KR20170037690A

KR20170037690A - 미강 또는 발효 미강 추출물을 유효성분으로 함유하는 혈행개선용 조성물

Info

Publication number: KR20170037690A
Application number: KR1020150121280A
Authority: KR
Inventors: 박성규
Original assignee: 박성규
Priority date: 2015-08-27
Filing date: 2015-08-27
Publication date: 2017-04-05

Abstract

본 발명은 미강(Rice Bran) 또는 발효 미강(Fermented Rice Bran) 추출물을 유효성분으로 함유하는 혈행개선용 조성물에 관한 것으로, 구체적으로, 본 발명의 미강 또는 발효 미강 추출물은 우수한 혈액응고 저해활성 및 인간 혈소판 응집저해 효과를 나타내고, 특히 미강 및 발효 미강의 열수 추출물은 미강 및 발효 미강 에탄올 추출물과 비교하여, 적혈구의 용혈 활성이 나타내지 않아, 세포독성이 없으므로, 인체에 안전한 혈전 질환 또는 혈행개선용 조성물로 사용될 수 있다.

Description

미강 또는 발효 미강 추출물을 유효성분으로 함유하는 혈행개선용 조성물{Composition for enhancing blood circulation containing the extract of Rice Bran and Fermented Rice Bran as an active ingredient}

본 발명은 미강(Rice Bran) 또는 발효 미강(Fermented Rice Bran) 추출물을 유효성분으로 함유하는 혈행개선용 약학적 조성물, 및 건강식품에 관한 것이다.

현대사회는 산업화로 인한 생활수준의 향상과, 라이프 스타일의 변화로 전통적인 식생활이 위협받고 있으며, 이러한 식생활 변화에 따라, 다양한 성인병이 증가되고 있다. 특히 최근에는 환경으로부터의 다양한 독성물질의 증가로 인한 간 손상 및 고지방 식이 섭취와 스트레스, 인구의 고령화로 인한 혈행 장애와 관련된 뇌, 심혈관계질환이 급증하고 있는 실정이다. 따라서 이러한 문제점을 극복하고자 다양한 항혈전 효능을 가진 건강지향성 식품 및 의약품들이 개발되고 있으며, 최근에는 부작용이 없으면서, 안전성이 확보된 천연 한방약재, 처연 곡류 부산물을 이용한 혈행 개선용 건강기능성 제품 개발에 관심이 집중되고 있다.

실제 우리나라는 전통적으로 다양한 한방약재를 추출하거나 분쇄하여 의료용 음료 혹은 건강기능성 환 등으로 제조하여 건강을 지키고 질병을 치료하는 데 사용하여 왔으며, 이러한 한방 약재의 이용은 과거에는 종교, 정치, 경제적 여건에 크게 좌우되어 왔으며, 일부 고소득층의 특수용도식품으로 한정되어 이용되어 왔다. 그러나 최근에는 생활수준의 향상과 건강에 대한 관심 증대로 일반인의 일상생활에서도 한방약재를 이용한 식 음료 및 의약품이 광범위하게 사용하고 있다.

외떡잎식물 벼목 화본과의 한해살이 풀인 벼(Oryza sativa L.)는 전 세계 인구의 2/3가 주식으로 사용하는 주요한 식량자원이다. 벼를 탈곡한 후, 왕겨를 벗긴 현미는 식감을 더욱 우수하게 하기 위해 다시 도정을 하게 된다. 이때 현미의 과피, 종피 및 호분층이 제거되어 백미로 바뀌는 데, 미강이라 함은 도정과정에서 부생된 과피, 종피 및 호분층의 혼합분쇄물인 미세 가루를 말하며, 10분 도정의 경우 현미 중량의 약 8%가 부산물로 생성된다.

미강의 성분 및 조성은 현미의 품종, 도정방법 등에 크게 좌우되나, 일반적으로 단백질이 12~16%, 섬유소가 20~25%, 지방이 16~22%로 알려져 있다. 또한, 미강은 비타민 B1, B2, E 등을 다량 함유하고 있으며, 칼슘, 인, 마그네슘 등 미네랄 함량이 높으며 phytic acid, gamma-oryzanol, alpha-tocopherol, alpha-tocotrienol 및 다양한 phenolic acid를 다량 함유하고 있어, 항산화 및 항염증 활성, 암세포 성장 억제작용이 우수하다고 보고되어 있으며, 특히 미강으로부터 추출한 미강유의 경우 저밀도 지단백 콜레스테롤 감소효과가 보고된 바 있다. 미강의 알려진 유용성분으로는 면역증강활성이 보고된 arabinoxylan, 항암, 항비만, 항당뇨의 이용가능성이 큰 phytic acid, 자외선 방어효과, 항균효과가 있는 ferulic acid, 강한 항산화작용이 있고 항궤양, 항당뇨, 면역조절능, 갱년기 장애 및 자율신경 실조증 등에 효과가 있는 것으로 알려진 γ-oryzanol, 미강유에 많이 포함되어 있으며 항산화, 항암, 혈압강하 효과가 있는 비타민 E아류인 tocotrienol 신경안정 효과가 있는 γ-amino butyric acid (GABA) 등이 있으며 그 외에도 isovitexin, tricin, octacosanol, phytosterol 및 squalene이 알려져 있다.

국내에서의 미강 생산량은 연간 50만 톤으로 추정하고 있으며, 이 중에서 약 20~30%만이 미강유 추출에 사용되며, 나머지는 사료나 퇴비로 이용되고 있다. 최근에는 미강의 유용 생리기능 및 높은 식이섬유 함량이 보고되면서 다이어트 소재 및 가공식품의 부재료로 이용하고자 하는 연구가 활발히 진행되고 있다.

이에, 본 발명자들은 인체에 무해한 천연물을 이용한 혈행개선용 조성물을 개발하기 위하여 노력한 결과, 미강 및 발효 미강 추출물이 우수한 혈액응고 저해활성 및 인간 혈소판 응집저해 효과를 나타내고, 특히 미강 및 발효 미강의 열수 추출물은 미강 및 발효 미강 에탄올 추출물과 비교하여, 적혈구의 용혈 활성이 나타내지 않아, 세포독성이 없는 것을 확인함으로써, 본 발명의 미강 및 발효 미강의 열수 추출물은 혈전 질환 치료 또는 혈행 개선용 조성물의 유효성분으로 유용하게 사용될 수 있다.

본 발명의 목적은 미강(Rice Bran) 또는 발효 미강(Fermented Rice Bran) 추출물을 유효성분으로 함유하는 혈전 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물, 건강기능식품, 혈행개선용 조성물에 관한 것이다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 미강(Rice Bran) 또는 발효 미강(Fermented Rice Bran) 추출물을 유효성분으로 함유하는 혈전 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 미강 또는 발효 미강 추출물을 유효성분으로 함유하는 혈전 질환 예방 및 개선용 건강식품을 제공한다.

또한, 본 발명은 미강 또는 발효 미강 추출물을 유효성분으로 함유하는 혈행개선용 약학적 조성물을 제공한다.

아울러, 본 발명은 미강 또는 발효 미강 추출물을 유효성분으로 함유하는 혈행개선용 건강기능식품을 제공한다.

본 발명의 미강(Rice Bran) 또는 발효 미강(Fermented Rice Bran) 추출물은 우수한 혈액응고 저해활성 및 인간 혈소판 응집저해 효과를 나타내고, 특히 미강 및 발효 미강의 열수 추출물은 미강 및 발효 미강 에탄올 추출물과 비교하여, 적혈구의 용혈 활성이 나타내지 않아, 세포독성이 없으므로, 인체에 안전한 혈전 질환 또는 혈행개선용 조성물로 사용될 수 있다.

도 1은 미강(Rice Bran) 또는 발효 미강(Fermented Rice Bran) 미강 사진을 나타낸 도이다.
도 2는 미강의 열수 추출물에 대한 혈소판 응집저해능을 나타낸 도이다.
도 3은 발효 미강의 열수 추출물에 대한 혈소판 응집저해능을 나타낸 도이다.

이하, 본 발명을 보다 상세히 설명한다.

본 발명은 미강(Rice Bran) 또는 발효 미강(Fermented Rice Bran) 추출물을 유효성분으로 함유하는 혈전 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

상기 미강 추출물은 하기의 단계들을 포함하는 방법에 의해 제조되는 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다:

1) 미강 또는 발효 미강에 추출용매를 가하여 추출하는 단계;

2) 단계 1)의 추출물을 여과하는 단계;

3) 단계 2)의 여과물을 감압 농축하는 단계; 및

4) 단계 3)의 농축물을 건조하는 단계.

본 발명의 제조방법에 있어서, 상기 단계 1)의 추출용매는 물, 알코올 또는 이의 혼합물을 사용하는 것이 바람직하다. 상기 알코올로는 C₁ 내지 C₂의 저급 알코올 이용하는 것이 바람직하며, 저급 알코올로는 에탄올 또는 메탄올을 이용하는 것이 바람직하다. 다만, 본 발명에서는 세포독성으로 인해, 열수 추출물을 이용하는 것이 가장 바람직하다.

추출방법으로는 진탕추출, Soxhelt 추출 또는 환류 추출을 이용하는 것이 바람직하나, 이에 한정하지 않는다. 상기 추출용매를 건조된 미강 또는 발효미강 분량의 1 내지 10배 첨가하여 추출하는 것이 바람직하며, 2 내지 3배 첨가하여 추출하는 것이 더욱 바람직하다. 추출 온도는 20℃ 내지 100℃인 것이 바람직하며, 20℃ 내지 50℃인 것이 가장 바람직하나, 이에 한정하지 않는다. 또한 추출시간은 1 내지 48시간이 바람직하며, 2 내지 10시간이 더욱 바람직하고, 2 내지 5시간이 가장 바람직하나, 이에 한정하지 않는다. 아울러 추출 횟수는 1 내지 5회인 것이 바람직하며, 3 내지 4회 반복 추출하는 것이 더욱 바람직하고, 3회인 것이 가장 바람직하나, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 제조방법에 있어서, 단계 3)의 감압농축은 진공 감압 농축기 또는 진공회전증발기를 이용하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 또한, 건조는 감압건조, 진공건조, 비등건조, 분무건조 또는 동결건조하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다.

상기 발효 미강은 발효원액, 발효원액을 감압증류 등의 방식으로 얻은 농축된 발효액, 또는 발효 원액을 동결건조 등의 방식으로 얻은 고형상의 발효분말을 의미한다.

상기 미강 발효물 제조시 미강에 접종되는 미생물 즉, 광합성세균, 젖산균 및/또는 효모의 탄소원과 에너지원은 당업계에 공지되어 있으며, 당업계에 공지된 임의의 것을 사용할 수 있는데, 통상은 당밀, 올리고당, 유당, 포도당, 과당, 설탕, 이들의 혼합물 등이 사용될 것이다. 이러한 탄소원과 에너지원은 의도한 발효 시간, 발효 정도, 미강의 사용량 등을 고려하여 임의의 범위로 첨가될 수 있다. 통상은 미강 100 중량부 기준 20 중량부 내지 120 중량부의 범위로 첨가될 것이다. 또한, 상기 탄소원과 에너지원 이외에 질소원, 무기염류, 생장소(growth factor) 등을 추가로 첨가할 수 있는데, 이들 질소원, 무기염류, 생장소 등도 당업계에 공지되어 있으며, 당업계에 공지된 임의의 것을 사용할 수 있다.

또한, 상기 "광합성세균"은 고등식물과 같이 빛 에너지를 이용하여 탄소 동화작용을 행하는 세균을 말한다. 이러한 광합성세균은 클로로비움속 세균(Chlorobiumsp.), 크로마튬속 세균(Chromatiumsp.), 로도스피릴륨속 세균(Rhodospirillumsp.), 로돕센도모나스속 세균(Rhodopsendomonassp.), 로도박터속 세균(Rhodobactersp.), 로돕슈도모나스속 세균(Rhodopseudomonassp.) 등으로 구분될 수 있는데, 본 발명에는 이들 모든 광합성세균이 사용될 수 있으나, 로돕슈도모나스속 세균 또는 로도박터속 세균이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.

또한, 상기 "젖산균"이란 포도당 등 당류를 분해하여 젖산을 생성하는 미생물을 의미하는데, 락토바실루스속 젖산균(Lactobacillussp.), 스트렙토코쿠스속 젖산균(Streptococcussp.), 페디오코쿠스속 젖산균(Pediococcussp.), 류코노스톡속 젖산균(Leuconostocsp.) 및 비피도박테리움속 젖산균(Bifidobacteriumsp.)을 포함하는 의미이며, 구체적으로는 락토바실루스 엑시도파일러스(Lactobacillusacidophilus), 락토바실루스 플란타룸(Lactobacillusplantarum), 락토바실루스 퍼멘텀(Lactobacillusfermentum), 비피도박테리움 롱검(Bifidobacteriumlongum), 비피도박테리움 비피덤(Bifidobacteriumbifidum) 등을 포함하는 의미이다.

또한, 상기 "효모"는 사카로마이세스속 효모를 의미하는데, 사카로마이세스 루시(Saccharomycesrouxii), 사카로마이세스 세레비시에(Saccharomyces cereviciae), 사카로마이세스 오비폴미스(Saccharomycesoviformis), 사카로마이세스 스테이네리(Saccharomycessteineri) 등을 포함하는 의미이다.

상기 혈전질환은 동맥경화증, 뇌출혈, 뇌졸증 및 뇌경색으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것이 바람직하나, 이에 한정하지 않는다.

본 발명의 구체적인 실시예에서, 본 발명자들은 제공받은 미강 및 발효 미강(도 1 참조)의 열수 추출물 및 에탄올 추출물을 각각 제조한 다음, 추출 수율(표 1 참조)을 확인한 후, 상기 추출물의 혈액응고 저해 효과를 확인한 결과, 본 발명의 미강 및 발효 미강 추출물은 유의적인 혈액응고저해 활성을 나타냄을 확인하였다(표 2 참조).

또한, 본 발명자들은 미강 및 발효 미강 추출물의 혈소판 응집저해 효과를 확인한 결과, 미강(도 2 참조) 및 발효 미강(도 3 참조) 열수 추출물, 및 에탄올 추출물 모두에서 유의적인 혈소판 응집저해 효과를 나타내는 것을 확인하였다.

아울러, 본 발명자들은 미강 및 발효 미강 추출물의 인간 적혈구 용혈 활성을 확인한 결과, 미강 및 발효 미강의 열수 추출물에서는 용혈 활성이 나타나지 않았으나, 에탄올 추출물에서는 모두에서 강한 용혈 활성이 확인되었다(표 5 참조).

따라서, 본 발명의 미강(Rice Bran) 또는 발효 미강(Fermented Rice Bran) 추출물은 우수한 혈액응고 저해활성 및 인간 혈소판 응집저해 효과를 나타내고, 특히 미강 및 발효 미강의 열수 추출물은 미강 및 발효 미강 에탄올 추출물과 비교하여, 적혈구의 용혈 활성이 나타내지 않아, 세포독성이 없으므로, 인체에 안전한 혈전 질환 치료용 조성물로 사용될 수 있다.

발명의 조성물은 경구 또는 비경구 투여(예를 들어, 도포 또는 정맥 내, 피하, 복강 내 주사)할 수 있으나 경구 투여가 바람직하다. 비경구 투여를 위한 제제로는 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 멸균된 수용액, 액제, 비수성용제, 현탁제, 에멀젼, 시럽, 좌제, 에어로졸 등의 외용제 및 멸균 주사제제의 형태로 제형화하여 사용될 수 있으며, 바람직하게는 크림, 젤, 패취, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 또는 카타플 라스마제의 피부 외용 약학적 조성물을 제조하여 사용할 수 있으나, 이에 한정하는 것은 아니다. 국소 투여의 조성물은 임상적 처방에 따라 무수형 또는 수성형일 수 있다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다. 경구 투여를 위한 고형제제에는 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 연질캅셀제, 환 등이 포함된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제, 에어로졸 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.

상기 조성물은 투여를 위해서 미강 또는 발효미강 유효성분 이외에 추가로 약제학적으로 허용 가능한 담체를 1종 이상 포함하여 제조할 수 있다. 약제학적으로 허용 가능한 담체는 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 덱스트로즈 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 1 성분 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형 등으로 제제화할 수 있다.

본 발명에 따른 약제학적으로 허용가능한 첨가제는 상기 조성물에 대해 0.1~90 중량부 포함되는 것이 바람직하다.

본 발명의 조성물의 바람직한 투여량은 체내에서 활성성분의 흡수도, 환자의 연령, 성별 및 비만의 정도에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나 바람직한 효과를 위해서, 경구 투여제의 경우 일반적으로 성인에게 1일에 체중 1㎏당 본 발명의 조성물을 1일 0.0001 내지 100 ㎎/㎏으로, 바람직하게는 0.001 내지 100 ㎎/㎏으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

본 발명의 대사성 질환 치료용 조성물은 미강 또는 발효미강 추출물에 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1종 이상 함유할 수 있다.

본 발명의 미강(Rice Bran) 또는 발효 미강(Fermented Rice Bran) 추출물은 우수한 혈액응고 저해활성 및 인간 혈소판 응집저해 효과를 나타내고, 특히 미강 및 발효 미강의 열수 추출물은 미강 및 발효 미강 에탄올 추출물과 비교하여, 적혈구의 용혈 활성이 나타내지 않아, 세포독성이 없으므로, 인체에 안전한 혈전 질환 예방 및 개선용 건강식품으로 사용될 수 있다.

본 발명의 미강 또는 발효미강 추출물은 식품학적으로 허용된 담체와 혼합하여 식품 조성물로서 제공될 수 있다.

본 발명의 미강 또는 발효미강 추출물을 식품 또는 음료 첨가물로 사용할 경우, 상기 미강 또는 발효미강 추출물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용되고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 상기 미강 또는 발효미강 추출물의 혼합양은 그의 사용목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우, 상기 미강 또는 발효미강 추출물은 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에, 장기간 복용이 가능하다. 상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 초콜릿류, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올 음료 및 비타민 복합제 등이 있다. 음료수로 제형화할 경우에 미강 또는 발효미강 추출물 이외에 첨가되는 액체 성분으로는 이제 한정되지는 않으나, 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드(예, 포도당, 과당 등), 디사카라이드(예, 말토오스, 수크로오스 등) 및 폴리사카라이드(예, 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당), 및 자일리톨, 소르비톨, 에리스리톨 등의 당 알코올이다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ㎖ 당 일반적으로 약 1 내지 20 g, 바람직하게는 약 5 내지 12 g이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제[타우마린, 스테비아 추출물(예, 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등)] 및 합성 향미제(예, 사카린, 아스파르탐 등)를 사용할 수 있다.

다른 양태로서, 본 발명의 식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 증진제 (치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 또한 본 발명의 식품 조성물은 과일 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 단독으로 또는 조합으로 사용될 수 있으며, 이러한 첨가제의 비율은 조성물 전체 중량당 0.001 내지 50 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

또한, 본 발명은 미강 또는 발효 미강 추출물을 유효성분으로 함유하는 혈행개선용 약학적 조성물, 또는 건강식품을 제공한다.

본 발명의 미강(Rice Bran) 또는 발효 미강(Fermented Rice Bran) 추출물은 우수한 혈액응고 저해활성 및 인간 혈소판 응집저해 효과를 나타내고, 특히 미강 및 발효 미강의 열수 추출물은 미강 및 발효 미강 에탄올 추출물과 비교하여, 적혈구의 용혈 활성이 나타내지 않아, 세포독성이 없으므로, 인체에 안전한 혈행개선용 조성물로 사용될 수 있다.

이하 본 발명을 실시예, 실험예 및 제조예에 의해 상세히 설명한다.

단, 하기 실시예, 실험예 및 제조예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예, 실험예 및 제조예에 한정되는 것은 아니다.

< 실시예 1> 실험 재료의 준비

본 발명에서 사용된 미강 및 발효 미강은 (주)알카비즈에서 2015년 5월 제공된 시료로 유기농 미강 1종(RB1)과 이를 발효시켜 제조한 발효미강 1종(FRB2)으로, 도 1에 나타내었다. 한편, 항혈전 활성평가에 사용한 혈장은 시판 control plasma (MD Pacific Technology Co., Ltd, Huayuan Industrial Area, China)를 사용하였으며, PT reagent와 aPTT reagent는 MD Pacific Hemostasis(MD Pacific Technology Co., Ltd, Huayuan Industrial Area, China)의 분석시약을 사용하여 측정하였다. 기타 사용한 시약은 시약급 이상으로 Sigma Co. (St. Louis, MO, USA)의 제품을 구입하여 사용하였다. 실험에 사용한 미강 시료는 안동대학교 식품영양학과에서 보관하였다(voucher specimen 2015-RB1, 2015-FRB2).

< 실시예 2> 통계 분석

본 발명의 실험 결과는 SPSS 21.0 버전을 사용하여 mean±SD로 나타내었으며, 각 군간의 차이는 ANOVA로 분석하였으며, Duncan 다중비교 검증법으로 통계적 유의성 검정을 조사하였다. 유의수준은 p<0.05로 하였다.

< 실시예 3> 미강 및 발효 미강 추출물의 제조

상기 <실시예 1>에서 준비한 미강 및 발효 미강의 열수 추출물을 제조하였다.

구체적으로, 시료 무게에 대해 10배의 증류수를 가한 후 80℃에서 1시간 3회 반복 추출하였으며, 이후 추출액은 filter paper(Whatsman No. 2)로 거른 후 65℃에서 감압 농축(Eyela Rotary evaporator N-1000, Tokyo Rikakikai Co., Ltd. Japan)하여 분말로 조제하였다. 한편, 에탄올 추출물 제조의 경우, 시료 무게에 대해 10배의 95% ethanol(Daejung Chemicals & Metals Co., Ltd. Korea)을 가한 후 상온에서 24시간, 3회 반복 추출하였으며, 추출액은 상기와 동일한 방법으로 50℃에서 감압 건조하여 분말로 조제하였다. 제조된 2종의 열수 추출물 및 2종의 에탄올 추출물들은 DMSO(dimethyl sulfoxide, Sigma Co., USA)에 적당한 농도로 녹여, in-vitro 항혈전 활성 및 적혈구 용혈 활성 평가에 사용하였다.

한편, 미강 및 발효 미강의 추출효율은 하기 [표 1]에 나타내었다. [표 1]에 나타낸 바와 같이, 미강의 경우 에탄올 추출효율이 높았으나, 발효 미강의 경우에는 반대로 열수 추출효율이 더욱 높았다. 또한, 같은 추출용매에서도 미강보다는 발효 미강에서의 추출효율이 높았다. 따라서, 생미강의 발효 처리 중 미강의 구조적 변화와 함께, 성분의 변화로 인해 추출효율이 상이한 것을 확인하였다(표 1).

	추출용매	추출효율
미강	열수	15.86±0.31
미강	에탄올	19.02±0.10
발효미강	열수	21.32±0.28
발효미강	에탄올	19.74±0.14

< 실험예 1> 미강 및 발효미강 추출물의 혈액응고 저해 효과 확인

미강 및 발효 미강의 열수 및 에탄올 추출물의 항혈전 활성 평가를 위해 먼저 혈액응고 저해활성을 평가하였다.

구체적으로, 혈액응고 저해 활성은 시료의 thrombin time(TT), prothrombin time(PT) 및 activated partial thromboplastin time(aPTT) 을 측정하여 평가하였다. 혈액 응고에서 중추적 역할을 수행하는 thrombin의 활성을 평가하는 TT는 37℃에서 0.5 U thrombin(Sigma Co., St. Louis, MO, USA) 50 μl와 20 mM CaCl₂50 μl, 다양한 농도의 시료 10 μl를 Amelung coagulometer KC-1A(Amelung. Lemgo, Germany)의 튜브에 혼합하여 2분간 반응시킨 후, 혈장 100 μl를 첨가한 후 혈장이 응고될 때까지의 시간을 측정하였으며, thrombin저해 활성은 3회 이상 반복한 시료 TT 실험의 평균치를 용매 대조구인 DMSO의 TT 평균치의 비로 나타내었다. 한편, 외인성 응고계(II, V, VII 및 X 인자)의 응고 활성을 종합적으로 측정하는 PT는 혈장 70 μl와 다양한 농도의 시료 10 μl를 coagulometer의 튜브에 첨가하여 37℃에서 3분간 가온 후, 130 μl의 PT reagent를 첨가하고 혈장이 응고될 때까지의 시간을 3회 반복한 실험의 평균치로 나타내었으며, prothrombin 저해 활성은 3회 이상 반복한 시료 PT 실험의 평균치를 DMSO의 PT 평균치의 비로 나타내었다. 내인성 경로에 의한 혈액응고활성을 평가하는 aPTT 측정의 경우에는, 표준혈장 70 μl와 다양한 농도의 시료 10 μl를 coagulometer 튜브에 첨가하여 37℃에서 3분간 가온 후, 65 μl의 aPTT reagent를 첨가하고 다시 37℃에서 3 분간 반응하였다. 이후 65 μl CaCl₂(35 mM)을 첨가한 후 혈장이 응고될 때까지의 시간을 3회 반복한 실험의 평균치로 나타내었으며, aPTT 연장 활성은 3회 이상 반복한 시료 aPTT 실험의 평균치를 DMSO의 aPTT 평균치의 비로 나타내었다. 이때 시료 대조군으로는 aspirin (Sigma Co., St. Louis, MO, USA)을, 용매 대조군으로는 DMSO를 사용하였다.

그 결과, 하기 [표 2]에 나타낸 바와 같이, 양성대조군으로 사용된 항혈전제 aspirin(1.5 mg/ml)은 무처리군에 비해 TT는 1.76배, PT는 1.48배, aPTT는 1.57배 연장시켜 우수한 혈액응고 저해활성을 나타내었다. 본 발명의 미강 또는 발효 미강추출물의 경우에는 5 mg/ml 농도에서, 생미강의 열수 추출물을 제외하고는 전체적으로 양호한 활성이 나타났으며, 특히 미강 및 발효 미강의 에탄올 추출물에서 우수한 활성이 나타났다. 특히, 생미강의 에탄올 추출물에서 강력한 aPTT 저해 활성이 나타났으며, 이러한 활성은 농도 의존적으로 확인되었다. 따라서 미강 및 발효 미강은 혈액응고저해 활성을 나타냄을 확인하였다(표 2).

< 실험예 2> 미강 및 발효미강 추출물의 혈소판 응집저해 효과 확인

혈전 생성반응의 개시 및 강화에 필수적인 혈소판은 collagen, 혈구세포 등과 결합하여 지혈 플러그(primary hemostatic plug)를 형성한다. 따라서 aspirin과 같은 효과적인 혈소판 응집저해제는 항혈전제로 사용되고 있다. 따라서, 본 발명의 제조된 미강 에탄올 및 발효 미강 추출물의 혈소판 응집 저해능을 확인하였다.

구체적으로, 혈소판 응집저해 활성은, 미세전극에 혈소판이 부착되어 응집됨에 따라 발생하는 전기 저항값의 변화를 측정하는 impedance법을 사용하였으며, 인간 농축 혈소판(platelet rich plasma: PRP)은 적십자로부터 공급받아 사용하였다. PRP의 전처리 및 수세과정은 기존의 보고와 동일하게 하였으며, 혈소판 응집은 Whole Blood Aggregometer(Chrono-log, PA, U.S.A)를 사용해 37℃에서 측정하였다. 자세하게는, 먼저 10 mM CaCl2 50μl suspending buffer 147.5μl, 시료 5 μl 가 포함된 반응 cuvette에 50 μl의 혈소판(5x108cells/ml)을 넣은 후 3분 동안 37℃로 가온 후 응집유도제로 collagen (1 mg/ml)을 2.5 μl를 넣고 혈소판 응집을 측정하였다. 응집반응은 collagen 첨가 후 12분간 측정하였으며 amplitude, slope, area under를 측정하여 평가하였다. 이때, amplitude(ohm)는 혈소판에 응집유도제를 첨가하였을 때 일어나는 최대 응집정도를 나타내며, slope는 응집유도제를 첨가한 직후부터 1분 동안의 응집곡선의 기울기를 나타내며, area under는 전체적인 혈소판 응집 정도를 표시하는 것으로 전기저항 증가에 따른 slope 곡선의 하강면적을 나타낸다. 본 발명의 미강 또는 발효 미강 추출물의 혈소판 응집 저해 활성은 시료 대신 DMSO를 첨가한 대조군과의 상대적인 area under값의 비를 백분율로 나타내었다.

그 결과, 표 3에 나타낸 바와 같이, 용매 대조군으로 사용된 DMSO의 혈소판 응집능을 평가한 결과 area under 101.8~105.9를 나타내었으며, 상업적으로 이용되고 있는 혈소판 응집저해제인 aspirin은 0.25 mg/ml 농도에서 area under 51.4를 나타내어 용매 대조군(DMSO)의 49.5%의 혈소판 응집능을 나타내어 우수한 혈소판 응집저해활성을 나타내었으며, aspirin은 0.5 mg/ml 농도에서는 area under 28.3을 나타내어 27.3%의 응집도를 나타내어, 농도의존적인 응집저해를 나타내었다(표 3).

또한, 도 2에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 미강의 열수 추출물에 대한 혈소판 응집저해능을 평가한 결과, 0.25 mg/ml 농도에서 48.0%의 혈소판 응집도, 0.2 mg/ml 농도에서 62.8%의 응집도를 나타내어 50% 응집저해에 소요되는 농도는 243.24 ug/ml 농도로 계산되었다. 한편, 미강 에탄올 추출물의 경우, 0.25 mg/ml 농도에서 24.5%의 혈소판 응집도, 0.2 mg/ml 농도에서 30.5%의 응집도를 나타내어 미강의 경우 에탄올 추출물이 열수 추출물보다 더욱 강력한 혈소판 응집저해를 나타내었다. 미강 에탄올 추출물의 50% 혈소판 응집저해에 소요되는 농도는 189.27 ug/ml 농도로 계산됨을 확인하였다(도 2).

아울러, 도 3에 나타낸 바와 같이, 발효 미강의 열수 추출물에 대한 혈소판 응집저해능을 평가한 결과, 0.25 mg/ml 농도에서 53.2%의 혈소판 응집도, 0.2 mg/ml 농도에서 91.0%의 응집도를 나타내어 50% 응집저해에 소요되는 농도는 254.23 ug/ml 농도로 계산되었다. 발효 미강 에탄올 추출물의 경우, 0.25 mg/ml 농도에서 21.8%의 혈소판 응집도, 0.2 mg/ml 농도에서 31.3%의 응집도를 나타내어 발효 미강의 경우에도 역시 에탄올 추출물이 열수 추출물보다 더욱 강력한 혈소판 응집저해를 나타내었다. 미강 에탄올 추출물의 50% 혈소판 응집저해에 소요되는 농도는 189.44 ug/ml 농도로 계산됨을 확인하였다(도 3).

< 실험예 3> 미강 및 발효 미강 추출물의 인간 적혈구 용혈 활성

본 발명의 미강 및 발효미강 추출물의 급성독성 평가의 일환으로 인간 적혈구에 대한 용혈 활성을 평가하였다.

구체적으로, 미강 및 발효미강 에탄올 및 열수 추출물의 안전성 평가의 일환으로 인간 적혈구(4%)를 이용하여 용혈 활성을 평가하였다. PBS로 3회 수세한 인간 적혈구 100 μl를 96-well microplate에 가하고 다양한 농도의 시료용액 100 μl를 가한 다음 37℃에서 30분간 반응시켰으며, 이후, 반응액을 10분간 원심분리(1,500 rpm)하여 상등액 100 μl를 새로운 microtiter plate로 옮긴 후 용혈에 따른 헤모글로빈 유출 정도를 414 nm에서 측정하였다. 시료의 용매 대조군으로는 DMSO(2%)를 사용하였으며, 적혈구 용혈을 위한 실험 대조군으로는 triton X-100 (1.0 mg/ml) 및 amphotericin B (0.02 mg/ml)를 사용하였다. 아울러, 용혈 활성은 하기 [수학식 1]을 이용하여 계산하였다.

그 결과, 표 4 및 표 5에 나타낸 바와 같이, 대조군으로 사용된 amphotericin는 용혈 활성이 보고된 항암제로서, 3 ug/ml 농도에서부터 50%의 적혈구를 용혈시켰으며(표 4), 12.5 ug/ml 농도에서는 거의 99%의 적혈구를 용혈하였다. 8종 시료의 경우 0.5 mg/ml 농도에서 인간 적혈구 용혈 활성을 평가한 결과, 미강 및 발효 미강의 열수 추출물에서는 용혈 활성이 나타나지 않았으나, 에탄올 추출물에서는 모두에서 강한 용혈 활성이 확인되었다(표 5).

따라서, 본 발명의 미강 및 발효 미강의 열수 추출물은 적혈구 용혈에 따른 급성독성은 나타나지 않는 것을 확인하였다.

이하, 본 발명에 따른 각 제제의 제조예를 예시한다. 하기 제조예는 본 발명의 실시에 대한 이해를 돕기 위한 것이지 본 발명에 따른 제형의 제조방법이 하기 제조예로 한정되는 것을 의미하지 않는다.

< 제조예 1> 약제의 제조

<1-1> 산제의 제조

미강 추출물 10 mg

수크로오즈 100 mg

탈크 10 mg

상기 성분들을 분말화하여 혼합한 후 기밀포에 충진하여 산제를 제조한다.

<1-2> 정제의 제조

미강 추출물 10 mg

전분 100 mg

수크로오즈 100 mg

스테아린산 마그네슘 2 mg

통상의 정제의 제조방법에 따라 상기 성분들을 혼합한 후 이를 타정하여 정제를 제조한다.

<1-3> 캅셀제의 제조

미강 추출물 10 mg

결정성 셀룰로오즈 3 mg

락토오즈 15 mg

스테아린산 마그네슘 1 mg

통상의 캅셀제의 제조방법에 따라 상기 성분들을 혼합한 후 젤라틴 캡슐에 충진하여 캅셀제를 제조한다.

<1-4> 과립제의 제조

미강 추출물 10 mg

대두 추출물 50 mg

포도당 200 mg

전분 500 mg

상기 성분들을 혼합한 후 30% 에탄올 100mL를 첨가하여 60에서 건조시켜 과립을 형성한 후 포에 충진하여 과립제를 제조한다.

<1-5> 환제의 제조

미강 추출물 10 mg

유당 1,500 mg

글리세린 1,500 mg

전분 980 mg

상기 성분들을 혼합한 후 통상의 환제의 제조방법에 따라 1환 당 4g이 되도록 제조한다.

<1-6> 주사제의 제조

미강 추출물 10 mg

만니톨 180 mg

주사용 멸균 증류수 2,870 mg

Na₂HPO₄12H₂O 30 mg

통상의 주사제 제조방법에 따라 1 앰플당 (2 mL)가 되도록 상기 성분을 혼합하여 제조한다.

<1-7> 액제의 제조

미강 추출물 10 mg

이성화당 10,000 mg

만니톨 5,000 mg

정제수 적량

통상의 액제 제조방법에 따라 정제수에 상기 성분을 용해시키고, 적절한 향을 가한 다음 병에 충진하여 멸균시켜 제조한다.

< 제조예 2> 식품의 제조

<2-1> 밀가루 식품의 제조

본 발명의 미강 또는 발효 미강 추출물 0.5~5.0 중량부를 밀가루에 첨가하고, 이 혼합물을 이용하여 빵, 케이크, 쿠키, 크래커 및 면류를 제조하였다.

<2-2> 스프 및 육즙(gravies)의 제조

본 발명의 미강 또는 발효 미강 추출물 0.1~5.0 중량부를 스프 및 육즙에 첨가하여 건강 증진용 육가공 제품, 면류의 수프 및 육즙을 제조하였다.

<2-3> 그라운드 비프(ground beef)의 제조

본 발명의 미강 또는 발효 미강 추출물 10 중량부를 그라운드 비프에 첨가하여 건강 증진용 그라운드 비프를 제조하였다.

<2-4> 유제품( dairyproducts )의 제조

본 발명의 미강 또는 발효 미강 추출물 5~10 중량부를 우유에 첨가하고, 상기 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였다.

<2-5> 선식의 제조

현미, 보리, 찹쌀, 율무를 공지의 방법으로 알파화시켜 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다.

검정콩, 검정깨, 들깨도 공지의 방법으로 쪄서 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다.

본 발명의 미강 또는 발효 미강 추출물을 진공 농축기에서 감압농축하고, 분무, 열풍건조기로 건조하여 얻은 건조물을 분쇄기로 입도 60 메쉬로 분쇄하여 건조분말을 얻었다.

상기에서 제조한 곡물류, 종실류 및 본 발명의 미강 또는 발효 미강 추출물을 다음의 비율로 배합하여 제조하였다.

곡물류(현미 30 중량부, 율무 15 중량부, 보리 20 중량부),

종실류(들깨 7 중량부, 검정콩 8 중량부, 검정깨 7 중량부),

본 발명의 미강 또는 발효 미강(3 중량부),

영지(0.5 중량부),

지황(0.5 중량부)

< 제조예 3> 음료의 제조

<3-1> 건강음료의 제조

액상과당(0.5%), 올리고당(2%), 설탕(2%), 식염(0.5%), 물(75%)과 같은 부재료와 본 발명의 미강 또는 발효 미강 추출물 5 g을 균질하게 배합하여 순간 살균을 한 후 이를 유리병, 패트병 등 소포장 용기에 포장하여 제조하였다.

<3-2> 야채 주스의 제조

본 발명의 미강 또는 발효 미강 추출물 5 g을 토마토 또는 당근 주스 1,000 ㎖에 가하여 야채 주스를 제조하였다.

<3-3> 과일 주스의 제조

본 발명의 미강 또는 발효 미강 추출물 1 g을 사과 또는 포도 주스 1,000 ㎖ 에 가하여 과일 주스를 제조하였다.

Claims

미강(Rice Bran) 또는 발효 미강(Fermented Rice Bran) 추출물을 유효성분으로 함유하는 혈전 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 추출물은 물, C₁ 내지C₂의 저급 알코올 또는 이들의 혼합물을 용매로 사용하여 추출하는 것을 특징으로 혈전 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물.
제 2항에 있어서, 상기 저급 알코올은 메탄올 또는 에탄올인 것을 특징으로 하는 혈전 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 발효 미강은 미강에 광합성세균, 젖산균 및 효모균로 구성된 군으로부터 선택되는 균을 미강에 접종하여 제조하는 것을 특징으로 하는 혈전 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 혈전 질환은 동맥경화증, 뇌출혈, 뇌졸증 및 뇌경색으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 혈전 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물.
미강 또는 발효 미강 추출물을 유효성분으로 함유하는 혈전 질환 예방 및 개선용 건강식품.
미강 또는 발효 미강 추출물을 유효성분으로 함유하는 혈행개선용 약학적 조성물.
미강 또는 발효 미강 추출물을 유효성분으로 함유하는 혈행개선용 건강기능식품.