CN110541039A - 基于草地贪夜蛾全基因组序列开发的ssr引物组及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种基于草地贪夜蛾全基因组序列开发的SSR引物组及其应用。该SSR引物组包括424对引物，其核苷酸序列如序列表SEQ ID No.1～848所示。本发明还提供了一种基于草地贪夜蛾全基因组序列开发的SSR核心引物组，包括30对核心引物，其核苷酸序列如序列表SEQ ID No.789～848所示。本发明中的SSR引物对草地贪夜蛾全基因组覆盖，分布均匀、多态性丰富、扩增稳定、扩增条带易于鉴定，结合接头荧光标记、毛细管电泳分离和激光诱导荧光检测技术实现了草地贪夜蛾田间群体的高通量准确鉴定和筛选，可用草地贪夜蛾指纹图谱数据库构建、区域种群监测、入侵虫源追踪、遗传多样性评价等领域。

Description

基于草地贪夜蛾全基因组序列开发的SSR引物组及其应用

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，特别涉及一种基于草地贪夜蛾全基因组序列开发的SSR引物组及其应用。

背景技术

草地贪夜蛾是联合国粮农组织全球预警的跨国界迁飞性重大害虫。该虫原发于美洲大陆，2016年传入非洲并爆发成灾。2018年入侵亚洲的印度、越南、缅甸等国家，2019年1月入侵我国云南省，并在全国自南向北迅速扩散，威胁农业生产。草地贪夜蛾作为新入侵的重大害虫，具有适生性广、迁飞能力强、繁殖倍数高、暴食危害重、防控难度等特点^[1-3]。捋清草地贪夜蛾入侵的路径，准确掌握该虫发生危害动态规律，形成适合我国虫源的分子指纹数据库，是科学制定草地贪夜蛾防控技术、保障农业生产安全和农产品质量安全的前提基础。

不同的草地贪夜蛾群体通常对特定作物具有取食趋性。田间草地贪夜蛾主要分为玉米型(Corn-Strain)和水稻型(Rice-strain)两个亚群体。玉米型主要在玉米、高粱、棉花上发现，而水稻型的取食性相对较为广谱，主要取食水稻、苜蓿、牧草、小米等作物。除了取食偏好外，两个品系的草地贪夜蛾在生理特征、交配行为和性外激素的组成方面有很大的不同。但是，由于两个寄主型形态学和行为方面的相似性，田间难以被区分。分子标记是以个体间核苷酸序列变异为基础的遗传标记，是DNA水平遗传差异的直接反映。分子标记检测技术具有测试周期短、不受环境影响和季节限制、供选择的标记数量多、可以高通量测试分析等优势。

草地贪夜蛾亚群体的分类主要根据田间采集的幼虫寄主范围，结合分子标记的分化进行界定。基于线粒体细胞色素C氧化酶亚基I基因(CO I)的分子标记不仅能够区分玉米型和水稻型两个亚群体的，而且具备鉴别其亚型的能力，是目前最常用的有效分子条形码^[5-7]。另外，有研究表明，根据Z染色体上编码磷酸丙糖异构酶(Tpi)基因开发的分子标记，能够更好鉴定到草地贪夜蛾雌性“水稻型”和雄性“玉米型”的杂交型。鉴于目前鉴定到的我国草地贪夜蛾具有“水稻型”细胞质和“玉米型”细胞核的特点，两种标记有机结合虽然能够提高鉴定的准确率，但是仍然无法全面了解草地贪夜蛾的群体多样性、群体遗传结构以及虫源动态。

微卫星标记SSR(Simple Sequence Repeats)，是以1～6个核苷酸为单位，呈串联重复的DNA序列，广泛分布于真核生物基因组中。与其他分子标记相比，SSR标记具有共显性、多态性高、重复性好、操作简单等有点。广泛用于生物多样性研究、品系分类、遗传图谱构建、分子标记辅助选择和比较基因组研究等领域^[10]。Arias等(2011)基于来自三个地理群体的15个个体，利用焦磷酸测序法开发了192个SSR标记用于美国草地贪夜蛾的群体遗传结构分析。Pavinato等(2013)利用基因组富集的方法，开发了6个SSR标记用于巴西草地贪夜蛾的群体遗传结构分析。Arias等(2019)采用9个SSR标记，对北美的草地贪夜蛾遗传分析表明，该地区草地贪夜蛾经历了虫口的扩张，虽然基因流与氟苯二胺和氟苯脲敏感性之间不存在相关性，但是发现具有较高LC₅₀的群体扩散到其他的地区并保持较高的抗性基因频率^[11-13]SSR标记虽然对分析草地贪夜蛾的遗传分布和监测起了很好的作用，但是相比其他物种，现有草地贪夜蛾的SSR标记数量少，对我国草地贪夜蛾种群针对性不高，不能满足当前对该害虫的研究和监测需要。大量开发覆盖全基因组的SSR标记是对草地贪夜蛾开展深入研究和防控的重要工作之一。

Gouin等^[14]公布并分析了来自实验室和田间自然群体的草地贪夜蛾全基因组序列。2019年5月，深圳华大生命科学研究院和云南农业大学共同牵头，联合中国科学院动物研究所、广东省农科院、青岛农业大学等多个单位共同成立研究小组，对入侵中国的草地贪夜蛾进行全基因组测序研究，公布了草地贪夜蛾的高质量染色体水平的基因组。

现有的草地贪夜蛾SSR标记数量少，存在覆盖率低的问题，因此，提供一套具有扩增稳定、电泳条带清晰、多态性丰富的优点的SSR标记具有重要意义。

发明内容

本发明的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种基于草地贪夜蛾全基因组序列开发的SSR引物组。这些引物组具有扩增稳定、电泳条带清晰、多态性丰富的优点，克服了原有草地贪夜蛾SSR标记数量少，覆盖率低的问题，可有效用于草地贪夜蛾遗传多样性、种群监测鉴定、DNA指纹图谱构建等研究。

本发明的另一目的在于提供所述基于草地贪夜蛾全基因组序列开发的SSR引物组的应用，结合接头荧光标记、毛细管电泳分离和激光诱导荧光检测技术实现了草地贪夜蛾田间群体的高通量准确鉴定和筛选。该方法可用于在草地贪夜蛾遗传多样性和种群鉴定中，具有可靠、迅速的特点，能准确区分草地贪夜蛾种群间差异并实现高通量的群体筛选，最大限度准确地反映草地贪夜蛾不同地理种群间的亲缘关系。

本发明的目的通过下述技术方案实现：一种基于草地贪夜蛾全基因组序列开发的SSR引物组，该SSR引物组包括424对引物，其核苷酸序列如序列表SEQ ID No.1～848所示。

一种基于草地贪夜蛾全基因组序列开发的SSR核心引物组，该SSR核心引物组包括30对核心引物，其核苷酸序列如序列表SEQ ID No.789～848所示。

本发明可在SSR引物组或SSR核心引物组的每个正向引物的5’末端添加M13通用接头序列，或是在每个正向引物的5’末端添加带荧光标记的M13通用接头序列，从而能够利用带荧光标记的通用型M13引物进行毛细管电泳，实现了简便、可靠及高通量的检测。

所述的M13通用接头序列的核苷酸序列如下所示(SEQ ID No.849)：5’-TGTAAAACGACGGCC AGT-3’。

所述的荧光标记为采用荧光基团HEX和FAM进行标记。

所述的基于草地贪夜蛾全基因组序列开发的SSR引物组或所述的基于草地贪夜蛾全基因组序列开发的SSR核心引物组在草地贪夜蛾遗传多样性分析，种群鉴定指纹图谱数据库构建，区域种群监测，和/或入侵虫源追踪方面的应用。

所述的基于草地贪夜蛾全基因组序列开发的SSR引物组或所述的基于草地贪夜蛾全基因组序列开发的SSR核心引物组在草地贪夜蛾遗传多样性分析，种群鉴定指纹图谱数据库构建、区域种群监测或入侵虫源追踪方面的应用，优选为通过如下步骤实现：

(1)DNA提取：提取草地贪夜蛾的基因组DNA作为PCR扩增模板；

(2)采用上述SSR引物组或SSR核心引物组进行PCR扩增，得到扩增产物；

(3)将扩增产物进行毛细管电泳和激光诱导荧光检测；

(4)根据电泳结果进行草地贪夜蛾遗传多样性分析，种群鉴定指纹图谱数据库构建，区域种群监测，和/或入侵虫源追踪。

步骤(1)中所述的DNA提取优选为采用微量样品基因组DNA提取试剂盒进行提取。

步骤(1)中所述的草地贪夜蛾优选为草地贪夜蛾的幼虫：小于3龄的幼虫整头虫提取，大于等于3龄的幼虫取头胸部提取。

步骤(1)中所述的基因组DNA的浓度优选为10ng/μL。

步骤(2)中所述的SSR引物组或SSR核心引物组中在每个正向引物5’末端添加了带荧光标记的M13通用接头序列。

所述的M13通用接头序列的核苷酸序列如下所示(SEQ ID No.849)：5’-TGTAAAACGACGGCC AGT-3’。

所述的荧光标记为采用荧光基团HEX(5-六氯荧光素氨基磷酸酯)和FAM(羧基荧光素)进行标记。

步骤(2)中所述的PCR扩增的体系为25μL扩增体系：TaKaRa Taq(5U/μL)0.125μL,10×PCR Buffer(Mg²⁺Plus)2.5μL,dNTP Mixture(各2.5mM)2μL，上游和下游引物(10μM)各0.4μL，模板1μL，加ddH₂O至25μL。

步骤(2)中所述的PCR扩增的反应程序为：94℃预变性2min；94℃变性10S，55℃退火30S，72℃延伸30S，35个循环；72℃延伸5min。

步骤(3)中所述的进行毛细管电泳和激光诱导荧光检测为在CEQ8000遗传分析系统(Beckman Coulter,USA)中进行。

步骤(3)中所述的毛细管电泳分离的条件优选为：温度50℃；进样2.0KV，30s；电泳4.8KV，时间65min。

步骤(4)中所述的遗传多样性分析包括等位基因数(Na)，多样性指数(He)，多态性信息量(PIC)，种群间的遗传相似系数和聚类分析等；优选为采用PowerMarker V3.25计算引物的等位基因数(Na)、多样性指数(He)、多态性信息量(PIC)，利用NTSYS-peversion-2.02c软件计算种群间的遗传相似系数，用GeneAIEx软件计算Nei’s遗传距离，用Phylip软件的UPGMA方法根据Nei’s遗传距离矩阵绘系统发育树。

本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：

1、本发明的424对SSR引物对草地贪夜蛾全基因组覆盖，分布均匀、多态性丰富、扩增稳定、扩增条带易于鉴定，结合接头荧光标记、毛细管电泳分离和激光诱导荧光检测技术实现了草地贪夜蛾田间群体的高通量准确鉴定和筛选，可用草地贪夜蛾指纹图谱数据库构建、区域种群监测、入侵虫源追踪、遗传多样性评价等领域，为草地贪夜蛾的早期预警预报，合理的防控方案制定提供依据。

2、本发明通过PCR扩增和聚丙烯酰胺凝胶电泳确定其扩增带型清晰、多态性高、重复稳定性好后，在引物中在每个正向引物5’末端添加了M13序列，利用带荧光标记的通用型M13引物进行毛细管电泳，实现了简便、可靠及高通量的检测。

附图说明

图1是草地贪夜蛾全基因SSR序列分布的特征图；其中，A为6638个SSR序列分布特征图；B为424个SSR序列分布特征图。

图2是为2对引物(SF01AF+SF01AR和SF02AF+SF02AR)在5份草地贪夜蛾样品中检测到的多态性。

图3是UPGMA聚类分析结果图(图中的数字表示Nei’s标准遗传距离)。

图4是基于SSR标记的主坐标分析PCoA图(图中：区域1为湖南张家界个体为主；区域2为广东省个体为主；区域3为广西南宁个体为主)。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。下列实施例中未注明具体实验条件的试验方法，通常按照常规实验条件或按照制造厂所建议的实验条件。除非特别说明，本发明所用试剂和原材料均可通过市售获得。

实施例1：覆盖草地贪夜蛾全基因组的SSR序列的鉴定和标记设计

1.草地贪夜蛾全基因组序列的获取

从https://www.ncbi.nlm.nih.gov/genome/？term＝Spodoptera+frugiperda+(NCBI)下载草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda Sf9,GCA_002213285.1)序列。利用MISA(MIcroSAtellite identification tool,http://pgrc.ipk-gatersleben.de/misa/ misa.html)软件，设置参数为：3～20核苷酸，重复次数≥6次，复合SSR的两个SSR间的最大距离100bp。对下载的草地贪夜蛾基因组的fasta序列进行SSR位点搜索。输出以SSR为中心，侧翼各200-bp的序列用于设计引物。

2.草地贪夜蛾全基因组SSR引物设计

根据下载的SSR序列，利用Primer3(v.0.4.0)软件设计引物。设置参数：Productsize range:100～300bp；Numbers to return:3；Max 3’stability:2kcal/mol；Maxmispriming:8；Primer Tm:50～65bp；Maximum Tm difference:5℃。在上述参数下，共获得分布于2396个Scaffold的6638个SSR标记，平均每个Scaffold具有2.7个SSR标记，49.42％为4-bp的重复，32.21％为3-bp的重复，15.64％为7-bp的重复，1.79％为5-bp的重复，0.62％为6-bp的重复，0.32％为大于或等于8-bp的重复。进一步筛选每个scaffold中最大的SSR，得到1379个SSR标记。去除重复的标记序列之后，最终得到424个覆盖草地贪夜蛾全基因组的SSR标记，49.06％为4-bp的重复，37.74％为3-bp的重复，5.19％为5-bp的重复，6-bp和大于或等于8-bp的重复均为3.54％，0.94％为7-bp的重复。424对引物的核苷酸序列如序列表SEQ ID No.1～848所示。该424个SSR由广州天一辉远生物科技有限公司合成(图1)。

实施例2：草地贪夜蛾SSR标记多态性和稳定性的鉴定

1、草地贪夜蛾基因组DNA的提取

(1)材料：从2019年5-6月，采集广东、湖南、广西、云南、贵州等5省10个地点的草地贪夜蛾幼虫(见表1)，用于引物的评价和遗传多样性分析。

表1本发明中用于草地贪夜蛾遗传多样性分析的材料信息

(2)CTAB法提取基因组DNA

1)样品处理：采用微量样品基因组DNA提取试剂盒(DP316，天根，中国)提取DNA。小于3龄的幼虫整头虫提取，大于等于3龄的幼虫取头胸部提取；虫体放入含有1.5mL DNA抽提液的2ml离心管内，立即加入180μl缓冲液GA，加入钢珠，放入样品研磨机(Bullet美国)振荡处理；

2)加入20μl Proteinase K溶液，涡旋混匀10sec；

3)在56℃孵育直到样本充分降解消化，需要时间大约30min到1h，期间每15min需要涡旋混匀；

4)加入200μl的缓冲液GB和1μl Carrier RNA储存液，浓度为1μg/μl(Carrier RNA储存液)，充分颠倒混匀，70℃放置10min，期间每3min涡旋混匀10sec，溶液应变清亮，短暂离心以去除管盖内壁的液滴；

5)加入200μl的乙醇(96～100％，v/v)。如果室温超过25℃，请将乙醇置冰上预冷。轻轻颠倒混匀样品，室温放置5min，简短离心以去除管盖内壁的液滴；

6)取上一步所得溶液全部转入吸附柱CR2中(吸附柱放入收集管中)，12,000rpm(～13,400×g)离心30sec，弃废液，将吸附柱CR2放回收集管中；

7)向吸附柱CR2中加入500μl缓冲液GD(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，12,000rpm(～13,400×g)离心30sec，弃废液，将吸附柱CR2放回收集管中；

8)向吸附柱CR2中加入600μl漂洗液PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)12,000rpm(～13,400×g)离心30sec，弃废液，将吸附柱CR2放回收集管中；

9)重复操作步骤8；

10)12,000rpm(～13,400×g)离心2min，倒掉废液。将吸附柱CR2置于室温放置2′5min，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液；

11)将吸附柱CR2转入一个干净的离心管中，向吸附膜中间位置悬空滴加20～50μl洗脱缓冲液TB，室温放置2～5min，12,000rpm(～13,400×g)离心2min，将溶液收集到离心管中；

12)DNA使用NanoDrop分光光度计(2000，赛默飞世尔)测定浓度，稀释到10ng/μL的浓度后，用作PCR扩增模板。

2、草地贪夜蛾基因组SSR引物的扩增与筛选

选择广州花都(GZHD)采集的5个样品，用于检测草地贪夜蛾基因组SSR标记的扩增情况及多态性。采用实施例1中合成的424对引物，分别以5份样品的基因组DNA进行扩增，根据扩增的结果，确定可稳定扩增、带型清晰且多态性丰富的引物对。具体过程如下：

(1)PCR扩增

PCR体系包括TaKaRa Taq(5U/μL)0.125μL,10×PCR Buffer(Mg²⁺Plus)2.5μL,dNTPMixture(各2.5mM)2μL，上游和下游引物(10μM)各0.4μL，模板1μL，加ddH₂O至25μL；

PCR反应程序为94℃预变性2min；94℃变性10S，55℃退火30S，72℃延伸30S，35个循环；72℃延伸5min。

(2)变性聚丙烯酰胺凝胶电泳

1)清洗玻璃板：用自来水沾上洗涤灵把玻璃板反复擦洗干净，用双蒸水擦洗两遍，再用95％酒精擦洗两遍，干燥；在长板和凹槽上涂上0.5ml琼脂糖凝胶0.5％(v/v)。操作过程中防止两块玻璃板相互污染；

2)制备变性胶：按照常规成份配制变性聚丙烯酰胺凝胶。

3)灌胶：灌胶过程中防止出现气泡，待胶流到下部，在上部轻轻的插上梳子，使其聚合至少1小时以上；

4)预电泳：1×TBE缓冲液600ml加入正极槽(底槽)中，600ml预热至65℃，加入负极槽(上槽)，拔出梳子，90W恒功率预电泳10～20分钟(视室温情况而定)；

5)变性：20ul PCR样品加上6X Loading buffer，混匀后，在PCR仪上运行变性程序：95℃变性5分钟，4℃冷却10分钟；

6)电泳：用移液器吹吸加样槽，清除气泡，插入样品梳子，每个加样孔点入5ul样品；80W恒功率电泳至Loading buffer带(二甲苯青)至胶板的另一前沿(约40分钟)；电泳结束后，小心分开两块玻璃板，胶会紧贴在涂Binding silane的玻璃板上；

7)银染：采用王凤格等(2004)的快速银染法；

8)固定：10％(v/v)冰醋酸固定液，轻轻晃动3分钟；

9)漂洗：用双蒸水快速漂洗一次，不超过10秒；

10)染色：0.2％(w/v)的硝酸银溶液中染色5min；

11)漂洗：双蒸水快速漂洗，时间不超过10秒；

12)显影：3％(w/v)NaOH+0.5％(v/v)甲醛显影，轻轻晃动至带纹出现；

13)定影：10％(v/v)冰醋酸溶液中定影5分钟。(v/v是指体积比)

3、424对引物对5头草地贪夜蛾样品(SF7#，SF8#，SF9#，SF10#和SF11#)的筛选显示，所设计的424对引物均能在草地贪夜蛾基因组DNA中有效扩增。其中60％的引物对能够扩增出2个以上的等位基因，20％的引物能够扩增出3个以上等位基因，10％的引物扩增出的条带显示出丰富的多态性(图2，以引物SF01AF+SF01AR(SEQ ID No.1～2)和SF02AF+SF02AR(SEQ ID No.3～4)为例。说明根据草地贪夜蛾全基因组开发的SSR标记是有效的。从424对引物中优选了30对能够扩增出3个以上等位引物的引物作为核心引物(SEQ IDNo.789～848)，用于草地贪夜蛾的种群遗传多样性分析。

实施例3：草地贪夜蛾SSR标记在种群遗传多样性分析的应用

1、毛细管电泳

根据实施例2步骤2的筛选结果，在30对核心引物(SEQ ID No.789～848)对应的正向引物5’端添加M13通用接头序列(5’-TGTAAAACGACGGCC AGT-3’)，并合成带两种带荧光基团(HEX和FAM)的M13接头引物(5’-TGTAAAACGACGGCC AGT-3’)(均由广州天一辉远生物科技有限公司)，对实施例2步骤1的42份样品(表1)进行毛细管电泳分离和激光诱导荧光检测。

PCR产物在CEQ8000遗传分析系统(Beckman Coulter,USA)上进行SSR多态性分析。该系统采用荧光标记、毛细管电泳分离和激光诱导荧光检测技术。将上述步骤2中的PCR产物稀释15倍，吸取稀释后的PCR产物0.5μl作为分析样本加入样品板，每孔加入15μl的SLS(上样缓冲液，甲酰胺)和0.15μl分子量内标-400(internal standard 400)。样品板样品孔内加入半滴矿物油以防止在CEQ8000上运行反应物蒸发，缓冲液板中对应孔内加入3/4体积的电泳缓冲液(Beckman Coulter,USA))。选择HUM-STR方法(毛细管温度50℃；进样2.0KV，30s；电泳4.8KV，65min)进行电泳分析。

通过检测荧光标记，所得数据被自动收集，利用CEQ片段分析软件(BeckmanCoulter，USA)自动统计分析数据，并将有效峰转化为“0、1”原始距阵。每个SSR位点的多态性信息量(Polymorphic Information Content，简称PIC)按Senior MS等提供的公式计算，即PIC＝1-∑fi2，其中fi为i位点的基因频率。用GeneAIEx软件计算Nei’s遗传距离，使用Phylip软件的UPGMA方法根据Nei’s遗传距离矩阵绘系统发育树。

分析结果显示，被检测的群体两两之间的遗传相似度(I)范围为0.670～0.895之间，均大于0.6，表明各种群之间遗传相似性较高。Nei’s标准遗传距离(D)分析表明，广东东莞群体和广西南宁群体之间的遗传距离最大为0.400，广东花都群体和湖南张家界群体之间的遗传距离最小为0.111。其中，广东花都群体与其他地理群体的遗传距离范围为0.111～0.185之间，均相对低于其他各群体间遗传距离(表2)。UPGMA聚类分析显示5个群体聚合成为一个大的分支，广东花都群体与湖南张家界群体形成一个最近的分支(图3)。

PCoA分析表明，5个群体在二维平面上主要分为3个区域(图4)。第一个区域以湖南张家界群体为主，第2个区域以广东省的3个地区群体为主，混杂了湖南和广西的个体，第3个区域为广西南宁群体的3个特殊个体(SF039，SF034和SF05)。从PCoA分析图可以看出，总体而言，湖南张家界群体和广西南宁群体含有的特异遗传个体较多，且后者的分布区域较为分散。

表2草地贪夜蛾不同地理种群的Nei’s遗传距离(D)和遗传相似度(I)

注：表中***对角线以上为遗传相似度(I)，对角线以下为Nei’s标准遗传距离(D)

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

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序列表

<110> 华南农业大学

<120> 基于草地贪夜蛾全基因组序列开发的SSR引物组及其应用

<160> 849

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<223> Sf01AF

<400> 1

catgttactc gtggataatg 20

<210> 2

<223> Sf01AR

tgattttccc tatctacact aat 23

<210> 3

<223> Sf02AF

gcaaaggcgg ttaaatctat attg 24

<210> 4

<223> Sf02AR

tctcaaaatg aagttcggca aaat 24

<210> 5

<223> Sf03AF

actgatgggt gagtggcatt tt 22

<210> 6

<223> Sf03AR

gggataaaag gcgtgacgtt at 22

<210> 7

<223> Sf04AF

agggaaagga agtgaagaat ta 22

<210> 8

<223> Sf04AR

agtcttctcc ccttctctat ct 22

<210> 9

<223> Sf05AF

tgacttacaa taacacgtat aac 23

<210> 10

<223> Sf05AR

gaattgaccc ttctacagat tta 23

<210> 11

<223> Sf06AF

aatggctctt tgatgggatt tt 22

<210> 12

<223> Sf06AR

ttatgaacag tagggcgttt aa 22

<210> 13

<223> Sf07AF

ttgtggctga ctgtatttt 19

<210> 14

<223> Sf07AR

cgcatataag tccctttaat ac 22

<210> 15

<223> Sf08AF

cgtcacgtcg atattatttt 20

<210> 16

<223> Sf08AR

agtgtgatag tcgtgtcctt aa 22

<210> 17

<223> Sf09AF

taactatcag cgggttatta g 21

<210> 18

<223> Sf09AR

cttcactgct ctgttcctat tg 22

<210> 19

<223> Sf10AF

cataggctaa gaacattgtt acta 24

<210> 20

<223> Sf10AR

tcgtcagtct gtcaaaccaa att 23

<210> 21

<223> Sf11AF

acctgtaact atggaccata tct 23

<210> 22

<223> Sf11AR

ctgtaagtcc tccatgttcc ttaa 24

<210> 23

<223> Sf12AF

cattggtgcc gtctgaatat tt 22

<210> 24

<223> Sf12AR

cttaaagcac tcaagagaca taa 23

<210> 25

<223> Sf13AF

acgccttagt ttaacgactg taat 24

<210> 26

<223> Sf13AR

cagcaacaac ctctcgacta at 22

<210> 27

<223> Sf14AF

tgtacagaca tggagttgtt at 22

<210> 28

<223> Sf14AR

acggtatggt aatcacacta ta 22

<210> 29

<223> Sf15AF

tgtcctgcac atacattatc 20

<210> 30

<223> Sf15AR

gactaacgcc attgagacaa ta 22

<210> 31

<223> Sf16AF

aggaggcata tcaagtacaa att 23

<210> 32

<223> Sf16AR

aagagagaga gagtgatata ga 22

<210> 33

<223> Sf17AF

acctgcttta tgttggctgt attg 24

<210> 34

<223> Sf17AR

acatctacct gcataccaaa tt 22

<210> 35

<223> Sf18AF

aacagtcacg tcaaagtaaa t 21

<210> 36

<223> Sf18AR

accgtcagtt tagtttaggt ttag 24

<210> 37

<223> Sf19AF

gtctcaaacc gcaatatgta at 22

<210> 38

<223> Sf19AR

ggcccaacag tttccgaaat aa 22

<210> 39

<223> Sf20AF

tgtccgttta taagccgagt tat 23

<210> 40

<223> Sf20AR

ctgcatcgtt tggacagttt ta 22

<210> 41

<223> Sf21AF

agtgtaaaag gttcaggttt atc 23

<210> 42

<223> Sf21AR

acatacctac ccataccatt tag 23

<210> 43

<223> Sf22AF

tcgctcacac acatacacag atta 24

<210> 44

<223> Sf22AR

tgaacagcat tgcgtgaaca tta 23

<210> 45

<223> Sf24AF

caacaatggc attcagtaat at 22

<210> 46

<223> Sf24AR

tcggtagaat tgagacttat tt 22

<210> 47

<223> Sf25AF

aaaaccagaa gacaggcaat tt 22

<210> 48

<223> Sf25AR

gcagtcggga cccattctta at 22

<210> 49

<223> Sf26AF

aaaacggaac cttgtagat 19

<210> 50

<223> Sf26AR

gcctaacagt ttcggaaata aa 22

<210> 51

<223> Sf27AF

tcatcgtctt gtctttattt 20

<210> 52

<223> Sf27AR

ggatctatct gacgacctaa tt 22

<210> 53

<223> Sf28AF

tcgatcgaaa gcaaacgcaa ta 22

<210> 54

<223> Sf28AR

tccaaacttc cagctaacta atg 23

<210> 55

<223> Sf29AF

caaacacgtg gtaagtaaca aaat 24

<210> 56

<223> Sf29AR

tttgatgact tcgctggtat tt 22

<210> 57

<223> Sf30AF

acgactcaga gaacaactag ta 22

<210> 58

<223> Sf30AR

ctggagtagt cgtggttgta gta 23

<210> 59

<223> Sf31AF

cgctttgctt ggctcctatt g 21

<210> 60

<223> Sf31AR

tctatagttg tgggtgtcct atct 24

<210> 61

<223> Sf32AF

tcctgcagtg gatgtaatg 19

<210> 62

<223> Sf32AR

caaagtcaac tacactaaca atac 24

<210> 63

<223> Sf33AF

ccggagctgc agactatcta 20

<210> 64

<223> Sf33AR

gacagtcttt gattgagaaa taga 24

<210> 65

<223> Sf34AF

gcactgattc gctgactagt att 23

<210> 66

<223> Sf34AR

gcctggtgcc aaataaatt 19

<210> 67

<223> Sf35AF

acgataccac tcaagccaaa at 22

<210> 68

<223> Sf35AR

ttttcacgct caaccctttt aa 22

<210> 69

<223> Sf37AF

tgaagatgat tgccttattt 20

<210> 70

<223> Sf37AR

caccacccat aactttaaaa 20

<210> 71

<223> Sf38AF

tcgcttcaca tgtgtatcca ttta 24

<210> 72

<223> Sf38AR

gctacggatc ggctttgaga ta 22

<210> 73

<223> Sf39AF

ataactatcg gcgggtgatt ag 22

<210> 74

<223> Sf39AR

tcctttactg ctctgctcct att 23

<210> 75

<223> Sf40AF

gccatcaaac attacgcgta gat 23

<210> 76

<223> Sf40AR

cccgctctgc ttgacttcta t 21

<210> 77

<223> Sf41AF

atattcgaat ttggcgctaa aa 22

<210> 78

<223> Sf41AR

tgtcgtacat gaaggagggt tat 23

<210> 79

<223> Sf42AF

agtttgaagt cggtccagat ta 22

<210> 80

<223> Sf42AR

aatctagaga aatcatcgta tct 23

<210> 81

<223> Sf43AF

accgtatttc cacctccaat ta 22

<210> 82

<223> Sf43AR

cgccccagac ggacatatag 20

<210> 83

<223> Sf44AF

gctttgtctt tacctcgtct ttta 24

<210> 84

<223> Sf44AR

cagaccgtgc caacaatta 19

<210> 85

<223> Sf45AF

aagtaccata ccacctgcaa ta 22

<210> 86

<223> Sf45AR

gctactacgc ttagatttat aaa 23

<210> 87

<223> Sf46AF

gtcgattctg tacatgaaat at 22

<210> 88

<223> Sf46AR

gcgtgatgaa aactatacta taac 24

<210> 89

<223> Sf47AF

acgttacttt taccgcccat aa 22

<210> 90

<223> Sf47AR

tggaacatta tagtttggca tat 23

<210> 91

<223> Sf48AF

agttagacgc tttggaggtt agat 24

<210> 92

<223> Sf48AR

cacttttcct tgctcagtta tt 22

<210> 93

<223> Sf49AF

tgttgatttg atttggcccg ataa 24

<210> 94

<223> Sf49AR

ggtggcggct tgtcgtttta 20

<210> 95

<223> Sf50AF

ggaaataatt ggccgtgaca taa 23

<210> 96

<223> Sf50AR

tgtcaataaa cgtgggtgaa att 23

<210> 97

<223> Sf51AF

cttgtctttc aggtaagtct taag 24

<210> 98

<223> Sf51AR

tgatgtggaa ggaagtcagc tatt 24

<210> 99

<223> Sf52AF

tgtagtatgc aatctgttaa g 21

<210> 100

<223> Sf52AR

aaagaggcag tcgtaacaaa ta 22

<210> 101

<223> Sf53AF

tgacgtgtaa aagtgttatt 20

<210> 102

<223> Sf53AR

ccaacttaca aatgatacga taa 23

<210> 103

<223> Sf54AF

catatagaaa gagagacgga taga 24

<210> 104

<223> Sf54AR

actcgatcgc agtttaaaat 20

<210> 105

<223> Sf55AF

actgtaactc aacgcgtaca attt 24

<210> 106

<223> Sf55AR

attgtgatta actggtggaa att 23

<210> 107

<223> Sf56AF

ggaacttgcc ggaaaattat tt 22

<210> 108

<223> Sf56AR

gtaccagcca ccattcgtct at 22

<210> 109

<223> Sf57AF

gctacacgcc gtataacaca tta 23

<210> 110

<223> Sf57AR

tgggtttgaa atgcctggaa ta 22

<210> 111

<223> Sf58AF

gcaatggacg tcttgtagct aat 23

<210> 112

<223> Sf58AR

agtgaaaatt gtttgcctta atc 23

<210> 113

<223> Sf59AF

ccgacttaca cttggccatt tt 22

<210> 114

<223> Sf59AR

cttgagatat tgacgtcaga aaat 24

<210> 115

<223> Sf60AF

ttggtcagca gtggtcgttt at 22

<210> 116

<223> Sf60AR

tctcggggtg gtataagcaa tta 23

<210> 117

<223> Sf61AF

tggagattag agatgtggta ttat 24

<210> 118

<223> Sf61AR

ggtagacatg tttcttgggg atta 24

<210> 119

<223> Sf62AF

cgcatctgtc ttgtgtcgtt at 22

<210> 120

<223> Sf62AR

gctctgattg gttggctcgt ata 23

<210> 121

<223> Sf63AF

caagagcata tgtgagttgg atta 24

<210> 122

<223> Sf63AR

gcttcaaatc tccatacaac ttat 24

<210> 123

<223> Sf64AF

acgaaactac catcaagctt aa 22

<210> 124

<223> Sf64AR

acgtaatgtg caatcaatat ct 22

<210> 125

<223> Sf65AF

gcgtgttgtt ttatagccta tt 22

<210> 126

<223> Sf65AR

gtgtgacact aattaatcta tac 23

<210> 127

<223> Sf66AF

agcgtgccaa acaatttata c 21

<210> 128

<223> Sf66AR

cagaaggagg gttattaaaa t 21

<210> 133

<223> Sf67AF

acactttcat atctttccaa tag 23

<210> 130

<223> Sf67AR

ggttgcgtac ataccttact a 21

<210> 131

<223> Sf68AF

ggatcccttc actggctata aa 22

<210> 132

<223> Sf68AR

acctaacaaa atcctgacat aa 22

<210> 133

<223> Sf70AF

aaccggataa ccctatgata ga 22

<210> 134

<223> Sf70AR

tcgtgagcac aaacaaatta aa 22

<210> 135

<223> Sf71AF

gttcagcagt ggacgtctta tg 22

<210> 136

<223> Sf71AR

gagtccgggt tgtttattga tttt 24

<210> 137

<223> Sf72AF

ttttcattgc accgcctaaa g 21

<210> 138

<223> Sf72AR

acgtagataa cctccactcc taaa 24

<210> 139

<223> Sf73AF

gcgaacgtag gagcataaaa tt 22

<210> 140

<223> Sf73AR

acgcactcaa ctccaagcat at 22

<210> 141

<223> Sf74AF

tttaggggaa attcaggatt ag 22

<210> 142

<223> Sf74AR

tgggagaaaa gctttgttca ttta 24

<210> 143

<223> Sf75AF

gcttcgagcg tatttgtcag tata 24

<210> 144

<223> Sf75AR

ccttagcttg agagaccagt atac 24

<210> 145

<223> Sf77AF

cacgttgctt tgcccaaata at 22

<210> 146

<223> Sf77AR

acgaacaaac aaacgcacat ttt 23

<210> 147

<223> Sf78AF

cgcactgctc ggttcctatt 20

<210> 148

<223> Sf78AR

catcctaagg tgacgatgtt aaa 23

<210> 149

<223> Sf79AF

tgactaacaa ataccagcaa ttt 23

<210> 150

<223> Sf79AR

cgacactgac tcgtaaacaa ta 22

<210> 151

<223> Sf80AF

gcacattcga cggtcagttt at 22

<210> 152

<223> Sf80AR

actgtttgac ttgtgcccat aa 22

<210> 153

<223> Sf81AF

tggcgtttaa agtgttgtaa at 22

<210> 154

<223> Sf81AR

aggcccaaca gattcggaaa ta 22

<210> 155

<223> Sf82AF

tccatttcta cacctcttca taga 24

<210> 156

<223> Sf82AR

ggtgaagttt ccgatcccta tct 23

<210> 157

<223> Sf83AF

agtggtctaa gttcgcgcta at 22

<210> 158

<223> Sf83AR

accccatatg cacgtacatt tt 22

<210> 159

<223> Sf84AF

ttctgcaatg tcatcgctac ta 22

<210> 160

<223> Sf84AR

aatgctgcgt gaagagaaaa tt 22

<210> 161

<223> Sf85AF

accgaattac ttgacctatt tt 22

<210> 162

<223> Sf85AR

ccttagaatt ggtcgattta ttc 23

<210> 163

<223> Sf86AF

aggggaaggc ctttgttcaa ta 22

<210> 164

<223> Sf86AR

ccaacccacc tgcctcttat aa 22

<210> 165

<223> Sf87AF

ttgtcaagtc ggatcttata ag 22

<210> 166

<223> Sf87AR

aaatccattt agccgtttag 20

<210> 167

<223> Sf88AF

tgtgacaagt ctactgctgg atta 24

<210> 168

<223> Sf88AR

tgtattgtgg ctgtgaatca tttt 24

<210> 169

<223> Sf90AF

ttacctgttt gtgttgtatt 20

<210> 170

<223> Sf90AR

cagagttccc aatgatcaaa tt 22

<210> 171

<223> Sf91AF

atcgagcgtt aggaataaat tt 22

<210> 172

<223> Sf91AR

cggaaactcg ataaaatgaa ta 22

<210> 173

<223> Sf92AF

gttccaactc caactgcaaa at 22

<210> 174

<223> Sf92AR

cactcaaggc ggggaagtaa tt 22

<210> 175

<223> Sf93AF

acacccgaaa caccagagat tta 23

<210> 176

<223> Sf93AR

gctcagaaaa cggacgtgaa ata 23

<210> 177

<223> Sf94AF

ctataggtag ttgggtcatt ac 22

<210> 178

<223> Sf94AR

gtaagggtat tattgtaggt att 23

<210> 179

<223> Sf95AF

aaaattcgcg ttccattatc t 21

<210> 180

<223> Sf95AR

aacatgatac acccacttta tg 22

<210> 181

<223> Sf96AF

gcaacacgtc accctcatat 20

<210> 182

<223> Sf96AR

cggatatgga atgagtttga aaat 24

<210> 183

<223> Sf97AF

attttagaag tgggagcaga ta 22

<210> 184

<223> Sf97AR

tttgcttgcg gaaacaaata c 21

<210> 185

<223> Sf98AF

ctgcattcgt tcgggagtta tg 22

<210> 186

<223> Sf98AR

agcaatgcga aaagtaggtt tat 23

<210> 187

<223> Sf99AF

cagtaatttt gtgccaatga tat 23

<210> 188

<223> Sf99AR

agaggtgtgt aagattcgta gta 23

<210> 189

<223> Sf100AF

agcaaaccaa tcatctcata ga 22

<210> 190

<223> Sf100AR

agccaaatca tgagcaaggt taat 24

<210> 191

<223> Sf101AF

tgccgttctc agaataattt tatg 24

<210> 192

<223> Sf101AR

gccgtgcaca aagacattta atg 23

<210> 193

<223> Sf102AF

acggcgctgt ctctaattct aaa 23

<210> 194

<223> Sf102AR

actaaaccca agcgaactaa tt 22

<210> 195

<223> Sf103AF

tctgtcgttc tagggatagc aata 24

<210> 196

<223> Sf103AR

ttgttctacg tggaggatta ag 22

<210> 197

<223> Sf104AF

ttccaggcaa aagcatataa aa 22

<210> 198

<223> Sf104AR

tcagccaaga tgataacaaa tatg 24

<210> 199

<223> Sf105AF

acgtatttgc tcccactcct aaa 23

<210> 200

<223> Sf105AR

acatgccgaa tagtacgaaa at 22

<210> 201

<223> Sf107AF

gtttgtgaag gcataatggt aaag 24

<210> 202

<223> Sf107AR

attgctttga ggtcggggta at 22

<210> 203

<223> Sf108AF

attcaaacag agacgtaatt aag 23

<210> 204

<223> Sf108AR

acactatttc cacgtctcca tta 23

<210> 205

<223> Sf109AF

catgatcgat ggcttattct at 22

<210> 206

<223> Sf109AR

tcttctccgt gccaaatgat at 22

<210> 207

<223> Sf110AF

ccgataatct agcagacgta tt 22

<210> 208

<223> Sf110AR

atagtgaacc agagagttat tc 22

<210> 209

<223> Sf111AF

cacgctcaat agtcaatag 19

<210> 210

<223> Sf111AR

ttaagatgga cgtgttattc 20

<210> 211

<223> Sf112AF

gagccaaatt aaaagtgccc ttaa 24

<210> 212

<223> Sf112AR

tgaatatggc ttctgttgat tta 23

<210> 213

<223> Sf113AF

cgaaacgctg tcctactaaa at 22

<210> 214

<223> Sf113AR

tgctcaaacc ttcttcatgc aata 24

<210> 215

<223> Sf114AF

ttcccgaaca tcaaccctag at 22

<210> 216

<223> Sf114AR

acattaaatc cgcctatcat ttt 23

<210> 217

<223> Sf115AF

gaccagtagt tccggagatt aa 22

<210> 218

<223> Sf115AR

cgtggtgtaa aatatttgtt tag 23

<210> 219

<223> Sf116AF

ctgcctaccc ttcagagata aa 22

<210> 220

<223> Sf116AR

tgactgttag agaatgcctt aag 23

<210> 221

<223> Sf117AF

tgcctaactt catgggagat a 21

<210> 222

<223> Sf117AR

tgcgtcatcc atttaagata ga 22

<210> 223

<223> Sf118AF

gtttcctgtc gttccacctt ta 22

<210> 224

<223> Sf118AR

agaaagacaa gaacggttaa ag 22

<210> 225

<223> Sf119AF

gtcgtgacca gcgtgactta a 21

<210> 226

<223> Sf119AR

gtcagtttca cacgattgca ata 23

<210> 227

<223> Sf120AF

tctaaatcga gcagctcttc taaa 24

<210> 228

<223> Sf120AR

tgctgctctc acttttcgat cta 23

<210> 229

<223> Sf122AF

gaacgctcct tctccacatc ta 22

<210> 230

<223> Sf122AR

ctcaatcttc agctaatcac aata 24

<210> 231

<223> Sf123AF

gtcaaaatcc atcaaaccgt ttag 24

<210> 232

<223> Sf123AR

gggtctgggt gtcatgtgta tt 22

<210> 233

<223> Sf124AF

tcagcaccga cccatactat tg 22

<210> 234

<223> Sf124AR

ttcgacaaag gaaacgcaat ac 22

<210> 235

<223> Sf125AF

tttggaaaga tgcgtatttt 20

<210> 236

<223> Sf125AR

ggggtgtgaa attgatataa tac 23

<210> 237

<223> Sf126AF

gcgagatgta ggtacgaact aaa 23

<210> 238

<223> Sf126AR

gatgaatatt ggtcaaagga taga 24

<210> 239

<223> Sf127AF

aatgctcttt ctgttgtaat cta 23

<210> 240

<223> Sf127AR

ggatgagccg tttctgagat ta 22

<210> 241

<223> Sf128AF

gatcacgaat tcacaaatag ta 22

<210> 242

<223> Sf128AR

gtgcgtaata cctgtccatt tt 22

<210> 243

<223> Sf130AF

ggatgtatca tctgttagct agta 24

<210> 244

<223> Sf130AR

ttggtgtttt ggctgtgaga ta 22

<210> 245

<223> Sf131AF

aggtgtgtct gtaatgataa at 22

<210> 246

<223> Sf131AR

gaccgcatcc aagaaaatat tg 22

<210> 247

<223> Sf132AF

agttgccata gtttaccggt acta 24

<210> 248

<223> Sf132AR

tgtctaagaa cactcgcata tg 22

<210> 249

<223> Sf133AF

gaatctccat cccttttgtt aag 23

<210> 250

<223> Sf133AR

aaactgcctc ctccatatat ac 22

<210> 251

<223> Sf135AF

agtcgtcgtc atctatcgtc tat 23

<210> 252

<223> Sf135AR

acatctgtgc ttgtatacct aatg 24

<210> 253

<223> Sf136AF

tctccagcct cctaactctt tta 23

<210> 254

<223> Sf136AR

gcgttcaaag tccgtgcata aa 22

<210> 255

<223> Sf137AF

tgaggttatt tcggctcagt tat 23

<210> 256

<223> Sf137AR

gccacttcag cctgcatatt tt 22

<210> 257

<223> Sf139AF

cggtacacaa tctccaccta aag 23

<210> 258

<223> Sf139AR

gtaagacaca attgccaatt ac 22

<210> 259

<223> Sf140AF

tgtctaagaa cactcgcaca tatg 24

<210> 260

<223> Sf140AR

tgctccttta ccggcttgta ta 22

<210> 261

<223> Sf142AF

cagttcggag cttgctgatt at 22

<210> 262

<223> Sf142AR

ccagtaacac cgcctgctat tt 22

<210> 263

<223> Sf143AF

gctctgctcg gttcctatta atc 23

<210> 264

<223> Sf143AR

tgatcacttc agacatctta ttg 23

<210> 265

<223> Sf144AF

cctttcactg ctctgctcct att 23

<210> 266

<223> Sf144AR

agtgattgat actgacgcca aaat 24

<210> 267

<223> Sf145AF

gggtgtccga aaacaaggtt aag 23

<210> 268

<223> Sf145AR

acggacagac tgacagacta tt 22

<210> 269

<223> Sf147AF

gggtgatgta ttggggcgat at 22

<210> 270

<223> Sf147AR

accggcctat ctagaagtca tta 23

<210> 271

<223> Sf148AF

acagtcgttt tgccatccat aa 22

<210> 272

<223> Sf148AR

tgaggaagtc agtaaatgta atg 23

<210> 273

<223> Sf149AF

tctgtgacaa gaagagaata c 21

<210> 274

<223> Sf149AR

tgtcaaatcc gtagtcacca taa 23

<210> 275

<223> Sf150AF

ttcgtgtttt caatgtgtat tc 22

<210> 276

<223> Sf150AR

acgcaggtca ctagataata tt 22

<210> 277

<223> Sf151AF

acccacgaca caggagaaaa t 21

<210> 278

<223> Sf151AR

tgtatgtact gatttccgat acta 24

<210> 279

<223> Sf152AF

agtactacat cgactcacat aa 22

<210> 280

<223> Sf152AR

cgtgagtaag ccgataacat aata 24

<210> 281

<223> Sf154AF

tgtctaagaa cactcgccca taa 23

<210> 282

<223> Sf154AR

tgctgctgag tccaaggatt tt 22

<210> 283

<223> Sf156AF

catactctta ggctggtttt ag 22

<210> 284

<223> Sf156AR

cagtcaatcg agcgttagga ata 23

<210> 285

<223> Sf157AF

ttctccacac tgaagatatt t 21

<210> 286

<223> Sf157AR

acacttacac cttgttacta at 22

<210> 287

<223> Sf158AF

cagacaacca cctcgagcat aa 22

<210> 288

<223> Sf158AR

gctacttgcg gggatggtaa t 21

<210> 289

<223> Sf159AF

gctctgctcg gctcctatta g 21

<210> 290

<223> Sf159AR

cacctcaacg tgcctttaat tt 22

<210> 291

<223> Sf160AF

tcatctcgtg accgcaaaat ta 22

<210> 292

<223> Sf160AR

tttgtcaaac atgtctgctt aa 22

<210> 293

<223> Sf161AF

gctcgcgttt tgtaattatc 20

<210> 294

<223> Sf161AR

agcaatgcaa aacacaagga aata 24

<223> Sf162AF

cattgtggga ggcctatgtt tag 23

<210> 296

<223> Sf162AR

tcgacttctc taccaacgac ataa 24

<210> 297

<223> Sf163AF

cctcaatttc taccaagtgc ttat 24

<210> 298

<223> Sf163AR

ggtagatgat gaaccgtaga t 21

<210> 299

<223> Sf165AF

caaggatggg agaaattag 19

<210> 300

<223> Sf165AR

gattgtccta aacctgaact aaa 23

<210> 301

<223> Sf167AF

gggtaaggtt tgcgagtcct att 23

<210> 302

<223> Sf167AR

agatagagtg gttgcttcta aag 23

<210> 303

<223> Sf168AF

aaccagaatg ttgttgtcta t 21

<210> 304

<223> Sf168AR

gacaaaggaa cagcaattga tttt 24

<210> 305

<223> Sf169AF

ctgttgttcg gacggtaatt ta 22

<210> 306

<223> Sf169AR

acctatggtc cacaataaag 20

<210> 307

<223> Sf170AF

actcgatggg ttaaacaata atag 24

<210> 308

<223> Sf170AR

tcgggcaaat ttctcggtag ta 22

<210> 309

<223> Sf172AF

acaatataca tgcagcagaa ttt 23

<210> 310

<223> Sf172AR

tacggccgta aactgtaatt 20

<210> 311

<223> Sf173AF

tcacatctta ctcatttcga taa 23

<210> 312

<223> Sf173AR

cagattgtga ccgtagcatc ta 22

<210> 313

<223> Sf174AF

cggtaaacac tggtattctg atat 24

<210> 314

<223> Sf174AR

tggttgttaa gaaggtaaag ata 23

<210> 315

<223> Sf175AF

tggcagttac atgttggttt ag 22

<210> 316

<223> Sf175AR

tcttcttgtg attcgtgtaa ag 22

<210> 317

<223> Sf176AF

tggtagtggt tggatgcata ga 22

<210> 318

<223> Sf176AR

cgaacggtaa caaagtggga tat 23

<210> 319

<223> Sf177AF

gaactgcgaa ctaagggatt ac 22

<210> 320

<223> Sf177AR

agctaggtgg agtgacgata tc 22

<210> 321

<223> Sf178AF

tgtaacacag cgtcattatt t 21

<210> 322

<223> Sf178AR

ggacggagat ggtgaatgtt aat 23

<210> 323

<223> Sf180AF

agtcagtacc caccaagatt tag 23

<210> 324

<223> Sf180AR

tgaaatttga gtggcaggga aaat 24

<210> 325

<223> Sf181AF

caacatgtag attgtaggta ttg 23

<210> 326

<223> Sf181AR

cagcctaaga caatacaagc taat 24

<210> 327

<223> Sf182AF

tgtgtttcgt ttcctgtgtt tag 23

<210> 328

<223> Sf182AR

cagctaagtg gagtgacgat atc 23

<210> 329

<223> Sf183AF

gctcctaagt gctggcaaat at 22

<210> 330

<223> Sf183AR

agcttcccga gacatttcct taa 23

<210> 331

<223> Sf184AF

gaagagagag ggaaatagta 20

<210> 332

<223> Sf184AR

gatactgtca ggtaagttaa aa 22

<210> 333

<223> Sf185AF

cagatatggt cgatgtactc aata 24

<210> 334

<223> Sf185AR

agacttagga tgttcgcaat tac 23

<210> 335

<223> Sf186AF

ttcccgtgtc gagcaaagta tt 22

<210> 336

<223> Sf186AR

cccactttgc accattcgtt tat 23

<210> 337

<223> Sf187AF

actagccgtc taacattatc ta 22

<210> 338

<223> Sf187AR

acatgagaca tgtttccatt tt 22

<210> 339

<223> Sf188AF

cgcaaaagag ggtgttataa g 21

<210> 340

<223> Sf188AR

ccactttcac cgcccataac 20

<210> 341

<223> Sf189AF

cttcaggagg tcagagatta ta 22

<210> 342

<223> Sf189AR

tgatgttact agtgaccata tc 22

<210> 343

<223> Sf191AF

gtctcaactc aagtccccaa gata 24

<210> 344

<223> Sf191AR

tcatcccttc caatacgaca taac 24

<210> 345

<223> Sf192AF

gctcctattg atcgtagcgt aatg 24

<210> 346

<223> Sf192AR

gcaagttcag gttggtattt ta 22

<210> 347

<223> Sf194AF

agccgattaa taacgcatct tat 23

<210> 348

<223> Sf194AR

cctttggtta gcagtaggta ttc 23

<210> 349

<223> Sf195AF

tcggcctagg ttttctacaa tac 23

<210> 350

<223> Sf195AR

ttttgcgccg tgttgattat tt 22

<210> 351

<223> Sf196AF

agttagtgtg ggcttagtaa aa 22

<210> 352

<223> Sf196AR

ggaccagtat ttccggagat tag 23

<210> 353

<223> Sf197AF

ggataacgat gttggtagtg taat 24

<210> 354

<223> Sf197AR

ttttgcacat tgtcagtata ga 22

<210> 355

<223> Sf198AF

tgtacaccca ctttcaccat tta 23

<210> 356

<223> Sf198AR

gccttcctcg ataaatgcac tatt 24

<210> 357

<223> Sf199AF

actttctttg ggctagcgtt at 22

<210> 358

<223> Sf199AR

taaactactg tcatgcgatt tt 22

<210> 359

<223> Sf200AF

tgagtgctgt gttgtttaat ac 22

<210> 360

<223> Sf200AR

tccgtgctgt aactgactat ct 22

<210> 361

<223> Sf201AF

cacgcactca agtacaacga tta 23

<210> 362

<223> Sf201AR

gtgcgaccag tagaatatct 20

<210> 363

<223> Sf203AF

ccgcgttgaa gtagctagta tt 22

<210> 364

<223> Sf203AR

aacgttgatg tagttatgga tat 23

<210> 365

<223> Sf204AF

acaaacaaac tcttcagctt ta 22

<210> 366

<223> Sf204AR

gaccgcgccc ttcatacta 19

<210> 367

<223> Sf205AF

tgtaattggc tttctgttgt ctat 24

<210> 368

<223> Sf205AR

tcgctcaaga aacgtacaat aga 23

<210> 369

<223> Sf206AF

atggatcact gttatctgat taa 23

<210> 370

<223> Sf206AR

ccgaaactgt tgggcctata ta 22

<210> 371

<223> Sf207AF

acaatataca tgtgtgggta atc 23

<210> 372

<223> Sf207AR

gcctattgcc ttcctcgata aa 22

<210> 373

<223> Sf208AF

ttccggtcta tttacacatt tt 22

<210> 374

<223> Sf208AR

agcctgtaat ggtaaatgtt tat 23

<210> 375

<223> Sf209AF

gctctgcctg gctcctattg 20

<210> 376

<223> Sf209AR

cgcgggcaaa agctagtcta ta 22

<210> 377

<223> Sf210AF

ggttatgaaa attggcttgt aat 23

<210> 378

<223> Sf210AR

tgtagtaagg aggttaatgt ttag 24

<210> 379

<223> Sf211AF

agcggatttg gtagcctagt tat 23

<210> 380

<223> Sf211AR

gtaggcccaa cagtttcgaa aat 23

<210> 381

<223> Sf212AF

cattttactt tctgcagtta atg 23

<210> 382

<223> Sf212AR

caacgcttgg tattttcaga tttt 24

<210> 383

<223> Sf213AF

ctgaaagtcg tttggtaggt aatg 24

<210> 384

<223> Sf213AR

tagcaaagcg acgaaacata ag 22

<210> 385

<223> Sf214AF

acacctacag tcaaaccgct aaa 23

<210> 386

<223> Sf214AR

agggactctc tgaagtattt attg 24

<210> 387

<223> Sf215AF

tcgcctgttg agtaaaagag aata 24

<210> 388

<223> Sf215AR

caattgttac tggttactgt ctat 24

<210> 389

<223> Sf216AF

tctgtgcttc tttgaacgaa tcta 24

<210> 390

<223> Sf216AR

agcctatgtt actctggata atg 23

<210> 391

<223> Sf217AF

acaccttttc cacagcttaa aa 22

<210> 392

<223> Sf217AR

gctgctggta gtctgtggtt at 22

<210> 393

<223> Sf218AF

accagacgca acggtaatat g 21

<210> 394

<223> Sf218AR

ttcagcaatg aacgtcttat g 21

<210> 395

<223> Sf219AF

atggcaaact tctcttaata ga 22

<210> 396

<223> Sf219AR

tattgcagga aagacgaata ac 22

<210> 397

<223> Sf220AF

gagaactcat cagcttgttt atc 23

<210> 398

<223> Sf220AR

aaatccatca aagccgttta g 21

<210> 399

<223> Sf222AF

catgggactt acaacacaaa tt 22

<210> 400

<223> Sf222AR

ccaaagctga ggattttatt aa 22

<210> 401

<223> Sf223AF

agctacaaca cgccacaaaa tt 22

<210> 402

<223> Sf223AR

agttacattt tgacggcgta tct 23

<210> 403

<223> Sf224AF

gaacaattca caccttcata aa 22

<210> 404

<223> Sf224AR

acttcttacg ctagtgatag a 21

<210> 405

<223> Sf225AF

ccgagctggt gaagagaaga ata 23

<210> 406

<223> Sf225AR

ggtccgtcct ccttaccaat aa 22

<210> 407

<223> Sf226AF

<400> 407

acgacacctc tcaagttaaa 20

<210> 408

<223> Sf226AR

ggtacacctc ttgcataaca ttta 24

<210> 409

<223> Sf227AF

ggaatccatg aaagaaatat aag 23

<210> 410

<223> Sf227AR

tcgaaaactg agacataatt 20

<210> 411

<223> Sf228AF

tcgcggttat actttggtta ttg 23

<210> 412

<223> Sf228AR

caggggcctt agtctgctat ta 22

<210> 413

<223> Sf229AF

agcgaacctc tatgtcttca aatt 24

<210> 414

<223> Sf229AR

gagaatcggc caacatctat tt 22

<210> 415

<223> Sf231AF

gggaagagaa ggcgtggtat aa 22

<210> 416

<223> Sf231AR

gccccgctca ctaatcatca taa 23

<210> 417

<223> Sf232AF

agcagtttgg agatttctga tta 23

<210> 418

<223> Sf232AR

tccagtaaca ccctctgcta tt 22

<210> 419

<223> Sf233AF

ctcattggaa tataacacct ata 23

<210> 420

<223> Sf233AR

cctgctaacc ttaatactgt aaat 24

<210> 421

<223> Sf234AF

actatacagg cgcacagtac ta 22

<210> 422

<223> Sf234AR

acgtgtatgt ctccgagaat aga 23

<210> 423

<223> Sf235AF

acaacacccg tgagtttag 19

<210> 424

<223> Sf235AR

tgccacttca aggtaccaaa tag 23

<210> 425

<223> Sf236AF

gctgaaatcc atcaagccgt ttag 24

<210> 426

<223> Sf236AR

tgcggtacac tgggaagtag ta 22

<210> 427

<223> Sf237AF

cgagcagcgc cagaatttag 20

<210> 428

<223> Sf237AR

tagtttgccg atcgtcccat aa 22

<210> 429

<223> Sf239AF

cctagtgtaa ggcaaggtat tt 22

<210> 430

<223> Sf239AR

acatgttgtc cttgcgaaaa tac 23

<210> 431

<223> Sf240AF

gttcagcagt ggacgtctta ag 22

<210> 432

<223> Sf240AR

agtacgatgt ctcttttgga ata 23

<210> 433

<223> Sf241AF

tgtctaacaa cactcgcaca taa 23

<210> 434

<223> Sf241AR

tcagagtgtg tatatcgctt aa 22

<210> 435

<223> Sf242AF

tgacagcgat gaggagaatt ac 22

<210> 436

<223> Sf242AR

tctccactcc catcaccatc ta 22

<210> 437

<223> Sf243AF

cgatgggcca gtgtatcaga ta 22

<210> 438

<223> Sf243AR

ttcaccagta actttgcctt ta 22

<210> 439

<223> Sf244AF

tgttatcgca ttgggtccta aa 22

<210> 440

<223> Sf244AR

tccctccgtt tgtttgttag ta 22

<210> 441

<223> Sf245AF

gcaacagagc aaagagtaat tt 22

<210> 442

<223> Sf245AR

taattttgtc gctagtgata ga 22

<210> 443

<223> Sf246AF

gcagacagaa gttagttttc aata 24

<210> 444

<223> Sf246AR

acgtggtcat tgatcatcat ta 22

<210> 445

<223> Sf247AF

ctgttctatc gatacgtaca tttt 24

<210> 446

<223> Sf247AR

cagaaatagt acattgctat atg 23

<210> 447

<223> Sf248AF

tgactcacaa taacacgtat aac 23

<210> 448

<223> Sf248AR

cccctattac tggattgcta ttg 23

<210> 449

<223> Sf249AF

ggactagtag ttccggagat tag 23

<210> 450

<223> Sf249AR

cccctgcaca caaacaaaga ta 22

<210> 451

<223> Sf250AF

tgtccatcag tgaagctaaa g 21

<210> 452

<223> Sf250AR

ccttctcagt ccgtcgttag at 22

<210> 453

<223> Sf251AF

ttgccactca ttgccaaatc ta 22

<210> 454

<223> Sf251AR

cattagcgcg cggtagatag at 22

<210> 455

<223> Sf252AF

atctatccag ttgtcaataa ag 22

<210> 456

<223> Sf252AR

gaagaatgaa tgctgacgaa aat 23

<210> 457

<223> Sf253AF

gtcataacgc actatctata tat 23

<210> 458

<223> Sf253AR

ttcttagtgc tcccctacat at 22

<210> 459

<223> Sf254AF

gcactccggc cagcataaag 20

<210> 460

<223> Sf254AR

ctccgtccgc agctctattc 20

<210> 461

<223> Sf255AF

tcggttgagt ggttttgatt ctat 24

<210> 462

<223> Sf255AR

tcttgtcgtt gtgctaggtt atct 24

<210> 463

<223> Sf256AF

cgtgagtaag ccgatagtat aa 22

<210> 464

<223> Sf256AR

agagacctcc ccaacattac 20

<210> 465

<223> Sf257AF

agcgattttc tgacgtcaat atct 24

<210> 466

<223> Sf257AR

tgaaatcact gcatccgttt ag 22

<210> 467

<223> Sf258AF

catcggcttc ccctgtatct a 21

<210> 468

<223> Sf258AR

tgacctacac caacagcgaa ata 23

<210> 469

<223> Sf259AF

aaaatatggt agggatgata tc 22

<210> 470

<223> Sf259AR

agtctataca gctgcgattt ta 22

<210> 471

<223> Sf260AF

atccggacgt gtggttgttt ag 22

<210> 472

<223> Sf260AR

tccatagtgc atacagggat aa 22

<210> 473

<223> Sf261AF

agacaggcgt gaggttatg 19

<210> 474

<223> Sf261AR

cgtctgtctg taggtattat ta 22

<210> 475

<223> Sf262AF

ccgaatcgtt tctttgtttc ataa 24

<210> 476

<223> Sf262AR

tgtacataca cagtggcatt ac 22

<210> 477

<223> Sf264AF

catcattttc atctacccat aa 22

<210> 478

<223> Sf264AR

agaaggggaa tttgaaggat aag 23

<210> 479

<223> Sf265AF

tcggcccatc ataacaataa tg 22

<210> 480

<223> Sf265AR

tgttttacag tttggcgatt tt 22

<210> 481

<223> Sf266AF

cggaagctag ttataaacaa taa 23

<210> 482

<223> Sf266AR

acctgaccta accttctcat ttt 23

<210> 483

<223> Sf267AF

cttgagtttg gattatacag ata 23

<210> 484

<223> Sf267AR

ctagcttaga taccaaattt tag 23

<210> 485

<223> Sf268AF

tgagtattaa ccctgtgcca attt 24

<210> 486

<223> Sf268AR

caagtgatga tggcagttta tg 22

<210> 487

<223> Sf269AF

ccggtcattt gattatacgc ataa 24

<210> 488

<223> Sf269AR

tgatatcaat tccgaggctt at 22

<210> 489

<223> Sf270AF

agtcaagctg tttcttctta aag 23

<210> 490

<223> Sf270AR

tgttatggta atcggtggtt taa 23

<210> 491

<223> Sf271AF

ttctattggc tgtataacgt attg 24

<210> 492

<223> Sf271AR

aacgccacac acctcaaaat t 21

<210> 493

<223> Sf272AF

ggatatgtct gttcttcccc ttaa 24

<210> 494

<223> Sf272AR

tgagttggtc acagaataag tatt 24

<210> 495

<223> Sf273AF

aaagtgcttg tgtttgattt ag 22

<210> 496

<223> Sf273AR

tttggggaaa tgcttatatt 20

<210> 497

<223> Sf274AF

gatactccat cgatactcct aaaa 24

<210> 498

<223> Sf274AR

cgtggggatt atggcaaaac ttta 24

<210> 499

<223> Sf275AF

gaacttgaac ttgttgaact taa 23

<210> 500

<223> Sf275AR

gccaaaccca catgtaactt tag 23

<210> 501

<223> Sf276AF

agacgcctac ttcttgtgca tta 23

<210> 502

<223> Sf276AR

tttccttcac cgtttgttaa tg 22

<210> 503

<223> Sf277AF

catttgcaag cgtggtaatc 20

<210> 504

<223> Sf277AR

agcgtcctct gatgaactaa tg 22

<210> 505

<223> Sf278AF

ccccaaggtc tgacagtatt aa 22

<210> 506

<223> Sf278AR

accttataac cttcctcgat aa 22

<210> 507

<223> Sf279AF

gtctggaaat gtgcccggta ta 22

<210> 508

<223> Sf279AR

tcgatcattc tcaaggtcaa ttt 23

<210> 509

<223> Sf280AF

cggtgtcggc caaaataga 19

<210> 510

<223> Sf280AR

aggcccaact gtttcggaaa ta 22

<210> 511

<223> Sf282AF

tgagtggttt ataagacgat aac 23

<210> 512

<223> Sf282AR

tgtactgaaa tctgctctta ag 22

<210> 513

<223> Sf283AF

ctgcatctgt tcgggagtta tg 22

<210> 514

<223> Sf283AR

ggaatatacc gtgtgatttg ataa 24

<210> 515

<223> Sf284AF

gtataggttc tttgcatgta aaa 23

<210> 516

<223> Sf284AR

gaaatatcgg aaacccatag a 21

<210> 517

<223> Sf285AF

gctctcctga cataagcgaa tac 23

<210> 518

<223> Sf285AR

cagcagtgga cgtcttatag 20

<210> 519

<223> Sf286AF

aatccgaatc atccaattta 20

<210> 520

<223> Sf286AR

gacatttcgt gccataatat ac 22

<210> 521

<223> Sf287AF

atacggctaa cttgcgctaa at 22

<210> 522

<223> Sf287AR

tggtggggca aaactctata ga 22

<210> 523

<223> Sf288AF

gccaggtttg ctagtatatc tat 23

<210> 524

<223> Sf288AR

cccgctctac ttggttccta tt 22

<210> 525

<223> Sf289AF

tggagtttta ggccgtgtta cta 23

<210> 526

<223> Sf289AR

cgtaagtagt gtagtgaggt aaaa 24

<210> 527

<223> Sf291AF

caccagctgt ccgacattat tg 22

<210> 528

<223> Sf291AR

acaaccgggt cacttacgat at 22

<210> 529

<223> Sf292AF

taccgcgtgt gaacaagtaa tg 22

<210> 530

<223> Sf292AR

ggtaactggg aggagcaata aa 22

<210> 531

<223> Sf293AF

gccaaacgtt gacccattaa at 22

<210> 532

<223> Sf293AR

cgttttatag gtaagggcat ttt 23

<210> 533

<223> Sf294AF

acactcgcac ataagtccct tta 23

<210> 534

<223> Sf294AR

ttgtgtgtgt tcaagggatc ta 22

<210> 535

<223> Sf295AF

gtgtgtgtat gtggtgggaa aat 23

<210> 536

<223> Sf295AR

gttctgtgtc taggcctcta cta 23

<210> 537

<223> Sf296AF

tctaactaga ctagcgtact a 21

<210> 538

<223> Sf296AR

gccggccatt agtgataat 19

<210> 539

<223> Sf297AF

ctgtcgtttc gcccggatct a 21

<210> 540

<223> Sf297AR

gtgaagagga agaggaggaa gata 24

<210> 541

<223> Sf298AF

agtgggtgta cattggcatt ac 22

<210> 542

<223> Sf298AR

acgtagattt ctccttcgtc taat 24

<210> 543

<223> Sf299AF

agtttaagag aggctgggta aaa 23

<210> 544

<223> Sf299AR

ttcgtttccg cgttgaacat aa 22

<210> 545

<223> Sf300AF

gttcagcagt ggacgtttta tg 22

<210> 546

<223> Sf300AR

tctagaatcc ttgcaatctg taat 24

<210> 547

<223> Sf301AF

ctggtcgact atgttactgt taag 24

<210> 548

<223> Sf301AR

ggtatataat gtgtagcgcc ttta 24

<210> 549

<223> Sf302AF

cgtaaagcaa actcgtatta g 21

<210> 550

<223> Sf302AR

acagtaaatc gagcgttagg aata 24

<210> 551

<223> Sf303AF

ttgcctgcct tcttttgtta aa 22

<210> 552

<223> Sf303AR

cctatccgat ccaagtaacc taaa 24

<210> 553

<223> Sf304AF

gtccattatt tccttaggtc tat 23

<210> 554

<223> Sf304AR

gtcaaatgag cagaccagat at 22

<210> 555

<223> Sf305AF

ggcagttgta cctactcttt aa 22

<210> 556

<223> Sf305AR

tgaaggtttg gctggtagaa aat 23

<210> 557

<223> Sf306AF

aaacagcctt aatccatagc aata 24

<210> 558

<223> Sf306AR

ttcggacttc agcagccaaa tt 22

<210> 559

<223> Sf307AF

tcacatctat ctccgccatg tatt 24

<210> 560

<223> Sf307AR

accaccgtaa ccttcaatca ata 23

<210> 561

<223> Sf308AF

agattagagg atggtgataa aa 22

<210> 562

<223> Sf308AR

cgcggtacct tattgtgtaa at 22

<210> 563

<223> Sf309AF

gcaagagggg cattaaatta aa 22

<210> 564

<223> Sf309AR

tcagatcagt agttccggag atta 24

<210> 565

<223> Sf310AF

gttttgtaac gaagccatat ct 22

<210> 566

<223> Sf310AR

tgcgttgtaa gtaaaggtaa tt 22

<210> 567

<223> Sf311AF

agaatgttcg acgtgatctt ta 22

<210> 568

<223> Sf311AR

atgtcgatgt agaacccaaa at 22

<210> 569

<223> Sf312AF

gcggaagtct cgaacaaatt t 21

<210> 570

<223> Sf312AR

tgcatagctc ttatacttta gat 23

<210> 571

<223> Sf313AF

gcatatgaaa cgctatggga tta 23

<210> 572

<223> Sf313AR

ctctcacagt aaatacgaat cta 23

<210> 573

<223> Sf314AF

catcagttgc acgaaggtaa aa 22

<210> 574

<223> Sf314AR

agccgagtct aacccttcat ta 22

<210> 575

<223> Sf316AF

tgactttaat ctgacaggaa aat 23

<210> 576

<223> Sf316AR

gcgaaagaga tggatgaatg aata 24

<210> 577

<223> Sf317AF

ttgatgaagc gaaagagata tg 22

<210> 578

<223> Sf317AR

ctgctatttg atttgacgta aaa 23

<210> 579

<223> Sf318AF

acttttgctt gctcgtctat ct 22

<210> 580

<223> Sf318AR

ggttcgtgcg ttcttgagtt at 22

<210> 581

<223> Sf319AF

aacgtctgca gttcatctag ta 22

<210> 582

<223> Sf319AR

gctgaatgtt atgtttacct aatc 24

<210> 583

<223> Sf320AF

agttcggaaa acttaatgcc aata 24

<210> 584

<223> Sf320AR

agtcagctta tccctgtatg tata 24

<210> 585

<223> Sf321AF

aagaaacgag caaagagtta aa 22

<210> 586

<223> Sf321AR

cgatacccac ctagctccta tt 22

<210> 587

<223> Sf322AF

tttaattcag gttccacaat ac 22

<210> 588

<223> Sf322AR

acctgttgtg ttgtatgttt ta 22

<210> 589

<223> Sf323AF

ggcaatacag tgggtgaaag ata 23

<210> 590

<223> Sf323AR

aagaacttcc actttgcatt a 21

<210> 591

<223> Sf324AF

gtcatcgatt gtttactgaa tatg 24

<210> 592

<223> Sf324AR

gagcctggcg aatttggtat at 22

<210> 593

<223> Sf325AF

tgccagtcta ttttctgttt atg 23

<210> 594

<223> Sf325AR

gcacagcagc agacaattaa aa 22

<210> 595

<223> Sf326AF

gcccgactga ataggttgct tat 23

<210> 596

<223> Sf326AR

cagagccgta ttatcgctgt taag 24

<210> 597

<223> Sf327AF

tgtgggtgta cattggcatt atg 23

<210> 598

<223> Sf327AR

cagaacggac ggacatattt t 21

<210> 599

<223> Sf328AF

cctccctcaa tgacttccaa ata 23

<210> 600

<223> Sf328AR

ttgcaccgtg aatactttta tg 22

<210> 601

<223> Sf329AF

tttccttagt gtttccgtta atac 24

<210> 602

<223> Sf329AR

accggacgtg ggaattgaat aa 22

<210> 603

<223> Sf330AF

caattggacc tagttacata tt 22

<210> 604

<223> Sf330AR

tgacagccat ttcaaatgat aga 23

<210> 605

<223> Sf331AF

cctttgtata atggttgcaa aat 23

<210> 606

<223> Sf331AR

tcccacaata caacctgaga ttag 24

<210> 607

<223> Sf332AF

tcatgtgacc tttcttgtat aa 22

<210> 608

<223> Sf332AR

tgtcctacat ctgaccgaat tt 22

<210> 609

<223> Sf333AF

ccactctaga gatgacgaat aag 23

<210> 610

<223> Sf333AR

catcacaggt tttgcaatat tc 22

<210> 611

<223> Sf334AF

aggtcgctgt ctgtttgatt ta 22

<210> 612

<223> Sf334AR

tcctattggc tgtataacgt attg 24

<210> 613

<223> Sf335AF

agggcaaact aaacctttta a 21

<210> 614

<223> Sf335AR

agatagaaga agacacatgt tatg 24

<210> 615

<223> Sf336AF

atatcttcat ccccacatag ta 22

<210> 616

<223> Sf336AR

caagaagact atcaacagca atac 24

<210> 617

<223> Sf338AF

agcgtgatgt tttatagcct atag 24

<210> 618

<223> Sf338AR

tcgtactctc catcgcacat aa 22

<210> 619

<223> Sf339AF

atggacctag cacaaatac 19

<210> 620

<223> Sf339AR

gtggtagtgt actaaatctt aa 22

<210> 621

<223> Sf340AF

tctttctcac ttcttttctc tat 23

<210> 622

<223> Sf340AR

gacaccctca agccaaaat 19

<210> 623

<223> Sf341AF

acgcatagca acaccctctt ta 22

<210> 624

<223> Sf341AR

tcccttacca gtcctgctta gta 23

<210> 625

<223> Sf342AF

agccgagtct aacctcttca tta 23

<210> 626

<223> Sf342AR

acaatcgctt cacatgttta ttg 23

<210> 627

<223> Sf343AF

cagctacata gacgagacat aag 23

<210> 628

<223> Sf343AR

cgctctgctc ggttcctatt aa 22

<210> 629

<223> Sf344AF

tcattcgaca aagatcccaa att 23

<210> 630

<223> Sf344AR

gtgagttgtg tttgttgttg ttat 24

<210> 631

<223> Sf345AF

tcaacacata acaggtaaaa 20

<210> 632

<223> Sf345AR

ctacaggctc atattcataa ag 22

<210> 633

<223> Sf346AF

atcgagctgc ccatttctat at 22

<210> 634

<223> Sf346AR

tttgtagtgg ttgtatgatt tag 23

<210> 635

<223> Sf347AF

catgtgacct taactacaga ttta 24

<210> 636

<223> Sf347AR

acctaactca cctaccacta cta 23

<210> 637

<223> Sf348AF

cgaaacccag caacaaacca ata 23

<210> 638

<223> Sf348AR

agcccgaatc ttagactcca ttac 24

<210> 639

<223> Sf349AF

gctctactag tttcgagtca taga 24

<210> 640

<223> Sf349AR

aggctcaaca gtttcggaaa ta 22

<210> 641

<223> Sf350AF

gaccagtagt tccggagatt ag 22

<210> 642

<223> Sf350AR

gaatagggta aggaatgatt tatc 24

<210> 643

<223> Sf351AF

ggacctgtag ttccggagat ta 22

<210> 644

<223> Sf351AR

ttgtcagtca gtccgtcatc ta 22

<210> 645

<223> Sf352AF

tcgccatact cagagtcatt ta 22

<210> 646

<223> Sf352AR

ggagtacact gaggacttgc ttta 24

<210> 647

<223> Sf353AF

cgctgcctac ggaatcctaa at 22

<210> 648

<223> Sf353AR

gcctttgtgc actttcatcc tata 24

<210> 649

<223> Sf354AF

tttaaactac gcaacggatt tt 22

<210> 650

<223> Sf354AR

acataggtgc agtggtgata ta 22

<210> 651

<223> Sf355AF

acccgaagcg tttgaattat aa 22

<210> 652

<223> Sf355AR

tccgatagct atatggtact aaa 23

<210> 653

<223> Sf356AF

ccgaagaggc tgagaaatta gat 23

<210> 654

<223> Sf356AR

cgtcttcact ctctgcctct tta 23

<210> 655

<223> Sf357AF

acagaaacta gttaggcaca tcta 24

<210> 656

<223> Sf357AR

tggagccggc tatgatcatt at 22

<210> 657

<223> Sf359AF

gctttagttt gaacatcata tag 23

<210> 658

<223> Sf359AR

ctacaccagg agatagatat g 21

<210> 659

<223> Sf360AF

ccttcctgcc tctttccttt ctat 24

<210> 660

<223> Sf360AR

ttgtttatcg cgtgctgtaa aa 22

<210> 661

<223> Sf361AF

cgaacaagcg gtctctaatt 20

<210> 662

<223> Sf361AR

actgtaaagc gccggttatt tt 22

<210> 663

<223> Sf362AF

atgtgggaaa ttggacgatt ac 22

<210> 664

<223> Sf362AR

gctaaaagtg ctcgttaagt att 23

<210> 665

<223> Sf363AF

ctttccaacc acaaacgaca ata 23

<210> 666

<223> Sf363AR

tcctagtttc gtaaattcgt att 23

<210> 667

<223> Sf364AF

ggtcgaccca tcatgtatat aa 22

<210> 668

<223> Sf364AR

aagccggtta ttaaaggttt ta 22

<210> 669

<223> Sf365AF

gccaaagtag cctgataata aag 23

<210> 670

<223> Sf365AR

tgggagacat gcgttaggta aaa 23

<210> 671

<223> Sf366AF

actgactcta ctacggttgg ttat 24

<210> 672

<223> Sf366AR

tgcgtcaaaa tcggttcaga ta 22

<210> 673

<223> Sf367AF

cgtactgtgt agcatgtaag ttat 24

<210> 674

<223> Sf367AR

tgattaatgc gttacccact aaa 23

<210> 675

<223> Sf368AF

agttacttgt acaatagcga ata 23

<210> 676

<223> Sf368AR

ggagcgtgcc aaacaatta 19

<210> 677

<223> Sf369AF

agaattgacc tccttacaga ttta 24

<210> 678

<223> Sf369AR

aggatgtatg tcgcgaatgt ttaa 24

<210> 679

<223> Sf370AF

ggtgtgcctg taatgataaa t 21

<210> 680

<223> Sf370AR

agtgcgattt catttgccat ttt 23

<210> 681

<223> Sf371AF

caagtgtttg gctgttatat ta 22

<210> 682

<223> Sf371AR

gagacaggcg tgaggttat 19

<210> 683

<223> Sf372AF

acctgggctt attattttct aat 23

<210> 684

<223> Sf372AR

actaatgtag aaaaggtgta cta 23

<210> 685

<223> Sf373AF

cggagaaaga atatgaggaa tcta 24

<210> 686

<223> Sf373AR

tctttgtcaa cgtactttgt agat 24

<210> 687

<223> Sf374AF

agagtaactt ctggcatcat ttt 23

<210> 688

<223> Sf374AR

agataccgat accttactac ta 22

<210> 689

<223> Sf375AF

gcgtggcggg acaatattg 19

<210> 690

<223> Sf375AR

tcaattagtg atgtagccat aga 23

<210> 691

<223> Sf376AF

ccgcatgcat acttttctta a 21

<210> 692

<223> Sf376AR

cagagcgtgc caaaacaatt a 21

<210> 693

<223> Sf377AF

ggttttaaga ccgactgttg ttat 24

<210> 694

<223> Sf377AR

tgaagaagct atcaaacata gta 23

<210> 695

<223> Sf378AF

tgccttgcgg acttattatt at 22

<210> 696

<223> Sf378AR

tgcactatcc aacacaaaga atta 24

<210> 697

<223> Sf379AF

gctcctattg atcatggcgt aat 23

<210> 698

<223> Sf379AR

acttgtaatt ctgacgtgaa att 23

<210> 699

<223> Sf380AF

acctcctcat cttctacgac ttaa 24

<210> 700

<223> Sf380AR

acgaacacag tcagccaatt ta 22

<210> 701

<223> Sf381AF

cgtttgctcg tttgcctctt at 22

<210> 702

<223> Sf381AR

agacagacat cagtggaaat tac 23

<210> 703

<223> Sf382AF

gaaggcgagg aggacgttaa g 21

<210> 704

<223> Sf382AR

agatatgaac cgaccctaag taat 24

<210> 705

<223> Sf383AF

tgttgccact tctagtaggt att 23

<210> 706

<223> Sf383AR

gctcaggcgt cggtcaataa tt 22

<210> 707

<223> Sf384AF

ggttaagcct cactgtcgta ttg 23

<210> 708

<223> Sf384AR

gtcgagttca ttcagtcctc aata 24

<210> 709

<223> Sf385AF

acagcgacta tgttgagatt at 22

<210> 710

<223> Sf385AR

gccacacgac cgtacaaata aa 22

<210> 711

<223> Sf386AF

tcctcaagtg gacatacgta tct 23

<210> 712

<223> Sf386AR

tgtgctgtgt ggctggaata ta 22

<210> 713

<223> Sf387AF

<400> 713

acattttact atagcgacct tat 23

<210> 714

<223> Sf387AR

attgagtgac gtttgagtat tt 22

<210> 715

<223> Sf388AF

gtcaaaatcc atcaagcagt ttag 24

<210> 716

<223> Sf388AR

aggtcacctc cgttattata tc 22

<210> 717

<223> Sf389AF

ttagttagtc agagtcatta tc 22

<210> 718

<223> Sf389AR

tgatgataat gtggtgatta atg 23

<210> 719

<223> Sf390AF

cagtcaccgc atcaaccatt ac 22

<210> 720

<223> Sf390AR

cggttcgtga gttgtggatt tt 22

<210> 721

<223> Sf391AF

aaatgcttat gactcaagta aag 23

<210> 722

<223> Sf391AR

acgttgccca gtatacacaa ta 22

<210> 723

<223> Sf392AF

tggagtcaag ggccgtttta aa 22

<210> 724

<223> Sf392AR

tcaccggacg ttcaatgttt aa 22

<210> 725

<223> Sf393AF

agtcccaccc tatcacattg tata 24

<210> 726

<223> Sf393AR

gttccgccat atttacattc tat 23

<210> 727

<223> Sf394AF

tgttgcggaa atgcctttac ta 22

<210> 728

<223> Sf394AR

gcttagaaga ttgtcacatg ttat 24

<210> 729

<223> Sf395AF

ggccaccgta agtaataata taa 23

<210> 730

<223> Sf395AR

ccgccgtcaa actgtcttaa 20

<210> 731

<223> Sf396AF

cacgtaccgg taagctagtg atta 24

<210> 732

<223> Sf396AR

tgagcaagcg tgttgattaa tg 22

<210> 733

<223> Sf397AF

ggatatgact ataatacggc ttta 24

<210> 734

<223> Sf397AR

acacctacgt tccattggtt taa 23

<210> 735

<223> Sf398AF

tgagacatga ttttcgttat tg 22

<210> 736

<223> Sf398AR

tggtaaggtg ttaatgaata ga 22

<210> 737

<223> Sf399AF

tgtacctact tgtgcataaa g 21

<210> 738

<223> Sf399AR

cacatgaaac aaaaccgcag ata 23

<210> 739

<223> Sf400AF

cagagccagg taattattat tat 23

<210> 740

<223> Sf400AR

acgaaacctt caatgctatt t 21

<210> 741

<223> Sf401AF

agaccgaaac ttggctcata tt 22

<210> 742

<223> Sf401AR

tgcgatgggg atgagtgtag at 22

<210> 743

<223> Sf402AF

acttacgtta ccatgcattt at 22

<210> 744

<223> Sf402AR

tcatgttgga tgtaggtagc ataa 24

<210> 745

<223> Sf403AF

aaaggtttgg ctggtagaaa at 22

<210> 746

<223> Sf403AR

gaagcatggt ccaatcgtat ta 22

<210> 747

<223> Sf404AF

gtgctgggct cctcttttat ta 22

<210> 748

<223> Sf404AR

ctttcgcagg cctcttcaaa tt 22

<210> 749

<223> Sf405AF

gagaaggaac ggggtggttt ta 22

<210> 750

<223> Sf405AR

tcgtgacgac tttctgttat g 21

<210> 751

<223> Sf406AF

caactctttg tgtgatgtat aa 22

<210> 752

<223> Sf406AR

agactaatga gccactaatg 20

<210> 753

<223> Sf407AF

actctggtga ttcgggtata aa 22

<210> 754

<223> Sf407AR

tggaaggagt gtcaagagta tt 22

<210> 755

<223> Sf408AF

cgtgagttga gccagtagat 20

<210> 756

<223> Sf408AR

tgggttgatt gaaggttggt aaaa 24

<210> 757

<223> Sf409AF

acagtttaag gcacagttta taga 24

<210> 758

<223> Sf409AR

cgcgcgacta aaggacatta c 21

<210> 759

<223> Sf410AF

cttgactcac tactcgtaca taa 23

<210> 760

<223> Sf410AR

caaaagtaag acgttgtagt a 21

<210> 761

<223> Sf411AF

gacctcgttc gtgtcaactt at 22

<210> 762

<223> Sf411AR

gttctacgtg gaggactaaa a 21

<210> 763

<223> Sf412AF

gggcgacaaa ttccgaaata tg 22

<210> 764

<223> Sf412AR

acaccagtga cgtcagtaat c 21

<210> 765

<223> Sf413AF

tgaacccaaa tacggctagg ataa 24

<210> 766

<223> Sf413AR

ggatcgatac caaacccaaa ta 22

<210> 767

<223> Sf414AF

caaacgtcgg cccattcaat at 22

<210> 768

<223> Sf414AR

actgtgcgat gtgacaaatt ta 22

<210> 769

<223> Sf415AF

tggagaaaca ctgaaactga tta 23

<210> 770

<223> Sf415AR

acaggaggta ggatatattt ag 22

<210> 771

<223> Sf416AF

ataaagtcga cacatacata tag 23

<210> 772

<223> Sf416AR

gtcagcaagc aaacaagtaa at 22

<210> 773

<223> Sf417AF

ttcaaattgt cgggtttatc 20

<210> 774

<223> Sf417AR

tgggaaactg taatgataga t 21

<210> 775

<223> Sf418AF

gcttgcacaa tcagctggtt at 22

<210> 776

<223> Sf418AR

tggatggatt caaggagaca tta 23

<210> 777

<223> Sf419AF

cgaaactgtt tgggcctaca taa 23

<210> 778

<223> Sf419AR

tctaggctag ggtttagtgt att 23

<210> 779

<223> Sf420AF

tcatgaagta gataggtagg tata 24

<210> 780

<223> Sf420AR

tctacaattg ccgacgtctt ta 22

<210> 781

<223> Sf421AF

ccttcggtgc tagttagtaa aa 22

<210> 782

<223> Sf421AR

gtataactgc gaggaattac 20

<210> 783

<223> Sf422AF

cgttacagtt tggcgagtct agat 24

<210> 784

<223> Sf422AR

cgaccagtag ttccggagat ta 22

<210> 785

<223> Sf423AF

cgactgccgc gctactatag 20

<210> 786

<223> Sf423AR

caactttcga gacataccac taaa 24

<210> 787

<223> Sf424AF

gggtgagtga ggcgtgattt a 21

<210> 788

<223> Sf424AR

tacccacgtt ttcctctatt ac 22

<210> 789

<223> Sf23AF

tctcactctc actctcactc taaa 24

<210> 790

<223> Sf23AR

aacgtcagac ttggcctcta at 22

<210> 791

<223> Sf36AF

tgttgtgcgc ggtacctata tg 22

<210> 792

<223> Sf36AR

cacctgccaa caagaggaga ta 22

<210> 793

<223> Sf138AF

ctacaggcag ctctacgata ag 22

<210> 794

<223> Sf138AR

tcatttagtc aaccaaccaa tatg 24

<210> 795

<223> Sf69AF

acgacttcag aatagggaca gata 24

<210> 796

<223> Sf69AR

aagcggcgta ctgttggaga ta 22

<210> 797

<223> Sf76AF

ccaaaatggc ccagtagtta ag 22

<210> 798

<223> Sf76AR

ccttcctggt ctatttgaaa ta 22

<210> 799

<223> Sf89AF

aagtccattt ccaccagtac ta 22

<210> 800

<223> Sf89AR

tgtttcaata accgccatgc ttat 24

<210> 801

<223> Sf106AF

cgcaggtttt attgatttac ta 22

<210> 802

<223> Sf106AR

cagatttcgt actaccgttc tat 23

<210> 803

<223> Sf121AF

acgctaaagt acaaaacccc atat 24

<210> 804

<223> Sf121AR

gtatgcacaa cggttacatt atg 23

<210> 805

<223> Sf129AF

agcgatattt gtatgcacct aaa 23

<210> 806

<223> Sf129AR

acttccaggt attgaacatt ac 22

<210> 807

<223> Sf134AF

cgtggctggt agtggttaga t 21

<210> 808

<223> Sf134AR

cgtgcccttg tttctggttt aa 22

<210> 809

<223> Sf141AF

cgcacacaca cgtacaattt at 22

<210> 810

<223> Sf141AR

tcggaaacta ctgtataacc ttta 24

<210> 811

<223> Sf146AF

tgtcgctgca atttaataaa 20

<210> 812

<223> Sf146AR

gactcgctaa ctgaaacaaa tt 22

<210> 813

<223> Sf153AF

tgcgtatcat aagtgtgaag aata 24

<210> 814

<223> Sf153AR

agtaagggat tagttctggt acta 24

<210> 815

<223> Sf155AF

tctcaggcaa atctcccata ag 22

<210> 816

<223> Sf155AR

aagcgtgaag attgtcgaaa at 22

<210> 817

<223> Sf164AF

ccggtttggt ctgagagttt atc 23

<210> 818

<223> Sf164AR

ggtgaactta ttgccatacg atta 24

<210> 819

<223> Sf166AF

cagatttgtc atcaccaata c 21

<210> 820

<223> Sf166AR

gacttcgtct gtatggaata atg 23

<210> 821

<223> Sf171AF

agcgtgatga tttatagcct ata 23

<210> 822

<223> Sf171AR

gttagtttta agcggttgaa att 23

<210> 823

<223> Sf179AF

cctgaaggtt tggctgtaga aaat 24

<210> 824

<223> Sf179AR

tgactggtaa ttagtgaacg atat 24

<210> 825

<223> Sf190AF

agggtccctt attgatttag at 22

<210> 826

<223> Sf190AR

accgttacaa tcgttcgcta aa 22

<210> 827

<223> Sf193AF

agaaactgtc atgtaaacta atg 23

<210> 828

<223> Sf193AR

tcagaggaca cagacagaat aa 22

<210> 829

<223> Sf202AF

aactttagag cacgtcctag at 22

<210> 830

<223> Sf202AR

tcgttattgc ttggtggtgt tatg 24

<210> 831

<223> Sf221AF

tcacttccaa ccggcctatc ta 22

<210> 832

<223> Sf221AR

tggtcaatgc aggtggtgat at 22

<210> 833

<223> Sf230AF

ggattttccc tcctgctgta ta 22

<210> 834

<223> Sf230AR

tttacagggt gcttcaaatt ag 22

<210> 835

<223> Sf238AF

agcctgcgaa ctgtgcttta a 21

<210> 836

<223> Sf238AR

acactttgga acgagcaaat ag 22

<210> 837

<223> Sf263AF

acctgggctt attatttctg atta 24

<210> 838

<223> Sf263AR

agataacctc acccgttcct att 23

<210> 839

<223> Sf281AF

atgtgaggct gtatctgtaa tg 22

<210> 840

<223> Sf281AR

tcagaaataa cgagccacac ataa 24

<210> 841

<223> Sf290AF

actgtaaagg ccgcaactaa ag 22

<210> 842

<223> Sf290AR

agccgacaat taaacccata ac 22

<210> 843

<223> Sf315AF

gctcatctca ggaacgtaat ta 22

<210> 844

<223> Sf315AR

ggggctttat tttattgttt ag 22

<210> 845

<223> Sf337AF

cggccgatga tgctgtctat ta 22

<210> 846

<223> Sf337AR

agcctataac cttcctcgat aa 22

<210> 847

<223> Sf358AF

caaaacttta gcttggtaat c 21

<210> 848

<223> Sf358AR

cggcgtcaat ctaattagtt aat 23

<210> 849

<223> M13

tgtaaaacga cggccagt 18

Claims (10)

1.一种基于草地贪夜蛾全基因组序列开发的SSR引物组，其特征在于：该SSR引物组包括424对引物，其核苷酸序列如序列表SEQ ID No.1～848所示。

2.一种基于草地贪夜蛾全基因组序列开发的SSR核心引物组，其特征在于：该SSR核心引物组包括30对核心引物，其核苷酸序列如序列表SEQ ID No.789～848所示。

3.根据权利要求1所述的基于草地贪夜蛾全基因组序列开发的SSR引物组或权利要求2所述的基于草地贪夜蛾全基因组序列开发的SSR核心引物组，其特征在于：

在所述SSR引物组或所述SSR核心引物组的每个正向引物的5’末端添加M13通用接头序列，或在每个正向引物的5’末端添加带荧光标记的M13通用接头序列；

所述的M13通用接头序列的核苷酸序列SEQ ID No.849所示。

4.权利要求1所述的基于草地贪夜蛾全基因组序列开发的SSR引物组或权利要求2所述的基于草地贪夜蛾全基因组序列开发的SSR核心引物组在草地贪夜蛾遗传多样性分析，种群鉴定指纹图谱数据库构建，区域种群监测，和/或入侵虫源追踪方面的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，通过如下步骤实现：

(1)DNA提取：提取草地贪夜蛾的基因组DNA作为PCR扩增模板；

(2)采用权利要求1所述的SSR引物组或权利要求2所述的SSR核心引物进行PCR扩增，得到扩增产物；

(3)将扩增产物进行毛细管电泳和激光诱导荧光检测；

(4)根据电泳结果进行草地贪夜蛾遗传多样性分析，种群鉴定指纹图谱数据库构建，区域种群监测，和/或入侵虫源追踪。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：

步骤(2)中所述的SSR引物组或SSR核心引物组中在每个正向引物5’末端添加带荧光标记的M13通用接头序列；

所述的M13通用接头序列的核苷酸序列SEQ ID No.849所示；

所述的荧光标记为采用荧光基团HEX和FAM进行标记。

7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：

步骤(3)中所述的进行毛细管电泳和激光诱导荧光检测为在CEQ8000遗传分析系统中进行；

步骤(3)中所述的毛细管电泳分离的条件为：温度50℃；进样2.0KV，30s；电泳4.8KV，时间65min。

8.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：

步骤(4)中所述的遗传多样性分析包括等位基因数，多样性指数，多态性信息量，种群间的遗传相似系数和聚类分析。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于：

步骤(4)中所述的遗传多样性分析包括采用PowerMarker V3.25计算引物的等位基因数、多样性指数、多态性信息量，利用NTSYS-peversion-2.02c软件计算种群间的遗传相似系数，用GeneAIEx软件计算Nei’s遗传距离，用Phylip软件的UPGMA方法根据Nei’s遗传距离矩阵绘系统发育树。

10.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：

步骤(1)中所述的DNA提取为采用微量样品基因组DNA提取试剂盒进行提取；

步骤(1)中所述的草地贪夜蛾为草地贪夜蛾的幼虫；

步骤(2)中所述的PCR扩增的体系为25μL扩增体系：5U/μL TaKaRa Taq 0.125μL,10×PCR Buffer(Mg²⁺Plus)2.5μL,各2.5mM的dNTP Mixture 2μL，10μM的上游和下游引物各0.4μL，模板1μL，加ddH₂O至25μL；

步骤(2)中所述的PCR扩增的反应程序为：94℃预变性2min；94℃变性10S，55℃退火30S，72℃延伸30S，35个循环；72℃延伸5min。