KR20180041122A

KR20180041122A - 안구 염증 병태의 치료에 사용하기 위한 인테그린 알파4 길항제를 포함하는 제약 조성물

Info

Publication number: KR20180041122A
Application number: KR1020187003454A
Authority: KR
Inventors: 아힘 한스-피터 크라우스
Original assignee: 악세로비젼, 인크.
Priority date: 2015-07-08
Filing date: 2016-07-07
Publication date: 2018-04-23
Also published as: CL2018000057A1; RU2018103940A3; MA42016A1; TN2017000538A1; AU2016290197A1; EP3319639B1; JP6752276B2; UA123728C2; MA44935A1; US10751334B2; KR20220062688A; RU2018103940A; JP2018521126A; ES2835274T3; US20200000786A1; IL256770A; IL280827A; CA2989522C; ZA201708601B; US20180200240A1

Abstract

본 발명은, 인테그린 α4의 길항제, 및 제약 조성물, 주로 국소 투여되는 안과용 조성물에서의 그의 용도에 관한 것이다. 제약 조성물은 동물, 및 특히 인간을 포함한 포유류에서의 안구 염증 병태, 예컨대 안구 건조 질환, 비-감염성 포도막염 (예를 들어, 전방, 중간, 후방, 범포도막염), 비-감염성 결막염, 홍채염, 또는 공막염의 치료에 유용하다.

Description

안구 염증 병태의 치료에 사용하기 위한 인테그린 알파4 길항제를 포함하는 제약 조성물

관련 출원의 상호 참조

본 특허출원은 2015년 7월 8일 출원된 미국 가특허출원 번호 62/189,813을 우선권 주장하며, 상기 가특허출원의 전문은 본 특허출원에 대한 참조로 본원에 포함된다.

발명의 분야

본 발명은, 안구 건조 질환을 포함한 안구 염증 병태의 치료에 사용하기 위한 인테그린 α4 길항제를 포함하는 국소 안과용 조성물과 같은 제약 조성물에 관한 것이다. 본 발명은 또한, 인테그린 α4 길항제를 포함하는 국소 안과용 조성물과 같은 제약 조성물을 투여하는 것에 의한 인간 및 다른 포유류에서의 안구 건조 질환을 포함한 안구 염증 병태의 치료 방법에 관한 것이다.

안구 건조 질환 (DED)은 가장 통상적이고 불편한 눈 장애 중 하나이다. 이는 여성 및 노인에게 더 일반적인 다원적 안구 표면 질환으로서 정의되었다. DED는 불편감, 시각 장애, 눈물막 불안정 및 안구 표면의 염증 (안구 표면 조직에 대한 잠재적 손상을 일으킴)의 증상과 관련된다 (Research in Dry Eye DEWS Report 2007). 전-염증성 환경은 눈물막, 각막 및 결막에서의 시토카인 및 케모카인의 수준 증가, 및 결막 상피 및 때로는 눈물샘의 증가된 자가반응 T-세포 침입을 특징으로 하며 (Pflugfelder et al., 1999; de Paiva et al., 2009a; Massingale et al., 2009); 이는 스턴(Stern) 및 동료에 의해 검토되었다 (Stern et al., 2010; Stern et al., 2013). 눈물막 조성물 (점액소, 지질, 단백질)의 변경 및 감소된 부피는 질환 사이클에 기여하는 눈물막 이상을 일으킨다.

마우스를 건조 스트레스 (DS)의 제어된 환경에 적용하면 많은 점에서 환자에서의 인간 DED를 연상시키는 안구 표면 병증이 나타난다 (Dursun et al., 2002; de Paiva et al., 2006b; Niederkorn et al., 2006; de Paiva et al., 2009a). 현 시점에서, 이 모델은 DED 연구에 대한 가장 잘 특성화된 동물 모델을 나타낸다.

인테그린은 하나의 α- 및 하나의 β-서브유닛으로 이루어진 이종이량체 당단백질이다. 백혈구의 세포 표면 상에서 발현되며, 인테그린은 염증 부위에 대한 이들의 동원(recruitment)에서 역할을 한다. 특정 α- 및 β-서브유닛의 연합은 인테그린의 리간드 특이성을 결정한다. α4 인테그린 서브유닛 (CD49d)은 베리 레이트 항원(Very Late Antigen)-4, VLA-4 (인테그린 α4β1; CD49d/CD29) 및 α4β7 (CD49d/CD103)의 구성성분이다. 인테그린 α4β1의 경우, 상응하는 리간드는 혈관 내피 세포 상의 면역글로불린 상과 부착 분자 혈관 세포 부착 분자 1 (VCAM-1) 및 세포외 매트릭스 당단백질 피브로넥틴이고, 이들은 인테그린 α4β1 발현 세포의 귀소, 트래피킹(trafficking), 분화, 프라이밍, 활성화, 증식 및 생존의 원인이 된다. 인테그린 α4β1은 림프구, 단핵구, 대식세포, NK 세포 및 호산구 상에서 발현된다. 인테그린 α4β7 및 그의 상응하는 리간드, MAdCAM (점막 어드레신 세포 부착 분자(Mucosal Addressin Cell Adhesion Molecule)-1)은 소화관에 대한 백혈구 트래피킹을 조절하지만, DED에서의 이들의 관여는 배제될 수 없다.

인테그린 α4 서브유닛에 대항하는 항체인 나탈리주마브는 염증을 크게 억제하고, 다발성 경화증 (Cross and Naismith, 2014) 및 크론병 (Cohen et al., 2014) (이 또한 T 세포 매개된 병증임) 둘 다에서 임상 결과를 개선시키는 것으로 나타났다. 소분자 길항제인 리피테그라스트는, 안구 건조 환자에게 국소으로 전달되는 경우, 상이한 부착 분자 (LFA-1, 인테그린 αLβ2)에 대항하고, 각막 착색을 감소시키고 증상을 개선시키는 것으로 나타났다 (Sheppard et al., 2014). 또한, 인테그린 α4β1에 대한 특이적 소분자 길항제, BIO-8809는, 마우스 안구 건조 모델에서 각막 플루오레세인 착색, 결막 T 세포 침입 및 각막 및 결막에서의 TNFα 발현을 감소시키는 것으로 나타났다 (Ecoiffier et al., 2008). 이들 고려사항들과 함께, DED의 동물 모델에서 인테그린 α4 의 봉쇄를 더욱 탐구할 근거가 제공되었다.

발명의 요약

하나의 측면에서, 본 출원은, 안구 염증 병태의 치료를 필요로 하는 포유류에게 치료 유효량의 화학식 I의 화합물:

또는 그의 제약상 허용되는 염, 에스테르, 무수물, 수화물, 용매화물, 다형체, 광학 이성질체, 라세미체, 부분입체이성질체 또는 거울상이성질체 (총체적으로 치료제 A로서 언급됨)를 안구 투여하는 것을 포함하는, 상기 포유류에서의 안구 염증 병태의 치료 방법에 관한 것이다. 특정 실시양태에서, 치료제 A는 국소 적용된다. 국소 투여는 각막, 결막낭, 및/또는 안검에 대한 것일 수 있다. 특정 다른 실시양태에서, 치료제 A는 국소, 예를 들어, 결막하, 전방내, 유리체강내, 테논낭하, 망막하, 맥락막하, 또는 맥락막상으로 적용된다.

또 다른 측면에서, 본 출원은, 안구 염증 병태의 치료에 사용하기 위한, 화학식 I의 화합물:

또는 그의 제약상 허용되는 염, 에스테르, 무수물, 수화물, 용매화물, 다형체, 광학 이성질체, 라세미체, 부분입체이성질체 또는 거울상이성질체 (총체적으로 치료제 A로서 언급됨)에 관한 것이다. 특정 실시양태에서, 치료제 A는 제약상 허용되는 비히클, 예컨대 제약상 허용되는 안과용 비히클 내에 제공된다.

또 다른 측면에서, 본 출원은, 안구 염증 병태의 치료에 유용한, 화학식 I의 화합물

또는 그의 제약상 허용되는 염, 에스테르, 무수물, 수화물, 용매화물, 다형체, 광학 이성질체, 라세미체, 부분입체이성질체 또는 거울상이성질체 (총체적으로 치료제 A로서 언급됨) 및 하나 이상의 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 제약 조성물에 관한 것이다. 특정 실시양태에서, 제약 조성물은 안구 투여에 적합하다. 일부 이러한 실시양태에서, 제약 조성물은 국소 적용되기에 적합하다. 특정 실시양태에서, 제약 조성물은 결막낭 또는 안검에 적용되기에 적합하다. 특정 다른 실시양태에서, 제약 조성물은 결막하, 전방내, 유리체강내, 테논낭하, 망막하, 맥락막하, 또는 맥락막상으로 적용되기에 적합하다.

또 다른 측면에서, 본 출원은, 점안약, 스프레이 또는 미스트 형태로 적용시 안구 염증 병태의 치료에 유용한, 치료제 A 및 하나 이상의 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 제약 조성물에 관한 것이다.

추가의 측면에서, 본 출원은, 국소 안과용 제제로서 적용시 안구 염증 병태의 치료에 유용한, 치료제 A 및 하나 이상의 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 제약 조성물에 관한 것이다.

또한 추가의 또 다른 측면에서, 본 출원은, 림프절에 대한 항원-제시 세포의 이동을 막거나 감소시킴으로써 안구 염증 병태의 치료를 필요로 하는 포유류 (이 포유류는 인간일 수 있음)에서의 안구 염증 병태의 치료 방법에 관한 것이다. 이러한 방법은, 상기 포유류 (이 포유류는 인간일 수 있음)에게 치료 유효량의 치료제 A를 투여하는 것을 포함한다.

또 다른 측면에서, 본 출원은, 화학식 I의 화합물:

또는 그의 제약상 허용되는 염, 에스테르, 무수물, 수화물, 용매화물, 다형체, 광학 이성질체, 라세미체, 부분입체이성질체 또는 거울상이성질체 및 하나 이상의 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 제약 조성물에 관한 것이다.

또한 또 다른 측면에서, 본 출원은, 안구 염증 병태, 예컨대 DED의 치료를 필요로 하는 포유류 (이 포유류는 인간일 수 있음)에게 치료 유효량의 (a) 치료제 A를 포함하는 제약 조성물; (b) 시클로스포린 A; 및 (c) 하나 이상의 제약상 허용되는 부형제를 투여하는 것을 포함하는, 상기 포유류/인간에서의 안구 염증 병태, 예컨대 DED의 치료 방법에 관한 것이다.

또한 추가의 또 다른 측면에서, 본 출원은, 안구 염증 병태, 예컨대 DED의 치료를 필요로 하는 포유류 (이 포유류는 인간일 수 있음)에게 치료 유효량의, (a) 치료제 A를 포함하는 제약 조성물; (b) 덱사메타손 염기 및 포스페이트, 디플루프레드네이트, 플루오시놀론, 플루오로메톨론 염기 및 아세테이트, 로테프레드놀, 프레드니솔론 아세테이트 및 포스페이트, 리멕솔론, 및 트리암시놀론 아세토니드로 이루어진 군으로부터 선택된 국소 스테로이드; 및 (c) 하나 이상의 제약상 허용되는 부형제를 투여하는 것을 포함하는, 상기 포유류/인간에서의 안구 염증 병태, 예컨대 DED의 치료 방법에 관한 것이다.

또한 추가의 측면에서, 본 출원은, 안구 염증 병태, 예컨대 DED의 치료를 필요로 하는 포유류 (이 포유류는 인간일 수 있음)에게 치료 유효량의, (a) 치료제 A를 포함하는 제약 조성물; (b) 브롬페낙, 디클로페낙, 플루르비프로펜, 케토롤락, 및 네파페낙으로 이루어진 군으로부터 선택된 비-스테로이드 항-염증 약물; 및 (c) 하나 이상의 제약상 허용되는 부형제를 투여하는 것을 포함하는, 상기 포유류/인간에서의 안구 염증 병태, 예컨대 DED의 치료 방법에 관한 것이다.

또한 추가의 측면에서, 본 출원은, 안구 염증 병태, 예컨대 DED의 치료를 필요로 하는 포유류 (이 포유류는 인간일 수 있음)에게 치료 유효량의, a) 치료제 A를 포함하는 제약 조성물; (b) LFA-1 인테그린 길항제, 예컨대 리피테그라스트; 및 (c) 하나 이상의 제약상 허용되는 부형제를 투여하는 것을 포함하는, 상기 포유류/인간에서의 안구 염증 병태, 예컨대 DED의 치료 방법에 관한 것이다.

또한 또 다른 측면에서, 본 출원은, 안구 염증 병태의 치료를 위한 의약의 제조에서의, 화학식 I의 화합물:

또는 그의 제약상 허용되는 염, 에스테르, 무수물, 수화물, 용매화물, 다형체, 광학 이성질체, 라세미체, 부분입체이성질체 또는 거울상이성질체의 용도에 관한 것이다.

상기 언급된 측면 중 임의의 것의 특정 실시양태에서, 안구 염증 병태는 안구 건조 질환이다. 각각의 측면의 다른 실시양태에서, 안구 염증 병태는 비-감염성 포도막염 (전방, 중간, 후방, 전체), 비-감염성 결막염, 홍채염, 또는 공막염이다.

상기 언급된 측면 중 임의의 것의 특정 실시양태에서, 치료제 A는 화합물 (I) 또는 그의 제약상 허용되는 염이다. 특정 실시양태에서, 치료제 A는 화합물 (I)의 칼륨 염이다.

상기 치료 방법 및/또는 용도 중 임의의 것은 치료제 A를 함유하는 제약 조성물의 국소 또는 다른 안구 투여에 의해 달성될 수 있음이 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 이해될 것이다. 본원에서 사용되는 바와 같이 용어 "국소 투여"는, 눈의 표면에 적용되는 점안약, 스프레이, 미스트, 겔, 크림 또는 연고 형태의 적용, 결막낭으로의 적용, 삽입물을 통한 적용, 안과용 의약 전달을 위해 디자인된 약물 전달 장치를 통한 적용 등을 포함한다. 본원에서 사용되는 바와 같이 용어 "다른 안구 투여"는, 제약상 허용되는 제제의 결막하, 전방내, 유리체강내, 테논낭하, 망막하, 맥락막하, 또는 맥락막상 적용, 안과용 의약의 전달을 위해 디자인된 삽입물 또는 장치 등을 포함한다.

본원에 제공된 데이터에 기초하여, α4 인테그린 수용체의 봉쇄는, DED에 추가로, 그의 병인이 백혈구를 포함하는 다른 안구 염증 및 면역학적 병태, 예컨대 모든 형태의 포도막염 (전방, 중간, 후방, 전체), 결막염, 홍채염, 또는 공막염 (범발성, 결정형, 괴사형)을 치료하고 개선시킬 것이다.

또한 (S)-3-(4-((4-카르바모일피페리딘-1-카르보닐)옥시)페닐)-2-((S)-4-메틸-2-(2-(o-톨릴옥시)아세트아미도)펜탄아미도) 프로파논산; 또는 (2S)-3-[4-({[4-(아미노카르보닐)-1-피페리디닐]카르보닐}옥시)페닐]-2-[((2S)-4-메틸-2-{[2-(2-메틸페녹시)아세틸]아미노}펜타노일)아미노] 프로판산; 또는 GW559090으로서 공지되어 있는 화학식 I의 화합물은, 이전에 경구 흡입 경로에 의해 천식 환자에서 임상 조사되었던 강력한 인테그린 α4 길항제이다 (Ravensberg et al., 2006).

임의의 작용 기계론에 국한되지 않으며, 화학식 I의 화합물의 효과는 항-염증 및 질환 변형 둘 다인 것으로 보인다. 눈으로 국소 투여시, 화학식 I의 화합물은, DED의 마우스 모델에서 각막 상피 장벽 기능을 개선시키고, 각막 및 결막에서의 염증성 마커를 감소시키고, T 림프구의 결막으로의 동원 및 귀소를 감소시키고, 또한 놀랍게도, 항원-제시 세포의 배출 림프절로의 이동 및 활성화를 봉쇄하였다. 화학식 I의 화합물은 전신 투여시에는 비-효과적이었다. 이는 백혈구 트래피킹에서의 인테그린의 널리 공지된 역할에 비추어 놀라운 것이다. 백혈구 트래피킹의 봉쇄가, 화학식 I의 화합물과 같은 인테그린 α4 길항제의 단독의 또는 적어도 주된 작용 메커니즘인 경우, 전신 약물 노출이 안구 표면에서의 약물 노출에 비해 더 중요할 것임이 추론될 수 있다. 백혈구 트래피킹은, 세포 부착 분자 VCAM-1 및 MAdCAM과의 상호작용을 통해 염증 부위에서의 혈관 내피 벽을 이전시키기 전에 순환하는 백혈구에 결합된 인테그린 α4 길항제에 의해 억제된다. 화학식 I의 화합물의 전신 경로가 아닌 국소 투여 경로가 이 동물 모델에서 DED의 징후를 치료하는 데 효과적이었다는 사실은, 인테그린 α4 길항작용에 의한 전신 효과보다는 국소 효과를 시사한다. 이러한 국소 효과는 인테그린 α4 길항제 화학식 I의 화합물에 대해 특이적인 것으로 보이며, 국소 덱사메타손 포스페이트는 DED 관련 각막 착색을 개선시키지만, 항원-제시 세포의 배출 림프절로의 이동은 개선시키지 않는다는 점에서, 국소 스테로이드 치료 (덱사메타손 포스페이트)와 구별된다. 인테그린 α4 길항작용의 치료 효과는 독특한 메커니즘을 이용한다는 것이 상기 고려사항으로부터 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 인지될 수 있다. 이러한 독특한 메커니즘의 중요한 질환-변형 측면은, 국소 스테로이드와 같은 다른 약물과 공유되지 않는 메커니즘인, 배출 림프절 수준에서의, DED 중에 존재하는, 면역 사이클의 방해이다.

도 1: 화학식 I의 화합물로의 국소 치료는 DS-유도 각막 장벽 붕괴를 용량-의존적으로 막음을 보여준다.
건조 스트레스 (DS) 5일 후 OGD 흡수의 강도 스코어의 기하 평균±95% 신뢰 구간. NS=스트레스 부여되지 않고 비-치료됨; DS5=국소 치료 없이 5일 동안 건조 스트레스; 모든 다른 그룹은 국소 치료된 DS5임; Dex=덱사메타손 포스페이트 0.1%; BSS=평형 염액 (레이터스 파마시(Leiter's Pharmacy), 미국 캘리포니아주 산호세), 덱사메타손에 대한 비히클; V GW=포스페이트-완충 식염수, pH 7 (GW559090에 대한 비히클); GW_1 mg/mL=GW559090 (1 mg/mL); GW_3 mg/mL=GW559090 (3 mg/mL); GW_10 mg/mL=GW559090 (10 mg/mL); GW_30 mg/mL=GW559090 (30 mg/mL). N=26-30.
*p<0.05; **p<0.01, 대조군과 비교 (DS5 vs NS; Dex vs Dex 비히클; GW vs GW 비히클; Log10 OGD 데이터의 혼합 효과 아노바(ANOVA)).
도 2: 화학식 I의 화합물은 주로, 전신적으로가 아니라 국소적으로 작용하여 DS-유도 각막 장벽 붕괴를 개선시킴을 보여준다.
건조 스트레스 (DS) 5일 후 OGD 흡수의 강도 스코어의 기하 평균±95% 신뢰 구간. NS=스트레스 부여되지 않고 비-치료됨; DS5=국소 치료 없이 5일 동안 건조 스트레스; 모든 다른 그룹은 국소 치료된 DS5임; Dex=덱사메타손 포스페이트 0.1%; V Dex=평형 염액 (레이터스 파마시, 미국 캘리포니아주 산호세), 덱사메타손에 대한 비히클; GW 국소=국소 GW559090 (30 mg/mL; 60 ㎍/눈); GW SC= 피하 GW559090 (30 mg/mL; 120 ㎍); V GW=포스페이트-완충 식염수, pH 7 (GW559090에 대한 비히클). N=26-30.
*p<0.05; **p<0.01, 대조군과 비교 (DS5 vs NS; GW vs GW 비히클; Log10 OGD 데이터의 혼합 효과 아노바).
도 3a 및 도 3b: 화학식 I의 화합물로의 국소 치료가 염증성 마커를 감소시킴을 보여준다.
도 3a. 각막에서의 IL-1a, MMP-9, CXCL-9, TGF-b1 유전자의 발현의 상대 배수(Relative fold of expression) ± SD
도 3b. 결막에서의 TGF-b1 유전자의 발현의 상대 배수 ± SD
선은 스트레스 부여되지 않은 비-치료 대조군을 나타낸다.
V GW=포스페이트-완충 식염수, pH 7 (비히클); GW_30 mg/mL=GW559090 (30 mg/mL). N=7-8.
*p<0.05; **p<0.01; ***p<0.001; ****p<0.0001 (쌍을 이루지 않는 T 시험)
도 4: 화학식 I의 화합물로의 국소 치료는 배출 경부 림프절에서의 CD11c+ 및 CD11c+/MHC II+ 수지상 세포를 감소시킴을 보여준다.
각각의 마우스로부터 통합된 배출 CLN으로부터 단리된 퍼센트 게이팅된 세포 (FACS)를 CD11c, CD11b 및 MHC II에 대해 착색시켰다. NS=스트레스 부여되지 않고 비-치료됨; DS1=치료 없이 1일 동안 건조 스트레스; 모든 다른 그룹은 치료된 DS1임; Dex=덱사메타손 포스페이트 0.1%; V GW=포스페이트-완충 식염수, pH 7 (덱사메타손 및 GW559090에 대한 비히클); GW 국소= 국소 양측성 GW559090 (30 mg/mL; 60 ㎍/눈); GW SC=GW559090 SC BID (30 mg/mL; 120 ㎍). N=16. *p<0.05; 대조군과 비교 (DS1 vs NS; GW vs GW 비히클; 고정 치료 및 랜덤 실험 효과에서의 2-웨이 아노바 후 두네트의 다중 비교(Dunnett's multiple comparison) 절차).
도 5: 화학식 I의 화합물로의 국소 치료는 결막 T 세포 침입을 감소시킴을 보여준다.
건조 스트레스 (DS) 5일 후 세포 밀도 그룹 평균 및 95% 신뢰 구간. NS=스트레스 부여되지 않고 비-치료됨; DS5=치료 없이 5일 동안 건조 스트레스; 모든 다른 그룹은 치료된 DS5임; GW 국소= 국소 GW559090 (30 mg/mL; 60 ㎍/눈); V GW=포스페이트-완충 식염수, pH 7 (GW559090에 대한 비히클). N=5.
*p<0.05; ***p<0.001, DS5 대조군과 비교 (크루스칼-월리스(Kruskal-Wallis) 절차 후 둔의 다중 비교(Dunn's multiple comparison) 절차).
도 6: 40 μL (50 mg/mL) GW559090A의 투여 후 GW559090의 결막 및 각막 조직 농도를 나타낸다. 대략 4000 nM (~2400 ng/mL)에서의 파선은, 단백질 결합이 98%인 경우 ~80 nM (~48 ng/mL)의 IC90 농도를 달성하기 위해 필요한 대략적 조직 수준을 나타낸다. 단백질 결합이 98%인 경우 ~8 nM (~5 ng/mL)의 IC50 농도를 달성하기 위해 필요한 대략적 조직 수준은 400 nM (~240 ng/mL)이다. 40 ㎕ (50 mg/mL) GW559090A의 투여 후, 결막 및 각막 조직 농도는 30분에 3000 ng/mL 초과이고, 수준은 3시간에 각막 조직 내에서 1000 ng/mL 초과로 지속되었다.

발명의 상세한 설명

I. DED의 마우스 모델에서의 α4 인테그린 길항제의 국소 작용

DED는 불편감, 시각 장애, 눈물막 불안정 및 안구 표면의 염증 (안구 표면 조직에 대한 잠재적 손상을 일으킴)의 증상과 관련된다 (Research in Dry Eye DEWS Report 2007). 이는 다양한 스펙트럼의 병인, 예컨대 환경, 약물-유도, 콘택트 렌즈 착용, 노화를 포함한다. DED는 또한 전신 자가면역 병태, 예컨대 쇼그렌 증후군(Sjoegren's syndrome), 류머티스성 관절염, 전신 홍반성 루푸스, 이식편 대 숙주 질환, 스티븐스-존슨 증후군(Stevens-Johnson syndrome), 안구 반흔성 유천포창, 유육종증 (스턴 등 (2010); 조우크리(Zoukhri) (2006)에 의해 검토됨) (이에 제한되지는 않음)에 버금가는 안구 출현을 나타낼 수 있다.

안구 표면 DED의 염증성 질환은 자가반응 T 세포에 의해 매개되고, 각막 장벽 장애, 염증성 시토카인 및 케모카인의 증가된 발현 및 수준, 눈물막 불안정 및 불편감과 관련된다. 본 발명자는, 인테그린 α4 길항제가, DED의 마우스 모델에서, 눈에 국소 투여시, 각막 상피 장벽 기능을 구제하고, 각막 및 결막에서의 염증성 마커 발현을 감소시키고, 결막 T 세포 침입을 감소시키고, 항원-제시 세포의 배출 림프절로의 이동 및 활성화를 억제하였음을 발견하였다.

프라이밍 및 활성화된 T 림프구는 혈관 내피 상의 상응하는 부착 분자와 상호작용하는 이들의 세포 표면에서 발현되는 부착 수용체의 도움 하에 혈류로부터 염증 부위로 트래피킹된다. 림프구 인테그린 α4β1 (VLA-4), α4β7 및 αLβ2 (LFA-1)는 각각 내피 VCAM-1, MAdCAM 및 ICAM-1에 결합한다. 염증 부위에서, 림프구 인테그린 수용체는 특정 조직 성분, α4β1의 경우에는 피브로넥틴과 상호작용할 수 있고, 이는 추가로 림프구 귀소, 활성화 및 증식을 보조한다 (Nojima et al., 1990; Cox et al., 2010). 화학식 I의 화합물은 α4β1에 대해 고친화력을 갖는다 (표 1). 세포 부착 분석에서, 이는 VCAM-1 및 피브로넥틴 (CS-1 도메인)에 대한 α4β1의, 뿐만 아니라 MAdCAM에 대한 α4β7의 세포 부착을 강력하게 봉쇄하였다 (표 1). 후자의 상호작용은 소화관 환경과 관련성을 갖지만, 눈에서는 연구된 바 없다. 구강 건조증 및 DED를 갖는 쇼그렌 환자에서는 혈관 및 수지상 세포 상의 VCAM-1 및 입술 조직에서의 T 림프구 침입에서 인테그린 α4β1이 검출되었다 (Edwards et al., 1993).

각막 상피에 의한 형광 염료의 흡수 증가는 DED의 특징이다. 마우스에서의 오레곤-그린 덱스트란(Oregon-Green Dextran; OGD)으로의 각막 착색 강도는 실험적 DS 후 각막 장벽 기능의 감소와 양의 상관관계를 가짐이 이전에 보고되었다 (de Paiva et al., 2009a; de Paiva et al., 2006b). 이는, 각막의 플루오레세인 착색에 의해 입증되는 안구 건조 환자에서 임상적으로 나타나는 것을 모방한다. 낮은 착색 스코어는 염료 배제, 즉 각막 장벽 온전성의 지표이다. 반면, 높은 착색 스코어는 장벽 장애를 반영한다. 각막 플루오레세인 착색 스코어는 DED의 진단에서 중요한 종점으로서, 또한 임상 시험에서 효능 파라미터로서 사용되어 왔다.

제어된 DS 환경 (하기 재료 및 방법에 기재된 바와 같음)에서 5일에 걸쳐, 마우스는 각막 장벽 장애를 나타내었고, 이는 이전에 보고된 바와 같이, 점모양 각막 OGD 착색 (하기 재료 및 방법에 기재된 바와 같음)으로서 분명해진다 (de Paiva et al., 2009a; de Paiva et al., 2006b). 이러한 마우스 모델에서, 화학식 I의 화합물의 국소 투여는 국소 코르티코스테로이드, 덱사메타손 포스페이트와 유사하게 각막 OGD 착색을 용량-의존적으로 감소시켰다 (도 1). 윤활제 및 비-스테로이드 면역조절제가 효과적이지 않은 경우, 국소 스테로이드가 DED에 대한 효과적인 의약이지만, 이들은 스테로이드-관련 안구 부작용을 나타낼 가능성으로 인해 전형적으로 단기간 사용된다. 상이한 인테그린 α4β1 길항제, BIO-8809에 의한 이러한 동물 모델에서의 각막 착색의 유사한 개선이 이전에 보고되었다 (Ecoiffier et al., 2008). 체중과 관련하여, 마우스 눈으로의 약물의 국소 적용은 인간에게 주어지는 용량을 2 내지 3 자릿수만큼 훨씬 초과한다. 마우스에서의 국소 치료는 관련 전신 노출을 달성함이 고려가능하다. 인테그린이 백혈구 트래피킹에서 역할을 하기 때문에, 전신 노출은 안구 질환 치료를 위한 인테그린 길항제에 대한 전제조건이 될 수 있다. 따라서, 전신 치료가 보다 효과적인지를 결정하는 것이 중요하였다. 흥미롭게도, 나란히 동일한 용량의 전신 치료와 국소 치료를 비교할 때, 화학식 I의 화합물은 단지 국소 투여시에만 각막 착색을 현저히 개선시켰다 (도 2). 이러한 놀라운 발견은, 치료 성공을 위해 필요한 화학식 I의 화합물을 사용하는 이러한 질환에서의 치료에 대한 결정적으로 중요한 국소적 성분이 존재함을 시사한다.

DED는, 항원-제시 수지상 세포 (종종 APC 또는 DC로서 언급됨)의 안구 표면으로부터 자가반응 T 세포의 프라이밍이 일어나는 배출 경부 림프절 (CLN)로의 이동을 포함하는 면역 사이클의 결과임이 제안되었다 (Pflugfelder et al., 2008). 이어서, 이들 자가반응 CD4+ T 세포는 안구 표면으로 돌아가 질환을 전파시킨다 (Coursey et al., 2013; Niederkorn et al., 2006; Zhang et al., 2012). CD4+ T 세포 상에 존재하는 인테그린 수용체에서는, 인테그린 α4 길항제로의 치료가 배출 림프절에서 T 세포에 영향을 주는지의 문제가 나타났다. 1일의 DS는 배출 림프절에서 CD4+ 또는 CD8+ T 세포를 증가시키지 않고, 또한 화학식 I의 화합물 또는 덱사메타손으로의 치료는 T 세포의 개수를 감소시키지 않았다. 이전에 보고된 바와 같이, 1일의 DS는 배출 림프절에서 CD11b+ 단핵구를 현저히 상승시켰다 (Schaumburg et al., 2011; Zhang et al., 2014). 그러나, 약물 치료 어느 쪽도 단핵구의 개수를 감소시킬 수는 없었다.

DC-고갈된 마우스는 DED를 나타내지 않기 때문에, DC가 DS에 의해 유도되는 면역 매개된 병증에 있어 중요한 것으로 이전에 나타났다 (Schaumburg et al., 2011). CD11c+ DC는, 단기간 DS에 의해, 현저하지는 않더라도, 배출 림프절에서 상승된 것으로 나타났다. 이들 세포에 대해 현저한 효과를 주지 않았던 국소 덱사메타손 또는 화학식 I의 화합물로의 전신 치료와 달리, 활성화된 (MHC-II+) 및 비-활성화된 CD11c+ 세포는 화학식 I의 화합물로의 국소 치료에 의해 감소되었다 (도 4). 이러한 놀라운 발견은, 화학식 I의 화합물이 항원-제시 세포의 배출 림프절로의 이동을 막음을, 또한 이러한 효과가 안구 표면에 존재하는 약물을 필요로 함을 시사한다. 유사하게, 앞서 논의된 바와 같이, 단지 화학식 I의 화합물로의 국소 치료만이 각막 착색을 개선시켰다. 이와 함께 (그러나 임의의 특정 이론에 의해 국한되지는 않음), 이들 결과는, 화학식 I의 화합물이, 항원-제시 DC의 배출 CLN으로의 이동을 막고, 이에 따라 면역 사이클을 방해함으로써, 안구 표면의 수준에서 국소적으로 작용하여 DED와 관련된 안구 염증을 치료함을 암시한다.

DED에서, 또한 이 마우스 모델에서 안구 표면에서의 전-염증성 환경은 문헌에 충분히 기재되어 있다 (Corrales et al., 2006; Coursey et al., 2014; de Paiva et al., 2009a; de Paiva et al., 2006a; de Paiva et al., 2009b; de Paiva et al., 2011). 많은 시토카인 및 케모카인의 발현이 각막 및 결막에서 증가하여 눈물막에서의 상승된 수준을 초래한다. 본원에 제공된 실시예에서, 화학식 I의 화합물의 국소 치료는 각막 상피에서 IL-1α, MMP-9, CXCL-9 및 TGFβ1 및 결막에서 TGFβ1의 발현을 억제하였다 (도 3). IL-1α는 상피 및 염증성 세포에 의해 방출되는 전-염증성 시토카인이다. 그의 질환에 대한 잠재적 관련성은, 안구 표면 염증에 대한 IL-1 수용체 길항제, EBI-005의 임상 개발에 의해 강조된다 (Hou et al., 2013; Goldstein et al., 2015). MMP-9는 DS에서 각막 상피의 치밀한 접속의 파단 및 각막 장벽 붕괴에 연루된 프로테아즈이다 (de Paiva et al., 2006b; Luo et al., 2004; Pflugfelder et al., 2005). MMP-9의 눈물 수준은 안구 건조 환자에서 각막 착색 강도 및 다른 임상 파라미터와 상관되는 것으로 나타났다 (Chotikavanich et al., 2009). CXCL9는, CXCL10 및 CXCL11과 함께, 인터페론-감마 생성 Th1 세포를 끌어당기고, 안구 건조 환자에서 눈물막 및 결막에서 상승되어 있다 (Yoon et al., 2010). TGF-β1은 IL-6 및 IL-23과 함께 Th-17 프라이밍에 관여되고, 이는 안구 건조 환자의 눈물에서 상승된 것으로 나타났다 (Gutcher et al., 2011; Stockinger et al., 2007; Zheng et al., 2010). 따라서, 화학식 I의 화합물로의 치료는, DED에서의 안구 표면 염증과 관련된 일부 염증성 마커를 이러한 동물 모델에서 감소시킨다.

실시예는, 마우스 DS 모델에서 화학식 I의 화합물의 사용에 의한 안구 건조의 객관적 징후의 개선을 입증한다. 강력한 인테그린 α4 길항제는 안구 표면의 수준에서 국소적으로 작용하여, 항원-제시 세포의 배출 림프절로의 이동을 막고, 그 결과 안구 건조의 면역 사이클을 방해하였다. 항원-제시 세포 이동의 봉쇄에 의한 이 질환의 치료는 신규성을 나타내며, 인테그린 길항제에 대해 이전에 알려지지 않은 작용 메커니즘이다.

II. 치료 방법

DED를 포함한 안구 염증 병태의 치료에 대하여, 용어 "치료" 또는 "치료하는"은, 특히, 질환의 발달을 막는 것, 질환의 과정을 변경시키는 것 (예를 들어, 질환의 진행을 늦추는 것, 그러나 이에 제한되지는 않음), 또는 질환의 증상을 역전시키는 것 또는 대상체에서의 하나 이상의 증상 및/또는 하나 이상의 생화학적 마커를 감소시키는 것, 하나 이상의 증상이 악화되거나 진행되는 것을 막는 것, 회복을 촉진시키거나 예후를 개선시키는 것, 및/또는 질환을 갖지 않는 대상체에서 질환을 막는 것 뿐만 아니라 기존 질환의 진행을 늦추거나 감소시키는 것을 지칭한다. 주어진 대상체에서, 증상의 개선, 그의 악화, 퇴행, 또는 진행은 객관적 또는 주관적 수단에 의해 결정될 수 있다. 예방 방법 (예를 들어, 재발의 발생을 막거나 감소시킴) 또한 치료로 고려된다.

임의의 대상체에서, 대상체가 안구 염증 병태를 갖는지 또는 가질 위험이 있는지에 대해 평가가 수행될 수 있다. 예를 들어, 안구 건조 질환의 진단을 위해 각막의 플루오레세인 착색이 사용된다. 평가는, 적절한 치료 과정, 예컨대 예방 치료, 유지 치료, 또는 조절 치료를 나타낼 수 있다.

따라서, 대상체에게 치료 유효량의 치료제를 투여함으로써 안구 염증 병태를 치료하거나, 방지하거나, 조절하거나, 또는 약화시키는 방법이 본원에서 제공된다. 치료제는 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 에스테르, 수화물, 용매화물, 다형체, 광학 이성질체, 라세미체, 부분입체이성질체 또는 거울상이성질체를 포함한다. 특정 실시양태에서, 대상체는 포유류, 예컨대 인간 또는 다른 포유류이다.

특정 실시양태에서, 투여는 안구 투여, 예컨대 국소 투여 또는 다른 안구 투여 (예를 들어, 국소 주사)이다. 특정 실시양태에서, 치료제는 안구 표면으로 전달된다. 특정 실시양태에서, 치료제는, 예를 들어 각막, 결막, 및/또는 안검에, 국소 투여된다. 특정 실시양태에서, 치료제는 각막에 국소 투여된다. 특정 실시양태에서, 치료제는 결막낭에 또는 안검에 적용된다. 특정 실시양태에서, 국소 투여는 점안약, 연고, 또는 로션의 적용을 포함한다. 특정 실시양태에서, 치료제는 결막하, 전방내, 유리체강내, 테논낭하, 망막하, 맥락막하, 또는 맥락막상으로 투여된다. 특정 실시양태에서, 치료제는, 예를 들어, 안구주위, 안구내, 결막하, 안구후, 또는 전방내 주사와 같은 국소 주사에 의해 전달된다. 전신 투여가 바람직하지 않지만, 특정 실시양태에서는, 투여가 전신 투여일 수 있다.

특정 실시양태에서, 투여는 치료제를 방출시키는 지속 방출 장치, 예컨대 미니- 또는 마이크로펌프의 삽입에 의해 달성된다. 지속 방출 장치는 생분해성 또는 비-생분해성일 수 있다.

치료제는, 치료제가 각막 및 눈의 내부 영역으로 침투할 수 있기에 충분한 시간 동안 안구 표면과 접촉되어 유지되도록 제약상 허용되는 안과용 비히클 내에서 전달될 수 있다. 제약상 허용되는 안과용 비히클은, 예를 들어, 연고, 식물 오일 또는 캡슐화 물질일 수 있다.

특정 실시양태에서, 치료제는 항원-제시 세포의 안구 표면으로부터 배출 림프절로의 이동을 포함하는 면역 사이클을 방해하도록 국소적으로 작용한다. 특별한 특정 실시양태에서, 치료제는 항원-제시 세포의 배출 림프절로의 이동을 봉쇄하도록 국소적으로 작용한다. 특정 실시양태에서, 배출 림프절은 경부 림프절이다.

특정 실시양태에서, 안구 염증 병태는 안구 건조 질환, 비-감염성 포도막염 (전방, 중간, 후방, 및 범포도막염), 비-감염성 결막염, 홍채염, 또는 공막염이다.

안구 염증 병태가 안구 건조 질환인 특정 실시양태에서, 안구 건조 질환은, 알레르기, 당뇨병, 눈물샘 부족, 전신 홍반성 루푸스, 이식편 대 숙주 질환, 파킨슨병(Parkinson's disease), 쇼그렌 증후군, 류머티스성 관절염, 시력 교정을 위한 라식(LASIK) 치료로부터 발생하는 합병증, 콘택트 렌즈 사용, 건조 기후, 공기 오염, 또는 담배 연기에 대한 노출, 각막 손상, 결막 섬유증, 스티븐스-존슨 증후군, 선천적 무루증, 안구 반흔성 유천포창, 유육종증, 또는 안구 건조 질환의 증상을 일으키는 다른 약물로의 치료에 의해 야기되거나 이들과 관련된다. 특정 실시양태에서, 안구 염증 병태는 쇼그렌 증후군과 관련된 안구 건조 질환이다. 따라서, 하나의 실시양태에서, 방법은, 알레르기, 당뇨병, 눈물샘 부족, 전신 홍반성 루푸스, 이식편 대 숙주 질환, 파킨슨병, 쇼그렌 증후군, 류머티스성 관절염, 시력 교정을 위한 라식 치료로부터 발생하는 합병증, 콘택트 렌즈 사용, 건조 기후, 공기 오염, 또는 담배 연기에 대한 노출, 각막 손상, 결막 섬유증, 스티븐스-존슨 증후군, 선천적 무루증, 안구 반흔성 유천포창, 유육종증을 갖는, 또는 안구 건조 질환의 증상을 일으키는 다른 약물로 치료된 인간에게 치료제를 투여하는 것을 포함한다.

일반적으로, 치료제의 투여량은 대상체의 연령, 체중, 신장, 성별, 일반적 의료 상태 및 이전 의료 이력과 같은 요인에 따라 달라질 것이다. 전형적으로, 수용자에게, 각각의 병에 걸린 눈에, 약 0.001 mg 내지 약 3000 mg, 보다 특별하게는 약 0.01 mg 내지 약 300 mg, 보다 특별하게는 약 0.1 mg 내지 약 30 mg, 보다 특별하게는 약 0.5 mg 내지 약 10, 보다 특별하게는 약 1 mg 내지 약 5 mg 범위의 치료제의 개별 용량을 제공하는 것이 바람직하다. 특정 실시양태에서, 치료제의 개별 용량은, 각각의 병에 걸린 눈에서 약 0.6, 약 0.8, 약 1.0, 약 1.2, 약 1.4, 약 1.6, 약 1.8, 약 2.0, 약 2.2, 약 2.4, 약 2.6, 약 2.8, 약 3.0, 약 3.2, 약 3.4, 약 3.6, 약 3.8, 또는 약 4.0 mg이다. 특정 실시양태에서, 치료제의 개별 용량은 각각의 병에 걸린 눈에서 약 1.8 mg이다. 특정 실시양태에서, 치료제의 개별 용량은 각각의 병에 걸린 눈에서 약 3.0 mg이다. 투여량 값은 완화시키려는 병태의 유형 및 중증도에 따라 달라질 수 있음을 인지하여야 한다. 추가로, 임의의 특정 대상체에 대하여, 특정 투여량 요법은 개인 필요 및 조성물의 투여를 관리하거나 감독하는 사람의 전문적 판단에 따라 시간에 따라 조정되어야 하며, 본원에 기재된 투여량 범위는 단지 예시적인 것이며 청구된 조성물의 범위 또는 실행을 제한하도록 의도되지 않음을 이해하여야 한다.

예방을 포함한 치료의 목적상, 치료제는 대상체에게 제약상 허용되는 담체 중에서 치료 유효량으로 투여된다. "치료 유효량"은 생리학적으로 유의한 양이다. 치료제는 그의 존재가 수용자 대상체의 생리학에 있어 검출가능한 변화를 일으키는 경우에 생리학적으로 유의한 것이다.

특정 실시양태에서, 제약 조성물은 약 1 mg/mL 내지 약 100 mg/mL의 치료제를 함유한다. 특정 실시양태에서, 제약 조성물은 약 10 mg/mL 내지 약 100 mg/mL의 치료제를 함유한다. 특정 실시양태에서, 제약 조성물은 약 10 mg/mL 내지 약 50 mg/mL의 치료제를 함유한다. 특정 실시양태에서, 제약 조성물은 약 10 mg/mL의 치료제를 함유한다. 특정 실시양태에서, 제약 조성물은 약 15 mg/mL의 치료제를 함유한다. 특정 실시양태에서, 제약 조성물은 약 20 mg/mL의 치료제를 함유한다. 특정 실시양태에서, 제약 조성물은 약 25 mg/mL의 치료제를 함유한다. 특정 실시양태에서, 제약 조성물은 약 30 mg/mL의 치료제를 함유한다. 특정 실시양태에서, 제약 조성물은 약 35 mg/mL의 치료제를 함유한다. 특정 실시양태에서, 제약 조성물은 약 40 mg/mL의 치료제를 함유한다. 특정 실시양태에서, 제약 조성물은 약 45 mg/mL의 치료제를 함유한다. 특정 실시양태에서, 제약 조성물은 약 50 mg/mL의 치료제를 함유한다.

특정 실시양태에서, 제약 조성물은 약 10 ㎕ 내지 약 100 ㎕의 부피로 투여된다. 특정 실시양태에서, 제약 조성물은 약 20 ㎕ 내지 약 80 ㎕의 부피로 투여된다. 특정 실시양태에서, 제약 조성물은 약 20 ㎕의 부피로 투여된다. 특정 실시양태에서, 제약 조성물은 약 30 ㎕의 부피로 투여된다. 특정 실시양태에서, 제약 조성물은 약 40 ㎕의 부피로 투여된다. 특정 실시양태에서, 제약 조성물은 약 50 ㎕의 부피로 투여된다. 특정 실시양태에서, 제약 조성물은 약 60 ㎕의 부피로 투여된다. 특정 실시양태에서, 제약 조성물은 약 70 ㎕의 부피로 투여된다. 특정 실시양태에서, 제약 조성물은 약 80 ㎕의 부피로 투여된다.

특정 실시양태에서, 제약 조성물은 각각의 병에 걸린 눈에 1일 당 적어도 1회 투여된다. 특정 실시양태에서, 제약 조성물은 각각의 병에 걸린 눈에 1일 당 적어도 2회 투여된다. 특정 실시양태에서, 제약 조성물은 각각의 병에 걸린 눈에 1일 당 적어도 3회 투여된다. 특정 실시양태에서, 제약 조성물은 각각의 병에 걸린 눈에 1일 당 적어도 4회 투여된다. 특정 실시양태에서, 제약 조성물은 각각의 병에 걸린 눈에 1일 당 적어도 5회 투여된다. 특정 실시양태에서, 제약 조성물은 각각의 병에 걸린 눈에 1일 당 적어도 6회 투여된다. 특정 실시양태에서, 제약 조성물은 각각의 병에 걸린 눈에 1일 당 적어도 7회 투여된다. 특정 실시양태에서, 제약 조성물은 각각의 병에 걸린 눈에 1일 당 적어도 8회 투여된다. 특정 실시양태에서, 제약 조성물은 각각의 병에 걸린 눈에 1일 당 적어도 9회 투여된다. 특정 실시양태에서, 제약 조성물은 각각의 병에 걸린 눈에 1일 당 적어도 10회 투여된다.

특정 실시양태에서, 치료 유효량은 투여 후 적어도 1, 적어도 2, 적어도 3, 적어도 4, 적어도 5, 또는 적어도 6시간(들) 동안 적어도 약 240 ng/mL의 조직 농도를 달성하기에 충분한 양이다. 특정 실시양태에서, 조직은 결막이다. 특정 실시양태에서, 조직은 각막이다. 따라서, 특정 실시양태에서, 치료 유효량은 투여 후 적어도 1, 적어도 2, 적어도 3, 적어도 4, 적어도 5, 또는 적어도 6시간(들) 동안 적어도 약 240 ng/mL의 결막 또는 각막 조직 농도를 달성하기에 충분한 양이다. 특정 실시양태에서, 치료 유효량은 투여 후 적어도 6시간 동안 적어도 약 240 ng/mL의 결막 또는 각막 조직 농도를 달성하기에 충분한 양이다.

특정 실시양태에서, 치료 유효량은 투여 후 적어도 1, 적어도 2, 적어도 3, 적어도 4, 적어도 5, 또는 적어도 6시간(들) 동안 적어도 약 358 ng/mL의 조직 농도를 달성하기에 충분한 양이다. 특정 실시양태에서, 조직은 결막이다. 특정 실시양태에서, 조직은 각막이다. 따라서, 특정 실시양태에서, 치료 유효량은 투여 후 적어도 1, 적어도 2, 적어도 3, 적어도 4, 적어도 5, 또는 적어도 6시간(들) 동안 적어도 약 358 ng/mL의 결막 또는 각막 조직 농도를 달성하기에 충분한 양이다. 특정 실시양태에서, 치료 유효량은 투여 후 적어도 6시간 동안 적어도 약 358 ng/mL의 결막 또는 각막 조직 농도를 달성하기에 충분한 양이다.

특정 실시양태에서, 치료 유효량은 투여 후 적어도 1, 적어도 2, 적어도 3, 적어도 4, 적어도 5, 또는 적어도 6시간(들) 동안 적어도 약 1000 ng/mL의 조직 농도를 달성하기에 충분한 양이다. 특정 실시양태에서, 조직은 결막이다. 특정 실시양태에서, 조직은 각막이다. 따라서, 특정 실시양태에서, 치료 유효량은 투여 후 적어도 1, 적어도 2, 적어도 3, 적어도 4, 적어도 5, 또는 적어도 6시간(들) 동안 적어도 약 1000 ng/mL의 결막 또는 각막 조직 농도를 달성하기에 충분한 양이다. 특정 실시양태에서, 치료 유효량은 투여 후 적어도 3시간 동안 적어도 약 1000 ng/mL의 결막 또는 각막 조직 농도를 달성하기에 충분한 양이다.

특정 실시양태에서, 안구 투여되는 치료 유효량은 치료제에 대한 생물학적으로 미미한 전신 노출을 일으킨다. 특정 실시양태에서, 안구 투여되는 치료 유효량은 전신 면역 억제를 생성하지 않는다.

개시된 치료제 및/또는 이러한 치료제를 함유하는 제약 조성물은 임의의 적합한 기간, 예컨대 적어도 약 12주, 적어도 약 24주, 적어도 약 36주, 또는 적어도 약 48주 동안 투여될 수 있다. 특정 실시양태에서, 치료제는 적어도 연속 12주 동안 투여된다. 특정 실시양태에서, 치료제는 적어도 연속 24주 동안 투여된다. 특정 실시양태에서, 치료제는 적어도 연속 36주 동안 투여된다. 특정 실시양태에서, 치료제는 적어도 연속 48주 동안 투여된다.

특정 실시양태에서, 치료는 적어도 연속 2주 동안의 치료제의 매일 투여를 포함한다. 이러한 치료 요법에서, 치료제는 1일 당 1회 초과, 예컨대 1일 당 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 또는 12회 투여될 수 있다. 특정 실시양태에서, 치료 요법의 지속기간은 2주를 초과한다. 특정 실시양태에서, 치료 요법의 지속기간은 3주를 초과한다. 특정 실시양태에서, 치료 요법의 지속기간은 4주를 초과한다. 특정 실시양태에서, 치료 요법의 지속기간은 5주를 초과한다. 특정 실시양태에서, 치료 요법의 지속기간은 6주를 초과한다. 특정 실시양태에서, 치료 요법의 지속기간은 7주를 초과한다. 특정 실시양태에서, 치료 요법의 지속기간은 8주를 초과한다. 특정 실시양태에서, 치료 요법의 지속기간은 9주를 초과한다. 특정 실시양태에서, 치료 요법의 지속기간은 10주를 초과한다. 특정 실시양태에서, 치료 요법의 지속기간은 11주를 초과한다. 특정 실시양태에서, 치료 요법의 지속기간은 12주를 초과한다.

특정 실시양태에서, 치료제 (예를 들어, 치료제 A)는 동일한 또는 별도의 제약 조성물 중에서 하나 이상의 추가의 치료제와 함께 공동-투여된다. 이러한 추가의 치료제는 안구 염증 병태의 치료에 사용되는 다른 치료제를 포함할 수 있다.

특정 실시양태에서, 추가의 치료제는 시클로스포린 A이다. 시클로스포린 A는 미시적 진균 톨리포클라디움 인플라툼(Tolypocladium inflatum)에 의해 합성된 11개 아미노산의 시클릭 펩티드이다. 시클로스포린 A는 화학식 [R-[[R*,R*-(E)]]-시클릭(L-알라닐-D-알라닐-N-메틸-L-류실-N-메틸-L-류실-N-메틸-L-발릴-3-히드록시-N,4-디메틸-L-2-아미노-6-옥테노일-L-a-아미노-부티릴-N-메틸글리실-N-메틸-L-류실-L-발릴-N-메틸-L-류실) (CAS 번호 59865-13-3)을 갖는다.

특정 실시양태에서, 추가의 치료제는 스테로이드이다. 일부 이러한 실시양태에서, 스테로이드는 글루코코르티코이드이다. 일부 이러한 실시양태에서, 스테로이드는 디플루프레드네이트, 프레드니솔론, 덱사메타손, 플루오시놀론, 플루오로메톨론, 로테프레드놀, 메드리손, 리멕솔론, 트리암시놀론, 코르티손, 또는 히드로코르티손이다. 특정 실시양태에서, 스테로이드는 덱사메타손 (예컨대 덱사메타손 염기 또는 덱사메타손 포스페이트), 디플루프레드네이트, 플루오시놀론, 플루오로메톨론 (예컨대 플루오로메톨론 염기 또는 플루오로메톨론 아세테이트), 로테프레드놀, 프레드니솔론 (예컨대 프레드니솔론 아세테이트 또는 프레드니솔론 포스페이트), 리멕솔론, 또는 트리암시놀론 (예컨대 트리암시놀론 아세토니드)이다.

특정 실시양태에서, 추가의 치료제는 비-스테로이드 항-염증제이다. 일부 이러한 실시양태에서, 비-스테로이드 항-염증제는 브롬페낙, 디클로페낙, 플루르비프로펜, 케토롤락, 및 네파페낙으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

특정 실시양태에서, 추가의 치료제는 LFA 길항제, 예컨대 리피테그라스트이다. 리피테그라스트는 또한 (2S)-2-[[2-(1-벤조푸란-6-카르보닐)-5,7-디클로로-3,4-디히드로-1H-이소퀴놀린-6-카르보닐]아미노]-3-(3-메틸술포닐페닐)프로판산으로서 공지되어 있고, 그 전문이 본원에 참조로 포함되는 WO2006/125119에서 확인되었다.

특정 실시양태에서, 치료제는 수의학에서, 특히, 예를 들어, 개, 고양이, 및 말에서의 건조 각결막염; 개, 고양이, 및 말에서의 만성 표층 각막염 (CSK); 및 개, 고양이, 및 말에서의 순막의 림프구형질세포 침입과 같은 안구 염증 병태의 치료에서 사용될 수 있다.

III. 화합물

화학식 I의 화합물은 미국 특허 번호 6,867,192, 실시예 27에 기재된 합성을 사용하여 합성될 수 있다. 미국 특허 번호 6,867,192의 전체 내용은 본원에 참조로 포함된다.

간단히, 하나의 실시양태에서, 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 히드로클로라이드 (0.4 g) 및 1-히드록시벤조트리아졸 (0.3 g)을 질소 분위기 하에 아세토니트릴 (50 ml) 중의 (2-메틸페녹시)아세트산 (0.345 g)의 용액에 첨가한다. 20℃에서 30분 동안 교반 후, 4-[(2S)-2-{[(2S)-2-아미노-4-메틸펜타노일]아미노}-3-(tert-부톡시)-3-옥소프로필]페닐 4-(아미노카르보닐)-1-피페리딘카르복실레이트 히드로클로라이드 (1 g)를 첨가한 후, 디이소프로필에틸아민 (0.35 ml)을 첨가하고, 18 h 동안 교반을 계속한다. 혼합물을 진공에서 농축시키고, 잔류물을 1M 염산 (100 ml)과 에틸 아세테이트 (300 ml) 사이에 분배한다. 층을 분리하고, 유기 상을 1M 염산 (2x100 ml), 포화 수성 탄산수소나트륨 (3x100 ml) 및 염수 (100 ml)로 세척하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 진공에서 증발시켜 백색 고체를 수득한다. 클로로포름 (5 ml) 중의 이것의 용액에 트리플루오로아세트산 (5 ml) 및 물 (1 ml)을 첨가한다. 20℃에서 3 h 동안 교반 후, 용매를 진공에서 증발시키고, 잔류물을 톨루엔 (2x20 ml)과 공비증류시키고, 이어서 에테르로 연화처리(triturating)하여 (2S)-3-[4-({[4-(아미노카르보닐)-1-피페리디닐]카르보닐}옥시)페닐]-2-[((2S)-4-메틸-2-{[2-(2-메틸페녹시)아세틸]아미노}펜타노일)아미노]프로판산을 수득한다.

별법으로, 또 다른 실시양태에서, DMF (475 ml) 중의 (2S)-3-[4-(알릴옥시)페닐]-2-[(tert-부톡시카르보닐)아미노]프로판산 (115.8 g) 및 1-히드록시벤조트리아졸 (48.6 g)의 용액을 왕(Wang) 수지 (50 g)에 첨가한다. 15분 후, 1,3-디이소프로필카르보디이미드 (56.5 ml)를 첨가하고, 혼합물을 45℃에서 24 h 동안 교반한다. 수지를 여과하고, DMF (3x360 ml), 메탄올 (3x360 ml) 및 디클로로메탄 (3x700 ml)으로 세척한다. 디클로로메탄 (644 ml) 중의 수지의 슬러리에 피리딘 (14.7 ml)을 첨가한다. 아세트산 무수물 (26.9 ml)을 첨가하고, 혼합물을 20℃에서 12 h 동안 교반한다. 수지를 여과하고, 디클로로메탄 (3x550 ml), 메탄올 (3x370 ml) 및 디클로로메탄 (3x550 ml)으로 세척한다.

디클로로메탄 (100 ml) 중의 수지의 20 g의 슬러리를 2 내지 5℃로 냉각시키고, 디클로로메탄 (80 ml) 중의 페놀 (20 g)의 용액으로 처리한다. 클로로트리메틸실란 (20 ml)을 적가하고, 혼합물을 2 내지 5℃에서 6 h 동안 교반한다. 수지를 여과하고, 디클로로메탄 (3x200 ml), 메탄올 (3x200 ml), DMF 중 10% 물 (2x200 ml), DMF 중 10% 디이소프로필에틸아민 (3x200 ml), DMF (200 ml), 메탄올 (3x200 ml) 및 디클로로메탄 (3x200 ml)으로 세척한다.

DMF (55 ml) 중의 수지의 슬러리를 DMF (85 ml) 중의 Fmoc-류신 (32.7 g) 및 1-히드록시벤조트리아졸 (12.5 g)의 용액으로 처리한다. 5분 후, 1,3-디이소프로필카르보디이미드 (19.3 ml)를 첨가하고, 혼합물을 20℃에서 15 h 동안 교반한다. 수지를 여과하고, DMF (3x150 ml), 메탄올 (3x150 ml) 및 디클로로메탄 (3x150 ml)으로 세척한다.

수지를 DMF (180 ml) 중의 20% 피페리딘으로 처리하고, 20℃에서 1 h 동안 교반한다. 수지를 여과하고, DMF (3x150 ml), 디클로로메탄 (3x150 ml), DMF (3x150 ml) 및 디클로로메탄 (3x150 ml)으로 세척한다. DMF (50 ml) 중의 이것의 슬러리에 DMF (100 ml) 중의 (2-메틸페녹시)아세트산 (17.9 g) 및 1-히드록시벤조트리아졸 (14.6 g)의 용액을 첨가한다. 5분 후, 1,3-디이소프로필카르보디이미드 (16.9 ml)를 첨가하고, 혼합물을 20℃에서 65 h 동안 교반한다. 수지를 여과하고, DMF (2x150 ml), 메탄올 (3x150 ml) 및 디클로로메탄 (3x150 ml)으로 세척한다.

디클로로메탄 (60 ml) 중의 수지의 슬러리를 디클로로메탄 (140 ml) 중의 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0) (5.21 g)의 용액, 그 후 모르폴린 (13 ml)으로 처리한다. 혼합물을 20℃에서 2 h 동안 교반하고, 이어서 수지를 여과하고, 디클로로메탄 (7x200 ml)으로 세척한다.

디클로로메탄 (160 ml) 중의 수지의 슬러리를 디이소프로필에틸아민 (12.4 ml)으로 처리한 후, 4-니트로페닐 클로로포르메이트 (24.8 g)로 5분 간격으로 3 부분으로 처리한다. 혼합물을 20℃에서 1 h 동안 교반한다. 수지를 여과하고, 디클로로메탄 (3x200 ml)으로 세척한다. 수지를 DMF (180 ml) 중의 이소니페코타미드 (15.8 g)의 용액으로 처리하고, 혼합물을 20℃에서 1.5 h 동안 교반한다. 수지를 여과하고, DMF (4x200 ml) 및 디클로로메탄 (2x200 ml)으로 세척한다.

수지를 디클로로메탄 (200 ml) 중의 50% TFA로 처리한다. 20℃에서 1 h 동안 교반 후, 수지를 여과하고, 디클로로메탄 (5x200 ml)으로 세척한다. 합한 여액 및 세척액을 진공에서 증발시킨다. 잔류물을 톨루엔 (2x100 ml)과 공비증류시키고, 이어서 에테르 (50 ml)로 연화처리하고, 생성된 백색 고체를 여과한다. 여기에 아세토니트릴 (150 ml)을 첨가하고, 혼합물을 환류로 가열한다. 생성된 현탁액을 20℃로 냉각시키고, 18 h 동안 교반한다. 혼합물을 여과하여 (2S)-3-[4-({[4-(아미노카르보닐)-1-피페리디닐]카르보닐}옥소)페닐]-2-[((2S)-4-메틸-2-{[2-(2-메틸페녹시)아세틸]아미노}펜타노일)아미노]프로판산을 수득한다.

특정 실시양태에서, 치료제 (예를 들어, 치료제 A)는 화합물 (I)의 제약상 허용되는 염이다. 어구 "제약상 허용되는"은 본원에서, 타당한 의학적 판단의 범위 내에서, 타당한 이익/위험 비율에 맞는, 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응, 또는 다른 문제 또는 합병증 없이 인간 및 동물의 조직과 접촉하여 사용하기에 적합한 이들 화합물, 물질, 조성물, 및/또는 투여 형태를 지칭한다.

특정 실시양태에서, 치료제 (예를 들어, 치료제 A)는 화합물 (I)의 칼륨 염이다.

특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 화합물은 컨쥬게이트, 복합체, 또는 전구약물로서 투여된다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 화합물은 전구약물의 형태로 투여된다. 이러한 전구약물은 대상체에 의해 대사되어 화학식 (I)의 화합물을 제공할 수 있다.

IV. 제약 조성물

본원에서 사용되는 바와 같이 어구 "제약상 허용되는 담체"는, 대상 작용제를 신체의 하나의 기관 또는 부분으로부터 신체의 또 다른 기관 또는 부분으로 운반하거나 수송하는 것에 관여되는 제약상 허용되는 물질, 조성물 또는 비히클, 예컨대 액체 또는 고체 충전제, 희석제, 부형제, 용매 또는 캡슐화 물질을 의미한다. 각각의 담체는 제제의 다른 성분과 상용성이라는 의미에서 "허용되는" 것이어야 하며, 예를 들어 담체는 치료시 작용제의 효과를 감소시키지 않는다. 다시 말해서, 담체는 제약상 불활성이다.

조성물은 제약상 유용한 조성물의 제조를 위한 공지된 방법에 따라 제제화될 수 있고, 이로써 화합물을 제약상 허용되는 담체와 혼합한다. 멸균 포스페이트-완충 식염수는 제약상 허용되는 담체의 일례이다. 다른 적합한 담체는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있다. 예를 들어, 문헌 [REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, 19th Ed. (1995)]을 참조한다.

국소 투여에 대해 적합화된 제약 조성물은 연고, 크림, 에멀젼, 현탁액, 로션, 분말, 용액, 페이스트, 겔, 스프레이, 미스트, 에어로졸 또는 오일로서 제제화될 수 있다. 특정 실시양태에서, 제약 조성물은 용액, 예컨대 안과용 용액이다. 이러한 실시양태에서, 안과용 용액은, 각각의 눈에서 1일 당 1 액적 이상의 형태로, 국소 경로를 통해, 인간 또는 비-인간 포유류에게 투여된다.

눈의 치료를 위해, 조성물은 국소 연고 또는 크림으로서 적용될 수 있다. 연고로 제제화되는 경우, 활성 성분은 파라핀계 또는 수-혼화성 연고 기재와 함께 사용될 수 있다. 별법으로, 활성 성분은 수-중-유(oil-in-water) 크림 기재 또는 유-중-수(water-in-oil) 기재와 함께 크림으로 제제화될 수 있다.

눈으로의 국소 투여에 대해 적합화된 제약 조성물은 활성 성분을 적합한 담체, 특히 수성 용매 중에 용해시키거나 현탁시킨 점안약을 포함한다. 눈에 투여하려는 제제는 안과용으로 상용성인 pH 및 삼투질농도를 가질 것이다. 하나 이상의 안과용으로 허용되는 pH 조정제 및/또는 완충제가 본 발명의 조성물 중에 포함될 수 있으며, 이는 산, 예컨대 아세트산, 붕산, 시트르산, 락트산, 인산 및 염산; 염기, 예컨대 수산화나트륨, 인산나트륨, 붕산나트륨, 시트르산나트륨, 아세트산나트륨, 및 락트산나트륨; 및 완충제, 예컨대 시트레이트/덱스트로스, 중탄산나트륨 및 염화암모늄을 포함한다. 이러한 산, 염기, 및 완충제는 조성물의 pH를 안과용으로 허용되는 범위 내에서 유지하기 위해 필요한 양으로 포함될 수 있다. 하나 이상의 안과용으로 허용되는 염은 조성물의 삼투질농도를 안과용으로 허용되는 범위 내로 도입하기에 충분한 양으로 조성물 중에 포함될 수 있다. 이러한 염은 나트륨, 칼륨 또는 암모늄 양이온 및 클로라이드, 시트레이트, 아스코르베이트, 보레이트, 포스페이트, 비카르보네이트, 술페이트, 티오술페이트 또는 비술파이트 음이온을 갖는 것들을 포함한다.

본 발명의 조성물은 안구 전달 장치 또는 삽입물을 사용하여 눈으로, 결막하로, 전방내로, 유리체강내로, 테논낭하로, 망막하로, 맥락막하로, 맥락막상으로, 결막낭 내에 또는 안검으로 국소 적용될 수 있다. 이러한 장치 또는 삽입물은 다수의 정의된 방출 속도 및 지속적 용량 동력학 및 침투율을 갖는 하나 이상의 치료제의 조절 방출을 위해 디자인될 수 있다. 조절 방출은, 약물 확산, 침식, 용해 및 삼투성을 향상시킬 중합체 분자량, 중합체 결정도, 공중합체 비율, 가공 조건, 표면 마감, 기하구조, 부형제 첨가 및 중합체 코팅의, 생분해성/생침식성 중합체 (예를 들어 폴리(에틸렌 비닐) 아세테이트 (EVA), 초-가수분해된 PVA), 히드록시알킬 셀룰로스 (HPC), 메틸셀룰로스 (MC), 히드록시프로필 메틸 셀룰로스 (HPMC), 폴리카프로락톤, 폴리(글리콜)산, 폴리(락트)산, 폴리무수물의 상이한 선택 및 특성을 도입하는 중합체 매트릭스의 디자인을 통해 얻어질 수 있다.

안구 장치 또는 삽입물을 사용하는 약물 전달을 위한 제제는, 명시된 투여 경로에 적절한 하나 이상의 활성제 및 아주반트를 조합할 수 있다. 예를 들어, 활성제를 임의의 제약상 허용되는 부형제, 락토스, 수크로스, 전분 분말, 알칸산의 셀룰로스 에스테르, 스테아르산, 활석, 스테아르산마그네슘, 산화마그네슘, 인산 및 황산의 나트륨 및 칼슘 염, 아카시아, 젤라틴, 알긴산나트륨, 폴리비닐피롤리딘, 및/또는 폴리비닐 알콜과 혼합하여, 통상의 투여를 위해 정제화 또는 캡슐화할 수 있다. 별법으로, 화합물을 폴리에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜, 카르복시메틸 셀룰로스 콜로이달 용액, 에탄올, 옥수수 오일, 땅콩 오일, 면실유, 참깨유, 트라가칸트 검, 및/또는 다양한 완충제 중에 용해시킬 수 있다. 화합물을 또한 생분해성 및 비-생분해성 중합체 둘 다의 조성물, 및 시간 지연 특성을 갖는 담체 또는 희석제와 혼합할 수 있다. 생분해성 조성물의 대표적 예는, 알부민, 젤라틴, 전분, 셀룰로스, 덱스트란, 폴리사카라이드, 폴리 (D,L-락티드), 폴리 (D,L-락티드-코-글리콜리드), 폴리 (글리콜리드), 폴리 (히드록시부티레이트), 폴리 (알킬카르보네이트) 및 폴리 (오르토에스테르) 및 이들의 혼합물을 포함할 수 있다. 비-생분해성 중합체의 대표적 예는, EVA 공중합체, 실리콘 고무 및 폴리 (메틸아크릴레이트), 및 이들의 혼합물을 포함할 수 있다.

안구 전달을 위한 제약 조성물은 또한 계내 겔화가능한 수성 조성물을 포함한다. 이러한 조성물은 겔화제를 눈과의 또는 누액과의 접촉시 겔화를 촉진시키기에 효과적인 농도로 포함한다. 적합한 겔화제는 열경화성 중합체를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 본원에서 사용되는 바와 같이 용어 "계내 겔화가능한"은, 눈과의 또는 누액과의 접촉시 겔을 형성하는 저점도의 액체를 포함할 뿐만 아니라, 눈에 투여시 상당히 증가된 점도 또는 겔 강성도를 나타내는 보다 점성인 액체, 예컨대 반-유체 및 씩소트로픽 겔도 포함한다. 예를 들어, 안구 약물 전달에 사용하기 위한 중합체의 예에 대한 교시 목적상 본원에 참조로 포함되는 루드빅(Ludwig)의 문헌 (2005)을 참조한다.

V. 키트

또한, 키트, 예를 들어, 치료 목적을 위한 키트가 본원에서 제공된다. 키트는, 본원에 기재된 바와 같은 하나 이상의 화합물을, 예를 들어, 미리 측정된 용량으로 포함할 수 있다. 키트는 임의로 세포와 화합물의 접촉을 위한 장치 및 사용을 위한 지시를 포함할 수 있다.

장치는 시린지, 이식가능한 펌프, 예컨대 미니- 및 마이크로펌프, 및 안과용 사용을 위한 다른 장치를 포함한다.

또한, 별도의 투여 형태의, 그러나 서로 연합된 치료제 A 및 또 다른 치료제 (조합 요법 및 조합 조성물에 사용되는 것들)를 포함하는 치료적 조합이 본원에서 제공된다. 본원에서 사용되는 바와 같이 용어 "서로 연합된"은, 별도의 투여 형태가 동일한 요법의 부분으로서 판매되고 투여되도록 의도된다는 것이 용이하게 명백하도록, 별도의 투여 형태가 함께 패키징되거나 또는 다른 방식으로 서로에게 부착됨을 의미한다. 화합물 및 다른 작용제는 바람직하게는 블리스터 팩 또는 다른 다중-챔버 패키지, 또는 연결된 상태로, 사용자에 의해 분리될 수 있는 (예를 들어, 두 용기 사이의 스코어 라인 상에서의 인열에 의해) 별도로 밀봉된 용기 (예컨대 호일 파우치 등) 내에 함께 패키징된다.

또한 또 다른 실시양태에서, 본 발명은, 별도의 용기 내에, a) 본 발명의 화합물; 및 b) 본 명세서의 다른 부분에 기재된 것들과 같은 또 다른 치료제를 포함하는 키트를 제공한다.

실시예

재료

[3H] GW559090은, 분자 당 5개의 3H 원자를 함유하여 76 Ci/mmol의 특정 활성을 제공하도록 아머샴(Amersham)에서 주문 합성되었다.

모든 동물 연구는, 잭슨 랩스(Jackson Labs; 미국 메인주 바 하버)로부터 구입된 6 내지 8주령의 C57BL/6 마우스를 사용하여 수행되었다.

결합 및 세포 부착

주르캣(Jurkat) J6 세포 (인간 림프아세포 세포주)를 FCS (10%) 및 글루타민 (2 mM) 보충된 RPMI 1640 중에서 현탁액 배양으로서 성장시켰다. RPMI8866 세포 (인간 B 림프성 세포주)를 FCS (10%) 및 글루타민 (2 mM) 보충된 RPMI 1640 중에서 현탁액 배양으로서 성장시켰다. RBL-2H3 세포 (래트 호염기성 세포주)를 2 mM L-글루타민, 1 mM 피루브산나트륨, 1 x 비-필수 아미노 산, 1 mM 피루브산Na, 10% 열 불활성화된 소 태아 혈청 보충된 이글스(Eagle's) MEM 플러스 이글스 염 중에서 배양시켰다.

J6 포화 분석 (여과 분석): VLA-4를 발현하는 인간 J6 세포에서 화학식 I의 화합물의 결합을 특성화하였다. J6 세포를 500 g로 5분 동안 원심분리에 의해 수확하고, 분석 완충제 (50 mM HEPES, pH 7.5, 100 mM NaCl, 2 mM 글루코스, 1 mM MnCl₂) 중에 재현탁시켰다. 각각의 웰은 1x10⁶개 세포 및 NSB (비-특이적 결합)를 정의하는 10 μM 저온 GW559090, 또는 완충제를 함유하였다. [3H]GW559090 (0.02 내지 50 nM)을 500 ㎕의 최종 부피로 첨가하고, 37℃에서 2h 동안 인큐베이션시켰다. 결합된 [3H]GW559090을 예비-침지된 와트만(Whatman) GF/B 필터를 통해 급속 진공 여과에 의해 분리한 후, 빙냉 완충제 중에서 3회 세척하고, 이어서 필터 디스크에 섬광제를 첨가하고, 베크만 신틸레이션(Beckman Scintillation) 카운터 상에서 분 당 붕해를 측정하였다. 50 ㎕ 분취량의 라벨 희석 범위로부터 붕해를 카운팅함으로써 포화 곡선의 각각의 농도에 대해 첨가된 [3H] GW559090의 실제 양을 측정하였다.

RBL-2H3 세포에서의 포화 결합 분석 (SPA 분석): 분석 완충제는 50 mM HEPES, 100 mM NaCl, 1 mM MnCl₂, pH 7.5 (NaOH 사용)를 함유하였다. WGA SPA 비드를 1 mg/웰로 사용하였다. 세포를 수확하고, 분석 완충제 중에 재현탁시키고, 백색 바닥 플레이트 내에서 웰 당 1백만개의 세포를 첨가하였다. 20 μM의 최종 분석 농도를 제공하는 저온 GW559090 (비-특이적 결합을 정의함) 또는 완충제 단독을 첨가하고, 이어서 플레이트에 대한 농도 범위에 걸쳐 [3H] GW559090을 첨가하였다 (공칭 [3H] GW559090 농도 범위는 0.01 내지 200 nM임). 최종 분석 부피는 250 ㎕였다. 이어서, 플레이트를 37℃에서 2h 동안 인큐베이션시켰다. 왈락 마이크로베타(Wallac Microbeta) 플레이트 리더에서 섬광 (WGA SPA 비드로부터)에 의해 붕해를 카운팅하였다.

50 ㎕ 분취량의 라벨 희석 범위로부터 분 당 붕해를 카운팅함으로써 포화 곡선의 각각의 농도에 대해 첨가된 [3H] GW559090의 실제 양을 측정하였다.

VCAM 세포 부착 분석: 폴리스티렌 96-웰 마이크로타이터 플레이트를 37℃에서 2시간 동안 비카르보네이트 완충제 중의 0.05 mg/mL의 농도로 IgG로 코팅하였다. 용액을 흡기시키고, 플레이트를 PBS로 2회 세척하였다. 이어서, 플레이트를 4℃에서 밤새 PBS 중 3% BSA의 VCAM-1의 1:4000 희석과 함께 인큐베이션시켰다. 사용 전에, VCAM-1을 흡기시키고, 플레이트를 PBS로 2회 세척하였다.

J6 또는 RPMI 세포 (필요에 따라)를 37℃에서 10 min 동안 형광 염료 BCECF-AM (10 μM 및 6 x 10⁶개 세포/mL)으로 라벨링한 후, 500 g로 5 min 동안 원심분리에 의해 과량을 제거하고, 세포를 HBSS 중에 1.2x10⁷개 세포/mL의 세포 농도로 재현탁시켰다. 화학식 I의 화합물 (38.1 pM 내지 10 μM의 농도 범위에 걸쳐)을 함유하는 동일 부피의 HBSS 및 세포를 VCAM-1 코팅된 플레이트에 첨가하였다. 37℃에서 30분 인큐베이션 후, 부착되지 않거나 느슨하게 부착되는 세포를 플레이트 역전 및 티슈 페이퍼 상의 블롯팅에 의해 제거하였다. PBS로의 2회 세척 및 블롯팅 후, 트리톤(Triton) X-100 (2% v/v)을 첨가하였다. 플레이트를 왈락 빅토르(Wallac Viktor)에서 카운팅하였다. 부착을 억제한 화합물은 보다 낮은 형광 판독치를 나타내었다.

MAdCAM 세포 부착 분석: 폴리스티렌 96-웰 마이크로타이터 플레이트를 37℃에서 2.5시간 동안 비카르보네이트 완충제 중의 0.05 mg/mL의 농도로 IgG로 코팅하였다. 용액을 흡기시키고, 플레이트를 PBS로 2회 세척하였다. 이어서, 플레이트를 4℃에서 밤새 PBS 중 3% BSA의 204.0 ng/mL의 농도로 MAdCAM과 함께 인큐베이션시켰다. 사용 전에, MAdCAM을 흡기시키고, 플레이트를 PBS로 2회 세척하였다. J6 또는 RPMI 세포 (필요에 따라)를 37℃에서 10 min 동안 형광 염료 BCECF-AM (10 μM 및 6 x 10⁶개 세포/mL)으로 라벨링한 후, 500 g로 5 min 동안 원심분리에 의해 과량을 제거하고, 세포를 HBSS 중에 1.2x10⁷개 세포/mL의 세포 농도로 재현탁시켰다. 화학식 I의 화합물 (38.1 pM 내지 10 μM의 농도 범위에 걸쳐)을 함유하는 동일 부피의 HBSS 및 세포를 MAdCAM 코팅된 플레이트에 첨가하였다. 37℃에서 30분 인큐베이션에 걸쳐 부착이 일어났다. 부착되지 않거나 느슨하게 부착되는 세포를 플레이트 역전 및 티슈 페이퍼 블롯팅에 의해 제거하였다. PBS로의 2회 세척 및 블롯팅 후, 트리톤 X-100 (2% v/v)을 첨가하였다. 플레이트를 왈락 빅토르에서 카운팅하였다.

CS-1 세포 부착 분석: 폴리스티렌 96-웰 마이크로타이터 플레이트를 4℃에서 밤새 비카르보네이트 완충제 중의 0.01 mg/mL의 농도로 CS-1 (연결 세그먼트 1, 피브로넥틴의 세포 부착 도메인)로 코팅하였다. 용액을 흡기시키고, 플레이트를 PBS로 2회 세척하였다. 이어서, 플레이트를 60 min 동안 3% BSA의 존재 하에 실온에서 인큐베이션시키고, 플릭킹(flicking)하여 BSA를 제거하고, 비카르보네이트 완충제 중에서 2회 세척하였다. J6 또는 RPMI 세포 (필요에 따라)를 37℃에서 10 min 동안 형광 염료 BCECF-AM (10 μM 및 6 x 10⁶개 세포/mL)으로 라벨링한 후, 500 g로 5 min 동안 원심분리에 의해 과량을 제거하고, 세포를 HBSS 중에 1.2x10⁷개 세포/mL의 세포 농도로 재현탁시켰다. 화학식 I의 화합물 (19.0 pM 내지 5 μM의 농도 범위에 걸쳐)을 함유하는 동일 부피의 HBSS 및 세포를 CS-1 코팅된 플레이트에 첨가하였다. 37℃에서 30분 인큐베이션에 걸쳐 부착이 일어났다. 부착되지 않거나 느슨하게 부착되는 세포를 플레이트 역전 및 티슈 페이퍼 블롯팅에 의해 제거하였다. PBS로의 2회 세척 및 블롯팅 후, 트리톤 X-100 (2% v/v)을 첨가하였다. 플레이트를 왈락 빅토르에서 카운팅하였다.

건조 스트레스의 유도, 치료 요법

6 내지 8주령의 암컷 C57BL/6 마우스를, 이전에 기재된 바와 같이 (de Paiva et al., 2006b; Niederkorn et al., 2006) 5일 동안 DS에 적용하였다 (DS5). 1일 당 2회로, 눈 당 1 액적 (2 ㎕ 부피) 또는 피하 주사 (4 ㎕ 부피)로의 국소 양측성 치료를 DS와 동시에 제1일에 개시하였고, 제4일 내내 계속하였다. 화학식 I의 화합물 또는 덱사메타손 포스페이트 0.1%로의 치료를 상응하게 치료된 비히클 대조군과 비교하였다. 마우스를 시험 물품 중 하나를 수용하도록 랜덤화하였다. 대조군 마우스를 기류 또는 스코폴라민으로의 노출 없이 50 내지 75% 상대 습도에서 유지되는 스트레스 부여되지 않은 (NS) 환경에서 유지하고, 시험 또는 대조군 물품으로 치료하지 않았다. 치료 효과를, 오레곤 그린 덱스트란(Oregon Green Dextran; OGD)으로의 각막 착색; 실시간 PCR에 의한 안구 표면 조직 내의 염증성 마커의 발현; FACS 분석에 의한 배출 경부 림프절에서의 세포 집단 분석; 면역조직화학에 의한 결막 T 세포 침입에 대해 평가하였다.

각막 OGD 착색

제5일 아침에, 마우스는 하나의 s.c. 용량의 스코폴라민을 수용하였다. 2시간 후, 이전에 기재된 바와 같이 (de Paiva et al., 2006b) 70 kDa 분자 크기의 컨쥬게이팅된 형광 염료인 오레곤 그린 덱스트란 (OGD-488) (인비트로겐-몰레큘라 프로브즈(Invitrogen-Molecular Probes))을 사용하여 각막 착색을 평가하였다. 절차는, 안락사 1분 전, 유리 모세관 피펫을 사용한 각막 상의 0.5 ㎕의 OGD의 점적주입으로 이루어졌다. 마우스를 이소플루란 기체의 흡입 후 경부 탈구에 의해 안락사시켰다. 이어서, 눈을 2 mL의 BSS로 헹구었다. 각막 터칭 없이 안구 표면으로부터 과량의 액체를 주의깊게 필터 페이퍼로 블롯팅하였다. 2초의 노출 시간으로, 니콘(Nikon) SMZ-1500 입체 현미경을 사용하여, 470 nm 여기 및 488 nm 방출 파장 길이 하에 양쪽 눈의 디지털 사진을 얻었다. 각각의 동물들로부터 양쪽 눈을 평가하였고; 우측 눈을 항상 먼저, 그 후 좌측 눈을 평가하였다. 고정된 관심 영역 (2-mm 직경 원)을 중심 각막 상에 배치함으로써 NIS 엘레멘츠(NIS Elements) (버젼 3.0)를 사용하여 중심 각막에서의 평균 강도를 디지털 이미지로부터 평가하였다. 소프트웨어에 의해 형광의 평균 강도를 판독하고, 데이터베이스 (엑셀(Excel), 마이크로소프트(Microsoft))에 저장하였다. 중심 고리에서의 이 형광 측정을 각각의 마우스 눈에 대해 2명의 차폐된 관찰자에 의해 독립적으로 수행하였다. 실험의 결론에 의해, 모든 연구 주 동안 수집된 모든 데이터를 사용하여 2명의 관찰자로부터 결과를 평균내었다 (엑셀, 마이크로소프트). 결과를 회색도의 기하 평균±95% 신뢰 구간으로서 나타내었다.

RNA 단리 및 역전사

제조업자의 프로토콜에 따라 피코퓨어(PicoPure)™ RNA 단리 키트 (악투루스 바이오사이언스 인코포레이티드(Acturus Bioscience Inc, 미국 캘리포니아주 마운틴 뷰)를 사용하여 비-치료 대조군 마우스, 5일 동안 DS에 적용된 마우스 (DS5), 화학식 I의 화합물 (30 m/mL)로 국소 치료된 DS5 마우스 및 비히클 치료된 동물 (n=7/그룹)로부터 각각의 시점에 두 눈 (우측 및 좌측)으로부터 수집 및 통합된 각막 및 결막 상피로부터 전체 RNA를 단리하였다. 간단히, 각막 상피 세포를 스크레이핑하고, 전체 결막을 절단하고, 100 ㎕의 추출 완충제 중에 넣고, 42℃에서 30분 동안 인큐베이션시켰다. 세포 추출물을 예비컨디셔닝된 정제 컬럼 상에 로딩하고, 이를 원심분리하고, DNase (퀴아젠(Qiagen), 미국 캘리포니아주 발렌시아)로 처리하고, 2종의 상이한 세척 완충제로 2회 세척하였다. RNA를 12 ㎕의 낮은 이온 강도의 완충제 중에서 용출시켰다. 분광광도계 (나노드롭(NanoDrop) 2000, 써모 사이언티픽(Thermo Scientific), 미국 델라웨어주 윌밍톤)를 사용하여 260 nm에서의 흡수에 의해 RNA 농도를 측정하고, 샘플을 사용시까지 -80℃에 저장하였다. 이전에 기재된 바와 같이 (de Paiva et al., 2006a), M-MuLV 역전사효소 (레디-투-고 유-프라임 퍼스트-스트랜드 비즈(Ready-To-Go You-Prime First-Strand Beads); 아머샴 파마시아 바이오테크, 인코포레이티드(Amersham Pharmacia Biotech, Inc.), 미국 뉴저지주 피스카타웨이)를 사용하여 랜덤 육량체를 갖는 1 ㎍의 전체 RNA로부터 제1-가닥 cDNA를 합성하였다.

절대적 실시간 폴리머라제 사슬 반응

샘플로부터 cDNA 분취량 (1 내지 4 ㎕)을, 반응마다 하기의 것들을 함유하는 10 ㎕의 총 부피로 실시간 PCR에 사용하였다: 사용된 0.3 ㎕의 유전자 특이적 타크만(Taqman) 프로브 및 5 ㎕의 2X 타크만 패스트 PCR 마스터 믹스(Taqman Fast PCR Master Mix) (어플라이드 바이오시스템즈(Applied Biosystems)). 실시간 PCR을 스텝원플러스(StepOnePlus)™ 실시간 PCR 시스템 (어플라이드 바이오시스템즈) 상에서 수행하였고, 파라미터는 95℃에서 22 sec 동안의 예비-변성, 그 후 95℃에서 1 sec 동안의 변성의 40 사이클, 60℃에서 20 sec의 어닐링 및 확장으로 이루어졌다. 샘플 및 표준물을 이중으로 분석하였다. 사용된 시약의 PCR 및 DNA 오염을 평가하기 위해 모든 실험에 비-템플레이트 대조군 및 역전사가 없는 전체 RNA가 포함되었다. 하기 마우스 타크만 프로브를 사용하였다: IL-1α (Mm00439620); MMP-9 (Mm00442991); CXCL9 (Mm004434946); TGF-β1 (Mm00441724) 및 HPRT-1 (Mm00446968). HPRT-1 유전자를 각각의 반응에 대해 내인성 참조물로서 사용하였다. 정량 PCR의 결과를, 표적 변화 = 2-ΔΔ C_T인 비교 C_T 방법에 의해 분석하였다. 결과를 비-치료 대조군 그룹의 HPRT-1의 C_T 값에 의해 정규화하였다 (de Paiva et al., 2006b).

배출 림프절의 해부

경부 배출 림프절 (CLN)을 외과적으로 절단하고, ~ 8 mL의 완전 RPMI 배지를 갖는 원형 배양 플레이트에 넣고, 2개의 반투명 슬라이드 사이에서 충돌시켰다.

유동 세포측정법

1일 동안 DS 조건 하에 처리된 C57BL/6 마우스로부터의 CLN의 단일-세포 현탁액을 제조하고, 이전에 기재된 바와 같이 (de Paiva et al., 2009a) 원심분리하고 순차적으로 여과하였다. 이어서, 1.0 mL의 ACT 용액을 30초 동안 첨가한 후, 2.0 mL의 완전 RPMI를 첨가하였다. 세포를 다시 한번 원심분리하고, 상청액을 흡기시켰다. 이어서, 세포를 2.0 mL의 완전 RPMI 중에 재현탁시키고, 카운팅을 위해 준비하였다. 10 ㎕의 트립토판 블루(Trypan Blue)를 카운팅에 사용하였고, 세포를 튜브 내에서 1x10⁶개 세포/mL로 분할하였다. 이어서, 세포를 20 ㎕ 비-컨쥬게이팅된 항-마우스 CD16/CD32 (BD 파르밍겐(BD Pharmingen), 미국 캘리포니아주 샌 디에고), 그 후 80 ㎕의 직접 컨쥬게이팅된 1차 항체 또는 동형 중에서 빙상 인큐베이션시켰다. 마지막으로, 샘플을 1 mL PBS/1%FBS로 세척하고, 원심분리하고, 1:1000의 PI를 함유하는 0.3 mL PBS/1%FBS 중에 재현탁시켰다. 샘플을 A BD LSRII 벤치탑(Benchtop) 세포측정기로 분석 수행시까지 4℃에서 저장하였다. BD 디바 소프트웨어 (BD 파르밍겐) 및 플로우조(FlowJo) (트리스타 인코포레이티드(TreeStar Inc))를 사용하여 데이터를 분석하였다.

결막 T 세포 침입

면역조직화학을 위해, 5 마리 마우스/그룹 (n=5)의 눈 및 부속기를 최적 절단 온도에서 절단하여 매립시키고 (OCT 화합물; VWR, 미국 조지아주 수와니), 액체 질소 중에서 플래시 동결시켰다. 시상 8-㎛ 섹션을 저온유지상태 (HM 500; 마이크론(Micron), 독일 발도르프)로 절단하고, -80℃에서 저장된 유리 슬라이드 상에 배치하였다.

면역조직화학을 수행하여 검출하고, CD4 (클론 H129.9, 10 ㎍/mL, BD 바이오사이언스(BD Bioscience, 미국 캘리포니아주 샌 디에고)에 대해 포지티브 착색된 결막 상피 및 간질 내의 세포를 검출하고 카운팅하였다. 크리오섹션을, 노바레드(NovaRed) 시약 (벡터(Vector), 미국 캘리포니아주 벌링게임)을 사용하여 상기 언급된 1차 항체 및 적절한 비오티닐화된 2차 항체 (BD 파르밍겐) 및 벡타스테인 엘리트 ABC(Vectastain Elite ABC)로 착색하였다. 2차 항체 단독 및 적절한 항-마우스 동형 (BD 바이오사이언스) 또한 대조군으로서 사용되었다. 각각의 동물로부터 2개 섹션을 검사하고, 디지털 카메라 (DS-Fi1을 갖는 이클립스(Eclipse) E400; 니콘)가 장착된 현미경으로 사진찍었다. 이미지-분석 소프트웨어 (NIS 엘레멘츠 소프트웨어, 버젼 3.0, BR, 니콘)를 사용하여 500 ㎛의 거리에 대한 상피에서의 적어도 500 ㎛의 길이에 걸쳐, 결막의 배상 세포 풍부 영역에서 포지티브 착색된 세포를 카운팅하였다.

통계 분석

OGD 데이터의 편중 분포로 인해, log10 스케일로 분석을 수행하여 데이터가 보다 정규 분포되도록 하였다. Log10 OGD 데이터를 2명의 관찰자 및 좌측 및 우측 눈에 대하여 평균내었다. 혼합 효과 아노바 모델은 고정 효과로서의 치료 그룹 및 랜덤 효과로서의 주를 포함하였다. 95% 및 99% 신뢰 구간을 질환 (5일 DS vs 별도의 동물 사육장에서 유지된 비-치료 그룹) 및 화합물 치료 효과 (치료 vs 비히클)에 대해 구성하였다. 이들 비교는 모두 예비-계획된 것이어서 (각각의 치료와 그의 비히클 그룹의 비교), 다중성에 대한 조정이 이루어지지 않았다. Log10 스케일 치료 효과를 추정하고, 신뢰 한계를 다시 원래의 OGD 스케일로 전환시키고, 그에 따라 그룹 기하 평균의 비율 및 이들의 신뢰 한계에 대한 추정치를 나타내었다. 유전자 발현 분석을 위해, 쌍을 이루지 않는 T 시험을 수행하여 약물 및 비히클 치료를 비교하였다. 유동 세포측정법 분석을 위해, 고정 치료 및 랜덤 실험 효과에서의 2-웨이 아노바를 이용하여 치료 차이를 시험하였다. 분석 후, 두네트의 다중 비교 절차를 수행하여 각각의 치료 그룹과 비히클 그룹을 비교하였다. 각각의 섹션에 대해 T 세포 밀도를 계산하고, 각각의 동물에서 섹션에 대해 평균내었다. 평균 세포 밀도 데이터의 분포는 비-정규적이었기 때문에, 비-파라메트릭 방법 (크루스칼-월리스 절차, 그 후 둔의 다중 비교 기술)을 이용하여 이를 분석하였다.

실시예 1. GW559090의 약리학

인간 J6 세포에 결합하는 [3H]GW559090은 포화가능하였고, 이들 실험에서 4개의 별도의 실험으로부터 유래된 0.19 nM (0.08 내지 0.43) (기하 평균 및 95% CL)의 평균 Kd를 갖는 단일 결합 부위로 기재되었다. [3H] GW559090에 대한 단일 고친화력 결합 부위가 또한 래트 α4β1을 발현하는 래트 RBL-2H3 세포에서 나타났다 (평균 Kd 1.04 nM (0.58 내지 1.89)).

코팅된 마이크로타이터 플레이트 내에서 VCAM-1 및 CS-1 (피브로넥틴 도메인)에 대한 α4β1 (주르캣 J6 세포)에서; MAdCAM에 대한 α4β7 (RPMI 8866 세포)에서 세포 부착의 억제를 측정하였다. GW559090은 7.72 nM (2.39 내지 24.9)의 평균 IC50으로 단상 방식으로 VCAM-1에 대한 J6 세포 부착을 억제하였다. GW559090은 또한, 이상 방식으로 MAdCAM에 대한, 또한 8.04 nM (3.05 내지 21.2)의 평균 IC50으로 CS-1에 대한 J6 세포 부착을 억제하였고, 이는 J6 세포에서 MAdCAM - GW559090 결합에 대한 고친화력 및 저친화력 부위의 존재를 지지한다. RPMI 8866 MAdCAM 결합은 대부분 α4β7 매개된 세포 부착을 평가한다. GW559090은 23.0 nM (20.0 내지 26.4)의 IC50으로 MAdCAM에 대한 RPMI 8866 세포 부착을 억제하였다. GW559090은 또한, 각각 4.81 nM (2.82 내지 8.20) 및 24.5 nM (동일한 이중의 값)의 IC50으로 단순 단상 방식으로 VCAM-1, 및 CS-1에 대한 RPMI 8866 결합을 억제하였다.

표 1. α4 인테그린에 대한 [3H] GW559090의 결합 및 세포 부착의 억제

추가로, 화학식 I의 화합물은, LFA-1을 포함한 비-α4 인테그린에 대해 고도로 선택적인 것으로 보고되었다 (Ravensberg et al., 2006). MDS 파마 스크린(MDS Pharma screen)에서 53개의 수용체 및 4개의 수송체에 대한 방사리간드 결합 분석에서 화학식 I의 화합물 (10 μM)에 의한 현저한 억제는 나타나지 않았다.

실시예 2. 화학식 I의 화합물로의 국소 치료는 건조-유도 각막 장벽 붕괴를 막음.

본 발명자들은 비-치료된 스트레스 부여되지 않은 것 (NS)과 안구 건조 대조군 그룹 사이의 OGD 착색에 의해 측정된 각막 침투성에서의 현저한 증가를 확인하였다 (DS5, 도 1). 코르티코스테로이드 치료는 인간 및 마우스 둘 다에서 안구 건조의 각막 상피 질환을 개선시키는 것으로 보고되었기 때문에 (de Paiva et al., 2006a; de Paiva et al., 2006b; Marsh and Pflugfelder, 1999), 본 발명자들은 포지티브 대조군으로서 덱사메타손 (Dex)으로의 국소 치료를 사용하였다. 0.1% Dex로의 치료는 OGD 강도 스코어를 현저히 개선시켰다. 1 mg/mL만큼 낮은, 또한 30 mg/mL만큼 높은 화학식 I의 화합물의 용량 범위를 조사하였다. 해당 비히클에 대해 화학식 I의 화합물의 농도 증가에 따라 OGD 강도 스코어의 현저한 감소가 인지되었다. 가장 효과적인 농도는 30 mg/mL (도 1)였고, 따라서 이를 후속 연구에서 사용하였다.

실시예 3. 화학식 I의 화합물은 안구 표면 상에서 국소 작용함.

각막 착색에 대한 화학식 I의 화합물의 전신 투여의 효과를 탐구하기 위해, 국소 및 피하 (SC)의 두가지 투여 경로를 비교하였다. 동일한 용량을 SC (하나의 4 ㎕ 볼루스로서 120 ㎍) 및 국소 (각각의 눈에 2 ㎕ 액적으로서 60 ㎍)로 주어졌다. 전신으로 화학식 I의 화합물을 수용하는 마우스에 또한 국소 비히클 점안약이 주어졌다. 도 2에 나타낸 바와 같이, 또한 도 1과 유사하게, 국소 덱사메타손은 OGD 흡수를 감소시켰다. 화학식 I의 화합물로의 국소 치료 또한 그의 비히클에 비해 DS-유도 각막 장벽 붕괴를 현저히 감소시켰다. 이러한 효과는, 화학식 I의 화합물이 전신 투여된 경우에는 나타나지 않았다. 이들 결과는, 전형적인 점안약으로서의 국소 투여에 의해 화학식 I의 화합물의 국소 치료 효과가 달성됨을 나타낸다. 이는, 전신 약물 노출을 필요로 해야 하는 혈류로부터의 백혈구 트래피킹에서의 인테그린의 공지된 역할을 고려할 때 놀라운 발견이다. 국소 투여된 약물로부터의 이러한 국소 작용은 α4 인테그린 길항제에 대한 신규한 작용 메커니즘을 시사한다.

실시예 4. 화학식 I의 화합물로의 국소 치료는 안구 표면 상의 염증성 마커를 감소시킴

DED는 종종 각막 및 결막에서 증가된 T-세포 관련 시토카인, 매트릭스-메탈로프로테아제 및 염증성 시토카인을 수반한다 (Coursey et al., 2014; de Paiva et al., 2009a; Yoon et al., 2010). 본 발명자들은, 5일의 DS 동안 30 mg/mL로 화학식 I의 화합물로 국소 치료된 마우스를 사용하여 각막 및 결막에서의 IL-1α, TGF-β1, MMP-9 및 CXCL-9의 발현을 조사하고, 비히클 투여된 마우스와 비교하였다. 이들 유전자는, 이들이 DS에 의해 고도로 유도가능하기 때문에 선택되었다 (Coursey et al., 2014; de Paiva et al., 2009a; de Paiva et al., 2006b; de Paiva et al., 2006a; Yoon et al., 2007). 실험 그룹 및 스트레스 부여되지 않은 대조군 둘 다는 유사한 하우스키핑 유전자의 발현을 가졌고; 실험 그룹을 스트레스 부여되지 않은 대조군에 대해 보정하였다. 결과를 도 3에 나타내었다.

비히클 대조군에 비해 GW559090으로 치료된 각막에서 IL-1α, MMP-9, TGF-β1 및 CXCL9 전사물의 현저한 감소가 있었다 (도 3a). 결막에서는, TGF-β1 발현의 현저한 감소가 있었으나, IL-1α, MMP-9 및 CXCL-9와 관련해서는 변화가 없었다 (도 3b). 이들 결과는, 화학식 I의 화합물이 안구 표면에서 염증의 마커를 감소시킬 수 있음을 나타낸다.

실시예 5. 화학식 I의 화합물로의 국소 치료는 수지상 세포 활성화를 감소시킴.

배출 CLN은 DED에서 면역 사이클의 필수적 부분이다 (Pflugfelder et al., 2008; Schaumburg et al., 2011). 존재하는 경우, CLN에 대한 화학식 I의 화합물의 효과를 측정하기 위해, 마우스를 1일 동안 DS에 적용하고, 화학식 I의 화합물로 1일 2회 국소 또는 전신 (피하; 국소와 동일한 120 ㎍ 용량)으로 치료하였다. 피하 약물을 수용하는 마우스에게 부수적으로 양쪽 눈에 비히클을 국소 투여하여 국소 점안약에서 나타나는 안구 표면의 습윤화를 모방하였다. 배출 CLN을 절단하고, T 세포 (CD4, CD8), 단핵구 (CD11b), 수지상 세포 (CD11c) 및 MHC II의 유동 세포측정법 분석을 위해 준비하였다.

1일의 DS는 정상 마우스에 비해 CLN에서 CD11b⁺ 단핵구의 현저한 증가를 초래하였다. 연구된 다른 세포 집단 어느 것도 배출 CLN에서 DS에 의해 현저하게 변경되지 않았다. 치료는 T 세포 집단 또는 CD11b+ 단핵구에 대한 영향을 갖지 않았다. CD11c⁺ 및 CD11c⁺/MHC II⁺ 세포는 DS에 의해 변화되는 경향이 있었지만 현저하지는 않았으며, 화학식 I의 화합물로의 국소 치료는 비히클 대조군 그룹에 비해 DC의 활성화 및 비-활성화 형태 둘 다를 감소시켰다. 화학식 I의 화합물로의 전신 치료나 덱사메타손 포스페이트로의 국소 치료 어느 것도 동일한 효과를 생성하지 않았다. 결과를 도 4에 나타내었다.

화학식 I의 화합물이 국소 투여시에만 안구 건조의 이러한 마우스 모델에서 CLN으로의 항원-제시 세포 이동을 억제하고 각막 착색을 개선시키고, 전신 투여시에는 그렇지 않다는 사실은 매우 흥미로운 발견이다. 이는, DED 치료에서 인테그린 α4 길항제에 의한 전신 효과보다는 국소 효과를 시사한다. 이러한 국소 효과는 인테그린 α4 길항제 GW559090에 대해 특이적인 것으로 보이며, 국소 덱사메타손 포스페이트는 DED 관련 각막 착색을 개선시키만, 항원-제시 세포의 배출 림프절로의 이동은 개선시키지 않는다는 점에서, 국소 스테로이드 치료 (덱사메타손 포스페이트)와 구별된다. 인테그린 α4 길항작용의 치료 효과는 독특하고 신규한 메커니즘을 이용한다는 것이 상기 고려사항으로부터 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 인지될 수 있다.

실시예 6. 래빗에서의 PK 연구

본원에서 GW559090A로서 언급되는 GW559090의 칼륨 염을 단일 양측성 액적으로서 국소 안구 투여에 의해 수컷 뉴질랜드 화이트(New Zealand White) 래빗에게 제공하였다 (연구 #1: n = 2 마리 래빗/4개 눈/시점; 연구 #2: n = 3 마리 래빗/6개 눈/시점). 지정된 시간 (투여 후 0.5, 1, 3, 6시간)에, 안구 조직을 수집하고, 분석을 위해 처리하였다. 탠덤 질량 분광측정법 (LC-MS/MS)과 함께 액체 크로마토그래피에 의해 각막 및 안구 결막에서 GW559090의 농도를 측정하였다.

40 ㎕ (50 mg/mL)의 단일 국소 투여 후, 두 연구 모두에서 투여후 1시간 (Tmax)에 안구 결막에서의 Cmax 값이 나타났다. 평균 결막 농도는 일반적으로 시간에 따라 감소하고, 투여후 6시간에 걸쳐 정량화가능하였다. 40 ㎕ (50 mg/mL)의 단일 국소 투여 후, 두 연구 모두에서 투여후 0.5시간 (Tmax)에 각막에서의 평균 Cmax 값이 나타났다. 평균 각막 농도는 일반적으로 시간에 따라 감소하고, 투여후 6시간에 걸쳐 정량화가능하였다. 평균 각막 농도는 투여후 3 및 6시간의 시점에 평균 결막 농도보다 더 높았다. 대략 358 ng/mL의 결막 및 각막 조직 농도는 6시간까지 지속되었다 (도 6). 결막 및 각막 조직 농도는 30분에 3000 ng/mL를 초과하였고, 수준은 3시간에 각막 조직 내에서 1000 ng/mL 초과로 지속되었다 (도 6).

실시예 7. 13주 동안 뉴질랜드 화이트 래빗으로의 국소 안구 투여

GW559090A를 이 연구에서 사용하였다. 본 실시예에서의 용량 및 농도는 모 화합물 GW559090에 대하여 나타낸 것이다.

GW559090A를 13주 동안 국소 안구 투여에 의해 뉴질랜드 화이트 래빗에게 제공하였다. 동물에게 1일 당 6 또는 12회로, 투여간 1시간 간격을 두고 투여하였다. 치료 그룹은, (1) 비히클 (1일 12회), (2) 30 mg/mL/수행, 1일 6회 제공, (3) 50 mg/mL/수행, 1일 6회 제공, 또는 (4) 50 mg/mL/수행, 1일 12회 제공이었다.

GW559090A를 0.5% 염화나트륨을 갖는 25 mM 포스페이트 완충제 중의 모액으로서 제제화하여 그룹 3 또는 4로의 투여에 사용하기 위한 50 mg/mL 모액을 얻거나, 또는 0.75% 염화나트륨을 함유하는 25 mM 포스페이트 완충제로 추가로 희석하여 그룹 2로의 투여를 위한 30 mg/mL 용액을 얻었다. 대조군 동물을 50 mg/mL 용액에 대한 비히클 (0.5% 염화나트륨을 갖는 25 mM 포스페이트 완충제)로 처리하였다.

13주의 치료 기간 동안, 래빗은 0.06 mL의 일정한 용량 부피로 GW559090A 또는 비히클의 1일 국소 안구 용량을 수용하였다 (1일 6 또는 12회, 투여간 1시간의 간격을 두고). 시험 물품 제제 또는 비히클을, 눈과 직접 치환 피펫의 접촉을 막기 위해 적합한 거리로부터 우측 눈의 부분적으로 젖혀진 하안검 내로 적하하였다. 이어서, 용량 손실을 막고 외부 안구 표면에 걸쳐 균일한 분포를 돕기 위해, 하안검 및 상안검을 대략 5초 동안 온화하게 결합시켰다. 비-투여 눈은 임의의 시간에 조작되지 않았고, 동물 비-치료 대조군 부위 내에서 유지되었다.

투여간 1시간의 간격을 둔, 30 또는 50 mg/mL/수행, 1일 6회 또는 50 mg/mL/수행, 1일 12회로의 국소 안구 투여에 의한 13주 동안의 GW559090A의 점적주입은 잘 용인되었고, 안구 변화 또는 전신 독성을 일으키지 않았다. 최대 무독성 용량(No-Observed-Adverse-Effect; NOAEL)은, 투여간 1시간의 간격을 둔, 50 mg/mL/수행, 1일 12회였다. 제13주 값에 기초하여, 이 용량에서, AUC0-1 (0-24) 노출은 수컷의 경우 19.6 (235) ng.h/mL 및 암컷의 경우 35.5 (426) ng.h/mL였고; Cmax는 수컷의 경우 38.1 g/mL 및 암컷의 경우 68.0 ng/mL였다.

GW559090A의 안구 투여 후 수컷 및 암컷 래빗으로부터의 GW559090에 대한 복합 평균 독성역학 파라미터를 각각 표 2 및 표 3에 나타내었다.

표 2. GW559090A의 안구 투여 후 수컷 래빗으로부터의 GW559090에 대한 복합 평균 독성역학 파라미터

a. 1일 6회 용량

b. 1일 12회 용량

c. 최초 1일 용량 후

NA: 적용가능하지 않음

표 3. GW559090A의 안구 투여 후 암컷 래빗으로부터의 GW559090에 대한 평균 독성역학 파라미터

a. 1일 6회 용량

b. 1일 12회 용량

c. 최초 1일 용량 후

NA: 적용가능하지 않음

"AUC_0-24"는 AUC_0-1에 1일 용량의 총 수를 곱하여 총 1일 추정 AUC를 나타내는 것이다.

실시예 8. 13주 동안의 비글 도그(Beagle Dog)로의 국소 안구 투여

GW559090A를 13주 동안 국소 안구 투여에 의해 비글 도그에게 제공하였다. 동물에게 1일 당 6 또는 12회로, 투여간 1시간 간격을 두고 투여하였다. 치료 그룹은, (1) 비히클 (1일 12회), (2) 30 mg/mL/수행, 1일 6회 제공, (3) 50 mg/mL/수행, 1일 6회 제공, 또는 (4) 50 mg/mL/수행, 1일 12회 제공이었다.

GW559090A를 0.5% 염화나트륨을 갖는 25 mM 포스페이트 완충제 중의 모액으로서 제제화하여 그룹 3 또는 4로의 투여에 사용하기 위한 50 mg/mL 모액을 얻거나, 또는 0.75% 염화나트륨을 함유하는 25 mM 포스페이트 완충제로 추가로 희석하여 그룹 2로의 투여를 위한 30 mg/mL 용액을 얻었다.

13주의 치료 기간 동안, 도그는 0.06 mL의 일정한 용량 부피로 GW559090 또는 비히클 (1일 12회)의 1일 국소 안구 용량을 수용하였다 (1일 6 또는 12회, 투여간 1시간의 간격을 두고). 시험 물품 제제 또는 비히클을, 눈과 직접 치환 피펫의 접촉을 막기 위해 적합한 거리로부터 좌측 눈의 부분적으로 젖혀진 하안검 내로 적하하였다. 이어서, 용량 손실을 막고 외부 안구 표면에 걸쳐 균일한 분포를 돕기 위해, 하안검 및 상안검을 대략 5초 동안 온화하게 결합시켰다. 비-투여 눈은 임의의 시간에 조작되지 않았고, 동물 비-치료 대조군 부위 내에서 유지되었다.

50 mg/mL까지의 농도로 1일 12회까지 좌측 눈의 하안검 하의 시험 물품의 점적주입은 잘 용인되었다. 시험 물품의 국소 또는 전신 효과에 기인하는 것으로 여겨지는 어떠한 결과도 없었다.

결론적으로, 투여간 1시간의 간격을 둔, 30 또는 50 mg/mL/수행, 1일 6회 또는 50 mg/mL/수행, 1일 12회로의 13주 동안의 비글 도그로의 GW559090의 국소 안구 투여는 잘 용인되었고, 안구 변화 또는 전신 독성을 일으키지 않았다. 따라서, 최대 무독성 용량 수준 (NOAEL)은 50 mg/mL/수행, 1일 12회였다. 이 용량에서, 수컷 및 암컷의 제13주 값의 조합에 기초하여, AUC_0-1 노출은 11.2 ng.h/mL였고 (추정 AUC_0-24는 134 ng.h/mL임); Cmax는 28.7 ng/mL였다.

GW559090A의 안구 투여 후 수컷 및 암컷 도그로부터의 GW559090에 대한 독성역학 값의 요약을 각각 표 4 및 표 5에 나타내었다.

표 4. GW559090A의 안구 투여 후 수컷 도그로부터의 GW559090에 대한 평균 독성역학 파라미터

a. 최초 1일 용량 후

b. 1일 6회 용량

c. 1일 12회 용량

NA: 적용가능하지 않음

표 5. GW559090A의 안구 투여 후 암컷 도그로부터의 GW559090에 대한 평균 독성역학 파라미터

a. 최초 1일 용량 후

b. 1일 6회 용량

c. 1일 12회 용량

NA: 적용가능하지 않음

실시예 9. 안구 건조 환자에서의 GW559090의 안전성, 용인성 및 효능을 평가하기 위한 랜덤화된 이중 맹검 플라시보 대조 병용-그룹 디자인

이는 2-부분 연구이다. 부분 1은 하나 이상의 센터에서 수행될 것이고, 건강한 지원자에서의 GW559090의 오픈-라벨 용량 단계적 축소 용인성 시험이다. 용인가능 용량의 식별에 따라, 연구는 부분 2로 이동될 것이다. 부분 2는 안구 건조 질환 (DED)의 치료를 위한 GW559090의 안전성 및 효능을 평가하는 전향적, 플라시보 대조, 랜덤, 이중-맹검, 병용 그룹, 다중-센터 연구이다.

부분 1은 최대 2개의 치료 아암(arm)을 가질 것이다. 최대 10명의 건강한 지원자는 7일의 기간 동안 한쪽 눈에 50 mg/mL GW559090 TID를 수용할 것이다. 이 용량이 10명의 환자에서 용인되는 경우, 연구는 부분 2로 진행될 것이며, 보다 낮은 용량은 탐구되지 않을 것이다. 50 mg/mL가 잘 용인되지 않는 경우, 10명의 건강한 지원자의 제2 코호트는 7일의 기간 동안 한쪽 눈에 30 mg/mL GW559090 TID를 수용할 것이다. 이 용량이 용인되는 경우, 연구는 부분 2로 진행될 것이다. 용인성의 평가는 물리적 결과의 검토 및 용인성 설문에 대한 응답에 기초할 것이다. 어떠한 용량도 용인되지 않으면 연구는 종결될 것이다. 개개의 환자에 대한 프로토콜의 이 시기 참여의 최대 지속기간은 22일 (14일 스크리닝, 7일 GW559090, 1일 후속 조치)일 것이다.

부분 2에서는, 중도 내지 중증 DED를 갖는 대략 90명의 대상체를 플라시보 준비 기간(run-in period)으로 도입하고, 그 동안 이들은 14일에 걸쳐 1 액적의 플라시보 TID를 수용할 것이다. 플라시보 준비 기간 후, 여전히 포함 기준을 충족하며 준비 기간 내에 투여에 대한 순응을 나타낸 대략 76명의 제1 대상체를 2:1 비율 (GW559090:플라시보)로 2개 아암 중 하나로 랜덤화할 것이다. 대상체를 1일 3회 전달된 GW559090의 최고 용인 용량 (부분 1로부터), 또는 1일 3회 플라시보 (비히클) 용량으로 랜덤화할 것이다. 대상체는 최대 12주 동안 배정된 약물을 지속할 것이다. 프로토콜의 이 시기의 대상체의 참여 최대 지속기간은 115일 (14일 스크리닝, 14일 플라시보 기저, 84일 치료, 및 3일 후속 조치)일 것이다.

프로토콜의 부분 2는 안구 건조 집단에서의 개념 입증을 확립하도록 의도된다. 전-임상 모델에서 나타난 효능은 덱사메타손에 비해 열등하지 않음을 고려하면, 의미있는 효과는 눈의 상피 온전성을 직접 반영하는 객관적 생리학적 바이오마커 (각막 착색)에서 나타날 것으로 예상하는 것이 타당하다. 조사자 또는 대상체에 의해, 다중 종점이 보고 바이어스에 적용됨에 따라, 이중 맹검 랜덤화 접근이 적절하다. 이전 연구가 부분적으로 비히클 점안약의 윤활 효과로 인한 확연한 플라시보 효과를 나타내었기 때문에, 플라시보 (비히클) 아암이 포함된다. 따라서, 임상 결과는 이러한 효과를 고려하지 않고는 평가될 수 없다.

실시예 10. 안구 건조 환자에서 GW559090의 안전성, 용인성 및 효능을 평가하기 위한 연구

이 연구에서는, 중도 내지 중증 DED를 갖는 대략 200명의 대상체를 초기에 스크리닝할 것이다. 대략 120명의 대상체를 1:1 비율 (GW559090:플라시보)로 2개 아암 중 하나로 랜덤화할 것이다. 대상체를 1일 3회 전달된 GW559090의 최고 용인 용량 (예를 들어, 50 mg/mL), 또는 1일 3회 플라시보 (비히클) 용량으로 랜덤화할 것이다. 연구의 이 시기의 지속기간은 98 내지 101일 (14일 플라시보 기저, 84일 치료, 및 임의로, 3일 후속 조치)일 것이다.

중간 분석 완료에 따라, 이어서, 추가의 대상체를 병용 용량-범위 연구로 랜덤화할 것이다. 중간 분석이 최고 용인 용량의 TID에 대한 강한 반응을 나타내는 경우, 대략 200명의 대상체를 5개 그룹 중 하나로 랜덤화할 것이다: 플라시보 TID; 3 mg/mL TID; 30 mg/mL TID; 50 mg/mL TID; 또는 50 mg/mL BID. 중간 분석이 최고 용인 용량의 TID에 대한 중도 반응을 나타내는 경우, 대략 140명의 대상체를 4개 그룹 중 하나로 랜덤화할 것이다: 플라시보 TID; 3 mg/mL TID; 30 mg/mL TID; 또는 50 mg/mL TID.

참조문헌

예시적 실시양태

A1. 화학식 I의 화합물:

또는 임의의 그의 제약상 허용되는 이성질체, 수화물, 무수물, 용매화물, 에스테르, 염 형태, 유리 산 또는 염기, 전구약물, 복합체, 컨쥬게이트, 또는 다형체, 및 하나 이상의 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 제약 조성물.

A2. 국소 적용되는 실시양태 A1의 제약 조성물.

A3. 결막낭에 또는 안검에 적용되는 실시양태 A1의 제약 조성물.

A4. 결막하, 전방내, 유리체강내, 테논낭하, 망막하, 맥락막하, 또는 맥락막상으로 적용되는 실시양태 A1의 제약 조성물.

A5. 안구 염증 병태의 치료에 유용한 실시양태 A2, A3 또는 A4의 제약 조성물.

A6. 점안약, 스프레이 또는 미스트의 형태로 적용되는 상기 실시양태 중 임의의 것의 제약 조성물.

A7. 삽입물 또는 다른 전달 장치를 사용하여 적용되는 상기 실시양태 중 임의의 것의 제약 조성물.

A8. 안구 염증 병태의 치료를 필요로 하는 포유류/인간에게 치료 유효량의 화학식 I의 화합물:

또는 임의의 그의 제약상 허용되는 이성질체, 수화물, 무수물, 용매화물, 에스테르, 염 형태, 유리 산 또는 염기, 전구약물, 복합체, 컨쥬게이트, 또는 다형체, 및 하나 이상의 제약상 허용되는 부형제를 투여하는 것을 포함하는, 상기 포유류/인간에서의 안구 염증 병태의 치료 방법.

A9. 조성물을 국소 적용하는 것인 실시양태 A8의 방법.

A10. 조성물을 결막낭에 또는 안검에 적용하는 것인 실시양태 A8의 방법.

A11. 조성물을 결막하, 전방내, 유리체강내, 테논낭하, 망막하, 맥락막하, 또는 맥락막상으로 적용하는 것인 실시양태 A8의 방법.

A12. 조성물을 점안약, 스프레이 또는 미스트의 형태로 적용하는 것인 상기 실시양태 중 임의의 것의 방법.

A13. 조성물을 삽입물 또는 다른 전달 장치를 사용하여 적용하는 것인 상기 실시양태 중 임의의 것의 방법.

A14. 안구 염증 병태의 치료에 사용하기 위한, 화학식 I의 화합물:

A15. 안구 염증 병태의 치료를 필요로 하는 포유류/인간에게 치료 유효량의 화학식 I의 화합물:

또는 임의의 그의 제약상 허용되는 이성질체, 수화물, 무수물, 용매화물, 에스테르, 염 형태, 유리 산 또는 염기, 전구약물, 복합체, 컨쥬게이트, 또는 다형체, 및 하나 이상의 제약상 허용되는 부형제를 투여하는 것을 포함하는, 항원-제시 세포의 림프절로의 이동을 봉쇄하는 것에 의한 상기 포유류/인간에서의 안구 염증 병태의 치료 방법.

A16. 안구 염증 병태의 치료를 필요로 하는 포유류/인간에게 치료 유효량의, (a) 화학식 I의 화합물:

또는 임의의 그의 제약상 허용되는 이성질체, 수화물, 무수물, 용매화물, 에스테르, 염 형태, 유리 산 또는 염기, 전구약물, 복합체, 컨쥬게이트, 또는 다형체를 포함하는 제약 조성물; 및 (b) 시클로스포린 A, 및 하나 이상의 제약상 허용되는 부형제를 투여하는 것을 포함하는, 상기 포유류/인간에서의 안구 염증 병태의 치료 방법.

A17. 안구 염증 병태의 치료를 필요로 하는 포유류/인간에게 치료 유효량의, (a) 화학식 I의 화합물:

또는 임의의 그의 제약상 허용되는 이성질체, 수화물, 무수물, 용매화물, 에스테르, 염 형태, 유리 산 또는 염기, 전구약물, 복합체, 컨쥬게이트, 또는 다형체를 포함하는 제약 조성물; 및 (b) 덱사메타손 염기 및 포스페이트, 디플루프레드네이트, 플루오시놀론, 플루오로메톨론 염기 및 아세테이트, 로테프레드놀, 프레드니솔론 아세테이트 및 포스페이트, 리멕솔론, 및 트리암시놀론 아세토니드로 이루어진 군으로부터 선택된 국소 스테로이드, 및 하나 이상의 제약상 허용되는 부형제를 투여하는 것을 포함하는, 상기 포유류/인간에서의 안구 염증 병태의 치료 방법.

A18. 안구 염증 병태의 치료를 필요로 하는 포유류/인간에게 치료 유효량의, (a) 화학식 I의 화합물:

또는 임의의 그의 제약상 허용되는 이성질체, 수화물, 무수물, 용매화물, 에스테르, 염 형태, 유리 산 또는 염기, 전구약물, 복합체, 컨쥬게이트, 또는 다형체를 포함하는 제약 조성물; 및 (b) 브롬페낙, 디클로페낙, 플루르비프로펜, 케토롤락, 및 네파페낙으로 이루어진 군으로부터 선택된 비-스테로이드 항-염증 약물, 및 하나 이상의 제약상 허용되는 부형제를 투여하는 것을 포함하는, 상기 포유류/인간에서의 안구 염증 병태의 치료 방법.

A19. 안구 염증 병태의 치료를 필요로 하는 포유류/인간에게 치료 유효량의, (a) 화학식 I의 화합물:

또는 임의의 그의 제약상 허용되는 이성질체, 수화물, 무수물, 용매화물, 에스테르, 염 형태, 유리 산 또는 염기, 전구약물, 복합체, 컨쥬게이트, 또는 다형체를 포함하는 제약 조성물; 및 (b) LFA-1 인테그린 길항제, 및 하나 이상의 제약상 허용되는 부형제를 투여하는 것을 포함하는, 상기 포유류/인간에서의 안구 염증 병태의 치료 방법.

A20. LFA-1 인테그린 길항제가 리피테그라스트인 실시양태 A19의 방법.

A21. 조성물을 점안약, 스프레이 또는 미스트의 형태로 적용하는 것인 실시양태 A15, A16, A17, A18, A19, 또는 A20의 방법.

A22. 안구 염증 병태의 치료를 위한 의약의 제조에서의, 화학식 I의 화합물:

또는 임의의 그의 제약상 허용되는 이성질체, 수화물, 무수물, 용매화물, 에스테르, 염 형태, 유리 산 또는 염기, 전구약물, 복합체, 컨쥬게이트, 또는 다형체, 및 하나 이상의 제약상 허용되는 부형제의 용도.

A23. 안구 염증 병태가 안구 건조 질환, 비-감염성 포도막염 (예를 들어, 전방, 중간, 후방, 또는 범포도막염), 비-감염성 결막염, 홍채염, 또는 공막염인 상기 실시양태 중 임의의 것의 제약 조성물, 방법, 또는 용도.

A24. 안구 염증 병태가 안구 건조 질환인 상기 실시양태 중 임의의 것의 제약 조성물, 방법, 또는 용도.

Claims

안구 염증 병태의 치료에 사용하기 위한, 화학식 I의 화합물:

또는 그의 제약상 허용되는 염, 에스테르, 수화물, 용매화물, 다형체, 광학 이성질체, 라세미체, 부분입체이성질체 또는 거울상이성질체를 포함하는 제약 조성물.
제1항에 있어서, 안구 투여에 적합한 제약 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서, 안구 염증 병태가 안구 건조 질환, 비-감염성 포도막염, 비-감염성 결막염, 홍채염, 및 공막염으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 제약 조성물.
안구 투여에 적합한, 화학식 I의 화합물:

또는 그의 제약상 허용되는 염, 에스테르, 수화물, 용매화물, 다형체, 광학 이성질체, 라세미체, 부분입체이성질체 또는 거울상이성질체, 및 하나 이상의 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 제약 조성물.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 점안약, 겔, 연고, 스프레이, 또는 미스트로서 제제화되는 제약 조성물.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 안과용 용액으로서 제제화되는 제약 조성물.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 안과용 용액이 약 10 mg/mL 내지 약 100 mg/mL, 바람직하게는 약 30 mg/mL 내지 약 50 mg/mL의 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 수화물, 용매화물, 다형체, 광학 이성질체, 라세미체, 부분입체이성질체 또는 거울상이성질체를 함유하는 것인 제약 조성물.
제6항 또는 제7항에 있어서, 안과용 용액의 개별 용량이 약 10 ㎕ 내지 약 100 ㎕의 부피를 갖는 것인 제약 조성물.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 제약상 허용되는 염이 칼륨 염인 제약 조성물.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, (a) 시클로스포린 A; (b) 덱사메타손 염기, 덱사메타손 포스페이트, 디플루프레드네이트, 플루오시놀론, 플루오로메톨론 염기, 플루오로메톨론 아세테이트, 로테프레드놀, 프레드니솔론 아세테이트, 프레드니솔론 포스페이트, 리멕솔론, 및 트리암시놀론 아세토니드로 이루어진 군으로부터 선택된 스테로이드; (c) 브롬페낙, 디클로페낙, 플루르비프로펜, 케토롤락, 및 네파페낙으로 이루어진 군으로부터 선택된 비-스테로이드 항-염증제; 및 (d) LFA-1 길항제로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 추가의 치료제를 추가로 포함하는 제약 조성물.
안구 염증 병태의 치료에 사용하기 위한, 화학식 I의 화합물:

또는 그의 제약상 허용되는 염, 에스테르, 수화물, 용매화물, 다형체, 광학 이성질체, 라세미체, 부분입체이성질체 또는 거울상이성질체.
안구 염증 병태의 치료를 위한 의약의 제조에서의, 화학식 I의 화합물:

또는 그의 제약상 허용되는 염, 에스테르, 수화물, 용매화물, 다형체, 광학 이성질체, 라세미체, 부분입체이성질체 또는 거울상이성질체의 용도.
제11항 또는 제12항에 있어서, 안구 염증 병태가 안구 건조 질환, 비-감염성 포도막염, 비-감염성 결막염, 홍채염, 및 공막염으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 화합물 또는 용도.
제12항 또는 제13항에 있어서, 의약이 (a) 시클로스포린 A; (b) 덱사메타손 염기, 덱사메타손 포스페이트, 디플루프레드네이트, 플루오시놀론, 플루오로메톨론 염기, 플루오로메톨론 아세테이트, 로테프레드놀, 프레드니솔론 아세테이트, 프레드니솔론 포스페이트, 리멕솔론, 및 트리암시놀론 아세토니드로 이루어진 군으로부터 선택된 스테로이드; (c) 브롬페낙, 디클로페낙, 플루르비프로펜, 케토롤락, 및 네파페낙으로 이루어진 군으로부터 선택된 비-스테로이드 항-염증제; 및 (d) LFA-1 길항제로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 추가의 치료제와 조합하여 사용하기 위한 것인 용도.
제11항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 제약상 허용되는 염이 칼륨 염인 화합물 또는 용도.