KR20210155901A - 누에동충하초(눈꽃동충하초) 물 추출물을 포함하는 면역 증진용 조성물 - Google Patents
누에동충하초(눈꽃동충하초) 물 추출물을 포함하는 면역 증진용 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 누에동충하초 물 추출물을 포함하는 면역 증진용 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 누에동충하초 물 추출물은 생체에 독성이 없으면서도 NO 및 TNF-α의 생성을 촉진하는 등 우수한 면역 증진 효과를 가지고 있어, 면역력이 약화된 개체 또는 면역 증진이 필요한 개체의 면역 증진에 유용하게 이용될 수 있다.
Description
본 발명은 누에동충하초 물 추출물을 포함하는 면역 증진용 조성물에 관한 것이다.
인체는 외부의 병원체 침입이 일어나면 이를 식별하고 제거하는 면역작용을 통하여 몸을 보호하며 항상성을 유지하는 생체방어 반응을 일으킨다. 피부, 소화관, 호흡기 등을 통해 침입한 유해물질로부터 신체를 보호하는 방어체계로 외부 자극물질을 제거하는 대식 작용을 하거나, 상처에 발생한 심각한 염증을 줄이는 작용을 통해 항상성 유지 활동을 한다. 체내 병원균의 유입으로 인해 활성화되었던 염증 반응을 포함한 모든 면역작용은 병원균의 제거가 이루어지고 나면 정상의 상태로 돌아오게 되지만 면역 조절에 어려움이 있는 경우, 면역 반응이 정상인 사람에 비해 현저히 높거나 낮게 발생한다. 면역기능이 결핍되거나 저하된 상태를 ‘면역부전’이라고 하며 이 상태에서는 면역반응이 제대로 활성화되지 못하여 감염을 일으키게 된다. 반대로 '면역과민반응'은 일부의 면역반응이 과하게 발생하여 면역체계가 불균형을 이루게되고, 결과적으로 알레르기 반응을 일으키는 것이다.
면역계는 자연저항, 비특이성 면역체계 및 특이성 면역체계로 구분할 수 있다. 자연저항(1차 방어선)이란 미생물을 위시한 모든 침입자들을 그들의 종류에 관계없이 막아내는 해부생리학적 요소들을 말하며, 비특이적 면역(2차 방어선)은 자연저항을 돌파하여 체내로 들어온 침입자들을 제거하는 식세포로 구성된 방어체계를, 그리고 특이성 면역계(3차 방어선)는 림프구들로 구성된 면역체계이며, 이중 특이성 면역계는 기억능 그리고 자기와 비자기를 구분할 수 있는 능력을 지닌 고도로 발달한 면역체계이다.
대식세포(Macrophage)는 다양한 기능을 가진 세포로 산화적 스트레스 상황에서 여러 가지 사이토카인(cytokine)과 일산화산소(NO)를 생성하여 면역체계에서 중요한 역할을 한다. 대식세포는 항원을 제시하거나(antigenpresenting),종양을 없애거나(tumoricidal), 미생물 세포를 죽이는(microbicidal) 세포로서, 세포매개(cellmediated) 또는 체액성 면역(humoral immunity)에 중심적인 역할을 하는 조절세포로, 활성화된 대식세포에서 생산되는 NO는 비특이적 숙주방어기작인 대식작용, 그리고 세균 및 암세포의 증식억제활성을 보인다. 특히 대식세포에서 리포다당류(Lipopolysaccharide; LPS), 사이토카인, TNF-α와 같은 자극에 의해 발현되는 iNOS는 장시간동안 다량의 NO를 생산하여, NFκB 활성을 촉진시키는 것으로 알려져 있다. 활성화된 대식세포에 의한 슈퍼옥사이드 음이온(superoxide anion) 과산화수소(hydrogen peroxide, H2O2)와 같은 활성산소종(reactive oxygen species; ROS) 및 일산화질소(nitric oxide, NO)의 생산은 비특이적 면역에 있어서 중요한 세포독성 및 세포활성 억제 기작이다. 따라서 안전한 천연화합물과 대식세포에서의 ROS 및 NO의 생성의 상관관계에 관련한 다양한 연구들이 수행되고 있다.
한편, 동충하초는 겨울에는 곤충 형태로 있다가 여름에는 버섯이 되기 때문에 붙여진 이름으로 곤충에서 발생하는 버섯을 말하며, 그 중에서도 누에동충하초는 누에나방과 곤충 집누에나방의 유충(누에)에 동충하초를 감염시켜 형성되는 눈꽃동충하초의 건조 전체를 의미한다. 그러나 현재까지 누에동충하초의 면역 증진 활성에 대해서는 구체적으로 밝혀진 바가 없다.
이에 본 발명자들은 생체에 독성이 없으면서도, 면역 증진 효과가 우수한 새로운 약물을 개발하기 위해 연구를 수행한 결과, 누에동충하초 물 추출물이 NO 및 TNF-α 생성을 촉진하는 등 우수한 면역 증진 효과가 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.
따라서, 본 발명의 목적은 누에동충하초 물 추출물을 포함하는 면역 증진용 건강기능식품 조성물 및 식품 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 누에동충하초 물 추출물을 포함하는 면역 증진용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 누에동충하초 물 추출물을 포함하는 면역 증진용 사료 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 1) 누에동충하초를 동결 건조하는 단계; 및 2) 상기 건조된 누에동충하초와 물을 1:5 내지 1:15 중량비로 혼합하여 누에동충하초 물 추출물을 제조하는 단계;를 포함하는 누에동충하초 물 추출물을 포함하는 면역 증진용 조성물의 제조 방법을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 누에동충하초 물 추출물을 포함하는 면역 증진용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 누에동충하초 물 추출물을 포함하는 면역 증진용 식품 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 누에동충하초 물 추출물을 포함하는 면역 증진용 약학적 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 누에동충하초 물 추출물을 포함하는 면역 증진용 사료 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 1) 누에동충하초를 동결 건조하는 단계; 및 2) 상기 건조된 누에동충하초와 물을 1:5 내지 1:15 중량비로 혼합하여 누에동충하초 물 추출물을 제조하는 단계;를 포함하는 누에동충하초 물 추출물을 포함하는 면역 증진용 조성물의 제조 방법을 제공한다.
본 발명에 따른 누에동충하초 물 추출물은 생체에 독성이 없으면서도 NO 및 TNF-α의 생성을 촉진하는 등 우수한 면역 증진 효과를 가지고 있어, 면역력이 약화된 개체 또는 면역 증진이 필요한 개체의 면역 증진에 유용하게 이용될 수 있다.
도 1은 누에동충하초 물 추출물의 항산화 활성, 폴리페놀함량 및 플라보노이드 함량을 나타낸 도이다.
도 2는 누에동충하초 물 추출물의 세포 내 NO 생성에 미치는 영향을 나타낸 도이다.
도 3은 누에동충하초 물 추출물의 세포 내 TNF-α 생성에 미치는 영향을 나타낸 도이다.
도 4는 누에동충하초 물 추출물과 홍삼의 항산화 활성을 비교하여 나타낸 도이다.
도 5는 누에동충하초 물 추출물과 홍삼의 폴리페놀 함량을 비교하여 나타낸 도이다.
도 2는 누에동충하초 물 추출물의 세포 내 NO 생성에 미치는 영향을 나타낸 도이다.
도 3은 누에동충하초 물 추출물의 세포 내 TNF-α 생성에 미치는 영향을 나타낸 도이다.
도 4는 누에동충하초 물 추출물과 홍삼의 항산화 활성을 비교하여 나타낸 도이다.
도 5는 누에동충하초 물 추출물과 홍삼의 폴리페놀 함량을 비교하여 나타낸 도이다.
본 발명은 누에동충하초 물 추출물을 포함하는 면역 증진용 건강기능식품 조성물 및 식품 조성물을 제공한다. 또한, 본 발명은 누에동충하초 물 추출물을 포함하는 약학적 조성물, 사료 조성물 및 누에동충하초 물 추출물을 포함하는 면역 증진용 조성물의 제조 방법을 제공한다.
이하 본 발명에 대하여 보다 상세히 설명한다.
본 발명에 있어서, 누에동충하초는 누에나방 또는 곤충 집누에나방의 유충(누에)에 동충하초를 감염시켜 형성되는 눈꽃동충하초의 건조 전체를 의미할 수 있으며, 누에에 동충하초를 감염시켜 형성되는 동충하초 전체를 포함하는 개념일 수 있다.
본 발명에 있어서, "추출물"은 누에동충하초의 추출 처리에 의해 얻어지는 추출 및 분획물, 이들의 희석액, 농축액, 상기 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 상기 추출액의 조정제물이나 정제물, 또는 이들의 혼합물 등, 추출액 자체 및 추출액을 이용하여 형성 가능한 모든 제형의 추출물을 포함한다.
본 발명의 누에동충하초 물 추출물은 건조된 누에동충하초 분말에 물을 1:5 내지 1:15 중량비의 용매를 가하여 완전히 침지되도록 하여 제조되며, 바람직하게는 1:8 내지 1:12 중량비의 용매를 가하여 제조될 수 있으며, 더욱 바람직하게는 누에동충하초 분말 부피의 10배 중량의 용매를 가하여 제조될 수 있으나 이에 제한되지 않는다. 추출 방법은 열수추출법, 냉침추출법, 환류냉각추출법, 용매추출법, 수증기증류법, 초음파추출법, 용출법, 압착법 등의 추출 방법을 사용할 수 있다. 추출 온도는 3℃ 내지 120℃ 온도일 수 있고, 바람직하게는 10℃ 내지 100℃일 수 있고, 더욱 바람직하게는 40℃ 내지 60℃일 수 있고, 더 더욱 바람직하게는 50℃일 수 있으나 이에 제한되지 않는다. 추출 시간은 10분 내지 5시간동안 추출되는 것일 수 있고, 더욱 바람직하게는 30분 내지 2시간 동안 추출되는 것일 수 있으며, 더 더욱 바람직하게는 30분 또는 2시간 동안 추출되는 것일 수 있으나 이에 제한되지 않는다.
특히 바람직하게 본 발명의 누에동충하초 물 추출물은 증류수를 용매로 하여 40℃ 내지 60℃ 온도에서 30분 내지 2시간 동안 추출된 것 일 수 있으며, 바람직하게는 50℃에서 30분 동안 추출된 것일 수 있다.
본 발명의 누에동충하초 물 추출물은 생체 내 독성을 가지지 않으면서도, NO 및 TNF-α의 생성을 촉진하는 등 우수한 면역 증진 효과를 가질 수 있으므로, 건강기능식품, 식품, 약학, 사료, 각종 보조제 등 다양한 분야에서 유용하게 사용될 수 있다.
본 발명에서는 누에동충하초 물 추출물을 포함하는 면역 증진용 건강기능식품 조성물 및 식품 조성물을 제공한다.
본 발명에 있어서 “건강기능식품”이란 식품에 물리적, 생화학적, 생물공학적 수법 등을 이용하여 해당 식품의 기능을 특정 목적에 작용, 발현하도록 부가가치를 부여한 식품군이나 식품 조성이 갖는 생체방어리듬조절, 질병방지와 회복 등에 관한 체내조절기능을 생체에 대하여 충분히 발현하도록 설계하여 가공한 식품을 의미한다. 본 발명의 목적상 상기 건강기능식품은 면역 증진 활성을 증진시키기 위한 것을 의미한다.
본 발명에 있어서 식품 조성물은 당업계에서 통상적으로 사용되는 방법에 의하여 제조가능하며, 상기 제조 시에는 당업계에서 통상적으로 첨가하는 원료 및 성분을 첨가하여 제조할 수 있다. 또한 상기 식품 조성물의 제형 또한 식품 조성물로 인정되는 제형이면 제한 없이 제조될 수 있다.
본 발명에 따른 식품으로는 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 기능성 식품 등이 있다. 또한 식품에는 특수영양식품 (예, 조제유류, 영, 유아식 등), 식육가공품, 어육제품, 두부류, 묵류, 면류 (예, 라면류, 국수류 등), 빵류, 건강보조식품, 조미식품 (예, 간장, 된장, 고추장, 혼합장 등), 소스류, 과자류 (예, 스넥류), 캔디류, 쵸코렛류, 껌류, 아이스크림류, 유가공품 (예, 발효유, 치즈 등), 기타 가공식품, 김치, 절임식품 (각종 김치류, 장아찌 등), 음료 (예, 과실 음료, 채소류 음료, 두유류, 발효음료류 등), 천연조미료 (예, 라면 스프 등), 식품첨가제 등이 포함되나 이에 제한되지 않는다. 상기 식품, 음료 또는 식품첨가제는 통상의 제조방법으로 제조될 수 있다.
본 발명의 조성물을 건강기능식품 첨가물로 사용할 경우, 상기 조성물을 그대로 첨가하거나 다른 건강기능식품 성분과 함께 사용할 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다. 유효성분의 혼합량은 사용 목적에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조 시에 본 발명의 조성물은 원료에 대하여 바람직하게는 50 중량부 이하, 보다 바람직하게는 25 중량부 이하의 양으로 첨가할 수 있다. 그러나, 건강 조절 및 위생을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안정성 면에서 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용할 수 있다.
본 발명의 식품 또는 건강기능식품 조성물은 유효성분인 누에동충하초 물 추출물을 함유하는 것 외에 통상의 식품 조성물과 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당 알코올이다. 상술한 향미제는 천연 향미제 (타우마틴), 스테비아 추출물 (예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제 (사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다.
또한, 상기 식품 조성물은 누에동충하초 물 추출물 외에 여러 가지 영양제, 비타민, 광물 (전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제 (치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 식품 조성물은 천연 과일 주스 및 과일 주스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다.
본 발명에서는 누에동충하초 물 추출물을 포함하는 면역 증진용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명에서 면역 증진용 약학적 조성물은 구체적으로 NO 및 TNF-α 생성을 촉진하는 등 비특이적 숙주방어기작인 대식작용, 그리고 세균 및 암세포의 증식억제를 활성하는 등으로 면역을 증진시키는 것일 수 있다.
따라서 본 발명의 면역 증진용 약학적 조성물은 면역 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물일 수 있으며, 상기 면역 관련 질환은 감기, 천식, 폐렴, 알러지성 비염, 알러지성 결막염, 아토피성 피부염, 알러지, 류마티스 관절염, 알츠하이머병, 자가면역성 갑상선 질환, 염증성 장질환, 재생불량성 빈혈, 홍반성 루푸스 및 건선으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있다.
본 발명에 있어서 약학적 조성물은 통상의 방법에 따라 다양한 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 예컨대, 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽 등의 경구형 제형으로 제형화할 수 있고, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 투여를 위해서 상기 유효성분 이외에 추가로 약학적으로 허용 가능한 담체를 1종 이상 포함하여 제조할 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물에 포함되는 약학적으로 허용되는 담체는 제제시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토오스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 약학적 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물의 투여량은 상기 약학적 조성물의 제제화 방법, 투여 방식, 투여 시간 및/또는 투여 경로 등에 의해 다양해질 수 있으며, 상기 약학적 조성물의 투여로 달성하고자 하는 반응의 종류와 정도, 투여 대상이 되는 개체의 종류, 연령, 체중, 일반적인 건강 상태, 질병의 증세나 정도, 성별, 식이, 배설, 해당 개체에 동시 또는 시간차를 두고 함께 사용되는 약물 기타 조성물의 성분 등을 비롯한 여러 인자 및 의약 분야에서 잘 알려진 유사 인자에 따라 다양해질 수 있으며, 당해 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 목적하는 치료에 효과적인 투여량을 용이하게 결정하고 처방할 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물의 투여량은 예를 들어, 1일 1 mg/kg 내지 1,000 mg/kg일 수 있으나, 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
본 발명의 약학적 조성물의 투여 경로 및 투여 방식은 각각 독립적일 수 있으며, 그 방식에 있어 특별히 제한되지 아니하며, 목적하는 해당 부위에 상기 약학적 조성물이 도달할 수 있는 한 임의의 투여 경로 및 투여 방식에 따를 수 있다.
상기 약학적 조성물은 경구 투여 또는 비경구 투여 방식으로 투여할 수 있다. 상기 비경구 투여 방식으로는 예를 들어 정맥 내 투여, 복강 내 투여, 근육 내 투여, 경피 투여 또는 피하 투여 등이 포함되며, 상기 약학적 조성물을 질환 부위에 도포하거나 분무, 흡입하는 방법 또한 이용할 수 있으나 이에 제한되지 않는다.
또한 본 발명은 누에동충하초 물 추출물을 포함하는 면역 증진용 사료 조성물을 제공한다. 본 발명의 사료 조성물은 누에동충하초 물 추출물을 사료 첨가제 형태로 따로 제조하여 사료에 혼합시키거나, 사료 제조 시 직접 첨가 시켜 제조할 수 있다. 본 발명의 사료 내 누에동충하초 물 추출물은 액상 또는 건조 상태일 수 있으며, 바람직하게는 건조된 분말 형태이다. 건조방법은 통풍건조, 자연건조, 분무건조 및 동결건조가 가능하지만, 이에 제한되는 것은 아니다. 본 발명의 누에동충하초 물 추출물은 분말 형태로 사료 중량의 0.05 중량% 내지 10 중량%, 바람직하게는 0.1 중량% 내지 2 중량%의 성분비로 혼합될 수 있다. 또한, 상기 사료 조성물은 본 발명의 누에동충하초 물 추출물 외에 사료의 보존성을 높일 수 있는 통상의 첨가제들을 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 누에동충하초 물 추출물을 포함하는 사료 조성물에는 식물성으로는 곡물류, 근과류, 식품가공 부산물류, 조류, 섬유질류, 제약 부산물류, 유지류, 전분류, 박류, 곡물부산물류 등이 있으며, 동물성으로는 단백질류, 무기물류, 유지류, 광물성류, 단세포 단백질, 동물성 플랑크톤류, 남은 음식물 등이 있으며 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 사료 조성물에는 품질 저하를 방지하기 위하여 첨가하는 결착제, 유화제, 보존제 등이 포함될 수 있고, 효용 증대를 위하여 사료에 첨가하는 아미노산제, 비타민제, 효소제, 생균제, 향미제, 비단백태질소화합물, 규산염제, 완충제, 착색제, 추출제, 올리고당 등이 포함될 수 있으며, 그 외에도 사료 혼합제 등을 추가로 포함할 수 있다.
또한 본 발명은 누에동충하초 물 추출물을 포함하는 면역 증진용 조성물의 제조 방법을 제공한다.
보다 구체적으로 1) 누에동충하초를 동결 건조하는 단계; 및 2) 상기 건조된 누에동충하초와 물을 1:5 내지 1:15 중량비로 혼합하여 누에동충하초 물 추출물을 제조하는 단계;를 포함하는 누에동충하초 물 추출물을 포함하는 면역 증진용 조성물의 제조 방법을 제공한다.
본 발명에 있어서, 상기 1) 단계의 건조는 누에동충하초 분말을 제조하기 위한 목적을 달성하기 위하여 동결 건조의 방법으로 행해질 수 있다. 상기 동결 건조는 채취된 누에동충하초를 냉동한 후 상온에서 해동한 후 멸균하고, 이를 동결건조기에서 -35∼-45℃에서 24 내지 72시간 동안 건조하여 얻어질 수 있다. 상기 건조된 동결 건조물은 분말화한 후 추출될 수 있다.
본 발명의 상기 2) 단계의 누에동충하초 물 추출물을 제조하는 단계는 누에동충하초와 물을 1:5 내지 1:15 중량비로 혼합하여 누에동충하초 물 추출물을 제조하는 것일 수 있으며, 바람직하게는 누에동충하초와 물을 1:8 내지 1:12 중량비로 혼합하는 것일 수 있으며, 더욱 바람직하게는 누에동충하초의 10배 중량의 물을 혼합하여 누에동충하초 물 추출물을 제조하는 것일 수 있으나 이에 제한되지 않는다.
또한 본 발명의 상기 2) 단계의 추출 온도는 3℃ 내지 120℃ 온도일 수 있고, 바람직하게는 10℃ 내지 100℃일 수 있고, 더욱 바람직하게는 40℃ 내지 60℃일 수 있고, 더 더욱 바람직하게는 50℃일 수 있으나 이에 제한되지 않는다. 추출 시간은 10분 내지 5시간동안 추출되는 것일 수 있고, 더욱 바람직하게는 30분 내지 2시간 동안 추출되는 것일 수 있으며, 더 더욱 바람직하게는 30분 또는 2시간 동안 추출되는 것일 수 있으나 이에 제한되지 않는다.
이하, 앞서 설명한 내용과 중복되는 내용은 명세서 기재의 복잡성을 피하기 위하여 생략하며, 중복된 내용은 동일하게 적용될 수 있다.
이하 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다. 하기 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐 본 발명이 하기 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
실시예 1. 누에동충하초 물 추출물 제조 및 분석 시료의 준비
본 발명의 시료는 경북영덕농가에서 생산한 눈꽃누에동충하초를 채취하여 사용하였다. 채취된 누에동충하초는 동결건조기를 이용하여 동결 건조시켜 준비하여 이하 실시예에서 사용되었다. 동결 건조된 누에동충하초와 상기 동결 건조된 누에동충하초 무게의 10배의 증류수를 넣어 누에동충하초 물 추출물을 제조하였다. 추출은 온도와 시간을 달리하여 수행하였으며 4℃ 조건에서 15시간, 25℃ 조건에서 15시간, 50℃ 조건에서 30분, 50℃ 조건에서 2시간, 100℃ 조건에서 30분 또는 100℃ 조건에서 2시간동안 추출을 각각 진행하였다. 이후, 수득한 추출물의 상등액을 분리하여 동결 건조하여 누에동충하초 물 추출물을 준비하였다.
또한, 본 발명에서는 마우스 유래 대식세포주인 RAW264.7 세포를 한국세포주은행(Korean Cell Line Bank, Seoul, Korea)에서 구입하여 세포 실험에 사용하였다.
실시예 2. 누에동충하초 물 추출물의 추출 조건에 따른 항산화 활성, 폴리페놀함량 및 플라보노이드 함량 확인
실시예 1에서 제조된 누에동충하초 물 추출물의 항산화 활성, 폴리페놀함량 및 플라보노이드 함량을 확인하여 도 1에 나타내었다.
도 1에 나타낸 바와 같이, 누에동충하초 물 추출물은 추출 조건에 따라 각기 다른 항산화 활성, 폴리페놀 함량 및 플라보노이드 함량을 나타냈으며 특히, 50℃ 추출물의 항산화 활성, 폴리페놀 함량 및 플로보노이드 함량이 가장 높게 나타나는 것을 확인하였다.
실시예 3. 누에동충하초 물 추출물의 면역 증진 효과 확인
실시예 3.1 비교 대조군의 제조
비교 실험에 사용한 홍삼은 정관장으로부터 제공받아 사용하였으며, 누에동충하초 에탄올 추출물은 동결 건조된 누에동충하초와 상기 동결 건조된 누에동충하초 무게의 10배의 에탄올을 넣어 제조하였다. 추출은 70%(v/v) 에탄올로 50℃에서 1시간동안 수행하여 누에동충하초 에탄올 추출물을 제조하였다. 천연물 중 홍삼은 면역 증진 효과를 나타내는 물질로 알려져 있으므로, 이를 비교대조군으로 하여 면역 증진 효과를 확인하였다.
배양된 RAW264.7 세포를 분주하고 누에동충하초 물 추출물과 비교 실험을 위한 누에동충하초 에탄올 추출물과 홍삼을 각 배지에 첨가하여 24시간동안 배양하고 배양액을 모아 ELISA kit를 이용하여 제조 회사의 권장 법에 따라 NO 생성량 및 TNF-α 생성량을 확인하였다. NO 생성량 분석을 위해서는 추가적으로 배양 상층액에 griess reagent를 혼합하여 15분 후 548nm에서 흡광도를 측정하였다.
실시예 3.2 누에동충하초 물 추출물의 NO 생성 촉진 확인
실시예 1에서 제조한 누에동충하초 물 추출물의 면역 증진 효과를 확인하기 위하여 NO 생성 촉진 정도를 분석하였다. 활성화된 대식세포에서 생산되는 NO는 비특이적 숙주방어기작인 대식작용, 그리고 세균 및 암세포의 증식억제활성을 나타내는 것으로 알려져 있으며, 실시예 3.1의 방법으로 NO 생성량을 확인하고 그 결과를 도 2에 나타내었다.
도 2에 나타낸 바와 같이, 누에동충하초 물 추출물에 의해 유도된 NO는 홍삼 또는 누에동충하초 에탄올 추출물에 비해 현저히 높은 생성량을 보임을 확인하였다. 누에동충하초 물 추출물을 농도별로 처리 시 200(μg/ml) 농도까지 NO 생성량이 농도 의존적으로 증가함을 확인하였으며, 모든 농도에서 본 발명의 누에동충하초 물 추출물은 누에동충하초 에탄올 추출물보다 높은 NO 생성량을 보였으며, 100(μg/ml) 농도 이상의 누에동충하초 물 추출물은 동일 농도의 홍삼에 비해 현저히 높은 NO 생성량을 보였다. 특히, 200(μg/ml) 농도의 누에동충하초 물 추출물은 1000(μg/ml) 농도의 홍삼에 비해서 높은 NO 생성량을 보임을 확인하였다.
상기와 같은 결과는 누에동충하초 물 추출물이 면역반응에 중요한 역할을 한다고 알려진 NO 생성을 효과적으로 촉진함으로써 면역 증진 효과를 나타냄을 보여주는 결과이다.
실시예 3.3 누에동충하초 물 추출물의 TNF-α 생성 촉진 확인
실시예 1에서 제조한 누에동충하초 물 추출물의 면역 증진 효과를 확인하기 위해 누에동충하초 물 추출물 처리 시 TNF-α 생성 촉진 정도를 분석하였다. TNF-α는 면역 반응에서 대식 세포의 보조인자로서 면역 반응에서 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 있으므로 실시예 3.1의 방법으로 TNF-α 생성량을 확인하고 그 결과를 도 3에 나타내었다.
도 3에 나타낸 바와 같이, 누에동충하초 물 추출물에 의해 유도된 TNF-α는 홍삼 또는 누에동충하초 에탄올 추출물에 비해 1000배 내지 3000배의 생성량을 보임을 확인하였다. 누에동충하초 물 추출물을 농도별로 처리 시 농도 500(μg/ml)까지 TNF-α 생성량이 농도 의존적으로 증가함을 확인하였으며, 모든 농도에서 본 발명의 누에동충하초 물 추출물은 누에동충하초 에탄올 추출물 및 홍삼보다 높은 TNF-α 생성량을 보임을 확인하였다.
상기와 같은 결과는 누에동충하초 물 추출물이 면역반응에 중요한 역할을 한다고 알려진 TNF-α생성을 효과적으로 촉진함으로써 면역 증진 효과를 나타냄을 보여주는 결과이다.
비교예 1. 누에동충하초 물 추출물과 홍삼의 항산화 활성, 폴리페놀함량 비교
실시예 2에서 가장 항산화활성, 폴리페놀함량 및 플라보노이드 함량이 높게 나타난 50℃ 조건에서 30분 추출한 누에동충하초 물 추출물의 항산화활성 및 폴리페놀함량을 홍삼의 항산화활성 및 폴리페놀 함량과 비교 수행하였고 그 결과를 도 4에 나타내었다. 항산화 활성은 ABTS 방법으로 확인하였으며, 비교 실험에 사용한 홍삼은 정관장으로부터 제공받아 사용하였다. 천연물 중 홍삼은 면역 증진 효과를 나타내는 물질로 알려져 있으므로, 이를 본 비교대조군으로 하여 면역 증진 효과를 확인하였다.
도 4에 나타낸 바와 같이, 누에동충하초 물 추출물은 90% 이상의 활성산소를 제거하였으며 홍삼에 비해 약 2배 정도의 항산화 활성을 보임을 확인하였다. 또한, 도 5에 나타낸 바와 같이 누에동충하초 물 추출물의 폴리페놀함량은 홍삼에 비해 약 1.31배 높은 것을 확인하였다.
이러한 결과는 강력한 항산화, 면역 증진 효과를 나타내는 홍삼 대비 본 발명의 누에동충하초 물 추출물이 높은 활성산소제거 활성 및 폴리페놀 함량을 나타내며 이를 통해 우수한 면역 증진 효과를 달성할 수 있음을 보여주는 결과이다.
이하 본 발명의 조성물의 제제예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.
제제예 1. 약학적 조성물의 제조
1- 1. 산제의 제조
누에동충하초 물 추출물 2 g
유당 1 g
상기의 성분을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.
1- 2. 정제의 제조
누에동충하초 물 추출물 100 mg
옥수수전분 100 mg
유당 100 mg
스테아린산 마그네슘 2 mg
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.
1-3. 캡슐제의 제조
누에동충하초 물 추출물 100 mg
옥수수전분 100 mg
유당 100 mg
스테아린산 마그네슘 2 mg
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.
Claims (12)
- 누에동충하초 물 추출물을 포함하는 면역 증진용 건강기능식품 조성물.
- 제 1항에 있어서, 상기 누에동충하초 물 추출물은 3℃ 내지 120℃ 온도에서 10분 내지 5시간동안 추출되는 것을 특징으로 하는, 면역 증진용 건강기능식품 조성물.
- 제 2항에 있어서, 상기 온도는 40℃ 내지 60℃인 것을 특징으로 하는, 면역 증진용 건강기능식품 조성물.
- 제 3항에 있어서, 상기 추출은 30분 내지 2시간 동안 추출되는 것을 특징으로 하는, 면역 증진용 건강기능식품 조성물.
- 제 1항에 있어서, 상기 누에동충하초 물 추출물은 NO 및 TNF-α 생성을 촉진하는 것인 면역 증진용 건강기능식품 조성물.
- 누에동충하초 물 추출물을 포함하는 면역 증진용 식품 조성물.
- 누에동충하초 물 추출물을 포함하는 면역 증진용 약학적 조성물.
- 누에동충하초 물 추출물을 포함하는 면역 증진용 사료 조성물.
- 1) 누에동충하초를 동결 건조하는 단계; 및
2) 상기 건조된 누에동충하초와 물을 1:5 내지 1:15 중량비로 혼합하여 누에동충하초 물 추출물을 제조하는 단계;를 포함하는 누에동충하초 물 추출물을 포함하는 면역 증진용 조성물의 제조 방법. - 제 9항에 있어서, 상기 누에동충하초 물 추출물을 제조하는 단계는 3℃ 내지 120℃ 온도에서 10분 내지 5시간동안 추출하는 것을 특징으로 하는, 누에동충하초 물 추출물을 포함하는 면역 증진용 조성물의 제조 방법.
- 제 10항에 있어서, 상기 온도는 40℃ 내지 60℃인 것을 특징으로 하는, 누에동충하초 물 추출물을 포함하는 면역 증진용 조성물의 제조 방법.
- 제 11항에 있어서, 상기 추출은 30분 내지 2시간 동안 추출하는 것을 특징으로 하는, 누에동충하초 물 추출물을 포함하는 면역 증진용 조성물의 제조 방법.
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