KR20180047677A - 락토코커스 락티스, 이의 배양물 또는 이의 용출물을 포함하는 각질형성세포 증식 또는 각질형성세포 사멸 억제용 조성물 - Google Patents

락토코커스 락티스, 이의 배양물 또는 이의 용출물을 포함하는 각질형성세포 증식 또는 각질형성세포 사멸 억제용 조성물 Download PDF

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KR20180047677A
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조정훈
김용진
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(주)아모레퍼시픽
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Abstract

본 명세서에는 유효성분으로 락토코커스 락티스(Lactococcus lactis) 균주 이의 배양물, 이의 용출물 및 상기 용출물의 추출물 중 어느 하나 이상을 포함하는 각질형성세포 증식용 조성물 또는 각질형성세포 사멸 억제용 조성물로서, 상기 균주는 구체적으로 동백나무의 꽃에서 분리된 균주이며, 상기 조성물은 각질형성세포를 증식시키고, 각질형성세포 사멸을 억제하므로, 피부 장벽강화효과 또는 피부보습 증진효과가 우수하다.

Description

락토코커스 락티스, 이의 배양물 또는 이의 용출물을 포함하는 각질형성세포 증식 또는 각질형성세포 사멸 억제용 조성물 {A composition for keratinocyte proliferation or inhibiting of keratinocyte apoptosis comprising Lactococcus lactis, culture of the same or lysate of the same}
본 명세서는 유효성분으로 락토코커스 락티스 또는 이의 용출물을 포함하는 각질형성세포 증식 또는 각질형성세포 사멸 억제용 조성물에 관한 것이다.
최근 화학원료, 곤충 및 동물성 원료를 지양하게 됨에 따라 환경 유래 친 바이오 효능 소재를 찾을 필요가 대두되었다. 안전성 이슈가 있는 화학원료와 달리 미국과 유럽의 안전성 평가기준에서 프로바이오틱스는 인체에 위험성이 없는 것으로 간주되고 있다. 식품 시장에서는 이미 프로바이오틱스의 유당불내증 개선과 면역체계 강화, 염증과 알레르기 반응 개선 등의 다양한 효능이 입증되었으므로 그 활용 가치가 크다.
한편, 미생물 자원은 석유, 물 등과는 달리 재생산할 수 있다는 점에서 지속가능한 자원으로 분류되고, 다양한 환경에 적응한 미생물 고유의 특성을 이용하므로 연구 및 산업적 적용 가능성이 매우 높다.
락토코커스 락티스(Lactococcus lactis)는 주로 치즈와 같은 유제품에서 발견되는 균주로 현재까지는 정장작용 및 과민성 대장증후군에 대한 개선 효과, 항균물질인 bacteriocin 생성 여부만 알려져 있었다.
한국등록특허 제 10-0949716 호 한국공개특허 제 10-2008-0092090 호 일본등록특허 제 4604207 호 프랑스 공개특허 제 2968990 호
이에, 본 발명의 발명자들은 락토코커스 락티스(Lactococcus lactis)에 관한 연구를 하여 상기 락토코커스 락티스(Lactococcus lactis)에 각질형성세포 증식 및 사멸 억제 효능을 연구하여 본 발명에 이르게 되었다.
본 발명의 일측면은, 유효성분으로 락토코커스 락티스(Lactococcus lactis) 균주, 이의 배양물, 이의 용출물 및 상기 용출물의 추출물 중 어느 하나 이상을 포함하는 각질형성세포 증식용 조성물을 제공하고자 한다.
본 발명의 일측면은, 유효성분으로 락토코커스 락티스(Lactococcus lactis) 균주, 이의 배양물, 이의 용출물 및 상기 용출물의 추출물 중 어느 하나 이상을 포함하는 각질형성세포 사멸 억제용 조성물을 제공하고자 한다.
본 발명의 일 측면은, 각질형성세포 증식 또는 각질형성세포 사멸 억제효과가 있는 건강 식품 또는 화장료 조성물을 제공하고자 한다.
본 발명의 일측면은, 유효성분으로 락토코커스 락티스 락티스(Lactococcus lactis subsp. lactis) 균주, 이의 배양물, 이의 용출물 및 상기 용출물의 추출물 중 어느 하나 이상을 포함하는 각질형성세포 증식용 조성물을 제공한다.
본 발명의 일측면은, 유효성분으로 락토코커스 락티스 락티스(Lactococcus lactis subsp. lactis) 균주, 이의 배양물, 이의 용출물 및 상기 용출물의 추출물 중 어느 하나 이상을 포함하는 각질형성세포 사멸 억제용 조성물을 제공한다.
본 발명의 일측면에서, 상기 균주는 동백나무의 꽃에서 분리된 균주인, 조성물을 제공한다.
본 발명의 일측면에서, 상기 균주는 락토코커스 락티스 W-camellia(Lactococcus lactis W-camellia)인, 조성물을 제공한다.
본 발명의 일측면에서, 상기 균주는 기탁번호 KCCM11915P 인, 조성물을 제공한다.
본 발명의 일측면에서, 상기 유효성분은 가열 용출물인, 조성물을 제공한다.
본 발명의 일측면에서, 상기 유효성분은 조성물 전체 중량에 대하여 0.001 내지 90 중량% 포함되는, 조성물을 제공한다.
본 발명의 일측면에서, 상기 조성물은 피부장벽 강화용인, 조성물을 제공한다.
본 발명의 일측면에서, 상기 조성물은 피부보습 증진용인, 조성물을 제공한다.
본 발명의 일측면에서, 상기 조성물은 건강 식품 또는 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명의 다른 측면은, 락토코커스 락티스 W-camellia(Lactococcus lactis W-camellia)인 균주를 제공한다.
본 발명의 다른 측면에서, 상기 균주는 기탁번호가 KCCM11915P인, 균주이다.
본 발명의 일 측면에 따른 조성물은 각질형성세포 증식 효과가 있다.
본 발명의 일 측면에 따른 조성물은 각질형성세포 사멸 억제 효과가 있다.
본 발명의 일 측면에 따른 조성물은 피부장벽 강화 효과가 있다.
본 발명의 일 측면에 따른 조성물은 피부보습 증진 효과가 있다.
본 발명의 일 측면은 각질형성세포 증식 효과가 있는 건강 식품 조성물을 제공하는 효과가 있다.
본 발명의 일 측면은 각질형성세포 사멸 억제 효과가 있는 건강 식품 조성물을 제공하는 효과가 있다.
본 발명의 일 측면은 각질형성세포 증식 효과가 있는 화장료 조성물을 제공하는 효과가 있다.
본 발명의 일 측면은 각질형성세포 사멸 억제 효과가 있는 화장료 조성물을 제공하는 효과가 있다.
도 1은 락토코커스 락티스 W-camellia의 16S rRNA sequence blast 결과이다.
도 2는 본원발명 실험예 1에 따른 실험결과로, 본원발명 실시예 2 및 비교예 1 내지 2의 피부세포 증식 촉진 효과를 측정한 그래프이다.
도 3는 본원발명 실험예 2에 따른 실험결과로, 본원발명 실시예 2의 피부세포 이동촉진 효과를 측정한 그래프이다.
도 4는 본원발명 실험예 3에 따른 실험결과로, 본원발명 실시예 2의 피부세포 사멸 억제효과를 측정한 그래프이다.
본 발명의 일측면은 동백나무의 꽃에서 분리한 락토코커스 락티스(Lactococcus lactis) 균주, 또는 이의 가열 용출액을 유효성분으로 포함하는 조성물로써, 피부세포, 특히 각질형성세포의 생장 증진, 피부장벽 강화를 목적으로 한 제품에 제공하고자 한다.
이하 본 발명에 대하여 상세히 설명한다.
본 발명의 일측면은, 유효성분으로 락토코커스 락티스 락티스(Lactococcus lactis subsp. lactis) 균주, 이의 배양물, 이의 용출물 및 상기 용출물의 추출물 중 어느 하나 이상을 포함하는 각질형성세포 증식용 조성물을 제공한다.
본 발명의 일측면은, 유효성분으로 락토코커스 락티스 락티스(Lactococcus lactis subsp. lactis) 균주, 이의 배양물, 이의 용출물 및 상기 용출물의 추출물 중 어느 하나 이상을 포함하는 각질형성세포 사멸 억제용 조성물을 제공한다.
본 명세서에서 "배양물"은 외부와 차단된 배양배지에서 균주를 배양시켰을 때, 배양된 균주 및 배양결과물이다.
본 명세서에서 "용출물(lysate)"는 대상 균주가 물리적, 화학적, 생물학적 메커니즘에 의해 용균(lysis)된 균주의 내용물이다.
일 구현예에서, 상기 조성물에 포함되는 균주는 균주의 동결건조물일 수 있으일 수 있다.
본 발명의 일측면에서, 상기 균주는 동백나무의 꽃에서 분리된 균주인, 조성물을 제공한다.
상기 동백나무는 Camellia japonica일 수 있으며, 제주지역에서 채집할 수 있다.
본 발명의 일측면에서, 상기 균주는 락토코커스 락티스 W-camellia(Lactococcus lactis W-camellia)인, 조성물을 제공한다.
본 발명의 일측면에서, 상기 균주는 기탁번호 KCCM11915P 인, 조성물을 제공한다.
본 발명의 일측면에서, 상기 용출물은 가열 용출물인, 조성물을 제공한다.
본 발명의 다른 측면에서, 상기 유효성분 중 상기 균주의 용출물은 통상적인 방법으로 제조할 수 있으나, 바람직하게 가열 용출물의 제조방법으로 제조할 수 있다.
본 발명의 다른 측면에서, 상기 균주의 용출물은 상기 균주를 배양하는 단계, 세포를 분리하기 위해 배양된 균주를 원심분리하는 단계 및 분리된 세포를 가열하여 용출하는 단계를 통해 제조될 수 있다.
본 발명의 일측면에서, 상기 유효성분은 조성물 전체 중량을 기준으로 0.001 내지 90 중량%로 포함될 수 있다. 일 구현예에서, 상기 유효성분은 조성물 전체 중량을 기준으로 0.001 중량% 이상, 0.01중량% 이상, 0.1중량% 이상, 1중량% 이상, 1.1 중량% 이상, 1.5 중량% 이상, 2 중량% 이상, 3 중량% 이상, 5 중량% 이상, 10 중량% 이상, 20중량% 이상 또는 30 중량% 이상일 수 있다. 또한, 상기 인삼 꽃대 추출물은 조성물 전체 중량을 기준으로 90 중량% 이하, 85중량% 이하, 80중량% 이하, 70중량% 이하, 50중량% 이하, 40중량% 이하, 30중량% 이하, 20중량% 이하, 10 중량% 이하, 5 중량% 이하, 4 중량% 이하, 3 중량% 이하, 2 중량% 이하, 1 중량% 이하, 0.1 중량% 이하 또는 0.05중량% 이하일 수 있다.
본 발명의 일측면에서, 상기 조성물은 피부장벽 강화용인, 조성물을 제공한다.
본 발명의 일측면에서, 상기 조성물은 피부보습 증진용인, 조성물을 제공한다.
본 발명의 일측면에서, 상기 조성물은 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸, 및 외용제 중 어느 하나의 형태로 제형화된 조성물을 제공한다.
본 발명의 일측면에서, 상기 조성물은 피부 외용제 조성물일 수 있다.
본 발명의 일측면에서, 상기 조성물은 화장료 조성물일 수 있다. 본 명세서의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 유효성분을 화장료 조성물로 사용 시 투여량 결정은 당업자의 수준 내에 있으며, 조성물의 1일 투여 용량은 투여하고자 하는 대상의 연령, 건강상태, 합병증 등의 다양한 요인에 따라 달라지지만, 성인을 기준으로 할 때 일반적으로는 상기 유효성분을 1 내지 500mg/kg, 바람직하게는 30 내지 200 mg/kg을 1일 1 내지 2회 분할하여 투여할 수 있으며, 상기 투여량은 어떠한 방법으로도 본 발명의 범위를 한정하는 것이 아니다
본 발명의 일 측면에서 상기 조성물은 식품 조성물일 수 있으며 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강보조 식품류 등이 있고, 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료인 형태로 사용될 수 있다. 각 제형의 식품 조성물은 유효 성분 이외에 해당 분야에서 통상적으로 사용되는 성분들을 제형 또는 사용 목적에 따라 당업자가 어려움 없이 적의 선정하여 배합할 수 있으며, 다른 원료와 동시에 적용할 경우 상승 효과가 일어날 수 있다.
이때, 식품 또는 음료 중에 포함되는 유효성분의 양은 일반적으로 건강식품 조성물인 경우에는 전체 식품의 0.1 내지 60 중량%를 포함할 수 있고, 건강음료 조성물은 100ml를 기준으로 0.002 내지 50g, 일측면에서는 0.02 내지 10g을 포함할 수 있다.
상기 유효성분을 식품 조성물로 사용 시 투여량 결정은 당업자의 수준 내에 있으며, 이의 1일 투여 용량은 예를 들어 0.1mg/kg/일 내지 5000mg/kg/일, 보다 구체적으로는 50 mg/kg/일 내지 500 mg/kg/일이 될 수 있으나, 이에 제한되지 않으며, 투여하고자 하는 대상의 연령, 건강 상태, 합병증 등 다양한 요인에 따라 달라질 수 있다.
일실시예에서 상기 조성물은 본 발명이 목적으로 하는 주 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 주 효과에 상승 효과를 줄 수 있는 다른 성분 등을 함유할 수 있다. 예를 들어, 물성 개선을 위하여 향료, 색소, 살균제, 산화방지제, 방부제, 보습제, 점증제, 무기염류, 유화제 및 합성 고분자 물질 등의 첨가제를 더 포함할 수 있다. 그 외에도, 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당 및 해초 엑기스 등의 보조 성분을 더 포함할 수도 있다. 상기 성분들은 제형 또는 사용 목적에 따라서 당업자가 어려움 없이 적의 선정하여 배합할 수 있으며, 그 첨가량은 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 선택될 수 있다. 예를 들어, 상기 성분들의 첨가량은, 조성물 전체 중량을 기준으로, 0.01-5 중량%, 보다 구체적으로는 0.01-3 중량% 범위일 수 있다.
본 발명의 일측면에서, 상기 조성물은 약학 조성물일 수 있다. 약학 제형의 제조에 있어서, 활성 성분을 담체와 함께 혼합 또는 희석하거나, 용기 형태의 담체 내에 봉입시키는 것이 바람직하다. 담체가 희석제로 사용 되는 경우에는 활성 성분에 대한 담체, 부형제 또는 매질(medium)로 작용하는 고형, 반고형 또는 액상의 물질일 수 있다. 따라서, 제형은 정제, 환제, 분제, 사쉐, 엘릭시르, 현탁제, 유제, 용액제, 시럽제, 에어로졸, 연질 또는 경질 젤라틴 캅셀제, 멸균 주사제, 멸균 분제 등의 형태일 수 있다. 적합한 담체, 부형제 및 희석제의 예로는, 락토로스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 칼슘 실리케이트, 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 미정질 셀룰로오스, 폴리비닐피롤리돈, 물, 메틸하이드록시벤조에이트, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제형은 충진제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제, 방부제 등을 추가로 포함할 수 있다. 본 발명의 약학 조성물은 포유동물에 투여된 후 활성성분의 신속, 지속 또는 지연된 방출을 제공할 수 있도록 당업계에 잘 알려진 방법을 사용하여 제형화될 수 있다. 본 발명의 약학 조성물은 경구, 경피, 피하, 정맥, 복강, 근육, 국소도포, 첩포 및 이온토포레시스 (iontophoresis)를 포함한 여러 경로를 통해 투여될 수 있고, 이 중에서 국소 적용 및 경구투여가 바람직할 수 있다. 사람의 경우, 활성 화합물의 통상적인 1일 투여량은 0.1 내지 100mg/kg체중, 바람직하게는 5 내지 70mg/kg체중의 범위일 수 있고, 1회 또는 수회로 나누어 투여할 수 있다. 그러나, 활성 성분의 실제 투여량은 치료할 질환, 투여 경로, 환자의 연령, 성별 및 체중, 및 질환의 중증도 등의 여러 관련 인자에 비추어 결정되어야 하는 것으로 이해되어야 하며, 따라서, 상기 투여량은 어떠한 방법으로도 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
본 발명에 따른 조성물의 제형은 용액, 유화물, 점성형 혼합물, 타블렛, 분말 등의 다양한 형태일 수 있으며, 이는 단순 음용, 주사 투여, 스프레이 방식 또는 스퀴즈 방식 등의 다양한 방법으로 투여될 수 있다.
본 발명의 다른 측면은, 락토코커스 락티스 W-camellia(Lactococcus lactis W-camellia)인 균주를 제공한다.
본 발명의 다른 측면에서, 상기 균주는 기탁번호가 KCCM11915P인, 균주이다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
실시예 1: 동백꽃으로부터 락토코커스 락티스 균주의 분리
제주도에서 채집한 동백나무(Camellia japonica)의 꽃을 멸균 증류수에 1회 세척하여 이물질을 제거하고 중량 대비 10배의 phosphate buffered saline(PBS)에 침지 시킨 후 250 rpm의 속도로 1시간 동안 반응 시켰다. 상기의 용액을 BCP 아가(plate count agar with bromcresol purple)에 적정량 분주하여 배양하고 주변이 노란색으로 변하는 콜로니(colony)를 취하여 MRS agar에서 단독배양을 하였다. MRS agar 배지에 옮긴 콜로니(colony)를 여러 회에 걸쳐 계대배양(subculture)하여 단일 균주를 분리하였다. 상기와 같은 방법으로 동백꽃으로부터 미지의 균주를 분리하였다.
(1) 분리된 균주의 동정
상기와 같이 분리된 균주를 하기의 동정과정을 통해 락토코커스 락티스 락티스(Lactococcus lactis subsp. lactis)에 속함을 확인하였다.
분리된 균주의 미생물 동정 및 분류를 위한 16S rRNA 염기서열 분석 결과는 첨부된 도 1과 같았다. 분석 결과, 분리된 균주는 락토코커스 락티스 MP14_2B와 가장 높은 상동성을 나타내어 상기 미생물을 락토코커스 락티스로 동정하고 락토코커스 락티스 W-camellia로 명명하였으며, 한국미생물 보존센터에 2016년 10월 20일자로 기탁하였다(기탁번호 KCCM11915P). 락토코커스 락티스 W-camellia의 16S rRNA 유전자 염기서열은 본 명세서에 첨부된 서열 목록 1과 같다.
(2) 균주의 생물학적 특성
본 발명의 락토코커스 락티스 W-camellia는 그람 양성균이며, 호기적 조건과 혐기적 조건에서 모두 성장가능하며 포자를 형성하지 않고 운동성이 없으며 세포의 형태는 구형이다. 본 발명의 미생물에 대한 통상의 특성을 정리하면 아래 표 1과 같았다.
특성 W-Camellia
형태 구균
그람 염색 그람 양성
45℃에서의 생장 생장 안함
15℃에서의 생장 생장 안함
카탈라아제(Catalase) 생성 생성 안함
포자 형성 형성 안함
글루코스로부터 가스 생성 생성 안함
호기조건에서의 생장 생장 함
실시예 2 : 락토코커스 락티스 균주의 용출물 제조
상기 실시예 1를 통해 분리한 락토코커스 락티스를 배지(MRS Broth)에서 37℃, 24시간 동안 정치배양하였다. 액체 배지 내 균 농도가 5 X 108 ~ 1 X 109 CFU/mL가 되었을 때, 4에서, 4000 rpm 원심 분리를 통하여 영양세포를 수확하고 PBS로 균체를 세척하였다. 균체를 PBS에 5 X 108 ~ 1 X 109 CFU/mL 의 농도로 재분산(resuspension)시키고 100℃에서 10분간 가압가온하여 사멸시키고 멸균 용기에 담아 동결건조 하여 용출물을 제조하였다.
비교예 1 내지 2
비교예 1로 실시예 1의 균주와 동속이종의 균주인 Lactococcus gravieae KCTC3772를 생물자원센터에서 구매하여 실시예 2와 동일한 방법으로 가열 용출물을 제조하였다.
비교예 2로 실시예 1의 균주와 동속동종의 균주인 Lactococcus lactis KCTC3769를 생물자원센터에서 구매하여 실시예 2와 동일한 방법으로 가열 용출물을 제조하였다.
상기 비교예 1내지 2를 하기 실험예들에 사용하였다.
실험예 1 : 피부세포 증식 효과 비교
상기 실시예 2의 락토코커스 락티스 용출물과 상기 비교예 1 내지 2의 피부세포의 증식효과를 측정하였다.
혈청 배제 배지(serum-free media)로 피부세포의 증식 속도를 늦추고 실시예 2 및 비교예 1 내지 2를 처리하였다.
구체적으로 하기와 같은 방법으로 실험하였다.
각질형성세포인 HaCaT을 5X103 cells/well의 농도로 96 well plate에 접종하고 1일 동안 5% CO2, 37℃ 조건에서 배양하여 안정화 시킨 후 실험에 사용하였다. 각질형성세포의 배지를 혈청배제 배지(serum-free 배지)로 치환해주고 영양배지 처리군으로는 10% FBS(fetal bovine serum)가 포함된 배지를 처리하였다. 무처리군으로는 실시예 및 비교예와 동량의 PBS(phosphate buffered saline)을 첨가하여 비교하였다. 하기 표2와 같은 시료를 처리하여 시간 경과에 따른 세포의 증식 정도를 MTT assay를 이용하여 측정하였다.
샘플명 시료 배지에 포함된 농도
영양처리군 FBS -
무처리군 PBS -
동속이종군 Lac . graviae KCTC3772 용출물 100 μg/mL
동속동종군 Lac . lactis KCTC3769 용출물 100 μg/mL
W-camellia Lac . lactis W-camellia 용출물 100 μg/mL
실험 결과는 도 2와 같았다. 도 2와 같이 본원발명 실시예 2의 가열 용출물은 비교예 1 내지 2에 비해 우수한 피부세포 증식효과를 나타내었다.
실험예 2 : Cell migration assay 실험
상기 실시예 2의 피부 세포 증식 효과를 확인하기 위해 cell migration assay 실험을 하였다. 실험에는 cell migration assay을 위한 insert well dish를 활용하였다(Ibidi culture-insert 2 well). 각질형성세포인 HaCaT을 4X105 cells/mL농도로 insert well에 70 μL씩 접종하고 1일 동안 5% CO2, 37℃ 조건에서 배양하여 안정화 시킨 후 실험에 사용하였다. 세포가 충분히 자란 것을 확인하고 insert를 제거하여 well간의 초기 간격을 측정하였다. 이후 각질형성세포의 배지를 혈청배제 배지(serum-free 배지)로 치환해주고 무처리군으로는 실시예와 동량의 PBS(phosphate buffered saline)을 첨가하고 시험군은 실시예 2의 락토코커스 락티스 용출물을 100 μg/mL 농도로 첨가하여 세포가 이동하는 정도에 따라 well간의 간격이 줄어듦을 비교하였다.
실험결과는 도 3에 도시하였다. 도 3과 같이 실시예 2의 용출물은 무처리군에 비해 효과가 우수하였다.
실험예 3 : 피부세포 사멸 억제효과
피부세포의 사멸 억제 효과를 평가하기 위해 IFN-γ, TNF-α를 이용해 피부세포에 사멸을 유도하고 실시예 2의 락토코커스 락티스의 용출물을 처리하여 세포사멸 억제여부를 확인하였다.
각질형성세포인 HaCaT을 2X104 cells/well 농도로 96 well plate에 접종하고 1일 동안 5% CO2, 37℃ 조건에서 배양하여 안정화 시킨 후 실험에 사용하였다. 이후 각질형성세포의 배지를 혈청배제 배지(serum-free 배지)로 치환해주고 무처리군으로는 실시예와 동량의 PBS(phosphate buffered saline)을 첨가하고 대조군과 시험군은 혈청 배제 배지에 IFN-γ와 TNF-α를 각각 100 ng/mL, 20 ng/mL 농도로 처리하여 세포사멸을 유도하였다. 대조군에는 실시예와 동량의 PBS를 첨가하고 시험군은 실시예2의 락토코커스 락티스 용출물을 첨가하였다. 1일 동안 5% CO2, 37℃ 조건에서 추가 배양한 뒤 MTT assay를 통해 세포의 사멸 정도를 비교하였다. 하기 표3은 시료 처리 농도를 정리한 표이다.
샘플명 IFN-γ, TNF-α 시료
무처리군 - PBS 동량
대조군 100 ng/mL, 20 ng/mL PBS 동량
W-camellia 100 ng/mL, 20 ng/mL 100μg/mL
실험결과는 도 4와 같았다. 도 4와 같이 실시예 2의 용출물은 대조군에 비해 세포사멸이 억제됨을 확인할 수 있었다.
이하, 본 발명에 따른 조성물의 제형예를 설명하나, 이는 본 발명을 한정하고자 함이 아니며, 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.
[제형예 1] 환제의 제조
실시예 2를 30 중량%, 옥수수전분 30 중량%, 글리세린 20 중량% 및 솔비톨 분말 20 중량%를 혼합하고, 제환기를 사용하여 환을 제조하였다. 내용물의 최종 중량은 3.5g 이었다.
[제형예 2] 정제의 제조
실시예 2 30 중량%, 유당 20.5 중량%, 덱스트린 20 중량%, 말티톨 분말 20 중량% 및 자일리톨 분말 7 중량%를 혼합하고, 유동층 건조기를 이용하여 과립화한 다음, 슈거 에스테르(sugar ester) 2.5 중량%를 첨가하여 타정기로 타정하였다. 내용물의 최종 중량은 2g이었다.
[제형예 3] 과립제의 제조
실시예 2 30 중량%, 자일리톨 5 중량% 및 이소말트 65 중량%를 혼합하고, 유동층 과립기를 사용하여 과립으로 성형한 후에 포에 충진하였다. 내용물의 최종 중량은 2g이었다.
[제형예 4] 주사제의 제조
하기 표 4에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 주사제를 제조하였다.
배합 성분 함량
실시예 2 10-50mg
주사용 멸균 증류수 적량
pH 조절제 적량
[제형예 5] 건강식품
하기 표 5에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 건강식품을 제조하였다.
배합 성분 함량
실시예 2 20mg
비타민 A 아세테이트 70μg
비타민 E 1.0mg
비타민 B1 0.13mg
비타민 B2 0.15mg
비타민 B6 0.5mg
비타민 B12 0.2μg
비타민 C 10mg
비오틴 10μg
니코틴산아미드 1.7mg
엽산 50μg
판토텐산 칼슘 0.5mg
황산 제1철 1.75mg
산화아연 0.82mg
탄산마그네슘 25.3mg
제1인산칼륨 15mg
제2인산칼슘 55mg
구연산칼륨 90mg
탄산칼슘 100mg
염화마그네슘 24.8mg
[제형예 6] 건강음료
하기 표 6에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 건강음료을 제조하였다.
배합 성분 함량
실시예 2 1000mg
구연산 1000mg
올리고당 100g
타우린 1g
정제수 잔량
[제형예 7] 영양화장수
하기 표 7에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 영양화장수를 제조하였다.
성분 함량(중량%)
정제수 잔량
글리세린 8.0
부틸렌글리콜 4.0
히알루론산 추출물 5.0
베타글루칸 7.0
카보머 0.1
실시예 2 0.05
카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드 8.0
스쿠알란 5.0
세테아릴 글루코사이드 1.5
소르비탄 스테아레이트 0.4
세테아릴 알코올 1.0
방부제 적량
향 적량
색소 적량
트리에탄올아민 0.1
합계 100
[제형예 8] 영양크림
하기 표 8에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 영양크림을 제조하였다.
성분 함량(중량%)
정제수 잔량
글리세린 3.0
부틸렌글리콜 3.0
유동파라핀 7.0
베타글루칸 7.0
카보머 0.1
실시예 2 3.0
카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드 3.0
스쿠알란 5.0
세테아릴 글루코사이드 1.5
소르비탄 스테아레이트 0.4
폴리솔베이트 60 1.2
방부제 적량
향 적량
색소 적량
트리에탄올아민 0.1
합계 100
[제형예 9] 마사지 크림
하기 표 9에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 마사지 크림을 제조하였다.
성분 함량(중량%)
정제수 잔량
글리세린 8.0
부틸렌글리콜 4.0
유동파라핀 45.0
베타글루칸 7.0
카보머 0.1
실시예 2 1.0
카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드 3.0
밀납 4.0
세테아릴 글루코사이드 1.5
세스퀴 올레인산 소르비탄 0.9
바세린 3.0
방부제 적량
향 적량
색소 적량
파라핀 1.5
합계 100
[제형예 10] 팩
하기 표 10에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 팩을 제조하였다.
성분 함량(중량%)
정제수 잔량
글리세린 4.0
폴리비닐알콜 15.0
히알루론산 추출물 5.0
베타글루칸 7.0
알란토인 0.1
실시예 2 0.5
노닐 페닐에테르 0.4
폴리솔베이트 60 1.2
방부제 적량
향 적량
색소 적량
에탄올 6.0
합계 100
[제형예 11] 연고
하기 표 11에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 연고를 제조하였다.
성분 함량(중량%)
정제수 잔량
글리세린 8.0
부틸렌글리콜 4.0
유동파라핀 15.0
베타글루칸 7.0
카보머 0.1
실시예 2 1.0
카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드 3.0
스쿠알란 1.0
세테아릴 글루코사이드 1.5
소르비탄 스테아레이트 0.4
세테아릴 알코올 1.0
방부제 적량
향 적량
색소 적량
밀납 4.0
합계 100
한국미생물보존센터(국외) KCCM11915P 20161020
<110> AMOREPACIFIC CORPORATION <120> A composition for keratinocyte proliferation, inhibiting of keratinocyte apoptosis comprising Lactococcus lactis, culture of the same or lysate of the same <130> 16P591IND <160> 1 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 686 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 16S rRNA of Lactococcus lactis subsp. lactis W-camellia <400> 1 gatgagtgct agatgtaggg agctataagt tctctgtatc gcagctaacg caataagcac 60 tccgcctggg gagtacgacc gcaaggttga aactcaaagg aattgacggg ggcccgcaca 120 agcggtggag catgtggttt aattcgaagc aacgcgaaga accttaccag gtcttgacat 180 actcgtgcta ttcctagaga taggaagttc cttcgggaca cgggatacag gtggtgcatg 240 gttgtcgtca gctcgtgtcg tgagatgttg ggttaagtcc cgcaacgagc gcaaccccta 300 ttgttagttg ccatcattaa gttgggcact ctaacgagac tgccggtgat aaaccggagg 360 aaggtgggga tgacgtcaaa tcatcatgcc ccttatgacc tgggctacac acgtgctaca 420 atggatggta caacgagtcg cgagacagtg atgtttagct aatctcttaa aaccattctc 480 agttcggatt gtaggctgca actcgcctac atgaagtcgg aatcgctagt aatcgcggat 540 cagcacgccg cggtgaatac gttcccgggc cttgtacaca ccgcccgtca caccacggga 600 gttgggagta cccgaagtag gttgcctaac cgcaaggagg gcgcttccta aggtaagacc 660 gatgactggg gtgaagtcgt acaggg 686

Claims (12)

  1. 유효성분으로 락토코커스 락티스 락티스(Lactococcus lactis subsp. lactis) 균주, 이의 배양물, 이의 용출물 및 상기 용출물의 추출물 중 어느 하나 이상을 포함하는 각질형성세포 증식용 조성물.
  2. 유효성분으로 락토코커스 락티스 락티스(Lactococcus lactis subsp. lactis) 균주, 이의 배양물, 이의 용출물 및 상기 용출물의 추출물 중 어느 하나 이상을 포함하는 각질형성세포 사멸 억제용 조성물.
  3. 제 1항 또는 제 2항에 있어서,
    상기 균주는 동백나무의 꽃에서 분리된 균주인, 조성물.
  4. 제 3항에 있어서,
    상기 균주는 락토코커스 락티스 W-camellia(Lactococcus lactis W-camellia)인, 조성물.
  5. 제 4항에 있어서,
    상기 균주는 기탁번호가 KCCM11915P 인, 조성물.
  6. 제 1항 또는 제 2항에 있어서,
    상기 유효성분은 가열 용출물인, 조성물.
  7. 제 1항 또는 제 2항에 있어서,
    상기 유효성분은 조성물 전체 중량에 대하여 0.001 내지 90 중량%로 포함되는, 조성물.
  8. 제 1항 또는 제 2항에 있어서,
    상기 조성물은 피부장벽 강화용인, 조성물.
  9. 제 1항 또는 제 2항에 있어서,
    상기 조성물은 피부보습 증진용인, 조성물.
  10. 제 1항 또는 제 2항에 있어서,
    상기 조성물은 건강 식품 또는 화장료 조성물.
  11. 락토코커스 락티스 W-camellia(Lactococcus lactis W-camellia)인 균주.
  12. 제 11항에 있어서,
    상기 균주는 기탁번호가 KCCM11915P 인, 균주.
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