KR20170115764A

KR20170115764A - 이소리퀴리티게닌 및 플루피르틴 또는 미르타자핀의 병용 요법에 의한 신경질환 치료

Info

Publication number: KR20170115764A
Application number: KR1020160043373A
Authority: KR
Inventors: 윤승용; 김나영; 김동호
Original assignee: 울산대학교 산학협력단; 재단법인 아산사회복지재단
Priority date: 2016-04-08
Filing date: 2016-04-08
Publication date: 2017-10-18

Abstract

본 발명은 이소리퀴리티게닌(isoliquiritigenin)을 플루피르틴(flupirtine) 또는 미르타자핀(mirtazapine)과 복합제 형태로 병용하여 처리할 경우 보다 효과적으로 신경질환을 예방 또는 치료할 수 있는 효과가 있다.

Description

이소리퀴리티게닌 및 플루피르틴 또는 미르타자핀의 병용 요법에 의한 신경질환 치료{Combination therapy for treating neurodegenerative diseases using combination of isoliquiritigenin and flupirtine or mirtazapine}

본 발명은 이소리퀴리티게닌(isoliquiritigenin)을 플루피르틴(flupirtine) 또는 미르타자핀(mirtazapine)과 조합함으로써 신경질환을 예방 또는 치료하기 위한 조성물 및 방법을 제공한다.

신경세포사멸은 알츠하이머성 치매, 파킨슨병, 루게릭병, 헌팅톤병 등 다양한 퇴행성 뇌질환, 뇌졸중 등의 뇌혈관 질환, 및 급성 뇌 및 척수 손상의 주된 병리현상이며, 신경세포사멸과 더불어 치명적인 뇌기능 또는 척수기능의 손상으로 이어지기 때문에, 이를 효과적으로 방지하는 약물들에 대한 개발이 활발히 진행되고 있다.

신경세포 손상으로 인해 발병되는 주요 질병 중 하나인 알츠하이머(alzheimer) 는 치매를 일으키는 대표적인 질환으로, 뇌의 신경세포가 퇴화되고 뇌가 축소되어 점진적인 정신장애를 일으키는데 기억장애, 판단장애, 추상적 사고의 장애 및 인격변화 등을 포함한 지적 기능의 손실을 특징으로 한다. 아세틸콜린에스터라제 억제제는 경도 및 중등도의 알츠하이머병에서 효과를 인정받고 있으나, 미국 식품의약국에서 공식적으로 효과가 인정되어 널리 사용되고 있는 성분으로는 타크린, 도네페질, 리바스티그민, 갈란타민 등에 불과하고, 이들 중 일부는 간 독성을 보여 현재 거의 사용되지 않는 것으로 알려져 있다.

알츠하이머 외에도, 헌팅턴 질환, 파킨슨 질환, 뇌졸중, 뇌중풍, 피크 (Pick)병, 크로이츠펠트-야콥병, 근위축성 측삭 경화증, 중증근무력증 및 다발성 경화증을 포함하는 많은 신경퇴행성 질환이 신경퇴화 과정의 결과로 인해 발생하는 것으로 알려져 있으나, 신경세포 보호를 통해 이들 질환을 치료하는 데 효과와 안정성이 검증된 약물은 부족한 실정이다.

따라서, 신경세포 사멸을 억제하고 신경세포를 보호하는 데 효과적인 약물의 개발이 요구되고 있다.

대한민국 특허공개 제10-2015-0138963호(2015.12.11)

이에, 본 발명은 두 가지 약물이 상호보완적으로 작용하여 신경세포 사멸을 억제하고 신경세포를 보호하는 데 상승 효과를 발휘함으로써 신경질환을 예방 또는 치료하는데 효과적인 복합제제인 약학 조성물 및 이를 이용한 병용 요법을 제공한다.

일예로, 본 발명은 이소리퀴리티게닌(isoliquiritigenin); 및 플루피르틴(flupirtine) 또는 미르타자핀(mirtazapine)을 포함하는, 신경질환 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.

다른 예로, 본 발명은 이소리퀴리티게닌(isoliquiritigenin); 및 플루피르틴(flupirtine) 또는 미르타자핀(mirtazapine)을 개체에 치료학적 유효량으로 투여하는 것을 포함하는, 신경질환 치료 방법을 제공한다.

다른 예로, 본 발명은 이소리퀴리티게닌(isoliquiritigenin); 및 플루피르틴(flupirtine) 또는 미르타자핀(mirtazapine)을 포함하는, 신경 보호용 식품 조성물을 제공한다.

본 발명은 이소리퀴리티게닌(isoliquiritigenin) 및 플루피르틴(flupirtine) 또는 미르타자핀(mirtazapine)의 복합요법에 따른 신경보호 증진 효과에 기초한 것으로, 각 약물을 단독으로 사용한 경우보다 상기와 같이 복합으로 사용하는 경우 예상치 못하게 신경보호 효과가 증진되므로 다양한 신경질환에 적용할 수 있는 치료용 조성물 및 치료 방법을 제공한다.

일 양태로, 본 발명은 이소리퀴리티게닌; 및 플루피르틴 또는 미르타자핀을 포함하는, 신경질환 예방 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.

다른 양태로, 본 발명은 이소리퀴리티게닌; 및 플루피르틴 또는 미르타자핀을 개체에 치료학적 유효량으로 투여하는 것을 포함하는, 신경질환 치료 방법에 관한 것이다.

다른 예로, 본 발명은 이소리퀴리티게닌; 및 플루피르틴 또는 미르타자핀을 포함하는, 신경 보호 증진용 식품 조성물에 관한 것이다.

본 발명은 두 가지 약물이 상호보완적으로 작용하여 신경세포 사멸을 억제하고 신경세포를 보호하는 데 상승 효과를 발휘함으로써 신경질환을 예방 또는 치료하는데 효과적이다.

도 1은 플루피르틴 및 이소리퀴리티게닌 각각의 단독 처리군 대비 조합 처리군의 세포 생존도를 그래프로 나타낸 것이다.
도 2는 미르타자핀 및 이소리퀴리티게닌 각각의 단독 처리군 대비 조합 처리군의 세포 생존도를 그래프로 나타낸 것이다.
도 3은 (1) 이소리퀴리티게닌 및 플루피르틴 조합과 (2) 이소리퀴리티게닌 및 미르타자핀 조합을 처리한 군에 대해 이들 약물 단독 처리군과의 세포생존율 및 LDH 방출정도를 분석한 결과를 나타낸 것이다.

이하, 본 발명을 보다 상세하게 설명한다.

이소리퀴리티게닌은 화합물명이 (E)-1-(2,4-디하이드록시페닐)-3-(4-하이드록시페닐)프로프-2-엔-1-온 [(E)-1-(2,4-dihydroxyphenyl)-3-(4-hydroxyphenyl)prop-2-en-1-one]이며, 이소리퀴리티게닌은 감초, 황기, 강진향 등의 식물에 함유되어 있는 천연 플라보노이드 화합물의 일종이다. 이소리퀴리티게닌은 암세포의 생장을 억제하며 코카인 중독 치료를 보조할 수 있는 것으로 알려져 있다.

플루피르틴은 화합물명이 에틸 {2-아미노-6-[(4-플루오로벤질)아미노]피리딘-3-일}카바메이트 [ethyl {2-amino-6-[(4-fluorobenzyl)amino]pyridin-3-yl}carbamate] 인 아미노피리미딘계 화합물의 일종이다. 플루피르틴은 비마약성 진통제로서 사용되며, 카타토론(Katadolon) 등의 상품명으로 상용화되어 있다.

미르타자핀은 화합물명이 (±)-2-메틸-1,2,3,4,10,14b-헥사하이드로피라지노[2,1-a]피리도[2,3-c][2]벤즈아제핀 [(±)-2-methyl-1,2,3,4,10,14b-hexahydropyrazino[2,1-a]pyrido[2,3-c][2]benzazepine] 인 화합물로, 비정형 항우울제로 사용되며, 레메론(Remeron) 등의 상품명으로 상용화되어 있다.

이소리퀴리티게닌, 플루피르틴 또는 미르타자핀은, 이에 제한되는 것은 아니나, 이들을 함유하는 다양한 식물로부터 추출, 분리 및 정제하여 수득하거나, 당업계에서 잘 알려진 공지의 합성방법에 의해 합성할 수 있고, 시판된는 상용품을 이용할 수도 있다.

본 발명의 화합물은 약학적으로 허용되는 염의 형태로 사용될 수 있다. 또한 본 발명의 화합물은 결정다형체, 수화물, 무수물 또는 용매화물의 형태일 수 있다. 또한, 본 발명의 화합물은 거울상 이성질체, 라세미 혼합물, 프로드러그, 및 대사물질과 같은 유도체 형태일 수 있다. 또한 본 발명의 화합물은 단독으로 또는 다른 약학적 활성 화합물과 결합하거나 집합으로 사용될 수 있다.

본원에서 용어, "약학적으로 허용가능한 염"은 당해 기술분야에서 통상적인 방법에 따라 제조한 염을 의미하며, 이러한 제조방법은 당업자에게 공지되어 있다. 구체적으로, 상기 약제학적으로 허용 가능한 염은 약리학적 또는 생리학적으로 허용되는 다음 무기산, 유기산 또는 염기로부터 유도된 염을 포함하지만 이것으로 한정되지는 않는다. 적합한 산의 예로는 염산, 메실산, 브롬산, 황산, 질산, 과염소산, 푸마르산, 말레산, 인산, 글리콜산, 락트산, 살리실산, 숙신산, 톨루엔-p-설폰산, 타르타르산, 아세트산, 시트르산, 메탄설폰산, 포름산, 벤조산, 말론산, 나프탈렌-2-설폰산, 벤젠설폰산 등을 포함할 수 있다. 적합한 염기로부터 유도된 염은 알칼리 금속, 예를 들어, 나트륨, 또는 칼륨, 알칼리 토금속, 예를 들어, 마그네슘을 포함할 수 있다.

본 발명은 이와 같은 약물의 조합물을 사용하여 신경세포 보호 효능을 향상시키고, 이에 의하여 각 약물의 함량을 감소시킬 수 있으므로 약물과 관련된 독성 및 부작용을 양호하게 조절할 수 있다. 또한, 본원에서 각 약물은 동시에 또는 순차적으로 투여할 수 있다.

본원에서 신경세포 보호 효과란, 신경세포를 손상시킬 수 있는 외부의 자극에 대하여 신경세포를 보호하는 효과, 또는 신경세포의 사멸을 방지하고 신경세포의 세포 생존도를 증진시키는 효과를 의미한다.

본원에서 신경질환은, 신경세포의 퇴화 내지 사멸에 의하여 발생하는 질환, 또는 신경세포 보호를 통하여 예방, 개선, 경감 또는 치료를 기대할 수 있는 질환을 포함한다. 그 예로서, 치매, 알츠하이머 질환, 혈관성 치매, 기억력 저하, 헌팅턴 질환, 파킨슨 질환, 뇌졸중, 뇌중풍, 피크 (Pick)병, 크로이츠펠트-야콥병, 근위축성 측삭 경화증, 중증근무력증, 다발성 경화증, 또는 외상에 의한 뇌 또는 골수 손상 등을 예시할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 조성물이 약학 조성물로 사용될 경우, 상기 조성물 내의 유효성분의 함량은 질환의 증상, 증상의 진행 정도, 환자의 상태 등에 따라서 적절히 조절 가능하며, 예컨대, 전체 조성물 중량을 기준으로 0.0001 내지 99.9중량%, 바람직하게는 0.001 내지 50중량%인 것이 좋으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 함량비는 용매를 제거한 건조량을 기준으로 한 값이다.

본 발명의 약학 조성물은 약학적으로 허용가능한 담체를 추가로 포함할 수 있으며, 담체와 함께 제제화될 수 있다. 상기 약학적으로 허용가능한 담체란, 생물체를 자극하지 않고 투여 화합물의 생물학적 활성 및 특성을 저해하지 않는 담체, 부형제 또는 희석제를 말한다. 상기 조성물은 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제 또는 멸균 주사용액 등의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 바람직하게는 경구 제형으로 사용될 수 있다.

상기 약학 조성물을 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다.　경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 적어도 한 가지 이상의 부형제 및/또는 윤활제 등을 포함할 수 있다.　경구투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성 용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제 등이 포함될 수 있다.

본 발명 조성물의 적합한 총 1일 사용량은 올바른 의학적 판단범위 내에서 처치의에 의해 결정될 수 있다는 것은 당업자에게 자명한 일이다. 특정 환자에 대한 구체적인 치료적 유효량은 달성하고자 하는 반응의 종류와 정도, 경우에 따라 다른 제제가 사용되는지의 여부를 비롯한 구체적 조성물, 환자의 연령, 체중, 일반 건강 상태, 성별 및 식이, 투여 시간, 투여 경로 및 조성물의 분비율, 치료기간, 및 조사되는 방사선량을 비롯한 다양한 인자와 의약 분야에 잘 알려진 유사 인자에 따라 다르게 적용하는 것이 바람직하다. 예를 들어, 1일 당 0.001 ㎍/kg-100 mg/kg(체중)으로 사용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 본 발명의 목적에 적합한 약학 조성물의 유효량은 전술한 사항을 고려하여 결정하는 것이 바람직하다.　투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수 있다. 본 발명의 조성물은 동물, 바람직하게는 인간을 포함하는 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 정맥, 근육, 피하주사 등에 의해 투여될 수 있다. 본 발명의 조성물의 약학적 투여 형태는 유효성분의 약학적 허용 가능한 염의 형태로도 사용될 수 있고, 또한 단독으로 또는 타 약학적 활성 화합물과 결합뿐만 아니라 적당한 집합으로 사용될 수 있다.

본 발명의 조성물은 또한 식품 조성물로 사용될 수 있다.

본 발명에서 식품은 영양소를 한 가지 또는 그 이상 함유하고 있는 천연물 또는 가공품을 의미하며, 바람직하게는 어느 정도의 가공 공정을 거쳐 직접 먹을 수 있는 상태가 된 것을 의미하며, 통상적인 의미로서, 각종 식품, 건강기능 식품, 음료, 식품 첨가제 및 음료 첨가제를 모두 포함하는 의미로 사용된다. 상기 식품의 예로서 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 기능성 식품 등이 있다. 추가로, 본 발명에서 식품에는 특수영양식품(예, 조제유류, 영,유아식 등), 식육가공품, 어육제품, 두부류, 묵류, 면류(예, 라면류, 국수류 등), 건강보조식품, 조미식품(예, 간장, 된장, 고추장, 혼합장 등), 소스류, 과자류(예, 스넥류), 유가공품(예, 발효유, 치즈 등), 기타 가공식품, 김치, 절임식품(각종 김치류, 장아찌 등), 음료(예, 과실,채소류 음료, 두유류, 발효음료류, 아이스크림류 등), 천연조미료(예, 라면 스프 등), 비타민 복합제, 알코올 음료, 주류 및 그 밖의 건강보조식품류를 포함하나 이에 한정되지 않는다. 상기 건강기능식품, 음료, 식품첨가제 또는 음료첨가제는 통상의 제조방법으로 제조될 수 있다.

상기 식품 조성물은 식품학적으로 허용 가능한 식품 보조 첨가제를 포함할 수 있으며, 기능성 식품의 제조에 통상적으로 사용되는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더욱 포함할 수 있다.

또한, 상기 식품에 있어서, 상기 약물들의 양은 전체 식품 중량의 0.00001 중량% 내지 50 중량%로 포함될 수 있으며, 상기 식품이 음료인 경우에는 식품 전체의 부피 100 ml 를 기준으로 0.001 g 내지 50 g, 바람직하게는 0.01 g 내지 10 g의 비율로 포함될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명이 하기 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.

실시예 1. 신경세포 배양(Neuron culture)

대뇌피질 신경세포 일차 배양은 배아기(embryonic day) 16일의 새끼 생쥐의 뇌로부터 준비되었다. 보다 상세하게, 대뇌피질을 칼슘- 및 마그네슘- 프리 HBSS (Hank's balanced salt solution)에서 절개하고 37℃에서 10분 동안 0.125% 트립신 용액에서 배양하였다. 트립신을 20% 태아소혈청을 함유한 DMEM(Dulbecco's modified Eagle's medium)으로 불활성화하고, 대뇌피질 조직을 파스퇴르 피펫을 이용하여 반복적으로 분쇄하여 추가로 분리하였다. 얻어진 세포 현탁액을 B27 보충제 (GibcoBRL)로 보강된 NB 배지 (neurobasal medium)에서 희석하였고, 폴리-D-라이신-(Sigma, 50㎍/ml) 및 라미닌-(1㎍/ml, GibcoBRL)으로 코팅된 플레이트 위에 분주하였다. 신경세포는 OA(Okadaic acid; 10 nM, Sigma-Aldrich) 및 다양한 저해제들을 첨가하기 전 10일 동안 37℃ 및 5% CO₂ 환경에서 유지되었다.

실시예 2. 세포 생존도(Cell viability) 측정

<2-1> ATP 정량화 분석

대사적으로 활성화된 세포들의 존재를 신호화하는 ATP(adenosine 5'-triphosphate)를 정량화함으로써 살아있는 세포 수를 결정하였다(CellTiter-Glo　Luminescent Cell Viability Assay; Promega, Madison, WI). 불투명한 96-웰 플레이트의 각 웰에 CellTiter-Glo　Reagent 100　μl을 첨가하여 세포들을 포함하는 세포 배양물(100　μl)을 동일 부피로 조정하였다. 세포 용해(cell lysis)를 유도하기 위하여 함유물들을 회전교반기(orbital shaker)로 2분간 혼합하였다. 그 다음 상온에서 10분간 두어 용액을 안정화한 후 발광 신호를 기록하였다.

실험결과

실험대상 약물과 처리 농도는 표 1에 나타내었다.

	약물	표기	처리 농도
1	이소리퀴리티게닌(Isoliquiritigenin)	Isoliquiritigenin	2uM
2	릴메니딘(Rilmenidine)	Rilmenidine	2uM
3	플루피르틴(Flupiritine)	Flupiritine	2uM
4	미르타자핀(Mirtazapine)	9-C11	0.5uM
5	부프로피온(Bupropion)	6-F04	0.5uM
6	가바펜틴(Gabapentin)	2-D11	0.5uM
7	피오글리타존(PioglitazoneHCl)	3-A03	0.5uM
8	아시트레틴(Acitretin)	2-E09	0.5uM
9	데스벤라팍신(Desvenlafaxine Succinate Hydrate)	7-E04	0.5uM
10	미노싸이클린(Minocycline )	4-G05	0.5uM
11	아포모르핀(ApomorphineHCl Hemihydrate)	1-F07	0.2uM
12	라멜테온(Ramelteon)	10-B10	0.2uM
13	브로모크립틴(Bromocriptine Mesylate)	2-E07	0.2uM
14	로피니롤(RopiniroleHCl)	10-C10	0.1uM

표 1에 기재된 약물을 단독으로 또는 2종을 조합하여 신경세포에 처리한 후 세포 생존도를 측정한 결과를 표 2에 나타내었다. 실험은 1번 플레이트와 2번 플레이트로 나누어, 실험군 당 각 3번씩 실시하였으며, 그 평균값을 나타내었다.

1번 플레이트에서의 세포 생존도 측정결과[단위: arbitrary unit (luminescence value)]

	약물1	약물2	평균값
	대조군(Control)	-	165644.7
	OA	-	50078.2
단독	Isoliquiritigenin	-	69486.7
단독	Rilmenidine	-	84364.7
단독	Flupiritine	-	85661.3
단독	9-C11	-	79970.7
단독	6-F04	-	86624.0
단독	2-D11	-	87371.3
단독	3-A03	-	91051.3
단독	2-E09	-	89226.0
단독	7-E04	-	83574.0
단독	4-G05	-	86880.0
단독	1-F07	-	83548.0
단독	10-B10	-	94822.7
단독	2-E07	-	91902.7
단독	10-C10	-	89930.0
1	Isoliquiritigenin	Rilmenidine	95880.0
2	Isoliquiritigenin	Flupiritine	98392.0
3	Isoliquiritigenin	9-C11	102024.0
4	Isoliquiritigenin	6-F04	93796.0
5	Isoliquiritigenin	2-D11	83588.7
6	Isoliquiritigenin	3-A03	93324.0
7	Isoliquiritigenin	2-E09	87053.3
8	Isoliquiritigenin	7-E04	95144.7
9	Isoliquiritigenin	4-G05	85390.0
10	Isoliquiritigenin	1-F07	94524.0
11	Isoliquiritigenin	10-B10	96695.3
12	Isoliquiritigenin	2-E07	96440.7
13	Isoliquiritigenin	10-C10	95498.7
14	Rilmenidine	Flupiritine	98317.3
15	Rilmenidine	9-C11	95888.7
16	Rilmenidine	6-F04	99692.7
17	Rilmenidine	2-D11	85774.7
18	Rilmenidine	3-A03	93156.0
19	Rilmenidine	2-E09	92856.7
20	Rilmenidine	7-E04	92754.0
21	Rilmenidine	4-G05	93685.3
22	Rilmenidine	1-F07	96889.3
23	Rilmenidine	10-B10	96660.7
24	Rilmenidine	2-E07	95044.7
25	Rilmenidine	10-C10	91755.3
26	Flupiritine	9-C11	102084.7
27	Flupiritine	6-F04	76466.7
28	Flupiritine	2-D11	87650.7
29	Flupiritine	3-A03	83484.7
30	Flupiritine	2-E09	77842.0
31	Flupiritine	7-E04	83085.3
32	Flupiritine	4-G05	82900.7
33	9-C11	2-E09	85248.0
34	9-C11	7-E04	77668.7
35	9-C11	4-G05	71971.3
36	9-C11	1-F07	63624.0
37	9-C11	10-B10	68422.0
38	9-C11	2-E07	75311.3
39	9-C11	10-C10	72158.7
40	6-F04	2-D11	42960.0
41	6-F04	3-A03	41136.0
42	6-F04	2-E09	33809.3
43	6-F04	7-E04	47969.3
44	6-F04	4-G05	58044.0
45	6-F04	1-F07	67048.7
46	6-F04	10-B10	65858.0

2번 플레이트에서의 세포 생존도 측정결과[단위: arbitrary unit (luminescence value)]

	약물1	약물2	평균값
	Control		158156.4
	OA		64178.7
단독	Isoliquiritigenin	-	76741.3
단독	Rilmenidine	-	74137.3
단독	Flupiritine	-	76356.7
단독	9-C11	-	78226.0
단독	6-F04	-	74781.3
단독	2-D11	-	76829.3
단독	3-A03	-	78383.3
단독	2-E09	-	82762.0
단독	7-E04	-	71416.7
단독	4-G05	-	73116.0
단독	1-F07	-	80065.3
단독	10-B10	-	80243.3
단독	2-E07	-	83868.7
단독	10-C10	-	84910.7
54	6-F04	2-E07	81304.7
55	6-F04	10-C10	84172.7
56	2-D11	3-A03	89633.3
57	2-D11	2-E09	86116.7
58	2-D11	7-E04	81737.3
59	2-D11	4-G05	81630.0
60	2-D11	1-F07	84494.0
61	2-D11	10-B10	79350.0
62	2-D11	2-E07	84461.3
63	2-D11	10-C10	83332.0
64	3-A03	2-E09	84392.7
65	3-A03	7-E04	83920.7
66	3-A03	4-G05	85156.0
67	3-A03	1-F07	82154.7
68	3-A03	10-B10	78625.3
69	3-A03	2-E07	77392.7
70	3-A03	10-C10	81613.3
71	2-E09	7-E04	84049.3
72	2-E09	4-G05	84358.7
73	2-E09	1-F07	74368.7
74	2-E09	10-B10	82654.0
75	2-E09	2-E07	70920.7
76	2-E09	10-C10	77151.3
77	7-E04	4-G05	68923.3
78	7-E04	1-F07	70154.0
79	7-E04	10-B10	101429.3
80	7-E04	2-E07	76286.7
81	7-E04	10-C10	72552.7
82	4-G05	1-F07	73549.3
83	4-G05	10-B10	64535.3
84	4-G05	2-E07	59531.3
85	4-G05	10-C10	63336.0
86	1-F07	10-B10	63614.7
87	1-F07	2-E07	61431.3
88	1-F07	10-C10	55274.7
89	10-B10	2-E07	59117.3
90	10-B10	10-C10	66127.3
91	2-E07	10-C10	55036.7

위 결과에서 알 수 있는 바와 같이, 플루피르틴(flupirtine)의 단독 처리군의 경우 세포 생존도가 85661.3 이나, 플루피르틴을 부프로피온(6-F04)과 조합(76466.7), 피오글리타존(3-A03)과 조합(83484.7), 아시트레틴(2-E09)과 조합(77842.0), 데스벤라팍신(7-E04)과 조합(83085.3) 또는 미노싸이클린(4-G05)과 조합(82900.7)한 경우에는 플루피르틴 단독 처리군보다 오히려 세포 생존도가 낮아지는 것을 알 수 있었으나, 플루피르틴을 이소리퀴리티게닌(isoliquiritigenin)과 조합한 경우에는 예상치 못하게 세포 생존도가 현저히 증가(98392.0)하는 것이 확인되었다. 플루피르틴 및 이소리퀴리티게닌 각각의 단독 처리군 대비 조합 처리군의 효과를 도 1에 그래프로 나타내었다.

또한, 미르타자핀(mirtazapine, 9-C11)의 단독 처리군의 경우 세포 생존도가 79970.7 이나, 미르타자핀을 데스벤라팍신(7-E04)과 조합(77668.7), 미노싸이클린(4-G05)과 조합(71971.3), 아포모르핀(1-F07)과 조합(63624.0), 라멜테온(10-B10)과 조합(68422.0), 브로모크립틴(2-E07)과 조합(75311.3) 또는 로피니롤(10-C10)과 조합(72158.7)한 경우에는 미르타자핀 단독 처리군보다 오히려 세포 생존도가 낮아지는 것을 알 수 있었으나, 미르타자핀을 이소리퀴리티게닌(isoliquiritigenin)과 조합한 경우에는 예상치 못하게 세포 생존도가 현저히 증가(102024.0)하는 것이 확인되었다. 미르타자핀 및 이소리퀴리티게닌 각각의 단독 처리군 대비 조합 처리군의 효과를 도 2에 그래프로 나타내었다.

<2-2> MTT 및 LDH 를 통한 세포 생존도 분석

상기 <2-1>에서 사용한 동일한 실험군을 대상으로 ATP 정량화법에 의한 세포 생존도를 분석한 것과 같이, MTT/LDH 분석을 통해 다시 한 번 본 발명의 복합 약물에 의한 세포 생존도 분석을 수행하였다. MTT 어세이로 세포 생존도를 확인하였고, LDH 방출확인으로 세포사멸 정도를 확인하였다. 약물처리 48시간 후 세포가 배양되어 있는 48웰의 세포 배양물을 LDH 어세이 분석을 위해 불투명한 96-웰 플레이트 각 웰에 넣고 LDH-Substrate를 1:1로 30분 동안 처리하였다. 30분 후 LDH-정지 용액을 처리하고 490nm 파장에서 흡광도를 측정하였다 약물처리 24시간 후 배양물을 제거하고 남은 48웰의 세포들은 MTT 용액을 첨가하고 3시간 동안 배양한 다음, 모든 배양물을 제거하고 DMSO 50ul 처리한 다음, 불투명한 96-웰 플레이트 각 웰에 첨가하여 파장(wavelength) 570nm, 참조파장(reference wavelength) 650nm 파장에서 흡광도를 측정하였다.

분석 결과, 도 3에 나타낸 바와 같이, MTT 분석을 통한 세포생존도를 확인해 보면 이소리퀴리티게닌(isoliquiritigenin) 및 플루피르틴(flupirtine)을 처리한 군의 경우, 이들 약물을 단독 처리한 군에 비해 복합처리한 군에서 세포생존율이 더 높은 것으로 나타났고, 이소리퀴리티게닌(isoliquiritigenin) 및 미르타자핀(mirtazapine)을 처리한 군 역시 단독 처리 군에 비해 복합처리한 군이 세포 생존율이 더 높은 것으로 나타났다.

또한, LDH 방출정도를 분석한 결과에서는 이소리퀴리티게닌(isoliquiritigenin) 및 플루피르틴(flupirtine)을 각각 처리한 군에 비해 이들 약물을 복합처리한 군이 LDH 방출정도가 감소한 것으로 나타났고, 이소리퀴리티게닌(isoliquiritigenin) 및 미르타자핀(mirtazapine)을 처리한 군 역시 단독 처리 군에 비해 복합처리한 군에서 LDH의 방출정도가 감소한 것으로 나타났다.

이상의 결과로부터, 단독 요법이나 다른 약물 간의 조합보다 플루피르틴 및 이소리퀴리티게닌의 조합, 또는 미르타자핀 및 이소리퀴리티게닌의 조합에 의한 병용 요법이 신경세포 보호 효과가 우수하므로 다양한 신경질환에 적용될 수 있음을 알 수 있다.

이제까지 본 발명에 대하여 그 바람직한 실시예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.

Claims

이소리퀴리티게닌(isoliquiritigenin); 및
플루피르틴(flupirtine) 또는 미르타자핀(mirtazapine)을 포함하는,
신경질환 예방 또는 치료용 약학 조성물.
제1항에 있어서,
상기 신경질환은 치매, 알츠하이머 질환, 혈관성 치매, 기억력 저하, 헌팅턴 질환, 파킨슨 질환, 뇌졸중, 뇌중풍, 피크 (Pick)병, 크로이츠펠트-야콥병, 근위축성 측삭 경화증, 중증근무력증, 다발성 경화증, 또는 외상에 의한 뇌 또는 골수 손상인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
제1항에 있어서,
약학적으로 허용가능한 담체를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
제1항에 있어서,
상기 조성물은 경구 투여되는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.