KR20170058563A - Nrf-2 활성 증진 엉겅퀴 전초 추출물의 제조방법 및 이를 함유하는 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은, Nrf-2 활성 증진 엉겅퀴 전초 추출물의 제조방법 및 이를 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로서, 보다 상세히는, 엉겅퀴 전초를 75 ~ 99.5% 에탄올 용매에 추출하는 단계; 및 추출된 엉겅퀴 전초 추출물을 감압건조 또는 동결건조하여 파우더를 얻는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 엉겅퀴 추출물의 제조방법과 이를 포함하는 화장료 조성물이다. 본 발명은 엉겅퀴 전초 추출물의 주요 성분의 손상을 최소화하고 특정연속공정방법으로 제조된 정제 엉겅퀴 전초 추출물을 유효성분으로 한다. 항산화 단백질 Nrf-2와 관계된 ARE 단백질 활성을 증진시키는 엉겅퀴 전초 추출물을 피부에 적용시킴으로써, 항상 외부에 노출되어 있어 스트레스를 받는 피부의 항상성을 유지하고 활성 산소에 의한 피부 노화 방지가 뛰어나다.

Description

Nrf-2 활성 증진 엉겅퀴 전초 추출물의 제조방법 및 이를 함유하는 화장료 조성물{METHOD OF PREPARING A CIRSIUM JAPONICUM EXTRACT OF Nrf-2 ACTIVATOR, AND COSMETIC COMPOSITION COMPRISING THE SAME}

본 발명은, 한국산업단지공단 「남동 거점 광역 네트워크를 통한 글로벌 화장품 테마」연구사업 중 “국내자생천연물을 이용한 대사체 배출 촉진 효과를 갖는 항노화 화장품 개발” 과제의 결과물이다(과제고유번호 THMSD02R2).

본 발명은, Nrf-2 활성 증진 엉겅퀴 전초 추출물의 제조방법 및 이를 함유하는 화장료 조성물에 관한 것이다.

세포 내에서는 에너지 연소과정에서 자연스럽게 활성산소가 발생되며, 이들 활성산소를 중화할 수 있는 항산화 반응이 동시에 일어난다. 활성산소 생성반응과 항산화 반응이 균형적으로 일어나면, 인체는 정상 성장과 대사가 이루어진다. 그러나 발생되는 활성산소가 세포내에서 처리할 수 있는 항산화 반응의 용량을 초과하게 되면 세포는 산화적 스트레스에 빠지고, 암과 당뇨, 심장병 등 각종 만성 질병 및 노화와 같은 현상을 일으키게 된다.

이를 방지하기 위하여, 세포는 해로운 물질을 해독하고 세포 산화·환원 항상성을 유지하기 위하여 복잡한 신호전달 기작을 발생시킨다. 이러한 신호전달 기작 중 하나는 세포를 보호하고 해독 효소들의 발현을 유도하는데, 제 1단계에서 cytochrome P450 효소에 의하여 활성산소의 발생을 촉진시키는 생체이물(xenobiotic)을 수산화(hydroxylation) 시키고 이 반응을 통하여 물을 생성한다고 알려져 있다. 이후 phase II 시스템 효소 반응을 통하여 완전한 수용성 외부 기질 (hydrophilic xenobiotics)로 변화 되고, 마지막으로 Phase I/II 반응을 통하여 생성된 수용성 외부 기질은 phase III 반응을 통하여 최종적으로 세포 외로 배출된다.

NF-E2 related factor 2 (Nrf-2)는 산화적 스트레스로부터 인체를 보호하고 생체이물 (xenobiotic)의 해독 역할을 하는 phase II 효소라 불리는 일련의 단백질을 조절하는 주 조절자로 알려져 있다. 산화적 스트레스가 없는 경우 세포질내 Nrf2는 Keap1 단백질에 결합되어 끊임없이 유비퀴티네이션(ubiquitination)되어 분해되므로 그 활성이 억제된다. 반면에, 과도한 산화적 스트레스가 있는 경우, Nrf2는 Keap1 단백질로부터 유리되어 핵 내로 이동되고 항산화효소 유전자 프로모터 내에 존재하는 항산화반응요소(ARE, antioxidant response element)에 결합하여 항산화효소를 발현시켜 산화적 스트레스를 제거하려고 한다. 이러한 역할을 통하여 Nrf2는 세포의 항상성 유지에 중요한 역할을 담당하는 것으로 알려져 있다.

최근 피부 노화에 관련 있는 활성산소 제거를 위한 항산화제 물질에 대한 연구가 진행되고 있다. 그러나, 이러한 연구에 의해 개발된 물질의 경우 몇 가지 부작용이 문제되고 있다.

천연 유래 물질로 이러한 부작용이나 세포독성에 대한 위험이 없거나 적으면서, 항산화 및 항염 효과가 우수하여, 부작용이 없을 뿐 아니라 그 함량의 제한 없이 화장품에 사용될 수 있는 물질의 개발이 요구되고 있다. 특히, 최근에는 소비자들의 욕구에 부응하기 위하여 천연 원료를 이용한 화장료에 대한 연구개발이 활발히 진행되고 있는 실정이다.

엉겅퀴는 국화과의 여러해살이풀로 가시나물이라고도 하며 꽃은 6∼8월에 피고 자주색에서 적색이다. 산이나 들에서 자란다. 줄기는 곧게 서고 높이 50∼100cm이고 전체에 흰 털과 더불어 거미줄 같은 털이 있다.

뿌리잎은 꽃필 때까지 남아 있고 줄기잎보다 크다. 줄기잎은 바소꼴모양의 타원형으로 깃처럼 갈라지고 밑은 원대를 감싸며 갈라진 가장자리가 다시 갈라지고 깊이 패어 들어간 모양의 톱니와 더불어 가시가 있다. 꽃은 6∼8월에 피고 자주색에서 적색이다. 가지와 줄기 끝에 두화가 달린다. 총포의 포조각은 7∼8열로 배열하고 안쪽일수록 길어진다. 관모는 길이 16∼19mm이다. 연한 식물체를 나물로 하고 성숙한 뿌리를 약용으로 한다. 열매는 수과로 3.5∼4mm이다. 한국·일본·중국 북동부 및 우수리에 분포한다. 잎이 좁고 녹색이며 가시가 다소 많은 것을 좁은잎엉겅퀴, 잎이 다닥다닥 달리고 보다 가시가 많은 것을 가시엉겅퀴, 백색 꽃이 피는 것을 흰가시엉겅퀴라고 한다.

등록특허 제10-0728813은 고려엉겅퀴 추출물을 주요 활성성분으로 함유하는 피부외용제 조성물을 개시한다.

등록특허 제10-1447471는 콜레스테롤 저하 효과를 가지는 고려엉겅퀴 추출물을 개시한다.

등록특허 제10-1409760는 피부주름 개선 효능을 가지는 우뭇가사리와 엉겅퀴 추출 복합물의 유산균 발효물 및 이를 유효성분으로 함유하는 제품을 개시한다.

등록특허 제10-1318055는 엉겅퀴 추출물과 이소플라본을 유효성분으로 하는 골다공증 치료 및 예방용 조성물을 개시한다.

등록특허 제10-1281710는 엉겅퀴 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물을 유효성분으로 함유하는 비만 치료 및 예방용 조성물을 개시한다.

그러나 상기 문헌 어디에도 피부 항상성 유지와 관련된 Nrf-2 증대 효능이 증가된 엉겅퀴 전초 추출물의 제조방법 및 이를 함유하는 화장료 조성물에 대한 개시는 없었다. 이에, 본 발명자들은 이제까지 알려지지 않은 여러 소재들에 있어서 화장료로의 응용 가능성을 연구한 결과, 엉겅퀴 전초 추출물을 피부항상성 유지에 뛰어난 엉겅퀴 전초 추출물을 제조 할 수 있었고, 이에 본 발명을 완성 하게 되었다.

KR 10-0728813 B1 (2007.06.08.) KR 10-1447471 B1 (2014.09.29.) KR 10-1409760 B1 (2014.06.13.) KR 10-1318055 B1 (2013.10.07.) KR 10-1281710 B1 (2013.06.27.)

본 발명에서 이루고자 하는 기술적 과제는 엉겅퀴 전초 추출물의 주요 성분의 손상을 최소화한 엉겅퀴 전초 추출물을 제공 하고, 항산화 단백질 Nrf2 및 관련 ARE의 활성을 갖는 엉겅퀴 전초 추출물의 제조방법 및 피부항상성 유지가 뛰어난 화장료 조성물을 제공하는데 목적이 있다.

본 발명은 상술한 종래 기술의 문제점을 해결하기 위해 안출된 것으로서,

엉겅퀴 추출물을 유효성분으로 하는 Nrf2 활성증진 화장료 조성물을 제공한다.

또한 본 발명에 있어서, 상기 엉겅퀴 추출물은, 75 ~ 99.5%의 에탄올 용매에서 추출된 것임을 특징으로 하는 Nrf2 활성증진 화장료 조성물을 제공한다.

또한 본 발명에 있어서, 엉겅퀴 추출물을, 전체 조성물 중량 대비, 0.001 ~ 10 중량% 범위 이내로 포함하고, 피부 노화 방지, 항산화, 및 피부 항상성 유지에서 선택된 1이상의 효능을 갖는 것을 특징으로 하는 Nrf2 활성증진 화장료 조성물을 제공한다.

또한 본 발명에 있어서, 화장수류, 에센스류, 크림류, 팩류, 패치류, 피부접착용 겔류, 파운데이션류, 및 메이크업 베이스류 중에서 선택되는 하나 이상의 제형인 것임을 특징으로 하는 Nrf2 활성증진 화장료 조성물을 제공한다.

또한, 엉겅퀴 전초를 75 ~ 99.5% 에탄올 용매에 추출하는 단계; 및

추출된 엉겅퀴 전초 추출물을 감압건조 또는 동결건조하여 파우더를 얻는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 엉겅퀴 추출물의 제조방법을 제공한다.

본 발명은 엉겅퀴 전초 추출물의 주요 성분의 손상을 최소화하고 특정연속공정방법으로 제조된 정제 엉겅퀴 전초 추출물을 유효성분으로 한다. 항산화 단백질 Nrf-2와 관계된 ARE 단백질 활성을 증진시키는 엉겅퀴 전초 추출물을 피부에 적용시킴으로써, 항상 외부에 노출되어 있어 스트레스를 받는 피부의 항상성을 유지하고 활성 산소에 의한 피부 노화 방지가 뛰어나다.

도 1은, 본 발명의 엉겅퀴 전초 추출물에 대한 HaCaT-ARE-GFP-luciferase 세포에서 ARE 유도능을 나타낸 그래프이다.
도 2는, 본 발명의 엉겅퀴 전초 추출물에 대한 Nrf-2 및 기타 전사인자 증가 효과를 나타낸 그림이다.

본 발명은, 한국산업단지공단 「남동 거점 광역 네트워크를 통한 글로벌 화장품 테마」연구사업 중 “국내자생천연물을 이용한 대사체 배출 촉진 효과를 갖는 항노화 화장품 개발” 과제의 결과물이다(과제고유번호 THMSD02R2).

본 발명은,

엉겅퀴 추출물을 유효성분으로 하는 Nrf2 활성증진 화장료 조성물이다.

여기서, ‘Nrf2’는, ‘NF-E2-related factor-2’의 약어로서, antioxidant-response element (ARE)에 결합하여 다양한 항산화 유전자들의 발현을 조절하는 필수 전사인자이다. ‘Nrf2’라는 용어는 통상의 기술자에게 널리 사용되므로, 이에 대한 정의는 통상적으로 사용되는 것을 그대로 따르고, 이에 대한 상세한 설명은 생략하기로 한다.

상기 엉겅퀴 추출물은, 엉겅퀴 전초를 75 ~ 99.5% 에탄올 용매에 추출하는 단계; 및 추출된 엉겅퀴 전초 추출물을 감압건조 또는 동결건조하여 파우더를 얻는 단계를 포함하여 제조될 수 있다.

특히, 상기 엉겅퀴 추출물은, 75 ~ 99.5%의 에탄올 용매에서 추출된 것이 바람직하고, 80%의 에탄올 용매에서 추출된 것이 더 바람직하다. 후술할 실시예를 통해 이해할 수 있을 것으로, 에탄올 농도에 따라, Nrf2 활성 정도가 다른 효과 차이가 날 수 있다.

상기 엉겅퀴 추출물은, 전체 조성물 중량 대비, 0.001 ~ 10 중량% 범위 이내로 포함되는 것이 바람직한데, 0.001 중량% 미만에서는 원하는 효능을 내기에 부족할 수 있고, 10 중량% 초과에서는 생약제제의 보관 안정성 및 제제화 문제 등이 발생할 우려가 있어 바람직하지 않다.

본 발명의 화장료 조성물은, 제형 형태에 있어서 특별히 제한되지 않으며, 통상의 기술자에게 널리 알려지고 자명한 모든 제형으로 제조될 수 있다. 이에 대한 비제한적 예시로, 화장수류, 에센스류, 크림류, 팩류, 패치류, 피부접착용 겔류, 파운데이션류, 및 메이크업 베이스류 중에서 선택되는 하나 이상의 제형인 것을 들 수 있다.

이하 본 발명에 대하여 실시예를 들어 보다 더 상세히 설명한다. 그러나, 이하의 실시예는 발명의 상세한 설명을 위한 것일 뿐, 이에 의해 권리범위를 제한하려는 의도가 아님을 분명히 한다.

실시예

엉겅퀴 전초 추출물의 제조

엉겅퀴 전초를 건조 중량 대비 20배(w/v)의 물에탄올 용매(물/20%에탄올/50%에탄올/70%에탄올/80%에탄올/99.5%에탄올)를 사용하여 60℃에서 10 ~ 15 시간 추출하였다. 추출된 엉겅퀴 전초 추출물을 여과한 후 감압 농축하고 동결건조하여 엉겅퀴 전초 파우더를 얻었다. 이와 같이 수득된 것을 각 순서대로“실시예1”“실시예2”“실시예3”“실시예4”“실시예5”“실시예6” 이라하고, 하기 시험예에서 사용 하였다.

시험예 1

HaCaT -ARE- GFP - luciferase 세포에서 ARE 유도능 활성

본 발명의 추출물에 대한 Nrf2 활성을 유도능 활성을 알아보기 위하여, HaCaT-ARE-GFP-luciferase 세포를 사용 하였다. HaCaT-ARE-GFP-luciferase 세포는 human keratinocyte 세포주인 HaCaT 세포에 Nrf2 단백질이 결합하는 anti-oxidant response element (ARE)가 삽입되어 있는 세포로 약물에 의해 ARE가 활성화되면 GFP, Luciferse를 동시 발현하게 된다.

HaCaT-ARE-GFP-luciferase 세포에 각 실시예에서 제조된 엉겅퀴 전초 추출물을 각각 200ppm(ug/mL) 농도로 24 시간 처리하고 이후 각각의 luciferase 값을 측정하고, Student t-test를 통하여 활성도를 통계처리를 하여 ARE 유도능을 비교하였다.

도 1에 나타낸 바와 같이, 상기 실시예의 엉겅퀴 전초 추출물을 처리한 결과 70%초과의 에탄올 용액 추출조건에서 뚜렷한 Nrf2 전사인자(ARE) 발현이 증가되는 것을 알 수 있었으며, 200ppm 처리시 약 10배 증가하는 것을 확인 할 수 있었다.

시험예 2

Nrf-2 유도능 활성

본 발명의 엉겅퀴 전초 추출물에 대한 Nrf2 활성을 유도능 활성을 알아보기 위하여, Nrf-2 관련 ARE 단백질 증가 효과가 가장 좋은 실시예5의 엉겅퀴 전초 추출물을 각각 200ppm(ug/mL) 농도로 처리하고 이후 시간별로 western blot 및 RT-PCR을 이용하여 Phase II enzyme level을 측정하였다.

도 2에 나타낸 바와 같이, 상기 실시예5의 엉겅퀴 전초 추출물을 처리한 결과 뚜렷한 Nrf-2 및 기타 전사인자 발현이 증가되는 것을 알 수 있었다.

[제형예1] 유연화장수

번호	성 분	함량(%)
1	글리세린	5.00
2	1,3-부틸렌 글라이콜	3.00
3	PEG 1500	1.00
4	알란토인	0.10
5	DL-판테놀	0.30
6	EDTA-2Na	0.02
7	벤조페논-9	0.04
8	에탄올	10.00
9	옥틱도데세스-16	0.20
10	폴리솔베이트 20	0.20
11	엉겅퀴 전초 추출물	1.0
12	방부제, 향, 색소	미량
13	증류수	잔량

[제형예2] 수렴화장수

번호	성 분	함량(%)
1	글리세린	2.00
2	1,3-부틸렌 글라이콜	2.00
3	알란토인	0.10
4	DL-판테놀	0.30
5	EDTA-2Na	0.02
6	벤조페논-9	0.04
7	에탄올	15.00
8	폴리솔베이트 20	0.20
9	엉겅퀴 전초 추출물	1.0
10	구연산	미량
11	방부제, 향, 색소	미량
12	증류수	잔량

[제형예3] 영양화장수

번호	성 분	함량(%)
1	세테아릴 알콜	1.00
2	글리세릴스테아레이트	0.50
3	폴리소르베이트 60	1.00
4	소르비탄세스퀴올리에이트	0.30
5	세틸옥타노에이트	6.00
6	스쿠알란	4.00
7	샤플라워오일	4.00
8	부틸렌글라이콜	4.00
9	글리세린	4.00
10	카보머	0.10
11	트리에탄올아민	0.10
12	엉겅퀴 전초 추출물	3.00
13	방부제, 향, 색소	미량
14	증류수	잔량

[제형예4] 에센스

번호	성 분	함량(%)
1	글리세린	10.00
2	베타인	5.00
3	PEG 1500	2.00
4	알란토인	0.10
5	DL-판테놀	0.30
6	EDTA-2Na	0.02
7	벤조페논-9	0.04
8	히드록시에틸 셀룰로오스	0.10
9	카르복시비닐 폴리머	0.20
10	트리에탄올아민	0.18
11	옥틸도데칸올	0.30
12	옥틸도데세스-16	0.40
13	에탄올	6.00
14	엉겅퀴 전초 추출물	3.00
15	방부제, 향, 색소	미량
16	증류수	잔량

[제형예5] 팩

번호	성 분	함량(%)
1	폴리비닐 알콜	15.00
2	셀룰로오스 검	0.15
3	글리세린	3.00
4	PEG 1500	2.00
5	시이크데스트린	0.15
6	DL-판테놀	0.30
7	알란토인	0.10
8	글리시리진산 모노암모늄	0.20
9	니코틴 아미드	0.40
10	에탄올	5.00
11	PEG 40 경화피마자유	0.30
12	엉겅퀴 전초 추출물	3.00
13	방부제, 향, 색소	미량
14	증류수	잔량

Claims (5)

1. 엉겅퀴 추출물을 유효성분으로 하는 Nrf2 활성증진 화장료 조성물.
2. 청구항 1에 있어서, 상기 엉겅퀴 추출물은, 75 ~ 99.5%의 에탄올 용매에서 추출된 것임을 특징으로 하는 Nrf2 활성증진 화장료 조성물.
3. 청구항 1에 있어서, 엉겅퀴 추출물을, 전체 조성물 중량 대비, 0.001 ~ 10 중량% 범위 이내로 포함하고, 피부 노화 방지, 항산화, 및 피부 항상성 유지에서 선택된 1이상의 효능을 갖는 것을 특징으로 하는 Nrf2 활성증진 화장료 조성물.
4. 청구항 1에 있어서, 화장수류, 에센스류, 크림류, 팩류, 패치류, 피부접착용 겔류, 파운데이션류, 및 메이크업 베이스류 중에서 선택되는 하나 이상의 제형인 것임을 특징으로 하는 Nrf2 활성증진 화장료 조성물.
5. 엉겅퀴 전초를 75 ~ 99.5% 에탄올 용매에 추출하는 단계; 및
   추출된 엉겅퀴 전초 추출물을 감압건조 또는 동결건조하여 파우더를 얻는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 엉겅퀴 추출물의 제조방법.

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