RU2455937C1 - Способ выявления псевдоэксфолиативного материала на ранних стадиях заболевания глаза - Google Patents
Способ выявления псевдоэксфолиативного материала на ранних стадиях заболевания глаза Download PDFInfo
- Publication number
- RU2455937C1 RU2455937C1 RU2011115153/14A RU2011115153A RU2455937C1 RU 2455937 C1 RU2455937 C1 RU 2455937C1 RU 2011115153/14 A RU2011115153/14 A RU 2011115153/14A RU 2011115153 A RU2011115153 A RU 2011115153A RU 2455937 C1 RU2455937 C1 RU 2455937C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- structures
- smear
- tem
- imprint
- early stages
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области медицины, в частности к офтальмологии. Для выявления псевдоэксфолиативного материала (ПЭМ) в структурах задней камеры глаза на ранних стадиях заболевания у пациентов с катарактой проводят ультразвуковую биомикроскопию. При выявлении точечных включений на поверхности структур, обращенных в заднюю камеру глаза, во время проведения факоэмульсификации после парацентеза роговицы берут соскоб в зоне расположения точечных включений. Выполняют мазок-отпечаток, высушивают его на воздухе до полного испарения влаги. Окрашивают краской-фиксатором Май-Грюнвельда по методике Паппенгейма, далее докрашивают методом гистологической окраски по Маллори. При обнаружении на мазке-отпечатке фибриллярно-гранулярных структур темно-синего цвета констатируют наличие ПЭМ. Способ позволяет выявлять псевдоэксфолиативный материал в структурах задней камеры глаза на ранних стадиях заболевания. 2 ил., 2 пр.
Description
Изобретение относится к медицине, в частности к офтальмологии, и может быть использовано для выявления псевдоэксфолиативного материала (ПЭМ) на поверхности структур глазного яблока.
В клинической офтальмологии диагноз псевдоэксфолиативного синдрома (ПЭС) выставляется на основании визуализации ПЭМ белесовато-серого цвета на передней капсуле хрусталика, что характерно для поздних, развитых стадий ПЭС с глубокими структурными и системными нарушениями, трудно поддающимися коррекции. По данным исследователей в процессе развития синдрома ПЭМ сначала последовательно появляется на структурах, обращенных в заднюю камеру глаза (на отростках цилиарного тела, задней поверхности радужки, цинновой связке, экваториальной и периэкваториальной зонах капсулы хрусталика), с перераспределением в последнюю очередь на переднюю капсулу хрусталика, заднюю поверхность роговицы, на структуры угла передней камеры. Таким образом, на ранних стадиях заболевания передняя капсула хрусталика остается клинически интактной, в связи с чем затруднена диагностика ПЭС.
В медицине существуют два основных метода морфологического исследования биологических образцов: гистологический и цитологический.
Гистологический метод предназначен для изучения структуры фрагмента тканей, представляющих единый объект.
При гистологическом методе исследования объектом выступает фрагмент тканей, который после забора погружается в фиксирующий раствор для стабилизации тканей, далее подвергается стандартной гистологической проводке, при которой происходит обезвоживание и обезжиривание путем последовательного переноса этого фрагмента тканей по спиртам восходящей концентрации, пропитывание и уплотнение (заливка парафином, целлоидином или др.) с приготовлением гистологических срезов и их последующей окраской одной из гистологических окрасок, дифференцирующей клетки и ткани исследуемого фрагмента [«Микроскопическая техника» Ромейс Б., М.: Изд. ИЛ. - 1953. - 718 с.; «Практическое руководство по патогистологической технике для офтальмологов» Архангельский В.Н., М.: Медгиз. - 1957. - 111 с.]. При этом в исследуемом образце после гистологической проводки сохраняются лишь структуры, которые крепятся между собой при помощи элементов стромы и межклеточных взаимоотношений, а гистологическая окраска дает четкую визуализацию этих структур и позволяет оценить процессы, происходящие в них.
При цитологическом методе есть возможность исследовать отдельные клетки, биологические жидкости и другие бесструктурные образцы (аспираты при тонкоигольной биопсии (ТИАБ) опухолей, кровь, соскобы, слизь, мокроту и т.д.) [Руководство по цитологии, т.1-2, М. - Л., 1965-1966 гг.]. Для этой методики достаточно разместить исследуемый объект на предметном стекле (мазок, отпечаток тканей, капля и др.), высушить его на воздухе и окрасить одним из способов цитологической окраски (по методике Паппенгейма, по методике Лейшмана и др.). Метод не требует предварительной фиксации образца, так как она осуществляется в процессе самой окраски за счет метилового спирта, на котором готовятся красители. Этот способ позволяет только визуализировать клетки, волокнистые структуры, форменные элементы крови и другие объекты, входящие в состав исследуемого образца, но, так как окраски неспецифичны, ценность его ограничивается информативностью лишь в отношении структуры и внешнего вида клеток.
Каждый из описанных методов обладает отрицательными моментами в отношении исследования ПЭМ, так как она не имеет плотной фиксации с подлежащими структурами. Поэтому при попытке выявления гистологическим методом данного материала происходит его механическое вымывание из исследуемого образца. При исследовании мазка-отпечатка по стандартной цитологической методике удается только сохранить его в образце, но неспецифичность окраски делает невозможным отдифференцировать ПЭМ и другие неклеточные структуры, входящие в состав исследуемого мазка. Эти проблемы создают значительные трудности в изучении структуры ПЭМ, вызывают сложности в исследовании этиопатогенеза ПЭС и затрудняют раннюю диагностику этого синдрома.
Авторам не известен способ выявления ПЭМ на ранних стадиях заболевания глаза.
Техническим результатом является расширение средств диагностики, выявление ПЭМ на поверхности структур глазного яблока с целью дальнейшего определения метода лечения ПЭС и профилактики осложнений, связанных с ним.
Технический результат достигается тем, что у пациентов с катарактой проводят ультразвуковую биомикроскопию (УБМ), и если в результате выявляют точечные включения на поверхности структур, обращенных в заднюю камеру глаза, то далее во время проведения факоэмульсификации (ФЭК) после парацентеза роговицы берут соскоб в зоне расположения точечных включений, из которого выполняют мазок-отпечаток, затем полученный мазок-отпечаток высушивают на воздухе до полного испарения влаги, окрашивают краской-фиксатором Май-Грюнвельда по методике Паппенгейма, далее докрашивают методом гистологической окраски по Маллори и при обнаружении на мазке-отпечатке фибриллярно-гранулярных структур темно-синего цвета констатируют наличие ПЭМ.
Изобретение поясняется изображением мазков-отпечатков с ПЭМ на фиг.1, 2.
Фиг.1. Мазки-отпечатки донорских глаз с поверхности цилиарных отростков. Окраска - по Паппенгейму-Маллори. Увеличение ×200.
Фиг.2. Мазок-отпечаток передней капсулы хрусталика. Окраска - по Паппенгейму-Маллори. Увеличение ×50.
При создании изобретения методика была изначально отработана на донорских глазах, у которых были обнаружены белесоватые отложения на цилиарных отростках и задней поверхности радужки при макромикроскопическом их препарировании. С поверхностей этих структур брали мазки-отпечатки и исследовали при помощи стандартного метода приготовления цитологических мазков по методике Паппенгейма с красителем-фиксатором Май-Грюнвальда, описанной в учебной литературе «Цитология и общая гистология», автор Быков В.Л. - Sotis, СПб., 2002. - 519 с. (с.49-51). Далее мазок-отпечаток докрашивали методом окраски по Маллори.
В результате на окрашенном мазоке-отпечатоке была обнаружена аномальная фибриллярно-гранулярная структура темно-синего цвета, что указывает белковую природу, сходную с коллагеновой и ретикулярной тканью ПЭМ (фиг.1).
Таким образом, была разработана методика, по которой мазок-отпечаток с ПЭМ проходит приготовление цитологического препарата, включающее фиксацию и частичную окраску с сохранением ПЭМ в исследуемом образце, и, не проходя все этапы стандартной гистологической обработки, окрашивается гистологической окраской по Маллори в темно-синий цвет, что делает возможным изучение структуры ПЭМ.
Данный метод использован для выявления диагноза ПЭС в трупных донорских глазах, его применение позволило изучить ранние морфологические признаки этого процесса и определить их клиническое соответствие для повышения точности установления диагноза ПЭС у офтальмологических пациентов.
Использование разработанного метода цитогистологического исследования для выявления ПЭМ на ранних стадиях заболевания глаза является необходимым, так как он отличается высокой информативностью и точностью.
При приготовлении мазка-отпечатка используется цитологический метод фиксации образца (соскоб) с сочетанием двух методик окрашивания: по методике Паппенгейма и по методике Маллори, что приводит к сохранению ПЭМ в исследуемом мазке-отпечатке для дальнейшего изучения его структуры.
Применяя методику гистологического окрашивания по Маллори, выявляют фибриллярно-гранулярные структуры, окрашенные специфически в темно-синий цвет, и таким образом подтверждают диагноз ПЭС.
Фибриллярно-гранулярная структура, окрашенная в темно-синий цвет, подтверждает его белковую природу, сходную с коллагеновой и ретикулярной тканью, но не амилоидной природы (как предполагалось ранее), так как при данной окраске амилоид приобретает красно-сиреневый цвет (фиг.2).
Способ осуществляется следующим способом.
Всем пациентам с осложненной катарактой проводят УБМ. В случаях обнаружения точечных включений на поверхности структур, обращенных в заднюю камеру глаза, с целью определения характера этих включений во время проведения ФЭК после выполнения парацентеза берут соскоб в зоне их расположения, который наносят на чистое предметное стекло, при этом образуют мазок-отпечаток. Полученный мазок- отпечаток высушивают на воздухе при комнатной температуре примерно в течение 2 часов. Подсохший на воздухе препарат окрашивают краской-фиксатором Май-Грюнвальда по методике Паппенгейма в течение 3 мин, далее, не сливая краски, к ней добавляют дистиллированную воду, увеличивая объем вдвое, через 1 минуту краску с мазка сливают и, не ополаскивая ее, приступают к гистологической окраске по методике Маллори. Наносят на мазок 10 капель Карболфуксин по Цилю, оставляют на 10 мин. Промывают в дистиллированной воде, наносят на мазок 10 капель кислотного буфера, оставляют на 10 сек, промывают в дистиллированной воде и наносят 10 капель раствора фосфорномолибденовой кислоты, оставляют на 5 мин. Далее, не промывая, наносят 10 капель полихромного раствора Маллори, оставляют на 1 мин; промывают в дистиллированной воде; обезводят в трех емкостях 96-градусного спирта по 1 минуте; просветляют в ксилоле и заключают в бальзам под покровное стекло. В результате получают мазок-отпечаток, на котором визуализируются фибриллярно-гранулярные структуры, окрашенные в темно-синий цвет, что подтверждает наличие ПЭМ.
Изобретение подтверждается следующими клиническими примерами.
Пример 1.
Пациент Р., возраст 58 лет, поступил в клинику с диагнозом: осложненная катаракта правого глаза, подвывих хрусталика 1 степени. На УБМ были отмечены множественные точечные включения в периэкваториальной зоне капсулы хрусталика, в связи с чем при выполнении ФЭК после осуществления парацентеза роговицы шпателем с передней капсулы хрусталика был взят соскоб, из чего сформировали мазок-отпечаток, который исследовали согласно изобретению. В результате обнаружили фибриллярно-гранулярную структуру, окрашенную в темно-синий цвет, что подтверждает наличие ПЭМ.
Пример 2.
Пациент С., возраст 69 лет, поступил в клинику с диагнозом: осложненная катаракта левого глаза, миопия средней степени. На УБМ были отмечены множественные точечные включения относительно высокой акустической плотности на задней поверхности радужки. С целью выяснения природы данных включений при выполнении ФЭК после проведения парацентеза роговицы взяли соскоб с задней поверхности радужки, который отправили на цитогистологическое исследование. С данного фрагмента сделали мазок-отпечаток на предметном стекле и исследовали согласно изобретению. Фибриллярно-гранулярной структуры, окрашенной в темно-синий цвет, на данном мазке-отпечатке не обнаружили, что свидетельствует об отсутствии ПЭМ.
Точный и высокоинформативный разработанный способ позволяет выявить ПЭМ на поверхности структур глазного яблока на ранних стадиях заболевания, изучить его структуру, что в дальнейшем дает возможность определить методы лечения ПЭС и профилактики связанных с ним осложнений.
Claims (1)
- Способ выявления псевдоэксфолиативного материала (ПЭМ) в структурах задней камеры глаза на ранних стадиях заболевания, заключающийся в том, что у пациентов с катарактой проводят ультразвуковую биомикроскопию и, если в результате выявляют точечные включения на поверхности структур, обращенных в заднюю камеру глаза, то далее во время проведения факоэмульсификации после парацентеза роговицы берут соскоб в зоне расположения точечных включений, из которого выполняют мазок-отпечаток, затем полученный мазок-отпечаток высушивают на воздухе до полного испарения влаги, окрашивают краской-фиксатором Май-Грюнвельда по методике Паппенгейма, далее докрашивают методом гистологической окраски по Маллори и при обнаружении на мазке-отпечатке фибриллярно-гранулярных структур темно-синего цвета констатируют наличие ПЭМ.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2011115153/14A RU2455937C1 (ru) | 2011-04-19 | 2011-04-19 | Способ выявления псевдоэксфолиативного материала на ранних стадиях заболевания глаза |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2011115153/14A RU2455937C1 (ru) | 2011-04-19 | 2011-04-19 | Способ выявления псевдоэксфолиативного материала на ранних стадиях заболевания глаза |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2455937C1 true RU2455937C1 (ru) | 2012-07-20 |
Family
ID=46847236
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2011115153/14A RU2455937C1 (ru) | 2011-04-19 | 2011-04-19 | Способ выявления псевдоэксфолиативного материала на ранних стадиях заболевания глаза |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2455937C1 (ru) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105241686A (zh) * | 2015-08-10 | 2016-01-13 | 河南科技大学 | 小鲵科动物视网膜显微组织切片的制备方法 |
RU2697777C1 (ru) * | 2018-09-27 | 2019-08-19 | федеральное государственное автономное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр "Межотраслевой научно-технический комплекс "Микрохирургия глаза" имени академика С.Н. Федорова" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ контроля наличия псевдоэксфолиативного материала у пациентов с катарактой и глаукомой с псевдоэксфолиативным синдромом |
RU2702157C1 (ru) * | 2019-02-04 | 2019-10-04 | федеральное государственное автономное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр "Межотраслевой научно-технический комплекс "Микрохирургия глаза" имени академика С.Н. Федорова" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ оценки состояния угла передней камеры на наличие гранул пигмента и псевдоэксфолиативного материала у пациентов с катарактой и глаукомой на фоне псевдоэксфолиативного синдрома |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2338453C2 (ru) * | 2007-01-09 | 2008-11-20 | Волгоградский государственный медицинский университет | Способ прогнозирования осложнений экстракции катаракты при псевдоэксфолиативном синдроме |
RU2346647C1 (ru) * | 2007-10-10 | 2009-02-20 | Федеральное государственное учреждение "Межотраслевой научно-технический комплекс "Микрохирургия глаза" имени академика С.Н. Федорова Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи" | Способ диагностики закрытоугольной глаукомы с наличием ангулярного блока в сочетании с циклохрусталиковым и относительным зрачковыми блоками у лиц монголоидной расы с псевдоэксфолиативным синдромом |
-
2011
- 2011-04-19 RU RU2011115153/14A patent/RU2455937C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2338453C2 (ru) * | 2007-01-09 | 2008-11-20 | Волгоградский государственный медицинский университет | Способ прогнозирования осложнений экстракции катаракты при псевдоэксфолиативном синдроме |
RU2346647C1 (ru) * | 2007-10-10 | 2009-02-20 | Федеральное государственное учреждение "Межотраслевой научно-технический комплекс "Микрохирургия глаза" имени академика С.Н. Федорова Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи" | Способ диагностики закрытоугольной глаукомы с наличием ангулярного блока в сочетании с циклохрусталиковым и относительным зрачковыми блоками у лиц монголоидной расы с псевдоэксфолиативным синдромом |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
GOTTANKA J. et al. Correlation of pseudoexfoliative material and optic nerve damage inpseudoexfoliation syndrome. Invest Ophthalmol Vis Sci. 1997 Nov; 38(12):2435-46. (реферат), [он-лайн], [найдено 12.01.2012], найдено из базы данных PubMed. REPO L.P. et al. Pseudoexfoliation syndrome with poorly dilating pupil: a light and electron microscopic study of the sphincter area. Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol. 1996 Mar; 234(3):171-6. (реферат), [он-лайн], [найдено 12.01.2012], найдено из базы данных PubMed. * |
ЕГОРОВА Э.В. и др. Информативность ультразвуковой биомикроскопии в диагностике псевдоэксфолиативного синдрома. - РМЖ Клиническая офтальмология, 2006, т.7, №2, с.50. * |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105241686A (zh) * | 2015-08-10 | 2016-01-13 | 河南科技大学 | 小鲵科动物视网膜显微组织切片的制备方法 |
CN105241686B (zh) * | 2015-08-10 | 2018-04-13 | 河南科技大学 | 小鲵科动物视网膜显微组织切片的制备方法 |
RU2697777C1 (ru) * | 2018-09-27 | 2019-08-19 | федеральное государственное автономное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр "Межотраслевой научно-технический комплекс "Микрохирургия глаза" имени академика С.Н. Федорова" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ контроля наличия псевдоэксфолиативного материала у пациентов с катарактой и глаукомой с псевдоэксфолиативным синдромом |
RU2702157C1 (ru) * | 2019-02-04 | 2019-10-04 | федеральное государственное автономное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр "Межотраслевой научно-технический комплекс "Микрохирургия глаза" имени академика С.Н. Федорова" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ оценки состояния угла передней камеры на наличие гранул пигмента и псевдоэксфолиативного материала у пациентов с катарактой и глаукомой на фоне псевдоэксфолиативного синдрома |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN104569397B (zh) | 一种乳腺癌检测质控品及其制备方法 | |
De-Giorgio et al. | Post-mortem ocular changes and time since death: scoping review and future perspective | |
Muntz et al. | Improved Demodex diagnosis in the clinical setting using a novel in situ technique | |
Jain et al. | Rapid evaluation of fresh ex vivo kidney tissue with full-field optical coherence tomography | |
CN107677531A (zh) | 完整呈现恶性肿瘤细胞位置的细胞块石蜡切片制作方法 | |
RU2455937C1 (ru) | Способ выявления псевдоэксфолиативного материала на ранних стадиях заболевания глаза | |
WO2022015728A1 (en) | Cellular diagnostic and analysis methods | |
Lu et al. | Recent progress in optical clearing of eye tissues | |
Alvarez et al. | Update on imaging modalities for ocular surface pathologies | |
RU2326591C1 (ru) | Способ судебно-медицинской диагностики смерти от странгуляционной механической асфиксии | |
RU2801049C1 (ru) | Способ установления возрастной принадлежности неизвестного человека при проведении судебно-медицинской экспертизы | |
Graham et al. | Papanicolaou smears and frozen sections on selected cutaneous neoplasms | |
RU2777205C1 (ru) | Способ диагностики увеальной меланомы | |
RU2366949C1 (ru) | Способ диагностики состояния организма | |
Ford et al. | The ophthalmic pathology cut-up–Part 2 | |
RU2785853C1 (ru) | Способ дифференциальной диагностики злокачественной опухоли и доброкачественного процесса костной ткани на отсканированных изображениях гистологического стекла | |
RU2554824C1 (ru) | Способ дифференциальной диагностики простой и быстрорастущей миомы матки с нормальным строением эндометрия | |
RU2808738C1 (ru) | Способ оценки процесса формирования сосудистой сети на хориоаллантоисной мембране куриного эмбриона | |
RU2712080C1 (ru) | Способ проведения цитологического исследования при дифференциальной диагностике узловых образований щитовидной железы | |
RU2725765C1 (ru) | Способ окрашивания антигенов при помощи флуоресцентных антител на свежезамороженных срезах опухоли и метастазов | |
Geschickter | Fresh tissue diagnosis in the operating room | |
RU2272290C2 (ru) | Способ дифференциальной диагностики туберкулеза и злокачественных поражений легких | |
RU2233122C1 (ru) | Способ диагностики псориаза | |
RU2235323C2 (ru) | Способ диагностики злокачественных новообразований | |
Blud et al. | Comparison of histological staining techniques for copper. |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20130420 |