CN114224803B - 一种提升真皮胶原蛋白质量与维护成纤维细胞形态的抗衰老组合及其应用 - Google Patents
一种提升真皮胶原蛋白质量与维护成纤维细胞形态的抗衰老组合及其应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开一种组合物及其制备方法和用途。所述组合物含有组分(a)、组分(b)、组分(c)和组分(d);所述组分(a)为大豆水解物,组分(b)为红毛丹叶提取物,组分(c)为袋鼠爪提取物,组分(d)中含有假叶树根提取物和七叶树皂苷。
Description
技术领域
本发明涉及日用化工领域,尤其涉及一种提升真皮层胶原蛋白质量与维护成纤维细胞形态的抗衰老组合及应用。
背景技术
皮肤的衰老与真皮层的胞外基质息息相关。胶原蛋白纤维是胞外基质中重要的组分,占皮肤干重的75%,并为皮肤提供韧性与弹力。胞外基质的变化是皮肤衰老的重要原因,年老的皮肤中胶原蛋白纤维的粗细变得不均,结构更加紊乱,同时胶原蛋白本身的完整度也被基质金属蛋白酶破坏。成纤维细胞位于真皮层胞外基质形成的网络当中。成纤维细胞也是负责合成胞外基质的细胞。年轻的成纤维细胞与胞外基质连接,通过这样的方式控制机械力并维持狭长的形态。而年老的成纤维细胞与胞外基质的连接减少,其尺寸变小,形态不再狭长。这样形态的变化,使得年老的成纤维细胞产生更多氧化压力,并且生产新胞外基质的能力也衰减。综合而言,胞外基质构成了真皮层成纤维细胞生存的微环境,而成纤维细胞又具有调控胞外基质的能力,二者相互依存,相互影响。
类视黄醇是皮肤抗老的黄金标杆,它具有改善真皮层老化的能力。类视黄醇包含了视黄酸,视黄醛,视黄醇(也称维生素A)和视黄醇衍生物等。类视黄醇可以增加胶原蛋白的合成,减少UV诱导的MMP-3的产生。人体实验中,类视黄醇减少了皮肤皱纹,改善皮肤粗糙。然而,类视黄醇具有很强刺激性,常引发皮肤不适,并且会破坏皮肤屏障;这种反应比较高发,也被称为“类视黄醇反应”(Retinoid reaction)。
现有技术具有不少促进胶原蛋白合成的,专利CN 103167865 B中提及了柏科侧柏属植物种子提取物具有促进胶原蛋白合成和成纤维细胞增殖的作用;专利CN 1921823 A中公开了一种酵母水解物具有促进成胶原蛋白合成的作用。然而在这些专利中,都没有提及新合成的胶原蛋白的质量如何,也没提及成纤维细胞的形态是否完整。
目前有很多促进胶原蛋白合成的技术,但是缺乏促进完整有序且高质量的胶原蛋白合成的技术;也缺乏对于成纤维细胞形态保护的技术,尤其是在UV压力条件下依然能保护成纤维细胞的技术;更没有同时修护真皮层胶原蛋白质量和成纤维细胞形态,以此达到真皮层年轻度的技术;另外本领域期待在功效方面能够媲美视黄醇,但不引发皮肤刺激且不破坏皮肤屏障的组合。
发明内容
本发明旨在提供一种能够促进完整有序且高质量的胶原蛋白合成,以及保护成纤维细胞形态的组合物。
在本发明的第一方面,提供一种组合物,所述组合物含有组分(a)、组分(b)、组分(c)和组分(d);
所述组分(a)为大豆水解物,组分(b)为红毛丹叶提取物,组分(c)为袋鼠爪提取物,组分(d)中含有假叶树根提取物和七叶树皂苷。
在另一实施方式中,以组合物的总质量计,其中含有:
25-50wt%组分(a)
4-5wt%组分(b)
15-50wt%组分(c)和
0.5-50wt%组分(d)。
在另一实施方式中,以组合物的总质量计,其中含有:
45-50wt%组分(a)
4-5wt%组分(b)
45-50wt%组分(c)和
0.5-1.0wt%组分(d)。
在另一实施方式中,以组合物的总质量计,其中含有:
25-30wt%组分(a)
4-5wt%组分(b)
15-20wt%组分(c)和
45-50wt%组分(d)。
在另一实施方式中,所述组分(a)为来自Silab公司的商品名为的产品,所述组分(b)为来自BASF公司的商品名为NephoriaTM的产品,所述组分(c)为来自Lucas Meyer公司的商品名为SKINecturaTM的产品,所述组分(d)为来自BASF公司的商品名为/>LS 9832的产品。
在本发明的第二方面,提供一种如上所述的本发明提供的组合物的制备方法,所述方法包括步骤:将组分(a)、组分(b)、组分(c)和组分(d)混合,得到如上所述的本发明提供的组合物。
在本发明的第三方面,提供一种如上所述的本发明提供的组合物的用途,所述组合物用作化妆品或个人洗护产品;或用于制备化妆品或个人洗护产品。
在另一实施方式中,所述组合物用作促进产生高质量胶原蛋白化妆品或个人洗护产品;或用于制备促进产生高质量胶原蛋白化妆品或个人洗护产品。
在另一实施方式中,所述组合物用作维护成纤维细胞的密度与形态化妆品或个人洗护产品;或用于制备维护成纤维细胞的密度与形态化妆品或个人洗护产品。
在本发明的第四方面,提供一种化妆品或个人洗护产品,所述化妆品或个人洗护产品包括如上所述的本发明提供的组合物和化妆品上可接受的载体。
据此,本发明提供了在功效方面能够媲美视黄醇,但不引发皮肤刺激且不破坏皮肤屏障的组合。
附图说明
图1显示本发明实施例1所获得的促进真皮层产生强韧完整的高质量胶原蛋白的情况;其中,
A是在重建真皮层模型上涂抹了培养基的情况(本发明组合物的对照),B是在重建真皮层模型上涂抹了溶于培养基中的本发明组合物的情况;
C是在重建真皮层模型上涂抹了DMSO的情况(视黄醇的对照),D是在重建真皮层模型上涂抹了溶于DMSO中的视黄醇(10μM)的情况。
图2显示本发明实施例1所获得的促进真皮层产生强韧完整的高质量胶原蛋白的数量变化情况;纵坐标是量化后的高质量胶原蛋白的数量。
图3显示本发明实施例2所获得的在紫外线照射下,成纤维细胞状况;其中,
A是空白对照组的情况,B是阴性对照组的情况,C是样品组情况,D是阳性对照组情况。
图4显示年轻及老化皮肤中的胶原蛋白纤维情况;其中,
a和b显示年轻皮肤中的胶原蛋白纤维;c和d显示老化后断裂的胶原蛋白纤维。
具体实施方式
发明人经过广泛而深入的研究,意外地发现了一种组合,该组合能够诱导真皮层生成新的、完整有序的高质量胶原蛋白,还能通过提升胶原蛋白的自组装与合理的空间结构来提升胞外间质的健康程度,在此基础上通过维护真皮层中的血管健康,长久维持胞外基质的完整性。在胞外间质完好的基础上,提升成纤维细胞的健康,即丰富的密度与狭长的形态,并确保及时在UV压力作用下,成纤维细胞依然能够维持其健康。在此基础上,完成了本发明。
在本发明中,“大豆水解物”、“大豆纤维水解物”、“水解大豆细粉”和组分(a)可以互换使用,都是指一种以大豆纤维为原料而获得的水解产物,其中含羟脯氨酸糖蛋白(HRGP)的糖肽。在本发明的一种实施方式中,使用Silab的水解大豆细粉(商品名:)作为本发明提供的组合物中的组分(a)。
本发明中,“红毛丹(Nephelium lappaceum L.)”是无患子科韶子属大型热带果树。
本发明中“红毛丹叶提取物”和组分(b)可以互换使用。在本发明的一种实施方式中,使用BASF的红毛丹叶提取物(商品名:NephoriaTM)作为本发明组合物中的组分(b)。
本发明中,“袋鼠爪”是血皮草科(Haemodoraceae),鼠爪花属(Anigozanthos)植物。本发明使用其提取物,本发明中“袋鼠爪提取物”和组分(c)可以互换使用。在本发明的一种实施方式中,使用Lucas Meyer的袋鼠爪提取物(商品名:SKINecturaTM)作为本发明组合物的组分(c)。
本发明中,“假叶树(Ruscusaculeata L.)”是百合科假叶树属灌木。本发明使用含有假叶树有效部位根的提取物和结构如式Ⅱ所示的七叶皂苷的混合物:
本发明中“假叶树根提取物和七叶树皂苷”、“含有假叶树根提取物和七叶树皂苷的混合物”和组分(d)可以互换使用。在本发明的一种实施方式中,使用BASF的LS 9832作为本发明组合物的组分(d)。
在本发明中,“高质量胶原蛋白”是指真皮层形态完整,非断裂碎片化的胶原蛋白纤维。如(“Protection of skin biological targets by different types ofsunscreens”Fourtanier A,Bernerd F,Bouillon C,et al.Protection of skinbiological targets by different types of sunscreens[J].Photodermatology,photoimmunology&photomedicine,2006,22(1):22-32.)的记载,年轻健康的胶原蛋白纤维有序排列(即高质量的胶原蛋白)(见图4的a和b,该图来自上述文献);而老化皮肤的胶原蛋白,胶原蛋白纤维本身形态粗细不均,而且排列散乱(非高质量的胶原蛋白)(见图4的c和d,该图来自上述文献)。本发明的组合物可促进真皮层产生完整、非碎片化的高质量胶原蛋白。
本发明使用了二次谐波生成(Second Harmonic Generation,SHG)显微成像研究真皮层中的胶原蛋白。SHG显微镜可以显示出形态完整,非碎片化的胶原蛋白纤维(“Frommolecular structure to tissue architecture:collagen organization probed bySHG microscopy”Cicchi R,Vogler N,Kapsokalyvas D,et al.From molecularstructure to tissue architecture:collagen organization probed by SHGmicroscopy[J].Journal of biophotonics,2013,6(2):129-142.),因此用于表征本发明中所提及的“强韧完整的高质量胶原蛋白”。而形态紊乱不完整的胶原蛋白则无法在该显微镜下出现。
视黄醇具有优异的皮肤抗老效果,其作用机理包括促进胶原蛋白数量的生成(“Retinoic acid ameliorates photoaged skin through RAR-mediated pathway inmice”Li Z,Niu X,Xiao S,et al.Retinoic acid ameliorates photoaged skin throughRAR-mediated pathway in mice[J].Molecular medicine reports,2017,16(5):6240-6247.)。本发明中将视黄醇作为阳性对照。
在本发明中,“成纤维细胞密度与形态”是指每单位面积内成纤维细胞的数量(密度);正常的成纤维细胞形态是狭长,纺锤状的,当紫外线照射后,成纤维细胞会失去狭长,纺锤装的形态,变得更小更圆。(Shin,Jung-Won,et al."Molecular mechanisms ofdermal aging and antiaging approaches."International journal of molecularsciences 20.9(2019):2126.)本发明的组合物可在紫外线照射下维护成纤维细胞良好的密度与形态。
“组合物(composition)”是指当施用于个体(一般指人)时,能够促进真皮层产生强韧完整的高质量胶原蛋白和/或在紫外线照射下,维护成纤维细胞良好的密度与形态的一种组合物。
如本文所用,术语“化妆品学上可接受的载体”指使化妆品或个人洗护产品可施用的载体,包括各种赋形剂和稀释剂,它们本身并不是必要的活性成分,且施用后没有过分的毒性。合适的载体是本领域普通技术人员所熟知的。在化妆品卫生规范2015版中可找到关于化妆品学上可接受的赋形剂的充分讨论。在组合物中这类载体可包括保湿剂、乳化剂、增稠剂、螯合剂、润肤剂等。例如但不限于,丁二醇、甘油、甜菜碱、透明质酸钠、丙二醇、甘油硬脂酸酯/PEG-100硬脂酸酯、甘油硬脂酸酯、黄原胶、羟乙基纤维素、卡波姆、EDTA二钠、异构十六烷、棕榈酸异辛酯、十六十八醇、鲸蜡硬脂醇、聚二甲基硅氧烷等。
“施用”一词在此是指直接施用所述的组合物,而可在施用个体皮肤上形成该组合物的一相当用量者。
本文中使用“个体”或“个人”等词,是指可接受所述组合物和/或方法用于皮肤上的人。
本发明提供的组合物中包括组分(a)、组分(b)、组分(c)和组分(d),以组合物的总重量计,其中组分(a)+组分(b)+组分(c)+组分(d)的量为0.1-100wt%,例如但不限于,0.3-100wt%、0.2-2.1wt%、98-100wt%等。
在本发明的一种实施方式中,以提供的组合物的总重量计,其中包括25-50wt%的组分(a)、4-5wt%的组分(b)、15-50wt%的组分(c)和0.5-50wt%的组分(d)。
在本发明的一种实施方式中,提供一种促进真皮层产生强韧完整的高质量胶原蛋白的组合物,以所提供的组合物的总重量计,其中包括的组分(a)为45-50wt%、组分(b)为4-5wt%、组分(c)为45-50wt%、组分(d)为0.5-1.0wt%。
在本发明的一种实施方式中,提供一种能维护紫外线照射情况下成纤维细胞的良好密度与形态的组合物,以所提供的组合物的总重量计,其中包括的组分(a)为25-30wt%、组分(b)为4-5wt%、组分(c)为15-20wt%、组分(d)为45-50wt%。
可以将本发明提供的组合物与化妆品学上可接受的载体混合,得到各种可施用于人皮肤的化妆品或个人洗护产品,包括但不限于,隔离霜、防晒霜、面霜、眼霜、乳液、精华液、化妆水等。
虽然用以界定本发明较广范围的数值范围与参数皆是约略的数值,此处已尽可能精确地呈现具体实施例中的相关数值。然而,任何数值本质上不可避免地含有因个别测试方法所致的标准偏差。在此处,“约”通常是指实际数值在一特定数值或范围的正负10%、5%、1%或0.5%之内。或者是,“约”一词代表实际数值落在平均值的可接受标准误差之内,视本领域技术人员的考虑而定。除了实验例之外,或除非另有明确的说明,当可理解此处所用的所有范围、数量、数值与百分比(例如用以描述材料用量、时间长短、温度、操作条件、数量比例及其它相似者)均经过“约”的修饰。因此,除非另有相反的说明,本说明书与附随权利要求书所揭示的数值参数皆为约略的数值,且可视需求而更动。至少应将这些数值参数理解为所指出的有效位数与套用一般进位法所得到的数值。
除非本说明书另有定义,此处所用的科学与技术词汇的含义与本领域技术人员所理解与惯用的意义相同。此外,在不和上下文冲突的情形下,本说明书所用的单数名词涵盖该名词的复数型;而所用的复数名词时亦涵盖该名词的单数型。
本发明提到的上述特征,或实施例提到的特征可以任意组合。本案说明书所揭示的所有特征可与任何组合物形式并用,只要这些特征的组合不存在矛盾,所有可能的组合都应当认为是本说明书记载的范围。说明书中所揭示的各个特征,可以任何可提供相同、均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特别说明,所揭示的特征仅为均等或相似特征的一般性例子。
本文描述和公开的理论或机制,无论是对或错,均不应以任何方式限制本发明的范围,即本发明内容可以在不为任何特定的理论或机制所限制的情况下实施。
本发明的主要优点在于:
1、本发明提供的组合物具有促进真皮层产生强韧完整的高质量胶原蛋白的作用。
2、本发明提供的组合物具有在紫外线照射下,维护情况成纤维细胞良好的密度与形态的作用。
下面结合具体实施例,进一步阐述本发明。应理解,这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法,通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明,否则所有的百分数、比率、比例、或份数按重量计。本发明中的重量体积百分比中的单位是本领域技术人员所熟知的,例如是指在100毫升的溶液中溶质的重量。除非另行定义,文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外,任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。
实施例1
1.重建真皮层模型+施药
将人体原代成纤维细胞(来自18岁女性的皮肤成纤维细胞)在基质(MimediscTM)上培养35天,每两天更换一次培养基,用于培养重建真皮层模型;在第36天,将溶于二甲亚砜(DMSO)的视黄醇(10μM)或溶于培养基(即上述用于培养原代成纤维细胞的基质)的本发明组合物(以培养基的总重量计,其中含有该组合物0.318%)连续8天分别涂抹于重建真皮层模型上。
在本发明组合物溶于培养基后,以培养基的总重量计,组分(a)的浓度为0.15%,组分(b)的浓度为0.015%,组分(c)的浓度为0.15%,组分(d)的浓度为0.003%。
组分(a)是Silab的水解大豆细粉(商品名:),组分(b)是BASF的红毛丹叶提取物(商品名:NephoriaTM),组分(c)是Lucas Meyer的袋鼠爪提取物(商品名:SKINecturaTM),组分(d)是BASF的/>LS 9832。
2.分析高质量胶原蛋白纤维
使用SHG(Second Harmonic Generation)与Multiphoton Autofluorescence(LSM780 NLO,Zeiss,Jena Germany)技术对真皮层模型进行扫描,借助NDD(nondescanneddetection)捕捉发光信号,以检测高质量形态完整的胶原蛋白纤维。
多光子显微镜(LSM780 NLO,Zeiss,Jena Germany.)中的双光子激发态荧光(TPEF)与二次谐波显微镜(SHG)搭配了激光扫描共聚焦显微镜用以获得真皮层组织照片。使用的激光器为飞秒钛:蓝宝石(Ti;Sa)(Chameleon Ultra II,Coherent,Santa Clara,CA,USA));真皮纤维中,使用多光子激发态的波长为790nm(功率7%),反射光的信号使用NDD(Non-descanned detection)探测器收集。
3.结果
见图1和2
使用SHG显微镜结合多光子自荧光技术观察到,本发明提供的组合物让重建真皮模型中的高质量的胶原蛋白增加了29%(较作为对照组的培养基);相对应地,视黄醇让高质量的胶原蛋白增加了26%(较作为对照组的DMSO)。
(注:使用该技术检测到的胶原蛋白纤维即是高质量且强韧的胶原蛋白纤维)
实施例2
1.实验材料
测试系统:本测试所用皮肤模型为3D全层皮肤模型由广东博溪生物科技有限公司生产提供,模型批号为:F200701和F200801。
主要试剂:FSK4培养液(3D全层皮肤模型专用培养液;广东博溪)、胎牛血清(四季青)、PBS(博士德)、辣根过氧化氢酶DAB显色试剂盒(生工)、多聚甲醛(国药)、二甲苯(国药)、无水乙醇(国药)、苏木精(碧云天)、伊红(碧云天)。
主要设备:CO2培养箱(Thermo)、超净工作台(苏净安泰)、UVA灯管(飞利浦)、UVB灯管(飞利浦)、酶标仪(BioTek)、微量振荡器(其林贝尔)、正置显微镜(Olympus)。
测试配方:
2.皮肤模型处理
(a)模型分组:将模型转移到6孔板上,吸取0.9mL/孔FSK4(含10%FBS)培养基。同时将模型随机分为空白对照组(BC)、阴性对照组(NC)、阳性对照组(PC)和样本组,每组3个重复。
注:空白对照指皮肤模型未照射UV也未涂样任何物质;阴性对照指皮肤模型使用UV照射但未涂样任何物质;阳性对照指皮肤模型经UV照射并涂抹含有视黄醇的样品(配方1);样本组指皮肤模型经UV照射并涂抹含有本发明组合物的样品(配方2)。
(b)紫外线照射:将分组后的皮肤模型(除空白对照组),阴性对照组(NC)、阳性对照组(PC)和样本组分别置于UVA及UVB辐射仪下照射。UVA照射剂量为35J/cm2,UVB照射剂量为50mJ/cm2。
(c)模型培养:皮肤模型辐照处理后,迅速将模型移入已添加FSK4培养液的专用培养模具中,其中培养体积以155ml/皿计算。
(d)涂抹模型:用无菌移液枪分别吸取配方1和配方2加于经辐照的皮肤模型表面,用1mL无菌注射器将配方样品涂匀。涂抹量以20μL/模型计,表面涂抹时以轻柔打圈的方式尽量涂抹均匀,以保证各配方样品充分吸收。整个操作是在十万级洁净区内的超净工作台内进行,所用物资均经过无菌处理。
(e)模型培养:涂抹模型的步骤完成后,将培养皿置于CO2培养箱(37℃、5%CO2、95%RH)中孵育培养。其中辐照和配方样品涂抹频次均为1次/天,共计4次。最后一次辐照及涂抹结束后,皮肤模型继续培养24h。
(f)样本收集:培养结束后,用装有无菌PBS溶液的洗瓶清洗模型表面残留的受试物,用无菌棉签轻轻拭去模型内、外残留液体。
3.组织形态检测:将用于组织形态的皮肤模型用4%的多聚甲醛进行固定处理,固定24h后,将模型环切取下,进行H&E染色处理,显微镜下拍照观察,采集图片。
4.结果
见图3
相比空白组,3D全层皮肤模型在UV照射后真皮层成纤维细胞的密度显著减少,且形态明显变化,失去了狭长的纺锤状形态;而含有本发明提供的组合物的配方2修护了成纤维细胞的密度与形态,且效果媲美视黄醇(配方1)。
相比空白组,UV照射破坏了角质层细胞连接,使得细胞泛起;视黄醇也松散了角质细胞构成的皮肤屏障,这与之前的文献报道一致。而本发明提供的组合物(样品组)却使得角质层细胞间连接更加紧密,强化了皮肤屏障。
阳性对照组,即含有视黄醇的样品(配方1)松散了角质层皮肤屏障,而样本组,即含有本发明组合物的样品(配方2)却反而让角质层屏障连接更紧密。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已,并非用以限定本发明的实质技术内容范围,本发明的实质技术内容是广义地定义于申请的权利要求范围中,任何他人完成的技术实体或方法,若是与申请的权利要求范围所定义的完全相同,也或是一种等效的变更,均将被视为涵盖于该权利要求范围之中。
Claims (9)
1.一种用于提升真皮胶原蛋白质量与维护成纤维细胞形态的组合物,其特征在于,以组合物的总质量计,所述组合物含有25-50wt%组分(a)、4-5wt%组分(b)、15-50wt%组分(c)和0.5-50wt%组分(d);
所述组分(a)为大豆水解物,为Silab公司Pro-coll-one+®产品;
组分(b)为红毛丹叶提取物,为BASF公司NephoriaTM产品;
组分(c)为袋鼠爪提取物,为Lucas Meyer公司SKINecturaTM产品;
组分(d)中含有假叶树根提取物和七叶树皂苷,为BASF公司Biophytex® LS 9832产品。
2.如权利要求1所述的组合物,其特征在于,以组合物的总质量计,其中含有:
45-50wt%组分(a),
4-5wt%组分(b),
45-50wt%组分(c),
0.5-1.0wt%组分(d)。
3.如权利要求1所述的组合物,其特征在于,以组合物的总质量计,其中含有:
25-30wt%组分(a),
4-5wt%组分(b),
15-20wt%组分(c),
45-50wt%组分(d)。
4.一种如权利要求1-3任一项所述的组合物的制备方法,其特征在于,所述方法包括步骤:将组分(a)、组分(b)、组分(c)和组分(d)混合,得到所述的组合物。
5.一种如权利要求1-3任一项所述的组合物的用途,其特征在于,所述组合物用于制备化妆品或个人洗护产品。
6.如权利要求5所述的用途,其特征在于,所述化妆品或个人洗护产品选自:隔离霜、防晒霜、面霜、眼霜、乳液、精华液或化妆水。
7.如权利要求5所述的用途,其特征在于,所述组合物用于制备促进产生高质量胶原蛋白的化妆品或个人洗护产品。
8.如权利要求5所述的用途,其特征在于,所述组合物用于制备维护成纤维细胞的密度与形态的化妆品或个人洗护产品。
9.一种化妆品或个人洗护产品,其特征在于,所述化妆品或个人洗护产品包括如权利要求1-3任一项所述的组合物和化妆品上可接受的载体。
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