KR20190007863A

KR20190007863A - 비타민나무 열매 추출물을 포함하는 미백용 에멀션 화장료 조성물 및 그의 제조방법

Info

Publication number: KR20190007863A
Application number: KR1020170089438A
Authority: KR
Inventors: 김기섭; 윤창순; 이수응; 김애영; 이은모; 명경희
Original assignee: (주)다럼앤바이오
Priority date: 2017-07-14
Filing date: 2017-07-14
Publication date: 2019-01-23
Also published as: WO2019013396A1; KR102016164B1

Abstract

본 발명은 폴리글리세릴 10-스테아레이트 0.1~5 중량%, 폴리글리세릴-3 메틸글루코스 디스테아레이트 0.1~5 중량%, 및 피이지-5 레이프씨드 스테롤 0.1~5 중량%의 유화제; 미리스틴산이소프로필 0.1~5 중량%, 마카다미아유 0.1~5 중량%, 마누카오일 0.1~5 중량%, 및 퍼플루오로폴리에테르 0.1~5 중량%의 오일; 글리세린 1~15 중량% 및 1,2-헥산디올의 1~15 중량%; 화학식 1로 표시되는 블록 공중합체 0.5~20 중량%; 비타민나무 열매 열수추출물 0.1~20 중량%;에스테르계 에몰리언트 0.5 내지 3중량%; 페닐벤즈이미다졸설포닉애씨드 5~15 중량%; 및 잔량의 물을 포함하는 미백용 에멀션 화장료 조성물 및 그의 제조방법을 제공한다.

Description

비타민나무 열매 추출물을 포함하는 미백용 에멀션 화장료 조성물 및 그의 제조방법{Whitening emulsion cosmetic composition containing a vitamin tree fruit extract and method for manufacturing the same}

본 발명은 비타민나무 열매 추출물을 포함하는 미백용 에멀션 화장료 조성물 및 그의 제조방법에 관한 것이다.

피부는 자연적 과정을 통해서뿐만 아니라, 자외선, 스트레스 및 피부 부작용 등의 외부 요인에 의해 쉽게 노화된다. 피부 노화 과정 중 피부가 부분적으로 검어지는 현상(색소 침착: pigmentation)이 발생되고 이로 인해 미관상 문제가 나타나게 된다.

인체 피부에서 색소 침착이 발생되는 과정을 살펴보면, 멜라닌이라는 색소가 만들어지는 과정이 가장 중요한 단계이다. 멜라닌은 피부에 존재하는 멜라닌 형성세포에서 만들어지는데, 타이로신으로부터 타이로시나아제라는 효소에 의해 만들어진다. 이렇게 만들어진 멜라닌은 주변의 각질형성세포로 전달되고 각질형성세포의 피부턴오버에 의해 각질층으로 전달되고 마침내 때와 함께 피부에서 떨어져 나가게 된다. 그러므로 일정한 피부색을 나타내려면 일정한 양의 멜라닌이 만들어지고 일정량이 피부 각질을 통해 없어져야 한다.

한편, 색소 침착은 멜라닌이 너무 많이 만들어지거나, 피부 각질로 잘 떨어져 나가지 못해 일어나는 현상에서 기인된다. 따라서, 색소 침착을 막고 피부 미백 효과를 나타내기 위해서는 멜라닌 형성세포에서 멜라닌을 합성하기 위하여 거치는 일련의 과정을 억제하고 불활성화시켜야 한다.

현대인의 피부는 지속적인 환경파괴로 인한 오염물질과 오존층의 파괴로 인해 자외선 양의 지속적인 증가로 인하여, 외인성 인자들을 방어하기 위한 능력이 현저하게 저하되어 있는 상태이다.

그러므로, 효과적으로 멜라닌 형성세포에서 멜라닌을 합성하기 위하여 거치는 일련의 과정을 억제하기 위한 화장품 등의 수단은 점점 더 중요해지고 있다.

그러나, 종래의 미백 화장료 조성물의 경우 멜라닌의 합성과정을 일련의 과정을 효과적으로 억제하지 못하는 것으로 보이며, 더 나아가서 부작용으로 인하여 피부를 손상시키기도 하는 것으로 보인다. 그러므로 이러한 문제의 해결이 요구되고 있다.

대한민국 공개특허 10-2016-0011732

본 발명은, 종래기술의 상기와 같은 단점을 해결하기 위하여 안출된 것으로서,

비타민나무 열매 추출물을 포함하는 50 m 내지 100 nm의 안정한 나노입자를 포함함으로써 피부흡수율 및 저장안정성이 매우 우수한 비타민나무 열매 추출물을 포함하는 미백용 에멀션 화장료 조성물 및 그의 제조방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.

본 발명은,

폴리글리세릴 10-스테아레이트 0.1~5 중량%, 폴리글리세릴-3 메틸글루코스 디스테아레이트 0.1~5 중량%, 및 피이지-5 레이프씨드 스테롤 0.1~5 중량%의 유화제;

미리스틴산이소프로필 0.1~5 중량%, 마카다미아유 0.1~5 중량%, 마누카오일 0.1~5 중량%, 및 퍼플루오로폴리에테르 0.1~5 중량%의 오일;

글리세린 1~15 중량% 및 1,2-헥산디올의 1~15 중량%;

하기 화학식 1로 표시되는 블록 공중합체 0.5~20 중량%;

비타민나무 열매 열수추출물 0.1~20 중량%;

에스테르계 에몰리언트 0.5 내지 3중량%;

페닐벤즈이미다졸설포닉애씨드 5~15 중량%; 및

잔량의 물을 포함하는 미백용 에멀션 화장료 조성물을 제공한다:

[화학식 1]

상기 식에서,

n은 2~10의 자연수이고,

a 및 b는 몰분율으로서 a는 0.5 및 b는 0.5이며;

c 및 d는 몰분율으로서, c는 0.05~0.2이며, d는 0.8~0.95이며, c+d는 1이다.

또한, 본 발명은

(a) 화장료 조성물 총 중량에 대하여, 폴리글리세릴 10-스테아레이트 0.1~5 중량%, 폴리글리세릴-3 메틸글루코스 디스테아레이트 0.1~5 중량%, 및 피이지-5 레이프씨드 스테롤 0.1~5 중량%, 미리스틴산이소프로필 0.1~5 중량%, 마카다미아유 0.1~5 중량%, 마누카오일 0.1~5 중량%, 퍼플루오로폴리에테르 0.1~5 중량%, 글리세린 1~15 중량% 및 1,2-헥산디올의 1~15 중량%, 하기 화학식 1로 표시되는 블록 공중합체 0.5~20 중량%를 혼합하고, 75 내지 85℃로 가온하여 유상부를 준비하는 단계;

(b) 화장료 조성물 총 중량에 대하여, 비타민나무 열매 열수추출물 0.1~20 중량%, 에스테르계 에몰리언트 0.5 내지 3중량%, 페닐벤즈이미다졸설포닉애씨드 5~15 중량%, 및 물 잔량을 혼합하고 75 내지 85℃로 가온하여 수상부를 준비하는 단계;

(c) 상기 수상부를 유화조내에서 2,500 내지 3,500rpm으로 교반하고, 여기에 유상부를 투입하여 2,500 내지 3,500rpm으로 교반하여 유화시켜 마이크로(Micro)사이즈의 제 1에멀젼상을 형성하는 단계;

(d) 상기 제 1에멀젼 상을 37 내지 50℃로 냉각시키는 냉각단계; 및

(e) 상기 제 1에멀젼 상을 37 내지 50℃의 온도에서 고압형 유화기에 투입하여 600 내지 1,500bar의 압력으로 2회 내지 3회 2차유화시키는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는 미백용 에멀션 화장료 조성물의 제조방법을 제공한다:

[화학식 1]

상기 식에서,

n은 2~10의 자연수이고,

a 및 b는 몰분율으로서 a는 0.5 및 b는 0.5이며;

본 발명의 비타민나무 열매 추출물을 포함하는 미백용 에멀션 화장료 조성물은 비타민나무 열매 추출물을 포함하는 50 m 내지 100 nm의 안정한 나노입자를 포함함으로써 매우 우수한 활성성분의 피부흡수율 및 저장안정성을 제공한다.

또한 본 발명의 미백용 에멀션 화장료 조성물의 제조방법은 폴리-D,L-락트산-co-글리콜산과 디이소시아네이트 화합물로 치환된 폴리아크릴산의 블록 공중합체를 도입함으로써 매우 효율적으로 안정적인 나노입자 에멀션 화장료 조성물을 제공한다.

도 1은 비타민나무 열매 추출물의 항산화 효능평가(ABTS assay) 결과를 나타낸 그래프이다.
도 2는 비타민나무 열매 추출물의 B16F10 세포에 대한 세포독성 실험 결과를 나타낸 그래프이다.
도 3은 비타민나무 열매 추출물의 미백 효능평가(Melanogenesis inhibition assay) 결과를 나타낸 그래프이다.

이하에서 본 발명을 자세하게 설명한다.

글리세린 1~15 중량% 및 1,2-헥산디올의 1~15 중량%;

하기 화학식 1로 표시되는 블록 공중합체 0.5~20 중량%;

비타민나무 열매 열수추출물 0.1~20 중량%;

에스테르계 에몰리언트 0.5 내지 3중량%;

페닐벤즈이미다졸설포닉애씨드 5~15 중량%; 및

잔량의 물을 포함하는 미백용 에멀션 화장료 조성물에 관한 것이다:

[화학식 1]

상기 식에서,

n은 2~10의 자연수이고,

a 및 b는 몰분율으로서 a는 0.5 및 b는 0.5이며;

상기 비타민 나무는 산자나무(Hippophae rhamnoides L.; 비타민나무)라고도 불리우며, 보리수과에 속하는 관목으로서 100 여종 이상의 성분을 포함하고 있으며, 특히 비타민(A, B, C, E, F, K)등 유효한 성분을 많이 함유하고 있다. 겨울철 추위 및 여름철 고온에서도 잘 자라며, 척박한 지대에서도 잘 자라는 강한 적응성을 지녔다. 이미 산자나무의 항산화 활성측정 및 산자나무의 지방산 함량 및 암 예방, 면역 체계 분야 등 다양한 연구 분야가 이루어지고 있으며 산자나무 열매에 베타 카로틴 성분이 함유하고 있다고 보고된 바 있다.

상기 유화제는 화장료 조성물 총 중량에 대하여 1 내지 10 중량%로 포함되는 경우에 더욱 바람직하다. 상기 범위로 포함되면 화장료 조성물이 안정되고 투명한 외관을 가질 수 있다.

상기 오일은 화장료 조성물 총 중량을 기준으로 5 내지 20 중량%로 포함되는 경우에 더욱 바람직하다. 상기 범위로 포함되면 유화 안정도가 더 우수해질 수 있다.

상기 폴리-D,L-락트산-co-글리콜산과 디이소시아네이트 화합물로 치환된 폴리아크릴산의 블록 공중합체에 있어서, 폴리-D,L-락트산-co-글리콜산은 소수성 부분으로 포함되며, 디이소시아네이트 화합물로 치환된 폴리아크릴산은 친수성 부분으로 포함된다.

상기에서 폴리-D,L-락트산-co-글리콜산(하기 화학식 2)과 디이소시아네이트 화합물로 치환된 폴리아크릴산(하기 화학식 3)은 이소시아네이트기와 카르복실기의 히드록시기의 결합에 의해 폴리-D,L-락트산-co-글리콜산과 디이소시아네이트 화합물로 치환된 폴리아크릴산의 블록 공중합체를 형성한다.

[화학식 2]

[화학식 3]

상기 폴리-D,L-락트산-co-글리콜산의 중량 평균분자량은 1,000 내지 80,000인 것이 바람직하며, 상기 디이소시아네이트 화합물로 치환된 폴리아크릴산의 공중합체의 중량평균분자량은 100 내지 10,000인 것을 사용하는 것이 나노입자 에멀션의 형성에 바람직하다.

상기 공중합체의 평균 입자 직경은 10 내지 1,00 나노미터인 것이 바람직하다. 이러한 입자크기일 때 피부로의 침투 및 유효성분의 포집성이 우수하게 된다. 이와 같이 얻어지는 공중합체는 저분자량 미셀과 비교하여 수용액 속에서 현저하게 안정적이다. 상기 공중합체의 이러한 특징은 본 발명의 수중유형 나노입자 에멀션 화장료 조성물이 장기간 동안 안정된 상태로 보관될 수 있으며, 체내에서도 상당한 기간동안 그 구조를 유지할 수 있음을 의미한다.

상기 에멀션 화장료 조성물은 왕겨, 율피, 메밀껍질, 및 껍질 채로 건조한 작두콩을 1~3 : 1~3 : 1~3 : 1~3의 중량비로 혼합한 혼합물을 열수추출한 추출물 0.1~5 중량%를 더 포함할 수 있다.

상기 왕겨, 율피, 메밀껍질, 및 껍질 채로 건조한 작두콩은 곡물 또는 열매의 껍질로서 약효성분으로서는 많이 사용되지 않고 버려지고 있으나, 본 발명자들의 연구에 의하면 피부보호에 우수한 효과를 제공하는 것으로 확인되었다.

상기 왕겨에는 조섬유가 35~46%, 가용성 당질이 22~5%, 회분이 13~21%, 조단백질이 2~3% 포함되어 있다. 상기 율피는 소화개선과 피부노화 방지에 도움이 된다고 알려져 있다. 상기 메밀껍질은 피를 맑게 해주기 때문에 피부트러블을 방지해주는 기능을 후 수행할 수 있다.

상기 껍질 채로 건조한 작두콩은 본초강목에서 장과 위를 보호 하고 속을 따뜻하게 하고 신장기능을 강화하고 원기를 보호하고 종기나 치질 화농성 염증 질환에 효과가 있다고 언급되어 있다. 작두콩은 맛이 달고 그 성질은 따뜻하며, 비염, 알레르기성 비염, 감기, 축농증, 콧물, 재채기, 코막힘, 천식 등의 호흡기 질환에 효가가 탁월한 것으로 알려져 있다. 이 밖에 성장촉진을 시키고 뼈를 튼튼하게 할 수 있으므로 어린이 성장에 도움이 되며, 아토피, 여드름, 피부 보습 효과 때문에 피부질환에도 효과가 좋으며, 노폐물을 제거해 변비와 비만에 도움을 주고 장운동을 활발하게 해주며, 헛배부름 등의 증상에 좋다. 또한, 간이나 종기 등에 대한 염증에 탁월하고 구강염 중이염 등에도 좋으며, 혈액순환을 촉진시켜 주며, 면역력을 강화시키고, 체내 독소 배출 및 독성 해독 작용을 갖는 것으로 알려져 있다.

상기 에멀션 화장료 조성물은 헤어토닉, 스칼프트리트먼트, 헤어크림, 일반 연고제, 유연화장수, 수렴화장수, 영양화장수, 아이크림, 영양크림, 마사지크림, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징 워터, 파우더, 에센스, 팩, 바디로션, 바디크림, 바디오일, 바디에센스, 메이크업베이스, 파운데이션, 염모제, 샴푸, 린스, 바디세정제, 치약, 또는 구강청정제 형태로 제조될 수 있다.

상기 에멀젼 화장료 조성물의 제조 시 사용하는 보조성분으로 색소, 향, 방부제 또는 점증제 등을 추가로 포함할 수 있으며, 이때 보조성분의 함량은 예를 들어 화장료 조성물 총 중량을 기준으로 0 내지 20 중량%일 수 있다.

또한, 본 발명에 따른 나노에멀젼은 내상의 함량을 높이고 유효성분을 효과적으로 전달하기 위해 목적하는 분산성을 달성할 수 있는 정도의 저점도를 가지는 것이라면 특별히 제한되지 않으나, 예를 들어 5000 cps 이하, 구체적으로 3000 cps 이하, 더욱 구체적으로 2000 cps 이하의 점도를 가질 수 있다. 상기 '저점도'의 에멀젼은 점도가 매우 작아 점도를 실험적으로 측정할 수 없는 경우에서부터 앞서 언급한 점도 범위에 속하는 에멀젼 모두를 포함하는 것으로, 점도가 실험적으로 측정되지 않은 경우의 점도 범위는 0이므로, 예를 들어 0 내지 5000cps, 구체적으로 1 내지 3000 cps, 더욱 구체적으로 5 내지 2000 cps의 점도를 가질 수 있다.

상기 에멀젼은 나노 크기를 가지는 것으로 에멀젼의 안정도를 향상시키면서도 저점도의 에멀젼을 제조할 수 있을 정도라면 특별히 제한되지 않으나, 예를 들어 평균 크기가 250 nm 이하, 구체적으로 200 nm 이하일 수 있다.

상기 에멀젼은 위 평균 크기 범위에 속하는 어떠한 크기라도 가질 수 있으나, 예를 들어 10 내지 250 nm, 구체적으로 20 내지 200 nm의 평균 크기를 가질 수 있다.

또한, 본 발명은

(e) 상기 제 1에멀젼 상을 37 내지 50℃의 온도에서 고압형 유화기에 투입하여 600 내지 1,500bar의 압력으로 2회 내지 3회 2차유화시키는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는 미백용 에멀션 화장료 조성물의 제조방법에 관한 것이다:

[화학식 1]

상기 식에서,

n은 2~10의 자연수이고,

a 및 b는 몰분율으로서 a는 0.5 및 b는 0.5이며;

상기에서 각 성분들에 관한 내용은 상기 수중유형 나노입자 에멀션 화장료 조성물에서 기술된 내용이 모두 적용될 수 있다. 그러므로 중복 기재는 생략한다.

이하에서, 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세히 설명한다. 그러나, 하기의 실시예는 본 발명을 더욱 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 하기의 실시예에 의하여 한정되는 것은 아니다. 하기의 실시예는 본 발명의 범위 내에서 당업자에 의해 적절히 수정, 변경될 수 있다.

제조예 1: 비타민나무 열매 열수추출물의 제조

비타민나무 열매 1 kg을 증류수 10 리터에 넣고, 100℃에서 24시간 추출하여 비타민나무 열매의 열수 추출물을 제조하였다.

제조예 2: 왕겨, 율피 , 메밀껍질, 및 껍질 채로 건조한 작두콩의 열수추출물 제조

왕겨, 율피, 메밀껍질, 및 껍질 채로 건조한 작두콩을 각각 300g 씩 혼합하고, 증류수 12 리터에 넣고, 100℃에서 24시간 추출하여 열수 추출물을 제조하였다.

제조예 3: 폴리 - D,L -락트산-co- 글리콜산과 디이소시아네이트 화합물로 치환된 폴리아크릴산의 블록 공중합체의 제조

(1) 디이소시아네이트 화합물로 치환된 폴리아크릴산의 제조

질소 가스가 환류되고, 온도 조절이 용이하도록 냉각 장치를 설치한 1L 반응기에 아크릴산 40 중량부를 투입하였다. 에틸 아세테이트(EAc; ethyl aceate) 60 중량부를 용제로 투입하고, 질소 가스를 30분 동안 퍼징(purging)하였다. 온도를 60℃로 유지하고, 반응개시제인 AIBN(azobisisobutyronitrile) 0.1 중량부를 투입하고, 3 시간 동안 반응시켜, 중량평균분자량이 1,500인 아크릴산 중합체를 제조하였다.

질소 가스가 환류되고, 온도 조절이 용이하도록 냉각 장치를 설치한 1L 반응기에, 에틸 아세테이트(EAc; ethyl aceate) 100 중량부를 용제로 투입하고 상기에서 제조된 아크릴산 중합체 고형분 100중량부와, 헥사메틸렌디이소시아네이트 10중량부 및 마그네슘 트리플루오로술포네이트 54 mg 및 로놀(lonol) 0.5 중량부와 티누빈(Tinuvin) 0.15 중량부를 투입하였다. 110℃까지 가열하였다. 가열을 15시간 동안 수행하여 헥사메틸렌디이소시아네이트로 치환된 아크릴산을 제조하였다.

(2) 폴리-D,L-락트산-co-글리콜산과 디이소시아네이트 화합물로 치환된 폴리아크릴산의 블록 공중합체의 제조

반응 용기에 디메틸포름아마이드 100 ml 및 N,N-카르보닐디이미다졸(N,N- carbonyldiimidazole, CDI) 290 mg을 넣고 교반하였다. 여기에 수평균분자량 11,000의 폴리-D,L-락트산-co-글리콜산(RG502, 베링거잉겔하임, 독일) 20 g을 첨가하여 폴리-D,L-락트산-co-글리콜산의 하이드록시 말단기를 활성화시켰다. 상기 용액에 로놀(lonol) 0.5 mg과 티누빈(Tinuvin) 0.15mg과 상기 제조예 1에서 제조된 수평균 분자량이 2,000인 폴리아크릴산 25g을 가하고 110℃까지 가열하였다. 가열을 15시간 동안 수행한 후, 0.45 마이크로미터의 공극 크기를 지닌 나일론 필터로 여과시킨 뒤, 삼차증류수에 분산시킨 뒤 투석을 통해 미반응물 및 반응시약을 제거하여 블록공중합체를 제조하였다.

실시예 1: 수중유형 나노입자 에멀션 화장료 조성물의 제조

화장료 조성물 총 중량에 대하여, 폴리글리세릴 10-스테아레이트 5 중량%, 폴리글리세릴-3 메틸글루코스 디스테아레이트 3 중량%, 피이지-5 레이프씨드 스테롤 5 중량%, 미리스틴산이소프로필 5 중량%, 마카다미아유 5 중량%, 마누카오일 5 중량%, 퍼플루오로폴리에테르 5 중량%, 글리세린 10 중량% 및 1,2-헥산디올 12 중량%, 제조예 2에서 제조된 블록 공중합체 5 중량%를 혼합하고, 75 내지 85℃로 가온하여 유상부를 준비하였다.

화장료 조성물 총 중량에 대하여, 제조예 1에서 제조된 비타민나무 열매 열수추출물 10 중량%, 에스테르계 에몰리언트 2 중량%, 페닐벤즈이미다졸설포닉애씨드 7 중량%, 및 물 잔량을 혼합하고 75 내지 85℃로 가온하여 수상부를 준비하였다.

상기 수상부를 유화조내에서 2,500 내지 3,500rpm으로 교반하고, 여기에 유상부를 투입하여 2,500 내지 3,500rpm으로 교반하여 유화시켜 마이크로(Micro)사이즈의 제 1에멀젼상을 형성하였다. 상기 제 1에멀젼 상을 37 내지 50℃로 냉각시키는 냉각하였다. 상기 제 1에멀젼 상을 37 내지 50℃의 온도에서 고압형 유화기에 투입하여 600 내지 1,500bar의 압력으로 2회 내지 3회 2차유화시켜서 미백용 에멀션 화장료 조성물을 제조하였다.

실시예 2: 수중유형 나노입자 에멀션 화장료 조성물의 제조

상기 실시예 1에서 수상부에 상기 제조예 2에서 제조한 왕겨, 율피, 메밀껍질, 및 껍질 채로 건조한 작두콩 3 중량%를 더 첨가한 것을 제외하고는 실시예 1과 동일한 방법으로 미백용 에멀션 화장료 조성물을 제조하였다.

시험예 1: 에멀션의 입자 크기 측정 및 입자 크기 변화에 의한 나노에멀션 안정도 평가

동적 광산란 원리에 의한 마스터사이저 2000 (Mastersizer 2000, Malvern Instrument, UK)을 사용하여, 상기 실시예 1에 따라 얻은 본 발명의 유중수형 나노입자 에멀션 화장료 조성물들의 입자의 크기를 각각 측정하였고, 그 결과는 하기 표 1에 나타내었다. 이 때 입자 크기의 측정은 나노에멀션 희석 용액의 탁도가 10-20%가 되도록 정제수로서 희석시켜서 다음과 같은 조건하에서 실시되었다.

측정시간: 2분, 초당 측정 회수: 5×10³, 온도: 20℃, 점도: 0.89 centipoise, 입자 굴절율: 1.4, 분산매 굴절율: 1.33

입자 크기 측정은 제조 1일후 및 40℃에서 6개월동안 보관후 2회에 걸쳐 실시하여 고온에서 장기간 보관후의 나노에멀션의 열역학적 안정성을 평가하였다.

시험예 2. 육안 관찰에 의한 유화안정도

상기 실시예 1에서 얻은 유중수형 나노에멀션 화장료 조성물들의 유화안정도는 입자크기의 측정과 함께 육안으로 다음과 같이 관찰하여 평가하였고, 그 결과는 하기 표 1에 나타내었다.

상기 실시예 1의 조성물들의 실온(약 25℃)과 40℃에서 6개월 보관 후의 유화상태를 제조 직후의 상태와 비교 관찰하였다. 불안정한 상태는 침강, 분리, 배액, 크리밍, 합일 등이 일어난 부분으로 육안으로 관찰하였다. 유화안정도는 전체에서 불안정한 부분을 제외한 안정한 부분의 백분율(%)로서 평가하는데 다음식으로 나타낸다.

유화안정도(%) = [(전체-불안정한 부분)/전체]×100 %

나노입자 에멀젼 화장료 조성물	입자크기(nm)		입자크기 증가(%)	육안관찰에 의한 유화안정도(%)
	제조 후, 실온 1일 보관 후	제조 후 40℃에서 6개월 보관 후
실시예 1	80	83	4.8	94

시험예 3: 비타민나무 열매 열수추출물의 활성 평가

상기 제조예 1에서 제조된 바타민 나무 열매 열수 추출물의 황산화 효능 및 미백효능을 (재)춘천바이오산업진흥원에 의뢰하여 평가하였다.

1. 실험 방법

가. 항산화 효능평가 ( ABTS assay 사용)

1) 시료 정보

(1) 0.45㎛ filter로 여과 후 사용

(2) 시료준비: 100배, 200배, 400배로 희석하여 사용

2) 평가 방법

(1) 실험 재료

- ABTS(2,2'-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic acid)) 7mM 용액

- Potassium persulfate(K₂S₂O₈) 140mM 용액

- Standard solution (Ascorbic acid 80㎍/㎖, 40㎍/㎖, 20㎍/㎖, 10㎍/㎖)

- 96 well plate

- ELISA reader

(2) 실험 순서

a. ABTS+ Stock solution을 제조하여 24시간 방치 후 흡광도(734㎚) 값이 0.68~0.72가 나오도록 희석

b. 시료 및 standard solution을 96 well plate에 well 당 20㎕씩 첨가

c. ABTS+ Solution을 각 well 당 180㎕씩 첨가

d. 암실, 실온에서 10분간 반응 후 흡광도(734㎚) 측정

나. 미백 효능평가 ( Melanogenesis inhibition assay 사용)

1) 시료 정보

(1) 0.45㎛ filter로 여과 후 사용

(2) 시료준비: 10배, 20배, 40배로 희석하여 사용

2) 평가 방법

(1) 실험 재료

- 멜라닌 생성 세포주 B16F10 cell (ATCC CRL-6475)

- DMEM 배지 (+10% FBS, 1% Antibiotics)

- Positive control (Arbutin 2㎎/㎖)

- 37℃ CO₂ incubator

- PBS(Phosphate Buffered Saline) pH 7.4

- 50uM α-MSH(α-Melanocyte Stimulating Hormone) stock solution

- Trypsin-EDTA

- 1M NaOH (+10% DMSO)

- Cell Counting Kit-8 (제조사: Dojindo)

- Cell culture flask(25㎠, 75㎠), 96 well plate

(2) 실험 순서

a. DMEM 배지 (+10% FBS, 1% Antibiotics)에 B16F10 세포 배양

b. 배양한 세포를 Cell culture flask(25㎠)에 2×105 cells/flask로 분주하여 24시간 배양

c. 배양액 제거 후 α-MSH(최종농도 50nM)이 포함된 배지 4.5㎖와 시료 0.5㎖를 첨가하여 48시간 배양 (※최종적으로 시료는 10배 희석)

d. 배양액 제거 후 새 배지로 교환하여 CCK-8 assay를 이용, 세포 독성 여부를 측정하고 독성이 없다고 판단되는 값(Cell Viability(% of control) ≥ 80%)에 대해서만 미백 효능 인정

e. 세포를 Trypsin-EDTA를 이용하여 회수하고 배양액 제거 후 1M NaOH

(+10% DMSO) 용액을 이용하여 세포를 용해, 세포 내 멜라닌 획득

f. 멜라닌이 용해된 lysate를 이용, 490nm에서 흡광도 측정하여 세포수 대비 멜라닌 합성량(%)을 계산

2. 실험 결과

가. 항산화 효능평가 ( ABTS assay)

도 1에 도시된 바와 같이, 비타민나무 열매 추출물의 항산화 효능평가(ABTS assay) 결과, 200배 희석액의 경우, 대표적인 항산화 물질인 Ascorbic acid 40㎍/㎖과 유사한 항산화 활성을 나타냈다.

시료의 농도가 증가함에 따라 라디칼 소거능이 함께 증가하는 것으로 보아, 위 농도에서 항산화 효능이 있는 것으로 판단되었다.

나. 미백 효능평가 ( Melanogenesis inhibition assay)

도 2에 도시된 바와 같이, 비타민나무 열매 추출물의 B16F10 세포에 대한 세포독성 실험 결과, 100배 희석액 처리군에서 독성(Cell Viability(% of control) ≤≤ 80%)을 보였으며 200배, 400배 희석액 처리군에서는 독성을 보이지 않았다. 따라서 독성을 띄는 100배 희석액 군을 제외한 나머지 군에서 미백 효과를 판단되었다.

도 3에 도시된 바와 같이, 비타민나무 열매 추출물의 미백 효능평가(Melanogenesis inhibition assay) 결과, 멜라닌의 생성량이 α-MSH 단독처리군을 100% 기준으로 400배 희석액 처리군에서 약 89%, 200배 희석액 처리군에서 약 52%로 나타나 농도 의존적으로 그 생성량이 감소하는 경향을 보였다.

200배 희석액 시료의 경우, 대표적인 미백 물질인 Arbutin(200㎍/㎖)과 유사한 정도의 멜라닌 생성저해 효능을 나타냈다. 시료의 농도가 증가함에 따라 멜라닌 생성량이 감소하는 것으로 보아, 위 농도에서 미백 효능이 있는 것으로 판단되었다.

Claims

폴리글리세릴 10-스테아레이트 0.1~5 중량%, 폴리글리세릴-3 메틸글루코스 디스테아레이트 0.1~5 중량%, 및 피이지-5 레이프씨드 스테롤 0.1~5 중량%의 유화제;
미리스틴산이소프로필 0.1~5 중량%, 마카다미아유 0.1~5 중량%, 마누카오일 0.1~5 중량%, 및 퍼플루오로폴리에테르 0.1~5 중량%의 오일;
글리세린 1~15 중량% 및 1,2-헥산디올의 1~15 중량%;
하기 화학식 1로 표시되는 블록 공중합체 0.5~20 중량%;
비타민나무 열매 열수추출물 0.1~20 중량%;
에스테르계 에몰리언트 0.5 내지 3중량%;
페닐벤즈이미다졸설포닉애씨드 5~15 중량%; 및
잔량의 물을 포함하는 미백용 에멀션 화장료 조성물:
[화학식 1]

상기 식에서,
n은 2~10의 자연수이고,
a 및 b는 몰분율으로서 a는 0.5 및 b는 0.5이며;
c 및 d는 몰분율으로서, c는 0.05~0.2이며, d는 0.8~0.95이며, c+d는 1이다.
제1항에 있어서,
왕겨, 율피, 메밀껍질, 및 껍질 채로 건조한 작두콩을 1~3 : 1~3 : 1~3 : 1~3의 중량비로 혼합한 혼합물을 열수추출한 추출물 0.1~5 중량%를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 미백용 에멀션 화장료 조성물.
제1항에 있어서,
상기 미백용 에멀션 화장료 조성물은 헤어토닉, 스칼프트리트먼트, 헤어크림, 일반 연고제, 유연화장수, 수렴화장수, 영양화장수, 아이크림, 영양크림, 마사지크림, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징 워터, 파우더, 에센스, 팩, 바디로션, 바디크림, 바디오일, 바디에센스, 메이크업베이스, 파운데이션, 염모제, 샴푸, 린스, 바디세정제, 치약, 또는 구강청정제의 원료로 사용되는 것을 특징으로 하는 미백용 에멀션 화장료 조성물.
(a) 화장료 조성물 총 중량에 대하여, 폴리글리세릴 10-스테아레이트 0.1~5 중량%, 폴리글리세릴-3 메틸글루코스 디스테아레이트 0.1~5 중량%, 및 피이지-5 레이프씨드 스테롤 0.1~5 중량%, 미리스틴산이소프로필 0.1~5 중량%, 마카다미아유 0.1~5 중량%, 마누카오일 0.1~5 중량%, 퍼플루오로폴리에테르 0.1~5 중량%, 글리세린 1~15 중량% 및 1,2-헥산디올의 1~15 중량%, 하기 화학식 1로 표시되는 블록 공중합체 0.5~20 중량%를 혼합하고, 75 내지 85℃로 가온하여 유상부를 준비하는 단계;
(b) 화장료 조성물 총 중량에 대하여, 비타민나무 열매 열수추출물 0.1~20 중량%, 에스테르계 에몰리언트 0.5 내지 3중량%, 페닐벤즈이미다졸설포닉애씨드 5~15 중량%, 및 잔량의 물을 혼합하고 75 내지 85℃로 가온하여 수상부를 준비하는 단계;
(c) 상기 수상부를 유화조내에서 2,500 내지 3,500rpm으로 교반하고, 여기에 유상부를 투입하여 2,500 내지 3,500rpm으로 교반하여 유화시켜 마이크로(Micro)사이즈의 제 1에멀젼상을 형성하는 단계;
(d) 상기 제 1에멀젼 상을 37 내지 50℃로 냉각시키는 냉각단계; 및
(e) 상기 제 1에멀젼 상을 37 내지 50℃의 온도에서 고압형 유화기에 투입하여 600 내지 1,500bar의 압력으로 2회 내지 3회 2차유화시키는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는 미백용 에멀션 화장료 조성물의 제조방법:
[화학식 1]

상기 식에서,
n은 2~10의 자연수이고,
a 및 b는 몰분율으로서 a는 0.5 및 b는 0.5이며;
c 및 d는 몰분율으로서, c는 0.05~0.2이며, d는 0.8~0.95이며, c+d는 1이다.