KR20170055614A - 토사자 추출물을 또는 그의 분획물을 포함하는 갱년기성 심혈관계 질환의 예방 및 치료용 조성물 - Google Patents
토사자 추출물을 또는 그의 분획물을 포함하는 갱년기성 심혈관계 질환의 예방 및 치료용 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 토사자 추출물 또는 그의 분획물을 포함하는 갱년기성 심혈관계 질환의 예방 또는 치료용 조성물, 상기 조성물을 이용한 갱년기성 심혈관계 질환의 예방 또는 치료방법, 토사자 추출물 또는 그의 분획물을 포함하는 갱년기성 심혈관계 질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물 및 사료용 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 토사자 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 천연 약제로서 갱년기성 심혈관계 질환의 예방 또는 개선을 위한 식품 조성물, 화장료 조성물, 및 의약외품 조성물을 포함한 다양한 제품에 응용될 수 있다.
Description
본 발명의 토사자 추출물을 또는 그의 분획물을 포함하는 갱년기성 심혈관계 질환의 예방 및 치료용 조성물에 관한 것으로서, 보다 구체적으로, 본 발명은 토사자 추출물 또는 그의 분획물을 포함하는 갱년기성 심혈관계 질환의 예방 또는 치료용 조성물, 상기 조성물을 이용한 갱년기성 심혈관계 질환의 예방 또는 치료방법, 토사자 추출물 또는 그의 분획물을 포함하는 갱년기성 심혈관계 질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물 및 사료용 조성물에 관한 것이다.
갱년기 장애는 폐경 이후의 난소의 기능저하로 인한 에스트로겐, 즉 여성호르몬의 분비감소에 기인하며, 안면홍조, 빈맥, 발한, 두통증 등의 혈관성 변화에 의한 증상, 근육통, 관절통, 요통 등의 근골격계 변화에 의한 증상, 빈뇨 요실금 등의 비뇨생식기 변화에 의한 증상, 기억력 감퇴, 우울증, 집중력 감퇴, 현기증 등의 뇌신경계 변화에 의한 증상, 시력감퇴, 피부 및 모발의 변화 등의 일반적인 증상이 나타나며, 상기 증상들은 정도의 차이는 있으나 폐경 전후의 여성의 약 80%가 경험하고 있다. 또한, 무엇보다도 주목할 만한 사실은 갱년기를 거치면서 여성의 생명에 영향을 미치는 중요한 변화가 장기간에 걸쳐 발생하는데 이는 골다공증과 심혈관계 질환의 발생 위험성의 증가이다.
이 중에서 심혈관계 질환은 심장 및 혈관계의 이상이 원인으로 발생하는 뇌졸증, 심근경색, 뇌출혈, 심부전증, 뇌혈전증, 심장마비, 혈관재협착 및 동맥경화증 들 수 있으며, 이들은 모두 혈전생성으로 인해 야기될 수 있다. 혈전은 혈액이 생체의 심혈관계 내에서 응고되어 덩어리를 형성하는 것을 말하며, 심혈관내에 혈전이 생기면 혈류의 감소 또는 차단으로 장기나 조직에 허혈성 손상을 유발하고, 혈전의 일부 또는 전부가 떨어져나와 그 부서진 혈전이 색전 (embolism)을 유발하여 심장 관련 질환 (심근경색, 고혈압, 심부전, 부정맥, 동맥경화)과 혈관질환 (뇌졸중)을 포함하는 심혈관계 질환을 발병시킬 수 있다.
따라서, 이러한 질병 자체 및 그 질병 발생 후 심각한 신체적, 사회적 후유증으로 국민의료비 과다지출과 삶의 질 저하가 초래되는 것이 심혈관계 질환의 심각한 문제점으로 지적되고 있다.
이와 같은 심혈관계 질환에 대한 문제점이 점차 중요하게 인식되면서 이들 질환의 발병기전 연구와 더불어 예방 및 치료에 대한 연구에 많은 투자가 이루어지고 있는 바, 호르몬 대체요법 및 항혈전 제제 등이 개발되었으나, 그 중, 호르몬 대체요법은, 유방암, 관상동맥질환, 뇌졸증, 혈전증 등의 부작용이 보고되면서 그의 사용이 제한되고 있는 추세이다. 이와 같이 지금까지 꾸준한 약제 연구와 개발에도 불구하고 심혈관계 질환의 유병율과 발병율은 꾸준히 증가하고, 치료과정에서 발생하는 부작용 등의 문제가 해결되지 않고 있다. 따라서, 이에 대한 치료제 개발과 함께 부작용을 동반하지 않는 심혈관계 질환 억제 및 예방을 위한 활성물질 및 천연물 소재 개발의 필요성이 절실히 요구되고 있는 실정이다.
한편, 토사자 (Cuscuta japonica Chois)는 메꽃과 (Convolvulaceae)에 속하는 한해살이 덩굴성 식물로, 새삼씨 또는 금사초라고도 불리운다. 실과 같은 모양을 한 토사자를 허리나 다리뼈를 다친 토끼가 먹어 나았다고 하여 토자자라는 이름이 유래되었으며, 동의보감에서는 토사자가 정력을 좋게해주고 원기를 복돋우며, 요통과 당뇨병에 효과가 있다고 기록되어있다. 또한, 토사자의 효능으로는 졍력증진, 신장기능 강화, 뼈 기능 강화, 이뇨 효과, 설과 효과, 야맹증 개선 등에 효과가 있다고 보고되어 이와 관련된 한약재로 널리 활용되고 있다. 이외에도, 토사자는 골흡수 억제 활성을 가지므로, 폐경기 여성들에게서 발생하는 골 질환을 개선시킬 수 있음이 공지된 바 있지만(한국공개특허 2013-0059533), 갱년기성 심혈관계 질환의 치료용도로는 알려진 바가 없으며, 이는 본 발명자들에 의해서 최초로 규명되었다.
이러한 배경하에, 본 발명자들은 천연 약초를 이용하여 갱년기성 심혈관계 질환을 개선하기 위한 방법을 개발하고자 예의 연구 노력한 결과, 토사자 (Cuscuta japonica Chois)추출물이 갱년기성 심혈관계 질환의 발병시에 수반되는 혈전생성을 억제하는 효능이 있음을 규명하고, 이를 활용한 갱년기성 심혈관계 질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물을 완성하였다.
본 발명의 하나의 목적은 토사자 (Cuscuta japonica Chois)추출물 또는 그의 분획물을 유효 성분으로 포함하는 갱년기성 심혈관계 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 하나의 목적은 상기 약학 조성물을 이를 필요로 하는 개체에 투여하는 단계를 포함하는 갱년기성 심혈관계 질환의 예방 또는 치료 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 하나의 목적은 토사자 추출물 또는 그의 분획물을 유효 성분으로 포함하는 갱년기성 심혈관계 질환의 예방 또는 개선을 위한 식품 조성물을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위한 하나의 양태로서, 본 발명은 토사자 추출물 또는 그의 분획물을 유효 성분으로 포함하는 갱년기성 심혈관계 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
본 발명에서 사용되는 용어, "토사자 (Cuscuta japonica Chois)"란, 메꽃과에 속하는 한해살이 덩굴성 식물인 새삼의 씨앗을 말하며, 새삼씨 또는 금사초라고도 한다. 목본식물에 기생하는 식물로 원줄기는 철사와 같고 황적색을 띤다. 줄기의 직경은 1.5 ㎜로 잎은 길이는 2 ㎜ 이하로 비늘 모양이다. 꽃은 백색으로 8 내지 9월에 피고 종자는 토사자라 하여 약재로 이용된다. 상기 토사자는 갱년기성 심혈관계 질환의 치료용도로는 알려진 바가 없으며, 이는 본 발명자들에 의해서 최초로 규명되었다. 본 발명에서 토사자는 상업적으로 판매되는 것을 구입하거나, 자연에서 채취 또는 재배된 것을 사용할 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어, "추출물"이란, 상기 토사자의 추출물을 의미한다. 상기 추출물은 각 성분의 분쇄물을 건조 중량의 약 5 내지 30배, 바람직하게는 약 10 내지 20배에 달하는 부피의 물, 메탄올, 에탄올 등과 같은 탄소수 1(C1)내지 4(C4)의 저급 알콜과 같은 극성 용매 또는 이들의 약 1:0.1 내지 1:10의 혼합비를 갖는 혼합용매로 용출할 수 있으며, 추출 온도는 20℃ 내지 100℃, 바람직하게는 60℃ 내지 100℃에서, 추출기간은 약 1시간 내지 4일 동안 열수 추출, 냉침 추출, 환류 냉각 추출, 여과 추출 또는 초음파 추출 등의 추출 방법을 사용하여 추출한 추출물일 수 있으나, 본 발명의 심혈관계 질환의 예방 또는 치료 효과를 나타낼 수 있는 추출물인 한, 이에 제한되지 않고, 추출액, 추출액의 희석액 또는 농축액, 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 또는 이들 조정제물 또는 정제물을 모두 포함할 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어, "분획물"이란, 여러 다양한 구성 성분들을 포함하는 혼합물로부터 특정 성분 또는 특정 성분 그룹을 분리하기 위하여 분획을 수행하여 얻어진 결과물을 의미한다.
본 발명에서 상기 분획물을 얻는 분획 방법은 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용하는 방법에 따라 수행될 수 있다. 다양한 용매를 처리하여 수행하는 용매 분획법, 일정한 분자량, 컷-오프 값을 갖는 한외여과막을 통과시켜 수행하는 한외여과 분획법, 다양한 크로마토그래피(크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작한 것)를 수행하는 크로마토그래피 분획법, 및 이의 조합 등이 될 수 있다. 본 발명의 일 실시예에서는 토사자를 추출하여 얻은 추출물에 소정의 용매를 처리하여 상기 추출물로부터 분획물을 얻는 방법을 사용하였다. 본 발명에서 상기 분획물을 얻는데 사용되는 용매의 종류는 특별히 제한되지 않으며, 당해 기술 분야에서 공지된 임의의 용매를 사용할 수 있다. 상기 분획 용매의 비제한적인 예로는 물, 알코올 등의 극성 용매: 헥산 (Hexane), 에틸아세테이트 (Ethyl acetate), 클로로포름 (Chloroform), 디클로로메탄 (Dichloromethane) 등의 비극성 용매 등을 들 수 있다. 이들은 단독으로 사용되거나 2종 이상 혼합하여 사용될 수 있다. 상기 분획 용매 중 알코올을 사용하는 경우에는 바람직하게는 C1내지 C4의 알코올을 사용할 수 있다.
일 예로, 상기 분획물은 토사자 추출물을 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올, 헥산, 에틸아세테이트, 및 이들의 혼합 용매로 구성되는 군으로부터 선택되는 용매로 분획하여 제조한 것일 수 있다. 다른 일 예로, 상기 분획물은 토사자 추출물을 물, 헥산, 에틸아세테이트 또는 부탄올로 분획하여 제조한 것일 수 있다. 또한, 열수에 의해 추출한 것일 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어, "갱년기성 심혈관계 질환"이란, 여성의 폐경기에 난소 기능저하로 인한 생체내의 순환계 시스템의 이상, 기능장애, 손상 등의 다양한 원인으로 인하여 발생되는 직접적인 질환뿐만 아니라, 이러한 직접적인 질환에 의해 파생되는 2차적 질환을 포괄적으로 의미한다. 이러한 갱년기성 심혈관계 질환 중에서도 혈전생성에 의해 유발되는 질환으로는, 바람직하게는 뇌졸증, 심근경색, 뇌출혈, 심부전증, 뇌혈전증, 심장마비, 혈관재협착 및 동맥경화증으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명에서 갱년기성 심혈관계 질환은 폐경기 여성에게서 나타나는 난소 기능저하로 여성호르몬 분비이상이 발생하여 이로 인해, 심장과 주요 동맥에서 발병하는 질환일 수 있으며, 상기 갱년기성 심혈관 질환은 혈전생성에 의해 발병될 수 있다. 그러나, 이를 치료하기 위해, 폐경기 여성 또는 자궁이 없는 여성에게 에스트로겐-프로게스테론, 또는 에스테로겐을 투여하는 여성호르몬 요법을 수행할 경우, 유방암, 관상동맥질환, 뇌졸증, 정맥혈전증 등이 발생 위험성이 높아진다는 부작용이 보고되고 있어 여성호르몬 요법 치료가 제한되고 있다.
본 발명의 일 실시예에서 토사자 추출물을 포함하는 조성물이 유방암세포의 증식에는 영향을 미치지 않고, 갱년기성 혈전생성을 억제하는 효과를 나타내었다.
구체적으로, 양성대조군인 β-에스트라디올이 유방암세포를 큰 폭으로 증식시키는 반면에, 토사자는 유방암 세포의 증식에 영향을 미치지 않는 것으로 나타났다. 또한, 갱년기성 혈전유발 모델동물을 이용한 실험을 통해, 토사자 추출물을 투여한 군에서 혈전 생성시간이 11.67 ± 0.58을 나타내었고, 토사자 추출물을 투여하지 않은 모델동물군에서는 혈전 생선시간이 7.00 ± 1.41를 나타내어, 토사자 추출물 투여군이 1.67배 혈전 생성시간이 증가함을 확인함으로써, 혈전생성을 억제하는 효능을 확인하였다(도 2). 따라서, 본 발명의 약학 조성물은 유방암세포의 증식에 영향을 미치지 않고, 또한, 혈전생성을 억제함으로써 갱년기성 심혈관계 질환 치료에 대한 순응도를 높이고, 치료에 동반되는 부작용을 완화하여 환자의 삶의 질을 높일 수 있을 것으로 기대된다.
또한, 본 발명의 상기 조성물이 유방암세포 증식에 영향을 미치지 않는 다는 것을 확인함으로써 유방암을 유발시키지 않는 심혈관계 질환의 예방 또는 치료제로서 사용될 수 있고, 또한, 천연물로부터 유래된 것이어서 체내에 심각한 자극을 가한다거나 유해한 작용을 유발함이 없이 안정하게 사용될 수 있는 이점이 있다.
본 발명에서 사용되는 용어, "예방"이란, 본 발명에 따른 갱년기성 심혈관계 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 개체에 투여하여 심혈관계 질환의 발병을 억제하거나 지연시키는 모든 행위를 의미한다.
본 발명에서 사용되는 용어, "치료"란, 본 발명의 상기 조성물을 갱년기성 심혈관계 질환 발병의 의심 개체에 투여하여 심혈관계 질환의 증세가 호전되도록 하거나 이롭게 되도록 하는 모든 행위를 의미한다.
본 발명의 약학 조성물은 총 조성물의 중량 대비 토사자 추출물 또는 그의 분획물을 0.01 내지 100 중량%로 포함할 수 있으며, 구체적으로 1 중량% 내지 80 중량%로 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명에 따른 심혈관계 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물은 약학적으로 허용 가능한 담체를 추가로 포함할 수 있으며, 상기 담체와 함께 제제화되어, 식품, 의약품, 사료 첨가제 및 음용수 첨가제 등으로 제공될 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어, "약학적으로 허용 가능한 담체"란, 생물체를 자극하지 않으면서, 투여되는 화합물의 생물학적 활성 및 특성을 저해하지 않는 담체 또는 희석제를 의미할 수 있다.
본 발명에 사용 가능한 상기 담체의 종류는 특별히 제한되지 아니하며 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용되고 약학적으로 허용되는 담체라면 어느 것이든 사용할 수 있다. 상기 담체의 비제한적인 예로는, 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 알부민 주사 용액, 덱스트로스 용액, 멜토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 등을 들 수 있다 이들은 단독으로 사용되거나 2종 이상을 혼합하여 사용될 수 있다.
또한, 필요한 경우, 항산화제, 완충제 및/또는 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가하여 사용할 수 있으며, 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제, 윤활제 등을 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형, 환약, 캡슐, 과립 또는 정제 등으로 제제화하여 사용할 수 있다.
본 발명에 따른 심혈관계 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물의 투여 방식은 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용하는 방식에 따를 수 있다. 상기 투여 방식의 비제한적인 예로, 조성물을 경구 투여 또는 비경구 투여 방식으로 투여할 수 있다. 본 발명의 상기 심혈관계 질환의 예방, 개선 또는 치료용 약학 조성물은 목적하는 투여 방식에 따라 다양한 제형으로 제작할 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 단일제제로도 사용할 수 있고, 공인된 심혈관계 질환 치료 효과를 가진다고 알려진 약물을 추가로 포함하여 복합제제로 제조하여 사용할 수 있으며, 약제학적으로 허용되는 담체 또는 부형제를 이용하여 제제화함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 다용량 용기내에 내입시켜 제조될 수 있다.
또 하나의 양태로서, 본 발명의 상기 약학 조성물을 갱년기성 심혈관계 질환이 발병되거나 또는 발병될 가능성이 있는 개체에 투여하는 단계를 포함하는 갱년기성 심혈관계 질환의 예방 또는 치료 방법을 제공한다.
이때, 상기 토사자, 추출물, 분획물, 갱년기성 심혈관계 질환, 예방 및 치료의 정의는 상기에서 설명한 바와 같다.
본 발명에서 사용되는 용어, "개체"란, 갱년기성 심혈관계 질환이 발병되었거나 발병할 가능성이 있는 인간을 포함한 쥐, 생쥐, 가축 등의 모든 동물을 의미한다. 구체적인 예로, 인간을 포함한 포유동물일 수 있다.
본 발명의 상기 갱년기성 심혈관계 질환의 예방 또는 치료 방법은 구체적으로, 심혈관계 질환이 발병하였거나 발병할 위험이 있는 인간을 제외한 개체에 상기 약학 조성물을 약학적으로 유효한 양으로 투여하는 단계를 포함할 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어, "약학적으로 유효한 양"이란, 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 환자의 성별, 연령, 체중, 건강상태, 질병의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 방법, 투여 시간, 투여 경로, 및 배출 비율, 치료 기간, 배합 또는 동시에 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적으로 또는 동시에 투여할 수 있다. 그리고 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용을 유발하지 않으면서 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
구체적으로 본 발명의 조성물은 고형분을 기준으로 1일 0.0001 내지 100 mg/체중 kg으로, 더욱 구체적으로 0.001 내지 100 mg/체중 kg으로 투여할 수 있다. 투여는 상기 권장 투여량을 하루에 한 번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다.
본 발명에서 사용되는 용어, "투여"란, 어떠한 적절한 방법으로 환자에게 본 발명의 약학적 조성물을 도입하는 것을 의미하며, 본 발명의 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 경구 또는 비경구의 다양한 경로를 통하여 투여될 수 있다.
상기 조성물을 투여하는 투여 경로 및 투여 방식은 특별히 제한되지 않으며, 목적하는 해당 부위에 상기 조성물을 포함하는 조성물이 도달할 수 있는 한 임의의 투여 경로 및 투여 방식에 따를 수 있다. 구체적으로, 상기 조성물은 경구 또는 비경구의 다양한 경로를 통하여 투여될 수 있으며, 그 투여 경로의 비제한적인 예로는, 구강, 직장, 국소, 정맥내, 복강내, 근육내, 동맥내, 경피, 비측내 또는 흡입 등을 통하여 투여되는 것을 들 수 있다.
또 하나의 양태로서, 본 발명은 갱년기성 심혈관계 질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.
이때, 상기 토사자, 추출물, 분획물, 갱년기성 심혈관계 질환, 예방 및 치료의 정의는 상기에서 설명한 바와 같다.
상기 토사자는 천연 물질로서 오랫동안 사용되어 안정성이 입증되었으며, 상식할 수 있으면서도 심혈관계 질환의 예방 또는 개선을 도모할 수 있는 식품의 형태로 제조되어 섭취할 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어. "개선"이란, 상기 갱년기성 심혈관계 질환의 치료되는 상태와 관련된 다양한 파라미터, 예를 들면, 증상의 정도, 회복시간 등을 감소시키는 모든 행위를 의미한다.
상기 식품의 종류는 특별히 제한되지 아니하며, 통상적인 의미에서의 식품을 모두 포함할 수 있다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 비제한적인 예로는 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올 음료 및 비타민 복합제 등을 들 수 있다. 상기 조성물을 식품 첨가물로 사용할 경우, 상기 조성물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함게 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다.
상기 식품 조성물은 식품학적으로 허용가능한 담체를 포함할 수 있다.
상기 식품 조성물은 건강기능식품인 것일 수 있다. 건강기능식품 (functional food)이란, 특정 보건용 식품 (food for special health, FoSHU)과 동일한 용어로, 영양 공급 외에도 생체조절기능이 효율적으로 나타나도록 가공된 의학, 의료효과가 높은 식품을 의미하는데, 상기 식품은 심혈관계 질환의 예방 또는 개선에 유용한 효과를 얻기 위하여 정제, 켑슐, 분말, 과립, 액상, 환 등의 다양한 형태로 제조될 수 있다.
이때, 상기 식품에 포함되는 추출물의 함량은 특별히 이에 제한되지 않으나, 식품 조성물의 총 중량에 대하여 0.01 내지 100 중량%, 보다 바람직하게는 1 내지 80 중량%로 포함될 수 있다. 식품이 음료인 경우에는 100 mL기준으로 1 내지 30 g, 바람직하게는 3 내지 20 g의 비율로 포함될 수 있다.
상기 건강기능식품은 당업계에서 통상적으로 사용되는 방법에 의하여 제조가능하며, 상기 제조 시에는 당업계에서 통상적으로 첨가하는 원료 및 성분을 첨가하여 제조할 수 있다. 또한, 일반 약품과는 달리 식품을 원료로 하여 약품의 장기 복용 시 발생할 수 있는 부작용 등이 없는 장점이 있고, 휴대성이 뛰어날 수 있다.
또한, 상기 식품 조성물은 식품 조성물에 통상 사용되어 냄새, 맛, 시각 등을 향상시킬 수 있는 추가 성분을 포함할 수 있다. 예들 들어, 비타민 A, C, D, E, B1, B2, B6, B12, 니아신(niacin), 비오틴(biotin), 폴레이트(folate), 판토텐산(panthotenic acid) 등을 포함할 수 있다. 또한, 아연(Zn), 철(Fe), 칼슘(Ca), 크롬(Cr), 마그네슘(Mg), 망간(Mn), 구리(Cu), 크륨(Cr) 등의 미네랄; 및 라이신, 트립토판, 시스테인, 발린 등의 아미노산을 포함할 수 있다.
또한, 상기 식품 조성물은 방부제(소르빈산 칼륨, 벤조산나트륨, 살리실산, 데히드로초산나트륨 등), 살균제(표백분과 고도 표백분, 차아염소산나트륨 등), 산화방지제(부틸히드록시아니졸(BHA), 부틸히드록시톨류엔(BHT) 등), 착색제(타르색소 등), 발색제(아질산 나트륨, 아초산 나트륨 등), 표백제(아황산나트륨), 조미료(MSG 글루타민산나트륨 등), 감미료(둘신, 사이클레메이트, 사카린, 나트륨 등), 향료(바닐린, 락톤류 등), 팽창제(명반, D-주석산수소칼륨 등), 강화제, 유화제, 증점제(호료), 피막제, 검기초제, 거품억제제, 용제, 개량제 등의 식품 첨가물(food additives)을 포함할 수 있다. 상기 첨가물은 식품의 종류에 따라 선별되고 적절한 양으로 사용될 수 있다.
본 발명의 식품 조성물의 일 예로 건강음료 조성물로 사용될 수 있으며, 이 경우 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드; 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드; 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드; 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜일 수 있다. 감미제는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제; 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 건강음료 조성물 100 mL 당 일반적으로 약 0.01 0.04 g, 구체적으로 약 0.02 0.03 g이 될 수 있다.
상기 외에 건강음료 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산, 펙트산의 염, 알긴산, 알긴산의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올 또는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 천연 과일주스, 과일주스 음료, 또는 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 혼합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 건강음료 조성물 100 중량부당 0.01 ~ 0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
본 발명의 토사자 추출물을 유효 성분으로 포함하는 조성물은 혈전생성을 억제하여 갱년기성 심혈관계 질환을 효과적으로 예방, 개선, 및 치료할 수 있는 효과가 있다.
또한, 상기 본 발명의 토사자 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 천연 약제로서 갱년기성 심혈관계 질환의 예방 또는 개선을 위한 식품 조성물, 가축 사료용 조성물, 화장료 조성물, 및 의약외품 조성물을 포함한 다양한 제품에 응용될 수 있다.
또한, 본 발명의 조성물은 천연물로부터 유래된 것이어서 심혈관계 질환의 예방, 치료, 및 개선 효능 이외에 체내에 심각한 자극을 가한다거나 유해한 작용을 유발함이 없이 안전하게 사용할 수 있다.
도 1은 MCF-7 세포주를 이용하여 에스트로겐 (17β-에스트라디올)과 토사자 추출물의 유방암세포 증식에 미치는 영향을 평가한 결과를 나타내는 그래프이다.
도 2는 갱년기성 혈전유발 모델동물을 이용하여 토사자 추출물의 항혈전 활성을 검토한 결과를 나타내는 그래프이다(Sham; 난소적출 랫드, OVX-대조군; 난소적출 후 혈전유발 렛드, 토사자 추출물 투여군; 난소적출 혈전유발 마우스에 토사자 추출물 투여한 랫드, 상기 결과는 평균 ± SD(N=3)로 나타내었다. 통계학적 유의 값은 스튜던트티이검정 (Student's t-test)에 의해 대조군 데이터와 비교하였다(**p < 0.01)).
도 2는 갱년기성 혈전유발 모델동물을 이용하여 토사자 추출물의 항혈전 활성을 검토한 결과를 나타내는 그래프이다(Sham; 난소적출 랫드, OVX-대조군; 난소적출 후 혈전유발 렛드, 토사자 추출물 투여군; 난소적출 혈전유발 마우스에 토사자 추출물 투여한 랫드, 상기 결과는 평균 ± SD(N=3)로 나타내었다. 통계학적 유의 값은 스튜던트티이검정 (Student's t-test)에 의해 대조군 데이터와 비교하였다(**p < 0.01)).
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세히 설명한다. 다만, 이들 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것에 불과하므로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 한정되는 것으로 해석되어서는 안된다.
실시예 1: 토사자 추출물의 제조
본 발명에 따른 토사자는 대전 백재당으로부터 구입하였다. 상기 토사자 추출물을 제조하기 위해, 토사자 시료양의 10배의 물 또는 에탄올을 첨가한 후, 70℃에서 12시간 처리하여 토사자 열수 추출물을 얻었다. 상기 토사자 추출물을 0.4μm 필터로 여과한 후, 진공회전농축기 (rotary evaporator)를 이용하여 농축 및 동결건조하여 토사자 추출물을 제조하였다.
실시예
2:
MCF
-7 세포주를 이용한 에스트로겐 및 토사자 추출물의 유방암세포 증식에 미치는 영향 검토
실시예 2-1. MCF-7 세포배양
인간 유방상피조직 유래 암세포인 MCF-7 세포주 (Human breast adenocarcinoma cell line)는 한국세포주 은행으로부터 분양받았다. 세포배양을 위해, 10% 소태아혈청(fetal bovine serum, FBS)과 1% 페니실린-스트렙토마이신 (penicilin-streptomycin)을 포함하는 RPMI 1640 (Roswell Park Memorial Institute)배지에서, 37℃, 5%의 CO2조건에서 세포를 배양하였다. 상기 세포배양액을 2일에 한 번씩 교체하였고, 세포가 100 mm 페트리 디쉬에서 80% 내지 90%의 세포밀집도 (cell confluence)에 이르면 계대배양을 하였다. 계대 후, 에스트로겐 활성을 측정하기 위해 사이토미트리 (Cytometry)를 이용하여 세포수를 측정하고 96웰 플레이트의 각 웰에 1.0×105의 세포밀도로 접종 (seeding)하고 나머지는 동결보존하였다.
실시예 2-2. 유방암세포 증식에 미치는 영향 검토
MCF-7 세포에 대한 토사자 열수 추출물이 유방암세포 증식에 영향을 미치는지의 여부를 평가를 위해 17β-에스트라디올 (17β-estradiol)을 양성대조군으로 사용하였다. MCF-7 세포 배양액의 소태아혈청 (fetal bovine serum, FBS)에 포함되어 있는 스테로이드 호르몬을 제거하기 위하여 덱스트란 코팅된 활성탄 (Dextran-coated charcoal, Sigma, USA)으로 미리 처리한 5% Charcoal stripped FBS를 포함하는 RPMI 1640배지를 이용하여 48시간 배양하였다. 96웰 플레이트에 1.0×104세포/웰로 분주하여 24시간 동안 배양하였다. 그 다음, 토사자 추출물을 10μg/mL 농도로 처리하고 24시간 배양 후 10μL의 분석시약 (assay reagent)을 첨가하여 배양기에서 3시간 반응시킨 다음, 마이크로플레이트 리더 (croplate reader)를 이용하여 450 nm에서의 흡광도 변화를 측정하여 대조군에 대한 세포생존율을 백분율로 나타내었다(도 1).
도 1은 MCF-7 세포주를 이용하여 에스트로겐 (17β-에스트라디올)과 토사자가 유방암세포 증식에 영향을 미치는지의 여부를 검토한 그래프이다.
상기 도 1에서 나타내는 바와 같이, 스테로이드 호르몬을 제거한 배지에서 대조군과 비교하여 양성대조군인 17β-에스트라디올 (17β-estradiol)첨가군에서는 MCF-7 세포수가 큰 폭으로 증가함을 확인할 수 있었다. 이에 반해, 토사자 추출물 첨가군은 유방암세포 증식에 영향을 미치지 않았다. 이와 같은 결과로부터, 17β-에스트라디올은 기존의 호르몬 치료로 인한 부작용으로 보고되고 있는 바와 같이, 유방암세포를 큰 폭으로 증식시켰으나, 토사자 추출물은 유방암세포 증식에 영향을 미치지 않음을 확인하여, 유방암 발생의 부작용을 유발하지 않는 갱년기성 질환의 예방 및 치료제로서 활용될 수 있을 것으로 기대된다.
실시예
3:
갱년기성
혈전유발 모델동물을 이용한 토사자 추출물의
항혈전
활성검색
실시예
3-1. 난소적출 갱년기 동물모델 제작
모델동물은 7주령의 SD (Sprague Dawley)암컷 렛드를 오리엔트바이오로부터 구입하여 1주일간 기본식이로 적응시킨 후, 난괴법 (randomized block design)에 의해 Sham (정상대조군)군과 난소적출군으로 군분리를 실시하였다. 난소적출을 위한 동물마취는 2% 아이소풀루란 (isoflurane)과 질소산소의 비율이 7:3인 혼합기체의 흡입마취제로 유도하였고, 수술을 진행하는 동안 일정한 체온을 유지하기 위해 전기 담뇨 (heating pad)의 온도를 37℃로 유지하였다. 마취된 동물을 뉘이고 고정시킨 후, 양쪽 좌우 난소주변 털 날림 및 감염방지를 위하여 면도를 시행하였다. 척추 좌우 1cm를 절개한 후, 난소주변의 체지방을 잡아 난소낭에 싸인 난소를 봉합사로 고정한 후 제거하였다. 복막과 근층은 흡수성 봉합사로 봉합하고, 피부는 비흡수성 봉합사로 봉합하였다. 봉합 후, 모델동물을 온도 24±2℃에서 습도 55% 내지 60%를 유지하는 사육조건에서 물과 식이를 자유공급시키며 사육하였다. 상기 난소적출 시술 1주일 후부터 생리식염수를 2주일간 투여한 OVX-대조군 모델동물 및 토사자 열수 추출물을 생리식염수에 녹여 2주간 매일 100 mg/kg씩 경구투여한 토사자 모델동물을 제작하였다.
실시예 3-2. 난소적출 랫트의 갱년기 유발 여부 평가
상기 랫트의 갱년기 유발 여부를 확인하기 위하여 자궁 무게 및 여성호르몬의 일종인 17β-에스트라디올(17β-estradiol)의 혈청 내 수치를 측정하였다. 구체적으로, 상기 랫트를 희생시킨 후 자궁을 적출하여 무게를 측정하였으며, 혈청 17β-에스트라디올 농도는 RIA kit(Linco 사)로 측정하였다. 상술한 바에 따라 측정한 결과는 하기 표 1에 정리하였다.
(난소유지 정상대조군; 난소적출하지 않은 정상대조군, Sham군; 난소적출 렛드, 양성대조군; 난소적출 렛드에 17β-에스트라디올 투여군, 모든 값은 평균 ± SD로 나타내었다. 각 결과의 통계적 유의성은 Tukey test를 통해 확인하였으며, 같은 열에서 a, b 로 나타나는 서로 다른 첨자는 p<0.05에서 유의한 차이가 있음을 의미한다.)
상기 표 1에서 나타내는 바와 같이, 난소유지 정상 대조군 랫드에 비하여 난소를 적출한 Sham군에서 혈청 17β-에스트라디올 수치가 현저히 감소함을 확인하였고, 이에 반해 호르몬을 투여한 난소적출 양성 대조군에서는 정상 대조군 랫드와 호르몬 수치가 비슷함을 확인하였다.
상기 결과를 통해, 난소를 제거한 랫트는 갱년기가 잘 유도되었음을 확인할 수 있었다.
실시예 3-3. 혈전 유도 및 토사자의 항혈전 활성검색
토사자 열수 추출물의 투여에 의한 항혈전 활성을 측정하기 위해, 혈전유발 모델동물을 2% 아이소풀루란과 질소산소 비율이 7:3인 혼합기체로 흡입마취를 유도하고, 실험을 진행하는 동안 일정한 체온을 유지하기 위하여 전기담요 (heating pad)의 온도를 37℃로 유지하였다. 모델동물의 정중경부를 절개하고 미주신경과 주변혈관이 손상되지 않도록 주의하여 우측 경동맥을 노출시킨 후, FeCl3를 적신 2×2 mm의 여과지 (filter paper)에 3분간 접촉시켜 혈전을 유도하였다. 여과지를 제거한 다음, 생리식염수로 닦아내고 혈류측정기를 이용하여 최대 30분 동안 혈류측정을 실시하였다. chart(ADI, Australia)프로그램을 사용하여 혈전 생성시간을 분석은 하였으며, 측정값의 기본단위는 조직관류 단위 (tissue perfusion unit, TPU)로, 혈전 생성시간은 TPU값이 0까지 완전히 떨어진 시점을 기준으로 하였다(도 2). 도 2는 갱년기성 혈전유발 모델동물을 이용하여 토사자 추출물의 항혈전 활성을 검토한 결과를 나타내는 그래프이다.
상기 도 2에서 나타내는 바와 같이, 혈전을 유발시키지 않은 Sham군 (정상대조군)의 혈전 생성시간인 30.00 ± 0.00분과 비교하여, 난소를 적출하고 생리식염수를 2주간 투여하여 혈전을 유발시킨 OVX-대조군에서는 혈전 생성시간이 7.00 ± 1.41분으로 유의하게 감소함을 확인하여, 갱년기성 혈전유발 모델동물을 확립하였음을 확인하였다.
또한, 상기 갱년기성 혈전유발 모델동물에 토사자 추출물을 2주간 투여한 군의 혈전 생성시간은 11.67 ± 0.58분을 나타내어 OVX-대조군과 비교해 4.6분 이상 혈전시간이 증가함으로써, 1.67배 이상 유의하게 증가되었다. 이러한 결과로부터 토사자 추출물이 혈전생성을 억제하는 우수한 효능을 나타냄을 확인하였다. 따라서, 토사자 추출물 또는 그의 분획물은 심혈관계 질환의 예방 및 치료, 개선을 위하여 효과적으로 사용할 수 있음을 알 수 있었다.
이와 같은 결과를 종합해 볼 때, 상기 토사자는 유방암세포 증식에 영향을 미치지 않고, 또한, 갱년기성 혈전생성을 억제하는 효과를 나타내므로, 기존의 호르몬 치료제의 사용으로 인해 유발되는 유방암, 관상동맥질환, 뇌졸증, 혈전증 등의 부작용을 발생시키지 않고, 심혈관계 질환의 예방 또는 치료에 사용될 수 있다. 즉, 상기 결과로부터, 토사자는 장기나 조직의 부위에 따라 작용이 다를 가능성이 있으므로, 유방암을 유발하지 않음과 동시에, 심혈관계 질환을 예방 또는 치료할 수 있는 선택적 에스트로겐 수용체 조절제 (Selective estrogen receptor modulator, SERM)로서 사용될 것이 기대된다.
이상의 설명으로부터, 본 발명이 속하는 기술분야의 당업자는 본 발명이 그 기술적 사상이나 필수적 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 이와 관련하여, 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적인 것이 아닌것으로서 이해해야만 한다. 본 발명의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 특허 청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 등가 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.
Claims (8)
- 토사자 (Cuscuta japonica Chois)추출물 또는 그의 분획물을 유효성분으로 포함하는 갱년기성 심혈관계 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 토사자 추출물은 물, C1내지 C4의 알코올 및 이들의 혼합용매로 이루어진 군에서 선택되는 용매로 추출하여 수득한 것인 약학 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 토사자 추출물은 토사자를 물 또는 에탄올로 추출하여 수득한 것인 약학 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 토사자 추출물 또는 그의 분획물은 혈전생성을 억제하는 것인 약학 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 갱년기성 심혈관계 질환은 혈전생성에 의해 유발되는 것인 약학 조성물.
- 제5항에 있어서,
상기 혈전생성에 의해 유발되는 심혈관계 질환은 뇌졸증, 심근경색, 뇌출혈, 심부전증, 뇌혈전증, 심장마비, 혈관재협착 및 동맥경화증으로 이루어진 군에서 선택되는 질환인 약학 조성물.
- 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 따른 약학 조성물을 갱년기성 심혈관계 질환이 발병되거나 또는 발병될 가능성이 있는 인간을 제외한 개체에 투여하는 단계를 포함하는 갱년기성 심혈관계 질환의 예방 또는 치료방법.
- 토사자 추출물 또는 그의 분획물을 유효성분으로 포함하는 갱년기성 심혈관계 질환 예방 또는 개선용 식품 조성물.
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