RU2725291C1 - Способ донозологической неинвазивной диагностики состояния здоровья работников - Google Patents
Способ донозологической неинвазивной диагностики состояния здоровья работников Download PDFInfo
- Publication number
- RU2725291C1 RU2725291C1 RU2019116395A RU2019116395A RU2725291C1 RU 2725291 C1 RU2725291 C1 RU 2725291C1 RU 2019116395 A RU2019116395 A RU 2019116395A RU 2019116395 A RU2019116395 A RU 2019116395A RU 2725291 C1 RU2725291 C1 RU 2725291C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- cells
- range
- alizarin
- smears
- points
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 34
- 230000036541 health Effects 0.000 title description 4
- RGCKGOZRHPZPFP-UHFFFAOYSA-N alizarin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C3=C(O)C(O)=CC=C3C(=O)C2=C1 RGCKGOZRHPZPFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 38
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 32
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 claims abstract description 22
- 230000000093 cytochemical effect Effects 0.000 claims abstract description 12
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 claims abstract description 10
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 claims abstract description 10
- 210000003104 cytoplasmic structure Anatomy 0.000 claims abstract description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 claims abstract description 5
- 238000009826 distribution Methods 0.000 claims abstract description 4
- 238000010186 staining Methods 0.000 claims abstract description 4
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 claims abstract description 3
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 claims abstract description 3
- 238000000799 fluorescence microscopy Methods 0.000 claims description 7
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 abstract description 13
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 abstract description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 4
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 abstract description 3
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 abstract description 3
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 abstract description 3
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 2
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 abstract description 2
- 239000011575 calcium Substances 0.000 abstract description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 238000009830 intercalation Methods 0.000 abstract description 2
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 abstract 2
- 235000013403 specialized food Nutrition 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 210000000214 mouth Anatomy 0.000 description 12
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 6
- 241000199919 Phaeophyceae Species 0.000 description 5
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- AZQWKYJCGOJGHM-UHFFFAOYSA-N 1,4-benzoquinone Chemical compound O=C1C=CC(=O)C=C1 AZQWKYJCGOJGHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 4
- 230000002380 cytological effect Effects 0.000 description 4
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 4
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 3
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001474374 Blennius Species 0.000 description 2
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 2
- 230000002327 eosinophilic effect Effects 0.000 description 2
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 230000003862 health status Effects 0.000 description 2
- 230000003780 keratinization Effects 0.000 description 2
- 210000005128 keratinized epithelium Anatomy 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 210000002200 mouth mucosa Anatomy 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 238000007790 scraping Methods 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 150000004345 1,2-dihydroxyanthraquinones Chemical class 0.000 description 1
- PLXMOAALOJOTIY-FPTXNFDTSA-N Aesculin Natural products OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1Oc2cc3C=CC(=O)Oc3cc2O PLXMOAALOJOTIY-FPTXNFDTSA-N 0.000 description 1
- 206010003694 Atrophy Diseases 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000003771 C cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000012625 DNA intercalator Substances 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 206010020649 Hyperkeratosis Diseases 0.000 description 1
- 229930192392 Mitomycin Natural products 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N Mytomycin Chemical compound C1N2C(C(C(C)=C(N)C3=O)=O)=C3[C@@H](COC(N)=O)[C@@]2(OC)[C@@H]2[C@H]1N2 NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N 0.000 description 1
- -1 alizarin Chemical class 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 150000004056 anthraquinones Chemical class 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 230000037444 atrophy Effects 0.000 description 1
- 210000000270 basal cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 125000000837 carbohydrate group Chemical group 0.000 description 1
- 210000000748 cardiovascular system Anatomy 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 230000019522 cellular metabolic process Effects 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 231100001261 hazardous Toxicity 0.000 description 1
- 230000013632 homeostatic process Effects 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 239000000138 intercalating agent Substances 0.000 description 1
- 230000003859 lipid peroxidation Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 1
- 229960004857 mitomycin Drugs 0.000 description 1
- 230000009456 molecular mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 description 1
- 238000000399 optical microscopy Methods 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 238000005502 peroxidation Methods 0.000 description 1
- 125000003367 polycyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002488 pyknotic effect Effects 0.000 description 1
- 150000004059 quinone derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 125000004151 quinonyl group Chemical group 0.000 description 1
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61B—DIAGNOSIS; SURGERY; IDENTIFICATION
- A61B5/00—Measuring for diagnostic purposes; Identification of persons
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/30—Staining; Impregnating ; Fixation; Dehydration; Multistep processes for preparing samples of tissue, cell or nucleic acid material and the like for analysis
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
- G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
- G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
- G01N21/6447—Fluorescence; Phosphorescence by visual observation
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
- G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
- G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
- G01N21/6486—Measuring fluorescence of biological material, e.g. DNA, RNA, cells
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/52—Use of compounds or compositions for colorimetric, spectrophotometric or fluorometric investigation, e.g. use of reagent paper and including single- and multilayer analytical elements
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/84—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving inorganic compounds or pH
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pathology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Surgery (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине, а именно к гигиене, клинико-лабораторной диагностике, цитологии, и может быть использовано для исследования клеток эпителия полости рта у работников, подвергающихся воздействию вредных факторов рабочей среды и трудового процесса. Проводят изготовление мазков буккального эпителия, окрашивание мазков ализарином красным С, проведение флуоресцентной микроскопии мазков. Далее осуществляют количественную оценку строения клеток в мазках путем вычисления цитохимического коэффициента флуоресценции, количественно выражающего особенности строения ядра и цитоплазмы, а также степень дифференцировки клеток и вычисляемого путем подсчета клеток с распределением соответственно содержанию в них красителя ализарина красного С. Всего изучают 100 клеток. Рассчитывают средний цитохимический коэффициент - СЦК по формуле:где Nэ - количество эпителиоцитов. 1 балл - не флуоресцирующие в диапазоне 580-680 нм, не окрашенные ализарином клетки; 2 балла - слабо флуоресцирующие по периферии цитоплазмы клетки в диапазоне 580-680 нм, 90% площади ядра и перинуклеарная зона, флуоресцирует в диапазоне 400-580 нм; 3 балла - ядро флуоресцирует в диапазоне 400-580 нм, окрашенные ализарином цитоплазматические структуры, флуоресцируют в диапазоне 580-680 нм; 4 балла - ядро и внутриклеточные цитоплазматические структуры, окрашенные ализарином, флуоресцируют в диапазоне 580-680 нм; 5 баллов - ядро и цитоплазма интенсивно флуоресцируют в диапазоне 580-680 нм. Способ обеспечивает возможность выявления цитохимических особенностей кальций-зависимого механизма регулирования дифференцировки буккального эпителия, за счет объективной оценки состояния клеток при просмотре под оптическим микроскопом окрашенных мазков, а также возможности с помощью флуоресцентной микроскопии сделать оценку ДНК-интеркалирующих свойств ализарина красного С, который окрашивает ядра клеток буккального эпителия, что обеспечивает обоснование мер профилактики, одним из элементов которого является применение специализированных пищевых продуктов, обладающих протекторными свойствами и повышающих общую сопротивляемость организма. 2 табл., 1 пр.
Description
Изобретение относится к медицине, а именно к гигиене, клинико-лабораторной диагностике, цитологии, и, являясь способом диагностики состояния здоровья работников, обеспечивает выявление донозологических признаков нарушений здоровья при воздействии вредных производственный факторов.
Методы диагностики преморбидных состояний человека весьма разнообразны и включают психодиагностическое тестирование, изучение иммунного статуса, функций сердечно-сосудистой системы, определение биохимических параметров крови, а именно, показателей свободнорадикального и перекисного окисления (состояние антиоксидантных систем и перекисного окисления липидов), состояние ферментных систем клеток и другие. В настоящий момент актуальным направлением в современной клинико-лабораторной диагностике являются неинвазивные методы обследования. Особенное значение имеют подобные методы с целью донозологической диагностики нарушений состояния здоровья, обусловленных влиянием неблагоприятных факторов окружающей среды, включая факторы рабочей среды. К неинвазивному методу гигиенической донозологической диагностики относят цитологическое исследование буккального эпителия слизистой оболочки ротовой полости.
Известны способы цитологического исследования мазков слизистой оболочки ротовой полости [1. Быков В.Л., Гистология и эмбриология органов полости рта человека. Учебное пособие. Издание второе, исправленное, 1998. 2-е изд. СПб.: Специальная литература, 1998. 248 с.]. При этом методе, материал, получаемый путем соскоба с внутренней поверхности ротовой полости с помощью шпателя или тампона, переносят на покровное стекло, фиксируют и окрашивают одним из принятых полихромных методов: по Папаниколау, Романовскому-Гимзе и др. Подобное диагностическое цитологическое исследование используют для выявления нарушений процесса дифференцировки эпителия при развитии воспалительных, дистрофических, предопухолевых или опухолевых процессов. В эпителии полости рта определяются базальные, парабазальные, промежуточные и поверхностные клетки, а в участках, подвергающихся ороговению, также и роговые чешуйки. При травме и наличии воспалительных процессов эпителия в мазке отмечаются базальные клетки, а парабазальные обнаруживаются при атрофии. Преобладание в мазке промежуточных клеток указывает на созревание эпителия и его максимальный уровень обнаруживается наличием поверхностных клеток, в случае ороговевания эпителия - роговых чешуек. При гиперкератозах содержание последних резко увеличивается. Путем подсчета индекса созревания, который является количественным соотношением клеток в различной стадии дифференцировки: парабазальных, промежуточных, поверхностных и роговых чешуек, и выражен в процентах, оценивается степень созревания эпителия. С этой целью используют и другие количественные показатели, а именно, кариопикнотический индекс (относительное содержание клеток с пикнотическим ядром) и эозинофильный индекс (доля клеток с эозинофильной цитоплазмой) [1].
Недостатками известных способов является то обстоятельство, что с их помощью не осуществляется цитохимическая оценка молекулярных механизмов регуляции дифференцировки многослойного плоского неороговевающего эпителия слизистой оболочки ротовой полости, что не позволяет в должной мере соотнести влияние неблагоприятных факторов окружающей среды, в том числе вредных факторов рабочей среды, на состояние здоровья человека.
Наиболее близким, к заявляемому техническому решению является метод цитохимического исследования буккального эпителия слизистой оболочки ротовой полости, путем окраски клеток спиртовым раствором ализарина красного С [2. Зиновьев С.В., Романцова Е.Б., Целуйко С.С. Цитохимическая характеристика орального секрета у школьниц // Российский вестник перинатологии и педиатрии. 2016. Т. 61. №4. С. 266-267]. Задачей известного способа [2], является морфологическая оценка ядра клеток буккального эпителия по включению красителя и его оптической плотности, которая определяется с помощью оптической микроскопии в проходящем свете.
Недостатком данного метода является [2] субьективность и ограничение информации о клеточном метаболизме, сопровождающих процесс дифференцировки, что не позволяет в полной мере оценить состояние эпителия и использовать его в качестве гигиенической донозологической диагностики нарушений в состоянии здоровья человека.
Техническая проблема, ранее препятствующая решению задачи заявленного способа, невозможность объективной оценки состояния клеток при просмотре под оптическим микроскопом окрашенных мазков, тогда как в заявляемом способе, используется явление флуоресценции окрашенных ализарином красным С клеток буккального эпителия. Недостатком известных способов [2], наиболее близких к заявляемому нами техническому решению является то, что они осуществляются без флуоресцентной микроскопии.
1. Технический результат заявленного способа заключается в том, что с его помощью выявляются цитохимические особенности кальций-зависимого механизма регулирования дифференцировки буккального эпителия.
2. Техническим результатом заявленного способа является то, что с помощью флуоресцентной микроскопии можно сделать оценку ДНК-интеркалирующих свойств ализарина красного С, который окрашивает ядра клеток буккального эпителия. Это позволяет оценить особенности строения ДНК изучаемых клеточных элементов. Фрагменты хинонов являются общими для многих природных и синтетических соединений, включая ализарин, которые являются ДНК-интеркалирующими агентами, благодаря их структурам, способным образовывать водородные связи с азотистыми основаниями. Указанные соединения имеют боковые цепи, углеводные остатки и основные атомы азота, которые прочно связываются с ДНК [3. Горностаев Л.М., Арнольд Е.В., Лаврикова Т.И., Руковец Т.А., Талдыкина Д.С., Халявина Ю.Г., Штиль А.А. Полициклические хиноидные соединения в качестве противоопухолевых препаратов // Сибирское медицинское обозрение. 2017. Т. 6. С. 21-31.] Примерами производных хинонов с противоопухолевой активностью доксорубицин, митомицин [3]. Все известные хиноновые ДНК-интеркаляторы способны нарушать функции ДНК, что приводит к гибели клеток. Ализарин - самый известный хинон, на основе которого синтезированы другие антрахиноны, так же обладает противоопухолевой активностью [4. Mishra S.R., P. Nandhakumar, Yadav К.Р., et all. In vitro analysis of alizarin as novel therapeutic agent for murine breast cancer // The Pharma Innovation Journal 2017; 6(10): 345-350; 5. Ye M.Y., Yao G.Y., Pan Y.M., Liao Z.X., Zhang Y., Wang H.S. Synthesis and antitumor activities of novel α-aminophosphonate derivatives containing an alizarin moiety // Guiyang Yao, Weilong Dai, Synthesis and antitumor properties of novel alizarin analogs // Eur. J. Med. Chem. 2014. 23. 12. P. 5031-5042].
3. Учитывая то, что с помощью ализарина красного С выявляются микроядра [2], техническим результатом заявленного способа является цитохимическая характеристика механизма развития ядерной патологии в клетках буккального эпителия.
Поэтому, новизной и изобретательским уровнем заявленного способа является оценка клеток с привлечением флуоресцентной микроскопии в мазках буккального эпителия, окрашенных ализарином красным С, после чего вычисляется цитохимический коэффициент, который характеризует степень дифференцировки клеток.
Цель способа: выявить и количественно охарактеризовать особенности строения ядра и цитоплазмы клеток многослойного плоского неороговевающего эпителия полости рта.
Суть способа заключается в том, что с помощью флуоресцентной микроскопии оценивается степень включения ализаринового красного С в ядро и цитоплазму клеток буккального эпителия.
Способ осуществляется в 6 этапов:
1. Полоскание рта исследуемого лица дистиллированной водой. После чего исследуемый выплевывает воду.
2. С помощью медицинского шпателя делается соскоб со слизистой оболочки ротовой полости, после чего изготавливают два мазка буккального эпителия на предметном стекле.
3. Фиксация высушенного мазка буккального эпителия производится 96%-ным этиловым спиртом в течение 10 минут. Мазки после фиксации делятся на две части: А. Мазки без обработки и Б. мазки с обработкой нейтральным 5% раствором ЭДТА (этилендиаминтетрауксусная кислота).
4. Окрашивание мазка производят в 5%-ном спиртовом р-ре ализарина красного С в течение 10 минут. Для удаления воды производится промокание краев мазка фильтровальной бумагой. Последующее отмывание мазка осуществляется в дистиллированной воде на протяжении 30 секунд в нескольких сменах. Высушивание мазков производится на открытом воздухе в темном помещении.
5. Флуоресцентная микроскопия окрашенных мазков производится под иммерсионном объективом ×100, окулярами ×10 в отраженном свете. Неокрашенные клетки просматриваются при возбуждении флуоресценции длиной волны от 340-400 нм с эмиссией флуоресценции в диапазоне 400-580 нм. Окрашенные ализарином мазки просматриваются при возбуждении флуоресценции при длине волны от 430-520 нм с эмиссией флуоресценции в диапазоне 580-680 нм.
6. Количественную оценку проводят путем подсчета клеток с распределением соответственно содержанию в них красителя и распределением баллов. Всего изучается 100 клеток. Рассчитывают средний цитохимический коэффициент - СЦК по формуле:
где:
Nэ - количество эпителиоцитов;
1 балл - не флуоресцирующие в диапазоне 580-680 нм, не окрашенные ализарином клетки.
2 балла - слабо флуоресцирующие по периферии цитоплазмы клетки в диапазоне 580-680 нм, 90% площади ядра и перинуклеарная зоны, флуоресцирует в диапазоне 400-580 нм.
3 балла - ядро флуоресцирует в диапазоне 400-580 нм, окрашенные ализарином цитоплазматические структуры, флуоресцируют в диапазоне 580-680 нм.
4 балла - ядро и внутриклеточные цитоплазматические структуры окрашенные ализарином, флуоресцируют в диапазоне 580-680 нм.
5 баллов - ядро и цитоплазма интенсивно флуоресцируют, в диапазоне 580-680 нм.
Пример исследования.
Объектом исследования служили 43 работника испытательного лабораторного центра учреждения Роспотребнадзора, осуществляющих профессиональную деятельность во вредных условиях труда 3 класса 1-3 степени (в соответствии с Р 2.2.2006-05 «Руководство по гигиенической оценке факторов рабочей среды и трудового процесса. Критерии и классификация условий труда»). Возраст обследуемых - 22-65 лет. Мы дважды исследовали слизистую оболочку полости рта у 43 обследуемых: 1 этап - до приема продукта переработки бурых морских водорослей, 2 этап - после приема продукта переработки бурых морских водорослей. В качестве продукта переработки применялся специализированный продукт «Ламиналь (биогель из морской капусты)» [6. Аминина Н.М. Лечебно-профилактический продукт «Ламиналь - биогель из морских водорослей». Владивосток: Тинро-Центр, 2006. 34 с.] (Свидетельство о государственной регистрации №RU. 77.99.88.004.E.005810.04.15). Прием биогеля по 30 грамм осуществлялся в профилактических целях до начала трудовой смены за 30 минут до приема пищи. Продолжительность эксперимента составила четыре рабочих недели. Буккальный эпителий забирался шпателем с последующим переносом на предметное стекло и высушиванием на открытом воздухе в течение 10 минут с последующей фиксацией 96%-ным этиловым спиртом. В цитологических мазках исследовалось по 100 клеток до и после приема биогеля. Клеточный профиль буккального эпителия изучали с помощью заявленного способа. Для флуоресцентной микроскопии использовали микроскоп фирмы Карл Цейс - Axio Scope.А1. Результаты исследования представлены в таблице №1.
После флуоресцентного изучения состояния клеток производится отмывание мазка от ализарина красного в растворе дистиллированной воды. Затем мазки окрашиваются по Романовскому-Гимза, после чего определяется индекс созревания клеток буккального эпителия, а именно, соотношение парабазальных /промежуточных/ поверхностных клеток/роговых чешуек, выраженное в процентах, также оценивается степень дифференцировки и полнота созревания эпителия (табл. 2).
4. Таким образом, заявленный способ существенно уточняет известные способы исследования буккального эпителия [1, 2]. Техническим результатом заявленного способа является оценка положительного воздействия продукта переработки бурых морских водорослей на ротовую полость человека.
Технический результат: с помощью заявленного способа можно установить максимальную эффективную продолжительность времени, необходимого для приема продукта переработки бурых морских водорослей. Прием продукта переработки бурых морских водорослей в дозе 30 грамм, в течение 4 рабочих недель, приводит к стабилизации клеточных маркеров структурного гомеостаза полости рта. Отмечается отсутствие цитотоксических эффекта специализированного продукта, применяемого в комплексе профилактических мер для снижения негативного влияния вредных производственных факторов на эпителий ротовой полости персонала испытательного лабораторного центра. 
Источники информации
1. Быков В.Л., Гистология и эмбриология органов полости рта человека. Учебное пособие. Издание второе, исправленное, 1998. 2-е изд. СПб.: Специальная литература, 1998. 248 с.
2. Зиновьев С.В., Романцова Е.Б., Целуйко С.С. Цитохимическая характеристика орального секрета у школьниц // Российский вестник перинатологии и педиатрии. 2016. Т. 61. №4. С. 266-267.
3. Горностаев Л.М., Арнольд Е.В., Лаврикова Т.И., Руковец Т.А., Талдыкина Д.С, Халявина Ю.Г., Штиль А.А. Полициклические хиноидные соединения в качестве противоопухолевых препаратов // Сибирское медицинское обозрение. 2017. Т. 6. С. 21-31.
4. Mishra S.R., P. Nandhakumar, Yadav К.Р., et all. In vitro analysis of alizarin as novel therapeutic agent for murine breast cancer // The Pharma Innovation Journal 2017; 6(10): 345-350.
5. Ye M.Y., Yao G.Y., Pan Y.M., Liao Z.X., Zhang Y., Wang H.S. Synthesis and antitumor activities of novel α-aminophosphonate derivatives containing an alizarin moiety // Guiyang Yao, Weilong Dai, Synthesis and antitumor properties of novel alizarin analogs // Eur. J. Med. Chem. 2014. 23. 12. P. 5031-504.
6. Аминина H.M. Лечебно-профилактический продукт «Ламиналь - биогель из морских водорослей». Владивосток: Тинро-Центр, 2006. 34 с.
Claims (9)
- Способ исследования клеток эпителия полости рта у работников, подвергающихся воздействию вредных факторов рабочей среды и трудового процесса, включающий изготовление мазков буккального эпителия, окрашивание мазков ализарином красным С, проведение флуоресцентной микроскопии мазков; далее осуществляют количественную оценку строения клеток в мазках путем вычисления цитохимического коэффициента флуоресценции, количественно выражающего особенности строения ядра и цитоплазмы, а также степень дифференцировки клеток и вычисляемого путем подсчета клеток с распределением соответственно содержанию в них красителя ализарина красного С; всего изучают 100 клеток, рассчитывают средний цитохимический коэффициент - СЦК по формуле:
-
- где:
- Nэ - количество эпителиоцитов;
- 1 балл - не флуоресцирующие в диапазоне 580-680 нм, не окрашенные ализарином клетки;
- 2 балла - слабо флуоресцирующие по периферии цитоплазмы клетки в диапазоне 580-680 нм, 90% площади ядра и перинуклеарная зона, флуоресцирует в диапазоне 400-580 нм;
- 3 балла - ядро флуоресцирует в диапазоне 400-580 нм, окрашенные ализарином цитоплазматические структуры флуоресцируют в диапазоне 580-680 нм;
- 4 балла - ядро и внутриклеточные цитоплазматические структуры, окрашенные ализарином, флуоресцируют в диапазоне 580-680 нм;
- 5 баллов - ядро и цитоплазма интенсивно флуоресцируют в диапазоне 580-680 нм.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2019116395A RU2725291C1 (ru) | 2019-05-27 | 2019-05-27 | Способ донозологической неинвазивной диагностики состояния здоровья работников |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2019116395A RU2725291C1 (ru) | 2019-05-27 | 2019-05-27 | Способ донозологической неинвазивной диагностики состояния здоровья работников |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2725291C1 true RU2725291C1 (ru) | 2020-06-30 |
Family
ID=71510230
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2019116395A RU2725291C1 (ru) | 2019-05-27 | 2019-05-27 | Способ донозологической неинвазивной диагностики состояния здоровья работников |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2725291C1 (ru) |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2012500860A (ja) * | 2008-08-22 | 2012-01-12 | エスエヌユー アールアンドディービー ファウンデーション | シリカ系蛍光ナノ粒子 |
| CA2641954C (en) * | 2006-03-06 | 2016-04-26 | Zetiq Technologies Ltd. | Methods and compositions for identifying a cell phenotype |
| WO2016064353A1 (en) * | 2014-10-21 | 2016-04-28 | Budak Mehmet | Tissue and cell stain formula with a novel molecule obtained from papaver rhoeas |
| CN109342381A (zh) * | 2018-11-22 | 2019-02-15 | 广州往圣生物科技有限公司 | 一种荧光染色试剂 |
-
2019
- 2019-05-27 RU RU2019116395A patent/RU2725291C1/ru active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2641954C (en) * | 2006-03-06 | 2016-04-26 | Zetiq Technologies Ltd. | Methods and compositions for identifying a cell phenotype |
| JP2012500860A (ja) * | 2008-08-22 | 2012-01-12 | エスエヌユー アールアンドディービー ファウンデーション | シリカ系蛍光ナノ粒子 |
| WO2016064353A1 (en) * | 2014-10-21 | 2016-04-28 | Budak Mehmet | Tissue and cell stain formula with a novel molecule obtained from papaver rhoeas |
| CN109342381A (zh) * | 2018-11-22 | 2019-02-15 | 广州往圣生物科技有限公司 | 一种荧光染色试剂 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| ЗИНОВЬЕВ С.В. и др. Цитохимическая характеристика орального секрета у школьниц. Российский вестник перинатологии и педиатрии. 2016, 4, стр.266-267. * |
| ЗИНОВЬЕВ С.В. и др. Цитохимическая характеристика орального секрета у школьниц. Российский вестник перинатологии и педиатрии. 2016, 4, стр.266-267. КАРНАУХОВ В.Н. Люминесцентный анализ клеток. Изд-во "Аналитическая микроскопия". 2002, стр.131. * |
| КАРНАУХОВ В.Н. Люминесцентный анализ клеток. Изд-во "Аналитическая микроскопия". 2002, стр.131. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP6348635B2 (ja) | 生細胞干渉法を介した急速超並列単細胞薬物反応測定法 | |
| Sauer et al. | Fluorescence lifetime imaging ophthalmoscopy (FLIO) of macular pigment | |
| Bindewald-Wittich et al. | Two-photon–excited fluorescence imaging of human RPE cells with a femtosecond Ti: sapphire laser | |
| Rübe et al. | DNA double-strand break rejoining in complex normal tissues | |
| JPH027427B2 (ru) | ||
| Miura et al. | Two-photon microscopy and fluorescence lifetime imaging of retinal pigment epithelial cells under oxidative stress | |
| RU2725291C1 (ru) | Способ донозологической неинвазивной диагностики состояния здоровья работников | |
| Cheng et al. | Exposure to 2, 5-hexanedione can induce neural malformations in chick embryos | |
| Gerding et al. | Intravital staining of the internal limiting membrane with a novel heavy solution of brilliant blue G | |
| Finnerud et al. | Pseudoxanthoma elasticum: proof of calcification of elastic tissue; occurrence with and without angioid streaks of the retina | |
| Campbell et al. | Clinical applications of non‐invasive multi and hyperspectral imaging of cell and tissue autofluorescence beyond oncology | |
| RU2549989C2 (ru) | Способ микроскопического исследования нативного соскоба корня языка | |
| Khalil | Chromosome aberrations in cultured rat bone marrow cells treated with inorganic fluorides | |
| US8880142B2 (en) | Method for precisely determining the fluorescence in a layer system, such as the eye | |
| RU2455937C1 (ru) | Способ выявления псевдоэксфолиативного материала на ранних стадиях заболевания глаза | |
| Woodland et al. | Sensitivity of immunoperoxidase and immunofluorescence staining for detecting chlamydia in conjunctival scrapings and in cell culture. | |
| Kagan et al. | Grading atherosclerosis in aorta and coronary arteries obtained at autopsy: WHO trials of macroscopic methods | |
| RU2326591C1 (ru) | Способ судебно-медицинской диагностики смерти от странгуляционной механической асфиксии | |
| Bringmann et al. | Age-and sex-related variations of individual retinal layer thickness in the foveal center of healthy eyes | |
| RU2412640C1 (ru) | Способ дифференциальной диагностики ринитов | |
| RU2643955C1 (ru) | Способ отбора и подготовки пробы клеток конъюнктивы для проведения бактериологического, вирусологического и иммунологического исследований | |
| RU2789238C1 (ru) | Способ дифференциальной диагностики красного плоского лишая слизистой оболочки рта | |
| RU2594119C1 (ru) | Способ прогнозирования течения апластической анемии после спленэктомии по индексу соотношения масс cd4+/cd8+ т-лимфоцитов селезенки | |
| Gisoldi et al. | The usefulness of lutein/trypan blue vital dye for the staining of corneal endothelium: a pilot study on DMEK pretreated tissues | |
| RU2456598C2 (ru) | Способ определения тяжести заболевания у больных бронхолегочными заболеваниями |