KR20180014042A - 약물을 전달하기 위한 가교된 히알루론산 및 이를 이용한 약학적 제제 - Google Patents

약물을 전달하기 위한 가교된 히알루론산 및 이를 이용한 약학적 제제 Download PDF

Info

Publication number
KR20180014042A
KR20180014042A KR1020177037472A KR20177037472A KR20180014042A KR 20180014042 A KR20180014042 A KR 20180014042A KR 1020177037472 A KR1020177037472 A KR 1020177037472A KR 20177037472 A KR20177037472 A KR 20177037472A KR 20180014042 A KR20180014042 A KR 20180014042A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
hyaluronic acid
agent
crosslinked
drug
loq
Prior art date
Application number
KR1020177037472A
Other languages
English (en)
Inventor
미하일 셀야닌
펠릭스 폴약
키릴 신겔
나탈리야 미하일로바
Original Assignee
알바트로스 테크놀로지스 리미티드
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 알바트로스 테크놀로지스 리미티드 filed Critical 알바트로스 테크놀로지스 리미티드
Publication of KR20180014042A publication Critical patent/KR20180014042A/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6903—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being semi-solid, e.g. an ointment, a gel, a hydrogel or a solidifying gel
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/61—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule the organic macromolecular compound being a polysaccharide or a derivative thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents

Abstract

본 발명은 히알루론산 및 항종양제를 포함하는 수용성 겔 폴리머 매트릭스를 개시한다. 항종양제는 하나 이상의 공유 결합 및/또는 비-공유 결합을 통해 히알루론산과 가교되어, 항종양제의 수용성이 개선된다. 약동학적 실험에서, 항종양제의 Cmax (최고 약물 혈장 농도) 및 Tmax (Cmax에 도달하는데 걸리는 시간)가 개선되는 것으로 확인되었다.

Description

약물을 전달하기 위한 가교된 히알루론산 및 이를 이용한 약학적 제제
관련 출원에 대한 교차 참조
본 출원은 2015년 5월 29일자 미국 가출원 62/168,411에 대한 우선권을 주장한다. 이 미국 가출원의 내용은 참조에 의해 본 명세서에 포함된다.
본 발명은 암 치료에 있어 약물 전달용 비히클, 이의 제조 방법 및 이를 포함하는 약학적 제제에 관한 것이다. 보다 상세하게는, 비-제한적으로, 본 발명은 항암제를 전달하기 위한 가교된 히알루론산, 이의 제조 방법 및 이를 포함하는 약학적 제제에 관한 것이다. 히알루론산에 항암제가 가교될 수 있다.
히알루론산 (HA)은 N-아세틸-D-글루코사민과 β-글루코론산으로 이루어진 천연적으로 생성되는 다가음이온성의 황산화되지 않은 글리코사미노글리칸이다. 히알루론산은 대부분의 척추 동물의 결합 조직, 특히 피부 및 관절의 세포내 매트릭스에 존재하여, 보호하고, 구조를 안정화하며, 충격을 흡수하는 역할을 담당한다. 히알루론산은 천연 상태에서는 용해성이 우수하며, 효소적 대사 및 유리 라디칼 대사를 통한 빠른 턴오버를 가진다.
HA는, 고유한 점탄성 특성과, 이의 생체친화성 및 비-면역원성으로 인해, 관절염에서 관절액의 보충, 눈 수술에서 수술적 보조로서, 그리고 외과적인 상처의 치유 및 재생 촉진 등의 다양한 임상적인 용도로 사용되기에 이르렀다. 최근 들어, HA는 눈, 코, 폐, 비경구 및 국소 등의 다양한 투여 경로를 위한 약물 전달제로서 평가되었다.
활성 성분이 조절-방출되는 방식으로 환자에게 약물을 전달하는 방법은 수십년간 활발하게 연구되어 온 분야로서, 중합체 과학에서의 최근 수많은 개발과 소분자 약물, 핵산, 단백질 및 펩타이드와 같이 보다 취약한 약학적 물질을 전달하고자 하는 필요성에 의해 촉진되어 왔다. 소분자 약물 뿐만 아니라 단백질 및 펩타이드 약물을 투여하는데 사용되는 지속 방출성 (sustained release) 비히클로서 생분해성 입자들이 개발되고 있다. 약물은, 전형적으로, 생체적합한 생분해성 폴리머 매트릭스 안에 캡슐화된다. 폴리머가 분해되거나 및/또는 약물이 폴리머 외부로 확산됨에 따라, 약물은 체내로 방출된다. 이러한 입자를 제조하는데 사용되는 전형적인 폴리머는 폴리(글리콜라이드-co-락티드) (PLGA), 폴리글리콜산, 폴리-p-하이드록시부티레이트 및 폴리아크릴산 에스테르와 같은 폴리에스테르이다. 이들 입자는 약물이 체내에서 분해되는 것을 방지하는 추가적인 이점도 가진다. 이들 입자는, 크기, 조성 및 전달되는 약물에 따라 임의의 이용가능한 경로를 통해 개체에게 투여할 수 있다.
생체친화성은, 지속 방출성 비히클을 약물의 타겟 전달을 위해 사용하는 경우에, 특히 비히클의 체류 시간이 전달되는 약물의 임상적인 효과 보다 훨씬 길 경우, 특히 중요하다. 조절 방출 기법은 약물의 효과를 연장시키고, 치료학적 지수를 개선할 수 있어, 자연히 연장된 작용 기간을 제공하는 문제에 적합할 수 있다.
본 발명은 넓은 의미에서 암 치료를 위한 히알루론산-기반의 약물 전달 비히클에 관한 것이다. 약물 전달 비히클은 공유 결합, 이온 결합 및/또는 정전기적 결합을 통해 히알루론산과 가교된 항암제/항종양제를 포함할 수 있다. 이로써, 약물이 가교제로서 뿐 아니라 치료제로서 작용함으로써 2가지 목적을 제공하는, 가교된 히알루론산 매트릭스를 형성할 수 있다. 이론으로 결부시키고자 하는 것은 아니지만, 본원 전체의 비-제한적인 구현예에 기술되고 예시된 바와 같이, 이러한 약물 전달 비히클은, (1) 약물의 용해성 및 안정성 증진; (2) 암 세포의 병리학적 활성 (예, 암 세포에서 CD44 과발현)을 나타내는 세포에 대한 약물 전달 비히클의 선택성 증가 및/또는 타겟 특이성; 및/또는 (3) 약물 용량 감소에 이르는, 몇가지 이점을 제공할 수 있다. 다른 방식으로, 약물 전달 비히클은 약물을 안정시키고 용해시킬 수 있으며, 또한 동시에 전형적으로 건강한 조직에 대한 항암제와 관련된 몇가지 유해한 부작용을 줄일 수 있다. 이는, 약물의 용량 감소를 통해 달성될 수 있으며, 이로써 암 치료의 비용 효율을 높이고, 전형적으로 항암제와 관련된 잠재적인 부작용을 완화할 수 있다.
이에, 일 구현예에서, 본 발명은 넓은 의미에서는 원하는 세포 또는 조직에 의도한 약물을 특이적으로 전달하기 위한 전달 시스템에 관한 것이다.
본 발명은 암 치료를 위한 약물 전달 비히클로서 가교된 히알루론산에 관한 것이다. 일 구현예에서, 히알루론산은 생물학적 활성 화합물을 이용하여 가교된다. 추가적인 구현예에서, 생물학적 활성 화합물은 예방학적/치료학적 물질이다. 추가적인 구현예에서, 생물학적 활성 화합물은 항종양제이다.
일 구현예에서, 본 발명은 암 치료를 위한 약물 전달 비히클 안에 캡슐화되거나 또는 봉입된 약물을 포함하는 약학적 제제에 관한 것이다. 또 다른 구현예에서, 약물은 항종양제 등의 소분자 화합물이다. 또 다른 구현예에서, 항종양 화합물은 아자시티딘 (azacitidine), 이마티닙 (imatinib), 레날리도미드 (lenalidomide), 에토포시드 (etoposide), 토포테칸 (topotecan), 이리노테칸 (irinotecan), 레트로졸 (letrozole), 랄록시펜 (raloxifene), 사이클로포스파미드 (cyclophosphamide), 메클로르에타민 (mechlorethamine), 카르바질퀴논 (carbazylquinone), 멜팔란 (melphalan), 티오테파 (thiotepa), 부설판 (busulfan), 니무스틴 (nimustine), 카르무스틴 (carmustine), 프로카르바진 (procarbazine), 다카르바진 (dacarbazine), 메토트렉세이트 (methotrexate), 6-머캅토푸린 (6-mercaptopurine), 6-티오구아닌 (6-thioguanine), 아자티오프린 (azathioprine), 5-플루오로우라실 (5-fluorouracil), 프토라푸르 (ftorafur), 플록스우리딘 (floxuridine), 시타라빈 (cytarabine), 안시타빈 (ancitabine), 독시플루리딘 (doxifluridine), 액티노마이신 D (actinomycin D), 블레오마이신 (bleomycin), 미토마이신 (mitomycin), 크로모마이신 A3 (chromomycin A3), 시넬빈 A (cinelbin A), 어클라시노마이신 A (aclacinomycin A), 아드리아마이신 (adriamycin), 페플로마이신 (peplomycin), 시스플라틴 (cisplatin), 미톡산트론 (mitoxantrone), 에피루비신 (epirubicin), 피라루비신 (pirarubicin), 빈블라스틴 (vinblastine), 빈크리스틴 (vincristine), 빈데신 (vindesine), 카르보플라틴 (carboplatin), 에스트라무스틴 포스페이트 (estramustine phosphate), 미토탄 (mitotane), 포르피린 (porphyrin), 파클리탁셀 (paclitaxel) 및 도세탁셀 (docetaxel)로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 물질일 수 있다. 또 다른 측면에서, 이들 항종양 화합물들의 임의 조합이 본 발명의 약물 전달 비히클내에 수용될 수 있다. 또 다른 구현예에서, 항종양 화합물은 붕소-함유성 화합물일 수 있다. 붕소-함유성 화합물은 머캅토운데카하이드로도데카보레이트 (mercaptoundecahydrododecaborate, BSH) 또는 p-보로노페닐알라닌 (p-boronophenylalanine, BPA)일 수 있다. 본 발명의 또 다른 구현예에서, 붕소-함유성 화합물을 포함하는 약학적 제제는 붕소 중성자 포획 요법 (BNCT)에 이용될 수 있다.
일 구현예에서, 약학적 제제는, 육종 및 암종으로부터 선택되는 한가지 질환의 치료에 사용될 수 있으며, 그 예로는, 비-제한적으로, 섬유육종, 점액육종, 지방육종, 연골육종, 골원성 육종, 척색종, 혈관육종, 내피육종 (endotheliosarcoma), 림프관육종 (lymphangiosarcoma), 림프관내피육종 (lymphangioendotheliosarcoma), 윤활막종, 중피종, 유잉 종양, 평활근육종, 횡문근육종, 결장암, 췌장암, 유방암, 난소암, 전립선암, 편평세포암, 기저 세포 암종, 선암종, 한선암종 (sweat gland carcinoma), 피지샘 암종 (sebaceous gland carcinoma), 유두상 암종, 유두상 선암종, 낭선암, 수질 암종 (medullary carcinoma), 기관지암 (bronchogenic carcinoma), 신장 세포 암종, 간종양, 담관암, 융모암, 정상피종, 배아암종 (embryonal carcinoma), 윌름 종양, 자궁경부암, 고환 종양, 폐암, 소 세포 폐암, 방광암, 상피암, 신경교종, 성상세포종, 수모세포종, 두개인두종, 뇌실막세포종, 송과체종, 혈관모세포종, 청신경종양 (acoustic neuroma), 핍지교종, 수막종, 흑색종, 신경모세포종 및 망막모세포종이 있다. 본 발명의 약학적 제제는 또한 난소암 및 유방암과 같은 상피암 및 육종에 적용가능하다.
일 구현예에서, 본 발명은 가교된 히알루론산을 포함하는 연장된 작용을 제공하는 조성물에 관한 것이다.
일 구현예에서, 본 발명은 히알루론산이 항종양제와 같은 소분자 화합물을 이용하여 가교된, 히알루론산 조성물에 관한 것이다.
일 구현예에서, 본 발명은, 히알루론산이, 히알루론산과의 하나 이상의 공유 결합, 이온 결합 및/또는 정전기적 (예, 수소 결합) 상호작용을 제공하는 하나 이상의 항종양제를 이용해 가교된, 히알루론산 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 일 구현예에서, 항종양제는 히알루론산과의 하나 이상의 공유 결합, 이온 결합 및/또는 정전기적 (예, 수소 결합) 상호작용을 제공하는 하나 이상의 관능기를 포함한다. 이러한 관능기에 대한 비-제한적인 예로는 아민 기, 하이드록시 기 및 카르보닐 함유성 관능기 등이 있다.
일 구현예에서, 본 발명은, 히알루론산과의 비-공유적 상호작용을 제공하는 항종양제를 이용해 히알루론산과 가교된, 히알루론산 조성물에 관한 것이다.
일 구현예에서, 본 발명은, 생물학적 활성 화합물을 원하는 세포 또는 조직으로 타겟 전달하는데 사용하기 위한 가교된 히알루론산 조성물에 관한 것이다. 일 구현예에서, 생물학적 활성 화합물은 항종양제이다.
일 구현예에서, 본 발명은 암 치료에 사용하기 위한 가교된 히알루론산 조성물에 관한 것이다. 치료 대상이 되는 암 타입이 히알루론산 매트릭스 안에 캡슐화되는 생물학적 활성 화합물을 결정한다. 암에 대한 비-제한적인 예로는 육종 및 암종이 있으며, 그 예로는, 비-제한적인 예로, 섬유육종, 점액육종, 지방육종, 연골육종, 골원성 육종, 척색종, 혈관육종, 내피육종, 림프관육종, 림프관내피육종, 윤활막종, 중피종, 유잉 종양, 평활근육종, 횡문근육종, 결장암, 췌장암, 유방암, 난소암, 전립선암, 편평 세포암, 기저 세포 암종, 선암종, 한선암종, 피지샘 암종, 유두상 암종, 유두상 선암종, 낭선암, 수질 암종, 기관지암, 신장 세포 암종, 간종양, 담관암, 융모암, 정상피종, 배아암종, 윌름 종양, 자궁경부암, 고환 종양, 폐암, 소 세포 폐암, 방광암, 상피암, 신경교종, 성상세포종, 수모세포종, 두개인두종, 뇌실막세포종, 송과체종, 혈관모세포종, 청신경종양, 핍지교종, 수막종, 흑색종, 신경모세포종 및 망막모세포종 등이 있다. 가교된 히알루론산 조성물은 또한 육종 및 상피암, 예를 들어 난소암 및 유방암을 치료하는데 사용하기 위한 것이다.
의도한 약물의 생체내 거동을 조절하고 약물을 효과적이고 특이적이며 용이하게 세포 또는 조직 등의 타겟에 전달하는, 히알루론산 조성물이 강력하게 요구되고 있다.
일 구현예에서, 본 발명은, 히알루론산을 하나 이상의 생물학적 활성 화합물과 혼합하여 혼합물을 제조하는 단계 및 혼합물을 압출기에 투입하여 가교된 히알루론산을 제조하는 단계를 포함하는, 가교된 히알루론산 제조 방법에 관한 것이다. 일 구현예에서, 생물학적 활성 화합물은 항종양제이다.
일 구현예에서, 본 발명은 가교된 히알루론산을 포함하는 조성물을 치료가 필요한 개체에게 투여하는 단계를 포함하는 암 치료 방법에 관한 것이다. 암에 대한 비-제한적인 예로는 육종 및 암종 등이 있으며, 그 예는, 비-제한적으로, 섬유육종, 점액육종, 지방육종, 연골육종, 골원성 육종, 척색종, 혈관육종, 내피육종, 림프관육종, 림프관내피육종, 윤활막종, 중피종, 유잉 종양, 평활근육종, 횡문근육종, 결장암, 췌장암, 유방암, 난소암, 전립선암, 편평 세포암, 기저 세포 암종, 선암종, 한선암종, 피지샘 암종, 유두상 암종, 유두상 선암종, 낭선암, 수질 암종, 기관지암, 신장 세포 암종, 간종양, 담관암, 융모암, 정상피종, 배아암종, 윌름 종양, 자궁경부암, 고환 종양, 폐암, 소 세포 폐암, 방광암, 상피암, 신경교종, 성상세포종, 수모세포종, 두개인두종, 뇌실막세포종, 송과체종, 혈관모세포종, 청신경종양, 핍지교종, 수막종, 흑색종, 신경모세포종 및 망막모세포종 뿐만 아니라 육종 및 상피암, 예를 들어 난소암 및 유방암 등이 있다.
일 구현예에서, 본 발명은, 건강한 세포/장기에 대한 유해한 부작용은 낮추고, 치료학적 활성은 연장시키고, 보다 나은 효능을 가진, 암의 약물 치료를 위한 히알루론산 조성물에 관한 것이다.
일 구현예에서, 본 발명은 10,000 Da 내지 7,000,000 Da의 분자량을 가진 히알루론산과 항종양제를 포함하는 수용성 겔 폴리머 매트릭스에 관한 것이다. 항종양제는 폴리머 매트릭스와 가교된다. 이러한 폴리머 매트릭스와의 가교는, 항종양제 그 자체와 비교해, 항종양제의 수용성을 향상시킨다. 본 발명의 측면에서, 수용성 겔 폴리머 매트릭스의 항종양제는 개선된 Cmax (최대 약물 혈장 농도) 및 Tmax (Cmax에 도달하는데 걸리는 시간) 값을 가진다. 본 발명의 일 측면에서, 항종양제는 하나 이상의 공유 결합 및/또는 정전기적 결합에 의해 가교된다. 본 발명의 일 측면에서, 가교는 압출 공정에 의해 달성된다.
일 구현예에서, 본 발명은 분자량 10,000 Da 내지 7,000,000 Da의 히알루론산 및 항종양제를 포함하는 약학적 전달 비히클에 관한 것이다. 항종양제는 히알루론산과 가교되어 수용성 겔 폴리머 매트릭스를 형성한다. 이러한 폴리머 매트릭스와의 가교는, 항종양제 자체와 비교해, 항종양제의 수용성을 개선한다. 본 발명의 일 측면에서, 약학적 전달 비히클의 항종양제는 개선된 Cmax (최대 약물 혈장 농도) 및 Tmax (Cmax에 도달하는데 걸리는 시간) 값을 가진다. 본 발명의 일 측면에서, 항종양제는 하나 이상의 공유 결합 및/또는 정전기적 결합에 의해 가교된다. 본 발명의 일 측면에서, 가교는 압출 공정에 의해 달성된다.
일 구현예에서, 본 발명은 가교된 히알루론산 매트릭스의 제조 방법에 관한 것이다. 제조 방법은 히알루론산을 압출하여 압출된 히알루론산을 제조하는 단계, 압출된 히알루론산을 항종양제와 혼합하여 혼합물을 만드는 단계 및 혼합물을 압출하여 가교된 히알루론산 매트릭스를 제조하는 단계를 포함할 수 있다.
또한, 본 발명은 구현예 1 내지 30을 개시한다. 구현예 1은, 분자량 10,000 Da 내지 7,000,000 Da의 히알루론산 및 항종양제를 포함하며, 항종양제가 폴리머 매트릭스와 가교되며, 폴리머 매트릭스가 항종양제의 수용성을 개선하는, 수용성 겔 폴리머 매트릭스이다. 구현예 2는, 항종양제가 하나 이상의 공유 결합 및/또는 정전기적 결합에 의해 가교된, 구현예 1에 따른 수용성 겔 폴리머 매트릭스이다. 구현예 3은, 항종양제가 정전기적 결합에 의해 가교되고; 정전기적 결합이 수소 결합인, 구현예 2에 따른 수용성 겔 폴리머 매트릭스이다. 구현예 4는, 항종양제가 공유 결합에 의해 가교된, 구현예 3에 따른 수용성 겔 폴리머 매트릭스이다. 구현예 5는, 항종양제가 아자시티딘, 이마티닙, 레날리도미드, 에토포시드, 토포테칸, 이리노테칸, 레트로졸, 랄록시펜, 사이클로포스파미드, 메클로르에타민, 카르바질퀴논, 멜팔란, 티오테파, 부설판, 니무스틴, 카르무스틴, 프로카르바진, 다카르바진, 메토트렉세이트, 6-머캅토푸린, 6-티오구아닌, 아자티오프린, 5-플루오로우라실, 프토라푸르, 플록스우리딘, 시타라빈, 안시타빈, 독시플루리딘, 액티노마이신 D, 블레오마이신, 미토마이신, 크로모마이신 A3, 신시넬빈 A, 어클라시노마이신 A, 아드리아마이신, 페플로마이신, 시스플라틴, 미톡산트론, 에피루비신, 피라루비신, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 빈데신, 카르보플라틴, 에스트라무스틴 포스페이트, 미토탄, 포르피린, 파클리탁셀 및 도세탁셀로부터 선택되는, 구현예 1 내지 4 중 어느 하나에 따른 수용성 겔 폴리머 매트릭스이다. 구현예 6은, 히알루론산 : 항종양제의 비율이 약 20: 1 내지 약 2:1인, 구현예 1 내지 5 중 어느 하나에 따른 수용성 겔 폴리머 매트릭스이다. 구현예 7은, 히알루론산 : 항종양제의 비율이 약 10: 1 내지 약 2:1인, 구현예 6에 따른 수용성 겔 폴리머 매트릭스이다. 구현예 8은, 히알루론산 : 항종양제의 비율이 약 5: 1 내지 약 2:1인, 구현예 7에 따른 수용성 겔 폴리머 매트릭스이다. 구현예 9는, 가교가 압출 공정에 의해 달성되는, 구현예 1 내지 8 중 어느 하나에 따른 수용성 겔 폴리머 매트릭스이다. 구현예 10은, 항종양제가 개선된 Cmax (최대 약물 혈장 농도) 및 Tmax (Cmax에 도달하는데 걸리는 시간) 값을 가진, 구현예 1 내지 9 중 어느 하나에 따른 수용성 겔 폴리머 매트릭스이다.
구현예 11은, 분자량 10,000 Da 내지 7,000,000 Da의 히알루론산 및 항종양제를 포함하며, 항종양제가 히알루론산과 가교되어 수용성 겔 폴리머 매트릭스를 형성하며, 폴리머 매트릭스가 항종양제의 수용성을 개선하는, 약학적 전달 비히클이다. 구현예 12는, 항종양제가 하나 이상의 공유 결합 및/또는 정전기적 결합에 의해 가교된, 구현예 11에 따른 약학적 전달 비히클이다. 구현예 13은, 항종양제가 정전기적 결합에 의해 가교되고; 정전기적 결합이 수소 결합인, 구현예 12에 따른 약학적 전달 비히클이다. 구현예 14는, 항종양제가 공유 결합에 의해 가교된, 구현예 12에 따른 약학적 전달 비히클이다. 구현예 15는, 항종양제가 아자시티딘, 이마티닙, 레날리도미드, 에토포시드, 토포테칸, 이리노테칸, 레트로졸, 랄록시펜, 사이클로포스파미드, 메클로르에타민, 카르바질퀴논, 멜팔란, 티오테파, 부설판, 니무스틴, 카르무스틴, 프로카르바진, 다카르바진, 메토트렉세이트, 6-머캅토푸린, 6-티오구아닌, 아자티오프린, 5-플루오로우라실, 프토라푸르, 플록스우리딘, 시타라빈, 안시타빈, 독시플루리딘, 액티노마이신 D, 블레오마이신, 미토마이신, 크로모마이신 A3, 신시넬빈 A, 어클라시노마이신 A, 아드리아마이신, 페플로마이신, 시스플라틴, 미톡산트론, 에피루비신, 피라루비신, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 빈데신, 카르보플라틴, 에스트라무스틴 포스페이트, 미토탄, 포르피린, 파클리탁셀 및 도세탁셀로부터 선택되는, 구현예 11 내지 14 중 어느 하나에 따른 약학적 전달 비히클이다. 구현예 16은, 히알루론산 : 항종양제의 비율이 약 20: 1 내지 약 2:1인, 구현예 11 내지 15 중 어느 하나에 따른 약학적 전달 비히클이다. 구현예 17은, 히알루론산 : 항종양제의 비율이 약 10: 1 내지 약 2:1인, 구현예 16에 따른 약학적 전달 비히클이다. 구현예 18은, 히알루론산 : 항종양제의 비율이 약 5: 1 내지 약 2:1인, 구현예 17에 따른 약학적 전달 비히클이다. 구현예 19는, 가교가 압출 공정에 의해 달성되는, 구현예 11 내지 18 중 어느 하나에 따른 약학적 전달 비히클이다. 구현예 20은, 항종양제가 개선된 Cmax (최대 약물 혈장 농도) 및 Tmax (Cmax에 도달하는데 걸리는 시간) 값을 가진, 구현예 11 내지 19 중 어느 하나에 따른 약학적 전달 비히클이다.
구현예 21은, 히알루론산을 압출하여 압출된 히알루론산을 제조하는 단계; 상기 압출된 히알루론산을 항종양제와 혼합하여 혼합물을 제조하는 단계; 및 상기 혼합물을 압출하여 가교된 히알루론산 매트릭스를 제조하는 단계를 포함하는, 가교된 히알루론산 매트릭스의 제조 방법이다. 구현예 22는, 가교된 히알루론산 매트릭스를 부가적인 히알루론산과 혼합하여 압출하는 단계를 더 포함하는, 구현예 21에 따른 가교된 히알루론산 매트릭스의 제조 방법이다. 구현예 23은, 히알루론산의 분자량이 10,000 Da 내지 7,000,000 Da인, 구현예 21 또는 22에 따른 가교된 히알루론산 매트릭스의 제조 방법이다. 구현예 24는, 항종양제가 아자시티딘, 이마티닙, 레날리도미드, 에토포시드, 토포테칸, 이리노테칸, 레트로졸, 랄록시펜, 사이클로포스파미드, 메클로르에타민, 카르바질퀴논, 멜팔란, 티오테파, 부설판, 니무스틴, 카르무스틴, 프로카르바진, 다카르바진, 메토트렉세이트, 6-머캅토푸린, 6-티오구아닌, 아자티오프린, 5-플루오로우라실, 프토라푸르, 플록스우리딘, 시타라빈. 안시타빈, 독시플루리딘, 액티노마이신 D, 블레오마이신, 미토마이신, 크로모마이신 A3, 신시넬빈 A, 어클라시노마이신 A, 아드리아마이신, 페플로마이신, 시스플라틴, 미톡산트론, 에피루비신, 피라루비신, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 빈데신, 카르보플라틴, 에스트라무스틴 포스페이트, 미토탄, 포르피린, 파클리탁셀 및 도세탁셀로부터 선택되는, 구현예 21 내지 23 중 어느 하나에 따른 가교된 히알루론산 매트릭스의 제조 방법이다. 구현예 25는, 히알루론산 : 항종양제의 비율이 약 20: 1 내지 약 2:1인, 구현예 21 내지 24 중 어느 하나에 따른 가교된 히알루론산 매트릭스의 제조 방법이다. 구현예 26은, 히알루론산 : 항종양제의 비율이 약 10: 1 내지 약 2:1인, 구현예 25에 따른 가교된 히알루론산 매트릭스의 제조 방법이다. 구현예 27은, 히알루론산 : 항종양제의 비율이 약 5: 1 내지 약 2:1인, 구현예 26에 따른 가교된 히알루론산 매트릭스의 제조 방법이다. 구현예 28은, 항종양제가 공유 결합 및/또는 정전기적 결합에 의해 가교된, 구현예 21 내지 27 중 어느 하나에 따른 가교된 히알루론산 매트릭스의 제조 방법이다. 구현예 29는, 항종양제가 정전기적 결합에 의해 가교되고; 정전기적 결합이 수소 결합인, 구현예 28에 따른 가교된 히알루론산 매트릭스의 제조 방법이다. 구현예 30은, 항종양제가 공유 결합에 의해 가교된, 구현예 29에 따른 가교된 히알루론산 매트릭스의 제조 방법이다.
본 발명의 전술한 내용과 그외 이점 및 특징들은 첨부된 그림/도면을 참조하여 예로 제공된 예시적인 구현예들에 대한 비-제한적인 하기 설명을 읽었을 때 보다 명확해 질 것이다.
첨부된 그림/도면에서:
도 1은 2일간 인큐베이션한 후 MM.1S 세포주에 대한 아자시티딘 (Vidaza™)을 포함하는 히알루론산 조성물의 효과를 예시한 것이다; NC - 음성 대조군 (히알루론산); PC - 양성 대조군 (순수 약물); ABP - 약물-HA 복합체; Mix - 압출하지 않은 기계적 혼합물.
도 2는 3일간 인큐베이션한 후 MM.1S 세포주에 대한 아자시티딘을 포함하는 히알루론산 조성물의 효과를 예시한 것이다; NC - 음성 대조군 (히알루론산); PC - 양성 대조군 (순수 약물); ABP - 약물-HA 복합체; Mix - 압출하지 않은 기계적 혼합물.
도 3은 2일간 인큐베이션한 후 K-562 세포주에 대한 이마티닙 (글리벡 (Gleevec)™)을 포함하는 히알루론산 조성물의 효과를 예시한 것이다; NC - 음성 대조군 (히알루론산); PC - 양성 대조군 (순수 약물); ABP - 약물-HA 복합체; Mix - 압출하지 않은 기계적 혼합물.
도 4는 3일간 인큐베이션한 후 K-562 세포주에 대한 이마티닙을 포함하는 히알루론산 조성물의 효과를 예시한 것이다; NC - 음성 대조군 (히알루론산)이고; PC - 양성 대조군 (순수 약물); ABP - 약물-HA 복합체; Mix - 압출하지 않은 기계적 혼합물.
도 5는 2일간 인큐베이션한 후 MM.1S 세포주에 대한 레날리도미드 (Revlimid™)를 포함하는 히알루론산 조성물의 효과를 예시한 것이다; NC -음성 대조군 (히알루론산); PC - 양성 대조군 (순수 약물); ABP - 약물-HA 복합체; Mix - 압출하지 않은 기계적 혼합물.
도 6은 3일간 인큐베이션한 후 MM.1S 세포주에 대한 레날리도미드를 포함하는 히알루론산 조성물의 효과를 예시한 것이다; NC - 음성 대조군 (히알루론산); PC - 양성 대조군 (순수 약물); ABP - 약물-HA 복합체; Mix -기계적 혼합물, 압출 안함.
도 7은 2일간 인큐베이션한 후 HL-60 세포주에 대한 에토포시드 (Etopophos™)를 포함하는 히알루론산 조성물의 효과를 예시한 것이다; NC - 음성 대조군 (히알루론산); PC - 양성 대조군 (순수 약물); ABP - 약물-HA 복합체; Mix -기계적 혼합물, 압출 안함.
도 8은 3일간 인큐베이션한 후 HL-60 세포주에 대한 에토포시드를 포함하는 히알루론산 조성물의 효과를 예시한 것이다; NC - 음성 대조군 (히알루론산); PC - 양성 대조군 (순수 약물); ABP - 약물-HA 복합체; Mix - 압출하지 않은 기계적 혼합물.
도 9는 2일간 인큐베이션한 후 HCT-116 세포주에 대한 토포테칸 (Hycamtin™)을 포함하는 히알루론산 조성물의 효과를 예시한 것이다; NC - 음성 대조군 (히알루론산); PC - 양성 대조군 (순수 약물); ABP - 약물-HA 복합체; Mix -기계적 혼합물, 압출 안함.
도 10은 3일간 인큐베이션한 후 HCT-116 세포주에 대한 토포테칸을 포함하는 히알루론산 조성물의 효과를 예시한 것이다; NC - 음성 대조군 (히알루론산); PC - 양성 대조군 (순수 약물); ABP - 약물-HA 복합체; Mix - 압출하지 않은 기계적 혼합물.
도 11은 2일간 인큐베이션한 후 HCT-116 세포주에 대한 이리노테칸 (Camptosar™)을 포함하는 히알루론산 조성물의 효과를 예시한 것이다; NC - 음성 대조군 (히알루론산); PC - 양성 대조군 (순수 약물); ABP - 약물-HA 복합체; Mix -기계적 혼합물, 압출 안함.
도 12는 3일간 인큐베이션한 후 HCT-116 세포주에 대한 이리노테칸을 포함하는 히알루론산 조성물의 효과를 예시한 것이다; NC - 음성 대조군 (히알루론산); PC - 양성 대조군 (순수 약물); ABP - 약물-HA 복합체; Mix - 압출하지 않은 기계적 혼합물.
도 13은 2일간 인큐베이션한 후 MCF-7 세포주에 대한 레트로졸 (Femara™)을 포함하는 히알루론산 조성물의 효과를 예시한 것이다; NC - 음성 대조군 (히알루론산); PC - 양성 대조군 (순수 약물); ABP - 약물-HA 복합체; Mix - 압출하지 않은 기계적 혼합물.
도 14는 3일간 인큐베이션한 후 MCF-7 세포주에 대한 레트로졸을 포함하는 히알루론산 조성물의 효과를 예시한 것이다; NC - 음성 대조군 (히알루론산); PC - 양성 대조군 (순수 약물); ABP - 약물-HA 복합체; Mix - 압출하지 않은 기계적 혼합물.
도 15는 2일간 인큐베이션한 후 MCF-7 세포주에 대한 랄록시펜 (Evista™)을 포함하는 히알루론산 조성물의 효과를 예시한 것이다; NC - 음성 대조군 (히알루론산); PC - 양성 대조군 (순수 약물); ABP - 약물-HA 복합체; Mix - 압출하지 않은 기계적 혼합물.
도 16은 3일간 인큐베이션한 후 MCF-7 세포주에 대한 랄록시펜을 포함하는 히알루론산 조성물의 효과를 예시한 것이다; NC - 음성 대조군 (히알루론산); PC - 양성 대조군 (순수 약물); ABP - 약물-HA 복합체; Mix - 압출하지 않은 기계적 혼합물.
도 17은 종양 이식 후 0일 - 60일간 비히클 군 및 처리군 동물에서의 시간 경과에 따른 평균 종양 체적을 나타낸 것이다. 에스트로겐 투여하지 않는 인간 MCF-7 유방암 종양 모델에서, 비히클 군 및 처리된 동물에서의 시간 경과에 따른 종양 체적을 각 처리군의 평균 종양 체적으로 표시한다.
도 18은 종양 이식 후 0일에서 49일까지 비히클 군과 처리군 동물에서의 시간 경과에 따른 평균 종양 체적을 나타낸 것이다. 에스트로겐 투여하지 않는 인간 MCF-7 유방암 종양 모델에서, 비히클 군 및 처리군 동물에서의 시간 경과에 따른 종양 체적을 각 처리군의 평균 종양 체적으로 표시한다.
도 19는 순수 약물 (5 mg/kg) 및 HA-레트로졸 복합체 (약물 2 및 5 mg/kg에 해당됨)를 경구 투여한 후 랫의 혈장내 레트로졸의 약동학적 특성을 나타낸 것이다.
도 20은 순수 약물 (50 mg/kg) 및 HA-랄록시펜 복합체 (약물 50 및 15 mg/kg에 해당됨)를 경구 투여한 후 랫의 혈장내 랄록시펜의 약동학적 특성을 나타낸 것이다.
용어 정의
본원에 사용되는 용어 및 표현에 대한 명확하고 일관된 이해를 제공하기 위해, 이하 다수의 정의들이 제공된다. 또한, 달리 정의되지 않는 한, 본원에서 모든 기술 용어 및 과학 용어들은 본 발명이 속하는 기술 분야의 당업자들에게 공통적으로 이해되는 바와 동일한 의미를 가진다.
용어 "부정관사 (a, an)"는, 청구항 및/또는 명세서에서 용어 "포함하는"과 함께 사용되는 경우, "하나"를 의미할 수 있지만, 또한 문맥 상 명확하게 기술되지 않은 한 "하나 이상", "적어도 하나" 및 "하나 또는 2 이상"이라는 의미와 부합할 수 있다. 마찬가지로, 용어 "다른"은 문맥 상 명확하게 기술되지 않은 한 적어도 제2 또는 그 이상을 의미할 수 있다.
본 명세서 및 청구항에 사용되는 바와 같이, 용어 "포함하는" (및 "포함한다 (comprise 및 comprises)"와 같은 임의의 포함하는 형태), "가지는" (및 "가진다 (have 및 has)"와 같은 임의의 가지는 형태), "등의" (및 "등이 있다 (include 및 includes)"와 같은 임의의 포함하는 형태) 또는 "함유하는" (및 "포함한다 (contain 및 contains)"와 같은 임의의 함유하는 형태)은 포괄적이거나 또는 제한이 없는 것을 의미하며, 부가적인, 언급되지 않은 요소 또는 프로세스 단계를 배제하는 것이 아니다.
본 명세서 및 청구항에서, 용어 "구성되는" 및 이의 파생어는 언급된 특징, 요소, 성분, 그룹, 정수 및/또는 단계의 존재를 명시하는 제한적인 용어로 의도되며, 및/또는 또 다른 언급되지 않은 특징, 요소, 성분, 그룹, 정수 및/또는 단계들의 존재는 또한 배제된다.
본원에서, 용어 "필수적으로 구성된"은 언급된 특징, 요소, 성분, 그룹, 정수 및/또는 단계가 존재할 뿐만 아니라 이들 특징, 요소, 성분, 그룹, 정수 및/또는 단계의 기본적인 특성 및 새로운 특성(들)에 실질적으로 영향을 미치지 않는 것이 존재할 수 있음을 명시하는 것으로 의도된다. 비-제한적인 일 측면에서, 본 발명의 기본적인 새로운 특성은, 항종양제를 히알루론산과 가교하는 것이며, 이로써 항종양제의 수용성을 개선/높일 수 있다.
본원에서, 용어 "약", "실질적으로" 및 "대략"은 최종 결과가 현저하게 달라지지 않도록, 수식된 용어에 대한 합리적인 수준에서의 편차를 의미한다. 이들 용어의 정도는, 편차가 이를 수식하는 용어의 의미를 무효화하지 않을 경우, 수식된 용어의 적어도 ±1% 편차를 포함하는 것으로 해석되어야 한다.
본원에서, 용어 "압출기"는 임의의 통상적인 싱글 또는 더블 스크류 압출 장치를 지칭한다.
압출기에서 용어 "체류 시간"은 물질이 투입 포터에서 다이 (die)까지 압출기를 통과하는데 걸리는 시간을 의미한다. 체류 시간은 착색제를 함유한 물질을 소량 투입 포트에 투입함으로써 측정한다. 크로노미터 (chronometer)는 착색제가 배럴에 들어갈 때 시작되며, 착색제가 다이 배출구에서 관찰될 때 정지된다.
용어 "압출물 온도"는 휴대용 열전대를 다이 개구부들 중 하나에 밀어넣어 측정하였을 때 압출기의 다이 배출구에서의 물질의 온도를 의미한다.
본원에서, 용어 "암"은 이의 통례적인 의미로 제시되며, 비정상적인 세포가 제어없이 분열하는 질환에 대한 일반명이다. 암 세포는 근처 조직에 침투할 수 있으며, 혈류 및 림프계를 통해 신체의 다른 부위로 퍼질 수 있다. 암에는 주요한 몇가지 타입들이 존재하는데, 예를 들어 암종은 내부 장기를 라이닝하거나 덮고 있는 피부 또는 조직에서 발생하는 암이다. 육종은 뼈, 연골, 지방, 근육, 혈관 또는 기타 결합 또는 지지 조직에서 발생하는 암이다. 백혈병은 골수와 같이 혈액을 만드는 조직에서 발생한 암으로서, 비정상적인 세포 다량 생산되어 혈류로 들어가게 된다. 림프종은 면역계 세포에서 발생하는 암이다.
본원에서 용어 "유효량" 및 "치료학적 유효량"은, 치료 중인 질환 또는 장애의 증상 완화를 포함하여, 연구자, 수의학자, 의사 또는 그외 임상학자가 얻고자 하는, 조직 시스템, 동물 또는 인간에서, 원하는 치료학적 효능, 생물학적 또는 의학적 반응을 구현하는데 효과적인, 화합물, 물질 또는 화합물을 포함하는 조성물 또는 본원의 조성물의 양을 의미한다.
본원에서, "약제학적으로 허용가능한"이라는 표현은, 적절한 의학적 판단 범위에 해당되며 인간 및 동물의 조직과 접촉 방식으로 사용하는데 적합하며, 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응 또는 기타 문제 또는 합병증이 없으며, 합리적인 효용/위험 비율에 상응하는, 화합물, 물질, 조성물 및/또는 투약 형태를 의미한다.
본원에서, "소분자"라는 표현은, 천연적으로 생성되거나 또는 (예, 화학 합성을 통해) 인공적으로 제조되든 간에, 상대적으로 저 분자량이며, 단백질, 폴리펩타이드 또는 핵산이 아닌, 유기 화합물 및 이의 염을 지칭한다. 전형적으로, 소분자는 약 1500 g/mol 미만의 분자량을 가진다. 또한, 소분자는 전형적으로 복수의 탄소-탄소 결합을 가진다. 공지된 천연적으로 형성되는 소분자로는, 비-제한적으로, 페니실린, 에리트로마이신, 탁솔 및 라파마이신 등이 있다. 공지된 합성 소분자로는, 비-제한적으로, 암피실린, 메티실린, 설파메톡사졸 및 설폰아미드 등이 있다.
본원에서, 용어 "안정화"는 화합물을 특정 상태로 유지시키고, 특정 상태에서 다른 상태로의 변동을 방지하거나 속도를 늦추는 것을 포함한다.
본원에서, 용어 "생물학적 활성"은 생물학적 기능을 매개하는 능력을 지칭한다.
본원에서, 용어 "가교 물질" 및 "가교제"는 하나 이상의 공유 결합 및/또는 비-공유 결합을 통해 히알루론산과 반응할 수 있는 화학 물질을 망라하는 것으로 의도된다. 비-공유 결합에 대한 비-제한적인 예로는 이온 결합, 소수성 상호작용, 수소 결합 및 반 데르 발스 힘 (분산 인력 (dispersion attractions), 쌍극자-쌍극자 및 쌍극자-유발 상호작용) 등이 있다. 본 발명의 일 구현예에서, 가교 물질은 항종양제이다.
본원에서, 용어 "가교된"은 히알루론산의 2개 이상의 폴리머 체인이 가교 물질을 통해 공유 또는 비-공유적으로 결합되는 것을 의미한다. 이러한 가교는, 단일 폴리머 체인에서 또는 2 이상의 체인들 간에 락톤, 무수물 또는 에스테르 형성으로 이어지는 분자간 또는 분자내 탈수와는 구별된다. 그러나, 분자내 가교는 또한 본원에 기술된 조성물에서 발생할 있는 것도 고려된다. 가교 물질은 2개 이상의 분자 (즉, 히알루론산 체인) 간에 공유 및/또는 비-공유 결합을 형성하는 관능기를 2개 이상 포함한다. 본 발명의 일 측면에서, 가교 물질은, 가교가 진행될 수 있도록 히알루론산의 관능기에 상호보완적인 (complimentary) 관능기를 포함한다. 본 발명의 일 구현예에서, 가교 물질은 항종양제이다.
본원에서, 용어 "개체"는 인간 또는 동물을 의미한다. 통상적으로, 동물은 영장류, 설치류, 가축 동물 또는 스포츠 동물과 같은 척추 동물이다. 용어 "환자", "개인" 및 "개체"는 본원에서 상호 호환적으로 사용된다.
본원에서, 용어 "장기적인 작용"은 장기간 작용하는 조성물, 즉, 조성물이 방출된 약물 (예, 항종양제) 자체에서 정상적으로 확인되는 것 보다 연장된 방출 시간을 제공하도록 약동학적 특징을 가진 조성물을 지칭한다.
본원에서, 용어 "약제학적으로 허용가능한 담체"는 "약제학적 담체"와 동의어이며, 인간 등의 개체에게 투여하였을 때 장기간 또는 영구적인 유해 효과가 실질적으로 없는 임의의 담체를 지칭하며, "약제학적으로 허용가능한 비히클, 안정제, 희석제, 첨가제, 보조제 또는 부형제" 등의 용어들을 포괄한다. 비-제한적인 예로, 물, 식염수 및 글리신 등과 같은 수성 매질 등의, 다양한 임의의 약제학적으로 허용가능한 담체가 사용된다.
본 발명의 조성물
본 발명의 히알루론산은 소분자 화합물과 가교된다. 가교를 통해, 소분자 화합물의 용해성이 화합물 그 자체의 용해성에 비해 개선된다. 또한, 히알루론산과의 가교로 수용성이 매우 우수한 겔 구조가 형성되며, 또한 동시에 소분자 화합물의 분해에 대해 개선된 내성이 부여된다. 일 구현예에서, 가교 물질은 항종양제와 같은 소분자 화합물이다 (용어 "항종양제" 및 "항암제"는 본원 전체에서 상호 호환적일 수 있음). 또 다른 구현예에서, 항종양 화합물은 아자시티딘, 이마티닙, 레날리도미드, 에토포시드, 토포테칸, 이리노테칸, 레트로졸, 랄록시펜, 사이클로포스파미드, 메클로르에타민, 카르바질퀴논, 멜팔란, 티오테파, 부설판, 니무스틴, 카르무스틴, 프로카르바진, 다카르바진, 메토트렉세이트, 6-머캅토푸린, 6-티오구아닌, 아자티오프린, 5-플루오로우라실, 프토라푸르, 플록스우리딘, 시타라빈, 안시타빈, 독시플루리딘, 액티노마이신 D, 블레오마이신, 미토마이신, 크로모마이신 A3, 신시넬빈 A, 어클라시노마이신 A, 아드리아마이신, 페플로마이신, 시스플라틴, 미톡산트론, 에피루비신, 피라루비신, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 빈데신, 카르보플라틴, 에스트라무스틴 포스페이트, 미토탄, 포르피린, 파클리탁셀 및 도세탁셀로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상일 수 있다. 또 다른 구현예에서, 항종양 화합물은 붕소-함유성 화합물일 수 있다. 붕소-함유성 화합물은 머캅토운데카하이드로도데카보레이트 (BSH) 또는 p-보로노페닐알라닌 (BPA)일 수 있다. 본 발명의 또 다른 구현예에서, 붕소-함유성 화합물을 포함하는 약학적 제제는 붕소 중성자 포획 요법 (BNCT)에 이용될 수 있다.
본 발명의 또 다른 구현예에서, 가교는, 가교된 히알루론산 네트워크에 포획 또는 함침되도록, 추가적인 양의 항종양제의 존재 하에 수행된다. 가교된 히알루론산 네트워크는 항종양제(들)와 같은 활성 물질(들)에 대한 장기적인 생체이용성을 제공하는 비히클로서 사용된다. 본 발명의 일 구현예에서, 가교된 히알루론산은 압출에 의해 수득된다. 중합, 폴리머 변형 또는 폴리머 블렌드의 상용화 (compatibilization) 등의 공정을 위한 연속 반응조로서 압출기의 사용은, 대중화된 기술들을 수반한다. 반응 압축 (reactive extrusion)의 경우, 중합, 그래프팅, 코폴리머 형성, 분자 네트워크 형성, 가교, 관능화 및 조절성 분해 등의 몇가지 유기 반응들이 압출기에서 수행될 수 있다. 본 발명의 일 구현예에서, 2개의 스크류가 맞물려 동일 방향으로 회전하는 압출기 (TSE)가 사용될 수 있다. 연속 반응조로서 압출기를 이용하는 경우의 한가지 이점은 실질적으로 고상 화학 공정이라는 것이다. 즉, 압출 공정에 실제 용매가 필요하지 않으며; 압출 공정은 전형적으로 반응 부산물을 거의 생성하지 않으며; 압출 공정은 일반적으로 원하는 산물을 우수한 수율로 제공하며; 압출 공정은 불용성 및 열 취약성 출발 물질로부터 고체 산물을 생산할 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 항종양제는, 필요에 따라, 다른 약물과 (또는 3, 4, 5, 6종 이상의 약물)과 적절하게 조합될 수 있으며, 암 치료를 위한 약물 전달 비히클에 수용될 수 있다. 다른 약물로는, 비-제한적으로, 다른 항종양제(들); 중추 신경계 약물 (예, 전신 마취제, 최면제/진통제, 항불안제 등); 말초 신경계 약물 (예, 골격근 이완제, 진경제 등); 순환계 약물 (예, 강심제, 항부정맥제, 이뇨제, 혈압 강하제, 혈관수축제, 혈관이완제, 지질강하제, 기타 순환계 약물); 호흡계 약물 (예, 호흡기 자극제, 진해제, 거담제, 진해성 거담제, 기관지 확장제 등); 소화기계 약물 (예, 진토제, 항팽만제, 위 소화제, 제산제, 기타 소화기계 약물 등); 호르몬제 (예, 뇌하수체 호르몬, 타액선 호르몬, 갑상선 호르몬, 부갑상선 호르몬, 동화작용성 스테로이드 호르몬, 부신 호르몬, 안드로겐 호르몬, 혼합 호르몬, 기타 호르몬 등); 비타민 제제 (예, 비타민 A, 비타민 D, 비타민 B, 비타민 C, 비타민 E, 비타민 K, 혼합 비타민, 기타 비타민 등); 알레르기 약물 (예, 항히스타민제); 항생제 약물 (예, 그람 양성 박테리아 또는 그람 음성 박테리아에 작용하는 약물); 및 항바이러스제 등이 있다.
일 구현예에서, 본 발명에 따른 조성물에 존재하는 히알루론산의 총량은 조성물의 약 50.0% 내지 약 99.5% w/w 범위일 수 있다. 일 구현예에서, 히알루론산의 총량은 조성물의 약 60.0% 내지 약 90.0% w/w 범위일 수 있다. 또 다른 구현예에서, 히을루론산의 총량은 조성물의 약 70.0% 내지 약 80.0% w/w 범위일 수 있다.
일 구현예에서, 본 발명에 따른 조성물에 존재하는 항종양제의 총량은 조성물의 약 0.5% 내지 약 50.0% w/w 범위일 수 있다. 일 구현예에서, 항종양제의 총량은 조성물의 약 10% 내지 약 40% w/w 범위일 수 있다. 또 다른 구현예에서, 항종양제의 총량은 조성물의 약 20% 내지 약 30% w/w 범위일 수 있다.
CD44는 상당수의 포유류 세포 타입들에서 발현된다. CD44는 이의 기본적인 리간드가 히알루론산 (HA)으로서 동정된, 널리 분포하는 세포 표면 당단백질이다. CD44는 세포 증식, 세포 분화, 세포 이동, 혈관신생, 해당 수용체에 대한 사이토카인, 케모카인 및 성장인자의 제시, 및 세포막에 프로테아제 도킹 뿐만 아니라 세포 생존을 위한 신호전달에 참여한다. 이들 생물학적 특성들 모두 정상 세포의 생리학적 활성에 기본이지만, 또한 암 세포의 병리학적 활성과도 연관되어 있다. 동물 실험을 통해, 항체, 안티센스 올리고뉴클레오티드 및 CD44-가용성 단백질에 의한 CD44 타겟팅이 다양한 신생물의 악성 활성을 크게 약화시키는 것으로 입증되었으며, 이는 항-CD44 물질의 치료학적 잠재성을 부각시켰다. CD44 및 이의 변이체는 전형적으로 다양한 암 세포주들에서 발현되기 때문에, 본 발명의 히알루론산 조성물은 의도한 약물을 원하는 세포 또는 조직에 특이적으로 전달하기 위한 적절한 전달 시스템을 구성한다.
일 구현예에서, 본 발명의 가교된 히알루론산 조성물은 세포/침범된 장기가 가진 특정 타겟 부위에 선택적으로 결합한다. 본 발명의 가교된 히알루론산 조성물은 정해진 세포/장기(들) 집단에 대한 타겟 특이성 및 우수한 선택성을 가진다. 본 발명의 일 구현예에서, 타겟 부위는 CD44이다. 전술한 약물 대부분은 어느 정도 효과가 있지만, 정상 세포 대비 종양 세포에 대한 선택성 결핍은 종종 심각한 부작용을 야기한다. 아울러, 약물 내성의 출현도 다수 암을 치료하는데 심각한 문제로 남아있다. 암 화학요법에서 결정적인 문제는 항암제가 건강한 조직에 심각한 독성 부작용을 나타낸다는 것이다. 예외없이, 이런 부작용들은 용량 감소, 치료 지연 또는 치료의 중단으로 이어진다. 본 발명의 히알루론산 조성물은 정상적인 건강한 세포에 의한 활성 약물의 흡수는 감소시키면서 암 세포 또는 조직내 약물의 유입 및 체류는 강화한다. 또한, 본 발명의 히알루론산 조성물의 타겟 전달은 활성 약물의 생체이용성을 개선시키면서 조성물의 지속 방출을 통해 이의 효과를 극대화한다.
본 발명의 일 구현예에서, 히알루론산은 타겟에 특이적으로 결합하며, 약물 전달 비히클을 타겟/종양 부위로 향하게 한다. 타겟에 결합되면, 약물이 서서히 방출되어, 타겟/종양 부위에 내재화된다. 세포독성 약물의 세포내 방출은 세포성 효소, 바람직하게는 종양 세포에서 발현되는 효소에 의해 수반된다.
본 발명의 용도 및 방법
도 1-16에 예시된 바와 같이, 다양한 암 세포주에 대한 아자시티딘 (HA-아자시티딘 (9: 1 w/w), 도 1 및 2); 이마티닙 (HA-이마티닙 (9: 1 w/w); 도 3 및 4); 레날리도미드 (HA-레날리도미드 (9: 1 w/w); 도 5 및 6); 에토포시드 (HA- 에토포시드 (9: 1 w/w); 도 7 및 8); 토포테칸 (HA-토포테칸 (9: 1 w/w); 도 9 및 10); 이리노테칸 (HA-이리노테칸 (9: 1 w/w); 도 11 및 12); 레트로졸 (HA-레트로졸 (9: 1 w/w); 도 13 및 14); 및 랄록시펜 (HA-랄록시펜 (9: 1 w/w); 도 15 및 16)의 효과를 조사하였다. 모든 히알루론산-약물 조성물은 압출 공정을 이용해 제조되었다. 그 활성은 약 2일 또는 3일 동안 노출시킨 후 표면화된 세포독성 효과 측면에서 측정하였다. 음성 대조군 히알루론산 (HA)은 플레이트 16개 중 어느 플레이트에서도 최고 용량 10 ㎍/ml에서 확실한 세포독성을 나타내지 않았다. HA는 일반적으로 안전한 것으로 간주되기 때문에, 활성 (세포독성)의 증가는 예상되지 않았으며, 전혀 관찰되지 않았다. 그러나, HA-복합체화된 분자 (예, 가교된)가 non-CD-44 양성 세포 보다 높은 친화성으로 CD-44 양성 세포를 타겟팅하여, 정상 세포와 암 세포의 혼합 집단에서 효능 증가를 부여할 수 있다는 것이 입증되었다.
도 3-4 및 9-10에 예시된 바와 같이, HA-이마티닙 및 HA-토포테칸 복합체는 시험관내 세포 독성과 암 세포주에 대한 효능을 용량 및 시간 의존적인 방식으로 발휘하였다. HA-아자시티딘 복합체에서도, 그러나 더 높은 용량에서, 유사한 결과를 관찰할 수 있었다 (도 1-2). HA-레날리도미드 복합체 (도 5-6)는 MM.1S 세포에 대한 저해 활성이 거의 없거나 전혀 발휘하지 않았다. 양성 대조군 및 모 API는 HL-60 세포에서 강력한 3일 세포독성 및 저해 활성을 나타내었지만, HA-에토포시드 복합체는 활성을 거의 발휘하지 않았다.
본 발명의 일 구현예에서, 가교된 히알루론산은 약물 전달 플랫폼으로서 사용된다. 본 발명의 또 다른 구현예에서, 히알루론산은 항종양제의 수용성을 개선하는 매트릭스를 제공한다. 본 발명의 일 구현예에서, 히알루론산은 하나 이상의 공유성, 이온성 및/또는 정전기적 (예, 수소 결합) 상호작용에 의해 약물 (예, 항종양제)과 가교된다. 가교는, 항종양제의 생체이용성의 개선될 뿐만 아니라 이의 용해성을 개선시키도록, 항종양제의 안정화 효과를 제공한다.
생체이용성이 매우 낮은 가용성이 좋지 않은 약물들이 다수 존재한다. HA는, 물에 대한 높은 친화성으로 인해, 유기 분자 (예, 약물)와 HA의 복합체 형성으로 수용성이 매우 높은 겔이 구축된다. 일 측면에서, 본 발명은 수용성이 높은 HA-약물 복합체에 관한 것이다. 이들 복합체는 모 약물 단독과 비교해 약물에 생체이용성 증가를 부여하는 것으로 추측된다. 나아가, 약물이 HA-약물 복합체 형태일 경우, 더 낮은 약물 농도 (즉, 저 용량)로 사용하여, 관찰되는 독성 및 부작용은 감소시키지만 약물의 효능은 약화시키지 않을 것으로 추측된다.
HA는 단백질 수용체 CD44에 대해 높은 친화성을 가지기 때문에, 종양 세포 상에 CD44가 과발현되는 것으로 관찰되므로, HA-약물 복합체는 약물 (예, 항종양제)를 종양 조직 및 장기로 타겟 전달할 수 있을 것으로 추측된다. 또한, 타겟 전달은 약물 효율을 높이는 추가적인 이점을 제공해준다.
몇가지 HA-약물 복합체를 제조 및 조사하였다: HA-이리노테칸, HA-랄록시펜; 및 HA-레트로졸. 이리노테칸은 양호한 수용성을 나타내지만, 랄록시펜 및 레트로졸은 수용성이 매우 낮다. 실험시, Cmax (최대 약물 혈장 농도) 및 Tmax (Cmax에 도달하는데 걸리는 시간) 값들을 측정하였다. 이리노테칸의 경우, HA-이리노테칸 복합체는 모 약물 이상의 어떠한 현저한 개선을 보이지 않았다. 이는 이리노테칸 (25 mg/ml)의 양호한 수용성을 감안하면, 놀랍지 않았다. 그러나, 랄록시펜의 경우, HA-랄록시펜 복합체는, 복합체화되지 않은 약물과 비교해, Cmax 및 Tmax 값 둘다 현저하게 개선된 것으로 나타났다: Cmax (μM) 0.84 및 Tmax (h) 3.5 (표 6A) vs Cmax (μM) 0.19 및 Tmax (h) 4.5. (표 7A). 유사한 결과는 레트로졸에서도 관찰할 수 있었는데, 또한 복합체화되지 않은 약물과 비교해, Cmax 및 Tmax 값 둘다 현저하게 개선된 것으로 나타났다: Cmax (μM) 11.38 및 Tmax (h) 2.3 (표 8A) vs Cmax (μM) 4.24 및 Tmax (h) 4.5. (표 9A). 비슷한 결과들은 ng/mL의 농도들에서도 수득되었다 (표 6B vs 7B 및 8B vs 9B).
실험
이하, 본 발명에 따른 다양한 가교된 히알루론산 조성물의 제조를 예시한 다수의 실시예들이 제공된다. 하기 비-제한적인 실시예들은 본 발명을 예시하기 위한 것이다.
HA-약물 복합체를 제조하기 위한 일반 공정
본 발명의 일 구현예에서, 반응 압출 공정을 이용해 HA-약물 복합체 (9: 1, 중량비)를 제조하였다. 반응 압출 공정에서, 약물이 HA 매트릭스에 가교되게 된다.
히알루론산을 압출기를 통해 통과시켜, 포스트 압출된 히알루론산 (post extruded hyaluronic acid)을 수득하였다. 이 포스트 압출된 히알루론산의 분액을 약물과 (1:1) 혼합한 다음 기계 믹서에서 약 두(2) 시간 동안 추가로 혼합하였다. 그런 다음, 조성물을 압출기를 통해 통과시켰다. 본 발명의 일부 구현예에서, 조성물을 2회 이상 압출기를 통과시켰다. 제조된 압출된 조성물을 부가적인 포스트 압출된 히알루론산과 혼합하고, 약 2시간 동안 기계 믹서에서 혼합하였다. 마지막으로, 이 조성물에 대해 추가로 압출 과정을 실시하였다.
p.o. 투여 후 혈장내 약물 농도 정량
랄록시펜, 레트로졸 및 이리노테칸 및 이의 대사산물 SN-38의 혈장내 약물 농도를 SD 수컷 랫에 p.o. 투여한 후 정량하였다. 랄록시펜의 약동학 파라미터를 평가하기 위해, 랄록시펜을 HA 복합체 [HA-랄록시펜 (HA-R)]로서 또는 HA 가교없이 [랄록시펜 (R)], 50 mg/kg (순수 약물, HCl 염) 농도로 투여하였다. 레트로졸의 약동학 파라미터를 평가하기 위해, 레트로졸을 HA 복합체 [HA-레트로졸 (HA-L)]로서 또는 HA 가교없이 [레트로졸 (L)], 5 mg/kg (순수 약물, 유리 염기) 농도로 투여하였다. 이리노테칸의 약동학 파라미터를 평가하기 위해, 이리노테칸을 HA 복합체 [HA-이리노테칸 (HA-I)]로서 또는 HA 가교없이 [이리노테칸 (I)], 50 mg/kg (순수 약물, HCl 염) 농도로 투여하였다. 정량은 짧은 LC 컬럼에서 빠른 농도 구배를 이용해 행해진 선택적인 MRM 모드로 수행하였다.
재료
SD 랫 혈장 K2-EDTA는 BioreclamationIVT (Baltimore, MD, USA)사에서 구입하였다.
장치
분석용 저울 메틀러 토레도 (Model AT201); 에펜도르프 미세원심분리기 (Model 5424); LC/MS/MS AB/SCIEX 4000 QTRAP (자동샘플러 G 1367 A, 컬럼 히터 G1316A 및 바이너리 펌프 G1312A로 구성된 Agilent 1100 series HPLC 시스템). HPLC 등급의 아세토니트릴; ACS 등급의 암모늄 포르메이트; 암모늄 아세테이트 및 포름산 (98%)은 Fisher Scientific 사에서 입수하였다. 물은 Millipore (Bedford, MA, USA) 사의 Milli-Q Synthesis A10 초순수 워터 시스템으로 정제하였다.
동물 및 샘플 수집 프로토콜
생체내 프로토콜
랄록시펜의 경우, SD 수컷 랫들로 구성된 하나의 그룹 (동물 6마리/그룹)에 HA-랄록시펜 (HA-R) 500 mg/kg을 p.o. 투여량으로 투여하였으며, 이는 순수 약물 (HCl 염) 50 mg/kg에 해당되며, 한 그룹 (동물 6마리/그룹)에는 랄록시펜 50 mg/kg을 경구 투여량으로 투여하였다.
레트로졸의 경우, SD 수컷 랫들로 구성된 하나의 그룹 (동물 6마리/그룹)에 HA-레트로졸 (HA-L) 50 mg/kg을 p.o. 투여량으로 투여하였으며, 이는 순수 약물 (HCl 염) 5.0 mg/kg에 해당되며, 한 그룹 (동물 6마리/그룹)에는 레트로졸 5.0 mg/kg을 경구 투여량으로 투여하였다.
이리노테칸의 경우, SD 수컷 랫들로 구성된 하나의 그룹 (동물 6마리/그룹)에 HA-이리노테칸 (HA-I) 500 mg/kg을 p.o. 투여량으로 투여하였으며, 이는 순수 약물 (HCl 염) 50 mg/kg에 해당되며, 한 그룹 (동물 6마리/그룹)에는 이리노테칸 50 mg/kg을 경구 투여량으로 투여하였다.
0, 30분, 1시간, 3시간, 6시간, 24시간, 30시간 및 48시간 경과 시점에 혈액 샘플을 채취하였다. 모든 혈장 샘플들은 원심분리하여 수득하고, -80℃에서 냉동시켰다. 혈장을 드라이아이스 상에서 바이오파마시 플랫폼으로 이동시켜, 추출 및 LC/MS/MS 분석할 때까지 -80℃에서 보관하였다 (표 1).
표 1 : SD 수컷 랫에서의 실험 요약.
화합물 투여량1 시점
HA-R 50 mg/kg1 투여 전, 30분, 1시간, 3시간, 6시간, 24시간, 30시간, 48시간
R 50 mg/kg
HA-L 5.0 mg/kg2
L 5.0 mg/kg
HA-I 50 mg/kg1
I 50 mg/kg
1 순수 약물에 대한 당량, HCl 염; 2 순수 약물에 대한 당량.
샘플 분석
이리노테칸 및 SN-38
혈장 튜브를 얼음 위에서 해동시키고, 조작하는 동안 얼음 위에 보관하였다. 혈장 샘플을 볼텍스 혼합하고, 40 ㎕ 씩 에펜도르프 튜브에 파이펫으로 분주하였다. 2M NaF 수용액 10 ㎕를 빨리 첨가하여, 혈장 에스테라제에 의한 이리노테칸의 분해를 최소화하였다. 내부 표준물질 (SN-22 - 0.5 μM/아세토니트릴) 100 ㎕를 첨가하여 단백질을 석출시켰다. 튜브를 볼텍스 혼합하고, 13,000 rpm에서 5분간 원심분리하였다. 그런 후, 상층액 40 ㎕를 HPLC 96-웰 플레이트에 이동시키고, 5mM 암모늄 포르메이트 수용액 pH 4.0을 2배 부피로 첨가하여 혼합하였다. 블랭크 SD 랫 혈장에서 10 μM에서 0.002 μM까지 연속 희석하여 캘리브레이션 곡선을 구하였다. 표준 혈장 샘플을 전술한 바와 같이 처리하였다.
랄록시펜
혈장 샘플을 볼텍스 혼합하고, 20 ㎕ 씩 에펜도르프 튜브에 파이펫으로 분주하였다. 내부 표준물질 (라베탈롤 - 0.5 μM/아세토니트릴) 40 ㎕를 첨가하여 단백질을 석출시켰다. 튜브를 볼텍스 혼합하고, 13,000 rpm에서 5분간 원심분리하였다. 그런 후, 상층액 40 ㎕를 HPLC 96-웰 플레이트에 이동시키고, 0.2% 포름산 수용액을 2배 부피로 첨가하여 혼합하였다. 블랭크 SD 랫 혈장에서 10 μM에서 0.002 μM까지 연속 희석하여 캘리브레이션 곡선을 구하였다. 표준 혈장 샘플을 전술한 바와 같이 처리하였다.
레트로졸
혈장 튜브를 얼음 위에서 해동시켰다. 혈장 샘플을 볼텍스 혼합하고, 20 ㎕ 씩 에펜도르프 튜브에 파이펫으로 분주하였다. 아세토니트릴 40 ㎕를 첨가하여 단백질을 석출시켰다. 튜브를 볼텍스 혼합하고, 13,000 rpm에서 4.5분간 원심분리하였다. 그런 후, 상층액 20 ㎕를 HPLC 96-웰 플레이트에 이동시키고, 5 mM 암모늄 아세테이트 수용액을 2배 부피로 첨가하여 혼합하였다. 블랭크 SD 랫 혈장에서 10 μM에서 0.002 μM까지 연속 희석하여 캘리브레이션 곡선을 구하였다. 표준 혈장 샘플을 전술한 바와 같이 처리하였다.
생물학적 분석
Phenomenex Luna C8(2) 30 x 2 mm (5 ㎛)에서 0.7 mL/min으로 농도 구배 용출을 수행하여 크로마토그래피를 수행하였다. 주입 부피는 4 ㎕였다. 전체 수집 시간은 4.5분이었다. 샘플을 LC-MS/MS를 이용해 선택적인 MRM 모드로 분석하였다. 캘리브레이션 곡선에 대한 피크 면적 비율과 샘플의 정량을 분석 소프트웨어 버전 1.6.2를 사용해 계산하였다. 캘리브레이션 곡선을, 이차 가중치 (quadratic weighted) 1/x 회귀 (regression)를 이용하여, 분석물/내부 표준물질의 피크 면적 비율 대 액면 (nominal) 분석물 농도를 이용해 그래프로 작성하였다.
표 2A : SD 수컷 랫 (그룹 34)에서 HA-이리노테칸 500 mg/kg (순수 약물 50 mg/mL에 해당됨, HCl 염)을 경구 투여량으로 투여한 후 혈장내 이리노테칸 (μM) 농도.
시간 (hr) 그룹 34 랫 번호 #
127 128 129 82 83 84 평균 SD
0.5 0.008 0.049 0.007 0.008 0.028 0.002 0.017 0.018
1 0.007 0.036 0.008 0.016 0.021 0.004 0.015 0.012
3 0.014 0.043 0.008 0.102 0.105 0.010 0.047 0.046
6 0.008 0.018 0.120 0.075 0.030 0.003 0.042 0.046
24 <LOQ <LOQ <LOQ <LOQ <LOQ <LOQ - -
30 <LOQ <LOQ <LOQ <LOQ <LOQ <LOQ - -
48 <LOQ <LOQ <LOQ <LOQ <LOQ <LOQ - -
AUC 0-inf
[μM/h] 		0.10 0.27 1.12 1.13 0.42 0.05 0.51 0.49
C max (μM) 0.014 0.049 0.120 0.102 0.105 0.010 0.067 0.049
T max (h) 3 0.5 6 3 3 3 3.1 1.7
C 6h (μM) 0.008 0.018 0.120 0.075 0.030 0.003 0.042 0.046
표 2B : SD 수컷 랫 (그룹 34)에서 HA-이리노테칸 500 mg/kg (순수 약물 50 mg/mL에 해당됨, HCl 염)을 경구 투여량으로 투여한 후 혈장내 이리노테칸 (ng/mL) 농도.
시간 (hr) 그룹 34 랫 번호 #
127 128 129 82 83 84 평균 SD
0.5 5.1 30.4 4.1 4.8 17.6 1.4 10.6 11.2
1 4.3 22.3 5.1 9.9 13.2 2.7 9.6 7.4
3 8.6 26.5 5.0 63.8 65.2 6.1 29.2 28.5
6 4.9 11.5 74.6 46.9 18.4 2.1 26.4 28.6
24 <LOQ <LOQ <LOQ <LOQ <LOQ <LOQ - -
30 <LOQ <LOQ <LOQ <LOQ <LOQ <LOQ - -
48 <LOQ <LOQ <LOQ <LOQ <LOQ <LOQ - -
AUC 0-inf
[μM/h]
C max (μM) 8.6 30.4 74.6 63.8 65.2 6.1 41.5 30.4
T max (h) 3.0 0.5 6.0 3.0 3.0 3.0 3.1 1.7
C 6h (μM) 4.9 11.5 74.6 46.9 18.4 2.1 26.4 28.6
표 3A : SD 수컷 랫 (그룹 35)에서 이리노테칸 50 mg/kg (순수 약물, HCl 염)을 경구 투여량으로 투여한 후 혈장내 이리노테칸 (μM) 농도.
시간 (hr) 그룹 35 랫 번호 #
133 134 135 88 89 90 평균 SD
0.5 0.190 0.243 0.247 0.020 0.029 0.054 0.130 0.108
1 0.318 0.335 0.178 0.052 0.053 0.028 0.161 0.139
3 0.125 0.146 0.267 0.062 0.086 0.018 0.117 0.086
6 0.226 0.168 0.361 0.245 0.092 0.025 0.186 0.119
24 0.002 0.010 0.003 0.003 0.001 0.004 0.004 0.003
30 0.003 0.005 0.005 0.003 0.003 0.005 0.004 0.001
48 <LOQ <LOQ <LOQ <LOQ <LOQ <LOQ - -
AUC 0-inf
[μM/h] 		3.23 2.84 4.87 2.86 1.31 0.51 2.60 1.53
C max (μM) 0.318 0.335 0.361 0.245 0.092 0.054 0.234 0.131
T max (h) 1 1 6 6 6 0.5 3.417 2.836
C 6h (μM) 0.003 0.005 0.005 0.003 0.03 0.005 0.004 0.001
표 3B : SD 수컷 랫 (그룹 35)에서 이리노테칸 50 mg/kg (순수 약물 HCl 염)을 경구 투여량으로 투여한 후 혈장내 이리노테칸 (ng/mL) 농도.
시간 (hr) 그룹 35 랫 번호 #
133 134 135 88 89 90 평균 SD
0.5 118.4 151.7 154.2 12.3 17.9 33.5 81.3 67.4
1 198.1 208.6 111.0 32.6 33.2 17.3 100.1 86.5
3 78.0 90.7 166.2 38.9 53.6 11.1 73.1 53.7
6 140.7 104.9 224.8 152.8 57.4 15.7 116.0 74.1
24 1.4 6.2 1.7 1.9 0.9 2.6 2.4 1.9
30 1.7 3.1 2.9 1.6 2.1 3.2 2.5 0.7
48 <LOQ <LOQ <LOQ <LOQ <LOQ <LOQ - -
AUC 0-inf
[μM/h]
C max (μM) 198.1 208.6 224.8 152.8 57.4 33.5 145.9 81.7
T max (h) 3.0 0.5 6.0 3.0 3.0 3.0 3.1 1.7
C 6h (μM) 140.7 104.9 224.8 152.8 57.4 15.7 116.0 74.1
표 4A : SD 수컷 랫 (그룹 34)에서 HA-이리노테칸 500 mg/kg (순수 약물 50 mg/mL에 해당됨, HCl 염)을 경구 투여량으로 투여한 후 혈장내 SN-38 (μM) 농도.
시간 (hr) 그룹 34 랫 번호 #
127 128 129 82 83 84 평균 SD
0.5 0.063 0.089 0.040 0.051 0.105 0.026 0.062 0.030
1 0.067 0.100 0.037 0.083 0.105 0.058 0.075 0.026
3 0.101 0.104 0.068 0.131 0.116 0.067 0.098 0.026
6 0.068 0.056 0.151 0.104 0.096 0.049 0.087 0.038
24 <LOQ <LOQ <LOQ <LOQ <LOQ <LOQ - -
30 <LOQ <LOQ <LOQ <LOQ <LOQ <LOQ - -
48 <LOQ <LOQ <LOQ <LOQ <LOQ <LOQ - -
AUC 0-inf
[μM/h] 		0.98 0.78 -1) 1.92 2.17 0.81 1.33 0.66
C max (μM) 0.101 0.104 0.151 0.131 0.116 0.067 0.112 0.029
T max (h) 3 0.5 6 3 3 3 3.1 1.7
C 6h (μM) 0.068 0.056 0.151 0.104 0.096 0.049 0.087 0.038
1 AUCo-inf로 계산 불가
표 4B : SD 수컷 랫 (그룹 34)에서 HA-이리노테칸 500 mg/kg (순수 약물 50 mg/mL에 해당됨, HCl 염)을 경구 투여량으로 투여한 후 혈장내 SN-38 (ng/mL) 농도.
시간 (hr) 그룹 34 랫 번호 #
127 128 129 82 83 84 평균 SD
0.5 24.9 34.8 15.5 19.9 41.2 10.1 24.4 11.8
1 26.2 39.1 14.6 32.7 41.3 22.6 29.4 10.2
3 39.5 40.8 26.8 51.6 45.5 26.2 38.4 10.1
6 26.6 22.0 59.3 40.6 37.8 19.3 34.3 14.9
24 <LOQ <LOQ <LOQ <LOQ <LOQ <LOQ - -
30 <LOQ <LOQ <LOQ <LOQ <LOQ <LOQ - -
48 <LOQ <LOQ <LOQ <LOQ <LOQ <LOQ - -
AUC 0-inf
[μM/h]
C max (μM) 39.5 40.8 59.3 51.6 45.5 26.2 43.8 11.3
T max (h) 3 1 6 3 3 3 3.1 1.7
C 6h (μM) 26.6 22.0 59.3 40.6 37.8 19.3 34.3 14.9
표 5 : SD 수컷 랫 (그룹 35)에서 이리노테칸 50 mg/kg (순수 약물, HCl 염)을 경구 투여량으로 투여한 후 혈장내 SN-38 (μM) 농도.
시간 (hr) 그룹 35 랫 번호 #
133 134 135 88 89 90 평균 SD
0.5 0.305 0.266 0.413 0.094 0.137 0.128 0.224 0.125
1 0.170 0.185 0.264 0.124 0.134 0.087 0.160 0.062
3 0.122 0.117 0.220 0.129 0.113 0.033 0.123 0.059
6 0.154 0.140 0.240 0.182 0.156 0.065 0.156 0.057
24 0.002 0.018 0.007 0.013 0.008 0.019 0.011 0.007
30 0.008 0.017 0.012 0.013 0.022 0.019 0.015 0.005
48 <LOQ <LOQ <LOQ <LOQ <LOQ <LOQ - -
AUC 0-inf
[μM/h] 		2.34 2.55 3.76 2.72 2.37 1.48 2.54 0.74
C max (μM) 0.305 0.266 0.413 0.182 0.156 0.128 0.242 0.107
T max (h) 0.5 0.5 0.5 6 6 0.5 2.3 2.8
C 6h (μM) 0.008 0.017 0.012 0.013 0.022 0.019 0.015 0.005
표 6A : SD 수컷 랫 (그룹 30)에서 HA-랄록시펜 500 mg/kg (순수 약물 50 mg/mL에 해당됨, HCl 염)을 경구 투여량으로 투여한 후 혈장내 랄록시펜 (μM) 농도.
시간 (hr) 그룹 30 랫 번호 #
79 80 81 85 86 87 평균 SD
0.5 0.028 0.033 0.050 0.039 0.035 0.040 0.038 0.007
1 0.073 0.080 0.198 0.139 0.111 0.148 0.125 0.047
3 0.381 0.964 0.905 0.939 0.915 0.559 0.777 0.245
6 0.767 0.335 0.707 0.546 0.613 0.262 0.538 0.202
24 0.020 0.013 0.013 0.031 0.033 0.007 0.020 0.011
30 0.010 0.010 0.006 0.022 0.021 0.006 0.012 0.007
48 <LOQ 0.007 <LOQ 0.003 0.002 0.005 - -
AUC 0-inf
[μM/h] 		9.44 6.44 10.15 8.95 9.56 4.58 8.19 2.19
C max (μM) 0.767 0.964 0.905 0.939 0.915 0.559 0.84 0.155
T max (h) 6 3 3 3 3 3 3.5 1.2
C 6h (μM) 0.010 0.010 0.006 0.022 0.021 0.006 0.012 0.007
표 6B : SD 수컷 랫 (그룹 30)에서 HA-랄록시펜 500 mg/kg (순수 약물 50 mg/mL에 해당됨, HCl 염)을 경구 투여량으로 투여한 후 혈장내 랄록시펜 (ng/mL) 농도.
시간 (hr) 그룹 30 랫 번호 #
79 80 81 85 86 87 평균 SD
0.5 14.5 16.7 25.5 20.0 17.7 20.6 19.2 3.8
1 37.4 40.8 101.2 70.8 56.6 75.4 63.7 23.9
3 194.4 491.4 461.6 479.1 466.4 284.9 396.3 125.1
6 391.1 171.0 360.5 278.3 312.8 133.6 274.6 103.0
24 10.3 6.5 6.5 15.9 16.9 3.6 10.0 5.5
30 5.0 5.2 2.9 11.1 10.6 3.0 6.3 3.7
48 <LOQ 3.8 0.6 1.5 1.0 2.4 1.9 1.3
AUC 0-inf
[μM/h]
C max (μM) 391.1 491.4 461.6 479.1 466.4 284.9 429.1 78.8
T max (h) 6.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.5 1.2
C 6h (μM) <LOQ 3.8 0.6 1.5 1.0 2.4 1.9 1.3
표 7A : SD 수컷 랫 (그룹 31)에서 랄록시펜 50 mg/kg (순수 약물, HCl 염)을 경구 투여량으로 투여한 후 혈장내 랄록시펜 (μM) 농도.
시간 (hr) 그룹 31 랫 번호 #
91 92 93 97 98 99 평균 SD
0.5 0.012 0.009 0.023 0.019 0.030 0.010 0.017 0.009
1 0.023 0.007 0.028 0.021 0.048 0.013 0.023 0.014
3 0.094 0.081 0.324 0.151 0.363 0.062 0.179 0.131
6 0.087 0.095 0.249 0.180 0.244 0.082 0.156 0.079
24 0.006 0.015 0.003 0.004 0.022 0.002 0.009 0.008
30 0.007 0.005 0.003 0.003 0.017 0.008 0.007 0.005
48 <LOQ 0.067 0.003 0.013 0.003 0.025 0.022 0.027
AUC 0-inf
[μM/h] 		1.35 2.60 3.53 2.58 4.07 1.59 2.62 1.06
C max (μM) 0.094 0.095 0.324 0.180 0.363 0.082 0.190 0.125
T max (h) 3 6 3 6 3 6 4.5 1.6
C 6h (μM) <LOQ 0.067 0.003 0.013 0.003 0.025 0.022 0.027
표 7B : SD 수컷 랫 (그룹 31)에서 랄록시펜 50 mg/kg (순수 약물 HCl 염)을 경구 투여량으로 투여한 후 혈장내 랄록시펜 (ng/mL) 농도.
시간 (hr) 그룹 31 랫 번호 #
91 92 93 97 98 99 평균 SD
0.5 6.2 4.4 11.6 9.6 15.5 5.1 8.7 4.3
1 11.8 3.6 14.2 10.6 24.4 6.5 11.9 7.2
3 48.0 41.2 165.3 77.0 185.2 31.7 91.4 67.0
6 44.6 48.7 126.8 91.7 124.4 41.6 79.6 40.0
24 3.2 7.5 1.7 2.1 11.3 1.1 4.5 4.1
30 3.6 2.4 1.4 1.5 8.9 4.0 3.6 2.8
48 <LOQ 34.0 1.3 6.7 1.6 13.0 11.3 13.5
AUC 0-inf
[μM/h]
C max (μM) 48.0 48.7 165.3 91.7 185.2 41.6 96.8 63.7
T max (h) 3 6 3 6 3 6 4.5 1.6
C 6h (μM) <LOQ 34.0 1.3 6.7 1.6 13.0 11.3 13.5
표 8A : SD 수컷 랫 (그룹 32)에서 HA-레트로졸 50 mg/kg (순수 약물 5.0 mg/mL에 해당됨, HCl 염)을 경구 투여량으로 투여한 후 혈장내 레트로졸 (μM) 농도.
시간 (hr) 그룹 32 랫 번호 #
103 104 105 109 110 111 평균 SD
0.5 10.09 8.48 7.58 7.24 8.86 9.93 8.70 1.17
1 10.74 9.70 9.16 9.30 14.01 10.42 10.56 1.81
3 10.39 10.19 11.58 10.44 10.03 11.30 10.66 0.63
6 8.846 8.528 8.445 9.355 9.557 7.192 8.65 0.84
24 6.956 6.411 6.108 8.496 9.113 5.100 7.03 1.51
30 6.826 6.378 6.418 8.512 7.597 6.556 7.05 0.85
48 6.095 4.527 4.832 5.864 4.572 4.592 5.08 0.71
AUC 0-inf
[μM/h] 		1429.3 616.7 760.1 748.5 548.8 882.2 831 316
C max (μM) 10.74 10.19 11.58 10.44 14.04 11.30 11.38 1.40
T max (h) 1 3 3 3 1 3 2.3 1.0
C 6h (μM) 6.095 4.527 4.832 5.864 4.572 4.592 5.080 0.708
표 8B : SD 수컷 랫 (그룹 32)에서 HA-레트로졸 50 mg/kg (순수 약물 5.0 mg/mL에 해당됨, HCl 염)을 경구 투여량으로 투여한 후 혈장내 레트로졸 (ng/mL) 농도.
시간 (hr) 그룹 32 랫 번호 #
103 104 105 109 110 111 평균 SD
0.5 2877 2419 2164 2065 2527 2833 2481 335
1 3065 2767 2612 2655 4005 2972 3013 517
3 2963 2908 3303 2979 2862 3225 3040 180
6 2524 2433 2409 2669 2727 2052 2469 240
24 1985 1829 1743 2424 2600 1455 2006 432
30 1947 1820 1831 2429 2167 1870 2011 242
48 1739 1291 1379 1673 1304 1310 1449 202
AUC 0-inf
[μM/h]
C max (μM) 3065 2908 3303 2979 4005 3225 3248 400
T max (h) 1 3 3 3 1 3 2.3 1.0
C 6h (μM) 1738.9 1291.5 1378.6 1673.1 1304.4 1310.0 1449 202
표 9A : SD 수컷 랫 (그룹 33)에서 레트로졸 5.0 mg/kg을 경구 투여량으로 투여한 후 혈장내 레트로졸 (μM) 농도.
시간 (hr) 그룹 33 랫 번호 #
115 116 117 121 122 123 평균 SD
0.5 1.916 1.537 1.317 2.977 1.078 3.050 1.98 0.85
1 2.089 2.640 1.881 3.801 1.815 4.342 2.76 1.07
3 2.143 3.979 3.024 5.867 3.492 5.674 4.03 1.48
6 2.649 3.626 3.319 4.773 3.981 4.073 3.74 0.72
24 2.356 3.117 2.415 3.407 3.194 2.717 2.87 0.44
30 1.943 2.488 2.527 3.504 2.647 2.714 2.64 0.50
48 1.442 2.044 2.198 2.671 2.090 1.748 2.03 0.42
AUC 0-inf
[μM/h] 		175.0 265.1 580.9 414.9 268.1 233.3 323 149
C max (μM) 2.649 3.979 3.319 5.867 3.981 5.674 4.24 1.28
T max (h) 6 3 6 3 6 3 4.5 1.6
C 6h (μM) 1.442 2.044 2.198 2.671 2.090 1.748 2.03 0.42
표 9B : SD 수컷 랫 (그룹 33)에서 레트로졸 5.0 mg/kg을 경구 투여량으로 투여한 후 혈장내 레트로졸 (ng/mL) 농도.
시간 (hr) 그룹 33 랫 번호 #
115 116 117 121 122 123 평균 SD
0.5 546.7 438.4 375.6 849.3 307.5 870.2 565 242
1 595.9 753.2 536.7 1084.5 517.7 1238.9 788 305
3 611.4 1135.2 862.6 1673.9 996.3 1618.8 1150 422
6 755.8 1034.4 946.8 1361.7 1135.8 1161.9 1066 206
24 672.3 889.3 689.1 972.0 911.2 775.2 818 124
30 554.3 709.9 720.9 999.6 755.1 774.3 752 144
486 411.4 583.1 627.0 762.1 596.4 498.8 580 119
AUC 0-inf
[μM/h]
C max (μM) 755.8 1135.2 946.8 1673.9 1135.8 1618.8 1211 366
T max (h) 6 3 6 3 6 3 4.5 1.6
C 6h (μM) 411.4 583.1 627.0 762.1 596.4 498.8 580 119
도 19 및 20에 예시된 바와 같이, 랄록시펜 및 레트로졸의 생체이용성은 HA와 조합된 후 증가된다. 중요하게도, 랄록시펜 및 레트로졸의 생체이용성이 실질적으로 증가함에도 불구하고, 약물 독성의 검출가능한 증가는 양쪽 화합물에서 발견되지 않았다. 이론으로 결부시키고자 하는 것은 아니지만, 약물 성분의 개선된 생체이용성은 HA와의 가교 결합의 결과이며, 가교로 투여전 HA-약물 복합체를 물에 용해하였을 때 콜로이드와 비슷한 시스템 형성을 유도하는 것으로 추측된다.
인간 유방암 MCF-7 세포를 가진 Crl:NU(NCr)-foxn1 nu 누드 마우스에 대한, 4주간 이십회 (2) 경구 투여하였을 때의 HA-레트로졸 복합체의 항종양 활성
HA-레트로졸 복합체 (Aluron Biopharma Inc., Montreal, Qc, Canada). HA 복합체내 레트로졸의 함량은 10 중량%이다. 레트로졸 (순도 98%)은 캐나다 퀘벡 몬트리올에 소재한 ChemRF Laboratories Inc. 사에서 구입하였다. 카르복시메틸셀룰로스 소듐 (CMC)은 캐나다 온타리오 오크빌에 소재한 Sigma-Aldrich Inc. 사에서 구입하였다.
레트로졸
1주일에 한번 레트로졸 용액을 준비하였다. 레트로졸 (15 mg)을 30.0 mL 멸균 주사용수 중에 재구성하여, 투여량 5 mg/kg (0.5 mg/mL)을 만들었다. 재구성한 용액을 ~8시간 동안 시간 당 ~5분씩 볼텍싱한 다음 실온에서 밤새 세워 두었다. 다음날, 용액을 빙랭한 물이 충진된 수조 소니케이터를 사용해 10-20분간 초음파를 처리하였다. 용해 후, 레트로졸 용액을 바이얼 5개에 분주하고 (5일 투여용), 4℃에서 보관하였다.
HA-레트로졸
HA-레트로졸 용액 세개 (3)를 일주일에 한번 제조하였다: 저 용량 (0.05 mg/mL), 중간 용량 (0.5 mg/mL) 및 고 용량 (5.0 mg/mL). HA-레트로졸 (150 mg)을 멸균 주사용수 30 mL 중에 재구성하여, 용량 50 mg/kg (5 mg/mL)을 만들었다. 재구성한 용액을 ~8시간 동안 1시간 마다 ~5분간 볼텍싱한 다음 실온에서 밤새 세워두었다. 다음날, 용액을 마지막으로 ~1분간 볼텍싱하고, 바이얼 5개 (5일 투여용)에 분주하여 4℃에 보관하였다. 5 mg/kg 용액을 적절한 부피의 주사용수로 희석하여 (1:10), 저 용량 HA-레트로졸 용액 0.5 mg/kg (0.05 mg/mL)을 준비하였다. 또한, 저 용량 HA-레트로졸 용액을 바이얼 5개 (5회 투여용)에 분주하여, 투여하기 위해 4℃에서 보관하였다.
CMC-레트로졸
CMC-레트로졸 용액을 일주일에 한번 제조하였다. 용액은 3단계로 제조하였다: 1) 레트로졸 (15 mg)을 멸균 주사용수 30.0 mL 중에 재구성하여, 용량 5 mg/kg (0.5 mg/mL)을 만들고; 2) 이 레트로졸 용액을 CMC (135 mg)와 혼합한 다음; 3) 재구성한 용액을 ~8시간 동안 1시간 마다 ~5분간 볼텍싱한 다음 실온에서 밤새 세워두었다. 다음날, 용액을 마지막으로 한번 볼텍싱하고, 빙랭한 물이 충진된 수조 소니케이터를 사용해 10-20분간 초음파를 처리하였다. 용해 후, CMC-레트로졸 용액을 바이얼 5개 (5일 투여용)에 분주하여 4℃에 보관하였다. 수득되는 용량은 50 mg/kg CMC-레트로졸 (CMC 4.5 mg/mL + 레트로졸 0.5 mg/mL)이었다.
종양 세포주
인간 유방암 세포주 MCF-7은 Sigma-Aldrich (ECACC; lot # 12C002) 사에서 구입하였다.
동물
Crl:NU(NCr)-foxn1nu 암컷 누드 마우스 (35-42일령) 칠십두마리 (72)를 미국 메사추세츠 윌밍턴에 위치한 Charles River Laboratories Inc. 사에서 구입하였다.
종양 접종
각 동물의 좌측 아래쪽 옆구리에 암 세포를 피하 주사하여 Crl:NU(NCr)-foxn1nu 암컷 누드 마우스 72마리에서 MCF-7 종양을 유도하였다. 다수 조직들에서 발견되는 복잡한 세포외 환경을 모방하고 (에스트로겐 보충이 없는 조건에서) 종양 증식을 촉진하기 위해, EHS (Engelbreth-Holm-Swarm) 마우스 육종 세포에 의해 분비되는 젤라틴 단백질 매트릭스인 Matrigel® (Corning Life Sciences, Corning, NY, USA; Lot No. 4209014)에서 종양 세포를 준비하였다. 간략하게는, MCF-7 세포에 트립신을 처리하여 원심분리하고, 멸균 포스페이트-완충화된 염수 중에 원심분리 (400 g, 5분, 실온)하여 한번 세척하였다. 트리판 블루 배제 검사에 의해 세포 수를 측정하고, 빙랭한 멸균 포스페이트-완충화된 염수 중에 농도를 조정하여, 0.1 mL 당 MCF-7 세포 1 x 107개로 준비하였다. 그런 후, 세포를 Matrigel® (1 : 1)과 조심스럽게 혼합하여, 주입할 때까지 얼음 위에 두었다. 동물의 좌측 아래쪽 옆구리에 25G 바늘을 사용해 세포 0.2 mL (1 x 107개/마우스)을 피하 접종하였다. 주입이 끝나면, 바늘을 180°로 돌려, 액체 (세포)가 누출되지 않게 하였다. 종양 접종이 끝나면 트리판 블루 배제 검사에 의해 세포 생존성을 측정하였다.
시험 물질의 투여 (처리 스케줄)
투여 용액은 20G 게이지의 바늘을 사용하여 경구 투여 (위관 영양 공급)에 의해 4주간 이십회 (20) 투여하였다. 투여 부피는 0.2 mL (~10 mL/kg)이었다.
종양 이식 후 0일부터 60일까지 비히클 그룹과 처리 동물에서 시간 경과에 따른 평균 종양 체적을 도 17에 나타낸다. 종양 체적은 변화가 적었지만, 최고 용량의 HA-레트로졸 (50 mg/kg)은 인간 MCF-7 유방 종양에 대해 유의한 활성을 나타내는 것으로 확인되었다 (p=0.039) (표 10). HA-레트로졸은 5 mg/kg 및 0.5 mg/kg에서 비활성이었으므로, 용량-의존적인 상관성은 없었다 (각각 p=0.915 및 p=0.570). 비-융합형 레트로졸 (자유 형태) 또한 비활성인 것으로 확인되었다. CMC-레트로졸은 약간의 활성이 있었지만, 관찰된 활성은 유의하지 않았다 (표 10). 비-융합형 레트로졸 (5 mg/kg), HA-레트로졸 (50 mg/kg), HA-레트로졸 (0.5 mg/kg) 및 CMC-레트로졸 (50 mg/kg)에서, 종양이 제거 (촉진가능한 덩어리가 없음)로 이어지는 종양의 축소가 관찰되었다 (표 11). HA-레트로졸을 최고 용량 (50 mg/kg)으로 반복적으로 경구 투여한 후 유의한 종양 축소가 관찰되었지만 (p=0.039), 저 용량 (5 및 0.5 mg/kg)에서는 그렇지 않았다. 따라서, 유의한 항종양 활성을 나타내는 HA-레트로졸의 최소 유효 용량 (MED)은 50 mg/kg으로 확정되었다. HA-레트로졸 50 mg/kg은 순수 레트로졸 용량 5 mg/kg에 해당된다. 순수 레트로졸 (5 mg/kg)은 활성이 없는 것으로 확인되었고, CMC-레트로졸 (50 mg/kg)은 다소 활성을 나타내었지만, 관찰된 활성이 유의하진 않았다.
표 10 : 비히클 그룹 및 처리 마우스에서 실험 종료시 (60일) 인간 유방암 MCF-7 종양의 평균 체적 및 통계학적 분석 (스튜던트 t-검정).
처리 평균 종양 체적 ( mm3 )±SD 통계 분석: 무처리 vs 처리 동물 (p 값) * 통계적 유의성 (p≤0.05)
무처리 74.0 ± 8.2 N/A N/A
레트로졸 5 mg/kg 54.0 ± 13.9 0.258 x
HA-레트로졸 50 mg/kg 38.7 ± 7.5 0.039 o
HA-레트로졸 5 mg/kg 67.2 ± 6.0 0.915 x
HA-레트로졸 0.5 mg/kg 71.8 ± 12.7 0.570 x
CMC-레트로졸 50 mg/kg 50.0 ± 11.8 0.085 x
* GraphPad Prism version 6으로 측정.
표 11 : 실험 종료시 종양이 없어진 동물 (촉진가능한 덩어리가 없음)의 수 및 종양이 관찰되지 않은 (시작) 일.
처리 종양이 없어진 치유 동물의 수 종양이 관찰되지 않은 시작일
무처리 0/10 N/A
레트로졸 5 mg/kg 3/10 39, 52, 52
HA-레트로졸 50 mg/kg 2/10 36, 56
HA-레트로졸 5 mg/kg 0/9 N/A
HA-레트로졸 0.5 mg/kg 1/10 60
CMC-레트로졸 50 mg/kg 2/10 28, 39
4주간에 걸쳐 이십회 (20) 경구 투여하였을 때 17β-에스트라디올 보충 공급된 인간 유방암 MCF -7 세포를 가진 Crl:NU(NCr) - foxn1 nu 암컷 누드 마우스에서의 HA- 랄록시 펜 복합체의 항종양 활성
HA-랄록시펜 복합체 (Aluron Biopharma Inc., Montreal, Qc, Canada). HA 복합체내 랄록시펜의 함량은 10 중량%이다. 랄록시펜 하이드로클로라이드 염 (순도 98%)은 캐나다 퀘벡 몬트리얼에 위치한 ChemRF Laboratories Inc. 사에서 구입하였다. 카르복시메틸셀룰로스 소듐 (CMC)은 캐나다 온타리오 오크빌에 위치한 Sigma-Aldrich Inc. 사에서 구입하였다.
랄록시펜
랄록시펜 용액을 일주일에 한번 준비하였다. 랄록시펜 (75 mg)을 15.0 mL 멸균 주사용수 중에 재구성하여, 투여량 50 mg/kg (0.5 mg/mL)을 만들었다. 재구성한 용액을 간단히 볼텍싱하고, 용액을 빙랭한 물로 충진된 수조 소니케이터를 사용해 10-20분간 초음파를 처리하였다. 용해 후, 랄록시펜 용액을 바이얼 5개에 분주하고 (5일 투여용), 4℃에서 보관하였다.
HA-랄록시펜
HA-랄록시펜 용액 세개 (3)를 일주일에 한번 제조하였다: 저 용량 (0.5 mg/mL), 중간 용량 (5.0 mg/mL) 및 고 용량 (50.0 mg/mL). HA-랄록시펜 (15 mg, 150 mg 및 1 g)을 각각 멸균 주사용수 30 mL, 50 mL 및 20 mL 중에 재구성하여, 용량 5 mg/kg (순수 약물 0.5 mg/mL에 해당됨), 50 mg/kg (5.0 mg/mL) 및 500 mg/kg (50 mg/mL)을 만들었다. 재구성한 용액을 ~8시간 동안 1시간 마다 ~5분간 볼텍싱한 다음 실온에서 밤새 세워두었다. 다음날, 용액을 ~1분간 볼텍싱하고, 바이얼 5개 (5일 투여용)에 분주하여 4℃에 보관하였다.
CMC-랄록시펜
CMC-랄록시펜 용액을 일주일에 한번 제조하였다. 용액은 3단계로 제조하였다: 1) 랄록시펜 (100 mg)을 멸균 주사용수 20.0 mL 중에 재구성하여, 용량 50 mg/kg (5.0 mg/mL)을 만들고 - 재구성한 용액을 간단히 볼텍싱한 다음 빙랭한 물이 담긴 수조 소니케이터를 사용해 10-20분간 초음파를 처리함; 2) 이 랄록시펜 용액을 CMC (900 mg)와 3-웨이 스탑코크 시린지 (BD, Franklin Lakes, NJ, USA)를 사용해 혼합한 다음; 3) 재구성한 용액을 ~8시간 동안 1시간 마다 ~5분간 볼텍싱한 다음 실온에서 밤새 세워두었다. 다음날, 용액을 마지막으로 한번 볼텍싱하고, 바이얼 5개 (5일 투여용)에 분주하여 4℃에 보관하였다. 수득되는 용량은 500 mg/kg CMC-랄록시펜 (CMC 45 mg/mL + 랄록시펜 5 mg/mL)이었다.
종양 세포주
인간 유방암 세포주 MCF-7은 Sigma-Aldrich (ECACC; lot # 12C002) 사에서 구입하였다. 에스트로겐-의존적인 MCF-7 종양의 증식을 뒷받침하기 위해, 종양 이식 하루 전에 마우스의 종양 이식 측의 반대측에 트로이소플루란 마취 하에, 17β-에스트라디올 60-일 방출 펠릿 (Innovative Research of America, Sarasota, FL) 0.72 mg을 10G 투관침을 사용해 s.c.로 이식하였다.
동물
Crl:NU(NCr)-foxn1nu 암컷 누드 마우스 (35-42일령) 칠십두마리 (72)를 미국 메사추세츠 윌밍턴에 위치한 Charles River Laboratories Inc. 사에서 구입하였다.
종양 접종
각 동물의 좌측 아래쪽 옆구리에 암 세포를 피하 투여하여 Crl:NU(NCr)-foxn1nu 암컷 누드 마우스 72마리에서 MCF-7 종양을 유도하였다. 간략하게는, MCF-7 세포에 트립신을 처리하여 원심분리하고, 멸균 포스페이트-완충화된 염수 중에 원심분리 (400 g, 5분, 실온)하여 한번 세척하였다. 트리판 블루 배제 검사에 의해 세포 수를 측정하고, 멸균 포스페이트-완충화된 염수 중에 농도를 조정하여, 0.1 mL 당 MCF-7 세포 1 x 107개로 준비하였다. 동물의 좌측 아래쪽 옆구리에 25G 바늘을 사용해 세포 0.1 mL (1 x 107개/마우스)을 피하 접종하였다. 주입이 끝나면, 바늘을 180°로 회전시켜, 액체 (세포)가 누출되지 않게 하였다. 종양 접종이 끝나면 트리판 블루 배제 검사에 의해 세포 생존성을 측정하였다.
시험 물질의 투여 (처리 스케줄)
투여 용액은 20G 게이지의 바늘을 사용하여 경구 투여 (위관 영양 공급)에 의해 4주간 이십회 (20) 투여하였다. 투여 부피는 0.2 mL (~1O mL/kg)이었다.
종양 이식 후 0일에서 49일 사이의 비히클 그룹과 처리 동물에서 시간 경과에 따른 평균 종양 체적을 도 18에 나타낸다. 최고 용량의 HA-랄록시펜 (500 mg/kg)만 인간 MCF-7 유방 종양에 대해 유의한 활성을 나타내는 것으로 확인되었다 (p=0.0178) (표 12). HA-랄록시펜은 50 mg/kg 및 5.0 mg/kg에서 비활성이었으므로, 용량-의존적인 상관성은 없었다. 비-융합형 랄록시펜 (자유 형태) 또한 비활성인 것으로 확인되었다. HA-랄록시펜을 500 mg/kg으로 처리한 동물에서는, 유의한 항암 활성이 있더라도, 종양 축소는 관찰되지 않았다. 그러나, HA-랄록시펜은 주어진 용법에서 (4주간 20회 투여) 종양 증식의 속도를 늦추는 것으로 확인되었다 (도 18). HA-랄록시펜은 500 mg/kg 수준에서, 인간 유방암 MCF-7 종양에 대해 높은 활성을 나타낸다. 유의한 항종양 활성을 나타내는 HA-랄록시펜의 최소 유효 용량 (MED)는, 5 및 50 mg/kg의 다른 두가지 (2) 용량에서는 활성이 없었기 때문에, 500 mg/kg으로 확정되었다. HA-랄록시펜 500 mg/kg은 랄록시펜 용량 50 mg/kg에 해당된다. 순수 랄록시펜은 종양 증식을 억제하지 않았으며, 이는 MCF-7 이종이식 마우스 모델에서 0.3, 3.0 mg/kg/day (Brady H., Desai S., Gayo-Fung L.M. et al. Effects of SP500263, a Novel, Potent Antiestrogen, on Breast Cancer Cells and in Xenograft Models. Cancer Res. 62 (2002) 1439-1442) 및 13.8 mg/kg (27 μmole/kg)(Okamoto Y., Liu X., Suzuki N., et al. Increased antitumor potential of the raloxifene prodrug, raloxifene diphosphate. Int. J. Cancer 122 (2008) 2142-2147)에서 약물의 효능 결핍을 제시한 문헌의 데이타와 부합된다. 그러나, 본 실험에서, HA와의 가교가 랄록시펜의 생체이용성을 증가시키는 것으로 입증되었으며, HA-랄록시펜이 유일한 활성 화합물이다. 마지막으로, HA-랄록시펜은 500 mg/kg에서 CMC-랄록시펜 500 mg/kg 보다 더 강력한 것으로 확인되었다.
표 12 : 비히클 그룹 및 처리 마우스에서 실험 종료시 (49일) 인간 유방암 MCF-7 종양의 평균 체적 및 통계학적 분석 (스튜던트 t-검정).
처리 평균 종양 체적 (mm 3 ) ±SD 통계 분석: 무처리 대 처리 동물 (p 값) * 통계적 유의성 (p≤0.05)
무처리 2140.6 ± 546.2 N/A N/A
랄록시펜 50 mg/kg 1919.5 ± 104.1 0.480 X
HA-랄록시펜 500 mg/kg 942.2 ± 287.4 0.018 O
HA-랄록시펜 50 mg/kg 1892.2 ± 257.3 0.524 X
HA-랄록시펜 5 mg/kg 1787.7 ± 300.1 0.406 X
CMC-랄록시펜 500 mg/kg 1303.5 ± 357.4 0.079 X
* GraphPad Prism version 6으로 측정.
비-융합형 레트로졸 (5 mg/kg), HA-레트로졸 (50 mg/kg), HA-레트로졸 (0.5 mg/kg) 및 CMC-레트로졸 (50 mg/kg)에서, 종양 축소로 인해 종양이 제거된 동물 (촉진가능한 덩어리가 없음)이 관찰되었다 (표 11). HA-레트로졸을 최고 용량 (50 mg/kg)으로 반복적으로 경구 투여한 후 유의한 종양 축소가 관찰되었지만 (p=0.039), 저 용량 (5 및 0.5 mg/kg)에서는 그렇지 않았다. 따라서, 유의한 항종양 활성을 나타내는 HA-레트로졸의 최소 유효 용량 (MED)은 50 mg/kg으로 확정되었다. HA-레트로졸 50 mg/kg은 순수 레트로졸 용량 5 mg/kg에 해당된다. 순수 레트로졸 (5 mg/kg)은 활성이 없는 것으로 확인된 반면, CMC-레트로졸 (50 mg/kg)은 다소 활성을 나타내었지만, 관찰된 활성이 유의하진 않았다.
본 발명은 현재 바람직한 예로 간주되는 것을 참조하여 기술되어 있지만, 본 발명이 언급된 예들로 한정되지 않는 것으로 이해되어야 한다. 한편, 본 발명은 첨부된 청구항의 사상 및 범위에 포함되는 다양한 변형 및 등가의 구성을 포괄하는 것으로 의도된다.

Claims (30)

  1. 수용성 겔 폴리머 매트릭스로서,
    분자량 10,000 Da 내지 7,000,000 Da의 히알루론산; 및 항종양제를 포함하며;
    상기 항종양제가 폴리머 매트릭스와 가교되며,
    상기 폴리머 매트릭스가 상기 항종양제의 수용성을 개선시키는, 수용성 겔 폴리머 매트릭스.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 항종양제가 하나 이상의 공유 결합 및/또는 정전기적 결합 (electrostatic bonding)에 의해 가교되는, 수용성 겔 폴리머 매트릭스.
  3. 제2항에 있어서,
    상기 항종양제가 정전기적 결합에 의해 가교되며, 상기 정전기적 결합이 수소 결합인, 수용성 겔 폴리머 매트릭스.
  4. 제2항에 있어서,
    상기 항종양제가 공유 결합에 의해 가교되는, 수용성 겔 폴리머 매트릭스.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
    아자시티딘 (azacitidine), 이마티닙 (imatinib), 레날리도미드 (lenalidomide), 에토포시드 (etoposide), 토포테칸 (topotecan), 이리노테칸 (irinotecan), 레트로졸 (letrozole), 랄록시펜 (raloxifene), 사이클로포스파미드 (cyclophosphamide), 메클로르에타민 (mechlorethamine), 카르바질퀴논 (carbazylquinone), 멜팔란 (melphalan), 티오테파 (thiotepa), 부설판 (busulfan), 니무스틴 (nimustine), 카르무스틴 (carmustine), 프로카르바진 (procarbazine), 다카르바진 (dacarbazine), 메토트렉세이트 (methotrexate), 6-머캅토푸린 (6-mercaptopurine), 6-티오구아닌 (6-thioguanine), 아자티오프린 (azathioprine), 5-플루오로우라실 (5-fluorouracil), 프토라푸르 (ftorafur), 플록스우리딘 (floxuridine), 시타라빈 (cytarabine), 안시타빈 (ancitabine), 독시플루리딘 (doxifluridine), 액티노마이신 D (actinomycin D), 블레오마이신 (bleomycin), 미토마이신 (mitomycin), 크로모마이신 A3 (chromomycin A3), 시넬빈 A (cinelbin A), 어클라시노마이신 A (aclacinomycin A), 아드리아마이신 (adriamycin), 페플로마이신 (peplomycin), 시스플라틴 (cisplatin), 미톡산트론 (mitoxantrone), 에피루비신 (epirubicin), 피라루비신 (pirarubicin), 빈블라스틴 (vinblastine), 빈크리스틴 (vincristine), 빈데신 (vindesine), 카르보플라틴 (carboplatin), 에스트라무스틴 포스페이트 (estramustine phosphate), 미토탄 (mitotane), 포르피린 (porphyrin), 파클리탁셀 (paclitaxel) 및 도세탁셀 (docetaxel)로부터 선택되는, 수용성 겔 폴리머 매트릭스.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 히알루론산 : 상기 항종양제의 비율이 약 20: 1 내지 약 2: 1인, 수용성 겔 폴리머 매트릭스.
  7. 제6항에 있어서,
    상기 히알루론산 : 상기 항종양제의 비율이 약 10: 1 내지 약 2: 1인, 수용성 겔 폴리머 매트릭스.
  8. 제7항에 있어서,
    상기 히알루론산 : 상기 항종양제의 비율이 약 5: 1 내지 약 2: 1인, 수용성 겔 폴리머 매트릭스.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 가교가 압출 공정 (extrusion process)에 의해 달성되는, 수용성 겔 폴리머 매트릭스.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항종양제가 개선된 Cmax (최대 약물 혈장 농도) 및 Tmax (Cmax에 도달하는데 걸리는 시간)를 나타내는, 수용성 겔 폴리머 매트릭스.
  11. 약학적 전달 비히클로서,
    분자량 10,000 Da 내지 7,000,000 Da의 히알루론산; 및 항종양제를 포함하며;
    상기 항종양제가 상기 히알루론산과 가교되어 수용성 겔 폴리머 매트릭스를 형성하며,
    상기 폴리머 매트릭스는 상기 항종양제의 수용성을 개선시키는, 약학적 전달 비히클.
  12. 제11항에 있어서,
    상기 항종양제가 하나 이상의 공유 결합 및/또는 정전기적 결합에 의해 가교되는, 약학적 전달 비히클.
  13. 제12항에 있어서,
    상기 항종양제가 정전기적 결합에 의해 가교되며, 상기 정전기적 결합이 수소 결합인, 약학적 전달 비히클.
  14. 제12항에 있어서,
    상기 항종양제가 공유 결합에 의해 가교되는, 약학적 전달 비히클.
  15. 제11항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항종양제가 아자시티딘, 이마티닙, 레날리도미드, 에토포시드, 토포테칸, 이리노테칸, 레트로졸, 랄록시펜, 사이클로포스파미드, 메클로르에타민, 카르바질퀴논, 멜팔란, 티오테파, 부설판, 니무스틴 카르무스틴, 프로카르바진, 다카르바진, 메토트렉세이트, 6-머캅토푸린, 6-티오구아닌, 아자티오프린, 5-플루오로우라실, 프토라푸르, 플록스우리딘, 시타라빈, 안시타빈, 독시플루리딘, 액티노마이신 D, 블레오마이신 미토마이신, 크로모마이신 A3, 시넬빈 A, 어클라시노마이신 A, 아드리아마이신, 페플로마이신, 시스플라틴, 미톡산트론, 에피루비신, 피라루비신, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 빈데신, 카르보플라틴, 에스트라무스틴 포스페이트, 미토탄, 포르피린, 파클리탁셀 및 도세탁셀로부터 선택되는, 약학적 전달 비히클.
  16. 제11항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 히알루론산 : 상기 항종양제의 비율이 약 20: 1 내지 약 2: 1인, 약학적 전달 비히클.
  17. 제16항에 있어서,
    상기 히알루론산 : 상기 항종양제의 비율이 약 10: 1 내지 약 2: 1인, 약학적 전달 비히클.
  18. 제17항에 있어서,
    상기 히알루론산 : 상기 항종양제의 비율이 약 5: 1 내지 약 2: 1인, 약학적 전달 비히클.
  19. 제11항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 가교가 압출 공정에 의해 달성되는, 약학적 전달 비히클.
  20. 제11항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항종양제는 개선된 Cmax (최대 약물 혈장 농도) 및 Tmax (Cmax에 도달하는데 걸리는 시간)를 나타내는, 약학적 전달 비히클.
  21. 하기 단계들을 포함하는 가교된 히알루로산 매트릭스의 제조 방법:
    히알루론산을 압출하여 압출된 히알루론산을 제조하는 단계;
    상기 압출된 히알루론산을 항종양제와 혼합하여 혼합물을 제조하는 단계; 및
    상기 혼합물을 압출하여 가교된 히알루론산 매트릭스를 제조하는 단계.
  22. 제21항에 있어어,
    상기 가교된 히알루론산 매트릭스를 부가적인 히알루론산과 혼합하여 압출하는 단계를 더 포함하는, 제조 방법.
  23. 제21항 또는 제22항에 있어서,
    상기 히알루론산이 분자량 10,000 Da 내지 7,000,000 Da을 가지는, 제조 방법.
  24. 제21항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항종양제가 아자시티딘, 이마티닙, 레날리도미드, 에토포시드, 토포테칸, 이리노테칸, 레트로졸, 랄록시펜, 사이클로포스파미드, 메클로르에타민, 카르바질퀴논, 멜팔란, 티오테파, 부설판, 니무스틴 카르무스틴, 프로카르바진, 다카르바진, 메토트렉세이트, 6-머캅토푸린, 6-티오구아닌, 아자티오프린, 5-플루오로우라실, 프토라푸르, 플록스우리딘, 시타라빈, 안시타빈, 독시플루리딘, 액티노마이신 D, 블레오마이신, 미토마이신, 크로모마이신 A3, 시넬빈 A, 어클라시노마이신 A, 아드리아마이신, 페플로마이신, 시스플라틴, 미톡산트론, 에피루비신, 피라루비신, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 빈데신, 카르보플라틴, 에스트라무스틴 포스페이트, 미토탄, 포르피린, 파클리탁셀 및 도세탁셀로부터 선택되는, 제조 방법.
  25. 제21항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 히알루론산 : 상기 항종양제의 비율이 약 20: 1 내지 약 2: 1인, 제조 방법.
  26. 제25항에 있어서,
    상기 히알루론산 : 상기 항종양제의 비율이 약 10: 1 내지 약 2: 1인, 제조 방법.
  27. 제26항에 있어서,
    상기 히알루론산 : 상기 항종양제의 비율이 약 5: 1 내지 약 2: 1인, 제조 방법.
  28. 제21항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항종양제가 공유 결합 및/또는 정전기적 결합 (electrostatic bonding)에 의해 가교되는, 제조 방법.
  29. 제28항에 있어서,
    상기 항종양제가 정전기적 결합에 의해 가교되며, 상기 정전기적 결합이 수소 결합인, 제조 방법.
  30. 제28항에 있어서,
    상기 항종양제가 공유 결합에 의해 가교되는, 제조 방법.
KR1020177037472A 2015-05-29 2016-05-30 약물을 전달하기 위한 가교된 히알루론산 및 이를 이용한 약학적 제제 KR20180014042A (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201562168411P 2015-05-29 2015-05-29
US62/168,411 2015-05-29
PCT/CA2016/000159 WO2016191850A1 (en) 2015-05-29 2016-05-30 Cross-linked hyaluronic acid for drug delivery and pharmaceutical preparation using same

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20180014042A true KR20180014042A (ko) 2018-02-07

Family

ID=57397789

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020177037472A KR20180014042A (ko) 2015-05-29 2016-05-30 약물을 전달하기 위한 가교된 히알루론산 및 이를 이용한 약학적 제제

Country Status (7)

Country Link
US (1) US20160346398A1 (ko)
EP (1) EP3302569A1 (ko)
JP (1) JP2018516277A (ko)
KR (1) KR20180014042A (ko)
CA (1) CA2985502A1 (ko)
RU (1) RU2017143884A (ko)
WO (1) WO2016191850A1 (ko)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IL269506B2 (en) 2017-03-22 2024-04-01 Genentech Inc Hyaluronic acid cross-linked hydrogel preparations and methods
EP4072590A4 (en) * 2019-12-13 2024-01-03 Folium Labs Inc COMPLEXES COMPRISING A CARBOHYDRATE POLYMER AND AN ACTIVE INGREDIENT AND THEIR PREPARATION PROCESSES
CN112007006B (zh) * 2020-08-07 2022-12-30 山东省药学科学院 一种治疗口腔溃疡的药用组合物及其制备方法
CN116327936A (zh) * 2023-04-19 2023-06-27 东莞市人民医院 应用于硼中子俘获治疗的可溶性微针、其制备方法和应用

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6284786B1 (en) * 1999-02-16 2001-09-04 The Center For The Improvement Of Human Functioning, Int'l., Inc. Treatment of cancer using lipoic acid in combination with ascorbic acid
ITPD20020271A1 (it) * 2002-10-18 2004-04-19 Fidia Farmaceutici Composti chimico-farmaceutici costituiti da derivati dei taxani legati covalentemente all'acido ialuronico o ai suoi derivati.
ITMI20071267A1 (it) * 2007-06-22 2008-12-23 Fidia Farmaceutici Uso di coniugati dell'acido ialuronico nel trattamento locale di malattie cutanee iperproliferative
ITMI20120092A1 (it) * 2012-01-26 2013-07-27 Micro Macinazione S A Compositi di inclusione farmaco-carrier preparati con processo di attivazione meccano-chimica mediante mulini a getto di fluido ad alta energia
WO2014172784A1 (en) * 2013-04-25 2014-10-30 Aluron Biopharma Inc. Crosslinked hyaluronic acid compositions

Also Published As

Publication number Publication date
EP3302569A1 (en) 2018-04-11
CA2985502A1 (en) 2016-12-08
RU2017143884A (ru) 2019-07-01
US20160346398A1 (en) 2016-12-01
JP2018516277A (ja) 2018-06-21
WO2016191850A1 (en) 2016-12-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Fakhari et al. Engineered in-situ depot-forming hydrogels for intratumoral drug delivery
Zhao et al. In situ activation of STING pathway with polymeric SN38 for cancer chemoimmunotherapy
Wu et al. Nanogel‐incorporated physical and chemical hybrid gels for highly effective chemo–protein combination therapy
US9814734B2 (en) Bufalin liposome, preparation method therefor and application thereof
Jing et al. Keratinocyte membrane-mediated nanodelivery system with dissolving microneedles for targeted therapy of skin diseases
US11110168B2 (en) Nanoparticles, controlled-release dosage forms, and methods for delivering an immunotherapeutic agent
KR102512475B1 (ko) 칼슘 락테이트 조성물 및 사용 방법
US10632081B2 (en) Intralymphatic delivery of hyaluronan nanoparticle for cancer metastasis
KR20180014042A (ko) 약물을 전달하기 위한 가교된 히알루론산 및 이를 이용한 약학적 제제
Zhang et al. Tumor progression of non-small cell lung cancer controlled by albumin and micellar nanoparticles of itraconazole, a multitarget angiogenesis inhibitor
AU2019348440A1 (en) Degradable hyaluronic acid hydrogels
Emam et al. Doxorubicin expands in vivo secretion of circulating exosome in mice
Marzi et al. Hydrogels as promising therapeutic strategy for the treatment of skin cancer
RU2451509C1 (ru) Противоопухолевый препарат
KR20090080046A (ko) ｐＨ 표적화된 약물 운반용 조성물 및 방법
CA3008095C (en) A pharmaceutical composition comprising apatite-based matrix and surface modifying agent
JP5843086B2 (ja) 治療活性物質の作用を増強するための高分子化環状ニトロキシドラジカル化合物の使用
WO2012070033A1 (en) An implant for the controlled release of pharmaceutically active agents
Zhou et al. Spatially targeting of tumor-associated macrophages and cancer cells for suppression of spontaneously metastatic tumor
US20230099637A1 (en) Palladium Hyaluronic Acid Particles and Methods of Managing Cancer or Angiogenic Conditions
KR20150054543A (ko) 간 표적화 나노입자, 이의 제조방법 및 이를 포함하는 약학적 조성물
CN104840432A (zh) 一种紫杉烷类长循环纳米粒及其制备方法
Jiang et al. Epidural Administration of Curcumin-Loaded Polycaprolactone/Gelatin Electrospun Nanofibers for Extended Analgesia After Laminectomy in Rats
KR20130097088A (ko) 서방성 제제
US20130259944A1 (en) Methods and compositions for treating cancer with platinum particles