KR20170100486A - 파파베르 로에아스로부터 수득된 신규 분자를 포함하는 조직 및 세포 염색 제제 - Google Patents

파파베르 로에아스로부터 수득된 신규 분자를 포함하는 조직 및 세포 염색 제제 Download PDF

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Abstract

파파베르 로에아스로부터 세포 및 조직 염색이 제제화되고, 이는 조직병리학, 미생물학 및 세포학에서 현미경 평가를 위해서 핵을 특이적으로 염색하는 새로운 하나의 생플라보노이드를 포함한다. 이는 일상적인 사용을 위해서 헤마톡실린에 대한 대안으로 보인다.
이러한 화합물의 생화학적 명칭은;
테트라히드로-3,4,5-트리히드록시-6-메틸-2H-피란-2-일옥실)메틸)2H-피란-2,3,4,5-테트라올)-4-메톡시페닐)-7-메톡시-4H-크로멘-4-온이다.
NMR 분석은 분자의 생화학적 구조가 생플라보노이드임을 보여준다(도 4, 5).
상승적 분자 및 다른 분자들과 함께, 파파베르 로에아스 내의 분자는 생물학적 및 비생물학적 샘플을 관통한다. 다른 상승적 메커니즘과 함께 조합하여 염색 제제가 제조된다. 매염제의 함량 및 종류 및 pH는 염색 결과의 품질 및 타이밍에 영향을 주는 패러미터들이다.
파파베르 로에아스 제제는 특히 실험실 및 병원에서의 진단을 위한 조직 검사용으로 제조되며, 일상적으로 사용하도록 의도된다. 세계적으로 수백만 건의 생물학적 샘플이 외과수술 및 생물학적 준비를 위해서 검사되며, 샘플들은 진단을 위해서 염색된다(헤마톡실린 조직 염색이 일상적으로 사용되며, 이는 헤마톡실린 캄페치아눔(Hematoxylin campechianum (로그우드; logwood))이라고 불리는 나무로부터 제조되고, 이는 세계 우림의 구성원이다. 약 1200 톤의 파우더 및 70,000 톤의 액체 헤마톡실린 염료(연간 150 억 달러)를 생산하기 위해서, 매년 3000 그루의 로그우드 나무 뿐만 아니라 토지가 훼손된다.
파파베르 로에아스는 핵을 강조하는 효과적이고 구체적인 염색을 제공한다. 명확한 경제적 기여 이외에도, 파파베르 로에아스는 널리 성장하고, 용이하게 수확 및 생산될 수 있다. 파파베르 로에아스 제제는 또한 중요하고 가치있는 산업적 제품이 되는 것을 가능케 하는 생태적 영향을 지구에 미친다.

Description

파파베르 로에아스로부터 수득된 신규 분자를 포함하는 조직 및 세포 염색 제제{Tissue and cell stain formula with a novel molecule obtained from papaver rhoeas}
개양귀비꽃 염색(Papaver rhoeas stain)은, 유도체와 상승적(synergistic) 분자와 더불어 새로운 생플라보노이드(bioflavonoid)를 포함한다. 새로운 핵 염색은 개양귀비꽃 추출물로부터 '세포 및 조직'의 핵에 특이적인 염색을 제공하는 진단 목적으로 제제화된다. 본 발명은 일상적인 염색인 "헤마톡실린(hematoxylin)"의 대안적인 제제이며, 또한 보건 분야에서의 진단 및 경제 기여에 대한 이점을 갖는 염색에 관한 것이다.
개요
개양귀비꽃 제제는 주로 핵 염색에 사용되며, 이는 새로운 분자를 포함하고 매년 경제에 100-150억 달러를 기여할 수 있으며, 헤마톡실린의 대체물이다. 이러한 자원은 지역적 생태계 균형을 이루고 있는 세계의 멸종 위기에 처한 우림을 보존하기 위한 노력에 기여할 것이며, 산업적 제품으로 유용할 것이다. (Anatech LTD. "histology chemicals, 'boiling hematoxylin market" "Summer 2008 INNOVATOR.)
개양귀비꽃 제제는 일상적인 진단에 사용되는 헤마톡실린의 기존 염색에 대한 합리적 대안이다. 헤마톡실린에 대한 수요가 증가하는 것은 인구 및 진단적 치료 의료 과정의 수가 증가하는데 기인한다. 그램 당 헤마톡실린의 판매 가격은 매우 높고, 생산은 세계 우림을 위험에 빠뜨릴 뿐만 아니라, 생태계에 위험을 가한다.
본 발명에서 개양귀비꽃은 발견 및 제제화된, 새로운 세포-조직 염료원이다. 개양귀비꽃 분자는 생플라보노이드 분자이고, 에오신(eosin)과 결합되며, 매우 활성이고, 기능적이다. 분자 자체는 유도체 및 상승적 분자와 함께, 조직 중 핵에서 및 미생물학적 시료로부터의 균류와 같은 다른 공급원에서 명확한 염색을 제공함으로써 정밀한 염색 세부사항을 가능하게 하고, 진단 목적으로 조직병리학, 세포학에 적용될 수 있다. 진단에 있어서 색상 및 조명의 넓은 스펙트럼 및 특성들의 세부사항은 새로운 진단 패러미터 및 발견을 제공한다.
병원, 실험실 및 제조 중 염색을 위한 방법에서, 장비 및 물질은 현저한 추가 투자 없이 전통적인 기술과 유사하다. 분자는 면역계 조절자, T 세포 활성화제, 항바이러스제, 조직 보호 및 재생뿐만 아니라, 표지자 및 새로운 비타민 복합체의 합성용으로도 사용될 수 있다. 그것은 또한 와인 업계에서 식품을 염색하기 위한 불활성인 염료, 군복, 특히 유아복 및 장난감용 및 착색제로서 친환경 섬유에서, 또한 피부를 젊게 하고 부드럽게 하여 반점 치료제 및 주름 치료제로서 사용될 수 있다. 화장품은 외과 보철 및 외과 봉합의 염색에 사용된다. 생화학 진단 검사용으로도 적용된다. 특히, 산업용 플라즈마 TV에서, 생산을 위한 모니터 스크린 및 나노기술, 및 나노입자 합성을 위한 센서 기술에 사용될 수 있고, 또한 페인트를 수용하는 프린터 카트리지를 제조하는 데에도 사용될 수 있다. 또한, 면역조직화학 또는 다른 디지털 영상화 기술과 조합되어 진단 목적으로 사용될 것이다.
개양귀비꽃은 자연에서 천연적으로 성장한다. 그 종명은 파파베르 로에아스 L(Papaver rhoeas L)이고, 과학적인 계통명은 파파베라세아에(Papaveraceae)이다. 다른 이름으로는 붉은 양귀비(red Poppy), 옥수수 양귀비(Corn Poppy), 플란더스 양귀비(Flanders Poppy), 셜리 양귀비(Shirley Poppy), 파파베르 파파베르(Papaver Papaver), 파파베르 루비니(Papaver Roubini), 파파베르 테누이시마(Papaver tenuissima), 파파베르 투미길(Papaver tumigil), 파파베르 트릴로붐(Papaver trilobum), 파파베르 스트리고숨(Papaver strigosum)이 있고, 동일한 종들이 존재한다(1-6). 보통 2 ~ 4 개의 큰 털이 많은 꽃받침의 꽃잎에 검은 반점이 있으며, 붉은 잎을 갖는다. 난소는 중앙에 위치하고, 검은 색 필드(field)로 둘러싸여 있다. 꽃가루의 양은 과일의 크기에 따라 다르며, 과일 당 200 개 이상의 씨앗을 함유한다.
파파베르 로에아스는 햇볕이 잘 드는 기후에서 자라고, 모래 토양에서 가장 잘 자란다. 파파베르 로에아스의 꽃잎은 화학적으로 발생하는 색을 띠고 있으며, 파파베르산(Papaveric acid)이 관여하는 반응을 일으킨다. 그것은 진정 효과를 갖고, 초경 조절(menarche regulating), 거담(expectorant), 최면(hypnotic)을 나타내고, 약간의 마약성 및 진정 작용을 하며(7-9), 발열, 기관지염 증상 및 기침, 불면증, 소화 장애 및 통증 치료에 유용하다(10-12). 또한, 그것은 과다 활동과 불면증과 같은 신경 계통 징후에도 사용될 수 있다. 그것은 또한, 어린이들에게 안전한 것으로 밝혀졌다(13-15).
플라보노이드는 과일, 야채, 곡물, 나무 껍질, 뿌리에 자연적으로 존재하는 페놀계 구조를 가지며, 또한, 꽃, 차 및 와인에서 발견되고(16), 5000 가지 이상의 플라보노이드가 검출되었지만, 그 구체적인 효과가 밝혀진 바는 거의 없다. 과일의 색상은 생플라보노이드 꽃으로 인한 것이다(17-20). 음식으로 섭취할 경우 심혈관 질환을 낮추고 사망률을 감소시킨다(21,22). 그 유도체 또한 채소에서 관찰되며, 예를 들어 비타민 P(일상적인)와 같은 비타민으로서 그 특성을 나타낸다(23). 모세 혈관 벽의 혈관 투과성(24)은 플라보노이드에 의해서 증가하며, 이는 1950 년대에 밝혀진 바 있다. 플라보노이드는 4 개의 주요 그룹(25,26)으로 나뉘며, 하위 그룹으로 분류될 수 있다(27). 플라보노이드는 분자 구조에 있어서 각 그룹에 대해서 특성을 나타낸다.
플라본(Flavone)은 중앙의 방향족 고리에 이중 결합을 가지고 있으며, 평면 구조를 갖는다. 플라보노이드는 2-페닐 벤조피렌 방향족 헤테로시클릭 고리를 포함한다. 생플라보노이드는 식물에 색을 부여하고, 또한 플라보노이드 식물 성장과 발달에 중요한 역할을 한다. 버섯과 생플라보노이드로 UV-B 광선에 대한 천연 장벽을 만드는 것은 기회적 균류 성장을 방지하는데 도움을 준다. 항미생물 및 항기생충 효과도 밝혀졌다. 미생물로 미생물 플라보노이드 분자에 유전적 변화를 가할 수도 있다. 그러나, 기술적으로 이는 고가의 방법이다(28).
IUPAC 4.5에 따르면 플라보노이드는 이소플라보노이드(isoflavonoids)와 네오플라보노이드(neoflavonoids)의 두 그룹으로 나뉜다. 이들은 이소플라본 구조로부터 유래된 3-페닐 크로멘-4-온(3-페닐-1,4-벤조피란) 및 생플라보노이드의 구조로부터 유래된 페닐 쿠마란 (4-페닐-1,2-벤조피란)이다.
생플라보노이드에는 케톤과 그 플라본 및 플라보놀(flavonols)의 함유 여부에 따라 화합물의 이름이 주어진다. 플라보노이드라는 용어는 또한, 폴리페놀 화합물을 서술하기 위해서, 비-폴리히드록시 케톤보다 느슨하게 사용된다. 플라보노이드는 세 개의 고리 또는 헤테로시클릭 구조를 갖고, 전반적으로 3-고리 구조 플로로글루시놀(phloroglucinol) 모델을 나타내는 구조를 갖는다. 이소플라보노이드 분자는 유전공학에 의해서 생산될 수 있다(28).
파파베르 로에아스, 꽃잎 및 캡슐은 일부 알칼로이드를 생산한다. 이러한 알칼로이드는 산과 함께 가열되면 포르피린(Porphyrin)으로 불리우는 활성 복합체로 변환된다. 미지의 반응 복합체 알카로이드의 결과로, 붉은 색이 나타난다. Klayman에서는 이를 "적색 채색 원리"라고 부르며(29-33), 색상은 반응의 pH와 관련되어 전개된다(33-35).
생플라보노이드는, 수퍼옥시드 디스무타제(superoxide dismutase), 카탈라아제(catalase), 및 글루타티온 퍼옥시다아제(glutathione peoxidase), 아스코르브산 및 α-토코페롤과 같은 환원제를 통해서 내부 산화 반응 산소 종을 감소시킴으로써(41), 지질 과산화를 방지하고(36-38), 항산화제로서 반응성 산소 라디칼에 대한 반응을 가속시켜서(39,40), 산소 손상을 조절한다.
일부 플라보노이드는 반응성 산소-유도체를 불활성화된 라디칼 퍼옥시니트라이트로 변환시킨다(41). 많은 플라보노이드가 내피 세포 및 대식세포와 상호작용할 수 있으며, 대식세포 내에서는 산화질소, 산화질소 합성효소(nitric-oxide synthase) 활성이 감소되고(43), 따라서 극히 유해한 퍼옥시니트라이트와 반응하여, 무산소 라디칼의 생성을 유도한다.
플라보노이드는 항산화제로 작용하며, 또한 잔류 자유 라디칼을 제거하여 손상을 덜 야기하고, 또한 산화질소(44)와 반응할 수 있고, 산화질소 분자가 플라보노이드에 의해서 억제된다(45).
크산틴의 옥시다아제 활성 억제를 야기하는(48) 플라보노이드 산화적 손상(46,47)은, 백혈구 염증을 감소시킨다(49). 일부 플라보노이드 수퍼옥시드 생성(50)은 호중구의 탈과립을 아무런 효과 없이 억제한다. 비만 세포 탈과립(mast cell degranulation)은 막 내에서 진행되고, Ca2 + 수용체는 채널의 조절에 영향을 미친다(51,52).
플라보노이드는 철-결합 및 철-안정화 특성을 갖고, 또한 지질 과산화를 억제한다(53-56). 일부 플라보노이드(57-59)는 호중구 부착이 최적의 염증 반응을 일으키므로 염증 세포를 감소시킨다. 그러나, 일반적으로, 보체 활성화를 감소시킬 수 있다. 플라보노이드는 퍼옥시다아제 방출을 감소시킨다. 이러한 감소에 의한 A1-항트립신 활성화는, 반응성 산소 라디칼의 생성을 억제한다. 단백질 분해 효소는 항염증 및 항혈전 형성 특성과 함께 효소 시스템(60-62)에 대한 아라키돈산의 점진적 불활성화를 나타낸다(63).
플라보노이드의 일일 평균 섭취량에 대한 연구는 제한적이다. 예를 들어, 비타민 C의 섭취량은 플라보노이드 섭취량의 3 배 이상이다(64). 플라보노이드 섭취량은 국가마다 크게 다르다(65,66). 코호트 연구를 통해 플라보노이드의 식품 섭취량을 결정하는 것은 어렵다. 인간에서 플라보노이드의 대사 흡수 및 분비와 관련된 연구 역시 제한적이다(67-72). 글리코실화된 형태는 아글리콘 형태(aglycone form)보다 더 많이 흡수된다. 컨쥬게이션(conjugation)은 장내 및 간에서 발생한다(73).
플라보노이드의 대사는 장 세포에서 시작되고, 간으로 수송된 후에 알부민에 결합함으로써 컨쥬게이션의 글루쿠로니드가 생성되고, 술페이트기, 메틸기 첨가, 또는 플라보노이드의 컨쥬게이션 두 가지 모두가 완성된다. 지중해 지역에서, 활성의 컨쥬게이션된 생플라보노이드의 양이 높을수록, 치사율 및 심혈관 질환의 비율이 낮다.
생플라보노이드의 소위 독성 효과는 잘 연구된 바가 없다(74-79). 균등 돌연변이 특성에 관한 많은 논의가 있다(80-82). 그러나, 오랜 연구에 걸친 인간에서의 다른 연구들은 확실한 발암성 부작용의 가능성은 낮다는 점을 보여준다. 플라보노이드는 암 세포 및 불멸화 세포에 독성을 나타내지만, 정상 세포에는 덜 독성을 나타내는 분자이다
인간을 대상으로 한 다른 연구들에 의하면 확실한 발암성 부작용 가능성은 낮다. 플라보노이드는 암세포 또는 불멸화 세포에 독성을 나타내지만, 이는 정상 세포에는 덜 독성을 나타내는 분자이다(83-85). 인 비트로 연구에서, 플라보노이드의 항알레르기제, 항산화제, 항균제, 항박테리아성, 항진균성, 일부 다른 생물학적 및 약리적 활성은 항-바이러스 효과를 갖는 것으로 나타났다.
Wang 등(87)은 단순 헤르페스 바이러스(Herpes simplex virus), HIV 뿐만 아니라, 호흡기 세포 융합 바이러스(respiratory syncytial virus), 패러인플루엔자 바이러스, 및 아데노바이러스에 의해서 수행된 연구에서 플라보노이드의 항바이러스성 활성을 보여주었다. 플라보노이드의 효과는 바이러스의 복제 사이클의 다른 단계에 대해서 달라질 수 있다(88). 플라보노이드 아글리콘의 형태(89)는 로타 바이러스 억제에 영향을 미친다. 역전사 효소 또는 DNA-지시 RNA 중합 효소로서의 항-HIV제(90)에 대해서도, 저해 활성에 관한 연구가 있다. HIV로 감염된 환자를 치료하기 위한 기존에 정의된 플라보노이드의 치료에 대한 현저한 기여가 혜택을 주는지도 불명확하다(91). 플라보노이드 중 인 비트로 연구에서, 백혈병(MLL) 유전자는 토포이소머라아제 효소를 억제함으로써 DNA 복제 돌연변이 효과를 발전시키는데 중요한 것으로 여겨진다. 시클로옥시게나아제 및 리폭시게나아제는 항-염증 효과를 통해서 보여진다. 막 티로신 키나아제(92,93)는 다양한 면역 반응을 억제하는 플라보노이드의 성질이다.
내피 혈관 신생은 몇몇 발달 반응에 의해 조절된다. 플라보노이드 섭취는, 폐암 및 흑색종 성장률 사이에 역 상관관계를 갖는다. 그러나, 플라보노이드 항 혈관신생 효과 뒤의 메커니즘은 확실하지 않다. 단백질 키나아제의 가능한 메커니즘(94-104)은 억제일 수 있다.
플라보노이드 음식을 규칙적으로 섭취한 남성들에서의 임상 연구는 관상 동맥 심장 질환으로 인한 사망 위험이 감소되는 것을 보여주었다. 부가적으로, 치매의 발달을 막기 위해 플라보노이드 섭취(105,106)가 제안되었다. 산화적 스트레스의 존재와 혈관 손상 사이의 총 혈장 콜레스테롤 농도 역 상관 관계가 보고되었다. 플라보노이드를 섭취하면 치매의 위험이 줄어든다. 혈관 염증 기전 변화, 동맥 혈압 및 고혈압이 고도로 조절된다. 혈관은 세포에서 산화 스트레스 관련 신호 전달 경로를 억제하고, 모세 혈관 내피 기능을 증가시킴으로써 죽상 동맥 경화증의 위험을 줄인다. 혈전 형성은 혈소판 응집을 억제함으로써 응고 형성을 억제한다. 플라보노이드는 (a) 직접적 항균 활성을 갖고, (b) 활성을 갖는 항생제와 상승 작용하며, (c) 박테리아 독성 인자를 억제하는 동일한 효과를 갖는다.
또한, 산화적 손상의 인 비보 효과를 측정하기 위해서, 부적절한 절차와 제한된 연구 및 과도한 양의 노동력이라는 문제점이 존재한다. 흡수 및 배설에 대한 더 많은 자료를 수집할 수 있도록 보장하는 분석 기술의 개발이 필요하다. 오늘날의 정보에 비추어 볼 때, 과일, 채소 및 음료(예 : 홍차와 적포도주)로 플라보노이드 섭취가 권장된다(107-112).
진단, 교육 및 연구 목적을 위한 조직 병리학 및 세포학에서, 고정 및 살아있는 조직 및 세포 샘플은 조직 및 세포에서의 진단 특성을 결정하기 위해서, 현미경 검사 및 평가를 통해, 특정 병리학적 특징을 확인하기 위해 염색된다. 현미경 평가를 위해서, 먼저 조직 또는 세포 샘플을 위한 유리 슬라이드가 배치된다. 파파베르 로에아스 제제로 염색되기 이전에, 이러한 샘플은 무색, 반투명 또는 투명하다. 새로운 제제는 조직층을 공격적으로 관통하고, 세포막과 핵에 도달한다. 내용물의 제제에 의해 제공되는 염색은 착색 방법이며, 적절한 현미경 평가가 제공되고, 구조에 대한 필요한 정보 사이의 관계를 보여주는 특징을 이해하기 위해서, 조직 및 세포에서 구조들을 구별해서 적절하게 착색시키는 것을 보장해주어야 한다.
도 1: 파파베르 로에아스 조직 및 세포 염색 제제 분석 방법
도 2: 파파베르 로에아스 제제를 위한 준비 단계
도 3: 파파베르 로에아스 전구체의 제조 기술
도 4: 파파베르 로에아스 생플라보노이드의 시스 - 트랜스 화학 구조
도 5: 분자의 명칭 및 생화학적 구조
도 6: 파파베르 로에아스 제제 염색 패턴
도 7: 파파베르 로에아스 제제 염색 방법의 단계
도 8: 염색 변이 및 감별법
도 9: 염색 패턴에 따른 파파베르 로에아스 세포 및 조직 염색 타입
도 10: 파파베르 로에아스 제제 제조의 예
도 11: 파파베르 로에아스 제제는 폐 조직 중 세포 핵을 특이적으로 강조함
도 12: 파파베르 로에아스 제제는 폐 조직 중 세포 핵을 특이적으로 강조함
도 13: 파파베르 로에아스 제제와 에오신은 폐 조직에서 핵 및 조직 세부사항을 보여줌
도 14: 파파베르 로에아스 제제와 에오신은 폐 조직에서 핵 및 조직 세부사항을 보여줌
도 15: 파파베르 로에아스 제제는 균류의 구조적 세부사항을 염색함
도 16: 파파베르 로에아스 꽃잎 내부의 비례 나선형 관형 구조
도 17: 원자력 현미경은 파파베르 로에아스 꽃잎 내의 시스터널(cisternal) 구조를 보여줌
도 18: 파파베르 로에아스 분자의 NMR 분석
용어 및 정의
I. 본 발명은 생물학적 시료 중 세포핵의 염색과 관련이 있으며, 새로운 세포 조직 염료(Papaver rhoeas Cell Texture Paint)를 개시한다. 이러한 염료는 새로운 활성 생플라보노이드를 함유하는 것으로 밝혀졌다.
II. 용어는 실시를 위해 본 발명을 더욱 잘 설명하고, 이를 편리하게 설명하기 위해서 사용된다.
III. 새로운 특정 용어가 존재하는 경우, 상기 새로운 용어의 특성이 설명되며, 그 세부사항이 상세히 서술된다.
IV. 정의는 단일 또는 복수로 표현될 수 있다. 수치는 예시된 수치로 제한되지는 않는다.
V. "유도체(derivative)"는 1, 2, 3을 가질 수 있는 분자의 개수로 언급되며, 이러한 수는 4 이하로 감소되거나 또는 특정 구체예로 증가될 수 있다.
VI. "상승적 분자(synergistic molecule)"는 1, 2, 3을 가질 수 있는 분자의 개수로 언급되며, 이러한 수는 특정 구체예를 위해서 4 이상으로 증가될 수 있다 ("synergistic molecule" in address to meaning of the number of molecules having 1, 2, 3, and this number may be increased to 4 or more, and for those specific purposes of the invention).
VII. 전형적으로, 염색 프로토콜에서 린스 용매로서 수돗물은 매우 경제적으로 사용된다. 실제로, 본 명세서에서 사용되는 "물"이라는 용어는 증류수 또는 탈 이온수와 같은 응용 및 특정된 수돗물을 포함한다.
VIII. "생물학적 샘플"은 원핵생물 기원, 코켈 고세균(kokel archaeal) 또는 진핵생물 기원(예를 들어, 곤충, 원생동물, 조류, 어류, 파충류)이다. 또는, 포유 동물(예를 들어, 랫트, 마우스, 소, 개, 당나귀, 기니아 피그 또는 토끼) 또는 영장류(예를 들어, 침팬지 또는 인간)일 수 있다. 생체 내 또는 생체 외 생물학적 조직 또는 체액에서 수득될 수 있다. 그러한 샘플은, 체액(예를 들어, 혈액, 혈장, 혈청 또는 뇨), 세포, 세포 기관, 분리된 기관, 생물학적 시료를 포함한다. 조직 및 분획에는 전체 또는 일부가 포함될 수 있다. 생물학적 샘플은 또한 생물학적 샘플의 일부에서 추출된다. 생물학적 샘플 단백질은 탄수화물과 핵산을 포함할 수 있다.
IX. 생물학적 시료, 조직 및 생물학적 체액에 대한 세포질 검사는 본 발명을 평가하기 위한 것이다. 체강 세척, 눈 세척액, 피부 장벽, 뺨 타액선, 혈액 및 질 분비샘, 골수, 소변, 쿠퍼액(preejakulat), 유두 흡인(nipple aspiration), 정액, 우유, 객담, 점액, 흉막 삼출액(pleural effusion), 골반액, 활액(synovial fluid), 복수액(ascites fluid), 자궁 경부암 검사(pap smear), 직장 도말(rectal swab), 흡인(aspiration), 바늘 생검(needle biopsy), 외과 또는 부검액, 조직 표본, 혈장, 혈청, 척수액, 림프액, 땀, 눈물, 객담, 타액, 종양, 체액, 기관 및 인 비트로 세포주 및 세포학적 샘플링 대상인 조직 배양액을 포함한다. 생물학적 세포 및 조직 검체는 파라핀 중에서 침지시키는 것과 같이 고정시킨 후 염색 공정에 사용될 수 있다. 이러한 준비물은 조사를 위해 문서 유리 상에 위치시킬 수 있다. 샘플은 곰팡이, 기생충 및 미생물을 착색하는데 사용할 수 있다. 생물학적 샘플의 염색 단계를 위한 준비의 기술적 차이는 본 발명에 대한 어떠한 제한도 의미하지 않는다.
X. 염료 용액은 물 또는 화학적 용매와 같은 액체를 사용하여 실온에서 용매 중에 보관된다. 물(부피 기준으로 약 50 % 이상) 및 하나 이상의 저급 알칸올 및 물을 포함하는 액체 또는 폴리올을 함유한다 (Water (approximately 50% and more by volume) and contains liquid or polyols comprising one or more lower alkanols and water). 변형에 따라서 변이가 가해질 수 있다. 사용되는 용매로는 에탄올, 증류수, 메탄올, 흐르는 물, 에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜, 메탄올 및 포름 알데히드가 언급될 수 있다.
XI. 상기 용어는 보다 높은 산화물을 갖는 분자의 항산화 용량을 나타내며, 상기 분자는 다른 분자의 산화를 방지하는 동일한 환경에 있다 (The term describes the antioxidant capacity of molecules with a higher oxide and the molecule is in the same environment that prevents oxidation of other molecules).
XII. 저급 알칸 올 분자; OH기, 알킬기(메틸기, 에틸기, n-함유는 1-5개 탄소 원자의 알킬기) -프로필기, (이소프로필기, n-부틸기, 부틸기, t-부틸기, n-기, 이소펜틸기, 네오펜틸기 또는 펜틸) 및 저급(알칸올은 메탄올, 에탄올 및 이소프로판올)이 첨가될 수 있다 (The lower alkanol molecule; OH group, alkyl group (a methyl group, ethyl group, n-containing is an alkyl group of 1-5 carbon atoms) - propyl group, (isopropyl group, n - butyl group, a butyl group, a t-butyl group, n - group, isopentyl group, neopentyl group, or pentyl.) and low (alkanols are methanol, ethanol and isopropanol) may be added).
XIII. 상기 용어는 다른 분자보다 더 강한 환원 전위를 갖는 2차 산화제 분자를 지칭한다. 상이한 화학적 산화제가 상이한 제제에 사용될 수 있다. 요오드 염 및 포타슘 아이오데이트, 소듐 아이오데이트, 산화아연, 퍼망가네이트 염 또는 포타슘 퍼망가네이트, 소듐 퍼이오데이트, 포타슘 퍼이오데이트 및 퍼옥시드, 히드로겐 퍼옥시드, 퍼이오데이트, 칼슘 히포클로라이트, 클로르아미드(kloramit), 라임 클로리드, 소듐 아이오데이트, 산화아연, 요오드, 소듐 히포클로라이트, 산화, 예를 들어 히드로클로리드 및 바륨 히드록시드 (The term refers to the secondary oxidant molecules having a stronger reduction potential than other molecular. Different chemical oxidants may be used for different formulations. Iodine salts and potassium iodate, sodium iodate, zinc oxide, permanganate salt or potassium permanganate, sodium periodate, potassium periodate salts and peroxides, hydrogen peroxide, periodate, calcium hypochlorite, kloramit, lime chloride, sodium iodate, zinc oxide, iodine, sodium hypochlorite, oxidation example hydrochloride, and barium hydroxide).
XIV. 매염제(mordant)는 금속인 염료 분자의 양이온 착물을 결합할 수 있다. 새로운 분자는 세포, 미엘린, 엘라스틴 및 근육 선의 콜라겐 섬유 및 미토콘드리아 내에서 DNA를 검출할 수 있으며, 분자의 상승 효과와 또한 연결되어 있다. 매염제의 예는 하기와 같이 열거될 수 있다. 암모늄 술페이트, 알루미늄 포타슘 술페이트, 알루미늄 암모늄 술페이트, 알루미늄 클로리드, 철, 텅스텐, 지르코늄, 비스무트, 몰리브덴 포스포몰리브덴산 또는 몰리브덴산, 바나듐(바나데이트) 알루미늄 또는 암모늄 알럼, 알루미늄 술페이트, 포타슘 알럼, 알루미늄 아세테이트, 칼슘 클로리드, 알루미늄 니트레이트, 철, 암모늄 술페이트, 페러스 술페이트, 포타슘 페로시아니드, 포타슘 페리시아니드, 페릭 클로리드, 코퍼 아세테이트, 철 알럼, 알루미늄, 비스무스 니트레이트, 몰리브덴 산 및 포스포몰리브덴 산. 매염제가 다른 금속은 다른 색의 분획을 생성한다. 예를 들면; 알루미늄; 보라색-파랑, 철; 블루-블랙, 크롬; 블루-블랙, 구리; 블루-그린, 니켈; 보라색, 주석; 적색, 납; 어두운 갈색; 오스뮴; 그린-브라운.
XV. 생물학적 제제 혼합물은 산을 생물학적 시료의 세포에 첨가함으로써 제조되고, 핵 염색 특이성이 증가한다. 이러한 목적으로, 아세트산, 살리실산, 시트르산, 염산, 황산, 포화 에탄올성 포름산, 아스코르브산을 사용할 수 있다.
XVI. 산화 방지제라는 용어는 감도 안정화에 사용되고, 이는 염료 산화의 최적 지속기간을 유지하고 저장 수명을 연장시킨다. 안정제 글리세롤, 수화 클로랄(chloral hydrate), 디에틸렌 글리콜, 포타슘 이오디드, 에틸 글리콜.
XVII. "분자"는 유기 분자이고, 다양한 부착 지점을 통해서 다른 분자들과 연결되어 복합체 구조를 형성할 수 있다 ( "molecule" is an organic molecule may be linked through various points of attachment to other molecules and form complex structures). 새로운 조성 및 분자 구조는 염료 조합 조성물의 분자로 특이적으로 다양성이 생성될 수 있다 (The new composition and molecular structure can be specifically created diversity with the molecules of dye combinations composition). 다른 분자 구조 및 이러한 분자에 부착된 합성된 구조 및 다른 특성들이 다양성을 형성할 수 있다. 이러한 분자의 일부 예로는 다당류가 있다. 아밀로오스 또는 시클로덱스트린 및 다른 알도오스 고리, 단당류, 글루코오스, 프럭토오스, 및 갈락토오스, 이당류(수크로오스), 다른 결합 분자들은 말토오스 및 락토오스와 같은 크립트 에테르(crypts ethers), 덴드리머, 나노튜브, 칼리사네레(kalisaneres), 발리노믹(valinomyc) 및 니게리신(nigericin)이 고려된다.
XVIII. 본 발명을 개시하는 명세서 및 청구 범위를 통해서, 용어는 특정 언어 표현에 사용된다. 용어 "약"은 특정 값이 용어에 의해서 수정된 정확한 값에 한정되지 않는다는 것을 의미한다. 달리 언급하지 않으면, 본원에서 사용된 바와 같이, 청구 범위 등에서 분자량, 반응 조건 및 성분, 특성의 양을 표현하는 모든 숫자들은, 각각의 경우에 상기 용어에 의해서 수정될 수 있다는 것을 이해해야 한다. 따라서, 달리 지시되지 않는 한, 원하는 특성에 의해서 특정된 각각의 수치 패러미터에 대한 적어도 상당한 자리수의 숫자 및 그 수치 패러미터가 하기 서술 내용에서 상세히 설명될 수 있다.
XIX. "알킬"이라는 용어는 분지, 직쇄 알킬기(예를 들어, 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 펜틸, 헥실, 헵틸, 옥틸, 노닐, 데실 등)로서, 포화 지방족기를 의미하며, 사슬 알킬기(이소프로필, 터트-부틸, 이소부틸 등)를 포함한다 (The term of "alkyl" means a branched, straight chain alkyl groups (for example, methyl, ethyl, propyl, butyl, pentyl, hexyl, heptyl, octyl, nonyl, decyl, etc.) refers to a saturated aliphatic groups, including. Chain alkyl groups (isopropyl, tert-butyl, isobutyl, etc.)). 직쇄 또는 분지 사슬 알킬 백본에서 탄소 원자수가 6 이하인 것(예를 들어, C1-6 직쇄형, 분지형 사슬의 경우 C3-C6), 척수(예를 들어 C1 내지 C4 직쇄형 또는 C3-C4 분지형 사슬의 경우 4 이하의 탄소 원자)를 포함한다 (A straight chain or in branched chain alkyl backbone to arm 6 or with fewer carbon atoms (e.g., C1-C6, for C3-C6 branched chain, straight chain ), spinal cord (e.g., C1 to C4 straight chain or 4 or fewer carbon atoms, for C3-C4 branched chain)). "C1-C6" 알킬은 1-6 개의 탄소 원자를 함유하는 알킬기를 의미한다. 본원에 사용된 용어 "C1-C4" 알킬은 1-4 개의 탄소 원자를 함유하는 알킬기를 의미한다. 더욱이, 용어 알킬, "미치환된 알킬" 및 치환된 탄화수소 백본의 후반 절반의 "치환된 알킬"을 포함하는 것은 하나 이상의 탄소에서 수소를 치환하는 치환기를 갖는 알킬을 의미한다 (Moreover, the term alkyl, both "unsubstituted alkyls" and including "substituted alkyls" of the latter half of the substituted hydrocarbon backbone means alkyl having substituents replacing a hydrogen on one or more carbons). 그러한 치환은, 예를 들어, (C1-C4) 알킬, (C1-C4) 알콕시, 아미노, ((C1-C4) 알킬아미노 및 (C1-C4) 디알킬 아미노를 포함), 시클로알킬 및 (페닐, 나프틸 포함), 아릴, 히드록실, 시아노, 할로겐 또는 니트로를 포함한다. 아릴 알킬 및 시클로알킬 치환기 또한 전술한 바와 같이 나타내진다.
XX. "알콕시"라는 용어는 치환 및 비치환된 알킬, 알케닐 및 알키닐기가 공유결합된 산소 원자를 의미한다. 알콕시기의 예는 메톡시, 에톡시, 이소프로폭시, 프로폭시, 부톡시, 펜톡시를 포함하지만, 이에 한정되는 것은 아니다. 일부 구체예에서, 4 개 이하의 탄소 원자를 갖는 직쇄형 또는 분지형 골격을 갖는 분지형 알콕시가 포함된다(예를 들어, C1-C4 직쇄형, C3-C4 분지형). 본원에서 사용된 "C1-C4"알킬은 1 내지 4 개의 탄소 원자를 함유하는 알킬기를 의미한다.
XXI. 본원에 사용 된 "아민" 또는 "아미노"는 하나 이상의 탄소 또는 변경되거나 또는 질소 원자가 헤테로 원자에 공유 결합된 구조를 의미한다 (As used herein, "amine" or "amino" means the structure in which at least one carbon or changed or a nitrogen atom is covalently bonded to the heteroatom). 알킬기는 4 개 또는 탄소 원자 수가 적은 백본일 수 있다(예를 들어, C1-C4 직쇄, C3-C4 분지형 사슬). (C1-C4) 알킬아미노는, 하나 이상의 추가적인 질소가 C1-C4 알킬기에 결합된 기 및 화합물을 의미한다. (C1-C4) 알킬아미노에서, 질소는 적어도 2 개의 추가의 C1-C4 알킬기에 결합된 기 및 화합물을 형성한다 ("(C1-C4) alkylamino, the nitrogen is bound to at least two additional C 1 -C 4 alkyl group refers to groups and compounds).
XXII. "아릴"이라는 용어에는, 예를 들어, 벤젠, 페닐, 피롤, 푸란, 티오펜, 0 내지 4개의 헤테로 원자를 함유하는 티아졸기, 예를 들어, 5 및 6-원 단일-고리 방향족기, 이소티아졸, 이미다졸, 트리아졸, 테트라졸, 피라졸, 옥사졸, 이속사졸, 피리딘, 피라진, 피리다진 및 피리미딘 등이 포함된다. 또한, "아릴"은 다중고리 아릴기를 의미하며, 예를 들어 트리시클릭, 비시클릭, 예를 들어 나프탈렌, 벤족사졸, 벤조비스옥사졸, 벤조티아졸, 벤즈이미다졸, 벤조티오펜, 메틸렌디옥시페닐, 퀴놀린, 이소퀴놀린을 의미하며, 이러한 기는 또한 인돌, 벤조푸란, 퓨린을 포함하고, 데아자퓨린 구조 또는 인돌리진 중 헤테로원자를 갖는 것을 포함한다. "아릴 헤테로시클릭", "헤테로아릴" 또는 "헤테로방향족"은 또한 다음과 같이 표현될 수도 있다. 전술한 바와 같은 방향족 고리에서, ((C1-C4) 알킬, (C1-C4) 알콕시, ((C1-C4) 알킬 아미노 및 (C1-C4) 디알킬 아미노를 포함) 아미노, 히드록시, 시아노, 할로겐 또는 니트로와 같은 치환기가 하나 이상의 고리 위치에서 발견되는 것이다 (An aromatic ring as described above, such as is found in one or more ring positions with such substituents, (C1-C4) alkyl, (C1-C4) alkoxy, ((C1-C4) alkylamino and (C1-C4) including dialkylamino) amino, hydroxy, cyano, halogen, or nitro). 아릴기는 또한 융합될 수 있고, 폴리싸이클 (예, 테트랄린)은 비방향족 지환족 또는 가교성 헤테로아릴을 충분히 생성한다. 예를 들어, 라자루스 헤테로시클릭 고리(Lazarus heterocyclic rings)는 옥시란, 디티에트 토(dithiet to), 피롤린, 피롤, 푸란, 디히드로푸란, 디히드로티오펜, 티오펜, 피라졸, 1,2,2,3-트리아졸을 포함하고, 1,2,4는 비포화된 시클릭 화합물, 트리아졸, 디티아졸, 테트라졸, 피리딘, 피란, 피리미딘, 피란, 티아피르 밸브(thiapyr valve), 디아진, 티아진, 디옥신, 트리아진 및 테트라센을 포함한다 (Aryl groups can also be fused, a polycycle (e.g., tetralin) creates enough non-aromatic alicyclic or koprulenebilir.heteroaril includes, for example Lazarus heterocyclic rings include oxirane, dithiet to, pyrroline, pyrrole, furan, dihydrofuran, dihydrothiophene, thiophene, pyrazole, imidazole, oxazole, thiazole, isothiazole, 12,2,3-triazole, 1,2,4 includes unsaturated cyclic compounds, triazole, dithiazole to, tetrazole, pyridine, pyran, pyrimidine, pyran, thiapyr valve, diazine, thiazine, dioxin, triazine and tetracene).
XXIII. "항체"라는 용어는 특정 공간 및 극성에 특이적으로 결합하여, 조직에 보완적인 것으로 정의된 면역 글로불린 분자를 의미한다. 항체는 모노클로날 또는 폴리클로날일 수 있으며, 분비된 단백질의 수집의 연속성 하이브리드 세포(모노클로날) 또는 숙주 혈청의 수집에 의해서 형성된 것(폴리클로날)으로 수득된다 (The antibody may be monoclonal or polyclonal and either continuous hybrid cell of the collection of the secreted protein (monoclonal) or formed by the collection of host serum (polyclonal) is obtained). 항체는 완전한 면역글로불린이거나, 또는 그 단편, 예를 들어 IgA, IgD, IgE, IgG1, IgG2a, IgG2b 및 IgG3, IgM 종류 및 이소타입, 전장과 유사한 친화도로 결합력을 보유할 수 있는 부분을 포함하는 기능적 항체 단편(예를 들어, Fab, Fv 및 F(ab '). Sub.2 또는 Fab')을 포함할 수도 있다.
XXIV. 바인더(binder)의 용어; 생물학적 샘플에서 하나 이상의 표적에 결합할 수 있는 분자를 지칭한다. 바인더는 고유한 방식으로 대상에 연결될 수 있다. 적합한 바인더는 천연 또는 변형된 펩타이드, 단백질(예를 들어, 항체, 아피보(afibo) 또는 압타머), 핵산(예를 들어, 폴리뉴클레오티드, DNA, RNA 또는 압타머)을 포함하며; 다당류(예를 들어, 렉틴, 당), 지질, 효소, 효소 기질 또는 억제제, 리간드, 수용체, 항원 또는 합텐(haptens)을 포함할 수 있다. 현재 표적에 따라서, 분석되는 샘플에 적합한 바인더가 선택 및 결정될 수 있다.
XXV. 현재 표적에 따라서, 분석되는 샘플에 적합한 바인더가 선택 및 결정될 수 있다. 예를 들어, 표적은 샘플 중에 리간드를 포함할 수 있고 바인더는 수용체를 포함할 수 있거나, 또는 표적은 수용체를 포함할 수 있고 바인더는 리간드를 포함할 수 있다. 유사하게, 표적은 항원을 포함할 수 있고 바인더는 항체 또는 그 결합 단편을 포함할 수 있거나, 또는 그 역이거나, 또는 항체들을 포함할 수 있다. 일부 구체예에서, 표적은 핵산을 포함할 수 있고, 바인더는 상보적 핵산을 포함할 수 있다. 일부 구체예에서, 표적 및 바인더 양자 모두는 서로 결합할 수 있는 단백질들을 포함할 수 있다.
XXVI. 새로운 기능성 및 분자 오븐 제품(molecular oven products)에 대한 임의의 변화는 본 발명을 제한하지 않으며, 본 발명의 가능한 능력으로서 고려된다.
파파베르 로에아스 추출물로부터 수득한 새로운 세포 핵 염색이 본 발명에 서술되어 있다. 이러한 새로운 조직학적 페인트는 매우 활성이고 기능적인 생플라보노이드를 함유한다. 파파베르 로에아스 제제는 조직 병리학, 세포학 및 미생물학에서 적용되는 독특한 패턴의 생물학적 특성을 보여주는 새로운 핵 염색으로서 세포 및 조직 샘플의 특성을 보여준다 (도 11,12)
세포핵 특징은 병리학자들에 의해서 진단의 목적, 특히 악성 또는 전이성 세포의 검출을 위해 평가되지만, 진단과는 별도로, 수술 후 외과 표본 및 생검, 미세 침 생검(fine needlebiopsy), 도말(smears), 세척에서, 그리고 침습적 또는 비침습적 방법 샘플로 정상적인 발견의 병리학적 소견을 돕기 위해서, 또한 부검 준비물을 검사하기 위해서도 사용된다.
파파베르 로에아스는 자연에서 자발적으로 성장하며, 조직 세포 핵 제제를 생산하기 위한 염색을 유지하도록 용이하게 생산가능하다. 염색 제제는 세포 핵의 핵을 강조하기 위한 분자로 구성된다. 상기 분자는 분석되고, 이하에서 제시되고 설명되는 다른 연구실 연구로 진행된다.
충분하고 안정적인 염색을 제공하기 위해서 매염제(금속)가 통합되고, 산이 첨가된다. 파파베르 로에아스 제제는 간결한 방식으로 명확한 세포 모폴로지를 갖는 영구 염색 특성을 나타내었다. 특히, 에오신 염색과 조합되는 경우, 파파베르 로에아스 제제는 조직과 세포, 조직층, 막, 근육 조직, 핵 내부 또는 세포질 내부 구조를 염색하고, 미세한 세부 사항으로 착색한다(도 13.14).
염료 용액에 대한 저장 시간의 연장된 길이는 자연적으로 또는 화학적으로 산화된다 (The extended length of the storage time on the dye solution is oxidized naturally or chemically)(113, 114). 산화제의 최적의 효율 및 사용량은 과산화로부터의 생성물 형성을 방지할 수 있다(115, 116).
염료 농도의 변동은 염색의 안정성을 방해한다(117). 이러한 시간은 염색의 적용으로 대체되어야 하고 수정되어야 한다. 염색의 강도는 시각적으로 평가된다. 숙련된 전문가가 염색을 평가하고 원하는 염색 품질에 도달할 때까지 염색 강도를 조정한다.
플라보노이드는 일반적으로 2 개의 방향족 고리를 함유한다. 이들 각각의 고리는 적어도 하나의 히드록실기 및 3-탄소 브릿지를 갖는 6-헤테로시클릭 고리 디자인을 형성한다 (Each of these ring forms at least one hydroxyl group and 6-heterocyclic ring design with three-carbon bridge). 작용기 및 헤테로시클릭 구조의 특성 또는 산화 상태 및 결합된 분획에 따라서 방향족 고리에 결합된 헤테로시클릭 고리로 인해서 플라보노이드 서브그룹이 형성된다.
이러한 분자는 천연 또는 변형된 펩타이드, 단백질(예를 들어, 항체 또는 앱 타머), 핵산(예를 들어, 폴리뉴클레오티드, DNA, RNA 또는 앱타머), 다당류(예를 들어, 렉틴, 당), 지질, 효소, 효소 기질 또는 억제제, 리간드, 수용체, 항원 또는 합텐의 다른 기 및 분자에 연결하기 위해서 바인더를 사용한다. 유사하게, 연결된 표적 기는 항원 및 항체 또는 항체 단편 일 수 있다. 이러한 제제 중 파파베르 로에아스는 핵산을 표적화한다.
파파베르 로에아스는 현미경, 분자 및 원자력 현미경 조사와 관련되어 조정된다(도 1). 분자 분석을 위해서, 여과된 추출 용액을 고온 에탄올 중에서 절반 속도로 인큐베이션함으로써 건조시킨다. 건조된 샘플을 3회 분쇄하고(triturated), 메탄올 조 도중에 1 시간 동안 처리한다. 다시, 액체 분획을 밤 중에 30-60 ℃의 인큐베이터에서 증발시키고 건조시킨다. 생성된 분말 1g을 100cc의 에탄올에 용해시키고, 섬유 플레이트에 흡착시킨다. 1 % 암모늄 용액을 포함하는 핑크색 플레이트는 특이적으로 푸르게 관찰된다. 이러한 청색 염료를 아세트산 중에 용해시킨다. 액체 분획을 제거하였다. 그리고, 잔류 건조 분말을 분석을 위해서 가공한다(도 2.3).
분자 분석은 생플라보노이드의 특징(도 18) 및 구조 생화학적 명칭인; 5-히드록시-2-(3-(테트라히드로-6-((테트라히드로-3,4,5-트리히드록시-6-메틸-2H-피란-2-일옥시)메틸)-2H-피란-2,3,4,5-테트라올)-4-메톡시페닐)-7-메톡시-4H-크로멘-4-온을 나타낸다.
이는 생플라보노이드에 대한 생화학적 구조의 특징을 갖는다(도 4, 5).
파파베르 로에아스 제제 및 에오신(118)이 조합으로 사용될 수 있다. 상기 분자 및 그 유도체 상승적 생플라보노이드 및 새로운 분자는 조직층, 막, 근육 세포를 염색하고, 세포질 내부 및 핵내 구조 뿐만 아니라 점액 및 신경 섬유를 상세히 묘사한다.
상기 염색 제제는 매염제, 용매, 산, 산화제 또는 산화제 및 보존제와 통합되어 적절한 수치의 제제로 이용되도록 변형될 수 있다(119).
산은 일반적으로 용액의 pH를 조절하는 데 사용되며, 보다 내구성 있는 염색 형성을 유지할 수 있으며, 보다 선택적으로 세포를 착색시키고, 과도한 산화물을 방지한다. 따라서, 산은 침전물의 형성을 방지한다. 자동 또는 수동 염색 방법을 선택할 수 있다.
안정화 첨가제는 초고속 산화를 방지하고, 기본적으로 최적화를 통해 보다 긴 유효 기간을 제공한다. 이러한 목적으로, 아밀로스, 시클로덱스트린, 크립탄즈(cryptands), 크립토파이신(cryptophycin), 카비탄드(Kavitand), 크라운 에테르(crown ether), 칼릭사렌(Calixarene), 발리노미신(valinomycin), 시클로덱스트린(cyclodextrin) 또는 니게리아(Nigeria)가 사용된다.
액체 용매는 물에 용해되어 다른 항산화 물질과 결합한다. 예를 들어, n-프로필, n-옥틸 및 n-도데실, n-알킬 갈레이트 갈레이트(n-alkyl gallates gallates); 소르비톨 및 만니톨과 같은 환원될 수 있는 당; 벤조에이트 및 히드록시벤조에이트; 설파이드 및 메타비설파이트; 시트르산, 타르타르산, 락트산, 에리 소르브산(erythorbic acid), 아스코르빈산, 요산, 탄닌산 및 염기성 염(Mg2 +, NH4 +, Na+, K+ 및 Ca2+ 염); EDTA 및 수화 클로랄(chloral hydrate)이 첨가된다.
하나 이상의 용매가 파파베르 제제에 사용될 수 있다. 물, 에탄올과 같은 저급 알칸올, 폴리올 등이 함유될 수 있다. 폴리올의 예로는 글리세롤, 에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜 및 폴리프로필렌 글리콜이 적용될 수 있다.
포르말린은 조직 및 세포 샘플의 적당한 고정액이다. 파라핀 조직 카세트가 샘플 제조 및 충전 및 침지에 사용되어 결빙(frost)되도록 방치된다. 파라핀으로 고정된 조직은 마이크로톰 커터(microtome cutter)로 박편으로 절단되고, 유리 현미경 슬라이드 상에 놓여진다. 이어서, 제조물을 오븐 내에 넣어 과량의 파라핀을 녹이고, 잔류 왁스 상에서 녹여진다. 자일렌 및 톨루엔 슬라이드로 탈왁스화를 완전하게 수행하여야 한다.
동결된 조직 샘플은 염색 과정의 단편으로 취해질 수 있다. 단기간용 동결 조직 단편은 10% 포르말린 중에 보관된다. 염색 방법, 타이밍 및 순서는 제제화 방법 및 기타 조건에 따라 달라질 수 있다. 에오신 Y에 대한 세포질 염색 반대물로, 오렌지 1 G(Orange 1 G), 연녹색 SF 황색 비스마르크 브라운(light green SF yellowish Bismarck Brown), 빠른 녹색 FCF(fast green FCF), O-6, EA25, EA36, EA50 및 EA65도 사용된다(122).
염색 제제는 하기 염료 제제 중에서, Giles, Anderson, 코카콜라의 Bosma Bullard Carazz로 불리우는 Groot de Baker Bennett Bohmer, Debi로부터의, Delafield Duval, Ehrlich Friedlander, Gadsdo Gage, Galigh, Garvey 's, Graham, Martinotti Mann Mallory로 명명된 Mitchell Mayer Masson, 즉 McLachlan iodine, Lillie Lee Launoy Langeron Krutsay Kleinenberg Horneyold Haug Hamilton, Harris, Harris, Harris & Power's, Haugen's Molnar, Papamiltiades', Pusey, Rawitz' Reddy, Sass', Schmorl, Sliders', Unna Watson's 및 Weigert 및 Wright 및 철-매염제 헤마톡실린 Anderson, Cretin, Faure, Goldman, Hansen, Heidenhain Janssen, Krajina, krutsay Manna, Lillie, Lillie 및 Earle, Masson, More & Bassal, Murray, Paquin 및 Goddard Agaud Rozas를 포함하는 Kefalas', Seidel Thomas', Weigert 및 Yasvoyn 또는 비스무스-매염제 헤마톡실린 Roach & Smith와 같이 변형될 수 있다. 구리-매염제화된 헤마톡실린 Bensley는 Cook 및 Faure로 명명되었다. 몰리브덴-매염제 헤마톡실린 해(molybdenum-mordant hematoxylin year)로서 유지됨. 바나듐-매염제화된 헤마톡실린 Hedenham Smith, 지르코늄-매염제 헤마톡실린 및 McNulty & Smith(123)가 고려될 수 있다 (The stain formula can be modified in the following dye formulations as in Gills, Anderson, Groot de Baker Bennett Bohmer, called Bosma Bullard Carazz of Coca Cola, from Debi, Delafield Duval, Ehrlich Friedlander, Gadsdo Gage, Galigh is, Garvey's, Graham, Mitchell Mayer Masson named Martinotti Mann Mallory says McLachlan iodine Lillie Lee Launoy Langeron Krutsay Kleinenberg Horneyold Haug Hamilton, Harris, Harris & Power's, Haugen's Molnar, Papamiltiades ', Pusey, Rawitz' Reddy,, Sass ', Schmorl, Sliders', Unna Watson's and Weigert and Wright and iron-mordant hematoxylin Anderson, Cretin, Faure, Goldman, Hansen, Heidenhain Janssen, Kefalas', including Krajina, the krutsay Manna, Lillie, Lillie and Earle, Masson, More & Bassal, Murray, Paquin and Goddard agaud Rozas', Seidel Thomas', Weigert and Yasvoyn or bismuth-mordant hematoxylin Roach & Smith is. Copper-mordanted hematoxylin Bensley, has named Cook and Faure. Held as of molybdenum-mordant hematoxylin year. Vanadium-mordanted hematoxylin Hedenham Smith, zirconium-mordant hematoxylin and McNulty & Smith (123) can be considered).
아크리딘 염료, 안트라퀴논 염료, 아릴메탄 염료, 아조 염료, 디아조늄 염료, 니트로 염료와 같은 다른 염색이 조합될 수 있으며, (특히 자동 사용의 방법에서) 프탈로시아닌 염료, 퀴논 이민 염료, 테트라졸륨 염료, 염료 및 티아졸 염료, 크산텐을 조합할 수 있다. 조직학적 염색을 위한 번역 페인트 샘플에는, 아세트산, 황색 산, 1 흑색 산, 22 블루 93, 산 푹신(acid fuchsin), 산 녹색, 산, 산, 1 녹색 5, 산 적색, 오렌지 산 10, 산 적색 4, 산 적색 26, 산, 산, 산 적색 29, 산 적색 44, 산 적색 51, 산 적색 66, 산 적색 73, 산 적색 87, 산 적색 91, 산 적색 92, 산 적색 94, 101 적색 103, 산 로세아(acid rosea), 산 루빈(the acid Rubin), 산 보라 19, 산, 1 황색 산, 9 황색 산, 23 황색 산, 24 황색 산, 36 황색, 황색 73, 산 황색 S, 산 황색 T, 아크리딘, 아크리플라빈(acriflavine), 알시안 블루(alcian blue), 알시안 옐로우, 알코올-가용성 에오신, 알리자린(alizarin), 알리자린 블루, 알리자린 블루 2RC, 알리자린 카민(alizarin carmin), 알리자린 시아닌 R, 알리자린 레드 S, 알리자린 푸르푸린, 알루미나, 아미도 블랙 10B, 적색 아미도나프톨, 아미도 슈왈츠(amido schwarz), 아닐린 블루 WS, 마우베(mauve), 안트라센 G 아조에오'FP 블루 SWR(anthracene G azoeo're blue SWR), 안트라센 블루 SWX, 아우라민 0(Auramine 0), 아조-에오신, 아조캄 B(azocarm B), 아조캄 G, 아조익 디아조 5, 아조익 디아조 48, 아조플록스 to(azophlox to), 아조브 블루(azov blue), 딥 블루, 아주레 B(azure B), 아주레 C, 베이직 블루 8, 베이직 화운데이션(basic foundation), 9 청색 화운데이션, 12 청색 화운데이션, 15 청색 화운데이션, 17 청색 화운데이션, 20 청색 화운데이션, 26 청색 갈색 원(blue brown one), 베이직 유 푸쉬(basically you Fusch), 베이직, 4 베이직 5 적색 베이직 적색 2 베이직 녹색(4 basic 5 red basic red 2 basic green), 오렌지 14, 베이직, 5 녹색, 베이직 필수, 9 적색 보라색 2, 베이직 보라색 4, 베이직 보라색 10, 베이직 보라색 14, 베이직 필수, 1 황색 황색 2, 비에브리히 R(Biebrich R), 비스마르크(Bismarck) 갈색 Y, 브라질(Brazil), 브라질, 샤이니 크록(shiny Croc), 브릴리언트 크리스탈 스칼렛 6R 스칼렛 비에브리히 스칼렛(brilliant crystal scarlet 6R scarlet Biebrich scarlet), 칼슘, 적색, 카민, 카민 산 카르모이신 6(carminic acid Carmoisine 6), 셀레스틴 청색 B(Celestine blue B), 차이나 블루, 클로란트 패스트 적색 5B(chlorant fast red 5B), 적색, 청색 코엘레스트 시카고 블루 4B(blue coelest the Chicago blue 4B), 크롬 보라색 CG, 2 크로모트롭 to(2 chromotrop to), 시아닌까지의 크로목스 R(chromox until cyanine R), 콩고 고린도(Congo Corinth), 콩고 적색, 코튼 블루 코튼(cotton blue cotton), 적색, 적색 적색 3D 상의 크로커(Crocker on red red 3D), 크로커의 붉은 달(Crocker's red Moon), 스케치, 크리스털 폰시오 6R(crystal Ponceau 6R), 크리스털 적색, 크리스탈 보라색, 달리아(dahlia), 다이아몬드 그린 B, 다이렉트 블루 14, 다이렉트 블루 58, 크로커 다이렉트 다이렉트 적색 28 적색 다이렉틀리(Crocker direct direct red 28 red directly), 10 적색, 다이렉트, 7 황색 다이렉틀리, 81 적색 다이렉틀리, 80 적색, 청색 4 두라졸(blue 4 durazol), 청색 8G, 황색, 에오시놀, 에오신 Y 에오신 에오신 B, 청색 에오신, 에오신, 두라졸, 에리 가넷 B(Erie garnet B), 시아닌 R로의 에리오크로(eriochro to cyanine R), 에리스로신 B 에틸 에오신(erythrosine B ethyl eosin), 에틸 녹색, 에틸 보라색, 에반 청색(Evan's blue), 패스트 청색 B(fast blue B), 패스트 녹색 FCF, 패스트 적색 B, 패스트 황색, 패스트 황색 엑스트라 패스트 황색 G(fast yellow extra fast yellow G), 유성 흑색 HB(oily black HB), 플루오레세인, 푸드 녹색 3(food green 3), 갈레온(galleon), 갈라민 청색 갈로시(gallamine blue gallocy's), 용담 보라색(gentian violet), 황색, 리사민 패스트 황색 1(lissamine fast yellow 1), INT, 케르메스(Kermes), 케르메스산(kermesic acid), 케르메흐트로트(kemechtrot), Lac, 락카산(laccaic acid), LAUTH 더 바이올렛(LAUTH the violet), 연녹색, 투 루트(to root), 1 청색 투 루트, 퀴클리 러브 더 BBL(quickly rub the BBL), 헬베티아 청색(helvetia blue), Hoffman 보라색(Hoffman's violet), 히드라진 황색(hydrazine yellow), 임페리얼 적색 헬리오 리사민 녹색 SF(imperial red Helio lissamine green SF), 룩솔 패스트 청색(Luxol fast blue), 마젠타(magenta), 0 , 마젠타 II, 마젠타 II, 마젠타 III, 말라카이트 녹색(malachite green), 맨체스터 갈색(Manchester brown), 마르티우스 황색(Martius yellow), 라일락(lilac), 마우베 to, 메르브로 my(merbro my), 머큐로크롬(Mercurochrome), 메타닐 황색(methanyl yellow), 메틸렌 블루 메틸렌 아주레 B(methylene blue methylene azure B), 메틸렌 블루 C, 메틸렌 블루, 메틸렌 그린, 청색, 메틸, 메틸 녹색, 메틸 보라색, 메틸 보라색 2B, 메틸 보라색 10B, 황색 3G 밀링(yellow 3G milling), 매염제 청색 3, 매염제 청색 10, 청색 14 매염제, 매염제 청색 23, 청색 32 매염제, 매염제 4 적색 천연 매염제, 45 청색-자색, 11까지 적색-자색(red-purple to 11), 3 25 적색 보라색(3 25 red violet), 보라색까지 자색 39(purple to violet 39), 나프탈렌 블루, 나프톨 블루, 흑색, 나프톨 그린 B, 나프톨 옐로우 S, 1 천연 흑색, 천연 적색, 천연 적색 3, 천연 경관, 28 적색 천연, 25 적색 천연, 24 적색 천연, 16 적색 천연, 8 적색, 황색 6, NBT, 중성 적색, 겟 뉴 푹신(get new fuchsin), 나이아가라 블루 3B, 블루 나이트, 나일 블루, 나일 블루 a, 나일 블루 황산염, 나일 레드, 니트로 BT, 니트로 블루 테트라졸리움, 핵 패스트 적색, 오일 적색 O, 오렌지 G, 오르세인(orcein), 파라노사닐린 페르킨 보라색(Pararosaniline Perkin violet), 플록신 B(phloxine B), 피크르산(picric acid), 폰시오 6R(Ponceau 6R), 폰시오 B, 폰시오 데 자일리딘(Ponceau de xylidine), 폰시오 S, 폰타 더 스카이 블루 5B(Ponta the sky blue 5B), 프림로즈(primrose), 프리물라 to(primula to), 푸르푸린(purpurin), 파이로 B(pyro B), G 피로닌 Y(G pyronin Y), 로다민 B(rhodamine B), 로사닐 더 파이로(rosanil the pyro), OR, 적색 중 적색 R(red R in red), 샬라크 R(Scharlach R), 셸락(shellac), 시리우스 적색 F3B(sirius red F3B), 시리우스 적색 4B 사프라닌(sirius red 4B safranin), 벵갈(Bengal), 사프론 로즈 시리우스 청색 어보브 F3(saffron rose Sirius blue above F3), 시아닌 R-가용성 블루까지의 솔로크로(solochro to cyanine R-soluble blue), 용매; 3 흑색 용매 청색 38 용매, 23 적색 a 용매, 24 적색 a 용매, 27 적색 a 용매, 45 적색, 황색 94, 스피리트 가용성 에오신(spirit soluble eosin), 수단 III(Sudan III), 수단 IV 수단 흑색 B(Sudan IV Sudan black B), 수단 적색 BK(Sudan red BK), 황 황색 S(sulfur yellow S), 스위스 청색(Swiss blue), 타트라진(tartrazine), S 티오플라빈 T(S thioflavin T), 티온(tion), 청색(blue), 톨루이딘 적색 톨루엔(toluidine red toluene), 트로파에올 G(tropaeol G), 트라파플라브 더 티오플라빈(trypaflav the thioflavin), 청색, 우라닌 트리판(Uranin trypan), 빅토리아 청색 4R(Victoria blue 4R), 빅토리아 청색 B, 빅토리아 청색 R, 빅토리아 녹색 B, 수용성 에오신, 우드스타 적색(woodsta red), 자일리딘 폰시우(xylidine Ponceau) 및 에오신 황색, 및 그 조합이 있다(Other stains can be combined esuch as acridine dyes, anthraquinone dye, arylmethane dyes, azo dyes, diazonium dyes, dyes such as nitro dyes, can combine the (particularly methods of use of automatic) phthalocyanine dyes, quinine imine dyes, tetrazolium dyes, dyes and thiazole dyes, xanthene. Translation paint samples for histological staining, acetic acid, yellow acid, 1 black acid, 22 blue 93, acid fuchsin, acid green, acid, acid, 1 Green 5, Acid red, orange acid 10, acid red 4, acid red 26, acid, acid, acid red 29, acid red 44, acid red 51, acid red 66, acid red 73, acid red 87, acid red 91, acid red 92, acid red 94, 101 red 103, acid rosea the acid Rubin, acid violet 19, acid, acid, 1 yellow acid, 9 yellow acid, 23 yellow acid, 24 yellow acid, 36 yellow yellow 73, acid yellow S, acid yellow T, acridine, acriflavine, alcian blue, alcian yellow, alcohol-soluble eosin, alizarin, alizarin blue, alizarin blue 2RC, alizarin carmine, alizarin cyanine BBS alizarol cyanine R, alizarin red S, alizarin purpurin, alumina, amido black 10B, red amidonaphthol, amido schwarz, aniline blue WS, mauve, anthracene G azoeo're blue SWR , anthracene blue SWX, Auramine 0, azo-eosin, azocarm B, azocarm G, azoic diazo 5, azoic diazo 48, azophlox to, azov blue, deep blue, azure B, azure C, basic blue 8, the basic foundation, 9 blue foundation, 12 blue foundation, 15 blue foundation, 17 blue foundation, 20 blue foundation, 26 blue brown one, basically you Fusch, basic, 4 basic 5 red basic red 2 basic green, orange 14, basic, 5 green, basic essentials, 9 red violet 2 , basic violet 4, basic violet 10, basic violet 14, basic essentials, 1 yellow yellow 2, Biebrich R, Bismarck brown Y, Brazil, Brazil, shiny Croc, brilliant crystal scarlet 6R scarlet Biebrich scarlet, calcium, red, carmine, carminic acid Carmoisine 6, Celestine blue B, china blue, chlorant fast red 5B, red, blue coelest the Chicago blue 4B, chrome violet CG, 2 chromotrop to, chromox until cyanine R, Congo Corinth, Congo red, cotton blue cotton, red, Crocker on red red 3D, Crocker's red Moon, sketch, crystal Ponceau 6R, crystal red, crystal violet, dahlia, diamond green B, direct blue 14, direct blue 58, Crocker direct direct red 28 red directly, 10 red, direct, 7 yellow directly, 81 red directly, 80 red, blue 4 durazol, blue 8G, yellowish, eosinol, eosin Y eosin eosin B, bluish eosin, eosin, durazol, Erie garnet B, eriochro to cyanine R, erythrosine B ethyl eosin, ethyl green, ethyl violet, Evan's blue, fast blue B, fast green FCF, fast red B, fast yellow, fast yellow extra fast yellow G, oily black HB, fluorescein, food green 3, galleon, gallamine blue gallocy's, gentian violet, yellow, lissamine fast yellow 1, INT, Kermes, kermesic acid, kemechtrot, Lac, laccaic acid, LAUTH the violet, light green, to root, 1 blue to root, quickly rub the BBL, helvetia blue, Hoffman's violet, hydrazine yellow, imperial red Helio lissamine green SF , Luxol fast blue, magenta, 0, magenta II, magenta II, magenta III, malachite green, Manchester brown, Martius yellow, lilac, mauve to, merbro my, Mercurochrome, methanyl yellow, methylene blue methylene azure B, methylene blue C, methylene blue, methylene green, blue, methyl, methyl green, methyl violet, methyl violet 2B, methyl violet 10B, yellow 3G milling, mordant blue 3, mordant blue 10, blue 14 mordant, mordant blue 23, blue 32 mordant, mordant 4 red natural mordant, 45 blue-purple, red-purple to 11, 3 25 red violet, purple to violet 39, naphthalene blue, black, naphthol blue, black, naphthol green B, naphthol yellow S, 1 natural black, natural red, natural red 3, natural scenic, 28 red natural, 25 red natural, 24 red natural, 16 red natural, 8 red, yellow 6, NBT, neutral red, get new fuchsin, Niagara blue 3B, blue night, Nile blue, Nile blue a, Nile blue sulfate, Nile red, nitro BT, nitro blue tetrazolium, nuclear fast red, oil red O, orange G, orcein, Pararosaniline Perkin violet, phloxine B, picric acid, Ponceau 2R, Ponceau 6R, Ponceau B, Ponceau de xylidine, Ponceau S, Ponta the sky blue 5B, primrose, primula to, purpurin, pyro B, G pyronin Y, rhodamine B, rosanil the pyro, OR, red R in red, Scharlach R, shellac, sirius red F3B, sirius red 4B safranin, Bengal , saffron rose Sirius blue above F3, solochro to cyanine R-soluble blue, solvent;, 3 black solvent blue 38 solvent, 23 red a solvent, 24 red a solvent, 27 red a solvent, 45 red, yellow 94, spirit soluble eosin, Sudan III, Sudan IV Sudan black B, Sudan red BK, sulfur yellow S, Swiss blue, tartrazine, S thioflavin T, tion, blue, toluidine red toluene, tropaeol G, trypaflav the thioflavin, blue, Uranin trypan, Victoria blue 4R, Victoria blue B, Victoria blue R, Victoria green B, water-soluble eosin, woodsta red, xylidine Ponceau and eosin yellowish, and combinations thereof.)(123-128).
조직학에서 매염제로서 상승적 분자인 가장 보편적인 두 가지 금속은 알루미늄 및 제2철(ferric) 이온이다. 상기 매염제 염료들은 공유 또는 배위 결합으로 킬레이션을 형성한다. 매염제의 다가 금속 이온 및 염료 분자는 배위결합 복합체를 생성한다. 킬레이트 형성은 "호수(lake)"를 구성하며, 이는 염료-매염제 다가 복합체로 정의된다. 이러한 분자는 하나 이상의 부착 지점을 가지며, 복합체 형성의 결과는 다양성 및 기능성에서 상이하다.
제제의 pH 수준을 변경하면 매우 급격하고 극적인 색상 변화가 발생된다. 갑작스런 색상 변화는 탈영역화된 전자들 및 더 낮은 에너지 수준을 갖는 금속 전자들의 위치 변화로 설명된다. 금속은 복합체 분자 구조와 비교할 때, 상대적으로 더 낮은 에너지 수준을 갖는 바, 즉 용액 중에서 금속 첨가에 의해서 에너지 수준이 갑자기 떨어진다.
DNA 구조 중, 데옥시리보오스 포스페이트의 뒤에는 염기가 티민, 시토신, 구아닌 및 아데닌으로서 위치하고, 이는 매핑을 통해서 상보적 방식으로 나선형 구조를 형성한다. 포스페이트기는 조직학적 염색을 위한 기본이다. 염료에 대한 매염제에 첨가되어, DNA 중 포스페이트는 킬레이트 형성을 야기할 것이다.
배위 결합 어셈블리를 형성하기 위해서 필요한 전자는 인산염 산소에 연결된 매염제 염료로부터 온다. DNA 및 단백질은 히드록실기 및 카르복실기를 함유하며, 단백질 성분 및 DNA 복합체를 포함하는 핵 크로마틴도 그러하다. 따라서, 염색이 DNA로부터 제거된 후에도 핵 성분은 여전히 가시적이다.
부적절하게 고정된 조직은 최적으로 염색될 수 없다. 신속 공정 기술들은 염색 품질에 영향을 준다. 10% 중성 완충 포르말린을 수 시간 동안 적용하는 것으로는, 단백질의 고정이 부적절할 것이다. 에탄올은 안정제이며 탈수제이다. 포르말린 용액을 통한 고정은 이러한 목적을 위해서 충분하다. 에탄올이 단독으로 사용되는 경우, 불안정하고 왜곡된 단면은 조직의 결함을 남긴다.
진행성 염색 방법(progressive staining method)은 퇴행 방법(regressive method)과 대조되어 분별될 필요는 없다. 세포 핵의 염색을 제외한 배경 염색 역시 다양한 정도로 바람직할 수 있다. 진행성 용액은 점액 없이 배경 염색을 거의 또는 전혀 나타내지 않는다.
그러나, 산 첨가물 중 더 높은 염료 농도(1.5-2.0 g/l)는 또한 깨끗한 배경 염색을 제공한다. 역행 페인트(특히 상기 제제 중 5 g/l 염료 농도)는 더욱 강하게 염색하는 것으로 나타난다. 역행 염색 이후에, 분별(differentiation)은 명확하고 깨끗하고 핵 모폴로지 외양을 제공한다. 역행 제제는 고부피 실험실 및 병원에 의해서 선호될 수 있다.
암모늄 및 칼륨의 알루미늄, 단독 또는 용매와의 알루미늄은 낮은 pH 수준을 나타낸다. 그러나, 제제의 산성 염료의 pH로 조정되면, 단시간 액체와 접촉하고 있는 알칼리 용액은 액체의 pH에 영향을 주지 않을 것이다. 염료 용액의 수명은 매염제 또는 염료와 관련되고, 다시 알칼리 용액의 보유량에 관련된다. 이러한 방식으로, 페인트가 활성이 감소되기 시작한다. 열화(degradation)의 첫 번째 징후는 염색 용액이 적색-명보라색으로부터 적색 불투명 체리 색상으로 변화하는 것이다. 염료 용액 내로 산성 염료의 첨가를 통한 활성화에는 더 적은 양이 관여한다. 이러한 목적으로, 25% 아세트산, 0.1% 시트르산 또는 0.5% 염산, 타르타르산, 락트산, 에리소르브산, 아스코르브산, 요산, 탄닌산이, pH 조절의 요구량에 따라서 1 리터 용액으로 결정되어야 한다. 다른 산 또한 pH 조절을 위해서 선택될 수 있다. 용액의 pH는 2.5 부근이어야 한다. 그러나, 제제에 따라서 pH 1-4 사이에서 변형이 조절될 수 있다(도 6).
강산을 첨가하면 조직 중 칼슘 저장이 용해되고, 염색된 조직에서 칼슘의 침착(deposition)은 진단에 중요하므로, (예를 들어, 유방암) 오진단을 야기할 수도 있다. 따라서, 강산인 매우 낮은 pH 수치는 피해야 한다. 아세트산 및 시트르산과 같은 것들은 더 깨끗하고 뚜렷한 코어 염색을 하는 산 함유 제제를 제공할 것으로 예상된다. 약산을 함유하는 이상적인 진행성 제제로 핵을 염색하는 것은 달리 달성될 수도 있다. 이와는 대조적으로, 제제를 함유하지 않는 산은 배경을 더 잘 보여주고, 커넬(kernel)을 보여주기에 덜 명확할 것이다. 제제 중에 산을 퇴행적 첨가하는 경우 염색에는 기여할 것이지만, 명확성을 제공하기 위해서는 염료 용액의 산성 pH에 접근하여 그 수준을 증가시키고, 염색의 수명을 연장시킬 것이다.
염색 프로토콜의 단계는 1. 탈파라핀화(deparaffinization), 2. 재수화(Rehydration) (알코올 사용), 3. 물로 린스, 4. 파파베르 로에아스 제제 구현, 5. 린스를 위해 물로 린스, 6. 분별(differentiation), 7. 물로 린스, 8. 청색화, 9. 물로 린스, 10. 알코올로 린스, 11. 에오신, 12. 탈수(알코올 사용), 13. 물(또는 자일렌)로 제거(도 7).
염색 시간은 다른 염료에서와 같이 적용되며, 제제화 비율에 따라서 30 분에서 1 분 또는 2 분까지 조절될 수 있다(131 내지 133). 매우 짧은 인큐베이션 기간은 불완전하고 일관성 없는 염색을 야기한다. 적절한 제조에 실패하는 경우 교반에 의해서 교정될 수 있다. 산은 슬라이드 상의 결함을 제거할 수 있다. 그러나, 이는 매염제 염료 복합체의 효율성을 감소시킬 수 있다. 염색과 함께 교반 15 초(진탕)를 통해서 총 염색 기간을 감소시켰다. 만약 교반이 없는 경우 지속시간이 길어져야 한다.
염색을 위해서 5 분을 적용하는 것으로 충분하다. 시간 길이를 조절함으로써 진행성 염색에 대한 품질을 조절할 수 있다. 이상적으로는 염색 시간은 5-10 분이다. 진행성 페인팅이 먼저 신속하게 개시되고, 타이밍과는 더욱 독립적이며, 나중에 그 자체로 평형 시점을 제한한다. 퇴행적 기술의 경우, 5-10 분이 충분한 시간이다. 과량의 염료는 산 알코올에 의해서 제거된다.
에탄올을 통한 분별화가 이러한 목적을 위해서 적용되며, 산 에탄올의 농도는 변화된다. 샘플; 70 % 에탄올 (표준 산성 알코올) .5-% 염산 혼합물을 30-45 초간 사용. 클립보드(clipboard)를 완전히 삭제하기 위해서는 강산 염료의 희석이 필요하다. 여기에서 70% 증류수가 에탄올 대신 사용될 수 있다. 물은 산을 희석시킬 수 있으며, 분별은 최적의 염색을 야기할 수 있다. 그러나, 알코올 대신 물을 사용함으로써 염색 불규칙성이 발생된다. n-이소-프로판올이 선택될 수 있다.
조직 슬라이드 상의 산성 매체의 초기 색상은 밝은 적색-보라색 색상이다. 이는 영구적인 색상이 아니며, 청색 지속성 색상으로 변환되어야 한다. 색상의 적색 단계가 장착된 유리 아래로 침출(leached out)된다. 청색 상은 용제에 내성이고, 불용성이며, 물 및 약한 용제로 제공되며, pH를 조정하여 영구적으로 변환이 제공된다. 수돗물 또는 기타 알칼리성 용액이 청색화(blueing)를 제공한다. 상기 물은 핵을 청색으로 변화시키기에 충분하고, 0.1-1 % 리튬 카르보네이트 용액, 0.5 % 소듐 아세테이트, 2 % 소듐 비카르보네이트 및 스콧 수돗물 대체물(Scott's tap water substitute)과 같은 다른 알카리 용액도 충분하다(도 8).
물 중의 염소는 슬라이드 상의 페이트 색상이 변색되는 것을 야기할 수 있으며, 염색 및 표백을 완전히 제거할 수도 있다. 염소화된 물을 사용하는 경우, 수돗물을 사용하여 세척함으로써 제거되거나, 비밀 또는 비-염소화된 물을 사용하여야 한다. 만약 강 알카리가 청색화를 위해서 사용되는 경우에는, 높은 pH는 후속 에오신 염색을 방해할 수 있다. pH 조절, 정착액(fixatives), 산화제 및 다른 염료에 의해서 제공되는 용매로 분별화가 유지될 수 있다.
과도한 염색은 매염제를 사용함으로써 감소될 수 있다. 더욱 많은 매염제가 첨가될 수록 용액 중에 함유된 염료가 조직에 결합하는 것에 경합하고, 조직으로부터 서서히 염료를 분리시킨다. 이러한 방법으로 염색 제조에 대해서 완전한 제거가 가능하다. 숙성(ripening)은 염색 용액의 효율성을 증가시킬 것이다. 숙성은 천연 산화 공정에 의해서 달성되는 것이 더욱 신뢰성 있고 내구성 있다. 상단으로부터 공기가 유입되는 것을 가능하게 하는 솜으로 느슨하게 닫힌 오버사이즈 플라스크가 가능하다. 플라스크는 서서히 산화되는 것을 가능하게 하기 위해서, 따뜻하고, 어둡고, 통풍이 잘되는 곳에 위치시켜야 한다.
화학적 숙성에 사용되는 화학적 산화제는 더 빠르고 효율적인 성숙화(maturation)를 제공한다. 끓이는 것은 작업을 가속화하며, 끓임 이후에, 소듐 아이오데이트, 칼슘 히포클로라이트, 히드로겐 퍼옥시드, USP, 포타슘 퍼망가네이트, 포타슘 페리시아니드, 소듐 이오디드, 산화 아연이, 포타슘 퍼이오데이트 및 소듐 히포클로라이트 이외에도 화학적 산화제로서 사용될 수 있다.
알루미늄 포타슘 술페이트와 같은 알루미늄 염과 결합할 때, 용액은 엷은 색상(미성숙)의 불투명한 투명 보라색이며, 산화되면 밝은 짙은 자색(숙성)으로 변화한다. 그들은 또한 철 염과 결합될 수 있다. 이들은 매우 어두운 보라 색상이고, 대개 짙은 색이다. 사용된 화합물에 따라서, 옥살산, 보락스 페리시아니드, 포타슘 퍼망가네이트가 산화제로서 사용될 수 있다.
염색 용액을 위한 주된 매염제로는 알루미늄 술페이트 또는 포타슘 알루미늄 술페이트, 암모늄 알루미늄 술페이트, 소듐 알루미늄 술페이트, 알루미늄 아세테이트 및 알루미늄 니트레이트가 사용될 수 있다. 페인트 분말 1 리터 당 5 그램이 사용되며, 수성 용매로는 증류수가 사용되어야 한다. 매염제 염료 비율은 대략 10 배 또는 이 보다 약간 낮은 수준일 수 있다. 과도하고 지속적인 산화는 침전물을 축적한다. 이러한 침전물은 또한 산화를 통해서 결과물이 불활성 유도체인 매염제를 포함한다. 염색 제제는 주기적으로 여과된다.
추출물로부터 수득된 파파베르 로에아스 제제는 짙은 적색이며, 다양한 방법으로 취급된다. 산물 자체의 분쇄물은 상업적으로 판매되기에 적합하며(특히 수송의 용이성 관점에서), 병원 및 실험실의 기술자에 의해서 제조된다. 테스트된 용액은 즉시 사용가능한 패키지로서 수송되기에 용이하거나 또는 암 수용기 내에서 적당한 병원으로 배달될 수 있다.
아세트산과 반응함으로써, 크로마틴 코어는 더욱 일관성 있고 명확하게 나타나는 핵 영상을 제공한다. 매염제 알루미늄을 함유하는 페인트 제제는 산성 pH(-3.3 내지 -2.5 pH)이다. 길이로 페인팅된 구조의 효율성은, 만약 염료 수용기가 염색과 함께 복수의 세척 동안 이동하게 된다면, 감소될 수 있다. 새로운 용액의 첨가가 코팅을 강화시킬 것이다. 산화 이후 용액 내에서는 덜 유효한 유도체들이 야기되고, 일부 침전물의 형성이 야기된다. 액체 제제는 호기성 산화를 방지하기 위해서 오일 박층으로 덮힌 배럴(barrel) 또는 수용기 내에 보관될 수 있다.
세포질을 카운터 염색하기 위해서 에오신 Y, 또는 다른 염료가 사용될 수 있다. 일반적인 원칙이 여기에 적용가능하지만, 결과는 주관적인 분석이다. 대조 염료가 이상적인데, 이는 조직이 서로에 대해서 명확하게 구별되는 것을 가능하게 하기 위해서 핵 바깥의 청색 코어 성분들을 보기 좋게 만들 뿐만 아니라(도 14), 콜라겐 샘플로부터 새로운 근육 조직을 구별할 수 있어야 한다. 에오신 Y는 일반적으로 95% 에탄올 중에 가용성이며, 따라서 일단 보얀미슬라(boyanmisla) 중에 알코올이 너무 장기간 남겨지게 되면, 폐쇄된 라멜라 제조물 CAs(lamella preparation CAs with closed)가 무색이 될 것이다 (Eosin Y is normally soluble in 95% ethanol so if the lamella preparation CAs with closed once the alcohol is left on too long in my boyanmisla will become colorless). 95% 에탄올 중에 너무 오랫동안 남겨지는 경우, 따라서, EO로 염색된 조직은 무색이 될 수 있으며, Eon의 해상도에 대해서 k 100% 에탄올보다 작지만, 여기에서도, 페인트는 조직으로부터 제거된다 (If left too long in 95% ethanol, therefore, can be made with stained EO colorless tissue, it is less than k you 100% ethanol on the resolution of the Eon, but here, too, the paint is removed from the tissue). 이러한 문제점을 회피하기 위해서, 호산구성(eosinophilic) 제조물은 95% 에탄올 차감 또는 형태로 신속 침지 중에서 7-10회 세척되어야 한다. 에오신 적색 색상은 청색 코어와 대조해서 적당한 대비를 부여한다. 에오신 Y는 일반적으로 약간 황색-오렌지 색상을 갖지만, 아세트산은 이를 더 붉게 만든다.
적색 색상의 강도는 핵 바깥의 구조들을 구별하는데 중요하다. 부적절한 염색은 다른 한편으로는 희미한 염색을 야기하고, 핵 이외에 너무 지나친 염색은 조직 구조들을 구별하는 것을 어렵게 한다. 에오신 염료는 콜라겐; 옅은 분홍색, 근육; 진한 분홍색, 호산성 세포질; 적색, 호염기성 세포질; 자색, 코어; 짙은 자주 청색, 적혈구; 적색을 조합함으로써 대비된다. 에오신은 파파베르 로에아스 제제를 염색하고 약 1 분후 슬라이드에 가해져야 한다.
이후 더 많은 에오신 염료가 세척되어야 한다(129, 130). 바람직하게는, 일련의 에틸알코올 용액 중 50%, 75% 및 95% 농도가 이러한 목적을 위해서 선택된다.
염색 공정의 종료는 중요한 기준이지만, 색상 강도 및 대비를 시각적으로 평가하는 것이 최상의 접근법이다. 염색 표준 및 품질 관리에 대한 경험은 염색의 효율성 향상을 야기한다(134-138).
파파베르 로에아스 제제는 비인간 조직 생물학적 샘플의 염색에 사용된다. 예를 들어, 효모 볼로부터의 샘플 중 효모 균이 세부적으로 염색된다(도 15).
다시, 꽃잎을 광 현미경 및 원자력 현미경으로 관찰한 결과, 탁월한 비례적 나선형 튜브에 의해서 생산된 액체로 채워진 완벽한 정렬로 시스터널(cisternal) 구조가 배열됨을 보여주었다(도 16, 17).
실시예
1. 실시예 1. 전구체의 제조: 냉동, 신선 또는 건조된 파파베르 로에아스 꽃잎(petals)을 추출된 염료의 제조에 이용하였다(도 9). 잎들은 절편화하였다. 증류수를 첨가하고, 밤새도록 방치한 다음, 이를 압축하여 액체 염료 전구체를 수득하였다. 1차 염료 자색, 적색, 자주 적색, 붉은 자색 및 붉은 청색. 여과 후에 용액은 1/10 비율 포르말린, 에탄올, 메탄올, 다른 에테르와 같이 통합된 용매를 제공하며, 30 ℃ 내지 60 ℃, 인큐베이터 중에서 열로 건조되었다. 건조된 조생성물을 메탄올로 재차 처리하고, 침전물을 분리하였다. 이러한 침전물을 사용하여 분말 조생성물을 제조하였다. 이러한 침전물을 냉 또는 비등 에틸 알코올(1g 페인트/100 에틸 알코올) 내에 첨가하고 용해시켰다. 이러한 액체 혼합물(냉 또는 비등 온도)을 1000 ml의 탈이온수에 첨가하였다.
2. 실시예 2: 분자 분석을 위해서, 추출 용액을 여과하고, 에탄올로 처리하고, 인큐베이터 내에서 건조시켰다. 건조한 샘플을 분쇄한 다음, 메탄올 배쓰에 3번 통과시키고, 밤새 30 ℃ 내지 60 ℃ 인큐베이터에 넣고, 액체 분획을 증발시켰다. 1 g의 생성된 분말을 100 cc의 에탄올에 용해시키고, 플레이트 상의 섬유에 흡착시켰다. 1 % 암모니아 용액으로 분홍색 플레이트의 청색화가 관찰되었다. 이러한 청색 염료를 아세트산 중에 용해시켰다. 액체 분획을 제거하고, 잔류 건조 분말을 분석하였다.
3. 실시예 3: 이러한 새로운 분자의 조성물 중에 화학적 산화제를 부분적으로 또는 완전히 사용하였다. 분자의 유도체가 산화의 결과로서 생성될 것이다. 그러나, 덜 활성인 복합체들 역시 생성될 것이다. 산화제 및 분자의 몰 균형은 4:1 내지 1:1이다. 용매 내의 염료는 다중 매염제를 갖는다(알루미늄, 철 비스무스 매염제, 구리, 몰리브덴, 크롬 및 바나듐, 및 지르코늄)(120, 121). 분자 및 매염제의 몰 비율은 2:1 내지 1:100이며, 이러한 비율은 제제에 따라서 달라지고, 예를 들어 1:20 내지 1:5 사이에서 변화한다. 제제는 또한 아세트산과 같은 산을 함유할 수 있다. 최종 매염제 염료 및 용매 용액(예를 들어, AlCl3 80%, 10-50 g/리터)은 산성 pH를 갖는다. 제제에 산을 첨가하게 되면 핵 염색의 특이성이 조절되고, 보존 기간이 연장된다. 청색화는 세포 핵의 형태를 강조한다. 염료 제제에 아세트산을 첨가하면 색상을 밝은 갈색 자주색으로 변화시킨다(도 10).
4. 실시예 4: 제제를 위한 이상적인 pH는 2.5이지만, 이는 1 내지 4까지 변화한다. 일부 특정 구체예에서, 산화제는 조성물 중 소듐 아이오데이트, 매염제로서 알루미늄 술페이트, β-시클로덱스트린으로서 알루미늄 클로리드 항산화제, 용매로서 60 내지 90% 물이며, 10 내지 40% 에틸렌 글리콜 혼합물의 비율에서 사용될 수 있다. n-프로필 갈레이트, 히드로퀴논, 및 하나 이상의 수용성 항산화제가 사용될 수 있다.
5. 실시예 5: 착색은 진행적 또는 퇴행적 방식으로 이루어진다. 생물학적 샘플은 현미경 슬라이드에 의해서 지지된다. 상기 방법은 또한 현미경 슬라이드 상에 탑재된 세포학 샘플에도 사용될 수 있다. 대조 염색법, 에오신이 선택됨.
6. 실시예 6 : 안정제는 과도한 산화, 증발 및 궁극적으로 침전을 방지한다. 염색 제제는 용매의 양으로 제조되고, 염료/용매 비는 1-20 그램 대 1 리터로 설정된다. 진행성 용액의 경우 리터 당 최소 1g의 염료가 사용되며, 퇴행성 페인트의 경우, 용매의 리터 당 최소 5g이 포함된다. 매염제의 양이 일정하게 유지되면, 용액에 농축된 염료가 적어지면, 세포핵의 선택적인 염색이 나타난다. 예를 들어, 염료의 10 % 용액 5 mL와 알콜 염료 용액을 10 % 이상으로 증가시켜 최적의 선택도에 도달한다.
7. 실시예 7 : 농도가 낮고 용액 중의 염료의 매염 염료/염료 비율이 높으면, 염료가 용액 중에 잔류하고 소량의 염료가 조직에 부착한다. 0.1% 또는 2% 아세트산, 시트르산과 같은 산을 첨가하면 저장 수명이 연장된다.
8. 실시예 8 : 매우 낮은 pH 수준의 용액은 조직 석회화가 또한 용해될 수 있기 때문에 진단에 중요하다. 따라서, 진단은 강한 산성 용액으로는 오류와 누락을 야기할 수 있다. 0.2ml 빙초산의 농도를 증가시키거나, 또는 0.1ml HCl 산을 첨가하여 테스트할 수 있다. 염료 5g 및 산성 매염제(알루미늄 술페이트) 50g을 사용함으로써 퇴행 염색 제제가 수득되고 (1/10s의 비율), 염료 1g 및 매염제(알루미늄 술페이트) 50g을 사용하여 진행성 염색 제제가 수득된다(비율 1/50) (도 9)
9. 실시예 9: 탈이온수 비등점 1000ml를 대형 플라스크에 넣는다. 이는 첨가된 암모늄 술페이트 50g을 포함하고, 혼합물을 냉각시킨다. 건조 분말 4g을 플라스크 내에 넣고, 0.4g의 소듐 이오디드와 함께 교반하면서 50 ml의 냉수 중에 용해시킨다. 100cc의 에틸렌 글리콜을 첨가하여 혼합하고 10cc의 아세트산을 첨가한다(pH 단위는 2.7 내지 3.1임). 스톡 용액을 서로 혼합한다. 페인트는 사용 준비가 된다. 페인팅을 위한 적용 시간은 시험을 통해서 최적화되어야 한다.
10. 실시예 10: 변형이 가능하다. 제제 5g의 염료 매염제 염료를 포함하는무산 퇴행 제제에 100g의 산을 첨가한다. 여기에서 비율은 1/20이다(염료 5g + 알루미늄 술페이트 100g). 진행성 제제의 경우 1 리터당 1-2 g, 퇴행 제제의 경우 5-6 g 및 중간 제제의 경우 3-4 g의 염색을 포함한다. 염료의 제조 및 적용은 기술자에 의해서 잘 이해되어야 한다. 염료의 함량을 변화시켜서 결과물인 염료의 품질을 조절할 수 있다.
11. 실시예 11: 제조된 분말은 적색을 띤 자주색 갈색이고, 에탄올에 용해되며, 물에는 덜 녹는다(100 cc의 물, 1 g의 염료 용해, 100 g 에틸 알코올, 35-50 g의 제거 페인트 용해). 글리세린은 항산화제로서 포함될 수 있고, 제제의 과도한 산화를 방지하며, 또한 균류의 증식을 방지한다. pH 단위 2.0-5 범위 내에서 미생물 성장을 억제하기 위해서, Proclin 300® 소듐 아지드, Proclin 150®, Proclin Proclin 200® 및 950®과 같은 임의의 항미생물제가 첨가된다. (예를 들어) Proclin 300® (Sigma Aldrich, St Louis, MO)의 약 0.04 %의 양으로 용액에 첨가(도 10).
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Claims (82)

  1. 본 발명은 세포의 핵에 특이적인 조직-세포 염색 제제 및 분자를 개시하고 있다.
  2. 청구항 1에 있어서, 상기 제제는 파파베르 로에아스(양귀비)로부터 수득된 것인 방법.
  3. 청구항 2에 있어서, 고함량의 활성 및 기능성 신규 생플라보노이드를 함유하는 것인 방법.
  4. 청구항 1에 있어서, 진단을 위해서 생물학적 조직 중에서 세포 핵을 특이적으로 염색하는 것인 방법.
  5. 청구항 3에 있어서, 분자 분석이 도 1에 도시된 바와 같은 것인 화합물.
  6. 청구항 5에 있어서, 상기 분자의 명칭이 5-히드록시-2-(3-(테트라히드로-6-((테트라히드로-3,4,5-트리히드록시-6-메틸-2H-피란-2-일옥시)메틸)-2H-피란-2,3,4,5-테트라올)-4-메톡시페닐)-7-메톡시-4H-크로멘-4-온인 것인 화합물.
  7. 청구항 6에 있어서, 방향족 헤테로시클릭 생화학적 구조인 플라반인 것인 화합물.
  8. 청구항 7에 있어서, 도 4 및 5에 도시된 생화학적 구조를 나타내는 생플라보노이드인 것인 화합물.
  9. 청구항 8에 있어서, 다른 방향족 헤테로시클릭 분자 구조 및 기와 새로운 복합체를 형성하는 것인 화합물.
  10. 청구항 9에 있어서, 히드록실, 메틸 수소 R 기 및 그 다른 변이체, 1-12의 탄소 원자를 갖는 분자, 알킬, 플루오로알킬 또는 페닐기가 결합된 것인 화합물.
  11. 청구항 10에 있어서, 다양한 약리적 특성을 나타내는 다른 생물학적 구조에 결합된 NH2, OCH3, Cl, Br, I 및 O-HC를 포함하는 것인 화합물.
  12. 청구항 11에 있어서, NH2, OCH3, Cl, Br, I 및 O-HC"가 다른 생물학적 및 약리적 특징을 분별할 수 있는 것인 화합물.
  13. 청구항 12에 있어서, 상기 분자가 CxHy 구조에 결합하고, x 및 y가 하나 또는 두 자리 숫자로 연결되고, 다르거나 또는 동일한 숫자인 것을 특징으로 하는 것인 화합물.
  14. 청구항 6에 있어서, 분자가 시스- 또는 트랜스- 구조를 나타내는 것인 화합물.
  15. 청구항 14에 있어서, 연장기에 작동가능하게 연결된 N, O, S 및 C를 포함하고, 주로 다른 원자들에 고정된 A 분자인 것인 화합물.
  16. 청구항 15에 있어서, N, O, S 및 C에 작동가능하게 연결된 A 분자가 다른 원자들에 3차(tertiary) 결합하는 다른 기를 포함하는 A 분자인 것인 화합물.
  17. 청구항 6에 있어서, 알킬기(예를 들어, 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 펜틸, 헥실, 헵틸, 옥틸, 노닐, 데실 등), 이소프로필, t-부틸, 이소부틸 등을 포함하는 6개 이하의 탄소 원자를 갖는 직쇄 또는 분지 사슬 알킬 골격 암(arms)을 갖는 포화 지방족기 사슬 알킬기, 분자, 및 ((C1-C4) 알킬, (C1-C4) 알콕시, 아미노, ((C1-C4) 알킬아미노 포함 및 (C1-C4) 디알킬아미노), 시클로알킬, (페닐, 나프닐)), 아릴기, 히드록실기, 시아노, 할로겐, 니트로, 아릴알킬 및 시클로아릴알킬이 결합된 A 분자인 것인 화합물.
  18. 청구항 6에 있어서, 상기 분자는 5-카르복시-플루오레신, 6-카르복시-플루 오레신, 5,6-카르복시플루오레신, 6-카르복시-2 ',4,4',5 ',7,7'- 헥사클로로플루오레신, 6-카르복시-2',4,7,7'-테트라클로로플루오레신, 6-카르복시-4',5'-디클로로-2',7'-디메톡시플루오레신, 플루오레신-5-이소시아네이트(FITC), 나프토플루오레신, 5-카르복시로다민, 6-카복스 라돈스(6-kaboks Radon's), 5,6-디카르복실레이트 로다민, 로다민 6G, 테트라메틸 로다민, X-로다민, 알렉사 플루오르 350, 알렉사 플루오르 405, 알렉사 플루오르 430, 알렉사 플루오르 488, 알렉사 플루오르 500, 알렉사 플루오르 514, 알렉사 플루오르 532, 알렉사 플루오르 546, 알렉사 플루오르 555, 알렉사 플루오르 568, 알렉사 플루오르 594, 알렉사 플루오르 610, 알렉사 플루오르 633, 알렉사 플루오르 635, 알렉사 플루오르 647, 알렉사 플루오르 660, 알렉사 플루오르 680, 알렉사 플루오르 700, 알렉사 플루오르 750, BODIPY FL, BODIPY TMR, BODIPY 493/503, BODIPY 530/550, BODIPY 558/568, BODIPY 564/570, BODIPY 576/589, BODIPY 581/591, BODIPY 630/650, BODIPY 650/665, 메 톡시 쿠마린, NPV와 같은 진단용 형광 염료에 부착되는 것인 화합물.
  19. 청구항 6에 있어서, 상기 분자 및 그 유도체 및 수반되는 상승적 분자는 조직세포병리학에서 세포 핵을 염색하는데 사용되는 것인 방법.
  20. 청구항 19에 있어서, 상기 제제는 악성 및 전이성 세포의 존재를 검출하는 것인 방법.
  21. 청구항 20에 있어서, 상기 제제는 종양 생검, 미세 바늘 생검 샘플, 도말(smear), 세척, 외과수술(surgery), 수술 후 외과수술(post-operative surgery) 및 다른 침습적 및 비침습적 샘플 및 생물학적 물질 샘플에서의 평가 및 진단에 이용되는 것인 방법.
  22. 청구항 21에 있어서, 상기 생물학적 샘플은 인간, 동물, 식물 및 미생물학 샘플인 것인 방법.
  23. 청구항 22에 있어서, 상기 생물학적 샘플 기원은, 원핵생물, 고세균 기원 또는 진핵생물 기원(예를 들어, 곤충, 원생동물, 조류, 어류, 파충류), 포유류 기원(예를 들어, 쥐, 소, 개, 당나귀, 돼지, 토끼) 또는 영장류 기원(침팬지 또는 인간)인 것인 방법.
  24. 청구항 23에 있어서, 체액(예를 들어, 혈액, 혈장, 혈청 또는 소변) 중의 단백질, 탄수화물 또는 핵산 및 분리된 장기, 조직, 분획, 세포, 기관 또는 조직 절편이 인 비보 또는 인 비트로에서 생물학적 샘플로서 적용되는 것인 방법.
  25. 청구항 24에 있어서, 염료 전구체가 꽃잎으로부터 얻어진 액체 분획을 압축 및 여과함으로써 생산되는 것인 방법.
  26. 청구항 25에 있어서, 신선, 건조 또는 동결 꽃잎이 상기 염료의 액체 분획의 전구체를 제조하는데 사용되는 것인 방법.
  27. 청구항 25에 있어서, 0.1-10 부피%의 액체 전구체가 건조 분말 염료로 변환되는 것인 방법.
  28. 청구항 25에 있어서, 우레아, 황산, HCl, 아세트산, 포름산이 상승 작용 분자이고, 다른 유기 및 무기 원자 및 분자와 함께 상기 분자를 결합하는 것인 방법.
  29. 청구항 21에 있어서, 상기 제제는 조직층, 막, 근육의 줄무늬, 세포질내 핵내 구조를 특유적으로 염색하는 카운터염색제로서 에오신과 조합되는 것인 방법.
  30. 청구항 29에 있어서, 제제는 신경교(neuroglial) 구조를 염색하는 것인 방법.
  31. 청구항 28에 있어서, 제제는 고정제로서 항산화제를 함유하는 것인 방법.
  32. 청구항 31에 있어서, 상기 용매 또는 산화 화학물질, 매염제, 및 산의 개수 및 종류는 다른 제제에 대해서 달라지는 것인 방법.
  33. 청구항 32에 있어서, 제제는 자동 또는 수동 방법으로서 적용되는 것인 방법.
  34. 청구항 28에 있어서, 제제는 조직 및 세포에서 바이러스 질병의 효과를 검사하기 위해서, 미생물, 균류, 박테리아로서의 생물학적 샘플에 대해서 이용되는 것인 방법.
  35. 청구항 6에 있어서, 상기 분말화 또는 액체 분획이, 에멀젼, 현탁액 또는 당-코팅된 알약, 정제, 캡슐 또는 연질 젤라틴으로서 목적에 따라서 사용되고 오일 중에 패킹되는 것인 방법.
  36. 청구항 35에 있어서, 경구, 비강, 직장, 질, 경요도, 복강내, 정맥내, 국소 또는 혈류 및 체강, 및 경피가 적용 경로인 것인 화합물.
  37. 청구항 33에 있어서, 기술 및 장비 및 방법이 통상적인 기술과 동일하며, 병원용으로 사용하기에 어떠한 추가적인 투자도 필요로 하지 않는 것인 방법.
  38. 청구항 6에 있어서, 핵 중 DNA 인산염 및 금속 착물을 수반하는 다른 결합 단백질이 더욱 복잡한 구조를 형성하는 것인 화합물.
  39. 청구항 6에 있어서, 금속 인산염 및 DG 단백질 복합체에 의해서 수반되는 핵 중 DNA 결합에서 프라이스(Price)가 구조로 이루어지는 것인 방법.
  40. 청구항 33에 있어서, 제제가 다른 염색 및 제제 중에서와 같이 변형되는 것인 방법.
  41. 청구항 33에 있어서, 상기 용매, 매염제 유도체의 종류, 산화제 및 항산화제의 함량을 변화시켜서 다양한 제제가 제조되는 것인 방법.
  42. 청구항 33에 있어서, 생물학적 샘플이 포르말린 및 알코올로 고정되는 것인 방법.
  43. 청구항 40에 있어서, 동결 세포 및 조직 샘플이 염색에 이용되는 것인 방법.
  44. 청구항 6에 있어서, 새로운 비타민 분자가 합성되는 것인 화합물.
  45. 청구항 6에 있어서, (1) T 세포 활성화제, (2) 항산화제, (3) 항당뇨제, (4) 콜레스테롤 저하 인자, (5) 항-괴사 인자, (6) 항-염증제, (7) 항우울제, (8) 세포 감소제, (9) 치매 예방, (10) 재생 치료, (10) 암 치료제 또는 예방제, (11) 항고혈압제, (12) 항바이러스제, (13) HIV의 치료용, (14) 혈소판 기능 장애, (15) 죽상 경화증 치료, (16) 심혈관 질환 치료로서 기능하는 것인 화합물.
  46. 청구항 40에 있어서, (1) 염료 5g 및 제제의 사용(비율 1/10s)으로 퇴행성인 매염제(알루미늄 술페이트) 50g 및 (2) 염료 1g 및 제제에 의해서(1/50으로서 비율) 진행성 매염제(알루미늄 술페이트) 50g이 수득되는 것인 방법 (The method of claim 40, wherein (1) 5 g of dye and 50 g of mordant (Aluminum sulfate) regressive with the use of formula (ratio 1 / 10s) and (2) 1g dye 50g of mordant (Aluminum sulfate) progressively by use formula is obtained. (ratio as 1/50)).
  47. 청구항 40에 있어서, 5g 산 첨가 및 100g 매염제 염료 제제가 퇴행성을 제공하는 것인 방법(1/20 비율, pH 2.3-4이어야 함).
  48. 청구항 40에 있어서, 진행성 중간 퇴행성 제제가, 제제 리터 당 각각 1-2g, 2-4g, 5-6g의 제제를 포함하는 것인 방법.
  49. 청구항 46에 있어서, 매염제가 철, 비스무스, 구리, 몰리브덴, 바나듐 및 지르코늄과 같은 하나 이상의 금속인 것인 방법.
  50. 청구항 49에 있어서, 매염제로서 알루미늄 술페이트, 암모늄 알루미늄 술페이트, 알루미늄 아세테이트 및 알루미늄 니트레이트, 및 포타슘 알루미늄 술페이트가 선택될 수 있는 것인 방법.
  51. 청구항 48에 있어서, 일정한 매염제와 함께 더 낮은 농도의 염료가 더욱 핵에 대한 선택성을 나타내는 것인 방법.
  52. 청구항 49에 있어서, "호수 형성(lake formation)"을 생성하는 매염제 및 염료가 가열에 의해서 가속되는 것인 방법.
  53. 청구항 50에 있어서, 용매 1 리터 중 매염제 50g, 염료 1g이 대략 2.9 pH 단위를 갖는 것인 방법.
  54. 청구항 52에 있어서, 상기 염료 용액이, 금속에 대한 친화도의 결과로, 또한 상기 조직 중 금속을 검출하는데 사용되는 것인 방법.
  55. 청구항 32에 있어서, 산화가 소듐 아이오데이트, 칼슘 히포클로라이트(표백), 히드로겐 퍼옥시드, USP, 포타슘 퍼망가네이트, 포타슘 페리시아니드, 소듐 이오디드, 산화 아연, 포타슘 퍼이오데이트 및 소듐 히포클로라이트에 의해서 이용되는 것인 방법.
  56. 청구항 55에 있어서, 불활성 유도체가 과도한 산화로 인해서 축적 및 침전화되는 것인 방법.
  57. 청구항 40에 있어서, (1) 수명을 연장하고, (2) pH를 조절하고, (3) 사용된 염료에 핵 선택성을 증가시키기 위해서, 산이 염료 용액에 첨가되는 것인 방법.
  58. 청구항 57에 있어서, 산 및 항산화제가 증발 또는 침전을 방지하는 것인 방법.
  59. 청구항 40에 있어서, 용매 및 매염제에 부가하여, 둘 이상의 항산화제 및 히드로퀴논 및 n-프로필 갈레이트를 포함할 수 있는 것인 방법.
  60. 청구항 59에 있어서, 수용성 항산화제 첨가제, 용매로서 물, 에탄올과 같은 저급 알코올, 및 폴리올이 첨가되고, 상기 폴리올은 글리세롤, 에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜 및 폴리(프로필렌 글리콜)을 포함하고, 이들 중 하나 이상이 첨가되는 방법 (The method of claim 59, wherein water-soluble anti-oxidant additive as solvent or water, a lower alcohol such as ethanol, and a polyol is added which polyols include glycerol, ethylene glycol, propylene glycol, polyethylene glycol and poly (propylene glycol) when one of or more than one than that).
  61. 청구항 60에 있어서, 에탄올과 같은 용매, 시클로덱스트린, 크립탄즈, 카비탄드, 크라운 에테르, 및 니게리신 발리노미신, 히드로퀴논, n-프로필, n-옥틸 및 n-도데실, N-알킬 갈레이트; 소르비톨 및 만니톨과 같은 환원될 수 있는 당; 벤조에이트 및 히드록시벤조에이트; 설파이드 및 메타비설파이트; 시트르산, 말산, 말레산, 타르타르산, 락트산, 에리토르브산, 아스코르빈산, 요산, 탄닌산 및 Mg2+, NH4 +, 산, Na+, K+와 같은 산의 염이 사용되는 것인 방법.
  62. 청구항 61에 있어서, Proclin 300® 소듐 아지드, Proclin 150®, Proclin Proclin 200® 및 950®과 같은 항미생물제가 미생물 성장을 억제하는 것인 방법.
  63. 청구항 54에 있어서, 상기 염료 용액이 상층에 오일층을 갖고, 피펫에 의해서 하부로부터 배수되는 수용기 중에 보관되는 것인 방법.
  64. 청구항 55에 있어서, 천연 숙성을 위해서, 병이 느슨한 솜에 의해서 느슨하게 입혀짐으로써 산소 교환을 허용하는 것인 방법.
  65. 청구항 48에 있어서, 상기 샘플이 염색을 5-30분 동안 적용하는 유리 상에 위치되는 것인 방법.
  66. 청구항 65에 있어서, 하기 단계들을 포함하는 것인 방법: 1. 자일렌의 공정, 2. 재수화(알코올 사용), 3. 구현, 4. 물 및 린스로 린스, 5. 분별화, 6. 7. 8. 청색화와 함께 린스, 9. 알코올로 린스, 10. 11. 12. 탈수 에오신(알코올 사용), 13. 물 및 자일렌으로 세척.
  67. 청구항 65에 있어서, 청색화가 0.1% 암모늄 용액으로 5 분 동안 수행되는 것인 방법.
  68. 청구항 66에 있어서, 상기 청색화가 (1) 암모늄 수(pH 9-10 수준), (2) 0.1-1% 리튬 카르보네이트 용액, (3) 0.5% 소듐 아세테이트, (4) % 소듐 비카르보네이트 및 (5) 스콧 용액에 의해서 제공되는 것인 방법.
  69. 청구항 68에 있어서, 과도한 염색의 제거 목적으로 (1) 1% 염산, (2) 0.1% 시트르산, (3) 2-5% 아세트산, 및 (4) 다가 매염제와 같은 약산을 함유하는 70% 에탄올이 첨가되는 것인 방법 (The method of claim 68, wherein excessive stain is removed with the 70% ethanol containing a weak acid such as (1) 1% hydrochloric, (2) 0.1% citric acid, (3) 2-5% acetic acid, and (4) the mordant is added for this purpose Multivalent).
  70. 청구항 69에 있어서, 진행성 제제가 핵에 대한 더욱 선택적인 염색을 제공하는 반면, 배경은 더 깨끗하게 나타나는 것인 방법.
  71. 청구항 69에 있어서, 고농도의 염료(예를 들어, 5 g/l)가 퇴행성 염색 배경 및 뮤신을 제공하는 것을 특징으로 하는 방법.
  72. 청구항 66에 있어서, 프라이스를 위해서 에오신을 45초 또는 1분 동안 조합시키는 것이 세포질 구조를 기술하는 것인 방법.
  73. 청구항 66에 있어서, 과도하게 염색된 에오신이 (1) 물, (2) 톨루엔, (3) 자일렌, 및 (4) t-부탄올로 제거되는 것인 방법.
  74. 청구항 6에 있어서, 다른 분자가 크립(Creep) 유도체, 크립티프(kriptif) 유도체, 공극(cavity) 유도체, 에테르 유도체, 덴드리머 유도체, 나노튜브 유도체, 나노입자, 칼리사네레즈(kalisanerez) 유도체, 발리노미신(valinomycin) 유도체 및 이들의 변형을 함유하는 정밀 유도체(fine derivatives) 및 하나 이상의 성분 니게리신 및 유도체 분자, 및/또는 다른 분자의 히드록실기에 연결된 코어기 또는 다른 것에 부착되고, 분자 자체는 알도오스 수소 원자 고리 원자에 의해서 랭크되고(ranked), -F, -Cl, -Br, -I, 니트로기, 아세틸기, 알킬기, 아릴기, 토실기, 메실기, 1차, 2차, 3차 및 양자화기(quantizer)와 같은 아미노기가 아실기에 연결되고, 할로기, 인-함유, 예를 들어, 로우(row) 또는 다른 분자의 둘 이상의 히드록실기, 인산 및 알킬 인산기, 황을 함유하는 기, 예를 들어, 술페이트, 술페이트, 및 에스테르기 및, 케톤기, 옥심기, 카르복실산기 및 그 유도체와 같은 알데히드기를 연결하는 가교화기, 카르보네이트 및 카르바메이트기는 실리콘-함유 기이고, 상기 기는 붕소, 주석 기, 철, 분자, 칼륨-함유 분자 및 기들을 함유하는 기로 구성된 기이고, 본 발명에서는, 암모늄 알럼, 알루미늄 술페이트, 포타슘 알럼, 알루미늄 아세테이트, 칼슘 클로리드, 알루미늄 니트레이트, 철, 암모늄 술페이트, 페러스 술페이트, 포타슘 페로시아니드, 포타슘 페리시아니드, 페릭 클로리드, 구리 아세테이트, 철 알럼, 알루미늄 클로리드, 비스무스 니트레이트, 포스포몰리브덴산 또는 몰리브덴산인 것인 방법.
  75. 청구항 66에 있어서, 헤마톡실린에서와 같이 제제화된 샘플의 조직학적 염색을 위해서, Gill, Anderson, Groot, Baker, Bennett, Bohmer, Bosma Bullard Carazz of Coca Cola, from Debi, Delafield, Duval, Ehrlich, Friedlander, Gadsden's, Gage, Galigh is, Garvey, Graham, Martinotti, from Mitchell, Mayer, Masson, Mann, Mallory, McLachlan, Lugol, Lillian, Lee, Launoy, Langeron, Krutsay, Kleinenberg, Horneyold, Haug, Hamilton, Harris, Harris & Power, Haug Molnar, Papamiltiades', Pusey most, Rawitz 'Reddy, the Sasser', Schmorl, Sliders', Unna, at Watson's, Weigert, Wright and Anderson, Cretin, Faure, Goldman, Hansen, heidenhain, janss, the Kefalas, Krajan, Krutsay, La Manna and Earle, More & Bassal, Murray, Paquin and Goddard, Regaud, Rozas', Seidel Thomas', Weigert, that Yasvoyn Roach & Smith, 구리-매염화된 헤마톡실린, Bensley, Cooke 및 faure held of 바나듐-매염화된 헤마톡실린, Hedenham, McNulty 및 Smith & Smith와 같은 변형인 것인 방법.
  76. 청구항 66에 있어서, 다른 조직 및 세포 염료는 하기와 같이 조합되는 것인 방법: 아크리딘 염료, 안트라퀴논 염료, 아릴메탄 염료, 아조 염료, 디아조늄 염료, 니트로 염료와 프탈로시아닌 염료, 퀴논 이민 염료, 테트라졸륨 염료, 티아졸 염료, 및 크산텐 염료와 같은 다른 염색이 조합될 수 있으며 (특히 자동 사용의 방법에서), 조직학적 염색을 위한 번역 페인트 샘플에는, 아세트산, 황색 산, 1 흑색 산, 22 블루 93, 산 푹신(acid fuchsin), 산 녹색, 산, 산, 1 녹색 5, 산 적색, 오렌지 산 10, 산 적색 4, 산 적색 26, 산, 산, 산 적색 29, 산 적색 44, 산 적색 51, 산 적색 66, 산 적색 73, 산 적색 87, 산 적색 91, 산 적색 92, 산 적색 94, 101 적색 103, 산 로세아(acid rosea), 산 루빈(the acid Rubin), 산 보라 19, 산, 1 황색 산, 9 황색 산, 23 황색 산, 24 황색 산, 36 황색, 황색 73, 산 황색 S, 산 황색 T, 아크리딘, 아크리플라빈(acriflavine), 알시안 블루(alcian blue), 알시안 옐로우, 알코올-가용성 에오신, 알리자린(alizarin), 알리자린 블루, 알리자린 블루 2RC, 알리자린 카민(alizarin carmin), 알리자린 시아닌 R, 알리자린 레드 S, 알리자린 푸르푸린, 알루미나, 아미도 블랙 10B, 적색 아미도나프톨, 아미도 슈왈츠(amido schwarz), 아닐린 블루 WS, 마우베(mauve), 안트라센 G 아조에오'FP 블루 SWR(anthracene G azoeo're blue SWR), 안트라센 블루 SWX, 아우라민 0(Auramine 0), 아조-에오신, 아조캄 B(azocarm B), 아조캄 G, 아조익 디아조 5, 아조익 디아조 48, 아조플록스 to(azophlox to), 아조브 블루(azov blue), 딥 블루, 아주레 B(azure B), 아주레 C, 베이직 블루 8, 베이직 화운데이션(basic foundation), 9 청색 화운데이션, 12 청색 화운데이션, 15 청색 화운데이션, 17 청색 화운데이션, 20 청색 화운데이션, 26 청색 갈색 원(blue brown one), 베이직 유 푸쉬(basically you Fusch), 베이직, 4 베이직 5 적색 베이직 적색 2 베이직 녹색(4 basic 5 red basic red 2 basic green), 오렌지 14, 베이직, 5 녹색, 베이직 필수, 9 적색 보라색 2, 베이직 보라색 4, 베이직 보라색 10, 베이직 보라색 14, 베이직 필수, 1 황색 황색 2, 비에브리히 R(Biebrich R), 비스마르크(Bismarck) 갈색 Y, 브라질(Brazil), 브라질, 샤이니 크록(shiny Croc), 브릴리언트 크리스탈 스칼렛 6R 스칼렛 비에브리히 스칼렛(brilliant crystal scarlet 6R scarlet Biebrich scarlet), 칼슘, 적색, 카민, 카민 산 카르모이신 6(carminic acid Carmoisine 6), 셀레스틴 청색 B(Celestine blue B), 차이나 블루, 클로란트 패스트 적색 5B(chlorant fast red 5B), 적색, 청색 코엘레스트 시카고 블루 4B(blue coelest the Chicago blue 4B), 크롬 보라색 CG, 2 크로모트롭 to(2 chromotrop to), 시아닌까지의 크로목스 R(chromox until cyanine R), 콩고 고린도(Congo Corinth), 콩고 적색, 코튼 블루 코튼(cotton blue cotton), 적색, 적색 적색 3D 상의 크로커(Crocker on red red 3D), 크로커의 붉은 달(Crocker's red Moon), 스케치, 크리스털 폰시오 6R(crystal Ponceau 6R), 크리스털 적색, 크리스탈 보라색, 달리아(dahlia), 다이아몬드 그린 B, 다이렉트 블루 14, 다이렉트 블루 58, 크로커 다이렉트 다이렉트 적색 28 적색 다이렉틀리(Crocker direct direct red 28 red directly), 10 적색, 다이렉트, 7 황색 다이렉틀리, 81 적색 다이렉틀리, 80 적색, 청색 4 두라졸(blue 4 durazol), 청색 8G, 황색, 에오시놀, 에오신 Y 에오신 에오신 B, 청색 에오신, 에오신, 두라졸, 에리 가넷 B(Erie garnet B), 시아닌 R로의 에리오크로(eriochro to cyanine R), 에리스로신 B 에틸 에오신(erythrosine B ethyl eosin), 에틸 녹색, 에틸 보라색, 에반 청색(Evan's blue), 패스트 청색 B(fast blue B), 패스트 녹색 FCF, 패스트 적색 B, 패스트 황색, 패스트 황색 엑스트라 패스트 황색 G(fast yellow extra fast yellow G), 유성 흑색 HB(oily black HB), 플루오레세인, 푸드 녹색 3(food green 3), 갈레온(galleon), 갈라민 청색 갈로시(gallamine blue gallocy's), 용담 보라색(gentian violet), 황색, 리사민 패스트 황색 1(lissamine fast yellow 1), INT, 케르메스(Kermes), 케르메스산(kermesic acid), 케르메흐트로트(kemechtrot), Lac, 락카산(laccaic acid), LAUTH 더 바이올렛(LAUTH the violet), 연녹색, 투 루트(to root), 1 청색 투 루트, 퀴클리 러브 더 BBL(quickly rub the BBL), 헬베티아 청색(helvetia blue), Hoffman 보라색(Hoffman's violet), 히드라진 황색(hydrazine yellow), 임페리얼 적색 헬리오 리사민 녹색 SF(imperial red Helio lissamine green SF), 룩솔 패스트 청색(Luxol fast blue), 마젠타(magenta), 0 , 마젠타 II, 마젠타 II, 마젠타 III, 말라카이트 녹색(malachite green), 맨체스터 갈색(Manchester brown), 마르티우스 황색(Martius yellow), 라일락(lilac), 마우베 to, 메르브로 my(merbro my), 머큐로크롬(Mercurochrome), 메타닐 황색(methanyl yellow), 메틸렌 블루 메틸렌 아주레 B(methylene blue methylene azure B), 메틸렌 블루 C, 메틸렌 블루, 메틸렌 그린, 청색, 메틸, 메틸 녹색, 메틸 보라색, 메틸 보라색 2B, 메틸 보라색 10B, 황색 3G 밀링(yellow 3G milling), 매염제 청색 3, 매염제 청색 10, 청색 14 매염제, 매염제 청색 23, 청색 32 매염제, 매염제 4 적색 천연 매염제, 45 청색-자색, 11까지 적색-자색(red-purple to 11), 3 25 적색 보라색(3 25 red violet), 보라색까지 자색 39(purple to violet 39), 나프탈렌 블루, 나프톨 블루, 흑색, 나프톨 그린 B, 나프톨 옐로우 S, 1 천연 흑색, 천연 적색, 천연 적색 3, 천연 경관, 28 적색 천연, 25 적색 천연, 24 적색 천연, 16 적색 천연, 8 적색, 황색 6, NBT, 중성 적색, 겟 뉴 푹신(get new fuchsin), 나이아가라 블루 3B, 블루 나이트, 나일 블루, 나일 블루 a, 나일 블루 황산염, 나일 레드, 니트로 BT, 니트로 블루 테트라졸리움, 핵 패스트 적색, 오일 적색 O, 오렌지 G, 오르세인(orcein), 파라노사닐린 페르킨 보라색(Pararosaniline Perkin violet), 플록신 B(phloxine B), 피크르산(picric acid), 폰시오 6R(Ponceau 6R), 폰시오 B, 폰시오 데 자일리딘(Ponceau de xylidine), 폰시오 S, 폰타 더 스카이 블루 5B(Ponta the sky blue 5B), 프림로즈(primrose), 프리물라 to(primula to), 푸르푸린(purpurin), 파이로 B(pyro B), G 피로닌 Y(G pyronin Y), 로다민 B(rhodamine B), 로사닐 더 파이로(rosanil the pyro), OR, 적색 중 적색 R(red R in red), 샬라크 R(Scharlach R), 셸락(shellac), 시리우스 적색 F3B(sirius red F3B), 시리우스 적색 4B 사프라닌(sirius red 4B safranin), 벵갈(Bengal), 사프론 로즈 시리우스 청색 어보브 F3(saffron rose Sirius blue above F3), 시아닌 R-가용성 블루까지의 솔로크로(solochro to cyanine R-soluble blue), 용매; 3 흑색 용매 청색 38 용매, 23 적색 a 용매, 24 적색 a 용매, 27 적색 a 용매, 45 적색, 황색 94, 스피리트 가용성 에오신(spirit soluble eosin), 수단 III(Sudan III), 수단 IV 수단 흑색 B(Sudan IV Sudan black B), 수단 적색 BK(Sudan red BK), 황 황색 S(sulfur yellow S), 스위스 청색(Swiss blue), 타트라진(tartrazine), S 티오플라빈 T(S thioflavin T), 티온(tion), 청색(blue), 톨루이딘 적색 톨루엔(toluidine red toluene), 트로파에올 G(tropaeol G), 트라파플라브 더 티오플라빈(trypaflav the thioflavin), 청색, 우라닌 트리판(Uranin trypan), 빅토리아 청색 4R(Victoria blue 4R), 빅토리아 청색 B, 빅토리아 청색 R, 빅토리아 녹색 B, 수용성 에오신, 우드스타 적색(woodsta red), 자일리딘 폰시우(xylidine Ponceau) 및 에오신 황색, 및 그 조합.
  77. 청구항 66에 있어서, 에오신 Y, 오렌지 G, 연녹색 SF, 황색 갈색 비스마르크, 패스트 그린 FCF, O-6, EA25, EA36, EA50 및 EA65와 같은 다른 카운터염색이 조합을 위해서 사용되는 것인 방법.
  78. 청구항 77에 있어서, 상기 대조 염료 에오신 조직은 하기와 같이 염색되는 것인 방법: (1) 콜라겐; 옅은 분홍색, (2) 근육; 진한 분홍색, (3) 호산성 세포질; 적색, (4) 호염기성 세포질; 자색, (5) 코어; 짙은 자주 청색, (6) 적혈구는 적색.
  79. 청구항 6에 있어서, 펩티드, 단백질에 대한 항체, 폴리뉴클레오티드 핵산, DNA, RNA 또는 압타머), 다당류(예를 들어, 렉틴, 당), 지질, 효소, 효소 서브세트의 저해제, 리간드, 수용체, 항원, 합텐(haptens), 리간드, 항원 항체, 항체 단편이 표적과 가교 모두에 결합되어 다른 특징을 제공하는 것인 화합물.
  80. 청구항 79에 있어서, 유기 및 무기 형광 물질 및 반투과성 나노입자가 면역 조직화학 염색 방법을 위해서 부착 될 수 있는 것인 방법.
  81. 청구항 8에 있어서, 상기 유도체 및 상승적 분자는 (1) 식품 염료, (2) 보강제(prostheses) 및 봉합사(suture) 착색제, (3) 와인 제조용 착색제, (4) 생태계코보호 섬유 제품을 코팅, (5) 경량으로 인한 군사 유니폼 염색, (6) 센서 제조, (7) 나노 입자 합성을 위한 나노 기술, (8) 표시기, (9) 플라즈마 TV 디스플레이 기술, (10) 프린터의 잉크 제조, (11) 화장품 산업에서 활성 물질 또는 착색제, (12) 제약 산업, (13) 약초 식품, 구강 보충제 및 캡슐 및 음료의 제조를 위해 이용될 수 있는 것인 화합물.
  82. 청구항 8에 있어서, 상이한 유형의 투여 장치, 적용 및 상기 분자와 관련된 제제가 개시된 본 발명의 결과로서 고려되는 것인 화합물.
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