KR20210139329A - 항종양 요법의 방법 - Google Patents

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미네이 타마르 라흐밀레비츠
쉬프라 파인-슈무엘리
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바스큘라 바이오제닉스 리미티드
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Abstract

본 발명은 내피 세포 특이 프로모터에 작동가능하게 연결된 Fas-키메라 유전자를 포함하는 시동 용량의 벡터를 대상체에게 투여함을 포함하여, 종양을 갖는 대상체에서 항종양 반응을 유도하거나 개선하는 방법을 제공하며, 여기서 시동 용량의 백신은 종양 또는 이의 일부를 외과적으로 제거하기 전에 투여된다.

Description

항종양 요법의 방법
전자적으로 제출된 서열 목록에 대한 참조
본 출원과 함께 제출된 ASCII 텍스트 파일(이름: 2020-03-13-SeqListing_ST25-3182-092PC01.txt; 크기: 71.8KB(73,613바이트): 생성 날짜: 2020년 3월 12일)의 전자적으로 제출된 서열 목록의 내용은 전문이 본원에 참고로 포함된다.
관련 출원에 대한 참조
본 출원은 2019년 3월 13일에 출원된 미국 가특허 출원 제62/817,735호의 이익을 주장하며, 이의 전문은 본원에 참고로 포함된다.
혈관신생은 여러 병리의 공통적이고 주요한 특징이다. 이들 중에는 혈관신생이 질환 상태를 개선할 수 있는 질환(예를 들어 허혈성 심장 질환) 및 과도한 혈관신생이 병리의 일부이므로 제거되어야 하는 질환이 있다. 이러한 후자의 질환에는 당뇨병(당뇨병성 망막증), 심혈관 질환(죽상경화증), 만성 염증(류마티스 관절염) 및 암이 포함된다. 혈관신생은 종양에서 발생하며 이들의 성장, 침습 및 전이를 가능하게 한다. 1971년에, Folkman은 종양 성장과 전이가 혈관신생에 의존적이며 따라서 혈관신생을 억제하는 것이 종양 성장을 저지하는 전략일 수 있다고 제안하였다.
전사 인자에서 성장 인자에 이르기까지 혈관신생에 관여하는 여러 분자가 있다. 저산소증은 신혈관 형성을 유도하는 중요한 환경 인자이며, 이것은 혈관신생 촉진 인자(pro-angiogenic factor)인 여러 사이토카인의 방출을 유도한다. 이들 중에는 혈관 내피 성장 인자(VEGF) 및 이들의 수용체, 안지오포이에틴 패밀리의 구성원, 염기성 섬유아세포 성장 인자 및 엔도텔린-1(ET-1)이 있다. 이들 인자는 내피 세포의 활성화, 증식 및 이동을 통한 혈관신생의 유도에 관여한다.
많은 화학요법제가 암에 대한 잠재적 치료법으로 시험되었지만, 이러한 제제에 대해 상당한 부작용이 알려져 있다. 혈관신생의 내인성 억제제의 재조합 형태도 암 치료를 위해 시험되었다. 이러한 재조합 억제제의 만성 전달의 잠재적인 약동학적, 생명공학적 및 경제적 결점으로 인해 과학자들은 다른 접근법을 개발하게 되었다.
항-VEGF 단클론 항체인 베바시주맙(bevacizumab)의 개발은 화학요법에 대한 보완적 치료 방식으로서 항혈관신생 접근법을 검증하였다. 2세대 다중-표적 티로신 키나제 억제제를 포함한 여러 소분자 억제제도 암에 대한 항혈관신생제로서의 가망성을 보여주었다.
그러나, 재조합 억제제, 항체 및 소분자의 만성 전달의 잠재적인 약동학적 및 경제적 결점 뿐만 아니라 단일 요법으로서 적용될 때 나타나는 제한된 활성으로 인해 과학자들은 항혈관신생 유전자 요법을 평가하게 되었다. 유전자 요법은 유전성 및 후천성 인간 질병을 치료하기 위해 부각된 양식이다. 그러나, 발현 기간, 면역 반응 유도, 벡터의 세포독성 및 조직 특이성을 포함하여 성공적인 유전자 요법을 제한하는 다수의 장애물이 있다. 암 유전자 요법을 위한 두 가지 일반적인 전략이 제안되었다: 종양 지시된 유전자 요법 또는 전신 유전자 요법. 전신 치료로는 암성 세포 또는 이의 환경에 유전자 요법 제품을 표적화하는데 성공하지 못했기 때문에 대부분의 요법들이 종양 자체에 투여되었다.
본 개시내용은 내피 세포 특이 프로모터에 작동가능하게 연결된 Fas-키메라 유전자를 포함하는 시동 용량(priming dose)의 벡터를 대상체에게 투여함을 포함하여, 종양을 갖는 대상체에서 항종양 반응을 유도하거나 개선하는 방법에 관한 것이며, 여기서 시동 용량의 벡터는 종양 또는 이의 일부를 외과적으로 제거하기 전에 투여되고, 항종양 반응은 종양 또는 이의 일부의 외과적 제거 전에 시동 용량의 벡터를 제공받지 않은 대상체 또는 벡터를 투여받지 않은 대상체에서의 항종양 반응과 비교하여 투여 후 유도되거나 개선된다.
본 개시내용은 내피 세포 특이 프로모터에 작동가능하게 연결된 Fas-키메라 유전자를 포함하는 시동 용량의 벡터를 대상체에게 투여함을 포함하여, 이를 필요로 하는 대상체에서 종양을 치료하는 방법에 관한 것이며, 여기서 시동 용량의 벡터는 종양 또는 이의 일부를 외과적으로 제거하기 전에 투여된다.
일부 측면에서, 본 개시내용의 방법은 수술후 용량(post-surgical dose)의 벡터를 투여함을 추가로 포함한다. 일부 측면에서, 수술후 용량의 벡터는 하나 이상의 화학요법제와 조합하여 추가로 투여된다.
본 개시내용의 일부 측면에서, 하나 이상의 화학요법제는 아시비신; 아클라루비신; 아코다졸 하이드로클로라이드; 아크로닌; 아드리아마이신; 아도젤레신; 알데스류킨; 알림타; 알트레타민; 암보마이신; 아메탄트론 아세테이트; 아미노글루테티미드; 암사크린; 아나스트로졸; 안트라마이신; 아스파라기나제; 아스퍼린; 아자시티딘; 아제테파; 아조토마이신; 바티마스타트; 벤조데파; 비칼루타미드; 비산트렌 하이드로클로라이드; 비스나피드 디메실레이트; 베바시주맙, 비젤레신; 블레오마이신 설페이트; 브레퀴나르 나트륨; 브로피리민; 부설판; 칵티노마이신; 칼루스테론; 카라세미드; 카베티머; 카보플라틴; 카르무스틴(BiCNU); 카루비신 하이드로클로라이드; 카르젤레신; 세데핑골; 클로람부실; 시롤레마이신; 시스플라틴; 클라드리빈; 크리스나톨 메실레이트; 사이클로포스파미드; 시타라빈; 다카르바진; 닥티노마이신; 다우노루비신 하이드로클로라이드; 데시타빈; 덱소르마플라틴; 데자구아닌; 데자구아닌 메실레이트; 디아지쿠온; 도세탁셀; 독소루비신; 독소루비신 하이드로클로라이드; 드롤록시펜; 드롤록시펜 시트레이트; 드로모스타놀론 프로피오네이트; 두아조마이신; 에다트렉세이트; 에플로르니틴 하이드로클로라이드; 엘사미트루신; 엔로플라틴; 엔프로메이트; 에피프로피딘; 에피루비신 하이드로클로라이드; 에르불로졸; 에소루비신 하이드로클로라이드; 에스트라무스틴; 에스트라무스틴 포스페이트 나트륨; 에타니다졸; 에토포시드; 에토포시드 포스페이트; 에토프린; 파드로졸 하이드로클로라이드; 파자라빈; 펜레티니드; 플록수리딘; 플루다라빈 포스페이트; 플루오로우라실; 플루오로시타빈; 포스퀴돈; 포스트리에신 나트륨; 젬시타빈; 젬시타빈 하이드로클로라이드; Gliadel® 웨이퍼; 하이드록시우레아; 이다루비신 하이드로클로라이드; 이포스파미드; 일모포신; 인터페론 알파-2a; 인터페론 알파-2b; 인터페론 알파-nl; 인터페론 알파-n3; 인터페론 베타-I a; 인터페론 감마-I b; 이프로플라틴; 이리노테칸 하이드로클로라이드; 란레오티드 아세테이트; 레트로졸; 류프로리드 아세테이트; 리아로졸 하이드로클로라이드; 로메트렉솔 나트륨; 로무스틴(CCNU); 로속산트론 하이드로클로라이드; 마소프로콜; 메이탄신; 메클로레타민 하이드로클로라이드; 메게스트롤 아세테이트; 멜렌게스트롤 아세테이트; 멜팔란; 메노가릴; 머캅토퓨린; 메토트렉세이트; 메토트렉세이트 나트륨; 메토프린; 메투레데파; 미틴도미드; 미토카신; 미토크로민; 미토길린; 미토말신; 미토마이신; 미토스퍼; 미토탄; 미톡산트론 하이드로클로라이드; 마이코페놀산; 노코다졸; 노갈라마이신; 오르마플라틴; 옥시수란; 파조티닙; 파클리탁셀; 페그아스파라기나제; 펠리오마이신; 펜타무스틴; 페플로마이신 설페이트; 퍼포스파미드; 피포브로만; 피포술판; 피록산트론 하이드로클로라이드; 플리카마이신; 플로메스탄; 포르피머 나트륨; 포르피로마이신; 프레드니무스틴; 프로카바진 하이드로클로라이드; 퓨로마이신; 퓨로마이신 하이드로클로라이드; 피라조푸린; 리보프린; 로글레티미드; 사핑골; 사핑골 하이드로클로라이드; 세무스틴; 심트라젠; 소라피닙; 스파포세이트 나트륨; 스파르소마이신; 스피로게르마늄 하이드로클로라이드; 스피로무스틴; 스피로플라틴; 스트렙토니그린; 스트렙토조신; 술로페누르; 수니티닙; 탈리소마이신; 탁솔; 테코갈란 나트륨; 테가푸르; 텔록산트론 하이드로클로라이드; 테모포르핀; 테모졸로미드; 테니포시드; 테록시론; 테스토락톤; 티아미프린; 티오구아닌; 티오테파; 티아조푸이린; 티라파자민; 토포테칸 하이드로클로라이드; 토레미펜 시트레이트; 트레스톨론 아세테이트; 트리시리빈 포스페이트; 트리메트렉세이트; 트리메트렉세이트 글루쿠로네이트; 트립토렐린; 튜불로졸 하이드로클로라이드; 우라실 머스타드; 우레데파; 바프레오티드; 베르테포르핀; 빈블라스틴 설페이트; 빈크리스틴 설페이트; 빈데신; 빈데신 설페이트; 비네피딘 설페이트; 빈글리시네이트 설페이트; 빈류로신 설페이트; 비노렐빈 타르트레이트; 빈로시딘 설페이트; 빈졸리딘 설페이트; 보로졸; 제니플라틴; 지노스타틴; 및 조루비신 하이드로클로라이드로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
일부 측면에서, 하나 이상의 화학요법제는 항-VEGF 항체 또는 VEGF 결합 분자이다. 일부 측면에서, 항-VEGF 항체는 단클론 항체, 인간화 항체, 인간 항체, 단일 쇄 항체, 또는 키메라 항체이다. 일부 측면에서, VEGF 길항제는 Fab, F(ab)2, Fv, 또는 scFv를 포함한다.
일부 측면에서, 하나 이상의 화학요법제는 항-VEGF 수용체 결합 항체 또는 VEGF 수용체 결합 분자이다. 일부 측면에서, 항-VEGF 수용체 결합 항체는 단클론 항체, 인간화 항체, 인간 항체, 단일 쇄 항체, 또는 키메라 항체이다. 일부 측면에서, VEGF 길항제는 Fab, F(ab)2, Fv, 또는 scFv를 포함한다.
특정 측면에서, VEGF 길항제는 베바시주맙, 라니비주맙, VGX-100, r84, 애플리버셉트, IMC-18F1, IMC-1C11, 및 라무시루맙으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 보다 특정한 측면에서, VEGF 길항제는 베바시주맙이다.
본 개시내용의 일부 측면에서, Fas-키메라 유전자는 Fas 폴리펩티드의 막관통 도메인 및 세포내 도메인에 융합된 TNF 수용체 1(TNFR1) 폴리펩티드의 세포외 도메인을 포함하는 폴리펩티드를 암호화한다. 일부 측면에서, TNFR1의 세포외 도메인은 서열 번호 4와 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 TNFR1의 세포외 도메인은 TNF-α에 결합할 수 있다. 일부 측면에서, Fas 폴리펩티드의 막관통 도메인 및 세포내 도메인은 서열 번호 8과 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 Fas 폴리펩티드의 막관통 도메인 및 세포내 도메인은 Fas 매개된 아폽토시스를 유도할 수 있다.
본 개시내용의 일부 측면에서, Fas-키메라 유전자는 서열 번호 3과 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 제1 뉴클레오티드 서열, 및 서열 번호 7과 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 제2 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 측면에서, 내피 세포 특이 프로모터는 PPE-1 프로모터를 포함한다. 일부 측면에서, 내피 세포-특이 프로모터는 서열 번호 15 또는 서열 번호 16과 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 시스-조절 요소를 추가로 포함하고, 여기서 시스-조절 요소는 시스-조절 요소가 없는 내피 세포 특이 프로모터에 비해 개선된 내피 세포 특이성을 유도한다. 특정 측면에서, 시스-조절 요소는 서열 번호 11 또는 서열 번호 12를 포함한다. 일부 측면에서, 시스-조절 요소는 서열 번호 13 또는 서열 번호 14를 추가로 포함한다.
일부 측면에서, 내피 세포 특이 프로모터는 PPE-1-3X 프로모터이다. 특정 측면에서, PPE-1-3X 프로모터는 서열 번호 18과 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 여기서 PPE-1-3X 프로모터는 내피 세포에서 Fas-키메라 유전자 발현을 지시할 수 있다.
본 개시내용의 일부 측면에서, 벡터는 아데노바이러스의 E1 영역을 함유하지 않는다.
일부 측면에서, 벡터의 시동 용량은 종양 또는 이의 일부를 외과적으로 제거하기 약 7일, 약 8일, 약 9일, 약 10일, 약 11일, 약 12일, 약 13일, 약 2주, 약 15일, 약 20일, 약 3주, 약 25일, 약 4주, 약 1개월, 약 5주, 약 6주, 약 7주, 약 2개월, 약 3개월, 약 4개월, 약 5개월, 또는 약 6개월 전에 투여된다.
일부 측면에서, 벡터 및 하나 이상의 화학요법제의 수술후 용량은 순차적으로 투여된다. 일부 측면에서, 벡터의 수술후 용량은 하나 이상의 화학요법제 이전에 투여된다.
본 개시내용의 일부 측면에서, 벡터의 시동 용량은 약 1 x 1015개 미만, 약 1 x 1014개 미만, 약 5 x 1013개 미만, 약 4 x 1013개 미만, 약 3 x 1013개 미만, 약 2 x 1013개 미만, 약 1 x 1013개 미만, 약 9 x 1012개 미만, 약 8 x 1012개 미만, 약 7 x 1012개 미만, 약 6 x 1012개 미만, 약 5 x 1012개 미만, 약 4 x 1012개 미만, 약 3 x 1012개 미만, 약 2 x 1012개 미만, 약 1 x 1012개 미만, 약 9 x 1011개 미만, 약 8 x 1011개 미만, 약 7 x 1011개 미만, 약 6 x 1011개 미만, 약 5 x 1011개 미만, 약 4 x 1011개 미만, 약 3 x 1011개 미만, 약 2 x 1011개 미만, 약 1 x 1011개 미만, 약 9 x 1010개 미만, 약 8 x 1010개 미만, 약 7 x 1010개 미만, 약 6 x 1010개 미만, 약 5 x 1010개 미만, 약 4 x 1010개 미만, 약 3 x 1010개 미만, 약 2 x 1010개 미만, 또는 약 1 x 1010개 미만 바이러스 입자의 유효량으로 투여된다.
일부 측면에서, 벡터의 수술후 용량은 약 1 x 1015개 미만, 약 1 x 1014개 미만, 약 5 x 1013개 미만, 약 4 x 1013개 미만, 약 3 x 1013개 미만, 약 2 x 1013개 미만, 약 1 x 1013개 미만, 약 9 x 1012개 미만, 약 8 x 1012개 미만, 약 7 x 1012개 미만, 약 6 x 1012개 미만, 약 5 x 1012개 미만, 약 4 x 1012개 미만, 약 3 x 1012개 미만, 약 2 x 1012개 미만, 약 1 x 1012개 미만, 약 9 x 1011개 미만, 약 8 x 1011개 미만, 약 7 x 1011개 미만, 약 6 x 1011개 미만, 약 5 x 1011개 미만, 약 4 x 1011개 미만, 약 3 x 1011개 미만, 약 2 x 1011개 미만, 약 1 x 1011개 미만, 약 9 x 1010개 미만, 약 8 x 1010개 미만, 약 7 x 1010개 미만, 약 6 x 1010개 미만, 약 5 x 1010개 미만, 약 4 x 1010개 미만, 약 3 x 1010개 미만, 약 2 x 1010개 미만, 또는 약 1 x 1010개 미만 바이러스 입자의 유효량으로 투여된다.
본 개시내용의 일부 측면에서, 베바시주맙은 약 15 mg/kg, 14 mg/kg, 13 mg/kg, 12 mg/kg, 11 mg/kg, 10 mg/kg, 9 mg/kg, 8 mg/kg, 7 mg/kg, 6 mg/kg, 5 mg/kg, 4 mg/kg, 3 mg/kg, 2 mg/kg, 또는 1 mg/kg 미만의 유효량으로 투여된다.
특정 측면에서, 벡터의 수술후 용량은 3 x 1012 내지 3 x 1013개 바이러스 입자의 유효량으로 투여되고 베바시주맙은 5 mg/kg 내지 15 mg/kg의 유효량으로 투여된다.
본 개시내용의 일부 측면에서, 벡터의 수술후 용량은 반복적으로 투여된다.
일부 측면에서, 벡터의 시동 용량 및 벡터의 수술후 용량은 동일하다. 또 다른 측면에서, 벡터의 시동 용량 및 벡터의 수술후 용량은 상이하다. 일부 측면에서, 벡터의 시동 용량은 벡터의 수술후 용량보다 높다. 또 다른 측면에서, 벡터의 시동 용량은 벡터의 수술후 용량보다 낮다.
본 개시내용의 일부 측면에서, 벡터의 수술후 용량은 매일, 약 2일에 한 번, 약 3일에 한 번, 약 4일에 한 번, 약 5일에 한 번, 약 6일에 한 번, 약 7일에 한 번, 약 2주에 한 번, 약 3주에 한 번, 약 4주에 한 번, 약 5주에 한 번, 약 6주에 한 번, 약 7주에 한 번, 약 2개월에 한 번, 또는 약 6개월에 한 번 반복적으로 투여된다.
일부 측면에서, 베바시주맙은 반복적으로 투여된다. 특정 측면에서, 베바시주맙은 약 7일에 한 번, 약 2주에 한 번, 약 3주에 한 번, 약 4주에 한 번, 약 2개월에 한 번, 약 3개월에 한 번, 약 4개월에 한 번, 약 5개월에 한 번, 또는 약 6개월에 한 번 반복적으로 투여된다.
보다 특정한 측면에서, 벡터의 수술후 용량은 2개월마다 투여되고 베바시주맙은 2주마다 투여된다.
본 개시내용의 일부 측면에서, 종양은 육종, 흑색종, 암종, 백혈병, 호지킨병, 비호지킨 림프종, 다발성 골수종, 신경모세포종, 유방암, 난소암, 폐암(비소세포 폐암(NSCLC) 포함), 횡문근육종, 원발성 혈소판증가증, 원발성 거대글로불린혈증, 소세포 폐 종양, 원발성 뇌 종양, 신경교종(다형성 교모세포종(GBM) 및 재발성 GBM 포함), 위암, 결장암(전이성 결장직장암(mCRC) 포함), 간담도암, 악성 췌장 췌도종, 악성 카르시노이드, 방광암, 전암성 피부 병변, 고환암, 림프종, 갑상선암, 유두상 갑상선암, 신경모세포종, 신경내분비암, 식도암, 비뇨생식도암, 악성 고칼슘혈증, 자궁경부암, 자궁내막암, 부신피질암, 전립선암, 뮐러암(Mullerian cancer), 난소암, 복막암, 나팔관암, 또는 자궁 유두상 장액 암종으로부터 유래되거나 이와 관련된다.
일부 측면에서, 육종은 연골육종, 섬유육종, 림프육종, 흑색육종, 점액육종, 골육종, 아베메시 육종(Abemethy's sarcoma), 지방성 육종(adipose sarcoma), 지방육종(liposarcoma), 포상 연부 육종, 법랑아육종, 포도상 육종, 녹색종 육종, 융모막 암종, 배아 육종, 빌름스 종양 육종, 자궁내막 육종, 간질성 육종, 유잉 육종, 근막 육종, 섬유모세포 육종, 거대 세포 육종, 과립구 육종, 호지킨 육종, 특발성 다발 색소 출혈 육종, B 세포의 면역모세포 육종, 림프종, T 세포의 면역모세포 육종, 젠센 육종(Jensen's sarcoma), 카포시 육종, 쿠퍼 세포 육종, 혈관육종, 백혈육종, 악성 간엽종 육종, 방골 육종, 망상내피 육종, 라우스 육종, 장액낭 육종(serocystic sarcoma), 활막 육종, 또는 말초혈관확장 육종(telangiectaltic sarcoma)이다.
일부 측면에서, 흑색종은 말단-흑자 흑색종(acra-lentiginous melanoma), 멜라닌 결핍 흑색종(amelanotic melanoma), 양성 소아 흑색종, 클라우드만 흑색종(Cloudman's melanoma), S91 흑색종, 하딩-패시 흑색종(Harding-Passey melanoma), 소아 흑색종, 악성 흑색점 흑색종(lentigo maligna melanoma), 악성 흑색종, 전이성 흑색종, 결절 흑색종, 조갑하 흑색종, 또는 표재 확산 흑색종이다.
일부 측면에서, 암종은 선방 암종(acinar carcinoma), 선방상 암종(acinous carcinoma), 선낭 암종(adenocystic carcinoma), 선모 낭포 암종(adenoid cystic carcinoma), 선암종(carcinoma adenomatosum), 부신 피질의 암종(carcinoma of adrenal cortex), 폐포 암종(alveolar carcinoma), 폐포 세포 암종(alveolar cell carcinoma), 기저 세포 암종(basal cell carcinoma), 기저세포 암종(carcinoma basocellulare), 기저세포양 암종(basaloid carcinoma), 기저편평 세포 암종(basosquamous cell carcinoma), 세기관지폐포 암종(bronchioalveolar carcinoma), 세기관지 암종(bronchiolar carcinoma), 기관지원성 암종(bronchogenic carcinoma), 대뇌모양 암종(cerebriform carcinoma), 담관세포 암종(cholangiocellular carcinoma), 융모 암종(chorionic carcinoma), 콜로이드질 암종(colloid carcinoma), 면포 암종(comedo carcinoma), 자궁체부 암종(corpus carcinoma), 사상엽 암종(cribriform carcinoma), 흉부 갑옷 암종(carcinoma en cuirasse), 피부 암종(carcinoma cutaneum), 원주 암종(cylindrical carcinoma), 원주 세포 암종(cylindrical cell carcinoma), 관 암종(duct carcinoma), 경성 암종(carcinoma durum), 배아 암종(embryonal carcinoma), 뇌질양 암종(encephaloid carcinoma), 표피양 암종(epiermoid carcinoma), 상피 아데노이드 암종(carcinoma epitheliale adenoides), 외장성 암종(exophytic carcinoma), 궤양 전 암종(carcinoma ex ulcere), 섬유성 암종(carcinoma fibrosum), 젤라틴양 암종(gelatiniform carcinoma), 젤라틴성 암종(gelatinous carcinoma), 거대 세포 암종(giant cell carcinoma), 거대세포 암종(carcinoma gigantocellular), 선암종(glandular carcinoma), 과립막 세포 암종(granulosa cell carcinoma), 모상 암종(hair-matrix carcinoma), 헤마토이드 암종(hematoid carcinoma), 간세포 암종(hepatocellular carcinoma), 허슬 세포 암종(Hurthle cell carcinoma), 유리질 암종(hyaline carcinoma), 부신모양 암종(hypernephroid carcinoma), 소아 배아 암종(infantile embryonal carcinoma), 제자리 암종(carcinoma in situ), 표피내 암종(intraepidermal carcinoma), 상피내 암종(intraepithelial carcinoma), 크롬페처 암종(Krompecher's carcinoma), 쿨키츠키-세포 암종(Kulchitzky-cell carcinoma), 대세포 암종(large-cell carcinoma), 렌즈핵 암종(lenticular carcinoma), 렌즈핵 암종(carcinoma lenticulare), 지방종 암종(lipomatous carcinoma), 림프상피성 암종(lymphoepithelial carcinoma), 수질 암종(carcinoma medullare), 수질 암종(medullary carcinoma), 흑색증 암종(melanotic carcinoma), 연성 암종(carcinoma molle), 점액 암종(mucinous carcinoma), 점액분비 암종(carcinoma muciparum), 점액세포 암종(carcinoma mucocellulare), 점막표피양 암종(mucoepidernoid carcinoma), 점액 암종(carcinoma mucosum), 점액성 암종(mucous carcinoma), 점액종 암종(carcinoma myxomatodes), 비인두 암종(naspharyngheal carcinoma), 연맥 세포 암종(oat cell carcinoma), 화골성 암종(carcinoma ossificans), 유골 암종(osteoid carcinoma), 유두상 암종(papillary carcinoma), 문맥주위 암종(periportal carcinoma), 침습전 암종(preinvasive carcinoma), 가시 세포 암종(prickle cell carcinoma), 수상 암종(pultaceous carcinoma), 신장의 신세포 암종(renal cell carcinoma of kidney), 저장 세포 암종(reserve cell carcinoma), 육종성 암종(carcinoma sarcomatodes), 슈나이더 암종(schneiderian carcinoma), 경성 암종(scirrhous carcinoma), 음낭 암종(carcinoma scroti), 인환 세포 암종(signet-ring cell carcinoma), 단순 암종(carcinoma simplex), 소세포 암종(small-cell carcinoma), 솔라노이드 암종(solanoid carcinoma), 구상 세포 암종(spheroidal cell carcinoma), 방추 세포 암종(spindle cell carcinoma), 해면질 암종(carcinoma spongiosum), 편평상피 암종(squamous carcinoma), 편평 세포 암종(squamous cell carcinoma), 스트링 암종(string carcinoma), 혈관확장성 암종(carcinoma telangiectaticum), 모세혈관확장성 암종(carcinoma telangiectodes), 이행 세포 암종(transitional cell carcinoma), 결절성 암종(carcinoma tuberosum), 결절모양 암종(tuberous carcinoma), 사마귀모양 암종(verrucous carcinoma), 또는 비플로솜 암종(carcinoma viflosum)이다.
특정 측면에서, 종양은 교모세포종으로부터 유래되거나 이와 관련된다. 보다 특정한 측면에서, GBM은 재발성 GBM이다.
일부 측면에서, 벡터는 아데노바이러스 벡터이다. 특정 측면에서, 아데노바이러스 벡터는 아데노바이러스 혈청형 5이다. 보다 특정한 측면에서, 벡터는 서열 번호 19를 포함하거나, 이로 구성되거나, 이로 본질적으로 구성된다. 보다 특정한 측면에서, 벡터는 ECACC(European Collection of Cell Cultures) 수탁 번호 13021201을 갖는 단리된 바이러스이다.
양태
1. 내피 세포 특이 프로모터에 작동가능하게 연결된 Fas-키메라 유전자를 포함하는 시동 용량의 벡터를 대상체에게 투여함(여기서, 시동 용량의 벡터는 종양 또는 이의 일부를 외과적으로 제거하기 전에 투여된다)을 포함하여, 종양을 갖는 대상체에서 항종양 반응을 유도하거나 개선하는 방법(여기서, 항종양 반응은 종양 또는 이의 일부의 외과적 제거 전에 시동 용량의 벡터를 제공받지 않은 대상체 또는 벡터를 투여받지 않은 대상체에서의 항종양 반응과 비교하여 투여 후 유도되거나 개선된다).
2. 내피 세포 특이 프로모터에 작동가능하게 연결된 Fas-키메라 유전자를 포함하는 시동 용량의 벡터를 대상체에게 투여함(여기서, 시동 용량의 벡터는 종양 또는 이의 일부를 외과적으로 제거하기 전에 투여된다)을 포함하여, 이를 필요로 하는 대상체에서 종양을 치료하는 방법.
3. 수술후 용량의 벡터를 투여함을 추가로 포함하는, 양태 1 또는 2의 방법.
4. 수술후 용량의 벡터가 하나 이상의 화학요법제와 조합하여 추가로 투여되는, 양태 3의 방법.
5. 하나 이상의 화학요법제가 아시비신; 아클라루비신; 아코다졸 하이드로클로라이드; 아크로닌; 아드리아마이신; 아도젤레신; 알데스류킨; 알림타; 알트레타민; 암보마이신; 아메탄트론 아세테이트; 아미노글루테티미드; 암사크린; 아나스트로졸; 안트라마이신; 아스파라기나제; 아스퍼린; 아자시티딘; 아제테파; 아조토마이신; 바티마스타트; 벤조데파; 비칼루타미드; 비산트렌 하이드로클로라이드; 비스나피드 디메실레이트; 베바시주맙, 비젤레신; 블레오마이신 설페이트; 브레퀴나르 나트륨; 브로피리민; 부설판; 칵티노마이신; 칼루스테론; 카라세미드; 카베티머; 카보플라틴; 카르무스틴(BiCNU); 카루비신 하이드로클로라이드; 카르젤레신; 세데핑골; 클로람부실; 시롤레마이신; 시스플라틴; 클라드리빈; 크리스나톨 메실레이트; 사이클로포스파미드; 시타라빈; 다카르바진; 닥티노마이신; 다우노루비신 하이드로클로라이드; 데시타빈; 덱소르마플라틴; 데자구아닌; 데자구아닌 메실레이트; 디아지쿠온; 도세탁셀; 독소루비신; 독소루비신 하이드로클로라이드; 드롤록시펜; 드롤록시펜 시트레이트; 드로모스타놀론 프로피오네이트; 두아조마이신; 에다트렉세이트; 에플로르니틴 하이드로클로라이드; 엘사미트루신; 엔로플라틴; 엔프로메이트; 에피프로피딘; 에피루비신 하이드로클로라이드; 에르불로졸; 에소루비신 하이드로클로라이드; 에스트라무스틴; 에스트라무스틴 포스페이트 나트륨; 에타니다졸; 에토포시드; 에토포시드 포스페이트; 에토프린; 파드로졸 하이드로클로라이드; 파자라빈; 펜레티니드; 플록수리딘; 플루다라빈 포스페이트; 플루오로우라실; 플루오로시타빈; 포스퀴돈; 포스트리에신 나트륨; 젬시타빈; 젬시타빈 하이드로클로라이드; Gliadel® 웨이퍼; 하이드록시우레아; 이다루비신 하이드로클로라이드; 이포스파미드; 일모포신; 인터페론 알파-2a; 인터페론 알파-2b; 인터페론 알파-nl; 인터페론 알파-n3; 인터페론 베타-I a; 인터페론 감마-I b; 이프로플라틴; 이리노테칸 하이드로클로라이드; 란레오티드 아세테이트; 레트로졸; 류프로리드 아세테이트; 리아로졸 하이드로클로라이드; 로메트렉솔 나트륨; 로무스틴(CCNU); 로속산트론 하이드로클로라이드; 마소프로콜; 메이탄신; 메클로레타민 하이드로클로라이드; 메게스트롤 아세테이트; 멜렌게스트롤 아세테이트; 멜팔란; 메노가릴; 머캅토퓨린; 메토트렉세이트; 메토트렉세이트 나트륨; 메토프린; 메투레데파; 미틴도미드; 미토카신; 미토크로민; 미토길린; 미토말신; 미토마이신; 미토스퍼; 미토탄; 미톡산트론 하이드로클로라이드; 마이코페놀산; 노코다졸; 노갈라마이신; 오르마플라틴; 옥시수란; 파조티닙; 파클리탁셀; 페그아스파라기나제; 펠리오마이신; 펜타무스틴; 페플로마이신 설페이트; 퍼포스파미드; 피포브로만; 피포술판; 피록산트론 하이드로클로라이드; 플리카마이신; 플로메스탄; 포르피머 나트륨; 포르피로마이신; 프레드니무스틴; 프로카바진 하이드로클로라이드; 퓨로마이신; 퓨로마이신 하이드로클로라이드; 피라조푸린; 리보프린; 로글레티미드; 사핑골; 사핑골 하이드로클로라이드; 세무스틴; 심트라젠; 소라피닙; 스파포세이트 나트륨; 스파르소마이신; 스피로게르마늄 하이드로클로라이드; 스피로무스틴; 스피로플라틴; 스트렙토니그린; 스트렙토조신; 술로페누르; 수니티닙; 탈리소마이신; 탁솔; 테코갈란 나트륨; 테가푸르; 텔록산트론 하이드로클로라이드; 테모포르핀; 테모졸로미드; 테니포시드; 테록시론; 테스토락톤; 티아미프린; 티오구아닌; 티오테파; 티아조푸이린; 티라파자민; 토포테칸 하이드로클로라이드; 토레미펜 시트레이트; 트레스톨론 아세테이트; 트리시리빈 포스페이트; 트리메트렉세이트; 트리메트렉세이트 글루쿠로네이트; 트립토렐린; 튜불로졸 하이드로클로라이드; 우라실 머스타드; 우레데파; 바프레오티드; 베르테포르핀; 빈블라스틴 설페이트; 빈크리스틴 설페이트; 빈데신; 빈데신 설페이트; 비네피딘 설페이트; 빈글리시네이트 설페이트; 빈류로신 설페이트; 비노렐빈 타르트레이트; 빈로시딘 설페이트; 빈졸리딘 설페이트; 보로졸; 제니플라틴; 지노스타틴; 및 조루비신 하이드로클로라이드로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 양태 4의 방법.
6. 하나 이상의 화학요법제가 항-VEGF 항체 또는 VEGF 결합 분자인, 양태 4의 방법.
7. 항-VEGF 항체가 단클론 항체, 인간화 항체, 인간 항체, 단일 쇄 항체, 또는 키메라 항체인, 양태 6의 방법.
8. VEGF 길항제가 Fab, F(ab)2, Fv, 또는 scFv를 포함하는, 양태 6 또는 7의 방법.
9. 하나 이상의 화학요법제가 항-VEGF 수용체 결합 항체 또는 VEGF 수용체 결합 분자인, 양태 4의 방법.
10. 항-VEGF 수용체 결합 항체가 단클론 항체, 인간화 항체, 인간 항체, 단일 쇄 항체, 또는 키메라 항체인, 양태 9의 방법.
11. VEGF 길항제가 Fab, F(ab)2, Fv, 또는 scFv를 포함하는, 양태 9 또는 10의 방법.
12. VEGF 길항제가 베바시주맙, 라니비주맙, VGX-100, r84, 애플리버셉트, IMC-18F1, IMC-1C11, 및 라무시루맙으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 양태 6 내지 11 중의 어느 하나의 방법.
13. VEGF 길항제가 베바시주맙인, 양태 12의 방법.
14. Fas-키메라 유전자가 Fas 폴리펩티드의 막관통 도메인 및 세포내 도메인에 융합된 TNF 수용체 1(TNFR1) 폴리펩티드의 세포외 도메인을 포함하는 폴리펩티드를 암호화하는, 양태 1 내지 13 중의 어느 하나의 방법.
15. TNFR1의 세포외 도메인이 서열 번호 4와 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 TNFR1의 세포외 도메인이 TNF-α에 결합할 수 있는, 양태 14의 방법,
16. Fas 폴리펩티드의 막관통 도메인 및 세포내 도메인이 서열 번호 8과 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 Fas 폴리펩티드의 막관통 도메인 및 세포내 도메인이 Fas 매개된 아폽토시스를 유도할 수 있는, 양태 14 또는 15의 방법.
17. Fas-키메라 유전자가 서열 번호 3과 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 제1 뉴클레오티드 서열, 및 서열 번호 7과 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 제2 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 양태 1 내지 16 중의 어느 하나의 방법.
18. 내피 세포 특이 프로모터가 PPE-1 프로모터를 포함하는, 양태 1 내지 17 중의 어느 하나의 방법.
19. 내피 세포-특이 프로모터가 서열 번호 15 또는 서열 번호 16과 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 시스-조절 요소를 추가로 포함하고, 여기서 시스-조절 요소가 시스-조절 요소가 없는 내피 세포 특이 프로모터에 비해 개선된 내피 세포 특이성을 유도하는, 양태 1 내지 17 중의 어느 하나의 방법.
20. 시스-조절 요소가 서열 번호 11 또는 서열 번호 12를 포함하는, 양태 19의 방법.
21. 시스-조절 요소가 서열 번호 13 또는 서열 번호 14를 추가로 포함하는, 양태 20의 방법.
22. 내피 세포 특이 프로모터가 PPE-1-3X 프로모터인, 양태 1 내지 21 중의 어느 하나의 방법.
23. PPE-1-3X 프로모터가 서열 번호 18과 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 여기서 PPE-1-3X 프로모터가 내피 세포에서 Fas-키메라 유전자 발현을 지시할 수 있는, 양태 22의 방법.
24. 벡터가 아데노바이러스의 E1 영역을 함유하지 않는, 양태 1 내지 23 중의 어느 하나의 방법.
25. 벡터의 시동 용량이 종양 또는 이의 일부를 외과적으로 제거하기 약 7일, 약 8일, 약 9일, 약 10일, 약 11일, 약 12일, 약 13일, 약 2주, 약 15일, 약 20일, 약 3주, 약 25일, 약 4주, 약 1개월, 약 5주, 약 6주, 약 7주, 약 2개월, 약 3개월, 약 4개월, 약 5개월, 또는 약 6개월 전에 투여되는, 양태 1 내지 24 중의 어느 하나의 방법.
26. 벡터 및 하나 이상의 화학요법제의 수술후 용량이 순차적으로 투여되는, 양태 3 내지 25 중의 어느 하나의 방법.
27. 벡터의 수술후 용량이 하나 이상의 화학요법제 이전에 투여되는, 양태 26의 방법.
28. 벡터의 시동 용량이 약 1 x 1015개 미만, 약 1 x 1014개 미만, 약 5 x 1013개 미만, 약 4 x 1013개 미만, 약 3 x 1013개 미만, 약 2 x 1013개 미만, 약 1 x 1013개 미만, 약 9 x 1012개 미만, 약 8 x 1012개 미만, 약 7 x 1012개 미만, 약 6 x 1012개 미만, 약 5 x 1012개 미만, 약 4 x 1012개 미만, 약 3 x 1012개 미만, 약 2 x 1012개 미만, 약 1 x 1012개 미만, 약 9 x 1011개 미만, 약 8 x 1011개 미만, 약 7 x 1011개 미만, 약 6 x 1011개 미만, 약 5 x 1011개 미만, 약 4 x 1011개 미만, 약 3 x 1011개 미만, 약 2 x 1011개 미만, 약 1 x 1011개 미만, 약 9 x 1010개 미만, 약 8 x 1010개 미만, 약 7 x 1010개 미만, 약 6 x 1010개 미만, 약 5 x 1010개 미만, 약 4 x 1010개 미만, 약 3 x 1010개 미만, 약 2 x 1010개 미만, 또는 약 1 x 1010개 미만 바이러스 입자의 유효량으로 투여되는, 양태 1 내지 27 중의 어느 하나의 방법.
29. 벡터의 수술후 용량이 약 1 x 1015개 미만, 약 1 x 1014개 미만, 약 5 x 1013개 미만, 약 4 x 1013개 미만, 약 3 x 1013개 미만, 약 2 x 1013개 미만, 약 1 x 1013개 미만, 약 9 x 1012개 미만, 약 8 x 1012개 미만, 약 7 x 1012개 미만, 약 6 x 1012개 미만, 약 5 x 1012개 미만, 약 4 x 1012개 미만, 약 3 x 1012개 미만, 약 2 x 1012개 미만, 약 1 x 1012개 미만, 약 9 x 1011개 미만, 약 8 x 1011개 미만, 약 7 x 1011개 미만, 약 6 x 1011개 미만, 약 5 x 1011개 미만, 약 4 x 1011개 미만, 약 3 x 1011개 미만, 약 2 x 1011개 미만, 약 1 x 1011개 미만, 약 9 x 1010개 미만, 약 8 x 1010개 미만, 약 7 x 1010개 미만, 약 6 x 1010개 미만, 약 5 x 1010개 미만, 약 4 x 1010개 미만, 약 3 x 1010개 미만, 약 2 x 1010개 미만, 또는 약 1 x 1010개 미만 바이러스 입자의 유효량으로 투여되는, 양태 3 내지 28 중의 어느 하나의 방법.
30. 베바시주맙이 약 15 mg/kg, 14 mg/kg, 13 mg/kg, 12 mg/kg, 11 mg/kg, 10 mg/kg, 9 mg/kg, 8 mg/kg, 7 mg/kg, 6 mg/kg, 5 mg/kg, 4 mg/kg, 3 mg/kg, 2 mg/kg, 또는 1 mg/kg 미만의 유효량으로 투여되는, 양태 12 내지 29 중의 어느 하나의 방법.
31. 벡터의 수술후 용량이 3 x 1012 내지 3 x 1013개 바이러스 입자의 유효량으로 투여되고 베바시주맙이 5 mg/kg 내지 15 mg/kg의 유효량으로 투여되는, 양태 12 내지 29 중의 어느 하나의 방법.
32. 벡터의 수술후 용량이 반복적으로 투여되는, 양태 3 내지 31 중의 어느 하나의 방법.
33. 벡터의 시동 용량과 벡터의 수술후 용량이 동일한, 양태 3 내지 32 중의 어느 하나의 방법.
34. 벡터의 시동 용량과 벡터의 수술후 용량이 상이한, 양태 3 내지 32 중의 어느 하나의 방법.
35. 벡터의 시동 용량이 벡터의 수술후 용량보다 높은, 양태 3 내지 32 중의 어느 하나의 방법.
36. 벡터의 시동 용량이 벡터의 수술후 용량보다 낮은, 양태 3 내지 32 중의 어느 하나의 방법.
37. 벡터의 수술후 용량이 매일, 약 2일에 한 번, 약 3일에 한 번, 약 4일에 한 번, 약 5일에 한 번, 약 6일에 한 번, 약 7일에 한 번, 약 2주에 한 번, 약 3주에 한 번, 약 4주에 한 번, 약 5주에 한 번, 약 6주에 한 번, 약 7주에 한 번, 약 2개월에 한 번, 또는 약 6개월에 한 번 반복적으로 투여되는, 양태 32 내지 36 중의 어느 하나의 방법.
38. 베바시주맙이 반복적으로 투여되는, 양태 12 내지 37 중의 어느 하나의 방법.
39. 베바시주맙이 약 7일에 한 번, 약 2주에 한 번, 약 3주에 한 번, 약 4주에 한 번, 약 2개월에 한 번, 약 3개월에 한 번, 약 4개월에 한 번, 약 5개월에 한 번, 또는 약 6개월에 한 번 반복적으로 투여되는, 양태 38의 방법.
40. 벡터의 수술후 용량이 2개월마다 투여되고 베바시주맙이 2주마다 투여되는, 양태 12 내지 39 중의 어느 하나의 방법.
41. 종양이 육종, 흑색종, 암종, 백혈병, 호지킨병, 비호지킨 림프종, 다발성 골수종, 신경모세포종, 유방암, 난소암, 폐암(비소세포 폐암(NSCLC) 포함), 횡문근육종, 원발성 혈소판증가증, 원발성 거대글로불린혈증, 소세포 폐 종양, 원발성 뇌 종양, 신경교종(다형성 교모세포종(GBM) 및 재발성 GBM 포함), 위암, 결장암(전이성 결장직장암(mCRC) 포함), 간담도암, 악성 췌장 췌도종, 악성 카르시노이드, 방광암, 전암성 피부 병변, 고환암, 림프종, 갑상선암, 유두상 갑상선암, 신경모세포종, 신경내분비암, 식도암, 비뇨생식도암, 악성고칼슘혈증, 자궁경부암, 자궁내막암, 부신피질암, 전립선암, 뮐러암(Mullerian cancer), 난소암, 복막암, 나팔관암, 또는 자궁 유두상 장액 암종으로부터 유래되거나 이와 관련되는, 양태 1 내지 40 중의 어느 하나의 방법.
42. 육종이 연골육종, 섬유육종, 림프육종, 흑색육종, 점액육종, 골육종, 아베메시 육종(Abemethy's sarcoma), 지방성 육종(adipose sarcoma), 지방육종(liposarcoma), 포상 연부 육종, 법랑아육종, 포도상 육종, 녹색종 육종, 융모막 암종, 배아 육종, 빌름스 종양 육종, 자궁내막 육종, 간질성 육종, 유잉 육종, 근막 육종, 섬유모세포 육종, 거대 세포 육종, 과립구 육종, 호지킨 육종, 특발성 다발 색소 출혈 육종, B 세포의 면역모세포 육종, 림프종, T 세포의 면역모세포 육종, 젠센 육종(Jensen's sarcoma), 카포시 육종, 쿠퍼 세포 육종, 혈관육종, 백혈육종, 악성 간엽종 육종, 방골 육종, 망상내피 육종, 라우스 육종, 장액낭 육종(serocystic sarcoma), 활막 육종, 또는 말초혈관확장 육종(telangiectaltic sarcoma)인, 양태 41의 방법.
43. 흑색종이 말단-흑자 흑색종(acra-lentiginous melanoma), 멜라닌 결핍 흑색종(amelanotic melanoma), 양성 소아 흑색종, 클라우드만 흑색종(Cloudman's melanoma), S91 흑색종, 하딩-패시 흑색종(Harding-Passey melanoma), 소아 흑색종, 악성 흑색점 흑색종(lentigo maligna melanoma), 악성 흑색종, 전이성 흑색종, 결절 흑색종, 조갑하 흑색종, 또는 표재 확산 흑색종인, 양태 41의 방법.
44. 암종이 선방 암종(acinar carcinoma), 선방상 암종(acinous carcinoma), 선낭 암종(adenocystic carcinoma), 선모 낭포 암종(adenoid cystic carcinoma), 선암종(carcinoma adenomatosum), 부신 피질의 암종(carcinoma of adrenal cortex), 폐포 암종(alveolar carcinoma), 폐포 세포 암종(alveolar cell carcinoma), 기저 세포 암종(basal cell carcinoma), 기저세포 암종(carcinoma basocellulare), 기저세포양 암종(basaloid carcinoma), 기저편평 세포 암종(basosquamous cell carcinoma), 세기관지폐포 암종(bronchioalveolar carcinoma), 세기관지 암종(bronchiolar carcinoma), 기관지원성 암종(bronchogenic carcinoma), 대뇌모양 암종(cerebriform carcinoma), 담관세포 암종(cholangiocellular carcinoma), 융모 암종(chorionic carcinoma), 콜로이드질 암종(colloid carcinoma), 면포 암종(comedo carcinoma), 자궁체부 암종(corpus carcinoma), 사상엽 암종(cribriform carcinoma), 흉부 갑옷 암종(carcinoma en cuirasse), 피부 암종(carcinoma cutaneum), 원주 암종(cylindrical carcinoma), 원주 세포 암종(cylindrical cell carcinoma), 관 암종(duct carcinoma), 경성 암종(carcinoma durum), 배아 암종(embryonal carcinoma), 뇌질양 암종(encephaloid carcinoma), 표피양 암종(epiermoid carcinoma), 상피 아데노이드 암종(carcinoma epitheliale adenoides), 외장성 암종(exophytic carcinoma), 궤양 전 암종(carcinoma ex ulcere), 섬유성 암종(carcinoma fibrosum), 젤라틴양 암종(gelatiniform carcinoma), 젤라틴성 암종(gelatinous carcinoma), 거대 세포 암종(giant cell carcinoma), 거대세포 암종(carcinoma gigantocellular), 선암종(glandular carcinoma), 과립막 세포 암종(granulosa cell carcinoma), 모상 암종(hair-matrix carcinoma), 헤마토이드 암종(hematoid carcinoma), 간세포 암종(hepatocellular carcinoma), 허슬 세포 암종(Hurthle cell carcinoma), 유리질 암종(hyaline carcinoma), 부신모양 암종(hypernephroid carcinoma), 소아 배아 암종(infantile embryonal carcinoma), 제자리 암종(carcinoma in situ), 표피내 암종(intraepidermal carcinoma), 상피내 암종(intraepithelial carcinoma), 크롬페처 암종(Krompecher's carcinoma), 쿨키츠키-세포 암종(Kulchitzky-cell carcinoma), 대세포 암종(large-cell carcinoma), 렌즈핵 암종(lenticular carcinoma), 렌즈핵 암종(carcinoma lenticulare), 지방종 암종(lipomatous carcinoma), 림프상피성 암종(lymphoepithelial carcinoma), 수질 암종(carcinoma medullare), 수질 암종(medullary carcinoma), 흑색증 암종(melanotic carcinoma), 연성 암종(carcinoma molle), 점액 암종(mucinous carcinoma), 점액분비 암종(carcinoma muciparum), 점액세포 암종(carcinoma mucocellulare), 점막표피양 암종(mucoepidernoid carcinoma), 점액 암종(carcinoma mucosum), 점액성 암종(mucous carcinoma), 점액종 암종(carcinoma myxomatodes), 비인두 암종(naspharyngheal carcinoma), 연맥 세포 암종(oat cell carcinoma), 화골성 암종(carcinoma ossificans), 유골 암종(osteoid carcinoma), 유두상 암종(papillary carcinoma), 문맥주위 암종(periportal carcinoma), 침습전 암종(preinvasive carcinoma), 가시 세포 암종(prickle cell carcinoma), 수상 암종(pultaceous carcinoma), 신장의 신세포 암종(renal cell carcinoma of kidney), 저장 세포 암종(reserve cell carcinoma), 육종성 암종(carcinoma sarcomatodes), 슈나이더 암종(schneiderian carcinoma), 경성 암종(scirrhous carcinoma), 음낭 암종(carcinoma scroti), 인환 세포 암종(signet-ring cell carcinoma), 단순 암종(carcinoma simplex), 소세포 암종(small-cell carcinoma), 솔라노이드 암종(solanoid carcinoma), 구상 세포 암종(spheroidal cell carcinoma), 방추 세포 암종(spindle cell carcinoma), 해면질 암종(carcinoma spongiosum), 편평상피 암종(squamous carcinoma), 편평 세포 암종(squamous cell carcinoma), 스트링 암종(string carcinoma), 혈관확장성 암종(carcinoma telangiectaticum), 모세혈관확장성 암종(carcinoma telangiectodes), 이행 세포 암종(transitional cell carcinoma), 결절성 암종(carcinoma tuberosum), 결절모양 암종(tuberous carcinoma), 사마귀모양 암종(verrucous carcinoma), 또는 비플로솜 암종(carcinoma viflosum)인, 양태 41의 방법.
45. 종양이 교모세포종으로부터 유래되거나 이와 관련되는, 양태 1 내지 41 중의 어느 하나의 방법.
46. 교모세포종이 재발성 교모세포종인, 양태 45의 방법.
47. 벡터가 아데노바이러스 벡터인, 양태 1 내지 46 중의 어느 하나의 방법.
48. 아데노바이러스 벡터가 아데노바이러스 혈청형 5인, 양태 47의 방법.
49. 벡터가 서열 번호 19를 포함하거나, 이로 구성되거나, 이로 본질적으로 구성되는, 양태 1 내지 48 중의 어느 하나의 방법.
50. 벡터가 ECACC(European Collection of Cell Cultures) 수탁 번호 13021201을 갖는 단리된 바이러스인, 양태 1 내지 49 중의 어느 하나의 방법.
도 1은 Ad5-PPE-1-3X-Fas-c 벡터(예를 들어, VB-111)에 대한 신보강 요법(neoadjuvant therapy) 섭생을 보여준다. 그룹 A의 환자는 종양을 외과적으로 제거하기 21 ± 7일 전에 1 x 1013개 VP로 VB-111의 정맥내 주입을 제공받는다. 그룹 B와 C의 환자는 종양을 외과적으로 제거하기 21 ± 7일 전에 위약의 정맥내 주입을 제공받는다. 수술에서 회복된 후, 그룹 A와 B의 환자는 8주마다 1 x 1013개 VP로 VB-111의 정맥내 주입을 제공받고 그룹 C의 환자는 8주마다 표준 치료를 제공받는다. 질병 진행시, 그룹 A와 B의 환자는 또한 임상적으로 나타난다면 베바시주맙의 주입을 제공받을 수 있다. XRT, 방사선 요법; TMZ, 테모졸로미드; PFS, 무진행 생존율; OS, 전체 생존율; SOC, 표준 치료.
I. 정의
달리 정의되지 않는 한, 본원에서 사용된 모든 기술 용어 및 과학 용어는 본 발명이 속하는 기술 분야의 통상의 숙련가에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 상충하는 경우, 정의를 포함한 본 출원이 우선할 것이다. 문맥상 달리 요구되지 않는 한, 단수 용어는 복수를 포함하고 복수 용어는 단수를 포함한다. 본원에 언급된 모든 공보, 특허 및 기타 참고문헌은 각 개별 공보 또는 특허 출원이 참고로 포함되는 것으로 구체적이고 개별적으로 표시된 것처럼 모든 목적을 위해 전문이 참고로 포함된다.
본원에 기술된 것과 유사하거나 등가인 방법 및 재료가 본 개시내용의 실시 또는 시험에서 사용될 수 있지만, 적합한 방법 및 재료는 아래에 기술되어 있다. 재료, 방법 및 실시예는 예시일 뿐이며 제한하려는 것은 아니다. 본 발명의 다른 특징 및 이점은 상세한 설명 및 청구범위로부터 명백할 것이다.
본 발명을 추가로 정의하기 위해, 하기 용어 및 정의가 제공된다.
본 개시내용 전체에 걸쳐, 용어 "a" 또는 "an"은 그 실체 중 하나 이상을 지칭하며; 예를 들면, "폴리뉴클레오티드(a polynucleotide)"는 하나 이상의 폴리뉴클레오티드를 나타내는 것으로 이해된다. 이와 같이, 용어 "a" (또는 "an"), "하나 이상(one or more)" 및 "적어도 하나(at least one)"는 본원에서 상호교환가능하게 사용될 수 있다.
또한, "및/또는"은 본원에서 사용되는 경우 2개의 명시된 특징 또는 성분 각각이 다른 것과 함께 또는 다른 것 없이 구체적으로 개시된 것으로 간주되어야 한다. 따라서, 본원에서 "A 및/또는 B"와 같은 문구에서 사용된 용어 "및/또는"은 "A 및 B", "A 또는 B", "A"(단독) 및 "B"(단독)을 포함하도록 의도된다. 마찬가지로, "A, B, 및/또는 C"와 같은 문구에서 사용된 용어 "및/또는"은 다음의 측면 각각을 포함하도록 의도된다: A, B, 및 C; A, B 또는 C; A 또는 C; A 또는 B; B 또는 C; A 및 C; A 및 B; B 및 C; A(단독); B(단독); 및 C(단독).
측면이 "포함하는(comprising)"이라는 표현으로 본원에 기술되는 곳이면 어디든지 "구성되는(consisting of)" 및/또는 "본질적으로 구성되는(consisting essentially of)"과 관련하여 기술된 유사한 측면이 또한 제공되는 것으로 이해된다.
달리 정의되지 않는 한, 본원에서 사용된 모든 기술 용어 및 과학 용어는 본 개시내용이 관련되는 기술 분야의 통상의 숙련가에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 예를 들면, 문헌[the Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology, Juo, Pei-Show, 2nd ed., 2002, CRC Press; The Dictionary of Cell and Molecular Biology, 3rd ed., 1999, Academic Press; and the Oxford Dictionary Of Biochemistry And Molecular Biology, Revised, 2000, Oxford University Press]은 본 개시내용에서 사용된 용어들의 다수의 일반 사전을 숙련자에게 제공한다.
단위, 접두사 및 기호는 SI(Systeme International de Unites) 허용 형식으로 표시된다. 수치 범위에는 범위를 정의하는 숫자가 포함된다. 달리 표시되지 않는 한, 아미노산 서열은 아미노에서 카복시 방향으로 왼쪽에서 오른쪽으로 작성된다. 본원에 제공된 표제는 명세서를 전체적으로 참조하여 가질 수 있는 본 개시내용의 다양한 측면의 제한이 아니다. 따라서, 바로 아래에 정의된 용어들은 그 전체가 명세서를 참조하여 더욱 완전히 정의된다.
용어 "약(about)"은 대략(approximately), 대충(roughly), 주위(around), 또는 정도(in the regions of)를 의미하기 위해 본원에서 사용된다. 용어 "약"이 수치 범위와 함께 사용되는 경우, 이것은 제시된 수치 값의 위 및 아래 경계를 확장하여 해당 범위를 수정한다. 일반적으로, 용어 "약"은 명시된 값의 상하 수치 값을 10%의 변동까지 위 또는 아래로(더 높게 또는 더 낮게) 수정하기 위해 본원에서 사용된다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "항체"는 온전한 면역글로불린, 이의 항원-결합 단편, 또는 항원-결합 분자를 의미한다. 본 발명의 항체는 임의의 이소형 또는 클래스(예를 들어, M, D, G, E 및 A) 또는 임의의 하위클래스(예를 들어 G1-4, A1-2)일 수 있으며 카파(κ) 또는 람다(λ) 경쇄를 가질 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "유효량"은 원하는 결과를 달성하기 위해, 필요한 투여량 및 기간 동안, 효과적인 양을 지칭한다. 원하는 결과는, 예를 들면, 시험 관내 또는 생체내에서 항종양 반응 또는 신생-혈관형성 또는 혈관신생의 감소 또는 억제를 유도하는 것일 수 있다. 유효량은 신생-혈관형성 또는 혈관신생의 "치료" 또는 완전한 제거일 필요는 없다. 일부 양태에서, 유효량은 종양의 크기 또는 체적을 감소시킬 수 있다. 또 다른 양태에서, 유효량은 암의 하나 이상의 증상을 감소 또는 개선할 수 있다.
용어 "폴리뉴클레오티드" 또는 "뉴클레오티드"는 단일 핵산 뿐만 아니라 복수의 핵산을 포함하는 것으로 의도되며, 단리된 핵산 분자 또는 작제물, 예를 들어 메신저 RNA(mRNA) 또는 플라스미드 DNA(pDNA)를 지칭한다. 특정 양태에서, 폴리뉴클레오티드는 통상적인 포스포디에스테르 결합 또는 비-통상적 결합 (예를 들어, 펩티드 핵산(PNA)에서 발견되는 것과 같은 아미드 결합)을 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "폴리뉴클레오티드", "뉴클레오티드" 또는 "핵산"은 상호교환적으로 사용될 수 있고, 비번역된 5' 및 3' 서열, 코딩 서열 뿐만 아니라 핵산 서열의 단편, 에피토프, 도메인 및 변이체를 포함한 전장 cDNA 서열의 뉴클레오티드 서열을 함유할 수 있다. 폴리뉴클레오티드는 비변형된 RNA 또는 DNA 또는 변형된 RNA 또는 DNA일 수 있는 임의의 폴리리보뉴클레오티드 또는 폴리데옥시리보뉴클레오티드로 구성될 수 있다. 예를 들면, 폴리뉴클레오티드는 단일- 및 이중-가닥 DNA, 단일- 및 이중-가닥 영역의 혼합물인 DNA, 단일- 및 이중-가닥 RNA, 및 단일- 및 이중-가닥 영역의 혼합물인 RNA, 단일-가닥 또는 보다 전형적으로 이중-가닥 또는 단일- 및 이중-가닥 영역의 혼합물일 수 있는 DNA 및 RNA를 포함하는 혼성 분자로 구성될 수 있다. 또한, 폴리뉴클레오티드는 RNA 또는 DNA 또는 RNA와 DNA 둘 다를 포함하는 삼중-가닥 영역으로 구성될 수 있다. 폴리뉴클레오티드는 또한 하나 이상의 변형된 염기 또는 안정성을 위해 또는 다른 이유로 변형된 DNA 또는 RNA 백본을 함유할 수 있다. "변형된" 염기는, 예를 들면, 트리틸화 염기 및 특이 염기, 예를 들어 이노신을 포함한다. DNA와 RNA에 다양한 변형이 이루어질 수 있다; 따라서 "폴리뉴클레오티드"는 화학적으로, 효소적으로 또는 대사적으로 변형된 형태를 포함한다.
본 개시내용에서, 폴리펩티드는 펩티드 결합 또는 변형된 펩티드 결합에 의해 서로 연결된 아미노산, 즉, 펩티드 등배체로 구성될 수 있으며, 20개 유전자-암호화된 아미노산(예를 들어, 비-천연 발생 아미노산) 이외의 아미노산을 함유할 수 있다. 본 개시내용의 폴리펩티드는 번역후 처리와 같은 자연적 과정에 의해, 또는 당업계에 널리 공지된 화학적 변형 기술에 의해 변형될 수 있다. 이러한 변형은 기본 텍스트에 및 더욱 상세한 논문 뿐만 아니라 방대한 연구 문헌에 잘 기술되어 있다. 변형은 펩티드 백본, 아미노산 측쇄 및 아미노 또는 카복실 말단을 포함하여 폴리펩티드의 어느 곳에서나 발생할 수 있다. 동일한 유형의 변형이 주어진 폴리펩티드의 여러 부위에서 동일하거나 다양한 정도로 존재할 수 있는 것으로 인지될 것이다. 또한, 주어진 폴리펩티드는 많은 유형의 변형을 함유할 수 있다. 폴리펩티드는, 예를 들면, 유비퀴틴화의 결과로 분지될 수 있으며, 이들은 분지화가 있거나 없는 고리형일 수 있다. 고리형, 분지형 및 분지 고리형 폴리펩티드는 번역후 자연 과정에서 생성되거나 합성 방법에 의해 만들어질 수 있다. 변형은 아세틸화, 아실화, ADP-리보실화, 아미드화, 플라빈의 공유 부착, 헴 잔기의 공유 부착, 뉴클레오티드 또는 뉴클레오티드 유도체의 공유 부착, 지질 또는 지질 유도체의 공유 부착, 포스포티딜이노시톨의 공유 부착, 가교결합, 고리화, 이황화 결합 형성, 탈메틸화, 공유 가교결합 형성, 시스테인 형성, 피로글루타메이트 형성, 포르밀화, 감마-카복실화, 글리코실화, GPI 앵커 형성, 하이드록실화, 요오드화, 메틸화, 미리스토일화, 산화, 페길화, 단백질 분해 처리, 인산화, 프레닐화, 라세미화, 셀레노일화, 황산화, 아르기닐화와 같은 단백질에 아미노산의 전달-RNA 매개된 추가, 및 유비퀴틴화를 포함한다. (예를 들어, 문헌 참조; Proteins - Structure And Molecular Properties, 2nd Ed., T.E. Creighton, W.H. Freeman and Company, New York (1993); Posttranslational Covalent Modification of Proteins, B.C. Johnson, Ed., Academic Press, New York, pgs. 1-12 (1983); Seifter et al., Meth Enzymol 182:626-646 (1990); Rattan et al., Ann NY Acad Sci 663:48-62 (1992).)
용어 "단편", "변이체", "유도체" 및 "유사체"는, 본 개시내용의 임의의 폴리펩티드 또는 폴리뉴클레오티드를 언급할 때, 적어도 일부 활성, 즉 폴리펩티드 또는 폴리뉴클레오티드의 임의의 자연-발생 기능으로서 기능하는 능력을 보유하는 임의의 폴리펩티드 또는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 예를 들면, 종양 괴사 인자 수용체 1(TNFR1)의 "단편", "변이체", "유도체" 및 "유사체"는 자연 발생 전장 TNFR1의 일부 활성, 예를 들어, TNFR1 리간드, 즉, TNF-알파 또는 림포톡신에 결합하는 능력을 갖는다. 또 다른 예에서, Fas 폴리펩티드의 "단편", "변이체", "유도체" 및 "유사체"는 자연 발생 전장 Fas 폴리펩티드의 일부 활성, 예를 들어 아폽토시스를 유도하는 능력을 갖는다. 또 다른 예에서, 내피 세포-특이 프로모터의 "단편", "변이체", "유도체" 및 "유사체"는 프로모터에 작동가능하게 연결된 유전자의 내피 세포-특이 발현을 유도할 수 있다. TNFR, Fas 폴리펩티드 및 내피 세포-특이 프로모터의 다양한 단편, 변이체, 유사체, 또는 유도체의 추가의 비제한적 예는 아래에 기술되어 있다.
2개의 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드 서열 사이의 "서열 동일성 퍼센트"라는 용어는 두 서열의 최적 정렬을 위해 도입되어야 하는 추가 또는 결실(즉, 갭)을 고려하여 비교 창에 걸쳐 서열이 공유하는 동일한 일치 위치의 수를 지칭한다. 일치된 위치는 동일한 뉴클레오티드 또는 아미노산이 표적 및 참조 서열 모두에 제공되는 임의의 위치이다. 갭은 뉴클레오티드 또는 아미노산이 아니기 때문에 표적 서열에 제공된 갭은 계산되지 않는다. 마찬가지로, 참조 서열로부터의 뉴클레오티드 또는 아미노산이 아닌 표적 서열 뉴클레오티드 또는 아미노산은 계산되기 때문에 참조 서열에 제공된 갭은 계산되지 않는다.
서열 동일성의 퍼센트는 동일한 아미노산 잔기 또는 핵산 염기가 두 서열 모두에서 발생하는 위치의 수를 결정하여 일치된 위치의 수를 산출하고, 비교 창에서 일치된 위치의 수를 전체 위치의 수로 나누고, 결과에 100을 곱하여 서열 동일성의 퍼센트를 산출함으로써 계산된다. 두 서열 사이의 서열 비교 및 서열 동일성 퍼센트 결정은 온라인 사용 및 다운로드 둘 다를 위해 쉽게 이용 가능한 소프트웨어를 사용하여 수행할 수 있다. 적합한 소프트웨어 프로그램이 다양한 소스로부터 및 단백질 및 뉴클레오티드 서열 둘 다의 정렬을 위해 이용 가능하다. 서열 동일성 퍼센트를 결정하기 위한 한 가지 적합한 프로그램은 미국 정부의 국립 생명공학 정보 센터 BLAST 웹 사이트(blast.ncbi.nlm.nih.gov)로부터 이용 가능한 BLAST 프로그램 제품군의 일부인 bl2seq이다. Bl2seq는 BLASTN 또는 BLASTP 알고리즘을 사용하여 두 서열 간의 비교를 수행한다. BLASTN은 핵산 서열을 비교하는데 사용되는 반면 BLASTP는 아미노산 서열을 비교하는데 사용된다. 다른 적합한 프로그램은, 예를 들어, EMBOSS 생물정보학 프로그램 제품군의 일부이고 www.ebi.ac.uk/Tools/psa에서 유럽 생물정보학 연구소(EBI)에서도 이용 가능한, Needle, Stretcher, Water, 또는 Matcher이다.
폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드 참조 서열과 정렬되는 단일 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드 표적 서열 내의 상이한 영역은 각각 고유한 서열 동일성 퍼센트를 가질 수 있다. 서열 동일성 퍼센트 값은 10분의 1에 가깝게 반올림됨을 주지한다. 예를 들면, 80.11, 80.12, 80.13, 및 80.14는 80.1로 반내림되는데 반해 80.15, 80.16, 80.17, 80.18, 및 80.19는 80.2로 반올림된다. 또한 길이 값은 항상 정수임을 주지한다.
당업계의 숙련가는 서열 동일성 퍼센트의 계산을 위한 서열 정렬의 생성이 1차 서열 데이터에 의해 독점적으로 유도되는 이원 서열-서열 비교에 제한되지 않는다는 것을 인지할 것이다. 서열 정렬은 다중 서열 정렬로부터 유도될 수 있다. 다중 서열 정렬을 생성하는 적합한 프로그램 중 하나는 www.clustal.org로부터 이용 가능한 ClustalW2이다. 또 다른 적합한 프로그램은 www.drive5.com/muscle/로부터 이용 가능한 MUSCLE이다. ClustalW2 및 MUSCLE은 대안적으로 예를 들어 EBI로부터 이용 가능하다.
또한, 서열 데이터를 구조 데이터(예를 들어 결정학적 단백질 구조), 기능 데이터(예를 들어 돌연변이의 위치) 또는 계통 발생 데이터와 같은 이질적 소스로부터의 데이터와 통합함으로써 서열 정렬이 생성될 수 있음을 인지할 것이다. 다중 서열 정렬을 생성하기 위해 이질적 데이터를 통합하는 적절한 프로그램은 www.tcoffee.org에서 이용 가능하고 대안적으로 예를 들어 EBI로부터 이용 가능한 T-Coffee이다. 또한 계산된 서열 동일성 퍼센트에 사용된 최종 정렬이 자동 또는 수동으로 큐레이팅될 수 있음을 인지할 것이다.
본원에서 사용되는 용어 "연결된(linked)", "융합된(fused)", "융합(fusion)", "키메라성(chimeric)" 및 "키메라(chimera)"는 상호교환가능하게 사용된다. 이러한 용어는 화학적 접합 또는 재조합 수단을 포함한 모든 수단에 의해 2개 이상의 요소 또는 성분을 함께 결합하는 것을 지칭한다. "프레임내 융합(in-frame fusion)"은 원래 ORF의 올바른 판독 프레임을 유지하는 방식으로 연속적인 더 긴 ORF를 형성하기 위해 2개 이상의 개방 판독 프레임(ORF)을 결합하는 것을 지칭한다. 따라서, 생성된 재조합 융합체 또는 키메라 단백질은 원래 ORF에 의해 암호화된 폴리펩티드에 해당하는 2개 이상의 세그먼트를 포함하는 단일 단백질이다(이 세그먼트는 자연에서는 일반적으로 그렇게 결합되지 않음). 따라서 판독 프레임이 융합된 세그먼트 전체에 걸쳐 연속적으로 만들어지지만, 세그먼트는 예를 들면 프레임내 링커 서열에 의해 물리적으로 또는 공간적으로 분리될 수 있다.
용어 "이종 뉴클레오티드 서열"은 폴리뉴클레오티드가 그것과 비교되는 실체의 폴리뉴클레오티드와는 다른 실체로부터 유래됨을 의미한다. 예를 들어, 이종 폴리뉴클레오티드는 합성일 수 있거나, 상이한 종, 개체의 상이한 세포 유형, 또는 별개의 개체의 동일하거나 상이한 유형의 세포로부터 유래될 수 있다. 하나의 측면에서, 이종 뉴클레오티드 서열은 융합 폴리뉴클레오티드를 생성하기 위해 다른 폴리뉴클레오티드에 작동가능하게 연결된 폴리뉴클레오티드일 수 있다. 일부 측면에서, 이종 뉴클레오티드 서열은 폴리펩티드를 암호화할 수 있다. 예를 들면, 이종 뉴클레오티드 서열은 폴리펩티드를 암호화하는 유전자에 작동가능하게 연결된 프로모터 요소일 수 있다. 이종 뉴클레오티드 서열은 또한 폴리펩티드를 암호화하는 유전자에 작동가능하게 연결된, 인핸서, 사일런서(silencer) 또는 전사 인자와 같은 다른 시스-조절 요소를 포함할 수 있다. 또 다른 측면에서, 이종 뉴클레오티드 서열은 폴리펩티드를 암호화하지 않는다.
본원에서 사용되는 용어 "발현"은 유전자가 생화학 물질, 예를 들면, RNA 또는 폴리펩티드를 생성하는 과정을 지칭한다. 이 과정은 일과성 발현 및 안정 발현 둘 다 뿐만 아니라 유전자 녹다운을 제한 없이 포함하는 세포 내 유전자의 기능적 존재의 모든 징후를 포함한다. 이것은 유전자의 메신저 RNA(mRNA), 전달 RNA(tRNA), 작은 헤어핀 RNA(shRNA), 작은 간섭 RNA(siRNA) 또는 기타 RNA 산물로의 전사 및 이러한 mRNA의 폴리펩티드(들)로의 번역을 제한 없이 포함한다. 원하는 최종 생성물이 생화학 물질인 경우, 발현은 해당 생화학 물질 및 임의의 전구체의 생성을 포함한다.
본원에서 사용되는 용어 "상보성 결정 영역"(CDR)은 항원에 대한 결합을 담당하는 항체의 아미노산 잔기를 지칭한다. 항체의 CDR 영역은 항체의 중쇄 및 경쇄 둘 다의 초가변 영역 내에서 발견된다. 전장 항체는 중쇄 가변 도메인에 3개의 CDR 영역 및 경쇄 가변 도메인에 3개의 CDR 영역을 포함한다.
본원에서 사용되는 용어 "외과적 제거"는 대상체에서 종양 부담을 완화할 목적으로 대상체로부터 종양 또는 이의 일부를 외과적으로 제거하는 것을 지칭한다. 종양의 외과적 제거는 전체 또는 부분 종양 절제일 수 있다. 종양 또는 이의 일부의 외과적 제거는 당업계에서 허용되는 표준 의료 절차를 사용하여 수행될 수 있다. 본 개시내용에서, 종양 또는 이의 일부의 "외과적 제거"는 생검 또는 진단 목적을 위한 종양 조직의 제거를 포함하지 않는다.
본원에서 사용되는 용어 "시동 용량"은 종양 또는 이의 일부를 외과적으로 제거하기 전에 종양을 가진 대상체에게 벡터를 투여하는 것을 지칭한다. 본원에서 사용되는 용어 "수술후 용량"은 대상체가 종양 또는 이의 일부를 외과적으로 제거한 후 대상체에게 벡터를 투여하는 것을 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "항종양 반응"은 종양의 존재에 대한 대상체의 신체 반응을 지칭한다. 예를 들면, 일부 측면에서 본 개시내용의 항종양 반응은 항종양 면역 반응일 수 있다. 일부 측면에서, 항종양 면역 반응은 종양 베드 내 종양-침윤 CD8+ 림프구의 존재를 특징으로 한다. 일부 측면에서, 항종양 면역 반응은 대상체의 특정 사이토카인 프로필을 특징으로 한다. 일부 측면에서, 항종양 면역 반응은 종양 마커 또는 종양 조직에 대해 지시된 대상체에서의 순환하는 항종양 항체의 존재를 특징으로 한다.
본원에서 사용되는 용어 "반복적으로 투여되는"은 정의된 고정 간격으로 반복적으로 치료제를 투여하는 것을 지칭한다. 각 투여 사이의 시간 간격은 반복 투여 과정 동안 변경될 수 있으며 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 7주, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 6개월, 7개월, 8개월, 9개월, 10개월, 11개월, 1년 또는 그 이상으로 길 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "병용 요법"은 질병 또는 병태를 치료하기 위한 둘 이상의 치료 방식의 투여를 지칭한다. 본 개시내용의 일부 측면에서, 병용 요법은 이를 필요로 하는 대상체에게 벡터 및 하나 이상의 화학요법제를 투여하는 것을 지칭한다. 일부 양태에서, 병용 요법은 벡터를 투여하기 전에 하나 이상의 화학요법제를 투여하는 것을 포함한다. 또 다른 양태에서, 병용 요법은 하나 이상의 화학요법제를 벡터 투여와 동시에 투여하는 것을 포함한다. 또 다른 양태에서, 병용 요법은 벡터를 투여한 후 하나 이상의 화학요법제를 투여하는 것을 포함한다. 일부 측면에서, 벡터 및 하나 이상의 화학요법제는 종양 또는 이의 일부를 외과적으로 제거한 후 종양을 갖는 대상체에게 병용 요법으로 투여된다. 일부 측면에서, 하나 이상의 화학요법제는 VEG 길항제이다.
본원에서 사용되는 용어 "아데노바이러스"는 아데노바이러스과(Adenoviridae) 계열의 인간 아데노바이러스를 지칭한다. 본 개시내용의 아데노바이러스는, 예를 들면, 종 A(혈청형 12, 18 및 31), 종 B(혈청형 3, 7, 11, 14, 16, 21, 34, 35, 50, 및 55), 종 C(혈청형 1, 2, 5, 6 및 57), 종 D(8, 9, 10, 13, 15, 17, 19, 20, 22-30, 32, 33, 36-39, 42-49, 51, 53, 54, 및 56), 종 E(혈청형 4), 종 F(혈청형 40 및 41), 또는 종 G(혈청형 52)를 포함하는 7개 종 및 57개 혈청형 중 어느 하나로부터의 아데노바이러스를 포함할 수 있다. 본원에서 사용되는 용어 "아데노바이러스 벡터"는 천연 야생형 바이러스와 다르게 행동하도록 유전적으로 변형된 아데노바이러스를 지칭한다. 예를 들면, 아데노바이러스 벡터는 특정 패키징 세포주 외부에서 복제할 수 없도록 변형될 수 있다. 일부 측면에서, 아데노바이러스 벡터는 비-아데노바이러스 단백질을 암호화하는 하나 이상의 유전자를 지니도록 유전적으로 변형된다.
II. 본 개시내용의 치료 방법
본 개시내용은 Fas 키메라 단백질을 발현하는 벡터의 시동 용량을 대상체에게 투여함을 포함하여, 종양을 갖는 대상체에서 항종양 반응을 유도하거나 개선하는 방법을 제공하며, 여기서 벡터의 시동 용량은 종양 또는 이의 일부를 외과적으로 제거하기 전에 대상체에게 투여된다. 특정 측면에서, 항종양 반응은 종양 또는 이의 일부의 외과적 제거 전에 벡터의 시동 용량을 제공받지 않은 대상체 또는 벡터를 투여받지 않은 대상체에서의 항종양 반응과 비교하여 투여 후 유도되거나 개선된다. 일부 측면에서, 항종양 반응은 항종양 면역 반응이다.
본 개시내용은 또한 Fas 키메라 단백질을 발현하는 벡터의 시동 용량을 대상체에게 투여함을 포함하여, 종양을 갖는 대상체에서 종양 침윤 림프구(TIL) 밀도를 유도하거나 개선하는 방법을 제공하며, 여기서 벡터의 시동 용량은 종양 또는 이의 일부를 외과적으로 제거하기 전에 대상체에게 투여된다. 특정 측면에서, 종양 부위의 TIL 밀도는 종양 또는 이의 일부의 외과적 제거 전에 벡터의 시동 용량을 제공받지 않은 대상체 또는 벡터를 투여받지 않은 대상체의 종양에서의 TIL 밀도와 비교하여 투여 후 유도되거나 개선된다.
본 개시내용은 또한 Fas 키메라 단백질을 발현하는 벡터의 시동 용량을 대상체에게 투여함을 포함하여, 종양을 갖는 대상체에서 혈관신생을 억제하거나 감소시키는 방법을 제공하며, 여기서 벡터의 시동 용량은 종양 또는 이의 일부를 외과적으로 제거하기 전에 투여된다. 특정 측면에서, 혈관신생은 종양 또는 이의 일부의 외과적 제거 전에 벡터의 시동 용량을 제공받지 않은 대상체 또는 벡터를 투여받지 않은 대상체에서의 혈관신생과 비교하여 투여 후 억제되거나 감소된다.
본 개시내용의 일부 측면은 Fas 키메라 단백질을 발현하는 벡터의 시동 용량을 대상체에게 투여함을 포함하여, 이를 필요로 하는 대상체의 종양에서 내피 세포의 아폽토시스를 유도하는 방법에 관한 것이며, 여기서 벡터의 시동 용량은 종양 또는 이의 일부를 외과적으로 제거하기 전에 투여된다. 특정 측면에서, 대상체의 종양에서 내피 세포의 아폽토시스는 종양 또는 이의 일부의 외과적 제거 전에 벡터의 시동 용량을 제공받지 않은 대상체 또는 벡터를 투여받지 않은 대상체의 종양에서의 내피 세포의 아폽토시스와 비교하여 증가되거나 향상된다.
본 개시내용은 또한 Fas 키메라 단백질을 발현하는 벡터의 시동 용량을 대상체에게 투여함을 포함하여, 이를 필요로 하는 대상체에서 종양의 크기를 감소시키거나 억제하는 방법을 제공하며, 여기서 벡터의 시동 용량은 종양 또는 이의 일부를 외과적으로 제거하기 전에 투여된다. 특정 측면에서, 종양의 크기는 종양 또는 이의 일부의 외과적 제거 전에 벡터의 시동 용량을 제공받지 않은 대상체 또는 벡터를 투여받지 않은 대상체에서의 종양의 크기와 비교하여 투여 후 감소되거나 억제된다.
본 개시내용은 또한 Fas 키메라 단백질을 발현하는 벡터의 시동 용량을 대상체에게 투여함을 포함하여, 대상체에서 종양과 관련된 질병 또는 병태를 치료하는 방법을 포함하며, 여기서 벡터의 시동 용량은 종양 또는 이의 일부를 외과적으로 제거하기 전에 투여된다. 특정 측면에서, 질병 또는 병태는 종양 또는 이의 일부의 외과적 제거 전에 벡터의 시동 용량을 제공받지 않은 대상체 또는 벡터를 투여받지 않은 대상체에서의 질병 또는 병태와 비교하여 투여 후 치료된다.
종양 성장은 자기 공명 영상(MRI) 스캔, 기능적 MRI(fMRI) 스캔, 컴퓨터 단층촬영(CT) 스캔, 또는 양전자 방출 단층촬영(PET) 스캔을 포함하지만 이에 제한되지 않는 당업계에 공지된 기술에 의해 측정될 수 있다. 특정 측면에서, 종양의 성장은 MRI로 측정된다. 일부 측면에서, 대상체의 종양은 벡터로 치료하는 동안 발생한 재발성 종양이다. 또 다른 양태에서, 대상체의 종양은 벡터로 치료하는 동안 발생한 전이성 종양이다.
용어 "대상체" 또는 "개체" 또는 "동물" 또는 "환자" 또는 "포유동물"은 항종양 반응을 갖거나 가질 것으로 예상되는 임의의 대상체, 특히 포유동물 대상체를 의미한다. 일부 측면에서, 대상체는 인간이다. 일부 측면에서, 대상체는 암 환자이다.
하나의 측면에서, 대상체는 개선되거나 유도된 항종양 반응을 필요로 한다. 특정 측면에서, 개선되거나 유도된 항종양 반응을 필요로 하는 대상체는 종양 또는 이의 전이를 갖고, 여기서 본 개시내용의 방법은 종양 또는 이의 전이를 치료하거나, 감소시키거나 또는 크기를 줄인다. 또 다른 측면에서, 개선되거나 유도된 항종양 반응을 필요로 하는 대상체는 혈관신생 억제가 필요하며, 여기서 본 개시내용의 방법은 혈관신생을 치료, 감소, 예방 또는 저하시킨다. 또 다른 측면에서, 개선되거나 유도된 항종양 반응을 필요로 하는 대상체는 암을 갖고, 여기서 본 개시내용의 방법은 암을 치료한다.
하나의 측면에서, 대상체는 대상체에서 종양의 크기 감소 또는 억제를 필요로 한다. 특정 측면에서, 종양의 크기 감소 또는 억제를 필요로 하는 대상체는 종양 또는 이의 전이를 갖고, 여기서 본 개시내용의 방법은 종양 또는 이의 전이를 치료하거나, 감소시키거나 크기를 줄인다. 또 다른 측면에서, 종양의 크기 감소 또는 억제를 필요로 하는 대상체는 혈관신생 억제가 필요하고, 여기서 본 개시내용의 방법은 혈관신생을 치료, 감소, 예방 또는 저하시킨다. 또 다른 측면에서, 종양의 크기 감소 또는 억제를 필요로 하는 대상체는 암을 갖고, 여기서 본 개시내용의 방법은 암을 치료한다.
하나의 측면에서, 대상체는 혈관신생 억제 또는 감소를 필요로 한다. 특정 측면에서, 혈관신생 억제 또는 감소를 필요로 하는 대상체는 종양 또는 이의 전이를 갖고, 여기서 본 개시내용의 방법은 종양 또는 이의 전이를 치료하거나, 감소시키거나 크기를 줄인다. 또 다른 측면에서, 혈관신생 억제 또는 감소를 필요로 하는 대상체는 종양 또는 이의 전이를 갖고, 여기서 본 개시내용의 방법은 혈관신생을 치료, 감소, 예방 또는 저하시킨다. 또 다른 측면에서, 혈관신생 억제 또는 감소를 필요로 하는 대상체는 암을 갖고, 여기서 본 개시내용의 방법은 암을 치료한다.
하나의 측면에서, 대상체는 종양에서 내피 세포의 아폽토시스 유도를 필요로 한다. 특정 측면에서, 종양에서 내피 세포의 아폽토시스 유도를 필요로 하는 대상체는 종양 또는 이의 전이를 갖고, 여기서 본 개시내용의 방법은 종양 또는 이의 전이를 치료하거나, 감소시키거나 크기를 줄인다. 또 다른 측면에서, 종양에서 내피 세포의 아폽토시스 유도를 필요로 하는 대상체는 혈관신생 억제가 필요하고, 여기서 본 개시내용의 방법은 혈관신생을 치료, 감소, 예방 또는 저하시킨다. 또 다른 측면에서, 종양에서 내피 세포의 아폽토시스 유도를 필요로 하는 대상체는 암을 갖고, 여기서 본 개시내용의 방법은 암을 치료한다.
하나의 측면에서, 대상체는 종양과 관련된 질병 또는 병태의 치료를 필요로 한다. 특정 측면에서, 종양과 관련된 질병 또는 병태의 치료를 필요로 하는 대상체는 종양 또는 이의 전이를 갖고, 여기서 본 개시내용의 방법은 종양 또는 이의 전이를 치료하거나, 감소시키거나 크기를 줄인다. 또 다른 측면에서, 종양과 관련된 질병 또는 병태의 치료를 필요로 하는 대상체는 혈관신생 억제가 필요하고, 여기서 본 개시내용의 방법은 혈관신생을 치료, 감소, 예방 또는 저하시킨다. 또 다른 측면에서, 종양과 관련된 질병 또는 병태의 치료를 필요로 하는 대상체는 암을 갖고, 여기서 본 개시내용의 방법은 암을 치료한다.
A. 시동 용량
본 개시내용의 방법에서, 벡터의 시동 용량은 종양 또는 이의 일부를 외과적으로 제거하기 전에 상이한 시간에 투여될 수 있다. 일부 측면에서, 벡터의 시동 용량은 종양 또는 이의 일부를 외과적으로 제거하기 약 7일, 약 8일, 약 9일, 약 10일, 약 11일, 약 12일, 약 13일, 약 2주, 약 15일, 약 16일, 약 17일, 약 18일, 약 19일, 약 20일, 약 3주, 약 22일, 약 23일, 약 24일, 약 25일, 약 26일, 약 27일, 약 4주, 약 1개월, 약 5주, 약 6주, 약 7주, 약 8주, 약 2개월, 약 3개월, 약 4개월, 약 5개월, 또는 약 6개월 전에 투여된다. 일부 측면에서, 벡터의 시동 용량은 종양 또는 이의 일부를 외과적으로 제거하기 약 9일, 약 10일, 약 11일, 약 12일, 약 13일, 약 14일, 약 15일, 약 16일, 약 17일, 약 18일, 또는 약 19일 전에 투여된다. 일부 측면에서, 벡터의 시동 용량은 종양 또는 이의 일부를 외과적으로 제거하기 약 9일 내지 약 19일, 약 10일 내지 약 18일, 약 11일 내지 약 17일, 약 12일 내지 약 16일, 또는 약 13일 내지 약 15일 전에 투여된다. 특정 측면에서, 벡터의 시동 용량은 종양 또는 이의 일부를 외과적으로 제거하기 약 14일 전에 투여된다.
본 개시내용의 일부로서 투여되는 벡터의 용량은 바이러스 입자(VP)로 측정될 수 있다. 벡터의 시동 용량의 유효량은 약 1 x 1016, 1 x 1015, 1 x 1014, 5 x 1013, 4 x 1013, 3 x 1013, 2 x 1013, 1 x 1013, 9 x 1012, 8 x 1012, 7 x 1012, 6 x 1012, 5 x 1012, 4 x 1012, 3 x 1012, 2 x 1012, 1 x 1012, 9 x 1011, 8 x 1011, 7 x 1011, 6 x 1011, 5 x 1011, 4 x 1011, 3 x 1011, 2 x 1011, 1 x 1011, 9 x 1010, 8 x 1010, 7 x 1010, 6 x 1010, 5 x 1010, 4 x 1010, 3 x 1010, 2 x 1010, 또는 1 x 1010개 이하 바이러스 입자를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 또 다른 양태에서, 벡터의 시동 용량의 유효량은 약 1 x 1010 내지 약 1 x 1016, 약 1 x 1011 내지 약 1 x 1015, 약 1 x 1011 내지 약 1 x 1016, 약 1 x 1012 내지 약 1 x 1015, 약 1 x 1012 내지 약 1 x 1016, 약 1 x 1012 내지 약 1 x 1014, 약 5 x 1012 내지 약 1 x 1016, 약 5 x 1012 내지 약 1 x 1015, 약 5 x 1012 내지 약 1 x 1014, 약 1 x 1012 내지 약 1 x 1013, 약 1 x 1013 내지 약 1 x 1014개 바이러스 입자이다.
일부 측면에서, 벡터의 시동 용량은 적어도 약 1 x 1011개 바이러스 입자의 유효량으로 투여된다. 일부 측면에서, 벡터의 시동 용량은 적어도 약 1 x 1012개 바이러스 입자의 유효량으로 투여된다. 일부 측면에서, 벡터의 시동 용량은 적어도 약 1 x 1013개 바이러스 입자의 유효량으로 투여된다. 일부 측면에서, 벡터의 시동 용량은 적어도 약 3 x 1013개 바이러스 입자의 유효량으로 투여된다. 일부 측면에서, 벡터의 시동 용량은 적어도 약 1 x 1014개 바이러스 입자의 유효량으로 투여된다. 일부 측면에서, 벡터의 시동 용량은 적어도 약 1 x 1015개 바이러스 입자의 유효량으로 투여된다. 또 다른 양태에서, 벡터의 시동 용량은 적어도 약 1 x 107, 1 x 108, 1 x 109, 1 x 1010, 또는 5 x 1010개 바이러스 입자의 유효량으로 투여된다.
B. 종양 또는 이의 일부의 외과적 제거
본 개시내용에서, 종양 또는 이의 일부의 외과적 제거는 대상체의 종양 부담을 감소시킨다. 외과적 제거는 종양의 전체 또는 부분 절제일 수 있다. 일부 측면에서, 종양의 외과적 제거는 종양의 부분 절제이다. 일부 측면에서, 종양의 외과적 제거는 종양의 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 또는 약 99%를 제거한다. 본 개시내용의 일부 측면에서, 종양의 외과적 제거는 종양의 전체 절제이며, 여기서 종양의 100%가 제거된다.
C. 수술후 용량
본 개시내용의 일부 측면에서, 대상체는 종양 또는 이의 일부를 외과적으로 제거한 후 벡터의 수술후 용량을 추가로 제공받는다. 벡터의 수술후 용량은 대상체가 종양 또는 이의 일부의 외과적 제거로부터 회복된 후에 투여된다. 일부 측면에서, 벡터의 수술후 용량은 종양 또는 이의 일부를 외과적으로 제거한지 약 7일, 약 8일, 약 9일, 약 10일, 약 11일, 약 12일, 약 13일, 약 14일, 약 2주, 약 15일, 약 16일, 약 17일, 약 18일, 약 19일, 약 20일, 약 21일, 약 3주, 약 22일, 약 23일, 약 24일, 약 25일, 약 26일, 약 27일, 약 28일, 약 4주, 약 29일, 약 30일, 약 1개월, 약 31일, 약 32일, 약 33일, 약 34일, 약 35일, 약 5주, 약 36 일, 약 37일, 약 38일, 약 39일, 약 40일, 약 41일, 약 42일, 약 6주, 약 7주, 약 8주, 약 2개월, 약 3개월, 약 4개월, 약 5개월, 또는 약 6개월 후에 투여된다. 일부 측면에서, 벡터의 수술후 용량은 종양 또는 이의 일부를 외과적으로 제거한지 약 14일 내지 약 35일, 약 15일 내지 약 34일, 약 16일 내지 약 34일, 약 17일 내지 약 33일, 약 18일 내지 약 32일, 약 19일 내지 약 31일, 약 20일 내지 약 30일, 약 21일 내지 약 29일, 약 22일 내지 약 28일, 약 23일 내지 약 27일, 또는 약 24일 내지 약 26일 후에 투여된다. 특정 측면에서, 벡터의 수술후 용량은 수술한지 14일 이후에 투여된다. 또 다른 측면에서, 벡터의 수술후 용량은 수술한지 35일 이내에 투여된다. 또 다른 측면에서, 벡터의 수술후 용량은 수술한지 14일 이후 및 수술한지 35일 이내에 투여된다.
일부 측면에서, 벡터의 수술후 용량은 반복적으로 투여된다. 일부 측면에서, 벡터의 수술후 용량은 매일, 약 2일에 한 번, 약 3일에 한 번, 약 4일에 한 번, 약 5일에 한 번, 약 6일에 한 번, 약 7일에 한 번, 약 2주에 한 번, 약 3주에 한 번, 약 4주에 한 번, 약 5주에 한 번, 약 6주에 한 번, 약 7주에 한 번, 약 2개월에 한 번, 약 3개월에 한 번, 약 4개월에 한 번, 약 5개월에 한 번, 약 6개월에 한 번, 약 7개월에 한 번, 약 8개월에 한 번, 약 9개월에 한 번, 약 10개월에 한 번, 약 11개월에 한 번, 또는 약 12개월에 한 번 반복적으로 투여된다.
본 개시내용의 일부로서 투여되는 벡터의 용량은 바이러스 입자(VP)로 측정될 수 있다. 하나의 양태에서, 벡터의 시동 용량은 벡터의 수술후 용량보다 낮다. 또 다른 양태에서, 벡터의 시동 용량은 벡터의 수술후 용량보다 높다. 또 다른 양태에서, 벡터의 시동 용량은 벡터의 수술후 용량과 동일하다.
벡터의 수술후 용량의 유효량은 약 1 x 1016, 1 x 1015, 1 x 1014, 5 x 1013, 4 x 1013, 3 x 1013, 2 x 1013, 1 x 1013, 9 x 1012, 8 x 1012, 7 x 1012, 6 x 1012, 5 x 1012, 4 x 1012, 3 x 1012, 2 x 1012, 1 x 1012, 9 x 1011, 8 x 1011, 7 x 1011, 6 x 1011, 5 x 1011, 4 x 1011, 3 x 1011, 2 x 1011, 1 x 1011, 9 x 1010, 8 x 1010, 7 x 1010, 6 x 1010, 5 x 1010, 4 x 1010, 3 x 1010, 2 x 1010, 또는 1 x 1010개 이하 바이러스 입자를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 또 다른 양태에서, 벡터의 시동 용량의 유효량은 약 1 x 1010 내지 약 1 x 1016, 약 1 x 1011 내지 약 1 x 1015, 약 1 x 1011 내지 약 1 x 1016, 약 1 x 1012 내지 약 1 x 1015, 약 1 x 1012 내지 약 1 x 1016, 약 1 x 1012 내지 약 1 x 1014, 약 5 x 1012 내지 약 1 x 1016, 약 5 x 1012 내지 약 1 x 1015, 약 5 x 1012 내지 약 1 x 1014, 약 1 x 1012 내지 약 1 x 1013, 약 1 x 1013 내지 약 1 x 1014개 바이러스 입자이다.
일부 측면에서, 벡터의 수술후 용량은 적어도 약 1 x 1011개 바이러스 입자의 유효량으로 투여된다. 일부 측면에서, 벡터의 수술후 용량은 적어도 약 1 x 1012개 바이러스 입자의 유효량으로 투여된다. 일부 측면에서, 벡터의 수술후 용량은 적어도 약 1 x 1013개 바이러스 입자의 유효량으로 투여된다. 일부 측면에서, 벡터의 수술후 용량은 적어도 약 1 x 1014개 바이러스 입자의 유효량으로 투여된다. 일부 측면에서, 벡터의 수술후 용량은 적어도 약 1 x 1015개 바이러스 입자의 유효량으로 투여된다. 또 다른 양태에서, 벡터의 수술후 용량은 적어도 약 1 x 107, 1 x 108, 1 x 109, 1 x 1010, 또는 5 x 1010개 바이러스 입자의 유효량으로 투여된다.
D. 질병 및 병태
본 개시내용의 방법은 암과 관련된 질병 또는 장애를 안정화하는데 유용하다. 일부 양태에서, 암은 전이성 직장결장암(mCRC), 진행성 비평편 비-소세포 폐암(NSCLC), 전이성 신세포 암종(mRCC), 다형성 교모세포종(GBM), 뮐러암, 난소암, 복막암, 나팔관암, 또는 자궁 유두상 장액암이다. 일부 측면에서, 본 개시내용은 악성 복막액, 예를 들어 복수의 용적을 감소시키거나, 대상체에 대한 통증을 감소시키거나, 대상체의 생존을 연장시키거나, 이들의 임의의 조합일 수 있다. 본 개시내용으로 감소, 억제 또는 치료될 수 있는 종양은 고형 종양, 원발성 종양, 또는 전이성 종양일 수 있다. 용어 "전이성" 또는 "전이"는 다른 부분 또는 기관에 이차 종양 병변을 확립할 수 있는 종양 세포를 지칭한다.
본 개시내용의 방법에서, "고형 종양"은 육종, 흑색종, 암종 또는 기타 고형 종양 암을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. "육종"은 배아 결합 조직과 같은 물질로 구성된 종양을 지칭하며 일반적으로 원섬유 또는 균질한 물질에 내장된 조밀하게 패킹된 세포로 구성된다. 육종은 연골육종, 섬유육종, 림프육종, 흑색육종, 점액육종, 골육종, 아베메시 육종(Abemethy's sarcoma), 지방성 육종(adipose sarcoma), 지방육종(liposarcoma), 포상 연부 육종, 법랑아육종, 포도상 육종, 녹색종 육종, 융모막 암종, 배아 육종, 빌름스 종양 육종, 자궁내막 육종, 간질성 육종, 유잉 육종, 근막 육종, 섬유모세포 육종, 거대 세포 육종, 과립구 육종, 호지킨 육종, 특발성 다발 색소 출혈 육종, B 세포의 면역모세포 육종, 림프종, T 세포의 면역모세포 육종, 젠센 육종(Jensen's sarcoma), 카포시 육종, 쿠퍼 세포 육종, 혈관육종, 백혈육종, 악성 간엽종 육종, 방골 육종, 망상내피 육종, 라우스 육종, 장액낭 육종(serocystic sarcoma), 활막 육종, 또는 말초혈관확장 육종(telangiectaltic sarcoma)을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.
용어 "흑색종"은 피부 및 기타 기관의 멜라닌 세포 시스템으로부터 발생하는 종양을 지칭한다. 흑색종은, 예를 들면, 말단-흑자 흑색종(acra-lentiginous melanoma), 멜라닌 결핍 흑색종(amelanotic melanoma), 양성 소아 흑색종, 클라우드만 흑색종(Cloudman's melanoma), S91 흑색종, 하딩-패시 흑색종(Harding-Passey melanoma), 소아 흑색종, 악성 흑색점 흑색종(lentigo maligna melanoma), 악성 흑색종, 전이성 흑색종, 결절 흑색종, 조갑하 흑색종, 또는 표재 확산 흑색종을 포함한다.
용어 "암종"은 주변 조직에 침투하여 전이를 일으키는 경향이 있는 상피 세포로 구성된 신생 악성 종양을 지칭한다. 예시적인 암종은, 예를 들면, 선방 암종(acinar carcinoma), 선방상 암종(acinous carcinoma), 선낭 암종(adenocystic carcinoma), 선모 낭포 암종(adenoid cystic carcinoma), 선암종(carcinoma adenomatosum), 부신 피질의 암종(carcinoma of adrenal cortex), 폐포 암종(alveolar carcinoma), 폐포 세포 암종(alveolar cell carcinoma), 기저 세포 암종(basal cell carcinoma), 기저세포 암종(carcinoma basocellulare), 기저세포양 암종(basaloid carcinoma), 기저편평 세포 암종(basosquamous cell carcinoma), 세기관지폐포 암종(bronchioalveolar carcinoma), 세기관지 암종(bronchiolar carcinoma), 기관지원성 암종(bronchogenic carcinoma), 대뇌모양 암종(cerebriform carcinoma), 담관세포 암종(cholangiocellular carcinoma), 융모 암종(chorionic carcinoma), 콜로이드질 암종(colloid carcinoma), 면포 암종(comedo carcinoma), 자궁체부 암종(corpus carcinoma), 사상엽 암종(cribriform carcinoma), 흉부 갑옷 암종(carcinoma en cuirasse), 피부 암종(carcinoma cutaneum), 원주 암종(cylindrical carcinoma), 원주 세포 암종(cylindrical cell carcinoma), 관 암종(duct carcinoma), 경성 암종(carcinoma durum), 배아 암종(embryonal carcinoma), 뇌질양 암종(encephaloid carcinoma), 표피양 암종(epiermoid carcinoma), 상피 아데노이드 암종(carcinoma epitheliale adenoides), 외장성 암종(exophytic carcinoma), 궤양 전 암종(carcinoma ex ulcere), 섬유성 암종(carcinoma fibrosum), 젤라틴양 암종(gelatiniform carcinoma), 젤라틴성 암종(gelatinous carcinoma), 거대 세포 암종(giant cell carcinoma), 거대세포 암종(carcinoma gigantocellular), 선암종(glandular carcinoma), 과립막 세포 암종(granulosa cell carcinoma), 모상 암종(hair-matrix carcinoma), 헤마토이드 암종(hematoid carcinoma), 간세포 암종(hepatocellular carcinoma), 허슬 세포 암종(Hurthle cell carcinoma), 유리질 암종(hyaline carcinoma), 부신모양 암종(hypernephroid carcinoma), 소아 배아 암종(infantile embryonal carcinoma), 제자리 암종(carcinoma in situ), 표피내 암종(intraepidermal carcinoma), 상피내 암종(intraepithelial carcinoma), 크롬페처 암종(Krompecher's carcinoma), 쿨키츠키-세포 암종(Kulchitzky-cell carcinoma), 대세포 암종(large-cell carcinoma), 렌즈핵 암종(lenticular carcinoma), 렌즈핵 암종(carcinoma lenticulare), 지방종 암종(lipomatous carcinoma), 림프상피성 암종(lymphoepithelial carcinoma), 수질 암종(carcinoma medullare), 수질 암종(medullary carcinoma), 흑색증 암종(melanotic carcinoma), 연성 암종(carcinoma molle), 점액 암종(mucinous carcinoma), 점액분비 암종(carcinoma muciparum), 점액세포 암종(carcinoma mucocellulare), 점막표피양 암종(mucoepidernoid carcinoma), 점액 암종(carcinoma mucosum), 점액성 암종(mucous carcinoma), 점액종 암종(carcinoma myxomatodes), 비인두 암종(naspharyngheal carcinoma), 연맥 세포 암종(oat cell carcinoma), 화골성 암종(carcinoma ossificans), 유골 암종(osteoid carcinoma), 유두상 암종(papillary carcinoma), 문맥주위 암종(periportal carcinoma), 침습전 암종(preinvasive carcinoma), 가시 세포 암종(prickle cell carcinoma), 수상 암종(pultaceous carcinoma), 신장의 신세포 암종(renal cell carcinoma of kidney), 저장 세포 암종(reserve cell carcinoma), 육종성 암종(carcinoma sarcomatodes), 슈나이더 암종(schneiderian carcinoma), 경성 암종(scirrhous carcinoma), 음낭 암종(carcinoma scroti), 인환 세포 암종(signet-ring cell carcinoma), 단순 암종(carcinoma simplex), 소세포 암종(small-cell carcinoma), 솔라노이드 암종(solanoid carcinoma), 구상 세포 암종(spheroidal cell carcinoma), 방추 세포 암종(spindle cell carcinoma), 해면질 암종(carcinoma spongiosum), 편평상피 암종(squamous carcinoma), 편평 세포 암종(squamous cell carcinoma), 스트링 암종(string carcinoma), 혈관확장성 암종(carcinoma telangiectaticum), 모세혈관확장성 암종(carcinoma telangiectodes), 이행 세포 암종(transitional cell carcinoma), 결절성 암종(carcinoma tuberosum), 결절모양 암종(tuberous carcinoma), 사마귀모양 암종(verrucous carcinoma), 또는 비플로솜 암종(carcinoma viflosum)을 포함한다.
억제되거나 치료될 수 있는 추가의 암은, 예를 들면, 백혈병, 호지킨병, 비호지킨 림프종, 다발성 골수종, 신경모세포종, 유방암, 난소암, 폐암(비소세포 폐암(NSCLC) 포함), 횡문근육종, 원발성 혈소판증가증, 원발성 거대글로불린혈증, 소세포 폐 종양, 원발성 뇌 종양, 신경교종(다형성 교모세포종(GBM) 및 재발성 GBM 포함), 위암, 결장암(전이성 결장직장암(mCRC) 포함), 간담도암, 악성 췌장 췌도종, 악성 카르시노이드, 방광암, 전암성 피부 병변, 고환암, 림프종, 갑상선암, 유두상 갑상선암, 신경모세포종, 신경내분비암, 식도암, 비뇨생식도암, 악성 고칼슘혈증, 자궁경부암, 자궁내막암, 부신피질암, 전립선암, 뮐러암, 난소암, 복막암, 나팔관암, 또는 자궁 유두상 장액 암종을 포함한다.
특정 측면에서, 종양은 신경교종이다. 용어 "신경교종"은 뇌 또는 척추의 신경교 세포로부터 발생하는 종양을 지칭한다. 신경교종은 뇌실막종, 성상세포종(다형성 교모세포종 포함), 희소돌기신경교종, 뇌간 신경교종, 시신경 교종, 및 핍지성상세포종과 같은 혼합 신경교종을 포함할 수 있지만, 이에 제한되지 않는다. 특정 측면에서, 종양은 다형성 교모세포종과 관련되거나 이로부터 유래된다. 일부 측면에서, 종양은 재발성 종양이다. 특정 측면에서, 종양은 재발성 다형성 교모세포종이다.
III. Fas - 키메라 유전자 및 내피 세포 특이 프로모터를 포함하는 핵산 작제물
본 개시내용은 내피 세포 특이 프로모터에 작동가능하게 연결된 Fas-키메라 유전자를 포함하는 벡터의 시동 용량을 종양을 갖는 대상체에게 투여함을 포함하는 항종양 요법의 방법을 제공하고, 여기서 벡터는 종양 또는 이의 일부를 외과적으로 제거하기 전에 투여된다. 본 개시내용은 1회 이상의 수술후 용량의 Fas-키메라 벡터를 대상체에게 투여하는 방법을 추가로 제공한다.
본 개시내용에서 Fas-키메라 단백질을 암호화하는 유전자(또는 유전자 산물)는 내피 세포에서 Fas-키메라 유전자 산물의 발현을 지시하는 내피 세포-특이 프로모터에 연결될 수 있다. 이러한 세포독성 유전자 산물의 발현은 과도한 신생-혈관형성 또는 혈관 성장이 바람직하지 않은 상황에서, 예를 들어 종양에서 유용하다.
A. Fas - 키메라
본 발명의 핵산 작제물에 의해 발현되는 Fas-키메라 단백질은 적어도 2개의 "사멸 수용체" 폴리펩티드를 포함하고, 각각의 폴리펩티드는 상이한 단백질로부터 유래된다. Fas-키메라 단백질의 제1 폴리펩티드는 종양 괴사 인자 수용체 1(TNFR1)의 리간드 결합 도메인을 포함한다. Fas-키메라 단백질의 제2 폴리펩티드는 Fas 폴리펩티드의 이펙터 도메인을 포함한다.
TNFR1의 리간드 결합 도메인은 TNFR1 리간드에 결합하는 임의의 도메인일 수 있다. 하나의 양태에서, TNFR1 리간드는 TNF-α이다. 또 다른 양태에서, TNFR1 리간드는 림포톡신-α이다. TNFR1의 리간드 결합 도메인은 TNFR1 또는 이의 단편, 변이체, 유도체 또는 유사체의 세포외 도메인일 수 있다. TNFR1 리간드 결합 도메인의 비제한적인 예는 아래에 기술되어 있다.
본 발명에 유용한 Fas 폴리펩티드의 이펙터 도메인은 사멸-유도 신호전달 복합체(DISC)를 형성하여 아폽토시스를 유도하는 임의의 Fas 도메인을 포함한다. 하나의 양태에서, Fas 폴리펩티드의 이펙터 도메인은 세포내 도메인, 막관통 도메인, 또는 둘 다를 포함한다. Fas 폴리펩티드 이펙터 도메인의 비제한적인 예는 아래에 기술되어 있다.
TNFR1 및 Fas 폴리펩티드는 펩티드 결합에 의해 또는 링커에 의해 연결될 수 있다. TNFR1 리간드 결합 도메인을 Fas 이펙터 도메인과 연결하는 링커는 폴리펩티드 링커 또는 비-펩티드 링커일 수 있다. 예를 들면, Fas-키메라 단백질에 대한 링커는 하나 이상의 글리신, 세린, 류신 또는 이들의 임의의 조합을 포함할 수 있다. 하나의 양태에서, 본 발명에 유용한 링커는 Ser-Leu를 포함한다. 또 다른 양태에서, 본 발명에 유용한 링커는 (GGGS)n을 포함하고(Denise et al. J. Biol. Chem. 277:35035-35043 (2002)), 여기서 n은 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10 또는 그 이상일 수 있다(서열 번호 27).
1. 종양 괴사 인자 수용체 1
전장 인간 TNFR1 폴리펩티드는 455개 아미노산 길이이고 TNF-R1, 종양 괴사 인자 수용체 유형 I(TNFRI), TNFR-I, TNFRSF1A, TNFAR, p55, P60 또는 CD120a로도 알려져 있다. 자연 발생 인간 TNFR1 폴리펩티드는 TNF-α 또는 동종삼량체 림포톡신-α에 결합하는 것으로 알려져 있다. 세포외 도메인에 대한 TNF-α의 결합은 TNFR1의 동종삼량체화를 야기하며, 이것은 그후 종양 괴사 인자 수용체 유형 1-관련 사멸 도메인 단백질(TRADD)의 사멸 도메인과 특이적으로 상호작용한다. TNF 수용체 관련 인자(TRAFS), 수용체-상호작용 세린/트레오닌-단백질 키나제 1(RIPK1), 및 사멸 도메인을 지닌 Fas-관련 단백질(FADD)과 같은 다양한 TRADD-상호작용 단백질이 TRADD와의 결합에 의해 복합체로 동원된다. 복합체는 적어도 두 개의 별개의 신호전달 캐스케이드, 아폽토시스 및 NF-카파-B 신호전달을 활성화한다.
인간 TNFR1 폴리펩티드 서열로 보고된 455 aa 폴리펩티드 서열은 UniProtKB 데이터베이스에서 식별자 번호 P19438-1을 갖는다. 이러한 인간 TNFR1 폴리펩티드 서열은 본원에서 이소형 A 및 서열 번호 2로 지정된다. 서열 번호 1은 서열 번호 2를 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다. 108aa의 폴리펩티드 서열은 인간 TNFR1 폴리펩티드 서열의 이소형으로서 보고되었으며 UniProtKB 데이터베이스에서 식별자 번호 P19438-2를 갖는다. 108aa 폴리펩티드는 이소형 A(서열 번호 2)의 아미노산 1 내지 108에 상응하고 본원에서 이소형 B로 지정된다. 232aa를 갖는 인간 TNFR1 폴리펩티드의 또 다른 변이체는 UniProtKB 데이터베이스에서 식별자 번호 P19438-3으로서 보고되었다. 232aa 폴리펩티드는 이소형 A(서열 번호 2)의 아미노산 1 내지 232에 상응하고 본원에서 이소형 C로 지정된다. 인간 TNFR1의 추가의 천연 변이체는 H51Q, C59R, C59S, C62G, C62Y, P75L, T79M, C81F, C99S, S115G, C117R, C117Y, R121P, R121Q, P305T, 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 돌연변이를 포함한 이소형 A, B, 및 C의 TNFR1 폴리펩티드를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 또 다른 알려진 TNFR1 변이체는 L13LILPQ, K255E, S286G, R394L, 412:Missing, GPAA443-446APP, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한 이소형 A, B, 및 C의 TNFR1 폴리펩티드를 포함한다.
표 1은 인간 야생형 TNFR1 아미노산 서열 및 야생형 TNFR1을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 보여준다.
표 1. TNFR1 서열
Figure pct00001
Figure pct00002
마우스 TNFR1 폴리펩티드 서열 및 이의 변이체가 또한 보고되어 있다. 454aa 마우스 TNFR1 폴리펩티드는 UniProtKB 데이터베이스에서 식별자 번호 P25118을 갖는다. 다른 동물에서 알려진 TNFR1 폴리펩티드는 래트(예를 들어, UniProtKB 데이터베이스에서 P22934), 소(예를 들어, UniProtKB 데이터베이스에서 O19131), 돼지(예를 들어, UniProtKB 데이터베이스에서 P50555), 또는 말(예를 들어, UniProtKB 데이터베이스에서 D1MH71)을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.
전장 TNFR1은 두 개의 쇄, (1) TNF 수용체 슈퍼패밀리 구성원 1A, 막 형태(즉, 전장 TNFR1에 상응하는 아미노산 22 내지 455) 및 (2) TNF-결합 단백질 1(TBPI)(즉, 전장 TNFR1에 상응하는 아미노산 41 내지 291)로 절단될 수 있다. 전장 인간 TNFR1 폴리펩티드는 신호 서열(서열 번호 2의 아미노산 1 내지 21), 세포외 도메인(서열 번호 2의 아미노산 22 내지 211), 막관통 도메인(서열 번호 2의 아미노산 212 내지 234), 및 세포질 도메인(서열 번호 2의 아미노산 235 내지 455)로 구성된다. TNFR1 세포외 도메인은 네 개의 시스테인 반복 영역, TNFR-Cys1(서열 번호 2에 상응하는 아미노산 43 내지 82), TNFR-Cys2(서열 번호 2에 상응하는 아미노산 83 내지 125), TNFR-Cys3(서열 번호 2에 상응하는 아미노산 126 내지 166), 및 TNFR-Cys4(서열 번호 2에 상응하는 아미노산 167 내지 196)를 포함한다.
당업계의 숙련가가 인지하는 바와 같이, 상기 열거된 도메인의 시작 및 종료 잔기는 사용된 컴퓨터 모델링 프로그램 또는 도메인을 결정하기 위해 사용된 방법에 따라 달라질 수 있다. 이와 같이, TNFR1의 다양한 기능적 도메인은 상기 정의된 것과 다를 수 있다.
하나의 양태에서, Fas-키메라 단백질에 유용한 TNFR1의 리간드 결합 도메인은 TNFR1, 또는 이의 임의의 단편, 변이체, 유도체 또는 유사체의 세포외 도메인을 포함하거나, 이들로 본질적으로 구성되거나, 이들로 구성되며, 여기서 TNFR1, 또는 이의 임의의 단편, 변이체, 유도체 또는 유사체의 세포외 도메인은 TNF-α에 결합한다. 또 다른 양태에서, TNFR1의 리간드 결합 도메인은 TNFR-Cys1; TNFR-Cys2; TNFR-Cys3; TNFR-Cys4; TNFR-Cys1 및 TNFR-Cys2; TNFR-Cys1 및 TNFR-Cys3; TNFR-Cys1 및 TNFR-Cys4; TNFR-Cys2 및 TNFR-Cys3; TNFR-Cys2 및 TNFR-Cys4; TNFR-Cys3 및 TNFR-Cys4; TNFR-Cys1, TNFR-Cys2, 및 TNFR-Cys3; TNFR-Cys1, TNFR-Cys2, 및 TNFR-Cys4; TNFR-Cys2, TNFR-Cys3, 및 TNFR-Cys4; 또는 TNFR-Cys1, TNFR-Cys2, TNFR-Cys3, 및 TNFR-Cys4를 포함한다. 또 다른 양태에서, Fas-키메라 단백질에서 TNFR1의 리간드 결합 도메인은 TNF 결합 단백질 I을 포함한다. 또 다른 양태에서, Fas-키메라 단백질의 TNFR1 리간드 결합 도메인은 서열 번호 2의 아미노산 22 내지 190, 아미노산 22 내지 191, 아미노산 22 내지 192, 아미노산 22 내지 193, 아미노산 22 내지 194, 아미노산 22 내지 195, 아미노산 22 내지 196, 아미노산 22 내지 197, 아미노산 22 내지 198, 아미노산 22 내지 199, 아미노산 22 내지 200, 아미노산 22 내지 201, 아미노산 22 내지 202, 아미노산 22 내지 203, 아미노산 22 내지 204, 아미노산 22 내지 205, 아미노산 22 내지 206, 아미노산 22 내지 207, 아미노산 22 내지 208, 아미노산 22 내지 209, 아미노산 22 내지 210, 또는 아미노산 22 내지 211과 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 본질적으로 구성되거나, 이들로 구성되며, 여기서 리간드 결합 도메인은 TNFR1 리간드, 예를 들어, TNF-α에 결합한다.
또 다른 양태에서, TNFR1의 리간드 결합 도메인은 신호 펩티드를 추가로 포함한다. 적합한 신호 펩티드의 한 가지 예는 TNFR1의 신호 펩티드, 예를 들어, 서열 번호 2의 아미노산 1 내지 21이다. 또 다른 양태에서, Fas-키메라 유전자 산물의 리간드 결합 도메인은 서열 번호 2의 아미노산 1 내지 190, 아미노산 1 내지 191, 아미노산 1 내지 192, 아미노산 1 내지 193, 아미노산 1 내지 194, 아미노산 1 내지 195, 아미노산 1 내지 196, 아미노산 1 내지 197, 아미노산 1 내지 198, 아미노산 1 내지 199, 아미노산 1 내지 200, 아미노산 1 내지 201, 아미노산 1 내지 202, 아미노산 1 내지 203, 아미노산 1 내지 204, 아미노산 1 내지 205, 아미노산 1 내지 206, 아미노산 1 내지 207, 아미노산 1 내지 208, 아미노산 1 내지 209, 아미노산 1 내지 210, 또는 아미노산 1 내지 211과 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 본질적으로 구성되거나, 이들로 구성되며, 여기서 리간드 결합 도메인은 TNFR1 리간드, 예를 들어, TNF-α에 결합한다. 특정 양태에서, Fas-키메라 단백질의 TNFR1 리간드 결합 도메인은 서열 번호 4와 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 본질적으로 구성되거나, 이들로 구성되며, 여기서 리간드 결합 도메인은 TNFR1 리간드, 예를 들어, TNF-α에 결합한다.
또 다른 양태에서, TNFR1의 리간드 결합 도메인은 서열 번호 3과 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다.
여전히 또 다른 양태에서, Fas-키메라 단백질의 TNFR1 리간드 결합 도메인은 서열 번호 2의 아미노산 22 내지 108(TNFR1 이소형 B), 서열 번호 2의 아미노산 22 내지 232(TNFR1 이소형 C), 또는 서열 번호 2의 아미노산 44 내지 291(TBP1)과 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 본질적으로 구성되거나, 이들로 구성되며, 여기서 리간드 결합 도메인은 TNFR1 리간드, 예를 들어, TNF-α에 결합한다.
2. Fas 폴리펩티드
전장 인간 Fas 폴리펩티드는 335개 아미노산 길이이며 종양 괴사 인자 수용체 슈퍼패밀리 구성원 6, 아포-1 항원, 아폽토시스-매개 표면 항원 Fas, Fas 리간드(FasL) 수용체, 또는 CD95로도 알려져 있다. 자연 발생 Fas 폴리펩티드는 TNFSF6/FasL에 대한 수용체이다. Fas 폴리펩티드가 Fas 리간드(FasL)에 결합할 때, Fas와 FasL 사이의 상호작용이 FADD, 카스파제-8 및 카스파제-10을 포함하는 사멸-유도 신호전달 복합체(DISC)의 형성을 초래한다. 세포의 일부 유형(유형 I)에서, 처리된 카스파제-8은 카스파제 계열의 다른 구성원을 직접 활성화하고, 세포의 아폽토시스의 실행을 촉발한다. 세포의 또 다른 유형(유형 II)에서, Fas-DISC는 미토콘드리아로부터의 프로아폽토시스 인자의 방출 증가 및 카스파제-8의 활성화 증폭으로 소용돌이치는 피드백 루프를 시작한다. Fas-매개 아폽토시스는 말초 내성의 유도, 성숙한 세포의 항원-자극된 자살 또는 둘 다에서 역할을 할 수 있다.
인간 Fas 폴리펩티드 서열로서 보고된 335aa 폴리펩티드 서열은 UniProtKB 데이터베이스에서 식별자 번호 P25445-1을 갖는다. 이러한 인간 Fas 폴리펩티드 서열은 본원에서 서열 번호 6으로서 지정된다. 서열 번호 5는 서열 번호 6을 암호화하는 뉴클레오티드 서열이다. Fas 폴리펩티드를 암호화하는 뉴클레오티드 서열은 APT1, FAS1, 또는 TNFRSF6으로도 알려져 있다. 전장 Fas 폴리펩티드는 신호 펩티드(서열 번호 6에 상응하는 아미노산 1 내지 25), 세포외 도메인(서열 번호 6에 상응하는 아미노산 26 내지 173), 막관통 도메인(서열 번호 6에 상응하는 아미노산 174 내지 190), 및 세포내 (또는 세포질) 도메인(서열 번호 6에 상응하는 아미노산 191 내지 335)을 함유한다. 세포내 도메인은 사멸 도메인(예를 들어, 서열 번호 6에 상응하는 아미노산 230 내지 314)을 함유한다.
당업계의 숙련가가 인지하는 바와 같이, 상기 열거된 도메인의 시작 및 종료 잔기는 사용된 컴퓨터 모델링 프로그램 또는 도메인을 결정하기 위해 사용된 방법에 따라 달라질 수 있다. 이와 같이, Fas의 다양한 기능적 도메인은 상기 정의된 것과 다를 수 있다. 표 2는 야생형 인간 Fas 아미노산 서열 및 Fas 단백질을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 보여준다.
표 2. Fas 서열
Figure pct00003
Figure pct00004
마우스 Fas 폴리펩티드 서열 및 이의 변이체가 또한 보고되어 있다. 327aa 마우스 Fas 폴리펩티드는 UniProtKB 데이터베이스에서 식별자 번호 P25446을 갖는다. 다른 동물에서 알려진 Fas 폴리펩티드는 구대륙 원숭이(예를 들어, UniProtKB 데이터베이스에서 Q9BDN4), 붉은털 원숭이(예를 들어, UniProtKB 데이터베이스에서 Q9BDP2), 래트(예를 들어, UniProtKB 데이터베이스에서 Q63199), 또는 소(예를 들어, UniProtKB 데이터베이스에서 P51867)를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.
Fas 폴리펩타이드의 서열 변이에 기초하여, 당업계의 통상의 숙련가는 Fas 폴리펩타이드의 이펙터 도메인에서 서열 변이를 확인할 수 있다. 예를 들면, Fas 이펙터 도메인의 천연 변이체는 C178R, L180F, P183L, I184V, T198I, Y232C, T241K, T241P, V249L, R250P, R250Q, G253D, G253S, N255D, A257D, I259R, D260G, D260V, D260Y, I262S, N264K, T270I, T270K, E272G, E272K, L278F, K299N, T305I, I310S, 또는 이들의 임의의 조합의 하나 이상의 치환 또는 돌연변이를 포함할 수 있다.
하나의 양태에서, 본 발명에 유용한 Fas 폴리펩티드의 이펙터 도메인은 Fas 폴리펩티드의 사멸 도메인을 포함한다. 또 다른 양태에서, Fas 폴리펩티드의 이펙터 도메인은 서열 번호 6의 아미노산 230 내지 314와 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 본질적으로 구성되거나, 이들로 구성된다. 또 다른 양태에서, Fas 폴리펩티드의 이펙터 도메인은 Fas 폴리펩티드의 세포내 도메인을 포함한다. 또 다른 양태에서, Fas 폴리펩티드의 이펙터 도메인은 서열 번호 6의 아미노산 185 내지 335, 아미노산 186 내지 335, 아미노산 187 내지 335, 아미노산 188 내지 335, 아미노산 189 내지 335, 아미노산 190 내지 335, 아미노산 191 내지 335, 아미노산 192 내지 335, 아미노산 193 내지 335, 아미노산 194 내지 335, 아미노산 195 내지 335, 아미노산 196 내지 335, 아미노산 197 내지 335, 아미노산 198 내지 335, 또는 아미노산 199 내지 335와 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
여전히 또 다른 양태에서, Fas 폴리펩티드의 이펙터 도메인은 Fas 폴리펩티드의 막관통 도메인을 추가로 포함한다. 또 다른 양태에서, Fas 폴리펩티드의 이펙터 도메인은 서열 번호 6의 아미노산 174 내지 335와 적어도 약 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 양태에서, Fas 폴리펩티드의 이펙터 도메인은 Fas 세포외 도메인의 C-말단 부분으로부터 약 10, 약 9, 약 8, 약 7, 약 6, 약 5, 약 4, 약 3, 약 2, 또는 약 1개의 아미노산을 추가로 포함한다. 특정 양태에서, Fas 폴리펩티드의 이펙터 도메인은 서열 번호 6의 아미노산 179 내지 335, 아미노산 178 내지 335, 아미노산 177 내지 335, 아미노산 176 내지 335, 아미노산 175 내지 335, 아미노산 174 내지 335, 아미노산 173 내지 335, 아미노산 172 내지 335, 아미노산 171 내지 335, 아미노산 170 내지 335, 아미노산 169 내지 335, 아미노산 168 내지 335, 아미노산 167 내지 335, 아미노산 166 내지 335, 아미노산 165 내지 335, 아미노산 164 내지 335, 또는 아미노산 163 내지 335와 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 이펙터 도메인은 사멸-유도 신호전달 복합체(DISC)를 형성하거나, 카스파제 8을 활성화하거나, 아폽토시스를 유도한다.
일부 양태에서, Fas 폴리펩티드의 이펙터 도메인은 서열 번호 8과 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 본질적으로 구성되거나, 이들로 구성되며, 여기서 이펙터 도메인은 사멸-유도 신호전달 복합체(DISC)를 형성하거나, 카스파제 8을 활성화하거나, 아폽토시스를 유도한다.
또 다른 양태에서, Fas 폴리펩티드의 이펙터 도메인은 서열 번호 7과 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다.
하나의 양태에서, 본 발명의 Fas-키메라 유전자 산물은 서열 번호 10과 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 본질적으로 구성되거나, 이들로 구성되며, 여기서 Fas-키메라 유전자 산물은 아폽토시스를 유도한다. 또 다른 양태에서, Fas-키메라 유전자 산물은 서열 번호 9와 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화되며, 여기서 Fas-키메라 유전자 산물은 아폽토시스를 유도한다.
B. 내피 세포 -특이 프로모터
Fas-키메라 유전자를 포함하는 핵산 작제물은 작동가능하게 연결된 Fas-키메라 유전자의 발현을 조절하는데 유용한 하나 이상의 발현 조절 요소를 추가로 포함한다. 발현 조절 요소는 프로모터, 분비 신호, 및 기타 조절 요소를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.
본 개시내용에 유용한 핵산 작제물은 내피 세포-특이 프로모터를 이용하여 내피 세포에서 Fas-키메라 단백질의 발현을 지시함으로써 내피 세포의 아폽토시스를 유도한다.
본 개시내용의 목적을 위해, 내피 세포-특이 프로모터는 시스-조절 요소가 없는 프로모터에 비해 프로모터의 내피 세포 특이성을 개선시키는 하나 이상의 시스-조절 요소를 함유할 수 있다. 하나의 예에서, 시스-조절 요소는 내피 세포-특이 전사를 더욱 촉진시키는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함한다. 또 다른 측면에서, 시스-조절 요소는 저산소 반응 요소를 포함한다. 또 다른 예에서, 시스-조절 요소는 폴리뉴클레오티드 서열 및 저산소 반응 요소 둘 다를 포함한다.
하나의 양태에서, 본 발명에 유용한 시스-조절 요소는 서열 번호 11 또는 서열 번호 12(서열 번호 11의 상보성 서열)와 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함하며, 여기서 시스-조절 요소는 시스-조절 요소가 없는 프로모터에 비해 프로모터의 내피 세포 특이성을 개선한다. 시스-조절 요소는 서열 번호 13 또는 서열 번호 14(서열 번호 13의 상보성 서열)와 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 추가의 뉴클레오티드 서열을 추가로 포함할 수 있다.
또 다른 양태에서, 본 발명을 위한 시스-조절 요소는 서열 번호 13 또는 서열 번호 14(서열 번호 13의 상보성 서열)와 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함하며, 여기서 시스-조절 요소는 시스-조절 요소가 없는 프로모터에 비해 프로모터의 내피 세포 특이성을 개선한다. 시스-조절 요소는 서열 번호 11 또는 서열 번호 12(서열 번호 11의 상보성 서열)와 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 추가의 뉴클레오티드 서열을 추가로 포함할 수 있다.
또 다른 양태에서, 본 발명을 위한 시스-조절 요소는 서열 번호 15 또는 서열 번호 16(서열 번호 15의 상보성 서열)과 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함하며, 여기서 시스-조절 요소는 시스-조절 요소가 없는 프로모터에 비해 프로모터의 내피 세포 특이성을 개선한다. 또 다른 양태에서, 핵산 작제물에 대한 시스-조절 요소는 서열 번호 7 또는 이의 임의의 단편, 변이체, 유도체 또는 유사체를 포함하며, 여기서 단편, 변이체, 유도체 또는 유사체는 시스-조절 요소가 없는 프로모터에 비해 프로모터의 내피 세포 특이성을 개선한다.
일부 양태에서, 본 발명을 위한 시스-조절 요소는 서열 번호 22 또는 서열 번호 23과 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함하며, 여기서 시스-조절 요소는 시스-조절 요소가 없는 프로모터에 비해 프로모터의 내피 세포 특이성을 개선한다. 또 다른 양태에서, 핵산 작제물에 대한 시스-조절 요소는 서열 번호 22 또는 서열 번호 23 또는 이의 임의의 단편, 변이체, 유도체 또는 유사체를 포함하며, 여기서 단편, 변이체, 유도체 또는 유사체는 시스-조절 요소가 없는 프로모터에 비해 프로모터의 내피 세포 특이성을 개선한다.
또 다른 양태에서, 본 발명을 위한 시스-조절 요소는 서열 번호 24 또는 서열 번호 25와 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함하며, 여기서 시스-조절 요소는 시스-조절 요소가 없는 프로모터에 비해 프로모터의 내피 세포 특이성을 개선한다. 또 다른 양태에서, 핵산 작제물에 대한 시스-조절 요소는 서열 번호 24 또는 서열 번호 25 또는 이의 임의의 단편, 변이체, 유도체 또는 유사체를 포함하며, 여기서 단편, 변이체, 유도체 또는 유사체는 시스-조절 요소가 없는 프로모터에 비해 프로모터의 내피 세포 특이성을 개선한다.
표 3은 본 발명에 유용한 다양한 시스-조절 요소 서열을 보여준다.
표 3. 내피 세포-특이 시스-조절 요소 및 프로모터
Figure pct00005
Figure pct00006
본 개시내용을 위한 시스-조절 요소는 프로모터 상류 또는 프로모터의 하류에 연결되거나 프로모터의 두 뉴클레오티드 사이에 삽입될 수 있다. 본 개시내용을 위한 내피 세포-특이 프로모터는 당업계에 공지된 임의의 프로모터를 이용할 수 있다. 예를 들면, 본 개시내용에 사용될 수 있는 적합한 프로모터는 내피-특이 프로모터를 포함한다: 프리프로엔도텔린-1(PPE-1 프로모터), 2010년 11월 11일에 공개된 제US 2010/0282634호; 및 2011년 7월 14일에 공개된 제WO 2011/083464호); PPE-1-3X 프로모터(미국 특허 제7,579,327호, 미국 특허 제8,071,740호, 미국 제8,039,261호, 제US2010/0282634호, 제US 2007/0286845호, 제WO 2011/083464호, 및 제WO2011/083466호); TIE-1(S79347, S79346) 및 TIE-2(U53603) 프로모터[Sato TN, Proc Natl Acad Sci U S A 1993 Oct 15;90(20):9355-8], 엔도글린 프로모터[Y11653; Rius C, Blood 1998 Dec 15;92(12):4677-90], 폰 빌레브란트 인자[AF152417; Collins CJ Proc Natl Acad Sci U S A 1987 Jul;84(13):4393-7], KDR/flk-1 프로모터[X89777, X89776; Ronicke V, Circ Res 1996 Aug;79(2):277-85], FLT-1 프로모터[D64016 AJ224863; Morishita K, : J Biol Chem 1995 Nov 17;270(46):27948-53], Egr-1 프로모터[AJ245926; Sukhatme VP, Oncogene Res 1987 Sep-Oct;l(4):343-55], E-셀렉틴 프로모터[Y12462;Collins T J Biol Chem 1991 Feb 5;266(4):2466-73], 내피 부착 분자 프로모터: ICAM-1 [X84737; Horley KJ EMBO J 1989 Oct;8(10):2889-96], VCAM-1[M92431; Iademarco MF, J Biol Chem 1992 Aug 15;267(23): 16323-9], PECAM-1[AJ313330 X96849; CD31, Newman PJ, Science 1990 Mar 9;247(4947): 1219-22], 혈관 평활근-특이 요소: CArG box X53154 및 대동맥 카복시펩티다제-유사 단백질(ACLP) 프로모터[AF332596;Layne MD, Circ Res. 2002; 90: 728-736] 및 대동맥 우선 발현 유전자-1[Yen-Hsu Chen J. Biol. Chem, Vol. 276, Issue 50, 47658-47663, December 14, 2001], 이들 모두는 전문이 본원에 참고로 포함된다.
하나의 양태에서, 내피 세포-특이 요소에 연결된 프로모터는 서열 번호 17과 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함하며, 여기서 요소에 연결된 프로모터는 프로모터에 작동가능하게 연결된 유전자에 대한 내피 세포 특이성을 유도한다. 또 다른 양태에서, 내피 세포-특이 요소에 연결된 프로모터는 야생형 PPE-1 프로모터의 단편, 변이체, 유도체 또는 유사체를 포함하며, 여기서 상기 단편, 변이체, 유도체 또는 유사체는 프로모터에 작동가능하게 연결된 유전자에 대한 내피 세포 특이성을 유도한다. 하나의 예에서, 내피 세포-특이 요소는 서열 번호 17에 상응하는 뉴클레오티드 잔기 442와 449 사이에 삽입될 수 있다.
추가의 양태에서, 내피 세포-특이 프로모터는 저산소 반응 요소를 포함한다. 저산소 반응 요소(HRE)는 엔도텔린-1 프로모터의 안티센스 가닥에 위치한다. 이 요소는 저산소증에 의한 (인간, 래트 및 뮤린 유전자의) 엔도텔린-1 프로모터의 양성 조절에 필요한 저산소증-유도성 인자-1 결합 부위이다. 저산소증은 에리트로포이에틴(Epo), VEGF 및 다양한 당분해 효소를 포함한 여러 유전자의 발현을 유도하는 강력한 신호이다. 코어 서열(8개 염기쌍)은 저산소 조건에 반응하는 모든 유전자에서 보존되며 측면 영역은 다른 유전자와 상이하다. ET-1 저산소 반응 요소는 GAT A-2와 AP-1 결합 부위 사이에 위치한다. 하나의 예에서, 저산소 반응 요소는 서열 번호 26, 이의 단편, 변이체, 유도체 또는 유사체를 포함한다.
또 다른 양태에서, 본 발명에 유용한 내피 세포-특이 프로모터는 서열 번호 18과 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함하거나, 이들로 본질적으로 구성되거나, 이들로 구성되며, 여기서 시스-조절 요소에 연결된 프로모터는 프로모터에 작동가능하게 연결된 유전자에 대한 내피 세포 특이성을 유도한다. 또 다른 양태에서, 내피 세포-특이 프로모터는 서열 번호 18의 단편, 변이체, 유도체 또는 유사체를 포함하며, 여기서 상기 이의 단편, 변이체, 유도체 또는 유사체는 프로모터에 작동가능하게 연결된 유전자에 대한 내피 세포 특이성을 유도한다.
내피 세포-특이 프로모터의 추가의 변형은 제WO2011/083464호, 제WO2011/083466호, 및 제WO2012/052423호에서 찾아볼 수 있으며, 이들은 전문이 본원에 참고로 포함된다.
본 개시내용은 또한 뉴클레오티드 서열 서열 번호 17을 포함하는 신규한 프로모터 서열을 제공한다. 하나의 예에서, 프로모터는 내피 세포-특이 시스-조절 요소를 추가로 포함한다. 하나의 예에서, 내피 세포-특이 시스-조절 요소는 서열 번호 11, 서열 번호 12, 서열 번호 13, 서열 번호 14, 서열 번호 15, 서열 번호 16, 서열 번호 22, 서열 번호 23, 서열 번호 24, 서열 번호 25, 서열 번호 26 또는 이의 임의의 단편, 유도체, 변이체 또는 유사체를 포함하며, 여기서, 이의 단편, 유도체, 변이체 또는 유사체는 시스-조절 요소가 없는 프로모터에 비해 프로모터의 내피 세포 특이성을 개선한다. 또 다른 예에서, 프로모터는 서열 번호 18의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 본 발명은 신규한 프로모터 및 이종 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 작제물을 포함한다. 하나의 양태에서, 이종 핵산 서열은 본원에 기술된 Fas-키메라 단백질을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 또 다른 양태에서, 이종 뉴클레오티드 서열은 아데노바이러스 서열을 포함한다.
C. 벡터
본 개시내용은 또한 내피 세포-특이 프로모터에 작동가능하게 연결된 Fas-키메라 유전자를 포함하는 핵산 작제물을 포함하는 벡터를 제공한다. 본 개시내용의 목적을 위해, 다수의 벡터 시스템이 사용될 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 이러한 측면의 실시에 사용될 수 있는 다양한 바이러스 유전자 전달 시스템은 아데노바이러스 벡터, 알파바이러스 벡터, 엔테로바이러스 벡터, 페스티바이러스 벡터, 렌티바이러스 벡터, 배큘로바이러스 벡터, 헤르페스바이러스 벡터, 엡스타인 바 바이러스 벡터, 파포바바이러스 벡터, 폭스바이러스 벡터, 백시니아 바이러스 벡터, 아데노-연관 바이러스 벡터 및 단순 헤르페스 바이러스 벡터를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.
또 다른 양태에서, 내피 세포-특이 프로모터에 작동가능하게 연결된 Fas-키메라 유전자를 포함하는 벡터는 아데노바이러스이다. 예를 들면, 아데노바이러스는 인간 아데노바이러스 종 A(혈청형 12, 18, 및 31), B(혈청형 3, 7, 11, 14, 16, 21, 34, 35, 50, 및 55), C(혈청형 1, 2, 5, 6, 및 57), D(8, 9, 10, 13, 15, 17, 19, 20, 22-30, 32, 33, 36-39, 42-49, 51, 53, 54, 및 56), E(혈청형 4), F(혈청형 40 및 41), 또는 G(혈청형 52) 중의 어느 하나 이상일 수 있다. 특정 양태에서, 본 발명을 위한 아데노바이러스는 인간 아데노바이러스 혈청형 5이다. 일부 양태에서, 유전자 요법에 유용한 아데노바이러스는 E1 영역 및 E3 영역을 함유하지 않는 재조합 비-복제 아데노바이러스이다.
특정 측면에서, 벡터는 Ad5-PPE-1-3X-Fas-c 벡터이다. 보다 특정한 측면에서, 벡터는 서열 번호 19를 포함하거나, 이들로 본질적으로 구성되거나, 이들로 구성된 Ad5-PPE-1-3X-Fas-c 벡터이다. 또 다른 양태에서, 아데노바이러스 벡터는 ECACC(European Collection of Cell Cultures) 수탁 번호 13021201을 갖는 단리된 바이러스이다.
IV. 하나 이상의 화학요법제를 추가로 포함하는 치료
본 개시내용의 일부 측면에서, 수술후 용량의 벡터가 하나 이상의 화학요법제와 조합하여 투여된다.
A. 화학요법제
본 개시내용의 방법을 사용하여 투여될 수 있는 하나 이상의 화학요법제는 아시비신; 아클라루비신; 아코다졸 하이드로클로라이드; 아크로닌; 아드리아마이신; 아도젤레신; 알데스류킨; 알림타; 알트레타민; 암보마이신; 아메탄트론 아세테이트; 아미노글루테티미드; 암사크린; 아나스트로졸; 안트라마이신; 아스파라기나제; 아스퍼린; 아자시티딘; 아제테파; 아조토마이신; 바티마스타트; 벤조데파; 비칼루타미드; 비산트렌 하이드로클로라이드; 비스나피드 디메실레이트; 베바시주맙, 비젤레신; 블레오마이신 설페이트; 브레퀴나르 나트륨; 브로피리민; 부설판; 칵티노마이신; 칼루스테론; 카라세미드; 카베티머; 카보플라틴; 카르무스틴(BiCNU); 카루비신 하이드로클로라이드; 카르젤레신; 세데핑골; 클로람부실; 시롤레마이신; 시스플라틴; 클라드리빈; 크리스나톨 메실레이트; 사이클로포스파미드; 시타라빈; 다카르바진; 닥티노마이신; 다우노루비신 하이드로클로라이드; 데시타빈; 덱소르마플라틴; 데자구아닌; 데자구아닌 메실레이트; 디아지쿠온; 도세탁셀; 독소루비신; 독소루비신 하이드로클로라이드; 드롤록시펜; 드롤록시펜 시트레이트; 드로모스타놀론 프로피오네이트; 두아조마이신; 에다트렉세이트; 에플로르니틴 하이드로클로라이드; 엘사미트루신; 엔로플라틴; 엔프로메이트; 에피프로피딘; 에피루비신 하이드로클로라이드; 에르불로졸; 에소루비신 하이드로클로라이드; 에스트라무스틴; 에스트라무스틴 포스페이트 나트륨; 에타니다졸; 에토포시드; 에토포시드 포스페이트; 에토프린; 파드로졸 하이드로클로라이드; 파자라빈; 펜레티니드; 플록수리딘; 플루다라빈 포스페이트; 플루오로우라실; 플루오로시타빈; 포스퀴돈; 포스트리에신 나트륨; 젬시타빈; 젬시타빈 하이드로클로라이드; Gliadel® 웨이퍼; 하이드록시우레아; 이다루비신 하이드로클로라이드; 이포스파미드; 일모포신; 인터페론 알파-2a; 인터페론 알파-2b; 인터페론 알파-nl; 인터페론 알파-n3; 인터페론 베타-I a; 인터페론 감마-I b; 이프로플라틴; 이리노테칸 하이드로클로라이드; 란레오티드 아세테이트; 레트로졸; 류프로리드 아세테이트; 리아로졸 하이드로클로라이드; 로메트렉솔 나트륨; 로무스틴(CCNU); 로속산트론 하이드로클로라이드; 마소프로콜; 메이탄신; 메클로레타민 하이드로클로라이드; 메게스트롤 아세테이트; 멜렌게스트롤 아세테이트; 멜팔란; 메노가릴; 머캅토퓨린; 메토트렉세이트; 메토트렉세이트 나트륨; 메토프린; 메투레데파; 미틴도미드; 미토카신; 미토크로민; 미토길린; 미토말신; 미토마이신; 미토스퍼; 미토탄; 미톡산트론 하이드로클로라이드; 마이코페놀산; 노코다졸; 노갈라마이신; 오르마플라틴; 옥시수란; 파조티닙; 파클리탁셀; 페그아스파라기나제; 펠리오마이신; 펜타무스틴; 페플로마이신 설페이트; 퍼포스파미드; 피포브로만; 피포술판; 피록산트론 하이드로클로라이드; 플리카마이신; 플로메스탄; 포르피머 나트륨; 포르피로마이신; 프레드니무스틴; 프로카바진 하이드로클로라이드; 퓨로마이신; 퓨로마이신 하이드로클로라이드; 피라조푸린; 리보프린; 로글레티미드; 사핑골; 사핑골 하이드로클로라이드; 세무스틴; 심트라젠; 소라피닙; 스파포세이트 나트륨; 스파르소마이신; 스피로게르마늄 하이드로클로라이드; 스피로무스틴; 스피로플라틴; 스트렙토니그린; 스트렙토조신; 술로페누르; 수니티닙; 탈리소마이신; 탁솔; 테코갈란 나트륨; 테가푸르; 텔록산트론 하이드로클로라이드; 테모포르핀; 테모졸로미드; 테니포시드; 테록시론; 테스토락톤; 티아미프린; 티오구아닌; 티오테파; 티아조푸이린; 티라파자민; 토포테칸 하이드로클로라이드; 토레미펜 시트레이트; 트레스톨론 아세테이트; 트리시리빈 포스페이트; 트리메트렉세이트; 트리메트렉세이트 글루쿠로네이트; 트립토렐린; 튜불로졸 하이드로클로라이드; 우라실 머스타드; 우레데파; 바프레오티드; 베르테포르핀; 빈블라스틴 설페이트; 빈크리스틴 설페이트; 빈데신; 빈데신 설페이트; 비네피딘 설페이트; 빈글리시네이트 설페이트; 빈류로신 설페이트; 비노렐빈 타르트레이트; 빈로시딘 설페이트; 빈졸리딘 설페이트; 보로졸; 제니플라틴; 지노스타틴; 및 조루비신 하이드로클로라이드를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 추가의 항신생물제는 문헌[Chapter 52, Antineoplastic Agents (Paul Calabresi and Bruce A. Chabner), and the introduction thereto, 1202-1263, of Goodman and Gilman's "The Pharmacological Basis of Therapeutics", Eighth Edition, 1990, McGraw-Hill, Inc.]에 개시된 것들을 포함한다.
본 개시내용의 일부 측면에서, 하나 이상의 화학요법제는 알트레타민, 랄트리트렉시드, 토포테칸, 파클리탁셀, 도세탁셀, 시스플라틴, 카보플라틴, 옥살리플라틴, 리포솜 독소루비신, 겜시타빈, 사이클로포스파미드, 비노렐빈, 이포스파미드, 에토포시드, 알트레타민, 카페시타빈, 이리노테칸, 멜팔란, 페메트렉시드, 베바시주맙, 및 알부민 결합 파클리탁셀로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 하나의 특정 측면에서, 화학요법제는 파클리탁셀이다.
일부 측면에서, 대상체는 최대 3회, 최대 2회, 또는 최대 1회의 이전 화학 요법을 받았다. 또 다른 측면에서, 대상체는 재발성 암에 대해 3회 이상의 이전 화학요법을 받지 않았다.
화학요법제의 유효량이 당업계에서 이용 가능하다. 특정 측면에서, 예를 들면, 파클리탁셀의 유효량은 적어도 약 10 mg/m2, 적어도 약 20 mg/m2, 적어도 약 30 mg/m2, 적어도 약 40 mg/m2, 적어도 약 50 mg/m2, 적어도 약 60 mg/m2, 적어도 약 70 mg/m2, 적어도 약 80 mg/m2, 적어도 약 90 mg/m2, 적어도 약 100 mg/m2, 또는 적어도 약 110 mg/m2일 수 있다. 또 다른 측면에서, 파클리탁셀의 유효량은 약 10 mg/m2 내지 약 200 mg/m2, 약 20 mg/m2 내지 약 150 mg/m2, 약 30 mg/m2 내지 약 100 mg/m2, 또는 40 mg/m2 내지 약 80 mg/m2이다. 또 다른 측면에서, 파클리탁셀의 유효량은 약 10 mg/m2, 약 20 mg/m2, 약 30 mg/m2, 약 40 mg/m2, 약 50 mg/m2, 약 60 mg/m2, 약 70 mg/m2, 약 80 mg/m2, 약 90 mg/m2, 또는 약 100 mg/m2이다.
특정 측면에서, 벡터의 수술후 용량은 3 x 1012 내지 3 x 1013 VP의 유효량으로 투여되고 파클리탁셀은 40 mg/m2 내지 100 mg/m2의 유효량으로 투여된다.
일부 측면에서, 하나 이상의 화학요법제는 반복적으로 투여된다. 특정 측면에서, 하나 이상의 화학요법제는 약 7일에 한 번, 약 2주에 한 번, 약 3주에 한 번, 약 4주에 한 번, 약 2개월에 한 번, 약 3개월에 한 번, 약 4개월에 한 번, 약 5개월에 한 번, 또는 약 6개월에 한 번 반복적으로 투여된다.
B. VEGF 길항제
본 개시내용의 일부 측면에서, 하나 이상의 화학요법제는 VEGF 길항제이다.
혈관 내피 성장 인자인 VEGF는 내피 세포-특이 미토겐 및 혈관신생의 유도제이다. VEGF라는 용어는 VEGF 유전자 계열의 구성원을 포함한다: VEGF-A, VEGF-B, VEGF-C 및 VEGF-D. VEGF-A는 VEGF 유전자 계열의 원형 구성원으로 간주된다. 대체 엑손 스플라이싱을 통해, VEGF-A는 4가지 다른 이소형으로 존재한다: VEGF121, VEGF165, VEGF189, 및 VEGF206. 4개의 VEGF-A 이소형은 신호 서열 절단 후 (각각) 121, 165, 189 및 206개 아미노산 길이이다.
일단 발현되면, VEGF는 세포외로 분비되고, 여기서 이것은 VEGF 수용체(VEGFR)의 세포외 영역에 결합한다. 2개의 주요 VEGFR, VEGFR-1 또는 VEGFR-2가 있으며, 이들 둘 다는 수용체 티로신 키나제이다. 제3 VEGFR인 VEGFR-3은 VEGF-C 및 VEGF-D에만 결합하는 관련 수용체 티로신 키나제이다. VEGF에 결합시, VEGFR은 내피 세포 증식 및 혈관신생을 야기하는 하류 이벤트에 신호를 보낸다. VEGF-C 및 VEGF-D는 림프 혈관신생을 조절하는 것으로 알려져 있다.
VEGF 유전자는 저산소증-유도성 인자-1(HIF-1)과 매우 상동성인 뉴클레오티드 서열을 함유한다. 이러한 HIF-1 유사 서열은 저산소 조건하에서 VEGF 유전자 발현의 유도를 가능하게 한다. 따라서, 종양 미세환경 내와 같은 저산소 조건하에서, VEGF 유전자 발현이 유도된다. 종양 베드 내에서 높은 수준의 VEGF의 생성은 VEGFR 신호전달을 증가시켜 내피 세포 성장 및 혈관신생을 초래한다. 종양 내의 새로운 혈관의 형성은 성장하는 종양에 혈액과 산소를 제공한다.
혈관신생 및 종양 성장과 발달에 있어서의 VEGF의 두드러진 역할로 인해, VEGF 길항제는 잠재적인 암 치료제로서 연구된다. VEGF 길항제는 VEGF에 직접 결합하여 VEGFR과의 상호작용을 차단함으로써 VEGF 활성을 방지할 수 있다. 이것은 VEGFR 및 하류 이벤트로부터의 신호전달을 감소시켜 혈관신생 감소를 야기한다. 본 개시내용의 일부 측면에서, 상기 방법에 유용한 VEGF 길항제는 항-VEGF 항체 또는 VEGF 결합 분자이다. 본 개시내용의 일부 측면에서, 항-VEGF 항체 또는 VEGF-결합 분자는 단클론 항체, 인간화 항체, 인간 항체, 단일 쇄 항체 또는 키메라 항체이다. 일부 측면에서, 치료법을 위한 항-VEGF 항체 또는 VEGF-결합 분자는 Fab, F(ab)2, Fv, 또는 scFv를 포함한다.
VEGF 활성을 감소시키거나 억제할 수 있는 VEGF 길항제의 또 다른 유형은 VEGFR에 결합하여 VEGF와 VEGFR 상호작용을 차단하는 분자이다. 수용체/리간드 결합의 이러한 간섭은 VEGFR 신호전달을 방지하고 혈관신생 및 내피 세포 증식을 감소시킨다. 본 개시내용의 일부 측면에서, VEGF 길항제는 항-VEGFR 항체 또는 VEGFR-결합 분자이다. 일부 측면에서, 항-VEGFR 항체 또는 VEGFR-결합 분자는 단클론 항체, 인간화 항체, 인간 항체, 단일 쇄 항체 또는 키메라 항체이다. 일부 측면에서, 항-VEGFR 항체 또는 VEGFR-결합 분자는 Fab, F(ab)2, Fv, 또는 scFv를 포함한다.
VEGF 또는 VEGFR에 결합하는 VEGF 길항제는 수용체/리간드 상호작용, VEGFR 신호전달, 및 하류 신호전달 이벤트, 예를 들어 내피 세포 증식 및 혈관신생을 방지한다는 점에서 유사한 작용 메카니즘에 의해 VEGF 활성을 억제할 수 있다. 따라서, 본 개시내용의 일부 측면에서, VEGF 길항제는 베바시주맙(미국 특허 제7,169,901호, 전문이 본원에 참고로 포함됨), 라니비주맙(미국 특허 제7,297,334호, 전문이 본원에 참고로 포함됨), VGX-100(미국 특허 제7,423,125호, 전문이 본원에 참고로 포함됨), r84(미국 특허 제8,034,905호, 전문이 본원에 참고로 포함됨), 애플리버셉트(미국 특허 제5,952,199호, 전문이 본원에 참고로 포함됨), IMC-18F1(미국 특허 제7,972,596호, 전문이 본원에 참고로 포함됨), IMC-1C11(제PCT/US2000/02180호, 전문이 본원에 참고로 포함됨), 및 라무시루맙(미국 특허 제7,498,414, 전문이 본원에 참고로 포함됨)으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. VEGF 결합 분자는 항체 유래 분자의 다른 형태, 예를 들어 모노바디, 디아바디, 미니바디, 또는 VEGF 결합 항체의 적어도 하나의 CDR을 포함하는 임의의 키메라 단백질, 예를 들어 베바시주맙을 포함한다.
특정 측면에서, 항-VEGF 항체 또는 VEGF 결합 분자는 VH CDR1 (서열 번호 28), VH CDR2 (서열 번호 29), VH CDR3 (서열 번호 30), VL CDR1 (서열 번호 31), VL CDR2 (서열 번호 32), VL CDR3 (서열 번호 33), 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 적어도 하나의 CDR을 포함한다. 표 4 참조.
표 4. 상보성 결정 영역의 아미노산 서열
Figure pct00007
특정 측면에서, 항-VEGF 항체 또는 VEGF 결합 분자는 베바시주맙의 중쇄 가변 영역(VH)의 CDR1 (서열 번호 28), CDR2 (서열 번호 29), 또는 CDR3 (서열 번호 30)을 포함한다. 예를 들면, 항-VEGF 항체 또는 VEGF 결합 분자는 VH의 CDR1 및 CRD2, VH의 CDR1 및 CDR3, VH의 CDR2 및 CDR3, 또는 VH의 CDR1, CDR2, 또는 CDR3을 포함한다. 특정 측면에서, 항-VEGF 항체 또는 VEGF 결합 분자는 베바시주맙의 경쇄 가변 영역(VL)의 CDR1 (서열 번호 31), CDR2 (서열 번호 32), 또는 CDR3 (서열 번호 33)을 포함한다. 예를 들면, 항-VEGF 항체 또는 VEGF-결합 분자는 VL의 CDR1 및 CDR2, VL의 CDR1 및 CDR3, VL의 CDR2 및 CDR3, 또는 VL의 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함한다. 일부 양태에서, 항-VEGF 항체 또는 VEGF 결합 분자는 베바시주맙의 VH를 포함한다. 특정 양태에서, 항-VEGF 항체 또는 VEGF 결합 분자는 베바시주맙의 VL을 포함한다.
본 개시내용의 또 다른 측면에서, 항-VEGF 항체 또는 VEGF 결합 분자는 VH CDR1 (서열 번호 28), VH CDR2 (서열 번호 29), VH CDR3 (서열 번호 30), VL CDR1 (서열 번호 31), VL CDR2 (서열 번호 32), 및 VL CDR3 (서열 번호 33)을 포함한다.
VEGF 길항제의 유효량이 당업계에서 이용 가능하다. 예를 들면, VEGF 길항제(예를 들어, 베바시주맙)의 용량은 mg/체중 kg으로 측정될 수 있다. 하나의 측면에서, 예를 들면, 베바시주맙의 유효량은 적어도 약 1mg/kg, 2 mg/kg, 3 mg/kg, 4 mg/kg, 5mg/kg, 6 mg/kg, 7 mg/kg, 8 mg/kg, 9 mg/kg, 10 mg/kg, 11 mg/kg, 12 mg/kg, 13 mg/kg, 14 mg/kg, 또는 15 mg/kg일 수 있다. 일부 측면에서, 베바시주맙의 유효량은 약 15 mg/kg, 14 mg/kg, 13 mg/kg, 12 mg/kg, 11 mg/kg, 10 mg/kg, 9 mg/kg, 8 mg/kg, 7 mg/kg, 6 mg/kg, 5 mg/kg, 4 mg/kg, 3 mg/kg, 2 mg/kg, 또는 1 mg/kg 이하를 포함한다. 하나의 측면에서, 벡터의 수술후 용량과 조합하여 투여되는 베바시주맙의 용량은 벡터가 없는 베바시주맙(예를 들어, 베바시주맙 단독을 사용하는 치료법)의 용량보다 낮다.
특정 측면에서, 벡터의 수술후 용량은 3 x 1012 내지 3 x 1013 VP의 유효량으로 투여되고 베바시주맙은 5 mg/kg 내지 15 mg/kg의 유효량으로 투여된다.
일부 측면에서, VEGF 길항제(예를 들어, 베바시주맙)는 반복적으로 투여된다. 특정 측면에서, 베바시주맙은 약 7일에 한 번, 약 2주에 한 번, 약 3주에 한 번, 약 4주에 한 번, 약 2개월에 한 번, 약 3개월에 한 번, 약 4개월에 한 번, 약 5개월에 한 번, 또는 약 6개월에 한 번 반복적으로 투여된다. 보다 특정한 측면에서, 베바시주맙은 약 2주에 한 번 반복적으로 투여된다.
본 개시내용은 대상체에게 시동 용량의 벡터를 투여하는 단계(여기서, 벡터의 시동 용량은 종양 또는 이의 일부를 외과적으로 제거하기 전에 투여된다); 종양 또는 이의 일부를 외과적으로 제거하는 단계; 및 베바시주맙과 조합하여 수술후 용량의 벡터를 대상체에게 투여하는 단계를 포함하여, 종양을 갖는 대상체에서 항종양 반응을 유도하거나 개선하는 방법을 제공한다.
본 개시내용은 또한 대상체에게 시동 용량의 벡터를 투여하는 단계(여기서, 벡터의 시동 용량은 종양 또는 이의 일부를 외과적으로 제거하기 전에 투여된다); 종양 또는 이의 일부를 외과적으로 제거하는 단계; 및 베바시주맙과 조합하여 수술후 용량의 벡터를 대상체에게 투여하는 단계를 포함하여, 대상체에서 종양의 크기를 감소시키거나 억제하는 방법을 제공한다.
본 개시내용은 또한 대상체에게 시동 용량의 벡터를 투여하는 단계(여기서, 벡터의 시동 용량은 종양 또는 이의 일부를 외과적으로 제거하기 전에 투여된다); 종양 또는 이의 일부를 외과적으로 제거하는 단계; 및 베바시주맙과 조합하여 수술후 용량의 벡터를 대상체에게 투여하는 단계를 포함하여, 종양을 갖는 대상체에서 혈관신생을 억제하거나 감소시키는 방법을 제공한다.
본 개시내용은 또한 대상체에게 시동 용량의 벡터를 투여하는 단계(여기서, 벡터의 시동 용량은 종양 또는 이의 일부를 외과적으로 제거하기 전에 투여된다); 종양 또는 이의 일부를 외과적으로 제거하는 단계; 및 베바시주맙과 조합하여 수술후 용량의 벡터를 대상체에게 투여하는 단계를 포함하여, 대상체의 종양에서 내피 세포의 아폽토시스를 유도하는 방법을 제공한다.
본 개시내용은 또한 대상체에게 시동 용량의 벡터를 투여하는 단계(여기서, 벡터의 시동 용량은 종양 또는 이의 일부를 외과적으로 제거하기 전에 투여된다); 종양 또는 이의 일부를 외과적으로 제거하는 단계; 및 베바시주맙과 조합하여 수술후 용량의 벡터를 대상체에게 투여하는 단계를 포함하여, 대상체에서 종양과 관련된 질병 또는 병태를 치료하는 방법을 제공한다.
본 개시내용의 일부 측면에서, 수술후 용량의 벡터 및 베바시주맙을 투여하는데 사용되는 섭생은 벡터와 베바시주맙의 반복 투여를 포함한다. 하나의 측면에서, 벡터는 매일, 약 2일에 한 번, 약 3일에 한 번, 약 4일에 한 번, 약 5일에 한 번, 약 6일에 한 번, 약 7일에 한 번, 약 2주에 한 번, 약 3주에 한 번, 약 4주에 한 번, 약 5주에 한 번, 약 6주에 한 번, 약 7주에 한 번, 약 2개월에 한 번, 또는 약 6개월에 한 번 반복적으로 투여된다. 또 다른 측면에서, 베바시주맙은 약 7일에 한 번, 약 2주에 한 번, 약 3주에 한 번, 약 4주에 한 번, 약 2개월에 한 번, 약 3개월에 한 번, 약 4개월에 한 번, 약 5개월에 한 번, 또는 약 6개월에 한 번 반복적으로 투여된다. 특정 측면에서, 벡터는 2개월마다 투여되고 베바시주맙은 2주마다 투여된다.
V. 약제학적 조성물
또한, 본 발명에서는 본 발명의 방법에 사용되는 Fas-키메라 단백질을 발현하는 벡터를 포함하는 약제학적 조성물이 제공된다. 약제학적 조성물은 인간을 포함한 포유동물에게 투여하기 위해 제형화될 수 있다. 본 발명의 방법에 사용되는 약제학적 조성물은, 예를 들어, 이온 교환체, 알루미나, 알루미늄 스테아레이트, 레시틴, 혈청 단백질, 예를 들어 인간 혈청 알부민, 완충 물질, 예를 들어 인산염, 글리신, 소르브산, 칼륨 소르베이트, 포화 식물성 지방산, 물, 염 또는 전해질의 부분 글리세리드 혼합물, 예를 들어 프로타민 설페이트, 인산수소이나트륨, 인산수소칼륨, 염화나트륨, 아연 염, 콜로이드성 실리카, 마그네슘 트리실리케이트, 폴리비닐 피롤리돈, 셀룰로스계 물질, 폴리에틸렌 글리콜, 나트륨 카복시메틸셀룰로스, 폴리아크릴레이트, 왁스, 폴리에틸렌-폴리옥시프로필렌 블록 중합체, 폴리에틸렌 글리콜 및 양모지를 포함하는 약제학적으로 허용되는 담체를 포함한다. 하나의 양태에서, 조성물은 염수를 첨가함으로써 제형화된다.
본 개시내용의 조성물은 임의의 적합한 방법에 의해, 예를 들어, 비경구(예를 들어, 피하, 정맥내, 근육내, 관절내, 활막내, 흉골내, 척추강내, 간내, 병변내 및 두개내 주사 또는 주입 기술 포함), 뇌실내, 경구, 흡입 스프레이, 국소, 직장, 비강, 협측, 질 또는 이식된 저장소를 통해 투여될 수 있다. 하나의 양태에서, 병용 요법은 전신 또는 국소로 전달된다. 전신 또는 국소 전달을 위해, 약제학적 제형은 바늘, 캐뉼라 또는 수술 기구와 같은 기계적 장치를 사용하여 투여될 수 있다.
본 발명의 방법에 사용되는 조성물의 멸균 주사 가능한 형태는 수성 또는 유성 현탁액일 수 있다. 이들 현탁액은 적합한 분산제 또는 습윤제 및 현탁제를 사용하여 당업계에 공지된 기술에 따라 제형화될 수 있다. 멸균 주사 가능한 제제는 또한 무독성 비경구적으로 허용되는 희석제 또는 용매 중의 멸균 주사 가능한 용액 또는 현탁액, 예를 들면 1,3-부탄디올 중의 현탁액일 수 있다. 사용될 수 있는 허용 가능한 비히클 및 용매 중에는 물, 링거 용액 및 등장성 염화나트륨 용액이 있다. 또한, 멸균 고정유가 용매 또는 현탁 매질로서 통상적으로 사용된다. 이러한 목적을 위해, 합성 모노- 또는 디-글리세리드를 포함한 임의의 완하성 고정유가 사용될 수 있다. 올레산 및 이의 글리세리드 유도체와 같은 지방산은 특히 폴리옥시에틸화된 버전에서 올리브유 또는 피마자유와 같은 약제학적으로 허용되는 천연 오일과 마찬가지로 주사제의 제조에 유용하다. 이러한 오일 용액 또는 현탁액은 또한 장쇄 알콜 희석제 또는 분산제, 예를 들어 카복시메틸 셀룰로스 또는 에멀젼 및 현탁액을 포함한 약제학적으로 허용되는 투여 형태의 제형화에 통상적으로 사용되는 유사한 분산제를 함유할 수 있다. 다른 일반적으로 사용되는 계면활성제, 예를 들어 Tweens, Spans 및 약제학적으로 허용되는 고체, 액체 또는 기타 투여 형태의 제조에 일반적으로 사용되는 기타 유화제 또는 생체이용률 향상제가 또한 제형화의 목적으로 사용될 수 있다.
비경구 제형은 단일 볼루스 용량, 주입 또는 부하 볼루스 용량에 이은 유지 용량일 수 있다. 이들 조성물은 특정의 고정된 또는 가변 간격, 예를 들어 하루에 한 번, 또는 "필요에 따라" 투여될 수 있다.
본 발명의 방법에 사용되는 특정 약제학적 조성물은 예를 들어 캡슐, 정제, 수성 현탁액 또는 용액을 포함하는 허용되는 투여 형태로 경구 투여될 수 있다. 특정 약제학적 조성물은 또한 비강 에어로졸 또는 흡입에 의해 투여될 수 있다. 이러한 조성물은 벤질 알콜 또는 기타 적절한 보존제, 생체이용률을 향상시키기 위한 흡수 촉진제, 및/또는 기타 통상적인 가용화제 또는 분산제를 사용하여 염수 중의 용액으로서 제조될 수 있다.
실시예
실시예 1
당해 실시예는 외과적으로 접근 가능한 재발성/진행성 교모세포종(GBM)을 가진 환자에서 바이러스 암 요법 Ad5-PPE-1-3X-Fas-c에 대한 초기 면역학적 약력학 매개변수를 평가하기 위한 무작위 조절된 II상 외과적 시험을 제공한다.
목적:
연구 설계
이것은 외과적으로 접근 가능한 재발성/진행성 교모세포종(rGBM)을 가진 참가자에서 Ad5-PPE-1-3X-Fas-c 바이러스 암 요법, ofranergene obadenovec(VB-111)에 대한 초기 면역학적 약력학 매개변수를 평가하기 위한 무작위 조절된 맹검 II상 외과적 시험이다. 이 연구의 주요 목표는 신보강제(neoadjuvant) VB-111이 종양 면역학적 반응을 유발하는지, 면역 반응이 종양 및 말초 혈액 면역 세포를 사용하여 민감하게 모니터링될 수 있는지, 신보강제 VB-111이 종양-특이 T 세포를 증가시키는지를 조사하는 것이다. 도 1 참조.
그룹 A: 1x1013 VP의 VB-111이 수술 21±7일 전에 정맥내로 투여될 것이다. 수술로부터 회복시(수술 후 28-35일 이내) 참가자는 6주마다 정맥내 VB-111을 제공받을 것이다. 조영-증강 진행(contrast-enhancing progression)의 증거가 있는 경우, 참가자는 지지 치료를 위해 필요에 따라 베바시주맙을 개시할 수 있으며 진행이 2개의 연속적인 종양 성장 시점에 의해 뒷받침될 때까지 VB-111 주입을 계속할 것이다.
그룹 B: 위약이 수술 21±7일 전에 정맥내 투여될 것이다. 수술로부터 회복시(수술 후 28-35일 이내) 참가자는 6주마다 정맥내 VB-111을 제공받을 것이다. 조영-증강 진행의 증거가 있는 경우, 참가자는 지지 치료를 위해 필요에 따라 베바시주맙을 개시할 수 있으며 진행이 2개의 연속적인 종양 성장 시점에 의해 뒷받침될 때까지 VB-111 주입을 계속할 것이다.
그룹 C: 위약이 수술 21±7일 전에 정맥내 투여될 것이다. 수술로부터 회복시, 참가자는 진행의 증거가 2개의 연속적인 종양 성장 시점에 의해 뒷받침될 때까지 6주마다 표준 치료를 제공받을 것이다.
수술로부터 회복 후, 참가자는 치료에 대한 반응을 평가하기 위해 방사선학 이미징을 사용하여 6주마다 평가될 것이다. 신경-종양학에서의 반응 평가(RANO) 기준이 반응률의 효능 종점으로서 사용될 것이다. (섹션 11.4에 기술된 바와 같은) 수정된 RANO(iRANO)가 면역요법 치료에서 보이는 종양 반응 패턴으로 인해 탐색 방식으로 반응 및 진행을 평가하는데 사용될 것이다. 이상 반응은 시험 전반에 걸쳐 모니터링될 것이며 이상 반응에 대한 NCI 공통 용어 기준(CTCAE) 버전 5.0에 요약된 지침에 따라 중증도의 등급이 매겨질 것이다. 연구 요법으로의 치료는 2개의 연속적인 종양 성장 시점, 허용할 수 없는 이상 반응(들), 치료의 추가 투여를 방해하는 병발성 질환, 참가자 철회에 대한 연구자의 결정, 참가자의 동의 철회, 참가자의 임신, 시험 치료 또는 절차 요구사항에 대한 비준수, 24개월의 연구 요법 완료, 또는 관리상 이유에 의해 진행이 뒷받침될 때까지 계속될 것이다.
이 연구는 다음을 유도하는 VB-111의 신보강제 사용을 정의할 것이다: 1) 종양 내에서 종양 침윤 T 림프구 증가; 및 2) 강화된 전신 특이 T 세포 반응. 종양 조직, 말초 혈액, 및 이미징 평가의 조합이 평가될 것이다.
일차 목표
일차 목표 1: 재발성/진행성 GBM 참가자에서 종양 침윤 T 림프구(TIL) 밀도에 대한 VB-111의 영향을 평가하기 위함.
신보강제 VB-111은 보강제 및 대조군 종양과 비교하여 종양 내 종양 침윤 T 림프구를 증가시키고 전신 종양-특이 T 세포 반응을 향상시킬 것이다.
일차 목표 2: 수술을 받는 진행성/재발성 GBM 참가자에서 정맥내 VB-111의 안전성과 내약성을 평가하기 위함.
안전성 분석은 중대한 이상 반응(SAE) 및 임상 관심 사례(ECI)를 포함하여 CTCAE 버전 5.0 기준에 의해 정의된 바와 같은 독성 및 등급을 기반으로 할 것이다. 약물 귀인, 발병 시간, 사례의 지속기간, 해결, 및 투여된 모든 병용 약물이 기록될 것이다. 분석된 AE는 모든 AE, SAE 및 치명적 AE를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
이차 목표
이차 목표 1: RANO 기준을 사용하여, 대조군(그룹 C)과 비교하여 VB-111로 치료한 재발성/진행성 GBM 참가자(그룹 A 및 그룹 B)에서 6개월 무진행 생존율(PFS6)을 추정하기 위함. VB-111로 치료받은 참가자의 더 많은 비율이 치료 후 6개월에 종양 진행을 경험하지 않았을 것으로 예상된다.
이차 목표 2: 각 아암에서 재발성/진행성 GBM 참가자의 전체 생존율을 계산하기 위함. VB-111로 치료받은 진행성/재발성 GBM 참가자는 그룹 C 및/또는 이 참가자 모집단의 과거 대조군보다 상당히 더 오래 살 것으로 예상된다.
이차 목표 3: 말초 T 세포 반응, 특히 확장된 TCR 클론에 대한 VB-111의 영향을 평가하기 위함. VB-111에 대한 반응으로 TCR 클론의 특정 하위세트가 확장될 것으로 예상된다.
탐색 목표
다음을 포함하는 탐색적 바이오마커, 임상 결과 및 이상 반응 간의 연관성을 평가하기 위함:
· 종양 미세환경 내에서 세포 주기-관련 유전적 시그니처 또는 IFN-γ 관련 시그니처에 대한 VB-111의 영향을 탐색하고, 임상 반응과 상호연관시킴.
· 종양 조직 및 말초 혈액 내의 올리고클론성 T-세포 집단에 대한 VB-111의 영향을 탐색하고, 임상 반응과 상호연관시킴.
· 특정 MRI 매개변수에 대한 VB-111의 영향을 탐색하고, 종양 및 말초 혈액 면역 반응과 상호연관시킴.
· RANO에 의해 정의된 바와 같은 PFS 및 OS에 의한 VB-111의 효능을 추정함.
· iRANO에 의해 정의된 바와 같은 PFS6, PFS 및 OS에 의한 VB-111의 효능을 추정함.
참가자 선정
포함 기준
다음은 포함 기준이 될 것이다:
조직학적으로 확인된 교모세포종의 진단;
방사선으로 초기 진단시 표준 치료 후 (RANO 기준에 따른) 교모세포종/교육종의 1차 또는 2차 진행;
진행시 RANO 기준에 의한 측정 가능한 질병;
기준선에서 최대 종양 체적은 다음 기준을 충족한다: 최장 직경 ≤ 4cm;
진행시 외과적으로 절제 가능한 질병;
무작위 배정 전 다음 기간의 간격:
· 이전 외과적 절제로부터 적어도 28일, 또는 정위 생검으로부터 7일;
· 종양 진행에 대한 명백한 조직학적 확인이 없는 한, 이전 방사선요법으로부터 적어도 12주;
· 이전 화학요법으로부터 적어도 23일;
· 니트로소우레아로부터 적어도 42일;
· 다른 항종양 요법(백신 포함)으로부터 적어도 42일;
· 모든 연구용 제제로부터 적어도 28일.
매일 덱사메타손 2mg 이하의 코르티코스테로이드 사용. 참가자는 연구 전반에 걸쳐 스테로이드 용량을 늘릴 필요가 있을 것이라는 예상 없이 무작위 배정 전 적어도 1주일 동안 안정 용량 또는 감소 용량을 유지해야 한다;
연령 ≥ 18세;
KPS ≥ 70%;
적어도 3개월의 기대 수명;
다음 기준에 따른 적절한 골수, 간 및 신장 기능:
· 절대 호중구 수 ≥ 1,500개 세포/mL
· 혈소판 ≥ 100,000개 세포/mL.
· 총 빌리루빈 수치 > 1.5 규격 ULN을 갖는 대상체의 경우 정상 상한치(ULN) 내의 총 빌리루빈 또는 직접 빌리루빈 ≤ 규격 ULN.
· 아스파르테이트 아미노트랜스퍼라제 (AST) ≤ 2.0 x ULN.
· (Cockcroft-Gault 공식으로 계산된) 정상 한계치 이상의 크레아티닌 수치를 가진 참가자의 경우 혈청 크레아티닌 수준 ≤ ULN 또는 크레아티닌 청소율 ≥ 50 mL/min;
· 서면 동의 문서를 이해하고 서명할 수 있는 능력;
· 가임 여성과 남성은 시험 기간 전반에 걸쳐 표준 피임법을 사용해야 한다;
가임 여성은 초기 스크리닝시 및/또는 1일차 전 7일 이내에 혈청 베타-인간 융모막 성선 자극 호르몬 임신 검사가 음성이어야 한다;
가임 여성과 가임 여성 배우자가 있는 남성은 두 가지 신뢰할 수 있는 피임 방법을 동시에 사용하거나 연구 시작 전, 치료를 받는 동안, 및 치료를 받은 후 4개월 동안 이성간 접촉을 완전히 금하는데 동의해야 한다. 한 가지 방법은 자궁내 장치, 호르몬(피임약, 주사 또는 임플란트), 난관 결찰 또는 파트너의 정관 절제술과 같은 매우 효과적인 방법을 포함해야 한다. 다른 방법은 추가의 호르몬 요법 또는 남성용 콘돔, 격막 또는 자궁경부 캡과 같은 차단 피임법일 수 있다. 여성 또는 그녀의 파트너가 연구에 참가하는 동안 임신했거나 임신이 의심된다면 즉시 담당의에게 알려야 한다.
여성이 ≥ 12개월의 무월경 기간 및 연령 ≥ 45세로 정의되는 폐경 후이거나 자궁적출술 및/또는 양측 난소절제술을 받았다면 여성은 가임 가능성이 없는 것으로 간주된다.
배제 기준
다음은 제외 기준이다:
연구용 제제의 연구에서 또는 연구 장치를 사용한 현재 또는 계획된 참가. 주로 뇌간 또는 척수에 국한된 종양을 가짐.
미만성 연수막 질환 또는 두개외 질환의 존재를 가짐.
1차 연구 치료 전 28일 이내에 외과적 처치(개방 생검, 외과적 절제, 상처 교정, 또는 체강으로의 진입을 포함한 기타 주요 수술 포함) 또는 유의한 외상성 손상.
1차 연구 치료 후 7일 이내에 경미한 외과적 처치(예를 들어, 정위 생검 또는 션트 배치), 1차 연구 치료의 2일 이내에 혈관 통로의 배치.
연구 치료 기간 동안 GBM 병변에 대해 의도된 신경외과적 절차 이외의 수술을 받을 것으로 예상됨.
이전의 정위적 방사선요법(참고: SRS 치료 부위에서 종양 재발이 판명된 생검을 가진 사람들은 연구 중앙 조사관의 승인을 받은 경우 자격이 있는 것으로 간주되어야 함).
VEGF 격리제(즉, 베바시주맙, 애플리버셉트 등) 또는 VEGFR 억제제(세디리닙, 파조파닙, 수니티닙, 소라페닙 등)를 포함한 이전의 항혈관신생 요법.
연구 약물 VB-111의 이전 투여.
연구 결과를 방해할 수 있는 병용 약물(예를 들어, 흡입, 국소 또는 관절내 스테로이드 이외의 면역억제제 또는 최대 <2mg/일의 덱사메타손 등가물의 경구 코르티코스테로이드의 안정 또는 감소 용량).
알려진 활성 2차 악성 종양. 예외는 비-흑색종 피부암, 비-전이성 전립선암, 제자리 자궁경부암, 및 유방의 제자리 관상피 또는 소엽 암종을 포함한다. 참가자는 항암 요법을 완료하고 스크리닝 전 2년 이상 질병이 없었다면 현재 활성 악성 종양이 있는 것으로 간주되지 않는다.
진행중이거나 활동성인 감염, 증상이 있는 울혈성 심부전, 불안정 협심증, 심장 부정맥, 또는 연구 요건 준수를 제한하는 정신 질환/사회적 상황을 포함하지만 이에 제한되지 않는 조절되지 않는 병발성 질환.
무작위 배정 전 6개월 이내에 뇌졸중 또는 일과성 허혈 발작의 병력.
MRI 스크리닝에서 CNS 출혈 CTCAE 등급 2 이상의 증거.
무작위 배정 전 6개월 이내에 활동성 심장 질환(즉, 급성 관상 동맥 증후군, 불안정 협심증, 뉴욕 심장 협회 등급 II 이상의 울혈성 심부전, 또는 약물로 조절되지 않거나 프로토콜 치료를 잠재적으로 방해할 수 있는 심각한 심장 부정맥).
무작위 배정 전 6개월 이내에 유의한 혈관 질환(예를 들어, 수술 회복을 필요로 하는 대동맥류, 말초 동맥 혈전증, 증상이 있는 말초 혈관 질환).
정맥 혈전 색전증 CTCAE 버전 5.0 등급 3 이상의 병력.
알려진 증식성 및/또는 혈관성 망막병증.
무작위 배정 1주 이내에 부적절하게 조절된 고혈압(수축기 혈압 > 150mmHg 및/또는 이완기 혈압 > 100mmHg로 정의됨).
무작위 배정 6개월 이내에 폐 출혈/객혈 ≥ 등급 2(에피소드당 ≥ 2.5mL의 밝은 적혈구로 정의됨)의 병력.
무작위 배정 전 6개월 이내에 활동성 위장관 출혈의 병력.
출혈의 위험이 있는(즉, 치료적 항응고제의 부재하에서) 유전적 출혈 체질 또는 유의한 응고병증의 병력 또는 증거.
현재 또는 최근(연구 무작위 배정 10일 이내) 아스피린 > 325mg/일, 클로피도그렐 > 75mg/일 또는 등가물 사용. 항응고제의 치료적 또는 예방적 사용이 허용됨.
알려진 간 질환(알콜성, 약물/독소 유도된, 유전적 또는 자가면역).
위장관 천공 또는 농양의 병력.
지난 6개월 이내에 HIV, HBV, HCV 바이러스 중 어느 것에 대한 검사 양성. 예외는 과거 노출을 나타내지만 활동성 감염의 증거가 없는(예를 들어 음성 PCR) HBV에 대해 혈청학적 양성인 참가자를 포함한다.
무작위 배정 전 6개월 이내에 두개내 농양의 병력.
치유되지 않은 심각한 상처, 활동성 궤양 또는 치료되지 않은 골절.
임신 또는 수유 중인 참가자.
연구 계획
이것은 외과적으로 접근 가능한 재발성/진행성 교모세포종(rGBM)이 있는 참가자에서 바이러스성 암 요법 VB-111에 대한 초기 면역학적 약력학 매개변수를 정의하기 위한 무작위 조절된 맹검 II상 외과적 시험이다.
참가자는 기준선 방문시 무작위화 배정 최대 14일 전에 적격성에 대해 스크리닝될 것이다. 이들은 1:1:1 비율의 신보강제/보강제 아암(그룹 A), 보강제 아암(그룹 B) 및 대조군 아암(그룹 C)의 세 그룹 중 하나로 순차적으로 무작위 배정될 것이다.
그룹 A( 신보강제 / 보강제 ): 15명의 참가자는 수술 21±7일 전에 1x1013 VP의 VB-111을 정맥내 제공받을 것이다. 종양 샘플은 수술시 수득될 것이며, 조직(신선, 냉동 및 FFPE)은 1차, 2차 및 탐색 목표를 달성하기 위해 처리될 것이다. 수술로부터 회복시(수술 후 28-35일 이내), 참가자는 종양 진행이 (RANO 기준에 기초하여) 2개의 연속적인 종양 성장 시점 또는 연구 약물의 중단이 필요한 이상 반응에 의해 뒷받침될 때까지 6주마다 단일 제제 정맥내 VB-111을 재개할 것이다. 조영-증강 진행의 초기 증거가 있고, 임상적으로 안정한다면, 참가자는 VB-111 주입을 계속할 수 있다. 베바시주맙은 임상적으로 지시된 경우 지지 요법으로서 사용될 수 있다. 혈액 샘플은 연구 전반에 걸쳐 약력학 마커로서 수득될 것이다. 사전 설정된 이상 반응 결정에 기초하여 용량 보류 및 증상 관리가 일어날 것이다. DLT는 결정되지 않을 것이다. 독성 평가 기간은 등록과 함께 시작되어 마지막 치료일 이후 30일까지 연장될 것이다. 참가자는 등록 기간부터 2차 진행까지 MRI 변화, 임상 검사 및 스테로이드 용량에 대해 추적될 것이다. 2차 연속 MRI에서 종양 진행이 확인된 후, VB-111은 중단되고 참가자는 사망할 때까지 생명 상태에 대해 3개월마다 추적될 것이다.
그룹 B( 보강제 ): 15명의 참가자는 수술 21±7일 전에 위약을 정맥내 제공받을 것이다. 종양 샘플은 수술시 수득될 것이며, 조직(신선, 냉동 및 FFPE)은 1차, 2차 및 탐색 목표를 달성하기 위해 처리될 것이다. 수술로부터 회복시(수술 후 28-35일 이내), 참가자는 종양 진행이 (RANO 기준에 기초하여) 2개의 연속적인 종양 성장 시점 또는 연구 약물의 중단이 필요한 이상 반응에 의해 뒷받침될 때까지 6주마다 단일 제제 정맥내 VB-111을 재개할 것이다. 조영-증강 진행의 초기 증거가 있고, 임상적으로 안정한다면, 참가자는 VB-111 주입을 계속할 수 있다. 베바시주맙은 임상적으로 지시된 경우 지지 요법으로서 사용될 수 있다. 혈액 샘플은 연구 전반에 걸쳐 약력학 마커로서 수득될 것이다. 사전 설정된 이상 반응 결정에 기초하여 용량 보류 및 증상 관리가 일어날 것이다. DLT는 결정되지 않을 것이다. 독성 평가 기간은 등록과 함께 시작되어 마지막 치료일 이후 30일까지 연장될 것이다. 참가자는 등록 기간부터 2차 진행까지 MRI 변화, 임상 검사 및 스테로이드 용량에 대해 추적될 것이다. 2차 연속 MRI에서 종양 진행이 확인된 후, VB-111은 중단되고 참가자는 사망할 때까지 생명 상태에 대해 3개월마다 추적될 것이다.
그룹 C(대조군): 15명의 참가자는 수술 21±7일 전에 위약을 정맥내 제공받을 것이다. 종양 샘플은 수술시 수득될 것이며, 조직(신선, 냉동 및 FFPE)은 1차, 2차 및 탐색 목표를 달성하기 위해 처리될 것이다. 수술로부터 회복시(수술 후 28-35일 이내), 참가자는 그룹 A 및 그룹 B에서 결정된 바와 같이 진행의 증거가 있을 때까지 표준 치료를 제공받을 것이다.
본 개시내용의 일부 측면에서, 표 5에 열거된 표준 치료 아암에 무작위 배정된 참가자에 대한 단일 제제 치료 중의 어느 것이 대조군 치료 아암에 사용될 수 있다.
표 5: 단일 제제 표준 치료.
Figure pct00008
수술로부터 회복 후, 참가자는 치료에 대한 반응을 평가하기 위해 방사선학 이미징을 사용하여 6주마다 평가될 것이다. 신경-종양학에서의 반응 평가(RANO) 기준이 반응률의 효능 종점으로서 사용될 것이다. 수정된 RANO(iRANO)가 면역요법 치료에서 보이는 종양 반응 패턴(예를 들어, 종양 플레어)으로 인해 탐색 방식으로 반응 및 진행을 평가하는데 사용될 것이다. 이상 반응은 시험 전반에 걸쳐 모니터링될 것이며 NCI CTCAE 버전 5.0에 요약된 지침에 따라 중증도의 등급이 매겨질 것이다. 연구 요법으로의 치료는 2개의 연속적인 종양 성장 시점, 허용할 수 없는 이상 반응(들), 치료의 추가 투여를 방해하는 병발성 질환, 참가자 철회에 대한 연구자의 결정, 참가자의 동의 철회, 참가자의 임신, 시험 치료 또는 절차 요구사항에 대한 비준수, 24개월의 연구 요법 완료, 또는 관리상 이유에 의해 문서화된 질환 진행이 뒷받침될 때까지 계속될 것이다.
용량 변경
VB-111과 관련된 이상 반응을 경험하고 반복 투여가 예정된 환자의 경우, 반복 투여는 사례의 중증도가 CTCAE 등급 1 이상으로 개선될 때까지 지연될 수 있다. 용량 변경은 허용되지 않는다.
표준 치료와 관련된 이상 반응을 경험하고 반복 투여가 예정된 환자의 경우, 반복 투여는 사례의 중증도가 CTCAE 등급 1 이상으로 개선될 때까지 지연될 수 있다. 표준 치료 요법의 경우 용량 감소가 허용된다.
의학적/외과적 사건 또는 연구 요법과 관련되지 않은 병참학적 이유(예를 들어, 예정 수술, 관련없는 의학적 사건, 참가자 휴가 및/또는 휴일)의 경우 투여 중단이 허용된다. 후원자와 달리 논의하지 않는 한, 참가자는 예정된 중단 3주 이내에 연구 요법을 원래대로 되돌려야 한다. 중단에 대한 이유는 참가자의 연구 기록에 문서화되어야 한다.
연구 약물의 추가 투여에 대한 기준
이전 연구-관련 개입의 독성 효과로부터 등급 1 이하로 회복됨.
다음 기준에 따른 적절한 골수, 간 및 신장 기능:
· 절대 호중구 수 ≥ 1,500개 세포/mL
· 혈소판 ≥ 100,000개 세포/mL.
· 정상 상한치(ULN) 이내의 총 빌리루빈.
· 아스파르테이트 아미노트랜스퍼라제 (AST) ≤ 2.0 x ULN.
· (Cockcroft-Gault 공식으로 계산된) 정상 한계치 이상의 크레아티닌 수치를 가진 참가자의 경우 혈청 크레아티닌 수준 ≤ ULN 또는 크레아티닌 청소율 ≥ 50 mL/min.
여성의 경우, 임신 검사에서 음성.
연구자의 의견으로, 연구 약물로의 참가자의 지속적인 치료에 대해 과도한 위험을 유발할 수 있는 병발성 질환 또는 의학적 병태가 없음.
상기 열거된 기준을 충족시킬지 의심스럽거나 충족시키지 못하는 경우, 연구자는 치료 진행 방법에 대한 지침에 대해 의료 모니터(Medical Monitor)와 연락해야 한다.
용량 투여 시기
시동 용량 투여
VB-111/위약은 무작위 배정으로부터 5일 이내에 투여되어야 한다.
그룹 A: 참가자는 예정된 수술 절제 21±7일 전에 정맥내 주입에 의해 VB-111 1x1013 VP를 제공받을 것이다.
그룹 B: 참가자는 예정된 수술 절제 21±7일 전에 정맥내 주입에 의해 위약을 제공받을 것이다.
그룹 C: 참가자는 예정된 수술 절제 21±7일 전에 정맥내 주입에 의해 위약을 제공받을 것이다.
수술후 용량 투여
그룹 A 및 그룹 B의 경우, 수술로부터 회복시(수술 후 28~35일 이내), 모든 절차/평가를 완료하고 검토한 후 시험 치료를 투여해야 한다. 시험 치료는 관리상 이유로 인해 각 주기의 예정된 주입/주사일 전후 3일까지 투여될 수 있다.
모든 시험 치료는 외래 환자를 기준으로 투여될 것이다.
그룹 A: 참가자는 6주마다 VB-111을 재개할 것이다.
그룹 B: 참가자는 6주마다 VB-111을 제공받을 것이다.
그룹 C: 참가자는 표준 치료를 제공받을 것이다.
치료법의 기간 및 연구 치료로부터의 제외에 대한 기준
치료법의 기간은 개별 반응, 질병 진행의 증거 및 내성에 따라 좌우될 것이다. 치료는 최대 24개월 동안 또는 다음 기준 중 하나가 적용될 때까지 계속될 수 있다:
참가자 또는 법정 대리인(부모 또는 법정 후견인과 같은)이 동의를 철회함;
방사선학적 종양 진행이 2개의 연속적인 종양 성장 시점에 의해 뒷받침됨;
허용할 수 없는 불리한 경험;
치료의 추가 투여를 방해하는 병발성 질환;
참가자 철회에 대한 연구자의 결정;
참가자가 혈청 임신 검사에서 양성으로 확인됨;
시험 치료 또는 절차 요구사항에 대한 비준수;
참가자 상태의 일반적 또는 특이적 변화로 인해 치료하는 연구자의 판단에서 참가자가 추가 치료를 받아들일 수 없음; 또는
관리상 이유.
이들 기준 중 어느 것이 적용될 때 참가자는 프로토콜 요법에서 제외될 것이다. 프로토콜 요법에서 제외된 이유와 참가자가 제외된 날짜는 사례 보고서 양식(CRF)으로 문서화되어야 한다. 대체 치료 옵션은 참가자와 논의될 것이다.
비정상적이거나 생명을 위협하는 합병증의 경우, 치료하는 연구자는 전체 임상 주 연구자에게 즉시 통지해야 한다.
치료 평가의 종료 및 추적조사
치료 종료 후, 각 참가자는 이상 반응 모니터링을 위해 30일 및 중대한 이상 반응 보고를 위해 90일 동안 추적될 것이다.
허용할 수 없는 이상 반응에 대해 프로토콜 요법에서 제외된 참가자는 이상 반응이 해결되거나 안정화될 때까지 추적될 것이다.
진행성 질병 이외의 이유로 중단한 참가자는 질병 진행, 비연구 암 치료 시작, 동의 철회 또는 추적 조사에 실패할 때까지 질병 상태에 대한 치료후 추적조사를 받을 것이다.
VB -111 제제
표 6: VB-111 제제
Figure pct00009
* 약사는 멸균된 빈 백을 사용하고 백에 40ml NS + 10ml VB-111을 개별적으로 추가할 수 있거나; NS의 50ml 백을 사용하고 초과 용량을 제거한 다음 VB-111을 추가할 수 있다.
** < 50kg 참가자의 경우 35ml는 VB-111의 30% 감소를 나타낸다.
VB-111은 위험군 2에 포함되기 때문에, 모든 작업은 BSL II 조건에서 이루어져야 한다. 약물 준비의 전 과정은 실온에서 생물안전 작업대(BSC)에서 수행되어야 한다. 해동 후, 약물을 가능한 한 빨리 실온의 염수에서 희석해야 한다. 필요한 경우, 약물을 희석하기 전에 최대 3시간 동안 얼음에 유지시킬 수 있음을 주지한다. 일단 약물이 염수에서 최종 제형이 되면, 투여시까지 실온에서 유지시킨다. 염수에서 VB-111/위약의 최대 시간(투여 완료시까지)은 실온에서 60분(+ 30분 창)이다.
약물을 준비하는 현장 요원은 용기에 있는 정보가 연구와 참가자에게 적절한지 확인해야 한다: 제품명, 농도, 배치 번호.
참가자의 체중에 따라 적용할 용적을 결정한다(표 3 참조).
체중이 >50kg 이상인 환자의 경우: 50ml 멸균 주사기에 (실온으로 되게 한) 40ml 염수를 넣는다. 대안적으로, 50ml 식염수 백을 선택하고 초과 용적(10ml)을 제거한다.
체중이 <50kg인 환자의 경우: 50ml 멸균 주사기에 (실온으로 되게 한) 28ml 염수를 넣는다.
실온에서 VB-111 용액 2병을 해동한다. 장갑을 낀 손 사이를 문지르면 과정을 단축할 수 있다. 해동 시간을 반드시 표시해야 한다.
체중이 >50kg인 환자의 경우: 10ml 주사기를 사용하여, 특정 참가자를 위한 바이알 각각으로부터 5ml의 VB-111을 꺼낸다. 체중이 <50kg인 환자의 경우, 첫 번째 바이알에서 5ml 및 두 번째 바이알에서 2ml만 꺼낸다.
미리 준비된 염수 용액이 들어 있는 주사기/염수 백에 VB-111을 추가한다. 피스톤을 당겨 주사기에 남아 있는 VB-111을 염수와 혼합하고 이를 주사기/염수 백으로 다시 밀어 넣는다.
내용물을 손으로 휘저어 희석된 약물을 혼합한다.
임의의 표준 폐쇄 시스템 약물-전달 장치(CSTD)가 약물 준비 및 투여에 사용될 수 있다.
준비를 완료한 후, 조정 과정을 수행한다:
정확한 수의 소스 바이알이 사용되었는지 확인한다.
약물 책임 일지(drug accountability log)에 참가자에게 할당된 바이알을 기록한다.
약물 용액의 준비 후, 약국 절차 및 MSDS에 따라 약국의 약물 제형화 구역을 청소한다. 임상 목적으로 사용된 나머지 물질은 원래의 용기에 수거되어 MSDS 하에 상세하게 설명된 바와 같이 폐기된다.
VB-111/위약의 신보강제 용량의 준비는 다른 연구 활동에 참여하지 않는 비맹검 부위 약사 또는 피지명자에 의해 수행될 것이다.
체중이 50kg 미만인 참가자는 50mL의 1x1013 VP 대신 35mL의 0.7x1013 VP의 감소된 용량으로 VB-111/위약을 제공받을 것이다. VB-111은 다음과 같이 준비하고 투여해야 한다: VB-111 2병은 해동해야 한다. 7mL의 VB-111을 바이알에서 취하여(첫 번째 바이알에서 5ml, 두 번째 바이알에서 2ml) 염수 28mL와 합하여 총 용적이 35mL가 되게 만든다. 0.7x1013의 총 용량은 VB-111 용량의 30% 감소를 나타낸다.
위약
생리식염수(NS)가 이 연구에서 위약으로 사용될 것이다.
투여
희석된 VB-111/위약의 단일 정맥내 주입은 3mL/분으로 투여되어야 한다. 주입 펌프 또는 주사기 펌프가 사용될 수 있다.
염수 중의 VB-111/위약에 대한 최대 시간(투여가 완료될 때까지)은 실온에서 60분(+ 30분 창)이다.
체중이 50kg 미만인 참가자는 VB-111/위약을 감소된 용량(50mL의 1x1013 VP 대신 35mL의 0.7x1013 VP)으로 제공받을 것이다.
확장된 TCR 클론, TIL 밀도 및 TCR 중첩
본 발명자들은 확장된 및 공유된 TCR을 확인하여; VB-111에 의해 유도된 항종양 면역 반응을 확인하기 위해 차세대 서열분석으로 종양 및 말초 혈액 T 세포 수용체(TCR) 레퍼토리를 평가할 것이다.
게놈 DNA를 새로 냉동된 종양(프로토콜 수술) 및 말초 혈액(면역 모니터링 시점)로부터 단리하고 TCRVβ 영역을 통한 차세대 서열분석으로 분석하여 TIL 밀도를 정량화하고 종양과 말초 혈액 사이의 중첩을 평가할 것이다.
그후, 말초로 확장된 TCR 클론의 수, TIL 밀도 및 TCR 중첩을 임상 변수와 상호관련시켜 결과(PFS6, OS 및 독성)에 대한 예후 값 및 예측 값을 갖는 잠재적 바이오마커를 확인할 것이다.
면역조직화학(IHC) 측정
GBM을 확인하는 사전-연구 수술로부터 최소 1개의 포르말린-고정된 파라핀-포매(FFPE) 종양 조직 블록(선호) 또는 최소 10개의 FFPE 염색되지 않은 절편을 무작위 배정 60일 이내에 제출해야 한다. 또한, 프로토콜 수술로부터 최소 1개의 포르말린-고정된 파라핀-포매(FFPE) 종양 조직 블록(선호) 또는 최소 10개의 FFPE 염색되지 않은 절편을 아래 표 xx에 따라 제출해야 한다. 염색된 다중 IHC는 종양 미세환경 내에서 PD-1, PD-L1, CD3, CD4, CD8, Iba-1, Ki-67을 공간적으로 정량하기 위해 수행할 것이다.
면역표현형
종양 및 말초 혈액 T 세포 하위세트 및 활성화 마커는 VB-111로 치료하는 동안 편향되지 않은 방식으로 확장 또는 수축하는 면역 세포 하위세트를 확인하기 위해 질량 세포계측법 고차원 분석으로 평가될 것이다. CD4/CD8 비율, Treg 집단(CD3+,CD4+CD25+CD127low), 활성화(CD3+CD8+CD25/69), MDSC(CD33+HLA-DrlowCD11b+PD-L1+), 음성 공동자극 마커(CD3+CD4/8 +PD-1+, CD3+CD4/8+CTLA-4+)가 각 시점에서 결정될 것이다. CyToF 분석은 전혈의 Ficoll 밀도 구배 분리로부터 수득된 PBMC에서 수행될 것이다. 이 검사를 위한 채혈은 치료 전, 수술 전 및 종양 상태에 대해 수득된 모든 MRI 스캔과 함께 수행될 것이다. 말초 혈액 수집, 처리 및 운송에 대한 지침은 아래 표 7에 제공되어 있다.
세포-주기 관련 유전자 시그니처 , 유전자 발현 시그니처 및 체세포 돌연변 이
프로토콜 수술로부터의 종양 샘플은 Allprotect 조직 시약 용액(Qiagen)에 침지시켜야 한다. RNA-seq를 수행하고 분석할 것이다. 각 종양에서 체세포 돌연변이의 수를 평가하고, 데이터를 임상 변수와 상호관련시켜 결과(PFS, OS)에 대한 예후 값 및 예측 값을 갖는 잠재적 바이오마커를 확인할 것이다. 세포-주기 관련 유전자 시그니처(Nanostring IO360) 및 서열분석 데이터를 평가할 것이다.
이식유전자 분석
DNA 및/또는 RNA를 DNA 및/또는 RNA 단리 키트를 사용하여 새로 냉동된 조직 샘플로부터 추출할 것이다. DNA 샘플을 조직에 삽입된 바이러스 이식 유전자 서열의 존재에 대해 PCR에 의해 시험할 것이다. RNA 샘플을 조직에서 바이러스 이식 유전자 발현에 대해 PCR에 의해 시험할 것이다.
표 7: 상관 샘플 요약
Figure pct00010
표 8: 탐색적 바이오마커 표
Figure pct00011
표 9: 탐색적 이식유전자 발현 표
Figure pct00012
표 10: 이미징 상관관계 표
Figure pct00013
효과의 측정
종양 반응은 진행이 2개의 연속적인 종양 성장 시점에 의해 뒷받침될 때까지 RANO 기준에 기초한 평가와 함께 대비 및 비-대비 뇌 자기 공명 영상(MRI)을 사용하여 8주마다 평가될 것이다(지역 및 중앙 맹검 독립 방사선 심사위원회). 진행되지 않거나 사망한 참가자의 경우, PFS는 마지막 적절한 방사선학적 평가에서 검열될 것이다. 진행을 결정하기 위한 기준 스캔은 수술후 치료를 시작하기 직전에 수득된 수술후 스캔이 될 것이다.
측정 가능한 질병
일부 측면에서, 측정 가능한 질병은 0mm 스킵으로 바람직하게는 최대 5mm 떨어져 있는 2개 이상의 축 슬라이스에서 볼 수 있는 적어도 10mm의 두 개의 수직 직경을 갖는 MRI에 의해 경계가 명확하게 정의된 이차원적, 조영-증강, 측정 가능한 병변이다. 기준선에서 측정 가능한 병변의 크기를 결정하는데 있어서 슬라이스간(inter-slice) 간격의 존재를 고려해야 한다. 낭포 또는 외과적 캐비티(surgical cavity) 주변의 종양 측정은 직경이 적어도 10mm로 측정되는 결절 성분이 없는 한 측정할 수 없는 것으로 간주되어야 한다. 반응을 결정하는데 있어서 낭포성 또는 외과적 캐비티를 측정해서는 안된다. 모든 종양 측정은 밀리미터로 기록되어야 한다.
측정 불가능한 질병
일부 측면에서, 측정 불가능한 질병은 1차원적으로 측정 가능한 병변, 경계가 명확하지 않은 종괴, 또는 최대 수직 직경 <10mm인 병변이다.
표적 병변
일부 측면에서, 최대 5개 병변까지의 측정 가능한 모든 병변을 표적 병변으로 식별하고 기준선에서 기록 및 측정(수직 직경의 곱의 합)해야 한다. 표적 병변은 이들의 크기(최장 직경을 갖는 병변)와 이미징 기법에 의한 정확한 반복 측정에 대한 이들의 적합성을 기준으로 하여 선택해야 한다. 때때로, 가장 큰 병변이 재현 가능한 측정에 적합하지 않을 수 있으며 재현 가능하게 측정될 수 있는 다음으로 큰 병변을 선택해야 한다.
비-표적 병변
여러 병변 중 하나 또는 두 개만 크기가 증가하는 재발성 질환을 갖는 참가자의 경우, 확대된 병변이 반응 평가를 위한 표적 병변으로 간주되어야 한다. 다른 병변은 비표적 병변으로 간주될 것이며 이것 또한 기록해야 한다.
드물게, 표적 병변의 안정 질환(SD) 또는 부분 반응(PR)의 설정에서도 치료 중단을 요하는 비표적 병변의 명백한 진행, 또는 새로운 조영-증강 병변의 발달이 발생할 수 있다. 이러한 변화가 진행으로서 자격을 얻을 것이다.
비표적 병변은 최대 개수 5를 초과하는 측정 가능한 병변을 또한 포함한다. 이러한 병변의 측정이 필요한 것은 아니지만 이의 유무를 추적 기간 전반에 걸쳐 주지해야 한다.
측정 가능한 질병의 평가에 대한 지침
모든 측정은 눈금자 또는 캘리퍼스를 사용하여 미터법으로 측정하고 기록해야 한다. 모든 기준 평가는 치료 시작 28일 전까지 수행해야 한다.
측정은 기존 MRI로 수행된다. 기준선 및 추적 기간 동안 식별되고 보고된 각각의 병변을 특성화하기 위해 동일한 평가 방법과 동일한 기술이 사용되어야 한다. 이러한 기술은 슬라이스 두께가 10mm 이하인 연속 절단물로 수행해야 한다. MRI는 코어 랩에 의해 국소적 및 중추적 둘 다로 평가될 것이다.
표적 병변에 대한 반응 기준
완전 반응 ( CR :):
다음 기준을 모두 충족해야 한다:
· 적어도 4주 동안 지속된 모든 조영증강 측정 가능 및 측정 불가능 질병의 완전한 소실;
· 새로운 병변 없음;
· 안정한 또는 개선된 비-조영증강 (T2/FLAIR) 병변;
· 참가자는 코르티코스테로이드를 중단해야 함; 및
· 임상적으로 안정하거나 개선됨.
부분 반응 (PR):
다음 기준을 모두 충족해야 한다:
· 적어도 4주 동안 지속된 모든 측정 가능한 조영증강 병변의 수직 직경의 곱의 합에서 기준선과 비교하여 50% 이상 감소;
· 측정 불가능한 질병의 진행 없음;
· 새로운 병변 없음;
· 기준선 스캔과 비교하여 동일하거나 더 낮은 용량의 코르티코스테로이드에서 안정한 또는 개선된 비-조영증강 (T2/FLAIR) 병변;
· 스캔 평가 시점의 코르티코스테로이드 용량이 기준선 스캔 시점의 용량보다 커서는 안됨; 및
· 임상적으로 안정하거나 개선됨.
안정 질환 (SD):
다음 기준을 모두 충족해야 한다:
· CR, PR 또는 진행에 대한 자격이 없음;
· 기준선 스캔과 비교하여 동일하거나 더 낮은 용량의 코르티코스테로이드에서 안정한 비-조영증강 (T2/FLAIR) 병변; 및
· 임상적으로 안정함.
진행성 질환 (PD):
다음 기준 중 어느 것을 충족해야 한다:
· 안정한 또는 증가하는 코르티코스테로이드 용량에서 기준선(감소가 없는 경우) 또는 최상의 반응에서 수득된 가장 작은 종양 측정치와 비교하여 조영증강 병변의 수직 직경의 곱의 합에 있어서 ≥25% 증가;
· 동반이환 사건(예를 들어, 방사선 요법, 탈수초화, 허혈성 손상, 감염, 발작, 수술후 변화, 또는 기타 치료 효과)으로 인한 것이 아닌, 기준선 스캔 또는 치료 시작 후 최상의 반응과 비교하여 안정한 또는 증가하는 용량의 코르티코스테로이드에서 T2/FLAIR 비-조영증강 병변의 유의한 증가;
· 임의의 새로운 병변;
· 종양 이외의 다른 원인(예를 들어, 발작, 약물 부작용, 치료 합병증, 뇌혈관 사건, 감염 등) 또는 코르티코스테로이드 용량의 변화에 기인하지 않는 명백한 임상 악화;
· 사망 또는 상태 악화로 인해 평가를 위해 되돌아오지 못함; 또는
· 측정 불가능한 질병의 명확한 진행.
RANO 반응 기준은 표 11에 요약되어 있다:
표 11: RANO 반응 기준의 요약
Figure pct00014
CR =완전 반응; PR=부분 반응; SD=안정 질환; PD=진행성 질환; NA= 해당없음
# *가 있는 기준 중 어느 것이 존재할 때 진행이 일어난다
NA 지속적인 임상 악화가 없는 경우 진행을 결정하는데 있어서 코르티코스테로이드 단독의 증가는 고려되지 않을 것이다.
확인 측정/반응의 기간
확인
PR 또는 CR의 상태를 지정하기 위해서는, 반응에 대한 기준이 처음 충족된 후 적어도 4주 후에 수행해야 하는 반복 평가에 의해 종양 측정치의 변화가 확인되어야 한다.
전체 반응의 기간
전체 반응의 기간은 CR 또는 PR에 대한 기준이 충족된 시간부터 재발성 또는 진행성 질환이 객관적으로 문서화되는 첫 번째 날짜까지 측정된다(진행성 질병에 대한 참조로서 치료 시작 이래로 기록된 가장 작은 측정치를 취함).
안정 질환의 기간
안정 질병은 치료 시작 이래로 기록된 가장 작은 측정값을 참조로 취하여 치료 시작부터 진행 기준이 충족될 때까지 측정된다.
RANO 기준에 대한 수정
RANO 기준의 다음 적응은 탐색적 방식으로 이 연구에서 치료된 참가자에 대한 반응을 평가하는데 사용될 것이다(표 12):
잠재적인 가진행(Potential Pseudoprogression): 방사선학 이미징이 초기 PD를 보이는 경우, 유의한 임상적 저하(예를 들어, KPS의 유의한 감소)를 경험하지 않은 참가자는 진행이 2개의 연속적인 종양 성장 시점에 의해 뒷받침될 때까지 연구 치료를 계속하도록 허용될 수 있다. 참가자는 이 기간 동안 매 주기(대략 8주마다) MRI로 면밀히 모니터링해야 한다. 최대 3개월 후 추가 진행의 방사선학적 증거가 있거나 언제든지 유의하게 저하되는 참가자는 참가자가 진행 기준을 충족한 첫 번째 날짜로 소급되는 질병 진행 날짜와 함께 진행성으로 분류되며 이러한 참가자는 연구 요법에서 중단될 것이다. 3개월은 다음을 기준으로 하여 합리적이다: 1) XRT/일일 테모졸로마이드-관련 가진행의 피크 시간은 교모세포종 참가자의 경우 일반적으로 완료 후 3개월 이내이고; 2) 3개월은 또한 현재까지 면역 체크포인트 봉쇄요법과 같은 면역 요법으로 치료받은 진행성 흑색종 또는 기타 고형 종양을 가진 참가자들 사이에서 관찰되는 가진행에 대한 가장 일반적인 기간이다.
초기 방사선학적 PD를 갖는 이 연구의 참가자들 중에서, 진행의 방사선학적 확인을 기다리면서 치료 지속 및 베바시주코트 추가의 옵션과 함께 PD를 확인하기 위해서는 종양 평가를 정기적으로(매 주기, 대략 8주마다) 반복해야 한다.
2개의 연속적인 종양 성장 시점에 의해 뒷받침되는 진행을 갖는 참가자는 연구 약물을 중단하고 연구의 추적/생존 단계에 들어갈 것이다. 종양 부담이 증가 또는 감소했는지 여부를 결정하는데 있어서, 연구자는 모든 표적 병변 뿐만 아니라 비표적 병변을 고려해야 한다.
진행을 정의하기 위한 종양 조영증강: 방사선학적 진행성 질환은 조영증강 종양의 평가에 의해 정의될 것이며 RANO에 요약된 바와 같이 T2 또는 FLAIR 변화 단독의 존재를 기반으로 하여 종양 진행을 선언하지는 않을 것이다.
방사선학적 PD의 초기 증거가 있는 참가자의 경우, 참가자는 추적 이미징에서 PD가 확인될 때까지 최대 3개월 동안 연구 치료를 계속할 수 있다. 참가자가 유의한 임상적 저하를 경험하지 않고 참가자가 연구 요법을 충분히 견딜 수 있는 경우 PD의 확인을 기다리면서 연구 치료에 더하여 2주마다 베바시주맙 10mg/kg을 제공받을 것이다(참가자가 독성에 대해 연구 치료를 중단해야 하는 경우, 이들은 치료를 떠나야 함).
실행 가능한 경우, 2개의 연속적인 종양 성장 시점에 의해 진행이 뒷받침될 때까지 연구 요법을 중단해서는 안된다. 초기 방사선학적 진행에도 불구하고 치료를 계속할 수 있는 이러한 허용은 일부 참가자가 면역요법 시작 후 처음 몇 개월에는 일시적인 종양 플레어를 가질 수 있지만 이후에는 질병 반응을 가질 수 있다는 관찰을 고려한다. 유의한 신경학적 쇠약을 나타내고 있는 참가자는 진행성 질환의 확인을 위해 반복적인 이미징을 할 필요가 없다.
표 12: PD의 첫 번째 방사선학적 증거 후 이미징 및 치료
Figure pct00015
진행성 방사선학적 소견이 있는 참가자는 실제 종양 진행으로부터 VB-111과 관련된 염증으로 인한 가진행을 설명하기 위해 외과적 개입을 받도록 권장된다. 유의한 면역 침윤 및 서서히 전개되는 신경교증의 조직병리학적 소견이 있는 참가자는 연구 요법을 계속할 수 있을 것이다. 대조적으로, 조직병리학적 평가에 의해 진행성 종양의 명백한 증거가 있는 참가자는 진행성인 것으로 정의되며 연구 요법에서 중단될 것이다. 이러한 참가자의 경우, 참가자가 PD에 대한 방사선학적 기준을 충족한 첫 번째 날짜가 종양 진행 날짜가 될 것이다.
방사선학 검토
무작위 배정 전에 참가자가 포함 기준을 충족하도록 보장하기 위해 기준선 뇌신경 영상의 검토가 수행될 것이다. 연구 중 뇌신경 영상의 검토는 후향적으로 수행될 것이다.
통계 분석 계획
이 섹션은 연구를 위한 통계 분석 전략과 절차를 간략하게 설명한다. 연구가 시작된 후, 1차 및/또는 주요 2차 가설, 또는 이러한 가설과 관련된 통계적 방법이 변경되면 프로토콜이 수정될 것이다. 프로토콜이 확정된 후 이루어진 탐색적 또는 기타 비확증적 분석에 대한 변경은, 이것이 언제, 왜 발생했는지에 대한 설명과 함께, 연구에 대한 임상 연구 보고서(CSR)에 나열될 것이다. 사후 탐색적 분석은 CSR에서 명확하게 확인될 것이다.
연구 종점
치료 내 및/또는 치료 간 차이에 대해 평가될 효능 및 안전성 종점이 아래에 열거되어 있으며 선택된 종점의 유도에 대한 설명이 뒤따른다.
효능 종점
종양 침윤 T 세포(TIL) 밀도.
PFS6은 RANO에 의해 정의된 바와 같이 6개월의 무진행 생존을 갖는 참가자의 비율이다.
OS는 무작위 배정으로부터 어떠한 원인으로 인한 사망까지의 시간이다. 참가자는 다른 이유로 연구 약물의 진행 또는 중단 후 생존 상태에 대해 추적될 것이다.
안전성 종점
1차 안전성 종점은 CTCAE 버전 5.0 기준을 사용하여 등급이 매겨지는 AE이다. 안전성은 중대한 이상 반응(SAE) 및 임상 관심 사례(ECI)를 포함하여 VB-111을 제공받은 참가자가 경험한 독성 및 등급을 정량화하여 평가될 것이다. 기타 안전성 종점은 실험실 안전성 평가, KPS 상태, 활력 징후 및 신체 검사를 포함한다.
분석 세트의 정의
전체 분석 세트 모집단은 이 연구에서 1차 효능 종점 TIL 밀도 분석을 위한 모집단으로서 역할을 할 것이다. 전체 분석 세트 모집단은 수술전 용량의 VB-111/위약을 제공받고 수술을 받은 각 코호트 내의 모든 참가자로 구성된다.
치료 의향(intention to treat; ITT) 모집단은 모든 무작위 배정된 참가자로서 정의된다. ITT 모집단은 2차 효능 종점(PFS6, OS)에 사용될 것이다.
치료를 받은 모든 참가자(All Participants as Treated; APaT) 모집단은 이 연구에서 안전성 데이터 분석에 사용될 것이다. APaT 모집단은 적어도 1회 용량의 연구 치료를 제공받은 모든 할당된 참가자로 구성된다. 각 특정 매개변수의 분석에 포함하려면 적어도 1회 용량의 연구 치료 이후에 수득된 적어도 하나의 실험실 또는 활력 징후 측정이 필요하다. 기준선으로부터의 변화를 평가하기 위해서는, 기준선 측정이 또한 필요하다.
샘플 크기 고려사항
이것은 외과적으로 접근 가능한 재발성/진행성 교모세포종(rGBM)을 갖는 참가자에서 바이러스성 암 요법 VB-111에 대한 초기 면역학적 약력학 매개변수를 평가하기 위한 무작위 조절된 맹검 II상 외과적 시험이다. 참가자는 수술 전에 1:1:1 무작위배정 비율로 그룹 A 또는 B 또는 C에 무작위로 할당될 것이다. VB-111은 그룹 A(신보강제/보강제) vs 합동 대조군(그룹 B+C)을 비교하여 TIL 밀도에서 통계적으로 유의한 증가의 형태로 효과적인 항종양 면역 반응을 생성할 수 있다.
본 발명자들의 예비 데이터에 기초하여, TIL 밀도의 평균은 합동 대조군(그룹 B 및 C)에서 0.4(핵형성된 세포당 T 세포)(SD=0.5)로 추정된다. 계층화된 2-샘플 t-검정을 사용하여 0.05(단측)의 알파 수준에서 그룹 A vs 그룹 B+C를 비교하여, 합동 그룹(B+C)에서는 30개, 그룹 A에서는 15개의 샘플 크기(총 45개 평가 가능)가 84% 검정력으로 0.8 이상의 TIL 밀도에서 표준 차이를 검출할 수 있다. 효과 크기는 두 모집단 평균의 차이를 통합 표준 편차로 나눈 Cohen의 D로서 정의된다.
효능 분석
종양 크기 계층화를 이용한 2-샘플 t-검정을 사용하여 두 그룹(그룹 A vs 합동 그룹 B+C) 간의 종양 침윤 T 세포 밀도의 차이를 시험할 것이다. 데이터 분포는 분석 전에 검토될 것이다. 데이터 변환은 적절하다고 판단되는 대로 수행될 것이다.
PFS6의 2차 종점에 대해, 과거 비교 데이터가 치료 시작 직전 또는 프로토콜의 일부로서 수술을 받은 재발성 IV 등급 신경교종의 II상 경험에 대한 통합 분석으로부터 이용 가능하며, PFS6 비율은 10%로 문서화되어 있다. 그룹 비교(그룹 A vs C; 그룹 B vs C; 그룹 A+B vs C)는 5%의 단측 알파에서 PFS6 비율을 비교하기 위해 정확 이항 검정과 Bonferroni 조정을 사용하여 수행될 것이다.
OS의 경우, 분석은 치료 시작 직전 또는 이의 일부로서 수술을 받은 재발성 IV 등급 신경교종의 2상 경험에 대한 통합 분석으로부터 이용 가능한 과거 비교 데이터를 사용하여 수행될 것이다. Kaplan-Meier(KM) 곡선 및 KM 곡선으로부터의 중간값 추정치가 적절하게 제공될 것이다. 효능 평가 데이터가 없거나 생존 데이터가 없는 참가자는 1일차에 검열될 것이다. TCR 클론의 확장의 평가를 위해, 2-샘플 T-검정과 Bonferroni 조정을 사용하여 그룹 A+B vs 그룹 C에서 VB-111 이후 확장된 TCR 클론의 증가 수를 비교할 것이다.
특정 실시양태에 대한 전술한 설명은 다른 사람들이, 당업계의 기술 내의 지식을 적용함으로써, 과도한 실험 없이, 본 개시내용의 일반적인 개념으로부터 벗어나지 않으면서, 이러한 특정 실시양태와 같은 다양한 적용에 대해 용이하게 수정 및/또는 적응할 수 있는 본 발명의 일반적인 특성을 충분히 밝힐 것이다. 따라서, 이러한 적응 및 수정은 본원에 제시된 교시 및 지침에 기초하여 개시된 실시양태의 등가물의 의미 및 범위 내에 있도록 의도된다. 본원의 어법 또는 용어는 본 명세서의 용어 또는 어구가 교시 및 지침에 비추어 숙련가에 의해 해석되도록 설명의 목적을 위한 것이지 제한의 목적을 위한 것은 아님을 이해해야 한다.
기탁기관명 : European Collection of Cell Cultures(ECACC)
수탁번호 : 13021201
수탁일자 : 20130212
SEQUENCE LISTING <110> Vascular Biogenics Ltd. <120> METHODS OF ANTI-TUMOR THERAPY <130> 3182.092PC01/GLL/C-K/DHH <150> US 62/817,735 <151> 2019-03-13 <160> 33 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 1365 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <223> TNFRSF1A <400> 1 atgggcctct ccaccgtgcc tgacctgctg ctgccgctgg tgctcctgga gctgttggtg 60 ggaatatacc cctcaggggt tattggactg gtccctcacc taggggacag ggagaagaga 120 gatagtgtgt gtccccaagg aaaatatatc caccctcaaa ataattcgat ttgctgtacc 180 aagtgccaca aaggaaccta cttgtacaat gactgtccag gcccggggca ggatacggac 240 tgcagggagt gtgagagcgg ctccttcacc gcttcagaaa accacctcag acactgcctc 300 agctgctcca aatgccgaaa ggaaatgggt caggtggaga tctcttcttg cacagtggac 360 cgggacaccg tgtgtggctg caggaagaac cagtaccggc attattggag tgaaaacctt 420 ttccagtgct tcaattgcag cctctgcctc aatgggaccg tgcacctctc ctgccaggag 480 aaacagaaca ccgtgtgcac ctgccatgca ggtttctttc taagagaaaa cgagtgtgtc 540 tcctgtagta actgtaagaa aagcctggag tgcacgaagt tgtgcctacc ccagattgag 600 aatgttaagg 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ctccttcacc gcttcagaaa accacctcag acactgcctc 300 agctgctcca aatgccgaaa ggaaatgggt caggtggaga tctcttcttg cacagtggac 360 cgggacaccg tgtgtggctg caggaagaac cagtaccggc attattggag tgaaaacctt 420 ttccagtgct tcaattgcag cctctgcctc aatgggaccg tgcacctctc ctgccaggag 480 aaacagaaca ccgtgtgcac ctgccatgca ggtttctttc taagagaaaa cgagtgtgtc 540 tcctgtagta actgtaagaa aagcctggag tgcacgaagt tgtgcctacc aagcttagga 600 tccagatcta acttggggtg gctttgtctt cttcttttgc caattccact aattgtttgg 660 gtgaagagaa aggaagtaca gaaaacatgc agaaagcaca gaaaggaaaa ccaaggttct 720 catgaatctc caaccttaaa tcctgaaaca gtggcaataa atttatctga tgttgacttg 780 agtaaatata tcaccactat tgctggagtc atgacactaa gtcaagttaa aggctttgtt 840 cgaaagaatg gtgtcaatga agccaaaata gatgagatca agaatgacaa tgtccaagac 900 acagcagaac agaaagttca actgcttcgt aattggcatc aacttcatgg aaagaaagaa 960 gcgtatgaca cattgattaa agatctcaaa aaagccaatc tttgtactct tgcagagaaa 1020 attcagacta tcatcctcaa ggacattact agtgactcag aaaattcaaa cttcagaaat 1080 gaaatccaaa gcttggtcta g 1101 <210> 10 <211> 366 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <223> FAS-chimera <400> 10 Met Gly Leu Ser Thr Val Pro Asp Leu Leu Leu Pro Leu Val Leu Leu 1 5 10 15 Glu Leu Leu Val Gly Ile Tyr Pro Ser Gly Val Ile Gly Leu Val Pro 20 25 30 His Leu Gly Asp Arg Glu Lys Arg Asp Ser Val Cys Pro Gln Gly Lys 35 40 45 Tyr Ile His Pro Gln Asn Asn Ser Ile Cys Cys Thr Lys Cys His Lys 50 55 60 Gly Thr Tyr Leu Tyr Asn Asp Cys Pro Gly Pro Gly Gln Asp Thr Asp 65 70 75 80 Cys Arg Glu Cys Glu Ser Gly Ser Phe Thr Ala Ser Glu Asn His Leu 85 90 95 Arg His Cys Leu Ser Cys Ser Lys Cys Arg Lys Glu Met Gly Gln Val 100 105 110 Glu Ile Ser Ser Cys Thr Val Asp Arg Asp Thr Val Cys Gly Cys Arg 115 120 125 Lys Asn Gln Tyr Arg His Tyr Trp Ser Glu Asn Leu Phe Gln Cys Phe 130 135 140 Asn Cys Ser Leu Cys Leu Asn Gly Thr Val His Leu Ser Cys Gln Glu 145 150 155 160 Lys Gln Asn Thr Val Cys Thr Cys His Ala Gly Phe Phe Leu Arg Glu 165 170 175 Asn Glu Cys Val Ser Cys Ser Asn Cys Lys Lys Ser Leu Glu Cys Thr 180 185 190 Lys Leu Cys Leu Pro Ser Leu Gly Ser Arg Ser Asn Leu Gly Trp Leu 195 200 205 Cys Leu Leu Leu Leu Pro Ile Pro Leu Ile Val Trp Val Lys Arg Lys 210 215 220 Glu Val Gln Lys Thr Cys Arg Lys His Arg Lys Glu Asn Gln Gly Ser 225 230 235 240 His Glu Ser Pro Thr Leu Asn Pro Glu Thr Val Ala Ile Asn Leu Ser 245 250 255 Asp Val Asp Leu Ser Lys Tyr Ile Thr Thr Ile Ala Gly Val Met Thr 260 265 270 Leu Ser Gln Val Lys Gly Phe Val Arg Lys Asn Gly Val Asn Glu Ala 275 280 285 Lys Ile Asp Glu Ile Lys Asn Asp Asn Val Gln Asp Thr Ala Glu Gln 290 295 300 Lys Val Gln Leu Leu Arg Asn Trp His Gln Leu His Gly Lys Lys Glu 305 310 315 320 Ala Tyr Asp Thr Leu Ile Lys Asp Leu Lys Lys Ala Asn Leu Cys Thr 325 330 335 Leu Ala Glu Lys Ile Gln Thr Ile Ile Leu Lys Asp Ile Thr Ser Asp 340 345 350 Ser Glu Asn Ser Asn Phe Arg Asn Glu Ile Gln Ser Leu Val 355 360 365 <210> 11 <211> 47 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Endothelial Cell-Specific Enhancer Elements <400> 11 ctggagggtg actttgcttc tggagccagt acttcatact tttcatt 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ataaaaaggc ggcggagaac 720 tgtccgagtc agaagcgttc ctgcaccggc gctgagagcc tgacccggtc tgctccgctg 780 tccttgcgcg ctgcctcccg gctgcccgcg acgctttcgc cccagtggaa gggccacttg 840 ctgcggccgc 850 <210> 18 <211> 987 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Endothelial Cell-Specific PPE-1 3X Promoter <400> 18 gtacgtgtac ttctgatcgg cgatactagg gagataagga tgtgcctgac aaaaccacat 60 tgttgttgtt atcattatta tttagttttc cttccttgct aactcctgac ggaatctttc 120 tcacctcaaa tgcgaagtac tttagtttag aaaagacttg gtggaagggg tggtggtgga 180 aaagtagggt gatcttccaa actaatctgg ttccccgccc gccccagtag ctgggattca 240 agagcgaaga gtggggatcg tccccttgtt tgatcagaaa gacataaaag gaaaatcaag 300 tgaacaatga tcagccccac ctccacccca cccccctgcg cgcgcacaat acaatctatt 360 taattgtact tcatactttt cattccaatg gggtgacttt gcttctggag aaactcttga 420 ttcttgaact ctggggctgg cagctagcct ccagaagcaa agtcacccca ttggaatgaa 480 aagtatgaag tacaatgaaa agtatgaagt actggctcca gaagcaaagt caccctccag 540 aagcaaagtc accccattgg aatgaaaagt atgaagtacg ctagcaaaag gggaagcggg 600 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agactcgccc aggtgttttt ctcaggtgtt ttccgcgttc 420 cgggtcaaag ttggcgtttt attattatag tcagtacgta cgtgtacttc tgatcggcga 480 tactagggag ataaggatgt gcctgacaaa accacattgt tgttgttatc attattattt 540 agttttcctt ccttgctaac tcctgacgga atctttctca cctcaaatgc gaagtacttt 600 agtttagaaa agacttggtg gaaggggtgg tggtggaaaa gtagggtgat cttccaaact 660 aatctggttc cccgcccgcc ccagtagctg ggattcaaga gcgaagagtg gggatcgtcc 720 ccttgtttga tcagaaagac ataaaaggaa aatcaagtga acaatgatca gccccacctc 780 caccccaccc ccctgcgcgc gcacaataca atctatttaa ttgtacttca tacttttcat 840 tccaatgggg tgactttgct tctggagaaa ctcttgattc ttgaactctg gggctggcag 900 ctagcctcca gaagcaaagt caccccattg gaatgaaaag tatgaagtac aatgaaaagt 960 atgaagtact ggctccagaa gcaaagtcac cctccagaag caaagtcacc ccattggaat 1020 gaaaagtatg aagtacgcta gcaaaagggg aagcgggctg ctgctctctg caggttctgc 1080 agcggtctct gtctagtggg tgttttcttt ttcttagccc tgcccctgga ttgtcagacg 1140 gcgggcgtct gcctctgaag ttagccgtga tttcctctag agccgggtct tatctctggc 1200 tgcacgttgc ctgtgggtga ctaatcacac aataacattg tttagggctg gaatgaagtc 1260 agagctgttt acccccactc tataggggtt caatataaaa aggcggcgga gaactgtccg 1320 agtcagaagc gttcctgcac cggcgctgag agcctgaccc ggtctgctcc gctgtccttg 1380 cgcgctgcct cccggctgcc cgcgacgctt tcgccccagt ggaagggcca cttgctgcgg 1440 ccgctaattc tgcagatcgg gatccggcat gggcctctcc accgtgcctg acctgctgct 1500 gccgctggtg ctcctggagc tgttggtggg aatatacccc tcaggggtta ttggactggt 1560 ccctcaccta ggggacaggg agaagagaga tagtgtgtgt ccccaaggaa aatatatcca 1620 ccctcaaaat aattcgattt gctgtaccaa gtgccacaaa ggaacctact tgtacaatga 1680 ctgtccaggc ccggggcagg atacggactg cagggagtgt gagagcggct ccttcaccgc 1740 ttcagaaaac cacctcagac actgcctcag ctgctccaaa tgccgaaagg aaatgggtca 1800 ggtggagatc tcttcttgca cagtggaccg ggacaccgtg tgtggctgca ggaagaacca 1860 gtaccggcat tattggagtg aaaacctttt ccagtgcttc aattgcagcc tctgcctcaa 1920 tgggaccgtg cacctctcct gccaggagaa acagaacacc gtgtgcacct gccatgcagg 1980 tttctttcta agagaaaacg agtgtgtctc ctgtagtaac tgtaagaaaa gcctggagtg 2040 cacgaagttg tgcctaccaa gcttaggatc cagatctaac ttggggtggc tttgtcttct 2100 tcttttgcca attccactaa ttgtttgggt gaagagaaag gaagtacaga aaacatgcag 2160 aaagcacaga aaggaaaacc aaggttctca tgaatctcca accttaaatc ctgaaacagt 2220 ggcaataaat ttatctgatg ttgacttgag taaatatatc accactattg ctggagtcat 2280 gacactaagt caagttaaag gctttgttcg aaagaatggt gtcaatgaag ccaaaataga 2340 tgagatcaag aatgacaatg tccaagacac agcagaacag aaagttcaac tgcttcgtaa 2400 ttggcatcaa cttcatggaa agaaagaagc gtatgacaca ttgattaaag atctcaaaaa 2460 agccaatctt tgtactcttg cagagaaaat tcagactatc atcctcaagg acattactag 2520 tgactcagaa aattcaaact tcagaaatga aatccaaagc ttggtctagc tcgagcatgc 2580 atctaggcgg ccgcatggca gaaattcgcg aattcgctag cgttaacgga tcctctagac 2640 gagatccgaa cttgtttatt gcagcttata atggttacaa ataaagcaat agcatcacaa 2700 atttcacaaa taaagcattt ttttcactgc attctagttg tggtttgtcc aaactcatca 2760 atgtatctta tcatgtctag atctgtactg aaatgtgtgg gcgtggctta agggtgggaa 2820 agaatatata aggtgggggt cttatgtagt tttgtatctg ttttgcagca gccgccgccg 2880 ccatgagcac caactcgttt gatggaagca ttgtgagctc atatttgaca acgcgcatgc 2940 ccccatgggc cggggtgcgt cagaatgtga tgggctccag cattgatggt cgccccgtcc 3000 tgcccgcaaa ctctactacc ttgacctacg agaccgtgtc tggaacgccg ttggagactg 3060 cagcctccgc cgccgcttca gccgctgcag ccaccgcccg cgggattgtg actgactttg 3120 ctttcctgag cccgcttgca agcagtgcag cttcccgttc atccgcccgc gatgacaagt 3180 tgacggctct tttggcacaa ttggattctt tgacccggga acttaatgtc gtttctcagc 3240 agctgttgga tctgcgccag caggtttctg ccctgaaggc ttcctcccct cccaatgcgg 3300 tttaaaacat aaataaaaaa ccagactctg tttggatttg gatcaagcaa gtgtcttgct 3360 gtctttattt aggggttttg cgcgcgcggt aggcccggga ccagcggtct cggtcgttga 3420 gggtcctgtg tattttttcc aggacgtggt aaaggtgact ctggatgttc agatacatgg 3480 gcataagccc gtctctgggg tggaggtagc accactgcag agcttcatgc tgcggggtgg 3540 tgttgtagat gatccagtcg tagcaggagc gctgggcgtg gtgcctaaaa atgtctttca 3600 gtagcaagct gattgccagg ggcaggccct tggtgtaagt gtttacaaag cggttaagct 3660 gggatgggtg catacgtggg gatatgagat gcatcttgga ctgtattttt aggttggcta 3720 tgttcccagc catatccctc cggggattca tgttgtgcag aaccaccagc acagtgtatc 3780 cggtgcactt gggaaatttg tcatgtagct tagaaggaaa tgcgtggaag aacttggaga 3840 cgcccttgtg acctccaaga ttttccatgc attcgtccat aatgatggca atgggcccac 3900 gggcggcggc ctgggcgaag atatttctgg gatcactaac gtcatagttg tgttccagga 3960 tgagatcgtc ataggccatt tttacaaagc gcgggcggag ggtgccagac tgcggtataa 4020 tggttccatc cggcccaggg gcgtagttac cctcacagat ttgcatttcc cacgctttga 4080 gttcagatgg ggggatcatg tctacctgcg gggcgatgaa gaaaacggtt tccggggtag 4140 gggagatcag ctgggaagaa agcaggttcc tgagcagctg cgacttaccg cagccggtgg 4200 gcccgtaaat cacacctatt accggctgca actggtagtt aagagagctg cagctgccgt 4260 catccctgag caggggggcc acttcgttaa gcatgtccct gactcgcatg ttttccctga 4320 ccaaatccgc cagaaggcgc tcgccgccca gcgatagcag ttcttgcaag gaagcaaagt 4380 ttttcaacgg tttgagaccg tccgccgtag gcatgctttt gagcgtttga ccaagcagtt 4440 ccaggcggtc ccacagctcg gtcacctgct ctacggcatc tcgatccagc atatctcctc 4500 gtttcgcggg ttggggcggc tttcgctgta cggcagtagt cggtgctcgt ccagacgggc 4560 cagggtcatg tctttccacg ggcgcagggt cctcgtcagc gtagtctggg tcacggtgaa 4620 ggggtgcgct ccgggctgcg cgctggccag ggtgcgcttg aggctggtcc tgctggtgct 4680 gaagcgctgc cggtcttcgc cctgcgcgtc ggccaggtag catttgacca tggtgtcata 4740 gtccagcccc tccgcggcgt ggcccttggc gcgcagcttg cccttggagg aggcgccgca 4800 cgaggggcag tgcagacttt tgagggcgta gagcttgggc gcgagaaata ccgattccgg 4860 ggagtaggca tccgcgccgc aggccccgca gacggtctcg cattccacga gccaggtgag 4920 ctctggccgt tcggggtcaa aaaccaggtt tcccccatgc tttttgatgc gtttcttacc 4980 tctggtttcc atgagccggt gtccacgctc ggtgacgaaa aggctgtccg tgtccccgta 5040 tacagacttg agaggcctgt cctcgagcgg tgttccgcgg tcctcctcgt atagaaactc 5100 ggaccactct gagacaaagg ctcgcgtcca ggccagcacg aaggaggcta agtgggaggg 5160 gtagcggtcg ttgtccacta gggggtccac tcgctccagg gtgtgaagac acatgtcgcc 5220 ctcttcggca tcaaggaagg tgattggttt gtaggtgtag gccacgtgac cgggtgttcc 5280 tgaagggggg ctataaaagg gggtgggggc gcgttcgtcc tcactctctt ccgcatcgct 5340 gtctgcgagg gccagctgtt ggggtgagta ctccctctga aaagcgggca tgacttctgc 5400 gctaagattg tcagtttcca aaaacgagga 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ataaacctct 32880 gattaaacat ggcgccatcc accaccatcc taaaccagct ggccaaaacc tgcccgccgg 32940 ctatacactg cagggaaccg ggactggaac aatgacagtg gagagcccag gactcgtaac 33000 catggatcat catgctcgtc atgatatcaa tgttggcaca acacaggcac acgtgcatac 33060 acttcctcag gattacaagc tcctcccgcg ttagaaccat atcccaggga acaacccatt 33120 cctgaatcag cgtaaatccc acactgcagg gaagacctcg cacgtaactc acgttgtgca 33180 ttgtcaaagt gttacattcg ggcagcagcg gatgatcctc cagtatggta gcgcgggttt 33240 ctgtctcaaa aggaggtaga cgatccctac tgtacggagt gcgccgagac aaccgagatc 33300 gtgttggtcg tagtgtcatg ccaaatggaa cgccggacgt agtcatattt cctgaagcaa 33360 aaccaggtgc gggcgtgaca aacagatctg cgtctccggt ctcgccgctt agatcgctct 33420 gtgtagtagt tgtagtatat ccactctctc aaagcatcca ggcgccccct ggcttcgggt 33480 tctatgtaaa ctccttcatg cgccgctgcc ctgataacat ccaccaccgc agaataagcc 33540 acacccagcc aacctacaca ttcgttctgc gagtcacaca cgggaggagc gggaagagct 33600 ggaagaacca tgtttttttt tttattccaa aagattatcc aaaacctcaa aatgaagatc 33660 tattaagtga acgcgctccc ctccggtggc gtggtcaaac tctacagcca aagaacagat 33720 aatggcattt gtaagatgtt gcacaatggc ttccaaaagg caaacggccc tcacgtccaa 33780 gtggacgtaa aggctaaacc cttcagggtg aatctcctct ataaacattc cagcaccttc 33840 aaccatgccc aaataattct catctcgcca ccttctcaat atatctctaa gcaaatcccg 33900 aatattaagt ccggccattg taaaaatctg ctccagagcg ccctccacct tcagcctcaa 33960 gcagcgaatc atgattgcaa aaattcaggt tcctcacaga cctgtataag attcaaaagc 34020 ggaacattaa caaaaatacc gcgatcccgt aggtcccttc gcagggccag ctgaacataa 34080 tcgtgcaggt ctgcacggac cagcgcggcc acttccccgc caggaaccat gacaaaagaa 34140 cccacactga ttatgacacg catactcgga gctatgctaa ccagcgtagc cccgatgtaa 34200 gcttgttgca tgggcggcga tataaaatgc aaggtgctgc tcaaaaaatc aggcaaagcc 34260 tcgcgcaaaa aagaaagcac atcgtagtca tgctcatgca gataaaggca ggtaagctcc 34320 ggaaccacca cagaaaaaga caccattttt ctctcaaaca tgtctgcggg tttctgcata 34380 aacacaaaat aaaataacaa aaaaacattt aaacattaga agcctgtctt acaacaggaa 34440 aaacaaccct tataagcata agacggacta cggccatgcc ggcgtgaccg taaaaaaact 34500 ggtcaccgtg attaaaaagc accaccgaca gctcctcggt catgtccgga gtcataatgt 34560 aagactcggt aaacacatca ggttgattca catcggtcag tgctaaaaag cgaccgaaat 34620 agcccggggg aatacatacc cgcaggcgta gagacaacat tacagccccc ataggaggta 34680 taacaaaatt aataggagag aaaaacacat aaacacctga aaaaccctcc tgcctaggca 34740 aaatagcacc ctcccgctcc agaacaacat acagcgcttc cacagcggca gccataacag 34800 tcagccttac cagtaaaaaa gaaaacctat taaaaaaaca ccactcgaca cggcaccagc 34860 tcaatcagtc acagtgtaaa aaagggccaa gtgcagagcg agtatatata ggactaaaaa 34920 atgacgtaac ggttaaagtc cacaaaaaac acccagaaaa ccgcacgcga acctacgccc 34980 agaaacgaaa gccaaaaaac ccacaacttc ctcaaatcgt cacttccgtt ttcccacgtt 35040 acgtcacttc ccattttaag aaaactacaa ttcccaacac atacaagtta ctccgcccta 35100 aaacctacgt cacccgcccc gttcccacgc cccgcgccac gtcacaaact ccaccccctc 35160 attatcatat tggcttcaat ccaaaataag gtatattatt gatgatg 35207 <210> 20 <400> 20 000 <210> 21 <400> 21 000 <210> 22 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Endothelial Cell-Specific Enhancer Element <400> 22 ggtgactttg cttctggag 19 <210> 23 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Endothelial Cell-Specific Enhancer Element <400> 23 ctccagaagc aaagtcacc 19 <210> 24 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Endothelial Cell-Specific Enhancer Element <400> 24 gtacttcata cttttcatt 19 <210> 25 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Endothelial Cell-Specific Enhancer Element <400> 25 aatgaaaagt atgaagtac 19 <210> 26 <211> 6 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Hypoxia Response element <400> 26 gcacgt 6 <210> 27 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide linker <400> 27 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser 1 5 10 15 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser 20 25 30 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser 35 40 <210> 28 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH CDR1 <400> 28 Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Gly Met Asn 1 5 10 <210> 29 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH CDR2 <400> 29 Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe Lys 1 5 10 15 Arg <210> 30 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH CDR3 <400> 30 Tyr Pro His Tyr Tyr Gly Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 31 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL CDR1 <400> 31 Ser Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 32 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL CDR2 <400> 32 Phe Thr Ser Ser Leu His Ser 1 5 <210> 33 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL CDR3 <400> 33 Gln Gln Tyr Ser Thr Val Pro Trp Thr 1 5

Claims (15)

  1. 종양을 갖는 대상체(여기서, 대상체는 종양 또는 이의 일부를 외과적으로 제거하기 전에 시동 용량의 벡터를 투여받는다)에서 항종양 반응(여기서, 항종양 반응은 종양 또는 이의 일부의 외과적 제거 전에 시동 용량의 벡터를 제공받지 않은 대상체 또는 벡터를 투여받지 않은 대상체에서의 항종양 반응과 비교하여 투여 후 유도되거나 개선된다)을 유도하거나 개선하는데 사용하기 위한 내피 세포 특이 프로모터에 작동가능하게 연결된 Fas-키메라 유전자를 포함하는 벡터.
  2. 종양 치료를 필요로 하는 대상체(여기서, 대상체는 종양 또는 이의 일부를 외과적으로 제거하기 전에 시동 용량의 벡터를 투여받는다)에서 상기 종양을 치료하는데 사용하기 위한 내피 세포 특이 프로모터에 작동가능하게 연결된 Fas-키메라 유전자를 포함하는 벡터.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 대상체가 상기 벡터의 수술후 용량을 추가로 투여받는 벡터.
  4. 제3항에 있어서, 상기 벡터의 상기 수술후 용량이 하나 이상의 화학요법제와 조합하여 추가로 투여되는 벡터.
  5. 제1항 내지 제4항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 벡터의 상기 시동 용량이 상기 종양 또는 이의 일부를 외과적으로 제거하기 약 7일, 약 8일, 약 9일, 약 10일, 약 11일, 약 12일, 약 13일, 약 2주, 약 15일, 약 20일, 약 3주, 약 25일, 약 4주, 약 1개월, 약 5주, 약 6주, 약 7주, 약 2개월, 약 3개월, 약 4개월, 약 5개월, 또는 약 6개월 전에 투여되는 벡터.
  6. 제1항 내지 제5항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 벡터의 상기 시동 용량이 약 1 x 1015개 미만, 약 1 x 1014개 미만, 약 5 x 1013개 미만, 약 4 x 1013개 미만, 약 3 x 1013개 미만, 약 2 x 1013개 미만, 약 1 x 1013개 미만, 약 9 x 1012개 미만, 약 8 x 1012개 미만, 약 7 x 1012개 미만, 약 6 x 1012개 미만, 약 5 x 1012개 미만, 약 4 x 1012개 미만, 약 3 x 1012개 미만, 약 2 x 1012개 미만, 약 1 x 1012개 미만, 약 9 x 1011개 미만, 약 8 x 1011개 미만, 약 7 x 1011개 미만, 약 6 x 1011개 미만, 약 5 x 1011개 미만, 약 4 x 1011개 미만, 약 3 x 1011개 미만, 약 2 x 1011개 미만, 약 1 x 1011개 미만, 약 9 x 1010개 미만, 약 8 x 1010개 미만, 약 7 x 1010개 미만, 약 6 x 1010개 미만, 약 5 x 1010개 미만, 약 4 x 1010개 미만, 약 3 x 1010개 미만, 약 2 x 1010개 미만, 또는 약 1 x 1010개 미만 바이러스 입자의 유효량으로 투여되는 벡터.
  7. 제3항 내지 제5항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 벡터의 상기 수술후 용량이 약 1 x 1015개 미만, 약 1 x 1014개 미만, 약 5 x 1013개 미만, 약 4 x 1013개 미만, 약 3 x 1013개 미만, 약 2 x 1013개 미만, 약 1 x 1013개 미만, 약 9 x 1012개 미만, 약 8 x 1012개 미만, 약 7 x 1012개 미만, 약 6 x 1012개 미만, 약 5 x 1012개 미만, 약 4 x 1012개 미만, 약 3 x 1012개 미만, 약 2 x 1012개 미만, 약 1 x 1012개 미만, 약 9 x 1011개 미만, 약 8 x 1011개 미만, 약 7 x 1011개 미만, 약 6 x 1011개 미만, 약 5 x 1011개 미만, 약 4 x 1011개 미만, 약 3 x 1011개 미만, 약 2 x 1011개 미만, 약 1 x 1011개 미만, 약 9 x 1010개 미만, 약 8 x 1010개 미만, 약 7 x 1010개 미만, 약 6 x 1010개 미만, 약 5 x 1010개 미만, 약 4 x 1010개 미만, 약 3 x 1010개 미만, 약 2 x 1010개 미만, 또는 약 1 x 1010개 미만 바이러스 입자의 유효량으로 투여되는 벡터.
  8. 제3항 내지 제7항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 벡터의 상기 시동 용량과 상기 벡터의 상기 수술후 용량이 동일한 벡터.
  9. 제3항 내지 제7항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 벡터의 상기 시동 용량과 상기 벡터의 상기 수술후 용량이 상이한 벡터.
  10. 제3항 내지 제9항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 벡터의 상기 수술후 용량이 매일, 약 2일에 한 번, 약 3일에 한 번, 약 4일에 한 번, 약 5일에 한 번, 약 6일에 한 번, 약 7일에 한 번, 약 2주에 한 번, 약 3주에 한 번, 약 4주에 한 번, 약 5주에 한 번, 약 6주에 한 번, 약 7주에 한 번, 약 2개월에 한 번, 또는 약 6개월에 한 번 반복적으로 투여되는 벡터.
  11. 제1항 내지 제10항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 종양이 육종, 흑색종, 암종, 백혈병, 호지킨병, 비호지킨 림프종, 다발성 골수종, 신경모세포종, 유방암, 난소암, 폐암(비소세포 폐암(NSCLC) 포함), 횡문근육종, 원발성 혈소판증가증, 원발성 거대글로불린혈증, 소세포 폐 종양, 원발성 뇌 종양, 신경교종(다형성 교모세포종(GBM) 및 재발성 GBM 포함), 위암, 결장암(전이성 결장직장암(mCRC) 포함), 간담도암, 악성 췌장 췌도종, 악성 카르시노이드, 방광암, 전암성 피부 병변, 고환암, 림프종, 갑상선암, 유두상 갑상선암, 신경모세포종, 신경내분비암, 식도암, 비뇨생식도암, 악성 고칼슘혈증, 자궁경부암, 자궁내막암, 부신피질암, 전립선암, 뮐러암(Mullerian cancer), 복막암, 나팔관암, 또는 자궁 유두상 장액 암종으로부터 유래되거나 이와 관련되는 벡터.
  12. 제11항에 있어서, 상기 종양이 재발성 교모세포종(recurrent glioblastoma)인 벡터.
  13. 제1항 내지 제12항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 벡터가 서열 번호 19를 포함하거나, 이들로 구성되거나, 이들로 본질적으로 구성되는 벡터.
  14. 제1항 내지 제13항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 벡터가 ECACC(European Collection of Cell Cultures) 수탁 번호 13021201을 갖는 단리된 바이러스인 벡터.
  15. 제4항 내지 제14항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 하나 이상의 화학요법제가 베바시주맙인 벡터.
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