에 비례한다.
6배 부피의 1.76X 배지(DMEMc, NaHCO3, NaOH, 항생제, FCS), 3배 부피의 래트 꼬리 I형 콜라겐(2mg/ml) 및 1배 부피의 DMEMc을 혼합하여 피부 등가물 생성 배지를 제조하였다.
혼합물을 GlasBoxPlusTM의 직사각형 셀에 부었다. 겔은 37℃에서 몇 분 내에 형성되었다. "추출물" 조성물(배지 중 최종 농도: 0.2%(V/V))을 함유하는 다양한 배양 배지 또는 조성물이 없는 배양 배지(음성 대조군)를 첨가하고 등장력을 24 시간 동안 측정하였다.
- 통계 분석
수축력에 대한 연구를 위해 이원 분산 분석을 수행하였고, 필요한 경우 피셔 검증(p <0.05)을 수행하였다.
GraphPad Prism®5 소프트웨어를 사용하여 곡선하 면적(AUC), 기울기(수축률) 및 최대 수축률을 계산하였다. 이들 데이터에 대해 일원 분산 변이 분석을 수행하였고, 필요한 경우 피셔 검증(p <0.05)를 수행하였다.
- 결과
수축력은 "추출물"의 존재 하에 대조군에 비해 0.2% 정도 유의하게 증가한다. 이 증가는 측정 시작 후 1 시간 30 분에 유의하며 0.2%의 추출물의 존재 하에 적어도 11 시간까지 증가한다(도 5A 및 도 5B). 또한, AUC(시간의 경과에 따른 수축력을 나타내는 곡선하 면적) 및 최대 수축이 추출물로 처리하지 않은 대조군에 비해 본 발명에 따른 추출물로 처리한 군에 대해 유의하게 증가되는 것이 관찰되었다.
아니고잔토스 플라비두스 추출물은 비세포성 피부 등가물의 수축력을 상당히 그리고 분명히 자극한다. 본 발명에 따른 아니고잔토스 플라비두스 추출물은 따라서 즉각적인, 수렴성의, 수축 및 리프팅의 물리적 효과를 발휘하고 따라서 노화 피부에 즉각적인 수축 효과를 발휘하도록 사용될 수 있다.
실시예 6: 추출물을 함유하는 화장료 조성물의 예
- 2%의 "추출물" 조성물을 포함하는 노화 방지 크림(크림 B)
Figure pct00001
크림 B의 노화 방지 특성은 실시예 7에 제시된 임상 시험에서 평가하였다.
- 2%의 "추출물" 조성물을 포함하는 노화 방지 세럼
Figure pct00002
- "추출물" 조성물의 2%를 포함하는 노화 방지 크림
Figure pct00003
실시예 7: 추출물의 주름 방지 효과에 대한 임상적 평가
시험된 크림:
- 크림B: 2%의 "추출물" 조성물을 함유(실시예 5 참조).
- 크림 A: "추출물" 조성물의 2%가 2%의 탈이온수로 대체되었다는 점을 제외하고 크림 B와 동일한 조성을 갖는 위약 크림.
- 프로토콜
크림 A 제품(위약 크림)의 용도에 대한 시험은 다음의 프로토콜에 따라 2%의 "추출물" 조성물을 함유하는 크림 B 제품과 비교하여 수행하였다:
42 명의 지원자가 본 연구에 블라인드로 포함되어 전용 프로그램에 의해 확립된 무작위 추출 목록에 따라 두 그룹으로 분류되었다:
- 크림 A를 받은 그룹 A: 모든 유형의 피부를 갖고, 이 중 민감한 피부가 57%이고, 피부 포토타입 II 내지 IV를 갖는 45 세에서 69 세의 21 명의 여성(평균 연령: 56.4 세).
- 크림 B를 받은 그룹 B: 모든 유형의 피부를 갖고, 이 중 민감한 피부가 48%이고, 피부 포토타입 II 내지 IV를 갖는 46 세에서 77세의 21 명의 여성(평균 연령: 60.8 세).
제품은 실험실에서 지원자들에게 처음 도포되었다. 다음 도포는 하루 두 번 지원자의 집에서 자발적으로 실시되었다. 첫 번째 도포 후 T+1 시간: 제품을 제거한 후 해당 부위에 대한 피부과 전문의의 피부 파라미터 평가에 의해 제품의 내성 평가를 수행하였다. T+7 일: 사용 7 일 후 해당 부위에 대한 피부 파라미터의 평가(전화 연락)에 의해 제품의 내성 평가를 수행하였다. T+28 일: 시험 28일 후 피부 파라미터의 평가에 따라 피부과 전문의에 의해 제품의 내성 평가를 수행하였다. 전용 설문지를 통해 제품의 품질에 대한 지원자들의 자체 평가를 수행하였다.
또한, 눈가 주름의 평균 깊이에 대해 제품의 효능에 대한 평가를 수행하였다.
효능 측정은 T0, T1h(즉, 적용 후 1 시간) 및 T28(즉, 시험된 제품의 적용 후 28일)에 수행하였다. 1h에서의 측정한 결과, 추출물의 즉각적인 수축 효과를 평가할 수 있었다. T28에서의 측정 결과, 추출물의 노화 방지 효과, 특히 장기간의 주름 방지 효과를 평가할 수 있었다. 주름 깊이의 평가는 LifeViz Micro™ 시스템(Quantificare)을 사용하여 피부 표면의 굴곡을 정량화함으로써 수행하였다. LifeViz Micro™는 해당 피부 부위에 대한 구조광(structured light) 투사를 기반으로 한 비접촉식 측정 방법이다.
- 결과
크림 B는 시험 동안 환자들에게 내성이 좋았다.
아니고잔토스 플라비두스 추출물을 함유한 크림으로 처리한 피부는, 크림 A(위약 크림)로 처리한 피부(도 6)에 비해, 적용 28 일 이후 유의한 10%의 주름 깊이 감소를 나타냈다. 5%의 주름 깊이의 감소는 크림 B를 적용한 지 1 시간 후에 볼 수 있으며, 이는 본 발명에 따른 추출물의 즉각적인 수축 효과를 분명히 보여준다(도6).

Claims (13)

  1. 노화 방지제로서의 아니고잔토스 플라비두스(Anigozanthos flavidus) 추출물의 화장료 용도.
  2. 피부에 대한 주름 방지, 스무딩(smoothing), 토닝(toning), 재구조화(restructuring), 또는 재형성(remodeling) 제제로서의 아니고잔토스 플라비두스 추출물의 화장료 용도.
  3. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
    아니고잔토스 플라비두스 추출물은 피부 노화의 하나 이상의 징후를 예방, 지연 및/또는 치료하기 위한 화장료 조성물에 활성제로서 존재하는, 아니고잔토스 플라비두스 추출물의 화장료 용도.
  4. 제 3 항에 있어서,
    피부 노화의 징후(들)는 피부, 특히 입술과 눈꺼풀에서의 미세 라인 및/또는 주름의 출현, 피부, 특히 목에서의 위축 또는 처짐, 피부 밀도의 손실, 피부 견고성의 손실, 피부 긴장성의 손실, 피부 탄력의 손실, 피부 수축성의 손실, 피부 유지력의 손실, 피부 처짐, 피부의 매끄러운 외관의 변화, 피부 거칠기의 증가 및 얼굴 윤곽의 변화로 이루어진 군에서 선택되는, 아니고잔토스 플라비두스 추출물의 화장료 용도.
  5. 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서,
    아니고잔토스 플라비두스 추출물은 아니고잔토스 플라비두스의 지상부, 예를 들어 꽃, 잎, 줄기 및 이들의 조합으로부터 수득되는, 아니고잔토스 플라비두스 추출물의 화장료 용도.
  6. 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서,
    아니고잔토스 플라비두스 추출물은 극성 용매를 사용하는 추출에 의해 수득되는, 아니고잔토스 플라비두스 추출물의 화장료 용도.
  7. 제 3 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서,
    화장료 조성물은 바람직하게 비타민, 선 필터(sun filter) 및 선스크린(sunscreen), 노화 또는 주름 방지제, 산화 방지제, 리프팅제(lifting agent), 퍼밍제(firming agent), 반점 방지제, 홍조 방지제, 슬리밍제(slimming agent), 탈수제, 보습제, 진정제, 스크러빙(scrubbing) 또는 박피제(exfoliating agent), 소광제(matting agent), 피지 조절제, 라이트닝(lightening) 활성제, 셀프-태닝(self-tanning) 활성제, 태닝 촉진제 및 이들의 조합으로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 추가 화장제를 또한 포함하는, 아니고잔토스 플라비두스 추출물의 화장료 용도.
  8. 제 3 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 있어서,
    화장료 조성물은 수용액, 수성-알코올성 용액, 수중유(O/W) 또는 유중수(W/O) 또는 다중(삼중: W/O/W또는 O/W/O) 에멀젼, 나노에멀젼(nanoemulsion), 특히 100 nm 미만의 액적 크기를 갖는 O/W 나노에멀젼, 소구체(spherule)에 의한 수성상 중의 지방상의 수성 겔 또는 분산액, 현탁액, 바람직하게는 수성 또는 수성-알코올성 배지 내의 현탁액, 리포좀 현탁액, 분말, 로션, 우유, 크림, 고약, 겔, 폼 및 연고로 이루어진 군에서 선택되는, 아니고잔토스 플라비두스 추출물의 화장료 용도.
  9. 제 3 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 있어서,
    화장료 조성물은 화장품, 메이크업 제품 또는 신체 위생 제품, 예를 들어 로션, 우유, 세럼, 수성 또는 유성 겔, 에멀젼, 크림, 특히 데이 크림(day cream) 또는 나이트 크림(night cream), 크림-겔, 스킨케어 워터, 연고, 밤(balm), 파운데이션, 스프레이, 아이섀도우, 스틱, 립스틱, 글로스, 립밤, 폼, 탈취제, 영양 마스크, 샤워 젤, 및 박피 또는 스크러빙 제품에서 선택되는, 아니고잔토스 플라비두스 추출물의 화장료 용도.
  10. 노화의 징후의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 화장료 조성물로서, 상기 조성물은 특히 제 5 항 또는 제 6 항에서 정의한 아니고잔토스 플라비두스 추출물 및 하나 이상의 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는, 노화의 징후의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 화장료 조성물.
  11. 화장료 조성물의 제조를 위한 조성물로서, 조성물은,
    - 10중량% 내지 50 중량%, 바람직하게는 20중량% 내지 40중량%의 아니고잔토스 플라비두스 추출물,
    - 바람직하게는 수성 용매, 유기 용매, 바람직하게는 에탄올, 프로판디올, 부틸렌 글리콜, 글리세롤 또는 이소프로판올과 같은 저급 알코올, 친유성제 및 이들의 혼합물에서 선택되는 50 중량% 내지 90중량%, 바람직하게는 60중량% 내지 80중량%의 담체, 및
    - 선택적으로, 바람직하게는 pH 조절제, 산화 방지제, 보존제, 안정화제, 벡터화제, 증점제, 유화제, 친수성 또는 친유성 겔화제, 향료, 광물유 또는 유기 오일 및 이들의 조합에서 선택되는 0.1중량% 내지 30중량%의 화장용으로 허용되는 추가 부형제를 포함하는 화장료 조성물의 제조를 위한 조성물.
  12. 제 11 항에 있어서,
    20중량% 내지 40중량%의 아니고잔토스 플라비두스 액체추출물, 및
    60중량% 내지 80중량%의 글리세롤을 포함하는 화장료 조성물의 제조를 위한 조성물.
  13. 제 10 항에 따른 화장료 조성물을 제조하기 위한 공정으로서, 공정은 제 11 항 또는 제 12 항에서 정의한 조성물을 하나 이상의 화장용으로 허용되는 부형제 및/또는 화장 효과를 갖는 하나 이상의 추가 활성제와 혼합하는 단계를 포함하는 화장료 조성물을 제조하기 위한 공정.
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