KR20180098508A - 무 유전자원 분석을 위한 분자표지 및 이의 용도 - Google Patents

Abstract

본 발명은 무의 종(species) 또는 계통을 검출할 수 있는 분자마커, 분자마커 증폭용 프라이머 세트 및 무 작물 시료로부터 게놈 DNA를 분리하는 단계; 상기 분리된 게놈 DNA를 주형으로 하고, 제2항의 프라이머 세트를 이용하여 PCR을 수행하는 단계; 및 상기 증폭된 산물을 전기영동하여 증폭 유무 및 증폭 산물의 크기(size)를 분석하는 단계를 포함하는, 무의 종(species) 또는 계통 식별 방법에 관한 것이다. 본 발명에서 규명한 분자마커 및 이를 증폭할 수 있는 프라이머 세트는 다양한 무 유전자원을 계통별, 종별로 용이하고 신속하게 구분할 수 있으며 유전체 구조를 분석할 수 있어 고품질의 무 개량품종 개발, 농수산물의 수출입 원산지 판별, 무 유전제 보유 및 유지 등에 유용하게 활용할 수 있는 효과가 있다.

Description

무 유전자원 분석을 위한 분자표지 및 이의 용도{Molecular Markers for Selecting radish genetic resources and use thereof}

본 발명은 무의 다양한 유전체를 계통 분류할 수 있고, 다른 품종과 계통을 구분할 수 있는 무 유전자원 분석을 위한 분자표지 및 이의 용도에 관한 것이다.

분자 유전학의 발전과 대량 염기서열 분석 기술의 발전에 따라 식물체를 대상으로 한 특정 분자표지의 연구가 가속화되고 있다. 이로서 식물종의 다양성을 유전체 수준에서 구별할 수 있게 되었으며, 분자표지는 여러 가지 유전자원을 구분하고 또는 이를 보존하기 위한 중요한 평가 수단으로도 이용되어 지고 있다.

한편, 배추과에 속하는 무는 아시아에서 널리 재배되는 뿌리 채소 작물로서, 형태적으로 다양한 뿌리 모양을 가지며, 생리적으로는 개화시기, 영양성분 등의 차이가 다양하여 보다 품질이 우수한 무를 재배 및 생산하기 위한 유전자원의 확보에 연구가 집중되고 있다. 특히 무는 벼, 배추와 같은 주요 작물과 상응되는 식량 필수 작물이며, 따라서 경제적으로도 중요한 작물이므로, 여러 가지의 분자표지 발굴에 대한 연구가 보고되고 있다.

그러나 현재까지 개발된 생물의 종 및 품종을 식별하는 방법은 형태적 또는 이화학적 방법이 사용되어 왔으나, 상기 배추과에 속하는 무를 포함하는 작물은 염색체 구성이 복잡하여 분속지표가 확립되기 어렵기 때문에 거의 주관적으로 품종 및 종 판별이 이루어지고 있는 실정에 있다.

또한 개발된 방법의 경우, AFLP, RAPD 또는 EST 염기서열에 기반을 둔 SNP 또는 SSR 등의 분자표지들이 대부분이었다. 그러나 이렇게 개발된 분자표지는 노동력과 비용 및 시간이 많이 소요될 뿐만 아니라, 재현성이 떨어지는 단점이 있어, 다양한 무 유전자원을 분류하고 유전체를 분석하기에는 부적합할 뿐만 아니라, 무 유전체의 일부 EST 서열을 기반으로 하기에 충분한 정보를 제공하기에는 부적합하다는 문제점이 있다.

이에 본 발명자들은 무 표준유전체를 기반으로 한 PCR-기반의 분자표지를 개발함으로써 다양한 무 유전자원의 유전체 구조를 분석할 수 있고, 효율적으로 다양한 유전체를 보유 및 유지하는데 이용될 수 있음을 확인하였다.

한국공개특허 제2013-022328호

본 발명의 목적은 무의 종(species) 또는 계통 검출용 분자마커를 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 본 발명의 무의 종(species) 또는 계통 검출용분자마커를 검출 및 증폭할 수 있는 프라이머 세트를 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 본 발명에 따른 프라이머 세트를 이용하여 무의 종(species) 또는 계통 식별 방법을 제공하는 것이다.

상기와 같은 본 발명의 목적을 달성하기 위해서, 본 발명은 서열번호 1 내지 68의 염기서열로 이루어진 군 중에서 선택되는 어느 하나의 염기서열을 포함하는 무의 종(species) 또는 계통 검출용 분자마커를 제공한다.

또한, 본 발명은 본 발명의 분자마커를 검출 및 증폭할 수 있는 프라이머 세트를 제공한다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 프라이머 세트는 GC 함량이 40~60%이고, 56~60℃의 온도에서 PCR 수행할 수 있다.

나아가, 본 발명은, 무 작물 시료로부터 게놈 DNA를 분리하는 단계; 상기 분리된 게놈 DNA를 주형으로 하고, 본 발명의 프라이머 세트를 이용하여 PCR을 수행하는 단계; 및 상기 증폭된 산물을 전기영동하여 증폭 유무 및 증폭 산물의 크기(size)를 분석하는 단계를 포함하는, 무의 종(species) 또는 계통 식별 방법을 제공한다.

본 발명은 무의 종(species) 또는 계통을 검출할 수 있는 분자마커, 분자마커 증폭용 프라이머 세트 및 무 작물 시료로부터 게놈 DNA를 분리하는 단계; 상기 분리된 게놈 DNA를 주형으로 하고, 본 발명의 프라이머 세트를 이용하여 PCR을 수행하는 단계; 및 상기 증폭된 산물을 전기영동하여 증폭 유무 및 증폭 산물의 크기(size)를 분석하는 단계를 포함하는, 무의 종(species) 또는 계통 식별 방법에 관한 것이다. 본 발명에서 규명한 분자마커 및 이를 증폭할 수 있는 프라이머 세트는 다양한 무 유전자원을 계통별, 종별로 용이하고 신속하게 구분할 수 있으며 유전체 구조를 분석할 수 있어 고품질의 무 개량품종 개발, 농수산물의 수출입 원산지 판별, 무 유전제 보유 및 유지 등에 유용하게 활용할 수 있는 효과가 있다.

도 1은 본 발명에서 규명한 분자마커를 무 14개의 계통에 적용하여 PCR 분석을 통해 증폭 여부를 전기영동하여 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 2는 본 발명에서 규명한 분자마커를 이용하여 14개 계통의 무의 종류를 계통 분류한 것을 나타낸 것이다.

본 발명자들은 무의 종 또는 계통을 PCR 기반으로 식별할 수 있는 분자표지를 개발한 점에 특징이 있다.

일반적으로 식물 품종을 식별하는 방법은 크게 재배시험을 통한 형태적 특성 검정 방법, 종 또는 품종 간 동위효소의 차이를 통한 검정 방법 및 DNA에 기초한 분자 마커를 이용한 검정 방법으로 나뉜다. 이 중 분자 마커를 이용한 검정 방법은 작물의 유전·육종연구에서 유전적 다양성과 계통 유연 관계 분석 그리고 식물 유전자원의 보존과 관리 등에 유용한 정보를 제공하고 있으며(Smith et al., 1997. Theor. Appl. Genet. 95: 163-173), 표현형에 근거한 전통적인 식별 방법에 비해 재배 환경 및 작물의 생장 단계에 영향을 받지 않아 객관적이며 재현성 또한 높다는 장점을 가진다.

한편, 식량의 주요 작물이라고 할 수 있는 무는 아직까지 계통분류학이 완성되지 않고 있고 원산지, 품종 등 유전자원의 내역을 신속히 구별할 수 있는 분자마커가 부재한 상황이다.

이러한 점에서 본 발명자들은 DNA에 기초한 PCR과 같은 간편하고 신속한 방법으로 무의 다양한 품종, 계통, 원산지 등을 구분할 수 있는 분자마커를 발굴하였다.

보다 구체적으로, 본 발명자들은 무의 고정계통인 WK10039와 WK10024를 대상으로 다형성 지역을 탐색하였는데, 이들 고정계통의 표준유전체 염기서열 매핑 시, 서열간의 삭제 또는 삽입(InDel)이 나타나는 지역을 탐색하였고 서열변이를 증명하는 NGS 서열 read가 7개 이상이며, WK10039와 WK10024 간의 InDel 길이차이가 10bp이상인 지역만을 선별하였다.

이는 InDel 길이차이가 너무 짧은 지역을 선별하게 되면 종 또는 계통간 구분이 PCR 방법으로 용이하지 않기 때문이다.

이러한 탐색 방법을 통해, 하기 표에 기재된 최종 68개의 분자마커를 발굴하였다. 또한, 이들 마커를 대상으로 임의로 265 InDel 좌위에 대해 Primer3 프로그램을 이용하여 amplicon 크기 100~300 bp, 최적 길이 20 bp, Tm 56~60℃, GC 함량 40-60%의 조건으로 분자마커 증폭 또는 검출용 프라이머를 디자인하였다. 구체적인 프라이머 세트는 하기 표 1 내지 표 2에 나타낸 바와 같이, 각 연번에 따른 분자마커를 각각 증폭할 수 있는 프라이머 세트를 고안하였다. 이들 68개 분자마커를 증폭할 수 있는 136개로 구성되는 68쌍 프라이머 세트는 한번의 PCR 수행이 가능하며, 다양한 종류의 무를 종류별 계통별 구분이 가능하다.

그러므로 본 발명은 무의 종(species) 또는 계통 검출용 분자마커를 제공할 수 있으며, 바람직하게 상기 분자마커는 서열번호 1 내지 68개의 염기서열로 이루어진 군 중에서 선택되는 어느 하나의 염기서열로 이루어진 분자마커일 수 있다.

또한, 본 발명은 본 발명의 무의 종(species) 또는 계통 검출용 분자마커를 검출 및 증폭할 수 있는 프라이머 세트를 제공할 수 있는데, 상기 프라이머 세트는 상기 표 1 내지 표 2에 기재된 바와 같은 염기서열로 이루어진 것일 수 있다.

본 발명에서 용어, "프라이머 세트"란 상보적인 주형과 염기쌍(base pair)을 형성할 수 있고 템플레이트 가닥 복사를 위한 시작 지점으로 기능을 하는 짧은 핵산 서열을 의미한다.

또한, 본 발명에 따른 상기 분자마커는 서열번호 1 내지 68로 이루어진 군 중에서 선택되는 어느 하나의 염기서열 또는 상기 염기서열의 변이체를 포함할 수 있다. 구체적으로, 상기 분자마커에 해당되는 염기서열과 70% 이상, 바람직하게는 80% 이상, 더욱 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 가지는 염기서열을 포함할 수 있다. 염기서열(폴리뉴클레오티드)에 대한 “서열 상동의 %”는 두 개의 최적으로 배열된 서열과 비교 영역을 비교함으로써 확인되며, 비교 영역에서의 폴리뉴클레오티드 서열의 일부는 두 서열의 최적 배열에 대한 참고 서열(추가 또는 삭제를 포함하지 않음)에 비해 추가 또는 삭제(즉, 갭)를 포함할 수 있다.

또한, 본 발명은 본원발명에 따른 분자마커를 검출할 수 있는 프라이머 세트를 이용하여 무의 종(species) 또는 계통 식별 방법을 제공할 수 있는데, 바람직하게, 무 작물 시료로부터 게놈 DNA를 분리하는 단계; 상기 분리된 게놈 DNA를 주형으로 하고, 상기 본 발명의 68쌍의 프라이머 세트를 이용하여 PCR을 수행하는 단계; 및 상기 증폭된 산물을 전기영동하여 증폭 유무 및 증폭 산물의 크기(size)를 분석하는 단계를 포함할 수 있다.

특히, 본 발명에 따른 분자마커는 각각에 대응하는 프라이머 세트를 이용하여증폭될 수 있는데, 즉, 프라이머 세트 1을 사용할 경우 서열번호 1의 분자마커를 증폭할 수 있고, 프라이머 세트 1는 서열번호 2의 분자마커를, 프라이머 세트 3은 서열번호 3의 분자마커를 증폭할 수 있으며, 이와 같이 각각의 프라이머 세트는 그 순서에 따라 각 서열번호에 해당하는 분자마커를 증폭할 수 있다.

본 발명의 상기 PCR은 무 유래의 게놈 DNA를 주형으로 하고 68쌍의 본원 발명의 프라이머 세트를 이용하여 증폭 반응을 수행하여 표적 서열을 증폭할 수 있다. 표적 핵산을 증폭하는 방법은 중합효소연쇄반응(PCR), 리가아제 연쇄반응(ligase chain reaction), 핵산 서열 기재 증폭(nucleic acid sequence-based amplificatoin), 전사 기재 증폭 시스템(transcription-based amplification system), 가닥 치환 증폭(strand displacement amplification) 또는 Qβ 복제효소(replicase)를 통한 증폭 또는 당업계에 알려진 핵산 분자를 증폭하기 위한 임의의 기타 적당한 방법이 있다. 이 중에서, PCR이란 중합효소를 이용하여 표적 핵산에 특이적으로 결합하는 프라이머 세트로부터 표적 핵산을 증폭하는 방법이다. 이러한 PCR 방법은 통상적인 조건을 취할 수 있으며, 이외에도 이러한 PCR 방법은 상업적으로 이용 가능한 키트를 이용할 수도 있다.

본 발명의 상기 증폭된 표적 서열은 검출 가능한 표지 물질로 표지될 수 있다. 하나의 구체적 예로서, 상기 표지 물질은 형광, 인광 또는 방사선을 발하는 물질일 수 있으나, 이로 제한되지 않는다. 바람직하게는 상기 표지 물질은 에티디움브로마이드(Ethidium Bromide: EtBr), Cy-5 또는 Cy-3이다. 표적 서열의 증폭 시 프라이머의 5′-말단에 Cy-5 또는 Cy-3를 표지하여 PCR을 수행하면 표적 서열이 검출 가능한 형광 표지 물질로 표지될 수 있다. 또한, 방사선 물질을 이용한 표지는 PCR 수행 시 ³²P 또는 ³⁵S 등과 같은 방사선 동위원소를 PCT 반응액에 첨가하면 증폭 산물이 합성되면서 방산선이 증폭 산물에 혼입되어 증폭 산물이 방사선으로 표지될 수 있다.

PCR 방법으로 증폭된 산물이 검출은 DNA 칩, 겔 전기영동, 방산선 측정, 형광 측정 또는 인광 측정을 통해 수행될 수 있으나, 이로 제한되는 것은 아니다. 증폭 산물을 검출하는 방법 중의 하나로서, 겔 전기영동을 수행할 수 있다. 겔 전기영동은 증폭 산물의 크기에 따라 아가로스 겔 전기영동 또는 아크릴아미드 겔 전기영동을 이용할 수 있다. 또한, 형광 측정 방법은 프라이머의 5′-말단에 Cy-5 또는 Cy-3를 표지하여 PCR을 수행하면 표적 서열이 검출 가능한 형광 표지 물질로 표지되며, 이렇게 표지된 형광은 형광 측정기를 이용하여 측정할 수 있다. 또한, 방사선 측정 방법은 PCR 수행시 ³²P 또는 ³⁵S 등과 같은 방사선 동위원소를 PCR 반응액에 첨가하여 증폭 산물을 표지한 후, 방사선 측정기구, 예를 들면, 가이어 계수기(Geiger counter) 또는 액체섬광계수기(liquid scintillation counter)를 이용하여 방사선을 측정할 수 있다.

본 발명의 일 구체예에서, 상기 증폭된 산물 검출은 겔 전기영동을 통해 증폭된 산물의 크기(size) 및 증폭 유무를 통해 분석하였다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.

<실시예 1>

무 고정 계통인 WK10039와 WK10024 간의 다형성을 검색하여 계통 구분이 가능한 분자표지 지역 탐색

무 고정계통인 WK10039와 WK10024 간의 유전자 다형성을 갖는 분자표지자들을 탐색하기 위해 먼저 부계 계통의 염기서열 확보를 위하여 Qiagen DNeasy kit을 이용하여 WK10024의 genomic DNA를 추출하였다. 이후 추출된 gDNA는 Agilent 2100 Bioanalyzer를 이용하여 NGS 서열 결정에 사용될 수 있을 정도로 손상이 없는 gDNA 인지 분석하였다. 이후 양질의 gDNA는 NGS 서열 결정을 위해 라이브러리를 제작하였고, 제작된 라이브러리의 gDNA는 다시 Illumina HiSeq1000을 이용하여 500 bp paired end shotgun sequencing을 수행하여 80X 이상 서열을 생산하였다. 이렇게 얻어진 WK10024 계통의 서열은 무 표준유전체인 WK10039의 서열에 BWA 프로그램을 이용하여 매핑 및 정렬하였는데, 다형성 탐색을 위해 상기 매핑된 서열간의 결손(deletion) 또는 삽입(insertion)이 나타나는 지역만을 탐색하였고, 특히 Read depth는 7이상으로, WK10039와 WK10024간의 InDel 길이 차이가 10 bp 이상인 지역만을 선별하였다.

<실시예 2>

무의 종 구분이 가능한 분자표지 발굴

상기 실시예 1에서 확보된 WK10039와 WK10024간의 InDel 길이 차이가 10 bp 이상이고 depth가 7이상인 1,039개를 대상으로 무의 종 구분이 가능한 분자표지를 PCR 기반의 방법으로 탐색하기 위한 프라이머를 디자인 하였다. 구체적으로 선별된1,039개의 후보 분자표지 중에서 임의로 265 InDel 좌위에 대해 Primer3 프로그램을 이용하여 amplicon 크기 100~300 bp, 최적 길이 20 bp, Tm 58℃, GC 함량 40-60%의 조건으로 PCR이 가능하도록 프라이머를 디자인하였다.

분석 결과, 1,039개의 후보 분자표지 중에서 68개의 분자표지가 1개 이상의 다형성이 존재하는 것으로 확인되었으며, 다형성이 확인된 프라이머 세트와 분자표지를 표 1 및 표 2에 나타내었다.

<실시예 3>

분자표지 검출용 프라이머를 이용한 무의 다형성 분석

상기 실시예들에서 확인된 무 종간의 다형성이 존재하는 68개의 분자표지와 이들을 검출할 수 있는 프라이머를 이용하여 실제적으로 서로 다른 계통의 무를 구분할 수 있는지 확인하는 과정을 수행하였다. 먼저 하기 표 3에 기재된 무의 대표적인 14개 계통으로부터 gDNA를 CTAB 방법으로 분리하였고, 총 20 ng의 gDNA를 대상으로 상기 실시예 2의 프라이머 세트들을 이용하여 PCR을 수행하였다. 증폭되어진 결과를 바탕으로 밴드가 증폭되어진 경우는 1, 증폭되지 않은 경우는 0으로 콜링하였다. 이 결과는 NTSYS 2.2 프로그램을 이용하여 유전체를 분류하였다.

분류	명칭	학 명	기원
육성계통	WK10039	Raphanus sativus cv. WK10039
	WK10024	R. sativus cv. WK10024
야생형	W1	R. raphanistrum ssp. raphanistrum	베트남
	W2	R. raphanistrum ssp. Munra	인도
	W3	R. raphanistrum ssp. Mungra	인도
	W4	R. sativus var. raphanistroides Makino	일본
	W5	R. sativus var. raphanistroides Makino	한국
	W6	R. sativus var. raphanistroides Makino	한국
재배형	C1	R. sativus var. longipinnatus L. H. Bailey cv. Long Scarlet	미국
	C2	R. sativus var. radicula Pers.	한국
	C3	R. sativus var. hortensis Becker cv. DB104	한국
	C4	R. sativus var. hortensis Becker cv. DB109	중국
	C5	R. sativus var. hortensis Becker cv. DB110	중국
	C6	R. sativus var. hortensis Becker cv. DB113	일본

분석 결과, 도 1에 나타낸 바와 같이, 본 발명에서 규명한 68개의 분자표지를 14계통에 적용시킨 결과, 각 계통을 구분할 수 있음을 알 수 있었고, 나아가 전기영동 결과를 이용하여 유전체군을 분리한 결과 야생종과 재배종의 분리 및 구분이 가능하여 도 2에 나타낸 바와 같이 본 발명의 68개의 분자표지 검출용 프라이머 세트를 이용하여 무의 유전체군을 분류할 수 있음을 알 수 있었다.

이제까지 본 발명에 대하여 그 바람직한 실시예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.

<110> Industry Academic Cooperation Foundation of Catholic University <120> Molecular Markers for Selecting radish genetic resources and use thereof <130> PN1808-000 <160> 68 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 213 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> RsInD22 <400> 1 tctacaataa cacacgcaca tacaacatat ataacatgtt tagaactcca ataaataaaa 60 actcctacta caagtggcca tttagccttt tcgccgcaag tcagttaccc accttagacg 120 gaaattaata gttgaacaga tatgtagcta aaaaatgttt ttagcttttg tttttttttt 180 caggtgaaga tgacggatag aagtagaatg gag 213 <210> 2 <211> 232 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> RsInD27 <400> 2 tcccaggtta gaatggttta agttgtcggc tgaatcccga aaacaggaca gtagctcaac 60 tagaaacact tgtgagatgt tattcattaa tagaactttg gttctgatcg aaaactcaaa 120 actgtctttt tttttttgaa aaagggcttt aaatcttttt tattgtttac caatgaattt 180 tactaatgga tcctatttta tattctattc tgcataatac aaaatgaacc gt 232 <210> 3 <211> 251 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> RsInD23 <400> 3 atagcgttat acatacacat gcgattcaaa 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atacggtttt taggttggtt ctggtaaact gaatggtcat tcctaatgga caatattgca 60 agtgaacggt tcaaaactgt aaagtggtcc aaagagcatc aaaactggga taacgaagtc 120 tcatgagaca gctttattcc tg 142 <210> 52 <211> 186 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> RsInD91 <400> 52 caaagcaaga tagactccag aagctcagta accaatttag acatcaaggt cctcccacct 60 gaaagaaaca agagaacctt ttaatatttc agtagagcag tattcatgta ttttttttta 120 tcagcaaacg aatgaaacag taaaatcaaa atctcacaag cactaagtgc ctaaagtagc 180 atttgg 186 <210> 53 <211> 177 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> RsInD92 <400> 53 ttacgatttc tggttttcat cgtcggttat ggtttcttca gttactttct acaaagaact 60 aaaatggcta tttaatattt actaacacga ggaaaatatt taagatcttc tattttattt 120 atttttttgt tagcccacag tttttccctt catggctttc tcgttctttg tctctaa 177 <210> 54 <211> 139 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> RsInD94 <400> 54 ctgttatcaa cgtattggaa ccatttgatg gccttcttac cgacgctagg catgatcgga 60 caattcaaat agttgaattg tgtttcaagt gcgttgacca gttgaattgt gtgtacaatg 120 cgttgatcag 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gagggaaaca agttttgtga gaatcatacc gggttccaag tgtgaagatg ccagaatttc 120 tgatgattcc tcc 133 <210> 59 <211> 146 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> RsInD210 <400> 59 cagtagcaag caatgaagta tcaattcgct aatacgttac agtttgtatg cacaatacat 60 aatagcccgt gttcacctaa taactaatgg gcctttaaaa tcaaatcctg taaagttaac 120 tcagcccatt atcacattag ggtttt 146 <210> 60 <211> 210 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> RsInD225 <400> 60 ctacaagcga aaatgaacat gtgtcaaggt atttgttaaa aacaagacga gtcaagattc 60 attatccgcc agaaacatgc aatgatcaaa gctctaacat atgaaacaag aaggaaaagg 120 ccactcacct gacaggatag ataagtccat tttgaagtgc aagaacactg aaacgagtga 180 tcacaaagag tactgaggat accactagtg 210 <210> 61 <211> 174 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> RsInD226 <400> 61 tggaaatgtg ttagctttct tgtgtgttat aatgcgtctt gttattgatt cggtttactt 60 gttttctttt ggtgggtaag ataatgtggg cggaggccat gagcaaactt gaaggcatgg 120 attcatcaga aagagagcgc ctatggcctc agcttgtgca aggttttaaa gatc 174 <210> 62 <211> 146 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> RsInD217 <400> 62 tctcttcttc atatctggtc tcgttgtcaa tctccttcag gtgtggcttt cctcttaaag 60 tcgaaacctt ttttaagatt cctttgcaga tctcctcttc tctttgtaca cttgttctct 120 gtattgattc actgttgtta gggttc 146 <210> 63 <211> 166 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> RsInD233 <400> 63 gcttaatccc tcaaatacga acacaacgcg taatattcat gatactaggg cattaagaca 60 cgtacatgag gacttttcat gttccggagt gtgtggatgg aagatgctta gtgaacgaac 120 gaattcacca aactcgatca caccgtttcg cttcctatca aacata 166 <210> 64 <211> 148 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> RsInD250 <400> 64 tgattttgtt tcgtgattag ggttaatcac tagctcaggg tcagaatagt aatctccgga 60 taataactgc agtaacaaaa acatttagaa acttttgttg ttttaattca aaaactgttt 120 ctgttatata cagttgtttt gagcctcg 148 <210> 65 <211> 136 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> RsInD246 <400> 65 acataatgtc cccactcata actttttttt gtctccataa ctttgtctat gccaccaact 60 atgacaaatt tgaagatata tagtcagtcg catctaaatc tctctttcta atggccatat 120 gtattgatta 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Claims (3)

1. 서열번호 18의 염기서열로 이루어진 재배형 무의 판별용 분자마커로서,
   사이즈마커의 100 내지 200 bp 사이에서 나타나는 2개의 밴드 중, 150 bp의 밴드가 나타난 경우에는 R. sativus var. hortensis Becker cv. DB104, R. sativus var. hortensis Becker cv. DB109 및 R. sativus var. hortensis Becker cv. DB113 중 하나의 종인 것이고,
   사이즈마커의 100 내지 200 bp 사이에서 나타나는 2개의 밴드 중, 150 bp 보다 큰 밴드가 나타난 경우에는 R. sativus var. longipinnatus L. H. Bailey cv. Long Scarlet, R. sativus var. radicula Pers. 및 R. sativus var. hortensis Becker cv. DB110 중 하나의 종인 것을 특징으로 하는 재배형 무의 판별용 분자마커.
2. 서열번호 18의 염기서열로 이루어진 분자마커를 검출 또는 증폭하기 위한 프라이머 세트 18을 포함하는 재배형 무의 판별용 조성물로서,
   사이즈마커의 100 내지 200 bp 사이에서 나타나는 2개의 밴드 중, 150 bp의 밴드가 나타난 경우에는 R. sativus var. hortensis Becker cv. DB104, R. sativus var. hortensis Becker cv. DB109 및 R. sativus var. hortensis Becker cv. DB113 중 하나의 종인 것이고,
   사이즈마커의 100 내지 200 bp 사이에서 나타나는 2개의 밴드 중, 150 bp 보다 큰 밴드가 나타난 경우에는 R. sativus var. longipinnatus L. H. Bailey cv. Long Scarlet, R. sativus var. radicula Pers. 및 R. sativus var. hortensis Becker cv. DB110 중 하나의 종인 것을 특징으로 하는 재배형 무의 판별용 조성물.
3. 무 작물 시료로부터 게놈 DNA를 분리하는 단계;
   상기 분리된 게놈 DNA를 주형으로 하고, 제2항의 조성물을 이용하여 PCR을 수행하는 단계; 및
   상기 증폭된 산물을 전기영동하여 증폭 유무 및 증폭 산물의 크기(size)를 분석하는 단계;를 포함하는 재배형 무의 판별 방법으로서,
   사이즈마커의 100 내지 200 bp 사이에서 나타나는 2개의 밴드 중, 150 bp의 밴드가 나타난 경우에는 R. sativus var. hortensis Becker cv. DB104, R. sativus var. hortensis Becker cv. DB109 및 R. sativus var. hortensis Becker cv. DB113 중 하나의 종인 것이고,
   사이즈마커의 100 내지 200 bp 사이에서 나타나는 2개의 밴드 중, 150 bp 보다 큰 밴드가 나타난 경우에는 R. sativus var. longipinnatus L. H. Bailey cv. Long Scarlet, R. sativus var. radicula Pers. 및 R. sativus var. hortensis Becker cv. DB110 중 하나의 종인 것을 특징으로 하는 재배형 무의 판별 방법.
   

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