KR20180083937A - 항 인간 ip-10 항체 및 이의 용도 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 고친화성으로 IP-10에 결합하고, IP-10이 그의 수용체에 결합하는 것을 억제하며, IP-10 유도 칼슘 플럭스를 억제하고 IP-10 유도 세포 이동을 억제하는 단리된 단클론 항체, 특히 인간 항체를 제공한다. 본 발명의 항체를 코딩하는 핵산 분자, 발현 벡터, 숙주 세포 및 본 발명의 항체를 발현하는 방법이 또한 제공된다. 본 발명의 항체를 포함하는 면역접합체, 이중특이적 분자 및 약제학적 조성물이 또한 제공된다. 본 발명은 또한 다양한 염증성 및 자가면역 질환을 치료하는 방법을 포함하는, 본 발명의 항체를 사용하여 IP-10 활성을 억제하는 방법을 제공한다.

Description

항 인간 IP-10 항체 및 이의 용도
관련 출원에 대한 상호 참조
본원은 2015년 11월 30일에 출원된 미국 가출원 제62/261,210호 및 2016년 8월 12일에 출원된 제62/374,622호에 대한 우선권을 주장한다. 본 명세서 전반에 인용된 특허, 특허 출원, 및 참고문헌의 내용은 그 전체가 참조로 본원에 포함되어 있다.
기술분야
본 발명은 항 인간 IP-10 항체 및 이의 용도에 관한 것이다.
인터페론 감마 유도성 단백질 10(IP-10)(CXCL10으로도 알려짐)은 인터페론 감마(IFN-감마)로 처리된 세포에서 IP-10 유전자의 발현에 기초하여 최초로 확인된 10kDa 케모카인이다(Luster, A.D. et al. (1985) Nature 315:672-676). IP-10은 혈소판 인자 4 및 베타-트롬보글로불린과 같은 화학 주성(chemotactic activity)을 갖는 단백질에 상동성을 나타내고 결합 조직 활성화 펩타이드 III과 같은 유사분열촉진 활성을 갖는 단백질에 상동성을 나타낸다(Luster, A.D. et al. (1987) Proc . Natl. Acad . Sci . USA 84:2868-2871). IP-10은 IFN-감마에 대한 반응으로 내피 세포, 단핵구, 섬유아세포, 및 각질형성세포를 포함하는 다양한 세포에 의해 분비된다(Luster, A.D. and Ravetch, J.V. (1987) J. Exp . Med . 166:1084-1097). IP-10은 또한 인간의 피부에서 지연형 과민성(DTH) 반응에서 진피 대식세포 및 내피 세포에 존재하는 것으로 나타났다(Kaplan, G. et al. (1987) J. Exp . Med . 166:1098-1108). IP-10은 원래 IFN-감마에 의해 유도되는 것에 기초하여 확인되었지만, 또한, 예를 들어 수지상 세포에서 IFN-알파에 의해 유도될 수 있다(Padovan, E. et al. (2002) J. Leukoc . Biol. 71:669-676). IP-10 발현은 또한 IFN-감마, 바이러스 및 지질다당류와 같은 자극에 의해 성상세포 및 미세아교세포와 같은 중추신경계 세포에서 유도될 수 있다(Vanguri, R. and Farber, J.M. (1994) J. Immunol . 152:1411-1418; Ren, L.Q. et al. (1998) Brain Res. Mol . Brain Res. 59:256-263). IP-10의 면역생물학은 문헌[Neville, L.F et al. (1997) Cytokine Growth Factor Rev. 8:207-219]에서 검토된다.
IP-10에 대한 수용체는 7개의 막관통 수용체인 CXCR3으로서 확인되었다(Loetscher, M. et al. (1996) J. Exp . Med . 184:963-969). CXCR3은 활성화된 T 림프구 상에서 발현되나 휴지기 T 림프구, 또는 B 림프구, 단핵구 또는 과립구 상에서는 발현되지 않는 것으로 나타났다(Loetscher, M. et al., 상기). CXCR3 발현은 TGF-베타 1 자극에 의해 NK 세포 상에서 상향조절되는 것으로 나타났다(Inngjerdingen, M. et al. (2001) Blood 97:367-375). CXCR3에 대한 2개의 다른 리간드가 또한 확인되었다: MIG(Loetscher, M. et al., 상기) 및 ITAC(Cole, K.E. et al. (1998) J. Exp . Med. 187:2009-2021).
IP-10이 CXCR3에 결합하는 것은 활성화된 T 세포에서 칼슘 이동 및 화학주성을 매개하는 것으로 나타났다(Loetscher, M. et al., 상기). 화학주성 및 세포내 칼슘 이동은 또한 활성화된 NK 세포에서 IP-10이 CXCR3에 결합함으로써 유도된다(Maghazachi, A.A. et al. (1997) FASEB J. 11:765-774). 흉선 내에서, IP-10은 TCRαβ+ CD8+ T 세포, TCRαβ+ T 세포 및 NK 유형 세포에 대한 화학주성인자(chemoattractant)인 것으로 나타났다(Romagnani, P. et al. (2001) Blood 97:601-607).
IP-10 또는 그의 수용체 CXCR3은 다발성 경화증(예컨대, Sorensen, T.L. et al. (1999) J. Clin . Invest. 103:807-815 참고), 류마티스성 관절염(예컨대, Patel, D.D. et al. (2001) Clin . Immunol . 98:39-45 참고), 궤양성 대장염(예컨대, Uguccioni, M. et al. (1999) Am. J. Pathol. 155:331-336 참고), 간염(예컨대, Narumi, S. et al. (1997) J. Immunol . 158:5536-5544 참고), 척수 손상(예컨대, McTigue, D.M. et al. (1998) J. Neurosci . Res. 53:368-376; Gonzalez et al. 2003. Exp. Neurol. 184:456-463 참고), 전신 홍반성 루푸스(예컨대, Narumi, S. et al. (2000) Cytokine 12:1561-1565 참고), 이식 거부반응(예컨대, Zhang, Z. et al. (2002) J. Immunol . 168:3205-3212 참고), 쇼그렌 증후군(예컨대, Ogawa, N. et al. (2002) Arthritis Rheum. 46:2730-2741 참고)을 포함하는 다양한 상이한 염증 병태 및 자가면역 병태에서 확인되었다.
이러한 병태를 치료하기 위한 IP-10에 결합하는 항체는, 예컨대, WO제2005/058815호에 기재된 바와 같이 당업계에 알려져 있다. 그러나, IP-10의 활성을 억제하는 개선된 치료제(예컨대, 항체), 특히 인간에게 사용하기에 적합한 제제가 요구된다.
본 발명은 인터페론 감마 유도성 단백질 10(IP-10)(CXCL10으로도 알려짐), 예컨대, 인간 IP-10에 결합하고, 이전에 기술된 항-IP-10 항체와 비교하여 최적화된 물리적 안정성 및 개선된 기능적 특징을 갖는 단리된 단클론 항체(예컨대, 인간 단클론 항체)를 제공한다. 특히, 본 발명은 변형되지 않은 항체와 비교하여 유의하게 개선된 안정성 및 활성을 나타내는, 항체 IP10.1의 변형된 형태(WO 제2005/058815호, 항체 6A5로도 지칭됨)에 관한 것이다. 구체적으로, 항체 IP10.의 중쇄 CDR 도메인을 변경함으로써, 변형된 항체는 더 높은 열 안정성 및 열 가역성(예컨대, 70.2℃에서 제1 멜팅 온도(64℃에서 IP10.1에 대한 TM1) 및 73℃에서 41.2%의 열 가역성을 갖는 더 높은 열 안정성 및 열 가역성)을 나타낸 것으로 나타났다. 동시에, 변형된 항체는 인간 IP-10에 대해 결합 친화성의 적어도 50배 개선뿐만 아니라, 예컨대, 그의 표적 세포(예컨대 CXCR3-발현 세포(CXCR3/300.19) 및 장 상피 세포(KM12SM))에 대한 외인성 IP-10 결합의 차단의 적어도 5배 증가, IFNα/γ로 자극된 hPBMC에 의한 내인성 IP-10 매개된 IL-6 분비의 억제의 적어도 6배 증가, IFNγ/LPS로 자극된 hPBMC에 의한 내인성 IP-10 매개된 IL-12p40 분비의 억제의 적어도 4배 더 큰 효력, 및 약동학/약력학(PK/PD) 모델링의 측면에서 적어도 150배 더 큰 효력을 포함하는, 변형되지 않은 항체와 비교하여 다른 기능적 특징의 개선을 나타내었음이 예기치 않게 관찰되었다. 변형되지 않은 대응물과 비교하여 본원에 기재된 변형된 항체에 의해 나타난 다른 개선된 기능적 특징은 하기를 포함한다:
(a) hPBMC에 의한 내인성 IP-10 매개된 IL-12p40 분비의 억제에서의 효력 증가(예컨대, 적어도 4배 우수);
(b) 혈액(대장염 모델)에서 IL-6 및 IL-12p40의 억제 증가;
(c) 예컨대, 최대 10일까지, 유리(free) IP-10의 억제 증가;
(d) 마우스 비장에서 인간 CXCR3+ NK 세포 빈도 감소
(e) CXCR3/300.19 세포에서 마우스 IP-10-유도 칼슘 플럭스(flux) 억제에서 효력 증가(예컨대, 적어도 8배 우수)
(f) 사이토카인의 순환 수준의 감소 증가; 및/또는
(g) 체내 혈청 제거율(CLT) 증가(예컨대, 적어도 2배 우수).
또한, 변형된 항체(항체 IP10.1과 같이)는 인간 MIG, 인간 ITAC 또는 마우스 IP-10 중 어느 하나와 상당한 교차 반응성이 결여되어 있다. 변형된 항체의 안정성 및 결합/생물학적 활성의 조합된 증가는, 특히 항체 기능에 대한 CDR 영역의 중요도에 비추어 볼 때 놀라웠다.
따라서, 본 발명의 항체는 항체 IP10.1과 비교하여 개선된 물리적 특성(즉, 열 및 화학적 안정성)뿐만 아니라 개선된 기능적 특징(예컨대, 인간 IP-10에 대한 결합 친화성 및 효력)을 나타낸다.
특정 구현예에서, 단리된 단클론 항체(예컨대, 인간 항체), 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 영역은 서열번호: 16, 28, 40, 52, 64, 76, 88, 100, 112, 124, 136, 또는 148의 중쇄 가변 영역으로부터 유래되며, 예컨대 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열은 서열번호: 16으로부터 유래된다(예컨대, 각각: 13, 14, 및 15에 제시된 바와 같음).
또 다른 구현예에서, 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 영역은 서열번호: 22, 34, 46, 58, 70, 82, 94, 106, 118, 130, 142, 또는 154의 경쇄 가변 영역으로부터 유래되며, 예컨대 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열은 서열번호: 22로부터 유래된다(예컨대, 각각 서열번호: 19, 20, 및 21에 제시된 바와 같음).
또 다른 구현예에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호: 16, 28, 40, 52, 64, 76, 88, 100, 112, 124, 136, 또는 148의 아미노산 서열을 포함하고/하거나 경쇄 가변 영역은 서열번호: 22, 34, 46, 58, 70, 82, 94, 106, 118, 130, 142, 또는 154의 아미노산 서열(예컨대, 서열번호: 16 및/또는 22의 아미노산 서열), 또는 서열번호: 16, 28, 40, 52, 64, 76, 88, 100, 112, 124, 136, 또는 148, 및/또는 서열번호: 22, 34, 46, 58, 70, 82, 94, 106, 118, 130, 142, 또는 154에 대해 적어도 95% 아미노산 동일성을 갖는 서열(예컨대, 각각 서열번호: 16 및/또는 22에 대해 적어도 95% 아미노산 동일성을 갖는 서열)을 포함한다. 대안적으로, 중쇄 가변 영역은 서열번호: 166, 167, 또는 168에 제시된 바와 같은 공통 아미노산 서열을 포함한다.
또 다른 구현예에서, 중쇄 및 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 영역은 각각 하기 아미노산 서열을 포함한다:
(a) 서열번호: 13, 14, 및 15 및 서열번호: 19, 20, 및 21;
(b) 서열번호: 25, 26, 및 27 및 서열번호: 31, 32, 및 33;
(c) 서열번호: 37, 38, 및 39 및 서열번호: 43, 44, 및 45;
(d) 서열번호: 49, 50, 및 51 및 서열번호: 55, 56, 및 57;
(e) 서열번호: 61, 62, 및 63 및 서열번호: 67, 68, 및 69;
(f) 서열번호: 73, 74, 및 75 및 서열번호: 79, 80, 및 81;
(g) 서열번호: 85, 86, 및 87 및 서열번호: 91, 92, 및 93;
(h) 서열번호: 97, 98, 및 99 및 서열번호: 103, 104, 및 105;
(i) 서열번호: 109, 110, 및 111 및 서열번호: 115, 116, 및 117;
(j) 서열번호: 121, 122, 및 123 및 서열번호: 127, 128, 및 129;
(k) 서열번호: 133, 134, 및 135 및 서열번호: 139, 140, 및 141; 또는
(l) 서열번호: 145, 146, 및 147 및 서열번호: 152, 152, 및 153.
본원에 기재된 항체(또는 이의 항원 결합 부분)는 활성화된 T 세포 또는 NK 세포에 의해 매개된 염증성 또는 자가면역 반응의 억제, 원치않는 IP-10 활성을 수반하는 바이러스 또는 박테리아 감염의 억제, 뿐만 아니라 IP-10 단백질의 검출을 포함하는, 다양한 분야에 사용될 수 있다.
특정 구현예에서, 인간 IP-10은 서열번호: 157(Genbank 등록번호 NP_001556) 에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드를 포함하고; CXCR3은 서열번호: 158(Genbank 등록번호 NP_001495)에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드를 포함하며; 레서스(rhesus) 원숭이 IP-10은 서열번호: 159(Genbank 등록번호 AAK95955)에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드를 포함하고; 마우스 IP-10은 서열번호: 160(Genbank 등록번호 NP_067249)에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드를 포함하며; 인간 MIG는 서열번호: 161(Genbank 등록번호 NP_002407)에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드를 포함하고/하거나; 인간 ITAC는 서열번호: 162(Genbank 등록번호 NP_005400)에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드를 포함한다.
또 다른 구현예에서, 항체, 또는 이의 항원 결합 부분은 하기 특성 중 적어도 하나를 추가로 나타낸다:
(a) IP-10의 CXCR3에의 결합을 억제하는 특성;
(b) IP-10 유도 칼슘 플럭스를 억제하는 특성;
(c) IP-10 유도 세포 이동을 억제하는 특성;
(d) 레서스 원숭이 IP-10과 교차 반응하는 특성;
(e) 마우스 IP-10과 교차 반응하지 않는 특성;
(f) 인간 MIG와 교차 반응하지 않는 특성; 및/또는
(g) 인간 ITAC와 교차 반응하지 않는 특성.
예를 들어, 항체, 또는 이의 항원 결합 부분은 특성 (a), (b), (c), (d), (e), (f), 및 (g) 중 적어도 2개의 특성을 나타낸다. 대안적으로, 항체, 또는 이의 항원 결합 부분은 특성 (a), (b), (c), (d), (e), (f), 및 (g) 중 적어도 3개, 또는 특성 (a), (b), (c), (d), (e), (f), 및 (g) 중 적어도 4개, 5개, 6개, 또는 7개 특성 모두를 나타낸다.
또 다른 구현예에서, 항체, 또는 이의 항원 결합 부분은 1 x 10-9 M 이하의 KD, 예컨대, 1 x 10-10 M 이하의 KD, 또는 1 x 10-11 M 이하의 KD로 인간 IP-10에 결합한다.
또 다른 구현예에서, 항체, 또는 이의 항원 결합 부분은 인간 IP-10의 SISNQP(서열번호: 163), VNPRSLEKL(서열번호: 164), 및/또는 IIPASQFCPRVEIIA(서열번호: 165) 내의 아미노산 잔기에 결합한다.
본 발명의 항체는 전장 항체, 예를 들어, 선택적으로 중쇄간 디설파이드 다리 이종성이 감소되거나 폐지되도록 중쇄 불변 영역 힌지 영역 내에(Angal et al. (1993) Mol . Immunol. 30:105-108에 기재된 바와 같이 위치 241에 상응하는 위치에서) 세린에서 프롤린으로의 돌연변이를 갖는, IgG1, IgG2 또는 IgG4 아이소타입, 예컨대, IgG1 아이소타입의 전장 항체일 수 있다. 일 양태에서, 불변 영역 아이소타입은 아미노산 잔기 228에 돌연변이, 예컨대, S228P를 갖는 IgG4이다. 대안적으로, 항체는 Fab, Fab' 또는 Fab'2 단편, 또는 단쇄 항체와 같은 항체 단편(예컨대 결합 단편)일 수 있다.
또 다른 양태에서, 항체(또는 이의 항원 결합 부분)는 항체에 접합된 치료제, 예컨대, 세포독소 또는 방사성 동위원소를 포함하는 면역접합체의 부분이다. 또 다른 양태에서, 항체는 상기 항체, 또는 이의 항원 결합 부분과 상이한 결합 특이성을 갖는 제2 기능적 모이어티(예컨대, 제2 항체)를 포함하는 이중특이적 분자의 부분이다.
선택적으로 약제학적으로 허용가능한 담체에서 제제화된 본 발명의 항체, 또는 이의 항원 결합 부분, 면역접합체 또는 이중특이적 분자를 포함하는 조성물이 또한 제공된다.
항체, 또는 이의 항원 결합 부분(예컨대, 가변 영역 및/또는 CDR)을 코딩하는 핵산 분자, 뿐만 아니라 이러한 핵산을 포함하는 발현 벡터 및 이러한 발현 벡터를 포함하는 숙주 세포가 또한 제공된다. 이러한 발현 벡터를 포함하는 숙주 세포를 사용하여 항-IP-10 항체를 제조하는 방법이 또한 제공되며, 이는 (i) 숙주 세포에서 항체를 발현시키는 단계 및 (ii) 숙주 세포로부터 항체를 단리시키는 단계를 포함할 수 있다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 염증성 또는 자가면역 반응이 억제되도록 T 세포 또는 NK 세포를 본 발명의 항체, 또는 이의 항원 결합 부분과 접촉시키는 단계를 포함하는 활성화된 T 세포 또는 NK 세포에 의해 매개된 염증성 또는 자가면역 반응을 억제하는 방법을 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 대상에서 염증성 또는 자가면역 질환이 치료되도록, 본 발명의 항체, 또는 이의 항원 결합 부분을 대상에게 투여하는 단계를 포함하는 치료를 필요로 하는 대상에서 염증성 또는 자가면역 질환을 치료하는 방법을 제공한다. 질환은, 예를 들어, 다발성 경화증, 류마티스성 관절염, 염증성 장 질환(예컨대, 궤양성 대장염, 크론병), 전신 홍반성 루푸스, I형 당뇨병, 염증성 피부 장애(예컨대, 건선, 편평태선), 자가면역 갑상선 질환(예컨대, 그레이브스 병, 하시모토 갑상선염), 쇼그렌 증후군, 폐 염증(예컨대, 천식, 만성 폐쇄성 폐 질환, 폐 사르코이드증, 림프구성 폐포염), 이식 거부반응, 척수 손상, 뇌 손상(예컨대, 뇌졸중), 신경퇴행성 질환(예컨대, 알츠하이머병, 파킨슨병), 치은염, 유전자 요법 유도 염증, 혈관신생 질환, 염증성 신장 질환(예컨대, IgA 신장증, 막증식성 사구체신염, 급속 진행성 사구체신염) 및 아테롬성 동맥경화증일 수 있다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 대상에서 바이러스 또는 박테리아 감염이 치료되도록 본 발명의 항체, 또는 이의 항원 결합 부분을 대상에게 투여하는 단계를 포함하는 치료를 필요로 하는 대상에서 원치않는 IP-10 활성을 수반하는 바이러스 또는 박테리아 감염을 치료하는 방법을 제공한다. 예를 들어, 항체는 바이러스 수막염, 바이러스 뇌염 또는 박테리아 수막염을 치료하는데 사용될 수 있다. 본 발명의 방법에 의해 치료될 바이러스 감염은, 예를 들어, 인간 면역결핍 바이러스(HIV), 간염 C 바이러스(HCV), 단순 포진 바이러스 I형(HSV-1) 또는 중증 급성 호흡기 증후군(SARS) 바이러스에 의해 매개될 수 있다.
일 구현예에서, 방법은 항-IP-10 항체(또는 이의 항원 결합 부분)의 30-450 mg의 단일 용량, 예를 들어, 30 mg, 40 mg, 50 mg, 60 mg, 70 mg, 80 mg, 90 mg, 100 mg, 110 mg, 120 mg, 130 mg, 140 mg, 150 mg, 160 mg, 170 mg, 180 mg, 190 mg, 200 mg, 210 mg, 220 mg, 230 mg, 240 mg, 250 mg, 260 mg, 270 mg, 280 mg, 290 mg, 300 mg, 310 mg, 320 mg, 330 mg, 340 mg, 350 mg, 360 mg, 370 mg, 380 mg, 390 mg, 400 mg, 450mg, 또는 a 용량 of 35 mg, 45 mg, 55 mg, 65 mg, 75 mg, 85 mg, 95 mg, 105 mg, 115 mg, 125 mg, 135 mg, 145 mg, 155 mg, 165 mg, 175 mg, 185 mg, 195 mg, 205 mg, 215 mg, 225 mg, 235 mg, 245 mg, 255 mg, 265 mg, 275 mg, 285 mg, 295 mg, 305 mg, 315 mg, 325 mg, 335 mg, 345 mg, 355 mg, 355 mg, 375 mg, 385 mg, 395 mg, 405 mg, 또는 445mg의 용량의 항체의 단일 용량의 투여를 포함한다.
또 다른 구현예에서, 항체는 매주 또는 2주마다 투여된다. 또 다른 구현예에서, 항체는 약 12주의 기간 동안, 예컨대, 1, 15, 29, 43, 57, 및 71일째에 투여된다.
항체는 임의의 적합한 수단에 의해, 예를 들어, 정맥내 투여 또는 피하 투여에 의해 대상에게 투여될 수 있다.
일 구현예에서, 방법은 약 12주의 기간 동안 2주마다 항체, 또는 이의 항원 결합 부분의 약 40mg의 단일 용량의 정맥내 투여를 포함하는 궤양성 대장염을 치료하기 위한 것이다.
또 다른 구현예에서, 항-IP-10 항체는 1차(최전선) 치료(예컨대, 초기 또는 첫 번째 치료)로서 투여된다. 또 다른 구현예에서, 항-IP-10 항체는 2차 치료(예컨대, 재발 후 및/또는 첫 번째 치료가 실패한 경우를 포함하는, 동일하거나 상이한 치료제를 이용한 초기 치료 후)로서 투여된다.
본원에 제공된 치료 방법의 효능은 임의의 적합한 수단을 사용하여 평가될 수 있다. 일 구현예에서, 치료는 적어도 하나의 치료 효과, 예컨대, 완전한 반응, 부분적인 반응, 및 안정한 질환을 낳는다.
본원에 기재된 방법에서 사용하기 위해 조정된 치료적 유효량으로, 항-IP-10 항체, 예컨대 IP10.44(BMS-986184), 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 함유하는 약제학적 조성물을 포함하는 키트가 또한 제공된다. 일 구현예에서, 키트는 하기를 포함한다:
(a) 서열번호: 16, 28, 40, 52, 64, 76, 88, 100, 112, 124, 136, 또는 148에 제시된 서열을 갖는 중쇄 가변 영역의 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인, 예컨대 서열번호: 16으로부터의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열(예컨대, 각각 서열번호: 13, 14, 및 15에 제시된 바와 같음), 및 서열번호: 22, 34, 46, 58, 70, 82, 94, 106, 118, 130, 142, 또는 154에 제시된 서열을 갖는 경쇄 가변 영역의 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인, 예컨대 서열번호: 22로부터의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열(예컨대, 각각 서열번호: 19, 20, 및 21에 제시된 바와 같음)을 포함하는 항-IP-10 항체의 용량; 및
(b) 본 발명의 방법에서 항-IP-10 항체를 사용하기 위한 설명서.
또 다른 구현예에서, 이러한 방법은 본 발명의 조성물, 이중특이적, 또는 면역접합체를 투여하는 단계를 포함한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 전술한 방법에서의 용도를 위한, 또는 전술한 방법에서의 용도를 위한 약제의 제조를 위한(예컨대, 치료를 위한) 본 발명의 항-IP-10 항체 및 조성물을 제공한다.
본 개시내용의 다른 특징 및 이점은 하기의 상세한 설명 및 예로부터 명백할 것이며, 이는 제한하는 것으로 해석되지 않아야 한다. 본원 전반에 인용된 모든 참고문헌, Genbank 항목, 특허 및 공개된 특허 출원의 내용은 본원에 참고로 명확히 포함되어 있다.
도 1a는 IP10.1(6A5) 인간 단클론 항체의 중쇄 가변 영역의 뉴클레오타이드 서열(서열번호: 5) 및 아미노산 서열(서열번호: 4)을 나타낸다. CDR1(서열번호: 1), CDR2(서열번호: 2) 및 CDR3(서열번호: 3) 영역이 묘사되어 있으며, V, D 및 J 생식계열 유래가 표시되어 있다.
도 1b는 1P10.1 인간 단클론 항체의 경쇄 가변 영역의 뉴클레오타이드 서열(서열번호: 11) 및 아미노산 서열(서열번호: 10)을 나타낸다. CDR1(서열번호: 7), CDR2(서열번호: 8) 및 CDR3(서열번호: 9) 영역이 묘사되어 있으며, V 및 J 생식계열 유래가 표시되어 있다.
도 2a는 IP10.44 인간 단클론 항체의 중쇄 가변 영역의 뉴클레오타이드 서열(서열번호: 17) 및 아미노산 서열(서열번호: 16)을 나타낸다. CDR1(서열번호: 13), CDR2(서열번호: 14) 및 CDR3(서열번호: 15) 영역이 묘사되어 있으며, V, D 및 J 생식계열 유래가 표시되어 있다.
도 2b는 IP10.44 인간 단클론 항체의 경쇄 가변 영역의 뉴클레오타이드 서열(서열번호: 23) 및 아미노산 서열(서열번호: 22)을 나타낸다. CDR1(서열번호: 19), CDR2(서열번호: 20) 및 CDR3(서열번호: 21) 영역이 묘사되어 있으며, V 및 J 생식계열 유래가 표시되어 있다.
도 3a는 IP10.45 인간 단클론 항체의 중쇄 가변 영역의 뉴클레오타이드 서열(서열번호: 29) 및 아미노산 서열(서열번호: 28)을 나타낸다. CDR1(서열번호: 25), CDR2(서열번호: 26) 및 CDR3(서열번호: 27) 영역이 묘사되어 있으며, V, D 및 J 생식계열 유래가 표시되어 있다.
도 3b는 IP10.45 인간 단클론 항체의 경쇄 가변 영역의 뉴클레오타이드 서열(서열번호: 35) 및 아미노산 서열(서열번호: 34)을 나타낸다. CDR1(서열번호: 31), CDR2(서열번호: 32) 및 CDR3(서열번호: 33) 영역이 묘사되어 있으며, V 및 J 생식계열 유래가 표시되어 있다
도 4a는 IP10.46 인간 단클론 항체의 중쇄 가변 영역의 뉴클레오타이드 서열(서열번호: 41) 및 아미노산 서열(서열번호: 40)을 나타낸다. CDR1(서열번호: 37), CDR2(서열번호: 38) 및 CDR3(서열번호: 39) 영역이 묘사되어 있으며, V, D 및 J 생식계열 유래가 표시되어 있다.
도 4b는 IP10.46 인간 단클론 항체의 경쇄 가변 영역의 뉴클레오타이드 서열(서열번호: 47) 및 아미노산 서열(서열번호: 46)을 나타낸다. CDR1(서열번호: 43), CDR2(서열번호: 44) 및 CDR3(서열번호: 45) 영역이 묘사되어 있으며, V 및 J 생식계열 유래가 표시되어 있다.
도 5a는 IP10.52 인간 단클론 항체의 중쇄 가변 영역의 뉴클레오타이드 서열(서열번호: 53) 및 아미노산 서열(서열번호: 52)을 나타낸다. CDR1(서열번호: 49), CDR2(서열번호: 50) 및 CDR3(서열번호: 51) 영역이 묘사되어 있으며, V, D 및 J 생식계열 유래가 표시되어 있다.
도 5b는 IP10.52 인간 단클론 항체의 경쇄 가변 영역의 뉴클레오타이드 서열(서열번호: 59) 및 아미노산 서열(서열번호: 58)을 나타낸다. CDR1(서열번호: 55), CDR2(서열번호: 56) 및 CDR3(서열번호: 57) 영역이 묘사되어 있으며, V 및 J 생식계열 유래가 표시되어 있다.
도 6a는 IP10.53 인간 단클론 항체의 중쇄 가변 영역의 뉴클레오타이드 서열(서열번호: 65) 및 아미노산 서열(서열번호: 64)을 나타낸다. The CDR1(서열번호: 61), CDR2(서열번호: 62) 및 CDR3(서열번호: 63) 영역이 묘사되어 있으며, V, D 및 J 생식계열 유래가 표시되어 있다.
도 6b는 IP10.53 인간 단클론 항체의 경쇄 가변 영역의 뉴클레오타이드 서열(서열번호: 71) 및 아미노산 서열(서열번호: 70)을 나타낸다. CDR1(서열번호: 67), CDR2(서열번호: 68) 및 CDR3(서열번호: 69) 영역이 묘사되어 있으며, V 및 J 생식계열 유래가 표시되어 있다.
도 7a는 IP10.43 인간 단클론 항체의 중쇄 가변 영역의 뉴클레오타이드 서열(서열번호: 77) 및 아미노산 서열(서열번호: 76)을 나타낸다. CDR1(서열번호: 73), CDR2(서열번호: 74) 및 CDR3(서열번호: 75) 영역이 묘사되어 있으며, V, D 및 J 생식계열 유래가 표시되어 있다.
도 7b는 IP10.43 인간 단클론 항체의 경쇄 가변 영역의 뉴클레오타이드 서열(서열번호: 83) 및 아미노산 서열(서열번호: 82)을 나타낸다. CDR1(서열번호: 79), CDR2(서열번호: 80) 및 CDR3(서열번호: 81) 영역이 묘사되어 있으며, V 및 J 생식계열 유래가 표시되어 있다.
도 8a는 IP10.47 인간 단클론 항체의 중쇄 가변 영역의 뉴클레오타이드 서열(서열번호: 89) 및 아미노산 서열(서열번호: 88)을 나타낸다. CDR1(서열번호: 85), CDR2(서열번호: 86) 및 CDR3(서열번호: 87) 영역이 묘사되어 있으며, V, D 및 J 생식계열 유래가 표시되어 있다.
도 8b는 IP10.47 인간 단클론 항체의 경쇄 가변 영역의 뉴클레오타이드 서열(서열번호: 95) 및 아미노산 서열(서열번호: 94)을 나타낸다. CDR1(서열번호: 91), CDR2(서열번호: 92) 및 CDR3(서열번호: 93) 영역이 묘사되어 있으며, V 및 J 생식계열 유래가 표시되어 있다.
도 9a는 IP10.48 인간 단클론 항체의 중쇄 가변 영역의 뉴클레오타이드 서열(서열번호: 101) 및 아미노산 서열(서열번호: 100)을 나타낸다. CDR1(서열번호: 97), CDR2(서열번호: 98) 및 CDR3(서열번호: 99) 영역이 묘사되어 있으며, V, D 및 J 생식계열 유래가 표시되어 있다.
도 9b는 IP10.48 인간 단클론 항체의 경쇄 가변 영역의 뉴클레오타이드 서열(서열번호: 107) 및 아미노산 서열(서열번호: 106)을 나타낸다. CDR1(서열번호: 103), CDR2(서열번호: 104) 및 CDR3(서열번호: 105) 영역이 묘사되어 있으며, V 및 J 생식계열 유래가 표시되어 있다.
도 10a는 IP10.49 인간 단클론 항체의 중쇄 가변 영역의 뉴클레오타이드 서열(서열번호: 113) 및 아미노산 서열(서열번호: 112)을 나타낸다. CDR1(서열번호: 109), CDR2(서열번호: 110) 및 CDR3(서열번호: 111) 영역이 묘사되어 있으며, V, D 및 J 생식계열 유래가 표시되어 있다.
도 10b는 IP10.49 인간 단클론 항체의 경쇄 가변 영역의 뉴클레오타이드 서열(서열번호: 119) 및 아미노산 서열(서열번호: 118)을 나타낸다. CDR1(서열번호: 115), CDR2(서열번호: 116) 및 CDR3(서열번호: 117) 영역이 묘사되어 있으며, V 및 J 생식계열 유래가 표시되어 있다.
도 11a는 IP10.50 인간 단클론 항체의 중쇄 가변 영역의 뉴클레오타이드 서열(서열번호: 125) 및 아미노산 서열(서열번호: 124)을 나타낸다. CDR1(서열번호: 121), CDR2(서열번호: 122) 및 CDR3(서열번호: 123) 영역이 묘사되어 있으며, V, D 및 J 생식계열 유래가 표시되어 있다.
도 11b는 IP10.50 인간 단클론 항체의 경쇄 가변 영역의 뉴클레오타이드 서열(서열번호: 131) 및 아미노산 서열(서열번호: 130)을 나타낸다. CDR1(서열번호: 127), CDR2(서열번호: 128) 및 CDR3(서열번호: 129) 영역이 묘사되어 있으며, V 및 J 생식계열 유래가 표시되어 있다.
도 12a는 IP10.51 인간 단클론 항체의 중쇄 가변 영역의 뉴클레오타이드 서열(서열번호: 137) 및 아미노산 서열(서열번호: 136)을 나타낸다. CDR1(서열번호: 133), CDR2(서열번호: 134) 및 CDR3(서열번호: 135) 영역이 묘사되어 있으며, V, D 및 J 생식계열 유래가 표시되어 있다.
도 12b는 IP10.51 인간 단클론 항체의 경쇄 가변 영역의 뉴클레오타이드 서열(서열번호: 143) 및 아미노산 서열(서열번호: 142)을 나타낸다. CDR1(서열번호: 139), CDR2(서열번호: 140) 및 CDR3(서열번호: 141) 영역이 묘사되어 있으며, V 및 J 생식계열 유래가 표시되어 있다.
도 13a는 IP10.54 인간 단클론 항체의 중쇄 가변 영역의 뉴클레오타이드 서열(서열번호: 149) 및 아미노산 서열(서열번호: 148)을 나타낸다. CDR1(서열번호: 145), CDR2(서열번호: 146) 및 CDR3(서열번호: 147) 영역이 묘사되어 있으며, V, D 및 J 생식계열 유래가 표시되어 있다.
도 13b는 IP10.54 인간 단클론 항체의 경쇄 가변 영역의 뉴클레오타이드 서열(서열번호: 155) 및 아미노산 서열(서열번호: 154)을 나타낸다. CDR1(서열번호: 151), CDR2(서열번호: 152) 및 CDR3(서열번호: 153) 영역이 묘사되어 있으며, V 및 J 생식계열 유래가 표시되어 있다.
도 14는 유리 혈청 IP-10을 억제하는 항체 IP10.1 및 IP10.44의 활성을 나타내는 그래프이다.
도 15는 NK 세포 빈도를 억제하는 항체 IP10.1 및 IP10.44의 활성을 나타내는 그래프이다.
도 16a(TNBS 대장염) 및 16B(CD40-유도 대장염)는 2개의 구별되는 대장염 모델에서 IP10.1(6A1) 및 IP10.44(18G2)의 항체 대용물의 효능을 나타내는 그래프이다.
도 17a(IFNγ), 17b(TNFα), 17c(IL-12p40), 및 17d(IL-6)는 CD40-유도 대장염 모델에서 사이토카인의 순환 수준을 감소시키는 IP10.1(6A1) 및 IP10.44(18G2)의 항체 대용물의 활성을 나타내는 그래프이다.
도 18a 및 18b(IL-6), 18c 및 18d(IFNγ), 및 18e 및 18f(IL-12p40)는 CD40-유도 대장염 모델을 사용하여 m 및 염증이 생긴 장에서의 사이토카인의 순환 수준을 감소시키는 IP10.44 (18G2) 및 항-TNFα 항체의 항체 대용물의 활성을 나타내는 그래프이다.
도 19a(IP10.44) 및 19b(IP10.1)는 IP10.44 및 IP10.1의 정맥내 용량 후 유리 혈청 IP-10의 시간 프로파일을 나타내는 그래프이다.
도 20은 시노몰구스 원숭이에서 혈청 IP10.44와 비교하여 유리 혈청 IP-10 억제(% 기준선)를 나타내는 그래프이다.
도 21a 내지 21f는 PK/PD 모델링에 의해 관찰된 대 예측된 유리 및 총 혈청 IP-10을 나타내는 그래프이다(유리 혈청 IP-10에 대한 1 pM의 LLOQ; 값이 LLOQ 미만이면, LLOQ는 플롯팅에 사용되었음).
도 22는 고친화성 항-IP-10 마우스 대용물(18G2)을 항-TNFα 대용물과 비교하는 그래프이다.
본 발명을 더 쉽게 이해할 수 있도록, 특정 용어가 먼저 정의된다. 추가의 용어는 상세한 설명 전반에 제시되어 있다.
용어 "6A5", "항체 6A5", "항체 IP10.1", "IP10.1", 및 "엘데루맙(Eldelumab)"은 WO제2005/058815호에 기재된, 항-인간 IP-10 항체, 6A5를 지칭한다. IP10.1의 중쇄 가변 영역을 코딩하는 뉴클레오타이드 서열(서열번호: 5) 및 상응하는 아미노산 서열(서열번호: 4)은 도 1a에 나타나 있다(각각 서열번호: 1, 2, 및 3으로 지정된 CDR 서열을 가짐). IP10.1의 경쇄 가변 영역을 코딩하는 뉴클레오타이드 서열(서열번호: 11) 및 상응하는 아미노산 서열(서열번호: 10)은 도 1b에 나타나 있다(각각 서열번호: 7, 8, 및 9로 지정된 CDR 서열을 가짐).
용어 "인터페론 감마 유도성 단백질 10", "IP-10", 및 "CXCL10"은 상호교환적으로 사용되며, 인간 IP-10의 변이체, 아형 및 종 동족체를 포함한다. 따라서, 본 발명의 인간 항체는, 특정 경우에, 인간 이외의 종의 IP-10과 교차반응할 수 있다. 다른 경우, 항체는 인간 IP-10에 완전히 특이적일 수 있고, 종 또는 다른 유형의 교차 반응성을 나타내지 않을 수 있다. 인간 IP-10의 전체 아미노산 서열은 Genbank 등록번호 NP_001556(서열번호: 157)을 갖는다. 레서스 원숭이 IP-10의 전체 아미노산 서열은 Genbank 등록번호 AAK95955(서열번호: 159)를 갖는다. 마우스 IP-10의 전체 아미노산 서열은 Genbank 등록번호 NP_067249(서열번호: 160)를 갖는다.
용어 "CXCR3"은 IP-10(CXCL10)에 대한 수용체를 지칭한다. 인간 CXCR3의 전체 아미노산 서열은 Genbank 등록번호 NP_001495(서열번호: 158)를 갖는다.
용어 "MIG"는 IP-10과 구별되는, 감마 인터페론에 의해 유도된 모노카인으로도 알려진 CXCR3에 대한 리간드를 지칭한다. 인간 MIG의 전체 아미노산 서열은Genbank 등록번호 NP_002407(서열번호: 161)을 갖는다.
용어 "ITAC"는 IP-10과 구별되는, 인터페론 유도성 T 세포 알파 화학주성인자로도 알려진 CXCR3에 대한 리간드를 지칭한다. 인간 ITAC의 전체 아미노산 서열은 Genbank 등록번호 NP_005400(서열번호: 162)을 갖는다.
용어 "면역 반응"은 예를 들어, 침입 병원체의 인간 신체, 병원체로 감염된 세포 또는 조직, 암성 세포, 또는, 자가면역 또는 병적 염증의 경우, 정상 세포 또는 조직의 선택적 손상, 파괴, 또는 제거를 초래하는 상기 세포 또는 간에 의해 생산된 림프구, 항원 제시 세포, 식세포 세포, 과립구, 및 가용성 거대분자의 작용을 지칭한다.
"신호 전달 경로"는 세포의 한 부분으로부터 세포의 또 다른 부분으로의 신호 전송에서 역할을 하는 다양한 신호 전달 분자 사이의 생화학적 관계를 지칭한다. 본원에 사용된 바와 같이, 문구 "세포 표면 수용체"는, 예를 들어, 신호를 받고 이러한 신호를 세포의 원형질막을 가로질러 전송할 수 있는 분자 및 분자의 복합체를 포함한다. 본 발명의 "세포 표면 수용체"의 예는 IP-10 분자가 결합하는 CXCR3 수용체이다.
본원에 언급된 바와 같이 용어 "항체"는 전체 항체 및 이의 임의의 항원 결합 단편(즉, "항원 결합 부분") 또는 단쇄를 포함한다. "항체"는 디설파이드 결합에 의해 상호연결된 적어도 2개의 중쇄(H) 및 2개의 경쇄(L)를 포함하는 당단백질, 또는 이의 항원 결합 부분을 지칭한다. 각각의 중쇄는 중쇄 가변 영역(본원에서 VH로 약칭됨) 및 중쇄 불변 영역으로 구성된다. 중쇄 불변 영역은 3개의 도메인, CH1, CH2 및 CH3으로 구성된다. 각각의 경쇄는 경쇄 가변 영역(본원에서 VL로 약칭됨) 및 경쇄 불변 영역으로 구성된다. 경쇄 불변 영역은 하나의 도메인 CL로 구성된다. VH 및 VL 영역은 프레임워크 영역(FR)으로 불리는 더욱 보존된 영역 사이에 배치된, 상보성 결정 영역(CDR)으로 불리는 초가변성 영역으로 더 세분화될 수 있다. 각각의 VH 및 VL은 하기 순서로 아미노 말단부터 카복시 말단까지 배열된 3개의 CDR 및 4개의 FR로 구성된다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. 중쇄 및 경쇄의 가변 영역은 항원과 상호작용하는 결합 도메인을 함유한다. 항체의 불변 영역은 면역글로불린이 면역계의 다양한 세포(예컨대, 효과기 세포) 및 전통적인 보체계의 제1 성분(Clq)을 포함하는 숙주 조직 또는 인자에 결합하는 것을 매개할 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 항체의 "항원 결합 부분"(또는 간단히 "항체 부분")은 항원(예컨대, IP-10)에 특이적으로 결합하는 능력을 보유하는 항체의 하나 이상의 단편을 지칭한다. 항체의 항원 결합 기능은 전장 항체의 단편에 의해 수행될 수 있는 것으로 나타났다. 용어 항체의 "항원 결합 부분"에 포함되는 결합 단편의 예는 (i) VL, VH, CL 및 CH1 도메인으로 구성된 1가 단편인 Fab 단편; (ii) 힌지 영역에서 디설파이드 다리에 의해 연결된 2개의 Fab 단편을 포함하는 2가 단편인 F(ab')2 단편; (iii) VH 및 CH1 도메인으로 구성된 Fd 단편; (iv) 항체의 단일 아암(arm)의 VL 및 VH 도메인으로 구성된 Fv 단편, (v) VH 도메인으로 구성된 dAb 단편(Ward et al., (1989) Nature 341:544-546); 및 (vi) 단리된 상보성 결정 영역(CDR)을 포함한다. 또한, Fv 단편의 2개의 도메인인 VL 및 VH는 별개의 유전자에 의해 코딩되지만, 이들은 VL 및 VH 영역이 1가 분자(단쇄 Fv(scFv)로 알려짐)를 형성하기 위해 쌍을 형성하는 단일 단백질 사슬을 제조할 수 있는 합성 링커에 의해 재조합 방법을 사용하여 연결될 수 있으며; 예컨대, Bird et al. (1988) Science 242:423-426; 및 Huston et al. (1988) Proc . Natl . Acad . Sci . USA 85:5879-5883을 참고한다. 이러한 단쇄 항체는 또한 용어 항체의 "항원 결합 부분"에 포함되는 것으로 의도된다. 이들 항체 단편은 당업자에게 알려진 종래의 기술을 사용하여 수득되며, 단편은 온전한 항체와 동일한 방식으로 유용성에 대해 스크리닝된다.
본원에 사용된 바와 같이, "단리된 항체"는 상이한 항원 특이성을 갖는 다른 항체가 실질적으로 없는 항체를 지칭하는 것으로 의도된다(예컨대, IP-10에 특이적으로 결합하는 단리된 항체는 IP-10 이외의 항원에 특이적으로 결합하는 항체가 실질적으로 없음). 그러나, IP-10에 특이적으로 결합하는 단리된 항체는 다른 종으로부터의 IP-10 분자와 같은 다른 항원에 대해 교차 반응성을 가질 수 있다. 더욱이, 단리된 항체는 다른 세포 물질 및/또는 화학물질이 실질적으로 없을 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이 용어 "단클론 항체" 또는 "단클론 항체 조성물"은 단일 분자 조성물의 항체 분자의 제제를 지칭한다. 단클론 항체 조성물은 특정 에피토프에 대해 단일 결합 특이성 및 친화성을 나타낸다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "인간 항체"는 프레임워크 및 CDR 영역 모두가 인간 생식계열 면역글로불린 서열로부터 유래된 가변 영역을 갖는 항체를 포함하는 것으로 의도된다. 또한, 항체가 불변 영역을 함유하는 경우, 불변 영역은 또한 인간 생식계열 면역글로불린 서열로부터 유래된다. 본 발명의 인간 항체는 인간 생식계열 면역글로불린 서열에 의해 코딩되지 않은 아미노산 잔기(예컨대, 시험관내 무작위 또는 부위 특이적 돌연변이유발 또는 생체내 체세포 돌연변이에 의해 도입된 돌연변이)를 포함할 수 있다. 그러나, 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "인간 항체"는 마우스와 같은 또 다른 포유동물 종의 생식계열로부터 유래된 CDR 서열이 인간 프레임워크 서열에 접목된 항체를 포함하는 것으로 의도된다.
용어 "인간 단클론 항체"는 프레임워크 및 CDR 영역 모두가 인간 생식계열 면역글로불린 서열로부터 유래된 가변 영역을 갖는 단일 결합 특이성을 나타내는 항체를 지칭한다. 일 구현예에서, 인간 단클론 항체는 형질전환 비인간 동물, 예컨대, 불멸화된 세포에 융합된 인간 중쇄 이식유전자 및 경쇄 이식유전자를 포함하는 게놈을 갖는 형질전환 마우스로부터 수득된 B 세포를 포함하는 하이브리도마에 의해 생산된다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "재조합 인간 항체"는 재조합 수단에 의해 제조되거나, 발현되거나, 생성되거나 단리된 모든 인간 항체를 포함하며, 예컨대 (a) 인간 면역글로불린 유전자에 대해 형질전환이거나 염색체이식된 동물(예컨대, 마우스) 또는 이로부터 제조된 하이브리도마(하기에 기재된 바와 같음)로부터 단리된 항체, (b) 예컨대, 트랜스펙토마(transfectoma)로부터, 인간 항체를 발현하도록 형질전환된 숙주 세포로부터 단리된 항체, (c) 재조합, 조합형 인간 항체 라이브러리로부터 단리된 항체, 및 (d) 인간 면역글로불린 유전자 서열을 다른 DNA 서열로 스플라이싱하는 것을 포함하는 임의의 다른 수단에 의해 제조, 발현, 생성 또는 단리된 항체를 포함한다. 이러한 재조합 인간 항체는 프레임워크 및 CDR 영역이 인간 생식계열 면역글로불린 서열로부터 유래된 가변 영역을 갖는다. 그러나, 특정 구현예에서, 이러한 재조합 인간 항체는 시험관내 돌연변이유발(또는, 인간 Ig 서열에 대해 형질전환된 동물이 사용될 때, 생체내 체세포 돌연변이유발)을 거칠 수 있으므로, 재조합 항체의 VH 및 VL 영역의 아미노산 서열은, 인간 생식계열 VH 및 VL 서열로부터 유래되고 관련되지만, 생체내 인간 항체 생식계열 레퍼토리 내에 자연적으로 존재할 수 없는 서열이다.
본원에 사용된 바와 같이, "아이소타입"은 중쇄 불변 영역 유전자에 의해 코딩된 항체 클래스(예컨대, IgM 또는 IgGl)를 지칭한다.
문구 "항원을 인식하는 항체" 및 "항원에 특이적인 항체"는 "항원에 특이적으로 결합하는 항체"와 본원에서 상호교환적으로 사용된다.
본원에 사용된 바와 같이, "인간 IP-10에 특이적으로 결합하는" 항체는 5 x 10-9 M 이하, 더욱 바람직하게는 1 x 10-10 M 이하, 및 더욱더 바람직하게는 1 x 10-11 M 이하의 KD로 인간 IP-10에 결합하는 항체를 지칭하는 것으로 의도된다. "레서스 원숭이 IP-10과 교차 반응하는" 항체는 1 x 10-9 M 이하, 더욱 바람직하게는 1 x 10-10 M 이하, 및 더욱더 바람직하게는 1 x 10-11 M 이하의 KD로 레서스 원숭이 IP-10에 결합하는 항체를 지칭하는 것으로 의도된다. "마우스 IP-10과 교차 반응하지 않는" 또는 "인간 MIG와 교차 반응하지 않는" 또는 "인간 ITAC와 교차 반응하지 않는" 항체는 1.5 x 10-8 M 이상의 KD, 더욱 바람직하게는 5-10 x 10-8 M 이상 및 더욱더 바람직하게는 1 x 10-7 M 이상의 KD로 마우스 IP-10, 인간 MIG 또는 인간 ITAC에 결합하는 항체를 지칭하는 것으로 의도된다. 특정 구현예에서, 마우스 IP-10, 인간 MIG 및/또는 인간 ITAC와 교차 반응하지 않는 이러한 항체는 표준 결합 분석에서 이들 단백질에 대해 본질적으로 검출가능하지 않는 결합을 나타낸다.
본원에 사용된 바와 같이, "IP-10의 CXCR3에의 결합을 억제하는" 항체는 1 nM 이하의 Ki, 더욱 바람직하게는 0.75 nM 이하의 Ki, 더욱더 바람직하게는 0.5 nM 이하 및 더욱더 바람직하게는 0.25 nM 이하의 Ki로 IP-10이 CXCR3에 결합하는 것을 억제하는 항체를 지칭하는 것으로 의도된다.
본원에 사용된 바와 같이, "IP-10 유도 칼슘 플럭스를 억제하는" 항체는 10 nM 이하, 더욱 바람직하게는 7.5 nM 이하, 더욱더 바람직하게는 5 nM 이하 및 더욱더 바람직하게는 2.5 nM 이하의 IC50으로 IP-10 유도 칼슘 플럭스를 억제하는 항체를 지칭하는 것으로 의도된다.
본원에 사용된 바와 같이, "IP-10 유도 세포 이동을 억제하는" 항체는 2 μg/ml 이하, 더욱 바람직하게는 1 μg/ml 이하, 더욱더 바람직하게는 0.5 μg/ml 이하 및 더욱더 바람직하게는 0.25 μg/ml 이하의 IC50으로 IP-10 유도 세포 이동을 억제하는 항체를 지칭하는 것으로 의도된다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "Kassoc" 또는 "Ka"는 특정 항체-항원 상호작용의 결합 속도를 지칭하는 것으로 의도되는 반면, 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "Kdis" 또는 "Kd"는 특정 항체-항원 상호작용의 해리 속도를 지칭하는 것으로 의도된다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "KD"는 Kd 대 Ka의 비율(즉, Kd/Ka)로부터 수득되고 몰 농도(M)로 표현되는 해리 상수를 지칭하는 것으로 의도된다. 항체에 대한 KD 값은 당업계에 널리 확립된 방법을 사용하여 결정될 수 있다. 항체의 KD를 결정하는 바람직한 방법은 표면 플라즈몬 공명을 사용하는 것, 바람직하게는 Biacore® 시스템과 같은 바이오센서 시스템을 사용하는 것이다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 IgG 항체에 대한 "고친화성"은 표적 항원에 대해 10-8 M 이하, 더욱 바람직하게는 10-9 M 이하 및 더욱더 바람직하게는 10-10 M 이하의 KD를 갖는 항체를 지칭한다. 그러나, "고친화성" 결합은 다른 항체 아이소타입에 대해 달라질 수 있다. 예를 들어, IgM 아이소타입에 대한 "고친화성" 결합은 10-7 M 이하, 더욱 바람직하게는 10-8 M 이하의 KD를 갖는 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "대상"은 임의의 인간 또는 비인간 동물을 포함한다. 용어 "비인간 동물"은 모든 척추동물, 예컨대, 포유동물 및 비-포유동물, 예컨대 비인간 영장류, 양, 개, 고양이, 말, 소, 닭, 양서류, 파충류 등을 포함한다.
본 발명의 다양한 양태는 하기 하위섹션에 더 상세히 기재되어 있다.
항-IP-10 항체
본 발명의 항체는 인간 IP-10에 특이적으로 결합하고 상기 기재된 바와 같이 항체의 특히 개선된 기능적 특징 또는 특성을 특징으로 한다. 또한, 항체는 하나 이상의 비인간 영장류, 예컨대 레서스 원숭이로부터의 IP-10과 교차 반응할 수 있다. 바람직하게는, 항체는 마우스 IP-10과 교차 반응하지 않는다. 더욱이, MIG 및 ITAC 역시 CXCR3 수용체에 대한 리간드이지만, 본 발명의 항체는 바람직하게는 인간 MIG 또는 인간 ITAC와 교차 반응하지 않는다.
바람직하게는, 본 발명의 항체는 고친화성으로, 예를 들어 10-8 M 이하 또는 10-9 M 이하 또는 심지어 10-10 M 이하의 KD로 IP-10에 결합한다.
또한, 본 발명의 항체는 IP-10의 하나 이상의 기능적 활성을 억제할 수 있다. 예를 들어, 일 구현예에서, 항체는 IP-10이 CXCR3에 결합하는 것을 억제한다. 또 다른 구현예에서, 항체는 IP-10 유도 칼슘 플럭스를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 항체는 IP-10 유도 세포 이동(화학주성)을 억제한다.
다양한 종의 IP-10 및/또는 MIG 또는 ITAC에 대한 항체의 결합 능력을 평가하기 위한 표준 분석은 당업계에 알려져 있으며, 이는 예를 들어, ELISA, 웨스턴 블롯 및 RIA를 포함한다. 적합한 분석은 실시예에 상세히 기재되어 있다. 항체의 결합 동력학(예컨대, 결합 친화성)은 또한 Biacore 분석과 같은 당업계에 알려진 표준 분석에 의해 평가될 수 있다. IP-10의 기능적 특성(예컨대, 수용체 결합, 칼슘 플럭스, 화학주성)에 미치는 항체의 효과를 평가하기 위한 분석은 실시예에 더 상세히 기재되어 있다.
따라서, 당업계에 알려지고 본원에 기재된 방법론에 따라 결정된 바와 같이 이러한 IP-10 기능적 특성(예컨대, 생화학적, 면역화학적, 세포, 생리학적 또는 다른 생물학적 활성 등) 중 하나 이상을 "억제하는" 항체는 항체의 존재하에(예컨대, 또는 무관한 특이성의 대조군 항체가 존재할 때) 관찰된 것과 비교하여 특정 활성의 통계학적으로 유의한 감소와 관련되는 것으로 이해될 것이다. 바람직하게는 IP-10 활성을 억제하는 항체는 측정된 매개변수의 적어도 10%. 더욱 바람직하게는 적어도 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90%까지 이러한 통계학적으로 유의한 감소를 가져오며, 특정 바람직한 구현예에서 본 발명의 항체는 IP-10 기능적 활성의 92%, 94%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 초과를 억제할 수 있다.
단클론 항체 IP10.44, IP10.52, IP10.45, IP10.46, IP10.53, IP10.43, IP10.47, IP10.48, IP10.49, IP10.50, IP10.51, 및 IP10.54
본 발명의 바람직한 항체는 인간 단클론 항체 IP10.44, IP10.43, IP10.45, IP10.46, IP10.47, IP10.48, IP10.49, IP10.50, IP10.51, IP10.52, IP10.53, 또는 IP10.54이다. IP10.44, IP10.43, IP10.45, IP10.46, IP10.47, IP10.48, IP10.49, IP10.50, IP10.51, IP10.52, IP10.53, 및 IP10.54의 VH 아미노산 서열은 서열번호: 16, 28, 40, 52, 64, 76, 88, 100, 112, 124, 136, 및 148에 나타나 있다. IP10.44, IP10.43, IP10.45, IP10.46, IP10.47, IP10.48, IP10.49, IP10.50, IP10.51, IP10.52, IP10.53, 및 IP10.54의 VL 아미노산 서열은 서열번호: 22, 34, 46, 58, 70, 82, 94, 106, 118, 130, 142, 및 154에 나타나 있다.
본 발명의 특정 항체는 하기 및 다음 실시예에 기재된 바와 같이 구조적으로 그리고 화학적으로 규명된 인간 단클론 항체 IP10.44(또한 BMS-986184로 본원에 지칭됨)이다. IP10.44의 VH 아미노산 서열은 서열번호: 16(도 2a)에 나타나 있다. IP10.44의 VL 아미노산 서열은 서열번호: 22(도 2b)에 나타나 있다.
인간 IP-10에 결합하는 본원에 기재된 항체의 VH 및 VL 서열(또는 CDR 서열)은 인간 IP-10에 결합하는 다른 항체의 VH 및 VL 서열(또는 CDR 서열)과 "혼합되고 매치"될 수 있다. 바람직하게는, VH 및 VL 사슬(또는 이러한 사슬 내의 CDR)이 혼합되고 매치되는 경우, 특정 VH/VL 쌍형성으로부터의 VH 서열은 구조적으로 유사한 VH 서열로 대체된다. 마찬가지로, 바람직하게는 특정 VH/VL 쌍형성으로부터의 VL 서열은 구조적으로 유사한 VL 서열로 대체된다.
예를 들어, 본 발명의 항체, 또는 이의 항원 결합 부분은 하기를 포함하며:
(a) IP10.44, IP10.43, IP10.45, IP10.46, IP10.47, IP10.48, IP10.49, IP10.50, IP10.51, IP10.52, IP10.53, 또는 IP10.54의 아미노산 서열, 예컨대, 서열번호: 16(즉, IP10.44의 VH)을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및
(b) IP10.44, IP10.43, IP10.45, IP10.46, IP10.47, IP10.48, IP10.49, IP10.50, IP10.51, IP10.52, IP10.53, 또는 IP10.54의 아미노산 서열, 예컨대, 서열번호: 22(즉, IP10.44의 VL)를 포함하는 경쇄 가변 영역 또는 또 다른 항-IP-10 항체(즉, IP10.44, IP10.43, IP10.45, IP10.46, IP10.47, IP10.48, IP10.49, IP10.50, IP10.51, IP10.52, IP10.53, 또는 IP10.54와 상이한 항체)의 VL;
상기 항체는 인간 IP-10에 특이적으로 결합한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명의 항체, 또는 이의 항원 결합 부분은 하기를 포함하며:
(a) IP10.44, IP10.43, IP10.45, IP10.46, IP10.47, IP10.48, IP10.49, IP10.50, IP10.51, IP10.52, IP10.53, 또는 IP10.54의 중쇄 가변 영역의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 영역, 예컨대, 아미노산 서열 서열번호: 16을 포함하는 중쇄 가변 영역의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 영역(즉, IP10.44의 CDR 서열, 각각 서열번호: 13, 14, 및 15); 및
(b) IP10.44, IP10.43, IP10.45, IP10.46, IP10.47, IP10.48, IP10.49, IP10.50, IP10.51, IP10.52, IP10.53, 또는 IP10.54의 경쇄 가변 영역의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 영역, 예컨대, 아미노산 서열 서열번호: 22를 포함하는 경쇄 가변 영역의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 영역(즉, IP10.44의 CDR 서열, 각각 서열번호: 19, 20, 및 21) 또는 또 다른 항-IP-10 항체의 CDR(즉, IP10.44, IP10.43, IP10.45, IP10.46, IP10.47, IP10.48, IP10.49, IP10.50, IP10.51, IP10.52, IP10.53, 또는 IP10.54와 상이한 항체); 상기 항체는 인간 IP-10에 특이적으로 결합한다. 예를 들어, 항체, 또는 이의 항원 결합 부분은 인간 IP-10에 결합하는 다른 항체의 경쇄 CDR1, CDR2, 및/또는 CDR3 영역 중 하나 이상과 조합된 IP10.44의 중쇄 가변 CDR1, CDR2, 및 CDR3 영역을 포함할 수 있다.
또한, CDR1 및/또는 CDR2 도메인(들)과 무관하게 CDR3 도메인 단독이 동족 항원에 대한 항체의 결합 특이성을 결정할 수 있고, 공통된 CDR3 서열에 기초하여 동일한 결합 특이성을 갖는 다수의 항체가 예측가능하게 생성될 수 있음이 당업계에 널리 알려져 있다. 예컨대, Klimka et al., British J. of Cancer 83(2):252-260 (2000); Beiboer et al., J. Mol . Biol . 296:833-849 (2000); Rader et al., Proc . Natl . Acad . Sci . U.S.A . 95:8910-8915 (1998); Barbas et al., J. Am. Chem . Soc . 116:2161-2162 (1994); Barbas et al., Proc. Natl . Acad . Sci . U.S.A . 92:2529-2533 (1995); Ditzel et al., J. Immunol . 157:739-749 (1996); Berezov et al., BIAjournal 8:Scientific Review 8 (2001); Igarashi et al., J. Biochem (Tokyo) 117:452-7 (1995); Bourgeois et al., J. Virol 72:807-10 (1998); Levi et al., Proc. Natl . Acad . Sci . U.S.A . 90:4374-8 (1993); Polymenis and Stoller, J. Immunol. 152:5218-5329 (1994) 및 Xu and Davis, Immunity 13:37-45 (2000). 또한, 미국 특허 제6,951,646호; 제6,914,128호; 제6,090,382호; 제6,818,216호; 제6,156,313호; 제6,827,925호; 제5,833,943호; 제5,762,905호 및 제5,760,185호를 참고한다. 이들 참고문헌 각각은 그 전체가 본원에 참고로 포함되어 있다.
따라서, 또 다른 구현예에서, 본 발명의 항체는 IP10.44, IP10.43, IP10.45, IP10.46, IP10.47, IP10.48, IP10.49, IP10.50, IP10.51, IP10.52, IP10.53, 또는 IP10.54의 중쇄 가변 영역의 적어도 CDR3 영역 및 IP10.44, IP10.43, IP10.45, IP10.46, IP10.47, IP10.48, IP10.49, IP10.50, IP10.51, IP10.52, IP10.53, 또는 IP10.54의 경쇄 가변 영역의 적어도 CDR3(예컨대, 서열번호: 15 및 21, IP10.44의 중쇄 및 경쇄 가변 영역의 CDR3)을 포함한다. 이러한 항체는 바람직하게는 CDR3 서열이 유래된 항체, 예컨대, 항체 IP10.44와 (a) 결합에 대해 경쟁하고; (b) 기능적 특징을 보유하고; (c) 동일한 에피토프에 결합하고/하거나; (d) 유사한 결합 친화성을 갖는다.
아미노산 변형
또 다른 구현예에서, 본 발명의 항체는 하나 이상의 보존적 변형에 의해 IP10.44, IP10.43, IP10.45, IP10.46, IP10.47, IP10.48, IP10.49, IP10.50, IP10.51, IP10.52, IP10.53, 또는 IP10.54(예컨대, IP10.44)의 것과 상이한 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열의 중쇄 및/또는 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다. 그러나, 바람직한 구현예에서, (a) IP10.44의 VH CDR1의 글루탐산 및 티로신 잔기(하기 서열 EYGMH(서열번호: 13)에서 밑줄 쳐 있는 바와 같음)는 변형되지 않고, (b) IP10.44의 VH CDR2의 글리신, 알라닌, 류신, 이소류신, 글리신, 및 알라닌 잔기(하기 서열 VIGFAGLIKGYADSVKG(서열번호: 14)에서 밑줄 쳐 있는 바와 같음)는 변형되지 않으며, (c) IP10.44의 VH CDR3의 알라닌 및 아스파라긴 잔기(하기 서열 EGAGSNIYYYYGMDV(서열번호: 15)에서 밑줄 쳐 있는 바와 같음)는 변형되지 않는다. 항원 결합을 제거하지 않는 특정 보존적 서열 변형이 이뤄질 수 있음이 당업계에서 이해된다. 예컨대, 문헌[Brummell et al. (1993) Biochem 32:1180-8; de Wildt et al. (1997) Prot . Eng. 10:835-41; Komissarov et al. (1997) J. Biol . Chem . 272:26864-26870; Hall et al. (1992) J. Immunol . 149:1605-12; Kelley 및 O'Connell (1993) Biochem. 32:6862-35; Adib-Conquy et al. (1998) Int . Immunol . 10:341-6 및 Beers et al. (2000) Clin . Can. Res. 6:2835-43]을 참고한다. 따라서, 일 구현예에서, 항체는 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및/또는 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하며,
(a) 중쇄 가변 영역 CDR1 서열은, IP10.44의 VH CDR1의 글루탐산 및 티로신 잔기(하기 서열 EYGMH(서열번호: 13)에서 밑줄 쳐 있는 바와 같음)가 변형되지 않은 것을 제외하고, 서열번호: 13, 및/또는 이의 보존적 변형을 포함하고/하거나;
(b) 중쇄 가변 영역 CDR2 서열은 IP10.44의 VH CDR2의 글리신, 알라닌, 류신, 이소류신, 글리신, 및 알라닌 잔기(하기 서열 VIGFAGLIKGYADSVKG(서열번호: 14) 에서 밑줄 쳐 있는 바와 같음)가 변형되지 않은 것을 제외하고, 서열번호: 14, 및/또는 이의 보존적 변형을 포함하고/하거나;
(c) 중쇄 가변 영역 CDR3 서열은 IP10.44의 VH CDR3의 알라닌 및 아스파라긴 잔기(하기 서열 EGAGSNIYYYYGMDV(서열번호: 15)에서 밑줄 쳐 있는 바와 같음)가 변형되지 않은 것을 제외하고, 서열번호: 15, 및 이의 보존적 변형을 포함하고/하거나; 및/또는
(d) 경쇄 가변 영역 CDR1, 및/또는 CDR2, 및/또는 CDR3 서열은 서열번호: 19, 및/또는, 서열번호: 20, 및/또는 서열번호: 21, 및/또는 이의 보존적 변형을 포함하고/하거나;
(e) 항체는 인간 IP-10에 특이적으로 결합한다.
추가적으로 또는 대안적으로, 항체는 상기에 기재된 다음의 기능적 특성 중 하나 이상, 예컨대 인간 IP-10에 대한 고친화성 결합, 원숭이 IP-10(예컨대, 시노몰구스 원숭이, 레서스 원숭이)에 결합하나, 마우스 IP-10에 실질적으로 결합하지 않는 능력, 인간 MIG 또는 인간 ITAC와 교차 반응하지 않는 능력, 및 (a) IP-10이 CXCR3에 결합하는 것, (b) IP-10 유도 칼슘 플럭스, 및/또는 (c) IP-10 유도 세포 이동(화학주성)을 억제하는 능력을 가질 수 있다.
다양한 구현예에서, 항체는, 예를 들어, 인간, 인간화 또는 키메라 항체일 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "보존적 서열 변형"은 아미노산 서열을 함유하는 항체의 결합 특징에 유의하게 영향을 미치거나 이를 변경하지 않는 아미노산 서열을 지칭하는 것으로 의도된다. 이러한 보존적 변형은 아미노산 치환, 부가 및 결실을 포함한다. 변형은 부위 지향적 돌연변이유발 및 PCR 매개 돌연변이유발과 같이 당업계에 알려진 표준 기술에 의해 본 발명의 항체에 도입될 수 있다. 보존적 아미노산 치환은 아미노산 잔기가 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기로 대체되는 것이다. 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기의 계열은 당업계에 정의되었다. 이러한 계열은 염기성 측쇄(예컨대, 리신, 아르기닌, 히스티딘), 산성 측쇄(예컨대, 아스파트산, 글루탐산), 비전하 극성 측쇄(예컨대, 글리신, 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 티로신, 시스테인, 트립토판), 비극성 측쇄(예컨대, 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌), 베타 분지형 측쇄(예컨대, 트레오닌, 발린, 이소류신) 및 방향족 측쇄(예컨대, 티로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘)를 갖는 아미노산을 포함한다. 따라서, 본 발명의 항체의 CDR 영역 내의 하나 이상의 아미노산 잔기는 동일한 측쇄 계열로부터의 다른 아미노산 잔기로 대체될 수 있고 변경된 항체는 본원에 기재된 기능적 분석을 사용하여 보유된 기능(즉, 상기 제시된 기능)에 대해 시험될 수 있다.
조작되고 변형된 항체
본 발명의 항체는 변형된 항체를 조작하기 위해 출발 물질로서 IP10.44, IP10.43, IP10.45, IP10.46, IP10.47, IP10.48, IP10.49, IP10.50, IP10.51, IP10.52, IP10.53, 또는 IP10.54(예컨대, 항체 IP10.44)의 VH 및/또는 VL 서열 중 하나 이상을 갖는 항체를 사용하여 제조될 수 있다. 항체는, 예를 들어 하나 이상의 CDR 영역 내의 및/또는 하나 이상의 프레임워크 영역 내의 하나 또는 2개의 가변 영역(즉, VH 및/또는 VL) 내의 하나 이상의 잔기를 변형함으로써 조작될 수 있다. 추가적으로 또는 대안적으로, 항체는, 예를 들어 항체의 효과기 기능(들)을 변경하기 위해, 불변 영역(들) 내의 잔기를 변형함으로써 조작될 수 있다.
특정 구현예에서, CDR 접목은 항체의 가변 영역을 조작하는데 사용될 수 있다. 항체는 주로 6개의 중쇄 및 경쇄 상보성 결정 영역(CDR)에 위치한 아미노산 잔기를 통해 표적 항원과 상호작용한다. 이런 이유로 인해, CDR 내의 아미노산 서열은 CDR 외부의 서열보다 개별 항체 간에 더 다양하다. CDR 서열은 대부분의 항체-항원 상호작용을 담당하기 때문에, 상이한 특성을 갖는 상이한 항체로부터의 프레임워크 서열에 접목된 특정 자연발생 항체로부터의 CDR 서열을 포함하는 발현 벡터를 제작함으로써 특정 자연발생 항체의 특성을 모방하는 재조합 항체를 발현할 수 있다(예컨대, Riechmann et al. (1998) Nature 332:323-327; Jones et al. (1986) Nature 321:522-525; Queen et al. (1989) Proc. Natl . Acad . See. U.S.A . 86:10029-10033; 미국 특허 제5,225,539호; 제5,530,101호; 제5,585,089호; 제5,693,762호 및 제6,180,370호 참고).
따라서, 본 발명의 또 다른 구현예는 IP10.44, IP10.43, IP10.45, IP10.46, IP10.47, IP10.48, IP10.49, IP10.50, IP10.51, IP10.52, IP10.53, 또는 IP10.54의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열(예컨대, 각각 서열번호: 13, 14, 및 15)을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및/또는 IP10.44, IP10.43, IP10.45, IP10.46, IP10.47, IP10.48, IP10.49, IP10.50, IP10.51, IP10.52, IP10.53, 또는 IP10.54의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열(예컨대, 각각 서열번호: 19, 20, 및 21)을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 단리된 단클론 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다. 이러한 항체는 단클론 항체 IP10.44 또는 본원에 기재된 다른 항체의 VH 및 VL CDR 서열을 함유하지만, 이들은 상이한 프레임워크 서열을 함유할 수 있다.
이러한 프레임워크 서열은 생식계열 항체 유전자 서열을 포함하는 공공 DNA　데이터베이스 또는 공개된 참고문헌으로부터 얻을 수 있다. 예를 들어, 인간 중쇄 및 경쇄 가변 영역 유전자에 대한 생식계열 DNA 서열은 "VBase" 인간 생식계열 서열 데이터베이스(인터넷 상의 www.mrc-cpe.cam.ac.uk/vbase에서 이용가능함), 뿐만 아니라 상기 언급된 문헌[Kabat et al. (1991); Tomlinson et al. (1992) "The Repertoire of Human Germline VH Sequences Reveals about Fifty Groups of VH Segments with Different Hypervariable Loops" J. Mol . Biol. 227:776-798; 및 Cox et al. (1994) "A Directory of Human Germ-line VH Segments Reveals a Strong Bias in their Usage" Eur . J. Immunol. 24:827-836(이들 각각의 내용은 참고로 본원에 명시적으로 포함되어 있음)]에서 발견될 수 있다. 또 다른 예로서, 인간 중쇄 및 경쇄 가변 영역 유전자에 대한 생식계열 DNA 서열은 Genbank 데이터베이스에서 발견될 수 있다. 예를 들어, HCo7 HuMAb 마우스에서 발견된 하기 중쇄 생식계열 서열은 수반하는 Genbank 등록번호: 1-69(NG_0010109, NT_024637 & BC070333), 3-33(NG_0010109 & NT_024637) 및 3-7(NG_0010109 & NT_024637)에서 이용가능하다. 또 다른 예로서, HCo12 HuMAb 마우스에서 발견된 하기 중쇄 생식계열 서열은 수반하는 Genbank 등록번호: 1-69(NG_0010109, NT_024637 & BC070333), 5-51(NG_0010109 & NT_024637), 4-34(NG_0010109 & NT_024637), 3-30.3(CAJ556644) & 3-23(AJ406678)에서 이용가능하다.
항체 단백질 서열은 당업자에게 널리 알려진 Gapped BLAST(Altschul et al. (1997), 상기)로 불리는 서열 유사성 탐색 방법 중 하나를 사용하여 편집된 단백질 서열 데이터베이스와 비교된다.
본 발명의 항체에서 사용하기 위한 바람직한 프레임워크 서열은 본 발명의 선택된 항체에 의해 사용된 프레임워크 서열과 구조적으로 유사한 것, 예컨대, IP10.44에 의해 사용된 VH 3-33 프레임워크 서열 및/또는 VK A27 프레임워크 서열과 유사한 것이다. VH CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, 및 VK CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열은 프레임워크 서열이 유래된 생식계열 면역글로불린 유전자에서 발견된 것과 동일한 서열을 갖는 프레임워크 영역 상에 접목될 수 있거나, 또는 CDR 서열은 생식계열 서열과 비교하여 하나 이상의 돌연변이를 함유하는 프레임워크 영역 상에 접목될 수 있다. 예를 들어, 항체의 항원 결합 능력을 유지하거나 향상시키기 위해 프레임워크 영역 내의 잔기를 돌연변이시키는 것이 특정 경우에 이로울 수 있는 것으로 나타났다(예컨대, 미국 특허 제5,530,101호; 제5,585,089호; 제5,693,762호 및 제6,180,370호 참고).
또 다른 유형의 가변 영역 변형은 VH 및/또는 VL CDR1, CDR2 및/또는 CDR3 영역 내의 아미노산 잔기를 돌연변이시켜 관심 항체의 하나 이상의 결합 특성(예컨대, 친화성)을 개선하는 것이다. 부위 지향적 돌연변이유발 또는 PCR 매개 돌연변이유발이 돌연변이(들)를 도입하기 위해 수행될 수 있고, 항체 결합, 또는 관심있는 다른 기능적 특성에 대한 효과가 본원에 기재되고 실시예에 제공된 바와 같은 시험관내 또는 생체내 분석에서 평가될 수 있다. 바람직하게는 보존적 변형(상기 논의된 바와 같음)이 도입된다. 돌연변이는 아미노산 치환, 부가 또는 결실일 수 있지만, 바람직하게는 치환일 수 있다. 더욱이, 전형적으로 CDR 영역 내의 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개 이하의 잔기가 변경된다.
따라서, 또 다른 구현예에서, 본 발명은 본원에 기재된 중쇄 및/또는 경쇄 가변 영역 서열을 포함하는 단리된 항-IP-10 단클론 항체, 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하며, 이들 서열은 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 또는 부가를 포함한다. 예를 들어, (a) 서열번호: 13, 또는 서열번호: 13과 비교하여 1개, 2개, 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가를 갖는 아미노산 서열(바람직하게는 IP10.44의 VH CDR1의 글루탐산 및 티로신 잔기(하기 서열 EYGMH에 밑줄 쳐 있는 바와 같음)가 서열번호: 13과 동일함)을 포함하는 VH CDR1 영역; (b) 서열번호: 14, 또는 서열번호: 14와 비교하여 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가를 갖는 아미노산 서열(바람직하게는 IP10.44의 VH CDR2의 글리신, 알라닌, 류신, 이소류신, 글리신, 및 알라닌 잔기(하기 서열 VIGFAGLIKGYADSVKG에 밑줄 쳐 있는 바와 같음)가 서열번호: 14와 동일함)을 포함하는 VH CDR2 영역; (c) 서열번호: 15, 또는 서열번호: 15와 비교하여 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가를 갖는 아미노산 서열(바람직하게는 IP10.44의 VH CDR3의 알라닌 및 아스파라긴 잔기(하기 서열 EGAGSNIYYYYGMDV에 밑줄 쳐 있는 바와 같음)가 서열번호: 15와 동일함)을 포함하는 VH CDR3 영역을 포함하는 중쇄 가변 영역; (d) 서열번호: 19, 또는 서열번호: 19와 비교하여 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1 영역; (e) 서열번호: 20, 또는 서열번호: 20과 비교하여 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2 영역; 및 (f) 서열번호: 21, 또는 서열번호: 21과 비교하여 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3 영역을 포함하는, 단리된 항-IP-10 단클론 항체, 또는 이의 항원 결합 부분.
본 발명의 조작된 항체는, 예컨대 항체의 특성을 개선하기 위해, VH 및/또는 VL 내의 프레임워크 잔기가 변형된 항체를 포함한다. 전형적으로 이러한 프레임워크 변형은 항체의 면역원성을 감소시키기 위해 이뤄진다. 예를 들어, 하나의 접근법은 하나 이상의 프레임워크 잔기를 상응하는 생식계열 서열로 "역돌연변이"시키는 것이다. 더욱 구체적으로, 체세포 돌연변이를 겪은 항체는 상기 항체가 유래된 생식계열 서열과 상이한 프레임워크 잔기를 함유할 수 있다. 이러한 잔기는 항체 프레임워크 서열을 상기 항체가 유래된 생식계열 서열과 비교함으로써 확인될 수 있다.
또 다른 유형의 프레임워크 변형은 T 세포 에피토프를 제거하여 항체의 잠재적 면역원성을 감소시키기 위해, 프레임워크 영역 내의, 또는 심지어 하나 이상의 CDR 영역 내의 하나 이상의 잔기를 돌연변이시키는 것을 포함한다. 이 접근법은 "탈면역화"로도 지칭되며 미국 특허 공개 제20030153043호에 더 상세히 기재되어 있다.
프레임워크 또는 CDR 영역 내에서 이뤄진 변형 외에도 또는 변형에 대안적으로, 본 발명의 항체는, 전형적으로 항체의 하나 이상의 기능적 특성, 예컨대 혈청 반감기, 보체 결합(complement fixation), Fc 수용체 결합, 및/또는 항원-의존적 세포 세포독성을 변경하기 위해, Fc 영역 내에 변형을 포함하도록 조작될 수 있다. 또한, 본 발명의 항체는 그의 당화를 변형하기 위해, 다시 항체의 하나 이상의 기능적 특성을 변경하기 위해, 화학적으로 변형되거나(예컨대, 하나 이상의 화학적 모이어티가 항체에 부착될 수 있음) 변형될 수 있다. 이들 구현예 각각은 하기에 더 상세히 기재되어 있다. Fc 영역 내의 잔기의 넘버링은 Kabat의 EU 지수의 것이다.
바람직한 구현예에서, 항체는 중쇄 불변 영역의 힌지 영역 내의 위치 228에 상응하는 위치에 세린에서 프롤린으로의 돌연변이(S228P; EU 지수)를 포함하는 IgG4 아이소타입 항체이다. 이러한 돌연변이는 힌지 영역 내의 중쇄간 디설파이드 다리의 이종성을 폐지한 것으로 보고되었다(Angal et al. 상기; 위치 241은 Kabat 넘버링 시스템에 기초함).
일 구현예에서, CH1의 힌지 영역은 힌지 영역 내의 시스테인 잔기의 수가 변경되도록, 예컨대, 증가되거나 감소되도록 변형된다. 이 접근법은 미국 특허 제5,677,425호에 추가로 기재되어 있다. CH1의 힌지 영역 내의 시스테인 잔기의 수는, 예를 들어, 경쇄 및 중쇄의 조립을 용이하게 하기 위해 또는 항체의 안정성을 증가시키거나 감소시키기 위해 변경된다.
또 다른 구현예에서, 항체의 Fc 힌지 영역은 항체의 생물학적 반감기를 감소시키기 위해 돌연변이된다. 더욱 구체적으로, 항체가 천연 Fc-힌지 도메인 SpA 결합에 비해 손상된 스타필로코커스 단백질 A(SpA) 결합을 갖도록, 하나 이상의 아미노산 돌연변이가 Fc-힌지 단편의 CH2-CH3 도메인 계면 영역 내로 도입된다. 이 접근법은 미국 특허 제6,165,745호에 더 상세히 기재되어 있다.
또 다른 구현예에서, 항체는 그의 생물학적 반감기를 증가시키기 위해 변형된다. 다양한 접근법이 가능하다. 예를 들어, 미국 특허 제6,277,375에 기재된 바와 같이, 하기 돌연변이 중 하나 이상이 도입될 수 있다: T252L, T254S, T256F. 대안적으로, 생물학적 반감기를 증가시키기 위해, 미국 특허 제5,869,046호 및 제6,121,022호에 기재된 바와 같이, 항체는 IgG의 Fc 영역의 CH2 도메인의 2개의 루프로부터 얻은 구조(salvage) 수용체 결합 에피토프를 함유하도록 CH1 또는 CL 영역 내에서 변경될 수 있다.
또 다른 구현예에서, Fc 영역은 항체의 효과기 기능(들)을 변경하기 위해 적어도 하나의 아미노산 잔기를 상이한 아미노산 잔기로 대체함으로써 변경된다. 예를 들어, 아미노산 잔기 234, 235, 236, 237, 297, 318, 320 및 322로부터 선택된 하나 이상의 아미노산은 항체가 효과기 리간드에 대해 변경된 친화성을 가지지만 모 항체의 항원 결합 능력을 보유하도록 상이한 아미노산 잔기로 대체될 수 있다. 친화성이 변경되는 효과기 리간드는, 예를 들어, Fc 수용체 또는 보체의 C1 성분일 수 있다. 이 접근법은 미국 특허 제5,624,821호 및 제5,648,260호에 더 상세히 기재되어 있다.
또 다른 예에서, 아미노산 잔기 329, 331 및 322로부터 선택된 하나 이상의 아미노산은 항체가 변경된 C1q 결합 및/또는 감소되거나 폐지된 보체 의존적 세포독성(CDC)을 갖도록 상이한 아미노산 잔기로 대체될 수 있다. 이 접근법은 미국 특허 제6,194,551호에 더 상세히 기재되어 있다.
또 다른 예에서, 아미노산 위치 231 및 239 내의 하나 이상의 아미노산 잔기가 변경되어 보체를 고정하는 항체의 능력을 변경한다. 이 접근법은 PCT 공개 WO 제94/29351호에 더 상세히 기재되어 있다.
또 다른 실시예에서, Fc 영역은 항체 의존적 세포 세포독성(ADCC)을 매개하는 항체의 능력을 증가시키고/시키거나 하기 위치에서 하나 이상의 아미노산을 변형함으로써 Fcγ 수용체에 대한 항체의 친화성을 증가시키기 위해 변형된다: 238, 239, 248, 249, 252, 254, 255, 256, 258, 265, 267, 268, 269, 270, 272, 276, 278, 280, 283, 285, 286, 289, 290, 292, 293, 294, 295, 296, 298, 301, 303, 305, 307, 309, 312, 315, 320, 322, 324, 326, 327, 329, 330, 331, 333, 334, 335, 337, 338, 340, 360, 373, 376, 378, 382, 388, 389, 398, 414, 416, 419, 430, 434, 435, 437, 438 또는 439. 이 접근법은 PCT 공개 WO 제00/42072호에 더 상세히 기재되어 있다. 더욱이, FcγR1, FcγRII, FcγRIII 및 FcRn에 대한 인간 IgG1 상의 결합 부위가 맵핑되었고 개선된 결합을 갖는 변이체가 기술되었다(Shields et al. (2001) J. Biol . Chem. 276:6591-6604 참고). 위치 256, 290, 298, 333, 334 및 339에서의 특정 돌연변이는 FcγRIII에의 결합을 개선하는 것으로 나타났다. 또한, 하기 조합 돌연변이가 FcγRIII 결합을 개선하는 것으로 나타났다: T256A/S298A, S298A/E333A, S298A/K224A 및 S298A/E333A/K334A.
또 다른 구현예에서, 항체의 당화는 변형된다. 예를 들어, 무당화된(aglycosylated) 항체가 제조될 수 있다(즉, 항체는 당화가 결여됨). 당화는, 예를 들어, 항원에 대한 항체의 친화성을 증가시키기 위해 변경될 수 있다. 이러한 탄수화물 변형은, 예를 들어, 항체 서열 내의 하나 이상의 당화 부위를 변경함으로써 달성될 수 있다. 예를 들어, 하나 이상의 가변 영역 프레임워크 당화 부위를 제거하여 상기 부위에서 당화를 제거하는 하나 이상의 아미노산 치환이 이뤄질 수 있다. 이러한 당화는 항원의 항체에 대한 친화성을 증가시킬 수 있다. 예컨대, 미국 특허 제5,714,350호 및 제6,350,861호를 참고한다.
추가적으로 또는 대안적으로, 변경된 유형의 당화를 갖는 항체, 예컨대 감소된 양의 푸코실 잔기를 갖는 저푸코실화(hypofucosylated) 항체 또는 증가된 바이섹팅(bisecting) GlcNac 구조를 갖는 항체가 제조될 수 있다. 이러한 변경된 당화 패턴은 항체의 ADCC 능력을 증가시키는 것으로 입증되었다. 이러한 탄수화물 변형은, 예를 들어, 변경된 당화 기계를 갖는 숙주 세포에서 항체를 발현시킴으로써 달성될 수 있다. 변경된 당화 기계를 갖는 세포는 당업계에 기술되었고, 본 발명의 재조합 항체를 발현하여 변경된 당화를 갖는 항체를 생산하는 숙주 세포로서 사용될 수 있다. 예를 들어, 세포주 Ms704, Ms705, 및 Ms709는 푸코실트랜스퍼라제 유전자인 FUT8(α(1,6)-푸코실트랜스퍼라제)이 결실되어 있어서, Ms704, Ms705, 및 Ms709 세포주에서 발현된 항체는 이들의 탄수화물 상에 푸코스가 결여되어 있다. Ms704, Ms705, 및 Ms709 FUT8-/- 세포주는 2개의 대체 벡터를 사용하여 CHO/DG44 세포에서 FUT8 유전자의 표적화된 파괴에 의해 생성되었다(미국 특허 공개 제20040110704호 및 Yamane-Ohnuki et al. (2004) Biotechnol Bioeng 87:614-22 참고). 또 다른 예로서, EP 제1,176,195호는 푸코실 트랜스퍼라제를 코딩하는 기능적으로 파괴된 FUT8 유전자를 갖는 세포주를 기재하며, 이러한 세포주에서 발현된 항체는 α-1,6 결합-관련 효소를 감소시키거나 제거함으로써 저푸코실화를 나타낸다. EP 제1,176,195호는 또한 항체의 Fc 영역에 결합하는 N-아세틸글루코사민에 푸코스를 부가하는 낮은 효소 활성을 갖거나 효소 활성을 갖지 않는 세포주, 예를 들어 랫트 골수종 세포주 YB2/0(ATCC CRL 1662)를 기술한다. PCT 공개 WO 제03/035835호는 푸코스를 Asn(297)-연결된 탄수화물에 부착하는 능력이 감소되어 숙주 세포에서 발현된 항체의 저푸코실화를 야기하는 변이체 CHO 세포주인 Lec13 세포를 기술한다(또한 Shields et al. (2002) J. Biol . Chem. 277:26733-26740 참고). 변형된 당화 프로파일을 갖는 항체는 또한 PCT 공개 WO 제06/089231호에 기재된 바와 같이, 달걀에서 생산될 수 있다. 대안적으로, 변형된 당화 프로파일을 갖는 항체는 좀개구리밥(Lemna)과 같은 식물 세포에서 생산될 수 있다. 식물계에서 항체를 생산하는 방법은 2006년 8월 11일에 출원된 Alston & Bird LLP attorney docket No. 040989/314911에 상응하는 미국 특허 출원에 개시되어 있다. PCT 공개 WO 제99/54342호는 당단백질-변형 글리코실 트랜스퍼라제(예컨대, β(1,4)-N-아세틸글루코사미닐트랜스퍼라제 III(GnTIII))를 발현하도록 조작된 세포주를 기술하며, 조작된 세포주에서 발현된 항체는 항체의 증가된 ADCC 활성을 야기하는 증가된 바이섹팅 GlcNac 구조를 나타낸다(또한 Umana et al. (1999) Nat. Biotech. 17:176-180 참고). 대안적으로, 항체의 푸코스 잔기는 푸코시다제 효소를 사용하여 절단될 수 있고; 예컨대, 푸코시다제 α-L-푸코시다제는 항체로부터 푸코실 잔기를 제거한다(Tarentino et al. (1975) Biochem. 14:5516-23).
본 개시내용에 의해 고려되는 본원 항체의 또 다른 변형은 페길화이다. 항체는, 예를 들어, 항체의 생물학적(예컨대, 혈청) 반감기를 증가시키기 위해 페길화될 수 있다. 항체를 페길화하기 위해, 항체, 또는 이의 단편은 전형적으로 하나 이상의 PEG 그룹이 항체 또는 항체 단편에 부착하게 되는 조건하에, PEG의 반응성 에스테르 또는 알데히드 유도체와 같은 폴리에틸렌 글리콜(PEG)과 반응된다. 바람직하게는, 페길화는 반응성 PEG 분자(또는 유사한 반응성 수용성 중합체)와의 아실화 반응 또는 알킬화 반응을 통해 수행된다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "폴리에틸렌 글리콜"은 다른 단백질을 유도체화하기 위해 사용된 PEG의 임의의 형태, 예컨대 모노(C1-C10) 알콕시- 또는 아릴옥시-폴리에틸렌 글리콜 또는 폴리에틸렌 글리콜-말레이미드를 포함하는 것으로 의도된다. 특정 구현예에서, 페길화될 항체는 무당화된 항체이다. 단백질을 폐길화시키는 방법은 당업계에 알려져 있으며, 본 발명의 항체에 적용될 수 있다. 예컨대, EP 제0 154 316호 및 EP 제0 401 384호를 참고한다.
항체 물리적 특성
본 발명의 항체는 이의 상이한 부류를 검출하고/하거나 구별하기 위한 이들의 다양한 물리적 특성을 특징으로 할 수 있다.
예를 들어, 항체는 경쇄 또는 중쇄 가변 영역 내에 하나 이상의 당화 부위를 함유할 수 있다. 이러한 당화 부위는 변경된 항원 결합으로 인해 항체의 증가된 면역원성 또는 항체의 pK의 변경을 야기할 수 있다(Marshall et al (1972) Annu Rev Biochem 41:673-702; Gala and Morrison (2004) J Immunol 172:5489-94; Wallick et al (1988) J Exp Med 168:1099-109; Spiro (2002) Glyco -biology 12:43R-56R; Parekh et al (1985) Nature 316:452-7; Mimura et al. (2000) Mol Immunol 37:697-706). 당화는 N-X-S/T 서열을 함유하는 모티프에서 발생하는 것으로 알려졌다. 일부 경우, 가변 영역 당화를 함유하지 않는 항-IP-10 항체를 갖는 것이 바람직하다. 이것은 가변 영역 내에 당화 모티프를 함유하지 않는 항체를 선택함으로써 또는 당화 영역 내의 잔기를 돌연변이시킴으로써 달성될 수 있다.
바람직한 구현예에서, 항체는 아스파라긴 이성(isomerism) 부위를 함유하지 않는다. 아스파라긴의 탈아미드화는 N-G 또는 D-G 서열 상에서 발생할 수 있고, 이는 폴리펩타이드 사슬 내에 꼬임(kink)을 도입하고 그의 안정성(이소아스파트산 효과)을 감소시키는 이소아스파트산 잔기를 생성시킬 수 있다.
각각의 항체는 일반적으로 6 내지 9.5의 pH 범위에 속하는 고유한 등전점(pI)을 가질 것이다. IgG1 항체에 대한 pI는 전형적으로 7-9.5의 pH 범위에 속하고 IgG4 항체에 대한 pI는 전형적으로 6-8의 pH 범위에 속한다. 정상 범위 이외의 pI를 갖는 항체가 생체내 조건하에 일부 언폴딩 및 불안정성을 가질 수 있다는 추측이 있다. 따라서, 정상 범위에 속하는 pI 값을 함유하는 항-IP-10 항체를 갖는 것이 바람직하다. 이것은 정상 범위 내의 pI를 갖는 항체를 선택함으로써 또는 전하를 띤 표면 잔기를 돌연변이시킴으로써 달성될 수 있다.
본 발명의 항체를 코딩하는 핵산 분자
본 발명의 또 다른 양태는 본 발명의 항체를 코딩하는 핵산 분자에 관한 것이다. 핵산은 전체 세포, 세포 용해물, 또는 부분적으로 정제된 또는 실질적으로 정제된 형태 내에 존재할 수 있다. 알칼리/SDS 치료, CsCl 밴딩(banding), 컬럼 크로마토그래피, 아가로스 겔 전기영동 및 당업계에 널리 알려진 다른 것을 포함하는 표준 기술에 의해 다른 세포 성분 또는 다른 오염물, 예컨대, 다른 세포 핵산 또는 단백질로부터 정제될 때 핵산은 "단리"되거나 "실질적으로 순수하게 된다". 문헌[F. Ausubel, et al., ed. (1987) Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing and Wiley Interscience, New York]을 참고한다. 본 발명의 핵산은, 예를 들어, DNA 또는 RNA일 수 있고, 인트론 서열을 함유하거나 함유하지 않을 수 있다. 바람직한 구현예에서, 핵산은 cDNA 분자이다.
본 발명의 핵산은 표준 분자 생물학 기술을 사용하여 수득될 수 있다. 하이브리도마(예컨대, 하기에 더 기재된 바와 같은 인간 면역글로불린 유전자를 갖는 형질전환 마우스로부터 제조된 하이브리도마)에 의해 발현된 항체의 경우, 하이브리도마에 의해 제조된 항체의 경쇄 및 중쇄를 코딩하는 cDNA는 표준 PCR 증폭 또는 cDNA 클로닝 기술에 의해 수득될 수 있다. 면역글로불린 유전자 라이브러리로부터 수득된 항체의 경우(예컨대, 파아지 디스플레이 기술을 사용하여), 항체를 코딩하는 핵산은 라이브러리로부터 회수될 수 있다.
본 발명의 바람직한 핵산 분자는 IP10.44 단클론 항체의 VH 및 VL 서열을 코딩하는 것이다. IP10.44의 VH 및 VL 서열을 코딩하는 DNA 서열은 각각 서열번호: 17 및 23에 나타나 있다.
VH 및 VL 분절을 코딩하는 DNA 단편이 얻어지면, 이들 DNA 단편은, 예를 들어 가변 영역 유전자를 전장 항체 사슬 유전자, Fab 단편 유전자 또는 scFv 유전자로 변환시키기 위해, 표준 재조합 DNA 기술에 의해 더 조작될 수 있다. 이러한 조작에서, VL 또는 VH 코딩 DNA 단편은 항체 불변 영역 또는 가요성 링커와 같은 또 다른 단백질을 코딩하는 또 다른 DNA 단편에 작동가능하게 연결된다. 이 문맥에서 사용된 바와 같이, 용어 "작동가능하게 연결된"은 2개의 DNA 단편이 연결되어 상기 2개의 DNA 단편에 의해 코딩된 아미노산 서열이 인프레임(in-frame)을 유지하는 것을 의미하는 것으로 의도된다.
VH 영역을 코딩하는 단리된 DNA는 VH 코딩 DNA를 중쇄 불변 영역(CH1, CH2 및 CH3)을 코딩하는 또 다른 DNA 분자에 작동가능하게 연결함으로써 전장 중쇄 유전자로 변환될 수 있다. 인간 중쇄 불변 영역 유전자의 서열은 당업계에 알려져 있으며(예컨대, Kabat, E. A., el al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242 참고), 이들 영역을 포함하는 DNA 단편은 표준 PCR 증폭에 의해 수득될 수 있다. 중쇄 불변 영역은 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, IgE, IgM 또는 IgD 불변 영역일 수 있으나, 가장 바람직하게는 IgG1 또는 IgG4 불변 영역이다. Fab 단편 중쇄 유전자의 경우, VH 코딩 DNA는 중쇄 CH1 불변 영역만을 코딩하는 또 다른 DNA 분자에 작동가능하게 연결될 수 있다.
VL 영역을 코딩하는 단리된 DNA는 VL 코딩 DNA를 경쇄 불변 영역 CL을 코딩하는 또 다른 DNA 분자에 작동가능하게 연결함으로써 전장 경쇄 유전자(뿐만 아니라 Fab 경쇄 유전자)로 변환될 수 있다. 인간 경쇄 불변 영역 유전자의 서열은 당업계에 알려져 있으며(예컨대, Kabat, E. A., et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242 참고), 이들 영역을 포함하는 DNA 단편은 표준 PCR 증폭에 의해 수득될 수 있다. 경쇄 불변 영역은 카파 또는 람다 불변 영역일 수 있지만, 가장 바람직하게는 카파 불변 영역이다.
scFv 유전자를 생성하기 위해, VH 및 VL 코딩 DNA 단편은 가요성 링커를 코딩하는, 예컨대, 아미노산 서열(Gly4 -Ser)3을 코딩하는 또 다른 단편에 작동가능하게 연결되어, VH 및 VL 서열은 인접한 단쇄 단백질로서 발현될 수 있고, VL 및 VH 영역은 가요성 링커에 의해 연결된다(예컨대, Bird et al. (1988) Science 242:423-426; Huston et al. (1988) Proc . Natl . Acad . Sci . USA 85:5879-5883; McCafferty et al., (1990) Nature 348:552-554 참고).
본 발명의 단클론 항체의 생산
본 발명의 단클론 항체(mAb)는 종래의 단클론 항체 방법론, 예컨대, 문헌[Kohler and Milstein (1975) Nature 256: 495]의 표준 체세포 혼성화 기술을 포함하는 다양한 기술에 의해 생산될 수 있다. 체세포 혼성화 절차가 바람직하지만, 원칙적으로 단클론 항체를 생산하는 다른 기술, 예컨대, B 림프구의 바이러스 또는 종양발생 형질전환이 사용될 수 있다.
하이브리도마를 제조하는 바람직한 동물 시스템은 쥣과 시스템이다. 마우스에서 하이브리도마 생산은 매우 널리 확립된 절차이다. 융합을 위한 면역화된 비장세포의 단리를 위한 면역화 프로토콜 및 기술은 당업계에 알려져 있다. 융합 파트너(예컨대, 쥣과 골수종 세포) 및 융합 절차 또한 알려져 있다.
본 발명의 키메라 또는 인간화 항체는 상기 기재된 바와 같이 제조된 쥣과 단클론 항체의 서열에 기초하여 제조될 수 있다. 중쇄 및 경쇄 면역글로불린을 코딩하는 DNA는 관심있는 쥣과 하이브리도마로부터 수득되고 표준 분자 생물학 기술을 사용하여 비-쥣과(예컨대, 인간) 면역글로불린 서열을 함유하도록 조작될 수 있다. 예를 들어, 키메라 항체를 생성하기 위해, 쥣과 가변 영역은 당업계에 알려진 방법을 사용하여 인간 불변 영역에 연결될 수 있다(예컨대, 미국 특허 제4,816,567호(Cabilly et al.) 참고). 인간화 항체를 생성하기 위해, 쥣과 CDR 영역은 당업계에 알려진 방법을 사용하여 인간 프레임워크 내로 삽입될 수 있다(예컨대, 미국 특허 제5,225,539호(Winter), 및 미국 특허 제5,530,101호; 제5,585,089호; 제5,693,762호 및 제6,180,370호(Queen et al.) 참고).
바람직한 구현예에서, 본 발명의 항체는 인간 단클론 항체이다. IP-10에 대한 이러한 인간 단클론 항체는 마우스 시스템보다는 인간 면역 시스템의 부분을 갖는 형질전환 또는 트랜스염색체(transchromosomic) 마우스를 사용하여 생성될 수 있다. 이러한 형질전환 및 트랜스염색체 마우스는 각각 HuMAb 마우스 및 KM 마우스로서 본원에 지칭된 마우스를 포함하며, 이는 총괄하여 "인간 Ig 마우스"로 본원에 지칭된다.
HuMAb 마우스®(Medarex, Inc.)는, 내인성 μ 및 κ 사슬 유전자좌를 불활성화시키는 표적화된 돌연변이와 함께, 재배열되지 않은 인간 중쇄(μ 및 γ) 및 κ 경쇄 면역글로불린 서열을 코딩하는 인간 면역글로불린 유전자 미니유전자좌를 함유한다(예컨대, Lonberg, et al. (1994) Nature 368(6474): 856-859 참고). 따라서, 마우스는 마우스 IgM 또는 κ의 감소된 발현을 나타내며, 면역화에 대한 반응으로, 도입된 인간 중쇄 및 경쇄 이식유전자는 고친화성 인간 IgGκ 단클론을 생성하는 부류 전환(class switching) 및 체세포 돌연변이를 겪는다(Lonberg, N. et al. (1994), 상기; Lonberg, N. (1994) Handbook of Experimental Pharmacology 113:49-101; Lonberg, N. and Huszar, D. (1995) Intern. Rev. Immunol. 13: 65-93, 및 Harding, F. and Lonberg, N. (1995) Ann. N.Y. Acad . Sci. 764:536-546에서 검토됨). HuMab 마우스의 제조 및 사용, 및 이러한 마우스에 의해 보유된 게놈 변형은 문헌[Taylor, L. et al. (1992) Nucleic Acids Research 20:6287-6295; Chen, J. et al. (1993) International Immunology 5: 647-656; Tuaillon et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:3720-3724; Choi et al. (1993) Nature Genetics 4:117-123; Chen, J. et al. (1993) EMBO J. 12: 821-830; Tuaillon et al. (1994) J. Immunol. 152:2912-2920; Taylor, L. et al. (1994) International Immunology 6: 579-591; and Fishwild, D. et al. (1996) Nature Biotechnology 14: 845-851(이들 모두의 내용은 그 전체가 참고로 본원에 명시적으로 포함됨)]에 더 기재되어 있다. 또한, 미국 특허 제5,545,806호; 제5,569,825호; 제5,625,126호; 제5,633,425호; 제5,789,650호; 제5,877,397호; 제5,661,016호; 제5,814,318호; 제5,874,299호; 및 제5,770,429호(모두 Lonberg 및 Kay); 미국 특허 제5,545,807호(Surani et al.); PCT 공개 WO 제92/03918호, WO 제93/12227호, WO 제94/25585호, WO 제97/13852호, WO 제98/24884호 및 WO 제99/45962호(모두 Lonberg 및 Kay); 및 PCT 공개 WO 제01/14424호(Korman et al)를 참고한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명의 인간 항체는 이식유전자 및 트랜스염색체 상의 인간 면역글로불린 서열을 갖는 마우스, 예컨대 인간 중쇄 이식유전자 및 인간 경쇄 트랜스염색체를 갖는 마우스를 사용하여 길러질 수 있다. "KM 마우스"로서 본원에 지칭된 이러한 마우스는 PCT 공개 WO 제02/43478호(Ishida et al)에 상세히 기재되어 있다.
또한, 인간 면역글로불린 유전자를 발현하는 대안적인 형질전환 동물 시스템이 당업계에서 이용가능하며 본 발명의 항-IP-10 항체를 기르는데 사용될 수 있다. 예를 들어, 제노마우스(Abgenix, Inc.)로 불리는 대안적인 형질전환 시스템이 사용될 수 있고; 이러한 마우스는, 예를 들어, 미국 특허 제5,939,598호; 제6,075,181호; 제6,114,598호; 제6, 150,584호 및 제6,162,963호(Kucherlapati et al)에 기재되어 있다.
더욱이, 인간 면역글로불린 유전자를 발현하는 대안적인 트랜스염색체 동물 시스템이 당업계에서 이용가능하며, 이는 본 발명의 항-IP-10 항체를 기르는데 사용될 수 있다. 예를 들어, "TC 마우스"로 불리는, 인간 중쇄 트랜스염색체 및 인간 경쇄 트랜스염색체 모두를 갖는 마우스가 사용될 수 있고; 이러한 마우스는 문헌[Tomizuka et al. (2000) Proc . Natl . Acad . Sci . USA 97:722-727]에 기재되어 있다. 또한, 인간 중쇄 및 경쇄 트랜스염색체를 갖는 소가 당업계에 기재되었고(Kuroiwa et al. (2002) Nature Biotechnology 20:889-894), 본 발명의 항-IP-10 항체를 기르는데 사용될 수 있다.
본 발명의 인간 단클론 항체는 또한 인간 면역글로불린 유전자의 라이브러리를 스크리닝하는 파아지 디스플레이 방법을 사용하여 제조될 수 있다. 인간 항체를 단리하는 이러한 파아지 디스플레이 방법은 당업계에 확립되어 있다. 예를 들어: 미국 특허 제5,223,409호; 제5,403,484호; 및 제5,571,698호(Ladner et al.); 미국 특허 제5,427,908호 및 제5,580,717호(Dower et al.); 미국 특허 제5,969,108호 및 제6,172,197호(McCafferty et al.); 및 미국 특허 제5,885,793호; 제6,521,404호; 제6,544,731호; 제6,555,313호; 제6,582,915호 및 제6,593,081호(Griffiths et al)를 참고한다.
본 발명의 인간 단클론 항체는 또한 면역화시 인간 항체 반응이 발생할 수 있도록 인간 면역 세포가 재구성된 SCID 마우스를 사용하여 제조될 수 있다. 이러한 마우스는, 예를 들어, 미국 특허 제5,476,996호 및 제5,698,767호(Wilson et al)에 기재되어 있다.
인간 Ig 마우스의 면역화
인간 Ig 마우스가 본 발명의 인간 항체를 기르는데 사용될 때, 이러한 마우스는 문헌[Lonberg, N. et al. (1994) Nature 368(6474): 856-859; Fishwild, D. et al. (1996) Nature Biotechnology 14: 845-851; 및 PCT 공개 WO 제98/24884호 및 WO 제01/14424호]에 기재된 바와 같이, IP-10 항원 및/또는 재조합 IP-10, 또는 IP-10 융합 단백질의 정제된 또는 농축된 제제로 면역화될 수 있다. 바람직하게는, 마우스는 첫 번째 주입시 6-16주령일 것이다. 예를 들어, IP-10 항원의 정제된 또는 재조합 제제(5-50 μg)는 인간 Ig 마우스를 복강내로 면역화시키는데 사용될 수 있다.
IP-10에 대한 완전한 인간 단클론 항체를 생성하는 상세한 절차는 하기 실시예 1에 기재되어 있다. 다양한 항원을 이용한 누적 경험은 형질전환 마우스가 완전 프로인트 보조제 중의 항원으로 복강내로(IP) 초기에 면역화된 후, 불완전 프로인트 보조제 중의 항원으로 2주마다 IP 면역화(최대 총 6)할 때 반응한다는 것을 보여주었다. 그러나, 프로인트 이외의 보조제도 효과적인 것으로 밝혀져 있다. 또한, 보조제의 부재시 전체 세포는 매우 면역원성인 것으로 밝혀져 있다. 면역 반응은 면역화 프로토콜의 과정 동안 모니터링될 수 있고, 혈장 샘플은 안와후 채혈에 의해 수득된다. 혈장은 ELISA(하기에 기재된 바와 같음)에 의해 스크리닝될 수 있고, 항-IP-10 인간 면역글로불린의 충분한 역가를 갖는 마우스가 융합을 위해 사용될 수 있다. 마우스는 희생시켜 비장을 제거하기 3일 전에 항원으로 정맥내로 부스트될 수 있다. 각각의 면역화를 위해 2-3 융합이 수행될 필요가 있을 수 있는 것으로 예상된다. 6 내지 24마리의 마우스가 각 항원에 대해 전형적으로 면역화된다. 일반적으로 HCo7 및 HCo12 균주 모두가 사용된다. 또한, HCo7 및 HCo12 이식유전자 모두는 2개의 상이한 인간 중쇄 이식유전자(HCo7/HCo12)를 갖는 단일 마우스 내로 함께 증식될 수 있다.
본 발명의 인간 단클론 항체를 생산하는 하이브리도마의 생성
본 발명의 인간 단클론 항체를 생산하는 하이브리도마를 생성하기 위해, 면역화된 마우스로부터 비장세포 및/또는 림프절 세포가 단리되고 적절한 불멸화된 세포주, 예컨대 마우스 골수종 세포주에 융합될 수 있다. 생성된 하이브리도마는 항원 특이적 항체의 생산에 대해 스크리닝될 수 있다. 예를 들어, 면역화된 마우스의 비장 림프구의 단일 세포 현탁액은 50% PEG와 함께 P3X63-Ag8.653 비분비 마우스 골수종 세포(ATCC, CRL 1580)의 수의 1/6에 융합될 수 있다. 세포는 평바닥 미세적정 플레이트에 약 2 x 105로 플레이팅된 후, 20% 태아 클론 혈청, 18% "653" 조건 배지, 5% 오리겐(IGEN), 4 mM L-글루타민, 1 mM 피루브산 나트륨, 5mM HEPES, 0.055 mM 2-머캅토에탄올, 50 단위/ml 페니실린, 50 mg/ml 스트렙토마이신, 50 mg/ml 젠타마이신 및 1X HAT(Sigma; HAT는 융합 24시간 후 첨가됨)를 함유하는 선택 배지에서 2주 배양된다. 약 2주 후, 세포는 HAT가 HT로 대체된 배지에서 배양될 수 있다. 이후, 개별 웰은 인간 단클론 IgM 및 IgG 항체에 대한 ELISA에 의해 스크리닝될 수 있다. 광범위한 하이브리도마 성장이 일어나면, 배지는 일반적으로 10-14일 후 관찰될 수 있다. 항체 분비 하이브리도마는 다시 플레이팅되고, 다시 스크리닝되고, 인간 IgG에 대해 여전히 양성이면, 단클론 항체는 제한 희석에 의해 적어도 2회 서브클로닝될 수 있다. 이후, 안정한 서브클론이 시험관내에서 배양되어 특성 규명을 위해 조직 배양 배지에서 소량의 항체를 생성할 수 있다.
인간 단클론 항체를 정제하기 위해, 선택된 하이브리도마는 단클론 항체 정제를 위한 2리터 스피너 플라스크에서 성장될 수 있다. 상층액은 단백질 A-세파로스를 갖는 친화성 크로마토그래피(Pharmacia, Piscataway, N.J.) 이전에 여과되고 농축될 수 있다. 용출된 IgG는 순도를 보장하기 위해 겔 전기영동 및 고성능 액체 크로마토그래피에 의해 확인될 수 있다. 버퍼액은 PBS로 교환될 수 있고, 농도는 1.43 소광 계수를 사용하여 OD280에 의해 결정될 수 있다. 단클론 항체는 분취될 수 있고 -80℃에서 보관될 수 있다.
본 발명의 단클론 항체를 생산하는 트랜스펙토마의 생성
본 발명의 항체는 또한, 예를 들어, 당업계에 널리 알려진 바와 같은 재조합 DNA 기술 및 유전자 형질감염 방법의 조합을 사용하여, 숙주 세포 트랜스펙토마에서 생산될 수 있다(예컨대, Morrison, S. (1985) Science 229:1202).
예를 들어, 항체, 또는 이의 항체 단편을 발현하기 위해, 부분적 또는 전장 경쇄 및 중쇄를 코딩하는 DNA는 표준 분자 생물학 기술(예컨대, 관심 항체를 발현하는 하이브리도마를 사용한 PCR 증폭 또는 cDNA 클로닝)에 의해 수득될 수 있고, 유전자가 전사 및 번역 제어 서열에 작동가능하게 연결되도록 DNA가 발현 벡터 내로 삽입될 수 있다. 이 문맥에서, 용어 "작동가능하게 연결된"은 벡터 내의 전사 및 번역 제어 서열이 항체 유전자의 전사 및 번역을 조절하는 의도된 기능을 제공하도록 항체 유전자가 벡터 내로 라이게이션되는 것을 의미하는 것으로 의도된다. 발현 벡터 및 발현 제어 서열은 사용된 발현 숙주 세포와 양립가능하도록 선택된다. 항체 경쇄 유전자 및 항체 중쇄 유전자는 별개의 벡터 내로 삽입될 수 있거나, 더욱 전형적으로, 두 유전자는 동일한 발현 벡터 내로 삽입된다. 항체 유전자는 표준 방법(예컨대, 항체 유전자 단편 및 벡터 상의 상보적 제한 부위의 라이게이션, 또는 제한 부위가 존재하지 않는 경우 평활 말단 라이게이션)에 의해 발현 벡터 내로 삽입된다. 본원에 기재된 항체의 경쇄 및 중쇄 가변 영역은 이들을 원하는 아이소타입의 중쇄 불변 및 경쇄 불변 영역을 이미 코딩하는 발현 벡터 내로 삽입함으로써 임의의 항체 아이소타입의 전장 항체 유전자를 생성하는데 사용될 수 있고, 이로써 VH 분절은 벡터 내의 CH 분절(들)에 작동가능하게 연결되고 VL 분절은 벡터 내의 CL 분절에 작동가능하게 연결된다. 추가적으로 또는 대안적으로, 재조합 발현 벡터는 숙주 세포로부터 항체 사슬의 분비를 용이하게 하는 신호 펩타이드를 코딩할 수 있다. 신호 펩타이드가 항체 사슬 유전자의 아미노 말단에 인프레임으로 연결되도록 항체 사슬 유전자는 벡터 내로 클로닝될 수 있다. 신호 펩타이드는 면역글로불린 신호 펩타이드 또는 이종 신호 펩타이드(즉, 비면역글로불린 단백질로부터의 신호 펩타이드)일 수 있다.
항체 사슬 유전자 외에도, 본 발명의 재조합 발현 벡터는 숙주 세포에서 항체 사슬 유전자의 발현을 제어하는 조절 서열을 갖는다. 용어 "조절 서열"은 항체 사슬 유전자의 전사 또는 번역을 제어하는 프로모터, 인핸서 및 다른 발현 제어 요소(예컨대, 폴리아데닐화 신호)를 포함하는 것으로 의도된다. 이러한 조절 서열은, 예를 들어, 문헌[Goeddel(Gene Expression Technology. Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, CA (1990))]에 기재되어 있다. 조절 서열의 선택을 포함하는 발현 벡터의 설계가 형질전환될 숙주 세포의 선택, 원하는 단백질의 발현 수준 등과 같은 인자에 따라 달라질 수 있음이 당업자에게 이해될 것이다. 포유동물 숙주 세포 발현을 위한 바람직한 조절 서열은 포유동물 세포에서 높은 수준의 단백질 발현을 유도하는 바이러스 요소, 예컨대 사이토메갈로바이러스(CMV), 시미안 바이러스 40(SV40), 아데노바이러스(예컨대, 아데노바이러스 주요 후기 프로모터(AdMLP) 및 폴리오마로부터 유래된 프로모터 및/또는 인핸서를 포함한다. 대안적으로, 비바이러스 조절 서열, 예컨대 유비퀴틴 프로모터 또는 β-글로빈 프로모터가 사용될 수 있다. 또한, 조절 서열은 상이한 공급원으로부터의 서열, 예컨대 SV40 초기 프로모터 및 인간 T 세포 백혈병 바이러스 유형 1의 긴 말단 반복으로부터의 서열을 함유하는, SRα 프로모터 시스템으로 구성된다(Takebe, Y. et al. (1988) Mol. Cell. Biol. 8:466-472).
항체 사슬 유전자 및 조절 서열 외에도, 본 발명의 재조합 발현 벡터는 숙주 세포에서 벡터의 복제를 조절하는 서열(예컨대, 복제 원점) 및 선별 마커 유전자와 같은 추가 서열을 가질 수 있다. 선별 마커 유전자는 벡터가 도입된 숙주 세포의 선별을 용이하게 한다(예컨대, 미국 특허 제4,399,216호, 제4,634,665호 및 제5,179,017호(모두 Axel et al.) 참고). 예를 들어, 전형적으로 선별 마커 유전자는 벡터가 도입된 숙주 세포에서 G418, 히그로마이신 또는 메토트렉세이트와 같은 약물에 대한 내성을 부여한다. 바람직한 선별 마커 유전자는 디하이드로폴레이트 환원효소(DHFR) 유전자(메토트렉세이트 선택/증폭을 갖는 dhfr- 숙주 세포에서 사용하기 위함) 및 네오 유전자(G418 선별을 위함)를 포함한다.
경쇄 및 중쇄의 발현을 위해, 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 발현 벡터(들)는 표준 기술에 의해 숙주 세포 내로 형질감염된다. 용어 "형질감염"의 다양한 형태는 원핵 또는 진핵 숙주 세포 내로 외인성 DNA를 도입하는데 일반적으로 사용되는 다양한 기술, 예컨대, 전기천공, 칼슘-인산염 침전, DEAE-덱스트란 형질감염 등을 포괄하는 것으로 의도된다. 원핵 또는 진핵 숙주 세포에서 본 발명의 항체를 발현하는 것이 이론적으로 가능하지만, 진핵 세포, 및 가장 바람직하게는 포유동물 숙주 세포에서 항체의 발현이 가장 바람직한데, 이러한 진핵 세포, 및 특히 포유동물 세포가 원핵 세포보다 적절히 폴딩되고 면역학적으로 활성인 항체를 조립하고 분비할 가능성이 있기 때문이다. 항체 유전자의 원핵 발현은 활성 항체의 고수율의 생산에 비효과적인 것으로 보고되었다(Boss, M. A. 및 Wood, C. R. (1985) Immunology Today 6:12-13).
본 발명의 재조합 항체를 발현하는 바람직한 포유동물 숙주 세포는 차이니즈 햄스터 난소(CHO 세포)(예컨대, R. J. Kaufman and P. A. Sharp (1982) Mol . Biol. 159:601-621에 기재된 바와 같은 DHFR 선별 마커와 함께 사용되는, Urlaub and Chasin, (1980) Proc . Natl . Acad . Sci . USA 77:4216-4220에 기재된 dhfr- CHO 세포를 포함함), NSO 골수종 세포, COS 세포 및 SP2 세포를 포함한다. 특히, NSO 골수종 세포와 함께 사용하기 위해, 또 다른 바람직한 발현 시스템은 WO 제87/04462호, WO 제89/01036호 및 EP 제338,841호에 개시된 GS 유전자 발현 시스템이다. 항체 유전자를 코딩하는 재조합 발현 벡터가 포유동물 숙주 세포 내로 도입되는 경우, 항체는 숙주 세포에서 항체를 발현하게 하거나 또는, 더욱 바람직하게는, 항체를 숙주 세포가 성장한 배양 배지 내로 분비하게 하는 충분한 시간 동안 숙주 세포를 배양함으로써 생산된다. 항체는 표준 단백질 정제 방법을 사용하여 배양 배지로부터 회수될 수 있다.
면역접합체
또 다른 양태에서, 본 발명은 치료 모이어티, 예컨대 세포독소, 약물(예컨대, 면역억제제) 또는 방사성독소에 접합된, 항-IP-10 항체, 또는 이의 단편을 특징으로 한다. 이러한 접합체는 본원에서 "면역접합체"로 지칭된다. 하나 이상의 세포독소를 포함하는 면역접합체는 "면역독소"로 지칭된다. 세포독소 또는 세포독성제는 세포에 해로운(예컨대, 사멸시키는) 임의의 제제를 포함한다. 예는 탁솔, 사이토칼라신 B, 그라미시딘 D, 브롬화 에티듐, 에메틴, 미토마이신, 에토포시드, 테노포시드, 빈크리스틴, 빈블라스타틴, 콜키신, 독소루비신, 다우노루비신, 디하이드록시 안트라신 디온, 미톡산트론, 미트라마이신, 악티노마이신 D, 1-데하이드로테스토스테론, 글루코코르티코이드, 프로카인, 테트라카인, 리도카인, 프로프라놀롤, 및 프로마이신 및 이의 유사체 또는 동족체를 포함한다. 치료제는 또한, 예를 들어, 항대사물질(예컨대, 메토트렉세이트, 6-머캅토퓨린, 6-티오구아닌, 시타라빈, 5-플루오로우라실 데카르바진), 알킬화제(예컨대, 메클로레타민, 티오테파 클로람부실, 멜팔란, 카르무스틴(BSNU) 및 로무스틴(CCNU), 사이클로포스파미드, 부설판, 디브로모만니톨, 스트렙토조토신, 미토마이신 C, 및 시스-디클로로디아민 백금 (II)(DDP) 시스플라틴), 안트라사이클린(예컨대, 다우노루비신(이전에 다우노마이신) 및 독소루비신), 항생제(예컨대, 닥티노마이신(이전에 악티노마이신), 블레오마이신, 미트라마이신, 및 안트라마이신(AMC)), 및 항유사분열제(예컨대, 빈크리스틴 및 빈블라스타틴)를 포함한다.
본 발명의 항체에 접합될 수 있는 치료적 세포독소의 다른 바람직한 예는 두오카르마이신, 칼리케아미신, 메이탄신 및 아우리스타틴, 및 이의 유도체를 포함한다. 칼리케아미신 항체 접합체의 예는 상업적으로 이용가능하다(Mylotarg™; Wyeth-Ayerst).
사이톡신은 당업계에서 이용가능한 링커 기술을 사용하여 본 발명의 항체에 접합될 수 있다. 세포독소를 항체에 접합하는데 사용된 링커 유형의 예는, 비제한적으로, 하이드라존, 티오에테르, 에스테르, 디설파이드 및 펩타이드 함유 링커를 포함한다. 예를 들어, 리소좀 구획 내의 낮은 pH에 의한 절단에 민감하거나 또는 카텝신(예컨대, 카텝신 B, C, D)과 같은 종양 조직에서 주로 발현되는 프로테아제와 같은 프로테아제에 의한 절단에 민감한 링커가 선택될 수 있다.
치료제를 항체에 접합하기 위한 세포독소, 링커 및 방법의 유형의 추가의 논의를 위해, 또한 문헌[Saito, G. et al. (2003) Adv. Drug Deliv. Rev. 55:199-215; Trail, P.A. et al. (2003) Cancer Immunol. Immunother. 52:328-337; Payne, G. (2003) Cancer Cell 3:207-212; Allen, T.M. (2002) Nat. Rev. Cancer 2:750-763; Pastan, I. and Kreitman, R. J. (2002) Curr. Opin. Investig. Drugs 3:1089-1091; Senter, P.D. and Springer, C.J. (2001) Adv . Drug Deliv . Rev. 53:247-264]을 참고한다.
본 발명의 항체는 또한 방사성면역접합체로도 불리는 세포독성 방사성약제를 생성하기 위해 방사성 동위원소에 접합될 수 있다. 진단적으로 또는 치료적으로 사용하기 위해 항체에 접합될 수 있는 방사성 동위원소의 예는, 비제한적으로, 요오드131, 인듐111, 이트륨90 및 루테튬177을 포함한다. 방사성면역접합체를 제조하는 방법은 당업계에 확립되어 있다. Zevalin™(IDEC Pharmaceuticals) 및 Bexxar™(Corixa Pharmaceuticals)를 포함하는 방사성면역접합체의 예가 상업적으로 이용가능하며, 유사한 방법이 본 발명의 항체를 사용하여 방사성면역접합체를 제조하는데 사용될 수 있다.
본 발명의 항체 접합체는 주어진 생물학적 반응을 변형하는데 사용될 수 있고, 약물 모이어티는 고전적인 화학적 치료제에 제한되는 것으로 해석되지 않아야 한다. 예를 들어, 약물 모이어티는 원하는 생물학적 활성을 갖는 단백질 또는 폴리펩타이드일 수 있다. 이러한 단백질은, 예를 들어, 효소적 활성 독소, 또는 이의 활성 단편, 예컨대 아브린, 리신 A, 슈도모나스 외독소, 또는 디프테리아 독소; 단백질, 예컨대 종양 괴사 인자 또는 인터페론-γ; 또는, 생물학적 반응 변형제, 예를 들어, 림포카인, 인터루킨-1("IL-1"), 인터루킨-2("IL-2"), 인터루킨-6("IL-6"), 과립구 대식세포 집락 자극 인자("GM-CSF"), 과립구 집락 자극 인자("G-CSF"), 또는 다른 성장 인자를 포함할 수 있다.
이러한 치료적 모이어티를 항체에 접합시키는 기술은 널리 알려져 있으며, 예컨대, 문헌[Arnon et al., "Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy", in Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy, Reisfeld et al. (eds.), pp. 243-56 (Alan R. Liss, Inc. 1985); Hellstrom et al., "Antibodies For Drug Delivery", in Controlled Drug Delivery (2nd Ed.), Robinson et al. (eds.), pp. 623-53 (Marcel Dekker, Inc. 1987); Thorpe, "Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy: A Review", in Monoclonal Antibodies '84: Biological And Clinical Applications, Pinchera et al. (eds.), pp. 475-506 (1985); "Analysis, Results, And Future Prospective Of The Therapeutic Use Of Radiolabeled Antibody In Cancer Therapy", in Monoclonal Antibodies For Cancer Detection And Therapy, Baldwin et al. (eds.), pp. 303-16 (Academic Press 1985), and Thorpe et al., "The Preparation And Cytotoxic Properties Of Antibody-Toxin Conjugates", Immunol. Rev., 62:119-58 (1982)]을 참고한다.
이중특이적 분자
또 다른 양태에서, 본 발명은 본 발명의 항-IP-10 항체, 또는 이의 단편을 포함하는 이중특이적 분자를 특징으로 한다. 본 발명의 항체, 또는 이의 항원 결합 부분은 다른 기능적 분자, 예컨대, 또 다른 펩타이드 또는 단백질(예컨대, 수용체에 대한 또 다른 항체 또는 리간드)로 유도체화되거나 이에 연결되어 적어도 2개의 상이한 결합 부위 또는 표적 분자에 결합하는 이중특이적 분자를 생성할 수 있다. 본 발명의 항체는 사실상 하나를 초과하는 다른 기능적 분자로 유도체화되거나 이에 연결되어 2개를 초과하는 상이한 결합 부위 및/또는 표적 분자에 결합하는 다중특이적 분자를 생성할 수 있으며; 이러한 다중특이적 분자는 또한 본원에 사용된 바와 같은 용어 "이중특이적 분자"에 포함되는 것으로 의도된다. 본 발명의 이중특이적 분자를 생성하기 위해, 본 발명의 항체는 하나 이상의 다른 결합 분자, 예컨대 또 다른 항체, 항체 단편, 펩타이드 또는 결합 모방체에 기능적으로 연결될 수 있고(예컨대, 화학적 커플링, 유전적 융합, 비공유 결합 또는 다른 방법에 의해), 이로써 이중특이적 분자가 생성된다.
따라서, 본 발명은 IP-10에 대해 적어도 하나의 제1 결합 특이성 및 제2 표적 에피토프에 대해 제2 결합 특이성을 포함하는 이중특이적 분자를 포함한다. 본 발명의 특정 구현예에서, 제2 표적 에피토프는 Fc 수용체, 예컨대, 인간 FcγRI(CD64) 또는 인간 Fcα 수용체(CD89)이다. 따라서, 본 발명은 FcγR, FcαR 또는 FcεR 발현 효과기 세포(예컨대, 단핵구, 대식세포 또는 다형핵 세포(PMN)), 및 IP-10을 발현하는 표적 세포에 모두 결합할 수 있는 이중특이적 분자를 포함한다. 이들 이중특이적 분자는 IP-10 발현 세포를 효과기 세포에 표적화하고 Fc 수용체 매개 효과기 세포 활성, 예컨대 IP-10 발현 세포의 식균작용, 항체 의존적 세포 매개 세포독성(ADCC), 사이토카인 방출, 또는 수퍼옥사이드 음이온의 생성을 촉발한다.
이중특이적 분자가 다중특이적인 본 발명의 구현예에서, 분자는 항-Fc 결합 특이성 및 항-IP-10 결합 특이성 외에도 제3 결합 특이성을 추가로 포함할 수 있다. 일 구현예에서, 제3 결합 특이성은 항-향상 인자(EF) 부분, 예컨대, 세포독성 활성에 관여하는 표면 단백질에 결합하여 표적 세포에 대한 면역 반응을 증가시키는 분자이다. "항-향상 인자 부분"은 주어진 분자, 예컨대, 항원 또는 수용체에 결합하여 Fc 수용체 또는 표적 세포 항원에 대한 결합 결정기의 효과를 향상시키는 항체, 기능적 항체 단편 또는 리간드일 수 있다. "항-향상 인자 부분"은 Fc 수용체 또는 표적 세포 항원에 결합할 수 있다. 대안적으로, 항-향상 인자 부분은 제1 및 제2 결합 특이성이 결합하는 독립체(entity)와 상이한 독립체에 결합할 수 있다. 예를 들어, 항-향상 인자 부분은 세포독성 T-세포에 결합할 수 있다(예컨대 표적 세포에 대한 면역 반응을 증가시키는 CD2, CD3, CD8, CD28, CD4, CD40, ICAM-1 또는 다른 면역 세포를 통해).
일 구현예에서, 본 발명의 이중특이적 분자는 결합 특이성으로서 적어도 하나의 항체, 또는 이의 항체 단편을 포함하며, 이는 예컨대, Fab, Fab', F(ab')2, Fv, 또는 단쇄 Fv를 포함한다. 항체는 또한 경쇄 또는 중쇄 이량체, 또는 이의 임의의 최소 단편, 예컨대 Ladner et al. 미국 특허 제4,946,778호에 기재된 바와 같은 Fv 또는 단쇄 작제물일 수 있으며, 이의 내용은 참고로 명확하게 포함되어 있다.
일 구현예에서, Fcγ 수용체에 대한 결합 특이성은 단클론 항체에 의해 제공되며, 이의 결합은 인간 면역글로불린 G(IgG)에 의해 차단되지 않는다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "IgG 수용체"는 염색체 1에 위치한 8개의 γ-사슬 유전자 중 어느 것을 지칭한다. 이들 유전자는 총 12개의 막관통 또는 가용성 수용체 아형을 코딩하며, 이는 3개의 Fcγ 수용체 부류로 나뉜다: FcγRI(CD64), FcγRII(CD32), 및 FcγRIII(CD16). 일 바람직한 구현예에서, Fcγ 수용체는 인간 고친화성 FcγRI이다. 인간 FcγRI는 72 kDa 분자이며, 단량체성 IgG에 대해 고친화성(108 - 109 M-1)을 나타낸다.
특정 바람직한 항-Fcγ 단클론 항체의 생산 및 특성은 Fanger 등에 의해 PCT 공개 WO 제88/00052호 및 미국 특허 제4,954,617호에 의해 기재되어 있으며, 이의 교시는 본원에 참고로 완전히 포함되어 있다. 이들 항체는 수용체의 Fcγ 결합 부위와 구별되는 부위에 있는 FcγRI, FcγRII 또는 FcγRIII의 에피토프에 결합하며, 따라서, 이들의 결합은 IgG의 생리학적 수준에 의해 실질적으로 차단되지 않는다. 본 발명에서 유용한 특정 항-FcγRI 항체는 mAb 22, mAb 32, mAb 44, mAb 62 및 mAb 197이다. mAb 32를 생산하는 하이브리도마는 미국 미생물 보존 센터, ATCC 등록 번호 HB9469로부터 이용가능하다. 다른 구현예에서, 항-Fcγ 수용체 항체는 단클론 항체 22의 인간화 형태(H22)이다. H22 항체의 생산 및 특성은 문헌[Graziano, R.F. et al.(1995) J. Immunol 155 (10): 4996-5002 및 PCT 공개 WO 제94/10332호]에 기재되어 있다. H22 항체를 생산하는 세포주는 명칭 HA022CL1 하에 미국 미생물 보존 센터에 기탁되었고 등록 번호 CRL 11177을 갖는다.
또 다른 바람직한 구현예에서, Fc 수용체의 결합 특이성은 인간 IgA 수용체, 예컨대, Fc-알파 수용체(FcαRI(CD89))에 결합하는 항체에 의해 제공되며, 이의 결합은 바람직하게는 인간 면역글로불린 A(IgA)에 의해 차단되지 않는다. 용어 "IgA 수용체"는 염색체 19 상에 위치한 하나의 α-유전자(FcαRI)의 유전자 산물을 포함하는 것으로 의도된다. 이 유전자는 55 내지 110 kDa의 몇 개의 선택적 스플라이싱된 막관통 아형을 코딩하는 것으로 알려져 있다. FcαRI(CD89)는 단핵구/대식세포, 호산성 및 호중성 과립구 상에서 항시적으로 발현되지만, 비효과기 세포 집단에서는 발현되지 않는다. FcαRI는 IgA1 및 IgA2 모두에 대해 중간 친화성(
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5 x 107 M-1)을 가지며, 이는 G-CSF 또는 GM-CSF와 같은 사이토카인에 노출시 증가된다(Morton, H.C. et al. (1996) Critical Reviews in Immunology 16:423-440). IgA 리간드 결합 도메인 외부의 FcαRI에 결합하는 A3, A59, A62 및 A77로서 확인된 4개의 FcαRI-특이적 단클론 항체가 기술되었다(Monteiro, R.C. et al. (1992) J. Immunol. 148:1764).
FcαRI 및 FcγRI는 본 발명의 이중특이적 분자에서 사용하기 위한 바람직한 촉발 수용체인데, 이들은 (1) 주로 면역 효과기 세포, 예컨대, 단핵구, PMN, 대식세포 및 수지상 세포 상에서 발현되고; (2) 높은 수준(예컨대, 세포당 5,000-100,000개)으로 발현되며; (3) 세포독성 활성(예컨대, ADCC, 식균작용)의 매개자이고; (4) 자기에게 표적화된 자기 항원을 포함하는 항원의 향상된 항원 제시를 매개하기 때문이다.
인간 단클론 항체가 바람직하지만, 본 발명의 이중특이적 분자에 사용될 수 있는 다른 항체는 쥣과, 키메라 및 인간화 단클론 항체이다.
본 발명의 이중특이적 분자는 당업계에 알려진 방법을 사용하여, 구성요소 결합 특이성, 예컨대, 항-FcR 및 항-IP-10 결합 특이성을 접합시킴으로써 제조될 수 있다. 예를 들어, 이중특이적 분자의 각각의 결합 특이성은 개별적으로 생성된 다음 서로 접합될 수 있다. 결합 특이성이 단백질 또는 펩타이드인 경우, 다양한 커플링 또는 가교결합제가 공유 접합을 위해 사용될 수 있다. 가교결합제는 공유 접합을 위해 사용될 수 있다. 가교결합제의 예는 단백질 A, 카르보디이미드, N-석신이미딜-S-아세틸-티오아세테이트(SATA), 5,5'-디티오비스(2-니트로벤조산)(DTNB), o-페닐렌디말레이미드(oPDM), N-석신이미딜-3-(2-피리딜디티오)프로피오네이트(SPDP), 및 설포석신이미딜 4-(N-말레이미도메틸) 사이클로헥산-1-카복실레이트(설포-SMCC)를 포함한다(예컨대, Karpovsky et al. (1984) J. Exp . Med. 160:1686; Liu, MA et al. (1985) Proc . Natl . Acad . Sci . USA 82:8648 참고). 다른 방법은 문헌[Paulus (1985) Behring Ins. Mitt. No. 78, 118-132; Brennan et al. (1985) Science 229:81-83, 및 Glennie et al. (1987) J. Immunol. 139: 2367-2375]에 기재된 것을 포함한다. 바람직한 접합제는 SATA 및 설포-SMCC이며, 이들 모두는 Pierce 화학회사(Rockford, IL)로부터 이용가능하다.
결합 특이성이 항체인 경우, 이들은 2개의 중쇄의 C-말단 힌지 영역의 설프하이드릴 결합을 통해 접합될 수 있다. 특히 바람직한 구현예에서, 힌지 영역은 접합 전에, 홀수 개의 설프하이드릴 잔기, 바람직하게는 하나의 설프하이드릴 잔기를 함유하도록 변형된다.
대안적으로, 두 결합 특이성은 동일한 벡터에서 코딩되고 동일한 숙주 세포에서 발현되고 조립될 수 있다. 이 방법은 이중특이적 분자가 mAb x mAb, mAb x Fab, Fab x F(ab')2 또는 리간드 x Fab 융합 단백질인 경우 특히 유용하다. 본 발명의 이중특이적 분자는 하나의 단쇄 항체 및 결합 결정기를 포함하는 단쇄 분자, 또는 2개의 결합 결정기를 포함하는 단쇄 이중특이적 분자일 수 있다. 이중특이적 분자는 적어도 2개의 단쇄 분자를 포함할 수 있다. 이중특이적 분자를 제조하는 방법은 예를 들어 미국 특허 제5,260,203호; 미국 특허 제5,455,030호; 미국 특허 제4,881,175호; 미국 특허 제5,132,405호; 미국 특허 제5,091,513호; 미국 특허 제5,476,786호; 미국 특허 제5,013,653호; 미국 특허 제5,258,498호; 및 미국 특허 제5,482,858호에 기재되어 있다.
이중특이적 분자와 이들의 특이적 표적과의 결합은, 예를 들어, 효소-결합 면역흡착 분석(ELISA), 방사면역분석(RIA), FACS 분석, 생물분석(예컨대, 성장 억제), 또는 웨스턴 블롯 분석에 의해 확인될 수 있다. 이들 분석 각각은 일반적으로 관심있는 복합체에 특이적인 표지된 시약(예컨대, 항체)를 사용함으로써 특히 관심있는 단백질-항체 복합체의 존재를 검출한다. 예를 들어, FcR-항체 복합체는 예컨대, 항체-FcR 복합체를 인식하고 이에 특이적으로 결합하는 효소-결합 항체 또는 항체 단편을 사용하여 검출될 수 있다. 대안적으로, 복합체는 임의의 다양한 다른 면역분석을 사용하여 검출될 수 있다. 예를 들어, 항체는 방사능으로 표지되어 방사면역분석(RIA)에서 사용될 수 있다(예를 들어, Weintraub, B., Principles of Radioimmunoassays, Seventh Training Course on Radioligand Assay Techniques, The Endocrine Society, March, 1986 참고, 이는 본원에 참고로 포함되어 있음). 방사성 동위원소는 γ 계수기 또는 섬광 계수기의 사용과 같은 수단에 의해 또는 자기방사법에 의해 검출될 수 있다.
약제학적 조성물
또 다른 양태에서, 본 발명은 약제학적으로 허용가능한 담체와 함께 제제화된, 본 발명의 단클론 항체, 또는 이의 항원 결합 부분(들) 중 하나 또는 조합을 함유하는 조성물, 예컨대, 약제학적 조성물을 제공한다. 이러한 조성물은 본 발명의 (예컨대, 2개 이상의 상이한) 항체, 또는 면역접합체 또는 이중특이적 분자 중 하나 또는 조합을 포함할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 약제학적 조성물은 표적 항원 상의 상이한 에피토프에 결합하거나 상보적 활성을 갖는 항체(또는 면역접합체 또는 이중특이적)의 조합을 포함할 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물은 또한 조합 요법으로 투여될 수 있고, 즉, 다른 제제와 조합될 수 있다. 예를 들어, 조합 요법은 적어도 하나의 다른 항염증제 또는 면역억제제와 조합된 본 발명의 항-IP-10 항체를 포함할 수 있다. 조합 요법에서 사용될 수 있는 치료제의 예는 본 발명의 항체의 용도에 관한 섹션에서 하기에 더 상세히 기재되어 있다.
본원에 사용된 바와 같이, "약제학적으로 허용가능한 담체"는 생리학적으로 양립가능한 임의의 및 모든 용매, 분산 매질, 코팅, 항균 및 항진균제, 등장성 및 흡수 지연제 등을 포함한다. 바람직하게는, 담체는 정맥내, 근육내, 피하, 비경구, 척추 또는 표피 투여(예컨대, 주사 또는 주입에 의해)에 적합하다. 투여 경로에 따라, 활성 화합물, 즉, 항체, 면역접합체, 또는 이중특이적 분자는 화합물을 불활성화시킬 수 있는 산 및 다른 자연 조건의 작용으로부터 화합물을 보호하는 물질 내에 코팅될 수 있다.
본 발명의 약제학적 화합물은 하나 이상의 약제학적으로 허용가능한 염을 포함할 수 있다. "약제학적으로 허용가능한 염"은 모 화합물의 원하는 생물학적 활성을 보유하고 임의의 원하지 않는 독소 효과를 주지 않는 염을 지칭한다(예컨대, Berge, S.M., et al. (1977) J. Pharm . Sci. 66:1-19 참고). 이러한 염의 예는 산 부가염 및 염기 부가염을 포함한다. 산 부가염은 비독성 무기산, 예컨대 염산, 질산, 인산, 황산, 브롬화수소산, 요오드화수소산, 인 등으로부터 유래된 것, 뿐만 아니라 비독성 유기산, 예컨대 지방족 모노 및 디카복실산, 페닐 치환된 알카노산, 하이드록시 알카노산, 방향족 산, 지방족 및 방향족 설폰산 등으로부터 유래된 것을 포함한다. 염기 부가염은 알칼리 토금속, 예컨대, 나트륨, 칼륨, 마그네슘, 칼슘 등으로부터 유래된 것, 뿐만 아니라 비독성 유기 아민, 예컨대 N,N'-디벤질에틸렌디아민, N-메틸글루카민, 클로로프로카인, 콜린, 디에탄올아민, 에틸렌디아민, 프로카인 등으로부터 유래된 것을 포함한다.
본 발명의 약제학적 조성물은 또한 약제학적으로 허용가능한 항산화제를 포함할 수 있다. 약제학적으로 허용가능한 항산화제의 예는: (1) 수용성 항산화제, 예컨대 아스코르브산, 시스테인 수화염화물, 황산수소 나트륨, 메타중아황산 나트륨, 아황산 나트륨 등; (2) 지용성 항산화제, 예컨대 아스코빌 팔미테이트, 부틸레이트화된 하이드록시아니솔(BHA), 부틸화된 하이드록시톨루엔(BHT), 레시틴, 프로필 갈레이트, 알파-토코페롤 등; 및 (3) 금속 킬레이트화제, 예컨대 시트르산, 에틸렌디아민 테트라아세트산(EDTA), 소르비톨, 타르타르산, 인산 등을 포함한다.
본 발명의 약제학적 조성물에서 사용될 수 있는 적합한 수성 및 비수성 담체의 예는 물, 에탄올, 폴리올(예컨대, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 등), 및 이의 적합한 혼합물, 식물성 오일, 예컨대 올리브 오일, 및 주사가능한 유기 에스테르, 예컨대 에틸 올레에이트를 포함한다. 적합한 유동성은, 예를 들어, 코팅 물질, 예컨대 레시틴의 사용에 의해, 분산액의 경우 필요한 입자 크기의 유지에 의해, 그리고 계면활성제의 사용에 의해 유지될 수 있다.
이러한 조성물은 또한 보조제, 예컨대 보존제, 습윤제, 유화제 및 분산제를 함유할 수 있다. 미생물의 존재의 방지는 상기 멸균 절차에 의해, 그리고 다양한 항균 및 항진균제, 예를 들어, 파라벤, 클로로부탄올, 페놀 소르브산 등을 포함시킴으로써 확보될 수 있다. 등장화제, 예컨대 당, 염화나트륨 등을 조성물에 포함시키는 것이 또한 바람직할 수 있다. 또한, 주사가능한 약제학적 형태의 연장된 흡수는 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴과 같이 흡수를 지연시키는 제제를 포함시킴으로써 달성될 수 있다.
약제학적으로 허용가능한 담체는 멸균 수용액 또는 분산액 및 멸균 주사가능한 용액 또는 분산액의 즉석 제조를 위한 멸균 분말을 포함한다. 약제학적 활성 물질을 위한 이러한 매질 및 제제의 사용은 당업계에 알려져 있다. 임의의 종래의 매질 또는 제제가 활성 화합물과 양립하지 않는 것을 제외하고, 본 발명의 약제학적 조성물에서 이의 용도가 고려된다. 보충적인 활성 화합물이 또한 조성물에 포함될 수 있다.
치료 조성물은 전형적으로 제조 및 보관 조건하에 멸균이고 안정해야 한다. 조성물은 용액, 미세유화액, 리포좀, 또는 높은 약물 농도에 적합한 다른 규칙 구조로 제제화될 수 있다. 담체는, 예를 들어, 물, 에탄올, 폴리올(예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 및 액체 폴리에틸렌 글리콜, 등), 및 이의 적합한 혼합물을 함유하는 용매 또는 분산 매질일 수 있다. 적합한 유동성은, 예를 들어, 레시틴과 같은 코팅의 사용에 의해, 분산액의 경우 필요한 입자 크기의 유지에 의해 그리고 계면활성제의 사용에 의해 유지될 수 있다. 많은 경우, 조성물에 등장화제, 예를 들어, 당, 폴리알콜, 예컨대 만니톨, 소르비톨, 또는 염화나트륨을 포함시키는 것이 바람직할 것이다. 주사가능한 조성물의 연장된 흡수는 흡수를 지연시키는 제제, 예를 들어, 모노스테아레이트 염 및 젤라틴을 조성물에 포함시킴으로써 달성될 수 있다.
멸균 주사가능한 용액은, 필요한 경우, 상기 열거된 성분 중 하나 또는 조합을 갖는 적절한 용매 중에 필요한 양의 활성 화합물을 혼입시킨 다음, 멸균 미세여과함으로써 제조될 수 있다. 일반적으로, 분산액은 활성 화합물을 염기성 분산 매질 및 상기 열거된 것으로부터 필요한 다른 성분을 함유하는 멸균 비히클에 혼입시킴으로써 제조된다. 멸균 주사가능한 용액의 제조를 위한 멸균 분말의 경우, 바람직한 제조 방법은 이전에 멸균여과된 용액으로부터 활성 성분 및 임의의 추가의 원하는 성분의 분말을 생성하는 진공 건조 및 동결 건조이다.
단일 투여 형태를 생산하기 위해 담체 물질과 조합될 수 있는 활성 성분의 양은 치료되는 대상, 및 특정 투여 방식에 따라 달라질 것이다. 단일 투여 형태를 생산하기 위해 담체 물질과 조합될 수 있는 활성 성분의 양은 일반적으로 치료 효과를 야기하는 조성물의 양일 것이다. 일반적으로, 100% 중에서, 이 양은 활성 성분의 약 0.01% 내지 약 99%, 바람직하게는 약제학적으로 허용가능한 담체와 조합된 활성 성분의 약 0.1% 내지 약 70%, 가장 바람직하게는 약 1% 내지 약 30% 범위일 것이다.
투여량 요법은 최적의 원하는 반응(예컨대, 치료 반응)을 제공하도록 조정된다. 예를 들어, 단일 볼루스가 투여될 수 있거나, 몇 개의 분할 용량이 시간이 경과함에 따라 투여될 수 있거나 용량이 치료 상황의 긴급성에 의해 표시된 대로 비례적으로 감소하거나 증가할 수 있다. 투여의 용이성 및 투여량의 균일성을 위해 비경구 조성물을 투여 단위 형태로 제제화하는 것이 특히 유리하다. 본원에 사용된 바와 같은 투여 단위 형태는 치료될 대상을 위한 단위 투여량으로서 적합한 물리적으로 구별되는 단위를 지칭하며; 각 단위는 필요한 약제학적 담체와 함께 원하는 치료 효과를 생성하도록 계산된 미리 결정된 양의 활성 화합물을 함유한다. 본 발명의 투여 단위 형태의 사양은 (a) 활성 화합물의 독특한 특징 및 치료될 특정 치료 효과, 및 (b) 개체에서 민감성의 치료를 위해 이러한 활성 화합물을 배합하는 것의 본 기술분야에서 내재된 한계에 의해 결정되고 이에 직접적으로 의존한다.
항체 투여의 경우, 투여량은 숙주 체중의 약 0.0001 내지 100 mg/kg, 및 더욱 일반적으로 0.01 내지 5 mg/kg의 범위이다. 예를 들어, 투여량은 0.3 mg/kg 체중, 1 mg/kg 체중, 3 mg/kg 체중, 5 mg/kg 체중 또는 10 mg/kg 체중 또는 1-10 mg/kg의 범위 이내일 수 있다. 예시적인 치료 요법은 1주마다 1회, 2주마다 1회, 3주마다 1회, 4주마다 1회, 1개월마다 1회, 3개월마다 1회 또는 3 내지 6개월마다 1회의 항체의 투여를 수반한다. 예를 들어, 항체를 위한 투여 요법은 정맥내 투여를 통한 1 mg/kg 체중 또는 3 mg/kg 체중을 포함하며, 항체는 하기 투여 일정 중 하나를 사용하여 제공된다: (i) 6개 투여량에 대해 4주마다 이후 3개월마다; (ii) 3주마다; (iii) 3 mg/kg 체중으로 1회 후 3주마다 1 mg/kg 체중. 항체를 위한 바람직한 투여 요법은 또한 항-IP-10 항체(또는 이의 항원 결합 부분)의 30-450 mg의 단일 용량의 투여를 포함한다. 예를 들어, 항체의 단일 용량은 30 mg, 40 mg, 50 mg, 60 mg, 70 mg, 80 mg, 90 mg, 100 mg, 110 mg, 120 mg, 130 mg, 140 mg, 150 mg, 160 mg, 170 mg, 180 mg, 190 mg, 200 mg, 210 mg, 220 mg, 230 mg, 240 mg, 250 mg, 260 mg, 270 mg, 280 mg, 290 mg, 300 mg, 310 mg, 320 mg, 330 mg, 340 mg, 350 mg, 360 mg, 370 mg, 380 mg, 390 mg, 400 mg, 450mg, 또는 a 용량 of 35 mg, 45 mg, 55 mg, 65 mg, 75 mg, 85 mg, 95 mg, 105 mg, 115 mg, 125 mg, 135 mg, 145 mg, 155 mg, 165 mg, 175 mg, 185 mg, 195 mg, 205 mg, 215 mg, 225 mg, 235 mg, 245 mg, 255 mg, 265 mg, 275 mg, 285 mg, 295 mg, 305 mg, 315 mg, 325 mg, 335 mg, 345 mg, 355 mg, 355 mg, 375 mg, 385 mg, 395 mg, 405 mg, 또는 445mg의 용량이다. 일부 방법에서, 항체는 매주마다 또는 2주마다 투여된다. 또 다른 방법에서, 항체는 약 12주의 기간 동안, 예컨대, 1, 15, 29, 43, 57, 및 71일째에 투여된다. 예를 들어, 방법은 약 12주의 기간 동안, 2주마다, 항체, 또는 이의 항원 결합 부분의 약 40mg의 단일 용량을 포함할 수 있다.
일부 방법에서, 상이한 결합 특이성을 갖는 둘 이상의 단클론 항체가 동시에 투여되며, 이 경우, 투여된 각각의 항체는 표시된 범위 내에 속한다. 항체는 일반적으로 여러 번 투여된다. 단일 투여 사이의 간격은, 예를 들어, 매주, 매월, 3개월마다 또는 매년일 수 있다. 간격은 또한 환자에서 표적 항원에 대한 항체의 혈액 수준을 측정함으로써 나타낸 바와 같이 불규칙적일 수 있다. 일부 방법에서, 투여량은 약 1-1000 μg /ml 및 일부 방법에서 약 25-300 μg /ml의 혈장 항체 농도를 달성하도록 조정된다.
대안적으로, 항체는 지속적인 방출 제제로서 투여될 수 있으며, 이 경우 덜 빈번한 투여가 필요하다. 투여량 및 빈도는 환자에서 항체의 반감기에 따라 다르다. 일반적으로, 인간 항체가 가장 긴 반감기를 나타내며, 그 다음으로 인간화 항체, 키메라 항체, 및 비인간 항체이다. 투여의 투여량 및 빈도는 치료가 예방적 또는 치료적인지 여부에 따라 달라질 수 있다. 예방적 적용에서, 비교적 적은 투여량이 장기간 비교적 빈번하지 않은 간격으로 투여된다. 일부 환자는 이들의 생애 나머지 동안 계속 치료를 받는다. 치료적 적용에서, 질환의 진행이 감소되거나 종료될 때까지, 및 바람직하게는 환자가 질환의 증상의 부분적 또는 완전한 개선을 나타낼 때까지, 비교적 짧은 간격의 비교적 높은 투여량이 때때로 필요하다. 이후, 환자는 예방적 요법을 투여받을 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물에서 항체(및 다른 활성 성분)의 실제 투여량 수준은 환자에게 독성 없이 특정 환자, 조성물, 및 투여 방식에 대해 원하는 치료 반응을 달성하는데 효과적인 항체의 양을 얻기 위해 달라질 수 있다. 선택된 투여량 수준은 사용된 본 발명의 특정 조성물, 또는 이의 에스테르, 염 또는 아미드의 활성, 투여 경로, 투여 시간, 사용되는 특정 화합물의 배설 속도, 치료의 지속시간, 사용된 특정 조성물과 조합하여 사용된 다른 약물, 화합물 및/또는 물질, 치료되는 환자의 연령, 성별, 체중, 병태, 일반적인 건강 및 이전 병력, 및 의학 분야에서 널리 알려진 유사 인자를 포함하는 다양한 약동학 인자에 좌우될 것이다.
항-IP-10 항체의 "치료적 유효량"은 바람직하게는 질환 증상의 중증도의 감소, 질환 무증상 기간의 빈도 및 지속시간의 증가, 또는 질환 고통으로 인한 손상 또는 장애의 예방을 야기한다. 류마티스성 관절염(RA)의 경우, 치료적 유효량은 바람직하게는 RA와 관련된 신체 증상, 예를 들어, 통증, 피로, 아침 경직(1시간 넘게 지속됨), 확산성 근육통, 식욕 상실, 약화, 열감(warmth)을 가진 관절 통증, 부기, 압통, 및 비활동 후 관절의 경직의 추가 약화를 예방한다. 치료적 유효량은 바람직하게는 또한 RA의 발병을 예방하거나 지연시키며, 예컨대 질환의 조기 또는 예비 징후가 존재할 때 필요할 수 있다. 마찬가지로, 그것은 RA와 관련된 만성 진행을 지연시키는 것을 포함한다. RA의 진단에 사용된 실험실 검사는 화학(IP-10 수준의 측정 포함), 혈액학, 혈청학 및 방사선학을 포함한다. 따라서, 상기 중 어느 것을 모니터링하는 임의의 임상적 또는 생화학적 분석이 특정 치료가 RA를 치료하기 위한 치료적 유효량인지 결정하기 위해 사용될 수 있다. 당업자는 대상의 크기, 대상의 증상의 중증도, 및 선택된 투여의 특정 조성물 또는 투여 경로와 같은 인자에 기초하여 이러한 양을 결정할 수 있을 것이다.
본 발명에 사용된 조성물은 당업계에 알려진 하나 이상의 다양한 방법을 사용하여 하나 이상의 투여 경로를 통해 투여될 수 있다. 당업자에 의해 이해될 바와 같이, 투여 경로 및/또는 방식은 원하는 결과에 따라 달라질 것이다. 항체를 위한 바람직한 투여 경로는 정맥내, 근육내, 진피내, 복강내, 피하, 척추 또는 다른 비경구 투여 경로, 예를 들어 주사 또는 주입에 의한 것을 포함한다. 본원에 사용된 바와 같이 문구 "비경구 투여"는 장관 및 국소 투여 이외의 투여 방식, 일반적으로 주사에 의한 것을 의미하며, 비제한적으로, 정맥내, 근육내, 동맥내, 척추강내, 관절낭내(intracapsular), 안와내, 심장내, 진피내, 복강내, 기관경유, 피하, 표피하(subcuticular), 관절내, 관절낭하(subcapsular), 지주막하(subarachnoid), 척추내, 경막외 및 흉골내 주사 및 주입을 포함한다.
대안적으로, 항체는 비-비경구 경로, 예컨대 국소, 표피 또는 점막 투여 경로를 통해, 예를 들어, 비강내로, 경구로, 질로, 직장으로, 설하로 또는 국소로 투여될 수 있다.
활성 화합물은 임플란트, 경피 패치, 및 미세캡슐화된 전달 시스템을 포함하는, 제어 방출 제제와 같이, 화합물이 빠르게 방출되는 것을 방지할 담체를 이용하여 제조될 수 있다. 생분해성, 생체적합성 중합체, 예컨대 에틸렌 비닐 아세테이트, 폴리무수물, 폴리글리콜산, 콜라겐, 폴리오르토에스테르, 및 폴리젖산이 사용될 수 있다. 이러한 제제를 제조하기 위한 많은 방법은 특허되어 있거나 일반적으로 당업자에게 알려져 있다. 예컨대, 문헌[Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J.R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., New York, 1978]을 참고한다.
치료 조성물은 당업계에 알려진 의료 장치를 이용하여 투여될 수 있다. 예를 들어, 바람직한 구현예에서, 본 발명의 치료 조성물은 무바늘 피하 주사 장치, 예컨대 미국 특허 제5,399,163호; 제5,383,851호; 제5,312,335호; 제5,064,413호; 제4,941,880호; 제4,790,824호; 또는 제4,596,556호에 개시된 장치를 이용하여 투여될 수 있다. 본 발명에서 유용한 널리 알려진 임플란트 및 모듈의 예는 제어된 속도로 약물을 분배하기 위한 이식가능한 미세주입 펌프를 개시하는 미국 특허 제4,487,603호; 피부를 통해 약물을 투여하기 위한 치료 장치를 개시하는 미국 특허 제4,486,194호; 정확한 주입 속도로 약물을 전달하기 위한 약물 주입 펌프를 개시하는 미국 특허 제4,447,233호; 지속적인 약물 전달을 위한 가변 유동 이식가능한 주입 기기를 개시하는 미국 특허 제4,447,224호; 다중 챔버 구획을 갖는 삼투 약물 전달 시스템을 개시하는 미국 특허 제4,439,196호; 및 삼투 약물 전달 시스템을 개시하는 미국 특허 제4,475,196호를 포함한다. 이들 특허는 본원에 참고로 포함된다. 많은 다른 이러한 임플란트, 전달 시스템, 및 모듈은 당업자에게 공지되어 있다.
특정 구현예에서, 본 발명에 사용된 항체는 생체내에서 적절한 분포를 보장하도록 제제화될 수 있다. 예를 들어, 혈액-뇌 장벽(BBB)은 많은 고도의 친수성 화합물을 배제한다. 본 발명의 치료 화합물이 BBB를 가로지르는 것을 보장하기 위해(필요한 경우), 이들은, 예를 들어, 리포좀 내에서 제제화될 수 있다. 리포좀을 제조하는 방법의 경우, 예컨대, 미국 특허 제4,522,811호; 제5,374,548호; 및 제5,399,331호를 참고한다. 리포좀은 특정 세포 또는 장기 내로 선택적으로 수송되는 하나 이상의 모이어티를 포함할 수 있으며, 따라서 표적화된 약물 전달을 향상시킬 수 있다(예컨대, V.V. Ranade (1989) J. Clin . Pharmacol. 29:685 참고). 예시적인 표적화 모이어티는 엽산 또는 바이오틴(예컨대, 미국 특허 제5,416,016호; Low et al. 참고); 만노사이드(Umezawa et al., (1988) Biochem . Biophys . Res. Commun. 153:1038); 항체(P.G. Bloeman et al. (1995) FEBS Lett. 357:140; M. Owais et al. (1995) Antimicrob . Agents Chemother. 39:180); 계면활성제 단백질 A 수용체(Briscoe et al. (1995) Am. J. Physiol. 1233:134); p120(Schreier et al. (1994) J. Biol . Chem . 269:9090)를 포함하며; 또한 문헌[K. Keinanen; M.L. Laukkanen (1994) FEBS Lett . 346:123; J.J. Killion; I.J. Fidler (1994) Immunomethods 4:273]을 참고한다.
본 발명의 용도 및 방법
본 발명의 항체(및 면역접합체 및 이중특이적 분자)는 시험관내 및 생체내 진단 및 치료 유용성을 갖는다. 예를 들어, 이들 분자는, 예컨대 시험관내 또는 생체외에서, 배양 중인 세포에게 투여될 수 있거나, 또는 다양한 장애를 치료하거나, 예방하거나 또는 진단하기 위해, 예컨대 생체내에서, 대상에 투여될 수 있다. 본원에 사용된 바와 같이 용어 "대상"은 인간 및 비인간 동물을 포함하는 것으로 의도된다. 비인간 동물은 모든 척추동물, 예컨대, 포유동물 및 비포유동물, 예컨대 비인간 영장류, 양, 개, 고양이, 소, 말, 닭, 양서류, 및 파충류를 포함한다. 방법은 비정상적인 IP-10 발현과 관련된 장애를 갖는 인간 환자를 치료하는데 특히 적합하다. IP-10에 대한 항체가 또 다른 제제와 함께 투여될 때, 이 둘은 순서대로 또는 동시에 투여될 수 있다.
일 구현예에서, 본 발명의 항체(및 면역접합체 및 이중특이적 분자)는 IP-10의 수준, 또는 IP-10을 함유하는 세포의 수준을 검출하는데 사용될 수 있다. 이것은, 예를 들어, 항체와 IP-10 사이에 복합체를 형성시키는 조건하에, 샘플(예컨대, 시험관내 샘플) 및 대조군 샘플을 항-IP-10 항체와 접촉시킴으로써 달성될 수 있다. 항체 및 IP-10 사이에 형성된 임의의 복합체는 검출되고 샘플 및 대조군에서 비교된다. 예를 들어, ELISA 및 유세포 분석과 같은 당업계에 널리 알려진 표준 검출 방법이 본 발명의 조성물을 사용하여 수행될 수 있다.
따라서, 일 양태에서, 본 발명은 항체 또는 이의 부분 및 IP-10 사이에 복합체를 형성시키는 조건하에, 샘플, 및 대조군 샘플을 IP-10에 특이적으로 결합하는 본 발명의 항체, 또는 이의 항원 결합 부분과 접촉시키는 단계를 포함하는, 샘플에서 IP-10(예컨대, 인간 IP-10 항원)의 존재를 검출하거나, 또는 IP-10의 양을 측정하는 방법을 추가로 제공한다. 이후, 복합체의 형성이 검출되며, 여기서 대조군 샘플과 비교하여 샘플의 복합체 형성의 차이는 샘플 내의 IP-10의 존재를 나타낸다.
또한 본 발명의 조성물(예컨대, 항체, 인간 항체, 면역접합체 및 이중특이적 분자) 및 사용 설명서를 포함하는 키트가 본 발명의 범위에 속한다. 키트는 적어도 하나의 추가적인 시약, 또는 하나 이상의 추가적인 본 발명의 항체(예컨대, 제1 항체와 구별되는 표적 항원 상의 에피토프에 결합하는 상보적 활성을 갖는 항체)를 추가로 함유할 수 있다. 키트는 전형적으로 키트의 내용물의 의도된 용도를 나타내는 라벨을 포함한다. 용어 라벨은 키트 위에 또는 키트와 함께 제공되거나 키트에 동봉된 임의의 글, 또는 기록물을 포함한다.
IP-10은 활성화된 T 세포 및 NK 세포에 대해 화학주성인자 효과를 가지며 염증 및 자가면역 반응의 부위에 이러한 세포를 모집하는 것으로 알려져 있다. 따라서, 본 발명의 항-IP-10 항체(및 면역접합체 및 이중특이적 분자)는 다양한 임상 징후에서 활성화된 T 세포 및/또는 NK 세포에 의해 매개되는 염증성 또는 자가면역 반응을 억제하는데 사용될 수 있다. 따라서, 본 발명은 염증성 또는 자가면역 반응이 억제되도록 T 세포 또는 NK 세포를 본 발명의 항체, 또는 이의 항원 결합 부분(또는 본 발명의 면역접합체 또는 이중특이적 분자)과 접촉시키는 단계를 포함하는 활성화된 T 세포 및/또는 NK 세포에 의해 매개된 염증성 또는 자가면역 반응을 억제하는 방법을 제공한다. 본 발명의 항체가 사용될 수 있는 염증성 또는 자가면역 병태의 특정 예는, 비제한적으로, 하기를 포함한다:
A. 다발성 경화증 및 다른 탈수초 질환
IP-10 mRNA의 발현은 다발성 경화증의 마우스 모델인 쥣과 실험적 알레르기성 뇌척수염(EAE)에서 증가된 것으로 나타났다(Godiska, R. et al. (1995) J. Neuroimmunol . 58:167-176). 더욱이, IP-10의 증가된 수준은 급성 탈수초 사건 동안 MS 환자의 뇌척수액에서 발견되었다(Sorensen, T.L. et al. (1999) J. Clin . Invest. 103:807-815; Franciotta et al. (2001) J. Neuroimmunol . 115:192-198). IP-10은 또한 MS 병변에서 성상세포에 의해 발현되지만 영향을 받지 않은 백질에서는 발현되지 않은 것으로 나타났고(Balashov, K.E. et al. (1999) Proc . Natl . Acad. Sci . USA 96:6873-6878), MS 플라크 내의 대식세포에 의해 그리고 주위 실질조직(parenchyma) 내의 반응성 성상세포에 의해 발현되는 것으로 나타났다(Simpson, J.E. et al. (2000) Neuropathol . Appl . Neurobiol . 26:133-142). PCT 특허 공개 WO 제02/15932호는 MS의 마우스 간염 바이러스(MHV) 모델에서 항-IP-10 항체의 투여가 감소된 T 림프구 및 대식세포 침윤을 야기하였고, 탈수초의 진행을 억제하였으며, 재수초화를 증가시켰고, 신경 기능을 개선하였음을 나타내었다(또한 Liu, M.T. et al. (2001) J. Immunol. 167:4091-4097 참고). 쥣과 항-IP-10 항체의 투여는 쥣과 EAE에서 임상적 및 조직학적 질환 발병률 및 중증도를 감소시키는 것으로 나타났다(Fife, B.T. et al. (2001) J. Immunol . 166:7617-7624).
전술한 것을 고려할 때, 본 발명의 항-IP-10 항체는 상기 항체를 치료를 필요로 하는 대상에게 투여함으로써 MS 및 다른 탈수초 질환의 치료에 사용될 수 있다. 항체는 단독으로 또는 다른 항-MS 제제, 예컨대 인터페론 베타-1a(예컨대, 아보넥스®, 레비프®), 인터페론 베타-1b(예컨대, 베타세론®), 글라티라머 아세테이트(예컨대, 코팍손®) 및/또는 미톡산트론(예컨대, 노반트론®)과 조합하여 사용될 수 있다.
B. 류마티스성 관절염
IP-10 수준은 류마티스성 관절염(RA)을 갖는 환자의 윤활액, 활액 조직 및 혈청에서 유의하게 상승하는 것으로 나타났다(Patel, D.D. et al. (2001) Clin . Immunol. 98:39-45; Hanaoka, R. et al. (2003) AArthritis Res. and Therapy 5:R74-R81). IP-10 수용체인 CXCR3은 RA 환자의 활액 조직 내의 비만 세포 상에서 우선적으로 발현되는 것으로 나타났다(Ruschpler, P. et al. (2003) Arthritis Res. Ther. 5:R241-R252). 보조제 유도 관절염(AA) 랫트 모델에서, 자기 IP-10에 대한 검출가능한 자가항체 반응이 보고되었다(Salomon, I. et al. (2002) J. Immunol. 169:2685-2693). 더욱이, IP-10을 코딩하는 DNA 백신의 투여는 랫트 내에서 중화 항-IP-10 항체의 생산을 증가시켰고, 이들 IP-10 자가항체는 AA에 대한 내성을 순수한 랫트로 입양 전달할 수 있다(Salomon, I. et al., 상기).
전술한 것을 고려할 때, 본 발명의 항-IP-10 항체는 상기 항체를 치료를 필요로 하는 대상에게 투여함으로써 류마티스성 관절염의 치료에서 사용될 수 있다. 항체는 단독으로 또는 다른 항-RA 제제, 예컨대 비스테로이드성 항염증성 약물(NSAID), 진통제, 코르티코스테로이드(예컨대, 프레드니손, 하이드로코르티손), TNF-억제제(아딜리무맙(휴미라®), 에타네르셉트(엔브렐®) 및 인플릭시맙(레미케이드®) 포함), 질환 변형 항류마티스 약물(메토트렉세이트, 사이클로포스파미드, 사이클로스포린, 아우라노핀, 아자티오프린, 금 나트륨 티오말레이트, 하이드록시클로로퀸 설페이트, 레플루노미드, 미노사이클린, 페니실라민 및 설파살라진 포함), 섬유근육통 약물, 골다공증 약물 및 통풍 약물과 조합하여 사용될 수 있다.
C. 염증성 장 질환
IP-10 발현은 궤양성 대장염 환자로부터 채취한 결장 생검의 고유판(lamina propria)을 침윤하는 세포에서 유의하게 향상되는 것으로 나타났다(Uguccioni, M. et al. (1999) Am. J. Pathol. 155:331-336). 또한, IP-10의 중화는 급성 대장염에서의 상피 궤양화로부터 마우스를 보호하고 음와(crypt) 세포 생존을 향상시키는 것으로 나타났다(Sasaki, S. et al. (2002) Eur . J. Immunol. 32:3197-3205). 또한, 인간에서의 크론병과 유사한 대장염을 발병하는 IL-10 -/- 마우스에서, 항-IP-10 항체를 이용한 치료는 염증 점수의 개선으로 이어졌다(Singh, U.P. et al. (2003) J. Immunol. 171:1401-1406).
전술한 것을 고려할 때, 본 발명의 항-IP-10 항체는 상기 항체를 치료를 필요로 하는 대상에게 투여함으로써, 궤양성 대장염 및 크론병을 포함하는 염증성 장 질환(IBD)의 치료에서 사용될 수 있다. 항체는 단독으로 또는 다른 항-IBD 제제, 예컨대 메살라민을 함유하는 약물(설파살라진 및 5-아미노살리실산(5-ASA)을 함유하는 다른 제제, 예컨대 올살라진 및 발살라지드 포함), 비스테로이드성 항염증성 약물(NSAID), 진통제, 코르티코스테로이드(예컨대, 프레드니손, 하이드로코르티손), TNF-억제제(아딜리무맙(휴미라®), 에타네르셉트(엔브렐®) 및 인플릭시맙(레미케이드®) 포함), 면역억제제(예컨대, 6-머캅토퓨린, 아자티오프린 및 사이클로스포린 A), 및 항생제와 조합하여 사용될 수 있다.
D. 전신 홍반성 루푸스
혈청 IP-10 수준은 전신 홍반성 루푸스(SLE) 환자에서 현저히 증가하는 것으로 나타났으며, 그 수준은 질환 활성과 상관관계가 있는 것으로 나타났다(예컨대, Narumi, S. et al. (2000) Cytokine 12:1561-1565 참고). 따라서, 또 다른 구현예에서, 본 발명의 항-IP-10 항체는 상기 항체를 치료를 필요로 하는 대상에게 투여함으로써 SLE의 치료에 사용될 수 있다. 항체는 단독으로 또는 다른 항-SLE 제제, 예컨대 비스테로이드성 항염증성 약물(NSAID), 진통제, 코르티코스테로이드(예컨대, 프레드니손, 하이드로코르티손), 면역억제제(예컨대, 사이클로포스파미드, 아자티오프린, 및 메토트렉세이트), 항말라리아제(예컨대, 하이드록시클로로퀸) 및 dsDNA 항체의 생산을 억제하는 생물학적 약물(예컨대, LJP 394)과 조합하여 사용될 수 있다.
E. I형 당뇨병
혈청 IP-10 수준은 I형 당뇨병 환자, 특히 최근에 발병한 질환을 갖는 환자에서 상승된 것으로 나타났고, 그 수준은 GAD 자가항체에 양성인 환자에서 GAD-반응성 감마-인터페론-생산 T 세포의 수와 상관관계가 있는 것으로 나타났다(Shimada, A. et al. (2001) Diabetes Care 24:510-515). 개별 연구에서, 혈청 IP-10 수준은 새롭게 진단된 질환을 갖는 환자 및 상기 질환에 대해 높은 위험에 있는 환자에서 증가된 것으로 나타났고, IP-10 농도는 IFN-감마 수준과 상관관계가 있었다(Nicoletti, F. et al. (2002) Diabetologia 45:1107-1110). 더욱이, 베타 세포는 IP-10을 분비하여 T 세포의 화학주성을 일으키는 것으로 입증되었고, CXCR3이 결핍된 마우스는 I형 당뇨병의 발병을 지연시키는 것으로 나타났다(Frigerio, S. et al. (2002) Nature Medicine 8:1414-1420).
따라서, 또 다른 구현예에서, 본 발명의 항-IP-10 항체는 상기 항체를 치료를 필요로 하는 대상에게 투여함으로써 I형 당뇨병의 치료에 사용될 수 있다. 항체는 단독으로 또는 다른 항당뇨제, 예컨대 인슐린과 조합하여 사용될 수 있다.
F. 염증성 피부 장애
IP-10 발현은 다양한 염증성 피부 장애와 관련된 것으로 나타났다. 예를 들어, IP-10은 각질형성세포 및 건선성 플라크로부터의 진피 침윤물에서 검출되었다(Gottlieb, A.B. et al. (1988) J. Exp. Med. 168:941-948). 더욱이, CXCR3은 진피 CD3+ 림프구에 의해 발현되며, 이는 CXCR3이 건선성 진피로의 T 림프구 이동(trafficking)에 관여한다는 것을 시사한다(Rottman, J.B. et al. (2001) Lab. Invest. 81:335-347). 따라서, 또 다른 구현예에서, 본 발명의 항-IP-10 항체는 상기 항체를 치료를 필요로 하는 대상에게 투여함으로써 건선의 치료에 사용될 수 있다. 항체는 단독으로 또는 다른 제제 또는 치료, 예컨대 국소 치료(예컨대, 스테로이드, 콜타르, 칼시포트리엔, 타자로텐, 안트랄린, 살리실산), 광요법, 전신 약물(예컨대, 메토트렉세이트, 경구 레티노이드, 사이클로스포린, 푸말산 에스테르) 및/또는 생물학적 약물(예컨대, 알레파셉트, 에팔리주맙)과 조합하여 사용될 수 있다.
피부 및 구강 점막의 만성 염증성 질환인 편평태선은 CXCR3을 발현하는 침윤성 CD4+ 및 CD8+ T 세포와 관련된 것으로 나타났고, 더욱이, CD8+ 침윤성 세포용해성 T 세포는 이들의 세포용해성 과립 내에 IP-10을 갖는 것으로 나타났으며, 병변 각질형성세포는 IP-10을 과발현하는 것으로 나타났다(Iijima, W. et al. (2003) Am. J. Pathol. 163:261-268). 따라서, 또 다른 구현예에서, 본 발명의 항-IP-10 항체는 상기 항체를 치료를 필요로 하는 대상에게 투여함으로써 편평태선의 치료에 사용될 수 있다. 항체는 다른 제제 또는 치료, 예컨대 항염증제, 항히스타민, 코르티코스테로이드 및 광 요법과 조합하여 사용될 수 있다.
IP-10 발현은 다른 염증성 피부 장애, 예컨대 피부의 만성 원판상 홍반성 루푸스 및 제스너 림프구성 침윤에서 상승된 것으로 나타났다(Flier, J. et al. (2001) J. Pathol . 194:398-405). 따라서, 본 발명의 항-IP-10 항체는 상기 항체를 치료를 필요로 하는 대상에 투여함으로써 이들 염증성 피부 장애의 치료에 사용될 수 있다. 항체는 단독으로 또는 상기 기재된 바와 같은 다른 제제 또는 치료와 조합하여 사용될 수 있다.
G. 자가면역 갑상선 질환
IP-10 및 CXCR3 모두는 그레이브스 병(GD)을 겪는 환자의 갑상선에서 발현되나 정상 갑상선 조직에서는 발현되지 않는(또는 불량하게 발현되는) 것으로 나타났으며, 발현은 최근에 발병한 GD를 갖는 환자에서 가장 높았다(Romagnani, P. et al. (Am. J. Pathol. 161:195-206). IP-10은 또한 하시모토 갑상선염을 겪는 환자의 갑상선 조직에서 발현되는 것으로 나타났다(Kemp, E.H. et al. (2003) Clin. Endocrinol. 59:207-213). 따라서, 또 다른 구현예에서, 본 발명의 항-IP-10 항체는 상기 항체를 치료를 필요로 하는 대상에게 투여함으로써 그레이브스 병 및 하시모토 갑상선염을 포함하는 자가면역 갑상선 질환의 치료에 사용될 수 있다. 항체는 단독으로 또는 다른 제제 또는 치료, 예컨대 항갑상선 약물, 방사성 요오드 및 아전 갑상선절제술(subtotal thyroidectomy)과 조합하여 사용될 수 있다.
H. 쇼그렌 증후군
IP-10 mRNA의 발현은 쇼그렌 증후군(SS) 환자의 타액선에서 유의하게 상향조절되는 것으로 나타났으며, 발현은 림프상 침윤에 인접한 관 상피에서 가장 두드러졌다(예컨대, Ogawa, N. et al. (2002) Arthritis Rheum. 46:2730-2741 참고). 따라서, 또 다른 구현예에서, 본 발명의 항-IP-10 항체는 상기 항체를 치료를 필요로 하는 대상에게 투여함으로써 쇼그렌 증후군의 치료에 사용될 수 있다. 항체는 단독으로 또는 다른 항-SS 제제, 예컨대 인공 윤활제(예컨대, 무보존제 인공 눈물, 인공 타액, 향이 없는 피부 로션, 식염수 비강 스프레이, 및 질 윤활제), 안구 건조의 치료를 위한 Lacriserts®, 구강 건조의 치료를 위한 필로카르핀 염산염(Salagen®) 및 세이멜린(ceyimeline(Eyoxac®)), 비스테로이드성 항-염증성 약물(NSAID), 스테로이드 및 면역억제 약물과 조합하여 사용될 수 있다.
I. 폐 염증
IP-10 발현은 알러지성 천식의 마우스 모델에서 조사되었고, 상기 결과는 IP-10이 알러지 유발물질(allergen) 투여 후 폐에서 상향조절되고 IP-10의 과발현이 증가된 기도 과다활성, 호산구증가증, 증가된 IL-4 수준 및 CD8+ 림프구의 모집과 관련이 있다는 것을 입증하였다(Medoff, B.D. et al. (2002) J. Immunol. 168:5278-5286). 더욱이, 만성 폐쇄성 폐 질환(COPD)이 발병하는 흡연자는 기관지 상피에서 IP-10을 발현하는 것으로 나타났다(Saetta, M. et al. (2002) Am. J. Respir . Crit . Care Med. 165:1404-1409). 또한, 높은 수준의 IP-10이 폐 사르코이드증 및 림프구성 폐포염을 갖는 환자의 기관지폐포 세척액에서 입증되었다(Agostini, C. et al. (1998) J. Immunol . 161:6413-6420).
따라서, 또 다른 구현예에서, 본 발명의 항-IP-10 항체는 상기 항체를 치료를 필요로 하는 대상에게 투여함으로써 폐 염증을 특징으로 하는 질환, 예컨대 천식, COPD, 폐 사르코이드증 또는 림프구성 폐포염의 치료에 사용될 수 있다. 항체는 단독으로 또는 폐 염증을 감소시키기 위한 다른 제제, 예컨대 크로몰린 나트륨, 네도크로밀 나트륨, 흡입된 코르티코스테로이드, 전신(예컨대, 경구) 코르티코스테로이드, 속효성 베타 길항제, 속효성 기관지확장제, 지효성 베타 길항제 또는 작용제(경구 또는 흡입된), 류코트리엔 변형제, 테오필린 및 산소 요법과 조합하여 사용될 수 있다.
J. 이식 거부반응
IP-10은 이식된 조직의 거부반응에서 역할을 하는 것으로 나타났다. 예를 들어, 마우스를 중화 항-IP-10 항체로 처리하는 것은 소장 동종이식편의 생존을 증가시켰고 고유판에서 숙주 T 세포 및 NK 세포의 축적을 감소시켰다(Zhang, Z. et al. (2002) J. Immunol . 168:3205-3212). 또한, 췌장 소도(pancreatic islet) 동종이식편을 받는 마우스에서, 항-IP-10 항체 처리는 또한 증가된 동종이식편 생존 및 감소된 림프구성 이식편 침윤을 야기하였다(Baker, M.S. et al. (2003) Surgery 134:126-133). 또한, 정상 심장이 아닌 심장 동종이식편은 IP-10 및 CXCR3을 발현하는 것으로 나타났고, 상승된 IP-10 수준은 심장 동종이식편 혈관병증과 관련이 있었다(Zhao, D.X. et al. (2002) J. Immunol. 169:1556-1560). CXCR3 및 IP-10은 또한 염증성 세포를 침윤하는 폐 동종이식편에 의해 발현되는 것으로 나타났다(Agostini, C. et al. (2001) Am J. Pathol . 158:1703-1711). CXCR3 또는 IP-10의 생체내 중화는 쥣과 폐 이식 모델에서 폐 이식 수여자에 대한 주요 한계인 폐쇄성 세기관지염 증후군(bronchiolitis obliterans syndrome; BOS)을 약화시키는 것으로 나타났다(Belperio, J.A. et al. (2002) J. Immunol . 169:1037-1049).
전술한 것을 고려할 때, 본 발명은 또한 본 발명의 항-IP-10 항체를 치료를 필요로 하는 이식 수여자에게 투여함으로써 이식 거부반응을 억제하는 방법을 제공한다. 치료될 수 있는 조직 이식의 예는, 비제한적으로, 간, 폐(예컨대, BOS의 치료), 신장, 심장, 소장, 및 췌장 소도 세포를 포함한다. 항체는 단독으로 또는 이식 거부반응을 억제하기 위한 다른 제제, 예컨대 면역억제제(예컨대, 사이클로스포린, 아자티오프린, 메틸프레드니솔론, 프레드니솔론, 프레드니손, 마이코페놀레이트 모페틸, 시릴리무스, 라파마이신, 타크로리무스), 항감염제(예컨대, 아시클로비르, 클로트리마졸, 간시클로비르, 니스타틴, 트리메토프림설파르네톡사졸), 이뇨제(예컨대, 부메타니드, 푸로세미드, 메토라존) 및 궤양 약물(예컨대, 시메티딘, 파르노티딘, 란소프라졸, 오메프라졸, 라니티딘, 수크랄페이트)과 조합하여 사용될 수 있다.
K. 척수 손상
척수에 대한 외상성 손상은 염증 세포의 침윤을 초래한다. IP-10은 척수 손상 후 이차 퇴행에서 중요한 역할을 하는 것으로 나타났다(Gonzalez et al. (2003) Exp. Neurol.184:456-463; 또한 PCT 특허 공개 WO 제03/06045호 참고). IP-10은 손상 후 6 및 12시간에 타박상을 입은 랫트 척수(McTigue, D.M. et al. (1998) J. Neurosci. Res. 53:368-376) 및 손상 후 6시간에 손상된 마우스 척수(Gonzalez et al. (2003) 상기)에서 유의하게 증가한 것으로 나타났다. 따라서, 척수 손상 후 IP-10 활성의 억제는 염증성 세포의 침윤을 감소시키고 따라서 염증에 대한 이차 조직 손상을 감소시키는데 유용한 것으로 나타났다. 억제는 또한 염증성 세포의 침윤을 감소시키고, 이차 퇴행을 감소시키고, 외상성 뇌 손상 및 뇌졸중 후 회복을 개선할 수 있다. 따라서, 본 발명은 또한 본 발명의 항-IP-10 항체를 대상에게 투여하는 단계를 포함하는 치료를 필요로 하는 대상에서 척수 손상 및 뇌 손상(예컨대, 뇌졸중)을 치료하는 방법을 제공한다. 항체는 단독으로 또는 다른 제제, 예컨대 다른 항염증제와 조합하여 사용될 수 있다.
L. 신경퇴행성 질환
중추신경계 내의 IP-10 및 CXCR3 발현은 알츠하이머병(AD)과 관련된 병리학적 변화와 연계하여 상향조절되는 것으로 밝혀졌다(Xia, M.Q. and Hyman, D.T. (1999) J. Neurovirol. 5:32-41). AD 뇌에서, CXCR3은 다양한 피질 및 피질하부 영역에서 뉴런 및 뉴런 돌기 상에서 항시적으로 발현되는 것으로 나타났고 IP-10은 성상세포에서 발현되는 것으로 나타났으며 그의 수준은 정상 뇌와 비교하여 현저하게 상승하였다(Xia, M.Q. et al. (2000) J. Neuroimmunol. 108:227-235). 따라서, 본 발명의 항체는 항-IP-10 항체를 단독으로 또는 다른 치료제와 조합하여 치료를 필요로 하는 대상에게 투여함으로써 알츠하이머병 및 파킨슨병과 같은 신경퇴행성 질환의 치료에 사용될 수 있다. 알츠하이머병 치료를 위해 항-IP-10 항체가 조합될 수 있는 제제의 예는 콜린에스테라아제 억제제(도네페질, 리바스티그민, 갈란타민, 타크린) 및 비타민 E를 포함한다. 파킨슨병 치료를 위해 항-IP-10 항체가 조합될 수 있는 제제의 예는 레보도파이다.
M. 치은염
변연부 치주염은 염증이 있는 잇몸 조직과 관련이 있다. IP-10을 생산하는 세포뿐만 아니라 CXCR3 수용체를 발현하는 세포가 염증이 있는 인간 잇몸 조직에서 발견되었다(Kabashima, H. et al. (2002) Cytokine 20:70-77). 따라서, 또 다른 구현예에서, 본 발명의 항-IP-10 항체는 상기 항체를 치료를 필요로 하는 대상에게 투여함으로써 치은염의 치료에 사용될 수 있다. 항체는 단독으로 또는 다른 제제 또는 치료, 예컨대 항치은 구강세척제(예컨대, 항생제성 구강세척제), 치주 스케일링 및 치근 활택술(root planing) 및 치주 수술과 조합하여 사용될 수 있다.
N. 유전자 요법 관련 염증
유전자 요법에 사용된 아데노바이러스 벡터로서 사용되는 복제 결핍 아데노바이러스는 바이러스 벡터에 의해 감염된 조직에서 급성 손상 및 염증을 유발할 수 있다. 이러한 아데노바이러스 벡터는 NFkB의 캡시드 의존적 활성화를 통해 IP-10의 발현을 유도하는 것으로 나타났다(Borgland, S.L. et al. (2000) J. Virol. 74:3941-3947). 따라서, 본 발명의 항-IP-10 항체는 IP-10의 원치않는 생산을 자극하는, 바이러스 벡터, 예컨대 아데노바이러스 벡터를 이용하는 유전자 요법 치료 동안 IP-10 유도 손상 및/또는 염증을 억제하는데 사용될 수 있다.
O. 혈관신생 질환
IP-10은 시험관내 및 생체내에서 혈관신생을 억제하는 것으로 나타났다(Strieter et al. (1995) Biochem . Biophys . Res. Commun. 210:51-57; Angiolillo et al. (1995) J. Exp . Med. 182:155-162; Luster et al. (1995) J. Exp. Med. 182:219-231). 혈관신생은 외상에 대한 치유 반응과 같은 많은 질환 과정에서 결정적인 역할을 한다. 예를 들어, 손상된 척수 내의 혈관구조는 손상 후 적어도 28일까지 활발한 재형성(remodeling) 상태를 유지한다(Popovich et al. (1997) J. Comp. Neurol. 377:443-464).
IP-10은 내피 세포 성장 및 화학주성의 억제를 통해 혈관신생억제 효과를 발휘하는 것으로 여겨진다. 그것은 그의 헤파린 결합 모티프뿐만 아니라 수용체 매개 기전을 통해 이를 수행한다. 그의 헤파린 결합 모티프를 통해, 그것은 혈관신생 인자 FGF-2 및 VEFG165가 이들의 수용체에 결합하는 것을 방지한다. 그것은 또한 수용체 매개 과정을 통해 그의 효과를 발휘한다. IP-10에 대한 수용체인 CXCR3은 2개의 공지된 변이 CXCR3A 및 CXCR3B를 생산하기 위해 선택적으로 스플라이싱된다. CXCR3A 수용체에 대한 IP-10 결합은 표적 세포의 증식 및 화학주성을 야기하는 반면, CXCR3B 수용체에 대한 IP-10 결합은 성장 및 화학주성의 억제의 반대 효과를 갖는다. IP-10이 혈관신생억제 인자로서 작용하는 것은 CXCR3B 수용체를 통해서이다(Lasagni et al. (2003) J. Exp . Med . 197:1537-1549).
전술한 것을 고려할 때, 본 발명의 항-IP-10 항체는 혈관신생을 필요로 하는 질환, 예를 들어 IP-10의 혈관신생억제 행동이 치유를 지연시키거나 예방하고 질환 과정을 악화시키는 경우, 치료에 사용될 수 있다. 이러한 질환은 1) 상처 치유, 여성 발정 주기, 임신, 운동 유도 비대 등에 영향을 미칠 수 있는 비정상적인 생리학적 신생혈관; 2) 측부 혈관 형성(심근 허혈, 말초 허혈, 대뇌 허혈 포함), 관상 동맥 질환, 말초 혈관 질환, 뇌졸중, 상처 치유, 도세포 이식과 같은 장기 이식 후의 생착, 골절 및 힘줄 회복, 재건 수술, 조직 공학, 재발협착증, 탈모, 욕창(decubitus) 및 정체성 궤양, 위장관 궤양, 태반 기능부전(placental insufficiency), 무균 괴사, 폐 및 전신 고혈압, 혈관성 치매, 알츠하이머병, 피질하부 경색 및 백질뇌증을 갖는 대뇌 상염색체 우성 동맥병증(CADASIL); 갑상선 가성낭종 및 림프부종의 유도를 포함하는, 신생혈관의 자극을 필요로 할 수 있는 징후; 및 3) 혈관 기형, 건선, 및 임신중독증(pre-eclampsia)을 포함하는 혈관 재형성이 필요할 수 있는 징후를 포함한다. 본 발명의 항체는 단독으로 또는 다른 혈관신생 유도제와 조합하여 사용될 수 있다.
P. 염증성 신장 질환
CXCR3 수용체는 IgA 신장증, 막증식성 사구체신염 또는 급속 진행성 사구체신염을 갖는 환자의 혈관사이(mesangial) 세포에 의해 발현되는 것으로 보고되었다(Romagnani, P. et al. (1999) J. Am. Soc . Nephrol . 10:2518-2526). 또한, 신독성 신장염의 마우스 모델에서, IP-10 mRNA 수준은 신장염의 유도 후 7일에 신독성 신장염의 피질에서 6배 증가하였다(Schadde, E. et al. (2000) Nephrol. Dial. Transplant. 15:1046-1053). 또한, IP-10 발현의 높은 수준은 정상 신장과 비교하여 사구체신염을 갖는 인간 환자의 신장 생검 표본에서 관찰되었다(Romagnani, P. et al. (2002) J. Am. Soc . Nephrol. 13:53-64). 따라서, 본 발명의 항-IP-10 항체는 IgA 신장증, 막증식성 사구체신염 및 급속 진행성 사구체신염을 포함하는 염증성 신장 질환의 치료에 사용될 수 있다. 본 발명의 항체는 단독으로 또는 사구체신염의 치료에 사용되는 다른 제제 또는 치료, 예컨대 항생제, 이뇨제, 고혈압 약물 및 투석과 조합하여 사용될 수 있다.
Q. 아테롬성 동맥경화증
IP-10은 혈관 평활근에 대한 유사분열촉진 및 화학주성 인자인 것으로 나타났으며, 이는 아테롬성 동맥경화증의 병인에 기여하는 평활근 세포의 중요한 특징이다(Wang, X. et al. (1996) J. Biol . Chem . 271:24286-24293). IP-10은 또한 LPS 또는 인터페론 감마로 처리 후 평활근 세포에서 유도되는 것으로 나타났으며, 또한 풍선 혈관성형술(balloon angioplasty) 후 랫트 경동맥에서 유도되었다(Wang, X. et al. (1996) 상기). 더욱이, IP-10은 아테롬(atheroma) 관련 내피 세포, 평활근 세포 및 대식세포에서 발현되는 것으로 입증되었고, 이는 아테롬발생(atherogenesis) 동안 혈관벽 병변 내에서 관찰된 활성화된 T 세포의 모집 및 보유에서 IP-10의 역할을 시사한다(Mach, F. et al. (1999) J. Clin . Invest. 104:1041-1050). 따라서, 본 발명의 항-IP-10 항체는 아테롬성 동맥경화증의 치료 또는 예방에서 사용될 수 있다. 항체는 단독으로 또는 아테롬성 동맥경화증의 치료에 사용된 다른 제제 또는 치료, 예컨대 고혈압 약물 및 콜레스테롤 저하 약물과 조합하여 사용될 수 있다.
R. 바이러스 감염
IP-10은 다양한 바이러스 감염에서 상향조절될 수 있고, 바이러스 감염과 싸우기 위해 활성화된 T 세포를 모집하는데 있어 유익한 역할을 할 수 있다. 그러나, 특정한 경우, 바이러스 감염 동안 IP-10의 생산은 유해한 영향을 야기할 수 있으므로, IP-10 활성은 원치 않을 수 있으며, 본 발명의 항-IP-10 항체를 사용하여 이러한 바이러스 감염에서 IP-10 활성을 억제하는 것이 바람직할 수 있다.
예를 들어, IP-10은 단핵구 유래 대식세포 및 말초 혈액 림프구에서 인간 면역결핍 바이러스(HIV)의 복제를 자극하는 것으로 나타났다(Lane, B.R. et al. (2003) Virology 307:122-134). 또한, IP-10 수준은 HIV 감염 환자의 뇌척수액 및 뇌에서 그리고 HIV gp120-형질전환 마우스의 중추신경계에서 상승된다(Asensio, V.C. et al. (2001) J. Virol . 75:7067-7077).
IP-10 수준은 또한 만성 지속성 C형 간염 바이러스(HCV)을 갖는 환자에서 그리고 만성 활성 간염을 갖는 환자에서 상승되는 것으로 나타났다(Narumi, S. et al. (1997) J. Immunol . 158:5536-5544). HCV 감염된 간에서, IP-10은 간세포에 의해 발현되지만 간 내의 다른 세포 유형에 의해 발현되지 않는 것으로 나타났으며, 혈액과 비교하여 간에서 유의하게 높은 비율의 CXCR3 양성 T 세포가 발견되었다(Harvey, C.E. et al. (2003) J. Leukoc . Biol. 74:360-369).
IP-10의 분비 증가는 마우스에서 급성 안구 단순 포진 바이러스 유형 I(HSV-1) 감염에 대한 염증성 반응과 관련이 있는 것으로 나타났으며, 항-IP-10 항체를 이용한 HSV-1 감염된 마우스의 처리는 각막 기질 내로의 단핵 세포 침윤을 감소시키고, 각막 병리학을 감소시키며, 급성 감염 동안 각막 기질에서부터 망막으로의 바이러스의 진행을 억제하는 것으로 나타났다(Carr, D.J. et al. (2003) J. Virol . 77:10037-10046).
IP-10 발현은 또한 바이러스 수막염에서 발현되는 것으로 나타났다. IP-10은 바이러스 수막염 환자의 CSF에 존재하고 호중구, 말초 혈액 단핵 세포 및 활성화된 T 세포에서의 화학주성 활성을 담당하는 것으로 나타났다(Lahrtz, F. et al. (1997) Eur . J. Immunol . 27:2484-2489; Lahrtz, F. et al. (1998) J. Neuroimmunol . 85:33-43).
전술한 것을 고려할 때, 본 발명의 항-IP-10 항체는 상기 항체를 치료를 필요로 하는 대상에게 투여함으로써 원치않는 IP-10 활성을 수반하는 바이러스 감염의 치료에 사용될 수 있다. 치료될 수 있는 바이러스 감염의 비제한적인 예는 HIV(예컨대, HIV 유도 뇌염), HCV, HSV-1, 바이러스 수막염 및 중증 급성 호흡기 증후군(SARS)을 포함한다. 항체는 단독으로 또는 다른 항바이러스제, 예컨대 HIV 감염의 경우, 뉴클레오사이드/뉴클레오타이드 역전사효소 억제제, 비뉴클레오사이드 역전사효소 억제제 및/또는 프로테아제 억제제(및 이의 조합), HCV 감염의 경ㅇ우, 인터페론 알파 2a, 페길화된 인터페론 알파 2a, 및/또는 리바비린, 및 HSV-1 감염의 경우, 아시클로비르, 발라시클로비르 및/또는 팜시클로비르와 조합하여 사용될 수 있다.
S. 박테리아 감염.
박테리아 감염은 영향을 받은 세포에서 IP-10 생산을 유도한다(Gasper, N.A. et al. (2002) Infect Immun . 70:4075-82 참고). 박테리아 수막염은 또한 IP-10 발현을 유발하는 것으로 특히 알려져 있다(Lapinet, J.A. et al. (2000) Infect Immun. 68:6917-23). IP-10은 또한 박테리아 감염 모델에서 정세관의 고환 체세포에 의해 생산되며, 이는 박테리아 감염의 병인에서 전통적으로 발견되는 고환 염증 동안 호중구 및 T 림프구의 축적에서 이들 케모카인의 가능성 있는 역할을 강력하게 나타낸다(Aubry, F. et al. (2000) Eur Cytokine Netw. 11:690-8).
전술한 것을 고려할 때, 본 발명의 항-IP-10 항체는 상기 항체를 치료를 필요로 하는 대상에게 투여함으로써 원치않는 IP-10 활성을 포함하는 박테리아 감염의 치료에 사용될 수 있다. 박테리아 감염의 예는, 비제한적으로, 박테리아 수막염 및 박테리아 폐렴을 포함한다. 항체는 단독으로 또는 항생제와 같은 다른 항박테리아제와 조합하여 사용될 수 있다.
본 발명은 하기 실시예에 의해 추가로 설명되며, 이는 추가로 한정하는 것으로 해석되지 않아야 한다. 본원 전반에 인용된 모든 도면 및 모든 참고문헌, 특허 및 공개된 특허 출원의 내용은 본원에 참고로 명확히 포함된다.
방법 및 물질 :
실시예 1 : 항체 IP10.1의 변이체의 설계
엘데루맙(IP10.1로도 지칭됨)은 RA, 크론병 및 궤양성 대장염을 갖는 환자의 몇 가지 임상 시험에서 이전에 평가되었다. 이들 시험에서 임상 반응의 신호가 관찰되었다. 그러나, 엘데루맙의 추가 개발은 일부 문제, 예컨대 (1) IV 및 SC 전달 모두를 위해 고용량을 필요로 하고 SC 전달을 위해 높은 투여 빈도를 필요로 하는 차선 (한 자릿수) nM 친화성/효력; (2) 다량의 단백질의 투여로부터의 유의한 IV 주입 반응; 및 (3) 2년 보관 기간으로 관찰된 최대 30% 이성질화에 의해 도전을 받았다.
상기 기재된 엘데루맙의 문제를 고려하여, 개선된 친화성을 가지며 이성질화 가능성이 없는 차세대 항체가 생성되었다. 항체 IP10.1은 처음에 scFv 분자로 제작되었고 최적화 전에 활성이 확인되었다. IP10.1의 HCDR 영역에서 무작위화되고(NNS) 도핑된 올리고뉴클레오타이드(70% 부모, 30% 기타)의 조합을 사용하여 scFv 최적화 라이브러리를 생성하였다. PROfusion® mRNA 디스플레이 시스템을 사용하여, 토끼 세망용해물(reticulolysate)을 사용한 수회의 전사 및 번역을 통해 이 DNA 라이브러리를 얻었다. 코딩 mRNA를 프로마이신 연결을 통해 그 자체의 scFv에 융합하였다. 선택 동안, 바이오틴 표지된 IP-10에 결합한 임의의 scFv를 자성 스트렙타비딘 비드에 의해 포획하고 PCR에 의해 증폭시켜 다음 라운드로 진행시켰다. PROFusion mRNA 디스플레이 시스템의 사이클을 정량적 중합효소 사슬 반응(qPCR®)에 의해 유의한 표적 결합 신호가 관찰될 때까지 계속하였다. 이후 목표 농도를 떨어뜨림으로써 그리고 해리속도(off-rate) 선택 동안 더 단단한 친화성을 갖는 클론을 유리하게 함으로써 수행된 증가된 엄격성 선택을 수행하였다. 결합 집단을 클로닝하고 시퀀싱하였다. HCDR 영역에서 화학적 문제가 없는 독특한 클론을 고처리량 포유동물 발현 시스템(HMEP)을 통해 발현시키고 SPR(Biacore)을 사용하여 IP-10에 대한 친화성 개선을 시험하였다. 전체적으로, 중쇄 가변 영역 내의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 잔기의 표적화된 무작위화에 의해 50개 넘는 변이체가 생성되었고, 이를 인간 IP-10에의 결합에 대해 스크리닝하였다. 37℃에서 해리속도의 유의한 개선을 나타낸 변이체를 IgG(IgG1)로서 재구성하고, 추가의 선택 과정을 거쳤다. IP10.1 및 그의 변이체(IgG1 전장 항체로 재구성됨)의 CDR 비교가 표 1에 나타나 있다. 표 2는 37℃에서 IP10.1과 비교된 이들 변이체의 결합 친화성을 나타낸다. 이들 변이체를 시노 IP10, 마우스 IP10, 또는 MIG와의 교차 반응성(데이터는 나타내지 않음) 및 IP10.1과의 교차 경쟁, 물리적 안정성, 구조적 안정성, 소수성 상호작용, 및 응집(데이터는 나타내지 않음)에 대해 추가로 분석하였다.
2개의 클론(IP10.44 및 IP10.52)이 IP10.1과 비교하여 실질적으로 더 높은 친화성을 나타내었고, IP-10에의 결합에 대해 IP10.1과 경쟁하고, IP10.1과 비교하여 개선된 생물물리학적 프로파일을 갖는다. 따라서, IP10.44 및 IP10.52를 추가 연구를 위해 선택하였다.
따라서, 클론 IP10.44 및 IP10.52를 이들의 특징을 추가로 구별하기 위해 강제 안정성 연구(산화 및 탈아미드화)에 적용하였다. 두 항체는 강제 안정성 조건하에 유사한 행동을 나타내었지만, IP10.52는 IP10.44과 비교하여 약간 증가된 VH 영역 탈아미드화 및 더 빠른 해리속도를 나타내었다. 따라서, IP10.44를 추가 특성규명을 위해 선택하였다.
표 1
IgG1f 재구성을 위한 변이체의 선택
Figure pct00002
표 2
IP10.1 대비 개선된 결합 친화성을 갖는 변이체
Figure pct00003
실시예 2 : IP10.44의 특성규명
A. IP10.44의 생물물리학적 및 생화학적 특성규명
1. 결합
Biacore® 기반 결합 연구에서, IP10.1은 약 5 nM의 KD를 가지고 있었으며 IP10.44는 10 pM의 KD를 나타내었는데(Biacore의 검출 한계는 90 pM임), 이는 적어도 50배 개선을 나타낸다. IP10.1과 마찬가지로, IP10.44는 원숭이 및 인간에서 유사한 KD를 가지며, 마우스와 교차반응하지 않는다.
표 3
Figure pct00004
2. 에피토프 맵핑
a. 수소/중수소 교환 질량 분석( HDX -MS)
HDX-MS 방법은 백본 아미드 수소 원자의 중수소 교환의 속도 및 범위를 모니터링함으로써 용액 중의 단백질 구조 및 구조적 역학을 조사한다. HDX의 수준은 백본 아미드 수소 원자의 용매 접근가능성(solvent accessibility) 및 단백질 수소 결합에 좌우된다. HDX시 단백질의 질량 증가는 MS에 의해 정확하게 측정될 수 있다. 이 기술이 효소 소화와 병행되면, 펩타이드 수준의 구조 특징이 분석될 수 있으며, 이는 표면에 노출된 펩타이드를 내부에 접혀있는 펩타이드와 구별할 수 있게 해준다. 전형적으로, 중수소 표지화 및 후속 ?칭 실험이 수행된 다음, 온라인 펩신 소화, 펩타이드 분리, 및 MS 분석이 수행된다.
항-IP10 mAb IP10.44 및 IP10.1을 사용하여 IP-10 상에서 에피토프 맵핑을 수행하였다. 에피토프 맵핑 실험 전에, 재조합 전장 인간 IP-10(20 μM) 및 재조합 IP-10과 항-IP-10 mAb의 단백질 복합체(1:1 몰 비율)에 대한 공통 펩신 펩타이드(peptic peptide)의 목록을 생성하기 위해 비-중수소화 실험을 수행하여, IP10에 대해 100% 서열 커버리지를 달성하였다. HDX-MS 실험에서, 5 μL의 각 샘플(IP-10 또는 mAb를 갖는 IP-10)을 55 μL의 D2O 완충제(10 mM 인산염 완충제, D2O, pD 7.0)로 희석하여 표지화 반응을 시작하였다. 반응을 하기와 같이 상이한 기간 동안 수행하였다: 20초; 1분; 10분; 및 240분. 각 표지화 반응 기간 말기에, ?칭 완충제(4M GdnCl 및 0.4M TCEP를 갖는 100 mM 인산염 완충제, pH 2.5, 1:1, v/v)를 첨가하여 반응을 ?칭시키고 50 μL의 ?칭된 샘플을 분석을 위해 Waters® HDX-MS 시스템에 주사하였다. 일반 펩신 펩타이드의 중수소 흡수 수준을 항-IP10 mAb의 부재/존재하에 모니터링하였다.
IP-10에서 IP10.44에 대한 HDX-MS 측정은 그것이 하기와 같이 IP10.1과 동일한 펩타이드 영역으로 구성된 에피토프를 갖는다는 것을 나타낸다:
펩타이드 영역 1(13-18): SISNQP(서열번호: 163)
펩타이드 영역 2(19-27): VNPRSLEKL(서열번호: 164)
펩타이드 영역 3(29-43): IIPASQFCPRVEIIA(서열번호: 165)
이들 펩타이드 영역에 대한 중수소 흡수의 변화는 영역 3 > 1
Figure pct00005
2의 순위일 수 있으며, 영역 3이 중수소 흡수에서 가장 유의한 변화를 가지며, 영역 1 및 2가 중수소 흡수에서 가장 적은 유의한 변화를 갖는다.
경쟁 실험은 IP10.44가 IP-10과의 결합에 대해 IP10.1과 경쟁한다는 것을 확인시켜 주었고, 이는 그것이 IP10.1의 것과 동일한 에피토프에 결합하고 (IP10.1과 마찬가지로) 인간 MIG 또는 인간 ITAC(본원에 정의된 바와 같음)와 교차반응하지 않는다는 것을 시사한다.
b. 결정학
방법
IP10 및 IP10.44 Fab의 미리 형성된 복합체로부터 결정을 성장시켰다. 단백질 농도는 50 mM Tris-HCl, pH 8, 150 mM NaCl에서 약 6 mg/ml이었다. 이것을 100 mM Tris-말레산, pH 5.0, 18%(w:v) PEG 3350으로 구성된 웰 용액과 1:2의 비율로 혼합하고 결정을 행잉 드롭 증기 확산(hanging drop vapor diffusion)에 의해 성장시켰다. 결정을 75% 웰 용액 및 25% 글리세롤인 용액에서 동결보호하였다.
데이터를 Pilatus 6M 검출기를 사용하여 시카고 외부의 Advanced Photon Source에서 빔라인(beamline) 17-ID(IMCA-CAT)에서 수집하였다. 결정 온도를 100 K에 유지시켰다. 데이터를 180° 범위의 데이터에 대해 0.2°웨지로 900개 이미지로서 수집하였다. 통합을 위해 XDS(Kabsch, 2010a,b) 및 크기 조정(scaling)을 위해 AIMLESS(Evans & Murshudov, 2013)를 사용하는 autoPROC로 데이터를 처리하여 하기 통계를 산출하였다:
표 4
스페이스 그룹: P21; 단위 격자: a = 53.6 Å; b = 86.8 Å; c = 133.5 Å; β = 98.8°.
Figure pct00006
분자 치환은 프로그램 PHASER 및 3개의 파트로 구성된 IP10 / Fab 구조로부터 유래된 모델, CDR이 없고 Gly 또는 Ala 중 하나로 돌연변이되어 변화된 잔기를 갖는 Fv (VL 및 VH 도메인), CL:CH1 도메인 이량체, 및 적어도 첫 번째 성분에 대해 스페이스 그룹 P21에서 적어도 6 및 다른 성분에 대해 적어도 8의 TFZ 점수인, 성분을 성공적으로 배치하기 위한 PHASER 기준을 모든 단계에서 만족한 IP10 이량체(표 5에 나타난 바와 같음)를 사용하였다.
표 5
Figure pct00007
생성된 전자 밀도 맵은 모델로부터 누락된 잔기 및 측쇄에 대한 전자 밀도를 나타내었다. 구조는 COOT 분자 그래픽 프로그램(Emsley et al., 2010) 및 BUSTER 세밀화(Blanc et al. 2004 and GlobalPhasing, Ltd.)를 사용하여 완성되었다.
결과
IP10 / IP10.44 Fab 복합체의 구조는 2.23 Å 해상도로 결정되었다. IP10의 표면 상의 가장 두드러진 특징은 측쇄 Ile 12, Ser 13, 및 Ile 14로 구성된 돌출부이다(데이터는 나타내지 않음). 이것은 긴 CDR-H3에 의해 생성된 구멍 내로 그리고 그것과 CDR-H1 및 H2 사이에 삽입된다. 잔기 12-14 돌출부의 오른쪽에 있는 IP10 상의 상대적으로 오목한 곳은 확장된 CDR-H3이 결합하는 곳이다(데이터는 나타내지 않음).
접촉에 의해 정의된 바와 같은 IP10.1 및 IP10.44 모두에 대한 에피토프에 관여하는 IP10 상의 잔기(S. Sheriff et al. 1987; Sheriff, 1993)는 Val 7, Cys 9, Thr 10, Cys 11, Ile 12, Ser 13, Ile 14, Ser 15, Asn 16, Pro 37, Arg 38, Lys 47, Gly 49, Glu 50, Lys 51, Arg 52, Cys 53이다.
3. 안정성
IP10.44는 70.2℃에서 제1 멜팅 온도(64℃에서 IP10.1에 대한 TM1) 및 73℃에서 41.2%의 열 가역성으로 높은 열 안정성 및 열 가역성을 나타낸다.
IP10.44를 발현하는 안정한 CHO 풀을 사용하여 약 20 L 규모의 IP10.44의 8개의 배치를 생산하였다. 이 단계의 세포 배양에서의 발현 수준은 약 50 mg/L이었고 정제 수율은 원스텝 단백질-A 정제 방법을 사용하여 60-70%이었다. 항체를 완충제(20 mM 히스티딘 및 10% 수크로스 pH6)에서 제제화하고, 다양한 방법에 의해 동일성, 순도, 이종성 및 당화를 시험하였다. 결과는 항체의 동일성을 확인시켜 주었고, 순도는 크기 배제 크로마토그래피에 의해 볼 수 있듯이 >97 % 단량체성 분획이었다. 이종성 및 당화는 인간 IgG1 항체에게 예상되는 것을 대표한다.
표 6
Figure pct00008
B. IP10.44의 세포 기반 활성
Biacore® 기반 동력학 분석은 IP10.1 대비 IP10.44의 우수한 KD를 입증하였는데, 이는 주로 해리 상수(koff)의 개선에 의해 유도된다. 예상된 t1/2(IP-10 결합의 반감기)는 IP10.1의 경우 약 3시간인 반면, IP10.44의 경우 >100시간이다. 따라서, < 2시간의 지속시간을 가지며 어느 항체의 KD보다 유의하게 더 높은 외인성 IP-10의 농도(≥ 10 nM)를 필요로 하는 기존 분석(칼슘 플럭스, 화학주성)은 이들 2개의 항체를 구별할 수 없을 것으로 예상될 것이다. 이러한 구별을 위해, 어느 항체의 KD와 유사하거나 이보다 낮으며 IBD 환자에서의 IP-10 농도와 더 가깝게 유사한 IP-10 수준(약 두자릿수 pM)에서 유도될 수 있는 강력한 신호/노이즈 비율로 지속시간이 ≥ 24시간 지속되는 새로운 세포 분석이 개발되었다. 이러한 분석은 양면(two-pronged) 접근법을 취함으로써 개발되었다: 1) 항-IP-10 Ab 및 IP-10이 세포에 첨가하기 전에 ≥ 24시간 동안 미리 배양되고 낮은 수준(<100 pM) IP-10 (외인성)의 첨가가 강력한 신호/노이즈 비율을 제공하는 기존 분석의 최적화; 2) 적어도 24시간 동안 염증성 자극에 의해 유도된 약 두자릿수 pM 내인성 IP-10에 의해 세포 기능이 매개되는 새로운 분석의 확인. 제1 접근법의 경우, 2개의 분석이 사용되었다: 전체 세포(CXCR3-발현 B 세포주, 및 장 상피 세포주)에 결합하는 I125-IP-10(20 pM)의 억제. 제2 접근법의 경우, 2개의 추가적인 분석이 사용되었다: 24시간 동안 IFNγ/α 또는 IFNγ/α/IL-1β/LPS로 처리된 hPBMC에 의한 IL-6 분비의 측정, 및 먼저 IFNγ에 의해 24시간 동안, 그 다음으로 LPS에 의해 또 다른 24시간 동안 순차적으로 자극된 hPBMC에 의한 IL-12p40 분비의 측정.
이러한 새롭게 확립된 세포 기반 분석에서, IP10.44는 IP10.1보다 우수한 활성을 입증하였다. 예를 들어, 전체 세포 결합 분석에서, IP10.44는 외인성 IP-10이 CXCR3-발현 세포(CXCR3/300.19) 및 장 상피 세포(KM12SM)를 포함하는 그의 표적 세포에 결합하는 것을 차단하는데 있어 IP10.1보다 적어도 5배 우수한 효력을 나타낸다.
또한, IP10.44는 IFNα/γ로 자극된 hPBMC에 의한 내인성 IP-10-매개된 IL-6 분비를 억제하는데 있어 IP10.1보다 적어도 6배 우수한 효력을 나타내었다. 유사하게, IP10.44는 IFNγ/LPS로 자극된 hPBMC에 의한 내인성 IP-10-매개된 IL-12p40 분비를 IP10.1 대비 4배 더 큰 효력, 및 표 7에 나타낸 바와 같이 유의하게 더 우수한 최대 억제(IP10.44에서 약 100% 대 IP10.1에서 약 75%)로 억제하였다.
표 7
Figure pct00009
hPBMC 기반 분석을 사용한 기계적 연구는 단핵구가 IP-10, IL-6 및 IL-12p40의 주요 세포 공급원임을 입증한다. 중요하게도, 이러한 시험관내 분석에서 관찰된 IP10.44의 우수한 세포 활성을 지지하여, IP10.44에 대한 고친화성 항-IP-10 마우스 대용물은 SCID(T/B 세포 결핍) 마우스에서 CD40에 의해 유도된 선천 면역 대장염에서 IP10.1에 대한 저친화성 쥣과 대용물보다 혈액에서 IL-6 및 IL-12p40의 우수한 억제를 나타내었다(하기 참고).
C. 생체내 활성
1. 표적 관여(target engagement( TE ))
시노스(cynos)에서 유리 IP-10의 장기간 억제를 제공하는 IP10.44의 능력에 대해 시험하였다. 시노스의 혈청에서 유리 IP-10 수준을 특이적으로 측정하기 위한 2개의 민감한 LC-MS 기반 분석이 확립하였고, 이를 IP10.44 및 IP10.1이 첨가된 샘플을 사용하여 추가로 검증하였다. 이들 분석을 사용하여, 비히클이 투여된 것 대비 10 mg/kg의 이들 2개의 항체가 각각 투여된 시노스의 혈청에서 유리 IP-10 수준의 시간 의존적 변화를 측정하였다. IP10.1은 투여 후 6시간 동안 유리 IP-10을 일시적으로 감소시킨 다음 10일의 지속시간 동안 6배까지 증가시킨 반면, 극명하게 대조적으로, IP10.44는 10일까지 유리 IP-10을 완전히 억제하였다(도 14). 이들 데이터는 IP10.44가 순환에서 표적 관여에서 IP10.1보다 우수하다는 것을 입증한다.
2. PK/PD(약동학 및 약력학 매개변수)
순수한 환경에서 NK 세포 상의 CXCR3 신호전달의 부재는 CXCR3 KO 마우스를 이용한 연구에 기초하여 순환 및 림프상 장기에서 이들의 빈도를 감소시키는 것으로 보고되었다. 내부 연구는 고친화성 항-IP-10 마우스 대용물이 순수한 마우스의 혈액 및 비장에서 CXCR3+ NK 세포 빈도를 유의하게 감소시키나 저친화성 항-IP-10 마우스 대용물은 그렇지 않다는 것을 나타내어, NK 세포 하위집합이 IP-10에 의한 CXCR3에서의 신호전달을 억제하는 잠재적인 PD 바이오마커임을 확인시켜 준다. 이 발견을 이용하고 IP10.44 또는 IP10.1이 마우스 IP-10과 교차 반응하지 않는다는 것을 고려하여, NSG/HSC 마우스(마우스 T/B/NK 세포가 자연적으로 결핍되고, '인간화' 면역 시스템을 갖는 마우스를 생성하기 위해 인간 조혈 줄기 세포(HSC)로 재구성함으로써 인간 T/B/NK 세포가 보충될 수 있는 마우스 균주)의 혈액 및 비장에서 인간 CXCR3+ NK 빈도에 대한 두 항체의 효과를 시험하였다. IP10.44는 50 mg/kg(NSG 마우스에서 2개의 인간 항체의 차선(sub-optimal) pK에 기초하여 표적 커버리지를 최대화하기 위해 선택된 용량)이 투여된 이들 마우스의 비장에서 인간 CXCR3+ NK 세포 빈도를 유의하게 감소시키나, IP10.1은 그렇지 않다(도 15). 혈액 내의 CXCR3+ NK 세포에 대한 두 항체의 유의한 효과는 이 연구에서 관찰되지 않았는데, 아마도 노령(재구성 후 >6개월)에서 비롯된 순환에서 이 세포 집단의 낮은 빈도 때문일 수 있다.
3. IBD 모델
IBD 모델에서의 효능을 시험하였다. IP10.44 또는 IP10.1은 마우스 IP-10과 교차 반응하지 않으므로, 마우스는 실험적 대장염 모델에서 이들 분자를 직접 시험하기에 부적합하다. 따라서, 2개의 항-마우스 IP-10 대용물 항체, 즉, 항체 18G2 및 6A1를 확인하였고, 이들의 친화성은 각각 IP10.44 및 IP10.1과 대등하다. 세포 기반 분석에서, 18G2는 CXCR3/300.19 세포주에서 마우스 IP-10 유도 칼슘 플럭스를 억제하는데 있어 6A1보다 약 8배 우수한 효력을 나타내었다. 생체내 PD 연구는 순수한 마우스에서 혈액 내의 CXCR3+ NK 세포 빈도 및 수를 감소시키는데 있어 18G2가 6A1보다 우수하다는 것을 보여주었다.
2개의 대용물을 대장염의 2개의 구별되는 모델에서 시험하였는데, 하나는 야생형 마우스에서 TNBS에 의해 유도되었는데, 이의 발병은 선천 및 적응 면역 모두를 포함하고, 다른 하나는 SCID(T/B-결핍) 마우스에서 CD40에 의해 유도되었는데, 이의 발병은 선천 면역만을 포함한다. 두 모델에서, 항-p40 항체는 질환을 감소시키는데 효과적이며, 따라서 양성 대조군으로서의 역할을 하는 것으로 나타났다. 중요하게도, 고친화성 대용물 18G2는 IP10.1 대용물 6A1보다 유의하게 더 우수한 효능을 나타낸다(도 16a 및 16b). 6A1이 말기 최저(terminal trough)에서 18G2보다 > 2배 더 높은 노출을 갖는다는 점에서 이 우수성은 PK/노출의 차이 때문이 아니다. 따라서, 이 데이터는 IP10.1과 비교하여 IP10.44에서 관찰된 친화성 증가가 선천 및 적응 면역 모두에 의해 유도된 장 염증의 맥락에서 더 큰 효능으로 전환될 수 있음을 시사한다.
CD40 유도 마우스 대장염은 유의한 전신 염증을 포함하는 더 견고한 모델이므로, 순환하는 염증유발성 사이토카인의 수준에 대한 고친화성 18G2 대 저친화성 6A1의 효과를 또한 평가하였다. 6A1보다 우수한 효능과 일관되게, 18G2는 IFNγ, IL-12p40, IL-6, TNFα, MCP-1, 및 RANTES를 포함하는 몇 가지 사이토카인의 순환 수준을 더 강하게 감소시킨다(도 17a-d). 이 모델에서 고친화성 대용물인 18G2를 사용한 별도의 연구는 혈액 및 염증이 있는 장 사이에서 IFNγ, IL-12p40, IL-6 및 TNFα를 포함하는 사이토카인의 하위집합의 감소에서 상관관계를 나타내었다.
IP-10을 표적화하는 것이 작용 기전에 있어서 IBD에 대한 표준 치료를 대표하는 TNFα를 표적화하는 것과 차별화될 수 있는지 결정하기 위해, CD40 유도 대장염의 SCID 마우스 모델을 사용하였다. 이 모델은 순환 및 장에서 IP-10 및 TNFα의 풍부한 존재, 및 항-IP-10 및 항-TNFα 항체 모두의 입증된 효능 때문에 선택되었다. 이 모델에서 고친화성 항-IP-10 마우스 대용물(18G2) 대 항-TNFα 대용물에 대한 비교 연구에서, 두 항체는 유의한 효능을 나타내었다(도 22).
중요하게도, 멀티플렉스 사이토카인 분석은 혈청 및 염증이 있는 장에서 염증유발성 사이토카인을 감소시키는데 있어 이들 두 개입 사이의 명확한 차이를 보여주며, 이는 이들의 효능을 달성하기 위한 기전이 차별화될 수 있음을 시사한다. 루미넥스 기반 멀티플렉스 사이토카인 분석에 의해 측정된 바와 같이, 항-TNFα 대용물과 비교하여, 18G2는 IFNγ, IL-12p40, IL-6, RANTES, 및 MIP1베타의 혈청 수준 및 INFγ, IL-12p40, IL-6, IL-17 및 IL-22의 결장 수준을 유의하게 감소시킨다(도 18a-f).
종합하면, 이들 데이터는 IP-10을 표적화하는 것이 실험적 대장염의 전신 및 국소 염증 환경에서 TNFα를 표적화하는 것과 기계적으로 차별화될 수 있음을 나타낸다. 또한, 18G2는 순환 및 염증이 있는 장에서 TNFα를 강하게 감소시키는 반면, 항-TNFα는 두 구획에서 IP-10 수준에 거의 영향을 미치지 않아 실험적 대장염에서 두 개입을 차별화하는 또 다른 증거를 제공한다.
D. 면역원성
IP10.44의 면역원성을 시험관내 T 세포 증식 분석을 사용하여 평가하였고, 이를 동일한 분석에서 IP10.1의 면역원성과 비교하였다. IP10.1의 7-10% 면역원성과 비교하여, IP10.44는 20-25% 면역원성을 나타내었다.
E. 시노몰구스 원숭이에서 약동학 및 약력학
IP10.44는 시노몰구스 원숭이에서 비선형 PK를 나타내었다(데이터는 나타내지 않음). 유리 약물 분석을 IP10.44 및 IP10.1 모두에 대해 사용하였다. 0.5에서 10 mg/kg으로 용량 증가시, IP10.44의 총 체내 혈청 제거율(CLT)은 약 4배 감소하였지만, 정상 상태에서의 분포의 부피(Vss)는 유사하게 유지되었다. 결과적으로, T-1/2는 약 5배 증가하였다. 이것은 원숭이 및 인간 모두에서 IP10.1의 비선형 PK와 일치한다. IP10.44의 CLT는 0.5 mg/kg의 IP10.1보다 2배 더 높았다. 비선형 PK가 표적 매개 약물 배치(TMDD)에 의해 야기되고 IP10.44의 더 높은 결합 친화성이 표적이 포화되지 않을 때 더 낮은 용량에서 더 높은 제거율을 나타낸다고 가정될 수 있다. 그러나, 더 높은 용량의 IP10.44 및 IP10.1의 PK 비교는 상반되는 결과를 나타내었다: 2개의 항체에 대한 CLT 값은 10 mg/kg에서는 유사하였지만, 20 mg/kg에서는 IP10.44의 CLT가 IP10.1보다 2.7배 더 높았다.
IP10.44는 유리 혈청 IP-10 수준을 억제하는데 있어 IP10.1보다 우수성을 나타내었다(도 19a 및 19b). IV 볼루스 투여 후, IP10.44는 유리 혈청 IP-10의 용량 의존적 억제를 나타내었고, 기준선 수준(약 40 pM)에서 LLOQ(1 pM)로의 유리 IP-10의 억제에 의해 정의된 완전한 억제의 지속시간은 0.5 mg/kg의 경우 3일 및 10 mg/kg의 경우 약 10일이었다. 유리 혈청 IP-10의 신속한 반동(17일에 기준선으로 돌아옴)은 아마도 ADA로 인한 가속화된 약물 붕괴에 의해 유발되었다. 반면, 20 mg/kg 정도의 고용량의 IP10.1은 유리 혈청 IP-10을 억제하지 않고 유리 혈청 IP-10을 기준선 수준 초과로 상승시켰으며(최대 7배 증가), 이는 임상에서 관찰된 것과 일치한다. 유리 혈청 IP-10 억제 대 IP10.44의 유리 약물 농도의 단순 회귀는 223 ± 88 pM의 IC50을 밝혀내었다(도 20). 또한, 원숭이에서 유리 약물 PK, 유리 및 총 혈청 IP-10 데이터에 대한 PK/PD 모델링은, 원숭이에서 IP10.1(6.5 ± 1.1 nM의 생체내 Kd)보다 약 150배 더 강력한 IP10.44에 대해 43 ± 6 pM의 생체내 Kd를 예상하였다(도 21a 내지 21f).
또한, IP10.44 또는 IP10.1의 IV 투여 후, 총 혈청 IP-10의 급격한 증가가 4 내지 30시간 Tmax로 관찰되었다. 총 IP-10 증가 크기는 용량 의존적이었고, 최대 증가는 IP10.44의 경우 최대 5 nM 및 IP10.1의 경우 최대 12 nM이었고, 이는 기준선 수준(약 40 pM)과 비교하여 >100배 증가를 나타낸다.
요약하면, IP10.44는 시노몰구스 원숭이에서 유리 혈청 IP-10의 억제에서 IP10.1보다 우수한 생체내 KD(약 150배)(43 ± 6 pM 대 6.5 ± 1.1 nM의 생체내 KD)를 입증하였다. IP10.1은 원숭이 및 인간 모두에서 유리 혈청 IP-10 수준을 기준선을 초과하여 증가시킨 반면(>5배), IP10.44(원숭이에게 IV 투여 후)는 0.5 mg/kg에서 약 3일 및 10 mg/kg에서 약 10일 동안 유리 혈청 IP-10의 지속적이고 완전한(<LLOQ 1 pM) 억제를 나타내었다. 유리 약물 분석을 사용하여 원숭이에서 IP10.44의 pK를 규명하였다. IP10.44는 원숭이에서 아마도 표적 매개된 약물 배치로부터 비롯되는 비선형 PK를 나타내었다. 이것은 원숭이 및 인간에서 관찰된 IP10.1의 비선형 PK와 유사하다. IP10.1과 비교하여, IP-10에 대한 IP10.44의 더 높은 친화성은 원숭이에서 상대적으로 더 짧은 반감기(T-1/2)를 야기하였다. 1 및 10 mg/kg의 IP10.44의 인간 T-1/2는 각각 약 2 및 약 6일인 것으로 예측되었다. 동일한 용량에서, IP10.1의 상응하는 인간 T-1/2는 각각 약 4 및 약 8일이었다. 인간에서 IP10.44의 피하 생체이용률(70%)은 IP10.1의 것과 동일한 것으로 가정되었다. 전임상 PK/PD 정보에 기초하여, 2주마다 피하 투여된 IP10.44의 인간 용량은 120 mg/70 kg인 것으로 예상되었다. 이 용량에서, UC 환자 집단의 90번째 백분위수에 해당하는 유리 혈청 IP-10 수준은 건강한 대상의 10번째 백분위수로 80%까지 감소하였다.
시노몰구스 PK/PD 연구에서 20 mg/kg의 단일 IV 볼루스 용량까지 부작용이 관찰되지 않았다. 전반적으로, IP10.44는 허용가능한 PK/PD 특성 및 안전 프로파일을 입증하였다.
실시예 3 :
(A) 건강한 대상에서 BMS -986184(IP10.44)의 안전성, 내성, 약동학, 및 표적 관여에 관한 단일 상승 용량 연구(SAD) 및 다중 용량 연구(MAD) 및
(B) 중등도 내지 중증 궤양성 대장염( UC )을 갖는 환자에서 BMS -986184의 안전성, 효능, 약동학, 표적 관여, 및 약력학의 평가
도입
파트 A는 건강한 남성 및 여성 참가자에서 BMS-986184의 안전, 내성, 약동학 (PK), 및 표적 관여(TE)를 평가하기 위한 무작위, 위약 대조, 이중 맹검, 단일 상승(SAD) 및 다중 용량(MAD) 연구이다. 파트 A1(SAD)에는, 패널 S1, S2, S3, S4, 및 S5로 지정된 최대 5개의 연속 정맥내(IV) 용량 패널이 있을 것이다. 또한, 패널 S6 및 S7로 지정된 최대 2개의 피하 용량 패널이 있을 수 있다. SC 용량 패널(S6 및 S7)에 대해 선택된 예상된 용량은 IV 용량 패널 S1- S4 동안 관찰된 평균 노출을 초과하지 않을 것이다. 이전의 패널보다 낮거나 높은 용량까지의 추가의 용량 패널이 조정에 의해 추가될 수 있다. 파트 A2(MAD)에서, 패널 M1 및 M2로 지정된 최대 2 패널 정맥내(IV) 또는 피하(SC)가 있을 수 있다. 파트 B는 UC를 갖는 남성 및 여성 환자에서, BMS-986184의 안전, 효능, 약동학, 표적화된 관여, 및 약력학을 평가하기 위한 무작위, 위약 대조, 이중 맹검, 기계 증명(POM) 연구이다. 파트 B는 파트 A의 안전, 내성, PK, 및 TE의 평가 후 시작될 것이다. 연구 도식은 표 8에 나타나 있다.
표 8: 연구 설계 도식
Figure pct00010
파트 A
건강한 참가자에서 SAD/MAD를 위한 연구 설계 ( 파트 A)
파트 A에서, 건강한 참가자는 적격성을 결정하기 위해 스크리닝 평가를 받을 것이다. 참가자는 1일부터 21일 이내에 스크리닝 절차를 완료해야 한다. 단체 및 참가자의 일정을 수용하기 위해 ±2일 시간대 방문(window visit)이 사용될 수 있다. 참가자는 -1일째의 아침에 임상 시설에 입원할 것이다.
건강한 참가자에서 SAD를 위한 연구 설계 ( 파트 A1)
순차적 SAD 용량 패널(S1-S7)마다 8명의 건강한 남성 또는 여성 참가자가 있을 것이다. 각 패널은 이중 맹검이며 무작위 배정될 것이다. 제1 용량 패널(S1)의 경우, 센티넬(sentinel) 패널이 투여될 것이다. 1명의 건강한 남성 또는 여성 참가자는 BMS-986184의 단일 용량을 받을 것이고, 1명의 건강한 남성 또는 여성 참가자는 일치된 위약을 받을 것이다. 이들 2명의 참가자로부터 이용가능한 안전 데이터(임의의 보고된 부작용, 신체 검사에서의 발견, 임의의 임상 실험 결과, 생명 징후, 및 ECG 포함)는 제1 용량 패널(S1)의 나머지 참가자의 치료 전에 연구자와 의뢰자에 의해 24시간 이내에 평가될 것이다. 1일째에, 제1 용량 패널(S1)의 나머지 6명의 건강한 남성 또는 여성 참가자는 BMS-986184의 단일 용량 또는 일치된 위약을 5:1의 비율로 받도록 무작위배정될 것이다. 각각의 순차적 용량 패널(S2-S7)의 경우, 1일째에, 8명의 건강한 남성 또는 여성 참가자는 BMS-986184의 단일 용량 또는 일치된 위약을 1일째에 3:1의 비율로 받도록 무작위배정될 것이다. 용량 선택 기준은 하기에 기재되어 있다.
건강한 참가자에서 SAD/MAD를 위한 연구 설계 ( 파트 A)
파트 A에서, 건강한 참가자는 적격성을 결정하기 위해 스크리닝 평가를 받을 것이다. 참가자는 1일부터 21일 이내에 스크리닝 절차를 완료해야 한다. 단체 및 참가자의 일정을 수용하기 위해 ±2일 시간대 방문이 사용될 수 있다. 참가자는 -1일째의 아침에 임상 시설에 입원할 것이다.
건강한 참가자에서 SAD를 위한 연구 설계 ( 파트 A1)
순차적 SAD 용량 패널(S1-S7)마다 8명의 건강한 남성 또는 여성 참가자가 있을 것이다. 각 패널은 이중 맹검이며 무작위 배정될 것이다. 제1 용량 패널(S1)의 경우, 센티넬 패널이 투여될 것이다. 1명의 건강한 남성 또는 여성 참가자는 BMS-986184의 단일 용량을 받을 것이고, 1명의 건강한 남성 또는 여성 참가자는 일치된 위약을 받을 것이다. 이들 2명의 참가자로부터 이용가능한 안전 데이터(임의의 보고된 부작용, 신체 검사에서의 발견, 임의의 임상 실험 결과, 생명 징후, 및 ECG 포함)는 제1 용량 패널(S1)의 나머지 참가자의 치료 전에 연구자와 의뢰자에 의해 24시간 이내에 평가될 것이다. 1일째에, 제1 용량 패널(S1)의 나머지 6명의 건강한 남성 또는 여성 참가자는 BMS-986184의 단일 용량 또는 일치된 위약을 5:1의 비율로 받도록 무작위배정될 것이다. 각각의 순차적 용량 패널(S2-S7)의 경우, 1일째에, 8명의 건강한 남성 또는 여성 참가자는 BMS-986184의 단일 용량 또는 일치된 위약을 1일째에 3:1의 비율로 받도록 무작위배정될 것이다. 용량 선택 기준은 표 9에 기재되어 있다.
Figure pct00011
건강한 참가자에서 MAD를 위한 연구 설계 ( 파트 A2)
순차적 MAD 용량 패널(M1-M2)마다 8명의 건강한 남성 또는 여성 참가자가 있을 것이다. 1일째에, 이들 동일한 8명의 건강한 남성 또는 여성 참가자는 BMS-986184 또는 일치된 위약을 1일째에 3:1의 비율로 받도록 무작위배정될 것이다. 각각의 패널은 이중 맹검이며, 무작위배정될 것이다. 용량 선택 기준은 하기에 기재되어 있다. MAD 패널(M1 및 M2)의 참가자는 50일째에 휴가를 받을 때까지 계속 임상 시설에 머물 것이다. 50일째에 임의의 지속되는 AE 또는 SAE를 갖는 참가자는 연구자가 이러한 사건이 해결되었거나 임상적으로 중요하지 않다고 여겨지는 것으로 결정할 때까지 연구 장소에 머물러야 한다. 참가자는 57, 64, 71, 85, 및 99일째에 추적 평가를 위해 임상과로 돌아갈 것으로 예상된다. 단체 및 참가자의 일정을 수용하기 위해 ±2일 시간대 방문이 사용될 수 있다. 파트 A2 MAD 참가자에 대한 대략적인 연구 지속시간은 최대 120일일 것이다. 연구를 일찍 중단하는 참가자는 99일째에 시작될 예정인 연구 퇴원 평가를 완료해야 할 것이다. AE 이외의 이유로 중단한 참가자는 교체될 수 있다. 최대 16명의 참가자가 SAD 연구의 파트 A2를 완료할 예정이다. 신체 검사, 생명 징후 측정, 안과적 평가, 12-유도(lead) ECG, 및 임상 실험실 평가가 투여 간격 동안 선택된 시간에 수행될 것이다. 참가자는 연구 동안 AE에 대해 면밀히 모니터링될 것이다. 혈액 샘플은 안전 및 PK 분석을 위해 선택된 시점에 수집될 것이다. 연구의 파트 A2 동안 각 참가자로부터 약 495 mL의 혈액이 채혈될 것이다. 파트 A2를 위한 연구 방문 도식이 표 10에 나타나 있다.
표 10: 건강한 참가자에서 MAD 연구의 연구 방문 도식 (파트 A2)
Figure pct00012
UC를 갖는 환자에서 POM을 위한 연구 설계 ( 파트 B)
파트 B에서 중등도-내지-중증 UC를 갖는 최대 36명의 참가자가 있을 것이다. 파트 B는 3개의 기간을 포함한다: 스크리닝 기간, 치료 기간, 및 안전 추적 기간. 중간 분석이 예상된 치료 용량에서 불충분한 표적 관여를 나타내는 경우, 36명의 참가자(24명 활성: 12명 위약)의 부가적인 더 높은 용량 패널이 추가될 수 있거나, 또는 견딜 수 없는 안전 사고가 발생하면, 예측된 PK 노출이 안전 결과와 관련된 노출 범위보다 충분히 낮은 36명의 참가자(24 활성: 12 위약)의 더 낮은 용량 패널이 추가될 수 있다. PK 및 PD 데이터가 건강한 대상의 SAD/MAD 연구로부터 이용가능하게 되면, UC를 가진 대상의 PoM 연구(파트 B) 동안에서 용량 부피 및 투여의 최종 결정이 결정될 것이다. 프로토콜은 UC 참가자의 PoM 연구를 위한 최종 용량 선택을 포함하도록 상기 시간에서 수정될 것이다. 참가자는 적격성을 결정하기 위해 스크리닝 평가를 받을 것이다. 파트 B의 참가자는 1일(무작위배정)부터 28일 이내에 스크리닝 절차를 완료해야 한다. 스크리닝 기간 동안, 참가자는 UC로 인한 것이고 다른 원인으로 인한 것이 아닌 활성 장 점막 염증을 확인하기 위해 신체 검사 및 병력, 흡연력, 스크리닝 검사 절차, 스크리닝 내시경 및 실험실 평가를 받을 것이다.
치료 기간:
1일째에, UC를 갖는 최대 36명의 참가자는 12주 동안 2주마다(1, 15, 29, 43, 57, 및 71일째) BMS-986184의 단일 용량 또는 일치된 위약을 2:1의 비율로 받도록 무작위배정될 것이다. 파트 B는 이중 맹검이며 무작위배정될 것이다. 85일째에, 참가자는 내시경 검사를 받을 것이다. 치료 기간 동안 UC 발적(flare)을 경험하는 참가자의 경우, 연구 프로토콜을 준수하기 위해 모든 노력을 기울여야 한다. 연구자의 의견에서, 참가자는 연구 프로토콜에 따라 허용되지 않고/않거나 입원이 필요한 요법을 보증한 다음, 참가자(들)는 연구자의 재량에 따라 치료를 받아야 하며 연구를 중단하여야 한다. 조사자는 연구 기간 동안 UC 발적을 겪고 있는 임의의 참가자에 대해 논의하기 위해 의료 모니터와에 접촉할 것이 강력히 권고된다.
안전 추적 기간:
추적 방문은 57일 동안 2주마다(99, 113, 및 127일째) 발생할 것이다. 파트 B 참가자를 위한 대략적인 연구 지속시간은 최대 177일일 것이다. AE 이외의 이유로 중단하는 참가자는 교체될 수 있다. 최대 72명의 참가자가 계획된다. 신체 검사, 생명 징후 측정, 12-유도 ECG, 및 임상 실험 평가가 투여 간격 동안 선택된 시간에 수행될 것이다. 참가자는 연구 동안 AE에 대해 면밀히 모니터링될 것이다. 혈액 샘플은 안전 및 PK 분석을 위해 선택된 시점에 수집될 것이다. 연구의 파트 B 동안 각 참가자로부터 약 300 mL의 혈액이 채혈될 것이다. 파트 B에 대한 연구 방문 도식이 표 11에 나타나 있다.
표 11: UC를 갖는 환자에서 연구 방문 도식 POM 연구 (파트 B)
Figure pct00013
참가자의 수
최대 72명 참가자가 파트 A에서 9개의 패널(7개의 SAD 패널 및 2개의 MAD 패널)에 대해 무작위배정될 것이다. 파트 A1(SAD)에서, 각각의 패널은 8명의 참가자(패널당 6명 활성: 2명 위약)로 구성될 것이다. 총 56명의 참가자가 파트 A1(SAD)에서 치료받을 것이다. MAD가 개시되면, 추가적인 16명의 참가자(패널당 6명 활성: 2명 위약)가 파트 A2(MAD)에서 치료받을 것이다. 참가자의 수는 통계적 검증력(statistical power) 고려사항에 기초하지 않지만, 각 패널에서 BMS-986184를 6명의 참가자에게 투여하는 것은 샘플이 채취된 집단에서 24% 발병률로 발생할 임의의 AE의 발병을 적어도 1회 관찰할 80% 확률을 제공한다. AE의 발병률이 32%이면, 6명의 BMS-986184 치료된 참가자의 샘플 크기로 임의의 AE의 발병을 적어도 1회 관찰할 확률은 90%이다. 연구의 파트 B(POM)에서, 총 36명의 참가자는 파트 A2에서 전달된 표적화된 치료 용량을 받기 위해 무작위배정될 것이다(24명 활성: 12명 위약). 중간 분석이 예상된 치료 용량에서 불충분한 표적 관여를 나타내는 경우, 36명의 참가자(24명 활성: 12명 위약)의 부가적인 더 높은 용량 패널이 추가될 수 있거나, 또는 견딜 수 없는 안전 사고가 발생하면, 예측된 PK 노출이 안전 결과와 관련된 노출 범위보다 충분히 낮은 36명의 참가자(24 활성: 12 위약)의 더 낮은 용량 패널이 추가될 수 있다. 중간 분석이 예상된 치료 용량에서 불충분한 표적 관여를 나타내는 경우, 36명의 참가자(24명 활성: 12명 위약)의 부가적인 더 높은 용량 패널이 추가될 수 있거나, 또는 견딜 수 없는 안전 사고가 발생하면, 예측된 PK 노출이 안전 결과와 관련된 노출 범위보다 충분히 낮은 36명의 참가자(24명 활성: 12명 위약)의 더 낮은 용량 패널이 추가될 수 있다.
연구 말기 정의
첫 번째 참가자가 연구 특정 동의서 양식에 서명한 날짜가 연구 시작으로서 정의될 것이다. 참가자는 연구 특정 동의서 양식(ICF)이 서명될 때 등록된 것으로 간주된다. 마지막 참가자가 퇴원 절차 또는 마지막 추적 방문을 완료하는 날짜가 연구 말기로 정의될 것이다.
연구 설계를 위한 과학적 근거
NHV에서 FIH 연구를 통해 BMS-986184의 개발을 시작해야 하는 몇 가지 이유가 있다. 그것은 UC를 갖는 참가자로 이동하기 전에 증분 및 점진적 용량 상승을 이용하여 더 안전한 개발 경로를 허용할 것이다. 그것은 치료 지수를 더 잘 알려주기 위한 광범위한 용량(30 mg부터 약 450 mg IV 및 잠재적으로 SC까지)의 평가를 이용하여, 치료 시간대를 정확하게 확립할 것이다. 면역억제 및 감염은 질환 효과의 부재하에 그리고 활성화된 면역계의 영향 없이 건강한 참가자에서 단일 용량 후 평가될 것이다. 건강한 참가자에서 SAD 및 MAD를 완료 후, UC를 갖는 참가자에서 반복 투여가 수행될 것이다.
용량 정당화
이용가능한 이전의 임상 경험이 없이, FIH 연구를 위한 용량 선택은 예측된 PK 노출, 비임상 연구로부터 확립된 PK/TE(즉, 혈청에서 유리 IP-10) 관계, 및 동물 독성학 연구로부터 확립된 안전 한계에 기초하였다. 간략하게, 인간 PK 매개변수를 원숭이에서 비선형 PK를 나타내는 PK 모델을 사용하여 추정한 후 인간에게 외삽하였다. 예측된 인간 PK 매개변수를 사용하여 Cmax 및 AUC를 추정하여 FIH 연구에서 시험된 용량 범위에 대한 안전 한계를 계산하였다. FIH에서 시험되고 있는 용량 범위에서 혈청 내의 BMS-986184 및 유리 IP-10의 수준 사이의 관계를 탐구하는, PK/PD 모델을 사용하여 상응하는 PD 반응을 추정하였다. PK 및 표적 관여 사이의 관계를 완전히 탐구하기 위해, 예측된 PD 반응을 사용하여 각각의 용량 수준에서 예상된 표적 관여를 제공하여 적절한 범위의 용량을 결정하였다.
비임상 데이터로부터 인간으로의 외삽에서 변환 불확실성을 해결하기 위해, 용량 수준 및 패널의 수는 지속적으로 안전, 내성, 및 실시간 PK/PD 분석에 기초하여 조정될 수 있다. SAD에서 첫 번째 2개 용량 수준은 고정될 것이다(30 및 75 mg). 파트 A에서 나머지 용량 수준 및 파트 B에서 전체 용량 범위는 PK/PD 분석에 기초하여 각각의 용량 패널에서 예상되는 PK 노출 및 유리 IP-10에 도달하도록 조정될 수 있다. 또한, 선택된 SAD 용량 패널에서 예상된 PK 노출은 연구 참가자의 안전을 보장하기 위해 NOAEL에서 Cmax 및 AUC로부터 추정된 미리 지정된 안전 배수를 초과하지 않을 것이다.
건강한 참가자에서 SAD를 위한 용량 선택 정당성 ( 파트 A1)
파트 A1에서, 안전성, PK, 및 TE 데이터를 사용하여 용량 상승 결정이 이뤄질 것이다. 현재 용량 패널로부터 이용가능한 안전성 데이터(임의의 보고된 부작용, 신체 검사에서의 발견, 안과적 검사, 임의의 임상 실험 결과, 생명 징후, 및 ECG 포함)는 후속 용량 패널에 대한 용량 상승을 결정하기 전에 연구자 및 의뢰자에 의해 평가될 것이다. 현재 용량 수준으로부터 모든 참가자에 대한 최대 15일까지의 안전성 데이터가 연구자 및 의뢰자에 의해 검토되고 안전성 및 내성을 입증하는 것으로 결정될 때까지, 참가자는 후속 용량 패널에서 무작위배정되지 않을 것이다. 파트 A1에서 첫 번째 및 두 번째 용량 패널(S1 및 S2)은 각각 고정될 것이다(30 mg 및 75 mg). SAD 패널 2를 초과하는 나머지 용량 패널(S3-S5)의 경우, 용량 선택은 안정성 평가 외에도, 누적 데이터를 사용한 실시간 PK/PD 분석에 기초한 이전 용량 패널에서 확립된 PK/PD 관계에 의해 안내될 것이다. 파트 A1 SAD에서 예측된 플레이스홀더(placeholder) 용량 범위는 30 mg부터 약 450 mg까지이다.
연구의 SAD 부분인 파트 A1에서, 용량 범위는 표적 매개 약물 배치로 인한 잠재적인 비선형 PK를 고려하여 PK 및 표적 관여(즉, 혈청에서 기준선으로부터 유리 IP-10의 감소) 사이의 정량적 관계를 규명하기 위해, 그리고 환자 연구를 가능하게 하기 위해 인간에서 충분한 안전 한계를 확립하기 위해, 광범위한 노출을 포함하도록 선택되었다. 원숭이 모델에서 TMDD의 관찰로 인해, 비선형성이 가장 명확한 용량 범위의 하부 말단에서 PK의 특성을 더 잘 얻기 위한 노력으로 IV 투여 경로가 FIH의 단일 용량 조건하에 연구되도록 선택되었다. SC 투여가 표적 환자 집단에서 최상의 순응 및 편의에 바람직하므로, BMS-986184는 또한 SC 투여의 실행가능성을 결정하고 후속 연구 부분에서 시험될 적절한 투여 요법을 개발하기 위해 연구의 SAD 부분에서 SC 투여될 것이다.
IV 경로에 의해 투여될 시작 용량의 크기는 전임상 연구로부터의 독성학 결과를 고려하여 선택되었다. 최대 권장 시작 용량(MRSD)을 원숭이에서 NOAEL 용량을 사용하여 계산하였다. 가장 민감한 종으로 여겨지는 원숭이에서의 NOAEL은 30 mg/kg/주였다. NOAEL 용량의 10배 안전 한계를 고려하는, 체표면적 방법에 기초한 MRDS는 약 58 mg이다. PK/PD 모델로부터의 예측은 이 용량에서 최소를 초과하는 약리학적 활성을 제시하므로, MRSD는 인간에서 시작 용량으로서 시험하기에 적절하지 않다. 따라서, SAD에서 시작 용량을 30 mg으로 낮추었고, 이로써 혈청에서 기준선으로부터의 예측된 유리 IP-10 감소는 37%인 것으로 예상된다(표 12). NOAEL에서 노출로부터 추정된 30 mg에서의 Cmax 및 AUC의 예상된 안전 한계는 각각 59 및 322배이다. 제안된 용량 상승 계획은 예측된 유효 용량 주위의 노출을 일괄하여 다룰 것으로 예상된다. 정상 상태 최저에서 유리 IP-10의 중화(≥90%의 감소로서 정의된 바와 같음)가 환자에서 의도된 효능을 유도하는데 필요한 것으로 가정하면, 정상 상태 최저에서 유리 IP-10의 90% 및 95% 감소를 달성할 것으로 예상된 투여 요법은 2주마다(Q2W) 투여된 각각 180 mg 및 300 mg인 것으로 예상된다. 따라서, 최대 300 mg까지의 연구 약물의 단일 용량 상승은 PK/PD 프로파일의 가파른 부분을 특성화할 뿐만 아니라 예측된 유효 용량 범위를 포획하는데 충분할 것이다. 300 mg에서, NOAEL에서의 노출로부터 추정된 Cmax 및 AUC의 예상 안전 한계는 각각 6.4 및 13배였다(표 13).
UC 환자가 건강한 대상과 비교하여 목표 부하의 차이로 인해 PK 뿐만 아니라 PD에서 큰 변동성을 나타낼 수 있다는 것을 고려할 때, 이 화합물을 UC 환자에서의 장기간 임상 연구로 진행시키기 위한 충분한 안전 정보를 제공하기 위해, SAD에서 300 mg를 초과하는 용량을 시험하는 것이 필요할 수 있다. 이를 위해, 연구의 SAD 부분에 대해 제안된 최고 용량은 약 450 mg일 것이다. 50 mg의 투여는 선택사항이며, 이는 이전 SAD 패널로부터 얻은 안전성, PK, 및 TE 데이터에 따라 달라질 것임에 유의한다. 관찰된 PK 및 TE 데이터가 최저에서의 유리 IP-10의 최대 억제가 더 낮은 용량 수준에서 달성될 수 있음을 시사하면, 제안된 최고 용량은 SAD 연구에서 조사되지 않을 것이다. NOAEL에서의 노출로부터 추정된 이 용량 수준에 대한 Cmax 및 AUC의 예상된 안전 한계는 각각 4, 및 8배였다(표 12).
30 내지 450 mg의 제안된 용량은 PK/PD의 완전한 특성규명을 보장하는 한편, 후속 환자 연구를 위한 용량 선택을 알리기 위해 충분한 안전 정보를 제공하는 광범위한 노출 범위를 도출할 것이다. 표 13은 NOAEL 및 LOAEL에서의 노출에 기초하여 인간에서 예상된 노출과 후속 안전 한계를 요약한다. 표 12는 단일 용량 투여 후 14일째에 인간에서 예상된 표적 관여를 요약한다.
표 12: 14일째에 SAD에서 유리 IP-10의 평균 감소 (IV 투여) (파트 A1)
Figure pct00014
Figure pct00015
첫 번째 2개의 패널에 30 mg 및 75 mg을 투여한 후, 나머지 용량 패널의 선택은 건강한 대상에서 관찰된 PK/PD 프로파일에 따라 달라질 것이다. 적절한 안전 한계를 유지하기 위해 용량 증가가 예상된 노출 범위를 제공한다는 것을 보장하기 위해, 하기 인자가 후속 용량 증가를 결정할 때 고려될 것이다. 예측된 용량 수준의 예측된 평균 Cmax 및 AUC는 표 13의 미리 지정된 것을 초과하지 않을 것이다. 연속적인 SAD 패널 사이의 예측된 용량 수준의 증가는 약 3배 증분을 넘지 않을 것이다. 후속 용량 패널에서의 예측된 평균 PK 노출(AUC(INF))은 이전 용량 패널에서의 평균 AUC(INF)로부터 약 4배 증가를 넘지 않을 것이다. NOAEL 노출로부터 Cmax 및 AUC(INF)에 대한 최소 안전성 노출 한계는 각각 4배 및 8배로 유지될 것이다.
SC에서 용량 선택 정당화
SAD에서 적어도 2개의 용량 패널의 IV 투여 후, BMS-986184를 피하 투여할지 여부를 결정하기 위해 타당성 평가가 수행될 것이다. SC 투여를 위한 제제는 40 mg/mL의 강도로 이용가능하다. IV 투여 후 의도된 TE가 달성되고 너무 많은 SC 주사를 투여할 필요 없이 달성가능한 것으로 간주되면, SC 투여 후 BMS-986184의 추가 시험이 조사될 것이다(표 13).
BMS-986184의 예상된 비선형 PK 및 후속 용량 의존적 생체이용률 때문에, 절대 생체이용률을 적절히 평가하기 위해 용량 수준을 일치시키는 것이 필요하다. 수행되는 경우, SC 경로를 통한 용량 수준은 상응하는 IV 용량과 일치할 것이다. 패널 S6의 SC 용량 수준은 IV 용량 패널 S2 또는 S3과 유사할 수 있고, 패널 S7의 SC 용량 수준은 IV 용량 패널 S3 또는 S4와 유사할 수 있다. 용량은 SAD에서 이용가능한 PK, TE, 안전 데이터에 기초하여 그리고 파트 B에서 시험되는 잠재적인 용량 수준을 고려하여 선택될 것이다. SC 패널에 대한 예측된 평균 Cmax 및 AUC는 IV 투여 후 상응하는 용량 수준에서의 평균 Cmax 및 AUC를 넘지 않을 것이다.
건강한 참가자에서 MAD를 위한 용량 선택 정당화 ( 파트 A2)
연구의 MAD 부분인 파트 A2에서, BMS-986184의 다중 투여 후 안전, 내성, 및 지속된 TE를 규명하기 위해 2개의 용량 수준이 연구될 수 있다. 파트 A2에서, MAD 패널(M1 및 M2)에서 시험되는 용량 수준뿐만 아니라 투여 경로(IV 및/또는 SC)는 연구의 파트 A1 SAD로부터 수득된 이용가능한 안전성, PK, 및 TE 데이터를 사용하는 PK/PD 모델 및 파트 B에서 시험되는 잠재적인 치료 용량 수준에 기초하여 결정될 것이다. 연구의 MAD 부분의 목표는, NOAEL 노출로부터 Cmax 및 AUC(INF)에 대한 안전 노출 한계가 각각 적어도 5배 및 10배인 것을 보장하면서, 투여 기간 동안 유리 IP-10의 약 50% 이상의 감소를 달성하고 지속하는 용량 수준을 선택하는 것이다. 투여 간격의 선택은 관찰된 PK(즉, T-HALF) 및 PD(시간 경과에 따른 IP-10 억제의 유지)에 따라 달라질 것이다. 현재, 2주 투여 간격이 적절한 것으로 간주되나, 관찰된 PK/PD 및 안전성 프로파일에 기초하여 1주가 고려될 수 있다.
첫 번째 용량 패널(M1)의 경우, 용량은 처음 3개의 SAD 패널(S1-S3)로부터의 PK, TE, 및 안전 데이터가 검토되고 데이터가 진행하기에 안전한 것으로 간주된 후에 선택될 것이다. 용량 수준은 관찰된 PK, TE, 안전, 및 다중 투여 후 예상된 정상 상태 PK 및 TE를 고려하여 패널 S2 또는 S3와 유사할 수 있다. 두 번째 용량 패널(M2)의 경우, 용량 수준은 처음 4개의 SAD 패널(S1-S4)로부터의 PK, TE, 및 안전 데이터가 검토되고 데이터가 진행하기에 안전한 것으로 간주된 후에 선택될 것이다. 표 14 - 표 5.5.1-3은 MAD에서 시험될 수 있는 잠재적인 용량 수준 및 안전 한계를 갖는 상응하는 PK 노출을 보여준다.
표 14: MAD에서 잠재적인 용량 수준 및 안전 한계 (파트 A2)
Figure pct00016
UC 환자에서 POM을 위한 용량 선택 정당화 ( 파트 B)
PK 및 PD 데이터가 건강한 참가자의 SAD/MAD 연구로부터 이용가능하게 되면, UC 환자에서 POM 연구(파트 B) 동안 용량 부피 및 투여의 최종 결정이 결정될 것이다. 프로토콜은 UC 참가자의 POM 연구를 위한 최종 용량 선택을 포함하도록 상기 시간에서 수정될 것이다. 단일 투여 요법은 파트 B에서 시험하기 위해 선택될 것이다. 그러나, 관찰된 PD가 불충분한 경우 더 높은 용량, 또는 예기치 못하 안전 결과의 경우 더 낮은 용량을 포함하도록 또 다른 용량 패널이 추가될 수 있다. 투여 경로(IV 또는 SC), 유리 IP-10의 90% 이상 감소를 달성하고 지속하는 능력, 투여 간격 지속시간, 및 안전 노출 한계의 유지에 관한 동일한 고려사항이 결정하는데 적용될 것이다.
치료
연구 치료는 연구 무작위배정 또는 치료 할당에 따라 연구 참가자에게 투여되도록 의도된 임의의 조사 치료(들), 시판 제품(들), 위약 또는 의료 기기로서 정의된다.
연구 치료는 조사 제품(IP) 및 비조사 제품(비-IP) 모두를 포함한다. 일부 영역에서 조사 의약품으로도 알려진 조사 제품은, 이미 시판 허가를 가지나 허가 형태와 다르게 사용되거나 조립되거나(제제화되거나 포장된), 또는 허가되지 않은 징후에 사용되는 제품을 포함하여, 임상 연구에서 참조로서 시험 또는 사용되거나, 또는 허가된 형태에 관한 추가 정보를 얻기 위해 사용되는 활성 물질 또는 위약의 약제학적 형태로 정의된다. 주어진 진단을 위한 표준 치료의 성분으로서, 예방적, 진단적, 또는 치료적 이유를 위한 지지 또는 회피 약물로서 사용되는 다른 약물은 비조사 제품으로서 간주될 수 있다.
이 프로토콜의 경우, 연구 약물은 조사 제품 BMS-986184-01 주사, 150 mg/바이알 (40 mg/mL) 3.75 mL 바이알 및 외관 유사(look-a-like) 위약을 포함한다.
BMS-986184-01 또는 외관 유사 위약은 투여 패널에 의존적으로 피하 또는 정맥내로 용액으로서 투여될 것이다.
표 15: IMI012004를 위한 연구 치료
Figure pct00017
표 16: 용량 선택 및 시기
Figure pct00018
연구 평가 및 절차
효능 평가
효능 평가는 중등도 내지 중증 UC를 갖는 참가자에서 내시경검사 및 조직병리학 점수의 개선에 의해 측정된 바와 같이 파트 B에 대해서만 수행될 것이다.
일차 효능 평가
변형된 바론 점수(Baron Score)
변형된 바론이 내시경검사를 통해 평가된 점막 질환 중증도를 평가하는데 사용될 것이다. 변형된 바론 평점 체계는 0 내지 4의 등급의 내시경검사 지수이며, 더 높은 점수는 더 큰 중증도를 나타낸다. 변형된 바론은 하기와 같이 점수가 매겨진다: 점수 0은 혈관 패턴이 보이는 정상적이고 부드러운 반짝이는 점막; 부서지지 않음을 나타내고, 점수 1은 과립상 점막; 보이지 않는 혈관 패턴; 부서지지 않음; 충혈을 나타내며, 점수 2는 1과 동일; 부서지는 점막을 나타낸다.
내시경검사 및 내시경적 평가
품질 데이터 및 표준화를 확보하기 위해, 내시경검사는 가능한 한 임상 내내 동일한 내시경을 사용하여 조사자의 재량에 따라 임상 부위에서 국소적으로 수행될 것이다. 기준선(1일째), 및 12주(85일째) 연구 방문에 연구 약물로 주입하기 전에 S상 결장경검사 또는 대장내시경을 수행해야 한다. 기준선 내시경검사(대장내시경 또는 S상 결장경검사)는 무작위배정 28일 이내에 수행되어야 하며, 파일에 기록되어야 하고, 무작위배정과 가능한 가깝게 수행되어야 한다. 85일째 내시경검사(대장내시경 또는 S상 결장경검사)는 85일째 방문 전후로 3일 이내에 수행되어야 한다. 대장내시경 또는 S상 결장경검사는 기준선(1일째) 및 85일째에 수행될 수 있다. 수행된 절차(대장내시경 또는 S상 결장경검사)는 모든 시점에 동일할 필요는 없다. 결장암의 스크리닝은 현지 가이드라인에 기재된 대로 수행되어야 하며 조사자의 재량에 따라 수행되어야 한다. 결장암의 평가를 위해 수행된 임의의 생검은 조사자의 재량으로 현지 판독자에 의해 평가될 것이다.
또한, UC의 진단의 조직학 확인을 얻기 위해 수행된 임의의 생검은 조사자의 재량으로 지역 판독자에 의해 평가될 것이다. 스크리닝에서 수행된 대장내시경 절차는 메이요 점수의 내시경검사 하위점수 성분을 결정하고 무작위배정 28일 내에 수행되는 경우 S상 결장경검사를 대체하는데 사용될 수 있다.
생검은 결장직장의 가장 심하게 영향을 받은 부위로부터 채취해야 한다(기준선 내시경검사 평가에서 영향을 받지 않은 부위를 특히 표적화할 때는 제외). 결장 및 직장의 모든 부분이 동일하게 영향을 받은 경우, 직장 생검이 채취되어야 한다. 조직병리학 분석을 위해, 상기 2개의 생검은 바람직하게는 대형 겸자(jumbo forcep)를 사용하여 채취해야 한다. 궤양이 존재하는 경우, 생검은 궤양의 모서리를 향해야 한다.
내시경검사 영상은 각 내시경검사(1일째 및 85일째) 동안 얻어질 것이고 내시경검사 판독자에 의한 독립적 내시경 점막 평점 및 메이요 내시경검사 점수 및 변형된 바론 점수의 결정을 위해 보내질 것이다. 중앙 판독 실험실로부터 상세한 영상 검토 정책이 내시경 절차, 비디오 기록, 및 내시경 기록의 비디오 캡처 및 전송에 이용될 설비를 개괄할 것이다. 각 참가자에 대해, 전체 내시경 절차의 비디오 기록이 허용가능한 저장 매체를 사용하여 수행될 것이다. 내시경 기록은 영상 검토 정책에 따라 자격이 있는 위장병학자에 의해 맹검 방식으로 중앙에서 판독될 것이다. 등록을 위한 참가자 적격성을 결정하기 위한 목적을 위해, 기준선 메이요 점수 내시경적 하위점수는 섹션 9.1.2에 기재된 바와 같이 조사자에 의해 현지에서 그리고 중앙 내시경검사 판독자(제3 판매회사)에 의해 결정될 것이다. 모든 다른 내시경 평점(기준선에서의 변형된 바론 점수, 및 메이요 내시경 하위점수, 85일째에 변형된 바론 점수)은 중앙 내시경 판독자(제3 판매회사)에 의해서만 수행될 것이다. 시험에서 임상 종료점을 위해 사용된 메이요 점수는 중앙 내시경검사 판독자로부터 유래된 메이요 내시경검사 하위점수를 이용할 것이다. 시험에서 임상 종료점을 위해 사용된 변형된 바론 점수는 또한 중앙 내시경검사 판독자로부터 유래될 것이다.
결장 조직의 수집은 투여 전 1일째 및 85일째에 내시경검사 절차 동안 수행될 것이다. 품질 데이터 및 표준화를 보장하기 위해, 1일째 및 85일째에 결장 조직 조직병리학적 평점(게보스(Geboes), 변형된 라일리(Riley), 및 로바르츠(Robarts) 조직병리학 지수, 섹션 9.1.2 참고)은 중앙 판독 실험실에 의해 계약된 단일 맹검의 병리학자에 의해 중앙에서 판독될 것이다. 중앙 판독 실험실로부터의 상세한 영상 검토 정책은 표본 전달, 처리, 슬라이드 준비 및 조직병리학적 평점을 위한 슬라이드의 디지털화를 위해 이용될 조직병리학적 절차를 개괄적으로 설명할 것이다. 내시경 기록은 영상 검토 정책에 따라 자격이 있는 병리학자에 의해 맹검 방식으로 중앙에서 판독될 것이다.
이차 효능 평가
내시경적 평가 - 변형된 바론 점수
조직병리학적 평가
변형된 라일리 (Riley) 지수
변형된 라일리 지수는 6개의 특징[급성 염증성 세포 침윤(고유판에서의 호중구), 음와 농양(crypt abscess), 뮤신 결핍, 표면 상피 온전성, 만성 염증성 세포 침윤(고유판에서의 원형 세포), 및 음와 건축학적 불규칙성]을 고려한 조직병리학적 평점 시스템이며, 각각은 0-3의 등급이며, 더 높은 점수는 더 중증 조직병리학을 나타낸다.
게보스 ( Geboes ) 점수
게보스 점수는 건축학적 변화, 만성 염증성 침윤, 고유판 호중구 및 호산구, 상피에서의 호중구, 음와 파괴, 및 침식 또는 궤양에 기초하여 질환 활성을 측정하는 6점 등급 체계(0-5)를 사용하는 조직병리학적 평점 시스템이다. 더 높은 등급은 더 중증 질환 활성을 나타낸다.
로바츠 ( Robarts ) 조직병리학 지수
로바츠 조직병리학 지수(RHI) 총 점수는 0(질환 활성 없음) 내지 33(중증 질환 활성)의 범위이다. RHI는 하기로서 계산될 수 있다:
RHI = 1 x 만성 염증성 침윤 수준 (4 수준) +
2 x 고유판 호중구 (4 수준) +
3 x 상피에서의 호중구 (4 수준) +
5 x 침식 또는 궤양 (게보스 5.1 및 5.2를 조합한 후 4 수준);
만성 염증성 침윤
0=증가 없음
1=경미하지만 명백한 증가
2=중등도 증가
3=현저한 증가
고유판 호중구
0=없음
1=경미하지만 명백한 증가
2=중등도 증가
3=현저한 증가
상피에서의 호중구
0=없음
1=<5% 음와 관련됨
2=<50% 음와 관련됨
3=>50% 음와 관련됨
침식 또는 궤양
0=침식, 궤양 또는 과립화 조직 없음
1=회복 상피+인접 염증
1=개연성있는 침식―중심이 손상됨
2=명백한 침식
3=궤양 또는 과립화 조직
임상 평가
메이요(Mayo) 점수
메이요 점수는 질환 활성을 평가하는데 사용될 것이다. 메이요 평점 체계는 4개의 질환 변수(각각은 0 내지 3의 등급임, 더 높은 점수는 더 큰 빈도 또는 중증도를 나타냄)로 구성된 복합 지수이다: 대변 빈도, 직장 출혈, 내시경검사 결과, 및 의사의 종합 평가(PGA). 이들 3개의 항목은 부분적 메이요 점수를 계산하는데 사용될 것이다. 내시경 메이요 하위성분의 포함은 완전한 메이요 점수를 계산하는데 사용될 것이다. 부분적 및 전체 메이요 점수는 IVRS에 의해 자동으로 계산될 것이고, 연구자 및 의뢰자에게 이용가능하게 될 것이다.
메이요 점수는 0 내지 12점의 범위이며, 모든 4개의 질환 변수를 이용하고, 더 높은 점수는 보다 중증인 질환을 나타낸다. 내시경 하위점수는 0-3의 내시경 등급만을 포함한다. 부분적 메이요 점수는 내시경 하위점수를 제외한 모든 성분(직장 출혈, 대변 빈도, 의사의 종합 평가)을 포함한다.
메이요 평점 체계는 조사원 사이의 평점을 표준화하는 방법으로서 조사자의 미팅 또는 다른 포럼에서 조사원과 함께 검토되고 논의될 것이다.
대변 빈도 성분의 경우, 점수 0 = 참가자의 대변 정상 횟수, 1 = 정상보다 1회 또는 2회 더 많은 대변, 2 = 정상보다 3회 또는 4회 더 많은 대변, 3 = 정상보다 5회 이상 더 많은 대변.
직장 출혈 성분의 경우, 0 = 대변에서 관찰되는 혈액 없음, 1 = 매일 배변 절반 이하에 대해 대변과 함께 혈액 흔적, 2 = 매일 배변 대부분에 대해 대변과 함께 명백한 혈액, 3 = 배변과 함께 통과하는 혈액.
PGA는 0 = 정상, 1 = 경미한 질환, 2 = 중등도 질환, 3 = 중증 질환으로서 점수가 매겨진다.
2 항목 환자 관련 결과(PRO)
2 항목 PRO는 추가의 효능 평가로서 일지 입력(diary entry)으로부터의 직장 출혈 및 대변 빈도의 성분을 사용한 복합 점수이다.
메이요 점수를 위한 일지 입력 시기
일지 입력 시기는 내시경검사가 수행되는 때에 따라 달라진다. 내시경검사가 수행되지 않은 방문의 경우(치료 기간 8, 15, -29, 43, 57, 및 71일째), 참가자는 각 연구 방문 직전 적어도 5일 동안 일지 입력을 완료할 것이다.
내시경검사가 기준선에 수행되는 방문의 경우(치료 기간 1 및 85일째), 참가자는 내시경검사 준비일 직전 적어도 5일 연속으로 일지 입력을 완료할 것이다. 내시경검사는 임상 평가 전 및 투여 전 3일 이내에(장 준비 및 내시경 절차일 제외) 수행되어야 한다.
탐색적 효능 평가
내시경 및 임상 평가
변형된 바론 점수, 임상 및 조직학적 평가가 내시경적, 임상 및 조직학적 차도를 평가하는데 사용될 것이다.
결장 점막 생검 수집
파트 B의 모든 참가자의 경우, 연구의 일부로서 내시경검사 중에, 또는 85일 전 조기 종료시에 생검이 수행될 것이다. 내시경 수축 동안 30 cm 떨어진 가장 심하게 영향을 받은 결장 부위에서의 5 내지 6개의 샘플의 생검을 각 내시경검사시에 수행하였다. 가장 영향을 받은 부위에 궤양이 생기면, 궤양의 가장자리에서 샘플을 얻어야 한다. UC의 임의의 가시적인 병변 특징이 없으면, 2개의 샘플은 내시경 수축시 10 cm의 영역으로부터 수집되어야 한다. 또한, 기준선 방문시에, 하기에 기재된 바와 같이 각 참가자에 대해 영향을 받지 않은 부위(내시경 수축 동안 30 cm 이내에 존재하는 경우)로부터 2개의 생검 샘플을 얻어야 한다. 1 내지 2개의 생검 표본은 연구를 위해 제공된 각 용기에 넣어야 한다. 포르말린 고정된 병을 10% 중성 완충 포르말린으로 미리 채우고, RNA 레이터(later) 병은 RNA 레이터 용액으로 미리 채운다.
약동학
BMS-986184의 약동학은 혈청 농도 대 시간 데이터로부터 유래될 것이다. 하기 약동학 매개변수는 SAD 및 MAD 모두에 대한 건강한 참가자에서 평가될 것이다:
Figure pct00019
하기 약동학 매개변수는 파트 A1 SAD에 대한 건강한 참가자에서 평가될 것이다.
Figure pct00020
하기 약동학 매개변수는 파트 A2 MAD에 대한 건강한 참가자에서 평가될 것이다.
Figure pct00021
하기 약동학 매개변수는 파트 B POM에 대한 UC 환자에서 평가될 것이다.
Figure pct00022
개별적인 참가자 약동학 매개변수 값은 검증된 약동학 분석 프로그램에 의한 비구획 방법에 의해 유도될 것이다. 실제 시간이 분석에 사용될 것이다.
표 17: BMS-986184를 위한 약동학 샘플링 일정 - SAD (파트 A1)
Figure pct00023
표 18: BMS-986184를 위한 약동학 샘플링 일정 - MAD (파트 A2)
Figure pct00024
Figure pct00025
표 19: BMS-986184를 위한 약동학 샘플링 일정 - POM (파트 B)
Figure pct00026
혈청 샘플은 검증된 리간드-결합 면역분석에 의해 BMS-986184에 대해 분석될 것이다. 위약을 받은 참가자로부터 수집된 약동학 샘플은 위약 상태를 확인하기 위한 요청이 없는 한 분석되지 않을 것이다.
면역원성 평가
BMS-986184에 대한 특정 ADA의 발생은 계획된 시점에서 얻어진 측정치로부터 결정될 것이다. 샘플의 분석은 검증된 면역분석을 사용하여 수행될 것이다. 연구의 종료점은 약물 치료의 개시부터 마지막 용량의 추적 기간까지 지속적인 양성 ADA의 발병률이다.
하기 정의가 적용될 것이다:
참가자의 ADA 상태:
· 기준선 ADA 양성 참가자: 기준선 ADA 양성 샘플을 갖는 참가자
· ADA 양성 참가자: 정의된 관찰 기간 동안 치료의 개시 후 임의의 시간에 기준선 대비 적어도 하나의 ADA 양성 샘플을 갖는 참가자.
· ADA 음성 참가자: 치료 개시 후 ADA 양성 샘플이 없는 참가자
약력학
분변 칼프로텍틴
분변 칼프로텍틴은 장내 과립구의 배설과 상관관계가 있기 때문에 IBD에서 장내 염증의 대용물 마커이다. 분변 칼프로텍틴은 요법에 대한 반응 마커로서 종적으로 추적될 수 있다.
고민감성 CRP ( hsCRP )
hsCRP는 염증의 비특이적 급성기 반응성 마커이다. hsCRP는 안전 실험실로서 역할을 할 것이고, 안전 요법에 대한 반응의 마커로서 종적으로 추적될 수 있다.
바이오마커
표적 관여 바이오마커
표적 관여를 위한 혈청 IP-10 수준(총 및 유리)( 파트 A & B)
파트 A에서, 혈액은 TE를 평가하기 위해 무혈청 및 총 IP-10 수준의 측정을 위해 채혈될 것이다.
표 20: 혈청 TE 바이오마커 샘플링 일정 BMS-986184 - SAD (파트 A1)
Figure pct00027
표 21: TE 바이오마커 샘플링 일정 BMS-986184 -MAD (파트 A2)
Figure pct00028
파트 B에서, 혈액은 TE를 평가하기 위해 무혈청 및 총 IP-10 수준의 측정을 위해 표 9.8.1.1-3 에 나타낸 시간에 채혈될 것이다. 혈액 수집 및 처리의 추가적인 세부내용은 실험실 절차 매뉴얼에서 부위에 제공될 것이다.
표 22: TE 바이오마커 샘플링 일정 BMS-986184 - 파트 B (POM)
Figure pct00029
조직 표적 관여 바이오마커 ( 파트 B)
결장 생검은 조직 TE를 평가하기 위해 유리 및 총 IP-10 수준을 측정하는데 사용될 것이다.
약력학 바이오마커 ( 파트 B)
파트 B 단독에서, 혈액은 hsCRP의 평가를 위한 시간에 투여전에 채혈될 것이다. 분변 칼프로텍틴이 또한 측정될 것이다.
탐구적 혈청/혈장 바이오마커 ( 파트 B)
파트 B 단독에서, 혈액은 IP-10 또는 관련된 경로의 중화와 상관관계가 있을 수 있는 탐구적 혈청 바이오마커의 평가를 위해 투여 전에 채혈될 것이다. 탐구적 혈청 바이오마커는 비제한적으로 다른 CXCR3 관련 케모카인(CXCL9/MIG, CXCL11/ITAC), IL-1(α, β), IL-6, IL-10, IL-12, G-CSF, MIP-3β, IFN-γ 및 UC 질환 활성 및/또는 점막 치유와 상관관계가 있을 수 있는 새로운 마커를 포함할 수 있다. 궤양성 대장염에서 BMS-986184의 활성을 이해하는 것을 돕기 위해 단백질체 프로파일링이 수행될 수 있다.
면역 세포 표현형분석 ( 파트 B)
파트 B 단독에서, 혈액은 비제한적으로 하기 마커를 포함할 수 있는 면역 세포 표현형분석을 위해 투여 전에 채혈될 것이다: CXCR3, CD3, CD4, CD56, CD16, CD45RA, CCR7. 이들 결과는 항-IP-10 요법의 결과로서 발생할 수 있는 약력학 변화를 평가하고/하거나 반응의 기준선 예측자를 잠재적으로 확인하는데 사용될 것이다.
면역조직화학 ( 파트 B)
포르말린 고정된 샘플의 면역조직화학은 표준 절차에 따라 하기 항원을 포함할 수 있다: CD3, CD68, IP-10, Foxp3, 사이토케라틴 18, EpCAM, IL17, 및 CXCR3.
유전자 발현 프로파일링
전혈 RNA 발현 ( 파트 B)
파트 B 단독에서, 혈액은 투여 전에 채혈될 것이다. 이들 샘플은 염증성 및/또는 UC 질환 경로, 작용 기준 및 BMS-986184 치료에 대한 반응과 관련된 약력학 및 효능 바이오마커를 확인하기 위해 광범위한 RNA 프로파일링(마이크로어레이 또는 RNA 시퀀싱)을 제공할 것이다. 또한, 이들 샘플은 BMS-986184 처리된 참가자에 대한 효능을 예측할 수 있는 기준선에서의 유전자 발현을 탐색하는데 사용될 것이다.
조직 RNA 발현 ( 파트 B)
RNA 레이터에 보관된 결장 생검은 RNA를 단리하기 위해 처리될 것이다. 이들 샘플은 염증성 및/또는 UC 질환 경로, 작용 기준 및 BMS-986184 치료에 대한 반응과 관련된 약력학 및 효능 바이오마커를 확인하기 위해 광범위한 RNA 프로파일링(마이크로어레이 또는 RNA 시퀀싱)을 제공할 것이다. 또한, 이들 샘플은 BMS-986184 처리된 참가자에 대한 효능을 예측할 수 있는 기준선에서의 유전자 발현을 탐색하는데 사용될 것이다.
서열 목록의 요약
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균등물
당업자는 일상적인 실험만을 사용하여 본원에 개시된 본 발명의 특정 구체 예의 많은 균등물을 인식하거나 확인할 수 있을 것이다. 이러한 균등물은 하기 청구범위에 포함되는 것으로 의도된다.
SEQUENCE LISTING <110> BRISTOL-MYERS SQUIBB SRINIVASAN, Mohan, et al. <120> IP-10 ANTIBODIES AND THEIR USES <130> MXI-541PC <140> PCT/US2016/064140 <141> 2016-11-30 <150> US 62/374,622 <151> 2016-08-12 <150> US 62/261,210 <151> 2015-11-30 <160> 168 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: VH CDR1 a.a. IP10.1 <400> 1 Asn Asn Gly Met His 1 5 <210> 2 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: VH CDR2 a.a. IP10.1 <400> 2 Val Ile Trp Phe Asp Gly Met Asn Lys Phe Tyr Val Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 3 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: VH CDR3 a.a. IP10.1 <400> 3 Glu Gly Asp Gly Ser Gly Ile Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val 1 5 10 15 <210> 4 <211> 124 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: VH a.a. 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IP10.54 <400> 155 gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcagctatt tagcctggta ccagcagaaa 120 cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcca gcagggccac tggcatccca 180 gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 240 cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cagtatggta gctcacctat attcactttc 300 ggccctggga ccaaagtgga tatcaaa 327 <210> 156 <211> 216 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Full-length light chain a.a. 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Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 157 <211> 98 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <222> (1)..(98) <223> Human IP-10 a.a. <400> 157 Met Asn Gln Thr Ala Ile Leu Ile Cys Cys Leu Ile Phe Leu Thr Leu 1 5 10 15 Ser Gly Ile Gln Gly Val Pro Leu Ser Arg Thr Val Arg Cys Thr Cys 20 25 30 Ile Ser Ile Ser Asn Gln Pro Val Asn Pro Arg Ser Leu Glu Lys Leu 35 40 45 Glu Ile Ile Pro Ala Ser Gln Phe Cys Pro Arg Val Glu Ile Ile Ala 50 55 60 Thr Met Lys Lys Lys Gly Glu Lys Arg Cys Leu Asn Pro Glu Ser Lys 65 70 75 80 Ala Ile Lys Asn Leu Leu Lys Ala Val Ser Lys Glu Arg Ser Lys Arg 85 90 95 Ser Pro <210> 158 <211> 368 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <222> (1)..(368) <223> Human CXCR3 a.a. <400> 158 Met Val Leu Glu Val Ser Asp His Gln Val Leu Asn Asp Ala Glu Val 1 5 10 15 Ala Ala Leu Leu Glu Asn Phe Ser Ser Ser Tyr Asp Tyr Gly Glu Asn 20 25 30 Glu Ser Asp Ser Cys Cys Thr Ser Pro Pro Cys Pro Gln Asp Phe Ser 35 40 45 Leu Asn Phe Asp Arg Ala Phe Leu Pro Ala Leu Tyr Ser Leu Leu Phe 50 55 60 Leu Leu Gly Leu Leu Gly Asn Gly Ala Val Ala Ala Val Leu Leu Ser 65 70 75 80 Arg Arg Thr Ala Leu Ser Ser Thr Asp Thr Phe Leu Leu His Leu Ala 85 90 95 Val Ala Asp Thr Leu Leu Val Leu Thr Leu Pro Leu Trp Ala Val Asp 100 105 110 Ala Ala Val Gln Trp Val Phe Gly Ser Gly Leu Cys Lys Val Ala Gly 115 120 125 Ala Leu Phe Asn Ile Asn Phe Tyr Ala Gly Ala Leu Leu Leu Ala Cys 130 135 140 Ile Ser Phe Asp Arg Tyr Leu Asn Ile Val His Ala Thr Gln Leu Tyr 145 150 155 160 Arg Arg Gly Pro Pro Ala Arg Val Thr Leu Thr Cys Leu Ala Val Trp 165 170 175 Gly Leu Cys Leu Leu Phe Ala Leu Pro Asp Phe Ile Phe Leu Ser Ala 180 185 190 His His Asp Glu Arg Leu Asn Ala Thr His Cys Gln Tyr Asn Phe Pro 195 200 205 Gln Val Gly Arg Thr Ala Leu Arg Val Leu Gln Leu Val Ala Gly Phe 210 215 220 Leu Leu Pro Leu Leu Val Met Ala Tyr Cys Tyr Ala His Ile Leu Ala 225 230 235 240 Val Leu Leu Val Ser Arg Gly Gln Arg Arg Leu Arg Ala Met Arg Leu 245 250 255 Val Val Val Val Val Val Ala Phe Ala Leu Cys Trp Thr Pro Tyr His 260 265 270 Leu Val Val Leu Val Asp Ile Leu Met Asp Leu Gly Ala Leu Ala Arg 275 280 285 Asn Cys Gly Arg Glu Ser Arg Val Asp Val Ala Lys Ser Val Thr Ser 290 295 300 Gly Leu Gly Tyr Met His Cys Cys Leu Asn Pro Leu Leu Tyr Ala Phe 305 310 315 320 Val Gly Val Lys Phe Arg Glu Arg Met Trp Met Leu Leu Leu Arg Leu 325 330 335 Gly Cys Pro Asn Gln Arg Gly Leu Gln Arg Gln Pro Ser Ser Ser Arg 340 345 350 Arg Asp Ser Ser Trp Ser Glu Thr Ser Glu Ala Ser Tyr Ser Gly Leu 355 360 365 <210> 159 <211> 98 <212> PRT <213> Macaca mulatta <220> <221> misc_feature <222> (1)..(98) <223> Rhesus monkey IP-10 a.a. <400> 159 Met Asn Gln Thr Ala Ile Leu Ile Cys Cys Leu Val Phe Leu Thr Leu 1 5 10 15 Ser Gly Ile Gln Gly Ile Pro Leu Ser Arg Thr Val Arg Cys Thr Cys 20 25 30 Ile Ser Ile Ser Asn Gln Pro Val Asn Pro Arg Ser Leu Glu Lys Leu 35 40 45 Glu Ile Ile Pro Pro Ser Gln Phe Cys Pro His Val Glu Ile Ile Ala 50 55 60 Thr Met Lys Lys Lys Gly Glu Lys Arg Cys Leu Asn Pro Glu Ser Lys 65 70 75 80 Ala Ile Lys Asn Leu Leu Lys Ala Val Ser Lys Glu Arg Ser Lys Arg 85 90 95 Ser Pro <210> 160 <211> 98 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> misc_feature <222> (1)..(98) <223> Mouse IP-10 <400> 160 Met Asn Pro Ser Ala Ala Val Ile Phe Cys Leu Ile Leu Leu Gly Leu 1 5 10 15 Ser Gly Thr Gln Gly Ile Pro Leu Ala Arg Thr Val Arg Cys Asn Cys 20 25 30 Ile His Ile Asp Asp Gly Pro Val Arg Met Arg Ala Ile Gly Lys Leu 35 40 45 Glu Ile Ile Pro Ala Ser Leu Ser Cys Pro Arg Val Glu Ile Ile Ala 50 55 60 Thr Met Lys Lys Asn Asp Glu Gln Arg Cys Leu Asn Pro Glu Ser Lys 65 70 75 80 Thr Ile Lys Asn Leu Met Lys Ala Phe Ser Gln Lys Arg Ser Lys Arg 85 90 95 Ala Pro <210> 161 <211> 125 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <222> (1)..(125) <223> Human MIG a.a. <400> 161 Met Lys Lys Ser Gly Val Leu Phe Leu Leu Gly Ile Ile Leu Leu Val 1 5 10 15 Leu Ile Gly Val Gln Gly Thr Pro Val Val Arg Lys Gly Arg Cys Ser 20 25 30 Cys Ile Ser Thr Asn Gln Gly Thr Ile His Leu Gln Ser Leu Lys Asp 35 40 45 Leu Lys Gln Phe Ala Pro Ser Pro Ser Cys Glu Lys Ile Glu Ile Ile 50 55 60 Ala Thr Leu Lys Asn Gly Val Gln Thr Cys Leu Asn Pro Asp Ser Ala 65 70 75 80 Asp Val Lys Glu Leu Ile Lys Lys Trp Glu Lys Gln Val Ser Gln Lys 85 90 95 Lys Lys Gln Lys Asn Gly Lys Lys His Gln Lys Lys Lys Val Leu Lys 100 105 110 Val Arg Lys Ser Gln Arg Ser Arg Gln Lys Lys Thr Thr 115 120 125 <210> 162 <211> 94 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <222> (1)..(94) <223> Human ITAC a.a.a <400> 162 Met Ser Val Lys Gly Met Ala Ile Ala Leu Ala Val Ile Leu Cys Ala 1 5 10 15 Thr Val Val Gln Gly Phe Pro Met Phe Lys Arg Gly Arg Cys Leu Cys 20 25 30 Ile Gly Pro Gly Val Lys Ala Val Lys Val Ala Asp Ile Glu Lys Ala 35 40 45 Ser Ile Met Tyr Pro Ser Asn Asn Cys Asp Lys Ile Glu Val Ile Ile 50 55 60 Thr Leu Lys Glu Asn Lys Gly Gln Arg Cys Leu Asn Pro Lys Ser Lys 65 70 75 80 Gln Ala Arg Leu Ile Ile Lys Lys Val Glu Arg Lys Asn Phe 85 90 <210> 163 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Epitope Peptide 1 <400> 163 Ser Ile Ser Asn Gln Pro 1 5 <210> 164 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Epitope Peptide 2 <400> 164 Val Asn Pro Arg Ser Leu Glu Lys Leu 1 5 <210> 165 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: Epitope Peptide 3 <400> 165 Ile Ile Pro Ala Ser Gln Phe Cys Pro Arg Val Glu Ile Ile Ala 1 5 10 15 <210> 166 <211> 124 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: VH a.a. consensus all Abs <220> <221> misc_feature <222> (23)..(23) <223> X can be T or A <220> <221> misc_feature <222> (31)..(31) <223> X can be S or E or K or Q or T or N or R or D <220> <221> misc_feature <222> (32)..(32) <223> X can be Y or H or S or F <220> <221> misc_feature <222> (52)..(52) <223> X can be D or G or S <220> <221> misc_feature <222> (53)..(53) <223> X can be F or Y or H <220> <221> misc_feature <222> (54)..(54) <223> X can be V or A or G or N <220> <221> misc_feature <222> (56)..(56) <223> X can be D or L or V or I or A <220> <221> misc_feature <222> (57)..(57) <223> X can be T or I or N <220> <221> misc_feature <222> (59)..(59) <223> X can be Y or G or S <220> <221> misc_feature <222> (61)..(61) <223> X can be T or A <220> <221> misc_feature <222> (82)..(82) <223> X can be Q or E <220> <221> misc_feature <222> (93)..(93) <223> X can be V or I <220> <221> misc_feature <222> (101)..(101) <223> X can be A or E or D <220> <221> misc_feature <222> (104)..(14) <223> X can be N or S or G <220> <221> misc_feature <222> (104)..(104) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (105)..(105) <223> X can be I or L or V <220> <221> misc_feature <222> (107)..(107) <223> X can be Y or F <220> <221> misc_feature <222> (108)..(108) <223> X can be Y or F <400> 166 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Xaa Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Xaa Xaa 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Xaa Xaa Xaa Gly Xaa Xaa Lys Xaa Tyr Xaa Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Xaa Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Xaa Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Gly Xaa Gly Ser Xaa Xaa Tyr Xaa Xaa Tyr Gly Met Asp 100 105 110 Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 167 <211> 124 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: VH a.a. consensus Abs IP10.44, IP10.45, IP10.46, IP10.52, and IP10.53 <220> <221> misc_feature <222> (23)..(23) <223> X can be T or A <220> <221> misc_feature <222> (31)..(31) <223> X can be E or K or Q or D <220> <221> misc_feature <222> (32)..(32) <223> X can be Y or H <220> <221> misc_feature <222> (52)..(52) <223> X can be G or S <220> <221> misc_feature <222> (53)..(53) <223> X can be F or Y or H <220> <221> misc_feature <222> (54)..(54) <223> X can be A or G or N <220> <221> misc_feature <222> (56)..(56) <223> X can be D or L or V or A <220> <221> misc_feature <222> (59)..(59) <223> X can be Y or G or S <220> <221> misc_feature <222> (101)..(101) <223> X can be A or E <220> <221> misc_feature <222> (104)..(104) <223> X can be N or S <220> <221> misc_feature <222> (105)..(105) <223> X can be I or V <220> <221> misc_feature <222> (107)..(107) <223> X can be Y or F <400> 167 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Xaa Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Xaa Xaa 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Xaa Xaa Xaa Gly Xaa Ile Lys Xaa Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Gly Xaa Gly Ser Xaa Xaa Tyr Xaa Tyr Tyr Gly Met Asp 100 105 110 Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 168 <211> 124 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <220> <221> misc_feature <222> (23)..(23) <223> X can be T or A <220> <221> misc_feature <222> (31)..(31) <223> X can be E or D <220> <221> misc_feature <222> (53)..(53) <223> X can be F or Y <220> <221> misc_feature <222> (54)..(54) <223> X can be A or G <220> <221> misc_feature <222> (104)..(104) <223> X can be N or S <220> <221> misc_feature <222> (105)..(105) <223> X can be I or V <400> 168 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Xaa Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Xaa Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Gly Xaa Xaa Gly Leu Ile Lys Gly Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Gly Ala Gly Ser Xaa Xaa Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp 100 105 110 Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120

Claims (58)

  1. 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하는, 인간 IP-10에 결합하는 단리된 단클론 항체, 또는 이의 항원 결합 부분으로서, 중쇄 가변 영역이 서열번호: 16, 28, 40, 52, 64, 76, 88, 100, 112, 124, 136, 또는 148의 중쇄 가변 영역으로부터의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 영역을 포함하는 것인 단리된 단클론 항체, 또는 이의 항원 결합 부분.
  2. 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하는, 인간 IP-10에 결합하는 단리된 단클론 항체, 또는 이의 항원 결합 부분으로서, 중쇄 가변 영역이 서열번호: 16의 중쇄 가변 영역으로부터의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 영역을 포함하는 것인 단리된 단클론 항체, 또는 이의 항원 결합 부분.
  3. 제1항에 있어서, 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 영역이 각각 하기의 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체, 또는 이의 항원 결합 부분:
    (a) 서열번호: 13, 14, 및 15;
    (b) 서열번호: 25, 26, 및 27;
    (c) 서열번호: 37, 38, 및 39;
    (d) 서열번호: 49, 50, 및 51;
    (e) 서열번호: 61, 62, 및 63;
    (f) 서열번호: 73, 74, 및 75;
    (g) 서열번호: 85, 86, 및 87;
    (h) 서열번호: 97, 98, 및 99;
    (i) 서열번호: 109, 110, 및 111;
    (j) 서열번호: 121, 122, 및 123;
    (k) 서열번호: 133, 134, 및 135; 또는
    (l) 서열번호: 145, 146, 및 147.
  4. 제1항에 있어서, 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 영역이 각각 서열번호: 13, 14, 및 15의 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체, 또는 이의 항원 결합 부분.
  5. 제1항 또는 제3항에 있어서, 경쇄 가변 영역이 서열번호: 22, 34, 46, 58, 70, 82, 94, 106, 118, 130, 142, 또는 154의 경쇄 가변 영역으로부터의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 영역을 포함하는 것인 항체, 또는 이의 항원 결합 부분.
  6. 제1항 또는 제3항에 있어서, 경쇄 가변 영역이 서열번호: 22의 경쇄 가변 영역으로부터의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 영역을 포함하는 것인 항체, 또는 이의 항원 결합 부분.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 영역이 각각 하기의 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체, 또는 이의 항원 결합 부분:
    (a) 서열번호: 19, 20, 및 21;
    (b) 서열번호: 31, 32, 및 33;
    (c) 서열번호: 43, 44, 및 45;
    (d) 서열번호: 55, 56, 및 57;
    (e) 서열번호: 67, 68, 및 69;
    (f) 서열번호: 79, 80, 및 81;
    (g) 서열번호: 91, 92, 및 93;
    (h) 서열번호: 103, 104, 및 105;
    (i) 서열번호: 115, 116, 및 117;
    (j) 서열번호: 127, 128, 및 129;
    (k) 서열번호: 139, 140, 및 141; 또는
    (l) 서열번호: 151, 152, 및 153.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 영역이 각각 서열번호: 19, 20, 및 21의 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체, 또는 이의 항원 결합 부분.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 중쇄 가변 영역이 서열번호: 18, 30, 42, 54, 66, 78, 90, 102, 114, 126, 138, 또는 150의 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체, 또는 이의 항원 결합 부분.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 중쇄 가변 영역이 서열번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체, 또는 이의 항원 결합 부분.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 경쇄 가변 영역이 서열번호: 24, 36, 48, 60, 72, 84, 96, 108, 120, 132, 144, 또는 156의 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체, 또는 이의 항원 결합 부분.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 경쇄 가변 영역이 서열번호: 24의 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체, 또는 이의 항원 결합 부분.
  13. 하기의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 영역을 포함하는, 인간 IP-10에 결합하는 단리된 단클론 항체, 또는 이의 항원 결합 부분:
    (a) 각각 서열번호: 13, 14, 및 15, 및 서열번호: 19, 20, 및 21;
    (b) 각각 서열번호: 25, 26, 및 27, 및 서열번호: 31, 32, 및 33;
    (c) 각각 서열번호: 37, 38, 및 39, 및 서열번호: 43, 44, 및 45;
    (d) 각각 서열번호: 49, 50, 및 51, 및 서열번호: 55, 56, 및 57;
    (e) 각각 서열번호: 61, 62, 및 63, 및 서열번호: 67, 68, 및 69;
    (f) 각각 서열번호: 73, 74, 및 75, 및 서열번호: 79, 80, 및 81;
    (g) 각각 서열번호: 85, 86, 및 87, 및 서열번호: 91, 92, 및 93;
    (h) 각각 서열번호: 97, 98, 및 99, 및 서열번호: 103, 104, 및 105;
    (i) 각각 서열번호: 109, 110, 및 111, 및 서열번호: 115, 116, 및 117;
    (j) 각각 서열번호: 121, 122, 및 123, 및 서열번호: 127, 128, 및 129;
    (k) 각각 서열번호: 133, 134, 및 135, 및 서열번호: 139, 140, 및 141; 또는
    (l) 각각 서열번호: 145, 146, 및 147, 및 서열번호: 151, 152, 및 153.
  14. 각각 서열번호: 13, 14, 및 15, 및 서열번호: 19, 20, 및 21의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 영역을 포함하는, 인간 IP-10에 결합하는 단리된 단클론 항체, 또는 이의 항원 결합 부분.
  15. 각각 서열번호: 16 및 22에 대해 적어도 95% 아미노산 동일성을 갖는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열을 포함하는, 인간 IP-10에 결합하는 단리된 단클론 항체, 또는 이의 항원 결합 부분.
  16. 각각 하기의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하는, 인간 IP-10에 결합하는 단리된 단클론 항체, 또는 이의 항원 결합 부분:
    (a) 서열번호: 16 및 22;
    (b) 서열번호: 28 및 34;
    (c) 서열번호: 40 및 46;
    (d) 서열번호: 52 및 58;
    (e) 서열번호: 64 및 70;
    (f) 서열번호: 76 및 82;
    (g) 서열번호: 88 및 94;
    (h) 서열번호: 100 및 106;
    (i) 서열번호: 112 및 118;
    (j) 서열번호: 124 및 130;
    (k) 서열번호: 136 및 142; 또는
    (l) 서열번호: 148 및 154.
  17. 각각 서열번호: 16 및 22의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하는, 인간 IP-10에 결합하는 단리된 단클론 항체, 또는 이의 항원 결합 부분.
  18. 각각 하기의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하는, 인간 IP-10에 결합하는 단리된 단클론 항체, 또는 이의 항원 결합 부분:
    (a) 서열번호: 18 및 24;
    (b) 서열번호: 30 및 36;
    (c) 서열번호: 42 및 48;
    (d) 서열번호: 54 및 60;
    (e) 서열번호: 66 및 72;
    (f) 서열번호: 78 및 84;
    (g) 서열번호: 90 및 96;
    (h) 서열번호: 102 및 108;
    (i) 서열번호: 114 및 120;
    (j) 서열번호: 126 및 132;
    (k) 서열번호: 138 및 144; 또는
    (l) 서열번호: 150 및 156.
  19. 각각 서열번호: 18 및 24의 아미노산 서열을 포함하는 전장 중쇄 및 경쇄 사슬을 포함하는, 인간 IP-10에 결합하는 단리된 단클론 항체, 또는 이의 항원 결합 부분.
  20. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 하기의 특성 중 하나 또는 조합을 나타내는 항체, 또는 이의 항원 결합 부분:
    (a) IP-10의 CXCR3에의 결합을 억제하는 특성;
    (b) IP-10 유도 칼슘 플럭스를 억제하는 특성;
    (c) IP-10 유도 세포 이동을 억제하는 특성;
    (d) 레서스 원숭이 IP-10과 교차 반응하는 특성;
    (e) 마우스 IP-10과 교차 반응하지 않는 특성;
    (f) 인간 MIG와 교차 반응하지 않는 특성; 및/또는
    (g) 인간 ITAC와 교차 반응하지 않는 특성.
  21. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 1 x 10-9 M 이하의 KD로 인간 IP-10에 결합하는 항체, 또는 이의 항원 결합 부분.
  22. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 1 x 10-10 M 이하의 KD로 인간 IP-10에 결합하는 항체, 또는 이의 항원 결합 부분.
  23. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 1 x 10-11 M 이하의 KD로 인간 IP-10에 결합하는 항체, 또는 이의 항원 결합 부분.
  24. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, SISNQP(서열번호: 163), VNPRSLEKL(서열번호: 164), 및/또는 IIPASQFCPRVEIIA(서열번호: 165) 내의 아미노산 잔기에 결합하는 항체, 또는 이의 항원 결합 부분.
  25. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 인간, 인간화, 또는 키메라 항체인 항체, 또는 이의 항원 결합 부분.
  26. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, IgG1, IgG2 또는 IgG4 아이소타입인 항체, 또는 이의 항원 결합 부분.
  27. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 단편 또는 단쇄 항체인 항체, 또는 이의 항원 결합 부분.
  28. 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항의 항체, 또는 이의 항원 결합 부분, 및 제2 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 포함하는 이중특이적 분자.
  29. 치료제에 연결된, 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항의 항체, 또는 이의 항원 결합 부분을 포함하는 면역접합체.
  30. 제29항에 있어서, 치료제가 세포독소 또는 방사성 동위원소인 면역접합체.
  31. 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항의 항체, 또는 이의 항원 결합 부분, 제28항의 이중특이적 분자, 또는 제29항 또는 제30항의 면역접합체, 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 조성물.
  32. 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항의 항체, 또는 이의 항원 결합 부분의 중쇄 및/또는 경쇄 가변 영역을 코딩하는 단리된 핵산.
  33. 제32항의 핵산을 포함하는 발현 벡터.
  34. 제33항의 발현 벡터를 포함하는 숙주 세포.
  35. 제34항의 숙주 세포에서 항체를 발현시키는 단계 및 숙주 세포로부터 항체를 단리시키는 단계를 포함하는, 항-IP-10 항체를 제조하는 방법.
  36. 염증성 또는 자가면역 반응이 억제되도록 T 세포 또는 NK 세포를 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항의 항체, 또는 이의 항원 결합 부분과 접촉시키는 단계를 포함하는, 활성화된 T 세포 또는 NK 세포에 의해 매개된 염증성 또는 자가면역 반응을 억제하는 방법.
  37. 대상에서의 염증성 또는 자가면역 질환이 치료되도록 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항의 항체, 또는 이의 항원 결합 부분을 대상에게 투여하는 단계를 포함하는, 치료를 필요로 하는 대상에서 염증성 또는 자가면역 질환을 치료하는 방법.
  38. 제37항에 있어서, 질환이 염증성 장 질환(IBD)인 방법.
  39. 제38항에 있어서, IBD가 궤양성 대장염 또는 크론병인 방법.
  40. 제37항에 있어서, 질환이 류마티스성 관절염, 전신 홍반성 루푸스, I형 당뇨병, 염증성 피부 장애(예컨대, 건선, 편평태선), 자가면역 갑상선 질환(예컨대, 그레이브스 병, 하시모토 갑상선염), 쇼그렌 증후군, 폐 염증(예컨대, 천식, 만성 폐쇄성 폐 질환, 폐 사르코이드증, 림프구성 폐포염), 이식 거부반응, 척수 손상, 뇌 손상(예컨대, 뇌졸중), 신경퇴행성 질환(예컨대, 알츠하이머병, 파킨슨병), 치은염, 유전자 요법 유도 염증, 혈관신생 질환, 염증성 신장 질환(예컨대, IgA 신장증, 막증식성 사구체신염, 급속 진행성 사구체신염), 다발성 경화증, 및 아테롬성 동맥경화증으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  41. 제37항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 30-450 mg의 용량의 항체, 또는 이의 항원 결합 부분의 단일 용량의 투여를 포함하는 방법.
  42. 제41항에 있어서, 용량이 30 mg, 40 mg, 50 mg, 60 mg, 70 mg, 80 mg, 90 mg, 100 mg, 110 mg, 120 mg, 130 mg, 140 mg, 150 mg, 160 mg, 170 mg, 180 mg, 190 mg, 200 mg, 210 mg, 220 mg, 230 mg, 240 mg, 250 mg, 260 mg, 270 mg, 280 mg, 290 mg, 300 mg, 310 mg, 320 mg, 330 mg, 340 mg, 350 mg, 360 mg, 370 mg, 380 mg, 390 mg, 400 mg, 또는 450mg으로부터 선택되는 것인 방법.
  43. 제41항에 있어서, 용량이 35 mg, 45 mg, 55 mg, 65 mg, 75 mg, 85 mg, 95 mg, 105 mg, 115 mg, 125 mg, 135 mg, 145 mg, 155 mg, 165 mg, 175 mg, 185 mg, 195 mg, 205 mg, 215 mg, 225 mg, 235 mg, 245 mg, 255 mg, 265 mg, 275 mg, 285 mg, 295 mg, 305 mg, 315 mg, 325 mg, 335 mg, 345 mg, 355 mg, 355 mg, 375 mg, 385 mg, 395 mg, 405 mg, 또는 445mg으로부터 선택되는 것인 방법.
  44. 제41항에 있어서, 용량이 40 mg인 방법.
  45. 제41항에 있어서, 용량이 100 mg인 방법.
  46. 제41항에 있어서, 용량이 150 mg인 방법.
  47. 제41항에 있어서, 용량이 250 mg인 방법.
  48. 제41항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서, 항체, 또는 이의 항원 결합 부분이 매주마다 또는 2주마다 투여되는 것인 방법.
  49. 제41항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 항체, 또는 이의 항원 결합 부분이 약 12주의 기간 동안 투여되는 것인 방법.
  50. 제41항 내지 제49항 중 어느 한 항에 있어서, 항체, 또는 이의 항원 결합 부분이 1, 15, 29, 43, 57, 및 71일째에 투여되는 것인 방법.
  51. 제41항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, 항체, 또는 이의 항원 결합 부분이 정맥내 투여를 위해 제제화되는 것인 방법.
  52. 제41항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, 항체, 또는 이의 항원 결합 부분이 피하 투여를 위해 제제화되는 것인 방법.
  53. 제41항 내지 제52항 중 어느 한 항에 있어서, 장애가 궤양성 대장염인 방법.
  54. 대상에서의 궤양성 대장염이 치료되도록 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항의 항체, 또는 이의 항원 결합 부분을 대상에게 투여하는 단계를 포함하는, 치료를 필요로 하는 대상에서 궤양성 대장염을 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 약 12주의 기간 동안 2주마다 항체, 또는 이의 항원 결합 부분의 약 40mg의 단일 용량의 정맥내 투여를 포함하는 것인 방법.
  55. 대상에서의 바이러스 또는 박테리아 감염이 치료되도록 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항의 항체, 또는 이의 항원 결합 부분을 대상에게 투여하는 단계를 포함하는, 치료를 필요로 하는 대상에서 원치않는 IP-10 활성을 수반하는 바이러스 또는 박테리아 감염을 치료하는 방법.
  56. 제55항에 있어서, 바이러스 감염이 인간 면역결핍 바이러스(HIV), 간염 C 바이러스(HCV), 단순 포진 바이러스 유형 I(HSV-1) 또는 중증 급성 호흡기 증후군(SARS) 바이러스에 의해 매개된 것인 방법.
  57. 염증성 또는 자가면역 반응을 억제하기 위한 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항의 항체, 또는 이의 항원 결합 부분, 제28항의 이중특이적 분자, 또는 제29항 또는 제30항의 면역접합체의 용도.
  58. 염증성 또는 자가면역 반응을 억제하는 약제의 제조에 있어서, 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항의 항체, 또는 이의 항원 결합 부분, 제28항의 이중특이적 분자, 또는 제29항 또는 제30항의 면역접합체의 용도.
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