KR20180054597A - 조성물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 원치 않는 효과, 보다 구체적으로 T 세포 매개 치료와 함께 발생하는 원치 않는 효과를 치료 또는 예방하는데 사용하기 위한 NFAT 활성화 억제제를 포함하는 제제에 관한 것이다. 원치 않는 효과는 선택적으로 활성화 T 세포 활성화에 의해 유발되는 사이토카인 방출 증후군(CRS) 또는 위장(GI) 염증과 관련된, 예를 들어, 궤양성 대장염과 같은, 염증성 장질환과 관련된 증상들일 수 있다. 원치 않는 효과를 완화하는 것 외에, 본 발명은 또한 T 세포 매개 치료의 치료적 효과를 유지하는 것을 목적으로 한다.

Description

조성물
본 발명은 치료의 원치 않는 효과를 치료하는데, 예를 들어 완화하는데, 더욱 특히 T 세포-매개된 치료와 함께 발생하는 하나 이상의 원치 않는 효과를 치료하는데 사용하기 위한 약학적 유효 성분을 포함하는 조성물에 관한 것이다. 원치 않는 효과는 사이토카인 방출 증후군(cytokine release syndrome, CRS) 또는 위장(GI) 염증과 관련된, 예를 들어 활성화된 T 세포 활성에 의해 선택적으로 유발되는 궤양성 대장염과 같은 염증성 장질환과 관련된 증상들일 수 있다. 원치 않는 효과를 완화하는 것 이외에도 본 발명은 치료의 유효성(effectiveness)을 유지하는 것 또한 목표로 한다. 조성물은 원치 않는 효과가 관찰되는 보조(adjunct) 치료 동안 또는 예방 치료 동안 적용될 수 있다.
면역계의 T 세포의 활성은 T 세포 수용체(TCR)에 대한 항원-결합에 의존하지만, 다양한 신호 전달 경로, 자극 및 억제 모두의 복잡한 상호 작용에 의해 조절된다는 것이 오랫동안 알려져 왔다. 항원-특이적 T 세포 활성화는 T 세포와 항원-제시 세포(APCs) 사이의 두 개의 신호를 필요로 한다. 첫 번째 신호는 APCs 상 주조직 적합성 복합체(MHC) 분자와 함께 TCR에 항원의 제시를 필요로 한다. T 세포 활성화를 완료하기 위해, T 세포 상의 CD28 수용체와 APCs 상의 동시-자극 분자의 상호 작용이 또한 필요하다. CTLA-4 및 PD-1 체크포인트 수용체를 포함하여 T 세포 면역의 음성 조절자(체크포인트 단백질이라고도 함)는 T 세포 활성을 조절하고 부적절한 T 세포 반응을 예방하기 위해 건강한 개인에게 중요하다. TCR을 통한 비접촉(naive) T 세포의 자극 후, CTLA-4는 상향 조절되고 CD28과 경쟁한다. PD-1 체크포인트 단백질은 만성적으로 자극된 T 세포에서 발현되는 공-억제 분자이며 일반적으로 이의 리간드인, PD-L1 및 PD-L2와의 상호작용을 통해 T 세포 활성을 조절하는데 결정적인 역할을 한다. PD-L1 그리고 정도는 덜 하지만 PD-L2는 많은 혈액학 및 비-혈액학 인간 종양에서 발현되는 것으로 밝혀졌다. 예를 들어 CTLA-4 및/또는 PD-1 리간드 결합의 항체 표적화에 의한 면역 체크포인트 차단(blockade)은 이제 자가 T 세포의 활성을 이용하는 다양한 형태의 암을 다루기 위한 수많은 면역학적 기반 전략 중 하나로 인식되고 있다(Gelao et al. Toxins (2014) 6, 914-933).
TCR에서의 항원-결합을 T 세포 작동자(effector) 기능의 활성화와 연결시키는 핵심 단백질은 NFAT (활성화 T 세포의 핵 인자)이다. NFAT1-4는 칼슘/칼시뉴린(calcineurin)-조절 전사 인자의 패밀리이다. 그들의 발현과 활성화는 다양한 세포 유형에 따라 다르며 그들의 기능은 세포의 상황(context)에 달려있다. 항원 -TCR 결합시 세포질 Ca2 +의 증가는 NFAT를 탈인산화시키는 칼시뉴린의 활성을 증가시킨다. 탈인산화되면 NFAT는 핵으로 이동하여 다른 전사 인자와 상호 작용하여 다양한 전(pro)-염증성 사이토카인의 발현을 유도한다. 핵에서 NFAT는 예를 들어 AP-1과 상호 작용하는 것으로 알려져 있다. 함께, 쌍(the pair)은 게놈의 조절 지역에 결합하여 T 세포를 활성화시키는 유전자 프로그램을 개시한다. 최근, AP-1의 유용성에 따라 NFAT가 T 세포 활성화 또는 기능 소실(exhaustion) 쪽으로 치우친다는 증거가 제시되었다; 그것이 없으면 NFAT는 음성 조절 프로그램을 개시한다(Martinez et al. (February 2015) Immunity 42, 265-278). PD-1/PD-L1 결합은 T 세포의 NFAT 활성화에 영향을 미치는 것으로 알려져 있다. 따라서 항 PD-1 또는 항 PD-L1 항체와 PD-1:PD-L1 상호 작용의 차단은 NFAT 활성화 경로를 재활성화시킬 수 있다(Cong et al. (May 2015) Gen. Eng.Biotechnol, News vol 35, No. 10). NFAT는 또한 CREB-결합 단백질(CBP) 및 p300과 같은 전사 공활성화 인자(coactivators)와 상호작용한다.
NFAT의 핵 진입을 촉진하는 칼시뉴린은 NFAT 활성화에서 가장 잘 특징화된 신호전달 분자이지만, 이는 단독으로는 아니다. 다수의 다른 T 세포 신호전달 분자들 또한 NFAT 활성화와 연관되어 있다. Ras 및 단백질 키나아제 C는 NFAT-AP-1 복합체의 완전한 활성화를 위해 Jun/Fos의 합성 및 활성화를 자극한다. c-Raf와 Rac는 NFAT-CBP 상호작용을 촉진시키는 것으로 나타났다. 대조적으로, 글리코겐 신타 제 키나아제 3에 의한 NFAT의 인산화는 NFAT의 핵 방출(export)을 야기한다. NFAT 활성화를 차단하는 것에 의하여, 글리코겐 신타제 키나아제 3은 T 세포 활성화의 음성 조절자인 것으로 나타났다. 다른 MAPK 중에서 c-Jun N-말단 키나아제는 T 세포에서 칼시뉴린의 NFAT 표적화를 억제하고 세포외 신호-조절 키나아제는 NFAT의 핵 방출(export)을 증가시킨다. p38 MAPK가 NFATp와 NFAT3를 인산화시켜 이들의 핵 방출(export)을 촉진하는 것으로 나타났다. p38 MAPK는 NFAT 프로모터를 활성화시키고, NFAT mRNA를 안정화시키고, NFAT 번역을 증가시키고, NFAT-CBP 결합을 촉진시킨다. p38 MAPK의 전반적인 효과는 NFAT의 활성화이다.
NFAT가 핵으로부터 방출되고 그의 불활성 인산화된 형태로 세포질에 상주하는 휴지(resting) Tconv 세포와는 달리, NFAT 단백질의 분획은 다양한 전사 인자들과 상호작용을 통해, Foxp3 표적 유전자에 선택적으로 결합하는 1차 Treg의 핵에 본질적으로 국한되는 것으로 나타났다. 따라서 Treg 세포가 칼시뉴린 억제제에 노출되면 NFAT의 핵에서의 방출이 유발되지 않으므로, 이는 그의 핵 이동(translocation)이 칼시뉴린 활성에 독립적임을 가리킨다. 중요하게, Tregs는 IL-2의 존재하에서 칼시뉴린 억제제에 저항성이 있고 항 CD3 자극에 반응하여 증식을 지속하는 반면, 비-Tregs의 증식은 칼시뉴린 억제제에 의해 소실된다. 또한, PMA는 T 세포 활성화에는 필요하지만 NFAT에는 필요하지 않은 다른 전사 인자를 활성화시키는데, 이오노마이신(ionomycin)의 부재 하 Treg의 증식을 선택적으로 유도한다. 자기-MHC 클래스 II와의 TCR 상호 작용은 PMA로 유도된 Treg 증식에 필요하지 않다. 독특하게, Tregs는 PMA에 의해 확장되거나 칼시뉴린 억제제의 존재 하 Treg 표현형과 기능성을 유지한다(Li, Q et al., Constitutive Nuclear Localization of NFAT in Foxp3+ Regulatory T Cells Independent of Calcineurin Activity J Immunol. 2012 May 1;188(9):4268-77).
Tconv 세포에서의 것과 유사하게 조절 T 세포-흉선-유래 자연 발생 조절 T 세포 (nTreg)를 제어하는 데에 있어 NFAT의 역할은 칼슘 신호를 포함한다. 그러나, Tconv 세포에서와는 달리, Treg 제어 및 활성은 Foxp3 유전자의 NFAT 결합 영역에 결합을 야기하는 Foxp3 (Fork head box P3)와 같은 상이한 전사 인자와의 NFAT의 상호 작용을 포함한다. TGF-β에 의한 말초적으로 유도된 Treg (iTreg)의 생성은 CD4+ T 세포가 iTreg로 분화하는 능력이 사라진(missing) NFAT 패밀리 구성원의 수와 함께 현저하게 감소하기 때문에 NFAT 발현에 의존하는 것으로 알려져 있다. TGF-β로 유도된 iTreg에서 Foxp3의 발현은 존재하는 개별 구성원보다는 NFAT의 역치 값에 달려있다고 결론지을 수 있다. 이는 NFAT1, NFAT2 또는 NFAT4 단독 또는 조합이 결핍된 마우스에서 nTreg의 빈도가 변경되지 않았기 때문에 iTreg 개발에 대해 특유하다. 중요하게, nTreg와 iTreg 둘다의 기능은 nTreg와 iTreg에서 더 적은 핵 NFAT가 반영된 견고한 NFAT 수준에 독립적이었다. Treg 세포가 마우스 모델에서 대장염이나 이식 거부를 억제할 수 있다는 것이 이전에 밝혀졌다. Vaeth는 NFAT 구성원의 결실이 생체 외에서 또는 대장염 및 생체 내 이식에서 억제자 활성을 변화시키지 않는다는 것을 입증했다. 이 시나리오는 Treg 기능을 유지하면서 선택적으로 전(pro) 염증성 전통적 T 세포를 표적으로 하는 자가 면역 질환 및 이식치료에서의 높은 NFAT 활성의 억제를 강조한다(Vaeth M, et al. (2012). Dependence on nuclear factor of activated T cells (NFAT) level discriminates conventional T cells from Foxp3+ regulatory T cells. Proc Natl Acad Sci USA 109(40):16258-16263).
동종 조혈 모세포 이식(allo-HCT)의 면역학적 합병증인 이식편대숙주병(GvHD)은 주로 NFAT-1 및 NFAT-2 활성화 T 세포에 의해 유도된다는 것이 최근에 확립되었다. GvHD를 촉진시키는 중요한 요소는 화학 요법 및/또는 방사선 요법을 사용하는 allo-HCT를 위해 필수적인 조건화 요법(conditioning regime)이다. 이러한 처리는 GI 장벽 손상 및 염증성 사이토카인의 국소 방출을 동반하기 쉽다. 이것은 NFAT 활성화를 통한 T 세포 활성화를 유도하여 전(pro)-염증성의 사이토 카인 분비를 유발하고 사이토카인의 폭풍을 일으킬 수 있다. 대조적으로, allo-HCT 치료에 의해 공여자 T 세포 중에 또한 제공되는 Foxp3 + 조절 T 세포의 선택적인 억제 또는 결실을 통해 NFAT-1 및 NFAT-2가 결핍된 Treg 세포가 활성을 유지함이 최근에 확립되었다. 또한, NFAT-1 및 NFAT-2가 결핍된 Tconv 세포가 GvHD를 유도하는 능력은 제한적이다. 따라서, 이식의 바람직한 이식편-대-백혈병(GvL) 효과를 촉진시키는 데 중요한 것으로 여겨지는 세포 집단인 Tregs에서의 NFAT 활성은 필수적이지 않음이 제안되었다. 정상적인 NFAT 발현 T 세포와 비교하여 NFAT가 결핍된 T 세포 증식 및 표적 세포, 조직 또는 기관으로의 회기가 감소한다는 것은 주목할만하다(Vaeth et al. (January 2015) PNAS 112, 1125-1130).
NFAT 활성화는 T 및 B 세포 활성화 및 T 및 B 세포 발달 뿐만아니라 수지상 세포를 비롯한 다양한 다른 면역 세포에서 중요한 역할을 한다. 동종 조혈모세포 이식 (HSCT) 후 T 세포 발달 동안 T 세포 전구체와 이식편-대-숙주병(GVHD) 중 증식하는 T 림프구의 공간-시간적인 활성화 패턴은 HSCT 후 첫째날 공여자 T 세포가 말초 림프절 및 장(intestine)으로 이동하여 장에서 NFAT 활성화가 우세함을 보여주었고, 이는 GVHD 발달 중 동종활성화(alloactivation)의 초기 단계에서 장 내 NFAT 활성화 공여자 T 세포에 대한 중요한 역할을 시사한다. NFAT 단백질의 탈인산화와 그 다음 탈인산화된 NFAT의 세포질에서 핵으로의 이동을 포함하는 T 세포 수용체 자극 후 NFAT의 활성화는 신속하며, 인터루킨-2 (IL-2), 인터페론 γ (IFNγ), 종양 괴사 인자-α (TNFα)를 포함하나 이에 제한되지 않는 T 세포 활성화와 관련된 몇 가지 중요한 유전자의 조절과 연관된다. BMT 후 첫 2~3일에, 공여자 T 세포는 말초 림프절 (PLN)과 장으로 이동하였으나 NFAT 활성화는 주로 PLN이 아닌 장에서 나타났다. 다음날, 4 내지 8일에 NFAT 활성은 비슷하였으나; PLN에는 장에서 보다 T 세포가 유의하게 많았으며, 전반적으로 장 내에서 훨씬 높은 비율의 활성화된 T 세포를 야기하였다. 그 뒤, 구성 신호에 대한 NFAT의 활성화 비율은 각 시점에서 장 내에서 더 높았다(Na et al. Concurrent visualization of trafficking, expansion, and activation of T lymphocytes and T cell precursors in vivo; Blood, 16 September 2010 volume 116, no. 11). 이 관찰은 장에서 세포 당 더 많은 활성화 또는 상대적으로 높은 백분율의 활성화 세포를 시사한다. 모두가 GvHD의 발병 중 동종활성화(alloactivation) 작용의 초기 단계에서 장의 지배적인 역할을 가리킨다.
GvHD에 대한 통상적인 치료는 사이클로스포린 A 또는 타크로리무스(FK506)와 같은 NFAT 억제제를 사용한다. 현재, 각 약물의 유일하게 이용 가능한 제형은 주사 또는 경구 투여 후 광범위한 전신 노출을 제공하기 위한 것이다. 이들 약물 모두는 칼시뉴린 작용을 억제하여 NFAT의 활성화를 억제한다. GvHD에서 이점을 제공하기 위해 필요한 용량인, 일반적으로 고용량으로 처음 주사를 투여 한 다음 경구로 초기 용량을 높게 투여하면 전신이 높은 수준의 광범위한 NFAT 억제에 노출되며 억제는 NFAT 패밀리의 다양한 구성원 사이를 차별하지 않는다. 그러한 높은 용량에서, 전신 농도는 신장, 간, 중추 신경계 및 심장 혈관계와 같은 기관의 조직 및 세포에 직접 심각한 부작용을 유발할 수 있는 상당한 잠재력을 갖는 것으로 알려져 있다. 또한, 광범위한 전신 NFAT 억제는 신체 전체에 걸쳐 IL-2 발현의 억제를 야기한다. 따라서 사이클로스포린 A나 타크로리무스와 같은 NFAT 저해제는 심한 부작용을 일으킬 수 있는 알려진 잠재력 외에도 작동 T 세포의 IL-2 생산 장애로 인한 Treg 기능의 간접 교란(perturbation)을 통해서뿐만 아니라 공여된 T 세포의 감소된 증식을 통해서도 GvL 효과를 방해할 수 있다. 마우스 모델에서 급성 GvHD 동안 NFAT 활성화의 공간-시간 활성화 패턴을 조사한 결과, 가장 강한 NFAT 활성화가 위장관 내였음이 밝혀졌다. 또한, NFAT 활성이 장-회기(gut-homing) 수용체 α4β7 인테그린의 상향 조절과 관련되어 있음이 인식된다. WO 2008/122967에 개시된 바와 같은 CsA의 경구 전달용 조성물(본 출원과 공통된 소유권임)은 GvHD 치료를 위한 CsA 사용의 이점 대 부작용의 균형을 개선하도록 설계된다.
allo-HCT 치료에서, NFAT-활성화 T 세포는 단독으로 잠재적인 생명 위협 문제의 근원이며, NFAT 발현이 감소되거나 제거될 때 감소될 수 있는 문제점이다. Tregs와 관련된 것들을 포함하여 allo-HCT T 세포와 관련된 유익한 GvL 효과는 NFAT 억제에 의해 덜한 정도로 영향을 받지 않는다. 전통적인 allo-HCT 세포 치료법을 통한 면역 조절 외에도 NFAT-활성화 T 세포의 제공 또는 촉진을 통한 임상적 면역 요법이 다양한 질환, 특히 암뿐만 아니라 HIV-1/AIDS와 같은 만성 감염을 포함하는 감염과의 싸움에서 중요한 치료적 전략을 제공할 수 있음이 이제 인정된다. 종양에 대한 자가 T 세포 공격의 촉진을 이끄는 앞서 언급한 면역 체크포인트 차단은 NFAT 활성화 T 세포에 의해 매개되는 그러한 면역 전략을 예시하는 많은 접근법 중 하나 일 뿐이다. 지금 많은 관심을 받고 있는 이러한 다른 접근법은 T 세포가 T 세포 표면의 수용체를 통해 표적 질환 항원, 예를 들어 종양 항원에 직접 또는 간접적으로 결합될 때 활성화되는 T 세포 관여 치료이다. 이러한 치료는 조작된 TCR이 T 세포(immunocore Limited에 의한 조사 하에 ImmTACs(immune mobilising monoclonal TCRs against cancer)에 의해 예시되는)를 사용하는 항-CD3 항체 단편(ScFv)에 연결되는 이중특이성 항체 또는 이중특이성 구조물로 이루어진 이중특이성 T 세포 관여자를 포함하는 다가(multivalent)의 사용을 포함한다. 그들은 또한 키메라 항원 수용체를 제시하도록 조작된 Treg 세포, CAR-T 치료 및 TCR 조작된 T 세포를 포함하는 다르게 변형된 T 세포의 사용을 포함한다. 이러한 세포는 생체 외에서 조작된 자가 세포일 수 있으며 동일한 환자에게 되돌려질 수 있다. 그러나, 조작된 동종 CAR-T 세포도 정상적인 TCR이 유전자 편집에 의해 불활성화의 대상이 되는지 조사 중에 있다. 그러한 치료는 엄청난 치료 잠재력을 지니고 있지만, 원치 않는 부작용이 없지 않으며, 이는 어떤 경우에는 생명에 위협적임이 드러날 수 있고 작동 T 세포 내 NFAT 활성화의 본질적인 결과이다.
전-염증성 사이토카인의 과도한 방출이 GvHD를 매개하는 활성화 T 세포와 관련된 특징인 것과 같이, 이러한 사이토카인 폭풍은 NFAT-활성화 T 세포에 의해 매개되는 세포 치료와 함께 발생하기 쉽고, 일반적으로 사이토카인 방출 증후군으로 언급된다. CRS는 열, 메스꺼움, 두통, 빈맥, 저혈압, 발진 및 호흡 곤란을 특징으로 하며 신경 증상(manifestation)을 나타낼 수도 있다. CRS 발생은 드문 일이 아니지만 종종 관리가 가능하다. 그러나, T 세포 기반 치료로 투여되고 이후 CRS가 발병한 대상체에서는 사망자가 있었다. CRS는 예를 들어 Xu et al. (2014) Cancer Letters 343, 172-178: 'Cytokine release syndrome in cancer immunotherapy with chimeric antigen receptor engineered T cells'에서 검토된 바와 같이 혈액학적 악성 종양을 치료하기 위한 자가 CAR-T 치료의 최근 임상 시험에서 특히 주목할 만하다. 또한, Maude et al. (2014) Cancer J. 20, 119-122: 'Managing Cytokine Release Syndrome Associated with Novel T Cell-engaging Therapies' 및 Minagawa et al. (May 2015) Pharmaceuticals 8, 230-249: 'Seatbelts in CAR therapy: How safe are CARs?'를 참고하라.
이러한 T 세포 치료에 대한 CRS 발병에 대한 책임과 심각성은 기저(baseline) 사이토카인 수준, 종양 부담(burden) 및 T 세포 투약 뿐아니라 전처리(pre-conditioning)와 연결되어 왔다. CAR-T 세포 주입시 기저 사이토카인 수준이 높거나 단기간에 표적 세포와 접촉하는 CAR-T 세포가 다량일 경우 CRS가 신속하고 심각하게 유발될 수 있다. 사이토카인 프로파일이 크게 변화하는 동안 IFN-γ, TNF-α 및 IL-6이 가장 빈번하게 모니터링되는 사이토카인이다. IFN-γ와 IL-6은 문제성 CRS 환자의 대부분에서 10배 이상 증가된다.
사이토카인 방출 증후군을 야기하는 생물학적 제제의 투여는 장기 이식 중에 전신 면역 억제제로서 투여되는 NFAT를 유도하는 것으로 알려진 생물학적 제제인 항-CD3 mAb OTK3의 투여와 관련되는 것으로 처음 보고되었다. OKT3 주사 후 1-4 시간 이내에 TNF-α, IFN-γ, IL-6와 같은 전염증성 사이토카인의 혈청 농도가 현저히 상승했다. 가장 최근에는 항 CD28 mAb TGN1412로 치료된 6명의 환자 중 6명에서 사이토카인 폭풍이 보고되었다. 이 보고서에서 주입 후 1시간 이내에 TNF-α 수치가 최고조에 달했고 주입 4 시간 후인 다음 시점에서 IL-2, IL-6, IL-10 및 IFN-γ가 최고 수준에 도달했다(다른 사이토카인의 상승은 IL-4, IL-8, IL-12 및 IL-1β를 포함했다). 그 연구의 6명의 환자 모두 집중치료실에서 보조 치료를 필요로 했으며, 6명 중 2명은 11일 및 21일 동안 광범위한 집중치료를 필요로 했다.
CRS 치료는 코르티코스테로이드 및 보다 최근에는 항 IL-6 단일클론 항체인 토실리주맙(tocilizumab)으로 보고되었다. 코르티코스테로이드는 CRS를 치료하지만 세포 치료의 치료 활성을 중단시킨다. 반면에 토실리주맙(tocilizumab)은 치료 효과를 유지하면서 CRS를 치료하는 것으로 보고되었으나 완전히 검증되지는 않았다. 또한, 토실리주맙(tocilizumab)은 CRS 치료에 항 IL-6 항체를 사용하는 이점을 제시하지만 CRS를 예방하고 상술한 다양한 T 세포 조절 치료 접근법에 대한 보조 치료로 작용하기 위한 접근법으로서 동등하게 효과적으로 사용될 수 있는지는 분명하지 않다. 또한, 주사 가능한 단일항체로서, IL-6 항체는 엄청나게 비쌀 수 있다. 그러므로, T 세포 매개 치료와 관련된 치료적 활성을 유지하면서 CRS를 치료, 감소, 및/또는 예방하는 치료에 대한 필요가 있다.
염증성 장질환에 관련된 증상들은 면역 체크포인트 차단을 포함하는 T 세포 매개 치료에 관련된 원치 않는 "면역-관련 부작용"으로 주목되어 왔다(Gelao et al. ibid). 이것은 궤양성 대장염(UC)과 크론병 모두에서 염증 조직이 다량의 사이토카인을 분비하는 활성화된 T 세포로 심하게 침윤된다는 사실과 일치한다. Shih et al.은 UC 질환이 있는 결장 점막의 침윤 림프구에서 NFAT2의 핵 이동과 활성화를 보고하였다(World J. Gasteroenterol. 14, 1759-1767).
사이토카인 상승은 대부분의 환자에서 측정 가능하지만, 상승의 정도는 CRS의 중증도 또는 치료에 대한 반응성과는 상관관계가 없을 수 있다. 또한 일부 환자는 현저한 사이토카인 상승 없이 증상을 경험하는 반면, 일부 환자는 임상 증상에 비례하여 검사 결과를 입증한다.
결론적으로, 해결될 수 있는 CRS 대상체와 치명적일 수 있는 CRS 대상체를 식별하는 것이 어려울 수 있다. 따라서, T 세포 매개 치료에 걸쳐 보조 치료로서 투여 될 수 있는 임상적으로 효과적이고 비용 효과적인 치료가 필요하다.
사이클로스포린 A는 면역억제 및 항-염증 성질을 갖는 고리형 폴리펩타이드이다. 상기 화합물은 신장, 간, 심장, 복합 심폐(combined heart-lung), 폐 또는 췌장 이식 후 장기 거부반응의 방지, 골수 이식 후 거부반응의 방지; 이식편대숙주병(GVHD); 건선; 아토피 피부염, 류마티스 관절염 및 신장 증후군의 치료 및 예방에 대해 승인되었다(Neoral™ 제품 특성 요약 24/02/2012). 또한 사이클로스포린 A는 중증 치료저항성 판상형 건선, 베체트병, 빈혈, 중증 근무력증 및 과민성 대장 증후군, 크론병, 궤양성 대장염을 포함하는 대장염, 게실염, 주머니염, 직장염, 위장 이식편대숙주병(GI-GVHD), 결장직장암 및 선암을 포함하는 위장관에 발병하는 다양한 질환 및 허혈 유도 질환의 치료를 포함하는 다양한 기타 질환의 치료에 유용할 수 있다. 다양한 기타 질환에 사이클로스포린 A를 이용한 치료가 유익할 수 있고(Landford et al. (1998) Ann Intern Med;128: 1021-1028), 이의 전체가 본원에 참조로 통합된다. 사이클로스포린 A는 궤양성 대장염(Lichtiger et al, 예비 보고서(cyclosporine in the treatment of severe ulcerative colitis), Lancet. 1990;336:16-19; Cohen et al, Intravenous cyclosporine in ulcerative colitis (a five-year experience), Am J Gastroenterol. 1999;94:1587-1592)을 포함하는 염증성 장 질환(Sandborn WJ, a critical review of cyclosporin therapy in inflammatory bowel disease, Inflamm Bowel Dis. 1995;1:48-63)을 포함하는 다수의 위장 질환의 치료에 사용되었다.
그러나, 앞서 언급된 바와 같이 사이클로스포린 A는 고혈압, 신장 기능 손상, 및 신경독성을 포함하는 많은 원치 않는 부작용을 갖는다(Feutren et al, Risk factors for cyclosporine-induced nephropathy in patients with auto-immune diseases, International kidney biopsy registry of cyclosporine for autoimmune diseases, N Engl J Med. 1992;326:1654-1660; Wijdicks et al., Neurotoxicity in liver transplant recipients with cyclosporine immunosuppression, Neurology. 1995;45:1962-1964; and Porter et al, Cyclosporine-associated hypertension, National High Blood Pressure Education Program. Arch Intern Med. 1990;150:280-283).
사이클로스포린 A는 정맥내 제제로서 이용가능하다; Sandimmun™은, 에탄올 및 폴리에톡실화된 피마자유(예를 들어 Kolliphor™ EL) 중의 사이클로스포린 A 50 mg/ml 용액이다. 상기 제품은 또한 에탄올, 옥수수유 및 리네오일 마크로골 글리세라이드 중의 사이클로스포린 A 용액을 함유한 연질 젤라틴 캡슐(Sandimmune™ 연질 젤라틴 캡슐) 및 올리브유, 에탄올, 및 라브라필 M 1944 CS(폴리에톡실화된 올레익 글리세라이드) 중에 용해된 사이클로스포린을 함유하는 경구 투여 용액(Sandimmune™ 경구 용액)을 포함하는, 경구 투여 제제로 시판된다. 더욱 최근에는 DL-α-토코페롤, 무수 에탄올(absolute ethanol), 프로필렌 글리콜, 옥수수유-모노-디-트리글리세라이드, 폴리옥실 40 수소화된 피마자유 중에 용해된 사이클로스포린 A를 함유하는 마이크로에멀전 농축 제제(Neoral™)가 승인되었다. 경구 투여 후 Neoral™ 제제는 마이크로에멀전의 형성을 야기하여 경구 투여 Sandimmune™에 비하여 향상된 생체이용률을 가진다고 서술된다. 류마티스 관절염 또는 건선과 같은 전신 자가면역질환 또는 고형 기관 거부반응을 예방하기 위해 필요한 것으로 여겨지는 전신 면역억제를 가능하게 할 목적으로 주로 개발된, 이들 경구 투여 사이클로스포린 A 조성물은 모두 즉시 방출(instant release) 조성물이며 사이클로스포린 A는 사이클로스포린 A가 전신으로 흡수되는 위 및 소장 중에 고농도로 존재할 것이다.
Sandborn et al.(J Clin Pharmacol. 1991 ; 31 :76-80)은 경구 및 정맥내 뿐아니라 오일-계 및 수-계 관장 후 사이클로스포린의 상대 전신 흡수를 확인하였다. 관장 투여 후 관찰된 무시할 수 있는 혈장 사이클로스포린 농도에 기초하여, 사이클로스포린은 가용화된 경우에도, 결장으로부터 잘 흡수되지 않음이 시사되었다. 그러나 관장은 염증성 장질환의 치료에 현저한 효능을 입증하였다(Ranzi T, et al, Lancet 1989;2:97). 염증성 장질환의 치료에 있어서 정맥내 또는 경구 투여 사이클로스포린 효능은 용량 의존적으로, 결장에의 충분한 농도 도달을 보장하기 위해 고용량이 요구된다. 전신 독성은 용량 및 기간 의존적인 것으로 알려졌다. 염증성 장질환을 치료하기 위해 승인된 소프트-겔 또는 에멀전 기반 제형의 경구 또는 주사 투여 후 필요한 농도에서, 부작용이 생길 가능성이 높다. 따라서, 사이클로스포린이 많은 학습된 치료 가이드라인 중 치료적 선택으로 언급되지만, 이의 권고되는 사용은 3개월 이하로 제한되며 혈압 모니터링은 말할 것도 없고, 신장 및 간 기능 뿐아니라 혈액 내 약물 농도의 빈번한 모니터링이 요구된다.
환자에게 투여하기 적합한 형태로 약학적 유효 성분을 제형화하는 것은 발달된 과학 분야이다. 이는 또한 약물의 효능에 있어 핵심 고려 사항이다. 약물 및 다른 유효 성분을 제형화하는 방법에는 많은 예가 있다. 이들 제형의 목표는 다양하며 전신 흡수의 증가, 새로운 투여 경로의 허용, 생체이용률 향상, 활성 대사 감소, 또는 원치 않는 투여 경로의 회피에 이를 수 있다.
WO 2008/122965는 사이클로스포린을 적어도 결장에서 방출하는 변형 방출(modified release) 성질을 갖는 경구 사이클로스포린 미니캡슐 조성물을 개시한다. WO2010/133609는 분산된 오일 액적(droplet)이 있는 수용성 중합체 매트릭스를 포함하고, 변형 방출 코팅을 포함하는 조성물을 개시한다. 개시된 조성물은 또한 유효 성분을 함유한다.
개시의 간략한 개요
치료의 유효성(effectiveness)을 유지하면서 NFAT-활성화 T 세포에 의해 매개되는 치료와 관련된 면역-관련 부작용(adverse effects)을 감소하거나 예방하기 위한 GI로 전달되는 NFAT 활성화 억제제의 신규한 용도가 지금 제안된다.
NFAT-활성화 T 세포에 의해 매개되는 치료와 함께 발생하는 하나 이상의 원치 않는 효과를 치료하는데 사용하기 위한 NFAT 활성화 억제제를 포함하는 조성물이 제공되며, 여기서 상기 원치 않는 효과는 사이토카인 방출 증후군(CRS) 및 위장 염증과 관련된 증상들에서 선택되며, 여기서 상기 조성물은 위장관으로 투여되어 상기 하나 이상의 원치 않는 효과가 치료의 유효성의 유지와 함께 치료된다.
NFAT 활성화 억제제를 포함하는 조성물은 NFAT 활성화 T 세포에 의해 매개되는 치료와 함께 발생하는 하나 이상의 원치 않는 효과를 치료하기 위해 사용될 수 있다. 원치 않는 효과는 사이토카인 방출 증후군 및 위장관 염증과 관련된 증상들, 예를 들어, 궤양성 대장염 및 크론병과 같은 염증성 장질환과 관련된 증상들에서 선택될 수 있다. 조성물은 위장관(GIT)으로 투여될 수 있다. 하나 이상의 원치 않는 효과는 NFAT-활성화 T 세포에 의해 매개되는 치료의 유효성을 유지하면서 치료된다. 조성물은 NFAT 억제제를 GIT의 특정 영역(region) 또는 GIT 전체에 걸쳐서 공급하기 위한 것일 수 있다. 조성물은 선택적으로 조절된 또는 제한된 전신 흡수를 제공할 수 있다. 본 출원에 걸쳐 NFAT 활성화 억제제는 NFAT 억제제로 언급될 수 있다. 그러므로 두 가지 용어, "NFAT 활성화 억제제" 및 "NFAT 억제제"는 동등한 것으로 간주된다.
NFAT 활성화 억제제를 포함하는 조성물에 의해 치료되는 원치 않는 효과는 NFAT-활성화 T 세포에 의해 매개되는 치료와 함께 발생한다. 이는 원치 않는 효과가 NFAT-활성화 T 세포에 의해 매개되는 치료에 의해 야기될 때를 포함하고, 치료는 선택적으로 NFAT 활성화 억제제를 포함하는 조성물과 공동-투여된다. 공동-투여는 NFAT 활성화 억제제를 포함하는 조성물이 NFAT-활성화 T 세포에 의해 매개되는 치료에 동시에, 순차적으로 또는 별도로 투여되는 상황을 포함한다.
또한, NFAT 활성화 억제제를 포함하는 조성물은 NFAT-활성화 T 세포에 의해 매개되는 치료에 의해 유발되거나 함께 발생하는 하나 이상의 원치 않는 효과로 고통받는 환자를 치료하는데 사용될 수 있다.
실시양태에서 원치 않는 효과는 NFAT-활성화 T 세포에 의해 매개되는 치료에 의해 유발되거나 함께 발생하는 NFAT-활성화 T 세포 유발 CRS 또는 NFAT-활성화 T 세포 유발 GI 감염이다.
이러한 투여는 바람직하게 NFAT 활성화 억제제의 조절-방출 제형을 사용하는 경구 투여이다. 조성물은 NFAT 활성화 억제제를 GIT의 특정 부위에 방출하는 조절되거나 변형된 방출 조성물일 수 있다. 예를 들어, 조성물은 NFAT 억제제를 위, 소장(십이지장, 공장, 회장), 대장(맹장, 결장, 직장) 또는 이의 조합 내에서 방출되도록 조정될 수 있다. 바람직하게, 사용되는 조성물은 공지 제형 및 이하 더 논의되는 제형을 포함하여, 경구 투여를 위한 사이클로스포린 A의 조절 방출 제형이다. 이는 원치 않는 효과를 치료하는, 예를 들어 NFAT-활성화 T 세포에 의해 매개되는 치료에 관련된 우려되는 면역 부작용을 완화하거나 예방하는 비용 효과적인 방법을 제공한다. 이와 같이, 개입(intervention)은 치료와 관련된 원치 않는 효과의 발생 후 발생하는 임의의 심각한 효과를 기다릴 필요가 없다.
본 발명의 조성물은 면역 부작용(예를 들어, CRS)과 같은 진단된 원치 않는 효과를 치료(완화)하기 위해 투여될 수 있는 것으로, 또는 그러한 원치 않는 효과의 발생을 예방하거나 감소시키기 위한 예방적 조성물로서 인식될 수 있다. 그러한 예방적 투여는 T 세포 매개 치료 효과와 함께 보조 치료일 수 있으나, 예를 들어 전처리(pre-conditioning) 요법 동안 또는 후에, T 세포 치료 활동에 추가적으로 선행할 수도 있다. 바람직하게, 조성물은 NFAT-활성화 T 세포에 의해 매개되는 치료와 함께 보조치료로서 임의의 전처리(pre-conditioning) 요법 전체에 걸쳐 GI관으로 투여될 수 있다.
NFAT-활성화 T 세포를 표적 질환 항원, 특히 종양 항원으로 제공 또는 촉진하는데 의존하는 치료들의 수가 증가하고 있다. 본 발명은 그러한 활성화된 T 세포가 의도된 치료적 이점을 위해 사용될 때마다 사용될 수 있다. 그러나, 그의 사용은 화학치료법 및/또는 방사선치료를 사용하는 전처리(pre-conditioning) 요법이 자가 T 세포를 고갈시키기 위해 사용될 때 특히 특혜를 받을 것으로 예상된다. 그러한 예에서, 전처리 요법 전체에 걸쳐 또는 적어도 NFAT-활성화 T 세포에 의해 매개되는 치료의 이전에 본 발명에 따른 조성물을 투여하는 것이 바람직할 수 있다. 상기한 바와 같이 그러한 투여는 또한 바람직하게 실제 치료 기간 중에 계속될 수 있고, 치료가 혈액학적 질병에 관한 것일 경우 allo-HCT의 적용 동안 계속될 수 있다. 본 발명의 적용이 유익할 수 있는 NFAT-활성화 세포에 의해 매개되는 치료의 예는 이제 이하 더 간략히 기술된다.
세포 치료에서 투여용 세포 유형은 동종(allogenic) 또는 자가(autologous)일 수 있다. 또한, 세포 치료는 변형되거나 변형되지 않을 수 있다. 세포 치료는 변형되거나 변형되지 않은 동종 또는 자가의 임의의 조합일 수 있다. 세포 치료는 조혈모세포 이식, 전혈 수혈, 혈청 수혈 또는 이의 분획을 포함할 수 있고, 이들 모두는 천연 세포 집단 및 이들의 부분을 포함한다. 세포 치료법 치료 전략은 또한 특정 줄기세포 집단의 분리 및 이동, 작동 세포의 투여, 성숙 세포를 다능성 세포가 되도록 유도, 및 성숙 세포의 재프로그램화를 포함한다. 다량의 작동 세포 투여는 암 환자, 미해결된 감염이 있는 이식 환자 및 눈에 화학적으로 파괴된 줄기세포를 가진 환자들에게 유익할 수 있다.
본 발명과 관련된 세포 치료는 다음 접근법을 포함한다: (i) 종양 세포를 죽이는 환자 자신의 정주성(resident) 면역 세포(예를 들어, T 세포)를 활성화시키기 위해 고안된 수지상 세포와 같은 면역세포 치료, 및 (ii) 암 세포를 직접 찾고, 인지하고 죽이는 T 세포와 같은 면역 세포의 직접적 주입. 두 경우 모두, 치료 세포는 환자에게 주입 전 실험실에서 제조되고 수확될 수 있다. 면역 세포, 예를 들어 T 세포는 원하는 성질로 선택될 수 있고 주입 전 실험실에서 많은 수로 키워질 수 있다. 이러한 세포 치료의 도전(challenge)은 치료를 위해 충분한 기능과 수의 세포를 생성하는 연구원들의 능력을 포함한다.
치료는 또한 유전자 및 세포 치료 둘다의 조합을 포함하는 치료일 수 있다. 구체적으로, 치료는 면역세포에 의해 발현될 때, 이들 세포가 특이적으로 암 세포를 인지하도록 하는 인공적인 수용체를 암호화하는 유전자를 포함할 수 있다. 이는 이들 유전자 변형 면역 세포가 환자에서 암 세포를 죽이는 능력을 증가시킨다. 이 접근법의 일례는 "키메라 항원 수용체"(CARs)라고 불리는 일종의 새로운 인공 수용체를, 면역 세포, 일반적으로 환자 자신의 면역 세포, 예를 들어 T 세포로 유전자 도입하는 것이고, 이는 그리고 나서 "CAR-T" 세포로 불린다. 따라서 치료는 T 세포 치료일 수 있고, 여기서 T 세포는 종양 특이적 CARs를 발현하도록 유전적으로 변형된다.
본 발명의 치료제로 특히 주목할 점은 종양 침윤 림프구(TILs)의 양자 전이(adoptive transfer) 또는 유전적으로 조작된 T 세포, 및 T 세포-관여 가용성 이중-특이성 제제, 예를 들어 BiTEs 및 ImmTACs를 포함하는 세포-기반 치료이다.
키메라 항원 수용체(CARs)는 TCR 신호전달 복합체의 제타(zeta) 서브유닛을 통해 신호전달을 매개할 수 있다. 이들 CARs의 주된 한계는 생체내에서 CAR-조작된 T 세포의 낮은 지속성이다; CAR 지속성은 진행성 전이암 환자의 종양 퇴행과 상관관계가 있다. CAR은 모두 면역 활성화 및 T 세포 지속성을 강화하기 위해 고안된, CD28, CD27 및 41-BB로부터의 것들과 같은 추가적인 공-자극 신호전달 도메인을 포함할 수 있다.
CAR-조작된 T 세포는 B 세포 항원 CD19를 표적으로 할 수 있다.
치료는 선택적으로 NY-ESO-1의 에피토프 특이적인, TCR 친화성-강화 T 세포일 수 있다.
치료는 가용성 이중특이성 분자에 의해 이루어질 수 있다. 가용성 생물학적 제제의 제조는 세포 기반 치료보다 훨씬 덜 비싸고 시간이 걸릴 수 있다. 일반적으로, T 세포-관여 생물학적 제제는 T 세포 천연 특이성에 독립적인 활성화를 야기하는, T 세포 활성화를 가진(주로 항-CD3 scFv 항체 단편을 통해) -항체 또는 TCR 계- 고-친화성 TAA 인지와 결합하는, 이중-특이성 융합 단백질이다. 모든 항체-기반 접근법 중에서, 트리오맙(Triomabs)이 가장 진보하며 카투막소맙(catumaxomab)이 최근 출시되었다. 이러한 시약은 세 개의 세포: 종양 표적 세포, T 세포 및 악세서리(accessory) 세포(대식세포, 수지상세포 또는 자연살해(NK) 세포) 사이에 다리 형성을 가능하도록 하기 위해 추가적인 Fc (fragment crystallisable) 성분을 혼입한다. EpCam 또는 Her2를 표적하는 트리오맙(Triomab)은 현재 다양한 고형 종양 적응증에서 1-3상 임상 시험 중에 있다. T 세포-관여 항체(BiTEs)는 단일 폴리펩타이드 사슬로 생산되는 두개의 단쇄 가변 단편(scFv)을 포함한다. 가장 진보된 BiTE - CD19 표적 제제 - 는 급성 림프구성 백혈병 환자의 2상 시험에서 80%의 반응률을 보였다. 또한, 초기 단계 임상 개발에는 안정화된 쇄간 이황화 결합으로 연결된 분리된 폴리펩타이드로 제조되는, 밀접하게 관련된 DARTS (dual affinity retargeting antibodies) 및 항체 단편이 머리에서 꼬리 배열(head to-tail arrangement)로 접힌 비-공유 동종이량체로 생산되는 사가(tetravelent) 탠덤(tandem) 디아바디(TandAbs)가 있다. 항체와 달리 TCR-기반 생물학적 제제는 잠재적으로 표적 항원의 전체 레퍼토리에 접근한다; 그러나 가용성 TCRs을 생산해야 하는 어려움(challenge) 때문에 역사상 진전이 제한적이었다. 암에 대한 면역 이동 단클론 TCRs (Immune mobilising monoclonal TCR)(ImmTACs)은 해결책을 제공한다. ImmTACs는 새로운 쇄간 이황화 결합에 의해 안정화되고 생체내 및 시험관내에서 강력한 T 세포 매개 종양 세포 살해를 유발하기 위해 항-CD3 scFv에 융합되는, pMHC에 대해 피코몰(picomolar) 친화도를 가지도록 조작된 가용성 TCR을 포함한다. ImmTACs는 T 세포 종양 인지에 가장 관련 있는 장애물 중 하나를 극복하면서, pMHC에 대해 피코몰 친화도를 갖는 TCR-기반 가용성 시약의 제1세대를 대표한다. 가장 진보된 ImmTAC은 전이성 흑색종 환자의 1/2상 임상 시험에서 현재 시험중인 gp100 펩타이드 표적제이다: 일부 유망한 예비 자료들이 이들 연구에서 나오고 있다.
그러나 환자 면역계의 고유한 힘을 이용하는 다른 접근법은 재직접(redirected) T 세포 치료의 안정성과 임상적 성공을 더욱 향상시키는데 초점이 있다. 접근법은 암과 정상 조직에서의 표적 발현의 개선된 이해 뿐아니라 적절한 표적의 선택에 대한 더 나은 이해를 포함한다. 이는 잠재적 항원의 광대한 배열에 접근할 수 있는 TCR 기반 표적 시스템에 있어서 다른 무엇보다 매우 중요하다. 이와 함께 가장 유망한 파이프라인 후보자의 진전을 보장하기 위해서는 임상 안전 및 독성을 예측하기 위해 보다 정교한 시험관내 및 인 실리코(in silico) 도구를 사용하여 종합적인 전임상 검사를 적용하는 것이 중요하다. 실제로 TCR 기반 치료법에 대한 효과적인 전임상 경로가 최근 기술되었다. 또한, 유도성 자살 시스템과 같은 양자 전이된 T 세포에 대한 '중지' 메커니즘의 실현은 임상 안전을 향상시킬 수 있다.
암의 복잡성 및 면역계를 회피하는 능력을 고려할 때 성공적인 치료(예를 들어, 종양 근절 또는 종양 성장 또는 전이 억제)에는 치료법의 조합이 필요할 것이다. 조합(combination) 치료는 본원에 기술된 NFAT 활성화 T 세포에 의해 매개되는 2가지 이상의 치료를 포함할 수 있고 또는 하나 이상의 그러한 치료를 다른 시약 예를 들어, 화학치료 또는 항체(이하 논의되는 화학치료제 시약과 같은)와 조합하는 것은 효능 및 반응 내구성을 개선할 수 있다. 조합 치료는 상가적이거나 또는 보다 바람직하게 개별적인 시약 단독의 사용에 비하여 상가적 효과 이상을 제공할 수 있다. 예를 들어, 항-PD-1와 같은 면역 체크포인트 항체 억제제와 재직접(redirected) T 세포 사이의 잠재적 시너지는 T 세포 음성 조절을 억제하는 결과로 지속적으로 더욱 활성임을 증명할 수 있다. 임의의 조합은 면역자극 성질을 보유하는 분자를 포함할 수 있다.
본 발명은 GI '오프 타겟(off target)' 면역-유도(immune-driven) 부작용에 대해 보호하기 위해 전체 GIT 또는 특정 실시양태에서 적어도 결장이 NFAT 억제제에 노출되도록 및 '온 타겟(on target)' 효과에 영향을 주지 않고 비-GI '오프 타겟(off target)' 효과에 대해 보호하기 위해 동력학(kinetics)이 향후 조절되어 전신 노출을 제공하도록 광범위한 NFAT 억제제의 약동학을 선택적으로 조절하는데 초점을 둔다. 이는 가용화된 NFAT 억제제, 예를 들어, 사이클로스포린을 GIT 전체에 걸쳐 또는 적어도 결장에서 방출하는 제형의 개발로 달성된다.
활성화될 때, 이의 긍정적인 성질이 암 세포의 직접적 또는 간접적 살해인, 염증을 유도하는 T 작동 세포 - 주로 Th1, Th2 및 Th17 - 이외에, 다른 유형의 T 세포인, T 조절 세포가 반대균형을 제공한다. 따라서, '오프 타겟' T 세포의 감소된 활성화 및 Treg 세포의 우선적인 활성화를 통해 NFAT 억제제의 조합이 '오프 타겟' 효과를 방지하면서 T 작동 세포 활성화가 '온 타겟' 효과를 제공하기 위해 조절될 수 있다면, Treg:Teff 세포의 개선된 균형과 또한 '온 타겟' 및 '오프 타겟 효과의 적절한 균형을 제공하는데 유익할 것으로 기대될 것이다.
말초 조직에서 통상적인 나이브(naive) CD4+ 세포로부터 생성된 iTreg 또는 적응성(adaptive) Treg에서 Foxp3 발현에 NFAT가 필요하다는 보고가 있다. iTreg와 관련하여, NFAT2는 Foxp3의 CNS1과 결합하는 것으로 보고되었는데, 이는 장(gut) 관련 림프 조직에서 iTreg 생성에 결정적인 요소로 간주된다. 녹아웃 마우스를 사용하여, NFAT1 및 NFAT4와 비교하여 NFAT2에 대한 FoxP3 발현의 의존성을 분석하였다. TGF-β는 항-CD3/28 및 IL-2와 결합하여 WT CD4+CD25- T 세포에서 강력한 Foxp3 발현을 유도하는 반면, NFAT2가 없는 경우에는 유도가 적당히 감소하지만 NFAT1 및 NFAT2 둘다 없는 경우에는 더 감소하였다. NFAT1 단일 및 NFAT1-NFAT4 이중 결핍 CD4+CD25-T 세포에 대한 추가 분석은, 하나의 패밀리 멤버 결핍은 Foxp3-발현 세포를 일부 감소켰지만 두 멤버의 손실은 iTreg 유도를 거의 폐기시켰음을 보여주었다. 같은 그룹은 사이클로스포린 A에 의한 모든 NFAT 멤버의 약리학적 억제가 항CD3/28 + TGF-β 및 IL-2로 자극하는 동안 나이브 CD4+ T 세포에서 Foxp3 유도를 완전히 차단함을 입증했다. 흉선 세포/T 세포 특이적 Nfat2 녹아웃을 사용하여, NFAT2가 없는 흉선 유래 nTreg의 발달이 분석되었다. 데이터는 흉선, 비장 및 림프절(LN)의 CD4+ 세포 집단 중 Foxp3+ CD25+ nTreg의 빈도가 NFAT 멤버의 임의의 개별 또는 조합의 결핍에 영향을 받지 않는다는 것을 보여주었다. nTreg가 NFAT 발현에 관계없이 발달하는 반면, iTreg의 말초 발달은 개별 패밀리 멤버에 대한 관대함(permissiveness)을 가진 높은 NFAT 수준에 결정적으로 의존한다는 것으로 요약되었다. 이 데이터는 FoxP3를 발달 및 발현시키기 위해 NFAT 전사 인자에 대한 iTreg의 의존을 강조하지만, 일단 nTreg 또는 iTreg로 분화되면 억제자(suppressor) 기능은 낮은 수준의 NFAT의 존재 하에서라도 발휘될 수 있다. T 세포에서 발현된 셋의 NFAT 패밀리 멤버 중 둘이 결합된 결실이 Treg 억제 활성을 거의 손상시키지 않는다는 발견에 의해 뒷받침되는데, 이는 최소 수준의 NFAT 활성 수준이 조절 기능에 충분하거나 억제 용량이 NFAT와는 독립적인 것을 가리키며, 이 군은 높은 NFAT 활성은 Treg 기능을 위해 회피되어야 한다는 암시로 결론내렸다. 이를 바탕으로 저자들은 칼시뉴린 억제제에 대한 편향을 제안했다. 칼시뉴린 억제제 CsA 및 FK506은 덜 바람직하고 NFAT 활성화를 특이적으로 감소시켜서, 이에 의해 기능적으로 전염증성 Teff를 억제하나 Treg는 억제하지 않는 R11-VIVIT 및 MCV1과 같은 새로운 치료제들이 진전되어야 한다고 제안되었다(Vaeth et al. PNAS, October 2, 2012; vol. 109; no. 40; 16263).
동일한 군은 사이클로스포린 또는 타크로리무스를 사용하는 pan-NFAT 약리학 적 억제가 면역-종양학 치료 동종 조혈모세포 이식 접근법과 관련된 '오프 타겟' 부작용을 감소시키는데 효과적이었다는 점을 강조했다. 이 면역 치료의 '온 타겟' 유익한 효과는 종양 세포를 공격하는 활성화 T 세포 때문이다. '오프 타겟' 부작용은 다양한 조직과 기관을 공격하는 동종 T 림프구의 활성화와 확장에 의해 유발된다. '온 타겟' 효과를 유지하면서 Treg가 '오프 타겟' 효과를 완화시킨다는 이전의 보고에 기초하고, Treg가 아니라 Teff에 대한 NFAT의 필수적인 역할을 강조하였던 초기 NFAT 녹-아웃 연구를 토대로, 이 군은 활성화 T 세포 항암 활성에 대한 NFATs의 영향 뿐아니라 "오프 타겟" 효과의 면역 발병에 대한 개별적인 NFAT 패밀리 멤버의 구체적 기여를 연구하였다. NFAT가 결핍된 동종 공여자 T 세포가 증식, 표적 조직 회기 및 손상된 작동자 기능을 감소시킬 뿐만 아니라 반대로 동종 조혈모세포 이식 후에 Foxp3+ Treg 빈도를 증가시키는 것으로 밝혀졌다. 이 작업은 NFAT 결핍 Tregs가 완전히 억제되어 '오프 타겟' 효과로부터 보호된다는 것을 입증했다. 이전의 연구는 '오프 타겟' 동안의 공간 -시간적인 NFAT T 세포 활성화 패턴이 '오프 타겟' 효과를 위한 주요 표적 기관인 위장관에서 가장 강력하고 이것이 염증 신호와 동시에 일어났다는 것을 증명했다. 이는 NFAT가 장-회기 수용체 α4β7-인테그린의 상향 조절을 통해 표적 조직 회기에 기능적으로 필수적이라는 이들 NFAT 녹-아웃 연구를 통한 확인과 관련되는 것으로 제안되었다. 이 보고서는 Tregs가 NFAT와는 대개 독립적으로 작동하며 사이클로스포린 치료가 작동 T 세포의 IL-2 생산 장애로 인해 Treg 기능을 간접적으로 동요시킨다는 것을 제안했다. 저자들은 특정 NFAT에 대해 더 높은 특이성을 가진 다른 NFAT 억제제가 사이클로스포린과 같은 pan-NFAT 억제제와 관련된 심각한 부작용을 제한할 수 있는 '오프 타겟' 효과를 조절할 수 있다고 결론지었지만 동시에 T 세포 치료와 관련된 '온 타겟' 효과는 부인하지 않았다. '오프 타겟'과 '온 타겟' 효과 모두를 감소시킬 수 있는 사이클로스포린의 사용은 '온 타겟' 효과를 유지하기 위해 저-용량 IL2로 보충될 수 있다고 제안되었다(Vaeth et al.; PNAS;, 2015, 112권, 4호, 1129쪽). 상기는 pan-/비-선택적 NFAT 억제제 및 사이클로스포린의 존재 하에 Treg 기능의 유지는 외인성 IL2로부터 이익을 얻음을 부정적 교시(teach away)한다. 본 발명은 pan-NFAT 억제제(외인성 IL2의 부재 하)의 선택적 분포가 생존을 향상시키고, 표적 장기에서의 사이토카인 발현을 조절하며, NFAT-활성화 T 세포 치료 모델에서 Treg;Teff 균형을 개선함을 증명한다.
따라서, 본 발명의 일 실시양태에서 IL2 (예를 들어 외인성 IL2)는 본 발명의 조성물과 함께 공동-투여되지 않고, 공동-투여는 선택적으로 IL2의 동시의, 순차적인 또는 별도의 투여를 말한다.
NFAT 활성화 T 세포에 의해 매개되는 치료
본 발명은 T 세포 표면의 수용체를 통해 표적 질환 항원에 직접적 또는 간접적으로 결합할 때 T 세포가 활성화되는 임의의 형태의 T 세포 관여 치료가 사용될 때마다 적용될 수 있다. 이 수용체는 자연 발생 T 세포 수용체, 예를 들면, 표적 항원, 예를 들어 관심 있는 확인된 종양 항원의 부분을 포함하는 백신으로 활성화된, 또는 변형된 T 세포 수용체, 예를 들어 종양 항원에 대해 지시된, 또는 예를 들어 고 친화성 T 세포 수용체일 수 있다. 본 발명의 적용으로 특히 유익할 것으로 기대되는 다른 T 세포 관여 치료는 상기 언급한 바와 같이 이중특이성 항체 및 CAR-T 치료와 같은 이중특이성 T 세포 관여자의 사용을 포함한다.
NFAT 활성화 T 세포에 의해 매개되는 치료는 본원 및 하기에 논의되는 치료 중 임의의 것일 수 있다. 선택적으로, 치료법은 이중특이성 T 세포 관여자(이중특이성 T 세포 관여 치료로도 지칭됨), CAR 세포 치료(예를 들어, CAR-T 세포 치료) 또는 면역 체크포인트 차단 치료이다.
이중특이성 T 세포 관여자( Bispecific T Cell Engagers )
이중특이성 항체와 같은 이중특이성 T 세포 관여자는 T 세포 항원 및 질환 항원, 예를 들어 종양 항원 또는 T 세포 수용체 및 질환 항원, 예를 들어 종양 항원 둘 다에 결합할 수 있다. 이러한 이중특이성 T 세포 관여자는 특히 다양한 암 치료와 관련하여 많은 관심을 끌고 있다. 이러한 이중특이성 항체의 제작은 잘 알려져 있으며, 연결된 항체 단편, 예를 들어 결합된 scFvs의 사용을 포함한다. 예를 들어, 치료 항체 블리나투모맙(blinatumomab)은 CD19/CD3 이중특이성 T 세포 관여자 항체이다. 임상 시험에서 이의 사용은 CRS를 일으키는 것으로 보고되었다. 그러한 CRS 발생을 관리하기 위해 현재까지 보고된 시도는 스테로이드 사용 또는 토실리주맙(tocilizumab)의 추가 사용에 중점을 두었다(예를 들어, Bouhassira et al. (2015) Expert Opin. Biol. 15, 403-416 참고). 항-CD3 항체는 NFAT의 강력한 활성제이다. 이 경로를 통한 NFAT의 활성화는 NFAT 활성화 억제제에 의해 억제된다. 따라서, 본 발명의 조성물은 항-CD3 항체 또는 이의 단편을 포함하는 치료에 사용될 수 있다.
상기한 바와 같이, 대안적으로 항-CD3 scFv를 단일클론 TCR과 연결시켜 치료 적 이중특이성 T 세포 관여자를 제공하는 것이 알려져 있다. 이중특이성 항체의 경우에서와 같이, 이러한 이중특이성 구조물은 암 치료와 관련하여 특히 흥미롭다. 예를 들어 흑색종-관련 항원 gp-100의 HLA-A2 제한 펩타이드에 대해 친화도가 높은 조작된 TCR을 갖는 이러한 이중특이성 구조물은 현재 악성 흑색종의 치료를 위해 연구 중이다. 유사한 구조물이 암 치료 분야에서 널리 응용될 수 있다. 또한, 본 발명은 T 세포 표적화 및 활성화의 치료적 이점이 피할 수 없는 부수적인 부작용, 특히 CRS 및 위장 염증과 관련된 증상들의 위험을 자동적으로 수반하는 임의의 임상적 적용에서 보조 치료 또는 예방적으로 사용을 확인할 수 있다.
NFAT 활성화 T 세포에 의해 매개되는 치료는: 블리나투모맙(Blinatumomab) [CD19 및 CD3 Ⅲ (모두)], MEHD7945A [HER3 및 EGFR Ⅱ (결장직장암, 두경부암], ABT-122 [TNF 및 IL-17 Ⅱ (류마티스 관절염)], ABT-981 [IL-1α 및 IL-1β Ⅱ (골관절염)], SAR156597 [IL-4 및 IL-13 Ⅱ (IPF)], MM-111 [HER2 및 HER3 II (위암)], IMCgp100 [단클론 T 세포 수용체 항-CD3 scFv 융합 단백질, GP100 및 CD3 II (흑색종)], RO5520985 [ANG2 및 VEGFA II (결장직장암)], XmAb5871 [CD19 및 CD32B I/II (류마티스 관절염)], COVA322 [TNF 및 IL-17A I/IIa (건선)], ALX-0761 [IL-17A 및 IL-17E I (건선)], AFM13 [CD30 및 CD16A I (호지킨 림프종)], AFM11 [CD19 및 CD3 I (비호지킨 림프종)], MEDI-565 [CEA 및 CD3 I (GI 선암)], 얼투막소맙(Ertumaxomab) [HER2, CD3 및 FcR I (고형 종양)], MGD006 [CD123 및 CD3 I (AML)], MGD007 [GPA33 및 CD3 I (결장직장암)], LY3164530 [MET 및 EGFR I (진행암)]에서 선택된 이중특이성 항체일 수 있다.
이중특이성 T 세포 관여자는 다가(multivalent), 예를 들어, 3가(trivalent) 또는 4가(quadrivalent) 항체 또는 단백질일 수 있다. 예를 들어, 치료는 4가 탠덤 디아바디(tetravalent tandem diabody, TandAb)일 수 있고, 이의 일례는 그의 결합 부위 두개로 T 세포의 CD3 수용체에 결합하고 다른 두 결합 부위로 종양 수용체에 결합한다(예를 들어, CD19 또는 EGFRvIII 수용체를 통해). 4가 탠덤 디아바디의 예는 AFM11 및 AFM21을 포함한다. 이중특이성 T 세포 관여자는 3가, 예를 들어 단백질 또는 항체일 수 있고, 여기서 예를 들어 하나의 결합 부위는 T 세포 상 수용체(예를 들어 CD3)에 결합하고 다른 두 결합 부위는 표적 종양의 두 개의 다른 수용체에 결합한다. 종양의 두 개의 다른 부위를 표적하는 것은 T 세포 관여자 치료의 보다 큰 선택성 및/또는 효능을 제공할 것으로 예상된다.
치료는 4가 항체, 예를 들어 AMv-564 (4가 항체 모방(mimetic), CD33/CD3은 Amphivena Therapeutics, Inc에 의해 개발됨)를 포함하는 다가 항체일 수 있다.
고 친화성 T 세포 수용체( TCRs )
NFAT 활성화 T 세포에 의해 매개되는 치료는 종양 관련 항원을 인지할 수 있는 고 친화성 T 세포 수용체로 조작된 T 세포로 실시될 수 있다. 그러한 TCRs의 예는 NY-ESO-1 TCR 1, HPV-16 E6 TCR1, HPV-16 E6 TCR, MAGE A3/A6 TCR1, MAGE A3 TCR1, SSX2 TCR1, NY-ESO TCR (NY-ESO-1 암 고환 항원을 표적하는 조작된 더 높은 친화성 TCR), MAGE-A-10 TCR (MAGE를 표적하는 조작된 더 높은 친화성 TCR), BPX-701 (흑색종 또는 PRAME 내 우선적으로 발현되는 항원을 발현하는 고형 종양에 대한 TCR 제품 후보자), ATTCK20 (항체-표적화 종양 세포 살해 20 (ATTCK20)은 CD20을 표적하는 단클론 항체인, 리툭시맙과 함께 투여되는 환자의 항체-결합 T 세포 수용체(ACTR) T 세포의 조합이다. ACRT은 새로운 암 세포 살해 활성을 창출하기 위해 두 개의 다른 인간 면역 세포 유형, 자연 살해(NK) 세포 및 T 세포에서 정상적으로 발견되는 수용체로부터의 성분들을 조합한 키메라 단백질이다. ATTCK는 ACTR을 발현하는 T 세포가 암 세포 표면상 종양-표적 항체에 관여할 때 발생한다) 중에서 선택되는 TCR을 포함한다.
CAR 치료
CAR 치료는 CAR-면역 세포 치료, 예를 들어 CAR-T일 수 있다. 본 발명에 따른 NFAT 활성화 억제제를 포함하는 조성물의 투여는 자가 CAR-T 치료 및 동종 CAR-T 치료 둘다에 관련하여 특히 중요하고, 특히 이러한 치료들은 혈액학적 악성 종양, 예를 들어 B 세포 급성 림프아구성 백혈병(B-ALL), 만성 림프구성 백혈병(CLL) 및 급성 골수성 백혈병(AML)을 다루는 것을 목적으로 한다.
이러한 치료에서, 표적 항원에 대한 수용체는 스페이서로 막관통 도메인 및 T 세포 자극 도메인, 일반적으로 정상적인 T 세포 활성화에 필요한 CD3-제타 도메인 및 적어도 하나의 공동-자극 도메인 예를 들어, CD28 및/또는 4-1BB 신호전달 도메인에 연결된 항체, 예를 들어 ScFV에서 일반적으로 유래한 세포외 항원-결합 부분을 포함하는 T 세포에 의해 제시되는 조작된 키메라 수용체이다. 예를 들어, CD28 공자극 및 CD3- 제타 쇄 신호전달 영역과 융합된 ScFv에서 유래된 항-CD19 단클론 항체를 포함하는 융합 단백질을 발현하는 CAR-T 세포는 B-ALL 환자와 관련하여 많은 주목을 받고 있다. 이러한 조작된 키메라 수용체는 표적 인식에서 HLA 제한을 고려해야 할 필요성을 회피하는 장점을 가지며, T 세포 활성화의 정상적인 유리한 메카니즘을 효과적으로 활용하는 것으로 나타났다; 항원-결합이 NFAT 활성화를 초래할 것으로 나타났다. 그러나 이미 위에서 언급했듯이 CRS는 생명을 위협하는 결과를 가질 수 있는 그러한 치료의 문서로 충분히 입증된 가능성 있는 원치않는 부작용이다.
백혈병 환자에서, 주입된 CAR-T 세포는 말초 혈액에서 다량의 암세포를 만난 후 집중적으로 활성화될 수 있다. CAR-T 세포가 증식하여 CRS를 강화시키거나 CRS의 위험을 증가시킬 수 있다. 더욱이, CAR-T 세포 융합 전의 전처리(pre-conditioning)는 사이토카인 생산을 통해 CRS의 위험을 상당히 증가시킬 수 있다. 상기에서 언급한 바와 같이, 화학치료 및/또는 방사선치료에 의한 전처리는 나이브 T 세포를 활성화 T 세포로 분화시키는 전염증성 사이토카인의 생성과 함께 위장관의 국소 염증과 관련될 수 있다. 또한 NFAT가 활성화 T 세포에서 장-회기 수용체 α4β7 인테그린을 상향조절한다는 것이 알려져 있다.
따라서, 염증성 사이토카인 모니터링은 CAR-T 세포 입양 치료(adoptive therapy)를 수행하는 데에 있어 표준이 되었다. 용량 증량(dose escalation) 전략은 문제가 되는 CRS 발생의 위험을 줄이기 위해 사용될 수 있지만 적절한 시작 용량을 판단하기 어렵고 치료 효능이 감소될 수 있다. 이전에 CRS를 억제하기 위해 시도된 다른 수단은 이상적이지 않다. 예를 들어, 메틸프레드니솔론과 같은 코르티코스테로이드는 경증 및 중등도의 CRS 환자에서 사용되었지만 CAR-T 세포 효능에 영향을 준다. 상기 언급한 바와 같이, IL-6 수용체 항체 요법은 CAR-T 치료에서 CRS를 억제하는데 유리한 것으로 최근에 제안되었지만, 그러한 재조합 생물학적 제제의 사용은 높은 관련 비용을 갖는다. 본 발명은 예를 들어 전신적으로 혈액학적 악성 종양에 대항하여 CAR-T 세포의 정상적인 주요 요구 부위와 분리되지만, CRS의 원치 않는 합병증 발병을 위한 핵심 장소로 예상될 수 있는 GI관에서 유리하게 활성화 T 세포를 발현하는 NFAT를 표적으로 한다. 또한, 본 발명은 GI관 투여용으로 제형화된, NFAT 활성화 억제제, 바람직하게 예를 들어 사이클로스포린 A를 사용할 수 있고, 이는 NFAT 활성화 억제제의 통상의 예방적 사용조차도 타당하게 한다. 대조적으로, 현재 CAR-T 치료 및 기타 T 세포 치료와 관련된 CRS는 일반적으로 CRS가 심각하다고 여겨질 때 예를 들어 스테로이드 치료로의 개입을 고려한 모니터링 대상일 뿐이다.
CAR-T 치료는 임의의 질환 관련 항원, 예를 들어 종양 관련 항원을 표적할 수 있다. 예를 들어, CAR 치료는: 탄산 무수화 효소(Carbonic anhydrase) IX (CAIX), CD19, CD20, CD22, CD30, CD33, CD38, CD44 (특히 변이체 7/8), CD123, CD138, 발암배아성 항원(carcinoembryonic antigen)(CEA), EGFR, EGFRvIII, erb-B2, erb-B3, erb-B4, WT1, c-Met , FAB, GD2, GD3, 흑색종 항원 패밀리 A1 (MAGE-A1), 단백질 melan-A (T 세포 1 또는 MART-1으로 인지되는 흑색종 항원), 글리코프로테인(glycoprotein) 100 (gp100), 메소텔린(mesothelin), mucin 1 cell surface associated (MUC1), NY-ESO1, 전립선 줄기세포 항원(PSCA), 전립선 특이적 막 항원(PSMA), L1 세포 부착 분자(L1CAM; CD171), MUC16(ecto), ROR1, VEGF-R2 및 KDR (종양 신생혈관(Tumour neovasculature)), EGP-2, EGP-30, IL-13R-a2, k-경쇄, TNFRSF17 (BCMA; CD269, SLAM 패밀리 멤버 7　(SLAMF7 또는 CS1)) 및 엡스타인바(Epstein Barr) 바이러스(EBV) 항원에서 선택되는 항원을 표적할 수 있다. CARs의 추가적인 예는 "In -cell immunotherapy: looking forward" Corrigan-Curay et al. Mol. Ther. 2014 Sep; 22(9):1564-74 및 "chimeric antigen receptor T cell therapy to target hematologic malignancies" Kenderian et al. Cancer Res. 2014 Nov 15; 74(22):6383-9에 기술되어 있다.
CAR-T 치료는 CD19, CD20 및 CD123에서 선택된 항원을 표적할 수 있다.
자가 CAR-T 치료
치료는 예를 들어 CD19 CAR1, KTE-C19 CAR, EGFRvIII CAR, JCAR015 (CD19), JCAR017 (CD19), JCAR014 (CD19), BPX-401 (CD19) CBM-C19.1, CAR-T CD19, CTL109 (CD19) JCAR018 (CD22), JCAR023 (L1-CAM), JTCR016 (WT-1), MUC16으로 지시된 CAR-T, 예를 들어 IL-12 분비, MUC-16(ecto) CAR T 세포 ROR1로 지시된 CAR-T, BPX-601 (전립선 줄기세포 항원을 과발현하는 고형 종양 치료를 위한 개발 중 CAR T 제품 또는 PSCA, bb2121 (종양 괴사 인자(TNF) 수용체 수퍼패밀리 멤버 17(TNFRSF17; BCMA; CD269)에 대한 CAR-T 세포 치료), CAR-T CD30 (CD20 항원에 특이적인 CAR T 세포), CAR-T EGFR 및 CART-meso (메소텔린으로 지시된 CAR-T 세포)에서 선택되는 자가 CAR-T 일 수 있다.
동종 CAR-T 치료
치료는 예를 들어 UCART19, UCART123, UCART38, UCARTCS1 및 EBV-CTL에서 선택되는 동종 CAR-T 치료일 수 있다.
면역 체크포인트 차단 치료
면역 체크포인트 차단 치료는 자가 T 세포에 의해 매개되는 치료의 다른 형태이나 이 경우 비변형 T 세포; 하나 이상의 시약, 예를 들어 항체가 사용되어 하나 이상의 알려진 T 세포 억제 경로를 억제한다.
만성 바이러스 감염에서 T 세포 고갈은 이러한 경로의 작동으로 매개되는 T 세포 고갈에 연결되는 것으로 오랫동안 알려져 왔다. PD-1 및 LAG-3, 2B4 및 Tim-3와 같은 다른 억제 수용체는 적어도 부분적으로 상승 작용하여 비-중복(non-redundant) 신호전달 경로를 통한 T 세포 고갈의 확립에 기여한다. 따라서, 억제-수용체 매개 고갈은 환경에서 리간드의 이용가능성에 의해 "조절"된다. 또한 확립된(established) 진행(progressing) 암의 맥락에서 T 세포는 종양 미세 환경에서 높은 종양-항원 부담 및 면역 억제 인자로 인해 만성 감염에서 관찰된 것과 유사한 고갈 상태를 나타내는 것으로 알려져 있다. 실험적 종양 모델 및 인간 종양으로부터 분리된 T 세포는 만성 감염에서 고갈된 T 세포의 많은 표현형 및 기능적 특징을 공유한다: 종양 침윤성 CD8 T 세포는 작동 사이토카인의 생산이 손상되고, PD-1, LAG-3, 2B4, TIM-3, CTLA-4를 포함하는 억제 수용체를 발현하고 고갈된 T 세포를 기술하는 신호전달 경로의 변경을 표시한다.
이러한 배경에 대하여, 음성 체크포인트 수용체의 차단은 암, 특히 PD-1:PD-L1 상호 작용 및 항-CTLA 항체의 항체 차단 치료에 대한 매우 유망한 접근법으로 알려졌다. CTLA-4 차단 단클론 항체인 이필립무맙(Ipilimumab)은 흑색종 치료를 위한 최초의 FDA 승인 암 면역 치료였다. 그러나, PD-1 및/또는 CTLA-4 차단에 의한 T 세포 과소반응(hypo-responsiveness)을 반전시키는 것은 비용이 든다: 일부 환자에서는 부정적인 면역 독성이 일부 중대하고 심지어 치명적일 수 있는 것으로 관찰되었다(Schietinger 및 Greenberg (2014) Trends Immunol. 35, 51-60). 진행성(advanced) 흑색종 환자 총 135명의 항-PD1 단클론 항체 람브롤리주맙(Lambrolizumab)의 임상 시험에서 대개 저등급으로 지정되는 일반적인 부작용을 갖는 유망한 결과가 보고되었다. 그러나, 이 연구는 과도한 사이토카인 생산과 일치하는 부정적인 증상들(adverse symptoms) 및 위장관 염증과 일치하는 증상들을 관찰하지 않은 것이 아니다(Hamid et al. (2013) New Eng. J. Med. 369, 134- 144). 그러나, 그러한 부정적인 증상(adverse symptoms)은 T 세포 과소반응(hypo-responsiveness)을 역전시키는데 내재된 위험이며, 심각성을 예측하거나 완전히 제거하기 어렵다는 것을 명심할 필요가 있다. 본 발명은 NFAT 활성화 억제제, 특히 사이클로스포린 A를 위장관에 투여함으로써 상기 위험을 관리하는 유리한 수단으로 고려된다. 중요한 것은, 그러한 투여는 특히 혈액학적 악성 종양의 치료 표적화의 맥락에서 암을 다루기 위한 상대적으로 고가의 생물학적 제제의 치료 효과를 위태롭게하지 않으면서 그러한 위험의 예방적 관리를 현실적이고 비용 효과적인 선택으로 가능하게 할 수 있다는 것이다.
NFAT의 억제제를 포함하는 조성물과 함께 사용될 수 있는 체크포인트 억제제의 예로는 예를 들어, 항-PD-1/항-PD-L1 억제제; 림프구-활성화 유전자 3 (LAG3; CD223)을 표적으로 하는 항체; 글루코코르티코이드-유발 종양 괴사 인자 수용체(TNFR) - 관련 단백질(GITR; TNFRSF18)/Treg 자극제를 표적으로 하는 항체; 항-CTLA-4 수용체 억제제; 및 항-TIM-3 수용체 억제제를 포함한다.
NFAT 활성화 T 세포에 의해 매개되는 치료는 예를 들어, REGN2810, 옵디보(Opdivo)(니볼루맙(nivolumab), PD-1에 대한 인간 IgG4 mAb), 키트루다(Keytruda)(팸브롤리주맙(pembrolizumab), PD-1에 대한 인간화 IgG4 mAb, MEDI4736은 PD-L1을 표적으로 하는 인간 IgG1 mAb이고, 항-PD-L1 항체 MPDL3280A 및 PDR001 (PDR1)에서 선택되는 항-PD-1/항-PD-L1일 수 있다.
NFAT 활성화 T 세포에 의해 매개되는 치료는 예를 들어 LAG525와 같은 림프구-활성화 유전자 3 (LAG3; CD223)을 표적으로 하는 항체일 수 있다.
NFAT 활성화 T 세포에 의해 매개되는 치료는 예를 들어 여보이(Yervoy)(이필리무맙(ipilimumab), CTLA-4 수용체에 대한 인간 mAb) 및 CTLA-4에 대한 인간 mAb (CD152)인 트레멜리무맙에서 선택되는 항-CTLA-1 수용체 억제제일 수 있다.
NFAT 활성화 T 세포에 의해 매개되는 치료는 예를 들어 MBG453과 같은 항-TIM-3 수용체 억제제일 수 있다.
Th-17 관련 사이토카인 유전자 IL-17A 및 IL-17F 및 IL-23에 대한 림프계 세포(lymphoid cell)의 반응성을 궤양성 대장염 및 크론병과 같은 염증성 장질환을 포함하는 염증성 질환의 병인론과 연결시키는 많은 증거가 현재 있음이 또한 주목할 가치가 있다(Geremia et al.(2011) J. Exp.Med. 208, 1127-1133; Liu et al.(2009) World J. Gastroenterol. 15, 5784-5788). 결장직장암의 경우에, 화학치료는 높은 수준의 IL-17A를 분비하도록 기질(stromal) 세포를 유도하는 것으로 보고되었으며, 이는 T 헬퍼 림프구(Th 17 세포)를 생산하는 IL-17A/F의 분화를 촉진시키는 주요 전사 인자인 RORyt의 경구용 소분자 길항제 개발에서 주목할 만하다. 이러한 RORyt 길항제는 현재 Visionary Pharmaceuticals에서 다양한 Th17 세포 염증성 질환 치료에 사용하기 위해 개발 중이다. 또한 사이클로스포린 A는 이전에 Th17 세포 및 IL17 생산의 감쇠를 통해 스테로이드 내성 염증 질환의 치료에 임상적 효능을 갖는 것으로 시사되었다(Schweiz-Bowers et al. (March 2015) PNAS 4080-4085)). 따라서, 본 발명에 따른 NFAT 활성화 억제제, 특히 GI관으로 경구 전달을 위해 제형화되는 사이클로스포린 A의 사용은 GI 염증과 관련된 GI관 내 국부적 증상, 예를 들어 염증성 장질환과 관련된 증상, 예를 들어 대장염을 감소시키거나 예방하기 위해 RoRyt 길항제와 함께 또는 단독으로 유용하게 고려될 수 있다.
장 상피 세포(intestinal epithelial cell)(IEC) 세포사멸이 궤양성 대장염에 기여하는 것으로 보고되었으며, 염증성 사이토카인 TNF를 표적으로 하는 치료법이 IBD 환자에서 IEC 세포사멸을 억제하는 것으로 밝혀진 것도 주목할 만하다(Qiu et al. (2011) J. Clin. Invest. 121, 1722-1732). 이는 현재 제안된 바와 같이 NFAT 활성화 억제제 사용의 유효성(effectiveness)에 기여할 수 있다.
또한, 본 발명에 의해 고려되는 NFAT-활성화 T 세포에 의해 매개되는 특정 치료법은 GIT에서 세포사멸을 일으킨다. GIT의 세포사멸은 설사와 염증으로 증상을 일으킬 수 있다. 상기 문단과 같이, 본 발명의 조성물은 GIT에서의 세포사멸을 억제하여 치료의 유효성(effectiveness)에 더 기여한다.
본 발명과 관련하여 관심의 대상인 T 세포 치료는 종종 allo-HCT 치료에 대한 가교 치료(bridging therapies)로 사용된다. 본 발명의 중요한 이점은 본 발명이 치료적 NFAT 활성화 T 세포와 함께 발생하는 원치 않는 효과를 치료(완화 또는 예방)하는데 사용될 수 있고, 이후 동일한 조성물의 투여가 allo-HCT 치료의 후속 실행과 함께 GvHD를 완화하거나 예방하기 위해 계속될 수 있다는 점이 인정될 것이다. 따라서, 본 발명은 NFAT 활성화 억제제를 포함하는 조성물을 NFAT 활성화 T 세포에 의해 매개되는 치료(선택적으로 T 세포 치료, 바람직하게 CAR-T 세포 치료)와 함께 발생하는 원치 않는 효과를 치료하기 위한 용도 및 후속 allo-HCT 치료에서 GvHD를 치료하기 위한 용도로 고려한다. 원치 않는 효과는 사이토카인 방출 증후군(CRS) 및 위장 염증과 관련된 증상들, 예를 들어 궤양성 대장염 및 크론병과 같은 염증성 장질환과 관련된 증상들에서 선택될 수 있다. 조성물은 위장관으로 투여됨으로써 하나 이상의 원치 않는 효과가 치료의 유효성의 유지와 함께 감소되거나 예방된다.
allo-SCT와 관련된 전처리(conditioning) 화학치료 및/또는 방사선 치료는 잔여 CAR-T 세포를 박멸할 것이다. 그러나 많은 환자에서 주입된 CAR-T 세포의 수명이 3개월 미만이라는 것을 감안할 때 CAR-T 세포 기능 상실의 간접적인 척도인 B 세포 회복 후까지 allo-SCT를 보류하는 것은 환자가 악성 B 세포의 CAR T 세포 매개 살해의 완전한 혜택을 받도록 보장한다. 소수의 치료 환자 중에서 적합한(eligible) 70%의 환자가 CAR-T 세포 치료 후 allo-SCT를 받았고, 현재까지(2 내지 24개월의 follow up) 보고된 재발 사례는 없었으며, 이는 치료 선택권이 많지 않거나 없는 환자들에게 이 질환의 임상적 결과를 개선하면서, allo-SCT에 대한 가교로서 입양 CAR-T 세포 치료의 잠재력을 뒷받침한다.
또한 본 발명은 allo-SCT 과정 동안 및 그 뒤 사용되기 위한 것일 수 있다.
본 발명은 생물학적 제제로의 치료에 대한 전구체로서 유리하게 사용될 수 있으며, 이러한 생물학적 제제는 T 세포를 활성화시키고, 활성화 메카니즘의 적어도 일부는 NFAT 활성화를 통해 이루어진다.
또한, 본 발명은 치료의 반복 주입(선택적으로 T 세포 관여 치료(예를 들어, CAR-T 세포 치료))과 함께 사용하기 위한 것; 치료(예를 들어, CAR-T 세포 치료)와 함께 사용하기 위한 것일 수 있고, 여기서 치료는 다른 방법과 조합되고; 예방용으로 사용하기 위해; 치료에 사용하기 위해, 여기서 상기 치료는 높은 질환 부담을 갖는 환자에게 투여되고; 그 치료와 함께 사용되기 위해, 상기 치료는 IL-6을 포함하는 전신성 자극제와 조합된다.
높은 종양 부담(tumour-burden)으로도 지칭되는 높은 질환 부담은 일반적으로 진행 암, 예컨대 병기 I, 병기 II, 병기 III 또는 병기 IV의 암 환자를 지칭한다. 높은 질환 부담은 당업자에게 잘 알려져 있으며, 예를 들어 골수에서 >40%, >50%, >60% 또는 >70%의 아세포(blasts)를 갖는 환자로 정의될 수 있으며, 선택적으로 아세포(blasts)는 B-세포 림프아구(lymphoblasts)이다. 높은 질환 부담은 또한 국제 암 관리 연합(UICC)과 암에 대한 미국 합동위원회(AJCC)에 의해 승인된 TNM 시스템을 사용하여 적절히 정의될 수 있다. TNM 시스템은 원발 종양(T)의 크기 및/또는 범위(도달 거리(reach)), 근처 림프절로 전이된 양(N) 및 전이(M)의 존재에 기초한다. 예를 들어, 높은 질환 부담은 암, 모드, 전이(TMN) 병기 시스템에서 T2, 3 또는 4 및/또는 N1, 2 또는 3 및/또는 M1으로 정의되는 암 환자일 수 있다. 예를 들어, 높은 종양 부담은 다음과 같은 암으로 정의될 수 있다: T4 N3 M1, T4 N3 M0, T4 N2 M1, T4 N1 M1, T4 N2 M0, T4 N1 M0, T3 N3 M1, T3 N3 M0, T3 N2 M1, T3 N1 M1, T3 N2 M0, T3 N1 M0, T2 N3 M1, T2 N3 M0, T2 N2 M1, T2 N1 M1, T2 N2 M0 또는 T2 N1 M0.
상기는 NFAT 활성화 T 세포가 질환 퇴치를 위해 활용되고 있는 몇 가지 방법을 강조한다. 더 많은 것들이 고려중에 있다, 예를 들어 고갈된 T 세포에서 AP-1 신호전달을 구제하는 것(rescuing)(Martinez et al. (2015) ibid). 종양 미세 환경에서 생성된 VEGF-A는 VEGF-A/VEGFR을 표적으로 하는 제제에 의해 되돌려질 수 있는 CD8+ T 세포 고갈에 연관된 PD-1 및 다른 억제 체크포인트의 발현을 촉진한다는 것이 또한 밝혀졌다(Voron et al. (January 2015) J. Exp. Med. 212, 139-148). 그러나, T 세포의 활성화에 의존하는 임의의 이러한 치료법은 환자에서 원치 않는 부작용, 특히 CRS 및 위장 염증과 관련된 증상을 일으키지 않으면서 동시에 효과적인 치료 효과를 얻는 것 사이의 균형 잡기에 의존한다는 것이 더욱 강조된다.
원치 않는 효과(Undesirable Effects)
본 발명의 조성물에 의해 치료되는 NFAT-활성화 T 세포에 의해 매개되는 치료와 함께 발생하는 원치 않는 효과는 사이토카인 방출 증후군 또는 위장 염증과 관련된 증상이다. 선택적으로, 증상은 본원에 개시된 임의의 것과 같은 염증성 장질환과 관련될 수 있다. 위장(GI) 염증은 활성화 T 세포 활성에 의해 유발될 수 있으며, 선택적으로 GI 염증은 방사선 또는 화학치료를 받은 환자의 활성화 T 세포 활성에 의해 유발된다. 따라서 GI 염증은 방사선 치료나 화학 치료로 유발된 손상이 있거나 없는 환자에서 활성화 T 세포 활성에 의해 유발될 수 있다.
상기한 바와 같이, CRS는 NFAT-활성화 T 세포의 활성과 관련된 잘 알려진 원치 않는 면역 부작용이다. 이는 심각도가 크게 다를 수 있다. 개입이 바람직한 문제성 CRS는 진단을 위한 다음 기준과 같을 수 있다: (i) 열, 특히 3일 이상의 연일 동안 지속되는 열 (ii) 적어도 하나의 주된 일곱 개의 관련 사이토카인(IFN-γ, IL-6, Flt-3L, 프렉탈카인(fractalkine), IL-5, IL-10 및 GM-CSF)의 수준 증가 (iii) 저혈압 및 저산소증(90% 미만의 PO2)과 같은 독성의 적어도 하나의 임상 징후. 신경학적 변화가 관찰될 수 있다. 예를 들어, 주된 일곱 개의 CRS-관련 사이토카인 중 두 개의 수준이 75배 증가 또는 하나의 그러한 사이토카인의 250배 증가는 CRS 진단의 핵심 수단일 수 있다. 보다 최근에, 중증 CRS 환자들은 CRS가 없거나 비-문제성 CRS를 가진 환자와 비교하여 혈청내 20 mg/dl 이상의 C 반응성 단백질(CRP)의 증가된 수준을 지속적으로 나타냄이 관찰되었다. 그러므로, 약 20 mg/dl 이상의 CRP는 중증 CRS의 혈청 바이오마커로 제안되었다[Patel et al. (2014) Immunotherapy 6, 675-678]. 증가된 혈청 CRP는 그러므로, 예를 들어 예방적으로 투여될 때, 본 발명에 따른 NFAT-활성화 억제제를 투여하거나 GI관으로 그 투여의 유효성(effectiveness)을 모니터링하기 위해 상기 언급한, 다른 진단 마커들과 함께 또는 단독으로 유용한 마커일 수 있다.
CRS가 종종 우려되는 주요한 또는 유일한 원치 않는 효과이지만, 위장관 염증의 본원에서 앞서 언급된 증상들 또한 NFAT-활성 T 세포에 의해 매개되는 치료의 원치 않는 효과로 예상될 수 있다. 그러한 증상들은 과민성 장질환(irritable bowel disease), 크론병(Crohn's disease), 궤양성 대장염, 셀리악병(celiac disease), 장염(gastroenteritis), 십이지장염(duodenitis), 공장염(jejunitis), 회장염(ileitis), 소화성 궤양(peptic ulcer), 주머니염(pouchitis), 컬링 궤양(Curling's ulcer), 충수염(appendicitis), 대장염, 위막성 대장염(pseudomembraneous colitis), 게실증(diverticulosis), 게실염(diverticulitis), 콜라젠성 결장염(collagenous colitis), 선택적으로 GIT에서 나온 전신 감염, 결직장암(colorectal carcinoma) 및 선암(adenocarcinoma)에서 선택된 질환(condition)과 관련되거나 같을 수 있다. 본 발명은 궤양성 대장염 또는 크론병의 증상을 감소하거나 예방하는데 특별한 적용을 찾을 수 있다.
본 발명은 기능적 NFAT 발현이 존재하는 T 세포에 의해 매개되는 임의의 광범위한 치료와 관련하여 그러한 원치 않는 효과를 감소하거나 예방하는데 적용가능하며, 하기에서 추가로 확장될 것이다. 이러한 치료는 T 세포 활성화가 하나 이상의 수단, 예를 들어 표적 항원에 대한 키메라 항원 수용체를 제시하는 T 세포를 면역 체크포인트 차단을 위한 수단, 예를 들어 항-PD1 항체와 결합함으로써 촉진되는 조합 치료일 수 있다.
본 발명은 T 세포 표면의 수용체를 통해 표적 질환 항원에 직접 또는 간접적으로 결합될 때 T 세포가 활성화되는 T 세포 관여 치료의 임의의 형태가 사용될 때마다 적용될 수 있다. 이 수용체는 예를 들면, 표적 항원, 예를 들어 관심의 확인된 종양 항원의 부분을 포함하는 백신에 의해 활성화되는, 자연 발생 T 세포 수용체, 또는 예를 들어 종양 항원에 대하여 지시된, 변형된 T 세포 수용체일 수 있다. 수용체는 T 세포 항원 및 질환 항원, 예를 들어 종양 항원 둘다에 결합하는 이중특이성 항체일 수 있다. 이러한 이중특이성 항체의 구축은 잘 알려져 있고 연결된 항체 단편, 예를 들어, 결합된 scFvs의 사용을 포함한다. 본 발명에 따른 NFAT 활성 억제제를 포함하는 조성물의 투여는 그러나, CAR-T 치료, 특히 혈액학적 악성종양, 예를 들어 B 세포 급성 림프아구성 백혈병(B cell acute lymphoblastic leukaemia)(B-ALL), 만성 림프구성 백혈병(chronic lymphocytic leukaemia)(CLL), 및 급성 골수성 백혈병(acute myelogenous leukaemia)(AML)을 다루는 데 목적이 있는 치료와 같은, 자가 CAR-T 치료 및 동종 CAR-T 치료 모두와 관련하여 특별히 관심 대상이 된다.
이러한 치료에서, 표적 항원에 대한 수용체는 스페이서로 막관통 도메인 및 T 세포 자극 도메인, 일반적으로 정상적인 T 세포 활성화에 필요한 CD3-제타 도메인 및 적어도 하나의 공동-자극 도메인 예를 들어, CD28 및/또는 4-1BB 신호전달 도메인에 연결된 항체, 예를 들어 ScFV에서 일반적으로 유래한 세포외 항원-결합 부분을 포함하는 T 세포에 의해 제시되는 조작된 키메라 수용체이다. 예를 들어, CD28 공자극 및 CD3- 제타 쇄 신호전달 영역과 융합된 ScFv에서 유래된 항-CD19 단클론 항체로 이루어진 융합 단백질을 발현하는 CAR-T 세포는 B-ALL 환자와 관련하여 많은 주목을 받고 있다. 이러한 조작된 키메라 수용체는 표적 인식에서 HLA 제한을 고려해야 할 필요성을 회피하는 장점을 가지며, T 세포 활성화의 정상적인 유리한 메카니즘을 효과적으로 활용하는 것으로 나타났다; 항원-결합이 NFAT 활성화를 초래할 것으로 나타났다. 그러나 이미 위에서 언급했듯이 CRS는 생명을 위협하는 결과를 가질 수 있는 그러한 치료의 문서로 충분히 입증된 가능성 있는 원치않는 부작용이다.
백혈병 환자에서, 주입된 CAR-T 세포는 말초 혈액에서 다량의 암세포를 만난 후 집중적으로 활성화될 수 있다. CAR-T 세포가 증식하여 CRS를 강화시키거나 CRS의 위험을 증가시킬 수 있다. 더욱이, CAR-T 세포 융합 전의 전처리(pre-conditioning)는 사이토카인 생산을 통해 CRS의 위험을 상당히 증가시킬 수 있다. 따라서, 염증성 사이토카인 모니터링은 CAR-T 세포 입양 치료(adoptive therapy)를 수행하는 데에 있어 표준이 되었다. 용량 증량(dose escalation) 전략은 문제가 되는 CRS 발생의 위험을 줄이기 위해 사용될 수 있지만 적절한 시작 용량을 판단하기 어렵고 치료 효능이 감소될 수 있다. 이전에 CRS를 억제하기 위해 시도된 다른 수단은 이상적이지 않다. 예를 들어, 메틸프레드니솔론과 같은 코르티코스테로이드는 경증 및 중등도의 CRS 환자에서 사용되었지만 CAR-T 세포 효능에 영향을 준다. 상기 언급한 바와 같이, IL-6 수용체 항체 요법은 CAR-T 치료에서 CRS를 억제하는데 유리한 것으로 최근에 제안되었지만, 그러한 재조합 생물학적 제제의 사용은 높은 관련 비용을 갖는다. 본 발명은 예를 들어 전신적으로 혈액학적 악성 종양에 대항하여 CAR-T 세포의 정상적인 주요 요구 부위와 분리되지만, CRS의 원치 않는 합병증 발병을 위한 핵심 장소로 예상될 수 있는 GI관에서 유리하게 활성화 T 세포를 발현하는 NFAT를 표적으로 한다.
상기에서 언급한 바와 같이, 이는 특히 자가 T 세포를 고갈시키기 위해 전처리(pre-conditioning)가 수행되는 경우 그러할 수 있다. 화학치료 및/또는 방사선치료에 의한 전처리는 나이브 T 세포를 활성화 T 세포로 분화시키는 선천성 및 후천성 면역 세포에 의한 전염증성 사이토카인 및 케모카인의 생성과 함께 GI관 내 국소 염증과 관련될 수 있다. 또한 NFAT가 장-회기 수용체 α4β7 인테그린을 상향조절한다는 것이 알려져 있다. 또한, 본 발명은 예방적 사용을 위해 바람직하게는 예를 들어 GI관으로 투여를 위해 제형화된 화학 엔티티(chemical entity), 바람직하게는 예를 들어 사이클로스포린을 사용할 수 있다. 대조적으로, CRS는 CAR-T 치료와 관련이 있으며 다른 T 세포 치료는 일반적으로 중증으로 간주될 때 개입의 관점에서 모니터링의 대상일 뿐이다.
따라서, 본 발명은 치료가 환자에서 자가 T 세포를 고갈시키는 전처리 요법을 포함할 때 사용될 수 있다. 전처리는 화학- 및/또는 방사선치료에 의할 수 있다. 본 발명은 NFAT 활성화 T 세포에 의해 매개되는 치료가 화학- 및/또는 방사선치료 전처리 요법을 포함할 때 위장 염증 및 CRS과 관련된 원치 않는 효과를 치료하기 위한 것일 수 있다.
사이토카인 방출 증후군(CRS)은 경증(열, 오한, 피로 및 두통)에서부터 생명을 위협하는 경우(저혈압, 빈맥, 폐부종, 정신 상태의 변화 및 발작)에 이르는 것으로 특징지어질 수 있다. 가장 중증의 경우는 압박기 지원과 기계적 환기가 필요하다. 일반적으로 이들은 사이토카인 및 CAR T 세포에 수반되는 상승과 관련된다. CRS 증상은 치료(예를 들어 CAR T 세포 주입) 투여 후 2일째와 같이 일찍 나타나기 시작할 수 있다.
사이토카인 방출 증후군(CRS)은 투여된 치료와 관련된 집단적 T 세포 활성화, 예를 들어, 그들의 표적 항원에 의한 CAR-T 세포의 집단적 활성화에 관련된 열, 저혈압 및 신경학적 변화를 포함하는 일련의 임상 독성이다. 이 증후군에 관련된 중증 질병은 CAR T 세포와 같은 치료를 더 큰 집단의 환자에 적용하는 데 있어 주된 임상적 한계를 대표한다. CAR T 세포와 같은 세포 치료의 임상 시험 중 관찰되는 독성은 저혈압, 열, 피로, 신부전 및 둔감(obtundation)을 포함한다. 사이토카인 증가는 독성과 동시에 일어나는 것으로 보여지므로, 이는 사이토카인 방출 증후군(CRS)에 이차적인 것으로 여겨진다.
CRS를 나타내는 환자들은 조사된 39개 사이토카인에서 많은 다양한 상승을 보였다. CRS는 IL-2, IFN-g 및 IL-10과 같은 사이토카인의 상승을 특징으로 할 수 있는 반면 다른 것들은 예상보다 덜 두드러지는데; 예를 들어 IL-1b는 식세포, 수지상 세포, 내피 세포 및 간세포에서 생성되고, IL-12는 식세포 및 수지상 세포에서 생산된다.
원치 않는 효과는 CAR T 세포 활성화와 관련된 임상적으로 중요하고, 중증인 CRS (sCRS)일 수 있다. sCRS는 i) 적어도 3일 연일동안의 열; ii) 기저치에서 적어도 75배의 두 개의 사이토카인 최대 배수 변화 또는 기저치에서 적어도 250배의 하나의 사이토카인의 최대 배수 변화(CRS 환자에서 일반적으로 증가되는 것으로 발견되는 일곱 개의 사이토카인의 미리 선택된 군 중); 및 iii) 저혈압(적어도 하나의 정맥 혈관작용성(vasoactive) 승압제(pressor)를 필요로 함), 저산소증(PO2<90%), 또는 신경학적 질병(정신 상태 변화, 둔감 및 발작 포함)과 같은 독성의 적어도 하나의 임상적 징후로 구성된 것으로 정의된다, Davila et al.
CRS의 중증도 및 사이토카인 상승은 CAR T 주입시 종양 부담과 유의한 상관관계가 있다. 그러므로, 본 발명은 높은 종양 부담을 가진 것으로 알려진 대상체에게 더 높은 용량의 NFAT 억제제를 투여하는 것을 고려한다. 대안적으로 또는 추가적으로, NFAT 억제제를 받은 환자(예를 들어 본 발명의 조성물의 투여로)는 더 높은 용량의 세포 치료(예를 들어 CAR-T 세포)를 받을 수 있다. 이 더 높은 용량의 세포 치료는 더 높은 종양 부담과 함께일 수 있고 또는 아닐 수 있다(즉, 더 높은 용량의 세포 치료가 치료 전 종양-부담과 관계없이 투여될 수 있다). 형태학적 잔존 질환(morphologic residual disease)이 없는 환자들은 경미하거나 검출되지 않는 사이토카인 상승을 보인 반면, sCRS를 일으킨 모든 환자들은 형태학적 잔존 백혈병을 가졌다. CRS의 중증도를 구별하고 독성을 언제 치료할지 결정하는 것은 CAR T 세포의 효능을 제한할 수 있는 미숙하고, 불필요한 개입을 피하기 위해 필수적이다.
NFAT 억제제의 용량은 또한 당업자에 의해 이해되는 바와 같이 변경될 수 있다. 투여되는 NFAT 억제제의 양은 본원 다른 곳에서 논의되는 바와 다를 수 있다. NFAT 억제제의 시기선택(timing) 또한 다를 수 있다. 예를 들어, NFAT 억제제는 일정하게 투여될 수 있고(예를 들어 각각 연속적인 날에 선택적으로 같은 시간에) 또는 NFAT 억제제는 맥동성 방식으로 투여될 수 있다(예를 들어 비-연속적인 날에).
CRP 및 CRS의 중증도 사이의 상관관계는 확립되었고 가장 아픈 환자가 40-50 ㎍/ml의 CRP 상승에 도달하였다. sCRS가 있는 환자와 없는 환자 사이의 평균 CRP에서 상당한 차이가 있었다. 그러므로, CRP 수준이 20 ㎍/ml에 도달할 때, 환자들은 임박한 임상 독성 위험에 처한 것이므로 집중적인 모니터링 프로그램을 시작하는 것이 권고된다. 따라서, 본 발명의 조성물은 그들의 CRP 수준이 >5 ㎍/ml, >10 ㎍/ml 또는 >20 ㎍/ml, 예를 들어 5 내지 40 ㎍/ml, 10 내지 40 ㎍/ml, 5 내지 30 ㎍/ml, 5 내지 20 ㎍/ml, 10 내지 30 ㎍/ml, 10 내지 20 ㎍/ml일 때 환자에게 투여될 수 있다.
본 발명은 CRS 또는 유사한 반응의 위험을 제한하면서, 또한 개입 뿐아니라 예방용 프로토콜의 표준화를 가능하게 하는 잠재력을 가지면서, 면역 치료 효능(예를 들어 CAR-T 기능) 및 결과를 강화하는 잠재력을 갖는 치료 알고리즘의 개발을 뒷받침할 것이다. 이러한 치료 알고리즘은 예를 들어 조합 치료 및/또는 용량 요법을 포함할 수 있다.
본 발명의 조성물은 하나 이상의 원치 않는 효과를 감소 또는 예방하는데 사용하기 위한 것이다. 원치 않는 효과는 사이토카인 방출 증후군 및 염증성 장질환에 관련된 증상들에서 선택될 수 있다. 조성물은 적어도 하나의 추가적인 유효 성분, 예를 들어 적어도 하나의 면역억제제를 포함할 수 있다. 특히 원치 않는 효과는 CRS 및 염증성 장질환, 과민성 장질환, 크론병, 궤양성 대장염, 셀리악병, 이식편대숙주병(graft-versus-host disease), 위장 이식편대숙주병(gastrointestinal graft-versus-host disease), 장염, 십이지장염, 공장염, 회장염, 소화성 궤양, 컬링 궤양, 충수염, 대장염, 위막성 대장염, 게실증, 게실염, 주머니염, 콜라젠성 결장염, 거시적 대장염, 설사성 대장염, 자궁내막증, 결직장암 및 선암에서 선택될 수 있다. 증상들은 또한 직장염과 관련될 수 있다. 증상들은 원발 경화성 담관염(primary sclerosing cholangitis), 가족성 선종성 용종증(familial adenomatous polyposis), 항문주변 누공(perianal fistulae)을 포함한 항문주변 크론병과 관련될 수 있다.
수지상 세포는 원치 않는 효과에서 중요한 역할을 할 수 있다. 본 발명의 조성물은 수지상 세포에서 NFAT 활성을 억제할 수 있다. 예를 들어 치료는 GM-CSF 및 CAIX를 구성하는 융합 단백질을 발현하도록 변형된 수지상 세포, DC-Ad GM-CAIX (Kite Pharma)와 같은 변형된 수지상 세포를 포함할 수 있다.
더 일반적으로 면역 세포, 예를 들어 선천(innate) 및 후천(adaptive) 면역 세포는 원치 않는 효과에서 중요한 역할을 할 수 있다. 본 발명의 조성물은 면역 세포, 예를 들어 수지상 세포와 같은 GIT 내 면역 세포에서 NFAT 활성화를 억제할 수 있다. 면역 세포는 치료, 예를 들어 동종 세포의 일부일 수 있고, 치료는 전술하는 단락에 논의되는 것들과 같은 변형된 수지상 세포를 포함할 수 있고 또는 면역 세포는 자가일 수 있다.
이러한 양상에 따른 사이클로스포린 조성물은 예를 들어 즉시 방출 조성물을 제공하기 위해 경구로 투여될 수 있다. 또한 예를 들어 관장 또는 좌약의 형태로 직장으로 위장관에 조성물을 투여하는 것이 고려된다. 조성물의 다른 투여 경로도 또한 고려되는데, 예를 들어 조성물은 예를 들어 십이지장 내 투여, 공장 내 또는 회장 내 투여에 의해 GIT로 직접 투여될 수 있다. 이러한 투여 경로는 하부 GI관 내 특정 지점으로의 전달을 위해 위(및 선택적으로 GI관의 다른 부분)를 우회할 수 있게 한다. 이들 투여 경로는 예를 들어 GI관 내 원하는 위치에 출구(exit)를 갖는 적절한 튜빙(tubing)을 사용하여 달성될 수 있다. 적절하게는 튜빙은 경구 또는 비강으로 GI로 삽입된다. 대안으로, 투여는 위 튜빙(gastric tubing) 또는 연속적 또는 불연속적 경피내시경적 위루술(percutaneous endoscopic gastrostomy)(PEG) 튜빙(tubing)으로 달성될 수 있다. PEG는 복부 벽을 통해 환자의 위내로 튜브(PEG 튜브)가 통과되는 내시경 의료 수술이다. 이 투여 방법은 예를 들어 연하곤란 또는 진정으로 인하여 약물을 경구로 섭취할 수 없는 환자에게 특히 적합할 수 있다.
조성물은 고체 조성물일 수 있다. 조성물은 장용성 코팅(예를 들어 지연 방출 중합체 코팅, 즉시 방출 중합체 코팅) 또는 코팅이 없거나, 조성물을 GIT의 부위, 예를 들어 소장 및/또는 결장에서 방출되도록 하는 코팅(또는 그 부재)으로 코팅될 수 있다. 조성물은 오일상을 포함할 수 있고, 오일상은 선택적으로 NFAT 억제제를 포함할 수 있다.
조성물은 또한 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스를 포함할 수 있다. 조성물은 선택적으로 계면활성제를 포함할 수 있다. 조성물은 선택적으로 오일상을 포함할 수 있다. 오일상은 바람직하게 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스 중에 분산되어 있다. 본 발명의 조성물은 NFAT 억제제(선택적으로 사이클로스포린) 및 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스 및/또는 (바람직하게는 및) 계면활성제 및/또는 (바람직하게 및) 선택적으로 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스 중에 분산된, 오일상을 포함하는 조성물일 수 있다. 계면활성제는 본원의 다른 곳에서 정의된 임의의 계면활성제일 수 있다. 계면활성제는 선택적으로 중쇄 또는 장쇄 지방산 모노- 또는 디-글리세라이드 또는 이들의 조합일 수 있거나 이를 포함할 수 있으며, 폴리에틸렌글리콜 에테르 또는 에스테르가 아닐 수 있거나 이를 포함하지 않을 수 있다. 조성물은 고체 조성물일 수 있다. 조성물은 건조된 비드 형태일 수 있다. 조성물은 건조된 콜로이드 형태일 수 있다. 바람직하게 조성물은 경구 투여용이다.
선택적으로, NFAT 억제제(선택적으로 사이클로스포린), 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스, 계면활성제 및 오일상은 코어 내에 포함된다. 따라서, 조성물은 코어를 포함할 수 있다. 따라서, 조성물은 코어를 포함할 수 있으며, 코어는 사이클로스포린, 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스, 계면활성제 및 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스 중에 분산된 오일상을 포함할 수 있다.
코어는 선택적으로 액체 콜로이드의 고형화에 의해 형성된 건조된 콜로이드일 수 있고, 즉 건조된 콜로이드성 조성물일 수 있다. 조성물은 고체 콜로이드일 수 있거나 조성물은 고체 콜로이드 형태로 있을 수 있으며, 즉 고체 콜로이드성 조성물일 수 있다. 액체 콜로이드는 하이드로겔 형성 중합체이거나 이를 포함하는 연속상 및 NFAT 억제제이거나 이를 포함하는 분산상 및 오일상을 포함하며, 여기서 액체 콜로이드는 계면활성제(제1 계면활성제라고도 지칭됨)를 더 포함한다.
본 발명의 고체 콜로이드성 조성물은 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스이거나 이를 포함하는 연속상 및 사이클로스포린 A이거나 이를 포함하는 분산상 및 오일상을 포함할 수 있고, 여기서 콜로이드성 액체 조성물 또는 고체 콜로이드성 조성물은 중쇄 또는 장쇄 지방산 모노- 또는 디-글리세라이드 또는 이들의 조합이거나 이를 포함하며 폴리에틸렌글리콜 에테르 또는 에스테르는 아니거나 이를 포함하지 않는 계면활성제(제1 계면활성제라고도 지칭됨)를 더 포함한다.
일 실시양태에서, 오일상은 NFAT 억제제 용액을 포함한다. 따라서, NFAT 억제제는 오일상에 용해될 수 있고, 예를 들어 완전히 용해, 실질적으로 완전히 용해 또는 부분적으로 용해될 수 있다. 따라서, 오일상은 NFAT 억제제의 용액 및 일부 용해되지 않은 NFAT 억제제를 포함할 수 있다.
NFAT 억제제는 칼시뉴린 억제제일 수 있다. NFAT 억제제는 액체 가용성일 수 있다. NFAT 억제제는 사이클로스포린, 사이클로스포린 유도체, 타크로리무스 유도체, 피라졸, 피라졸 유도체, 포스파타제 억제제, S1P 수용체 조절제(modulators), 독소, 파라세타몰 대사체, 진균 페놀성 화합물, 관상혈관 확장제(coronary vasodilators), 페놀성 아데이드(adeide), 플라보놀, 티아졸 유도체, 피라졸로피리미딘 유도체, 벤조티오펜 유도체, 로카글라미드(rocaglamide) 유도체, 디아릴 트리아졸, 바비튜레이트(barbiturates), 항정신병약(페노티아진), 세로토닌 길항제, 살리실산 유도체, 프로폴리스 또는 석류로부터 유래된 페놀성 화합물, 이미다졸 유도체, 피리디늄 유도체, 푸라노쿠마린, 알칼로이드, 트리털페노이드, 털페노이드, 올리고뉴클레오타이드, 또는 펩타이드에서 선택될 수 있다.
NFAT 억제제는 사이클로스포린, 타크로리무스, A 285222, 엔도탈(endothall), 4-(플루오로메틸)페닐포스페이트 FMPP, 노르칸타리딘(norcantharidin), 티르포스틴(tyrphostins), 오카다산(okadaic acid), RCP1063, cya/cypa (사이클로필린 A (cyclophilin A)), isa247 (보클로스포린(voclosporin))/cypa, [dat-sar]3-cya, fk506/fkbp12, 아스코마이신/fkbp12, 피네크로리무스(pinecrolimus)/FKBP12, 1,5-디벤조일옥시메틸-노르칸타리딘(norcantharidin), am404, btpl, btp2, 디베푸린(dibefurin), 디피리다몰(dipyridamole), 고시폴(gossypol), 캠퍼롤(kaempferol), lie 120, NCI3, PD 144795, Roc-1, Roc-2, Roc-3, ST 1959 (DLI111-it), 티오펜탈(thiopental), 펜토바비탈(pentobarbital), 티아밀랄(thiamylal), 세코바비탈(secobarbital), 트리플루오페라진(trifluoperazine), 트로피세트론(tropisetron), UR-1505, WIN 53071, 카페인산 페닐에틸 에스터, KRM-III, YM-53792, 푸니칼라진(punicalagin), 임페라토린(imperatorin), 퀴놀론 알칼로이드 화합물 1 및 3, 임프레식 애씨드(impressic acid), 올레아난(oleanane) 트리털페노이드 화합물 3, 고미신(gomisin) N, CaN457 -482-AID, CaN424-521-AID, mFATc2106 -121-SPREIT, VIVIT 펩타이드, R11-Vivit, ZIZIT cis-pro, INCA1, INCA6, INCA2, AKAP79330 -357, RCAN1, RCAN1-4141-197-exon7, RCAN1-4143-163-CIC 펩타이드, RCAN1-495-118-SP 반복 펩타이드, LxVPc 1 펩타이드, MCV1, VacA, A238L, 및 A238L200-213에서 선택될 수 있다.
바람직하게, NFAT 억제제는 사이클로스포린이다. 본 명세서 전반에 걸쳐 용어 사이클로스포린은 화합물 부류 또는 사이클로스포린 A를 지칭할 수 있다. 바람직하게, 사이클로스포린의 사용은 사이클로스포린 A에 관련된다.
NFAT 억제제(선택적으로 사이클로스포린)는 코어 또는 조성물의 건조 중량을 기준으로 약 5 중량% 내지 약 20 중량%, 약 8 중량% 내지 약 15 중량%, 또는 약 9 중량% 내지 약 14 중량%의 양으로 조성물에 적절하게 존재한다.
NFAT 억제제(선택적으로 사이클로스포린)는 액체 조성물 내 액체 조성물의 최대 10 중량%, 선택적으로 약 1 중량% 내지 약 10 중량%, 약 2 중량% 내지 약 8 중량%, 약 3 중량% 내지 약 6 중량%, 약 3 중량% 내지 약 5 중량%의 양으로 적절히 존재한다. 선택적으로 사이클로스포린은 액체조성물 내 액체 조성물의 약 4 중량%로 존재할 수 있다.
본원에 기재된 조성물은 GIT의 특정 위치에 국소적으로 NFAT 억제제를 전달하는데 사용될 수 있으며, 예를 들어 본원에 기재된 고체 조성물은 적어도 결장에서 NFAT 억제제의 방출을 제공하도록 조정될 수 있다. 조성물은 NFAT 억제제를 활성인 형태, 예를 들어, 가용화 형태로 GIT에 국소적으로 제공하기 위해 사용될 수 있고 이로써, 암과 같은 치료되는 질환에 대한 치료적 효과를 유지하면서 치료의 원치 않는 효과를 감소 또는 예방하는 작용을 하는 GIT 내에서 활성(이용가능한) 형태로 NFAT 억제제의 고농도를 제공할 수 있다. 활성인 형태, 예를 들어 가용화 형태의 NFAT 억제제의 방출은, 고농도의 NFAT 억제제를 결장과 같은 GIT의 국소 조직으로 직접적으로 흡수할 수 있게 한다. 그러나, 상술한 바와 같이, 특정 NFAT 억제제, 특히 사이클로스포린 A의 전신 노출은 수많은 원치 않는 부작용을 가진다. 따라서, 사이클로스포린에 대한 전신 노출을 최소화하면서 GIT의 조직에서 치료적으로 유익한 농도를 유지하는 사이클로스포린 A 조성물이 바람직할 것이다.
본 발명의 조성물은 또한 NFAT 억제제를 NFAT의 전신 흡수 및 조절(modulation)을 허용하는 GIT 부위에 전달하기 위하여 사용될 수 있다. 조성물은 가용화 형태로 NFAT 억제제를 제공하기 위해 사용될 수 있고 이로써 활성인(이용가능한) 형태로 고농도의 NFAT 억제제를 제공할 수 있다. 예를 들어, 조성물은 NFAT 억제제가 위, 소장(십이지장, 공장 또는 회장), 대장(맹장, 결장 또는 직장) 또는 이들의 조합에서 방출되도록 조정될 수 있다. 바람직하게, NFAT 억제제의 전신 흡수는 위 및/또는 소장(십이지장, 공장 및/또는 회장) 내에서 NFAT 억제제를 방출하도록 조정된 조성물로 달성될 수 있고, 바람직하게 십이지장, 공장 및/또는 회장 내에서 방출된다.
조성물은 조성물로부터 사이클로스포린의 방출을 제어 또는 조절하기 위한 코팅을 포함할 수 있다. 유리하게 코팅은 조성물로부터 사이클로스포린의 즉시, 지연 및/또는 지속 방출을 제공하기 위한 중합체 코팅이다. 적절하게 그러한 코팅은 이하 자세히 기술되며, 조절 방출 중합체, 지속 방출 중합체, 장용성 중합체, pH 비의존성 중합체, pH 의존성 중합체 및 위장관에서 세균성 효소에 의한 분해에 특히 취약한 중합체 또는 둘 이상의 이러한 중합체의 조합이거나 이를 포함하는 코팅을 포함한다. 구체적인 실시양태에서 코팅은 pH 비의존성 중합체, 예를 들어 에틸 셀룰로오스이거나 이를 포함하는 코팅이거나 이를 포함한다. 보다 구체적인 실시양태에서, 코팅은 pH 비의존성 중합체, 예를 들어 에틸 셀룰로오스 및 선택적으로 수용성 폴리사카라이드, 예를 들어 펙틴 또는 이의 조합, 특히 펙틴이거나 이를 포함한다.
일 실시양태에서 앞선 단락에서 지칭된 코팅은 제2 코팅이라고도 지칭되는 외부 코팅이다. 조성물은 선택적으로 서브-코트(sub-coat) 또는 제1 코팅으로 지칭되는 추가 코팅을 포함할 수 있다. 제1 코팅 및 제2 코팅 각각의 중합체는 상이하다. 종종 제2 코팅은 제1 코팅에서 발견되는 임의의 중합체를 가지지 않는데; 예를 들어 제1 코팅이 하이드록시프로필메틸 셀룰로오스(예를 들어 이거나)를 포함하면, 제2 코팅은 하이드록시프로필메틸 셀룰로오스를 또한 포함하지 않을 것이다. 또한 제1 코팅이 셀룰로오스 에테르의 수용성 에테르 또는 에스테르이거나 이를 포함할 때, 제2 코팅의 주성분(예를 들어 50% 이상)은 제1 코팅의 것과 다른 중합체이거나 이를 포함하는 것으로 상황이 고려된다. 따라서, 제1 및 제2 코팅은 적절하게 조성물의 부분으로서 두 층의 재료를 제공한다. 제2 코팅이 성분들의 혼합물을 포함할 때, 외부 제2 코팅의 부성분(minor components)은 서브-코팅의 재료와 동일할 수 있는 것으로 이해되는 것이다. 예를 들어, 제1 코팅이 HPMC이거나 이를 포함하고 제2 코팅이 에틸 셀룰로오스를 포함할 때, 에틸 셀룰로오스는 선택적으로 이 예에서 제1 코팅 재료, HPMC를 경미한 양(예를 들어, 50%, 40%, 30% 또는 20% 미만)으로 더 포함할 수 있다. 이러한 실시양태에서, 제1 코팅 및 제2 코팅은 상이한 것으로 간주된다.
약학적 조성물이 제2 코팅을 포함하지 않는 실시양태에서, 원치 않는 증상들이 소장에 영향을 미치는 질환에 관련될 수 있다. 이러한 조성물은 셀리악병 또는 크론병에서 선택된 질환과 관련된 증상을 감소 또는 예방할 수 있을 것이다.
본 발명의 조성물은 NFAT 억제제(선택적으로 사이클로스포린), 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스, 계면활성제 및 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스 중에 분산되는 오일상을 포함할 수 있다. 선택적으로 조성물은 제1 코팅을 더 포함할 수 있고, 여기서 제1 코팅은 상기 및 본원의 다른 곳에서 기재된 바와 같이 수용성 셀룰로오스 에테르이거나 이를 포함한다. 제1 코팅 이외에 또는 제1 코팅에 대한 대안으로 조성물은 제2 코팅을 포함할 수 있다. 선택적으로 제2 코팅은 조성물로부터 유효 성분의 방출을 제어 또는 조절하기 위한 코팅, 적절하게 중합체 코팅이거나 이를 포함한다. 중합체 코팅은 본 명세서 내 다른 곳에 추가 기재된 바와 같을 수 있다.
조성물이 제1 코팅 및 제2 코팅을 포함할 때 제2 코팅은 제1 코팅의 외부에 있을 수 있다.
조성물은 코어, 여기서 코어는 NFAT 억제제(선택적으로 사이클로스포린), 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스, 계면활성제 및 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스 중에 분산되는 오일상을 포함하고; 코어 외부에 제1 코팅, 여기서 제1 코팅은 상기 및 본원 다른 곳에서 기재된 바와 같이 수용성 셀룰로오스 에테르이고; 및 제1 코팅 외부에 제2 코팅을 포함할 수 있고, 여기서 계면활성제는 본원에서 기재된 바와 같다. 본 명세서 전체에 걸쳐 "코어"는 사이클로스포린, 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스, 본원에서 기재된 바와 같은 계면활성제 및 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스 중에 분산되는 오일상을 포함하는 코어를 지칭할 수 있다.
본 발명의 일 실시양태에 따르면 계면활성제는 선택적으로 중쇄 또는 장쇄 지방산 모노-글리세라이드, 디-글리세라이드 또는 이들의 조합이고, 제1 코팅은 수용성 셀룰로오스 에테르이거나 이를 포함하고 조성물은 제1 코팅 외부에 제2 코팅을 더 포함하고, 여기서 제2 코팅은 조성물로부터 유효 성분의 방출을 제어 또는 조절하기 위하여 코팅, 적절하게 중합체 코팅이거나 이를 포함한다. 중합체 코팅은 본 명세서 다른 곳에서 추가 기재되는 바와 같을 수 있다.
제1 코팅은 적절하게 수용성 셀룰로오스 에테르이거나 이를 포함할 수 있다. 수용성 셀룰로오스 에테르는 임의의 셀룰로오스 에테르 또는 이의 유도체, 예를 들어 물에 가용성인 셀룰로오스 에테르의 에스테르일 수 있다. 그러므로, 수용성 셀룰로오스 에테르는 알킬 셀룰로오스; 하이드록시알킬 셀룰로오스; 하이드록시알킬 알킬 셀룰로오스; 및 카르복시알킬 셀룰로오스에서 선택될 수 있다. 적절하게 제1 코팅은 메틸 셀룰로오스, 하이드록시에틸 셀룰로오스, 하이드록시프로필 셀룰로오스 및 하이드록시프로필메틸 셀룰로오스, 및 이들의 조합에서 선택된 하나 이상의 수용성 셀룰로오스 에테르이거나 이를 포함한다. 특정 실시양태에서 제1 코팅은 수용성 하이드록시프로필 메틸셀룰로오스이거나 이를 포함한다. 제1 코팅(서브-코팅) 중에 존재하는 수용성 셀룰로오스 에테르 및 이들의 수용성 유도체(예컨대, 셀룰로오스 에테르의 수용성 에스테르)는 제1 코팅의 건조 중량의 적어도 20 중량%, 40 중량%, 50 중량%, 60 중량%, 70 중량%, 80 중량%, 85 중량% 또는 90 중량%를 적절히 형성한다.
본 발명에 따라 코어 및 제1 코팅을 포함하는 약학적 조성물이 제공되며, 여기서 코어는 사이클로스포린, 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스, 계면활성제 및 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스 중에 분산된 오일상을 포함하며 제1 코팅은 수용성 셀룰로오스 에테르이거나 이를 포함하며 제1 코팅은 제1 코팅으로 인한 중량 증가에 상응하는 양으로 코어의 0.5 중량% 내지 20 중량%로 존재하며, 계면활성제는 본원에 기재된 바와 같이, 예를 들어 중쇄 또는 장쇄 지방산 모노- 또는 디-글리세라이드 또는 이들의 조합이고 폴리에틸렌글리콜 에테르 또는 에스테르가 아니거나 이를 포함하지 않는다.
본 발명의 제1 코팅은 조성물로부터 유효 성분의 방출을 변형한다. 조성물 위의 코팅은 조성물 내의 유효 성분의 방출 속도를 느리게 할 것이라는 기대가 있을 것이다. 조성물을 추가의 재료로 코팅하는 것은 조성물 내의 유효 성분과 접촉하게 되는 용해 매질에 대한 추가의 장벽을 제공할 것이므로 이는 합리적으로 기대할 수 있다. 이러한 기대 결과와는 반대로, 본 발명의 조성물은 코팅되지 않은 조성물에 비하여 유효 성분의 방출 속도를 증가시키는 수용성 셀룰로오스 에테르이거나 이를 포함하는 코팅을 포함한다. 또한, 본 발명의 코팅이 결핍된 비교 조성물은 시간이 지남에 따라 더 적은 용액 중의 유효 성분을 제공하는 반면, 본 발명의 코팅은 용액 중에 유효 성분을 유지하는 유익한 효과를 갖는다. 이론에 구속되고자 하는 것은 아니지만, 코팅은 용액으로부터 유효 성분의 침전을 방지하여, 이에 의해 용액 중의 유효 성분을 더 높은 양으로 유지하는 것으로 생각된다.
본 출원 전체에 걸쳐서, 유효 성분, 활성, 및 약학적 유효 성분은 상호 교환적으로 사용되며 모두 NFAT 억제제, 선택적으로 사이클로스포린, 바람직하게는 사이클로스포린 A를 지칭한다.
본 발명의 조성물은 당업자에게 알려진 임의의 형태를 취할 수 있다. 바람직하게는, 조성물은 경구 조성물이다. 조성물은 단일 미니비드 또는 다수의 미니비드 형태일 수 있다. 따라서 본 발명은 본 발명의 다수의 미니비드를 제공한다. 유사하게, 본 발명은 다수의 미니비드를 포함하는 단위 투약 형태(unit dosage form)를 포함하는 다수의 미니비드 제제를 제공한다.
또한 본 발명은 코어 및 제1 코팅을 포함하며, 코어는 NFAT 억제제, 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스, 계면활성제 및 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스 중에 분산된 오일상을 포함하고 제1 코팅은 수용성 셀룰로오스 에테르이거나 이를 포함하며 제1 코팅은 1 μm 내지 1 mm의 두께를 가지고 계면활성제는 본원에 기재된 바와 같이, 예를 들어 중쇄 또는 장쇄 지방산 모노- 또는 디-글리세라이드 또는 이들의 조합이고 폴리에틸렌글리콜 에테르 또는 에스테르가 아니거나 이를 포함하지 않는, 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명의 임의의 약학적 조성물은 본원에서 제2 코팅으로 지칭되는, 추가의 코팅을 포함할 수 있다. 제2 코팅은 제1 코팅 외부에 있을 수 있다. 제2 코팅은 지연 방출 중합체이거나 이를 포함할 수 있다. 본 발명의 임의의 실시양태 및 임의의 양상에서 제1 및 제2 코팅은 상이할 수 있다.
그러므로 본 발명은, 코어, 제1 코팅 및 제1 코팅 외부의 제2 코팅을 포함하는 약학적 조성물을 고려하며, 여기서 코어는 NFAT 억제제, 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스, 계면활성제 및 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스 중에 분산된 오일상을 포함하며, 제1 코팅은 수용성 셀룰로오스 에테르(예를 들어 HPMC)이거나 이를 포함하며, 제2 코팅은 지연 방출 중합체(예를 들어 에틸셀룰로오스)이거나 이를 포함한다.
본 발명의 임의의 양상 또는 실시양태의 조성물은 고체 콜로이드 형태일 수 있다. 더욱이, 조성물의 코어는 고체 콜로이드 형태일 수 있다. 콜로이드는 연속상 및 분산상을 포함한다. 코어를 형성하기 위해 사용될 수 있는 적합한 연속상 및 분산상은 하기 및 발명을 실시하기 위한 구체적인 내용에 더욱 자세히 정의된다. 연속상은 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스이거나 이를 포함할 수 있다. 따라서, 연속상이 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스인 경우, 본 발명의 조성물은 분산상을 포함하는 하이드로겔 형성 중합체의 고체 단위의 형태를 취할 수 있다. 분산상은 연속상 또는 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스 중에 분산된 액적(droplet)일 수 있다. 분산상은 오일상이거나 이를 포함할 수 있다.
따라서, 본 발명은 연속상 및 분산상을 포함하는 고체 콜로이드 형태인 조성물로서, 연속상은 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스이거나 이를 포함하며 연속상은 오일상이거나 이를 포함하고, 조성물은 NFAT 억제제(예를 들어 사이클로스포린) 및 계면활성제를 더 포함하는, 조성물을 제공한다. 바람직하게, 계면활성제는 중쇄 또는 장쇄 지방산 모노- 또는 디-글리세라이드 또는 이들의 조합이고 폴리에틸렌글리콜 에테르 또는 에스테르가 아니거나 이를 포함하지 않는다. 오일상은 용액 중의 사이클로스포린을 포함할 수 있다.
조성물은 연속상 및 분산상을 포함하는 고체 콜로이드 형태의 코어를 포함할 수 있으며, 연속상은 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스이거나 이를 포함하며 연속상은 오일상이거나 이를 포함하고, 코어는 NFAT 억제제 및 계면활성제를 더 포함한다. 오일상은 NFAT 억제제를 선택적으로 용액 중에 포함할 수 있다.
고체 콜로이드 조성물 또는 코어의 연속상은 하이드로겔-형성 중합체 매트릭스이거나 이를 포함한다. 실시양태에서 하이드로겔-형성 중합체 매트릭스는 하이드로콜로이드, 비-하이드로콜로이드 검 또는 키토산이거나 이를 포함한다. 특정 실시양태에서 하이드로겔-형성 중합체 매트릭스는 젤라틴, 한천, 폴리에틸렌 글리콜, 녹말, 카세인, 키토산, 콩 단백질, 홍화 단백질(safflower protein), 알기네이트, 젤란 검, 카라기난, 잔탄 검, 프탈레이트화된 젤라틴, 숙시네이트화된 젤라틴, 셀룰로오스프탈레이트-아세테이트, 올레오레진, 폴리비닐아세테이트, 아크릴릭 또는 메타크릴릭 에스테르 및 폴리비닐아세테이트-프탈레이트의 중합물질(polymerisate) 및 전술한 어느 하나의 임의의 유도체; 또는 2개 이상의 이러한 중합체의 혼합물이거나 이를 포함한다. 추가의 실시양태에서 하이드로겔-형성 중합체 매트릭스는 카라기난, 젤라틴, 한천 및 펙틴, 또는 이들의 조합, 선택적으로 젤라틴 및 한천 또는 이들의 조합에서 선택된 하이드로콜로이드이거나 이를 포함한다. 특히, 하이드로겔-형성 중합체 매트릭스의 중합체는 젤라틴이거나 이를 포함한다. 일 실시양태에서, 하이드로겔-형성 중합체는 셀룰로오스 또는 셀룰로오스 유도체를 포함하지 않으며, 예컨대 셀룰로오스 에테르를 포함하지 않는다.
본 발명의 이러한 양상에서 조성물은 고체 콜로이드 형태일 수 있고 콜로이드는 연속상 및 분산상을 포함하며 NFAT 억제제는 용액 중에 존재하거나 분산상 중에 현탁된다. 예를 들어, 사이클로스포린은 분산상 중의 용액 중에 존재할 수 있다.
앞서 기재된 개별적인 실시양태는 본 발명의 추가 실시양태를 제공하기 위해 하나 이상의 기재된 다른 실시양태들과 조합될 수 있음을 이해해야 한다.
제1 코팅은 코어와 접촉할 수 있다. 제2 코팅은 제1 코팅 상에 존재할 수 있다. 실시양태에서 제1 코팅은 코어와 접촉하며 제2 코팅은 제1 코팅 상에 존재한다.
제2 코팅은 지연 방출 중합체이거나 이를 포함할 수 있으며 지연 방출 중합체는 장용성 중합체, pH 비의존성 중합체, pH 의존성 중합체 및 위장관 내 세균성 효소에 의한 분해에 특히 취약한 중합체, 또는 2개 이상의 이러한 중합체의 조합에서 선택될 수 있다. 따라서, 제2 코팅은 전술한 임의의 지연 방출 중합체이거나 아래에 언급되는 지연 방출 중합체와 관련하여 언급되는 특성을 보유하는 것일 수 있다.
실시양태에서 지연 방출 중합체는 pH 6.5 초과의 수성 매질 중에서 수용성 또는 수투과성일 수 있다. 지연 방출 중합체는 pH-비의존성 중합체, 예를 들어 에틸 셀룰로오스이거나 이를 포함할 수 있다.
본 발명의 임의의 양상 및 임의의 실시양태에서 수용성 셀룰로오스 에테르는 메틸 셀룰로오스, 하이드록시에틸 셀룰로오스, 하이드록시프로필 셀룰로오스 및 하이드록시프로필 메틸셀룰로오스 중의 어느 하나 또는 이들의 조합에서 선택될 수 있다. 수용성 셀룰로오스 에테르는 바람직하게는 하이드록시프로필 메틸셀룰로오스(HPMC)일 수 있다.
실시양태에서 제1 코팅은 하이드록시프로필 메틸 셀룰로오스이거나 이를 포함할 수 있으며 제2 코팅은 에틸 셀룰로오스이거나 이를 포함할 수 있다.
제1 코팅의 중량 증가의 개시는 코어의 중량%로 주어진다. 유사하게, 제2 코팅의 중량 증가는 코어상에 제1 코팅(서브-코트)이 없는 경우에, 코어의 중량%로 주어진다. 조성물이 제1 코팅을 포함하는 경우, 제2 코팅의 중량 증가는 제2 코팅으로 코팅된 조성물, 예를 들어 코어 및 제1 코팅의 중량%로 주어진다.
하이드로겔 형성 중합체 또는 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스는 하이드로콜로이드, 비-하이드로콜로이드 검 또는 키토산이거나 이를 포함할 수 있다. 하이드로겔 형성 중합체 또는 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스는 가역적 하이드로콜로이드, 예를 들어 열가역적 하이드로콜로이드 또는 열가역적 하이드로겔 형성 중합체일 수 있다. 대안으로, 하이드로겔 형성 중합체 또는 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스는 비가역적 하이드로콜로이드이거나 이를 포함할 수 있다. 하이드로겔 형성 중합체 또는 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스는 젤라틴, 한천, 폴리에틸렌 글리콜, 녹말, 카세인, 키토산, 콩 단백질, 홍화 단백질(safflower protein), 알기네이트, 젤란 검, 카라기난, 잔탄 검, 프탈레이트화된 젤라틴, 숙시네이트화된 젤라틴, 셀룰로오스프탈레이트-아세테이트, 올레오레진, 폴리비닐아세테이트, 아크릴릭 또는 메타크릴릭 에스테르 및 폴리비닐아세테이트-프탈레이트의 중합물질 및 전술한 어느 하나의 임의의 유도체; 또는 하나 이상의 이러한 하이드로겔 형성 중합체의 혼합물이거나 이를 포함할 수 있다. 하이드로겔 형성 중합체 또는 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스는 카라기난, 젤라틴, 한천 및 펙틴, 또는 이들의 조합, 선택적으로 젤라틴 및 한천 또는 이들의 조합에서 선택되는 하이드로콜로이드이거나 이를 포함할 수 있고, 더욱 선택적으로 하이드로겔 형성 중합체 또는 중합체 매트릭스를 형성하는 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스는 젤라틴이거나 이를 포함한다. 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스는 선택적으로 알긴산의 가교된 염에서 선택된 비-하이드로콜로이드 검이거나 이를 포함한다. 바람직한 실시양태에서 하이드로겔 형성 중합체 또는 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스는 젤라틴이거나 이를 포함한다.
실시양태에서 하이드로겔 형성 중합체 또는 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스는 가소제를, 선택적으로 글리세린, 폴리올, 예를 들어 소르비톨, 폴리에틸렌 글리콜 및 트리에틸 시트레이트 또는 이들의 혼합물에서 선택된 가소제를, 특히 소르비톨을 더 포함한다.
하이드로겔 형성 중합체 매트릭스는 NFAT 억제제를 캡슐화할 수 있다. NFAT 억제제는 용액 중에 캡슐화될 수 있다. 사이클로스포린은 용액 중에 존재하거나 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스로 또한 캡슐화된 조성물의 다른 성분, 예를 들어 다른 곳에서 논의한 오일상 또는 분산상 중에 현탁될 수 있다.
분산상은 고체, 반고체 또는 액체일 수 있다. 특히, 분산상은 액체일 수 있다. 다른 특정한 경우 분산상은 반고체일 수 있고, 예를 들어 왁스성(waxy)일 수 있다.
분산상은 오일상이거나 이를 포함할 수 있고, 예를 들어 오일상은 고체, 반고체 또는 액체일 수 있다. 적합하게 분산상 또는 오일상은 액체 지질 및 선택적으로 그와 혼화될 수 있는 용매이거나 이를 포함한다. 액체 지질은 선택적으로 중쇄 모노- 또는 디- 또는 트리글리세라이드(특히 중쇄 트리글리세라이드)이다.
NFAT 억제제는 분산상 중에 용해될 수 있다. NFAT 억제제는 분산상 중에 현탁될 수 있다. 분산상은 본원의 다른 곳에 기재된 것일 수 있고, 예를 들어 바로 앞의 두 문단에 기재된 것일 수 있다.
오일상 또는 분산상은 액체 지질일 수 있거나 이를 포함할 수 있다. 특히, 오일상 또는 분산상은 단-, 중- 또는 장-쇄 트리글리세라이드 제제, 또는 이들의 조합, 예를 들어 카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드, 즉 카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드 제제이거나 이를 포함할 수 있다.
따라서, 일 실시양태에서 조성물은 사이클로스포린, 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스, 계면활성제 및 단-, 중- 또는 장-쇄 트리글리세라이드 제제, 또는 이들의 조합(선택적으로 카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드, 즉 카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드 제제)를 포함하며 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스 중에 분산된 오일상을 포함한다. 조성물은 건조 콜로이드 형태일 수 있다. 조성물은 비드 형태일 수 있다.
특정 실시양태에서 분산상 또는 오일상은 용매를 더 포함하고, 따라서 선택적으로 분산상 또는 오일상은 액체 지질 및 용매이거나 이를 포함할 수 있다. 용매는 액체 지질 및 물과 혼화될 수 있고, 선택적으로 용매는 2-(2-에톡시에톡시)에탄올 및 폴리(에틸렌 글리콜) 중에서 선택되고, 특히 용매는 2-(2-에톡시에톡시)에탄올이다. 추가의 실시양태에서 분산상 또는 오일상은 중쇄 모노- 디- 또는 트리글리세라이드(특히 중쇄 트리글리세라이드), 2-(에톡시에톡시)에탄올 및 계면활성제이거나 이를 포함한다. 본 문단에 기재된 분산상 또는 오일상은 사이클로스포린을 함유할 수 있고, 사이클로스포린은 선택적으로 용액 중에 존재할 수 있다.
적합하게, NFAT 억제제는 용매에 가용성이다. 용매는 알코올(예를 들어 에탄올 또는 이소프로판올), 글리콜(예를 들어 프로필렌 글리콜 또는 폴리에틸렌 글리콜) 또는 글리콜 에테르일 수 있다. 용매는 글리콜 에테르, 예를 들어 에틸렌 글리콜 에테르, 특히 알킬, 아릴, 또는 아랄킬 에틸렌 글리콜에테르일 수 있다. 용매는 2-메톡시에탄올; 2-에톡시에탄올; 2-프로폭시에탄올; 2-이소프로폭시에탄올; 2-부톡시에탄올; 2-페녹시에탄올; 2-벤질옥시에탄올; 2-(2-메톡시에톡시)에탄올; 2-(2-에톡시에톡시)에탄올; 및 2-(2-부톡시에톡시)에탄올에서 선택된 글리콜 에테르일 수 있다. 특히 용매는 2-(2-에톡시에톡시)에탄올 또는 2-페녹시에탄올이다. 특정 용매는 2-(2-에톡시에톡시)에탄올이다.
바람직하게, 오일상 또는 분산상은 단-, 중- 또는 장-쇄 트리글리세라이드 제제, 또는 이들의 조합(선택적으로 카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드, 즉 카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드 제제)을 포함한다. 오일상 또는 분산상이 단-, 중- 또는 장-쇄 트리글리세라이드 제제, 또는 이들의 조합을 포함하는 경우, 트리글리세라이드는 실질적으로 분산상 또는 오일상(선택적으로 액체 지질)의 전부이다. 예를 들어, 오일상 또는 분산상은 단-, 중- 또는 장-쇄 트리글리세라이드 제제를 오일상 또는 분산상(선택적으로 액체 지질)의 80% 초과, 선택적으로 85%, 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 초과의 양으로 포함할 수 있다. 적합하게, 단-, 중- 또는 장-쇄 트리글리세라이드 제제는 실질적으로 모노- 또는 디-글리세라이드가 부재한다. 예를 들어, 계면활성제는 10%, 8%, 5%, 3%, 2% 또는 1% 미만의 모노- 또는 디-글리세라이드를 포함할 수 있다.
실시양태에서 조성물은 하나 이상의 추가의 계면활성제, 바람직하게는 하나의 추가의 계면활성제를 더 포함한다. 추가의 계면활성제는 본원에 기술된 임의의 계면활성제일 수 있다. 추가의 계면활성제는 본 명세서에 걸쳐 제2 계면활성제 또는 추가 계면활성제로 지칭될 수 있으며 이들 용어는 상호 교환적으로 사용된다.
제2 계면활성제로 적합한 계면활성제는 발명을 실시하기 위한 구체적인 내용에 더욱 자세히 기술된다. 바람직하게 제2 계면활성제는 음이온성 계면활성제이다. 예를 들어, 제2 계면활성제는 알킬 설페이트, 예를 들어 소듐 도데실 설페이트일 수 있다.
이들 실시양태에서 액체 조성물이 콜로이드 형태인 경우, 조성물은 고체 콜로이드 형태이거나 조성물은 고체 콜로이드 형태의 코어를 포함하고, 콜로이드는 연속상 및 분산상을 포함하고, 연속상은 하이드로겔-형성 중합체 매트릭스를 포함하며 제2 계면활성제가 연속상, 분산상 또는 양쪽 모두 내에 존재할 수 있다. 바람직하게 제2 계면활성제는 연속상 내에 존재하며 제1 계면활성제는 분산상 내에 존재한다. 따라서, 액체 조성물의 수성상은 제2 계면활성제를 포함할 수 있으며 오일상은 제1 계면활성제를 포함할 수 있다. 일 실시양태에서 코어는 적어도 연속상 중에 존재하는 하나의 추가적인 계면활성제를 더 포함하고, 계면활성제는 10 초과, 예를 들어 20 초과의 HLB 값을 갖는다.
조성물은 콜로이드를 형성하기 위해 분산상과 연속상을 혼합해 형성된 조성물의 특성을 가질 수 있고, 연속상은 하이드로겔 형성 중합체를 포함하는 수성상이며 분산상은 오일상이고, 약학적 유효 성분은 연속상 또는 분산상 중에 존재하며, 콜로이드는 조성물을 형성하기 위해 겔화 된다. 조성물은 따라서 고체 콜로이드 형태이다.
더욱이, 조성물은 콜로이드를 형성하기 위해 분산상과 연속상을 혼합해 형성된 코어의 특성을 갖는 코어를 포함할 수 있고, 연속상은 하이드로겔 형성 중합체를 포함하는 수성상이며 분산상은 오일상이고, 약학적 유효 성분은 연속상 또는 분산상 중에 존재하며, 콜로이드는 코어를 형성하기 위해 겔화 된다. 코어는 따라서 고체 콜로이드 형태이다.
조성물 또는 코어는 사이클로스포린, 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스, 계면활성제 및 오일상을 포함하고 다음을 포함하는 과정에 의해 얻어진 조성물의 특징을 가질 수 있다:
(i) 하이드로겔 형성 중합체를 수성 액체 중에 용해하여 수상 용액을 형성하는 단계;
(ii) NFAT 억제제를 오일상 중에 용해하여 용액을 형성하는 단계;
(iii) 수상 용액 (i) 및 오일상 용액 (ii)을 혼합해 콜로이드(선택적으로 에멀전)를 형성하는 단계;
(iv) 콜로이드를 노즐을 통해 방출해 액적을 형성하는 단계;
(v) 하이드로겔-형성 중합체가 겔 또는 고체화되도록 유도 또는 허용하여 하이드로겔-형성 중합체 매트릭스를 형성하는 단계; 및
(vi) 고체를 건조하는 단계.
수상 및 오일상은 오일상 대 수상의 비율이 1:4 내지 1:10, 선택적으로 1:4 내지 1:8, 1:5 내지 1:7로 혼합될 수 있다(예를 들어 (iii) 단계에서). 예를 들어, 오일상 대 수상 비율은 1:4, 1:5, 1:6 또는 1:7일 수 있다.
오일상 용액 (ii)는 NFAT 억제제를 적합한 소수성 액체 중에 용해 또는 분산시켜 제조할 수 있다. 소수성 액체는 예를 들어, 본원에 기재된 임의의 오일 또는 액체 지질일 수 있다. 예를 들면 소수성 액체는 트리글리세라이드의 포화 또는 불포화 지방산, 또는 이들의 폴리에틸렌글리콜과의 에테르 또는 에스테르이거나, 이를 포함할 수 있다. 오일상의 특정 오일은 트리글리세라이드이거나 이를 포함하고, 예를 들어 중쇄 트리글리세라이드를 포함하는 오일이고, 선택적으로 오일은 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12개의 탄소 원자를 갖는 지방산, 예컨대 C8-C10 지방산에서 선택된 적어도 하나의 지방산의 트리글리세라이드를 포함한다.
적합하게는, 수상 용액 (i)은 음이온성 계면활성제, 예컨대 본원의 다른 곳에 기재된 바와 같이, 예를 들어 소듐 도데실 설페이트(SDS)를 더 포함한다.
상술한 과정에 의해 얻어진 코어의 특성을 갖는 코어, 예를 들어 상기 과정에 의해 얻어진 코어는, 수용성 셀룰로오스 에테르이거나 이를 포함하는 코팅, 선택적으로 방출을 제어 또는 변형하기 위한 제2 코팅, 바람직하게는 앞서 및 본원에 기재된 중합체성 코팅을 포함하는 코팅을 제공하기 위해 코팅될 수 있다. 코팅된 조성물은 코어에 코팅을 적용함으로써, 예컨대 기재된 바와 같이 코어에 제1 및 제2 코팅을 적용함으로써 얻을 수 있다. 코팅을 적용하기 전에, 코어는 앞서 기재된 단계 (i) 내지 (vi) 또는 (i) 내지 (v)를 갖는 과정에 의해 제조될 수 있다. 코팅(들)을 적용하기 위한 적합한 방법은 아래에 기재되며 코어 상에 코팅 조성물을 스프레이 코팅하여 코팅을 적용하는 것을 포함한다. 단계 (i) 내지 (vi) 또는 (i) 내지 (v)를 갖는 과정은 자체로 본 발명의 양상을 구성한다.
조성물 또는 코어는 제2 계면활성제(또는 추가 계면활성제로 지칭됨)를 더 포함할 수 있고, 선택적으로 제2 계면활성제는 음이온성 계면활성제로서, 선택적으로 알킬 설페이트, 카복실레이트 또는 인지질에서 선택되고, 또는 비이온성 계면활성제로서, 선택적으로 소르비탄계 계면활성제, PEG-지방산, 지방 알코올 에톡실레이트, 알킬페놀 에톡실레이트, 지방산 에톡실레이트, 지방 아미드 에톡실레이트, 알킬 글루코사이드 또는 글리세릴 지방산, 또는 폴록사머, 또는 이들의 조합에서 선택된다. 따라서 본 발명의 액체 조성물은 적어도 다음의 구성을 포함할 수 있다: 하이드로겔 형성 중합체를 포함하는 수상, 제1 계면활성제 및 사이클로스포린이 용해된 수상 중에 분산된 오일상 및 제2 계면활성제. 유사하게, 본 발명의 조성물은 적어도 다음의 구성을 포함할 수 있다: 사이클로스포린, 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스, 제1 계면활성제 및 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스 중에 분산된 오일상 및 제2 계면활성제.
실시양태에서, 제2 계면활성제는 상기 정의된 바와 같이 조성물 내 유일한 계면활성제일 수 있다.
실시양태에서 조성물이 고체 콜로이드 형태인 경우, 제2 계면활성제는 분산상 또는 연속상 중에 있을 수 있다. 제2 계면활성제는 연속상 중에 존재하고 음이온성 계면활성제, 예를 들어 지방산염 및 담즙염에서 선택된 적어도 하나의 계면활성제, 특히 알킬 설페이트, 예를 들어 소듐 도데실 설페이트일 수 있다. 분산상 중의 계면활성제는 비이온성 계면활성제일 수 있다.
실시양태에서 조성물은 음이온성 계면활성제, 예를 들어 소듐 도데실 설페이트이거나 이를 포함하는 제2 계면활성제를 포함하고, 이는 연속상 중에 존재한다.
실시양태에서 조성물은 음이온성 계면활성제 및 용매; 음이온성 계면활성제 및 오일; 및 음이온성 계면활성제, 용매 및 오일에서 선택된 부형제의 조합을 더 포함한다. 바람직하게는, 음이온성 계면활성제는 알킬 설페이트, 예를 들어 소듐 도데실 설페이트이고, 오일은 중쇄 모노-, 디-, 및/또는 트리-글리세라이드(선택적으로 중쇄 트리글리세라이드, 예를 들어 카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드이고, 및 용매는 2-(에톡시에톡시)에탄올이다.
조성물은 계면활성제, 가용화제, 투과성 증진제, 붕해제, 결정화 억제제, pH 조절제, 안정화제, 또는 이들의 조합에서 선택된 부형제를 더 포함할 수 있다.
본 발명의 조성물 또는, 조성물이 코어를 포함하는 경우, 코어는 분산상 또는 오일상을 포함할 수 있고, 분산상 또는 오일상은
NFAT 억제제(예를 들어, 사이클로스포린);
폴리에틸렌글리콜 에테르 또는 에스테르가 아니거나 이를 포함하지 않는 중 또는 장쇄 지방산 모노- 또는 디-에스테르 또는 이들의 조합, 예컨대 중 또는 장쇄 지방산 모노- 또는 디-글리세라이드 또는 이들의 조합, 예를 들어 글리세릴 모노올레이트/디올레이트;
중쇄 모노- 디- 또는 트리-글리세라이드, 예를 들어 카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드; 및
용매, 예를 들어 2-(에톡시에톡시)에탄올
이거나 이를 포함하며,
조성물 또는 코어는
음이온성 계면활성제, 예를 들어 지방산염 및 담즙염에서 선택된 적어도 하나의 계면활성제, 특히 알킬 설페이트, 예를 들어 소듐 도데실 설페이트
카라기난, 젤라틴, 한천 및 펙틴, 또는 이들의 조합에서 선택되고, 선택적으로 젤라틴 및 한천 또는 이들의 조합에서 선택되는 하이드로콜로이드이거나 이를 포함하는 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스, 더욱 선택적으로 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스의 중합체는 젤라틴이거나 이를 포함하고; 및
선택적으로 가소제, 예를 들어 글리세린, 폴리올, 예를 들어 소르비톨, 폴리에틸렌 글리콜 및 트리에틸 시트레이트 또는 이들의 혼합물에서 선택된 가소제, 특히 소르비톨
이거나 이를 포함할 수 있다.
일 실시양태에서 조성물은 코어 및 코어 외부의 코팅을 포함하며, 코어는 고체 콜로이드 형태이고, 콜로이드는 연속상 및 분산상을 포함하며, 분산상은
NFAT 억제제(선택적으로 사이클로스포린 A);
폴리에틸렌글리콜 에테르 또는 에스테르가 아니거나 이를 포함하지 않는 중 또는 장쇄 지방산 모노- 또는 디-글리세라이드 또는 이들의 조합, 예를 들어 글리세릴 모노올레이트/디올레이트;
중쇄 모노- 디- 및/또는 트리-글리세라이드, 예를 들어 카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드; 및
공용매, 예를 들어 2-(에톡시에톡시)에탄올
이거나 이를 포함하며;
연속상은
카라기난, 젤라틴, 한천 및 펙틴, 또는 이들의 조합에서 선택되고, 선택적으로 젤라틴 및 한천 또는 이들의 조합에서 선택되는 하이드로콜로이드이거나 이를 포함하는 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스, 더욱 선택적으로 수용성 중합체 매트릭스의 중합체는 젤라틴이거나 이를 포함하고;
선택적으로 가소제, 선택적으로 글리세린, 폴리올 예를 들어 소르비톨, 폴리에틸렌 글리콜 및 트리에틸 시트레이트 또는 이들의 혼합물에서 선택된 가소제, 특히 소르비톨; 및
음이온성 계면활성제, 예를 들어 지방산염 및 담즙염에서 선택된 적어도 하나의 계면활성제, 특히 알킬 설페이트, 예를 들어 소듐 도데실 설페이트
이거나 이를 포함하며;
코어 상의 코팅은 본원에 기재된 바와 같은 제1 코팅 또는 제2 코팅이다.
적합하게 코팅은 제1 코팅 및 제1 코팅 외부의 제2 코팅을 포함하며;
제1 코팅은 앞서 기재된 바와 같은 수용성 셀룰로오스 에테르이거나 이를 포함하는 코팅이며;
제2 코팅은 앞서 정의된 바와 같이 조성물로부터 사이클로스포린 A의 방출을 제어 또는 조절하기 위한 코팅, 적합하게는 중합체성 코팅이거나 이를 포함한다.
제1 코팅 및/또는 제2 코팅을 포함하는 실시양태, 예를 들어 바로 앞의 문단에 언급된 바와 같이, 특정 제1 코팅은 하이드록시프로필메틸 셀룰로오스이거나 이를 포함하며 제1 코팅 외부의 특정 제2 코팅은 pH 비의존성 중합체, 예를 들어 에틸 셀룰로오스이거나 이를 포함하며; 특히 제2 코팅은 에틸 셀룰로오스 및 선택적으로 수용성 및 자연 발생 다당류, 예를 들어 펙틴 또는 다른 수용성 자연 발생 다당류에서 선택된 다당류이거나 이를 포함한다. 제2 코팅은 따라서 펙틴 또는 다른 상기의 다당류를 함유할 수 있거나 또는 실질적으로 펙틴 및 다른 상기의 다당류가 부재할 수 있다. 따라서 제어 방출 중합체로서 에틸셀룰로오스를 포함하며 펙틴 또는 다른 상기의 다당류를 더 포함하는 제2 코팅과 또한 제어 방출 중합체로서 에틸셀룰로오스를 포함하며 펙틴 또는 다른 상기의 다당류를 더 포함하지 않는 제2 코팅이 개시된다.
선택적으로 젤라틴을 포함하는, 하이드로겔 형성 중합체는 300 내지 700 mg/g(선택적으로 380 내지 500 mg/g)의 양으로 존재할 수 있다. 중쇄 모노, 디 및/또는 트리-글리세라이드는 20 내지 200 mg/g(선택적으로 40 내지 80 mg/g)의 양으로 존재할 수 있다. 용매, 예를 들어 2-(에톡시에톡시)에탄올은 100 내지 250 mg/g(선택적으로 160 내지 200 mg/g)의 양으로 존재할 수 있다. 폴리에틸렌글리콜 에테르 또는 에스테르가 아니거나 이를 포함하지 않는 중 또는 장쇄 지방산 모노- 또는 디-에스테르 또는 이들의 조합, 예를 들어 글리세릴 모노올레이트/디올레이트는 80 내지 200 mg/g(선택적으로 100 내지 150 mg/g)의 양으로 존재할 수 있다. 음이온성 계면활성제, 예를 들어 소듐 도데실 설페이트는 최대 100 mg/g 또는 최대 50 mg/g(선택적으로 15 - 50 mg/g, 바람직하게는 25 - 50 mg/g 또는 25 - 45 mg/g)의 양으로 존재할 수 있다.
조성물 또는 코어는 젤라틴을 포함하는 하이드로겔 형성 중합체를, 선택적으로 300 내지 700 mg/g의 양으로, 포함할 수 있고, 코어는 중쇄 모노, 디 및/또는 트리-글리세라이드를, 선택적으로 20 내지 200 mg/g의 양으로, 더 포함하고, 조성물 또는 코어는 다음의 성분을 더 포함한다:
용매, 예를 들어 2-(에톡시에톡시)에탄올, 선택적으로 100 내지 250 mg/g의 양;
폴리에틸렌글리콜 에테르 또는 에스테르가 아니거나 이를 포함하지 않는 중 또는 장쇄 지방산 모노- 또는 디-에스테르 또는 이들의 조합, 예를 들어 글리세릴 모노올레이트/디올레이트, 선택적으로 80 내지 200 mg/g의 양; 및
음이온성 계면활성제, 예를 들어 소듐 도데실 설페이트, 선택적으로 최대 50 mg/g의 양.
인식될 바와 같이 조성물 또는 코어는 NFAT 억제제(선택적으로 사이클로스포린)를 더 포함한다.
조성물 또는 코어는
예를 들어 300 내지 700 mg/g의 양의 젤라틴이거나 이를 포함하는, 하이드로겔 형성 중합체;
최대 약 250 mg/g, 예를 들어 50 내지 250 mg/g의 양의 NFAT 억제제(선택적으로 사이클로스포린);
20 내지 200 mg/g의 양의 중쇄 트리글리세라이드, 예를 들어 Miglyol 810, 선택적으로 존재할 경우 100 내지 250 mg/g의 양의 용매, 예를 들어 2-(에톡시에톡시)에탄올;
폴리에틸렌글리콜 에테르 또는 에스테르가 아니거나 이를 포함하지 않는 80 내지 200 mg/g의 양의 중 또는 장쇄 지방산 모노- 또는 디-에스테르 또는 이들의 조합, 예를 들어 글리세릴 모노올레이트/디올레이트를 포함하는 계면활성제; 및
최대 50 mg/g, 예를 들어 10 내지 50 mg/g, 또는 선택적으로 20 내지 45 mg/g의 양의 음이온성 계면활성제, 예를 들어 소듐 도데실 설페이트
를 포함할 수 있다.
조성물 또는 코어는
380 - 500 mg/g의 양의 젤라틴;
90 - 250 mg/g(선택적으로 90 - 200 mg/g 또는 90 - 160 mg/g)의 양의 사이클로스포린; 및
40 - 80 mg/g의 양의 카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드;
160 - 200 mg/g의 양의 2-(2-에톡시에톡시)에탄올;
100 - 150 mg/g의 양의 글리세릴 모노올레이트 및/또는 글리세릴 디올레이트; 및
15 - 50 mg/g(선택적으로 25 - 50 mg/g 또는 25 - 45 mg/g)의 양의 SDS; 및
선택적으로 30 - 80 mg/g의 양의 D-소르비톨
을 포함할 수 있다.
조성물 또는 코어는
380 - 500 mg/g의 양의 젤라틴;
90 - 140 mg/g의 양의 사이클로스포린; 및
40 - 80 mg/g의 양의 카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드;
160 - 200 mg/g의 양의 2-(2-에톡시에톡시)에탄올;
100 - 150 mg/g의 양의 글리세릴 모노올레이트 및/또는 글리세릴 디올레이트; 및
15 - 50 mg/g(선택적으로 25 - 50 mg/g 또는 25 - 45 mg/g)의 양의 SDS; 및
선택적으로 30 - 80 mg/g의 양의 D-소르비톨
을 포함할 수 있다.
조성물 또는 코어는 콜로이드일 수 있다. 조성물 또는 코어가 콜로이드인 경우, NFAT 억제제, 예를 들어 사이클로스포린은 콜로이드의 분산상 중에 용해될 수 있다.
조성물 또는 코어는 콜로이드일 수 있다; 따라서, 조성물 또는 코어는 연속상 및 분산상을 포함할 수 있고 연속상은
380 - 500 mg/g의 양의 젤라틴; 및
선택적으로 30 - 80 mg/g의 양의 D-소르비톨을 포함하고;
분산상은
90 - 140 mg/g의 양의 사이클로스포린; 및
40 - 80 mg/g의 양의 카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드를 포함하며;
조성물은
160 - 200 mg/g의 양의 2-(2-에톡시에톡시)에탄올;
100 - 150 mg/g의 양의 글리세릴 모노올레이트 및/또는 글리세릴 디올레이트; 및
15 - 50 mg/g의 양의 SDS를 더 포함한다.
콜로이드성 조성물 또는 코어는
300 내지 700 mg/g의 양의 젤라틴을 포함하는 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스를 포함하는 연속상;
최대 200 mg/g의 양의 사이클로스포린; 및
20 내지 200 mg/g의 양의 중쇄 트리-글리세라이드를 포함하는 분산상을 포함하고;
조성물은
100 내지 250 mg/g의 양의 용매;
폴리에틸렌글리콜 에테르 또는 에스테르가 아니거나 이를 포함하지 않는 중 또는 장쇄 지방산 모노- 또는 디-에스테르 또는 이들의 조합, 예를 들어 글리세릴 모노올레이트/디올레이트이거나 이를 포함하는 계면활성제(제1 계면활성제); 및
최대 50 mg/g의 양의 음이온성 계면활성제(제2 계면활성제)를 더 포함한다.
성분의 mg/g을 가리키는 앞서의 실시양태에서, 농도는 조성물의 건조 중량을 기준으로 한다.
적합하게는, 바로 앞서 기재된 6개의 조성물 또는 코어에서, 조성물은 분산상 및 연속상을 포함하는 콜로이드이고; 분산상은 사이클로스포린, 중쇄 트리글리세라이드 및 중 또는 장쇄 지방산 모노- 또는 디- 에스테르 계면활성제를 포함하며; 연속상은 하이드로겔 형성 중합체(예컨대, 젤라틴) 및 음이온성 계면활성제(예컨대, SDS)를 포함한다.
본 발명은 이의 범위 내에 코어가 분산상을 갖는 콜로이드이고 콜로이드의 연속상(매트릭스 상)이 약학적 유효 성분의 분산된 입자, 예를 들어 마이크로입자 또는 나노입자를 더 포함하는 조성물을 포함한다. 그렇지 않으면 분산상 및 연속상은 본 명세서의 다른 곳에 기재된 것일 수 있다.
본 발명의 조성물 및/또는 코어는 미니비드 형태일 수 있다. 이는 코어가 미니비드이며 제1 코팅 및, 적용되는 경우, 코어와 연결되는 제2 코팅이 미니비드 형태인 것일 수 있다. 그러나, 코어가 미니비드이며 조성물이 미니비드가 아닌 것도 가능하다. 조성물은 추가로 다수의 미니비드를 포함할 수 있다. 따라서 본 발명은 본원에 개시된 약학적 조성물의 특징을 가진 미니비드를 고려한다.
조성물 또는 미니비드는 코어의 최대 단면 치수(cross sectional dimension)로 약 0.01 mm 내지 약 5 mm, 예를 들어 1 mm 내지 5 mm, 및 이 경우 1 mm 내지 3 mm 또는 1 mm 내지 2 mm를 가질 수 있다. 미니비드는 구상일 수 있다. 구상 미니비드는 1.5 이하, 예를 들어 1.1 내지 1.5의 종횡비를 가질 수 있다.
본 발명의 조성물은 경구 투여용일 수 있다. 조성물은 0.1 mg 내지 1000 mg, 선택적으로 1 mg 내지 500 mg, 예를 들어 10 mg 내지 300 mg, 또는 25 내지 250 mg 적합하게는 약 25 mg, 약 35 mg, 약 37.5 mg, 약 75 mg, 약 150 mg, 약 180 mg, 약 210 mg, 약 250 mg 또는 약 300 mg의 NFAT 억제제(선택적으로 사이클로스포린)을 포함하는 경구 투여용 단위 투약 형태로 제형화될 수 있다. 적합하게 조성물은 예를 들어, 연질 또는 경질 겔 캡슐, 젤라틴 캡슐, HPMC 캡슐, 압축 정제 또는 사쉐(sachet) 내 다수의 미니비드 중에서 선택된 다수의 미니비드 단위 투약 형태이다. 미니비드는 본원의 다른 곳에 기재된 바와 같을 수 있다.
본 발명의 추가적인 구성에 따르면 NFAT 억제제 및 계면활성제를 포함하는 조성물이 제공되고, 선택적으로 계면활성제는 중쇄 또는 장쇄 지방산 모노- 또는 디-글리세라이드 또는 이들의 조합이거나 이를 포함한다. 적합하게 조성물은 폴리에틸렌글리콜 에테르 또는 에스테르가 아니거나 이를 포함하지 않는다. 적합하게 계면활성제는 조성물의 적어도 6 중량%, 예를 들어 조성물의 적어도 10 중량%, 적어도 15 중량% 또는 적어도 20 중량%의 양으로 존재한다. 선택적으로 계면활성제는 10 내지 약 50 중량%의 양으로 존재한다.
본 발명의 본 양상에 따른 조성물은 오일상, 예를 들어 본원에 기재된 임의의 오일상을 더 포함할 수 있다.
NFAT 억제제(바람직하게 사이클로스포린)는 부분적으로 또는 완전히 조성물 중에 용해될 수 있다. 적합하게 NFAT 억제제(바람직하게 사이클로스포린)은 완전히 조성물 중에 용해된다.
특정 조성물은
(i) NFAT 억제제(바람직하게 사이클로스포린 A) 10 내지 60부;
(ii) 중쇄 지방산 트리글리세라이드, 예를 들어 카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드 5 내지 40부;
(iii) 계면활성제 10 내지 50부; 및
(iv) 용매 0 내지 60부를 포함하며;
모든 부는 중량부이며 부의 합 (i) + (ii) + (iii) + (iv) = 100이다.
또다른 조성물은
(i) 사이클로스포린 A 10 내지 40부;
(ii) 중쇄 지방산 트리글리세라이드, 카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드 5 내지 25부;
(iii) 계면활성제 15 내지 30부; 및
(iv) 용매, 예를 들어 2-(2-에톡시에톡시)에탄올 10 내지 60부(선택적으로 용매 20 내지 40부 또는 25 - 30부)를 포함하며;
모든 부는 중량부이며 부의 합 (i) + (ii) + (iii) + (iv) = 100이다.
본 양상에서 선택적으로 계면활성제는 글리세릴 카프릴레이트, 글리세릴 카프레이트, 글리세릴 모노올레이트, 글리세릴 디올레이트 및 글리세롤 모노리놀레이트, 또는 이들의 조합에서 선택된다.
본 발명은 추가적으로 대상체의 위장관으로(선택적으로 구강으로) 본원에서 기술된 조성물을 투여하는 것을 포함하는, NFAT 억제제를 대상체에게 투여하는 방법을 제공한다. 방법은 NFAT 활성화 T 세포에 의해 매개되는 치료와 함께 발생하는 원치 않는 효과를 감소 또는 예방하기 위해 수행될 수 있다. 원치 않는 효과는 사이토카인 방출 증후군(CRS) 및 염증성 장질환에 관련된 증상들에서 선택될 수 있다. 원치 않는 효과는 치료의 유효성(effectiveness)을 유지하면서 감소되거나 예방될 수 있다. 조성물은 본원에 기술된 임의의 조성물일 수 있다.
본 발명의 추가적인 양상은 NFAT 활성화 T 세포에 의해 매개되는 치료와 함께 발생하는 하나 이상의 원치 않는 효과를 감소 또는 예방하기 위한 약제의 제조에 있어서의 사용을 위한 본원에서 기술되는 조성물의 용도를 제공하는데, 여기서 상기 원치 않는 효과는 사이토카인 방출 증후군(CRS) 및 염증성 장질환에 관련된 증상들에서 선택되고, 상기 조성물은 위장관으로 투여됨으로써 상기 하나 이상의 원치 않는 효과가 상기 치료의 유효성을 유지하면서 감소되거나 예방된다.
본 발명의 일 양상에서 조성물을 제조하는 방법이 제공되고, 방법은 오일상을 하이드로겔 형성 중합체를 포함하는 수상과 혼합하는 것을 포함하며, 상기 오일상은 NFAT 억제제(선택적으로 사이클로스포린)를 용액 중에 갖고 계면활성제를 포함하며, 상기 방법은 에멀젼의 고형화를 유도하는 단계를 더 포함한다.
본 발명의 조성물은 본원에 기술된 방법으로 얻어진 조성물의 특징을 갖는 조성물일 수 있다.
선택적으로, 오일상 및 수상은 오일상 대 수상 비율이 1:2 내지 1:12, 선택적으로 1:4 내지 1:10, 1:4 내지 1:8, 예를 들어 1:5 내지 1:7로 혼합된다.
상기 방법은 코어를 HPMC를 포함하는 코팅으로 코팅하여 코팅으로 인한 중량 증가가 약학적 조성물의 중량의 0.5% 내지 20%인 단계를 더 포함할 수 있다. 코어는 약학적 유효 성분을 포함할 수 있으며 본 명세서에 기재된 바와 같은 코어일 수 있다.
특정한 유효 성분에 대하여 조성물이 위 및 상부 위장관을 통과할 때까지 조성물로부터의 유효 성분의 방출을 제한 또는 지연함이 바람직할 수 있다. 제2 코팅을 포함하는 본 발명의 조성물은 이러한 적용에 특히 적합할 수 있다. 제2 코팅은 조성물로부터 방출을 지연하는 역할을 하고, 반면 제1 코팅(예컨대, HPMC)의 존재는 조성물이 하부 위장관 내에서 유효 성분을 방출할 때 방출되는 유효 성분의 양을 증가시킨다. 제2 코팅의 존재로 인한 유효 성분 방출의 지연 기간은 사용되는 제2 코팅의 성질 또는 양을 적절히 선택함으로써 맞출 수 있다. 주어진 제2 코팅 재료에 대하여 코팅의 더 큰 중량 증가는 일반적으로 조성물 투여와 유효 성분 방출 간의 시간을 증가시킬 것이다. 본 발명의 조성물은 따라서 위장관의 매우 특정한 부분에서 높은 수준의 유효 성분의 방출을 제공하기 위해 사용될 수 있다. 이러한 지연 방출 조성물은 유효 성분이 위장관에서보다 높은 전신 흡수로부터 발생하는 원치 않는 부작용을 갖는 경우 특히 유익할 수 있다.
첨부된 청구항의 주제가 본 명세서에 참조로 포함된다. 명세서는 따라서 청구항과 함께 해석되어야 하며 청구항에 언급된 구성은 명세서의 주제에 적용가능하다. 예를 들어, 방법 청구항에 기재된 구성은, 구성이 물건에 나타나는 경우 명세서에 언급된 물건에도 또한 적용가능하다. 예를 들어, 제조물 청구항에 언급된 구성은 명세서에 포함된 관련 방법 주제에 또한 적용가능하다. 유사하게, 방법의 맥락으로 명세서에 언급된 구성은, 구성이 제조물에 나타나는 경우 명세서에 언급된 제조물에도 또한 적용가능하다. 또한, 제조물의 맥락으로 명세서에 언급된 구성은 명세서에 포함된 관련 방법 대상물에 또한 적용가능하다.
본 발명의 실시양태는 동반되는 도면을 참고하여 이하 더 기술된다:
도 1은 마우스 생존을 보여주는 그래프이다.
도 2는 연구의 각 마우스 군에서 시간에 걸친 중량 변화를 보여주는 그래프이다.
도 3a-l은 마우스의 비장, 폐, 간 및 장(gut)에서 T 세포 수준 관련한 데이타를 보여주는 막대 차트이다.
도 4a-f는 각 군의 마우스의 결장 내 사이토카인 수준에 대한 막대 차트이다.
도 5a-e는 각 군의 마우스의 소장 내 사이토카인 수준에 대한 막대 차트이다.
도 6a-c는 각 군의 마우스의 비장 내 사이토카인 수준에 대한 막대 차트이다.
도 7a-e는 각 군의 마우스의 폐 내 사이토카인 수준에 대한 막대 차트이다.
도 8은 GI 내 FoxP3+ 세포의 막대 차트이다.
도 9는 GI 내 T 세포를 생산하는 TNFα의 막대 차트이다.
도 10은 각 시험군의 마우스의 소장의 조직학적 슬라이드를 보여준다.
도 11 세포사멸 양을 보여주기 위해 염색된 각 시험군 마우스의 소장의 조직학적 슬라이드.
상기와 같이, 표적 질환 항원, 특히 종양 항원에 대하여 NFAT-활성화 T 세포의 제공 또는 촉진에 의존하는 치료의 수가 증가하고 있다. 본 발명은 그러한 활성화된 T 세포가 의도된 치료적 혜택을 위해 사용될 때마다 사용될 수 있다. NFAT 활성화 T 세포는 예를 들어 NFAT 활성화 자연 살해 T 세포(NK T 세포)를 포함하는, 임의의 NFAT 활성화 T 세포일 수 있다. 그러나, 이의 사용은 화학치료 및/또는 방사선치료를 사용하는 전처리 요법이 자가 T 세포를 고갈시키기 위해 사용될 때 특히 유리할 수 있는 것으로 예상된다. 그러한 예에서, 본 발명에 따른 조성물을 전처리 요법 전체에 걸쳐 또는 적어도 활성화 치료 T 세포의 적용 이전에 투여하는 것이 바람직할 수 있다. 상기와 같이, 그러한 투여는 또한 실제 세포 치료 기간 동안 바람직하게 계속될 수 있고, 치료가 혈액학적 악성 종양에 대한 경우는 allo-HCT의 후속 적용 중에 계속될 수 있다. 본 발명의 적용이 이로울 수 있는 T 세포 치료의 예는 앞에서 기술된다.
바람직하게 본 발명의 NFAT 억제제는 사이클로스포린이다. 본원에서 유효 성분에 대한 언급은 NFAT 억제제에 대한 언급이다. 두 가지 용어는 상호호환적으로 사용된다. 본원에서 "사이클로스포린"에 대한 언급은 사이클로스포린-A (사이클로스포린 및 INN 시클로스포린(ciclosporin)으로도 알려짐)에 대한 언급이다. 다른 형태의 사이클로스포린, 예를 들어 사이클로스포린 -B, -C, -D 또는 -G 및 이들의 임의의 유도체 또는 전구체는 본원에 기술된 조성물에 사용될 수 있는 것으로 고려된다.
"세포 치료(cellular therapy)" 또는 "세포 치료(cytotherapy)"로도 불리는 "세포 치료(cell therapy)"는 세포 물질이 환자에게 투여되거나, 또는 예를 들어 T 세포 기반 치료, 예를 들어 본원에서 기술된 T 세포 치료의 직접적인 투여를 통해서, 환자에게 치료의 투여가 NFAT 활성화 T 세포 반응을 제거하는 치료이다. 투여는 보통 환자에게 주사(injection)로 수행된다. 세포 물질은 일반적으로 온전한(intact), 살아있는 세포일 수 있다. 예를 들어 세포 치료는 T 세포를 포함하고, 세포-매개 면역을 통해 암과 싸울 수 있는 변형된 T 세포가 면역치료 과정에 주사될 수 있다.
NFAT 활성화 T 세포에 의해 매개되는 치료의 유효성의 유지는 NFAT 억제제를 포함하는 조성물이 치료와 함께 사용될 때 긍정적인 치료의 치료적 결과로 여겨질 수 있다. 따라서, NFAT 억제제를 포함하는 조성물은 치료에 의해 치료되는 질환, 예를 들어 암에 대하여 치료의 원하는 치료적 효과에 부정적으로 영향을 미치지 않는다. 치료의 긍정적인 결과는 의사에 의해 쉽게 확인될 수 있고, 치료를 시작하도록 결정하게 만든 동일한 채점(scoring) 시스템 또는 랭킹(ranking)에 기초하여 잠재적으로 확인될 수 있다. 예를 들어, NFAT 활성화 T 세포에 의해 매개되는 치료로 치료하기 이전에, 환자는 다음 병기로 정의되는 암을 가질 수 있다: T4 N3 M1, T4 N3 M0, T4 N2 M1, T4 N1 M1, T4 N2 M0, T4 N1 M0, T3 N3 M1, T3 N3 M0, T3 N2 M1, T3 N1 M1, T3 N2 M0, T3 N1 M0, T2 N3 M1, T2 N3 M0, T2 N2 M1, T2 N1 M1, T2 N2 M0 또는 T2 N1 M0; 치료의 유효성을 유지하기 위해 환자 암은 NFAT 억제제를 포함하는 조성물과 함께 치료한 후 더 낮은 병기로 분류될 수 있다. 예를 들어, 환자는 치료 이전에 T4 N3 M1으로 분류되었을 수 있고 본 발명의 조성물의 보조 투여 치료 후 T3 N2 M1으로 분류될 수 있다. 용어 "치료의 유효성의 유지(maintenance of effectiveness of the therapy)"는 다음 및 이들의 조합을 포함한다: 차도(remission) 또는 반응(response)을 달성하는 치료; 효과적인 수준에서 남아있는 혈청 내 T 세포 수준(선택적으로 CART 세포 수준); 본 발명의 조성물 투여 이전의 수준 정도로 남아있는 혈청 T 세포 수준; 및 본 발명의 조성물 투여 전 거의 50% 수준으로 떨어지는 혈청 T 세포 수준. 또한 "치료의 유지(maintenance of therapy)"는 다음을 포함할 수 있다: 차도(remission)의 유지, 예를 들어 ALL의 경우, 골수의 % 아세포가 <5%, <10%, <20%, 또는 <30%. 고형 종양의 경우 "치료의 유지"는 원발 또는 이차 종양의 부재, 전이의 결핍 또는 종양 성장의 억제를 포함할 수 있다. "치료의 유지"는 또한, 또는 대안으로, 전이의 예방, 미세전이의 예방 또는 전이 세포의 증가의 감소 또는 부재를 지칭할 수 있다.
"NFAT 활성화 T 세포에 의해 매개되는 치료"는 환자를 치료하기 위해 사용될 때 다음 효과 및 이들의 조합을 제공할 수 있다: (1) 상태, 질병 또는 질환의 개시 및/또는 진행의 위험을 감소 또는 억제, 예컨대 지연하는 것; (2) 상태, 질병 또는 질환에 걸릴 수 있거나 이에 대한 성향이 있을 수 있으나 상기 상태, 질병 또는 질환의 임상적 또는 준임상적(subclinical) 증상을 겪거나 나타내지 않는 환자(예컨대 인간 또는 동물)에 있어서 진행하는 상태, 질병 또는 질환의 임상적 증상의 발현을 예방, 또는 예컨대 위험의 감소 또는 지연하는 것; (3) 상태, 질병 또는 질환을 억제하는 것(예컨대, 그의 적어도 하나의 임상 또는 준임상적 증상의 질환, 또는 유지 치료의 경우 그의 재발의 저지, 감소 또는 진행의 지연); 및/또는 (4) 질환을 완화하는 것(예컨대, 상태, 질병 또는 질환 또는 적어도 하나의 그의 임상 또는 준임상적 증상의 퇴보를 야기). 본 발명의 상기 조성물이 환자의 치료에 사용되는 경우, 예를 들어 치료의 보조 치료로서, 치료는 환자의 건강을 유지하는 것; 환자의 건강을 회복 또는 향상시키는 것; 및 원치 않는 효과 진행을 지연시키는 것의 임의의 하나 이상을 고려한다. 치료되는 환자에 대한 이점은 통계적으로 유의미한 또는 적어도 상기 환자 또는 의사가 지각할 수 있는 것일 수 있다. 약제는 투여된 모든 환자에게서 반드시 임상적 효과를 생성하지는 않을 것임이 이해될 것이며, 본 문단은 이에 따라 이해되어야 한다. 본원에 기재된 조성물 및 방법은 NFAT 활성화 T 세포에 의해 매개되는 치료의 원치 않는 효과의 치료 및/또는 예방에 사용된다.
NFAT 활성화 T 세포에 의해 매개되는 치료는 예를 들어 암의 치료를 위한 것일 수 있다. 그러나, NFAT 활성화 T 세포가 유익할 수 있는 다른 질환도 고려된다. 암은 고형 종양 또는 혈액 암일 수 있다. 암은 육종, 흑색종, 피부암, 혈액학적 악성 종양, 혈액학적 종양, 림프종, 암종 또는 백혈병일 수 있으며 암은 급성 림프아구성 백혈병, B 세포 급성 림프아구성 백혈병(B cell acute lymphoblastic leukaemia)(B-ALL), 만성 림프구성 백혈병(chronic lymphocytic leukaemia)(CLL), 급성 골수성 백혈병(acute myelogenous leukaemia)(AML), B 세포 악성 종양, B 세포 림프종, 광범위 B형 대세포 림프종(diffuse large B cell lymphoma), 만성 림프구 백혈병(chronic lymphocyte leukaemia), 비-호지킨 림프종, 예를 들어 ABC-DLBCL, 외투세포 림프종(mantle cell lymphoma), 여포성 림프종(follicular lymphoma), 털 세포 백혈병(hairy cell leukaemia) B-세포 비-호지킨 림프종(B-cell non-Hodgkin lymphoma), 발덴스트롬 마크로글로불린혈증(Waldenstrom's macroglobulinemia), 다발성 골수종, 골암, 골 전이, 면역억제 흑색종, 전이성 비소세포폐암, 비소세포폐암, 전이성 흑색종, 뇌암, 호르몬 불응성 전립선암(hormone refractory prostate cancer), 전립선암, 전이성 유방암, 유방암, 4기 흑색종, 신경아세포종 고형 종양(neuroblastoma solid tumour), 전이성 췌장암, 췌장암, 골수이형성증후군, 난소암, 난관암(fallopian tube cancer), 복막 종양(peritoneal tumour), 결직장암, 폐암, 자궁경부암, 고환암, 신장암 또는 두경부암일 수 있고, 암의 일 실시양태에서 암은 위장관의 암이 아니고, 보다 특히 이 실시양태에서 암은 하부 GI관의 암이 아니고, 예를 들어, 암은 결직장암이 아니다.
따라서 암은 혈액학적 암 예를 들어 림프종, 만성 림프구성 백혈병(chronic lymphocytic leukaemia)(CLL), 급성 림프아구성 백혈병(acute lymphoblastic leukaemia)(ALL) 또는 비-호지킨 림프종일 수 있다. 암은 고형 종양 예를 들어 유방, 난소, 췌장, 결장, 위, 폐 또는 전립선암 또는 흑색종일 수 있다. 암은 흑색종일 수 있다.
치료는 림프 조직(lymphatic tissue), 예를 들어 GIT 또는 림프절의 림프조직 내 전이성 세포를 표적으로 하는 치료일 수 있다.
선택적으로 치료에 의해 치료되는 암은 B 세포 급성 림프아구성 백혈병(B cell acute lymphoblastic leukaemia)(B-ALL), 만성 림프구성 백혈병(chronic lymphocytic leukaemia)(CLL) 또는 급성 골수성 백혈병(acute myelogenous leukaemia)(AML)이다.
NFAT 억제제를 포함하는 조성물은 본원에서 기술된 NFAT 활성화 T 세포에 의해 매개되는 치료에 관련된 원치 않는 효과의 감소 또는 예방에 사용될 수 있고, 이는 NFAT 활성화 T 세포에 의해 매개되는 치료로 투여받고 예를 들어 치료로 치료되어, 질환이 이후에 개선되는, 원치 않는 효과로 고통받는 환자의 유지 치료(maintenance therapy)를 포함할 수 있다. 이러한 환자는 증상을 보이는(symptomatic) 질병으로 고통받을 수 있고 또는 받지 않을 수 있다. NFAT 억제제를 포함하는 조성물을 사용하는 유지 치료는 NFAT 활성화 T 세포에 의해 매개되는 치료에 관련된 원치 않는 효과의 (재)발생 또는 진행을 저지, 감소 또는 지연시키는 것을 목적으로 한다.
NFAT 억제제를 포함하는 조성물은 치료와 관련된 원치 않는 효과의 원하는 감소 또는 예방을 제공하기 위해 NFAT 활성화 T 세포에 의해 매개되는 치료와 동시에, 순차적으로 또는 별도로 투여될 수 있다. 예를 들어, 치료가 환자에게 존재할 때 NFAT 억제제가 GI관, 예를 들어 결장 내 존재하도록 조성물은 치료 이전에 또는 실질적으로 동시에 투여될 수 있다. 대안으로 조성물은 환자에게 치료 투여 후 환자에게 투여될 수 있다. 치료와 관련된 원치 않는 효과는 치료가 투여된 후 일정 기간 동안 관찰되지 않을 수 있다. 따라서, 효과 예를 들어 CRS의 시작을 완화하거나 감소시키기 위해 NFAT 억제제를 포함하는 조성물은 치료의 원치 않는 효과의 시작에 대한 대응으로 치료의 투여 후 사용될 수 있다. 따라서, 조성물은 그것이 발생된 후, 치료의 원치 않는 효과에 대응하기 위한 구제 치료(rescue therapy)로 사용될 수 있다. 조성물은 또한 CRS와 같은 치료의 원치 않는 효과의 발생 위험을 예방하거나 감소시키기 위해 예방적으로 사용될 수 있다. 본원에서 기술된 바와 같이 조성물은 치료되는 질환, 예를 들어 암에 대한 상기 치료의 치료적 유효성을 유지하면서, GI관, 예를 들어 하부 GI관으로 NFAT 억제제를 전달하고 적절하게 CRS와 같은 치료와 관련된 원치 않는 효과를 중재한다.
"유효량"은 원하는 치료를 달성하기에, 예를 들어 하나 이상의 원치 않는 효과를 감소 또는 예방하고 치료의 유효성을 유지하기에 또는 원하는 치료적 또는 예방적 반응을 야기하기에 충분한 양을 의미한다. 상기 치료적 또는 예방적 반응은 사용자(예컨대, 의사)가 치료의 유효한 반응으로 인식할 임의의 반응일 수 있다. 추가로, 치료적 또는 예방적 반응의 평가에 기초하여, 적절한 치료 기간, 적절한 용량, 및 잠재적인 조합 치료를 결정하는 것은 당업자의 기술에 속한다.
조성물 또는 개시된 조성물에 적용되는 "건조" 및 "건조된"이란 용어는 5 중량% 미만의 유리수(free water), 예컨대 1 중량% 미만의 유리수를 함유하는 조성물 또는 조성물의 지칭을 포함할 수 있다. 그러나, 일차적으로, 개시된 조성물에 적용되는 "건조" 및 "건조된"은 초기 고형화된 조성물 중에 존재하는 하이드로겔이 굳은 조성물을 형성하도록 충분히 건조되었음을 의미한다. 이에 대해 고체 콜로이드가 지칭되는 경우 또한 본원의 정의에 따른 건조 콜로이드를 지칭한다.
기술된 조성물의 성분 및 부형제는 의도된 목적에 적합하다. 예를 들어, 약학적 조성물은 약학적으로 허용되는 성분을 포함한다.
달리 언급되지 않으면, 본 발명의 조성물의 성분, 요소, 부형제 등은 본원의 다른 곳에 논의된 하나 이상의 의도된 목적에 적합하다.
의심을 피하기 위하여, 앞서 "배경기술"이란 표제 하에 본 명세서에 개시된 정보는 본 발명과 관련되며 본 발명의 개시의 일부로서 해석되는 것으로 여기에 명시된다.
본 발명이 제제를 지칭하는 경우 이는 본 발명의 조성물과 동일한 의미를 갖는다. 따라서, 제제 및 조성물은 상호 교환적으로 사용된다.
본 명세서의 상세한 설명 및 청구항에 걸쳐서, 용어 "포함하다" 및 "함유하다" 및 이들의 변형은 "포함하나 제한되지 않음"을 의미하며, 다른 모이어티, 첨가제, 성분, 정수 또는 단계를 제외하려는 의도가 아니다(또한 제외하지 않는다). 본 명세서의 상세한 설명 및 청구항에 걸쳐서, 문맥이 달리 요구하는 바가 아니라면 단수는 복수를 포괄한다. 특히, 부정관사가 사용되는 경우, 본 명세서는 문맥이 달리 요구하는 바가 아니라면, 단수뿐 아니라 복수를 고려함을 이해해야 한다.
본 발명의 특정 양상, 실시양태 또는 실시예와 연관하여 기재되는 구성, 정수, 특성, 화합물, 화학적 모이어티 또는 기는 호환되지 않는 경우가 아니라면 본원에 기재된 임의의 다른 양상, 실시양태 또는 실시예에 적용가능함을 이해해야 한다. 본 명세서(임의의 첨부된 청구항, 요약 및 도면을 포함)에 개시된 모든 구성, 및/또는 개시된 임의의 방법 또는 과정의 모든 단계는, 그러한 구성 및/또는 단계가 적어도 상호배타적인 경우의 조합을 제외하고, 임의의 조합으로 조합될 수 있다. 본 발명은 임의의 전술한 양태의 세부 사항에 구속되지 않는다. 본 발명은 본 명세서(임의의 첨부된 청구항, 요약 및 도면을 포함)에 개시된 구성의 임의의 신규한 것, 또는 임의의 신규한 조합, 또는 개시된 임의의 방법 또는 과정의 단계의 임의의 신규한 것, 또는 임의의 신규한 조합에 미친다.
독자는 본 출원과 연관된 명세서와 동시에 또는 앞서 출원되고 본 명세서와 함께 일반의 시각에 공개된 모든 문서 및 자료와 주의를 기울이며, 이러한 모든 문서 및 자료는 본원에 참조로 인용된다.
조성물
일 실시양태에서, 조성물은 매트릭스 및 NFAT 억제제를 포함한다. 상기 매트릭스는 하이드로겔 형성 중합체와 함께 형성될 수 있고, 상기 중합체에 추가적인 부형제를 함유할 수 있다. 상기 유효 성분은 상기 매트릭스 내에 함유된다. 상기 유효 성분은 용액 또는 현탁액, 또는 이들의 조합 중에 존재할 수 있다; 그러나 본 발명은 유효 성분의 용액 또는 현탁액을 포함하는 조성물에 제한되지 않으며 예를 들어, 리포좀 또는 사이클로덱스트린 중에 캡슐화된 유효 성분을 포함한다. 매트릭스는 유효 성분이 포함된 봉입체(inclusions)를 함유할 수 있다; 예를 들어, 봉입체는 유효 성분이 용해 또는 현탁된 소수성 매질을 포함할 수 있다. 유효 성분은 따라서 매트릭스 중에 직접 용해 또는 현탁되거나, 유효 성분이 용해 또는 현탁된 봉입체에 의해 간접적으로 매트릭스 중에 용해 또는 현탁될 수 있다.
조성물은, 그러므로, 매트릭스-형성 중합체, 특히 하이드로겔-형성 중합체를 포함한다. 조성물의 매트릭스는 수투과성 중합체, 수팽윤성 중합체 및 생분해성 중합체에서 선택된 중합체를 포함하는 중합체 매트릭스이거나 이를 포함할 수 있다. 특히, 매트릭스는 아래에 더욱 자세히 기재되는 하이드로겔 형성 중합체이거나 이를 포함한다.
조성물로부터 유효 성분의 변형 방출은 매트릭스 재료의 성질에 의해 달성될 수 있다. 예를 들어 매트릭스는 내부에 유효 성분이 함유된, 예컨대 용해 또는 현탁된 투과성 또는 침식성 중합체일 수 있다; 경구 투여 후 매트릭스는 점차 용해 또는 침식됨으로써 매트릭스로부터 유효 성분을 방출한다. 침식은 생분해성 중합체 매트릭스의 생분해에 의해 달성될 수 있다. 매트릭스가 투과성인 경우, 물이 매트릭스를 투과하여 약물이 매트릭스로부터 확산되도록 한다. 하이드로겔 형성 중합체로 형성된 매트릭스는 따라서 변형 방출 중합체를 포함할 수 있다. 이러한 변형 방출 중합체로서 셀룰로오스 유도체, 예를 들어 하이드록시프로필메틸 셀룰로오스, 폴리(락틱산), 폴리(글리콜로익)산, 폴리(락틱-코 글리콜릭산 공중합체), 폴리에틸렌 글리콜 블록 공중합체, 폴리오르토에스테르, 폴리안하이드라이드, 폴리안하이드라이드 에스테르, 폴리안하이드라이드 이미드, 폴리아미드 및 폴리포스파진이 언급될 수 있다.
중합체 매트릭스
본 발명의 조성물은 NFAT 억제제(예를 들어 사이클로스포린), 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스, 계면활성제 및 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스 중에 분산된 오일상을 포함할 수 있다. 추가로, 본 발명의 특정한 실시양태에서 본 발명의 조성물은 코어를 포함하며 코어는 NFAT 억제제(예를 들어 사이클로스포린), 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스, 계면활성제 및 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스 중에 분산된 오일상을 포함한다. 조성물 또는 코어는 기계적 강도를 제공하기 위한, 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스이거나 이를 포함할 수 있는, 연속상 또는 매트릭스상을 포함한다. 실시양태에서 사이클로스포린은 연속상 또는 매트릭스 내의 오일상 또는 분산상 내에 포함된다. NFAT 억제제(예를 들어, 사이클로스포린)는 코어 또는 조성물의 하이드로겔-형성 중합체 매트릭스(연속상 또는 수상) 내의 분산상으로서 존재할 수 있다. 분산상은 오일상이거나 이를 포함할 수 있다. 예를 들어 분산상은 지질 및 NFAT 억제제(예를 들어, 사이클로스포린)를 포함할 수 있다. 코어 또는 조성물은 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스를 포함하는 수상 내의 오일상 중에 용해된 NFAT 억제제(예를 들어, 사이클로스포린)를 분산시켜 콜로이드를 형성한 뒤 조성물을 고형화(겔)되도록 함으로써 제조될 수 있고 이에 의해, 사이클로스포린을 하이드로겔-형성 중합체 매트릭스 내에 고정할 수 있다.
코어는 고체 콜로이드 형태를 가질 수 있고, 콜로이드는 연속상 및 분산상을 포함하며, 연속상은 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스이거나 이를 포함하고 분산상은 선택적으로 NFAT 억제제(예를 들어, 사이클로스포린)를 포함하는, 오일상이거나 이를 포함한다. 분산상은 NFAT 억제제(예를 들어, 사이클로스포린)를 함유하는, 예를 들어 그것을 용액 또는 현탁액 또는 양자의 조합으로서 함유하는 비히클을 포함할 수 있다. 비히클은 본원에 기재된 바와 같은 오일상일 수 있다.
하이드로겔-형성 중합체 및 NFAT 억제제(예를 들어, 사이클로스포린)를 포함하는 분산상을 포함하는 이러한 코어는 아래에 더욱 자세히 기재된다.
지연 방출 코팅
특정 실시양태에서, 본 발명은 코팅-형성 중합체이거나 이를 포함하는 코팅을 갖는 조성물을 제공하며, 코팅-형성 중합체는 하이드로겔 형성 중합체이다; 코팅은 외부에 제2 코팅이 있는 제1 코팅일 수 있다. 제2 코팅은 지연 방출 코팅일 수 있으나, 본 발명이 제2 코팅이 지연 방출 코팅일 것을 요구하지는 않는다. 제2 코팅은 지연 방출 중합체이거나 이를 포함할 수 있다.
제1 코팅은 본 명세서의 다른 곳에 기재된 양으로 존재할 수 있다.
제1 코팅은 코어의 0.5 중량% 내지 20 중량%의 제1 코팅에 의한 중량 증가에 상응하는 양으로 존재할 수 있다.
또한, 조성물은 0.5% 내지 15%; 1% 내지 15%; 1% 내지 12%; 1% 내지 10%; 1% 내지 8%; 1% 내지 6%; 1% 내지 4%, 2% 내지 10%; 2% 내지 8%; 2% 내지 6%; 2% 내지 7%; 2% 내지 4%; 4% 내지 8%; 4% 내지 7%, 4% 내지 6%, 5% 내지 7%; 7% 내지 20%; 7% 내지 16%; 9% 내지 20%; 9% 내지 16%; 10% 내지 15%; 및 12% 내지 16%로부터의 범위에서 선택된 코팅에 의한 중량 증가에 상응하는 양으로 존재하는 제1 코팅을 포함할 수 있다.
본 발명은 코어, 제1 코팅 및 제1 코팅 외부의 제2 코팅을 포함하는 약학적 조성물을 제공하며, 코어는 NFAT 억제제(예를 들어, 사이클로스포린), 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스, 계면활성제 및 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스 중에 분산된 오일상을 포함하며, 제1 코팅은 수용성 셀룰로오스 에테르이거나 이를 포함하며, 제2 코팅은 지연 방출 중합체이거나 이를 포함하며, 제1 코팅은 코어의 0.5 중량% 내지 20 중량%의 제1 코팅에 의한 중량 증가에 상응하는 양으로 존재할 수 있고, 계면활성제는 중쇄 또는 장쇄 지방산 모노- 또는 디-글리세라이드 또는 이들의 조합이고 폴리에틸렌글리콜 에테르 또는 에스테르가 아니거나 이를 포함하지 않는다.
본 발명의 조성물은 1 μm 내지 1 mm의 두께를 갖는 제1 코팅을 포함할 수 있다. 따라서, 앞서 특정한 코팅에 의한 % 중량 증가는 1 μm 내지 1 mm의 두께에 상응할 수 있다.
제1 코팅은 1 μm 내지 500 μm; 10 μm 내지 250 μm; 10 μm 내지 100 μm; 10 μm 내지 50 μm; 10 μm 내지 20 μm; 50 μm 내지 100 μm; 100 μm 내지 250 μm; 100 μm 내지 500 μm; 50 μm 내지 500 μm; 50 μm 내지 250 μm; 100 μm 내지 1 mm; 500 μm 내지 1 mm로부터의 범위에서 선택된 두께를 가질 수 있다. 본 문단에 개시된 두께를 갖는 코팅은 본 출원의 임의의 코팅일 수 있다. 특히 본 문단에 지칭된 코팅은 수용성 셀룰로오스 에테르 코팅일 수 있다.
제1 코팅은 1% 내지 20%, 4% 내지 7%, 5% 내지 7%, 4% 내지 15%, 8% 내지 15%, 4% 내지 12% 및 8% 내지 12%로부터의 범위에서 선택된 중량 증가로 존재할 수 있다. 제2 코팅은 8% 내지 15% 또는 8% 내지 12%의 범위에서 선택된 중량 증가로 존재할 수 있다.
추가로, 본 발명은 코어, 제1 코팅 및 제1 코팅 외부의 제2 코팅을 포함하는 약학적 조성물을 제공하며, 코어는 NFAT 억제제(예를 들어, 사이클로스포린), 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스, 계면활성제 및 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스 중에 분산된 오일상을 포함하며, 제1 코팅은 수용성 셀룰로오스 에테르이거나 이를 포함하며, 제2 코팅은 지연 방출 중합체이거나 이를 포함하며, 제1 코팅은 1 μm 내지 1 mm의 두께를 갖는다.
제2 코팅은 본원의 다른 곳에 기재된 양으로 존재할 수 있다. 적합하게 제2 코팅은 조성물 상에 약 10 μm 내지 약 1 mm, 예를 들어, 약 10 μm 내지 약 500 μm, 약 50 μm 내지 약 1 mm, 또는 약 50 μm 내지 약 500 μm의 코팅 두께를 제공한다. 두께는 따라서 약 100 μm 내지 약 1 mm, 예컨대 100 μm 내지 약 750 μm 또는 약 100 μm 내지 약 500 μm일 수 있다. 두께는 약 250 μm 내지 약 1 mm, 예컨대 약 250 μm 내지 약 750 μm 또는 250 μm 내지 약 500 μm일 수 있다. 두께는 약 500 μm 내지 약 1 mm, 예컨대 약 750 μm 내지 약 1 mm 또는 약 500 μm 내지 약 750 μm일 수 있다. 두께는 따라서 약 10 μm 내지 약 100 μm, 예컨대 약 10 μm 내지 약 50 μm 또는 약 50 μm 내지 약 100 μm일 수 있다.
제2 코팅(또는 외부 코팅으로 지칭)이 존재하는 임의의 양상 또는 실시양태에서 제2 코팅은 2% 내지 40%의 % 중량 증가로 존재할 수 있음이 고려된다. 추가로 제2 코팅은 4% 내지 30%, 4% 내지 7%, 7% 내지 40%, 7% 내지 30%, 8% 내지 25%, 8% 내지 20%, 2% 내지 25%, 2% 내지 20%, 4% 내지 25%, 4% 내지 20%, 4% 내지 15%, 4% 내지 13%, 7% 내지 15%, 7% 내지 13%, 8% 내지 12%, 9% 내지 12% 및 20% 내지 25%로부터의 범위에서 선택된 코팅에 의한 중량 증가에 상응하는 양으로 존재할 수 있다.
본 발명의 임의의 양상 및 실시양태에서 제1 코팅은 0.5% 내지 20%, 바람직하게는 1% 내지 16% 또는 4% 내지 16%의 코어에 대한 % 중량 증가로 존재할 수 있고, 제2 코팅은 4% 내지 24%, 7% 내지 24%, 22% 내지 24%, 7% 내지 15%, 또는 8% 내지 12%, 바람직하게는 22% 내지 24%, 7% 내지 15%, 또는 8% 내지 12%의 % 중량 증가로 존재할 수 있다.
코어는 바람직하게는 미니비드의 형태, 예를 들어 이하에서 더욱 자세히 기재할 바와 같이, 예를 들어 고체 콜로이드 형태이다. 제2 코팅은 필름 또는 막일 수 있다. 제2 코팅, 예컨대 필름 또는 막은 위 이후까지 방출을 지연하는 역할을 할 수 있다; 코팅은 따라서 장용성 코팅일 수 있다. 지연 방출 코팅은 하나 이상의 지연 방출 물질, 바람직하게는 중합체 성질(예컨대 아래에서 더욱 자세히 기재될 바와 같이 메타크릴레이트 등; 다당류 등), 또는 이러한 하나 이상의 물질의 조합을 포함할 수 있고, 선택적으로 다른 부형제, 예를 들어 가소제를 포함할 수 있다. 사용되는 경우, 바람직한 가소제는 친수성 가소제를 포함하며 예를 들어 트리에틸 시트레이트(TEC)이고, 이는 아래 기재될 바와 같이 코팅으로서 Eudragit® 패밀리 중합체를 사용할 경우 특히 바람직하다. 아래에 에틸 셀룰로오스를 갖는 코팅과 관련하여 더욱 자세히 기재될, 다른 바람직한 가소제는 디부틸 세바케이트(DBS)이다. 대안적인 또는 추가적인 선택적으로 포함되는 부형제는 활택제(glidant)이다. 활택제는 유동성을 향상시키기 위해 분말 또는 다른 매질에 첨가되는 물질이다. 일반적인 활택제는 코팅으로서 Eudragit® 패밀리 중합체를 사용할 경우 바람직한 탈크이다.
지연 방출 코팅(제2 코팅)은 아래에 기재된 바와 같이 적용될 수 있고 두께 및 밀도에 따라 변동될 수 있다. 코팅의 양은 적용되는 건조 조성물(예컨대, 코어)에 추가된(증가된) 추가 중량으로 정의된다. 중량 증가는 바람직하게 0.1% 내지 50%, 바람직하게 코어의 건조 중량의 1% 내지 15%, 더욱 바람직하게 3% 내지 10% 또는 5-12% 또는 8-12% 범위 내이다.
지연 방출 코팅의 중합체성 코팅 재료는 메타크릴산 공중합체, 암모니오 메타크릴레이트 공중합체, 또는 이들의 혼합물을 포함할 수 있다. 메타크릴산 공중합체, 예컨대 EUDRAGIT™ S 및 EUDRAGIT™ L(Evonik)이 특히 적합하다. 이들 중합체는 위저항성 및 장용성 중합체이다. 이들 중합체 필름은 순수한 물 및 희석된 산에 불용성이다. 이들은 카르복시산 함량에 따라 더 높은 pH에서 용해될 수 있다. EUDRAGIT™ S 및 EUDRAGIT™ L은 중합체 코팅 중의 단일 성분으로 또는 임의의 비율의 조합으로 사용될 수 있다. 중합체의 조합을 사용함으로써, 중합체성 재료는 다양한 pH 수준, 예컨대 EUDRAGIT™ L 및 EUDRAGIT™ S가 별도로 용해되는 pH의 사이에서 용해도를 나타낼 수 있다. 특히, 코팅은 본 문단에 기재된 하나 이상의 공중합체를 포함하는 장용성 코팅일 수 있다. 언급되는 특정 코팅 재료는 Eudragit L 30 D-55이다.
상표 "EUDRAGIT"은 이하에서 메타크릴산 공중합체, 특히 Evonik에서 상표명 EUDRAGIT으로 판매되는 것을 지칭하기 위해 사용된다.
상기 지연 방출 코팅은, 존재하는 경우, 대부분(예컨대, 총 중합체성 코팅 함량의 50% 초과)의 적어도 하나의 약학적으로 허용되는 수용성 중합체, 및 선택적으로 일부분(예컨대, 총 중합체성 함량의 50% 미만)의 적어도 하나의 약학적으로 허용되는 수불용성 중합체를 포함하는 중합체성 재료를 포함할 수 있다. 대안으로, 막 코팅은 대부분(예컨대, 총 중합체성 함량의 50% 초과)의 적어도 하나의 약학적으로 허용되는 수불용성 중합체, 및 선택적으로 일부분(예컨대, 총 중합체성 함량의 50% 미만)의 적어도 하나의 약학적으로 허용되는 수용성 중합체를 포함하는 중합체성 재료를 포함할 수 있다.
암모니오 메타크릴레이트 공중합체, 예컨대 EUDRAGIT™ RS 및 EUDRAGIT™ RL (Evonik)은 본 발명에 사용하기 적합하다. 이들 중합체는 순수한 물, 희석된 산, 완충 용액, 및/또는 소화액에서 전체 생리적 pH 범위에 걸쳐 불용성이다. 중합체는 pH에 무관히 물 및 소화액 중에서 팽윤된다. 팽윤된 상태에서, 이들은 물 및 용해된 유효 성분들에 투과성이다. 중합체의 투과성은 중합체 중의 에틸 아크릴레이트(EA), 메틸 메타크릴레이트(MMA), 및 트리메틸 암모니오에틸 메타크릴레이트 클로라이드(TAMCl) 기의 비율에 의존한다. 예를 들어, EA:MMA:TAMCl 비율 1:2:0.2를 갖는 중합체(EUDRAGIT™ RL)는 1:2:0.1 비율인 것(EUDRAGIT™ RS)보다 더욱 투과성이다. EUDRAGIT™ RL의 중합체는 높은 투과성의 불용성 중합체이다. EUDRAGIT™ RS의 중합체는 낮은 투과성의 불용성 필름이다. 이 패밀리의 확산-제어 pH-비의존성 중합체는 에틸 아크릴레이트, 메틸 메타크릴레이트 및 낮은 함량의 메타크릴산 에스테르의 공중합체이며 중합체를 투과성으로 만들기 위한 염으로 존재하는 4차 암모늄 기를 갖는 RS 30 D이다. RS 30 D는 수성 분산액으로 이용가능하다.
아미노 메타크릴레이트 공중합체는 임의의 원하는 비율로 조합될 수 있고, 비율은 약물 방출 속도를 변형하기 위해 변형될 수 있다. 예를 들어, 90:10의 EUDRAGIT™ RS: EUDRAGIT™ RL 비율이 사용될 수 있다. 대안으로, EUDRAGIT™ RS: EUDRAGIT™ RL 비율은 약 100:0 내지 약 80:20, 또는 약 100:0 내지 약 90:10, 또는 이 사이의 임의의 비율일 수 있다. 이러한 조성물에서, 투과성이 더 낮은 중합체 EUDRAGIT™ RS가 일반적으로 더 용해성인 RL과의 중합체성 재료에서 대부분을 포함하고, 용해될 경우, 틈이 형성되도록 하여 이를 통해 용질이 코어와 접촉될 수 있어 유효 성분이 제어된 방식으로 빠져나오도록 한다.
아미노 메타크릴레이트 공중합체는 약물 방출의 원하는 지연 및/또는 코팅의 공극 및/또는 약물이 빠져 나가기 위한 코팅 내 조성물의 노출 및/ 또는 고정화 또는 수용성 중합체 매트릭스의 용출을 달성하기 위해 중합체 재료 내에 메타크릴산 공중합체와 조합될 수 있다. 암모니오 메타크릴레이트 공중합체(예컨대, EUDRAGIT™ RS) 대 메타크릴산 공중합체의 비율은 약 99:1 내지 약 20:80 범위 내로 사용될 수 있다. 또한 2개 유형의 중합체는 동일한 중합체성 재료로 조합되거나, 비드에 적용되는 별개의 코팅으로서 제공될 수 있다.
Eudragit™ FS 30 D는 메타크릴산, 메틸 아크릴레이트, 및 메틸 메타크릴레이트로 이루어진 음이온성 수계 아크릴릭 중합체성 분산이며 pH 민감성이다. 이 중합체는 함유한 카르복시기가 더 적어 높은 pH(> 6.5)에서 용해된다. 이러한 시스템의 이점은 전통적인 분말 적층(layering) 및 유동화 층(bed) 코팅 기술을 사용해 합리적인 처리 시간 내에 대규모로 용이하게 제작될 수 있다는 것이다. 추가적인 예는 작용기로 메타크릴산을 갖는 음이온성 중합체의 수성 분산인 EUDRAGIT® L 30D-55이다. 이는 30% 수성 분산으로 이용가능하다.
앞서 기재된 EUDRAGIT™ 중합체 이외에, 수많은 다른 그러한 공중합체가 약물 방출 제어에 사용될 수 있다. 이들은 메타크릴레이트 에스테르 공중합체, 예를 들어, EUDRAGIT™ NE 및 EUDRAGIT™ NM 범위를 포함한다. EUDRAGIT™ 중합체에 대한 추가적인 정보는 "Chemistry and Application Properties of Polymethacrylate Coating Systems," in Aqueous Polymeric Coatings for Pharmaceutical Dosage Forms, ed. James McGinity, Marcel Dekker Inc., New York, pg 109-114에서 찾을 수 있으며 상기 전체가 본원에 참조로 통합된다.
하이드록시프로필 메틸셀룰로오스(HPMC)의 여러 유도체는 또한 pH 의존성 용해도를 나타내고 지연 방출 코팅으로 본 발명에 사용될 수 있다. 이러한 유도체의 예로 HPMC 에스테르를 언급할 수 있고, 예를 들어 상부 소장관에서 빠르게 용해하는 하이드록시프로필 메틸셀룰로오스 프탈레이트(HPMCP) 및 이온화될 수 있는 카르복시기가 존재해 높은 pH (LF 등급에 대해 > 5.5 및 HF 등급에 대해 > 6.8)에서 중합체가 가용화되도록 하는 하이드록시프로필 메틸셀룰로오스 아세테이트 숙시네이트(HPMCAS)가 있다. 이들 중합체는 Shin-Etsu Chemical Co. Ltd.에서 상업적으로 이용가능하다. 지연 방출 코팅으로 유용한 것으로 본원에 기재된 다른 중합체와 마찬가지로, HPMC 및 유도체(예컨대, 에스테르)는 다른 중합체, 예컨대 EUDRAGIT RL-30 D와 조합될 수 있다.
다른 중합체 특히 장용성 또는 pH-의존성 중합체가 코팅을 제공하기 위해 사용될 수 있다. 이러한 중합체는 프탈레이트, 부티레이트, 숙시네이트, 및/또는 멜리테이트(mellitate) 기를 포함할 수 있다. 이러한 중합체는 셀룰로오스 아세테이트 프탈레이트, 셀룰로오스 아세테이트 숙시네이트, 셀룰로오스 수소 프탈레이트, 셀룰로오스 아세테이트 트리멜리테이트, 하이드록시프로필-메틸셀룰로오스 프탈레이트, 하이드록시프로필-메틸셀룰로오스 아세테이트 숙시네이트, 녹말 아세테이트 프탈레이트, 아밀로오스 아세테이트 프탈레이트, 폴리비닐 아세테이트 프탈레이트, 및 폴리비닐 부티레이트 프탈레이트를 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
pH 비의존성 중합체 지연 방출 코팅
특정 실시양태에서 제2 코팅은, 존재하는 경우, 용해 프로파일 및/또는 본 발명의 조성물에 포함된 유효 성분을 방출하는 능력에 있어서 pH-비의존성인 중합체성 코팅이거나 이를 포함한다. pH-비의존성 중합체 지연 방출 코팅은 지연 방출 중합체, 선택적으로 복수의 지연 방출 중합체, 및 하나 이상의 다른 선택적인 성분을 포함한다. 다른 성분은 조성물의 성질을 조절하는 역할을 할 수 있다. 예시는 이미 주어졌다(예컨대, Eudragit RS 및 RL).
pH-비의존성 중합체성 코팅의 다른 예는 에틸 셀룰로오스이거나 이를 포함하는 코팅이다; pH-비의존성 중합체성 코팅은 그러므로, 에틸 셀룰로오스인 지연 방출 중합체를 가질 수 있다. 투약 형태는 에틸 셀룰로오스 및 - 액체 제제의 경우 - 액체 비히클, 하나 이상의 다른 성분에 추가하여, 코팅에 사용되는 에틸 셀룰로오스 제제를 포함할 수 있음을 이해해야 한다. 다른 성분은 조성물의 성질, 예컨대 안정성 또는 필름 코팅의 유연성과 같은 코팅의 성질을 조절하는 역할을 할 수 있다. 에틸 셀룰로오스는 이러한 조성물에서 유일한 지연 방출 중합체일 수 있다. 에틸 셀룰로오스는 투약 형태를 코팅하는 데 사용하기 위하여 코팅 조성물의 건조 중량의 적어도 50 중량%, 적어도 60 중량%, 적어도 70 중량%, 적어도 80 중량%, 적어도 90 중량% 또는 적어도 95 중량%의 양일 수 있다. 따라서, 에틸 셀룰로오스 코팅은 에틸 셀룰로오스 이외에 다른 성분을 포함할 수 있다. 에틸 셀룰로오스는 에틸 셀룰로오스 코팅의 적어도 50 중량%, 적어도 60 중량%, 적어도 70 중량%, 적어도 80 중량%, 적어도 90 중량% 또는 적어도 95 중량%의 양일 수 있다. 결과적으로, 에틸 셀룰로오스는 제2 코팅의 건조 중량의 적어도 50 중량%, 적어도 60 중량%, 적어도 70 중량%, 적어도 80 중량%, 적어도 90 중량% 또는 적어도 95 중량%의 양일 수 있다. 적합하게 에틸 셀룰로오스 코팅은 필름의 유연성을 향상시키고 코팅의 적용 동안 코팅 조성물의 필름-형성 성질을 향상시키기 위해 아래에 기술될 가소제를 더 포함한다.
상기 조성물, 선택적으로 코어(즉, 제1 코팅의 부재시) 또는 제1 코팅에 적용될 수 있는 특정 에틸 셀룰로오스 코팅 조성물은 유화제, 예컨대 암모늄 올레이트의 도움을 받아 물에 균일하게 현탁된, 서브미크론 내지 미크론 입자 크기 범위, 예컨대 0.1 내지 10 μm 크기의, 에틸 셀룰로오스의 분산이다. 에틸 셀룰로오스 분산은 선택적으로 및 바람직하게 가소제를 함유할 수 있다. 적합한 가소제는 예를 들어 디부틸 세바케이트(DBS), 디에틸프탈레이트, 트리에틸 시트레이트, 트리부틸 시트레이트, 트리아세틴, 또는 중쇄 트리글리세라이드를 포함한다. 코팅 조성물에 존재하는 가소제의 양은 코팅의 원하는 성질에 따라 바뀔 수 있다. 일반적으로 가소제는 가소제 및 에틸 셀룰로오스의 조합된 중량의 1 내지 50%의 범위로, 예를 들어 약 8 내지 약 50%로 포함한다. 이러한 에틸 셀룰로오스 분산은, 예를 들어, 미국 특허 No. 4,502,888에 따라 제작될 수 있고, 이는 본원에 참조로 통합된다. 본 발명의 사용에 적합하며 상업적으로 이용가능한 이러한 에틸 셀룰로오스 분산의 하나는 상표명 수릴리스(Surelease®)로 Colorcon of West Point, Pa. USA에서 판매된다. 이 제품에서, 에틸 셀룰로오스 입자는, 예컨대 올레산 및 가소제와 혼합되어, 그 후 선택적으로 압출 및 융해된다. 융해된 가소된 에틸 셀룰로오스는 그 후 예를 들어, 암모니아화된 물 중에 선택적으로 고전단(high shear) 혼합 장치에서, 예컨대 압력 하에서 직접 유화된다. 암모늄 올레이트가 제자리에서(in situ), 예를 들어 가소화된 에틸 셀룰로오스 입자의 분산을 형성하고 안정화하기 위해 형성될 수 있다. 최종 고체 함량을 달성하기 위해 추가의 정제된 물이 그 뒤 첨가될 수 있다. 또한 미국 특허 No. 4,123,403을 참조하고, 이는 본원에 참조로 통합된다.
상표 "수릴리스(Surelease®)"는 이하에서 에틸 셀룰로오스 코팅 재료, 예를 들어 유화제, 예컨대 암모늄 올레이트의 도움을 받아 물에 균일하게 현탁된, 서브미크론 내지 미크론 입자 크기 범위, 예컨대 약 0.1 내지 10 μm 크기의, 에틸 셀룰로오스의 분산을 지칭하기 위해 사용된다. 특히, 상표 "수릴리스(Surelease®)"는 본원에서 수릴리스(Surelease®) 상표로 Colorcon에서 판매되는 제품을 지칭하는 데 사용된다.
수릴리스(Surelease®) 분산은 pH에 상대적으로 둔감한 재현성 있는 프로파일을 갖는 유효 성분 방출의 속도를 조정하는 제2 코팅으로 사용될 수 있는 필름-형성 중합체, 가소제 및 안정화제의 조합의 예이다. 약물 방출의 본질적 수단은 수릴리스® 분산 막을 통한 확산에 의하며 이는 필름 두께에 직접적으로 제어된다. 수릴리스의 사용은 특히 바람직하며 코팅으로 적용되는 수릴리스의 양을 증가 또는 감소시켜 코팅된 조성물의 용해를 변형할 수 있다. 달리 명시한 바가 없다면, 용어 "수릴리스®"의 사용은 수릴리스 Surelease E-7-19020, E-7-19030, E-7-19040 또는 E-7-19050에 적용될 수 있다. 에틸 셀룰로오스 코팅 제제, 예를 들어 수릴리스 E-7-19020은, 올레산 및 디부틸 세바케이트와 혼합되고, 그 후 압출 및 융해된 에틸 셀룰로오스를 포함할 수 있다. 융해된 가소화된 에틸 셀룰로오스는 그 후 압력 하에 고전단(high shear) 혼합 장치에서 암모니아화된 물 중에 직접 유화된다. 암모늄 올레이트가 가소화된 에틸 셀룰로오스 입자의 분산을 형성하고 안정화하기 위해 제자리에서 형성된다. 최종 고체 함량을 달성하기 위해 추가의 정제된 물이 그 뒤 첨가된다. 에틸 셀룰로오스 코팅 제제, 예를 들어 수릴리스 E-7-19030은, 재료로 분산된 콜로이드성 무수 실리카를 추가로 포함할 수 있다. 에틸 셀룰로오스 코팅 제제, 예를 들어 수릴리스 E-7-19040은, 특히 콜로이드성 무수 실리카 및 올레산을 포함하는 제제에서, 디부틸 세바케이트 대신 중쇄 트리글리세라이드를 포함할 수 있다. 에틸 셀룰로오스 코팅 제제, 예를 들어 수릴리스 E-7-19050은, 융해 및 압출 전 올레산과 혼합된 에틸 셀룰로오스로부터 유도될 수 있다. 융해된 가소화된 에틸 셀룰로오스는 그 후 압력 하에 고전단(high shear) 혼합 장치에서 암모니아화된 물 중에 직접 유화된다. 암모늄 올레이트가 가소화된 에틸 셀룰로오스 입자의 분산을 형성하고 안정화하기 위해 제자리에서 형성된다. 그러나, 중쇄 트리글리세라이드, 콜로이드성 무수 실리카 및 올레산을 포함하는 제제가 바람직하다. 수릴리스 E-7-19040가 특히 바람직하다.
본 발명은 또한 에틸 셀룰로오스, 예컨대 수릴리스 제제와, 다른 코팅 성분, 예를 들어 알긴산나트륨, 예컨대 상표명 Nutrateric™로 시판되는 알긴산나트륨과의 조합의 사용을 고려한다.
앞서 논한 EUDRAGIT™ 및 수릴리스(Surelease®) 중합체에 추가하여, 호환되는 경우, 추가의 지연-방출 프로파일을 제공하기 위해 본원에 개시된 임의의 코팅 중합체의 조합이 혼합될 수 있다.
지연 방출 코팅은 중합체성 재료의 투과성을 증가시키기 위해 적어도 하나의 가용성 부형제를 더 포함할 수 있다. 이들 가용성 부형제는 또한 공극 형성제이거나 이로 지칭될 수 있다. 적합하게, 적어도 하나의 가용성 부형제 또는 공극 형성제는 가용성 중합체, 계면활성제, 알칼리 금속염, 유기산, 당, 다당류, 또는 당알코올에서 선택된다. 이러한 가용성 부형제는 폴리비닐 피롤리돈, 폴리비닐 알코올(PVA), 폴리에틸렌 글리콜, 수용성 하이드록시프로필 메틸 셀룰로오스, 염화나트륨, 계면활성제, 예를 들어, 소듐 라우릴 설페이트 및 폴리소르베이트, 유기산, 예를 들어, 아세트산, 아디프산, 시트르산, 푸마르산, 글루타르산, 말산, 숙신산, 및 타타르산, 당, 예를 들어, 덱스트로스, 프럭토오스, 글루코오스, 락토오스, 및 수크로오스, 당알코올, 예를 들어, 락티톨, 말티톨, 만니톨, 소르비톨, 및 자일리톨, 잔탄 검, 덱스트린, 및 말토덱스트린을 포함하나 이에 제한되지 않으며; 결장에서 보통 발견되는 세균성 효소에 의한 분해에 취약한 다당류, 예를 들어 콘드로이틴 설페이트, 펙틴, 덱스트란, 구아 검 및 아밀라아제, 키토산 등, 및 전술한 어느 하나의 유도체를 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 일부 실시양태에서, 폴리비닐 피롤리돈, 만니톨, 및/또는 폴리에틸렌 글리콜이 가용성 부형제로서 사용될 수 있다. 적어도 하나의 가용성 부형제는 중합체 코팅의 총 건조 중량을 기준으로 약 0.1 중량% 내지 약 15 중량% 범위 내, 예를 들어 약 0.5 중량% 내지 약 10 중량%, 약 0.5 중량% 내지 약 5 중량%, 약 1 중량% 내지 약 3 중량%, 적합하게 중합체 코팅의 총 건조 중량을 기준으로 약 2 중량%의 양으로 사용될 수 있다. 지연 방출 코팅은 HPMC를 갖지 않을 수 있다.
방출 속도의 변형, 예컨대 방출의 지연 또는 연장을 만드는 것은, 임의의 개수의 방법으로 달성될 수 있다. 메커니즘은 장의 국소 pH에 의존적 또는 독립적일 수 있고, 또한 원하는 효과의 달성을 위해 국소 효소 활성에 의존할 수 있다. 변형-방출 조성물의 예는 해당 분야에 알려져 있으며, 예를 들어 미국 특허 Nos. 3,845,770; 3,916,899; 3,536,809; 3,598,123; 4,008,719; 5,674,533; 5,059,595; 5,591,767; 5,120,548; 5,073,543; 5,639,476; 5,354,556; 및 5,733,566에 기재되고, 이들 모두 전부가 본원에 참조로 인용된다.
수릴리스(SureleaseTM) 또는 다른 pH-비의존성 중합체 물질에 결장 세균성 효소(및 선택적으로 또는 대안으로 췌장 또는 다른 관련된 효소)에 의한 분해에 취약한 제2 중합체(예컨대, 다당류, 특히 헤테로 다당류)의 추가는 제2 중합체가 분해되는 위장관 내의 부위 또는 부위들로 유효 성분의 표적화된 방출을 제공함에 도움을 준다. 코팅에 존재하는 추가된 제2 중합체의 양을 변경함으로써 조성물로부터 NFAT 억제제(예를 들어 사이클로스포린 A)의 요구되는 방출을 제공하기 위하여 용해 프로파일을 최적화할 수 있다.
특정 실시양태에서 지연 방출 코팅은 적어도 결장에서 유효 성분의 방출을 제공한다. 따라서 일 실시양태에서 코팅은 에틸 셀룰로오스(바람직하게는 앞서 기재된, 및 특히 예를 들어, 암모늄 올레이트와 같은 유화제, 및/또는 예를 들어, 디부틸 세바케이트 또는 중쇄 트리글리세라이드와 같은 가소제로 제형화되는)를 포함한다. 또한 코팅은 에틸 셀룰로오스(바람직하게는 앞서 기재된, 및 특히 유화제, 예를 들어, 암모늄 올레이트 및/또는 가소제, 예를 들어, 디부틸 세바케이트 또는 중쇄 트리글리세라이드로 제형화된) 및 결장에서 보통 발견되는 세균성 효소에 의한 분해에 취약한 다당류의 조합을 포함한다. 이러한 다당류는 콘드로이틴 설페이트, 펙틴, 덱스트란, 구아 검 및 아밀라아제, 키토산 등, 및 전술한 어느 하나의 유도체를 포함한다. 키토산은 결장-특이적 방출 프로파일을 얻는 것과 관련하여 사용될 수 있다; 추가로 또는 대안으로 펙틴이 사용될 수 있다.
지연 방출 코팅 목적을 위해 다당류 그 자체의 사용이 시도되었으나 제한된 성공을 거두었다. 대부분의 비-녹말 다당류는 양호한 필름 형성 성질이 부족한 결점을 가진다. 또한, 이들은 위장관 중에서 팽윤하여 다공성이 되어, 약물의 조기 방출을 초래한다. 췌장 알파 아밀라아제의 분해에 저항성이 있으나 결장 세균성 효소에 의해 분해될 수 있는 무정형 아밀로오스조차, 아밀로오스 필름에 불용성 중합체, 예를 들어 에틸 셀룰로오스 및/또는 아크릴레이트를 혼입시킴으로써 제어될 수는 있으나, 수성 매질 중에서 팽윤하는 단점이 있다. 아밀로오스는 그러나 수용성이 아니며 수불용성 다당류가 제외되는 것은 아니나, 본 발명의 실시양태에 따른 코팅으로 사용될 때 세균성 효소 분해에 취약한 수용성 다당류(WSP)의 사용이 특히 유리한 결과를 가져온다. 본 발명의 이 실시양태에 있어 특히 바람직한 다당류는 펙틴이다. 이용가능한 상이한 등급의 펙틴, 즉 상이한 정도의 메틸화(DM), 즉 메탄올로 에스테르화된 카르보닐기의 백분율, 예를 들어 50% 초과의 DM을 갖는 고메톡시(HM) 펙틴으로 알려진 펙틴 또는 저메톡시(LM) 펙틴, 또는 HM 펙틴 및 LM 펙틴을 포함하는 펙틴 조합을 포함하는 다양한 종류의 펙틴이 사용될 수 있다. 또한 이 실시양태에서 다양한 정도의 아세틸화(Dac)를 갖는 펙틴을 사용하는 것도 가능하다. 함께, DM 및 Dac 또는 치환도는 에스테르화도(DE)로 알려져 있다. 다양한 DE의 펙틴이 본 발명에 따라 사용될 수 있다. 펙틴을 대체하여, 알긴산나트륨이 본 발명의 실시양태에 따라 다당류로 사용될 수 있다. 그러나, 다른 실시양태는 아밀로오스 및/또는 아밀로오스를 함유하는 녹말을 알맞게 포함할 수 있다. 예를 들어 아밀로오스 백분율 56%의 Hylon V(National Starch Food Innovation)　또는 아밀로오스 백분율 70%의 Hylon VII를 포함하는 다양한 등급의, 상이한 백분율의 아밀로오스를 함유하는 녹말이 사용될 수 있다. 잔여 백분율은 아밀로펙틴이다. 다당류 펙틴, 아밀로오스 및 알긴산나트륨은 유효 성분의 결장 전달 달성에 특히 바람직하다.
수용성 다당류, 적합하게 펙틴이, 에틸 셀룰로오스(바람직하게 수릴리스)에 의해 대안으로 제공되는 코팅에서 공극형성제로 작용할 수 있음이 밝혀졌다. "공극"은 조성물의 표면부터 코어까지의 통로와 같은 구멍을 뜻하는 것이 아니라, 본 발명의 코팅 상에 및 내에 불규칙적으로 발생하는 코팅의 약점 또는 부재 영역이다.
공극 형성제는 수릴리스와 연관하여 이전에 기재되었다(예를 들어, US 2005/0220878 참조).
본 발명의 특정 실시양태에 따르면 지연 방출 코팅은 에틸 셀룰로오스, 예컨대 수릴리스(SureleaseTM), 및 수용성 다당류(WSP)를 포함하며 에틸 셀룰로오스(특히 수릴리스(SureleaseTM)) 대 WSP의 비율은 코팅의 건조 중량을 기준으로, 이상적으로 90:10 내지 99:1, 바람직하게, 95:5 내지 99:1, 더욱 바람직하게 97:3 내지 99:1 범위 내, 예를 들어 약 98:2이다. 적합하게 이 실시양태에서 에틸 셀룰로오스, 예컨대 수릴리스™, 및 WSP를 포함하는 코팅의 적용으로 인한 조성물의 중량 증가는 1 내지 30% 범위 내(예를 들어, 3% 내지 25%; 5% 내지 15%; 8% 내지 14%; 10% 내지 12%; 12% 내지 18%; 또는 16% 내지 18%, 적합하게 중량 증가는 약 11%, 약 11.5%, 또는 약 17%이다)이다. 이 양태의 WSP는 펙틴이 특히 바람직하다. 에틸 셀룰로오스, 예컨대 수릴리스™를 포함하는 코팅을 사용한 특히 바람직한 중량 증가는, 5-12% 또는 8-12% 범위 내의 것이다.
따라서 일 실시양태에서 제2 코팅은 에틸 셀룰로오스 및 수용성 다당류(특히 펙틴)를 포함하며 수용성 다당류(WSP)는 제2 코팅의 건조 중량을 기준으로, 0 중량% 내지 10 중량%, 선택적으로 0 중량% 또는 0.1 중량% 내지 약 10 중량%의 양으로 존재한다. 적합하게 WSP는 제2 코팅의 총 건조 중량을 기준으로 약 0.5% 내지 약 10%, 예를 들어 약 0.5% 내지 약 5%, 약 1% 내지 약 3%, 적합하게 약 2%의 양으로 존재한다. 이 실시양태에서 WSP는 바람직하게는 펙틴이다. 이 실시양태에서 제2 조성물은 적합하게 가소제를 더 포함한다. 적합한 가소제는 앞서 수릴리스™와 관련되어 기재된 것을 포함한다. 적합하게 이 실시양태에서 제2 코팅의 적용으로 인한 조성물의 중량 증가는 1 내지 30%(예를 들어 3% 내지 25%; 5% 내지 15%; 8% 내지 14%; 10% 내지 12%; 12% 내지 18%; 또는 16% 내지 18%, 적합하게 중량 증가는 약 11%, 약 11.5%, 또는 약 17%이다) 범위 내이다.
일 실시양태에서 지연 방출 중합체는 수용성 셀룰로오스 에테르가 아니다. 제2 코팅이 지연 방출 중합체이거나 이를 포함하는 경우 지연 방출 중합체는 제1 코팅의 수용성 셀룰로오스 에테르와 동일하지 않을 수 있다. 따라서 제2 코팅은 제1 코팅과 동일하지 않을 수 있다.
제1 코팅
본 발명은 수용성 셀룰로오스 에테르이거나 이를 포함하는 제1 코팅을 가질 수 있는 약학적 조성물을 제공한다. 본 발명은 제1 중합체 코팅을 갖는 약학적 조성물로서, 중합체는 수용성 셀룰로오스 에테르이거나 이를 포함하는 것인, 약학적 조성물을 제공한다. 수용성 셀룰로오스 에테르는, 예를 들어 메틸 셀룰로오스, 하이드록시에틸 셀룰로오스, 하이드록시프로필 셀룰로오스 및 하이드록시프로필메틸 셀룰로오스에서 선택될 수 있다.
적합하게 제1 코팅(즉, 서브 코팅)의 재료는 조성물의 제2 코팅과 상이하다. 예를 들어, 제1 코팅이 셀룰로오스 에테르의 수용성 에스테르이거나 이를 포함하는 경우, 제2 코팅의 주성분(들)(예컨대, 50% 초과)은 제1 코팅과 상이한 중합체이거나 이를 포함한다. 따라서, 제1 및 제2 코팅은 조성물의 부분으로서 적합하게 재료의 2개 층을 제공한다. 제2 코팅이 성분의 혼합물을 포함할 때, 외부 제2 코팅의 부성분은 제1 코팅의 재료와 동일할 수 있음을 이해해야 한다. 예를 들면, 제1 코팅이 HPMC이거나 이를 포함하고 제2 코팅은 에틸 셀룰로오스를 포함할 때, 에틸 셀룰로오스는 소량(예컨대, 50%, 40%, 30% 또는 20% 미만)의 제1 코팅 재료, 이 예에서는 HPMC를 선택적으로 더 포함할 수 있다. 이러한 실시양태에서 서브-코팅 및 제2 코팅은 상이한 것으로 고려된다.
수용성 셀룰로오스 에테르는 알킬 셀룰로오스, 예를 들어 메틸 셀룰로오스, 에틸 메틸 셀룰로오스; 하이드록시알킬 셀룰로오스, 예를 들어 하이드록시에틸 셀룰로오스(Cellosize™ 및 Natrosol™로 시판), 하이드록시프로필 셀룰로오스 (Klucel™로 시판) 또는 하이드록시메틸 셀룰로오스; 하이드록시알킬 알킬 셀룰로오스, 예를 들어 하이드록시에틸 메틸 셀룰로오스(HEMC), 하이드록시프로필 메틸 셀룰로오스 (Methocel™, Pharmacoat™, Benecel™로 시판) 또는 에틸 하이드록시에틸 셀룰로오스(EHEC); 및 카르복시알킬 셀룰로오스, 예를 들어 카르복시메틸 셀룰로오스(CMC)에서 선택된 수용성 셀룰로오스 에테르일 수 있다. 적합하게 수용성 셀룰로오스 에테르는, 예를 들어 메틸 셀룰로오스, 하이드록시에틸 셀룰로오스, 하이드록시프로필 셀룰로오스 및 하이드록시프로필메틸 셀룰로오스에서 선택될 수 있다.
수용성 셀룰로오스 에테르는 조성물에 필름 또는 코팅으로서 적용에 적합한 낮은 점도의 중합체일 수 있다. 중합체의 점도는 약 2 내지 약 60 mPa.s, 예를 들어 약 2 내지 약 20 mPa.s; 약 2 내지 약 8 mPa.s의 점도; 더욱 적합하게는 약 4 내지 약 10 mPa.s, 예를 들어 약 4 내지 약 6 mPa.s의 점도일 수 있다. 대안으로, 중합체의 점도는 앞서 언급한 임의 또는 전부의 범위 외, 예를 들어 20 mPa.s 이상일 수 있다. 대안으로, 중합체의 점도는 앞서 언급한 임의 또는 전부의 범위 외, 예를 들어 20 mPa.s 이상일 수 있다. 중합체의 점도는 ASTM 표준 방법 (D1347 및 D2363)을 사용한 Ubbelode 점도계를 사용해 20℃에서 물 중의 2% 중합체 용액의 점도를 측정하여 확인될 수 있다.
수용성 셀룰로오스 에테르는 수용성 하이드록시프로필메틸 셀룰로오스(HPMC 또는 하이프로멜로스)일 수 있다. HPMC는 셀룰로오스의 하이드록시 기를 메톡시 및 하이드록시프로필 기로 치환해 변형하여 제조된다. 셀룰로오스 사슬의 각 안하이드로글루코오스 단위는 3개의 하이드록실 기를 갖는다. 안하이드로글루코오스 단위의 치환기의 양은 치환도로 표현될 수 있다. 만약 각 단위의 3개 하이드록실기가 전부 치환되면, 치환도는 3이다. 고리의 치환기 수가 HPMC의 성질을 결정한다. 또한 치환도는 존재하는 메톡시 및 하이드록시프로필 기의 중량%로 표현될 수 있다. 적합하게 HPMC는 약 19 내지 약 30%의 메톡시 치환 및 약 7 내지 약 12%의 하이드록시프로필 치환을 갖는다. 특히 HPMC는 25 내지 30% 메톡시 치환 및 7 내지 12% 하이드록시프로필 치환을 갖는다. 적합하게 HPMC는 조성물에 필름 또는 코팅으로 적용하기 적합한 낮은 점도의 HPMC이다. HPMC의 점도는 적합하게 약 2 내지 60 mPa.s, 예를 들어 약 2 내지 약 20 mPa.s, 더욱 적합하게 약 4 내지 약 10 mPa.s의 점도이다. HPMC의 점도는 ASTM 표준 방법 (D1347 및 D2363)을 사용한 Ubbelode 점도계를 사용해 20 ℃에서 물 중의 2% HPMC 용액의 점도를 측정하여 확인된다. 이러한 HPMC는 예를 들어 Methocel™, 예를 들어 Methocel™ E5를 포함하는 Methocel™ E로서 시판된다.
제1 코팅이 셀룰로오스 에테르의 수용성 유도체이거나 이를 포함할 때, 유도체는, 예를 들어 셀룰로오스 에테르의 수용성 에스테르일 수 있다. 셀룰로오스 에테르의 수용성 에스테르는 잘 알려져 있으며 하나 이상의 적합한 아크릴화제와 함께 형성된 셀룰로오스 에테르의 에스테르를 포함할 수 있다. 아크릴화제는, 예를 들어, 적합한 산 또는 무수물 산 또는 아실 할라이드일 수 있다. 따라서 셀룰로오스 에테르의 에스테르는 하나의 에스테르 모이어티 또는 혼합 에스테르를 형성하기 위해 2개 이상의 에스테르 모이어티를 함유할 수 있다. 셀룰로오스 에테르의 수용성 에스테르의 예는 셀룰로오스 에테르(예를 들어 HPMC)의 수용성 프탈레이트, 아세테이트, 숙시네이트, 프로피오네이트 또는 부티레이트 에스테르일 수 있다. 적합하게 셀룰로오스 에테르의 수용성 에스테르는 셀룰로오스 에테르(예를 들어 HPMC)의 수용성 프탈레이트, 아세테이트-숙시네이트, 프로피오네이트, 아세테이트-프로피오네이트 또는 아세테이트-부티레이트 에스테르이다.
일 실시양태에서 셀룰로오스 에테르의 수용성 에스테르는 서브-코팅과 관련하여 앞서 기술된 임의의 수용성 셀룰로오스 에테르의 수용성 에스테르이거나 이를 포함할 수 있다.
특정 셀룰로오스 에테르의 수용성 에스테르는 HPMC의 수용성 에스테르이다. 5.5 초과의 pH에서 물에 가용성인 HPMC의 에스테르는 이온화될 수 있는 카르복시 기가 존재하여 높은 pH(LF 등급에 대해 > 5.5 및 HF 등급에 대해 > 6.8)에서 중합체가 가용화되도록 하는 하이드록시프로필 메틸셀룰로오스 프탈레이트(HPMCP), 또는 하이드록시프로필 메틸셀룰로오스 아세테이트 숙시네이트(HPMCAS)이거나 이를 포함할 수 있다. 이들 중합체는 Shin-Etsu Chemical Co. Ltd에서 상업적으로 시판된다.
셀룰로오스 에테르-함유 코팅은 하이프로멜로스이거나 이를 포함할 수 있고, 예컨대 하이프로멜로스, 이산화티탄 및 폴리에틸렌 글리콜의 혼합물로 제조될 수 있고; 코팅은 적어도 20중량%의 하이프로멜로스, 선택적으로 적어도 50% 또는 적어도 75중량% 하이프로멜로스, 예컨대 적어도 80중량% 또는 적어도 85중량% 또는 90중량% 하이프로멜로스를 포함할 수 있다. 코팅을 형성하는 데 사용되는 코팅 재료는 따라서 앞서의 문장에 언급된 건조 중량 백분율의 하이프로멜로스를 포함할 수 있다.
만약 코팅으로 하이프로멜로스, 이산화티탄 및 폴리에틸렌 글리콜의 혼합물을 사용함이 바람직하다면, Colorcon에 의해 상업화된 제품인 Opadry White를 포함하는, 이러한 혼합물에 대응되는 상업 제품을 이용할 수 있다. 더욱 일반적으로, Opadry 및 Opadry II라는 상품명으로 상업화된 다양한 제품이 언급될 수 있다. 추가의 비제한적인 예는 Opadry YS-1-7706-G white, Opadry Yellow 03B92357, Opadry Blue 03B90842를 포함한다. 이들 제제는 사용 직전 물에 희석될 수 있는 건조 필름 코팅 제제로 이용가능하다. Opadry 및 Opadry II 제제는 셀룰로오스성 필름 형성 중합체(예컨대 HPMC 및/또는 HPC)를 포함하고, 폴리덱스트로스, 말토덱스트린, 가소제(예컨대, 트리아세틴, 폴리에틸렌 글리콜), 폴리소르베이트 80, 착색제(예컨대, 이산화티탄, 하나 이상의 염료 또는 레이크), 및/또는 다른 적합한 필름-형성 중합체(예컨대, 아크릴레이트-메타크릴레이트 공중합체)를 함유할 수 있다. 적합한 OPADRY 또는 OPADRY II 제제는 가소제 및 하나 이상의 말토덱스트린, 및 폴리덱스트로스(a) 트리아세틴 및 폴리덱스트로스 또는 말토덱스트린 또는 락토오스, 또는 b) 폴리에틸렌 글리콜 및 폴리덱스트로스 또는 말토덱스트린을 포함하나 이에 제한되지 않음)을 포함할 수 있다. 특히 바람직한 상업 제품은 Opadry White (HPMC/HPC-계) 및 Opadry II White(PVA/PEG-계)이다.
셀룰로오스 에테르-함유 코팅은 또한 물 및 제1 코팅의 중합체를 포함하는 단순한 용액으로서 적용될 수 있다. 예를 들어 중합체가 예를 들어 Methocel과 같은 HPMC일 때, 제1 코팅은 HPMC의 수용액 또는 분산으로서 코어에 적용될 수 있다. 선택적으로 코팅 용액은 알코올과 같은 다른 용매를 포함할 수 있다. 대안으로 코팅은 휘발성 유기 용매 중의 용액 또는 분산으로서 적용될 수 있다.
적합하게 수용성 셀룰로오스 에테르를 함유하는 제1 코팅은 코팅으로 인한 조성물의 중량 증가에 상응하는 양으로서 코팅 적용 전의 조성물의 중량을 기준으로 0.5 중량% 내지 40 중량%(예를 들어 0.5 중량% 내지 30 중량%; 0.5 중량% 내지 20 중량%; 1 중량% 내지 25 중량%; 1 중량% 내지 15 중량%; 1 중량% 내지 6 중량%; 1 중량% 내지 4 중량%; 4 중량% 내지 6 중량%; 6 중량% 내지 10 중량%; 9 중량% 내지 15 중량% 또는 12 중량% 내지 15 중량%) 존재한다. 수용성 셀룰로오스 에테르를 함유하는 제1 코팅은 코팅으로 인한 조성물의 중량 증가에 상응하는 양으로서 코팅 적용 전의 조성물 또는 코어의 중량을 기준으로 1 중량% 내지 10 중량%; 4 중량% 내지 10 중량%; 4 중량% 내지 8 중량%; 및 5 중량% 내지 8 중량% 존재한다.
다른 실시양태에서 수용성 셀룰로오스 에테르를 함유하는 제1 코팅은 제1 코팅으로 인한 중량 증가에 상응하는 양으로서 코팅 적용 전의 조성물의 중량을 기준으로 9 중량% 내지 30 중량%, 적합하게 9 중량% 내지 20 중량%, 또는 특히 10 중량% 내지 15 중량%에서 선택된 양으로 존재한다.
적합하게 수용성 셀룰로오스 에테르를 함유하는 제1 코팅은 조성물 상에 적어도 5 μm, 적합하게 약 5 μm 내지 약 1 mm, 예를 들어 약 10 μm 내지 약 1 mm, 약 10 μm 내지 약 500 μm, 약 50 μm 내지 약 1 mm, 약 50 μm 내지 약 500 μm의 코팅 두께를 제공한다. 두께는 따라서 약 100 μm 내지 약 1 mm, 예컨대 약 100 μm 내지 약 750 μm 또는 약 100 μm 내지 약 500 μm일 수 있다. 두께는 약 250 μm 내지 약 1 mm, 예컨대 약 250 μm 내지 약 750 μm 또는 약 250 μm 내지 약 500 μm일 수 있다. 두께는 약 500 μm 내지 약 1 mm, 예컨대 약 750 μm 내지 약 1 mm 또는 약 500 μm 내지 약 750 μm일 수 있다. 두께는 따라서 약 10 μm 내지 약 100 μm, 예컨대 약 10 μm 내지 약 50 μm 또는 약 50 μm 내지 약 100 μm일 수 있다.
제1 코팅이 수용성 셀룰로오스 에테르를 포함할 때 셀룰로오스 에테르(들)는 적합하게 제1 코팅의 건조 중량의 적어도 40 중량%, 50 중량%, 60 중량%, 70 중량%, 80 중량%, 85 중량% 또는 90 중량%를 형성한다. 대안으로 수용성 셀룰로오스 에테르가 제1 코팅이다.
코팅 과정과 관련하여 아래에서 더욱 자세히 기재될 바와 같이, 수용성 셀룰로오스 에테르를 함유하는 제1 코팅이 적용되기 전에 본 발명의 조성물을 건조하는 것이 바람직하다.
지연 방출 코팅에 적용하기 이전에 약학적 유효 성분을 포함하는 코어에, 수용성 셀룰로오스 에테르를 함유하는, 본 출원의 다른 곳에서 서브 코트로 지칭되는 서브-코팅(따라서 서브 코트와 제1 코팅은 동등하다)을 적용하는 것은 예상치 못한 이점을 제공함이 밝혀졌다. 이러한 서브-코팅의 존재는 본 발명에 따른 지연 방출 조성물의 용출 성질을 향상시키는 것으로 밝혀졌다. 특히 이러한 서브-코팅의 존재는 이러한 서브-코팅의 사용이 없이 제조된 조성물에 비하여 조성물로부터 유효 성분의 방출 속도를 증가시키며 또한 정해진 시간 동안 방출되는 유효 성분의 양을 증가시킴이 밝혀졌다. 이들 발견은, 지연 방출 외부 코팅에 추가된 서브-코팅의 존재는, 더욱 두꺼운 코팅이 존재하기 때문에 주어진 시간 동안, 더욱 적은 약물이 방출될 것이므로, 조성물로부터의 약물 방출을 지연 또는 억제하는 역할을 할 것으로 예상되었기에, 예상치 못한 것이다. 그러나, 이러한 예상과 반대로 이러한 서브-코팅이 없는 조성물에 비하여 유효 성분의 방출 정도 및 속도가 증가하였다. 따라서, 수용성 셀룰로오스 에테르이거나 이를 포함하는 서브-코트 및 서브-코트 외부의 지연 방출 코팅을 포함하는 본 발명에 따른 지연 방출 조성물은, 특유한 용출 프로파일을 제공한다. 이러한 서브-코팅의 존재는 또한, 특히 코어가 미니비드 형태일 때, 배치-대-배치 변동성을 감소시키는 것으로 밝혀졌다. 수용성 셀룰로오스 에테르이거나 이를 포함하는 서브-코팅은 따라서 더욱 일관된 용출 프로파일로 인해 환자-내 및 환자-간 변동성 또한 감소시킨다. 본 발명에 따른 서브-코팅된 조성물의 특유의 성질(특히 용출 프로파일)은 본 발명에 따른 조성물의 유리한 약물동역학 성질에 기여하는 것으로 기대된다. 본 발명의 수용성 셀룰로오스 에테르를 함유하는 코팅은 다양한 배치의 미니비드의 방출 프로파일 간의 변동성을 감소시키는데 유용할 수 있다.
따라서 일 실시양태에서 NFAT 억제제, 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스, 계면활성제 및 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스 중에 분산된 오일 상을 포함하는 조성물이 제공되며 상기 조성물은 제1 코팅을 더 포함하고; 제1 코팅은 수용성 셀룰로오스 에테르이거나 이를 포함한다.
제2 코팅
조성물은 제1 코팅 이외에 제2 코팅을 가질 수 있고, 여기서 제2 코팅은 지연 방출 중합체이거나 이를 포함한다. 조성물은 본원에서 정의된 제2 코팅을 가질 수 있으나 제1 코팅이 부재할 수 있다. 유사하게, 조성물은 제1 코팅을 가질 수 있고 제2 코팅이 부재할 수 있다.
제2 코팅은 중량 증가로 4% 내지 25%, 선택적으로: 4% 내지 15%, 4% 내지 12%, 15% 내지 25%, 8% 내지 13%, 2% 내지 20%, 5% 내지 15%, 8% 내지 15%, 8% 내지 12%, 2% 내지 8%, 3% 내지 7%, 또는 4% 내지 6%으로 존재할 수 있다.
일 실시양태에서, NFAT 억제제, 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스, 계면활성제 및 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스 중에 분산된 오일상을 포함하는 조성물이 제공되며, 조성물은 제1 코팅 및 제1 코팅 외부에 제2 코팅을 더 포함하며; 여기서
제1 코팅은 수용성 셀룰로오스 에테르이거나 이를 포함하며; 및
제2 코팅은 지연 방출 코팅이거나 이를 포함하며, 예를 들어 지연 방출 중합체이거나 이를 포함한다.
일 실시양태에서, 사이클로스포린, 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스, 계면활성제 및 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스 중에 분산된 오일상을 포함하는 조성물이 제공되고, 조성물은 제1 코팅의 부재 하에 제2 코팅을 더 포함하며; 여기서
제2 코팅은 지연 방출 코팅이거나 이를 포함하며, 예를 들어 지연 방출 중합체이거나 이를 포함한다.
본 발명의 일 양상은 적어도 두 집단(populations)의 유효 성분 함유 미니비드를 포함하는 다수의 미니비드 조성물에 있고, 여기서 적어도 하나의 미니비드 집단 멤버는 본원에 기술된 바와 같은 미니비드이다(즉, 미니비드 형식(format)의 본원의 조성물). 두 집단은 상이한 것으로 이해될 것이다. 그러한 복수의 미니비드 집단 조성물은 둘 이상의 다음의 세 집단을 포함하거나 이로 구성될 수 있다:
수용성 셀룰로오스 에테르이거나 이를 포함하는 코팅을 갖지만, 외부 코팅을 가지지 않는, 예를 들어 본원에 기술된 바와 같은, 집단; 및/또는
수용성 셀룰로오스 에테르이거나 이를 포함하는 제1 코팅 및 지연 방출 코팅, 예를 들어 본원에서 기술된 바와 같이, 예를 들어 지연 방출 중합체이거나 이를 포함하는 코팅이거나 이를 포함하는 제2 코팅을 갖는 집단; 및/또는
지연 방출 코팅, 예를 들어 본원에서 기술된 바와 같이, 예를 들어 제1 코팅 부재 하 지연 방출 중합체이거나 이를 포함하는 제2 코팅이거나 이를 포함하는 제2 코팅을 갖는 집단.
복수의 미니비드 조성물의 각 집단의 각각의 미니비드는 NFAT 억제제(예를 들어 사이클로스포린)을 함유할 수 있고, 다른 집단의 일부 또는 전부의 미니비드 또는 한 집단은 NFAT 억제제(예를 들어 사이클로스포린)을 함유할 수 있고, 또다른 집단은 이에 대하여 다른 유효 성분(들), 예를 들어 상이한 조합을 함유할 수 있다.
다수 집단 조성물은 NFAT 억제제를 위장관의 상이한 영역에 전달하는데 사용될 수 있다.
다수 집단 조성물의 미니비드는 예를 들면 겔 캡슐 또는 사쉐(sachet) 중에 함유될 수 있다.
제2 코팅은 제1 코팅 외부에 있으며 본원에 기재된 임의의 지연 방출 코팅일 수 있다. 특히, 제2 코팅은 앞서 기재된 pH 비의존성 중합체 변형 방출 코팅이거나 이를 포함할 수 있다. 예를 들어 제2 코팅은 장용성 코팅 또는 pH 비의존성 코팅이거나 이를 포함할 수 있다. 제2 코팅은 세균성 또는 다른 효소에 의해 분해될 수 있는 중합체를 포함하는 중합체 혼합물을 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서 제2 코팅은 에틸 셀룰로오스 및 선택적으로 수용성 다당류, 특히 결장 세균에 의한 분해에 취약한 것, 적합하게 펙틴을 포함한다. 따라서 제2 코팅은 앞서 기재된 수릴리스(Surelease)-펙틴 혼합물을 포함할 수 있다.
제1 및 제2 코팅 모두가 조성물에 동시에 존재할 것이 요구되지 않는다. 예를 들어, 조성물은 제1 코팅의 부재 하 제2 코팅(외부 코팅)을 포함할 수 있다. 역으로, 조성물은 제2 코팅의 부재 하 제1 코팅을 포함할 수 있다.
제1 및 제2 코팅은 독립적으로 수계 코팅일 수 있고 또는 용매계 코팅일 수 있다. 이는 제1 및/또는 제2 코팅이 코어 또는 조성물에 적용되기 전에 제형화될 수 있고 및/또는 수계 조성물 또는 용매계(비-수성 용매계) 조성물로서 코어 또는 조성물에 적용될 수 있음을 의미한다. 수계 또는 용매계 코팅 조성물은 물 또는 용매 중의 코팅 재료의 현탁 또는 용액일 수 있다.
일 실시양태에서 조성물은 코어 및 외부 코팅(또는 본원에서 제2 코팅으로 지칭)을 포함하며, 코어는 NFAT 억제제(예를 들어 사이클로스포린), 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스, 계면활성제 및 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스 중에 분산된 오일상을 포함하며, 계면활성제는 중쇄 또는 장쇄 지방산 모노- 또는 디-글리세라이드 또는 이들의 조합이고 폴리에틸렌 글리콜 에테르 또는 에스테르가 아니거나 이를 포함하지 않는다. 조성물은 선택적으로 서브-코트를 더 포함할 수 있다.
본 발명의 일 실시양태에서 코어, 제1 코팅 및 제1 코팅 외부의 제2 코팅을 포함하는 조성물이 제공되며;
상기 코어는 NFAT 억제제(예를 들어 사이클로스포린), 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스, 계면활성제 및 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스 중에 분산된 오일상을 포함하고, 계면활성제는 중쇄 또는 장쇄 지방산 모노- 또는 디-글리세라이드 또는 이들의 조합이고 폴리에틸렌 글리콜 에테르 또는 에스테르가 아니거나 이를 포함하지 않으며;
상기 제1 코팅은 수용성 셀룰로오스 에테르, 특히 하이드록시프로필메틸 셀룰로오스이거나 이를 포함하며;
상기 제2 코팅은 변형 방출 코팅 또는 지연 방출 코팅, 특히 pH 비의존성 변형 방출 코팅이거나 이를 포함하며;
상기 제1 코팅은 제1 코팅의 적용 전 조성물의 중량을 기준으로 (i) 8 중량% 내지 15 중량%; (ii) 8 중량% 내지 12 중량%, 예를 들어 약 10 중량%; 또는 (iii) 2.5 중량% 내지 6 중량%, 예를 들어 약 5 중량%에서 선택된 범위 내로 제1 코팅에 의한 중량 증가에 상응하는 양으로 존재하며;
상기 제2 코팅은 제2 코팅의 적용 전 조성물의 중량을 기준으로 (a) 4 중량% 내지 20 중량%; (b) 7.5 중량% 내지 20 중량%; (c) 10 중량% 내지 12 중량%, 예를 들어 약 11 중량% 또는 약 11.5 중량%; 또는 (d) 16 중량% 내지 18 중량%, 예를 들어 약 17 중량%에서 선택된 범위 내로 제2 코팅에 의한 조성물의 중량 증가에 상응하는 양으로 존재한다.
바로 앞의 문단의 실시양태에서 제1 및 제2 코팅은 적합하게 앞서 또는 아래에서 기재된 임의의 제1 및 제2 코팅이다. 따라서 이 부분에 기재된 코팅은 필요한 경우 지연 방출 코팅을 제공하기 위해 본원에 기재된 임의의 조성물에 적용될 수 있음이 의도된다. 코팅은 본 출원에 기재된 중합체 매트릭스 및 약학적 유효 성분을 포함하는 코어에 변형 방출 코팅을 제공함에 특히 유용하다.
외부 장벽 또는 보호 코팅
본원에 기재된 조성물은 제1 및/또는 제2 코팅 외부에, 예를 들어 제2 코팅, 변형 방출 코팅 외부에 보호 코팅을 포함할 수 있다. 보호 코팅은, 예를 들어 조성물의 최종 투약 형태로의 제형화, 또는 조성물의 취급, 운반 또는 보관 중에 초래되는 손상으로부터 변형 방출 코팅을 보호하는 데 도움을 줄 수 있다. 보호 코팅은 조성물의 외부 표면에 적절하게 적용될 수 있다. 보호 코팅은 보호 코팅이 제2 코팅(변형 방출 코팅)과 접촉될 수 있도록 제2 코팅(변형 방출 코팅)에 직접 적용될 수 있다. 보호 코팅은 사용될 경우 조성물로부터 사이클로스포린 A의 방출에 악영향을 미치지 않는 적절한 수용성 코팅이다. 적합하게 보호 코팅은 수용성 중합체이거나 이를 포함한다. 보호 코팅은 수용성 셀룰로오스성 또는 PVA 필름-형성 중합체를 포함할 수 있다. 적합하게 보호 코팅은 본원에 기재된 바와 같이 Opadry(HPMC/HPC-계), Opadry II(PVA/PEG-계) 또는 폴리비닐 알코올-폴리에틸렌 글리콜 그라프트 공중합체(Kollicoat IR)이거나 이를 포함할 수 있다. 보호 코팅은 약 2 내지 약 50 μm의 층으로 존재할 수 있다. 적합하게 보호 코팅은 보호 코팅 적용 전 조성물의 중량을 기준으로 약 0.5 내지 약 10%의 중량 증가를 주도록 적용된다.
연속상 중합체 매트릭스(수상)
본 명세서의 이 부분은 모두 하이드로겔 형성 중합체에 관한 중합체 매트릭스 및 연속상에 관한다. 따라서, 중합체 매트릭스 또는 연속상의 언급은 하이드로겔 형성 중합체와 동등할 수 있다. 더욱이, 중합체 매트릭스에 관한 본 명세서의 이 부분은 성분의 양을 조성물의 중량에 대한 백분율로서 열거한다. 본 명세서의 이 부분의 문맥에서, 의미하는 바는 코팅을 제외한 조성물 또는 코어의 건조 중량의 중량 백분율이다.
조성물 또는 코어는 매트릭스 또는 연속상 및 또한 분산상 또는 오일상을 포함할 수 있다. 유사하게 본 발명의 액체 조성물은 하이드로겔 형성 중합체를 포함하는 수상을 포함한다. 적합하게 조성물 또는 코어의 연속상 또는 매트릭스 상은 하이드로겔-형성 중합체이거나 이를 포함한다. 하이드로겔-형성 중합체는 하이드로겔을 형성할 수 있는 중합체이다. 하이드로겔은 수성 액체 매질의 부피에 걸친 친수성 중합체 사슬의 네트워크(매트릭스)를 포함하는, 정지 상태에서 유동을 나타내지 않는, 고체 또는 반고체 재료로 기재될 수 있다. 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스는 하이드로겔 형성 중합체 사슬의 네트워크이며, 따라서 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스는 매트릭스를 형성하도록 허용 또는 유발된 하이드로겔 형성 중합체이다.
조성물 또는 코어는 젤라틴; 한천; 아가로오스; 펙틴; 카라기난; 키토산; 알기네이트; 녹말; 잔탄 검; 아라비아 검; 구아 검; 로커스트 콩 검; 폴리우레탄; 폴리에테르 폴리우레탄; 셀룰로오스; 셀룰로오스 에스테르, 셀룰로오스 아세테이트, 셀룰로오스 트리아세테이트; 가교-결합된 폴리비닐 알코올; 아크릴산, 하이드록시알킬 아크릴레이트, 하이드록시에틸 아크릴레이트, 디에틸렌 글리콜 모노아크릴레이트, 2-하이드록시프로필아크릴레이트, 3-하이드록시프로필 아크릴레이트의 중합체 및 공중합체; 메타크릴산, 하이드록시에틸 메타크릴레이트, 디에틸렌글리콜 모노메타크릴레이트, 2-하이드록시프로필 메타크릴레이트, 3-하이드록시프로필 메타크릴레이트, 디프로필렌 글리콜 모노메틸아크릴레이트의 중합체 및 공중합체; 비닐피롤리돈; 아크릴아미드 중합체 및 공중합체, N-메틸아크릴아미드, N-프로필아크릴아미드; 메타크릴아미드 중합체 및 공중합체, N-이소프로필메타크릴아미드, N-2-하이드록시에틸메타크릴아미드; 및 비닐 피롤리돈; 및 이들의 조합으로 이루어진 군에서 선택된 하이드로겔-형성 중합체 매트릭스를 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서 앞서의 물질의 임의의 2차 또는 3차 등 조합이 예상된다.
추가의 실시양태에서 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스는 젤라틴, 한천, 폴리에틸렌 글리콜, 녹말, 카세인, 키토산, 콩 단백질, 홍화 단백질, 알기네이트, 젤란 검, 카라기난, 잔탄 검, 프탈레이트화된 젤라틴, 숙시네이트화된 젤라틴, 셀룰로오스프탈레이트-아세테이트, 올레오레진, 폴리비닐아세테이트, 아크릴릭 또는 메타크릴릭 에스테르 및 폴리비닐아세테이트-프탈레이트의 중합물질 및 전술한 어느 하나의 임의의 유도체; 또는 하나 이상의 이러한 하이드로겔 형성 중합체의 혼합물로 이루어진 군에서 선택된다.
하이드로겔 형성 중합체 매트릭스는 또한 하이드로콜로이드, 즉 콜로이드 입자가 물 중에 분산되며 사용가능한 물의 양이 겔의 형성을 허용하는 콜로이드 시스템으로 지칭될 수 있다. 실시양태에서 비가역적(단일-상태) 하이드로콜로이드가 아니라 가역적 하이드로콜로이드, 바람직하게 열-가역적 하이드로콜로이드(예컨대, 한천, 아가로오스, 젤라틴 등)를 사용함이 바람직하다. 열-가역적 하이드로콜로이드는 겔 및 졸 상태로 존재할 수 있고, 열을 가하거나 제거함으로써 상태 사이를 변동할 수 있다. 젤라틴, 한천 및 아가로오스는 열-가역적, 재수화할 수 있는 콜로이드이며 특히 바람직하다. 젤라틴 유도체, 예를 들어, 숙시네이트화된 또는 프탈레이트화된 젤라틴이 또한 고려된다. 본 발명에 따라 사용될 수 있는 열가역적 하이드로콜로이드는, 개별적으로 또는 조합으로, 천연 공급원으로부터 유도된 것, 예를 들어, 카라기난(해초로부터 추출), 젤라틴(소, 돼지, 물고기 또는 식물 공급원으로부터 추출), 한천(해초로부터), 아가로오스(한천으로부터 얻은 다당류) 및 펙틴(감귤 껍질, 사과 및 다른 과일로부터 추출)을 포함한다. 비-동물계 하이드로콜로이드는 예컨대, 채식주의자 또는 종교적 또는 건강상의 이유로 동물 제품의 섭취를 바라지 않는 개인에 대한 투여 등의 특정 적용에 바람직할 수 있다. 카라기난의 사용과 관련하여, 미국 특허출원 2006/0029660 A1(Fonkwe et al)이 참조되며 이의 전체가 본원에 참조로 통합된다. 하이드로겔-형성 중합체는 젤라틴과 하나 이상의 다른 열가역적 하이드로콜로이드, 예컨대, 방금 나열한 하나 이상의 다른 열가역적 하이드로콜로이드를 포함하거나 이와의 조합일 수 있다. 하이드로겔-형성 중합체는 젤라틴과 한천을 포함하거나 이의 조합일 수 있다; 선택적으로, 적어도 하나의 추가의 열가역적 하이드로콜로이드, 예를 들어 방금 나열한 것이 조합에 포함될 수 있다.
열-가역적 콜로이드는 다른 하이드로겔-형성 중합체에 비한 이점을 제공한다. 열-가역적 콜로이드의 겔화 또는 경화는 콜로이드의 냉각, 예컨대 액체 냉각욕 또는 공기 흐름으로 일어난다. 다른 하이드로겔-형성 중합체의 겔화는 화학적으로 유도되며, 경화 과정이 일어나는 데 시간이 소요될 수 있기 때문에 젤라틴 매질로 조성물의 내용물의 유출이 일어날 수 있다. 조성물의 내용물의 유출은 조성물 내 유효 성분의 부정확한 양을 야기할 수 있다. 열-가역적 콜로이드는 또한 열-가역적 겔로 알려져 있으며, 따라서 하이드로겔 형성제가 열-가역적 겔화제인 것이 바람직하다.
하이드로겔 형성제에 적용될 수 있는 유리한 다른 용어는 "열방성(thermotropic)"이다: 열방성 겔화제(독자는 본 발명에 사용되는 하이드로겔 형성제로 바람직한 것으로 추론할 것이다)는 온도 변화에 의해 겔화를 야기하는 것으로 이러한 겔화제는 화학적으로 유도된, 예컨대 이온으로 겔화를 유도하는 이온성(ionontropic) 겔화제, 예를 들어 키토산의 겔화에 비해 더욱 빠르게 겔화될 수 있다. 본 발명의 실시양태에서, 따라서, 하이드로겔 형성제는 열방성 겔-형성 중합체 또는 이러한 중합체의 조합이다.
코어를 제조하기 위한 조성물의 제조는 하이드로겔-형성 중합체가 용액 내, 바람직하게 수성 용액으로 존재할 것을 요구할 수 있다. 하이드로겔-형성 중합체는 본원에 기재된 바와 같은 제조 중 수상의 5 중량% 내지 50 중량%, 바람직하게 10 중량% 내지 30 중량%, 더욱 바람직하게 15 중량% 내지 20 중량%에 상당한다. 추가로 하이드로겔-형성 중합체는 8 내지 35%(예를 들어 15-25%, 바람직하게 17-18%)의 하이드로-겔 형성 중합체; 65%-85%(바람직하게 77-82%)의 물 더하기(plus), 선택적으로, 1-5%(바람직하게 1.5 내지 3%)의 소르비톨을 포함할 수 있다. 존재할 경우 수상 예비혼합물 중의 계면활성제(예컨대 음이온성 계면활성제)는 0.1 내지 5%(바람직하게 0.5 내지 4%)의 양으로 존재할 수 있으며 모든 부는 수상의 중량 기준이다.
실시양태에서 조성물은 조성물의 건조 중량을 기준으로 하이드로겔 형성 중합체 메트릭스를 적어도 25 중량%, 바람직하게 적어도 40 중량% 포함한다. 예를 들어 하이드로겔-형성 중합체 매트릭스는 조성물의 25 내지 70%, 예를 들어 40 내지 70% 적합하게 45 내지 60%로 존재하며, %는 조성물의 건조 중량을 기준으로 한 중량이다.
실시양태에서 하이드로겔 형성 중합체는 약학적으로 허용가능한 중합체이다.
특정한 실시양태에서 하이드로겔-형성 중합체는 젤라틴이다. 특정한 실시양태에서 하이드로겔-형성 중합체는 젤라틴이다. 특정한 실시양태에서 하이드로겔-형성 중합체는 젤라틴을 포함한다. 특정한 실시양태에서 젤라틴은 조성물의 적어도 30%, 예를 들어 30 내지 70% 또는 40 내지 70% 적합하게 40 내지 60%를 포함하며, %는 조성물의 건조 중량을 기준으로 한 중량이다.
하이드로겔-형성 중합체는 가소제, 예를 들어 소르비톨 또는 글리세린, 또는 이들의 조합을 선택적으로 포함할 수 있다. 특히 하나 이상의 가소제가 젤라틴과 조합될 수 있다.
하이드로겔 형성 중합체가 젤라틴이거나 이를 포함하는 실시양태에서, O. T. Bloom에 의해 1925년 개발된 겔 또는 젤라틴의 강도 측정인, "블룸 강도"를 참고한다. 테스트는 탐침(보통 0.5인치 지름을 가짐)이 겔을 파괴하지 않고 겔의 표면을 4 mm 굴절시키는 데 필요한 중량(그램)을 확인한다. 결과는 블룸(등급)으로 표현되며 보통 30 내지 300 블룸 범위이다. 젤라틴에 블룸 테스트를 실시하기 위해, 테스트 전 6.67% 젤라틴 용액은 10℃에서 17-18시간 동안 보관된다.
하이드로겔 형성 중합체가 젤라틴이거나 이를 포함할 때 젤라틴의 블룸 강도는 125 블룸 내지 300 블룸, 200 블룸 내지 300 블룸 및 바람직하게 225 블룸 내지 300 블룸 범위 내일 수 있다. 더 높은 블룸 강도의 젤라틴은 더 높은 농도의 더 낮은 블룸 강도의 젤라틴으로 대체될 수 있음이 이해될 것이다.
본 발명에 따르면, 하이드로겔 형성 중합체 또는 하이드로겔-형성 중합체 매트릭스가 젤라틴이거나 이를 포함하는 실시양태에서, 젤라틴은 다양한 수단으로 얻어질 수 있다. 예를 들어, 이는 콜라겐성 재료, 예컨대 동물의 피부, 백색 결합 조직, 또는 뼈의 부분적 수화로 얻을 수 있다. A형 젤라틴은 주로 돼지 피부의 산 처리로부터 유도되며, pH 7 내지 pH 9의 등전점을 나타내고, 한편 B형 젤라틴은 뼈 및 동물(소) 피부의 알칼리 처리로부터 유도되며 pH 4.7 내지 pH 5.2의 등전점을 나타낸다. A형 젤라틴이 좀더 바람직하다. 본 발명에 사용되는 젤라틴은 또한 냉수성 어류의 피부로부터 유도될 수 있다. 본 발명에서 비드 제조를 위해 필요한 점도 및 블룸 강도 성질을 갖는 젤라틴을 얻기 위해 A형 및 B형 젤라틴의 혼합이 사용될 수 있다.
더 낮은 온도의 젤라틴(또는 녹는점 감소제를 갖는 젤라틴 유도체 또는 젤라틴 혼합물) 또는 더 낮은 온도에서 고형화될 수 있는 다른 중합체 매트릭스(예컨대 알긴산나트륨) 또한 사용될 수 있다. 따라서 낮은 온도의 젤라틴이거나 이를 포함하는 중합체가 바람직한 매트릭스 중합체로 생각된다.
본 발명에 따르면, 하이드로겔 형성 중합체 또는 하이드로겔-형성 중합체 매트릭스가 젤라틴이거나 이를 포함하는 실시양태에서, 출발 젤라틴 재료는 바람직하게 제조 전에 본 발명의 조성물의 경도를 조절하기 위해 젤라틴에 가소제 또는 연화제를 첨가하여 "연질 젤라틴"을 생산하도록 변형된다. 가소제의 첨가는 용출 및/또는 추가의 처리, 예컨대 코팅을 최적화하기에 바람직하도록 증진된 연성 및 유연성을 달성한다. 젤라틴 또는 다른 하이드로겔-형성 중합체와의 조합에 유용한 본 발명의 가소제는 글리세린(1,2,3-프로판트리올), D-소르비톨(D-글루시톨), 소르비톨 BP(비-결정 소르비톨 용액) 또는 D-소르비톨의 수용액, 소르비탄(예컨대 Andidriborb 85/70), 만니톨, 말티톨, 아라비아 검, 트리에틸 시트레이트, 트리-n-부틸 시트레이트, 디부틸세바케이트를 포함한다. 다른 또는 유사한 저분자량 폴리올 또한 고려되며 예를 들어 에틸렌 글리콜 및 프로필렌 글리콜이다. 폴리에틸렌 글리콜 및 폴리프로필렌 글리콜 또한 사용될 수 있으나 이들은 덜 바람직하다. 글리세린 및 D-소르비톨은 Sigma Chemical Company, St. Louis, Mo. USA 또는 Roquette, France로부터 얻을 수 있다. 다른 기능을 위해 포함된 일부 유효 성분 또는 부형제가 가소제로 작용할 수 있다.
연화제 또는 가소제는, 사용될 경우, 이상적으로 본 발명의 조성물의 건조 중량의 30%에 이르는 비율로 포함될 수 있고, 바람직하게 최대 20% 및 더욱 바람직하게 최대 10%이며, 더더욱 바람직하게 3 내지 8%, 및 가장 바람직하게 4% 내지 6%이다.
필수적이지는 않으나, 본 발명의 조성물의 붕해 속도를 증진함이 특히 바람직한 경우 하이드로겔-형성 중합체 매트릭스는 또한 선택적으로 붕해제를 함유할 수 있다. 포함될 수 있는 붕해제의 예는 알긴산, 크로스카멜로스 나트륨, 크로스포비돈, 저-치환 하이드록시프로필 셀룰로오스 및 녹말 글리콜레이트 나트륨이다.
결정화 억제제(예컨대 조성물의 건조 중량의 약 1%) 또한 본 발명의 조성물에 포함될 수 있다. 예는 예컨대 유화제 등의 다른 역할을 할 수 있는 하이드록시 프로필/메틸 셀룰로오스(HPC 또는 HPMC, 하이프로멜로스 등)이다.
다른 실시양태에서, 하이드로겔-형성 중합체 매트릭스는 미국 특허 4,659,700 (Johnson & Johnson); Kumar Majeti N.V. Ravi in Reactive 및 Functional Polymers, 46, 1, 2000; 및 Paul et al. in ST.P. Pharma Science, 10, 5, 2000에 기재된 바와 같이 첨가제가 있거나 없는 바이오겔 형태로 존재할 수 있는 키토산이며, 위 3개 문헌 전부는 본원에 참조로 통합된다. 키토산 유도체, 예컨대 티올화된 화합물 또한 고려된다.
하이드로겔-형성 중합체 매트릭스는 비-하이드로콜로이드 검일 수 있다. 예는 알긴산의 가교된 염이다. 예를 들어, 갈조류의 벽으로부터 추출된 알긴산나트륨 검의 수용액은 2가 및 3가 양이온에 노출되었을 때의 잘 알려진 겔화 성질을 갖는다. 일반적인 2가 양이온은 주로 염화칼슘 수용액 형태인, 칼슘이다. 이 실시양태에서 가교 또는 겔화는 이러한 다가 양이온, 특히 칼슘과의 반응을 통해 일어나는 것이 바람직하다.
하이드로겔-형성 중합체 매트릭스는 낮은 수분 함량을 가질 수 있고, 따라서 조성물은 낮은 수분 함량을 가질 수 있다. 아래에 기재되는 바와 같이, 코어의 제조 중, 선택적으로 NFAT 억제제 예를 들어 사이클로스포린을 포함하는, 분산상 또는 오일상은, 예를 들어 미니비드인 조성물 또는 코어를 제공하기 위해 하이드로겔-형성 중합체의 수용액과 혼합되며 조성물은 겔화된다. 적합하게 조성물 또는 코어는 그에 존재하는 수분 함량을 감소시키기 위해 형성 후 건조된다.
특정한 실시양태에서 조성물은 디설파이드 결합을 함유하는 화합물을 포함하지 않는다. 실시양태에서 하이드로겔-형성 중합체는 디설파이드 결합을 함유하는 화합물을 포함하지 않는다.
코어의 연속상(수상)을 형성하는 하이드로겔-형성 중합체 매트릭스는 계면활성제를 더 포함할 수 있다. 조성물에 사용될 수 있는 계면활성제는 아래의 "계면활성제" 부분에 기재된다.
조성물 또는 코어의 연속상, 수상 또는 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스에 존재할 수 있는 계면활성제는, 예를 들어 양이온성; 양쪽성(쌍성이온성); 음이온성 계면활성제, 예를 들어 퍼플루오로-옥타노에이트(PFOA 또는 PFO), 퍼플루오로-옥탄설포네이트(PFOS), 소듐 도데실 설페이트(SDS), 암모늄 라우릴 설페이트, 및 다른 알킬 설페이트 염, 소듐 라우릴 에테르 설페이트(SLES)로도 알려진 소듐 라우레트 설페이트, 및 알킬 벤젠 설포네이트; 및 비-이온성 계면활성제, 예를 들어 퍼플루오로카본, 폴리옥시에틸렌 글리콜 도데실 에테르(예컨대 Brij 예를 들어, Brij 35), Myrj(예컨대 Myrj 49, 52 또는 59), 지방 알코올 에톡실레이트, 알킬페놀 에톡실레이트, 지방산 에톡실레이트, 지방 아미드 에톡실레이트, 알킬 글루코사이드, Tween 20 또는 80(폴리소르베이트로도 알려짐)(Brij, Myrj 및 Tween 제품은 Croda에서 상업적으로 시판),중심의 폴리옥시프로필렌(폴리(프로필렌 옥사이드))의 소수성 사슬과 측면의 2개의 폴리옥시에틸렌(폴리(에틸렌 옥사이드))의 친수성 사슬로 구성된 비이온성 트리블록 공중합체인 폴록사머, 또는 전술한 것의 조합으로 구성된 군에서 선택된 계면활성제를 포함한다. 특히, 계면활성제는 음이온성 계면활성제 및 이들의 조합에서 선택되거나 이를 포함할 수 있고, 음이온성 계면활성제는 선택적으로 본 문단에 언급된 것이다. 계면활성제의 특정 부류는 황산염이다. 수상 중의 바람직한 음이온성 계면활성제는 SDS이다. 음이온성 계면활성제의 혼합물이 사용될 수 있다. 추가의 계면활성제의 혼합물, 예컨대 퍼플루오로카본을 포함하는 혼합물 또한 고려된다.
본 발명의 실시양태에서, 코어는, 이론에 구속되지 않고, 수상(중합체 매트릭스)를 적어도 부분적으로 분배하는 것으로 생각되는 친수성 계면활성제를 포함한다.
코어의 수상 내 이러한 포함이 의도된 이러한 계면활성제는 바람직하게 본 발명의 조성물의 제조 및 처리를 수월하게 하기 위해 용이하게 확산되거나 확산될 수 있는 계면활성제이다.
계면활성제는 적어도 10 및 선택적으로 적어도 15, 예컨대 적어도 20, 또는 적어도 30 및 선택적으로 38-42, 예컨대 40의 HLB를 갖을 수 있다. 이러한 계면활성제는 임의의 특정 유형(이온성, 비이온성, 양쪽성)일 수 있으며 조성물의 건조 중량의 0.1% 내지 6%, 예컨대 0.1% 내지 5%. 0.1% 내지 4% 또는 0.1% 내지 3%의 비율, 더욱 바람직하게 적어도 1% 및 특히 1.0 내지 4.5 또는 5%, 이상적으로 2-4% 범위 내 또는 근접, 예를 들어 2 내지 3% 또는 대략 2% 또는 대략 4%의 비율을 포함할 수 있다.
달리 기술 또는 요구된 바가 없다면, 모든 백분율 및 비율은 중량 기준이다.
일 실시양태에서 조성물 또는 코어의 연속상, 수상 또는 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스 중에 존재할 수 있는 음이온성 계면활성제는 알킬 설페이트, 카복실레이트 또는 인지질, 또는 이들의 조합에서 선택된 음이온성 계면활성제일 수 있다.
조성물 또는 코어의 제조 과정 중 수상으로 도입되는 시점의 계면활성제의 물리적 형태는 조성물 또는 코어의 제조를 용이하게 하는 역할을 한다. 이와 같이, 액체 계면활성제가 이용될 수 있으나, 실온에서 고체 형태(예컨대, 결정, 과립 또는 분말)인 계면활성제를 사용함이, 특히 수상이 젤라틴을 포함하는 경우, 바람직하다.
분산상
조성물의 중합체 매트릭스 또는 연속상, 또는 코어가 존재하는 실시양태에서, 앞서 기재된 코어(예를 들어 하이드로겔-형성 중합체)는 오일상이거나 이를 포함하는 분산상을 포함할 수 있다. 적절하게 분산상은, 존재하는 경우, NFAT 억제제(예를 들어 사이클로스포린)를 포함할 수 있다. 이러한 실시양태에서 NFAT 억제제(예를 들어 사이클로스포린)는 바람직하게 분산상 중에 가용성이고, 즉 분산상은 유효 성분이 용출되는 비히클을 포함한다. 사이클로스포린이 분산상에 가용화된 실시양태가 바람직하며, 왜냐하면 이러한 조성물은 가용화된 형태로 사이클로스포린을 방출하며, 이는 예를 들어 결장 점막으로의 흡수를 향상시킴으로써, 방출 부위에서 약물의 치료적 효과를 향상시킬 수 있기 때문이다.
실시양태에서 NFAT 억제제(예를 들어 사이클로스포린)는 분산상 중에 있거나 포함된다. 분산상은 오일상이거나 이를 포함한다. 바람직하게, 분산상은 오일상이다.
분산상은 물과 혼화되지 않는 상(또는 본원에서 오일상으로 지칭됨)을 포함할 수 있다. 물과 혼화되지 않는 상은 주위 온도(예컨대 25 ℃)에서 고체, 반고체 또는 액체일 수 있고, 따라서 오일상은 예를 들어 주위 온도에서 왁스성일 수 있다. 오일상은 액체 지질 및 선택적으로 그와 혼화될 수 있는 용매이거나 이를 포함할 수 있다. NFAT 억제제, 예를 들어 사이클로스포린은 오일상 중에 존재할 수 있다. 적합하게 NFAT 억제제(예를 들어 사이클로스포린)는 오일상 중에 가용성이다.
분산상은 오일의, 예를 들어 액체 지질의 조합을 포함할 수 있다. 오일상은 액체 지질이거나 이를 포함할 수 있다. 액체 지질은 단-, 중- 또는 장-쇄 트리글리세라이드 제제, 또는 이들의 조합일 수 있다. 중쇄 트리글리세라이드(MCT)는 C6, C7, C8, C9, C10, C11 및 C12 지방산에서 선택된 적어도 하나의 지방산의 하나 이상의 트리글리세라이드를 포함한다. 본 발명에 유용한 상업적으로 시판되는 제제인, 트리글리세라이드, 특히 MCT는 천연 제품으로부터 유래한 혼합물이며 보통 또는 항상 MCT가 아닌 화합물을 소량 함유하고 있음이 이해될 것이다; 용어 "중쇄 트리글리세라이드 제제"는 따라서 이러한 제제를 포함하는 것으로 해석되어야 한다. 단쇄 트리글리세라이드는 C2-C5 지방산에서 선택된 적어도 하나의 단쇄 지방산의 하나 이상의 트리글리세라이드를 포함한다. 장쇄 트리글리세라이드는 적어도 13개의 탄소 원자를 갖는 적어도 하나의 장쇄 지방산의 하나 이상의 트리글리세라이드를 포함한다.
액체 지질은 트리글리세라이드 및/또는 디글리세라이드이거나 이를 포함할 수 있다. 이러한 글리세라이드는 중쇄 트리글리세라이드 또는 단쇄 트리글리세라이드 또는 이들의 조합에서 선택될 수 있다.
액체 지질은 카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드, 즉 카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드 제제일 수 있다(여기에 카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드가 아닌 소량의 화합물이 함유될 수 있음이 이해될 것이다). 따라서, 오일상은 트리글리세라이드 및/또는 디글리세라이드, 선택적으로 카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드, 즉 카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드 제제일 수 있다.
분산상은 선택적으로 용매를 포함할 수 있다. 따라서 오일상은 용매를 포함할 수 있다. 선택적으로 오일상에 포함되는 상기의 용매는 액체 지질 및 물 양자와 혼화될 수 있다. 적합한 용매의 예는 상표명 칼비톨(Carbitol™)로 시판되는 2-(2-에톡시에톡시)에탄올, 칼비톨 셀로솔브(Carbitol cellosolve), 트랜스큐톨(Transcutol™), 디옥시톨(Dioxitol™), 폴리-솔브(Poly-solv DE™), 및 도와날(Dowanal DE™); 또는 더 순수한 트랜스큐톨(Transcutol™) HP (99.9)이다. Gattefosse로부터 상업적으로 시판되는 트랜스큐톨 P (Transcutol P) 또는 HP가 바람직하다. 다른 가능한 공용매는 폴리(에틸렌 글리콜)이다. 분자량 190-210(예컨대 PEG 200) 또는 380-420(예컨대 PEG 400)의 PEG가 이 실시양태에서 바람직하다. 적합한 PEG는 Union Carbide Corporation에서 제조된 "Carbowax"란 명칭으로 상업적으로 구입할 수 있으나, 많은 대안적 제조자들 또는 공급자들도 가능하다.
분산상은 코어의 건조 중량의 10-85%에 상당할 수 있다.
앞서 논한 바와 같이 분산상은 임의의 약학적으로 적합한 오일, 예컨대 액체 지질을 포함하는 오일상일 수 있다. 오일상은 오일 드롭으로 존재할 수 있다. 코어의 건조 중량으로서, 오일상은 10% 내지 85%, 예컨대 15% 내지 50%, 예를 들어 20% 내지 30% 또는 35% 내지 45%의 비율을 포함할 수 있다. 용어 "오일"은 주위 온도 또는 주위에 근접한 온도, 예컨대 10 ℃ 내지 40 ℃ 또는 15 ℃ 내지 35 ℃에서 전체적으로 또는 부분적으로 액체이며, 소수성이나 적어도 하나의 유기 용매에 가용성인 임의의 물질을 의미한다. 오일은 식물성 오일(예컨대, 님(neem)) 오일) 및 석유화학 오일을 포함한다.
오일은 코어의 건조 중량을 기준으로 약 2 중량% 내지 약 25 중량%, 약 3 중량% 내지 약 20 중량%, 약 3 중량% 내지 약 10 중량% 또는 약 5 중량% 내지 약 10 중량%의 양으로 조성물에 존재할 수 있다.
오일상에 포함될 수 있는 오일은 폴리-불포화 지방산, 예컨대, 오메가-3 오일, 예를 들어 에이코사펜타노익산(EPA), 도코사헥사노인산(DHA), 알파-리놀레익산(ALA), 공액 리놀레익산(CLA)을 포함한다. 바람직하게 초순수 EPA, DHA 또는 ALA 또는 CLA가 예컨대 최대 98% 또는 그 이상의 순도로 사용된다. 오메가 오일은 예컨대 임의의 적합한 식물, 예컨대 사카잉키(sacha inchi)로부터 유래할 수 있다. 이러한 오일은 단독으로, 예컨대 EPA 또는 DHA 또는 ALA 또는 CLA 또는 임의의 조합으로 사용될 수 있다. 임의의 비율로 2차, 3차 등 조합. 예컨대 상표명 Epax 6000으로 시판되는 EPA 및 DHA 비율 1:5의 2차 혼합물을 포함하는 이러한 성분의 조합이 고려된다. 오일상의 오일 부는 본 문단에 언급된 오일이거나 이를 포함할 수 있다.
오일상에 포함될 수 있는 오일은 올리브유, 참기름, 코코넛유, 팜핵유, 님 오일을 포함하는 특히 천연 트리글리세라이드-계 오일이다. 오일은 포화 코코넛 및 팜핵유-유래 카프릴릭 및 카프릭 지방산 및 글리세린, 예컨대 상표명 Miglyol™로 공급되는, 본 발명의 오일상의 하나 이상의 성분으로서 Miglyol™ 810, 812(카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드); Miglyol™ 818: (카프릴릭/카프릭/리놀레익 트리글리세라이드); Miglyol™ 829: (카프릴릭/카프릭/숙시닉 트리글리세라이드; Miglyol™ 840: (프로필렌 글리콜 디카프릴레이트/디카프레이트)를 포함하는 범위에서 선택되는 시판되는 것이거나 이를 포함할 수 있다. Miglyol™ 810/812는 C8/C10-비율만 상이한 MCT 제제이며, 낮은 C10-함량으로 인해, Miglyol™ 810 의 점도 및 운점(cloud point)이 더 낮다는 것을 주목해야 한다. Miglyol™ 범위는 Sasol Industries로부터 시판된다. 앞서 기술한 바와 같이, 오일상에 포함될 수 있는 오일은 실온에서 반드시 액체이거나 완전히 액체일 것을 요하지 않는다. 왁스성-유형 오일 또한 가능하다: 이들은 제조 온도에서 액체이나 보통의 주위 온도에서 고체 또는 반고체이다. 오일상의 오일 부는 본 문단에서 언급된 오일이거나 이를 포함할 수 있다.
본 발명에 따라 오일상에 포함될 수 있는 대체 또는 추가적인 오일은 다른 중쇄 트리글리세라이드 제제, 예컨대 Gattefosse에서 제조된, 특히 제조번호 WL1349의 Labrafac™ Lipophile이다. Miglyol™ 810, 812 또한 중쇄 트리글리세라이드 제제이다.
따라서 오일상은 중쇄 모노- 디- 또는 트리-글리세라이드이거나 이를 포함할 수 있다.
본원에 언급된 중쇄 글리세라이드(예컨대 모노- 디- 또는 트리-글리세라이드)는 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12개의 탄소 원자를 갖는 지방산, 예컨대 C8-C10 지방산에서 선택된 적어도 하나의 지방산의 하나 이상의 트리글리세라이드를 포함하는 것들이다.
낮은 HLB(10 미만의 HLB)의 오일상 또는 분산상이거나 이를 포함할 수 있는 적합한 오일은 중쇄 트리글리세라이드, 카프릴로카프로일 마크로골 글리세라이드 및 카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드를 포함한다. 시판 제품으로서, 낮은 HLB 범위에서 특히 바람직한 오일은 Labrafac™ Lipophile (예컨대 1349 WL ), Captex 355 및 Miglyol 810이다.
실시양태의 오일상 또는 분산상은 하나 이상의 용매, 예컨대 2-(2-에톡시에톡시)에탄올 또는 앞서 언급한 낮은 분자량의 PEG를 더 포함할 수 있음을 이해해야 한다. 용매는 코팅되지 않은 조성물 또는 코어의 건조 중량을 기준으로 조성물 중에 약 1 중량% 내지 30 중량%, 약 5 중량% 내지 30 중량%, 약 10 중량% 내지 25 중량%, 또는 약 12 중량% 내지 22 중량%의 양으로 존재할 수 있다.
특정 오일상은 오일(낮은 HLB), 계면활성제 및 공용매를 포함한다. 예를 들어 다음의 세 가지 시판 제품: Transcutol P(공용매로서), Myglyol 810(오일로서) 및 Capmul GMO-50(계면활성제). 오일상은 따라서 다음의 배합으로 이루어지거나 포함할 수 있다: 2-에톡시에탄올, MCT 및 특히 카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드 제제, 및 글리세릴 모노올레이트/디올레이트. 오일상은 NFAT 억제제, 예를 들어 사이클로스포린을 더 포함할 수 있다.
바람직하게, NFAT 억제제, 예를 들어 사이클로스포린은 오일상에 가용성이다. 조성물의 제조와 관련하여 이하 논할 바와 같이, NFAT 억제제, 예를 들어 사이클로스포린은 적합하게 오일상에 용해되며 오일상은 하이드로겔 형성 중합체를 포함하는 수상과 혼합된다.
분산상(오일상)은 글리세라이드 제제이거나 이를 포함할 수 있으며, 선택적으로 분산상은 지방산 모노글리세라이드, 디글리세라이드 또는 트리글리세라이드 또는 이들의 조합이거나 이를 포함하고, 또는 분산상은 카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드 제제이거나 이를 포함한다.
오일상은 또한 전에 언급한 용매 또는 공용매와 동일하거나 상이한 하나 이상의 휘발성 또는 비휘발성 용매를 포함할 수 있다. 이러한 용매는 예를 들어 처리, 예컨대 코어에 존재하는 성분의 초기 용출 후 본 발명의 제제에 남을 수 있으며, 코어 제제에서 특정 기능을 갖지 않을 수 있다. 대안으로, 이러한 용매는 존재하는 경우 오일상 내에 NFAT 억제제, 예를 들어 사이클로스포린을 용해된 상태(용액 중)로 유지하거나 분산, 배출 등을 수월하게 하는 기능을 할 수 있다. 다른 실시양태에서, 용매는 처리 중 일부 또는 전부 증발하여 따라서 전혀 없거나 소량만이 존재할 수 있다. 관련된 실시양태에서, 용매는, 특히 오일과 물에 모두 가용성인 용매가 사용될 때, 코어의 수상 중에 부분적으로 또는 완전히 존재할 수 있다. 이러한 용매의 예는 에탄올이다. 다른 예는 공용매로 이미 언급된 트랜스큐톨(transcutol)이다.
따라서, 조성물은 연속상을 형성하는 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스 및 사이클로스포린을 포함하는 분산상, 낮은 HLB의 중 또는 장쇄 모노- 또는 디-에스테르 계면활성제, 낮은 HLB의 오일, 및 선택적으로 공용매를 포함할 수 있다. 선택적으로, 중 또는 장쇄 모노- 또는 디-에스테르 계면활성제는 중- 또는 장쇄 모노- 또는 디-글리세라이드 계면활성제이다.
계면활성제
오일상은 상기 및 본원의 다른 곳에서 기술된 바와 같이 계면활성제를 더 포함할 수 있다. 오일상 중 계면활성제의 존재는 또한 오일상이 수상 중에 분산될 때 액체 조성물에 대해 안정화 효과를 제공할 수 있다. 또한 오일상 중 계면활성제의 존재는 특히 억제제가 사이클로스포린일 때 오일상 중 NFAT 억제제의 용액으로부터 NFAT 억제제의 결정화를 억제할 수 있다. 계면활성제는 또한 분산상이 액체 조성물, 조성물 또는 코어 제조 동안 수상과 혼합될 때 개선된 유화를 제공할 수 있다(즉, 유화제로서 작용한다).
계면활성제는 최대 8, 최대 6, 또는 최대 5의 HLB 값을 가질 수 있다. 대안으로 계면활성제는 최대 7, 1-8, 1-7, 2-6, 1-5, 2-5, 1-4, 1-3, 1-2, 2-4, 3-4, 3-6, 5-8, 6-8 및 6-7에서 선택된 HLB 값을 가질 수 있다. 바람직하게는 계면활성제는 최대 6, 2-6 또는 3-6의 HLB 값을 가진다.
NFAT 억제제(예를 들어, 사이클로스포린)는 계면활성제 중에 가용성일 수 있고, 예를 들어 사이클로스포린 A는 계면활성제 중에서 200mg/g 초과의 용해도를 가질 수 있다. 따라서, 계면활성제는 200 mg/g 초과의 사이클로스포린 용해도를 가질 수 있다. 계면활성제는 200 mg/g 내지 500 mg/g, 선택적으로 250 mg/g 내지 500 mg/g의 사이클로스포린 용해도를 가질 수 있다.
계면활성제는 200 mg/g 내지 400 mg/g, 225 mg/g 내지 375 mg/g, 200 mg/g 내지 300 mg/g, 300 mg/g 내지 400 mg/g, 225 mg/g 내지 275 mg/g, 350 mg/g 내지 400 mg/g의 NFAT 억제제(예를 들어, 사이클로스포린) 용해도를 가질 수 있다. 바람직하게는, 계면활성제는 200 mg/g 내지 400 mg/g 또는 225 mg/g 내지 375 mg/g의 NFAT 억제제(예를 들어, 사이클로스포린) 용해도를 가진다. 계면활성제는 250 mg/g 내지 400 mg/g, 250 mg/g 내지 375 mg/g, 250 mg/g 내지 300 mg/g, 300 mg/g 내지 400 mg/g, 250 mg/g 내지 275 mg/g, 350 mg/g 내지 400 mg/g의 NFAT 억제제(예를 들어, 사이클로스포린) 용해도를 가질 수 있다. 바람직하게는, 계면활성제는 250 mg/g 내지 400 mg/g 또는 250 mg/g 내지 375 mg/g의 NFAT 억제제(예를 들어, 사이클로스포린) 용해도를 가진다. 계면활성제 중에서 사이클로스포린의 용해도는 당업자에게 알려진 기술에 의해, 예를 들어 본원에 참고로 통합되는, Development of a Self Micro-Emulsifying Tablet of Cyclosporine- A by the Liquisolid Compact Technique, Zhao et al(International Jpurnal of Pharmaceutical Sciences and Research, 2011, Vol. 2(9), 2299-2308)에 기재된 프로토콜에 의해 확인될 수 있다.
계면활성제는 최대 6의 HLB 및 200 mg/g 내지 400 mg/g의 NFAT 억제제(예를 들어, 사이클로스포린) 용해도를 가질 수 있다. 계면활성제는 2-6(선택적으로 3-6)의 HLB 값 및 200 mg/g 내지 400 mg/g의 NFAT 억제제(예를 들어, 사이클로스포린) 용해도를 가질 수 있다. 계면활성제는 2-6(선택적으로 3-6)의 HLB 값 및 225 mg/g 내지 275 mg/g의 NFAT 억제제(예를 들어, 사이클로스포린) 용해도를 가질 수 있다. 계면활성제는 2-6(선택적으로 3-6)의 HLB 값 및 250 mg/g 내지 300 mg/g의 NFAT 억제제(예를 들어, 사이클로스포린) 용해도를 가질 수 있다.
계면활성제는 최대 6의 HLB 및 250 mg/g 내지 400 mg/g의 NFAT 억제제(예를 들어, 사이클로스포린) 용해도를 가질 수 있다. 계면활성제는 2-6(선택적으로 3-6)의 HLB 값 및 250 mg/g 내지 400 mg/g의 NFAT 억제제(예를 들어, 사이클로스포린) 용해도를 가질 수 있다. 계면활성제는 2-6(선택적으로 3-6)의 HLB 값 및 250 mg/g 내지 375 mg/g의 NFAT 억제제(예를 들어, 사이클로스포린) 용해도를 가질 수 있다. 계면활성제는 2-6(선택적으로 3-6)의 HLB 값 및 250 mg/g 내지 300 mg/g의 NFAT 억제제(예를 들어, 사이클로스포린) 용해도를 가질 수 있다.
계면활성제의 존재는 경구 투여 후 조성물로부터의 NFAT 억제제, 특히 사이클로스포린의 방출 속도 및 정도를 향상시킬 수 있다. 계면활성제의 존재는 하부 위장관, 특히 결장에서 발견되는 바와 같이 조성물에서 수성 매질 내로 방출된 후 NFAT 억제제(예를 들어, 사이클로스포린)의 높은 비율을 가용화된 형태로 유지하는 역할을 할 수 있다.
일 실시양태에서 오일상은 오일 또는 액체 지질을 포함하며 계면활성제는 오일 또는 액체 지질보다 많은 양으로 존재한다. 선택적으로, 계면활성제는 조성물의 건조 중량의 6 중량% 초과의 양으로 존재할 수 있다. 이는 코팅되지 않은 조성물 또는 코어를 가리킨다. 계면활성제는, 예를 들어 액체 조성물에서, 오일상의 12 중량% 초과를 포함할 수 있다. 계면활성제는 코어의 건조 중량을 기준으로 조성물 중에 약 5 중량% 내지 약 20 중량%, 약 8 중량% 내지 약 20 중량%, 약 8 중량% 내지 약 15 중량%, 또는 약 10 중량% 내지 약 14 중량%의 양으로 존재할 수 있다. "코어의 건조 중량"에 대한 언급은 코팅되지 않은 코어 중에 존재하는 물 외의 성분의 중량을 의미함을 이해해야 한다.
계면활성제:오일의 중량비는 약 5:1 내지 약 1:5, 약 3:1 내지 약 1:2, 약 3:1 내지 약 1:1 또는 약 2.5:1 내지 약 1.5:1일 수 있다. 적합하게 중량비는 약 1:1, 약 2:1, 약 2.5:1, 약 3:1, 약 1:1.5 또는 약 1:2일 수 있다.
NFAT 억제제(선택적으로 사이클로스포린), 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스, 계면활성제 및 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스 중에 분산된 오일상을 포함하는 조성물이 제공되며, 여기서 계면활성제는 글리세릴 카프릴레이트/카프레이트(Capmul MCM), 글리세릴 모노올레이트/디올레이트(Capmul GMO-50), 글리세롤 모노리놀레이트(Maisine 35-1) 및 이들의 조합에서 선택된 계면활성제이거나 이를 포함한다. 조성물은 고체 조성물일 수 있다. 조성물은 건조 비드 형태일 수 있다. 조성물은 건조 콜로이드 형태일 수 있다.
선택적으로, 계면활성제는 글리세릴 모노올레이트, 글리세릴 디올레이트 또는 이들의 조합이거나 이를 포함한다. Capmul GMO-50은 글리세릴 모노올레이트 및 글리세릴 디올레이트의 조합을 포함하는 시판되는 계면활성제의 예이다. 따라서, 계면활성제는 Capmul GMO-50일 수 있다. 본 명세서에서 Capmul GMO-50이 언급되는 경우 글리세릴 모노올레이트 및 글리세릴 디올레이트의 혼합물을 지칭하는 것으로 이해될 것이다. Capmul GMO-50은 또한 글리세릴 모노올레이트 단독을 지칭할 수 있다.
유사하게, 당업자는, 예를 들어 글리세릴 모노올레이트/디올레이트와 같이 기재된 계면활성제가, 글리세릴 모노올레이트 및 글리세릴 디올레이트의 조합을 고려함을 이해할 것이다. 달리 말하면 계면활성제 명칭 중의 "/"는 계면활성제가 두 성분의 혼합물임을 나타낸다.
오일상 또는 분산상의 액체 지질 또는 오일은 적합하게는 계면활성제가 아니다. 그러나, 특정한 오일, 특히 천연 공급원으로부터 유래된 오일은 계면 활성 성질을 갖는 성분을 포함할 것이다. 예를 들어 많은 트리글리세라이드 오일은 또한 모노 및 디글리세라이드 성분을 포함하며 따라서 일부 계면활성제 유사 성질을 발휘할 수 있다. 따라서 오일은 적합하게 0-10의 HLB 값을 가지나, 적합하게 오일은 0에 가까운 HLB, 예를 들어 0 내지 3, 선택적으로 약 0, 약 1 또는 약 2의 HLB를 갖는다.
오일상 중의 계면활성제는 예를 들어 중쇄 또는 장쇄 지방산 모노- 또는 디-글리세라이드 또는 이들의 조합이거나 이를 포함할 수 있으며, 계면활성제는 폴리에틸렌 글리콜 에테르 또는 에스테르가 아니거나 이를 포함하지 않는다. 선택적으로 계면활성제는 중쇄 또는 장쇄 지방산 모노-글리세라이드, 디-글리세라이드 또는 이들의 조합이고, 선택적으로 계면활성제는 폴리에틸렌 글리콜 에테르 또는 에스테르가 아니거나 이를 포함하지 않는다. 본 발명에서 고려되는 2개의 특정 계면활성제는 글리세릴 카프릴레이트/카프레이트 및 글리세릴 모노올레이트/디올레이트이다. 시판 제조품, 예컨대 부성분을 함유하는 시판 제조품 또한 계면활성제로 사용될 수 있다. 바람직한 예는 Capmul GMO-50(글리세릴 모노올레이트/디올레이트) 및 Capmul MCM(글리세릴 카프릴레이트/카프레이트)이다.
실시양태 내에서, 오일의 HLB는 0-10(선택적으로 1-8, 예컨대 1-6 및 때로는 1-5) 범위 내일 수 있다.
다른 실시양태에서 오일상은 0-10(바람직하게 1-5) 범위 내의 HLB 값을 갖는 오일을 포함하고 최대 10 및 선택적으로 최대 7, 1-8, 1-7, 1-5, 2-5, 1-4, 1-3, 1-2, 2-4, 3-4, 5-8, 6-8 및 6-7의 HLB를 갖는다.
다른 실시양태에서 오일상은 오일 및 계면활성제를 포함하며 오일 및 계면활성제 양자는 0-10 범위 내의 HLB 값을 갖는다. 예를 들어 오일은 1-5, 예를 들어 1 내지 4 또는 1-2의 HLB를 가지며 계면활성제는 HLB 2-8, 예를 들어 3-7, 2-6, 또는 3-4를 갖는다.
조성물은, 앞서 기재된 계면활성제를 포함한다. 계면활성제는 조성물 또는 코어 중에, 예를 들어 하이드로겔-형성 중합체 매트릭스, 또는 분산상 또는 양쪽 중에 존재할 수 있다. 계면활성제는 또한 조성물에 포함되거나 코어에 적용된 하나 이상의 코팅 중에 존재할 수 있다.
조성물은 추가의 계면활성제를 포함할 수 있다. 조성물이 추가의 계면활성제를 포함하는 경우 이 계면활성제는 제2 계면활성제로 지칭될 수 있으며 본 발명의 조성물에 존재하는 계면활성제는 제1 계면활성제로 지칭될 수 있다. 따라서, 제1 및 제2 계면활성제는 본원에 상술된 임의의 계면활성제일 수 있다. 일 실시양태에서, 제1 계면활성제는 중쇄 또는 장쇄 지방산 모노- 또는 디-글리세라이드 또는 이들의 조합이거나 이를 포함하고, 폴리에틸렌글리콜 에테르 또는 에스테르가 아니거나 이를 포함하지 않는다. 대안의 실시양태에서, 제1 계면활성제는 음이온성 계면활성제, 예를 들어 소듐 라우릴 설페이트이다. 추가의 계면활성제는 조성물 또는 코어 중에, 예를 들어 하이드로겔-형성 중합체 매트릭스, 또는 분산상 또는 양쪽 중에 존재할 수 있다. 추가의 계면활성제는 또한 조성물에 포함되거나 코어에 적용된 하나 이상의 코팅 중에 존재할 수 있다. 적합한 추가의 계면활성제는 음이온성, 양이온성, 양쪽성이온성, 또는 비이온성일 수 있다.
본 명세서의 상세한 설명 및 청구항에서, 용어 "계면활성제"는 "계면 활성 물질(surface active agent)"의 축약으로 사용된다. 본 상세한 설명 및 청구항의 목적상, 계면활성제의 4가지의 주요 분류가 있는 것으로 추정된다; 따라서 추가의 계면활성제는 음이온성, 양이온성, 비이온성, 및 양쪽성(양쪽성 이온성)일 수 있다. 비이온성 계면활성제는 전체로서 잔존하여, 수용액에서 전하를 띠지 않으며, 양이온 또는 음이온으로 해리되지 않는다. 음이온성 계면활성제는 수용성이며, 음전하를 띠고 수중에 위치할 경우 양이온 및 음이온으로 해리된다. 음전하는 물의 표면 장력을 낮추고 계면 활성 물질로 작용한다. 양이온성 계면활성제는 양전하를 띠고, 수중에 위치할 경우 양이온 및 음이온으로 해리된다. 이 경우, 양전하는 물의 표면 장력을 낮추고 계면활성제로 작용한다. 양쪽성(양쪽성 이온성) 계면활성제는 산성 용액 중에서 양전하를 가지며 양이온성 계면활성제처럼 작동하거나, 염기성 용액 중에서 음전하를 가지며 음이온성 계면활성제처럼 작동하는 것으로 추정된다.
계면활성제(제1 계면활성제 및 제2 계면활성제)는 음이온성 계면활성제 및 이들의 조합; 비이온성 계면활성제 및 이들의 조합; 및 음이온성 계면활성제(예컨대 이러한 계면활성제의 단수 또는 복수) 및 비이온성 계면활성제(예컨대 이러한 계면활성제의 단수 또는 복수)의 조합에서 선택될 수 있다. 바람직하게 계면활성제는 음이온성 계면활성제 또는 비이온성 계면활성제이다. 예를 들어 제1 계면활성제는 비이온성일 수 있고, 제2 계면활성제는 음이온성일 수 있다.
더욱이, 실시양태에서 조성물은 NFAT 억제제, 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스, 제1 계면활성제 및 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스 중에 분산된 오일 상을 포함하고, 조성물은 제2 계면활성제를 더 포함한다. 선택적으로 제1 계면활성제는 비이온성 계면활성제, 예를 들어 중쇄 또는 장쇄 지방산 모노- 또는 디-글리세라이드 또는 이들의 조합이거나 이를 포함하고 폴리에틸렌글리콜 에테르 또는 에스테르가 아니거나 이를 포함하지 않는다. 선택적으로 제2 계면활성제는 음이온성 계면활성제이다.
계면활성제는 1949년 및 1954년 Griffin에 의해, 및 이후 Davies에 의해 기술된(본래 비이온성 계면활성제에 대하여) 바와 같이, 분자의 상이한 영역에 대해 값을 계산함으로써 확인된, 계면활성제가 친수성인지 또는 친지질성인지에 관한 정도를 측정하는 친수성-친지질성 균형(HLB)에 따라 분류될 수 있다. 방법은 분자 전체 및 친수성 및 친지질성 부분의 분자량을 공식에 적용하여 최대 40의 임의의(반경험적) 척도를 얻는데 보통의 범위는 0 내지 20이다. 0의 HLB 값은 완전히 소수성인 분자에 대응하며, 20의 값은 완전히 친수성 성분으로 만들어진 분자에 대응할 것이다. HLB 값은 분자의 계면활성제 성질을 예측하는 데 사용될 수 있다:
Figure pct00001
HLB 수치는 시스템이 개발된, 비이온성 이외의 계면활성제에 부여될 수 있지만, 음이온성, 양이온성, 비이온성 및 양쪽이온성(쌍성이온성) 계면활성제에 대한 HLB 숫자는 중요성이 덜 할 수 있으며 종종 수학적인 계산 결과가 아닌 상대적이거나 비교적인 숫자로 표시될 수 있다. 이 때문에 계면활성제가 "최대값" 20 이상을 가질 수 있는 것이다. 그러나 HLB 숫자는 양호한 성능을 달성하기 위하여 주어진 에멀전 시스템에 대하여 원하는 적용의 HLB 요구치를 기재하는 데 유용할 수 있다.
계면활성제는 비이온성 계면활성제일 수 있다. 계면활성제는 폴리옥시에틸렌화된 계면활성제일 수 있다. 계면활성제는 친수성 사슬, 예를 들어 폴리옥시에틸렌 사슬 또는 폴리하이드록실화된 사슬일 수 있는 친수성 머리를 갖는다.
계면활성제는 물론 소수성 부분 및 특히 소수성 사슬을 갖는다. 소수성 사슬은 예를 들어 적어도 6개의 탄소 원자 및 선택적으로 적어도 10개의 탄소 원자, 및 특히 적어도 12개의 탄소 원자를 갖는, 탄화수소 사슬일 수 있다; 일부 탄화수소 사슬은 22개 이하의 탄소 원자, 예를 들어 C10-C20, C12-C20 또는 C15-C20 탄화수소 사슬을 가진다. 이는 예컨대 바로 앞서 언급한 개수의 탄소 원자를 갖는, 알킬 사슬일 수 있다. 이는 예컨대 바로 앞서 언급한 개수의 탄소 원자를 갖는, 하나 이상의 탄소-탄소 이중 결합을 갖는 알케닐 사슬일 수 있다. 계면활성제는 소수성 특성을 유지한다면 치환된 탄화수소 사슬, 예컨대 알킬 사슬 또는 알케닐 사슬을 포함할 수 있다. 이들은 예를 들어 1개 또는 2개의 치환기, 예를 들어 단일 치환기, 예컨대 할로겐(예컨대 F 또는 Cl), 하이드록시, 티올 옥소, 니트로, 시아노에서 선택된 것일 수 있다; 하이드록시 또는 티올 치환기는 예를 들어 지방산에 의해 에스테르화될 수 있다. 한 종류의 계면활성제는 하이드록시로 단일치환된 탄화수소를 포함한다; 선택적으로, 정량의 계면활성제의, 예컨대 비드 중의 계면활성제의 하이드록시 기의 적어도 일부는 본원에 개시된 지방산 또는 모노-하이드록시 지방산으로 에스테르화되거나 예컨대 적어도 6개의 탄소 원자 및 선택적으로 적어도 10개의 탄소 원자, 및 특히 적어도 12개의 탄소 원자를 갖는 지방 알코올로 에테르화될 수 있다; 일부 탄화수소 사슬은 22개 이하의 탄소 원자, 예컨대 C10-C20, C12-C20 또는 C15-C20 지방 알코올를 가진다.
소수성 사슬은 에스테르화된 지방산 R1-COOH 또는 에테르화 또는 에스테르화된 지방 에테르 R1-COH의 일부일 수 있으며 R1은 예컨대 전술한 문단에서 언급한 바와 같이 소수성 사슬이다. 에스테르-형성 또는, 경우에 따라, 에테르-형성 기는 일반적으로 친수성 사슬을 포함할 것이다.
언급한 바와 같이, 계면활성제는 친수성 사슬을 가질 수 있으며 비이온성 계면활성제일 수 있고, 양자의 조건을 만족할 수 있다. 친수성 사슬은 폴리(옥시에틸렌) 또는 마크로골로도 알려진 폴리(에틸렌글리콜)일 수 있다. 친수성 사슬은 식 -(O-CH2-CH2)n-OR일 수 있고 n은 5 또는 6 내지 50이며 R은 H 또는 알킬, 예컨대 에틸 또는 메틸이다. 본 발명은 n이 6 내지 40, 예컨대 6 내지 35인 실시를 포함한다. 일부 실시양태에서, n은 6 내지 25이며 선택적으로 8 내지 25 또는 8 내지 15이다. 다른 실시양태에서, n은 8 내지 50 또는 8 내지 40, 예컨대 10 내지 50, 10 내지 40 또는 10 내지 35이다. 특정 실시양태에서, n은 15이다. 모든 식 -(O-CH2-CH2)n-OR의 친수성 사슬에 대해, 실시양태의 일 종류에서 R은 H이다.
친수성 사슬은 예컨대 사슬의 탄소 원자에 하이드록시 기를 갖는, 예를 들어 글루카미드인, 폴리하이드록실화된 사슬(예를 들어 C5-C20 예컨대 C5-C10 사슬)일 수 있다.
계면활성제는 에틸렌 옥사이드를 피마자유와 반응시킴으로써 제조될 수 있는 폴리에톡실화 피마자유(폴리에틸렌 글리콜 에테르)일 수 있다. 상업적인 제조는 계면활성제, 예를 들어, 예를 들어 리시놀레산의 폴리에틸렌 글리콜 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 및 글리세롤의 폴리에틸렌 글리콜 에스테르와 같은 부성분(minor components)을 함유하는 상업적인 제제로 사용될 수 있다. 바람직한 예는 크레모포어 EL(Cremophor EL)로도 알려진 BASF사의 크레모포어(Cremophor)이다. 대안적인 또는 추가적인 가용화제는 예를 들어 포스파티딜콜린과 같은 인지질을 포함한다. 포스포리피드 가용화제를 포함하는 본 발명의 조성물의 실시양태에서, 포스포리피드 가용화제는 수상 또는 오일상 또는 둘다에 혼입될 수 있다. 적어도 하나의 포스포리피드 가용화제가 각 상에 혼입되면, 두 상 모두에서 동일한 포스포리피드 가용화제이거나 또는 각각 다른 포스포리피드 가용화제일 수 있다.
비이온성 계면활성제
계면활성제(제1 계면활성제 및/또는 제2 계면활성제)는 다음 비이온성 계면활성제에서 선택된 적어도 하나의 계면활성제이거나 이를 포함할 수 있다.
폴리에틸렌글리콜 에테르 또는 에스테르가 아니거나 이를 포함하지 않는 중쇄 또는 장쇄 지방산 모노- 또는 디-글리세라이드 또는 이의 조합은 글리세릴 모노카프레이트, 글리세릴 디카프레이트, 글리세릴 모노카프릴레이트, 글리세릴 디카프릴레이트, 글리세릴 카프레이트, 글리세릴 모노카프릴레이트/카프레이트, 글리세릴 카프릴레이트/카프레이트 글리세릴 디카프릴레이트/카프레이트, 글리세릴 모노올레이트/디올레이트, 글리세릴 모노올레이트, 글리세릴 디올레이트, 글리세릴 모노스테아레이트, 글리세릴 디스테아레이트, 글리세릴 모노팔미토스테아레이트, 글리세릴 디팔미토스테아레이트, 글리세릴 모노베헤네이트, 글리세릴 디베헤네이트, 글리세릴 모노리놀레이트, 글리세롤 모노리놀레이트, 글리세릴 디리놀레이트, 폴리글리세릴 디올레이트, 프로필렌 글리콜 모노헵타노에이트 및 이들의 조합에서 선택된다.
PEG-지방산 모노에스테르 계면활성제, PEG-지방산 디에스테르 계면활성제, PEG-지방산 모노에스테르 및 디에스테르 계면활성제 혼합물, PEG 글리세롤 지방산 에스테르, 오일 및 알코올의 트랜스에스테르화된 생성물, 저급 알코올 지방산 에스테르, 폴리글리세르화된 지방산, 프로필렌 글리콜 지방산 에스테르, 모노 및 디글리세라이드 계면활성제, 스테롤 및 스테롤 유도체 계면활성제, PEG-소르비탄 지방산 에스테르, 소르비탄 지방산 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 알킬 에테르, 당 에스테르 계면활성제, 폴리에틸렌 글리콜 알킬 페놀 계면활성제, POE-POP 블록 공중합체, 인지질.
PEG-지방산 모노 에스테르 계면활성제, 예를 들어 PEG 4-100 모노라우레이트, PEG 4-100 모노올레이트, PEG 4-100 모노스테아레이트, PEG-라우레이트, PEG-올레이트, PEG 스테아레이트, 및 PEG 리시노올레이트. PEG-지방산 디에스테르 계면활성제, 예컨대 PEG 디라우레이트; PEG 디올레이트, PEG 디스테아레이트, PEG 디팔미테이트. PEG-지방산 모노- 및 디에스테르의 혼합물.
PEG 글리세롤 지방산 에스테르, 예를 들어 PEG 글리세릴 라우레이트, PEG 글리세릴 스테아레이트, PEG 글리세릴 올레이트.
PEG-소르비탄 지방산 에스테르, 예컨대 PEG 소르비탄 라우레이트, PEG 소르비탄 모노라우레이트, PEG 소르비탄 모노팔미테이트, PEG 소르비탄 모노스테아레이트, PEG 소르비탄 트리스테아레이트, PEG 소르비탄 테트라스테아레이트, PEG 소르비탄 모노올레이트, PEG 소르비탄 올레이트, PEG 소르비탄 트리올레이트, PEG 소르비탄 테트라올레이트, PEG 소르비탄 모노이소스테아레이트, PEG 소르비톨 헥사올레이트, PEG 소르비톨 헥사스테아레이트.
프로필렌 글리콜 지방산 에스테르, 예를 들어 프로필렌 글리콜 모노카프릴레이트, 프로필렌 글리콜 모노라우레이트, 프로필렌 글리콜 올레이트, 프로필렌 글리콜 미리스테이트, 프로필렌 글리콜 모노스테아레이트, 프로필렌 글리콜 리시노올레이트, 프로필렌 글리콜 이소스테아레이트, 프로필렌 글리콜 모노올레이트, 프로필렌 글리콜 디카프릴레이트/디카프레이트, 프로필렌 글리콜 디옥타노에이트, 프로필렌 글리콘 카프릴레이트/카프레이트, 프로필렌 글리콜 디라우레이트, 프로필렌 글리콜 디스테아레이트, 프로필렌 글리콜 디카프릴레이트, 프로필렌 글리콜 디카프레이트.
소르비탄 지방산 에스테르, 예를 들어 소르비탄 모노라우레이트, 소르비탄 모노팔미테이트, 소르비탄 모노올레이트, 소르비탄 모노스테아레이트, 소르비탄 트리올레이트, 소르비탄 세스퀴올레이트, 소르비탄 트리스테아레이트, 소르비탄 모노이소스테아레이트, 소르비탄 세스퀴스테아레이트.
저급 알코올 지방산 에스테르, 예를 들어 에틸 올레이트, 이소프로필 미리스테이트, 이소프로필 팔미테이트, 에틸 리놀레이트, 이소프로필 리놀레이트.
폴리옥시에틸렌-폴리옥시프로필렌 블록 공중합체, 예를 들어 폴록사머 105, 폴록사머 108, 폴록사머 122, 폴록사머 123, 폴록사머 124, 폴록사머 181, 폴록사머 182, 폴록사머 183, 폴록사머 184, 폴록사머 185, 폴록사머 188, 폴록사머 212, 폴록사머 215, 폴록사머 217, 폴록사머 231, 폴록사머 234, 폴록사머 235, 폴록사머 237, 폴록사머 238, 폴록사머 282, 폴록사머 284, 폴록사머 288, 폴록사머 331, 폴록사머 333, 폴록사머 334, 폴록사머 335, 폴록사머 338, 폴록사머 401, 폴록사머 402, 폴록사머 403, 폴록사머 407.
폴리글리세르화된 지방산, 예를 들어 폴리글리세릴 스테아레이트, 폴리글리세릴 올레이트, 폴리글리세릴 이소스테아레이트, 폴리글리세릴 라우레이트, 폴리글리세릴 리시노올레이트, 폴리글리세릴 리놀레이트, 폴리글리세릴 펜타올레이트, 폴리글리세릴 디올레이트, 폴리글리세릴 디스테아레이트, 폴리글리세릴 트리올레이트, 폴리글리세릴 셉타올레이트, 폴리글리세릴 테트라올레이트, 폴리글리세릴 데카이소스테아레이트, 폴리글리세릴 데카올레이트, 폴리글리세릴 모노올레이트, 디올레이트, 폴리글리세릴 폴리리시노올레이트.
PEG 알킬 에테르, 예를 들어 PEG 올레일 에테르, PEG 라우릴 에테르, PEG 세틸 에테르, PEG 스테아릴 에테르.
PEG 알킬 페놀, 예를 들어 PEG 노닐 페놀, PEG 옥틸 페놀 에테르.
알코올 또는 폴리알코올과 천연 또는 수소화된 오일의 트랜스에스테르화된 생성물, 예를 들어 PEG 피마자유, PEG 수소화된 피마자유, PEG 피마자유, PEG 옥수수유, PEG 아몬드유, PEG 살구핵유, PEG 올리브유, PEG-6 땅콩유, PEG 수소화된 팜핵유, PEG 팜핵유, PEG 트리올레인, PEG 옥수수 글리세라이드, PEG 아몬드 글리세라이드, PEG 트리올레이트, PEG 카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드, 라우로일 마크로골 글리세라이드, 스테아로일 마크로골 글리세라이드, 식물성 오일 및 소르비톨의 모노, 디, 트리, 테트라 에스테르, 펜타에리트리틸 테트라이소스테아레이트, 펜타에리트리틸 디스테아레이트, 펜타에리트리틸 테트라올레이트, 펜타에리트리틸 테트라스테아레이트, 펜타에리트리틸 테트라카프릴레이트/테트라카프레이트, 펜타에리트리틸 테트라옥타노에이트.
지용성 비타민, 예를 들어 비타민 A, D, E, K, 및 이들의 이성질체, 유사체, 및 유도체. 상기 유도체는 예를 들어, 이들 지용성 비타민 물질의 유기산 에스테르, 예를 들어 비타민 E 또는 비타민 A의 숙신산 에스테르를 포함한다. 이들 비타민의 유도체는 토코페릴 PEG-1000 숙시네이트(비타민 E TPGS) 및 다양한 분자량의 PEG 모이어티, 예를 들어 PEG 100-8000을 갖는 기타 토코페릴 PEG 숙시네이트 유도체를 포함한다.
스테롤 또는 스테롤 유도체(예를 들어 페길화된 스테롤과 같이 예컨대, 에스테르화 또는 에테르화된 스테롤), 예를 들어 콜레스테롤, 시토스테롤, 라노스테롤, PEG 콜레스테롤 에테르, PEG 콜레스타놀, 피토스테롤, PEG 피토스테롤.
당 에스테르, 예를 들어 수크로오스 디스테아레이트, 수크로오스 디스테아레이트/모노스테아레이트, 수크로오스 디팔미테이트, 수크로오스 모노스테아레이트, 수크로오스 모노팔미테이트, 수크로오스 모노라우레이트, 알킬 글루코사이드, 알킬 말토사이드, 알킬 말토트리오사이드, 알킬 글리코사이드, 유도체 및 기타 당 유형: 글루카미드.
카복실레이트(특히 카복실레이트 에스테르), 예를 들어 에테르 카복실레이트, 숙시닐레이트화된 모노 글리세라이드, 소듐 스테아릴 푸마르레이트, 모노- 및 디글리세라이드의 스테아로일 프로필렌 글리콜 수소 숙시네이트화된, 모노/디아세틸화된 타타르산 에스테르, 모노-, 디글리세라이드의 시트르산 에스테르, 지방산의 글리세릴-락토 에스테르; 아실 락틸레이트: 지방산의 락트산 에스테르, 칼슘/소듐 스테아로일-2-락틸레이트, 칼슘/소듐 스테아로일 락틸레이트, 알긴산염, 프로필렌 글리콜 알기네이트.
지방산 모노 글리세라이드, 디글리세라이드 또는 트리글리세라이드 또는 이들의 조합.
본 발명의 사용에 적합한 마크로골 에스테르의 예는 적어도 6개의 탄소 원자 및 선택적으로 적어도 10개의 탄소 원자, 및 특히 적어도 12개의 탄소 원자를 갖는 지방산의 마크로골 에스테르이다; 일부 지방산은 22개 이하의 탄소 원자를 가지며, 예를 들어 C10-C20, C12-C20 또는 C15-C20 지방산이다. 지방산은 포화 또는 불포화될 수 있으나 특히 포화된다. 언급될 것은 마크로골 25 세토스테아릴 에테르(Cremophor® A25); 마크로골 6 세토스테아릴 에테르(Cremophor® A6); 마크로골 글리세롤 리시놀레이트 35(Cremophor® EL); 마크로골-글리세롤 하이드록시스테아레이트 40(Cremophor® RH 40); 마크로골-15-하이드록시스테아레이트(Solutol® HS 15)이다. 본 발명의 사용에 적합한 마크로골 에테르의 예는 적어도 6개의 탄소 원자 및 선택적으로 적어도 10개의 탄소 원자, 및 특히 적어도 12개의 탄소 원자를 갖는 지방 알코올의 마크로골 에테르이다; 일부 지방 알코올은 22개 이하의 탄소 원자를 가지며, 예를 들어 C10-C20, C12-C20 또는 C15-C20 지방 알코올이다. 지방 알코올은 포화 또는 불포화될 수 있으나 일 실시양태에서는 포화된다.
본 발명의 사용에 적합한 공중합체의 예는 플루로닉(pluronic)(폴록사머); 폴리비닐 피롤리돈-폴리비닐아세테이트(Plasdone S630); 아미노알킬 메타크릴레이트 공중합체(Eudragit EPO); 메타크릴산-메틸 메타크릴레이트 공중합체(Eudragit S100, L100); 폴리카프로락톤-PEG; 폴리카프로락톤-메톡시-PEG; 폴리(아스파르트산)-PEG; 폴리(벤질-L-글루타메이트)-PEG; 폴리(D,L-락티드)메톡시-PEG; 폴리(벤질-L-아스파테이트-PEG; 또는 폴리(L-라이신)-PEG이다.
바람직한 양태에서 미셀 형성 계면활성제는 마크로골 에스테르, 더욱 바람직하게는 BASF에서 판매되는 Kolliphor® HS 15와 같은, European Pharmacopoeia monograph number 2052 마크로골-15-하이드록시스테아레이트에 따른 마크로골 에스테르이다.
음이온성 계면활성제
계면활성제(제1 및/또는 제2 계면활성제)는 적어도 하나의 음이온성 계면활성제이거나 이를 포함할 수 있다.
계면활성제(제1 및/또는 제2 계면활성제)는 지방산염 또는 담즙염, 예를 들어 소듐 카프로에이트, 소듐 카프릴레이트, 소듐 카프레이트, 소듐 라우레이트, 소듐 미리스테이트, 소듐 미리스톨레이트, 소듐 팔미테이트, 소듐 팔미토올레이트, 소듐 올레이트, 소듐 리시노올레이트, 소듐 리놀레이트, 소듐 리놀레네이트, 소듐 스테아레이트, 소듐 라우릴 설페이트, 소듐 테트라데실 설페이트, 소듐 라우릴 사코시네이트, 소듐 디옥틸 설포숙시네이트; 소듐 콜레이트, 소듐 타우로콜레이트, 소듐 글리코콜레이트, 소듐 데옥시콜레이트, 소듐 타우로데옥시콜레이트, 소듐 글리코데옥시콜레이트, 소듐 우르소데옥시콜레이트, 소듐 케노데옥시콜레이트, 소듐 타우로케노데옥시콜레이트, 소듐 글리코 케노데옥시콜레이트, 소듐 콜릴사코시네이트 및 소듐 N-메틸 타우로콜레이트일 수 있다. 바람직하게 상기 제2 계면활성제는 소듐 라우릴 설페이트이다.
인지질, 예를 들어 계란/콩 레시틴, 카디오리핀, 스핑고미엘린, 포스파티딜콜린, 포스파티딜 에탄올아민, 포스파티딘산, 포스파티딜 글리세롤, 포스파티딜 세린.
일반식 RO-PO3-M+를 가지며 R기는 에스테르 형성기, 예컨대, 선택적으로 PEG 모이어티로 치환되어 그를 통해 알킬, 알케닐 또는 아릴기가 인산 모이어티와 결합된, 알킬, 알케닐 또는 아릴기인, 인산 에스테르. R은 장쇄(예컨대, >C9) 알코올 또는 페놀의 잔기일 수 있다. 특정 예는 디에탄올암모늄 폴리옥시에틸렌-10 올레일 에테르 포스페이트, 지방 알코올 또는 지방 알코올 에톡실레이트와 인산 또는 무수물의 에스테르화 생성물을 포함한다.
설페이트 및 설포네이트(특히 이들의 에스테르), 예를 들어 에톡실화된 알킬 설페이트, 알킬 벤젠 설포네이트, α-올레핀 설포네이트, 아실 이세티오네이트, 아실 타우레이트, 알킬 글리세릴 에테르 설포네이트, 옥틸 설포숙시네이트 디소듐, 디소듐 언데실렌아미데오-MEA-설포숙시네이트, 알킬 포스페이트 및 알킬 에테르 포스페이트.
양이온성 계면활성제
계면활성제(제1 및/또는 제2 계면활성제)는 다음의 양이온성 계면활성제에서 선택된 적어도 하나의 양이온성 계면활성제이거나 이를 포함할 수 있다.
헥사데실 브롬화 트리암모늄, 도데실 염화암모늄, 알킬 벤질디메틸암모늄 염, 디이소부틸 페녹시에톡시디메틸 벤질암모늄 염, 알킬피리디늄 염; 베타인(트리알킬글리신): 라우릴 베타인(N-라우릴,N,N-디메틸글리신); 에톡실화된 아민: 폴리옥시에틸렌-15 코코넛 아민, 알킬 -아민/디아민/4차 아민 및 알킬 에스테르.
본 발명의 사용에 적합한 양친매성 중합체의 예는 알킬 글루카미드; 폴리에톡실레이트화된 알킬 에테르로도 알려진 지방 알코올 폴리(에톡실)레이트; 폴리(에톡실)화된 지방산 에스테르(Myrj 또는 Solutol); 지방 아미드 폴리에톡실레이트; 지방 아민 에톡실레이트; 알킬페놀 에톡실레이트; 폴리에톡실화된 소르비탄 에스테르(폴리소르베이트); 폴리에톡실화된 글리세라이드; 또는 폴리-글리세롤 에스테르이다.
유화제
계면활성제는 유화제로 작용할 수 있으며 이러한 계면활성제는 예를 들어: 트리세테아레트-4 포스페이트, 에틸렌 글리콜 팔미토스테아레이트 및 디에틸렌 글리콜 팔미토스테아레이트의 혼합물(예를 들어 상표명 SEDFOSTM 75로 판매); 소르비탄 에스테르, 예컨대 소르비탄 모노올레이트, 소르비탄 모노라우레이트, 소르비탄 모노팔미테이트, 소르비탄 모노스테아레이트(예를 들어 상표명 Span®으로 판매), PEG-8 밀랍왁스, 예컨대 상표명 Apifil®로 판매; 세틸 알코올, 세테트-20 및 스테아레이트-20의 혼합물(예를 들어 EmulcireTM 61 WL 2659); PEG-6 스테아레이트 및 PEG-32 스테아레이트의 혼합물(예를 들어 Tefose® 1500); PEG-6 팔미토스테아레이트, 에틸렌 글리콜 팔미토스테아레이트, 및 PEG-32 팔미토스테아레이트의 혼합물(예컨대 Tefose® 63); 트리글리세롤 디이소스테아레이트(예를 들어 상표명 Plurol Diisostearique®로 판매되는 제품); 폴리글리세릴-3 디올레이트(예를 들어 상표명 Plurol® Oleique로 판매되는 제품)에서 선택된 비이온성 유화제를 포함한다.
바람직한 제1 계면활성제
바람직하게, 계면활성제는 중쇄 또는 장쇄 지방산 모노- 또는 디-글리세라이드 또는 이들의 조합이고 폴리에틸렌글리콜 에테르 또는 에스테르가 아니거나 이를 포함하지 않는다. 계면활성제가 중쇄 또는 장쇄 지방산 모노- 또는 디-글리세라이드 또는 이들의 조합을 포함하고 폴리에틸렌글리콜 에테르 또는 에스테르가 아니거나 이를 포함하지 않는 경우, 중쇄 또는 장쇄 지방산 모노- 또는 디-글리세라이드 또는 이들의 조합은 실질적으로 계면활성제의 전부이다. 예를 들어, 계면활성제는 폴리에틸렌글리콜 에테르 또는 에스테르가 아니거나 이를 포함하지 않는, 중쇄 또는 장쇄 지방산 모노- 또는 디-글리세라이드 또는 이들의 조합을 계면활성제의 80% 초과, 선택적으로 85%, 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 초과의 양으로 포함할 수 있다. 적합하게는, 계면활성제는 실질적으로 트리글리세라이드가 부재한다. 예를 들어, 계면활성제는 10%, 8%, 5%, 3%, 2% 또는 1% 미만의 트리글리세라이드를 포함할 수 있다.
중쇄 지방산 모노-에스테르 또는 디-에스테르는 사슬 탄소 원자로 8 내지 12개를 갖는 지방산을 포함한다. 장쇄 지방산 모노-에스테르 또는 디-에스테르는 사슬 탄소 원자로 적어도 13개, 바람직하게는 13 내지 26개를 갖는 지방산을 포함한다. 장쇄 지방산은 사슬 탄소 원자로 14 내지 22개 또는 사슬 탄소 원자로 16 내지 20개를 선택적으로 가질 수 있다.
모노-글리세라이드 또는 디-글리세라이드 계면활성제는 하나의 지방산에 에스테르화된 하나의 글리세롤 또는 2개의 지방산들에 에스테르화된 하나의 글리세롤을 포함할 수 있으며, 지방산들은 동일하거나 상이할 수 있고, 일반적으로 지방산들은 동일할 것이다. 본 발명의 계면활성제는 폴리에틸렌 글리콜 에테르 또는 에스테르가 아니거나 이를 포함하지 않는 계면활성제이다; 이는 에테르 또는 에스테르 연결로 계면활성제 분자에 결합된 폴리에틸렌글리콜 성분이 없음을 의미한다. 예를 들어 페길화된 지방산 글리세라이드, 예컨대 올레오일 마크로골-6 글리세라이드(Labrafil M1944CS로 시판). 공급되는 계면활성제 조성물 내에 함유된 소량의 폴리에틸렌글리콜(PEG)을 갖는 본 발명의 상업적인 계면활성제가 공급되는 것도 가능하다. 비-결합된 PEG를 함유하는, 달리 말하면 PEG가 부재하는 계면활성제의 이러한 상업적 제제의 사용은 계면활성제가 폴리에틸렌글리콜 에테르 또는 에스테르가 아니거나 이를 포함하지 않는다는 제한에 의해 제외되지 않는다.
계면활성제는 중쇄 또는 장쇄 지방산 모노- 또는 디-글리세라이드 또는 이들의 조합이거나 이들을 포함할 수 있고 폴리에틸렌글리콜 에테르 또는 에스테르가 아니거나 이들을 포함하지 않을 수 있으며, 지방산 에스테르는 포화 또는 불포화이다. 바람직하게는, 지방산은 불포화이다. 불포화 지방산은 1개 또는 2개만의 이중 결합을 함유할 수 있다.
계면활성제가 중쇄 또는 장쇄 지방산 디-글리세라이드인 경우(글리세롤에 2개의 지방산이 에스테르화되었음을 의미함) 계면활성제는 동일하거나 상이한 2개의 지방산을 포함할 수 있다. 예를 들어 2개의 지방산은 둘 다 불포화 또는 둘 다 포화일 수 있다. 대안으로, 2개 중 하나의 지방산은 포화일 수 있고 다른 지방산은 불포화일 수 있다.
바람직하게 계면활성제는 장쇄 모노- 또는 디-글리세라이드 또는 이들의 조합이고 폴리에틸렌글리콜 에테르 또는 에스테르가 아니거나 이를 포함하지 않는다. 더욱 바람직한 계면활성제는 장쇄 모노- 또는 디-글리세라이드 또는 이들의 조합이고 폴리에틸렌글리콜 에테르 또는 에스테르가 아니거나 이를 포함하지 않으며, 지방산은 13 내지 22개의 탄소 원자, 선택적으로 16 내지 20개의 탄소 원자의 사슬 길이를 갖는다. 특히 지방산은 18개의 탄소 원자의 사슬 길이를 가질 수 있다.
일 실시양태에서 계면활성제는 글리세릴 모노카프레이트, 글리세릴 디카프레이트, 글리세릴 모노카프릴레이트, 글리세릴 디카프릴레이트, 글리세릴 카프레이트, 글리세릴 모노카프릴레이트/카프레이트, 글리세릴 카프릴레이트/카프레이트 글리세릴 디카프릴레이트/카프레이트, 글리세릴 모노올레이트/디올레이트, 글리세릴 모노올레이트, 글리세릴 디올레이트, 글리세릴 모노스테아레이트, 글리세릴 디스테아레이트, 글리세릴 모노팔미토스테아레이트, 글리세릴 디팔미토스테아레이트, 글리세릴 모노베헤네이트, 글리세릴 디베헤네이트, 글리세롤 모노리놀레이트, 글리세릴 디리놀레이트, 폴리글리세릴 디올레이트, 프로필렌 글리콜 모노헵타노에이트, 및 이들의 조합에서 선택된다.
바람직한 계면활성제는 글리세릴 모노카프릴레이트/카프레이트, 글리세릴 디카프릴레이트/카프레이트, 글리세릴 모노올레이트, 글리세롤 모노리놀레이트, 글리세릴 디올레이트, 글리세릴 모노스테아레이트, 글리세릴 디스테아레이트, 글리세릴 모노팔미토스테아레이트, 글리세릴 디팔미토스테아레이트, 글리세릴 모노베헤네이트, 글리세릴 디베헤네이트, 글리세릴 모노리놀레이트, 글리세릴 디리놀레이트, 폴리글리세릴 디올레이트 및 이들의 조합에서 선택된 계면활성제이거나 이를 포함할 수 있다.
따라서, 사이클로스포린, 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스, 계면활성제 및 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스 중에 분산된 오일상을 포함하는 조성물이 제공되고, 여기서 계면활성제는 글리세릴 모노카프릴레이트/카프레이트, 글리세릴 디카프릴레이트/카프레이트, 글리세릴 모노올레이트, 글리세롤 모노리놀레이트, 글리세릴 디올레이트, 글리세릴 모노스테아레이트, 글리세릴 디스테아레이트, 글리세릴 모노팔미토스테아레이트, 글리세릴 디팔미토스테아레이트, 글리세릴 모노베헤네이트, 글리세릴 디베헤네이트, 글리세릴 모노리놀레이트, 글리세릴 디리놀레이트, 폴리글리세릴 디올레이트 및 이들의 조합에서 선택된 계면활성제이거나 이를 포함할 수 있다.
계면활성제는 글리세릴 카프릴레이트, 글리세릴 카프레이트, 글리세릴 모노올레이트, 글리세릴 디올레이트, 글리세롤 모노리놀레이트 또는 이들의 조합에서 선택된 계면활성제이거나 이를 포함할 수 있다.
특히 바람직한 계면활성제는 글리세릴 카프릴레이트/카프레이트(Capmul MCM), 글리세릴 모노올레이트/디올레이트(Capmul GMO-50) 및 글리세롤 모노리놀레이트(Maisine 35-1)에서 선택된 계면활성제이거나 이를 포함할 수 있다.
선택적으로, 계면활성제는 글리세릴 모노스테아레이트 EP/NF 및 PEG-75 팔미토스테아레이트의 혼합물(예를 들어 GeltoTM 64)이 아니다. 적합하게는, 계면활성제는 글리세릴 모노스테아레이트의 혼합물이 아니거나 이를 포함하지 않는다.
바람직한 제2 계면활성제
바람직하게 제2 계면활성제는 음이온성 계면활성제이다. 예를 들어, 제2 계면활성제는 알킬 설페이트, 예를 들어 소듐 도데실 설페이트일 수 있다.
제2 계면활성제는 지방산염 또는 담즙염, 예를 들어 소듐 카프로에이트, 소듐 카프릴레이트, 소듐 카프레이트, 소듐 라우레이트, 소듐 미리스테이트, 소듐 미리스톨레이트, 소듐 팔미테이트, 소듐 팔미토올레이트, 소듐 올레이트, 소듐 리시노올레이트, 소듐 리놀레이트, 소듐 리놀레네이트, 소듐 스테아레이트, 소듐 라우릴 설페이트, 소듐 테트라데실 설페이트, 소듐 라우릴 사코시네이트, 소듐 디옥틸 설포숙시네이트; 소듐 콜레이트, 소듐 타우로콜레이트, 소듐 글리코콜레이트, 소듐 데옥시콜레이트, 소듐 타우로데옥시콜레이트, 소듐 글리코데옥시콜레이트, 소듐 우르소데옥시콜레이트, 소듐 케노데옥시콜레이트, 소듐 타우로케노데옥시콜레이트, 소듐 글리코 케노데옥시콜레이트, 소듐 콜릴사코시네이트 및 소듐 N-메틸 타우로콜레이트일 수 있다. 바람직하게 제2 계면활성제는 소듐 라우릴 설페이트이다.
기타 부형제
조성물은 선택적으로 다음의 추가적인 물질 또는 물질의 종류의 하나 이상을 함유한다. 예를 들어, 조성물은 보호제, 예를 들어 단백질 분해 효소 억제제 또는 산 분해에 대한 보호제 또는 둘다(예컨대, 알칼리, 예를 들어 수산화나트륨); 접착제 엔티티(entity), 예를 들어, 점막- 또는 생-접착제; 유효 성분의 용해도를 최대화하기 위한 부형제; 유효 성분의 GIT에서의 투과성을 최대화하기 위한 부형제를 함유할 수 있다. 상피 장벽의 투과성을 증진시키는 일반적인 부형제는 소듐 카프레이트, 소듐 도데카노에이트, 소듐 팔미테이트, SNAC, 키토산 및 이들의 유도체, 지방산, 지방산 에스테르, 폴리에테르, 담즙염, 인지질, 알킬 폴리글루코사이드, 하이드록실라아제 억제제, 항산화제(예컨대, 아스코르브산) 및/또는 산화질소 공여제를 포함하나 이에 제한되지 않는다. 앞의 목록은 회장에서의 투과성을 향상시키기 위해 특히 중요하다.
결장에서의 투과성을 증진하기 위해, 일반적인 부형제는 소듐 카프레이트, 소듐 도데카노에이트, 소듐 팔미테이트, SNAC, 키토산 및 이들의 유도체, 지방산, 지방산 에스테르, 폴리에테르, 담즙염, 인지질, 알킬 폴리글루코사이드, 당 에스테르, 하이드록실라아제 억제제, 항산화제(선택적으로 커큐미노이드, 플라보노이드, 커큐민, 베타-카로텐, α-토코페롤, 아스코르브산, 아스코르브산염, 라자로이드, 카베딜롤, 부틸화된 하이드록시톨루엔, 프로필 갈레이트, 하이드랄라진, 카르노스산, 비타민 E, 레시틴 오보레시틴(비텔린), 베지레시틴, 푸마르산 또는 시트르산에서 선택됨) 및/또는 다양한 약학적 유효 성분에 공유 결합으로 부착된 산화질소 공여 기를 포함하는 산화질소 공여제를 포함하나 이에 제한되지 않는다. 조성물은 GIT, 예컨대 소장 또는 결장에서의 국소 조직 생체이용률을 향상시키기 위해 PgP 펌프 억제제(선택적으로 NSAIDs, 시메티딘, 오메프라졸, 비타민 E TPGS, 베라피밀, 퀴니딘, PSC833, 암프레나비르(APV), 인디나비르(IDV), 넬피나비르(NFV), 리토나비르(RTV) 및 사퀴나비르(SQV)에서 선택됨)를 포함하되, 이에 제한되지 않는, 유출 펌프 억제제, 및, 선택적으로 정유(essential oil), 시메티딘, 계면활성제(예를 들어 크레모포어), 오일, 오메프라졸, 베라파밀, 리토나비르 및 카바마제핀 또한 식물 추출물, 예컨대 감귤 과실 추출물에서 선택된, 시토크롬 P450 억제제를 포함하되, 이에 제한되지 않는, 대사 억제제를 포함하는, 부형제 또는 다른 활성 약학적 또는 다른 성분을 더 포함할 수 있다. 조성물은 따라서 조성물의 투여 후 사이클로스포린의 대사를 더 감소시키기 위해 P450 억제제를 더 포함할 수 있다. P450 억제제는 사이클로스포린의 장 및/또는 간 대사를 억제하는 작용을 할 수 있다. 조성물은 PgP 억제제를 더 포함할 수 있다. 선택적으로 조성물은 P450 억제제 및 PgP 억제제를 포함할 수 있다.
조성물은 회장 및 결장을 포함하는 위장관에 걸쳐 유효 성분, 예컨대 사이클로스포린 A 또는 다른 면역억제제의 치료적 잠재력을 증진하기 위해, 흡수 제한제, 정유, 예컨대 오메가 3 오일, 천연 식물 추출물, 예컨대 님, 이온 교환 수지, 세균 분해성 공액 링커(conjugation linker), 예컨대 아조 결합, 다당류, 예컨대 아밀로오스, 구아 검, 펙틴, 키토산, 이눌린, 사이클로덱스트린, 콘드로이틴 설페이트, 덱스트란, 구아 검 및 로커스트 콩 검, 핵 인자 카파 B 억제제, 산, 예컨대 푸마르산, 시트르산 및 기타, 및 이들의 변형을 포함하나 이에 제한되지 않는 부형제를 더 포함할 수 있다.
조성물은 소장과 같은 GIT 내에서 특정한 유효 성분, 예컨대 사이클로스포린 또는 다른 면역억제제의 흡수와 연관된 전신 부작용을 감소시키기 위해 항산화제, 예컨대 커큐미노이드, 플라보노이드를 포함하나 이에 제한되지 않는, 또는 더욱 특히 커큐민, 베타-카로텐, α-토코페롤, 아스코르베이트 또는 라자로이드를 포함하는 부형제를 더 포함할 수 있다.
조성물은 항산화제(예컨대, 아스코르브산 또는 BHT - 부틸 하이드록시 톨루엔), 미각 차폐제 또는 감광 성분 또는 광보호 성분을 더 또는 별개로 포함할 수 있다. 항산화제는 수상(예컨대 친수성 항산화제) 또는 코어의 분산상(예컨대 소수성 항산화제, 예컨대 비타민 E) 중에, 예를 들어 최대 1 중량%, 바람직하게 0.01 내지 0.50 중량%, 더욱 바람직하게 0.10 내지 0.20 중량%로 혼입될 수 있다.
조성물은, 특히 회장 및/또는 결장, 예컨대 결장에 표적화된 면역억제제의 경우와 같이, 조성물이 면역억제제를 함유하는 경우, 면역 증진 영양소, 예컨대 비타민 A/B/C/E; 카로테노이드/베타-카로텐 및 철, 망간, 셀레늄, 아연을 더 포함할 수 있다. 이러한 영양소는 조성물 중에 존재할 수 있고, 또는 조성물이 코팅을 갖는 경우, 예를 들어 비드 형태인 경우, 영양소는 코팅 중에 존재할 수 있다.
조성물은 또한 착색제, 미각 차폐제, 희석제, 충전제, 결합제 등을 포함하는, 약학적 조성물에 사용되는 기타 잘 알려진 부형제를 포함할 수 있다. 이러한 선택적인 추가 성분의 존재는 물론 적용되는 특정 투약 형태에 의존한다.
형상, 크기 및 기하학
본 발명의 조성물은 제한이 없는 개수의 형상 및 크기로 형성될 수 있다. 조성물의 제조 과정을 기재하는 아래의 부분에서, 유체 분산을 성형틀에 붓거나 또는 도입하여 경화하거나 경화를 야기하는 것을 포함하는 다양한 방법이 제시된다. 따라서 조성물은 원하는 형태에 따라 적절한 성형틀을 제작함으로써(예컨대 디스크, 환약 또는 정제 형태로) 제작될 수 있다. 그러나, 성형틀의 사용이 필수는 아니다. 예를 들어, 조성물은 예컨대 유체 분산을 평평한 표면에 부어 경화하거나 경화를 야기함으로써 시트로 형성될 수 있다.
바람직하게, 조성물은 아래에 기재된 바와 같이 제조된 구 또는 구-유사 형상의 형태일 수 있다. 바람직하게, 본 발명의 조성물은 실질적으로 구형인, 심리스(seamless) 미니비드 형태이다. 미니비드 표면 상의 이음매(seam)의 부재는 더욱 일관된 코팅, 유동성 등을 허용하기 때문에 예컨대 추가의 처리, 예를 들어 코팅에서 이점이 된다. 미니비드 상의 이음매의 부재는 또한 비드 용출의 일관성을 증진한다.
본 발명에 따른 미니비드의 바람직한 크기 또는 지름 범위는 미니비드의 경구 투여시 위에서의 정체를 피하도록 선택될 수 있다. 더 큰 투약 형태는 위에서 다양한 기간 동안 정체되고 음식과 함께여야만 유문 괄약근을 통과하는 반면 작은 입자는 음식과 무관히 유문을 통과한다. 적합한 크기 범위의 선택(아래 참조)은 따라서 투약-후 치료 효과를 더욱 일관적으로 만든다. 단일 대형 모놀리식(monolithic) 경구 형태, 예컨대, 전통적인 압축 알약과 비교하면, 위장관 내로 방출되는 비드 집단(본 발명의 투약 형태에서 예상된 바와 같이)은 더욱 큰 장 내강 분산을 허용하여 더 큰 상피 면적에 노출됨으로써 흡수를 증진하며, 위장관의 특정 부분, 예컨대 결장으로의 더 큰 국소 코팅을 달성한다. 회장-맹장 연결부에서의 체류 시간의 감소는 또다른 잠재적인 이점이다.
본 발명의 조성물은 바람직하게 가능한 매트릭스 재료의 얇은 스킨(skin)을 제외하고 및 임의의 코팅 층을 제외하고 내부적으로(즉, 단면적으로) 균일함을 의미하는 모놀리식(monolithic)이다.
본 발명의 제제로서 제공되는 미니비드는 일반적으로 0.5 mm 내지 10 mm 범위의 지름이며 상한은 바람직하게 5 mm, 예컨대 2.5 mm이다. 특히 유용한 상한은 2 mm 또는 1.7 mm이다. 하한은 바람직하게 1 mm, 예컨대 1.2 mm, 더욱 바람직하게 1.3 mm, 가장 바람직하게 1.4 mm일 수 있다. 일 실시양태에서 지름은 0.5 내지 2.5 mm, 예를 들어 1 mm 내지 3 mm, 1 mm 내지 2 mm, 1.2 mm 내지 3 mm 또는 1.2 mm 내지 2 mm이다. 미니비드는 최소 크기와 무관히, 2.5 mm 이하의 지름을 가질 수 있다. 비드는 최소 크기와 무관히, 2 mm 이하의 지름을 가질 수 있다.
본원에 기재된 미니비드는 종횡비 1.5 이하, 예컨대 1.3 이하, 예를 들어 1.2 이하 및, 특히 1.1 내지 1.5, 1.1 내지 1.3 또는, 1.1 내지 1.2를 가질 수 있다. 본원에 기재된 미니비드 집단, 예컨대 적어도 10개의 비드는, 평균 종횡비 1.5 이하, 예컨대 1.3 이하, 예를 들어 1.2 이하 및, 특히, 1 내지 1.5, 1 내지 1.3 또는 1 내지 1.2를 가질 수 있다. 본 문단에 언급된 종횡비는 선택적으로 코팅된 미니비드 및 선택적으로 코팅되지 않은 미니비드에 적용된다. 평균 종횡비는 적합하게 미니비드 집단에 대하여, 예컨대 적어도 10개의 미니비드에 대하여, 입자 크기 분석기, 예를 들어 Innopharma Labs, Dublin 18, Ireland의 Eyecon™ 입자 특성계를 사용해 확인된다.
개시된 미니비드는, 따라서, 앞서 개시된 크기 및 1 내지 1.5의 종횡비를 가질 수 있다. 개시된 비드는 앞서 개시된 크기 및 1.3 이하, 예를 들어 1.2 이하 및, 특히, 1.1 내지 1.5, 1.1 내지 1.3 또는, 1.1 내지 1.2의 종횡비를 가질 수 있다.
비드 크기(지름)은 임의의 적합한 기술, 예를 들어 현미경, 체, 침강, 광학 감지 지역(optical sensing zone) 방법, 전기 감지 지역(electrical sensing zone) 방법 또는 레이저 광 산란으로 측정될 수 있다. 본 명세서의 목적을 위해, 비드 크기는 USP General Test <786> Method I (USP 24-NF 18, (U.S. Pharmacopeial Convention, Rockville, MD, 2000), pp. 1965-1967)에 따른 분석 체로 측정된다.
실시양태에서, 본 발명의 미니비드는 단분산이다. 다른 실시양태에서, 본 발명의 미니비드는 단분산이 아니다. "단분산"은 비드 집단(예컨대 적어도 100개, 더욱 바람직하게 적어도 1000개)에 대하여 미니비드가 35% 이하, 선택적으로 25% 이하, 예를 들어 15% 이하, 예컨대 10% 이하 및 선택적으로 8% 이하, 예컨대 5% 이하의 이들의 지름의 변동 계수(CV)를 갖음을 의미한다. 중합체 비드의 특정 종류는 25% 이하의 CV를 갖는다. 본 명세서에서 지칭될 경우 CV는 100배(표준편차)를 평균으로 나눈 것으로 정의되며 "평균"은 평균 입자 지름이고 표준편차는 입자 크기의 표준편차이다. 이러한 CV의 확인은 체를 사용해 실시할 수 있다.
본 발명은 35%의 CV 및 평균 지름 1 mm 내지 2 mm, 예컨대 1.5 mm를 갖는 미니비드를 포함한다. 또한 본 발명은 20%의 CV 및 평균 지름 1 mm 내지 2 mm, 예컨대 1.5 mm를 갖는 미니비드 및 10%의 CV 및 평균 지름 1 mm 내지 2 mm, 예컨대 1.5 mm를 갖는 미니비드를 포함한다. 실시양태의 일 분류에서, 90%의 미니비드는 0.5 mm 내지 2.5 mm, 예컨대 1 mm 내지 2 mm의 지름을 갖는다.
투약 형태
본 발명의 조성물은 약학적 사용에 적합한 경구 투여 투약 형태로 제조될 수 있다. 제제가 미니비드 형태인 실시양태에서, 본 발명은 예를 들어 캡슐, 정제, 스프링클 또는 사쉐로서 복수의 미니비드를 포함하는 투약 형태를 제공한다. 미니비드는 또한 직장으로 투여되거나 질 투여 조성물, 예를 들어 관장 또는 좌약일 수 있다. 조성물, 예를 들어 미니비드 형태는 좌약 또는 관장 조성물을 제공하기 위해 적합한 매질 중에 혼합될 수 있다. 좌약 및 관장으로 적합한 매질은 잘 알려져 있으며 예를 들어, 좌약으로서 낮은 녹는점의 왁스 또는 관장 조성물로서 적합한 수성 또는 오일계 매질을 포함한다.
실시양태에서 비드 집단을 포함하는 투약 형태는 예를 들어, 예를 들어 위에서 비드를 방출하는 단일 경질 젤 캡슐에 함유된 단일 단위 투약 형태로 제시될 수 있다. 대안으로 비드는 비드를 식품 상에 또는 음료 내에 뿌려지도록 하거나 공급(feeding) 튜브 예를 들어 비위 튜브(naso-gastric tube) 또는 십이지장 공급(feeding) 튜브를 통해 투여되도록 하는 사쉐 또는 기타 용기로 제시될 수 있다. 대안으로, 비드는 예를 들어 비드 집단이 아래 기재된 바와 같이 단일 정제로 압축되는 경우, 정제로서 투여될 수 있다. 대안으로, 예컨대 병 뚜껑을 비틀면, 비드가 병 또는 바이알의 유체 또는 기타 내용물 내로 방출되어 비드가 교반으로 또는 교반 없이 이러한 내용물 중에 분산(또는 용해)되도록 비드는 충진되거나, 예컨대 전문가용 병 뚜껑(cap)으로 압축되거나 또는 그렇지 않으면 전문가용 병 뚜껑 또는 밀봉 용기(또는 밀봉될 용기)의 다른 요소 내의 공간을 충진될 수 있다. 병 또는 바이알의 유체 또는 기타 내용물은 사이클로스포린 조성물과 다른 유효 성분의 편리한 공투여를 용이하게 하기 위해 선택적으로 하나 이상의 추가의 유효 성분을 함유할 수 있다. 예는 Humana Pharma International (HPI) S.p.A, Milan, Italy에서 제작된 Smart Delivery Cap이다. 하나 이상 미니비드 집단을 포함하는 실시양태에서, 미니비드 집단은 동일한 투약 형태로 제형화될 수 있고 또는 별도의 투약 형태로 제형화될 수 있으며, 투약 형태는 선택적으로 동일하거나 상이할 수 있다.
투약 형태는 (당업자에 알려진 적절한 오일 또는 분말계 결합제 및/또는 충진제와의) 압축을 통해 본 발명의 비드가 더 큰 질량의 비드를 생성하도록 더 성장될 수 있는 방식으로 제형화될 수 있다. 더 큰(예컨대, 압축된) 질량은 자체로 알약 형상, 정제 형상, 캡슐 형상 등을 포함하는 다양한 형상을 취할 수 있다. 이러한 버전의 비드 실시양태가 해결하는 특정 문제점은 분말 또는 펠렛으로 충진된 경질 젤 캡슐에서 일반적으로 발견되는 "죽은 공간"(정착된 입자 내용물 상부) 및/또는 "빈 공간"(입자 내용물 요소 간)이다. 이러한 죽은/빈 공간을 갖는 펠렛- 또는 분말-충진 캡슐에서, 환자는 만약 캡슐이 이러한 죽은 공간을 함유하지 않을 경우 필요할 수 있는 것보다 더 큰 캡슐을 삼킬 필요가 있다. 본 발명의 본 실시양태의 비드는 어떠한 캡슐 또는 쉘에도 바람직한, 크게 감소된, 예컨대 본질적으로 존재하지 않는, 죽은/빈 공간이 남겨진 내부 형태를 갖기 위해 캡슐로 용이하게 압축될 수 있다. 대안으로 죽은 또는 빈 공간은 비드를 비히클, 예컨대, 불활성일 수 있거나, 기능적 성질, 예컨대, 투과성 증진 또는 증진된 용출을 가질 수 있거나 비드 중의 임의의 유효 성분과 동일 또는 상이한 유효 성분을 포함할 수 있는 오일 중에 현탁함으로써 유리하게 사용될 수 있다. 예를 들어, 경질 젤라틴 또는 HPMC 캡슐은 코팅되지 않은 및/또는 코팅된 비드와 조합된 액체 매질로 충진될 수 있다. 액체 매질은 본원에 기재된 하나 이상의 계면활성제 상 성분이거나 하나 이상의 계면활성제일 수 있다. 특히 바람직하되 비제한적인 예는 옥수수유, 소르비탄 트리올레이트(상표명 SPAN 85로 시판), 프로필렌 글리콜 디카프릴로카프레이트(상표명 Labrafac로 시판), 2-(2-에톡시에톡시)에탄올(상표명 Transcutol P로 시판) 및 폴리소르베이트 80(상표명 Tween 80으로 시판)이다.
대표적인 실시양태에서 투약 형태의 비드는 본원에 기재된 바와 같이 제조되며 예를 들어 적어도 다음의 재료를 함께 혼합함으로써 제조된다: 하이드로겔-형성 중합체; 오일상, 중쇄 또는 장쇄 지방산 모노- 또는 디-글리세라이드 또는 이들의 조합이거나 이를 포함하는 계면활성제로서, 계면활성제는 폴리에틸렌글리콜 에테르또는 에스테르가 아니거나 이를 포함하지 않는 계면활성제, 및 사이클로스포린 A, 적합하게 오일상, 예컨대 액체 지질에 용해되어 하이드로겔-형성 중합체 중에 사이클로스포린 A의 분산을 형성하는 사이클로스포린 A. 분산은 단일 오리피스 노즐로부터 적합한 냉각 액체로 방출됨으로써 고형화된 비드 내에 고정된다. 냉각 액체의 제거 후 비드는 변형 방출 코팅(제2 코팅)(적합하게 변형 방출 코팅 아래의 서브 코트와 함께)으로 코팅되고, 코팅된 비드는 그 후 선택적으로 약학적 사용에 적합한 젤라틴 또는 HPMC 캡슐로 충진된다.
적합하게 투약 형태는 0.1 mg 내지 1000 mg, 선택적으로 1 mg 내지 500 mg, 예를 들어 10 mg 내지 300 mg, 15 mg 내지 300 mg, 또는 25 내지 250 mg, 적합하게 약 15 mg, 약 25 mg, 약 35 mg, 약 50 mg, 약 75 mg, 약 100 mg, 약 150 mg, 약 180 mg, 약 200 mg, 약 210 mg 또는 약 250 mg 사이클로스포린 A를 함유하는 경구 투여를 위한 단위 투약 형태로 제조된다.
제제의 함량 및 분포 확인
본 발명에 따른 조성물의 하나 이상의 성분의 정체(identity) 및/또는 분포는 당업자에게 알려진 임의의 방법으로 확인될 수 있다. 조성물의 하나 이상의 성분의 분포는, 예를 들어, 근적외선(NIR) 화학 영상 기술로 확인될 수 있다. NIR 화학 영상 기술은 조성물, 예를 들어 미니비드의 표면 또는 단면의 영상을 생성하는 데 사용될 수 있다. 이 기술로 생성된 영상은 조성물의 하나 이상의 성분의 분포를 보여 준다. NIR 화학 영상 기술에 더하여, 미니비드와 같은 조성물의 하나 이상의 성분의 분포는, 예를 들어, 비행시간 이차 이온 질량분석(ToFSIMS)으로 확인될 수 있다. ToFSIMS 영상은 조성물 내의 하나 이상의 성분의 분포를 밝힐 수 있다. ToFSIMS 분석 또는 NIR 분석으로 생성된 영상은 조성물의 표면 또는 조성물의 단면에 걸친 성분 분포를 보여줄 수 있다. 본 문단에 기재된 방법은 예를 들어, 중합체 매트릭스, 예컨대 건조된, 콜로이드, 용액 또는 분산을 포함하는 조성물에 적용할 수 있다.
제조 과정
본 발명의 제제를 제조하기 위해 다양한 방법이 사용될 수 있다.
제제가 수불용성 중합체 매트릭스 중의 유효 성분을 포함하는 경우의 양태에서, 코어를 제조하는 기본적인 방법은 매트릭스 재료, 예를 들어 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스 재료(예컨대, 폴리(아미드), 폴리(아미노산), 히알루론산; 지질단백질; 폴리(에스테르), 폴리(오르토에스테르), 폴리(우레탄) 또는 폴리(아크릴아미드), 폴리(글리콜산), 폴리(락트산) 및 대응되는 공중합체(폴리(락타이드-코-글리콜라이드산; PLGA); 실록산; 폴리실록산; 디메틸실록산/메틸-비닐실록산 공중합체; 폴리(디메틸실록산/메틸비닐실록산/메틸수소실록산) 디메틸비닐 또는 트리메틸 공중합체; 실리콘 중합체; 알킬 실리콘; 실리카, 규산알루미늄, 규산칼슘, 규산알루미늄마그네슘, 규산마그네슘, 규조류 실리카 기타 본원의 다른 곳에서 더욱 일반적으로 기재된 바와 같음)의 유체 형태와, 유효 성분을 혼합하여 현탁액, 용액 또는 콜로이드 형태를 취할 수 있는 혼합물을 형성하는 것이다. 혼합물은 조성물 또는 코어를 형성하도록 처리된다. 예를 들어 조성물은 성형 또는 핫-멜트 압출 과정을 사용해 비드를 형성하도록 원하는 형태로 형상화될 수 있다.
NFAT 억제제, 오일상 및 수용성 중합체 매트릭스를 포함하는, 조성물 또는 특정 실시양태에서 코어를 제조하는 방법이 이하 기술된다. 일반적으로 이들 코어는 코팅된다. 조성물은 또한 선택적으로 계면활성제를 포함한다.
일반적으로, 본원에 기재된 제조 과정은 액체(들)의 혼합을 포함한다. 이러한 혼합 과정은 액체 상태로 혼합되는 물질들이 액체 형태인 온도에서 실시되어야 한다. 예를 들어, 열가역적 겔화제는 이들이 액체 상태인 온도, 예를 들어 50 내지 75℃, 예를 들어 50 내지 70℃, 또는 55-75℃, 예컨대 60-70℃ 및 특히 수성 젤라틴을 포함하는 제제를 혼합하는 경우의 특정 양태에서 약 55℃ 또는 65℃에서 혼합되어야 한다. 유사하게 제제의 기타 성분은 그 성분 예를 들어 분산상에 사용될 수 있는 계면활성제 또는 왁스는 성분을 융해하기 위해 가열이 필요할 수 있다.
본원에 개시된 바와 같이, 오일상, 하이드로겔 형성 중합체 및 NFAT 억제제(예를 들어 사이클로스포린) 및 선택적으로 계면활성제를 포함하는 조성물 또는 코어는 예를 들어 물, 하이드로겔 형성 중합체 및 선택적으로 제2 계면활성제를 포함하는 재료를 혼합하여 수성 연속상을 형성하고, 분산상을 혼합함으로써 제조될 수 있다. 적어도 하나의 수상 및 분산상은 NFAT 억제제(예를 들어 사이클로스포린)을 포함하며, NFAT 억제제는 함유되는 상에 용해될 수 있고, 예를 들어 양쪽 상은 함께 혼합되기 전 투명한 액체일 수 있다. 바람직하게, 분산상(상기 오일상)은 콜로이드를 형성하기 위해 수상과 함께 NFAT 억제제(예를 들어 사이클로스포린)(예를 들어 오일, 선택적인 용매, NFAT 억제제 및 제1 계면활성제를 포함하는 분산상)를 포함할 수 있다. 콜로이드는 에멀전 또는 마이크로에멀전의 형태를 가질 수 있으며 분산상은 수성 연속상 중에 분산된다. 이 콜로이드는 선택적으로 본 발명의 액체 조성물을 나타낼 수 있다. 본 발명의 조성물 또는 코어를 제조하기 위해, 하이드로겔 형성 중합체는 그 후 겔화하도록 야기 또는 허용되어 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스를 형성한다. 적합하게, 과정은 조성물을 원하는 형태, 예컨대 비드(또는 미니비드로 호칭)로의 제형화 또는 처리를 포함하며, 형성 과정은 성형을 포함할 수 있으나 바람직하게 수성 콜로이드를 단일 오리피스 노즐을 통해 방출하여 액적을 형성하고 냉각 매질, 예컨대 물과 혼화되지 않는 냉각 액체를 통과하도록 야기 또는 허용하여, 액적이 냉각되어 예컨대 비드를 형성하는 것을 포함한다.
재료의 혼합은 수성 예비혼합물(또는 수상 또는 연속상) 및 분산상 예비혼합물(예컨대 오일상 예비혼합물)의 혼합을 포함할 수 있고, 수성 예비혼합물은 물 및 수용성 물질을 포함하고 분산상 예비혼합물은 계면활성제 및 NFAT 억제제(예를 들어 사이클로스포린)을 함유하는 비히클을 포함할 수 있다. 비히클은 소수성 액체, 예를 들어 액체 지질일 수 있고, 또는 자기조립 구조를 형성하기 위한 재료, 예를 들어 계면활성제이거나 이를 포함할 수 있다. 특히 분산상 예비혼합물은 사이클로스포린 A, 제1 계면활성제, 오일 및 다른 지용성 성분, 예를 들어 선택적인 용매를 포함할 수 있다. 예비혼합물은 앞서 언급한 바와 같이, 형성하려는 상에 적합한 하나 이상의 계면활성제를 함유할 수 있으며, 예를 들어 수성 예비혼합물은 제2 계면활성제를 포함할 수 있다.
수성 예비혼합물은, 수용성 성분, 즉, 하이드로겔 형성 중합체 및 수용성 부형제 및 선택적으로 NFAT 억제제(바람직하게 NFAT 억제제가 수용성일 때)의 수 중 용액을 포함하거나 종종 이로 이루어진다. 수성 예비혼합물은, 본 명세서의 다른 곳에 기재된 바와 같은, 하이드로겔 형성 중합체를 위한 가소제를 포함할 수 있다. 수성 예비혼합물은, 예컨대 중합체 점도를 증가시키고 유화를 향상시켜 처리 중 유효 성분의 침전을 방지하는 것을 돕는, 제2 계면활성제를 포함할 수 있다. SDS는 이러한 계면활성제의 예이다. 어쨌든, 수성 예비혼합물의 성분은 성분을 용해/융해하기 충분한 기간 동안, 예를 들어, 완전한 수성 예비혼합물을 형성하기 위해 1시간 내지 12시간 동안 교반될 수 있다.
분산상 예비혼합물은 분산으로서 또는 앞서 기재된 바와 같이 바람직하게 비히클(예를 들어 오일상) 중의, 예를 들어 오일을 포함하는 액체 중 또는 자기조립 구조의 성분을 포함하는 액체 중의 용액으로서, 제1 계면활성제 및 NFAT 억제제(바람직하게 NFAT 억제제가 분산상 중 가용성일 때, 예를 들어 오일 가용성)를 포함할 수 있다. 예를 들어 오일상 예비혼합물은 따라서 액체 지질, 예를 들어 중쇄 트리글리세라이드(MCT) 제제일 수 있고, 중쇄 트리글리세라이드는 C6-C12 지방산에서 선택된 적어도 하나의 지방산의 하나 이상의 트리글리세라이드이고, 및 사이클로스포린 A 및 계면활성제는 중 또는 장쇄 지방산 모노- 또는 디-글리세라이드이거나 이를 포함한다. 적합하게 오일상 예비혼합물은 주위 온도에서 교반되어 오일 및 계면활성제 중의 NFAT 억제제 용액을 형성한다. 일부 실시양태에서, 오일상 예비혼합물의 성분은 예를 들어, 10분 내지 3시간의 기간 동안 혼합(또는 교반)되어 예비혼합물을 형성한다.
2개의 예비혼합물은 예를 들어, 몇 초 내지 1시간, 예를 들어 30초 내지 1시간, 적합하게 5분 내지 1시간 동안 조합 및 교반되어, 수성 하이드로겔 형성 중합체 중의 분산상의 분산을 형성하여 본 발명의 액체 조성물을 형성할 수 있다. 분산은 그 후 더 처리되어 조성물 또는 코어를 형성할 수 있다. 2개의 예비혼합물은 혼합 용기 중의 교반에 의해 분산으로 조합될 수 있다; 이들은 추가로 또는 대안으로 연속 유동 혼합기 중에서 조합될 수 있다.
NFAT 억제제 및 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스를 포함하는 조성물 또는 코어의 기본적인 제조 방법은, 따라서, 하이드로겔 형성 중합체(또는 중합체의 혼합물)의 액체 형태(바람직하게 용액)와 NFAT 억제제, 계면활성제(모호함을 피하기 위해 제1 계면활성제) 및 오일상(및 임의의 다른 분산상 성분)을 혼합하여, 이후의 과정에서 하이드로겔을 형성하는, 중합체의 분산을 형성하는 것이다. 방법은 보통 수성 중합체 상 예비혼합물 및 분산상 예비혼합물을 함께 혼합하는 과정을 포함한다. 요구되는 최종 조성물(본원의 다른 곳에 기재된 바와 같은)을 고려하여, 분산상 예비혼합물 및 액체 하이드로겔 형성 중합체(즉, 하이드로겔 형성 중합체의 용액 또는 현탁액, 수상)은 중량비 1:1 내지 1:10, 특히 1:4 내지 1:9, 예컨대 1:5 내지 1:7로 혼합될 수 있다. 일반적으로 당업자에게 친숙할 바와 같이 수상 중 분산상의 분산을 달성하여 콜로이드를 형성하기 위해(예를 들어 수성 하이드로겔이 연속상인 에멀전 또는 마이크로에멀전 형태일 수 있음), 자기적 또는 기계적 시스템, 예컨대 오버헤드 교반기를 사용하여 성분의 완만한 교반만이 요구된다. 연속적인 교반이 바람직하다. 혼합은 또한 인-라인 혼합 시스템을 사용해 달성될 수 있다. 임의의 적절한 실험실 교반 기구 또는 산업 규모 혼합기가 본 목적을 위해 이용될 수 있으며 예를 들어 Magnetic Stirrer(Stuart 제조) 또는 Overhead Stirrer(KNF 또는 Fisher 제조)이다. 성분, 예컨대 물의 증발을 최소화하는 방향으로 장치를 설치함이 바람직하다. 본 발명의 과정의 일 실시양태에서, 이러한 목표를 달성하기 위해 교반에 대해 밀폐된 시스템을 이용하는 것이 바람직하다. 인-라인 혼합은 밀폐 시스템 처리에 특히 적합할 수 있다. 적합하게 2개 성분의 혼합은 50 내지 70℃, 또는 55-75℃, 예컨대 60-70 ℃의 온도에서 일어난다.
2개의 상의 혼합은 콜로이드를 생성하며 수성 하이드로겔 형성 중합체는 수성 연속상이며 수상에 가용성이 아닌 성분은 분산상이다. 콜로이드는 에멀전 또는 마이크로에멀전 형태를 가질 수 있다.
콜로이드는 앞서 기재된 바와 같이 분산상 예비혼합물과 액체 수상을 교반과 함께 조합하여 형성된다. 그 후 생성된 콜로이드성 분산은 앞서 기재된 고형화된 코어 제제를 가지나 코어 제제에 여전히 존재하는 액체 물을 가진다.
용어 "건조"의 사용으로, 건조 단계가 건조된 코어를 생산하기 위해 필수적임을 암시하려는 것이 아니며(그러나 이것이 제외되지는 않는다) 오히려 고체 또는 고형화된 수성 외부 상이 실질적으로 물을 갖지 않거나 이용가능한 물을 갖지 않는다는 것이다. 수상(외부 상)의 고형화는 화학적(예컨대, 가교) 또는 물리적(예컨대 냉각 또는 가열)인 것을 포함한 다양한 수단을 통해 일어날 수 있다. 이러한 측면에서, 심지어 특정한 양태에서, 코어에서 물이 대부분 부재함(또는 가교된 매트릭스 내에 갇힘)에도 불구하고, 용어 "수상"은 본 문서에서 코어의 외부(연속) 상을 가리키기 위해 사용된다. 코어의 외부 상은 그러나 수용성이며 수성 매질에 용해된다.
본 발명의 조성물을 겔화 또는 고형화하는 방법은 당업계에 알려져 있다. 예를 들어, 독자는 WO2015/067763, 특히 페이지 81-88로 안내된다. 이 문서의 전체 내용이 본원에서 참조로 통합된다.
따라서, 본 발명은 NFAT 억제제, 계면활성제, 및 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스 중의 오일상을 포함하는 본 발명의 조성물 또는 코어의 제조 과정을 포함하며, 과정은 물 및 수용성/수분산성 재료(따라서 하이드로겔-형성 중합체를 포함)를 포함하는 수성 예비혼합물 및 오일상, NFAT 억제제 및 계면활성제, 선택적으로 다른 부형제(예컨대 오일(들) 및 지용성/지분산성 재료)를 포함하는 분산상 예비혼합물(예컨대 오일상 예비혼합물)을 형성하는 단계, 및 2개의 예비혼합물을 조합하여 하이드로겔 형성 중합체를 포함하는 수상 내의 콜로이드(분산상)을 형성하는 단계를 포함하는 제조 방법을 포함함이 이해될 것이다. 콜로이드는 그 후 형상을 가진 단위, 예를 들어 유효 성분을 포함하는 코어를 제공하는 비드로 형성될 수 있다. 더욱 특히 앞서 정의된 조성물 또는 코어의 제조는 다음을 포함할 수 있다:
(i) 수용성 성분(예컨대 본원의 다른 곳에 기재된 바와 같이 하이드로겔 형성 중합체, 임의의 수용성 부형제(들))의 수 중 용액을 포함하는 수상 예비혼합물을 형성하는 단계;
(ii) 선택적으로 기타 분산상 성분(예컨대, 본원의 다른 곳에 기재된 바와 같이 계면활성제, 용매 등)과 함께, 액체 지질 중의 NFAT 억제제, 및 계면활성제의 분산액 또는 바람직하게 용액을 일반적으로 포함하는 분산상 예비혼합물을 형성하는 단계;
(iii) 수상 예비혼합물(i) 및 분산상 예비혼합물(ii)을 혼합하여 콜로이드를 형성하는 단계;
(iv) 노즐을 통해 콜로이드를 방출하여 액적을 형성하는 단계;
(v) 하이드로겔 형성 중합체가 겔화 또는 고형화하도록 야기 또는 허용하여 수용성 중합체 매트릭스를 형성하는 단계; 및
(vi) 고체를 건조하는 단계.
본 발명의 액체 조성물의 제조는 다음을 포함할 수 있다:
(i) 수용성 성분(예컨대 본원의 다른 곳에 기재된 바와 같이 하이드로겔 형성 중합체, 임의의 수용성 부형제(들))의 수 중 용액을 포함하는 수상 예비혼합물을 형성하는 단계;
(ii) 선택적으로 다른 분산상 성분(예컨대, 본원의 다른 곳에 기재된 바와 같이 계면활성제, 용매 등)과 함께, 액체 지질 중의 NFAT 억제제, 및 제1 계면활성제의 분산액 또는 바람직하게 용액을 일반적으로 포함하는 분산상 예비혼합물을 형성하는 단계; 및
(iii) 수상 예비혼합물(i) 및 분산상 예비혼합물(ii)을 혼합하여 콜로이드를 형성하는 단계.
일부 제조 과정은 아래의 단계 (A) 내지 (D)를 포함하거나, 대안으로, 제조 과정은 단계 (A) 내지 (D)의 단일한 1개 또는 임의의 조합을 포함할 수 있다.
(A) 수상의 예시적 제조
수상 성분을 물, 예컨대 정제수에, 교반, 예컨대 초음파 또는 젓기 하에 가한다. 온도를, 예컨대 60-70 ℃ 및 특히 65 ℃로 점차 상승시켜 고체의 완전한 용해를 달성한다. 수상 성분은 하이드로겔 형성 중합체, 예컨대 젤라틴 또는 한천 및 선택적으로 하나 이상의 다른 부형제, 예를 들어 D-소르비톨 (가소제) 및 계면활성제(예를 들어 SDS)를 포함한다. 가능한 수상 성분은 본원의 다른 곳에 기재된다.
젤라틴은 A형 젤라틴일 수 있다. 일부 덜 바람직한 실시에서, 젤라틴은 B형이다. 젤라틴은 블룸 강도 125-300, 선택적으로 200-300, 예를 들어 225-300, 및 특히 275를 가질 수 있다. 수상의 성분은 예를 들어, 1시간 내지 12시간의 기간 동안 교반되어 수상(수성 예비혼합물)의 제조를 완료할 수 있다.
(B) 분산상의 예시적 제조
NFAT 억제제를 계면활성제, 오일 및 다른 분산상 성분(예를 들어 공용매)와 함께 교반, 예컨대 초음파 또는 젓기 하에, 적합하게 주위 온도에서 혼합해 유효 성분을 분산 또는 바람직하게는 용해한다.
(C) 2개 상의 예시적 혼합
수상 및 분산상을 혼합한다. 2개 상은 원하는 중량으로 혼합될 수 있다; 예를 들어, 분산상 대 수상의 중량비는 1;1 내지 1:10, 예컨대 1:4 내지 1:9 및 선택적으로 1:5 내지 1:8 예컨대 약 1:5 또는 약 1:7일 수 있다. 생성된 콜로이드는 60-70℃ 및 특히 65℃의 온도에서 예컨대 초음파 또는 젓기로 교반되어, 균일한 분산을 달성한 후, 균일한 분산은 비드로 형성된다. 특히, 균일한 분산은 단일 오리피스 노즐을 통해 방출되어 액적을 형성하고 이는 냉각 매질로 낙하한다. 노즐은 적합하게 액적 형성을 용이하게 하도록 진동된다. 노즐은 2-200 Hz 및 선택적으로 15-50 Hz의 진동수로 진동될 수 있다.
냉각 매질은 예를 들어 공기 또는 오일일 수 있다; 오일은 적합하게, 예를 들어 중쇄 트리글리세라이드의 경우 예컨대 Miglyol 810N과 같이 생리적으로 허용된다. 냉각 매질은 주로 15℃ 미만, 예를 들어 10℃ 미만이되 0℃ 초과의 냉각 온도일 수 있다. 일부 실시양태에서 냉각 온도는 8-10℃이다. 노즐 크기(지름)는 일반적으로 0.5 내지 7.5 mm, 예컨대 0.5 내지 5 mm 및 선택적으로 0.5 내지 4 mm이다. 일부 실시양태에서, 노즐 지름은 1 내지 5 mm, 예를 들어 2 내지 5 mm, 및 선택적으로 3 내지 4 mm, 및 특히 3.4 mm일 수 있다. 노즐 지름은 1 내지 2 mm일 수 있다.
3.4 mm 노즐 또는 1.5 mm 노즐을 통한 유속은 5 내지 35 g/min 및 선택적으로 10 내지 20 g/min 이며 상이한 크기의 노즐에 대해 노즐 면적에 따라 적합히 조정될 수 있다.
(D) 비드의 예시적 처리
냉각된 비드는 회수되며, 예를 들어 15-60분의 체류 시간 후, 예를 들어 대략 30분 후 냉각 오일로부터 회수될 수 있다. 냉각 액체(예컨대 오일)로부터 회수된 비드는 과량의 냉각 액체를 제거하기 위해 원심분리, 그 후 건조될 수 있다. 적합하게, 건조는 실온, 예컨대 15-40℃ 및 선택적으로 20-35℃에서 수행된다. 건조는 예를 들어 6 내지 24시간, 예컨대 비드가 실온에서 건조되는 경우 약 12시간 동안 드럼 건조기에서 실시될 수 있다. 건조된 비드는 적합하게 적어도 부분적으로 물과 혼화될 수 있는 휘발성 비수성 액체로 세척될 수 있고, 예컨대 에틸 아세테이트로 세척될 수 있다. 세척된 비드는 실온에서, 예를 들어 15-25℃ 및 선택적으로 20-25℃에서 건조될 수 있다. 건조는 예를 들어 6 내지 48시간, 예컨대 비드가 실온에서 건조되는 경우 약 24시간 동안 드럼 건조기에서 실시될 수 있다. 건조는 임의의 적합한 수단, 예를 들어 적합하게 진공 하에서 드럼 건조기를 사용하거나; 또는 단순히 비드 배치를 통해 따뜻한 공기를 흐르게 하거나, 예를 들어 유동 베드 건조기의 경우 비드를 적합한 장치 중에서 따뜻한 공기와 함께 유동화하여 달성될 수 있다. 건조 후, 비드는 1 내지 10 mm, 선택적으로 2 내지 5 mm를 통과해 과대 크기 비드를 제거하고, 그 후 공극 크기 0.5 내지 9 mm, 선택적으로 1 내지 4 mm의 체를 통과해 과소 크기의 비드를 제거한다.
체질(sieving) 과정에서 거부된 비드를 재활용할 수 있음이 이해될 것이다.
본 발명의 추가의 양상으로서 본원에 기재된 임의의 과정으로 얻을 수 있는 제제(상기 특성을 갖는)가 제공된다. 본원에 기재된 과정은 따라서 코어의 수성 연속 매트릭스 상을 형성하는 적절한 성분 중에 코어의 분산상을 형성하는 적절한 성분을 분산시킴으로써 본원에 기재된 실시양태의 임의의 특정한 코어를 제공하는 데 사용될 수 있다.
전술한 문단들은 코팅되지 않은 조성물 또는 코어의 형성을 기재한다. 조성물은 코팅을 포함할 수 있다. 코어는 코팅될 수 있다. 조성물 또는 코어는 서브 코트 및/또는 제2 코팅(또한 변형 방출 코팅 또는 외부 코팅으로 지칭됨)으로 코팅될 수 있다. 적합한 서브 코트 및 변형 방출 코팅(제2 코팅 또는 외부 코팅)은 본원에 기재된 임의의 것 및 임의의 제1 코팅(서브 코트에 대해) 또는 제2 코팅(변형 방출 코팅에 대해)이다. 코팅(들)은 잘 알려진 방법을 사용해 적용될 수 있으며, 예를 들어 아래 기재된 스프레이 코팅으로 원하는 서브 코트 및 변형 방출 코팅 중량 증가를 줄 수 있다.
앞서 기재된 방법의 하나(선택적으로 진동하는 노즐을 통한 에멀전의 방출)와 관련하여 2개의 동심(concentric) 오리피스(중심 및 외부)로, 외부 유체는 본원에 기재된 코팅(비드 외부에)을 형성할 수 있다. Freund에서 제조된 Spherex 기기(Freund의 미국 특허 5,882,680 참조)가 바람직하게 사용된다(이 특허의 전체 내용은 본원에 참조로 통합된다). 다른 유사한 방출 또는 압출 기구, 예를 들어 본원에 전술한 방출 기구 또한 사용될 수 있다.
Spherex 기기의 사용은 매우 높은 단분산성을 달성한다. 예를 들어 일반적인 100 g에서, 비드의 배치 97 g은 지름 1.4 내지 2 mm 또는 1 내지 2 mm이다. 원하는 크기 범위는 상이한 크기의 입자를 거부/스크리닝하는 해당 분야에 알려진 방법으로 달성될 수 있다. 예를 들어, 배치를 먼저 예컨대 2 mm 메쉬에 통과시키고 이어서 1.4 mm 메쉬에 통과시켜 큰/작은 비드를 거부/스크리닝할 수 있다.
비드를 스프레이 코팅함이 바람직한 경우 1.4 내지 2 mm 지름 범위는 바람직한 크기이다(더 작은 경우, 코팅 기기의 스프레이가 비드를 지나칠 수 있다; 너무 큰 경우, 일관된 코팅 달성에 필요한, 비드의 유동화가 더 어렵다).
코팅 과정
코팅 과정은 임의의 적합한 수단, 예컨대, 중합체 코트 용액(특히 앞서 기재된 바와 같이)을 제제에 적용하는 코팅 기기의 사용으로 수행될 수 있다. 코팅을 위한 중합체는 제조자에 의해 완제품 용액으로 직접 사용을 위해 공급되거나 제조자의 지시에 따라 사용 전 제조될 수 있다. 코팅 과정은 WO2015/067763 내 "코팅 과정(Coating Process)" 표제 하 기술된 것일 수 있으며, 이의 내용은 참조로 본원에 통합된다.
코팅은 적합하게 조성물 또는 코어에 코팅(들)을 적용하기 위해 Wurster 컬럼과 같은 유동층 코팅 시스템을 사용해 수행된다. 적절한 코팅 기기는 당업자에게 알려져 있으며 예를 들어, 천공된 팬 또는 유동화-계 시스템, 예를 들어 GLATT, Vector(예컨대 CF 360 EX), ACCELACOTA, Diosna, O'Hara 및/또는 HICOATER 처리 장치를 포함한다. 언급할 것은 "하부 스프레이(Bottom Spray)" 설정에서 사용되는 MFL/01 Fluid Bed Coater(Freund)이다.
일반적인 코팅 조건은 다음과 같다:
Figure pct00002
적합하게 코팅은 코팅의 중합체(및 다른 성분)의 용액 또는 분산으로 적용된다. 일반적으로 코팅은 수성, 용액 또는 분산으로 적용되나, 필요한 경우 다른 용매 시스템이 사용될 수 있다. 코팅 분산은 유동층 코팅기 내 스프레이로 조성물 또는 코어에 적용되어 요구되는 코팅 중량 증가를 준다. 일반적으로 코팅 과정은 코어를 35 내지 40℃, 바람직하게 40 내지 42℃로 유지하는 온도에서 수행된다.
코팅의 적용 후, 조성물은 건조, 예를 들어 40 내지 45℃에서 건조될 수 있다.
본 발명은 본원에 기재된 바와 같이 얻어진 조성물의 특성을 갖는 생성물을 더 제공하며, 그 특성으로서 정의된 생성물은 그것이 제조된 방법을 제외하고 조성물의 특성에 의해 정의된다.
본원에 언급된 바와 같이 기재된 과정은 본원의 다양한 실시양태에 기재된 임의의 조성물을 제공하는 데 사용될 수 있다. 예를 들면 코어 및 수용성 셀룰로오스 에테르 또는 셀룰로오스 에테르의 수용성 유도체를 포함하는 제1 코팅 및/또는 지연 방출 중합체를 포함하는 제2 코팅을 포함하는 본 발명의 조성물이 제공되며 코어는 젤라틴, NFAT 억제제, 중쇄 모노- 디- 및/또는 트리-글리세라이드를 포함하는 하이드로겔-형성 중합체 매트릭스, 중쇄 또는 장쇄 지방산 모노- 또는 디-글리세라이드 또는 이들의 조합이거나 이를 포함하고 폴리에틸렌글리콜 에테르 또는 에스테르가 아니거나 이를 포함하지 않는 제1 계면활성제, 공용매 및 선택적으로 제2 계면활성제를 포함하며, 코어는 코어를 형성함에 있어 앞서 기재된 단계 (i) 내지 (vi)를 포함하는 과정에 의해 얻어진 코어의 성질을 가지며, 과정의 단계 (i)의 수상 예비혼합물은 젤라틴 및 선택적으로 제2 계면활성제(적합하게 음이온성 계면활성제)를 포함하며, 과정의 단계 (ii)의 오일상 예비혼합물은 중쇄 모노- 디- 또는 트리-글리세라이드, 소수성 유효 성분, 계면활성제(적합하게 비이온성 계면활성제) 및 공용매를 포함하며; 코어는 선택적으로 수용성 셀룰로오스 에테르 또는 셀룰로오스 에테르의 수용성 유도체를 포함하는 제1 코팅 및/또는 지연 방출 중합체를 포함하는 제2 코팅으로 코팅되며; 코팅은 본원에 기재된 임의의 것이다. 따라서, 과정은 제1 코팅 및/또는 제2 코팅을 포함하는 앞서 기재된 조성물을 생산할 수 있다. 과정은 추가적으로 제1 코팅 및 제1 코팅 외부의 제2 코팅을 포함하는 조성물을 생산할 수 있다.
특정 실시양태에서 조성물 또는 코어는 고체 콜로이드 형태이고, 상기 콜로이드는 연속상 및 분산상을 포함하며,
상기 분산상은
사이클로스포린;
중쇄 모노-, 디-, 및/또는 트리-글리세라이드, 예를 들어 중쇄 트리글리세라이드, 특히 카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드;
중- 또는 장쇄 모노- 또는 디-글리세라이드, 특히 글리세릴 모노올레이트/디올레이트; 및
공용매(예를 들어 2-(에톡시에톡시)에탄올)이거나 이를 포함하며;
상기 연속상은
카라기난, 젤라틴, 한천 및 펙틴, 또는 이들의 조합에서 선택되는, 선택적으로 젤라틴 및 한천 또는 이들의 조합에서 선택되는 하이드로콜로이드이거나 이를 포함하는 하이드로겔-형성 중합체 매트릭스, 더욱 특히 하이드로겔-형성 중합체 매트릭스의 중합체는 젤라틴이거나 이를 포함하며;
가소제, 선택적으로 글리세린, 폴리올, 예를 들어 소르비톨, 폴리에틸렌 글리콜 및 트리에틸 시트레이트 또는 이들의 혼합물에서 선택된 가소제, 특히 소르비톨; 및
음이온성 계면활성제, 예를 들어 지방산 염, 알킬 설페이트 및 담즙염에서 선택된 적어도 하나의 계면활성제, 특히 알킬 설페이트, 예를 들어 소듐 도데실 설페이트이거나 이를 포함한다.
다른 특정 실시양태에서, 조성물 또는 코어는 고체 콜로이드 형태이고, 콜로이드는 연속상 및 분산상을 포함하며, 여기서,
분산상은
사이클로스포린;
중쇄 모노-, 디- 및/또는 트리-글리세라이드, 예를 들어 중쇄 트리글리세라이드 특히 카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드;
비이온성 계면활성제(예를 들어 폴리에톡실화 피마자유(예를 들어 Kolliphor EL) 중- 또는 장쇄 모노- 또는 디-글리세라이드, 특히 글리세릴 모노올레이트/디올레이트; 및
공용매(예를 들어 2-(에톡시에톡시)에탄올);
이거나 이를 포함하고,
여기서 연속상은
카라기난, 젤라틴, 한천 및 펙틴 또는 이들의 조합에서 선택되는, 선택적으로 젤라틴 및 한천 또는 이들의 조합에서 선택되는 하이드로콜로이드이거나 이를 포함하는 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스, 더욱 특히 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스의 중합체는 젤라틴이거나 이를 포함하고;
가소제, 선택적으로 글리세린, 폴리올, 예를 들어 소르비톨, 폴리에틸렌 글리콜 및 트리에틸 시트레이트 또는 이들의 혼합물에서 선택된 가소제, 특히 소르비톨; 및
음이온성 계면활성제, 예를 들어 지방산 염, 알킬 설페이트 및 담즙염에서 선택된 적어도 하나의 계면활성제, 특히 알킬 설페이트, 예를 들어 소듐 도데실 설페이트이거나 이를 포함한다.
실시양태에서, 코어는 젤라틴을 300 내지 700 mg/g의 양으로 포함하는 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스를 포함하고, 코어는 사이클로스포린 A, 중쇄 모노-, 디- 또는 트리-글리세라이드(예를 들어 중쇄 트리글리세라이드, 특히 카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드)를 20 내지 200 mg/g의 양으로 더 포함하고, 코어는 다음 성분을 더 포함한다:
150 내지 250 mg/g의 양의 공용매(예를 들어 2-(에톡시에톡시)에탄올);
80 내지 200 mg/g의 양의 비이온성 계면활성제; 및
15 내지 50 mg/g의 양의 음이온성 계면활성제,
여기서 중량은 코어의 건조 중량을 기준으로 한다.
적합하게, 상기 문단의 실시양태에서, 사이클로스포린 A는 60 내지 150 mg/g, 예를 들어 80 내지 120 mg/g 또는 특히 80 내지 100 mg/g의 양으로 존재할 수 있다. 비이온성 및 음이온성 계면활성제는 본원에서 정의된 바와 같고, 예를 들어 음이온성 계면활성제는 알킬 설페이트, 카복실레이트 또는 인지질(특히 SDS)에서 선택되고; 또는 비이온성 계면활성제는 솔비탄-계 계면활성제, PEG-지방산, 또는 글리세릴 지방산 또는 폴록사머에서 선택된다. 특정 비이온성 계면활성제는 폴리에톡실화 피마자유(예를 들어 KolliphorTM EL)이다.
추가의 특정 실시양태에서 분산상은
60 - 180 mg/g의 양의 사이클로스포린;
40 - 80 mg/g의 양의 카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드;
100 - 200 mg/g의 양의 2-(2-에톡시에톡시)에탄올; 및
100 - 150 mg/g의 양의 글리세릴 모노올레이트 및/또는 글리세릴 디올레이트를 포함하며, 중량은 조성물의 건조 중량을 기준으로 한다.
오일상 또는 분산상은
120 - 360 mg/g의 양의 사이클로스포린;
80 - 160 mg/g의 양의 카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드;
200 - 400 mg/g의 양의 2-(2-에톡시에톡시)에탄올; 및
200 - 300 mg/g의 양의 글리세릴 모노올레이트 및/또는 글리세릴 디올레이트를 포함할 수 있으며, 중량은 습윤(wet) 조성물의 중량을 기준으로 한다.
액체 조성물은
20 - 60 mg/g의 양의 사이클로스포린;
13 - 27 mg/g의 양의 카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드;
50 - 70 mg/g의 양의 2-(2-에톡시에톡시)에탄올; 및
30 - 55 mg/g의 양의 글리세릴 모노올레이트 및/또는 글리세릴 디올레이트를 포함하는 오일상을 포함할 수 있으며, 중량은 조성물, 즉 액체 조성물의 습윤(wet) 중량을 기준으로 하고, 선택적으로 오일상 대 수상 비율은 1:5일 수 있다.
일 실시양태에서 수상 또는 연속상은 300 내지 700 mg/g의 양의 젤라틴, 및 15 - 50 mg/g의 양의 SDS를 포함하는 하이드로겔-형성 중합체 매트릭스를 포함하며, 중량은 조성물의 건조 중량을 기준으로 한다.
일 실시양태에서 수상은 120 내지 280 mg/g의 양의 젤라틴 및 6 - 20 mg/g의 양의 SDS를 포함하는 하이드로겔-형성 중합체 매트릭스를 포함할 수 있으며 중량은 수상의 중량을 기준으로 한다. 수상은 100 내지 230 mg/g의 양의 젤라틴 및 5 - 16 mg/g의 양의 SDS를 포함하는 하이드로겔-형성 중합체 매트릭스를 포함할 수 있으며, 중량은 조성물, 즉 상기 액체 조성물의 중량을 기준으로 하고, 선택적으로 오일상 대 수상 비율은 1:5일 수 있다.
적합하게 바로 앞의 두 문단의 실시양태에서 사이클로스포린은 90 내지 140 mg/g, 예를 들어 60 내지 150 mg/g, 80 내지 120 mg/g 또는 특히 80 내지 100 mg/g의 양으로 존재할 수 있다. 음이온성 계면활성제는 본원에서 정의한 바와 같으며, 예를 들어 알킬 설페이트, 카복실레이트 또는 인지질(특히 SDS)에서 선택된 음이온성 계면활성제이다.
본원에서 기재된 하이드로겔-형성 중합체 매트릭스를 포함하는 조성물 또는 코어는 본원에 기재된 바와 같이 코팅될 수 있다. 이러한 실시양태에서의 특정 코팅은
수용성 셀룰로오스 에테르, 특히 하이드록시프로필메틸 셀룰로오스이거나 이를 포함하는 제1 코팅(서브 코팅);
변형 방출 코팅, 특히 pH 비의존성 변형 방출 코팅, 더욱 특히 에틸 셀룰로오스(예컨대 수릴리스)를 포함하는 코팅, 더욱 특히 에틸 셀룰로오스 및 수용성 다당류, 예컨대 펙틴을 포함하는 코팅(예컨대 본원에 기재된 바와 같은 수릴리스-펙틴 코팅)이거나 이를 포함하는 상기 제1 코팅 외부의 제2 코팅을 포함하는 코팅이며; 여기서
제1 코팅은 제1 코팅에 의한 중량 증가에 상응하는 양으로서 제1 코팅 적용 전의 제제의 중량을 기준으로 (i) 8 중량% 내지 12 중량%, 예를 들어 약 10 중량%; 또는 (ii) 4 중량% 내지 6 중량%, 예를 들어 약 5 중량%에서 선택된 범위로 존재하고;
제2 코팅은 제2 코팅에 의한 제제의 중량 증가에 상응하는 양으로서 제2 코팅 적용 전의 제제의 중량을 기준으로 (i) 10 중량% 내지 12 중량%, 예를 들어 약 11 중량% 또는 약 11.5 중량%; 또는 (ii) 16 중량% 내지 18 중량%, 예를 들어 약 17 중량%에서 선택된 범위로 존재한다.
동일하게, 앞서 기재한 하이드로겔-형성 중합체 매트릭스를 포함하는 조성물 또는 코어는
변형 방출 코팅, 특히 pH 비의존성 변형 방출 코팅, 더욱 특히 에틸 셀룰로오스(예컨대 수릴리스)를 포함하는 코팅, 더욱 특히 에틸 셀룰로오스 및 펙틴과 같은 수용성 다당류를 포함하는 코팅(예를 들어, 본원에서 기술된 바와 같은 수릴리스-펙틴 코팅)이거나 이를 포함하는 제2 코팅을 포함하는 코팅으로 코팅될 수 있고; 여기서
제2 코팅은 제2 코팅에 의한 제제의 중량 증가에 상응하는 양으로서 제2 코팅 적용 전의 제제의 중량을 기준으로 (i) 10 중량% 내지 12 중량%, 예를 들어 약 11 중량% 또는 약 11.5 중량%; 또는 (ii) 16 중량% 내지 18 중량%, 예를 들어 약 17 중량%에서 선택된 범위로 존재한다.
본원에 기재된 다음의 특성이 적용가능한 코어, 예컨대 바로 앞의 문단의 코어에, 다음의 특성이 존재할 수 있다:
젤라틴이 300 내지 700 mg/g의 양으로 존재할 수 있다;
중쇄 모노-, 디- 또는 트리-글리세라이드(예를 들어 카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드)가 20 내지 200 mg/g의 양으로 존재할 수 있다;
공용매(예를 들어 2-(에톡시에톡시)에탄올)가 150 내지 250 mg/g의 양으로 존재할 수 있다;
비이온성 계면활성제(예를 들어 소르비탄계 계면활성제, PEG-지방산, 또는 글리세릴 지방산 또는 폴록사머 또는 특히 폴리에톡실화된 피마자유, 예를 들어 Kolliphor EL)가 80 내지 200 mg/g의 양으로 존재할 수 있다;
음이온성 계면활성제(예를 들어, 알킬 설페이트, 카복실레이트 또는 인지질 (특히 SDS))가 15 내지 50 mg/g의 양으로 존재할 수 있다;
사이클로스포린 A가, 60 내지 180 mg/g, 적합하게 60 내지 150 mg/g, 90 내지 150 mg/g, 또는 80 내지 100 mg/g, 예를 들어 81 내지 98 mg/g의 양으로 존재할 수 있다;
이 때 모든 중량은 코팅 전 코어의 건조 중량을 기준으로 한다.
조성물 또는 상기 코어는 셀룰로오스 에테르 및 그 유도체, 특히 하이드록시프로필메틸 셀룰로오스에서 선택된 수용성 화합물이거나 이를 포함하는 제1 코팅(서브 코팅)을 포함하거나 이로 코팅될 수 있다; 제1 코팅은 제1 코팅 적용 전 코어의 중량을 기준으로 제1 코팅에 의한 중량 증가에 상응하는 양으로 (i) 8 중량% 내지 12 중량%, 예를 들어 약 10 중량%; 또는 (ii) 4 중량% 내지 6 중량%, 예를 들어 약 5 중량%에서 선택된 범위의 양으로 존재한다. 제1 코팅은 그에 적용된 변형 방출 코팅(또는 제2 코팅)을 가질 수 있다.
바람직하게, 임의의 변형 방출 코팅(제2 코팅)은, 특히 바로 앞서의 문단의 실시양태에서, pH 비의존성 변형 방출 코팅이거나 이를 포함하며, 더욱 특히 상기 제2 코팅은 에틸 셀룰로오스(예컨대 수릴리스)를 포함하는 변형 방출 코팅, 더더욱 특히 에틸 셀룰로오스 및 수용성 다당류, 펙틴을 포함하는 변형 방출 코팅(예컨대 본원에 기재된 바와 같은 수릴리스-펙틴 코팅)일 수 있으며; 변형 방출 코팅은 제2 코팅 적용 전 제제의 중량을 기준으로 제2 코팅에 의한 제제의 중량 증가에 상응하는 양으로 (a) 10 중량% 내지 12 중량%, 예를 들어 약 11 중량% 또는 약 11.5 중량%; 또는 (b) 16 중량% 내지 18 중량%, 예를 들어 약 17 중량%에서 선택된 양으로 존재한다.
추가로 본 발명의 조성물을 형성하는 과정은 제1 집단 및 제2 집단을 혼합하는 과정을 포함할 수 있으며,
제1 집단은 수용성 셀룰로오스 에테르이거나 이를 포함하는 코팅을 가지나 예컨대 본원에 기재된, 외부 코팅을 갖지 않으며;
제2 집단은 수용성 셀룰로오스 에테르이거나 이를 포함하는 제1 코팅 및 예를 들어 본원에 기재된 바와 같이, 예컨대 지연 방출 중합체이거나 이를 포함하는 코팅인, 지연 방출 코팅이거나 이를 포함하는 제2 코팅을 갖는다.
NFAT 활성화 T 세포에 의해 매개되는 치료
NFAT 활성화 T 세포에 의해 매개되는 치료는 본원에 기술된 임의의 치료일 수 있고, 다음을 포함하나 이에 제한되지 않는다:
블리나투모맙(blinatumomab) MEHD7945A, ABT-122, ABT-981, SAR156597, MM-111, IMCgp100, RO5520985, XmAb5871, COVA322, ALX-0761, AFM13, AFM11, MEDI-565, 얼투막소맙(Ertumaxomab), MGD006, MGD007, LY3164530 및 AMv-564에서 선택되는 이중특이성 항체;
NY-ESO-1 TCR 1, HPV-16 E6 TCR1, HPV-16 E6 TCR, MAGE A3/A6 TCR1, MAGE A3 TCR1, SSX2 TCR1, NY-ESO TCR, MAGE-A-10 TCR, BPX-701 및 ATTCK20에서 선택되는 고 친화성 T 세포 수용체 T 세포;
CD19 CAR1, KTE-C19 CAR, EGFRvIII CAR, JCAR015, JCAR017, JCAR014, BPX-401, CBM-C19.1, CAR-T CD19, CTL109, JCAR018, JCAR023, JTCR016, MUC16에 지시된 CAR-T, ROR1에 지시된 CAR-T, BPX-601, bb2121, CAR-T CD30, CAR-T EGFR 및 CART-meso에서 선택되는 자가 CAR-T;
UCART19, UCART123, UCART38, UCARTCS1 및 EBV-CTL에서 선택되는 동종 CAR-T 치료;
항-PD-1/항―PD-L1 억제제, 예를 들어 REGN2810, Opdivo, Keytruda, MEDI4736, MPDL3280A 및 PDR001 (PDR1), 림프구 활성화 유전자 3을 표적하는 항체(an antibody targeting lymphocyte-activation gene 3)(LAG3; CD223), 예를 들어 LAG525, 이필리무맙(ipilimumab) 및 트레멜리무맙에서 선택되는, 항-CTLA-4 수용체 억제제 및 항-TIM-3 수용체 억제제, 예를 들어 MBG453에서 선택되는 체크포인트 억제제.
NFAT 활성화 T 세포에 의해 매개되는 치료는 단독 치료 또는 둘 이상의 이러한 치료, 적합하게 본원에 기술된 임의의 둘 이상의 치료일 수 있다. 예를 들어 치료는 이중특이성 T 세포 관여자, 키메라 항원 수용체 치료 및 체크포인트 차단 치료에서 선택된 둘 이상의 치료를 포함하고, 예를 들어 여기서 치료는 체크포인트 차단 치료 및 이중특이성 T 세포 관여자 및 키메라 항원 수용체 치료에서 선택되는 하나 이상의 치료를 포함한다. 예를 들어, NFAT 활성화 T 세포에 의해 매개되는 치료는 PD1 체크포인트 억제제(예를 들어 Medi4736 또는 Keytruda (펨브롤리주맙(pembrolizumab))) 및 하나 이상의 CAR T 치료, 보다 구체적으로 PD1 체크포인트 억제제(예를 들어 Medi4736 또는 Keytruda (펨브롤리주맙(pembrolizumab))) 및 하나 이상의 CD19 CAR T 치료, 예를 들어 CD19 CAR1, KTE-C19 CAR, JCAR015, JCAR017, JCAR014, BPX-401 및 CTL109에서 선택되는 CAR T의 조합을 포함할 수 있다. 보다 구체적인 조합은 Medi4736 및 JCAR014, JCAR015 및 JCAR017에서 선택된 CAR T이다. 다른 조합은 이중특이성 T 세포 관여 치료, 예를 들어 블리나투모맙(blinatumomab) 및 CAR T, 예를 들어 본원에서 기술된 임의의 CAR T 치료이다. 그러나, 또다른 조합은 HIF 길항제 또는 IDO 억제제와 함께 체크포인트 억제제를 포함할 수 있다. 본 발명의 NFAT 활성화 T 세포와 조합하여 사용되기 위한 다른 제제는 CpG 올리고데옥시뉴클레오타이드이다.
NFAT 활성화 T 세포에 의해 매개되는 치료 또는 이들의 조합은 본원에 기술된 하나 이상의 면역-종양학 보조 치료와 함께 사용될 수 있다.
적용(Applications)
본 발명의 조성물은 달성되는 향상된 용해 프로파일에 의해 약학적 유효 성분의 경구 전달에 유리하게 사용될 수 있다.
치료의 유효성(effectiveness)의 유지에 의해, 기능적, 구성적 또는 활성화된 NFAT를 발현하는 T 세포가 GI관 외부에 전신적으로 충분한 양으로 보유됨으로써 이들의 원하는 유리한 치료적 효과가 유지되는 것으로 이해될 것이다. 본 발명은 NFAT 억제제의 전신 생체이용률을 조정하여 NFAT에 의해 유도되는 임의의 부정적인 ("오프 타겟") 효과를 조절하면서 NFAT 세포의 ("온 타겟")유효성을 허용할 수 있다.
본 발명의 특정 실시양태의 목적은 국소 및 전신 염증을 감소시키는 것, 예를 들어 사이토카인, 특히 전염증성 사이토카인의 수준을 감소시키는 것이다. 따라서 본 발명은 국소 사이토카인 수준 및 전신 사이토카인 수준을 감소 또는 조절할 수 있는 조성물을 고려한다. 대안으로, 본 발명은 위장관에서 국소 사이토카인 수준을 감소시킬 수 있지만 전신 사이토카인 수준 및/또는 전신 림프구(선택적으로 T 세포 또는 NK 세포) 수준에는 영향을 미치지 않을 수 있다. 일 실시양태에서, 앞서 언급된 특징들은 본 출원의 다른 곳에서 정의된 코팅에 의해 이루어진다. 예를 들어, 국소 위장관의 사이토카인 수준의 감소는 지연 방출 중합체 코팅을 갖는 본 발명의 조성물로 달성될 수 있다.
대안으로, 본 발명은 위장관에서 T-림프구, B-림프구, 항원제시세포, 호산구, 호중구 및 식세포를 포함하나 이에 제한되지 않는 면역 세포에 의해 다양하게 방출되는 국소 사이토카인 및 케모카인 수준을 감소시킬 수 있지만 전신 사이토카인 수준 및/또는 전신 림프구(선택적으로 T 세포 또는 NK 세포) 수준에는 영향을 미치지 않는다. 일 실시양태에서, 앞서 언급된 특징들은 본 출원의 다른 곳에서 정의된 코팅에 의해 이루어진다. 예를 들어, 국소 위장관의 사이토카인 및 케모카인 수준의 감소는 지연 방출 중합체 코팅을 갖는 본 발명의 조성물로 달성될 수 있다.
본 발명의 조성물은 하부 장에서 사이클로스포린 방출을 표적하기 위하여 사이클로스포린 A 및 변형 방출 코팅, 예를 들어 pH 비의존성 중합체를 포함하는 변형 방출 조성물을 포함한다. 이러한 조성물은 사이클로스포린 A의 낮은 전신 노출을 야기하면서, 한편 하부 위장관, 특히 결장 중 높은 수준의 사이클로스포린 A를 제공한다. 이러한 조성물은 사이클로스포린 A를 활성 형태, 예를 들어 용액으로 방출하여, 하부 위장관의 국소 조직에서 사이클로스포린 A의 증진된 흡수를 제공한다. 조성물이 미니비드 형태로 사용될 때, 미니비드는 유리하게 경구 투여 후 위장관의 넓은 부분에 걸쳐 분산되며 따라서 예를 들어 결장의 넓은 부분에 더욱 균일한 사이클로스포린 노출을 제공한다.
따라서 본 발명에 따른 하부 위장관의 국소 치료를 위한 사이클로스포린을 포함하는 변형 방출 조성물은 GIT의 질환의 치료 또는 예방에 유용할 것으로 기대된다. 특히 본 발명의 조성물은 사이클로스포린 A 및/또는 다른 면역억제제를 포함할 수 있으며 하부 위장관에 발병하는 염증성 질환, 특히 결장에 발병하는 질환의 예방 또는 치료에 유용할 수 있다.
본 발명의 조성물은 적합하게 경구 투여된다. 요구되는 용량은 치료되는 특정한 질환 및 질환의 병기에 따라 달라질 것이다. 사이클로스포린 A를 함유하는 조성물의 경우, 조성물은 일반적으로 0.1 내지 100 mg, 예를 들어 1 내지 500 mg 또는 특히 25 내지 250 mg 사이클로스포린 A의 용량을 제공하도록 투여될 것이다. 조성물은 적합하게 단일 일일 용량으로서 투여된다.
NFAT 억제제를 포함하는 조성물과 함께 또는 NFAT 활성화 T 세포에 의해 매개되는 치료와 함께 사용되기 적합할 수 있는 항암제는 다음에서 선택되는 하나 이상의 제제를 포함하나 이에 제한되지 않는다:
(i) 항증식제/항신생물 약물 및 이들의 조합, 예컨대 알킬화제(예를 들어 시스-플라틴, 옥살리플라틴, 카보플라틴, 사이클로포스파미드, 질소 머스타드, 우라실 머스타드, 벤다무스틴, 멜팔란, 클로람부실, 클로르메틴, 부술판, 테모졸아미드, 니트로소우레아, 이포사미드, 멜팔란, 피포브로만, 트리에틸렌-멜라민, 트리에틸렌티오포포라민, 카무스틴, 로무스틴, 스트롭토조신 및 다카바진); 항대사물질(예를 들어 젬시타빈 및 안티폴레이트, 예컨대 플루오로피리미딘, 예컨대 5-플루오로우라실 및 테가푸르, 랄티트렉세드, 메토트렉세이트, 페메트렉시드, 시토신 아라비노사이드, 플록수리딘, 시타라빈, 6-메르캅토푸린, 6-티오구아닌, 플루다라빈 포스페이트, 펜토스타틴, 및 젬시타빈 및 하이드록시우레아); 항생제(예를 들어 안트라사이클린, 예컨대 아드리아마이신, 블레오마이신, 독소루비신, 다우노마이신, 에피루비신, 이다루비신, 미토마이신-C, 닥티노마이신 및 미트라마이신); 항유사분열제(예를 들어 빈카 알칼로이드, 예컨대 빈크리스틴, 빈블라스틴, 빈데신 및 비노렐빈 및 탁소이드, 예컨대 탁솔 및 탁소테레 및 폴로키나아제 억제제); 프로테아좀 억제제, 예를 들어 카필조밉 및 보르테조밉; 인터페론 요법; 및 토포아이소머라아제 억제제(예를 들어 에피포도필로톡신, 예컨대 에토포사이드 및 테니포사이드, 암사크린, 토포테칸, 이리노테칸, 미톡산트론 및 캄프토테신), 블레옴신, 닥티노마이신, 다우노루비신, 독소루비신, 에피루비신, 이다루비신, 아라-C, 파클리탁셀(Taxol™), 납파클리탁셀, 도세탁셀, 미트라마이신, 데옥시코-포르마이신, 미토마이신-C, L-아스파라기나아제, 인터페론(특히 IFN-알파), 에토포사이드, 테니포사이드, DNA-디메틸화제, (예를 들어, 아자시티딘 또는 데시타빈); 및 히스톤 디-아세틸라아제(HDAC) 억제제(예를 들어 보리노스타트, MS-275, 파노비노스타트, 로미뎁신, 발프로익산, 모세티노스타트(MGCD0103) 및 프라시노스타트 SB939);
(ii) 세포정지제, 예컨대 항에스트로겐(예를 들어 타목시펜, 풀베스트란트, 토레미펜, 랄록시펜, 드롤록시펜 및 이오독시펜), 항안드로겐(예를 들어 비칼루타미드, 플루타미드, 닐루타미드 및 사이프로테론 아세테이트), LHRH 길항제 또는 LHRH 작용제(예를 들어 고세렐린, 레우프로렐린 및 부세렐린), 프로게스토겐(예를 들어 메게스트롤 아세테이트), 아로마타아제 억제제(예를 들어 아나스토로졸, 레트로졸, 보라졸 및 엑세메스테인) 및 5α-환원효소 억제제, 예를 들어 피나스테리드; 및 나벨벤, CPT-II, 아나스트라졸, 레트라졸, 카페시타빈, 렐록사픔, 사이클로포스파미드, 이포사미드, 및 드롤록사핀;
(iii) 항침습제, 예를 들어 다사티닙 및 보수티닙(SKI-606), 및 메탈로프로테이나아제 억제제, 우로키나아제 플라스미노겐 활성인자 수용체 기능 억제제 또는 헤파라나아제에 대한 항체;
(iv) 성장 인자 기능 억제제; 예를 들어 이러한 억제제는 성장 인자 항체 및 성장 인자 수용체 항체를 포함하며, 예를 들어 안티-erbB2 항체 트라스투주맙[Herceptin™], 안티-EGFR 항체 파니투무맙, 안티-erbB1 항체 세툭시맙, 티로신 키나아제 억제제, 예를 들어 상피 성장 인자 패밀리 억제제(예를 들어 EGFR 패밀리 티로신 키나아제 억제제, 예컨대 게피티닙, 에를로티닙, 6-아크릴아미도-N-(3-클로로-4-플루오로페닐)-7-(3-모폴리노프로폭시)-퀴나졸린-4-아민(CI 1033), erbB2 티로신 키나아제 억제제, 예컨대 라파티닙) 및 공자극 분자에 대한 항체, 예컨대 CTLA-4, 4-IBB 및 PD-I, 또는 사이토카인에 대한 항체(IL-10, TGF-베타); 간세포 성장 인자 패밀리 억제제; 인슐린 성장 인자 패밀리 억제제; 세포 사멸의 단백질 조정자 조절인자(예를 들어 Bcl-2 억제제); 혈소판-유도 성장 인자 패밀리 억제제, 예컨대 이마티닙 및/또는 닐로티닙(AMN107); 세린/트레오닌 키나아제 억제제(예를 들어 Ras/Raf 신호 억제제, 예컨대 파르네실 트랜스퍼라아제 억제제, 예를 들어 소라페닙, 티피파르닙 및 로나파르닙), MEK 및/또는 AKT 키나아제를 통한 세포 신호 억제제, c-키트 억제제, abl 키나아제 억제제, PI3 키나아제 억제제, Plt3 키나아제 억제제, CSF-1R 키나아제 억제제, IGF 수용체, 키나아제 억제제; 오로라 키나아제 억제제 및 사이클린 의존 키나아제 억제제, 예컨대 CDK2 및/또는 CDK4 억제제; 및 CCR2, CCR4 또는 CCR6 길항제;
(v) 항혈관형성제, 예컨대 혈관 내피 성장 인자 효과를 억제하는 것, [예를 들어 항-혈관 내피 세포 성장 인자 항체 베바시주맙(Avastin™)]; 탈리도마이드, 레날리도마이드, 및 예를 들어, VEGF 수용체 티로신 키나아제 억제제, 예컨대 반데타닙, 바탈라닙, 수나티닙, 악시티닙 및 파조파닙;
(vi) 유전자 치료 접근, 예를 들어 이상 p53 또는 이상 BRCA1 또는 BRCA2와 같은 이상 유전자를 대체하는 접근을 포함;
(vii) 면역치료 접근, 예를 들어 항체 치료, 예컨대 알렘투주맙(alemtuzumab), 리툭시맙(rituximab), 이브리투모맙 티욱세탄(ibritumomab tiuxetan)(Zevalin®) 및 오파투무맙(ofatumumab); 인터페론, 예컨대 인터페론 α; 인터류킨, 예컨대 IL-2(알데슬류킨(aldesleukin)); 인터류킨 억제제, 예를 들어 IRAK4 억제제; 예방 및 치료 백신을 포함하는 암 백신, 예컨대 HPV 백신, 예를 들어 가다실(Gardasil), 서바릭스(Cervarix), 온코파지(Oncophage) 및 시풀류셀-T(Sipuleucel-T)(Provenge); gp100; 수지상 세포계 백신(예컨대 Ad.p53 DC); 톨 유사 수용체(toll-like receptor) 조절인자, 예를 들어 TLR-7 또는 TLR-9 길항제; 및
(viii) 세포독성제, 예를 들어 플루다리빈(fludaribine)(플루다라(fludara)), 클라드리빈(cladribine), 펜토스타틴(pentostatin)(NipentTM);
선택적으로, 항암제는 NFAT 활성화 T 세포에 의해 매개되는 치료가 아니다.
면역-종양학 보조 치료( Immuno -oncology adjunct therapies)
NFAT에 의해 매개되는 치료는 치료의 효과를 강화시키거나 향상시키는 하나 이상의 보조 치료와 함께 사용될 수 있다. 따라서, 본원에서 기술된 치료는 하나 이상의 보조 치료와 함께 사용될 수 있다. 예를 들어 NFAT 활성화 T 세포에 의해 매개되는 치료는 다음의 하나 이상에서 선택되는 보조 치료와 함께 사용될 수 있다:
아데노신 A2A 수용체 억제제, 예를 들어 HTL-1071;
항 CEACAM1 항체, 예를 들어 CM-24, 발암배아성 항원(carcinoembryonic antigen)(CEA)-관련 세포 부착 분자 1(CEACAM1; CD66a)을 표적하는 인간화 IgG4 mAb;
BRAG 억제제, 특히 체크포인트 억제제와 사용될 때, 예를 들어 타핀라(Tafinlar);
TGF 베타 수용체 키나아제 억제제(특히 체크포인트 억제제와 함께 사용될 때);
MAP 키나아제 억제제, 예를 들어 메키니스트(Mekinist)(MAP 키나아제 키나아제 1의 소분자 억제제(MAP2K1; MEK1) 및 MEK2);
STING (Stimulator of interferon genes) 작용제, 예를 들어 MIW815 (STING 작용제);
NK 세포 활성제, 예를 들어 α-갈락토실세라마이드(특히 체크포인트 억제제와 함께 사용될 때); 및
전염증성 사이토카인, 예를 들어 IL-2, INFγ, GM-CSF, IL-7, IL-12, IL-15, IL-18 및 IL-21;
또는 둘 이상의 이들의 조합.
실시예
실시예 1: 본 발명의 액체 조성물의 제조
소듐 도데실 설페이트(SDS) 및 D-소르비톨을 정제수와 일정한 교반 하에 혼합하여 수상을 제조하였다. 그 후 상기 용액에 젤라틴을 가하고 약 60-70℃로 완만히 열을 가해 젤라틴의 완전한 융해를 달성하였다. 수상의 조성물은 아래의 표 1에 나타나 있다.
표 1
Figure pct00003
실온에서 교반하면서 2-(2-에톡시에톡시)에탄올(트랜스큐톨 HP (Transcutol HP)), 글리세릴 모노올레이트/디올레이트(Capmul GMO-50) 및 카프릭/카프릴릭 트리글리세라이드(Miglyol 810)를 함께 혼합하여 용액을 형성함으로써 오일상을 제조하였다. 사이클로스포린 A를 가하고 투명한 용액을 얻을 때까지 혼합하였다. 오일상의 조성물은 아래의 표 2에 나타나 있다.
표 2
Figure pct00004
오일상을 약 1:5 (오일상:수상)의 비율로 가열된 수상과 혼합하였다. 생성된 혼합물은 균질성을 달성하기 위해 자석 교반기를 사용하여 60-70℃에서, 250-350 rpm으로 교반하였다.
실시예 2: 미니비드의 제조
본원에 기재된 미니비드는 본 발명의 조성물일 수 있다. 대안으로 미니비드는 코어일 수 있다. 미니비드는 일반적으로 다음의 절차에 따라 미니비드를 형성하여 제조하였다.
심리스(seamless) 미니비드 형태의 조성물 또는 코어는 Spherex 과정을 사용하여 다음과 같이 제조하였다.
실시예 1에 기재된 절차에 따라 수상 및 오일상 혼합물을 제조하였다.
그 후 상기 혼합물을 3 mm 지름의 단일 노즐 출구를 갖는 진동 노즐을 통해 공급(온도 제어되는 튜빙을 통해)하였다. 용액이 진동 노즐을 통해 10℃ 온도의 일정히 흐르는 중쇄 트리글리세라이드(Miglyol 810) 냉각 오일의 냉각 챔버 내로 흐르면서 심리스 미니비드를 형성하였다.
미니비드를 냉각 오일로부터 제거하고 원심분리기에 위치시켜 과량의 오일을 제거하였다. 원심분리 후, 냉각기 온도를 10℃ 및 가열기 온도를 20℃로 설정하여 제1 건조 단계를 개시하였다. 건조기는 15 rpm으로 회전하였다. 비드가 건조 드럼 내에서 자유롭게 회전하는 것이 관찰되면, 건조된 것으로 간주하였다.
미니비드를 에틸 아세테이트로 세척한 후 앞서 제1 건조 단계에서 언급된 것과 동일한 건조 조건 하에서 추가로 24시간 동안 건조하였다. 건조된 미니비드를 그 후 체로 걸러 과대 및 과소 크기의 비드를 제거하여 지름 1 mm - 2 mm의 코어를 얻었다. 이 절차는 표 3에 나타난 조성물을 갖는 코어를 제공하였고, 값은 각 성분에 대한 총 중량의 중량 백분율이다.
표 3
Figure pct00005
실시예 3: 에틸셀룰로오스의 오버코트(Overcoat)를 갖는 미니비드의 제조
제1 코팅(또는 서브코트로 지칭됨), Opadry로 코팅한 미니비드를, 실시예 3의 절차에 따라 생산하였다. 실시예 2의 절차로 생산한 미니비드를 그 후 수릴리스(Surelease®)(에틸셀룰로오스 분산)의 오버 코트(overcoat)(또는 본원에서 제2 코팅으로 지칭됨)로 코팅하였다.
수릴리스(Surelease®) 오버코트는 다음의 절차로 적용하였다. 수릴리스(Surelease®)를 스테인리스 스틸 용기에 천천히 가하고 혼합해 오버코트를 위해 필요한 수릴리스(Surelease®) 코팅 현탁을 제공하였다. 그리고 나서 미니비드를 유동층 코터(fluid bed coater)(Wurster column)로 로딩하고 현탁액으로 코팅함으로써 생성된 코팅 현탁액을 미니비드 표면상에 적용하였다. 주입구 공기 온도 및 주입구 온도 용적과 같은, 처리 파라메터는 필요한 코팅 중량 증가에 도달할 때까지 미니비드 온도가 40℃ 내지 42℃를 유지하도록 조정하였다. 오버코트된 미니비드는 그리고 나서 40-45℃에서 한 시간 동안 코터에서 건조시켰다.
미니비드는 수릴리스(Surelease®)의 13% 중량 증가로 코팅하였다.
오버코트를 갖는 미니비드는 표 4에 나타난 조성물을 갖는다.
표 4
Figure pct00006
실시예 4: 융합된 T 세포에 의해 유도된 원치 않는 효과의 마우스 모델
다음의 마우스 주(strain)를 사용하였다: NSG 또는 NOD scid gamma　(NOD.Cg-Prkdc scid 　Il2rg tm1Wjl /SzJ) (Jackson Labs, Bar Harbour, Maine, USA). NSG는 현재까지 기재된 가장 면역 결핍된 상태인 근친 교배 실험실 마우스의 주(strain)이다. NSG 마우스는 성숙 T 세포, B 세포 및 자연 살해(NK) 세포를 결핍한다. NSG 마우스는 또한 다수의 사이토카인 신호전달 경로가 결핍되어 있고, 그들은 선천 면역에 많은 결함을 가진다. NSG 마우스 중의 화합물 면역결핍은 광범위한 원발 인간 세포의 생착(engraftment)을 허용하며 인간 생물학 및 질환의 많은 분야의 정교한 모델링을 가능하게 한다. 모든 마우스는 보건국(아일랜드) 지침에 따라 보관되었고 HPRA로부터 AE19124/P002 프로젝트 허가의 조건으로 윤리적 승인을 받아 사용하였다. 동물실험을 위한 샘플 크기는 SISA를 사용하여 통계적 검증력 계산(statistical power calculation)에 의해 확인하였다. SISA 소프트웨어는 온라인 http://home.clara.net/sisa/power.htm.에 있다.
인간 말초혈액 단핵세포(PBMC) 분리
적혈구, 백혈구 및 혈소판을 함유한 전혈 버피 코트(buffy coat) 팩을 더블린, St. Jame's Hospital에서 IBTS (Irish Blood Transfusion Service)로부터 공급하였다. PMBC는 밀도 구배 원심분리에 의해 전혈에서 분리하였다. 버피 코트 팩의 내용물을 인산 완충 식염수(PBS)(Oxoid Ltd., Basingstoke, Hampshire, England)로 1/2로 희석하였다. 25 ml의 희석한 혈액을 50 ml 원심 튜브(Sarstedt) 중 15 ml 림포프렙(lymphoprep)(Axis-Shield PoC AS, Oslo, Norway) 위에 조심스럽게 놓았다. 튜브는 감속설정(brake) 없이 낮은 가속으로 2400 rpm에서 25분간 상온에서 원심분리하였다. 원심 분리 후, 적혈구 및 잔류 혈장을 남기면서 PBMC를 함유하는 흰색 버피 코트층을 새로운 멸균 50 ml 튜브로 옮겼다. 수집한 PBMC를 감속설정(brake) 및 높은 세팅으로 가속하여 1800 rpm에서 10분간 4℃에서 원심 분리하였다. 상청액을 제거하고 PBMC 펠렛을 20 ml의 PBS로 세척하고 1500 rpm에서 5분 동안 4℃에서 총 2회 원심 분리했다. 잔여 적혈구를 5 ml 1× 적혈구 용해 완충액(Biolegend, London, UK)을 사용하여 5분 동안 용해시켰다. 10% (v/v) 열 불활성화된 FBS, 50 U/㎖ 페니실린(Sigma-Aldrich), 50 ㎍/ml 스트렙토마이신(Sigma-Aldrich), 2 mM L-글루타민(Sigma-Aldich) 및 0.1% (v/v) 2-머캅토에탄올(Gibco))로 보충된 25 ml의 완전 RPMI (cRPMI)(RPMI 1640 (Sigma-Aldrich)를 첨가하여 용해를 종결시켰다. PBMC를 4℃에서 10분간 1000 rpm으로 원심 분리하여 혈소판을 제거하였다. PBMC 펠렛을 25 ㎖의 cRPMI에 재현탁하고 숫자를 세었다.
마우스에게 인간 PBMC의 투여
NOD.Cg-PrkdcscidIL2tmlWj1/Szj (NOD-Scid IL-2rγnull)(NSG) 마우스를 전처리 용량(conditioning dose)인 2.4 회색(Gy) 전신 감마선 조사에 노출시켰다. 갓 분리 한 인간 PBMC를 27 게이지 바늘과 1 ml 주사기를 사용하여 조사 후 4시간에서 24시간 이하 사이에 정맥 주사로 꼬리 정맥에 투여하였다. 주입 전에, PBMC를 멸균 PBS로 3회 세척하였다. 이전의 연구(Tobin et al., 2013)에서, PBMC의 최적 용량은 8.0×105 g-1인 것으로 밝혀졌다. 따라서 본 연구에서는 8.0×105 g-1을 사용하였다. 마우스들은 체중 감량이 있었는지, 털이 헝클어졌는지, 자세를 구부리는지 확인하기 위하여 조사하였다. 동물들을 우리로 되돌려 보내고 처음 1시간 동안 면밀히 관찰하였고 그 이후 일정한 간격으로 고통스러움이나 좋지 못한 건강의 임의의 징후가 있는지 관찰하였다. 동물의 체중을 매일 측정하고 그에 따라 체중 감량을 기록했다. 15% 이상의 총 체중 감소를 나타냈던 임의의 동물들은 인도적으로 희생시켰다. 또한, 동물 복지 점수 시트는 연구 전체에 걸쳐 활용하였다.
인간 MSC 또는 PBMC의 정맥 투여
주입 전에, 인간 PBMC 또는 MSC를 멸균 PBS로 3회 세척하였다. PBMC는 8.0×105 g-1로 마우스에게 투여하였고 MSC는 5.7×104 g-1로 투여하였다. PBMC 또는 MSC는 27 게이지 바늘 및 1 ml 주사기를 사용하여 꼬리 정맥으로 전달하였다. 각 마우스는 총 0.3 ml를 받았다. PBMC를 0일째에 주었고, 7일째에 MSC를 주었다. i.v 주사 후, 동물을 상기와 같이 관찰하였던 우리로 복귀시켰다.
사이클로스포린 제제의 제조 및 투여
실시예 2 및 실시예 3의 사이클로스포린 조성물. 즉시 방출 비드(실시예 2)는 10.87% 로딩의 CsA (109 ㎍/mg)를 가졌다. 이들 비드들 각각에 대해 평균 중량은 2-3 mg의 범위였고 생성된 활성 약리학적 성분(API)은 비드 당 220-330 μ/mg이었다. CsA의 결장 방출 비드(실시예 3)는 비드 당 250-350 μg의 API를 갖는 10% 로딩의 CsA (100 μg/mg)를 가졌다. 정확한 투여량(25 mg/kg)을 보장하기 위해 투여 전에 각 비드의 중량을 재었다. 투여는 경구 위관 영양법(oral gavage)에 의해 수행하였다. 간단하게, 각각의 비드를 공급 바늘에 연결된 200 μl PBS를 함유하는 주사기를 사용하여 공급(feeding) 바늘(Vet Tech, Cheshire, UK)(회사, 도시, 국가)의 끝에 로딩하였다. 마우스를 신중하게 움켜잡고 공급 바늘을 마우스의 입으로 삽입하였다. 공급 바늘을 조심스럽게 식도 아래로 유도하고, 비드를 주사기 내 200 μl PBS의 도움으로 방출시켰다. CsA의 Neoral® 제제는 100 mg 정제의 형태였다. CsA 용액을 바늘(18G)과 5 ml 주사기로 정제 안쪽에서 꺼내어 50 ml 튜브에 수집하였다. 투여 전, Neoral®을 PBS로 희석하여 25 mg/kg 용량으로 만들었고 300 μl을 상기 기술한 바와 같이 경구 위관 영양법으로 전달하였다. CsA의 Sandimmun® 제제는 50 mg/ml의 주사가능한 용액의 형태였다. CsA 용액을 PBS로 희석하여 투여하기 전에 25 mg/kg 용량으로 만들었다. Sandimmune®은 27 게이지 바늘과 1 ml 주사기를 사용하여 꼬리 정맥으로 전달하였다. 각 마우스는 총 0.3 ml를 받았다. 각 절차 후에, 동물들은 상기와 같이 그들이 관찰되는 우리로 복귀시켰다.
마우스는 즉시 방출(IR) 및 결장 방출(CR) 미니비드의 다음의 조합으로 투여하였다.
Figure pct00007
상기 기술된 조성물 A 내지 E로 처리한 마우스 군 이외에, 상기 기술된 바와 같이 Neoral 및 Sandimmune으로 투여한 마우스 군도 있었다. 또한 아무 PBMC 없이 PBS를 투여한 마우스 대조군(결과에서 "PBS"로 불림) 및 PBMC는 투여하였으나 사이클로스포린은 투여하지 않은 군인, 미처리군(결과에서 "PBMC만"으로 불림)도 있었다.
마우스로부터 세포 및 사이토카인 분석
마우스로부터 인간 비장세포의 분리
비장을 마우스로부터 무균으로 10% (v/v) 열 불활성화 FBS, 50 U/ml 페니실린, 50 ㎍/ml 스트렙토마이신 및 2 mM L-글루타민으로 보충된 cRPMI를 함유하는 50 ml 튜브로 옮겼다(표 2.1). 비장을 멸균 플런저(plunger)를 사용하여 70 μm 필터를 통해 신선한 50 ml 튜브로 균질화시킨 다음 분리된 비장 세포를 0.1% v/v 2-머캅토에탄올(Invitrogen-Gibco)을 함유하는 10 ml cRPMI에 현탁시켰다. 이 균질액을 300 g에서 5분간 원심 분리하고 적혈구 용해 완충 용액(BioLegend) 1 ml에서 10분간 실온에서 재현탁시켰다. 2 ml의 배지를 현탁액에 첨가하여 용해액을 중화시킨 후 600 g에서 5분간 원심 분리하였다. 상청액을 제거하고 세포를 신선한 cRPMI에 재현탁하고 숫자를 세었다. FACS 분석을 위해 세포를 재현탁하였다(2.10.1 부분 또는 2.10.2 부분).
비장 세포 배양물으로부터 사이토카인 분석
상기 기재한 바와 같이 마우스로부터 비장을 제거하고 단일 세포 현탁액을 제조하였다. 세포를 96 웰 둥근 바닥 플레이트에 웰당 2×105로 접종하고 cRPMI에서 배양하였다. 세포를 10 μg/ml Phorbal 12-myrisate 13-acetate (Sigma-Aldrich) 및 10 μg/ml 이오노마이신(ionomycin)(Sigma-Aldrich)으로 자극하지 않거나 자극하지 않았다. 상청액을 IL-1β, IL-2, IL-6, IL-17, IL-23 및 IFNγ의 검출을 위해 72 시간 후 수확하였다. 상청액의 사이토카인은 ELISA로 검출하였다.
모든 ELISA는 제조자의 지시(R & D Systems)에 따라 수행하였다. PBS 중의 특이적 포획 항체(인간 IFNγ, IL1β, IL2, IL6, IL17 또는 IL23)를 96 웰 미세적정 플레이트(NUNC)에 첨가하고 밤새 실온에서 배양하였다. 그런 다음 플레이트를 세척 완충액(0.05% v/v Tween 20으로 보충된 PBS)에서 3회 세척한 다음 차단 용액(1% w/v BSA가 보충된 PBS)에서 최소 1시간 동안 배양했다. 이어서, 플레이트를 세척하고 100 ㎕/웰의 샘플 상청액 또는 상응하는 사이토카인 표준과 함께 실온에서 2시간 동안 배양하였다. 세척 후, 플레이트를 실온에서 추가 2시간 동안 특이적 검출 항체와 함께 배양하였다. 플레이트를 다시 세척하고, 특이적 시약 희석제(BSA가 보충된 트리스 완충 용액(TBS)(Sigma-Aldrich))에서 1/40으로 희석한 100 ㎕/웰의 스트렙타비딘 홀스래디쉬 퍼옥시다아제(HRP)(R & D Systems) 접합체와 함께 20분 동안 배양하였다. 세척 후, 플레이트를 100 ㎕/웰의 테트라메틸벤지딘(TMB) 기질(Sigma-Aldrich)과 함께 20분 동안 실온에서 직광을 피해 배양하였다. 50 ㎕/웰의 1 M H2SO4를 첨가하여 20분 후에 반응을 중단시켰다. Gen5 데이터 분석 소프트웨어가 장착된 마이크로플레이트 판독기(BioTek EL800)를 사용하여 모든 ELISA에 대해 450 nm에서 샘플 및 표준의 흡광도(광학 밀도(O.D))를 측정하였다. Graph pad Prism5 소프트웨어를 사용하여 알려진 사이토카인 농도의 표준 곡선과 비교하여 각 샘플의 사이토카인 농도를 확인하였다.
마우스 간 또는 폐로부터 인간 세포의 분리
간 및 폐를 마우스로부터 무균으로 cRPMI를 함유하는 50 ml 튜브 내로 옮겼다(표 2.1). 조직을 멸균 플런저(plunger)를 사용하여 70 ㎛ 필터를 통해 신선한 50 ㎖ 튜브로 균질화시킨 다음 분리된 세포를 25 ㎖ cRPMI에 현탁시켰다. 이 균질액은 15 ml의 림포프렙(lymphoprep) 밀도 구배(Axis-Shield)에 걸쳐 놓고 감속설정(brake) 없이 낮은 가속으로 2400 rpm에서 25분간 원심 분리하였다. 계면을 흡입하여 신선한 표지된 50 ㎖ 튜브에 수집하였다. 계면을 25 ml PBS로 2회 세척하고 300 g에서 5분간 원심 분리하였다. 상청액을 제거하고 세포를 이하 기술되는 바와 같이 유세포 계측법(flow cytometry) 분석을 위해 재현탁시켰다.
마우스 위장관(GI tract)으로부터 인간 세포의 분리
소장 및 결장을 마우스로부터 무균으로 cRPMI를 함유하는 15 ㎖ 튜브 내로 옮겼다(표 2.1). 조직 샘플을 300 rpm에서 수평으로 일정하게 흔들면서 37℃에서 클로스트리듐 히스톨리티쿰(Clostridium histolyticum)(Sigma-Aldrich)으로부터 300 U/ml의 콜라게나아제, 10 ml 소화 용액(20 U/ml DNase I (Roche Diagnostics, Germany) 중에 두었다. 소화 1시간 후, 균질액을 멸균 플런저를 사용하여 70 ㎛ 필터를 통해 신선한 50 ㎖의 튜브로 통과시킨 다음, 분리된 세포를 25 ㎖의 cRPMI에 현탁시키고 1500 rpm에서 10분간 원심분리 하였다. 세포를 80% Percoll (Sigma-Aldrich) 4 ml 위에 덮어씌운 40% Percoll (Sigma-Alrdich) 8 ml에 재현탁하고 감속설정(brake) 없이 낮은 가속으로 20분 동안 2200 rpm으로 원심 분리했다. 계면을 흡입하여 제거하고 새로운 튜브로 옮겼다. 15 ml의 PBS를 첨가하고 계면을 4℃에서 1400 rpm으로 8분 동안 원심 분리했다. 상청액을 제거하고 세포를 하기 기술된 바와 같이 유세포 계측법(flow cytometry) 분석을 위해 재현탁시켰다.
마우스 위장관으로부터 사이토카인 분석
앞서 기술한 바와 같이 소장 및 결장을 마우스에서 제거하고 절편(section)을 즉시 스냅(snap) 동결시키고 -80℃에서 저장하였다. 조직을 해동시키고 장 내용물을 제거하였다. 조직을 잘게 썰고 Ultra-Turrax 균질기(독일)를 사용하여 냉각한 균질화 완충액(PBS: 프로테아제 억제제 칵테일(로슈)로 보충된 2% 열 불활성화 FBS) 1 ml 중에서 균질화하였다. 균질액을 4℃에서 13,000 rpm으로 15분 동안 마이크로 원심 분리하였다. 상청액을 제거하고 -20℃에서 보관하였다. 위장관 추출물의 단백질 농도는 Bradford 분석법(2.6.5 부분)으로 확인하였다. 단백질 추출물은 IL-1β, IL-2, IL-6, IL-17, IL-23 및 IFNγ에 대해 분석하였다. 상청액 내의 사이토 카인은 앞서 기술한 바와 같이 ELISA로 검출하였다.
유세포 계측법에 의한 시험관내 및 생체내 인간 PBMC의 검출
인간 세포에 의한 사이토카인 생산 검출
세포 내 TNFα 및 IFNγ를 유세포 계측법으로 분석하였다. 간단히, 공동 배양(coculture) 분석 또는 생체내 연구로부터 회수한 PBMC를 150 μl FACS 완충액에서 세척하고 96 웰 v 바닥 플레이트에서 950 rpm으로 5분 동안 원심 분리하였다. PBMC를 CD45 PercP, CD4 APC 및 CD8 PE 또는 상응하는 아이소타입(isotype) 대조 항체로 4℃에서 15분 동안 표지하였다. 세포를 150 μl FACS 완충액에서 두번 세척하고, 5분 동안 950 rpm에서 원심 분리하고 100 μl 고정(fix)/투과(permeabilisation) 완충액(eBioscience)으로 1시간 또는 밤새 고정시켰다. 이어서 세포를 200 μl 투과 완충액(eBioscience)으로 투과시키고 150μl의 FACS 완충액으로 세척하고 3 ㎕ 2% 래트 혈청을 사용하여 15분 동안 차단하였다. 세포를 TNFα, IFNγ 또는 아이소타입 대조 항체로 표지하고 4℃에서 1시간 동안 방치하였다. 샘플을 150 μl FACS 완충액으로 2회 세척하고, 카운팅(counting) 비드(3×105/ml)에 재현탁하고, CFlowPlus 소프트웨어(BD Biosciences)를 사용하여 유세포 계측법(Accuri C6 유동 세포 계수기, BD Biosciences)으로 분석 하였다.
FOXP3 발현을 검출하기 위한 세포의 세포내 염색
FoxP3 발현은 FoxP3 염색 키트(eBioscience)를 사용하여 세포내에서 분석하였다. 간략하게, 공동 배양(coculture) 분석 또는 생체내 연구로부터 회수한 PBMC를 150 μl의 FACS 완충액에서 세척하고 950 rpm에서 5분간 원심 분리하였다. PBMC를 4℃에서 15분 동안 CD4 APC 및 CD25 PE 또는 상응하는 아이소타입 대조 항체로 표지하였다. 세포를 150 μl FACS 완충액에서 2회 세척하고, 5분 동안 950 rpm에서 원심 분리하고 100 μl 고정/투과 완충액(eBioscience)으로 1시간 동안 고정시켰다. 이어서 세포를 200 ㎕ 투과 완충액(eBioscience)으로 투과시키고, 150 ㎕ FACS 완충액으로 세척하고 3 ㎕ 2% 래트 혈청을 사용하여 15분간 차단하였다. 세포를 FoxP3 또는 아이소타입 대조 항체로 표지하고 4℃에서 1시간 또는 밤새 방치했다. 샘플을 150 μl FACS 완충액으로 2회 세척하고, 카운팅(counting) 비드(3×105/ml)에 재현탁하고, CFlowPlus 소프트웨어(BD Biosciences)를 사용하여 유세포 계측법 (Accuri C6 유동 세포 계수기, BD Biosciences)으로 분석 하였다.
조직학 조직 준비(HISTOLOGY TISSUE PREPARATION)
폐, 간, 비장 및 소장을 실험 마우스로부터 13일째에 수확하고, 10% (v/v) 중성(neutral) 완충된 포르말린으로 적어도 24시간 동안 고정시켰다. 샘플을 추가로 24시간 동안 70% 에탄올로 옮겼다. 샘플은 조직을 에탄올(70%, 80%, 95%×2, 100%×3) 및 자일렌(×2)(Sigma Aldrich)을 포함하는 순차적 탈수 용액 및 고정액(fixatives)에 침지시키는 자동화 프로세서(Shandon Pathcentre, Runcorn, UK)를 사용하여 조직학을 위해 처리하였다. 처리 후 조직을 Shandon Histocentre 2 (Shandon)를 사용하여 파라핀 왁스에 묻고 4℃에서 밤새도록 두었다. Shandon Finesse 325 마이크로톰(microtome)(Thermo-Shandon, Waltham, MA, USA)을 사용하여 각 조직을 5 μm 절편(section)으로 절단했다. 절편의 임의의 접힘을 제거하기 위해 절편을 뜨거운 물 욕조(42℃)로 옮기기 전 냉수에 두었다. 조직 절편을 현미경 슬라이드(VWR) 위에 놓고 밤새 기건(air dry)시켰다. 그리고 나서 샘플을 H&E (2.11.2 부분)로 염색하고 2.11.4 부분에 요약된 시스템을 사용하여 맹검으로 점수를 매겼다.
조직학 헤마톡실린/에오신 염색(HISTOLOGY HAEMATOXYLIN/EOSIN STAINING)
H&E 염색을 시작하기 전에 왁스 제거를 돕기 위해 슬라이드를 최소 1시간 동안 56℃로 가열하였다. 그리고 나서 슬라이드를 자일렌(Sigma Aldrich)으로 10분간 옮겼다. 이를 새로운 자일렌으로 추가 10분 동안 반복하였다. 그 후 샘플을 각 5분 동안 3회 감소하는 농도의 에탄올(100%×2, 90% 및 80%)에 침지시킨 후 재수화시켰다. 샘플을 5분 동안 dH2O로 옮기고 나서 헤마톡실린(Haemotoxylin)(Sigma-Aldrich)에 3분 동안 침지시켰다. 그 후 샘플을 H2O 하에서 2분 동안 세척한 다음 1% 산성 알코올에 20초 이하로 두었다. 샘플을 H2O 하에서 다시 세척한 후 에오신(Eosin Y)(Sigma-Aldrich)에 3분간 침지시키고, 다시 H2O로 세척하였다. 슬라이드는 각 5분 동안 일련의 증가하는 에탄올 농도(80%, 90%, 100%)로 침지시킴으로써 탈수시켰다. 샘플을 기건시키고, DPX 봉입제(mounting media)(BDH)로 봉입시키고, 광학 현미경으로 검사하였다.
TUNEL (TERMINAL DEOXYNUCLEOTIDYL TRANSFERASE MEDIATED dUTP NICK END LABELING) 분석을 사용한 세포사멸의 조직학적 검출
TUNEL 분석을 시작하기 전에, 왁스 제거를 돕기 위해 슬라이드를 최소 1시간 동안 56℃로 가열하였다. 이어서, 슬라이드를 자일렌(Sigma-Aldrich)으로 10분간 옮겼다. 이를 새로운 자일렌으로 추가 10분 동안 반복하였다. 그 후 샘플을 각 5분 동안 3회 감소하는 농도의 에탄올(100%×2, 90% 및 80%)에 침지시킨 후 재수화시켰다. 그런 다음 샘플을 2분 동안 dH2O로 옮긴 후 6분 동안 끓는 항원 탈마스킹 용액(boiling antigen unmasking solution)(Vector, Peterborough, UK)에 침지시켰다. 그 후 샘플을 PBS로 2분간 세척하였다. 조직 절편을 ImmEdge ™ 왁스 펜 (Vector)으로 제한하였다. 일단 왁스가 말랐다. 10 ㎕의 효소-표지 용액(Roche)을 조직에 직접 첨가하였다. 샘플을 37℃의 가습 챔버에서 1시간 동안 배양하였다. 샘플을 PBS로 세척한 후 DAPI 핵 염색 100 ng/ml를 각 조직 샘플에 첨가하였다. 슬라이드를 실온에서 배양하고 빛으로부터 보호하였다. 샘플을 기건시키고, VectaMountTM 수용성 봉입제(mounting media)(Vector)로 봉입하고 형광 현미경 하에서 검사하였다.
조직학적 채점(HISTOLOGICAL SCORING)
H&E 염색 후, 슬라이드를 이전의 처리에 대한 참조없이 암호화하고 맹검 방식으로 검사하였다. 폐, 간 및 위장관에서 질환의 진행을 평가하기 위해 준-정량적 인 채점 차트를 사용하였디(Tobin et al., 2013). 병리학적 채점은 다음과 같이 수행하였다 :
Figure pct00008
마우스 폐, 간, 비장 및 위장관 내 CSA의 검출
폐, 간, 비장 및 위장관을 실험 마우스로부터 13일째 수확하고 즉시 스냅(snap) 동결시키고 -80℃에서 저장하였다. 조직을 실온으로 해동시켰다. 500 ㎕의 2% N-아세틸-L-시스테인(Sigma-Aldrich)을 각 샘플에 첨가하였다. 샘플을 10분간 보텍싱하고(vortexed) 13000 rpm에서 2분 동안 원심 분리하였고, 액상을 15 ml 튜브에 수집하였다. 액상 (A) 및 남은 잔류물은 이 시점에서 별도로 준비하였다. 500 ㎕의 50% EtOH (Sigma-Aldrich)를 25 ㎕의 내부 표준 작업 용액과 함께 남은 잔류물에 첨가하였다. 남은 잔류물 내 조직은 초음파 프로세서(주기: 0.5 초, 최대 진폭)를 사용하여 30초 동안 파괴하였다. 액상 (B)를 15 ml 튜브에 수집하였다. 500 ㎕의 50% EtOH (Sigma-Aldrich)를 남은 잔류물에 첨가하고 1분 동안 보텍싱하였다. 남아있는 모든 액체를 액상 (B)과 함께 15 ml 튜브로 옮겼다. 500 ㎕의 50% EtOH (Sigma-Aldrich)를 25 ul의 내부 표준 작업 용액과 함께 액상 (A)에 첨가하였다. 디이소프로필에테르(Sigma-Aldrich) 4 ml를 액상 (A) 및 (B)에 첨가하였다. (A)와 (B)를 5분 동안 격렬히 보텍싱하고 4000 rpm에서 2분간 원심 분리한 후 -80℃에서 10 분간 저장하였다. 유기 액상을 (A)와 (B)로부터 수집하고, 40℃에서 15분 동안 고속 진공(speedy vac)(DNA Speedy Vac Concentrator, Thermo Scientific)을 사용하여 증발시켰다. 50 ㎕의 50% EtOH (Sigma-Aldrich)을 (A) 및 (B)에 첨가하였다. (A) 및 (B)를 2분간 보텍싱하고 4000 rpm에서 1분간 원심 분리하였다. 약 50 ㎕를 LC-MS 분석용 주입을 위한 원뿔형 자동 샘플러 바이알로 옮겼다.
GI 조직 내 사이클로스포린 수준은 iv 투여된 사이클로스포린(Sandimmune) 보다 본 발명의 조성물 A-E에서 더 높을 수 있다.
실시예 5: 생존 및 중량 변화 데이터
각 마우스 군의 생존 데이터를 도 1에 나타내었고, 중량 변화 데이터를 도 2에 나타내었다. 도 1로부터 본 발명의 조성물은 사이클로스포린으로 처리되지 않은 마우스와 비교하여 향상된 생존율을 제공한다는 것이 명백하다. 본 발명의 특정 조성물은 미처리군과 비교하여 생존율에 있어 통계적으로 유의한 향상을 제공하였다. 특히, Neoral은 생존율에 있어 통계적으로 유의한 향상을 제공하지 못했다.
유사한 경향이 중량 변화 데이터에서도 관찰되었다. 중량 손실은 미처리군과 비교하여 사이클로스포린으로 투여한 군에서 더 낮았다.
실시예 6: T-세포 생착(T-cell Engraftment )
도 3a-l은 마우스의 비장, 폐, 간 및 장에서의 T 세포 수준에 관한 데이터를 보여준다. 각각의 마우스 군에 대해 CD45+ 세포(도 3a, 3d, 3g 및 3j), CD4+ 세포 (3b, 3e, 3h 및 3k) 및 CD8+ 세포(도 3c, 3f, 3i 및 3l)의 총 수가 나타나 있다. 총 세포 수는 본 발명의 조성물에 의해 유의하게 감소되지 않는다는 것이 명백하다. 비장, 폐, 간 또는 장에서의 본 발명의 조성물의 투여에 의해 공여자, 주입된 T 세포의 생착이 손상되지 않는다.
실시예 7: 결장 전염증성 사이토카인(Colon Pro-Inflammatory Cytokines )
도 4a-f는 각 군으로부터의 마우스 결장에서 IL2, IFNg, IL17, IL23, IL6 및 IL1b의 양을 각각 나타낸다. 본 발명의 조성물은 T 세포가 주입된 마우스의 결장에서 사이토카인 방출 증후군과 관련된 특정 사이토카인의 생성을 유의하게 감소시킨다.
실시예 8: 소장 전염증성 사이토카인(Small Intestine Pro-Inflammatory Cytokines)
도 5a-e는 소장에서의 IL2, IFNg, IL17, IL23, 및 IL1b의 양을 나타낸다. 결장 및 도 4a-f에서와 같이, 본 발명의 조성물은 소장에서의 사이토카인의 수를 감소시킨다.
실시예 7 및 도 3a-l의 데이터를 실시예 8 및 실시예 9의 데이터와 비교하면, 본 발명의 조성물이 T 세포 생착을 손상시키지 않지만, CRS에서 중요한 역할을 하는 특정 사이토카인의 양을 통계적으로 유의하게 감소히킨다는 것이 명백하다.
실시예 9: 비장성 전염증성 사이토카인( Spleenic Pro-Inflammatory Cytokines)
도 6a-c는 사이클로스포린이 마우스 비장에서 IL-2, IFNg 및 IL17의 생산을 유의하게 감소시킴을 보여준다. 대조적으로 도 3a-c는 T 세포 생착이 통계적으로 유의하게 영향받지 않음을 보여준다.
실시예 10: 폐 전염증성 사이토카인(Lung Pro-Inflammatory Cytokines )
도 7a-e는 사이클로스포린이 폐 내 특정 전염증성 사이토카인을 통계적으로 유의하게 감소시킴을 보여준다. 또한, 도 3d-f에 나타난 T 세포 생착 유지에 대한 사이토카인의 감소와 대비하는 것은 본 발명의 유익한 효과를 보여준다.
실시예 11: GIT 내 T 세포
도 8 및 9는 GIT 내 T 세포의 다양한 종류의 수준을 보여준다. 도 8은 FoxP3+, 조절 T 세포의 수준을 나타내고 도 9는 TNFα 생산 T 세포의 수준을 나타낸다. 도 8 및 도 9의 비교는 유익한 조절 T 세포인 FoxP3+는 통계적으로 유의하게 감소하지 않았지만, 사이토카인 방출을 촉진하는 TNFα 생산 T 세포는 GIT에서 통계적으로 유의하게 감소되었음을 보여준다. Treg 세포가 항염증제를 방출함으로써 염증의 균형을 조절한다는 점을 감안할 때 GIT에서 조절 T 세포의 존재가 높아지면 유익하다.
실시예 12: 장 융모 내 염증 및 세포사멸(Inflammation and apoptosis in Intestinal Villi )
도 10b 및 도 11b의 조직학 슬라이드는 각각 미처리 마우스 군에서 소장 융모의 염증 및 세포사멸을 나타낸다. 미처리 마우스 군은 건강한 마우스 모델에 비해 높은 수준의 염증 및 세포사멸을 나타준다. 본 발명의 조성물로 투여된 마우스 군은 상대적으로 최소의 염증 및 낮은(자연 상태에 가까운) 수준의 세포사멸을 나타낸다.
실시예 4의 마우스 모델은 미처리 마우스에서 높은 수준의 T 작동 세포를 생성한다. 이는 건강한 대조 마우스와 비교하여 미처리 마우스에서 상당한 양의 TNFα 생산 T 세포를 보여주는 도 9로부터 명백하다. 이는 치료가 T 작동 세포의 투여를 포함할 수 있는 또는 치료가 T 작동 세포를 촉진하는 NFAT 매개 T 세포 치료와 동등하다. 본 출원에서 제시된 데이터는 높은 T 작동 세포 수준의 존재 하에서 신체(폐, 간, 비장, 소장 및 결장에서) 전체에 걸친 사이토카인이 처리되지 않은 것과 비교하여 감소함을 보여준다(도 4 내지 7 참조). 대조적으로, 그리고 결정적으로, 신체 전체에 걸친 T 세포 수준은 크게 영향을 받지 않는다, 도 3 참조. 더욱이, 다른 신체 조직으로의 T 세포 회기는 영향을 받지 않은 것으로 보인다. 따라서 NFAT 매개 T 세포 치료의 유지는 본원에 포함된 자료를 토대로 예상될 수 있다. 또한 신체 전체에 걸친 사이토카인 수치의 감소는 사이토카인 방출 증후군이 완화될 수 있음을 암시한다. 또한, GIT에서 TNF-알파 생산 T-세포의 백분율은 본 발명의 조성물로 투여된 마우스에서 감소되었다(도 9 참조). GIT의 TNF-알파는 GI 염증 과정에서 중요한 역할을 한다.
T 세포에서 NFAT-활성화의 역할에 대한 이용가능한 지식과 함께 상기 언급된 연구는 발명자들로 하여금 암 치료와 함께 발생하기 쉬운 원치 않는 효과, 보다 특히 T 세포 활성의 조절장애로 발생하는 CRS 및 위장관 염증과 관련된 증상들을 방지하는 것을 목적으로 하는, CAR-T 치료 및 체크포인트 억제제 및 이중특이성 항체와 같은 T 세포 활성화제와 같은 T 세포에 의해 매개되는 암 치료용 보조 치료의 새로운 형태를 제안하도록 한다. 상기 언급된 연구는 암치료를 위한 T 세포의 원하는 활성이 계속되도록 하면서, GI관으로 NFAT 활성화 억제제의 공동-투여, 보다 구체적으로 예를 들어, GI로의 그러한 전달을 위해 제형화된 사이클로스포린 A의 경구 투여에 의한 보조 치료의 토대를 마련한다. 상기한 바와 같이, 이런 방식으로 효과적인 T 세포 매개 암 치료를 유지하면서 원치 않는 T 세포 활성을 누르는 능력은 중요하게 사이클로스포린 A와 같은 NFAT 활성화 억제제의 통상적인 예방적 사용조차 동일한 목적을 위해 타당한 것으로 만든다. 이는 T 세포 매개 치료의 적용을 방해할 수 있는 일반적으로 보고된 원치 않는 효과를 줄이는데 있어 상당한 기여로 보여진다.

Claims (88)

  1. NFAT-활성화 T 세포에 의해 매개되는 치료와 함께 발생하는 하나 이상의 원치 않는 효과를 치료하는데 사용하기 위한 NFAT 활성화 억제제를 포함하는 조성물로서, 상기 원치 않는 효과는 사이토카인 방출 증후군(Cytokine Release Syndrome, CRS) 및 위장 염증과 관련된 증상들에서 선택되고, 상기 조성물은 위장관으로 투여되어 치료의 유효성(effectiveness)의 유지와 함께 하나 이상의 원치 않는 효과가 치료되는 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    치료가 T 세포 관여 치료(T cell engaging therapy)이고, T 세포가 T 세포의 표면에서 수용체를 통해 표적 질환 항원에 직접적으로 또는 간접적으로 결합될 때 활성화되는 NFAT 활성화 억제제를 포함하는 조성물.
  3. 제1항에 있어서,
    치료가 면역 체크포인트 차단(immune checkpoint blockade) 치료인 NFAT 활성화 억제제를 포함하는 조성물.
  4. 제3항에 있어서,
    상기 치료가 T 세포 억제 경로를 표적하는 하나 이상의 항체를 사용하는 면역 체크포인트 차단(immune checkpoint blockade) 치료인 NFAT 활성화 억제제를 포함하는 조성물.
  5. 제4항에 있어서,
    상기 체크포인트 차단 치료가 항-CTLA-4 항체 및/또는 PD1 수용체에 결합하는 리간드를 표적하는 항체를 사용하는 NFAT 활성화 억제제를 포함하는 조성물.
  6. 제2항에 있어서,
    상기 T 세포 관여 치료가 임의의 이중특이성 T 세포 관여자(bispecific T cell engager) 또는 키메라 항원 수용체 치료인 NFAT 활성화 억제제를 포함하는 조성물.
  7. 제6항에 있어서,
    이중특이성 T 세포 관여자가 이중특이성 항체인 NFAT 활성화 억제제를 포함하는 조성물.
  8. 제6항에 있어서,
    키메라 항원 수용체 치료가 CAR-T 세포 치료인 NFAT 활성화 억제제를 포함하는 조성물.
  9. 제8항에 있어서,
    CAR 치료가 동종(allogenic)인 NFAT 활성화 억제제를 포함하는 조성물.
  10. 제8항에 있어서,
    CAR 치료가 자가(autologous)인 NFAT 활성화 억제제를 포함하는 조성물.
  11. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 치료가 NFAT-활성화 자가 T 세포에 의해 매개되는 NFAT 활성화 억제제를 포함하는 조성물.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서,
    원치 않는 효과가 CRS인 NFAT 활성화 억제제를 포함하는 조성물.
  13. 제1항에 있어서,
    치료가 자가 CAR-T 치료이고, 위장관으로 상기 조성물의 투여가 상기 치료의 유효성(effectiveness)을 유지하면서 CRS를 감소시키거나 예방하는 NFAT 활성화 억제제를 포함하는 조성물.
  14. 제1항에 있어서,
    치료가 동종 CAR-T 치료이고, 위장관으로 상기 조성물의 투여가 상기 치료의 유효성(effectiveness)을 유지하면서 CRS를 감소시키거나 예방하는 NFAT 활성화 억제제를 포함하는 조성물.
  15. 제12항 또는 제13항에 있어서,
    CAR-T 치료가 암, 바람직하게 혈액학적 악성종양의 치료를 위한 것이고;
    선택적으로 CAR-T의 표적 항원은 CAIX, CD19, CD20, CD22, CD30, CD33, CD38, CD44, (특히 변이체 7/8), CD123, CD138, CEA, EGFR, EGFRvIII, erb-B2, erb-B3, erb-B4, WT1, c-Met, FAB, GD2, GD3, MAGE-A1, MART-1, gp100, 메소텔린(mesothelin), MUC1, NY-ES01, PSCA, PSMA, L1CAM, MUC16(ecto), ROR1, VEGF-R2, KDR, EGP-2, EGP-30, IL-13R-a2, k-경쇄, TNFRSF17 (BCMA; CD269, SLAM 패밀리 멤버 7 (SLAMF7 또는 CS1)) 및 엡스타인바(Epstein-Barr) 바이러스(EBV) 항원에서 선택되고; 또는
    특히 CAR-T의 표적 항원은 CD19, CD20 또는 CD123에서 선택되는 NFAT 활성화 억제제를 포함하는 조성물.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서,
    치료가 환자의 자가 T 세포를 고갈시키기 위한 전-처리(pre-conditioning) 요법을 포함하는 NFAT 활성화 억제제를 포함하는 조성물.
  17. 제1항에 있어서,
    치료가 이중특이성 T 세포 관여자, 키메라 항원 수용체 치료 및 체크포인트 차단 치료에서 선택된 둘 이상의 치료를 포함하고, 예를 들어 치료가 체크포인트 차단 치료 및 이중특이성 T 세포 관여자 및 키메라 항원 수용체 치료에서 선택된 하나 이상의 치료를 포함하는 조성물.
  18. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서,
    하나 이상의 원치 않는 효과가 위장 염증과 관련된 증상들인 NFAT 활성화 억제제를 포함하는 조성물.
  19. 제18항에 있어서,
    위장 염증 증상들이 염증성 장질환, 선택적으로 과민성 장질환(irritable bowel disease), 크론병(Crohn's disease), 궤양성 대장염(ulcerative colitis), 셀리악병(celiac disease), 장염(gastroenteritis), 십이지장염(duodenitis), 공장염(jejunitis), 회장염(ileitis), 소화성 궤양(peptic ulcer), 주머니염(pouchitis), 컬링 궤양(Curling's ulcer), 충수염(appendicitis), 대장염(colitis), 위막성 대장염(pseudomembraneous colitis), 게실증(diverticulosis), 게실염(diverticulitis), 콜라젠성 결장염(collagenous colitis), 선택적으로 GIT에서 나온 전신 감염, 결직장암(colorectal carcinoma) 및 선암(adenocarcinoma)에서 선택된 질환과 관련되는 NFAT 활성화 억제제를 포함하는 조성물.
  20. 제18항에 있어서,
    염증성 장질환의 상기 증상들이 궤양성 대장염 또는 크론병과 관련되는 NFAT 활성화 억제제를 포함하는 조성물.
  21. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 억제제가 칼슘/칼시뉴린(calcineurin) 경로의 억제제인 NFAT 활성화 억제제를 포함하는 조성물.
  22. 제21항에 있어서,
    상기 억제제가 NFAT의 칼시뉴린 탈인산화를 억제하는 NFAT 활성화 억제제를 포함하는 조성물.
  23. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 억제제가 사이클로스포린, 사이클로스포린 유도체, 타크로리무스 유도체, 피라졸, 피라졸 유도체, 포스파타제 억제제, S1P 수용체 조절제(molulators), 독소, 파라세타몰 대사체, 진균 페놀성 화합물, 관상혈관 확장제(coronary vasodilator), 페놀성 아데이드, 플라보놀, 티아졸 유도체, 피라졸로피리미딘 유도체, 벤조티오펜 유도체, 로카글라미드(rocaglamide) 유도체, 디아릴 트리아졸, 바비튜레이트(barbiturates), 항정신병약(페노티아진), 세로토닌 길항제, 살리실산 유도체, 프로폴리스 또는 석류로부터 유래된 페놀성 화합물, 이미다졸 유도체, 피리디늄 유도체, 푸라노쿠마린, 알칼로이드, 트리털페노이드, 털페노이드, 올리고뉴클레오타이드, 또는 펩타이드에서 선택되는 NFAT 활성화 억제제를 포함하는 조성물.
  24. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서,
    억제제가 사이클로스포린, 타크로리무스, A285222, 엔도탈(endothall), 4-(플루오로메틸)페닐포스페이트 FMPP, 노르칸타리딘(norcantharidin), 티르포스틴(tyrphostins), 오카다산(okadaic acid), RCP1063, cya/cypa (사이클로필린 A (cyclophilin A)), isa247 (보클로스포린(voclosporin))/cypa, [dat-sar]3-cya, fk506/fkbp12, 아스코마이신(ascomyxin)/fkbp12, 피네크로리무스(pinecrolimus)/FKBP12, 1,5-디벤조일옥시메틸-노르칸타리딘(norcantharidin), am404, btpl, btp2, 디베푸린(dibefurin), 디피리다몰(dipyridamole), 고시폴(gossypol), 캠퍼롤(kaempferol), lie 120, NCI3, PD 144795, Roc-1, Roc-2, Roc-3, ST 1959 (DLI111-it), 티오펜탈(thiopental), 펜토바비탈(pentobarbital), 티아밀랄(thiamylal), 세코바비탈(secobarbital), 트리플루오페라진(trifluoperazine), 트로피세트론(tropisetron), UR-1505, WIN 53071, 카페인산 페닐에틸 에스터, KRM-III, YM-53792, 푸니칼라진(punicalagin), 임페라토린(imperatorin), 퀴놀론 알칼로이드 화합물 1 및 3, 임프레식 애씨드(impressic acid), 올레아난 트리털페노이드 화합물 3, 고미신(gomisin) N, CaN457 -482-AID, CaN424-521-AID, mFATc2106 -121-SPREIT, VIVIT 펩타이드, ZIZIT cis-pro, INCA1, INCA6, INCA2, AKAP79330 -357, RCAN1, RCAN1-4141-197-exon7, RCAN1-4143-163-CIC 펩타이드, RCAN1 -495-118-SP 반복 펩타이드, LxVPc 1 펩타이드, VacA, A238L, 및 A238L200 -213에서 선택되는 NFAT 활성화 억제제를 포함하는 조성물.
  25. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서,
    조성물이 장용(enteric) 코팅을 포함하는 고체 조성물인 NFAT 활성화 억제제를 포함하는 조성물.
  26. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서,
    하이드로겔 형성 중합체 매트릭스, 계면활성제 및 오일상을 더 포함하는 NFAT 활성화 억제제를 포함하는 조성물.
  27. 제20항에 있어서,
    오일상이 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스 중에 분산된 NFAT 활성화 억제제를 포함하는 조성물.
  28. 제26항 또는 제27항에 있어서,
    오일상이 NFAT 억제제 용액을 포함하는 조성물.
  29. 제26항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서,
    오일상이 액체 지질 및 선택적으로 그와 혼화될 수 있는 용매이거나 이를 포함하는 조성물.
  30. 제29항에 있어서,
    액체 지질이 글리세라이드 조성물이거나 이를 포함하며, 선택적으로 액체 지질이 중쇄 지방산 트리글리세라이드 또는 이들의 조합이거나 이를 포함하거나, 또는 액체 지질이 카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드 조성물이거나 이를 포함하는 조성물.
  31. 제26항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서,
    오일상이 예를 들어 오메가-3 오일, 예를 들어 에이코사펜타노익산, 도코사헥사에노익산, 알파-리놀레산 및 공액 리놀레산에서 선택된 폴리-불포화 지방산이거나 이를 포함하는 조성물.
  32. 제26항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서,
    오일상이 올리브유, 참기름, 코코넛유, 팜핵유 및 님(neem) 오일에서 선택된 오일이거나 이를 포함하는 조성물.
  33. 제26항 내지 제28항 중 어느 하나의 항에 있어서,
    오일상이 카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드; 카프릴릭/카프릭/리놀레익 트리글리세라이드; 카프릴릭/카프릭/숙시닉 트리글리세라이드; 및 프로필렌 글리콜 디카프릴레이트/디카프레이트에서 선택된 오일이거나 이를 포함하는 조성물.
  34. 제26항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서,
    오일상이 0 내지 10, 선택적으로 0 내지 5, 0 내지 3, 또는 0 내지 2의 HLB를 갖는 오일이거나 이를 포함하는 조성물.
  35. 제26항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서,
    오일상이 중쇄 트리글리세라이드 및 2-(에톡시에톡시)에탄올을 포함하는 오일이거나 이를 포함하는 조성물.
  36. 제26항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서,
    계면활성제가 적어도 200 mg/g의 사이클로스포린 용해도를 갖는 조성물.
  37. 제1항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서,
    조성물이 용매를 더 포함하며, 상기 용매는 오일상 및 물과 혼화될 수 있으며, 선택적으로 상기 용매는 2-(2-에톡시에톡시)에탄올 및 폴리(에틸렌 글리콜)에서 선택되며, 특히 상기 용매는 2-(2-에톡시에톡시)에탄올인 조성물.
  38. 제37항에 있어서, 오일상이 용매를 포함하는 조성물.
  39. 제38항에 있어서,
    용매가 약 200 내지 약 400의 평균 분자량을 갖는 PEG, 예를 들어 PEG 200 또는 PEG 400에서 선택된 폴리(에틸렌 글리콜)이거나 이를 포함하는 조성물.
  40. 제26항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서,
    오일상이 조성물의 건조 중량의 10-85%, 예를 들어 20-30%에 상당하는 조성물.
  41. 제26항 내지 제40항에 있어서,
    계면활성제가 최대 7, 1-8, 1-7, 1-5, 2-5, 1-4, 1-3, 1-2, 2-4, 3-4, 5-8, 6-8 및 6-7에서 선택된 HLB 값을 갖는 조성물 또는 용도.
  42. 제26항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서,
    계면활성제가 비이온성인 조성물.
  43. 제26항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서,
    계면활성제가 장쇄 지방산 모노- 또는 디-글리세라이드 또는 이들의 조합이거나 이를 포함하는 조성물.
  44. 제26항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서,
    계면활성제가 글리세릴 모노카프레이트, 글리세릴 디카프레이트, 글리세릴 모노카프릴레이트, 글리세릴 디카프릴레이트, 글리세릴 카프레이트, 글리세릴 모노카프릴레이트/카프레이트, 글리세릴 카프릴레이트/카프레이트 글리세릴 디카프릴레이트/카프레이트, 글리세릴 모노올레이트/디올레이트, 글리세릴 모노올레이트, 글리세릴 디올레이트, 글리세릴 모노스테아레이트, 글리세릴 디스테아레이트, 글리세릴 모노팔미토스테아레이트, 글리세릴 디팔미토스테아레이트, 글리세릴 모노베헤네이트, 글리세릴 디베헤네이트, 글리세릴 모노리놀레이트, 글리세롤 모노리놀레이트, 글리세릴 디리놀레이트, 폴리글리세릴디올레이트, 프로필렌 글리콜 모노헵타노에이트, 폴리글리세롤 디올레이트, 및 이들의 조합에서 선택된 계면활성제이거나 이를 포함하는 조성물.
  45. 제26항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서,
    계면활성제가 글리세릴 모노카프릴레이트/카프레이트, 글리세릴 디카프릴레이트/카프레이트, 글리세릴 모노올레이트, 글리세롤 모노리놀레이트, 글리세릴 디올레이트, 글리세릴 모노스테아레이트, 글리세릴 디스테아레이트, 글리세릴 모노팔미토스테아레이트, 글리세릴 디팔미토스테아레이트, 글리세릴 모노베헤네이트, 글리세릴 디베헤네이트, 글리세릴 모노리놀레이트, 글리세릴 디리놀레이트, 폴리글리세릴 디올레이트 및 이들의 조합에서 선택되는 조성물.
  46. 제26항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서,
    계면활성제가 글리세릴 카프릴레이트/카프레이트(Capmul MCM), 글리세릴 모노올레이트/디올레이트(Capmul GMO-50), 글리세롤 모노리놀레이트(Maisine 35-1) 및 이들의 조합에서 선택된 계면활성제이거나 이를 포함하는 조성물 또는 용도.
  47. 제26항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서,
    계면활성제가 글리세릴 카프릴레이트, 글리세릴 카프레이트, 글리세릴 모노올레이트, 글리세릴 디올레이트, 글리세롤 모노리놀레이트 또는 이들의 조합이거나 이를 포함하는 조성물.
  48. 제26항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서,
    조성물은 제2 계면활성제를 더 포함하며, 선택적으로 상기 제2 계면활성제가 선택적으로 알킬 설페이트, 카복실레이트 또는 인지질에서 선택되는, 음이온성 계면활성제이거나 또는 선택적으로 소르비탄계 계면활성제, PEG-지방산, 또는 글리세릴 지방산, 또는 폴록사머, 또는 이들의 조합에서 선택되는, 비이온성 계면활성제인 조성물.
  49. 제26항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서,
    조성물이 적어도 10, 예를 들어 20 초과의 HLB 값을 갖고, 선택적으로 음이온성 계면활성제인, 고 HLB 계면활성제를 더 포함하는 조성물.
  50. 제49항에 있어서,
    고 HLB 계면활성제가 지방산염 및 담즙염, 특히 알킬 설페이트, 예를 들어 소듐 도데실 설페이트에서 선택되는 조성물.
  51. 제49항 또는 제50항에 있어서,
    고 HLB 계면활성제는 적어도 연속상 중에 존재하는 조성물.
  52. 제26항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서,
    계면활성제, 가용화제, 투과성 증진제, 붕해제, 결정화 억제제, pH 조절제, 안정화제, 또는 이들의 조합에서 선택된 부형제를 더 포함하는 조성물.
  53. 제26항 내지 제52항 중 어느 한 항에 있어서,
    하이드로겔 형성 중합체 또는 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스가 하이드로콜로이드, 비-하이드로콜로이드 검 또는 키토산이거나 이를 포함하는 조성물.
  54. 제26항 내지 제52항 중 어느 한 항에 있어서,
    하이드로겔 형성 중합체 또는 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스가 가역적 하이드로콜로이드, 선택적으로 열가역적 하이드로겔 형성 중합체이거나 이를 포함하는 조성물.
  55. 제26항 내지 제52항 중 어느 한 항에 있어서,
    하이드로겔 형성 중합체 또는 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스는 비가역적 하이드로콜로이드이거나 이를 포함하는 조성물.
  56. 제26항 내지 제52항 중 어느 한 항에 있어서,
    하이드로겔 형성 중합체 또는 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스는 젤라틴, 한천, 폴리에틸렌 글리콜, 녹말, 카세인, 키토산, 콩 단백질, 홍화 단백질(safflower protein), 알기네이트, 젤란 검, 카라기난, 잔탄 검, 프탈레이트화된 젤라틴, 숙시네이트화된 젤라틴, 셀룰로오스 프탈레이트-아세테이트, 올레오레진, 폴리비닐아세테이트, 아크릴릭 또는 메타크릴릭 에스테르 및 폴리비닐아세테이트-프탈레이트의 중합물질(polymerisates) 및 전술한 어느 하나의 임의의 유도체; 또는 하나 이상의 이러한 하이드로겔 형성 중합체의 혼합물이거나 이를 포함하는 조성물.
  57. 제26항 내지 제52항 중 어느 한 항에 있어서,
    하이드로겔 형성 중합체 또는 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스는 카라기난, 젤라틴, 한천 및 펙틴, 또는 이들의 조합에서 선택된, 선택적으로 젤라틴 및 한천 또는 이들의 조합에서 선택된 하이드로콜로이드이거나 이를 포함하고, 더욱 선택적으로 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스의 중합체는 젤라틴이거나 이를 포함하는 조성물.
  58. 제26항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서,
    하이드로겔 형성 중합체 또는 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스가 가소제를, 선택적으로 글리세린, 폴리올, 예를 들어 소르비톨, 폴리에틸렌 글리콜 및 트리에틸 시트레이트 또는 이들의 혼합물에서 선택된 가소제를, 특히 소르비톨을 더 포함하는 조성물.
  59. 제26항 내지 제52항 중 어느 한 항에 있어서,
    하이드로겔 형성 중합체 또는 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스가 선택적으로 알긴산의 가교된 염에서 선택된 비-하이드로콜로이드 검이거나 이를 포함하는 조성물.
  60. 제26항 내지 제52항 중 어느 한 항에 있어서,
    하이드로겔 형성 중합체 또는 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스가 키토산이거나 이를 포함하는 조성물.
  61. 제1항 내지 제60항 중 어느 한 항에 있어서,
    조성물은 수상 예비혼합물(premix)과 오일상 예비혼합물(premix)을 혼합하여 혼합물을 형성하고, 상기 수상 예비혼합물은 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스를 포함하며, 상기 오일상 예비혼합물은 NFAT 억제제, 예를 들어 사이클로스포린이 용해된 오일상 및 계면활성제를 포함하며, 선택적으로 상기 혼합물은 에멀전의 형태이고, 및 혼합물을 고형화되도록 하며, 선택적으로 혼합물은 단일 오리피스(orifice) 노즐을 통과한 후 고형화되도록 함으로써 형성된 조성물의 특징을 갖는 조성물.
  62. 제61항에 있어서,
    조성물이 수상 예비혼합물에 존재하는 적어도 10의 HLB 값을 갖는 계면활성제를 더 포함하는 조성물.
  63. 제1항 내지 제62항 중 어느 한 항에 있어서,
    적어도 하나의 코팅을 더 포함하며, 선택적으로 적어도 하나의 코팅이 외부 코팅(제2 코팅)인 조성물.
  64. 제63항에 있어서,
    적어도 하나의 코팅이 NFAT 억제제, 예를 들어 사이클로스포린을 적어도 결장에서 방출하도록 조정된 조성물.
  65. 제54항에 있어서,
    NFAT 억제제, 예를 들어 사이클로스포린을 회장 및 결장에서 방출하도록 조정되거나 실질적으로 모든 NFAT 억제제, 예를 들어 사이클로스포린을 결장에서 방출하도록 조정된 조성물.
  66. 제63항 내지 제65항 중 어느 한 항에 있어서,
    적어도 하나의 코팅이 pH-비의존성 코팅을 포함하는 조성물.
  67. 제66항에 있어서,
    pH-비의존성 코팅이 에틸셀룰로오스를 포함하는 조성물.
  68. 제66항 또는 제67항에 있어서,
    pH-비의존성 코팅이 결장 세균의 효소에 의한 분해에 취약한 중합체를 포함하는 조성물.
  69. 제66항 내지 제68항 중 어느 한 항에 있어서,
    적어도 하나의 코팅이 pH-의존성 코팅을 포함하는 조성물.
  70. 제63항 내지 제69항 중 어느 한 항에 있어서,
    적어도 하나의 코팅이 2% 내지 40%의 코팅에 의한 중량 증가에 상응하는 양으로 존재하며, 선택적으로 제2 코팅에 의한 중량 증가가 4% 내지 30%, 4% 내지 7%, 7% 내지 40%, 7% 내지 30%, 8% 내지 25%, 8% 내지 20%, 2% 내지 25%, 2% 내지 20%, 4% 내지 25%, 4% 내지 20%, 4% 내지 15%, 4% 내지 13%, 7% 내지 15%, 7% 내지 13%, 8% 내지 12%, 9% 내지 12% 및 20% 내지 25%의 범위에서 선택되는 조성물.
  71. 제1항 내지 제70항 중 어느 한 항에 있어서,
    조성물이 2개의 코팅인 제1 코팅 및 제2 코팅을 포함하는 조성물.
  72. 제71항에 있어서,
    조성물이 수용성 셀룰로오스 에테르이거나 이를 포함하는 제1 코팅 및 제57항 내지 제64항 중 어느 한 항에 명시된 제2 코팅을 포함하는 조성물.
  73. 제72항에 있어서,
    수용성 셀룰로오스 에테르가 메틸 셀룰로오스, 하이드록시에틸 셀룰로오스, 하이드록시프로필 셀룰로오스, 하이드록시에틸 메틸셀룰로오스 및 하이드록시프로필메틸 셀룰로오스 중 어느 하나 또는 이들의 조합에서 선택되는 조성물.
  74. 제72항 또는 제73항에 있어서,
    수용성 셀룰로오스 에테르가 하이드록시프로필메틸 셀룰로오스인 조성물.
  75. 제72항 내지 제74항 중 어느 한 항에 있어서,
    제1 코팅이 0.5% 내지 20%의 코팅에 의한 중량 증가에 상응하는 양으로 존재하는 조성물.
  76. 제75항에 있어서,
    제1 코팅에 의한 중량 증가가 0.5% 내지 15%; 1% 내지 15%; 1% 내지 12%; 1% 내지 10%; 1% 내지 8%; 1% 내지 6%; 1% 내지 4%, 2% 내지 10%; 2% 내지 8%; 2% 내지 6%; 2% 내지 4%; 4% 내지 8%; 4% 내지 7%, 5% 내지 7%; 7% 내지 20%; 7% 내지 16%; 9% 내지 20%; 9% 내지 16%; 10% 내지 15%; 및 12% 내지 16%에서 선택된 범위 내인 조성물.
  77. 제72항 내지 제76항 중 어느 한 항에 있어서,
    제2 코팅이 제1 코팅 상에 있는 조성물.
  78. 제72항 내지 제77항 중 어느 한 항에 있어서,
    조성물은 조성물의 외부 표면 상에 추가적인 코팅을 더 포함하며, 코팅은 물리적 보호 코팅인 조성물.
  79. 제1항 내지 제78항 중 어느 한 항에 있어서,
    선택적으로 0.5 mm 내지 5 mm의 크기를 갖는 미니비드 형태인 조성물.
  80. 다수의 제74항의 미니비드를 포함하는 단위 투약 형태를 포함하는, 다수의 미니비드 제제.
  81. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물은
    300 내지 700 mg/g의 양의 젤라틴을 포함하는 하이드로겔 형성 중합체 매트릭스를 포함하는 연속상;
    최대 200 mg/g의 양의 사이클로스포린; 및
    20 내지 200 mg/g의 양의 중쇄 트리-글리세라이드를 포함하는 분산상을 포함하는 콜로이드성 조성물을 포함하고
    상기 조성물은
    100 내지 250 mg/g의 양의 용매;
    최대 8의 HLB를 갖는 80 내지 200 mg/g의 양의 계면활성제; 및
    최대 50 mg/g의 양의 음이온성 계면활성제를 더 포함하는 조성물.
  82. 제81항에 있어서,
    하이드로겔 형성 중합체 매트릭스는 D-소르비톨을 더 포함하며,
    중쇄 트리-글리세라이드는 카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드이며,
    용매는 2-(2-에톡시에톡시)에탄올이며,
    계면활성제는 폴리에틸렌글리콜 에테르 또는 에스테르가 아니거나 이를 포함하지 않는 중 또는 장쇄 지방산 모노- 또는 디-글리세라이드 또는 이들의 조합, 예를 들어 글리세릴 카프릴레이트, 글리세릴 카프레이트, 글리세릴 모노올레이트, 글리세릴 디올레이트, 글리세롤 모노리놀레이트 또는 이들의 조합이거나 이를 포함하며, 및
    음이온성 계면활성제는 SDS인 조성물.
  83. 제81항 또는 제82항에 있어서, 연속상은
    30 - 80 mg/g의 양의 D-소르비톨; 및
    380 - 500 mg/g의 양의 젤라틴을 포함하며;
    분산상은
    90 - 140 mg/g의 양의 사이클로스포린; 및
    40 - 80 mg/g의 양의 카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드를 포함하며;
    조성물은
    100 - 200 mg/g의 양의 2-(2-에톡시에톡시)에탄올;
    100 - 150 mg/g의 양의 글리세릴 카프릴레이트, 글리세릴 카프레이트, 글리세릴 모노올레이트, 글리세릴 디올레이트, 글리세롤 모노리놀레이트 또는 이들의 조합, 바람직하게는 글리세릴 모노올레이트 및/또는 글리세릴 디올레이트; 및
    15 - 50 mg/g의 양의 SDS를 더 포함하는 조성물.
  84. 제81항 내지 제83항 중 어느 한 항에 있어서,
    조성물이 액체 콜로이드 또는 고체 콜로이드 형태인 조성물.
  85. 제84항에 있어서,
    액체 콜로이드 또는 고체 콜로이드가 연속상 및 분산상을 포함하며, 상기 연속상은 젤라틴, SDS 및 D-소르비톨을 포함하며, 상기 분산상은 사이클로스포린, 2-(2-에톡시에톡시)에탄올, 글리세릴 모노올레이트 및/또는 글리세릴 디올레이트 및 카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드를 포함하는 조성물.
  86. 제84항에 있어서,
    액체 콜로이드가 연속상 및 분산상을 포함하며, 상기 콜로이드는 연속상 예비혼합물과 분산상 예비혼합물을 혼합하여 액체 콜로이드를 형성함으로써 얻을 수 있으며, 상기 연속상 예비혼합물은 젤라틴, SDS, D-소르비톨 및 물을 포함하며, 상기 분산상 예비혼합물은 사이클로스포린, 2-(2-에톡시에톡시)에탄올, 글리세릴 모노올레이트 및/또는 글리세릴 디올레이트 및 카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드를 포함하는 조성물.
  87. 제84항에 있어서,
    고체 콜로이드가 연속상 및 분산상을 포함하며, 콜로이드는 연속상 예비혼합물과 분산상 예비혼합물을 혼합하여 액체 콜로이드를 형성하고, 상기 연속상 예비혼합물은 젤라틴, SDS, D-소르비톨 및 물을 포함하며, 상기 분산상 예비혼합물은 사이클로스포린, 2-(2-에톡시에톡시)에탄올, 글리세릴 모노올레이트 및/또는 글리세릴 디올레이트 및 카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드를 포함하며, 및 상기 액체 콜로이드를 고형화되도록 함으로써 얻을 수 있는 조성물.
  88. P450 억제제 또는 PgP 억제제 또는 이들의 조합을 더 포함하는 제1항 내지 제87항 중 어느 하나의 조성물.
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