KR20180129936A - 담즙정체성 및 섬유증 질환의 치료 방법 - Google Patents

담즙정체성 및 섬유증 질환의 치료 방법 Download PDF

Info

Publication number
KR20180129936A
KR20180129936A KR1020187032696A KR20187032696A KR20180129936A KR 20180129936 A KR20180129936 A KR 20180129936A KR 1020187032696 A KR1020187032696 A KR 1020187032696A KR 20187032696 A KR20187032696 A KR 20187032696A KR 20180129936 A KR20180129936 A KR 20180129936A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
fibrosis
ntz
group
combination
statin
Prior art date
Application number
KR1020187032696A
Other languages
English (en)
Other versions
KR102410951B1 (ko
Inventor
로베르 왈크자크
꼬린느 푸꺄르
삘립쁘 드라따이유
Original Assignee
장피트
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 장피트 filed Critical 장피트
Publication of KR20180129936A publication Critical patent/KR20180129936A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR102410951B1 publication Critical patent/KR102410951B1/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/425—Thiazoles
    • A61K31/426—1,3-Thiazoles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/21—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates
    • A61K31/215—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids
    • A61K31/22—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids of acyclic acids, e.g. pravastatin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/21—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates
    • A61K31/215—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids
    • A61K31/22—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids of acyclic acids, e.g. pravastatin
    • A61K31/222—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids of acyclic acids, e.g. pravastatin with compounds having aromatic groups, e.g. dipivefrine, ibopamine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/365—Lactones
    • A61K31/366—Lactones having six-membered rings, e.g. delta-lactones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A61K31/403—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil condensed with carbocyclic rings, e.g. carbazole
    • A61K31/404—Indoles, e.g. pindolol
    • A61K31/405—Indole-alkanecarboxylic acids; Derivatives thereof, e.g. tryptophan, indomethacin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4418—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof having a carbocyclic group directly attached to the heterocyclic ring, e.g. cyproheptadine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A61K31/57—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms, e.g. pregnane or progesterone
    • A61K31/573—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms, e.g. pregnane or progesterone substituted in position 21, e.g. cortisone, dexamethasone, prednisone or aldosterone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/18—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for pancreatic disorders, e.g. pancreatic enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Fish Paste Products (AREA)
  • Manufacturing Of Steel Electrode Plates (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

본 발명은 섬유증 질환의 치료에 사용하기 위한 활성 성분의 상승적 조합에 관한 것이다.

Description

담즙정체성 및 섬유증 질환의 치료 방법
본 발명은 의학 분야, 특히 담즙정체성 또는 섬유증 질환의 치료에 관한 것이다.
세포외 매트릭스의 비정상적이고 과도한 침착(deposition)은 간, 폐, 신장 또는 심장 섬유증을 포함하는 모든 섬유증 질환의 특징이다. 영향받은 기관의 스펙트럼, 섬유증 과정의 진행 특성, 다수의 영향받은 개인, 및 효과적인 치료의 부재는 섬유증 질환을 치료하는 때 거대한 도전(challenge)을 제기한다.
섬유증 질환의 치료를 위한 새로운 치료학적 전략을 제안하기 위한 시도에서, 본 발명자들은 합성 항원생동물 제제(synthetic antiprotozoal agent)인 화합물 2-[(5-니트로-1,3-티아졸-2-일)카바모일]페닐]에타노에이트 (니타족사니드 - NTZ) 또는 이의 변성된 유도체 또는 이의 활성 대사산물 2-하이드록시-N-(5-니트로-2-티아졸릴)벤즈아미드(TZ로 공지된 티족사니드)가 스타틴과 함께 상승적인 항섬유증 특성을 나타냄을 발견하였다. 더욱이, 간 손상 모델에서 스타틴과 조합된 NTZ의 평가는 순환하는 담즙산 농도를 감소시키는 이의 능력을 나타내었으므로, 담즙정체성 (예컨대, PBC 및 PSC) 및 섬유증 질환 둘 다를 치료하기 위한 이러한 조합의 상승적 잠재능을 반영함을 나타내었다.
1975년(Rossignol and Cavier, 1975)에 최초로 기술된 NTZ는 혐기성 원생동물, 기생충, 및 혐기성 및 호기성 세균 둘 다를 포함하는 광범위한 스펙트럼의 미생물에 대해 매우 효과적인 것으로 밝혀졌다(Rossignol and Maisonneuve, 1984; Dubreuil, Houcke et al., 1996; Megraudd, Occhialini et al., 1998; Fox and Saravolatz, 2005; Pankuch and Appelbaum, 2006; Finegold, Molitoris et al., 2009). 이는 장 촌충류의 치료를 위해 사람에서 최초로 연구되었으며(Rossignol and Maisonneuve, 1984) 본 발명에 이르러 원생동물 기생충인 크리스토포리디움 파르붐(Crystosporidium parvum) 및 기아르디아 인테스티날리스(Giardia intestinalis)에 의해 유발된 설사의 치료용으로 현재 미국에서 허가되어 있다. NTZ는 또한 라틴 아메리카 및 인도에서 널리 상업화되었으며, 여기서 이는 광범위한 스펙트럼의 장 기생충 감염의 치료용으로 처방된다(Hemphill, Mueller et al., 2006). NTZ가 이의 항기생충 활성을 발휘하는 제안된 작용 메카니즘은 혐기성 물질대사를 위해 필수적인 피루베이트:페레독신 옥시도리덕타제(PFOR) 효소-의존성 전자 전달 반응의 억제를 통한다(Hoffman, Sisson et al., 2007). NTZ는 또한 마이코박테리움 투베르쿨로시스(Mycobacterium tuberculosis)에 대해 활성을 나타내며, 이는 PFOR의 동족체를 소유하지 않으므로, 대안적인 작용 메카니즘을 시사한다. 실제로, 저자는 NTZ가 또한 막 전위 및 유기체내 pH 항상성을 파괴하는 언커플러(uncoupler)로서 작용할 수 있음을 밝혀내었다(de Carvalho, Darby et al., 2011).
NTZ의 약리학적 효과는 이의 항기생충 또는 항세균 활성에 한정되지 않으며 최근 몇년 동안, 수개의 연구는 NTZ가 또한 항바이러스 활성을 부여할 수 있음을 밝혔다(Di Santo and Ehrisman, 2014; Rossignol, 2014). NTZ는 헤마글루티닌(인플루엔자) 또는 VP7(로타바이러스) 단백질의 성숙, 또는 선천적인 면역 반응에 관여하는 단백질 PKR의 활성화에 있어서의 차단을 포함하는 다양한 방식으로 바이러스 복제를 방해함을 나타내었다(검토를 위해 (Rossignol, 2014) 참고). NTZ는 또한 결정적인 물질대사 및 프로데쓰 시그날링 경로(prodeath signaling pathway)를 방해함으로써 광범위한 항암 특성을 가짐이 밝혀졌다(Di Santo and Ehrisman, 2014).
스타틴 (3-하이드록시-3-메틸글루타릴-보조효소 A 리덕타제 억제제)은 고콜레스테롤혈증의 치료 및 심혈관 질환의 예방용 의약으로서 일반적으로 처방된다.
프라바스타틴, 심바스타틴, 및 로바스타틴(이는 진균 발효로부터 천연적으로 유도된다) 및 플루바스타틴, 아토르바스타틴, 로수바사틴 및 피타바스타틴으로 구성된 화학적으로 합성된 스타틴의 제2 그룹을 포함하는 현재 7개의 독특하게 처방된 스타틴이 존재한다. 모든 스타틴이 디하이드록시-헵타노산 HMG-CoA 유사 모이어티(moiety)를 함유하지만, 이는 HMG-CoA 리덕타제에 대한 결합에 대해 경쟁하며, 각각의 스타틴은 유일하고 화학적 구조, 효능(예컨대, HMG-CoA 리덕타제 억제에 대한 IC50), 조직 침투 및 보유, 반감기, 물질대사 및 제거, 약물-약물 상호작용, 및 안전성에 있어서 유의적인 차이를 나타낸다. 심혈관 질환의 예방에 있어서 스타틴의 유리한 효과에 관여하는 메카니즘은 콜레스테롤 생합성을 억제하는 이들 제제의 능력에 크게 기여하여 왔다. 혈청 콜레스테롤의 60 내지 70%가 간 생합성으로부터 유도되며 HMG-CoA 리덕타제가 콜레스테롤 생합성 경로에서 중요한, 속도-제한 효소라는 사실로 인하여, 이러한 효소의 억제가 순환하는 LDL-콜레스테롤에 있어서 놀라운 감소를 야기한다는 것은 놀라운 것이 아니다. 더욱이, LDL-콜레스테롤의 감소는 간 LDL 수용체의 상향조절 및 LDL 청소(clearance)의 증가를 초래한다. 임상 및 실험 데이타 둘 다는 스타틴 치료요법으로부터의 이익의 합이 혈청 콜레스테롤 수준에 대한 이들의 양호한 효과를 초과하여 확장될 수 있음을 제시한다. 스타틴의 다면발현성 효과로서 기술된, 이들 콜레스테롤-독립된 효과는 이소프레노이드의 감소된 형성과 관련되어 있다. 실제로, HMG-CoA 리덕타제의 억제는 세포내 메발로네이트의 고갈뿐만 아니라 파르네실 피로포스페이트(FPP) 및 게라닐게라닐피로포스페이트(GGPP)를 포함하는 몇가지 하향 이소프레노이드 유도체를 생성한다. FPP 및 GGPP 둘 다는 다수의 단백질(전체 세포 단백질의 대략 2%)의 해독후 프레닐화에 요구된다(Wang, Liu et al., 2008)). 단백질 이소프레닐화는 적절한 소세포 굴재화 및 세포내 분자의 트래피킹(trafficking)을 가능하도록 한다. 예를 들면, 비-이소프레닐화된 GTPase는 세포질성으로 남지만 이소프레닐화된 GTPase는 세포 막 내로 삽입 및 정박(anchorage)을 허용하고, 후속적으로 시그날 형질도입에 관여하는 FPP 또는 GGPP 지질 부착을 제공한다. 따라서, 이소프레닐화의 억제는 많은 세포 현상(세포내 시그날 형질도입, 세포 증식, 염증, 운동성)에 필수적인 작은 GTPase(예컨대, Rho, Ras, Rac 및 Cdc42)의 불활성화를 야기한다(검토를 위해 (McFarlane, Muniyappa et al., 2002; Zhou and Liao, 2009; Yeganeh, Wiechec et al., 2014; Kavalipati, Shah et al., 2015) 참고). Rho GTPase 및 이의 표적 단백질 Rock가 섬유증 과정의 주요 현상인, 섬유모세포의 근섬유모세포로의 활성화/분화에 관여한다는 것은 입증되었으므로(Ji, Tang et al., 2014), 수개의 연구를 스타틴을 사용하여 수행함으로써 상이한 병리학적 모델에서 이들의 항섬유증 특성을 평가하였다. 심바스타틴은 사람 및 랫트 HSC 둘 다에서 섬유증 마커의 발현을 감소시키고 섬유증의 다양한 동물 모델에서 항섬유증 특성을 부여함이 입증되었다(Rombouts, Kisanga et al., 2003; Watts, Sampson et al., 2005; Wang, Zhao et al., 2013; Marrone, Maeso-Diaz et al., 2015). 또한, 피타바스타틴(Miyaki, Nojiri et al., 2011) 및 플루바스타틴(Chong, Hsu et al., 2015)은 CDAA 식이-유도된 NAFLD/NASH 모델에서 섬유증을 감소시킬 수 있었다. 스타틴의 이러한 유리한 효과는 간 섬유증으로 한정되지 않는다. 실제로, 아토르바스타틴은 블레오마이신-유도된 폐 섬유증에 대해 유의적으로 강력하였던 반면(Zhu, Ma et al., 2013) 심바스타틴은 사람 섬유성 폐로부터 기원한 섬유모세포에서 섬유증 마커의 발현을 억제하는 것으로 밝혀졌다(Watts, Sampson et al., 2005).
본 발명에서는, 강력한 항섬유증 제제를 확인하기 위하여, 표현형 스크리닝 검정을 사용하여, NTZ 또는 이의 중수소화된 유도체 또는 이의 활성 대사산물 TZ가, 스타틴과 함께, 첨가 또는 상승적 방식으로 근섬유모세포의 활성화를 방해함이 발견되었다. 이러한 효과는 이들 분자에 대해 이미 보고된 특성의 측면에서 전적으로 예측하지 못한 것이었다. NTZ 또는 이의 중수소화된 유도체 또는 TZ와 구체적인 스타틴의 조합은 다양한 유형의 섬유증 질환에 대한 강력한 치료학적 전략으로 여겨진다. 더욱이, 구체적인 스타틴과 함께 NTZ 또는 이의 유도체의 평가는 순환하는 담즙 산 농도를 감소시키는 예측하지 못한 상승 능력을 나타냄으로써 담즙정체성 장애(예컨대, PBC 및 PSC) 및 섬유증 질환 둘 다를 치료하는 이의 효능을 반영하였다.
발명의 요약
본 발명은 (i) [2-[(5-니트로-1,3-티아졸-2-일)카바모일]페닐]에타노에이트 (NTZ), NTZ의 중수소화된 유도체(NTZ-D), 2-하이드록시-N-(5-니트로-2-티아졸릴)벤즈아미드(TZ), 또는 티족사니드 글루쿠로나이드 (TZG), 및 (ii) 적어도 하나의 스타틴을 포함하는 상승적 조합에 관한 것이다. 이러한 조합은 담즙정체 또는 섬유증 질환의 치료 방법에 유용하다.
따라서, 본 발명은
(i) NTZ, NTZ-D, TZ 또는 TZG, 또는 NTZ, NTZ-D, TZ 또는 TZG의 약제학적으로 허용되는 염;
(ii) 스타틴의 상승적 조합에 관한 것이다.
본 발명의 조합은 약제학적 조성물 또는 부분 키트(kit-of-parts)의 형태일 수 있다.
또한, 본 발명의 상승적 조합의 성분은 동시에, 순차적으로 및 별도로 투여될 수 있다.
특수한 구현예에서, 상승적 조합이 성분 (i)는 NTZ 또는 약제학적으로 허용되는 이의 염이다.
본 발명의 특수한 구현예에서, 상기 하나 이상의 스타틴은 메바스타틴, 세리바스타틴, 피타바스타틴, 플루바스타틴, 심바스타틴, 아토르바스타틴, 로바스타틴, 로수바스타틴, 및 프라바스타틴으로 이루어진 그룹 중에서 선택된다. 다른 특수한 구현예에서, 스타틴은 피타바스타틴, 플루바스타틴, 심바스타틴 및 아토르바스타틴으로 이루어진 그룹 중에서 선택된다. 다른 특수한 구현예에서, 스타틴은 피타바스타틴, 플루바스타틴 및 심바스타틴으로 이루어진 그룹 중에서 선택된다.
또한, 본 발명의 상승적 조합은 피르페니돈 또는, 닌테다닙, 소라페닙 및 다른 RTKI와 같은 수용체 타이로신 키나제 억제제(RTKI), 또는 안지오텐신 II(AT1) 수용체 차단제, 또는 CTGF 억제제, 또는 MMP2, MMP9, THBS1 또는 세포-표면 인테그린과 같은 잠재성 TGFβ 복합체의 활성화제, TGFβ 수용체 I형(TGFBRI) 또는 II형(TGFBRII) 및 TGFβ, 악티빈, 인히빈, 노달(Nodal), 항-뮐러식 호르몬(anti-M
Figure pct00001
llerian hormone), GDF 또는 BMP와 같은 이들의 리간드, 보조 공-수용체(또한 III형 수용체로 공지됨)를 포함하는 TGFβ- 및 BMP-활성화된 경로를 방해하기 쉬운 임의의 항섬유증 화합물, 또는 조절성 또는 억제성 SMAD 단백질을 포함하는 SMAD-의존성 규범적 경로(SMAD-dependent canonical pathway)의 성분, 또는 MAPK 시그날링, TAK1, 로-유사(Rho-like) GTPase 시그날링 경로, 포스파티딜이노시톨-3 키나제/AKT 경로, TGFβ-유도된 EMT 과정의 다양한 분지(branch)를 포함하는 SMAD-독립성 또는 비-규범적 경로(non-canonical pathway)의 구성원, 또는 Hh 리간드 또는 표적 유전자를 포함하는 규범적 및 비-규범적 고슴도치 시그날링 경로(non-canonical Hedgehog signaling pathway), 또는 WNT의 임의의 구성원, 또는 TGFβ 시그날링에 영향을 미치기 쉬운 노치 경로로부터 선택된 공지된 항섬유증 활성을 지닌 적어도 하나의 치료학적으로 활성인 제제를 추가로 포함할 수 있다.
대안적으로, 본 발명에 따른 상승적 조합은 JAK/STAT 억제제 및 다른 소염제 및/또는 면역억제제로부터 선택된 적어도 하나의 치료학적으로 활성인 제제를 포함할 수 있다. 예를 들면, 치료학적으로 활성인 제제는 글루코코르티코이드, NSAIDS, 사이클로포스파미드, 니트로소우레아, 엽산 유사체, 퓨린 유사체, 피리미딘 유사체, 메토트렉세이트, 아자티오프린, 머캅토퓨린, 시클로스포린, 마이리오신, 타크롤리무스, 시롤리무스, 마이코페놀산 유도체, 핀골리모드 및 다른 스핀고신-1-포스페이트 수용체 조절인자, 전염증성 사이토킨 및 전염증성 사이토킨 수용체로서 이러한 표적에 대한 모노클로날 및/또는 폴리클로날 항체, T-세포 수용체, 인테그린으로부터 선택될 수 있다.
본 발명은 또한 의약으로서 사용하기 위한, 본 발명에 따른 상승적 조합에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 섬유증 장애의 치료 방법에서 사용하기 위한, 본원에 기술된 상승적 조합에 관한 것이다. 특수한 구현예에서, 섬유증 장애는 간, 위, 신장, 피부, 상피, 내피, 근육, 인대, 연골, 심장, 췌장, 폐, 자궁, 신경계, 고환, 음경, 난소, 부신, 동맥, 정맥, 결장, 장(예컨대, 소장), 담즙관, 연조직(예컨대, 세로칸 또는 후복막강), 골수, 관절, 눈 및 위 섬유증으로 이루어진 그룹 중에서 선택된다. 추가의 특수한 구현예에서, 섬유증 장애는 간, 신장, 피부, 상피, 내피, 근육, 인대, 연골, 심장, 췌장, 폐, 자궁, 신경계, 고환, 난소, 부신, 동맥, 정맥, 결장, 장(예컨대, 소장), 담즙관, 연조직(예컨대, 세로칸 또는 후복막강), 골수, 관절 및 위 섬유증으로 이루어진 그룹 중에서 선택된다. 추가의 특수한 구현예에서, 섬유증 장애는 간, 위, 폐, 심장, 근육, 연조직, 골수, 장, 및 관절 섬유증으로 이루어진 그룹 중에서 선택된다. 여전히 다른 구현예에서, 섬유증 장애는 비-알코올성 지방간염(NASH), 폐 섬유증, 특발성 폐 섬유증, 피부 섬유증, 눈 섬유증(예컨대, 캡슐 섬유증(capsular fibrosis)), 심근내막 섬유증, 세로칸 섬유증, 골수 섬유증, 후복막 섬유증, 진행성 거대 섬유증(탄광부의 진폐증의 합병증), 증식성 섬유증, 신생물섬유증, 폐 섬유증에 이은 만성 염증성 기도 질환(COPD, 천식, 폐기종, 흡연자의 폐, 결핵), 알코올 또는 약물 유도된 간 섬유증, 간 경화증, 감염-유도된 간 섬유증, 방사선 또는 화학치료제-유도된 섬유증, 신성 전신 섬유증(nephrogenic systemic fibrosis), 크론병(Crohn's disease), 궤양성 결장염, 켈로이드(keloid), 오래된 심근 경색, 피부경화증/전신경화증, 관절경화증(arthrofibrosis), 유착 관절낭염의 일부 형태, 원발성 경화성 담관염(PSC), 원발성 담즙성 담관염(Primary Biliary Cholangitis: PBC)과 같은 만성 섬유성 콜란지오패티(chronic fibrosing cholangiopathy), 담도 폐쇄증, 가족성 간내 담즙정제증 3형(PFIC3), 착상주변 섬유증 및 석면침착증으로 이루어진 그룹 중에서 선택된다.
본 발명의 특수한 구현예에 따라서, 담즙정체성 질환(cholestestatic disease)은 원발성 담즙성 담관염(primary biliary cholangitis : PBC), 또는 원발성 경화성 담관염(PSC), 임산부의 간내 담즙정체, 진행성 가족성 간내 담즙정제증, 담도 폐쇄증, 담석증, 감염성 담관염, 랑게르한스 세포 조직구증(Langerhans cell histiocytosis)과 관련된 담관염, 알라질 증후군(Alagille syndrome), 비증후군성 관 결핍(Nonsyndromic ductal paucity), 약물-유도된 담즙 정체, 및 전체 비경구 영양-관련 담즙 정체로 이루어진 그룹 중에서 선택된다. 특수한 국면에서, 담즙정체성 질환은 PBC이다.
특수한 구현예에 따라서, 본원에 기술된 각각의 국면 및 구현예에서, NTZ, NTZ-D 또는 TZ, 또는 NTZ; NTZ-D 또는 TZ의 약제학적으로 허용되는 염이 사용된다.
도면 및 표의 설명
도, 표 및 본문에서 사용된 약어:
α-SMA: 알파 평활근 액틴
ATORVA: 아토르바스타틴
BDL : 담관 연결
BMP: 골형태 형성 단백질
cDNA: 상보성 데옥시리보핵산
COL1A1: 콜라겐, 1형, 알파 1
CDAA: 콜린-결핍성 L-아미노산
CDAAc: 콜레스테롤이 보충된 콜린-결핍성 L-아미노산-정의된 식이
CHOL: 콜레스테롤
CSAA: 콜린 보충된 L-아미노산-정의됨
DDC: 3,5-디에톡시카보닐-1,4-디하이드로콜리딘
DMSO: 디메틸 설폭사이드
DTT: 디티오트레이톨
ELISA: 효소-연결된 면역흡착성 검정
EMT: 상피-간엽성 이행(Epithelial-mesenchymal transition)
EOB: 엑세스 오버 블리스(Excess Over Bliss)
FBS: 태아 송아지 혈청
FDA: 식품 의약국
FLUVA: 플루바스타틴
FPP: 파르네실 피로포스페이트
GDF: 성장 분화 인자
Hh: 고슴도치(Hedgehog)
GGPP : 게라닐게라닐피로포스페이트(Geranylgeranlpyrophosphate)
HMG-CoA: 3-하이드록시-3-메틸글루타릴-코엔자임 A
hHSC: 사람 간 성상 세포
HSC: 간 성상 세포
IC 50 : 최대 억제 농도의 1/2
InMyoFib: 장 섬유모세포
MMP2: 매트릭스 메탈로펩티다제 2
MMP9: 매트릭스 메탈로펩티다제 9
μl: 마이크로리터
LDL: 저 밀도 지단백질
LOVA: 로바스타틴
NHLF: 정상의 사람 폐 섬유모세포
NTZ: 니타족사니드
PBC: 원발성 담즙성 담관염
PBS: 인산염 완충제 염수
PITA: 피타바스타틴
PSC: 원발성 경화성 담관염
qPCR: 정량적인 폴리머라제 쇄 반응
pMol: 피코몰
PRAVA: 프라바스타틴
rhFGF: 재조합체 사람 기본 섬유모세포 성장 인자
ROSU: 로수바스타틴
RNA: 리보핵산
RT: 역 전사효소
SIMVA: 심바스타틴
SmBM: 평활근 세포 기본 배지
SteCGS: 성상 세포 성장 보충물
STeCM: 성상 세포 배지
TBA: 총 담즙산
TGFβ1: 종양 성장 인자 베타 1
TGFBRI: TGFb I형 수용체
TGFBRII: TGFb II형 수용체
THBS1: 트롬보스폰딘 1
TMB: 테트라메틸벤지딘
TZ: 티족사니드
TZG: 티족사니드 글루쿠로니드
도 1. 니타족사니드 및 이의 대사산물인 티족사니드는 사람 HSC에서 α-SMA 단백질의 TGFβ1-유도된 발현을 억제한다.
혈청-기원한 HSC를 전섬유조직생성 사이토킨(profibrogenic cytokine) TGFβ1(1ng/ml)로 활성화시키기 전에 NTZ (A) 또는 TZ (B)로 1시간 동안 예비항온처리하였다. 48시간의 항온처리 후, α-SMA의 발현을 ELISA로 측정하였다. 수득된 값을 TGFβ1 대조군 이상의 억제 퍼센트로 변환시켰다. 데이타는 평균(3회) ± 표준 편차(SD)로 나타낸다. 통계적 분석을 일원 배치분산분석(one-way ANOVA)에 이어 본페로니 사후 시험(Bonferroni post-hoc test)에 의해 시그마 플롯(Sigma Plot) 11.0 소프트웨어를 사용하여 수행하였다. [*: p<0.05; **: p<0.01; ***: p<0.001 (비교 대 TGFβ1 1ng/mL 그룹)]. 곡선 핏팅(curve fitting) 및 최대 억제 농도의 1/2(IC50)을 XLFit 소프트웨어 5.3.1.3으로 수행하였다.
도 2. TGFβ-유도된 hHSC에서 스타틴 약물의 차등적인 항섬유증 효과
혈청-기원한 HSC를 전섬유조직생성 사이토킨(profibrogenic cytokine) TGFβ1(1ng/ml)으로 활성화시키기 전에 피타바스타틴 (A), 플루바스타틴(B), 심바스타틴(C), 아토르바스타틴(D), 로바스타틴(E), 로수바스타틴(F) 및 프라바스타틴(G)과 함께 1시간 동안 예비항온처리하였다. 48시간의 항온처리 후, α-SMA의 발현을 ELISA로 측정하였다. 수득된 값을 TGFβ1 대조군 이상의 억제 퍼센트로 변환시켰다. 데이타는 평균(3회) ± 표준 편차(SD)로 나타낸다. 통계적 분석을 일원 배치분산분석(one-way ANOVA)에 이어 본페로니 사후 시험(Bonferroni post-hoc test)에 의해 시그마 플롯(Sigma Plot) 11.0 소프트웨어를 사용하여 수행하였다. [*: p<0.05; **: p<0.01; ***: p<0.001 (비교 대 TGFβ1 1ng/mL 그룹)]. 곡선 핏팅(curve fitting) 및 최대 억제 농도의 1/2(IC50)의 계산은 XLFit 소프트웨어 5.3.1.3로 수행하였다.
도 3: NTZ 및 피타바스타틴의 조합은 TGFβ1-유도된 hHSC에서 α-SMA를 상승적으로 억제한다.
조합을 투여량-반응 매트릭스 양식으로 시험하고 엑세스 오버 블리스(EOB)의 어디티비즘 모델(additivism model)에 따라 분석하였다. 이들 각각의 DMSO 대조군을 포함하는, NTZ (컬럼) 및 피타바스타틴(열)의 희석 시리즈를 제조하였다. 수득되는 혼합물을 혈청-고갈된 HSC에 전섬유조직발생 사이토킨 TGFβ1(1 ng/ml)으로 활성화시키기 1시간 전에 가하였다. (A) 모든 조합 쌍에 대한 TGFβ1 대조군에 대한 α-SMA 억제 퍼센트. 데이타는 4회 반복물의 평균으로 나타낸다. (B) EOB 점수는 물질 및 방법에 설명된 바와 같이 계산하였다. 양성 EOB 값을 지닌 어떠한 화합물 쌍도 상승적(연회색으로부터 검정색으로 착색됨)인 것으로 고려되었다. (C) 상승적 조합 쌍으로부터 유도된 데이타 값을 막대 그래프 표시로 플롯팅하였다. 데이타는 평균(4회 반복물) ± 표준 편차(SD)로서 나타낸다. 단일 제제 대 생성물 조합 사이의 통계적 분석을 스튜던트 t-시험(student t-test) 또는 만-휘트니 순위 합 시험(Mann-Whitney Rank Sum Test)에 의해 시그마 플롯 11.0 소프트웨어를 사용하여 수행하였다[*: p<0.05; **: p<0.01; ***: p<0.001].
도 4: NTZ 및 심바스타틴의 조합은 TGFβ-유도된 hHSC에서 α-SMA를 상승적으로 억제한다.
조합을 투여량-반응 매트릭스 양식으로 시험하고 엑세스 오버 블리스(EOB)의 어디티비즘 모델(additivism model)에 따라 분석하였다. 이들 각각의 DMSO 대조군을 포함하는, NTZ (컬럼) 및 심바스타틴(열)의 희석 시리즈를 제조하였다. 수득되는 혼합물을 혈청-고갈된 HSC에 전섬유조직발생 사이토킨 TGFβ1(1 ng/ml)으로 활성화시키기 1시간 전에 가하였다. (A) 모든 조합에 대하여 TGFβ1 대조군에 대한 α-SMA 억제 퍼센트. (B) EOB 점수는 물질 및 방법에 설명된 바와 같이 계산하였다. 양성 EOB 값을 지닌 어떠한 화합물 쌍도 상승적(연회색으로부터 검정색으로 착색됨)인 것으로 고려되었다. (C) 상승적 조합 쌍으로부터 유도된 데이타 값을 막대 그래프 표시로 플롯팅하였다. 데이타는 평균(4회 반복물) ± 표준 편차(SD)로서 나타내었다. 단일 제제 대 생성물 조합 사이의 통계적 분석을 스튜던트 t-시험 또는 만-휘트니 순위 합 시험에 의해 시그마 플롯 11.0 소프트웨어를 사용하여 수행하였다[*: p<0.05; **: p<0.01; ***: p<0.001].
도 5: NTZ 및 플루바스타틴의 조합은 TGFβ-유도된 hHSC에서 α-SMA를 상승적으로 억제한다.
조합을 투여량-반응 매트릭스 양식으로 시험하고 엑세스 오버 블리스(EOB)의 어디티비즘 모델(additivism model)에 따라 분석하였다. 이들 각각의 DMSO 대조군을 포함하는, NTZ (컬럼) 및 플루바스타틴(열)의 희석 시리즈를 제조하였다. 수득되는 혼합물을 혈청-고갈된 HSC에 전섬유조직발생 사이토킨 TGFβ1(1 ng/ml)으로 활성화시키기 1시간 전에 가하였다. (A) 모든 조합 쌍에 대한 TGFβ1 대조군을 능가하는 α-SMA 억제 퍼센트. (B) ㅍ(EOB) 점수는 물질 및 방법에 설명된 바와 같이 계산하였다. 양성 EOB 값을 지닌 어떠한 화합물 쌍도 상승적(연회색으로부터 검정색으로 착색됨)인 것으로 고려된다. (C) 상승적 조합 쌍으로부터 유도된 데이타 값을 막대 그래프 표시로 플롯팅하였다. 데이타는 평균(4회 반복물) ± 표준 편차(SD)로서 나타내었다. 단일 제제 대 생성물 조합 사이의 통계적 분석을 스튜던트 t-시험 또는 만-휘트니 순위 합 시험에 의해 시그마 플롯 11.0 소프트웨어를 사용하여 수행하였다[*: p<0.05; **: p<0.01; ***: p<0.001].
도 6: NTZ 및 로바스타틴의 조합은 TGFβ-유도된 hHSC에서 α-SMA를 상승적으로 억제한다.
조합을 투여량-반응 매트릭스 양식으로 시험하고 엑세스 오버 블리스의 어디티비즘 모델에 따라 분석하였다. 이들 각각의 DMSO 대조군을 포함하는, NTZ (컬럼) 및 로바스타틴(열)의 희석 시리즈를 제조하였다. 수득되는 혼합물을 혈청-고갈된 HSC에 전섬유조직발생 사이토킨 TGFβ1(1 ng/ml)으로 활성화시키기 1시간 전에 가하였다. (A) 모든 조합에 대한 TGFβ1 대조군에 대한 α-SMA 억제 퍼센트. (B) 엑세스 오버 블리스(EOB) 점수는 물질 및 방법에 설명된 바와 같이 계산하였다. 양성 EOB 값을 지닌 어떠한 화합물 쌍도 상승적(연회색으로부터 검정색으로 착색됨)인 것으로 고려된다. 상승적 쌍의 예는 (C)에 예시하고 상승적 조합 쌍으로부터 유도된 데이타 값을 막대 그래프 표시로 플롯팅하였다. 데이타는 평균(4회 반복물) ± 표준 편차(SD)로서 나타내었다. 단일 제제 대 생성물 조합 사이의 통계적 분석을 스튜던트 t-시험 또는 만-휘트니 순위 합 시험에 의해 시그마 플롯 11.0 소프트웨어를 사용하여 수행하였다[*: p<0.05; **: p<0.01; ***: p<0.001].
도 7: NTZ 및 아토르바스타틴의 조합은 TGFβ-유도된 hHSC에서 α-SMA를 상승적으로 억제한다.
조합을 투여량-반응 매트릭스 양식으로 시험하고 엑세스 오버 블리스의 어디티비즘 모델에 따라 분석하였다. 이들 각각의 DMSO 대조군을 포함하는, NTZ (컬럼) 및 아토르바스타틴(열)의 희석 시리즈를 제조하였다. 수득되는 혼합물을 혈청-고갈된 HSC에 전섬유조직발생 사이토킨 TGFβ1(1 ng/ml)으로 활성화시키기 1시간 전에 가하였다. (A) TGFβ1 대조군에 대한 α-SMA 억제 퍼센트. (B) 엑세스 오버 블리스(EOB) 점수는 물질 및 방법에 설명된 바와 같이 계산하였다. 양성 EOB 값을 지닌 어떠한 화합물 쌍도 상승적(연회색으로부터 검정색으로 착색됨)인 것으로 고려되고, (C) 상승적 조합 쌍으로부터 유도된 데이타 값은 막대 그래프 표시로 플롯팅한다. 데이타는 평균(4회 반복물) ± 표준 편차(SD)로서 나타낸다. 단일 제제 대 생성물 조합 사이의 통계적 분석을 스튜던트 t-시험 또는 만-휘트니 순위 합 시험에 의해 시그마 플롯 11.0 소프트웨어를 사용하여 수행하였다[*: p<0.05; **: p<0.01; ***: p<0.001].
도 8: NTZ 및 프라바스타틴의 조합은 TGFβ-유도된 hHSC에서 α-SMA를 상승적으로 억제한다.
조합을 투여량-반응 매트릭스 양식으로 시험하고 엑세스 오버 블리스의 어디티비즘 모델에 따라 분석하였다. 이들 각각의 DMSO 대조군을 포함하는, NTZ (컬럼) 및 프라바스타틴(열)의 희석 시리즈를 제조하였다. 수득되는 혼합물을 혈청-고갈된 HSC에 전섬유조직발생 사이토킨 TGFβ1(1 ng/ml)으로 활성화시키기 1시간 전에 가하였다. (A) TGFβ1 대조군에 대한 α-SMA 억제 퍼센트. (B) 엑세스 오버 블리스(EOB) 점수는 물질 및 방법에 설명된 바와 같이 계산하였다. 양성 EOB 값을 지닌 어떠한 화합물 쌍도 상승적(연회색으로부터 검정색으로 착색됨)인 것으로 고려되고, (C) 상승적 조합 쌍으로부터 유도된 데이타 값을 막대 그래프 표시로 플롯팅하였다. 데이타는 평균(4회 반복물) ± 표준 편차(SD)로서 나타낸다. 단일 제제 대 생성물 조합 사이의 통계적 분석을 스튜던트 t-시험 또는 만-휘트니 순위 합 시험에 의해 시그마 플롯 11.0 소프트웨어를 사용하여 수행하였다[*: p<0.05; **: p<0.01; ***: p<0.001].
도 9: 플라바스타틴은 또한 NTZ의 대사산물인 티족사니드와 상승작용하여 TGFβ-유도된 hHSC에서 섬유증을 감소시킨다.
혈청-기원한 HSC를 준최적 투여량(suboptimal dose)의 티족사니드 (TZ), 플루바스타틴, 또는 이들 둘 다의 생성물의 조합과 함께 1시간 동안 예비항온처리하였다. 데이타는 4회 반복물의 평균으로 나타낸다. 통계적 분석은 일원 ANOVA에 이어 본페로니 사후 시험에 의해 시그마 플롯(Sigma Plot) 11.0 소프트웨어를 사용하여 수행하였다. [*: p<0.05; **: p<0.01; ***: p<0.001 ('생성물 조합' 그룹에 대한 비교)].
도 10 NTZ와 심바스타틴의 조합은 순환하는 TBA 농도의 CCI4-유도된 수준을 상승적으로 예방한다.
250 내지 275g의 랫트에게 올리브 오일(대조군 그룹) 또는 올리브 오일 속에 유화된 CCl4(CCl4 : 올리브 오일 1:2 v/v, 최종 CCl4 농도: 2ml/kg)를 3주 동안 주당 2회 복강내 주사하였다. 동시에, 올리브 오일 주사된 그룹을 대조군 식이에 둔 반면 CCl4 주사된 그룹은 대조군 식이 또는 NTZ 30 mg/kg/일, SIMVA 10 mg/kg/일 또는 NTZ 30mg/kg/일/SIMVA 10mg/kg/일이 보충된 식이에 두었다. 희생시킨 후, 순환하는 TBA 농도를 측정하였다. 데이타는 평균 ± 표준 편차(SD)로 나타낸다. 통계적 분석은 시그마 플롯 11.0 소프트웨어: 올리브 오일 대 CCl4 : 만-휘트니 순위 합 시험: ###: p<0.001; CCl4 대 대조군 치료: ##: 크러스칼-왈리스 시험(Kruskal Wallis test)에 이어, 던 포스트(Dunn's post): p<0.001; NTZ/SIMVA 조합 대 NTZ 30 mpk 또는 SIMVA 1 10 mpk: 만-휘트니 순위 합 시험:: $$$ p<0.001을 사용하여 수행하였다.
발명의 상세한 설명
본 출원의 실험 부분에서, (i) NTZ, 또는 TZ와 (ii) 스타틴의 조합이 활성화된 섬유모세포에서 항섬유증 특성을 상승적으로 부여할 수 있음이 밝혀졌다. 또한, (i) NTZ 또는 TZ와 (ii) 스타틴의 조합이 또한 간 손상 모델에서 총 담즙 산의 변경된 수준을 감소시킬 수 있는 것으로 나타난다. 따라서, 본 발명은 (i) NTZ 또는 NTZ (NTZ-D), TZ 또는 TZG의 중수소화된 유도체와 같은 NTZ의 유도체, 또는 NTZ, NTZ-D, TZ 또는 TZG의 약제학적으로 허용되는 염, 및 (ii) 스타틴을 포함하는 활성제의 신규 상승적 조합에 관한 것이다.
특히, 본 발명은 담즙정체성 또는 섬유증 질환의 치료 방법에 사용하기 위한, (i) NTZ, NTZ, 또는 TZ의 중수소화된 유도체, 또는 NTZ, TZ, 또는 NTZ의 중수소화된 유도체의 약제학적으로 허용되는 염, 및 (ii) 스타틴의 상승적 조합에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 담즙정체 및 섬유증 장애의 치료 방법에 유용한 의약의 제조를 위한, (i) NTZ, NTZ-D, TZ 또는 TZG, 또는 NTZ, NTZ-D, TZ 또는 TZG의 약제학적으로 허용되는 염, 및 (ii) 스타틴을 포함하는, 본 발명의 상승적 조합의 용도에 관한 것이다. 본 발명은 또한 (i) NTZ, NTZ-D, TZ 또는 TZG, 또는 NTZ, NTZ-D, TZ 또는 TZG의 약제학적으로 허용되는 염, 및 (ii) 스타틴을 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이며, 상기 성분 (i) 및 (ii)는 본원에 기술된 바와 같이 상승적으로 작용한다. 본 발명에 따른 약제학적 조성물은 담즙정체성 또는 섬유증 장애를 치료하는데 유용하다.
섬유증 장애의 유발 제제 또는 개시 현상이 매우 다양하고 이들의 발병이 다양하지만, 영향받은 조직에서 일반적인 특징은 근섬유모세포라고 불리는 거대한 수의 활성화된 섬유모세포의 존재이다((Rosenbloom, Mendoza et al., 2013)). TGFβ1과 같은 섬유증 자극은 섬유모세포에서 근섬유모세포로의 분화를 유도할 수 있다(Leask and Abraham, 2004; Leask, 2007). 근섬유모세포는 대사적으로 및 형태학적으로 명백한 섬유모세포이며 이의 활성화는 섬유증 반응 동안에 중요한 역활을 한다. 더욱이, 이들 근섬유모세포는 상이한 형태의 콜라겐과 같은 세포외 매트릭스 형성에 관여하는 단백질의 발현을 포함하는 독특한 생물학적 기능을 나타낸다. α-평활근 액틴(α-SMA) 발현의 유도는 휴지성 섬유모세포의 활성화된 근섬유모세포 분화로의 인식된 특징이며 섬유증 과정을 방해하는 약물의 잠재능을 평가하기 위한 생리학적 판독물(physiological read-out)로서 사용될 수 있다. 종양 성장 β 인자, 및 특히 종양 성장 인자 베타 1 (TGFβ1)은 섬유모세포의 고 수준의 α-SMA 및 고 수준의 세포외 매트릭스 단백질을 발현하는 전섬유증 근섬유모세포 내로의 표현형 형질전환을 유도하는 생리학적 시그날을 인식하며, 상기 단백질은 이후 분비되어 섬유증 반흔 조직을 형성한다.
또한, 섬유모세포의 증식 및 활성화가 세포외 매트릭스를 구성하는 몇가지 연결 조직 성분(예를 들면, 콜라겐, 엘라스틴, 프로테오글리칸, 및 하이알루로난)의 생산에 관여함은 알려져 있다(Kendall and Feghali-Bostwick, 2014).
예측치못하게, NTZ 뿐만아니라 이의 활성 대사산물 TZ 및 NTZ 중수소화 유도체는 TGFβ-유도된 간 성상 세포에서 및 다른 기관으로부터의 원발 섬유모세포에서 α-SMA의 수준을 투여량-의존적으로 감소시켰기 때문에, 항섬유증 특성을 나타낸다. 더욱이, NTZ 및 이의 대사산물인 TZ는 간 손상의 모델에서 순환하는 총 담즙산을 감소시키는 이들의 능력에 의해 항담즙정체 특성을 나타내었다.
본 발명에 따라 사용될 NTZ, TZ 및 TZG는 각각 다음 화학식 I, II 및 III을 갖는다:
[화학식 I]
Figure pct00002
[화학식 II]
Figure pct00003
[화학식 III]
Figure pct00004
NTZ 및 TZ(G)("TZ(G)"는 "TZ 또는 TZG"를 지칭함)은 이들의 항기생충 및 항바이러스 활성에 대해 알려져 있었지만, 선행 기술은 NTZ, 및 TZ(G)가 항담즙정체 및 항-섬유증 효과를 가지고 있음을 교시하지 않고 있다.
본 발명자들은 이들 화합물이 담즙정체 및 섬유증의 치료시 치료 효과를 가짐을 새로운 본 발명의 방식으로 입증하였다.
선행 기술은 NTZ의 중수소화된 유도체(또한 본 출원에서 "NTZ-D"로 지칭됨)가 항담즙정체 또는 항-섬유증 효과를 가짐을 교시하고 있지 않다.
본 발명에 따라서, 본 발명에 따른 조성물에 사용될 NTZ의 중수소화된 유도체는 다음 화학식 IV를 갖는다:
[화학식 IV]
Figure pct00005
상기 화학식 IV에서,
R2는
Figure pct00006
그룹을 나타내고, 여기서, R2a, R2b 및 R2c는 동일하거나 상이하며, 수소 원자 또는 중수소 원자를 나타내고, 단 R2a, R2b, R2c는 동시에 수소 원자가 아니다.
특수한 구현예에서, R2a, R2b 및 R2c는 중수소 원자를 나타낸다.
특수한 구현예에서, R2a 및 R2b는 중수소 원자를 나타내고, R2c는 수소 원자를 나타낸다.
특수한 구현예에서, R2a는 중수소 원자를 나타내고, R2b 및 R2c는 중수소 원자를 나타낸다.
본 발명의 이러한 화합물의 예는 다음을 포함한다:
화합물 1 : 2-[(5-니트로-1,3-티아졸-2-일)카바모일]페닐 (d3)에타노에이트;
화합물 2 : 2-[(5-니트로-1,3-티아졸-2-일)카바모일]페닐 (d2) 에타노에이트; 및
화합물 3 : 2-[(5-니트로-1,3-티아졸-2-일)카바모일]페닐 (d1) 에타노에이트;
본 발명의 맥락에서, "NTZ, NTZ-D 및 TZ(G), 및 NTZ, NTZ-D 및 TZ(G)의 약제학적으로 허용되는 염" 또는 "화학식 I, II, III 및 IV의 화합물 및 화학식 I, II, III 및 IV의 화합물의 약제학적으로 허용되는 염"은 "성분(i)" 또는 "조합의 성분 (i)"로서 총칭하여 지칭된다.
본 발명의 맥락에서, "성분(ii)" 또는 "조합의 성분(ii)"는 "적어도 하나의 스타틴" 또는 "스타틴"을 지칭한다.
본 발명자들은 또한 NTZ, NTZ-D, TZ(G)와 스타틴의 조합이 사람 HSC에서 상승적인 항담즙정체 및/또는 항-섬유증 효과를 가질 수 있음을 신규하고 진보적인 방식으로 입증하였다.
본 발명에서, 상승작용은 2개 이상의 구조의 조화된 또는 관련된 작용에 의해 조합된 작용이 각각 별도의 작용의 합보다 큰 것으로 정의된다.
따라서, 본 발명은 (i) NTZ, NTZ-D, TZG, 또는 NTZ, NTZ-D 또는 TZ(G)의 약제학적으로 허용되는 염과, (ii) 스타틴의 상승적 조합에 관한 것이다. 본 발명은 또한 담즙정체 또는 섬유증 장애의 치료 방법에서 사용하기 위한 이러한 조합에 관한 것이다.
본 발명의 특수한 구현예에 따라서, 조합은 (i) NTZ, NTZ-D 또는 TZ, 또는 NTZE, NTZ-D 또는 TZ의 약제학적으로 허용되는 염, 및 (ii) 스타틴을 포함한다.
추가의 국면에서, 본 발명은 증식의 억제 및/또는 섬유모세포의 활성화에 사용하기 위한, 본 발명의 상승적 조합에 관한 것이다. 당해 분야에 공지된 바와 같이, 섬유모세포는 콜라겐 섬유 또는 세포외 매트릭스의 다른 연결 조직 성분의 생산에 관여한다.
용어 "섬유증", "섬유증 질환", "섬유증 장애" 및 이의 쇠퇴는 기관 또는 조직내 섬유성 연결 조직의 과도한 침착의 병리학적 상태를 말한다. 보다 구체적으로, 섬유증은 지속적인 섬유증 반흔 형성 및 조직 손상에 대한 반응으로서, 연결 조직에 의한 세포외 매트릭스의 과생산을 포함하는, 병리학적 과정이다. 생리학적으로, 연결 조직의 침착은 근본적인 기관 또는 조직의 구조 및 기능을 없앨 수 있다.
본 발명에 따라서, 섬유증 또는 섬유증 장애는 어떠한 기관 또는 조직 섬유증과 관련될 수 있다. 특수한 기관 섬유증의 예시적인 비-제한적 예는 간, 위, 신장, 피부, 상피, 내피, 근육, 인대, 연골, 심장, 췌장, 폐, 자궁, 신경계, 고환, 음경, 난소, 부신, 동맥, 정맥, 결장, 장(예컨대, 소장), 담즙관, 연조직(예컨대, 세로칸 또는 후복막강), 골수, 관절, 눈 또는 위 섬유증, 특히 간, 신장, 피부, 상피, 내피, 근육, 인대, 연골, 심장, 췌장, 폐, 자궁, 신경계, 고환, 난소, 부신, 동맥, 정맥, 결장, 장(예컨대, 소장), 담즙관, 연조직(예컨대, 세로칸 또는 후복막강), 골수, 관절 또는 위 섬유증을 포함한다.
본 발명에 따라서, 용어 "담즙정체" 또는 "담즙정체성 질환" 또는 "담즙정체성 장애" 및 이의 쇠퇴는 간세포에 의한 손상된 분비 또는 간내 또는 간외 담즙관을 통과하는 담즙 유동의 폐쇄로 인한 담즙 유동에 있어서의 감소로 정의된 병리학적 상태를 나타낸다. 따라서, 담즙정체의 임상적 정의는 담즙내로 일반적으로 분비된 물질이 보유되는 어떠한 상태이다.
특수한 구현예에서, 섬유증 장애는 간, 위, 폐, 심장, 신장, 근육, 피부, 연조직(예컨대, 세로칸 또는 후복막강), 골수, 장, 및 관절(예컨대, 무릎, 어깨 또는 다른 관절) 섬유증으로 이루어진 그룹 중에서 선택된다.
바람직한 구현예에서, 섬유증 장애는 간, 폐, 피부, 신장 및 장 섬유증으로 이루어진 그룹 중에서 선택된다.
본 발명의 보다 바람직한 구현예에서, 치료된 섬유증 장애는 섬유증 장애의 다음의 비배타적인 목록으로 이루어진 그룹 중에서 선택된다: 비-알코올성 지방간염(NASH), 폐 섬유증, 특발성 폐 섬유증, 피부 섬유증, 눈 섬유증, 심근내막 섬유증, 세로칸 섬유증, 골수 섬유증, 후복막 섬유증, 진행성 거대 섬유증(탄광부의 진폐증의 합병증), 증식성 섬유증, 신생물 섬유증, 폐 섬유증에 이은 만성 염증성 기도 질환(COPD, 천식, 폐기종, 흡연자의 폐, 결핵), 알코올 또는 약물 유도된 간 섬유증, 간 경화증, 감염-유도된 간 섬유증, 방사선 또는 화학치료제-유도된 섬유증, 신성 전신 섬유증, 크론병, 궤양성 결장염, 켈로이드, 오래된 심근 경색, 피부경화증/전신경화증, 관절경화증, 유착 관절낭염의 일부 형태, 원발성 경화성 담관염(PSC), 원발성 담즙성 담관염(PBC)과 같은 만성 섬유성 콜란지오패티, 담도 폐쇄증, 가족성 간내 담즙정제증 3형(PFIC3), 착상주변 섬유증 및 석면침착증.
본 발명의 특수한 구현예에 따라서, 담즙정체성 질환은 원발성 담즙성 담관염(PBC), 또는 원발성 경화성 담관염(PSC), 임산부의 간내 담즙정체, 진행성 가족성 간내 담즙정체, 담도 폐쇄증, 담석증, 감염성 담관염, 랑게르한스 세포 조직구증과 관련된 담관염, 알라질 증후군, 비증후군성 관 결핍, 약물-유도된 담즙정체, 및 전체 비경구 영양-관련 담즙정체로 이루어진 그룹 중에서 선택된다. 특수한 구현예에 따라서, 담즙정체성 질환은 PBC 또는 PSC, 특히 PBC이다.
용어 "치료" 또는 치료하는"은 이를 필요로 하는 대상체에서 담즙정체성 또는 섬유증 장애의 치유적 또는 예방적 치료를 지칭한다. 치료는 진단된 장애를 가진 대상체, 즉, 환자에게 본 발명의 조합을 투여하여 장애의 진행을 치유하거나, 지연시키거나, 역전시키거나, 둔화시킴으로써, 환자의 상태를 개선시킴을 포함한다. 치료는 또한 건강하거나 담즙정체성 또는 섬유증 장애로 진전될 위험이 있는 대상체에게 투여하여 장애를 예방하거나 지연시킬 수 있다.
따라서, 본 발명에 따라서, 섬유증 장애의 치료는 진단된 장애를 가진 대상체에게 본 발명의 조합을 예를 들면, 조합의 성분 (i) 및 (ii)를 함유하는 약제학적 조성물의 형태로 투여하여 장애의 진전을 치유하거나, 지연시키거나, 역전시키거나, 둔화시킴으로써, 환자의 상태를 개선시키거나 건강한 대상체, 특히 담즙정체성 또는 섬유증 장애로 진전될 위험이 있는 대상체에게 투여함을 포함한다.
치료될 대상체는 포유동물, 바람직하게는 사람이다. 본 발명에 따라 치료될 대상체는 앞서의 약물 치료, 관련된 병리학, 유전형, 위험 인자들에 대한 노출, 바이러스 감염과 같은 섬유정체성 또는 섬유증 질환과 관련된 몇가지 기준을 기반으로 하여, 및 또한 영상 방법 및 면역학적, 생화학적, 효소적, 화학적, 또는 핵산 검출 방법의 수단에 의해 평가될 수 있는 어떠한 관련된 생물마커의 검출을 기반으로 하여 선택될 수 있다.
본 발명에 따라서, 용어 "스타틴(들)"은 콜레스테롤의 생산시 중심 역활을 하는, 효소 HMG-CoA 리덕타제를 억제하는 콜레스테롤 저하 약물의 부류인 HMG-CoA 리덕타제 억제제를 지칭한다. 상승된 혈중 콜레스테롤 수준은 심혈관 질환(CVD)과 관련되었으며, 많은 연구는 CVD 상황의 위험이 지질-저하 치료요법에 의해 감소될 수 있음을 입증하였다. 초기에, 지질-저하 의료품은 필수적으로 저 포화 지방 및 콜레스테롤 식이, 담즙산 봉쇄제(콜레스티라민 및 콜레스티폴), 니코틴산(니아신), 피브레이트 및 프로부콜로 제한된다. 불행히도, 이들 치료 모두는 제한된 효능 또는 내성, 또는 둘 다를 갖는다.
상기 기술된 HMG-CoA 리덕타제 억제제는 3-하이드록시 락톤 환 또는 상응하는 개환된 디하이드록시 개방 산으로서 존재할 수 있는 모이어티(moiety)를 함유하는 구조적 화합물 부류에 속한다. 디하이드록시 개방-산의 염이 제조될 수 있으며, 실제로, 상기 주목한 바와 같이, 수개의 시판된 스타틴은 디하이드록시 개방 산 염 형태로 투여된다.
예를 들면, 로바스타틴 및 심바스타틴은 이들의 락톤화된 형태로 전세계적으로 시판되고 있다.
스타틴은 심혈관 질환을 감소시키고 고 위험인 사람에서 사망율을 감소시키는 것으로 밝혀져 있다. 스타틴이 조기 단계의 질환(2차 예방) 및 상승된 위험이 있으나 CVD가 없는 질환(1차 예방)을 치료하는데 효과적이라는 증거는 강력하다.
본 발명에 따라서, 본원에 사용된 바와 같은, 용어 "스타틴(들)"은 플루바스타틴, 아토르바스타틴, 메바스타틴, 세리바스타틴, 로바스타틴, 심바스타틴, 로수바스타틴, 프라바스타틴, 및 피타바스타틴을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 본 발명의 특수한 구현예에 따라서, 스타틴은 피타바스타틴, 플루바스타틴, 심바스타틴 및 아토르바스타틴으로부터 선택된다.
스타틴은 염, 수화물, 용매화물, 다형체, 또는 공-결정의 형태일 수 있다. 스타틴은 또한 염의 수화물, 용매화물, 다형체, 또는 공-결정의 형태일 수 있다. 스타틴은 또한 본 발명에 따른 락톤 형태의 유리 산으로 존재할 수 있다.
조합의 성분(ii)은 하나 이상의 스타틴, 즉 하나의 스타틴 또는 스타틴의 혼합물을 포함할 수 있다.
본 발명에 따라서, 본 발명의 조합 속에 포함된 스타틴은 상기 스타틴 및 본 발명의 조합의 성분(i)의 조합이 담즙정체 또는 섬유증에 대해 상승 작용을 제공하도록 선택된다. 이러한 상승작용은 실시예에 기술된 엑세스 오버 블리스(Excess Over Bliss: EOB) 방법을 사용하는 것과 같은, 당해 분야에 잘 공지된 방법에 따라 측정할 수 있다.
바람직한 구현예에서, 본 발명의 상승적 조합 속의 스타틴은 로바스타틴, 로수바스타틴, 프라바스타틴, 피타바스타틴, 플루바스타틴, 심바스타틴 및 아토르바스타틴으로 이루어진 그룹, 특히 피타바스타틴, 플루바스타틴 및 심바스타틴으로 이루어진 그룹 중에서 선택된다.
본 발명의 다른 국면은 약제학적 조성물의 형태의 상술한 상승적 조합에 관한 것이다. 따라서, 본 발명은 또한 (i) NTZ, NTZ-D 또는 TZ(G), 또는 NTZ, NTZ-D 또는 TZ(G)의 약제학적으로 허용되는 염, 및 (ii) 스타틴을 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다.
여전히 다른 국면에서, 본 발명은 하기에 보다 상세히 설명되는 바와 같이, 이의 성분을 동시에, 순차적으로 또는 별도로 투여하기 위한 부분 키트(kit-of-parts) 형태의, 상술한 상승적 조합에 관한 것이다.
본 발명은 또한 담즙정체 또는 섬유증의 치료 방법을 제공한다.
치료는 진단된 장애를 가진 환자에게 본 발명의 상승적 조합을 투여하여 장애의 진행을 치유하거나, 지연시키거나, 둔화시킴으로써, 환자의 상태를 개선시키거나, 건강한 대상체, 특히 담즙정체성 또는 섬유증 질환으로 진전될 위험이 있는 대상체에게 투여하여 질환을 예방함을 포함한다.
본 발명에 따라 치료될 대상체는 앞서의 약물 치료, 관련된 병리학, 유전형, 위험 인자들에 대한 노출, 바이러스 감염과 같은 섬유증 질환과 관련된 몇가지 기준을 기반으로 하여, 및 또한 영상 방법 및 면역학적, 생화학적, 효소적, 화학적, 또는 핵산 검출 방법에 의해 평가될 수 있는 어떠한 관련된 생물마커를 기반으로 하여 선택될 수 있다.
NTZ 또는 TZ의 합성은 예를 들면, (Rossignol and Cavier, 1975)에 의해 기술된 바와 같이, 또는 당해 분야의 숙련가에게 공지된 어떠한 다른 합성 방법에 의해 수행될 수 있다. TZG는 예를 들면, Wadouachi 2011. S'agit-il de A Wadouachi, J Kovensky, Synthesis of Glycosides of Glucuronic, Galacturonic and Mannuronic Acids: An Overview, Molecules, 2011, 16(5), 3933-3968에서와 같은 당해 분야에 공지된 합성 방법에 따라 합성될 수 있다.
특수한 구현예에서, 담즙정체성 또는 섬유증 장애의 치료는 NTZ, NTZ-D 및 TZ(G)로부터 선택된 적어도 2개의 화합물을 포함하는 조성물의 투여를 포함할 수 있다. 이러한 구현예에서, 투여된 스타틴은 2개의 화합물과 동일한 조성물 속에, 또는 상이한 조성물에서와 같이, 별도의 형태로 제공된다.
다른 구현예에서, 본 발명의 상승적 조합은 치료요법에서 동시, 순차적 또는 별도 투여용이므로, 가능하게는 상이한 조성물 속에 포함된다. 순차적인 투여의 경우, 조합의 성분(i)은 성분(ii) 전에 투여될 수 있거나, 성분(ii)는 성분(i) 전에 투여된다. 따라서, 본 발명은 또한 (i) NTZ, NTZ-D 및 TZ(G), 또는 NTZ, NTZ-D 및 TZ(G)의 약제학적으로 허용되는 이의 염, 및 (ii) 스타틴의 상승적 조합을 포함하는, 동시, 순차 또는 별도 투여용 부분 키트에 관한 것이다.
NTZ, NTZ-D, TZ(G) 및 스타틴은 특히 약제학적 용도와 상용성인 약제학적으로 허용되는 염, 특히 산 또는 염기 염으로 제형화될 수 있다. NTZ, NTZ-D 및 TZ(G)의 염 및 스타틴은 약제학적으로 허용되는 산 부가염, 약제학적으로 허용되는 염기 부가염, 약제학적으로 허용되는 금속 염, 암모늄 및 알킬화된 암모늄 염을 포함한다. 이들 염은 화합물의 최종 정제 단계 동안에 또는 염을 앞서 정제한 화합물내로 혼입시킴에 의해 수득될 수 있다.
성분(i) 및 (ii), 특히 화학식 I, II, III 또는 IV의 화합물과 하나 이상의 스타틴(들)의 조합은 화학식 I, II, III, IV의 화합물 또는 스타틴(들)의 유기 또는 무기 염기 또는 산으로부터 수득된 약제학적으로 허용되는 비-독성 염으로서 제형화될 수 있다.
성분(i) 및/또는 (ii), 특히 화학식 I, II, III의 화합물 및/또는 하나 이상의 스타틴(들)을 포함하는 본 발명의 약제학적 조성물은 또한 약제학적 맥락 내에서 허용되는, 1개 또는 수개의 부형제 또는 비히클(예컨대, 약제학적 용도와 혼용성이고 당해 분야의 통상의 기술자에게 잘 공지된 염수 용액, 생리학적 용액, 등장성 용액 등)을 포함할 수 있다.
이들 조성물은 또한 분산제, 가용화제, 안정화제, 방부제 등 중에서 선택된 1개 또는 수개의 제제 또는 비히클을 추가로 포함할 수 있다. 이들 제형(액체 및/또는 주사가능한 및/또는 고체)에 유용한 제제 또는 비히클은 특히 메틸셀룰로즈, 하이드록시메틸셀룰로즈, 카복시메틸셀룰로즈, 폴리소르베이트 80, 만니톨, 젤라틴, 락토즈, 식물성 오일, 아카시아, 리포좀 등이다.
이들 조성물은 궁극적으로 연장되고/되거나 느린 방출을 보증하는 생약 형태 또는 장치에 의해, 주사가능한 현탁제, 겔제, 오일제, 연고제, 알약, 정제, 좌제, 산제, 겔 캡(gel cap), 캅셀제, 에어로졸제 등의 형태로 제형화될 수 있다. 이러한 종류의 제형의 경우, 셀룰로즈, 카보네이트 또는 전분과 같은 제제를 유리하게 사용할 수 있다.
화학식 I, I, III의 화합물 및/또는 하나 이상이 스타틴(들)(본 발명의 조합의 성분 (i)과 상승 효과를 허용하는 것들 중에서, 상술한 바와 같이 선택된 스타틴)과 같은, 조합의 성분(i) 및/또는 (ii)를 포함하는 본 발명의 약제학적 조성물은 상이한 경로 및 상이한 형태로 투여될 수 있다. 예를 들면, 화합물(들)은 전신계 방식을 통해, 경구로, 비경구적으로, 흡입에 의해, 비강 분무에 의해, 비강 적하에 의해, 또는 예를 들면, 정맥내와 같은 주사에 의해, 근육내 경로에 의해, 피하 경로에 의해, 경피 경로에 의해, 국소 경로에 의해, 동맥내 경로 등에 의해 투여될 수 있다.
물론, 투여 경로는 당해 분야의 숙련가에게 잘 공지된 과정에 따라 하나 이상의 스타틴(들)과 함께 성분(i)의 형태로 채택될 것이다.
특수한 구현예에서, 성분(들) (i) 및 (ii)는 정제 또는 정제들로서 제형화된다. 다른 특수한 구현예에서, 화합물은 경구적으로 투여된다.
하나 이상이 스타틴(들)과 함께 NTZ, NTZ-D 또는 TZ(G)는 치료학적 유효량으로 투여된다. 본 발명의 맥락안에서, 용어 "유효량"은 바람직한 치료학적 효과를 생산하는데 충분한 양의 화합물을 지칭한다.
투여와 관련된 빈도 및/또는 투여량은 환자의 기능, 병리학, 투여 형태 등에서, 당해 분야의 통상의 기술자에 의해 채택될 수 있다. 전형적으로, 본 발명의 조합(약제학적 조성물 또는 부분 키트의 형태에서와 같은)은 50 mg/일 내지 2000 mg/일과 같은, 100 mg/일 내지 2000 mg/일; 및 특히 100 mg/일 내지 1000 mg/일과 같은 0.01 mg/일 내지 4000 mg/일 사이에 포함된 조합의 성분(i)에 대한 투여량에서 담즙정체성 또는 섬유증 질환의 치료를 위해 투여될 수 있다. 특수한 구현예에서, NTZ, TZ(G), 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은 약 1000 mg/일의 투여량에서(즉, 900 내지 1100 mg/일의 투여량에서), 특히 1000 mg/일에서 투여된다. 특수한 구현예에서, NTZ, TZ(G), 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은 약 1000 mg/일, 특히 1000 mg/일의 투여량에서 경구적으로, 특히 정제로서 투여된다. 투여는 필요할 경우, 매일 또는 심지어 1일에 수회 수행될 수 있다. 일 구현예에서, 화합물은 1일 1회, 1일 2회 또는 1일 3회와 같은 1일에 적어도 1회 투여된다. 특수한 구현예에서, 화합물은 1일 1회 또는 2회 투여된다. 특히, 경구 투여는 식사 동안, 예를 들면, 아침, 점심 또는 저녁 동안에 화합물을 약 1000 mg의 투여량, 특히 1000 mg의 투여량에서 포함하는 정제를 섭취함으로써 1일 1회 수행될 수 있다. 다른 구현예에서, 정제는 화합물은 약 500 mg(즉, 450 내지 550 mg의 투여량), 특히 500 mg의 투여량에서 포함하는 제1 정제를 하나의 식사 동안 투여하고, 화합물은 약 500 mg의 투여량에서, 특히 500 mg의 투여량에서 포함하는 제2 정제를 동일한 날에 다른 식사 동안 투여하는 것과 같이, 1일 2회 경구 투여된다.
상기 조합 중 스타틴의 투여량은 스타틴 자체에 따라 변할 수 있다. 투여량은 대표적인 스타틴 요법에 따라 스타틴의 효능에 대해 채택된다.
예를 들면, 플루바스타틴의 경우, 투여량은 10 내지 50 mg/일, 및 특히 20 내지 40 mg/일에 포함될 수 있다.
피타바스타틴의 경우, 투여량은 0,1 mg/일 내지 6 mg/일, 및 특히 1 내지 4 mg/일에 포함될 수 있다.
심바스타틴 및 아토르바스타틴 둘 다의 경우, 투여량은 1 mg/일 내지 100 mg/일, 및 특히 10 내지 80 mg/일에 포함될 수 있다.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 성분(i), 특히 NTZ는, NTZ의 경우 100 mg/일 내지 1000 mg/일 및 플루바스타틴의 경우 1 내지 4 mg/일을 포함하는 투여량에서 플루바스타틴과 함께 사용된다.
본 발명의 다른 바람직한 구현예에서, 성분(i), 특히 NTZ는, NTZ의 경우 100 mg/일 내지 1000 mg/일 및 피타바스타틴의 경우 1 내지 4 mg/일을 포함한 투여량에서 피타바스타틴과 함께 사용된다.
본 발명의 다른 바람직한 구현예에서, 성분(i), 특히 NTZ는, NTZ의 경우 100 mg/일 내지 1000 mg/일 및 심바스타틴 및 아토르바스타틴의 경우 10 내지 80 mg/일을 포함한 투여량에서 심바스타틴 또는 아토르바스타틴과 함께 사용된다.
다른 바람직한 구현예에서, 활성 성분은 경구 섭취용으로 의도된 알약 또는 정제 형태의 하나 이상의 약제학적 조성물(들)로서 투여된다.
투여는 필요할 경우 매일 또는 심지어 1일 수회 수행될 수 있다.
적합하게는, 본 발명의 조합을 사용한 치료 과정은 적어도 1주, 특히 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20 또는 24 주 이상 동안이다. 특히, NTZ, TZ(G) 또는 약제학적으로 허용되는 이의 염을 사용한 치료 과정은 적어도 1년, 2년, 3년, 4년 또는 적어도 5년 동안이다.
특수한 구현예에서, 본 발명은 이를 필요로 하는 환자에게, NTZ를 1000 mg/일의 투여량으로 투여하며, 특히 500 mg의 NTZ를 함유하는 정제를 1일 2회, 특히 2회의 상이한 식사 동안 투여함을 포함하는, 치료학적 유효량의 본 발명의 조합을 투여함을 포함하는, 상기 환자에서 담즙정체성 또는 섬유증 질환, 특히 간 섬유증, 보다 특히 간 섬유증에 이은 NASH의 치료에 관한 것이다.
특수한 구현예에서, 본 발명은 공지된 항섬유증 활성을 지닌 다른 분자와 같은 적어도 하나의 다른 치료학적 활성제에 추가로 조합된, 본 발명의 조합에 관한 것이다. 본 발명의 이러한 추가의 조합은 담즙정체성 또는 섬유증 질환의 치료에 유용하다.
이러한 구현예의 변형에 따라서, 하나 이상의 스타틴(들)과 함께 NTZ, TZ 또는 NTZ의 중수소화된 유도체는 항섬유증 화합물, 예컨대 피르페니돈, 또는 닌테다닙, 소라페닙 및 다른 RTKI와 같은 수용체 타이로신 키나제 억제제(RTKI), 또는 안지오텐신 II(AT1) 수용체 차단제, 또는 CTGF 억제제, 또는 MMP2, MMP9, THBS1 또는 세포-표면 인테그린과 같은 잠재성 TGFβ 복합체의 활성화제, TGFβ 수용체 I형(TGFBRI) 또는 II형(TGFBRII) 및 TGFβ, 악티빈, 인히빈, 노달(Nodal), 항-뮐러식 호르몬, GDF 또는 BMP와 같은 이들의 리간드, 보조 공-수용체(또한 III형 수용체로 공지됨)를 포함하는 TGFβ- 및 BMP-활성화된 경로를 방해하기 쉬운 항섬유증 화합물, 또는 조절성 또는 억제성 SMAD 단백질을 포함하는 SMAD-의존성 규범적 경로의 성분, 또는 MAPK 시그날링, TAK1, 로-유사(Rho-like) GTPase 시그날링 경로, 포스파티딜이노시톨-3 키나제/AKT경로, TGFβ-유도된 EMT 과정의 다양한 분지(branch)를 포함하는 SMAD-독립성 또는 비-규범적 경로의 구성원, 또는 Hh 리간드 또는 표적 유전자를 포함하는 규범적 및 비-규범적 고슴도치 시그날링 경로, 또는 WNT의 임의의 구성원, 또는 TGFβ 시그날링에 영향을 미치기 쉬운 노치 경로와 조합될 수 있다.
따라서, 본 발명은 또한 피르페니돈 또는, 닌테다닙, 소라페닙 및 다른 RTKI와 같은 수용체 타이로신 키나제 억제제(RTKI), 또는 안지오텐신 II(AT1) 수용체 차단제, 또는 CTGF 억제제, 또는 MMP2, MMP9, THBS1 또는 세포-표면 인테그린과 같은 잠재성 TGFβ 복합체의 활성화제, TGFβ 수용체 I형(TGFBRI) 또는 II형(TGFBRII) 및 TGFβ, 악티빈, 인히빈, 노달(Nodal), 항-뮐러식 호르몬, GDF 또는 BMP와 같은 이들의 리간드, 보조 공-수용체(또한 III형 수용체로 공지됨)를 포함하는 TGFβ- 및 BMP-활성화된 경로를 방해하기 쉬운 항섬유증 화합물, 또는 조절성 또는 억제성 SMAD 단백질을 포함하는 SMAD-의존성 규범적 경로의 성분, 또는 MAPK 시그날링, TAK1, 로-유사(Rho-like) GTPase 시그날링 경로, 포스파티딜이노시톨-3 키나제/AKT경로, TGFβ-유도된 EMT 과정의 다양한 분지를 포함하는 SMAD-독립성 또는 비-규범적 경로의 구성원, 또는 Hh 리간드 또는 표적 유전자를 포함하는 규범적 및 비-규범적 고슴도치 시그날링 경로, 또는 WNT의 임의의 구성원, 또는 TGFβ 시그날링에 영향을 미치기 쉬운 노치 경로로부터 선택된 공지된 항섬유증 활성을 지닌 적어도 하나의 치료학적으로 활성인 제제와 함께, 성분(i)과 성분(ii)로부터 선택된 화합물을 포함하는, 담즙정체성 또는 섬유증 질환의 치료 방법에서 이의 사용을 위한 약제학적 조성물에 관한 것이다.
다른 특수한 구현예에서, 성분(i) 및 성분(ii)와 또한 조합될 수 있는 분자의 다른 부류는 JAK/STAT 억제제, 또는 다른 소염 및/또는 면역억제제를 포함한다. 이러한 제제의 비배타적인 목록은 글루코코르티코이드, NSAIDS, 사이클로포스파미드, 니트로소우레아, 엽산 유사체, 퓨린 유사체, 피리미딘 유사체, 메토트렉세이트, 아자티오프린, 머캅토퓨린, 시클로스포린, 마이리오신, 타크롤리무스, 시롤리무스, 마이코페놀산 유도체, 핀골리모드 및 다른 스핀고신-1-포스페이트 수용체 조절인자, 전염증성 사이토킨 및 전염증성 사이토킨 수용체로서 이러한 표적에 대한 모노클로날 및/또는 폴리클로날 항체, T-세포 수용체, 인테그린을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 성분(i) 및 성분(ii)와 또한 조합될 수 있는 분자의 다른 부류는 성분(i)과 성분(ii)의 노출 또는 효과를 잠재적으로 향상시킬 수 있는 분자를 포함한다.
다른 구현예에서, 성분 (i) 및 성분 (ii)는 단독의 활성 성분으로서 투여된다.
추가의 구현예에서, 본 발명은 본 발명의 조합을, 특히 성분(i) 및 성분(ii)를 함유하는 약제학적 조성물 또는 부분 키트의 형태로 투여함을 포함하는 담즙정체성 및/또는 섬유증 질환의 치료 방법을 제공한다.
본 발명은 또한 다음의 비-제한적 실시예를 참고로 하여 추가로 설명된다.
실시예
물질 및 방법
화합물을 디메틸 설폭사이드(DMSO, Fluka 제품 번호 41640) 속에 용해하였다. 니타족사니드 (INTERCHIM 제품 번호 RQ550U), 티족사니드 (INTERCHIM 제품 번호 RP253), 및 피타바스타틴 (INTERCHIM 제품 번호 15414), 심바스타틴 (Sigma Aldrich cat #S6196), 플루바스타틴 (Sigma Aldrich 제품 번호 Y0001090), 프라바스타틴 (Selleckchem cat #S3036), 로수바스타틴 (Selleckchem 제품 번호 S2169), 로바스타틴 (Selleckchem 제품 번호 S4223), 아토르바스타틴 (Sigma Aldrich 제품 번호 PZ0001)은 상업적으로 구입하였다.
hHSC 배양
사람 원시 간 성상 세포(hHSC)(Innoprot)를 2% 태아 송아지 혈청(FBS, ScienCell 제품 번호 0010), 1% 페니실린/스트렙토마이신(ScienCell 제품 번호 0503) 및 성상 세포 성장 보충물(SteCGS; ScienCell 제품 번호 5352)이 보충된 STeCM 배지(ScienCell 제품 번호 5301) 속에서 배양하였다. 세포 배양 플라스크를 보다 우수한 부착을 위해 폴리-L 라이신(Sigma 제품 번호 P4707)으로 피복하였다.
조성물의 제조
2개 화합물 조합 매트릭스(NTZ/스타틴 또는 TZ/스타틴)
체크보드 매트릭스(checkerboard matrix)를 채택하였다. NTZ 또는 TZ 및 스타틴 스톡을 DMSO 속에 96-웰 플레이트의 열(스타틴) 및 컬럼(NTZ 또는 TZ)으로 5-점 시리즈로 일련 희석하였다. 6번째 점을 화합물 없이 100% DMSO로 충전시켰다. 후속적으로, 6X6 조합 매트릭스를 모든 단일 제제 농도의 1:1 혼합으로 생성하였다. 각각의 화합물에 대한 5개의 시험 농도를 TGF-β1으로 자극시킨 HSC 모델에서 α-SMA 함량을 측정함으로써 수득된 단일 제제로서 각각의 화합물의 각각의 IC50을 기반으로 선택하였다. 이후에, 2-배 및 4-배 더 높고 더 낮은 농도를 선택하였다.
TGF-β1 자극된 HSC 모델에서 각각 불활성 및 약한 억제제로 밝혀진 프라바스타틴 및 로수바스타틴의 경우, 투여량 범위는 임의로 선택하였다(5개의 투여량은 4μM로부터 출발하여 2배 일련 희석시켰다).
TGF-β1 및 화합물 처리를 사용한 hHSC의 활성화
사람 원시 간 성상 세포(hHSC)(Innoprot)를 표준 조건 하에서 상기 기술된 바와 같이 배양하였다. 세포를 후속적으로 ELISA에 의한 α-SMA의 측정을 위해 96-웰 플레이트내로 2 x 104개의 세포/웰의 밀도에서 플레이팅하였다. 다음날, 세포 배양 배지를 제거하고, 세포를 PBS(Invitrogen 제품 번호 14190)로 세척하였다. hHSC를 혈청-유리된 및 SteCGS-유리된 배지 속에서 24시간 동안 고갈시켰다. NTZ, 스타틴(피타바스타틴, 플루바스타틴, 심바스타틴, 아토르바스타틴, 로바스타틴, 로수바스타틴, 프라바스타틴) 및 각각의 NTZ/스타틴 조합을 사용한 치료를 위해, 및 또한 TZ, 스타틴(피타바스타틴, 심바스타틴, 플루바스타틴, 프라바사틴)을 사용한 치료를 위해, 각각의 조합 TZ/스타틴, 혈청-고갈된 hHSC를 화합물과 함께 1시간 동안 예비항온처리한 후 혈청-유리된 및 SteCGS-유리된 배지 속에서 추가로 24 또는 48시간의 기간 동안 전섬유조직발생 자극 TGFβ1(PeproTech 제품 번호 100-21, 1ng/mL)를 첨가하였다.
치료 말기에, 세포를 PBS (Invitrogen, 제품 번호 14190)로 세척한 후 50 μl의 분해 완충액(CelLyticTM MT 시약; Sigma #C3228)을 첨가하였다. 플레이트를 이후에 30분 동안 빙상에서 플레이트 진탕기를 사용하여 항온처리한 후, -20℃에서 저장하였다.
α-SMA ELISA
α-SMA의 수준을 샌드위치 ELISA를 사용하여 측정하였다. 요약하면, ELISA 플레이트의 웰을 우선 포획 항체(마우스 모노클로날 항-ACTA2, Abnova)로 4℃에서 밤새 피복하였다. PBS + 0,2% 트윈 20으로 3회 세척한 후, PBS +0.2% BSA로 이루어진 차단 용액을 1시간 동안 가한 후 다른 세척 주기를 수행하였다. 세포 분해물을 실온에서 2시간의 기간 동안 포획 항체에 결합시키기 위해 웰로 이전하였다. 세척 과정 후, 검출 항체(바이오티닐화된 마우스 모노클로날 항-ACTA2, Abnova)를 실온에서 2시간 동안 가한 후 3회 세척하였다. 검출을 위해, HRP-접합된 스트렙타비딘(R&D Systems 제품 번호 DY998)을 우선 실온에서 30분 동안 적용시켰다. 세척 후, HRP 기질 TMB (BD, #555214)를 가하고 암실 속에서 실온으로 7분 동안 항온처리하였다. 산화시키는 경우, TMB는 수용성 청색 반응 생성물을 형성하며, 이는 황산(정지 용액)의 첨가 시 황색으로 되어, 분광광도계를 사용하여 450nm에서 밀도의 정밀한 측정을 가능하도록 한다. 발색된 색상은 용해물 속에 존재하는 α-SMA의 양에 정비례한다.
엑세스 오버 블리스(EOB) 방법에 의한 상승 작용의 측정
αSMA ELISA 검정에서 수득된 값을 우선 TGF-β1 대조군에 대해 억제 %로 변환시켰다. 이후에, 분율으로 전환된 이들 억제%(100으로 나눈 퍼센트)를 사용하여, EOB (엑세스 오버 블리스)를 측정함으로써 약물 조합의 상승 효과를 정의하였다. 에측된 블리스 첨가 점수(Bliss additivism score)(E)를 우선 다음 방정식으로 측정하였다:
E=(A+B) - (A × B)
여기서 A 및 B는 주어진 용량에서 NTZ(A) 및 제공된 스타틴(B)의 0 내지 1의 범위에서 분율(fractions)로 전환된 억제%이다. 동일한 투여량에서 조합된 NTZ/스타틴의 블리스 예측(Bliss expectation)과 관찰된 억제 사이의 차이가 '엑세스 오버 블리스(Excess over Bliss)' 점수이다.
- 엑세스 오버 블리스 점수 = 0은 조합 치료가 부가적(독립된 경로 효과에 대해 예측된 것으로서)임을 나타내고;
- 엑세스 오버 블리스 점수 > 0은 부가보다 더 큰 활성(상승 작용)을 나타내며;
- 엑세스 오버 블리스 점수 < 0은 조합이 부가 미만(길항 작용)임을 나타낸다.
각각의 생성물 조합(NTZ + 스타틴)의 경우, 추가의 총 블리스 점수를 모든 EOB를 합하여 계산하였다.
상승작용을 입증하기 위해, 각각의 NTZ/스타틴 조합에 대해 최상의 EOB 점수에 상응하는 실험 값을 막대 그래프로 플롯팅하였다. NTZ/스타틴 또는 TZ/스타틴과 단일 제제 사이에 관찰된 유의성은 스튜던트 t-시험 또는 만-휘트니 순위 합 시험(Mann-Whitney Rank Sum Test)에 의해 Sigma Plot 11.0 소프트웨어를 사용하여 평가하였다[*: p<0.05; **: p<0.01; ***: p<0.001].
CCl4-유도된 간 섬유증에서 NTZ /SIMVA 조합의 상승적 치료 효과의 평가
NTZ/SIMVA 조합의 상승적 치료 효과를 CCl4-유도된 간 손상의 랫트 모델에서 평가하였다.
OFA S;다울리 랫트(Dawley rat)(초기 체중 250 내지 275g)를 이들의 체중에 따라 5개 그룹으로 무작위 분리하고 3주 동안 치료하였다. 랫트에게 올리브 오일(대조군 그룹) 또는 올리브 오일 속에 유화된 CCl4(CCl4:올리브 오일 1:2 v/v, 최종 CCl4 농도: 2ml/kg)을 주당 2회 복강내 주사하였다. 동시에, 올리브 오일을 주사한 그룹을 대조군 식이에 두는 한편, CCl4 주사된 그룹은 대조군 식이 또는 NTZ가 보충된 식이에 두었다. 3개의 요법(regimen)을 NTZ 30 mg/kg/일, SIMVA 10mg/kg/일 또는 NTZ/SIMVA 30/10 mg/kg/일의 노출 각각에 상응하도록 제조하였다. 치료 마지막 날에, 랫트를 6시간 절식 후 희생시켰다. 혈액 샘플을 수집하고 혈청을 생화학적 분석을 위해 분리하였다.
DDC-유도된 담즙정체 모델에서 NTZ /SIMVA 조합의 상승적 치료 효과의 평가:
NTZ/SIMVA 조합의 상승적 치료 효과는 DDC-유도된 담즙정체 모델에서 평가할 것이다.
C57BL/6 마우스에게 8주 동안 0,1% DDC-보충된 식이, 또는 NTZ 100 mg/kg/일, 또는 SIMVA 10mg/kg/일의 노출에 각각 상응하는 0.1% DDC-보충된 식이, 또는 표준 마우스 식이(Ssniff)를 공급할 것이다. 치료 마지막 날에, 마우스를 6시간 절식 후 희생시킬 것이다. 혈액 샘플을 생화학적 분석을 위해 취하고 간을 생화학적 및 조직학적 연구를 위해 신속하게 절개할 것이다.
만성 CCl4-유도된 간 섬유증 모델에서 NTZ/SIMVA 조합의 상승적 치료 효과의 평가
9주령의 C57BL/6 마우스를 대조군 식이 또는 NTZ로 보충된 식이에 6주 동안 둘 것이다. NTZ 및/또는 SIMVA를 함유하는 8개의 식이 요법을 30 또는 100 mg/kg/일에서 NTZ 또는 3 또는 10mg/kg/일에서 SIMVA 또는 NTZ/SIMVA 30/3; 100/3; 30/10,000/10mg/kg/일의 조합 각각의 노출에 각각 상응하도록 제조할 것이다. 동시에, 및 총 6주의 기간 동안, 마우스를 주당 3회로 올리브 오일 또는 비히클 속에 용해된 CCl4로 경구 위관영양법으로 치료할 것이다. CCl4의 양은 0.875 ml/kg으로부터 2.5ml/kg으로 점진적으로 증가시킬 것이다. 치료 마지막 날에, 마우스를 6시간 절식 후 희생시킬 것이다. 혈액 샘플을 수집하고 혈청을 생화학적 분석을 위해 수집할 것이다. 간은 생화학적, 조직학적 및 발현 연구를 위해 신속하게 절개할 것이다.
BDL 모델에서 NTZ/SIMVA 조합의 상승적 치료 효과의 평가
수술적 담즙관 연결을 랫트에서 수행하여 간외 담즙정체 및 후속적으로 간 섬유증을 유도할 것이다. 잠시 회복 기간 후, 동물을 30 또는 100 mg/kg/일에서 NTZ, 3 또는 10 mpk에서 SIMVA, 또는 30/3, 또는 100/10 mg/kg/일에서 NTZ/SIMVA로 1 내지 2주 동안 치료할 것이다. 치료 마지막 날에, 마우스를 6시간 절식 후 희생시킬 것이다. 혈액 샘플을 수집하고 혈청을 생화학적 분석을 위해 분리할 것이다. 간을 생화학적, 조직학적 및 발현 연구를 위해 신속하게 절개할 것이다.
총 담즘 산의 혈장 농도의 측정
총 담즙산(TBA)의 혈장 농도를 Daytona 자동화 분석기(Randox, 제품 번호 BI 3863)용의 적절한 Randox 키트(kit)를 사용하여 측정하였다. 티오-NAD의 존재하에서, 효소 3-α 하이드록시스테로이드 데하이드로게나제(3-α HSD)를 담즙 산에서 3-케토 스테로이드 및 티오-NADH로 전환시켰다. 반응은 가역적이며 3-α HSD는 3-케토스테로이드 및 티오-NADFH-를 담즙산 및 티오-NAD로 전환시킬 수 있다. 과량의 NADH의 존재하에서, 효소 주기는 효율적으로 발생하며 Thio-NADH의 형성 속도는 405nm에서 흡광도의 특이적인 변화를 측정함으로써 측정한다. 결과는 μmol/L로 나타낸다.
결과 및 결론:
분화된 근섬유모세포의 비정상적인 지속성은 많은 섬유증 질환의 특징이다. 간 손상에 이어서, 정지성(quiescent)의 HSC는 (α-SMA)-양성 근섬유모세포로의 차등화에 의해 특징화되는 활성의 과정을 겪는다. 새로운 항섬유증 모델을 찾기 위한 시도에서, FDA-승인된 약물의 라이브러리를 전섬유 조직 발생 사이토킨 TGFβ1으로 활성화된 사람 HSC의 모델에서 표현형적으로 스크리닝하였다. 섬유증 병변의 특징인, α-SMA의 수준을 사용하여 섬유증 과정을 방해하는 약물의 효능을 평가하였다. 스크리닝 캠페인은 니타족사니드(NTZ)의 확인을 이끌었으며, 이는 TGFβ-유도된 HSC에서 α-SMA의 수준을 투여량-의존적으로 감소시켰다. 전체적으로, NTZ는 0.1 내지 3μM를 포함하는 IC50을 나타내었다(도 1a).
NTZ가 이의 활성의 대사산물 티족사니드(TZ)로 신속하게 가수분해되는 것을 알려져 있으므로(Broekhuysen, Stockis et al., 2000), 이러한 대사산물도 또한 HBS 속에서의 항섬유증 활성에 대해 평가되었다. TZ는 0.1 내지 3μM을 포함하는 IC50을 나타내었다(도 1b). 흥미롭게도, 모두가 아닌 특정 스타틴은 또한 스크리닝 캠페인 동안에 확인되었다. TGFβ-유도된 HSC 모델에서 수행된 투여량-반응 분석(도 2)은 7개의 시험된 스타틴이 이들의 항섬유증 특성과 관련하여 동등하지 않음을 나타낸다.
전형적으로, 가장 강력한 항섬유증 스타틴인, 피타바스타틴(도 2a) 및 플루바스타틴(도 2b)은 1μM 미만의 IC50을 나타낸 반면 심바스타틴(도 2c), 아토르바스타틴(도 2d), 로바스타틴(도 2e)의 IC50 값은 일반적으로 1 내지 3μM 사이에 포함되었다. 로수바스타틴(도 2f)은 유의적인 항섬유증 활성을 나타내었지만 최고 투여량에서만 이었고, 및 프라바스타틴(도 2c)은 시험된 투여량에서 유일하게 불활성임이 발견되었다. 다양한 스타틴 계열 구성원의 항섬유증 특성이 이들의 지질 저하 능력과 관련된 것으로 여겨지지 않는다는 것은 의미가 있다. 예를 들면, HMG_CoA 리덕타제 억제(IC50 = 5.4 nM; (Mckenney, 2003))에 대한 가장 강력한 스타틴으로 고려되는, 로수바스타틴은 약한 항섬유증 특성을 나타내었다.
스타틴과 NTZ 또는 TZ의 조합이 상승 방식으로 섬유증을 감소시킬 수 있는지를 평가하기 위하여, 조합 매트릭스 실험을 TGFβ-유도된 HSC에서 수행하였다. 요약하면, NTZ 또는 TZ 및 스타틴 용액을 스타틴/NTZ 또는 스타틴/TZ 비의 큰 패널을 포함하는 36개 조합의 매트릭스를 생성하는 체크보드 양식으로 일련 희석시켰다. 이들의 상승작용을 기준으로 상이한 스타틴을 순위매기기 위하여, 각각의 스타틴에 대해 수득된 EOB 점수의 합을 또한 계산하였다. 이들 실험은 NTZ가 활성화된 HSC에서α-SMA 생산을 감소시키는데 모든 스타틴과 상승작용할 수 있지만 동일한 효능(potency)를 나타내지는 않았다.
가장 우수한 상승작용은 피타바스타틴(337의 총 EOB 점수)에 이은, 심바스타틴(255의 총 EOB 점수), 플루바스타틴(141의 총 EOB 점수), 로바스타틴(91의 총 EOB 점수), 프라바스타틴(88의 총 EOB 점수), 및 아토르바스타틴(73의 총 EOB 점수)와 조합된 NTZ를 사용하여 수득되었다(도 4b, 5b, 6b, 7b 및 8b). 양성 OEB 점수는 몇몇의 NTZ/ROSU 비의 경우에만 획득(데이타는 미기재)되었는데 이는 상승작용을 나타내고, 하지만, 다른 NTZ/스타틴 조합에 상대적으로는, 더 약하였다. 상승작용을 입증하기 위하여, 각각의 NTZ/스타틴 조합에 대한 높은 EOB 점수에 상응하는 실험값을 막대 그래프로 플롯팅하였다(도 4c, 5c, 6c, 7c, 및 8c).
이들 그래프는 NTZ와 피타바스타틴, 심바스타틴, 플루바스타틴, 로바스타틴, 아토르바스타틴 및 프라바스타틴의 조합이 최고 단일 제제(NTZ 또는 스타틴)와 비교하여 통계적으로 유의적인 우수한 항섬유증 효과를 나타냄을 보여준다. 가장 인상깊은 예는 피타바스타틴, 심바스타틴, 또는 플루바스타틴에서 나타나며, 여기서 단일 제제는 준최적 투여량에서 약한 항섬유증 활성(~10 내지 20% 억제)을 제공하나, NTZ와 조합되는 경우, 60 내지 70%의 정도로의 α-SMA의 억제에 도달한다. NTZ의 활성 대사산물인, 티족사니드가 또한 NTZ와 가장 우수한 상승작용을 나타낸 스타틴, 즉, 피타바스타틴, 심바스타틴 및 플루바스타틴과 함께 평가되었다. NTZ를 사용하여 관찰된 바와 같이, TZ 대사산물은 또한 이들 3개의 스타틴과 상승 작용하였다(플루바스타틴을 사용한 예는 도 9에 나타낸다).
항섬유증 특성 외에, 30 mg/kg/일에서의 NTZ와 10 mg/kg/일에서 심바스타틴의 조합은 CCl4-유도된 간 손상의 모델에서 순환하는 답즙 산 수준의 변경의 발생을 방지하도록 상승 작용함이 밝혀졌다(도 10). 결론적으로, 본 출원인은 화학식 I의 화합물과 스타틴의 조합에 대한 예측하지 못한 항담즙정체 및 항섬유증 활성을 발견하였다. 이들 결과는 화학식 I의 화합물과 스타틴의 조합이 상승적일 수 있으며 다수 유형의 담즙정체성 장애 및 섬유증 질환에서 치료학적 이점을 제공할 수 있음을 시사한다.
참고 문헌
Broekhuysen, J., A. Stockis, et al. (2000). "Nitazoxanide: pharmacokinetics and metabolism in man." Int J Clin Pharmacol Ther 38(8): 387-394.
Chong, L. W., Y. C. Hsu, et al. (2015). "Fluvastatin attenuates hepatic steatosis-induced fibrogenesis in rats through inhibiting paracrine effect of hepatocyte on hepatic stellate cells." BMC Gastroenterol 15: 22.
de Carvalho, L. P. S., C. M. Darby, et al. (2011). "Nitazoxanide disrupts membrane potential and intrabacterial pH homeostasis of Mycobacterium tuberculosis." ACS Med. Chem. Lett. 2(Copyright (C) 2015 American Chemical Society (ACS). All Rights Reserved.): 849-854.
Di Santo, N. and J. Ehrisman (2014). "A functional perspective of nitazoxanide as a potential anticancer drug." Mutat. Res., Fundam. Mol. Mech. Mutagen. 768(Copyright (C) 2015 American Chemical Society (ACS). All Rights Reserved.): 16-21.
Dubreuil, L., I. Houcke, et al. (1996). "In vitro evaluation of activities of nitazoxanide and tizoxanide against anaerobes and aerobic organisms." Antimicrob. Agents Chemother. 40(Copyright (C) 2015 American Chemical Society (ACS). All Rights Reserved.): 2266-2270.
Finegold, S. M., D. Molitoris, et al. (2009). "Study of the in vitro activities of rifaximin and comparator agents against 536 anaerobic intestinal bacteria from the perspective of potential utility in pathology involving bowel flora." Antimicrob. Agents Chemother. 53(Copyright (C) 2015 American Chemical Society (ACS). All Rights Reserved.): 281-286.
Fox, L. M. and L. D. Saravolatz (2005). "Nitazoxanide: a new thiazolide antiparasitic agent." Clin. Infect. Dis. 40(Copyright (C) 2015 American Chemical Society (ACS). All Rights Reserved.): 1173-1180.
Hemphill, A., J. Mueller, et al. (2006). "Nitazoxanide, a broad-spectrum thiazolide anti-infective agent for the treatment of gastrointestinal infections." Expert Opin. Pharmacother. 7(Copyright (C) 2015 American Chemical Society (ACS). All Rights Reserved.): 953-964.
Hoffman, P. S., G. Sisson, et al. (2007). "Antiparasitic drug nitazoxanide inhibits the pyruvate oxidoreductases of Helicobacter pylori, selected anaerobic bacteria and parasites, and Campylobacter jejuni." Antimicrob. Agents Chemother. 51(Copyright (C) 2015 American Chemical Society (ACS). All Rights Reserved.): 868-876.
Ji, H., H. Tang, et al. (2014). "Rho/Rock cross-talks with transforming growth factor-beta/Smad pathway participates in lung fibroblast-myofibroblast differentiation." Biomed Rep 2(6): 787-792.
Kavalipati, N., J. Shah, et al. (2015). "Pleiotropic effects of statins." Indian J Endocrinol Metab 19(5): 554-562.
Kendall, R. T. and C. A. Feghali-Bostwick (2014). "Fibroblasts in fibrosis: novel roles and mediators." Front Pharmacol 5: 123.
Leask, A. (2007). "TGFbeta, cardiac fibroblasts, and the fibrotic response." Cardiovasc Res 74(2): 207-212.
Leask, A. and D. J. Abraham (2004). "TGF-beta signaling and the fibrotic response." FASEB J 18(7): 816-827.
Marrone, G., R. Maeso-Diaz, et al. (2015). "KLF2 exerts antifibrotic and vasoprotective effects in cirrhotic rat livers: behind the molecular mechanisms of statins." Gut 64(9): 1434-1443.
McFarlane, S. I., R. Muniyappa, et al. (2002). "Clinical review 145: Pleiotropic effects of statins: lipid reduction and beyond." J Clin Endocrinol Metab 87(4): 1451-1458.
McKenney, J. M. (2003). "Pharmacologic characteristics of statins." Clin Cardiol 26(4 Suppl 3): III32-38.
Megraudd, F., A. Occhialini, et al. (1998). "Nitazoxanide, a potential drug for eradication of Helicobacter pylori with no cross-resistance to metronidazole." Antimicrob. Agents Chemother. 42(Copyright (C) 2015 American Chemical Society (ACS). All Rights Reserved.): 2836-2840.
Miyaki, T., S. Nojiri, et al. (2011). "Pitavastatin inhibits hepatic steatosis and fibrosis in non-alcoholic steatohepatitis model rats." Hepatol Res 41(4): 375-385.
Pankuch, G. A. and P. C. Appelbaum (2006). "Activities of tizoxanide and nitazoxanide compared to those of five other thiazolides and three other agents against anaerobic species." Antimicrob. Agents Chemother. 50(Copyright (C) 2015 American Chemical Society (ACS). All Rights Reserved.): 1112-1117.
Rombouts, K., E. Kisanga, et al. (2003). "Effect of HMG-CoA reductase inhibitors on proliferation and protein synthesis by rat hepatic stellate cells." J Hepatol 38(5): 564-572.
Rosenbloom, J., F. A. Mendoza, et al. (2013). "Strategies for anti-fibrotic therapies." Biochim Biophys Acta 1832(7): 1088-1103.
Rossignol, J.-F. (2014). "Nitazoxanide: A first-in-class broad-spectrum antiviral agent." Antiviral Res. 110(Copyright (C) 2015 American Chemical Society (ACS). All Rights Reserved.): 94-103.
Rossignol, J. F. and R. Cavier (1975). 2-Benzamido-5-nitrothiazoles, S.P.R.L. Phavic, Belg. . 11 pp.
Rossignol, J. F. and H. Maisonneuve (1984). "Nitazoxanide in the treatment of Taenia saginata and Hymenolepis nana infections." Am J Trop Med Hyg 33(Copyright (C) 2015 U.S. National Library of Medicine.): 511-512.
Wang, C. Y., P. Y. Liu, et al. (2008). "Pleiotropic effects of statin therapy: molecular mechanisms and clinical results." Trends Mol Med 14(1): 37-44.
Wang, W., C. Zhao, et al. (2013). "Simvastatin ameliorates liver fibrosis via mediating nitric oxide synthase in rats with non-alcoholic steatohepatitis-related liver fibrosis." PLoS One 8(10): e76538.
Watts, K. L., E. M. Sampson, et al. (2005). "Simvastatin inhibits growth factor expression and modulates profibrogenic markers in lung fibroblasts." Am J Respir Cell Mol Biol 32(4): 290-300.
Yeganeh, B., E. Wiechec, et al. (2014). "Targeting the mevalonate cascade as a new therapeutic approach in heart disease, cancer and pulmonary disease." Pharmacol Ther 143(1): 87-110.
Zhou, Q. and J. K. Liao (2009). "Statins and cardiovascular diseases: from cholesterol lowering to pleiotropy." Curr Pharm Des 15(5): 467-478.
Zhu, B., A. Q. Ma, et al. (2013). "Atorvastatin attenuates bleomycin-induced pulmonary fibrosis via suppressing iNOS expression and the CTGF (CCN2)/ERK signaling pathway." Int J Mol Sci 14(12): 24476-24491.

Claims (13)

  1. 상승적 조합(synergistic combination)으로,
    (i) 니타족사니드 (NTZ), NTZ의 중수소화된 유도체 (NTZ-D), 티족사니드 (TZ) 또는 티족사니드 글루쿠로나이드 (TZG), 또는 NTZ, NTZ-D, TZ 또는 TZG의 약제학적으로 허용되는 염; 및
    (ii) 적어도 하나의 스타틴,의 상승적 조합.
  2. 청구항 1에 있어서,
    약제학적 조성물의 형태 또는 부분 키트(kit-of-parts)의 형태인 상승적 조합.
  3. 청구항 1 또는 청구항 2에 있어서,
    상기 적어도 하나의 특이적인 스타틴이 메바스타틴, 세리바스타틴, 피타바스타틴, 플루바스타틴, 심바스타틴, 아토르바스타틴, 로바스타틴, 로수바스타틴, 및 프라바스타틴으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 상승적 조합.
  4. 청구항 3에 있어서,
    상기 스타틴이 피타바스타틴, 플루바스타틴 및 심바스타틴으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는, 상승적 조합.
  5. 청구항 1 내지 청구항 4 중 어느 한 항에 있어서,
    피르페니돈, 또는 닌테다닙, 소라페닙 및 다른 RTKI와 같은 수용체 타이로신 키나제 억제제(RTKI), 또는 안지오텐신 II(AT1) 수용체 차단제, 또는 CTGF 억제제, 또는 MMP2, MMP9, THBS1 또는 세포-표면 인테그린과 같은 잠재성 TGFβ 복합체의 활성화제, TGFβ 수용체 I형(TGFBRI) 또는 II형(TGFBRII) 및 TGFβ, 악티빈, 인히빈, 노달(Nodal), 항-뮐러식 호르몬(anti-M
    Figure pct00007
    llerian hormone), GDF 또는 BMP와 같은 이들의 리간드, 보조 공-수용체(또한 III형 수용체로 공지됨)를 포함하는 TGFβ- 및 BMP-활성화된 경로를 방해하기 쉬운 항섬유증 화합물, 또는 조절성 또는 억제성 SMAD 단백질을 포함하는 SMAD-의존성 규범적 경로(SMAD-dependent canonical pathway)의 성분, 또는 MAPK 시그날링, TAK1, 로-유사(Rho-like) GTPase 시그날링 경로, 포스파티딜이노시톨-3 키나제/AKT 경로, TGFβ-유도된 EMT 과정의 다양한 분지를 포함하는 SMAD-독립성 또는 비-규범적 경로(non-canonical pathway)의 구성원, 또는 Hh 리간드 또는 표적 유전자를 포함하는 규범적 및 비-규범적 고슴도치 시그날링 경로(non-canonical Hedgehog signaling pathway), 또는 WNT의 임의의 구성원, 또는 TGFβ 시그날링에 영향을 미치기 쉬운 노치 경로로부터 선택된 공지된 항섬유증 활성을 지닌 적어도 하나의 치료학적으로 활성인 제제를 추가로 포함하는 상승적 조합.
  6. 청구항 1 내지 청구항 5 중 어느 한 항에 있어서,
    JAK/STAT 억제제 및 다른 소염제 및/또는 면역억제제로부터 선택된 적어도 하나의 치료학적으로 활성인 제제를 추가로 포함하는 상승적 조합.
  7. 청구항 6에 있어서,
    상기 치료학적으로 활성인 제제가 글루코코르티코이드, NSAIDS, 사이클로포스파미드, 니트로소우레아, 엽산 유사체, 퓨린 유사체, 피리미딘 유사체, 메토트렉세이트, 아자티오프린, 머캅토퓨린, 시클로스포린, 마이리오신, 타크롤리무스, 시롤리무스, 마이코페놀산 유도체, 핀골리모드 및 다른 스핀고신-1-포스페이트 수용체 조절인자, 전염증성(proinflammatory) 사이토킨 및 전염증성 사이토킨 수용체와 같은 표적에 대한 모노클로날 및/또는 폴리클로날 항체, T-세포 수용체 및 인테그린으로부터 선택되는, 상승적 조합.
  8. 청구항 1 내지 청구항 7 중 어느 한 항에 있어서,
    의약으로서 사용하기 위한 상승적 조합.
  9. 청구항 1 내지 청구항 7 중 어느 한 항에 있어서,
    담즙정체성 장애(cholestatic disorder) 또는 섬유증 장애(fibrotic disorder)의 치료 방법에서 사용하기 위한, 상승적 조합.
  10. 청구항 9에 있어서,
    상기 섬유증 장애(fibrotic disorder)가 간, 위, 신장, 피부, 상피, 내피, 근육, 인대, 연골, 심장, 췌장, 폐, 자궁, 신경계, 고환, 음경, 난소, 부신, 동맥, 정맥, 결장, 장(예컨대, 소장), 담즙관, 연조직(예컨대, 세로칸 또는 후복막강), 골수, 관절, 눈, 및 위 섬유증으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는, 상승적 조합.
  11. 청구항 9 또는 청구항 10에 있어서,
    상기 섬유증 장애가 간, 위, 폐, 심장, 신장, 근육, 피부, 연조직, 골수, 장, 및 관절 섬유증으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 상승적 조합.
  12. 청구항 9 내지 청구항 11 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 섬유증 장애가 비-알코올성 지방간염(NASH), 폐 섬유증, 특발성 폐 섬유증, 피부 섬유증, 눈 섬유증, 심근내막 섬유증, 세로칸 섬유증, 골수 섬유증, 후복막 섬유증, 진행성 거대 섬유증, 증식성 섬유증, 신생물 섬유증, 폐 섬유증에 이은 만성 염증성 기도 질환(COPD, 천식, 폐기종, 흡연자의 폐, 결핵), 알코올 또는 약물 유도된 간 섬유증, 간 경화증, 감염-유도된 간 섬유증, 방사선 또는 화학치료제-유도된 섬유증, 신성 전신 섬유증(nephrogenic systemic fibrosis), 크론병(Crohn's disease), 궤양성 결장염, 켈로이드(keloid), 오래된 심근 경색, 피부경화증/전신경화증, 관절경화증(arthrofibrosis), 유착 관절낭염의 일부 형태, 원발성 경화성 담관염(PSC), 원발성 담즙성 담관염(Primary Biliary Cholangitis: PBC)과 같은 만성 섬유성 콜란지오패티(chronic fibrosing cholangiopathy), 담도 폐쇄증, 가족성 간내 담즙정제증 3형(PFIC3), 착상주변 섬유증 및 석면침착증으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는, 상승적 조합.
  13. 청구항 9 내지 청구항 11 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 담즙정체성 장애가 원발성 담즙성 담관염(primary biliary cholangitis: PBC), 원발성 경화성 담관염(PSC), 임산부의 간내 담즙정체, 진행성 가족성 간내 담즙정제증, 담도 폐쇄증, 담석증, 감염성 담관염, 랑게르한스 세포 조직구증(Langerhans cell histiocytosis)과 관련된 담관염, 알라질 증후군(Alagille syndrome), 비증후군성 관 결핍(Nonsyndromic ductal paucity), 약물-유도된 담즙 정체, 및 전체 비경구 영양-관련 담즙 정체로 이루어진 그룹 중에서 선택되는, 상승적 조합.
KR1020187032696A 2016-04-11 2017-03-13 담즙정체성 및 섬유증 질환의 치료 방법 KR102410951B1 (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP16305427.3 2016-04-11
EP16305427 2016-04-11
PCT/EP2017/055880 WO2017178173A1 (en) 2016-04-11 2017-03-13 Methods of treatment for cholestatic and fibrotic diseases

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20180129936A true KR20180129936A (ko) 2018-12-05
KR102410951B1 KR102410951B1 (ko) 2022-06-20

Family

ID=55755537

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020187032696A KR102410951B1 (ko) 2016-04-11 2017-03-13 담즙정체성 및 섬유증 질환의 치료 방법

Country Status (16)

Country Link
US (1) US20170290813A1 (ko)
EP (1) EP3442518B1 (ko)
JP (1) JP7134092B2 (ko)
KR (1) KR102410951B1 (ko)
CN (1) CN109152760B (ko)
AU (1) AU2017249603B2 (ko)
BR (1) BR112018069682A2 (ko)
CA (1) CA3019205A1 (ko)
CO (1) CO2018012180A2 (ko)
EA (1) EA201892297A1 (ko)
IL (1) IL262186B2 (ko)
MX (1) MX2018012285A (ko)
PH (1) PH12018502161A1 (ko)
SG (1) SG11201808540SA (ko)
WO (1) WO2017178173A1 (ko)
ZA (1) ZA201807390B (ko)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP6894923B2 (ja) 2016-04-11 2021-06-30 ジェンフィＧｅｎｆｉｔ 胆汁うっ滞性及び線維性の疾患の処置方法
WO2018154081A1 (en) * 2017-02-24 2018-08-30 Genfit Pharmaceutical compositions for combination therapy
EP3595656A1 (en) * 2017-03-13 2020-01-22 Genfit Pharmaceutical compositions for combination therapy
CN110257497B (zh) * 2019-02-22 2020-11-24 无锡市妇幼保健院 血清/血浆LncRNA标志物ENST00000449605.1及其应用
WO2023122869A1 (zh) * 2021-12-27 2023-07-06 浙江海正药业股份有限公司 瑞舒伐他汀钙在制备用于预防和治疗胆汁淤积及肝纤维化的药物中的用途

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2008040967A1 (en) * 2006-10-03 2008-04-10 Keele University Treatment of fibrosis
WO2013082469A2 (en) * 2011-12-02 2013-06-06 University Of Vermont And State Agricultural College Methods and compositions for treating infections
US20160008320A1 (en) * 2014-07-14 2016-01-14 University Of Washington Statins in the treatment of muscular dystrophies and myopathies

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2008124384A2 (en) * 2007-04-03 2008-10-16 Aegerion Pharmaceuticals, Inc. Combinations of mtp inhibitors with cholesterol absorption inhibitors or interferon for treating hepatitis c
US20110177999A1 (en) * 2007-08-09 2011-07-21 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Therapeutic Combinations Useful in Treating CFTR Related Diseases
EA029018B1 (ru) * 2009-02-13 2018-01-31 Ромарк Лабораториз Л.С. Фармацевтические составы нитазоксанида с контролируемым высвобождением

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2008040967A1 (en) * 2006-10-03 2008-04-10 Keele University Treatment of fibrosis
WO2013082469A2 (en) * 2011-12-02 2013-06-06 University Of Vermont And State Agricultural College Methods and compositions for treating infections
US20160008320A1 (en) * 2014-07-14 2016-01-14 University Of Washington Statins in the treatment of muscular dystrophies and myopathies

Also Published As

Publication number Publication date
WO2017178173A1 (en) 2017-10-19
JP2019513760A (ja) 2019-05-30
BR112018069682A2 (pt) 2019-01-29
SG11201808540SA (en) 2018-10-30
CO2018012180A2 (es) 2019-08-20
ZA201807390B (en) 2019-08-28
PH12018502161A1 (en) 2019-07-15
MX2018012285A (es) 2019-02-07
CA3019205A1 (en) 2017-10-19
EA201892297A1 (ru) 2019-07-31
IL262186B1 (en) 2023-06-01
KR102410951B1 (ko) 2022-06-20
US20170290813A1 (en) 2017-10-12
EP3442518B1 (en) 2024-01-17
JP7134092B2 (ja) 2022-09-09
EP3442518A1 (en) 2019-02-20
CN109152760A (zh) 2019-01-04
AU2017249603A1 (en) 2018-10-18
IL262186A (en) 2018-11-29
IL262186B2 (en) 2023-10-01
AU2017249603B2 (en) 2022-12-01
CN109152760B (zh) 2022-09-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR102410951B1 (ko) 담즙정체성 및 섬유증 질환의 치료 방법
KR102431257B1 (ko) 담즙정체성 및 섬유증 질환의 치료 방법
US9849104B2 (en) Treatment of NASH with gemcabene
US20220323422A1 (en) Methods of treatment for cholestatic and fibrotic diseases
US10653678B2 (en) Methods of treatment for cholestatic and fibrotic diseases
KR102205368B1 (ko) Fxr 작용제의 신규 요법
US10905680B2 (en) Methods of treatment for cholestatic and fibrotic diseases
KR102633249B1 (ko) 조합 치료를 위한 약학 조성물
EA043787B1 (ru) Применение комбинации нитазоксанида или тизоксанида со статином для лечения холестатических и фибротических нарушений
Moroni et al. Anti-inflammatory (colchicine) treatment for secondary prevention in coronary artery disease: a milestone has been met
EA044654B1 (ru) Фармацевтический комбинированный продукт и его применение
NZ785186A (en) Methods of treatment for cholestatic and fibrotic diseases
EA041166B1 (ru) Фармацевтические композиции для комбинированной терапии

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
AMND Amendment
E601 Decision to refuse application
AMND Amendment
E90F Notification of reason for final refusal
AMND Amendment
X701 Decision to grant (after re-examination)
GRNT Written decision to grant