KR20180090996A

KR20180090996A - 상처를 치유하기 위한 조성물 및 방법

Info

Publication number: KR20180090996A
Application number: KR1020187015261A
Authority: KR
Inventors: 수시트라 수미트란-홀게르손
Original assignee: 베리그라프트 아브
Priority date: 2015-11-02
Filing date: 2016-10-28
Publication date: 2018-08-14
Also published as: CA3003069A1; AU2016349679A1; WO2017076782A1; JP2018535749A; CN108495659A; US20180303970A1; EP3370787A1

Abstract

본 개시내용은 포유동물 조직의 세포외 매트릭스 구성성분 및 중합체를 포함하는 조작된 생체재료의 조성물; 상처 치유하는 방법; 및 상처 치유를 위해 치료제, 성장 인자, 또는 수화를 그를 필요로 하는 대상체에 전달하는 방법에 관한 것이다.

Description

상처를 치유하기 위한 조성물 및 방법

관련 출원

본 출원은 2015년 11월 2일자로 출원된, 미국 특허 가출원 번호 62/249,587에 대한 우선권을 주장하며, 이의 개시내용은 모든 목적을 위해 그 전문이 참조로 포함된다.

상처 치유는, 인간 신체에서의 정상 생물학적 과정으로서, 4개의 정확하고 고도로 프로그래밍된 단계를 통해 달성된다: 지혈, 염증, 증식, 및 재형성. 상처를 성공적으로 치유하기 위해, 모든 4개의 단계는 적절한 순서 및 시간 프레임으로 발생해야만 한다. 많은 인자는 이 과정의 1개 이상의 단계를 방해할 수 있으며, 따라서 부적절하거나 또는 손상된 상처 치유를 야기한다.

지연된 급성 상처 및 만성 상처를 포함한, 손상된 치유를 나타내는 상처는, 일반적으로 치유의 정상 스테이지를 통해 진행하는데 실패해 왔다. 이러한 상처는 연기된, 불완전한, 또는 미협응된 치유 과정으로 인해 병적 염증의 상태로 빈번하게 들어간다. 대부분의 만성 상처는 허혈, 당뇨병, 정맥 정체 질환, 또는 압박과 연관되어 있는 궤양이다. 비-치유 상처는 미국에서 약 3 내지 6백만명의 사람에게서 발생하며, 65세 이상의 사람은 이러한 사례의 85%를 차치한다. 비-치유 상처는 연간 30억 달러 초과로 추정된 총 비용으로, 거대한 건강 관리 지출을 유발한다.

성인 인간에서, 최적의 상처 치유는 하기 사례를 수반한다: (1) 빠른 지혈; (2) 적절한 염증; (3) 상처 부위에 대한 중간엽 세포 분화, 증식, 및 이동; (4) 적합한 혈관신생; (5) 신속한 재상피화 (상처 표면 상의 상피 조직의 재성장); 및 (6) 치유 조직에 강도를 제공하기 위한 콜라겐의 적절한 합성, 교차-연결, 및 정렬.

다양한 세포-기반 요법 및 조직 공학 전략법은 만성 상처 또는 급성 피부 외상을 앓고 있는 환자를 치료하기 위해 개발된 바 있다. 그러나, 어떠한 것도 만성 또는 급성 상처의 지속적인 상처 치유를 달성하는데 최적이지는 않다. 지속적인 상처 폐쇄를 달성하기 위해, 기능적인 혈관망의 형성은 상처 기저부의 재생에 중요하다. 본 개시내용은 상처를 치유하는데 사용하기 위한 개선된 조성물을 제공한다.

본 개시내용은, 특히, 상처에 적용하기 위한 포유동물 조직의 ECM 구성성분 및 중합체를 포함하는 조성물 (예를 들어, 조작된 생체재료); 조성물 (예를 들어, 조작된 생체재료)을 적용하는 것을 포함하는, 그를 필요로 하는 대상체의 상처를 치유하는 방법; 조성물 (예를 들어, 조작된 생체재료)을 적용하는 것을 포함하는, 그를 필요로 하는 대상체의 상처에 치료제를 전달하는 방법; 포유동물 조직의 세포외 매트릭스 (ECM) 구성성분, 중합체, 및 성장 인자를 포함하는 조성물 (예를 들어, 조작된 생체재료)을 대상체의 상처에 적용하는 것을 포함하는, 그를 필요로 하는 대상체의 상처에 성장 인자를 전달하는 방법; 및 포유동물 조직의 세포외 매트릭스 (ECM) 구성성분 및 중합체를 포함하는 조성물 (예를 들어, 조작된 생체재료)을 대상체의 상처에 적용하는 것을 포함하는, 그를 필요로 하는 대상체의 상처를 수화시키는 방법을 제공한다. 포유동물 조직은 탈세포화된 포유동물 조직일 수 있다. ECM의 구성성분은 포유동물 (예를 들어, 인간)의 조직으로부터 단리 및/또는 정제되거나 또는 각각의 ECM 구성성분 (예를 들어, 콜라겐, 엘라스틴, 라미닌, 글리코사미노글리칸, 프로테오글리칸, 항미생물제, 화학유인물질, 시토카인, 및 성장 인자)를 코딩하는 포유동물 (예를 들어, 인간)의 유전자 또는 유전자 단편을 수반하는 재조합 DNA 기술을 사용하여 생성되고 적합한 발현 시스템 (원핵 또는 진핵 (예를 들어, 곤충 또는 포유동물 세포))에서 발현되고, 후속적으로 관련 기술분야에서의 적합한 방법에 의해 단리 및/또는 정제되거나 또는 그렇게 될 수 있다.

조성물 (예를 들어, 조작된 생체재료) 중 ECM 구성성분은 포유동물 조직, 예를 들어, 상피 및/또는 결합 조직으로부터 수득될 수 있고, 피부, 태반, 및/또는 제대로부터 수득될 수 있다. 조성물 (예를 들어, 조작된 생체재료)은 겔 조성물일 수 있다. 조성물 (예를 들어, 조작된 생체재료) 중 중합체는 디사카라이드 중합체, 예를 들어, 히알루론산을 포함할 수 있다. 조성물 (예를 들어, 조작된 생체재료)은 혈액 세포 또는 혈소판 풍부 혈장을 추가로 포함할 수 있다. 조성물 (예를 들어, 조작된 생체재료)은 인간 말초 혈액 단핵 세포를 포함할 수 있다. ECM 구성성분은 콜라겐, 엘라스틴, 및/또는 황산화 글리코사미노글리칸 (GAG)을 포함할 수 있다. ECM 구성성분은 합성 중합체와 혼합될 수 있다.

조성물 (예를 들어, 조작된 생체재료) 중 포유동물 조직은 포유동물, 예를 들어, 돼지, 소, 새끼양, 염소, 양, 또는 영장류 (예를 들어, 인간)로부터 수득될 수 있다. 포유동물 조직은 탈세포화된 포유동물 조직일 수 있다. 포유동물은 돼지일 수 있다. 포유동물, 예를 들어, 돼지는 α-Gal (Galα1,3-Galβ1-4-GlcNAc-R) 에피토프에 대한 녹아웃 돌연변이체일 수 있다.

상처를 치유하는 방법은 급성 또는 만성 상처, 또는 피부 상처, 예컨대 피부 열상, 마찰상, 폐쇄 충격 수술 상처, 피부 찰과상, 화상, 피부 절개, 피부 열창, 피부 좌상, 피부 자상, 압박 궤양, 정맥 궤양, 동맥 궤양, 신경병증성/당뇨병성 상처, 림프부종, 또는 수술 부위 절개를 치유하는 것을 포함한다.

본 개시내용의 다른 특색 및 이점은 하기 상세한 설명 및 청구범위로부터 명백할 것이다.

달리 나타내지 않는 한, 본원에 언급된 모든 공개, 참고문헌, 특허 및/또는 특허 출원은 모든 목적을 위해 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.

도 1a - 1g는 돼지 피부의 육안적 형태학 및 조직학 영상이다. 위로 향한 표피 측 (도 1a) 및 위로 향한 진피 측 (도 1b)을 갖는 Gal/gal 녹아웃 천연 돼지 피부는 분홍색빛 색상, 털의 존재, 및 피하 지방을 입증하였다. 도 1c는 핵 (청색) 및 세포 물질의 존재를 제시하는 천연 돼지 피부의 헤마톡실린 및 에오신 염색을 제시한다. 도 1d 및 1e는 탈세포화의 9일 후에 탈세포화된 돼지 피부의 영상을 제시하고, 피부는 연한 백색이었다. 도 1f는 핵 및 세포 물질의 완전한 부재 하의 탈세포화된 돼지 피부의 헤마톡실린 및 에오신 영상 염색을 제시한다. 도 1g는 히알루론산 및 각질세포 배지를 함유하는 탈세포화된 돼지 피부를 사용하여 제조된 겔의 영상을 제시한다 (스케일 막대 - 50 μm).
도 2a - 2f는 탈세포화된 돼지 피부의 특징화의 막대 그래프 및 영상을 제시한다. 도 2a는 세포의 제거에도 불구하고 탈세포화된 돼지 피부 분말에서의 잔여 세포외 매트릭스 구성성분의 존재를 제시하는 막대 그래프이다. 도 2b는 천연 (상부 패널) 및 탈세포화된 (하부 패널) 돼지 피부 콜라겐 (청색)의 마손 트리크롬 (MT) 염색을 제시하는 영상이다. 도 2c는 (상부 패널) 천연 및 (하부 패널) 탈세포화된 돼지 피부에서 엘라스틴 (흑색)에 대한 베르호에프-반 기손 (VVG) 염색을 제시하는 영상이다. 도 2d는 빛에 대해 투명한 필라멘트형, 백색 육안 외양을 제시하는 분말화된 돼지 피부의 광학 현미경 사진이다. 도 2e 및 2f는 돼지 피부 분말이 형상 및 크기가 다양한 리본-유사 섬유로 이루어졌다는 것을 제시하는 스캐닝 전자 현미경사진이다. 섬유는 불규칙적으로 주름지고 꼬였고, 용이하게 분산가능한 다발을 형성한다 (스케일 막대 - 200 μm).
도 3a - 3d는 누드 마우스에서의 전층 피부 상처의 상처 치유의 육안적 형태학을 제시하는 영상의 시리즈이다. 치유는 미치료 (도 3a) 또는 히알루론산 (HA) (도 3b)으로 치료된 것들과 비교 시 제15일에 돼지 피부 겔 (PSG) 단독 (도 3c) 또는 PSG+인간 말초 혈액 단핵 세포 (PSG+hPBMC) (도 3d)로 치료된 마우스에서 유의하게 가속화하는 것으로 밝혀졌다. 게다가, 진분홍색 유색 반흔은 제25일에 과도한 수축으로 인해 미치료 그룹의 치유된 피부에서 여전히 관찰되었고 세장형 반흔은 또한 히알루론산 (도 3b) 및 각질세포 배지로 치료된 동물에서 관찰되긴 했지만, 반흔이 약간 있거나 또는 전혀 없는 현저하게 뚜렷하고 거의 완전히 치유된 피부는 PSG (도 3c) 또는 PSG+hPBMC (도 3d)로 치료된 동물에서 보였다.
도 4a - 4d는 누드 마우스에서의 상처 치유 진행을 제시하는 피부 생검의 헤마톡실린 및 에오신 염색 영상의 시리즈이다. 전층 피부 미치료 상처; 또는 히알루론산 (HA) (도 4b); 또는 돼지 피부 겔 (PSG 단독) (도 4c) 또는 PSG+인간 말초 혈액 단핵 세포 (PSG+hPBMC) (도 4d)로 치료된 전층 피부 상처의 치유 진행을 조직학에 의해 연구하였다. 수술 후 제5일에 보여진 바와 같이, 모든 그룹에서의 동물은 풍부한 염증 세포를 나타내었다. 대조군 (미치료 (도 4a) 및 HA (도 4b))에서의 상처는 심지어 제25일에도 인접한 조직으로부터 구별가능하였고 뚜렷한 진피 층이 전혀 관찰되지 않았지만, PSG 단독 (도 4c) 및 PSG+hPBMC (도 4d) 그룹에서, 케라틴+진피 층이 뚜렷하게 관찰되었다. 이들 동물의 복원된 피부는 정상 피부와 유사한 구조를 제시하였지만, 대조군에서의 진피 층은 여전히 불완전하였다. 화살표는 모든 사진에서 상처 부위를 나타내고 숙주 피부는 이 영역의 우측에 보여진다 (스케일 막대 - 200 μm).
도 5a - 5e는 미치료 및 돼지 피부 겔 치료된 누드 마우스에서의 상처의 콜라겐 염색을 제시하는 영상 및 막대 그래프이다. 미치료 (도 5a) 및 HA 치료된 (도 5b) 동물에서의 상처의 MT 염색은 콜라겐 (청색)의 약한 염색을 제시하긴 하지만, PSG 단독 (도 5c) 및 PSG+hPBMC (도 5d)로 치료된 동물은 상처 치유의 제25일에 콜라겐에 대해 더 강한 염색을 제시하였다. 제25일에 재생된 피부에서의 콜라겐 측정은, 미치료 마우스에 비교 시 PSG+hPBMC로 치료된 동물에서 유의하게 증가된 발현을 제시하였다; p<0.05; (스케일 막대 - 100μm) (도 5e).
도 6a-6f는 돼지 피부 겔 및 인간 말초 혈액 단핵 세포로 치료된 동물의 상처에서의 인간 세포의 검출을 제시하는 영상이다. 돼지 피부 겔 (PSG) 및 인간 말초 혈액 단핵 세포로 치료된 동물의 표피 및 진피에서의 인간 세포의 존재는 인간 특이적 미토콘드리아 항체를 사용하여 검출하였다. 양성 세포는 미치료 동물에서 전혀 발견되지 않았고 (도 6a) 배경 염색은 음성 대조군에서 전혀 관찰되지 않았다 (도 6b). 항체의 특이성은 인간 간 조직을 사용하는 양성 대조군에서 입증되었다 (도 6c). PSG+hPBMC로 치료된 동물로부터 취한 피부 생검의 표피 및 진피에서의 양성적으로 염색된 세포의 존재 (흑색 화살표)는 상처 치유의 제5일에 인간 세포의 존재를 입증하였다 (도 6d 및 6e). 동일한 동물로부터 취한 피부 생검은 상처 치유 동안 새로 형성된 혈관에서의 인간 세포의 존재를 제시하였다; (스케일 막대 - 25 μm) (도 6f).
도 7a - 7g는 돼지 피부 겔 및 인간 혈액 세포로 치료된 동물의 상처에서의 인간 혈관의 검출을 제시하는 영상이다. 새로 형성된 혈관의 분포 및 밀도는 면역형광을 사용하여 평가하였다. 마우스 내피 세포의 경우에 마우스 특이적 CD31 항체 (녹색)를 사용하여 제5일 및 제10일에 숙주 혈관을 검출하였다 (도 7a 및 7d). 인간 세포가 또한 제5일 및 제10일에 신생혈관화에 기여하는지 여부를 결정하기 위해, 인간 특이적 CD31 항체 (적색)를 사용하였다 (도 7b 및 7e). 도 7c 및 7f는 각각 도 7a 및 7b, 및 7d 및 7e의 병합된 사진이다. 대조군 동물과 비교 시 (도 7g), 각각 마우스 CD31 (녹색) 및 인간 CD31 (적색)에 대한 숙주 및 인간 혈관 염색의 현저하게 증가된 수가 PSG 및 인간 세포로 치료된 동물에서 제5일에 관찰되었다 (상부 패널). 그러나, 제10일에 인간 혈관의 낮은 수가 관찰되었다 (하부 패널).

포유동물 조직의 ECM 구성성분 및 중합체를 포함하는 조성물 (예를 들어, 조작된 생체재료); 조성물 (예를 들어, 조작된 생체재료)을 적용하는 것을 포함하는, 그를 필요로 하는 대상체의 상처를 치유하는 방법; 및 조성물 (예를 들어, 조작된 생체재료)을 적용하는 것을 포함하는, 그를 필요로 하는 대상체의 상처에 치료제를 전달하는 방법이, 특히, 본원에 제공된다. 포유동물 조직은 탈세포화된 포유동물 조직일 수 있다.

정의

하기 정의는 본 발명의 대상을 이해할 목적으로 및 첨부된 특허 청구범위를 구성하기 위해 포함된다. 본원에 사용된 약어는 화학적 및 생물학적 분야 내에서 그의 통상적인 의미를 갖는다.

본 개시내용에 사용된 바와 같은 용어 "생체재료" 또는 "조작된 생체재료"는, 천연 발생 또는 합성적으로 만들어질 수 있는, 살아있는 시스템과 상호작용하는 임의의 물질, 표면, 또는 구축물을 지칭할 수 있다. 따라서, 본원에 사용된 바와 같은 용어 "생체재료"는, 단독 또는 복합 시스템의 부분으로, 살아있는 시스템의 구성성분과의 상호작용을 조절함으로써, 임의의 치료 또는 진단 절차의 과정을 지시하기 위해 사용된 형태를 취하기 위해 조작된 바 있는 물질을 지칭한다. 본 개시내용에 사용된 바와 같은 용어 "하나 이상의"는 단일 구성성분 또는 대안적으로 2종 이상의 구성성분의 조합을 지칭한다.

본 개시내용에 사용된 바와 같은 용어 "겔"은 용이하게 유동가능한 액체가 아니고 고체가 아닌, 즉 반-고체인 물질을 지칭할 수 있다. 겔은 천연 발생 또는 합성 재료로부터 형성될 수 있다. 실시양태에서, 겔은 세포외 매트릭스 구성성분을 포함하는, 분말을 제조하기 위해 탈세포화된 피부로부터 출발하여 형성된 것일 수 있다.

용어 "세포외 매트릭스" 또는 "ECM"은 세포 성장을 위한 천연 또는 인공 스캐폴딩을 지칭할 수 있다. 천연 ECM (다세포 유기체, 예컨대 포유동물 및 인간에서 발견된 ECM)은 콜라겐, 엘라스틴, 라미닌, 글리코사미노글리칸, 프로테오글리칸, 항미생물제, 화학유인물질, 시토카인, 및 성장 인자를 포함하나 이에 제한되지는 않는, 구조적 및 비-구조적 생체분자의 복합 혼합물이다. 포유동물에서, ECM은 종종 약 90% 콜라겐을 그의 다양한 형태로 포함한다. ECM의 조성 및 구조는 조직의 공급원에 따라 달라진다. 예를 들어, 소장 점막하 (SIS), 방광 매트릭스 (UBM) 및 간 기질 ECM은 각각의 조직에 필요한 특유한 세포 함요로 인해 그의 전체 구조 및 조성에서 각각 상이하고, 미국 특허 8,361,503에 기재된 바와 같은 추가의 특징 및 상세사항은 본원에 참조로 포함된다. ECM의 구성성분은 포유동물 (예를 들어, 인간)의 조직, 예를 들어, 탈세포화된 조직으로부터 단리 및/또는 정제되거나 또는 각각의 ECM 구성성분 (예를 들어, 콜라겐, 엘라스틴, 라미닌, 글리코사미노글리칸, 프로테오글리칸, 항미생물제, 화학유인물질, 시토카인, 및 성장 인자)를 코딩하는 포유 동물 (예를 들어, 인간)의 유전자 또는 유전자 단편을 수반하는 재조합 DNA 기술을 사용하여 생성되고 적합한 발현 시스템 (원핵 또는 진핵 (예를 들어, 곤충 또는 포유동물 세포))로부터로 발현되고, 후속적으로 관련 기술분야에서의 적합한 방법에 의해 단리 및/또는 정제되거나 또는 그렇게 될 수 있다.

용어 "탈세포화된"은 물리적, 화학적, 또는 효소적 수단, 또는 그의 임의의 조합이, 그의 혈관 조직의 세포 구성성분을 제거한 것으로 의미하기 위해 본 개시내용에 사용된다. 남아있는 탈세포화된 혈관 조직은 천연 혈관 조직의 세포외 매트릭스를 포함하고, 엘라스틴, 콜라겐, 피브린, 및 혈관 조직에서 발견된 다른 세포외 단백질 또는 비-단백질성 화합물; 또는 본원에 참조로 포함된 미국 특허 7,060,022에 기재된 바와 같이, 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 알려진 그의 임의의 조합을 포함하나 이에 제한되지는 않을 수 있다.

본 개시내용에 사용된 바와 같은 용어 "히알루론산" 또는 "HA"는 글리코사미노글리칸으로 알려진 중합체의 부류의 구성원을 지칭한다. HA는 장쇄 선형 폴리사카라이드이고 통상적으로 n이 공급원, 단리 절차, 및 결정의 방법에 따라 달라질 수 있는 (C₁₄H₂₀NNaO₁₁)_n의 분자식을 갖는 나트륨 염으로서 존재한다. 그러나, 최대 14x10⁶의 분자량이 보고된 바 있고, 이전에 미국 특허 6,703,444에 기재된 바 있다.

본 개시내용에서 지칭된 바와 같은 용어 "중합체"는 많은 반복된 서브유닛으로 구성된 분자 또는 거대분자를 의미한다. 그의 광범위한 특성 때문에, 합성 및 천연 중합체 둘 다는 일상 생활에서 필수적이고 편재적인 역할을 한다. 중합체는 친숙한 합성 플라스틱 예컨대 폴리스티렌에서 생물학적 구조 및 기능에 기초적인 천연 생체중합체 예컨대 DNA 및 단백질까지 이른다. 천연 및 합성 중합체 둘 다는 단량체로 알려진 많은 소분자의 중합을 통해 생성된다. 소분자 화합물에 대비하여 결과적으로 큰 그의 분자 질량은, 인성, 점탄성, 및 결정보다 오히려 유리 및 반결정질 구조를 형성하는 경향을 포함한 특유한 물리적 특성을 생성한다. 예시적인 천연 중합체 재료는 쉘락, 앰버, 울, 실크, 고무, 및 셀룰로스를 포함한다. 비-천연 (예를 들어, 합성) 중합체는 합성 고무, 페놀 포름알데히드 수지, 네오프렌, 나일론, 폴리비닐 클로라이드, 폴리스티렌, 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 및 실리콘을 포함한다.

사용될 수 있는 추가적인 합성 중합체는 생분해성 중합체 예컨대 폴리(락티드) (PLA), 폴리(글리콜산) (PGA), 폴리(락티드-코-글리콜리드) (PLGA), 폴리(카프로락톤), 폴리카르보네이트, 폴리아미드, 폴리무수물, 폴리아미노산, 폴리오르토 에스테르, 폴리아세탈, 폴리시아노아크릴레이트 및 분해성 폴리우레탄, 및 비-침식성 중합체 예컨대 폴리아크릴레이트, 에틸렌-비닐 아세테이트 중합체 및 다른 아실 치환된 셀룰로스 아세테이트 및 그의 유도체, 비-침식성 폴리우레탄, 폴리스티렌, 폴리비닐 클로라이드, 폴리비닐 플루오라이드, 폴리(비닐 이미다졸), 클로로술폰화 폴리올리핀, 폴리에틸렌 옥시드, 폴리비닐 알콜, 테플론(teflon)®, 및 나일론을 포함한다. 비-흡수성 폴리비닐 알콜 스폰지는 유니포인트 인더스트리즈(Unipoint Industries)로부터, 이발론(Ivalon)™으로서 상업적으로 입수가능하다. 이 재료를 제조하는 방법은 미국 특허 번호 2,609,347 (Wilson); 2,653,917 (Hammon), 2,659,935 (Hammon), 2,664,366 (Wilson), 2,664,367 (Wilson), 및 2,846,407 (Wilson)에 기재되어 있으며, 그의 교시는 본원에 참조로 포함된다.

용어 "혈액 세포" 또는 "혈구" 또는 "조혈 세포"는 조혈을 통해 생산된 세포를 지칭하고 혈액에서 정상적으로 발견된다. 포유동물에서, 이들 세포는 3가지 일반적인 카테고리에 속한다: 적혈 세포 (적혈구), 백혈 세포 (백혈구), 및 혈소판 (혈전구). 이와 함께, 이들 3 종류의 혈액 세포는 부피 기준으로 혈액 조직의 최대 총 45%까지 첨가되고, 남아있는 55%의 부피는 혈액의 액체 구성성분인 혈장으로 구성된다. 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC)는 둥근 핵 (엽상 핵과 대조적임), 림프구 또는 단핵구를 갖는 임의의 혈액 세포로 구성된다. 이들 혈액 세포는 감염에 대항하는 면역계에서의 구성성분이다. 이들 세포는 혈액의 층을 분리하는 친수성 폴리사카라이드인 피콜, 및 혈액을 혈장의 상부 층, 이어서 PBMC의 층 및 다형핵 세포 (예컨대 호중구 및 호산구) 및 적혈구의 하부 분획으로 분리할, 구배 원심분리를 사용하여 전혈로부터 추출될 수 있다. 다형핵 세포는 적혈 세포를 용해시킴으로써 추가로 단리될 수 있다. 예시적인 혈액 세포는 적혈구, 거핵구, 단핵구, 및 과립구를 포함한다. 인간 말초 혈액 단핵 세포 (hPBMC)는 둥근 핵을 갖는 인간 혈액 세포 (예를 들어, 림프구 또는 단핵구)이다.

본 개시내용에 사용된 바와 같이, 용어 "반흔 조직" 및 "반흔 조직 형성"은 켈로이드증, 섬유낭성 상태 및 관절 강직을 포함한 섬유증을 유발하는 임의의 병리학적 상태를 포함한다. 상기 용어는 또한 수술후 유착 또는 구축, 켈로이드, 외상 후 형성된 과형성 또는 비대성 덩어리, 여드름을 포함한 염증 반응으로부터의 함몰 흉터, 주름짐, 셀룰라이트 형성, 신생물성 섬유증, 및 신체 내 국부 영역에서 섬유모세포 증식 및 대사를 수반하는 다른 섬유화 상태를 포함한다. 이러한 국부 영역은 또한 부위, 위치 또는 생물학적 조직으로서 본 개시내용에서 지칭될 수 있다.

본 개시내용에 사용된 바와 같이, 용어 "수축"은 상처 치유 및 복구의 단계를 지칭한다. 수축이 너무 오래 지속되면, 그것은 기형 및 기능 상실로 이어질 수 있다. 따라서 콜라겐 겔 수축 검정 또는 진피 등가물 모델을 사용하여 시험관내에서 모델링될 수 있는, 상처 수축의 생물학을 이해하는데 큰 관심이 있다. 수축은, 섬유모세포가 근섬유모세포로 분화되어 있을 때, 상처난 후 대략 1주째에 시작될 수 있다. 수축은 몇 주 동안 지속될 수 있고 상처가 완전히 재상피화된 후 계속될 수 있다. 상처는 상처난 부위에서 조직이 얼마나 느슨하냐에 따라, 하루에 최대 0.75 mm의 속도로 수축할 수 있다. 수축은 통상적으로 대칭적으로 발생하지 않으며; 오히려 대부분의 상처는 콜라겐으로 더 큰 조직화 및 정렬을 가능하게 하는 '수축의 축'을 갖는다. 처음에는, 수축은 근섬유모세포 수반 없이 발생한다. 이후에, 성장 인자에 의해 자극된 섬유모세포가 근섬유모세포로 분화한다. 평활근 세포와 유사한 근섬유모세포는, 이들이 평활근 세포에서 발견된 것과 동일한 종류의 액틴을 함유하기 때문에, 수축을 담당한다.

본 개시내용에 기재된 바와 같은 용어 "급성" 상처는 시간 경과에 따라서보다 오히려 갑자기 발생하는 피부에 대한 손상을 지칭할 수 있다. 급성 상처는 신체 상 어딘가에서 발생하고 표면상 긁힘에서 혈관, 신경, 근육 또는 다른 신체 부분을 훼손시키는 깊은 상처까지 다양할 수 있다. 많은 작용은 하기를 포함한 급성 상처를 야기할 수 있다: 피부가 거친 표면에 긁힘 및 문질러짐, 날카로운 뾰족한 물체, 예컨대 못으로 신체 조직이 찔림 또는 쑤셔짐, 날카로운 엣지 또는 블레이드, 예컨대 나이프로 피부가 깔끔하게 절단됨, 임의의 물체에 의해 강타 당함, 및 조직이 전단력에 의해 거칠게 찢어짐. 2가지 주요 유형의 급성 상처가 있다: 수술 및 외상. 수술 상처는 건강 관리 전문가에 의해 의도적으로 만들어진 절개이고 정확하게 절단하여 상처 주위에 깨끗한 변연부를 만든다. 수술 상처는 치유되기 위해 폐쇄되거나 (스티치, 스테이플 또는 접착제를 사용함) 또는 개방된 채로 둘 수 있다. 수술 상처를 위한 치유 과정은 감염에 대한 그의 잠재력에 의해 분류된다. 깨끗한 수술 상처는 오염되지 않은 것으로 간주되고, 수술실에서 또는 멸균 절차 환경에서 만들어질 것이다. 오염된 수술 상처는 아마 박테리아로 오염되었지만 아직 감염되지 않은 것이다. 더러운 수술 상처는 박테리아로 감염된 것이다. 외상 상처는 일부 자연의 힘에 의해 야기된 피부 및 기저 조직에 대한 손상이다. 이들은 힘을 야기한 물체에 의해 분류된다 (예를 들어, 찰과상, 자상, 열창, 또는 절개). 찰과상은 피부가 거친 표면에 긁히거나 또는 문질러져 외상을 야기하거나 조직을 찢을 수 있으며, 예컨대 무릎이 아스팔트에 긁히는 것이다. 자상은 뾰족한 물체로 조직을 찌를 때 발생하여 때때로 깊은 다중층 외상을 야기할 수 있으며, 예컨대 발이 못에 찔린 것이다. 열창은 날카로운 물체가 조직에 심한 타격을 전달할 때 발생하여 들쭉날쭉하고 불규칙적일 수 있는 찢음을 생성할 수 있으며, 예컨대 탁자에 다리를 부딪혀 피부에서 찢어짐을 야기하는 것이다. 절개는 피부에 대한 변연부 형성된 절단이 날카로운 블레이드에 의해 야기될 때 발생할 수 있으며, 예컨대 나이프에 손가락이 절단되는 것이다.

대부분의 상처가 하는 정돈된 세트의 스테이지에서 및 예측가능한 양의 시간에서 치유되지 않는 상처; 표준 양의 시간 (예를 들어, 3개월) 내에 치유되지 않는 상처로서 본 개시내용에 기재된 바와 같은 용어 "만성 상처"는 종종 만성으로 간주된다. 만성 상처는 상처 치유의 단계 중 하나 이상에서 지체되는 것으로 고려된다. 예를 들어, 만성 상처는 종종 너무 오랫 동안 염증성 스테이지에 남아있다. 급성 상처에서, 콜라겐과 같은 분자의 생산 및 분해 사이의 정확한 균형이 있고; 만성 상처에서 이 균형은 손실되고 분해는 너무 큰 역할을 한다.

"환자", "대상체", "그를 필요로 하는 환자", 및 "그를 필요로 하는 대상체"는 본 개시내용에서 상호교환가능하게 사용되고, 본 개시내용에 제공된 방법 및 조성물을 사용하여 투여함으로써 치료될 수 있는 질환 또는 상태를 앓고 있거나 또는 그에 걸리기 쉬운 살아있는 유기체를 지칭한다. 비제한적 예는 인간, 다른 포유동물, 소과, 래트, 마우스, 개, 원숭이, 염소, 양, 소, 사슴, 및 다른 비-포유 동물을 포함한다. 일부 실시양태에서, 환자는 인간이다. 시험관내에서 수득되거나 또는 시험관내에서 배양된 생물학적 개체의 조직, 세포 및 그의 자손이 또한 포괄된다.

본 개시내용에 사용된 바와 같은 용어 "치료하다", "치료하는 것" 또는 "치료", 및 다른 문법적 등가물은, 질환, 상태 또는 증상을 완화, 약화, 호전, 또는 예방하는 것, 추가의 증상을 예방하는 것, 증상의 기저 대사 원인을 호전 또는 예방하는 것, 질환 또는 상태를 억제하는 것, 예를 들어, 질환 또는 상태의 발생을 정지시키는 것, 질환 또는 상태를 경감하는 것, 질환 또는 상태의 퇴행을 유발하는 것, 질환 또는 상태에 의해 야기된 병태를 경감하는 것, 또는 질환 또는 상태의 증상을 중지시키는 것을 포함하고, 예방을 포함하도록 의도된다. 상기 용어는 치료적 이점 및/또는 예방적 이점을 달성하는 것을 추가로 포함한다. 치료적 이점은 치료될 기저 장애의 근절 또는 호전을 의미한다. 또한, 치료적 이점은, 환자가 여전히 기저 장애를 앓고 있을지라도, 환자에서 개선이 관찰되도록 기저 장애와 연관된 하나 이상의 생리적 증상의 근절 또는 호전으로 달성된다. 본 개시내용에 사용된 바와 같이, "상처 치유"는, 예를 제한하지 않으면서, 하기 사례 중 임의의 하나 이상을 수반하는 상처의 상태를 치료, 호전, 또는 개선시키는 것을 의미한다: (1) 빠른 지혈; (2) 적절한 염증; (3) 상처 부위에 대한 중간엽 세포 분화, 증식, 및 이동; (4) 적합한 혈관신생; (5) 신속한 재상피화 (상처 표면 상의 상피 조직의 재성장); 및 (6) 치유 조직에 강도를 제공하기 위한 콜라겐의 적절한 합성, 교차-연결, 및 정렬.

"대조군" 또는 "대조군 실험"은 그의 보통의 평범한 의미에 따라 사용되고 실험의 대상 또는 시약이 실험의 절차, 시약, 또는 변수의 생략을 제외하고는 병행 실험에서와 같이 처리되는 것을 지칭한다. 일부 경우에, 대조군은 실험적 효과를 평가하는데 비교의 표준으로서 사용된다. 일부 실시양태에서, 대조군은 본 개시내용 (실시양태 및 실시예 포함)에 기재된 바와 같은 조성물의 부재 하의 표현형 또는 결과의 활성의 측정이다.

"접촉하는 것"은 그의 보통의 평범한 의미에 따라 사용되고 적어도 2개의 별개의 종 (예를 들어 생체분자 또는 세포를 포함하는 화학적 화합물)이 반응, 상호작용 또는 물리적으로 닿기 위해 충분히 근접하게 되는 것을 가능하게 하는 과정을 지칭한다. 그러나, 생성된 반응 생성물은 첨가된 시약 사이의 반응으로부터 또는 반응 혼합물 중에 생성될 수 있는 1종 이상의 첨가된 시약으로부터의 중간체로부터 직접 생성될 수 있는 것으로 인지되어야 한다. 일부 실시양태에서 접촉하는 것은 본 개시내용에 기재된 조성물이 대상체와 상호작용하는 것을 가능하게 하는 것을 포함한다.

본 명세서의 상세한 설명 및 청구범위 전체에 걸쳐 용어 "포함하다" 및 용어의 다른 형태, 예컨대 "포함하는" 및 "포함한다"는, 포함하나 이에 제한되지는 않는다는 것을 의미하고, 예를 들어, 다른 구성성분을 제외하는 것으로 의도되지 않는다.

용어 상처의 "수화", 또는 상처를 "수화하는 것"은 표피 내 각질세포의 수화 상태를 지칭한다. 각질세포는 섬유화유발 및 항섬유화 가용성 인자의 생산을 통해 섬유모세포 거동을 조절하고, 그러한 인자의 생산은 각질세포의 수화 상태에 따른다.

"공동-투여하다"는 본 개시내용에 기재된 조성물이 추가적인 요법의 투여와 동시에, 그의 직전에, 또는 그의 직후에 투여되는 것을 의미한다. 개시내용의 조성물은 환자에게 단독으로 투여될 수 있거나 또는 공동-투여될 수 있다. 공동-투여는 개별적으로 또는 조합하여 조성물 (1종 초과의 조성물 또는 작용제)의 동시적 또는 순차적 투여를 포함하는 것을 의미한다. 제제는, 목적하는 경우에, (예를 들어, 상처 치유를 위한) 다른 활성 물질과 조합될 수 있다.

본 개시내용에 사용된 바와 같이, "순차적 투여"는 2종의 작용제 (예를 들어, 본 개시내용에 기재된 조성물)의 투여가 동일한 날에 별개로 발생하거나 또는 동일한 날에 발생하지 않는다는 것을 포함한다 (예를 들어, 연속적인 날에 발생함).

본 개시내용에 사용된 바와 같이, "공동 투여"는 지속기간 중에 적어도 부분적으로 중첩하는 것을 포함한다. 예를 들어, 2종의 작용제 (예를 들어, 생물활성을 갖는 본 개시내용에 기재된 임의의 조성물)가 공동으로 투여될 때, 그의 투여는 특정한 목적하는 시간 내에 발생한다. 작용제의 투여는 동일한 날에 시작하고 종료될 수 있다. 1종의 작용제의 투여는 또한 2종의 작용제가 동일한 날에 적어도 1회 취해지는 한 그날(들)까지 제2 작용제의 투여에 선행할 수 있다. 유사하게, 1종의 작용제의 투여는 2종의 작용제가 동일한 날에 적어도 1회 취해지는 한 제2 작용제의 투여 너머로 확장될 수 있다. 조성물/작용제는 공동 투여를 포함하기 위해 매일 동시에 취해질 필요는 없다.

본 개시내용에 사용된 바와 같이, "간헐적 투여"는 소정의 기간 동안 작용제의 투여 (이는 "투여의 제1 주기"로 간주될 수 있음)에 이어서 작용제를 취하지 않거나 또는 낮은 유지 용량으로 취하는 동안의 시간 (이는 "휴지기"로 간주될 수 있음)에 이어서 작용제가 다시 투여되는 동안의 기간 (이는 "투여의 제2 주기"로 간주될 수 있음)을 포함한다. 일반적으로, 투여의 제2 단계 동안, 작용제의 투여량 수준은 투여의 제1 주기 동안 투여되는 것과 일치하지만 의학적으로 필요한 만큼 증가 또는 감소될 수 있다.

본 개시내용에 사용된 바와 같이, 용어 "투여하는 것"은 대상체에게 좌제, 국소 접촉 (예를 들어, 스프레이), 비경구, 근육내, 병변내, 척수강내, 비강내 또는 피하 투여로서의 투여를 의미한다. 투여는 비경구 및 경점막을 포함한 임의의 경로 (예를 들어, 협측, 설하, 구개, 치은, 비강, 질, 직장, 또는 경피)에 의한 것이다. 다른 전달 방식은 리포솜 제제, 정맥내 주입, 경피 패치 등의 사용을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.

본 개시내용에 사용된 바와 같이, "유효량" 또는 "치료 유효량"은 목적하는 생물학적 효과, 예컨대 임상적 결과를 포함한 유익한 결과에 영향을 미치기에 충분한 양이다. 이와 같이, "유효량"은 그것이 적용되고 있는 맥락에 따른다. 유효량은 관련 기술분야에 알려진 인자, 예컨대 치료되는 개체의 질환 상태, 연령, 성별, 및 체중에 따라 달라질 수 있다. 수회 분할된 용량은 매일 투여될 수 있거나 또는 용량은 치료 상황의 절박성에 의해 지시되는 바와 같이 비례적으로 감소될 수 있다. 또한, 본 개시내용의 조성물/제제는 치료량을 달성하기 위해 필요한 만큼 빈번하게 투여될 수 있다.

구성성분의 중량 퍼센트는, 반대로 구체적으로 기재되지 않는 한, 구성성분이 포함되는 제제 또는 조성물의 총 중량을 기준으로 한다.

용어 "약"은 제제의 제조에서 및 질환 또는 장애의 치료에서 작용제의 효능을 변화시키지 않는 작용제의 농도 또는 양에서의 임의의 최소 변경을 지칭한다. 본 개시내용의 작용제 (예를 들어 치료제/활성제)의 농도 범위에 대하여 용어 "약"은 또한 유효량 또는 범위일 수 있는 언급된 양 또는 범위의 임의의 변이를 지칭한다. 실시양태에서, 용어 "약"은 명시된 수치 또는 데이터 포인트의 ±15%를 포함할 수 있다.

범위는 "약" 하나의 특정한 값에서, 및/또는 "약" 또 다른 특정한 값까지로 본 개시내용에 표시될 수 있다. 이러한 범위가 표현되는 경우에, 또 다른 측면은 하나의 특정한 값에서 및/또는 다른 특정한 값까지를 포함한다. 유사하게, 값이 선행하는 "약"의 사용에 의해 근사값으로서 표현될 때, 특정한 값은 또 다른 측면을 형성하는 것으로 이해된다. 각각의 범위의 종점은 다른 종점과 관련하여, 및 다른 종점과 상관없이 둘 다가 유의한 것으로 추가로 이해된다. 또한 본 개시내용에 개시된 다수의 값이 존재하고, 각각의 값이 또한 그 값 자체에 더하여 "약" 그 특정한 값으로 개시되는 것으로 이해된다. 또한 명세서 전체에 걸쳐, 데이터는 다수의 상이한 포맷으로 제공되고 이러한 데이터는 종점 및 시작점 및 데이터 포인트의 임의의 조합에 대한 범위를 나타내는 것으로 이해된다. 예를 들어, 특정한 데이터 포인트 "10" 및 특정한 데이터 포인트 "15"가 개시된다면, 10 및 15 초과, 이상, 미만, 이하, 및 그와 동일한 것 뿐만 아니라, 10 내지 15가 개시된 것으로 간주됨이 이해된다. 또한 2개의 특정한 단위 사이의 각각의 단위가 또한 개시된 것으로 이해된다. 예를 들어, 10 및 15가 개시된다면, 11, 12, 13, 및 14가 또한 개시된 것이다.

조성물

한 측면에서, 본 개시내용은 포유동물 조직의 세포외 매트릭스 (ECM) 구성성분 및 중합체를 포함하는 조성물 (예를 들어, 조작된 생체재료)을 포함한다. 본 개시내용은 요법에 사용하기 위한, ECM 구성성분 및 중합체를 포함하는 조성물 (예를 들어, 조작된 생체재료)을 제공한다. 본 개시내용의 조성물 (예를 들어, 조작된 생체재료)은 겔 조성물이거나 또는 그것일 수 있다. 본 개시내용의 조성물 중 포유동물 조직은 상피 및/또는 결합 조직을 포함할 수 있다. 조직은 포유동물, 예를 들어, 돼지, 소, 새끼양, 염소, 양, 또는 영장류 (예를 들어, 인간)로부터 수득될 수 있다. 조직은 돼지로부터 수득될 수 있다. 조직은 자가 또는 동종일 수 있다. 포유동물 조직은 탈세포화된 포유동물 조직이거나 또는 그것일 수 있다. 조성물은 포유동물 조직 및/또는 포유동물 조직의 세포외 매트릭스 (ECM) 구성성분, 1종 이상의 완충제, 및 영양소, 성장 인자, 및/또는 중합체 중 1종 이상이거나 또는 그것을 포함할 수 있다. 완충제는 완전 세포 배양 배지이거나 또는 그것일 수 있다. 세포 배양 배지는 혈청 무함유 또는 혈청 함유 배지이거나 또는 그것일 수 있다. 조성물은 각질세포 배지 및/또는 티오글리콜레이트의 구성요소이거나 또는 그것을 포함할 수 있다. 영양소는 아미노산, 모노사카라이드, 비타민, 무기 이온 및 미량 원소, 및/또는 염 중 1종 이상을 포함할 수 있다. 영양소는 아미노산일 수 있다. 영양소는 모노사카라이드일 수 있다. 영양소는 비타민일 수 있다. 영양소는 무기 산일 수 있다. 영양소는 미량 원소일 수 있다. 영양소는 염일 수 있다. 영양소로서 포함된 아미노산은 L-아르기닌HCl, L-시스틴2HCl, L-시스틴HCl H₂O, L-히스티딘HCl H₂O, L-이소류신, L-류신, L-리신HCl, L-메티오닌, L-페닐알라닌, L-트레오닌, L-트립토판, L-티로신2H₂O, L-발린, L-알라닌, L-아스파라긴, L-아스파르트산, L-글루탐산, 글리신, L-프롤린, L-세린, 및/또는 L-히드록시프롤린 중 1종 이상일 수 있다. 영양소로서 포함된 비타민은 K-Ca-판토테네이트, 염화콜린, 폴산, i-이노시톨, 니아신아미드, 피리독살 HCl, 피리독신 HCl, 리보플라빈, 티아민 HCl, 비오틴, 비타민 B12, 파라-아미노벤조산, 니아신, 아스코르브산, α-토코페롤 포스페이트, 칼시페롤, 메나디온, 비타민 A 중 1종 이상일 수 있다. 다른 화합물은 영양소, 예를 들어, D-글루코스, 페놀 레드, HEPES, 피루브산나트륨, 글루타티온 (환원됨), 하이포크산틴.Na, 티미딘, 리포산, 푸트레신 2HCl, 박토-펩톤, 티민, 아데닌 술페이트, 아데노신-5-트리포스페이트, 콜레스테롤, 2-데옥시-D-리보스, 아데노신-5-포스페이트, 구아닌 HCl, 리보스, 아세트산나트륨, 트윈 80, 우라실, 또는 크산틴 Na 중 1종 이상으로서 존재할 수 있다. 영양소로서 첨가된 무기 염은 CaCl₂, KCl, MgSO₄, NaCl, NaHCO₃, NaHPO₄, KNO₃, NaSeO₃, Ca(NO₃)₂, CuSO₄, NaHPO₄, MgCl₂, Fe(NO₃)₃, CuSO₄, FeSO₄, 또는 KH₂PO₄ 중 1종 이상일 수 있다.

본 개시내용의 조성물은 조작된 생체재료이거나 또는 그것일 수 있다. 생체재료는 천연 생체재료, 예를 들어, 콜라겐, 피브린, 실크, 펩티드, 브러시 중합체, 아가로스, 알기네이트, 히알루론산, 및 키토산이거나 또는 그것을 포함할 수 있다. 생체재료는 히알루론산일 수 있다. 생체재료는 콜라겐일 수 있다. 생체재료는 실크일 수 있다. 생체재료는 펩티드일 수 있다. 생체재료는 브러시 중합체일 수 있다. 생체재료는 아가로스일 수 있다. 생체재료는 알기네이트일 수 있다. 생체재료는 키토산일 수 있다. 생체재료는 유기 중합체, 예를 들어, 폴리 글리콜산 (PGA), 폴리 락트산 (PLA), 폴리 (락트산-코-글리콜산) (PLGA), 및/또는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 중 1종 이상이거나 또는 그것을 포함할 수 있다. 생체재료는 폴리 글리콜산 (PGA)일 수 있다. 생체재료는 폴리 락트산 (PLA)일 수 있다. 생체재료는 폴리 (락트산-코-글리콜산) (PLGA)일 수 있다. 생체재료는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)일 수 있다. 실시양태에서, 생체재료는 무기 구성성분, 예를 들어, 세라믹, 금속, 및/또는 히드록시아파타이트를 포함한다. 생체재료는 콜라겐, 피브린, 실크, 펩티드, 브러시 중합체, 아가로스, 알기네이트, 히알루론산, 키토산, PGA, PLA, PLGA, PEG, 세라믹, 금속, 또는 히드록시아파타이트 중 1종 이상이거나 또는 그것을 포함할 수 있다.

본 개시내용의 생체재료는 겔 형태, 스폰지 형태, 발포체 형태, 패치 형태, 또는 반-액체/유체 형태일 수 있다. 생체재료는 겔 형태일 수 있다.

세포외 매트릭스 (ECM)는 콜라겐, 프로테오글리칸, 구조 단백질 및 기저막 (예를 들어, 기저 조직으로부터 상피를 분리하는 단백질 섬유 및 글리코사미노글리칸의 예민한 막)으로 구성되고, 피부의 탄성, 인장 강도 및 압축성의 특유한 특성을 제공하는, 정상 피부의 가장 큰 구성성분이다. 재생 과정에서의 중요한 단계는 동일한 ECM을 합성하여 조직 재형성 및 더 적은 반흔 형성을 유발하는 것이다. 이러한 천연 절차를 증대 및 지지하기 위해, 상처 면적에 대한 유사한 주형의 도입은 효율적인 세포 이동, 증식, 분화를 유도하고 천연 ECM을 생성할 수 있다. 비-인간 포유동물 피부, 예를 들어, 돼지 피부는 천연 인간 ECM에 대한 필적할만한 구조를 보유하고 여러 유사한 인간 피부 ECM 구성성분의 존재는 돼지 피부에서 검증된 바 있다.

ECM 구성성분은 콜라겐, 엘라스틴, 및/또는 황산화 글리코사미노글리칸 (GAG)을 포함한다. 실시양태에서, ECM의 구성성분은 포유동물 (예를 들어, 인간)의 조직으로부터 단리 및/또는 정제되거나 또는 각각의 ECM 구성성분 (예를 들어, 콜라겐, 엘라스틴, 라미닌, 글리코사미노글리칸, 프로테오글리칸, 항미생물제, 화학유인물질, 시토카인, 및 성장 인자)을 코딩하는 포유동물 (예를 들어, 인간)의 유전자 또는 유전자 단편을 수반하는 재조합 DNA 기술을 사용하여 생성되고 적합한 발현 시스템 (원핵 또는 진핵 (예를 들어, 곤충 또는 포유동물 세포))에서 발현되고, 후속적으로 관련 기술분야에서의 적합한 방법에 의해 단리 및/또는 정제되거나 또는 그렇게 될 수 있다. 콜라겐은 재생된 피부의 가장 중요한 구성성분 중 하나이다. 실시양태에서, 증가되고 조직화된 콜라겐 침착은 개선된 상처 기저부 성숙과 연관된다.

PBMC는 본 개시내용의 조성물 (예를 들어, 조작된 생체재료)에 포함될 수 있다. PBMC는 자가 PBMC일 수 있다. 인간 PBMC의 혈관신생유발 및 재생 특성은 PBMC를 갖는 본 개시내용의 조성물 (예를 들어, 조작된 생체재료)이 개선된 혈관신생을 갖는 것을 가능하게 하여 그에 의해 성숙한, 잘 혈관화된 상처 기저부의 형성이 가속화한다. PBMC를 조성물 (예를 들어, 조작된 생체재료)에 첨가하는 것은 어떠한 유의한 유해 전신 건강 효과 없이 안전하면서 또한 실현가능한 것으로 보인다. 미배양된 인간 PBMC를 진피 조성물 (예를 들어, 조작된 생체재료) 내로 시딩하는 것은 혈관 형성, 성숙 및 매트릭스 재형성을 증가시킴으로써 증진된 조직 통합 효과를 가질 수 있다. 본 개시내용의 PBMC의 존재 또는 부재 하의, 본 개시내용의 조성물 (예를 들어, 조작된 생체재료)은 열 화상 후의 피부를 재생시킨다. 세포의 미배양된 집단을 활용하는 것은 잠재적인 임상 적용을 용이하게 할 수 있다.

본 개시내용은 본 개시내용의 조성물 (예를 들어, 조작된 생체재료) (예를 들어, 돼지 피부 기반 겔 (PSG))로 치료된 동물의 치유 피부 생검에서의 콜라겐의 발현이 풍부하다는 것을 포함한다. 본 개시내용은 인간 PBMC (hPBMC)를 포함하는 조성물 (예를 들어, 조작된 생체재료) (예를 들어, PSG+hPBMC)로 치료된 동물의 치유 피부 생검에서의 콜라겐의 발현이 풍부하다는 것을 포함한다. 실시양태에서, 탈세포화된 포유동물 조직 (예를 들어, 피부)은 세포외 매트릭스 단백질 예컨대 콜라겐 및 엘라스틴을 보유할 수 있으며, 이들 둘 다는 정상 조직 (예를 들어, 피부)의 중요한 구성성분이다. 본 개시내용의 조성물 (예를 들어, 조작된 생체재료 (예를 들어, 겔 조성물))에서의 콜라겐의 양이 높을수록 상처에 대한 숙주 세포의 더 빠른 침윤 및 더 신속한 상처 안정화를 촉진할 수 있다.

ECM 구성성분이 본 개시내용의 조성물에 사용하기 위해 수득된 조직은 포유동물로부터의 것이다. 포유동물은 α-Gal (Galα1,3-Galβ1-4GlcNAc-R) 에피토프에 대한 녹아웃 돌연변이체를 갖는 돼지일 수 있다. α-Gal (Galα1,3-Galβ1-4GlcNAc-R) 에피토프 (또한 주요 이종항원)는 돼지-대-인간 조직 및 기관 이종이식에서 제1 장벽이다. 갈락토스 α1, 3 갈락토스 (Gal/gal) 녹아웃 돼지로부터 취한 피부 이식편은 탈세포화된다. 탈세포화의 과정은 모든 세포 물질의 완전 제거를 유발하지 않을 수 있다.

본 개시내용의 조성물 (예를 들어, 조작된 생체재료)은 탄수화물 기반 중합체이거나 또는 그것을 포함할 수 있다. 예를 들어, 중합체는 디사카라이드 중합체일 수 있다. 디사카라이드 중합체는, 예를 들어, 히알루론산일 수 있다.

본 개시내용의 조성물 (예를 들어, 조작된 생체재료)은 중합체를 포함할 수 있으며, 여기서 중합체는 탄수화물 기반 중합체 (예를 들어, 디사카라이드)이다. 디사카라이드 중합체는 히알루론산을 포함할 수 있다. 본 개시내용의 조성물 (예를 들어, 조작된 생체재료)은 혈액 세포 또는 혈소판 풍부 혈장을 포함할 수 있다. 본 개시내용의 조성물 (예를 들어, 조작된 생체재료)은 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC)를 포함한다. 본 개시내용의 조성물에 사용된 PBMC는 자가 인간 PBMC이거나 또는 그것일 수 있다.

본 개시내용의 조성물은 세포 예컨대, 비제한적으로, 골수-유래 줄기 또는 전구 세포, 골수 단핵 세포, 중간엽 줄기 세포 (MSC), 제대 유래 줄기 세포, 다능 성체 전구 세포, 전혈 유래 줄기 또는 전구 세포 예컨대 내피 줄기 세포, 내피 전구 세포, 평활근 전구 세포, 전혈, 말초 혈액, 및 전혈로부터 단리될 수 있는 임의의 세포 집단을 포함하거나 또는 포함할 수 있다. 전구 세포는 세포의 하나의 유형으로 분화하도록 수임된 세포로 정의된다. 예를 들어, 내피 전구 세포는 내피 세포로 분화하도록 프로그래밍된 세포를 의미하고; 평활근 전구 세포는 평활근 세포로 분화하도록 프로그래밍된 세포를 의미한다. 전혈 또는 말초 혈액에서의 전구 세포는 비수임 및/또는 수임 세포, 예컨대 만능 세포 또는 전능 세포의 집단을 포함한다.

본 개시내용의 조성물은 또한 성장 인자를 포함할 수 있다. 본 개시내용의 조성물 중 성장 인자는 과립구 대식세포-콜로니 자극 인자 (GM-CSF), 인터류킨 (IL)-3, IL-4, 뉴트로핀 (NT)-6, 플레이오트로핀 (HB-GAM), 미드카인 (MK), 인터페론 유도성 단백질-10 (IP-10), 혈소판 인자 (PF)-4, 단핵구 화학주성 단백질-1 (MCP-1), RANTES (CCL-5, 케모카인 (C-C 모티프) 리간드 5), IL-8, IGF, 섬유모세포 성장 인자 (FGF)-1, FGF-2, FGF-3, FGF-4, FGF-5, FGF-6, FGF-7, FGF-8, FGF-9, 형질전환 성장 인자 (TGF)-β, VEGF, 혈소판-유래 성장 인자 (PDGF)-A, PDGF-B, HB-EGF, 간세포 성장 인자 (HGF), 종양 괴사 인자 (TNF)-α, 인슐린-유사 성장 인자 (IGF)-I, 및 그의 임의의 조합(들) 중 1종 이상이거나 또는 그것일 수 있다. 본 개시내용의 조성물 중 성장 인자는 GM-CSF이거나 또는 그것일 수 있다. 본 개시내용의 조성물 중 성장 인자는 IL-3이거나 또는 그것일 수 있다. 본 개시내용의 조성물 중 성장 인자는 IL-4이거나 또는 그것일 수 있다. 본 개시내용의 조성물 중 성장 인자는 NT-6이거나 또는 그것일 수 있다. 본 개시내용의 조성물 중 성장 인자는 HB-GAM이거나 또는 그것일 수 있다. 본 개시내용의 조성물 중 성장 인자는 MK이거나 또는 그것일 수 있다. 본 개시내용의 조성물 중 성장 인자는 IP-10이거나 또는 그것일 수 있다. 본 개시내용의 조성물 중 성장 인자는 PF-4 이거나 또는 그것일 수 있다. 본 개시내용의 조성물 중 성장 인자는 MCP-1이거나 또는 그것일 수 있다. 본 개시내용의 조성물 중 성장 인자는 CCL-5이거나 또는 그것일 수 있다. 본 개시내용의 조성물 중 성장 인자는 IL-8이거나 또는 그것일 수 있다. 본 개시내용의 조성물 중 성장 인자는 IGF이거나 또는 그것일 수 있다. 본 개시내용의 조성물 중 성장 인자는 (FGF)-1, FGF-2, FGF-3, FGF-4, FGF-5, FGF-6, FGF-7, FGF-8 또는 FGF-9이거나 또는 그것일 수 있다. 본 개시내용의 조성물 중 성장 인자는 형질전환 성장 인자 (TGF)-β이거나 또는 그것일 수 있다. 본 개시내용의 조성물 중 성장 인자는 VEGF이거나 또는 그것일 수 있다. 본 개시내용의 조성물 중 성장 인자는 혈소판-유래 (PDGF)-A이거나 또는 그것일 수 있다. 본 개시내용의 조성물 중 성장 인자는 PDGF-B이거나 또는 그것일 수 있다. 본 개시내용의 조성물 중 성장 인자는 HB-EGF이거나 또는 그것일 수 있다. 본 개시내용의 조성물 중 성장 인자는 간세포 성장 인자 (HGF)이거나 또는 그것일 수 있다. 본 개시내용의 조성물 중 성장 인자는 종양 괴사 인자 (TNF)-α이거나 또는 그것일 수 있다. 본 개시내용의 조성물 중 성장 인자는 인슐린-유사 성장 인자 (IGF)-I이거나 또는 그것일 수 있다.

조성물 (예를 들어, 조작된 생체재료) 중 ECM 구성성분은 콜라겐, 엘라스틴, 및/또는 황산화 글리코사미노글리칸 (GAG)을 포함할 수 있다. 조성물 (예를 들어, 조작된 생체재료)은 리본-유사 섬유를 포함할 수 있다. 섬유는 약 1 μm - 약 40 μm (예를 들어, 약 1 μm, 약 2 μm, 약 3 μm, 약 4 μm, 약 5 μm, 약 6 μm, 약 7 μm, 약 8 μm, 약 9 μm, 약 10 μm, 약 11 μm, 약 12 μm, 약 13 μm, 약 14 μm, 약 15 μm, 약 16 μm, 약 17 μm, 약 18 μm, 약 19 μm, 약 20 μm, 약 21 μm, 약 22 μm, 약 23 μm, 약 24 μm, 약 25 μm, 약 26 μm, 약 27 μm, 약 28 μm, 약 29 μm, 약 30 μm, 약 31 μm, 약 32 μm, 약 33 μm, 약 34 μm, 약 35 μm, 약 36 μm, 약 37 μm, 약 38 μm, 약 39 μm, 또는 약 40 μm) 폭, 약 0.1 μm - 약 10 μm (예를 들어, 약 0.1 μm, 약 0.5 μm, 약 1.0 μm, 약 1.5 μm, 약 2.0 μm, 약 2.5 μm, 약 3.0 μm, 약 3.5 μm, 약 4.0 μm, 약 4.5 μm, 약 5.0 μm, 약 5.5 μm, 약 6.0 μm, 약 6.5 μm, 약 7.0 μm, 약 7.5 μm, 약 8.0 μm, 약 8.5 μm, 약 9.0 μm, 약 9.5 μm, 또는 약 10.0 μm) 두께, 및/또는 약 ≥70 μm - 약 ≤4000 μm (예를 들어, 약 70 μm, 약 75 μm, 약 80 μm, 약 85 μm, 약 90 μm, 약 95 μm, 약 100 μm, 약 125 μm, 약 150 μm, 약 175 μm, 약 200 μm, 약 225 μm, 약 250 μm, 약 275 μm, 약 300 μm, 약 325 μm, 약 350 μm, 약 375 μm, 약 400 μm, 약 425 μm, 약 450 μm, 약 475 μm, 약 500 μm, 약 525 μm, 약 550 μm, 약 575 μm, 약 600 μm, 약 625 μm, 약 650 μm, 약 675 μm, 약 700 μm, 약 725 μm, 약 750 μm, 약 775 μm, 약 800 μm, 약 825 μm, 약 850 μm, 약 875 μm, 약 900 μm, 약 925 μm, 약 950 μm, 약 975 μm, 약 1000 μm, 약 1250 μm, 약 1500 μm, 약 1750 μm, 약 2000 μm, 약 2250 μm, 약 2500 μm, 약 2750 μm, 약 3000 μm, 약 3250 μm, 약 3500 μm, 약 3750 μm, 또는 약 4000 μm) 길이의 것일 수 있다. 섬유는 약 5 μm - 약 30 μm 폭의 것일 수 있다. 섬유는 약 0.5 μm - 약 5 μm 두께의 것일 수 있다. 섬유는 약 ≥75 μm - 약 ≤800 μm 길이의 것일 수 있다. 본 개시내용은 나타낸 범위의 모든 개재된 수를 포함한다.

최적의 상처 복구는 염증 반응 뿐만 아니라 성장 인자 및 시토카인 생산에 의해 영향받은 다중 세포 과정 (이동, 증식, 콜라겐 합성 및 침착)의 협응 기여에 따른다. 염증 과정은 상처 치유 반응에 직접적으로 연관되고, 염증성 시토카인은 피부 상처의 재상피화를 자극하고 증식성 각질세포의 성장을 촉진한다. 실시양태에서, 본 개시내용은 효율적인 염증 반응을 유도하기 위해 미배양된 PBMC 및 돼지 진피 구성성분으로 구성된 복합 생체재료를 포함하며, 이는 성공적이고 가속화된 상처 치유로 이어진다.

본 개시내용은 항원성을 감소시키고 세포외 매트릭스 (ECM) 구성성분의 많은 주요 구성성분을 보유하기 위해 이종 조직의 탈세포화를 포함하거나 또는 포함할 수 있다. 본 개시내용은 상처를 치유하기 위한 조성물을 생산하기 위해, 탈세포화 포유동물 조직 (예를 들어 피부, 태반, 또는 제대)를 포함하거나 또는 포함할 수 있다. 실시양태에서, 조성물은 생체재료이다. 본 개시내용의 조성물은 겔을 생산하도록 프로세싱되거나 또는 프로세싱될 수 있다. 겔은 본 개시내용에 기재된 방법에 의해 제조된 돼지 피부 겔 (PSG)일 수 있다. 본 개시내용에서, 상처 치유를 위한 이러한 돼지-수득된 ECM의 실현가능성 및 유효성은 누드-마우스 전층 피부 상처 모델에서 조사된다. 본 개시내용의 조성물을 제조하는 방법에서 인간 말초 혈액 단핵 세포 (hPBMC)를 겔 (예를 들어, PSG) 중에 포매하는 것은 급성 피부 상처의 셋팅에서 잘 조직화된 상처 조직의 형성 및 성숙을 추가로 가속화하였다.

다양한 ECM 구성성분 및 내인성 성장 인자로 구성된 돼지 피부-수득된 ECM 겔은 피부 조직 공학을 위한 생체재료로서 개발되어 있다. ECM 겔은 Gal/gal 녹아웃 돼지의 탈세포화된, 균질화된, 및 동결건조된 피부로부터 제조된다. 본 개시내용의 조성물은 인간 세포 첨가의 존재 또는 부재 하의 상처에의 직접 적용을 위해 제조된다. 본 개시내용의 ECM 겔 조성물은 15일 이내에 상처 치유 속도에 기여하고, 상호작용하고 세포의 우수한 부착 및 유리한 (예를 들어, 습윤) 치유 환경을 제공함으로써 그를 필요로 하는 대상체에서 상처를 보호한다. 상처 적용 전에 겔에의 인간 세포의 첨가는, 상처에서 숙주 혈관 형성을 현저하게 개선시키고 상처 치유 과정을 유의하게 가속화한다. 치유는 본 개시내용의 조성물을 상처에 적용한지 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 또는 15일 이내에 달성되거나 또는 달성될 수 있다. 상처, 예를 들어, 피부 열상, 마찰상, 폐쇄 충격 수술 상처, 피부 찰과상, 화상 (1도, 2도, 및/또는 3도), 피부 절개, 피부 열창, 피부 좌상, 피부 자상, 압박 궤양, 정맥 궤양, 동맥 궤양, 신경병증성/당뇨병성 상처, 림프부종, 또는 수술 부위 절개의 치유는 본 개시내용의 조성물을 상처에 적용한지 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 또는 15일 이내에 달성된다.

동물의 동일한 그룹에서, 인간 혈관은 인간 CD31의 발현, 및 인간 특이적 항-미토콘드리아 항체로의 양성 염색에 의해 입증된 바와 같이 제5일 및 제10일에 상처에서 발견된다. 게다가, qPCR 검출 시스템은 인간 세포의 적은 수의 존재를 확증하였지만; 그러나, 다른 오염 숙주 (마우스) 세포의 높은 배경에서의 소수 인간 특이적 세포의 확인은 어려웠다. 본 개시내용은 인간 혈액 세포 (예를 들어, hPBMC)를 포함하는 생체재료를 포함하며, 이는 인간 세포의 생존 및 상처의 신생혈관화를 유발한다. hPBMC를 포함하는 생체재료는 상처 치유를 가속화하였다.

본 개시내용의 생체재료 중 인간 말초 혈액 세포 및 탈세포화된 포유동물 조직의 ECM 구성성분 및 중합체는, 각질세포 및 상피 세포의 이동, 뿐만 아니라 신생혈관화를 조성적 특성으로 인해 촉진하며, 이는 개선된 상처 치유로 이어진다.

치료 또는 사용 방법

한 측면에서, 본 개시내용은 포유동물 조직의 ECM 구성성분 및 중합체를 포함하는 조성물 (예를 들어, 조작된 생체재료)을 대상체의 상처에 적용하는 것을 포함하는, 대상체에서 상처 치유하는 방법을 제공한다. 또 다른 측면에서, 본 개시내용은 포유동물 조직의 세포외 매트릭스 (ECM) 구성성분, 중합체 및 치료제를 포함하는 조성물 (예를 들어, 조작된 생체재료)을 대상체의 상처에 적용하는 것을 포함하는, 그를 필요로 하는 대상체의 상처에 치료제를 전달하는 방법을 제공한다. 포유동물 조직은 탈세포화된 포유동물 조직일 수 있다. 본 개시내용은 상처 적용 전에 겔에의 인간 세포의 첨가가, 상처에서 숙주 혈관 형성을 현저하게 개선시키고 상처 치유 과정을 유의하게 가속화한다는 것을 제공한다. 치유는 본 개시내용의 조성물을 상처에 적용한지 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 또는 15일 이내에 달성되거나 또는 달성될 수 있다. 상처, 예를 들어, 피부 열상, 마찰상, 폐쇄 충격 수술 상처, 피부 찰과상, 화상 (1도, 2도, 및/또는 3도), 피부 절개, 피부 열창, 피부 좌상, 피부 자상, 압박 궤양, 정맥 궤양, 동맥 궤양, 신경병증성/당뇨병성 상처, 림프부종 또는 수술 부위 절개의 치유는 본 개시내용의 조성물을 상처에 적용한지 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 또는 15일 이내에 달성된다. 상처는 피부 열상일 수 있다. 상처는 마찰상일 수 있다. 상처는 폐쇄 충격 수술 상처일 수 있다. 상처는 피부 열창일 수 있다. 상처는 피부 좌상일 수 있다. 상처는 피부 자상일 수 있다. 상처는 압박 궤양일 수 있다. 상처는 정맥 궤양일 수 있다. 상처는 동맥 궤양일 수 있다. 상처는 신경병증성/당뇨병성 상처일 수 있다. 상처는 림프부종일 수 있다. 상처는 수술 부위 절개일 수 있다.

추가 측면에서, 본 개시내용은 포유동물 조직의 세포외 매트릭스 (ECM) 구성성분, 중합체, 및 성장 인자를 포함하는 조성물 (예를 들어, 조작된 생체재료)을 대상체의 상처에 적용하는 것을 포함하는, 그를 필요로 하는 대상체의 상처에 성장 인자를 전달하는 방법을 제공한다. 포유동물 조직은 탈세포화된 포유동물 조직일 수 있다. 본 개시내용의 방법에 사용된 성장 인자는 과립구 대식세포-콜로니 자극 인자 (GM-CSF), 인터류킨 (IL)-3, IL-4, 뉴트로핀 (NT)-6, 플레이오트로핀 (HB-GAM), 미드카인 (MK), 인터페론 유도성 단백질-10 (IP-10), 혈소판 인자 (PF)-4, 단핵구 화학주성 단백질-1 (MCP-1), RANTES (CCL-5, 케모카인 (C-C 모티프) 리간드 5), IL-8, IGF, 섬유모세포 성장 인자 (FGF)-1, FGF-2, FGF-3, FGF-4, FGF-5, FGF-6, FGF-7, FGF-8, FGF-9, 형질전환 성장 인자 (TGF)-β, VEGF, 혈소판-유래 성장 인자 (PDGF)-A, PDGF-B, HB-EGF, 간세포 성장 인자 (HGF), 종양 괴사 인자 (TNF)-α, 인슐린-유사 성장 인자 (IGF)-I, 또는 그의 임의의 조합(들) 중 1종 이상이다. 본 개시내용의 방법에 사용된 성장 인자는 GM-CSF이거나 또는 그것일 수 있다. 본 개시내용의 방법에 사용된 성장 인자는 IL-3이거나 또는 그것일 수 있다. 본 개시내용의 방법에 사용된 성장 인자는 IL-4이거나 또는 그것일 수 있다. 본 개시내용의 조성물 중 성장 인자는 NT-6이거나 또는 그것일 수 있다. 본 개시내용의 방법에 사용된 성장 인자는 HB-GAM이거나 또는 그것일 수 있다. 본 개시내용의 방법에 사용된 성장 인자는 MK이거나 또는 그것일 수 있다. 본 개시내용의 방법에 사용된 성장 인자는 IP-10이거나 또는 그것일 수 있다. 본 개시내용의 방법에 사용된 성장 인자는 PF-4이거나 또는 그것일 수 있다. 본 개시내용의 방법에 사용된 성장 인자는 MCP-1이거나 또는 그것일 수 있다. 본 개시내용의 방법에 사용된 성장 인자는 CCL-5이거나 또는 그것일 수 있다. 본 개시내용의 방법에 사용된 성장 인자는 IL-8이거나 또는 그것일 수 있다. 본 개시내용의 방법에 사용된 성장 인자는 IGF이거나 또는 그것일 수 있다. 본 개시내용의 방법에 사용된 성장 인자는 (FGF)-1, FGF-2, FGF-3, FGF-4, FGF-5, FGF-6, FGF-7, FGF-8 또는 FGF-9이거나 또는 그것일 수 있다. 본 개시내용의 방법에 사용된 성장 인자는 형질전환 성장 인자 (TGF)-β이거나 또는 그것일 수 있다. 본 개시내용의 방법에 사용된 성장 인자는 VEGF이거나 또는 그것일 수 있다. 본 개시내용의 방법에 사용된 성장 인자는 혈소판-유래 성장 인자 (PDGF)-A이거나 또는 그것일 수 있다. 본 개시내용의 방법에 사용된 성장 인자는 PDGF-B이거나 또는 그것일 수 있다. 본 개시내용의 방법에 사용된 성장 인자는 HB-EGF이거나 또는 그것일 수 있다. 본 개시내용의 방법에 사용된 성장 인자는 간세포 성장 인자 (HGF)이거나 또는 그것일 수 있다. 본 개시내용의 방법에 사용된 성장 인자는 종양 괴사 인자 (TNF)-α이거나 또는 그것일 수 있다. 본 개시내용의 방법에 사용된 성장 인자는 인슐린-유사 성장 인자 (IGF)-I이거나 또는 그것일 수 있다.

또 다른 측면에서, 본 개시내용은 포유동물 조직의 세포외 매트릭스 (ECM) 구성성분 및 중합체를 포함하는 조성물 (예를 들어, 조작된 생체재료)을 대상체의 상처에 적용하는 것을 포함하는, 그를 필요로 하는 대상체의 상처를 수화시키는 방법을 제공한다. 포유동물 조직은 탈세포화된 포유동물 조직일 수 있다.

상처 치유하거나 또는 상처에 치료제를 전달하는 방법에 사용된 조성물은 본 개시내용의 이전 섹션에 개시되어 있고, 이 섹션에서 그의 전체가 참조로 포함된다.

상처 치유는 신체에서의 세포가 재생하고 복구하여 훼손된 또는 괴사성 면적의 크기를 감소시키는 과정이다. 상처 치유는 손상 부위 주위의 염증, 세포 이동 및 유사분열, 육아 조직의 혈관신생 및 발생, 결합 조직의 복구, 세포외 매트릭스의 재생 및 치유된 상처로 이어지는 재형성을 포함하는 단계의 세트를 수반한다. 각각의 단계는 그의 특유한 메카니즘을 갖고 또한 다른 단계와 상호연결된다. 이들 개별 단계의 지속기간은 상처의 강도 및 깊이에 따라 달라진다. 대부분의 상처 드레싱 치료는, 습윤 환경을 제공하고, 과도한 분비물 축적을 제어하고, 정상 치유를 교란할 수 있는 감염에 대해 보호함으로써 상처 치유의 이들 스테이지를 용이하게 하는 것을 목표로 한다.

다양한 물리적 인자 또는 화학적 작용제로 인한 피부 손상은 상처 치유 및 피부 재생을 유도할 수 있다. 그러나, 광범위한 화상 환자의 요법에서, 피부 자가 이식을 위한 공여 부위의 제한된 양은 지속적인 문제이다. 전층 상처는 부분층 피부 자가이식편으로 재표면화되긴 하지만, 깊은 진피 화상은 통상적으로 생물학적 또는 합성 커버 (드레싱)로 커버된다. 상처 커버는 일시적 대체제로서 작용한다. 상처가 자발적으로 치유되지 않는 경우에, 이들은 환자 자신의 피부로 대체되어야 한다.

본 개시내용은 상처를 치유하는 방법을 제공한다. 상처는 그의 원인, 위치, 손상 (또는 증상)의 유형, 상처 깊이, 및 상처의 조직 손실 또는 임상적 외양을 포함한 여러 방법에 의해 분류될 수 있다. 일반적인 상처는 표피상 (단지 표피의 손실), 부분층 (표피 및 진피 둘 다가 영향을 받음), 및 전층 (진피, 피하 지방 및 때때로 골이 영향을 받음)인 것으로서 분류된다. 부분층 상처는 분홍색으로 보일 수 있고, 종종 통증성이고, 황색 조직은 전혀 관찰되지 않는다. 전층 상처는 피부의 모든 층, 뿐만 아니라 골, 근육, 건, 신경 조직, 혈관 조직, 또는 상처 부위에서의 내장 기관을 포함한 기저 피하 조직 및 더 깊은 조직에 대한 훼손 또는 손상을 수반할 수 있다.

전층 상처 또는 손상은 하기 중 적어도 하나에 의해 야기할 수 있다: 둔력 외상; 관통 외상; 총상; 미생물 감염; 괴사성 감염; 박테리아 감염; 진균 감염; 저체온; 동상; 허혈; 조직 저산소증; 허혈성 조직의 재관류; 미세혈관 질환; 당뇨병과 연관된 혈관 질환; 비-이동 또는 부동; 괴저; 패혈증; 패혈성 쇼크; 골수염; 연조직염; 혈관염; 당뇨병; 당뇨병성 궤양; 당뇨병성 족부 궤양; 암; 백혈병; 간경변증; 만성 섬유증; 아테롬성동맥경화증; 부종; 겸상 적혈구 질환; 동맥 기능부전-관련 질병; 면역 억제; 면역억제 약물의 사용; 화학요법 약물의 사용; 스테로이드의 사용; 극한 온도에 대한 노출; 생물학적 독소에 대한 노출; 독성 물질에 대한 노출; 사교상; 곤충 교상; 곤충 자상; 독성 어류로부터의 자상; 또는 해파리로부터의 자상. 더욱이, 대상체는 패혈증, 패혈성 쇼크, 미생물 감염, 괴사성 감염, 괴사성 근막염, 괴저, 또는 골수염 중 적어도 1종을 발생할 수 있거나 또는 발생할 위험을 가질 수 있다.

전층 상처 또는 손상은 감염, 예를 들어 염발음성 혐기성 연조직염; 괴사성 근막염; 비-클로스트리디움 근괴사; 클로스트리디움 근괴사; 진균 괴사성 연조직염; 임균성 관절염; 비임균성 관절염; 박테리아 관절염; 육아종성 관절염; 혈행성 골수염; 인접-병소 골수염; 만성 골수염; 박테리아 골수염; 진균 골수염 등 중 하나 이상에 기인할 수 있거나 또는 연관된다. 이러한 감염을 야기할 수 있는 예시적인 유기체는 하기 중 1종 이상을 포함한다: 박테로이데스(Bacteroides) 종, 펩토스트렙토코쿠스(Peptostreptococcus) 종, 클로스트리디움(Clostridium) 종, 엔테로박테리아세아에(Enterobacteriaceae) 과의 구성원, 푸소박테리움(Fusobacterium) 종, 스트렙토코쿠스 피오게네스(Streptococcus pyogenes), 스타필로코쿠스 아우레우스(Staphylococcus aureus), 스트렙토코쿠스 아갈락티아에(Streptococcus agalactiae), 클로스트리디움 페르프린겐스(Clostridium perfringens), 클로스트리디움 노비이(Clostridium novyi), 클로스트리디움 셉티쿰(Clostridium septicum), 클로스트리디움 히스톨리티쿰(Clostridium histolyticum), 클로스트리디움 팔락스(Clostridium fallax), 클로스트리디움 비페르멘탄스(Clostridium bifermentans), 피코마이세스(Phycomyces) 종, 아스페르길루스(Aspergillus) 종, 리조푸스(Rhizopus) 종, 뮤코르(Mucor) 종, 압시디아(Absidia) 종, 네이세리아 고노레아에(Neisseria gonorrhoeae), 에스케리키아 콜라이(Escherichia coli), 시겔라(Shigella) 종, 살모넬라(Salmonella) 종, 캄필로박터(Campylobacter) 종, 예르시니아(Yersinia) 종, 스트렙토바실루스 모닐리포르미스(Streptobacillus moniliformis), 헤모필루스 인플루엔자에(Haemophilus influenzae), 미코박테리움 투베르쿨로시스(Mycobacterium tuberculosis), 블라스토미세스(Blastomyces) 종, 크립토코쿠스(Cryptococcus) 종, 스포로트릭스(Sporothrix) 종, 스포로트릭스 쉔크키이(Sporothrix schenckii), 칸디다(Candida) 종, 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa).

본 개시내용은 반흔 조직 형성을 감소시키는, 대상체에서 상처 치유하는 방법을 포함한다. 본 개시내용의 방법은 히알루론산 (HA)의 그러나 본 개시내용의 조성물 (예를 들어, 조작된 생체재료)이 결여된 조성물로 치료된 상처와 비교 시 반흔 조직 형성을 감소시킨다.

본 개시내용은 치유 상처의 탈색을 감소시키는, 대상체에 상처 치유하는 방법을 포함한다. 본 개시내용의 방법은 히알루론산 (HA)의 그러나 본 개시내용의 조성물 (예를 들어, 조작된 생체재료)이 결여된 조성물로 치료된 상처와 비교 시 탈색을 감소시킨다.

본 개시내용의 상처 치유하는 방법은 각질세포 및 상피 세포의 이동을 촉진한다. 본 개시내용의 상처 치유하는 방법은 상처에서의 신생혈관화를 촉진한다. 본 개시내용의 상처 치유하는 방법은 생체재료를 상처에 적용한 후 약 5 내지 10일 내에 신생혈관화를 촉진한다. 본 개시내용의 상처 치유하는 방법에서, 신생혈관화는 상처에서의 ECM 재형성을 유발한다. 본 개시내용의 상처 치유하는 방법에서 감소된 세장형 반흔이 히알루론산 (HA)의 그러나 본 개시내용의 생체재료가 결여된 조성물로 치료된 상처와 비교 시, 치유된 상처의 부위에서 관찰된다. 생체재료는 표피 세포를 생성하고 표피 및 진피의 이중층 구조를 복원시킨다. 상처는 생체재료를 상처에 적용한지 15 - 40일 이내에 치유될 수 있다. 상처는 생체재료를 상처에 적용한지 25일 이내에 치유될 수 있다.

제2 작용제와 조합한 상처 치유

한 측면에서, 본 개시내용은 치료제와 조합한 본 개시내용에서의 조성물 (예를 들어, 조작된 생체재료)로의 상처 치유를 제공한다. 한 측면에서, 본 개시내용은 포유동물 조직의 세포외 매트릭스 (ECM) 구성성분, 중합체, 및 유효 용량의 작용제를 갖는 상처 치유 또는 호전 작용제의 제약 조성물을 포함하는 조성물 (예를 들어, 조작된 생체재료)을 포함한다. 포유동물 조직은 탈세포화된 포유동물 조직일 수 있다. 치료제는 상처 치유 조성물 (예를 들어, 조작된 생체재료)과 독립적인 제약 조성물로서 조성물 (예를 들어, 조작된 생체재료)과 공동-투여 또는 공동으로 투여, 또는 순차적으로 투여에 의해, 투여될 수 있다. 이러한 경우에 본 개시내용은 치료제가 경구로, 국소로, 정맥내로, 복강내로, 비강으로, 또는 흡입에 의해 투여될 수 있다는 것을 포함한다. 본 개시내용의 치료제의 제약 조성물은 제약상 허용되는 부형제를 포함할 수 있다.

제2 치료제는 소양증 작용제 (항가려움증제), 진통제 (예를 들어, 통증 완화제), 소독제, 및 항생제를 포함할 수 있다. 본 개시내용의 제약 조성물 중 치료제는 상처 치유 작용제/분자이거나 또는 상처 치유 작용제/분자일 수 있다. 이러한 작용제/분자는 의도된 목적에 효과적인 양으로 적합하게 존재할 수 있다.

항가려움증제는 버드나무 목피 추출물, 살리실산, 항히스타민제 (디펜히드라민), 코르티코스테로이드 (예를 들어, 1% 히드로코르티손 크림), 벤조카인 국소 치료제, 민트 오일, 메탄올, 캄포르, 수산화암모늄, 벤질 알콜, 프라목신 히드로클로라이드를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.

예시적인 진통제는 비-마약류 (예를 들어, 아세트아미노펜), 비-스테로이드성 항염증 약물 (NSAID) (예를 들어, 아스피린, 디클로페낙, 덱시부프로펜, 디플루니살, 에토돌락, 페노프로펜, 플루페남산, 플루르비프로펜, 이부프로펜, 인도메타신, 케토프로펜, 케토롤락, 로르녹시캄, 록소프로펜, 메클로페남산, 메페남산, 멜록시캄, 나부메톤, 나프록센, 옥사프로진, 피록시캄, 살살레이트, 술린닥, 테녹시캄, 톨메틴 및 톨페남산)을 포함할 수 있으나 이에 제한되지는 않는다. 다른 진통제는 COX-2 억제제 (예를 들어, 셀레콕시브, 로페콕시브, 발데콕시브 및 에토리콕시브), 및 오피오이드 (예를 들어, 부프레노르핀, 부토르파놀, 코데인, 히드로코돈, 히드로모르폰, 레보파놀, 메페리딘, 메타돈, 모르핀, 날부핀, 옥시코돈, 옥시모르폰, 펜타조신, 및 프로폭시펜)를 포함한다.

소독제는 알콜 (예를 들어, 에탄올, 1-프로판올, 및 2-프로판올/이소프로판올), 4급 암모늄 화합물 (벤즈알코늄 클로라이드, 세틸 트리메틸암모늄 브로마이드, 세틸피리디늄 클로라이드, 벤제토늄 클로라이드), 붕산, 브릴리언트 그린, 클로르헥시딘 글루코네이트, 및 과산화수소 (단독으로 또는 아세트산과 조합하여 퍼아세트산을 제조함)를 포함할 수 있으나 이에 제한되지는 않는다. 다른 작용제는 아이오딘, 마누카 꿀, 머큐로크롬, 옥테니딘 디히드로클로라이드, 페놀, 염화나트륨, 차아염소산나트륨, 차아염소산나칼슘 및 페루 발삼을 포함할 수 있다.

항생제는 겐타미신, 카나마이신, 네오마이신, 네틸미신, 토브라마이신, 파로모마이신, 스트렙토마이신, 리팍시민, 로라카르베프, 에르타페넴, 도리페넴, 세팔렉신, 세파클로르, 세파만돌, 세폭시틴, 세프프로질, 세푸록심, 세픽심, 세프디니르, 세프디토렌, 세포페라존, 세포탁심, 세프포독심, 세프타지딤, 세프티부텐, 세프티족심, 세프트리악손, 세페핌, 반코마이신, 텔라반신, 달바반신, 라데졸리드, 토레졸리드, 아목시실린, 암피실린, 아즐로실린, 카르베니실린, 클록사실린, 디클록사실린, 플루클록사실린, 메즐로실린, 메티실린, 나프실린, 옥사실린, 페니실린 G, 페니실린 V, 피페라실린, 페니실린 G, 테모실린, 티카르실린, 레보플록사신, 로메플록사신, 목시플록사신, 날리딕스산, 노르플록사신, 오플록사신, 트로바플록사신, 그레파플록사신, 스파르플록사신, 테마플록사신, 마페니드, 술프아세트아미드, 술파메티졸, 술파메톡사졸, 술파살라진, 술프이속사졸, 데메클로시클린, 독시시클린, 미노시클린, 옥시테트라시클린, 테트라시클린, 클로파지민, 이소니아지드, 피라진아미드, 리파부틴, 리파펜틴, 스트렙토마이신, 뮤피로신, 플라텐시마이신, 퀴누프리스틴, 티암페니콜, 및/또는 티니다졸 중 1종 이상을 포함할 수 있으나 이에 제한되지는 않는다.

유효 용량은 작용제의 약 0.001 mg/kg 내지 약 100 mg/kg일 수 있다.

치료제는 화합물 약 0.001 mg/kg 내지 약 0.01 mg/kg, 화합물 약 0.01 mg/kg 내지 약 0.1 mg/kg, 화합물 약 0.1 mg/kg 내지 약 1.0 mg/kg, 화합물 약 1.0 mg/kg 내지 약 5.0 mg/kg, 화합물 약 5.0 mg/kg 내지 약 10 mg/kg, 화합물 약 10 mg/kg 내지 약 15 mg/kg, 화합물 약 15 mg/kg 내지 약 20 mg/kg, 화합물 약 20 mg/kg 내지 약 25 mg/kg, 화합물 약 25 mg/kg 내지 약 30 mg/kg, 화합물 약 30 mg/kg 내지 약 35 mg/kg, 화합물 약 35 mg/kg 내지 약 40 mg/kg, 화합물 약 40 mg/kg 내지 약 45 mg/kg, 화합물 약 45 mg/kg 내지 약 50 mg/kg, 화합물 약 50 mg/kg 내지 약 55 mg/kg, 화합물 약 55 mg/kg 내지 약 60 mg/kg, 화합물 약 60 mg/kg 내지 약 65 mg/kg, 화합물 약 65 mg/kg 내지 약 70 mg/kg, 화합물 약 70 mg/kg 내지 약 75 mg/kg, 화합물 약 75 mg/kg 내지 약 80 mg/kg, 화합물 약 80 mg/kg 내지 약 85 mg/kg, 화합물 약 85 mg/kg 내지 약 90 mg/kg, 화합물 약 90 mg/kg 내지 약 95 mg/kg, 또는 화합물 약 95 mg/kg 내지 약 100 mg/kg의 용량으로, 그를 필요로 하는 대상체에게 투여될 수 있다.

본 개시내용의 본 개시내용은 치료제가 조성물의 약 0.1% 내지 약 20% w/v일 수 있는 조성물의 유효 용량을 갖는 조성물을 포함한다.

예를 들어, 치료제의 유효 용량은 조성물의 약 0.001% - 약 0.01%, 약 0.01% - 약 0.1%, 약 0.1% - 약 1.0%, 약 1.0% - 약 2.0%, 약 2.0% - 약 3.0%, 약 3.0% - 약 4.0%, 약 4.0% - 약 5.0%, 약 5.0% - 약 6.0%, 약 6.0% - 약 7.0%, 약 7.0% - 약 8.0%, 약 8.0% - 약 9.0%, 약 9.0% - 약 10%, 약 10% - 약 11%, 약 11% - 약 12%, 약 12% - 약 13%, 약 13% - 약 14%, 약 14% - 약 15%, 약 15% - 약 16%, 약 16% - 약 17%, 약 17% - 약 18%, 약 18% - 약 19%, 또는 약 19% - 약 20% w/v일 수 있다.

조성물의 제조 방법

한 측면에서, 본 개시내용은 포유동물 조직의 세포외 매트릭스 (ECM) 구성성분 및 중합체를 포함하는 조성물을 제조하는 방법을 포함하며, 상기 방법은 포유동물 조직을 탈세포화하여 세포외 매트릭스 (ECM) 구성성분을 포함하는 분말을 제조하고, 상기 분말을 완충제, 영양소, 성장 인자, 중합체를 포함하는 배지와 혼합하며, 여기서 분말이 배지를 흡인하여, 그에 의해 조성물을 제조하는 것을 포함한다. 포유동물 조직은 탈세포화된 포유동물 조직일 수 있다. 실시양태에서, ECM의 구성성분은 포유동물 (예를 들어, 인간)의 조직으로부터 단리 및/또는 정제되거나 또는 각각의 ECM 구성성분 (예를 들어, 콜라겐, 엘라스틴, 라미닌, 글리코사미노글리칸, 프로테오글리칸, 항미생물제, 화학유인물질, 시토카인, 및 성장 인자)을 코딩하는 유전자 또는 유전자 단편을 수반하는 재조합 DNA 기술을 사용하여 생성되고 적합한 발현 시스템 (원핵 또는 진핵 (예를 들어, 곤충 또는 포유동물 세포))에서 발현되고, 후속적으로 관련 기술분야에서의 적합한 방법에 의해 단리 및/또는 정제되거나 또는 그렇게 될 수 있다.

본 개시내용에서 본 개시내용의 조성물을 제조하기 위한 분말은 조직을 화학적으로 처리하고, 화학적 처리된 조직을 냉동-건조시키고, 냉동-건조된 조직을 균질화함으로써 제조된다. 실시양태에서, 분말은 필라멘트형이다. 배지는 혈청 함유 배지, 감소된 혈청 함유 배지, 또는 혈청 무함유 배지이다. 성장 인자는 재조합 4-1BBL, 재조합 6Ckine, 6Ckine 재조합 인간 단백질, ANGPT2 (ANG2), ANGPTL5, 액티빈 A, 액티빈 R1b, BAFF, BAMBI, CXCL13, BDNF, BLC, BMP2, BMP4, BMP5, BMP7, BMPR1A, CCL1, CCL17, CCL20 (MIP-3), CCL21, CD40, GM-CSF, IL-3, IL-4, NT-6, HB-GAM, MK, IP-10, PF-4, MCP-1, RANTES, IL-8, IGF, FGF 1, FGF-2, FGF-3, FGF-4, FGF-5, FGF-6, FGF-7, FGF-8, FGF-9, TGF-β, VEGF, PDGF-A, PDGF-B, HB-EGF, HGF, TNF-α, IGF-I, 또는 그의 임의의 조합(들) 중 1종 이상이다. 영양소는 아미노산, 모노사카라이드, 비타민, 무기 이온 및 미량 원소, 및/또는 염을 포함할 수 있다. 영양소로서 포함된 아미노산은 L-아르기닌HCl, L-시스틴2HCl, L-시스틴HCl H₂O, L-히스티딘HCl H₂O, L-이소류신, L-류신, L-리신HCl, L-메티오닌, L-페닐알라닌, L-트레오닌, L-트립토판, L-티로신2H₂O, L-발린, L-알라닌, L-아스파라긴, L-아스파르트산, L-글루탐산, 글리신, L-프롤린, L-세린, 및/또는 L-히드록시프롤린 중 1종 이상일 수 있다. 영양소로서 포함된 비타민은 K-Ca-판토테네이트, 염화콜린, 폴산, i-이노시톨, 니아신아미드, 피리독살 HCl, 피리독신 HCl, 리보플라빈, 티아민 HCl, 비오틴, 비타민 B12, 파라-아미노벤조산, 니아신, 아스코르브산, a-토코페롤 포스페이트, 칼시페롤, 메나디온, 비타민 A 중 1종 이상일 수 있다. 다른 화합물은 영양소, 예를 들어, D-글루코스, 페놀 레드, HEPES, 피루브산나트륨, 글루타티온 (환원됨), 하이포크산틴.Na, 티미딘, 리포산, 푸트레신 2HCl, 박토-펩톤, 티민, 아데닌 술페이트, 아데노신-5-트리포스페이트, 콜레스테롤, 2-데옥시-D-리보스, 아데노신-5-포스페이트, 구아닌 HCl, 리보스, 아세트산나트륨, 트윈 80, 우라실, 및/또는 크산틴 Na 중 1종 이상으로서 존재할 수 있다. 영양소로서 첨가된 무기 염은 CaCl₂, KCl, MgSO₄, NaCl, NaHCO₃, NaHPO₄, KNO₃, NaSeO₃, Ca(NO₃)₂, CuSO₄, NaHPO₄, MgCl₂, Fe(NO₃)₃, CuSO₄, FeSO₄, 및/또는 KH₂PO₄ 중 1종 이상일 수 있다.

실시예

실시예 1: 돼지 피부 스캐폴드의 제조

Gal/gal 돼지 피부는 아반테아(Avantea) (이탈리아 크레모나)로부터 구입하였다. 20*15 cm 크기의 피부 조각을 Gal/gal 녹아웃 돼지로부터 절개하고, 플라스틱 백에 진공 밀봉하고, 사용할 때까지 -200℃에서 냉동 저장하였다. 피부를 실온에서 해동시키고, 진피하 지방 조직의 절제에 의해 깨끗하게 하고, 털을 제거하고, 마지막으로 증류수로 세척하였다. 이어서 피부를 5L 플라스틱 용기에 두고, 0.02% 아지드화나트륨 (시그마(Sigma), 독일) 및 1.86% EDTA (알파 에이사(Alfa Aesar), 독일)를 함유하는 0.5% SDS (나트륨 도데실 술페이트) (시그마, 독일)와 함께 37℃에서 9일 동안 연속적으로 200 RPM으로 교반하였다. SDS를 처음 24시간 후에 및 이어서 48시간마다 교체하였다. SDS의 모든 교체 동안, 피부를 증류수로 1시간 동안 세척하였다.

탈세포화된 돼지 피부

Gal/gal KO 돼지 피부를 0.5% SDS로의 연속 처리 후에 9일 내에 완전히 탈세포화하였다. 탈세포화 전 (도 1a-1c) 및 후 (도 1d-1f)의 돼지 피부의 육안적 형태학 및 조직학을 도 1a-1g에 제시하였다. 핵 (청색) 또는 세포 잔유물의 존재는 탈세포화된 돼지 피부에서 전혀 관찰되지 않았다 (도 1f). HA 및 각질세포 배지를 사용하여 제조된 돼지 피부 겔은 백색 색상이었고 (도 1g) 모든 상처 피부 치유 실험을 위해 사용하였다.

탈세포화된 돼지 피부 분말은 피부의 제생을 위해 필요한 주요 ECM 구성성분 중 하나- 콜라겐 (66.545 μg/mg), 뿐만 아니라 엘라스틴 (3.598 μg/mg) 및 황산화 GAG (4.555 μg/mg)를 보유하였다 (도 2a). MT 및 VVG 염색은 또한 콜라겐 및 엘라스틴이 탈세포화 후에 보존되었다는 것을 확증하였다 (도 2b 및 2c). 게다가, 분말화된 돼지 피부의 특징화는 탈세포화된 돼지 피부 분말이 필라멘트형, 백색 육안 외양을 가졌고 광학 현미경검사에 의해 조사될 때 빛에 대해 투명하였다는 것을 제시하였다 (도 2d). 스캐닝 전자 현미경검사는 그것이 형상 및 크기가 다양한 리본-유사 섬유로 이루어졌다는 것을 제시하였다. 우세한 섬유 치수는 20-30 μm 폭, 1-3 μm 두께 및 최대 2 mm 길이였다. 섬유는 불규칙하게 주름잡히고 꼬여, 용이하게 분산가능한 다발을 형성하였다 (도 2e 및 2f). 돼지 피부 분말의 멸균성 시험은 또한 배양 동안 2주 동안 측정된 광학 밀도에서 전혀 증가하지 않았다는 것을 제시하였으며, 이는 감마선 조사가 돼지 피부 분말의 멸균에 사용될 수 있다는 것을 제시한다.

세포외 매트릭스의 탈세포 및 특징화의 검증

탈세포화를 조직학 및 DNA 정량화를 사용하여 검증하였다. 정상 및 탈세포화된 피부로부터의 2개의 조각을 48시간 동안 포르말린에 고정시키고 파라핀에 포매하였다. 절편을 마이크로톰을 사용하여 5μm 두께로 절단하고 헤마톡실린 에오신 (HE), 마손 트리크롬 (MT) (25088, 폴리사이언시스(Polysciences), 미국) 및 베르호픈 반 기슨 (VVG) (25089, 폴리사이언시스, 미국) 방법으로 염색하여 핵, 콜라겐 및 엘라스틴의 존재를 확인하였다. 조직의 25 mg 조각을 정상 및 탈세포화된 피부로부터 절단하고, 총 DNA를 제조업체의 설명서에 따라 퀴아젠 혈액 및 조직 DNA 키트 (퀴아젠(Qiagen), 스웨덴)를 사용하여 단리하고, 260 nm 파장에서 나노드롭을 사용하여 정량화하였다.

탈세포화된 돼지 피부 분말의 제조 및 특징화

탈세포화 후에, 피부를 증류수로 5일 동안 세척하였다. 물을 12시간마다 2회 교체하였다. 탈세포화된 피부를 3*3 sq cm의 조각으로 절단하고 72시간 동안 냉동 건조시켰다 (동결건조시켰다). 동결건조된 조각을 0.75 μm 체가 장착된 크리오밀에서 14000 rpm으로 분쇄하였다. 수득된 필라멘트형 분말을 25 kGy에서 3분 및 25초 동안 감마선 조사에 의해 멸균하였다.

콜라겐, 엘라스틴 및 글리코아미노글리칸 (GAG)에 대한 돼지 피부 분말에서의 세포외 매트릭스 정량화를 수행하였다. 분말 구조 및 형태학을 광학 및 스캐닝 전자 현미경검사 (SEM)에 의해 조사하였다. 광학 영상화를 컬러뷰(ColorView) IIIu CCD 카메라 및 올림푸스 Cell^D 영상-분석 소프트웨어가 장착된 올림푸스 SZX16 스테레오 현미경 (소프트 이미징 시스템 게엠베하(Soft Imaging System GmbH), 독일)에 의해 수행하였다. SEM 분석을 2차 전자 검출 모드에서 자이스 수프라(Zeiss Supra) 40VP 기기에 의해 수행하였다. SEM 영상화 동안 샘플 충전을 감소시키기 위해, 분말 샘플을 가탄(Gatan) PECS Mod 682 기기에서 탄소 패드 상에 침착시키고 15 nm 두께 Au/Pd 필름에 의해 스퍼터-코팅하였다.

돼지 피부 겔 (PSG)의 제조

겔을 50 mg의 탈세포화된 피부 분말 및 250 μl의 히알루론산 (HA) (시그마, 독일)을 혼합함으로써 제조하여 겔 유사 점조도를 수득하였다. 히알루론산을 각질세포 배지 (론자(Lonza), 캘리포니아주)에서 1mg/ml로 구성하였다.

멸균성

1 mg 조사된 분말의 3개의 무작위 샘플을 티오글리콜레이트 브로쓰 (플루카(Fluka), 미국) 내에 첨가하고, 37℃에서 인큐베이터에서 2주 동안 배양하였다. 격일로, 200μl의 브로쓰를 수집하고, 분광광도계 (시너지(Synergy) 2, 바이오테크(Biotech), 미국)로 600nm 파장에서 광학 밀도를 측정함으로써 탁도에 대해 검증하였다. 탁도에서의 증가는 오염을 나타내었다.

동물 실험

7-8주령 및 중량 17-18g (타코닉(Taconic), 덴마크)의 총 72마리의 BALB/c 누드 암컷 마우스를 사용하여 상처 치유 속도를 연구하였다. 마우스를 전층 피부 상처의 유도 후에 4개의 그룹으로 나눴다; i) 미치료; ii) HA로 치료; iii) PSG 단독으로 치료; 및 iv) PSG+hPBMC (1*10⁶개 세포)로 치료. 마우스를 이소플루란을 사용하여 마취시키고, 10mg/kg의 카르프로펜 (리마딜) (화이자(Pfizer), 룩셈부르크)을 수술후 통증 완화를 위해 수술전 i.p. 뿐만 아니라 수술 후 2일 동안 매일 1회 제공하였다. 피부를 몇 방울의 화학적 가솔린으로 닦고 전층 1X1 cm 정사각형 절제 상처를 각각의 동물의 상배부 부위에 생성하였다. 세포의 존재 또는 부재 하의 겔을 멸균 목재 스틱을 사용하여 적용하였다. 이어서 테가덤(Tegaderm) (3M^TM, 독일)을 상처 위에 두고 보호를 위해 및 제자리에 겔을 유지하기 위해 4-0 비-흡수성 모노필라멘트 봉합사 (에티콘(Ethicon), 독일)를 사용하여 피부에 봉합하였다. 테가덤을 히드로필름으로 추가로 커버하여 동물에 의한 테가덤의 제거를 방지하였다. 수술 당일에, 말초 혈액을 건강한 인간 공여자로부터 수집하고, 단핵 세포를 림포프렙 상에서 분리하고, 단리된 세포를 PBS로 3회 세척하고, 각질세포 배지 중에 현탁시켰다. 세포를 바이오라드(Biorad) 자동화된 세포 카운터를 사용하여 카운팅하였다. 치료 후 5, 10, 15 및 25일째에, 동물을 희생시키고, 상처를 포함한 피부를 조직학적 실험을 위해 절제하였다. 피부 상처를 또한 사진찍었다.

상처의 조직학 및 면역조직화학

모든 그룹으로부터의 피부 상처의 파라핀 블록을 마이크로톰을 사용하여 5μm 두께로 절편화하고, 상처의 전체 영역을 커버하는 5개의 절편을 표준 절차에 따라 HE, MT 및 VVG로 염색하였다. 슬라이드를 라이카(Leica) SCN400 현미경을 사용하여 스캐닝하였다. 피부 절편을 인간 세포의 검출을 위해 인간 특이적 항-미토콘드리아 항체 1-100 (머크 밀리포어(Merck Millipore), 스웨덴 스톡홀름)으로 염색하였다. 사용된 2차 항체는 퍼옥시다제 아피니퓨어 (Fab)2 단편 염소-항-마우스 IgG, F(ab)2 단편 특이적 1:500 (잭슨 이뮤노리서치(Jackson Immunoresearch), 미국 웨스트 그로브)이었다.

면역형광

동결절편을 크리오톰을 사용하여 5μm 두께에 절단하였다. 인간 CD31 (1:25; 10148-MM13, 시노 바이올로지칼스(Sino Biologicals)) 및 마우스-특이적 CD31 (1:400, LSC 348704, LSBio)에 특이적인 항체 및 2차 항체 알렉사 GαM 568 (1:100; A11031, 라이프 테크놀로지스(Life Technologies)) 및 GαR FITC (1:100; SC3825, 산타 크루즈(Santa Cruz))를 사용하였다. 간략하게, 크리오슬라이드를 아세톤:메탄올 (4:6) 중에 10분 동안 -20℃에서 고정시키고, PBS로 5분 동안 세척하였다. 슬라이드를 2차 항체 숙주의 혈청으로 차단하고, 1차 항체와 함께 밤새 +4℃에서 인큐베이션하였다. 슬라이드를 PBS로 3회 세척하고, 2차 항체와 함께 암실에서 +4℃에서 45분 동안 인큐베이션하였다. 슬라이드를 PBS로 3회 세척하고, DAPI를 함유하는 마운팅 배지 (H1500, 벡터 래보러토리즈(Vector Laboratories)) 1방울로 커버 슬립을 덮었다.

콜라겐의 정량화

제25일 (새로 형성된 피부)에 모든 동물 그룹에서의 콜라겐의 양을 밀도측정법의 원리를 사용하여 MT 염색에서 청색 염색된 콜라겐의 강도를 기반으로 하여 정량화하였다. 5개의 대표적인 영상을 각각의 동물로부터 취하고, 영상당 청색 컬러의 총 강도를 바이오픽스(BioPix) iQ 2.1.8 소프트웨어로 정량화하였다. 콜라겐 강도를 임의 단위 (a.u)로서 판독하고, 각각의 동물에 대한 평균을 계산하였다.

상처 면적의 측정

상처 크기를 계산하기 위해, 측정 스케일을 상처의 부위에 두고 모든 마우스를 소니(Sony) α 35 디지털 카메라를 사용하여 사진찍었다. 이어서 동물당 미폐쇄 상처 (반흔 아님)의 면적을 계산하였다. 그룹당 미폐쇄 상처 면적/동물의 평균을 나타내었다.

유전자 분석

RNA를 1 ml 빙냉 퀴아졸(Qiazol) (퀴아젠 게엠베하(Qiagen GmbH))을 동결된 피부 샘플에 첨가함으로써 추출하였다. 스틸 비드를 각각의 샘플에 첨가하고, 샘플을 25 Hz에서 2 x 5분 동안 퀴아젠 티슈라이저(TissueLyser)에서 균질화하고, 200 μl 클로로포름을 첨가하고, 샘플을 15초 동안 격렬히 진탕하고, 실온에서 3분 동안 두고, 12,000 g으로 15분 동안 4℃에서 원심분리하였다. 원심분리 후에 350 μl의 상청액을 새 튜브로 옮기고, 350 μl 70% 에탄올과 혼합하고, 피펫팅에 의해 조심스럽게 혼합하고, RN이지 미니 키트(RNeasy Mini Kit) (퀴아젠 게엠베하)의 미니엘루트(MiniElute) 칼럼에 첨가하였다. 나머지 절차는 제조업체 지침서에 따랐다.

추출된 RNA를 제조업체 지침서에 따라 2 μg 총 RNA를 바이오라드 CFX96 기기에서 20 μl의 최종 반응 부피에 첨가함으로써 TATAA 그랜드스크립트 cDNA 합성 키트 (Tataa 바이오센터(Tataa Biocenter))를 사용하여 역 전사하였다.

qPCR을 60초 동안 95℃, 이어서 5초 동안 95℃, 30초 동안 60℃ 및 10초 동안 72℃의 45 사이클, 이어서 0.5℃ 스텝으로 55℃에서 95℃까지 용융 곡선의 온도 프로토콜을 사용하여 바이오라드 CFX384 기기에서 TATAA SYBR 그랜드마스터 믹스 (Tataa 바이오센터)를 사용하여 수행하였다. 각각의 반응을 위해, 4 μl cDNA를 20 μl의 총 반응 부피에 사용하였다. qPCR을 위해 2가지 검정을 수행하였으며, 하나는 인간 시토크롬 B (hCytB)에 대하여 지시되었고 다른 것은 마우스 시토크롬 B (mCytB)에 대하여 지시되었다. qPCR을 hCytB 검정의 경우에 이중으로 및 mCytB 검정의 경우에 단일 측정으로 수행하였다.

통계

나타내어진 모든 값은 그러한 실험의 평균이었고, 플롯팅된 그래프는 그 그룹의 평균이었고, 오차 막대는 원래 값의 표준 오차 평균이었다. 그래프를 그래프 패드 프리즘 소프트웨어 버전 6.0을 사용하여 플롯팅하였다. 스튜던트 t-검정을 사용하여 그룹 사이의 유의한 차이를 계산하였다. P 값 <0.05가 유의한 것으로 간주되었다.

실시예 2: 전층 상처 치유에 대한 돼지 피부 겔 (PSG) 및 인간 말초 혈액 단핵 세포 (hPBMC)의 효과

PSG의 상처 치유 능력을 결정하기 위해, 누드 마우스의 배부에 생성된 급성 전층 절제 상처를 미치료 또는 HA, PSG 단독 또는 PSG+hPBMC로 치료하였다. 도 3은 미치료 상처에서 및 HA, PSG 단독 및 PSG+hPBMC로 치료 후 상처에서 상처 치유 과정을 제시한다. 작업후 5 및 10일째에, 딱지가 모든 그룹에서 관찰되었다. 그러나, 제15일 즈음에, 딱지는 PSG-치료된 그룹에서 벗겨졌고, 상처는 재생된 피부로 가득했다.

PSG 단독 및 PSG + hPBMC 치료된 동물에서의 상처 폐쇄

명백한 차이가 PSG 단독 및 PSG+hPBMC로 치료된 동물에서의 상처 폐쇄와 관련하여 관찰되었다. 15일 즈음에, 이들 동물에서의 상처는 상처 폐쇄에서 가장 유의한 차이를 나타내었다. 이미 제15일에, 완전 상처 폐쇄가 미치료 및 HA로 치료된 0/3 (0%) 마우스와 비교 시, PSG+hPBMC로 치료된 5/6 (83%, p<0.05) 마우스, 및 PSG 단독으로 치료된 4/6 (66%, p<0.05) 마우스에서 관찰되었다. 제25일에, 완전 상처 치유가 모든 그룹에서 관찰되었다. PSG 단독 및 PSG+hPBMC로 치료된 동물에서의 치유된 피부는 정상 피부와 유사하긴 하지만, 세장형 반흔이 과도한 수축으로 인해 대조군 그룹의 치유된 피부에서 여전히 관찰되었다. 도 3에 제시된 바와 같이, 대조군 그룹 및 PSG-치료된 그룹 사이의 차이는 수술 후 15일째에 현저하였지만 (p<0.05), 25일째에는 유의하지 않았다.

상처 크기의 측정

상처 영상을 정량화하여 상이한 시점에서의 치유 면적을 제시하였다. 제15일에서의 상처 크기의 측정은, PSG (7.95±1.96 mm²; p<0.05) 및 PSG+hPBMC (3.5±1.92 mm²; p<0.05)로 치료된 동물이 미치료 동물 (상처 면적 26.58±4.42 mm²)과 비교 시 유의하게 더 작은 상처 면적을 가졌다는 것을 제시하였다. PSG 및 PSG+hPBMC로 치료된 동물에서의 상처 면적은 또한 HA로 치료된 동물 (13±8.88 mm²)과 비교 시 더 낮았다 (표 1).

표 1: 미치료 및 히알루론산 (HA), 돼지 피부 겔 (PSG) 또는 돼지 피부 겔 및 인간 말초 혈액 세포 (PSG+hPBMC)로 치료된 동물에서의 다양한 시점에서의 상처 크기의 측정

*미치료 동물과 비교 시

상처 치유 과정 및 복원된 조직의 구조 (예를 들어, 콜라겐 침착)

조직학적 염색을 수행하여 상처-치유 과정 및 복원된 조직의 구조를 평가하였다 (도 4). 수술 후 5일째에, 모든 그룹은 풍부한 염증 세포를 나타내었다. 10일 후에, 대조군에서의 상처를 인접한 조직으로부터 식별가능하였고, 구별가능한 케라틴 층은 전혀 관찰되지 않았다. PSG 및 PSG+hPBMC-치료된 그룹에서, 새로운 표피 세포는 상처 변연부 주위로 이동하였고 케라틴 층은 명백하게 뚜렷하였다. 제15일 및 제25일에, 치유된 상처의 횡단면의 H&E 염색은 새로 형성된 표피 층이 미치료 및 HA-치료된 상처와 비교 시 PSG 및 PSG+hPBMC-치료된 상처에서의 조직화 및 형태학에 관하여 주위 표피와의 큰 유사성을 나타내었다는 것을 입증하였다. 추가적으로, 미치료 및 HA-치료된 그룹에서, 이동 속도는 제한되었고 25일까지 전체 상처 표면을 가교할 수 없었으며, 이는 비-케라틴화된 중심을 제시한다 (도 4).

상처 기저부 내에서의 콜라겐 침착의 정도를 마손 트리크롬 염색을 사용하여 평가하였으며, 증가된 경우에, 조직화된 콜라겐 침착은 개선된 상처 기저부 성숙과 연관된다. MT 염색은 대조군과 비교 시 PSG 및 PSG+hPBMC-치료된 동물의 피부 생검에서의 콜라겐의 현저하게 증가된 발현을 제시하였다 (도 5a-5d). 조직병리학적 분석을 확증하기 위해, 밀도측정법에 의한 콜라겐의 정량화를 새로 재생된 피부에서 수행하였다 (수술 후 제25일). PSG+hPBMC (245011±35832 a.u, p<0.05)로 치료된 그룹에서의 동물은 미치료 (127001±25429 a.u) 그룹과 비교 시 유의하게 더 높은 양의 콜라겐을 가졌다. 비록 PSG 치료의 마우스에서의 콜라겐 밀도 (252314±70005 a.u, p=0.07)가 또한 미치료 그룹과 비교 시 높은 값을 제시했을지라도, 그러나 그것은 통계적으로 유의하지 않았다. HA-치료된 그룹은 177239±31097 a.u 밀도를 가졌고 또한 미치료 그룹과 비교한 경우에 유의하지 않았다 (도 5e).

PSG에서의 인간 세포가 상처에의 그의 적용 후에 생존하였는지 여부를 결정하기 위해, 제5일 및 제10일에서의 부분적으로 치유된 상처의 파라핀 절편을 인간 특이적 항-미토콘드리아 항체로 면역염색하였다. 결과는 대조군에서의 양성으로 염색된 세포의 부재 (도 6a 및 6b), 그러나 인간 간 조직 (양성 대조군; 도 6c)에서 뿐만 아니라 PSG+hPBMC로 치료된 동물의 진피 및 표피 층 둘 다 (도 6d-6f)에서의 인간 미토콘드리아 양성 세포의 존재를 입증하였다. 이들 결과는 인간 세포가 신생혈관화를 용이하게 함으로써 상처난 피부의 재상피화를 가속화하였다는 것을 나타내었다.

실시예 3: 상처 내에서의 인간 및 숙주 혈관 형성은 신생혈관화를 용이하게 함으로써 상처 치유를 가속화한다.

CD31 염색은 수술 후 5 및 10일째에 각각의 실험 그룹에서 혈관화를 제시하였다. 다수의 숙주 (마우스) 미세혈관이 제5일 & 제10일에 PSG+hPBMC-치료된 그룹에서 관찰되었고, 미세혈관 밀도는 대조군과 비교 시 훨씬 높았다 (각각 도 7a, 7d & 7g). 중요하게는, 인간-특이적 항-CD31 항체로 염색 시, 여러 소혈관은 제5일에 PSG+hPBMC-치료된 그룹에서 이러한 마커에 대해 양성으로 염색하였다 (도 7b). 그러나 인간 CD31에 대해 양성으로 염색하는 혈관의 수는 제10일에 감소하였고 (도 7e) 제15일에는 무시할만하였다. 이러한 발견은 인간 PBMC가 신생혈관화를 용이하게 함으로써 상처 치유를 가속화하였다는 것을 나타내었다.

실시예 4: 새로 형성된 피부에서의 인간 RNA의 검출

제5일, 제10일, 제15일 및 제25일에 취한 총 38개의 피부 샘플을 인간 세포의 검출을 위해 qPCR로 분석하였다. 샘플 중 23개를 hPBMC로 치료된 마우스로부터 취하였고, 15개의 샘플을 인간 세포로 치료되지 않은 마우스로부터 취하였다. 마우스 qPCR 검정에 대한 Cq 값은 모든 경우에 10 내지 14 범위로 낮긴 하지만, 인간 검정에 대한 Cq 값은 20 사이클 더 높았고, 이는 예상했던 바와 같이, 적은 수의 인간 세포가 마우스 조직에 존재한다는 것을 나타낸다. 인간 RNA는 인간 세포로 치료된 23개의 샘플 중 20개에서 확인될 수 있었지만, 3개의 샘플에서는 인간 RNA 샘플이 전혀 확인되지 않았다. 인간 세포로 치료되지 않은 샘플의 경우에, 유사한 범위의 Cq 값을 갖는 양성 qPCR 결과를 15개 샘플 중 4개에서 수득하였다.

다른 실시양태

본 개시내용이 그의 상세한 설명과 함께 기재되었지만, 상기 기재는 첨부된 청구범위의 범주에 의해 규정되는, 본 개시내용의 범주를 예시하기 위해 의도되는 것이며 이를 제한하지는 않는다는 것이 이해되어야 한다. 다른 측면, 이점, 및 변형은 하기 청구범위의 범주 내이다.

본 개시내용의 넘버링된 항은 하기와 같다:

1. 포유동물 조직의 세포외 매트릭스 (ECM) 구성성분 및 중합체를 포함하는 조성물.

2. 제1항에 있어서, 조작된 생체재료인 조성물.

3. 제2항에 있어서, 조작된 생체재료가 겔 조성물인 생체재료.

4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 과립구 대식세포-콜로니 자극 인자 (GM-CSF), 인터류킨 (IL)-3, IL-4, 뉴트로핀 (NT)-6, 플레이오트로핀 (HB-GAM), 미드카인 (MK), 인터페론 유도성 단백질-10 (IP-10), 혈소판 인자 (PF)-4, 단핵구 화학주성 단백질-1 (MCP-1), RANTES (CCL-5, 케모카인 (C-C 모티프) 리간드 5), IL-8, IGF, 섬유모세포 성장 인자 (FGF)-1, FGF-2, FGF-3, FGF-4, FGF-5, FGF-6, FGF-7, FGF-8, FGF-9, 형질전환 성장 인자 (TGF)-β, VEGF, 혈소판-유래 성장 인자 (PDGF)-A, PDGF-B, HB-EGF, 간세포 성장 인자 (HGF), 종양 괴사 인자 (TNF)-α, 인슐린-유사 성장 인자 (IGF)-I, 및 그의 임의의 조합(들)으로 이루어진 군으로부터 선택된 성장 인자를 추가로 포함하는 조성물.

5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 포유동물 조직이 상피 및/또는 결합 조직을 포함하는 것인 조성물.

6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 포유동물 조직이 피부, 태반, 및/또는 제대로부터 수득되는 것인 조성물.

7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 중합체가 탄수화물 기반 중합체인 조성물.

8. 제7항에 있어서, 중합체가 디사카라이드 중합체인 조성물.

9. 제8항에 있어서, 디사카라이드 중합체가 히알루론산인 조성물.

10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 혈액 세포 또는 혈소판 풍부 혈장을 추가로 포함하는 조성물.

11. 제10항에 있어서, 혈액 세포가 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC)인 조성물.

12. 제11항에 있어서, PBMC가 인간 세포인 조성물.

13. 제12항에 있어서, 인간 PBMC가 자가인 조성물.

14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, ECM 구성성분이 콜라겐, 엘라스틴, 및/또는 황산화 글리코사미노글리칸 (GAG)을 포함하는 것인 조성물.

15. 제2항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 생체재료가 리본-유사 섬유를 포함하는 것인 조성물.

16. 제15항에 있어서, 섬유가 약 1 μm - 약 40 μm 폭, 약 0.1 μm - 약 10 μm 두께, 및/또는 약 ≥70 μm - ≤4000 μm 길이의 것인 조성물.

17. 제16항에 있어서, 섬유가 약 5 μm - 약 30 μm 폭의 것인 조성물.

18. 제17항에 있어서, 섬유가 약 0.5 μm - 약 5 μm 두께의 것인 조성물.

19. 제16항에 있어서, 섬유가 약 ≥75 μm - 약 ≤800 μm 길이의 것인 조성물.

20. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 포유동물 조직이 돼지, 소, 새끼양, 염소, 양, 및 인간으로 이루어진 군으로부터 선택된 포유동물로부터 수득되는 것인 조성물.

21. 제20항에 있어서, 돼지가 α-Gal (Galα1,3-Galβ1-4GlcNAc-R) 에피토프에 대한 녹아웃 돌연변이체인 조성물.

22. 포유동물 조직의 세포외 매트릭스 (ECM) 구성성분 및 중합체를 포함하는 조성물을 대상체의 상처에 적용하는 것을 포함하는, 그를 필요로 하는 대상체의 상처를 치유하는 방법.

23. 포유동물 조직의 세포외 매트릭스 (ECM) 구성성분, 중합체, 및 치료제를 포함하는 조성물을 대상체의 상처에 적용하는 것을 포함하는, 그를 필요로 하는 대상체의 상처에 치료제를 전달하는 방법.

24. 포유동물 조직의 세포외 매트릭스 (ECM) 구성성분, 중합체, 및 성장 인자를 포함하는 조성물을 대상체의 상처에 적용하는 것을 포함하는, 그를 필요로 하는 대상체의 상처에 성장 인자를 전달하는 방법.

25. 포유동물 조직의 세포외 매트릭스 (ECM) 구성성분 및 중합체를 포함하는 조성물을 대상체의 상처에 적용하는 것을 포함하는, 그를 필요로 하는 대상체의 상처를 수화시키는 방법.

26. 제22항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물이 조작된 생체재료인 방법.

27. 제22항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 생체재료가 겔 조성물인 방법.

28. 제24항에 있어서, 성장 인자가 과립구 대식세포-콜로니 자극 인자 (GM-CSF), 인터류킨 (IL)-3, IL-4, 뉴트로핀 (NT)-6, 플레이오트로핀 (HB-GAM), 미드카인 (MK), 인터페론 유도성 단백질-10 (IP-10), 혈소판 인자 (PF)-4, 단핵구 화학주성 단백질-1 (MCP-1), RANTES (CCL-5, 케모카인 (C-C 모티프) 리간드 5), IL-8, IGF, 섬유모세포 성장 인자 (FGF)-1, FGF-2, FGF-3, FGF-4, FGF-5, FGF-6, FGF-7, FGF-8, FGF-9, 형질전환 성장 인자 (TGF)-β, VEGF, 혈소판-유래 성장 인자 (PDGF)-A, PDGF-B, HB-EGF, 간세포 성장 인자 (HGF), 종양 괴사 인자 (TNF)-α, 인슐린-유사 성장 인자 (IGF)-I, 및 그의 임의의 조합(들)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.

29. 제22항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 상처가 급성 상처 또는 만성 상처인 방법.

30. 제22항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 상처가 피부 상처인 방법.

31. 제22항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 상처가 피부 열상, 마찰상, 폐쇄 충격 수술 상처, 피부 찰과상, 화상, 피부 절개, 피부 열창, 피부 좌상, 피부 자상, 압박 궤양, 정맥 궤양, 동맥 궤양, 신경병증성/당뇨병성 상처, 림프부종, 또는 수술 부위 절개인 방법.

32. 제22항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 포유동물 조직이 상피 및/또는 결합 조직을 포함하는 것인 방법.

33. 제22항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 포유동물 조직이 피부, 태반, 및/또는 제대로부터 수득되는 것인 방법.

34. 제22항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 중합체가 탄수화물 기반 중합체인 방법.

35. 제22항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 중합체가 디사카라이드 중합체인 방법.

36. 제35항에 있어서, 디사카라이드 중합체가 히알루론산인 방법.

37. 제22항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물이 혈액 세포 또는 혈소판 풍부 혈장을 추가로 포함하는 것인 방법.

38. 제37항에 있어서, 혈액 세포가 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC)인 방법.

39. 제38항에 있어서, PBMC가 인간 세포인 방법.

40. 제39항에 있어서, 인간 PBMC가 자가인 방법.

41. 제22항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, ECM 구성성분이 콜라겐, 엘라스틴, 및/또는 황산화 글리코사미노글리칸 (GAG)을 포함하는 것인 방법.

42. 제22항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물이 리본-유사 섬유를 포함하는 것인 방법.

43. 제42항에 있어서, 섬유가 약 1 μm - 약 40 μm 폭, 약 0.1 μm - 약 10 μm 두께, 및/또는 약 ≥70 μm - ≤4000 μm 길이의 것인 방법.

44. 제43항에 있어서, 섬유가 약 5 μm - 약 30 μm 폭의 것인 방법.

45. 제43항에 있어서, 섬유가 약 0.5 μm - 약 5 μm 두께의 것인 방법.

46. 제43항에 있어서, 섬유가 약 ≥75 μm - 약 ≤800 μm 길이의 것인 방법.

47. 제22항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 포유동물 조직이 돼지, 소, 새끼양, 염소, 양, 및 인간으로 이루어진 군으로부터 선택된 포유동물로부터 수득되는 것인 방법.

48. 제47항에 있어서, 돼지가 α-Gal (Galα1,3-Galβ1-4GlcNAc-R) 에피토프에 대한 녹아웃 돌연변이체인 방법.

49. 제22항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 반흔 조직 형성을 감소시키는 방법.

50. 제49항에 있어서, 감소된 반흔 조직 형성이 히알루론산 (HA)으로 치료된 상처와 비교되는 것인 방법.

51. 제22항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, 치유 상처의 탈색을 감소시키는 방법.

52. 제51항에 있어서, 감소된 탈색이 히알루론산 (HA)으로 치료된 상처와 비교되는 것인 방법.

53. 제39항에 있어서, 각질세포 및 상피 세포의 이동을 촉진하는 방법.

54. 제39항에 있어서, 상처에서 신생혈관화를 촉진하는 방법.

55. 제54항에 있어서, 신생혈관화가 생체재료를 상처에 적용한 후 5 내지 10일 내에 촉진되는 것인 방법.

56. 제54항에 있어서, 신생혈관화가 상처에서 ECM 재형성을 유발하는 것인 방법.

57. 제39항에 있어서, 감소된 세장형 반흔이, 히알루론산으로 치료된 상처와 비교 시, 치유된 상처의 부위에서 관찰되는 것인 방법.

58. 제22항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서, 생체재료가 표피 세포를 생성하고 표피 및 진피의 이중층 구조를 복원시키는 것인 방법.

59. 제58항에 있어서, 상처가 생체재료를 상처에 적용한지 15 - 40일 이내에 치유되는 것인 방법.

60. 제59항에 있어서, 상처가 생체재료를 상처에 적용한지 25일 이내에 치유되는 것인 방법.

61. 포유동물 조직의 세포외 매트릭스 (ECM) 구성성분 및 중합체를 포함하는 조성물을 제조하는 방법이며, 포유동물 조직을 탈세포화하여 세포외 매트릭스 (ECM) 구성성분을 포함하는 분말을 제조하고, 상기 분말을 완충제, 영양소, 성장 인자, 또는 중합체를 포함하는 배지와 혼합하며, 여기서 분말이 배지를 흡인하여, 그에 의해 조성물을 제조하는 것을 포함하는 방법.

62. 제61항에 있어서, 분말이, 조직을 화학물질로 치료하고, 화학물질로 치료된 조직을 냉동-건조시키고, 냉동-건조된 조직을 균질화함으로써 제조되는 것인 방법.

63. 제61항 또는 제62항에 있어서, 분말이 필라멘트형인 방법.

64. 제61항 내지 제63항 중 어느 한 항에 있어서, 배지가 혈청 함유 배지, 감소된 혈청 함유 배지, 또는 혈청 무함유 배지인 방법.

65. 제61항 내지 제64항 중 어느 한 항에 있어서, 성장 인자가 재조합 4-1BBL, 재조합 6Ckine, 6Ckine 재조합 인간 단백질, ANGPT2 (ANG2), ANGPTL5, 액티빈 A, 액티빈 R1b, BAFF, BAMBI, CXCL13, BDNF, BLC, BMP2, BMP4, BMP5, BMP7, BMPR1A, CCL1, CCL17, CCL20 (MIP-3), CCL21, CD40, GM-CSF, IL-3, IL-4, NT-6, HB-GAM, MK, IP-10, PF-4, MCP-1, RANTES, IL-8, IGF, FGF 1, FGF-2, FGF-3, FGF-4, FGF-5, FGF-6, FGF-7, FGF-8, FGF-9, TGF-β, VEGF, PDGF-A, PDGF-B, HB-EGF, HGF, TNF-α, IGF-I, 및 그의 임의의 조합(들)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.

66. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, ECM 구성성분이 재조합 ECM 구성성분인 조성물.

67. 제66항에 있어서, 재조합 ECM 구성성분이 단리 및/또는 정제된 ECM 구성성분인 조성물.

68. 제22항 내지 제65항 중 어느 한 항에 있어서, ECM 구성성분이 재조합 ECM 구성성분인 방법.

69. 제68항에 있어서, 재조합 ECM 구성성분이 단리 및/또는 정제된 ECM 구성성분인 방법.

70. 제1항 내지 제69항 중 어느 한 항에 있어서, 포유동물 조직이 탈세포화된 포유동물 조직인 조성물 또는 방법.

Claims

포유동물 조직의 세포외 매트릭스 (ECM) 구성성분 및 중합체를 포함하는 조성물.
제1항에 있어서, 조작된 생체재료인 조성물.
제2항에 있어서, 조작된 생체재료가 겔 조성물인 조성물.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 과립구 대식세포-콜로니 자극 인자 (GM-CSF), 인터류킨 (IL)-3, IL-4, 뉴트로핀 (NT)-6, 플레이오트로핀 (HB-GAM), 미드카인 (MK), 인터페론 유도성 단백질-10 (IP-10), 혈소판 인자 (PF)-4, 단핵구 화학주성 단백질-1 (MCP-1), RANTES (CCL-5, 케모카인 (C-C 모티프) 리간드 5), IL-8, IGF, 섬유모세포 성장 인자 (FGF)-1, FGF-2, FGF-3, FGF-4, FGF-5, FGF-6, FGF-7, FGF-8, FGF-9, 형질전환 성장 인자 (TGF)-β, VEGF, 혈소판-유래 성장 인자 (PDGF)-A, PDGF-B, HB-EGF, 간세포 성장 인자 (HGF), 종양 괴사 인자 (TNF)-α, 인슐린-유사 성장 인자 (IGF)-I, 및 그의 임의의 조합(들)으로 이루어진 군으로부터 선택된 성장 인자를 추가로 포함하는 조성물.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 포유동물 조직이 상피 및/또는 결합 조직을 포함하는 것인 조성물.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 포유동물 조직이 피부, 태반, 및/또는 제대로부터 수득되는 것인 조성물.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 중합체가 탄수화물 기반 중합체인 조성물.
제7항에 있어서, 중합체가 디사카라이드 중합체인 조성물.
제8항에 있어서, 디사카라이드 중합체가 히알루론산인 조성물.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 혈액 세포 또는 혈소판 풍부 혈장을 추가로 포함하는 조성물.
제10항에 있어서, 혈액 세포가 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC)인 조성물.
제11항에 있어서, PBMC가 인간 세포인 조성물.
제12항에 있어서, 인간 PBMC가 자가인 조성물.
제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, ECM 구성성분이 콜라겐, 엘라스틴, 및/또는 황산화 글리코사미노글리칸 (GAG)을 포함하는 것인 조성물.
제2항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 생체재료가 리본-유사 섬유를 포함하는 것인 조성물.
제15항에 있어서, 섬유가 약 1 μm - 약 40 μm 폭, 약 0.1 μm - 약 10 μm 두께, 및/또는 약 ≥70 μm - ≤4000 μm 길이의 것인 조성물.
제16항에 있어서, 섬유가 약 5 μm - 약 30 μm 폭의 것인 조성물.
제16항에 있어서, 섬유가 약 0.5 μm - 약 5 μm 두께의 것인 조성물.
제16항에 있어서, 섬유가 약 ≥75 μm - 약 ≤800 μm 길이의 것인 조성물.
제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 포유동물 조직이 돼지, 소, 새끼양, 염소, 양, 및 인간으로 이루어진 군으로부터 선택된 포유동물로부터 수득되는 것인 조성물.
제20항에 있어서, 돼지가 α-Gal (Galα1,3-Galβ1-4GlcNAc-R) 에피토프에 대한 녹아웃 돌연변이체인 조성물.
제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 요법에 사용하기 위한 조성물.
포유동물 조직의 세포외 매트릭스 (ECM) 구성성분, 중합체, 및 치료제를 포함하는 조성물로서, 그를 필요로 하는 대상체의 상처에 치료제를 전달하는데 사용하기 위한 조성물.
포유동물 조직의 세포외 매트릭스 (ECM) 구성성분, 중합체, 및 성장 인자를 포함하는 조성물로서, 그를 필요로 하는 대상체의 상처에 성장 인자를 전달하는데 사용하기 위한 조성물.
포유동물 조직의 세포외 매트릭스 (ECM) 구성성분 및 중합체를 포함하는 조성물로서, 그를 필요로 하는 대상체의 상처를 수화시키는데 사용하기 위한 조성물.
제23항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 조작된 생체재료인 조성물.
제23항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 생체재료가 겔 조성물인 조성물.
제24항에 있어서, 성장 인자가 과립구 대식세포-콜로니 자극 인자 (GM-CSF), 인터류킨 (IL)-3, IL-4, 뉴트로핀 (NT)-6, 플레이오트로핀 (HB-GAM), 미드카인 (MK), 인터페론 유도성 단백질-10 (IP-10), 혈소판 인자 (PF)-4, 단핵구 화학주성 단백질-1 (MCP-1), RANTES (CCL-5, 케모카인 (C-C 모티프) 리간드 5), IL-8, IGF, 섬유모세포 성장 인자 (FGF)-1, FGF-2, FGF-3, FGF-4, FGF-5, FGF-6, FGF-7, FGF-8, FGF-9, 형질전환 성장 인자 (TGF)-β, VEGF, 혈소판-유래 성장 인자 (PDGF)-A, PDGF-B, HB-EGF, 간세포 성장 인자 (HGF), 종양 괴사 인자 (TNF)-α, 인슐린-유사 성장 인자 (IGF)-I, 및 그의 임의의 조합(들)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 조성물.
제22항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 상처가 급성 상처 또는 만성 상처인 조성물.
제22항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 상처가 피부 상처인 조성물.
제22항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 상처가 피부 열상, 마찰상, 폐쇄 충격 수술 상처, 피부 찰과상, 화상, 피부 절개, 피부 열창, 피부 좌상, 피부 자상, 압박 궤양, 정맥 궤양, 동맥 궤양, 신경병증성/당뇨병성 상처, 림프부종, 또는 수술 부위 절개인 조성물.
제23항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 포유동물 조직이 상피 및/또는 결합 조직을 포함하는 것인 조성물.
제23항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 포유동물 조직이 피부, 태반, 및/또는 제대로부터 수득되는 것인 조성물.
제23항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 중합체가 탄수화물 기반 중합체인 조성물.
제23항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 중합체가 디사카라이드 중합체인 조성물.
제35항에 있어서, 디사카라이드 중합체가 히알루론산인 조성물.
제22항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 혈액 세포 또는 혈소판 풍부 혈장을 추가로 포함하는 조성물.
제37항에 있어서, 혈액 세포가 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC)인 조성물.
제38항에 있어서, PBMC가 인간 세포인 조성물.
제39항에 있어서, 인간 PBMC가 자가인 조성물.
제23항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, ECM 구성성분이 콜라겐, 엘라스틴, 및/또는 황산화 글리코사미노글리칸 (GAG)을 포함하는 것인 조성물.
제23항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 리본-유사 섬유를 포함하는 조성물.
제42항에 있어서, 섬유가 약 1 μm - 약 40 μm 폭, 약 0.1 μm - 약 10 μm 두께, 및/또는 약 ≥70 μm - ≤4000 μm 길이의 것인 조성물.
제43항에 있어서, 섬유가 약 5 μm - 약 30 μm 폭의 것인 조성물.
제43항에 있어서, 섬유가 약 0.5 μm - 약 5 μm 두께의 것인 조성물.
제43항에 있어서, 섬유가 약 ≥75 μm - 약 ≤800 μm 길이의 것인 조성물.
제23항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 포유동물 조직이 돼지, 소, 새끼양, 염소, 양, 및 인간으로 이루어진 군으로부터 선택된 포유동물로부터 수득되는 것인 조성물.
제47항에 있어서, 돼지가 α-Gal (Galα1,3-Galβ1-4GlcNAc-R) 에피토프에 대한 녹아웃 돌연변이체인 조성물.
제22항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 반흔 조직 형성을 감소시키는 조성물.
제49항에 있어서, 감소된 반흔 조직 형성이 히알루론산 (HA)으로 치료된 상처와 비교되는 것인 조성물.
제22항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, 치유 상처의 탈색을 감소시키는 조성물.
제51항에 있어서, 감소된 탈색이 히알루론산 (HA)으로 치료된 상처와 비교되는 것인 조성물.
제39항에 있어서, 각질세포 및 상피 세포의 이동을 촉진하는 조성물.
제39항에 있어서, 상처에서 혈관화 또는 신생혈관화를 촉진하는 조성물.
제54항에 있어서, 혈관화 또는 신생혈관화가 생체재료를 상처에 적용한 후 5 내지 10일 내에 촉진되는 것인 조성물.
제54항에 있어서, 혈관화 또는 신생혈관화가 상처에서 ECM 재형성을 유발하는 것인 조성물.
제39항에 있어서, 감소된 세장형 반흔이, 히알루론산으로 치료된 상처와 비교 시, 치유된 상처의 부위에서 관찰되는 것인 조성물.
제22항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서, 생체재료가 표피 세포를 생성하고 표피 및 진피의 이중층 구조를 복원시키는 것인 조성물.
제58항에 있어서, 상처가 생체재료를 상처에 적용한지 15 - 40일 이내에 치유되는 것인 조성물.
제59항에 있어서, 상처가 생체재료를 상처에 적용한지 25일 이내에 치유되는 것인 조성물.
포유동물 조직의 세포외 매트릭스 (ECM) 구성성분 및 중합체를 포함하는 조성물을 제조하는 방법이며, 포유동물 조직을 탈세포화하여 세포외 매트릭스 (ECM) 구성성분을 포함하는 분말을 제조하고, 상기 분말을 완충제, 영양소, 성장 인자, 또는 중합체를 포함하는 배지와 혼합하며, 여기서 분말이 배지를 흡인하여, 그에 의해 조성물을 제조하는 것을 포함하는 방법.
제61항에 있어서, 분말이, 조직을 화학물질로 처리하고, 화학물질 처리된 조직을 냉동-건조시키고, 냉동-건조된 조직을 균질화함으로써 제조되는 것인 방법.
제61항 또는 제62항에 있어서, 분말이 필라멘트형인 방법.
제61항 내지 제63항 중 어느 한 항에 있어서, 배지가 혈청 함유 배지, 감소된 혈청 함유 배지, 또는 혈청 무함유 배지인 방법.
제61항 내지 제64항 중 어느 한 항에 있어서, 성장 인자가 재조합 4-1BBL, 재조합 6Ckine, 6Ckine 재조합 인간 단백질, ANGPT2 (ANG2), ANGPTL5, 액티빈 A, 액티빈 R1b, BAFF, BAMBI, CXCL13, BDNF, BLC, BMP2, BMP4, BMP5, BMP7, BMPR1A, CCL1, CCL17, CCL20 (MIP-3), CCL21, CD40, GM-CSF, IL-3, IL-4, NT-6, HB-GAM, MK, IP-10, PF-4, MCP-1, RANTES, IL-8, IGF, FGF 1, FGF-2, FGF-3, FGF-4, FGF-5, FGF-6, FGF-7, FGF-8, FGF-9, TGF-β, VEGF, PDGF-A, PDGF-B, HB-EGF, HGF, TNF-α, IGF-I, 및 그의 임의의 조합(들)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, ECM 구성성분이 재조합 ECM 구성성분인 조성물.
제66항에 있어서, 재조합 ECM 구성성분이 단리 및/또는 정제된 ECM 구성성분인 조성물.
제23항 내지 제60항 중 어느 한 항에 있어서, ECM 구성성분이 재조합 ECM 구성성분인 조성물.
제68항에 있어서, 재조합 ECM 구성성분이 단리 및/또는 정제된 ECM 구성성분인 조성물.
제1항 내지 제69항 중 어느 한 항에 있어서, 포유동물 조직이 탈세포화된 포유동물 조직인 조성물 또는 방법.
제22항에 있어서, 그를 필요로 하는 대상체에서 상처를 치유하는데 사용하기 위한 조성물.