KR20180059318A - 자감초, 향부자 및 강황의 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 자감초, 향부자 및 강황의 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 내외부 자극에 의한 피부보호 및 피부건강 증진 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.

Description

자감초, 향부자 및 강황의 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물{COSMETIC COMPOSITION COMPRISING AN EXTRACT OF A MIXTURE COMPRISING BAKED GLYCYRRHIZA URALENSIS FISCH, CYPERUS ROTUNDUS L. AND CURCUMA LONGA L.}

본 발명은 자감초, 향부자 및 강황의 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 내외부 자극에 의한 피부보호 및 피부건강 증진 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.

중국의 고전의서 황제내경에서 언급되고 있는 모든 질병은 氣(기)에서 생기며, 그 氣(기)는 九氣(구기)로 정의내리고 있는데, 이 九氣(구기)는 한기(寒氣), 열기(熱氣), 격기(膈氣), 풍기(風氣), 우기(憂氣), 희기(喜氣), 경기(驚氣), 노기(怒氣), 산람장기(山嵐氣) 등 아홉가지 기운을 이야기하며, 이러한 구기를 다스리는 처방은 동의보감, 세의득효방 등에서 기술된, 자감초, 향부자, 및 강황 등을 함유하는 신선구기탕이 알려져 있다.

이러한, 신선구기탕은 종래에 경구 복용하여 구토, 복부 통증, 메스꺼움 등을 치료하는 한방적인 효능이 알려져 있었다.

피부는 외부 환경의 자극으로부터 신체를 보호하는 중요한 역할을 하며, 또한 신체 내외부의 자극으로부터도 영향을 받는다.

이러한, 피부의 온도 자극, 미생물 감염 등으로 인한 피부 자극 완화 및 피부 개선을 위한 수많은 물질에 대한 연구가 진행되고 있다.

그러나, 신선구기탕의 한약재 성분들의 예컨대 온도 변화와 같은 피부 내외부의 자극에 대한 피부 자극 완화 및 피부 보호 효능에 대하여 연구된 내용은 구체적으로 알려진 바가 없는 실정이다.

본 발명은 체외 또는 체내로부터의 피부 자극을 완화하고 피부 상태를 개선할 수 있는 화장료 조성물을 제공하고자 한다.

본 발명은 자감초, 향부자 및 강황의 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명에 따른 화장료 조성물은 체외 또는 체내로부터의 피부 자극을 완화하고 피부 상태를 개선할 수 있으며, 구체적으로 고온 자극으로 인한 피부 염증 및 피부 주름, 산화 작용을 완화 및 개선하고, 미생물, 특히, 유해 미생물로부터 피부 세포를 보호하며, 피부 세포의 면역을 증진할 수 있다.

도 1은 고온 자극에 의한 세포 생존율에 대하여 제조예 1 내지 3 및 5가 미치는 효과를 나타내는 그래프이다.
도 2는 고온 자극에 의하여 증가된 IL-6에 대하여 제조예 4 및 5가 미치는 효과를 나타내는 그래프이다.
도 3은 고온 자극에 의한 세포 생장존율에 대하여 제조예 4 및 5가 미치는 효과를 나타내는 그래프이다.
도 4는 피부 세포 생장에 대하여 제조예 5가 미치는 효과를 나타내는 그래프이다.
도 5는 저온 자극에 대한 제조예 5의 세포 보호 효과를 나타내는 그래프이다.
도 6은 고온 자극에 대한 제조예 5의 주름 생성 저해 효과를 나타내는 그래프이다.
도 7은 고온 자극에 대한 제조예 5의 주름 생성 저해 효과를 나타내는 그래프이다.
도 8은 미생물 자극에 대한 제조예 5의 세포 보호 효과를 나타내는 그래프이다.
도 9 및 10은 피부 세포내 면역물질 증가에 대하여 제조예 5가 미치는 효과를 나타내는 그래프이다.
도 11은 고온 자극에 의한 열기 보호 유전자의 발현에 대하여 제조예 5가 미치는 효과를 나타내는 그래프이다.
도 12는 고온 자극에 의한 ROS 생성량에 대하여 제조예 5가 미치는 효과를 나타내는 그래프이다.
도 13은 산화 자극에 의한 ROS 생성량에 대하여 제조예 5가 미치는 효과를 나타내는 그래프이다.
도 14는 대식세포 활성화를 통한 면역반응 증진에 대하여 제조예 5가 미치는 효과를 나타내는 그래프이다.
도 15 및 16은 고온 자극에 의한 염증 생성에 대하여 제조예 5가 미치는 효과를 나타내는 그래프이다.
도 17은 베타-엔돌핀의 발현에 대하여 제조예 5가 미치는 효과를 나타내는 그래프이다.

본 명세서에서 언급되는 화합물의 명칭은 다른 특별한 언급이 없으면 미국화장품협회(Cosmetic, Toiletry and Fragrance Association, CTFA)에서 발행한 국제화장품원료집(International Cosmetic Ingredient Dictionary, ICID)에 등재된 INCI(International Nomenclature Cosmetic Ingredient) Name에 해당하는 화합물을 의미하며, 해당 명칭이 INCI Name 중 존재하지 않으면, 국제순수·응용화학연합(International Union of Pure and Applied Chemistry, IUPAC)에서 제정한 IUPAC 명명법에 따른 화합물을 의미하며, IUPAC 명명법에 따른 화합물이 존재하지 않으면, 본 발명의 기술분야에서 통용되는 화합물의 명칭에 대응하는 화합물을 의미한다.

이하, 본 발명에 따른 화장료 조성물을 상세하게 설명한다.

본 명세서에 있어서, 자감초(炙甘草)는 감초(甘草, 학명: Glycyrrhiza uralensis Fisch)를 불에 굽거나, 잿불에 묻어 구운 것을 의미한다. 본 발명에서 사용되는 자감초는 감초, 바람직하게는 감초의 뿌리를 구워서 사용할 수도 있고, 시중에서 판매되는 것을 구입하여 사용할 수도 있다.

본 명세서에 있어서, 향부자(香附子, 학명: Cyperus rotundus L.)는 벼목 사초과의 식물을 의미한다. 본 발명에서는 특히 향부자의 뿌리 부분을 사용한다.

본 명세서에 있어서, 강황(薑黃, 학명: Curcuma longa L.)은 생강목 생강과의 식물을 의미한다. 본 발명에서는 특히 강황의 뿌리 부분을 사용한다.

본 발명의 일 실시상태에 있어서, 조성물에 포함되는 유효성분, 즉 자감초, 향부자 및 강황의 혼합 추출물은 자감초, 향부자 및 강황의 생약 혼합물의 추출물일 수도 있고, 자감초 추출물, 향부자 추출물 및 강황 추출물의 혼합물일 수도 있다.

자감초, 향부자 및 강황의 혼합 추출물의 함량은 조성물 총 중량에 대하여 0.0001 내지 10.0 중량%이다. 상기 자감초, 향부자 및 강황의 혼합 추출물의 함량이 0.0001 중량% 미만일 때에는 본 발명에 따른 활성의 발현이 미비하고, 10.0 중량%를 초과하면 화장료 제형 중에서 다른 원료와의 상용성 문제가 발생하여 제형의 안정화가 저하될 수 있다.

본 발명의 일 실시상태에 있어서, 자감초 : 향부자 : 강황의 혼합비는 중량을 기준으로 1~10 : 1~10 : 1~10이다.

본 발명의 일 실시상태에 있어서, 추출물은 당업계에 공지된 통상의 방법에 따라, 즉, 통상적인 온도와 압력의 조건하에서, 통상적인 용매를 사용하여 제조된다.

본 발명의 일 실시상태에 있어서, 본 발명에서 사용되는 자감초, 향부자 및 강황의 혼합 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 무수 또는 함수 저급 알코올, 아세톤, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트, 헥산, 벤젠, 클로로포름, 글리세린, 부틸렌글리콜, 및 프로필렌글리콜로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 용매로 추출되는 것이다.

본 발명의 일 실시상태에 있어서, 상기 용매는 추출 용매이고, 상기 추출 용매는 탄소수 1 내지 4의 무수 또는 함수 저급 알코올, 즉, 에탄올, 메탄올, 프로판올 또는 부탄올이며, 바람직하게는 에탄올이고, 더 바람직하게는 20~90% 알코올이며, 가장 바람직하게는 50~70% 알코올이다.

본 발명의 일 실시상태에 있어서, 상기 용매는 추출 후 용매이고, 상기 추출 후 용매는 부틸렌글리콜이며, 바람직하게는 1,3-부틸렌글리콜이다.

본 발명의 일 실시상태에 있어서, 상기 용매의 양은 추출될 생약 또는 생약 혼합물의 건조 중량의 1~20배이며, 보다 바람직하게는 5~8배이다.

본 발명의 일 실시상태에 있어서, 추출물의 제조시 추출온도는 20~100℃이며, 보다 바람직하게는 70~80℃이다.

본 발명의 일 실시상태에 있어서, 본 발명에서 사용되는 추출물의 제조 방법은 하기의 단계를 포함한다:

(a) 생약(자감초, 향부자 및/또는 강황)에 추출 용매를 첨가하여 추출물을 얻는 단계; 및

(b) 단계 (a)의 생약 추출물을 여과한 뒤, 고온 진공 감압 조건 하에서 여과액을 농축건조하여 건조 생성물을 얻는 단계.

또한, 본 발명에서 사용되는 추출물의 제조 방법은 선택적으로 하기의 단계를 추가로 포함할 수도 있다:

(c) 상기 단계 (b)에서 얻은 건조 생성물을 용매에 용해하는 단계.

본 발명의 일 실시상태에 있어서, 상기 생약 추출물의 제조 방법을 보다 구체적으로 기재하면, 하기와 같지만, 이로 한정되는 것은 아니다:

우선, 원료가 되는 생약(자감초, 향부자 및/또는 강황)을 세척, 건조 및 작은 조각으로 파쇄한 다음 50% 에탄올을 추출할 생약 건조중량의 6배 부피비로 첨가하여 3~12시간 동안 80~110℃에서 추출시킨다.

이어, 약 300 메쉬의 여과체로 여과한 다음, 진공 감압 농축기를 이용하여 약 70℃의 고온에서 농축하여 생약 추출물을 건조물(예컨대, 파우더)의 형태로 얻을 수 있다.

상기와 같이 얻은 생약 추출물은 건조물의 형태로 제형화에 적용될 수도 있고, 적절한 용매에 용해시켜서 액상물(분산액, 현탁액 등의 용액)의 형태로 사용될 수도 있다. 상기 용매로는 예를 들어 부틸렌글리콜을 사용할 수 있으며, 바람직하게는 1,3-부틸렌글리콜을 사용할 수 있다.

본 발명의 일 실시상태에 있어서, 상기 자감초, 향부자 및 강황의 혼합 추출물은 상술한 추출법에 의한 추출물뿐만 아니라, 통상적인 정제 과정을 거친 추출물도 포함한다.

예컨대, 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외 여과막을 이용한 분리, 다양한 크로마토그래피(크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)에 의한 분리 등, 추가적으로 실시된 다양한 정제 방법을 통해 얻어진 분획도 상기 자감초, 향부자 및 강황의 혼합 추출물에 포함된다고 해석된다.

본 발명의 일 실시상태에 있어서, 상기 자감초, 향부자 및 강황의 혼합 추출물은 각각 감압 증류 및 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말 상태로 제조될 수 있다.

본 발명에 따른 혼합 추출물은 베타-엔도르핀의 생산 및 발현 촉진/증가 활성이 뛰어나므로, 뉴로코스메틱(Neurocosmetics)용 조성물로 대단히 유용하다.

본 발명의 일 실시상태에 있어서, 상기 조성물은 피부 자극 완화 또는 피부 상태 개선용이다.

본 발명에 있어서, “피부 상태 개선”이라는 표현은 피부의 상태가 정상 상태보다 좋지 않았을 때에는 정상 상태에 가깝게 되는 경우, 또는 피부의 상태가 이보다 더 좋아지는 경우를 의미하는 것이다. 예를 들어, 피부에 염증이 생겼을 경우에는 염증이 감소하거나 없어지는 것을 말하고, 피부 주름이 생겼을 경우에는 피부의 주름이 감소하거나 옅어지는 것을 말한다.

본 발명의 일 실시상태에 있어서, 상기 조성물은 고온 피부 자극 완화 또는 고온 자극된 피부 개선용이다. 본 명세서에서 내에서, 용어 “고온 피부 자극”과 관련하여, “고온”이라는 용어는 체온보다 높은 온도를 말하는 것으로서, 바람직하게는 40℃ 내지 90℃, 보다 바람직하게는 45℃ 내지 65℃의 온도를 말한다.

본 발명의 일 실시상태에 있어서, 상기 조성물은 고온 자극된 피부의 주름 개선용이다.

본 발명의 일 실시상태에 있어서, 상기 조성물은 고온 자극된 피부의 염증 개선용이다.

본 발명의 일 실시상태에 있어서, 상기 조성물은 저온 피부 자극 완화 또는 저온 자극된 피부 개선용이다. 본 명세서 내에서, 용어 “저온 피부 자극”과 관련하여, “저온”이라는 용어는 체온보다 낮은 온도를 말하는 것으로서, 바람직하게는 -10℃ 내지 20℃, 보다 바람직하게는 -5℃ 내지 10℃의 온도를 말한다.

본 발명의 일 실시상태에 있어서, 상기 조성물은 항균용이다.

본 발명의 일 실시상태에 있어서, 상기 조성물은 항산화용이다.

본 발명의 일 실시상태에 있어서, 상기 조성물은 고온 자극된 피부의 산화 억제용이다.

본 발명의 일 실시상태에 있어서, 상기 조성물은 피부 세포의 면역 증진용 또는 면역 체계 활성화용이다.

본 발명의 일 실시상태에 있어서, 상기 조성물은 베타-엔돌핀 생산 및/또는 발현의 촉진 내지 증진용이다. 베타-엔돌핀은 기쁠 때 생성되는 각길형성세포에 존재하는 호르몬으로서, 섬유아세포 생장 촉진, 각질불화 촉진, 상처 치유 효과가 있는 것으로 알려져 있다. 따라서, 본 발명에 따른 조성물은 세포 재생에 효과적으로 작용할 수 있다.

또한, 본 발명에 따른 조성물은 상기한 물질 이외에 주 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서, 바람직하게는 주 효과에 상승 효과를 줄 수 있는 다른 성분들을 포함할 수 있다. 또한 본 발명에 따른 조성물은 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료, 보습제, 에몰리언트제, 자외선 흡수제, 보존제, 살균제, 산화 방지제, pH 조정제, 향료, 냉감제 또는 제한제를 더 포함할 수 있다. 상기 성분의 배합량은 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 통상의 기술자가 용이하게 선정 가능하다.

본 발명에 따른 화장료 조성물은 화장품학 또는 피부과학적으로 허용가능한 매질 또는 기제를 함유한다. 이는 국소적용에 적합한 모든 제형으로, 예를 들면 용액, 겔, 고체 또는 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형(리포좀) 및 비이온형의 소낭 분산제의 형태로, 또는 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실 스틱의 형태로 제공될 수 있다. 이들 조성물은 당해 분야의 통상적인 방법에 따라 제조될 수 있다. 본 발명에 따른 조성물은 또한 포말(foam)의 형태로 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 사용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 지방 물질, 유기용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온 봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 또는 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 상기 보조제는 화장품학 또는 피부과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입된다.

본 발명의 화장료 조성물은 그 제형에 있어서 특별히 한정되는 바가 없으며, 예를 들면, 유연화장수, 수렴화장수, 영양화장수, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 아이크림, 아이에센스, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징워터, 팩, 파우더, 보디로션, 보디크림, 보디오일 또는 보디에센스 등의 화장료로 제형화될 수 있다.

이하, 실시예를 들어 본 발명을 보다 자세하게 설명한다. 그러나, 이러한 실시예들은 본 발명을 구체적으로 설명하려는 것일 뿐, 이러한 실시예에 의하여 본 발명의 권리범위가 제한되는 것은 아니다.

< 제조예 1> 자감초 추출물의 제조

자감초 100 g(건화약품에서 구입함)을 세척, 건조 및 작은 조각으로 파쇄한 다음, 50% 에탄올 600 g을 첨가한 후, 약 80~110℃ 환류장치 하에서 3~12시간 동안 끓이면서 추출하였다. 추출 완료 후 여과를 통해 자감초를 제거 한 추출액을 회전식 감압농축기에서 농축하고 동결건조하여 고체 상태의 자감초 추출물 17.73 g 을 수득하였다.

< 제조예 2> 향부자 추출물의 제조

상기 제조예 1에서 자감초 대신 향부자(건화약품에서 구입함)를 사용한 것을 제외하고는, 상기 제조예 1과 동일한 과정을 통하여 고체 상태의 향부자 추출물 11.87 g을 수득하였다.

< 제조예 3> 강황 추출물의 제조

상기 제조예 1에서 자감초 대신 강황(건화약품에서 구입함)을 사용한 것을 제외하고는, 상기 제조예 1과 동일한 과정을 통하여 고체 상태의 강황 추출물 2.76 g을 수득하였다.

< 제조예 4> 자감초 , 향부자 및 강황의 혼합(1:1:1) 추출물의 제조

자감초, 향부자 및 강황의 혼합비율을 중량비로 1:1:1로 한 생약 혼합물 30 g을 세척, 건조 및 작은 조각으로 파쇄한 다음, 50% 에탄올 180 g 을 첨가한 후, 약 80~110℃ 환류장치 하에서 3~12시간 동안 끓이면서 추출하였다. 추출 완료 후 여과를 통해 생약 혼합물을 제거한 추출액을 회전식 감압농축기로서 농축하고 동결건조하여 고체 상태의 혼합 추출물 3.91 g을 수득하였다.

< 제조예 5> 자감초 , 향부자 및 강황의 혼합(7:2:1) 추출물의 제조

상기 제조예 4에서 자감초, 향부자 및 강황의 혼합 비율을 1:1:1 대신 7:2:1로 조절한 것을 제외하고는, 상기 제조예 4과 동일한 과정을 통하여 고체 상태의 혼합 추출물 4.02 g을 수득하였다.

수득한 제조예 4와 5는 거의 유사한 활성을 나타내었으나(하기 시험예 참조), 성상 및 냄새면에서 제조예 5가 화장료로 적용하기에 더 적합하였다.

< 시험예 1> 각 추출물에 대한 고온 자극 억제 효과에 대한 비교

자감초, 향부자 및 강황 각각의 추출물(제조예 1~3)과 자감초, 향부자 및 강황의 혼합 추출물(제조예 5)의 농도별 고온 자극 억제 효과를 확인하기 위하여 고온 을 처리하여 자극을 유발하고 세포 생존율이 평가물질에 의해 증감되는 정도를 평가하였다. 구체적인 방법은 아래와 같다.

인체 유래 각질형성세포(human keratinocyte, ATCC)를 24 웰-플레이트(well plate)에 6Ｘ10⁴ cell/well이 되도록 접종한 후에 24시간 배양하였다. 배양 후 배양액을 버리고 각 웰에 시료를 농도별로 소태아혈청(FBS) 및 페놀레드(Phenol red)가 없는 Dubelcco Modified Eagle's Medium(DMEM, Welgene)에 3회 반복 처리하였다. 24시간 후 항온수조를 이용하여 고온 자극(45℃, 40분)을 가한 다음 24시간 배양한 후, 각 웰에서의 세포 생존율을 CCK-8(Takara) 시약을 이용하여 확인하고 그 결과를 도 1에 나타내었다.

본 실험 결과, 도 1에 나타낸 바와 같이 제조예 1~3 및 5의 추출물을 처리한 경우에 고온 자극을 받은 비교군에 비하여 자감초, 향부자 및 강황의 혼합 추출물 > 자감초추출물 > 향부자추출물 > 강황추출물 순으로 세포 생존율이 높게 나타났으며, 제조예 1~3 및 5의 처리 농도에 따라 고온 자극 무처리군에 비해서도 세포 생존율이 높게 나타났다.

< 시험예 2> 본 발명에 따른 피부외용제 조성물의 항염활성 측정

자감초, 향부자 및 강황의 혼합 추출물인 제조예 4 및 5의 고온 자극에 대한 항염증 효과를 확인하기 위하여 고온 자극을 처리하여 염증을 유발하고 염증매개물질인 IL-6(Interlukin-6)의 양이 평가물질에 의해 감소되는 정도를 평가하였다. 구체적인 방법은 아래와 같다.

인체 유래 각질형성세포(human keratinocyte; HaCaT, ATCC)를 24 웰-플레이트(well plate)에 6Ｘ10⁴ cell/well이 되도록 접종한 후에 24시간 배양 하였다. 배양 후 배양액을 버리고 각 웰에 시료를 농도별로 FBS, 페놀 레드가 없는 DMEM(Welgene)에 희석하여 3회 반복 처치하였다. 24시간 후 항온수조를 이용하여 고온 자극(45℃, 20분)을 가한 다음 24시간 배양 한 후, 배지를 원심분리하여 상등액을 5배 희석하고 IL-6 ELISA kit(R&D Systems)를 이용하여 IL-6의 양을 정량하여 그 결과를 도 2에 나타내었다.

본 실험 결과, 도 2에 나타낸 바와 같이 제조예 4 및 5의 추출물을 처리한 경우에는 고온 자극을 받은 비교군에 비하여 IL-6가 감소함을 확인하였다. 또한 고온 자극 무처리군과 IL-6의 양이 거의 유사한 것으로 나타나, 본 발명에 따른 자감초, 향부자 및 강황의 혼합 추출물이 정상세포의 항상성을 유지하는데 도움을 주는 것으로 나타났다.

< 시험예3 > 본 발명에 따른 피부외용제 조성물의 고온자극 억제효과 측정

자감초, 향부자 및 강황의 혼합 추출물인 제조예 4 및 5의 고온 자극 억제 효과를 확인하기 위하여 고온 자극을 처리하여 자극을 유발하고 세포 생장율이 평가물질에 의해 증감되는 정도를 평가하였다. 구체적인 방법은 아래와 같다.

인체 유래 각질형성세포(human keratinocyte, ATCC)를 24 웰-플레이트(well plate)에 6Ｘ10⁴ cell/well이 되도록 접종한 후에 24시간 배양하였다. 배양 후 배양액을 버리고 각 웰에 시료를 농도별로 소태아혈청(FBS), 페놀레드가 없는 DMEM(Welgene)에 3회 반복 처리하였다. 24시간 후 항온수조를 이용하여 고온 자극(45℃, 40분)을 가한 다음 24시간 배양한 후 각 웰에서의 세포 생존율을 CCK-8(Takara) 시약을 이용하여 확인하고 그 결과를 도 3에 나타내었다.

본 실험 결과, 도 3에 나타낸 바와 같이 제조예 4 및 5의 추출물을 처리한 경우에 고온 자극을 받은 비교군에 비하여 세포 생장율이 높게 나타났다.

< 시험예 4> 본 발명에 따른 피부외용제 조성물의 세포 증식 효과

자감초, 향부자 및 강황의 혼합 추출물인 제조예 5가 피부 세포 생장에 미치는 효과를 확인하기 위하여 농도별로 평가하였다. 구체적인 방법은 아래와 같다.

인체 유래 섬유아세포(human Dermal fibro blast, ATCC)를 48 웰-플레이트(well plate)에 5Ｘ10³ cell/well이 되도록 접종한 후에 24시간 배양 하였다. 배양 후 배양액을 버리고 각 웰에 시료를 농도별로 소태아혈청(FBS), 페놀레드가 없는 DMEM(Welgene)에 3회 반복 처리하였다. 72시간 배양한 후 각 웰에서의 세포 생존율을 CCK-8(Takara) 시약을 이용하여 확인하고 그 결과를 도 4에 나타내었다.

본 실험 결과, 도 4에 나타낸 바와 같이 제조예 5의 추출물이 무처리군에 비하여 세포 생존율이 높게 나타났으며, 제조예 5의 추출물 50ppm 처리시 무처리군에 비해 17% 피부 세포 증가 확인하였다.

< 시험예 5> 본 발명에 따른 피부외용제 조성물의 저온 자극에 대한 세포보호효과

자감초, 향부자 및 강황의 혼합 추출물인 제조예 5> 저온 자극에 대한 세포 보호 효과를 확인하기 위하여 농도별로 평가하였다. 구체적인 방법은 아래와 같다.

인체 유래 각질형성세포(human keratinocyte, ATCC)를 24 웰-플레이트(well plate)에 6Ｘ10⁴ cell/well이 되도록 접종한 후에 24시간 배양하였다. 배양 후 배양액을 버리고 각 웰에 시료를 농도별로 소태아혈청(FBS), 페놀레드가 없는 DMEM(Welgene)에 3회 반복 처리하였다. 24시간 후 냉동고를 이용하여 저온 자극(0℃, 40분)을 가한 후 24시간 배양하였다. 이후 각 웰에서의 세포 생존율을 CCK-8(Takara) 시약을 이용하여 확인하고 그 결과를 도 5에 나타내었다.

본 실험 결과, 도 5에 나타낸 바와 같이 제조예 5의 추출물이 저온 자극으로 인해 생존율이 떨어진 비교군에 비해 세포생존율이 2~3배 이상으로 높게 나타나, 제조예 5의 추출물이 저온 자극에 대한 세포보호효과가 있음을 나타냈다.

< 시험예 6> 본 발명에 따른 피부외용제 조성물의 고온 자극에 의한 주름 생성 저해 효과

자감초, 향부자 및 강황의 혼합 추출물인 제조예 5의 고온 자극으로 인한 주름 생성 저해 효과를 확인하기 위하여 농도별로 평가하였다. 구체적인 방법은 아래와 같다.

인체 유래 각질형성세포(human keratinocyte(HaCaT, ATCC)를 24 웰-플레이트(well plate)에 6Ｘ10⁴ cell/well이 되도록 접종한 후에 24시간 배양하였다. 배양 후 배양액을 버리고 각 웰에 시료를 농도별로 FBS, 페놀레드가 없는 DMEM(Welgene)에 희석하여 3회 반복 처리하였다. 24시간 한 후 항온수조를 이용하여 고온 자극(45℃, 20분)을 가한 후 72시간 배양하였다. 이후 배지를 원심분리 후 그 상등액을 100배 희석한 다음 MMP-1 ELISA kit(R&D Systems)를 이용하여 세포의 MMP-1 양을 정량하였으며, 이 결과를 도 6에 나타내었다

본 실험 결과, 도 6에 나타낸 바와 같이 고온 자극으로 인해 MMP-1의 발현이 35% 높아지며, 높아진 MMP-1의 발현을 제조예 5의 추출물을 처리함으로써 MMP-1의 발현이 15~29% 정도 낮추어져 제조예 5의 추출물이 주름생성 억제 효과가 있는 것으로 나타났다.

< 시험예 7> 본 발명에 따른 피부외용제 조성물의 고온 자극에 의한 주름생성저해효과

자감초, 향부자 및 강황의 혼합 추출물인 제조예 5의 고온 자극으로 인한 주름 생성저해 효과를 확인하였다. 구체적인 방법은 아래와 같다.

인체 유래 섬유아세포(human Dermal fibro blast, ATCC)를 6웰-플레이트(well plate)에 9Ｘ10⁴ cell/well이 되도록 접종한 후에 24시간 배양 하였다. 배양 후 배양액을 버리고 각 웰에 시료를 농도별로 FBS, 페놀레드가 없는 DMEM(Welgene)에 희석하여 3회 반복 처리하였다. 24시간 후 항온수조를 이용하여 고온 자극(45℃, 5분)을 준 후 72시간 배양하였다. 이후 배지를 원심분리 후 그 상등액을 100배 희석한 다음 MMP-2 ELISA kit(R&D Systems)를 이용하여 각 웰에서의 MMP-2 양을 정량하여 확인하고 그 결과를 도 7에 나타내었다.

본 실험 결과, 도 7에 나타낸 바와 같이 고온 자극으로 인해 MMP-2의 발현이 39% 높아지며, 높아진 MMP-1의 발현을 제조예 5의 추출물을 처리함으로써 MMP-2의 발현이 46%나 낮아져 제조예 5의 추출물이 주름생성 억제 효과가 있는 것으로 나타났다.

< 시험예 8> 본 발명에 따른 피부외용제 조성물의 미생물 자극에 의한 세포보호효과

자감초, 향부자 및 강황의 혼합 추출물인 제조예 5의 미생물 자극으로 인한 세포보호효과를 확인하였다. 구체적인 방법은 아래와 같다.

본 발명에 따른 조성물의 미생물로부터 세포 보호효과를 확인하기 위해, 쥐의 대식세포인 RAW264.7 세포(ATCC)를 이용하였다. 세포의 배양(Cell culture)에 사용된 DMEM, FBS, 페니실린-스트렙토마이신 및 인슐린(Insulin)은 Welgene에서 구입하였다. 상기 RAW264.7 세포는 DMEM 배지에 10% FBS, 1% 페니실린 스트렙토마이신을 사용하여 배양하였고, 37℃, 습한 CO₂배양기(5% CO₂/95% air)에서 배양하였다. 상기 세포가 배양접시의 약 80%가 차게 배양된 후, 0.25% 트립신 및 2.56 mmol/L EDTA를 처리하여 계대배양하였다. 5×10⁴의 세포수로 10% FBS-DMEM 배지에 현탁 시켜 96 웰 플레이트에 접종하고, 24시간 동안 37℃, 5% CO₂ 인큐베이터에서 배양하였다. 시료를 농도별로 처리하여 12시간 동안 반응시킨 후 그람 음성 박테리아의 세포벽으로부터 유래된 세포내 독소인 지질다당류를 상기 웰에 처리하였다. 이 때 비교를 위하여 시료 대신 L-NMNA(NG-메틸-L-아르기닌 아세테이트 염) 100μM을 웰에 처리한 것을 양성 대조군으로 사용하였다. 24시간 후 각 웰에서의 세포 생존율을 CCK-8(Takara) 시약을 이용하여 확인하고 그 결과를 도 8에 나타내었다.

본 실험 결과, 도 8에 나타난 바와 같이 미생물 자극으로 인해 낮아진 세포생장율을 제조예 5의 추출물을 처리함으로써 세포생장율이 높아져 제조예 5의 추출물이 미생물 및/또는 독소에 대한 세포보호효과가 있는 것으로 나타났다.

< 시험예 9> 본 발명에 따른 피부외용제 조성물의 피부세포내 면역물질 증가효과

자감초, 향부자 및 강황의 혼합 추출물인 제조예 5의 피부세포내 면역물질 증가 효과를 확인하였다. 구체적인 방법은 아래와 같다.

자연면역인자의 유전자 발현을 확인하기 위해, 인간 각질형성세포(HaCaT cells)를 5% CO₂ 및 37℃에서 95% 이상의 습도를 유지한 배양기에서 10% 소태아혈청, 100μg/ml 스트렙토마이신 및 100unit/ml 페니실린을 포함하는 DMEM 배지에서 배양하였다. 상기 세포가 배양접시의 약 80%가 차게 배양한 후, 0.25% 트립신 및 2.56 mmol/L EDTA를 처리하여 계대배양하였다. 1×10⁵의 세포수로 10% FBS-DMEM 배지에 현탁시켜 6 웰 플레이트에 접종하고, 24시간 동안 37℃, 5% CO₂ 인큐베이터에서 배양하였다. 사람 각질형성세포 배양액에 시료를 농도별로 가하여 24시간 세포와 함께 배양 후, 1ml의 인산염 완충액으로 세포를 두 번 세척하고, 트라이졸(인비트로젠사)을 이용하여 세포 내 전체 RNA(total RNA)를 분리하였다. 분리된 RNA를 키아젠사의 RNA 키트를 활용하여, 재 정제한 후, TECAN 기기를 이용하여, RNA의 질(quality)을 확인하였다. 인비트로젠사의 역전사키트(Superscript Reverse Transcriptase (RT) II kit)를 이용하여 상기 분리된 RNA로부터 cDNA를 합성하였고, 시험 세포 및 대조군의 HBD-2(Human bata-defension - 2) 및 HBD-3(Human bata-defension - 3) 의 mRNA 발현 수준을 실시간역전사중합효소연쇄반응(real time-reverse transcription polymerase chain reaction, Q-RT-PCR)으로 정량적으로 분석하였다. 이 때 사용한 프라이머는 하기 표 1에 나타내었으며, 분석 결과는 도 9 및 10에 나타내었다.

	프라이머 서열
HBD-2 Forward	CCTGTTACCTGCCTTAAGAG
HBD-2 Reverse	GAATCCGCATCAGCCACAG
HBD-3 Forward	CTTCTGTTTGCTTTGCTCTT
HBD-3 Reverse	CACTTGCCGATCTGTTCCTC

본 실험 결과, 도 9 및 10에 나타낸 바와 같이 제조예 5의 추출물을 처리한 군에서는 무처리군에 비해 HBD-2(Human bata-defension - 2) 및 HBD-3(Human bata-defension - 3)의 유전자 발현이 각각 1.6, 3.3배 증가하는 것을 확인하였다.

이로부터 본 발명에 따른 조성물은 피부에서 만들어내는 항균성 면역물질인 베타-디펜신(bata-defensin)을 생산하여, 면역체계를 강화하고, 피부 세포를 보호할 것으로 예상할 수 있다.

< 시험예 10> 본 발명에 따른 피부외용제 조성물의 고온 자극에 의한 열기 보호 유전자 발현 확인

자감초, 향부자 및 강황의 혼합 추출물인 제조예 5의 고온 자극으로 인한 스트레스 발생시 증가하는 유전자 발현이 감소하는 효과를 확인하였다. 구체적인 방법은 아래와 같다.

인간 각질형성세포(HaCaT cells)를 5% CO₂ 및 37℃에서 95% 이상의 습도를 유지한 배양기에서 10% 소태아혈청, 100μg/ml 스트렙토마이신 및 100unit/ml 페니실린을 포함하는 DMEM 배지에서 배양하였다. 상기 세포가 배양접시의 약 80%가 차게 배양된 후, 0.25% 트립신 및 2.56 mmol/L EDTA를 처리하여 계대배양하였다. 1×10⁵의 세포수로 10% FBS-DMEM 배지에 현탁시켜 6 웰 플레이트에 접종하고, 24시간 동안 37℃, 5% CO₂ 인큐베이터에서 배양하였다. 각질형성세포 배양액에 시료를 가하여 24시간 세포와 함께 배양한 후, 항온수조를 이용하여 고온 자극(45℃, 15분)을 가한 후 24시간 배양하였다. 1ml의 인산염 완충액으로 세포를 두 번 세척하고, 트라이졸(인비트로젠사)을 이용하여 세포 내 전체 RNA(total RNA)를 분리하였다. 분리된 RNA를 키아젠사의 RNA 키트를 활용하여, 재 정제한 후, TECAN 기기를 이용하여, RNA의 질(quality)을 확인하였다. 인비트로젠사의 역전사키트(Superscript Reverse Transcriptase (RT) II kit)를 이용하여 상기 분리된 RNA로부터 cDNA를 합성하였고, 시험 세포 및 대조군의 Heat shock protein70 및 GAPDH의 mRNA 발현 수준을 실시간역전사중합효소연쇄반응(real time-reverse transcription polymerase chain reaction, Q-RT-PCR)으로 정량적으로 분석하여 Heat shock protein70의 발현양을 조사하였다. 이 때 사용한 프라이머 서열은 하기 표 2에 나타내었으며, 조사 결과는 도 11에 나타내었다.

	프라이머 서열
Heat shock protein 70 forward	CTGCTGCGACAGTCCACTAC
Heat shock protein 70 Reverse	CTGGAAACGGAACACTGGAT

본 실험 결과, 도 11 에 나타낸 바와 같이 고온자극으로 인해 Heat shock protein70 의 mRNA 발현이 높아지며, 높아진 Heat shock protein70 의 mRNA 발현은 제조예 5의 추출물을 처리함으로 인해 Heat shock protein70 의 mRNA 발현이 증가하는 것을 확인하였으며, 이는 고온자극시 본 발명의 혼합추출물 처치 시 스트레스에 대한 보호 작용을 하는 Heat shock protein 70이 증가하는 것을 확인하였다 .

< 시험예 11> 본 발명에 따른 피부외용제 조성물의 고온 자극 및 산화자극에 의한 항산화 효과

자감초, 향부자 및 강황의 혼합 추출물인 제조예 5의 고온 자극 및 산화 자극으로 인한 항산화 효과를 확인하기 위하여 농도별로 평가하였다. 구체적인 방법은 아래와 같다.

사람의 표피 조직에서 분리한 각질형성세포(keratinocyte)를 96웰 검정 플레이트(Corning)의 각 웰에 3×10⁴개를 접종하고 24시간 동안 부착시켰다. 24시간 후 시료와 양성대조군인 Trolox(Sigma)를 FBS, 페놀레드가 없는 DMEM 배지에 희석하여 처치하였다. 24시간 뒤 배양액을 제거한 후, 각 웰에 100㎕의 인산완충염액(PBS)으로 헹군 후 DCF-DA시약(Sigma)을 50uM을 HBSS(Welgene)에 희석하여 빛을 차단하고 30분간 배양하였다. 이후 상기 세포를 HBSS에 100㎕로 5회 헹궈 배지의DCF-DA시약을 제거하였다. 이후 고온 자극은 항온수조를 이용하여 고온 자극(45℃, 15분) 처치하였다. 또한, 산화 자극은 하이드로퍼옥사이드(Hydroperoxide) 자극원을 사용하였으며, 산화 자극 군은 100uM의 하이드로퍼옥사이드(Sigma)를 HBSS 버퍼에 희석하여 처치하였다. 각각의 자극 후 생성된 활성 산소종의 양을 형광흡광도기(Tecan)을 이용하여 형광도를 측정한 후 도 12 및 13에 나타냈다.

본 실험 결과, 도 12에 나타낸 바와 같이 고온 자극으로 인해 ROS 생성량이 증가되며, 이 증가된 ROS 생성량을 제조예 5의 추출물을 처리함으로써 ROS 생성량이 감소한 효과를 나타냈다. 도 13에 나타낸 바와 같이 산화 자극으로 인해 ROS 생성량이 증가되며, 이 증가된 ROS 생성량을 제조예 5의 추출물을 처리함으로써 ROS 생성량이 감소한 효과를 나타냈다.

< 시험예 12> 본 발명에 따른 피부외용제 조성물의 대식세포 활성화를 통한 면역반응 증진효과

자감초, 향부자 및 강황의 혼합 추출물인 제조예 5의 대식세포 활성화를 통한 면역반응 증진효과를 농도별로 평가하였다. 구체적인 방법은 아래와 같다.

쥐의 대식세포인 RAW264.7 세포(ATCC)를 이용하였다. 세포의 배양(Cell culture)에 사용된 DMEM, FBS, 페니실린-스트렙토마이신 및 인슐린(Insulin)은 Welgene에서 구입하였다. 상기 RAW264.7 세포는 DMEM 배지에 10% FBS, 1% 페니실린 스트렙토마이신을 사용하여 배양하였고, 37℃ 습한 CO₂배양기(5% CO₂/95% air)에서 배양하였다. 상기 세포가 배양접시의 약 80%가 차게 배양한 후, 0.25% 트립신 및 2.56 mmol/L EDTA를 처리하여 계대배양하였다. 5×10³의 세포수로 10% FBS-DMEM 배지에 현탁시켜 96 웰 플레이트에 접종하고, 24시간 동안 37℃, 5% CO₂ 인큐베이터에서 배양하였다. 시료를 농도별로 처리하여 24시간 배양한 뒤, 상기 24시간 배양한 후의 배양액을 수집하여, Nitric Oxide(NO)의 분비량을 Griess reagent system(Promega, USA)를 이용하여 측정하였다. 상기 Griess reagent system을 이용한 측정법은 보다 상세하게는 상기 시스템의 제조사인 Promega에서 제공한 실험방법(protocol)을 따랐고, 상기 수집된 세포배양액에 술파닐아미드 용액(Sulfanilamide solution)을 먼저 넣고, NED 용액을 넣은 후에, 마이크로플레이트 판독기(Tecan)를 이용하여 540nm에서 측정하는 방법으로 수행하였다. 그 결과를 도 14에 나타냈다.

본 실험 결과, 도 14에 나타난 바와 같이 제조예 5의 추출물은 대식세포에서 농도 유의적으로 NO를 생성하는 것을 확인하였다. 면역반응에서 대식세포는 체내 면역을 극대화 시키는 중요 매개체로 활성화되면 다양한 사이토카인과 NO 등의 생리활성물질을 분비하여 각종 유해균 및 암세포의 성장을 억제시킨다.

이로부터 본 발명에 따른 피부 외용제 조성물인 제조예 5의 추출물은 대식세포를 활성화시켜 면역증강효과가 있을 것으로 여겨진다.

< 시험예 13> 본 발명에 따른 피부외용제 조성물의 고온 자극에 의한 염증생성억제 효과

자감초, 향부자 및 강황의 혼합 추출물인 제조예 5의 고온 자극으로 인한 염증생성 억제 효과를 평가하였다. 구체적인 방법은 아래와 같다.

인체 유래 각질형성세포(human keratinocyte(HaCaT, ATCC)를 24 웰-플레이트(well plate)에 6Ｘ10⁴ cell/well이 되도록 접종한 후에 24시간 배양하였다. 배양 후 배양액을 버리고 각 웰에 시료를 농도별로 FBS, 페놀레드가 없는 DMEM(Welgene)에 희석하여 3회 반복 처리하였다. 24시간 후 항온수조를 이용하여 고온 자극(45℃, 20분)을 가한 다음 24시간 배양한 후 배지를 원심분리하고 5배 희석하여 IL-6,8 ELISA kit(R&D Systems)를 이용하여 각 웰에서의 IL-6, IL-8의 양을 정량하여 그 결과를 도 15 및 16에 나타내었다.

본 실험 결과, 도 15 및 16에 나타낸 바와 같이 고온 자극으로 인해 IL-6, IL-8 생성량이 증가되며, 이 증가된 IL-6, IL-8 생성량을 제조예 5의 추출물을 처리함으로써 IL-6, IL-8 생성량이 감소한 효과(IL-6: 22~29% 감소; IL-8: 32% 감소)를 나타냈다.

이는 열기로 인하여 각질형성세포에서 염증이 유발되지만, 본 발명에 따른 혼합 추출물의 처리에 의하여 염증 생성이 억제된다는 것을 나타낸다.

< 시험예 14> 본 발명에 따른 피부외용제 조성물의 베타- 엔돌핀 증가

자감초, 향부자 및 강황의 혼합 추출물인 제조예 5의 베타-엔돌핀(bata-endorphin) 증가 효과를 평가하였다. 구체적인 방법은 아래와 같다.

인간 각질형성세포(HaCaT cells)를 5% CO₂ 및 37℃에서 95% 이상의 습도를 유지한 배양기에서 10% 소태아혈청, 100μg/ml 스트렙토마이신 및 100unit/ml 페니실린을 포함하는 DMEM 배지에서 배양하였다. 상기 세포를 배양접시의 약 80%가 차게 배양한 후, 0.25% 트립신 및 2.56 mmol/L EDTA를 처리하여 계대배양하였다. 1×10⁵의 세포수로 10% FBS-DMEM 배지에 현탁시켜 6 웰 플레이트에 접종하고, 24시간 동안 37℃, 5% CO₂ 인큐베이터에서 배양하였다. 사람 각질형성세포 배양액에 시료를 농도별로 가하여 24시간 세포와 함께 배양 후, 1ml의 인산염 완충액으로 세포를 두 번 세척하고, 트라이졸(인비트로젠사)을 이용하여 세포 내 전체 RNA(total RNA)를 분리하였다. 분리된 RNA를 키아젠사의 RNA 키트를 활용하여, 재 정제한 후, TECAN 기기를 이용하여, RNA의 질(quality)을 확인하였다. 인비트로젠사의 역전사키트(Superscript Reverse Transcriptase (RT) II kit)를 이용하여 상기 분리된 RNA로 부터 cDNA를 합성하였고, 시험 세포 및 대조군의 POMC및 GAPDH의 mRNA 발현 수준을 실시간역전사중합효소연쇄반응(real time-reverse transcription polymerase chain reaction, Q-RT-PCR)으로 정량적으로 분석하였다. 이 때 사용한 프라이머 서열은 하기 표 3에 나타내었으며, 분석 결과는 도 17에 나타내었다.

	프라이머 서열
GAPDH Forward	ATTGTCATACCAGGAAATGAGCTT
GAPDH Reverse	GTGTTCCTACCCCCAATGTGT

본 실험 결과, 도 17에 나타낸 바와 같이 제조예 5의 추출물은 베타-엔돌핀의 전구체인 프로오피오멜라노코르틴(Proopiomelanocortin; POMC)의 발현을 3.2배 증가시키는 것을 확인하였다.

이로부터 본 발명에 따른 조성물은 섬유아세포의 생장 및 각질 불화를 촉진하고, 상처 치유에 효과적으로 작용하여, 세포 재생에 도움이 될 것임을 알 수 있다.

< 시험예 15> 본 발명에 따른 피부외용제 조성물의 피부온도 조절효과(임상)

자감초, 향부자 및 강황의 혼합 추출물인 제조예 5의 피부온도 조절 효과를 평가하였다. 구체적인 방법은 아래와 같다.

건강한 피험자 20명을 대상으로 2주 동안 아침 저녁으로 오른쪽 얼굴에는 제조예 5를 5중량% 포함한 세럼인 하기 표 4의 실시예 1, 왼쪽에는 제조예 5를 포함하지 않는 베이스 세럼인 하기 표 4의 비교예 1을 400ul 씩 도포하였다.

(단위: 중량%)

성분	실시예 1	비교예 1
정제수	TO 100	To 100
글리세릴	7.5	7.5
디소듐 EDTA	0.02	0.02
하이드록시에틸셀룰로스	0.5	0.5
PEG-60 하이드로제네이티드 캐스터오일	0.4	0.4
에탄올	4.0	4.0
페녹시에탄올	0.5	0.5
제조예 5	0.005	-

2주 처치 후 고온 자극과 저온 자극 처치 시 피부 온도의 변화량을 열화상 카메라(FLIR Systems T200)를 이용하여 촬영하였다. 고온 자극의 경우 근적외선 강도 4로 60cm에서 10분간 열 자극 하였으며, 저온 자극의 경우 2℃ 얼음물에 30초 동안 수건을 적신 후 30초 동안 볼 부분 중심으로 자극하였다. 촬영된 사진을 FLIR Quick report 1.2 분석 프로그램을 이용하여 양쪽 볼의 평균온도를 확인하였다. 결과는 하기 표 5에 나타내었다.

		실시예 1	비교예 1
고온 자극	처치 전	32.95±0.5	32.82±0.6
	처치 후	35.12±0.7	35.12±0.6
	차이	2.18	2.30
저온 자극	처치 전	33.05±0.4	32.95±0.5
	처치 후	32.00±1.7	31.80±2.4
	차이	1.05	1.15

본 실험 결과, 상기 표 5에 나타낸 바와 같이 본 발명에 따른 조성물은 피부의 온도 변화의 항상성을 유지시켜주는 것으로 나타났다.

이하, 본 발명에 따른 조성물의 제제예를 설명하나, 본 발명의 피부 외용제 조성물은 여러 가지 제형으로 응용 가능하며, 이는 본 발명을 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.

[제형예1] 유연화장수

번호	성 분	함량(%)
1	글리세린	5.00
2	1,3-부틸렌 글라이콜	3.00
3	PEG 1500	1.00
4	알란토인	0.10
5	DL-판테놀	0.30
6	EDTA-2Na	0.02
7	벤조페논-9	0.04
8	에탄올	10.00
9	옥틱도데세스-16	0.20
10	폴리솔베이트 20	0.20
11	제조예 4	1.00
12	방부제, 향, 색소	미량
13	증류수	잔량

[제형예 2] 수렴화장수

번호	성 분	함량(%)
1	글리세린	2.00
2	1,3-부틸렌 글라이콜	2.00
3	알란토인	0.10
4	DL-판테놀	0.30
5	EDTA-2Na	0.02
6	벤조페논-9	0.04
7	에탄올	15.00
8	폴리솔베이트 20	0.20
9	제조예 4	1.50
10	구연산	미량
11	방부제, 향, 색소	미량
12	증류수	잔량

[제형예 3] 영양화장수

번호	성 분	함량(%)
1	세테아릴 알콜	1.00
2	글리세릴스테아레이트	0.50
3	폴리소르베이트 60	1.00
4	소르비탄세스퀴올리에이트	0.30
5	세틸옥타노에이트	6.00
6	스쿠알란	4.00
7	샤플라워오일	4.00
8	부틸렌글라이콜	4.00
9	글리세린	4.00
10	카보머	0.10
11	트리에탄올아민	0.10
12	제조예 4	0.05
13	방부제, 향, 색소	미량
14	증류수	잔량

[제형예 4] 에센스

번호	성 분	함량(%)
1	글리세린	10.00
2	베타인	5.00
3	PEG 1500	2.00
4	알란토인	0.10
5	DL-판테놀	0.30
6	EDTA-2Na	0.02
7	벤조페논-9	0.04
8	히드록시에틸 셀룰로오스	0.10
9	카르복시비닐 폴리머	0.20
10	트리에탄올아민	0.18
11	옥틸도데칸올	0.30
12	옥틸도데세스-16	0.40
13	에탄올	6.00
14	제조예 4	1.00
15	방부제, 향, 색소	미량
16	증류수	잔량

[제형예 5] 팩

번호	성 분	함량(%)
1	폴리비닐 알콜	15.00
2	셀룰로오스 검	0.15
3	글리세린	3.00
4	PEG 1500	2.00
5	시이크데스트린	0.15
6	DL-판테놀	0.30
7	알란토인	0.10
8	글리시리진산 모노암모늄	0.20
9	니코틴 아미드	0.40
10	에탄올	5.00
11	PEG 40 경화피마자유	0.30
12	제조예 4	0.05
13	방부제, 향, 색소	미량
14	증류수	잔량

Claims (14)

1. 자감초, 향부자 및 강황의 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물.
2. 제1항에 있어서,
   상기 자감초 : 상기 향부자 : 상기 강황의 혼합비는 중량을 기준으로 1~10 : 1~10 : 1~10인, 화장료 조성물.
3. 제1항에 있어서, 상기 혼합 추출물의 함량은 조성물 총 중량에 대하여, 0.0001 내지 10.0 중량%인, 화장료 조성물.
4. 제1항에 있어서,
   상기 혼합 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 무수 또는 함수 저급 알코올, 아세톤, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트, 헥산, 벤젠, 클로로포름, 글리세린, 부틸렌글리콜, 및 프로필렌글리콜로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 용매로 추출되는 것인, 화장료 조성물.
5. 제1항에 있어서.
   상기 조성물은 피부 자극 완화 및 피부 상태 개선용인 것인, 화장료 조성물.
6. 제5항에 있어서.
   상기 피부 자극은 고온 또는 저온 자극, 또는 미생물 또는 독소 자극인, 화장료 조성물.
7. 제6항에 있어서.
   상기 조성물은 고온 자극으로 인한 피부 주름을 개선하는 것인, 화장료 조성물.
8. 제6항에 있어서.
   상기 조성물은 고온 자극으로 인한 피부 염증을 개선하는 것인, 화장료 조성물.
   
9. 제1항에 있어서.
   상기 조성물은 항균용인 것인, 화장료 조성물.
10. 제1항에 있어서.
    상기 조성물은 항산화용인 것인, 화장료 조성물.
11. 제10항에 있어서.
    상기 조성물은 고온 자극으로 인한 피부의 산화를 억제하는 것인, 화장료 조성물.
12. 제1항에 있어서.
    상기 조성물은 피부 세포 내 면역 체계를 개선하는 것인, 화장료 조성물.
13. 제1항에 있어서.
    상기 조성물은 베타-엔도르핀의 생성을 증가 또는 촉진시키는 것인, 화장료 조성물.
14. 제1항에 있어서.
    상기 조성물은 피부 재생을 증진 또는 촉진하는 것인, 화장료 조성물.

Images