KR20180053320A - 뉴클레오시드 포스포아미데이트 프로드러그의 제조방법 및 이의 중간체 - Google Patents

뉴클레오시드 포스포아미데이트 프로드러그의 제조방법 및 이의 중간체 Download PDF

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Abstract

본 발명은 신규 뉴클레오시드 포스포아미데이트 계 프로드러그(전구약물)의 제조방법 및 이의 중간체를 제공한다. 구체적으로는 제1단계 반응 생성물의 이성질체 분리를 실시하고, 두 단계의 화학 합성을 수행하여, 고순도 화합물 Sp-1을 제조한다. 이 방법은 조작이 간단하고, 저비용이며, 고순도의 단일 이성질체 Sp-1을 최종적으로 제조할 수 있으며, HPLC 순도가 95% 이상, 나아가 99% 이상인 장점이 있다. 이 방법은 산업 생산에 적합하고, 임상 연구의 요구를 충족시킬 수 있다. 또한, 본 발명은 고순도 화합물 Sp-1을 제조하기 위한, 주요 중간체로 인계 시약 및 이의 제조 방법을 제공한다.

Description

뉴클레오시드 포스포아미데이트 프로드러그의 제조방법 및 이의 중간체
본 발명은 의약 기술 분야에 관한 것으로, 구체적으로 뉴클레오시드 포스포아미데이트 프로드러그의 제조방법 및 이의 중간체에 관한 것이다.
NUC-1031은 뉴카나 바이오메드(NuCana BioMed Ltd)에 의해 개발된 젬시타빈(gemcitabine)의 프로드러그이며, 말기 고형 종양, 췌장암, 유방암 등의 암 치료제로 현재 제2상 임상 시험 중이다. NUC-1031은 CAS는 840506-29-8이며, 하기 식 1로 표시되는 구조를 갖는다. 하기 식 Rp-1 및 Sp-1은 각각 NUC-1031의 인 원자 P에서의 거울상 이성질체이다.
Figure pct00001
Figure pct00002
Figure pct00003
WO2005012327 명세서 제 70 페이지에는 NUC-1031의 구체적인 구조 및 제조 방법이 기재되어있다. 구체적으로는 용매로서 THF/피리딘을 사용하여 NMI의 존재하에서 젬시타빈과 벤질-(벤조일-L-알라닌)-클로로 포스페이트를 1 : 3의 몰비로 2 시간 동안 반응시켜 조 생성물을 얻고, 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하고, 디클로로메탄/메탄올 (95 : 5)로 용출하여 거품 고체 NUC-1031을 수득하나, 수율은 불과 16 %였다.
WO2014076490A1에는 다음의 NUC-1031의 제조방법이 기재되어 있다.
Figure pct00004
3'-Boc-보호 젬시타빈 (100mg)과 2 몰 당량의 페닐(벤질-L-알라닌)클로로 포스페이트 (150mg)를, 0.5 몰 당량의 트리스(아세틸아세톤)철(III) (56mg)을 촉매로, 1.5 몰 당량의 DIPEA (55μL)을 염기로, 10ml의 THF를 반응 용매로 사용하여 질소 분위기 하에서 실온에서 24 시간 반응시켜, 수율은 45 %이고, 이성질체 RP : SP 비는 3 : 1이었다.
“Application of ProTide Technology to Gemcitabine: A Successful Approach to Overcome the Key Cancer Resistance Mechanisms Leads to a New Agent (NUC-1031) in Clinical Development”제목의 문헌(Journal of Medicinal Chemistry, Volume 57, Issue 4, Pages 1531-1542)은 디클로로메탄을 용매로 사용하여 TFA의 존재 하에서 하기 식의 화합물 5f에서 히드록시 보호기를 이탈시키고 최종 실리카겔 컬럼으로 정제하여 NUC-1031을 제조하는 방법이 기재되어 있고, 수율은 70 %이며, 이성질체의 함량은 각각 48 %, 52 %였다.
Figure pct00005
지금까지, 선행 기술에는 NUC-1031의 단일 이성체의 제조 방법에 관한 보고는 없었다. NUC-1031의 분자 구조 중의 키랄 P의 2 개의 거울상 이성질체는 구조가 매우 유사하고, 극성이 매우 유사하기 때문에 고순도의 단일 이성질체를 NUC-1031 이성체 혼합물(라세메이트)로부터 분리하는 것은 매우 어려워 지고, 특히 정제 과정에서 순도와 수율을 양립시키는 것은 보다 어렵다. 본 발명자들은 당 업계의 통상의 정석 실리카겔 컬럼 크로마토그래피, 역상 C18 실리카겔 결합 분취 크로마토 그래피, 구형 실리카 패킹의 순상 분취 크로마토그래피, 및 키랄 컬럼에 의한 분리법 등의 다양한 방법으로 NUC- 1031 이성체를 분리하려고 시도했지만, 모두 90 % 이상의 순도를 갖는 단일 이성질체를 분리할 수 없었다.
당 업계에 공지된 바와 같이, 일반적으로 이성체 혼합물인 화합물을 약물로 사용하는 경우, 거울상 이성질체의 입체 배치와 약리학적 효과의 관계는 다음과 같이 나눌 수 있다: (1) 약물의 약리학적 효과는 완전히 또는 주로 거울상 이성질체 중 하나에 의해 초래된다. 예를 들어, (S)-나프록센은 T 이성질체보다 35 배나 강력한 진통 효과가 있다. (2) 2 개의 이성체는 정반대의 약리학적 효과를 갖는다. 예를 들어, 피세나돌(Picenadol) 우회전성 이성질체는 아편류(opiate) 수용체 작용제이지만, 이의 좌회전성 이성질체는 아편류(opiate) 수용체의 길항제이다. (3) 이성질체 중 하나는 심각한 부작용이있다. 예를 들어, 구충 약품인 테트라미졸의 구토 반응은 D-이성질체에 의해 초래된다. (4) 약리 효과 중 하나는 높은 입체 선택성을 가지고 있지만, 다른 약리학적 효과는 입체 선택성이 낮거나, 또는 입체 선택성이 없다. 예를 들어, 진해약인 메토르판(methorphan)의 중독성은 주로 이의 L-이성질체에 의해 초래되는데, 진해 효과는 두 이성질체의 힘이 동등하다. (5) 2 개의 거울상 이성질체는 약리학적 효과는 다르지만, 약물 병용하는 편이 유리하다. 예를 들어, 항 고혈압제인 네비볼롤(nebivolol)의 D-이성질체는 β 수용체 차단제이며, L-이성질체는 말초 혈관의 저항을 저감할 수 있고, 심장 보호 효과가 있다.
NUC-1031에서 단일 이성질체 (Rp-1) 또는 (Sp-1)을 분리하고, 각각의 생물학적 활성을 개별적으로 연구하고, NUC-1031의 약리학적 효과, 독성이나 부작용 또는 독성 반응을 연구함으로써, 보다 우수한 활성을 가지고, 더 적은 독성과 부작용이있는, 유사 약물을 개발하는 것이 매우 중요하다. 임상 연구의 요구를 만족시킬 수 있는 고순도의 단일 이성질체 (Rp-1) 또는 (Sp-1)의 제조는 지금도 당 업계에서 조속한 해결이 요구되고 있는 과제이다.
NUC-1031에서 단일 이성질체 (Rp-1) 또는 (Sp-1)을 분리하고, 각각의 생물학적 활성을 개별적으로 연구하고, NUC-1031의 약리학적 효과, 독성이나 부작용 또는 독성 반응을 연구함으로써, 보다 우수한 활성을 가지고, 더 적은 독성과 부작용이있는, 유사 약물을 개발하는 것이 매우 중요하다. 임상 연구의 요구를 만족시킬 수 있는 고순도의 단일 이성질체 (Rp-1) 또는 (Sp-1)의 제조는 지금도 당 업계에서 조속한 해결이 요구되고 있는 과제이다.
상술 한 과제를 해결하기 위해, 본 발명은 고순도의 화합물 Sp-1과 화합물 Rp-1의 제조 방법을 제공한다.
우선, 본 발명은 화합물 Sp-1의 제조 방법을 제공한다.
Figure pct00006
이 방법은 화합물 61501c와 화합물 61501b를 반응시켜 화합물 61501a를 얻는 단계를 포함한다.
Figure pct00007
식에서, R은 H 또는 히드록시 보호기이고, L은 이탈기이다.
선택적으로, R이 H가 아닌 경우, 화합물 61501a의 히드록시 보호기를 이탈시킴으로써 화합물 Sp-1을 얻는다.
바람직하게는, L은 할로겐, 아릴옥시, 벤젠설포네이트 기, 캄포르설포네이트 기, 또는 적어도 하나의 전자 구인 기로 치환된 아릴옥시기이다. 보다 바람직하게는, 상기 전자 구인 기는 니트로 기 또는 할로겐이다. 더욱 바람직하게는, L은 니트로페녹시, p-클로로페녹시, o-클로로페녹시, 2,4-디니트로페녹시, 또는 펜타플루오로페녹시이다.
상기 방법에 있어서, 바람직하게는 상기 히드록시 보호기 R은 실릴, 알킬 또는 치환 알킬, 아실 또는 치환 아실, 알콕시카보닐 또는 치환 알콕시카보닐이다. 또한, 상기 히드록시 보호기 R은 테트라히드로피라닐, 벤질, p-메틸벤질, 아세틸, 프로피오닐, 부티릴, 벤조일, tert-부톡시 카보닐 (Boc), 벤질옥시카보닐 (Cbz), 9-플루오레닐메톡시카보닐 (Fmoc), 디메틸tert-부틸실릴, 트리메틸실릴, 또는 디메틸페닐실릴이다.
상기 방법에있어서, 바람직하게는 R은 H 또는 tert-부톡시 카보닐 (Boc)이며, L은 펜타플루오로페녹시이다.
그중, R이 H 인 경우, 화합물 Sp-1의 제조 방법은,
Figure pct00008
(1) 화합물 61501c (R = H)와 화합물 61501b를 반응시켜 화합물 Sp-1을 수득하는 단계를 포함한다.
식에서, L은 아릴옥시, 벤젠설포네이트 기, 캄포설포네이트 기, 또는 적어도 하나의 전자 구인 기로 치환된 아릴옥시이다.
또한, 선택적으로, 상기 방법은 화합물 Sp-1의 크로마토그래피 처리, 추출 또는 결정화 등의 방법에 의해 처리하고 정제된 Sp-1을 얻는 단계를 또한 포함 할 수 있다.
그중, R이 히드록시 보호기인 경우, 화합물 Sp-1의 제조 방법은,
Figure pct00009
(1) 화합물 61501c (R이 히드록시 보호기이다)과 화합물 61501b를 반응시켜, 화합물 61501a를 얻는 단계; 및
(2) 화합물 61501a의 히드록시 보호기를 이탈시켜 화합물 Sp-1을 수득하는 단계를 포함한다.
또한, 선택적으로, 상기 방법은 화합물 Sp-1을 크로마토그래피 처리, 추출 또는 결정화 등의 방법에 의해 처리하고 정제하여 Sp-1을 수득하는 단계를 또한 포함할 수 있다.
식중, L은 아릴옥시, 벤젠설포네이트 기, 캄포설포네이트 기, 또는 적어도 하나의 전자 구인 기로 치환된 아릴옥시이다.
상기 "히드록시 보호기"는 히드록시 기와 결합하여 에스테르, 실릴 에테르, 알킬 에테르를 형성한 기를 의미하고, 실릴, 알킬 또는 치환 알킬, 아실 또는 치환 아실을 포함한다. 예를 들어, 히드록시기와 결합하여 에스테르를 형성할 수 있는 히드록시 보호기로는, 예를 들어 포밀, 아세틸, 클로로아세틸, 부티릴, 프로피 오닐 등의 C1-6 알킬카보닐; 예를 들면 tert-부톡시 카보닐 (Boc), 벤질옥시카보닐 (Cbz), 9-플루오레닐메톡시카보닐 (Fmoc) 등의 차환된 카보닐을 들 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 상기 실릴 에테르를 형성하는 히드록시 보호기로는 트리플루오로메틸실릴, 트리메틸실릴, 디메틸페닐실릴, 디메틸 tert-부틸실릴 등을 들 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 히드록시기와 알킬 에테르를 형성 할 수 있는 히드록시 보호기로는, 예를 들면 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, tert-부틸 등의 C1-6 알킬; 예를 들면 벤질, p-메틸벤질, 트리페닐메틸, 테트라히드로피라닐 같은 치환 C1-6 알킬을 들 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.
상기 방법에 있어서, 당 업계의 일반적인 히드록시 보호기의 이탈 방법으로 화합물 61501a 보호기 R을 이탈시켜 화합물 Sp-1을 얻는다. 예를 들어, R이 벤질 또는 치환 벤질인 경우, Pb-C / H2 접촉 수소화 방법으로 보호기를 이탈시킬 수 있으며, 반응 용매는 테트라히드로퓨란 (THF), 메탄올, 톨루엔 또는 헥산 등인 것이 바람직하다. R은 알킬실릴 (예를 들면, 트리메틸실릴) 인 경우, 바람직하게는 산성 조건의 유기 용매 (예를 들면, HCl-MeOH, HCl-디옥산계 또는 AcOH-THF 계)에서 보호기인 알킬 실릴을 이탈 시키거나, 또는 테트라알킬암모늄 플루오라이드에 의해 이탈시킨다. R이 알킬아실 (예를 들어, 아세틸, 프로피오닐, 부티릴 등) 인 경우, 산성 또는 염기성 조건 하에서 가수 분해하여 이탈할 수 있는데, 예를 들면 나트륨 메톡사이드의 조건에서 메탄올을 용매로 사용, 실온에서 교반하여 해당 알킬아실기를 이탈시킬 수 있다.
상기 방법에 있어서, 보다 바람직하게는 히드록시 보호기 R은 tert-부톡시 카보닐 (Boc)이다. 바람직하게는 질소 분위기 하에서 화합물 61501a을 적절한 용매 (예를 들어, 디클로로메탄, 에틸 아세테이트) 및 적절한 온도 (예를 들면, -10 ℃ - 5 ℃, 바람직하게는 0 ℃) 조건에서, 산 (예를 들면, 트리플루오로아세트산, 염화수소 / 에틸 아세테이트)에 접촉시켜 히드록시 보호기를 이탈시켜, 반응 종료 후, 약 염기성 수용액 (예를 들면, 포화 중탄산 나트륨 용액) 및 유기 용매 (예 : 에틸 아세테이트)을 가하고, 유기층을 분리하고, 농축 건조시켜, 미정제 화합물 Sp-1을 수득한다. 더욱 바람직하게는, 상기 미정제 생성물을 정제하여, 예를 들어 실리카겔 컬럼크로마토그래피에 의해 (디클로로메탄 - 메탄올을 용리액으로 사용), 고순도의 화합물 Sp-1을 제조한다.
상기 방법에 있어서, 화합물 61501b는 다음과 같다.
Figure pct00010
식에서, L은 아릴옥시, 벤젠설포네이트 기, 캄포르설포네이트 기, 또는 적어도 하나의 전자 구인 기로 치환된 아릴 옥시기이다. 바람직하게는, 상기 전자 구인 기는 니트로 기 또는 할로겐이다.
더욱 바람직하게는, L은 니트로 페녹시, p-클로로페녹시, o-클로로페녹시, 2,4-디 니트로 페녹시 또는 펜타 플루오로 페녹시이다.
상기 화합물 Sp-1의 제조 방법에서, 보다 바람직하게는, R은 H 또는 tert-부 톡시 카보닐 (Boc)이며, L은 펜타플루오로페녹시이다.
다른 측면으로, 본 발명은 상술 한 방법 중 하나에 의해 얻어진 조성물을 더 제공하고, 상기 조성물은 상기 조성물의 약 95 중량 % 이상의 양으로 화합물 Sp-1을 포함한다.
또한, 본 발명은 상술 한 방법 중 하나에 의해 얻어진 조성물을 더 제공하고, 상기 조성물은 상기 조성물의 약 99 중량 % 이상의 양으로 화합물 Sp-1을 포함한다.
다른 측면으로, 본 발명은 또한 화합물 Rp-1의 제조 방법을 제공한다.
Figure pct00011
이 방법은 화합물 61501c을 화합물 61501e와 반응시켜 화합물 61502a을 얻는 단계를 포함한다.
Figure pct00012
식에서, R은 H 또는 히드록시 보호기이고, L은 아릴옥시, 벤젠설포네이트 기, 캄포르설포네이트 기, 또는 적어도 하나의 전자 구인 기로 치환된 아릴옥시기이다.
필요에 따라, 화합물 61502a의 히드록시 보호기를 이탈시켜 화합물 Rp-1을 얻는다.
그중, R이 H 인 경우, 화합물 Rp-1의 제조 방법은,
Figure pct00013
화합물 61501c (R = H)를 화합물 61501e와 반응시켜 화합물 Rp-1 (화합물 61502a, R = H의 경우)를 얻는 단계를 포함한다. 식에서 L은 아릴옥시, 벤젠설포네이트 기, 캄포설포네이트 기, 또는 적어도 하나의 전자 구인 기로 치환된 아릴옥시이다.
나아가, 선택적으로, 화합물 Rp-1을 크로마토그래피 처리, 추출 또는 결정화 등의 방법에 의해 처리하고, 정제된 Rp-1을 얻는 단계를 포함할 수 있다.
그중, R이 히드록시 보호기인 경우, 화합물 Rp-1의 제조 방법은,
Figure pct00014
(1) 화합물 61501c (R은 히드록시 보호기이다)를 화합물 61501e와 반응시켜 화합물 61502a를 수득하는 단계,
(2) 화합물 61502a의 히드록시 보호기를 이탈시켜 화합물 Rp-1을 수득하는 단계를 포함한다.
또한, 선택적으로, 화합물 Sp-1을 크로마토그래피 처리, 추출 또는 결정화 등의 방법에 의해 처리하고 정제된 Rp-1을 수득하는 단계를 더 포함할 수 있다.
식에서 L은 아릴옥시, 벤젠설포네이트 기, 캄포설포네이트 기, 또는 적어도 하나의 전자 구인 기로 치환된 아릴옥시이다.
여기서, 상기 "히드록시 보호기"는 히드록시기와 결합하여 에스테르, 실릴 에테르, 알킬 에테르를 생성할 수 있는 기를 의미하고, 실릴, 알킬 또는 치환 알킬, 아실 또는 치환 아실을 포함한다. 예를 들어, 히드록시기와 결합하여 에스테르를 생성할 수 있는 히드록시 보호기로는, 예를 들어 포밀, 아세틸, 클로로 아세틸, 부티릴, 프로피 오닐 등의 C1-6 알킬 카보닐; 예를 들면 tert-부톡시 카보닐 (Boc), 벤질 옥시 카보닐 (Cbz), 9-플루오레닐메틸옥시카보닐 (Fmoc) 등의 치환 카보닐을 들 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 상기 실릴 에테르를 형성하는 히드 록시 보호기로는 트리플루오로메틸실릴, 트리메틸실릴, 디메틸페닐실릴, 디메틸 tert-부틸실릴 등을 들 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 상기 히드록시기와 알킬 에테르를 형성 할 수 있는, 히드록시 보호기로는, 예를 들면 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, tert-부틸 등의 C1-6 알킬; 예를 들면 벤질, p-메틸벤질, 트리페닐메틸, 테트라하이드로 피라닐과 같은 치환 C1-6 알킬을 들 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.
상기 방법에있어서, 당 업계의 일반적인 히드록시 보호기의 이탈 방법으로 화합물 61502a 보호기 R을 이탈시켜 화합물 Rp-1을 얻는다. 예를 들어, R이 벤질 또는 치환 벤질인 경우, Pb-C / H2 접촉 수소화 방법으로 보호기를 이탈시킬 수 있으며, 반응 용매는 바람직하게는 THF, 메탄올, 톨루엔 또는 헥산 등이다. R이 알킬 실릴 (예를 들면 트리메틸 실릴)인 경우, 바람직하게는 산성 조건의 유기 용매 (예를 들면 HCl-MeOH, HCl-디옥산계 또는 AcOH-THF계)에서 보호기인 알킬 실릴을 이탈시키거나 또는 테트라 알킬암모늄 플루오라이드에 의해 이탈시킨다. R이 알킬 아실 (예를 들면 아세틸, 프로피오닐, 부티릴 등)인 경우, 산성 또는 염기성 조건 하에서 가수 분해하여 이탈시킬 수 있는데, 예를 들면 나트륨 메톡사이드 조건에서 메탄올을 용매로 실온에서 교반하여 해당 알킬 아실기를 이탈시킬 수 있다.
상기 방법에 있어서, 보다 바람직하게는 히드록시 보호기 R은 tert-부톡시 카보닐 (Boc)이다. 바람직하게는 질소 분위기 하에서 화합물 61502a를 적절한 용매 (예를 들어, 디클로로메탄, 에틸 아세테이트) 및 적절한 온도 (예를 들면, -10 ℃ - 5 ℃, 바람직하게는 0 ℃) 조건에서 산 (예를 들면, 트리 플루오로 아세트산, 염화수소 / 에틸 아세테이트)과 촉매적으로 히드록시 보호기를 이탈시킨다. 반응 종료 후, 약 염기성 수용액 (예를 들면, 포화 중탄산 나트륨 용액) 및 유기 용매 (예: 에틸 아세테이트)를 가하고, 유기층을 분리하고 농축 건조시켜, 미정제 화합물 Rp-1을 수득한다. 더욱 바람직하게는, 상기 미정제 생성물을 정제하여, 예를 들어 실리카겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 (디클로로메탄 - 메탄올을 용리액으로 사용), 고순도의 화합물 Rp-1을 제조한다.
상기 방법에 있어서, 화합물 61501e는 다음과 같다.
Figure pct00015
식에서, L은 아릴옥시, 벤젠설포네이트 기, 캄포설포네이트 기, 또는 적어도 하나의 전자 구인 기로 치환된 아릴옥시이다. 바람직하게는, 상기 전자 구인 기는 니트로 기 또는 할로겐이다.
더욱 바람직하게는, L은 니트로 페녹시, p-클로로페녹시, o-클로로페녹시, 2,4-디니트로페녹시 또는 펜타플루오로페녹시이다.
상기 화합물 Rp-1의 제조 방법에서, 보다 바람직하게는, R은 H 또는 tert-부톡시 카보닐 (Boc)이며, L은 펜타플루오로페녹시이다.
다른 측면으로, 본 발명은 상술한 방법 중 하나에 의해 얻어진 조성물을 더 제공하고, 상기 조성물은 상기 조성물의 약 95 중량 % 이상의 양으로 화합물 Rp-1을 포함한다.
나아가, 본 발명은 또한 상술한 방법 중 하나에 의해 얻어진 조성물을 제공하고, 상기 조성물은 상기 조성물의 약 99 중량 % 이상의 양으로 화합물 Rp-1을 포함한다.
본 발명에 있어서, 화합물 61501c (R이 히드록시 보호기인 경우)은 시판 중의 것을 사용할 수 있거나, 또는 일반적인 히드록시 보호 반응 방법에 의해 제조될 수 있다. 예를 들어, 화합물 61501c (R이 히드록시 보호기인 경우)은 화합물 61501d로부터 제조될 수 있다.
Figure pct00016
여기서, R의 히드록시 보호기의 종류에 따라 당 업계의 일반적인 반응 조건을 선택하고 작업한다. 예를 들어, R이 실릴 에테르계 보호기 (트리메틸 실릴 에테르, t-부틸 디메틸 클로로 실란, t- 헥실 디메틸 클로로 실란 등)인 경우에는 일반적으로 염기성 조건 하에서 실온에서 반응시킬 필요가 있다. R이 치환 알킬, 예컨대 벤질 또는 p-메틸벤질 등인 경우에는 일반적으로 염기성 조건에서 아세토 니트릴 또는 아세톤을 용매로 사용하여 환류 반응시킬 필요가 있다. R이 아실 또는 치환 아실 (예를 들어, tert-부톡시 카보닐, 클로로 아세틸, 아세틸 등)인 경우에는 일반적으로 염기성 환경 실온에서 반응시킴으로써 수득할 수 있다.
예를 들면, R이 tert-부톡시 카보닐인 경우, 화합물 61501d를 적절한 용매 (예를 들면, 테트라히드로퓨란, 디클로로메탄, 이소프로판올 또는 이것과 물의 혼합 용액)에서 염기성 (예를 들면, 탄산나트륨, 중탄산 나트륨 등) 조건에서 디-tert-부틸 디카보네이트와 반응시킴으로써 얻어지는 것이 바람직하다.
다른 측면으로, 본 발명은,
Figure pct00017
(1) 화합물 (PhO)P(O)(L')2를 알라닌 벤질 에스테르 및 제1 알칼리 성분(염기)과 반응시킴으로써, (L')P(O)(PhO)(Ala-CH2Ph)를 수득하는 단계,
(2) (L')P(O)(PhO)(Ala-CH2Ph)를 페놀 및 제2 알칼리 성분(염기)과 반응시킴으로써 화합물 61501b 및 61501e를 포함하는 혼합물을 수득하는 단계, 및
(3) 단계 (2)의 화합물 61501b 및 화합물 61501e을 포함하는 혼합물을, 추출 처리, 크로마토그래피 처리 또는 결정화 처리하여 화합물 61501b 또는 화합물 61501e을 수득하는 단계,
를 포함하는 화합물 61501b 및 61501e의 제조 방법을 제공한다.
식에서, L은 이탈기이고, 상기 이탈기는 아릴옥시, 벤젠설포네이트 기, 캄포설포네이트 기, 또는 적어도 하나의 전자 구인 기로 치환된 아릴옥시를 포함하고, L'과 L은 각각 독립적인 이탈기를 나타낸다.
알라닌 벤질 에스테르는 염산염의 형태도 포함되며, 상기 제1 알칼리 성분(제1 염기) 및 제2 알칼리 성분(제2 염기)은 독립적으로 유기 알칼리 성분(염기) 또는 무기 알칼리 성분(염기)으로부터 선택된다. 상기 유기 알칼리 성분(염기)으로는 트리에틸아민, DIPEA, NMM, 피리딘, 피페리딘을 들 수 있고, 상기 무기 알칼리 성분(염기)으로는 탄산나트륨, 중탄산 나트륨, 탄산칼륨, 중탄산 칼륨 등을 들 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.
여기서, 상기 이탈기는 당업자에게 알려진 것과 동일한 의미를 가지고 (Advanced Organic Chemistry : reactions, mechanisms and structure (고급 유기 화학 : 반응 메커니즘 구조) - 제 4 판, Jerry March, John Wiley 및 Sons의; 1992, 351 - 357 쪽), 기질 분자의 일부이며, 기질 분자에 결합하고 있는 기이다. 기질 분자가 치환 반응 (예를 들어, 친 핵성 시약)을 받는 반응에서, 이탈기는 그 다음 치환된다. 이탈기의 예로는 할로겐 (F, Cl, Br, I), 바람직하게는 Cl, Br 또는 I; 토실레이트, 메실레이트, 트리플레이트, 아세테이트, 캄포설포네이트 기, 아릴옥시 및 적어도 하나의 전자 구인 기로 치환된 아릴 옥시 (예를 들면, p-니트로페녹시, 2-클로로페녹시, 4-클로로페녹시, 2,4-디니트로페녹시, 펜타플루오로페녹시 등) 등을 들 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.
예를 들면, L이 펜타플루오로아릴옥시인 경우, 화합물 61501h 및 화합물 61501g을 염기성 조건 하에서 반응시킨 후, 화합물 61501f과 염기성 조건 하에서 더 반응시킴으로써 화합물 61501e와 61501b의 혼합물이 수득된다.
Figure pct00018
상기 단계에서, 바람직하게는 반응을 질소 분위기 하에서 실시하여 화합물 61501h를 적절한 용매 (예를 들어, 디클로로메탄, 이소프로판올, 디메틸포름아미드 (DMF), 디옥산 등) 중, 적절한 온도 (바람직하게는 -80 ℃ )에서, 화합물 61501g 및 적절한 알칼리 성분 (예를 들면, 트리에틸아민, N,N-디이소프로필에틸아민 (DIPEA), N-메틸모폴린 (NMM), 피리딘, 피페리딘)을 더 첨가한 후, 바람직하게는 실온에서 밤새 반응시킨 후, 반응액에 화합물 61501f 및 적절한 알칼리 성분 (예를 들면, 트리에틸아민, DIPEA, NMM, 피리딘, 피페리딘)을 더 첨가하고 반응 종료 후, 용매를 증발시키고, 에틸 아세테이트 및 물을 첨가하고, 목적 화합물 61 01e와 61501b의 혼합물을 분리하였다.
또한, 상기 방법에있어서, 단계 (3)은 화합물 61501b 및 화합물 61501e의 혼합물을 용매에 용해 또는 현탁시키고, 안티솔벤트(반용매; anti-solvent)를 첨가하여 결정화시킴으로써 화합물 61501b 수득할 수 있다.
본 발명의 바람직한 예에서, 화합물 61501b는 결정화에 의해 분리되는데, 이는 화합물 61502을 유기 용매에 녹여, 용해시키기 위해 교반하는, 단계 1, 및 상기 용액 계에 안티솔벤트를 적가하여 화합물 61501b를 결정화 시켜 수득하는 단계 2를 포함한다.
여기서, 상기 유기 용매는 C1-8 알콜, C2-8 에테르, C3-7 케톤, C3-7 에스테르, C1-2 염화 탄소 화합물 및 C2-7 니트릴 중 적어도 하나를 포함한다. 더욱 바람직하게는, 상기 유기 용매는 에틸 아세테이트, tert-부틸 메틸 에테르, 이소프로판올 또는 테트라히드로퓨란에서 선택된다.
상기 안티솔벤트는 C5-12 포화 탄화수소, C6-12 방향족 탄화수소 및 석유 에테르 중 적어도 하나를 포함하고, 더욱 바람직하게는, 상기 안티솔벤트는 석유 에테르 또는 헥산에서 선택된다.
또한, 상기 방법에 있어서, 유기 용매와 안티솔벤트의 부피비는 1 : 2 - 10 (v/v)이고, 바람직하게는 1 : 4 - 6 (v/v)이다. 화합물 61502 및 유기 용매의 사용량의 비율은 1 : 1 - 10 (w/v)이고, 바람직하게는 1 : 1.25 - 2.5 (w/v)이다.
다른 바람직한 구체예에 있어서, 상기 유기 용매는 에틸 아세테이트에서 선택되고, 상기 안티솔벤트는 석유 에테르에서 선택된다.
더욱 바람직하게는, 상기 방법에 있어서, 결정화 방법은, 화합물 61502을 에틸 아세테이트에 녹여 실온에서 교반하여 용해시키는 단계 1, 상기 용액계에 석유 에테르를 적가하고 결정화시키고, 여과하여 화합물 61501b를 수득하는 단계 2를 포함한다. 바람직하게는 화합물 61502 대 에틸 아세테이트의 사용량의 비율은 1 : 1.25 - 2.5 (w/v)이고, 에틸 아세테이트 대 석유 에테르의 사용량의 비율은 1 : 4 - 6 (v/v)이다.
또 다른 바람직한 구체예에서, 교반 용해 및 결정화 온도는 10 ℃ - 50 ℃이며, 더욱 바람직 온도는 25 ℃ - 30 ℃이다.
또한, 상기 방법에 있어서, 단계 (3)은 화합물 61501b 및 화합물 61501e를 포함하는 혼합물을 분취용 컬럼 크로마토그래피에 의해 분리하여 화합물 61501e을 수득한다.
본 발명의 다른 바람직한 예에서, 화합물 61501e의 제조 방법은, 화합물 61502을 액체 크로마토그래피에 의해 분리하여 화합물 61501e을 수득하는 단계를 포함한다.
바람직하게는, 상기 액체 크로마토그래피의 이동상은 메탄올-빙초산/물이다.
보다 바람직하게는, 상기 액체 크로마토 그래피는 C18,10μm 필러의 분취용 컬럼 의해 화합물 61501e을 분취한다.
더욱 바람직하게는 화합물 61502을 메탄올에 용해시킨 후, C18,10μm 역상 충진제에 통과시키고, 이동상으로서 메탄올 5 ‰ 아세테이트/물을 사용하여 메탄올의 비율을 70 % - 85 %로하고, 구배 용출하여 화합물 61501e을 수득한다.
또한 바람직한 예에서, 액체 크로마토 그래피의 조건은 아래의 표 1과 같다.
분취용 컬럼: 300DAC 300×250mm 필러: C18,10μm
이동상 A: 메탄올 이동상 B: 5 ‰ 아세트산 / 물

구배
조건		 시간
(분)		 이동상 A의
농도		 이동상 B의
농도		 검출 파장 λ
(nm)		 유속 V
(L/분)
0 70 30 260 1.8
30 70 30 260 1.8
100 85 15 260 1.8
본 발명의 또 다른 측면으로 다음 화합물을 제공한다.
Figure pct00019
Figure pct00020
Figure pct00021
Figure pct00022
Figure pct00023
식 중, L1은 아릴옥시, 벤젠설포네이트 기, 캄포설포네이트 기, 또는 하나 이상의 동일하거나 또는 상이한 전자 구인 기에 의해 치환된 아릴옥시이다.
단, 상기 화합물 중 L1은 펜타플루오로페녹시 화합물이 아니고, 화합물 61502-2중의 L1은 p-니트로페녹시가 아니다.
또한, 본 발명은하기 화합물을 제공한다.
다음과 같은 화합물을 포함한다.
Figure pct00024
Figure pct00025
Figure pct00026
Figure pct00027
Figure pct00028
Figure pct00029
Figure pct00030
Figure pct00031
Figure pct00032
다른 측면으로, 본 발명은 또한 Rp-1 또는 Sp-1을 제조하기 위한 상기 화합물의 용도(사용)를 제공한다.
다음의 정의 및 용어가 본 명세서에서 사용되며, 이들 용어는 당업자에게 공지되어있다. 달리 명시되지 않는 한, 이들 정의는 명세서 및 청구 범위 전반에 걸쳐 사용된다. 화학 이름, 일반 이름 및 화학 구조는 동일한 구조를 설명하기 위해 교환하여 사용할 수 있다. 이러한 정의는 용어를 단독으로 사용하거나 다른 용어와 조합하여 사용되는지 여부에 관계 없이 적용된다. 따라서, "알킬"의 정의는 "알킬" 뿐만 아니라 "히드록시 알킬", "할로 알킬", "알콕시"등의 알킬 부분에도 적용된다. 다르게 언급되거나 규정되지 않거나, 사실에 반하는 것으로 입증되지 않는 한, 여러 용어로 표현되는 치환기 (2 개 이상의 용어의 조합에 의해 특정되는 1 개의 치환기)와 골격 구조의 결합점은 복수의 용어의 마지막 언급된 치환기로서 대상 구조물에 연결된다. 예를 들어, 사이클로알킬 알킬 치환체는 "알킬"부분을 통해 표적 구조 (예를 들어, 표적 구조 - 알킬 - 사이클로알킬)에 연결된다.
용어 "알킬"은 1 - 30 개의 탄소 원자를 포함하는 직쇄 또는 측쇄의 포화 일가 탄화수소 잔기를 의미한다. 용어 "C1 - 6 알킬"은 1 내지 6 개의 탄소 원자를 포함하는 알킬을 말한다. 알킬의 예로는 메틸, 에틸, 프로필, 이소 프로필, n- 부틸, 이소 부틸, tert-부틸을 포함하는 저급 알킬 또는 이소 펜틸, 네오 펜틸, 헥실, 헵틸 및 옥틸을 들 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 용어 "치환 알킬"은 할로겐, 아릴, 사이클로알킬, 시아노, 히드록시, 알콕시, 카르복시 및 -C(O)O-알킬로부터 독립적으로 선택되는 하나 이상의 치환기로 치환될 수 있는 알킬을 말한다.
용어 "알콕시"는 알킬-O-기를 의미하며, 알킬은 상기 정의와 같다. 알콕시는 1 - 12 개의 탄소 원자를 포함하는 것이 바람직하고, 1 - 6 개의 탄소 원자를 포함하는 것이 더욱 바람직하다. 바람직한 알콕시로는 메톡시, 에톡시, 이소프로폭시를 들 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 알콕시 중 알킬기는 에테르 산소 원자를 통해 인접한 부분에 연결된다.
용어 "할로겐"및 "할로겐"은 염소, 브롬, 요오드 素又는 불소 원자의기를 말한다. 염화물, 브롬화물, 요오드 및 불소 바람직한 할로겐이다.
용어 "할로겐"및 "할라이드(할로겐화물)"는 염소, 브롬, 요오드 또는 불소 원자 기를 의미한다. 염화물, 브롬화물, 요오드화물 및 불화물이 바람직한 할라이드이다.
용어 "아릴"은 1 - 2 개의 방향족 고리를 갖는 치환 또는 비치환된 방향족, 단환식 또는 이환식의 화학적으로 구현 가능한 탄소 고리계를 가리킨다. 아릴 잔기(부분)는 일반적으로 6 - 14 개의 탄소 원자를 갖는다. 대표적인 예로는 페닐, 톨릴, 크실릴, 나프틸 등을 들 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 필요하다면, 탄소 고리 부분은 할로겐, 알킬, 페닐, 히드록시, 알콕시, 아미노 등 1 - 5 개, 바람직하게는 1 - 3 개의 치환기로 치환될 수 있다.
용어 "아실"은 카보닐 부분(잔기)과 비-카보닐 부분을 포함하는 치환기를 가리킨다. 상기 카보닐 부분은 카보닐 탄소와 헤테로 원자 사이에 이중 결합을 갖고, 상기 헤테로 원자는 O, N 및 S로부터 선택된다. 상기 헤테로 원자가 N 인 경우, N은 저급 알킬로 치환된다. 상기 비-카보닐 부분은 직쇄, 분지 또는 고리형의 C1 - 20 알킬, C1 - 10 알킬 또는 저급 알킬 등의 직쇄, 분지 및 고리형 알킬; 메톡시 메틸 등의 알콕시 알킬; 벤질 등의 아릴 알킬; 페녹시 메틸 등의 아릴옥시 알킬; 또는 다음으로 선택적으로 치환된 페닐을 포함하는 아릴로부터 선택된다: 할로겐 (F, Cl, Br, I), 히드록시, C1 - 4 알킬 또는 C1 - 4 알콕시; 메탄설포닐을 포함하는 알킬- 또는 아랄킬-설포닐와 같은 설포네이트 기, 단일-, 디-, 또는 트리포스페이트 기, 트리틸 또는 모노메톡시트리틀, 치환된 벤질, 트리알킬실릴(예, tert-부틸디메틸실릴) 또는 디페닐메틸실릴. 적어도 하나의 아릴 기가 비-카보닐 부분에 존재하는 경우, 상기 아릴 기는 바람직하게 페닐 기를 포함한다. 용어 "치환(된) 아실"은 할로겐, 아릴, 사이클로알킬, 시아노, 히드록시, 알콕시, 카복시 및 -C(O)O-알킬로부터 독립적으로 선택되는 하나 이상의 치환기로 치환된 아실을 가리킨다.
용어 "전자 구인 기"는 통상의 의미를 갖는다. 전자 구인 기의 예로는 할로겐, -NO2, -C(O)-(저급 알킬), -C(O)-(아릴), -C(O)O-(저급 알킬), -C(O)O-(아릴) 등을 들 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.
용어 "P*"는 인 원자가 키랄 원자임을 의미하고, "R" 또는 "S"의 상응하는 Cahn-Ingold-Prelog 이름을 가지며, 이러한 공지의 일반적인 의미를 가진다.
다른 측면으로, 본 발명은 또한 암 치료제를 제조하기 위한 상기 화합물 Rp-1, Sp-1의 사용을 제공하고; 상기 암은 췌장암 말기 고형 종양, 난소암, 및 유방암을 포함한다.
본 발명은 또한 상기 화합물 (Rp-1) 또는 화합물 (Sp-1)을 의약 활성 성분으로 포함하고, 하나 이상의 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약학적 조성물을 제공한다.
상기 약학적 조성물은 정맥 내, 피하, 복강 내, 근육 내, 흡입, 직장 및 국소 (구강 또는 설하 등)의 투여를 포함한 경구 또는 비경구 투여가 가능하다.
경구 투여를 위한 약학적 조성물은 정제, 캡슐, 과립 또는 현탁제를 포함한다. 경구 투여를 위한 정제는 본 발명에서 제공하는 조성물을 활성 성분으로 포함하고, 1 종 이상의 약학적으로 허용되는 부형제, 예를 들면 희석제, 붕해제, 결합제, 활택제, 감미료, 향미제, 착색제 및 방부제를 포함할 수 있다. 옥수수 및 알긴산이 붕해제로 사용되는 경우 적절한 불활성 희석제로는 탄산나트륨, 탄산 칼슘, 인산 나트륨, 인산 칼슘 및 유당을 들 수 있다. 결합제로는 전분 및 젤라틴을 들 수 있다. 선택적으로 윤활제는 스테아린산 마그네슘, 스테아린산 또는 활석(탈크) 일 수 있다. 선택적으로, 상기 정제는 위장의 흡수를 지연시키기 위해, 또한 글리세롤 모노스테아레이트 또는 글리세롤 디스테아레이트로 코팅 할 수 있다.
경구 투여를 위한 캡슐은 경질 캡슐 및 연질 캡슐을 포함하고, 경질 캡슐은 활성 성분으로서 본 발명에서 제공하는 조성물과 고체 희석제를 포함한다. 연질 캡슐은 활성 성분으로서 본 발명에서 제공하는 의약 조성물과 물 또는 오일 (예를 들어, 땅콩 오일, 액체 파라핀 또는 올리브유)를 포함한다.
직장 투여용 좌제는 좌제 기제가 코코아 오일 또는 살리실산염 일 수 있다.
질내 투여를 위한 제제는 활성 성분인 조성물 및 당 업계에 알려진 일반적인 담체를 포함하는, 페서리, 탐폰, 크림, 젤, 페이스트, 폼 또는 스프레이 형태이다.
정맥 내, 복강 내, 피하 및 근육 내 투여용 제제(제형)에 사용되는 경우, 본 발명에서 제공하는 조성물은 일반적으로 멸균 용액 또는 멸균 현탁액이며, 적절한 pH 및 삼투압을 갖는다. 이러한 제제의 제조에 대해서는, 당 업계에 알려진 일반적인 방법에 따라 제조될 수 있다.
상기 조성물의 투여량은 0.1 - 300mg/kg/일이며, 바람직하게는 0.5mg/kg/일이며, 보다 바람직 적절한 투여량은 1 - 50mg/kg/일이고 더욱 바람직하게는 1 - 50mg/kg/일이다. 바람직하게는 1 일 2 회, 3 회, 4 회 또는 5 회에 걸쳐 간격을 가지고 투여한다. 바람직하게는 활성 성분 10 - 1500mg, 더욱 바람직하게는 활성 성분 20 - 1000mg, 가장 바람직하게는 활성 성분 50 - 700mg을 1 개의 복용량 단위로 포함한다.
본 발명에서 제공하는 조성물은 단일 이성질체 Rp-1 또는 Sp-1의 함량이 높은 것으로, 임상에서 NUC-1031의 약리학적 활성에 대한 추가 연구 및 우수한 활성 및 낮은 부작용을 갖는 신규 항암제 개발을 위해 원재료를 제공한다. 또한, 본 발명자들은 독창적으로 제 1 단계의 반응 종료 후에서 단일 이성체의 분리를 위해, 이성체 혼합물 및/또는 라세미 혼합물에서 단일 이성질체를 분리하는 종래의 방법 에 비해 원료를 절약할 수 있다. 또한, 제 1 단계 반응의 이성질체 분리는 액체 크로마토그래피 또는 결정법에 의해 실시하기 위해, 조작이 간편하고, 종래의 키랄 크로마토그래피 컬럼을 사용하는 분리에 비해 비용을 크게 절약할 수 있다. 또한, 본 발명에서 제공하는 제조 방법의 전체 경로는 조작이 간단하고, 시설에 대한 요구가 낮고, 고순도의 제품을 얻을 수 있기 때문에 공업 생산에 적합하다.
본 발명에서 제공하는 조성물은 단일 이성질체 Rp-1 또는 Sp-1의 함량이 높은 것으로, 임상에서 NUC-1031의 약리학적 활성에 대한 추가 연구 및 우수한 활성 및 낮은 부작용을 갖는 신규 항암제 개발을 위해 원재료를 제공한다. 또한, 본 발명자들은 독창적으로 제 1 단계의 반응 종료 후에서 단일 이성체의 분리를 위해, 이성체 혼합물 및/또는 라세미 혼합물에서 단일 이성질체를 분리하는 종래의 방법 에 비해 원료를 절약할 수 있다. 또한, 제 1 단계 반응의 이성질체 분리는 액체 크로마토그래피 또는 결정법에 의해 실시하기 위해, 조작이 간편하고, 종래의 키랄 크로마토그래피 컬럼을 사용하는 분리에 비해 비용을 크게 절약할 수 있다. 또한, 본 발명에서 제공하는 제조 방법의 전체 경로는 조작이 간단하고, 시설에 대한 요구가 낮고, 고순도의 제품을 얻을 수 있기 때문에 공업 생산에 적합하다.
[도 1]도 1은 실시예 3의 방법에 의해 제조된 화합물 61501b의 HPLC 분석 스펙트럼을 나타낸 것이다. 도 중 화합물 61501b의 HPLC 순도는 100%이며, 피크 데이터는 다음과 같다.
Figure pct00033

[도 2]도 2는 실시예 10의 방법에 의해 제조된 화합물 Rp-1의 31P-NMR 스펙트럼을 나타내며, 도 중 δP는 3.81이다.
[도 3] 도 3은 실시예 20의 방법에 의해 제조된 화합물 Sp-1의 HPLC 분석을 나타낸 것으로, 화합물 Sp-1의 HPLC 순도가 100 %이다. 피크 데이터는 다음과 같다.
Figure pct00034

[도 4] 도 4는 실시예 20의 방법에 의해 제조된 화합물 Sp-1의 31P-NMR 스펙트럼을 나타낸 것이고, 도 중 δP는 3.64이다.
[도 5] 도 5는 실시예 20의 방법에 의해 제조된 화합물 Sp-1의 1H-NMR을 나타낸 것이다.
[도 6] 도 6은 화합물 Sp-1의 단결정의 현미경 사진을 나타낸 것이다.
[도 7] 도 7은 화합물 Sp-1 단결정 시뮬레이션 XRPD와 단결정 반사 XRPD와의 비교를 나타낸 것이다.
[도 8] 도 8은 화합물 Sp-1의 단결정의 단위 셀 다이어그램을 도시한다.
[도 9] 도 9는 화합물 Sp-1 분자의 입체 구조를 도시한다.
[도 10] 도 10은 화합물 Sp-1 분자의 입체 구조를 도시한다.
다음에 실시예에 의해 본 발명의 내용을 더욱 해석·설명하지만, 이들 실시예는 본 발명을 설명하기 위한 것에 불과하며, 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다. 하기 실시예에서 구체적인 조건을 명시하지 않는 한, 실험 방법은 정상적인 조건 또는 제조업체의 권장 조건에서 실시한다. 별도의 설명이없는 한, 모든 백분율, 비율, 비율 또는 부수는 중량에 의한 것이다.
본 발명의 중량 부피 백분율 단위는 당업자에게 주지되어 있는 것으로, 예를 들면, 100ml의 용액의 용질의 중량을 말한다. 별도의 정의가 없는 한, 본 명세서에서 사용되는 모든 용어 및 과학 용어는 당업자에게 주지되어 있는 것과 같은 의미를 가진다. 또한, 본 명세서의 기재와 같이 또는 동등한 임의의 방법 및 재료는 모두 본 발명의 방법에 사용할 수있다. 본 명세서에 기재된 바람직한 실시 방법 및 재료는 예시를 위한 것에 지나지 않는다.
본 발명의 중간체인 화합물 61501e, 61501b의 순도는 HPLC 법에 의해 측정한다. HPLC는 컬럼: YMC 수성체 150 × 4.6mm, 3μm; 이동상 : 40 % - 85 % 메탄올, 2 ‰ 인산 / 물, 실행 시간 46분, 구배 용리 필요에 따라 이동상 용매 비율을 조정 하고 1.0 (ml / min)의 조건에서 실시한다.
본 발명에 있어서, 화합물 Rp-1, Sp-1의 순도는 HPLC 법에 의해 측정한다. HPLC는 컬럼: 옥타데실실란-실리카겔을 필러로 사용하는 것 (YMC-수성체 C18 컬럼, 150mm × 4.6mm 3μm) 이동상 : 0.1 % 인산 - 메탄올 (10 - 50:90 50 ), 유속 1.0 (ml / min) 검출 파장 272nm의 조건에서 실시한다.
실시예 1 화합물 61502의 제조
Figure pct00035
-80℃에서 61501h 20g의 디클로로메탄 용액 60ml에 61501g 20.6g을 넣고 이어 트리 에틸 아민 19.3g의 디클로로메탄 희석액 20ml를 추가했다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 혼합물에 61501f을 추가하고 이어 트리에틸아민 19.3g의 디클로로메탄 희석액 20ml를 넣고 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반 하였다. 혼합물을 직접 탈 용매하고 잔류물을 에틸 아세테이트 200ml와 물 400ml에 용해시켰다. 에틸 아세테이트를 분리한 후, 에틸 아세테이트 (2 × 100ml)에서 수상을 2 번 씻어 주었고, 한 번에 에틸 아세테이트 100ml를 사용하였다. 에틸 아세테이트 상을 합하고, 에틸 아세테이트 상을 식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조했다. 에틸 아세테이트를 증류하여 목적 화합물 61502을 수득하였고, 이대로 다음의 정제에 사용했다.
실시예 2 화합물 61501e 제작
Figure pct00036
화합물 61502 47g을 메탄올 470ml에 녹여 C18,10μm 필러의 분취용 컬럼으로 정제하였다. 제조 방법은 아래의 표 4에 나타낸 바와 같고, 이동상은 각각 메탄올 5 ‰ 아세테이트 / 물에 메탄올의 비율을 70 %에서 85 %로 상승시켜 구배 용출을 실시했다.
표 4 : 제조방법
분취용 컬럼 : 300DAC 300 × 250mm 필러 : C18,10μm
이동상 A : 메탄올 이동상 B : 5 ‰ 아세트산 / 물

구배
조건		 시간 (분) 이동상 A의 농도 이동상 B의 농도 검출파장λ (nm) 유속V (L/분)
0 70 30 260 1.8
30 70 30 260 1.8
100 85 15 260 1.8
용리액을 단계적으로 수집하여 화합물 61501e 12g을 얻었다. 수율은 28 %이며, HPLC 순도는 99.8 %이다.
실시예 3 화합물 61501b 제조
Figure pct00037
화합물 61502 120g을 에틸 아세테이트 240ml에 녹여 교반을 계속하고, 실온에서 석유 에테르 720ml를 천천히 적하하여 결정을 석출한 후에 여과액을 여과하여 제거함으로써 화합물 61501b 48.8g을 얻고 수입 비율은 40.6 %이며, HPLC 순도 100 %이다 (도 1 참조).
실시예 4 화합물 61501c 제조
Figure pct00038
실온에서 화합물 61501d 20g과 테트라하이드로퓨란 200ml와 물 100ml의 혼합 용액에 탄산 나트륨 35.4g을 넣고 이어 디-tert-부틸 카보네이트 17.5g을 넣고 반응 종료까지 실온에서 교반을 계속했다. 에틸 아세테이트 혼합물을 3 회 추출하고 한 번에 에틸 아세테이트 200ml를 사용 하였다. 에틸 아세테이트를 합하고 식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조했다. 용매를 증류한 후, 실리카겔 컬럼 크로마토 그래피 (이동상 : 메탄올/디클로로메탄 (메탄올 비율을 2.5 %에서 10 %로 상승), 구배 용리)에 의해 화합물 61501c 18g을 수득하였다.
실시예 5 화합물 61501c2 제조
Figure pct00039
실온의 질소 분위기 하에서 탄산 칼륨 3g을 61501d 1g 및 BnBr 1g을 용해시킨 아세토 니트릴에 더해 반응을 환류까지 승온시켜 반응 종료까지 보온했다. 반응액을 직접 탈 용매하고 잔류물을 에틸 아세테이트 50ml에 용해하고, 포화 식염수로 세척한 후 무수 황산나트륨으로 건조했다. 탈용매 한 후, 실리카겔 컬럼 크로마토 그래피(이동상 : 메탄올/디클로로메탄 (메탄올 비율을 2.5 %에서 10 %로 상승), 구배 용리)에 의해 화합물 61501c2 900mg을 수득하였다.
실시예 6 화합물 61501c3 제조
Figure pct00040
실온의 질소 분위기 하에서 tert-부틸 디메틸 클로로 실란 0.8g을 61501d 1g을 용해하여 이루어지는 피리딘 10ml에 첨가하고, 반응 종료까지 보온했다. 반응액을 직접 탈용매하고 잔류물을 에틸 아세테이트 50ml에 용해한 후, 포화 식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조했다. 탈용매한 후, 실리카겔 컬럼 크로마토 그래피(이동상 : 메탄올/디클로로메탄 (메탄올 비율을 2.5 %에서 10 %로 상승), 구배 용리)에 의해 화합물 61501c3 500mg을 수득하였다.
실시예 7 화합물 61501c4 제조
Figure pct00041
실온의 질소 분위기 하에서 BzCl 0.8g을 61501d 1g의 피리딘 10ml에 첨가한 후, 반응 종료까지 보온했다. 반응액을 직접 탈용매하고 잔류물을 에틸 아세테이트 50ml에 용해한 후, 포화 식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조했다. 탈용매한 후, 실리카겔 컬럼 크로마토 그래피(이동상 : 메탄올/디클로로메탄 (메탄올 비율을 2.5 %에서 10 %로 상승), 구배 용리)에 의해 화합물 61501c4 600mg을 수득하였다.
실시예 8 화합물 Rp-1의 제조
Figure pct00042
Figure pct00043
(1) 화합물 61502a2 제조
0 ℃에서 화합물 61501c2 800mg의 테트라히드로퓨란 10ml 용액에 tert-부틸 마그네슘 클로라이드 용액 (1.0mol/L, 6.5ml)을 넣고 1시간 동안 교반시킨 후, 화합물 61501e 2g을 넣고 반응 종료까지 실온에서 교반을 계속했다. 혼합물에 물 50ml를 넣고 에틸 아세테이트에 의해 수상을 3 회 추출하고 한 번에 에틸 아세테이트 50ml를 사용 하였다. 에틸 아세테이트 상을 합하고 식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조하고 탈용매했다. 실리카겔 컬럼 크로마토 그래피(이동상 : 메탄올/디클로로메탄 (메탄올 비율을 2.5 %에서 5 %로 상승), 구배 용리)에 의해 정제하여 화합물 61502a2 700mg을 수득하였다.
(2) 화합물 Rp-1의 제조
실온에서 화합물 61502a2 500mg의 메탄올 용액 5ml에 Pd/C 100mg을 추가 반응계를 수소로 치환한 후, 압력을 0.4bar에 유지하고 실온에서 반응 종료까지 반응했다. 반응액은 직접 여과하고 여액은 탈용매한 후, 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(이동상 : 메탄올/디클로로메탄 (메탄올 비율을 2.5 %에서 10 %로 상승), 구배 용리)에 의해 정제하여 화합물 Rp-1 240mg을 얻고 HPLC 순도는 99.5 %이다. 31P-NMR (202MHz, MeOD) : δＰ３．８１．1H-NMR (500MHz, MeOD): δH: 7.56, 7.52 (2d,J=7.5Hz,1H,H-6), 7.38-7.33(m,7H,ArH), 7.26-7.19 (m,3H,ArH), 6.25 (apparent q, J=7.5Hz,1H,H-1’), 5.88, 5.84 (2×d,J=7.5Hz,1H,H-5), 5.18-5.12 (m,2H,OCH2Ph), 4.49-4.42(m,1H,H-5’), 4.38-4.31 (m,1H,H-5’), 4.25-4.18 (m,1H,H-3’), 4.07-4.01 (m,2H,H-4’,CHCH3), 1.38 (apparent t,J=8.5Hz,3H,CHCH3).
실시예 9 화합물 Rp-1의 제조
Figure pct00044
Figure pct00045
(1) 화합물 61502a3 제조
0 ℃에서 화합물 61501c3 800mg의 테트라하이드로퓨란 10ml 용액에 tert-부틸 마그네슘 클로라이드 용액 (1.0mol / L, 7ml)을 넣고 1시간 동안 교반시킨 후, 화합물 61501e 2g을 넣고 반응 종료까지 실온에서 교반을 계속했다. 혼합물에 물 50ml를 넣고 에틸 아세테이트로 수상을 3 회 추출하고 한 번에 에틸 아세테이트 50ml를 사용 하였다. 에틸 아세테이트 상을 합하고 식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조하고 탈용매했다. 실리카겔 컬럼 크로마토 그래피 (이동상 : 메탄올/디클로로메탄 (메탄올 비율을 2.5 %에서 5 %로 상승), 구배 용리)에 의해 정제하여 화합물 61502a3 400mg을 수득하였다.
(2) 화합물 Rp-1의 제조
0 ℃에서 화합물 61502a3 400mg의 메탄올 5ml 용액에 1mol/L 염산 (1ml)을 첨가하고 0 ℃에서 반응 종료까지 반응시켰다. 반응액을 직접 탈용매하고 잔류물을 에틸 아세테이트 50ml에 용해한 후, 포화 식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조했다. 탈용매한 후, 실리카겔 컬럼 크로마토 그래피(이동상 : 메탄올/디클로로메탄 (메탄올 비율을 2.5 %에서 10 %로 상승), 구배 용리)에 의해 정제하여 화합물 Rp-1 (200mg)을 수득하였고, HPLC 순도는 99.2 %이다.
실시예 10 화합물 Rp-1의 제조
Figure pct00046
Figure pct00047
(1) 화합물 61502a 제조
0 ℃에서 화합물 61501c 2g의 테트라하이드로퓨란 10ml 용액에 tert-부틸 마그네슘 클로라이드 용액 (1.0mol/L, 16ml)을 가하고 1h 동안 교반시킨 후, 화합물 61501e 5g을 넣고 반응 종료까지 실온에서 교반을 계속했다. 혼합물에 물 50ml를 넣고 에틸 아세테이트로 수상을 3 회 추출하고 한 번에 에틸 아세테이트 100ml를 사용 하였다. 에틸 아세테이트 상을 합하고 식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조하고 탈용매했다. 실리카겔 컬럼 크로마토 그래피(용리액 : 메탄올/디클로로메탄 2.5 % ~ 5 %)로 정제하여 화합물 61502a 2g을 수득하였고, 수율은 55 %이다.
(2) 화합물 Rp-1의 제조
0 ℃에서 화합물 61502a 2g의 디클로로메탄 10ml 용액에 트리플루오로아세트산 6ml를 넣고 반응 종료까지 보온하고 교반 하였다. 혼합물을 탈용매한 후, 중탄산 나트륨 용액 50ml를 넣고 에틸 아세테이트로 3 회 추출하고 한 번에 에틸 아세테이트 50ml를 사용 하였다. 에틸 아세테이트 상을 합하고 식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조했다. 탈용매한 후, 실리카겔 컬럼 크로마토 그래피(이동상 : 메탄올/디클로로메탄 (메탄올 비율을 2.5 %에서 5 %로 상승), 구배 용리)에 의해 화합물 Rp-1 700mg을 수득하였고, HPLC 순도 99. 1 %이다. 31P-NMR (202MHz,MeOD): δP 3.81 (도 2 참조). 1H-NMR (500MHz,MeOD): δH: 7.56, 7.52 (2d,J=7.5Hz,1H,H-6), 7.38-7.33 (m,7H,ArH), 7.26-7.19 (m,3H,ArH), 6.25 (apparent q, J=7.5Hz,1H,H-1’), 5.88, 5.84 (2×d,J=7.5Hz,1H,H-5), 5.18-5.12 (m,2H,OCH2Ph), 4.49-4.42 (m,1H,H-5’), 4.38-4.31 (m,1H,H-5’), 4.25-4.18 (m,1H,H-3’), 4.07-4.01 (m,2H,H-4’,CHCH3), 1.38 (apparent t,J=8.5Hz,3H,CHCH3).
실시예 11 화합물 Rp-1의 제조
Figure pct00048
Figure pct00049
(1) 화합물 61502a4 제조
0 ℃에서 화합물 61501c4 1g의 테트라히드로퓨란 10ml 용액에 tert-부틸 마그네슘 클로라이드 용액 (1.0mol / L, 8ml)을 가하고 1시간 동안 교반시킨 후, 화합물 61501e 2.5g을 첨가 후, 반응 종료까지 실온 에서 교반을 계속했다. 혼합물에 물 50ml를 넣고 에틸 아세테이트로 수상을 3 회 추출하고 한 번에 에틸 아세테이트 50ml를 사용 하였다. 에틸 아세테이트 상을 합하고 식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조하고 탈용매했다. 실리카겔 컬럼 크로마토 그래피(이동상 : 메탄올/디클로로메탄 (메탄올 비율을 2.5 %에서 5 %로 상승), 구배 용리)에 의해 정제하여 화합물 61502a4 900mg을 수득하였다.
(2) 화합물 Rp-1의 제조
실온에서 화합물 61502a4 900mg의 메탄올 5ml 용액에 7mol/L 메탄올 암모니아 용액 1.5ml을 첨가하여 실온에서 반응 종료까지 반응시켰다. 반응액을 직접 탈용매하고 잔류물을 에틸 아세테이트 50ml에 용해하고, 포화 식염수로 세척하고 무수 황산나트륨으로 건조한 후, 탈용매하여 실리카겔 컬럼 크로마토 그래피(이동상 : 메탄올/디클로로메탄 (메탄올 비율을 2.5 %에서 5 %로 상승), 구배 용리)에 의해 화합물 Rp-1 500mg을 수득하였고 HPLC 순도는 99.5 %이다.
실시예 12 화합물 Rp-1의 제조
Figure pct00050
(1) 화합물 Rp-1의 제작
0 ℃에서 화합물 61501d 1g의 테트라히드로퓨란 10ml 용액에 tert-부틸 마그네슘 클로라이드 용액 (1.0mol / L, 8ml)을 가하고 1시간 동안 교반시킨 후, 화합물 61501e 2.5g을 첨가하여, 반응 종료까지 실온에서 교반을 계속했다. 혼합물에 물 50ml를 넣고 에틸 아세테이트로 수상을 3 회 추출하고 한 번에 에틸 아세테이트 50ml를 사용 하였다. 에틸 아세테이트 상을 합하고 식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조하고 탈용매했다. 실리카겔 컬럼 크로마토 그래피(이동상 : 메탄올/디클로로메탄 (메탄올 비율을 2.5 %에서 5 %로 상승), 구배 용리)에 의해 정제하여 화합물 Rp-1 421mg을 수득하였다. HPLC 순도는 99.5 %이다.
실시예 13 화합물 61502-1r 및 화합물 61502-1s 제조
Figure pct00051
-80 ℃에서 61501h 2g의 디클로로메탄 용액 10ml에 61501g 2.1g을 넣고 이어 트리에틸아민 2g의 디클로로메탄 희석액 5ml를 더했다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반 하였다. 혼합물에 61501f1 이어 트리에틸아민 2g (5ml 디클로로메탄 희석)의 용액을 첨가하고 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반 하였다. 혼합물을 직접 탈용매하고 잔류물을 에틸 아세테이트 50ml 및 물 100ml에 용해시켰다. 에틸 아세테이트를 분리한 후, 에틸 아세테이트로 수상을 2 번 씻어주었고, 한 번에 에틸 아세테이트 30ml를 사용 하였다. 에틸 아세테이트 상을 합하고 에틸 아세테이트 상을 식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조했다. 에틸 아세테이트를 증류하여 목적 화합물 61502-1을 수득하였고, 이대로 다음의 정제에 사용했다.
화합물 61502-1 8g을 메탄올 50ml에 용해하고 C18,10μm 필러의 분취용 컬럼으로 정제 하였다. 제조 방법은 아래의 표 5와 같으며, 이동상은 각각 메탄올 5 ‰ 아세테이트/물에 메탄올의 비율을 70 %에서 80 %로 상승시켜 구배 용출을 실시했다.
표 5: 제조방법
분취용 컬럼 : 100DAC 100 × 250mm 필러 : C18,10μm
이동상 A : 메탄올 이동상 B : 5 ‰ 아세트산 / 물

구배
조건		 시간 (분) 이동상 A의 농도 이동상 B의 농도 검출파장λ (nm) 유속V (L/분)
0 70 30 260 1.8
30 70 30 260 1.8
100 85 15 260 1.8
용리액을 단계적으로 수집하여 화합물 61502-1r (1.1g), 61502-1s (1.3g)을 수득하였다.
실시예 14 화합물 Rp-1의 제조
Figure pct00052
Figure pct00053
실시예 12의 방법과 마찬가지로 화합물 61501e 대신 화합물 61502-1r 또는 61502-4r을 이용하여 화합물 Rp-1을 제조하였다. HPLC 순도는 각각 98.9 %, 99.1 %이다. 31P-NMR (202MHz, MeOD): δP 3.81; 1H-NMR (500MHz, MeOD): δH: 7.56, 7.52 (2d,J=7.5Hz, 1H,H-6), 7.38-7.33 (m, 7H, ArH), 7.26-7.19 (m, 3H, ArH), 6.25 (apparent q, J=7.5Hz, 1H, H-1’), 5.88,5.84 (2×d, J=7.5Hz, 1H, H-5), 5.18-5.12 (m, 2H, OCH2Ph), 4.49-4.42 (m, 1H, H-5’), 4.38-4.31 (m, 1H, H-5’), 4.25-4.18 (m, 1H, H-3’), 4.07-4.01 (m, 2H,H-4’, CHCH3), 1.38 (apparent t, J=8.5Hz,3H,CHCH3).
실시예 15 화합물 Sp-1의 제조
Figure pct00054
(1) 화합물 Sp-1의 제작
0 ℃에서 화합물 61501d (500mg)의 테트라히드로퓨란 (10ml) 용액에 tert-부틸 마그네슘 클로라이드 용액 (1.0mol/L, 5ml)을 가하고 1시간 동안 교반시킨 후, 화합물 61502-1s 1g을 추가 반응 종료까지 실온에서 교반을 계속했다. 혼합물에 물 30ml를 넣고 에틸 아세테이트로 수상을 3 회 추출하고 한 번에 에틸 아세테이트 20ml를 사용 하였다. 에틸 아세테이트 상을 합하고 식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조하고 탈용매하였다. 실리카겔 컬럼 크로마토 그래피(이동상 : 메탄올/디클로로메탄 (메탄올 비율을 2.5 %에서 5 %로 상승), 구배 용리)에 의해 정제하여 화합물 Sp-1 (186mg)을 수득하였다. HPLC 순도는 99.4 %이다. 31P-NMR (202MHz,MeOD): δP 3.64；1H-NMR (500MHz, MeOD): δH: 7.56,7.52 (2d,J=7.5Hz, 1H,H-6), 7.38-7.33 (m, 7H, ArH), 7.26-7.19 (m, 3H, ArH), 6.25 (apparent q, J=7.5Hz, 1H, H-1’), 5.88,5.84 (2×d, J=7.5Hz, 1H, H-5), 5.18-5.12 (m, 2H, OCH2Ph), 4.49-4.42 (m, 1H, H-5’), 4.38-4.31 (m, 1H, H-5’), 4.25-4.18 (m, 1H, H-3’), 4.07-4.01 (m, 2H,H-4’, CHCH3), 1.38 (apparent t, J=8.5Hz,3H,CHCH3).
실시예 16 화합물 61502-4 화합물 61502-4s 및 61502-4r 제조
Figure pct00055
-80 ℃에서 61501h (2g)의 디클로로메탄 (10ml) 용액에 61501g (2.1g)을 가하고 이어 2g 트리에틸아민 (5ml 디클로로메탄 희석) 용액을 첨가했다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반 하였다. 혼합물에 61501f4을 추가하고 이어 트리에틸아민 2g (5ml 디클로로메탄 희석)의 용액을 첨가하고 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반 하였다. 혼합물을 직접 탈용매하고 잔류물을 에틸 아세테이트 50ml 및 물 100ml에 용해시켰다. 에틸 아세테이트를 분리한 후, 에틸 아세테이트로 수상을 2 번 씻어주었고, 한 번에 에틸 아세테이트 30ml를 사용 하였다. 에틸 아세테이트 상을 합하고 에틸 아세테이트 상을 식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조했다. 에틸 아세테이트를 증류하여 목적 화합물 61502-4을 수득하고, 이대로 다음의 정제에 사용했다.
화합물 61502-4 (7.8g)을 메탄올 50ml에 용해하고 C18,10μm 필러의 분취용 컬럼으로 정제 하였다. 제조 방법은 아래의 표 6과 같으며, 이동상은 각각 메탄올 5 ‰ 아세테이트 / 물에 메탄올의 비율을 70 %에서 80로 상승시켜 구배 용출을 실시했다.
표 6: 제조방법
분취용 컬럼 : 100DAC 100 × 250mm 필러 : C18,10μm
이동상 A : 메탄올 이동상 B : 5 ‰ 아세트산 / 물

구배
조건		 시간 (분) 이동상 A의 농도 이동상 B의 농도 검출파장λ (nm) 유속V (L/분)
0 70 30 260 1.8
30 70 30 260 1.8
100 85 15 260 1.8
용리액을 단계적으로 수집하여 화합물 61502-4r (1.05g), 61502-4s (1.1g)을 수득하였다.
실시예 17 화합물 Sp-1의 제조
Figure pct00056
(1) 화합물 Sp-1의 제작
0 ℃에서 화합물 61501d (500mg)의 테트라히드로퓨란 (10ml) 용액에 tert-부틸 마그네슘 클로라이드 용액 (1.0mol / L, 5ml)을 가하고 1시간 동안 교반시킨 후, 화합물 61502-4s (1g)를 넣고 반응 종료까지 실온에서 교반을 계속했다. 혼합물에 물 30ml를 넣고 에틸 아세테이트로 수상을 3 회 추출하고 한 번에 에틸 아세테이트 20ml를 사용 하였다. 에틸 아세테이트 상을 합하고 식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조하고 탈용매했다. 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(이동상 : 메탄올/디클로로메탄 (메탄올 비율을 2.5 %에서 5 %로 상승), 구배 용리)에 의해 정제하여 화합물 Sp-1 (203mg)을 수득하였다. HPLC 순도는 98.3 %이다. 31P-NMR (202MHz,MeOD): δP 3.64；1H-NMR(500MHz, MeOD): δH: 7.56,7.52 (2d,J=7.5Hz, 1H,H-6), 7.38-7.33 (m, 7H, ArH), 7.26-7.19 (m, 3H, ArH), 6.25 (apparent q, J=7.5Hz, 1H, H-1’), 5.88,5.84 (2×d, J=7.5Hz, 1H, H-5), 5.18-5.12 (m, 2H, OCH2Ph), 4.49-4.42 (m, 1H, H-5’), 4.38-4.31 (m, 1H, H-5’), 4.25-4.18 (m, 1H, H-3’), 4.07-4.01 (m, 2H,H-4’, CHCH3), 1.38 (apparent t, J=8.5Hz,3H,CHCH3).
실시예 18 화합물 Sp-1의 제조
Figure pct00057
(1) 화합물 61501a2 제작
0 ℃에서 화합물 61501c2 (700mg)의 테트라히드로퓨란 (10ml) 용액에 tert-부틸 마그네슘 클로라이드 용액 (1.0mol / L, 7ml)을 넣고 1시간 동안 교반시킨 후, 화합물 61501b (2g)를 추가하고, 반응 종료까지 실온에서 교반을 계속했다. 혼합물에 물 50ml를 넣고 에틸 아세테이트로 수상을 3 회 추출하고, 한 번에 에틸 아세테이트 50ml를 사용 하였다. 에틸 아세테이트 상을 합하고 식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조하고 탈용매했다. 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(이동상 : 메탄올/디클로로메탄 (메탄올 비율을 2.5 %에서 5 %로 상승), 구배 용리)에 의해 정제하여 화합물 61501a 2700mg을 수득하고, 수율은 55 %이다.
(2) 화합물 Sp-1의 제조
실온에서 화합물 61501a2 (700mg)의 메탄올 (5ml) 용액에 Pd/C (150mg)을 첨가하고 반응계를 수소로 치환한 후, 압력을 0.4bar에 유지하고 실온에서 반응 종료까지 반응했다. 반응 액은 직접 여과하고 여액은 탈 용매 한 후, 실리카겔 컬럼 크로마토 그래피 (이동상 : 메탄올 / 디클로로메탄 (메탄올 비율을 2.5 %에서 10 %로 상승), 그레디언트 용리)에 의해 정제하여 화합물 Sp-1 (350mg)을 얻고 HPLC 순도는 99.3 %이다. 31P-NMR (202MHz,MeOD): δP 3.64. 1H-NMR (500MHz,MeOD): δH: 7.56,7.52 (2d,J=7.5Hz,1H,H-6), 7.38-7.33 (m,7H,ArH), 7.26-7.19 (m,3H,ArH), 6.25 (apparent q, J=7.5Hz,1H,H-1’), 5.88,5.84 (2×d,J=7.5Hz,1H,H-5), 5.18-5.12 (m,2H,OCH2Ph), 4.49-4.42 (m,1H,H-5’), 4.38-4.31 (m,1H,H-5’), 4.25-4.18 (m,1H,H-3’), 4.07-4.01 (m,2H,H-4’,CHCH3), 1.38 (apparent t,J=8.5Hz,3H,CHCH3).
실시예 19 화합물 Sp-1의 제조
Figure pct00058
Figure pct00059
(1) 화합물 61501a3 제조
0 ℃에서 화합물 61501c3 (700mg)의 테트라하이드로퓨란 (10ml) 용액에 tert-부틸 마그네슘 클로라이드 용액 (1.0mol/L, 8ml)을 가하고 1시간 동안 교반시킨 후, 화합물 61501b (2g)를 추가하고, 반응 종료까지 실온에서 교반을 계속했다. 혼합물에 물 50ml를 넣고 에틸 아세테이트로 수상을 3 회 추출하고, 한 번에 에틸 아세테이트 50ml를 사용 하였다. 에틸 아세테이트 상을 합하고 식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조하고 탈용매했다. 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(이동상 : 메탄올/디클로로메탄 (메탄올 비율을 2.5 %에서 5 %로 상승), 구배 용리)에 의해 정제하여 화합물 61501a 3600mg을 수득하였다.
(2) 화합물 Sp-1의 제작
0 ℃에서 화합물 61501a3 (600mg)의 메탄올 (5ml) 용액에 1mol / L 염산 (1ml)을 첨가하고 0 ℃에서 반응 종료까지 반응시켰다. 반응액을 직접 탈용매하고 잔류물을 에틸 아세테이트 50ml에 용해한 후, 포화 식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조했다. 탈용매한 후, 실리카겔 컬럼 크로마토 그래피(이동상 : 메탄올/디클로로메탄 (메탄올 비율을 2.5 %에서 10 %로 상승), 구배 용리)에 의해 정제하여 화합물 Sp-1 (300mg)을 수득하였다 , HPLC 순도는 99.5 %이다. 31P-NMR (202MHz, MeOD): δP 3.64. 1H-NMR(500MHz, MeOD): δH: 7.56,7.52 (2d,J=7.5Hz,1H,H-6), 7.38-7.33 (m,7H,ArH), 7.26-7.19 (m,3H,ArH), 6.25 (apparent q, J=7.5Hz,1H,H-1’), 5.88,5.84 (2×d,J=7.5Hz,1H,H-5), 5.18-5.12 (m,2H,OCH2Ph), 4.49-4.42 (m,1H,H-5’), 4.38-4.31 (m,1H,H-5’), 4.25-4.18 (m,1H,H-3’), 4.07-4.01 (m,2H,H-4’,CHCH3), 1.38 (apparent t,J=8.5Hz,3H,CHCH3).
실시예 20 화합물 Sp-1의 제조
Figure pct00060
Figure pct00061
1) 화합물 61501a 제조
0 ℃에서 화합물 61501c (2g)의 테트라히드로퓨란 (10ml) 용액에 tert-부틸 마그네슘 클로라이드 용액 (1.0mol/L, 16ml)을 가하고 1시간 동안 교반시킨 후, 화합물 61501b (5g)를 추가하고, 실온에서 반응 종료까지 교반 하였다. 혼합물에 물 50ml를 넣고 에틸 아세테이트로 수상을 3 회 추출하고, 한 번에 에틸 아세테이트 100ml를 사용 하였다. 에틸 아세테이트 상을 합하고 식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조하고 탈용매했다. 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(용리액 : 메탄올/디클로로메탄 2.5 % - 5 %) 정제하여 화합물 61501a 2.8g을 수득하였고, 수율은 77 %이며, HPLC 순도는 93 %이다.
(2) 화합물 Sp-1의 제작
0 ℃에서 화합물 61501a (2g)의 디클로로메탄 (10ml) 용액에 트리플루오로아세트산 6ml를 넣고 반응 종료까지 보온하고 교반 하였다. 혼합물을 탈용매한 후 중탄산 나트륨 용액 50ml를 넣고 에틸 아세테이트로 3 회 추출하고 한 번에 에틸 아세테이트 50ml를 사용 하였다. 에틸 아세테이트 상을 합하고 식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조했다. 탈용매한 후, 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(이동상 : 메탄올/디클로로메탄 (메탄올 비율을 2.5 %에서 5 %로 상승), 구배 용리에 의해 화합물 Sp-1 (700mg)을 수득하였고, HPLC 순도는 100 %이다 (도 3 참조). 31P-NMR (202MHz,MeOD): δP 3.64 (도 4 참조); 1H-NMR(500MHz,MeOD): δH: 7.56,7.52 (2d,J=7.5Hz,1H,H-6), 7.38-7.33 (m,7H,ArH), 7.26-7.19 (m,3H,ArH), 6.25 (apparent q, J=7.5Hz,1H,H-1’), 5.88,5.84 (2×d,J=7.5Hz,1H,H-5), 5.18-5.12 (m,2H,OCH2Ph), 4.49-4.42 (m,1H,H-5’), 4.38-4.31 (m,1H,H-5’), 4.25-4.18 (m,1H,H-3’), 4.07-4.01 (m,2H,H-4’,CHCH3), 1.38 (apparent t,J=8.5Hz,3H,CHCH3) (도 5 참조).
실시예 21 화합물 Sp-1의 제조
Figure pct00062
Figure pct00063
(1) 화합물 61501a4 제작
0 ℃에서 화합물 61501c4 (600mg)의 테트라히드로퓨란 (10ml) 용액에 tert-부틸 마그네슘 클로라이드 용액 (1.0mol / L, 7ml)을 넣고 1시간 동안 교반시킨 후, 화합물 61501b (1.8g) 를 넣고 반응 종료까지 실온에서 교반을 계속했다. 혼합물에 물 50ml를 넣고 에틸 아세테이트로 수상을 3 회 추출하고, 한 번에 에틸 아세테이트 50ml를 사용 하였다. 에틸 아세테이트 상을 합하고 식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조하고 탈용매했다. 실리카겔 컬럼 크로마토그래피 (이동상 : 메탄올/디클로로메탄 (메탄올 비율을 2.5 %에서 5 %로 상승), 구배 용리)에 의해 정제하여 화합물 (61501a4) 550mg을 수득하였다.
(2) 화합물 Sp-1의 제작
실온에서 화합물 61501a4 (500mg)의 메탄올 (5ml) 용액에 7mol/L 메탄올 암모니아 용액 1.5ml을 첨가하여, 실온에서 반응 종료까지 반응했다. 반응액을 직접 탈용매하고 잔류물을 에틸 아세테이트 50ml에 용해하고, 포화 식염수로 세척하고 무수 황산나트륨으로 건조한 후, 탈용매하여 실리카겔 컬럼 크로마토그래피 (이동상 : 메탄올/디클로로메탄 (메탄올 비율을 2.5 %에서 5 %로 상승), 구배 용리에 의해 화합물 Sp-1 (300mg)을 수득하였고 HPLC 순도는 99.5 %이다. 31P-NMR (202MHz,MeOD): δP 3.64. 1H-NMR(500MHz,MeOD): δH: 7.56,7.52 (2d,J=7.5Hz,1H,H-6), 7.38-7.33 (m,7H,ArH), 7.26-7.19 (m,3H,ArH), 6.25 (apparent q, J=7.5Hz,1H,H-1’), 5.88,5.84 (2×d,J=7.5Hz,1H,H-5), 5.18-5.12 (m,2H,OCH2Ph), 4.49-4.42 (m,1H,H-5’), 4.38-4.31 (m,1H,H-5’), 4.25-4.18 (m,1H,H-3’), 4.07-4.01 (m,2H,H-4’,CHCH3), 1.38 (apparent t,J=8.5Hz,3H,CHCH3).
실시예 22 화합물 Sp-1의 입체 배치 확인
본 발명의 화합물 Sp-1의 입체 배치를 더 확인하기 위해 발명자는 본 발명에서 제안하는 방법, 예를 들면 실시 예 15,17,18 - 21의 방법에 의해 얻어진 화합물 Sp-1의 단결정 성장을 하였다. 예를 들어, 화합물 Sp-1을 용매, 예를 들면 저급 알코올 및 물로 이루어진 용매 중에서 계의 온도를 30 - 50 ℃에서 0 - 5 ℃로 서서히 하강시킴으로써 막대형 단결정을 얻었다. 바람직하게는 상기 저급 알코올은 C1-3 알코올 (예를 들면 메탄올, 에탄올, 프로판올 또는 이소프로판올)이며, 더욱 바람직하게는, 상기 저급 알코올은 에탄올이다. 저급 알코올과 물 사용량 비율은 1 : 3 (v/v) 인 것이 바람직하다. 그리고, 단결정 분석을 실시했다.
신규 결정 형태의 확인을 용이하게 하기 위해, 본 발명은 X-선 회절 분석 데이터 및 이러한 데이터의 측정 조건은 다음과 같이 제공한다.
온도 123(2) K
파장 0.71073Å
결정계, 공간군 Monoclinic, P21
셀 크기 a=11.3607(l9)Å
b=34.841(5)Å
c=15.118(2)Å
α=90°
β=111.857(4)°
γ=90°
체적 5553.8(l5)Å3
Z 8
밀도 (계산값) 1.388 Mg/m3
흡수 계수 0.166 mm-1
F (000) 2416
크리스탈 크기 2.26×0.26×0.23mm
데이터 수집의 θ 범위 1.97-27.63°
수집된 반사/독립적인 반사 123782/13011[R(int) =0.1357]
강도 감쇠 98.9%
정제방법 F2의 전체 행렬 최조 제곱법
데이터 / 억제 / 매개 변수 13011/3/1403
F2 적합성 1.858
최종 R 지수[(I＞2sigma(I)] R1=0.1853、wR2=0.4314
피크 및 홀의 최대 차이 1.575 및 -1.177e.A-3
단결정 회절 데이터는 Buker D8 ADVANCE 단결정 회절 장치 (MoKα, λ = 0.71073Å)를 사용하여 123 (2) K에서 수집하였다.
결정 형태의 화합물 Sp-1의 제조
실시예 15에서 제조된 화합물 Sp-1을 에탄올/물 (1/3, v/v) 계에 첨가하고, 50 ℃에서 0.01 ℃/분의 속도로 5 ℃까지 서서히 냉각시켜 막대 형상의 단결정을 수득하였다(도 6 참조). 단결정 반사 XRPD 패턴은 도 7에 나타낸 바와 같고, 단결정 셀 다이어그램은 그림 8과 같다. 단결정 분석은 화합물 Sp-1 분자의 절대 배치는 인 원자 P1 (S)와 C9 (S), C18 (R), C19 (R), C21 (R)임을 확인하였다(도 9 및 도 10 참조).

Claims (15)

  1. 화합물 61501c와 화합물 61501b를 반응시켜 화합물 61501a를 수득하는 단계를 포함하는, 화합물 Sp-1의 제조방법에 있어서,
    Figure pct00064

    Figure pct00065

    (식 중, R은 H 또는 히드록시 보호기이고, L은 이탈기이다.)
    선택적으로, 상기 R이 H가 아닌 경우, 화합물 61501a의 히드록시 보호기를 이탈시킴으로써 화합물 Sp-1을 수득하는, 화합물 Sp-1의 제조방법.
  2. 제1항에 있어서,
    L은 할로겐, 아릴옥시, 벤젠설포네이트 기, 캄포설포네이트 기, 또는 적어도 하나의 전자 구인 기로 치환된 아릴옥시인 것을 특징으로 하는 방법.
  3. 제2항에 있어서,
    상기 전자 구인 기는 니트로 기 또는 할로겐인 것을 특징으로 하는 방법.
  4. 제1항에 있어서,
    L은 니트로 페녹시, p-클로로 페녹시, o-클로로 페녹시, 2,4-디니트로 페녹시 또는 펜타플루오로 페녹시인 것을 특징으로 하는 방법.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 히드록시 보호기 R은 실릴, 알킬 또는 치환된 알킬, 아실 또는 치환된 아실, 알콕시 카보닐 또는 치환된 알콕시 카보닐인 것을 특징으로 하는 방법.
  6. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 히드록시 보호기 R은 테트라히드로피라닐, 벤질, p-메틸 벤질, 아세틸, 프로피오닐, 부티릴, 벤조일, tert-부톡시 카보닐 (Boc), 벤질옥시 카보닐 (Cbz), 9-플루오레닐메틸옥시 카보닐 (Fmoc), 디메틸-tert-부틸실릴, 트리메틸 실릴 또는 디메틸페닐 실릴인 것을 특징으로 하는 방법.
  7. 제1항에 있어서,
    R은 H 또는 tert-부톡시 카보닐 (Boc)이고, L은 펜타플루오로 페녹시인 것을 특징으로 하는 방법.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 따른 방법에 의해 제조된 화합물 Sp-1을 약 95 중량% 이상 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  9. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 따른 방법에 의해 제조된 화합물 Sp-1을 약 99 중량% 이상 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  10. (1) 화합물 (PhO)P(O)(L')2를 알라닌 벤질 에스테르 및 제1 알칼리 성분과 반응시킴으로써, (L')P(O)(PhO)(Ala-CH2Ph)를 수득하는 단계,
    (2) (L')P(O)(PhO)(Ala-CH2Ph)를 페놀 및 제2 알칼리 성분과 반응시킴으로써, 화합물 61501b 및 61501e를 포함하는 혼합물을 수득하는 단계, 및
    (3) 단계 (2)의 화합물 61501b 및 화합물 61501e을 포함하는 혼합물을, 추출 처리, 크로마토그래피 처리 또는 결정화 처리하여 화합물 61501b를 수득하는 단계,
    를 포함하는 화합물 61501b의 제조 방법.
    Figure pct00066
    Figure pct00067

    (여기에서, L은 아릴옥시, 벤젠설포네이트 기, 캄포설포네이트 기, 또는 적어도 하나의 전자 구인 기로 치환된 아릴옥시이고, L'과 L은 각각 독립적으로 이탈기이다).
  11. 제10항에 있어서,
    단계 (3)은 화합물 61501b 및 화합물 61501e를 포함하는 혼합물을 용매에 용해 또는 현탁시키고, 안티솔벤트를 첨가하고, 결정화 시켜 화합물 61501b를 수득하는 것을 특징으로 하는 방법.
  12. 하기 식으로 나타내는 화합물.
    Figure pct00068
    Figure pct00069
    Figure pct00070

    Figure pct00071
    Figure pct00072

    (식 중, L1은 아릴옥시, 벤젠설포네이트 기, 캄포설포네이트 기, 또는 하나 이상의 동일하거나 또는 상이한 전자 구인 기에 의해 치환된 아릴옥시이고,
    단, 상기 화합물 중 L1은 펜타플루오로 페녹시 화합물이 아니고, 화합물 61502-2중의 L1은 p-니트로 페녹시가 아니다).
  13. 제12항에 있어서,
    상기 전자 구인 기는 F, Cl, Br, 니트로 기, 카복실, 설포네이트, 시아노 또는 카보닐에서 선택되는 것을 특징으로 하는 화합물.
  14. 제12항에 있어서,
    하기 화합물을 포함하는 것을 특징으로 하는 화합물.
    Figure pct00073
    Figure pct00074
    Figure pct00075

    Figure pct00076
    Figure pct00077
    Figure pct00078

    Figure pct00079
    Figure pct00080
    Figure pct00081

  15. 화합물 Sp-1 또는 Rp-1의 제조에서, 제10항 내지 제13항 중 어느 한 항에 따른 화합물의 용도.
    Figure pct00082
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