KR20180054818A - 암 줄기세포의 저해를 위한 조성물 및 방법 - Google Patents

암 줄기세포의 저해를 위한 조성물 및 방법 Download PDF

Info

Publication number
KR20180054818A
KR20180054818A KR1020187011440A KR20187011440A KR20180054818A KR 20180054818 A KR20180054818 A KR 20180054818A KR 1020187011440 A KR1020187011440 A KR 1020187011440A KR 20187011440 A KR20187011440 A KR 20187011440A KR 20180054818 A KR20180054818 A KR 20180054818A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
cancer
lox1
csc
gly
inhibitor
Prior art date
Application number
KR1020187011440A
Other languages
English (en)
Inventor
일레인 엠 허트
랄프 민터
스티븐 러스트
앨런 샌더콕
소티리오스 카라타나시스
Original Assignee
메디뮨 리미티드
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 메디뮨 리미티드 filed Critical 메디뮨 리미티드
Publication of KR20180054818A publication Critical patent/KR20180054818A/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7028—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages
    • A61K31/7034—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin
    • A61K31/704—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin attached to a condensed carbocyclic ring system, e.g. sennosides, thiocolchicosides, escin, daunorubicin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A61K31/7064—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines
    • A61K31/7068—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines having oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. cytidine, cytidylic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/713—Double-stranded nucleic acids or oligonucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2851—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the lectin superfamily, e.g. CD23, CD72
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0693—Tumour cells; Cancer cells
    • C12N5/0695—Stem cells; Progenitor cells; Precursor cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/25—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving enzymes not classifiable in groups C12Q1/26 - C12Q1/66
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2318/00—Antibody mimetics or scaffolds

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Mycology (AREA)

Abstract

본 발명은 일반적으로 암의 치료에 유용한 조성물 및 방법을 제공한다. 보다 구체적으로, 본 방법 및 조성물은 암 줄기세포(CSC)를 검출하거나, 정량화하거나, 저해하거나, 사멸시키거나, 분화시키거나 제거하는 데 사용될 수 있고, CSC와 연관된 암, 특히 LOX1을 발현하는 암 및 CSC의 치료에 사용될 수 있다.

Description

암 줄기세포의 저해를 위한 조성물 및 방법
관련 출원과의 교차 참조
본 특허 출원은 2015년 9월 30일에 출원된 미국 가특허 출원 62/235,144의 이득을 주장하며, 상기 가특허 출원은 그 전체가 원용에 의해 본 명세서에 포함된다.
전자 제출된 서열 목록의 언급
본 출원은 2016년 10월 28일에 생성되고 크기가 50,065 바이트인 텍스트 파일 명칭 "Lox1-200WO1_SequenceListing"로서 컴퓨터 판독 가능한 형태(CRF)로 본 출원과 함께 제출된 서열 목록을 참조로서 포함한다.
많은 효과적인 치료들이 일부 암(예를 들어, 소아 백혈병, 호지킨병 및 고환암)에 대항해 싸우고 있고, 조기 발견 및 예방에 관한 환자 교육에서 이루어진 진전 덕분에 일부 보편적인 암(예를 들어, 유방암, 전립선암)에 대한 사망률이 감소하긴 했어도, 많은 진행형 암을 앓고 있는 환자에 대한 생존율은 수십년 동안 크게 변하지 않았다. 이와 같이, 암은 여전히 미국에서 두번째로 가장 보편적인 사망 원인을 나타낸다.
암 줄기세포(CSC)는 그 명칭이 의미하는 바와 같이, 전분화능(pluripotency) 및 무제한 자가 재생이라는 줄기세포-유사 특징을 가진 암세포의 부분 집합(subset)이다. 이와 같이, 이러한 부차집단(subpopulation)의 세포는 종양 형성 및 이의 환경에의 적응에 책임이 있는 것으로 여겨진다. 현재 몇몇 증거들은, CSC가, 특히 잔존 질병(residual disease)이 최소인 경우에, 암의 약물 내성, 전이 및 재발에 책임이 있음을 가리킨다. 사실상 최근의 임상 증거는, 치료 기준이 되는 요법 후에 살아 남은 유방암 세포의 분획에서, CSC 시그너처를 갖는 세포가 농화되어 있었음을 보여주었다(문헌[Creighton et al., 2009]). 유사한 연구에서, 5q 결실 MDS을 갖는 환자에서, 임상적 및 세포 유전학적 차도(remission)가 나타났음에도 불구하고, 환자의 골수에 악성 줄기세포의 잔존 집단이 있는 것으로도 확인되었다(문헌[Tehranchi et al., 2010]). 현재 많은 임상 적응증들에서, 초기 치료적 반응에도 불구하고, 내성 암세포의 별개의 부분 집합의 체류가 재발 및 잠재적으로 전이를 초래할 수 있는 것으로 여겨진다.
암 줄기세포의 초기 식별(identification) 이후, 많은 종양 유형들에서 암 줄기세포가 발견되고 입증되어 왔다. AML 모델에서 CSC의 오리지널 식별 후(문헌[Lapidot et al., 1994]), CSC는 다수의 혈액학적 및 고형 종양 악성물들에서 발견되고 입증되었다. 고형 종양에서 CSC의 제1 증거는 유방암에서 유래되었으며, 여기서 CSC는 CD44+/CD24- 표면 마커 표현형을 갖고 있는 것으로 확인되었다(문헌[Al-Hajj et al., 2003]). 췌장암에서도 CSC가 잘 특징화되었다. 다양한 보고들이 Epcam+/CD44+/CD24+(문헌[Li et al., 2007]) 또는 CD133+(문헌[Hermann et al., 2007])로부터 췌장 CSC를 식별하긴 하지만, 다른 보고들은, 삼중 양성 Epcam+/CD44+/CD24+ 시그너처가 CSC의 종양형성 표현형을 가장 잘 추적한다고 보고하였다(문헌[van Vlerken et al., 2013]). 보고들은 결장직장암에서도 CSC를 식별하였으며, 연구는 마우스에서 장 종양 및 결장직장 종양에 대해 줄기세포 기원을 식별하였다(문헌[Barker et al., 2009]). 그렇지만, 당해 기술분야는 인간 CSC에 대한 표면 마커 표현형에 관해서는 의견 일치에 도달하지 못하였다. 많은 표면 마커들, 예컨대 CD66(문헌[Gemei et al., 2013]), LGR5(문헌[Hirsch et al., 2014]), 및 CD44 및 CD133(문헌[Wang et al., 2012])이 보고되어 있긴 하지만, 이들 표면 마커 표현형들 중 임의의 표면 마커 표현형이 인간 CSC에 대해 공통인 표현형일 수 있다는 임의의 강력한 확인이 결여되어 있으며, 이런 이유로 CSC의 존재의 식별에 보편적으로 사용될 수 있는 비-흡착성 구상체(sphere) 성장(예를 들어, 종양 구상체)과 같은 다른 기술들이 허용된다.
전형적인 항암 요법 및 새로 개발중인 항암 요법(예를 들어, 화학요법, 방사선, 수술)이 종양을 수축시키는 능력을 기반으로 평가되긴 하지만, 이들 요법은 암 줄기세포를 저해하거나 사멸시키는 데에는 효과가 없을 수 있으며, 이로 인해 암 되풀이 및 내성이 초래될 수 있다. 더욱이, 암 줄기세포가 전이와 연관이 있기 때문에, 암 줄기세포를 저해하거나 사멸시키지 않는 요법들은 연장된 질병 치료 또는 환자 생존에 효과가 없을 수 있다. 따라서, CSC 집단을 표적화하고 제거할 수 있는 새로운 약물이 암에 대한 임의의 성공적인 요법의 결정적인 구성요소로서 출현하고 있기 때문에, 이러한 약물을 식별하고 개발하는 것이 매우 중요하다. 현재의 연구는, 심지어 초기의 성공적인 치료적 개입 후에도, CSC가 암의 내화학성, 전이 및 궁극적으로는 재발에 책임이 있음을 보여주고 있다. 배아 줄기세포의 전분화능을 유도하는 경로와 동일한 주요 자가 재생 경로에 의해 CSC가 유도되긴 하지만, CSC 활성을 유도하는 다른 세포성 경로에 관한 지식은 여전히 한정되어 있다.
이에, 암의 종양 형성성을 감소시키고 암세포, 특히 암 줄기세포를 저해하거나 사멸시키는(예를 들어, 세포자멸사 또는 분화를 유도하는) 방법을 포함하여 암 치료를 위한 추가의 조성물 및 방법의 이용 가능성이, 보다 치료적인 옵션을 허용하고, 질병의 차도 및/또는 환자의 삶의 질 개선과 같은 보다 양호한 임상적 결과에 대한 잠재성을 가질 것이다.
일 양태에서, 본 개시내용은 암 줄기세포(CSC)의 증식의 저해 방법에 관한 것으로서, CSC의 증식을 저해하고/거나 생존을 감소시키기에 유효한 양의 LOX1 저해제를 CSC와 접촉시키는 단계를 포함한다.
일 양태에서, 본 개시내용은 과거에 치료를 받았지만 치료가 필요한 피험자에서 치료적으로 내성인 암의 치료 방법에 관한 것으로서, 치료적으로 내성인 암에 존재하는 암 줄기세포(CSC)를 저해하거나 사멸시키기에 유효한 양의 LOX1 저해제를 상기 피험자에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시형태에서, 이러한 방법은 치료적으로 내성인 암에 존재하는 암 줄기세포(CSC)의 분화를 유도하기에 유효한 양의 LOX1 저해제를 피험자에게 투여하는 단계를 포함할 수 있다.
일 양태에서, 본 개시내용은 과거에 치료를 받았지만 치료가 필요한 피험자에서 치료적으로 내성인 암의 치료 방법에 관한 것으로서, 치료적으로 내성인 암을 치료하기에 유효한 양의 LOX1 저해제를 상기 피험자에게 투여하는 단계를 포함한다.
일 양태에서, 본 개시내용은 암 줄기세포(CSC)를 포함하는 암의 치료 방법에 관한 것으로서, 암에서 CSC를 표적화하고 저해하거나 사멸시키기에 유효한 양의 LOX1 저해제를 치료가 필요한 피험자에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시형태에서, 이러한 방법은 암에 존재하는 암 줄기세포(CSC)의 분화를 유도하기에 유효한 양의 LOX1 저해제를 피험자에게 투여하는 단계를 포함할 수 있다.
일 양태에서, 본 개시내용은 암 줄기세포(CSC)를 포함하는 암의 치료 방법에 관한 것으로서, 암을 치료하기에 유효한 양의 LOX1 저해제를 치료가 필요한 피험자에게 투여하는 단계를 포함한다.
일 양태에서, 본 개시내용은 되풀이되거나 재발된 암을 앓고 있는 피험자에서 암의 치료 방법에 관한 것으로서, 암에서 CSC를 저해하거나 사멸시키기에 유효한 양의 LOX1 저해제를 상기 피험자에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시형태에서, 이러한 방법은 되풀이되거나 재발된 암에 존재하는 암 줄기세포(CSC)의 분화를 유도하기에 유효한 양의 LOX1 저해제를 피험자에게 투여하는 단계를 포함할 수 있다.
일 양태에서, 본 개시내용은 되풀이되거나 재발된 암을 앓고 있는 피험자에서 암의 치료 방법에 관한 것으로서, 암을 치료하기에 유효한 양의 LOX1 저해제를 상기 피험자에게 투여하는 단계를 포함한다.
일 양태에서, 본 개시내용은 암의 되풀이 또는 재발의 예방 방법에 관한 것으로서, 암의 되풀이 또는 재발을 예방하기에 유효한 양의 LOX1 저해제를 암의 되풀이 또는 재발의 예방이 필요한 피험자에게 투여하는 단계를 포함한다.
추가의 양태에서, 본 개시내용은 암을 앓고 있는 피험자에서 암 재발의 위험성의 감소 방법에 관한 것으로서, 암에서 CSC를 저해하거나 사멸시키기에 유효한 양의 LOX1 저해제를 상기 피험자에게 투여함으로써 피험자에서 암 재발의 위험성을 감소시키는 단계를 포함한다. 일부 실시형태에서, 이러한 방법은 암에 존재하는 암 줄기세포(CSC)의 분화를 유도하고 암의 재발 또는 되풀이의 위험성을 감소시키기에 유효한 양의 LOX1 저해제를 피험자에게 투여하는 단계를 포함할 수 있다.
또 다른 양태에서, 본 개시내용은 암 줄기세포(CSC)의 제거 방법에 관한 것으로서, CSC를 제거하기에 유효한 양의 LOX1 저해제를 CSC와 접촉시키는 단계를 포함한다.
일 양태에서, 본 개시내용은 암세포 집단에서 암 줄기세포(CSC)의 수의 선택적인 감소 방법에 관한 것으로서, 암세포 집단에서 CSC를 저해하거나 사멸시키기에 유효한 양의 LOX1 저해제를 상기 암세포 집단과 접촉시키는 단계를 포함한다. 일부 실시형태에서, 이러한 방법은 암세포 집단에서 암 줄기세포(CSC)의 분화를 유도하고 CSC의 수를 감소시키기에 유효한 양의 LOX1 저해제를 피험자에게 투여하는 단계를 포함할 수 있다.
추가의 양태에서, 본 개시내용은 종양 성장의 감소 또는 저해 방법을 제공하며, 종양 성장을 감소시키거나 저해하기에 유효한 양의 LOX1 저해제를 종양과 접촉시키는 단계를 포함한다. 관련 양태에서, 본 개시내용은 환자에서 종양 성장의 감소 또는 저해 방법을 제공하며, 종양 성장을 감소시키거나 저해하기에 유효한 양의 LOX1 저해제를 환자에게 투여하는 단계를 포함한다.
또 다른 양태에서, 본 개시내용은 종양 크기의 감소 방법을 제공하며, 종양 크기를 감소시키기에 유효한 양의 LOX1 저해제를 종양과 접촉시키는 단계를 포함한다. 관련 양태에서, 본 개시내용은 환자에서 종양 크기의 감소 방법에 관한 것이며, 종양 크기를 감소시키기에 유효한 양의 LOX1 저해제를 환자에게 투여하는 단계를 포함한다.
또 다른 양태에서, 본 개시내용은 종양 침습성 또는 전이의 저해, 감소 또는 예방 방법을 제공하며, 종양 침습성 또는 전이를 저해하거나, 감소시키거나 예방하기에 유효한 양의 LOX1 저해제를 종양과 접촉시키는 단계를 포함한다. 관련 양태에서, 본 개시내용은 환자에서 종양 침습성 또는 전이의 저해, 감소 또는 예방 방법에 관한 것이며, 종양 침습성 또는 전이를 저해하거나, 감소시키거나 예방하기에 유효한 양의 LOX1 저해제를 환자에게 투여하는 단계를 포함한다.
또 다른 양태에서, 본 개시내용은 화학요법이 필요한 환자에서 화학요법-연관 심장 독성의 저해, 감소 또는 예방 방법을 제공하며, 화학요법-연관 심장 독성을 저해하거나, 감소시키거나 예방하기에 유효한 양의 LOX1 저해제를 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함한다. 일 실시형태에서, 화학요법은 안트라사이클린, 예컨대 독소루비신이다. 일 실시형태에서, LOX1 저해제는 LOX1 항체이다.
본 개시내용은 또한, 치료적 조성물 및 약제학적 조성물을 포함하는 조성물에서 LOX1 저해제 또는 이의 조합의 하나 이상의 용도에 관한 것이다. 실시형태들에서, 용도 및 조성물은 본원에 개시된 다양한 방법들을 제공하기에 유효한 양의 저해제(들)를 포함한다. 실시형태들에서, 하나 이상의 용도는 본원에 기재된 종양, 암 줄기세포 및/또는 암 중 하나 이상을 치료하기 위한(예를 들어, 세포 증식의 진행 및/또는 진행 속도를 사멸시키거나, 제거하거나, 저해하거나, 감소시키며, 질병 상태의 진행 및/또는 진행 속도를 감소시키며, 자가 재생 및 팽창 능력을 감소시키기 위한(예를 들어, 분화를 유도하기 위한)) 약제의 제조를 위한 용도에 관한 것이다.
또 다른 양태에서, 본 개시내용은 시료에서 암 줄기세포(CSC)의 존재의 진단, 예후, 정량화, 식별 및/또는 검출 방법을 제공하며, 이러한 방법은
시료를 LOX1 핵산 서열 또는 LOX1 아미노산 서열에 결합하는 제제와 접촉시키는 단계;
상기 제제와 LOX1 핵산 서열 또는 LOX1 아미노산 서열 사이의 결합의 존재 또는 부재를 검출하는 단계; 및
상기 제제와 LOX1 핵산 서열 또는 LOX1 아미노산 서열 사이의 결합의 검출 시, 시료 내 CSC의 존재를 식별하는 단계
를 포함한다.
이러한 양태의 실시형태들에서, 본 방법은
시료 내 LOX1 핵산 서열 또는 LOX1 아미노산 서열의 양을 정량화하는 단계;
LOX1 핵산 서열 또는 LOX1 아미노산 서열의 양을 LOX1 핵산 또는 LOX1 아미노산의 참조 수준과 비교하는 단계; 및
검출된 양이 참조 수준보다 높은 경우 시료 내 CSC의 존재를 식별하는 단계
중 하나 이상을 추가로 포함할 수 있다.
보다 추가의 실시형태에서, 본 방법은 검출 가능한 모이어티를 포함하는 제제를 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 제제는, 엄격한 혼성화 조건 하에 LOX1 핵산 서열(예를 들어, mRNA, cDNA 등)의 적어도 일부에 혼성화하는 핵산 서열을 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 제제는, LOX1 아미노산 서열의 적어도 일부에 특이적으로 결합하는 항체를 포함할 수 있다.
상기 양태의 다양한 실시형태들에서, 본 방법은 LOX1를 발현하는 종양 및/또는 CSC, 또는 CSC 집단에 관한 것이다. 추가의 실시형태에서, 종양 및/또는 CSC, 또는 CSC 집단은 구상체-형성 CSC를 포함할 수 있다.
상기 양태의 다양한 실시형태들에서, 본 방법은 결장직장암, 췌장암, 폐암, 두경부암, 위암, 간세포암종, 부신암, 백혈병, 흑색종, 골수종, 전립선암, 갑상선암 및 유방암으로부터 선택되는 종양 및/또는 암에 관한 것이다.
본원에 기재된 양태들 및 실시형태들은 LOX1 저해제, LOX1 저해제들의 조합 및/또는 다른 암 치료제들을 포함하는 방법에 관한 것이다. 일부 실시형태에서, 저해제는 LOX1에 결합하는 항체, LOX1의 저분자(small molecule) 저해제, LOX1을 인코딩하는 핵산에 혼성화하는 siRNA 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
상기 양태들 및 실시형태들은 또한, 혈관신생, 종양발생 및 암과 관련된 질병의 치료 또는 관리를 위한 추가의 치료법을 추가로 포함하고 예를 들어 화학요법, 방사선요법, 면역요법 또는 당 기술분야에 공지된 임의의 다른 활성 제제 또는 요법과 같은 치료 섭생을 포함할 수 있는 방법, 용도 및 조성물에 관한 것이다.
당업자가 후속하는 상세한 설명 및 실시예를 검토한 경우 다른 양태들을 알게 될 것이다.
본 개시내용의 예시를 위해, 본 개시내용의 소정의 양태들이 도면에 도시되어 있다. 그러나, 본 개시내용은 도면에 도시된 양태들의 정밀한 배열 및 수단에 한정되지 않는다.
도 1a 내지 도 1c는 췌장 PDX 모델 유래의 CSC의 농화를 보여준다. (a) 후기 및 전이성 췌장암으로부터 유래된 3개의 췌장 PDX 모델의 H&E 염색이다. (b) 도 1a에서 보여진 PDX 모델로부터 형성된 종양 구상체이다. (c) 4일째에, 췌장 CSC를 가리키는 표면 마커(CD24 및 CD44)뿐만 아니라 CSC 상태를 유지시키는 것으로 식별된 유전자들(EZH2, BMI1, Sox2 및 Nanog)의 발현에 대해 종양 구상체를 분석하였다.
도 2는 CSC를 저해할 수 있는 DARPin의 식별에 사용되는, 일반화된 스크리닝 캐스케이드 전략을 보여준다. 우선 음성 선별을 사용하여, 비-관심 단백질을 제거하였으며, 후속해서 췌장 PDX 모델로부터 발생된 CSC 종양 구상체 상에서 양성 선별을 수행하였다. 정상 세포가 아니라 CSC에 결합하는 DARPin의 특이성을 확인하고, 이들 DARPin을 CSC를 저해하는 능력에 대해 검정법에서 시험하고, DARPin 표적(들)을 식별한다.
도 3a 내지 도 3b는 정상 세포가 아니라 췌장 CSC에 결합하는 DARPin(STEM0268)을 보여준다. (a) STEM0268은 FACS 단리된(CD24+, CD44+, EpCAM+에 의해 소팅된) 췌장 CSC에는 결합하지만(우측 패널), 정상적인 췌장 상피 세포에는 결합하지 않는다(좌측 패널). 삽도는 결합에 대해 FMAT에 의해 분석된 세포의 명시야 이미지를 보여준다. (b) 레인 1은 항-EpCAM이며; 레인 2는 항-MHC1-AF488이며; 레인 3은 세포 + 생존력 염료이며; 레인 4는 E-3-5이며; 레인 5는 DARPin STEM 0268이고; 레인 6은 비염색된(unstained) 세포이다. STEM0268은 정상적인 기관지 상피 세포 또는 결장 상피 세포에 결합하지 않고, 신장 상피 세포에는 미미한 결합을 보여준다.
도 4a 내지 도 4c는, STEM0268이 췌장암 세포에 결합하고 CSC 상에서 농화되어 있음을 예시하고 있다. STEM0268은 2개의 대조군 DARPin-Fc와 비교하여 PDX 모델 PA-0165 (a) 및 PA-0143 (b)에 결합한다. 그러나, STEM0268이 전체 종양 세포에 대해 어느 정도의 결합을 보여주긴 하지만, STEM0268은 CSC(들)에 대해 고도로 증가된 결합을 나타낸다.
도 5a 내지 도 5c는, STEM0268이 췌장 CSC를 저해함을 예시하고 있다. STEM0268은 PA-0143(a) 및 PA-0165(b) 둘 다에서 구상체 형성의 저해를 보여준다. STEM0268은 또한, EZH2high 세포(대조군 = 관련이 없는 DARPin 대조군)의 수에 의해 측정된 바와 같이, HPAC 세포주에서 CSC를 저해한다. 도 5a 및 도 5c에 나타낸 실험 또한, 살리노마이신(살리노마이신)(1 μM)을 양성 대조군으로서 사용하였다.
도 6a 내지 도 6c는 LOX1을 STEM0268의 표적으로서 식별하는 실험을 도시하고 있다. (a) 상이한 단백질들을 과발현하는 HEK293의 FACS 분석이다. 중간 패널은 STEM0268이 LOX1-발현 세포에 결합함을 보여준다. 대조군은 플라스미드 및 FcγR2b("Fcgr2b") 과발현 세포를 포함하지 않았다. 비-표적 단백질(S1PR2 및 BMPR1A)을 발현하는 HEK293 세포에 STEM0268이 결합하는 예들이 나타나 있다. (b) 플래그-태깅된(flag-tagged) 재조합 인간 LOX1을 이용한 ELISA는 STEM0268의 결합을 보여준다. 대조군은 인간 단백질에 결합하지 않는 2개의 DARPin-Fc(대조군 1 및 대조군 2), 뿐만 아니라 항-FLAG 항체 및 2차 항체 단독을 포함한다. (c) 재조합 인간 LOX1에 대한 STEM0268의 옥텟(octet) 결합이다.
도 7a 내지 도 7c는 다수의 모델들에서 LOX1 저해제에 의한 CSC의 저해를 나타낸다. (a) 도 5a 및 도 5b에서 이용된 췌장 PDX 모델에서 DARPin STEM0268과 비교하여, LOX1 모노클로날 항체인 LX5140110에 의한 CSC의 저해가 유사한 수준으로 나타나 있다. LX5140110은 추가의 췌장 세포주 (b), 뿐만 아니라 결장직장 세포주 (c)에서도 CSC를 저해한다.
도 8a 내지 도 8b는 췌장암에서 LX5140110에 의한 생체내 CSC의 저해를 도시하고 있다. (a) LX5140110은, 예상된 바와 같이 종양 모델 내 작은 퍼센트의 CSC를 특이적으로 표적화한 경우, PA0143 성장의 중등도(modest) 감소를 초래한다. P<0.0001 터키의 다중 비교 시험(Tukey's multiple comparison test). LX5140110은 비히클 및 IgG1 처리된 암(arm)과 비교된다. (b) CSC는 LX5140110을 이용한 처리 후 PA0143에서 감소된다.
도 9a 내지 도 9b는, LX5140110과 겜시타빈의 조합이 CSC를 저해할 수 있음을 나타내고 있다. (a) Pan02.13 췌장 세포주 성장은 겜시타빈(GEM)에 의해 저해된다. (b) Pan02.13에 겜시타빈을 처리하면 Pan02.13에서 CSC의 증가를 초래하며, 이러한 증가는 비-특이적인 대조군 IgG1이 아니라 LX5140110에 의해 역전될 수 있다.
도 10a 내지 도 10b는, 독소루비신이 LOX1 발현을 증가시킬 수 있음을 보여준다. (a) 독소루비신으로 처리된 인간 대동맥 내피 세포는 LOX1의 증가된 발현을 보여준다. 산화된 LDL(oxLDL)이 대조군으로서 사용되었다. (b) 독소루비신으로 처리된 심근 세포 또한, LOX1 발현의 증가를 보여준다.
도 11a 내지 도 11b는 독소루비신에 의해 유도된 심근 세포 손상, 및 이러한 손상을 역전시키는 LX5140110의 능력을 도시하고 있다. (a) 독소루비신(DOX)으로 처리된 심근 세포는 증가된 칼슘 수준을 가지며, 이러한 증가는 심근 세포 기능 장애를 나타낸다. 이들 수준은 LX5140110에 의해 역전된다. (b) DOX로 처리된 심근 세포는 감소된 생존력을 보여주지만, LX5140110으로 처리된 심근 세포는 증가된 세포 생존력을 보여준다.
본원에 기재된 발명은 우선, 렉틴-유사 산화된 저밀도 지질단백질 수용체-1(LOX1)이 CSC에 의해 과발현되고 CSC에서 기능적으로 관련이 있는 치료적 표적임을 언급하고 있다. 일부 암에서의 잠재적인 LOX1 발현에 대한 보고들이 존재하긴 하지만, 어떠한 보고들도, 암 및 암 전이를 치료하고 특히 CSC를 저해하기 위한 새롭고 예상치 못한 방법을 제공하는, 임의의 CSC 표현형에 대한 LOX1 발현 및 기능을 규명하고 있지 않다. 본원에 개시된 소정의 양태들 및 비제한적인 실시형태들에서 예시된 바와 같이, LOX1 활성을 표적화하고 저해하는 신규 방법은, CSC 표현형을 가진 세포를 포함하고 나타내는 암에 유용하고 효과적이다. 일부 예시적인 실시형태에서, 본원에 개시된 방법 및 제제는, LOX1을 발현하는 CSC 세포를 포함하는 암, 예를 들어 췌장암, 결장직장암, 간세포암종, 위암, 폐암, 두경부암 및 유방암을 표적화하는 데 사용될 수 있다. 따라서, 본 개시내용은, 암을 앓고 있는 환자에서 CSC를 저해하고 다양한 암을 저해하고/거나 치료하고 삶의 질을 개선하는 데 사용될 수 있는 방법 및 제제를 포함하는 신규 표적화 전략을 제공한다.
LOX1은 이황화 결합된 제II형 막관통 단백질이다. 이것은 처음에, 산화 저밀도 리포단백질(oxLDL)의 주요 수용체로서 확인되었다(문헌[Kume et al.,(1997)]). 상기 수용체는 짧은 N 말단 세포질 도메인, 막관통 도메인, 넥 도메인(neck domain) 및 C-타입 렉틴 도메인(CTLD; C-type lectin domain)으로 이루어지며, 이때 CTLD의 구조는 풀려졌다(문헌[Ohki et al.(2005)]). 게다가, LOX1은 넥 도메인에서 단백질 분해적으로 절단되어 용해성 LOX1(sLOX1; soluble LOX1)을 방출할 수 있다. LOX1은 클래스 E 스캐빈저 수용체(scavenger receptor)이며, oxLDL, C-반응성 단백질(CRP; C-reactive protein), 포스파티딜세린, 어드밴스드 당화 최종 산물(AGE; advanced glycation end product), 미세 고밀도 리포단백질(sdLDL; small dense lipoprotein), 산화 HDL, N4-옥소노나노일 라이신(ONL; oxononanoyl lysine), 열충격 단백질(hsp; heat shock protein), 클라미디아 뉴모니애(Chlamydia pneumoniae), 혈소판, 백혈구 및 세포자멸사성 세포(apoptotic cell)를 포함하는 다수의 리간드에 결합한다. 이러한 리간드 중 다수, 특히 oxLDL은 아테롬성 동맥 경화증과 연관된다. RhoA/Rac1, 일산화질소, p38MAPK, 단백질 키나아제 B 및 C, ERK1/2, 및 NFκB를 비롯하여 다수의 신호 전달 경로가 LOX1 활성화와 연관되어 있다. 예를 들어, 문헌[Taye et. al., Eur J Clin Invest. 43(7):740-5(2013)]을 참조한다.
전임상 증거는 LOX1을 혈관 기능 장애, 경화반 진행, 파열 및 혈전증, 아테롬성 동맥 경화증 및 염증성 병태의 촉진에 연루시킨다. 예를 들어, 문헌[Ulrich-Merzenich et al.(2013)]를 참조한다. 예를 들어, LOX1 넉아웃(knockout) 마우스는 감소된 대동맥 아테롬성 동맥 경화증 및 감소된 혈관벽 콜라겐 침착을 가지며(문헌[Mehta et al.,(2007)]), LOX1 과발현은 아테롬성 동맥 경화증 경화반 형성을 증가시켰으며(문헌[Inoue et al.,(2005)]; 및 문헌[White et al.,(2011)]), 이때 LOX1 발현이 취약성 경화반 숄더(shoulder) 상에서 관찰되고, 이는 대식 세포 축적, 세포자멸사(apoptosis), 및 MMP-9 발현과 연관된다(문헌[Li et al.,(2010)]). 중화 LOX1 항체는 아세틸콜린 유도된 관상 세동맥 확장을 회복시켰으며(문헌[Xu et al.,(2007)]), 래트에서 벌룬 상해(balloon injury) 후 내막 비후를 감소시켰다(문헌[Hinagata et al.(2006)]). 인간에서의 LOX1 발현은 항시적이지 않으며, 전염증성(proinflammatory) 자극에 의해 동적으로 유도가능하다. 아테롬성 동맥 경화증 경화반에서 LOX1은 내피 세포, 평활근 세포 및 대식 세포 상에서 발현된다. 흥미롭게도, 혈청 sLOX1은 급성 관동맥 증후군(ACS) 환자에서 경화반 불안정성 및 파열을 진단하고(문헌[Nakamura et al.,(2010)]); ACS 재발 또는 사망을 예측하는 것으로 제안되었으며(문헌[Kume et al.,(1997)]); 이는 증가하는 수의 복합 병변과 연관되어 있다(문헌[Zhao et al.,(2011)]).
이외에도, LOX1은 몇몇 유형의 암, 예컨대 전립선암에서 발현이 증가되는 것으로 나타나 있다(문헌[Fangning Wan et al. (2015)]). 또한 편평 비소세포 폐암에서, 높은 체질량 지수와 더불어 높은 단백질 발현 수준이 불량한 예후를 예측할 수 있을 것이라고 보고되어 있다(문헌[Long et al., (2015)]). LOX1은 또한, NF-kB의 활성화를 통해 정상적인 유방 상피 세포주(MCF10A)를 종양형성 세포주로 형질변환시키는 데 관여하는 것으로 보고되어 있으며, 세포 증식 및 이동에 임의의 관여를 하는 것으로 추측된다(문헌[Khaidakov M et al.,(2011) 및 Hirsh HA et al.(2010)]). 이들 보고가, 몇몇 암에서 LOX1이 수행할 수 있는 잠재적인 역할을 고찰하고 있긴 하지만, 본원에 제공된 본 개시내용은 LOX1이 CSC 생물학에서 역할을 한다는 최초의 증거인 것으로 여겨진다.
본 개시내용은 CSC에 대한 신규 표적으로서의 LOX1의 식별에 관한 설명 및 개요를 포함한다. 본원에서 언급된 바와 같이, 관련된 CSC 표적으로서의 LOX1의 확인은, 췌장암으로부터 수득된 환자-유래 이종이식편(PDX) 모델의 표현형 선별 및 분석을 포함하는 예시적인 실시예에 의해 고찰된다. PDX 모델에서, 종양 구상체를 발생시키고 실시예에서 고찰된 스크리닝 공정을 통해 CSC를 농화시켰다. CSC를 저해하기 위해(예를 들어, 증식을 저해하거나, 분화를 유도하거나, CSC 세포자멸사를 유도하거나, 그렇지 않다면 CSC 증식을 사멸시키거나 진행을 지연시키기 위해), LOX1의 저해제가 이용될 수 있다.
따라서, LOX1은 CSC 성장 및 활성에서 역할을 하며, 이는 전적으로 CSC 생물학에 있어서 새로운 것이다. 본 개시내용은, CSC, 예컨대 췌장암 모델 유래의 CSC가 LOX1을 발현하고, LOX1은 다시 CSC 자가 재생 및 증식에 영향을 미칠 수 있다고 언급하는 예시적인 실시형태를 제공한다. LOX1 저해제, 예컨대 모노클로날 항체를 이용하여 LOX1 활성을 중화시키는 단계를 포함하는 전략은 CSC 저해에 상당한 효과를 제공할 수 있으며, 이는, 종양에서 CSC를 감소시키기 위해 LOX1을 표적화하려는 요법에 대한 큰 잠재성을 지지한다.
본 개시내용을 계속해서 보다 상세히 설명하기에 앞서, 본 개시내용은 특정한 조성물 또는 공정 단계에 제한되지 않으며 이들은 변할 수 있음을 이해해야 한다. 본 명세서 및 첨부된 청구항에서 사용된 바와 같이, 단수형("a", "an")은 문맥상 명확하게 다르게 나타내지 않는 한 복수형을 포함함을 주지해야 한다. 나아가, 이들 용어뿐만 아니라 "하나 이상의" 및 "적어도 하나의"라는 용어는 본원에서 상호호환적으로 사용될 수 있다.
더욱이, "및/또는"은 다른 것과 함께 또는 다른 것 없이 2가지의 특정된 특징 또는 구성요소 각각의 특정한 개시 내용으로서 취하려는 것이다. 따라서, "A 및/또는 B"와 같은 어구에서 사용되는 "및/또는"이라는 용어는 "A 및 B", "A 또는 B", "A"(단독), 및 "B"(단독)를 포함하는 것으로 의도된다. 마찬가지로, A, B 및/또는 C"와 같은 어구에서 사용되는 "및/또는"이라는 용어는 하기 측면 각각을 포함하는 것으로 의도된다: A, B, 및 C; A, B, 또는 C; A 또는 C; A 또는 B; B 또는 C; A 및 C; A 및 B; B 및 C; A(단독); B(단독); 및 C(단독).
달리 정의되지 않으면, 본원에서 사용되는 모든 기술 및 과학 용어는 당업자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 예를 들어, 문헌[Molecular Biology, Juo, Pei-Show, 2nd ed., 2002, CRC Press; The Dictionary of Cell and Molecular Biology, 3rd ed., 1999, Academic Press; 및 the Oxford Dictionary Of Biochemistry And Molecular Biology, Revised, 2000, Oxford University Press]에는 이러한 개시 내용에서 사용되는 용어들 중 많은 것에 대한 일반 사전을 당업자에게 제공한다.
단위, 접두어 및 부호를 그의 국제 단위계(Systeme International dUnites; SI) 용인된 형태로 나타낸다. 수치 범위는 그 범위를 정의하는 수를 포함한다. 다르게 지시되지 않는 한, 아미노산 서열은 아미노에서 카르복시 배향으로 좌측에서 우측으로 표기된다. 본원에 제공된 제목은 본 발명의 다양한 양태들을 제한하는 것이 아니며, 이는 전체로서의 본 명세서의 참고에 의한 것일 수 있다. 따라서, 바로 아래에 정의된 용어는 본 명세서를 전체적으로 참고함으로써 더 충분히 정의된다.
양태가 "포함하는"이라는 언어를 이용하여 기술되는 곳이라면 어디든지, 달리 "~로 이루어진" 및/또는 "~로 본질적으로 이루어진"의 용어로 기술된 유사한 양태가 또한 제공된다.
본 발명의 맥락에서 "약" 및 "대략"이라는 용어는, 당업자가 이해하기에 해당 특징의 기술적 효과가 여전히 보장될 정확성의 간격을 의미한다. 전형적으로라는 용어는, 지시된 수치로부터 약 +/-10% 또는 약 +/-5%의 편차를 포함한다.
2개의 서열들 사이의 동일성 퍼센트의 확인은 바람직하게는, 문헌[Karlin and Altschul(1993) Proc. Natl. Acad. Sci USA 90: 5873-5877]의 수학적 알고리즘을 사용하여 달성된다. 이러한 알고리즘은 예를 들어, NCBI 웹사이트에서 입수 가능한 문헌[Altschul et al.(1990) J. Mol. Biol. 215: 403-410]의 BLASTn 프로그램 및 BLASTp 프로그램 내로 삽입된다. 동일성 퍼센트의 확인은 바람직하게는, BLASTn 프로그램 및 BLASTp 프로그램의 표준 파라미터를 이용하여 수행된다.
본원에서 아미노산은 그의 일반적으로 공지된 3문자 부호로 또는 IUPAC-IUB 생화학 명명 위원회(IUPAC-IUB)에 의해 권고되는 1문자 부호로 지칭될 수 있다. 마찬가지로, 뉴클레오타이드는 그의 일반적으로 용인되는 1문자 코드로 지칭될 수 있다.
본원에서 "LOX1" 및 "렉틴-유사 산화 저밀도 리포단백질 수용체-1"이라는 용어는 상호호환적으로 사용되며, LOX1 및/또는 LOX1의 생물학적 활성 단편을 나타낸다. 3가지의 hLOX1 아이소형의 cDNA 및 아미노산 서열은 젠뱅크(GenBank) 등록 번호 NP_002534.1, NP_001166103.1, 및 NP_001166104.1로 제공되며, 이들 각각은 그 전체가 원용에 의해 본 명세서에 포함된다.
"저해하다", "차단하다", "감소시키다" 및 "억제하다"라는 용어는 본원에서 상호호환적으로 사용되며, 활성의 충분한 차단을 포함하는 생물학적 활성의 임의의 통계학적으로 유의한 감소를 지칭한다. 예를 들어, "저해"는 LOX1의 생물학적 활성의 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 100%의 감소를 지칭할 수 있다. 따라서, "저해" 또는 "억제"라는 용어가 예를 들어 세포 표면 LOX1을 발현하는 세포(예를 들어, CSC)에서의 그리고 LOX1 리간드(예를 들어, oxLDL, CRP 및 AGE)의 존재 하에서의 LOX1-매개된 신호 전달 경로에 대한 영향을 기술하기 위하여 적용될 때, 상기 용어는 상기 세포에서 LOX1-결합 단백질, 예를 들어, 항-LOX1 항체가 LOX1-매개된 유도된 신호 전달을 통계학적으로 유의한 수준으로(예를 들어, p 값을 0.05 이하로 함) 감소시키는 능력을 지칭한다. 추가의 양태에서, 저해된 또는 차단된 LOX1-매개 생물학적 활성은 프로그래밍된 세포 사멸(즉 세포자멸사)을 제공한다. 추가의 실시형태에서, 저해된 또는 차단된 LOX1-매개 생물학적 활성은 세포(예를 들어, CSC)의 분화를 제공한다.
본원에서 상호호환적으로 사용되는 "항체" 또는 "면역글로불린"이라는 용어는 전체 항체 및 이의 임의의 항원-결합 단편 또는 단쇄를 포함한다. 전형적인 하에는 적어도 2개의 중쇄(H chain) 및 2개의 경쇄(L chain)가 이황화 결합에 의해 상호연결된 것을 포함한다. 각각의 중쇄는 중쇄 가변 영역(본원에서 VH로 약칭됨) 및 중쇄 불변 영역으로 이루어진다. 중쇄 불변 영역은 3개의 도메인, CH1, CH2, 및 CH3으로 이루어진다. 각각의 경쇄는 경쇄 가변 영역(본원에서 VL로 약칭됨) 및 경쇄 불변 영역으로 이루어진다. 경쇄 불변 영역은 1개의 도메인, Cl로 이루어진다. VH 및 VL 영역은 더 보존된, 프레임워크 영역(FW)으로 칭해지는 영역이 산재된, 상보성 결정 영역(CDR)으로 칭해지는 초가변성의 영역들로 추가로 세분될 수 있다. 각각의 VH 및 VL은 아미노-말단으로부터 카르복시-말단으로 하기 순서로 배열된 3개의 CDR 및 4개의 FW로 구성된다: FW1, CDR1, FW2, CDR2, FW3, CDR3, FW4. 중쇄 및 경쇄의 가변 영역은 항원과 상호작용하는 결합 도메인을 포함한다. 항체의 불변 영역은 면역계의 다양한 세포(예를 들어, 이펙터 세포), 및 고전적 보체계(classical complement system)의 첫 번째 구성요소(C1q)를 포함하는 숙주 조직 또는 인자에의 면역글로불린의 결합을 매개할 수 있다. 본 발명의 예시적인 항체는 전형적인 항체, scFv, 및 예를 들어 scFv가 전형적인 항체의 중쇄 및/또는 경쇄의 N-말단에(예를 들어, 펩타이드 결합을 통하여 또는 화학적 링커를 통하여) 공유 결합되거나 전형적인 항체의 중쇄 및/또는 경쇄 내에 삽입된 이들의 조합을 포함한다.
"항체"라는 용어는 표적, 예컨대 단백질, 폴리펩타이드, 펩타이드, 탄수화물, 폴리뉴클레오타이드, 지질, 또는 전술한 것의 조합을 면역글로불린 분자의 가변 영역 내의 적어도 하나의 항원 인식 부위를 통하여 인식하여 이에 특이적으로 결합하는 면역글로불린 분자를 나타낼 수 있다. "항체"라는 용어는 모노클로날 항체, 재조합 항체, 인간 항체, 인간화 항체, 키메라 항체, 2특이성 항체, 다중특이성 항체 또는 이들의 항체 단편을 포함한다.
"항체"라는 용어는 온전한 폴리클로날 항체, 온전한 모노클로날 항체, 항체 단편(예컨대 Fab, Fab', F(ab')2, 및 Fv 단편), 단쇄 Fv(scFv) 돌연변이체, 다중특이성 항체, 예컨대 적어도 2가지의 온전한 항체로부터 생성된 2특이성 항체, 키메라 항체, 인간화 항체, 인간 항체, 항체의 항원 결정 부분을 포함하는 융합 단백질, 및 항원 인식 부위를 포함하는 임의의 다른 변형된 면역글로불린 분자(항체가 요망되는 생물학적 활성을 나타내기만 한다면)를 포함한다. 항체는 각각 알파, 델타, 엡실론, 감마, 및 뮤로 칭해지는 중쇄 불변 도메인의 아이덴티티(identity)를 기반으로 하면, 하기의 면역글로불린의 임의의 5가지 주요 클래스: IgA, IgD, IgE, IgG, 및 IgM, 또는 이의 하위클래스(아이소타입(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2)의 것일 수 있다. 상이한 면역글로불린 클래스는 상이한 그리고 잘 알려진 서브유닛 구조 및 3차원 배열을 갖는다. 항체는 네이키드형(naked)이거나 다른 분자, 예컨대 독소, 방사성 동위 원소 등에 컨쥬게이션될 수 있다.
"생식 세포 계열화(germlining)"라는 용어는 항체에서 특정 위치의 아미노산이 생식 세포 계열(germ line)에서 발견되는 것과 동일한 위치에 나타나는 아미노산으로 역돌연변이됨을 의미한다.
"항원-결합 항체 단편" 또는 "LOX1-결합 항체 단편"이라는 용어는 온전한 항체의 일부분을 나타내며 온전한 항체의 상보성 결정 가변 영역을 나타낸다. 항체 단편의 예는 Fab, Fab', F(ab')2, 및 Fv 단편, 선형 항체, 단쇄 항체(예를 들어, ScFv), 및 다중특이성 항체(항체 단편으로부터 형성됨)를 포함하지만, 이에 한정되는 것은 아니다. 추가로 본 발명은 Fab 단편, Fab' 단편, F(ab')2 단편, Fv 단편, 디아바디, 또는 단쇄 항체 분자인 LOX1-결합 항체 단편을 제공한다.
"모노클로날 항체"는 단일 항원 결정자, 또는 에피토프의 고도로 특이적인 인식 및 결합에 연루된 균질한 하에 집단을 나타낸다. 이것은 전형적으로 상이한 항원 결정자들에 대하여 유도된 상이한 항체들을 포함하는 폴리클로날 항체와는 대조적이다. "모노클로날 항체"라는 용어는 온전한 모노클로날 항체 및 전장 모노클로날 항체 둘 모두와, 항체 단편(예컨대 Fab, Fab', F(ab')2, Fv), 단쇄(scFv) 돌연변이체, 항체 부분을 포함하는 융합 단백질, 및 항원 인식 부위를 포함하는 임의의 다른 변형된 면역글로불린 분자를 포함한다. 더욱이, "모노클로날 항체"는 하이브리도마, 파지 선발, 재조합 발현, 및 트랜스제닉(transgenic) 동물에 의한 것을 포함하지만 이에 한정되는 것은 아닌 수많은 방식으로 만들어진 그러한 항체를 나타낸다.
"인간화 항체"라는 용어는 최소 비-인간(예를 들어, 쥐과) 서열을 포함하도록 엔지니어링된 비-인간(예를 들어, 쥐과) 면역글로불린으로부터 유래된 항체를 나타낸다. 전형적으로, 인간화 항체는 상보성 결정 영역(CDR)로부터의 잔기가 요망되는 특이성, 친화도, 및 능력을 갖는 비-인간 종(예를 들어, 마우스, 래트, 토끼 또는 햄스터)의 CDR로부터의 잔기로 대체된 인간 면역글로불린이다(문헌[Jones et al., Nature, 321:522-525(1986)]; 문헌[Riechmann et al., Nature, 332:323-327(1988)]; 문헌[Verhoeyen et al., Science, 239:1534-1536(1988)]). 일부 예에서,인간 면역글로불린의 Fv 프레임워크 영역(FW) 잔기는 요망되는 특이성, 친화도 및 능력을 갖는 비-인간 종으로부터의 항체에서의 상응하는 잔기로 대체된다.
인간화 항체는 항체 특이성, 친화도, 및/또는 능력을 개량 및 최적화하기 위하여 Fv 프레임워크 영역 내에서의 및/또는 대체되는 비-인간 잔기 내에서의 추가의 잔기의 치환에 의해 추가로 변형될 수 있다. 일반적으로, 인간화 항체는 비-인간 면역글로불린에 상응하는 CDR 영역의 전부 또는 실질적으로 전부를 포함하는 적어도 1개, 그리고 전형적으로 2개 또는 3개의 가변 도메인의 실질적으로 전부를 포함하며, 반면에 FR 영역의 전부 또는 실질적으로 전부는 인간 면역글로불린 콘센서스(consensus) 서열의 것이다. 또한 인간화 항체는 면역글로불린 불변 영역 또는 도메인(Fc), 전형적으로 인간 변역글로불린의 불변 영역 또는 도메인(Fc)의 적어도 일부분을 포함할 수 있다. 인간화 항체의 생성에 사용되는 방법의 예가 미국 특허 제5,225,539호 또는 미국 특허 제5,639,641호에 기술되어 있다.
항체의 "가변 영역"은 단독의 또는 조합된 항체 경쇄의 가변 영역 또는 항체 중쇄의 가변 영역을 나타낸다. 중쇄 및 경쇄 각각의 가변 영역은 4개의 프레임워크 영역(FW)이 초가변 영역으로도 공지된 3개의 상보성-결정 영역(CDR)에 의해 연결된 것으로 이루어진다. 각각의 사슬에서의 CDR은 FW 영역에 의해, 그리고 다른 사슬로부터의 CDR에 의해 근접하게 결합되어 있으며, 항체의 항원-결합 부위의 형성에 기여한다. CDR을 결정하는 적어도 2가지 기술이 있다: (1) 종 전체에 걸친 서열 가변성을 기반으로 한 접근법(즉, 문헌[Kabat et al. Sequences of Proteins of Immunological Interest, (5th ed., 1991, National Institutes of Health, Bethesda Md.]); 및 (2) 항원-항체 복합체의 결정학적 연구를 기반으로 한 접근법(문헌[Al-lazikani et al., J. Molec. Biol. 273:927-948(1997)]). 게다가, 당업계에서 이러한 두 접근법의 조합을 때때로 이용하여 CDR을 결정한다.
일반적으로 카바트(Kabat) 넘버링 시스템(numbering system)은 가변 도메인에서의 잔기(대략적으로 경쇄의 잔기 1 내지 107 및 중쇄의 잔기 1 내지 113)를 나타낼 때 사용된다(예를 들어, 본원에 참고로 포함된 문헌[Kabat et al., Sequences of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)]). 카바트에서와 같은 아미노산 위치의 넘버링은 문헌[Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)]에서 항체의 컴필레이션(compilation)의 중쇄 가변 도메인 또는 경쇄 가변 도메인에 사용되는 넘버링 시스템을 나타낸다. 이러한 넘버링 시스템을 이용하면, 실제 선형 아미노산 서열은 가변 도메인의 단축 또는 가변 도메인의 FW 또는 CDR 내로의 삽입에 상응하는 더 많은 또는 추가의 아미노산을 포함할 수 있다. 예를 들어, 중쇄 가변 도메인은 H2의 잔기 52 뒤의 단일 아미노산 삽입(카바트에 따라 잔기 52a) 및 중쇄 FW 잔기 82 ENLDML 삽입된 잔기(예를 들어, 카바트에 따라 잔기 82a, 82b, 및 82c 등)를 포함할 수 있다.
잔기의 카바트 넘버링은 주어진 항체와 "기준" 카바트 넘버링 서열과의 상동성 영역에서의 정렬에 의해 주어진 항체에 대하여 결정될 수 있다. 대신 초티아(Chothia)는 구조적 루프의 위치를 나타낸다(문헌[Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917(1987)]). 카바트 넘버링 협약(convention)을 이용하여 넘버링될 때 초티아 CDR-H1 루프의 말단은 그 루프의 길이에 따라 H32와 H32 사이에서 변한다(이는 카바트 넘버링 스킴(scheme)이 삽입을 H35A 및 H35B에 두며; 35A도 존재하지 않고 35B도 존재하지 않을 경우, 루프는 32에서 끝나고; 단지 35A가 존재할 경우, 루프는 33에서 끝나며; 35A 및 35B 둘 모두가 존재할 경우, 루프는 34에서 끝나기 때문이다). AbM 초가변 영역은 카바트 CER과 초티아의 구조적 루프 사이의 타협을 나타내며, 옥스포드 몰레큘라즈 AbM 항체 모델링 소프트웨어(Oxford Molecular's AbM antibody modeling software)에 의해 사용된다.
IMGT(임뮤노제네틱스(ImMunoGeneTics))는 또한 CDR을 포함하는 면역글로불린 가변 영역을 위한 넘버링 시스템을 제공한다. 예를 들어, 본원에 참고로 포함된 문헌[Lefranc, M.P. et al., Dev. Comp. Immunol. 27: 55-77(2003)]을 참조한다. IMGT 넘버링 시스템은 초가변 루프의 5,000개 초과의 서열의 정렬, 구조 데이터, 및 특성화를 기반으로 하였으며, 모든 종에 있어서 가변 및 CDR 영역의 용이한 비교를 허용한다. IMGT 넘버링 스킴에 따르면, VH-CDR1은 위치 26 내지 35에 있으며, VH-CDR2은 위치 51 내지 57에 있으며, VH-CDR3은 위치 93 내지 102에 있으며, VL-CDR1은 위치 27 내지 32에 있으며, VL-CDR2는 위치 50 내지 52에 있으며, VL-CDR3은 위치 89 내지 97에 있다.
명세서 전체에 걸쳐 사용되는 바와 같이, 기술된 VH CDR 서열은 고전적인 카바트 넘버링 위치에 상응하며, 즉, 카바트의 H-CDR1은 위치 31 내지 35에 있고, VH-CDR2는 위치 50 내지 65에 있으며, VH-CDR3은 위치 95 내지 102에 있다. 또한 VL-CDR1, VL-CDR2 및 VL-CDR3은 고전적 카바트 넘버링 위치, 즉, 각각 위치 24 내지 34, 50 내지 56 및 89 내지 97에 상응한다.
"인간 항체"라는 용어는 인간에 의해 생성된 항체 또는 당업계에 공지된 임의의 기술을 이용하여 만들어진, 인간에 의해 생성된 항체에 상응하는 아미노산 서열을 갖는 항체를 의미한다. 이러한 인간 항체의 정의는 온전한 항체 또는 전장 항체, 이의 단편, 및/또는 적어도 하나의 인간 중쇄 및/또는 경쇄 폴리펩타이드를 포함하는 항체, 예컨대 쥐과 경쇄 및 인간 중쇄 폴리펩타이드를 포함하는 항체를 포함한다.
"키메라 항체"라는 용어는 면역글로불린 분자의 아미노산 서열이 2가지 이상의 종으로부터 유래된 항체를 나타낸다. 전형적으로, 경쇄 및 중쇄 둘 모두의 가변 영역은 요망되는 특이성, 친화도 및 능력을 갖는 하나의 포유류 종(예를 들어, 마우스, 래트 등)으로부터 유래된 항체의 가변 영역에 상응하는 반면, 불변 영역은 또 다른 것(일반적으로 인간)으로부터 유래된 항체에서의 서열에 대하여 상동성이어서 그 종에서 면역 반응을 유발하는 것을 회피한다.
"TM" 또는 "TM 돌연변이체"라는 용어는 IgG1 불변 영역에서의 돌연변이를 나타내며, 이는 그 돌연변이를 갖는 항체의 이펙터 기능(예를 들어, ADCC)을 감소시킨다. TM 돌연변이체는 IgG1의 중쇄 내로 도입된 3개의 돌연변이 L234F/L235E/P331S의 조합을 포함하며, 이는 이펙터 널(null) 인간 IgG1을 생성한다(문헌[EU numbering Kabat et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, U.S. Public Health Service, National Institutes of Health, Washington, D.C.]).
"YTE" 또는 "YTE 돌연변이체"라는 용어는 IgG1 Fc에서의 돌연변이를 나타내는데, 이는 그 돌연변이를 갖는 항체의 혈청중 반감기를 향상시키고 인간 FcRn에의 결합을 증가시킨다. YTE 돌연변이체는 IgG1의 중쇄 내로 도입된 3개의 돌연변이 M252Y/S254T/T256E의 조합을 포함한다(문헌[EU numbering Kabat et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, U.S. Public Health Service, National Institutes of Health, Washington, D.C.]). 본원에 참고로 포함된 미국 특허 제7,658,921호를 참조한다. YTE 돌연변이체는 항체의 혈청중 반감기를 상기 항체의 야생형 버전과 비교하여 대략 4배 증가시키는 것으로 밝혀졌다(문헌[Dall'Acqua et al., J. Biol. Chem. 281:23514-24(2006)]). 본원에 그 전체가 참고로 포함된 미국 특허 제7,083,784호를 또한 참조한다.
"LOX1-결합 단백질", "항-LOX1 항체", 또는 "LOX1에 특이적으로 결합하는 항체"라는 용어는 LOX1을 표적화함에 있어서 항-LOX1 항체가 치료제 또는 진단 시약으로 유용해지게 하기에 충분한 친화도로 LOX1에 결합할 수 있는 항-LOX1 항체와 같은 LOX1-결합 단백질을 나타낸다. 관련되지 않은 비-LOX1 단백질에의 항-LOX1 항체의 결합 정도는 예를 들어, 방사성면역검정법(RIA; radioimmunoassay), 비아코어®(분석물로서 재조합 LOX1, 그리고 리간드로서 항체를 사용하거나 그 반대로 사용함), 동적 배제 검정법(Kinetic Exclusion Assay)(키넥사®), 또는 당업계에 공지된 다른 결합 검정법에 의해 측정할 때 LOX1에의 상기 항체의 결합의 약 10% 미만이다. 소정의 양태에서, LOX1-결합 단백질은 해리 상수(KD)가 ≤1 nM, ≤ 0.5 nM, ≤0.1 nM, ≤10 pM, 또는 ≤1 pM이거나, 일부 예에서 KD가 약 150 pM 내지 약 600 pM 또는 약 400 pM 내지 약 600 pM인 전장 항체 또는 LOX1-결합 항체 단편이다. 소정의 양태에서, LOX1-결합 단백질은 해리 상수(KD)가 ≤1 μM, ≤100 nM, ≤10 nM, ≤1 nM, ≤0.1 nM, ≤10 pM, ≤1 pM, 또는 ≤0.1 pM이거나, 일부 예에서 KD가 약 150 pM 내지 약 600 pM인 전장 항체 또는 LOX1-결합 항체 단편이다.
"길항제" 또는 "차단성" LOX1-결합 단백질은 LOX1의 생물학적 활성을 저해하거나 감소시키는 것이다. 일부 양태에서, 길항 LOX1-결합 단백질은 LOX1이 oxLDL, AGE, 및/또는 CRP에 결합하는 능력을 저해한다. 일부 양태에서, LOX1-결합 단백질은 LOX1이 oxHDL, HSP60, 백혈구 및/또는 활성화된 혈소판에 결합하는 능력을 저해한다. 소정의 양태에서, LOX1-결합 단백질은 LOX1의 생물학적 활성을 실질적으로 또는 완전히 저해한다. 바람직하게는, LOX1의 생물학적 활성은 10%, 20%, 30%, 50%, 70%, 80%, 90%, 95%, 또는 심지어 100%만큼 감소된다. 특정한 양태에서, LOX1-결합 단백질은 항-LOX1 항체, 예컨대 전장 항체 또는 LOX1-결합 항체 단편이다. 추가의 양태에서, 항-LOX1 항체는 LOX1의 생물학적 활성을 10%, 20%, 30%, 50%, 70%, 80%, 90%, 95%, 또는 심지어 100%만큼 저해하거나 감소시킨다.
일반적으로 "결합 친화도"는 분자(예를 들어, 항체)의 단일 결합 부위와 그의 결합 파트너(예를 들어, 항원) 사이의 비-공유적 상호작용들의 총 합계의 강도를 나타낸다. 다르게 지시되지 않는 한 본원에 사용되는 바와 같이, "결합 친화도"는 결합하는 쌍(예를 들어, 항체와 항원)의 멤버들 사이의 1:1 상호작용을 반영하는 고유 결합 친화도를 나타낸다. 분자 X의 그의 파트너 Y에 대한 친화도는 일반적으로 해리 상수(KD)로 나타낼 수 있다. 친화도는 본원에 기술된 것을 비롯하여 당업계에 공지된 일반적인 방법에 의해 측정될 수 있다. 일반적으로 저-친화도 항체는 항원에 서서히 결합하며 쉽게 해리되는 경향이 있고, 반면에, 일반적으로 고-친화도 항체는 항원에 더 빠르게 결합하며 더 오랫동안 결합된 채로 남아있는 경향이 있다. 결합 친화도를 측정하는 다양한 방법이 당업계에 공지되어 있으며, 이들 중 임의의 것을 본 발명의 목적을 위하여 사용할 수 있다.
"효력"은 보통은 달리 진술되지 않으면 nM 또는 pM 단위의 IC50 값으로서 표현된다. IC50은 항체 분자의 중간 저해 농도이다. 기능 분석법에서, IC50은 생물학적 응답을 그의 최대치의 50%만큼 감소시키는 농도이다. 리간드-결합 연구에서, IC50은 수용체 결합을 최대의 특이적 결합 수준의 50%만큼 감소시키는 농도이다. IC50은 당업계에 공지된 수단에 의해 계산될 수 있다.
기준 항체와 비교할 때 본원에 개시된 LOX1-결합 단백질(예를 들어, 하에, 예컨대 전장 LOX1-항체 및 이의 LOX1-결합 항체 단편, 및 변이체 및 유도체)의 효력의 향상 배수는 적어도 약 2배, 적어도 약 4배, 적어도 약 6배, 적어도 약 8배, 적어도 약 10배, 적어도 약 20배, 적어도 약 30배, 적어도 약 40배, 적어도 약 50배, 적어도 약 60배, 적어도 약 70배, 적어도 약 80배, 적어도 약 90배, 적어도 약 100배, 적어도 약 110배, 적어도 약 120배, 적어도 약 130배, 적어도 약 140배, 적어도 약 150배, 적어도 약 160배, 적어도 약 170배, 또는 적어도 약 180배이거나 이보다 더 클 수 있다.
"항체 의존성 세포-매개 세포독성(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity)" 또는 "ADCC"는 특정 세포독성 세포(예를 들어, 자연 살해(NK) 세포, 호중구 및 대식 세포) 상에 존재하는 Fc 수용체(FcR) 상에 결합된 분비형 Ig에 의해 이러한 세포독성 이펙터 세포가 항원-보유 표적 세포에 특이적으로 결합하여 후속적으로 그 표적 세포를 세포독소로 사멸시키는 것이 가능해지는 세포독성의 형태를 나타낸다. 표적 세포의 표면에 대하여 유도된 특이적 고-친화도 IgG 항체는 세포독성 세포를 "무장"시키며 그러한 사멸에 절대적으로 요구된다. 표적 세포의 용해는 세포외 용해이며, 직접적인 세포-세포 접촉을 요구하며, 보체를 포함하지 않는다. 항체에 더하여, Fc 영역을 포함하는 다른 단백질, 구체적으로 Fc 융합 단백질(항원-보유 표적 세포에 특이적으로 결합하는 능력을 가짐)이 세포-매개성 세포독성을 초래할 수 있음이 고려된다. 단순함을 위하여, Fc 융합 단백질의 활성에서 생기는 세포 매개성 세포독성은 본원에서 ADCC 활성으로도 칭해진다.
LOX1-결합 단백질(예를 들어, LOX1 항체(이의 항원-결합 단편, 변이체, 및 유도체를 포함함)), 폴리뉴클레오타이드, 벡터, 세포, 또는 조성물은 자연에서 발견되지 않는 형태인 폴리펩타이드, 항체, 폴리뉴클레오타이드, 벡터, 세포, 또는 조성물이다. 단리된 폴리펩타이드류(예를 들어, 전장 항체 및 LOX1-결합 항체 단편을 포함하는 항-LOX1 항체), 폴리뉴클레오타이드, 벡터, 폴리뉴클레오타이드류, 벡터류, 세포류 또는 조성물류는 이들이 더 이상 자연에서 발견되는 형태가 아닌 정도로 정제된 것을 포함한다. 일부 양태에서, 단리된 항체, 폴리뉴클레오타이드, 벡터, 세포, 또는 조성물은 실질적으로 순수하다.
"피험자" 또는 "개체" 또는 "동물" 또는 "환자" 또는 "포유류"는 진단, 예후, 또는 치료법이 요망되는 임의의 피험자, 특히 포유류 피험자를 의미한다. 포유류 피험자는 인간, 가축, 농장 동물, 스포츠 동물 및 동물원 동물을 포함하며, 이는 예를 들어 인간, 비-인간 영장류, 개, 고양이, 기니 피그, 토끼, 래트, 마우스, 말, 소, 곰 등을 포함한다.
A. 방법
본 개시내용은, LOX1 저해제를 포함하는 방법과 관련된 다수의 양태들 및 실시형태들을 제공한다. 본원에서 고찰된 바와 같이, 이러한 양태들 및 실시형태들은 질병을 치료하는 방법, 예방하는 방법, 저해시키고/거나 진행을 지연시키는 방법, 재발 및/또는 되풀이의 위험성을 감소시키는 방법; 특정 세포 집단을 표적화하고/거나 사멸시키는 방법; CSC의 분화를 유도하고/거나 자가 재생 및 팽창 능력을 감소시키는 방법; 질병 병기(stage)를 확인하는 것을 포함하여 특정 세포 집단 및/또는 질병을 검출하며, 진단하고/거나 정량화하는 방법; 및 질병 모니터링 및/또는 예후 방법을 포함하여 질병과 관련된 다양한 방법들을 포함한다.
실시형태들에서, 본 개시내용은 암 줄기세포(CSC)의 증식을 저해하고/거나 생존을 감소시키기에 유효한 양의 LOX1 저해제를 CSC와 접촉시키는 단계를 포함하는, 암 줄기세포(CSC)의 증식의 저해 방법을 제공한다. 실시형태들에서, 상기 방법은 LOX1에 선택적인 LOX1 저해제를 유효량으로 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시형태에서, 저해제는 LOX1의 생화학적 캐스케이드를 선택적으로 저해한다. 용어 "저해제" 또는 "저해하다"와 함께 사용될 때 "선택적인"이라는 용어는, 다른 생체 분자에 대한 저해 활성과 비교하여 표적(예를 들어, LOX1)에 대한 저해 활성이 증가되어 있는 화합물(예를 들어, 본원에 기재된 바와 같은 저분자 또는 생물학적 분자)에 관한 것이다. 일 실시형태에서, 이러한 방법은 치료적 유효량의 LOX1 저해제를 추가의 항암제와 조합하여 투여하는 단계를 포함한다.
실시형태들에서, 본 개시내용은 과거에 치료를 받았지만 치료가 필요한 피험자에서 치료적으로 내성인 암의 치료 방법에 관한 것으로서, 상기 방법은 치료적으로 내성인 암에 존재하는 암 줄기세포(CSC)를 저해하거나 사멸시키고/거나 CSC에서 분화를 유도하기에 유효한 양의 LOX1 저해제를 상기 피험자에게 투여하는 단계를 포함한다. 일 실시형태에서, 과거의 치료는 방사선, 수술, 면역요법, 화학요법 및/또는 티로신 키나제 저해제이다.
추가의 실시형태에서, 본 개시내용은 과거에 치료를 받았지만 치료가 필요한 피험자에서 치료적으로 내성인 암의 치료 방법에 관한 것으로서, 상기 방법은 치료적으로 내성인 암을 치료하기에 유효한 양의 LOX1 저해제를 상기 피험자에게 투여하는 단계를 포함한다. 일 실시형태에서, 과거의 치료는 방사선, 수술, 면역요법, 화학요법 및/또는 티로신 키나제 저해제이다.
다른 실시형태에서, 본 개시내용은 암 줄기세포(CSC)를 포함하는 암의 치료 방법에 관한 것으로서, 상기 방법은 암에서 CSC를 표적화하고 저해하거나 사멸시키고/거나 CSC에서 분화를 유도하기에 유효한 양의 LOX1 저해제를 치료가 필요한 피험자에게 투여하는 단계를 포함한다. 일 실시형태에서, 이러한 방법은 치료적 유효량의 LOX1 저해제를 추가의 항암제와 조합하여 투여하는 단계를 포함한다.
다른 실시형태에서, 본 개시내용은 암 줄기세포(CSC)를 포함하는 암의 치료 방법에 관한 것으로서, 상기 방법은 암을 치료하기에 유효한 양의 LOX1 저해제를 치료가 필요한 피험자에게 투여하는 단계를 포함한다. 일 실시형태에서, 이러한 방법은 치료적 유효량의 LOX1 저해제를 추가의 항암제와 조합하여 투여하는 단계를 포함한다.
추가의 실시형태에서, 본 개시내용은 되풀이되거나 재발된 암을 앓고 있는 피험자에서 암의 치료 방법에 관한 것으로서, 상기 방법은 암에서 CSC를 저해하거나 사멸시키고/거나 CSC에서 분화를 유도하기에 유효한 양의 LOX1 저해제를 상기 피험자에게 투여하는 단계를 포함한다. 일 실시형태에서, 이러한 방법은 치료적 유효량의 LOX1 저해제를 추가의 항암제와 조합하여 투여하는 단계를 포함한다.
추가의 실시형태에서, 본 개시내용은 되풀이되거나 재발된 암을 앓고 있는 피험자에서 암의 치료 방법에 관한 것으로서, 상기 방법은 암을 치료하기에 유효한 양의 LOX1 저해제를 상기 피험자에게 투여하는 단계를 포함한다. 일 실시형태에서, 이러한 방법은 치료적 유효량의 LOX1 저해제를 추가의 항암제와 조합하여 투여하는 단계를 포함한다.
본 개시내용의 다른 실시형태는 암의 되풀이 또는 재발의 예방 방법에 관한 것으로서, 상기 방법은 암의 되풀이 또는 재발을 예방하기에 유효한 양의 LOX1 저해제를 암의 되풀이 또는 재발의 예방이 필요한 피험자에게 투여하는 단계를 포함한다. 일 실시형태에서, 이러한 방법은 치료적 유효량의 LOX1 저해제를 추가의 항암제와 조합하여 투여하는 단계를 포함한다.
추가의 실시형태에서, 본 개시내용은 암을 앓고 있는 피험자에서 암 재발의 위험성의 감소 방법에 관한 것으로서, 상기 방법은 암에서 CSC를 저해하거나 사멸시키고/거나 CSC에서 분화를 유도하기에 유효한 양의 LOX1 저해제를 상기 피험자에게 투여함으로써 피험자에서 암 재발의 위험성을 감소시키는 단계를 포함한다. 일 실시형태에서, 이러한 방법은 치료적 유효량의 LOX1 저해제를 추가의 항암제와 조합하여 투여하는 단계를 포함한다.
다른 실시형태에서, 본 개시내용은 암 줄기세포(CSC)의 제거 방법에 관한 것으로서, 상기 방법은 CSC를 제거하기에 유효한 양의 LOX1 저해제를 CSC와 접촉시키는 단계를 포함한다. 일 실시형태에서, 이러한 방법은 치료적 유효량의 LOX1 저해제를 추가의 항암제와 조합하여 투여하는 단계를 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 암세포 집단에서 암 줄기세포(CSC)의 수의 선택적인 감소 방법으로서, 상기 방법은 암세포 집단에서 CSC를 저해하거나 사멸시키고/거나 CSC에서 분화를 유도하기에 유효한 양의 LOX1 저해제를 암세포 집단과 접촉시키는 단계를 포함한다. 따라서, 저해제는 CSC의 추가의 증식을 억제하기에 충분한 양으로 치료가 필요한 피험자에게 투여되고/거나 다수의 CSC와 접촉될 수 있다. 일부 실시형태에서, 저해제는 CSC 집단에서 세포 사멸(세포자멸사)을 유도함으로써 CSC의 수를 감소시키기에 유효한 양으로 투여될 수 있다. 보다 다른 실시형태에서, 저해제는 CSC 집단에서 세포 분화를 유도함으로써 CSC의 수를 감소시키기에 유효한 양으로 투여될 수 있다. 이에 일부 실시형태에서, 저해제(들)는, CSC에서 세포자멸사를 본질적으로 유도할 수 없는 양이지만 피험자 또는 종양형성 조직에서 CSC의 분화를 유도함으로써 CSC 세포 집단을 자가-재생시키고 팽창시키는 CSC의 능력을 감소시키거나 하향조절하기에 유효한 양으로 제공된다. 저해제는 또한, CSC "생태 지위(niche)"가 더 이상 CSC 및 종양 조직 재생을 유지할 수 없도록 CSC 생태 지위를 동요시키기에(perturb) 유효한 양으로 제공될 수 있다. 일 실시형태에서, 이러한 방법은 치료적 유효량의 LOX1 저해제를 추가의 항암제와 조합하여 투여하는 단계를 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 종양 성장의 감소 또는 저해 방법을 제공하며, 상기 방법은 종양 성장을 감소시키거나 저해하기에 유효한 양의 LOX1 저해제를 종양과 접촉시키는 단계를 포함한다. 관련 양태에서, 본 개시내용은 환자에서 종양 성장의 감소 또는 저해 방법을 제공하며, 상기 방법은 종양 성장을 감소시키거나 저해하기에 유효한 양의 LOX1 저해제를 환자에게 투여하는 단계를 포함한다. 일 실시형태에서, 이러한 방법은 치료적 유효량의 LOX1 저해제를 추가의 항암제와 조합하여 투여하는 단계를 포함한다.
추가의 실시형태에서, 본 개시내용은 종양 크기의 감소 방법을 제공하며, 상기 방법은 종양 크기를 감소시키기에 유효한 양의 LOX1 저해제를 종양과 접촉시키는 단계를 포함한다. 관련 양태에서, 본 개시내용은 환자에서 종양 크기의 감소 방법에 관한 것으로서, 상기 방법은 종양 크기를 감소시키기에 유효한 양의 LOX1 저해제를 환자에게 투여하는 단계를 포함한다. 일 실시형태에서, 이러한 방법은 치료적 유효량의 LOX1 저해제를 추가의 항암제와 조합하여 투여하는 단계를 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 종양 침습성 또는 전이의 저해, 감소 또는 예방 방법을 제공하며, 상기 방법은 종양 침습성 또는 전이를 예방하거나, 감소시키거나 저해하기에 유효한 양의 LOX1 저해제를 종양과 접촉시키는 단계를 포함한다. 관련 양태에서, 본 개시내용은 환자에서 종양 침습성 또는 전이의 저해, 감소 또는 예방 방법을 제공하며, 상기 방법은 종양 침습성 또는 전이를 예방하거나, 감소시키거나 저해하기에 유효한 양의 LOX1 저해제를 환자에게 투여하는 단계를 포함한다. 일 실시형태에서, 이러한 방법은 치료적 유효량의 LOX1 저해제를 추가의 항암제와 조합하여 투여하는 단계를 포함한다.
본 개시내용에 의해 제공되는 실시형태들에서, 본 방법은 LOX1을 발현하는 종양 및/또는 CSC, 또는 CSC 집단에 관한 것이다. 추가의 실시형태에서, 종양 및/또는 CSC, 또는 CSC 집단은 구상체-형성 CSC를 포함할 수 있다.
상기 양태의 다양한 실시형태들에서, 본 방법은 종양 질병 및/또는 암 질병에 대해 피험자를 치료하는 것에 관한 것이다. 일부 실시형태에서, 암은 소화기 또는 위장 암(예를 들어, 항문암; 담관암; 간외(extrahepatic) 담관암; 충수암; 유암종, 위장암; 결장암; 소아 결장직장암을 포함한 결장직장암; 소아 식도암을 포함한 식도암; 담낭암; 소아 위암을 포함한 위(위장)암; 성인(원발성) 간세포암 및 소아 간세포암을 포함한 간세포암(예를 들어, 간세포암종); 소아 췌장암을 포함한 췌장암; 육종, 횡문근육종; 섬세포 췌장암; 직장암; 및 소장암); 폐암(예를 들어, 비소세포폐암(NSCLC) 및 소세포폐암(SCLC)); 두경부암(예를 들어, 구순암 및 구강암; 소아 경구암을 포함한 경구암; 하인두암; 소아 후두암을 포함한 후두암; 잠복 원발(occult primary)을 동반한 전이성 편평 목암(squamous neck cancer); 입(mouth) 암; 비강 및 부비강 암; 소아 비인두암을 포함한 비인두암; 구강인두암; 부갑상선암; 인두암; 소아 침샘암을 포함한 침샘암; 인후암; 및 갑상선암); 및 유방암으로부터 선택된다.
상기 고찰된 바와 같이, 일반적으로 "피험자"는 인간 및 비-인간 동물, 특히 포유류를 포함한다. 피험자의 치료 방법에 관한 양태들의 소정의 실시형태에서, 피험자의 비제한적인 예로는, 인간 피험자, 예를 들어 장애, 예를 들어 본원에 기재된 장애, 예컨대 암을 앓고 있는 인간 환자, 또는 정상 피험자 등이 있다. 일부 실시형태에서, "비-인간" 동물 또는 피험자는 모든 척추동물들, 예를 들어, 비-포유류(예컨대, 닭, 양서류, 파충류) 및 포유류, 예컨대 비-인간 영장류, 가축 및/또는 농업적으로 유용한 동물(예컨대, 양, 개, 고양이, 소, 돼지 등) 및 설치류(예컨대, 마우스, 래트, 햄스터, 기니피그 등)를 포함한다. 본원에 개시된 방법의 소정의 실시형태에서, 피험자는 인간 환자이다.
"치료" 또는 "치료하다"는 치료적 치료 및 예방적 또는 방지적 조치를 둘 다 지칭한다. 치료가 필요한 피험자로는, 이미 장애를 갖고 있는 개체뿐만 아니라 장애를 갖기 쉬운 개체 또는 장애가 예방되어야 하는 개체가 있다. 치료가 필요한 피험자로는, 이미 장애를 갖고 있는 개체뿐만 아니라 장애를 갖기 쉬운 개체 또는 장애가 예방되어야 하는 개체가 있다. 이에, 치료가 필요한 질병 또는 피험자와 관련하여 사용되는 경우, 상기 용어는 비처리된 피험자와 비교하여, 질병 진행의 중단 또는 지연, 질병의 차도, 증상의 예방, 질병 및/또는 증상 중증도의 감소, 또는 질병 기간의 감소를 포함하지만 이들로 한정되는 것은 아니다. 실시형태들에서, 치료 방법은 치료를 받고 있는 특정 질병의 하나 이상의 임상 적응증을 약화시킬 수 있다. LOX1을 발현하는 CSC, 뿐만 아니라 활성화된 LOX1 캐스케이드를 가진 CSC와 연관된 질병 또는 질환의 치료 방법에 관한 소정의 실시형태는, LOX1을 저해하는 화합물뿐만 아니라 이의 약제학적 조성물을 치료적 유효량으로 투여하는 단계를 포함한다. 실시형태들에서, 치료 방법은 질병 및/또는 증상의 추가의 진행을 예방하거나, 질병을 없애거나, 질병 및/또는 증상의 추가의 진행을 지연 또는 감소시키거나, 또는 CSC와 연관된 질병 및/또는 임상적 증상 및 LOX1을 발현하는 CSC와 연관된 암을 역전시키는 임의의 방법에 관한 것일 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 방법은 암의 진행을 중단시키거나 지연시키기에 충분한 치료적 유효량의 제제를 포함할 수 있다. 추가의 실시형태에서, 치료적 유효량은 피험자에서 CSC를 포함하는 암세포의 수를 감소시키기에(즉, 암세포를 사멸시키고/거나 암세포의 증식을 저해하고/거나 CSC의 분화를 유도하기에) 충분한 양이다. 피험자에서 암세포의 증식 및 암의 진행(예를 들어, 종양 크기, 세포 계수, 생화학적 마커, 2차 적응증 등)을 모니터링하는 방법은 본원에 고찰되어 있으며, 당업계에서 일반적으로 공지된 기술들을 또한 포함할 수 있다.
본원에 고찰된 바와 같이, 일부 실시형태는 방사선, 수술, 면역요법 또는 화학치료제와 더불어 LOX1 저해제를 투여하는 단계를 포함하는 치료 방법을 제공한다. 일부 실시형태에서, 이러한 방법은 치료적 유효량의 LOX1 저해제를 추가의 항암제와 조합하여 투여하는 단계를 포함한다. 광범위하게 다양한 항암제들(즉, 항신생물제들)이 당업계에 공지되어 있으며, 예를 들어 알킬화제, 항대사물질, 천연 항신생물제, 호르몬 항신생물제, 혈관신생 저해제, 분화 시약(differentiating reagent), 화학치료제, 티로신 키나제 저해제, RNA 저해제, 항체 또는 면역치료제, 유전자 치료제, 저분자 효소 저해제, 생물학적 반응 변형제 및 항전이제를 포함한다. 일반적으로 당업계에 공지된 화학치료제를 포함하여 이러한 활성 화합물의 일부 비제한적인 예로는, 예를 들어, 겜시타빈(Gemzar®), 카페시타빈(Xeloda®), Doxil®, 시타라빈, 덱사메타손, 이리노테칸(Camptosar®), 옥살리플라틴(Eloxatin®), 알부민-결합 파클리탁셀(Abraxane®), 테모졸로마이드, 아드리아마이신, 독소루비신, 에피루비신, 5-플루오로우라실, 시토신 아라비노시드("Ara-C"), 사이클로포스파미드, 티오테파, 부술판, 시톡신, 탁소이드(예를 들어, 파클리탁셀), 톡소테레, 메토트렉세이트, 시스플라틴, 멜팔란, 빈블라스틴, 블레오마이신, 에토포시드, 이포스파미드, 미토마이신 C, 미톡산트론, 빈크리스틴, 비노렐빈, 카르보플라틴, 테니포시드, 다우노마이신, 카미노마이신, 아미노프테린, 닥티노마이신, 미토마이신, 멜팔란 및 다른 관련된 질소 머스타드, 및 종양에서의 호르몬 작용을 조절하거나 저해하는 작용을 하는 호르몬 제제, 예컨대 타목시펜 및 오나프리스톤 등이 있다.
화학치료제는 많은 부작용들을 가지며, 이러한 부작용 중 하나가 심장의 독성(심장 독성으로도 지칭됨)이다. 특히, 화학치료제는 심근 세포 사멸 및 심부전을 초래할 수 있는 심장 손상을 유발하는 것으로 나타났다. 일 실시형태에서, 본 개시내용은 화학요법이 필요한 환자에서 화학요법-연관 심장 독성의 저해, 감소 또는 예방 방법을 제공하며, 상기 방법은 화학요법-연관 심장 독성을 저해하거나, 감소시키거나 예방하기에 유효한 양의 LOX1 저해제를 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함한다. 또 다른 실시형태에서, 본 개시내용은 화학요법이 필요한 환자에서 심장 독성의 역전 방법을 제공하며, 상기 방법은 화학요법-연관 심장 독성을 역전시키기에 유효한 양의 LOX1 저해제를 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함한다. 일 실시형태에서, 화학요법은 안트라사이클린, 예컨대 독소루비신이다.
본원에 사용되는 바와 같이, "투여" 또는 "투여하는"은, 요망되는 효과를 달성하기 위해 화합물 또는 화합물들을 임의의 적절한 경로에 의해 제공, 접촉 및/또는 전달하는 것을 지칭한다. 투여로는, 경구, 설하, 비경구(예를 들어, 정맥내, 피하, 피내(intracutaneous), 근육내, 관절내, 동맥내, 활액막내(intrasynovial), 흉골내(intrasternal), 척추강내(intrathecal), 병변내(intralesional) 또는 두개내(intracranial) 주사), 경피, 국소, 협측(buccal), 직장, 질내, 비내(nasal), 안내(ophthalmic) 투여, 흡입 및 이식 등이 있을 수 있으나, 이들로 한정되는 것은 아니다.
본원에 사용되는 바와 같이, "공동-투여되는"은 다수의 화합물들 또는 제제들의 동시적인 투여 또는 순차적인 투여를 지칭한다. 제1 화합물 또는 제제는 제2 화합물 또는 제제의 투여 이전에, 그와 동시에 또는 이후에 투여될 수 있다.
본원에서 "세포를 접촉시키는"에서와 같이 사용되는 "접촉시키는"은, 시험관내, 생체외 또는 생체내에서(즉, 피험자, 예컨대 인간, 마우스, 래트, 토끼, 고양이 및 개를 포함한 포유류 내에서) 세포를 직접적으로 또는 간접적으로 접촉시키는 것을 지칭한다. 세포를 저해제 화합물과 "반응시키거나" 또는 세포를 저해제 화합물에 "노출시키는" 것을 포함할 수도 있는, 세포를 접촉시키는 것은, 일반적으로 화합물 또는 제제를 피험자에게 투여하거나, 저해제를 세포 또는 조직, 또는 세포 또는 조직을 함유하는 유체를 함유하는 용기에 첨가 또는 적용한 결과로서 발생할 수 있다. 따라서, 세포를 저해제와 접촉시키는 것은, 세포(예를 들어, 피험자의 국소화된 영역 또는 시스템(예를 들어 림프계, 순환계 등) 내의 CSC 세포)를 포함하는 피험자, 조직, 또는 피험자 또는 조직의 영역에 저해제를 투여하는 것을 지칭할 수 있고, 표적 세포를 물리적으로 접촉시키지 않을 수 있다. 접촉은 세포, 조직, 포유류, 피험자, 환자 또는 인간에의 투여를 포함한다. 나아가, 세포와의 접촉은, 제제를 세포 배양물에 첨가하는 것을 포함한다. 다른 적합한 방법은, 본원에 고찰되거나 당업계에 공지된 바와 같은 적절한 투여 절차 및 경로를 사용하여 제제를 세포, 조직, 포유류, 피험자 또는 환자에게 도입하거나 투여하는 단계를 포함할 수 있다.
본 개시내용은 또한, 치료적 조성물 및 약제학적 조성물을 포함한 조성물에서 LOX1 저해제, 또는 1개 초과의 LOX1 저해제들의 조합의 하나 이상의 용도에 관한 것이다. 실시형태들에서, 용도 및 조성물은 본원에 개시된 다양한 방법들을 제공하기에 유효한 양의 저해제(들)를 포함한다. 실시형태들에서, 하나 이상의 용도는 본원에 기재된 종양 유형, 암 줄기세포 및/또는 암 중 하나 이상을 치료하기(예를 들어, 세포 증식을 사멸시키거나, 제거하거나, 저해하거나, 진행 및/또는 진행 속도를 감소시키며, 세포(CSC)의 자가 재생 및/또는 팽창 능력을 감소시키며, 질병 상태의 진행 및/또는 진행 속도를 감소시키기) 위한 약제의 제조를 위한 용도에 관한 것이다.
검출 방법
일부 양태 및 실시형태에서, 본원에 개시된 방법은 암 줄기세포(CSC)의 검출, 식별 및/또는 정량화에 유용한 하나 이상의 방법을 제공하고/거나 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 방법은 CSC를 포함하는 생물학적 시료에서 LOX1의 양을 검출, 식별 및/또는 정량화하는 것을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 방법은 암세포를 포함하는 시료에서 암 줄기세포(CSC)의 존재를 진단, 예후, 정량화, 식별 및/또는 검출하는 것을 제공하며, 상기 방법은
시료를 LOX1 핵산 서열 또는 LOX1 아미노산 서열에 결합하는 제제와 접촉시키는 단계;
상기 제제와 LOX1 핵산 서열 또는 LOX1 아미노산 서열 사이의 결합의 존재 또는 부재를 검출하는 단계; 및/또는
상기 제제와 LOX1 핵산 서열 또는 LOX1 아미노산 서열 사이의 결합의 검출 시, 시료 내 CSC의 존재를 식별하는 단계
중 하나 이상의 단계를 포함할 수 있다.
이들 방법에서, 이러한 단계들은 단독으로 사용될 수 있거나, 서로 또는 당업계에 일반적으로 공지된 다른 기술들과의 임의의 일련의 조합으로 사용될 수 있다. 이러한 양태의 일부 실시형태에서, 상기 방법은
시료 내 LOX1 핵산 서열 또는 LOX1 아미노산 서열의 양을 정량화하는 단계;
LOX1 핵산 서열 또는 LOX1 아미노산 서열의 양을 LOX1 핵산 또는 LOX1 아미노산의 참조 수준과 비교하는 단계; 및/또는
검출된 양이 참조 수준보다 높은 경우 시료 내 CSC의 존재를 식별하는 단계
중 하나 이상의 단계를 추가로 포함할 수 있다.
일부 양태 및 실시형태에서, 본원에 개시된 방법은 LOX1 양성 암 줄기세포(CSC)의 검출, 식별, 및/또는 정량화에 유용한 하나 이상의 방법을 제공하고/거나 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 방법은 CSC를 포함하는 생물학적 시료에서 LOX1 양성 CSC의 양을 검출, 식별 및/또는 정량화하는 것을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 방법은 암세포를 포함하는 시료에서 LOX1 양성 암 줄기세포(CSC)의 존재를 진단, 예후, 정량화, 식별, 및/또는 검출하는 것을 제공하며, 상기 방법은
시료를 LOX1 핵산 서열 또는 LOX1 아미노산 서열에 결합하는 제제와 접촉시키는 단계;
상기 제제와 LOX1 핵산 서열 또는 LOX1 아미노산 서열 사이의 결합의 존재 또는 부재를 검출하는 단계; 및/또는
상기 제제와 LOX1 핵산 서열 또는 LOX1 아미노산 서열 사이의 결합의 검출 시, 시료 내 LOX1 양성 CSC의 존재를 식별하는 단계
중 하나 이상의 단계를 포함할 수 있다.
보다 추가의 실시형태에서, 본 방법은 검출 가능한 모이어티를 포함하는 제제를 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 이러한 제제는 엄격한 혼성화 조건 하에 LOX1 핵산 서열의 적어도 일부에 혼성화하는 핵산 서열을 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 이러한 제제는 LOX1 아미노산 서열의 적어도 일부에 특이적으로 결합하는 항체를 포함할 수 있다.
상기 양태의 다양한 실시형태들에서, 본 방법은 LOX1을 발현하는 종양 및/또는 CSC, 또는 CSC 집단에 관한 것이다. 추가의 실시형태에서, 종양 및/또는 CSC, 또는 CSC 집단은 구상체-형성 CSC를 포함할 수 있다.
시료 내 CSC를 검출, 식별 및/또는 정량화하는 데 유용한 본원에 기재된 방법 외에도, 이들 양태들 및 실시형태들은 또한, 당업자에게 이용 가능한 임의의 방법 및 기술을 포함할 수 있다. 비제한적인 예로서, CSC는, 특정한 CSC에서 발현되거나 특정한 CSC에 특이적인 세포 표면 마커를 기반으로 하는 유세포분석; 염료 배제(예를 들어, 문헌[Moserle, L., et al., Cancer Res. (2008) 68; 5658-5668]에 기재된 바와 같은 Hoechst 33342)에 의한 부-집단(SP; side-population) 표현형의 검출; 혈청-무함유 배지에서 부유(floating) 구상체의 성장/증식 능력(예를 들어, 본원에 개시된 것뿐만 아니라 문헌[Ryback, A.P., et al., Biochim. Biophys. Acta (2011) 1813; 683-694]에 개시된 것); 및 특정한 효소 활성, 예컨대 알데하이드 데하이드로게나제 활성, 및 폴리콤(polycomb) 헤테로크로마틴 마커, H3K27me3 수준 및 zeste 2의 폴리콤 그룹 단백질 증강제(EZH2)를 포함하는 폴리콤 마커의 수준의 확인을 포함하는 기술을 사용하여 식별, 검출 및 단리될 수 있다.
일부 실시형태에서, 예를 들어 상승된 알데하이드 데하이드로게나제(ALDH) 발현 및 활성은 다양한 계통(예를 들어, 조혈, 유선, 내피, 간엽, 신경 계통)의 암 전구세포에 보고되어 왔고, 기술 및 상업적으로 입수 가능한 키트(예를 들어, ALDEFLUORTM, Stemcell Technologies)가 본원의 다양한 양태들 및 실시형태들과 함께 사용될 수 있다. 유사하게는, CSC의 식별에 보편적으로 발현되는 세포 표면 마커가 현재로서는 존재하지 않지만, 예를 들어 ALDH, CD13, CD15, CD24, CD44, CD90, CD117, CD133, CD166, CD326을 포함하여 많은 표면 마커들이 CSC 및 연관된 종양 유형과 연관이 있다(예를 들어, 문헌[Xia, P., Curr Stem Cell Res Ther. (2014) Mar; 9(2): 102-11; Shimamura, M., et al., Endocr. J.,(2014) 61(5):481-90; Tirino, V., et al., FASEB J.,(2013) Jan; 27(1):13-24] 참조).
일부 실시형태에서, 시료 내 CSC의 검출 또는 식별을 위한 하나 이상의 보편적인 표면 마커의 결여때문에, 검출, 식별 및/또는 정량화 방법은 본원에 개시되거나 그렇지 않다면 당업계에 공지된 바와 같은 구상체 배양 및 성장 검정법을 포함하는 세포 배양 기술을 포함한다.
B. 저해제
본원에 기재된 방법, 용도 및 조성물은 LOX1의 활성 및/또는 발현을 저해하거나, 하향조절하거나 없앨 수 있는 제제, 또는 하나 이상의 이러한 저해제들의 임의의 조합에 관한 실시형태를 포함한다. 상기 제제가 저해 기능을 갖고 있는 한(예를 들어 LOX1 발현 및/또는 활성을 저해하는 한), 이러한 저해제는 임의의 부류의 화합물로부터 선택될 수 있다. 예를 들어, 저해제는 LOX1을 저해하는 폴리펩타이드, LOX1을 저해하는 저분자, LOX1을 저해하는 폴리뉴클레오타이드, LOX1을 저해하는 앱타머(aptamer), LOX1을 저해하는 항체, 또는 LOX1을 저해하는 안티센스 분자 또는 siRNA 분자로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 따라서, 본원에 사용되는 바와 같이 저해제는 LOX1의 발현 및/또는 기능을 감소시키거나, 저해하거나, 하향조절하거나 없애는 임의의 화합물, 또는 LOX1의 발현 또는 기능을 중화시키거나, 감소시키거나 저해하는 데 적합한 제제를 지칭한다. 본원에 기재된 저해제는 예를 들어 LOX1에 결합하는 것을 포함하는 임의의 메커니즘에 의해 작용을 발휘할 수 있다. 결합 시, 저해제는 예를 들어 LOX1과 수용체 또는 리간드의 상호작용을 저해할 수 있으며, 이로써 LOX1은 수용체를 활성화시킬 수 없거나 리간드에 의해 활성화될 수 없다. 다른 실시형태에서, LOX1의 활성을 저해할 수 있는 제제(들)는 화학주성 활성을 저해할 수 있으며, 단백질을 격리시키고 생체이용률을 감소시킬 수 있거나, 이들의 임의의 조합을 수행할 수 있다.
일부 실시형태에서, 저해제는 LOX1에 결합할 수 있는 폴리펩타이드 또는 저분자일 수 있고, 당업계에서 통상적인 임의의 기술(예를 들어 저분자(small) 화합물 또는 폴리펩타이드 라이브러리의 스크리닝)에 의해 식별될 수 있다.　본원에 사용되는 바와 같이 "저분자"는 일반적으로, 낮은 분자량을 가진 작은 유기 화합물을 지칭한다. 저분자는 자연상에서 발생하는 것으로 공지되지 않은 합성 화합물, 또는 천연 공급원, 예컨대 세포, 식물, 진균류, 동물 등으로부터 단리되거나 발생하는 것으로 공지된 자연-발생 화합물일 수 있다. 일부 실시형태에서, 저분자는 5000 달톤 미만, 4000 달톤 미만, 3000 달톤 미만, 2000 달톤 미만, 1000 달톤 미만 또는 약 800 달톤 미만의 분자량을 가질 수 있다. 이러한 실시형태에서, 저분자는 전형적으로, 약 100 달톤 초과의 분자량을 가진다.
저분자 또는 폴리펩타이드가 LOX1에 결합할 수 있는지의 여부는 임의의 통상적인 기술 또는 검정법, 뿐만 아니라 본원에 기재된 기술 및 검정법에 의해 확인될 수 있다. 예를 들어, 이러한 기술은 효모 2-하이브리드 검정법 또는 생화학적 검정법, 예컨대 풀-다운(pull-down) 검정법, 공동-면역침전 검정법, 효소-연결 면역흡착 검정법(ELISA), 정량적 방사성리간드 결합 검정법, 플라즈몬 공명 검정법 또는 당업계에서 통상적으로 사용되는 임의의 다른 방법을 포함할 수 있다. 전형적으로, 풀-다운 또는 플라즈몬 공명 검정법을 사용하는 경우, 적어도 하나의 단백질을 친화도 태그, 예컨대 HIS-태그, GST-태그 또는 당업계에서 일반적으로 사용되는 검출 가능한 모이어티에 융합시키거나 그렇지 않다면 연결하는 것이 유용하다. 시험되는 폴리펩타이드 또는 임의의 다른 화합물이 LOX1의 활성을 저해할 수 있는지의 여부는, 막-결합 폴리펩타이드의 활성을 측정함으로써 확인될 수 있다. 적합하게는, 폴리펩타이드는 LOX1의 활성을 저해할 수 있다.
실시형태들에서, 저해제는, LOX1에 대해 특이성을 갖는 DNA, RNA 또는 펩타이드 앱타머를 지칭하는 "앱타머"일 수 있다. 폴리뉴클레오타이드 앱타머는 어디에서나 약 10개 내지 약 300개의 뉴클레오타이드 길이를 포함한다. 전형적으로, 앱타머는 약 30개 내지 약 100개 뉴클레오타이드 길이의 범위이고, 일부 실시형태에서는 약 10개 내지 60개 뉴클레오타이드 길이의 범위일 수 있다.　앱타머는 합성, 재조합 및 정제 방법을 포함하는 임의의 공지된 방법에 의해 제조될 수 있고, 단독으로 사용되거나 LOX1에 특이적인 다른 앱타머와 조합하여 사용될 수 있다.
본원에서 지칭되는 방법의 일부 특정한 실시형태에서, 저해제는 LOX1에 특이적으로 결합하는 항체일 수 있다. 일부 실시형태에서, 항체는 모노클로날 또는 폴리클로날 항체, 또는 다중특이적인(polyspecific) 항혈청일 수 있다. 이러한 실시형태에서, 항체는 또한, 상기 고찰된 바와 같으며 예를 들어, 단쇄 항체, 디아바디(diabody), 미니바디(minibody), 단쇄 Fv 단편(sc(Fv)), sc(Fv)2 항체, Fab 단편 또는 F(ab')2 단편을 포함하여 항체 변이체 또는 단편이 LOX1에 대해 특이적인 결합 특성을 유지하는 한, 이러한 변이체 또는 단편을 포함할 수 있다.
예시적인 LOX1 결합 단백질은 하기 표 1에 제공되어 있으며, 국제 특허 출원 PCT/EP2015/072644에 기재되어 있고, 상기 출원은 그 전체가 원용에 의해 본 명세서에 포함된다.
[표 1]
Figure pct00001
Figure pct00002
Figure pct00003
Figure pct00004
Figure pct00005
Figure pct00006
Figure pct00007
Figure pct00008
일부 양태에서, 단리된 LOX1-결합 단백질은 서열 번호: 4의 기준 VH 서열로부터의, 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개의 또는 이보다 더 적은 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VH 서열을 포함한다. 또한, 본 발명은 이 LOX1-결합 단백질을 코딩하는 핵산, 이러한 핵산을 포함하는 벡터, 및 이러한 핵산 및 벡터로 형질전환된 숙주 세포, 및 LOX1-결합 단백질의 제조 및 사용 방법을 제공한다.
추가의 양태에서, 단리된 LOX1-결합 단백질은 서열 번호: 4의 VH를 포함한다. 또한, 본 발명은 이 LOX1-결합 단백질을 코딩하는 핵산, 이러한 핵산을 포함하는 벡터, 및 이러한 핵산 및 벡터로 형질전환된 숙주 세포, 및 LOX1-결합 단백질의 제조 및 사용 방법을 제공한다.
일부 양태에서, 단리된 LOX1-결합 단백질은 서열 번호: 33의 기준 VL 서열로부터의 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개의 또는 이보다 더 적은 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VL 서열을 포함한다. 또한, 본 발명은 이 LOX1-결합 단백질을 코딩하는 핵산, 이러한 핵산을 포함하는 벡터 및 이러한 핵산 및 벡터로 형질전환된 숙주 세포, 및 LOX1-결합 단백질의 제조 및 사용 방법을 제공한다.
추가의 양태에서, 단리된 LOX1-결합 단백질은 서열 번호: 33의 VL을 포함한다. 또한, 본 발명은 이 LOX1-결합 단백질을 코딩하는 핵산, 이러한 핵산을 포함하는 벡터 및 이러한 핵산 및 벡터로 형질전환된 숙주 세포, 및 LOX1-결합 단백질의 제조 및 사용 방법을 제공한다.
일부 양태에서, LOX1-결합 단백질은 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR1, 서열 번호: 2, 5 내지 12 또는 13의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR2, 및 서열 번호: 3, 14 내지 17 또는 18의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR3을 포함하는 VH로부터 선택되는 VH; 및 서열 번호: 30의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR1, 서열 번호: 31의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR2, 및 서열 번호: 32, 34, 또는 35의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR3을 포함하는 VL로부터 선택되는 경쇄 VL을 포함한다. 또한, 본 발명은 이 LOX1-결합 단백질을 코딩하는 핵산, 이러한 핵산을 포함하는 벡터 및 이러한 핵산 및 벡터로 형질전환된 숙주 세포, 및 LOX1-결합 단백질의 제조 및 사용 방법을 제공한다.
또한, 본 방법은 본원에 개시된 기준 VH 및 VL LOX1-결합 단백질로부터의, 각각 각각 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개의 또는 이보다 더 적은 아미노산 치환, 결실, 및/또는 삽입을 갖는 VH 및 VL 서열을 포함하는 단리된 LOX1-결합 단백질에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 이 LOX1-결합 단백질을 코딩하는 핵산, 이러한 핵산을 포함하는 벡터 및 이러한 핵산 및 벡터로 형질전환된 숙주 세포, 및 LOX1-결합 단백질의 제조 및 사용 방법을 제공한다.
일부 양태에서, 단리된 LOX1-결합 단백질은 서열 번호: 4, 19 내지 28, 또는 29의 서열을 포함하는 VH, 및 서열 번호: 33, 36, 또는 37의 서열을 포함하는 VL을 갖는다. 또한, 본 발명은 이 LOX1-결합 단백질을 코딩하는 핵산, 이러한 핵산을 포함하는 벡터 및 이러한 핵산 및 벡터로 형질전환된 숙주 세포, 및 LOX1-결합 단백질의 제조 및 사용 방법을 제공한다.
일부 양태에서, 단리된 LOX1-결합 단백질은 하기: 중쇄 가변 영역(VH)-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, 및 경쇄 가변 영역(VL)-CDR1, VL-CDR2 및 VL-CDR3의 상보성 결정 영역(CDR)의 세트를 포함하며, 여기서, CDR의 세트는 (a) VH-CDR1이 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 갖고; (b) VH-CDR2가 서열 번호: 5의 아미노산 서열을 갖고; (c) VH-CDR3이 서열 번호: 14의 아미노산 서열을 갖고; (d) VL-CDR1이 서열 번호: 30의 아미노산 서열을 갖고; (e) VL-CDR2가 서열 번호: 31의 아미노산 서열을 갖고; (f) VL-CDR3이 서열 번호: 32의 아미노산 서열을 갖는 기준 CDR 세트와 동일하거나 상기 기준 CDR 세트로부터의 총 18개 이하의(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 또는 18개의) 아미노산 치환, 결실, 및/또는 삽입을 갖는다. 또한, 본 발명은 이 LOX1-결합 단백질을 코딩하는 핵산, 이러한 핵산을 포함하는 벡터 및 이러한 핵산 및 벡터로 형질전환된 숙주 세포, 및 LOX1-결합 단백질의 제조 및 사용 방법을 제공한다.
추가의 양태에서, LOX1-결합 단백질은 하기: VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2 및 VL-CDR3의 CDR의 세트를 포함하며, 여기서, (a) VH-CDR1은 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 갖고; (b) VH-CDR2는 서열 번호: 2의 아미노산 서열을 갖고; (c) VH-CDR3은 서열 번호: 3의 아미노산 서열을 갖고; (d) VL-CDR1은 서열 번호: 30의 아미노산 서열을 갖고; (e) VL-CDR2는 서열 번호: 31의 아미노산 서열을 갖고; (f) VL-CDR3은 서열 번호: 32의 아미노산 서열을 갖는다. 또한, 본 발명은 이 LOX1-결합 단백질을 코딩하는 핵산, 이러한 핵산을 포함하는 벡터 및 이러한 핵산 및 벡터로 형질전환된 숙주 세포, 및 LOX1-결합 단백질의 제조 및 사용 방법을 제공한다.
또한, 본 방법은 본원에 개시된 기준 VH 서열에 대하여 적어도 90, 95, 97, 98 또는 99%의 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역(VH) 및/또는 본원에 개시된 기준 VL 서열에 대하여 적어도 90, 95, 97, 98 또는 99%의 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 영역(VL)(예를 들어, 표 1에 개시된 VH 및 VL 서열)을 포함하는 단리된 LOX1-결합 단백질에 관한 것이다. 추가의 양태에서, 단리된 LOX1-결합 단백질은 서열 번호: 4의 서열에 대하여 적어도 90, 95, 97, 98 또는 99%의 서열 동일성을 갖는 VH 및/또는 서열 번호: 33의 서열에 대하여 적어도 90, 95, 97, 98 또는 99%의 서열 동일성을 갖는 VL을 포함한다. 또한, 본 발명은 이 LOX1-결합 단백질을 코딩하는 핵산, 이러한 핵산을 포함하는 벡터 및 이러한 핵산 및 벡터로 형질전환된 숙주 세포, 및 LOX1-결합 단백질의 제조 및 사용 방법을 제공한다.
일부 양태에서, LOX1-결합 단백질은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 VH 및 VL에 대하여 적어도 90, 95, 97, 98 또는 99%의 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역(VH) 및 적어도 90, 95, 97, 98 또는 99%의 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다: (a) 서열 번호: 4의 아미노산 서열을 갖는 VH 및 서열 번호: 33의 아미노산 서열을 갖는 VL; (b) 서열 번호: 29의 아미노산 서열을 갖는 VH 및 서열 번호: 33의 아미노산 서열을 갖는 VL; (c) 서열 번호: 41의 아미노산 서열을 갖는 VH 및 서열 번호: 58의 아미노산 서열을 갖는 VL; 및 (d) 서열 번호: 54의 아미노산 서열을 갖는 VH 및 서열 번호: 70의 아미노산 서열을 갖는 VL. 또한, 본 발명은 이 LOX1-결합 단백질을 코딩하는 핵산, 이러한 핵산을 포함하는 벡터 및 이러한 핵산 및 벡터로 형질전환된 숙주 세포, 및 LOX1-결합 단백질의 제조 및 사용 방법을 제공한다.
일부 양태에서, LOX1-결합 단백질은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 VH 및 VL에 대하여 적어도 90, 95, 97, 98 또는 99%의 서열 동일성을 갖는 VH 및 적어도 90, 95, 97, 98 또는 99%의 서열 동일성을 갖는 VL을 포함한다: (a) 서열 번호: 19의 아미노산 서열을 갖는 VH 및 서열 번호: 33의 아미노산 서열을 갖는 VL; (b) 서열 번호: 20의 아미노산 서열을 갖는 VH 및 서열 번호: 33의 아미노산 서열을 갖는 VL; (c) 서열 번호: 21의 아미노산 서열을 갖는 VH 및 서열 번호: 33의 아미노산 서열을 갖는 VL; (d) 서열 번호: 22의 아미노산 서열을 갖는 VH 및 서열 번호: 33의 아미노산 서열을 갖는 VL; (e) 서열 번호: 23의 아미노산 서열을 갖는 VH 및 서열 번호: 33의 아미노산 서열을 갖는 VL; (f) 서열 번호: 24의 아미노산 서열을 갖는 VH 및 서열 번호: 33의 아미노산 서열을 갖는 VL; (g) 서열 번호: 25의 아미노산 서열을 갖는 VH 및 서열 번호: 33의 아미노산 서열을 갖는 VL; (h) 서열 번호: 26의 아미노산 서열을 갖는 VH 및 서열 번호: 33의 아미노산 서열을 갖는 VL; (i) 서열 번호: 27의 아미노산 서열을 갖는 VH 및 서열 번호: 37의 아미노산 서열을 갖는 VL; (j) 서열 번호: 28의 아미노산 서열을 갖는 VH 및 서열 번호: 37의 아미노산 서열을 갖는 VL; (k) 서열 번호: 48의 아미노산 서열을 갖는 VH 및 서열 번호: 65의 아미노산 서열을 갖는 VL; (l) 서열 번호: 49의 아미노산 서열을 갖는 VH 및 서열 번호: 66의 아미노산 서열을 갖는 VL; (m) 서열 번호: 50의 아미노산 서열을 갖는 VH 및 서열 번호: 67의 아미노산 서열을 갖는 VL; (n) 서열 번호: 51의 아미노산 서열을 갖는 VH 및 서열 번호: 65의 아미노산 서열을 갖는 VL; (o) 서열 번호: 54의 아미노산 서열을 갖는 VH 및 서열 번호: 68의 아미노산 서열을 갖는 VL; (p) 서열 번호: 52의 아미노산 서열을 갖는 VH 및 서열 번호: 67의 아미노산 서열을 갖는 VL; (q) 서열 번호: 54의 아미노산 서열을 갖는 VH 및 서열 번호: 69의 아미노산 서열을 갖는 VL; (r) 서열 번호: 53의 아미노산 서열을 갖는 VH 및 서열 번호: 58의 아미노산 서열을 갖는 VL; 및 (s) 서열 번호: 41의 아미노산 서열을 갖는 VH 및 서열 번호: 58의 아미노산 서열을 갖는 VL. 또한, 본 발명은 이 LOX1-결합 단백질을 코딩하는 핵산, 이러한 핵산을 포함하는 벡터 및 이러한 핵산 및 벡터로 형질전환된 숙주 세포, 및 LOX1-결합 단백질의 제조 및 사용 방법을 제공한다.
추가의 양태에서, 본 방법은 서열 번호: 3의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR3을 포함하는 단리된 LOX1-결합 단백질을 포함할 수 있다. 추가의 양태에서, LOX1-결합 단백질은 서열 번호: 3의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR3 및 서열 번호: 2의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR2를 포함한다. 다른 양태에서, LOX1-결합 단백질은 서열 번호: 3의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR3 및 서열 번호: 5 내지 12 또는 13의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR2를 포함한다. 추가의 양태에서, LOX1-결합 단백질은 서열 번호: 3, 14 내지 17 또는 18의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR3 및 서열 번호: 2의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR2를 포함한다. 추가의 양태에서, LOX1-결합 단백질은 서열 번호: 3, 14 내지 17 또는 18의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR3 및 서열 번호: 2, 5 내지 12 또는 13의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR2를 포함한다. 추가의 양태에서, LOX1-결합 단백질은 서열 번호: 3, 14 내지 17 또는 18의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR3 및 서열 번호: 2, 5 내지 12 또는 13의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR2 및 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR1을 포함한다. 또한, 본 발명은 이 LOX1-결합 단백질을 코딩하는 핵산, 이러한 핵산을 포함하는 벡터 및 이러한 핵산 및 벡터로 형질전환된 숙주 세포, 및 LOX1-결합 단백질의 제조 및 사용 방법을 제공한다.
추가의 양태에서, 단리된 LOX1-결합 단백질은 서열 번호: 32의 아미노산 서열을 갖는 VLH-CDR3을 포함한다. 추가의 양태에서, LOX1-결합 단백질은 서열 번호: 32의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR3 및 서열 번호: 31의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR2를 포함한다. 다른 양태에서, LOX1-결합 단백질은 서열 번호: 32의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR3, 서열 번호: 31의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR2 및 서열 번호: 30의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR1을 포함한다. 다른 양태에서, LOX1-결합 단백질은 서열 번호: 32, 34, 또는 35의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR3, 서열 번호: 31의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR2를 포함한다. 추가의 양태에서, LOX1-결합 단백질은 서열 번호: 32, 34, 또는 35의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR3, 서열 번호: 31의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR2 및 서열 번호: 30의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR1을 포함한다. 또한, 본 발명은 이 LOX1-결합 단백질을 코딩하는 핵산, 이러한 핵산을 포함하는 벡터 및 이러한 핵산 및 벡터로 형질전환된 숙주 세포, 및 LOX1-결합 단백질의 제조 및 사용 방법을 제공한다.
추가의 양태에서, LOX1-결합 단백질은 1개, 2개, 또는 3개의 VH-CDR, 예컨대 서열 번호: 1의 서열과 동일하거나 서열 번호: 1의 서열에 대하여 총 1개, 2개의 또는 이보다 더 적은 아미노산 치환, 결실, 또는 삽입을 갖는 VH-CDR1, 서열 번호: 2, 5 내지 12 또는 13의 서열과 동일하거나 서열 번호: 2, 5 내지 12 또는 13의 서열에 대하여 총 1개, 2개의 또는 이보다 더 적은 아미노산 치환, 결실, 또는 삽입을 갖는 VH-CDR2, 또는 서열 번호: 3, 14 내지 17 또는 18의 서열과 동일하거나 서열 번호: 3, 14 내지 17 또는 18의 서열에 대하여 총 1개, 2개의 또는 이보다 더 적은 아미노산 치환, 결실, 또는 삽입을 갖는 VH-CDR3을 포함한다.
추가의 양태에서, LOX1-결합 단백질은 1개, 2개, 또는 3개의 VL-CDR, 예컨대 서열 번호: 30의 서열과 동일하거나 서열 번호: 30의 서열에 대하여 총 1개, 2개의 또는 이보다 더 적은 아미노산 치환, 결실, 또는 삽입을 갖는 VL-CDR1, 서열 번호: 31의 서열과 동일하거나 서열 번호: 31의 서열에 대하여 총 1개, 2개의 또는 이보다 더 적은 아미노산 치환, 결실, 또는 삽입을 갖는 VL-CDR2, 또는 서열 번호: 32, 34, 또는 35의 서열과 동일하거나 서열 번호: 32, 34, 또는 35의 서열에 대하여 총 1개, 2개의 또는 이보다 더 적은 아미노산 치환, 결실, 또는 삽입을 갖는 VL-CDR3을 포함한다.
일부 양태에서, 단리된 LOX1-결합 단백질은 서열 번호: 41의 기준 VH 서열로부터의 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개의 또는 이보다 더 적은 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VH 서열을 포함한다. 또한, 본 발명은 이 LOX1-결합 단백질을 코딩하는 핵산, 이러한 핵산을 포함하는 벡터 및 이러한 핵산 및 벡터로 형질전환된 숙주 세포, 및 LOX1-결합 단백질의 제조 및 사용 방법을 제공한다.
추가의 양태에서, 단리된 LOX1-결합 단백질은 서열 번호: 41의 VH를 포함한다. 또한, 본 발명은 이 LOX1-결합 단백질을 코딩하는 핵산, 이러한 핵산을 포함하는 벡터 및 이러한 핵산 및 벡터로 형질전환된 숙주 세포, 및 LOX1-결합 단백질의 제조 및 사용 방법을 제공한다.
일부 양태에서, 단리된 LOX1-결합 단백질은 서열 번호: 58의 기준 VL 서열로부터의 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개의 또는 이보다 더 적은 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VL 서열을 포함한다. 본 개시내용은 또한, LOX1-결합 단백질을 인코딩하는 핵산, 이들 핵산을 함유하는 벡터, 및 이들 핵산 및 벡터로 형질변환된 숙주 세포, 및 LOX1-결합 단백질의 제조 및 사용 방법을 제공한다.
추가의 양태에서, 단리된 LOX1-결합 단백질은 SEQ ID NO: 58의 VL을 포함한다. 본 개시내용은 또한, LOX1-결합 단백질을 인코딩하는 핵산, 이들 핵산을 함유하는 벡터, 및 이들 핵산 및 벡터로 형질변환된 숙주 세포, 및 LOX1-결합 단백질의 제조 및 사용 방법을 제공한다.
일부 양태에서, LOX1-결합 단백질은 서열 번호: 38의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR1, 서열 번호: 39, 42 또는 43의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR2, 및 서열 번호: 40, 44 내지 46 또는 47의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR3을 포함하는 VH로부터 선택되는 VH; 및 서열 번호: 55 또는 59의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR1, 서열 번호: 56 또는 60의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR2, 및 서열 번호: 57, 61 내지 63, 또는 64의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR3을 포함하는 VL로부터 선택되는 경쇄 VL을 포함한다.
일부 양태에서, 단리된 LOX1-결합 단백질은 서열 번호: 41, 48 내지 53, 또는 54의 서열을 포함하는 VH 및 서열 번호: 58, 65 내지 69, 또는 70의 서열을 포함하는 VL을 갖는다. 또한, 본 발명은 이 LOX1-결합 단백질을 코딩하는 핵산, 이러한 핵산을 포함하는 벡터 및 이러한 핵산 및 벡터로 형질전환된 숙주 세포, 및 LOX1-결합 단백질의 제조 및 사용 방법을 제공한다.
일부 양태에서, 단리된 LOX1-결합 단백질은 하기: 중쇄 가변 영역(VH)-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, 경쇄 가변 영역(VL)-CDR1, VL-CDR2 및 VL-CDR3의 상보성 결정 영역(CDR)의 세트를 포함하며, 여기서, CDR의 세트는 (a) VH-CDR1이 서열 번호: 38의 아미노산 서열을 갖고; (b) VH-CDR2가 서열 번호: 39의 아미노산 서열을 갖고; (c) VH-CDR3이 서열 번호: 44의 아미노산 서열을 갖고; (d) VL-CDR1이 서열 번호: 55의 아미노산 서열을 갖고; (e) VL-CDR2가 서열 번호: 60의 아미노산 서열을 갖고; (f) VL-CDR3이 서열 번호: 61의 아미노산 서열을 갖는 기준 CDR 세트와 동일하거나 상기 기준 CDR 세트로부터의 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개의 또는 이보다 더 적은 아미노산 치환, 결실, 및/또는 삽입을 갖는다. 또한, 본 발명은 이 LOX1-결합 단백질을 코딩하는 핵산, 이러한 핵산을 포함하는 벡터 및 이러한 핵산 및 벡터로 형질전환된 숙주 세포, 및 LOX1-결합 단백질의 제조 및 사용 방법을 제공한다.
일부 양태에서, 단리된 LOX1-결합 단백질은 하기: 중쇄 가변 영역(VH)-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, 경쇄 가변 영역(VL)-CDR1, VL-CDR2 및 VL-CDR3의 상보성 결정 영역(CDR)의 세트를 포함하며 여기서, 상기 CDR의 세트는 (a) VH-CDR1이 서열 번호: 38의 아미노산 서열을 갖고, (b) VH-CDR2가 서열 번호: 39의 아미노산 서열을 갖고; (c) VH-CDR3이 서열 번호: 40의 아미노산 서열을 갖고; (d) VL-CDR1이 서열 번호: 55의 아미노산 서열을 갖고; (e) VL-CDR2가 서열 번호: 56의 아미노산 서열을 갖고; (f) VL-CDR3이 서열 번호: 57의 아미노산 서열을 갖는 기준 CDR 세트와 동일하거나 상기 기준 CDR 세트로부터의 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개의 또는 이보다 더 적은 아미노산 치환, 결실, 및/또는 삽입을 갖는다. 또한, 본 발명은 이 LOX1-결합 단백질을 코딩하는 핵산, 이러한 핵산을 포함하는 벡터 및 이러한 핵산 및 벡터로 형질전환된 숙주 세포, 및 LOX1-결합 단백질의 제조 및 사용 방법을 제공한다.
추가의 양태에서, LOX1-결합 단백질은 (a) VH-CDR1이 서열 번호: 38의 아미노산 서열을 갖고; (b) VH-CDR2가 서열 번호: 39의 아미노산 서열을 갖고; (c) VH-CDR3이 서열 번호: 40의 아미노산 서열을 갖고; (d) VL-CDR1이 서열 번호: 55의 아미노산 서열을 갖고; (e) VL-CDR2가 서열 번호: 56의 아미노산 서열을 갖고; (f) VL-CDR3이 서열 번호: 57의 아미노산 서열을 갖는 하기: VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2 및 VL-CDR3의 CDR의 세트를 포함한다. 또한, 본 발명은 이 LOX1-결합 단백질을 코딩하는 핵산, 이러한 핵산을 포함하는 벡터 및 이러한 핵산 및 벡터로 형질전환된 숙주 세포, 및 LOX1-결합 단백질의 제조 및 사용 방법을 제공한다.
추가의 양태에서, 단리된 LOX1-결합 단백질은 서열 번호: 40의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR3을 포함한다. 추가의 양태에서, LOX1-결합 단백질은 서열 번호: 40의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR3 및 서열 번호: 39의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR2를 포함한다. 다른 양태에서, LOX1-결합 단백질은 서열 번호: 40의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR3 및 서열 번호: 42 또는 43의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR2를 포함한다. 추가의 양태에서, LOX1-결합 단백질은 서열 번호: 40, 44 내지 46, 또는 47의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR3 및 서열 번호: 39의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR2를 포함한다. 추가의 양태에서, LOX1-결합 단백질은 서열 번호: 40, 44 내지 46, 또는 47의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR3 및 서열 번호: 39, 42, 또는 43의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR2를 포함한다. 추가의 양태에서, LOX1-결합 단백질은 서열 번호: 40, 44 내지 46, 또는 47의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR3 및 서열 번호: 39, 42, 또는 43의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR2 및 서열 번호: 38의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR1을 포함한다. 또한, 본 발명은 이 LOX1-결합 단백질을 코딩하는 핵산, 이러한 핵산을 포함하는 벡터 및 이러한 핵산 및 벡터로 형질전환된 숙주 세포, 및 LOX1-결합 단백질의 제조 및 사용 방법을 제공한다.
추가의 양태에서, 단리된 LOX1-결합 단백질은 서열 번호: 57의 아미노산 서열을 갖는 VLH-CDR3을 포함한다. 추가의 양태에서, LOX1-결합 단백질은 서열 번호: 57의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR3 및 서열 번호: 56의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR2를 포함한다. 다른 양태에서, LOX1-결합 단백질은 서열 번호: 57의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR3, 서열 번호: 56의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR2 및 서열 번호: 55의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR1을 포함한다. 다른 양태에서, LOX1-결합 단백질은 서열 번호: 57의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR3, 서열 번호: 56 또는 60의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR2 및 서열 번호: 55 또는 59의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR1을 포함한다. 또한, 본 발명은 이 LOX1-결합 단백질을 코딩하는 핵산, 이러한 핵산을 포함하는 벡터 및 이러한 핵산 및 벡터로 형질전환된 숙주 세포, 및 LOX1-결합 단백질의 제조 및 사용 방법을 제공한다.
추가의 양태에서, LOX1-결합 단백질은 1개, 2개, 또는 3개의 VH-CDR, 예컨대 서열 번호: 38의 서열과 동일하거나 서열 번호: 38의 서열에 대하여 총 1개, 2개의 또는 이보다 더 적은 아미노산 치환, 결실, 또는 삽입을 갖는 VH-CDR1, 서열 번호: 39, 42 또는 43의 서열과 동일하거나 서열 번호: 39, 42 또는 43의 서열에 대하여 총 1개, 2개의 또는 이보다 더 적은 아미노산 치환, 결실, 또는 삽입을 갖는 VH-CDR2, 또는 서열 번호: 40, 44 내지 46 또는 47의 서열과 동일하거나 서열 번호: 40, 44 내지 46 또는 47의 서열에 대하여 총 1개, 2개의 또는 이보다 더 적은 아미노산 치환, 결실, 또는 삽입을 갖는 VH-CDR3을 포함한다. 또한, 본 발명은 이 LOX1-결합 단백질을 코딩하는 핵산, 이러한 핵산을 포함하는 벡터 및 이러한 핵산 및 벡터로 형질전환된 숙주 세포, 및 LOX1-결합 단백질의 제조 및 사용 방법을 제공한다.
추가의 양태에서, LOX1-결합 단백질은 1개, 2개, 또는 3개의 VL-CDR, 예컨대 서열 번호: 55 또는 59의 서열과 동일하거나 서열 번호: 55 또는 59의 서열에 대하여 총 1개, 2개의 또는 이보다 더 적은 아미노산 치환, 결실, 또는 삽입을 갖는 VL-CDR1, 서열 번호: 56 또는 60의 서열과 동일하거나 서열 번호: 56 또는 60의 서열에 대하여 총 1개, 2개의 또는 이보다 더 적은 아미노산 치환, 결실, 또는 삽입을 갖는 VL-CDR2, 또는 서열 번호: 57, 61 내지 63 또는 64의 서열과 동일하거나 서열 번호: 57, 61 내지 63 또는 64의 서열에 대하여 총 1개, 2개의 또는 이보다 더 적은 아미노산 치환, 결실, 또는 삽입을 갖는 VL-CDR3을 포함한다. 본 개시내용은 또한, LOX1-결합 단백질을 인코딩하는 핵산, 이들 핵산을 함유하는 벡터, 및 이들 핵산 및 벡터로 형질변환된 숙주 세포, 및 LOX1-결합 단백질의 제조 및 사용 방법을 제공한다.
일부 양태에서, LOX1-결합 단백질은 표 1에 기재된 바와 같은 CDR 세트: VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR3 및 VL-CDR3을 포함한다. 본 개시내용은 또한, LOX1-결합 단백질을 인코딩하는 핵산, 이들 핵산을 함유하는 벡터, 및 이들 핵산 및 벡터로 형질변환된 숙주 세포, 및 LOX1-결합 단백질의 제조 및 사용 방법을 제공한다.
일부 추가의 양태에서, LOX1-결합 단백질은 표 1에 개시된 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다. 또한, 본 발명은 이 LOX1-결합 단백질을 코딩하는 핵산, 이러한 핵산을 포함하는 벡터 및 이러한 핵산 및 벡터로 형질전환된 숙주 세포, 및 LOX1-결합 단백질의 제조 및 사용 방법을 제공한다.
일부 양태에서, 단리된 LOX1-결합 단백질은 G F D P E D HX1HX2HX3HX4HX5HX6 Q K F Q G(Gly Phe Asp Pro Glu Asp HX1 HX2 HX3 HX4 HX5 HX6Gln Lys Phe Gln Gly)(여기서, HX1은 Gly, Trp, Tyr, 또는 Phe이며; HX2는 Glu, Thr, Gln, Ser, Lys, 또는 Ala이고; HX3은 Thr, Tyr, Ile, 또는 Asn이며; HX4는 Ile, Ala, Arg, 또는 His이고; HX5는 Tyr, Val, Thr, Leu, 또는 Gln이며, HX6은 Ala, Asp, Gly, Ser, 또는 His임)(서열 번호: 71)의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR2를 포함한다.
추가의 양태에서, 단리된 LOX1-결합 단백질은 HX7 HX8 G HX9 HX10 HX11 HX12 G V R G W D Y Y Y G M D V(HX7 HX8Gly HX9 HX10 HX11 HX12Gly Val Arg Gly Trp Asp Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp)(여기서, HX7은 Pro, Ser, 또는 Val이며; HX8은 Asn, Thr, Trp, 또는 Asp이고; HX9는 Gln, Arg, 또는 Thr이며; HX10은 Gln 또는 His이고; HX11은 Gly 또는 Gln이며; HX12는 Lys 또는 Gly임)(서열 번호: 72)의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR3을 포함한다.
다른 양태에서, 단리된 LOX1-결합 단백질은 Q S Y D S LX1 LX2 LX3 LX4 LX5 LX6(Gln Ser Tyr Asp Ser LX1 LX2 LX3 LX4 LX5 LX6)(여기서, LX1은 Ser 또는 Met이며; LX2는 Leu, Tyr, 또는 His이고; LX3은 Ser 또는 Arg이며; LX4는 Gly, Ala이거나 아미노산이 부재하고; LX5는 Trp 또는 Phe이며; LX6은 Val, Gly, 또는 Ala임)(서열 번호: 73)의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR3을 포함한다.
일부 양태에서, 단리된 LOX1-결합 단백질은 하기: 중쇄 가변 영역(VH)-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, 및 경쇄 가변 영역(VL)-CDR1, VL-CDR2 및 VL-CDR3의 상보성 결정 영역(CDR)의 세트를 포함하며, 여기서, (a) VH-CDR1은 아미노산 서열: E L S M H(서열 번호: 1)를 포함하고; (b) VH-CDR2는 아미노산 서열: G F D P E D HX1 HX2 HX3 HX4 HX5 HX6 Q K F Q G(여기서, HX1은 G, W, Y 및 F로 이루어진 군으로부터 선택되며, HX2는 E, T, Q, K, A, 및 S로 이루어진 군으로부터 선택되고, HX3은 T, Y, I, 및 N으로 이루어진 군으로부터 선택되며, HX4는 I, A, R 및 H로 이루어진 군으로부터 선택되고, HX5는 Y, V, T, L 및 Q로 이루어진 군으로부터 선택되며, HX6은 A, D, G, S 및 H로 이루어진 군으로부터 선택됨)(서열 번호: 71)를 포함하고; (c) VH-CDR3은 아미노산 서열: HX7 HX8 G HX9 HX10 HX11 HX12 G V R G W D Y Y Y G M D V(여기서, HX7은 P, S 및 V로 이루어진 군으로부터 선택되며, HX8은 N, W, D, 및 T로 이루어진 군으로부터 선택되고, HX9는 Q, R 및 T로 이루어진 군으로부터 선택되며, HX10은 Q 및 H로 이루어진 군으로부터 선택되고, HX11은 G 및 Q로 이루어진 군으로부터 선택되며, HX12는 K 및 G로 이루어진 군으로부터 선택됨)(서열 번호: 72)를 포함하고; (d) VL-CDR1은 아미노산 서열: T G S S S N I G A G Y D V H(서열 번호: 30)를 포함하며; (e) VL-CDR2는 아미노산 서열: G N S N R P S(서열 번호: 31)을 포함하고; (f) VL-CDR3은 아미노산 서열: Q S Y D S LX1 LX2 LX3 LX4 LX5 LX6(여기서, LX1은 M 및 S로 이루어진 군으로부터 선택되며, LX2는 L, Y 및 H로 이루어진 군으로부터 선택되고, LX3은 S 및 R로 이루어진 군으로부터 선택되며, LX4는 A 및 G로 이루어진 군으로부터 선택되거나 누락되고(아미노산 없음), LX5는 W 및 F로 이루어진 군으로부터 선택되며, LX6은 V, G 및 A로 이루어진 군으로부터 선택됨)(서열 번호: 73)을 포함한다.
추가의 양태에서, 단리된 LOX1-결합 단백질은 G HX1 S HX2 HX3 HX4 HX5 HX6 HX7 HX8 HX9 HX10 D S V K G(Gly HX1 Ser HX2HX3HX4 HX5 HX6 HX7 HX8 HX9 HX10 Asp Ser Val Lys Gly)(여기서, HX1은 Ile 또는 Val이고; HX2는 Trp 또는 Leu이며; HX3은 Asn 또는 Gln이고; HX4는 Ser 또는 Glu이며; HX5는 Gly, Leu, 또는 Pro이고; HX6은 Ser, Tyr, 또는 Asp이며; HX7은 Ile, Thr, 또는 Arg이고; HX8은 Gly 또는 Tyr이며; HX9는 Tyr 또는 Met이고; HX10은 Ala 또는 Asp임)(서열 번호: 74)의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR2를 포함한다.
추가의 양태에서, 단리된 LOX1-결합 단백질은 E G HX11 W N Y D A HX12 D HX13(Glu Gly HX11 Trp Asn Tyr Asp Ala HX12 Asp HX13)(여기서, HX11은 Asn 또는 Ser이며; HX12는 Phe 또는 Leu이고; HX13은 Ile 또는 Val임)(서열 번호: 75)의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR3을 포함한다.
추가의 양태에서, 단리된 LOX1-결합 단백질은 T G T S LX1 D V G G Y N Y V S(Thr Gly Thr Ser LX1 Asp Val Gly Gly Tyr Asn Tyr Val Ser)(여기서, LX1은 Ser 또는 Asn임)(서열 번호: 76)의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR1을 포함한다.
추가의 양태에서, 단리된 LOX1-결합 단백질은 D V S LX2 R P S(Asp Val Ser X4 Arg Pro Ser)(여기서, LX2는 Asn 또는 Lys임)(서열 번호: 77)의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR2를 포함한다.
추가의 양태에서, 단리된 LOX1-결합 단백질은 LX3 LX4 LX5 LX6 LX7 LX8 S T N W V(LX3 LX4 LX5 LX6 LX7 LX8 Ser Thr Asn Trp Val)(여기서, LX3은 Ser, Leu, Met, 또는 Ala이며; LX4는 Ser, Gly, 또는 Gln이고; LX5는 Tyr, Arg, Ser, 또는 Gly이며; LX6은 Thr 또는 Met이고; LX7은 Ser, Trp, Gly, 또는 Val이며; LX8은 Ser 또는 Arg임)(서열 번호: 78)의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR3을 포함한다.
일부 양태에서, 단리된 LOX1-결합 단백질은 하기: 중쇄 가변 영역(VH)-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, 및 경쇄 가변 영역(VL)-CDR1, VL-CDR2 및 VL-CDR3의 상보성 결정 영역(CDR)의 세트를 포함하며, 여기서, (a) VH-CDR1은 아미노산 서열: D Y A M H(서열 번호: 38)를 포함하고; (b) VH-CDR2는 아미노산 서열: G HX1 S HX2 HX3 HX4 HX5 HX6 HX7 HX8 HX9 HX10 D S V K G(여기서, HX1은 I 및 V로 이루어진 군으로부터 선택되며, HX2는 W 및 L로 이루어진 군으로부터 선택되고, HX3은 N 및 Q로 이루어진 군으로부터 선택되며, HX4는 S 및 E로 이루어진 군으로부터 선택되고, HX5는 G, L 및 P로 이루어진 군으로부터 선택되며, HX6은 S, Y 및 D로 이루어진 군으로부터 선택되고, HX7은 I, T 및 R로 이루어진 군으로부터 선택되며, HX8은 G 및 Y로 이루어진 군으로부터 선택되고, HX9는 M 및 Y로 이루어진 군으로부터 선택되며, HX10은 A 및 D로 이루어진 군으로부터 선택됨)(서열 번호: 74)를 포함하며; (c) VH-CDR3은 아미노산 서열: E G HX11 W N Y D A HX12 D HX13(여기서, HX11은 N 및 S로 이루어진 군으로부터 선택되며, HX12는 F 및 L로 이루어진 군으로부터 선택되고, HX13은 I 및 V로 이루어진 군으로부터 선택됨)(서열 번호: 75)을 포함하고; (d) VL-CDR1은 아미노산 서열: T G T S LX1 D V G G Y N Y V S(여기서, LX1은 N 및 S로 이루어진 군으로부터 선택됨)(서열 번호: 76)을 포함하며; (e) VL-CDR2는 아미노산 서열: D V S LX2 R P S(여기서, LX2는 N 및 K로 이루어진 군으로부터 선택됨)(서열 번호: 77)을 포함하고; (f) VL-CDR3은 아미노산 서열: LX3 LX4 LX5 LX6 LX7 LX8 S T N W V(여기서, LX3은 L, M, A 및 S로 이루어진 군으로부터 선택되며, LX4는 S, Q 및 G로 이루어진 군으로부터 선택되고, LX5는 Y, S, G 및 R로 이루어진 군으로부터 선택되며, LX6은 T 및 M으로 이루어진 군으로부터 선택되고, LX7은 S, W, G 및 V로 이루어진 군으로부터 선택되고, LX8은 S 및 R로 이루어진 군으로부터 선택됨)(서열 번호: 78)를 포함한다.
일부 양태에서, 본원에 개시된 LOX1-결합 단백질의 CDR의 세트는 항체 프레임워크 영역 또는 당업계에 공지된 다른 단백질 스캐폴드(scaffold) 내에 제공된다. 예시적인 항체 프레임워크 영역은 하기를 포함한다: 생식 세포 계열 프레임워크 영역, 예컨대 중쇄의 항체 프레임워크 영역에 있어서 VH1-24(DP-5), JH6, VH3-09(DP-31), 및 JH3, 및 경쇄의 항체 프레임워크 영역에 있어서 Vλ1e(DPL-8), Vλ2a2(DPL-11), 및 JL3 및/또는 당업자에게 잘 알려진 임의의 적합한 프레임워크 영역.
일부 양태에서, LOX1-결합 단백질은 생식 세포 계열 프레임워크인 중쇄 가변 영역(VH) 및/도는 경쇄 가변 영역(VL)으로부터의 하나 이상의 프레임워크 영역을 포함한다. 중쇄 도메인의 프레임워크 영역은 VH1-24(DP-5), JH6, VH3-09(DP-31), JH3 프레임워크 및/또는 당업계에 잘 알려진 임의의 적합한 프레임워크 영역 또는 단백질 스캐폴드로부터 선택될 수 있다. 경쇄의 프레임워크 영역은 Vλ1e(DPL-8), Vλ2a2(DPL-11), 및 JL3 프레임워크, 및/또는 당업계에 잘 알려진 임의의 적합한 프레임워크 영역 또는 단백질 스캐폴드로부터 선택될 수 있다. 하나 이상의 CDR이 본원에 개시된 LOX1-결합 단백질(예를 들어, 표 1에 개시된 LOX1-결합 단백질)로부터 취해질 수 있고, 이는 적합한 프레임워크 및/또는 단백질 스캐폴드 내에 포함될 수 있다.
추가의 양태에서, 본 발명은 각각 서열 번호: 4 및 서열 번호: 33의 VH 및 VL을 포함하는 항체와 동일한 LOX1 에피토프에 결합하는 단리된 LOX1-결합 단백질을 제공한다.
다른 양태에서, 본원에 개시된 방법은 LOX1에 결합하기 위해, SEQ ID NO:4의 VH 서열 및 SEQ ID NO:33의 VL 서열을 포함하는 항체와 경쟁하거나 교차-경쟁하는 LOX1-결합 단백질(예를 들어 항체, 예컨대 전장 LOX1-항체, LOX1-결합 항체 단편, 및 이들의 변이체 및 유도체)을 포함한다. 특정 양태에서, LOX1-결합 단백질은 LOX1에 결합하기 위해, SEQ ID NO:4의 VH 및 SEQ ID NO:33의 VL을 포함하는 항체를 경쟁적으로 저해할 수 있다.
또한, SEQ ID NO:29의 VH 및 SEQ ID NO:33의 VL을 포함하는 LOX1-결합 단백질(예를 들어 LOX1 항체 또는 이의 단편)보다 더 큰 친화도로 LOX1에 결합할 수 있는 LOX1-결합 단백질, 예컨대 LOX1 항체(예를 들어, 전장 항-LOX1 항체, LOX1-결합 항체 단편 및 이들의 변이체 및 유도체)를 포함하는 방법이 제공된다. 본 개시내용은 또한, LOX1-결합 단백질을 인코딩하는 핵산, 이들 핵산을 함유하는 벡터, 및 이들 핵산 및 벡터로 형질변환된 숙주 세포, 및 LOX1-결합 단백질의 제조 및 사용 방법을 제공한다.
추가의 양태에서, 본 방법은 각각 SEQ ID NO:41 및 SEQ ID NO:58의 VH 및 VL을 포함하는 항체와 동일한 LOX1 에피토프에 결합하는 단리된 LOX1-결합 단백질을 포함한다.
다른 양태에서, 본 방법은 LOX1에 결합하기 위해, SEQ ID NO:41의 VH 서열 및 SEQ ID NO:58의 VL 서열을 포함하는 항체와 경쟁하거나 교차-경쟁하는 LOX1-결합 단백질(예를 들어 항체, 예컨대 전장 LOX1-항체 및 LX1-결합 항체 단편, 및 이들의 변이체 및 유도체)을 포함한다. 특정 양태에서, LOX1-결합 단백질은 LOX1에 결합하기 위해, SEQ ID NO:41의 VH 및 SEQ ID NO:58의 VL을 포함하는 항체를 경쟁적으로 저해할 수 있다.
서열 번호: 54의 VH 및 서열 번호: 70의 VL을 포함하는 전장 항체보다 더 큰 친화도로 LOX1에 결합할 수 있는 LOX1-결합 단백질, 예컨대 LOX1 항체(예를 들어, 전장 항-LOX1 항체 및 LX1-결합 항체 단편, 및 이들의 변이체 및 유도체)를 포함하는 방법이 또한 제공된다. 또한, 본 발명은 이 LOX1-결합 단백질을 코딩하는 핵산, 이러한 핵산을 포함하는 벡터 및 이러한 핵산 및 벡터로 형질전환된 숙주 세포, 및 LOX1-결합 단백질의 제조 및 사용 방법을 제공한다.
일부 양태에서, 본원에서 고찰된 방법에 포함된 항-LOX1 항체는 쥐과 항체, 인간 항체, 인간화 항체, 키메라 항체, 모노클로날 항체, 폴리클로날 항체, 재조합 항체, 2특이성 항체, 다중특이성 항체, 또는 이들의 임의의 조합이다. 일부 양태에서, 항-LOX1 항체는 Fv 단편, Fab 단편, F(ab')2 단편, Fab' 단편, dsFv 단편, scFv 단편, 또는 sc(Fv)2 단편이다.
본 발명은 종 전체에 걸쳐 LOX1 분자에 결합할 수 있는 LOX1-결합 단백질(예를 들어, 단리된 항-LOX1 항체, 예컨대 전장 LOX1-항체, 이의 LOX1-결합 항체 단편, 및 변이체 및 유도체)을 포함하는 방법을 포함한다. 일부 양태에서, LOX1-결합 단백질은 인간 LOX1(hLOX1) 및 시노몰구스 LOX1(cynoLOX1)에 결합한다. 추가의 양태에서, LOX1-결합 단백질은 인간 LOX1(hLOX1) 및 토끼 LOX1에 결합한다. 추가의 양태에서, LOX1-결합 단백질은 hLOX1, cynoLOX1 및 토끼 LOX1에 결합한다. 본원에 제공된 소정의 양태에서, LOX1-결합 단백질(예를 들어, 항-LOX1 항체)은 특이적으로 LOX1(예를 들어, hLOX1, cynoLOX1 및/또는 토끼 LOX1)에 결합하며, 하기 중 하나 이상에는 결합하지 않는다: CLEC-7A, CLEC-1A, CLEC-4L, CLEC-1B, SR-A1 및/또는 SR-B3. 예를 들어, 국제 특허 출원 PCT/EP2015/072644를 참조한다.
일부 양태에서, LOX1-결합 단백질(예를 들어, 단리된 항-LOX1 항체 또는 이의)은 인간 IgG1 TM 돌연변이 중쇄를 추가로 포함하며, 여기서, 중쇄 가변 영역(VH)은 서열 번호: 4, 19 내지 28 또는 29의 기준 아미노산 서열에 대하여 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 양태에서, LOX1-결합 단백질(예를 들어, 단리된 항-LOX1 항체 또는 이의)은 인간 IgG1 TM 돌연변이 중쇄를 추가로 포함하며, 여기서, 중쇄 가변 영역(VH)은 서열 번호: 41, 48 내지 53 또는 54의 기준 아미노산 서열에 대하여 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 양태에서, LOX1-결합 단백질(예를 들어, 전장 LOX1-항체, 이의 LOX1-결합 항체 단편, 및 변이체 및 유도체)은 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)에 더하여 그리고 임의로 중쇄 불변 영역 또는 이의 단편, 경쇄 불변 영역 또는 이의 단편을 포함한다. 소정의 양태에서, 경쇄 불변 영역은 카파 람다 경쇄 불변 영역, 예를 들어, 인간 카파 불변 영역 또는 인간 람다 불변 영역이다. 특정한 양태에서, 경쇄 불변 영역은 인간 카파 불변 영역이다.
추가의 양태에서, LOX1-결합 단백질(예를 들어, 전장 LOX1-항체, 이의 LOX1-결합 항체 단편, 및 변이체 및 유도체)은 인간 카파 불변 영역을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 가지며, 예를 들어, VL은 서열 번호: 33, 36, 또는 37의 기준 아미노산 서열에 대하여 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VL 아미노산 서열을 포함한다. 소정의 양태에서, 본 발명은 인간 IgG1 TM 돌연변이 중쇄 및 인간 카파 경쇄를 추가로 포함하는 LOX1-결합 단백질(예를 들어, 항-LOX1 항체 또는 이의 단편)을 제공하며, 여기서, 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)은 각각 하기를 포함한다: 서열 번호: 4의 서열 및 서열 번호: 33의 서열; 서열 번호: 29의 서열 및 서열 번호: 33의 서열; 서열 번호: 41의 서열 및 서열 번호: 58의 서열; 또는 서열 번호: 54의 서열 및 서열 번호: 70의 서열.
추가의 양태에서, LOX1-결합 단백질(예를 들어, 전장 LOX1-항체, 이의 LOX1-결합 항체 단편, 및 변이체 및 유도체)은 인간 카파 불변 영역을 추가로 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 가지며, 예를 들어, 경쇄는 서열 번호: 58, 65 내지 69 또는 70의 기준 아미노산 서열에 대하여 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 경쇄 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 소정의 양태에서, 본 발명은 인간 IgG1 TM 돌연변이 중쇄 및 인간 카파 경쇄를 추가로 포함하는 LOX1-결합 단백질(예를 들어, 항-LOX1 항체 또는 이의 단편)을 제공하며, 여기서, 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)은 각각 하기를 포함한다: 서열 번호: 41의 서열 및 서열 번호: 58의 서열, 서열 번호: 48의 서열 및 서열 번호: 65의 서열, 서열 번호: 49의 서열 및 서열 번호: 66의 서열, 서열 번호: 50의 서열 및 서열 번호: 67의 서열, 또는 서열 번호: 53의 서열 및 서열 번호: 58의 서열.
일부 양태에서, 본 발명은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 1가지의 특성을 갖는 단리된 LOX1-결합 단백질, 예컨대 항-LOX1 항체(예를 들어, 전장 LOX1-항체, 이의 LOX1-결합 항체 단편, 및 변이체 및 유도체)을 포함하는 방법에 관한 것이다: (a) 임의의 적합한 분석법에 의해 결정할 때 LOX1에의 oxLDL, C-반응성 단백질(CRP) 및/또는 어드밴스드 당화 최종 산물(AGE)의 결합을 감소시키거나 저해함; (b) 임의의 적합한 분석법에 의해 결정할 때 세포 표면 LOX1을 발현하는 내피 세포에서의 RhoA/Rac1, 일산화질소(NO), p38MAPK, 단백질 키나아제 B 및 C, ERK1/2, 및/또는 NFκB 신호전달을 감소시키거나 저해함; (c) 본원에 개시된 분석법을 포함하는 임의의 적합한 분석법에 의해 결정할 때 세포 표면 LOX1을 발현하는 내피 세포에서의 카스파아제-8, 카스파아제-9, 및/또는 BAX 활성을 감소시키거나 저해함; (d) 임의의 적합한 분석법에 의해 결정할 때 단일 뉴클레오타이드 다형성 K167N을 갖는 LOX1에 결합함; (e) 임의의 적합한 분석법에 의해 결정할 때 oxLDL 내재화를 감소시키거나 저해함; (f) 임의의 적합한 분석법에 의해 결정할 때 oxLDL-유도된 LOX1 신호전달을 감소시키거나 저해함; (g) 비아코어 또는 키넥사에 의해 결정할 때 약 150 pM 내지 약 600 pM(예를 들어, 약 400 pM)의 해리 상수(KD)로 LOX1에 결합함; (h) 비아코어에 의해 결정할 때 약 1 x 105 M-1 s-1 내지 약 6 x 106 M-1 s-1(예를 들어, 약 5 x105 M-1 s-1)의 Kon 속도로 LOX1에 결합함; 및 (i) 비아코어에 의해 결정할 때 약 1 x 10-4 s-1 내지 약 3 x 10-4 s-1(예를 들어, 약 2.3 x 10-4 s-1)의 Koff 속도로 LOX1에 결합함.
소정의 실시형태에서, 상기 식별된 특성들 외에도 또는 특성들에 대한 대안으로서, LOX1-결합 단백질은 하기의 특성들로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 특성을 가진다: (a) CSC를 사멸시키는 특성; (b) CSC를 제거하는 특성; (c) CSC를 저해하는 특성; (d) CSC 증식의 진행 및/또는 진행 속도를 감소시키는 특성; (e) CSC와 연관된 질병 상태의 진행 및/또는 진행 속도를 감소시키는 특성; (f) CSC의 자가 재생 및 팽창 능력을 감소시키는 특성; 및/또는 (g) CSC 분화를 유도하는 특성.
소정의 양태에서, 예를 들어, 키넥사® 또는 비아코어®에 의해 측정할 때, LOX1-결합 단백질, 예컨대 항-LOX1 항체(예를 들어, 전장 LOX1-항체, 이의 LOX1-결합 항체 단편, 및 변이체 및 유도체)는 LOX1, 예를 들어, 인간 LOX1(hLOX1) 및/또는 시노몰구스 LOX1(cynoLOX1), 및 이의 항원성 단편에 10-6 M 미만, 또는 10-7 M 미만, 또는 10-8 M 미만, 또는 10-9 M 미만, 또는 10-10 M 미만, 또는 10-11 M, 10-12 M 미만, 10-13 M 미만, 10-14 M 미만, 또는 10-15 M 미만의 해리 상수 또는 KD로 특이적으로 결합할 수 있다. 일 양태에서, 비아코어®에 의해 측정할 때, 항-LOX1 항체는 hLOX1 및 cynoLOX1에 약 1 x 10-8 M 미만 내지 약 1 x 10-10M의 KD로 결합할 수 있다.
또 다른 양태에서, LOX1-결합 단백질, 예컨대 항-LOX1 항체(예를 들어, 전장 LOX1-항체, 이의 LOX1-결합 항체 단편, 및 변이체 및 유도체)는 LOX1에 1x10-3 s-1 미만, 또는 2x10-3 s-1 미만의 Koff로 결합할 수 있다. 다른 양태에서, 예를 들어, 키넥사® 또는 비아코어®에 의해 측정할 때, LOX1-결합 단백질은 LOX1에 10-3 s-1 미만, 5x10-3 s-1 미만, 10-4 s-1 미만, 5x10-4 s-1 미만, 10-5 s-1 미만, 5x10-5 s-1 미만, 10-6 s-1 미만, 5x10-6 s-1 미만, 5x10-7 s-1 미만 미만, 10-8 s-1 미만, 5x10-8 s-1 미만, 10-9 s-1 미만, 5x10-9 s-1 미만, 또는 10-10 s-1 미만의 Koff로 결합한다. 일 양태에서, 비아코어®에 의해 측정할 때, 항-LOX1 항체는 hLOX1 및 cynLOX1에 1 내지 10x10-4 s-1의 Koff로 결합할 수 있다.
또 다른 양태에서, 예를 들어, 키넥사® 또는 비아코어®에 의해 측정할 때, LOX1-결합 단백질, 예컨대 항-LOX1 항체(예를 들어, 전장 LOX1-항체, 이의 LOX1-결합 항체 단편, 및 변이체 및 유도체)는 LOX1, 예를 들어, 인간 LOX1(hLOX1) 및/또는 시노몰구스 LOX1에 적어도 105 M-1 s-1, 적어도 5x105 M-1 s-1, 적어도 106 M-1 s-1, 적어도 5x106 M-1 s-1, 적어도 107 M-1 s-1, 적어도 5x107 M-1 s-1, 또는 적어도 108 M-1 s-1, 또는 적어도 109 M-1 s-1의 결합 속도 상수 또는 kon 속도로 결합할 수 있다. 일 양태에서, 비아코어®에 의해 측정할 때, 항-LOX1 항체는 hLOX1 및 cynLOX1에 약 1x105 M-1 s-1 내지 약 20x105 M-1 s-1의 kon 속도로로 결합할 수 있다.
상기에 나타낸 바와 같이, LOX1에 결합하는 VH 및/또는 VL 아미노산을 포함하는 LOX1-결합 단백질(예를 들어, 전장 LOX1-항체, 이의 LOX1-결합 항체 단편, 및 변이체 및 유도체)은 본원에 개시된 서열(예를 들어, 표 1 참조)에 대하여 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 가질 수 있다. 일부 양태에서, LOX1에 결합하는 VH 및/또는 VL 아미노산 서열(들)은 본원에 개시된 서열과 비교하여 15개 이하의(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 또는 15개의) 아미노산 부가, 치환(예를 들어, 보존적 치환) 또는 결실을 포함한다. 일부 양태에서, LOX1에 결합하는 VH 및/또는 VL 아미노산 서열(들)은 본원에 개시된 서열과 비교하여 8개 이하의(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8개의) 아미노산 부가, 치환(예를 들어, 보존적 치환) 또는 결실을 포함한다. 추가의 양태에서, LOX1에 결합하는 VH 및/또는 VL 아미노산 서열은 본원에 개시된 서열과 비교하여 5개 이하의(예를 들어, 1, 2, 3, 4 또는 5개의) 아미노산 부가, 치환(예를 들어, 보존적 치환) 또는 결실을 포함한다. 소정의 VH 영역 또는 VL 영역에 대하여 특정한 유사성 퍼센트를 갖거나, 1개 이상의 치환, 결실 및/또는 삽입(예를 들어, 보존적 치환)을 갖는 VH 및 VL 영역을 포함하는 LOX1-결합 단백질(예를 들어, 항-LOX1 항체 또는 이의 단편)은 본원에 개시된 VH 및/또는 VL 영역을 코딩하는 핵산 분자의 돌연변이 유발(예를 들어, 부위 지정(site-directed) 또는 PCR-매개 돌연변이 유발), 이어서 LOX1에의 결합에 대한 상기 코딩된 변경 항체의 시험 및 임의로, 본원에 개시된 기능 분석법 또는 기능의 유지를 시험하도록 일상적으로 변경될 수 있는 당업계에 공지된 분석법을 이용한 기능의 유지에 대한 시험에 의해 수득될 수 있다.
LOX1에 대한 LOX1-결합 단백질, 예컨대 항-LOX1 항체(예를 들어, 전장 LOX1-항체, 이의 LOX1-결합 항체 단편, 및 변이체 및 유도체)의 친화도 또는 친화력은 당업계에 공지된 임의의 적합한 방법, 예를 들어, 유세포 분석법, 효소-결합된 면역흡착 분석법(ELISA), 또는 방사성면역검정법(RIA), 또는 동역학적 방법(예를 들어, 키넥사® 또는 비아코어® 분석)을 이용하여 실험적으로 결정될 수 있다. 직접적 결합 분석법과, 경쟁적 결합 분석 포맷이 쉽게 이용될 수 있다(예를 들어, 문헌[Berzofsky et al., "Antibody-Antigen Interactions," In Fundamental Immunology, Paul, W. E., Ed., Raven Press: New York, N.Y.(1984)]; 문헌[Kuby, Immunology, W. H. Freeman and Company: New York, N.Y.(1992)]; 및 본원에 설명된 방법 참조). 특정 항체-항원 상호작용의 측정된 친화도는 상이한 조건들(예를 들어, 염 농도, pH, 온도) 하에 측정될 경우, 달라질 수 있다. 따라서, 친화도 및 다른 LOX1-결합 파라미터(예를 들어, KD 또는 Kd, Kon, Koff)의 측정은 당업계에 공지된 바와 같은 표준화된 완충제와, LOX1-결합 단백질 및 LOX1의 표준화된 용액을 이용하여 이루어진다.
본 발명은 본원에 개시된 LOX1-결합 단백질, 예컨대 항-LOX1 항체(예를 들어, 전장 LOX1-항체, 이의 LOX1-결합 항체 단편, 및 변이체 및 유도체)(예를 들어, 표 1 참조)로서, 항체가 이종성 제제(heterologous agent)에 컨쥬게이션된 것을 추가로 제공한다. 소정의 양태에서, 상기 제제는 항미생물제, 치료제, 프로드러그, 펩타이드, 단백질, 효소, 지질, 생물학적 응답 조절제, 의약품, 림포카인, 이종 항체 또는 항체 단편, 검출가능한 표지체, 또는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)이다. 헤테로컨쥬게이트(heteroconjugate) LOX1-결합 단백질은 본원의 다른 곳에서 더 상세하게 고찰된다. 헤테로컨쥬게이트 LOX1-결합 단백질은 국제 특허 출원 PCT/EP2015/072644에 보다 상세히 고찰된 바와 같이 제조될 수 있으며, 상기 출원은 그 전체가 원용에 의해 본 명세서에 포함된다.
소정의 양태에서, LOX1-결합 단백질은 항-LOX1 항체가 아니다. 단백질 표적에 고 친화도로 결합하는 비-항체 폴리펩타이드의 확인 및 생성을 위한 다양한 방법이 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, 문헌[Skerra, Curr. Opin. Biotech. 18:295-304(2007)], 문헌[Hosse et al., Protein Science 15:14-27(2006)], 문헌[Gill et al., Curr. Opin. Biotechnol. 17:653-658(2006)], 문헌[Nygren, FEBS J. 275:2668-76(2008)], 및 문헌[Skerra, FEBS J. 275:2677-83(2008)]을 참조하며, 이들 각각은 그 전체가 원용에 의해 본 명세서에 포함된다. 소정의 양태에서, 파지 디스플레이 기술을 이용하여 LOX1-결합 단백질을 확인/생성할 수 있다. 소정의 양태에서, 폴리펩타이드는 안키린, 단백질 A, 리포칼린, 피브로넥틴 도메인, 안키린 콘센서스 반복 도메인, 및 티오레독신으로 이루어진 군으로부터 선택되는 유형의 단백질 스캐폴드를 포함한다.
소정의 양태에서, 본 방법은 본원에 개시된 하나 이상의 LOX1-결합 단백질(예를 들어, 표 1 참조)과 동일한 에피토프에 결합하는 LOX1 저해제(예를 들어 항체, 예컨대 전장 항-LOX1 항체, 이의 LOX1-결합 항체 단편, 및 변이체 및 유도체를 포함하는 LOX1-결합 단백질)을 포함할 수 있다. 본원에 사용되는 바와 같이, "에피토프"라는 용어는 본 발명의 항체에 결합할 수 있는 표적 단백질 결정자를 나타낸다. 에피토프는 일반적으로 아미노산 또는 당 측쇄와 같은 분자의 화학적 활성 표면 그룹핑으로 이루어지며, 일반적으로 특정한 3차원 구조 특성과, 특정한 전하 특성을 갖는다. 입체형태적 및 비-입체형태적 에피토프는 전자에의 결합성이 변성 용매의 존재 하에서 상실되지만 후자의 것은 그렇지 않다는 점에서 구별된다. 그러한 항체는 표준 항원-결합 또는 활성 분석법에서 서열 번호: 4의 VH 서열 및 서열 번호: 33의 VL 서열을 포함하는 항체, 및/또는 서열 번호: 41의 VH 서열 및 서열 번호: 58의 VL 서열을 포함하는 항체와 교차 경쟁하는(예를 들어, 상기 항체의 결합을 통계학적으로 유의한 방식으로 경쟁적으로 저해하는) 그의 능력을 기반으로 하여 확인될 수 있다.
또한, LOX1 저해제를 포함하는 본 방법은 본원에 개시된 단리된 LOX1-결합 단백질(예를 들어, 표 1 참조)과 동일한 에피토프에 결합하는 LOX1-결합 단백질, 예컨대 항-LOX1 항체(예를 들어, 전장 LOX1-항체, 이의 LOX1-결합 항체 단편, 및 변이체 및 유도체)를 포함한다.
시험 LOX1-결합 단백질이, 예를 들어, 서열 번호: 4의 VH 서열 및 서열 번호: 33의 VL 서열을 포함하는 항체 및/또는 서열 번호: 41의 VH 서열 및 서열 번호: 58의 VL 서열을 포함하는 항체의 결합을 저해하는 능력은 상기 시험 LOX1-결합 단백질이 LOX1에의 결합에 대하여 그 항체와 경쟁할 수 있고; 그러한 LOX1-결합 단백질은 비제한적 이론에 따르면 이것이 경쟁하는 LOX1-결합 단백질(예를 들어, 항-LOX1 항체, 예컨대 전장 항-LOX1 항체, 이의 LOX1-결합 항체 단편, 및 변이체 및 유도체)과 동일하거나 관련된(예를 들어, 구조적으로 유사하거나 공간적으로 근접한) LOX1 상의 에피토프에 결합할 수 있음을 입증한다. 일 양태에서, LOX1-결합 단백질은 서열 번호: 4의 VH 서열 및 서열 번호: 33의 VL 서열을 포함하는 항체와 동일한 LOX1 상의 에피토프에 결합한다. 또 다른 양태에서, LOX1-결합 단백질은 서열 번호: 41의 VH 서열 및 서열 번호: 58의 VL 서열을 포함하는 항체와 동일한 LOX1 상의 에피토프에 결합한다.
일 양태에서, 본 발명은 LOX1에의 결합에 대하여 서열 번호: 4의 VH 서열 및 서열 번호: 33의 VL 서열을 포함하는 항체와 경쟁하는 LOX1-결합 단백질(예를 들어 항체, 예컨대 전장 LOX1-항체, LOX1-결합 항체 단편, 및 이들의 변이체 및 유도체)을 제공한다. 또 다른 양태에서, 본 발명은 LOX1에의 결합에 대하여 서열 번호: 41의 VH 서열 및 서열 번호: 58의 VL 서열을 포함하는 항체와 경쟁하는 LOX1-결합 단백질(예를 들어 항체, 예컨대 전장 LOX1-항체, LOX1-결합 항체 단편, 및 이들의 변이체 및 유도체)을 제공한다.
다른 실시형태에서, 저해제는 적어도 일부의 LOX1 mRNA에 상보적인 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 안티센스 분자일 수 있다. 일부 실시형태에서, 안티센스 분자는 세포에서 mRNA의 번역을 저해하는 방법에 사용하기에 적합하다. 안티센스 분자는 DNA, RNA, 또는 DNA 및 RNA 둘 다, 뿐만 아니라 화학적으로 변형된 핵산을 포함할 수 있다. 나아가 일부 실시형태에서, 안티센스 분자는 단일 가닥 또는 이중 가닥일 수 있다. 안티센스 분자는 약 10개 내지 약 500개의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있고, 일부 실시형태에서 예를 들어, 약 11개 내지 약 200개 뉴클레오타이드, 약 12개 내지 약 100개 뉴클레오타이드, 약 13개 내지 약 75개 뉴클레오타이드, 약 14개 내지 약 50개 뉴클레오타이드, 약 15개 내지 약 40개 뉴클레오타이드, 약 16개 내지 약 30개 뉴클레오타이드, 또는 약 17개 내지 약 25개 뉴클레오타이드 범위의 길이를 가질 수 있다. 당업자는, 이들 범위가 예시적인 실시형태를 나타냄을 이해할 것이다.
일부 실시형태에서, 저해제는 LOX1의 발현을 감소시키거나 저해하는 siRNA 분자를 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, siRNA 분자는, LOX1 mRNA에 혼성화할 수 있는 서열을 포함하는 단일 가닥 또는 이중 가닥 siRNA 분자일 수 있고, 단백질의 발현을 감소시키거나 저해하는 RNA 간섭 또는 또 다른 안티센스 메커니즘을 유도할 수 있다. siRNA 분자는, 이러한 siRNA 분자가 RNA 간섭을 유도하여 LOX1 단백질의 발현을 감소시키거나 저해할 수 있게 하는 임의의 서열일 수 있다. 일부 실시형태에서, siRNA 분자는 10 내지 100, 12 내지 80, 14 내지 60, 16 내지 50, 17 내지 40의 길이를 가질 수 있다. 적합하게는, siRNA는 18개 내지 30개 뉴클레오타이드 범위의 길이를 가지고, 소정의 실시형태에서는 약 18개 내지 약 26개 뉴클레오타이드를 가진다.
저해성 핵산 분자를 포함하는 실시형태들에서, 이러한 저해제는 엄격한 결합 조건 하에 표적 LOX1 핵산 서열에 결합할 수 있다. "엄격한 조건", "엄격한 결합 조건" 또는 "엄격한 혼성화 조건"이라는 용어는, 폴리뉴클레오타이드가 다른 서열들보다 표적 서열에 검출 가능하게 더 큰 정도로(예를 들어 백그라운드보다 적어도 2배로) 혼성화할 조건을 지칭한다. 엄격한 조건의 비제한적인 일례로는, 37℃에서 50% 포름아미드, 1 M NaCl, 1% SDS에서의 혼성화 및 60℃ 내지 65℃에서 0.1x SSC에서의 세척이 수행되는 조건이 있다.
LOX1의 폴리뉴클레오타이드 서열이 주어지면, 저해성 핵산 분자는 모티프를사용하여 디자인되고, 당업계의 표준 기술을 사용하여 저해 활성에 효과적인 것으로 예측될 수 있는 영역으로 표적화될 수 있다.
대안적으로 또는 추가로, LOX1의 활성을 확인하는 데 적합하고 당업자에게 이용 가능한 임의의 추가의 방법이 사용될 수 있다. 상기에서 고찰된 바와 같이, 본원에 기재된 다양한 양태들 및 실시형태들에서 유용한 저해제는 LOX1의 활성을 대조군과 비교하여, 10% 이상, 20% 이상, 30% 이상, 40% 이상, 50% 이상, 60% 이상, 70% 이상, 보다 바람직하게는 80% 이상, 90% 이상, 91% 이상, 92% 이상, 93% 이상, 94% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상 또는 99%이상만큼 저해할 수 있다. 특정 실시형태에서, 저해제는 LOX1의 활성을 50% 이상, 60% 이상 또는 70% 이상만큼 저해하기에 효과적이다. 다른 실시형태에서, 저해제는 LOX1의 활성을 적어도 85% 내지 약 100%, 적어도 90% 내지 약 100%, 적어도 95% 내지 약 100%, 또는 약 100%만큼 저해할 수 있다.
실시형태들에서, 저해제는 종양 질병 및/또는 암의 치료 또는 예방에 적합한 하나 이상의 추가 활성 제제를 포함하는 조성물에서 조합될 수 있다. 당업계에서 일반적으로 공지된 화학치료제를 포함하여 이러한 활성 화합물의 일부 비제한적인 예로는, 예를 들어, 겜시타빈(Gemzar®), 카페시타빈(Xeloda®), Doxil®, 시타라빈, 덱사메타손, 이리노테칸(Camptosar®), 옥살리플라틴(Eloxatin®), 알부민-결합 파클리탁셀(Abraxane®), 테모졸로마이드, 아드리아마이신, 독소루비신, 에피루비신, 5-플루오로우라실, 시토신 아라비노시드("Ara-C"), 사이클로포스파미드, 티오테파, 부술판, 시톡신, 탁소이드(예를 들어, 파클리탁셀), 톡소테레, 메토트렉세이트, 시스플라틴, 멜팔란, 빈블라스틴, 블레오마이신, 에토포시드, 이포스파미드, 미토마이신 C, 미톡산트론, 빈크리스틴, 비노렐빈, 카르보플라틴, 테니포시드, 다우노마이신, 카미노마이신, 아미노프테린, 닥티노마이신, 미토마이신, 멜팔란 및 다른 관련된 질소 머스타드, 및 종양에서의 호르몬 작용을 조절하거나 저해하는 작용을 하는 호르몬 제제, 예컨대 타목시펜 및 오나프리스톤 등이 있다.
C. 약제학적 조성물 및 제형
일부 양태에서, 본 개시내용은 약제학적 조성물을 제공한다. 이러한 약제학적 조성물은 LOX1 저해제, 또는 1개 초과의 LOX1 저해제들의 임의의 조합을 포함하는 조성물일 수 있다. 이러한 약제학적 조성물은 또한, 약제학적으로 허용 가능한 부형제를 포함하는 조성물일 수 있다. 소정의 양태에서, 본 개시내용의 약제학적 조성물은 약제로서 사용된다.
소정의 양태에서, 본원에 개시된 저해제는 약제학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 안정화제와 함께 약제학적 조성물로서 제형화될 수 있다. 소정의 양태에서, 이러한 약제학적 조성물은 당업계에 공지된 방법을 사용하여 하나 이상의 임의의 투여 경로를 통해 인간 또는 비-인간 동물에게 투여되기에 적합하다. 당업자가 이해하게 될 바와 같이, 투여 경로 및/또는 방식은 요망되는 결과에 따라 달라질 것이다. "약제학적으로 허용 가능한 담체"라는 용어는 활성 성분의 생물학적 활성의 효능을 방해하지 않는 하나 이상의 무독성 물질을 의미한다. 약제학적으로 허용 가능한 담체는 요망되거나 필요한 투여 경로, 용해성 및/또는 안정성에 적합하도록 선택될 수 있다.
생체내 투여에 사용되는 경우, 본 개시내용의 제형은 멸균되어야 한다. 본 개시내용의 제형은 멸균 여과, 방사선 등을 포함하여 다양한 멸균 방법에 의해 멸균될 수 있다. 일 양태에서, 제형은 예비멸균된 0.22-미크론 필터를 이용하여 필터-멸균된다. 주사용 멸균 조성물은 문헌["Remington: The Science & Practice of Pharmacy", 21st ed., Lippincott Williams & Wilkins,(2005)]에 기재된 바와 같이 통상적인 약제학적 관례에 따라 제형화될 수 있다.
이러한 양태의 실시형태들에서, 치료적 조성물은 특정 투여 경로, 예컨대 경구, 비내, 폐내, 국소(협측 및 설하 포함), 직장, 질내 및/또는 비경구 투여를 위해 제형화될 수 있다. 본원에 사용되는 바와 같이, "비경구 투여" 및 "비경구로 투여되는"이라는 표현은 통상 주사에 의한, 장(enteral) 및 국소 투여 이외의 투여 방식을 지칭하고, 비제한적으로 정맥내, 근육내, 동맥내, 척추강내, 피막내(intracapsular), 안와내(intraorbital), 심장내(intracardiac), 피내, 복강내, 경기관(transtracheal), 피하, 표피하(subcuticular), 관절내, 피막하(subcapsular), 지주막하(subarachnoid), 척수내, 경막외(epidural) 및 흉골내(intrasternal) 주사 및 주입을 포함한다. 국소 또는 경피 투여에 적합한 본 개시내용의 제형으로는, 분말, 시럽, 연고, 페이스트, 크림, 로션, 젤, 용액, 패치 및 흡입제가 있다. 저해제 및 다른 활성 물질은 멸균 조건 하에 약제학적으로 허용 가능한 담체 및 요구될 수 있는 임의의 보존제, 완충제 또는 분사제(propellant)와 함께 혼합될 수 있다(미국 특허 7,378,110; 7,258,873; 7,135,180; 미국 공개 2004-0042972; 및 2004-0042971).
제형은 통상적으로 단위 투약 형태로 제시될 수 있고, 약학 분야에서 공지된 임의의 방법에 의해 제조될 수 있다. 본 개시내용의 약제학적 조성물 내 활성 성분의 실제 투약 수준은, 환자에 유해하지 않으면서 특정 환자, 조성물 및 투여 방식에 대한 요망되는 치료 반응을 달성하기에 효과적인 활성 성분의 양(예를 들어, "치료적 유효량")을 수득하도록 변화될 수 있다. 선택된 투약 수준은 이용되는 특정 조성물의 활성, 투여 경로, 투여 시간, 이용되는 특정 화합물의 분비 속도, 치료 기간, 이용되는 특정 조성물과 조합하여 사용되는 다른 약물, 화합물 및/또는 물질, 치료를 받는 환자의 연령, 성별, 체중, 질환, 일반적인 건강 상태 및 과거의 병력, 및 의료 분야에 잘 공지된 유사한 인자들을 포함하여 다양한 약동학적 인자들에 따라 다를 것이다.
본 개시내용은 유사하게는, 진단 및 연구용으로 적합한 제형이 또한 제조될 수 있음을 고려한다. 이러한 제형 내 활성 제제의 농도, 뿐만 아니라 부형제의 존재 또는 부재는 특정 적용 및 의도되는 용도를 기반으로 선택될 수 있다.
D. 키트
본 개시내용의 또 다른 양태는 키트에 관한 것이다. 일 양태에서, 키트는 상기 기재된 바와 같은 임의의 저해제, 시약, 조성물 또는 약제학적 조성물, 및 적절한 용도 또는 투여에 관한 설명서 또는 표지(label)를 포함한다. 선택적으로, 키트는 또한, 운반 또는 사용을 용이하게 하기 위해 하나 이상의 용기 및/또는 주사기 또는 다른 장치를 포함할 수 있다. 본 개시내용은, 연구 검정법, 진단 검정법을 수행하고/거나 치료적 유효량을 투여하기 위한 구성성분들의 모든 또는 임의의 부분 집합이 키트에 담겨질 수 있음을 고려한다. 유사하게는, 키트는 예를 들어, 컨쥬게이트를 형성하기에 적합한 조건 하에 본 개시내용의 저해제와 치료용 또는 진단용 모이어티 사이에 공유 결합을 형성함으로써 컨쥬게이트를 제조하기 위한 설명서를 포함할 수 있다. 추가의 예로서, 본 개시내용의 치료 방법에 사용하기 위한 키트는 LOX1의 저해제(들)의 약제학적 제형을 함유하는 용액, 또는 하나 이상의 저해제의 동결된 조제물, 및 이를 필요로 하는 환자에게 조성물을 투여하고/거나 동결된 생성물을 재구성하기 위한 설명서를 포함할 수 있다.
본 개시내용은 또한, 완성되어 포장되고 표지된 약제학적 제품을 포함한다. 이러한 제조 물품은, 기밀하게 밀봉된 유리 바이얼 또는 다른 용기와 같은 적절한 통(vessel) 또는 용기 내에 적절한 단위 투약 형태를 포함한다. 비경구 투여에 적합한 투약 형태의 경우, 활성 성분은 멸균되고, 미립자-무함유 용액으로서 투여되기에 적합하다. 소정의 양태에서, 제형은 인간 또는 동물에게 정맥내 투여, 예컨대 정맥내 주입하기에 적합하다.
구체적인 양태에서, 본 개시내용의 제형은 단일 투여 바이얼 내에서 멸균 액체로서 제형화된다. 예시적인 용기로는, 바이얼, 병, 예비-충전된 주사기, IV 백, 블리트서 팩(blister pack)(하나 이상의 알약을 포함함) 등이 있으나, 이들로 한정되는 것은 아니다. 이러한 용기(들)에는, 약제학적 또는 생물학적 제품의 제조, 사용 또는 판매를 규제하는 정부 기관에 의해 처방된 형태의 주의사항이 선택적으로 부착될 수 있으며, 이러한 주의사항은 인간 진단 및/또는 투여에 대해 제조, 사용 또는 판매 기관에 의해 승인을 받았음을 반영한다.
임의의 약제학적 제품과 관련하여, 보관 및 수송 동안 제품의 안정성을 보호하기 위해 포장재 및 용기가 디자인된다. 나아가, 본 개시내용의 제품은 사용 설명서, 또는 문제의 질병 또는 장애를 적절하게 예방하거나 치료하는 방법에 대해 의사, 기술자 또는 환자에게 충고하는 다른 정보 물질을 포함한다. 즉, 제조 물품은 비제한적으로 실제 투여량, 모니터링 절차 등을 포함하는 투약 섭생 및 다른 모니터링 정보를 가리키거나 제시하는 설명 수단을 포함한다.
진단용 검정법을 위한 키트는 본원에 개시된 바와 같은 LOX1 저해제를 함유하는 용액, 또는 대안적으로 또는 이에 더하여 LOX1의 존재를 검출하기 위한 시약을 포함할 수 있다. 다양한 시약들은 비제한적으로 저분자 형광 태그, 단백질, 예컨대 비오틴, GFP 또는 다른 형광 단백질, 또는 에피토프 서열, 예컨대 his 또는myc와 같은 표지를 포함하여 당업계에 공지되고 본원에 기재된 방법에 따라 표지될 수 있다. 유사하게는, LOX1의 검출에 사용되는 1차 항체가 키트에 포함될 수 있다. 1차 항체는 LOX1 상의 서열, 또는 LOX1을 표지할 수 있는 표지, 태그 또는 에피토프에 관한 것일 수 있다. 따라서, 1차 항체는 검출을 위해 표지될 수 있거나, 신호의 추가적인 증폭이 요망되는 경우 1차 항체는 2차 항체에 의해 검출될 수 있고, 이러한 2차 항체 또한 키트에 포함될 수 있다.
연구용 키트가 또한, 고려된다. 이러한 키트는 예를 들어, 진단용 또는 치료용 키트와 유사할 수 있지만, 상기 키트 및 이의 용도가 연구용으로만 국한된다는 것을 명시하는 표지를 추가로 포함한다.
표지, 컨쥬게이트 및 모이어티
본 개시내용은 진단 검정법 및 다른 검정법을 위해 표지에 컨쥬게이션될 수 있는 시약을 포함하는 방법, 조성물 및 키트에 관한 것이며, 여기서 하나 이상의 표적 분자는 이러한 표지된 시약(들)에 의해 결합되고 검출될 수 있다. 표지로는 비제한적으로, 발색단, 형광단, 형광 단백질, 인광성 염료, 탠덤(tandem) 염료, 입자, 합텐(hapten), 효소 및 방사성 동위 원소 등이 있다.
소정의 양태에서, 시약은 형광단에 컨쥬게이션된다. 시약(들)에 부착되는 형광단의 선택은 컨쥬게이션된 분자의 흡광도 및 형광 방출 특성을 결정할 것이다. 사용될 수 있는 형광단 표지의 물리적 특성으로는, 분광 특징(spectral characteristic)(흡광도, 방출 및 스토우크스 이동(stokes shift)), 형광 강도, 수명, 분극화(polarization) 및 포토-블리칭 속도(photo-bleaching rate) 또는 이들의 조합이 있으나 이들로 한정되는 것은 아니다. 이러한 모든 물리적 특성들이 사용되어, 하나의 형광단을 또 다른 형광단으로부터 구별함으로써 다중화된(multiplexed) 분석이 가능할 수 있다. 형광 표지의 다른 적합한 특성은 예를 들어 표적(들)의 표지화가 세포 또는 유기체(예를 들어 살아 있는 동물) 내에서 수행되어야 하는 경우, 세포 투과성 및 저 독성을 포함할 수 있다.
소정의 양태에서, 효소는 표지이고, 시약에 컨쥬게이션된다. 효소는, 검출 가능한 신호의 증폭이 수득되어 검정법 민감도를 증가시킬 수 있기 때문에 적합한 표지일 수 있다. 효소 자체는 검출 가능한 반응을 생성하지 않지만, 효소가 적절한 기질과 접촉되는 경우 기질을 분해시켜, 전환된 기질이 형광, 비색(colorimetric) 또는 발광 신호를 생성하게 하는 작용을 한다. 표지화 시약 상의 하나의 효소가 다수의 기질들을 검출 가능한 신호로 전환시킬 수 있기 때문에, 효소는 검출 가능한 신호를 증폭시킨다. 효소 기질은 측정 가능한 바람직한 생성물, 예를 들어 비색, 형광 또는 화학발광을 제공하도록 선택된다. 이러한 기질은 당업계에서 광범위하게 사용되며, 당업자에게 잘 공지되어 있고, 예를 들어, 옥시도리덕타제, 예컨대 호스래디쉬 퍼옥시다제 및 기질, 예컨대 3,3'-다이아미노벤지딘(DAB); 포스파타제 효소, 예컨대 산 포스파타제, 알칼리 및 기질, 예컨대 5-브로모-6-클로로-3-인돌릴 포스페이트(BCIP); 글리코시다제, 예컨대 베타-글리코시다제, 베타-글루쿠로니다제 또는 베타-글루코시다제 및 기질, 예컨대 5-브로모-4-클로로-3-인돌릴 베타-D-갈락토피라노시드(X-gal)를 포함하며; 추가의 효소는 하이드롤라제, 예컨대 콜린에스터라제 및 펩티다제, 옥시다제, 예컨대 글루코스 옥시다제 및 시토크롬 옥시다제, 및 리덕타제를 포함하며, 이들에 대한 적합한 기질들이 공지되어 있다.
화학발광을 생성하는 효소들 및 이들의 적절한 기질들이 일부 검정법에 적합하다. 이들로는, 천연 및 재조합 형태의 루시퍼라제 및 에쿼린(aequorin)이 있으나 이들로 한정되는 것은 아니다. 포스파타제, 글리코시다제 및 옥시다제에 대한 화학발광-생성 기질들, 예컨대 안정한 디옥세탄, 루미놀, 이소루미놀 및 아크리디늄 에스테르를 함유하는 것들이 추가로 유용하다.
또 다른 양태에서, 비오틴과 같은 합텐이 또한, 표지로서 이용된다. 비오틴은, 효소 시스템에서 검출 가능한 신호를 추가로 증폭시키는 작용을 할 수 있고, 단리 목적을 위한 친화도 크로마토그래피에 사용되는 태그로서 작용할 수 있기 때문에 유용하다. 검출을 위해, 비오틴에 대해 친화도를 갖는 효소 컨쥬게이트, 예컨대 아비딘-HRP가 사용된다. 후속적으로, 퍼옥시다제 기질이 첨가되어, 검출 가능한 신호가 생성된다.
합텐은 또한, 호르몬, 천연 발생 및 합성 약물, 오염원, 알레르기원, 어펙터(affector) 분자, 성장 인자, 케모카인, 사이토카인, 림포카인, 아미노산, 펩타이드, 화학적 중간산물, 뉴클레오타이드 등을 포함한다.
소정의 양태에서, 형광 단백질은 시약(들)에 표지로서 컨쥬게이션될 수 있다. 형광 단백질의 예로는, 녹색 형광 단백질(GFP), 피코빌리단백질 및 이들의 유도체가 있다. 형광 단백질, 특히 피코빌리단백질은 특히, 탠덤 염료가 표지된 표지화 시약을 제조하는 데 유용하다. 이들 탠덤 염료는 더 큰 스토우크스 이동을 수득하기 위해 형광 단백질 및 형광단을 포함하며, 여기서 발광 스펙트럼은 형광 단백질의 흡광 스펙트럼의 파장으로부터 더 멀리 이동된다.
소정의 양태에서, 표지는 방사성 동위 원소이다. 적합한 방사성 물질의 예로는, 요오드(121I, 123I, 125I, 131I), 탄소(14C), 황(35S), 3중 수소(tritium)(3H), 인듐(111In, 112In, 113mIn, 115mIn,), 테크네튬(99Tc, 99mTc), 탈륨(201Ti), 갈륨(68Ga, 67Ga), 팔라듐(103Pd), 몰리브덴(99Mo), 제논(135Xe), 불소(18F), 153SM, 177Lu, 159Gd, 149Pm, 140La, 175Yb, 166Ho, 90Y, 47Sc, 186Re, 188Re,142Pr, 105 Rh 및 97 Ru 등이 있으나 이들로 한정되는 것은 아니다.
일부 양태에서, 약물 또는 독소는 시약(들)에 컨쥬게이션될 수 있다. 예를 들어, 시약은 세포독성 약물에 컨쥬게이션될 수 있다. 이러한 예에서, 시약은 LOX1, 또는 LOX1과 리간드 또는 수용체 사이의 복합체에 결합할 수 있고, 그런 다음 세포독성 약물이 세포에 전달된다. 일부 실시형태에서, 시약-컨쥬게이트는 세포 내에서 내재화될 수 있고, 세포독성 약물을 세포에 방출한다. 당업계에 공지된 임의의 세포독성 약물이 컨쥬게이션될 수 있다. 일부 항체 컨쥬게이트는 이미 FDA로부터 승인을 받은 것이거나, 현재 임상 시험중인 것들이다.
후속하는 실시예는 상기 개시된 양태들 및 실시형태들의 일부를 더 예시하기 위해 제시된다. 실시예는 본 개시내용 또는 첨부된 청구항의 범위 폭을 임의의 방식으로 제한하려는 것으로 간주되어서는 안 된다.
실시예
실시예 1: 암 줄기세포가 농화된 세포 집단의 생성
3개의 환자-유래 이종이식편(PDX) 췌장 종양을 암 줄기세포(CSC) 스크리닝용 공급원으로서 사용하였다. 임상에서 관찰된 환자 집단을 더 양호하게 나타내기 위해, 후기 및 전이성 종양을 사용하였다. 절제된 종양을 2 mm3 조각으로 잘게 자르고, 200 단위/mL 콜라게나제 IV(Worthington Biologics)를 함유하는 DMEM/F12 배지 내에서 조직이 완전히 해리될 때까지 10분 내지 15분마다 기계적으로 요동(disruption)시키면서 해리시켰다. 그런 다음, 세포를 2X 행크스 밸런스드 솔트솔루션(HBSS; Hanks' Balanced Salt Solution) 내에서 세척하고, 40 미크론 세포 여과기에 통과시켰다. 해리된 종양 세포를, 간엽 줄기세포 배지(MSCGM, Lonza)가 들어 있는 초저(ultra-low) 부착 6-웰 플레이트 내에 평판배양함으로써 CSC를 농화시켰다. 세포를 4일 동안 배양한 다음, 수합하고, 아쿠타제(Accutase)를 사용하여 해리시키고, 크리오스타 5(Cryostar 5) 배지 내에서 동결시켰다. 세포 현탁액들을 조합하여, 패닝(panning) 및 스크리닝에 필요한 80 x 106개 세포를 수득하였다.
췌장 PDX-유래 암 줄기세포의 농화. CSC를 농화시키기 위해, Jackson Laboratories사로부터 구매한 3개의 상이한 모델 유래의 췌장 PDX 종양들(도 1a)을 단일 세포로 해리시키고, 비-흡착성, 혈청-무함유 배양 조건에서 평판배양하였다. 그 결과, 이전에 CSC에 대해서 농화된 것으로 나타난 종양 구상체들이 형성되었다(도 1b). CSC의 농화를, 줄기세포 생물학에서 중요한 역할을 하는 것으로 공지된 유전자 EZH2, BMI1, SOX2 및 Nanog, 뿐만 아니라 췌장 CSC를 정의하는 데 사용될 수 있는 표면 마커인 CD24 및 CD44의 qPCR에 의해 확인하였다. 도 1c는 평판배양 후 4일째에 수합된 구상체를 이용하여 총 종양 세포와 비교한 경우, 모든 스템니스(stemness) 유잔자들의 유전자 발현이 40배 내지 300배 증가되었음을 보여준다. 그런 다음, 구상체들을, 디자인된 안키린 반복 단백질 "DARPin" 라이브러리(Molecular Partners)를 사용한 표현형 선별에 사용하기 위해 단일 세포로 해리시켰다(실시예 2 참조).
CSC 구상체 대 총 종양 세포의 qPCR. 평판배양 시, 각각의 해리된 PDX 모델의 300,000개 세포를 "총 종양" 집단으로서 사용하기 위해 급속 냉동시켰다. 4일 동안 인큐베이션한 후, 구상체를 800 rpm에서 원심분리에 의해 수합하였다. 그런 다음, 구상체를 아쿠타제를 사용하여 해리시키고, 2x HBSS에서 세척하였다. 그런 다음, 30 x 104개의 CSC 구상체 세포를 총 종양과의 비교를 위해 급속 냉동시켰다. RNA를, RNeasy Plus 미니 키트(Qiagen)를 제조업체의 설명에 따라 사용하여 동결된 펠렛으로부터 제조하였다. RNA를 나노드랍(Nanodrop)을 사용하여 정량화하였다. RNA를, 10 ng의 RNA를 함유하는 반응물에서 Superscript II(Life Technologies)를 사용하여 역전사시켰다. 생성된 cDNA를 Taqman PreAmp Master Mix 키트를 제조업체의 설명에 따라 사용하여 증폭시켰다. 예비증폭 후, 반응물을 1:20으로 희석시키고, 5 μL를 Taqman qPCR 반응기(Life Technologies)에서 사용하고, Fast Dx Real-Time PCR 기계 상에서 진행하였다.
실시예 2: 암 줄기세포에 대해 증강된 결합력을 가진 결합제의 식별
파지 디스플레이 세포 패닝을 수행하여, 농화된 췌장 CSC 집단에 결합하는 DARPin을 식별하였다. Molecular Partners사로부터 라이센스를 받은 DARPin 라이브러리는 3개의 PDX 모델들로부터 형성된 구상체 세포 상에서 친화도 선별을 받았다(문헌[Lloyd C et al Modelling the human immune response: performance of a 1011 human antibody repertoire against a broad panel of therapeutically relevant antigens Protein Eng Des Sel 2009]).
췌장 CSC에 대해 농화된 결합력을 가진 DARPin의 식별. 일반적인 스크리닝 작업의 개요가 도 2에 나타나 있다. 우선, 본 발명자들이 항체를 단리하기 원하지 않은 재조합 단백질에 대해 DARpin 라이브러리를 탈선별하였다. 탈선별 후, 췌장 PDX 구상체-농화된 CSC를 패닝에 사용하였다. 선별 후, 트립신 및 후속해서 TEA를 사용하여 DARPin을 용리하였다. 용리된 DARPin을, 췌장 PDX 모델 PA-0165로부터 소팅된 CSC(CD24+CD44+EpCAM+ 세포) 및 정상적인 췌장 상피 세포 둘 다에 대한 결합에 대해 평가하였다. 정상적인 췌장 상피 세포가 아니라 PA-0165 종양으로부터 유세포분석 소팅에 의해 농화된 CSC에 결합된 STEM0268(도 3a)을 플루오로메트릭 마이크로볼륨 검정법 기술(FMAT; Fluorometric microvolume)에 의해 확인하였다. 도 3a의 삽도는 세포의 명시야 이미지를 보여준다. DARPin(10 ug/mL)을 또한, 형광 보조 세포 소팅(FACS)을 사용하여 다른 정상적인 상피 세포주(기관지, 결장 및 신장)에의 결합에 대해 스크리닝하였다. STEM0268은 신장 상피 세포에 대해서는 미미한 결합을 보여주었으나, 기관지 및 결장 상피 세포에 대해서는 결합을 보여주지 않았다(도 3b). 결합을 FACS 분석에 의해 더 검사하였으며, 여기서 STEM0268은 PA-0165 및 PA-0143 PDX 모델 둘 다에 대해 결합을 보여주었고(각각 도 4a 및 도 4b), 표준 조직 배양 조건 하에 성장된 세포와 비교하여 HPAC 세포주로부터 생성된 구상체에 대해 상당한 결합 증가를 보여주었다(도 4c).
췌장 종양 세포, 정상적인 상피 세포 및 CSC에 대한 DARPin의 결합. 췌장암세포주를 ATCC로부터 구매하였다. 정상적인 췌장 상피 세포를 Cell Systems사로부터 구매하고, 제조업체의 설명에 따라 유지시켰다. 신장 상피 세포, 간세포 및 결장 상피 세포를 모두 ScienCell Research Laboratories사로부터 구매하고, 제조업체의 설명에 따라 유지시켰다. 심장 근육 세포 및 인간 기관지 상피 세포를 둘 다 PromoCell사로부터 구매하였으며, 제조업체의 설명에 따라 배양하였다. 우선, 세포주를 0.05% 트립신을 사용하여 탈착시키거나, 췌장 PDX 종양 덩어리를 상기 기재된 것과 동일한 프로토콜에 따라 해리시켰다. 세포를 1x HBSS, 2% 소 혈청 알부민 및 0.5 mM EDTA로 구성된 유세포분석 완충제 내에서 세척하였다. 재현탁된 세포를 계수하고, 96-웰 U-자형 바닥 플레이트의 웰에 1개 웰 당 200,000개 이하의 세포 밀도로 옮겼다. 그런 다음, 세포를 4℃에서 2 ug/mL의 DARPin 클론과 함께 1시간 동안 인큐베이션하였다. 세포를 유세포분석 완충제 내에서 세척하고, 재현탁된 세포를 APC-염소-항-인간 Fc 단편 특이적인 2차 항체를 사용하여 4℃, 암실에서 30분 동안 염색시켰다. 세포를 세척하고, 생존력 염색을 위해 DAPI를 함유하는 유세포분석 완충제 내에 재현탁시켰다. 시료를 LSRII 유세포분석기 상에서 판독하고, FlowJo 소프트웨어를 사용하여 분석하였다.
CSC에 대한 DARPin 활성의 스크리닝. 바람직한 결합 패턴을 보여주는 DARPin을, 선별에 사용된 췌장 PDX 모델(PA-0143) 중 하나를 사용하여 구상체 형성을 저해하는 DARPin의 능력에 대해 스크리닝하였다. 간략하게는, 종양 세포의 해리 후, 이들 종양 세포를, MSCGM와 함께 50 ug/mL DARPin을 함유하는 96-웰 초저 부착 플레이트에 평판배양하였다. 모든 DARPin들을 3회 중복하여 시험하였다. 4일 후, 플레이트를 판독하고, 비처리된 웰 및 대조군 DARPin-처리된 웰의 평균으로부터 적어도 1의 표준 편차(SD)에서 저해 활성을 보여주는 것으로서 저해성 분자를 식별하였다. CSC에서의 EZH2의 발현을 기반으로 한 제2 검정법을 또한 진행하였다. 본 발명자들은, 췌장암에서 CSC가 EZH2의 높은 발현 및 라이신 27 상에서의 히스톤 3의 트리메틸화를 기반으로 식별될 수 있음을 이미 보여준 바 있다(문헌[Van Vlerken L et al. 2013 EZH2 is required for breast and pancreatic cancer stem cell maintenance and can be used as a functional cancer stem cell reporter Stem Cells Transl Med 2(1):43-52]). HPAC 세포를 사용하여, EZH2 검정법을 50 ㎍/mL DARPin을 포함시켜 이전에 기재된 바와 같이 수행하였다. 비처리된 웰 및 대조군 웰의 평균으로부터 적어도 1의 SD로 저해하는 DARPin을 양성 히트(hit)로서 간주하였다.
실시예 3: 암 줄기세포의 저해제
STEM0268은 암 줄기세포를 저해한다. STEM0268이 CSC를 저해할 수 있는지 확인하기 위해, 본 발명자들은 췌장 PDX 모델의 종양 구상체 형성을 저해하는 STEM0268의 능력에 대해 시험하였다. 간략하게는, 세포를 200 단위/mL의 콜라게나제 IV를 사용하여 해리시키고, 평판배양하고, 세척한 다음, 계수하고, MSCGM(Lonza)에 30,000개 세포/mL로 재현탁시킨 다음, 초저 부착 6-웰 플레이트에 평판배양하였다. 항체를 적절한 웰에 50 ㎍/mL로 첨가하였다. 4일 동안 인큐베이션한 후, 구상체를 수합하고, 해리시키고, 유사한 방식으로 재평판배양하여, 2차 구상체를 발생시키고, CSC를 자가 재생시키는 능력에 대해 평가하였다. STEM0268은 PA-0143에서 비처리된 또는 대조군 DARPin-Fc 모델과 비교하여 27% 저해율을 보여주었으며(도 5a), PA-0165 모델에서 25% 저해율을 보여주었다(도 5b). 본 발명자들이 이전에 언급하였던 HPAC 세포주에서 췌장 CSC(문헌[Van Vlerken L et al. 2013])를 마크(mark)하는 EZH2high 세포의 수를 감소시키는 STEM0268의 능력을 또한 측정하였다. 도 5c에 나타낸 바와 같이, STEM0268은 DARPin-Fc 대조군과 비교하여 EZH2high 세포를 43%만큼 감소시켰다(P<0.005). 살리노마이신(1 μM)은 이들 두 실험 모두에서 양성 대조군으로서 역할을 하였다(문헌[Gupta PB et al. 2009]). 이들 실험은 종합적으로, STEM0268이 췌장 PDX 모델의 CSC를 저해할 수 있음을 나타낸다.
실시예 4: 암 줄기세포를 저해하기 위한 표적으로서의 LOX1의 식별
DARPin 표적 식별. STEM0268의 표적을 식별하기 위해, 본 발명자들은 이전에 기재된 바와 같이(문헌[Yao et al]) 단백질-과발현 HEK293 세포의 라이브러리를 스크리닝하였다. 간략하게는, 4319개의 포유류 발현 벡터들(각각이 독특한 막 단백질을 인코딩함)로 구성된 플라스미드 라이브러리를 HEK293T 세포에 개별적으로 형질감염시켰다. STEM0268 단백질을 배양된 배지 내에서 희석시키고, AlexaFluor647-컨쥬게이션된 항-인간 IgG Fc 2차 항체와 함께 혼합한 다음, 형질감염된 세포에 첨가하였다. 세포를 단백질과 함께 37℃에서 밤새 인큐베이션한 다음, 결합을 공초점 현미경(confocal microscopy)에 의해 측정하였다. 그런 다음, 양성 현미경 히트를 FACS에 의해 스크리닝하였다. 도 6a는 LOX1을 과발현하는 세포에 대한 STEM0268의 FACS 결합을 보여준다. Fc 감마 수용체 2b(Fcgr2b)를 DARPin-Fc에의 결합에 대한 양성 대조군으로서 사용하였다. 다른 비-표적 단백질(S1PR2 및 BMPR1A)에 대한 STEM0268의 FACS 결합의 예가 나타나 있다. STEM0268의 표적에 대한 이러한 식별을 검증하기 위해, 플래그-태깅된 재조합 인간 LOX1(rhLOX1)을 사용하여 ELISA를 수행하였다. STEM0268은 사실상 rhLOX1에 결합하였다(도 6b). 또한, 대조군 DARPin-Fcs 결합 항체 및 항-FLAG 항체 중 어느 것도, 플래그-태깅된 rhLOX1을 검출할 수 없었다. LOX1에 결합하는 STEM0268의 능력을 옥텟 분석에 의해 더 검증하였다(도 6c).
LX5140110은 암 줄기세포를 저해한다. LOX1 저해제가 CSC 구상체 형성을 저해하는 능력을 더 검증하기 위해, SEQ ID NO: 33을 포함하는 VL 및 SEQ ID NO: 4를 포함하는 VH를 포함하는 LOX1-특이적인 모노클로날 항체(mAb)인 LX5140110(예를 들어 표 1 참조)을, 췌장 PDX 모델에서 구상체 형성을 저해하는 능력에 대해 STEM0268과 비교하였다. LX5140110은 PA-0165 및 PA-0143 모델 둘 다에서 구상체 형성을 STEM0268과 유사한 정도로 저해하였다(도 7a). 또한, LX5140110은 다수의 췌장 세포주(도 7b) 및 결장직장 세포주(도 7c) 유래의 CSC를 저해할 수 있었다.
PA-0143을 이용한 생체내 연구를 진행하여, 생체내에서 CSC를 저해하는 LX5140110의 능력을 확인하였다. PA-0143 PDX 종양을 종양 단편의 투관침 이식(trocar implantation)에 의해 6주령 내지 8주령의 NSG 마우스(NOD.Cg-Prkdc scid Il2rg tm1Wjl /SzJ) 내로 통과시키고, 약 300 mm3까지 성장시킨 다음, 이때 마우스들을 무작위로 나누고, 대조군 IgG1 mAb 또는 LX5140110을 30 mg/kg으로 1주일에 2회 2주 동안 피하 주사하였다(도 8a). LX51401110은, 마찬가지로 30 mg/kg으로 투여된 비히클 처리 대조군 및 비-특이적인 IgG1 대조군 둘 다와 비교하여 PA-0143 모델의 종양 성장을 약간만 감소시켰으며(P<0.001, 터키스 비교 시험), 이는, LOX1이, 종양의 작은 퍼센트만 대표하는 CSC 상에서 주로 발현되는 것으로 보이기 때문에 예상된 바와 같았다. 항체의 마지막 투여 후 24시간째에, 종양을 마우스의 부분 집합으로부터 적출하고, CSC의 퍼센트에 대해 분석하였다. LX5140110은 비히클 대조군과 비교하여 CSC의 유의한 감소를 보여주었다(도 8b).
LX5140110과 화학요법의 병용은 항종양 세포 효능을 개선한다. 화학요법 및 심지어 일부 표적화된 요법에 의해 종양 크기(burden)가 감소하더라도 CSC는 농화될 수 있다는 점을 고려하면, 이들 제제와 함께 CSC-특이적인 표적화 요법을 사용하는 병용 접근법이 암 환자의 치료를 위한 매력적인 접근법이 된다. LX5140110이 CSC를 특이적으로 표적화하기 때문에, 본 발명자들은 췌장암에 대한 현재의 표준 치료 화학요법인 겜시타빈과 LX5140110의 병용 효과를 알아보고자 하였다. 우선, Pan02.13을 저해하는 겜시타빈의 능력을 시험하였다. Pan02.13 세포를, 100 ng/mL 겜시타빈이 있는 경우 및 없는 경우에서 표준 조직 배양 조건 하에 조직 배양 코팅된 편평-바닥 플레이트에서 평판배양하였다(n=10). 100 ng/mL에서, 세포수의 유의한 감소가 존재하였다(도 9a, P<0.001 스튜던츠 2-테일드 T-시험(student's two-tailed T-test)). CSC에 미치는 처리 효과를 확인하기 위해, Pan02.13을, 100 ng/mL의 겜시타빈(GEM)이 있는 경우 또는 없는 경우에서 50 ㎍/mL의 LX5140110 또는 대조군 항체와 함께 표준 조직 배양 조건에서 4일 동안 처리한 다음, CSC의 퍼센트를 유세포분석에 의해 분석하였다. CSC(EpCAM+CD24+CD44+)의 퍼센트를 각각의 처리 조건에서 확인하였다. 우선, 단일의 살아 있는 세포에 대해 스캐터(scatter) 및 DAPI를 사용하여 세포를 게이팅(gating)하였다. 형광 마이너스 원(FMO; Fluorescence minus one) 대조군을 게이팅에 이용하였으며, 이때 EpCAM+ 집단을 CD44 및 CD24 발현에 대해 분석하였다. 살아 있는 세포의 CSC의 빈도를 도 9b에 기록한다. 이들 조건 및 시점 하에, LX5140110은 CSC가 약간 감소되었음을 보여주었다. 보고된 바와 같이, 겜시타빈을 처리해도 CSC는 농화되었고 이러한 농화는 비-특이적인 IgG1의 포함에 의해 영향을 받지 않았다. 그러나, LX5140110의 처리는 이러한 증가를 저해하였을 뿐만 아니라 CSC의 퍼센트를 기준선 수준으로부터 약간 감소시켰다(0.62% 대 겜시타빈이 없는 대조군 IgG의 경우 0.81%).
LOX1의 저해는 화학요법-유도 심근 세포 손상을 감소시킬 수 있다. 화학요법과 항-CSC 표적화된 요법의 병용이 임상에서 유용할 것 같긴 하지만, 많은 화학요법들이 항종양 활성 외에도 의도치 않은 유해 부작용을 갖고 있는 것으로 공지되어 있다. 이러한 부작용 중 하나는 심장 손상으로서, 이는 심근 세포 사멸 및 심부전을 초래할 수 있다. LOX1은 독소루비신-매개 심근 세포 손상에서 주요한 역할을 하는 것으로 나타나 있다(문헌[Spallarossa et al., Biochemical and Biophysical Research Communications (2005) 335 188-196. Yokoyama et al., (2016) PLoS ONE 11(5): e0154994. doi:10.1371/journal.pone.0154994] 참조). 우선, 본 발명자들은, 인간 대동맥 내피 세포(HAEC) 및 배아 줄기세포-유래 심근 세포에서 독소루비신 처리에 반응하는 LOX1의 발현을 조사하였다. 산화된 LDL(Ox-LDL)은 LOX1의 통상적인 리간드이고, 이전의 보고들이 래트 심장 근육 세포에서 Ox-LDL에 반응하여 LOX1의 증가를 보여주기 때문에(문헌[Spallarossa et al.,(2005)]) 대조군으로서 첨가하였다. 4 x 104개의 세포를 96-웰 플레이트에 평판배양하고, 배지 단독, 또는 5 μM 독소루비신을 함유하는 배지를 24시간 동안 처리하였다. 그런 다음, 세포를 긁어내고, 프로테아제 저해제를 함유하는 1X RIPA 완충제를 얼음 상에서 사용하여 1시간 동안 용해시켰다. 로딩 완충제를 각각의 시료에 첨가한 다음, 90℃에서 10분 동안 가열하였다. 시료 12 ㎕를 4-12% 비스-트리스(bis-tris) 구배 겔 내에 각각의 레인 당 로딩하였다. 상기 겔을 MOPS 완충제 내에서 200 V에서 40분 동안 진행시켰다. 단백질을 iBlot을 사용하여 니트로셀룰로스 막 상으로 옮겼다. 상기 막을 카제인 용액을 이용하여 밤새 블라킹(blocking)시켰다. LX5140110을 카제인 블라킹 완충제 내 1 ㎍/ml의 농도로 상기 막에 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 막을 TBST 완충제를 사용하여 매회 5분 동안 3회 세척하였다. HRP에 컨쥬게이션된 항-인간-Fc 항체를 카제인 블라킹 완충제 내에서 1:5000의 희석비로 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 막을 TBST를 사용하여 매회 10분 동안 2회 세척한 다음, 마지막으로 TBS 완충제를 사용하여 15분 동안 세척하였다. Supersignal ELISA Pico 화학발광 기질을 1분 동안 첨가하였다. 막을 필름에 노출시키고, 발색시켰다. 도 10a에서 보여지는 바와 같이, LOX1 단백질은 Ox-LDL 및 DOX-처리 인간 대동맥 내피 세포 둘 다에서 상향조절되었으며, 이는 심장에서 화학치료제의 최초의 인카운터(encounter)이다. 흥미롭게는 본 발명자들은 또한, 5 μM DOX로 처리한 심근 세포에서 LOX1 발현의 증가를 검출하였다(도 10b).
다음, 본 발명자들은 LOX1의 저해가 독소루비신-매개 심근 세포 손상을 차단할 수 있는지 확인하고자 하였다. CytiviaTM 심근 세포를 GE Healthcare사로부터 구매하고, 인간 피브로넥틴을 소 피브로넥틴으로 대체하여 제조업체의 설명에 따라 평판배양하였다. 세포를 4일 동안 흡착시킨 다음, 배지를 교환하였다. 5일 내지 7일째에, 배지를 제거하고, 세포를 지시된 농도의 LX5140110과 함께 4시간 동안 예비인큐베이션한 다음, 5 μM 독소루비신(DOX)을 첨가하였다. DOX의 첨가 후, 세포를 24시간 동안 더 인큐베이션하였다. 인큐베이션 후, 배지를 제거하고, 세포를 DAPI(1 mg/mL의 1:4000 희석), TOTO-3(배지 1 mL 당 염료 용액 1 uL) 및 5 μM Fluo-4로 염색하였다. 세포를 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션한 다음, GE IN 세포 분석기 상 Image 상에서 이미지화하였다. 칼슘 농도를 확인하기 위해 Fluo-4를 사용하는 한편, DAPI 및 TOTO-3 염료를 배제한 세포의 수를 수득함으로써 생존력을 확인하였다. 심근 세포는 내독소-유도 심장 기능 장애 동안 칼슘 로드의 증가를 보여주는 것으로 공지되어 있다(문헌[Thompson et al., Pediatric Research (2000) 47: 669-676]). 도 11a에서 보여지는 바와 같이, 칼슘 농도는, 심근 세포 기능 장애를 보여주는 비처리 대조군과 비교하여, 5 μM DOX와 함께 인큐베이션된 심근 세포에서 대략 2.5배 증가하였다. 중요하게는, LX5140110은, DOX를 처리한 결과 나타나는 칼슘 축적을 저해할 수 있었다. 더욱이, DOX는 심근 세포의 생존력을 저하시켰으며(도 11b), 이러한 저하는 LOX1 저해제인 LX5140110에 의해 다시 역전되었다.
고찰
상기 실시예의 데이터는 관상 동맥 및 순환계 건강에 있어서 LOX1의 공지된 역할 외에도, 이전에 규명되지 않고 예측되지 않은 LOX1의 기능을 나타내고 있다. 특히, 본원에 제시된 연구는, 암과 관련하여 LOX1이 CSC 기능에 특이적인 역할을 하며, 이전에 보고되지 않은 발견을 나타낸다고 언급한다. 예시적인 몇몇 실시예에서, 췌장암 및 결장직장암 모델에서 LOX1이 CSC에 의해 과발현되고, PDX 모델에 대한 LOX1 저해제(DARPin 및 mAb)의 외인성 투여가 CSC의 직접적인 저해를 제공하였기 때문에 LOX1이 CSC 활성에 있어서 기능적인 역할을 한다는 결과를 보여준다. 더욱이, 상기 실시예의 데이터는, LOX1 저해제가 화학요법에 의해 유도된 CSC의 증가를 저해하고, 이들 LOX1 저해제가 매력적인 임상 패러다임과 병용하여 사용될 수 있음을 보여준다. 또한, 본 발명자는 상기 실시예에서, LOX1 저해제가, 화학요법 약물로 치료된 환자에 있어서 중요한 문제점인 화학요법-유도 심장 손상을 또한 보호할 수 있다는 증거를 제공한다.
많은 예비임상 및 임상 증거들이 암 치료에서 CSC의 결정적인 기능을 가리키고 있으며, 따라서 종양 세포 중 이러한 집단을 표적화하는 치료가 높은 가치가 있을 수 있다. 본원에 기재된 연구는 CSC 유지에 있어서 LOX1의 중요한 신규 역할을 가리킬 뿐만 아니라, LOX1의 중화가 CSC 기능을 저해하는 데 유용한 전략이 될 수 있고, LOX1의 차단에 의한 CSC의 저해가 환자의 삶을 개선하기 위한 독특하고 효과적인 치료법이 될 수 있음을 제시한다.
원용에 의한 포함
본원에서 언급된 모든 공개문헌 및 특허들은, 각각의 개별 공개 또는 특허가 원용에 의해 포함되는 것으로 구체적으로 그리고 개별적으로 언급되는 바와 같이, 이들 전체가 원용에 의해 본 명세서에 포함된다.
본 개시내용의 특정 양태들이 고찰되어 있긴 하지만, 상기 명세서는 예시적인 것이고 제한적인 것이 아니다. 당업자는 본 명세서 및 하기의 청구항의 검토 시, 본 개시내용에 많은 변화를 줄 수 있음을 알게 될 것이다. 본 개시내용의 전체 범위는 청구항, 및 이들의 등가물의 전체 범위와 함께, 그리고 명세서 및 이러한 변화들과 함께 참조로 하여 결정되어야 한다.
선택된 참조 문헌
Al-Hajj et al., (2003). Prospective identification of tumorigenic breast cancer cells. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 100, 3983-3988.
Barker et al., (2009). Crypt stem cells as the cells-of-origin of intestinal cancer. Nature 457, 608-611.
Creighton et al., (2009). Residual breast cancers after conventional therapy display mesenchymal as well as tumor-initiating features. Proceedings of the National Academy of Sciences 106, 13820-13825.
Gemei et al., (2013). CD66c is a novel marker for colorectal cancer stem cell isolation, and its silencing halts tumor growth in vivo. Cancer 119, 729-738.
Gupta PB et al., 2009 Identification of selective inhibitors of cancer stem cells by high-throughput screening Cell 138(4):645-59.
Fangning Wan et al., Oxidized low-density lipoprotein is associated with advanced-stage prostate cancer. 2015 Tumor Biology 36 (5):3573-82.
Hermann et al., (2007). Distinct populations of cancer stem cells determine tumor growth and metastatic activity in human pancreatic cancer. Cell stem cell 1, 313-323.
Hinagata et al., Cardiovasc . Res. 69:263-71 (2006).
Hirsh et al., A common gene network link cancer with lipid metabolism and diverse human diseases. 2010 Cancer Cell 17:348-61).
Hirsch et al., (2014). LGR5 positivity defines stem-like cells in colorectal cancer. Carcinogenesis 35, 849-858.
Inoue et al., Circ . Res. 97:176-84 (2005).
Khaidakov et al. Oxidized LDL receptor 1 (OLR1) as a possible link between obesity, dyslipidemia and cancer. 2011 PLOSOne 6(5):e20277.
Kume et al., 70th Scientific Sessions of the American Heart Association Ser. 96, 1997.
Lapidot et al., (1994). A cell initiating human acute myeloid leukaemia after transplantation into SCID mice. Nature 367, 645-648.
Li et al., (2007). Identification of pancreatic cancer stem cells. Cancer research 67, 1030-1037.
Li et al., Cir . Cardio . Imaging 3:464-72 (2010).
Long et al. Combination of body mass index and oxidized low density lipoprotein receptor 1 in prognosis prediction of patients withsquamous non-small cell lung cancer. 2015 Oncotarget advance publications, see, online publications at www.impactjournals.com/oncotarget/.
Mehta et al., Circ . Res. 100:1634-1642 (2007).
Nakamura et al., J. Pharm . Biomed . Anal. 51:158-163 (2010).
Ohki et al., Structure 13:905-917 (2005).
Tehranchi et al. (2010). Persistent Malignant Stem Cells in del(5q) Myelodysplasia in Remission. New England Journal of Medicine 363, 1025-1037.
Ulrich-Merzenich et al., Expert Opin Ther Targets. 17(8):905-19 (2013).
Van Vlerken L et al. 2013 EZH2 is required for breast and pancreatic cancer stem cell maintenance and can be used as a functional cancer stem cell reporter Stem Cells Transl Med 2(1):43-52.
Wang et al., (2012). Evaluation of CD44 and CD133 as cancer stem cell markers for colorectal cancer. Oncology reports 28, 1301-1308.
White et al., Cardiovascular pathology 20:369-73 (2011).
Xu et al., Arterioscler . Thromb . Vasc . Biol . 27(4) 871-877 (2007).
Zhao et al., Clin . Cardiol . 34:172-177 (2011).
SEQUENCE LISTING <110> MEDIMMUNE LTD <120> COMPOSITIONS AND METHODS FOR INHIBITING CANCER STEM CELLS <130> LOX1-200EP1 <150> US 62/235,144 <151> 2015-09-30 <160> 78 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lox514 CDR-1 Heavy Chain sequence <400> 1 Glu Leu Ser Met His 1 5 <210> 2 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LX5140110 CDR-2 Heavy Chain sequence <400> 2 Gly Phe Asp Pro Glu Asp Phe Lys Tyr His Thr His Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 3 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LX5140110 CDR-3 Heavy Chain sequence <400> 3 Val Trp Gly Thr Gln Gly Lys Gly Val Arg Gly Trp Asp Tyr Tyr Tyr 1 5 10 15 Gly Met Asp Val 20 <210> 4 <211> 129 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LX5140110 Heavy Chain sequence <400> 4 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Glu Leu 20 25 30 Ser Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Phe Asp Pro Glu Asp Phe Lys Tyr His Thr His Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Leu Val Trp Gly Thr Gln Gly Lys Gly Val Arg Gly Trp Asp Tyr 100 105 110 Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser 115 120 125 Ser <210> 5 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lox514 CDR-2 Heavy Chain sequence <400> 5 Gly Phe Asp Pro Glu Asp Gly Glu Thr Ile Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 6 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LX5140011 CDR-2 Heavy Chain sequence <400> 6 Gly Phe Asp Pro Glu Asp Trp Glu Tyr Ala Tyr Asp Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 7 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LX5140014 CDR-2 Heavy Chain sequence <400> 7 Gly Phe Asp Pro Glu Asp Tyr Thr Ile Arg Val Gly Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 8 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LX5140016 CDR-2 Heavy Chain sequence <400> 8 Gly Phe Asp Pro Glu Asp Trp Gln Thr His Thr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 9 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LX5140038 CDR-2 Heavy Chain sequence <400> 9 Gly Phe Asp Pro Glu Asp Trp Thr Ile His Val Asp Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 10 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LX5140094 CDR-2 Heavy Chain sequence <400> 10 Gly Phe Asp Pro Glu Asp Trp Gln Tyr His Val Ser Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 11 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LX5140108 CDR-2 Heavy Chain sequence <400> 11 Gly Phe Asp Pro Glu Asp Trp Ser Asn His Val Ser Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 12 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LX5140092 CDR-2 Heavy Chain sequence <400> 12 Gly Phe Asp Pro Glu Asp Trp Lys Tyr His Leu Ser Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 13 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LX5140093 CDR-2 Heavy Chain sequence <400> 13 Gly Phe Asp Pro Glu Asp Trp Ala Tyr His Gln Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 14 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LX5140011 CDR-3 Heavy Chain sequence <400> 14 Pro Asn Gly Gln Gln Gly Lys Gly Val Arg Gly Trp Asp Tyr Tyr Tyr 1 5 10 15 Gly Met Asp Val 20 <210> 15 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LX5140108 CDR-3 Heavy Chain sequence <400> 15 Ser Thr Gly Arg Gln Gly Lys Gly Val Arg Gly Trp Asp Tyr Tyr Tyr 1 5 10 15 Gly Met Asp Val 20 <210> 16 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LX5140092_D CDR-3 Heavy Chain sequence <400> 16 Pro Asp Gly Thr His Gln Gly Gly Val Arg Gly Trp Asp Tyr Tyr Tyr 1 5 10 15 Gly Met Asp Val 20 <210> 17 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LX5140092_N CDR-3 Heavy Chain sequence <400> 17 Pro Asn Gly Thr His Gln Gly Gly Val Arg Gly Trp Asp Tyr Tyr Tyr 1 5 10 15 Gly Met Asp Val 20 <210> 18 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LX5140093_D CDR-3 Heavy Chain sequence <400> 18 Pro Asp Gly Gln Gln Gly Lys Gly Val Arg Gly Trp Asp Tyr Tyr Tyr 1 5 10 15 Gly Met Asp Val 20 <210> 19 <211> 129 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LX5140011 Heavy Chain sequence <400> 19 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Glu Leu 20 25 30 Ser Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Phe Asp Pro Glu Asp Trp Glu Tyr Ala Tyr Asp Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Thr Pro Asn Gly Gln Gln Gly Lys Gly Val Arg Gly Trp Asp Tyr 100 105 110 Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser 115 120 125 Ser <210> 20 <211> 129 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LX5140014 Heavy Chain sequence <400> 20 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Glu Leu 20 25 30 Ser Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Phe Asp Pro Glu Asp Tyr Thr Ile Arg Val Gly Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Thr Pro Asn Gly Gln Gln Gly Lys Gly Val Arg Gly Trp Asp Tyr 100 105 110 Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser 115 120 125 Ser <210> 21 <211> 129 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LX5140016 Heavy Chain sequence <400> 21 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Glu Leu 20 25 30 Ser Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Phe Asp Pro Glu Asp Trp Gln Thr His Thr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Thr Pro Asn Gly Gln Gln Gly Lys Gly Val Arg Gly Trp Asp Tyr 100 105 110 Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser 115 120 125 Ser <210> 22 <211> 129 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LX5140038 Heavy Chain sequence <400> 22 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Glu Leu 20 25 30 Ser Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Phe Asp Pro Glu Asp Trp Thr Ile His Val Asp Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Thr Pro Asn Gly Gln Gln Gly Lys Gly Val Arg Gly Trp Asp Tyr 100 105 110 Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser 115 120 125 Ser <210> 23 <211> 129 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LX5140094 Heavy Chain sequence <400> 23 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Glu Leu 20 25 30 Ser Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Phe Asp Pro Glu Asp Trp Gln Tyr His Val Ser Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Thr Pro Asn Gly Gln Gln Gly Lys Gly Val Arg Gly Trp Asp Tyr 100 105 110 Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser 115 120 125 Ser <210> 24 <211> 129 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LX5140108 Heavy Chain sequence <400> 24 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Glu Leu 20 25 30 Ser Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Phe Asp Pro Glu Asp Trp Ser Asn His Val Ser Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Leu Thr Ser Thr Gly Arg Gln Gly Lys Gly Val Arg Gly Trp Asp Tyr 100 105 110 Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser 115 120 125 Ser <210> 25 <211> 129 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LX5140092_D Heavy Chain sequence <400> 25 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Glu Leu 20 25 30 Ser Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Phe Asp Pro Glu Asp Trp Lys Tyr His Leu Ser Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Thr Pro Asp Gly Thr His Gln Gly Gly Val Arg Gly Trp Asp Tyr 100 105 110 Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser 115 120 125 Ser <210> 26 <211> 129 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LX5140092_N Heavy Chain sequence <400> 26 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Glu Leu 20 25 30 Ser Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Phe Asp Pro Glu Asp Trp Lys Tyr His Leu Ser Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Thr Pro Asn Gly Thr His Gln Gly Gly Val Arg Gly Trp Asp Tyr 100 105 110 Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser 115 120 125 Ser <210> 27 <211> 129 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LX5140093_D Heavy Chain sequence <400> 27 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Glu Leu 20 25 30 Ser Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Phe Asp Pro Glu Asp Trp Ala Tyr His Gln Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Thr Pro Asp Gly Gln Gln Gly Lys Gly Val Arg Gly Trp Asp Tyr 100 105 110 Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser 115 120 125 Ser <210> 28 <211> 129 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LX5140093_N Heavy Chain sequence <400> 28 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Glu Leu 20 25 30 Ser Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Phe Asp Pro Glu Asp Trp Ala Tyr His Gln Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Thr Pro Asn Gly Gln Gln Gly Lys Gly Val Arg Gly Trp Asp Tyr 100 105 110 Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser 115 120 125 Ser <210> 29 <211> 129 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lox514 Heavy Chain sequence <400> 29 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Glu Leu 20 25 30 Ser Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Phe Asp Pro Glu Asp Gly Glu Thr Ile Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Thr Pro Asn Gly Gln Gln Gly Lys Gly Val Arg Gly Trp Asp Tyr 100 105 110 Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Arg Gly Thr Thr Val Thr Val Ser 115 120 125 Ser <210> 30 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lox514 CDR-1 Light Chain sequence <400> 30 Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly Tyr Asp Val His 1 5 10 <210> 31 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lox514 CDR-2 Light Chain sequence <400> 31 Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser 1 5 <210> 32 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lox514 CDR-3 Light Chain sequence <400> 32 Gln Ser Tyr Asp Ser Ser Leu Ser Gly Trp Val 1 5 10 <210> 33 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LX5140110 Light Chain sequence <400> 33 Gln Ser Val Val Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly 20 25 30 Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu 35 40 45 Leu Ile Tyr Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu 65 70 75 80 Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser 85 90 95 Leu Ser Gly Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 34 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LX5140094 CDR-3 Light Chain sequence <400> 34 Gln Ser Tyr Asp Ser Met Tyr Arg Phe Gly 1 5 10 <210> 35 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LX5140093 CDR-3 Light Chain sequence <400> 35 Gln Ser Tyr Asp Ser Ser His Arg Ala Trp Ala 1 5 10 <210> 36 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LX5140094 Light Chain sequence <400> 36 Gln Ser Val Val Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly 20 25 30 Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu 35 40 45 Leu Ile Tyr Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu 65 70 75 80 Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Met 85 90 95 Tyr Arg Phe Gly Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 37 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LX5140093 Light Chain sequence <400> 37 Gln Ser Val Val Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly 20 25 30 Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu 35 40 45 Leu Ile Tyr Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu 65 70 75 80 Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser 85 90 95 His Arg Ala Trp Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 38 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lox696 CDR-1 Heavy Chain sequence <400> 38 Asp Tyr Ala Met His 1 5 <210> 39 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lox696 CDR-2 Heavy Chain sequence <400> 39 Gly Ile Ser Trp Asn Ser Gly Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 40 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LX6960073_G82bS_gl CDR-3 Heavy Chain sequence <400> 40 Glu Gly Ser Trp Asn Tyr Asp Ala Leu Asp Ile 1 5 10 <210> 41 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LX6960073_G82bS_gl Heavy Chain sequence <400> 41 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Ser Asp Asp Tyr 20 25 30 Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Gly Ile Ser Trp Asn Ser Gly Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Gly Ser Trp Asn Tyr Asp Ala Leu Asp Ile Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 42 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LX6960067_ngl1 CDR-2 Heavy Chain sequence <400> 42 Gly Val Ser Leu Gln Glu Leu Tyr Thr Gly Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 43 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LX6960086_ngl1 CDR-2 Heavy Chain sequence <400> 43 Gly Ile Ser Trp Asn Ser Pro Asp Arg Tyr Met Asp Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 44 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lox696 CDR-3 Heavy Chain sequence <400> 44 Glu Gly Asn Trp Asn Tyr Asp Ala Phe Asp Ile 1 5 10 <210> 45 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LX6960067_ngl1 CDR-3 Heavy Chain sequence <400> 45 Glu Gly Ser Trp Asn Tyr Asp Ala Phe Asp Ile 1 5 10 <210> 46 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LX6960073_ngl1 CDR-3 Heavy Chain sequence <400> 46 Glu Gly Ser Trp Asn Tyr Asp Ala Leu Asp Ile 1 5 10 <210> 47 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LX6960101_ngl1 CDR-3 Heavy Chain sequence <400> 47 Glu Gly Asn Trp Asn Tyr Asp Ala Phe Asp Val 1 5 10 <210> 48 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LX6960067_ngl1 Heavy Chain sequence <400> 48 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr 20 25 30 Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Gly Val Ser Leu Gln Glu Leu Tyr Thr Gly Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Val Ser Gly Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Gly Ser Trp Asn Tyr Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Arg 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 49 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LX6960071_ngl1 Heavy Chain sequence <400> 49 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr 20 25 30 Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Gly Ile Ser Trp Asn Ser Gly Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Gly Asn Trp Asn Tyr Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Arg 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 50 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LX6960073_ngl1 Heavy Chain sequence <400> 50 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Ser Asp Asp Tyr 20 25 30 Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Gly Ile Ser Trp Asn Ser Gly Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Gly Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Gly Ser Trp Asn Tyr Asp Ala Leu Asp Ile Trp Gly Arg 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 51 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LX6960086_ngl1 Heavy Chain sequence <400> 51 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr 20 25 30 Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Gly Ile Ser Trp Asn Ser Pro Asp Arg Tyr Met Asp Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Gln Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Gly Asn Trp Asn Tyr Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Arg 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 52 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LX6960101_ngl1 Heavy Chain sequence <400> 52 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr 20 25 30 Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Gly Ile Ser Trp Asn Ser Gly Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Gly Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Gly Asn Trp Asn Tyr Asp Ala Phe Asp Val Trp Gly Arg 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 53 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LX6960073_gl Heavy Chain sequence <400> 53 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Ser Asp Asp Tyr 20 25 30 Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Gly Ile Ser Trp Asn Ser Gly Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Gly Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Gly Ser Trp Asn Tyr Asp Ala Leu Asp Ile Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 54 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lox696 Heavy Chain sequence <400> 54 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr 20 25 30 Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Gly Ile Ser Trp Asn Ser Gly Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Gly Asn Trp Asn Tyr Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Arg 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 55 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LX6960073_G82bS_gl CDR-1 Light Chain sequence <400> 55 Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr Asn Tyr Val Ser 1 5 10 <210> 56 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LX6960073_G82bS_gl CDR-2 Light Chain sequence <400> 56 Asp Val Ser Lys Arg Pro Ser 1 5 <210> 57 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LX6960073_G82bS_gl CDR-3 Light Chain sequence <400> 57 Met Gly Gly Met Gly Arg Ser Thr Asn Trp Val 1 5 10 <210> 58 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LX6960073_G82bS_gl Light Chain sequence <400> 58 Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Pro Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr 20 25 30 Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu 35 40 45 Met Ile Tyr Asp Val Ser Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu 65 70 75 80 Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Met Gly Gly Met Gly Arg 85 90 95 Ser Thr Asn Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 59 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LX6960116_ngl1 CDR-1 Light Chain sequence <400> 59 Thr Gly Thr Ser Asn Asp Val Gly Gly Tyr Asn Tyr Val Ser 1 5 10 <210> 60 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lox696 CDR-2 Light Chain sequence <400> 60 Asp Val Ser Asn Arg Pro Ser 1 5 <210> 61 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lox696 CDR-3 Light Chain sequence <400> 61 Ser Ser Tyr Thr Ser Ser Ser Thr Asn Trp Val 1 5 10 <210> 62 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LX6960067_ngl1 CDR-3 Light Chain sequence <400> 62 Leu Gly Arg Thr Trp Ser Ser Thr Asn Trp Val 1 5 10 <210> 63 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LX6960071_ngl1 CDR-3 Light Chain sequence <400> 63 Met Gly Ser Met Gly Arg Ser Thr Asn Trp Val 1 5 10 <210> 64 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LX6960094_ngl1 CDR-3 Light Chain sequence <400> 64 Ala Gln Arg Thr Val Ser Ser Thr Asn Trp Val 1 5 10 <210> 65 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LX6960067_ngl1 Light Chain sequence <400> 65 Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr 20 25 30 Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu 35 40 45 Met Ile Tyr Asp Val Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu 65 70 75 80 Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Leu Gly Arg Thr Trp Ser 85 90 95 Ser Thr Asn Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 66 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LX6960071_ngl1 Light Chain sequence <400> 66 Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Pro Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr 20 25 30 Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu 35 40 45 Met Ile Tyr Asp Val Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu 65 70 75 80 Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Met Gly Ser Met Gly Arg 85 90 95 Ser Thr Asn Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 67 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LX6960073_ngl1 Light Chain sequence <400> 67 Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Pro Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr 20 25 30 Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu 35 40 45 Met Ile Tyr Asp Val Ser Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu 65 70 75 80 Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Met Gly Gly Met Gly Arg 85 90 95 Ser Thr Asn Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 68 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LX6960094_ngl1 Light Chain sequence <400> 68 Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr 20 25 30 Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu 35 40 45 Met Ile Tyr Asp Val Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu 65 70 75 80 Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Gln Arg Thr Val Ser 85 90 95 Ser Thr Asn Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 69 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LX6960116_ngl1 Light Chain sequence <400> 69 Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Asn Asp Val Gly Gly Tyr 20 25 30 Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu 35 40 45 Met Ile Tyr Asp Val Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu 65 70 75 80 Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Met Gly Ser Met Gly Arg 85 90 95 Ser Thr Asn Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 70 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lox696 Light Chain sequence <400> 70 Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr 20 25 30 Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu 35 40 45 Met Ile Tyr Asp Val Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu 65 70 75 80 Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Ser Ser 85 90 95 Ser Thr Asn Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 71 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lox514 VH CDR2 <220> <221> misc_feature <222> (7)..(7) <223> Xaa is Gly, Trp, Tyr, or Phe <220> <221> misc_feature <222> (8)..(8) <223> Xaa is Glu, Thr, Gln, Ser, Lys, or Ala <220> <221> misc_feature <222> (9)..(9) <223> Xaa is Thr, Tyr, Ile, or Asn <220> <221> misc_feature <222> (10)..(10) <223> Xaa is Ile, Ala, Arg, or His <220> <221> misc_feature <222> (11)..(11) <223> Xaa is Tyr, Val, Thr, Leu, or Gln <220> <221> misc_feature <222> (12)..(12) <223> Xaa is Ala, Asp, Gly, Ser, or His <400> 71 Gly Phe Asp Pro Glu Asp Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 72 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lox514 VH CDR3 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> Xaa is Pro, Ser, or Val <220> <221> misc_feature <222> (2)..(2) <223> Xaa is Asn, Thr, Trp, or Asp <220> <221> misc_feature <222> (4)..(4) <223> Xaa is Gln, Arg, or Thr <220> <221> misc_feature <222> (5)..(5) <223> Xaa is Gln or His <220> <221> misc_feature <222> (6)..(6) <223> Xaa is Gly or Gln <220> <221> misc_feature <222> (7)..(7) <223> Xaa is Lys or Gly <400> 72 Xaa Xaa Gly Xaa Xaa Xaa Xaa Gly Val Arg Gly Trp Asp Tyr Tyr Tyr 1 5 10 15 Gly Met Asp Val 20 <210> 73 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lox514 VL CDR3 <220> <221> misc_feature <222> (6)..(6) <223> Xaa is Ser or Met <220> <221> misc_feature <222> (7)..(7) <223> Xaa is Leu, Tyr, or His <220> <221> misc_feature <222> (8)..(8) <223> Xaa is Ser or Arg <220> <221> misc_feature <222> (9)..(9) <223> Xaa is Gly, Ala, or no amino acid <220> <221> misc_feature <222> (10)..(10) <223> Xaa is Trp or Phe <220> <221> misc_feature <222> (11)..(11) <223> Xaa is Val, Gly, or Ala <400> 73 Gln Ser Tyr Asp Ser Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 <210> 74 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lox696 VH CDR2 <220> <221> misc_feature <222> (2)..(2) <223> Xaa is Ile or Val <220> <221> misc_feature <222> (4)..(4) <223> Xaa is Trp or Leu <220> <221> misc_feature <222> (5)..(5) <223> Xaa is Asn or Gln <220> <221> misc_feature <222> (6)..(6) <223> Xaa is Ser or Glu <220> <221> misc_feature <222> (7)..(7) <223> Xaa is Gly, Leu, or Pro <220> <221> misc_feature <222> (8)..(8) <223> Xaa is Ser, Tyr, or Asp <220> <221> misc_feature <222> (9)..(9) <223> Xaa is Ile, Thr, or Arg <220> <221> misc_feature <222> (10)..(10) <223> Xaa is Gly or Tyr <220> <221> misc_feature <222> (11)..(11) <223> Xaa is Tyr or Met <220> <221> misc_feature <222> (12)..(12) <223> Xaa is Ala or Asp <400> 74 Gly Xaa Ser Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 75 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lox696 VH CDR3 <220> <221> misc_feature <222> (3)..(3) <223> Xaa is Asn or Ser <220> <221> misc_feature <222> (9)..(9) <223> Xaa is Phe or Leu <220> <221> misc_feature <222> (11)..(11) <223> Xaa is Ile or Val <400> 75 Glu Gly Xaa Trp Asn Tyr Asp Ala Xaa Asp Xaa 1 5 10 <210> 76 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lox696 VL CDR1 <220> <221> misc_feature <222> (5)..(5) <223> Xaa is Ser or Asn <400> 76 Thr Gly Thr Ser Xaa Asp Val Gly Gly Tyr Asn Tyr Val Ser 1 5 10 <210> 77 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lox696 VL CDR2 <220> <221> misc_feature <222> (4)..(4) <223> Xaa is Asn or Lys <400> 77 Asp Val Ser Xaa Arg Pro Ser 1 5 <210> 78 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Lox696 VL CDR3 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> Xaa is Ser, Leu, Met, or Ala <220> <221> misc_feature <222> (2)..(2) <223> Xaa is Ser, Gly, or Gln <220> <221> misc_feature <222> (3)..(3) <223> Xaa is Tyr, Arg, Ser, or Gly <220> <221> misc_feature <222> (4)..(4) <223> Xaa is Thr or Met <220> <221> misc_feature <222> (5)..(5) <223> Xaa is Ser, Trp, Gly, or Val <220> <221> misc_feature <222> (6)..(6) <223> Xaa is Ser or Arg <400> 78 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Ser Thr Asn Trp Val 1 5 10

Claims (89)

  1. 암 줄기세포(CSC)의 증식의 저해 방법으로서, CSC의 증식을 저해하고/거나 생존을 감소시키기에 유효한 양의 렉틴-유사 산화된 LDL 수용체 1(LOX1)의 저해제를 CSC와 접촉시키는 단계를 포함하는 저해 방법.
  2. 제1항에 있어서,
    CSC이 LOX1을 발현하는, 방법.
  3. 제1항에 있어서,
    CSC가 구상체-형성(sphere-forming) CSC인, 방법.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
    CSC가 결장직장암, 췌장암, 폐암, 두경부암, 위암, 간세포암종 및 유방암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 암으로부터 유래된 것인, 방법.
  5. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
    저해제가, LOX1에 결합하는 항체, LOX1의 저분자 저해제, 및 LOX1을 인코딩하는 핵산에 혼성화하는 siRNA로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  6. 과거에 치료를 받았지만 치료가 필요한 피험자에서 치료적으로 내성인 암의 치료 방법으로서, 치료적으로 내성인 암에 존재하는 암 줄기세포(CSC)를 저해하거나 사멸시키기에 유효한 양의 LOX1 저해제를 상기 피험자에게 투여하는 단계를 포함하는 치료 방법.
  7. 과거에 치료를 받았지만 치료가 필요한 피험자에서 치료적으로 내성인 암의 치료 방법으로서, 치료적으로 내성인 암을 치료하기에 유효한 양의 LOX1 저해제를 상기 피험자에게 투여하는 단계를 포함하는 치료 방법.
  8. 제6항 또는 제7항에 있어서,
    CSC가 LOX1을 발현하는, 방법.
  9. 제6항 또는 제7항에 있어서,
    CSC가 구상체-형성 CSC를 포함하는, 방법.
  10. 제6항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서,
    CSC가 결장직장암, 췌장암, 폐암, 두경부암, 위암, 간세포암종 및 유방암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 암으로부터 유래된 것인, 방법.
  11. 제6항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서,
    저해제가, LOX1에 결합하는 항체, LOX1의 저분자 저해제, 및 LOX1을 인코딩하는 핵산에 혼성화하는 siRNA로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  12. 암 줄기세포(CSC)를 포함하는 암의 치료 방법으로서, 암에서 CSC를 저해하거나 사멸시키기에 유효한 양의 LOX1 저해제를 치료가 필요한 피험자에게 투여하는 단계를 포함하는 치료 방법.
  13. 암 줄기세포(CSC)를 포함하는 암의 치료 방법으로서, 암을 치료하기에 유효한 양의 LOX1 저해제를 치료가 필요한 피험자에게 투여하는 단계를 포함하는 치료 방법.
  14. 제12항 또는 제13항에 있어서,
    CSC가 LOX1을 발현하는, 방법.
  15. 제12항 또는 제13항에 있어서,
    CSC가 구상체-형성 CSC를 포함하는, 방법.
  16. 제12항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서,
    CSC가 결장직장암, 췌장암, 폐암, 두경부암, 위암, 간세포암종 및 유방암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 암으로부터 유래된 것인, 방법.
  17. 제12항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서,
    저해제가, LOX1에 결합하는 항체, LOX1의 저분자 저해제, 및 LOX1을 인코딩하는 핵산에 혼성화하는 siRNA로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  18. 되풀이되거나(recurring) 재발된 암을 앓고 있는 피험자에서 암의 치료 방법으로서, 암에서 CSC를 저해하거나 사멸시키기에 유효한 양의 LOX1 저해제를 상기 피험자에게 투여하는 단계를 포함하는 치료 방법.
  19. 되풀이되거나 재발된 암을 앓고 있는 피험자에서 암의 치료 방법으로서, 암을 치료하기에 유효한 양의 LOX1 저해제를 상기 피험자에게 투여하는 단계를 포함하는 치료 방법.
  20. 제18항 또는 제19항에 있어서,
    CSC가 LOX1을 발현하는, 방법.
  21. 제18항 또는 제19항에 있어서,
    CSC가 구상체-형성 CSC를 포함하는, 방법.
  22. 제18항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서,
    CSC가 결장직장암, 췌장암, 폐암, 두경부암, 위암, 간세포암종 및 유방암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 암으로부터 유래된 것인, 방법.
  23. 제18항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서,
    저해제가, LOX1에 결합하는 항체, LOX1의 저분자 저해제, 및 LOX1을 인코딩하는 핵산에 혼성화하는 siRNA로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  24. 암의 되풀이 또는 재발의 예방 방법으로서, 암의 되풀이 또는 재발을 예방하기에 유효한 양의 LOX1 저해제를 암의 되풀이 또는 재발의 예방이 필요한 피험자에게 투여하는 단계를 포함하는 예방 방법.
  25. 제24항에 있어서,
    암이 암 줄기세포(CSC)를 포함하는, 방법.
  26. 제25항에 있어서,
    CSC가 LOX1을 발현하는, 방법.
  27. 제25항에 있어서,
    CSC가 구상체-형성 CSC를 포함하는, 방법.
  28. 제25항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서,
    CSC가 결장직장암, 췌장암, 폐암, 두경부암, 위암, 간세포암종 및 유방암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 암으로부터 유래된 것인, 방법.
  29. 제24항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서,
    저해제가, LOX1에 결합하는 항체, LOX1의 저분자 저해제, 및 LOX1을 인코딩하는 핵산에 혼성화하는 siRNA로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  30. 암을 앓고 있는 피험자에서 암 재발의 위험성의 감소 방법으로서, 암에서 CSC를 저해하거나 사멸시키기에 유효한 양의 LOX1 저해제를 상기 피험자에게 투여함으로써 피험자에서 암 재발의 위험성을 감소시키는 단계를 포함하는 감소 방법.
  31. 제30항에 있어서,
    CSC가 LOX1을 발현하는, 방법.
  32. 제30항에 있어서,
    CSC가 구상체-형성 CSC를 포함하는, 방법.
  33. 제30항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서,
    CSC가 결장직장암, 췌장암, 폐암, 두경부암, 위암, 간세포암종 및 유방암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 암으로부터 유래된 것인, 방법.
  34. 제30항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서,
    저해제가, LOX1에 결합하는 항체, LOX1의 저분자 저해제, 및 LOX1을 인코딩하는 핵산에 혼성화하는 siRNA로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  35. 암 줄기세포(CSC)를 LOX1 저해제와 접촉시키는 단계를 포함하는, 암 줄기세포(CSC)의 제거 방법.
  36. 제35항에 있어서,
    CSC가 LOX1을 발현하는, 방법.
  37. 제35항에 있어서,
    CSC가 구상체-형성 CSC인, 방법.
  38. 제35항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서,
    CSC가 결장직장암, 췌장암, 폐암, 두경부암, 위암, 간세포암종 및 유방암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 암으로부터 유래된 것인, 방법.
  39. 제35항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서,
    저해제가, LOX1에 결합하는 항체, LOX1의 저분자 저해제, 및 LOX1을 인코딩하는 핵산에 혼성화하는 siRNA로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  40. 조성물에서의, 암에서 암 줄기세포(CSC)를 저해하거나 사멸시키기에 유효한 양의 LOX1 저해제의 용도.
  41. 제40항에 있어서,
    CSC가 LOX1을 발현하는, 용도.
  42. 제40항에 있어서,
    CSC가 구상체-형성 CSC를 포함하는, 용도.
  43. 제40항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서,
    CSC가 결장직장암, 췌장암, 폐암, 두경부암, 위암, 간세포암종 및 유방암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 암으로부터 유래된 것인, 용도.
  44. 제40항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서,
    저해제가, LOX1에 결합하는 항체, LOX1의 저분자 저해제, 및 LOX1을 인코딩하는 핵산에 혼성화하는 siRNA로 이루어진 군으로부터 선택되는, 용도.
  45. 암세포를 포함하는 시료에서 암 줄기세포(CSC)의 존재의 확인 방법으로서,
    시료를 LOX1 핵산 서열 또는 LOX1 아미노산 서열에 결합하는 제제와 접촉시키는 단계;
    상기 제제와 LOX1 핵산 서열 또는 LOX1 아미노산 서열 사이의 결합의 존재 또는 부재를 검출하는 단계; 및
    상기 제제와 LOX1 핵산 서열 또는 LOX1 아미노산 서열 사이의 결합의 검출 시, 시료 내 CSC의 존재를 식별(identifying)하는 단계
    를 포함하는 확인 방법.
  46. 제45항에 있어서,
    시료 내 LOX1 핵산 서열 또는 LOX1 아미노산 서열의 양을 정량화하는 단계, LOX1 핵산 서열 또는 LOX1 아미노산 서열의 양을 LOX1 핵산 또는 LOX1 아미노산의 참조 수준과 비교하는 단계, 및 검출된 양이 참조 수준보다 높은 경우 시료 내 CSC의 존재를 식별하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  47. 제45항 또는 제46항에 있어서,
    상기 제제가 검출 가능한 모이어티를 추가로 포함하는, 방법.
  48. 제45항 또는 제46항에 있어서,
    상기 제제가, 엄격한 혼성화 조건 하에 LOX1 핵산 서열에 혼성화하는 핵산 서열을 포함하는, 방법.
  49. 제45항 또는 제46항에 있어서,
    상기 제제가, LOX1 아미노산 서열에 특이적으로 결합하는 항체를 포함하는, 방법.
  50. 암세포 집단에서 암 줄기세포(CSC)의 수의 선택적인 감소 방법으로서, 암세포 집단에서 CSC를 저해하거나 사멸시키기에 유효한 양의 LOX1 저해제를 암세포 집단과 접촉시키는 단계를 포함하는 감소 방법.
  51. 제50항에 있어서,
    CSC가 LOX1을 발현하는, 방법.
  52. 제50항에 있어서,
    CSC가 구상체-형성 CSC를 포함하는, 방법.
  53. 제50항 내지 제52항 중 어느 한 항에 있어서,
    CSC가 결장직장암, 췌장암, 폐암, 두경부암, 위암, 간세포암종 및 유방암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 암으로부터 유래된 것인, 방법.
  54. 제50항 내지 제53항 중 어느 한 항에 있어서,
    저해제가, LOX1에 결합하는 항체, LOX1의 저분자 저해제, 및 LOX1을 인코딩하는 핵산에 혼성화하는 siRNA로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  55. 종양 성장의 감소 또는 저해 방법으로서, 종양 성장을 감소시키거나 저해하기에 유효한 양의 LOX1 저해제를 종양과 접촉시키는 단계를 포함하는 감소 또는 저해 방법.
  56. 제55항에 있어서,
    종양이 LOX1을 발현하는, 방법.
  57. 제55항에 있어서,
    종양이 구상체-형성 CSC를 포함하는, 방법.
  58. 제55항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서,
    종양이 결장직장암, 췌장암, 폐암, 두경부암, 위암, 간세포암종 및 유방암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 암으로부터 유래된 것인, 방법.
  59. 제55항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서,
    저해제가, LOX1에 결합하는 항체, LOX1의 저분자 저해제, 및 LOX1을 인코딩하는 핵산에 혼성화하는 siRNA로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  60. 종양 크기의 감소 방법으로서, 종양 크기를 감소시키기에 유효한 양의 LOX1 저해제를 종양과 접촉시키는 단계를 포함하는 감소 방법.
  61. 제60항에 있어서,
    종양이 LOX1을 발현하는, 방법.
  62. 제60항에 있어서,
    종양이 구상체-형성 CSC를 포함하는, 방법.
  63. 제60항 내지 제62항 중 어느 한 항에 있어서,
    종양이 결장직장암, 췌장암, 폐암, 두경부암, 위암, 간세포암종 및 유방암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 암으로부터 유래된 것인, 방법.
  64. 제60항 내지 제63항 중 어느 한 항에 있어서,
    저해제가, LOX1에 결합하는 항체, LOX1의 저분자 저해제, 및 LOX1을 인코딩하는 핵산에 혼성화하는 siRNA로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  65. 환자에서 종양 성장의 감소 또는 저해 방법으로서, 종양 성장을 감소시키거나 저해하기에 유효한 양의 LOX1 저해제를 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 감소 또는 저해 방법.
  66. 제65항에 있어서,
    종양이 LOX1을 발현하는, 방법.
  67. 제65항에 있어서,
    종양이 구상체-형성 CSC를 포함하는, 방법.
  68. 제65항 내지 제67항 중 어느 한 항에 있어서,
    종양이 결장직장암, 췌장암, 폐암, 두경부암, 위암, 간세포암종 및 유방암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 암으로부터 유래된 것인, 방법.
  69. 제65항 내지 제68항 중 어느 한 항에 있어서,
    저해제가, LOX1에 결합하는 항체, LOX1의 저분자 저해제, 및 LOX1을 인코딩하는 핵산에 혼성화하는 siRNA로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  70. 환자에서 종양 크기의 감소 방법으로서, 종양 크기를 감소시키기에 유효한 양의 LOX1 저해제를 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 감소 방법.
  71. 제70항에 있어서,
    종양이 LOX1을 발현하는, 방법.
  72. 제70항에 있어서,
    종양이 구상체-형성 CSC를 포함하는, 방법.
  73. 제70항 내지 제72항 중 어느 한 항에 있어서,
    종양이 결장직장암, 췌장암, 폐암, 두경부암, 위암, 간세포암종 및 유방암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 암으로부터 유래된 것인, 방법.
  74. 제70항 내지 제73항 중 어느 한 항에 있어서,
    저해제가, LOX1에 결합하는 항체, LOX1의 저분자 저해제, 및 LOX1을 인코딩하는 핵산에 혼성화하는 siRNA로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  75. 환자에서 종양 침습성 또는 전이의 저해, 감소 또는 예방 방법으로서, 종양 침습성 또는 전이를 저해하거나, 감소시키거나 예방하기에 유효한 양의 LOX1 저해제를 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 저해, 감소 또는 예방 방법.
  76. 제75항에 있어서,
    종양이 LOX1을 발현하는, 방법.
  77. 제75항에 있어서,
    종양이 구상체-형성 CSC를 포함하는, 방법.
  78. 제75항 내지 제77항 중 어느 한 항에 있어서,
    종양이 결장직장암, 췌장암, 폐암, 두경부암, 위암, 간세포암종 및 유방암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 암으로부터 유래된 것인, 방법.
  79. 제75항 내지 제78항 중 어느 한 항에 있어서,
    저해제가, LOX1에 결합하는 항체, LOX1의 저분자 저해제, 및 LOX1을 인코딩하는 핵산에 혼성화하는 siRNA로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  80. CSC에서 분화의 유도 방법으로서, CSC에서 분화를 유도하기에 유효한 양의 LOX1 저해제를 CSC와 접촉시키는 단계를 포함하는 유도 방법.
  81. 제80항에 있어서,
    CSC가 LOX1을 발현하는, 방법.
  82. 제80항에 있어서,
    CSC가 구상체-형성 CSC를 포함하는, 방법.
  83. 제80항 내지 제82항 중 어느 한 항에 있어서,
    CSC가 결장직장암, 췌장암, 폐암, 두경부암, 위암, 간세포암종 및 유방암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 암으로부터 유래된 것인, 방법.
  84. 제80항 내지 제83항 중 어느 한 항에 있어서,
    CSC에서의 분화의 유도가, CSC 집단을 포함하는 암을 앓고 있는 피험자에서 수행되는, 방법.
  85. 제80항 내지 제84항 중 어느 한 항에 있어서,
    저해제가, LOX1에 결합하는 항체, LOX1의 저분자 저해제, 및 LOX1을 인코딩하는 핵산에 혼성화하는 siRNA로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  86. 화학요법이 필요한 환자에서 화학요법-연관 심장 독성의 저해, 감소 또는 예방 방법으로서, 화학요법-연관 심장 독성을 저해하거나, 감소시키거나 예방하기에 유효한 양의 LOX1 저해제를 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 저해, 감소 또는 예방 방법.
  87. 제86항에 있어서,
    저해제가, LOX1에 결합하는 항체, LOX1의 저분자 저해제, 및 LOX1을 인코딩하는 핵산에 혼성화하는 siRNA로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  88. 제86항 또는 제87항에 있어서,
    화학요법이 안트라사이클린인, 방법.
  89. 제86항 내지 제88항 중 어느 한 항에 있어서,
    LOX1 저해제가, LOX1에 결합하는 항체인, 방법.
KR1020187011440A 2015-09-30 2016-09-29 암 줄기세포의 저해를 위한 조성물 및 방법 KR20180054818A (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201562235144P 2015-09-30 2015-09-30
US62/235,144 2015-09-30
PCT/EP2016/073362 WO2017055511A1 (en) 2015-09-30 2016-09-29 Compositions and methods for inhibiting cancer stem cells

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20180054818A true KR20180054818A (ko) 2018-05-24

Family

ID=57121217

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020187011440A KR20180054818A (ko) 2015-09-30 2016-09-29 암 줄기세포의 저해를 위한 조성물 및 방법

Country Status (13)

Country Link
US (2) US11192948B2 (ko)
EP (1) EP3356414A1 (ko)
JP (1) JP6938478B2 (ko)
KR (1) KR20180054818A (ko)
CN (1) CN108290952B (ko)
AU (2) AU2016329409B2 (ko)
CA (1) CA3000285A1 (ko)
HK (2) HK1255053A1 (ko)
IL (1) IL258242B2 (ko)
MA (1) MA43342A (ko)
RU (2) RU2021120719A (ko)
SG (1) SG10202002926UA (ko)
WO (1) WO2017055511A1 (ko)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EA202191656A1 (ru) * 2018-12-21 2021-10-26 23Эндми, Инк. Анти-il-36 антитела и способы их применения
CN111303280B (zh) * 2020-03-22 2022-01-07 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 高中和活性抗SARS-CoV-2全人源单克隆抗体及应用

Family Cites Families (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
US5639641A (en) 1992-09-09 1997-06-17 Immunogen Inc. Resurfacing of rodent antibodies
US20040042972A1 (en) 2002-04-11 2004-03-04 Medimmune Vaccines, Inc. Spray freeze dry of compositions for intranasal administration
WO2003087339A2 (en) 2002-04-11 2003-10-23 Medimmune Vaccines, Inc. Spray freeze dry of compositions for pulmonary administration
US7135180B2 (en) 2002-04-11 2006-11-14 Medimmune Vaccines, Inc. Preservation of bioactive materials by freeze dried foam
KR20050011741A (ko) 2002-04-11 2005-01-29 메드이뮨 백신즈 인코포레이티드 분무 건조에 의한 생물학적 활성 물질의 보존
EP1581639A4 (en) 2002-12-17 2006-03-08 Medimmune Vaccines Inc HIGH PRESSURE PULVISATION OF BIOACTIVE MATERIALS
JP2006022063A (ja) * 2004-07-09 2006-01-26 Univ Nihon Ｌｏｘ−１遺伝子発現抑制剤
WO2008103953A2 (en) * 2007-02-23 2008-08-28 Baylor Research Institute Activation of human antigen-presenting cells through dendritic cell lectin-like oxidized ldl receptor-1 (lox-1)
US20090311271A1 (en) * 2008-05-29 2009-12-17 Wyeth Methods and Compositions for Selective Inhibition of Ligand Binding to the Lectin-Like Receptor for Oxidized Low Density Lipoprotein (LOX-1)
WO2010138171A2 (en) * 2009-05-23 2010-12-02 Incube Labs, Llc Methods for cancer treatment using stem cells
WO2013119964A2 (en) * 2012-02-08 2013-08-15 Stem Centrx, Inc. Identification and enrichment of cell subpopulations
US9778264B2 (en) * 2010-09-03 2017-10-03 Abbvie Stemcentrx Llc Identification and enrichment of cell subpopulations
EP2678682A4 (en) 2011-02-24 2014-10-01 Vermillion Inc BIOLOGICAL MARKERS PANEL, DIAGNOSTIC METHODS AND TESTING NEEDS FOR OVARIAN CANCER
KR20150041149A (ko) * 2012-08-15 2015-04-15 네오스템 온콜로지, 엘엘씨 고순도 암 줄기 세포 및 고순도 암 줄기 세포 개체군의 신속한 생성 방법
UY35620A (es) * 2013-06-21 2015-01-30 Novartis Ag Anticuerpos del receptor 1 de ldl oxidado similar a lectina y métodos de uso
SG11201702385TA (en) 2014-10-01 2017-04-27 Medimmune Ltd Binding proteins specific for lox1 and uses thereof

Also Published As

Publication number Publication date
RU2752610C1 (ru) 2021-07-29
AU2016329409B2 (en) 2019-11-28
AU2020201276B2 (en) 2022-03-17
AU2016329409A1 (en) 2018-05-10
HK1255053A1 (zh) 2019-08-02
CN108290952A (zh) 2018-07-17
IL258242A (en) 2018-05-31
JP6938478B2 (ja) 2021-09-22
RU2021120719A (ru) 2021-11-03
HK1257189A1 (zh) 2019-10-18
US11192948B2 (en) 2021-12-07
CA3000285A1 (en) 2017-04-06
SG10202002926UA (en) 2020-05-28
EP3356414A1 (en) 2018-08-08
IL258242B (en) 2022-10-01
AU2020201276A1 (en) 2020-03-12
US20220195037A1 (en) 2022-06-23
MA43342A (fr) 2018-08-08
JP2018529716A (ja) 2018-10-11
IL258242B2 (en) 2023-02-01
CN108290952B (zh) 2023-05-02
US20180273616A1 (en) 2018-09-27
WO2017055511A1 (en) 2017-04-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP3950716A1 (en) Anti-claudin 18.2 antibody and application thereof
KR102048718B1 (ko) 항-cxcr4 항체 및 항체-약물 접합체
ES2938628T3 (es) Agentes de unión a VEGF/DLL4 y usos de los mismos
US9855342B2 (en) Targeting ABCB5 for cancer therapy
KR20210013165A (ko) GUCY2c에 특이적인 항체 및 이의 용도
TW201909926A (zh) Ｂ７ｈ３抗體－藥物偶聯物及其醫藥用途
TW201632555A (zh) 對ｃｄ７３具專一性之結合分子及其用途
RU2595394C2 (ru) Гуманизированные антитела к cxcr4 для лечения рака
EA032038B1 (ru) Rspo3-связывающие агенты и их применение
CN108064243B (zh) 对lox1具有特异性的结合蛋白及其用途
KR20140125351A (ko) 항-cd98 항체 및 이의 사용 방법
US20200087406A1 (en) Alk7 binding proteins and uses thereof
US20220195037A1 (en) Compositions and methods for inhibiting cancer stem cells
KR20240004860A (ko) 디엘엘3에 대한 결합 분자 및 이의 용도
CN110964107B (zh) Met结合分子、其组合和用途
US20240209112A1 (en) Anti-bcam antibody or antigen-binding fragment thereof
WO2024133132A1 (en) Anti-tgfbeta receptor 1 antibodies and uses thereof
AU2013204245A1 (en) Targeting abcb5 for cancer therapy

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E601 Decision to refuse application