CN109937031B - 用于美容用途的袋鼠爪提取物 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及袋鼠爪(Anigozanthos flavidus)提取物用作抗老化剂的用途，特别是用于减少细纹和皱纹的出现和提拉皮肤，使皮肤光滑，调节皮肤的色泽，重构或重塑皮肤。
Description
技术领域
本发明涉及美容领域，特别是抗衰老美容剂。
背景技术
皮肤是保护生物体抵御外界攻击的第一道屏障。该器官由几层组织组成。单挑出来说，作为皮肤最外层部分的表皮；真皮，即由成纤维细胞和细胞外基质组成的结缔组织，其执行皮肤内聚和营养功能；以及由脂肪细胞组成的下皮层。
表皮由角质形成细胞的几个细胞层组成。单挑出来说，称为基底层的表皮胚层，其特别含有皮肤干细胞；棘层(spiny layer/Stratum spinosum)，其由几个多角形细胞层组成；颗粒层(granular layer/Stratum granulosum)，其包含一至三个含有细胞质内含物的扁平细胞层；透明角质颗粒；和最后的角质层(horny layer/Stratum corneum)，其由称为角质细胞的富含角蛋白的无核细胞组成，角质层对应于角质形成细胞分化末期。
根据称为脱屑的过程，角质层的最外层细胞被连续去除并被下层细胞代替。角质层的细胞再生基于细胞成熟的过程，其中表皮基底层的细胞分化并逐渐迁移通过表皮的各个层，直到其以角质细胞的形式到达角质层。
皮肤老化，无论是由正常的衰老现象引起还是因外部因素如暴露于UV辐射加剧，都涉及细胞分化和/或更新的功能障碍，从而导致皮肤的所有层萎缩。从组织学观点来看，特别观察到了真皮质量的降低，特别是表皮厚度减少和细胞外基质的一致性丧失。因此，在细胞外基质中观察到胶原纤维变少且更不规则，并且III型胶原与I型胶原的比率增加。乳头状真皮的弹性纤维的数量也减少了，并且网状真皮的弹性纤维发生了改变。从美学的角度来看，这些改变导致皮肤外观和其机械性质发生改变：皮肤不太光滑，更粗糙，其微纹理更明显，并且其可以表现出细纹，这可能随着时间的推移引起深皱纹的形成。皮肤还表现出弹性、色泽和紧致度的丧失，这可能导致组织下垂或松弛并加重皱纹，特别是在面部或颈部。皮肤老化可能影响肤色的均匀性，并且可能导致色斑的出现。
市场上有许多抗老化美容产品，所述产品旨在预防或减弱皮肤松弛。
然而，目前仍然需要新的抗老化活性剂来预防或治疗由皮肤老化引起的改变，特别是与皮肤松弛有关的改变。
发明内容
本发明涉及袋鼠爪(Anigozanthos flavidus)提取物作为抗老化剂的美容用途。特别地，袋鼠爪提取物可以用作皮肤的抗皱剂、光滑剂、调色剂、重构剂或重塑剂。
通常，袋鼠爪提取物作为活性剂存在于美容组合物中以用于预防、延迟和/或治疗一种或多种皮肤老化征兆。皮肤老化征兆可以选自：皮肤上细纹和/或皱纹的出现，特别是在嘴唇或眼睑上，皮肤的萎缩或下垂，特别是在颈部，皮肤的密度丧失，皮肤的紧致度丧失，皮肤的张力丧失，皮肤的弹性丧失，皮肤的收缩性丧失，皮肤的维持丧失，皮肤松弛，皮肤的光滑外观改变，皮肤的粗糙度增加以及脸部的轮廓改变。
袋鼠爪提取物可以从袋鼠爪的地上部分例如花、叶、茎和其组合获得。在某些实施方式中，通过用极性溶剂，优选在热条件下提取来获得袋鼠爪提取物。
如上文所提及，袋鼠爪提取物可以作为活性剂存在于美容组合物中。所述美容组合物可以包含至少一种其它美容剂，所述其它美容剂优选选自维生素、阳光过滤剂和防晒剂、抗老化剂或抗皱剂、抗氧化剂、提拉剂、紧致剂、抗斑剂、抗红剂、减肥剂、导出剂(draining agent)、保湿剂、舒缓剂、擦洗剂或去死皮剂、消光剂、皮脂调节剂、增亮活性剂、自晒黑活性剂、晒黑促进剂以及其组合。
在某些实施方式中，美容组合物选自水溶液；水-醇溶液；水包油(O/W)或油包水(W/O)或多重(三重：W/O/W或O/W/O)乳液；纳米乳液，特别是O/W纳米乳液，其液滴尺寸小于100nm；脂肪相以小球形式在水相中的水性凝胶或分散液；悬浮液，优选在水性或水-醇性介质中；脂质体悬浮液；粉剂；洗剂；乳剂；乳霜；油膏；凝胶；泡沫；以及软膏。美容组合物可以选自美容产品、化妆品或身体卫生产品，例如洗剂；乳剂；精华露；水性或油性凝胶；乳液；乳霜，特别是日霜或晚霜；啫喱；护肤水；软膏；香膏；粉底；喷雾；眼影；粉条；唇膏；唇彩；润唇膏；泡沫；除臭剂；滋养面膜；浴用凝胶；以及去死皮或擦洗产品。
本发明还涉及一种用于预防或治疗老化征兆的美容组合物，所述组合物包含特别是上文所定义的袋鼠爪提取物和一种或多种药学可接受的赋形剂。根据另一方面，本发明涉及“前体”组合物，即用于制备美容组合物的组合物，所述前体组合物包含：
-10％至50％，优选20％至40％袋鼠爪提取物，优选袋鼠爪的液体提出物，
-50％至90％，优选60％至80％载体，所述载体优选选自水性溶剂，有机溶剂，优选低级醇如乙醇、丙二醇、丁二醇、甘油或异丙醇，亲脂性试剂和其混合物，以及
-任选地，0.1至30％美容学可接受的其它赋形剂，所述赋形剂优选选自pH调节剂、抗氧化剂、防腐剂、稳定剂、载剂(vectorizing agent)、增稠剂、乳化剂、亲水或亲脂性胶凝剂、香料、矿物油或有机油以及其组合，
百分比以相对于所述组合物总重量的重量表示。
例如，用于制备美容组合物的所述组合物包含：
-20％至40％袋鼠爪的水性提取物，和
-60％至80％甘油，
重量百分比相对于所述组合物的总重量表示。
本发明的目的还在于一种用于制备本发明的美容组合物的方法，所述方法包含将本发明的“前体”组合物与一种或多种从美容观点来看是可接受的赋形剂和/或与一种或多种具有美容作用的其它活性剂混合的步骤。
附图说明
图1显示表示为相对于对照的百分比的原胶原I的量，该原胶原I由与TGF-β或与0.1％浓度的称为“提取物”的组合物一起温育的成纤维细胞产生(实施例1)。
图2显示表示为相对于对照的百分比的腱生蛋白-X的量，该腱生蛋白-X由与胎牛血清(FCS)一起温育，与0.2％浓度“提取物”组合物(提取物0.2％)一起温育和在0.1％浓度的“提取物”组合物(提取物0.1％)存在下温育的成纤维细胞产生(实施例2)。
图3A-C呈现了与“提取物”对来自皱纹底部(BW)的人成纤维细胞的收缩力的作用有关的结果(实施例4)。图3A显示在0.1％(v/v)“提取物”组合物存在下，在0.2％(v/v)“提取物”组合物存在下和在活性剂不存在下(对照(-))，BW成纤维细胞在24小时内施加的收缩力的变化。
图3B的直方图对应于图3A的曲线的曲线下面积(AUC)。图3C的直方图对应于图3A的曲线的最大收缩力。
BW：无活性剂的BW成纤维细胞(阴性对照)，在0.1％(v/v)“提取物”组合物存在下温育的BW成纤维细胞(活性剂0.1％)和在0.2％(v/v)“提取物”组合物存在下温育的BW成纤维细胞(活性剂0.2％)。
图4显示来自皱纹底部的成纤维细胞中α-SM肌动蛋白纤维的免疫标记的图像：对照(A)，与0.2％“提取物”一起温育之后(B)以及在与0.1％“提取物”一起温育之后(C)。
图5A和5B显示在“提取物”组合物(0.2％活性剂)存在下(袋鼠爪0.2％)和所述组合物不存在下(对照)由非细胞等效真皮施加的收缩力随时间的变化。
图6显示用安慰剂乳霜(乳霜A)处理与用含有2％“提取物”的乳霜(乳霜B)相比，施加提取物之后1小时和处理28天之后，面部鱼尾纹深度的变化。
发明详述
袋鼠爪是血皮草科(Haemodoraceae)的一种地方性植物种，主要见于澳大利亚西南部。该植物的特征在于花，所述花的颜色通常为黄色或红色，并且其形状使人想起袋鼠爪。据本申请人所知，袋鼠爪提取物已用于美容剂中，最多地作为例如洗发组合物中的调理剂。似乎尚未描述过袋鼠爪提取物的美容生物学活性。
本申请人制备了袋鼠爪的水性提取物并且已经研究了该提取物的生物学活性。
令人惊讶的是，本申请人已经显示，袋鼠爪提取物对生物学标靶具有活性，所述生物学标靶在皮肤细胞外基质的组织和组成中起关键作用。如实施例中所说明，袋鼠爪提取物能够刺激真皮成纤维细胞合成原胶原I，并增加角质形成细胞的胶原XVII合成。本申请人还显示，袋鼠爪提取物能够刺激腱生蛋白-X的合成，腱生蛋白-X是一种糖蛋白，其在弹性纤维的结构和稳定性以及皮肤细胞外基质的胶原纤维的组织中起关键作用。袋鼠爪提取物还刺激成纤维细胞中肌动蛋白α2(也称为α平滑肌肌动蛋白(α-SMA))的合成，这也使来自皱纹底部的成纤维细胞产生的收缩力增加。还显示，袋鼠爪提取物能够增加非细胞等效真皮施加的收缩力，这表明提取物通过物理作用对真皮纤维的即时张紧作用。
本申请人还进行了目标为评价包含0.6重量％袋鼠爪水性提取物的日霜的抗老化作用的临床测试。这些试验显示，袋鼠爪提取物通过长期显著减少皱纹的深度而对皮肤施加张紧-重塑作用。还显示，袋鼠爪提取物施加即时张紧作用，该即时张紧作用可以在将袋鼠爪提取物施用于皮肤后的前几分钟观察到。
鉴于这些结果，因此，袋鼠爪提取物被应用于美容领域中作为用于预防或治疗皮肤老化征兆的抗老化剂。袋鼠爪提取物还用作即时作用张紧剂以便在短期内重新收紧皮肤和/或改善皮肤的外观或维持。
通过对合成参与皮肤细胞外基质的组织、内聚和弹性的几种关键蛋白质的作用，所以袋鼠爪提取物可以用于促进细胞外基质，特别是成人或老年人皮肤的真皮的重构和重组。通常，袋鼠爪提取物可以用于治疗或预防皮肤松弛，改善皮肤弹性，或治疗或预防皮肤的皱纹和细纹。因此，袋鼠爪提取物可以用作张紧剂或提拉剂或用作皮肤重塑剂和重构剂。特别地，袋鼠爪提取物可以用作美容剂来治疗或预防皮肤的与皮肤弹性丧失和/或皮肤细胞外基质改变有关的非病理性改变，例如由细胞外基质的成分如弹性纤维的定性或定量改变引起的细胞外基质的解体。
■本发明的袋鼠爪提取物的用途
根据第一方面，本发明涉及袋鼠爪提取物的非治疗性美容用途。袋鼠爪提取物可以用作美容剂，特别是抗老化剂。
在本发明的上下文中，袋鼠爪提取物是指从袋鼠爪植物的地上部分如叶、花、茎和其组合获得的提取物。在一个特定的实施方式中，从袋鼠爪的花和/或茎获得袋鼠爪提取物。可以通过任何已知的提取技术获得袋鼠爪提取物。优选地，通过用极性溶剂提取制备袋鼠爪提取物。通常，极性溶剂可以选自水、醇、酯、酮和其混合物。作为酯的实例，可以提及乙酸乙酯、乙酸丙酯和乙酸丁酯。醇涵盖但不限于甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、甲醇和多元醇如甘油。作为酮的实例，可以提及丙酮、环己酮或甲基乙基酮。
在一个特定的实施方式中，提取溶剂选自水、醇、和水-醇混合物，例如水/乙醇、水/甲醇、或水/甘油混合物。在某些特定的实施方式中，提取溶剂是水。
用极性溶剂提取可以通过本领域技术人员已知的任何方法进行，例如通过煎煮、浸渍、渗浸、渗滤或浸出。例如，可以通过在水中或在水-醇混合物中热提取来获得袋鼠爪提取物。合适的热提取技术是煎煮。
术语“煎煮”旨在指将植物材料在水中煮沸适合于获得有效提取的一段时间。
可以对已经经历一种或多种处理如冷冻、干燥、冷冻干燥、研磨或其组合的袋鼠爪的植物材料进行提取步骤。在某些实施方式中，对已经历研磨步骤的新鲜或干燥的植物材料进行提取。在提取结束时，可以通过能够将植物材料与液相分离的任何方法，例如通过离心和/或过滤来回收提取物。
例如，可以通过包含如下步骤的方法获得袋鼠爪提取物：
-通过干燥和研磨袋鼠爪的地上部分，通常是花和茎来制备植物材料的步骤，
-用极性溶剂，通常是水或水-醇混合物，优选在热条件下，例如通过煎煮来提取植物材料的步骤，以及
-优选通过过滤去除固体植物材料的步骤。
用于制备袋鼠爪提取物的方法可以在提取和/或过滤步骤结束时包含一个或多个其它步骤。该方法可以包含例如通过添加pH调节剂、稳定剂和/或美容学可接受的载体或助剂配制提取物的步骤，浓缩提取物的步骤，或干提取物的步骤。
在一个另外或替代的实施方式中，袋鼠爪提取物包含类黄酮、多酚和碳水化合物。以柚皮苷当量计，类黄酮可以相对于提取物的干物质占1％至15％，例如5％至15％或1％至8％；以绿原酸当量计，多酚可以相对于提取物的干物质占5重量％至30重量％，例如5重量％至25重量％，12重量％至20重量％，10重量％至30重量％，或15重量％至20重量％；并且以葡萄糖当量计，糖可以相对于提取物的干物质占35重量％至65重量％，例如35重量％至55重量％，40重量％至60重量％或40重量％至50重量％。分别使用从绿原酸(Folin-Ciocalteu的方法)、柚皮素(Zhishen等人,Food Chemistry,1999,64,555-559的方法)和葡萄糖(Bachelier等人,Cah.OSTRUM.sér.Pédol.第IV卷,3-1966的方法)获得的标准范围通过比色法测定多酚、类黄酮和糖含量。
在提取过程结束时获得的袋鼠爪提取物可以包含在0.1重量％至40重量％，优选0.1重量％至10重量％，例如0.1重量％至4重量％范围内的干物质含量。
在某些实施方式中，袋鼠爪提取物包含相对于提取物的干物质少于1重量％阿魏酸。优选地，袋鼠爪提取物不含阿魏酸。
在一个特定的实施方式中，袋鼠爪提取物的特征在于以下特征中的一种或多种(例如2、3、4、5种或全部)：
-通过用极性溶剂提取，优选通过在水中或在水-醇混合物中煎煮，从袋鼠爪的地上部分获得袋鼠爪提取物，
-袋鼠爪提取物包含0.1重量％至10重量％的干物质含量，
-以柚皮苷当量计，类黄酮相对于提取物的干物质占5重量％至15重量％，例如7重量％至13重量％，
-以葡萄糖当量计，糖相对于提取物的干物质占35重量％至65重量％，例如40重量％至60重量％，
-以绿原酸当量计，多酚相对于提取物的干物质占5重量％至25重量％，例如19重量％至20重量％，和/或
-袋鼠爪提取物包含相对于提取物的干物质少于1重量％阿魏酸。
在本发明的用途中，袋鼠爪提取物可以是液体形式，例如在水中或在水-醇混合物如水/甘油混合物中。在其它实施方式中，袋鼠爪提取物可以是干固体形式，通常为粉末形式。可以通过用任何已知技术例如通过喷雾干燥、蒸发或冷冻干燥去除提取溶剂来获得袋鼠爪的干提取物。
作为其它实例，袋鼠爪提取物可以是吸附在固体载体如麦芽糖糊精上的形式。
在某些实施方式中，袋鼠爪提取物是在水中或在水-醇混合物中，优选在水/甘油混合物中的液体提取物。所述水-醇混合物可以表示在1/9至9/1，优选1/9至2/1范围内的水/醇体积比。
出于本发明的目的，术语“抗老化剂”旨在指如下美容活性剂，其具有使其可以预防或治疗皮肤老化征兆的生物学活性。
表述“预防皮肤老化征兆”旨在指延迟或预防皮肤老化征兆的出现。
表述“治疗皮肤老化征兆”旨在指降低、减少、减弱、纠正或减缓皮肤老化征兆的发展。
表述“皮肤老化征兆”旨在指皮肤的视觉外观或机械性质由于老化导致的任何非病理性改变或变化，该老化无论是时间(随时间老化)和/或光诱导的老化(光老化)。因此，皮肤老化征兆是指皮肤的外观或机械性质的非病理性改变或变化。
因此，老化征兆涵盖但不限于：皮肤变薄，特别是表皮变薄，微纹理的出现，皮肤上细纹和/或皱纹的出现，包括在嘴唇和眼睑上，皮肤的萎缩或下垂，皮肤的光亮度丧失，肤色暗沉，皮肤上的色斑，眼睛下方的黑圈，皮肤的密度丧失，皮肤的紧致度丧失，皮肤的张力丧失，皮肤的收缩性丧失，皮肤的弹性丧失，皮肤的光滑外观改变，皮肤的粗糙度增加以及脸部的轮廓改变。出于本发明的目的，术语“皮肤”是指人体皮肤的任何部分，特别是包括嘴唇和眼睑的面部的皮肤、颈部皮肤和手部皮肤。
如上文所呈现，袋鼠爪提取物能够促进参与细胞外基质的结构和皮肤弹性的各种关键蛋白质的合成。
因此，袋鼠爪提取物可以用于改善、修复或预防皮肤机械性质的改变，特别是皮肤的柔软性、弹性、紧致度或张力。例如，袋鼠爪提取物可以用于改善、修复或预防成人皮肤或老年人皮肤的机械性质的改变。
术语“成人皮肤”旨在指超过40岁的男性或女性并且由于老化而表现出弹性丧失的皮肤。
在一个特定的实施方式中，本发明的提取物用于治疗或预防与皮肤的机械性质改变有关的皮肤老化征兆，特别是皮肤弹性丧失。因此，袋鼠爪提取物可以用作使皮肤光滑、提升(increasing)、提拉或重提拉、重构或重塑皮肤的试剂。袋鼠爪提取物还可以用作用于即时张紧皮肤的试剂。
表述“用于光滑的试剂”旨在指能够减少和/或纠正包括嘴唇的皮肤的微纹理的美容剂，所述微纹理是皱纹或细纹的形式。
表述“用于提拉或重提拉的试剂”旨在指能够对皮肤施加张紧作用的美容剂，通过施加张紧作用皮肤的外观得到改善并且皱纹变得不太明显。
表述“用于重塑皮肤的试剂”旨在指能够在弹性丧失或皮肤松弛之后减少皮肤的不规则外观的试剂，特别是在面部和颈部轮廓处。
术语“提升剂”旨在指能够对皮肤施加张紧作用从而减弱皮肤微纹理的美容剂。
术语“重组剂”旨在指能够预防或治疗由老化导致的皮肤细胞外基质的改变的美容剂，所述改变如细胞外基质的弹性纤维的损失或改变或者细胞外基质的胶原的损失或改变。
表述“即时张紧剂或立即起作用的张紧剂”旨在指能够对皮肤施加张紧作用从而增加皮肤的弹性和/或改善皮肤的外观或维持的美容剂，这种作用可能通常在施用于皮肤后几分钟(例如五分钟)和一小时之间可见。
例如，袋鼠爪提取物可以用于预防或治疗皮肤上细纹和/或皱纹的出现，特别是在嘴唇或眼睑上，皮肤的萎缩，例如在颈部，皮肤的下垂或松弛，皮肤的密度丧失，皮肤的紧致度丧失，皮肤的张力丧失，皮肤的弹性丧失，皮肤松弛，皮肤的光滑外观改变，皮肤的粗糙度增加以及脸部的轮廓改变。袋鼠爪提取物还可以用于赋予成人或老年人皮肤以更年轻的外观和/或改善其肤色或光亮度。
袋鼠爪提取物可以用于美容目的来重构或重组因老化而受损的皮肤细胞外基质。特别地，袋鼠爪提取物可以用于美容目的来刺激参与皮肤细胞外基质组织的蛋白质的合成。表述“参与皮肤细胞外基质组织的蛋白质”旨在指细胞外基质的组成蛋白，如胶原、弹性蛋白或原纤维蛋白，或参与细胞外基质的组成蛋白表达或组织的蛋白质，如腱生蛋白-X。在某些实施方式中，袋鼠爪提取物用作美容剂来刺激皮肤中，优选成人皮肤中选自原胶原I、胶原XVII和腱生蛋白-X的蛋白质的合成。在另一个实施方式中，袋鼠爪提取物用作美容剂来增加成人或老年人皮肤的真皮成纤维细胞的收缩力。在另一个实施方式中，袋鼠爪提取物用于刺激真皮代谢。
在某些实施方式中，将袋鼠爪提取物与具有美容作用的活性剂组合使用。此类试剂如下所述并且特别涵盖抗皱剂、抗老化剂、抗氧化剂、保湿剂、提拉剂和紧致剂。
在本发明的用途中，将袋鼠爪提取物施加于皮肤。所述提取物优选作为美容剂存在于旨在施加于皮肤的组合物中。所述组合物通常是美容组合物。袋鼠爪提取物通常相对于所述美容组合物的总重量占0.0001重量％至10重量％，优选0.001重量％至5重量％，更优选0.005重量％至3重量％。例如，袋鼠爪提取物可以占美容组合物的0.01重量％至3.0重量％，例如0.6重量％。袋鼠爪提取物可以以液体提取物的形式，以干提取物的形式或以下文在本说明书中描述的“前体”组合物的形式添加到美容组合物中。
所述美容组合物可以包含一种或多种美容学可接受的赋形剂和任选的一种或多种具有美容作用的其它活性剂。通常，所述美容组合物包含：
-0.0001％至10％袋鼠爪提取物，
-0％至20％的一种或多种其它活性剂，以及
-70％至99.9999％的一种或多种美容学可接受的赋形剂，
百分比以相对于美容组合物总重量的重量表示。
在某些实施方式中，所述美容组合物包含：
-0.001至5重量％袋鼠爪提取物，
-0.001％至10％的一种或多种其它活性剂，以及
-85％至99.998％的一种或多种美容学可接受的赋形剂。
在其它实施方式中，所述美容组合物包含：
-0.01至5重量％袋鼠爪提取物，
-0.01％至10％的一种或多种其它活性剂，以及
-85％至99.98％的一种或多种美容学可接受的赋形剂。
袋鼠爪提取物优选以液体形式存在。
在一个另外或替代的实施方式中，美容组合物包含0.001重量％至10重量％，例如0.005重量％至1重量％或0.005重量％至0.5重量％的来自袋鼠爪提取物的干物质。
表述“具有美容作用的活性成分”、“具有美容作用的活性剂”或“具有美容作用的美容剂或活性剂”旨在指能够对皮肤或皮肤附属体施加至少一种美容作用的化合物。术语“美容作用”旨在指如下任何非治疗性作用，该作用的目标为改良和/或改善皮肤或粘膜如嘴唇的外观，保护其抵御外界攻击(太阳、风、水分、干燥、化学产品)，或者预防和/或纠正与其老化有关的现象。
因此，在某些实施方式中，袋鼠爪提取物可以存在于还包含具有美容作用的其它活性成分的美容组合物中。具有美容作用的这种活性成分可以选自维生素、阳光过滤剂和防晒剂、抗老化剂、抗红剂、抗氧化剂、紧致剂、保湿剂、舒缓剂、擦洗剂或去死皮剂、消光剂、皮脂调节剂、增亮活性剂、抗斑活性剂、减肥剂、导出剂、自晒黑活性剂、晒黑促进剂以及其组合。特别地，美容组合物可以包含生育酚，和/或植物提取物，如亚麻籽的提取物、弧菌胞外多糖的提取物，或肽，如三氟乙酰基三肽-2。
优选地，美容组合物可以包含选自以下的活性剂：抗皱剂、抗红剂、抗氧化剂、保湿活性剂、舒缓剂、皮脂调节剂、抗斑剂、阳光过滤剂或防晒剂以及其组合。更优选地，具有美容作用的其它活性剂选自抗皱剂、抗氧化剂、保湿剂、紧致剂以及其组合。
作为保湿剂的实例，可以提及尿素；焦谷氨酸(PCA)和其衍生物，特别是其盐如精氨酸PCA、壳聚糖PCA、铜盐(PCA铜)、镁盐(PCA镁)、钠盐(PCA钠)或锌盐，PCA乙基己酯；葡萄糖酸钙；透明质酸和其盐和其它糖胺聚糖；果糖、葡萄糖、异麦芽糖、乳糖、海藻糖、聚右旋糖、蔗糖(saccharose/sucrose)、麦芽糖醇、甘露糖醇、山梨糖醇、木糖醇和其它碳水化合物和衍生物；聚乙二醇，如PEG-7、PEG-8、PEG-10、PEG-12或PEG-14；甘油；丙二醇；丁二醇；甜菜碱；瓜氨酸；胶原及其衍生物；组氨酸；丝蛋白水解产物、角蛋白水解产物或大豆水解产物；富含多糖和/或多酚的植物提取物，例如芦荟、矢车菊(荔枝菊(Centaurea cyanus))的提取物；以及其组合。
作为抗老化剂的实例，可以提及抗坏血酸和其衍生物，如抗坏血酸磷酸镁；糖胺聚糖和其衍生物；桫椤(Cyathea)多糖；胶原；亚麻籽(亚麻(Linum usitatissimum))提取物；肽，如己酰基四肽-3和三氟乙酰基三肽-2；萹蓄(Polygonum aviculare)提取物；褐藻提取物，特别是泡叶藻(Ascophyllum nodosum)提取物；蕨类植物提取物，特别是蚌桬椤(Cyathea cumingii)提取物。
作为舒缓剂的实例，可以提及尿囊素、芦荟提取物、桦树(例如白桦(Betulaalba))提取物、柳草(柳兰(Epilobium angustifolium))提取物、栗树(例如欧洲栗(Castenea sativa))提取物、矢车菊(例如荔枝菊)提取物、积雪草(例如雷公根(Centellaasiatica))提取物、马草(例如问荆(Equisetum arvense))提取物、茴香(例如小茴香(Foeniculum vulgare))提取物、普通金缕梅(例如北美金缕梅(Hamamelis virginiana))提取物、常春藤(例如洋常春藤(Hedera helix))提取物、玫瑰茄(Habiscus sabdariffa)提取物、百合(例如白百合(Liliumcandidum))提取物、普通锦葵(例如欧锦葵(Malvasylvestris)提取物、柠檬香蜂草(例如蜜蜂花(Melissa officinalis))提取物、黄芩(例如贝加尔黄芩(Scutellaria baicalensis))提取物、含羞草(例如细花含羞草(Mimosatenuiflora))提取物、委陵菜(例如洋委陵菜(Potentilla erecta))提取物、低聚糖提取物例如亚麻提取物、肽如棕榈酰三肽-8以及其组合。
作为抗氧化剂的实例，可以提及HMR(羟基甲基间苯二酚)、抗坏血酸和其衍生物、维生素B9、组氨酸盐酸盐或柳草(柳兰)提取物。具有抗氧化作用和维生素类型的活性成分通常以相对于美容组合物总重量至少1％的重量百分比使用。
作为皮脂调节剂的实例，可以提及亚麻木酚素、米粉、葡萄糖酸锌、肌氨酸、锡兰肉桂皮提取物、鳄梨提取物以及其组合。
作为抗红剂，可以提及皂苷、类黄酮、鲁斯可皂苷元、七叶苷糖和含有其的提取物，例如假叶树(Ruscus)提取物，以及某些精油，例如薰衣草或迷迭香的精油。
作为抗斑剂的实例，可以提及如甘草(光果甘草(Glycyrrhiza glabra))、木菠萝(菠萝蜜(Artocarpus heterophyllus))提取物、西酸模(western dock/R.occidentalis))提取物、属于柑橘属的植物的提取物、白藜芦醇、肽如低聚肽-68、九肽-1、曲酸、抗坏血酸磷酸镁以及其组合。
存在于美容组合物中的美容学可接受的赋形剂可以选自稀释剂；分散剂；胶凝剂；润肤剂；载剂，如聚阳离子聚合物或磷脂、树胶、树脂；溶剂，特别是低级醇，特别是乙醇、异丙醇、二丙二醇、丁二醇、丙二醇、甘油、山梨糖醇和丙二醇；填充剂，如改性淀粉和聚合淀粉、二氧化钛或金属硬脂酸盐；防腐剂；精油；珠光剂；染料；气味吸收剂；pH调节剂或中和剂；润滑剂；增稠剂；表面活性剂，包括阴离子、阳离子、两性或非离子表面活性剂；保湿剂；润湿剂；香料；有机或矿物颜料，如氧化铁；油性试剂，如植物来源的油或脂肪，动物来源的脂肪，合成油如石油膏、硅酮油(环聚二甲基硅氧烷)、脂肪醇酯、氟油、蜡、改性粘土、膨润土、脂肪酸的金属盐、二氧化硅、聚乙烯、云母；防腐剂；抗微生物剂；载体，如矿物质、泉水或花卉水；和/或美容剂或药物领域中通常用于配制的其它物质。
可以将袋鼠爪提取物并入任何类型的美容组合物中。优选地，该组合物是具有适用于局部施用，特别是适用于施加于皮肤的形式的美容组合物。所述美容组合物可以是如下形式：水溶液或水-醇溶液；水包油(O/W)或油包水(W/O)或多重(三重：W/O/W或O/W/O)乳液；纳米乳液，特别是O/W纳米乳液，其液滴尺寸小于100nm；水性凝胶；分散液；或粉剂。本发明的美容组合物可以是洗剂、乳剂、乳霜、油膏、凝胶、泡沫、溶液或软膏的形式。更一般地，本发明的组合物还可以是任何类型的美容产品的形式。其可以是美容护理产品或化妆品或身体卫生产品，例如洗剂；乳剂；精华露；水性或油性凝胶；乳液；乳霜；啫喱；护肤水；软膏；香膏；粉底；喷雾；眼影；粉条；唇膏；唇彩；泡沫；除臭剂；滋养面膜；浴用凝胶；或去死皮或擦洗产品。作为非限制性说明，袋鼠爪提取物可以作为抗老化、重提拉或重塑剂存在于用于成人或老年人皮肤的日霜中。袋鼠爪提取物可以作为抗老化剂存在于用于面部或颈部的再生精华露中。作为其它实例，袋鼠爪提取物可以作为光滑或重塑活性剂存在于用于手部、颈部或胸部的护理霜中。
在某些实施方式中，袋鼠爪提取物与载剂组合存在于美容组合物中。在某些实施方式中，通过运载体系配制袋鼠爪提取物。运载体系可以选自胶束；脂质体，其包括单层或多层脂质体；类脂质体；醇质体；层状体系；纳米体；脂质或聚合物囊泡；纳米球；可以是天然或可以是非天然聚合物的微米或纳米颗粒；水凝胶。优选地，将袋鼠爪提取物包封在选自脂质体和层状体系的运载体系中。用于实施本发明的脂质体和层状体系的特定实例特别描述于法国专利申请号1358589和1262303中。
本发明的另一个目的是一种用于治疗或预防受试者的皮肤老化征兆的美容方法，该方法包含向所述受试者施用美容有效量的袋鼠爪提取物，优选通过局部途径。通常将袋鼠爪提取物施加于待治疗的皮肤，例如在面部、颈部或手部上。优选地，袋鼠爪提取物存在于如上所述的美容组合物中，因此以美容组合物的形式例如以乳霜形式施加。如上文所提及，皮肤老化征兆可能是由于皮肤机械性能的改变，特别是皮肤弹性的丧失。优选地，本发明的美容方法的目的在于治疗或预防皮肤老化征兆，该皮肤老化征兆选自皮肤上皱纹和/或细纹、色斑的出现，皮肤的萎缩，皮肤的下垂或松弛，皮肤的密度丧失，皮肤的紧致度丧失，皮肤的张力丧失，皮肤的弹性丧失，皮肤松弛，皮肤的光滑外观改变，皮肤的粗糙度增加，脸部的轮廓改变以及其组合。
本发明的目的还在于一种用于对皮肤，优选对成人皮肤施加即时张紧作用的美容方法，所述方法包含向所述受试者施用，优选局部施用美容有效量的袋鼠爪提取物。通常将袋鼠爪提取物施加于待治疗的皮肤，例如在面部、颈部或手部上。
本发明的另一个目的是一种美容方法，所述方法用于重组或重构皮肤细胞外基质，和/或用于刺激皮肤中，优选成人皮肤中选自原胶原I、胶原XVII和腱生蛋白-X的蛋白质的合成，和/或用于增加成人皮肤的真皮成纤维细胞的收缩力，所述方法包含向所述受试者施用，优选局部施用美容有效量的袋鼠爪提取物。在另一个实施方式中，袋鼠爪提取物用于刺激真皮代谢或重组或重构真皮。
在本发明的美容方法和用途中，待施用的剂量和袋鼠爪提取物的施用频率根据所要的美容作用、受试者的特征、特别是其性别、其年龄和其皮肤类型而变化。通常，可以将袋鼠爪提取物施加于待治疗的区域，每天一次或两次，通常在早晨和/或夜晚，持续连续几周或甚至几个月，例如至少三个月。待治疗的区域通常选自手部、颈部、面部或面部的一部分，如眼睛周围的区域、嘴唇周围的区域和鼻沟区域。袋鼠爪提取物可以以下述美容组合物的形式施加。所述美容组合物通常包含0.001重量％至10重量％，例如0.01重量％至5重量％提取物。
例如，为了在面部获得抗老化作用，患者可以在早晨和夜晚在其面部施加1g至2g剂量的含有0.1重量％袋鼠爪提取物的美容组合物。
受试者可以是女性或男性，通常超过30岁，优选超过40岁或超过45岁。例如，受试者可以是超过45岁的女性。
-本发明的其它目的
根据另一个方面，本发明的目的还是一种包含袋鼠爪提取物的美容组合物。通常，所述美容组合物包含：
-0.0001％至10％袋鼠爪提取物，
-0％至20％的一种或多种其它活性剂，以及
-70％至99.9999％的一种或多种美容学可接受的赋形剂，
百分比以相对于美容组合物总重量的重量表示。
在某些实施方式中，所述美容组合物包含：
-0.001至5重量％袋鼠爪提取物，
-0.001％至10％的一种或多种其它活性剂，以及
-85％至99.998％的一种或多种美容学可接受的赋形剂。
在其它实施方式中，所述美容组合物包含：
-0.01至5重量％袋鼠爪提取物，
-0.01％至10％的一种或多种其它活性剂，以及
-85％至99.98％的一种或多种美容学可接受的赋形剂。
不言而喻，提取物、其它活性剂和药学可接受的赋形剂如上所述。同样，美容组合物可以是任何类型，如上所述。
特别地，袋鼠爪提取物可以是液体提取物的形式。
在一个另外或替代的实施方式中，美容组合物包含0.001重量％至10重量％，例如0.005重量％至1重量％的来自袋鼠爪提取物的干物质。
根据另一个方面，本发明的目的还为一种旨在并入美容组合物中的组合物。因此，这种组合物对应于“前体”组合物。
优选地，用于制备美容组合物的这种组合物包含：
-10重量％至50重量％，优选20重量％至40重量％袋鼠爪提取物，
-50％至90％，优选60％至80％载体，所述载体优选选自水性溶剂，有机溶剂，优选低级醇如乙醇、丙二醇、丁二醇、甘油或异丙醇，亲脂性试剂和其混合物，以及
-任选地，0.01至30％美容学可接受的其它赋形剂，所述赋形剂优选选自pH调节剂、缓冲剂、载剂、抗氧化剂、防腐剂、稳定剂、增稠剂、乳化剂、亲水或亲脂性胶凝剂、香料、矿物油或有机油以及其组合，
百分比以相对于组合物总重量的重量表示。
不言而喻，袋鼠爪提取物可以如上所述。例如，袋鼠爪提取物可以是可以通过用极性溶剂提取从袋鼠爪的地上部分获得的提取物。在某些实施方式中，袋鼠爪提取物是例如在水中或在水-醇混合物如水/甘油混合物中的液体提取物。
在一个特定的实施方式中，用于制备美容组合物的组合物包含：
-20％至40％袋鼠爪的水性提取物，和
-60％至80％甘油，
百分比以相对于组合物总重量的重量表示。
“前体”组合物还可以包含缓冲剂或pH调节剂，如柠檬酸。通常，本发明的“前体”组合物的pH为3.0至4.5，通常为约3.9。
在一个另外或替代的实施方式中，“前体”组合物包含0.01重量％至10重量％，例如0.05重量％至5重量％或0.1重量％至1重量％的来自袋鼠爪提取物的干物质。
本发明的目的还在于所述“前体”组合物用于制备美容组合物的用途。不言而喻，所述最终的美容剂或药物组合物特别适用于实施本发明的美容用途中的任一种，并且可以具有上述特征中的任一种。
“前体”组合物可以相对于最终美容组合物或药物组合物的总重量以0.001重量％至50重量％，优选0.01重量％至10重量％，例如0.5重量％至5重量％或1.5重量％至2.5重量％的量存在于美容组合物中。
可以通过将本发明的“前体”组合物与一种或多种从美容观点来说是可接受的赋形剂和/或与一种或多种具有美容作用的其它活性剂混合来获得所述美容组合物。
本发明的另一个目的是一种用于制备本发明的美容组合物的方法，所述方法包含将袋鼠爪提取物或“前体”组合物与一种或多种美容学可接受的赋形剂和/或与一种或多种具有美容作用的其它活性剂混合的步骤。
本发明的目的还是一种用于制备本发明的“前体”组合物的方法，所述方法包含：
a)通过干燥和研磨提供袋鼠爪的植物基质，优选来自袋鼠爪的地上部分，
b)用极性溶剂提取植物基质，接着进行过滤步骤，从而获得液体提取物，
c)向来自过滤的液体提取物中添加美容学可接受的载体，
d)任选地，向滤液中添加美容学可接受的赋形剂，
e)任选地，进行pH调节步骤。
可以以任何顺序进行步骤c)、d)和e)。
在某些实施方式中，美容学可接受的载体包含甘油和/或水。
可以如上所述，例如使用水或水-醇混合物作为极性溶剂来进行提取步骤。
具体实施方式
本发明的其它方面和优点将通过阅读以下实施例显现出来，所述实施例应该被认为是说明性的而不是限制性的。
实施例
以下实施例用下文称为“提取物”的组合物进行，所述“提取物”组合物包含：
-30重量％袋鼠爪花或茎的水性提取物，该水性提取物含有约1.6重量％固体，和
-70重量％甘油。
出于本发明的目的，该组合物是“前体”组合物。
实施例1：袋鼠爪提取物对人真皮成纤维细胞合成原胶原I的作用
-背景
胶原组成了高度参与皮肤机械性质的蛋白质的家族。原胶原I是I型胶原的前体，其是结缔组织的主要成分。随着年龄的增长，皮肤中的胶原含量降低，这导致皮肤上皱纹或细纹的形成。
本研究的目的是确定袋鼠爪提取物对人真皮成纤维细胞合成原胶原的作用。
-方案
以如下浓度测试“提取物”组合物：0.1％和0.05％(v/v)。选择TGF-β作为阳性对照并且以10ng/ml进行测试。阴性对照对应于未用“提取物”组合物或TGFβ处理的细胞。
从人真皮中分离成纤维细胞，并且将其在37℃下，在5％CO2和95％湿度下维持在补充有10％胎牛血清、1％抗生素(青霉素/链霉素)和1％L-谷氨酰胺的特定DMEM培养基中。
将2.5×104个细胞/微板孔接种在完全DMEM培养基中。将细胞置于温育箱中24小时。接着将培养基用无血清DMEM代替。将微板在温育箱中再放置24小时以达到细胞静止期。
添加所需浓度的“提取物”组合物或TGF-β。将微板再温育24小时。在温育结束时，去除上清液并且通过ELISA(MK101Z，Ozyme)分析以便定量原胶原I。
-结果
所得结果如图1所说明。图1显示与未处理的细胞相比，处理的细胞中原胶原I合成的活化百分比。
用“提取物”组合物或TGFβ处理的成纤维细胞产生的原胶原I的量大于未处理的细胞。“提取物”组合物对胶原I合成的作用具有剂量依赖性。因此，袋鼠爪提取物刺激真皮成纤维细胞中的原胶原I。
实施例2：袋鼠爪提取物对人真皮成纤维细胞合成腱生蛋白X的作用
腱生蛋白-X是一种调节细胞外基质(ECM)的弹性纤维的结构和稳定性两者的蛋白质。其还能促成胶原纤维的组织。腱生蛋白-X在结缔组织的刚性和弹性中起关键作用。腱生蛋白-X的遗传性缺乏可能导致称为埃勒斯-当洛综合征(Ehlers-Danlos syndrome)的遗传疾病。
本研究的目的是确定“提取物”组合物对人真皮成纤维细胞合成腱生蛋白-X的作用。
-方案
以0.2％和0.1％(v/v)测试“提取物”组合物。使用10％胎牛血清作为阳性对照。阴性对照对应于未用提取物或胎牛血清处理的细胞。
从人腹部真皮中分离成纤维细胞，并且将其在37℃下，在5％CO2和95％湿度下维持在补充有10％胎牛血清、1％抗生素(青霉素/链霉素)和1％L-谷氨酰胺的特定DMEM培养基中。
将2.5×104个细胞/微板孔接种在完全DMEM培养基中。将细胞置于温育箱中24小时。接着将培养基用无血清DMEM代替。将微板在温育箱中再放置24小时以达到细胞静止期。
添加所需浓度的“提取物”组合物或胎牛血清。添加之后，将细胞再温育24小时。在温育结束时，去除上清液并且通过ELISA分析以便定量腱生蛋白-X。同时，在温育结束时，通过布拉德福德法(Bradford method)定量细胞裂解物中含有的蛋白质。
-结果
对所得结果进行斯氏t检验(Student's t-test)，p值<0.05。结果如图2所呈现。图2显示对于每种实验条件，培养基中存在的腱生蛋白-X的量，该量以相对于蛋白质总量的百分比表示。注意到，与阴性对照(未处理的细胞)相比，“提取物”组合物诱导腱生蛋白-X的量的剂量依赖性增加。换句话说，袋鼠爪提取物刺激人成纤维细胞中的腱生蛋白-X。
实施例3：袋鼠爪提取物对人角质形成细胞合成胶原XVII的作用
胶原XVII是一种跨膜蛋白，其在维持参与表皮粘附的细胞内和细胞外元件之间的粘结方面起着重要作用。
本研究的目的是确定“提取物”组合物对人角质形成细胞合成胶原XVII的作用。
-方案
以0.4％(v/v)的浓度测试“提取物”组合物。选择TGF-β作为阳性对照并且以10ng/ml测试。阴性对照对应于未用提取物或TGF-β处理的细胞。
从人上皮细胞系中分离角质形成细胞，并且将其在37℃下，在5％CO2和95％湿度下，在补充有10％胎牛血清、1％抗生素(青霉素/链霉素)和1％L-谷氨酰胺的DMEM培养基中培养。
将5×104个细胞/微板孔接种在完全DMEM培养基中，并且在温育箱中放置24小时。接着将培养基用包含1％胎牛血清、1％抗生素和1％L-谷氨酰胺的DMEM代替。将微板再放置在温育箱中24小时。
在温育结束时，添加所需浓度的“提取物”组合物或TGF-β。将微板再温育24小时。
使用稀释至1/100的抗胶原XVII抗体通过免疫标记检测并定量胶原XVII，并用与荧光素偶联的二次抗体显示。荧光强度对应于胶原XVII的表达量。使用Image J软件处理图像。
-结果
将荧光测量值相对于阴性对照测量的荧光强度的测量值归一化。观察到与“提取物”组合物一起温育的细胞的荧光强度增加+27％，从而说明与未处理的细胞相比，胶原XVII表达增加。与阴性对照相比，与TGF-β(阳性对照)一起温育使荧光信号增加257％。
总之，袋鼠爪提取物刺激人角质形成细胞合成胶原蛋白XVII。
实施例4：评价提取物的张紧作用：来自皱纹底部的成纤维细胞产生的收缩力的定量和α-SM肌动蛋白的定量
通过GlasBoxPlusTM系统，可以将美容活性剂对从来自皱纹底部的成纤维细胞获得的真皮“等效物”的张紧作用进行定量。来自皱纹底部的成纤维细胞产生的收缩力小于邻近的无皱纹皮肤。在GlasBoxPlusTM系统中测量收缩力之后，还可以在真皮等效物中进行α-SM肌动蛋白的免疫标记。本研究的目的是显示提取物对成纤维细胞收缩性和对α-SM肌动蛋白合成的作用，α-SM肌动蛋白参与细胞的可塑性、迁移和运动。
■方案
-成纤维细胞培养
从提拉物(手术废弃物；63岁女性)在无皱纹皮肤处和皱纹内取直径为2mm的活检组织。
使用常规的外植技术从健康皮肤(HF)和皱纹底部(BW)提取成纤维细胞。将外植体在37℃下，在潮湿氛围中并且在5％CO2存在下，在补充有10％胎牛血清(FCS)、40mg/l庆大霉素和2mg/l两性霉素B(DMEMc)的“杜尔贝科氏改良伊格尔氏培养基(Dulbecco'smodified Eagle's medium)”中培养。逐渐地(在约十天的过程中)，成纤维细胞迁移到外植体的外部。每周更新培养基两次。当成纤维细胞足量时，将其在胰蛋白酶-EDTA的作用下脱离，在相同的培养条件下传代培养并扩增。
-GlasBoxPlusTM系统和收缩力的测量
真皮等效物在由八个矩形单元组成的培养皿中产生。在每一个单元中放置两个柔性载玻片，所述载玻片的下部由网格组成，当真皮等效物聚合时其附着于所述网格。真皮等效物在两个载玻片之间形成，从而形成在中心略微收缩的矩形形状。在常规机械中这种形状被称为“空竹”形状。
在成纤维细胞产生的收缩力的影响下，载玻片变形。其变形通过光学纤维测量。这种变形与真皮等效物内产生的力成正比。使用PC采集卡和合适的软件实时进行测量。
在汇合时，将单层培养的成纤维细胞用胰蛋白酶消化，接着使用Mallassez载玻片计数，以使细胞悬浮液达到8×105个细胞/毫升。通过混合六体积的1.76X培养基(DMEMc、NaHCO3、NaOH、抗生素、FCS)、三体积的I型鼠尾胶原(2mg/ml)和1体积的细胞悬浮液(8×105个细胞/毫升)来制备真皮等效物生产培养基。
将混合物倒入GlasBoxPlusTM的矩形单元中。在37℃下在几分钟内形成凝胶。添加含有“提取物”组合物(在培养基中的最终浓度：0.1％和0.2％(V/V))或TGFβ1(2.5ng/ml)(阳性对照)或不含所述成分(阴性对照)的各种培养基，并且持续24小时测量等长力。
-α-SM肌动蛋白的标记
通过使用抗α-SM肌动蛋白小鼠单克隆抗体进行α-SM肌动蛋白纤维的免疫标记。与FITC偶联的抗小鼠第二抗体使得可以进行并定位免疫标记。将细胞核用赫斯特染料(Hoechst dye)染色。通过共聚焦显微镜在488nm下和双光子激发显微镜在705nm下进行观察。
使用直径为5mm的活检穿孔器获得真皮等效物的片段。将真皮等效物置于冷丙酮中以使其透化。用PBS洗涤后，添加过氧化氢水溶液以便去除内源性过氧化物酶。在用PBS冲洗后，将真皮等效物置于甘氨酸溶液中以便去除由于固定剂的醛基引起的背景噪音。接着将真皮等效物置于阻断溶液中，这使得可以阻断由二次抗体引起的非特异性结合。将组织置于一次抗体中过夜。用PBS洗涤之后，添加二次抗体。温育一小时并且用PBS洗涤之后，将细胞核用赫斯特染料染色10分钟。
在PBS中冲洗之后，通过Eukitt将真皮等效物安装在载玻片和盖玻片之间。在共聚焦显微镜(Zeiss LSM510 NLO)下以40倍放大倍数观察载玻片并拍摄照片。
-统计分析
对于收缩力研究，进行了双因素方差分析，必要时接着进行费希尔检验(Fishertest)。仅当p<0.05时才保持显著性。计算了曲线下面积(AUC)以及斜率(收缩速率)和最大收缩，这些值都通过GraphPad
5软件计算出。对于这些数据，进行了单因素方差分析，必要时接着进行费希尔检验。仅当p<0.05时才保持显著性。
■结果
由皱纹底部的成纤维细胞(BW)产生的收缩力显著低于健康成纤维细胞(HF)产生的收缩力。观察到与HF成纤维细胞相比，BW成纤维细胞的AUC(表示收缩力随时间变化的曲线的曲线下面积)和最大收缩显著降低(数据未显示)。在BW成纤维细胞和HF成纤维细胞中，成纤维细胞与TGF-β1一起温度都能诱导AUC和最大收缩力的显著增加。
在BW成纤维细胞组中，与“提取物”组合物一起温育使得收缩力显著增加，最大收缩力和AUC显著增加。这些结果如图3A、3B和3C所说明。“提取物”组合物还总体上增加了HF成纤维细胞中的收缩力，但观察到的增加量小于对于BW成纤维细胞所获得的增加量。免疫标记实验显示“提取物”组合物刺激BW成纤维细胞的α-SM肌动蛋白表达(参见图4)。
袋鼠爪提取物显著并且特别地刺激来自皱纹皮肤的成纤维细胞的收缩力。因此，其对成人或老年人皮肤施加张紧和提拉作用。
实施例5：评价提取物的即时物理张紧作用。
通过GlasBoxPlusTM系统，还可以通过测量所产生的收缩力来定量提取物对非细胞真皮等效物的即时张紧作用。
■方案
-GlasBoxPlusTM系统和收缩力的测量
非细胞真皮等效物在由八个矩形单元组成的培养皿中聚合。在每一个单元中放置两个柔性载玻片，所述载玻片的下部由网格组成，当非细胞真皮等效物聚合时其附着于所述网格。在提取物存在或不存在的情况下胶原凝胶的聚合产生引起载玻片变形的力。这种变形通过光学纤维测量。其与非细胞真皮等效物内产生的力成正比。
通过混合6体积的1.76X培养基(DMEMc、NaHCO3、NaOH、抗生素、FCS)、3体积的I型鼠尾胶原(2mg/ml)和1体积的DMEMc来制备真皮等效物生产培养基。
将混合物倒入GlasBoxPlusTM的矩形单元中。在37℃下在几分钟内形成凝胶。添加含有“提取物”组合物(在培养基中的最终浓度：0.2％(V/V))或不含所述成分(阴性对照)的各种培养基，并且持续24小时测量等长力。
-统计分析
对于收缩力研究，进行了双向方差分析，必要时接着进行费希尔检验，p<0.05。
使用GraphPad
5软件计算曲线下面积(AUC)、斜率(收缩速率)和最大收缩。对于这些数据，进行了单向方差分析，必要时接着进行费希尔检验(p<0.05)。
■结果
与对照组相比，在0.2％“提取物”存在时，收缩力显著增加。在0.2％提取物存在下，这种增加在测量开始后1小时30分变得显著，并且至少延长至第11小时(图5A和5B)。还观察到，与未用提取物处理的对照组相比，用本发明的提取物处理的组的AUC(表示收缩力随时间变化的曲线下面积)以及最大收缩显著增加。
袋鼠爪提取物显著并且特别地刺激非细胞真皮等效物的收缩力。因此，本发明的袋鼠爪提取物施加即时的收敛、张紧和提拉物理作用，因此可以用于对成人皮肤施加即时张紧作用。
实施例6：包含提取物的美容组合物的实施例
-包含2％“提取物”组合物的抗老化乳霜(乳霜B)
在实施例7中呈现的临床试验中评价了乳霜B的抗老化性质。
-包含2％“提取物”组合物的抗老化精华露
-包含2％“提取物”组合物的抗老化香膏
实施例7：提取物抗皱作用的临床评价。
测试的乳霜：
-包含2％“提取物”组合物的乳霜B(参见实施例5)。
-乳霜A：除了用2％去离子水代替2％“提取物”组合物之外，与乳霜B具有相同组成的安慰剂乳霜。
方案：
根据以下方案，与含有2％“提取物”组合物的乳霜B产品相比，进行乳霜A产品(安慰剂乳霜)使用的测试：
将42名志愿者盲式纳入研究中，并根据专用程序建立的随机化清单分成两组：
-接受乳霜A的A组：21名45至69岁的女性(平均年龄：56.4岁)，其具有所有类型的皮肤，其中57％具有敏感性皮肤，具有光分型II至IV。
-接受乳霜B的B组：21名46至77岁的女性(平均年龄：60.8岁)，其具有所有类型的皮肤，其中48％具有敏感性皮肤，具有光分型II至IV。
第一次在实验室中由志愿者施加该产品。后续施加通过在志愿者家中以一天施加两次的速率自施加进行。第一次施加后T+1小时：在去除产品之后，通过皮肤科医生评估目标领域的皮肤参数来评价正在试验的产品的耐受性。T+7天：通过在使用7天后评估目标领域的皮肤参数来评价所追踪的产品的耐受性(通过电话联系)。T+28天：由皮肤科医生根据测试28天之后的皮肤参数的评估来评价正在试验的产品的耐受性。志愿者通过专用的调查问卷自我评价所追踪产品的质量。
此外，进行了产品对鱼尾纹平均深度的功效的评价。
在T0、T1h(即施加之后1小时)和T28(即施加测试产品28天之后)进行功效测量。在1小时时的测量使得可以评价提取物的即时张紧作用。在T28时的测量使得可以评价提取物的长期抗老化作用，特别是抗皱作用。通过使用LifeViz MicroTM系统(Quantificare)定量皮肤表面的纹理来进行皱纹深度的评价。LifeViz MicroTM是一种非接触式测量方法，该方法基于目标皮肤区域上的结构化光投影。
结果
在试验期间，患者对乳霜B的耐受性良好。
用含有袋鼠爪提取物的乳霜B处理的皮肤显示，施加28天之后，与用乳霜A(安慰剂乳霜)处理的皮肤相比，皱纹深度显著减少10％(图6)。施加乳霜B之后一小时可见皱纹深度减少5％，这强调了本发明的提取物的即时张紧作用(图6)。
Claims (14)
1.一种袋鼠爪(Anigozanthos flavidus)提取物作为唯一活性成分用作抗老化剂的美容用途。
2.根据权利要求1所述的美容用途，其中所述袋鼠爪提取物用作皮肤的抗皱剂、光滑剂、调色剂、重构剂或重塑剂。
3.根据权利要求1所述的美容用途，其中所述袋鼠爪提取物作为活性剂存在于美容组合物中用于预防、延迟和/或治疗一种或多种皮肤老化征兆。
4.根据权利要求3所述的美容用途，其中所述皮肤老化征兆选自：皮肤上细纹和/或皱纹的出现，皮肤的萎缩或下垂，皮肤的光亮度丧失，肤色暗沉，皮肤上的色斑，眼睛下方的黑圈，皮肤的密度丧失，皮肤的紧致度丧失，皮肤的张力丧失，皮肤的弹性丧失，皮肤的收缩性丧失，皮肤的维持丧失，皮肤松弛，皮肤的光滑外观改变，皮肤的粗糙度增加，以及脸部的轮廓改变。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的美容用途，其中所述袋鼠爪提取物用于改善、修复或预防成人皮肤的机械性质的改变。
6.根据权利要求1-4中任一项所述的美容用途，其中所述袋鼠爪提取物用于改善成人皮肤的肤色或光亮度。
7.根据权利要求1-4中任一项所述的美容用途，其中所述袋鼠爪提取物从袋鼠爪的地上部分获得。
8.根据权利要求7所述的美容用途，其中所述袋鼠爪提取物从选自花、叶、茎和其组合的地上部分获得。
9.根据权利要求7所述的美容用途，其中所述袋鼠爪提取物通过用极性溶剂提取获得。
10.根据权利要求3所述的美容用途，其中所述美容组合物还包含至少一种选自以下的其它美容剂：维生素，阳光过滤剂和防晒剂，抗氧化剂，提拉剂，紧致剂，抗斑剂，减肥剂，导出剂，保湿剂，舒缓剂，擦洗剂或去死皮剂，皮脂调节剂，增亮活性剂，自晒黑活性剂，美黑促进剂以及其组合。
11.根据权利要求3所述的美容用途，其中所述美容组合物选自：水溶液，水-醇溶液，水包油（O/W）或油包水（W/O）或多重乳液，液滴尺寸小于100 nm的纳米乳液，或脂肪相以小球形式在水相中的分散液，悬浮液，粉剂，洗剂，乳剂，乳霜，油膏，凝胶，泡沫，以及软膏。
12.根据权利要求3所述的美容用途，其中所述美容组合物选自水性凝胶或脂质体悬浮液。
13.根据权利要求3所述的美容用途，其中所述美容组合物选自美容产品、化妆品或身体卫生产品。
14.根据权利要求3所述的美容用途，其中所述美容组合物选自：洗剂，精华露，水性或油性凝胶，乳液，乳霜，啫喱，护肤水，软膏，香膏，粉底，喷雾，眼影，唇彩，润唇膏，泡沫，除臭剂，滋养面膜，浴用凝胶，以及去死皮或擦洗产品。
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