JP2018535749A - 創傷を治癒するための組成物および方法 - Google Patents

Abstract

様々な細胞に基づく療法および組織工学ストラテジーが、慢性創傷または急性皮膚外傷に罹患している患者を処置するために開発されている。しかし、どれも慢性または急性創傷の永続性のある創傷治癒の実現において最適ではない。永続性のある創傷閉鎖を実現するために、機能的血管ネットワークの形成が創傷床の再生に重要である。本開示は、創傷を治癒させる際における使用のための改善された組成物を提供する。本開示は、哺乳動物組織の細胞外マトリックス成分およびポリマーを含む操作された生体材料の組成物、創傷治癒の方法、ならびにそれを必要とする対象に、創傷を治癒させるために、治療剤、増殖因子を送達し、または水分付与する方法に関する。

Description

本開示は、哺乳動物組織の細胞外マトリックス成分およびポリマーを含む操作された生体材料の組成物、創傷治癒の方法、および創傷治癒のための治療剤、増殖因子または水分付与を必要とする対象に創傷治癒のための治療剤、増殖因子または水分付与を送達する方法に関する。

創傷治癒は、人体における正常な生物学的プロセスとして、４つの正確かつ高度にプログラムされたフェーズ：止血、炎症、増殖、およびリモデリングによって実現される。創傷が治癒に成功するために、４つすべてのフェーズが適切な順序および時間枠で起こらなければならない。多くの因子が、このプロセスの１つまたは複数のフェーズを妨害し、よって不適切な創傷治癒または創傷治癒障害を引き起こし得る。

急性創傷および慢性創傷の遅延を含む治癒障害を呈する創傷は一般に、治癒の正常な段階を通じて進行することに失敗している。このような創傷は頻繁に、延期された、不完全な、または非協調的な治癒プロセスに起因して病的炎症の状態に入る。ほとんどの慢性創傷は、虚血、真性糖尿病、静脈うっ滞疾患、または圧力に関連した潰瘍である。非治癒創傷は、米国において約３００万〜６００万人に影響しており、６５歳またはそれより高齢の人がこれらの事象の８５％を占める。非治癒創傷は、非常に大きいヘルスケア支出をもたらし、総コストは、年間３０億ドル超と見積もられている。

成人において、最適な創傷治癒は、以下の事象：（１）急速な止血；（２）適切な炎症；（３）間葉細胞の分化、増殖、および創傷部位への遊走；（４）適当な血管新生；（５）迅速な再上皮化（創傷面上の上皮組織の再成長）；ならびに（６）治癒中の組織に強度をもたらすためのコラーゲンの適切な合成、架橋、および整列を伴う。

様々な細胞に基づく療法および組織工学ストラテジーが、慢性創傷または急性皮膚外傷に罹患している患者を処置するために開発されている。しかし、どれも慢性または急性創傷の永続性のある創傷治癒の実現において最適ではない。永続性のある創傷閉鎖を実現するために、機能的血管ネットワークの形成が創傷床の再生に重要である。本開示は、創傷を治癒させる際における使用のための改善された組成物を提供する。

本開示は、とりわけ、創傷に塗布するための哺乳動物組織のＥＣＭ成分およびポリマーを含む組成物（例えば、操作された生体材料）；それを必要とする対象の創傷を治癒させる方法であって、組成物（例えば、操作された生体材料）を塗布することを含む方法；それを必要とする対象の創傷に治療剤を送達する方法であって、組成物（例えば、操作された生体材料）を塗布することを含む方法；それを必要とする対象の創傷に増殖因子を送達する方法であって、哺乳動物組織の細胞外マトリックス（ＥＣＭ）成分、ポリマー、および増殖因子を含む組成物（例えば、操作された生体材料）を対象の創傷に塗布することを含む方法；ならびにそれを必要とする対象の創傷に水分付与（ｈｙｄｒａｔｅ）する方法であって、哺乳動物組織の細胞外マトリックス（ＥＣＭ）成分およびポリマーを含む組成物（例えば、操作された生体材料）を対象の創傷に塗布することを含む方法を提供する。哺乳動物組織は、脱細胞化哺乳動物組織であり得る。ＥＣＭの成分は、哺乳動物（例えば、ヒト）の組織から単離および／もしくは精製され、またはそうされてもよく、あるいはそれぞれのＥＣＭ成分（例えば、コラーゲン、エラスチン、ラミニン、グリコサミノグリカン、プロテオグリカン、抗菌薬、化学誘引物質、サイトカイン、および増殖因子）をコードする哺乳動物（例えば、ヒト）の遺伝子もしくは遺伝子断片を伴う組換えＤＮＡ技術を使用して生成され、適当な発現系（原核生物または真核生物（例えば、昆虫もしくは哺乳動物細胞））から発現され、当技術分野で適当な方法によって引き続いて単離および／もしくは精製され、またはそうされてもよい。

組成物（例えば、操作された生体材料）中のＥＣＭ成分は、哺乳動物組織、例えば、上皮および／または結合組織由来であり得、皮膚、胎盤、および／または臍帯から得ることができる。組成物（例えば、操作された生体材料）は、ゲル組成物であってもよい。組成物（例えば、操作された生体材料）のポリマーは、二糖ポリマー、例えば、ヒアルロン酸を含み得る。組成物（例えば、操作された生体材料）は、血液細胞または多血小板血漿をさらに含み得る。組成物（例えば、操作された生体材料）は、ヒト末梢血単核細胞を含み得る。ＥＣＭ成分は、コラーゲン、エラスチン、および／または硫酸化グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）を含み得る。ＥＣＭ成分は、合成ポリマーと混ぜられていてもよい。

組成物（例えば、操作された生体材料）の哺乳動物組織は、哺乳動物、例えば、ブタ、ウシ（ｃｏｗ）、子羊、ヤギ、ヒツジ、または霊長類（例えば、ヒト）から得ることができる。哺乳動物組織は、脱細胞化哺乳動物組織であり得る。哺乳動物は、ブタであってもよい。哺乳動物、例えば、ブタは、α−Ｇａｌ（Ｇａｌα１，３−Ｇａｌβ１−４−ＧｌｃＮＡｃ−Ｒ）エピトープのノックアウト突然変異体であり得る。

創傷を治癒させる方法は、急性もしくは慢性創傷、または皮膚裂傷、摩擦傷、非観血的衝撃手術創傷（ｃｌｏｓｅｄ ｉｍｐａｃｔ ｓｕｒｇｉｃａｌ ｗｏｕｎｄ）、皮膚剥離、火傷、皮膚切開創、皮膚裂創、皮膚挫傷、皮膚穿刺創、褥瘡性潰瘍、静脈性潰瘍、動脈性潰瘍、神経障害性／糖尿病性創傷、リンパ浮腫、もしくは手術部位切開創を含めた皮膚創傷を治癒させることを含む。

本開示の他の特徴および利点は、以下の詳細な説明および特許請求の範囲から明らかとなる。

それとは反対に注記されていない限り、本明細書のすべての刊行物、参考文献、特許、および／または特許出願参考文献は、すべての目的に関してそれらの全体が参照により本明細書に組み込まれている。

図１Ａ〜１Ｇは、ブタ皮膚の肉眼的モルフォロジーおよび組織診断画像である。表皮側を上にした（図１Ａ）および真皮側（図１Ｂ）を上にしたＧａｌ／ｇａｌノックアウト天然ブタ皮膚は、ピンクがかった色、毛髪の存在、および皮下脂肪を実証した。図１Ｃは、核（青色）および細胞物質の存在を示す天然ブタ皮膚のヘマトキシリンおよびエオシン染色を示す。図１Ｄおよび１Ｅは、９日間の脱細胞化後の脱細胞化ブタ皮膚の画像を示し、皮膚は、淡い白色であった。図１Ｆは、核および細胞物質が完全に存在しない脱細胞化ブタ皮膚のヘマトキシリンおよびエオシン染色の画像を示す。図１Ｇは、ヒアルロン酸およびケラチノサイト培地を含有する脱細胞化ブタ皮膚を使用して調製したゲルの画像を示す（スケールバー−５０μｍ）。 同上。 同上。

図２Ａ〜２Ｆは、脱細胞化ブタ皮膚の特徴付けの棒グラフおよび画像を示す。図２Ａは、細胞を除去したにもかかわらず脱細胞化ブタ皮膚粉末中の残留細胞外マトリックス成分の存在を示す棒グラフである。図２Ｂは、天然（上のパネル）および脱細胞化（下のパネル）ブタ皮膚コラーゲン（青色）のマッソントリクローム（ＭＴ）染色を示す画像である。図２Ｃは、（上のパネル）天然および（下のパネル）脱細胞化ブタ皮膚中のエラスチン（黒色）に対するＶｅｒｈｏｅｆｆ−Ｖａｎ Ｇｉｅｓｏｎ（ＶＶＧ）染色を示す画像である。図２Ｄは、光に対して透明であった繊維状白色巨視的外観を示す粉末化ブタ皮膚の光学顕微鏡写真である。図２Ｅおよび２Ｆは、ブタ皮膚粉末が形状およびサイズが様々であるリボン様繊維からなっていたことを示す走査電子顕微鏡写真である。繊維は、不規則にしわとなってねじれており、容易に分散性の束を形成していた（スケールバー−２００μｍ）。 同上。 同上。 同上。 同上。

図３Ａ〜３Ｄは、ヌードマウスにおける全層皮膚創傷の創傷治癒の肉眼的モルフォロジーを示す一連の画像である。治癒は、未処置（図３Ａ）またはヒアルロン酸（ＨＡ）（図３Ｂ）で処置したものと比較して１５日目にブタ皮膚ゲル（ＰＳＧ）のみ（図３Ｃ）またはＰＳＧ＋ヒト末梢血単核細胞（ＰＳＧ＋ｈＰＢＭＣ）（図３Ｄ）で処置したマウスにおいて有意に加速されることが判明した。さらに、ダークピンク色の瘢痕が、２５日目において過剰な収縮に起因して未処置群の治癒した皮膚中で依然として観察され、ヒアルロン酸（図３Ｂ）およびケラチノサイト培地で処置された動物において、長期瘢痕も観察され、一方、瘢痕がわずかな、または無い、際立って透明でほとんど完全に治癒した皮膚が、ＰＳＧ（図３Ｃ）またはＰＳＧ＋ｈＰＢＭＣ（図３Ｄ）で処置した動物において見られた。

図４Ａ〜４Ｄは、ヌードマウスにおける創傷治癒経過を示す皮膚生検のヘマトキシリンおよびエオシン染色の一連の画像である。未処置の；またはヒアルロン酸（ＨＡ）（図４Ｂ）；またはブタ皮膚ゲル（ＰＳＧのみ）（図４Ｃ）もしくはＰＳＧ＋ヒト末梢血単核細胞（ＰＳＧ＋ｈＰＢＭＣ）（図４Ｄ）で処置した全層皮膚創傷の治癒の経過を組織診断によって研究した。手術後５日目に見られた通り、すべての群の動物が豊富な炎症細胞を呈した。対照群（未処置（図４Ａ）およびＨＡ（図４Ｂ））における創傷は、２５日目でさえ隣接組織と区別可能であり、透明な真皮層は観察されなかった一方、ＰＳＧのみ（図４Ｃ）およびＰＳＧ＋ｈＰＢＭＣ（図４Ｄ）群において、ケラチン＋真皮層が明らかに観察された。これらの動物の回復した皮膚は、正常な皮膚のものと同様の構造を示したが、対照群における真皮層は、依然として不完全であった。矢印は、すべての写真において創傷エリアを示し、宿主皮膚がこの領域の右に見られる（スケールバー−２００μｍ）。

図５Ａ〜５Ｅは、未処置およびブタ皮膚ゲル処置ヌードマウスにおける創傷のコラーゲン染色を示す画像および棒グラフである。未処置（図５Ａ）およびＨＡ処置（図５Ｂ）動物における創傷のＭＴ染色は、コラーゲンのより弱い染色（青色）を示した一方、ＰＳＧのみ（図５Ｃ）およびＰＳＧ＋ｈＰＢＭＣ（図５Ｄ）で処置した動物は、創傷治癒の２５日目にコラーゲンに対する強い染色を示した。２５日目の再生皮膚中のコラーゲン測定は、未処置マウスと比較してＰＳＧ＋ｈＰＢＭＣで処置した動物において発現の有意な増大を示した、ｐ＜０．０５；（スケールバー−１００μｍ）（図５Ｅ）。 同上。

図６Ａ〜６Ｆは、ブタ皮膚ゲルおよびヒト末梢血単核細胞で処置した動物の創傷におけるヒト細胞の検出を示す画像である。ブタ皮膚ゲル（ＰＳＧ）およびヒト末梢血単核細胞で処置した動物の表皮および真皮におけるヒト細胞の存在が、ヒト特異的ミトコンドリア抗体を使用して検出された。陽性細胞は、未処置動物において見出されず（図６Ａ）、バックグラウンド染色は、陰性対照において観察されなかった（図６Ｂ）。抗体の特異性がヒト肝組織を使用して陽性対照中で実証された（図６Ｃ）。ＰＳＧ＋ｈＰＢＭＣで処置した動物から採取した皮膚生検の表皮および真皮における陽性染色細胞の存在（黒色矢印）は、創傷治癒の５日目にヒト細胞の存在を実証した（図６Ｄおよび６Ｅ）。同じ動物から採取した皮膚生検は、創傷治癒中に新しく形成された血管中のヒト細胞の存在を示した；（スケールバー−２５μｍ）（図６Ｆ）。 同上。

図７Ａ〜７Ｇは、ブタ皮膚ゲルおよびヒト血液細胞で処置した動物の創傷におけるヒト血管の検出を示す画像である。新しく形成された血管の分布および密度を、免疫蛍光を使用して査定した。マウス内皮細胞のマウス特異的ＣＤ３１抗体（緑色）を使用して５および１０日目に宿主血管を検出した（図７Ａおよび７Ｄ）。ヒト細胞も５および１０日目の新血管形成に寄与したか否かを判定するために、ヒト特異的ＣＤ３１抗体（赤色）を使用した（図７Ｂおよび７Ｅ）。図７Ｃおよび７Ｆは、それぞれ図７Ａと７Ｂおよび７Ｄと７Ｅの合わせた写真である。対照動物と比較して（図７Ｇ）、それぞれマウスＣＤ３１（緑色）およびヒトＣＤ３１（赤色）の著しく増加した数の宿主およびヒト血管染色が、ＰＳＧおよびヒト細胞で処置した動物において５日目に観察された（上のパネル）。しかし１０日目に、より少ない数のヒト血管が観察された（下のパネル）。 同上。 同上。

とりわけ、哺乳動物組織のＥＣＭ成分およびポリマーを含む組成物（例えば、操作された生体材料）；それを必要とする対象の創傷を治癒させる方法であって、組成物（例えば、操作された生体材料）を塗布することを含む方法；ならびにそれを必要とする対象の創傷に治療剤を送達する方法であって、組成物（例えば、操作された生体材料）を塗布することを含む方法が本明細書に提供されている。哺乳動物組織は、脱細胞化哺乳動物組織であり得る。
定義

以下の定義は、本主題を理解する目的および添付された特許請求の範囲の構築のために含められている。本明細書で使用する略語は、化学的および生物学的技術分野内のその慣例的な意味を有する。

本開示で使用する用語、「生体材料」または「操作された生体材料」は、天然に存在しても、合成的に作製されてもよい、生物系と相互作用する任意の物、表面、またはコンストラクトを指すことができる。よって、用語「生体材料」は、本明細書で使用する場合、単独で、または複雑なシステムの一部として、生物系の成分との相互作用を制御することによって、任意の治療または診断手順の過程を指示するのに使用される形態を採るように操作された物質を指す。本開示で使用する用語「１つまたは複数の」は、単一成分または代わりに２種もしくはそれよりも多い成分の組合せを指す。

本開示で使用する用語「ゲル」は、容易に流動可能な液体でなく、かつ固体でない、すなわち、半固体である材料を指すことができる。ゲルは、天然に存在するまたは合成の材料から形成され得る。緒実施形態では、ゲルは、細胞外マトリックス成分を含む粉末を調製するために脱細胞化された皮膚から出発して形成され得る。

用語「細胞外マトリックス」または「ＥＣＭ」は、細胞増殖のための天然の、または人工的な足場を指すことができる。天然ＥＣＭ（哺乳動物およびヒトなどの多細胞生物に見出されるＥＣＭ）は、これらに限定されないが、コラーゲン、エラスチン、ラミニン、グリコサミノグリカン、プロテオグリカン、抗菌薬、化学誘引物質、サイトカイン、および増殖因子を含めた構造的および非構造的生体分子の複合混合物である。哺乳動物では、ＥＣＭは、約９０％のコラーゲンをその様々な形態で含むことが多い。ＥＣＭの組成および構造は、組織の源に応じて変動する。例えば、小腸粘膜下層（ＳＩＳ）、膀胱マトリックス（ＵＢＭ）、および肝臓間質ＥＣＭはそれぞれ、参照により本明細書に組み込まれている米国特許第８，３６１，５０３号に記載されている通り、各組織に必要なユニークな細胞ニッチに起因する全体的な構造および組成、ならびにさらなる特性および詳細が異なる。ＥＣＭの成分は、哺乳動物（例えば、ヒト）の組織、例えば脱細胞化組織から単離および／または精製されてもよく、あるいはそれぞれのＥＣＭ成分（例えば、コラーゲン、エラスチン、ラミニン、グリコサミノグリカン、プロテオグリカン、抗菌薬、化学誘引物質、サイトカイン、および増殖因子）をコードする哺乳動物（例えば、ヒト）の遺伝子または遺伝子断片を伴う組換えＤＮＡ技術を使用して生成され、適当な発現系（原核生物または真核生物（例えば、昆虫もしくは哺乳動物細胞））から発現され、当技術分野で適当な方法によって引き続いて単離および／または精製されてもよい。

用語「脱細胞化された」は、物理的、化学的、もしくは酵素的手段、またはこれらのいずれかの組合せにより、その血管組織の細胞成分が除去されたことを意味するのに本開示で使用される。残っている脱細胞化血管組織は、参照により本明細書に組み込まれている米国特許７，０６０，０２２号に記載されている通り、天然の血管組織の細胞外マトリックスを含み、これらに限定されないが、エラスチン、コラーゲン、フィブリン、および血管組織中に見出される他の細胞外タンパク質もしくは非タンパク質性化合物；または当業者に公知のこれらのいずれかの組合せを含み得る。

本開示で使用する用語「ヒアルロン酸」または「ＨＡ」は、グリコサミノグリカンとして公知のポリマーのクラスのメンバーを指す。ＨＡは、長鎖線状多糖であり、（Ｃ_１４Ｈ_２０ＮＮａＯ_１１）_ｎの分子式を有するナトリウム塩として通常存在し、式中、ｎは、源、単離手順、および判定の方法によって変動し得る。しかし、最大で１４×１０^６の分子量が報告されており、米国特許６，７０３，４４４号に以前に記載されている。

本開示で言及する用語「ポリマー」は、多くの繰り返されたサブユニットから構成される分子または巨大分子を意味する。その広い範囲の性質のために、合成および天然ポリマーはともに、日常生活において必須の、かつ偏在する役割を果たす。ポリマーは、ポリスチレンなどの馴染みのある合成プラスチックから生物学的構造および機能に基本的なＤＮＡおよびタンパク質などの天然バイオポリマーに及ぶ。ポリマーは、天然および合成ともに、モノマーとして公知の多くの低分子の重合を介して創製される。低分子化合物と比べてこれらの結果として大きい分子量は、靭性、粘弾性、ならびに結晶ではなく、ガラスおよび半結晶性構造を形成する傾向を含めたユニークな物理的性質を生じさせる。例示的な天然ポリマー材料は、シェラック、琥珀、羊毛、シルク、ゴム、およびセルロースを含む。非天然（例えば、合成）ポリマーは、合成ゴム、フェノールホルムアルデヒド樹脂、ネオプレン、ナイロン、ポリ塩化ビニル、ポリスチレン、ポリエチレン、ポリプロピレン、およびシリコーンを含む。

使用することができる追加の合成ポリマーは、生分解性ポリマー、例えば、ポリ（ラクチド）（ＰＬＡ）、ポリ（グリコール酸）（ＰＧＡ）、ポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）（ＰＬＧＡ）、ポリ（カプロラクトン）、ポリカーボネート、ポリアミド、ポリアンヒドリド、ポリアミノ酸、ポリオルトエステル、ポリアセタール、ポリシアノアクリレート、および分解性ポリウレタンなど、ならびに非浸食性ポリマー、例えば、ポリアクリレート、エチレン−酢酸ビニルポリマー、および他のアシル置換酢酸セルロースならびにその誘導体、非浸食性ポリウレタン、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル、ポリフッ化ビニル、ポリ（ビニルイミダゾール）、クロロスルホン化ポリオレフィン（ｐｏｌｙｏｌｉｆｉｎｓ）、ポリエチレンオキシド、ポリビニルアルコール、ｔｅｆｌｏｎ（登録商標）、ならびにナイロンなどを含む。非吸収性ポリビニルアルコールスポンジは、Ｕｎｉｐｏｉｎｔ ＩｎｄｕｓｔｒｉｅｓからＩｖａｌｏｎ（商標）として市販されている。この材料を作製するための方法は、Ｗｉｌｓｏｎの米国特許第２，６０９，３４７号；Ｈａｍｍｏｎの同第２，６５３，９１７号、Ｈａｍｍｏｎの同第２，６５９，９３５号、Ｗｉｌｓｏｎの同第２，６６４，３６６号、Ｗｉｌｓｏｎの同第２，６６４，３６７号、およびＷｉｌｓｏｎの同第２，８４６，４０７号に記載されている。これらの教示は、本明細書に参照により組み込まれている。

用語「血液細胞」または「血球」または「造血細胞」は、造血を通じて産生される細胞を指し、通常、血液中に見出される。哺乳動物では、これらの細胞は、３つの一般的なカテゴリー：赤血球（エリスロサイト）、白血球（ロイコサイト）、および血小板（トロンボサイト）に入る。合わせると、これらの３種類の血液細胞は、合計で血液組織の４５体積％になり、体積の残りの５５％は、血漿、血液の液体成分から構成される。末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）は、丸い核（葉状核とは対照的に）、リンパ球、または単球を有する任意の血液細胞から構成される。これらの血液細胞は、感染と闘うための免疫系中の成分である。これらの細胞は、フィコール、血液の層を分離する親水性多糖、および勾配遠心分離を使用して全血から抽出することができ、勾配遠心分離は、血液を分離して血漿の最上層、その後に続くＰＢＭＣの層、ならびに多形核細胞（好中球および好酸球など）のボトム画分、ならびにエリスロサイトにする。多形核細胞は、赤血球を溶解することによってさらに単離することができる。例示的な血液細胞は、エリスロサイト、巨核球、単球、および顆粒球を含む。ヒト末梢血単核細胞（ｈＰＢＭＣ）は、丸い核を有するヒト血液細胞（例えば、リンパ球または単球）である。

本開示で使用する場合、用語「瘢痕組織」および「瘢痕組織形成」は、ケロイド症、線維嚢胞性状態、および関節硬直を含めた線維症から生じる任意の病的状態を含む。本用語は、術後癒着または拘縮、ケロイド、外傷後に形成される過形成塊または肥大塊、ざ瘡、しわ、セルライト形成、新生物線維症、ならびに体内の局所エリアにおける線維芽細胞増殖および代謝を伴う他の線維性状態を含めた炎症反応からの陥凹性瘢痕も含む。このような局所エリアは、部位、サイチュ、または生物組織とも本開示で呼ばれる場合がある。

本開示で使用する場合、用語「収縮」は、創傷治癒および修復のフェーズを指す。収縮が過剰に長く継続する場合、それは、美観損傷および機能喪失に至り得る。よって、コラーゲンゲル収縮アッセイまたは皮膚等価モデルを使用してｉｎ ｖｉｔｒｏでモデル化することができる創傷収縮の生物学の理解に大きな関心が存在する。収縮は、創傷のおよそ１週間後に始まる場合があり、このとき線維芽細胞は、筋線維芽細胞に分化している。収縮は、数週間続き得、創傷が完全に再上皮化された後継続し得る。創傷は、創傷したエリア内の組織がどのぐらい緩いかに応じて１日当たり最大で０．７５ｍｍの速度で収縮し得る。収縮は通常、対称的に起こらず、むしろ、ほとんどの創傷は「収縮の軸」を有し、それは、コラーゲンとの細胞のより優れた組織化および整列を可能にする。最初に、収縮は、筋線維芽細胞が関与せずに起こる。後に、線維芽細胞は、増殖因子に刺激され、筋線維芽細胞へと分化する。筋線維芽細胞は、平滑筋細胞と同様であり、収縮を担う。その理由は、これらが平滑筋細胞内に見出されるものと同じ種類のアクチンを含有するためである。

本開示に記載する用語「急性」創傷は、経時的にではなく、突然に起こる皮膚の傷害を指すことができる。急性創傷は、体上のどこにでも起こり得、表面の引っかき傷から血管、神経、筋肉、または他の身体部分に損傷を与える深い創傷まで様々となり得る。皮膚に対する粗面での擦り傷および擦りむけ、爪などの鋭くとがった先をした物体、体組織内への突き刺しまたは鋭い突き、ナイフなどの鋭いエッジまたは刃、皮膚のきれいなカット、任意の物体による強打、および純粋な力による乱暴な組織の引き裂きを含めた多くの作用が、急性創傷を引き起こし得る。２つの主なタイプの急性創傷：外科的および外傷性が存在する。外科創傷は、ヘルスケアの専門家によって意図的に作られる切開創であり、正確にカットされ、創傷周囲にきれいなエッジを作る。外科創傷は、閉じることができ（縫合糸、ステープル、または接着剤で）、または治癒するまで開放したままにすることができる。外科創傷の治癒プロセスは、感染に関するこれらの潜在性によって分類される。きれいな外科創傷は、汚染されていないとみなされ、手術室または無菌手順環境で作られる可能性が高い。汚染された外科創傷は、細菌で汚染された可能性があるが、まだ感染していないものである。汚れた外科創傷は、細菌感染を伴うものである。外傷性創傷は、何らかの特質の力によって引き起こされる皮膚および下にある組織の傷害である。これらは、力を引き起こした物体（例えば、剥離、刺し傷、裂創、または切開創）によって分類される。剥離は、皮膚に対する粗面での擦り傷または擦りむけであり得、アスファルトに対する膝の擦り傷などの組織の外傷および引き裂きを引き起こす。刺し傷は、先のとがった物体が組織を突き刺すとき起こり得、釘を足で踏むなどの深い多層外傷を時に引き起こす。裂創は、テーブルに足をぶつけるなどの、鋭い物体が組織に強打をもたらすとき起こり得、ギザギザで不揃いであり得る裂け傷をもたらし、皮膚の破れを引き起こす。切開創は、ナイフで指をカットするなど、皮膚への短いカットが鋭い刃で引き起こされるとき起こり得る。

ほとんどの創傷が治癒する様式である規則的なセットの段階および予測可能量の時間で治癒しない創傷として本開示に記載する用語「慢性創傷」；標準量の時間（例えば、３カ月）内で治癒しない創傷は、慢性とみなされることが多い。慢性創傷は、創傷治癒のフェーズの１つまたは複数で拘束されると思われる。例えば、慢性創傷は、炎症段階で過剰に長く留まることが多い。急性創傷では、コラーゲンなどの分子の産生と分解との間に正確なバランスが存在し、慢性創傷では、このバランスが失われ、分解が過剰に大きい役割を果たす。

「患者」、「対象」、「それを必要とする患者」、および「それを必要とする対象」は、本開示で互換的に使用され、本開示で提供される方法および組成物を使用する投与によって処置され得る疾患または状態に罹患している、または罹患しやすい生体を指す。非限定的な例は、ヒト、他の哺乳動物、ウシ（ｂｏｖｉｎｅ）、ラット、マウス、イヌ、サル、ヤギ、ヒツジ、ウシ（ｃｏｗ）、シカ、および他の非哺乳動物を含む。一部の実施形態では、患者は、ヒトである。ｉｎ ｖｉｔｒｏで得られ、またはｉｎ ｖｉｔｒｏで培養された生物学的エンティティの組織、細胞、およびこれらの子孫も企図されている。

本開示で使用する用語「処置する」、「処置すること」、または「処置」、および他の文法的同義語は、疾患、状態、または症状を軽減し、排除し、和らげ、または防止すること、追加の症状を防止すること、症状の基礎をなす代謝原因を和らげ、または防止すること、疾患または状態を阻害すること、例えば、疾患もしくは状態の発症を止めること、疾患もしくは状態を緩和すること、疾患もしくは状態の後退を引き起こすこと、疾患もしくは状態によって引き起こされる状態を緩和すること、または疾患もしくは状態の症状を停止させることを含み、予防を含むように意図されている。本用語は、治療上の利益および／または予防上の利益を実現することをさらに含む。治療上の利益とは、処置されている根本的な障害を根絶することまたは和らげることを意味する。また、治療上の利益は、根本的な障害に関連した生理的症状の１つまたは複数を根絶し、または和らげることで実現され、その結果、患者は根本的な障害に依然として苦しめられている場合があるにもかかわらず、改善が患者において観察される。本開示で使用する場合、「創傷治癒」は、例を限定することなく、以下の事象：（１）急速な止血；（２）適切な炎症；（３）間葉細胞の分化、増殖、および創傷部位への遊走；（４）適当な血管新生；（５）迅速な再上皮化（創傷面上の上皮組織の再成長）；ならびに（６）治癒中の組織に強度をもたらすためのコラーゲンの適切な合成、架橋、および整列の任意の１つまたは複数を伴う、創傷の状態を処置し、和らげ、または改善することを意味する。

「対照」または「対照実験」は、その単純な通常の意味に従って使用され、実験の対象または試薬が、実験の手順、試薬、または変数の省略を除いて並列実験のように処置される実験を指す。一部の事例では、対照は、実験の効果の評価において比較の標準として使用される。一部の実施形態では、対照は、本開示（実施形態および実施例を含む）に記載の組成物の非存在下での表現型の活性または成果の尺度である。

「接触させること」は、その単純な通常の意味に従って使用され、少なくとも２つ別個の種（例えば、生体分子を含めた化学化合物または細胞）が十分に近位にある状態になって反応し、相互作用し、または物理的に触れることを可能にするプロセスを指す。しかし、得られる反応生成物は、添加される試薬間の反応から直接、または反応混合物中で生成され得る、添加される試薬の１つもしくは複数からの中間体から生成することができることが察知されるべきである。一部の実施形態では、接触させることは、本開示に記載の組成物を対象と相互作用させることを含む。

本明細書の記載および特許請求の範囲全体にわたって、単語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、ならびにこの単語の他の形態、例えば、「含むこと」および「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」などは、含むがそれに限定されないことを意味し、例えば、他の成分を除外するように意図されていない。

用語創傷への「水分付与」、または創傷に「水分付与すること」は、表皮中のケラチノサイトの水分付与状態を指す。ケラチノサイトは、プロおよび抗線維性可溶性因子の産生によって線維芽細胞挙動を調節し、これらの因子の産生は、ケラチノサイトの水分付与状態に依存する。

「共投与する」とは、本開示に記載の組成物が、追加の療法の投与と同時、投与の直前、または直後に投与されることを意味する。本開示の組成物は、患者に単独で投与することができ、または共投与することができる。共投与は、個別に、または組合せで（１種を超える組成物または作用物質）組成物を同時または逐次投与することを意味する。調製物は、望まれる場合、他の活性物質（例えば、創傷治癒のための）と組み合わせることもできる。

本開示で使用する場合、「逐次投与」は、２種の作用物質（例えば、本開示に記載の組成物）の投与が同じ日に別個に行われ、または同じ日に行われない（例えば、連続日で行われる）ことを含む。

本開示で使用する場合、「同時的投与」は、少なくとも部分的に継続時間の重複を含む。例えば、２種の作用物質（例えば、生物活性を有する本開示に記載の任意の組成物）が同時的に投与されるとき、これらの投与は、ある特定の所望の時間内に行われる。作用物質の投与は、同じ日に始まり、終わってもよい。一方の作用物質の投与は、両作用物質が少なくとも１回同じ日に服用される限り、１日（数日）第２の作用物質の投与に先行することもできる。同様に、一方の作用物質の投与は、両作用物質が少なくとも１回同じ日に服用される限り、第２の作用物質の投与を越えて延長することができる。組成物／作用物質は、同時的投与を含めるのにそれぞれの日の同じ時間に服用される必要は無い。

本開示で使用する場合、「断続的投与」は、ある時間にわたる作用物質の投与（「第１の期間の投与」とみなすことができる）、その後の作用物質が服用されない、またはより低い維持用量で服用される時間（これは、「オフ期間」とみなすことができる）、その後の作用物質が再び投与される期間（「第２の期間の投与」とみなすことができる）を含む。一般に、投与の第２のフェーズの間、作用物質の投与量レベルは、第１の期間の投与の間に投与されるものと一致することになるが、医学的に必要な場合、増減することができる。

本開示で使用する場合、用語「投与すること」は、対象への座剤としての投与、局部的接触（例えば、スプレー剤）、非経口、筋肉内、病巣内、髄腔内、鼻腔内、または皮下投与を意味する。投与は、非経口および経粘膜（例えば、頬側、舌下、口蓋、歯肉、経鼻、膣、直腸、または経皮）を含めた任意の経路によるものである。他のモードの送達は、これらに限定されないが、リポソーム製剤、静脈内輸液、経皮パッチなどの使用を含む。

本開示で使用する場合、「有効量」または「治療有効量」は、臨床結果を含む有益な結果などの所望の生物学的効果に影響するのに十分な量である。したがって、「有効量」は、それが塗布されている状況に依存する。有効量は、当技術分野で公知の要因、例えば、処置されている個体の病態、年齢、性別、および体重によって変動し得る。いくつかの分割用量が毎日投与されてもよく、または用量は、治療状況の緊急性によって示される場合、比例して低減されてもよい。さらに、本開示の組成物／製剤は、治療量を実現するために必要な限り頻繁に投与することができる。

成分の重量パーセントは、それとは反対に具体的に述べられていない限り、成分が含まれている製剤または組成物の総重量に基づく。

用語「約」は、製剤の調製において、および疾患または障害の処置において作用物質の効力を変化させない作用物質の濃度または量における任意の最小限の変化を指す。本開示の作用物質（例えば、治療剤／活性剤）の濃度範囲に対する用語「約」も、有効量または範囲である述べた量または範囲の任意の変動を指す。緒実施形態では、用語「約」は、指定された数値またはデータ点の±１５％を含み得る。

範囲は、「約」１つの特定の値から、および／または「約」別の特定の値までとして本開示では表現することができる。このような範囲が表現されるとき、別の態様は、１つの特定の値から、および／または他の特定の値までを含む。同様に、値が先行詞「約」の使用によって近似として表現されているとき、特定の値は、別の態様を形成することが理解される。範囲のそれぞれの終点は、他の終点に関連して、および他の終点とは独立に、の両方で重要であることがさらに理解される。本開示で開示されているいくつかの値が存在し、各値は、値自体に加えて「約」その特定の値としても開示されていることも理解される。本願全体にわたって、データは、いくつかの異なる形式で提供されており、このデータは、終点および出発点、ならびにデータ点の任意の組合せについての範囲を表すことも理解される。例えば、特定のデータ点「１０」および特定のデータ点「１５」が開示されている場合、１０および１５より大きい、これらより大きいまたはこれらに等しい、これら未満、これら未満またはこれらに等しい、およびこれらに等しいが、１０から１５の間と同様に開示されているとみなされることが理解される。２つの特定の単位間の各単位も開示されていることも理解される。例えば、１０および１５が開示されている場合、１１、１２、１３、および１４も開示されている。
組成物

一態様では、本開示は、哺乳動物組織の細胞外マトリックス（ＥＣＭ）成分およびポリマーを含む組成物（例えば、操作された生体材料）を含み、または含み得る。本開示は、療法における使用のためのＥＣＭ成分およびポリマーを含む組成物（例えば、操作された生体材料）を提供する。本開示の組成物（例えば、操作された生体材料）は、ゲル組成物であり、またはそれであり得る。本開示の組成物の哺乳動物組織は、上皮および／または結合組織を含み得る。組織は、哺乳動物、例えば、ブタ、ウシ（ｃｏｗ）、子羊、ヤギ、ヒツジ、または霊長類（例えば、ヒト）から得ることができる。組織は、ブタから得ることができる。組織は、自己由来または同種異系であり得る。哺乳動物組織は、脱細胞化哺乳動物組織であり、またはそれであり得る。組成物は、哺乳動物組織および／もしくは哺乳動物組織の細胞外マトリックス（ＥＣＭ）成分、１種もしくは複数の緩衝液、ならびに栄養素、増殖因子、および／もしくはポリマーの１つもしくは複数であり、またはこれらを含み得る。緩衝液は、完全な細胞培養基であり、またはそれであり得る。細胞培養基は、無血清培地もしくは血清含有培地であり、またはそれであり得る。組成物は、ケラチノサイト培地および／またはチオグリコレートの構成要素であり、またはそれを含み得る。栄養素は、アミノ酸、単糖、ビタミン、無機イオンおよび微量元素、ならびに／または塩の１つまたは複数を含み得る。栄養素は、アミノ酸であり得る。栄養素は、単糖であり得る。栄養素は、ビタミンであり得る。栄養素は、無機酸であり得る。栄養素は、微量元素であり得る。栄養素は、塩であり得る。栄養素として含まれるアミノ酸は、Ｌ−アルギニンＨＣｌ、Ｌ−シスチン２ＨＣｌ、Ｌ−シスチンＨＣｌ Ｈ_２Ｏ、Ｌ−ヒスチジンＨＣｌ Ｈ_２Ｏ、Ｌ−イソロイシン、Ｌ−ロイシン、Ｌ−リシンＨＣｌ、Ｌ−メチオニン、Ｌ−フェニルアラニン、Ｌ−トレオニン、Ｌ−トリプトファン、Ｌ−チロシン２Ｈ_２Ｏ、Ｌ−バリン、Ｌ−アラニン、Ｌ−アスパラギン、Ｌ−アスパラギン酸、Ｌ−グルタミン酸、グリシン、Ｌ−プロリン、Ｌ−セリン、および／またはＬ−ヒドロキシプロリンの１種または複数であり得る。栄養素として含まれるビタミンは、Ｋ−Ｃａ−パントテン酸塩、塩化コリン、葉酸、ｉ−イノシトール、ナイアシンアミド、ピリドキサールＨＣｌ、ピリドキシンＨＣｌ、リボフラビン、チアミンＨＣｌ、ビオチン、ビタミンＢ１２、パラ−アミノ安息香酸、ナイアシン、アスコルビン酸、α−トコフェロールリン酸、カルシフェロール、メナジオン、ビタミンＡの１種または複数であり得る。他の化合物は、栄養素、例えば、Ｄ−グルコース、フェノールレッド、ＨＥＰＥＳ、ピルビン酸ナトリウム、グルタチオン（還元）、ヒポキサンチン．Ｎａ、チミジン、リポ酸、プトレシン２ＨＣｌ、バクトペプトン、チミン、アデニンスルフェート、アデノシン−５−トリホスフェート、コレステロール、２−デオキシ−Ｄ−リボース、アデノシン−５−リン酸、グアニンＨＣｌ、リボース、酢酸ナトリウム、Ｔｗｅｅｎ８０、ウラシル、またはキサンチンＮａの１種または複数として存在し得る。栄養素として添加される無機塩は、ＣａＣｌ_２、ＫＣｌ、ＭｇＳＯ_４、ＮａＣｌ、ＮａＨＣＯ_３、ＮａＨＰＯ_４、ＫＮＯ_３、ＮａＳｅＯ_３、Ｃａ（ＮＯ_３）_２、ＣｕＳＯ_４、ＮａＨＰＯ_４、ＭｇＣｌ_２、Ｆｅ（ＮＯ_３）_３、ＣｕＳＯ_４、ＦｅＳＯ_４、またはＫＨ_２ＰＯ_４の１種または複数であり得る。

本開示の組成物は、操作された生体材料であり、またはそれであり得る。生体材料は、天然生体材料、例えば、コラーゲン、フィブリン、シルク、ペプチド、ブラシポリマー、アガロース、アルギネート、ヒアルロン酸、およびキトサンであり、またはそれを含み得る。生体材料は、ヒアルロン酸であり得る。生体材料は、コラーゲンであり得る。生体材料は、シルクであり得る。生体材料は、ペプチドであり得る。生体材料は、ブラシポリマーであり得る。生体材料は、アガロースであり得る。生体材料は、アルギネートであり得る。生体材料は、キトサンであり得る。生体材料は、有機ポリマー、例えば、ポリグリコール酸（ＰＧＡ）、ポリ乳酸（ＰＬＡ）、ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ）、および／もしくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）の１種もしくは複数であり、またはそれを含み得る。生体材料は、ポリグリコール酸（ＰＧＡ）であり得る。生体材料は、ポリ乳酸（ＰＬＡ）であり得る。生体材料は、ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ）であり得る。生体材料は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）であり得る。緒実施形態では、生体材料は、無機成分、例えば、セラミック、金属、および／またはヒドロキシアパタイトを含む。生体材料は、コラーゲン、フィブリン、シルク、ペプチド、ブラシポリマー、アガロース、アルギネート、ヒアルロン酸、キトサン、ＰＧＡ、ＰＬＡ、ＰＬＧＡ、ＰＥＧ、セラミック、金属、もしくはヒドロキシアパタイトの１種もしくは複数であり、またはそれを含み得る。

本開示の生体材料は、ゲル形態、スポンジ形態、発泡体形態、パッチ形態、または半液体／流体形態であり得る。生体材料は、ゲル形態であり得る。

細胞外マトリックス（ＥＣＭ）は、コラーゲン、プロテオグリカン、構造タンパク質、および基底膜（例えば、下にある組織から上皮を分離するタンパク質線維およびグリコサミノグリカンの繊細な膜）から構成され、正常な皮膚の最大成分であり、これは、皮膚の弾性、引張強度、および圧縮性というユニークな性質をもたらす。再生プロセスにおける重要なステップは、同じＥＣＭを合成し、組織リモデリングおよびより少ない瘢痕形成をもたらすことである。この自然の手順を強化および支持するために、創傷エリアに同様の鋳型を導入すると、効率的な細胞遊走、増殖、分化が誘導され、天然のＥＣＭが産生され得る。非ヒト哺乳動物皮膚、例えば、ブタ皮膚は、天然ヒトＥＣＭと同等の構造を有し、いくつかの同様のヒト皮膚ＥＣＭ成分の存在がブタ皮膚で検証されている。

ＥＣＭ成分は、コラーゲン、エラスチン、および／または硫酸化グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）を含む。諸実施形態では、ＥＣＭの成分は、哺乳動物（例えば、ヒト）の組織から単離および／もしくは精製され、またはそうされてもよく、あるいはそれぞれのＥＣＭ成分（例えば、コラーゲン、エラスチン、ラミニン、グリコサミノグリカン、プロテオグリカン、抗菌薬、化学誘引物質、サイトカイン、および増殖因子）をコードする哺乳動物（例えば、ヒト）の遺伝子もしくは遺伝子断片を伴う組換えＤＮＡ技術を使用して生成され、適当な発現系（原核生物または真核生物（例えば、昆虫もしくは哺乳動物細胞））から発現され、当技術分野で適当な方法によって引き続いて単離および／もしくは精製され、またはそうされてもよい。コラーゲンは、再生される皮膚の最も重要な成分の１つである。緒実施形態では、コラーゲン沈着の増大および組織化は、創傷床成熟の改善と関連する。

ＰＢＭＣは、本開示の組成物（例えば、操作された生体材料）中に含まれている場合がある。ＰＢＭＣは、自己由来ＰＢＭＣであり得る。ヒトＰＢＭＣの血管新生促進および再生性質は、ＰＢＭＣを含む本開示の組成物（例えば、操作された生体材料）が血管新生を改善し、それにより、成熟した、十分に血管形成した創傷床の形成を加速することを可能にする。ＰＢＭＣの組成物（例えば、操作された生体材料）への添加は、著しい有害な全身健康作用を伴わずに安全および実現可能の両方であると思われる。無培養ヒトＰＢＭＣを皮膚組成物（例えば、操作された生体材料）内に播種すると、血管形成、成熟、およびマトリックスリモデリングを増大させることによって組織一体化効果が増強され得る。本開示の組成物（例えば、操作された生体材料）は、本開示のＰＢＭＣの有無にかかわらず、熱傷後の皮膚を再生する。細胞の無培養集団を利用すると、潜在的な臨床用途を促進することができる。

本開示は、本開示の組成物（例えば、操作された生体材料）（例えば、ブタ皮膚ベースゲル（ＰＳＧ））で処置された動物の治癒期皮膚生検中のコラーゲンの発現が豊富であることを含む。本開示は、ヒトＰＢＭＣ（ｈＰＢＭＣ）を含む組成物（例えば、操作された生体材料）（例えば、ＰＳＧ＋ｈＰＢＭＣ）で処置された動物の治癒期皮膚生検中のコラーゲンの発現が豊富であることを含む。緒実施形態では、脱細胞化哺乳動物組織（例えば、皮膚）は、細胞外マトリックスタンパク質、例えば、ともに正常組織（例えば、皮膚）の重要成分であるコラーゲンおよびエラスチンなどを保持し得る。本開示の組成物（例えば、操作された生体材料（例えば、ゲル組成物））中のコラーゲンの量が多いほど、創傷への宿主細胞のより急速な浸潤およびより迅速な創傷安定化を促進することができる。

本開示の組成物中に使用するためのＥＣＭ成分が得られる組織は、哺乳動物由来である。哺乳動物は、α−Ｇａｌ（Ｇａｌα１，３−Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃ−Ｒ）エピトープのノックアウト突然変異体を有するブタであり得る。α−Ｇａｌ（Ｇａｌα１，３−Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃ−Ｒ）エピトープ（重要な異種抗原でもある）は、ブタ−ヒト間組織および臓器異種移植における第１の障壁である。ガラクトースα１，３ガラクトース（Ｇａｌ／ｇａｌ）ノックアウトブタから採取される皮膚移植片が脱細胞化される。脱細胞化のプロセスは、すべての細胞物質の完全な除去をもたらさない場合がある。

本開示の組成物（例えば、操作された生体材料）は、炭水化物系ポリマーであり、またはそれを含み得る。例えば、ポリマーは、二糖ポリマーであり得る。二糖ポリマーは、例えば、ヒアルロン酸であり得る。

本開示の組成物（例えば、操作された生体材料）は、炭水化物系ポリマー（例えば、二糖）であるポリマーを含み得る。二糖ポリマーは、ヒアルロン酸を含み得る。本開示の組成物（例えば、操作された生体材料）は、血液細胞または多血小板血漿を含み得る。本開示の組成物（例えば、操作された生体材料）は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含む。本開示の組成物に使用されるＰＢＭＣは、自己由来ヒトＰＢＭＣであり、またはそれであり得る。

本開示の組成物は、これらに限定されないが、骨髄由来幹細胞または前駆細胞、骨髄単核細胞、間葉幹細胞（ＭＳＣ）、臍帯由来幹細胞、多分化能成人前駆細胞、全血由来幹細胞または前駆細胞、例えば、内皮幹細胞、内皮前駆細胞、平滑筋前駆細胞、全血、末梢血、および全血から単離され得る任意の細胞集団などの細胞を含み、または含み得る。前駆細胞は、一タイプの細胞に分化することを約束された細胞として定義される。例えば、内皮前駆細胞は、内皮細胞胞に分化するようにプログラムされた細胞を意味し、平滑筋前駆細胞は、平滑筋細胞に分化するようにプログラムされた細胞を意味する。全血または末梢血中の前駆細胞は、未確定および／または確定細胞、例えば、多能性細胞または全能性細胞などの集団を含む。

本開示の組成物は、増殖因子も含み得る。本開示の組成物中の増殖因子は、顆粒球マクロファージ（ｍａｃｒｏｐｈａｓｅ）−コロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、インターロイキン（ＩＬ）−３、ＩＬ−４、ニューロトロフィン（ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｎ）（ＮＴ）−６、プレイオトロフィン（ＨＢ−ＧＡＭ）、ミッドカイン（ＭＫ）、インターフェロン誘導タンパク質−１０（ＩＰ−１０）、血小板因子（ＰＦ）−４、単球走化性タンパク質−１（ＭＣＰ−１）、ＲＡＮＴＥＳ（ＣＣＬ−５、ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンド５）、ＩＬ−８、ＩＧＦ、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）−１、ＦＧＦ−２、ＦＧＦ−３、ＦＧＦ−４、ＦＧＦ−５、ＦＧＦ−６、ＦＧＦ−７、ＦＧＦ−８、ＦＧＦ−９、トランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）−β、ＶＥＧＦ、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）−Ａ、ＰＤＧＦ−Ｂ、ＨＢ−ＥＧＦ、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）−α、インスリン様増殖因子（ＩＧＦ）−Ｉ、およびこれらのいずれかの組合せの１つもしくは複数であり、またはそれらであり得る。本開示の組成物中の増殖因子は、ＧＭ−ＣＳＦであり、またはそれであり得る。本開示の組成物中の増殖因子は、ＩＬ−３であり、またはそれであり得る。本開示の組成物中の増殖因子は、ＩＬ−４であり、またはそれであり得る。本開示の組成物中の増殖因子は、ＮＴ−６であり、またはそれであり得る。本開示の組成物中の増殖因子は、ＨＢ−ＧＡＭであり、またはそれであり得る。本開示の組成物中の増殖因子は、ＭＫであり、またはそれであり得る。本開示の組成物中の増殖因子は、ＩＰ−１０であり、またはそれであり得る。本開示の組成物中の増殖因子は、ＰＦ−４であり、またはそれであり得る。本開示の組成物中の増殖因子は、ＭＣＰ−１であり、またはそれであり得る。本開示の組成物中の増殖因子は、ＣＣＬ−５であり、またはそれであり得る。本開示の組成物中の増殖因子は、ＩＬ−８であり、またはそれであり得る。本開示の組成物中の増殖因子は、ＩＧＦであり、またはそれであり得る。本開示の組成物中の増殖因子は、（ＦＧＦ）−１、ＦＧＦ−２、ＦＧＦ−３、ＦＧＦ−４、ＦＧＦ−５、ＦＧＦ−６、ＦＧＦ−７、ＦＧＦ−８、もしくはＦＧＦ−９であり、またはそれであり得る。本開示の組成物中の増殖因子は、トランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）−βであり、またはそれであり得る。本開示の組成物中の増殖因子は、ＶＥＧＦであり、またはそれであり得る。本開示の組成物中の増殖因子は、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）−Ａであり、またはそれであり得る。本開示の組成物中の増殖因子は、ＰＤＧＦ−Ｂであり、またはそれであり得る。本開示の組成物中の増殖因子は、ＨＢ−ＥＧＦであり、またはそれであり得る。本開示の組成物中の増殖因子は、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）であり、またはそれであり得る。本開示の組成物中の増殖因子は、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）−αであり、またはそれであり得る。本開示の組成物中の増殖因子は、インスリン様増殖因子（ＩＧＦ）−Ｉであり、またはそれであり得る。

組成物（例えば、操作された生体材料）中のＥＣＭ成分は、コラーゲン、エラスチン、および／または硫酸化グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）を含み得る。組成物（例えば、操作された生体材料）は、リボン様繊維を含み得る。繊維は、幅約１μｍ〜約４０μｍ（例えば、約１μｍ、約２μｍ、約３μｍ、約４μｍ、約５μｍ、約６μｍ、約７μｍ、約８μｍ、約９μｍ、約１０μｍ、約１１μｍ、約１２μｍ、約１３μｍ、約１４μｍ、約１５μｍ、約１６μｍ、約１７μｍ、約１８μｍ、約１９μｍ、約２０μｍ、約２１μｍ、約２２μｍ、約２３μｍ、約２４μｍ、約２５μｍ、約２６μｍ、約２７μｍ、約２８μｍ、約２９μｍ、約３０μｍ、約３１μｍ、約３２μｍ、約３３μｍ、約３４μｍ、約３５μｍ、約３６μｍ、約３７μｍ、約３８μｍ、約３９μｍ、もしくは約４０μｍ）、厚さ約０．１μｍ〜約１０μｍ（例えば、約０．１μｍ、約０．５μｍ、約１．０μｍ、約１．５μｍ、約２．０μｍ、約２．５μｍ、約３．０μｍ、約３．５μｍ、約４．０μｍ、約４．５μｍ、約５．０μｍ、約５．５μｍ、約６．０μｍ、約６．５μｍ、約７．０μｍ、約７．５μｍ、約８．０μｍ、約８．５μｍ、約９．０μｍ、約９．５μｍ、もしくは約１０．０μｍ）、および／または長さ約７０μｍ以上〜約４０００μｍ以下（例えば、約７０μｍ、約７５μｍ、約８０μｍ、約８５μｍ、約９０μｍ、約９５μｍ、約１００μｍ、約１２５μｍ、約１５０μｍ、約１７５μｍ、約２００μｍ、約２２５μｍ、約２５０μｍ、約２７５μｍ、約３００μｍ、約３２５μｍ、約３５０μｍ、約３７５μｍ、約４００μｍ、約４２５μｍ、約４５０μｍ、約４７５μｍ、約５００μｍ、約５２５μｍ、約５５０μｍ、約５７５μｍ、約６００μｍ、約６２５μｍ、約６５０μｍ、約６７５μｍ、約７００μｍ、約７２５μｍ、約７５０μｍ、約７７５μｍ、約８００μｍ、約８２５μｍ、約８５０μｍ、約８７５μｍ、約９００μｍ、約９２５μｍ、約９５０μｍ、約９７５μｍ、約１０００μｍ、約１２５０μｍ、約１５００μｍ、約１７５０μｍ、約２０００μｍ、約２２５０μｍ、約２５００μｍ、約２７５０μｍ、約３０００μｍ、約３２５０μｍ、約３５００μｍ、約３７５０μｍ、もしくは約４０００μｍ）であり得る。繊維は、幅約５μｍ〜約３０μｍのものであり得る。繊維は、厚さ約０．５μｍ〜約５μｍのものであり得る。繊維は、長さ約７５μｍ以上〜約８００μｍ以下のものであり得る。本開示は、示した範囲のすべての介在数を含む。

最適な創傷修復は、炎症反応ならびに増殖因子およびサイトカイン産生によって影響を受ける複数の細胞プロセス（遊走、増殖、コラーゲン合成、および沈着）の協調された寄与に依存する。炎症プロセスは、創傷治癒応答に直接リンクされ、炎症性サイトカインは、皮膚創傷の再上皮化を刺激し、増殖中のケラチノサイトの成長を促進する。緒実施形態では、本開示は、創傷治癒の成功および加速をもたらす効率的な炎症反応を誘導するための無培養ＰＢＭＣおよびブタ皮膚成分から構成されるコンポジット生体材料を含む。

本開示は、抗原性を低減し、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）成分の主成分の多くを保持するための異種間組織の脱細胞化を含み、または含み得る。本開示は、哺乳動物組織（例えば、皮膚、胎盤、または臍帯）を脱細胞化して、創傷を治癒させるための組成物を生成することを含み、または含み得る。緒実施形態では、組成物は、生体材料である。本開示の組成物は、ゲルを生成するために処理され、または処理されてもよい。ゲルは、本開示に記載の方法によって調製されるブタ皮膚ゲル（ＰＳＧ）であり得る。本開示では、創傷治癒のためのこのブタから得られるＥＣＭの実行可能性および有効性は、ヌードマウス全層皮膚創傷モデルにおいて調査される。本開示の組成物を調製する方法においてゲル（例えば、ＰＳＧ）にヒト末梢血単核細胞（ｈＰＢＭＣ）を包埋すると、急性皮膚創傷の状況で十分組織化された創傷組織の形成および成熟がさらに加速された。

様々なＥＣＭ成分および内因性増殖因子から構成されるブタ皮膚から得られるＥＣＭゲルが、皮膚組織工学用生体材料として開発されている。ＥＣＭゲルは、Ｇａｌ／ｇａｌノックアウトブタの脱細胞化、ホモジナイズ、および凍結乾燥された皮膚から調製される。本開示の組成物は、ヒト細胞添加の有無にかかわらず創傷への直接塗布のために調製される。本開示のＥＣＭゲル組成物は、細胞の良好な付着および好都合な（例えば、湿気のある）治癒環境を提供することによって、１５日以内の創傷治癒速度に寄与し、それを必要とする対象における創傷と相互作用し、この創傷を保護する。創傷に塗布する前に、ゲルにヒト細胞を添加すると、創傷における宿主血管形成が著しく改善され、創傷治癒プロセスが有意に加速される。治癒は、本開示の組成物を創傷に塗布して４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、または１５日以内に実現され、または実現され得る。創傷、例えば、皮膚裂傷、摩擦傷、非観血的衝撃手術創傷、皮膚剥離、火傷（１度、２度、および／もしくは３度）、皮膚切開創、皮膚裂創、皮膚挫傷、皮膚穿刺創、褥瘡性潰瘍、静脈性潰瘍、動脈性潰瘍、神経障害性／糖尿病性創傷、リンパ浮腫、または手術部位切開創の治癒は、本開示の組成物を創傷に塗布して４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、または１５日以内に実現される。

動物の同じ群において、ヒトＣＤ３１の発現およびヒト特異的抗ミトコンドリア抗体での陽性染色によって立証される通り、５および１０日目にヒト血管が創傷内に見出される。さらに、ｑＰＣＲ検出システムにより、少ない数のヒト細胞の存在が確認されたが、他の汚染宿主（マウス）細胞の高いバックグラウンドにおける少数のヒト特異的細胞の同定は困難であった。本開示は、ヒト血液細胞（例えば、ｈＰＢＭＣ）を含む生体材料を含み、ヒト細胞の生存および創傷の新血管形成をもたらす。ｈＰＢＭＣを含む生体材料により、創傷治癒が加速された。

本開示の生体材料中のヒト末梢血細胞および脱細胞化哺乳動物組織のＥＣＭ成分およびポリマーは、組成上の性質に起因してケラチノサイトおよび上皮細胞の遊走、ならびに新血管形成を促進し、創傷治癒を改善する。
処置または使用の方法

一態様では、本開示は、対象における創傷治癒の方法であって、哺乳動物組織のＥＣＭ成分およびポリマーを含む組成物（例えば、操作された生体材料）を対象の創傷に塗布することを含む方法を提供する。別の態様では、本開示は、それを必要とする対象の創傷に治療剤を送達する方法であって、哺乳動物組織の細胞外マトリックス（ＥＣＭ）成分、ポリマー、および治療剤を含む組成物（例えば、操作された生体材料）を対象の創傷に塗布することを含む方法を提供する。哺乳動物組織は、脱細胞化哺乳動物組織であり得る。本開示は、創傷に塗布する前に、ゲルにヒト細胞を添加すると、創傷における宿主血管形成が著しく改善され、創傷治癒プロセスが有意に加速されることを提供する。治癒は、本開示の組成物を創傷に塗布して４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、または１５日以内に実現され、または実現され得る。創傷、例えば、皮膚裂傷、摩擦傷、非観血的衝撃手術創傷、皮膚剥離、火傷（１度、２度、および／もしくは３度）、皮膚切開創、皮膚裂創、皮膚挫傷、皮膚穿刺創、褥瘡性潰瘍、静脈性潰瘍、動脈性潰瘍、神経障害性／糖尿病性創傷、リンパ浮腫、または手術部位切開創の治癒は、本開示の組成物を創傷に塗布して４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、または１５日以内に実現される。創傷は、皮膚裂傷であり得る。創傷は、摩擦傷であり得る。創傷は、非観血的衝撃手術創傷であり得る。創傷は、皮膚裂創であり得る。創傷は、皮膚挫傷であり得る。創傷は、皮膚穿刺創であり得る。創傷は、褥瘡性潰瘍であり得る。創傷は、静脈性潰瘍であり得る。創傷は、動脈性潰瘍であり得る。創傷は、神経障害性／糖尿病性創傷であり得る。創傷は、リンパ浮腫であり得る。創傷は、手術部位切開創であり得る。

さらなる態様では、本開示は、それを必要とする対象の創傷に増殖因子を送達する方法であって、哺乳動物組織の細胞外マトリックス（ＥＣＭ）成分、ポリマー、および増殖因子を含む組成物（例えば、操作された生体材料）を対象の創傷に塗布することを含む方法を提供する。哺乳動物組織は、脱細胞化哺乳動物組織であり得る。本開示の方法で使用される増殖因子は、顆粒球マクロファージ−コロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、インターロイキン（ＩＬ）−３、ＩＬ−４、ニューロトロフィン（ＮＴ）−６、プレイオトロフィン（ＨＢ−ＧＡＭ）、ミッドカイン（ＭＫ）、インターフェロン誘導タンパク質−１０（ＩＰ−１０）、血小板因子（ＰＦ）−４、単球走化性タンパク質−１（ＭＣＰ−１）、ＲＡＮＴＥＳ（ＣＣＬ−５、ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンド５）、ＩＬ−８、ＩＧＦ、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）−１、ＦＧＦ−２、ＦＧＦ−３、ＦＧＦ−４、ＦＧＦ−５、ＦＧＦ−６、ＦＧＦ−７、ＦＧＦ−８、ＦＧＦ−９、トランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）−β、ＶＥＧＦ、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）−Ａ、ＰＤＧＦ−Ｂ、ＨＢ−ＥＧＦ、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）−α、インスリン様増殖因子（ＩＧＦ）−Ｉ、またはこれらのいずれかの組合せの１種または複数である。本開示の方法で使用される増殖因子は、ＧＭ−ＣＳＦであり、またはそれであり得る。本開示の方法で使用される増殖因子は、ＩＬ−３であり、またはそれであり得る。本開示の方法で使用される増殖因子は、ＩＬ−４であり、またはそれであり得る。本開示の組成物中の増殖因子は、ＮＴ−６であり、またはそれであり得る。本開示の方法で使用される増殖因子は、ＨＢ−ＧＡＭであり、またはそれであり得る。本開示の方法で使用される増殖因子は、ＭＫであり、またはそれであり得る。本開示の方法で使用される増殖因子は、ＩＰ−１０であり、またはそれであり得る。本開示の方法で使用される増殖因子は、ＰＦ−４であり、またはそれであり得る。本開示の方法で使用される増殖因子は、ＭＣＰ−１であり、またはそれであり得る。本開示の方法で使用される増殖因子は、ＣＣＬ−５であり、またはそれであり得る。本開示の方法で使用される増殖因子は、ＩＬ−８であり、またはそれであり得る。本開示の方法で使用される増殖因子は、ＩＧＦであり、またはそれであり得る。本開示の方法で使用される増殖因子は、（ＦＧＦ）−１、ＦＧＦ−２、ＦＧＦ−３、ＦＧＦ−４、ＦＧＦ−５、ＦＧＦ−６、ＦＧＦ−７、ＦＧＦ−８、もしくはＦＧＦ−９であり、またはそれであり得る。本開示の方法で使用される増殖因子は、トランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）−βであり、またはそれであり得る。本開示の方法で使用される増殖因子は、ＶＥＧＦであり、またはそれであり得る。本開示の方法で使用される増殖因子は、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）−Ａであり、またはそれであり得る。本開示の方法で使用される増殖因子は、ＰＤＧＦ−Ｂであり、またはそれであり得る。本開示の方法で使用される増殖因子は、ＨＢ−ＥＧＦであり、またはそれであり得る。本開示の方法で使用される増殖因子は、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）であり、またはそれであり得る。本開示の方法で使用される増殖因子は、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）−αであり、またはそれであり得る。本開示の方法で使用される増殖因子は、インスリン様増殖因子（ＩＧＦ）−Ｉであり、またはそれであり得る。

さらに別の態様では、本開示は、それを必要とする対象の創傷に水分付与する方法であって、哺乳動物組織の細胞外マトリックス（ＥＣＭ）成分およびポリマーを含む組成物（例えば、操作された生体材料）を対象の創傷に塗布することを含む方法を提供する。哺乳動物組織は、脱細胞化哺乳動物組織であり得る。

創傷治癒の方法または創傷に治療剤を送達する方法において使用される組成物は、本開示の先のセクションに開示されており、このセクションにその全体が参照により組み込まれている。

創傷治癒は、体内の細胞が再生および修復して、損傷または壊死エリアのサイズを低減するプロセスである。創傷治癒は、傷害の領域を囲繞する炎症、細胞遊走および有糸分裂、血管新生および顆粒化組織の発達、結合組織の修復、細胞外マトリックスの再生、ならびに創傷の治癒をもたらすリモデリングを含む一連のフェーズを伴う。各フェーズは、その独特の機構を有し、他のフェーズとも相互接続されている。これらの個々のフェーズの継続時間は、創傷の強度および深さに応じて変動する。ほとんどの創傷包帯処置は、湿気のある環境を提供し、過剰な滲出液蓄積を制御し、正常な治癒を妨害する感染から保護することによって創傷治癒のこれらの段階を促進することを目的とする。

様々な物理的要因または化学剤によって引き起こされる皮膚傷害は、創傷治癒および皮膚再生を誘導することができる。しかし、広範に火傷した患者の療法において、皮膚自家移植のためのドナー部位の量が限られていることは、不断の問題である。全層創傷は、分層皮膚自己移植で新しい皮膚にされるが、深部皮膚火傷は通常、生物学的または合成カバー（包帯材）で覆われる。創傷カバーは、一時的な代替物として働く。創傷が自発的に治癒しない場合、これらは、患者自体の皮膚で置き換えられなければならない。

本開示は、創傷を治癒させる方法を提供する。創傷は、これらの原因、場所、傷害（または症状）のタイプ、創傷深さ、および創傷の組織喪失または臨床的外観を含むいくつかの方法によって分類することができる。一般的な創傷は、表層（表皮のみの喪失）、中間層（表皮および真皮の両方が影響される）、ならびに全層（真皮、皮下脂肪、および時に骨が影響される）として分類される。中間層創傷は、ピンク色に見える場合があり、有痛性であることが多く、黄色組織は観察されない。全層創傷は、傷害部位で、皮膚のすべての層、ならびに下にある皮下組織、および骨、筋肉、腱、神経組織、血管組織、または内臓器官を含むより深い組織への損傷または障害を伴い得る。

全層創傷または傷害は、以下：鈍器外傷；鋭的外傷；銃創；微生物感染；壊死性感染；細菌感染；真菌感染；低体温；凍傷；虚血；組織低酸素；虚血組織の再灌流；微小血管疾患；糖尿病に関連した血管疾患；非可動状態（ｎｏｎ−ｍｏｂｉｌｉｔｙ）または不動状態；壊疽；敗血症；敗血症ショック；骨髄炎；蜂巣炎；血管炎；真性糖尿病；糖尿病性潰瘍；糖尿病性足潰瘍；がん；白血病；硬変；慢性線維症；アテローム性動脈硬化症；浮腫；鎌状赤血球病；動脈不全関連疾病；免疫抑制；免疫抑制薬の使用；化学療法薬の使用；ステロイドの使用；極端な温度への曝露；生体毒素への曝露；毒物への曝露；ヘビ咬傷；虫刺され；昆虫刺傷；有毒魚からの毒注入；またはクラゲからの毒注入のうちの少なくとも１つによって引き起こされ得る。さらに、対象は、以下の状態：敗血症、敗血症ショック、微生物感染、壊死性感染、壊死性筋膜炎、壊疽、もしくは骨髄炎の少なくとも１つを発症する場合があり、または発症するリスクがあり得る。

全層創傷または傷害は、感染症、例えば、捻髪音性嫌気性蜂巣炎（ｃｒｅｐｉｔａｎｔ ａｎａｅｒｏｂｉｃ ｃｅｌｌｕｌｉｔｉｓ）；壊死性筋膜炎；非クロストリジウム性筋壊死；クロストリジウム性筋壊死；真菌壊死性蜂巣炎；淋菌性関節炎；非淋菌性関節炎（ｎｏｎｇｏｎａｃｏｃｃａｌ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ）；細菌性関節炎；肉芽腫性関節炎；血行性骨髄炎（ｈｅｍｏｔｏｇｅｎｏｕｓ ｏｓｔｅｏｍｙｅｌｉｔｉｓ）；隣接病巣性骨髄炎（ｃｏｎｔｉｇｕｏｕｓ−ｆｏｃｕｓ ｏｓｔｅｏｍｙｅｌｉｔｉｓ）；慢性骨髄炎；細菌性骨髄炎；真菌性骨髄炎；などの１つもしくは複数によって引き起こされる場合があり、またはそれに関連する。このような感染症を引き起こし得る例示的な生物は、以下：Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ種、Ｐｅｐｔｏｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ種、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ種、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ科のメンバー、Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ種、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｇａｌａｃｔｉａｅ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｎｏｖｙｉ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｓｅｐｔｉｃｕｍ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃｕｍ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｆａｌｌａｘ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｂｉｆｅｒｍｅｎｔａｎｓ、Ｐｈｙｃｏｍｙｃｅｓ種、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ種、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ種、Ｍｕｃｏｒ種、Ａｂｓｉｄｉａ種、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ種、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ種、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ種、Ｙｅｒｓｉｎｉａ種、Ｓｔｒｅｐｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｉｓ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ種、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ種、Ｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘ種、Ｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘ ｓｃｈｅｎｃｋｉｉ、Ｃａｎｄｉｄａ種、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａの１種または複数を含む。

本開示は、瘢痕組織形成を低減する、対象における創傷治癒の方法を含む。本開示の方法は、ヒアルロン酸（ＨＡ）の組成物であるが、本開示の組成物（例えば、操作された生体材料）を欠く組成物で処置される創傷と比較して瘢痕組織形成を低減する。

本開示は、治癒期創傷の脱色を低減する、対象における創傷治癒の方法を含む。本開示の方法は、ヒアルロン酸（ＨＡ）の組成物であるが、本開示の組成物（例えば、操作された生体材料）を欠く組成物で処置される創傷と比較して脱色を低減する。

本開示の創傷治癒の方法は、ケラチノサイトおよび上皮細胞の遊走を促進する。本開示の創傷治癒の方法は、創傷の新血管形成を促進する。本開示の創傷治癒の方法は、生体材料を創傷に塗布して約５〜１０日後に新血管形成を促進する。本開示の創傷治癒の方法では、新血管形成は、創傷にＥＣＭリモデリングをもたらす。本開示の創傷治癒の方法では、ヒアルロン酸（ＨＡ）の組成物であるが本開示の生体材料を欠く組成物で処置される創傷と比較して、長期瘢痕の低減が治癒された創傷の部位で観察される。生体材料は、表皮細胞を生成し、表皮および真皮の二重層構造を回復させる。創傷は、生体材料を創傷に塗布して１５〜４０日以内に治癒され得る。創傷は、生体材料を創傷に塗布して２５日以内に治癒され得る。
第２の作用物質と組み合わせた創傷治癒

一態様では、本開示は、治療剤と組み合わせた本開示の組成物（例えば、操作された生体材料）を用いた創傷治癒をもたらす。一態様では、本開示は、哺乳動物組織の細胞外マトリックス（ＥＣＭ）成分、ポリマー、および創傷治癒の医薬組成物または有効用量の作用物質を含む寛解剤を含む組成物（例えば、操作された生体材料）を含む。哺乳動物組織は、脱細胞化哺乳動物組織であり得る。治療剤は、組成物（例えば、操作された生体材料）と共投与し、または同時的に投与し、または逐次投与することによって創傷治癒組成物（例えば、操作された生体材料）と独立に医薬組成物として投与することができる。このような事例では、本開示は、治療剤を経口的に、局所的に、静脈内に、腹腔内に、経鼻的に、または吸入によって投与することができることを含む。本開示の治療剤の医薬組成物は、薬剤学的に許容される賦形剤を含み得る。

第２の治療剤は、抗掻痒剤（ｐｒｕｒｉｔｕｓ ａｇｅｎｔ）（かゆみ止め剤）、鎮痛剤（例えば、疼痛緩和剤）、防腐剤、および抗生物質を含み得る。本開示の医薬組成物中の治療剤は、創傷治癒作用物質／分子であり、またはそれであり得る。このような作用物質／分子は、意図される目的に有効な量で適切に存在し得る。

かゆみ止め剤は、これらに限定されないが、ヤナギ樹皮抽出物、サリチル酸、抗ヒスタミン剤（ジフェンヒドラミン）、コルチコステロイド（例えば１％ヒドロコルチゾンクリーム）、ベンゾカイン局所処置、ミント油、メタノール、樟脳、水酸化アンモニウム、ベンジルアルコール、塩酸プラモキシン（ｐｒａｍｉｘｉｎｅ ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）を含み得る。

例示的な鎮痛剤は、これらに限定されないが、非麻酔薬（例えば、アセトアミノフェン）、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）（例えば、アスピリン、ジクロフェナク、デキシブプロフェン、ジフルニサル、エトドラク、フェノプロフェン、フルフェナム酸、フルルビプロフェン、イブプロフェン、インドメタシン、ケトプロフェン、ケトロラック、ロルノキシカム、ロキソプロフェン（ｌｘｏｐｒｏｆｅｎ）、メクロフェナム酸（ｍｅｌｏｆｅｎａｍｉｃ ａｃｉｄ）、メフェナム酸、メロキシカム、ナブメトン（ｎａｂｕｍｅｔｎｅ）、ナプロキセン、オキサプロジン、ピロキシカム、サルサレート、スリンダク、テノキシカム、トルメチン、およびトルフェナム酸を含み得る。他の鎮痛薬は、ＣＯＸ−２阻害剤（例えば、セレコキシブ、ロフェコキシブ、バルデコキシブ、およびエトリコキシブ）、ならびにオピオイド（例えば、ブプレノルフィン、ブトルファノール、コデイン、ヒドロコドン、ヒドロモルフォン、レボルファノール（ｌｅｖｏｐｈａｎｏｌ）、メペリジン（ｍｅｄｅｒｉｄｉｎｅ）、メタドン、モルヒネ、ナルブフィン、オキシコドン、オキシモルホン、ペンタゾシン、およびプロポキシフェン）を含む。

防腐剤は、これらに限定されないが、アルコール（例えば、エタノール、１−プロパノール、および２−プロパノール／イソプロパノール）、四級アンモニウム化合物（塩化ベンザルコニウム、セチルトリメチルアンモニウムブロミド、塩化セチルピリジニウム（ｃｅｔｙｌｐｙｒｉｄｉｎｕｍ ｃｈｌｏｒｉｄｅ）、塩化ベンゼトニウム）、ホウ酸、ブリリアントグリーン、グルコン酸クロルヘキシジン、ならびに過酸化水素（単独で、または過酢酸を作製するために酢酸と組み合わせて）を含み得る。他の作用物質は、ヨウ素、マヌカハニー、マーキュロクロム、オクテニジン二塩酸塩、フェノール、塩化ナトリウム、次亜塩素酸ナトリウム、次亜塩素酸カルシウム、およびペルーバルサムを含み得る。

抗生物質剤は、これらに限定されないが、ゲンタマイシン、カナマイシン、ネオマイシン、ネチルマイシン、トブラマイシン、パロモマイシン、ストレプトマイシン、リファキシミン、ロラカルベフ、エルタペネム、ドリペネム、セファレキシン、セファクロル、セファマンドール、セフォキシチン、セフプロジル、セフロキシム、セフィキシム、セフジニル、セフジトレン、セフォペラゾン、セフォタキシム、セフポドキシム、セフタジジム、セフチブテン、セフチゾキシム、セフトリアキソン、セフェピム、バンコマイシン、テラバンシン、ダルババンシン、ラデゾリド、トレゾリド、アモキシシリン、アンピシリン、アズロシリン、カルベニシリン、クロキサシリン、ジクロキサシリン、フルクロキサシリン、メズロシリン、メチシリン、ナフシリン、オキサシリン、ペニシリンＧ、ペニシリンＶ、ピペラシリン、ペニシリンＧ、テモシリン、チカルシリン、レボフロキサシン、ロメフロキサシン、モキシフロキサシン、ナリジクス酸、ノルフロキサシン、オフロキサシン、トロバフロキサシン、グレパフロキサシン、スパルフロキサシン、テマフロキサシン、マフェニド、スルファセタミド、スルファメチゾール、スルファメトキサゾール、スルファサラジン、スルフイソキサゾール、デメクロサイクリン、ドキシサイクリン、ミノサイクリン、オキシテトラサイクリン、テトラサイクリン、クロファジミン、イソニアジド、ピラジナミド、リファブチン、リファペンチン、ストレプトマイシン、ムピロシン、プラテンシマイシン、キヌプリスチン、チアンフェニコール、および／またはチニダゾールの１種または複数を含み得る。

有効用量は、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇの間の作用物質であり得る。

治療剤は、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約０．０１ｍｇ／ｋｇの間の化合物、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約０．１ｍｇ／ｋｇの間の化合物、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１．０ｍｇ／ｋｇの間の化合物、約１．０ｍｇ／ｋｇ〜約５．０ｍｇ／ｋｇの間の化合物、約５．０ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの間の化合物、約１０ｍｇ／ｋｇ〜約１５ｍｇ／ｋｇの間の化合物、約１５ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇの間の化合物、約２０ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇの間の化合物、約２５ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇの間の化合物、約３０ｍｇ／ｋｇ〜約３５ｍｇ／ｋｇの間の化合物、約３５ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇの間の化合物、約４０ｍｇ／ｋｇ〜約４５ｍｇ／ｋｇの間の化合物、約４５ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇの間の化合物、約５０ｍｇ／ｋｇ〜約５５ｍｇ／ｋｇの間の化合物、約５５ｍｇ／ｋｇ〜約６０ｍｇ／ｋｇの間の化合物、約６０ｍｇ／ｋｇ〜約６５ｍｇ／ｋｇの間の化合物、約６５ｍｇ／ｋｇ〜約７０ｍｇ／ｋｇの間の化合物、約７０ｍｇ／ｋｇ〜約７５ｍｇ／ｋｇの間の化合物、約７５ｍｇ／ｋｇ〜約８０ｍｇ／ｋｇの間の化合物、約８０ｍｇ／ｋｇ〜約８５ｍｇ／ｋｇの間の化合物、約８５ｍｇ／ｋｇ〜約９０ｍｇ／ｋｇの間の化合物、約９０ｍｇ／ｋｇ〜約９５ｍｇ／ｋｇの間の化合物、または約９５ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇの間の化合物の用量でそれを必要とする対象に投与することができる。

本開示は、治療剤が組成物の約０．１％〜約２０％ｗ／ｖの間であり得る有効用量の組成物を含む組成物を含む。

例えば、治療剤の有効用量は、組成物の約０．００１％ｗ／ｖ〜約０．０１％ｗ／ｖの間、約０．０１％ｗ／ｖ〜約０．１％ｗ／ｖの間、約０．１％ｗ／ｖ〜約１．０％ｗ／ｖの間、約１．０％ｗ／ｖ〜約２．０％ｗ／ｖの間、約２．０％ｗ／ｖ〜約３．０％ｗ／ｖの間、約３．０％ｗ／ｖ〜約４．０％ｗ／ｖの間、約４．０％ｗ／ｖ〜約５．０％ｗ／ｖの間、約５．０％ｗ／ｖ〜約６．０％ｗ／ｖの間、約６．０％ｗ／ｖ〜約７．０％ｗ／ｖの間、約７．０％ｗ／ｖ〜約８．０％ｗ／ｖの間、約８．０％ｗ／ｖ〜約９．０％ｗ／ｖの間、約９．０％ｗ／ｖ〜約１０％ｗ／ｖの間、約１０％ｗ／ｖ〜約１１％ｗ／ｖの間、約１１％ｗ／ｖ〜約１２％ｗ／ｖの間、約１２％ｗ／ｖ〜約１３％ｗ／ｖの間、約１３％ｗ／ｖ〜約１４％ｗ／ｖの間、約１４％ｗ／ｖ〜約１５％ｗ／ｖの間、約１５％ｗ／ｖ〜約１６％ｗ／ｖの間、約１６％ｗ／ｖ〜約１７％ｗ／ｖの間、約１７％ｗ／ｖ〜約１８％ｗ／ｖの間、約１８％ｗ／ｖ〜約１９％ｗ／ｖの間、または約１９％ｗ／ｖ〜約２０％ｗ／ｖの間であり得る。
組成物を調製する方法

一態様では、本開示は、哺乳動物組織の細胞外マトリックス（ＥＣＭ）成分およびポリマーを含む組成物を調製する方法であって、哺乳動物組織を脱細胞化して細胞外マトリックス（ＥＣＭ）成分を含む粉末を調製することと、粉末を緩衝液、栄養素、増殖因子、ポリマーを含む培地と混合することとを含み、粉末が培地を吸い上げ、それにより組成物を調製する、方法を含む。哺乳動物組織は、脱細胞化哺乳動物組織であり得る。実施形態では、ＥＣＭの成分は、哺乳動物（例えば、ヒト）の組織から単離および／もしくは精製され、またはそうされてもよく、あるいはそれぞれのＥＣＭ成分（例えば、コラーゲン、エラスチン、ラミニン、グリコサミノグリカン、プロテオグリカン、抗菌薬、化学誘引物質、サイトカイン、および増殖因子）をコードする哺乳動物（例えば、ヒト）の遺伝子もしくは遺伝子断片を伴う組換えＤＮＡ技術を使用して生成され、適当な発現系（原核生物または真核生物（例えば、昆虫もしくは哺乳動物細胞））から発現され、当技術分野で適当な方法によって引き続いて単離および／もしくは精製され、またはそうされてもよい。

本開示では、本開示の組成物を調製するための粉末は、化学物質で組織を処置し、化学物質で処置された組織をフリーズドライし、フリーズドライされた組織をホモジナイズすることによって調製される。緒実施形態では、粉末は、繊維状である。培地は、血清含有、低血清、または無血清含有培地である。増殖因子は、組換え４−１ＢＢＬ、組換え６Ｃｋｉｎｅ、６Ｃｋｉｎｅ組換えヒトタンパク質、ＡＮＧＰＴ２（ＡＮＧ２）、ＡＮＧＰＴＬ５、アクチビンＡ、アクチビンＲ１ｂ、ＢＡＦＦ、ＢＡＭＢＩ、ＣＸＣＬ１３、ＢＤＮＦ、ＢＬＣ、ＢＭＰ２、ＢＭＰ４、ＢＭＰ５、ＢＭＰ７、ＢＭＰＲ１Ａ、ＣＣＬ１、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ２０（ＭＩＰ−３）、ＣＣＬ２１、ＣＤ４０、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＮＴ−６、ＨＢ−ＧＡＭ、ＭＫ、ＩＰ−１０、ＰＦ−４、ＭＣＰ−１、ＲＡＮＴＥＳ、ＩＬ−８、ＩＧＦ、ＦＧＦ１、ＦＧＦ−２、ＦＧＦ−３、ＦＧＦ−４、ＦＧＦ−５、ＦＧＦ−６、ＦＧＦ−７、ＦＧＦ−８、ＦＧＦ−９、ＴＧＦ−β、ＶＥＧＦ．ＰＤＧＦ−Ａ、ＰＤＧＦ−Ｂ、ＨＢ−ＥＧＦ、ＨＧＦ、ＴＮＦ−α、ＩＧＦ−Ｉ、またはこれらのいずれかの組合せの１種または複数である。栄養素は、アミノ酸、単糖、ビタミン、無機イオンおよび微量元素、ならびに／または塩を含み得る。栄養素として含まれるアミノ酸は、Ｌ−アルギニンＨＣｌ、Ｌ−シスチン２ＨＣｌ、Ｌ−シスチンＨＣｌ Ｈ_２Ｏ、Ｌ−ヒスチジンＨＣｌ Ｈ_２Ｏ、Ｌ−イソロイシン、Ｌ−ロイシン、Ｌ−リシンＨＣｌ、Ｌ−メチオニン、Ｌ−フェニルアラニン、Ｌ−トレオニン、Ｌ−トリプトファン、Ｌ−チロシン２Ｈ_２Ｏ、Ｌ−バリン、Ｌ−アラニン、Ｌ−アスパラギン、Ｌ−アスパラギン酸、Ｌ−グルタミン酸、グリシン、Ｌ−プロリン、Ｌ−セリン、および／またはＬ−ヒドロキシプロリンの１種または複数であり得る。栄養素として含まれるビタミンは、Ｋ−Ｃａ−パントテン酸塩、塩化コリン、葉酸、ｉ−イノシトール、ナイアシンアミド、ピリドキサールＨＣｌ、ピリドキシンＨＣｌ、リボフラビン、チアミンＨＣｌ、ビオチン、ビタミンＢ１２、パラ−アミノ安息香酸、ナイアシン、アスコルビン酸、ａ−トコフェロールリン酸、カルシフェロール、メナジオン、ビタミンＡの１種または複数であり得る。他の化合物は、栄養素、例えば、Ｄ−グルコース、フェノールレッド、ＨＥＰＥＳ、ピルビン酸ナトリウム、グルタチオン（還元）、ヒポキサンチン．Ｎａ、チミジン、リポ酸、プトレシン２ＨＣｌ、バクトペプトン、チミン、アデニンスルフェート、アデノシン−５−トリホスフェート、コレステロール、２−デオキシ−Ｄ−リボース、アデノシン−５−リン酸、グアニンＨＣｌ、リボース、酢酸ナトリウム、Ｔｗｅｅｎ８０、ウラシル、および／またはキサンチンＮａの１種または複数として存在し得る。栄養素として添加される無機塩は、ＣａＣｌ_２、ＫＣｌ、ＭｇＳＯ_４、ＮａＣｌ、ＮａＨＣＯ_３、ＮａＨＰＯ_４、ＫＮＯ_３、ＮａＳｅＯ_３、Ｃａ（ＮＯ_３）_２、ＣｕＳＯ_４、ＮａＨＰＯ_４、ＭｇＣｌ_２、Ｆｅ（ＮＯ_３）_３、ＣｕＳＯ_４、ＦｅＳＯ_４、および／またはＫＨ_２ＰＯ_４の１種または複数であり得る。

（実施例１）
ブタ皮膚足場の調製

Ｇａｌ／ｇａｌブタ皮膚は、Ａｖａｎｔｅａ（Ｃｒｅｍｏｎａ、イタリア）から購入した。２０＊１５ｃｍである皮膚のピースをＧａｌ／ｇａｌノックアウトブタから切断し、ビニール袋中に真空密閉し、使用するまで−２００℃で凍結して貯蔵した。皮膚を室温で解凍し、皮下脂肪組織を切除し、毛髪を除去し、最後に蒸留水で洗浄することによってきれいにした。次いで皮膚を５Ｌプラスチック容器内に配置し、０．０２％アジ化ナトリウム（Ｓｉｇｍａ、ドイツ）および１．８６％ ＥＤＴＡ（Ａｌｆａ Ａｅｓａｒ、ドイツ）を含有する０．５％ ＳＤＳ（ドデシル硫酸ナトリウム）（Ｓｉｇｍａ、ドイツ）とともに、２００ＲＰＭで３７℃にて９日間連続的にアジテートした。ＳＤＳを２４時間後に最初に交換し、次いで４８時間毎に交換した。ＳＤＳの毎回の交換の間、皮膚を蒸留水で１時間洗浄した。
脱細胞化ブタ皮膚

Ｇａｌ／ｇａｌ ＫＯブタ皮膚を０．５％ ＳＤＳで連続して処置した後９日以内に完全に脱細胞化した。脱細胞化の前（図１Ａ〜１Ｃ）および後（図１Ｄ〜１Ｆ）のブタ皮膚の肉眼的モルフォロジーおよび組織診断を図１Ａ〜１Ｇに示す。核（青色）または細胞残遺物の存在は、脱細胞化ブタ皮膚中に観察されなかった（図１Ｆ）。ＨＡおよびケラチノサイト培地を使用して調製したブタ皮膚ゲルは、色が白色であり（図１Ｇ）、すべての創傷皮膚治癒実験に使用した。

脱細胞化ブタ皮膚粉末は、皮膚−コラーゲンの再生に要求される重要なＥＣＭ成分の１つ（６６．５４５μｇ／ｍｇ）、ならびにエラスチン（３．５９８μｇ／ｍｇ）および硫酸化ＧＡＧ（４．５５５μｇ／ｍｇ）を保持した（図２Ａ）。ＭＴおよびＶＶＧ染色によっても、コラーゲンおよびエラスチンが脱細胞化後に保存されたことが確認された（図２Ｂおよび２Ｃ）。さらに、粉末化ブタ皮膚の特徴付けは、脱細胞化ブタ皮膚粉末が、光学顕微鏡法によって調査したとき、繊維状白色巨視的外観を有し、光に対して透明であることを示した（図２Ｄ）。走査電子顕微鏡法は、それが、形状およびサイズが様々であるリボン様繊維からなることを示した。支配的な繊維寸法は、幅２０〜３０μｍ、厚さ１〜３μｍ、および最大で長さ２ｍｍであった。繊維は、不規則にしわとなってねじれており、容易に分散可能な束を形成していた（図２Ｅおよび２Ｆ）。ブタ皮膚粉末の滅菌性試験は、培養中２週間測定して光学密度が増大しないことも示し、ガンマ照射をブタ皮膚粉末の滅菌に使用することができることを示した。

細胞外マトリックスの脱細胞化の検証および特徴付け

脱細胞化は、組織診断およびＤＮＡ定量化を使用して検証した。正常および脱細胞化皮膚からの２つのピースをホルマリン中に４８時間固定し、パラフィン中に包埋した。切片を、ミクロトームを使用して厚さ５μｍにカットし、ヘマトキシリン（Ｈｅｍａｔｏｘｉｌｉｎ）エオシン（ＨＥ）、マッソントリクローム（ＭＴ）（２５０８８、Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ、ＵＳＡ）、およびＶｅｒｈｏｅｆｆ Ｖａｎ Ｇｉｅｓｏｎ（ＶＶＧ）（２５０８９、Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ、ＵＳＡ）法によって染色して、核、コラーゲン、およびエラスチンの存在を同定した。組織のピース２５ｍｇを正常および脱細胞化皮膚からカットし、トータルＤＮＡを製造業者の指示に従ってＱｉａｇｅｎ Ｂｌｏｏｄ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ ＤＮＡキット（Ｑｉａｇｅｎ、スウェーデン）を使用して単離し、波長２６０ｎｍでナノドロップを使用して定量化した。
脱細胞化ブタ皮膚粉末の調製および特徴付け

脱細胞化後、皮膚を蒸留水中で５日間洗浄した。水は、１２時間毎に２回交換した。脱細胞化皮膚をカットして３＊３平方ｃｍのピースにし、７２時間フリーズドライ（凍結乾燥）した。凍結乾燥ピースを、１４０００ｒｐｍにて０．７５μｍシーブを有するクライオミルで粉砕した。得られた繊維状粉末を２５ｋＧｙでガンマ照射によって３分２５秒間滅菌した。

コラーゲン、エラスチン、およびグリコサミノグリカン（ｇｌｙｃｏａｍｉｎｏｇｌｙｃａｎｓ）（ＧＡＧ）に関するブタ皮膚粉末中の細胞外マトリックス定量化を実施した。粉末の構造およびモルフォロジーを光学および走査電子顕微鏡法（ＳＥＭ）によって調査した。光学画像法を、ＣｏｌｏｒＶｉｅｗ ＩＩＩｕ ＣＣＤ カメラ（Ｓｏｆｔ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍ ＧｍｂＨ、ドイツ）およびＯｌｙｍｐｕｓ Ｃｅｌｌ＾Ｄ画像分析ソフトウェアを備えたＯｌｙｍｐｕｓ ＳＺＸ１６立体顕微鏡によって実施した。ＳＥＭ分析をＺｅｉｓｓ Ｓｕｐｒａ ４０ＶＰ計測器によって二次電子検出モードで実施した。ＳＥＭ画像法中の試料帯電を低減するために、粉末試料をカーボンパッド上に堆積させ、Ｇａｔａｎ ＰＥＣＳ Ｍｏｄ６８２計測器で厚さ１５ｎｍのＡｕ／Ｐｄフィルムによってスパッタコートした。
ブタ皮膚ゲル（ＰＳＧ）の調製

ゲルを、脱細胞化皮膚粉末５０ｍｇおよびヒアルロン酸（ＨＡ）（Ｓｉｇｍａ、ドイツ）２５０μｌを混合してゲル様粘稠度を得ることによって調製した。ヒアルロン酸をケラチノサイト培地（Ｌｏｎｚａ、ＣＡ）中１ｍｇ／ｍｌで構成した。
滅菌性

照射済み粉末１ｍｇの３つのランダムな試料をチオグリコレートブロス（Ｆｌｕｋａ、ＵＳＡ）中に添加し、インキュベーター内で３７℃にて２週間培養した。１日おきに、ブロス２００μｌを収集し、波長６００ｎｍにて分光光度計（Ｓｙｎｅｒｇｙ２、Ｂｉｏｔｅｃｈ、ＵＳＡ）で光学密度を測定することによって濁度について検証した。濁度の増大は、汚染を示した。
動物実験

合計で、７２匹のＢＡＬＢ／ｃ雌ヌードマウス、７〜８週齢、および体重１７〜１８ｇ（Ｔａｃｏｎｉｃ、デンマーク）を、創傷治癒速度を研究するのに使用した。マウスを、全層皮膚創傷を誘導した後に４つの群；ｉ）未処置；ｉｉ）ＨＡで処置；ｉｉｉ）ＰＳＧのみで処置；およびｉｖ）ＰＳＧ＋ｈＰＢＭＣ（１＊１０^６細胞）で処置に分けた。マウスを、イソフルラン（ｉｓｏｆｌｕｏｒａｎｅ）を使用して麻酔し、１０ｍｇ／ｋｇのカルプロフェン（Ｋａｒｐｒｏｆｅｎ）（リマダイル）（Ｐｆｉｚｅｒ、Ｌｕｘｅｍｂｏｒｇ）を、術後疼痛緩和のためにｉ．ｐ．で術前に、かつ手術後２日間、１日１回与えた。皮膚を化学ガソリン２〜３滴で拭き、全層１×１ｃｍ四角切除創傷を各動物の上背エリアに創製した。細胞の有無にかかわらずゲルを滅菌した木製の棒を使用して塗布した。次いで、テガダーム（３Ｍ（商標）、ドイツ）を創傷上に配置し、保護のため、かつゲルを適所に保つために４〜０非吸収性モノフィラメント縫合糸（Ｅｔｈｉｃｏｎ、ドイツ）を使用して皮膚に縫合した。テガダームをハイドロフィルムでさらに覆って、動物がテガダームを除去するのを防止した。手術の日に、末梢血を健康ヒトドナーから収集し、単核細胞をリンホプレップで分離し、単離細胞をＰＢＳ中で３回洗浄し、ケラチノサイト培地中に懸濁させた。Ｂｉｏｒａｄ自動細胞計数器を使用して細胞をカウントした。処置の５、１０、１５、および２５日後に、動物を屠殺し、創傷を含む皮膚を組織学的検査のために摘出した。皮膚創傷も撮影した。
創傷の組織診断および免疫組織化学検査

すべての群からの皮膚創傷のパラフィンブロックを、ミクロトームを使用して厚さ５μｍで切片にし、創傷の全領域をカバーする５つの切片を標準手順に従ってＨＥ、ＭＴ、およびＶＶＧで染色した。スライドをＬｅｉｃａ ＳＣＮ４００顕微鏡を使用してスキャンした。皮膚切片をヒト特異的抗ミトコンドリア抗体（ａｎｔｉ−ｍｉｔｉｃｈｏｎｄｒｉａ ａｎｔｉｂｏｄｙ）１−１００（Ｍｅｒｃｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｓｔｏｃｋｈｏｌｍ、スウェーデン）で染色し、ヒト細胞を検出した。使用した二次抗体は、ペルオキシダーゼアフィニピュア（Ｆａｂ）２断片ヤギ抗マウスＩｇＧ、Ｆ（ａｂ）２断片スペシフィック１：５００（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ、Ｗｅｓｔ Ｇｒｏｖｅ、ＵＳＡ）であった。
免疫蛍光

凍結切片を、クライオトームを使用して厚さ５μｍでカットした。ヒトＣＤ３１に特異的な（１：２５；１０１４８−ＭＭ１３、Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ）およびマウス特異的ＣＤ３１（１：４００、ＬＳＣ３４８７０４、ＬＳＢｉｏ）抗体ならびに二次抗体Ａｌｅｘａ ＧαＭ５６８（１：１００；Ａ１１０３１、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）およびＧαＲ ＦＩＴＣ（１：１００；ＳＣ３８２５、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ）を使用した。簡単に言えば、クライオスライド（ｃｒｙｏｓｌｉｄｅ）をアセトン：メタノール（４：６）中に、−２０℃にて１０分間固定し、ＰＢＳ中で５分間洗浄した。スライドを二次抗体宿主の血清でブロックし、一次抗体とともに＋４℃で一晩インキュベートした。スライドをＰＢＳ中で３回洗浄し、二次抗体とともに暗所で＋４℃にて４５分間インキュベートした。スライドをＰＢＳ中で３回洗浄し、ＤＡＰＩを含有する封入剤（Ｈ１５００、Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）１滴でカバースリップした。
コラーゲンの定量化

２５日目にすべての動物群中のコラーゲンの量（新しく形成された皮膚）を、デンシトメトリーの原理を使用してＭＴ染色で青色に染色されたコラーゲンの強度に基づいて定量化した。５枚の代表的な画像を各動物から撮り、画像１枚当たりの青色の総強度をＢｉｏＰｉｘ ｉＱ２．１．８ソフトウェアで定量化した。コラーゲン強度を任意単位（ａ．ｕ）として読み取り、各動物の平均を算出した。
創傷面積の測定

創傷サイズを算出するために、測定スケールを創傷の部位に配置し、すべてのマウスを、Ｓｏｎｙα３５デジタルカメラを使用して撮影した。次いで動物１匹当たりの閉じていない創傷（瘢痕ではない）の面積を算出した。１群当たりの閉じていない創傷面積／動物の平均を提示する。
遺伝子分析

氷冷Ｑｉａｚｏｌ（Ｑｉａｇｅｎ ＧｍｂＨ）１ｍｌを凍結皮膚試料に添加することによってＲＮＡを抽出した。鋼ビーズを各試料に添加し、試料をＱｉａｇｅｎ ＴｉｓｓｕｅＬｙｓｅｒで２５Ｈｚにて２×５分間ホモジナイズし、クロロホルム２００μｌを添加し、試料を１５秒間活発に震盪させ、室温で３分放置し、１２，０００ｇで４℃にて１５分間遠心分離した。遠心分離後、上清３５０μｌを新しいチューブに移し、７０％エタノール３５０μｌと混合し、ピペット操作によって慎重に混合し、ＲＮｅａｓｙ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ ＧｍｂＨ）のＭｉｎｉＥｌｕｔｅカラムに添加した。手順の残りは、製造業者の指示に従った。

製造業者の指示に従ってＢｉｏｒａｄ ＣＦＸ９６計測器で２０μｌの最終反応体積中にトータルＲＮＡ ２μｇを添加することによって、ＴＡＴＡＡ ＧｒａｎｄＳｃｒｉｐｔ ｃＤＮＡ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｋｉｔ（Ｔａｔａａ Ｂｉｏｃｅｎｔｅｒ）を使用して、抽出したＲＮＡを逆転写した。

Ｂｉｏｒａｄ ＣＦＸ３８４計測器でＴＡＴＡＡ ＳＹＢＲ Ｇｒａｎｄｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ｔａｔａａ Ｂｉｏｃｅｎｔｅｒ）を使用して、９５℃６０秒間、その後９５℃５秒間、６０℃３０秒間、および７２℃１０秒間の４５サイクル、その後０．５℃ステップで５５℃〜９５℃の融解カーブという温度プロトコールを用いて、ｑＰＣＲを実施した。各反応について、ｃＤＮＡ ４μｌを２０μｌの総反応体積中で使用した。ｑＰＣＲについて、一方がヒトシトクロムＢ（ｈＣｙｔＢ）に対し、他方がマウスシトクロムＢ（ｍＣｙｔＢ）に対する２つのアッセイを行った。ｑＰＣＲは、ｈＣｙｔＢアッセイについては２連で、ｍＣｙｔＢアッセイについては単回測定で実施した。
統計

表したすべての値は、実験の平均であり、プロットしたグラフは、その群の平均であり、エラーバーは、元の値の標準誤差平均であった。グラフは、Ｇｒａｐｈ Ｐａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアバージョン６．０を使用してプロットした。スチューデントｔ−検定を使用して群間の有意差を算出した。Ｐ値＜０．０５を有意とみなした。

（実施例２）
全層創傷治癒に対するブタ皮膚ゲル（ＰＳＧ）およびヒト末梢血単核細胞（ｈＰＢＭＣ）の効果

ＰＳＧの創傷治癒能力を判定するために、ヌードマウスの背中に創製した急性全層切除創を未処置にしたか、またはＨＡ、ＰＳＧのみ、もしくはＰＳＧ＋ｈＰＢＭＣで処置した。図３は、未処置の創傷ならびにＨＡ、ＰＳＧのみ、およびＰＳＧ＋ｈＰＢＭＣで処置した後の創傷における創傷治癒プロセスを示す。手術の５および１０日後に、かさぶたがすべての群で観察された。しかし、１５日目までに、かさぶたはＰＳＧ処置群において剥がれ落ち、創傷は再生された皮膚で充実していた。
ＰＳＧのみおよびＰＳＧ＋ｈＰＢＭＣ処置動物における創傷閉鎖

明らかな差異が、ＰＳＧのみおよびＰＳＧ＋ｈＰＢＭＣで処置した動物において創傷閉鎖に関して観察された。１５日までに、これらの動物における創傷は、創傷閉鎖において最大の有意差を表した。１５日目に既に、完全な創傷閉鎖が、未処置およびＨＡで処置されたマウスにおける０／３（０％）と比較して、ＰＳＧ＋ｈＰＢＭＣで処置した５／６（８３％、ｐ＜０．０５）匹のマウスおよびＰＳＧのみで処置した４／６（６６％、ｐ＜０．０５）匹のマウスにおいて観察された。２５日目に、完全な創傷治癒がすべての群において観察された。ＰＳＧのみおよびＰＳＧ＋ｈＰＢＭＣで処置した動物における治癒した皮膚は、正常な皮膚と同様であった一方、長期瘢痕が過剰な収縮に起因して対照群の治癒した皮膚において依然として観察された。図３に示した通り、対照群とＰＳＧ処置との差異は、手術の１５日後に顕著であったが（ｐ＜０．０５）、２５日では有意でなかった。
創傷サイズの測定

創傷画像を定量化して異なる時点での治癒面積を示した。１５日目における創傷サイズの測定は、ＰＳＧ（７．９５±１．９６ｍｍ^２；ｐ＜０．０５）およびＰＳＧ＋ｈＰＢＭＣ（３．５±１．９２ｍｍ^２；ｐ＜０．０５）で処置した動物は、未処置動物（創傷面積２６．５８±４．４２ｍｍ^２）と比較して創傷面積が有意に小さかったことを示した。ＰＳＧおよびＰＳＧ＋ｈＰＢＭＣで処置した動物における創傷面積は、ＨＡで処置した動物を比較したとき（１３±８．８８ｍｍ^２）も小さかった（表１）。

創傷治癒プロセスおよび回復した組織の構造（例えば、コラーゲン沈着）

組織学的染色を実施して創傷治癒プロセスおよび回復した組織の構造を査定した（図４）。手術の５日後に、すべての群が豊富な炎症細胞を呈した。１０日後、対照群における創傷は、隣接組織から識別でき、区別可能なケラチン層は観察されなかった。ＰＳＧおよびＰＳＧ＋ｈＰＢＭＣ処置群において、新しい表皮細胞が創傷縁部周囲に遊走しており、ケラチン層が明確に顕著であった。１５および２５日目に、治癒した創傷の断面をＨ＆Ｅ染色すると、新しく形成された表皮層が、未処置およびＨＡ処置創傷と比較してＰＳＧおよびＰＳＧ＋ｈＰＢＭＣ処置創傷における組織化およびモルフォロジーに関して周囲表皮と高い類似性を示したことが明らかになった。さらに、未処置およびＨＡ処置群では、遊走速度が限られており、２５日までに創傷面全体に架橋することができず、角質化していない中心部を示した（図４）。

創傷床内のコラーゲン沈着の程度を、マッソントリクローム染色を使用して査定した。その理由は、コラーゲン沈着の増大、組織化が創傷床成熟の改善と関連しているためである。ＭＴ染色により、対照と比較してＰＳＧおよびＰＳＧ＋ｈＰＢＭＣ処置動物の皮膚生検中のコラーゲンの発現の著しい増大が示された（図５Ａ〜５Ｄ）。病理組織学的分析を確認するために、デンシトメトリーによるコラーゲンの定量化を新しく再生された皮膚（手術後２５日目）で実施した。ＰＳＧ＋ｈＰＢＭＣ（２４５０１１±３５８３２ａ．ｕ、ｐ＜０．０５）で処置した群中の動物は、未処置（１２７００１±２５４２９ａ．ｕ）群と比較してコラーゲンの量が有意に高かった。ＰＳＧで処置したマウスのコラーゲン密度（２５２３１４±７０００５ａ．ｕ、ｐ＝０．０７）も未処置と比較して高い値を示したが、それは、統計的に有意でなかった。ＨＡ処置群は１７７２３９±３１０９７ａ．ｕの密度を有し、やはり未処置群と比較した場合有意でなかった（図５Ｅ）。

ＰＳＧ中のヒト細胞が創傷にＰＳＧを塗布した後に生存したか否かを判定するために、５および１０日目の部分的に治癒した創傷のパラフィン切片をヒト特異的抗ミトコンドリア抗体で免疫染色した。結果は、対照における陽性染色細胞の非存在（図６Ａおよび６Ｂ）を実証したが、ヒト肝組織（陽性対照；図６Ｃ）ならびにＰＳＧ＋ｈＰＢＭＣで処置した動物の真皮層および表皮層の両方（図６Ｄ〜６Ｆ）におけるヒトミトコンドリア陽性細胞の存在を実証した。これらの結果は、ヒト細胞が新血管形成を促進することによって創傷皮膚の再上皮化を加速することを示した。

（実施例３）
創傷内のヒトおよび宿主血管形成は、新血管形成を促進することによって創傷治癒を加速する

ＣＤ３１染色により、手術の５および１０日後に各実験群における血管形成が示された。多数の宿主（マウス）微小血管が５および１０日目にＰＳＧ＋ｈＰＢＭＣ処置群において観察され、微小血管密度は、対照群と比較してはるかに高かった（それぞれ図７Ａ、７Ｄおよび７Ｇ）。重要なことに、ヒト特異的抗ＣＤ３１抗体で染色したとき、いくつかの小血管が５日目にＰＳＧ＋ｈＰＢＭＣ処置群においてこのマーカーについて陽性染色された（図７Ｂ）。しかし、ヒトＣＤ３１について陽性染色される血管の数は１０日目に減少し（図７Ｅ）、１５日目に無視できた。この知見は、ヒトＰＢＭＣが新血管形成を促進することによって創傷治癒を加速することを示した。

（実施例４）
新しく形成された皮膚中のヒトＲＮＡの検出

５、１０、１５および２５日目に採取した合計３８の皮膚試料をｑＰＣＲで分析し、ヒト細胞を検出した。２３の試料をｈＰＢＭＣで処置したマウスから採取し、１５の試料をヒト細胞で処置しなかったマウスから採取した。マウスｑＰＣＲアッセイのＣｑ値は、１０から１４の間の範囲ですべての場合において低かった一方、ヒトアッセイのＣｑ値は、２０サイクル高く、予期された通り、マウス組織内に存在するヒト細胞の数が低いことを示した。ヒトＲＮＡは、ヒト細胞で処置した２３試料のうちの２０において同定することができた一方、ヒトＲＮＡは、試料のうちの３つにおいて同定されなかった。ヒト細胞で処置しなかった試料について、同様の範囲内のＣｑ値を有する陽性のｑＰＣＲ結果が、１５試料のうちの４つにおいて得られた。
他の実施形態

本開示をその詳細な説明と併せて記載してきたが、上記の記述は、添付の特許請求の範囲の範囲によって定義される本開示の範囲を例示するように、かつ限定しないように意図されていることが理解されるべきである。他の態様、利点、および改変は、以下の特許請求の範囲の範囲内である。

本開示の番号付けされた条項は以下である：
１．哺乳動物組織の細胞外マトリックス（ＥＣＭ）成分およびポリマーを含む組成物。
２．操作された生体材料である、請求項１に記載の組成物。
３．ゲル組成物である、請求項２に記載の生体材料。
４．顆粒球マクロファージ−コロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、インターロイキン（ＩＬ）−３、ＩＬ−４、ニューロトロフィン（ＮＴ）−６、プレイオトロフィン（ＨＢ−ＧＡＭ）、ミッドカイン（ＭＫ）、インターフェロン誘導タンパク質−１０（ＩＰ−１０）、血小板因子（ＰＦ）−４、単球走化性タンパク質−１（ＭＣＰ−１）、ＲＡＮＴＥＳ（ＣＣＬ−５、ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンド５）、ＩＬ−８、ＩＧＦ、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）−１、ＦＧＦ−２、ＦＧＦ−３、ＦＧＦ−４、ＦＧＦ−５、ＦＧＦ−６、ＦＧＦ−７、ＦＧＦ−８、ＦＧＦ−９、トランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）−β、ＶＥＧＦ、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）−Ａ、ＰＤＧＦ−Ｂ、ＨＢ−ＥＧＦ、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）−α、インスリン様増殖因子（ＩＧＦ）−Ｉ、およびこれらのいずれかの組合せからなる群から選択される増殖因子をさらに含む、請求項１から３の一項に記載の組成物。
５．哺乳動物組織が、上皮および／または結合組織を含む、請求項１から４の一項に記載の組成物。
６．哺乳動物組織が、皮膚、胎盤、および／または臍帯から得られる、請求項１から５の一項に記載の組成物。
７．ポリマーが、炭水化物系ポリマーである、請求項１から６の一項に記載の組成物。
８．ポリマーが、二糖ポリマーである、請求項７に記載の組成物。
９．二糖ポリマーが、ヒアルロン酸である、請求項８に記載の組成物。
１０．血液細胞または多血小板血漿をさらに含む、請求項１から９の一項に記載の組成物。
１１．血液細胞が、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）である、請求項１０に記載の組成物。
１２．ＰＢＭＣが、ヒト細胞である、請求項１１に記載の組成物。
１３．ヒトＰＢＭＣが、自己由来である、請求項１２に記載の組成物。
１４．ＥＣＭ成分が、コラーゲン、エラスチン、および／または硫酸化グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）を含む、請求項１から１３の一項に記載の組成物。
１５．生体材料が、リボン様繊維を含む、請求項２から１４の一項に記載の組成物。
１６．繊維が、幅約１μｍ〜約４０μｍ、厚さ約０．１μｍ〜約１０μｍ、および／または長さ約７０μｍ以上〜４０００μｍ以下のものである、請求項１５に記載の組成物。
１７．繊維が、幅約５μｍ〜約３０μｍのものである、請求項１６に記載の組成物。
１８．繊維が、厚さ約０．５μｍ〜約５μｍのものである、請求項１７に記載の組成物。
１９．繊維が、長さ約７５μｍ以上〜約８００μｍ以下のものである、請求項１６に記載の組成物。
２０．哺乳動物組織が、ブタ、ウシ（ｃｏｗ）、子羊、ヤギ、ヒツジ、およびヒトからなる群から選択される哺乳動物から得られる、請求項１から１９の一項に記載の組成物。
２１．ブタが、α−Ｇａｌ（Ｇａｌα１，３−Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃ−Ｒ）エピトープのノックアウト突然変異体である、請求項２０に記載の組成物。
２２．それを必要とする対象の創傷を治癒させる方法であって、哺乳動物組織の細胞外マトリックス（ＥＣＭ）成分およびポリマーを含む組成物を前記対象の創傷に塗布することを含む方法。
２３．それを必要とする対象の創傷に治療剤を送達する方法であって、哺乳動物組織の細胞外マトリックス（ＥＣＭ）成分、ポリマー、および治療剤を含む組成物を前記対象の創傷に塗布することを含む方法。
２４．それを必要とする対象の創傷に増殖因子を送達する方法であって、哺乳動物組織の細胞外マトリックス（ＥＣＭ）成分、ポリマー、および増殖因子を含む組成物を前記対象の創傷に塗布することを含む方法。
２５．それを必要とする対象の創傷に水分付与する方法であって、哺乳動物組織の細胞外マトリックス（ＥＣＭ）成分およびポリマーを含む組成物を前記対象の創傷に塗布することを含む方法。
２６．組成物が、操作された生体材料である、請求項２２から２５の一項に記載の方法。
２７．生体材料が、ゲル組成物である、請求項２２から２５の一項に記載の方法。
２８．増殖因子が、顆粒球マクロファージ−コロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、インターロイキン（ＩＬ）−３、ＩＬ−４、ニューロトロフィン（ＮＴ）−６、プレイオトロフィン（ＨＢ−ＧＡＭ）、ミッドカイン（ＭＫ）、インターフェロン誘導タンパク質−１０（ＩＰ−１０）、血小板因子（ＰＦ）−４、単球走化性タンパク質−１（ＭＣＰ−１）、ＲＡＮＴＥＳ（ＣＣＬ−５、ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンド５）、ＩＬ−８、ＩＧＦ、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）−１、ＦＧＦ−２、ＦＧＦ−３、ＦＧＦ−４、ＦＧＦ−５、ＦＧＦ−６、ＦＧＦ−７、ＦＧＦ−８、ＦＧＦ−９、トランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）−β、ＶＥＧＦ、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）−Ａ、ＰＤＧＦ−Ｂ、ＨＢ−ＥＧＦ、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）−α、インスリン様増殖因子（ＩＧＦ）−Ｉ、およびこれらのいずれかの組合せからなる群から選択される、請求項２４に記載の方法。
２９．創傷が、急性創傷または慢性創傷である、請求項２２から２８の一項に記載の方法。
３０．創傷が、皮膚創傷である、請求項２２から２８の一項に記載の方法。
３１．創傷が、皮膚裂傷、摩擦傷、非観血的衝撃手術創傷、皮膚剥離、火傷、皮膚切開創、皮膚裂創、皮膚挫傷、皮膚穿刺創、褥瘡性潰瘍、静脈性潰瘍、動脈性潰瘍、神経障害性／糖尿病性創傷、リンパ浮腫、または手術部位切開創である、請求項２２から２８の一項に記載の方法。
３２．哺乳動物組織が、上皮および／または結合組織を含む、請求項２２から３１の一項に記載の方法。
３３．哺乳動物組織が、皮膚、胎盤、および／または臍帯から得られる、請求項２２から３２の一項に記載の方法。
３４．ポリマーが、炭水化物系ポリマーである、請求項２２から３３の一項に記載の方法。
３５．ポリマーが、二糖ポリマーである、請求項２２から３３の一項に記載の方法。
３６．二糖ポリマーが、ヒアルロン酸である、請求項３５に記載の方法。
３７．組成物が、血液細胞または多血小板血漿をさらに含む、請求項２２から３６の一項に記載の方法。
３８．血液細胞が、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）である、請求項３７に記載の方法。
３９．ＰＢＭＣが、ヒト細胞である、請求項３８に記載の方法。
４０．ヒトＰＢＭＣが、自己由来である、請求項３９に記載の方法。
４１．ＥＣＭ成分が、コラーゲン、エラスチン、および／または硫酸化グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）を含む、請求項２２から４０の一項に記載の方法。
４２．組成物が、リボン様繊維を含む、請求項２２から４０の一項に記載の方法。
４３．繊維が、幅約１μｍ〜約４０μｍ、厚さ約０．１μｍ〜約１０μｍ、および／または長さ約７０μｍ以上〜４０００μｍ以下のものである、請求項４２に記載の方法。
４４．繊維が、幅約５μｍ〜約３０μｍのものである、請求項４３に記載の方法。
４５．繊維が、厚さ約０．５μｍ〜約５μｍのものである、請求項４３に記載の方法。
４６．繊維が、長さ約７５μｍ以上〜約８００μｍ以下のものである、請求項４３に記載の方法。
４７．哺乳動物組織が、ブタ、ウシ（ｃｏｗ）、子羊、ヤギ、ヒツジ、およびヒトからなる群から選択される哺乳動物から得られる、請求項２２から４６の一項に記載の方法。
４８．ブタが、α−Ｇａｌ（Ｇａｌα１，３−Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃ−Ｒ）エピトープのノックアウト突然変異体である、請求項４７に記載の方法。
４９．瘢痕組織形成を低減する、請求項２２から４８の一項に記載の方法。
５０．瘢痕組織形成の低減が、ヒアルロン酸（ＨＡ）で処置される創傷と比較される、請求項４９に記載の方法。
５１．治癒期創傷の脱色を低減する、請求項２２から５０の一項に記載の方法。
５２．脱色の低減が、ヒアルロン酸（ＨＡ）で処置される創傷と比較される、請求項５１に記載の方法。
５３．ケラチノサイトおよび上皮細胞の遊走を促進する、請求項３９に記載の方法。
５４．創傷における新血管形成を促進する、請求項３９に記載の方法。
５５．新血管形成が、生体材料を創傷に塗布して５〜１０日後に促進される、請求項５４に記載の方法。
５６．新血管形成が、創傷におけるＥＣＭリモデリングをもたらす、請求項５４に記載の方法。
５７．長期瘢痕の低減が、ヒアルロン酸で処置される創傷と比較して、治癒した創傷の部位で観察される、請求項３９に記載の方法。
５８．生体材料が、表皮細胞を生成し、表皮および真皮の二重層構造を回復させる、請求項２２から５７の一項に記載の方法。
５９．創傷が、生体材料を創傷に塗布して１５〜４０日以内に治癒する、請求項５８に記載の方法。
６０．創傷が、生体材料を創傷に塗布して２５日以内に治癒する、請求項５９に記載の方法。
６１．哺乳動物組織の細胞外マトリックス（ＥＣＭ）成分およびポリマーを含む組成物を調製する方法であって、哺乳動物組織を脱細胞化して細胞外マトリックス（ＥＣＭ）成分を含む粉末を調製することと、粉末を緩衝液、栄養素、増殖因子、またはポリマーを含む培地と混合することとを含み、粉末が培地を吸い上げ、それにより組成物を調製する、方法。
６２．粉末が、化学物質で組織を処置し、化学物質で処置された組織をフリーズドライし、フリーズドライされた組織をホモジナイズすることによって調製される、請求項６１に記載の方法。
６３．粉末が、繊維状である、請求項６１から６２の一項に記載の方法。
６４．培地が、血清含有、低血清、または無血清含有培地である、請求項６１から６３の一項に記載の方法。
６５．増殖因子が、組換え４−１ＢＢＬ、組換え６Ｃｋｉｎｅ、６Ｃｋｉｎｅ組換えヒトタンパク質、ＡＮＧＰＴ２（ＡＮＧ２）、ＡＮＧＰＴＬ５、アクチビンＡ、アクチビンＲ１ｂ、ＢＡＦＦ、ＢＡＭＢＩ、ＣＸＣＬ１３、ＢＤＮＦ、ＢＬＣ、ＢＭＰ２、ＢＭＰ４、ＢＭＰ５、ＢＭＰ７、ＢＭＰＲ１Ａ、ＣＣＬ１、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ２０（ＭＩＰ−３）、ＣＣＬ２１、ＣＤ４０、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＮＴ−６、ＨＢ−ＧＡＭ、ＭＫ、ＩＰ−１０、ＰＦ−４、ＭＣＰ−１、ＲＡＮＴＥＳ、ＩＬ−８、ＩＧＦ、ＦＧＦ１、ＦＧＦ−２、ＦＧＦ−３、ＦＧＦ−４、ＦＧＦ−５、ＦＧＦ−６、ＦＧＦ−７、ＦＧＦ−８、ＦＧＦ−９、ＴＧＦ−β、ＶＥＧＦ．ＰＤＧＦ−Ａ、ＰＤＧＦ−Ｂ、ＨＢ−ＥＧＦ、ＨＧＦ、ＴＮＦ−α、ＩＧＦ−Ｉ、およびこれらのいずれかの組合せからなる群から選択される、請求項６１から６４の一項に記載の方法。
６６．ＥＣＭ成分が、組換えＥＣＭ成分である、請求項１から２１の一項に記載の組成物。
６７．組換えＥＣＭ成分が、単離および／または精製ＥＣＭ成分である、請求項６６に記載の組成物。
６８．ＥＣＭ成分が、組換えＥＣＭ成分である、請求項２２から６５の一項に記載の方法。
６９．組換えＥＣＭ成分が、単離および／または精製ＥＣＭ成分である、請求項６８に記載の方法。
７０．哺乳動物組織が、脱細胞化哺乳動物組織である、請求項１から２１および６６から６７の一項に記載の組成物、または請求項２２から６５および６８から６９の一項に記載の方法。

Claims (71)

1. 哺乳動物組織の細胞外マトリックス（ＥＣＭ）成分およびポリマーを含む組成物。
2. 操作された生体材料である、請求項１に記載の組成物。
3. 前記操作された生体材料が、ゲル組成物である、請求項２に記載の組成物。
4. 顆粒球マクロファージ−コロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、インターロイキン（ＩＬ）−３、ＩＬ−４、ニューロトロフィン（ＮＴ）−６、プレイオトロフィン（ＨＢ−ＧＡＭ）、ミッドカイン（ＭＫ）、インターフェロン誘導タンパク質−１０（ＩＰ−１０）、血小板因子（ＰＦ）−４、単球走化性タンパク質−１（ＭＣＰ−１）、ＲＡＮＴＥＳ（ＣＣＬ−５、ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンド５）、ＩＬ−８、ＩＧＦ、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）−１、ＦＧＦ−２、ＦＧＦ−３、ＦＧＦ−４、ＦＧＦ−５、ＦＧＦ−６、ＦＧＦ−７、ＦＧＦ−８、ＦＧＦ−９、トランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）−β、ＶＥＧＦ、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）−Ａ、ＰＤＧＦ−Ｂ、ＨＢ−ＥＧＦ、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）−α、インスリン様増殖因子（ＩＧＦ）−Ｉ、およびこれらのいずれかの組合せからなる群から選択される増殖因子をさらに含む、請求項１から３の一項に記載の組成物。
5. 哺乳動物組織が、上皮および／または結合組織を含む、請求項１から４の一項に記載の組成物。
6. 前記哺乳動物組織が、皮膚、胎盤、および／または臍帯から得られる、請求項１から５の一項に記載の組成物。
7. 前記ポリマーが、炭水化物系ポリマーである、請求項１から６の一項に記載の組成物。
8. 前記ポリマーが、二糖ポリマーである、請求項７に記載の組成物。
9. 前記二糖ポリマーが、ヒアルロン酸である、請求項８に記載の組成物。
10. 血液細胞または多血小板血漿をさらに含む、請求項１から９の一項に記載の組成物。
11. 前記血液細胞が、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）である、請求項１０に記載の組成物。
12. 前記ＰＢＭＣが、ヒト細胞である、請求項１１に記載の組成物。
13. 前記ヒトＰＢＭＣが、自己由来である、請求項１２に記載の組成物。
14. 前記ＥＣＭ成分が、コラーゲン、エラスチン、および／または硫酸化グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）を含む、請求項１から１３の一項に記載の組成物。
15. 前記生体材料が、リボン様繊維を含む、請求項２から１４の一項に記載の組成物。
16. 前記繊維が、幅約１μｍ〜約４０μｍ、厚さ約０．１μｍ〜約１０μｍ、および／または長さ約７０μｍ以上〜４０００μｍ以下のものである、請求項１５に記載の組成物。
17. 前記繊維が、幅約５μｍ〜約３０μｍのものである、請求項１６に記載の組成物。
18. 前記繊維が、厚さ約０．５μｍ〜約５μｍのものである、請求項１６に記載の組成物。
19. 前記繊維が、長さ約７５μｍ以上〜約８００μｍ以下のものである、請求項１６に記載の組成物。
20. 前記哺乳動物組織が、ブタ、ウシ（ｃｏｗ）、子羊、ヤギ、ヒツジ、およびヒトからなる群から選択される哺乳動物から得られる、請求項１から１９の一項に記載の組成物。
21. 前記ブタが、α−Ｇａｌ（Ｇａｌα１，３−Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃ−Ｒ）エピトープのノックアウト突然変異体である、請求項２０に記載の組成物。
22. 療法における使用のための、請求項１から２１の一項に記載の組成物。
23. 対象の創傷への治療剤の送達を必要とする対象の創傷に治療剤を送達する際における使用のための、哺乳動物組織の細胞外マトリックス（ＥＣＭ）成分、ポリマー、および前記治療剤を含む組成物。
24. 対象の創傷への増殖因子の送達を必要とする対象の創傷に増殖因子を送達する際における使用のための、哺乳動物組織の細胞外マトリックス（ＥＣＭ）成分、ポリマー、および前記増殖因子を含む組成物。
25. 対象の創傷への水分付与を必要とする対象の創傷に水分付与する際における使用のための、哺乳動物組織の細胞外マトリックス（ＥＣＭ）成分およびポリマーを含む組成物。
26. 操作された生体材料である、請求項２３から２５の一項に記載の使用のための組成物。
27. 前記生体材料が、ゲル組成物である、請求項２３から２５の一項に記載の使用のための組成物。
28. 前記増殖因子が、顆粒球マクロファージ−コロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、インターロイキン（ＩＬ）−３、ＩＬ−４、ニューロトロフィン（ＮＴ）−６、プレイオトロフィン（ＨＢ−ＧＡＭ）、ミッドカイン（ＭＫ）、インターフェロン誘導タンパク質−１０（ＩＰ−１０）、血小板因子（ＰＦ）−４、単球走化性タンパク質−１（ＭＣＰ−１）、ＲＡＮＴＥＳ（ＣＣＬ−５、ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンド５）、ＩＬ−８、ＩＧＦ、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）−１、ＦＧＦ−２、ＦＧＦ−３、ＦＧＦ−４、ＦＧＦ−５、ＦＧＦ−６、ＦＧＦ−７、ＦＧＦ−８、ＦＧＦ−９、トランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）−β、ＶＥＧＦ、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）−Ａ、ＰＤＧＦ−Ｂ、ＨＢ−ＥＧＦ、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）−α、インスリン様増殖因子（ＩＧＦ）−Ｉ、およびこれらのいずれかの組合せからなる群から選択される、請求項２４に記載の使用のための組成物。
29. 前記創傷が、急性創傷または慢性創傷である、請求項２２から２８の一項に記載の使用のための組成物。
30. 前記創傷が、皮膚創傷である、請求項２２から２８の一項に記載の使用のための組成物。
31. 前記創傷が、皮膚裂傷、摩擦傷、非観血的衝撃手術創傷、皮膚剥離、火傷、皮膚切開創、皮膚裂創、皮膚挫傷、皮膚穿刺創、褥瘡性潰瘍、静脈性潰瘍、動脈性潰瘍、神経障害性／糖尿病性創傷、リンパ浮腫、または手術部位切開創である、請求項２２から２８の一項に記載の使用のための組成物。
32. 哺乳動物組織が、上皮および／または結合組織を含む、請求項２３から３１の一項に記載の使用のための組成物。
33. 前記哺乳動物組織が、皮膚、胎盤、および／または臍帯から得られる、請求項２３から３２の一項に記載の使用のための組成物。
34. 前記ポリマーが、炭水化物系ポリマーである、請求項２３から３３の一項に記載の使用のための組成物。
35. 前記ポリマーが、二糖ポリマーである、請求項２３から３３の一項に記載の使用のための組成物。
36. 前記二糖ポリマーが、ヒアルロン酸である、請求項３５に記載の使用のための組成物。
37. 血液細胞または多血小板血漿をさらに含む、請求項２２から３６の一項に記載の使用のための組成物。
38. 前記血液細胞が、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）である、請求項３７に記載の使用のための組成物。
39. 前記ＰＢＭＣが、ヒト細胞である、請求項３８に記載の使用のための組成物。
40. 前記ヒトＰＢＭＣが、自己由来である、請求項３９に記載の使用のための組成物。
41. 前記ＥＣＭ成分が、コラーゲン、エラスチン、および／または硫酸化グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）を含む、請求項２３から４０の一項に記載の使用のための組成物。
42. リボン様繊維を含む、請求項２３から４０の一項に記載の使用のための組成物。
43. 前記繊維が、幅約１μｍ〜約４０μｍ、厚さ約０．１μｍ〜約１０μｍ、および／または長さ約７０μｍ以上〜４０００μｍ以下のものである、請求項４２に記載の使用のための組成物。
44. 前記繊維が、幅約５μｍ〜約３０μｍのものである、請求項４３に記載の使用のための組成物。
45. 前記繊維が、厚さ約０．５μｍ〜約５μｍのものである、請求項４３に記載の使用のための組成物。
46. 前記繊維が、長さ約７５μｍ以上〜約８００μｍ以下のものである、請求項４３に記載の使用のための組成物。
47. 前記哺乳動物組織が、ブタ、ウシ（ｃｏｗ）、子羊、ヤギ、ヒツジ、およびヒトからなる群から選択される哺乳動物から得られる、請求項２３から４６の一項に記載の使用のための組成物。
48. 前記ブタが、α−Ｇａｌ（Ｇａｌα１，３−Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃ−Ｒ）エピトープのノックアウト突然変異体である、請求項４７に記載の使用のための組成物。
49. 方法が、瘢痕組織形成を低減する、請求項２２から４８の一項に記載の使用のための組成物。
50. 瘢痕組織形成の低減が、ヒアルロン酸（ＨＡ）で処置される創傷と比較される、請求項４９に記載の使用のための組成物。
51. 前記方法が、治癒期創傷の脱色を低減する、請求項２２から５０の一項に記載の使用のための組成物。
52. 脱色の低減が、ヒアルロン酸（ＨＡ）で処置される創傷と比較される、請求項５１に記載の使用のための組成物。
53. 方法が、ケラチノサイトおよび上皮細胞の遊走を促進する、請求項３９に記載の使用のための組成物。
54. 方法が、前記創傷における血管新生または新血管形成を促進する、請求項３９に記載の使用のための組成物。
55. 前記血管新生または新血管形成が、前記生体材料を前記創傷に塗布して５〜１０日後に促進される、請求項５４に記載の使用のための組成物。
56. 前記血管新生または新血管形成が、前記創傷におけるＥＣＭリモデリングをもたらす、請求項５４に記載の使用のための組成物。
57. 長期瘢痕の低減が、ヒアルロン酸で処置される創傷と比較して、治癒した創傷の部位で観察される、請求項３９に記載の使用のための組成物。
58. 前記生体材料が、表皮細胞を生成し、表皮および真皮の二重層構造を回復させる、請求項２２から５７の一項に記載の使用のための組成物。
59. 前記創傷が、前記生体材料を前記創傷に塗布して１５〜４０日以内に治癒する、請求項５８に記載の使用のための組成物。
60. 前記創傷が、前記生体材料を前記創傷に塗布して２５日以内に治癒する、請求項５９に記載の使用のための組成物。
61. 哺乳動物組織の細胞外マトリックス（ＥＣＭ）成分およびポリマーを含む組成物を調製する方法であって、前記哺乳動物組織を脱細胞化して細胞外マトリックス（ＥＣＭ）成分を含む粉末を調製することと、前記粉末を緩衝液、栄養素、増殖因子、またはポリマーを含む培地と混合することとを含み、前記粉末が前記培地を吸い上げ、それにより前記組成物を調製する、方法。
62. 前記粉末が、化学物質で前記組織を処置し、前記化学物質で処置された組織をフリーズドライし、フリーズドライされた組織をホモジナイズすることによって調製される、請求項６１に記載の方法。
63. 前記粉末が、繊維状である、請求項６１から６２の一項に記載の方法。
64. 前記培地が、血清含有、低血清、または無血清含有培地である、請求項６１から６３の一項に記載の方法。
65. 前記増殖因子が、組換え４−１ＢＢＬ、組換え６Ｃｋｉｎｅ、６Ｃｋｉｎｅ組換えヒトタンパク質、ＡＮＧＰＴ２（ＡＮＧ２）、ＡＮＧＰＴＬ５、アクチビンＡ、アクチビンＲ１ｂ、ＢＡＦＦ、ＢＡＭＢＩ、ＣＸＣＬ１３、ＢＤＮＦ、ＢＬＣ、ＢＭＰ２、ＢＭＰ４、ＢＭＰ５、ＢＭＰ７、ＢＭＰＲ１Ａ、ＣＣＬ１、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ２０（ＭＩＰ−３）、ＣＣＬ２１、ＣＤ４０、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＮＴ−６、ＨＢ−ＧＡＭ、ＭＫ、ＩＰ−１０、ＰＦ−４、ＭＣＰ−１、ＲＡＮＴＥＳ、ＩＬ−８、ＩＧＦ、ＦＧＦ１、ＦＧＦ−２、ＦＧＦ−３、ＦＧＦ−４、ＦＧＦ−５、ＦＧＦ−６、ＦＧＦ−７、ＦＧＦ−８、ＦＧＦ−９、ＴＧＦ−β、ＶＥＧＦ．ＰＤＧＦ−Ａ、ＰＤＧＦ−Ｂ、ＨＢ−ＥＧＦ、ＨＧＦ、ＴＮＦ−α、ＩＧＦ−Ｉ、およびこれらのいずれかの組合せからなる群から選択される、請求項６１から６４の一項に記載の方法。
66. 前記ＥＣＭ成分が、組換えＥＣＭ成分である、請求項１から２２の一項に記載の組成物。
67. 前記組換えＥＣＭ成分が、単離および／または精製ＥＣＭ成分である、請求項６６に記載の組成物。
68. 前記ＥＣＭ成分が、組換えＥＣＭ成分である、請求項２３から６０の一項に記載の使用のための組成物。
69. 前記組換えＥＣＭ成分が、単離および／または精製ＥＣＭ成分である、請求項６８に記載の使用のための組成物。
70. 前記哺乳動物組織が、脱細胞化哺乳動物組織である、請求項１から６０および６６から６９の一項に記載の組成物、または請求項６１から６５の一項に記載の方法。
71. 創傷の治癒を必要とする対象における創傷を治癒させる際における使用のためである、請求項２２に記載の組成物。