KR20190017325A - 피부 주름 예방 또는 개선용 누에고치 발효물의 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 누에고치에 노루궁뎅이 버섯(Hericium erinaceum) 균사체를 접종한 후 발효시키는 단계;를 포함하여 제조된 피부 주름 예방 또는 개선용 누에고치 발효물의 제조방법에 관한 것이다. 본 발명에 따라 제조된 누에고치 발효물은 총 페놀화합물과 플라보노이드의 함량이 높고, 발효과정을 통해 생성된 다양한 생리활성 물질을 함유하면서도 피부에 독성이 없으며, 피부 주름 개선 활성, 항산화 활성 및 피부 노화 방지 특성을 나타낸다. 따라서 본 발명에 따른 누에고치 발효물은 항산화, 및 피부 주름 예방 또는 개선용 화장료 조성물에 유용하게 이용될 수 있다.

Description

피부 주름 예방 또는 개선용 누에고치 발효물의 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물{Method for preparing extract of fermented silkworm cocoon for improving antiwrinkle and a cosmetic composition containing the fermented extract of silkworm cocoon as an active ingredients}

본 발명은 피부 주름 예방 또는 개선용 누에고치 발효물의 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 보다 구체적으로는 누에고치를 노루궁뎅이 버섯(Hericium erinaceum) 균사체로 발효시켜 피부 주름 예방 또는 개선 효과가 우수한 누에고치 발효물을 제조하는 방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 피부 주름 예방 또는 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.

환경의 파괴로 인한 자외선 증가 및 각종 산화성 물질의 증가는 피부 손상과 단백질의 합성능 저하를 유발할 수 있다. 이러한 피부 세포의 손상이나 기능 저하는 피부 탄력의 감소, 피부 주름살의 증가, 기미와 주근깨 생성 등 피부 미용에 치명적인 현상들을 유발한다.

세포 외 기질(extracellular matrix)의 주요 구성 성분인 콜라겐은 피부의 섬유아세포에서 생성되는 주요 기질 단백질이며, 생체 단백질 총 중량의 약 30%를 차지하는 중요한 단백질로서 견고한 3중 나선구조를 가지고 있다. 콜라겐은 피부, 건(tendom), 뼈 및 치아 등의 유기 물질의 대부분을 형성하는데, 특히 뼈와 피부(진피)에 그 함유량이 높다. 대부분의 다른 체 구조물에서는 섬유상 봉입체로서 존재한다. 콜라겐은 비교적 약한 면역원인데, 콜라겐의 나선 구조에 의한 잠재성 항원 결정인자의 차폐가 그 일부 원인이고, 이 나선 구조는 또한 콜라겐이 단백질 분에에 대한 내성을 갖도록 한다.

콜라겐의 주된 기능으로는 피부의 기계적 견고성, 결합조직의 저항력과 조직의 결합력, 세포 접착의 지탱 또는 세포 분할과 분화(유기체의 성장 혹은 상처 치유시)의 유도 등이 알려져 있다(Van der Rest 등, Ann NY Acad Sci. 1990). 이러한 콜라겐은 연령 및 자외선 조사에 의한 광노화에 의해 감소하며, 이는 피부의 주름 형성과 밀접한 연관이 있다고 알려져 있다(Arthur K. Balin et al., Aging and the skin. 1989). 특히, 피부 진피의 70% 이상을 구성하는 콜라겐은 자외선 등에 의해 유발되는 콜라게나아제(collagenase)라는 분해효소에 의해 분해되며 이는 결국 피부의 탄력 저하를 유발한다.

화장품 시장은 이미 성숙 및 포화 수준에 도달하고 있어 앞으로 세계시장에서의 경쟁력을 향상시켜야 할 필요성이 절실한 상황이며, 우리나라 고유의 국산 화장품 브랜드의 개발과 수출 전략 마련의 필요성이 대두되고 있다. 그러나 우리나라 화장품 제조에 사용되는 원료의 약 80% 이상은 해외 수입을 통해 이루어지고 있는 실정이다. 화장품 원료 수입품 가운데 수입실적이 높은 원료 및 제품들은 각국이 특허 등의 방법을 통해 산업차원에서 보호하고 있기 때문에 국내에서 이를 수입할 경우 완제품으로 수입하거나 고가의 로열티를 지불해야 하는 실정이다. 다양한 식물 추출물과 전통 한약 효능을 접목한 한방 화장품은 국내시장에서 좋은 반응을 얻고 있다. 한방화장품은 수입에만 의존하던 화장품 원료를 국산으로 대체할 수 있고 시대적 트랜드인 웰빙에 부합하면서 소비자의 수요가 지속적으로 늘어나고 있어 국내 화장품 산업 발전 도모와 국제시장에서의 수출 교두보를 마련할 수 있을 것으로 기대된다. 하지만 우리나라만의 특색이 있는 한방 화장품 개발로 서양의 허브나 다른 천연추출물을 이용한 화장품과의 차별화가 되지 않으면 한방 화장품이란 의미도 점점 퇴색되어지리라 생각된다. 오랜 기간 동안 발효식품을 이용하여 온 우리 민족에게 발효는 매우 친숙한 단어이다. 그리고 미생물을 이용한 국내 발효 산업은 아미노산, 원료 의약품 생산을 통하여 세계 최고의 기술, 인프라, 전문가 및 경험을 보유하고 있으므로, 앞선 발효 기술과 경험을 활용하여 새로운 발효 천연물 화장품 소재를 개발한다면 차별화된 소재를 사용하여 새로운 효능이 부가된 향장제품을 만들 수 있는 기회를 제공할 수 있으며, 이것은 한방 화장품이 시장에서 고유 브랜드로 정착되어 중국, 일본으로 진출하여 세계화로 되는 길을 마련할 수 있다고 판단된다.

또한, 발효란 미생물이 어떤 물질을 분해하고 변형시키는 과정을 말하며, 그 과정을 통해 미생물이 또 다른 물질을 생산해내기도 한다. 우유에 발효균(미생물)을 넣어 두면 요구르트가 되고, 포도즙이 자체 발효되면서 포도주가 되듯이 발효과정을 거치면 유효성분이 분해되어, 그 미생물의 수가 증가하고 새로운 물질이 생겨난다.

이런 과정을 화장품에 적용시킨 것이 바로 발효 화장품이며, 피부에 좋은 물질을 미생물로 발효시킨 후 얻은 대사산물을 화장품에 이용하는 것이다. 화장품 중에는 양을 많이 쓰면 독성이 생기거나, 혹은 분자 크기가 피부 세포의 틈새보다 커서 피부에 깊숙이 침투되지 못한 채 제 기능을 발휘하지 못하는 경우가 있는데, 발효화장품은 이러한 문제점들을 해결해 준다. 발효를 통해 독성 성분들을 분해 및 변화시켜 그 독성을 최소화하고, 피부에 친숙한 물질로 변환시켜 적은 양으로도 피부에 큰 효능을 발휘할 수 있다.

한편, 종래부터 천연물의 추출물 또는 발효물을 함유하는 화장료에 관한 연구가 있어왔으며, 그러한 천연물 중의 하나로서 누에고치를 들 수 있다. 일반적으로 누에고치는 그 추출물에 피부보습, 살균효과 등이 있음이 알려져 있어 화장료의 원료로 사용되어 왔다.

대한민국 공개특허 제2005-0015177호 "누에고치로부터 추출된 세리신 단백질을 함유하는 미용팩 조성물"에는 누에고치로부터 추출한 세리신을 활성성분으로 함유하는 피부미용팩이 개시되어 있다. 대한민국 공개특허 제2007-0114953호 "생약 추출물을 포함하는 문제성 피부 개선용 조성물"에는 인삼, 천궁, 삼백초, 당귀, 어성초, 감초, 박하, 뽕잎, 녹차, 구기자, 진피, 검정콩, 검은깨, 누에고치 및 하수오 추출물을 포함하는 문제성 피부 개선용 조성물에 관하여 개시되어 있다. 상기 화장료 조성물은 모두 누에고치의 추출물을 이용한 것이다.

본 발명자들은 여러 천연물들의 화장품으로의 응용 가능성을 연구하는 과정에서, 누에고치를 노루궁뎅이 버섯 균사체로 발효시켜 제조한 누에고치 발효물을 제조하여, 피부 항산화 효과 및 피부주름 개선 효과(콜라게나아제 활성 저해능) 등의 생리활성을 검증하여 화장료 조성물로서의 가능성을 검토한 결과, 그 생리활성을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.

KR 10-2005-0015177 A KR 10-2007-0114953 A

본 발명이 해결하고자 하는 첫 번째 과제는 총 페놀화합물 및 플라보노이드 함량이 높고, 우수한 항산화 활성 및 콜라게나아제 저해 활성을 나타내며, 피부 독성을 나타내지 않는 누에고치 발효물의 제조방법을 제공하는 것이다.

본 발명이 해결하고자 하는 두 번째 과제는 상기 제조방법으로 제조된 누에고치 발효물을 유효성분으로 하는 피부 주름 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

상기한 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 누에고치에 노루궁뎅이 버섯(Hericium erinaceum) 균사체를 접종한 후 발효시키는 발효단계;를 포함하는 피부 주름 예방 또는 개선용 누에고치 발효물의 제조방법을 제공한다.

본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 발효단계는 누에고치 100 중량부에 대하여 노루궁뎅이 버섯 균사체 1 내지 20 중량부를 접종하여 25 내지 35 ℃에서 5 내지 15일간 배양하는 것일 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 누에고치 발효물을 유산균으로 발효시키는 2차 발효단계;를 더 포함할 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 유산균은 류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides)일 수 있다.

상기 유산균 발효는 상기 누에고치 발효물 100 중량부 대비 유산균 1 내지 20 중량부를 접종하여 25 내지 35 ℃에서 8 내지 32 시간 발효시키는 것일 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 누에고치 발효물을 물, 저급 알콜 수용액 및 아세톤 수용액으로 이루어진 군 중에서 선택되는 어느 하나의 용매로 추출하는 추출단계;를 더 포함할 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 추출단계는 누에고치 발효물 1 중량부에 대하여 20 내지 80 부피%의 저급 알콜 수용액 또는 20 내지 80 부피%의 아세톤 수용액을 1 내지 30 중량부로 혼합하여 20 내지 60 ℃에서 2 내지 24 시간 동안 교반하여 추출하는 것일 수 있다.

상기 제조방법에 따라 제조된 누에고치 발효물은 콜라게나아제 저해 활성을 나타낸다.

한편, 본 발명은 상기 제조방법으로 제조된 누에고치 발효물을 유효성분으로 포함하는 피부주름 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 화장료 조성물은 물, 유분, 계면활성제, 보습제, 점증제, 방향제, 보존제, 중화제, 에몰리언트제, 피부보호제 및 피부컨디셔닝제로 이루어진 군 중에서 선택되는 1종 또는 2종 이상을 더 포함할 수 있다.

본 발명의 일 구현예에 의하면, 상기 화장료는 스킨, 유액, 에센스, 로션, 미용액, 바디로션, 바디젤, 바디에센스, 바디세정제, 클렌징폼, 클렌징크림, 클렌징 겔, 팩, 마사지크림, 마사지겔, 영양크림, 수면크림 및 수분크림 중에서 선택된 어느 하나의 제형일 수 있다.

본 발명에 따른 제조방법에 의해 제조된 누에고치 발효물은 총 페놀화합물과 플라보노이드의 함량이 높고, 발효과정을 통해 생성된 다양한 생리활성 물질을 함유하면서도 피부에 독성이 없으며, 콜라게나아제 저해 활성, 항산화 활성 및 피부 노화 방지 특성을 나타낸다. 따라서 상기한 누에고치 발효물을 유효성분으로 함유하는 조성물은 항산화 및 피부주름 개선 등의 기능성을 요구하는 피부미용제품 또는 화장료의 조성물로 유용하게 이용될 수 있다.

도 1a는 누에고치를 노루궁뎅이 버섯 균사체 종균 접종 후 고체배양하여 30일 이 지난 경우의 사진이고, 도 1b는 누에고치를 상기 종균 접종 후 액체배양하여 7일이 지난 경우의 사진이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예 및 비교예에 따른 누에고치 발효물의 DPPH 라디칼 소거능을 측정한 결과를 나타내는 그래프이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예 및 비교예에 따른 누에고치 발효물의 ABTS 라디칼 소거능을 측정한 결과를 나타내는 그래프이다.
도 4a는 비교예 1의 농도 증가에 따른 DNA 손상 보호 효과를 나타내는 사진이고, 도 4b는 그 결과를 그래프로 나타낸 것이다.
도 5a는 실시예 1의 농도 증가에 따른 DNA 손상 보호 효과를 나타내는 사진이고, 도 5b는 그 결과를 그래프로 나타낸 것이다.
도 6a는 실시예 2의 농도 증가에 따른 DNA 손상 보호 효과를 나타내는 사진이고, 도 6b는 그 결과를 그래프로 나타낸 것이다.
도 7a는 비교예 1의 HSA 단백질의 산화적 손상에 대한 보호 작용을 보여주는 SDS-PAGE 겔 상의 단백질 띠 사진이며 도 7b는 상기 단백질 띠의 밀도를 측정한 값을 그래프로 나타낸 것이다.
도 8a는 실시예 1의 단백질의 산화적 손상에 대한 보호 작용을 보여주는 SDS-PAGE 겔 상의 단백질 띠 사진이며 도 8b는 상기 단백질 띠의 밀도를 측정한 값을 그래프로 나타낸 것이다.
도 9a는 실시예 2의 단백질의 산화적 손상에 대한 보호 작용을 보여주는 SDS-PAGE 겔 상의 단백질 띠 사진이며 도 9b는 상기 단백질 띠의 밀도를 측정한 값을 그래프로 나타낸 것이다.
도 10은 비교예 1의 농도별 콜라게나아제 효소 활성 저해능을 나타낸 그래프이다.
도 11 및 도 12는 각각 실시예 1 및 실시예 2의 농도별 콜라게나아제 효소 활성 저해능을 나타낸 그래프이다.
도 13은 세포 독성 실험에서 각 실시예 및 비교예의 24시간 배양 후의 농도별 세포 생존률을 나타낸 그래프이다.
도 14는 비교예 1, 실시예 1 및 실시예 2에 포함된 피부 보습 또는 주름개선과 관련된 아미노산들의 함량을 비교하여 나타낸 그래프이다.
도 15는 비교예 1, 실시예 1 및 실시예 2에 포함된 피부 보호에 관여하는 비극성 아미노산들의 조성을 분석한 결과를 나타낸 그래프이다.

이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.

본 발명의 일 측면에 따르면, 본 발명은 누에고치에 노루궁뎅이 버섯(Hericium erinaceum) 균사체를 접종한 후 발효시키는 발효단계;를 포함하는 피부 주름 예방 또는 개선용 누에고치 발효물의 제조방법을 제공한다.

본 발명에서는 노루궁뎅이 버섯 균사체를 발효에 이용함으로써 총 페놀화합물 및 플라보노이드의 함량이 높고, DPPH 라디칼 소거능, ABTS 라디칼 소거능, DNA 및 단백질의 산화적 손상에 대한 보호능 및 콜라게나아제 활성 저해능이 우수한 누에고치 발효물을 제조하는 방법을 제공한다.

또한, 상기 발효단계는 누에고치 100 중량부에 대하여 노루궁뎅이 버섯 균사체 1 내지 20 중량부를 접종하여 25 내지 35 ℃에서 5 내지 15일간, 더욱 바람직하게는 28 ~ 32 ℃에서 5 ~ 10 일간 배양하는 것일 수 있다. 상기의 조건에서 배양하는 경우, 누에고치의 실크 단백질이 풀어지면서 상기 실크 단백질 사이에 균사체가 착상 및 생장할 수 있게 되고, 누에고치 표면의 30 ~ 50% 가량을 균사체로 덮는 것을 육안으로 확인할 수 있게 된다.

상기 발효단계에서는 누에고치에 노루궁뎅이 버섯 균사체를 접종하기 전에 먼저 누에고치 중량 대비 5 내지 15배의 물을 넣고 110 내지 130 ℃에서 10 내지 20 분간 멸균 후 냉각하는 과정을 거치는 것이 더욱 바람직하다.

상기 발효단계에서 노루궁뎅이 버섯 균사체를 1 중량부 미만으로 접종하게 되면 균사체의 생성 및 생장이 더디게 되고, 20 중량부를 초과하여 균사체를 접종하면 발효 조건에 영향을 미치지는 않지만 경제적 효율성으로 볼 때 바람직하지 않다. 노루궁뎅이 버섯 균사체를 10 ~ 15중량부로 접종하는 경우 발효가 가장 잘 일어나므로 균사체의 성장이나 생산성에 더욱 바람직하다.

또한, 상기 발효단계에서 25 ℃ 미만으로 배양하는 경우 온도가 낮아 균사체의 생성 및 생장이 더디게 되고, 35 ℃를 초과하여 배양하는 경우에는 온도가 높아 균사체의 생성 및 생장이 느려져 바람직하지 않다. 그리고, 온도범위가 28 ~ 32 ℃인 것이 노루궁뎅이 버섯 균사체의 생성 및 생장에 더욱 적합하므로 보다 바람직하다.

또한, 상기 발효단계에서 5 일 미만으로 배양하는 경우에는 균사체의 생성이 충분하지 않게 되고, 15 일을 초과하여 배양하는 경우에는 산업화에 있어서 경제적 효율이 떨어지므로 바람직하지 않다. 그리고, 발효기간이 8 ~ 12 일인 것이 균사체의 생장 및 생산성 증가에 더욱 적합하므로 보다 바람직하다.

한편, 상기 발효단계에서 누에고치에 노루궁뎅이 버섯 균사체를 접종한 후 고체배양하는 경우에는 균사체의 생성 및 생장에 시간이 오래 걸리므로 액체배양하는 것이 더욱 바람직하다.

또한, 본 발명은 상기 누에고치 발효물을 유산균으로 발효시키는 2차 발효단계를 더 포함할 수 있다.

본 발명에 의하면, 상기 유산균은 류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides)인 것이 총 페놀화합물 및 플라보노이드 함량 증가에 적합하므로 가장 바람직하다.

또한, 상기 유산균으로 발효시키는 2차 발효는 상기 누에고치 발효물 100 중량부 대비 유산균 1 내지 20 중량부, 더욱 바람직하게는 5 내지 15 중량부를 접종하여 25 내지 35 ℃에서 8 내지 32 시간, 더욱 바람직하게는 28 내지 32 ℃에서 20 내지 25 시간 동안 발효시키는 것일 수 있다. 상기 유산균을 이용한 2차 발효는 25 내지 35 ℃에서 8 내지 32 시간 동안 발효시키는 것이 유산균의 생장 및 산업화에 유리하므로 바람직하다. 상기 발효를 상기 온도범위에서 벗어나서 수행하는 경우에는 유산균의 생장이 불가능하거나 느려지게 되므로 바람직하지 않다. 또한, 상기 발효를 8 시간 미만으로 수행하는 경우에는 유산균 발효의 효과가 충분하지 않게 되고, 32 시간을 초과하여 수행하는 경우에는 pH는 낮아지고, 산도 및 균수가 증가하므로 유산균의 생장이 느려지게 되어 상기 시간을 초과하여 발효시키는 효과의 증가가 미미하게 되어 바람직하지 않다.

본 발명에 의하면, 본 발명의 누에고치 발효물을 유산균으로 발효시키는 2차 발효단계를 더 거침으로써 총 페놀화합물의 함량, 플라보노이드 함량 및 각종 생리활성물질의 함량 등을 더욱 증가시킬 수 있으며, 이로 인해 상기 발효물의 항산화 효능을 더욱 강화할 수 있어 바람직하다.

또한, 본 발명은 상기 누에고치 발효물을 물, 저급 알콜 수용액 및 아세톤 수용액으로 이루어진 군 중에서 선택되는 어느 하나의 용매로 추출하는 추출단계;를 더 포함할 수 있다. 본 발명의 제조방법에서 유산균 발효단계를 거치는 경우에는 상기 추출단계는 유산균 발효단계 이후에 수행하는 것이 더욱 바람직하다.

또한, 상기 추출단계는 누에고치 발효물에 5 ~ 10 배(중량)의 물을 가한 후 90 ~ 120 ℃에서 10 ~ 14 시간 동안 가열하여 열수추출하는 것이거나, 누에고치 발효물 1 중량부에 대하여 20 내지 80 부피%의 저급 알콜 수용액 또는 20 내지 80 부피%의 아세톤 수용액을 1 내지 30 중량부로 혼합하여 20 내지 60 ℃에서 2 내지 24 시간 동안 교반하여 추출하는 것일 수 있다.

상기 추출단계에서 상기 용매는 좀 더 바람직하게는 50 내지 70 부피%의 저급 알콜 수용액 또는 30 내지 50 부피%의 아세톤 수용액일 수 있다. 상기 범위의 용매를 사용하여 추출된 추출물이 항산화 활성 및 콜라게나아제 저해 활성이 좀 더 우수하였다.

한편, 상기 저급 알콜은 탄소수 1 내지 4의 알콜을 의미는 것으로, 구체적으로 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올 및 이소프로필 알콜일 수 있고, 바람직하게는 에탄올 또는 이소프로필 알콜일 수 있다.

상기 교반은 20 내지 60 ℃에서 2 내지 24 시간 동안 수행될 수 있는데, 교반 온도가 상기 범위 미만이면 피부미용에 유용한 물질의 추출 수율이 낮아지면서도 온도를 낮추기 위한 장비가 필요하므로 경제적이지 않으며, 교반 온도가 상기 범위를 초과하면 피부미용에 유용한 물질이 파괴되거나, 주름 개선 등에 관여하지 않는 물질이 높은 함량으로 함께 추출됨으로써 기능성이 저하된 추출물이 제조될 수 있어 바람직하지 않다.

본 발명에 의하면, 상기 교반 전에 초음파 또는 마이크로파를 조사하는 전처리 단계를 더 수행할 수 있으며, 초음파와 마이크로파를 병용하여 조사하는 것도 무방하다. 상기 발효물에 초음파 또는/및 마이크로파를 조사하는 경우 그렇지 않은 경우에 비하여 항산화, 피부주름 예방 또는 개선 등의 피부미용 기능성이 향상된 추출물을 얻을 수 있어 바람직하다. 특히, 알콜 또는 아세톤의 함량이 낮은 용매를 이용하여 추출 시에도 피부 미용 기능성 성분의 추출이 용이하므로 바람직하다.

상기 초음파 조사는 15 내지 25 kHz 및 500 내지 800 watt로 2 내지 30분간 조사될 수 있으며, 상기 마이크로파 조사는 2000 내지 3000 MHz 및 50 내지 400 watt로 5 내지 60초간 조사되는 것 일 수 있다.

초음파 또는 마이크로파의 조사에너지 및 조사시간이 상기 범위 미만이면 조사에 의한 효과가 미미하며, 상기 범위를 초과하면 페놀화합물 또는 플라보노이드의 구조가 항산화, 피부주름 개선 등에 효과적이지 않은 구조로 변질된 추출물이 얻어질 수 있으므로 바람직하지 않다.

한편, 누에고치 발효물은 통상의 여과 방법 또는 장치를 이용하여 불순물을 제거할 수 있으며, 예를 들어 원심분리 방법을 이용하거나 마이크로 필터를 이용하여 여과하여 불순물이 제거된 추출물을 얻을 수 있다.

본 발명에 의하면 상기 마이크로 필터는 0.3 내지 0.8 ㎛ 필터일 수 있다.

본 발명은 또한, 상기의 방법에 따라 제조된 누에고치 발효물을 제공한다.

본 발명에 의하면, 상기 누에고치 발효물은 DPPH 라디칼 소거능, ABTS 라디칼 소거능, DNA 또는 단백질의 산화적 손상에 대한 보호능 및 콜라게나아제 효소 활성 저해능 등이 우수하므로, 노화방지, 항산화 및 피부주름 개선을 목적으로 유용하게 이용될 수 있다.

본 발명은 또한, 상기 누에고치 발효물을 유효성분으로 포함하는 피부주름 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명에 의하면 상기 조성물에서 상기 누에고치 발효물의 함량은 전체 화장료 조성물 총 중량에 대하여 0.01 내지 30 중량%로 함유될 수 있으며, 바람직하게는 0.03 내지 10 중량%로 함유될 수 있다. 상기 누에고치 발효물의 함량이 상기 범위 미만인 경우에는 누에고치 발효물에 의한 효과를 기대하기 어려우며, 상기 범위를 초과하는 경우에는 함량의 증가에 따른 효과의 증가가 미미하며, 제형의 안정성이 저하되는 문제가 있다.

본 발명에 따른 화장료는 공지된 바의 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어 스킨, 유액, 에센스, 로션, 바디로션, 바디젤, 바디에센스, 바디세정제, 클렌징폼, 클렌징크림, 클렌징 겔, 팩, 마사지크림, 마사지겔, 영양크림, 수면크림 및 수분크림으로 이루어진 군 중에서 선택되는 제형일 수 있다.

또한 각 제형의 화장료 조성물에 있어서 상기 누에고치 발효물 외에 다른 성분들을 사용목적 또는 제형의 특징에 따라 임으로 선정하여 배합할 수 있으며, 그 제형의 제제화에 필요에 따라 효과를 떨어뜨리지 않는 범위에서 첨가물을 더 포함할 수 있다.

상기 첨가물은 물, 유분, 계면활성제, 보습제, 점증제, 방향제, 보존제, 중화제, 에몰리언트제, 피부보호제, 피부컨디셔닝제, 방부제, 산화방지제, 자유 라디칼 파괴제, 불투명화제, 안정화제, 살균제, 산화 안정화제, 실리콘, 소포제, 비타민, 중합제, 추진제, 염기성화제, 산성화제, 착색제, 안료 및 충전제로 이루어진 군 중에서 선택되는 1종 또는 2종 이상일 수 있다.

이하, 바람직한 실시예를 들어 본 발명을 더욱 상세하게 설명한다. 그러나, 이들 실시예는 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이에 의하여 제한되지 않는다는 것은 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 자명할 것이다.

실시예

실시예 1.

가. 발효

누에고치 1 kg에 10 kg의 증류수를 가한 후, 고압멸균기에서 121 ℃, 1 시간 동안 멸균시켰다. 그리고, 미리 배양된 노루궁뎅이 버섯 균사체 종균 100 g을 접종하였다. 상기 노루궁뎅이 버섯 균사체 종균은 노루궁뎅이 버섯 균사체를 PDP(Potato dextrose broth) 배지에 계대하고 인큐베이터(shaking incubator)에서 130 rpm, 25 ℃에서 7 일씩 3차에 걸쳐 배양한 균사체 종균이다.

그리고, 30 ℃에서 7일 동안 발효시켰다.

상기 발효 직후 누에고치 표면의 40 % 가량에 균사체가 생성되어 덮인 것을 육안으로 확인할 수 있었다.

참고로, 상기 누에고치를 노루궁뎅이 버섯 균사체 종균 접종 후 고체배양하는 경우 누에고치 표면의 40 % 가량에 균사체가 생성되어 덮이기까지 30일 가량이 소요되는 반면 실시예와 같이 액체배양하는 경우에는 7일 가량이 소요되는 것을 확인하였다. 이에 따라, 본 발명의 발효방법으로는 액체배양 방법이 선택되었다. 도 1a는 누에고치를 노루궁뎅이 버섯 균사체 종균 접종 후 고체배양하여 30일 이 지난 경우의 사진이고, 도 1b는 누에고치를 상기 종균 접종 후 액체배양하여 7일이 지난 경우의 사진이다.

나. 추출

발효된 누에고치에 10 배(중량)의 물을 가한 후 110 ℃에서 12 시간 동안 가열하여 추출하고, 0.45 ㎛필터로 여과하여 발효 누에고치 추출물을 제조하였다.

실시예 2.

실시예 1의 가. 발효단계에서 얻은 발효물 100 중량부에 10 중량부의 류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides)를 접종한 후, 30 ℃에서 24 시간 동안 발효한 후 여과 살균하여 누에고치 발효물을 제조하였다. 상기 유산균 발효 직후의 배양물의 pH는 4.36, 산도는 1.116, 균수는 2.2×10⁸ cfu/㎖이었다.

상기 류코노스톡 메센테로이데스는 김장 김치로부터 분리한 유산균으로써, MRS Broth 액체배지에 접종한 후 37 ℃에서 15 시간 동안 정치배양한 후 종균으로 사용하였다.

비교예 1

발효 단계를 수행하지 않은 누에고치에 10 배(중량)의 물을 가한 후 110 ℃에서 12 시간 동안 가열하여 추출하고, 0.45 ㎛필터로 여과하여 누에고치 추출물을 제조하였다.

비교예 2

노루궁뎅이 버섯 균사체 대신 동충하초 균사체를 접종하여 발효시킨 것을 제외하고는 실시예 1과 동일한 방법으로 발효 누에고치 추출물을 제조하였다.

비교예 3

노루궁뎅이 버섯 균사체 대신 동충하초 균사체를 접종하여 발효시킨 것을 제외하고는 실시예 2와 동일한 방법으로 발효 누에고치 추출물을 제조하였다.

시험예

가. 총 페놀 함량 측정

추출물 중의 총 페놀 화합물(phenolics) 함량은 Folin-Ciocalteu법에 따라 측정하였다. 농도가 1000 ppm인 누에고치 발효물 200 ㎕에 Folin-Ciocalteu reagent 800 ㎕을 가하여 교반한 뒤, 10분 후에 10% Na₂CO₃ 용액 2㎖을 추가하였다. 그 후, 90분간 암실에서 반응시킨 후 765 nm에서 UV-Vis spectrometer를 이용하여 흡광도를 측정하였다.

나. 플라보노이드 함량 측정

총 페놀화합물 중의 플라보노이드(Flavonoid) 함량을 HPLC(High performance liquid chromatography)를 이용하여 측정하였다.

시험예 1. 성분분석

시험예 1.1. 발효에 따른 총 페놀화합물 함량 및 플라보노이드 함량

발효에 따른 총 페놀화합물 함량 및 플라보노이드 함량을 확인하였으며 이를 하기 표 1에 나타내었다.

구분	총 페놀 함량(mg/mL)	플라보노이드 함량(mg/mL)
실시예 1	5.20 ± 0.05	2.06 ± 0.07
실시예 2	4.38 ± 0.07	1.91 ± 0.09
비교예 1	2.88 ± 0.09	0.86 ± 0.01
비교예 2	3.96 ± 0.08	1.95 ± 0.06
비교예 3	4.24 ± 0.09	1.65 ± 0.06

표 1을 참고로 하면, 노루궁뎅이 버섯 균사체로 발효한 실시예 1의 경우 발효하지 않은 비교예 1에 비해 총 페놀 함량 및 플라보노이드 함량이 거의 2배 가량 증가한 것을 확인하였다.

일반적으로 천연물의 경우 총 페놀 및 플라보노이드 함량이 높을수록 항산화 기능이 높아진다는 보고가 있다. 이에 따라, 실시예 1 및 실시예 2의 발효물의 경우 비교예의 추출물 또는 발효물에 비해 항산화 기능 및 기타 활성들이 더욱 높을 것으로 판단된다.

시험예 2. 피부 기능성 평가

실시예 및 비교예의 발효물의 DPPH 라디칼 소거능, ABTS 라디칼 소거능, DNA손상 및 단백질 손상에 대한 보호능 및 콜라게나아제 활성저해능을 평가하였다.

시험예 2.1. 항산화 활성

시험예 2.1.1. DPPH 라디칼 소거능

DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl)는 매우 안정한 자유라디칼로 517 ㎚의 흡수 파장을 갖는 진한보라색의 화합물이다. 항산화제에 의해 탈색되므로 항산화 활성을 쉽게 측정할 수 있다.

DPPH는 시그마사(Sigma Co., Ltd,미국)에서 구입하여 사용하였다. 실시예 및 비교예의 시료 50 ㎕에 DPPH 용액(0.1 mM, 에탄올) 950 ㎕을 가하여 혼합한 후, 실온에서 20분간 반응시킨 뒤 에탄올에 의해 생긴 불순물을 centrifuge(10,000×g, 5 min)를 통해 제거하고 UV-Vis spectrometer를 사용하여 517nm에서 흡광도를 측정하였으며, 그 결과를 도 2에 나타내었다. 이때, 양성 대조군으로는 ascorbic acid를 사용하였다.

도 2를 참고로 하면, 노루궁뎅이 버섯 균사체로 발효한 실시예 1 및 실시예 2의 경우 발효하지 않은 비교예 1에 비해 DPPH 라디칼 소거능이 3배 가량 증가한 것을 확인할 수 있다.

시험예 2.1.2. ABTS 라디칼 소거능

ABTS(2,2'-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid)) 양이온 라디칼은 항산화 능력을 측정하기 위해 이용되었다. 먼저, ABTS를 7 mM 농도로 용해시킨 후 ABTS 양이온 라디칼을 만들기 위해 2.45 mM의 potassium persulfate를 첨가하고 12시간 동안 실온의 암실에서 보관하여 녹청색의 발색단을 생성시켰다. 상기 ABTS 양이온 라디칼을 증류수로 희석하여 734 ㎚에서 흡광도가 약 0.7 ~ 1.1이 되도록 준비한 후에 시험관에 시료를 50 μl씩 넣고 ABTS 양이온 라디칼 용액을 950 μl 씩 첨가하여 6분 동안 반응시킨 후에 spectrophotometer를 통해 734 ㎚에서 흡광도를 측정하였으며, 그 결과를 도 2에 나타내었다. 이때, 양성 대조군으로는 ascorbic acid를 사용하였다.

도 3을 참고로 하면, 노루궁뎅이 버섯 균사체로 발효한 실시예 1 및 실시예 2의 경우 발효하지 않은 비교예 1에 비해 ABTS 라디칼 소거능이 4배 이상 증가한 것을 확인할 수 있다.

시험예 2.1.3. DNA 손상에 대한 보호능

DNA의 산화적 손상에 누에고치 발효물이 미치는 영향을 관찰하기 위해, AAPH로 DNA 손상을 유도한 후, 누에고치 발효물이 어떤 영향을 미치는지를 agarose gel electrophoresis로 관찰하였다. DNA로는 2 ㎕의 pUC19(0.1 mg/mL)을 사용하였으며, AAPH 10 mM을 첨가하여 산화적 손상을 유도 하였다. 반응은 37℃에서 2시간 동안 진행하였고 agarose gel electrophoresis를 통해 DNA의 산화적 손상에 대한 보호 작용을 확인하였다.

Peroxyl radical은 생체내 고분자 물질 중 DNA와 결합하는 능력이 강하며 DNA의 산화적 손상을 유발한다. 이러한 DNA의 산화적 손상은 DNA adduct들을 생성하고, 단백질 등의 다른 분자들과 cross link를 일으키기도 하며, 유전자 돌연변이, 정상적인 유전자 발현의 방해 등을 통해 암세포를 생성하기도 한다.

DNA 손상 보호에 미치는 영향을 보다 세밀하게 관찰하기 위해 시료의 농도별 효과를 관찰하였다.

도 4a는 비교예 1의 농도 증가에 따른 DNA 손상 보호 효과를 나타내는 사진이고, 도 4b는 그 결과를 그래프로 나타낸 것이다.

도 4a에서 보는 바와 같이 lane1은 control DNA이며 lane 2는 AAPH를 처리하여 DNA의 산화적 손상을 유도한 것으로 DNA의 strand breakage가 일어나 DNA 밴드의 위치 변화가 일어났다. lane 3-6은 시료를 처리하여 peroxyl radical에 의한 DNA의 손상을 억제하는지를 확인한 것으로 시료용액을 농도별로 처리한 결과 농도가 증가함에 따라 DNA 손상에 변화가 없었다. 도 4b는 DNA 밴드를 밀도측정기로 측정한 결과 agarose gel 상에서 보는 바와 동일하게 DNA 밴드의 밀도가 시료 농도에 따라 거의 변화가 없는 것으로 나타났다.

도 5a는 실시예 1의 농도 증가에 따른 DNA 손상 보호 효과를 나타내는 사진이고, 도 5b는 그 결과를 그래프로 나타낸 것이다. 상기 도 5는 실시예 1의 농도가 증가함에 따라 DNA 손상 보호 효과가 증가하는 것을 나타내었다. 실시예 1의 경우 0.5 mg/mL 농도에서 DNA를 보호하기 시작했고 2.5 mg/mL 농도에서는 DNA의 80%를 보호하는 것으로 나타났다.

도 6a는 실시예 2의 농도 증가에 따른 DNA 손상 보호 효과를 나타내는 사진이고, 도 6b는 그 결과를 그래프로 나타낸 것이다. 도 6에 나타낸 바와 같이, 실시예 2의 경우 또한 2.5 mg/mL 농도에서는 DNA를 보호하는 것으로 나타났다.

상기 도 4 내지 도 6을 살펴보면, 노루궁뎅이 균사체로 발효시킨 실시예 1 및 실시예 2의 경우 미발효물인 비교예 1에 비해 DNA 손상에 대한 보호 효과가 훨씬 뛰어난 것으로 나타났다.

시험예 2.1.4. 단백질 손상에 대한 보호능

Peroxyl radical은 세포 내 단백질의 산화적 손상을 유도하며 이는 단백질의 구조적 변형, 기능의 상실 등을 유발하여 필요한 단백질들의 결핍 등에 의한 생체 내 항상성에 문제를 일으킬 수 있다. 실험에 사용된 HSA 단백질은 혈액 내 혈장 단백질 중에서 50~60 %를 차지하는 단백질로서 혈장삼투압, 비특이적 결합능력이 강해 호르몬, 대사산물, 약제 등의 운반체로 작용하는 단백질이다. 상기 단백질이 산화적 손상 또는 지질 과산화물에 의해 손상되는 경우 여러 가지 질환이 야기될 것으로 생각되며, 이러한 단백질의 산화적 손상을 억제하는 물질들은 노화 예방에 도움이 될 것으로 생각된다.

따라서, peroxyl radical에 의한 HSA의 산화적 변성에 본 발명의 실시예 또는 비교예의 시료가 어떤 영향을 미치는지를 알아보았다.

반응액에 HSA(2 mg/ml)와 50 mM AAPH를 처리하고 본 발명의 시료를 농도별로 첨가하여 37℃에서 4시간 동안 반응시킨 후 SDS-PAGE를 통해 단백질의 산화적 손상에 대한 보호 작용을 확인하였다. 도 7a는 비교예 1의 단백질의 산화적 손상에 대한 보호 작용을 보여주는 SDS-PAGE 겔 상의 단백질 띠 사진이며 도 7b는 상기 단백질 띠의 밀도를 측정한 값을 그래프로 나타낸 것이다. 상기 도 7a에서 lane 2의 경우 peroxyl radical에 의한 HSA의 산화적 손상으로 인해 단백질의 절단현상이 나타났다. 도 7에서 보는 바와 같이 비교예 1은 농도가 증가함에 따라 단백질의 손상 보호 정도가 미약하게 증가하는 것을 알 수 있었다.

도 8a는 실시예 1의 단백질의 산화적 손상에 대한 보호 작용을 보여주는 SDS-PAGE 겔 상의 단백질 띠 사진이며 도 8b는 상기 단백질 띠의 밀도를 측정한 값을 그래프로 나타낸 것이다. 상기 도 8에서, 실시예 1의 시료를 농도별로 처리한 결과 농도가 증가함에 따라 단백질의 산화적 손상에 대한 보호 효과가 증가함을 보였다. 또한 실시예 1의 경우 0.25 mg/mL 농도부터 단백질을 보호하는 효과가 나타났다.

도 9a는 실시예 2의 단백질의 산화적 손상에 대한 보호 작용을 보여주는 SDS-PAGE 겔 상의 단백질 띠 사진이며 도 9b는 상기 단백질 띠의 밀도를 측정한 값을 그래프로 나타낸 것이다. 상기 도 9에서 나타낸 바와 같이, 실시예 2의 시료를 농도별로 처리한 결과 농도가 증가함에 따라 단백질의 산화적 손상에 대한 보호 효과가 실시예 1의 경우보다 더욱 증가함을 알 수 있었다. 실시예 2의 경우 또한, 0.25 mg/mL 농도부터 단백질을 보호하는 효과가 나타났다.

실시예 2.2. 주름 예방 또는 개선 효과 실험: collagenase 저해 활성 측정

피부 주름의 예방 또는 개선 효과는 콜라게나아제 저해능을 통해 평가하였다. 콜라게나아제 저해활성 측정은 WE 등의 방법에 따라 측정하였다(WE, Heindrich HG. Zur quantitativen bestimmumg der collagenase. Hoppe-Seyler's. Physiol. Chem. 1963; 333: 149-151).

즉, 반응구는 0.1M Tris-HCl buffer(pH 7.5)에 4mM CaCl₂를 첨가하여, 4-phenylazobenzyloxycarbonyl-Pro-Leu-Gly-Pro-D-Arg(0.1 mg/mL)를 녹인 기질액 0.25 mL 및 실시예 또는 비교예의 시료 0.1 mL의 혼합액에 콜라게나아제(0.2 mg/mL) 0.15 mL를 첨가하여 실온에서 20 분간 방치한 후 6% citric acid 0.5 mL을 넣어 반응을 정지시킨 후, ethyl acetate 1.5 mL을 첨가하여 320 nm에서 흡광도를 측정하였다. 콜라게나아제 저해활성은 시료의 첨가구와 무첨가구의 흡광도 감소율로 나타내고, 구체적으로는 하기 수학식 1을 이용하여 계산하였으며, 그 결과를 도 10 내지 도 12에 나타내었다. 이때, 도 10 내지 도 12에서는 양성대조군으로 콜라게나아제 억제제(MMPs; matrix metalloproteinases, 단백질 저해제)가 사용되었다.

[수학식 1]

콜라게나아제 저해율(%) = (1 - 시료 첨가군의 흡광도 / 시료 무첨가군의 흡광도) × 100

도 10는 비교예 1의 농도별 콜라게나아제 효소 활성 저해능을 나타낸 그래프이다. 도 10를 살펴보면 비교예 1의 경우 콜라게나아제 효소 활성 저해 효과가 거의 나타나지 않는 것을 알 수 있다.

도 11 및 도 12은 실시예 1 및 실시예 2의 농도별 콜라게나아제 효소 활성 저해능을 나타낸 그래프이다. 도 11 및 도 12을 살펴보면 실시예 1 및 실시예 2의 경우 콜라게나아제 효소 활성 저해 효과가 비교예 1에 비해 훨씬 증가한 것을 알 수 있다. 특히, 실시예 2의 경우 매우 높은 콜라게나아제 저해 활성을 나타내었는데, 이는 유산균 발효에 의해 실크 단백질의 분해가 유도되어 효과적인 주름개선 물질들이 증가하였기 때문인 것으로 판단된다.

시험예 3. 세포 독성 실험

시험예 3.1. 세포배양

악성흑색종 세포주인 B16F10의 세포 증식을 위해 fetal bovine serum (ATCC) 10%(v/v)이 함유된 RPMI 1640 배지를 이용하여 37℃ 5% CO₂로 설정된 배양기(FORMA, OPTIMA INC, Japan)에서 배양하였다. 세포의 생존률은 [3-(4,5,-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-trazolium bromide](MTT)를 이용하여 측정하였다.

시험예 3.2. 세포 독성 실험

B16F10을 96 well plate에 1×10⁴ cells/well이 되도록 분주하였다. 실시예 또는 비교예의 시료 당 4개의 농도(1.67, 3.33, 5, 6.67 mg/mL)를 설정하였으며, 농도별로 3개의 well을 준비하였다. 세포 (1×10⁴ cells/well) 분주시 시료의 최종 희석농도를 감안하여 일정한 배양액을 분주하였다.

상기 세포를 37℃, 5% CO₂ incubator에서 24시간 배양하였다. 음성 대조군에는 DMSO를 처리하고 상기 시료와 동일한 조건으로 배양하였다.

도 13은 세포 독성 실험에서 각 실시예 및 비교예의 24시간 배양 후의 농도별 세포 생존률을 나타낸 그래프이다. 도 13에 나타낸 바와 같이 5개의 시료 모두 최종농도 5 mg/ml에서도 세포 독성이 거의 나타나지 않음을 확인하였다.

시험예 4. 아미노산 조성 분석

실시예 또는 비교예로부터 얻은 시료의 아미노산 조성을 살펴보기 위하여 6N-HCl을 이용하여 가수분해하고, PITC(Phenyl isothiocyanate)로 유도체화시킨 후 분석용 시료로 사용하였다. 아미노산 조성 분석은 아미노산 조성 분석(HPLC PICO-TAG system)을 이용하여 분석하였으며, 그 결과를 하기 표 2에 나타내었다.

	비교예 1(pg/㎍)	실시예 1(pg/㎍)	실시예 2(pg/㎍)
Cys	529	6907.72	17757.82
Asp	21044.79	170203.05	342682
Glu	8173.46	61928.4	285546.29
Ser	33080.53	221587.1	619759.87
Gly	12136.98	96055.57	251829.43
His	2269.34	17723.64	73817.72
Arg	4777.74	29023.4	94231.83
Thr	8192.48	53384.17	42946.41
Ala	3691.9	33413.3	170574.38
Pro	794.61	7476.24	58810.3
Tyr	5026.34	23851.43	52990.29
Val	3412.42	21533.69	124013.35
Met	228.74	3677.57	18109.99
Ile	1063.6	6670.33	63205.19
Leu	1507.31	9155.19	89053.48
Phe	676.54	5783.29	37785.03
Trp	247.61	3942.31	91916.63
Lys	2905.8	17486.04	90080.48

상기 표 2에 나타낸 바와 같이, 전체적으로 실시예 2의 아미노산 함량이 현저히 높은 것을 확인할 수 있었다.

도 14는 상기 표 2의 결과 중에서 비교예 1, 실시예 1 및 실시예 2에 포함된 피부 보습 또는 주름개선과 관련된 아미노산의 함량을 비교하여 나타낸 그래프이다. 도 14에 나타낸 바와 같이, 천연 보습인자로 알려진 세린(Ser)의 경우 실시예 2의 발효물에는 비교예 1의 18.7배나 함유되어 있고, 실시예 1에는 6.7 배 함유되어 있다. 또한, 천연 보습 성분인 라이신(Lys)의 경우 비교예 1에 비하여 실시예 2에 31 배가 함유되어 있는 것을 확인하였다. 따라서, 본 발명에 따른 누에고치 발효물은 보습 효과가 우수하다는 것을 알 수 있다.

그리고, 콜라겐의 주성분인 프롤린(Pro)과 아르기닌(Arg)의 경우 비교예 1에 비하여 실시예 2에 각각 7.4 배, 19.7 배의 함량으로 포함되어 있는 것을 확인하였다.

한편, 도 15는 상기 표 2의 결과 중에서 비교예 1, 실시예 1 및 실시예 2에 포함된 피부 보호에 관여하는 비극성 아미노산의 조성을 분석한 결과를 나타낸 그래프이다. 도 15를 살펴보면, 비교예 1에 비해 실시예 1 및 실시예 2에서 알라닌(Ala), 발린(Val), 루이신(Leu), 페닐알라닌(Phe)의 함량이 매우 높게 나타났으며, 특히 실시예 2에서는 상기 알라닌, 발린, 루이신, 페닐알라닌의 함량이 비교예 1에 비해 각각 46 배, 36 배, 59 배, 56 배가량 많은 것을 확인할 수 있었다.

제조예

제조예 1. 스킨의 제조

누에고치 발효물을 함유한 화장료 중 스킨의 제조예를 표 3에 나타내었다.

구분	원료	함량(중량%)
1	실시예 1 또는 2	2
2	글리세린	2.1
3	부틸렌 글리콜	2.0
4	판테놀	0.2
5	비즈왁스	0.8
6	에탄올	10
7	향료	미량
8	방부제	미량
9	정제수	잔량

제조예 2. 로션의 제조

누에고치 발효물을 함유한 화장료 중 로션의 제조예를 표 4에 나타내었다.

구분	원료	함량(중량%)
1	실시예 1 또는 2	2
2	시토스테롤	1.7
3	세라마이드	0.5
4	글리세린	5.0
5	토코페릴아세테이트	0.2
6	포도씨오일	2.5
7	잔탄검	0.3
8	향료	미량
9	방부제	미량
10	정제수	잔량

제조예 3. 크림의 제조

누에고치 발효물을 함유한 화장료 중 크림의 제조예를 표 5에 나타내었다.

구분	원료	함량(중량%)
1	실시예 1 또는 2	3
2	세라마이드	0.5
3	토코페릴아세테이트	0.2
4	글리세린	15.0
5	세티아릴알콜	2.0
6	우레아	0.5
7	트리에탄올아민	0.5
8	향료	미량
9	방부제	미량
10	정제수	잔량

비록 본 발명이 상기에 언급된 바람직한 실시예로서 설명되었으나, 발명의 요지와 범위로부터 벗어남이 없이 다양한 수정이나 변형을 하는 것이 가능하다. 또한, 첨부된 특허청구범위는 본 발명의 요지에 속하는 이러한 수정이나 변형을 포함한다.

Claims (10)

1. 누에고치에 노루궁뎅이 버섯(Hericium erinaceum) 균사체를 접종한 후 발효시키는 발효단계;를 포함하는 피부 주름 예방 또는 개선용 누에고치 발효물의 제조방법.
2. 제1항에 있어서,
   상기 발효단계에서는 누에고치 100 중량부에 대하여 노루궁뎅이 버섯 균사체 1 내지 20 중량부를 접종하여 25 내지 35 ℃에서 5 내지 15일간 배양하는 것을 특징으로 하는 피부 주름 예방 또는 개선용 누에고치 발효물의 제조방법.
3. 제1항에 있어서,
   상기 누에고치 발효물을 유산균으로 발효시키는 2차 발효단계;를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 피부 주름 예방 또는 개선용 누에고치 발효물의 제조방법.
4. 제3항에 있어서,
   상기 유산균은 류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides)인 것을 특징으로 하는 피부 주름 예방 또는 개선용 누에고치 발효물의 제조방법.
5. 제3항에 있어서,
   상기 유산균 발효는 상기 누에고치 발효물 100 중량부 대비 유산균 1 내지 20 중량부를 접종하여 25 내지 35 ℃에서 8 내지 32 시간 발효시키는 것을 특징으로 하는 피부 주름 예방 또는 개선용 누에고치 발효물의 제조방법.
6. 제1항에 있어서,
   상기 누에고치 발효물을 물, 저급 알콜 수용액 및 아세톤 수용액으로 이루어진 군 중에서 선택되는 어느 하나의 용매로 추출하는 추출단계;를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 피부 주름 예방 또는 개선용 누에고치 발효물의 제조방법.
7. 제6항에 있어서,
   상기 추출단계에서는 누에고치 발효물 1 중량부에 대하여 20 내지 80 부피%의 저급 알콜 수용액 또는 20 내지 80 부피%의 아세톤 수용액을 1 내지 30 중량부로 혼합하여 20 내지 60 ℃에서 2 내지 24 시간 동안 교반하여 추출하는 것을 특징으로 하는 피부 주름 예방 또는 개선용 누에고치 발효물의 제조방법.
8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항의 누에고치 발효물을 유효성분으로 포함하는 피부 주름 예방 또는 개선용 화장료 조성물.
9. 제8항에 있어서,
   상기 화장료는 스킨, 유액, 에센스, 로션, 미용액, 바디로션, 바디젤, 바디에센스, 바디세정제, 클렌징폼, 클렌징크림, 클렌징 겔, 팩, 마사지크림, 마사지겔, 영양크림, 수면크림 및 수분크림으로 이루어진 군 중에서 선택되는 어느 하나의 제형인 것을 특징으로 하는 피부 주름 예방 또는 개선용 화장료 조성물.
10. 제8항에 있어서,
    상기 화장료 조성물은 물, 유분, 계면활성제, 보습제, 점증제, 방향제, 보존제, 중화제, 에몰리언트제, 피부보호제 및 피부컨디셔닝제로 이루어진 군 중에서 선택되는 1종 또는 2종 이상을 더 포함하는 것을 특징으로 하는 피부 주름 예방 또는 개선용 화장료 조성물.

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