KR20190067279A - 아데노바이러스를 사용하는 치료 방법 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 내피세포-특이성 프로모터에 작동적으로 연결된 FAS-키메라 유전자를 포함하는 핵산 구조물을 포함하는 아데노바이러스를 투여함으로써 환자에게서 종양의 크기를 감소 또는 축소시키거나, 또는 종양을 제거하거나, 또는 종양에서 신생혈관형성 또는 혈관신생을 억제, 감소, 또는 축소시키는 방법을 제공한다. 또한, 내피세포-특이성 프로모터에 작동적으로 연결된 FAS-키메라 유전자를 포함하는 아데노바이러스의 동종 집단 및 그의 용도를 제공한다.

Description

아데노바이러스를 사용하는 치료 방법{TREATMENT METHODS USING ADENOVIRUS}
본 명세는 암 생물학, 면역학 및 약물학에 관한 것이다. 보다 특히, 본 명세는 Fas-키메라 트랜스유전자 산물을 발현하는 핵산 구조물 또는 상기 핵산 구조물의 동종 집단의 투여에 의해 부안과암과 관련된 질병 또는 질환을 치료하는 방법에 관한 것이다.
부인과암은 임상적으로 공격적이며, 대개는 여성 생식관의 조직에서 발생하고, 불량한 결과와 연관된다. 이들 암은 난소, 자궁, 나팔관, 및 자궁경부의 암, 및 또한 악성 혼합 뮐러 종양(MMMT)을 포함한다. 드문 경우에, MMMT는 또한 여성 복막(복벽의 내층)에서 발생할 수 있다.
부인과암은 발견이 어려울 수 있으며 종종 진행된 단계에서 진단된다. 난소암은 여성암의 대략 3퍼센트를 차지한다. 난소암은 여성에서 9번째로 가장 흔한 암이지만, 암-관련 사망의 다섯 번째 주된 원인이며 가장 치명적인 부인과암이다(2012년). 난소암은 화학요법에 민감하며 백금 및 탁산-기재 요법에 대해 높은 응답률을 갖는다. 그러나, 치료학적 설계 및 전달의 진보에도 불구하고, 암 재발 및 화학요법 내성은 여전히 상기 유형 암의 치료에 장애이다. 공격적인 1차 요법 및 높은 초기 응답률에도 불구하고, 진행된 난소 암종을 갖는 대부분의 여성은 재발하고 약물-내성 질병을 나타낼 것이다.
국제공개공보 WO 2014/118643 A2 (2014.08.07)
이러한 진행된 질병 상태에서, 후속의 화학요법에 대한 응답률은 실질적으로 감소하며, 이는 개선된 치료제 및 치료 전략을 개발해야 할 중대한 필요성을 강조한다.
본 발명은 환자에게 유효량의, 내피세포 특이성 프로모터에 작동적으로 연결된 Fas-키메라 유전자를 포함하는 핵산 구조물을 투여함을 포함하는, 상기 환자에게서 종양의 크기를 축소 또는 감소시키거나 또는 상기 종양의 성장을 제거하거나 지연시키는 방법에 관한 것이며, 여기에서 상기 핵산 구조물에 의해 암호화된 Fas-키메라 유전자 산물은 상기 환자에게서 상기 종양의 크기를 축소 또는 감소시키거나 또는 상기 종양을 제거하고, 상기 종양은 여성 부인과암 또는 그의 전이와 관련된다. 본 발명은 또한 종양이 있는 환자에게 유효량의, 내피세포 특이성 프로모터에 작동적으로 연결된 Fas-키메라 유전자를 포함하는 핵산 구조물을 투여함을 포함하는, 상기 종양에서 신생혈관형성 또는 혈관신생을 억제, 감소 또는 축소시키는 방법을 제공하며, 여기에서 상기 핵산 구조물에 의해 암호화된 Fas-키메라 유전자 산물은 상기 종양에서 신생혈관형성 또는 혈관신생을 억제, 감소 또는 축소시키며 상기 종양은 여성 부인과암 또는 그의 전이와 관련된다. 또한, 본 발명은 유효량의, 내피세포 특이성 프로모터에 작동적으로 연결된 Fas-키메라 유전자를 포함하는 핵산 구조물을 투여함을 포함하는, 환자에게서 뮐러암, 난소암, 복막암, 나팔관암, 또는 자궁 유두상 장액성 암종과 관련되거나 또는 이들로부터 유래하는 종양을 치료하거나 예방하는 방법을 포함하며, 여기에서 상기 핵산 구조물에 의해 암호화된 Fas-키메라 유전자 산물은 여성 부인과암 또는 그의 전이를 치료하거나 예방한다. 하나의 실시태양에서, 상기 종양 또는 그의 전이는 상기 투여 후 크기가 감소 또는 제거되거나 또는 상기 종양의 성장이 감소 또는 제거된다. 또 다른 실시태양에서, 종양 또는 그의 전이는 상기 종양의 최장 직경(LD)이 상기 투여 전의 LD에 비해 적어도 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 100% 감소하도록 감소된다. 다른 실시태양에서, 상기 여성 부인과암은 뮐러암, 난소암, 복막암, 나팔관암, 자궁 유두상 장액성 암종, 이들의 임의의 조합 또는 이들의 전이와 관련되거나 또는 이들로부터 유래한다.
일부 실시태양에서, 상기 환자는 선행의 백금 기재 요법을 받은 적이 있다. 일례로, 상기 환자는 재발한 백금-내성암이 있다. 또 다른 예로, 상기 재발한 백금-내성암 또는 재발한 탁산-내성암이 있는 환자는 백금 기재 요법 또는 탁산 기재 요법을 완료하거나 받은 지 6개월 이내에 진행성 종양을 갖는다.
몇몇 실시태양에서, 상기 환자는 아데노바이러스에 대한 기존 항체를 갖지 않거나 또는 아데노바이러스에 대한 항체를 나타내지 않는다.
다른 실시태양에서, 본 발명의 방법은 또한 유효량의 하나 이상의 화학요법제를 투여함을 포함한다. 상기 하나 이상의 화학요법제를 상기 핵산 구조물의 투여 전에, 상기 투여와 동시에, 또는 상기 투여 후에 투여할 수 있다. 특정한 실시태양에서, 상기 화학요법제는 패클리탁셀이다.
몇몇 실시태양에서, 본 발명의 방법을 위한 핵산 구조물은 아데노바이러스이다. 일례로, 상기 아데노바이러스는 Fas 폴리펩티드의 막통과 도메인 및 세포내 도메인에 융합된 TNF 수용체 1(TNFR1) 폴리펩티드의 세포외 도메인을 포함하는 Fas-키메라 유전자 산물을 발현한다. 상기 Fas-키메라 유전자 산물을 암호화하는 폴리뉴클레오티드는 내피세포 특이성 프로모터, 예를 들어, PPE-1-3X 프로모터에 작동적으로 연결된다. 특정 실시태양에서, 상기 아데노바이러스는 서열번호 19와 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
본 발명의 하나의 태양은 서열번호 18을 포함하는 핵산 구조물을 포함한다. 또 다른 태양에서, 상기 핵산 구조물은 Fas-키메라 단백질을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 추가로 포함한다. 다른 실시태양에서, 본 발명은 서열번호 19를 포함하는 벡터이다. 상기 벡터는 아데노바이러스일 수 있다.
더욱 다른 실시태양에서, 본 발명은 유러피언 콜렉션 오브 셀 컬쳐(ECACC) 기탁 번호 13021201을 갖는 아데노바이러스이다. 상기 아데노바이러스는 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 순수할 수 있다. 일례로, 본 발명은 상기 아데노바이러스 및 약학적으로 허용 가능함 담체를 포함하는 약학 조성물을 포함하며, 여기에서 상기 조성물은 또 다른 유형의 아데노바이러스, 예를 들어, 서열번호 20 또는 서열번호 21을 포함하는 아데노바이러스는 함유하지 않는다.
본 발명은 또한 혈관신생 또는 신생혈관형성의 억제, 감소 또는 축소가 필요한 개체에게 상기 핵산 구조물, 상기 벡터, 상기 아데노바이러스 또는 상기 조성물을 투여함을 포함하는, 상기 개체의 조직에서의 상기 억제, 감소 또는 축소 방법을 포함한다. 하나의 실시태양에서, 상기 조직은 종양을 포함한다. 또 다른 실시태양에서, 상기 종양의 크기는 상기 투여후 축소 또는 감소하거나 또는 상기 종양의 성장이 상기 투여후 느려진다. 다른 실시태양에서, 상기 종양은 갑상선암, 신경내분비암, 교모세포종, 여성 부인과암, 이들의 임의의 조합 또는 이들의 전이로부터 유래하거나 또는 이들과 관련된다.
도 1은 비히클, VB111 1E9(109 바이러스 입자(VP)의 VB-111), VB111 1E11(1011 VP의 VB-111), ComLow(20 ㎎/㎏ 카보플라틴 + 10 ㎎/㎏ 알림타(Alimta)), ComHigh(50 ㎎/㎏ 카보플라틴 + 30 ㎎/㎏ 알림타), VB111 1E9 + ComLow(VB-111 109 VP + 20 ㎎/㎏ 카보플라틴 + 10 ㎎/㎏ 알림타), VB111 1E9 + ComHigh(VB-111 109 VP + 50 ㎎/㎏ 카보플라틴 + 30 ㎎/㎏ 알림타), VB111 1E11 + ComLow(VB-111 1011 VP + 20 ㎎/㎏ 카보플라틴 + 10 ㎎/㎏ 알림타), 및 VB111 1E11 + ComHigh(VB-111 1011 VP + 50 ㎎/㎏ 카보플라틴 + 30 ㎎/㎏ 알림타)(x 축)이 투여된 루이스 폐암종 마우스에서의 평균 종양 크기(y 축)를 도시한다.
도 2는 비히클(1), VB111 1E9(109 바이러스 입자(VP)의 VB-111)(2), VB111 1E11(1011 VP의 VB-111)(3), ComLow(20 ㎎/㎏ 카보플라틴 + 10 ㎎/㎏ 알림타)(4), ComHigh(50 ㎎/㎏ 카보플라틴 + 30 ㎎/㎏ 알림타)(5), VB111 1E9 + ComLow(VB-111 109 VP + 20 ㎎/㎏ 카보플라틴 + 10 ㎎/㎏ 알림타)(6), VB111 1E9 + ComHigh(VB-111 109 VP + 50 ㎎/㎏ 카보플라틴 + 30 ㎎/㎏ 알림타)(7), VB111 1E11 + ComLow(VB-111 1011 VP + 20 ㎎/㎏ 카보플라틴 + 10 ㎎/㎏ 알림타)(8), 및 VB111 1E11 + ComHigh(VB-111 1011 VP + 50 ㎎/㎏ 카보플라틴 + 30 ㎎/㎏ 알림타)(9)(x 축)이 투여된 루이스 폐암종 마우스에서의 평균 종양 크기(y 축)의 박스 플롯을 도시한다.
도 3은 내피세포-특이성 프로모터(예를 들어, VB-111) 및 패클리탁셀에 작동적으로 연결된 FAS-키메라 유전자를 포함하는 아데노바이러스의 복합 요법 섭생을 도시한다. 약 3 x 1012 VP 또는 1 x 1013 VP의 VB-111을 8주마다 투여하고, 패클리탁셀을 매주 1회 투여한다.
I. 정의
달리 정의하지 않는 한, 본 발명에 사용된 모든 기술과학 용어들은 본 발명이 속한 분야의 통상적인 숙련가에 의해 통상적으로 이해되는 바와 동일한 의미를 갖는다. 상충하는 경우, 상기 정의를 포함하는 본 출원이 지배할 것이다. 문맥상 달리 요구되지 않는 한, 단수의 용어들은 복수를 포함할 것이고, 복수의 용어들은 단수를 포함할 것이다. 본 발명에서 언급된 모든 공보, 특허 및 다른 참고문헌들은 각각의 개별적인 공보 또는 특허 출원이 구체적이고 개별적으로 참고로 인용되는 것으로 지시되는 것처럼 모든 목적을 위해 내용 전체가 참고로 인용된다.
본 발명에 개시된 바와 유사하거나 동등한 방법 및 물질을 본 발명의 실시 또는 시험에 사용할 수 있지만, 적합한 방법 및 물질을 하기에 개시한다. 상기 물질, 방법 및 예들은 단지 예시적일뿐이며 제한을 의도하지 않는다. 본 발명의 다른 특징 및 이점은 상세한 설명 및 특허청구범위로부터 자명할 것이다.
본 발명을 더욱 한정하기 위해서, 하기의 용어 및 정의를 제공한다.
본 발명에 사용되는 바와 같이, "항체"는 완전한 면역글로불린, 또는 그의 항원-결합 단편을 의미한다. 본 발명의 항체는 임의의 아이소타입 또는 부류(예를 들어, M, D, G, E 및 A) 또는 임의의 하위부류(예를 들어, G1-4, A1-2)의 것일 수 있으며 카파(κ) 또는 람다(λ) 경쇄를 가질 수 있다.
본 발명에 사용된 바와 같은 "유효량"이란 용어는 목적하는 결과를 성취하기 위해, 필요한 투여량 및 기간동안 유효한 양을 지칭한다. 목적하는 결과는 예를 들어, 시험관내 또는 생체내 신생혈관형성 또는 혈관신생의 축소 또는 억제일 수 있다. 유효량은 신생혈관형성 또는 혈관신생의 완전한 제거일 필요는 없다.
본 발명에 사용된 바와 같이, "치료학적 유효량"은 목적하는 치료학적 결과를 성취하기 위해, 필요한 투여량 및 기간동안 유효한 양을 지칭한다. 치료학적 결과는 예를 들어, 증상의 감소, 방사선 영상화에서 종양 크기의 퇴보 또는 안정화, 연장된 생존, 개선된 이동성 등일 수 있다. 치료학적 결과는 "치유"일 필요는 없다.
본 발명에 사용되는 바와 같이, "예방학적 유효량"은 목적하는 예방학적 결과를 성취하기 위해, 필요한 투여량 및 기간동안 유효한 양을 지칭한다. 전형적으로, 예방학적 용량은 질병의 보다 이른 단계에 또는 상기 단계 전에 개체에 사용되기 때문에, 상기 예방학적 유효량은 상기 치료 유효량보다 적을 것이다.
"폴리뉴클레오티드" 또는 "뉴클레오티드"란 용어는 단일의 핵산뿐만 아니라 복수의 핵산을 포함함을 의미하며, 단리된 핵산 분자 또는 구조물, 예를 들어, 메신저 RNA(mRNA) 또는 플라스미드 DNA(pDNA)를 지칭한다. 몇몇 실시태양에서, 폴리뉴클레오티드는 통상적인 포스포다이에스테르 결합 또는 비-통상적인 결합(예를 들어, 아미드 결합, 예를 들어, 펩티드 헥산(PNA)에서 발견되는 결합)을 포함한다.
본 발명에 사용되는 바와 같이, "폴리뉴클레오티드", "뉴클레오티드", "핵산"은 호환적으로 사용될 수 있으며 번역되지 않은 5' 및 3' 서열, 암호화 서열을 포함한 전장의 cDNA 서열의 뉴클레오티드 서열뿐만 아니라 상기 핵산 서열의 단편, 에피토프, 도메인 및 변체를 함유한다. 상기 폴리뉴클레오티드는 변형되지 않은 RNA 또는 DNA 또는 변형된 RNA 또는 DNA일 수 있는 임의의 폴리리보뉴클레오티드 또는 폴리데옥시리보뉴클레오티드로 구성될 수 있다. 예를 들어, 폴리뉴클레오티드는 단일- 및 이중-가닥 DNA, 단일- 및 이중-가닥 영역의 혼합물인 DNA, 단일- 및 이중-가닥 RNA, 및 단일- 및 이중-가닥 영역의 혼합물인 RNA, 단일-가닥 또는 보다 전형적으로는 이중-가닥 또는 단일- 및 이중-가닥 영역의 혼합물일 수 있는 DNA 및 RNA를 포함하는 하이브리드 분자로 구성될 수 있다. 또한, 상기 폴리뉴클레오티드는 RNA 또는 DNA 또는 RNA와 DNA 모두를 포함하는 삼중-가닥 영역으로 구성될 수 있다. 폴리뉴클레오티드는 또한 안정성 또는 다른 이유로 인해 변형된 하나 이상의 변형된 염기 또는 DNA 또는 RNA 주쇄를 함유할 수 있다. "변형된" 염기는 예를 들어, 트리틸화된 염기 및 통상적이지 않은 염기, 예를 들어, 이노신을 포함한다. DNA 및 RNA에 대해 다양한 변형을 수행할 수 있으며; 따라서 "폴리뉴클레오티드"는 화학적으로, 효소적으로, 또는 대사적으로 변형된 형태를 포함한다.
본 발명에서, 폴리펩티드는 펩티드 결합 또는 변형된 펩티드 결합에 의해 서로 결합된 아미노산, 즉, 펩티드 등배전자체로 구성될 수 있으며, 20개 유전자-암호화된 아미노산 이외의 아미노산(예를 들어, 비-천연 아미노산)을 함유할 수 있다. 본 발명의 폴리펩티드를 천연 과정, 예를 들어, 번역후 가공에 의해서, 또는 당해 분야에 널리 공지된 화학적 변형 기법에 의해서 변형시킬 수 있다. 상기와 같은 변형은 기본서 및 보다 상세한 논문뿐만 아니라 방대한 연구 문헌에 충분히 개시되어 있다. 변형은 펩티드 주쇄, 아미노산 측쇄 및 아미노 또는 카복실 말단을 포함하여, 폴리펩티드 중의 어디에서나 일어날 수 있다. 동일한 유형의 변형이 동일하거나 다양한 정도로, 주어진 폴리펩티드 중의 여러 부위에 존재할 수 있음을 알 것이다. 또한, 주어진 폴리펩티드는 다수 유형의 변형들을 함유할 수 있다. 폴리펩티드는 예를 들어, 유비퀴틴화의 결과로서 분지될 수 있으며, 분지가 있거나 없는 환상일 수도 있다. 환상, 분지된, 및 분지된 환상 폴리펩티드는 번역 후 천연 과정으로부터 생성되거나 또는 합성 방법에 의해 제조될 수 있다. 변형은 아세틸화, 아실화, ADP-리보실화, 아미드화, 플라빈의 공유 부착, 헴 부분의 공유 부착, 뉴클레오티드 또는 뉴클레오티드 유도체의 공유 부착, 지질 또는 지질 유도체의 공유 부착, 포스포티딜이노시톨의 공유 부착, 가교결합, 환화, 다이설파이드 결합 형성, 탈메틸화, 공유 가교결합의 형성, 시스테인의 형성, 피로글루타메이트의 형성, 포르밀화, 감마-카복실화, 글리코실화, GPI 앵커 형성, 하이드록실화, 요오드화, 메틸화, 미리스토일화, 산화, peg화, 단백질 분해 과정, 인산화, 프레닐화, 라셈화, 셀레노일화, 황화, 아미노산의 단백질에의 운반-RNA 매개된 첨가, 예를 들어, 아르기닐화 및 유비퀴틴화를 포함한다. (예를 들어, 하기의 문헌들을 참조하시오: Proteins - Structure And Molecular Properties, 2nd Ed. , T. E. Creighton, W. H. Freeman and Company, New York (1993); Posttranslational Covalent Modification of Proteins, B. C. Johnson, Ed. , Academic Press, New York, pgs. 1-12 (1983); Seifter et al. , Meth Enzymol 182:626-646 (1990); Rattan et al. , Ann NY Acad Sci 663:48-62 (1992). )
본 발명의 임의의 폴리펩티드 또는 폴리뉴클레오티드를 언급할 때 "단편", "변체", "유도체" 및 "유사체"란 용어들은 적어도 일부의 활성, 즉, 상기 폴리펩티드 또는 폴리뉴클레오티드의 임의의 천연 작용으로서 작용하는 능력을 유지하는 임의의 폴리펩티드 또는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 예를 들어, 종양 괴사 인자 수용체 1(TNFR1)의 "단편", "변체", "유도체" 및 "유사체"는 천연 전장의 TNFR1의 일부 활성, 예를 들어, TNFR1 리간드, 즉, TNF-알파 또는 림프독소에 결합하는 능력을 갖는다. 또 다른 예애서, FAS 폴리펩티드의 "단편", "변체", "유도체" 및 "유사체"는 천연 전장의 FAS 폴리펩티드의 일부 활성, 예를 들어, 세포사멸을 유도하는 능력을 갖는다. 다른 예에서 내피세포-특이성 프로모터의 "단편", "변체", "유도체" 및 "유사체"는 상기 프로모터에 작동적으로 연결된 유전자의 내피세포-특이성 발현을 유도할 수 있다. 상기 TNFR1, FAS 폴리펩티드 및 내피세포-특이성 프로모터의 다양한 단편, 변체, 유사체 또는 유도체의 추가의 비제한적인 예들을 하기에 개시한다.
본 발명에서, "폴리펩티드 단편" 또는 "단백질 단편"은 폴리펩티드의 짧은 아미노산 서열을 지칭한다. 단백질 또는 폴리펩티드 단편은 "독립적"이거나 또는 상기 단편이 영역의 일부를 형성하는 보다 큰 폴리펩티드내에 포함될 수 있다. 본 발명의 폴리펩티드 단편의 전형적인 예는 예를 들어, 약 5개 아미노산, 약 10개 아미노산, 약 15개 아미노산, 약 20개 아미노산, 약 30개 아미노산, 약 40개 아미노산, 약 50개 아미노산, 약 60개 아미노산, 약 70개 아미노산, 약 80개 아미노산, 약 90개 아미노산, 및 약 100개 아미노산을 포함하는 단편들을 포함한다.
"보존적 아미노산 치환"은 아미노산 잔기가 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기로 대체되는 것이다. 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기들의 계열들, 예를 들어, 염기성 측쇄(예를 들어, 리신, 아르기닌, 히스티딘), 산성 측쇄(예를 들어, 아스파트산, 글루탐산), 하전되지 않은 극성 측쇄(예를 들어, 글리신, 아스파라진, 글루타민, 세린, 쓰레오닌, 티로신, 시스테인), 비극성 측쇄(예를 들어, 알라닌, 발린, 류신, 아이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌, 트립토판), 베타-분지된 측쇄(예를 들어, 쓰레오닌, 발린, 아이소류신) 및 방향족 측쇄(예를 들어, 타이로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘)가 당해 분야에서 정의되었다. 따라서, 폴리펩티드 중의 아미노산이 동일한 측쇄 계열로부터의 또 다른 아미노산으로 대체되는 경우, 상기 치환을 보존적인 것으로 간주한다. 또 다른 실시태양에서, 일련의 아미노산을 측쇄 계열 구성원들 중의 순서 및/또는 조성이 상이한 구조적으로 유사한 열(string)로 보존적으로 대체할 수 있다.
2개의 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드 서열간의 "서열 일치성 퍼센트"란 용어는 상기 두 서열의 최적의 정렬을 위해 도입시켜야 하는 첨가 또는 결실(즉, 틈)을 고려하여, 비교 창에 걸쳐 상기 서열들에 의해 공유되는 동일한 합치된 위치들의 수를 지칭한다. 합치된 위치는 동일한 뉴클레오티드 또는 아미노산이 표적 및 기준 서열 모두 중에 존재하는 임의의 위치이다. 상기 표적 서열 중에 존재하는 틈은 상기 틈이 뉴클레오티드 또는 아미노산은 아니기 때문에 카운트되지 않는다. 마찬가지로, 상기 기준 서열 중에 존재하는 틈은, 표적 서열 뉴클레오티드 또는 아미노산이 카운트되는 것이지 상기 기준 서열로부터의 뉴클레오티드 또는 아미노산이 카운트되는 것이 아니기 때문에, 카운트되지 않는다.
상기 서열 일치성의 백분율은, 동일한 아미노산 잔기 또는 핵산 염기가 2개 서열 모두에 존재하여 합치된 위치의 수를 제공하는 위치의 수를 측정하고, 상기 합치된 위치의 수를 비교창 중의 전체 위치의 수로 나누고, 상기 결과에 100을 곱하여 서열 일치성의 백분율을 제공함으로써 계산된다. 서열의 비교 및 2개 서열간의 서열 일치성 퍼센트의 측정을, 온라인 사용 및 다운로드 모두를 위해 쉽게 입수할 수 있는 소프트웨어를 사용하여 수행할 수 있다. 적합한 소프트웨어 프로그램들을 다양한 출처로부터, 단백질 및 뉴클레오티드 서열 모두의 정렬을 위해 입수할 수 있다. 서열 일치성 퍼센트의 측정에 적합한 한 가지 프로그램은 bl2seq이며, 이는 미국정부의 국립 생명공학 정보 센터 BLAST 웹 사이트(blast. ncbi. nlm. nih. gov)로부터 입수할 수 있는 프로그램의 BLAST 모음 부분이다. Bl2seq는 BLASTN 또는 BLASTP 연산을 사용하여 2개 서열간의 비교를 수행한다. BLASTN은 핵산 서열의 비교에 사용되는 반면, BLASTP는 아미노산 서열의 비교에 사용된다. 다른 적합한 프로그램은 예를 들어, Needle, Stretcher, Water, 또는 Matcher, 생물정보학 프로그램의 EMBOSS 모음 부분이며, 또한 유럽 생물정보학 연구소(EBI)(www. ebi. ac. uk/Tools/psa)로부터 입수할 수 있다.
폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드 기준 서열과 정렬되는 단일 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드 표적 서열내의 상이한 영역들은 각각 그들 자신의 서열 일치성 퍼센트를 가질 수 있다. 서열 일치성 퍼센트 값을 가장 가까운 1/10로 반올림한다. 예를 들어, 80. 11, 80. 12, 80. 13 및 80. 14는 80. 1로 버리는 반면, 80. 15, 80. 16, 80. 17, 80. 18 및 80. 19는 80. 2로 반올림하는 것에 유의한다. 길이 값은 항상 정수임에 유의한다.
당해 분야의 숙련가는 서열 일치성 퍼센트의 계산을 위한 서열 정렬의 생성이 1차 서열 데이터에 의해 독점적으로 구동되는 2원 서열-서열 비교로 제한되지 않음을 알 것이다. 서열 정렬은 다수의 서열 정렬들로부터 유도될 수 있다. 다수의 서열 정렬을 생성시키는 한 가지 적합한 프로그램은 www. clustal. org로부터 입수할 수 있는 ClustalW2이다. 또 다른 적합한 프로그램은 MUSCLE로, www. drive5. com/muscle/로부터 입수할 수 있다. ClustalW2 및 MUSCLE를 한편으로, 예를 들어, EBI로부터 입수할 수 있다.
서열 정렬을, 서열 데이터를 이종 소스, 예를 들어, 구조 데이터(예를 들어, 결정학적 단백질 구조), 기능 데이터(예를 들어, 돌연변이의 위치), 또는 계통발생 데이터로부터의 데이터와 통합시켜 생성시킬 수 있다. 이종 데이터를 통합시켜 다수의 서열 정렬을 생성시키는 적합한 프로그램은 T-Coffee(www. tcoffee. org로부터 입수할 수 있다)이며, 한편으로 예를 들어, EBI로부터 입수할 수 있다. 서열 일치성 퍼센트를 계산하는데 사용되는 최종 정렬을 자동으로 또는 수동으로 준비할 수 있음을 또한 알 것이다.
본 발명에 사용되는 바와 같이, "결합된", "융합된", "융합", "키메릭" 및 "키메라"란 용어들은 호환적으로 사용된다. 이들 용어는 화학적 접합 또는 재조합 수단을 포함하여 어떤 수단에 의해서든 2개 이상의 요소 또는 성분들을 함께 결합시킴을 지칭한다. "인-프레임 융합"은 원래의 개방 판독 프레임(ORF)의 정확한 판독 프레임을 유지하는 방식으로, 2개 이상의 ORF를 결합시켜 연속적인 보다 긴 ORF를 형성시킴을 지칭한다. 따라서, 생성되는 재조합 융합 또는 키메릭 단백질은 원래의 ORF에 의해 암호화된 폴리펩티드에 상응하는 2개 이상의 분절을 함유하는 단일 단백질이며, 상기 분절들은 자연에서는 통상적으로 그렇게 결합되지 않는다. 따라서 상기 판독 프레임은 상기 융합된 분절들 전체를 통해 연속적으로 만들어지지만, 상기 분절들은 예를 들어, 인-프레임 링커 서열에 의해 물리적으로 또는 공간적으로 분리될 수도 있다.
"이종" 및 "이종 부분"이란 용어들은 폴리뉴클레오티드, 폴리펩티드 또는 다른 부분이 상기 부분들과 비교되는 존재와 별개의 존재로부터 유래함을 의미한다. 예를 들어, 이종 폴리펩티드는 합성이거나, 또는 상이한 종, 개인의 상이한 세포 유형, 또는 다른 개인들의 동일하거나 상이한 유형의 세포로부터 유래할 수 있다. 하나의 태양에서, 이종 부분은 또 다른 폴리펩티드에 융합되어 융합 폴리펩티드 또는 단백질을 생성시키는 폴리펩티드일 수 있다. 또 다른 태양에서, 이종 부분은 비-폴리펩티드, 예를 들어, 폴리펩티드 또는 단백질에 접합된 PEG일 수 있다.
폴리펩티드와 관련하여, "선형 서열" 또는 "서열"은 아미노에서 카복실 말단 방향으로의 폴리펩티드 중의 아미노산들의 순서이며, 여기에서 상기 서열 중 서로 이웃하는 잔기들은 상기 폴리펩티드의 1차 구조 중에서 연속적이다.
본 발명에 사용되는 바와 같은 "발현"이란 용어는 유전자가 생화학물질, 예를 들어, RNA 또는 폴리펩티드를 생성시키는 과정을 지칭한다. 상기 과정은 비제한적으로 일시적인 발현 및 안정한 발현 모두뿐만 아니라 유전자 녹다운을 포함하여 세포내에서 유전자의 기능적 실재의 임의의 발현을 포함한다. 상기 과정은 비제한적으로 상기 유전자의 메신저 RNA(mRNA), 운반 RNA(tRNA), 작은 헤어핀 RNA(shRNA), 작은 간섭 RNA(siRNA) 또는 임의의 다른 RNA 산물로의 전사 및 상기와 같은 mRNA의 폴리펩티드(들)로의 번역을 포함한다. 최종 목적 산물이 생화학물질인 경우, 발현은 상기 생화학물질 및 임의의 전구체의 생성을 포함한다.
II. FAS-키메라 유전자 및 내피세포 특이성 프로모터를 포함하는 핵산 구조물
본 발명은 FAS-키메라 단백질을 발현하는 핵산 구조물을 투여함을 포함하는, 종양 중 혈관신생 또는 신생혈관형성의 억제, 감소 또는 축소에 의해 여성 부인과암에서 종양 크기를 축소 또는 감소시키는 방법에 관한 것이다. 본 발명에서 상기 FAS-키메라 단백질(또는 유전자 산물)을 암호화하는 유전자를, 내피 세포에서 상기 FAS-키메라 유전자 산물의 발현을 지시하는 내피세포 특이성 프로모터에 연결시킬 수 있다. 상기와 같은 세포독성 유전자 산물의 발현은 과도한 신생혈관형성 또는 혈관 성장이 바람직하지 못한 상황에, 예를 들어, 종양에 유용하다.
본 발명은 또한 내피세포-특이성 프로모터에 작동적으로 연결된 FAS-키메라 유전자를 포함하는 핵산 구조물의 동종 집단을 제공한다.
A. FAS-키메라
본 발명의 핵산 구조물에 의해 발현된 FAS-키메라는 적어도 2개의 "사멸 수용체" 폴리펩티드를 포함하며, 상기 폴리펩티드들은 각각 상이한 단백질로부터 유래한다. 상기 FAS-키메라 단백질의 제1 폴리펩티드는 종양 괴사 인자 수용체 1(TNFR1)의 리간드 결합 도메인을 포함한다. 상기 FAS-키메라 단백질의 제2 폴리펩티드는 FAS 폴리펩티드의 효과기 도메인을 포함한다.
상기 TNFR1의 리간드 결합 도메인은 TNFR1 리간드에 결합하는 임의의 도메인일 수 있다. 하나의 실시태양에서, 상기 TNFR1 리간드는 TNF-α이다. 또 다른 실시태양에서, 상기 TNFR1 리간드는 림프독소-α이다. TNFR1의 리간드 결합 도메인은 TNFR1의 세포외 도메인 또는 그의 임의의 단편, 변체, 유도체 또는 유사체일 수 있다. 상기 TNFR1 리간드 결합 도메인의 비제한적인 예를 하기에 개시한다.
본 발명에 유용한 FAS 폴리펩티드의 효과기 도메인은, 사멸-유도 신호 복합체(DISC)를 형성하고 이에 의해 세포사멸을 유도하는 임의의 FAS 도메인을 포함한다. 하나의 실시태양에서, FAS 폴리펩티드의 효과기 도메인은 세포내 도메인, 막통과 도메인, 또는 상기 둘을 모두 포함한다. FAS 폴리펩티드 효과기 도메인의 비제한적인 예를 하기에 개시한다.
상기 TNFR1 및 FAS 폴리펩티드를 펩티드 결합에 의해서 또는 링커에 의해서 연결시킬 수 있다. 상기 TNFR1 리간드 결합 도메인을 상기 FAS 효과기 도메인과 연결하는 링커는 폴리펩티드 링커 또는 비-펩티드 링커일 수 있다. 예를 들어, 상기 FAS-키메라 단백질에 대한 링커는 하나 이상의 글리신, 세린, 류신 또는 이들의 임의의 조합을 포함할 수 있다. 하나의 실시태양에서, 본 발명에 유용한 링커는 Ser-Leu를 포함한다. 또 다른 실시태양에서, 본 발명에 유용한 링커는 (GGGS)n을 포함하며(Denise et al. J. Biol. Chem. 277:35035-35043 (2002)), 여기에서, n은 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10 이상(서열번호 27)일 수 있다.
1. 종양 괴사 인자 수용체 1
전장의 인간 TNFR1 폴리펩티드는 455 아미노산 길이이며 또한 TNF-R1, 종양 괴사 인자 수용체 유형 I(TNFRI), TNFR-I, TNFRSF1A, TNFAR, p55, P60, 또는 CD120a로서 공지되어 있다. 천연 인간 TNFR1 폴리펩티드는 TNF-α 또는 동종삼량체성 림프독소-α에 결합하는 것으로 공지되어 있다. TNF-α의 세포외 도메인에의 결합은 TNFR1의 동종삼량체화를 이끌어내며, 이어서 상기는 종양 괴사 인자 수용체 유형 1-결합된 사멸 도메인 단백질(TRADD)의 사멸 도메인과 특이적으로 상호작용한다. 다양한 TRADD-상호작용 단백질, 예를 들어, TNF 수용체 결합된 인자(TRAFS), 수용체-상호작용 세린/쓰레오닌-단백질 키나제 1(RIPK1), 및 사멸 도메인을 갖는 Fas-결합된 단백질(FADD)은 TRADD와의 결합에 의해 상기 복합체로 모인다. 상기 복합체는 적어도 2개의 독특한 신호전달 캐스케이드인 세포사멸 및 NF-카파-B 신호전달을 활성화한다.
인간 TNFR1 폴리펩티드 서열로서 보고된 455 aa 폴리펩티드 서열은 UniProtKB 데이터베이스에서 식별번호 P19438-1을 갖는다. 상기 인간 TNFR1 폴리펩티드 서열은 본 발명에서 동형 A 및 서열번호 2로서 표시된다. 서열번호 1은 서열번호 2를 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다. 108 aa의 폴리펩티드 서열은 인간 TNFR1 폴리펩티드 서열의 동형으로서 보고되었으며 UniProtKB 데이터베이스에서 식별번호 P19438-2를 갖는다. 상기 108 aa 폴리펩티드는 동형 A의 아미노산 1 내지 108(서열번호 2)에 상응하며 본 발명에서 동형 B로서 표시된다. 232 aa를 갖는 인간 TNFR1 폴리펩티드의 또 다른 변체는 UniProtKB 데이터베이스에서 식별번호 P19438-3으로서 보고되었다. 상기 232 aa 폴리펩티드는 동형 A의 아미노산 1 내지 232(서열번호 2)에 상응하며 본 발명에서 동형 C로서 표시된다. 인간 TNFR1의 추가적인 천연 변체는 비제한적으로 H51Q, C59R, C59S, C62G, C62Y, P75L, T79M, C81F, C99S, S115G, C117R, C117Y, R121P, R121Q, P305T, 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 그룹 중에서 선택된 하나 이상의 돌연변이를 포함하는 동형 A, B 및 C의 TNFR1 폴리펩티드를 포함한다. 다른 공지된 TNFR1 변체는 L13LILPQ, K255E, S286G, R394L, 412:Missing, GPAA443-446APP, 또는 이들의 임의의 조합을 포함하는 동형 A, B 및 C의 TNFR1 폴리펩티드를 포함한다.
표 1은 인간 야생형 TNFR1 아미노산 서열 및 상기 야생형 TNFR1을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 나타낸다.
TNFR1 서열
서열번호 서열
TNFR1의 아미노산 서열(서열번호 2)
Figure pat00001
TNFR1을 암호화하는 뉴클레오티드 서열(서열번호 1)
Figure pat00002

Figure pat00003
TNFR1의 리간드 결합 도메인의 아미노산 서열(서열번호 4)
Figure pat00004
TNFR1의 리간드 결합 도메인을 암호화하는 뉴클레오티드 서열(서열번호 3)
Figure pat00005
마우스 TNFR1 폴리펩티드 서열 및 그의 변체를 또한 보고한다. 454 aa 마우스 TNFR1 폴리펩티드는 UniProtKB 데이터베이스에서 식별번호 P25118을 갖는다. 다른 동물들에서 공지된 TNFR1 폴리펩티드는 비제한적으로 래트(예를 들어, UniProtKB 데이터베이스에서 P22934), 소(예를 들어, UniProtKB 데이터베이스에서 O19131), 돼지(예를 들어, UniProtKB 데이터베이스에서 P50555), 또는 말(예를 들어, UniProtKB 데이터베이스에서 D1MH71)을 포함한다.
상기 전장의 TNFR1을 2개의 쇄, 즉, (1) TNF 수용체 상과 구성원 1A, 막형태(즉, 전장의 TNFR1에 상응하는 아미노산 22 내지 455) 및 (2) TNF-결합 단백질 1(TBPI)(즉, 전장의 TNFR1에 상응하는 아미노산 41 내지 291)로 절단할 수 있다. 상기 전장의 인간 TNFR1 폴리펩티드는 신호 서열(서열번호 2의 아미노산 1 내지 21), 세포외 도메인(서열번호 2의 아미노산 22 내지 211), 막통과 도메인(서열번호 2의 아미노산 212 내지 234) 및 세포질 도메인(서열번호 2의 아미노산 235 내지 455)로 이루어진다. 상기 TNFR1 세포외 도메인은 4 개의 시스테인 반복 영역, TNFR-Cys1(서열번호 2에 상응하는 아미노산 43 내지 82), TNFR-Cys2(서열번호 2에 상응하는 아미노산 83 내지 125), TNFR-Cys3(서열번호 2에 상응하는 아미노산 126 내지 166), 및 TNFR-Cys4(서열번호 2에 상응하는 아미노산 167 내지 196)를 포함한다.
당해 분야의 숙련가가 이해하는 바와 같이, 상기 나열된 도메인들의 시작 및 종료 잔기들은 사용되는 컴퓨터 모델링 프로그램 또는 상기 도메인의 측정에 사용되는 방법에 따라 변할 수 있다. TNFR1의 다양한 기능성 도메인들은 그 자체가 상기 정의된 것들 중에서 다양할 수 있다.
하나의 실시태양에서, FAS-키메라 단백질에 유용한 TNFR1의 리간드 결합 도메인은 TNFR1의 세포외 도메인, 및 이들의 임의의 단편, 변체, 유도체, 또는 유사체들로 필수적으로 이루어지거나, 또는 이루어지며, 여기에서 상기 TNFR1의 세포외 도메인, 또는 이들의 임의의 단편, 변체, 유도체, 또는 유사체들은 TNF-α에 결합한다. 또 다른 실시태양에서, TNFR1의 리간드 결합 도메인은 TNFR-Cys1; TNFR-Cys2; TNFR-Cys3; TNFR-Cys4; TNFR-Cys1 및 TNFR-Cys2; TNFR-Cys1 및 TNFR-Cys3; TNFR-Cys1 및 TNFR-Cys4; TNFR-Cys2 및 TNFR-Cys3; TNFR-Cys2 및 TNFR-Cys4; TNFR-Cys3 및 TNFR-Cys4; TNFR-Cys1, TNFR-Cys2, 및 TNFR-Cys3; TNFR-Cys1, TNFR-Cys2, 및 TNFR-Cys4; TNFR-Cys2, TNFR-Cys3, 및 TNFR-Cys4; 또는 TNFR-Cys1, TNFR-Cys2, TNFR-Cys3, 및 TNFR-Cys4를 포함한다. 다른 실시태양에서, 상기 FAS-키메라 단백질 중 TNFR1의 리간드 결합 도메인은 TNF 결합 단백질 I를 포함한다. 더욱 다른 실시태양에서, 상기 FAS-키메라 단백질의 TNFR1 리간드 결합 도메인은 서열번호 2의 아미노산 22 내지 190, 아미노산 22 내지 191, 아미노산 22 내지 192, 아미노산 22 내지 193, 아미노산 22 내지 194, 아미노산 22 내지 195, 아미노산 22 내지 196, 아미노산 22 내지 197, 아미노산 22 내지 198, 아미노산 22 내지 199, 아미노산 22 내지 200, 아미노산 22 내지 201, 아미노산 22 내지 202, 아미노산 22 내지 203, 아미노산 22 내지 204, 아미노산 22 내지 205, 아미노산 22 내지 206, 아미노산 22 내지 207, 아미노산 22 내지 208, 아미노산 22 내지 209, 아미노산 22 내지 210, 또는 아미노산 22 내지 211과 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 상기 서열로 필수적으로 이루어지거나, 또는 상기 서열로 이루어지며, 여기에서 상기 리간드 결합 도메인은 TNFR1 리간드, 예를 들어, TNF-α에 결합한다.
다른 실시태양에서, 상기 TNFR1의 리간드 결합 도메인은 신호 펩티드를 추가로 포함한다. 적합한 신호 펩티드의 일례는 TNFR1의 신호 펩티드, 예를 들어, 서열번호 2의 아미노산 1 내지 21이다. 더욱 다른 실시태양에서, 상기 FAS-키메라 유전자 산물의 리간드 결합 도메인은 서열번호 2의 아미노산 1 내지 190, 아미노산 1 내지 191, 아미노산 1 내지 192, 아미노산 1 내지 193, 아미노산 1 내지 194, 아미노산 1 내지 195, 아미노산 1 내지 196, 아미노산 1 내지 197, 아미노산 1 내지 198, 아미노산 1 내지 199, 아미노산 1 내지 200, 아미노산 1 내지 201, 아미노산 1 내지 202, 아미노산 1 내지 203, 아미노산 1 내지 204, 아미노산 1 내지 205, 아미노산 1 내지 206, 아미노산 1 내지 207, 아미노산 1 내지 208, 아미노산 1 내지 209, 아미노산 1 내지 210, 또는 아미노산 1 내지 211과 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 상기 서열로 필수적으로 이루어지거나, 또는 상기 서열로 이루어지며, 여기에서 상기 리간드 결합 도메인은 TNFR1 리간드, 예를 들어, TNF-α에 결합한다. 특정한 실시태양에서, 상기 FAS-키메라 단백질의 TNFR1 리간드 결합 도메인은 서열번호 4와 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 상기 서열로 필수적으로 이루어지거나, 또는 상기 서열로 이루어지며, 여기에서 상기 리간드 결합 도메인은 TNFR1 리간드, 예를 들어, TNF-α에 결합한다.
더욱 다른 실시태양에서, 상기 TNFR1의 리간드 결합 도메인은 서열번호 3과 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다.
더욱 다른 실시태양에서, 상기 FAS-키메라 단백질의 TNFR1 리간드 결합 도메인은 서열번호 2의 아미노산 22 내지 108(TNFR1 동형 B), 서열번호 2의 아미노산 22 내지 232(TNFR1 동형 C), 또는 서열번호 2의 아미노산 44 내지 291(TBP1)과 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 상기 서열로 필수적으로 이루어지거나, 또는 상기 서열로 이루어지며, 여기에서 상기 리간드 결합 도메인은 TNFR1 리간드, 예를 들어, TNF-α에 결합한다.
2. FAS 폴리펩티드
상기 전장의 인간 FAS 폴리펩티드는 335 아미노산 길이이며 또한 종양 괴사 인자 수용체 상과 구성원 6, Apo-1 항원, 세포사멸-매개 표면 항원 FAS, FASLG 수용체, 또는 CD95로서도 공지되어 있다. 천연 FAS 폴리펩티드는 TNFSF6/FASLG에 대한 수용체이다. 상기 FAS 폴리펩티드가 상기 FAS 리간드(FasL)에 결합하는 경우, FAS와 FasL간의 상호작용은 사멸-유도 신호 복합체(DISC)를 형성시키고, 상기 복합체는 FADD, 카스파제-8 및 카스파제-10을 함유한다. 일부 유형의 세포(유형 I)에서, 가공된 카스파제-8은 상기 카스파제 과의 다른 구성원들을 직접 활성화시키고, 상기 세포의 세포사멸의 실행을 촉발한다. 다른 유형의 세포(유형 II)에서, 상기 FAS-DISC는 미토콘드리아로부터 세포사멸전 인자의 방출 및 카스파제-8의 증폭된 활성화를 전진 증가시키는 피드백 고리를 시작한다. FAS-매개된 세포사멸은 말초 면역관용의 유도, 성숙한 세포의 항원-자극 자살 또는 이둘 모두에 한 역할을 할 수도 있다.
인간 FAS 폴리펩티드 서열로서 보고된 335 aa 폴리펩티드 서열은 UniProtKB 데이터베이스에서 식별 번호 P25445-1을 갖는다. 상기 인간 FAS 폴리펩티드 서열을 본 발명에서 서열번호 6으로 표시한다. 서열번호 5는 서열번호 6을 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다. 상기 FAS 폴리펩티드를 암호화하는 뉴클레오티드 서열은 또한 APT1, FAS1 또는 TNFRSF6으로서 공지되어 있다. 전장의 FAS 폴리펩티드는 신호 펩티드(서열번호 6에 상응하는 아미노산 1 내지 25), 세포외 도메인(서열번호 6에 상응하는 아미노산 26 내지 173), 막통과 도메인(서열번호 6에 상응하는 아미노산 174 내지 190) 및 세포내(또는 세포질) 도메인(서열번호 6에 상응하는 아미노산 191 내지 335)을 함유한다. 상기 세포내 도메인은 사멸 도메인(예를 들어, 서열번호 6에 상응하는 아미노산 230 내지 314)을 함유한다.
당해 분야의 숙련가가 이해하는 바와 같이, 상기 나열된 도메인들의 시작 및 종료 잔기들은 사용되는 컴퓨터 모델링 프로그램 또는 상기 도메인의 측정에 사용되는 방법에 따라 변할 수 있다. FAS의 다양한 기능성 도메인들은 그 자체가 상기 정의된 것들 중에서 다양할 수 있다. 표 2는 야생형 인간 FAS 아미노산 서열 및 상기 FAS 단백질을 암호화흔 뉴클레오티드 서열을 나타낸다.
FAS 서열
서열
인간 FAS 단백질의 아미노산 서열(서열번호 6)
Figure pat00006
인간 FAS 서열을 암호화하는 뉴클레오티드 서열(서열번호 5)
Figure pat00007
FAS의 효과기 도메인의 아미노산 서열(서열번호 8)
Figure pat00008
FAS의 효과기 도메인을 암호화하는 뉴클레오티드 서열(서열번호 7)
Figure pat00009

Figure pat00010
마우스 FAS 폴리펩티드 서열 및 그의 변체를 또한 보고한다. 327 aa 마우스 FAS 폴리펩티드는 UniProtKB 데이터베이스에서 식별번호 P25446을 갖는다. 다른 동물들에서 공지된 FAS 폴리펩티드는 비제한적으로 긴꼬리 원숭이(예를 들어, UniProtKB 데이터베이스에서 Q9BDN4), 붉은털 원숭이(예를 들어, UniProtKB 데이터베이스에서 Q9BDP2), 래트(예를 들어, UniProtKB 데이터베이스에서 Q63199), 또는 소(예를 들어, UniProtKB 데이터베이스에서 P51867)을 포함한다. 상기 FAS 폴리펩티드에서의 서열 변화를 근거로, 당해 분야의 통상적인 숙련가는 상기 FAS 폴리펩티드의 효과기 도메인 중의 서열 변화를 확인할 수 있다. 예를 들어, 상기 FAS 효과기 도메인의 천연 변체는 C178R, L180F, P183L, I184V, T198I, Y232C, T241K, T241P, V249L, R250P, R250Q, G253D, G253S, N255D, A257D, I259R, D260G, D260V, D260Y, I262S, N264K, T270I, T270K, E272G, E272K, L278F, K299N, T305I, I310S, 및 이들의 임의의 조합의 하나 이상의 치환 또는 돌연변이를 포함할 수 있다.
하나의 실시태양에서, 본 발명에 유용한 FAS 폴리펩티드의 효과기 도메인은 상기 FAS 폴리펩티드의 사멸 도메인을 포함한다. 또 다른 실시태양에서, 상기 FAS 폴리펩티드의 효과기 도메인은 서열번호 6의 아미노산 230 내지 314와 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 상기 서열로 필수적으로 이루어지거나, 또는 상기 서열로 이루어진다. 다른 실시태양에서, 상기 FAS 폴리펩티드의 효과기 도메인은 상기 FAS 폴리펩티드의 세포내 도메인을 포함한다. 더욱 다른 실시태양에서, 상기 FAS 폴리펩티드의 효과기 도메인은 서열번호 6의 아미노산 185 내지 335, 아미노산 186 내지 335, 아미노산 187 내지 335, 아미노산 188 내지 335, 아미노산 189 내지 335, 아미노산 190 내지 335, 아미노산 191 내지 335, 아미노산 192 내지 335, 아미노산 193 내지 335, 아미노산 194 내지 335, 아미노산 195 내지 335, 아미노산 196 내지 335, 아미노산 197 내지 335, 아미노산 198 내지 335, 아미노산 199 내지 335와 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
더욱 다른 실시태양에서, 상기 FAS 폴리펩티드의 효과기 도메인은 상기 FAS 폴리펩티드의 막통과 도메인을 추가로 포함한다. 더욱 다른 실시태양에서, 상기 FAS 폴리펩티드의 효과기 도메인은 서열번호 6의 아미노산 174 내지 335와 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시태양에서, 상기 FAS 폴리펩티드의 효과기 도메인은 상기 FAS 세포외 도메인의 C-말단 부분으로부터 약 10개, 약 9개, 약 8개, 약 7개, 약 6개, 약 5개, 약 4개, 약 3개, 약 2개 또는 약 1개의 아미노산을 추가로 포함한다. 몇몇 실시태양에서, 상기 FAS 폴리펩티드의 효과기 도메인은 서열번호 6의 아미노산 179 내지 335, 아미노산 178 내지 335, 아미노산 177 내지 335, 아미노산 176 내지 335, 아미노산 175 내지 335, 아미노산 174 내지 335, 아미노산 173 내지 335, 아미노산 172 내지 335, 아미노산 171 내지 335, 아미노산 170 내지 335, 아미노산 169 내지 335, 아미노산 168 내지 335, 아미노산 167 내지 335, 아미노산 166 내지 335, 아미노산 165 내지 335, 아미노산 164 내지 335, 또는 아미노산 163 내지 335와 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기에서 상기 효과기 도메인은 사멸-유도 신호 복합체(DISC)를 형성하거나, 카스파제 8을 활성화시키거나, 또는 세포사멸을 유도한다.
일부 실시태양에서, 상기 FAS 폴리펩티드의 효과기 도메인은 서열번호 8과 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 상기 서열로 필수적으로 이루어지거나, 또는 상기 서열로 이루어지며, 여기에서 상기 효과기 도메인은 사멸-유도 신호 복합체(DISC)를 형성하거나, 카스파제 8을 활성화시키거나, 또는 세포사멸을 유도한다.
다른 실시태양에서, 상기 FAS 폴리펩티드의 효과기 도메인은 서열번호 7과 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다.
하나의 실시태양에서, 본 발명에 대한 FAS-키메라 유전자 산물은 서열번호 10과 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 상기 서열로 필수적으로 이루어지거나, 또는 상기 서열로 이루어지며, 여기에서 상기 FAS-키메라 유전자 산물은 세포사멸을 유도한다. 진다. 또 다른 실시태양에서, 상기 FAS-키메라 유전자 산물은 서열번호 9와 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화되며, 여기에서 상기 FAS-키메라 유전자 산물은 세포사멸을 유도한다.
B. 내피세포-특이성 프로모터
FAS-키메라 유전자를 포함하는 핵산 구조물은 작동적으로 연결된 FAS-키메라 유전자의 발현을 조절하는데 유용한 하나 이상의 발현 조절 요소를 추가로 포함한다. 상기 발현 조절 요소는 비제한적으로 프로모터, 분비 신호, 및 다른 조절 요소를 포함한다.
본 발명에 유용한 핵산 구조물은 내피세포-특이성 프로모터를 사용하여 내피세포에서 FAS-키메라 단백질의 발현을 지시하고, 이에 의해 상기 내피세포의 세포사멸을 유도한다.
본 발명의 목적을 위해서, 내피세포-특이성 프로모터는 하나 이상의 시스-조절 요소를 함유하며, 상기 요소는 상기 시스-조절 요소가 없는 프로모터에 비해 상기 프로모터의 내피세포-특이성을 개선시킨다. 일례로, 상기 시스-조절 요소는 인헨서를 포함한다. 또 다른 태양에서, 상기 시스-조절 요소는 저산소증 반응 요소를 포함한다. 다른 예에서, 상기 시스-조절 요소는 인헨서와 저산소증 반응 효소를 모두 포함한다.
하나의 실시태양에서, 본 발명에 유용한 인헨서는 서열번호 11 또는 서열번호 12(서열번호 11의 상보적 서열)와 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함하며, 여기에서 상기 인헨서는 상기 인헨서가 없는 프로모터에 비해 프로모터의 내피세포 특이성을 개선시킨다. 상기 인헨서는 서열번호 13 또는 서열번호 14(서열번호 13의 상보적 서열)와 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 추가적인 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또 다른 실시태양에서, 본 발명에 대한 인헨서는 서열번호 13 또는 서열번호 14(서열번호 13의 상보적 서열)와 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함하며, 여기에서 상기 인헨서는 상기 인헨서가 없는 프로모터에 비해 프로모터의 내피세포 특이성을 개선시킨다. 상기 인헨서는 서열번호 11 또는 서열번호 12(서열번호 11의 상보적 서열)와 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 추가적인 뉴클레오티드 서열을 추가로 포함할 수 있다.
다른 실시태양에서, 본 발명에 대한 인헨서는 서열번호 15 또는 서열번호 16(서열번호 15의 상보적 서열)과 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함하며, 여기에서 상기 인헨서는 상기 인헨서가 없는 프로모터에 비해 프로모터의 내피세포 특이성을 개선시킨다. 더욱 다른 실시태양에서, 상기 핵산 구조물에 대한 인헨서는 서열번호 15 또는 서열번호 16 또는 이들의 임의의 단편, 변체, 유도체 또는 유사체를 포함하며, 여기에서 상기 단편, 변체, 유도체 또는 유사체는 상기 인헨서가 없는 프로모터에 비해 프로모터의 내피세포 특이성을 개선시킨다.
일부 실시태양에서, 본 발명에 대한 인헨서는 서열번호 22 또는 서열번호 23과 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함하며, 여기에서 상기 인헨서는 상기 인헨서가 없는 프로모터에 비해 프로모터의 내피세포 특이성을 개선시킨다. 더욱 다른 실시태양에서, 상기 핵산 구조물에 대한 인헨서는 서열번호 22 또는 서열번호 23 또는 이들의 임의의 단편, 변체, 유도체 또는 유사체를 포함하며, 여기에서 상기 단편, 변체, 유도체 또는 유사체는 상기 인헨서가 없는 프로모터에 비해 프로모터의 내피세포 특이성을 개선시킨다.
다른 실시태양에서, 본 발명에 대한 인헨서는 서열번호 24 또는 서열번호 25와 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함하며, 여기에서 상기 인헨서는 상기 인헨서가 없는 프로모터에 비해 프로모터의 내피세포 특이성을 개선시킨다. 더욱 다른 실시태양에서, 상기 핵산 구조물에 대한 인헨서는 서열번호 24 또는 서열번호 25 또는 이들의 임의의 단편, 변체, 유도체 또는 유사체를 포함하며, 여기에서 상기 단편, 변체, 유도체 또는 유사체는 상기 인헨서가 없는 프로모터에 비해 프로모터의 내피세포 특이성을 개선시킨다.
표 3은 본 발명에 유용한 다양한 인헨서 서열들을 나타낸다.
내피세포-특이성 인헨서 요소 및 프로모터
서열번호 서열
서열번호 11
Figure pat00011
서열번호 12
Figure pat00012
서열번호 13
Figure pat00013
서열번호 14
Figure pat00014
서열번호 15
 3X 인헨서 요소
Figure pat00015
서열번호 16
 3X 인헨서 요소 (서열번호 15의 상보적 서열)
Figure pat00016
서열번호 17
 PPE-1 프로모터
Figure pat00017
서열번호 18
 PPE-1-3X 프로모터
Figure pat00018

Figure pat00019
서열번호 22
Figure pat00020
서열번호 23
Figure pat00021
서열번호 24
Figure pat00022
서열번호 25
Figure pat00023
서열번호 26 저산소증 반응 요소
Figure pat00024
본 발명에 대한 인헨서를 프로모터의 프로모터 상류 또는 하류에 연결시키거나 또는 상기 프로모터 중 2개의 뉴클레오티드 사이에 삽입할 수 있다. 본 발명에 대한 내피세포-특이성 프로모터는 당해 분야에 공지된 임의의 프로모터를 사용할 수 있다. 예를 들어, 본 발명에 사용될 수 있는 적합한 프로모터는 내피-특이성 프로모터: 프리프로엔도텔린-1(PPE-1 프로모터), US 2010/0282634, 2010년 11월 11일자로 공개됨; 및 WO 2011/083464, 2011년 7월 14일자로 공개됨); PPE-1-3X 프로모터(미국특허 제 7,579,327 호, 미국특허 제 8,071,740 호, 미국특허 제 8,039,261 호, US2010/0282634, US 2007/0286845, WO 2011/083464, 및 WO2011/083466); TIE-1(S79347, S79346) 및 TIE-2(U53603) 프로모터[Sato TN, Proc Natl Acad Sci U S A 1993 Oct 15;90(20):9355-8], 엔도글린(Endoglin) 프로모터[Y11653; Rius C, Blood 1998 Dec 15;92(12):4677-90], 폰 빌레르브란트(von Willerbrand) 인자[AF152417; Collins CJ Proc Natl Acad Sci U S A 1987 Jul;84(13):4393-7], KDR/flk-1 프로모터[X89777, X89776; Ronicke V, Circ Res 1996 Aug;79(2):277-85], FLT-1 프로모터[D64016 AJ224863; Morishita K, : J Biol Chem 1995 Nov 17;270(46):27948-53], Egr-1 프로모터[AJ245926; Sukhatme VP, Oncogene Res 1987 Sep-Oct;l(4):343-55], E-셀렉틴 프로모터[Y12462;Collins T J Biol Chem 1991 Feb 5;266(4):2466-73], 내피 부착 분자 프로모터: ICAM-1[X84737; Horley KJ EMBO J 1989 Oct;8(10):2889-96], VCAM-1[M92431; Iademarco MF , J Biol Chem 1992 Aug 15;267(23): 16323-9], PECAM-1[AJ313330 X96849; CD31, Newman PJ, Science 1990 Mar 9;247(4947): 1219-22], 혈관 평활근-특이성 요소: CArG 박스 X53154 및 대동맥 카복시펩티다제-유사 단백질(ACLP) 프로모터[AF332596;Layne MD, Circ Res. 2002; 90: 728-736] 및 대동맥 우선 발현 유전자-1[Yen-Hsu Chen J. Biol. Chem, Vol. 276, Issue 50, 47658-47663, December 14, 2001](이들 문헌은 모두 내용 전체가 본 발명에 참고로 인용된다)을 포함한다. 하나의 실시태양에서, 내피세포-특이성 인헨서에 연결된 프로모터는 서열번호 17의 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 뉴클레오티드 서열을 포함하며, 여기에서 상기 인헨서에 연결된 프로모터는 상기 프로모토에 작동적으로 연결된 유전자에 대해 내피세포-특이성을 유도한다. 또 다른 실시태양에서, 상기 내피세포-특이성 인헨서에 연결된 프로모터는 야생형 PPE-1 프로모터의 단편, 변체, 유도체 또는 유사체를 포함하며, 여기에서 상기 단편, 변체, 유도체 또는 유사체는 상기 프로모터에 작동적으로 연결된 유전자에 대해 내피세포-특이성을 유도한다. 일례로, 상기 내피세포-특이성 인헨서는 서열번호 17에 상응하는 뉴클레오티드 잔기 442와 449 사이에 삽입될 수 있다.
추가의 실시태양에서, 내피세포-특이성 프로모터는 저산소증 반응 요소를 포함한다. 저산소증 반응 요소(HRE)는 엔도텔린-1 프로모터의 안티센스 가닥상에 위치한다. 상기 요소는 저산소증에 의한 상기 엔도텔린-1 프로모터(인간, 래트 및 쥐 유전자의)의 양(positive)의 조절에 필요한 저산소증-유도성 인자-1 결합 부위이다. 저산소증은 에리쓰로포이에틴(Epo), VEGF 및 다양한 해당 효소들을 포함한 여러 유전자의 발현을 유도하는 강력한 신호이다. 코어 서열(8개 염기쌍)이 저산소 조건에 응답하는 모든 유전자에서 보존되며, 인접한 서열들은 다른 유전자들과 상이하다. ET-I 저산소증 반응 요소는 GAT A-2와 AP-1 결합 부위 사이에 위치한다. 일례로, 저산소증 반응 요소는 서열번호 26, 그의 단편, 변체, 유도체 또는 유사체를 포함한다.
다른 실시태양에서, 본 발명에 유용한 내피세포-특이성 프로모터는 서열번호 18의 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 뉴클레오티드 서열을 포함하거나, 상기 서열로 필수적으로 이루어지거나, 또는 상기 서열로 이루어지며, 여기에서 상기 인헨서에 연결된 프로모터는 상기 프로모터에 작동적으로 연결된 유전자에 대해 내피세포-특이성을 유도한다. 또 다른 실시태양에서, 내피세포-특이성 프로모터는 서열번호 18의 단편, 변체, 유도체 또는 유사체를 포함하며, 여기에서 상기 단편, 변체, 유도체 또는 유사체는 상기 프로모터에 작동적으로 연결된 유전자에 대해 내피세포-특이성을 유도한다.
상기 내피세포-특이성 프로모터의 추가적인 변이들을 WO2011/083464, WO2011/083466 및 WO2012/052423(이들은 내용 전체가 본 발명에 참고로 인용된다)에서 찾을 수 있다.
본 발명은 또한 뉴클레오티드 서열 서열번호 17을 포함하는 신규의 프로모터 서열을 제공한다. 일례로, 상기 프로모터는 내피세포-특이성 인헨서를 추가로 포함한다. 일례로, 상기 내피세포-특이성 인헨서는 서열번호 11, 서열번호 12, 서열번호 13, 서열번호 14, 서열번호 15, 서열번호 16, 서열번호 22, 서열번호 23, 서열번호 24, 서열번호 25, 서열번호 26 또는 이들의 임의의 단편, 유도체, 변체 또는 유사체를 포함하며, 여기에서 상기 단편, 유도체, 변체 또는 유사체는 상기 인헨서가 없는 프로모터에 비해 상기 프로모터의 내피세포-특이성을 개선시킨다. 또 다른 예에서, 상기 프로모터는 서열번호 18의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 본 발명은 신규의 프로모터 및 이종 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 구조물을 포함한다. 하나의 실시태양에서, 상기 이종 핵산 서열은 본 발명에 개시된 FAS-키메라 단백질을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 또 다른 실시태양에서, 상기 이종 뉴클레오티드 서열은 아데노바이러스 서열을 포함한다.
C. 벡터
본 발명은 또한 내피세포-특이성 프로모터에 작동적으로 연결된 FAS-키메라 유전자를 포함하는 핵산 구조물을 포함하는 벡터를 제공한다. 본 발명의 목적을 위해서, 다수의 벡터 시스템들을 사용할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 상기 태양의 실시에 사용될 수 있는 다양한 바이러스 유전자 전달 시스템은 비제한적으로 아데노바이러스 벡터, 알파바이러스 벡터, 엔테로바이러스 벡터, 페스티바이러스 벡터, 렌티바이러스 벡터, 바큘로바이러스 벡터, 헤르페스바이러스 벡터, 엡스타인바 바이러스 벡터, 파포바바이러스 벡터, 폭스바이러스 벡터, 우두 바이러스 벡터, 아데노-관련된 바이러스 벡터 및 헤르페스 단순 바이러스 벡터를 포함한다.
또 다른 실시태양에서, 내피세포-특이성 프로모터에 작동적으로 연결된 FAS-키메라 유전자를 포함하는 벡터는 아데노바이러스이다. 예를 들어, 상기 아데노바이러스는 인간 아데노바이러스 종 A(혈청형 12, 18 및 31), B(혈청형 3, 7, 11, 14, 16, 21, 34, 35, 50, 및 55), C(혈청형 1, 2, 5, 6, 및 57), D(8, 9, 10, 13, 15, 17, 19, 20, 22-30, 32, 33, 36-39, 42-49, 51, 53, 54, 및 56), E(혈청형 4), F(혈청형 40 및 41), 또는 G(혈청형 52) 중 임의의 하나 이상일 수 있다. 특정 실시태양에서, 본 발명에 대한 아데노바이러스는 인간 아데노바이러스 혈청형 5이다. 일부 실시태양에서, 유전자 요법에 유용한 아데노바이러스는 재조합 비-복제성 아데노바이러스이며, 이는 E1 영역 및 E3 영역은 함유하지 않는다. 몇몇 실시태양에서, 본 발명에 대한 아데노바이러스는 조건부 복제성 아데노바이러스이며, 이는 E3 영역을 함유하지 않지만 E1 영역은 함유한다.
D. 생물학적 기탁물
생물학적 기탁물은 부타페스트 조약 및 37 C. F. R. §1. 808에 준하여, 영국 SP4 0JG 솔즈베리의 건강 보호국 배양물 콜렉션, 건강 보호국, 미생물 서비스, 포튼 다운(Health Protection Agency Culture Collections, Health Protection Agency, Microbiology Services, Porton Down)에 위치한 유러피언 콜렉션 오브 셀 컬쳐(ECACC)에 의해 제조되었다. 상기 기탁된 물질의 샘플은 특허의 허가시 대중이 이용할 수 있게 될 것이다. 본 발명에 개시되고 특허청구된 발명은 상기 기탁된 균주의 범위에 의해 제한되지 않는데, 그 이유는 상기 기탁된 실시태양은 단지 본 발명의 예시로서만 의도되기 때문이다.
균주 ECACC 수탁 번호 기탁일
VB-111 13021201 2013년 2월 12일
III. FAS-키메라 단백질을 발현하는 아데노바이러스를 사용하는 치료 방법
본 발명의 하나의 실시태양은 FAS 키메라 단백질을 발현하는 핵산 구조물 또는 상기 핵산 구조물을 포함하는 아데노바이러스의 사용 방법을 제공한다. 하나의 태양에서, FAS-키메라 단백질을 발현하는 핵산 구조물 또는 상기 핵산 구조물을 포함하는 아데노바이러스는 개체에게서 종양의 크기를 축소 또는 감소시키거나 종양을 제거하기에 유용하며, 여기에서 상기 핵산 구조물에 의해 암호화된 FAS-키메라 단백질은 상기 개체에게서 상기 종양의 크기를 축소 또는 감소시키거나, 또는 종양 성장속도를 늦추거나 또는 새로운 종양 전이성 병변의 출현을 방지하거나 또는 상기 종양을 제거하며, 여기에서 상기 종양은 여성 부인과암 또는 그의 전이와 관련되거나 또는 이로부터 유래한다. 이러한 효과를 방사성 진단 시험(예를 들어, CT 스캔) 및/또는 종양 마커(예를 들어, CA-125의 혈중 수준)를 근거로 평가할 수 있다. 또 다른 태양에서, FAS-키메라 단백질을 발현하는 핵산 구조물 또는 상기 핵산 구조물을 포함하는 아데노바이러스는 종양에서 신생혈관형성 또는 혈관신생을 억제, 감소 또는 축소시키기에 유용하며, 여기에서 상기 핵산 구조물에 의해 암호화된 FAS-키메라 단백질은 상기 종양에서 신생혈관형성 또는 혈관신생을 억제, 축소 또는 감소시키고, 여기에서 상기 종양은 여성 부인과암 또는 그의 전이와 관련되거나 이로부터 유래한다. 다른 태양에서, FAS-키메라 단백질을 발현하는 핵산 구조물 또는 상기 핵산 구조물을 포함하는 아데노바이러스는 개체에게서 여성 부인과암 또는 그의 전이와 관련되거나 이로부터 유래한 종양을 치료 또는 예방할 수 있으며, 여기에서 상기 핵산 구조물에 의해 암호화된 FAS-키메라 단백질은 상기 개체에게서 여성 부인과암 또는 그의 전이를 치료하거나 예방한다.
따라서, 하나의 태양에서, 본 발명은 개체에게서 종양 또는 그의 전이의 크기를 축소 또는 감소시키거나, 종양 또는 그의 전이를 제거하거나, 종양 또는 그의 전이의 성장을 늦추는 방법을 제공하며, 상기 방법은 상기 환자에게 유효량의 핵산 구조물(상기 구조물은 내피세포 특이성 프로모터에 작동적으로 연결된 Fas-키메라 유전자를 포함한다), 또는 상기 핵산 구조물을 포함하는 아데노바이러스를 투여함을 포함하며, 여기에서 상기 핵산 구조물에 의해 암호화된 Fas-키메라 유전자 산물은 상기 개체에게서 상기 종양 또는 그의 전이의 크기를 축소 또는 감소시키거나 또는 상기 종양 또는 그의 전이를 제거하고 상기 종양 또는 그의 전이는 여성 부인과암과 관련되거나 이로부터 유래한다. 또 다른 태양에서, 본 발명은 종양 또는 그의 전이에서 신생혈관형성 또는 혈관신생을 억제, 감소 또는 축소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 상기 종양 또는 그의 전이를 갖는 개체에게 유효량의 핵산 구조물(상기 구조물은 내피세포 특이성 프로모터에 작동적으로 연결된 Fas-키메라 유전자를 포함한다), 또는 상기 핵산 구조물을 포함하는 아데노바이러스를 투여함을 포함하며, 여기에서 상기 핵산 구조물에 의해 암호화된 Fas-키메라 유전자 산물은 상기 종양 또는 그의 전이에서 신생혈관형성 또는 혈관신생을 억제, 축소 또는 감소시키고, 상기 종양 또는 그의 전이는 여성 부인과암과 관련되거나 이로부터 유래한다. 다른 태양에서, 본 발명은 개체에게서 여성 부인과암과 관련되거나 이로부터 유래한 종양 또는 그의 전이를 치료 또는 예방하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 유효량의 핵산 구조물(상기 구조물은 내피세포 특이성 프로모터에 작동적으로 연결된 Fas-키메라 유전자를 포함한다)을 투여함을 포함하고, 여기에서 상기 핵산 구조물에 의해 암호화된 Fas-키메라 유전자 산물은 상기 환자에게서 여성 부인과암을 치료하거나 예방한다. 더욱 다른 실시태양에서, 상기 여성 부인과암의 종양 또는 그의 전이는 상기 투여 후에 크기가 감소하거나 제거된다. 몇몇 실시태양에서, 상기 종양 또는 그의 전이의 크기는 상기 종양의 최장 직경(LD)이 상기 투여 전의 LD에 비해 적어도 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 100% 감소한다. 몇몇 실시태양에서, 본 발명은 여성 부인과암과 관련된 질병 또는 질환의 안정화 방법을 포함한다. 예를 들어, 본 발명은 여성 부인과암과 관련된 종양의 추가적인 성장을 예방하거나 늦추는 방법을 포함한다. 추가의 실시태양에서, 본 발명은 악성 복막액, 예를 들어, 복수의 부피를 감소시키거나, 개체의 통증을 감소시키거나, 상기 개체의 생존을 연장시키거나, 또는 이들의 임의의 조합이다. 다른 실시태양에서, 본 발명의 아데노바이러스는 개체에게 투여될 때 상기 개체의 전체적인 생존을 연장시킨다. 추가의 실시태양에서, 본 발명의 아데노바이러스는 개체에게 투여될 때 상기 개체의 무진행 생존을 연장시킨다.
하나의 실시태양에서, 상기 여성 부인과암은 뮐러암, 난소암, 복막암, 나팔관암, 자궁 유두상 장액성 암종, 그의 전이, 또는 이들의 임의의 조합일 수 있다. 또 다른 실시태양에서, 상기 여성 부인과암은 자궁경부암, 자궁내막암, 임신성 융모성 질환, 자궁암, 외음부암, 그의 전이, 또는 이들의 임의의 조합일 수 있다. 다른 실시태양에서, 상기 여성 부인과암은 부인과 조직, 예를 들어, 자궁, 난소, 나팔관, 자궁경부, 난세포, 지지세포, 또는 이들의 임의의 조합으로부터 발생하는 임의의 암성 성장을 포함한다. 몇몇 실시태양에서, 여성 부인과암과 관련되거나 이로부터 유래하는 종양은 표면 상피-간질 종양(선암종), 유두상 장액성 낭선암종, 자궁내막 모양의 종양, 장액성 낭선암종, 유두상 종양, 점액성 낭선암종, 투명세포 난소 종양, 점액성 선암종, 낭선암종, 암종, 성기삭 간질성 종양, 생식세포 종양, 기형종, 미분화세포종, 표피모양(편평세포 암종), 브레너 종양, 이들의 전이 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 그룹 중에서 선택될 수 있다.
본 발명의 목적을 위해서 뮐러암은 악성 혼합 뮐러 종양(또한 악성 혼합 중배엽 종양, MMMT 및 암육종으로서도 알려짐)을 포함한다. MMMT는 암성(상피 조직) 및 육종성(결합 조직) 성분을 모두 함유하는 자궁, 난소, 나팔관 및 신체의 다른 부분들에서 발견되는 악성 신생물이다. 이는 2가지 유형, 즉, 동종(여기에서 육종성 성분은 자궁에서 발견되는 조직들, 예를 들어, 자궁내막, 섬유상 및/또는 평활근 조직들로 구성된다) 및 이종 유형(자궁에서 발견되는 조직들, 예를 들어, 연골, 골격근 및/또는 뼈로 구성된다)으로 나뉜다. MMMT는 자궁의 몸통으로부터 유래한 모든 종양의 2 내지 5 퍼센트를 차지하며, 평균 66세의 폐경후 여성들에서 주로 발견된다.
난소암은 난소로부터 발생하는 임의의 암성 성장을 포함한다. 대부분(90% 이상)의 난소암은 "상피성"으로서 분류되며 난소의 표면(상피)으로부터 발생하는 것으로 여겨진다. 그러나, 나팔관도 또한 일부 난소암의 근원지일 수 있다. 난소와 난관은 서로 밀접하게 관련되므로, 상기 나팔관 암세포는 난소암을 모방할 수 있는 것으로 생각된다. 다른 유형들은 난세포(생식세포 종양) 또는 지지세포로부터 발생할 수 있다. 일부 실시태양에서, 난소암은 2차 암이며, 체내 어딘가의 원발암으로부터의 전이의 결과이다. 난소암의 약 7%가 전이에 기인하는 반면 나머지는 원발암이다. 통상적인 원발암은 유방암 및 위장암이다.
복막암 또는 암종은 또한 장액성 표면 유두상 암종, 원발성 복막 암종, 난소-외 장액성 암종, 원발성 장액성 유두상 암종, 또는 모래종으로서 공지되어 있다. 상기는 역사적으로 "원발 불명 암종"(CUP) 하에 있는 것으로 분류되었다. 원발성 복막암(PPC, 또는 PPCa)은 복막내층 세포 또는 복강의 암이다. 조직학적 및 분자 생물학적 특징은 난소 장액성 암종, 자궁 장액성 암종, 나팔관 장액성 암종, 자궁경부 장액성 암종, 및 원발성 복막 장액성 암종을 포함한 장액성 암종들이 실제로 하나의 존재를 나타냄을 암시한다.
원발성 나팔관암(PFTC)(종종 단지 난관암)은 나팔관으로부터 기원하는 악성 신생물이다. 난관암은 여성중 모든 부인과암의 1 내지 2 퍼센트를 차지하는 비교적 드문 원발암인 것으로 생각된다.
자궁 장액성 암종(USC)(또한 자궁 유두상 장액성 암종(UPSC) 및 자궁 장액성 선암종으로서 공지됨)은 전형적으로 폐경후 여성들에서 발생하는 흔하지 않은 형태의 자궁내막암이다. 상기는 전형적으로 자궁내막 생검시 진단되며, 폐경후 출혈에 의해 알게된다. 보다 통상적인 경증 자궁내막모양 자궁내막 선암종과 달리, USC는 자궁내막 증식증으로부터 발생하지 않으며 호르몬-민감성이 아니다. 상기는 자궁내막 위축의 상황에서 발생하며 II형 자궁내막암으로서 분류된다.
"개체" 또는 "개인" 또는 "동물" 또는 "환자" 또는 "포유동물"이란 용어는 복막암 또는 여성 부인과암과 관련되거나 이로부터 유래하는 적어도 하나의 종양이 나타나거나 또는 나타날 것으로 예상되는 임의의 개체, 특히 포유동물 개체를 의미한다. 하나의 실시태양에서, 상기 개체는 인간이다. 또 다른 실시태양에서, 상기 개체는 암 환자이다.
본 발명의 하나의 실시태양에서, 상기 개체는 선행의 백금 기재 요법을 받은 적이 있는 개체이다. 상기와 같은 선행의 백금 기재 요법은 비제한적으로 시스플라틴, 카보플라틴, 옥살리플라틴, 네다플라틴, 사트라플라틴, 피코플라틴, 트라이플라틴, 테트라나이트레이트, 또는 아로플라틴을 포함한다. 백금-기재 항종양제는 단일부가물로서 DNA의 가교결합, 가닥간 가교결합, 가닥내 가교결합, 또는 DNA 단백질 가교결합을 야기한다. 대개 상기 항종양제는 구아닌의 인접한 N-7 위치에서 작용하여, 1, 2 가닥내 가교결합을 형성한다. 생성된 가교결합은 암세포에서 DNA 수복 및/또는 DNA 합성을 억제한다. 백금-기재 항종양제는 때때로 알킬화 항종양제와 유사한 효과로 인해 "알킬화-유사"로서 개시되지만, 알킬기를 갖지는 않는다. 몇몇 실시태양에서, 상기 선행의 백금-기재 요법은 시스플라틴(또한 시스플라티늄 또는 시스-다이아민다이클로로플라티늄(II)(CDDP)(상표명 시스플라틴(Cisplatin), 브랜드명 플라틴(Platin), FDA 오렌지 북에 따라 카딜라 헬쓰케어(Cadila Healthcare)에 의해 판매됨)으로서 공지됨)을 사용하는 요법이다. 시스플라틴은 고형 암의 치료를 위해서 식염수 중의 단기 주입으로서 정맥내 투여된다. 상기는 육종, 일부 암종(예를 들어, 소세포폐암, 및 난소암), 림프종 및 생식세포 종양을 포함한 다양한 유형의 암의 치료에 사용된다.
다른 실시태양에서, 상기 개체는 선행의 탁산-기재 요법을 받았었다. 탁산은 주목 속 식물(주목)에 의해 생산된 다이터펜이며, 화학요법제로서 널리 사용된다. 탁산은 현재 인공적으로 합성될 수 있다. 탁산제는 비제한적으로 패클리탁셀(탁솔(TAXOL)(등록상표)) 및 도세탁셀(탁소테레(TAXOTERE)(등록상표))을 포함한다.
하나의 태양에서, 탁산은 이종 부분에 융합되거나 결합될 수 있다. 상기와 같은 이종 부분은 탁산 제형의 용해도를 개선시키거나 탁산의 독성을 감소시킬 수 있다. 예를 들어, 탁산을 알부민에 융합시키거나 결합시킬 수 있다: 알부민-결합된 패클리탁셀(아브락산(ABRAXANE)(등록상표), 또한 나브-패클리탁셀이라 칭한다)은 패클리탁셀이 알부민 나노-입자에 결합된 대체 제형이다.
패클리탁셀 제조에 대한 합성적 접근은 도세탁셀의 개발을 도출하였다. 도세탁셀은 패클리탁셀과 유사한 성향의 임상적 용도를 가지며 탁소테레(TAXOTERE)(등록상표)의 이름으로 판매된다.
또 다른 태양에서, 본 발명에 유용한 탁산은 비제한적으로 개암나무의 껍질 및 잎 중의 패클리탁셀, 10-데아세틸바카틴 III, 바카틴 III, 패클리탁셀 C, 및 7-에피패클리탁셀을 포함한다.
다른 실시태양에서, 상기 개체는 3차 이하, 2차 이하, 또는 1차 이하의 선행 화학요법을 받았었다. 상기 선행 차의 화학요법은 백금-기재 요법 또는 탁산-기재 요법일 수 있다. 더욱 다른 실시태양에서, 상기 개체는 재발암으로 인해 3차를 초과하는 선행 화학요법을 받지는 않았다.
몇몇 실시태양에서, 상기 개체는 재발한 백금-내성암 또는 백금 난치성 질병이 있는 환자이다. 일부 실시태양에서, 상기 개체는 재발한 탁산 내성암이 있는 환자이다. 하나의 태양에서, 상기 재발한 백금-내성암 또는 재발한 탁산-내성암은 백금 또는 탁산 치료 도중, 백금 기재 요법 또는 탁산 기재 요법을 완료하거나 받은 지 약 1개월 이내, 약 2개월 이내, 약 3개월, 약 4개월, 약 5개월, 약 6개월, 약 7개월, 약 8개월, 약 9개월, 약 10개월, 약 11개월, 또는 약 12개월 이내에 진행성 종양을 갖는다. 특정 실시태양에서, 상기 재발한 백금-내성암 또는 재발한 탁산-내성암은 백금 기재 요법 또는 탁산 기재 요법을 완료하거나 받은 지 약 6개월 이내에 진행성 종양을 갖는다. 상기 재발한 백금-내성암 또는 재발한 탁산-내성암을 고형 종양에서의 반응 평가 기준(RECIST), 하나 이상의 종양 마커, 예를 들어, CA-125의 측정, 신체 검사, 재평가 또는 2차-확인 개복, 및/또는 하나 이상의 영상 연구(예를 들어, X-선, CT 또는 MRI)에 의해 측정할 수 있다.
RECIST는 암 환자가 치료 중 개선되거나("반응하거나"), 동일하게 머무르거나("안정성") 또는 악화("진행") 된 때를 한정하는 일련의 공개된 규정이다. 원래의 기준은 2000년 2월에 유럽 암 연구 및 치료 기구(EORTC), 미국 국립 암 연구소(NCI) 및 캐나다 임상 시험 그룹의 국립 암 연구소를 포함한 국제적인 공동연구에 의해 공개되었다. 2009년 1월에 공개된 RECIST 1. 1은 상기 원래의 기준을 갱신한 것이다. 고형 종양에서 목표 반응에 대한 암치료를 평가하는 임상 시험의 대부분은 RECIST를 사용한다.
일부 실시태양에서, 개체는 종양 마커, 예를 들어, CA-125를 나타낼 수 있다. 하나의 태양에서, 상기 개체의 CA-125 발현 수준이 상기 투여 후에 상기 투여 전의 CA-125 수준에 비해 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 55%, 적어도 약 60%, 적어도 약 65%, 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 또는 적어도 약 100% 감소된다.
일부 실시태양에서, 개체는 재발한 백금 민감성 질병으로 인해 단지 1회의 백금-기재 치료를 받았으며 후속으로 6개월 미만의 간격으로 무백금 구간을 가졌다.
다른 실시태양에서, 개체는 0 내지 1의 동부 종양학 협력 그룹(ECOG) 기능상태를 갖는다. ECOG는 환자의 질병의 진행, 상기 환자의 일상 생활에서 상기 질병의 영향, 및 적합한 치료 및 예후의 결정을 평가하는데 사용되는 등급 또는 기준이다. 표 4는 ECOG 기능상태를 나타낸다.
ECOG 기능상태*
등급 ECOG
0 모든 활동 가능, 어떤 제한 없이 병에 걸리기 전과 동일하게 일 수행
1 육체적으로 힘든 일은 제한이 있지만 거동이나 가벼운 성질의 일은 가능(예를 들어, 가벼운 집안일이나 사무실 일)
2 거동이나 자가 치료는 가능하나 어떠한 일도 수행하기 어려움, 일하는 시간의 50% 이상
3 제한적으로 자가치료 가능하며 깨어있는 시간의 50% 이상을 누워있거나 휠체어를 이용함
4 완전히 무력한 상태. 어떠한 자가치료도 불가능하며 대부분의 시간을 침대에서 보냄
5 사망
*문헌[Am. J. Clin. Oncol. : Oken. M. M. , Creech, R. H. , Tormey, D. C. , Horton, J. , Davis, T. E. , McFadden, E. T. , Carbone, P. P. : Toxicity And Response Criteria Of The Eastern Cooperative Oncology Group. Am J Clin Oncol 5:649-655, 1982]에 공개된 바와 같다.
일부 실시태양에서, 개체는 암이 없는 개체에 필적하는 골수 기능을 갖는다. 암이 없는 개체에 필적하는 골수 기능은 비제한적으로 주요 조혈 기관 및 1차 림프 조직으로서 그의 역할, 및 혈액 세포, 예를 들어, 적혈구, 과립구, 단핵구, 림프구 및 혈소판의 생산을 담당함을 포함한다. 상기 골수 구조 및 기능에 대한 상세한 설명을 하기 문헌들에서 찾는다: Jain, C. , 1986b, Schalm's Veterinary Hematology, The hematopoietic system (Lea and Febiger, Philadelphia, PA), 4, pp 350-387; Weiss and Geduldig, 1991, Blood 78:975-90; Wickramasinghe, 1992, in Histology for Pathologists, Bone marrow, ed Sternberg SS (Raven Press, New York), pp 1-31; Picker and Siegelman, 1999, in Fundamental Immunology, Lymphoid tissues and organs, ed Paul WE (Lippincott-Raven, Philadelphia, PA), 4, pp 479-531; Hoffman et al. , 2000, Hematology Basic Principals and Practice (Churchill Livingstone, New York), 3; Abboud and Lichtman, 2001, in Williams' Hematology, Structure of the marrow and the hematopoietic microenvironment, eds Beutler E, Lichtman MA, Coller BS, Kipps TJ, Seligsohn U (McGraw-Hill, New York), 6, pp 29-58(이들 문헌은 각각 내용 전체가 본 발명에 참고로 인용된다).
추가적인 실시태양에서, 개체는 암이 없는 개체에 필적하는 혈액기능을 가지며, 여기에서 혈액기능의 지표는 하기로 이루어진 그룹 중에서 선택된다:
a. 절대 호중구수(ANC)가 1,000/mm3 이상이다;
b. 혈소판(PLT)수가 100,000/mm3 이상이다;
c. 프로트롬빈 시간(PT)이 1. 2 x 정상치 상한(Upper Limit of Normal, ULN) 초 미만이다;
d. 트롬보플라스틴 시간(PTT)이 1. 2 x ULN 초 미만이고, 여기에서 PTT가 ULN을 초과하는 경우, 환자는 음성 루푸스 항응고인자(LAC)를 갖는다; 및
e. 이들의 임의의 조합.
다른 실시태양에서, 개체는 암이 없는 개체에 필적하는 기관 기능을 가지며, 여기에서 상기 기관 기능을 하기로 이루어진 그룹 중에서 선택된 일반 독성 기준을 사용하여 분석한다:
a. 1등급 일반 독성 기준(CTC) 이하의 신경병증;
b. 주요 골수의 30% 이하는 선행 방사선을 받은 영역을 함유함(예를 들어, 골반 또는 요추);
c. 2. 5 x 정상치 상한(ULN) 미만 또는 5 x ULN 미만의 혈청 글루타믹 옥살로아세트산 트랜스아미나제(SGOT), 혈청 글루타믹 피루브산 트랜스아미나제(SGPT), 또는 알칼리성 포스파타제;
d. 1. 5 x ULN 이하 수준의 빌리루빈;
e. 1. 5 x ULN 이하 수준의 크레아티닌;
f. 선별시 단백뇨의 요시험지봉(dip stick) 검사에 의해 2+ 미만 또는 1. 0 미만의 비의 요단백 크레아티닌; 및
g. 이들의 임의의 조합.
더욱 다른 실시태양에서, 개체를 선행 치료, 예를 들어, 임의의 화학요법, 방사선요법, 또는 생물학적 요법으로부터의 급성 독성으로부터 회복시켰다. 그러나, 상기 개체를 1등급 신경병증, 임의의 등급의 빈혈, 또는 탈모증으로부터 회복시킬 필요가 있을 수도 있다.
몇몇 실시태양에서, 개체는 선행의 혈관신생억제제를 받았다. 일부 실시태양에서, 상기 개체는 영상화 연구시 어떠한 선행의 위장(GI) 천공, GI 폐색, 또는 장 곤란을 갖지 않는다. 더욱 다른 실시태양에서, 상기 개체는 활동성의, 치료되지 않은 정신 질환 또는 치료를 요하는 신경학적 증상(I 등급 감각 신경병증은 허용됨)을 갖지 않거나, 치료되지 않은 중추신경계 또는 뇌 전이가 존재하지 않거나, 사전 동의의 이해 및/또는 제공을 방해할 수도 있는 임의의 치매 또는 현저하게 변경된 정신 상태를 갖지 않거나, 크레모포어 EL에 대해 어떠한 공지된 과민성도 갖지 않거나, 억제되지 않은 세균, 바이러스 또는 진균 감염의 증거가 없거나, 또는 이들의 임의의 조합을 갖는다. 더욱 다른 실시태양에서, 상기 개체는, 선행의 패클리탁셀 반응을 가졌지만 후속으로 재접종시 상기 약물을 허용한 경우 본 발명에 적합하다.
본 발명에 적합한 개체를 혈관신생 억제 요법을 위한 혈장 생물마커 또는 세포 표면 생물마커의 측정에 의해 확인할 수 있다. 하나의 실시태양에서, 본 발명에 적합한 개체는 혈장 생물마커를 나타내며, 상기 마커는 비제한적으로 혈관내피 성장인자(VEGF), 포스파티딜이노시톨-글리칸 생합성 부류 F 단백질(PIGF), 용해성 혈관내피 성장인자 수용체-1(sVEGFR-1), sVEGFR-2, sVEGFR-3, 염기성 섬유아세포 성장인자(bFGF), 인터류킨-1β(IL-1β), 인터류킨-6(IL-6), 인터류킨-8(IL-8), 종양괴사인자-α(TNF-α), 폰 빌레브란트 인자(vWF), 용해성 c-키트(c-키트), 간질 유래 인자 1α(SDF1α), 알파 태아단백질(AFP), 및 이들의 임의의 조합을 포함한다. 또 다른 실시태양에서, 본 발명에 적합한 개체는 세포 표면 생물마커를 나타내며, 상기 마커는 비제한적으로 CD31, CD34, CD45, CD133, 혈관내피 성장인자 수용체-1(VEGFR-1), VEGFR-2 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
중화 항체의 존재 또는 형성이 바이러스의 2차 투여시 효율적인 유전자 운반을 방해할 수도 있음은 공지되어 있다. 하나의 실시태양에서, 개체는 아데노바이러스에 대한 기존의 항체 반응을 갖지 않는다. 또 다른 실시태양에서, 개체는 상기 아데노바이러스의 투여시 아데노바이러스에 대한 항체 반응을 나타내지 않는다.
본 발명의 일부 태양에서, 개체는 루푸스 항응고인자(LAC, 또한 루푸스 항체, LA, 또는 루푸스 억제제로서 공지됨)를 나타내지 않는다. 상기 LAC의 존재를 임의의 공지된 방법들에 의해, 예를 들어, LAC 시험 또는 APLA 시험에 의해 상기 LAC를 측정함으로써 측정할 수 있다. LAC는 세포막과 관련된 인지질 및 단백질에 결합하는 면역글로불린이다(Joussen, J. , et al. , in Documenta Ophthalmologica, 2008, Volume 117, Number 3, Pages 263-265, Retinal Vascular Disease, S. J. Ryan (eds), Springer, 2007, 780 p, 1040, ISBN: 978-3-540-29541-9). LAC는 혈전전(prothrombotic) 작용제이다; 즉, LAC 항체의 존재는 생체내에서 혈전의 형성을 침전시킨다. 실험실 시험에서 이들 항체의 존재는 aPTT의 증가를 야기한다. 상기 항체의 존재는 시험관내 응고를 유도하는데 사용되는 인지질을 간섭하는 것으로 추측된다. 상기 항체는 생체내에서 혈소판 막 인지질과 상호작용하여 혈소판의 유착 및 응집을 증가시키고; 따라서 그의 생체내 혈전전 특성을 증가시키는 것으로 생각된다. 따라서, LAC는 생체내에서 응고제로서 작용한다.
IV. FAS-키메라를 발현하는 아데노바이러스의 동종 집단
본 발명은 또한 서열번호 19를 포함하는 아데노바이러스 또는 ECACC 기탁 번호 13021201을 갖는 아데노바이러스의 동종 집단을 제공한다. 본 발명에 사용된 바와 같은 "동종"이란 용어는 상이한 서열을 갖는 이종 아데노바이러스의 오염이 없는 단일의 아데노바이러스 집단을 지칭한다. 상기 이종 아데노바이러스의 예는 비제한적으로 서열번호 20 또는 서열번호 21을 포함하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 아데노바이러스를 포함한다.
서열번호 20을 포함하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 아데노바이러스 및 서열번호 21을 포함하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 아데노바이러스는 앞서 2011년 7월 14일자로 각각 WO2011/083464 및 WO2011/083466으로서 공개된 국제 출원 제 PCT/IL2011/00007 호 및 제 PCT/IL2011/00009 호(이들은 내용 전체가 본 발명에 참고로 인용된다)에 개시되었다.
본 발명은 서열번호 20(35203 bp) 및 서열번호 21과 상이한 2개의 뉴클레오티드 잔기를 포함하는, 서열번호 19(35,208 bp)를 포함하는 아데노바이러스를 제공한다. 서열번호 20 및 서열번호 21 중 2개의 불합치(즉, Gly → Ala)가 뉴클레오티드 잔기 501 및 1255에 있다. 또한, 서열번호 19는 뉴클레오티드 잔기 33624에 잉여 티미딘을 함유하고 3' 단부에 4 개의 잉여 염기쌍을 함유한다. 더욱이, 서열번호 21은 잉여 E1 영역을 암호화하는 아미노산을 함유한다.
서열번호 19는 서열번호 18에 상응하는 뉴클레오티드 잔기 458 내지 1444에 내피세포-특이성 프로모터(즉, PPE-1-3x 프로모터)의 뉴클레오티드 서열, 및 서열번호 9에 상응하는 뉴클레오티드 잔기 1469 내지 2569에 FAS-키메라 단백질을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
하나의 실시태양에서, 본 발명은 내피세포-특이성 프로모터에 작동적으로 연결된 FAS-키메라 유전자를 포함하는 아데노바이러스를 포함하는 조성물이며, 여기에서 상기 아데노바이러스는 서열번호 20을 함유하지 않고 서열번호 21을 함유하지 않는다. 또 다른 실시태양에서, 본 발명은 서열번호 19를 포함하는 아데노바이러스 또는 ECACC 기탁 번호 13021201을 갖는 아데노바이러스를 포함하는 조성물이며, 여기에서 상기 조성물은 서열번호 20을 포함하는 아데노바이러스를 함유하지 않고 서열번호 21을 포함하는 아데노바이러스를 함유하지 않는다.
또 다른 실시태양에서, 조성물은 서열번호 19의 뉴클레오티드 잔기 458 내지 2569를 포함하는 아데노바이러스를 포함하며, 여기에서 상기 조성물은 서열번호 20 또는 서열번호 21의 뉴클레오티드 잔기 458 내지 2569를 포함하는 아데노바이러스를 포함하지 않는다.
다른 실시태양에서, 본 발명의 조성물은 서열번호 19와 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열을 포함하는 아데노바이러스를 포함하며, 여기에서 상기 핵산 서열은 서열번호 20이 아니고 서열번호 21이 아니며, 상기 조성물은 서열번호 20을 포함하는 아데노바이러스를 함유하지 않고 서열번호 21을 포함하는 아데노바이러스를 함유하지 않는다.
더욱 다른 실시태양에서, 본 발명의 조성물은 서열번호 19를 포함하는 아데노바이러스 또는 ECACC 기탁 번호 13021201을 갖는 아데노바이러스를 포함하며, 여기에서 상기 아데노바이러스는 적어도 약 51% 순수하거나, 적어도 55% 순수하거나, 적어도 약 60% 순수하거나, 적어도 약 70% 순수하거나, 적어도 약 80% 순수하거나, 적어도 약 90% 순수하거나, 적어도 약 95% 순수하거나, 적어도 약 96% 순수하거나, 적어도 약 97% 순수하거나, 적어도 약 98% 순수하거나, 적어도 약 99% 순수하거나, 또는 약 100% 순수하다. 본 발명에 사용된 바와 같은 "순수한"이란 용어는 동종성의 정도, 즉, 이종 아데노바이러스가 없는 정도를 의미한다. 예를 들어, 서열번호 19를 포함하는 아데노바이러스를 포함하는 약 51% 순수한 조성물은 약 51%의 서열번호 19를 포함하는 아데노바이러스 및 약 49%의 이종 서열, 예를 들어, 서열번호 20 또는 서열번호 21을 포함하는 아데노바이러스를 함유한다. 본 발명의 조성물은 다른 성분, 예를 들어, 비제한적으로 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제, 긴장성 개질제, 또는 제형에 필요한 임의의 성분들을 함유할 수 있다.
일부 실시태양에서, 본 발명은 상기 핵산 구조물의 동종 집단을 단리하거나 정제하는 방법을 포함한다. 다른 실시태양에서, 본 발명은 아데노바이러스의 이종 집단, 예를 들어, 서열번호 20, 서열번호 21, 또는 이 둘 모두를, 서열번호 19를 포함하는 아데노바이러스 또는 ECACC 기탁 번호 13021201을 갖는 핵산 구조물을 포함하는 조성물로부터 제거하는 방법을 제공한다.
개체에게 유효량의 상기 아데노바이러스의 동종 집단 또는 상기 아데노바이러스의 동종 집단을 포함하는 조성물을 투여함을 포함하는, 상기 개체에서 종양의 크기를 축소 또는 감소시키거나 또는 종양 성장 속도를 늦추거나 종양을 제거하는 방법을 또한 제공한다. 본 발명은 또한 종양을 갖는 개체에게 유효량의 상기 아데노바이러스의 동종 집단 또는 상기 아데노바이러스의 동종 집단을 포함하는 조성물을 투여함을 포함하는, 종양에서 신생혈관형성 또는 혈관신생을 억제, 감소 또는 축소시키는 방법을 포함한다. 더욱이, 본 발명은 유효량의 상기 아데노바이러스의 동종 집단 또는 상기 아데노바이러스의 동종 집단을 포함하는 조성물을 투여함을 포함하는, 개체에서 암과 관련되거나 이로부터 유래한 종양을 치료 또는 예방하는 방법을 포함한다.
본 발명은 또한 개체에게 서열번호 20 또는 서열번호 21을 포함하는 아데노바이러스의 이종 집단 또는 상기 아데노바이러스의 이종 집단을 포함하는 조성물을 반복해서 투여하지 않고, 유효량의 상기 아데노바이러스의 동종 집단 또는 상기 아데노바이러스의 동종 집단을 포함하는 조성물을 투여함을 포함하는, 상기 개체에서 종양의 크기를 축소 또는 감소시키거나 또는 종양 성장 속도를 늦추거나 종양을 제거하는 방법을 포함한다. 또한, 종양을 갖는 개체에게 서열번호 20 또는 서열번호 21을 포함하는 아데노바이러스의 이종 집단 또는 상기 아데노바이러스의 이종 집단을 포함하는 조성물을 반복해서 투여하지 않고, 유효량의 상기 아데노바이러스의 동종 집단 또는 상기 아데노바이러스의 동종 집단을 포함하는 조성물을 투여함을 포함하는, 종양에서 신생혈관형성 또는 혈관신생을 억제, 감소 또는 축소시키는 방법을 포함한다. 또한, 본 발명은 서열번호 20 또는 서열번호 21을 포함하는 아데노바이러스의 이종 집단 또는 상기 아데노바이러스의 이종 집단을 포함하는 조성물을 반복해서 투여하지 않고, 유효량의 상기 아데노바이러스의 동종 집단 또는 상기 아데노바이러스의 동종 집단을 포함하는 조성물을 투여함을 포함하는, 개체에서 암과 관련되거나 이로부터 유래한 종양을 치료 또는 예방하는 방법을 포함한다.
상기 아데노바이러스의 동종 집단 또는 상기 조성물로 축소, 억제 또는 치료할 수 있는 종양은 고형 종양, 원발성 종양, 또는 전이성 종양일 수 있다. "전이성" 또는 "전이"란 용어는 또 다른 부분 또는 기관에 2차 종양 병변을 확립시킬 수 있는 종양 세포를 지칭한다.
다른 실시태양에서, 본 발명의 동종 집단은 상기가 필요한 개체에게 투여될 때 상기 개체의 전체적인 생존을 연장시킨다. 추가의 실시태양에서, 본 발명의 동종 집단은 상기가 필요한 개체에게 투여될 때 상기 개체의 무진행 생존을 연장시킨다.
"고형 종양"은 비제한적으로 육종, 흑색종, 암종 또는 다른 고형 종양암을 포함한다. "육종"은, 배아 결합 조직과 같은 물질로 구성되며 일반적으로 원섬유 또는 동종 물질 중에 매몰된 치밀하게 충전된 세포로 구성되는 종양을 지칭한다. 육종은 비제한적으로 연골육종, 섬유육종, 림프육종, 흑색육종, 점액육종, 골육종, 아베메티스 육종(Abemethy's sarcoma), 지방육종, 지질육종, 포상 연조직육종, 법랑모세포 육종, 포도상 육종, 녹색육종, 융모막암종, 태생육종, 윌름종양 육종, 자궁내막 육종, 간질육종, 유잉육종, 근막육종, 섬유아세포 육종, 거대세포 육종, 과립구 육종, 호지킨 육종, 특발성 다중 착색된 출혈성 육종, B세포의 면역아세포 육종, 림프종, T-세포의 면역아세포 육종, 젠센육종, 카포시육종, 쿠퍼 세포 육종, 혈관육종, 류코육종, 악성 간엽성 육종, 방골육종, 망상적혈구육종, 라우스육종, 혈청낭성 육종, 활막육종, 및 혈관확장성 육종을 포함한다.
"흑색종"이란 용어는 피부 및 다른 기관의 멜라닌세포계로부터 발생하는 종양을 지칭한다. 흑색종은 예를 들어, 말단흑색점 흑색종, 무흑색소성 흑색종, 양성 소아흑색종, 클라우드만 흑색종, S91 흑색종, 하딩 패세이 흑색종, 소아흑색종, 악성흑색점 흑색종, 악성 흑색종, 전이성 흑색종, 결절성 흑색종, 조갑하 흑색종, 및 표재 확장성 흑색종을 포함한다.
"암종"이란 용어는 주변 조직을 침투하고 전이를 발생시키는 경향이 있는 내피세포들로 구성된 악성 신생물을 지칭한다. 예시적인 암종은 예를 들어, 세엽세포암종, 선방세포암종, 샘낭암종, 아데노이드낭성암종, 선암종, 부신피질의 암종, 폐포성암종, 폐포세포암종, 기저세포암종, 기저세포암, 기저세포모양암종, 기저편평세포암종, 기관지폐포성암종, 세기관지성암종, 기관지원성암종, 대뇌모양암종, 담관세포암종, 융모성암종, 콜로이드암종, 면포암종, 자궁체부암종, 사상의암종, 흉부갑옷암종, 피부암종, 원주암종, 원주세포암종, 관암종, 듀럼암종, 태생암종, 뇌암종, 유표피암종, 상피아데노이드암종, 외장성암종, 궤양성암종, 섬유암종, 젤라틴형암종, 교상암종, 대세포암종, 거대세포암종, 선암종, 과립세포암종, 모기질암종, 혈액상암종, 간세포암종, 휘틀세포암종, 유리질암종, 고신장형암종, 유아태생암종, 상피내암종, 표피내암종, 상피내암종, 크롬페셔암종, 쿨치츠키(Kulchitzky)세포암종, 대세포암종, 수정체암종, 지방종성암종, 림프상피성암종, 수질암종, 흑색종암종, 연성암종, 점액암종, 점액분비암종, 점액세포암종, 점액표피암종, 점액암종, 점액질암종, 점액종성암종, 비인두암종, 연맥세포암종, 골화성암종, 유골암종, 유두상암종, 문맥주위암종, 비침윤성암종, 가시세포암종, 곤죽모양암종, 신장의 신세포암종, 저장세포암종, 육종성암종, 슈나이더암종, 경성암종, 음낭암종, 인환세포암종, 단순체암종, 소세포암종, 솔라노이드암종, 회전타원체세포암종, 방추세포암종, 해면암종, 편평암종, 편평세포암종, 스트링암종, 혈관확장성암종, 모세혈관확장성암종, 이행세포암종, 결절성암종, 결절암종, 우상암종, 및 비플로슘(viflosum)암종을 포함한다.
억제되거나 치료될 수 있는 추가적인 암은 예를 들어, 백혈병, 호지킨병, 비-호지킨 림프종, 다발성 골수종, 신경모세포종, 유방암, 난소암, 폐암, 횡문근육종, 원발성 혈소판증가증, 원발성 마크로글로불린혈증, 소세포폐종양, 원발성 뇌종양, 위암, 결장암, 악성 췌장인슐린종, 악성 유암종, 방광암, 전암성 피부 병변, 고환암, 림프종, 갑상선암, 갑상선의 유두상 암종, 신경모세포종, 신경내분비암, 식도암, 비뇨생식관암, 악성 고칼슘혈증, 자궁경부암, 자궁내막암, 부신피질암, 전립선암, 뮐러암, 난소암, 복막암, 나팔관암, 또는 자궁 유두상 장액성 암종을 포함한다.
V. 약학 조성물
본 발명은 또한 본 발명의 방법에 사용되는 FAS-키메라 단백질을 발현하는 핵산 구조물, 상기 핵산 구조물을 포함하는 아데노바이러스, 또는 상기 아데노바이러스의 동종 집단을 포함하는 약학 조성물을 제공한다. 상기 약학 조성물을 인간을 포함한 포유동물에 투여하기 위해 제형화할 수 있다. 본 발명의 방법에 사용되는 약학 조성물은 약학적으로 허용 가능한 담체, 예를 들어, 이온 교환제, 알루미나, 알루미늄 스테아레이트, 레시틴, 혈청 단백질, 예를 들어, 인간 혈청 알부민, 완충제 물질, 예를 들어, 포스페이트, 글리신, 소르브산, 칼륨 솔베이트, 포화된 식물성 지방산들의 부분적인 글리세라이드 혼합물, 물, 염 또는 전해질, 예를 들어, 프로타민 설페이트, 이나트륨 수소 포스페이트, 칼륨 수소 포스페이트, 염화 나트륨, 아연 염, 콜로이드성 실리카, 마그네슘 트라이실리케이트, 폴리비닐 피롤리돈, 셀룰로스-기재 물질, 폴리에틸렌 글리콜, 나트륨 카복시메틸셀룰로스, 폴리아크릴레이트, 왁스, 폴리에틸렌-폴리옥시프로필렌-블록 중합체, 폴리에틸렌 글리콜 및 양모지를 포함한다. 하나의 실시태양에서, 상기 조성물을, 염수를 가하여 제형화한다.
본 발명의 조성물을 임의의 적합한 방법에 의해, 예를 들어, 비경구(예를 들어, 피하, 정맥내, 근육내, 관절내, 활액내, 흉골내, 척추강내, 간내, 병변내 및 두개내 주사 또는 주입 기법을 포함한다), 뇌실내, 경구, 흡입 분무에 의해, 국소, 직장, 코, 구강, 질, 또는 이식된 저장소를 통해 투여할 수 있다. 앞서 개시한 바와 같이, FAS-키메라 유전자를 포함하는 핵산 구조물 또는 상기 아데노바이러스의 동종 집단을 포함하는 조성물은 내피세포에서 상기 FAS-키메라 유전자 산물을 발현하며 이에 의해 상기 내피세포의 세포사멸을 유도한다. 따라서, 상기 조성물은 종양 내피세포의 신생혈관형성 및/또는 혈관신생을 억제함으로써 상기 종양의 크기 또는 그의 전이를 억제하거나, 축소하거나 감소시킬 수 있다. 따라서, 하나의 실시태양에서, 상기 조성물을 전신적으로 또는 국소적으로 전달한다. 전신 또는 국소 전달을 위해서, 상기 핵산 구조물, 상기 아데노바이러스, 또는 상기 아데노바이러스의 동종 집단을 함유하는 약학 제형은 바늘, 캐뉼러 또는 수술 기구와 같은 기계 장치를 사용할 수 있다.
본 발명의 방법에 사용되는 조성물의 멸균 주사 형태는 수성 또는 유성 현탁액일 수 있다. 이들 현탁액을 적합한 분산 또는 습윤제 및 현탁제를 사용하여 당해 분야에 공지된 기법에 따라 제형화할 수 있다. 상기 멸균 주사 제제는 또한 무독성 비경구 허용 가능한 희석제 또는 용매 중의 멸균 주사 용액 또는 현탁액, 예를 들어, 1,3-부탄다이올 중의 현탁액일 수 있다. 상기 사용될 수 있는 허용 가능한 비히클 및 용매 중에는 물, 링거액 및 등장성 염화 나트륨 용액이 있다. 또한, 멸균 고정오일이 용매 또는 현탁 매질로서 통상적으로 사용된다. 상기 목적을 위해서, 임의의 단조로운 고정오일, 예를 들어, 합성 모노- 또는 다이-글리세라이드를 사용할 수도 있다. 지방산, 예를 들어, 올레산 및 그의 글리세라이드 유도체가, 특히 그의 폴리옥시에틸화된 버전에서 천연의 약학적으로 허용 가능한 오일, 예를 들어, 올리브오일 또는 피마자오일이므로, 주사가능물질의 제조에 유용하다. 상기 오일 용액 또는 현탁액은 또한 장쇄 알콜 희석제 또는 분산제, 예를 들어, 유화액 및 현탁액을 포함하여 약학적으로 허용 가능한 투여형의 제형화에 통상적으로 사용되는 카복시메틸 셀룰로스 또는 유사한 분산제를 함유할 수 있다. 다른 통상적으로 사용되는 계면활성제, 예를 들어, 트윈스(Tweens), 스팬스(Spans) 및 약학적으로 허용 가능한 고체, 액체 또는 다른 투여형의 제조에 통상적으로 사용되는 다른 유화제 또는 생체이용가능한 인헨서를 또한 제형화를 위해서 사용할 수 있다.
비경구 제형은 유지 용량에 따른 단일 일시주사 용량, 주입 또는 로딩 일시주사 용량일 수 있다. 상기 조성물을 일정하게 고정된 또는 가변적인 간격으로, 예를 들어, 하루에 1회, 또는 "필요한 대로" 투여할 수 있다.
본 발명의 방법에 사용되는 몇몇 약학 조성물을 허용 가능한 투여형, 예를 들어, 캡슐, 정제, 수성 현탁액 또는 용액으로 경구 투여할 수 있다. 몇몇 약학 조성물을 또한 코 에어로졸 또는 흡입에 의해 투여할 수 있다. 상기와 같은 조성물을, 벤질 알콜 또는 다른 적합한 보존제, 생물학적 이용효능을 증대시키기 위한 흡수 촉진제, 및/또는 다른 통상적인 용해제 또는 분산제를 사용하여, 염수 중의 용액으로서 제조할 수 있다.
단일 투여형을 생성시키기 위해 담체 물질과 병용될 수 있는 FAS-키메라 단백질을 발현하는 핵산 구조물, 상기 핵산 구조물을 포함하는 아데노바이러스, 또는 상기 아데노바이러스의 동종 집단의 양은 치료되는 숙주, 사용되는 폴리펩티드의 유형 및 특정한 투여 방식에 따라 변할 것이다. 상기 조성물을 단일 용량, 수회 용량으로서 또는 주입시 설정된 기간에 걸쳐 투여할 수 있다. 투여 섭생을 또한 최적의 목적하는 반응(예를 들어, 치료학적 또는 예방학적 반응)을 제공하기 위해서 조절할 수 있다.
하나의 실시태양에서, FAS-키메라 단백질을 발현하는 핵산 구조물, 아데노바이러스, 또는 상기 아데노바이러스의 동종 집단을 포함하는 조성물을 제1일(즉, 제1 용량)에 주입한 다음 1회 이상의 후속 용량, 예를 들어, 매 1주일 주기, 매 2주일 주기, 매 3주일 주기, 매 4주일 주기, 매 5주일 주기, 매 6주일 주기, 매 7주일 주기, 매 8주일 주기, 매 9주일 주기, 매 10주일 주기, 매 11주일 주기, 또는 매 12주일 주기로 주입한다. 또 다른 실시태양에서, FAS-키메라 단백질을 발현하는 핵산 구조물, 아데노바이러스, 또는 상기 아데노바이러스의 동종 집단을 포함하는 조성물을 제1일(즉, 제1 용량)에 주입한 다음 1회 이상의 후속 용량, 예를 들어, 매 2주일 주기, 매월 주기, 매 2개월 주기, 매 3개월 주기, 매 4개월 주기, 매 5개월 주기 또는 매 6개월 주기로 주입한다.
본 발명의 방법은 "유효량" 또는 "치료학적 유효량"의 FAS-키메라 단백질을 발현하는 핵산 구조물, 상기 핵산 구조물을 포함하는 아데노바이러스, 또는 상기 아데노바이러스의 동종 집단을 포함하는 조성물을 사용한다. 상기와 같은 유효량 또는 치료학적 유효량은 질병 상태, 개인의 연령, 성별 및 체중과 같은 인자에 따라 변할 수 있다. 유효량 또는 치료학적 유효량은 또한 임의의 독성 또는 유해 효과가 상기 치료학적으로 이로운 효과에 의해 유리해지는 양이다.
임의의 특정 환자에 대한 구체적인 투여량 및 치료 섭생은 다양한 인자들, 예를 들어, 사용되는 특정 조성물, 환자의 연령, 체중, 일반적인 건강, 성별 및 식이요법, 및 투여시간, 배출 속도, 약물 조합, 및 치료되는 특정 질병의 중증도에 따라 변할 것이다. 의료 종사자에 의한 상기와 같은 인자들의 판단은 당해 분야의 통상적인 기술내에 있다. 상기 량은 또한 치료되는 개인 환자, 투여 경로, 제형의 유형, 사용되는 화합물의 특성, 질병의 중증도 및 목적하는 효과에 따라 다를 것이다. 사용되는 양은 당해 분야에 널리 공지된 약물학적 및 약동학적 원리에 의해 결정될 수 있다.
FAS-키메라를 암호화하는 핵산 구조물을 포함하는 아데노바이러스 또는 상기 FAS-키메라 단백질을 암호화하는 핵산 구조물을 포함하는 아데노바이러스의 동종 집단의 유효량은 임의의 적합한 용량일 수 있다. 하나의 실시태양에서, 상기 아데노바이러스 또는 상기 아데노바이러스의 동종 집단의 유효량은 개체당 적어도 약 109 VP, 적어도 약 1010 VP, 적어도 약 1011 VP, 적어도 약 1012 VP, 또는 적어도 약 1013 VP이다. 또 다른 실시태양에서, 상기 아데노바이러스 또는 상기 아데노바이러스의 동종 집단의 유효량은 개체당 적어도 약 1 x 1012 VP, 적어도 약 2 x 1012 VP, 적어도 약 3 x 1012 VP, 적어도 약 4 x 1012 VP, 적어도 약 5 x 1012 VP, 적어도 약 6 x 1012 VP, 적어도 약 7 x 1012 VP, 적어도 약 8 x 1012 VP, 적어도 약 9 x 1012 VP, 또는 적어도 약 1 x 1013 VP이다. 다른 실시태양에서, 상기 아데노바이러스 또는 상기 아데노바이러스의 동종 집단의 유효량은 개체당 약 109 내지 약 1015 VP, 약 1010 내지 약 1014 VP, 약 1011 내지 약 1013 VP, 또는 약 1012 내지 약 1013 VP, 또는 약 3 x 1012 내지 약 1013 VP이다.
다른 태양에서, FAS-키메라 단백질을 발현하는 아데노바이러스 또는 상기 아데노바이러스의 동종 집단의 유효량을 제1 용량이 어떠한 독성도 유발하지 않는 경우 점증(escalate)시킨다. 예를 들어, FAS-키메라 단백질을 발현하는 아데노바이러스 또는 상기 아데노바이러스의 동종 집단의 제1 용량은 개체당 적어도 약 1 x 109, 약 1 x 1010 VP, 적어도 약 1 x 1011 VP, 적어도 약 1 x 1012 VP, 적어도 약 2 x 1012 VP, 적어도 약 3 x 1012 VP, 적어도 약 4 x 1012 VP, 적어도 약 5 x 1012 VP, 적어도 약 6 x 1012 VP, 적어도 약 7 x 1012 VP, 적어도 약 8 x 1012 VP, 또는 적어도 약 9 x 1012 VP일 수 있고, 상기 FAS-키메라 단백질을 발현하는 아데노바이러스의 제2 용량 또는 후속 용량들은 개체당 적어도 약 5 x 1012 VP, 적어도 약 6 x 1012 VP, 적어도 약 7 x 1012 VP, 적어도 약 8 x 1012 VP, 또는 적어도 약 9 x 1012 VP, 적어도 약 1 x 1013 VP, 적어도 약 2 x 1013 VP, 적어도 약 3 x 1013 VP, 적어도 약 4 x 1013 VP, 적어도 약 5 x 1013 VP, 적어도 약 6 x 1013 VP, 적어도 약 7 x 1013 VP, 적어도 약 8 x 1013 VP, 적어도 약 9 x 1013 VP, 적어도 약 1 x 1014 VP일 수 있다. 특정한 예에서, FAS-키메라 단백질을 발현하는 아데노바이러스 또는 상기 아데노바이러스의 동종 집단의 제1 용량은 개체당 약 3 x 1012 VP이고, 상기 FAS-키메라를 발현하는 아데노바이러스의 제2 용량은 개체당 약 1 x 1013 VP이다. 그러나, FAS-키메라 단백질을 발현하는 아데노바이러스 또는 상기 아데노바이러스의 동종 집단의 유효량을, 특정 용량이 용량 제한 독성을 유발하는 경우 감소시킬 수 있다.
상기 아데노바이러스 또는 상기 아데노바이러스의 동종 집단을 포함하는 조성물을 상기 개체에게 약 10분, 약 20분, 약 30분, 약 40분, 약 50분, 약 60분, 약 70분, 약 80분, 약 90분, 약 100분, 약 110분 또는 약 120분 동안 주입할 수 있다. 하나의 실시태양에서, 본 발명의 핵산 구조물을 60분 이하 동안 정맥내로 주입한다. 또 다른 실시태양에서, 상기 아데노바이러스 또는 상기 아데노바이러스의 동종 집단을 포함하는 조성물을 개체당 3 x 1012 VP 이하의 용량에 대해 1 ㎖/분의 속도로 주입한다. 상기 용량이 개체당 3 x 1012 VP를 초과하는 경우, 상기 아데노바이러스 또는 상기 아데노바이러스의 동종 집단을 포함하는 조성물을 처음 10 ㎖에 대해서 1 ㎖/분의 속도로, 이어서 나머지에 대해서 3 ㎖/분의 속도로 주입한다.
보충적인 활성 화합물을 또한 본 발명의 방법에 사용되는 조성물에 혼입시킬 수 있다. 예를 들어, FAS-키메라 유전자 산물을 암호화하는 핵산 구조물 또는 상기 핵산 구조물의 동종 집단을 하나 이상의 추가적인 치료제와 함께 제형화하고/하거나 함께 투여할 수 있다.
본 발명은 FAS-키메라 유전자 산물을 암호화하는 핵산 구조물 또는 상기 핵산 구조물의 동종 집단을 선택된 표적 조직으로 전달하기에 적합한 임의의 전달 방법, 예를 들어, 수용액의 일시주사 또는 조절된 방출 시스템의 이식을 포함한다. 조절된 방출 이식물의 사용은 반복 주사의 필요성을 감소시킨다.
FAS-키메라 유전자 산물을 암호화하는 핵산 구조물, 상기 핵산 구조물을 포함하는 아데노바이러스, 또는 상기 아데노바이러스의 동종 집단을 상기 종양에 직접 주입할 수도 있다. 화합물의 직접 종양 주입을 위한 다양한 이식물들이 공지되어 있으며 상기 이식물들은 여성 부인과암을 앓고 있는 인간 환자에게 치료 화합물을 전달하기에 유효하다.
상기 조성물은 또한 상기 화합물들에 적합한 전달 또는 지지 시스템으로서 작용하는 생체적합성 담체 물질 중에 분산된, FAS-키메라 유전자 산물을 암호화하는 핵산 구조물, 상기 핵산 구조물을 포함하는 아데노바이러스, 또는 상기 아데노바이러스의 동종 집단을 포함할 수 있다. 서방성 담체의 적합한 예는 좌약 또는 캡슐과 같은 성형된 물품 형태의 반투과성 중합체 기질을 포함한다. 이식성 또는 미세캡슐형 서방성 기질은 폴리락티드(미국특허 제 3,773,319 호; EP 58,481), L-글루탐산 및 감마-에틸-L-글루타메이트의 공중합체(Sidman et al. , Biopolymers 22:547-56 (1985)); 폴리(2-하이드록시에틸-메트아크릴레이트), 에틸렌 비닐아세테이트(Langer et al. , J. Biomed. Mater. Res. 15:167-277 (1981); Langer, Chem. Tech. 12:98-105 (1982)) 또는 폴리-D-(-)-3하이드록시부티르산(EP 133,988)을 포함한다.
본 발명의 방법에 따라, 상기 핵산 구조물, 상기 아데노바이러스 또는 상기 아데노바이러스의 동종 집단의 투여를 하나 이상의 화학요법제의 투여와 병행할 수 있다. 상기 화학요법제를 상기 FAS-키메라 단백질을 발현하는 아데노바이러스 또는 상기 아데노바이러스의 동종 집단의 투여 전에, 상기 투여와 동시에, 또는 상기 투여 후에 투여할 수 있다.
본 발명의 아데노바이러스와 함께 투여될 수 있는 하나 이상의 화학요법제는 비제한적으로 액시비신; 아클라루비신; 아코다졸 하이드로클로라이드; 아크로닌; 아드리아마이신; 아도젤레신; 알데스류킨; 알림타; 알트레타민; 암보마이신; 아메탄트론 아세테이트; 아미노글루테티미드; 암사크린; 아나스트로졸; 안트라마이신; 아스파라기나제; 아스펄린; 아자시티딘; 아제테파; 아조토마이신; 바티마스태트; 벤조데파; 비칼류타미드; 비스안트렌 하이드로클로라이드; 비스나피드 다이메실레이트; 베바시주맵, 비젤레신; 블레오마이신 설페이트; 브레퀴나르 나트륨; 브로피리민; 부설판; 칵티노마이신; 칼루스테론; 카라세미드; 카르베티머; 카르보플라틴; 카르머스틴; 카루비신 하이드로클로라이드; 카르젤레신; 세데핑골; 클로람부실; 시롤레마이신; 시스플라틴; 클라드리빈; 크리스나톨 메실레이트; 사이클로포스파미드; 시타라빈; 다카바진; 닥티노마이신; 다우노루비신 하이드로클로라이드; 데시타빈; 덱소마플라틴; 데자구아닌; 데자구아닌 메실레이트; 다이아지쿠온; 도세탁셀; 독소루비신; 독소루비신 하이드로클로라이드; 드롤록시펜; 드롤록시펜 시트레이트; 드로모스타놀론 프로피오네이트; 두아조마이신; 에다트렉세이트; 에플로르니틴 하이드로클로라이드; 엘사미트루신; 엔로플라틴; 엔프로메이트; 에피프로피딘; 에피루비신 하이드로클로라이드; 에르불로졸; 에소루비신 하이드로클로라이드; 에스트라머스틴; 에스트라머스틴 포스페이트 나트륨; 에타니다졸; 에토포시드; 에토포시드 포스페이트; 에토프린; 파드로졸 하이드로클로라이드; 파자라빈; 펜레티니드; 플록슈리딘; 플루다라빈 포스페이트; 플루오로유라실; 플루로시타빈; 포스퀴돈; 포스트리에신 나트륨; 젬시타빈; 젬시타빈 하이드로클로라이드; 하이드록시유레아; 이다루비신 하이드로클로라이드; 이포스파미드; 일모포신; 인터페론 알파-2a; 인터페론 알파-2b; 인터페론 알파-n1; 인터페론 알파-n3; 인터페론 베타-Ia; 인터페론 감마-Ib; 이프로플라틴; 이리노테칸 하이드로클로라이드; 란레오티드 아세테이트; 레트로졸; 류프롤리드 아세테이트; 리아로졸 하이드로클로라이드; 로메트렉솔 나트륨; 로머스틴; 로속산트론 하이드로클로라이드; 마소프로콜; 매이탄신; 메클로르에타민 하이드로클로라이드; 메제스트롤 아세테이트; 멜렌제스트롤 아세테이트; 멜팔란; 메노가릴; 머캅토퓨린; 메토트렉세이트; 메토트렉세이트 나트륨; 메토프린; 메튜레데파; 미틴도미드; 미토칼신; 미토크로민; 미토질린; 미토말신; 미토마이신; 미토스퍼; 미토탄; 미톡산트론 하이드로클로라이드; 마이코페놀산; 노코다졸; 노갈라마이신; 오르마플라틴; 옥시슈란; 파조티니브; 패클리탁셀; 페가스파가스; 펠리오마이신; 펜타머스틴; 페플로마이신 설페이트; 퍼포스파미드; 피포브로만; 피포설판; 피록산트론 하이드로클로라이드; 플리카마이신; 플로메스탄; 포르피머 나트륨; 포르피로마이신; 프레드니머스틴; 프로카바진 하이드로클로라이드; 퓨로마이신; 퓨로마이신 하이드로클로라이드; 피라조퓨린; 리보퓨린; 로글레티미드; 사핑골; 사핑골 하이드로클로라이드; 세머스틴; 심트라젠; 소라피니브; 스파포세이트 나트륨; 스파소마이신; 스피로제르마늄 하이드로클로라이드; 스피로머스틴; 스피로플라틴; 스트렙토니그린; 스트렙토조신; 슐로페누르; 수니티니브; 탈리소마이신; 탁솔; 테코갈란 나트륨; 테가퓨어; 텔록산트론 하이드로클로라이드; 테모포르핀; 테니포시드; 테록시론; 테스토락톤; 티아미프린; 티오구아닌; 티오테파; 티아조푸이린; 티라파자민; 토포테칸 하이드로클로라이드; 토레미펜 시트레이트; 트레스톨론 아세테이트; 트리시리빈 포스페이트; 트라이메트렉세이트; 트라이메트렉세이트 글루쿠로네이트; 트립토렐린; 튜불로졸 하이드로클로라이드; 유라실 머스타드; 유레데파; 바프레오티드; 베르테포르핀; 빈블라스틴 설페이트; 빈크리스틴 설페이트; 빈데신; 빈데신 설페이트; 비네피딘 설페이트; 빈글리시네이트 설페이트; 빈류로신 설페이트; 비노렐빈 타르트레이트; 빈로시딘 설페이트; 빈졸리딘 설페이트; 보로졸; 제니플라틴; 지노스타틴; 또는 조루비신 하이드로클로라이드를 포함한다. 추가적인 항종양제는 문헌[Chapter 52, Antineoplastic Agents (Paul Calabresi and Bruce A. Chabner)] 및 상기에 대한 도입부, 문헌[Goodman and Gilman's "The Pharmacological Basis of Therapeutics", Eighth Edition, 1990, McGraw-Hill, Inc. ]의 1202-1263에 개시된 것들을 포함한다.
일부 실시태양에서, FAS-키메라 단백질을 발현하는 아데노바이러스 또는 상기 아데노바이러스의 동종 집단이 투여된 개체를 방사선요법과 동시에 치료한다. 다른 실시태양에서, FAS-키메라 단백질을 발현하는 아데노바이러스 또는 상기 아데노바이러스의 동종 집단이 투여된 개체를 2개 이상의 화학요법제와 동시에 치료한다. 몇몇 실시태양에서, FAS-키메라 단백질을 발현하는 아데노바이러스 또는 상기 아데노바이러스의 동종 집단이 투여된 개체를 화학요법제 및 방사선요법과 동시에 치료한다.
본 발명의 복합 요법 태양에서, 상기 화학요법제는 패클리탁셀일 수 있다. 하나의 태양에서, FAS-키메라 단백질을 발현하는 아데노바이러스 또는 상기 아데노바이러스의 동종 집단을 패클리탁셀과 동시에 투여할 수 있다. 또 다른 태양에서, FAS-키메라 단백질을 발현하는 아데노바이러스 또는 상기 아데노바이러스의 동종 집단을 패클리탁셀의 투여 전 또는 후에 투여한다. 다른 실시태양에서, 패클리탁셀을 FAS-키메라 단백질을 발현하는 아데노바이러스 또는 상기 아데노바이러스의 동종 집단의 투여전 적어도 30분째에, 적어도 약 1시간째에, 적어도 약 2시간째에, 적어도 약 3시간째에, 적어도 약 4시간째에, 적어도 약 5시간째에, 적어도 약 6시간째에, 적어도 약 7시간째에, 적어도 약 8시간째에, 적어도 약 9시간째에, 적어도 약 10시간째에, 적어도 약 11시간째에, 적어도 약 12시간째에, 적어도 약 13시간째에, 적어도 약 14시간째에, 적어도 약 19시간째에, 적어도 약 20시간째에, 적어도 약 21시간째에, 적어도 약 22시간째에, 적어도 약 23시간째에, 적어도 약 24시간째에, 적어도 약 1일째에, 적어도 약 36시간째에, 적어도 약 2일째에, 적어도 약 60시간째에, 또는 적어도 약 3일째에 투여한다.
상기 화학요법제를 또한 임의의 적합한 방법에 의해, 예를 들어, 비경구, 심실내, 경구, 흡입 분무에 의해, 국소, 직장, 코, 구강, 질 또는 이식된 저장소를 통해 투여할 수 있다. 본 발명에 사용된 바와 같은 "비경구"란 용어는 피하, 정맥내, 근육내, 관절내, 활액내, 흉골내, 척추강내, 간내, 병변내, 복강내, 두개내 주사 또는 주입 기법을 포함한다.
상기 화학요법제의 유효량은 당해 분야에서 입수 가능하다. 하나의 태양에서, 예를 들어, 패클리탁셀의 유효량은 적어도 약 10 ㎎/㎡, 적어도 약 20 ㎎/㎡, 적어도 약 30 ㎎/㎡, 적어도 약 40 ㎎/㎡, 적어도 약 50 ㎎/㎡, 적어도 약 60 ㎎/㎡, 적어도 약 70 ㎎/㎡, 적어도 약 80 ㎎/㎡, 적어도 약 90 ㎎/㎡, 적어도 약 100 ㎎/㎡, 또는 적어도 약 110 ㎎/㎡일 수 있다. 또 다른 태양에서, 패클리탁셀의 유효량은 약 10 ㎎/㎡ 내지 약 200 ㎎/㎡, 약 20 ㎎/㎡ 내지 약 150 ㎎/㎡, 약 30 ㎎/㎡ 내지 약 100 ㎎/㎡, 또는 40 ㎎/㎡ 내지 약 80 ㎎/㎡이다. 다른 태양에서, 패클리탁셀의 유효량은 약 10 ㎎/㎡, 약 20 ㎎/㎡, 약 30 ㎎/㎡, 약 40 ㎎/㎡, 약 50 ㎎/㎡, 약 60 ㎎/㎡, 약 70 ㎎/㎡, 약 80 ㎎/㎡, 약 90 ㎎/㎡, 또는 약 100 ㎎/㎡이다.
상기 패클리탁셀 투여의 몇몇 태양에서, 패클리탁셀을 적어도 10분, 적어도 20분, 적어도 30분, 적어도 40분, 적어도 50분, 적어도 60분, 적어도 70분, 적어도 80분, 적어도 90분, 적어도 100분, 적어도 110분, 적어도 120분, 적어도 150분, 적어도 180분, 적어도 210분, 적어도 240분, 적어도 270분, 또는 적어도 300분 동안 주입한다. 특정한 예에서, 패클리탁셀을 적어도 1시간 동안 주입한다. 상기 패클리탁셀의 주입 방법은 당해 분야에 공지된 임의의 방법을 사용할 수 있다. 예를 들어, 패클리탁셀을 3시간에 걸쳐 0. 22 마이크론 이하의 미세다공성 멤브레인을 갖는 인-라인 필터를 통해 투여할 수 있다.
몇몇 태양에서, 패클리탁셀을 제1일(FAS-키메라 단백질을 발현하는 아데노바이러스 또는 상기 아데노바이러스의 동종 집단을 투여하는 같은 날)(즉, 제1 용량)에 주입한 다음 1회 이상의 후속 용량, 예를 들어, 3일마다, 4일마다, 5일마다, 6일마다, 7일마다, 8일마다, 9일마다, 10일마다, 11일마다, 12일마다, 13일마다, 또는 14일마다 주입한다. 특정한 예에서, 패클리탁셀을 제1일(즉, 제1 용량)에 이어서 8일(즉, 제2 용량), 15일(즉, 제3 용량) 및 22일(즉, 제4 용량) 스케줄로 28일마다 투여한다.
더욱 다른 태양에서, FAS-키메라 단백질을 발현하는 아데노바이러스 또는 상기 아데노바이러스의 동종 집단과 함께 동시투여되는 화학요법제의 유효량을, 제1 용량이 어떠한 독성도 유발하지 않는 경우 점증시킨다. 예를 들어, 패클리탁셀의 제1 용량은 약 10 내지 약 70 ㎎/㎡, 약 20 내지 약 60 ㎎/㎡, 약 30 내지 약 50 ㎎/㎡, 또는 약 40 ㎎/㎡일 수 있으며, 제2 용량 또는 임의의 후속 용량들을 약 10 ㎎/㎡, 약 20 ㎎/㎡, 약 30㎎/㎡, 약 40㎎/㎡, 약 50㎎/㎡, 약 60㎎/㎡, 약 70㎎/㎡, 또는 약 80㎎/㎡까지 점증시킬 수 있다. 하나의 실시태양에서, 패클리탁셀의 제1 용량은 약 40 ㎎/㎡이고, 패클리탁셀의 제2 용량은 약 80 ㎎/㎡이다. 또 다른 실시태양에서, 패클리탁셀의 제1 용량은 약 40 ㎎/㎡이고, 패클리탁셀의 제2 용량은 약 80 ㎎/㎡이고, 패클리탁셀의 제3 용량은 약 80 ㎎/㎡이다. 다른 실시태양에서, 패클리탁셀의 제1 용량은 약 40 ㎎/㎡이고, 패클리탁셀의 제2 용량은 약 80 ㎎/㎡이고, 패클리탁셀의 제3 용량은 약 80 ㎎/㎡이고, 패클리탁셀의 제4 용량은 약 80 ㎎/㎡이다.
그러나, 패클리탁셀의 유효량을, 상기 제1 용량이 개체에 대해 용량 제한 독성을 유발하는 경우 감소시킬 수 있다. 상기 용량 제한 독성을 임의의 공지된 방법에 의해 측정할 수 있다: 예를 들어, (1) ≥4일 동안 지속되는 <0. 5 x 109/L의 절대 호중구수(ANC) 또는 패혈증과 함께 <0. 5 x 109/L의 절대 호중구수, 또는 해열제 투약으로 쉽게 조절되지 않는 3 내지 4 등급 발열(>100. 2 ℉); (2) 임의의 지속 기간 동안 <10 x 109/L의 혈소판수; (3) 임의의 다른 약물-관련된 비 간성 및 비-혈액학적 등급 ≥3 독성, 또는 이들의 임의의 조합. 상기 독성은 의학적으로 조절될 수 있는 ≥3 등급 오심 또는 구토(오심 및/또는 구토가 의학적으로 조절될 수 없고 첫 번째 주기 동안 발생하는 경우, 이는 DLT로 간주될 것이다) 또는 ≥3 등급 저칼륨혈증, 저나트륨혈증, 저인산혈증, 저마그네슘혈증, 및 저칼슘혈증(이들이 쉽게 보정될 수 있고, 임상적으로 무증상이며, 의학적으로 중요한 합병증(예를 들어, ECG 변화)을 동반하지 않는 경우)은 포함하지 않는다.
하나의 실시태양에서, 제1일에 패클리탁셀의 제1 용량은 40 ㎎/㎡이고, 개체가 용량 제한 독성을 나타내지 않는다면, 8일째에 제2 용량 및 15일, 22일 및 28일째에 후속 용량들을 80 ㎎/㎡까지 점증시킨다. 또 다른 실시태양에서, 개체에서 ANC/약물이 ≥1,000/㎣인 경우, 상기 개체에게 패클리탁셀의 정상 용량(full dose), 예를 들어, 80 ㎎/㎡을 투여한다. 상기 개체에서 ANC/약물이 <1,000/㎣인 경우, 상기 패클리탁셀 투여를 멈춘다. ANC < 1,000 ㎣의 추가적인 발생이 존재하는 경우, 상기 패클리탁셀 용량을 60 ㎎/㎡으로 감소시킬 수 있다. 다른 실시태양에서, 개체가 ≥100,000/㎣의 혈소판/약물을 갖거나 <100,000/㎣ 및 >75,000/㎣의 최초 발생을 갖는 경우, 상기 개체에게 패클리탁셀의 정상 용량, 예를 들어, 80 ㎎/㎡를 투여한다. 개체가 <75,000/㎣의 혈소판/약물을 나타내는 경우, 상기 패클리탁셀 투여를 멈춘다. 상기 개체가 <100,000/㎣ 및 >75,000/㎣의 혈소판/약물의 반복 발생을 나타내는 경우, 상기 패클리탁셀 용량을 69 ㎎/㎡로 감소시킨다. 일부 실시태양에서, 개체가 >2 등급 신경병증의 최초 발생을 나타내는 경우, 상기 패클리탁셀 용량을 상기 정상 용량, 예를 들어, 약 80 ㎎/㎡에서 약 60 ㎎/㎡으로 감소시킨다. 상기 개체가 >2 등급 신경병증의 두 번째 발생을 나타내는 경우(또는 용량 감소에도 불구하고 지속적으로 나타내는 경우), 상기 패클리탁셀 용량을 40 ㎎/㎡으로 감소시킨다. 상기 개체가 세 번째 발생을(또는 용량 감소에도 불구하고 지속적으로) 나타내는 경우, 상기 패클리탁셀 투여를 중단한다.
패클리탁셀은 간독성을 유발하지 않는 것으로 공지되어 있지만; 중증 간 기능부전을 갖는 환자에서 그의 제거는 지연된다. 따라서, 간 기능부전을 갖는 개체에서 패클리탁셀의 용량을 하기 표에 따라 변경시킬 수 있다.
간 기능부전을 갖는 개체에 대한 패클리탁셀 용량 변경
혈청 AST, 또는 ALT 패클리탁셀
< 3x ULN 80 mg/m2
≥ 3x ULN 60 mg/m2
≥ 5x ULN 약물 보류
>1. 5 ㎎/㎗의 상승된 빌리루빈을 갖는 개체는 비정상적인 실험값이 ≤1 등급으로 개선될 때까지 패클리탁셀을 수용하지 않는다. 상기 표에 따라, 회복 후에 더 낮은 1회 용량 수준으로 치료를 재개할 수 있다. 2주를 초과하여 지속되는 패클리탁셀 독성을 나타내는 개체는 상기 약물을 중단할 수 있다. 몇몇 실시태양에서, 개체에게 하나 이상의 화학요법제, 예를 들어, 패클리탁셀의 투여 전, 투여와 동시, 또는 투여 후에 면역억제제를 투여한다. 하나의 실시태양에서, 상기 개체에게 투여하기에 유용한 면역억제제는 H2-수용체 길항물질, 시메티딘, 라니티딘, 파모티딘, 코르티코스테로이드, 덱사메타손, 사이클로스포린, 다이펜하이드라민, 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 그룹 중에서 선택된다.
추가의 실시태양에서, 본 발명의 방법은 하나 이상의 혈관신생억제제를 FAS 키메라 단백질을 발현하는 핵산 구조물의 투여 전, 투여와 동시, 또는 투여 후에 투여함을 추가로 포함한다.
일부 실시태양에서, 본 발명의 개체에게 진토제를 투여한다. 적합한 진토제의 예는 비제한적으로 5-HT3 수용체 길항물질(예를 들어, 돌라세트론, 그라니세트론, 온단세트로, 트로피세트론, 팔로노세트론, 또는 미르타자핀), 도파민 길항물질(예를 들어, 돔페리돈, 올란자핀, 드로페리돌, 할로페리돌, 클로르프로마진, 프로메타진, 프로클로르페라진, 메토클로프라미드, 알리자프리드, 또는 프로클로르페라진, 콤파진, 스템진, 부카스템, 스테메틸, 또는 페노틸), NK1 수용체 길항물질(예를 들어, 아프레피탄트 또는 카소피탄트), 항히스타민제(H1 히스타민 수용체 길항물질)(예를 들어, 사이클리진, 다이펜하이드라민, 다이멘하이드리네이트, 독실라민, 메클로진, 프로메타진, 또는 하이드록시진), 칸나비노이드(예를 들어, 칸나비스, 드로나비놀, 나빌론, JWH 시리즈, 또는 사티벡스), 벤조다이아제핀(예를 들어, 미다졸람 또는 로라제팜), 항콜린제(예를 들어, 하이오신), 스테로이드(예를 들어, 덱사메타손), 트라이메토벤즈아미드, 진저, 에메트롤, 프로포폴, 페퍼민트, 무스키몰, 또는 아지웨인), 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 다른 실시태양에서, 적합한 진토제는 덱사메타손, PRN 아티반, 키트릴, 콤파진, 페르페나진, 조프란, 페르페나진, 또는 이들의 임의의 조합이다.
다른 실시태양에서, 해열제를 FAS-키메라 단백질을 암호화하는 핵산 구조물의 투여 전, 투여와 동시, 또는 투여 후에 투여한다. 상기 해열제의 예는 비제한적으로 NSAID(예를 들어, 이부프로펜, 나프록센, 케토프로펜, 및 니메슐리드), 아스피린, 아세트아미노펜, 메타미졸, 나부메톤, 페나존, 퀴닌, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
본 발명의 방법은 또한 FAS-키메라 단백질을 발현하는 핵산 구조물 또는 화학요법제의 수용 전 또는 후에 개체에서 질병 진행을 측정함을 또한 포함한다. 하나의 실시태양에서, 질병 진행을 상기 종양의 크기를 측정함으로써 측정한다. 또 다른 실시태양에서, 질병 진행을 종양 항원, 예를 들어, CA-125의 발현을 측정함으로써 측정한다. 상기 질병 진행을 측정하기 위해서, 상기 개체의 혈액 및 소변을 상기 FAS-키메라 유전자 산물을 발현하는 핵산 구조물의 주입 전에, 상기 주입의 끝에, 상기 주입 후 약 3시간째 및/또는 상기 주입 후 약 6시간째에 수집한다. 다른 실시태양에서, 상기 개체에 대한 활력 징후를 0분 내지 15 분(투여 직전), 투여개시후 30분 ± 15분, 투여개시후 60분 ± 15분, 투여개시후 4시간 ± 15분, 투여개시후 6시간 ± 15분째, 및/또는 임의의 부작용의 발생시에 기록한다. 상기 측정하고자 하는 활력 징후는 비제한적으로 수축기압 및 확장기압, 말초 심박수, 체온, 호흡률, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 더욱 다른 실시태양에서, 상기 개체를 혈액학(예를 들어, 감별혈구계산, INR 및 활성화된 PTT); 응고(예를 들어, PTT 수준); FAS-키메라를 발현하는 핵산 구조물의 생체분포; 혈관신생 및 염증성 생물마커(예를 들어, VEGF, PlGF, sVEGFR1, bFGF, IL-1β, IL-6, IL-8, TNF-α, sVEGFR2, SDF1α, CD31, CD34, VEGFR2, vWF, 이들의 임의의 조합)의 발현; 종양 마커, 예를 들어, CA-125의 발현, 또는 이들의 임의의 조합에 대해 측정한다.
본 발명의 방법에 적합한 개체들을 발열 및 백혈구감소증에 대해 통상적인 방식으로 관리한다. 상기 개체들은 치료의 재개에 앞서 발열 및 활동성 감염 문제로부터 회복할 필요가 있다. 일부 실시태양에서, 성장 인자를 받고 있지 않는 개체들은 다음 주기에 뉴포젠(Neupogen) 또는 뉴라스타(Neulasta)가 주어졌다. 뉴포젠 5 ug/㎏/일을 받은 개체는 동일한 스케줄로 10 ug/㎏까지 그의 용량을 점증시킬 수 있다.
실시예
실시예 1
바이러스 벡터의 제작 및 클로닝
상기 벡터를 아데노바이러스 유형 5의 게놈의 대부분을 함유하고 재조합을 가능하게 하는 어댑터 플라스미드에 대해 부분적인 상동성을 갖는 주쇄를 사용하여 제작하였다.
E1 조기 전사 유닛을 상기 주쇄 플라스미드로부터 결실시키고, pWE25 및 Amp 내성 선택 마커 부위를 결실시킴으로써 추가로 변형시켰다.
Ad5, CMV 프로모터, MCS 및 SV40폴리A의 서열들을 함유하는 상기 어댑터 플라스미드를 상기 CMV 프로모터가 결실되도록 변형시키고, PPE-1 프로모터 및 Fas-c 단편을 제한 절단에 의해 삽입하였다. 상기 변형된 PPE-1 프로모터(PPE-1-3X, 서열번호 18) 및 Fas-키메라 트랜스유전자(Fas-c, 서열번호 9)를 아데노바이러스 벡터의 제작에 사용하였다. 상기 PPE-1-(3X)-Fas-c 요소(2115bp)를 상기 PPE-1-(3X)-luc 요소로부터 제작하였다. 상기 요소는 1. 4kb의 쥐 프리프로엔도텔린 PPE-1-(3X) 프로모터, 루시페라제 유전자, SV40폴리A 부위 및 쥐 ET-1 유전자의 첫 번째 인트론(하라츠 등(Harats D. et al. , JCI, 1995)에 의해 사용된 pEL8 플라스미드(8848bp)로부터 기원한다)을 함유한다. 상기 PPE-3-Luc 카세트를 BamHI 제한 효소를 사용하여 상기 pEL8 플라스미드로부터 잘라내었다. 상기 루시페라제 유전자를 Fas-c 유전자[인간 TNF-R1(종양 괴사 인자 수용체 1, 서열번호 4) 및 Fas(p55) 세포내 도메인(서열번호 8)의 세포외 및 막내 도메인으로 구성됨(Boldin et al. , JBC, 1995)]에 의해 치환시켜 PPE-1-3x-Fas-c 카세트를 수득하였다.
PPE-1(3x)-Fas-c 플라스미드 - 카세트를 제한 절단에 의해 상기 주쇄 플라스미드에 추가로 도입시켜 PPE-1(3x)-Fas-c 플라스미드를 생성시켰다.
어댑터-PPE-1(3x)-Fas-c 플라스미드 - PPE-1-3x-Fas-c 요소를 상기 제1 세대 구조물 PPE-1-3x-Fas-c 플라스미드로부터 잘라내고, 각각 5'- 및 3'- 단부에 SnaB1 및 EcoR1 제한 부위를 도입시키는 지정된 PCR 프라이머들로 증폭시켰다. 이들 부위를 사용하여 상기 PPE-Fas-c 단편을 SnaB1 및 EcoR1으로 절단된 어댑터 플라스미드 내로 클로닝하여 숙주 세포(예를 들어, PER. C6 세포)의 형질감염에 사용되는 어댑터-PPE-1-3x-Fas-c를 생성시켰다.
실시예 2
전이성 루이스 폐암종(LLC)을 갖는 마우스에서 VB-111의 효능 및 안전성
요약
본 연구에서, LLC 모델 마우스를 VB-111(109 또는 1011 바이러스 입자(VP)), 카보플라틴(20 또는 50 ㎎/㎏) 및 알림타(10 또는 30 ㎎/㎏)로, 또는 이들 소분자와 아데노벡터의 조합으로 처리하였다.
상기 두 용량을 모두 갖는 VB-111 처리는 100% 생존을 생성시켰다. 낮은 투여량의 화학요법의 투여는 약간 낮아진 생존률(94. 1%)을 생성시켰으며, 이는 비히클 투여에 의해 나타난 경우(93. 8%)와 유사하였다. 그러나, 높은 투여량의 화학요법제의 투여는 가장 낮은 백분율의 생존(50%)을 생성시켰다. 복합 처리는 VB-111 단독의 투여에 비해 생존을 감소시켰다(64%-93%).
기관 중량(심장, 신장 및 뇌)은 대개 그룹마다 유사하였다. 간, 비장 및 고환 중량에 있어서 그룹간에 약간의 차이가 있었으며, 단일의 보다 높은 VB-111 용량, 또는 상기 용량과의 임의의 조합에 대해서 주로 중량이 더 높았다.
간 기능에 있어서 비히클 처리에 비해 유의수준 차이는 관찰되지 않았다. 일반적으로, 복합 요법은 이들의 조합으로부터, 단일 요법보다 더 높은 독성을 생성시키지 않았다.
VB-111 109 + 고 케모(chemo)의 조합이 고 케모 처리 단독의 경우보다 현저하게 더 유효하다. 더욱 또한, 상기 복합 처리는 VB-111 109 처리 단독의 평균 및 중간 종양 크기를 개선시키지만(평균 및 중간에 대해서 각각 1. 5 및 5배), 통계학적으로 유의수준은 아니다. 상기 효과는 상기 처리를 보다 큰 그룹에 적용시킬 때 통계학적 유의수준을 나타낼 수도 있다.
VB-111 109 + 고 케모의 조합은 상기 두 그룹 간에 현저한 차이가 없기 때문에, VB-111 1011에 의해 획득된 높은 종양 크기 감소를 닮는다. 이러한 VB-111 1011에 대한 현저한 유사성은 VB-111 109 단독 처리에 의해서는 획득되지 않는다.
VB-111 109 + 고 케모 요법의 조합은 그의 높은 효능을 보존하고 카보플라틴 및 알림타 화학요법 단독의 낮은 효능을 개선시키면서 VB-111 용량을 감소시킬 수 있게 한다.
도입
루이스 폐암종(LLC)은 전이에 대해 널리 사용되는 마우스 모델이다(Varda-Bloom et al. , 2001). 본 연구는 확립된 화학요법들(예를 들어, 카보플라틴 및 알림타)과 VB-111의 복합 처리의 잠재적인 상승작용을 확인하기 위한, 즉, 단독 처리로서 또는 카보플라틴(20 또는 50 ㎎/㎏) 및 알림타(10 또는 30 ㎎/㎏)의 반복적인 복막내 처리와의 조합으로 단일 용량 VB-111(109 또는 1011 VP/마우스)의 효능을 평가하고 단일 치료제로서 및 상기에 언급한 화학요법과의 조합으로 VB-111의 안전성 및 관용성을 평가 및 특성화하기 위한 것이다.
연구 설계를 표 6에 나타낸다.
연구 설계
연구 그룹 및 기본적인 타임라인 9개의 처리 그룹을 하기와 같이 계획한다:
Figure pat00025

각각의 동물에게 0±1일째, 원발 종양 절단후 5일째에 무작위 방식으로 VB-111 용량 또는 비히클의 단일 주사를 제공하였다. 2회 용량의 카보플라틴 처리를 5-6일째에 제공하고, 10회 용량의 알림타 처리를 5일째부터 제공하였다. 상기 동물들을 연구 전체를 통해서 및 희생일(이는 5번째 대조용 동물(그룹 9)이 죽은 날과 같은 날에 수행되었다)까지 안전성 및 효능에 대해 평가하였다.
연구 지속기간 0시간으로부터 대략 1개월
동물 133마리의 수컷 C57B16 마우스(11-13주령), 이들은 왼쪽 발바닥에 D122 루이스 폐암종 세포의 주사 및 원발 종양의 절제(사지의 원위 분절의 절단)에 이어서, 폐에서 전이를 나타낼 것으로 예상되었다.
시험 약물 및 제형
VB-111: 아데노바이러스 5, E1 결실됨, 부분 E3 결실됨, PPE-1(3x) 프로모터를 가짐, 비히클(하기 참조) 중에서 제형화된 트랜스유전자 fas-키메라를 함유한다.
비히클: PBS 10% 글리세롤.
알림타: 페메트렉시드, 500mg 분말.
카보플라틴: "EBEWE" 10mg/ml.
투여량 VB-111 처리를 마우스 꼬리 정맥에의 주사에 의해, 100 ㎕의 총 부피로 투여하였으며, 20 또는 50mg/kg/카보플라틴을 5-6일째에 2회 용량으로, 0. 1ml IP 투여하였으며, 10 회 용량의 10 또는 30mg/kg/알림타를 5일째에, 0. 1ml IP로 투여하였다.
안전성 평가 모든 동물들의 일반적인 건강을 연구 전체를 통해 매일 추적하였다. 상기 동물들의 체중 및 임상징후를 상기 연구의 시작전, 원발 종양의 절제후, 0일째(투여일), 및 이어서 상기 연구가 끝날때까지 매주 기록하였다. 실험 평가는 상기 연구의 끝에서 5 마우스/그룹으로부터 취한 샘플의 혈액 화학(간기능에 대해서)을 포함하였다. 큰 기관(간, 비장, 심장, 신장, 폐, 성선 및 뇌)은 동물 희생시(5 마우스/그룹) 평가하였다.
효능 평가 치료 효과를 폐 중량 및 종양 크기에 의해 각 동물의 사망시 평가하였다.
통계 처리 그룹들을 기관 중량, 종양 크기 및 간기능 매개변수의 비교를 위해서 일원 ANOVA를 사용하여 비교하였다. 다른 것들과 상이한 그룹 또는 그룹들을 단리하기 위해서, 듄의 다중 비교 과정을 수행하였다(GPT 16일 GOT 16일 & 종양 크기).
0일째에 각 그룹의 체중을 희생시의 경우와 비교하였다(대응표본 t-검정).
효능에 대해서, 그룹들을 일원 ANOVA를 사용하여 분석하였다. 정규성 검정이 실패한 경우에, 듄의 방법을 적용하였다. 추가로, 만-휘트니 검정을 두 그룹간의 개별적인 비교를 위해 수행하였다.
물질 및 방법
시험 및 기준 물질
명칭: VB-111(PPE-fas)
화학명: 명시되지 않음
활성 성분 아데노바이러스 5, E1 결실됨, E3 부분 결실됨, PPE- 1(3x) 프로모터 있음, fas-키메라 트랜스유전자 함유
비히클 PBS 및 글리세롤
공급처: VBL
물리적 상태: 액체
보관 조건: ≤-65 ℃, 저온 바이알 중에서
품목 준비: 바이알을 처리일에 해동시키고 뒤집어 혼합해야 한다
명칭: 카보플라틴
화학명: 에베붸(Ebewe)
비히클 주사용 수(Water for Injection)
공급처: 에베붸
물리적 상태: 액체(450 ㎎/45 ㎖)
보관 조건: RT
명칭: 알림타
화학명: 페메트렉시드
비히클 주사용 수
공급처: 릴리(Lilly)
물리적 상태: 분말
보관 조건: RT
대조용 품목:
명칭: PBS 10% 글리세롤
공급처: VBL
물리적 상태: 액체
보관 조건: ≤-65 ℃, 저온 바이알 중에서
품목 준비: 바이알을 처리일에 해동시키고 30분 이하 동안 얼음상에 서 유지시켜야 한다.
D122 루이스 폐암종 세포를 해동시켰다. 세포 주사 제1일에, 세포를 수거하고 5 x 105/50 ㎕의 최종 농도로 현탁하고 왼쪽 발바닥에 주사하였다. 종양 직경을 주사후 5일째에 캘리퍼스를 사용하여 측정하였다. 후속으로 종양이 5 ㎜에 도달할 때까지 매주 측정하고 이어서 7 ㎜에서(-5일로서 한정됨) 절제할 때까지 매일 측정하였다. 죽인 다음에, 뇌, 심장, 간, 비장, 신장 및 고환을 수집하고, 칭량하고 하기의 매개변수에 따라 평가하였다: 완전한 기관의 색상 및 질감, 병변의 존재 또는 내부적으로(슬라이싱후) 상기 기관 중 전이의 임의의 증거. 간기능(혈중 GOT 및 GPT 수준)의 실험 분석은 5±1일째 및 연구의 끝(제16일)에서 5 마우스/그룹으로부터 취한 샘플을 포함하였다.
모든 동물 시술은 텔 하소머의 셰바(Sheba) 의료 센터의 "동물 보호 및 사용 위원회"에 의해 승인되었다. 상기 연구는 위약-조절된, 맹검 연구였다. C57B16 마우스에게 피하 주사에 의해 왼쪽 발바닥에 루이스 폐암종 세포(D122)를 제공하였다. 상기 종양 조직이 7 ㎜의 직경에 도달했을 때(세포주사후 대략 3주째), 원발 종양을 갖는 발바닥을 마취하에서 절제하였다. 이 날을 제 -5일로서 한정하였다. 제0일은 최초 투여일이고, 원발 종양 절제후 5일째이다. 상기 마우스를 하기 표에 개시하는 바와 같이, 0일째에 다양한 처리 그룹들로 무작위 분류하였다. 시험된 아데노바이러스 벡터 또는 대조용 물질을 마우스당 100 ㎕의 총 부피로 꼬리 정맥에 주사하였다. 카보플라틴 및 알림타를 1일 용량당 마우스당 100 ㎕의 총 부피로 IP 투여하였다.
상기 동물들을 상기 연구 전체를 통해서 및 희생시까지 안전성 및 효능(하기 평가 스케줄에 나열된 바와 같이)에 대해 추적하였다. 연구 도중 각 동물의 사망을 기록하고 사망 원인을 확인하고자 하였다. 각 마우스의 희생일을 하기와 같이 정하였다: 대조용 마우스(PBS 10% 글리세롤 - 그룹 9) 중 5번째가 전이로 죽으면, 제0일(상기 마우스에게 비히클의 최초 IV 투여)에서부터 지난 일수를 측정하였다. 상기 일수를 모든 생존 마우스에 대한 희생일로서 정하였다(즉, 5번째 대조용 마우스가 16일째에 죽었으면, 모든 마우스를 상기 마우스들 자신의 16일째에 도달하면 죽였다).
상기 효과의 평가를 표 7에 나타낸 바와 같이 예정된 대로 진행하였다.
평가 스케줄
매개변수 방법 연구일수
< -5 -5
원발 종양 절제		 0 5±1 그후
매주±1 		종료
원발 종양 너비 캘리퍼스 D122 주사후 5일째에 시작하여 5mm에 도달할 때까지 5일마다 한번, 이어서 매일
체중 -- √ 발을 제외한, 절제후 기준선 중량 √ √ √
임상 징후 하기 참조* √ √ √ √ √ √
혈액 화학
(간기능) **		 SM
30-20-06
√
√
일반적인 건강 SOP
10-25-01		 √ √ √ √ √ √
폐 중량 중량 √
주요 기관 평가 **
 비정상 조직의 시각적&염색
√
*피부, 털, 눈, 점막, 호흡, 신경 조절, 떨림, 침흘림, 설사, 몸운동 활동, 무기력, 경련, 이상행동 패턴, 수면, 혼수상태.
**그룹당 5 마우스로부터
결과
109 및 1011 VP VB-111 단독으로 처리된 마우스 그룹에서, 모든 동물이 16일까지 생존하였다. 복합 처리는 생존의 감소를 나타낸 반면, 생존의 최저 백분율은 표 8에 나타낸 바와 같이 고용량의 화학요법으로 처리된 마우스에서 나타났다.
16일까지의 사망률
그룹 전체수
(n) 		생존수
(n) 		생존률
(%)
비히클 16 15 93. 8%
VB-111 109 VP 15 15 100%
VB-111 1011 VP 15 15 100%
20mg/kg 카보플라틴+10mg/kg 알림타 17 16 94. 1%
50mg/kg 카보플라틴+30mg/kg 알림타 14 7 50%
VB-111 109 VP +20mg/kg 카보플라틴+10mg/kg 알림타 13 11 84. 6%
VB-111 109 VP +50mg/kg 카보플라틴+30mg/kg 알림타 14 9 64. 3%
VB-111 1011 VP +20mg/kg 카보플라틴+10mg/kg 알림타 15 12 80%
VB-111 1011 VP +50mg/kg 카보플라틴+30mg/kg 알림타 15 14 93. 3%
효능의 평가를 위해서, 폐를 희생일에 칭량하였다. 정상 폐의 질량은 약 0. 2 g이다. 종양 크기를 폐 질량 - 0. 2 g으로서 한정한다. 평균 및 중간 종양 크기를 표 9에 나타낸다.
평균 및 중간 종양 크기
그룹 수 처리 평균 종양 크기 (g) ± SD 중간 (g)
1 VB111 1011 0. 10±0. 04 0. 10
2 VB111 109 0. 34±0. 21 0. 40
8 고 케모 0. 48±0. 15 0. 50
5 저 케모 0. 49±0. 34 0. 50
6 VB111 1011+ 고 케모 0. 22 ±0. 16 0. 20
7 VB111 109+ 고 케모 0. 20±0. 24 0. 08
3 VB111 1011+저 케모 0. 47±0. 26 0. 46
4 VB111 109+저 케모 0. 53±0. 30 0. 62
9 비히클 1. 00±0. 20 0. 90
모든 처리는 도 1에 도시된 바와 같이 비히클 처리에 비해 보다 낮은 종양 크기를 생성시켰다. 도 1은 E11, E9+고 케모 및 E11+고 케모에 의한 처리가 모두 다른 처리 그룹들보다 더 낮은 평균 종양 크기를 나타내었음을 보인다.
효능에 대한 다수의 통계 비교를 수행하였다. 일원 ANOVA 방법을 사용한 경우, VB E9+저 케모의 조합을 제외하고 모든 다른 처리들에 대한 경우보다 비히클 처리(p=<0. 001)에 대해서 통계학적 유의수준의 더 높은 종양 크기가 존재한다. 종양 크기는 상기 두 케모 처리 및 상기 두 복합 처리와 저 케모에 비해 VB-111 1E11 처리의 경우 현저하게 더 낮았다. 2개 그룹간의 개별 비교와 함께 만-휘트니를 사용한 경우, VB-111 E11에서 종양 크기는 E9+고 케모를 제외하고 모든 그룹에서보다 현저하게 더 낮다. E9+고 케모는 E11, E9 및 E11+고 케모를 제외하고 모든 그룹보다 현저하게 더 낮다. 도 2는 상기 데이터의 박스 플롯을 도시한다.
결론
상기 두 용량의 VB-111 처리는 100% 생존을 생성시켰다. 저용량 화학요법의 투여는 약간 낮아진 생존률(94. 1%)을 생성시켰으며 이는 비히클 투여(93. 8%)에 의해 나타난 경우와 유사하였다. 그러나, 고용량 화학요법의 투여는 최저 생존률(50%)을 생성시켰다. 복합 처리는 VB-111 단독 투여에 비해 생존을 감소시켰다(64%-93%).
기관 중량(심장, 신장 및 뇌)은 대개는 상이한 그룹들 간에 상이하지 않았다. 간, 비장 및 고환 중량에 있어서 그룹간에 약간의 차이가 있었으며, 단일의 보다 높은 VB-111 용량, 또는 상기 용량과의 조합에 대해서 주로 중량이 더 높았다.
간 기능에 있어서 비히클 처리에 비해 유의수준 차이는 관찰되지 않았다. 일반적으로, 복합 요법은 이들의 조합으로부터, 단일 요법보다 더 높은 독성을 생성시키지 않았다.
VB-111 109 + 고 케모의 조합이 고 케모 처리 단독의 경우보다 상기 효과를 현저하게 개선시킨다. 더욱 또한, 상기 복합 처리는 VB-111 109 처리 단독에 비해 평균 및 중간 종양 크기를 개선시키지만(평균 및 중간에 대해서 각각 1. 5 및 5배), 통계학적으로 유의수준은 아니다. 상기 효과는 상기 처리를 보다 큰 그룹에 적용시킬 때 통계학적 유의수준을 나타낼 수도 있다.
VB-111 109 + 고 케모의 조합은 상기 두 그룹 간에 현저한 차이가 없기 때문에(박스 플롯 및 만-휘트니 통계 비교에서 볼 수 있다), E11에 의해 획득된 종양 크기 감소를 닮는다. 이러한 VB-111 1011에 대한 현저한 유사성은 VB-111 109 단독 처리에 의해서는 획득되지 않는다.
VB-111 109 + 고 케모 요법의 조합은 그의 높은 효능을 보존하고 카보플라틴 및 알림타 화학요법 단독의 낮은 효능을 개선시키면서 VB-111 용량을 감소시킬 수 있게 한다.
상기 VB111 109 + 고 케모 처리 그룹에서 생존률 및 체중 손실 모두 고 화학요법 단일 처리의 경우보다 양호하였다: 생존률 - 각각 64% 및 50%, 체중 손실 - 각각 9. 7% 및 11. 6%. 시험된 기관 중량들 중 어느 경우에도 이들 두 그룹 간의 차이는 나타나지 않았다.
실시예 3
패클리탁셀과 함께 Ad5PPE-1-3X-Fas 키메라의 투여
이는 임상 환경에서 AD5PPE-1-3X-Fas-키메라(VB-111)의 투여의 안전성 및 효능을 측정하기 위한 전향적, 개방, 용량 점증, 다기관(2 기관), I/II기 연구일 것이며, 결과, 예를 들어, 독성, 부작용, 항체 역가, 생체분포, 질병 진행 및 질병 재발 및 생존이, 패클리탁셀과 함께 일련의 용량의 Ad5PPE-1-3X-Fas 키메라 아데노바이러스 벡터의 정맥내 주입을 받은 고형 원발성 및 전이성 종양(예를 들어, 재발한 상피 난소암, 나팔관, 원발성 복막, MMMT 및 유두상 장액성 뮐러 종양)이 있는 환자에서 모니터될 것이다.
상기 아데노바이러스 벡터에 대한 항체의 발생, 종양 반응, 및 혈관신생 생물마커에 대한 VB-111의 효과를 또한 평가할 것이다.
물질 및 실험 방법
연구 목적
탐구 가설은 VB-111 + 매주 패클리탁셀이 허용 가능한 독성 및 반응률 또는 추후 평가를 보장하기에 충분한 임상 이점과 관련될 것이라는 것이다.
1차 목적
1. 예상 유효 용량에 걸쳐있는 제한된 수의 용량의 VB-111 및 매주 패클리탁셀 조합의 독성을 한정한다.
2. VB-111 및 매주 패클리탁셀 조합의 최적으로 허용되는 용량의 확대된 코호트에서의 효능(RECIST 반응, CA-125 반응 및 무진행 생존(PES))을 탐구한다.
2차 목적
독성 및 반응의 예측 마커를 탐구한다.
연구 설계 및 평가에 대한 개요
상기 개방, 단일 기관, I/II기 시험은 VB-111 및 매주 패클리탁셀의 조합이 전처리된 집단에서 병력이 있는 대조용에 비해 반응률을 개선시킬 수 있는지의 여부를 확인하기 위해서, 1, 8, 15 및 22일 스케줄로 매 28일마다 1시간에 걸쳐 주입되는 매주 패클리탁셀 40 내지 80 ㎎/㎡과 함께 제1일, 2번째 28-일 주기마다 주입되는 VB-111을 병용한다. 환자들은 과잉의 신경병증을 피하기 위해서 패클리탁셀 투여를 예정된 대로 중단하지만 VB-111 주입의 중단은 없도록 하는 변화 및 이점으로 치료를 계속할 수 있다. 상기 시험을 10명 환자에서 ≥2 반응을 근거로, 2-단계 사이몬의 디자인으로 설계하며, 추가 등록을 진행할 것이다.
개체 집단:
재발한 상피 난소암, 나팔관암, 원발성 복막, MMMT, 및 유두상 장액성 뮐러 종양을 갖는 개체들을 등록할 것이다.
등록이 계획된 환자들의 수
상기 연구 설계를 근거로, 안전성을 확인할 뿐만 아니라 상관성/전문 연구의 평가를 허용하기 위해서 진행된 암이 있는 2 내지 42명의 환자(용량 점증 동안 코호트당 최대 6명(=18 환자)), 및 MTD 용량 수준에 따라 29명 이하의 환자가 필요한 것으로 추정된다.
환자의 선택
RECIST 기준 및 CA-125(부인과 암 그룹간(GCIG) 기준)에 의해 한정된 반응률을 평가하고 안전성 프로파일을 개시하고 부작용 및 독성을 특성화하기 위한 I/II기 설계. I기 연구는 3개 용량 수준까지 3+3 설계로 등록시킬 것이다. II기 연구는 정상 용량 화학요법을 취하는 용량 수준 2 및 3의 참가자를 포함하여, 제1 단계에 10명 이하의 환자를 모집할 것이다. 적어도 2개의 반응이 존재하는 경우, 확대 코호트에서 최대 29명의 참가자까지 추가로 19명의 환자를 계속 등록시킬 것이다. 상기 효능 분석은 반응률을 평가할 것이다. 계속되는 안전성 재검토를 수행할 것이며 제1 단계에서 2개 이상, 또는 임의의 시점에서 3개의 ≥3 등급의 GI 천공이 존재하는 경우, 상기 연구를 마감할 것이다.
처리 그룹에 개체 포함에 대한 기준은 하기와 같다:
1. >18세의 환자.
2. 조직학적으로 확인된 상피 난소, 복막, 또는 나팔관암, 및 자궁 유두상 장액성 암종(UPSC), 및 부인과 MMMT.
3. 전이성 질병에 대해 3차 이하의 선행 화학요법이 허용된다.
4. 환자는 선행의 백금 또는 백금 기재 요법을 받았어야 한다.
5. 동부 종양학 협력 그룹(ECOG) 상태 0-1.
6. 백금 및 탁산 함유 섭생을 완료한 지 6개월 이내 또는 상기 섭생을 받는 동안 영상화 또는 CA-125에 의해 진행성 질병으로서 한정된 백금 내성 또는 난치성 질병(원발성 또는 2차 - 즉, 환자들은 <6 개월의 후속의 무백금 간격으로 재발한 백금 민감성 질병에 대한 단지 하나의 백금 기재 치료를 받을 수 있다).
7. 측정 가능하거나 평가 가능한 질병이 RECIST 또는 CA-125의 사용을 필요로 한다(일부 환자가 RECIST 및 CA-125 모두에 적합한 경우, 표준화된 적격성을 위해서 RECIST에 의한 평가를 선행한다).
8. 적합한 골수 기능.
9. 적합한 혈액학적 기능:
i. ANC ≥ 1000/㎣
ii. PLT ≥ 100,000/㎣
iii. PT 및 PTT(초) < 1. 2 X ULN(PTT>ULN을 갖는 환자는 음의 LAC를 가져야 한다)
10. 적합한 기관 기능:
a. 1 등급 이하의 CTC 신경병증.
b. 선행 방사선은 ≥30%의 주요 골수 함유 영역(골반, 요추)을 포함하지 않아야 한다.
c. 증명된 간 전이의 경우 ≤2. 5 x ULN 또는 <5 x ULN의 SGOT/SGPT/알칼리성 포스파타제
d. 빌리루빈 ≤ 1. 5 x ULN
e. 크레아티닌 ≤ 1. 5 x ULN
f. 선별시 요시험지봉 검사에 의해 단백뇨 < 2+ 또는 UPC(요단백 크레아티닌 비 < 1. 0).
11. 1 등급 신경병증 또는 임의의 등급의 빈혈 및 탈모증을 제외하고, 방사선요법, 화학요법, 생물학적 요법을 포함한 선행 치료로부터의 급성 독성으로부터 회복되어야 한다.
12. 혈관신생억제제에 의한 선행 치료는 제외 기준이 아니다.
13. 영상화시 선행의 GI 천공, 또는 GI 폐색 또는 장 곤란이 없다.
14. 치료를 요하는 활동성의, 치료되지 않은 정신질환 또는 신경학적 증상이 없다(I 등급 감각 신경병증은 허용됨). 치료되지 않은 중추신경계 또는 뇌 전이의 존재가 없다. 사전 동의의 이해 및/또는 제공을 방해할 수도 있는 임의의 치매 또는 현저하게 변경된 정신 상태가 없다.
15. 환자가 크레모포어(등록상표) EL에 대해 공지된 과민성을 갖지 않는다. 그러나, 참가자는, 선행의 패클리탁셀 반응을 가졌지만 후속으로 재접종시 상기 약물을 허용한 경우 참가자로 적합하다.
16. 억제되지 않은 세균, 바이러스 또는 진균 감염의 증거가 없다.
17. 환자가 투여 전 과거 30일 동안 다른 연구 요법을 받지 않는다.
18. 사전 동의를 받을 자격이 있어야 한다.
치료 그룹으로부터 개체의 제외 기준은 하기와 같다:
1. 재발암에 대해서 3차를 초과한 선행 화학요법.
2. 표재성 기저 세포 및 표재성 편평 세포 이외의 활동성 악성, 또는 최근 2년내 자궁경부의 상피내암이 없다. 동반된 뮐러 종양(전형적으로 자궁내막암)으로 진단된 환자는 제외되지 않는다. 2년내에 낮은 위험성(국소화된, 비-염증성)의 유방암으로 진단되고 치료 의도로 치료된 환자는 제외되지 않는다.
3. 연구 및/또는 추적조사 과정을 따를 수 없음.
4. 3개월 미만의 기대 수명.
5. 선행의 탁산 노출 이외의 동반이환으로부터의 일반 독성 기준(CTC) 1 등급 이상의 신경병증(운동 또는 감각), 예를 들어, 당뇨병.
6. 드물게 적용될 수 있지만, 가임 능력이 있는 성적으로 활성인 여성은 상기 연구 과정 동안, 실패의 위험을 최소화하는 방식으로 유효한 산아 제한 방법을 사용해야 한다. 연구 등록 전에, 가임 능력이 있는 여성에게 시험 참여 기간 동안 임신을 피해야 하는 중요성 및 의도하지 않은 임신의 잠재적인 위험 인자들을 알려야 한다. 가임 능력이 있는 모든 여성은 연구 제품의 최초 수용전 14일 이내에 임신 음성 검사를 받아야 한다. 상기 임신 검사가 양성인 경우, 상기 환자는 연구 제품을 받지 않아야 하며 상기 연구에 등록해서는 안 된다.
7. 부적합하게 조절된 고혈압.
8. 고혈압 위기 또는 고혈압 뇌증의 선행 병력.
9. 뉴욕 심장 협회(NYHA) II 등급 이상의 울혈성 심부전.
10. 제1 연구일 전 6개월 이내에 심근 경색 또는 불안정 협심증의 병력.
11. 제1일 전 6개월 이내에 뇌졸중 또는 일과성 허혈성 발작의 병력.
12. 치료된 뇌 전이를 제외한, 알고 있는 CNS 질병: 치료된 뇌 전이는 치료후 진행 또는 출혈의 증거를 갖지 않는 것으로서 정의되며 선별 기간 동안 임상 검사 및 뇌 영상화(MRI 또는 CT)에 의해 확인된 바와 같이, 덱사메타손의 계속되는 요구가 없다. 항경련제(안정한 용량)는 허용된다. 뇌 전이의 치료는 전뇌 방사선요법(WBRT), 방사선수술(RS; 감마 나이프, LINAC, 또는 등가의 것), 또는 치료 의사에 의해 적합한 것으로 간주되는 조합을 포함할 수 있다. 제1일 전 3개월 이내에 수행된 신경수술 절제 또는 뇌 생검에 의해 치료된 CNS 전이를 갖는 환자는 제외될 것이다.
13. 제1일 전 6개월 이내에 중대한 혈관 질병(예를 들어, 수술적 수복이 필요한 대동맥류, 또는 최근의 말초 동맥 혈전증).
14. 제1일 전 1개월 이내에 객혈(에피소드당 >1/2 티스푼의 선홍색 혈액)의 병력.
15. 출혈 특이체질 또는 중대한 응고장애(치료학적 응고방지제의 부재 하에서)의 증거.
16. 제1일 전 28일 이내에 큰 외과적 시술, 개방 생검, 또는 중대한 외상성 손상 또는 연구 과정 동안 큰 외과적 시술에 대한 필요성의 예상.
17. 제1일 전 7일 이내에, 혈관 삽입 장치의 배치를 제외하고, 총 생검 또는 다른 소규모 외과적 시술.
18. 제1일 전 6개월 이내에 복부 누공 또는 위장 천공.
19. 현재 장폐색의 징후 및 증상.
20. 현재 IV 수화 또는 총 비경구 영양법(TPN)에 대한 의존성.
21. 심한, 치유되지 않은 상처, 활성 궤양, 또는 치료되지 않은 골절.
22. TKI를 위해 선행 4주 이내 또는 항체 또는 펩티바디 기재 요법을 위해 6주 이내에 혈관신생 억제 요법을 받은 환자.
23. 등록전 최근 4주 이내 사이클로스포린의 사용을 포함하여 면역억제성 치료가 계속해서 필요하거나, 또는 임의의 상기와 같은 약물요법의 만성적인 사용 이력을 갖는 환자. 안정한 용량(예를 들어, 적어도 투여 2주 전에 시작된)의 코르티코스테로이드는 허용된다.
조성물: AD5-PPE-L-3X-FAS-키메라
Ad5-PPE-1-3X-fas-키메라(서열번호 19)는 변형된 쥐 프리-프로엔도텔린 프로모터(PPE-1-3x, 서열번호 18) 및 fas-키메라 트랜스유전자[Fas 및 인간 종양 괴사 인자(TNF) 수용체](서열번호 9)를 함유하는 비-복제성 아데노바이러스 벡터(Ad5, E1 결실된)로 이루어진, 혈관 파괴성 유전자 치료제이다. 상기는 1회 사용 바이알 중에, 멸균 벡터 용액으로서 제형화되고 동결(-65 ℃ 이하) 공급된다.
효능 및 약력학적 목표:
치료 계획
환자를 매주 1회 패클리탁셀과 함께 Ad5-PPE-1-3X-fas-키메라로 치료할 것이다. 상기 주기 길이는 28일이 될 것이다. 환자는 패클리탁셀을 매주(1, 8, 15 및 22일) 60-분 IV 주입으로서 수용할 것이다. Ad5-PPE-1-3X-fas-키메라를 주기 1로 출발하여 그 후에 2 주기마다 발생하는 홀수 주기의 제1일에 IV 주입으로서 투여할 것이다. 치료 계획을 도 3에 나타낸다. I기에 대한 용량 수준을 하기 표 10에 나타낸다.
I기1 성분에 대한 용량 수준:
용량 수준 n VB-111 x Q2
주기 2 		패클리탁셀 IV Q7d
13 3-6 3 x 1012 VPs 40 mg/m2
2 3-64 3 x 1012 VPs 80 mg/m2
3 3-6 1 x 1013 VPs 80 mg/m2
확대 코호트 29 MTD MTD
각주:
1. 최대 허용 용량(MTD)이 한정되거나 용량 수준 3이 완료된 후에 II기에 대한 크로스오버가 발생할 것이다.
2. 각 용량 수준에 대한 전체 VB-111 바이러스 입자 용량은 <50 ㎏인 환자에 대해 나타난 경우와 상이함에 유의하시오.
3. 개체 용량 점증 내에서 용량 수준 1에 대해 계획한다. 주기 2 제1일에서 용량 수준 1에 등록한 참가자의 경우, 패클리탁셀의 용량을, 상기 용량이 임상적으로 사용되는 표준 용량이라면, 80 ㎎/㎡까지 점증시킬 수 있다. 2명의 참가자가 용량 수준 1에서 용량 제한 독성(DLT)을 경험하는 경우, 상기 연구를 MTD의 확인 없이 마감할 것이다.
4. 이들 숫자는 (a)용량 수준 2에 직접 등록한 참가자 및 (b) 주기 3 동안 DLT의 평가를 위해 주기 2 제1일에 용량 수준 2로 용량-점증된 용량 수준 1 참가자의 포함을 반영할 수 있다.
따라서, I기 코호트의 참가자들을, 표 11에 나타내고 하기에 개시하는 바와 같은 변형된 3+3 설계를 사용하여 등록시킬 것이다.
용량 수준 1에서부터 용량 수준 2까지의 용량 점증: 2명의 참가자가 용량 수준 1에서 DLT를 경험하는 경우, 상기 연구를 MTD의 확인 없이 마감할 것이다. 용량 수준 1에서, 주기 2 제1일에 80 ㎎/㎡ 패클리탁셀로의 계획된 피실험 참가자 용량 내 점증이 존재하며, 이어서 이들 참가자는 주기 3에서 용량 수준 1에서 동반되는 VB-111 및 패클리탁셀 투여가 발생했다 하더라도, 용량 수준 2에 등록한 참가자들의 평가에 대해 합산될 수 있다(즉, 용량 수준 2에 등록한 참가자 및 80 ㎎/㎡까지 패클리탁셀 용량 점증된 용량 수준 1로 주기 3을 받는 참가자 모두, 용량 수준 2에서 2 내지 12명의 등록자가 될 수 있도록 평가될 것이며, 이중 6명 이하는 처음에 용량 수준 1에 등록하고 이어서 용량을 점증시킨다). 3명의 참가자를 평가한 후에(용량 수준 2에 대한 새로운 등록자로서든 또는 용량 수준 1에서 용량-점증하는 패클리탁셀로서든) 용량 수준 2에서 DLT가 존재하지 않는 경우, 상기 연구는 용량 수준 3을 등록할 것이다. 이 계획은 단지 개체내에서 패클리탁셀에 대한 용량 점증에만 적용할 뿐이며(40 ㎎/㎡ 용량을 획득하는 참가자들의 수를 최소화하기 위해서) 개체내 VB-111의 용량 점증은 없다.
용량 수준 2에서부터 용량 수준 3까지의 용량 점증: 일단 3명의 참가자가 용량 수준 2에 등록하였고 DLT 없이 VB-111의 초기 투여에 이어서 14일간 관찰되었다면, 개체들을, 적어도 6명의 참가자가 용량 수준 1 및 2에서 3x1012 VP를 투여받을 것이기 때문에, 용량 수준 3(1x1013 VP)에 등록시킬 수 있다. 용량 수준 3에서 두 번째 용량의 VB-111은 오직, 적어도 2명의 환자가 DLT 없이 3x1012 VP의 용량을 받은 후에만 제공될 수 있다. 또한, DLT 모니터링을 VB-111 I/II기 연구와 나란히 동시에 수행할 것이다. 이들 연구로부터의 안전성 발견은 상기 팀과 공유될 것이다. 임의의 DLT가 용량 수준 3에서 발생하는 경우, 참가자들은 계속해서 연구에 참여할 수 있으며 용량 수준 2 VB-111(3x1012 VP)를 추가로 투여 받을 것이다.
용량 점증 결정 규칙
주어진 용량 수준에서 DLT를 갖는 환자의 수 점증 결정 규칙
3 중 0** 다음 용량 수준으로 진행한다:
**개체내에서 용량 점증은 3명의 참가자가 용량 수준 1에서 28일에 걸쳐 DLT에 대해 충분히 평가될 것이 예상되지 않는 한 허용되지 않는다. 3명의 참가자가 연구시 4주의 초기 투여내에서 등록하고 DLT를 겪지 않는다면, 용량 수준 2를 개방하고 연구시 5주째(주기 2 제1일)에 용량 수준 2로 용량-점증하는 3명의 참가자와 동반하여 3명의 참가자를 등록시킬 것이다. 따라서, 자연증가가 느린 경우, 용량 수준 1에서 참가자는 용량 수준 1에 대한 DLT의 평가가 완료될 때까지 5주째(주기 2 제1일)에 용량을 점증시키지 않을 것이며 이는 DLT가 상기 코호트에서 경험되는 경우 더욱 지연될 수 있다.
3 중 1 3명의 추가적인 환자의 가입:
이들 3명의 추가적인 참가자 중 0명이 DLT를 경험하는 경우, 다음 용량 수준으로 진행한다. 이들 참가자 중 1명 이상이 DLT를 경험하는 경우, 이어서 용량 점증을 멈추며 상기 용량 이하 용량이 MTD이다. 추가 참가자가 용량 수준 1에 가입한 경우, MTL의 확인 없이 상기 연구를 마감할 것이다.
> 2 용량 점증을 멈추며 상기 용량 이하의 용량이 MTD이다. 2명의 참가자가 용량 수준 1에서 DLT를 경험하는 경우, 상기 연구를 MTD의 확인 없이 마감할 것이다.
최고 투여 용량에서 6 중 ≤1 이는 MTD이며 상기 집단에서 II기 용량이 권장된다.
상기 작용제의 새로운 성질의 제공되는 경우, 새로운 참가자들은 연구를 시작하는 각각의 새로운 사람들 사이에 적어도 2일 연속적으로 등록할 것이다. 다수의 신규 연구 참가자들은 같은 날에 투여받지 않을 수도 있다. 하나의 28-일 주기의 치료의 완료가 투여 코호트 각각에 대한 MTD 및 DLT의 측정을 위한 기준이 될 것이다. 독성 등급은 부작용에 대한 공통 용어 기준(CTCAE) 버전 4(인터넷상에서 다운로드 가능한 파일로서 입수할 수 있다: http://ctep. info. nih. gov)에 따라 평가될 것이다.
용량 제한 독성(DLT)의 정의
잠재적인 DLT의 평가를 제1 주기(주기 1) 동안 및 또한 DL1 참가자의 경우 제3 주기 동안 수행할 것이다.
독성을 CTCAE, 버전 4. 0에 의해 평가할 것이다. 용량-제한 독성을 하기와 같이 정의한다:
1. ≥4일 동안 지속되는 <0. 5 x 109/L의 절대 호중구수(ANC) 또는 패혈증과 함께 <0. 5 x 109/L의 절대 호중구수, 또는 해열제 투약으로 쉽게 조절되지 않는 3 내지 4 등급 발열(>100. 2 ℉).
2. 임의의 지속 기간 동안 <10 x 109/L의 혈소판수.
3. 임의의 다른 약물-관련된 비 간성 및 비-혈액학적 ≥3 등급 독성. 상기 독성은 의학적으로 조절될 수 있는 ≥3 등급 오심 또는 구토(오심 및/또는 구토가 의학적으로 조절될 수 없고 첫 번째 주기 동안 발생하는 경우, 이는 DLT로 간주될 것이다), 또는 쉽게 보정될 수 있고, 임상적으로 무증상이며, 의학적으로 중요한 합병증(예를 들어, ECG 변화)을 동반하지 않는 ≥3 등급 저칼륨혈증, 저나트륨혈증, 저인산혈증, 저마그네슘혈증, 및 저칼슘혈증은 포함하지 않는다.
VB-111 투여 후 24시간 이내에 발생하는 3-4 등급의 발열 사건은 대증요법에 반응하는 경우 DLT로 간주되지 않을 것이다. 임의의 시점에서 허용 가능하지 않은 독성 및/또는 진행을 갖는 환자는 연구에서 제외할 것이다.
연구 과정
치료-전 평가:
임상의(MD 또는 NP)는 적격성 기준에 맞는 환자를 평가할 것이다. 병력, 신체 검사 및 체중 및 활력징후의 기록 및 ECG 기록을 제1 치료주기의 개시 전 14일 이내에 수행할 것이다. 기준선 측정을 확립시키기 위한 조사를 상기 제1 치료주기의 개시 전 28일 이내에 수행해야 한다.
임의의 연구-투여 전에, 각 주기의 제1일에, 개체의 적격성을 재확인해야 한다.
하기의 평가를 D1의 3일 이내(주기 1을 제외하고, 혈액 시험을 제1일의 14일 이내에 검사할 수 있을 때)에 수행해야 한다:
1. 임상 평가: 병력, 신체 검사, 활력 징후(VS) 및 출혈 위험성에 대한 검사. 다른 때에는 VS 평가를 기관 치료기준에 따라 수행할 수 있다.
2. 혈액학: 감별혈구계산, INR 및 활성화된 PTT.
3. 응고: 정상치 상한(ULN) 이상의 부분적인 트롬보플라스틴 시간(PTT) 연장의 경우에, 혈액을 루푸스 항응고인자(LAC)를 위해서 채혈해야 한다. 연장된 aPTT를 갖는 환자는 aPTT가 정상화될 때까지 VB-111을 받지 않아야 한다. 루푸스 항응고인자(LAC)에 대해 양성으로 시험된 환자에서, VB-111의 반복 투여 전에 음성 시험이 필요하다. 지속적인 양성 LAC 또는 항인지질 항체(APLA) 시험의 경우, 상기 시험을 초기 양성 시험으로부터 12주 이내에 반복해야 한다.
4. 포괄적인 대사 패널: 전해질, 간기능 시험(LFTS), 요소 질소(BUN)/크레아티닌(Cr), 칼슘 및 마그네슘 포함.
5. 소변: 통상적인 분석을 위해 수집됨.
6. VB-111 특수 실험: 혈액을 하기를 위해 채혈할 것이다:
(i) 생체분포: VB-111 아데노바이러스 DNA 수준 및 트랜스유전자 발현 측정.
(ii) 생물마커: 혈관신생 억제 요법을 위한 생물마커를 상기 연구에 등록한 모든 환자들로부터 수득된 말초 혈액 샘플에서 시험할 것이다. 혈장 분석을 순환하는 혈관신생 및 염증 생물마커 VEGF, P1GF, sVEGFR1, bFGF, IL-1β, IL-6, IL-8 및 TNF-α(메소-스케일 디스커버리(Meso-Scale Discovery)로부터의 다중 ELISA 플레이트 사용) 및 sVEGFR1 및 SDF1α(R&D 시스템스 키트 사용)에 대해 수행할 것이다. 혈액-순환 세포를 표준 유식세포측정 프로토콜을 사용하여 신선한 샘플에서 계수할 것이다. 공문서의 조직을 CD31, CD34, VEGFR2, 및 vWF에 대해서 평가할 것이다.
(iii) 종양마커: CA-125
(iv) 항체: AD-5 바이러스에 대한 항체(중화 항체 포함)의 수준.
연구 치료제 주입:
연구 치료제 주입(패클리탁셀 또는 VB-111) 전에 ANC는 ≥1,000 ㎣이고 혈소판수는 ≥100,000/㎣이어야 한다.
패클리탁셀 주입:
진토제 요법: 진토제 요법은 기관 표준에 따라, 덱사메타손 10 ㎎ i. v. prn, 아티반 0. 5-2. 0 ㎎ i. v. , 및/또는 콤파진 10 ㎎ p. o. , 또는 퍼페나진 4 ㎎ p. o. 을 포함할 수 있다.
투여 순서는 패클리탁셀에 이어서 VB-111이 될 것이다.
패클리탁셀을 60분에 걸쳐 0. 22 마이크론 이하의 미세다공성 멤브레인을 갖는 인-라인 필터를 통해 40 내지 80 ㎎/㎡의 초기 용량으로 매주 투여할 것이다.
모든 환자는 중증 과민 반응을 방지하기 위해서 패클리탁셀의 투여전에 예비투약(premedication)을 받아야 한다. 환자들은 경구 덱사메타손 20㎎을 치료 전날 밤에, 20㎎을 제1 용량으로 치료 아침에 복용하고 이어서 패클리탁셀이 잘 허용되는 경우, 2주간 경구 없이 오직 IV 예비투약만을 취할 것이며, 상기 용량을 끊고 3주 후에 더 이상 사용하지 않을 수도 있다. 전형적인 예비투약 섭생은 패클리탁셀 전 30 내지 60분째에 제공되는 하기로 이루어진다: 10 내지 20 ㎎ 정맥내(IV) 덱사메타손, 50 ㎎ IV 다이펜하이드라민(또는 그의 등가물), 및 300 ㎎ 시메티딘 또는 50 ㎎ IV 라니티딘. 파모티딘 20 ㎎ IV를 국소 처방에 대한 대안으로서 대용할 수 있다. 상기 덱사메타손 용량을, 환자가 주어진 패클리탁셀에 과민 반응을 경험하는 경우 상기 조사자의 판단으로 증가시킬 수도 있다.
홀수 주기의 제1일:
상기 언급한 과정 외에, 홀수 주기의 D1에서, 하기의 과정들을 수행할 것이다.
종양 측정:
주기 1(1개월까지의 선행이 허용됨) 및 이어서 질병 진행시까지의 모든 홀수 주기(예를 들어, 주기 1, 3, 5 등 = 모두 8 주)의 D1 전에, CT에 의한 종양 측정을 가슴, 복부 및 골반상에서 수행할 것이다. 상기 평가를 투여 전 3일까지, 약물 투여에 앞서 수행할 것이다.
연구 치료제 주입: VB-111
VB-111을 질병 진행시까지 각 홀수 주기의 제1일에 투여할 것이다.
VB-111을 패클리탁셀 다음에 투여해야 한다. 이는 연구제를 안전성 예방으로서 마지막에 제공해야 한다는 범례에 근거한다. 두 작용제의 약물학에서 순서 의존적인 변경이 있을 것이라는 예상은 없다. 이는 패클리탁셀 다음에 바로(1시간 이내에)일 것으로 예상되지만, 임상적으로 필요한 경우 나중에(24시간 이내에) 투여할 수도 있다.
연장된 aPTT를 갖는 환자는 aPTT가 정상화될 때까지 VB-111을 받지 않아야 한다. LAC 및/또는 APLA에 대해 양성으로 시험된 환자에서, VB-111의 반복 투여 전에 음성 시험이 필요하다. 시험이 양성인 채로 있으면, 추가의 VB-111은 투여해서는 안 된다. 지속적인 양성 LAC 또는 항인지질 항체(APLA) 시험의 경우, 상기 시험을 초기 양성 시험으로부터 12주 이내에 반복해야 한다.
해열제 치료: 1000㎎의 아세트아미노펜을 VB-111 투여 전 및 PRN 아세트아미노펜 투여후에 투여할 것이다. 3 등급 발열을 나타내는 환자에서, 또는 조사자의 생각대로, i. v. 덱사메타손 10 ㎎을 후속 VB-111 용량의 투여 10분 전에 투여할 수 있다.
VB-111 준비 및 주입: 패클리탁셀 주입의 완료시, VB-111을 금식 또는 단지 가벼운 순한 식사를 한 환자에게 3x1012 VP(용량 수준 1-2) 또는 1x1013 VP(용량 수준 3)의 단일 용량으로서 투여할 것이다. 유의사항: 금식은 상기 환자가 보통의 낮은 정도의 자기제한 발열이기보다는 상당한 한기를 갖는 경우 구토를 피하기 위해서 제안된다. 이는 절대적인 요건은 아니다. 최종 투여 용액을 제조후 60분 이내에 투여해야 한다. 정규 식사는 투여후 0. 5 시간째에 허용될 것이다. 희석된 VB-111의 단일 정맥내 주입을 하기의 속도로 투여해야 한다:
1. 3x1012 VP 용량의 경우: 1 ㎖/분
2. 1x1013 VP 용량의 경우: 처음 10 ㎖에 대해서 1 ㎖/분, 이어서 나머지 주입에 대해서 3 ㎖/분.
VB-111 투여후 관찰
연구 참가자들을 연구 약물의 최초 투여 후 및 후속으로 임상적으로 필요한 대로 처음 8시간 동안 상기 진료소 또는 주입 지역에서 관찰해야 한다.
VB-111 분배 실험
혈액 및 소변 샘플을 하기의 시점에서 VB-111 아데노바이러스 DNA 수준 발현 측정을 위해 수집할 것이다:
혈액:
1. 0(투여전)
2. 주입의 끝에서
3. 3±0. 5 시간
4. 6±0. 5 시간
활력 징후:
활력 징후(수축기 및 확장기 혈압, 말초 심박수, 체온, 호흡률)를 기록할 것이다:
1. 0분(투여 직전)(-15분 범위)
2. 투여개시 후 30분(+/-15분 범위)
3. 투여개시 후 60분(+/-15분 범위)
4. 투여개시 후 4시간(+/-15분 범위)
5. 투여개시 후 6시간(+/-15분 범위)
6. 임의의 부작용의 발생시
각 주기의 제8, 15 및 22일
각 환자들을 하기의 평가를 위해 금식 상태에서 진료소로 보낼 필요가 있을 것이다:
1. 활력 징후: 반듯이 누운 상태의 수축기 및 확장기 혈압, 말초 심박수, 체온, 호흡률.
2. 혈액학: 감별혈구계산, INR 및 활성화된 PTT.
3. 응고: 필요한 경우 비정상 PTT 수준을 추적조사하기 위해.
4. 소변: 통상적인 분석을 위해 수집함.
혈액 실험을 주기 1 내지 6의 제8일에 수행할 것이다. 혈액을 하기를 위해 채혈할 것이다:
1. 생체분포: VB-111 아데노바이러스 DNA 수준 및 트랜스유전자 발현 측정(VB-111 주입에 따라 2번째 주기마다).
2. 생물마커: 혈장 분석을 순환하는 혈관신생 및 염증 생물마커 VEGF, P1GF, sVEGFR1, bFGF, IL-1β, IL-6, IL-8 및 TNF-α(메소-스케일 디스커버리로부터의 다중 ELISA 플레이트 사용) 및 sVEGFR1 및 SDF1α(R&D 시스템스 키트 사용)에 대해 수행할 것이다. 혈액-순환 세포를 표준 유식세포측정 프로토콜을 사용하여 신선한 샘플에서 계수할 것이다. 공문서의 조직을 CD31, CD34, VEGFR2, 및 vWF에 대해서 평가할 것이다.
3. 종양마커: CA-125
4. 항체: 상기 바이러스에 대한 항체(중화 항체 포함)의 수준.
유의사항: 전해질, LFTS, BUN/Cr, 칼슘 및 마그네슘을 포함한 포괄적인 대사 패널은 단지 제1, 8, 15, 22일에 LFT와 함께, 단지 D1에만 요구된다.
패클리탁셀을 상기에 상세히 나타낸 바와 같이 투여할 것이다. ANC는 >1,000/㎣이고 혈소판수는 >100,000/㎣이어야 한다.
진토제 요법: 진토제 요법은 기관 표준에 따라, 키트릴 750 ㎍ i. v. 또는 1 ㎎ p. o, 또는 조프란 10 ㎎ i. v. 또는 8 ㎎ p. o. 과 함께, 덱사메타손 10 ㎎ i. v. 뿐만 아니라 prn 아티반 0. 5-2. 0 ㎎ i. v. , 및/또는 콤파진 10 ㎎ p. o. , 또는 퍼페나진 4 ㎎ p. o. 을 포함할 수 있다.
연구 완료 방문
개체들에게 질병 진행시까지 상술한 주기 스케줄에 따라 복합 요법(패클리탁셀 및 VB-111)을 투여할 것이다.
VB-111의 최종 투여에 이어서, 각 환자를 동일한 임상 평가 및 통상적인 실험 샘플 회수와 함께, 예정되지 않은 실험 평가로서 보고되는 임상적으로 중요한 사건에 대한 반응으로, 최종 추적조사 방문을 위해 진료소로 복귀할 것이 요구될 것이다. 부작용 및 동반 투약을 선행의 상기 연구에서와 동일한 방식으로 기록해야 한다. 상기 개체는 신체검사를 받을 것이며 이는 치료 임상의(MD 또는 NP)에 의해 수행될 것이다. ECG를 수행할 것이다.
상기 연구를 중단하거나 질병 진행을 경험한 환자는 생존에 대한 평가를 위해서 진료소에 의해서 또는 전화로 추적조사될 것이다. 그러나, 질병 진행에 이어서, CA125 및 RECIST를 나타내는 데이터를 임상 연구 파일에서 유지시킬 것이다.
추가적인 과정
부작용
임의의 부작용을 갖는 모든 환자들에 대해 충분한 지원 수단을 사용해야 한다. 약물 투여에 따라 발생하는 모든 부작용들을 강도, 적용된 치료 수단, 결과 및 연구 약물에 대한 관련성의 평가와 함께, 사례 보고 양식(CRF)에 기록할 것이다. 관련된 부작용을 해법을 통해 추적할 것이다. 관련되지 않은 부작용은 해법을 통해 또는 연구 종료를 통해 추적될 것이다.
통상적인 부작용은 오심, 구토 및 식욕상실을 포함한다. 상기 환자는 또한 변비, 묽은 변 또는 설사를 경험할 수 있다. 설사가 발생하는 경우 수분 섭취를 증가시키는 것이 중요하다. 설사가 심해지면, 상기 환자는 입원해서 정맥수액을 받아야 할 수도 있다. 임의의 연구 제품의 투여는 일반적인 부작용의 위험을 수반한다. VB-111은 연구 제품이기 때문에, 인간에서의 잠재적인 부작용을 모두 알지는 못한다. VB-111은 하기에 나열된 부작용들을 전부, 일부 일으키거나, 전혀 일으키지 않을 수도 있다. 부작용은 연구 중인 동안 발생할 수도 있는 기존의 의학적 상태의 악화 또는 바람직하지 못한 의학적 상태이다. 하기에 나열된 가능한 부작용들 외에, 심하거나 생명을 위협할 수 있는 뜻밖의 또는 통상적이지 않은 부작용들이 VB-111을 단독으로 제공할 때 또는 다른 약물과 병용할 때 발생할 수도 있다. 상기 연구의 목적들 중 하나는 VB-111의 가능한 부작용을 조사하는 것이다. 상기 연구의는 상기 환자를 상기 연구 동안 면밀히 모니터할 것이며 상기 환자와 위험성, 불편함 및 부작용에 관한 임의의 문제에 대해 논의할 것이다.
VB-111과 관련된 위험성
있음 직한(발생할 가능성이 50%를 초과함)
·독감 증상, 예를 들어, 발열, 근육통, 피로, 한기
·오심
·구토
때때로(발생할 가능성이 1 내지 10%)
·변비
·간에 의해 비정상적으로 높은 수준의 효소가 생성됨(이는 간이 적절히 기능하지 못하고 피로 및 황달(피부 및 눈의 황색화)을 유발할 수 있음을 의미한다. 이는 대개 순하고 가역적이지만, 심하거나 생명을 위협할 수 있다)
·비장 크기의 증가는 대개 어떠한 증상도 일으키지 않지만, 상기 비장이 파열하는 경우 위통을 일으킬 수 있으며 생명을 위협할 수 있다.
·골수 중 새로운 혈구 생성의 증가(이는 증가된 혈구수를 생성시킬 수 있지만 백혈병의 위험성을 증가시키지 않는다)
·주사(찌른) 부위에서의 알러지 반응(이는 약간의 붉어짐 및 붓기를 유발할 수 있다)
·출혈
·정상적인 혈액 응고를 방해할 수도 있는 몇몇 유형의 항체(항인지질 항체)의 발생 및 비정상적으로 연장된 응고 시험(PTT). 이는 혈전증(혈병) 또는 출혈을 생성시킬 수 있으며, 이는 치료를 요하고 심하거나 생명을 위협할 수도 있다.
·상처를 치유하는 능력이 영향을 받을 수도 있다. 이는 감염을 유발하고 입원을 요할 수도 있다.
·고혈압
·과잉의 요단백. 이는 대개 무증상 병원 검사결과이나, 과도한 경우, 체액 저류, 예를 들어, 다리의 부종을 유발할 수 있다.
·두통
·식욕 상실 및 체중 감소(식욕 부진)
·감소된 수준의 혈중 나트륨(이는 의식의 혼란, 졸도, 피로 및 낮은 수준의 의식을 유발할 수 있다)
·혈중 과잉 당, 심한 경우 입원 및 긴급 치료를 요할 수도 있다.
·증가된 발한(다한증)
드문(발생할 가능성이 1% 미만)
·피곤 및 숨참을 유발할 수 있는 낮은 수의 적혈구. 이는 수혈을 요할 수도 있다.
·낮은 수의 혈소판(이는 출혈 및 멍을 일으킬 수 있다). 출혈은 심하거나 생명을 위협할 수도 있으며 수혈을 요할 수 있다.
·백혈구의 가벼운 증가(감염의 위험을 증가시킬 수 있다)
·심한 출혈
·신장의 기능이 열화될 수 있다(급성 신부전)(치료를 요할 수 있으며 심하거나 생명을 위협할 수도 있다)
·뇌부종이 뇌 관련 종양이 있는 환자에서 발생할 수 있다(예를 들어, 뇌전이)
·설사
·심장 및 혈관 합병증: 심장마비, 협십증(흉통), 또는 혈병(혈전증)(생명 기관으로의 혈액 공급을 막아 뇌졸중 또는 다른 기관에 대한 손상을 생성시킬 수 있다)
·울혈성 심부전 - 심장이 적절히 혈액을 펌핑할 수 없다(이는 허약과 피로, 체액 저류, 및 폐에서 체액 증대를 일으킬 수 있으며, 이는 숨이 차게 할 수 있다). 이는 심하거나 생명을 위협할 수도 있다.
패클리탁셀과 관련된 위험성
있음 직한(발생할 가능성이 50% 초과)
·순한 내지 생명을 위협할 수도 있는 중증 알러지
·손발 저림 및 통증(이는 때때로 추가적인 치료에 의해 악화되고 약물 중단후에도 사라지지 않을 수 있다)
·탈모
·근육 및 관절 통증
·피로
빈번한(발생할 가능성이 10 내지 50%)
·오심 및/또는 구토
·설사
·입 또는 목구멍이 따끔거림
·몽롱함
·두통
·간 손상
·피부 자극 및 부종(상기 약물이 정맥으로부터 누출되어 주변 피부로 주입되는 경우)
·입맛 변화
·선행 방사선 부위에서 피부의 자극
·발진
때때로(발생할 가능성이 1 내지 10%)
·장운동의 변화를 유발할 수 있는 결장의 염증
·췌장의 염증(이는 단지 짧은 시간 동안만 지속되는 복부 통증을 유발할 수 있다)
·섬광 또는 스폿의 감각
·신장 손상
·트라이글리세라이드라 칭하는 지방 형태의 증가된 혈중 수준(고트라이글리세라이드혈증)
·심박수의 느려짐
·불규칙한 박동
드문(발생할 가능성이 1% 미만)
·간부전
·발작
·의식의 혼란; 기분 변화
생검과 관련된 위험성:
생검을 영상화 기법의 지침하에서 통상적으로 수행한다. 각 과정은 상기 생검전에 별도의 승낙을 요한다. 위험성은 하기를 포함할 수 있다:
·통증 및 불편함. 통증 및 불편함의 크기는 상기 생검 부위의 위치에 따라 다양할 것이다. 상기 위험성을 연구의와 상의할 수 있다.
·생검 부위에서의 소량 출혈
·생검 부위의 압통
·생검 부위의 흉터
·드물게, 생검 부위의 감염.
흔치않게, 생검으로부터의 합병증이 생명을 위협할 수 있다. 임의의 중재적 시술과 함께, 출혈 및 기관 손상으로부터의 다른 잠재적으로 심각한 합병증이 발생할 수도 있다. 이들은 추가적인 수술적 중재를 요할 수도 있다.
방사선 스캔 및 X-선과 관련된 위험성:
상기 환자가 조사 연구하에 있을 때, CT 스캔을 사용하여 상기 질병을 평가할 수 있다. 이러한 검사의 빈도는 표준 치료이다. 장기적으로, 수년에 걸쳐, 암에 대한 방사선학적 평가 및 치료의 결과로서 새로운 암이 발생할 위험이 매우 낮다. 몇몇 유형의 약물 또는 상기 약물과 방사선과의 조합은 새로운 암이 발생할 위험을 추가로 약간 증가시킬 수도 있다.
상기 스캔 동안 정맥내로 주사되는 조영제의 사용으로 인한 위험성은 적다. 상기는 이미 신장 기능이 감소된 사람에서는 신장 기능을 악화시킬 수도 있다. 따라서, 신장 기능은 상기 연구에 참가하는 동안 면밀히 모니터될 것이다. 상기 환자의 신장 기능에 임의의 변화가 존재하는 경우, 상기 환자를 상기 연구로부터 제외시켜야 할 수도 있다.
흔치않게, 일부 사람들은 상기 조영제에 대해 알러지 반응(예를 들어, 두드러기 및 가려움)을 갖는다. 심한 반응(예를 들어, 혈압의 강하, 호흡 곤란 또는 중증 알러지 반응 및 사망)은 드물다.
생식 위험성:
본 조사 연구에 사용된 약물은 태아에 영향을 미칠 수도 있다. 본 조사 연구에 참가하는 동안, 환자는 임신을 해서는 안 되며, 수유를 해서도 안 된다. 상기 환자는 임신을 하게되면 즉시 의사에게 알려야 한다. 남성이나 여성 연구 참가자들의 임신 예방에 대한 상담을 제공할 것이다.
동반 약물치료
상기 제외 기준에 나열된 약물들 외에, 동반 약물치료에 대한 제한은 없다. 그러나, VB-111을 다른 약물과 혼합해서는 안 된다. 상기 연구 도중 투여되는 모든 동반 약물치료는 최종 용량에 이은 1개월 추적조사 방문시까지 기준선부터 보고될 것이다. 통상적인 약물은 제품명, 적응증, 투여량, 단위, 빈도, 시작 및 중지일과 함께 기록될 것이다. 임의의 계속되는 동반 약물치료는 그 자체로서 기록될 것이며, 중지일이 연구 종료전에 기록되지 않는다면 다시 나타낼 필요는 없다.
진토제 섭생
오심은 순한 부작용일 것으로 예상된다. 하기의 전형적인 진토제 섭생이 제안된다: 덱사메타손 4-8 ㎎ PO, 또는 로라제팜 0. 5-1. 0 ㎎, 또는 프로클로르페라진 10 ㎎ PO, 또는 메토클로프라미드 10-20 ㎎, 화학요법제의 투여 30분 전.
아스피린
저-용량 아스피린(≤325 ㎎/d)을 동맥 혈전색전증의 위험이 보다 높은 개체에서 개시하거나 계속할 수 있다. 연구시 동맥 허혈 또는 출혈의 징후가 나타나는 개체를, 약물 중단을 위해 평가해야 한다.
해열제 치료
VB-111 투여는 투여 후 대개 24시간 지속되는 자기-제한된 발열과 관련되며, 일부의 경우에 낮은 등급의 발열이 투여 후 2 내지 3일까지 연장될 수도 있다. 1000 ㎎의 아세트아미노펜을 VB-111 투여 전 및 PRN 아세트아미노펜 투여 후 1 내지 2시간째에 투여할 것이다. 3 등급 발열을 나타내는 환자에서, 또는 조사자의 재량으로, IV 덱사메타손 10 ㎎을 후속 VB-111 용량의 투여 10분전에 투여할 수 있다.
다른 실험 분석
임상적으로 중요한 사건에 반응하여 채취한 실험 샘플을 예정되지 않은 실험 평가로서 기록할 것이다. 임상적으로 관련된 이상 실험값의 경우에, 상기 값이 정상 범위내로 돌아올 때까지 상기 시험을 추적조사하고/하거나 상기 이상에 대한 적합한 설명을 찾는다. 모든 상기와 같은 실험 조사를 분배 평가를 제외하고 상기 연구 장소에서 수행할 것이며, 독립적인 기관 실험실로 보낼 것이다. 이들 결과 중 임의의 것이 확인을 필요로 한다면, 동일한 병원 실험실(가능한 경우)에서 재시험을 수행할 것이다. 실험 허가 인증서 및 통상적인 기준 범위를 각 병원 실험실에 제공해야 한다. 안전성 실험을 지역 실험실에서 수행하는 경우, 상기 실험에 대한 실험 허가 인증서 및 통상적인 기준 범위를 획득하기 위한 모든 노력을 행해야 한다.
ECG를 선별 방문시 및 6개월마다 또는 조기 철회 방문시 수행할 것이다.
연구 지속기간
각 환자에게 패클리탁셀을 매주 및 VB-111를 2주기마다 투여할 것이다. 환자들은 질병진행시까지 상기 연구에 참가할 것이며 이어서 그들의 파일은 오직 CA125 및 RECIST 세부사항의 수집을 위해서만 이용될 수 있을 것이다.
환자들은 어느 때라도 연구에서 철회할 것을 결정할 수 있다. 철회 환자는 여전히 접촉해야 하며 부작용(AE)에 관하여 질문을 받아야 한다. 모든 AE는 약물 또는 질병과의 관련성에 관계없이 환자의 기록 및 CRF에 보고될 것이다. 지금까지 완료된 전-임상 연구로부터의 독성 프로파일뿐만 아니라 트랜스유전자의 발현 특이성을 근거로, 치료 후 나타날 수 있는 임의의 보다 장기간의 독성을 확인하기 위해 적합한 시간으로 1년이 고려된다. 철회 또는 질병 진행을 경험한 환자들을 생존 데이터를 위해 대략 2개월마다 접촉해야 한다.
용량 제한 독성(주기# 1, 2 및 3만)
용량 제한 독성(DLT)은 상기 프로토콜의 제1주기에서 한정될 것이며 상기 주기 동안 DLT 한정을 촉발하는 모든 환자들은 프로토콜로부터 제외될 것이다. 주기 1 동안 용량감소는 허용되지 않을 것이다. DLT는 오심 및 III 등급 구토를 제외하고, >4일의 IV 등급 백혈구감소증(ANC <500/㎣), 발열 및 호중구감소증(온도 >100. 2 ℉ 및 ANC <500㎣으로서 한정됨), IV 등급 혈소판감소증(혈소판 <25,000 ㎣) 및 ≥III 등급 비-혈액학적 독성으로서 한정된다.
VB-111 투여 후 24시간 이내에 발생하는 3-4 등급 발열 사건은 대증요법에 반응하는 경우 DLT로 간주하지 않을 것이다.
패클리탁셀 80 ㎎/㎡이 매주 스케줄에 임상적으로 허용되는 용량인 경우, 상기를 상기 용량 이상으로 점증시킬 계획은 없다.
용량 변경 - 패클리탁셀
상기 연구의 용량 점증 단계의 제1 주기 동안 용량 변경은 수행되지 않을 수 있다.
증상성 신경병증 환자에서 연구 PI에 대한 논의 후에 '휴식 주기'가 허용된다. 4주 중 3주, 또는 또 다른 주기상에 있는 경우 8주 중 7주의 투여 스케줄이 허용될 것으로 예상된다. 용량 밀도가 상기 스케줄 중 하나에서 유지될 수 없는 경우, 상기 환자를 연구에서 제외시켜야 한다. 패클리탁셀 스케줄에 대한 용량 변경을 수행하는 경우, 상기 패클리탁셀 주기에 따라 VB-111 투여를 변경시킬 필요는 없을 것이다.
참가자들은 독성의 회복, 또는 사회 참여를 허용하기 위해서 3주까지 투여를 중단한 채로 연구에 남아있을 수도 있다.
유의사항: 28일 후에, 일단 환자가 용량을 감소하면, 용량 점증은 허용되지 않으며 상기 환자는 모든 후속 주기 동안 상기 용량을 지속해야 한다.
부작용에 대한 공통 용어 기준(CTCAE-4)에 의해 최대 독성 등급을 나타내는 시스템에 따라 용량 조절을 수행해야 한다.
혈액학 독성에 대한 일반적인 용량 변경에서 구체적으로 달리 서술되지 않는 한 72시간의 재치료 시간내에 획득된 혈구수를 기준으로 할 것이다. 패클리탁셀의 투여는 ANC(표 12), 혈소판수(표 13) 및 신경병증(표 14)을 근거로 결정될 것이다.
백혈구감소증 사전-매주 용량
ANC/약물 패클리탁셀
> 1000 /mm3 정상 용량
<1000 /mm3 약물 보류
ANC <1000 /mm3인 경우 추가 발생 용량을 60 ㎎/㎡으로 감소시킨다
혈소판감소증 사전-매주 용량
혈소판/약물 패클리탁셀
> 100,000 /mm 3 또는 <100,000
/mm 3 및 >75,000 /mm 3의 최초 발생		 정상 용량
<75,000 /mm3 약물 보류
혈소판
<100,000/mm 3 및 >75,000/mm 3
의 반복 발생		 용량을 60 g/m2으로 감소시킨다.
감각 신경병증 용량 감소 개요
신경병증 등급 > 2
최초 발생 1차 용량 감소 - 패클리탁셀 60 mg/m2
2차 발생(또는 용량 감소에도 불구하고 지속됨) 2차 용량 감소 - 패클리탁셀 40 mg/m2
3차 발생(또는 용량 감소에도 불구하고 지속됨) 연구 중지
일단 패클리탁셀 용량이 감소되면, 다시 점증시켜서는 안 된다.
장기적인 골수억제의 관리
혈소판 또는 호중구가 28일까지 회복되지 않은 경우, 추가로 7일을 혈액학적 회복을 위해 허용할 것이다. 35일째에 불완전하게 회복된(ANC <1,000/㎣ 또는 혈소판 <100,000/㎣) 환자는 프로토콜에서 제외될 것이다.
발열 및 백혈구감소증의 관리
환자들을 발열 및 백혈구감소증에 대해서 통상적인 방식으로 관리할 것이다. 환자들은 치료의 재개전에 발열 및 활동성 감염 조직으로부터 회복할 필요가 있을 것이다. 성장 인자를 받고 있지 않은 환자는 그의 다음 주기에 뉴포젠 또는 뉴라스타를 받을 것이다. 뉴포젠 5 ug/㎏/일을 받는 환자는 동일한 스케줄로 10 ug/㎏으로 그의 용량이 점증될 것이다.
추가 독성 및 용량 조절
다른 독성들이 예상되지는 않지만 본 시험에서 가능하다. 다음 주기의 7일 이내에 해결되지 않거나 I 등급으로 개선되지 않는 약물 관련된 III 또는 IV 등급 비-혈액학적 또는 비-점막 독성을 나타내는 환자는 프로토콜로부터 제외될 것이다. 다음 주기 개시 1주일 이내까지 해결되거나 I 등급으로 개선되는 심한 III 또는 IV 등급 비-혈액학적/비-점막 독성을 나타내는 환자는, 상기 환자가 요법에 반응하고 환자 독성이 시험 책임자에 의해 재검토되었다면 시험을 계속할 수 있다.
비정상적인 간기능 시험에 대한 용량 감소는 하기와 같다:
패클리탁셀은 간독성을 유발하지 않는 것으로 공지되어 있으나; 중증 간 기능부전 환자에서는 그의 제거가 지연된다. 따라서, 간 기능부전 환자에서 패클리탁셀의 용량을 표 15에 따라 변경시켜야 한다.
혈청 아스파테이트 아미노트랜스퍼라제(AST) 및 알라닌 아미노트랜스퍼라제(ALT) 수준에 근거한 패클리탁셀 투여
혈청 AST, 또는 ALT 패클리탁셀
< 3x ULN 80 mg/m2
≥ 3x ULN 60 mg/m2
≥ 5x ULN 약물 보류
상승된 빌리루빈 >1. 5 ㎎/㎗를 갖는 환자는 비정상적인 실험값이 <1 등급으로 개선될 때까지 패클리탁셀을 받지 않아야 한다. 상기 표에 따라, 회복된 후에 1 용량 수준 더 낮은 패클리탁셀로 치료를 재개해야 하며, 2주 넘게 지속되는 독성은 연구에서 제외될 것이다. 일단 환자가 용량을 감소하면, 용량 점증은 허용되지 않으며 상기 환자는 모든 후속 주기 동안 상기 용량을 지속해야 한다.
장기적인 aPTT 환자는 aPTT가 정상화될 때까지 VB-111을 받아서는 안 된다. 루푸스 항응고인자(LAC) 및/또는 항인지질 항체(APLA)에 대해 양성으로 시험된 환자에서, VB-111의 반복 투여 전에 음성 시험이 필요하다. 시험이 양성으로 남아있는 경우, 추가의 VB-111을 투여해서는 안 된다. 지속적인 양성 LAC 또는 APLA 시험의 경우, 상기 시험을 초기 양성 시험으로부터 12주 이내에 반복해야 한다.
난소암종에 부차적인 것으로 생각되는 심한 독성(즉, 장 폐색)을 나타내는 환자는 또한 프로토콜로부터 제외될 것이다. 가역적인 3-4 등급 독성이 암종에 부차적이고 환자가 화학요법으로부터 이익을 얻는 것으로 느껴지는 통상적이지 않은 상황에서, 치료의는 일단 독성이 해결되었으면 상기 프로토콜에 대한 잠재적인 속행에 대해서 연구 P. I를 재검토해야 한다.
다음 치료 주기는 오직 모든 비-혈액학적 독성이 I 등급 이상으로 해결된 경우에만 개시할 수 있다.
2회 이하의 용량 지연시, 각각 1주일은 허용된다. 독성이 지속되면 상기 환자는 연구를 쉴 것이다.
참가자 안전
상기 시험에 참가하는 환자들의 안전을 보장하기 위해서 다수의 수단을 취할 것이다. 상기 수단은 하기와 같은 제외 기준 및 통상적인 모니터링을 통해 다루어질 것이다.
상기 연구에 등록한 환자를, 상기 환자가 상기 연구에 참가하기 전 및 참가하는 동안 규칙적인 간격으로 임상적으로 및 표준 실험 시험으로 평가할 것이다. 안전 평가는 의학적 인터뷰, 부작용의 기록, 신체검사, 혈압, 및 실험실 측정(지역 실험실에 의해 수행됨)으로 이루어질 것이다. 환자들을 이들이 상기 연구에 참가하는 동안 연구 방문시마다 부작용(모든 등급), 심한 부작용, 및 약물 중단 또는 중지가 필요한 부작용에 대해서 평가할 것이다. 임의의 이유로 상기 연구의 치료 단계로부터 중단된 환자를 치료 중단 결정 후 약 30일까지(28 내지 42일) 평가할 것이다.
치료중인 환자가 선택에 의한 큰 수술을 필요로 하는 경우, 상기 외과적 시술 전 2 내지 4주 동안 치료를 유지할 것이 권장된다.
재-치료 기준
주기의 출발시 용량 조절은 그때의 비혈액학적 독성 또는 혈구수를 기준으로 해야 한다. 환자는 절대 호중구수가 >1,000 세포/㎣이 아니고, 혈소판수가 >100,00 세포/㎣이 아니고, 비혈액학적 독성이 1 등급(순한)으로 개선되거나 해결되지 않는다면, 새로운 주기의 치료를 시작해서는 안 된다.
환자는 재-치료전 3주까지 지연시킬 수 있다. 독성 회복이 3주 넘게 걸리는 경우, 상기 환자를 연구로부터 제외시켜야 한다.
독성:이익 상쇄가 참가자 및 의료진에게 이로운 것으로 느껴지면, 치료를 2등급 피로, 설사, 탈모 및 오심의 상황에서 계속할 수 있다.
패클리탁셀 제형, 공급, 보관 및 안정성
패클리탁셀(NSC #673089)
패클리탁셀 40-80 ㎎/㎡을 28일 주기로 제1, 8, 15 및 22일에 1시간에 걸쳐 IV 주입할 것이다. 약물을 2. 0 ㎡의 최대 체표면적(BSA)까지 투여할 것이며, BSA는 당일 체중으로부터 계산될 것이다.
제형
패클리탁셀을 30 ㎎/5 ㎖, 100 ㎎/16. 7 ㎖, 또는 300 ㎎/50 ㎖의 패클리탁셀을 함유하는 다중 용량 바이알 중의 6 ㎎/㎖ 비-수성 용액으로서 공급한다. 6 ㎎의 패클리탁셀 외에, 멸균 비-발열성 용액의 각 ㎖은 527 ㎎의 정제된 크레모포어(등록상표) EL(폴리옥시에틸화된 피마자오일) 및 49. 7%(v/v) 탈수된 알콜, USP를 함유한다.
보관
개봉하지 않은 패클리탁셀의 바이알은 20 내지 25 ℃(68 내지 77 ℉)에서 보관시 패키지상에 나타낸 날짜까지 안정하다. 빛을 차단시킨다.
조제
패클리탁셀을 주입전에 희석할 것이다. 패클리탁셀을 0. 9% 주사용 염화 나트륨, USP; 5% 덱스트로스 주사, USP; 5% 덱스트로스 및 0. 9% 염화 나트륨 주사, USP; 또는 링거 주사 중의 5% 덱스트로스로 0. 3 내지 1. 2 ㎎/㎖의 최종 농도로 희석할 것이다. 상기 용액들은 주변 온도(대략 25 ℃/77 ℉)에서 실내 조명 조건에서 27시간까지 물리적으로 및 화학적으로 안정하다. 가소제 DEHP(PVC 주입 주머니 또는 세트로부터 누출될 수도 있는)에의 환자 노출을 최소화하기 위해서, 희석된 패클리탁셀 용액을 병(유리, 폴리프로필렌) 또는 플라스틱(폴리프로필렌, 폴리올레핀) 주머니에서 보관하고 폴리에틸렌 내층의 투여 세트를 통해 투여해야 한다.
투여
패클리탁셀을 0. 22 마이크론 이하의 미세다공성 멤브레인을 갖는 인라인 필터를 통해 투여할 것이다. 필터 장치, 예를 들어, IVEX-2(등록상표) 또는 IVEX-HP(등록상표)(짧은 유입 및 유출 PVC-코팅된 튜빙을 포함한다)의 사용은 DEHP의 현저한 누출을 생성시키지 않았다.
예비투약
모든 환자는 심한 과민 반응을 방지하기 위해서 최초 패클리탁셀 투여전에 코르티코스테로이드, 다이펜하이드라민 및 H2 길항물질이 예비투약될 것이다. 약물에 대해 심한 과민 반응을 경험한 환자들은 상기 예비투약의 반복 및 묽은 용액에 의한 재접종 및 느린 주입이 필요할 수도 있다. 패클리탁셀에 대한 심한 과민 반응때문에 재접종을 진행할 필요는 없다. 상기 약물이 잘 허용되거나, 세모포어에 대한 허용성이 확립되어 있는 경우, 경구 덱사메타손을 점진적으로 철회할 수도 있다. 도세탁셀은 대체될 수 없다.
부작용: 가장 최신의 완전한 정보에 대해서는 패키지 삽입물을 참고한다.
공급처: 일반적인 제조사뿐만 아니라 브리스톨 마이어스 스큅 온콜로지(Bristol-Myers Squibb Oncology) 모두로부터 상업적으로 입수할 수 있다. 추가적인 정보에 대해서 미국 병원 처방 서비스 약물 정보 책자(the American Hospital Formulary Service Drug Information guide, Facts and Comparisons) 또는 패키지 삽입물을 참고한다.
VB-111
설명
연구 약물 바이알을 표지된 1. 8 ㎖ 저온바이알(폴리프로필렌) 중에서 각 개체 용량을 위해 공급할 것이다. 각각의 저온바이알은 1. 1 ㎖(1012 vp/㎖)의 분량을 함유한다.
제형
VB-111을 멸균 벡터 용액으로서 제형화한다. 상기 용액을 1회용 플라스틱 스크류 바이알 중에서 동결시켜(65 ℃ 이하) 공급한다. 각 바이알은 1012 vp/㎖의 바이러스 역가의 벡터 1. 1 ㎖ 및 비히클(포스페이트 완충 염수 중의 10% 글리세롤)을 함유한다. 상기 벡터 용액을 희석 및 취급 중 해동시키고 2-8 ℃에서 유지시켜야 한다.
안정성 및 보관
VB-111의 안정성 연구는 진행중이며 지금까지 65 ℃ 이하에서 30개월의 유통기한을 버틴다. 개봉 및/또는 희석된 바이알은 절대로 재사용해서는 안 된다. VB-111 바이알을 빛을 차단하여, 동결된(65 ℃ 이하) 폐쇄된 바이알 중에서 보관해야 한다.
조제
VB-111을 표 16에 나타낸 바와 같이 조제할 것이다.
VB-111 조제
용량 바이알 중 농도 (VP/
ml) 		튜브 중 VB-111의 부피 VB-111의 바이알# 하기 부피의 VB-111을 취한다 (ml) VB-111에 대한 주사기 유형 염수의 부피 염수에 대한 주사기 유형 조제된 총 부피 ≥50 ㎏ 체중의 개체에게 주사되는 부피 <50 ㎏ 체중의 개체에게 주사되는 부피
3x10 12 VPs

용량 수준
1+2 		1012 1. 1ml 3 3ml
3 x 1ml		 3ml 12ml
(2 x 6ml)		 2 x 10ml
15ml		 전체 부피 (15 ml) 10. 5ml
1x10 13
VPs

용량 수준 3 		1012 1. 1ml 10 10 x 1ml 10ml 40ml * 50ml 전체 부피 (50ml) 35ml
*약사는 멸균의 빈 주머니를 사용하여 개별적으로 40 ㎖ NS + 10 ㎖ VB-111을 상기 주머니에 가하거나, 또는 50 ㎖의 NS 주머니를 사용하고 이어서 과잉 부피를 제거하고 VB-111을 가할 수 있다. 어느 방식이든 허용가능한 약학적 관행이다.
약물 조제의 전체 과정을 BSC 유형 II 방에서 실온에서 수행할 것이다. 해동후, 상기 약물을 조제 중 빙수에서 3시간까지 유지시킬 수 있다.
상기 약물을 실온에서 염수로 희석한다.
상기 약물의 조제 및 약물 주사를 가능한 한 최단시간으로, 1시간을 초과하지 않고 완료할 것이다.
상기 약물을 조제하는 약사는 상기 용기에 대한 정보: 제품명, 농도, 배치 번호가 상기 연구 및 상기 개체에 적합함을 확인할 것이다.
멸균 플라스틱 튜브에 필요한 부피의 염수(실온으로 만든)를 넣는다. 장갑을 낀 손 사이에서 문질러 상기 VB-111 용액의 바이알을 해동시킨다. 즉시, 특정 개체에 대해 의도된 각각의 저온바이알로부터 1 ㎖의 VB-111을 꺼낸다. 각각 1 ㎖의 VB-111에 대해서 새로운 주사기를 사용한다. VB-111을 미리 제조된 염수 용액을 함유하는 플라스틱 주머니에 가한다. 상기 희석된 약물을 손으로 내용물을 저어 혼합한다. 상기 환자의 체중에 따라 적용되는 부피를 측정하고 필요한 주사 부피를 뽑아 투여용 주사기내로 넣는다(표 16 참조). 상기 조제의 완료 후에, 조정 과정을 수행한다: 정확한 번호의 공급원 바이알이 사용되었는지, 및 튜브 중에 남은 부피가 대략적으로 예상된 바와 같은지를 검사하고 약물 책임(accountability) 일지를 완료한다. 상기 약물 용액의 조제 후에, 제약 과정에 따라 약국의 약물 제형화 영역을 청소한다.
주입
1. 상기 희석된 VB-111의 단일 정맥내 주입을 하기 설명서에 따라 주사기 펌프를 통해 투여해야 한다:
a. 용량 수준 1-2: 3x1012 VP(개체의 체중에 따라 15 또는 10. 5 ㎖)를 1 ㎖/분의 속도로 투여해야 한다.
b. 용량 수준 3: 1x1013 VP(개체의 체중에 따라 50 또는 35 ㎖)
i. 주입을 하기의 속도로 투여해야 한다:
1. 처음 10분 동안 1 ㎖/분
2. 나머지 부피의 주입에 대해서 3 ㎖/분
투여의 완료 후 30분째에 정규 식사를 상기 개체에게 제공할 수 있다.
개체 중단
하기의 기준을 충족하는 개체들을 연구 치료로부터 중단시켜야 한다:
1. >7일을 지속하는 3등급 신경병증
2. 투약으로 조절되지 않는 4등급 고혈압 또는 3등급 고혈압
3. 콩팥증후군
4. ≥2 등급의 폐 또는 CNS 출혈; 임의의 4등급 출혈
5. 임의의 등급의 동맥 혈전색전사건
6. 4등급 울혈성 심부전
7. 위장 천공
8. 임의의 등급의 누공
9. 임의의 등급의 장 폐색
10. 의학적 또는 수술적 중재를 요하는 상처 열개
11. 연구 요구를 승낙하지 않거나 승낙하지 못하는 개체
12. 개체가 치료를 계속하기에는 더 이상 안전하지 않다는 연구자의 결정
13. 연구자에 의해 연구 치료와 관련되는 것으로 생각되는 모든 4등급 사건들
금기
연구 투약은 크레모포어(등록상표) EL(폴리옥시에틸화된 피마자 오일) 중에서 제형화된 약물에 대해, 공지된, 선행의, 심한(NCI CTC 3등급/4등급) 이력을 갖는 환자에서 금기된다.
임상 시험 및 과정
일련의 임상 시험 및 과정을 표 17에 따라 상기 연구 전체를 통해 특정한 간격으로 수행할 것이다.
임상 시험 및 과정
선별 치료 추적조사
평가 기준선 a 각 주기의 D1 제8, 15, 22일 연구 종료 i
포함/제외 기준 X
사전 동의 X
병력; 활력징후 (BP, HR, 체중 포함)# X X X X
독성 X X X
신체검사 X X X
기능상태 X X X
CBC dif. b X X X X
포괄적인 대사 패널 b X X 단지 LFTs X
소변검사 d X X X X
응고 e X X X
EKG X X
생체분포 X* (홀수 주기만) X* X
종양 반응 f X q2 주기 c
Ad-5 항체 X* (홀수 주기만) X^ X
상관성 과학/생물마커 g X 주기 1, 2, 및 이어서 홀수 주기만 주기 1
주기 2-6에 대해서 제8일
선택적인 종양 생검h Xh
CA-125 X X X
패클리탁셀 용량 X X
VB-111 용량 홀수 주기만
* 투여전 VB-111 투여일(2주기마다), 주입의 끝, 투여후 6시간째 및 상기 주기(홀수 주기)의 제8일에 수집된 샘플들.
^투여전 수집된 샘플들
#활력 징후가 투여전 VB-111 투여일, 및 투여후 30분, 60분, 4시간 및 6시간째에 모니터링될 것이다.
a: 모든 신체검사, 혈액 시험 및 소변검사를 등록전 14일 이내에 수행해야 한다. 종양의 방사선학적 평가는 등록전 4주 이내에 수행되어야 한다.
b: 혈액을 모든 후속 주기의 D1, 8, 15, 22일의 3일이내에 채혈할 수 있다. CBC dif. : 혈구 및 혈소판 감별검사; 전해질, LFT, BUN/Cr, 칼슘 및 마그네슘을 포함하는 포괄적인 대사 패널; 오직 LFT 및 CBC dif만이 제8, 15, 22일에 요구된다.
c: 종양 반응이 2주기 평가될 것으로 예상된다.
d: 새로운 또는 증가된 단백뇨가 존재하는 경우, 24시간 소변이 필요할 수도 있다. +2 요시험지봉 검사는 24-시간 수집을 요하지만 +3 요시험지봉 검사는 연구 약물 보류 및 24-시간 수집을 요한다. 소변검사는, 단백뇨가 VB-111 투여의 특징이 아니었으므로, D1, D8, D15, D22 및 임상적으로 지시된 바와 같이 획득될 것이다.
e: 혈액을 PT, PTT에 대해 각 주기의 D1의 3일이내에 채혈할 수 있다. ULN 이상의 PTT 연장의 경우에, 혈액을 루푸스 항응고인자(LAC) 및 항인지질 항체(베타-2-GP-1 및 항카디오리핀에 대해서 IgG 및 IgM)에 대해서 채혈해야 한다.
f: 종양 평가를 기관 표준, 예를 들어, 종양 반응 평가: CT, MRI 등에 의해 할 수 있다.
유의사항: 상기 종양 평가는 규칙적인 간격으로(매 8주마다)(이는 전형적으로 2주기마다 동시에 발생할 것이다), 그러나 고정된 간격으로(PFS, 1차 종점의 세척제 평가를 허용할 것이다) 일어나는 것으로 예정된다.
g: 특이적인 생물마커들을 질병진행시까지 투여전 주기 1 제1일 및 주기 1의 제8, 15, 22일, 주기 2 제1일, 주기 3 제1일 및 그 후 매 2주기마다 수집할 것이다.
h: 조직 획득은 상기 연구의 지시된 부분은 아니지만, 샘플을 획득하기 위해서 비-임상적으로 지시된 생검 또는 복부천자를 대신하기 위한 비용으로 선택적이다. 상기가 수행되는 명시된 시간은 없다. 하기 조직 수집 섹션을 참조하시오.
i: 연구 완료 데이터를 최종 용량의 연구 투약으로부터 30일의 1주일 이내에 완료해야 한다. 이어서 생존 데이터를 유선상으로 수집할 수 있다.
효능 및 안전성 평가
RECIST 기준
종양 반응을 기준선 및 그 후에 2주마다, 즉, 2, 4, 6 등의 주기 후에 RECIST 1. 1 기준을 사용하여 평가할 것이다. 환자가 패클리탁셀을 계속하는 경우, 형식적인 평가를 계속할 것이다. 영상화의 독립적인 평가를 튜머매트릭스(TumorMatrics)에 의해 수행할 것이다.
종양 측정
측정 가능한 질병: 적어도 하나의 측정 가능한 병변의 존재. 상기 측정 가능한 질병을 단독적인 병변으로 제한하는 경우, 그의 신생물 성질을 세포학/조직학에 의해 확인해야 한다.
측정 가능한 병변
>2. 0 ㎝의 최장 직경과 함께 적어도 하나의 치수로 정확하게 측정될 수 있는 병변. 나선 CT 스캔에 의해, 상기 병변은 적어도 하나의 치수에서 >1. 0 ㎝이어야 하며, 림프절의 경우, 최단 직경은 >1. 5 ㎝이어야 한다.
측정 가능하지 않은 병변
작은 병변(통상적인 기법에 의해 최장 직경 <2. 0 ㎝ 또는 나선 CT 스캔에 의해 <1. 0 ㎝) 및 다른 측정 가능하지 않은 병변을 포함한 모든 다른 병변. 이는 골 병변; 연수막 질병; 복수; 흉수/심낭 삼출; 염증성 유방 질환; 피부/폐 임파선염; 확인되지 않고 영상화 기법에 의해 추적되는 복부 덩어리; 및 낭성 병변을 포함한다.
모든 측정을 자 또는 캘리퍼스를 사용하여 미터 표기법으로 기록해야 한다. 모든 기준선 평가는 가능한 한 치료 시작에 가깝게 수행해야 하며 결코 상기 치료 시작 전 4주를 초과하여서는 안 된다.
동일한 평가 방법 및 동일한 기법을 사용하여 기준선 및 추적조사 기간 동안 각각의 확인되고 보고된 병변을 특성화하여야 한다.
임상적인 병변들은 오직 표재성인 경우(예를 들어, 피부 결절, 촉진 가능한 림프절) 측정 가능한 것으로 간주될 것이다. 피부 병변의 경우에, 상기 병변의 크기를 평가하기 위해 자를 포함하여 컬러 사진촬영에 의한 문서화가 권장된다.
표적 및 비-표적 병변의 기준선 문서화
각각의 관련된 기관의 전형적인 최대 5개 이하 병변의 모든 측정 가능한 병변들을 표적 병변으로서 확인해야 하며 기준선에서 기록 및 측정할 것이다.
표적 병변은 그의 크기(보다 긴 직경을 갖는 병변) 및 정확한 반복적인 측정(영상화 기법에 의해서 또는 임상적으로)에 대한 그의 적합성을 기준으로 선택되어야 한다.
모든 표적 병변들에 대해서 최장 직경들(LD)의 합을 계산하고 기준선 합 LD로서 보고할 것이다. 상기 기준선 합 LD를 기준으로서 사용하여 상기 질병의 측정 가능한 치수의 객관적인 종양 반응을 추가로 특성화할 것이다.
모든 다른 병변(또는 질병의 부위)을 비-표적 병변으로서 확인해야 하며 이를 또한 기준선에서 기록해야 한다. 측정은 필요하지 않으며 이들 병변은 "존재" 또는 "부재"가 이어져야 한다.
반응 기준
표적 병변의 평가:
완전한 반응(CR) - 모든 표적 병변의 소멸
부분적 반응(PR) - 기준선 합 LD를 기준으로 하여, 표적 병변의 LD의 합의 적어도 30% 감소.
진행성(PD) - 치료 개시 또는 하나 이상의 새로운 병변의 출현 이래로 보고된 최소 합 LD를 기준으로 하여, 표적 병변의 LD의 합의 적어도 20% 감소.
안정한 질병(SD) - 치료 개시 이래로 최소 합 LD를 기준으로 하여, PR로 한정하기에 충분한 수축도 없고 PD로 한정하기에 충분한 증가도 없다.
비-표적 병변의 평가:
완전한 반응(CR) - 모든 비-표적 병변의 소멸 및 종양 마커 수준의 정상화.
불완전 반응(비-CR)/비-진행성(비-PD) - 하나 이상의 비-표적 병변(들)의 지속 또는/및 정상 한계 이상의 종양 마커 수준의 유지.
진행성 질병(PD) - 하나 이상의 새로운 병변의 출현. 존재하는 비-표적 병변의 명료한 진행. 비-표적 병변의 분명한 진행만이 예외적이지만, 상기와 같은 상황에서, 치료의의 선택권이 우세하며 상기 진행 상태는 나중에 검토 패널(또는 연구 회장/1차 연구자)에 의해 확인되어야 한다.
최상의 전체적인 반응의 평가
최상의 전체적인 반응은 질병 진행/재발시까지 치료의 시작부터 기록된 최상의 반응이다(상기 치료가 시작된 이래 기록된 최소 측정을 진행성 질병에 대한 기준으로서 간주한다). 일반적으로, 환자의 최상의 반응 지정은 표 18에 나타낸 바와 같은 측정 및 확인 기준 모두의 성취에 따라 변할 것이다.
표적, 비-표적 및 새로운 병변의 측정에 근거한 전체적인 환자 반응
표적 병변 비-표적 병변 새로운 병변 전체적인 반응
CR CR 없음 CR
CR 비-CR/비-PD 없음 PR
PR 비-PD 없음 PR
SD 비-PD 없음 SD
PD 임의의 있음 또는 없음 PD
임의의 PD 있음 또는 없음 PD
임의의 임의의 있음 PD
당시 질병 진행의 객관적인 증거 없이 치료의 중단을 요하는 건강 상태의 전체적인 열화를 갖는 환자를 "임상적 열화"로서 보고할 것이다. 치료의 중단 후에조차 객관적인 진행을 기록하고자 모든 노력을 수행할 것이다.
일부의 상황에서, 정상 조직으로부터 잔류 종양을 구분하는 것은 어려울 수 있다. 완전한 반응의 평가가 이 결정에 따라 변한다면, 상기 잔류 종양을 상기 완전한 반응 상태의 확인 전에 조사(미세 바늘 흡출/생검)할 것이 권장된다.
확인: 부분적인 반응(PR) 또는 완전한 반응(CR)의 상태를 지정하기 위해서, 종양 크기의 변화를, 상기 반응에 대한 기준이 최초로 충족된 후 4주 이상 수행되어야 하는 반복 연구에 의해 확인해야 한다. SD의 경우에, 추적조사 측정은 연구가 6 내지 8주의 최소 간격으로 진입 후에 상기 SD 기준을 적어도 1회 충족해야 한다.
러스틴 기준: 오직 CA125만을 평가할 수 있는 경우(35 U/㎖ 이상으로 상승), 반응을 러스틴 기준보다는 오히려 GCIG에 따라 한정할 것이다.
GCIG CA125 반응 정의: CA125에 따른 반응은 전처리 샘플로부터 CA125 수준의 적어도 50% 감소가 존재하는 경우에 발생하였다. 상기 반응을 확인하고 적어도 28일 동안 유지시켜야 한다. 환자들을 오직 정상치 상한의 적어도 2배인 전처리 샘플을 갖고 치료 출발 전 2주 이내인 경우에만, CA125에 따라 평가할 수 있다.
CA125에 따른 진행은 CA125의 입증된(2개의 경우가 기록되었다) 상승 또는 ≥2xULN(2개의 경우가 기록되었다)까지의 선행의 정상적인 CA125 상승이 존재하는 경우 발생하였다.
예상된 부작용
VB-111은 마우스의 전임상 독성학 연구에서 최소 독성을 유발하였다. 순한 빈혈, 순한 혈소판감소증, 순한 백혈구증가증, 비종 및 골수 과다형성이 관찰되었다. 임상적 병리학과 상관이 없는 일시적인 간 효소 상승이 또한 관찰되었다. 아데노바이러스 벡터의 전신 투여는 충분히 허용되었다. 독감같은 증상(발열, 피로, 오한, 오심, 및/또는 구토)이 가장 흔한 부작용이다. aPTT 및 양성 LAC의 무증상 연장이 I/II기 시험에 참가한 여러 환자들에서 관찰되었다. 또한, 단일 사례의 심한 설사가 II기 환자에서 보고되었다. 정맥내 주사된 아데노 VP의 대부분은 간에 의해 격리되며, 이는 차례로 급성 트랜스아민염(transaminitis) 및 혈관손상을 특징으로 하는 염증 반응을 유발한다. 혈관신생 억제제의 주요 부작용은 상처 치유 장애, 출혈, 혈전색전증, 및 심혈관 사건, 고혈압 및 단백뇨이었다.
상관성 연구
분포
분포 평가를 위해서, 혈액 샘플을 부록 I에 따라 모든 환자로부터 수집할 것이다. 아데노바이러스 및 VB-111 트랜스유전자 수준 측정을 위한 상기 샘플의 시험을 최대 허용 용량 그룹 또는 최고 용량 코호트에서 수행할 것이다. 분포를 투여에 이은 소정의 시점에서 각각 Q-PCR 및 Q-RT-PCR에 의해 혈중 바이러스 DNA 및 트랜스유전자의 수준을 측정함으로써 평가할 것이다. 샘플을 모든 소정의 시점에서 모든 환자에 대해 수집할 것이다. 시험을 최고 용량에서 출발하여 환자로부터의 샘플 중에서 수행할 것이며 보다 낮은 용량까지 계속할 것이다. 투여에 이어서 바이러스 DNA의 검출 가능하지 않은 수준에 의해 발견된 샘플은 상기 트랜스유전자의 수준에 대해 시험되지 않을 것이며 나중의 시점에 대해서도 평가되지 않을 것이다.
항체
혈청 샘플을 아데노바이러스에 대한 항체(전체 IgG 및 중화 항체)의 수준의 분석을 위해 수집할 것이다.
혈관신생 생물마커
지금까지 혈관신생 억제 요법을 위한 생물마커는 존재하지 않고 있지만, 여러 생물마커 후보들이 동정되었다[Jain 2009]. 이들을 상기 연구에 등록한 모든 환자로부터 수득한 말초 혈액 샘플에서 시험할 것이다. 혈장 분석을, 확립된 프로토콜[Horowitz Clinical Ovarian Cancer 2011 in press]을 사용하여, 샘플을 중복 실행하여, 순환하는 혈관신생 및 염증 생물마커 VEGF, P1GF, sVEGFR1, bFGF, IL-1β, IL-6, IL-8 및 TNF-α(메소-스케일 디스커버리로부터의 다중 ELISA 플레이트 사용) 및 sVEGFR1 및 SDF1α(R&D 시스템스 키트 사용)에 대해 수행할 것이다. 혈액-순환 세포를 표준 유식세포측정 프로토콜을 사용하여 신선한 샘플에서 계수할 것이다. 상기 정량적 분석 종점은 앞서 개시한 바와 같이[Horowitz Clinical Ovarian Cancer 2011 in press], 치료후 혈액 단핵구 중 순환하는 CD34brightCD45dim CPC 또는 VEGFR2+CD45+ 단핵구의 분획 중 변화였다. 공문서의 조직을 CD31, CD34, VEGFR2, 및 vWF에 대해서 평가할 것이다.
조직 수집
조직 획득은 상기 연구의 지시된 부분은 아니지만, 샘플을 획득하기 위해서 비-임상적으로 지시된 생검 또는 복부천자를 대신하기 위한 비용으로 선택적이다. 상기가 수행되는 명시된 시간은 없다. 최적 시간은 VB-111의 최초 투여후 1 내지 2개월인 것으로 생각된다. 참가자의 20 내지 50%가 복부천자 가능한 복수 또는 안전한 생검에 적합한 영역을 가질 수 있는 것으로 예상된다.
통계학적 방법의 설명
VB-111의 MTD를 표준 "3+3" 설계를 사용하여 측정할 것이다. 즉, 3명의 환자를 먼저 특정 용량 수준으로 치료할 것이다. 한 명을 초과하는 환자가 DLT를 경험하는 경우 자연적인 증가가 멈출 것이며 다음 더 낮은 용량 수준이 MTD로서 받아들여질 것이다. DLT가 발생하지 않는 경우, 다음의 더 높은 용량 수준으로의 자연적인 증가가 시작될 것이다. 하나의 DLT가 발생하면, 3명의 추가적인 환자가 상기 용량 수준에 들어갈 것이다. 이들 3명의 환자 중 누구도 DLT를 경험하지 않으면 VB-111을 다음의 더 높은 수준으로 점증시킬 것이지만, 한 명 이상의 환자가 상기와 같은 사건을 경험하는 경우 자연적인 증가를 멈출 것이며 상기 MTD는 다음의 더 낮은 용량 수준인 것으로 한정될 것이다. 이러한 점증 계획에 의해, 표 19는 다양한 가정된 근원적인 독성 비율에 대한 다음의 더 높은 용량 수준으로의 점증 확률을 제공한다.
DLT에 근거한 VB-111 용량의 점증 확률
DLT의 실제비율 10% 20% 30% 40% 50% 60% 70%
점증의 확률 0. 91 0. 71 0. 49 0. 31 0. 17 0. 08 0. 03
표 19로부터 알 수 있는 바와 같이, DLT의 근원적인 위험이 <20%인 경우 상기 조합의 점증 기회가 >71%이고 상기 근원적인 위험이 <10%인 경우 점증 확률은 >91%이다. 대조적으로, 상기 근원적인 DLT 위험이 >50%인 경우 점증 기회는 기껏해야 17%이고 상기 위험이 >60%인 경우 기회는 <8%이다.
객관적인 반응의 평가는 주로 서술적일 것이다. 일반적으로, 전체적인 반응률 및 상응하는 95% 신뢰도 구간이 계산될 것이다.
상기 설계의 II기 태양은 RECIST 기준 또는 CA125(러스틴 기준이 아닌 GCIG)에 의해 한정된 반응률을 평가하고 안전성 프로파일을 개시하고 부작용 및 독성을 특성화할 것이다. 재발한 난소암이 있는 환자에서 화학요법-혈관신생억제제 조합의 보고된 반응(전형적으로 20 내지 25% 범위)에 근거한 표적 반응으로서 30%가 선택될 것이다.
상기 설계는 처음 10명의 환자가 단계 1 동안 등록될 것이라는 점에서 2-단계 최적 설계일 것이다. 이는 I기에서 80 ㎎/㎡의 패클리탁셀 용량을 개시하는 참가자(즉, 용량 수준 2 및 3의 참가자)를 포함할 것이다. 상기 연구의 I기 부분의 DL-2 및 3 코호트로부터 등록된 일련의 2 내지 6 명 환자와 함께, 추가로 4 내지 8명의 환자가 효능의 중간 분석전에 II기 첫 번째 단계에 등록할 것이다. 하나 이하의 반응이 관찰되면, 상기 시험은 모집을 중단할 것이다. 달리, 2개 이상의 반응이 존재하는 경우, 19명의 추가적인 참가자가 II기에 등록할 것이다(즉, 가능한 최대 총수 = 29)(이어서 전체 연구에 대한 총수는 II기에 대한 0 내지 29명과 중복하여 I기에 대해서 2 내지 18명일 것이다). 5개 이하의 반응이 존재하는 경우, 상기 요법의 추가적인 연구는 정당하지 않다.
실제 RR≤10%인 경우, 단계 1 동안 상기 시험의 종료 기회는 적어도 74%이다. 상기 실제 RR이 ≥30%인 경우, 상기 시험을 단계 1에서 중단할 기회는 ≤15%이다. 최종 분석력은 H0 거절에 80%:H1에 유리하게 PR≤10%:5%의 표적 유형-1 오류율에서 RR≥30%이다.
상기 시험은 2 등급 IV GI 천공이 단계 I 동안 관찰되는 경우 종료될 것이다. 언제라도 3 GI 천공이 존재하면, 상기 시험은 종료될 것이다. 4%의 실제 GI 천공을 가정하여, 단계 I 동안 2개를 초과하는 사건이 관찰될 확률은 6. 2%이며, 전체 시험으로부터 3개를 초과하는 사건이 관찰될 확률은 2. 7%이다.
IHC 데이터와 같은 정량적 및 반-정량적 데이터를, 상기 샘플 크기가 결정적인 결론을 이끌어내기에 충분한 힘이 부족하지만 수회의 연구에서 동일한 세트의 분석을 사용하는 이점이 우리로 하여금 효능 및 독성의 잠재적으로 가장 유용한 예보자를 평가할 수 있게 할 것이라는 이점을 인식하여, 상관성을 탐구하고자, 기술통계학 및 비-모수 분석을 사용하여 예비 파일럿 데이터로 간주할 것이다.
생물마커
주로 비-모수 방법(예를 들어, 윌콕슨 부호-순위 또는 순위 합계 검정)을 사용하여 CEC에 대한 VB-111의 영향을 평가할 것이며, 상관성/예견 수단, 통계학적 유의수준의 모든 시험은 양측성일 것이고 다중 비교를 위해 조절은 수행하지 않을 것이다.
유의수준의 수준
신뢰도 구간을 (양측) 95% 신뢰도 수준에서 계산할 것이다.
실험실 시험
혈관신생 생물마커 분석(국소적)
혈장 분석을 순환하는 혈관신생 및 염증 생물마커 VEGF, P1GF, sVEGFR1, bFGF, IL-1β, IL-6, IL-8 및 TNF-α(메소-스케일 디스커버리로부터의 다중 ELISA 플레이트 사용) 및 sVEGFR1 및 SDF1α(R&D 시스템스 키트 사용)에 대해 수행할 것이다. 혈액-순환 세포를 표준 유식세포측정 프로토콜을 사용하여 신선한 샘플에서 계수할 것이다. 공문서의 조직을 CD31, CD34, VEGFR2, 및 vWF에 대해서 평가할 것이다. 종양마커: CA-125. 실온에서 EDTA 튜브에서, 각 시점에 대해 10 cc의 총 혈장을 분석할 것이다.
샘플을 하기의 시점에서 수집할 것이다:
1. 기준선에서
2. 주기 1에서: 연구 약물 투여 전 제1일, 및 제 8, 15 및 22일
3. 연구 약물 투여 전 주기 2 제1일에서
4. 질병진행시까지, 연구 약물 투여 전, 주기 3으로 시작하여 그 후에 2주기마다
항체 시험
IgG 및 중화 항체를 포함하여 Ad-5 바이러스에 대한 항체의 역가를 분석을 위해 수집할 것이다. 샘플들을 하기의 시점에서 수집할 것이다:
1. 각 주기에서: 연구 약물 투여 전 제1, 8, 15 및 22일째;
2. 연구 종료 방문시.
혈액을 하기의 방식으로 수집하고 준비할 것이다:
1. 6 ㎖의 혈액을 응고방지제 없이 튜브에 수집할 것이다.
2. 샘플을 실온에서 1시간 동안 방치하고, 이어서 밤새 2 내지 8 ℃에서 보관하여 혈병을 수축되게 할 것이다.
3. 혈액을 다음날 원심분리할 것이다.
4. 대략 2 ㎖ 혈청을 추출하고 4개의 분액 튜브로 분할하고(각각 0. 5 ㎖, 각각 날젠(Nalgene) 100 1. 5 ㎖ 중에 총 2 ㎖) 분석을 위해 선적시까지 -20 ℃에서 보관할 것이다.
생체분포 시험
하기의 시험들을 수행할 것이다:
1. 혈액 생체분포: 바이러스 DNA 및 트랜스유전자 발현
2. 소변 생체분포: 바이러스 DNA
전혈 샘플을 하기의 시점에서 생체분포를 위해 수집할 것이다:
1. 연구 약물 투여 전, 각 홀수 주기의 제1 & 8일.
2. VB-111 투여일에:
a. 주입 전에(제1일 샘플과 동일)
b. 주입의 끝에서
c. 3±0. 5 시간
d. 6±0. 5 시간
e. 연구 종료 방문시.
혈액 샘플을 하기의 방식으로 준비할 것이다:
1. 매 시점으로부터의 혈액을 EDTA를 함유하는 4개의 튜브(0. 75 ㎖/튜브)에 수집할 것이다.
a. 바이러스 DNA의 분석용으로 2개 튜브
b. 트랜스유전자 발현의 분석용으로 2개 튜브
2. 상기 튜브들을 개체 번호, 이니셜, 샘플 수집 날짜 및 시간을 표지하고 -70 ℃ 이하에서 냉동고에서 보관해야 한다.
소변 샘플을 하기의 방식으로 준비할 것이다:
1. 1 내지 2 ㎖의 2개의 소변 샘플을 모아 놓은 전체 수집 분량으로부터 수집할 것이다.
2. 소변 샘플 및 전체 수집 분량을 추가의 분석시까지 동결시켜 보관할 것이다.
결과
VB-111을 6명의 환자(각각 연구 참가 전 적어도 1년의 지속기간 동안 나팔관 또는 상피난소암을 가졌다)에게, 도 3에 나타낸 바와 같이 개체당 패클리탁셀(40 ㎎ 또는 80 ㎎)과 함께 3x1012 VP의 용량으로 투여하였다. 상기 환자들은 VB-111과 관련된 어떠한 심한 부작용도 나타내지 않았다. 용량 제한 독성은 관찰되지 않았다.
ECACC 13021201 20130212
<110> VASCULAR BIOGENICS LTD. <120> TREATMENT METHODS USING ADENOVIRUS <130> IPA150402-US-D1 <150> US 61/715,206 <151> 2012/10/17 <150> US 61/785,287 <151> 2013/03/14 <160> 27 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 1365 <212> DNA <213> Homo sapiens TNFRSF1A <400> 1 atgggcctct ccaccgtgcc tgacctgctg ctgccgctgg tgctcctgga gctgttggtg 60 ggaatatacc cctcaggggt tattggactg gtccctcacc taggggacag ggagaagaga 120 gatagtgtgt gtccccaagg aaaatatatc caccctcaaa ataattcgat ttgctgtacc 180 aagtgccaca aaggaaccta cttgtacaat gactgtccag gcccggggca ggatacggac 240 tgcagggagt gtgagagcgg ctccttcacc gcttcagaaa accacctcag acactgcctc 300 agctgctcca aatgccgaaa ggaaatgggt caggtggaga tctcttcttg cacagtggac 360 cgggacaccg tgtgtggctg caggaagaac cagtaccggc attattggag tgaaaacctt 420 ttccagtgct tcaattgcag cctctgcctc aatgggaccg tgcacctctc ctgccaggag 480 aaacagaaca ccgtgtgcac ctgccatgca ggtttctttc taagagaaaa cgagtgtgtc 540 tcctgtagta actgtaagaa aagcctggag tgcacgaagt tgtgcctacc ccagattgag 600 aatgttaagg gcactgagga ctcaggcacc 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ggcttccaaa aggcaaacgg ccctcacgtc caagtggacg 35040 taaaggctaa acccttcagg gtgaatctcc tctataaaca ttccagcacc ttcaaccatg 35100 cccaaataat tctcatctcg ccaccttctc aatatatctc taagcaaatc ccgaatatta 35160 agtccggcca ttgtaaaaat ctgctccaga gcgccctcca ccttcagcct caagcagcga 35220 atcatgattg caaaaattca ggttcctcac agacctgtat aagattcaaa agcggaacat 35280 taacaaaaat accgcgatcc cgtaggtccc ttcgcagggc cagctgaaca taatcgtgca 35340 ggtctgcacg gaccagcgcg gccacttccc cgccaggaac catgacaaaa gaacccacac 35400 tgattatgac acgcatactc ggagctatgc taaccagcgt agccccgatg taagcttgtt 35460 gcatgggcgg cgatataaaa tgcaaggtgc tgctcaaaaa atcaggcaaa gcctcgcgca 35520 aaaaagaaag cacatcgtag tcatgctcat gcagataaag gcaggtaagc tccggaacca 35580 ccacagaaaa agacaccatt tttctctcaa acatgtctgc gggtttctgc ataaacacaa 35640 aataaaataa caaaaaaaca tttaaacatt agaagcctgt cttacaacag gaaaaacaac 35700 ccttataagc ataagacgga ctacggccat gccggcgtga ccgtaaaaaa actggtcacc 35760 gtgattaaaa agcaccaccg acagctcctc ggtcatgtcc ggagtcataa tgtaagactc 35820 ggtaaacaca tcaggttgat tcacatcggt cagtgctaaa aagcgaccga aatagcccgg 35880 gggaatacat acccgcaggc gtagagacaa cattacagcc cccataggag gtataacaaa 35940 attaatagga gagaaaaaca cataaacacc tgaaaaaccc tcctgcctag gcaaaatagc 36000 accctcccgc tccagaacaa catacagcgc ttccacagcg gcagccataa cagtcagcct 36060 taccagtaaa aaagaaaacc tattaaaaaa acaccactcg acacggcacc agctcaatca 36120 gtcacagtgt aaaaaagggc caagtgcaga gcgagtatat ataggactaa aaaatgacgt 36180 aacggttaaa gtccacaaaa aacacccaga aaaccgcacg cgaacctacg cccagaaacg 36240 aaagccaaaa aacccacaac ttcctcaaat cgtcacttcc gttttcccac gttacgtcac 36300 ttcccatttt aagaaaacta caattcccaa cacatacaag ttactccgcc ctaaaaccta 36360 cgtcacccgc cccgttccca cgccccgcgc cacgtcacaa actccacccc ctcattatca 36420 tattggcttc aatccaaaat aaggtatatt attgatgatg 36460 <210> 22 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Endothelial Cell-Specific Enhancer Element <400> 22 ggtgactttg cttctggag 19 <210> 23 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Endothelial Cell-Specific Enhancer Element <400> 23 ctccagaagc aaagtcacc 19 <210> 24 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Endothelial Cell-Specific Enhancer Element <400> 24 gtacttcata cttttcatt 19 <210> 25 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Endothelial Cell-Specific Enhancer Element <400> 25 aatgaaaagt atgaagtac 19 <210> 26 <211> 6 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Hypoxia Response element <400> 26 gcacgt 6 <210> 27 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide linker <400> 27 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser 1 5 10 15 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser 20 25 30 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser 35 40

Claims (34)

  1. 유러피언 콜렉션 오브 셀 컬쳐(ECACC) 기탁 번호 13021201을 갖는 아데노바이러스를 포함하고, 완충제로 제형화된 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 멸균 주사 형태로 제형화된 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 상기 완충제는 포스페이트, 글리신, 소르브산, 칼륨 솔베이트, 포화된 식물성 지방산들의 부분적인 글리세라이드 혼합물, 물, 염, 프로타민 설페이트, 이나트륨 수소 포스페이트, 칼륨 수소 포스페이트, 염화 나트륨, 및 아연 염으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 완충제 물질을 포함하는, 조성물.
  4. 제1항에 있어서, PBS 및 글리세롤로 제형화된 조성물.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 종양에서의 혈관신생(angiogenesis) 또는 신생혈관형성(neo-vascularization)의 억제(inhibiting), 감소(decreasing) 또는 축소(reducing)가 필요한 개체에게 유효량의 아데노바이러스를 투여하여, 종양에서의 혈관신생 또는 신생혈관형성을 억제, 감소 또는 축소하는 데에 사용하기 위한 조성물.
  6. 제5항에 있어서, 상기 유효량의 아데노바이러스는 약 109 내지 약 1015 바이러스 입자인 조성물.
  7. 제5항에 있어서, 전신적으로 또는 국소적으로 투여되는 것인 조성물.
  8. 제5항에 있어서, 상기 개체에 유효량의 하나 이상의 화학요법제 또는 방사선요법이 추가적으로 투여되는 것인 조성물.
  9. 제8항에 있어서, 상기 조성물의 투여 전에 하나 이상의 화학요법제 또는 방사선요법이 투여되는 것인 조성물.
  10. 제8항에 있어서, 상기 조성물의 투여 후에 하나 이상의 화학요법제 또는 방사선요법이 투여되는 것인 조성물.
  11. 제8항에 있어서, 상기 하나 이상의 화학요법제가 액시비신; 아클라루비신; 아코다졸 하이드로클로라이드; 아크로닌; 아드리아마이신; 아도젤레신; 알데스류킨; 알림타; 알트레타민; 암보마이신; 아메탄트론 아세테이트; 아미노글루테티미드; 암사크린; 아나스트로졸; 안트라마이신; 아스파라기나제; 아스펄린(Asperlin); 아자시티딘; 아제테파; 아조토마이신; 바티마스태트; 벤조데파; 비칼류타미드; 비스안트렌 하이드로클로라이드; 비스나피드 다이메실레이트; 베바시주맵, 비젤레신; 블레오마이신 설페이트; 브레퀴나르 나트륨; 브로피리민; 부설판; 칵티노마이신; 칼루스테론; 카라세미드; 카르베티머; 카르보플라틴; 카르머스틴; 카루비신 하이드로클로라이드; 카르젤레신; 세데핑골; 클로람부실; 시롤레마이신; 시스플라틴; 클라드리빈; 크리스나톨 메실레이트; 사이클로포스파미드; 시타라빈; 다카바진; 닥티노마이신; 다우노루비신 하이드로클로라이드; 데시타빈; 덱소마플라틴; 데자구아닌; 데자구아닌 메실레이트; 다이아지쿠온; 도세탁셀; 독소루비신; 독소루비신 하이드로클로라이드; 드롤록시펜; 드롤록시펜 시트레이트; 드로모스타놀론 프로피오네이트; 두아조마이신; 에다트렉세이트; 에플로르니틴 하이드로클로라이드; 엘사미트루신; 엔로플라틴; 엔프로메이트; 에피프로피딘; 에피루비신 하이드로클로라이드; 에르불로졸; 에소루비신 하이드로클로라이드; 에스트라머스틴; 에스트라머스틴 포스페이트 나트륨; 에타니다졸; 에토포시드; 에토포시드 포스페이트; 에토프린; 파드로졸 하이드로클로라이드; 파자라빈; 펜레티니드; 플록슈리딘; 플루다라빈 포스페이트; 플루오로유라실; 플루로시타빈; 포스퀴돈; 포스트리에신 나트륨; 젬시타빈; 젬시타빈 하이드로클로라이드; 하이드록시유레아; 이다루비신 하이드로클로라이드; 이포스파미드; 일모포신; 인터페론 알파-2a; 인터페론 알파-2b; 인터페론 알파-n1; 인터페론 알파-n3; 인터페론 베타-Ia; 인터페론 감마-Ib; 이프로플라틴; 이리노테칸 하이드로클로라이드; 란레오티드 아세테이트; 레트로졸; 류프롤리드 아세테이트; 리아로졸 하이드로클로라이드; 로메트렉솔 나트륨; 로머스틴; 로속산트론 하이드로클로라이드; 마소프로콜; 매이탄신; 메클로르에타민 하이드로클로라이드; 메제스트롤 아세테이트; 멜렌제스트롤 아세테이트; 멜팔란; 메노가릴; 머캅토퓨린; 메토트렉세이트; 메토트렉세이트 나트륨; 메토프린; 메튜레데파; 미틴도미드; 미토칼신; 미토크로민; 미토질린; 미토말신; 미토마이신; 미토스퍼; 미토탄; 미톡산트론 하이드로클로라이드; 마이코페놀산; 노코다졸; 노갈라마이신; 오르마플라틴; 옥시슈란; 파조티니브; 패클리탁셀; 페가스파가스; 펠리오마이신; 펜타머스틴; 페플로마이신 설페이트; 퍼포스파미드; 피포브로만; 피포설판; 피록산트론 하이드로클로라이드; 플리카마이신; 플로메스탄; 포르피머 나트륨; 포르피로마이신; 프레드니머스틴; 프로카바진 하이드로클로라이드; 퓨로마이신; 퓨로마이신 하이드로클로라이드; 피라조퓨린; 리보퓨린; 로글레티미드; 사핑골; 사핑골 하이드로클로라이드; 세머스틴; 심트라젠; 소라피니브(Sorafinib); 스파포세이트 나트륨; 스파소마이신; 스피로제르마늄 하이드로클로라이드; 스피로머스틴; 스피로플라틴; 스트렙토니그린; 스트렙토조신; 슐로페누르; 수니티니브; 탈리소마이신; 탁솔; 테코갈란 나트륨; 테가퓨어; 텔록산트론 하이드로클로라이드; 테모포르핀; 테니포시드; 테록시론; 테스토락톤; 티아미프린; 티오구아닌; 티오테파; 티아조푸이린; 티라파자민; 토포테칸 하이드로클로라이드; 토레미펜 시트레이트; 트레스톨론 아세테이트; 트리시리빈 포스페이트; 트라이메트렉세이트; 트라이메트렉세이트 글루쿠로네이트; 트립토렐린; 튜불로졸 하이드로클로라이드; 유라실 머스타드; 유레데파; 바프레오티드; 베르테포르핀; 빈블라스틴 설페이트; 빈크리스틴 설페이트; 빈데신; 빈데신 설페이트; 비네피딘 설페이트; 빈글리시네이트 설페이트; 빈류로신 설페이트; 비노렐빈 타르트레이트; 빈로시딘 설페이트; 빈졸리딘 설페이트; 보로졸; 제니플라틴; 지노스타틴; 및 조루비신 하이드로클로라이드로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 것인 조성물.
  12. 제8항에 있어서, 상기 화학요법제는 알부민이 결합된 패클리탁셀인 조성물.
  13. 제8항에 있어서, 상기 화학요법제는 베바시주맵인 조성물.
  14. 제5항에 있어서, 상기 종양은
    (i) 갑상선암, 신경내분비암, 교모세포종, 위장암, 여성 부인과암, 이들의 임의의 조합 또는 이들의 전이로부터 유래하거나 또는 이들과 관련되거나; 또는
    (ii) 폐암으로부터 유래하거나 또는 이들과 관련된 것인 조성물.
  15. 제5항에 있어서, 개체에 비경구로 투여되는 것인 조성물.
  16. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 종양 크기의 축소 또는 감소, 또는 종양 성장의 제거 또는 지연을 필요로 하는 개체에 유효량의 아데노바이러스를 투여하여, 종양 크기의 축소 또는 감소, 또는 종양 성장의 제거 또는 지연에 사용하기 위한 조성물.
  17. 제16항에 있어서, 상기 유효량의 아데노바이러스는 약 109 내지 약 1015 바이러스 입자인 조성물.
  18. 제16항에 있어서, 전신적으로 또는 국소적으로 투여되는 것인 조성물.
  19. 제16항에 있어서, 상기 개체에 유효량의 하나 이상의 화학요법제 또는 방사선요법이 추가적으로 투여되는 것인 조성물.
  20. 제19항에 있어서, 상기 조성물의 투여 전에 하나 이상의 화학요법제 또는 방사선요법이 투여되는 것인 조성물.
  21. 제19항에 있어서, 상기 조성물의 투여 후에 하나 이상의 화학요법제 또는 방사선요법이 투여되는 것인 조성물.
  22. 제19항에 있어서, 하나 이상의 화학요법제가 액시비신; 아클라루비신; 아코다졸 하이드로클로라이드; 아크로닌; 아드리아마이신; 아도젤레신; 알데스류킨; 알림타; 알트레타민; 암보마이신; 아메탄트론 아세테이트; 아미노글루테티미드; 암사크린; 아나스트로졸; 안트라마이신; 아스파라기나제; 아스펄린(Asperlin); 아자시티딘; 아제테파; 아조토마이신; 바티마스태트; 벤조데파; 비칼류타미드; 비스안트렌 하이드로클로라이드; 비스나피드 다이메실레이트; 베바시주맵, 비젤레신; 블레오마이신 설페이트; 브레퀴나르 나트륨; 브로피리민; 부설판; 칵티노마이신; 칼루스테론; 카라세미드; 카르베티머; 카르보플라틴; 카르머스틴; 카루비신 하이드로클로라이드; 카르젤레신; 세데핑골; 클로람부실; 시롤레마이신; 시스플라틴; 클라드리빈; 크리스나톨 메실레이트; 사이클로포스파미드; 시타라빈; 다카바진; 닥티노마이신; 다우노루비신 하이드로클로라이드; 데시타빈; 덱소마플라틴; 데자구아닌; 데자구아닌 메실레이트; 다이아지쿠온; 도세탁셀; 독소루비신; 독소루비신 하이드로클로라이드; 드롤록시펜; 드롤록시펜 시트레이트; 드로모스타놀론 프로피오네이트; 두아조마이신; 에다트렉세이트; 에플로르니틴 하이드로클로라이드; 엘사미트루신; 엔로플라틴; 엔프로메이트; 에피프로피딘; 에피루비신 하이드로클로라이드; 에르불로졸; 에소루비신 하이드로클로라이드; 에스트라머스틴; 에스트라머스틴 포스페이트 나트륨; 에타니다졸; 에토포시드; 에토포시드 포스페이트; 에토프린; 파드로졸 하이드로클로라이드; 파자라빈; 펜레티니드; 플록슈리딘; 플루다라빈 포스페이트; 플루오로유라실; 플루로시타빈; 포스퀴돈; 포스트리에신 나트륨; 젬시타빈; 젬시타빈 하이드로클로라이드; 하이드록시유레아; 이다루비신 하이드로클로라이드; 이포스파미드; 일모포신; 인터페론 알파-2a; 인터페론 알파-2b; 인터페론 알파-n1; 인터페론 알파-n3; 인터페론 베타-Ia; 인터페론 감마-Ib; 이프로플라틴; 이리노테칸 하이드로클로라이드; 란레오티드 아세테이트; 레트로졸; 류프롤리드 아세테이트; 리아로졸 하이드로클로라이드; 로메트렉솔 나트륨; 로머스틴; 로속산트론 하이드로클로라이드; 마소프로콜; 매이탄신; 메클로르에타민 하이드로클로라이드; 메제스트롤 아세테이트; 멜렌제스트롤 아세테이트; 멜팔란; 메노가릴; 머캅토퓨린; 메토트렉세이트; 메토트렉세이트 나트륨; 메토프린; 메튜레데파; 미틴도미드; 미토칼신; 미토크로민; 미토질린; 미토말신; 미토마이신; 미토스퍼; 미토탄; 미톡산트론 하이드로클로라이드; 마이코페놀산; 노코다졸; 노갈라마이신; 오르마플라틴; 옥시슈란; 파조티니브; 패클리탁셀; 페가스파가스; 펠리오마이신; 펜타머스틴; 페플로마이신 설페이트; 퍼포스파미드; 피포브로만; 피포설판; 피록산트론 하이드로클로라이드; 플리카마이신; 플로메스탄; 포르피머 나트륨; 포르피로마이신; 프레드니머스틴; 프로카바진 하이드로클로라이드; 퓨로마이신; 퓨로마이신 하이드로클로라이드; 피라조퓨린; 리보퓨린; 로글레티미드; 사핑골; 사핑골 하이드로클로라이드; 세머스틴; 심트라젠; 소라피니브(Sorafinib); 스파포세이트 나트륨; 스파소마이신; 스피로제르마늄 하이드로클로라이드; 스피로머스틴; 스피로플라틴; 스트렙토니그린; 스트렙토조신; 슐로페누르; 수니티니브; 탈리소마이신; 탁솔; 테코갈란 나트륨; 테가퓨어; 텔록산트론 하이드로클로라이드; 테모포르핀; 테니포시드; 테록시론; 테스토락톤; 티아미프린; 티오구아닌; 티오테파; 티아조푸이린; 티라파자민; 토포테칸 하이드로클로라이드; 토레미펜 시트레이트; 트레스톨론 아세테이트; 트리시리빈 포스페이트; 트라이메트렉세이트; 트라이메트렉세이트 글루쿠로네이트; 트립토렐린; 튜불로졸 하이드로클로라이드; 유라실 머스타드; 유레데파; 바프레오티드; 베르테포르핀; 빈블라스틴 설페이트; 빈크리스틴 설페이트; 빈데신; 빈데신 설페이트; 비네피딘 설페이트; 빈글리시네이트 설페이트; 빈류로신 설페이트; 비노렐빈 타르트레이트; 빈로시딘 설페이트; 빈졸리딘 설페이트; 보로졸; 제니플라틴; 지노스타틴; 및 조루비신 하이드로클로라이드로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 것인 조성물.
  23. 제19항에 있어서, 상기 화학요법제는 알부민이 결합된 패클리탁셀인 조성물.
  24. 제19항에 있어서, 상기 화학요법제는 베바시주맵인 조성물.
  25. 제16항에 있어서, 상기 종양은
    (i) 갑상선암, 신경내분비암, 교모세포종, 위장암, 여성 부인과암, 이들의 임의의 조합 또는 이들의 전이로부터 유래하거나 또는 이들과 관련되거나; 또는
    (ii) 폐암으로부터 유래하거나 또는 이들과 관련된 것인 조성물.
  26. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 여성 부인과암으로부터 유래하거나 또는 이와 관련된 종양 또는 전이를 가져 전체적인 생존의 연장을 필요로 하는 개체의 전체적인 생존을 연장하는 데에 사용하기 위한 조성물.
  27. 제26항에 있어서, 상기 유효량의 아데노바이러스는 약 109 내지 약 1015 바이러스 입자인 조성물.
  28. 제26항에 있어서, 전신적으로 또는 국소적으로 투여되는 것인 조성물.
  29. 제26항에 있어서, 상기 개체에 유효량의 하나 이상의 화학요법제 또는 방사선요법이 추가적으로 투여되는 것인 조성물.
  30. 제29항에 있어서, 상기 조성물의 투여 전에 하나 이상의 화학요법제 또는 방사선요법이 투여되는 것인 조성물.
  31. 제29항에 있어서, 상기 조성물의 투여 후에 하나 이상의 화학요법제 또는 방사선요법이 투여되는 것인 조성물.
  32. 제29항에 있어서, 상기 하나 이상의 화학요법제가 액시비신; 아클라루비신; 아코다졸 하이드로클로라이드; 아크로닌; 아드리아마이신; 아도젤레신; 알데스류킨; 알림타; 알트레타민; 암보마이신; 아메탄트론 아세테이트; 아미노글루테티미드; 암사크린; 아나스트로졸; 안트라마이신; 아스파라기나제; 아스펄린(Asperlin); 아자시티딘; 아제테파; 아조토마이신; 바티마스태트; 벤조데파; 비칼류타미드; 비스안트렌 하이드로클로라이드; 비스나피드 다이메실레이트; 베바시주맵, 비젤레신; 블레오마이신 설페이트; 브레퀴나르 나트륨; 브로피리민; 부설판; 칵티노마이신; 칼루스테론; 카라세미드; 카르베티머; 카르보플라틴; 카르머스틴; 카루비신 하이드로클로라이드; 카르젤레신; 세데핑골; 클로람부실; 시롤레마이신; 시스플라틴; 클라드리빈; 크리스나톨 메실레이트; 사이클로포스파미드; 시타라빈; 다카바진; 닥티노마이신; 다우노루비신 하이드로클로라이드; 데시타빈; 덱소마플라틴; 데자구아닌; 데자구아닌 메실레이트; 다이아지쿠온; 도세탁셀; 독소루비신; 독소루비신 하이드로클로라이드; 드롤록시펜; 드롤록시펜 시트레이트; 드로모스타놀론 프로피오네이트; 두아조마이신; 에다트렉세이트; 에플로르니틴 하이드로클로라이드; 엘사미트루신; 엔로플라틴; 엔프로메이트; 에피프로피딘; 에피루비신 하이드로클로라이드; 에르불로졸; 에소루비신 하이드로클로라이드; 에스트라머스틴; 에스트라머스틴 포스페이트 나트륨; 에타니다졸; 에토포시드; 에토포시드 포스페이트; 에토프린; 파드로졸 하이드로클로라이드; 파자라빈; 펜레티니드; 플록슈리딘; 플루다라빈 포스페이트; 플루오로유라실; 플루로시타빈; 포스퀴돈; 포스트리에신 나트륨; 젬시타빈; 젬시타빈 하이드로클로라이드; 하이드록시유레아; 이다루비신 하이드로클로라이드; 이포스파미드; 일모포신; 인터페론 알파-2a; 인터페론 알파-2b; 인터페론 알파-n1; 인터페론 알파-n3; 인터페론 베타-Ia; 인터페론 감마-Ib; 이프로플라틴; 이리노테칸 하이드로클로라이드; 란레오티드 아세테이트; 레트로졸; 류프롤리드 아세테이트; 리아로졸 하이드로클로라이드; 로메트렉솔 나트륨; 로머스틴; 로속산트론 하이드로클로라이드; 마소프로콜; 매이탄신; 메클로르에타민 하이드로클로라이드; 메제스트롤 아세테이트; 멜렌제스트롤 아세테이트; 멜팔란; 메노가릴; 머캅토퓨린; 메토트렉세이트; 메토트렉세이트 나트륨; 메토프린; 메튜레데파; 미틴도미드; 미토칼신; 미토크로민; 미토질린; 미토말신; 미토마이신; 미토스퍼; 미토탄; 미톡산트론 하이드로클로라이드; 마이코페놀산; 노코다졸; 노갈라마이신; 오르마플라틴; 옥시슈란; 파조티니브; 패클리탁셀; 페가스파가스; 펠리오마이신; 펜타머스틴; 페플로마이신 설페이트; 퍼포스파미드; 피포브로만; 피포설판; 피록산트론 하이드로클로라이드; 플리카마이신; 플로메스탄; 포르피머 나트륨; 포르피로마이신; 프레드니머스틴; 프로카바진 하이드로클로라이드; 퓨로마이신; 퓨로마이신 하이드로클로라이드; 피라조퓨린; 리보퓨린; 로글레티미드; 사핑골; 사핑골 하이드로클로라이드; 세머스틴; 심트라젠; 소라피니브(Sorafinib); 스파포세이트 나트륨; 스파소마이신; 스피로제르마늄 하이드로클로라이드; 스피로머스틴; 스피로플라틴; 스트렙토니그린; 스트렙토조신; 슐로페누르; 수니티니브; 탈리소마이신; 탁솔; 테코갈란 나트륨; 테가퓨어; 텔록산트론 하이드로클로라이드; 테모포르핀; 테니포시드; 테록시론; 테스토락톤; 티아미프린; 티오구아닌; 티오테파; 티아조푸이린; 티라파자민; 토포테칸 하이드로클로라이드; 토레미펜 시트레이트; 트레스톨론 아세테이트; 트리시리빈 포스페이트; 트라이메트렉세이트; 트라이메트렉세이트 글루쿠로네이트; 트립토렐린; 튜불로졸 하이드로클로라이드; 유라실 머스타드; 유레데파; 바프레오티드; 베르테포르핀; 빈블라스틴 설페이트; 빈크리스틴 설페이트; 빈데신; 빈데신 설페이트; 비네피딘 설페이트; 빈글리시네이트 설페이트; 빈류로신 설페이트; 비노렐빈 타르트레이트; 빈로시딘 설페이트; 빈졸리딘 설페이트; 보로졸; 제니플라틴; 지노스타틴; 및 조루비신 하이드로클로라이드로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 것인 조성물.
  33. 제29항에 있어서, 상기 화학요법제는 알부민이 결합된 패클리탁셀인 조성물.
  34. 제29항에 있어서, 상기 화학요법제는 베바시주맵인 조성물.
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