KR20170032323A - 혈중 희소 세포 포획 방법 - Google Patents
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Abstract
다운스트림에 적합한 혈중 희소 세포 포획을 포함하는 샘플을 준비하는 것을 가능하게 한다. 혈중 희소 세포 포획 방법은, 혈중 희소 세포를 혈액 내로부터 취출하는 혈중 희소 세포 포획 방법이며, 필터에 의한 혈액 여과 후에 상기 혈액으로부터 백혈구를 제거하는 공정을 갖는 것을 특징으로 한다.
Description
본 발명은, 혈중 희소 세포, 특히 혈중 순환 암세포(Circulating Tumor Cell, 이하 CTC라고 한다)를 효율적으로 포획할 수 있는 필터를 사용한 혈중 희소 세포 포획 방법에 관한 것이다.
암세포 농축의 연구·임상적 의의는 매우 커서, 혈액 내 암세포를 농축할 수 있으면, 암의 진단에 응용할 수 있다. 예를 들어, 암의 예후 및 치료의 가장 중요한 요인은 초진 시 및 처치 시에 있어서의 암세포 전이의 유무이다. 암세포의 초기 확산이 말초혈 중에 미친 경우, CTC를 검출하는 것은 암의 병상 진행을 판단하는 유용한 수단이다. 그러나, 혈액 내에는, 적혈구 또는 백혈구 등의 혈액 성분이 압도적으로 많이 존재하기 때문에, 매우 소량인 CTC의 검출은 곤란하다.
근년, 파릴렌을 사용한 수지 필터를 사용함으로써, 소량의 CTC를 효율적으로 검출하는 방법이 제안되어 있다(특허문헌 1).
혹은, 수지 대신에 금속을 사용한 필터를 사용함으로써, 필터의 강도를 향상시켜서, 백혈구와 암세포 변형능의 차이에 의해 분리하는 방법도 제안되어 있다(특허문헌 2).
혹은, 근년 백혈구를 선택적으로 제거함으로써, 남은 세포를 혈중 희소 세포로서 추출하는 방법이 제안되어 있다(비특허문헌 1 내지 6).
Fehm T, Solomayer EF, Meng S, Tucker T, Lane N, Wang J, et al. 「Methods for isolating circulating epithelial cells and criteria for their classification as carcinoma cells」Cytotherapy 2005;7:171-85.
Konigsberg R, Obermayr E, Bises G, Pfeiler G, Gneist M, Wrba F, et al. 「Detection of EpCAM positive and negative circulating tumor cells in metastatic breast cancer patients」Acta Oncol 2011;50:700-10.
Sieuwerts AM, Kraan J, Bolt J, van der Spoel P, Elstrodt F, Schutte M, et al. 「Anti-epithelial cell adhesion molecule antibodies and the detection of circulating normal-like breast tumor cells」J Natl Cancer Inst 2009;101:61-6.
Mostert B, Kraan J, Bolt-de Vries J, van der Spoel P, Sieuwerts AM, Schutte M, et al 「Detection of circulating tumor cells in breast cancer may improve through enrichment with anti-CD146」Breast Cancer Res Treat 2011;127:33-41.
Schindlbeck C, Stellwagen J, Jeschke U, Karsten U, Rack B, Janni W, et al 「Immunomagnetic enrichment of disseminated tumor cells in bone marrow and blood of breast cancer patients by the Thomsen-Friedenreich-Antigen」Clin Exp Metastasis 2008;25:233-40.
Deng G, Herrler M, Burgess D, Manna E, Krag D, Burke JF 「Enrichment with anti-cytokeratin alone or combined with anti-EpCAM antibodies significantly increases the sensitivity for circulating tumor cell detection in metastatic breast cancer patients」Breast Cancer Res 2008;10:R 69.
필터법은 혈액 내 백혈구, 적혈구 및 혈장판을 효율적으로 제거할 수 있지만, 백혈구는 암세포와 가까운 크기이므로, 모두를 제거할 수는 없다.
필터법은 백혈구 크기와 암세포 크기의 차이, 변형능의 차이로 분리하는 방법이다. 이 방법에 있어서, 필터의 재질, 구멍 형상, 구멍 직경, 개구율, 유속을 연구함으로써, 백혈구와 암세포를 꽤 분리할 수 있다.
그러나, 혈액량을 늘리면, 백혈구 잔사는 많아지는 경향이 있다. 통상, 정상인은 3500 내지 9500개/μL의 백혈구를 보유하고 있다.
미국 식품 의약품국(FDA)에서 승인된 유일한 혈중 암세포 검사 시스템은 Cellsearch이며, EpCAM을 갖는 암세포만을 선택적으로 포획할 수 있다. 단, 이 방법은 EpCAM을 갖는 암세포밖에 포획할 수 없다고 하는 것으로, 임상 의의가 의문시되고 있다. 이때 사용되는 혈액량은 7.5mL이다.
발명자들이 예의 노력한 결과, 7.5mL의 혈액을 흘린 경우, 백혈구는 2,000개 정도 잔류한다.
현시점에서는 농축률은 1:25000 정도가 한계라고 생각된다.
근년, Cellsearch는 임상 의의가 의문시되고 있다. 즉, 암세포의 수를 세는 것만으로는, 암 환자의 예후 예측밖에 할 수 없다고 말해지고 있다.
근년 요구되고 있는 것은 채취한 세포를 유전자 해석하는 등의 다운스트림이다. 그 경우, 암세포 1개에 대하여 허용되는 백혈구의 수는 10개 내지 100개이며, 망소 특성(Small-the-better characteristics)이다.
7.5mL의 혈액을 흘린 경우에 허용되는 백혈구는 500개 미만이 바람직하고, 100개 미만이 더욱 바람직하고, 50개 미만이 더욱 바람직하고, 10개 미만이 더욱 바람직하다.
다시 말하면, 즉 2,000개로는 다운스트림을 고려한 경우, 불충분하다.
한편, 백혈구를 선택적으로 제거함으로써, 남은 세포를 혈중 희소 세포로서 추출하는 방법도 제안되어 있지만, 이 방법에도 한계가 존재한다.
이 방법에서도 발명자들이 예의 노력한 결과, 7.5ml의 혈액을 흘린 경우, 백혈구는 2,000개 정도 잔류한다. 또한, 백혈구의 제거율을 높이려고 하면, 자기(磁氣) 비즈의 대량 투입이 필요해져서, 비용이 든다.
CTC의 제거 방법은 상기 방법 이외에도 다수 제안되어 있지만, 단독 방법으로는 한계가 있다.
본 발명은 상기를 고려하여 이루어진 것으로, 자기 비즈에 의해 백혈구를 저감시킨 후, 필터에 의해 백혈구를 더욱 저감시킴으로써, 다운스트림에 적합한 혈중 희소 세포 포획을 포함하는 샘플을 준비하는 것이 가능한 혈중 희소 세포 포획 방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.
본 발명의 일 형태에 따른 혈중 희소 세포 포획 방법은, 혈중 희소 세포를 혈액 내로부터 취출하는 혈중 희소 세포 포획 방법이며, 필터에 의한 혈액 여과 후에 백혈구를 제거하는 공정을 갖는 것을 특징으로 한다.
여기서, 상기 백혈구를 제거하는 공정이 백혈구를 자성 비즈에 의해 제거하는 공정인 형태로 할 수 있다.
또한, 상기 혈액 여과 후에 얻어지는 상기 혈중 희소 세포를 포함하는 액체에 있어서의 백혈구수가 1만개 이하인 형태로 할 수 있다.
상기 백혈구를 제거하는 공정에 있어서, 또는 그 후에, 세포 현탁액을 포유 동물의 혈청, 혈장, 또는 이들 유래의 단백질을 포함하는 수용액으로 희석하는 공정을 갖는 형태로 할 수 있다.
상기 포유 동물의 혈청 혹은 혈장이 소, 말 또는 사람 유래인 형태로 할 수 있다.
상기 포유 동물의 혈청 혹은 혈장이 소 태아 유래인 형태로 할 수 있다.
상기 포유 동물의 혈청 혹은 혈장의 수용액 농도가 1% 내지 50%의 범위인 형태로 할 수 있다.
상기 혈청 혹은 혈장의 수용액이 인산 완충액을 주성분으로 하는 형태로 할 수 있다.
상기 혈청 혹은 혈장의 수용액이 항응고제를 포함하는 형태로 할 수 있다.
상기 항응고제가 EDTA, 헤파린, 시트르산나트륨 및 불화나트륨 중 어느 하나인 형태로 할 수 있다.
상기 혈액 여과 전에 포유 동물의 혈청 혹은 혈장을 포함하는 수용액에 필터를 침지하는 공정을 포함하는 형태로 할 수 있다.
상기 혈액 여과 후이며 상기 백혈구를 제거하는 공정 전에 포유 동물의 혈청 혹은 혈장을 포함하는 수용액으로 혈구 세포를 세정하는 공정을 포함하는 형태로 할 수 있다.
상기 포유 동물의 혈청 혹은 혈장이 소, 말 또는 사람 유래인 형태로 할 수 있다.
상기 포유 동물의 혈청이 소 태아 혈청 혹은 혈장인 형태로 할 수 있다.
상기 필터 표면이 금 또는 백금 또는 팔라듐, 혹은 그들의 합금인 형태로 할 수 있다.
상기 필터가 니켈을 주성분으로 하고, 그의 표면에 금 또는 백금 또는 팔라듐, 혹은 그들의 합금이 도금되어 있는 형태로 할 수 있다.
상기 필터가 구리를 주성분으로 하고, 그의 표면에 금 또는 백금 또는 팔라듐, 혹은 그들의 합금이 도금되어 있는 형태로 할 수 있다.
상기 필터가 팔라듐을 주성분으로 하고, 그의 표면에 금 또는 백금, 혹은 그들의 합금이 도금되어 있는 형태로 할 수 있다.
상기 필터의 최외층이 금도금인 형태로 할 수 있다.
상기 필터의 최외층이 0.05㎛ 내지 1㎛의 귀금속 도금인 형태로 할 수 있다.
상기 혈중 희소 세포가 암세포인 형태로 할 수 있다.
상기 필터의 관통 구멍의 개구 형상이 원, 타원, 모서리가 둥근 직사각형, 직사각형, 정사각형 중 어느 하나인 형태로 할 수 있다. 또한, 모서리가 둥근 직사각형이란 2개의 같은 길이의 긴 변과 2개의 반원형으로 이루어지는 형상이다. 개구 형상을 직사각형 또는 모서리가 둥근 직사각형으로 한 경우, 관통 구멍에 막히기 어려워, 포획 대상으로 하는 성분의 농축률을 더욱 향상시킬 수 있다.
상기 필터의 관통 구멍을 형성하는 형상이 직사각형 또는 모서리가 둥근 직사각형 중 어느 하나 이상의 형상을 포함하고, 그의 짧은 변의 길이가 5㎛ 내지 15㎛인 형태로 할 수 있다.
상기 필터의 막 두께가 3㎛ 내지 50㎛인 형태로 할 수 있다.
본 발명에 따르면, 다운스트림에 적합한 혈중 희소 세포 포획을 포함하는 샘플을 준비하는 것이 가능한 혈중 희소 세포 포획 방법이 제공된다.
도 1은 세포 포착 카트리지의 개략 구성을 설명하는 도면이다.
도 2는 필터의 제조 방법을 설명하는 도면이다.
도 3은 구리판(구리 도금을 행하는 경우에는 Ni판)을 사용해서 필터를 제조하는 방법을 도시하는 개략 단면도이다.
도 4는 필터에 있어서의 긴 구멍 직경, 짧은 구멍 직경 및 개구율의 정의를 설명하는 도면이다.
도 2는 필터의 제조 방법을 설명하는 도면이다.
도 3은 구리판(구리 도금을 행하는 경우에는 Ni판)을 사용해서 필터를 제조하는 방법을 도시하는 개략 단면도이다.
도 4는 필터에 있어서의 긴 구멍 직경, 짧은 구멍 직경 및 개구율의 정의를 설명하는 도면이다.
이하, 첨부 도면을 참조하여, 본 발명을 실시하기 위한 형태를 상세하게 설명한다. 또한, 도면의 설명에 있어서는 동일 요소에는 동일 부호를 붙이고, 중복된 설명을 생략한다.
본 실시 형태에 따른 혈중 희소 세포 포획 방법에서는 혈중 희소 세포를 혈액 내로부터 필터에 의한 여과를 행한다. 혈액 여과를 행하기 위한 장치 구성은 특별히 한정되지 않지만, 일례로서 세포 포착 카트리지를 사용하는 경우에 대해서 설명한다. 세포 포착 카트리지(100)는, 도 1에 도시한 바와 같이, 세포 분산액이 유입되는 유입관(125)이 접속된 유입구(130)와, 세포 분산액이 유출되는 유출관(135)이 접속된 유출구(140)를 갖는 하우징(120)과, 하우징(120) 내에 배치되어, 세포 분산액에 포함되는 혈중 희소 세포를 포착하는 포착 영역을 갖는 필터(105)를 구비한다.
하우징(120)은 필터(105)를 유지하기 위한 부재이며, 상부 부재(110) 및 하부 부재(115)로 구성된다. 하우징(120)의 형상은 직육면체 또는 원통 등이어도 되며, 특별히 제약은 없다.
유입관(125)의 상류에는, 예를 들어 혈액 또는 세정액 등의 처리액 등이 접속된다. 또한, 유출관(135)의 하류에 펌프(P)가 접속됨으로써, 펌프(P)의 구동에 의해, 유입관(125)으로부터 하우징(120)의 내부로 혈액 등이 공급되고, 그 후, 유출관(135)으로부터 외부로 배출된다.
필터(105)에는 관통 구멍(106)이 형성되어 있다. 혈액을 세포 포착 카트리지(100) 내에 도입하면, 혈액의 적혈구 등은 관통 구멍(106)을 통과하지만, 혈중 희소 세포는 관통 구멍(106)을 통과할 수 없어, 필터(105) 표면에 체류한다. 이에 의해, 혈중 희소 세포를 회수할 수 있다.
또한, 세포 포착 카트리지(100)의 형상은 상기에 한정되지 않는다. 필터에 의한 혈액 여과에 의해, 혈중 희소 세포를 포착할 수 있는 것이면, 그 장치 구성은 특별히 한정되지 않는다.
이어서, 도 2 및 도 3을 참조하면서, 필터 제작 방법을 예시함과 함께, 필터의 설명을 행한다.
도 2는 MCL에 필러블 구리박(구리 도금을 행하는 경우에는 Ni박)을 접합한 기판을 사용하여, 금속제 박막 필터를 제조하는 방법을 도시하는 개략 단면도이다.
도 2의 (A)는 MCL(1) 위에 필러블 구리박(2)(구리 도금을 행하는 경우에는 Ni박)이 적층된 기판을 나타내고 있다. 먼저 이 기판을 준비한다.
필터를 제작하기 위한 기판으로서 사용하는 재료는 구리(도금이 구리인 경우에는 니켈)가 바람직하다. 구리는 약액에 의한 화학적 용해로 용이하게 제거 가능하며, 포토레지스트와의 밀착력에 있어서도 다른 재료에 비해 우수하다.
이어서, 도 2의 (B)에 도시한 바와 같이, 기판의 필러블 구리박(2) 위에 포토레지스트(3)를 형성한다. 이 포토레지스트의 두께는 후의 도체의 두께 1.0배 내지 2.0배가 바람직하다. 이 두께가 얇으면, 후에 레지스트 박리가 곤란해지고, 두꺼우면 회로 형성성이 곤란해진다. 구체적으로는, 포토레지스트(3)는 15 내지 50㎛의 두께가 바람직하다. 포토레지스트(3)를 형성하는 감광성 수지 조성물로서는 네가티브형 감광성 수지 조성물이 바람직하다. 네가티브형 감광성 수지 조성물은 적어도 결합제 수지, 불포화 결합을 갖는 광중합성 화합물, 광중합 개시제를 포함하는 것이 바람직하다.
이어서, 도 2의 (C)에 도시한 바와 같이, 포토레지스트(3) 위에 포토마스크(4)를 겹친 후에 포토레지스트 노광을 행한다. 이에 의해, 포토마스크(4)가 겹쳐 있지 않은 영역에 노광부(3a)가 형성된다.
이어서, 도 2의 (D)에 도시한 바와 같이, 알칼리 용액 등으로 미노광부(3b)의 포토레지스트 현상 제거를 행한다. 이에 의해, 필터의 관통 구멍에 대응하는 위치에 노광부(3a)가 남는다.
이어서, 도 2의 (E)에 도시한 바와 같이, 포토레지스트로 덮여 있지 않은 부분에의 전해 도금을 행함으로써, 도금층(5)을 형성한다. 이 도금의 부분이 필터의 재질이 된다.
이어서, 도 2의 (F)에 도시한 바와 같이, MCL(1)로부터, 전해 도금에 의해 도금층(5)이 형성된 필러블 구리박(2)을 박리한다.
이어서, 도 2의 (G)에 도시한 바와 같이, 약액에 의한 화학적 용해에 의해 필러블 구리박(2)을 제거하여, 노광부(3a) 및 도금층(5)에 의해 형성되는 자립막을 취출한다.
이어서, 도 2의 (H)에 도시한 바와 같이, 자립막 내에 남은 포토레지스트에 의한 노광부(3a)를 제거하여, 도금층(5)에 대하여 관통 구멍(6)을 형성한다.
이어서, 도 2의 (I)에 도시한 바와 같이, 무전해 금도금을 행하여, 필터 표면에 금도금층(7)을 형성한다. 이상에 의해, 세포 포착 카트리지(100)에 사용되는 필터(105)를 제조할 수 있다.
도 3은 구리판(구리 도금을 행하는 경우에는 Ni판)을 사용해서 금속제 박막 필터를 제조하는 방법을 도시하는 개략 단면도이다.
도 3에 도시하는 방법에서는, 도 2에 도시하는 방법에 있어서의 MCL(1)과 필러블 구리박(2) 대신에 구리판(또는 Ni판)(2')을 사용하고 있는 점 이외에는, 도 2에 도시하는 제조 방법과 같다.
즉, 도 3의 (A)는 기판으로서 사용하는 구리판(2')을 준비하는 공정을 나타내고 있다.
또한, 도 3의 (B)는 구리판(2')에 포토레지스트(3)를 라미네이트하는 공정을 나타내고 있다. 또한, 도 3의 (C)는 포토마스크(4)를 겹친 포토레지스트 노광을 나타내고 있다. 또한, 도 3의 (D)는 미노광부(3b)의 포토레지스트의 현상 제거를 나타내고 있다. 또한, 도 3의 (E)는 포토레지스트의 노광부(3a)로 덮여 있지 않은 부분에 전해 도금에 의해 도금층을 형성하는 공정을 나타내고 있다. 또한, 도 3의 (F)는 약액에 의한 화학적 용해(케미컬 에칭)에 의해 구리판(2')을 제거하여, 노광부(3a) 및 도금층(5)에 의해 형성되는 자립막을 취출하는 공정을 나타내고 있다. 또한, 도 3의 (G)는 자립막 내에 남은 포토레지스트에 의한 노광부(3a)를 제거하여, 도금층(5)에 대하여 관통 구멍(6)을 형성하는 공정을 나타내고 있다. 또한, 도 3의 (H)는 무전해 금도금을 행하여, 필터 표면에 금도금층(7)을 형성하는 공정을 나타내고 있다.
이와 같이, 도 2에 도시하는 방법 및 도 3에 도시하는 방법의 어느 것을 사용해도 세포 포착 카트리지(100)에 사용되는 필터(105)를 제조할 수 있다.
필터(105)의 재질은 금속인 것이 바람직하다. 금속은 가공성이 우수하므로, 필터의 가공 정밀도를 높일 수 있다. 이에 의해, 포획 대상으로 하는 성분의 포획률을 더욱 향상시킬 수 있다. 또한, 금속은 플라스틱 등의 다른 재료와 비교해서 강직하기 때문에, 외부로부터 힘이 가해져도 그의 사이즈 및 형상이 유지된다. 이 때문에, 관통 구멍보다 약간 큰 성분을 변형시켜서 통과시키는 경우, 보다 고정밀도의 분리·농축이 가능하게 된다.
또한, 금속의 주성분으로서는, 니켈, 은, 팔라듐, 구리, 이리듐 중 어느 하나, 혹은 이들의 합금이 바람직하다. 이상의 금속은 전기 도금 가능하다. 또한, 「주성분」이란, 필터(105)의 총 중량에 대한 당해 성분의 중량 비율이 50% 이상인 것을 나타낸다.
팔라듐 및 이리듐은 산화 환원 전위가 높고, 난용성이어서 특성이 양호하지만, 고가라고 하는 결점이 있다. 니켈은 수소보다 산화 환원 전위가 낮기 때문에, 용해되기 쉽지만, 저렴하다. 은 및 팔라듐은 귀금속이며, 이리듐에 비해 비교적 저렴하다.
필터를 제작하기 위한 기판(구리판(2'): 도 3 참조)으로서 사용하는 재료는 구리(필터(105)의 재질이 구리인 경우에는 니켈)가 바람직하다. 구리는 약액에 의한 화학적 용해로 용이하게 제거 가능하며, 포토레지스트와의 밀착력에 있어서도 다른 재료에 비해 우수하다. 또한, MCL(1)에 대하여 적층하는 금속박(2)(도 2 참조)에 대해서도, 구리(필터(105)의 재질이 구리인 경우에는 니켈)가 바람직하다.
또한, 도 2의 (E) 및 도 3의 (E)에 나타내는 도금층(5)의 형성은 전해 도금에 의해 행해진다. 예를 들어, 전해 니켈 도금으로서는 와트욕(황산니켈, 염화니켈, 붕산이 주성분), 술팜산욕(술팜산니켈, 붕산이 주성분), 스트라이크욕(염화니켈, 염화수소가 주성분) 등을 들 수 있다.
전해 은 도금으로서는, 시안화은칼륨 또는 타르타르산칼륨을 주성분으로 하는 욕을 들 수 있다.
전해 팔라듐 도금으로서는, 수용성 팔라듐염과 나프탈렌술폰산 화합물을 포함하는 욕을 들 수 있다.
전해 이리듐 도금으로서는, 할로겐을 포함하는 가용성 이리듐염 및 알코올류를 함유하는 욕을 들 수 있다.
전해 구리 도금으로서는, 황산구리와 황산, 염화물 이온을 주성분으로 하는 욕을 들 수 있다.
이들 도금욕을 사용하여, 전해 도금을 행한다. 전해 도금 시의 전류 밀도는 0.3 내지 4A/dm2의 범위가 좋으며, 0.5 내지 3A/dm2의 범위인 것이 보다 바람직하다. 전류 밀도를 4A/dm2 이하로 함으로써, 거칠음의 발생을 억제할 수 있고, 전류 밀도를 0.3A/dm2 이상으로 함으로써 금속의 결정립이 충분히 성장하여, 배리어층으로서의 효과가 높아지므로, 본 실시 형태의 효과가 양호하게 얻어지게 된다.
도금을 행할 때의 레지스트, 즉 노광부(3a)의 개소가 관통 구멍의 개소가 된다. 관통 구멍의 개구 형상으로서 원, 타원, 정사각형, 직사각형, 모서리가 둥근 직사각형, 다각형 등을 예시할 수 있다. 효율적으로 대상으로 하는 성분을 포획할 수 있는 관점에서는 원, 직사각형 또는 모서리가 둥근 직사각형이 바람직하다. 또한, 필터의 눈막힘 방지의 관점에서는 모서리가 둥근 직사각형이 특히 바람직하다.
관통 구멍(6)의 구멍 직경은 포착 대상으로 하는 성분의 사이즈에 따라서 설정된다. 본 명세서에 있어서 개구 형상이 타원, 직사각형, 다각형 등의 원 이외의 형상에 있어서의 구멍 직경이란, 각각의 관통 구멍을 통과할 수 있는 구의 직경의 최댓값으로 한다. 예를 들어 개구 형상이 직사각형인 경우, 도 4에 도시한 바와 같이, 짧은 변측의 짧은 구멍 직경과, 긴 변측의 긴 구멍 직경을 정의할 수 있지만, 관통 구멍(6)의 구멍 직경은 짧은 구멍 직경이 된다. 또한, 개구 형상이 다각형인 경우, 그 다각형의 내접원의 직경이 된다. 개구 형상이 직사각형 또는 모서리가 둥근 직사각형인 경우, 포획 대상으로 하는 성분이 관통 구멍(6)에 포획된 상태여도 개구부에 있어서 개구 형상의 긴 변 방향으로 간극이 생긴다. 이 간극을 통해서 액체가 통과 가능하기 때문에, 필터의 눈막힘을 방지할 수 있다. 필터의 짧은 구멍 직경의 길이는 5㎛ 내지 15㎛가 바람직하고, 7㎛ 내지 9㎛가 더욱 바람직하다.
필터(105)의 관통 구멍의 평균 개구율은 3 내지 50%가 바람직하고, 3 내지 20%가 보다 바람직하고, 3 내지 10%가 특히 바람직하다. 여기서, 개구율이란, 필터로서 기능하는 영역의 면적에 대한 관통 구멍이 차지하는 면적의 비율을 말한다(도 4 참조). 즉, 필터로서 기능하는 영역의 면적이란, 필터에 포함되는 복수의 관통 구멍 중, 관통 구멍의 최외부를 연결해서 얻어지는 영역(도 4에 있어서 파선으로 둘러싸인 영역 A1)이다. 개구율이 너무 높으면 백혈구에 걸리는 압력이 저하되어, 백혈구 잔여가 증가한다. 개구율이 낮으면 흘릴 수 있는 혈액량이 저하된다.
필터(105)의 두께는 3㎛ 내지 50㎛인 것이 바람직하고, 5㎛ 내지 30㎛인 것이 보다 바람직하고, 8㎛ 내지 20㎛인 것이 특히 바람직하다. 필터(105)의 막 두께가 3㎛ 미만인 경우에는 필터의 강도가 저하되어, 취급성이 곤란해지는 경우가 있다. 반대로, 50㎛를 초과하면 가공 시간이 길어지는 것에 의한 생산성 저하, 필요 이상의 재료 소비에 의한 비용적인 불리 또는 미세 가공 그 자체가 곤란해지는 것이 우려될 뿐만 아니라, 백혈구가 빠져 나가기 어려워진다.
이상 회로 형성 후, 수지층을 박리하여 구리박을 에칭(도 2)하거나, 또는 구리판을 제거(도 3)함으로써, 도 2의 (H) 또는 도 3의 (G)에 도시한 바와 같이, 도금층(5)에 의한 필터가 완성된다.
이어서, 필터에 남아 있는 레지스트(노광부(3a))를 강알칼리에 의해 제거한다. 강알칼리로서는, 0.1 내지 10wt%의 NaOH 또는 KOH 수용액이 바람직하다. 박리를 촉진하기 위해서 모노에탄올아민(1 내지 20vol%) 등을 첨가해도 된다. 박리가 곤란한 경우에는 과망간산나트륨 또는 과망간산칼륨 등에 알칼리(0.1 내지 10wt%의 NaOH 또는 KOH)를 첨가한 액으로 레지스트를 제거할 수도 있다.
레지스트를 제거한 필터에 대해서는 귀금속 도금을 행하면 좋다.
귀금속 도금으로서는, 금, 팔라듐, 백금, 루테늄, 인듐 등이 바람직하다.
귀금속 도금 중에서도 금은, 앞에서 나온 바와 같이 모든 금속 중에서 가장 산화 환원 전위가 높고, 세포 독성이 없는 것으로 되어 있다. 장기 보존에서의 변색 등도 거의 없다.
금도금은 무전해로 행할 수도 있고, 전해로 행할 수도 있다. 전해로 행하는 경우에는 두께 변동이 커져서, 필터의 구멍 직경 정밀도에 영향을 끼치지 쉽기 때문에, 무전해로 행하는 것이 바람직하다. 단, 전해 금도금은 피복률을 향상시킬 수 있다.
금도금은 치환 도금으로 행하는 것만으로도 효과가 있지만, 치환 도금과 환원 도금을 조합한 쪽이 효과가 크다.
금도금 전의 금속 필터는 표면이 산화되어 있는 경우가 있다. 따라서, 산화 피막의 제거를 행하는 것인데, 여기에서는 금속 이온과 착체를 형성하는 화합물이 들어 있는 수용액으로 세정하면 좋다.
구체적으로는 시안류, EDTA류 또는 시트르산류가 들어 있는 수용액이 좋다.
그 중에서도 시트르산류는 금도금의 전처리로서 최적이다. 구체적으로는 시트르산의 무수물, 시트르산의 수화물, 시트르산염 혹은 시트르산염의 수화물이면 되고, 구체적으로는 시트르산 무수물, 시트르산 1수화물, 시트르산나트륨, 시트르산칼륨 등을 사용할 수 있다. 그의 농도는 0.01mol/L 내지 3mol/L인 것이 바람직하고, 0.03mol/L 내지 2mol/L인 것이 보다 바람직하고, 0.05mol/L 내지 1mol/L의 범위인 것이 특히 바람직하다. 0.01mol/L 이상으로 함으로써 무전해 금도금층과 금속 필터의 밀착성이 향상된다. 또한, 3mol/L를 초과한 경우, 효과가 향상되지 않는 데다가, 경제적으로 바람직하지 않다.
시트르산을 포함하는 용액에의 침지는 70℃ 내지 95℃에서 1 내지 20분간 행하면 좋다.
시트르산을 포함하는 용액은, 발명의 효과가 얻어지는 범위에서 도금액 등에 포함되는 환원제, pH 조정제 등의 완충제를 첨가하는 것도 가능하지만, 환원제, pH 조정제 등은 소량이 바람직하고, 시트르산만의 수용액이 가장 바람직하다. 시트르산을 포함하는 용액의 pH는, 바람직하게는 5 내지 10이고, 보다 바람직하게는 6 내지 9이다.
pH 조정제로서는, 산 또는 알칼리이면 특별히 한정되지 않고, 산으로서는, 염산, 황산, 질산 등을 사용할 수 있고, 알칼리로서는, 수산화나트륨, 수산화칼륨, 탄산나트륨 등의 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속의 수산화물 용액을 들 수 있다. 전술한 바와 같이, 시트르산의 효과를 저해하지 않는 범위에서 사용할 수 있다. 또한, 시트르산을 포함하는 용액에, 질산을 100mL/L와 같은 고농도로 함유시키면, 시트르산만을 포함하는 용액으로 처리한 경우와 비교하여, 접착성을 개선시키는 효과가 저하된다.
환원제로서는, 환원성이 있는 것이면 특별히 한정되지 않고, 차아인산, 포름알데히드, 디메틸아민보란, 수소화붕소나트륨 등을 들 수 있다.
이어서, 치환 금도금을 행한다. 치환 금도금에는 시안욕과 비시안욕이 있지만, 환경 부하 또는 잔존 시의 세포 독성을 고려하면 비시안욕이 바람직하다. 비시안욕에 포함되는 금염으로서는, 염화금산염, 아황산금염, 티오황산금염, 티오말산금염이 예시 가능하다. 금염은 1종류만 사용해도 되고, 2종 이상을 조합해서 사용해도 된다.
더욱이, 시안계의 욕은 금속을 용해하는 효과가 지나치게 강하기 때문에, 금속에 따라서는 용해되어 핀 홀이 발생하기 쉽다. 상기와 같이 전처리를 충분히 행하는 경우에는 비시안계의 도금욕이 바람직하다.
금의 공급원으로서는 아황산금이 특히 바람직하다. 아황산금으로서는, 아황산금나트륨, 아황산금칼륨, 아황산금암모늄 등이 좋다.
금 농도는 0.1g/L 내지 5g/L의 범위가 바람직하다. 0.1g/L 미만에서는 금이 석출되기 어렵고, 5g/L를 초과하면 액이 분해되기 쉬워진다.
치환 금도금욕에는 금의 착화제로서 암모늄염 또는 에틸렌디아민테트라아세트산염이 들어 있으면 좋다. 암모늄염으로서는, 염화암모늄, 황산암모늄을 들 수 있고, 에틸렌디아민테트라아세트산염으로서는, 에틸렌디아민테트라아세트산, 에틸렌디아민테트라아세트산나트륨, 에틸렌디아민테트라아세트산칼륨, 에틸렌디아민테트라아세트산암모늄을 사용한다. 암모늄염의 농도는 7×10-3mol/L 내지 0.4mol/L의 범위에서 사용하는 것이 바람직하고, 암모늄염의 농도가 이 범위 외이면 액이 불안정해지는 경향이 있다. 에틸렌디아민테트라아세트산염의 농도는 2×10-3mol/L 내지 0.2mol/L의 범위에서 사용하는 것이 바람직하고, 암모늄염의 농도가 이 범위 외이면 액이 불안정해지는 경향이 있다.
액을 안정적으로 유지하기 위해서 0.1g/L 내지 50g/L의 아황산염이 들어 있으면 좋다. 아황산염으로서는 아황산나트륨 또는 아황산칼륨, 아황산암모늄 등을 들 수 있다.
pH 조정제로서 pH를 낮추는 경우에는, 염산 혹은 황산을 사용하는 것이 바람직하다. 또한, pH를 높이는 경우에는, 수산화나트륨, 수산화칼륨, 암모니아수를 사용하는 것이 바람직하다. pH는 6 내지 7로 조정하면 좋다. 이 범위 외에서는 액의 안정성 또는 도금의 외관에 악영향을 준다.
치환 도금은 액온 30도 내지 80도에서 사용하는 것이 바람직하고, 이 범위 외에서는 액의 안정성 또는 도금의 외관에 악영향을 준다.
이상과 같이 해서 치환 도금을 행하는 것이지만, 치환 도금으로는 완전히 금속을 덮는 것이 어렵다. 따라서, 다음에 환원제가 들어 있는 환원형의 금도금을 행한다. 치환 도금의 두께는 0.02㎛ 내지 0.1㎛의 범위가 바람직하다.
환원형의 금도금의 금염으로서는, 아황산금염 및 및 티오황산염이 바람직하고, 그의 함유량은 금으로서 1g/L 내지 10g/L의 범위인 것이 바람직하다. 금의 함유량이 1g/L 미만이면 금의 석출 반응이 저하되고, 10g/L를 초과하면, 도금액의 안정성이 저하됨과 함께, 도금액의 반출에 의해 금 소비량이 많아지므로 바람직하지 않다. 함유량은 2g/L 내지 5g/L로 하는 것이 보다 바람직하다.
환원제로서는 차아인산, 포름알데히드, 디메틸아민보란, 수소화붕소나트륨 등을 들 수 있지만, 페닐 화합물계 환원제가 보다 바람직하다. 예를 들어, 페놀, o-크레졸, p-크레졸, o-에틸페놀, p-에틸페놀, t-부틸페놀, o-아미노페놀, p-아미노페놀, 히드로퀴논, 카테콜, 피로갈롤, 메틸히드로퀴논, 아닐린, o-페닐렌디아민, p-페닐렌디아민, o-톨루이딘, o-에틸아닐린, p-에틸아닐린 등을 들 수 있고, 이들 중 1종 또는 2종 이상을 사용할 수 있다.
환원제의 함유량은 0.5g/L 내지 50g/L인 것이 바람직하다. 환원제의 함유량이 0.5g/L 미만이면 실용적인 석출 속도를 얻는 것이 곤란해지는 경향이 있고, 50g/L를 초과하면, 도금액의 안정성이 저하되는 경향이 있다. 환원제의 함유량은 2g/L 내지 10g/L로 하는 것이 보다 바람직하고, 2g/L 내지 5g/L인 것이 특히 바람직하다.
무전해 금도금액은 중금속염을 포함하고 있어도 된다. 석출 속도를 촉진하는 관점에서, 중금속염은 탈륨염, 납염, 비소염, 안티몬염, 텔루륨염 및 비스무트염으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나인 것이 바람직하다.
탈륨염으로서는, 황산탈륨염, 염화탈륨염, 산화탈륨염, 질산탈륨염 등의 무기 화합물염, 말론산 2탈륨염 등의 유기 착체염을 들 수 있고, 납염으로서는, 황산납염, 질산납염 등의 무기 화합물염, 아세트산염 등의 유기 아세트산염을 들 수 있다.
또한, 비소염으로서는, 아비소염, 비산염삼산화비소 등의 무기 화합물염 또는 유기 착체염을 들 수 있고, 안티몬염으로서는, 타르타르산안티모닐염 등의 유기 착체염, 염화안티몬염류, 옥시황산안티몬염, 삼산화안티몬 등의 무기 화합물염류를 들 수 있다.
텔루륨염으로서는, 아텔루륨산염, 텔루륨산염 등의 무기 화합물염 또는 유기 착체염을 들 수 있고, 비스무트염으로서는, 황산비스무트(III), 염화비스무트(III), 질산비스무트(III) 등의 무기 화합물염, 옥살산비스무트(III) 등의 유기 착체염을 들 수 있다.
상술한 중금속염은 1종류 또는 그 이상 사용할 수 있지만, 그의 첨가량의 합계는 도금액 전체 용량을 기준으로 해서 1ppm 내지 100ppm이 바람직하고, 1ppm 내지 10ppm이 보다 바람직하다. 1ppm 미만에서는, 석출 속도 향상 효과가 충분하지 않은 경우가 있고, 100ppm을 넘는 경우에는 도금액 안정성이 나빠지는 경향이 있다.
무전해 금도금액은 황계 화합물을 포함하고 있어도 된다. 페닐 화합물계 환원제 및 중금속염을 포함하는 무전해 금도금액 중에, 황 화합물을 더 함유시킴으로써, 액온 60 내지 80℃ 정도의 저온에서도 충분한 석출 속도가 얻어지고, 피막 외관도 양호한 데다가, 도금액의 안정성이 특히 우수하게 된다.
황계 화합물로서는, 황화물염, 티오시안산염, 티오요소 화합물, 머캅탄 화합물, 술피드 화합물, 디술피드 화합물, 티오케톤 화합물, 티아졸 화합물, 티오펜 화합물 등을 들 수 있다.
황화물염으로서는, 예를 들어 황화칼륨, 황화나트륨, 다황화나트륨, 다황화칼륨 등을 들 수 있고, 티오시안산염으로서는, 티오시안산나트륨, 티오시안산칼륨, 디티오 시안산칼륨 등을 들 수 있고, 또한 티오요소 화합물로서는, 티오요소, 메틸티오요소, 디메틸티오요소 등을 들 수 있다.
머캅탄 화합물로서는, 1,1-디메틸에탄티올, 1-메틸-옥탄티올, 도데칸티올, 1,2-에탄디티올, 티오페놀, o-티오크레졸, p-티오크레졸, o-디머캅토벤젠, m-디머캅토벤젠, p-디머캅토벤젠, 티오글리콜, 티오디글리콜, 티오글리콜산, 디티오글리콜산, 티오말산, 머캅토프로피온산, 2-머캅토벤조이미다졸, 2-머캅토-1-메틸이미다졸, 2-머캅토-5-메틸벤조이미다졸 등을 예시할 수 있다.
술피드 화합물로서는, 디에틸술피드, 디이소프로필술피드, 에틸이소프로필술피드, 디페닐술피드, 메틸페닐술피드, 로다닌, 티오디글리콜산, 티오디프로피온산 등을 예시할 수 있고, 디술피드 화합물로서는, 디메틸디술피드, 디에틸디술피드, 디프로필디술피드 등을 예시할 수 있다.
또한, 티오케톤 화합물로서는, 티오세미카르바지드 등을 예시할 수 있고, 티아졸 화합물로서는 티아졸, 벤조티아졸, 2-머캅토벤조티아졸, 6-에톡시-2-머캅토벤조티아졸, 2-아미노티아졸, 2,1,3-벤조티아디아졸, 1,2,3-벤조티아디아졸, (2-벤조티아졸릴티오)아세트산, 3-(2-벤조티아졸릴티오)프로피온산 등을 예시할 수 있고, 티오펜 화합물로서는, 티오펜, 벤조티오펜 등을 예시할 수 있다.
황계 화합물은 단독으로 사용해도 되고, 2종류 이상을 사용해도 된다. 황계 화합물의 함유량은 1ppm 내지 500ppm인 것이 바람직하고, 1ppm 내지 30ppm인 것이 보다 바람직하고, 1ppm 내지 10ppm인 것이 특히 바람직하다. 황계 화합물의 함유량이 1ppm 미만에서는, 석출 속도가 저하되어, 도금 번짐 불량이 발생하여, 피막 외관이 악화된다. 500ppm을 초과하면, 농도 관리에 곤란을 발생시켜서, 도금액이 불안정해진다.
무전해 금도금액에는, 상술한 금염, 환원제, 중금속염 및 황계 화합물에 더하여, 착화제, pH 완충제 및 금속 이온 은폐제 중 적어도 1개를 함유하는 것이 바람직하고, 이들 모두를 함유하는 것이 보다 바람직하다.
본 발명의 무전해 금도금액에는, 착화제를 함유시키는 것이 바람직하다. 구체적으로는 아황산염, 티오황산염, 티오말산염 등의 비시안계 착화제를 들 수 있다. 착화제의 함유량은, 도금액의 전체 용량을 기준으로 해서 1g/L 내지 200g/L가 바람직하다. 착화제의 함유량이 1g/L 미만인 경우, 금 착화력은 저하되고, 안정성이 저하된다. 200g/L를 초과하면, 도금 안정성은 향상되지만, 액 중에 재결정이 발생하여, 경제적으로 좋지 않다. 착화제의 함유량은 20g/L 내지 50g/L로 하는 것이 보다 바람직하다.
무전해 금도금액에는, pH 완충제를 함유시키는 것이 바람직하다. pH 완충제에 의해 석출 속도를 일정값으로 유지하여, 도금액을 안정화시키는 효과가 있다. 완충제는 복수의 것을 섞어도 된다. pH 완충제로서는, 인산염, 아세트산염, 탄산염, 붕산염, 시트르산염, 황산염 등을 들 수 있고, 이들 중에서는 붕산, 황산염이 특히 바람직하다.
pH 완충제의 함유량은, 도금액의 전체 용량을 기준으로 해서 1g/L 내지 100g/L인 것이 바람직하다. pH 완충제의 함유량이 1g/L 미만이면 pH의 완충 효과가 없고, 100g/L를 초과하면 재결정화해 버릴 우려가 있다. 더욱 바람직한 함유량은 20g/L 내지 50g/L이다.
금도금액에는 은폐제를 함유시키는 것이 바람직하다. 은폐제로서는, 벤조트리아졸계 화합물을 사용할 수 있고, 벤조트리아졸계 화합물로서는, 예를 들어 벤조트리아졸나트륨, 벤조트리아졸칼륨, 테트라히드로벤조트리아졸, 메틸벤조트리아졸, 니트로벤조트리아졸 등을 예시할 수 있다.
금속 이온 은폐제의 함유량은, 도금액의 전체 용량을 기준으로 해서 0.5g/L 내지 100g/L인 것이 바람직하다. 금속 이온 은폐제의 함유량이 0.5g/L 미만이면 불순물의 은폐 효과가 적어, 충분한 액 안정성을 확보할 수 없는 경향이 있다. 한편, 100g/L를 초과하면, 도금액 중에서 재결정화가 발생하는 경우가 있다. 비용 및 효과를 감안하면, 2g/L 내지 10g/L의 범위가 가장 바람직하다.
금도금액의 pH는 5 내지 10의 범위인 것이 바람직하다. 도금액의 pH가 5 미만의 경우, 도금액의 착화제인 아황산염 또는 티오황산염이 분해되어, 독성의 아황산 가스가 발생할 우려가 있다. pH가 10을 초과하는 경우, 도금액의 안정성이 저하되는 경향이 있다. 환원제의 석출 효율을 향상시켜서, 빠른 석출 속도를 얻기 위해, 무전해 금도금액의 pH는 8 내지 10의 범위로 하는 것이 바람직하다.
무전해 도금의 방법으로서는, 치환 금도금이 종료된 필터를 침지해서 금도금을 행한다.
도금의 액온은 50℃ 내지 95℃가 좋다. 50℃미만에서는 석출 효율이 나쁘고, 95℃ 이상에서는 액이 불안정해지기 쉽다.
이와 같이 해서 형성되는 최외층의 금도금층(7)은, 99중량% 이상의 순도의 금을 포함하는 것이 바람직하다. 금도금층(7)의 금 순도가 99중량% 미만이면 접촉부의 세포 독성이 높아진다. 신뢰성을 높이는 관점에서는, 금층의 순도는 99.5중량% 이상인 것이 보다 바람직하다.
또한, 금도금층(7)의 두께는 0.005㎛ 내지 3㎛로 하는 것이 바람직하고, 0.05㎛ 내지 1㎛로 하는 것이 보다 바람직하고, 0.1㎛ 내지 0.5㎛로 하는 것이 더욱 바람직하다. 금도금층(7)의 두께를 0.005㎛ 이상으로 함으로써 금속의 용출을 어느 정도 억제할 수 있다. 한편, 3㎛를 초과해도, 그 이상 효과가 크게 향상되지 않으므로, 경제적인 관점에서도 3㎛ 이하로 하는 것이 바람직하다. 귀금속 도금의 경우, 두께 0.05㎛ 내지 1㎛로 하는 것이 바람직하다.
이상과 같이 형성한 금 표면은 세포 독성이 없어, 대기 중 또는 혈액을 포함하는 대부분의 수용액 중에서 안정된다. 그러나, 금 표면은 비교적 소수성이며, 생체 적합성이 낮으므로, 생체 적합성을 향상시키는 처리를 실시하면 좋다. 이하 표면 처리의 일례를 나타낸다.
혈액 내의 성분인 백혈구, 적혈구, 혈소판은 이물에 대하여 거절 반응을 나타낸다. 따라서, 금속 표면에 전처리를 실시하는 것이 좋다. 이 경우, 혈액 여과 직전에 금속 표면을, 생체 적합성 중합체를 포함하는 용매에 침지하는 것이 바람직하다.
생체 적합성 중합체를 포함하는 용매로서는, 포유 동물의 혈청 혹은 혈장을 들 수 있다. 혈장은 항응고제가 들어 있는 채혈관으로 채혈하고 방치 또는 원심 분리한 경우에, 혈구 성분의 침전에 의해 생기는 상청이다. 이 혈장은 응고 인자를 포함한다. 한편, 항응고제가 들어 있지 않은 채혈관으로 채혈하고 방치한 경우, 항응고제가 들어 있지 않기 때문에, 혈구 성분이 응고 인자에 의해 응혈한다. 그 경우의 상청이 혈청이며, 혈청은 응고 인자를 결여한다.
포유 동물 중에서도 특성 또는 가격을 고려하면, 소, 말, 사람 중에서 선택하는 것이 바람직하고, 특히 소 태아 혈청이 바람직하다.
혈청 중에는 단백질을 포함한다. 단백질 중에 포함하는 알부민 또는 글로불린이 필터 표면에 흡착함으로써, 혈구 성분이 필터 표면에 흡착하는 것을 방지한다. 혈청 중에는 많은 단백질이 존재하지만, 혈청 알부민은 약 50% 내지 65%를 차지한다.
알부민은 아미노산이 다수 연결되어 있으므로 아미노기를 다수 갖고 있다. 아미노기는 귀금속(금, 백금, 팔라듐)에 대하여 견고한 배위 결합을 한다.
특히 금은 산화 피막이 거의 존재하지 않으므로, 특별한 전처리를 하지 않아도 알부민과 견고한 결합을 형성한다.
이러한 혈청 혹은 혈장을 희석한 수용액으로 필터(105)의 전처리를 행한다. 혈청 혹은 혈장의 농도는 1% 내지 50%의 범위가 바람직하고, 5% 내지 30%의 범위가 더욱 바람직하고, 10% 내지 20%의 범위가 더욱 바람직하다.
혈청 혹은 혈장은 수계의 용매로 희석하는 것이 좋고, 인산 등의 완충액이 들어 있는 것이 바람직하다. 혈청 혹은 혈장의 수용액은, 인산 완충액을 주성분으로 하는 것이 바람직하다.
추가로 혈청 혹은 혈장 용액에는 혈액의 항응고제가 들어 있는 것이 바람직하다. 이러한 항응고제에는 EDTA, 헤파린, 시트르산나트륨 및 불화나트륨 등을 들 수 있지만, 그 중에서 EDTA 또는 헤파린이 바람직하다.
처리 시간은 1분 이상 60분 이하가 바람직하고, 1분 이상 10분 이하가 더욱 바람직하다. 1분보다 짧은 경우는 생체 적합 고분자가 견고하게 귀금속 표면과 배위 결합하기 어렵다. 한편 60분보다 긴 경우는 작업 시간의 관점에서 바람직하지 않다.
이와 같이 해서 생체 적합성 중합체를 처리한 필터에 혈액을 흘린다(혈액 여과). 필터(105)를 세포 포착 카트리지(100)와 같은 장치에 대하여 설치해서 혈액을 통과시킨다. 혈액은 필터의 하방으로부터 음압으로 처리하든, 필터의 상방으로부터 가압으로 처리하든, 원심 분리와 같이 원심력으로 처리하든 상관없다. 어느 방법에 있어서도 혈액이 필터의 구멍을 통과하는 선속도를 컨트롤하는 것이 중요해진다.
또한, 샘플로서 필요한 혈액의 양은 1 내지 10ml이다.
혈액을 채취할 때의 채혈관은 항응고제가 들어 있는 것이 바람직하다. 이러한 것 중에는 EDTA-2K, EDTA-2Na, 시트르산나트륨, 불화나트륨 또는 헤파린 등을 들 수 있다.
또한, 채혈관으로 채취한 혈액을 샘플로 해서 모두 사용하는 방법과, 원심 분리에 의해 버피코트만을 취출하는 방법이 있다. 채혈관으로 채취한 혈액을 모두 사용하는 방법이 간편하지만, 적혈구 등의 성분을 제거해 둔 쪽이, 후속 공정이 용이해진다고 하는 장점이 있다.
버피코트만을 취출하는 방법을 사용하는 경우, 생체 적합성 중합체를 포함하는 용매로 희석하면 좋다. 이에 의해, 혈액 내 암세포 등이 쓸데없는 개소에 흡착하는 것을 방해할 수 있다.
생체 적합성 중합체를 포함하는 용매로서는, 포유 동물의 혈청 혹은 혈장을 들 수 있다. 혈장은 항응고제가 들어 있는 채혈관으로 채혈하고 방치 또는 원심 분리한 경우에, 혈구 성분의 침전에 의해 생기는 상청이다. 이 혈장은 응고 인자를 포함한다. 한편, 항응고제가 들어 있지 않은 채혈관으로 채혈하고 방치한 경우, 항응고제가 들어 있지 않으므로, 혈구 성분이 응고 인자에 의해 응혈한다. 그 경우의 상청이 혈청이며, 혈청은 응고 인자를 결여한다.
포유 동물 중에서도 특성 또는 가격을 고려하면, 소, 말 및 사람 중에서 선택하는 것이 바람직하고, 특히 소 태아 혈청은 양호한 특성이 얻어지기 쉽다.
혈청 중에는 단백질을 포함한다. 단백질 중에 포함하는 알부민 또는 글로불린이 필터 표면에 흡착함으로써, 혈구 성분이 필터 표면에 흡착하는 것을 방지한다. 혈청 중에는 많은 단백질이 존재하지만, 혈청 알부민은 약 50% 내지 65%를 차지한다.
이러한 혈청 혹은 혈장을 희석한 용액으로 필터의 전처리를 행한다. 혈청 혹은 혈장의 농도는 1% 내지 50%의 범위가 바람직하고, 5% 내지 30%의 범위가 더욱 바람직하고, 10% 내지 20%의 범위가 더욱 바람직하다.
혈청 혹은 혈장은 수계의 용매로 희석하는 것이 좋고, 인산 등의 완충액이 들어 있는 것이 바람직하다.
추가로 혈청 혹은 혈장 용액에는 혈액의 항응고제가 들어 있는 것이 바람직하다. 이러한 항응고제에는 EDTA, 헤파린, 시트르산나트륨 및 불화나트륨 등을 들 수 있지만, 그 중에서 EDTA 또는 헤파린이 바람직하다.
이와 같이 해서 백혈구와 CTC가 생체 적합성 중합체를 포함하는 용매에 희석된 세포 현탁액이 생기면, 백혈구를 제거한다.
백혈구의 제거에는 종래 공지의 방법인 백혈구의 자기 비즈(자성 비즈)에 의한 제거법을 사용할 수 있다. 이러한 비즈로서 Dynabeads M-450-CD45(pan-leucocyte)를 들 수 있다.
CD45 항체를 상기 자기 비즈에 반응시킨 비즈를 상기 세포 현탁액에 침지시킨다. 이때, 자기 비즈를 백혈구의 4배 내지 10배 정도 넣으면 된다. 자기 비즈의 양이 적으면 백혈구의 제거 효율이 저하되고, 자기 비즈의 양이 많으면 고비용으로 이어진다.
자기 비즈와 백혈구를 소정의 시간 반응시킨 후, 자기 비즈를 제거한다.
상기 공정에 의해, 백혈구수를 당초 5000만개(5mL의 경우) 수준으로부터 최저로도 50만개 수준으로 저감하는 것이 가능해진다.
이상의 공정에 의해 얻어진 세포의 현탁액을 혈액 여과함으로써 다운스트림이 가능한 수준까지 저감시킨다.
혈액이 필터(105)의 구멍을 통과하는 선속도(혈액의 부피/구멍의 총 면적)는 0.5 내지 100㎝/min의 범위인 것이 바람직하고, 5 내지 20㎝/min의 범위인 것이 더욱 바람직하다.
혈액 여과 후의 필터(105)를, 다시 혈청 혹은 혈장 용매로 세정하면 좋다. 혈청 혹은 혈장 용매는, 상기 침지용과 완전히 동일한 것을 사용할 수 있다. 세정액의 선속도는, 역시 0.5 내지 100㎝/min의 범위인 것이 바람직하고, 5 내지 20㎝/min의 범위인 것이 더욱 바람직하다.
당초의 침지에 의해, 생체 적합 고분자가 필터(105)의 표면에 흡착하고 있으므로 여과 시의 혈구 성분의 흡착을 억제할 수 있지만, 혈액 처리에 의해 혈구가 흡착하기 쉬운 표면이 된다.
또한, 세정 시에 다시 생체 적합성 고분자를 흘림으로써, 세정 효과가 높아진다.
세정액의 양은 적절히 조정해도 되지만, 상기 선속도로 1 내지 20분의 세정이 바람직하고, 5 내지 15분의 세정이 더욱 바람직하다.
이상과 같이 해서 농축한 CTC 등의 희소 세포를 포착할 수 있다. 생체 적합성 중합체를 화학적으로 견고하게 필터에 피복함으로써, 적혈구, 백혈구, 혈장판이라고 하는 성분을 제외하는 것이 가능해진다. 또한, 혈액 여과 전에 포유 동물의 혈청 혹은 혈장을 포함하는 수용액에 필터를 침지하거나, 또는 필터에 의한 혈액 여과 후에 포유 동물의 혈청 혹은 혈장을 포함하는 수용액으로 혈액의 혈구 세포를 세정하는 공정 중 적어도 한쪽을 포함하고 있으면 되지만, 특히 혈액 여과 전에 처리를 행함으로써, 효율적으로 혈액 내 희소 세포를 포획하는 것이 가능하게 된다.
혈액 여과를 사용하는 필터법에서는, 백혈구의 초기 투입량에 의해 최종적으로 남는 백혈구의 잔존량이 다른 경향이 있다. 발명자들의 검토로는 백혈구의 양은 필터 여과에 의해 1/25000 정도로 저감할 수 있다.
그러나, 혈액 7.5ml 중에는 백혈구가 5천만개 정도 존재하는 경우도 있다. 그러면, 백혈구가 2000개 정도(1000 내지 10000개)는 잔존해 버린다.
백혈구가 2000개 잔존했다 하더라도, 암세포의 카운트는 가능하다. 그러나 그 후의 유전자 해석 등의 다운스트림에서는, 암세포가 적으면 백그라운드가 강해져서, 양호한 결과가 얻어지기 어렵다.
필터법에 있어서 1000 내지 10000개 잔존한 백혈구를 어떻게 저감시킬 것인지와 같은 과제가 남는다.
따라서, 필터 상에 잔존한 백혈구와 암세포를 회수한다. 회수 방법으로서는 필터를 비이커에 침지하는 등의 방법을 생각할 수 있지만, 간편한 것은 역세정이다. 즉, 필터의 반대측으로부터 액을 흘려서, 세포를 회수한다. 이 때의 회수액에는 생체 적합성 중합체를 포함하는 용매를 사용하는 것이 바람직하다.
생체 적합성 중합체를 포함하는 용매로서는, 포유 동물의 혈청 혹은 혈장을 들 수 있다. 혈장은 항응고제가 들어 있는 채혈관으로 채혈하고 방치 또는 원심 분리한 경우에, 혈구 성분의 침전에 의해 생기는 상청이다. 이 혈장은 응고 인자를 포함한다. 한편, 항응고제가 들어 있지 않은 채혈관으로 채혈하고 방치한 경우, 항응고제가 들어 있지 않기 때문에, 혈구 성분이 응고 인자에 의해 응혈한다. 그 경우의 상청이 혈청이며, 혈청은 응고 인자를 결여한다.
포유 동물 중에서도 특성이나 가격을 고려하면, 소, 말, 사람 중에서 선택하는 것이 바람직하고, 특히 소 태아 혈청은 양호한 특성이 얻어지기 쉽다.
혈청 중에는 단백질을 포함한다. 단백질 중에 포함하는 알부민이나 글로불린이 필터 표면에 흡착함으로써, 혈구 성분이 필터 표면에 흡착하는 것을 방지한다. 혈청 중에는 많은 단백질이 존재하지만, 혈청 알부민은 약 50 내지 65%를 차지한다.
알부민은 아미노산이 다수 연결되어 있으므로 아미노기를 다수 갖고 있다. 아미노기는 귀금속(금, 백금, 팔라듐)에 대하여 견고한 배위 결합을 한다.
특히 금은 산화 피막이 거의 존재하지 않으므로, 특별한 전처리를 하지 않아도 알부민과 견고한 결합을 형성한다.
혈청 혹은 혈장의 농도는 1 내지 50%의 범위가 바람직하고, 5 내지 30%의 범위가 더욱 바람직하고, 10 내지 20%의 범위가 더욱 바람직하다.
혈청 혹은 혈장은 수계의 용매로 희석하는 것이 좋고, 인산 등의 완충액이 들어 있는 것이 바람직하다.
추가로 혈청 혹은 혈장 용액에는 혈액의 항응고제가 들어 있는 것이 바람직하다. 이러한 항응고제에는 EDTA나 헤파린, 시트르산나트륨, 불화나트륨 등을 들 수 있지만, 그 중에서 EDTA나 헤파린이 바람직하다.
이와 같이 해서 백혈구와 CTC가 생체 적합성 중합체를 포함하는 용매에 희석된 세포 현탁액이 생기면, 백혈구를 제거한다.
백혈구의 제거에는 종래 공지의 방법인 백혈구의 자기 비즈에 의한 제거법을 사용할 수 있다. 이러한 비즈로서 Dynabeads M-450-CD45(pan-leucocyte)를 들 수 있다.
CD45 항체를 자기 비즈에 반응시킨 비즈를 상기 세포 현탁액에 침지시킨다. 이때, 자기 비즈를 백혈구의 4배 내지 100배 정도 넣으면 좋다. 자기 비즈의 양이 적으면 백혈구의 제거 효율이 저하되고, 자기 비즈의 양이 많으면 고비용으로 이어진다.
자기 비즈와 백혈구를 소정의 시간 반응시킨 후, 자기 비즈를 제거한다.
상기 공정에 의해, 백혈구수를 당초 1000 내지 10000개(7.5ml의 경우) 수준으로부터 10 내지 100개 수준으로 저감하는 것이 가능해진다.
이와 같이 해서 얻어진 세포의 현탁액은 다운스트림이 가능한 수준으로 할 수 있다.
실시예
(필터 1)
감광성 수지 조성물(PHOTEC RD-1225: 두께 25㎛, 히타치가세이 가부시끼가이샤 제조)을 한변이 250㎜인 사각형의 기판(MCL-E679F: MCL의 표면에 필러블 구리박을 접합한 기판, 히타치가세이 고교 가부시끼가이샤 제조)의 편면에 라미네이트했다. 라미네이트 조건은 롤 온도 90℃, 압력 0.3㎫, 컨베이어 속도 2.0m/분으로 행하였다.
이어서, 광의 투과부의 형상이 모서리가 둥근 직사각형, 사이즈가 7.8(짧은 구멍 직경)×100(긴 구멍 직경)㎛이며 개구율 6.7%가 되도록 설계한 유리 마스크를 기판의 포토레지스트 라미네이트면에 정치했다. 본 실시예에 있어서는 동일한 방향을 향한 모서리가 둥근 직사각형이 장축 및 단축 방향으로 일정한 피치로 정렬된 유리 마스크를 사용했다.
계속해서, 600㎜Hg 이하의 진공 하에 있어서, 유리 마스크를 적재한 기판 상부로부터 자외선 조사 장치에 의해 노광량 30mJ/㎠의 자외선을 조사했다.
이어서, 1.0% 탄산나트륨 수용액으로 현상을 행하고, 기판 상에 직사각형의 포토레지스트가 수직으로 세워진 레지스트층을 형성했다. 이 레지스트를 갖는 기판의 구리 노출 부분에 pH가 4.5가 되도록 조정한 니켈 도금액 중 온도 55℃, 약 20분간 약 20㎛ 도금을 행하였다. 니켈 도금액의 조성을 표 1에 나타낸다.
이어서, 얻어진 니켈 도금층을 기판의 필러블 구리박과 함께 박리하고, 이 필러블 구리박을 온도 40℃에서 약 120분간, 교반 처리에서의 약액에 의한 화학적 용해(멕크 브라이트SF-5420B, 멕크 가부시키가이샤)에 의해 제거함으로써 금속 필터가 되는 자립막(20㎜×20㎜)을 취출했다.
마지막으로, 자립막 내에 남은 포토레지스트를 온도 60℃에서 약 40분간, 초음파 처리에서의 레지스트 박리(P3 Poleve, Henkel)에 의해 제거하여, 미세 관통 구멍을 갖는 금속 필터를 제작했다.
이에 의해, 주름·접힘·흠집·컬 등의 손상은 없고, 충분한 정밀도의 관통 구멍을 갖는 금속 필터를 제작했다.
이어서, 산성 탈지액 Z-200(월드 메탈 제조: 상품명)에 금속 필터를 침지하여, 금속 필터 상의 유기물의 제거를 행하였다(40℃ 3분).
수세 후, 비시안계의 무전해 Au 도금인 HGS-100(히타치가세이 제조: 상품명)으로부터 금 공급원인 아황산금을 뺀 액에 의해 80℃ 10분의 조건으로 치환 금도금 전처리를 행하였다.
다음에 비시안계의 치환형 무전해 Au 도금인 HGS-100(히타치가세이 제조: 상품명)에 80℃ 20분 침지하여, 치환 금도금을 행하였다. 치환 금도금의 두께는 0.05㎛였다.
수세 후, 비시안계 환원형 무전해 Au 도금인 HGS-5400(히타치가세이 제조 상품명)에 65℃ 10분 침지하여, 금도금을 행하고, 수세 후 건조를 행하였다. 금도금의 총 두께는 0.2㎛였다.
(비소(非小)세포 암세포주의 조정)
비소세포 암세포주인 NCI-H358 세포를 10% 소 태아 혈청(FBS)을 포함하는 RPMI-1640 배지에서, 37℃, 5% CO2 조건 하에서 정치 배양했다. 트립신 처리에 의해 배양 접시로부터 세포를 박리시켜서 회수하고, 인산 완충액(Phosphate buffered saline, PBS)을 사용해서 세정한 후에, 10μM Cell Tracker Red CMTPX(라이프 테크놀로지스 재팬 가부시키가이샤)로 37℃, 30분간 정치시킴으로써, NCI-H358 세포를 염색했다. 그 후, PBS로 세정하고, 트립신 처리에서 37℃에서 3분간 정치시킴으로써, 세포 덩어리를 해리시켰다. 그 후, 배지에서 트립신 처리를 정지시키고, PBS로 세정 후, 2mM EDTA 및 0.5% 소 혈청 알부민(BSA)을 포함하는 PBS(이하 2mM EDTA-0.5% BSA-PBS라고 한다)에 현탁하여, 조정용 현탁액을 얻었다. 또한, PBS는 인산 완충 생리 식염수이며 와코 쥰야꾸 고교 제조 제품코드 166-23555를 사용했다. BSA는 SIGMA-ALDRICH사 제조(제품명: 소 혈청-동결건조 분말로부터의 알부민, 세포 배양을 위한 바이오 시약(Product Name: Albumin from bovine serum-Lyophilized powder, Bio Reagent for cell culture))의 것을 사용했다. EDTA는 2Na(에틸렌디아민-N,N,N',N'-4아세트산2나트륨염 2수화물)(와코 쥰야꾸 고교 제조 제품코드 345-01865)를 사용했다.
(자기 비즈에 의한 혈액 샘플 중의 CTC의 농축)
(비교예 1)
7.5ml의 혈액 샘플로서, EDTA-2Na 함유 진공 채혈관에 채혈한 정상인 혈액에, 혈액 7.5mL당 1000개의, 앞에서 나온 암세포를 함유시킨 샘플을 사용했다. 샘플 중 백혈구의 수는 470만개/ml 즉, 3525만개/7.5ml였다.
상기에서 제작한 필터를 카트리지에 세트한 CTC 회수 장치: CT6000(히타치가세이 제조 상품명)을 사용해서 실험을 행하였다. CTC 회수 장치는 혈액 샘플, 또는 시약을 도입하기 위한 유로를 구비하고 있고, 유로의 입구는, 시린지를 가공해서 제작한 리저버에 접속했다. 이 리저버에, 혈액 샘플이나 시약을 순차 투입해 감으로써, CTC의 포착, 염색, 세정 등의 조작을 연속적으로 용이하게 행할 수 있도록 했다.
먼저, 리저버에, 2mM EDTA-10.0% FBS(소 태아 혈청)-PBS(Gibco 제조 PBS pH 7.4) 1ml(이하 세정액)를 도입하고, 필터 상을 채워서, 10분 방치했다. 계속해서, 연동 펌프를 사용해서 유속 200μL/분으로 송액을 개시했다. 그 후, 샘플 1을 투입했다. 약 5분 후, 리저버에 9mL의 세정액을 도입해서 세포의 세정을 행하였다.
다음에 PBS에 4% PFA를 녹인 액을 카트리지에 넣고, 세포를 15분 침지했다. 세정 후, 세정액에 0.2% TritonX를 녹인 액을 카트리지에 넣고, 세포를 15분 침지했다.
또한 10분 후, 펌프 유속을 20μL/분으로 변경하고, 리저버에 600μL의 세포 염색액(Hoechst 33342: 30μl, Wash buffer: 300ml)을 도입하여, 필터 상의 암세포 또는 백혈구를 형광 염색했다. 필터 상에 포착된 세포에 대하여 30분간 염색을 행한 후, 리저버에 1mL의 2mM EDTA-0.5% BSA-PBS를 도입해서 세포의 세정을 행하였다.
계속해서, 컴퓨터 제어식 전기 스테이지 및 냉각 디지털 카메라(DP70, 올림푸스 가부시키가이샤)를 장비한 형광 현미경(BX61, 올림푸스 가부시키가이샤)을 사용해서 필터를 관찰하여, 필터 상의 암세포 및 백혈구의 수를 카운트했다.
Hoechst 33342 및 Cell Tracker Red CMTPX 유래의 형광을 관찰하기 위해서, 각각 WU 및 WIG 필터(올림푸스 가부시키가이샤)를 사용해서 화상을 취득했다. 화상 취득 및 해석 소프트웨어에는 Lumina Vision(미따니 쇼지 가부시키가이샤)을 사용했다. 결과를 표 2에 나타낸다. 세포 회수율(%)=필터에 회수된 암세포수/혈액 샘플에 혼합한 암세포수×100%. 백혈구의 수는 Hoechst 33342로 염색된 세포수에서 암세포수를 빼는 것으로 산출했다. 이상의 방법으로 비교예 1에 관한 실험을 행하였다.
(비교예 2)
당초의 혈액량을 7.5ml가 아니고 15ml로 한 것 이외에는 비교예 1과 마찬가지 방법으로 실험을 행하였다.
(비교예 3)
당초의 혈액량을 7.5ml가 아니고 30ml로 한 것 이외에는 비교예 1과 마찬가지 방법으로 실험을 행하였다.
(실시예 1)
7.5ml의 혈액 샘플로서, EDTA-2Na 함유 진공 채혈관에 채혈한 정상인 혈액에, 혈액 7.5mL당 1000개의, 앞에서 나온 암세포를 함유시킨 샘플을 사용했다. 샘플 중 백혈구의 수는 470만개/ml 즉, 3525만개/7.5ml였다.
상기에서 제작한 필터를 카트리지에 세트한 CTC 회수 장치: CT6000(히타치가세이 제조 상품명)을 사용해서 혈액 여과를 행하였다. CTC 회수 장치는 혈액 샘플이나 시약을 도입하기 위한 유로를 구비하고 있고, 유로의 입구는, 시린지를 가공해서 제작한 리저버에 접속했다. 이 리저버에, 혈액 샘플 또는 시약을 순차 투입해 감으로써, CTC의 포착, 염색, 세정 등의 조작을 연속적으로 용이하게 행할 수 있도록 하였다.
먼저, 리저버에, 2mM EDTA-10.0% FBS(소 태아 혈청)-PBS(Gibco 제조 PBS pH 7.4) 1ml(이하 세정액)을 도입하고, 필터 상을 채워서, 10분 방치했다. 계속해서, 연동 펌프를 사용해서 유속 200μL/분으로 송액을 개시했다. 그 후, 혈액 샘플을 투입했다. 약 5분 후, 리저버에 9mL의 세정액을 도입해서 세포의 세정을 행하였다.
이어서, 세정액을 필터의 반대로부터 흘려서(역세정), 필터 상의 세포를 회수하여, 10ml의 세포가 들어간 현탁액을 얻었다.
자기 비즈에 CD45 항체를 붙인 Dynabeads CD45를 4.0×105개 분산액 1ml(0.1% BSA, 0.02% Sodium azide(나트륨 아지드), PBS pH 7.4)을 투입하고, 소정 시간 반응 후, 자기 비즈를 자석에 의해 사용해서 취출하고, 남은 암세포가 들어간 현탁액 1을 얻었다.
상기에서 제작한 필터를 카트리지에 세트한 CTC 회수 장치: CT6000(히타치가세이 제조 상품명)을 사용해서 CTC의 회수 작업을 행하였다. CTC 회수 장치는 혈액 샘플이나 시약을 도입하기 위한 유로를 구비하고 있고, 유로의 입구는, 시린지를 가공해서 제작한 리저버에 접속했다. 이 리저버에, 혈액 샘플이나 시약을 순차 투입해 감으로써, CTC의 포착, 염색, 세정 등의 조작을 연속적으로 용이하게 행할 수 있도록 했다.
먼저, 리저버에, 2mM EDTA-10.0% FBS(소 태아 혈청)-PBS(Gibco 제조 PBS pH 7.4) 1ml(이하 세정액)를 도입하고, 필터 상을 채워서, 10분 방치했다. 계속해서, 연동 펌프를 사용해서 유속 200μL/분으로 송액을 개시했다. 그 후, 현탁액 1을 투입했다. 약 5분 후, 리저버에 9mL의 세정액을 도입해서 세포의 세정을 행하였다.
다음에 PBS에 4% PFA를 녹인 액을 카트리지에 넣고, 세포를 15분 침지했다.
세정 후, 세정액에 0.2% TritonX를 녹인 액을 카트리지에 넣고, 세포를 15분 침지했다.
또한 10분 후, 펌프 유속을 20μL/분으로 변경하고, 리저버에 600μL의 세포 염색액(Hoechst 33342: 30μl, Wash buffer: 300ml)을 도입하여, 필터 상의 암세포 또는 백혈구를 형광 염색했다. 필터 상에 포착된 세포에 대하여 30분간 염색을 행한 후, 리저버에 1mL의 2mM EDTA-0.5% BSA-PBS를 도입해서 세포의 세정을 행하였다.
계속해서, 컴퓨터 제어식 전기 스테이지 및 냉각 디지털 카메라(DP70, 올림푸스 가부시키가이샤)를 장비한 형광 현미경(BX61, 올림푸스 가부시키가이샤)을 사용해서 필터를 관찰하여, 필터 상의 암세포 및 백혈구의 수를 카운트했다.
Hoechst 33342 및 Cell Tracker Red CMTPX 유래의 형광을 관찰하기 위해서, 각각 WU 및 WIG 필터(올림푸스 가부시키가이샤)를 사용해서 화상을 취득했다. 화상 취득 및 해석 소프트웨어에는 Lumina Vision(미따니 쇼지 가부시키가이샤)을 사용했다. 결과를 표 2에 나타낸다. 세포 회수율(%)=필터에 회수된 암세포수/혈액 샘플에 혼합한 암세포수×100%. 백혈구의 수는 Hoechst 33342로 염색된 세포수에서 암세포수를 빼는 것으로 산출했다.
(실시예 2)
당초의 혈액량을 7.5ml가 아니고 15ml로 한 것 이외에는 실시예 1과 마찬가지 방법으로 실시예 2에 관한 실험을 행하였다.
(실시예 3)
당초의 혈액량을 7.5ml가 아니고 30ml로 한 것 이외에는 실시예 1과 마찬가지 방법으로 실시예 3에 관한 실험을 행하였다.
각 실시예 및 비교예의 결과를 표 2에 나타낸다.
비교예 1 내지 3은 자기 비즈를 사용하지 않고 실험을 행한 경우이지만, 백혈구의 잔사가 많아 다운스트림에는 부적합하다. 실시예 1 내지 3은, 비교예의 세포 중의 백혈구를 자기 비즈로 저감시킨 후에 필터를 건 경우이다. 모든 경우도 백혈구가 줄어들어, 다운스트림에 대응할 수 있다. 단, 자기 비즈를 행하기 전의 백혈구 수가 많으면, 잔존 백혈구도 그에 수반하여, 늘어나는 경향이 있다. 또한 암세포의 회수율이 저하된다. 필터 여과 후의 백혈구수를 1만개 이하로 하는 것이 바람직하다.
이상 나타낸 바와 같이, 본 발명에서 나타낸 필터와 항원 항체 반응에 의한 백혈구 제거를 조합함으로써, 종래의 필터보다 특성이 향상되어, 다운스트림이 가능해진다.
1 : MCL
2 : 필러블 구리박
2' : 구리판
3 : 포토레지스트
3a : 포토레지스트 노광 부분(노광부)
3b : 포토레지스트 현상 부분(미노광부)
4 : 포토마스크
5 : 도금층
6 : 관통 구멍
7 : 금도금층
2 : 필러블 구리박
2' : 구리판
3 : 포토레지스트
3a : 포토레지스트 노광 부분(노광부)
3b : 포토레지스트 현상 부분(미노광부)
4 : 포토마스크
5 : 도금층
6 : 관통 구멍
7 : 금도금층
Claims (24)
- 혈중 희소 세포를 혈액 내로부터 취출하는 혈중 희소 세포 포획 방법이며, 필터에 의한 혈액 여과 후에 백혈구를 제거하는 공정을 갖는 것을 특징으로 하는 혈중 희소 세포 포획 방법.
- 제1항에 있어서, 상기 백혈구를 제거하는 공정이 백혈구를 자성 비즈에 의해 제거하는 공정인 것을 특징으로 하는 혈중 희소 세포 포획 방법.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 혈액 여과 후에 얻어지는 상기 혈중 희소 세포를 포함하는 액체에 있어서의 백혈구수가 1만개 이하인 것을 특징으로 하는 혈중 희소 세포 포획 방법.
- 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 백혈구를 제거하는 공정에 있어서, 또는 그 후에, 세포 현탁액을 포유 동물의 혈청, 혈장, 또는 이들 유래의 단백질을 포함하는 수용액을 사용하는 공정을 갖는 것을 특징으로 하는 혈중 희소 세포 포획 방법.
- 제4항에 있어서, 상기 포유 동물의 혈청 혹은 혈장이 소, 말 또는 사람 유래인 것을 특징으로 하는 혈중 희소 세포 포획 방법.
- 제4항에 있어서, 상기 포유 동물의 혈청 혹은 혈장이 소 태아 유래인 것을 특징으로 하는 혈중 희소 세포 포획 방법.
- 제4항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 포유 동물의 혈청 혹은 혈장의 수용액 농도가 1% 내지 50%의 범위인 것을 특징으로 하는 혈중 희소 세포 포획 방법.
- 제4항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 혈청 혹은 혈장의 수용액이 인산 완충액을 주성분으로 하는 것을 특징으로 하는 혈중 희소 세포 포획 방법.
- 제4항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 혈청 혹은 혈장의 수용액이 항응고제를 포함하는 것을 특징으로 하는 혈중 희소 세포 포획 방법.
- 제9항에 있어서, 상기 항응고제가 EDTA, 헤파린, 시트르산나트륨 및 불화나트륨 중 어느 하나인 것을 특징으로 하는 혈중 희소 세포 포획 방법.
- 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 혈액 여과 전에 포유 동물의 혈청 혹은 혈장을 포함하는 수용액에 필터를 침지하는 공정을 포함하는 것을 특징으로 하는 혈중 희소 세포 포획 방법.
- 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 혈액 여과 후이며 상기 백혈구를 제거하는 공정 전에 포유 동물의 혈청 혹은 혈장을 포함하는 수용액으로 혈구 세포를 세정하는 공정을 포함하는 것을 특징으로 하는 혈중 희소 세포 포획 방법.
- 제11항 또는 제12항에 있어서, 상기 포유 동물의 혈청 혹은 혈장이 소, 말 또는 사람 유래인 것을 특징으로 하는 혈중 희소 세포 포획 방법.
- 제11항 또는 제12항에 있어서, 상기 포유 동물의 혈청이 소 태아 혈청 혹은 혈장인 것을 특징으로 하는 혈중 희소 세포 포획 방법.
- 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 필터 표면이 금 또는 백금 또는 팔라듐, 혹은 그들의 합금인 것을 특징으로 하는 혈중 희소 세포 포획 방법.
- 제15항에 있어서, 상기 필터가 니켈을 주성분으로 하고, 그의 표면에 금 또는 백금 또는 팔라듐, 혹은 그들의 합금이 도금되어 있는 것을 특징으로 하는 혈중 희소 세포 포획 방법.
- 제15항에 있어서, 상기 필터가 구리를 주성분으로 하고, 그의 표면에 금 또는 백금 또는 팔라듐, 혹은 그들의 합금이 도금되어 있는 것을 특징으로 하는 혈중 희소 세포 포획 방법.
- 제15항에 있어서, 상기 필터가 팔라듐을 주성분으로 하고, 그의 표면에 금 또는 백금, 혹은 그들의 합금이 도금되어 있는 것을 특징으로 하는 혈중 희소 세포 포획 방법.
- 제15항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 필터의 최외층이 금도금인 것을 특징으로 하는 혈중 희소 세포 포획 방법.
- 제15항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 필터의 최외층이 0.05㎛ 내지 1㎛의 귀금속 도금인 것을 특징으로 하는 혈중 희소 세포 포획 방법.
- 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 혈중 희소 세포가 암세포인 것을 특징으로 하는 혈중 희소 세포 포획 방법.
- 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 필터의 관통 구멍의 개구 형상이 원, 타원, 모서리가 둥근 직사각형, 직사각형, 정사각형 중 어느 하나인 혈중 희소 세포 포획 방법.
- 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 필터의 관통 구멍의 개구 형상이 직사각형 및 모서리가 둥근 직사각형 중 어느 하나 이상의 형상을 포함하고, 그의 짧은 변의 길이가 5㎛ 내지 15㎛인 것을 특징으로 하는 혈중 희소 세포 포획 방법.
- 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 필터의 막 두께가 3㎛ 내지 50㎛인 것을 특징으로 하는 혈중 희소 세포 포획 방법.
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Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2013042689A (ja) | 2011-08-23 | 2013-03-04 | Hitachi Chemical Co Ltd | 癌細胞濃縮フィルター |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20140008210A1 (en) * | 2012-07-06 | 2014-01-09 | Aviva Biosciences Corporation | Methods and compositions for separating or enriching cells |
| US20080057505A1 (en) * | 2006-07-14 | 2008-03-06 | Ping Lin | Methods and compositions for detecting rare cells from a biological sample |
| KR101923152B1 (ko) * | 2007-12-04 | 2018-11-28 | 프로테오바이오엑티브스 피티와이 엘티디 | 전구 세포의 보호 및 그의 분화 조절 |
| JP6032207B2 (ja) * | 2011-10-14 | 2016-11-24 | 日立化成株式会社 | 金属フィルターの製造方法 |
| EP2838581A4 (en) * | 2012-04-20 | 2016-03-02 | Agency Science Tech & Res | DEVICE AND METHOD FOR SEPARATING A BIOLOGICAL UNIT FROM A SAMPLING VOLUME |
| CN104302755B (zh) * | 2012-05-14 | 2016-07-06 | 日立化成株式会社 | 癌细胞捕捉用金属过滤器、癌细胞捕捉用金属过滤片、癌细胞捕捉设备及它们的制造方法 |
| CN104178454B (zh) * | 2013-05-24 | 2019-03-08 | 益善生物技术股份有限公司 | 一种循环肿瘤细胞的富集、分析方法 |
| CN103725648A (zh) * | 2013-09-28 | 2014-04-16 | 长沙赢润生物技术有限公司 | 一种新的循环肿瘤细胞富集技术及试剂盒制备方法 |
| SG11201700728WA (en) * | 2014-07-30 | 2017-02-27 | Hitachi Chemical Co Ltd | Method for capturing rare cells in blood |
-
2015
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- 2015-07-30 KR KR1020177002001A patent/KR20170032323A/ko unknown
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2013042689A (ja) | 2011-08-23 | 2013-03-04 | Hitachi Chemical Co Ltd | 癌細胞濃縮フィルター |
Non-Patent Citations (6)
| Title |
|---|
| Deng G, Herrler M, Burgess D, Manna E, Krag D, Burke JF 「Enrichment with anti-cytokeratin alone or combined with anti-EpCAM antibodies significantly increases the sensitivity for circulating tumor cell detection in metastatic breast cancer patients」Breast Cancer Res 2008;10:R 69. |
| Fehm T, Solomayer EF, Meng S, Tucker T, Lane N, Wang J, et al. 「Methods for isolating circulating epithelial cells and criteria for their classification as carcinoma cells」Cytotherapy 2005;7:171-85. |
| Konigsberg R, Obermayr E, Bises G, Pfeiler G, Gneist M, Wrba F, et al. 「Detection of EpCAM positive and negative circulating tumor cells in metastatic breast cancer patients」Acta Oncol 2011;50:700-10. |
| Mostert B, Kraan J, Bolt-de Vries J, van der Spoel P, Sieuwerts AM, Schutte M, et al 「Detection of circulating tumor cells in breast cancer may improve through enrichment with anti-CD146」Breast Cancer Res Treat 2011;127:33-41. |
| Schindlbeck C, Stellwagen J, Jeschke U, Karsten U, Rack B, Janni W, et al 「Immunomagnetic enrichment of disseminated tumor cells in bone marrow and blood of breast cancer patients by the Thomsen-Friedenreich-Antigen」Clin Exp Metastasis 2008;25:233-40. |
| Sieuwerts AM, Kraan J, Bolt J, van der Spoel P, Elstrodt F, Schutte M, et al. 「Anti-epithelial cell adhesion molecule antibodies and the detection of circulating normal-like breast tumor cells」J Natl Cancer Inst 2009;101:61-6. |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
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