KR20160132496A - 초분자 조합 치료제 - Google Patents

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KR20160132496A
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모니디파 로이
사마드 호사인
아니루드하 센굽타
상하미트라 밀라바라푸
실라디티아 센굽타
아누브합 무케르지
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인빅터스 온콜로지 피비티. 엘티디.
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Abstract

본 발명은 일반적으로 초분자 조합 치료제, 이를 포함하는 조성물, 및 이의 용도에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 예컨대 지질 이중층 내에 초분자 어셈블리를 만들어, 추가적인 안정화를 제공함으로써 증가된 종양내 농도 및 그에 따라 증가된 효능을 결과시키는, 소수성 탁산-지질 공유 컨쥬게이트를 제공한다. 본 발명은 또한 탁산-지질 컨쥬게이트가 백금 화합물, 키나아제 저해제, 및 면역조절제 중 1종 이상과 조합되어 있는 초분자 조합 치료제 역시도 제공하며, 여기서 상기 백금 화합물, 키나아제 저해제, 및 면역조절제 각각은 지질과 임의로 컨쥬게이트된다.

Description

초분자 조합 치료제{SUPRAMOLECULAR COMBINATORIAL THERAPEUTICS}
관련 출원의 상호 참조
[0001] 이 출원은 2014년 4월 3일자 인도특허출원 No. 975/DEL/2014에 기초한 35 U.S.C. § 119(a)-119(d) 중 1 이상의 이익을 향유하는 출원으로서, 상기 출원의 내용 전체는 본 발명에 참조 통합되었다.
기술 분야
[0002] 본 발명은 일반적으로 초분자 조합 치료제, 이를 포함하는 조성물, 및 이의 용도에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 지질 이중층 및 미셀(micelles) 내에 초분자 어셈블리를 만들어, 추가적인(extra) 안정화를 제공함으로써 증가된 종양내 농도 및 그에 따라 증가된 효능을 결과시키는, 소수성 탁산-지질 공유 컨쥬게이트를 제공한다. 본 발명은 또한 탁산-지질 컨쥬게이트가 백금 화합물, 키나아제 저해제, 및 면역조절제(immunomodulator) 중 1종 이상과 조합되어 있는 초분자 조합 치료제 역시도 제공하며, 여기서 상기 백금 화합물, 키나아제 저해제, 및 면역조절제 각각은 지질과 임의로 컨쥬게이트된다.
[0003] 세계보건기구에 의하면, 암으로 인한 사망은 2008년에 760만명으로부터 2030년 경에는 1200만명까지 증가할 것으로 추산되고 있다. 이러한 문제점을 해소하기 위하여 보다 새로운 치료 전략으로서 2가지 패러다임이 대두되었는데, 이들은: (i) 발암원인을 보다 잘 이해하여, 분자학적으로 "표적화된" 치료법을 개발하는 것과; (ii) 종양에 특이적으로 약물을 전달하는 나노기술을 이용함으로써, 치료율을 향상시키는 것이 그것이다. 그러나, 암 화학요법을 개선하기 위한 독창적인 기회를 제공할 수 있는 이들 2가지 패러다임 간의 인터페이스는 오늘날에도 여전히 탐구되지 않은 채로 남아있다.
[0004] 파클리탁셀, 도세탁셀 및 카바지탁셀은 전이 난소암 및 유방암 치료에 흔히 사용되는 공지의 탁산이다. 이들의 독창적인 항증식 작용 메카니즘과 광범한 활성 스펙트럼은 과학분야에서 커다란 주목을 받아왔다. 탁산은 분열 중의 세포에서 미세관(microtubules)의 초안정화(hyper stabilization)를 촉진함으로 해서 세포 분열에 필요한 미세관의 해체(disassembly)　를 방지한다. 암세포에 대한 높은 효능과 비특이성으로 인해 이것은 오심, 구토, 설사, 어지러움 또는 기면 등과 같은 바람직하지 못한 심각한 부작용을 나타낸다. 수성 매질에 대한 극도의 저조한 불용해성은 또 다른 단점이며, 폴리옥시에틸화 카스터유 / 에탄올과 같은 효과적인 용매 및 적절한 완충제를 이용한 희석이 투여 전에 이용됨으로 해서, 이는 심각한 과민성 면역반응을 일으키게 된다. 투여와 관련한 이 같은 난제를 극복하기 위해, 문헌상으로 다양한 접근법이 알려져 왔다. 미셀, 리포좀 및 에멀젼1 , 2 형태의 파클리탁셀의 개선된 제형은 몇몇 약동학적 프로파일을 극복할 수 있지만 생체내(in vivo) 시스템에서 약물이 담체로부터 급속히 분리된다. 몇몇 접근법에서 수용성이 개선된 새로운 탁산 유사체를 합성함으로써, 약동학이 개선되었다2. 이에 따라, 이러한 어려움을 극복하기 위해 몇 가지 탁산 유사체3가 합성되었으나, 용해도 문제는 여전히 중요한 문제 거리이고, 효능은 급격히 저하된 반면 선택도는 그다지 향상되지 않았다.
[0005] 제형과 관련한 문제점을 해결하고 효능을 개선시키기 위해 몇몇 소수성4, 친지성 탁산5 전구약물이 합성되었는데 여기서는 투과성과 체류성 개선(enhance permeability and retention (EPR)) 현상이 종양에 대한 효과적인 약물 축적법으로 간주되어 생체내 효능이 더 우수한 것으로 간주되고 있다. 이러한 전구약물에 사용되는 지질로는 인지질, 콜레스테롤, 지방산 등을 들 수 있다.
[0006] 백금계 화학치료제는 모든 암의 70%에서 제1선의 치료법으로 이용되고 있다. 시스플라틴은 신독성을 일으키는 시스-[Pt(NH3)2Cl(OH2)]+ 및 시스-[Pt(NH3)2(OH2)]2+을 급속히 형성한다. 또한, 카보플라틴과 옥살리플라틴 두 가지 모두의 물이온화(aquation)는 현저히 느려서, 효능 감소를 야기한다. 최근, 이 분야에서 상당한 진전이 이루어졌는데, Dhar 등 (PNAS, 2008, 105, 17356)은 PLGA-b-PEG 나노입자들 내로 캡슐화되기에 충분히 소수성인 백금 (IV) 복합체 (c,t,c-[Pt(NH3)2(O2CCH2CH2CH2CH2CH3)2Cl2]을 생성하였다. 그러나, 이 경우 전구약물은 시스플라틴으로 세포내 가공되어야 한다. 뿐만 아니라, 폴리머(예컨대 폴리아미도아민 덴드리머-백금 복합체)으로의 백금의 컨쥬게이션에 기초한 대안적인 전략은 유리 시스플라틴에 비해 세포독성의 200-550배 감소를 일으켰다. 이것은 폴리머와 백금 간에 형성된 강력한 결합의 결과였다 (J Pharm Sci, 2009, 98, 2299). 또 다른 예는 AP5280, 즉 카보플라틴보다 덜 강력한 N-(2-히드록시프로필) 메타크릴아미드 코폴리머-결합된 백금이다. 여기서, 백금은 테트라펩타이드 스페이서의 COOH-말단 글리신에 커플링된 아미노말론산 킬레이트화제에 의해 지지되어 있다(Clin Can Res, 2004, 10, 3386; Eur J Can, 2004, 40, 291).
발명의 개요
[0007] 본 발명은 탁산의 전구약물이 긴 순환 기간, 개선된 흡수율 및 종양내 약물의 조절 방출 등과 같은 개선된 약동학 프로파일을 갖는 초분자 구조로 어셈블될 수 있음을 설명한다. 종양으로의 탁산 흡수는 어떤 공동-지질(co-lipid)의 부가와 함께 수성 완충제 중에서 초분자 어셈블리를 만들어 평균 입도 300 nm 미만의 나노입자를 형성함으로써 대량으로 달성될 수 있다. 초분자 어셈블리 뿐만 아니라 전구약물의 분해는 세포 내로 유효한 약물을 방출시킨다. 탁산의 전구약물의 의약 조성물은 에스테르, 에테르, 아미드 또는 기타 링커와의 공유 컨쥬게이션을 통해 탁산이 커플링되어 있는 링커를 포함한다. 지질 분자는 적절한 링커/스페이서를 통해 약물 분자에 컨쥬게이트된 콜레스테롤, 알파 토코페롤, 지방산 또는 기타 자연발생적인 지질분자일 수 있다. 스페이서는 숙신산, 푸마르산, 프로파르길산, 에틸렌 글리콜, 디에틸렌 글리콜, 천연 또는 비천연 아미노산 단독으로 이루어지거나 또는 이들의 여하한 조합으로 이루어질 수 있다.
[0008] 본 발명은 초분자 조합 치료제 (SCT)를 제공한다. 본 발명은 또한 조성물, 예컨대 초분자 조합 치료제를 포함하는 의약 조성물 역시도 제공한다. 본 발명에서, "초분자 조합 치료제" 또는 "SCT"라는 용어는 그 구조 내 또는 그 구조 상에서 전달될 활성물질이 그 구조에 공유적으로 (또는 달리 화학적으로) 결합되는 것이 아니라, 그 구조 내에 또는 그 구조에 의해 물리적으로 또는 기계적으로 함유되어 있는 나노 크기 또는 마이크로 크기의 구조물을 가리킨다. 이러한 구조는 반 데어 발스 힘 또는 기타 비공유 결합 형태에 의해 안정화될 수 있다. 초분자 조합 치료제는 입자, 리포좀, 미셀, 에멀젼의 형태일 수 있으나 이에 한정되지 않는다.몇몇 구체예에서, 초분자 조합 치료제는 탁산이 그 안에 존재하거나 또는 지질층 외표면 상에 있는, 루멘(lumen)을 형성하는 지질층을 갖는 입자 형태일 수 있다.
[0009] 특정 구체예는 탁산-지질 컨쥬게이트가 백금 화합물, 키나아제 저해제, 및 면역조절제 중 1종 이상과 조합되어 있는 초분자 조합 치료제를 제공하는데, 여기서 상기 백금 화합물, 키나아제 저해제, 및 면역조절제 각각은 지질과 임의로 컨쥬게이트되어 있다.
[0010] 또 다른 측면에서, 본 명세서에는 본 발명의 초분자 조합 치료제를 암 치료를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 암 치료방법이 설명되어 있다. 몇몇 구체예에서, 암은 : 유방암; 난소암; 신경아교종(glioma); 위장관암; 전립선암; 암종, 폐암종, 간세포 암종, 고환암; 자궁경부암; 자궁내막암; 방광암; 두경부암; 폐암; 위식도암, 및 부인과암으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 몇몇 구체예에서, 이 방법은 환자에게 1종 이상의 부가적인 항암 치료를 공동-투여(실시)하는 것을 도 포함한다. 몇몇 구체예에서, 부가적인 치료는 외과수술, 화학요법, 방사선요법, 열요법, 면역요법, 호르몬요법, 레이저요법, 항혈관신생 요법, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 몇몇 구체예에서, 부가적인 치료는 한자에게 항암제를 투여하는 것을 포함한다.
[0011] 본 발명은 또한 암 환자가 백금염 또는 탁산에 비해 자가-조립된 초분자 입자에 더 잘 반응할 가능성을 예측하는 방법도 제공한다. 일반적으로 이 방법은 1종 이상의 CAV1, CAV2, CAV3, LDLR, SMAD7, SMURF2, NEDD4 및 PRKCA의 발혀누준을 분석하여, CAV1, CAV2, CAV3, LDLR, SMAD7, SMURF2, NEDD4, PRKCA 중 적어도 1종의 발현 수준이 증가한 경우 이것이 자가-조립된 초분자 입자를 포함하는 치료에 긍정적인 반응을 나타내는 것으로 파악하는 것이다. 몇몇 구체예에서, 샘플은 종양 샘플일 수 있다. 또한, 샘플은 생검 샘플이거나 복수로부터의 세포 또는 흉막 삼출로부터의 세포일 수 있다. 분석 대상 샘플은 고정된, 왁스-포매된 조직 샘플일 수 있다.
[0012] 도 1은 본 발명의 일 구체예에 따른 신규한 초분자 탁산 2의 인 비트로 특징화를 나타낸다.
[0013] 도 2는 본 발명의 일 구체예에 따른 신규한 초분자 탁산 16의 인 비트로 특징화를 나타낸다.
[0014] 도 3은 반응성(빗금 없음) 및 비반응성(빗금 있음)세포주에서 qPCR에 의한 CAV1 mRNA의 발현을 나타낸다.
[0015] 도 4는 신규한 초분자 탁산이 암세포 표면에서 발현되는 단백질, 수용체 또는 마커와 결합하는 항체에 부착되어 있는, 본 발명의 일 구체예에 따른 초분자 조합 치료제 (SCT) 분자의 인 비트로 특징화를 나타낸 도면이다.
[0016] 도 5는 4T1 (TNBC) 종양에 대한 항-PD-L1 및 IO-125의 치료 효과를 나타낸다.
[0017] 일반적으로 초분자 조합 치료제는 탁산-지질 컨쥬게이트를 포함한다. 이 초분자 조합 치료제는 오직 1종의 탁산 컨쥬게이트 또는 2종 이상의 상이한 탁산 컨쥬게이트를 포함할 수 있는 것으로 이해되어야 한다. 따라서, 몇몇 구체예에서, 초분자 조합 치료제는 오직 1종의 탁산 컨쥬게이트 만을 포함한다 . 또 다른 몇몇 구체예에서, 초분자 조합 치료제는 적어도 2종 (예컨대, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10종 이상)의 상이한 종류의 탁산 컨쥬게이트를 포함한다. 상이한 종류의 탁산 컨쥬게이트라 함은 컨쥬게이트 내의 적어도 1종의 요소가 다른 요소와 상이함을 의미한다. 예컨대, 상이한 종류의 컨쥬게이트는 컨쥬게이트 내의 특이한 탁산, 컨쥬게이트 내의 특이한 지질, 또는 탁산과 지질이 한데 컨쥬게이트되는 방식, 즉 링커에 의해 상이할 수 있다. 몇몇 구체예에서, 탁산-지질 컨쥬게이트는 카바지탁셀-콜레스테롤 컨쥬게이트이다.
[0018] 탁산 컨쥬게이트에 더해 초분자 조합 치료제는 지질 컨쥬게이트된 키나아제 저해제를 더 포함할 수 있다. 따라서, 몇몇 구체예에서, 초분자 조합 치료제는 탁산-지질 컨쥬게이트 및 키나아제 저해제-컨쥬게이트를 포함한다. 탁산 컨쥬게이트 및 키나아제 저해제 컨쥬게이트를 포함하는 초분자 조합 치료제는 이들 컨쥬게이트들을 원하는 어떠한 조합이나 비율로든 가질 수 있다. 예컨대, 초분자 조합 치료제는 2종 이상 (예컨대 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10종 이상)의 상이한 종류의 탁산 컨쥬게이트와 1종의 키나아제 저해제 컨쥬게이트를 포함할 수 있다. 몇몇 다른 구체예에서, 초분자 조합 치료제는 1종의 탁산 컨쥬게이트와 2종 이상 (예컨대 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10종 이상)의 상이한 종류의 키나아제 저해제 컨쥬게이트를 포함할 수 있다. 또 다른 몇몇 다른 구체예에서, 초분자 조합 치료제는 2종 이상 (예컨대 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10종 이상)의 상이한 종류의 탁산 컨쥬게이트와 2종 이상 (예컨대 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10종 이상)의 상이한 종류의 키나아제 저해제 컨쥬게이트를 포함할 수 있다. 특정한 예시적인 구체예에서, 키나아제 저해제는 PI3K 저해제이다. 또 다른 몇몇 구체예에서, 초분자 조합 치료제는 2종 이상 (예컨대 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10종 이상)의 상이한 종류의 백금 컨쥬게이트, 2종 이상 (예컨대 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10종 이상)의 상이한 종류의 탁산 컨쥬게이트, 및 2종 이상 (예컨대 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10종 이상)의 상이한 종류의 키나아제 저해제 컨쥬게이트를 포함할 수 있다. 몇몇 구체예에서, 초분자 조합 치료제는 임의로 지질과 컨쥬게이트된 항-PD-L1 항체 (또는 그의 항원 결합 단편)을 더 포함한다.
[0019] 초분자 조합 치료제는 또한 지질과 컨쥬게이트된 백금 화합물을 포함할 수도 있다. 따라서, 몇몇 구체예에서, 초분자 조합 치료제는 탁산-지질 컨쥬게이트 및 백금 컨쥬게이트를 포함한다. 탁산 컨쥬게이트 및 백금 컨쥬게이트를 포함하는 초분자 조합 치료제는 이들 컨쥬게이트들을 소망되는 어떠한 조합이나 비율로든 가질 수 있다. 예컨대, 초분자 조합 치료제는 2종 이상 (예컨대 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10종 이상)의 상이한 종류의 탁산 컨쥬게이트와 1종의 백금 컨쥬게이트를 가질 수 있다. 몇몇 다른 예에서, 초분자 조합 치료제는 1종의 탁산 컨쥬게이트와 2종 이상 (예컨대 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10종 이상)의 상이한 종류의 백금 컨쥬게이트를 포함할 수 있다. 또 다른 몇몇 다른 구체예에서, 초분자 조합 치료제는 2종 이상 (예컨대 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10종 이상)의 상이한 종류의 탁산 컨쥬게이트와 2종 이상 (예컨대 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10종 이상)의 상이한 종류의 백금 컨쥬게이트를 포함할 수 있다. 몇몇 구체예에서, 초분자 조합 치료제는 또한 임의로 지질과 컨쥬게이트된 항-PD-L1 항체 (또는 그의 항원 결합 단편)를 추가로 포함한다.
[0020] 몇몇 구체예에서, 초분자 조합 치료제는 또한 지질과 컨쥬게이트된 항체 (또는 그의 항원 결합 단편)를 더 포함한다. 항체는 치료 목적상 (즉, 치료제 항체) 또는 초분자 조합 치료제를 원하는 위치로 표적화시키는데 있어서 (즉, 표적 항체) 유용할 수 있으나 이에 한정되지 않는다.
[0021] 몇몇 구체예에서, 초분자 조합 치료제는 또한 면역조절제(immunomodulator)를 포함한다. 면역조절제는 면역요법의 활성물질이며, 면역반응을 활성화시키거나 억압할 수 있다. 특정 구체예에서, 면역조절제는 암세포에 대한 면역 반응을 활성화 및 자극하는데, 이의 비제한적인 예로는 면역 세포(예컨대, 내추럴 킬러 세포, 림포카인-활성화된 킬러 세포, 세포독성 T 세포 및 수지상 세포), 항체 (예컨대, 항-PD-L1 및 항-PD-1 항체, 항-CD52, 항-VEGF-A, 항-CD30, 항-EGFR, 항-CD33, 항-CD20, 항-CTLA4, 및 항-HER-2 항체), 및 시토카인 (예컨대, 인터페론 및 인터류킨)을 들 수 있다. 특정한 예시적인 구체예에서, 면역조절제는 지질과 컨쥬게이트된다.
[0022] T 세포 활성화를 조절하는 한 가지 중요한 네거티브 공동-자극 시그널은 프로그램된 death-1 수용체 (PD-1 )(CD279), 및 그의 리간드 바인딩 파트너 PD-L1 (B7-H1, CD274) 및 PD-L2 (B7-DC, CD273)에 의해 제공된다. PD-1의 네거티브 조절 역할은 자가면역 경향이 있는 PD-1 녹 아웃(Pdcdl''')에 의해 밝혀졌다 [Nishimura 등, Immunity JJ. : 141-51 (1999); Nishimura 등, Science 291: 319-22 (2001)]. PD-1은 T 세포, B 세포, 내추럴 킬러 T 세포, 활성화된 단핵구 및 수지상 세포(DCs) 상에서 발현될 수 있다. PD-1은 활성화된, 그러나 자극되지 않은 인간 CD4+ 및 CD8+ T 세포, B 세포 및 골수세포에 의해 발현된다. 이것은 CD28 및 CTLA-4의 보다 제한적인 발현과 대조적인 것이다 [Nishimura 등, Int. Immunol. 8: 773-80 (1996); Boettler 등, J. Virol. 80: 3532-40 (2006)]. PD-L1은 마우스 T 및 B 세포, CD, 대식세포, 중간엽 줄기 세포 및 골수-유래된 비만 세포에서 구조적으로 발현된다 [Yamazaki 등, J. Immunol. 169: 5538-45 (2002)]. PD-L1은 광범위한 비조혈세포 (예컨대, 각막, 폐, 혈관 상피, 간의 비실질(liver nonparenchymal) 세포, 중간엽 줄기 세포, 췌장 소도, 태반의 영양막(placental synctiotrophoblasts), 각질세포 등)에서 발현되며 [Keir 등, Annu. Rev. Immunol. 26: 677-704 (2008)], 활성화 후, 다양한 세포 종류에서 상향조절된다. PD-L2 발현은 PD-L1에 비해 더 제한된다. PD-L2는 DCs, 대식세포, 및 골수-유래된 비만 세포 상에서 유도적으로 발현된다. PD-L2는 또한 휴지기의 복막 Bl 세포의 약 절반 내지 2/3에서 발현되지만 통상적인 B2 B 세포에서는 발현되지 않는다 [Zhong 등, Eur. J. Immunol. 37: 2405-10 (2007)].
[0023] PD-1 시그널링은 일반적으로 세포 증식에 대해서 보다 시토카인 생성에 더 큰 영향을 미치며, IFN-γ, TNF-α 및 IL-2 생성에 유의적인 영향을 미친다. PD-1 매개된 저해 시그널링은 또한 TCR 시그널링의 강도에도 의존하며, 낮은 수준의 TCR 자극에서 더 큰 억제가 전달된다. 이러한 감소는 CD28[Freeman 등, J. Exp. Med. 192: 1027-34 (2000)] 또는 IL-2의 존재 [Carter 등, Eur. J. Immunol. 32: 634-43 (2002)]를 통한 공동 자극에 의해 극복될 수 있다. PD-L1 및 PD-L2를 통한 시그널링이 양방향일 수 있다는 증거가 쌓이고 있다. 즉, TCR 또는 BCR 시그널링의 변형에 더해, 시그널링이 PD-L1 및 PD-L2를 발현하는 세포로 다시 전달될 수도 있다. 발덴스트롬 마크로글로불린혈증 환자로부터 분리된 천연의 인간 항-PD-L2 항체에 의한 수지상 세포 처리는 MHC II 또는 B7 공동자극 분자를 상향조절하지 않는 것으로 나타난 반면, 이러한 세포들은 전염증 시토카인, 특히 TNF-α 및 IL-6을 더 많은 양으로 생산하고, T 세포 증식을 자극하였다 [Nguyen 등, J. Exp. Med. 196: 1393-98 (2002)]. 또한 마우스들을 이 항체로 처리하면 (1) 이식된 B16 흑색종에 대한 내성이 증가되어 종양-특이적인 CTL를 급속히 유도하고 [Radhakrishnan 등, J. Immunol. 170: 1830-38 (2003); Radhakrishnan 등, Cancer Res. 64: 4965-72 (2004); Heckman 등, Eur. J. Immunol. 37: 1827-35 (2007)]; (2) 알레르기성 천식의 동물 모델에서 기도염증 질환의 발병을 차단한다 [Radhakrishnan 등, J. Immunol. 173: 1360-65 (2004); Radhakrishnan 등, J. Allergy Clin.Immunol. UJy. 668-74 (2005)]. Further evidence of reverse 시그널링 into 수지상 세포("DCs: dendritic cells")로의 역 시그널링의 또 다른 증거는 가용성 PD-1(Ig 불변부 - "s-PD-1"에 융합된 PD-1 EC 도메인)과 함께 배양된 골수 유래 Dc의 연구로부터 찾을 수 있다 [Kuipers 등, Eur. J. Immunol. 36: 2472-82 (2006)]. 이 sPD-1은 항-PD-1의 투여를 통해 가역적인 방식으로, DC 활성화를 억제하고 IL-10 생산을 증가시켰다. 이에 더해, 몇몇 연구들로부터 PD-1과 독립적인 PD-L1 또는 PD-L2에 대한 수용체를 나타내었다. B7.1은 이미 PD-L1에 대한 바인딩 파트너로서 동정된 바 있다 [Butte 등, Immunity 27: 111-22 (2007)]. 화학적인 가교 연구 결과 PD-L1과 B7.1은 이들의 IgV-유사 도메인들을 통해 상호작용할 수 있는 것으로 제안되었다. B7.1:PD-L1 상호작용은 저해 시그널을 T 세포에 유도할 수 있다.
[0024] 본 발명의 특정 측면은 개선된 종양 로딩 및 상향조절된 T 세포-매개된 면역반응성을 갖는, 초분자 구조물로 어셈블될 수 있는 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체와 화학치료약물과의 조합물의 전구약물, 및 이들 초분자의 암 치료 용도를 설명한다.
[0025] 항체 의존성 세포-매개된 세포독성 (ADCC) 활성을 갖는 본 발명에 따른 항-PD-L1 항체는 어떠한 유의적인 독성을 나타냄이 없이, 그의 용해(lysis)를 유도함으로써 PD-L1 산생 종양 세포에 직접 작용한다. 뿐만 아니라, 이들 항체는 인간 PD-L1과 인간 PD-1 간의 상호작용을 차단하여 암 치료를 위한 세포-매개된 면역 반응을 상향조절하는 T-세포 기능을 증진시킨다.
[0026] 또 다른 측면에서, 본 발명에 따라, 본 발명에서 설명된 바와 같은 초분자 조합 치료제를 암 치료를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 암의 치료방법이 설명된다. 몇몇 구체예에서, 암은: 유방암; 난소암; 신경아교종; 위장관암; 전립선암; 암종, 폐암종, 간세포 암종, 고환암; 자궁경부암; 자궁내막암; 방광암; 두경부암; 폐암; 위식도암, 및 부인과암으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
[0027] 몇몇 구체예에서, 상기 방법은 또한 1종 이상의 부가적인 항암 치료(제)를 환자에게 공동-실시(투여)하는 것을 더 포함한다. 몇몇 구체예에서, 이러한 부가적인 치료는 외과수술, 화학요법, 방사선요법, 열요법, 면역요법, 호르몬요법, 레이저요법, 항혈관신생 요법, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 몇몇 구체예에서, 이러한 부가적인 치료는 환자에게 항암제를 투여하는 것을 포함한다. 몇몇 구체예에서, 이 방법은 대상자에게 1종 이상의 면역조절제를 공동-투여하는 것을 더 포함한다. 몇몇 구체예에서, 면역조절제는 항-PD-L1 또는 항-PD-1 항체이다.
[0028] 종양으로의 백금/ 탁산/항-PD-L1의 흡수는 몇몇 공동-지질(co-lipid)의 첨가와 함께 수성 버퍼 중의 초분자 어셈블리에 의해 300 nm 미만의 평균 입도를 갖는 나노입자 형성에 의해 더 대량으로 달성될 수 있다. 초분자 어셈블리 뿐만 아니라 전구약물의 분해는 유효 약물을 세포 내로 방출시킨다. 백금/탁산의 전구약물의 의약 조성물은 링커를 포함하는데 이 링커에서 백금/탁산은 에스테르, 에테르, 아미드 또는 링커와의 다른 공유 컨쥬게이션을 통해 커플링된다. 지질 분자는 콜레스테롤, 알파 토코페롤, 지방산 또는 적절한 링커/스페이서를 통해 약물 분자에 컨쥬게이트된 그 밖의 자연발생적인 지질 분자일 수 있다. 스페이서는 숙신산, 푸마르산, 프로파르길산, 에틸렌 글리콜, 디에틸렌 글리콜, 천연 또는 비천연 아미노산으로 개별적으로 또는 여하한 조합으로 이루어질 수 있다.
[0029] 몇몇 구체예에서, 초분자 조합 치료제는 입자 형태, 즉 상기 입자가 루멘을 형성하는 지질층을 갖는 입자 형태로서, 백금/탁산/항-PD-L1 컨쥬게이트가 상기 지질층 내에 존재하거나 지질층 외표면 상에 존재한다.
[0030] 일 측면에서, 본 발명은 탁산 컨쥬게이트, 예컨대, 소수성 탁산-지질 컨쥬게이 트를 포함하는 초분자 조합 치료제를 제공한다. 초분자 조합 치료제 중의 컨쥬게이트의 양은 약 1% 내지 약 99% (w/w)의 범위일 수 있다. 예컨대, 초분자 조합 치료제 중의 컨쥬게이트의 양은 약 5% 내지 약 95%, 약 10% 내지 약 90%, 약 15% 내지 약 85%, 약 20% 내지 약 75%, 또는 약 25% 내지 약 50%일 수 있다.
[0031] 몇몇 구체예에서, 조성물은 2종 이상 (예컨대, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10종 이상)의 상이한 탁산 컨쥬게이트를 포함할 수 있다. 상이한 컨쥬게이트들은 어떠한 비율로 존재해도 무방하다. 예컨대, 상이한 컨쥬게이트들은 약 100:1 내지 1:100의 비율로 존재할 수 있다. 몇몇 구체예에서, 상이한 컨쥬게이트들은 약 50:1 내지 1:50, 25:1 내지 1:25, 10:1 내지 1:10, 5:1 내지 1:5, 또는 2.5:1 내지 1:2.5의 범위로 존재할 수 있다. 몇몇 구체예에서, 상이한 컨쥬게이트들은 약 1:1의 비율로 존재할 수 있다.
[0032] 초분자 조합 치료제의 형상, 크기 또는 형태에는 아무런 제한이 없다. 예컨대, 초분자 조합 치료제는 나노 구조 또는 마이크로 구조 형태일 수 있다. 이러한 구조의 비제한적인 예로는 리포좀, 에멀젼, 및 미셀을 들 수 있다. 몇몇 구체예에서, 초분자 조합 치료제는 리포좀 형태일 수 있다. 본 발명에서, "리포좀" 형태에는 지질층에 의해 봉입된 구획물(compartment)이 모두 포함된다. 리포좀은 1개 이상의 지질막을 가질 수 있다. 리포좀은 막의 종류와 크기에 의해 특징지을 수 있다. 소형 단층소포(SUVs: small unilamella vesicles)는 단일막을 가지며 일반적으로 직경이 0.02 내지 0.05 ㎛ 범위이고; 대형 단층소포(LUVS: large unilamellar vesicles)는 일반적으로 크기가 0.05 ㎛를 초과한다. 올리고라멜라 대형 소포와 멀티라멜라 소포는 복수개의, 일반적으로 동심원의 막 층들을 가지며 대체로 0.1 ㎛를 초과한다. 비동심원성 막, 즉 보다 큰 소포 내에 작은 소포를 몇 개 함유하는 리포좀을 다중소포성 소포(multivesicular vesicles)라 칭한다.
[0033] 리포좀을 형성하기 위해 지질 분자는 기다란 비극성(소수성) 부분과 극성(친수성) 부분을 포함한다. 분자의 소수성 및 친수성 부분들은 기다란 분자 구조의 양 말단에 위치하는 것이 바람직하다. 이러한 지질이 물에 분산되면 이들은 라멜라라 칭해지는 이중층 막을 자발적으로 형성한다. 라멜라는 2개의 지질분자 단층으로 구성되며 이들의 비극성(소수성) 표면은 서로 마주보고 있고 극성(친수성) 표면은 수성 매질 쪽을 향하고 있다. 지질에 의해 형성된 막은 세포의 내용물을 에워싸고 있는 세포막의 그것과 유사한 방식으로 수성상의 일부를 에워싼다. 따라서, 리포좀의 이중층은 세포막에 존재하는 단백질 성분이 없는 세포막과 유사성을 갖는다.
[0034] 리포좀 조성물은 기술분야에 알려진 다양한 방법 의해 제조될 수 있다. 예컨대, 미국특허 No. 4,235,871, No. 4,897,355 및 No. 5,171,678; 공개된 published PCT applications WO 96/14057 및 WO 96/37194; Felgner, P. L. 등, Proc. Natl . Acad . Sci ., USA (1987) 8:7413-7417, Bangham, 등 M. Mol . Biol . (1965) 23:238, Olson, 등 Biochim . Biophys . Acta (1979) 557:9, Szoka, 등 Proc . Natl . Acad . Sci . (1978) 75: 4194, Mayhew, 등 Biochim . Biophys . Acta (1984) 775:169, Kim, 등 Biochim . Biophys. Acta (1983) 728:339, 및 Fukunaga, 등 Endocrinol. (1984) 115:757 참조, 이들 문헌의 내용은 그 전체가 본 발명에 참조 통합됨.
[0035] 리포좀은 선택된 크기 범위 내에서 실제로 균일한 크기를 갖도록 제조될 수 있다. 한 가지 효과적인 크기제어 방법은 선택된 균일한 포어 크기를 갖는 일련의 폴리카보네이트 막을 통해 리포좀의 수성 현탁액을 사출시키는 것을 포함하는 것으로; 상기 막의 포어 크기는 그 막을 통한 사출에 의해 제조되는 리포좀의 가장 커다란 크기에 대체로 상응한다. 예컨대, 본 발명에 그 내용 전체가 참조 통합된 미국특허 No. 4,737,323 참조.
[0036] 몇몇 구체예에서, 초분자 조합 치료제의 지질 컨쥬게이트된 성분은 지질층 표면 상에 또는 지질층 내에 존재한다. 몇몇 구체예에서, 초분자 조합 치료제는, 지질 컨쥬게이트된 성분 (예컨대, 컨쥬게이트의 탁산, PI3K 저해제, 백금, 항체 부분)의 지질 비-지질 부분이 지질층의 외표면 상에 존재하는, 리포좀 형태이다.
[0037] 초분자 조합 치료제는 에멀젼의 형태일 수도 있다. 에멀젼은 일반적으로 하나의 지질이 다른 지질 내에 소적(droplets) 형태로 존재하는 대체로 이질적인 시스템이다(Idson, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger 및 Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 199; Rosoff, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger 및 Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., Volume 1, p. 245; Block in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger 및 Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 2, p. 335; Higuchi 등, in Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1985, p. 301 참조). 에멀젼은 종종 2개의 혼합되지 않는 액상들이 밀접히 혼합되어 상호 분산되어 있는 2상 시스템(biphasic system)이다. 일반적으로, 에멀젼은 유중수(w/o) 또는 수중유(o/w) 형태이다. 수성상이 미세 분할되어 부피가 큰 오일상 내로 극미한 소적으로서 분산되는 경우, 결과적인 그 조성물을 유중수(w/o) 에멀젼이라 칭한다. 이와 달리, 오일상이 미세 분할되어 부피가 큰 수성상 내로 극미한 소적으로서 분산될 경우, 결과적인 그 조성물은 수중유(o/w) 에멀젼이라 칭한다. 에멀젼은 분산상에 더해 부가 성분들을 더 함유할 수 있으며 본 발명에 개시된 컨쥬게이트는 수성상 또는 유성상 중의 용액으로서 또는 그 자체로 별도의 상으로서 존재할 수 있다. 유화제, 안정화제, 염료, 및 항산화제와 같은 약학적 부형제들 역시 필요에 따라 에멀젼 내에 존재할 수 있다. 약학적 에멀젼은 또한 예컨대 유중수중유(o/w/o) 및 수중유중수(w/o/w) 에멀젼의 경우처럼, 3상 이상의 상들로 이루어진 다중 에멀젼일 수도 있다. 이러한 복합 제형은 종종 단순한 이중 에멀젼은 제공하지 못하는 어떤 장점들을 제공한다. o/w 에멀젼의 개개의 오일 소적들이 작은 물방울들을 에워싸고 있는 다중 에멀젼은 w/o/w 에멀젼을 구성한다. 마찬가지로, 오일 연속상 내에 안정화된 작은 물 소구체에 의해 에워싸인 오일 소적 시스템은 o/w/o 에멀젼을 제공한다.
[0038] 에멀젼은 열역학적 안정성이 거의 또는 전혀 없는 것이 특징이다. 종종, 에멀젼의 분산상 또는 불연속상이 외부상 또는 연속상 내로 잘 분산되어 제형의 점도나 유화제 수단을 통해 이러한 형태로 유지된다. 에멀젼의 상들은 어느 것이건 반고체 또는 고체일 수 있는데 이는 에멀젼-스타일의 연고 기제 또는 크림의 경우와 마찬가지이다. 그 밖의 에멀젼 안정화 수단은 에멀젼의 어느 상 내로든 혼입될 수 있는 유화제의 사용을 수반한다. 유화제는 4가지 카테고리로 크게 분류될 수 있는데; 합성 계면활성제, 자연발생적인 유화제, 흡수 베이스, 및 미세 분산된 고체가 그것이다(Idson, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger 및 Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 199).
[0039] 표면활성제라고도 알려진 합성 계면활성제는 에멀젼 제형으로 광범한 적용성을 가지며 문헌을 통해 널리 검토된 바 있다 (Rieger, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger 및 Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 285; Idson, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger 및 Banker (Eds.), Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., 1988, volume 1, p. 199). 계면활성제는 일반적으로 양쪽성이며 친수성 부분과 소수성 부분을 포함한다. 계면활성제의 친수성 특성 대 소수성 특성의 비율은 친수성/친유성 밸런스(hydrophile/lipophile balance: (HLB))라고 칭해지며, 제형 제조시 계면활성제의 분류와 선택에 있어 가치있는 도구이다. 계면활성제는 친수성기의 특성에 기초하여 여러가지 클래스, 즉: 비이온, 음이온, 양이온 및 양쪽성계로 분류될 수 있다 (Rieger, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger 및 Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 285).
[0040] 에멀젼 제형에 사용되는 자연발생적인 유화제에는 라놀린, 밀랍, 포스파타이드, 레시틴 및 아카시아가 포함된다. 흡수 베이스는 물을 빨아들여 w/o 에멀젼을 형성하면서도 무루 라놀린 및 친수성 페트롤라툼과 같이, 그의 반고체 점도를 유지하도록, 친수성 특성을 지닌다. 미세하게 분할된 고체 역시 특히 계면활성제와 점성 제제의 조합에에서 우수한 유하제로서 사용되어 왔다. 이들에는 극성 무기 고체 예컨대 중금속 수산화물, 비팽창성 점토 예컨대 벤토나이트, 애터펄자이트, 헥토라이트, 카올린, 몬모릴로나이트, 콜로이드계 알루미늄 실리케이트 및 콜로이드계 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 안료 및 비극성 고체 예컨대 카본 또는 글리세릴트리스테아레이트가 포함된다.
[0041] 다양한 비유화물질 역시도 에멀젼 제형에 포함되어 에멀젼 특성에 기여할 수 있다. 이들의 비제한적인 예로는 지방, 오일, 왁스, 지방산, 지방 알코올, 지방 에스테르, 보습제, 친수성 콜로이드, 보존제 및 항산화제를 들 수 있다 (Block, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger 및 Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 335; Idson, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger 및 Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 199).
[0042] 친수성 콜로이드 또는 하이드로콜로이드에는 자연발생적인 검 및 합성 폴리머 예컨대 다당류 (예컨대 아카시아, 한천, 알긴산, 카라기난, 구아검, 카라야검 및 트라가칸트), 셀룰로스 유도체 (예컨대, 카복시메틸셀룰로스 및 카복시프로필셀룰로스), 및 합성 폴리머 (예컨대, 카보머, 셀룰로스 에테르, 및 카복시비닐 폴리머)가 포함된다. 이들은 물 중에서 분산 및 팽창하여, 분산상 소적 주변에 강한 계면 막을 형성하고 외부상의 점성을 증가시킴으로써 에멀젼을 안정화시키는 콜로이드 용액을 형성한다.
[0043] 에멀젼은 종종 미생물의 성장을 용이하게 뒷받침할 수 있는 탄수화물, 단백질, 스테롤 및 포스파타이드와 같은 몇몇 성분들도 함유할 수 있으므로, 이들 제형은 종종 보존제도 포함한다. 에멀젼 제형에서 흔히 사용되는 보존제로는 메틸 파라벤, 프로필 파라벤, 4급 암모늄 염, 벤잘코늄 클로라이드, p-히드록시벤조산의 에스테르, 및 붕산을 들 수 있다. 항산화제 역시도 제형의 변질을 방지하기 위해 에멀젼 제형에 흔히 첨가된다. 사용되는 항산화제는 자유 래디칼 스캐빈져 예컨대 토코페롤, 알킬 갈레이트(gallates), 부틸화 히드록시아니솔, 부틸화 히드록시톨루엔, 또는 환원제 예컨대 아스코르브산 및 소듐 메타바이설파이트 및 항산화 상승제 예컨대 시트르산, 타르타르산 및 레시틴일 수 있다.
[0044] 피부학적, 경구 및 비경구 경로를 통한 에멀젼 제형의 적용 및 이들의 제조방법이 문헌을 통해 검토되어 왔다(Idson, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger 및 Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 199). 경구 전달을 위한 에멀젼 제형은 제형화의 편의성 뿐만 아니라 흡수성 및 생체이용성 관점에서의 이들의 효율성으로 인해 매우 널리 사용되어 왔다(Rosoff, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger 및 Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 245; Idson, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger 및 Banker (Eds.), 1988, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 199).
[0045] 초분자 조합 치료제는 입자 형태일 수 있다. 본 발명에서, "입자"라는 용어는 리포좀, 에멀젼, 소포(vesicles) 및 지질 입자를 포괄한다. 일반적으로, 입자는 그 형태나 형상에 제한이 없으며 예컨대 구형, 막대형, 타원형, 실린더형, 캡슐, 또는 디스크형일 수 있고; 이들 입자들은 네트워크 또는 응집체의 일부일 수도 있다. 제한 없이, 입자들은 nm 내지 밀리미터대의 크기를 가질 수 있다. 몇몇 구체예에서, 입자는 마이크로입자 또는 나노입자이다. 본 발명에서, "마이크로입자(microparticle)"라는 용어는 입자 크기가 약 1 ㎛ 내지 약 1000 ㎛인 입자를 칭한다. 본 발명에서, "나노입자(nanoparticle)"이라는 용어는 입자 크기가 약 0.1 nm 내지 약 1000 nm인 입자를 가리킨다. 일반적으로 본 발명에 개시된 입자들은 나노입자들이며 평균 직경은 약 5 nm 내지 약 500 nm이다. 몇몇 구체예에서, 입자의 평균 직경은 약 75 nm 내지 약 500 nm, 약 25 nm 내지 약 250 nm, 약 50 nm 내지 약 150 nm, 약 75 nm 내지 약 125 nm, 약 50 nm 내지 약 500 nm, 약 75 nm 내지 약 200 nm, 약 100 내지 약 175 nm, 약 125 nm 내지 약 175 nm, 약 40 nm 내지 약 90 nm, 또는 약 50 nm 내지 약 80 nm이다.
[0046] 몇가지 구체예에서 나노입자의 직경은 약 1 um 미만, 예컨대, 약 1 um 이하의 직경, 약 500 nm 이하의 직경, 약 400 nm 이하의 직경, 약 300 nm 이하의 직경, 약 200 nm 이하의 직경, 약 100 nm 이하의 직경, 약 50 nm 이하의 직경, 또는 약 10 nm 이하의 직경일 수 있다. 몇 가지 구체예에서, 나노입자의 직경은 1 um 미만, 예컨대, 1 um 이하의 직경, 500 nm 이하의 직경, 400 nm 이하의 직경, 300 nm 이하의 직경, 200 nm 이하의 직경, 100 nm 이하의 직경, 50 nm 이하의 직경, 또는 10 nm 이하의 직경일 수 있다. 몇몇 구체예에서, 조성물 내의 나노입자들의 직경은 약 1 nm 내지 약 1 um, 예컨대 약 1 nm 내지 약 500 nm 직경, 약 1 nm 내지 약 200 nm 직경, 약 10 nm 내지 약 200 nm 직경, 약 100 nm 내지 약 200 nm 직경 또는 약 10 nm 내지 약 100 nm 직경이다. 몇몇 구체예에서, 조성물 내의 나노입자들은 직경이 1 nm 내지 1 um, 예컨대 1 nm 내지 500 nm 직경, 1 nm 내지 200 nm 직경, 10 nm 내지 200 nm 직경, 100 nm 내지 200 nm 직경, 또는 10 nm 내지 100 nm 직경일 수 있다.
[0047] 몇몇 구체예에서, 나노입자들은 특정한 크기, 예컨대 직경이 약 200 nm 미만이 되도록 선택할 수도 있다. 특정 크기 및/또는 크기 범위의 나노입자들을 선택하는 방법은 기술분야에 공지이며 비제한적인 예로서, 여과, 침강, 원심분리 및/또는 크로마토그래피법, 예컨대 SEC를 들 수 있다.
[0048] 통상의 기술자라면 대체로 입자들이 표시된 "크기" 주변의 입자 크기 분포를 나타냄을 이해할 것이다. 달리 명시하지 않는 한, 본 발명에서 "입자 크기/입도 (particle size)"라는 용어는 입자의 크기 분포 모드, 즉, 크기 분포로 가장 흔히 일어나는 값을 가리킨다. 입자 크기를 측정하는 방법은 통상의 기술자에게 공지이며, 예컨대 동적 광산란 (예컨대 광상관 분광법, 레이저 회절법, 저각도 레이저 광산란법(LALLS), 및 중각도 레이저 광산란법(MALLS)), 차광법 (예컨대 쿨터 분석법), 또는 기타 기술 (예컨대 레올로지 및 광현미경 또는 전자현미경)에 의한 방법을 들 수 있다.
[0049] 몇몇 구체예에서, 입자는 실제로 구형일 수 있다. "실제로 구형"이라는 의미는 입자의 최장 축 길이 대 최단 수직축 길이의 비율이 약 1.5 이하임을 의미한다. 실제로 구형이라는 것은 대칭 선을 요구하지는 않는다. 또한, 입자들은 입자 전체의 크기에 비해 작은 스케일의 선이나 압흔(indentation) 또는 돌기(protuberance)와 같은 표면 텍스쳐를 가지면서도 여전히 실제로 구형일 수 있다. 몇몇 구체예에서, 입자의 최장축 대 최단축 사이의 길이 비율은 약 1.5 이하, 약 1.45 이하, 약 1.4 이하, 약 1.35 이하, 약 1.30 이하, 약 1.25 이하, 약 1.20 이하 또는 약 1.15 이하 또는 약 1.1 이하일 수 있다. 특정 이론에 구애됨이 없이, 실제로 구형인 입자들에서는 표면 접촉이 최소화되어 보관시 입자의 바람직하지 못한 응집이 최소화된다. 많은 결정 또는 플레이크들은 납작한 표면을 갖는데 이에 의해 이온성 또는 비이온성 상호작용에 의해 응집이 일어날 수 있는 커다란 표면 접촉 면적이 허용될 수 있다. 구체는 훨씬 적은 면적에서 이러한 접촉을 허용한다.
[0050 ] 입자는 예컨대 단분산 또는 다중분산될 수 있고 주어진 분산액 중 입자의 직경 변화는 가변적일 수 있다. 몇몇 구체예에서, 입자들은 실질적으로 동일한 입자 크기를 갖는다. 비교적 큰 입자와 작은 입자 양방이 모두 존재하는, 광범한 크기 분포를 갖는 입자들은 큰 입자들 사이의 공간에 작은 입자들이 채워질 수 있으므로, 새로운 접촉 표면이 만들어진다. 광범한 크기 분포는 결합 응집을 위한 많은 접촉 기회를 만들어냄으로서 보다 큰 구체를 결과시킬 수 있다. 본 발명에 설명된 입자들은 좁은 크기 분포를 가짐으로 해서, 접촉 응집의 기회를 최소화한다. "좁은 크기 분포"라 함은 10번째 백분위수(percentile)의 부피 직경에 대한 작은 구형 입자의 90번째 백분위수의 부피 직경의 비율이 5 이하인 입자 크기 분포이다. 몇몇 구체예에서, 10번째 백분위수의 부피 직경에 대한 작은 구형 입자의 90번째 백분위수의 부피 직경은 4.5 이하, 4 이하, 3.5 이하, 3 이하, 2.5 이하, 2 이하, 1.5 이하, 1.45 이하, 1.40 이하, 1.35 이하, 1.3 이하, 1.25 이하, 1.20 이하 또는 1.15 이하 또는 1.1 이하이다.
[0051] 기하 표준편차(Geometric Standard Deviation: GSD)를 이용하여 좁은 크기 분포를 나타낼 수도 있다. GSD 계산은 15.9% 및 84.1%의 백분율 미만의 누적값에서의 효과적인 컷오프 직경(ECD: effective cutoff diameter)를 결정하는 것을 포함한다. GSD는 84.17% 미만의 ECD 대 15.9% 미만의 ECD의 비율의 제곱근과 같다. GSD는 GSD<2.5인 경우 좁은 크기 분포를 갖는다. 몇몇 구체예에서, GSD는 2 미만, 1.75 미만, 또는 1.5 미만이다. 일 구체예에서, GSD는 1.8 미만이다.
[0052] 탁산 컨쥬게이트에 더해, 초분자 조합 치료제는 1종 이상의 부가적인 지질 및/또는 기타 성분들을 더 포함할 수 있다. 특정 이론에 구애됨이 없이, 기타 지질은 다양한 목적, 예컨대 지질 산화 방지, 이중층의 안정화, 형성시 응집 감소 또는 입자 표면에 대한 리간드 부착 등의 다양한 목적으로, 초분자 조합 치료제에 포함될 수 있다. 여러가지 지질이 존재할 수 있으며, 여기에는 양쪽성, 중성, 양이온, 음이온 지질, 스테롤 및 인지질이 포함되나 이에 한정되지 않는다. 또한, 이러한 지질은 단독으로 또는 상호 조합적으로 사용될 수 있다. 몇몇 구체예에서, 초분자 조합 치료제는 지단백질 입자, 예컨대, HDL 또는 LDL을 추가로 포함한다. 초분자 조합 치료제는 약 1% 내지 약 99% (w/w)의 부가적인 지질 또는 성분을 포함할 수 있다. 또한 부가적인 지질 또는 성분은 컨쥬게이트에 대해 10:1 내지 1:10의 비율로 존재할 수 있다. 2종 이상의 상이한 부가적인 지질이 초분자 조합 치료제 내에 존재할 경우, 각각의 지질은 독립적으로 컨쥬게이트에 대해 10:1 내지 1:10의 비율일 수 있다. 또한, 만일 2종 이상의 상이한 부가적인 지질이 초분자 조합 치료제 내에 존재할 경우, 이러한 2종의 지질은 10:1 내지 1:10의 비율일 수 있다. 비제한적으로, 초분자 조합 치료제의 2종의 부가적인 성분 (컨쥬게이트 및 지질 또는 2종의 상이한 지질)은 10:1 내지 1:10, 5:1 내지 1:5, 또는 2.5:1 내지 1:2.5의 비율일 수 있다. 몇몇 구체예에서, 초분자 조합 치료제 내의 2종의 상이한 성분들은 약 1:1, 약 1:1.2, 약 1:1.5, 약 1:1.7, 약 1:2, 약 1:2.5, 약 1:3, 약 1:3.5, 약 1:4, 약 1:4.5, 약 1:5, 약 1:5.5, 약 1:6, 약 1:6.5, 약 1:7, 약 1:7.5, 약 1:8, 약 1:8.5, 약 1:9, 약 1:9.5, 또는 약 1:10의 비율일 수있다. 만일 초분자 조합 치료제가 3종 이상의 성분을 포함할 경우 어떤 2 성분 간의 비율은 다른 2 성분 간의 비율과 독립적일 수 있다.
[0053] 몇몇 구체예에서, 조성물은 컨쥬게이트에 더해 제1 지질을 더 포함한다.
[0054] 본 발명에서 "지질"이라는 용어는 유기 용매에 용해되는 물질을 의미하며 이의 비제한적인 예로는 오일, 지방, 스테롤, 트리글리세라이드, 지방산, 인지질, 등을 들 수 있다. 제한 없이 지질은 스테롤 지질, 지방산, 지방 알코올, 글리세로지질 (예컨대, 모노글리세라이드, 디글리세라이드, 및 트리글리세라이드), 인지질, 글리세로인지질, 스핑고지질, 프레놀 지질, 사카로지질, 폴리케타이드, 및 이들의 여하한 조합으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 지질은 다가불포화 지방산 또는 알코올일 수 있다. 본 발명에서 "다가불포화 지방산(polyunsaturated 지방산)"이라는 용어는 그의 탄화수소 사슬 내에 탄소-탄소 이중 결합이 2개 이상 존재하는 지방산 또는 알코올을 의미한다. 지질은 또한 고도 불포화 지방산 또는 알코올일 수 있다. 본 발명에서 "고도 불포화 지방산(highly polyunsaturated 지방산)" 또는 "고도 불포화 지방 알코올(highly polyunsaturated fatty alcohol)"이라는 용어는 적어도 18개의 탄소 원자 및 적어도 3개의 이중 결합을 갖는 지방산 또는 알코올을 의미한다. 지질은 오메가-3 지방산일 수 있다. 본 발명에서 "오메가-3 지방산"이라는 용어는 그의 제1 이중 결합이 산 기의 반대쪽 말단으로부터 세어서 3번재 탄소-탄소 결합에서 일어나는 것인 다가불포화 지방산을 의미한다.
[0055] 몇몇 구체예에서, 지질은 콜레스테롤; 1,3-프로판디올 디카프릴레이트/디카프레이트; 10-운데센산; 1--도트리아콘탄올; 1-헵타코산올; 1-노나코산올; 2-에틸 헥산올; 안드로스탄; 아라키드산; 아라키돈산; 아라키딜 알코올; 베헨산; 베헤닐 알코올; 캄풀 MCM C10; 카프르산; 카프릭 알코올; 카프릴 알코올; 카프릴산; 카프릴/카프르산 포화 지방 알코올 C12-C18의 에스테르; 카프릴/카프르 트리글리세라이드; 카프릴/카프르 트리글리세라이드; 세라마이드 포스포릴콜린 (스핑고미엘린, SPH); 세라마이드 포스포릴에탄올아민 (스핑고미엘린, Cer-PE); 세라마이드 포스포릴글리세롤; 세로플라스틱산; 세로트산; 세릴 알코올; 세테아릴 알코올; Ceteth-10; 세틸 알코올; 콜란; 콜레스탄; 콜레스테롤; 시스-11-에이코센산; 시스-11-옥타데센산; 시스-13-도코센산; 클루이틸 알코올; 디호모-γ-리놀렌산; 도코사헥산산; 난 레시틴; 에이코사펜타엔산; 에이코센산; 엘라이드산; 엘라이도리놀레닐알코올; 엘라이도리놀레일 알코올; 엘라이딜 알코올; 에루식산; 에루실 알코올; 에스트란; 에틸렌 글리콜 디스테아레이트 (EGDS); 게딕산; 게딜 알코올; 글리세롤 디스테아레이트 (I형) EP (Precirol ATO 5); 글리세롤 트리카프릴레이트/카프레이트; 글리세롤 트리카프릴레이트/카프레이트 (CAPTEX® 355 EP/NF); 글리세릴 모노카프릴레이트 (Capmul MCM C8 EP); 글리세릴 트리아세테이트; 글리세릴 트리카프릴레이트; 글리세릴 트리카프릴레이트/카프레이트/라우레이트; 글리세릴 트리카프릴레이트/트리카프레이트; 글리세릴 트리팔미테이트 (트리팔미틴); 헤나트리아콘틸산; 헤네이코실 알코올; 헤네이코실산; 헵타코실산; 헵타데칸산; 헵타데실 알코올; 헥사트리아콘틸산; 이소스테아르산; 이소스테아릴 알코올; 라세르산; 라우르산; 라우릴 알코올; 리그노세르산; 리그노세릴 알코올; 리노엘라이드산; 리놀레산; 리놀레닐 알코올; 리놀레일 알코올; 마르가르산; 미드(Mead); 멜리식산; 멜리실 알코올; 몬탄산; 몬타닐 알코올; 미리실 알코올; 미리스트산; 미리스톨산; 미리스틸 알코올; 네오데칸산; 네오헵탄산; 네오노난산; 네르본; 노나코실산; 노나데실 알코올; 노나데실산; 노나데실산; 올레산; 올레일 알코올; 팔미트산; 팔미톨레산; 팔미톨레일 알코올; 펠라곤산; 펠라곤 알코올; 펜타코실산; 펜타데실 알코올; 펜타데실산; 포스파티드산(포스파티데이트, PA); 포스파티딜콜린 (레시틴, PC); 포스파티딜에탄올아민 (세팔린, PE); 포스파티딜이노시톨 (PI); 포스파티딜이노시톨 비스포스페이트 (PIP2); 포스파티딜이노시톨 포스페이트(PIP); 포스파티딜이노시톨 트리포스페이트(PIP3); 포스파티딜세린 (PS); 폴리글리세릴-6-디스테아레이트; 프레그난; 프로필렌 글리콜디카프레이트; 프로필렌 글리콜 디카프릴로카프레이트; 프로필렌 글리콜 디카프릴로카프레이트; 프실산; 레시놀레아산; 레시놀레일 알코올; 사피엔산; 대두 레시틴; 스테아르산; 스테아리돈; 스테아릴 알코올; 트리코실산; 트리데실 알코올; 트리데실산; 트리올레인; 운데실 알코올; 운데실렌산; 운데실산; 바센산; α-리놀렌산; 및 γ-리놀렌산으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
[0056] 몇몇 구체예에서, 제1 지질은 인지질이다.
[0057] 제한 없이, 인지질은 천연 기원, 예컨대 난황 또는 대두 인지질, 또는 합성 또는 반합성 기원의 것일 수 있다. 인지질은 부분적으로 정제 또는 분획화되어 포스파티딜 콜린, 6 내지 22개의 탄소 원자를 갖는 정의된 아실기를 갖는 포스파티딜 콜린, 포스파티딜 콜린, 포스파티딜 에탄올아민, 포스파티딜 이노시톨, 포스파티드산, 포스파티딜 세린, 스핑고미엘린 또는 포스파티딜 글리세롤의 순수한 분획 또는 혼합물을 포함할 수 있다. 적절한 인지질의 비제한적인 예로는, 포스파티딜콜린, 포스파티딜글리세롤, 레시틴, β,γ-디팔미토일-α-레시틴, 스핑고미엘린, 포스파티딜세린, 포스파티드산, N-(2,3-디(9-(Z)-옥타데세닐옥시))-프로-1-필-N,N,N-트리메틸암모늄 클로라이드, 포스파티딜에탄올아민, 리소레시틴, 리소포스파티딜에탄올아민, 포스파티딜이노시톨, 세팔린, 카르디올리핀, 세레브로사이드, 디세틸포스페이트, 디올레오일포스파티딜콜린, 디팔미토일포스파티딜콜린, 디팔미토일포스파티딜글리세롤, 디올레오일포스파티딜글리세롤, 팔미토일-올레오일-포스파티딜콜린, 디-스테아로일-포스파티딜콜린, 스테아로일-팔미토일-포스파티딜콜린, 디-팔미토일-포스파티딜에탄올아민, 디-스테아로일-포스파티딜에탄올아민, 디-미리스토일-포스파티딜세린, 디-올레일-포스파티딜콜린, 디미리스토일 포스파티딜 콜린 (DMPC), 디올레오일포스파티딜에탄올아민 (DOPE), 팔미토일올레오일포스파티딜콜린 (POPC), 계란 포스파티딜콜린 (EPC), 디스테아로일포스파티딜콜린 (DSPC), 디올레오일포스파티딜콜린 (DOPC), 디팔미토일포스파티딜콜린 (DPPC), 디올레오일포스파티딜글리세롤 (DOPG), 디팔미토일포스파티딜글리세롤 (DPPG), -포스파티딜에탄올아민 (POPE), 디올레오일-포스파티딜에탄올아민 4-(N-말레이미도메틸)-시클로헥산-1-카르복실레이트 (DOPE-mal), 1-스테아로일-2-올레오일 포스파티딜콜린 (SOPC), 1,2-디스테아로일-sn-글리셈-3-포스포에탄올아민 (DSPE), 및 이들의 조합, 등을 들 수 있다. 비-인(non-phosphorus) 함유 지질 역시 이용가능하다. 이의 에로는, 스테아릴아민, 도데실아민, 아세틸 팔미테이트, 지방산 아미드, 등을 들 수 있다. 그 밖의 인-결여 화합물, 예컨대 글리코스핑고지질 패밀리, 디아실글리세롤 및 β-아실옥시산 등을 이용 할 수 있다.
[0058] 몇몇 구체예에서, 초분자 조합 치료제 중의 인지질은 1,2-디데카노일-sn-글리세로-3-포스포콜린; 1,2-디에루코일-sn-글리세로-3-포스페이트(나트륨염); 1,2-디에루코일-sn-글리세로-3-포스포콜린; 1,2-디에루코일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민; 1,2-디에루코일-sn-글리세로-3[포스포-rac-(1-글리세롤) (나트륨염); 1,2-디리놀레오일-sn-글리세로-3-포스포콜린; 1,2-디라우로일-sn-글리세로-3-포스페이트(나트륨염); 1,2-디라우로일-sn-글리세로-3-포스포콜린; 1,2-디라우로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민; 1,2-디라우로일-sn-글리세로-3[포스포-rac-(1-글리세롤) (나트륨염); 1,2-디라우로일-sn-글리세로-3[포스포-rac-(1-글리세롤) (암모늄염); 1,2-디라우로일-sn-글리세로-3-포스포세린 (나트륨염); 1,2-디미리스토일-sn-글리세로-3-포스페이트(나트륨염); 1,2-디미리스토일-sn-글리세로-3-포스포콜린; 1,2-디미리스토일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민; 1,2-디미리스토일-sn-글리세로-3[포스포-rac-(1-글리세롤) (나트륨염); 1,2-디미리스토일-sn-글리세로-3[포스포-rac-(1-글리세롤) (암모늄염); 1,2-디미리스토일-sn-글리세로-3[포스포-rac-(1-글리세롤) (나트륨/암모늄염); 1,2-디미리스토일-sn-글리세로-3-포스포세린 (나트륨염); 1,2-디올레오일-sn-글리세로-3-포스페이트(나트륨염); 1,2-디올레오일-sn-글리세로-3-포스포콜린; 1,2-디올레오일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민; 1,2-디올레오일-sn-글리세로-3[포스포-rac-(1-글리세롤) (나트륨염); 1,2-디올레오일-sn-글리세로-3-포스포세린 (나트륨염); 1,2-디팔미토일-sn-글리세로-3-포스페이트(나트륨염); 1,2-디팔미토일-sn-글리세로-3-포스포콜린; 1,2-디팔미토일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민; 1,2-디팔미토일-sn-글리세로-3[포스포-rac-(1-글리세롤) (나트륨염); 1,2-디팔미토일-sn-글리세로-3[포스포-rac-(1-글리세롤) (암모늄염); 1,2-디팔미토일-sn-글리세로-3-포스포세린 (나트륨염); 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스페이트(나트륨염); 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포콜린; 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민; 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3[포스포-rac-(1-글리세롤) (나트륨염); 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3[포스포-rac-(1-글리세롤) (암모늄염); 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포세린 (나트륨염); Egg-PC; 수소첨가된 Egg PC; 수소첨가된 Soy PC; 1-미리스토일-sn-글리세로-3-포스포콜린; 1-팔미토일-sn-글리세로-3-포스포콜린; 1-스테아로일-sn-글리세로-3-포스포콜린; 1-미리스토일-2-팔미토일-sn-글리세로 3-포스포콜린; 1-미리스토일-2-스테아로일-sn-글리세로-3-포스포콜린; 1-팔미토일-2-미리스토일-sn-글리세로-3-포스포콜린; 1-팔미토일-2-올레오일-sn-글리세로-3-포스포콜린; 1-팔미토일-2-올레오일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민; 1-팔미토일-2-올레오일-sn-글리세로-3[포스포-rac-(1-글리세롤)] (나트륨염); 1-팔미토일-2-스테아로일-sn-글리세로-3-포스포콜린; 1-스테아로일-2-미리스토일-sn-글리세로-3-포스포콜린; 1-스테아로일-2-올레오일-sn-글리세로-3-포스포콜린; 및 1-스테아로일-2-팔미토일-sn-글리세로-3-포스포콜린으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
[0059] 몇몇 구체예에서, 인지질은 SPOC, 난(egg) PC, 또는 수소첨가된 대두 PC (HSPC)이다. 일 구체예에서, 조성물 중의 인지질은 SOPC이다.
[0060] 몇몇 구체예에서, 초분자 조합 치료제는 제1 지질과 컨쥬게이트에 더해 제2 지질을 더 포함한다. 몇 가지 추가 구체예에서, 제2 지질은 인지질이다.
[0061] 몇몇 구체예에서, 초분자 조합 치료제는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)을 더 포함한다. PEG는 단독으로 또는 초분자 조합 치료제의 성분과 컨쥬게이트된 상태로 조성물 중에 포함될 수 있다. 예컨대, PEG는 컨쥬게이트 또는 초분자 조합 치료제의 지질 성분과 컨쥬게이트될 수 있다. 몇몇 구체예에서, PEG는 초분자 조합 치료제의 지질 성분과 컨쥬게이트된다. 제한 없이, PEG는 여하한 지질 또는 인지질과 컨쥬게이트될 수 있다. 예컨대, PEG 컨쥬게이트된 지질은 PEG 컨쥬게이트된 디아실글리세롤 및 디알킬글리세롤, PEG- 컨쥬게이트된 포스파티딜에탄올아민, 포스파티드산에 컨쥬게이트된 PEG, PEG 컨쥬게이트된 세라마이드(미국특허 No.　5,885,613), PEG 컨쥬게이트된 디알킬아민, PEG 컨쥬게이트된 1,2-디아실옥시프로판-3-아민, 및 1,2-디스테아로일-sn-글리셈-3-포스포에탄올아민 (DSPE)에 컨쥬게이트된 PEG, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 몇몇 구체예에서, PEG 컨쥬게이트된 지질은 1,2-디스테아로일-sn-글리셈-3-포스포에탄올아민-N-[아미노(폴리에틸렌 글리콜)-2000] (DSPE-PEG2000)이다.
[0062] 몇몇 구체예에서, 초분자 조합 치료제는 표적화 리간드를 더 포함한다. 본 발명에서, "표적화 모이어티" 또는 "표적화 리간드"라는 용어는 선택된 표적, 예컨대 세포, 세포 유형, 조직, 기관, 신체의 일부 또는 구획, 예컨대 세포, 조직 또는 기관 구획에 대해 증강된 친화성을 제공하는 여하한 분자를 일컫는다. 표적화 모이어티 또는 표적화 리간드는 광범한 대상을 포괄할 수 있다. 이러한 리간드는 자연발생적인 분자, 또는 재조합 또는 합성 분자를 포함할 수 있다. 예시적인 표적화 리간드의 예로는, 항체 (폴리클로날 또는 모노클로날), 항체의 항원 결합 단편, 항원, 폴레이트, EGFR, 알부민, 수용체 리간드, 탄수화물, 압타머, 인테그린 수용체 리간드, 케모카인 수용체 리간드, 트랜스페린, 바이오틴, 세로토닌 수용체 리간드, PSMA, 엔도텔린, GCPII, 소마토스타틴, LDL 및 HDL 리간드를 들 수 있으나 이에 한정되지 않는다. 부가적인 예시적인 리간드로는, 폴리라이신 (PLL), 폴리 L-아스파르트산, 폴리 L-글루탐산, 스티렌-말레산 무수물 코폴리머, 폴리(L-락타이드-코-글리콜라이드) 코폴리머, 디비닐 에테르-말레산 무수물 코폴리머, N-(2-히드록시프로필)메타크릴아미드 코폴리머 (HMPA), 폴리에틸렌 글리콜 (예컨대, PEG-2K, PEG-5K, PEG-10K, PEG-12K, PEG-15K, PEG-20K, PEG-40K), MPEG, [MPEG]2, 폴리비닐 알코올 (PVA), 폴리우레탄, 폴리(2-에틸아크릴산), N-이소프로필아크릴아미드 폴리머, 폴리포스파진, 폴리에틸렌이민, 양이온기, 스퍼민, 스퍼미딘, 폴리아민, 슈도펩타이드-폴리아민, 펩티도미메틱 폴리아민, 덴드리머 폴리아민, 아르기닌, 아미딘, 프로타민, 양이온 지질, 양이온 포르피린, 폴리아민의 4급염, 티로트로핀, 멜라노트로핀, 렉틴, 당단백질, 게면활성 단백질 A, 뮤신, 글리코실화 폴리아미노산, 트랜스페린, 비스포스포네이트, 폴리글루타메이트, 폴리아스파테이트, 압타머, 아시알로페투인, 히알루로난, 프로콜라겐, 면역글로불린 (예컨대, 항체), 인슐린, 트랜스페린, 알부민, 당-알부민 컨쥬게이트, 인터컬레이팅제 (예컨대, 아크리딘), 크로스-링커 (예컨대 소랄렌, 미토마이신 C), 포르피린 (예컨대, TPPC4, 텍사피린, 사피린), 폴리시클릭 방향족 탄화수소 (예컨대, 페나진, 디히드로페나진), 인공 엔도뉴클리아제 (예컨대, EDTA), 친지성 분자 (예컨대, 스테로이드, 담즙산, 콜레스테롤, 콜산, 아다만탄 아세트산, 1-피렌 부티르산, 디히드로테스토스테론, 1,3-비스-O(헥사데실)글리세롤, 제라닐옥시헥실기, 헥사데실글리세롤, 보네올, 멘톨, 1,3-프로판디올, 헵타데실기, 팔미트산, 미리스트산,O3-(올레오일)리토콜산, O3-(올레오일)콜렌산, 디메톡시트리틸 또는 페녹사진), 펩타이드 (예컨대, 알파 헬라이칼 펩타이드, 양쪽성 펩타이드, RGD 펩타이드, 세포 투과 펩타이드, 엔도솜용해/융합생성 펩타이드), 알킬화제, 포스페이트, 아미노, 머캅토, 폴리아미노, 알킬, 치환된 알킬, 방사능표지된 마커, 효소, 합텐 (예컨대 바이오틴), 전달/흡수 보조제 (예컨대, 나프록센, 아스피린, 비타민 E, 엽산), 합성 리보뉴클리아제 (예컨대, 이미다졸, 비스이미다졸, 히스타민, 이미다졸 클러스터, 아크리딘-이미다졸 컨쥬게이트, 테트라아자마크로사이클의 Eu3+ 복합체), 디니트로페닐, HRP, AP, 항체, 호르몬 및 호르몬 수용체, 렉틴, 탄수화물, 다가 탄수화물, 비타민 (예컨대, 비타민 A, 비타민 E, 비타민 K, 비타민 B, 예컨대, 엽산, B12, 리보플라빈, 바이오틴 및 피리독살), 비타민 코팩터, 리포다당류, p38 MAP 키나아제의 활성화제, NF-κB의 활성화제, 탄손, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 시토칼라신, 노코다졸, 다플라키놀라이드, 라트룬쿨린 A, 팔로이딘, 스윈홀라이드 A, 인다노신, 미오세르빈, 종양괴사인자 알파 (TNF알파), 인터류킨-1 베타, 감마 인터페론, 천연 또는 재조합 저밀도 지단백질 (LDL), 천연 또는 재조합 고밀도 지단백질 (HDL), 및 세포-침투제 (예컨대, a.helical 세포-침투제)를 들 수 있으나 이에 한정되지 않는다.
[0063] 펩타이드 및 펩티도미메틱 리간드에는 자연발생적인 또는 변형된 펩타이드, 예컨대, D 또는 L 펩타이드; α, β, 또는 γ 펩타이드; N-메틸 펩타이드; 아자펩타이드; 1 이상의 아미드를 갖는 펩타이드, 즉, 1 이상의 우레아, 티오우레아, 카바메이트, 또는 설포닐 우레아 결합으로 결합이 대체된 펩타이드; 또는 시클릭 펩타이드가 포함된다. 펩티도미메틱 (본 발명에서 올리고펩티도미메틱이라고도 칭함)은 천연 펩타이드와 유사한 소정의 3차원 구조로 폴딩될 수 있는 분자이다. 펩타이드 또는 펩티도미메틱 리간드는 약 5-50 아미노산 길이, 예컨대, 약 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 또는 50 아미노산 길이이다.
[0064] 탄수화물 기반 표적화 리간드의 비제한적인 예로는, D-갈락토스, 다가갈락토스, N-아세틸-D-갈락토스 (GalNAc), 다가 GalNAc, 예컨대 GalNAc2 및 GalNAc3; D-만노스, 다가 만노스, 다가 락토스, N-아세틸-갈락토스아민, N-아세틸-글루코스아민, 다가 푸코스, 글리코실화 폴리아미노산 및 렉틴을 들 수 있다. 다가(multivalent)라는 용어는 단당류 유닛이 1개보다 많이 존재함을 가리킨다. 이러한 단당류 서브유닛은 글리코시드 결합을 통해 서로 연결되거나 또는 스캐폴드 분자에 연결될 수 있다.
[0065] 리간드로서 본 발명에 적합한 몇몇 폴레이트 및 폴레이트 유사체가 미국특허 Nos. 2,816,110; 5,552,545; 6,335,434 및 7,128,893에 개시되어 있으며, 이 문헌들의 내용 전체는 본 발명에 참조 통합되었다.
[0066] 표적화를 위해 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 사슬과 같은 친수성 폴리머 사슬로 표면을 코팅하여 입자를 표적화하는 것이 제안된 바 있다(Allen, 등, Biochimica et Biophysica Acta 1237: 99-108 (1995); DeFrees, 등, Journal of the American Chemistry Society 118: 6101-6104 (1996); Blume, 등, Biochimica et Biophysica Acta 1149: 180-184 (1993); Klibanov, 등, Journal of Liposome Research 2: 321-334 (1992); 미국특허 No. 5,013556; Zalipsky, Bioconjugate Chemistry 4: 296-299 (1993); Zalipsky, FEBS Letters 353: 71-74 (1994); Zalipsky, in Stealth Liposomes Chapter 9 (Lasic 및 Martin, Eds) CRC Press, Boca Raton Fl (1995). 리간드, 세포 표면 수용체, 당단백질, 비타민 (예컨대, 리보플라빈), 압타머 및 모노클로날 항체와 같은 그 밖의 표적화 모이어티 역시 이용가능하다. 표적화 모이어티에는 전체 단백질 또는 그의 단편이 포함될 수 있다. 표적 메카니즘은 일반적으로, 표적화 모이어티가 표적, 예컨대 세포 표면 수용체와 상호작용할 수 있도록 하는 방식으로 리포좀 표면에 표적화제를 위치시킬 것을 필요로 한다.
[0067] 몇몇 구체예에서, 표적화 리간드는 암세포 표면에 발현된 마커, 단백질, 또는 수용체에 결합한다. 암세포의 막과 우선적으로 결합 및/또는 가교하는 표적화 리간드는 기술분야에 알려져 있으며, 이의 예로는 iRGD, RGD, Lyp-1 펩타이드 (CGNKRTRGC), NGR 펩타이드, iNGR, RGR 펩타이드, CAR 펩타이드, tCAR 펩타이드 (CARSKNK); FSH-33, 알로스타틴 1, 펜타펩타이드 CREKA, 간암종 표적화　펩타이드, 펩타이드 GFE, 항-EGFR 항체 및/또는 항체 단편, 특히 세툭시맙, CendR,　iRGD　펩타이드 (RGD-CendR 하이브리드 펩타이드), 소분자(small molecules), 예컨대 CEA와 같은 암-특이 에피토프에 결합하는 항체 및/또는 항체 단편, 가스트린-방출 펩타이드 수용체, 소마토스타틴 수용체, 갈라닌 수용체, 여포-자극 호르몬 수용체, p32 단백질, 섬유아세포 성장인자 수용체, HepG2, 상피성장인자 수용체, 인테그린 ανβ6, 뉴로필린-1 수용체 및 VEGF 수용체 및 이의 변이체 또는 조합을 들 수 있다. 몇몇 구체예에서, 표적화제는 iRGD, 예컨대 서열 CRGDKGPDC을 갖는 펩타이드일 수 있다. 몇몇 구체예에서, 표적화 리간드는 EGFR에 결합한다.
[0068] 몇몇 구체예에서, 표적화 리간드는 에피토프 결합 활성 또는 항체-기반 결합 모이어티를 유지하는 폴리클로날 또는 모노클로날 항체 또는 그의 단편이다.
[0069] 몇몇 구체예에서, 표적화 리간드는 암세포 표면에 발현된 단백질 수용체와 결합할 수 있는 폴리클로날 또는 모노클로날 항체, 항체 단편, 펩타이드,이다.
[0070] 몇몇 구체예에서, 표적화 리간드는 C242 항체 (CanAg), 리툭시맙 (CD20), 트라스투주맙 (Her2), 세툭시맙 (EGFR), 베바시주맙 (VEGF), 파니투무맙, 알렘투주맙, 오파투무맙, 겜투주맙 (CD33), 이노투주맙 (CD22), 로르보투주맙 (CD56), 브렌툭시맙 (CD30), 글렘바투무맙 (GPNMB), 그의 에피토프 결합 단편 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 항체이다.
[0071] 표적화 리간드는 예컨대 본 발명에 설명된 초분자 조합 치료제의 표면에 존재하거나 및/또는 본 발명에 설명된 초분자 조합 치료제의 막 또는 지질층 내에 부분적으로 매립(embedded)되어 있다. 표적화제를 통합시키는 방법은 기술분야에 공지이며 이의 비제한적인 예는 본 발명에 설명되어 있다. 몇몇 구체예에서, 본 발명에 설명된 초분자 조합 치료제는 2종 이상의 표적화제를 포함할 수 있고, 예컨대 초분자 조합 치료제는 각기 상이한 표적화제를 포함하는 나노입자들의 조합을 포함하거나 및/또는 조성물은 각기 복수개의 표적화제를 포함하는 나노입자들을 포함할 수 있다. 몇몇 구체예에서, 본 발명에 설명된 초분자 조합 치료제는 1개의 표적화제, 2개의 표적화제, 3개의 표적화제 또는 그 이상의 표적화제를 포함할 수 있다.
[0072] 한 가지 접근법에서, 표적화 리간드는 초분자 조합 치료제의 한 성분(예컨대, 지질)에 연결될 수 있다. 몇몇 구체예에서, 표적화 리간드는 지질과 컨쥬게이트될 수 있다. 다양하고도 상이한 표적화 리간드 및 방법이 기술분야에 공지이고 또 이용가능하며, 이의 예로는 예컨대, in Sapra, P. 및 Allen, TM, Prog . 지질 Res. 42(5):439-62 (2003); 및 Abra, RM 등,J . Liposome Res. 12:1-3, (2002)에 설명된 것들을 들 수 있다. 표적화 모이어티와 컨쥬게이트된 그 밖의 지질이 미국특허 출원 공개 No. US2009/0247608 및 No. US2012/0046478에 설명되어 있으며 이 문헌들의 내용 전체는 본 발명에 참조 통합되었다.
[0073] 몇몇 구체예에서, 조성물은 탁산 컨쥬게이트에 더해 치료제를 더 포함할 수 있다. 제한 없이, 치료제가 초분자 조합 치료제 내에 존재할 경우, 치료제는 초분자 조합 치료제에 의해 둘러 싸이거나; 초분자 조합 치료제의 지질층 내에 존재하거나; 또는 초분자 조합 치료제의 표면에 존재할 수 있다.
[0074] 본 발명에서, "치료제"라는 용어는 진단, 치료, 예방학적 의약 또는 수의학적 목적에서 생명체에게 투여되는 분자, 분자 그룹, 복합체 또는 물질을 의미한다. 본 발명에서, "치료제"라는 용어에는 "약물" 또는 "백신"이 포함된다. 이 용어는 내외부적으로 투여되는 국소용, 국부용 및 전신용의 인간 및 동물용 의약, 치료제, 리메디, 영양보조물질(nutraceuticals), 약용화장품, 생물학적 물질, 장치, 진단제, 및 피임제를 포괄하며, 임상 및 수의용 스크리닝, 예방, 진단, 치유, 웰빙, 검출, 이미징, 진단, 치료, 외과수술, 모니터링, 화장품, 보철구, 법의학 분야에 유용한 제제가 포함된다. 이 용어는 또한 식물, 동물 및/또는 인간과 접촉할 수 있는 세포 수용체, 막 수용체, 호르몬 수용체, 치료용 수용체, 미생물, 바이러스 또는 선택된 표적을 인식할 수 있는 선택된 분자 또는 선택된 핵산 서열을 포함하는 농장, 작업장, 군대, 산업 및 환경분야의 치료제 또는 리메디도 포함한다. 특히 이 용어는 또한 치료효과를 내는 핵산 및 핵산을 포함하는 화합물, 예컨대 데옥시리보핵산 (DNA), 리보핵산 (RNA), 또는 이의 혼합물 또는 조합, 예컨대 DNA나노플렉스(DNAnanoplexes)를 들 수 있다.
[0075] "치료제"라는 용어는 또한 이것이 적용되는 생물학적 시스템 내에서 국소 또는 전신적으로 생물학적, 생리적 또는 치료적 효과를 제공할 수 있는 물질도 포괄한다. 예컨대, 치료제는 특히 감염 또는 염증을 제어하는 작용을 하거나, 세포 성장 및 세포 재생을 증강시키거나, 종양 성장을 제어하고, 진통제로서 작용하며, 항세포 부착을 촉진하고, 뼈 성장을 증강시키는 작용을 할 수 있는 것이다. 그 밖의 적절한 치료제로는 항-바이러스제, 호르몬, 항체, 또는 치료용 단백질을 들 수 있다. 기타 치료제로는 투여 당시에는 생물학적으로 활성적이지 않지만, 일단 대상자에게 투여된 후에는 대사 또는 그 밖의 메카니즘을 통해 생물학적 활성 물질로 변환되는 물질인 전구약물을 들 수 있다. 이에 더해, 실크-기반(silk-based) 약물 전달 조성물은 2종 이상의 치료제의 조합을 함유할 수 있다.
[0076] 치료제로는 광범위한 여러가지 화합물들을 들 수 있으며, 여기에는 화학적 화합물, 화학적 화합물의 혼합물, 예컨대 소형 유기 또는 무기 분자; 사카린; 올리고당; 다당류; 생물학적 마크로분자, 예컨대, 펩타이드, 단백질, 및 펩타이드 유사체 및 유도체; 펩티도미메틱; 항체 (폴리클로날 및 모노클로날) 및 그의 항원결합 단편; 핵산; 핵산 유사체 및 유도체; 세균, 식물, 진균 또는 동물 세포와 같은 생물학적 물질로부터 만들어진 추출물; 동물 조직; 자연발생적 또는 합성 조성물; 및 이들의 조합이 포함된다. 몇몇 구체예에서, 치료제는 소분자이다.
[0077] 본 발명에서, "소분자"라는 용어는 "자연적인 산물과 유사한(natural product-유사)" 화합물을 가리킬 수 있지만, 용어 "소분자"는 "자연적인 산물과 유사한" 화합물로 국한되지 않는다. 오히려, 소분자는 일반적으로 이것이 몇몇개의 탄소-탄소 결합을 함유하고, 분자량이 5000 달톤 (5 kDa) 미만, 좋기로는 3 kDa 미만, 더욱 좋기로는 2 kDa 미만, 및 가장 좋기로는 1 kDa 미만인 것을 특징으로 한다. 몇몇 경우, 분자량이 700 달톤 이하인 소분자가 바람직하다.
[0078] 치료제의 비제한적인 예로는 문헌 [Harrison's Principles of Internal Medicine , 13th Edition, Eds. T.R. Harrison 등 McGraw-Hill N.Y., NY; Physicians' Desk Reference, 50th Edition, 1997, Oradell New Jersey, Medical Economics Co.; Pharmacological Basis of Therapeutics, 8th Edition, Goodman 및 Gilman, 1990; United States Pharmacopeia, The National Formulary, USP XII NF XVII, 1990; current edition of Goodman and Oilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics ; 및 현재판 The Merck Index]에 설명된 것들을 들 수 있으며, 상기 문헌들은 그 내용 전체가 본 발명에 참조 병합되었다.
[0079] 치료제는 초분자 조합 치료제의 한 성분과 연결될 수 있다. 예컨대, 치료제는 초분자 조합 치료제의 지질 또는 인지질 성분과 연결될 수 있다. 치료제 및 초분자 조합 치료제의 성분은 결합 또는 링커를 통해 연결될 수 있다. 이 링커는 적용에 따라 절단가능하거나 불가능할 수 있다. 특정 구체예에서, 절단가능한 링커는 목적하는 표적으로 운반된 후 치료제를 방출시키는데 이용될 수 있다. 컨쥬게이션 또는 커플링 상호반응의 의도된 성질 또는 목적하는 생물학적 효과는 링커기의 선택을 좌우한다. 몇몇 구체예에서, 지질 컨쥬게이트된 치료제 중의 지질은 콜레스테롤이다.
[0080] 초분자 조합 치료제는 치료제 또는 그의 컨쥬게이트를 약 1% 내지 약 99% (w/w) 포함할 수 있다. 또한 치료제 또는 그의 컨쥬게이트는 탁산 컨쥬게이트와 10:1 내지 1:10의 비율로 존재할 수 있다. 제한 없이, 초분자 조합 치료제 중의 탁산 컨쥬게이트 및 치료제 (또는 그의 컨쥬게이트)는 10:1 내지 1:10, 5:1 내지 1:5, 또는 2.5:1 내지 1:2.5의 비율일 수 있다. 몇몇 구체예에서, 초분자 조합 치료제 중의 탁산 컨쥬게이트 및 치료제 (또는 그의 컨쥬게이트)는 약 1:1, 약 1:1.2, 약 1:1.5, 약 1:1.7, 약 1:2, 약 1:2.5, 약 1:3, 약 1:3.5, 약 1:4, 약 1:4.5, 약 1:5, 약 1:5.5, 약 1:6, 약 1:6.5, 약 1:7, 약 1:7.5, 약 1:8, 약 1:8.5, 약 1:9, 약 1:9.5, 또는 약 1:10의 비율로 존재할 수있다.
[0081] 몇몇 구체예에서, 치료제는 항체 (예컨대, 폴리클로날 또는 모노클로날 항체) 또는 그의 항원 결합 단편이다. 일 구체예에서, 치료제는 지질, 예컨대, 콜레스테롤과 컨쥬게이트된 항체 (예컨대, 폴리클로날 또는 모노클로날 항체), 또는 그의 항원 결합 단편이다. 몇몇 구체예에서, 항체는 항-PD-1 항체, 항-PD-L1 항체 및 그의 조합을 포함하는 면역조절제이다. 몇몇 구체예에서, 면역조절제는 지질, 예컨대 콜레스테롤 또는 본 발명에 개시된 그 밖의 지질과 컨쥬게이트된다.
[0082] 몇몇 구체예에서, 치료제는 화학치료제 또는 항암제이다. 본 발명에서 용어 "화학치료제"는 비정상적인 세포 성장을 특징으로 하는 질병을 치료하는데 치료적으로 유용한 여하한 화학물질 또는 생물학적 물질을 가리킨다. 이러한 질환으로는 종양, 신생물 및 암, 그리고 과형성(hyperplastic) 성장에 의해 특징지어지는 질병을 들 수 있다. 이러한 물질은 암세포가 지속적으로 증식하는데 필요한 세포 활성을 억제하는 기능을 할 수 있다. 모든 구체예의 몇몇 측면에서, 화학치료제는 세포 사이클 저해제 또는 세포 분열 저해제이다. 본 발명의 방법에 유용한 화학 치료제의 카테고리에는 알킬화제/알칼로이드제, 항대사산물, 호르몬 또는 호르몬 유사체, 및 다양한 항신생물 약물이 포함된다. 이들 물질 대부분은 암세포에 대해 직간접적으로 독성적이다. 일 구체예에서, 화학치료제는 방사능 분자이다. 통상의 기술자라면 유용한 화학치료제를 쉽게 동정할 수 있을 것이다. 예컨대 문헌 [Slapak 및 Kufe, Principles of Cancer Therapy, Chapter 86 in Harrison's Principles of Internal Medicine, 14th edition; Perry 등, Chemotherapy, Ch. 17 in Abeloff, Clinical Oncology 2nd ed. 2000 Churchill Livingstone, Inc; Baltzer L, Berkery R (eds): Oncology Pocket Guide to Chemotherapy, 2nd ed. St. Louis, Mosby-Year Book, 1995; Fischer D S, Knobf M F, Durivage H J (eds): The Cancer Chemotherapy Handbook, 4th ed. St. Louis, Mosby-Year Book, 1993)] 참조. 몇몇 구체예에서, 화학치료제는 세포독성 화학치료제일 수 있다. 본 발명에서 "세포독성 물질(cytotoxic agent)"이라 함은 세포의 기능을 억제 또는 예방하고 및/또는 세포의 파괴를 일으키는 물질을 가리킨다. 이 용어는 방사능 동위원소 (예컨대 At211, I131, I125, Y90, Re186, Re188, Sm153, Bi212, P32 및 Lu의 방사능 동위원소), 화학치료제, 및 독소, 예컨대 소분자 독소, 세균, 진균, 식물 또는 동물 기원의 효소활성 독소, 이의 단편 및/또는 변이체가 포함된다.
[0083] 화학치료제라는 용어는 상이한 작용 메카니즘을 갖는 많은 화학치료제를 포괄하는 넓은 개념이다. 일반적으로, 화학치료제는 작용 메카니즘에 따라 분류된다. 이용가능한 많은 물질이 다양한 종양의 발달 경로의 항대사산물이거나 또는 종양 세포의 DNA와 반응한다. 또한 토포이소머라제 I 및 토포이소머라제 II와 같은 효소를 억제하는 물질 또는 항유사분열 물질(antimitotic agents)도 있다.
[0084] 화학치료제의 비제한적인 예로는 아로마타제 저해제; 항에스트로겐, 항안드로겐 (특히 전립선암의 경우) 또는 고나도렐린 작용제(agonist); 토포이소머라제 I 저해제 또는 토포이소머라제 II 저해제; 미세관 활성화제, 알킬화제, 항-신생물 항-대사물 또는 플라틴 화합물; 단백질 또는 지질 키나아제 활성 또는 단백질 또는 지질 포스파타제 활성을 표적화/감소시키는 화합물, 추가의 항혈관신생 화합물 또는 세포분화 프로세스를 유도하는 화합물; 브래디키닌 1 수용체 또는 안지오텐신 II 길항제; 시클로옥시게나제 저해제, 비스포스포네이트, 헤파라나제 저해제 (헤파란 설페이트 분해를 방지함), 예컨대, PI-88, 생물학적 반응 변형제, 좋기로는 림포카인 또는 인터페론, 예컨대 인터페론 γ, 유비퀴틴화 저해제 또는 항-아포톱틱 경로를 차단하는 저해제; Ras 종양형성 이소폼의 저해제 또는 파네실 트랜스퍼라제 저해제; 텔로머라제 저해제, 예컨대, 텔로메스타틴; 프로테아제 저해제, 매트릭스 메탈로프로테이나제 저해제, 메티오닌아미노펩티다제 저해제, 예컨대, 벵가미드 또는 그의 유도체; 프로테아좀 저해제, 예컨대, PS-341 (보르테조밉 / 벨케이드); 혈액학적 악성종양 치료에 사용되는 물질 또는 FMS-유사 티로신 키나아제 저해제; HSP90 저해제; 히스톤 데아세틸라제 (HDAC) 저해제; mTOR 저해제; 소마토스타틴 수용체 길항제; 인테그린 길항제; 항-백혈병 화합물; 종양 세포 손상 접근법, 예컨대 이온화 방사선; EDG 바인더; 키나아제 저해제의 안트라닐산 아미드 클래스; 리보뉴클레오타이드 리덕타제 저해제; S-아데노실메티오닌데카복실라제 저해제; VEGF 또는 VEGFR에 대한 항체; 광역학적 치료; 안지오스타틴 스테로이드; AT1 수용체 길항제; ACE 저해제; 등을 들 수 있다.
[0085] 그 밖의 화학치료제의 비제한적인 예로는, 식물성 알칼로이드, 호르몬 물질 및 길항제, 생물학적 반응 변형제, 좋기로는 림포카인 또는 인터페론, 안티센스 올리고뉴클레오타이드 또는 올리고뉴클레오타이드 유도체; 또는 기타 미지의 작용 메카니즘을 갖는 각종 물질 또는 물질들을 들 수 있다.
[0086] 화학치료제는 초분자 조합 치료제의 한 성분에 연결될 수 있다. 예컨대, 화학치료제는 초분자 조합 치료제의 지질 또는 인지질 성분에 연결될 수 있다. 화학치료제 및 초분자 조합 치료제의 한 성분은 결합 또는 링커를 통해 함께 연결될 수 있다. 이 링커는 적용례에 따라 절단가능하거나 불가능할 수 있다. 특정 구체예에서, 절단가능한 링커는 목적하는 표적으로 전달된 후 화학치료제를 방출하는데 이용될 수 있다. 컨쥬게이션 또는 커플링 상호반응의 의도된 특징 또는 목적하는 생물학적 효과는 링커기 선택에 영향을 미친다. 몇몇 구체예에서, 지질 컨쥬게이트된 화학치료제 중의 지질은 콜레스테롤이다.
[0087] 초분자 조합 치료제는 화학치료제 또는 그의 컨쥬게이트를 약 1% 내지 약 99% (w/w) 포함할 수 있다. 또한 화학치료제 또는 그의 컨쥬게이트는 탁산 컨쥬게이트와 10:1 내지 1:10의 비율로 존재할 수 있다. 제한 없이, 초분자 조합 치료제 중의 탁산 컨쥬게이트 및 화학치료제는(또는 그의 컨쥬게이트) 10:1 내지 1:10, 5:1 내지 1:5, 또는 2.5:1 내지 1:2.5의 비율일 수 있다. 몇몇 구체예에서, 초분자 조합 치료제 중의 탁산 컨쥬게이트 및 화학치료제(또는 그의 컨쥬게이트)는 약 1:1, 약 1:1.2, 약 1:1.5, 약 1:1.7, 약 1:2, 약 1:2.5, 약 1:3, 약 1:3.5, 약 1:4, 약 1:4.5, 약 1:5, 약 1:5.5, 약 1:6, 약 1:6.5, 약 1:7, 약 1:7.5, 약 1:8, 약 1:8.5, 약 1:9, 약 1:9.5, 또는 약 1:10의 비율일 수있다.
[0088] 몇몇 구체예에서, 화학치료제는 키나아제 저해제, 예컨대 포스포이노시타이드 3-키나아제 (PI 3-키나아제 또는 PI3K) 저해제일 수 있다. 포스포이노시타이드 3-키나아제는 포스파티딜이노시톨의 이노시톨 고리의 3 위치 히드록실기를 인산화시킬 수 있는 관련 효소의 패밀리이다. 이들은 포스파티딜이노시톨-3-키나아제로도 알려져 있다. PI3Ks는 일련의 인산화 이벤트를 통하여 글루코스 흡수를 조절하기 위해 IRS (인슐린 수용체 기질)과 상호반응한다. 포스포이노시톨- 3-키나아제 패밀리는 클래스 I , II 및 클래스 III으로 구성되며, 클래스 I은 혈장막의 내엽에서 PI(4,5)P2를 PI(3,4,5)P3로 전환시킬 수 있는 유일한 클래스이다.
[0089] 클래스 I PI3K은 조절절 및 촉매적 서브유닛으로 이루어진 헤테로다이머 분자이다; 이들은 서열 유사성에 따라 다시 IA 및 IB 서브세트로 나뉜다. 클래스 IA PI3K는 p110α, β 또는 δ 촉매 서브유닛에 부착되는 5종의 조절적 p85α, p55α, p50α, p85β 또는 p55γ 서브유닛 중 한 가지로 구성된다. 처음 3종의 조절적 서브유닛은 모두 동일한 유전자( Pik3r1 )의 스플라이스 변이체이고, 다른 2개는 다른 유전자(각각 Pik3r2 및 Pik3r3, p85β 및 p55γ)에 의해 발현된다. 가장 많이 발현되는 조절 서브유닛은 p85α이며, 3종의 촉매 서브유닛 모두는 별도 유전자 (각각 p110α, p110β 및 p110δ에 대해 Pik3ca, Pik3cb 및 Pik3cd)에 의해 발현된다. 처음 2가지 p110 이소폼 (α 및 β)은 모든 세포에서 발현되지만, p110δ은 주로 백혈구에서 발현되는데 이는 이것이 후천성면역계와 함께 나란히 진화된 것임을 시사한다. 조절적 p101 및 촉매적 p110γ 서브유닛은 타입 IB PI3K를 포함하며 각기 단일 유전자에 의해 인코딩된다.
[0090] 클래스 II는 3종의 촉매적 이소폼 (C2α, C2β, 및 C2γ)를 포함하며, 클래스 I 및 III과 달리, 조절 단백질은 포함하지 않는다. 이들 효소들은 PI로부터 PI(3)P의 생산을 촉매한다 (또한 PI(4)P로부터 PI(3,4)P2도 생산할 수도 있음). C2α 및 C2β는 체내 전반에 걸쳐 발현되지만, C2γ의 발현은 간세포로 국한된다. 클래스 II PI3Ks의 독특한 특징은 C-말단 C2 도메인이다. 이 도메인은 Ca2 +의 결합을 배위하기 위해 필수적인 Asp 잔기를 결여하는데, 이는 클래스 II PI3K가 Ca2+ 독립적인 방식으로 지질에 결합함을 시사한다. 클래스 III은 PI로부터 PI(3)P의 생성을 편향시킨다는 점에서 II와 유사하지만, 구조면에서 클래스 I과 더욱 유사한데 이는 이들이 촉매적( Vps34 ) 및 조절적(p150) 서브유닛의 헤테로다이머로서 존재하기 때문이다. 클래스 III은 단백질 및 소포의 트래피킹과 주로 관련된 것으로 보인다.
[0091] 본 발명에서, "PI3K 저해제"는 포스파티딜이노시톨의 이노시톨 고리의 3위치의 히드록실기의 인산화 수준에 의해 측정되는 바와 같이, 또는 PI3K의 하류의 분자들의 활성 및/또는 인산화(증가된 인산화는 PI3K 활성을 가리킴)에 의해 측정되는 바와 같이, PI3K의 활성을 억제하는 물질을 가리킨다. 이러한 하류 분자의 예는 기술분야에 알려져 있으며 이의 예로는 AKT, SGK, mTOR, GSK3β, PSD-95, S6, 및 4EBP1을 들 수 있으나 이에 한정되지 않는다. PI3K의 활성을 직간접적으로 측정하는 방법은 기술분야에 공지이며, 예컨대 상업적으로 구득가능한 포스포-이소폼 특이 항체(예컨대 항-포스포-AKT 항체, Cat No. ab66138 Abcam, Cambridge, MA)를 이용하여 PI3K의 하류에 있는 분자의 인산화 수준을 측정하는 것을 들 수 있다.
[0092] 몇몇 구체예에서, PI3K 저해제는 LY294002, PI103, 및/또는 PI828일 수 있다. PI3K 저해제의 또 다른 비제한적인 예로는 워르트만닌, 데메톡시비리딘, IC486068, IC87114, GDC-0941, 페리포신, CAL101, PX-866, IPI-145, BAY 80-6946, BEZ235, P6503, TGR1202, SF1126, INK1117, BKM120, IL147, XL765, 팔로미드 529, GSK1059615, ZSTK474, PWT33597, TG100-115, CAL263, GNE-447, CUDC-907, 및 AEZS-136을 들 수 있다.
[0093] 몇몇 구체예에서, 컨쥬게이트는 지질과 공유적으로 링크된 PI3K 저해제를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 지질 컨쥬게이트된 PI3K 저해제는
Figure pct00001
또는
Figure pct00002
이다.
지질과 공유적으로 연결된 부가적인 PI3K 저해제가 예컨대 PCT 특허공개 No. WO2013188763에 개시되어 있으며, 이 문헌은 그 내용 전체가 본 발명에 참조 통합되었다.
[0094] 몇몇 구체예에서, 초분자 조합 치료제는 적어도 1종(예컨대, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10종 또는 그 이상의 상이한 종류의) 탁산 컨쥬게이트 및 적어도 1종의 탁산 컨쥬게이트 (예컨대, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10종 또는 그 이상의 상이한 종류의) 지질 컨쥬게이트된 PI3K 저해제)를 포함한다. 초분자 조합 치료제는 PI3K 저해제 컨쥬게이트를 약 1% 내지 약 99% (w/w) 포함할 수 있다. 또한 PI3K 저해제 컨쥬게이트는 탁산 컨쥬게이트와 10:1 내지 1:10의 비율로 존재할 수 있다. 만일 2종 이상의 상이한 PI3K 저해제 컨쥬게이트가 조성물 내에 존재할 경우, 각각의 PI3K 저해제 컨쥬게이트는 컨쥬게이트와 10:1 내지 1:10의 비율로 존재한다. 또한, 만일 2종 이상의 상이한 PI3K 저해제 컨쥬게이트가 조성물 중에 존재할 경우, 2종의 PI3K 저해제 컨쥬게이트는 10:1 내지 1:10의 비율로 존재할 수있다. 제한 없이, 초분자 조합 치료제의 2종의 상이한 성분(컨쥬게이트 및 PI3K 저해제 컨쥬게이트)는 10:1 내지 1:10, 5:1 내지 1:5, 또는 2.5:1 내지 1:2.5의 비율로 존재할 수 있다. 몇몇 구체예에서, 초분자 조합 치료제 중의 2종의 상이한 성분들은 약 1:1, 약 1:1.2, 약 1:1.5, 약 1:1.7, 약 1:2, 약 1:2.5, 약 1:3, 약 1:3.5, 약 1:4, 약 1:4.5, 약 1:5, 약 1:5.5, 약 1:6, 약 1:6.5, 약 1:7, 약 1:7.5, 약 1:8, 약 1:8.5, 약 1:9, 약 1:9.5, 또는 약 1:10의 비율로 존재할 수 있다. 만일 초분자 조합 치료제가 2종을 초과한 성분들을 포함할 경우, 어떠한 2종 간의 성분비는 다른 2종 성분 간의 비율과 독립적일 수 있다.
[0095] 몇몇 구체예에서, 화학치료제는 백금산염(platinate)이다. 어떤 백금 화합물이든 본 발명의 방법 및 조성물에 이용될 수 있다. 몇몇 구체예에서, 백금 화합물은 백금 (II) 또는 백금 (IV) 화합물이다. 몇몇 구체예에서, 백금 (II) 화합물은 시스플라틴, 옥살리플라틴, 카보플라틴, 파라플라틴, 사르트라플라틴, 및 그의 조합으로부터 선택된다. 바람직한 일 구체예에서, 백금산염은 시스플라틴 또는 옥살리플라틴이다. 시스플라틴 [시스-디클로로디아민플라티늄(II)] (CDDP)은 항종양제의 중요한 부류로 대두되었으며 고환암, 난소암, 자궁경부암, 두경부암 및 비소세포 폐암을 비롯한 다양한 종양의 치료에 널리 이용되고 있다(Jamieson, 등, Chem. Rev. (1999), 99(9): 2467-2498). 또한 삼중 네거티브 유방암에서도 활성적인 것으로 알려져 있다 (Leong, 등, J. Clin. Invest. (2007), 117(5): 1370-80). 그러나 이것의 사용은 주로 투여량-제한적인데 이는 신장에 대한 독성 또는 신독성에 기인한다(Madias, NE 및 Harrington, JT, Am. J. (1978), 65(2): 307-14).
[0096] 몇몇 구체예에서, 백금은 적어도 1종의 배위 결합을 통해 지질에 분리가능하게(dissociably) 연결될 수 있다. 몇몇 구체예에서, 배위 결합은 Pt->O이다. 또 다른 몇몇 구체예에서, 배위 결합은 Pt->N이다. 몇몇 구체예에서, 컨쥬게이트는 적어도 1개의 배위 결합을 통해 콜레스테롤과 분리가능하게 연결된 백금을 포함한다. 몇몇 구체예에서, 지질 컨쥬게이트된 백금 화합물은:
Figure pct00003
또는 IO-125:
Figure pct00004
이다.
[0097] 백금산염 (또는 백금-함유 화학치료제)을 포함하는 부가적인 컨쥬게이트가 예컨대, 미국특허 공개 2012/0189571, 및 국제특허공개 WO 2010/091192에 개시되어 있으며, 이들 문헌들은 그 내용 전체가 본 발명에 참조 통합되었다.
[0098] 몇몇 구체예에서, 초분자 조합 치료제는 적어도 1종 (예컨대, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10종 또는 그 이상의 상이한 종류의) 탁산 컨쥬게이트 및 적어도 1종의 백금 컨쥬게이트 (예컨대, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10종 또는 그 이상의 상이한 종류의) 지질 컨쥬게이트된 백금)를 포함한다. 초분자 조합 치료제는 약 1% 내지 약 99% (w/w)의 백금 컨쥬게이트를 포함할 수 있다. 또한 백금 컨쥬게이트는 탁산 컨쥬게이트와 10:1 내지 1:10의 비율로 존재할 수 있다. 만일 2종 이상의 상이한 백금 컨쥬게이트가 조성물 내에 존재할 경우 각각의 백금 컨쥬게이트는 탁산 컨쥬게이트와 독립적으로 10:1 내지 1:10의 비율로 존재할 수 있다. 또한, 만일 2종 이상의 상이한 백금 컨쥬게이트가 조성물 내에 존재할 경우, 2종의 백금 컨쥬게이트는 10:1 내지 1:10의 비율로 존재할 수 있다. 무제한적으로, 초분자 조합 치료제의 2종의 상이한 성분들 (탁산 컨쥬게이트 및 백금 컨쥬게이트)은 10:1 내지 1:10, 5:1 내지 1:5, 또는 2.5:1 내지 1:2.5의 비율로 존재할 수 있다. 몇몇 구체예에서, 초분자 조합 치료제 중의 2종의 상이한 성분들은 약 1:1, 약 1:1.2, 약 1:1.5, 약 1:1.7, 약 1:2, 약 1:2.5, 약 1:3, 약 1:3.5, 약 1:4, 약 1:4.5, 약 1:5, 약 1:5.5, 약 1:6, 약 1:6.5, 약 1:7, 약 1:7.5, 약 1:8, 약 1:8.5, 약 1:9, 약 1:9.5, 또는 약 1:10의 비율로 존재할 수 있다. 만일 초분자 조합 치료제가 3종 이상의 성분을 포함하는 경우 어떤 2개 성분 간의 비율은 다른 2개 성분 간의 비율과 독립적일 수 있다.
[0099] 초분자 조합 치료제는 또한 형성 동안 전하-유도된 응집을 방지하는, 입자들의 입체 안정화로부터 결과될 수 있는, 형성 중의 입자들의 응집을 감소시키도록 선택된 성분들도 포함할 수있다. 응집을 감소시키는 적절한 성분의 비제한적인 예로는, 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)-변형된 지질 (즉, PEG 컨쥬게이트된 지질), 모노시알로강글리오사이드 Gm1, 및 폴리아미드 올리고머 ("PAO") 예컨대 US Pat. No. 6,320,017에 기재된 것들을 들 수있다. PEG-변형된 지질의 적절한 예로는, PEG-변형된 디아실글리세롤 및 디알킬글리세롤, PEG-변형된 포스파티딜에탄올아민 및 포스파티드산, PEG-세라마이드 컨쥬게이트(예컨대, PEG-CerC14 또는 PEG-CerC20), PEG-변형된 디알킬아민, PEG-변형된 1,2-디아실옥시프로판-3-아민, 및 PEG 컨쥬게이트된 DSPE (예컨대, DSPE-PEG2000)을 들 수 있으나 이에 한정되지 않는다. PEG, Gm1, 또는 ATTA와 같이, 형성시 응집을 방지하는, 비하전, 친수성, 입체-배리어 모이어티를 갖는 그 밖의 화합물 역시 지질과 결합되어 형성시 응집을 감소시킬 수 있다. ATTA-지질은 예컨대, 미국특허 No. 6,320,017에 설명되어 있고, 및 PEG-지질 컨쥬게이트는, 예컨대, 미국특허 Nos. 5,820,873, 5,534,499 및 5,885,613에 설명되어 있다. 일반적으로, 응집을 감소시키도록 선택되는 지질 성분의 농도는 약 0.1 내지 15% (지질의 몰 퍼센트 기준임)이다. 응집 방지 화합물이 적절히 기능하기 위해 반드시 지질 컨쥬게이션이 필요한 것은 아니다. 용액 중 유리 PEG 또는 유리 ATTA는 응집을 방지하는데 충분할 수 있다. 만일 리포좀이 제형화 후 안정할 경우, PEG 또는 ATTA는 대상자에게 투여하기 전에 투석될 수 있다.
[00100] 중성 지질은 조성물 내에 존재할 경우, 생리적 pH에서 비하전 상태 또는 중성 쯔비터이온 형태로 존재하는, 몇 종의 지질 종일 수 있다. 이러한 지질의 비제한적인 예로는, 디아실포스파티딜콜린, 디아실포스파티딜에탄올아민, 세라마이드, 스핑고미엘린, 디히드로스핑고미엘린, 세팔린, 및 세레브로사이드를 들 수 있다. 본 발명에 설명된 리포좀에 사용되기 위한 중성 지질은 일반적으로, 예컨대 혈류 내의 리포좀의 안정성 및 리포좀 크기를 고려하여 선택한다. 좋기로는 중성 지질 성분은 2개의 아실기를 갖는 지질(즉, 디아실포스파티딜콜린 및 디아실포스파티딜에탄올아민)이 바람직하다. 사슬의 길이와 포화도를 달리하는 다양한 아실 사슬기를 갖는 지질을 입수할 수 있으며 또는 공지 기술에 의해 분리 또는 합성할 수 있다. 일군의 구체예에서, 탄소사슬 길이가 C6 내지 C22 범위(예컨대, C6, C8, C10, C12, C14, C16, C18, C22, 또는 C22)인 포화 또는 불포화 지방산을 함유하는 지질이 바람직하다. 또한, 포화 지방산과 불포화 지방산 사슬의 혼합물을 함유하는 지질도 이용가능하다. 몇몇 구체예에서, 중성 지질은 포스파티딜콜린, DOPE, DSPC, POPC, DMPC, DPPC 또는 그 밖의 관련 포스파티딜콜린일 수 있다. 본 발명에 유용한 중성 지질은 또한 스핑고미엘린, 디히드로스핑고미엘린, 또는 세린 및 이노시톨과 같은 그 밖의 헤드기를 갖는 인지질로 구성될 수 있다.
[00101] 초분자 조합 치료제 내에 존재시, 스테롤 성분은 리포좀, 지질 소포 또는 지질 입자 제조 분야에서 통상적으로 사용되는 스테롤이면 어느 것이든 무방하다. 바람직한 스테롤은 콜레스테롤이다.
[00102] 초분자 조합 치료제 내에 존재시, 양이온 지질은 대략 생리적 pH에서 순수한(net) 양하전을 띠는 몇몇 지질 종일 수 있다. 이러한 지질의 비제한적인 예로는, N,N-디올레일-N,N-디메틸암모늄 클로라이드 ("DODAC"); N-(2,3-디올레일옥시)프로필-N,N-N-트리에틸암모늄 클로라이드 ("DOTMA"); N,N-디스테아릴-N,N-디메틸암모늄 브로마이드 ("DDAB"); N-(2,3-디올레오일옥시)프로필)-N,N,N-트리메틸암모늄 클로라이드 ("DOTAP"); 1,2-디올레일옥시-3-트리메틸아미노프로판 클로라이드 염 ("DOTAP.Cl"); 3β-(N-(N',N'-디메틸아미노에탄)-카바모일)콜레스테롤 ("DC-Chol"), N-(1-(2,3-디올레일옥시)프로필)-N-2-(스퍼민카복사미도)에틸)-N,N-디메틸암모늄 트리플루오르아세테이트 ("DOSPA"), 디옥테실아미도글리실 카르복시스퍼민("DOGS"), 1,2-디올레오일-sn-3-포스포에탄올아민 ("DOPE"), 1,2-디올레오일-3-디메틸암모늄 프로판 ("DODAP"), N, N-디메틸-2,3-디올레일옥시)프로필아민 ("DODMA"), N-(1,2-디미리스틸옥시프로프-3-일)-N,N-디메틸-N-히드록시에틸 암모늄 브로마이드 ("DMRIE"), 5-카복시스퍼밀글리신 디오카올레이아미드 ("DOGS"), 및 디팔미토일포스파티딜에탄올아민 5-카복시스퍼밀-아미드 ("DPPES")를 들 수 있다. 이에 더해, 예컨대, 리포펙틴 (DOTMA 및 DOPE를 포함, GIBCO/BRL로부터 구득가능), 및 리포펙타민 (DOSPA 및 DOPE를 포함, GIBCO/BRL로부터 구득가능)과 같은, 양이온 지질의 몇몇 상업적 조제물도 이용가능하다. 지질 입자 형성에 적합한 그 밖의 양이온 지질이 WO98/39359, WO96/37194에 설명되어 있다. 그 밖의 적절한 양이온 지질은 예컨대 미국특허 출원 공개 No. 2011/0997720 및 PCT 특허 출원 공개 No. WO 2009/132131 및 No. WO 2009/132131에 개시되어 있으며 이들 문헌은 그 내용 전체가 본 발명에 참조 통합되었다.
[00103] 초분자 조합 치료제에 존재할 경우, 음이온 지질은 대략 생리적 pH에서 순수한 음하전을 띠는 몇몇 지질 종일 수 있다. 이러한 지질의 비제한적인 예로는, 포스파티딜글리세롤, 카디올리핀, 디아실포스파티딜세린, 디아실포스파티드산, N-도데카노일 포스파티딜에탄올로아민, N-숙시닐 포스파티딜에탄올아민, N-글루타릴 포스파티딜에탄올아민, 리실포스파티딜글리세롤, 및 중성 지질에 결합된 그 밖의 음이온 변형기를 들 수있다.
[00104] 본 발명에서, "양쪽성 지질(amphipathic lipids)"라는 용어는 지질 물질의 소수성 부분은 소수성 상 내로 배향된 반면, 친수성 부분은 수성상 내로 배향되어 있는, 여하한 적절한 물질을 가리킨다. 이러한 화합물의 비제한적인 예로는, 인지질, 아미노지질, 및 스핑고지질을 들 수 있다.
[00105] 본 발명에 설명된 초분자 조합 치료제에 포함되기에 적합한 것들로는 프로그램가능한 융합 지질을 들 수 있다. 프로그램가능한 융합 지질을 함유하는 입자들은 세포막에 융합되는 경향이 거의 없고 주어진 시그널 이벤트가 일어날 때까지 이들의 페이로드를 전달한다. 이에 따라, 초분자 조합 치료제가 세포와 융합이 개시되기 전에, 생명체 또는 질병 개소로 투여 후 보다 균질하게 분포된다. 시그널 이벤트는, 예컨대, pH, 온도, 이온 환경 또는 시간 변화일 수 있다. 후자의 경우,
a change in pH, temperature, ionic environment, 또는 time. In the latter case, a fusion delaying 또는 "cloaking" component, such as an ATTA-지질 컨쥬게이트 또는 PEG-지질 컨쥬게이트와 같이 융합을 지연시키거나 "차폐하는(cloaking)" 성분은, 시간이 경과하면 입자 막 외부로 쉽게 교환될 수 있다. 그 때까지, 입자들은 체내에 적절히 분포되어, 융합생성(fusogenic)적이 되도록 충분량의 차폐제(cloaking agent)가 소실된다. 그 밖의 시그널 이벤트의 경우, 질병 개소 또는 표적 세포와 연관된 시그널, 예컨대 종양 개소에서의 보다 낮은 pH를 선택하는 것이 요망된다.
[00106] 양쪽성 물질의 특징의 보충 물질로서 또는 용해도를 향상시키고 입자의 안정화능을 개선할 목적에서, 초분자 조합 치료제에 1종 이상의 보완적인 표면활성제를 첨가할 수 있다. 이러한 보충 물질은 약학적으로 허용가능한 비이온성 계면활성제일 수 있으며 좋기로는 히드록실기를 1개 이상 함유하는 유기 화합물의 알킬렌 옥사이드 유도체인 것이 바람직하다. 예를 들어 에톡실화 및/또는 프로폭실화 알코올 또는 에스테르 화합물 또는 그의 혼합물을 흔하게 구득할 수 있으며 당업자에게는 이러한 보충제가 잘 알려져 있다. 이러한 화합물의 예로는 지방산 및 소르비톨의 에스테르, 예컨대 소르비탄 모노팔미테이트, 유성 수크로스 에스테르, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 지방산 에스테르, 폴리옥시에틸렌 지방산 에스테르, 폴리옥시에틸렌 알킬 에테르, 폴리옥시에틸렌 스테롤 에테르, 폴리옥시에틸렌-폴리프로폭시 알킬 에테르, 블록 폴리머 및 에틸 에테르, 뿐만 아니라 폴리옥시에틸렌 카스터 오일 또는 수소첨가된 카스터 오일 유도체 및 폴리글리세린 지방산 에스테르를 들 수 있다. 적절한 비이온성 계면활성제의 비제한적인 예로는 다양한 등급의 PLURONIC®, POLOXAMER®, SPAN®, TWEEN®, POLYSORBATE®, TYLOXAPOL®, EMULPHOR® 또는 CREMOPHOR® 등을 들 수 있다. 보충적인 표면활성제는 또한 이온 성질의 것, 예컨대 담즙 물질, 콜산 또는 데옥시콜산 및 그의 염, 및 유도체 또는 유리 지방산, 에컨대 올레산, 리놀레산 및 그 밖의 것 등을 들 수 있다. 기타 이온성 표면활성제로는 특히 양이온성 지질 유사 C6-C24 알킬아민 또는 알칸올아민 및 양이온성 콜레스테롤 에스테르를 들 수 있다.
[00107] 몇몇 구체예에서, 초분자 조합 치료제는 PEG 컨쥬게이트된 지질 및 인지질을 포함한다.
[00108] 몇몇 구체예에서, 초분자 조합 치료제는 탁산-지질 컨쥬게이트 및 PI3K 저해제-지질 컨쥬게이트를 포함한다.
[00109] 몇몇 구체예에서, 초분자 조합 치료제는 탁산-지질 컨쥬게이트 및 백금-지질 컨쥬게이트를 포함한다.
[00110] 몇몇 구체예에서, 초분자 조합 치료제는 탁산-지질 컨쥬게이트 및 항체 (또는 그의 항원 결합 단편) 지질 컨쥬게이트를 포함한다. 항체, 또는 그의 항원 결합 단편은 치료제 또는 표적화 리간드일 수 있다.
[00111] 일 측면에서, 본 발명은 지질에 컨쥬게이트된 탁산을 포함하는 컨쥬게이트를 제공한다. "탁산"이라 함은 일반적으로 탁서스 속 (예컨대, 주목, 예컨대 비제한적인 예로서 Taxus baccata, Taxus brevifolia, Taxus canadensis, Taxus chinensis, Taxus cuspidata, Taxus floridana, Taxus globosa, Taxus sumatrana, Taxus walUchiana)에 속하는 식물에 의해 생산되는 디테르펜-함유 화합물 및 그의 합성 및 반합성 형태를 가리킨다. 이 용어는 다음의 코어 구조
Figure pct00005
를 함유하는 화합물을 가리킨다. 기본적인 탁산 코어 구조는 더 치환될 수도 있고 또는 탁산이라고 일반적으로 알려진, 다수의 생산하는 고리내 불포화를 함유할 수도 있다. 일반적으로, 이러한 화합물은 미세관과 상호반응하여 유사분열을 중단시킴으로서 세포 성장을 차단할 수 있다. 본 발명에서 "디테르펜(diterpene)"이라는 용어는 4개의 이소프렌 유닛으로부터 유래된 탄소 골격을 갖는 화학적 물질을 의미한다. 탁산 그룹의 화합물로는 파클리탁셀, 도세탁셀, 및 카바지탁셀을 들 수 있다.
[00112] 탁산은 자연으로부터 분리될 수 있고, 자연발생적인 전구체로부터 합성할 수도 있다. 예컨대 파클리탁셀 (탁솔®, Bristol-Myers Squibb)은 파클리탁셀의 히드록실기가 되는 바카틴의 히드록실기에 보호기를 붙이고, 전구체 바카틴을 파클리탁셀로 전환시킨 다음, 히드록실기로부터 보호기를 제거하는 방식으로, 바카틴으로부터 제조될 수 있다 (예컨대, WO93/10076. 국제공개일 05/27/93; K. V. Rao, 미국특허 No. 5,200.534; R.A. Holton, 미국특허 No. 5,015, 744; PCT US92/07990; V.J. Stella 및 A.E. Mathew, 미국특허 No. 4.960,790; K.C. Nicolau, Nature 3j54 (1993), pp. 464-466; Nicolau, K. C. 등. Nature 367 (1994) pp.630-634; Holton, R. A., 등 J. Am. Chem. Soc. H6 (1994) pp. 1597-1600; WO93/16059, 국제공개일 08/19/93; EP 528.729, 국제공개일 02/24/93; EP 522,958, published 01/13/93; WO91/13053, 국제공개일 09/05 91; EP 414,610, 국제공개일 02/27/91 ; 상기 문헌들의 내용은 모두 본 발명에 참조 통합됨). 탁산의 비제한적인 예에는 파클리탁셀 및 도세탁셀, 이들의 유도체 및 혼합물이 포함된다.
[00113] 탁산은 다양한 암을 치료하는데 효과적으로 사용될 수 있다. 예컨대 파클리탁셀은 난소암 및 유방암 뿐만 아니라, 악성 흑색종, 결장암, 백혈병 및 폐암에 대해 활성을 갖는 것으로 밝혀졌다 (예컨대, Borman, Chemical & Engineering News, September 2, 1991, pp. 11-18; The Pharmacological Basis of Therapeutics (Goodman Gilman 등, eds.), Pergamon Press, New York (1990), p. 1239; Suffness, Antrtumor Alkaloids, in: "The Alkaloids, Vol. XXV," Academic Press, Inc. (1985), Chapter 1 , pp. 6-18; Rizzo 등, J. Pharm. & Biomed. Anal. §(2):159-164 (1990); 및 Biotechnology 9:933-938 (October. 1991). 파클리탁셀은 세포 핵 내의 튜불린에 결합하여 미세관의 해체를 차단하고, 그 결과 세포 분열을 억제함으로써 암 세포에 작용한다(Schiff 등, Nature 277:665 (1979)
[00114] 탁산이라는 용어에는 또한 박틴 및 박틴 유도체도 포함된다. "바카틴(baccatin)"이라는 용어 또는 "바카틴 유도체"라는 용어는 탁산 골격의 13-위치의 측쇄가 히드록시기인 탁산 유도체를 가리킨다. 이들은 종종 문헌에서 바카틴 또는 "바카틴 I-VII" 또는 탁산 골격의 트리시클릭 고리 상의 치환기 특성에 따라 달리 명명된다. 본 발명에서, 탁산이라는 용어네는 아베오-탁산도 포함된다. 아베오-탁산은 5원 A 고리를 갖는다. 탁산은 자연으로부터 유래할 수 있고, 합성적으로 또는 반합성적으로 또는 양자의 조합에 의해 만들어질 수도 있다. 탁산의 예로는 파클리탁셀 (탁솔™), 도세탁셀 (탁소티어), 카바지탁셀, 아브레탁산, 탁소프렉신, 지오탁스, 세팔로만닌, 10-데아세틸세팔로만닌, 바카틴, 탁신, 브레비폴리올, 10-데아세틸바카틴, 홍도우샨 A, 홍도우샨 B, 홍도우샨 C, 7-에피탁솔, 7-에피바카틴 III, 및 10-데스아세틸-7-에피탁솔을 들 수 있으나 이에 한정되지 않는다.
[00115] 몇몇 구체예에서, 컨쥬게이트 내의 탁산은 카바지탁셀이다.
[00116] 몇몇 구체예에서, 탁산과 지질은 링커를 통해 공유적으로 컨쥬게이트될 수 있다. "링커"라는 용어는 어떤 화합물의 2 부분을 연결하는 유기 모이어티를 의미한다. 링커는 일반적으로 직접 결합 또는 산소나 황과 같은 원자, NR1, C(O), C(O)O, C(O)NR1, SO, SO2, SO2NH 또는 원자 사슬과 같은 유닛, 예컨대 치환 또는 비치환된 알킬, 치환되거나 치환되지 않은 알케닐, 치환되거나 치환되지 않은 알키닐, 아릴알킬, 아릴알케닐, 아릴알키닐, 헤테로아릴알킬, 헤테로아릴알케닐, 헤테로아릴알키닐, 헤테로시클릴알킬, 헤테로시클릴알케닐, 헤테로시클릴알키닐, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로시클릴, 시클로알킬, 시클로알케닐, 알킬아릴알킬, 알킬아릴알케닐, 알킬아릴알키닐, 알케닐아릴알킬, 알케닐아릴알케닐, 알케닐아릴알키닐, 알키닐아릴알킬, 알키닐아릴알케닐, 알키닐아릴알키닐, 알킬헤테로아릴알킬, 알킬헤테로아릴알케닐, 알킬헤테로아릴알키닐, 알케닐헤테로아릴알킬, 알케닐헤테로아릴알케닐, 알케닐헤테로아릴알키닐, 알키닐헤테로아릴알킬, 알키닐헤테로아릴알케닐, 알키닐헤테로아릴알키닐, 알킬헤테로시클릴알킬, 알킬헤테로시클릴알케닐, 알킬헤테로시클릴알키닐, 알케닐헤테로시클릴알킬, 알케닐헤테로시클릴알케닐, 알케닐헤테로시클릴알키닐, 알키닐헤테로시클릴알킬, 알키닐헤테로시클릴알케닐, 알키닐헤테로시클릴알키닐, 알킬아릴, 알케닐아릴, 알키닐아릴, 알킬헤테로아릴, 알케닐헤테로아릴, 알키닐헤테로아릴(여기서 1 이상의 메틸렌이 O, S, S(O), SO2, N(R1)2, C(O), 절단가능한 연결기에 의해 종결 또는 간섭될 수 있음), 치환되거나 치환되지 않은 아릴, 치환되거나 치환되지 않은 헤테로아릴, 치환되거나 치환되지 않은 헤테로시클릭 (여기서 R1은 수소, 아실, 지방족 또는 치환된 지방족임)일 수 있다.
[00117] 몇몇 구체예에서, 링커는 분지형 링커일 수 있다. 분지혀여 링커의 분지점은 적어도 3가 원자일 수 있으며, 4가, 5가 또는 6가 원자 또는 다가를 내는 기일 수 있다. 특정 구체예에서, 분지점은, -N, -N(Q)-C, -O-C, -S-C, -SS-C, -C(O)N(Q)-C, -OC(O)N(Q)-C, -N(Q)C(O)-C, 또는 -N(Q)C(O)O-C일 수 있고; 여기서 Q는 독립적으로 각각의 경우 H 또는 임의 치환된 알킬일 수 있다. 또 다른 구체예에서, 분지점은 글리세롤 또는 글리세롤 유도체일 수 있다.
[00118] 몇몇 구체예에서, 링커는 적어도 1개의 절단가능한 연결기를 포함한다. 절단가능한 연결기는 세포 외부에서 충분히 안정하지만, 일단 표적 세포내로 유입되면 절단되어 링커가 유지하는 2개 부분을 한데 방출시키는 것이다. 바람직한 일 구체예에서, 절단가능한 연결기는 대상자의 혈액 또는 혈청이나, 제2 레퍼런스 조건 (예컨대 혈액이나 혈청에서 발견되는 조건을 모방하거나 그러한 조건을 나타낼 수 있는 조건)에서보다, 표적 세포 또는 제1 레퍼런스 조건 (예컨대 세포내 조건을 모방하거나 그러한 조건을 나타내도록 선택될 수 있는 조건)에서 적오도 10배 이상, 좋기로는 적어도 100배 이상 더 신속하게 절단된다.
[00119] 절단가능한 연결기는 절단제, 예컨대, pH, 레독스(redox: 산화환원) 전위 또는 분해성 분자의 존재에 민감하다. 일반적으로, 절단제는 혈청 또는 혈액에서보다 세포 내부에서 보다 일반적이거나 더 고수준 또는 고활성으로 존재한다. 이러한 분해성 물질의 예로는: 특정 기질에 대해 선택되거나 또는 기질 특이성을 갖지 않는 레독스제, 예컨대 레독스 효소 또는 환원제 세포 내에 존재하고 환원에 의해 레독스 절단가능한 연결기를 분해할 수 있는 예컨대 머캅탄; 에스테라제; 아미다제; 엔도좀 또는 산성 환경을 만들어낼 수 있는 물질, 예컨대 pH 5 이하를 결과시키는 물질; 일반적인 산으로서 작용함으로써 산 절단가능한 연결기를 분해 또는 가수분해할 수있는 효소, 펩티다제(기질 특이적일 수 있음) 및 프로테아제 및 포스파타제를 들 수 있다.
[00120] 링커는 특정 효소에 의해 절단가능한 절단가능 연결기를 포함할 수 있다. 링커 내로 통합되는 절단가능한 연결기의 종류는 표적화될 세포에 따라 달라질 수 있다. 몇몇 구체예에서, 절단가능한 연결기는 혈액 또는 혈청 (또는 세포외조건을 모방하도록 선택된 인 비트로 조건 하) 비해 세포 (또는 세포내 조건을 모방하도록 선택된 인 비트로 조건 하) 내에서 적어도 1.25, 1.5, 1.75, 2, 3, 4, 5, 10, 25, 50, 또는 100배 더 빨리 절단된다. 몇몇 구체예에서, 절단가능한 연결기는 세포 내(또는 세포내 조건을 모방하도록 선택된 인 비트로 조건 하)에 비해 혈액 내 (또는 세포외조건을 모방하도록 선택된 인 비트로 조건 하)에서 90%, 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 5%, 또는 1% 미만으로 절단된다.
[00121] 예시적인 절단가능한 연결기의 비제한적인 예로는 레독스 절단가능한 연결기(예컨대, -S-S- 및 -C(R)2-S-S-, 여기서 R은 H 또는 C1-C6 알킬이고 적어도 1개의 R은 C1-C6 알킬 예컨대 CH3 또는 CH2CH3); 포스페이트-기반 절단가능한 연결기(예컨대, -O-P(O)(OR)-O-, -O-P(S)(OR)-O-, -O-P(S)(SR)-O-, -S-P(O)(OR)-O-, -O-P(O)(OR)-S-, -S-P(O)(OR)-S-, -O-P(S)(ORk)-S-, -S-P(S)(OR)-O-, -O-P(O)(R)-O-, -O-P(S)(R)-O-, -S-P(O)(R)-O-, -S-P(S)(R)-O-, -S-P(O)(R)-S-, -O-P(S)( R)-S-, . -O-P(O)(OH)-O-, -O-P(S)(OH)-O-, -O-P(S)(SH)-O-, -S-P(O)(OH)-O-, -O-P(O)(OH)-S-, -S-P(O)(OH)-S-, -O-P(S)(OH)-S-, -S-P(S)(OH)-O-, -O-P(O)(H)-O-, -O-P(S)(H)-O-, -S-P(O)(H)-O-, -S-P(S)(H)-O-, -S-P(O)(H)-S-, 및 -O-P(S)(H)-S-, 여기서 R은 임의 치환된 선형 또는 분지형 C1-C10 알킬); 산 절단가능한 연결기 (예컨대, 히드라존, 에스테르, 및 아미노산의 에스테르, -C=NN- 및 -OC(O)-); 에스테르-기반의 절단가능한 연결기 (예컨대, -C(O)O-); 펩타이드-기반 절단가능한 연결기, (예컨대, 세포 내의 펩티다제 및 프로테아제와 같은 효소에 의해 절단되는 연결기, - NHCHRAC(O)NHCHRBC(O)-, 여기서 RA 및 RB는 2개의 인접 아미노산들의 R기임)를 들 수 있다. 펩타이드 기반의 절단가능한 연결기는 2개 이상의 아미노산을 포함한다. 몇몇 구체예에서, 펩타이드-기반의 절단가능한 연결기는 세포에서 발견되는 펩티다제 또는 프로테아제에 대한 기질인 아미노산 서열을 포함한다.
[00122] 몇몇 구체예에서, 링커는 산에 불안정한 기를 포함한다. 일반적으로, 산으로 절단가능한 연결기는 pH 약 6.5 이하(예컨대 약 6.5, 6.0, 5.5, 5.0, 4.5, 4.0, 3.5, 3.0 또는 그 이하)의 산성 조건 하에서 또는 일반적인 산으로서 작용가능한 효소와 같은 물질에 의해 절단가능하다.
[00123] 몇몇 구체예에서, 링커는 1종 이상의 숙신산, 푸마르산, 프로파르길산, 에틸렌 글리콜, 디에틸렌 글리콜, 및 천연 또는 비천연 아미노산을 포함한다.
[00124] 몇몇 구체예에서, 링커는 옥살산, 말론산, 숙신산, 글루타르산, 숙신산, 에틸렌 디아민, 천연 또는 비천연 아미노산, 에틸렌 글리콜, 디에틸렌 글리콜, 아세트산, 프로피온산, 부티르산, 발레르산, 아크릴산, 부-2-텐산, 펜-2-텐산, 헥-2-센산, 2-프로핀산, 부-2-틴산, 펜-2-틴산, 헥-2-신산, 에틸렌, 프로필렌, 1-부텐, 1-펜텐, 1-헥센, 아세틸렌, 프로핀, 부-1-틴, 펜-1-틴, 또는 이들의 여하한 조합을 포함한다.
[00125] 몇몇 구체예에서, 링커는 숙신산 및 에틸렌 디아민; 숙신산 및 천연 또는 비천연 아미노산; 에틸렌 글리콜 및 아세트산; 에틸렌 글리콜 및 아크릴산; 디에틸렌 글리콜 및 아세트산; 소수성 아미노산 및 글리콜산; 소수성 아미노산 및 말론산; 소수성 아미노산 및 숙신산; 소수성 아미노산 및 글루타르산; 및 이들의 조합을 포함한다.
[00126] 몇몇 구체예에서, 링커는 -C(O)CH2CH2C(O)NHCH2CH2NHC(O)-; -C(O)CH2CH2C(O)NHCH2NHC(O)-; -C(O)CH2OCH2CH2-; -C(O)CH2CH2OCH2CH2-; -C(O)CH2OCH2CH2OCH2CH2-; -C(O)CH(R)NHC(O)CH2-, 여기서 R은 H, CH3, CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2, C(CH3)CH2CH3, 또는 CH2-페닐; -C(O)CH(R)NHC(O)CH2CH2-, 여기서 R은 H, CH3, CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2, C(CH3)CH2CH3, 또는 CH2-페닐; -C(O)CH(R)NHC(O)(CH2)nC(O)-, 여기서 R은 H, CH3, CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2, C(CH3)CH2CH3, 또는 CH2-페닐이고 n은 1, 2, 또는 3; -C(O)CH(R)NHC(O)CH2OCH2CH2 -, 여기서 R은 H, CH3, CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2, C(CH3)CH2CH3, 또는 CH2-페닐; -C(O)C=C(CH2)n-C(O)-, 여기서 n은 1, 2 또는 3; -C(O)C=C(CH2)n-, 여기서, n은 0, 1, 또는 2; -C(O)CH=CH(CH2)nC(O)-, 여기서, n은 0, 1, 2, 또는 3; -C(O)CH=CH(CH2)n-, 여기서, n은 1, 2, 또는 3; 및 -C(O)CH2CH2C(O)NHCH2C(O)-이다.
[00127] 몇몇 구체예에서, 탁산-지질 컨쥬게이트 중의 지질은 콜레스테롤, 알파-토코페롤, 또는 지방산이다. 일 구체예에서, 탁산-지질 컨쥬게이트 중의 지질은 콜레스테롤이다.
[00128] 탁산 및 지질은 그들의 각 구조 내에 존재하는 반응성 관능기를 이용하여 서로 (또는 링커)와 공유적으로 컨쥬게이트될 수 있다. "반응성 관능기"라는 용어는 다른 관능기와 반응할 수 있는 관능기를 가리킨다. 예시적인 반응성 관능기의 비제한적인 예로는, 히드록실, 아민, 티올, 티알, 설피노, 카복실산, 아미드, 등을 들 수 있다. 지질, 탁산 및 링커 상의 반응성 관능기는 같거나 다를 수 있다. 몇몇 구체예에서, 지질 상의 반응성기는 히드록실, 아민, 티올, 또는 카복실산이다. 몇몇 구체예에서, 탁산 상의 반응성기는 히드록실, 아민, 티올, 또는 카복실산이다.
[00129] 몇몇 구체예에서, 탁산-지질 컨쥬게이트는 can be selected from the group consisting of 탁산 컨쥬게이트 1-33으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있으며 이들의 구조는 후술하는 실시예 섹션에 나타나 있다.
[00130] 몇몇 구체예에서, 본 발명에 설명된 방법은 암에 걸린 환자 또는 암에 걸린 것으로 진단된 환자를 치료하는 것과 관련이 있다. 암 환자는 현행의 암 진단법을 이용하여 의사에 의해 동정될 수 있다. 이러한 상태를 특징화하고 진단에 도움이 되는 암의 증상 및/또는 합병증은 기술분야에 공지이고 이의 비제한적인 예로는 종양의 성장, 암세포를 산생하는 장기 또는 조직의 기능 손상 등을 들 수 있다. 예컨대 암의 진단에 도움이 될 수 있는 테스트의 비제한적인 예로는 조직 생검 및 조직학적 검사를 들 수 있다. 암의 가족력 또는 암 위험 인자 (예컨대 담배 제품, 방사능 등)에 대한 노출 역시도 대상자가 암에 걸려 있거나 암으로 진단받을 가능성이 있는지를 판단하는데 도움이 될 수 있다.
[00131] 암의 비제한적인 예로는, 선암종을 비롯한 암종, 림프종, 모세포종, 흑색종, 육종, 백혈병, 편평세포암, 소세포 폐암, 비소세포 폐암, 위장관암, 호지킨 및 비호지킨 림프종, 췌장암, 기저세포암종, 담관암, 방광암, 교모세포종 및 수모세포종을 포함한 뇌암; 유방암, 자궁경부암, 융모막암종; 결장암, 결장직장암, 자궁내막 암종, 자궁내막암; 식도암, 위암; 다양한 유형의 두경부암, 보웬병 및 파젯병을 비롯한 상피내암성 신생물; 급성 림프구성 및 골수성 백혈병을 비롯한 혈액학적 신생물; 카포시 육종, 모발세포 백혈병; 크롬성 골수기원 백혈병, AIDS-연관 백혈병 및 성인 T-세포 백혈병 림프종; 신장암 예컨대 신세포 암종, T-세포 급성 림프모구 백혈병/림프종, 호지킨병을 비롯한 림프종 및 림프구성 림프종; 간암 예컨대 간암종 및 간암, 메르켈세포 암종, 흑색종, 다발성 골수종; 신경모세포종; 편평세포암종을 비롯한 구강암; 상피세포로부터 유래한 난소암, 평활근육종, 횡문근육종, 지방육종, fibROS1arcoma, 및 골육종을 비롯한 육종; 췌장암;흑색종을 비롯한 피부암, 간질 세포, 생식세포 및 중간엽 세포; pROS1tate 암, 직장암; 외음암, 선암종을 비롯한 신장암; 고환종 및 비고환종(기형종, 융모막암종)과 같은 종자 종양, 간질 종양, 및 생식 세포 종양; 갑상선 선암종 및 수질성 암종을 비롯한 갑상선암; 식도암, 타액선 암종, 및 윌름 종양을 들 수 있으나 이에 한정되지 않는다.
[00132] 본 발명에 설명된 조성물과 방법은 암에 걸리거나 암에 걸린 것으로 진단된 대상자에게 투여할 수 있다. 몇몇 구체예에서, 본 발명에 설명된 방법은 암의 증상을 완화시키기(alleviating) 위해 본 발명에 설명된 조성물의 유효량을 대상자에게 투여하는 것을 포함한다. 본 발명에서, "암의 증상을 완화"시킨다 함은 암과 관련된 증상 또는 상태를 경감시키는 것이다. 동등한 미처리 대조군과 비교할 때, 이러한 경감은 표준 기술에 의해 측정시 적어도 5%, 10%, 20%, 40%, 50%, 60%, 80%, 90%, 95%, 99% 또는 그 이상이다. 본 발명에 설명된 조성물을 대상자에게 투여하기 위한 다양한 수단은 기술분야에 공지이다. 이러한 방법의 비제한적인 예로는 경구, 비경구, 정맥내, 근육내, 피하, 피내, 기도(에어로졸), 폐, 경피, 국소, 주사, 또는 종양내 투여를 들 수 있으나 이에 한정되지 않는다. 투여는 국소 또는 전신 투여일 수 있다.
[00133] 본 발명에서 "유효량"이라는 용어는 질병 또는 장애의 적어도 한 가지 증상을 완화시키는데 필요한 본 발명에 설명된 조성물의 양을 가리키는 것으로 원하는 효과를 제공하는 의약 조성물의 충분한 양에 관게된다. 그러므로 "치료적 유효량"이라는 용어는 일반적인 대상자에게 투여시 특정한 항종양 효과를 제공하는데 충분한 본 발명의 조성물의 양을 가리킨다. 본 발명에서 유효량은 다양한 문맥에서, 질병의 증상 발명을 지연시키고, 질병의 증상 경과를 변경하며 (예컨대 비제한적인 예로서 질병의 증상 진행을 둔화시키는 것), 또는 질병의 증상을 역전시키는데 충분한 양도 포함한다. 따라서, 정확한 "유효량"을 특정하는 것은 그다지 현실적이지 않다. 주어진 어떠한 경우에서든 적절한 "유효량"은 오로지 실험을 이용함으로써 통상의 기술자가 결정할 수 있다.
[00134] 유효량, 독성 및 치료 효능은 세포 배양 또는 실험동물에서 표준 의약 공정, 예컨대, LD50 (집단의 50%에 대해 치명적인 투여량) 및 ED50 (집단의 50%에서 치료적으로 효과적인 투여량)에 의해 알아낼 수 있다. 투여량은 사용되는 투여 형태 및 이용된 투여 경로에 따라 달라질 수 있다. 독성 효과와 치료 효과 사이의 투여량 비율은 치료 지표가 되며 LD50/ED50 비율로 표시할 수 있다. 높은 치료 지수를 나타내는 조성물과 방법이 바람직하다. 치료적 유효 투여량은 먼저 세포 배양 분석법으로부터 평가할 수 있다. 또한, 투여량은 세포 배양 또는 적절한 동물 모델을 이용하여 결정되는 바와 같이 IC50 (즉 증상의 최대-절반 억제를 달성하는, 본 발명의 조성물의 농도)을 포함하여 순환혈장 농도 범위를 달성하도록 제형화될 수 있다. 혈중 수준은 에컨대 고성능 액체 크로마토그래피에 의해 측정될 수 있다. 어떤 특정 투여량의 효과는 적절한 생물분석법, 예컨대 특히 종양의 크기 및/또는 성장을 분석함으로써 모니터링할 수 있다. 투여량은 관찰된 치료 효과를 적정하기 위해 담당의사가 필요에 따라 결정 및 조정할 수 있다.
[00135] 몇몇 구체예에서, 본 발명에 설명된 기술은 초분자 조합 치료제 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 의약 조성물에 관한다. 약학적으로 허용되는 담체 및 희석제에는 염수, 버퍼 수용액, 용매 및/또는 분산매질이 포함된다. 이러한 담체와 희석제의 이용은 기술분야에 공지이다. 약학적으로 허용가능한 담체로서 기능할 수 있는 몇가지 비제한적인 예로는: (1) 락토스, 글루코스 및 수크로스와 같은 당(sugar); (2) 옥수수 전분 및 감자 전분과 같은 전분; (3) 소듐 카복시메틸 셀룰로스, 메틸셀룰로스, 에틸 셀룰로스, 미정질 셀룰로스 및 셀룰로스 아세테이트와 같은 셀룰로스 및 그의 유도체; (4) 분말 트라가칸트; (5) 엿당(malt); (6) 젤라틴; (7) 마그네슘 스테아레이트, 소듐 라우릴 설페이트 및 탈크와 같은 윤활제; (8) 코코아 버터 및 좌약용 왁스와 같은 부형제; (9) 낙화생유, 면실유, 잇꽃유, 참기름, 올리부유, 옥수수유 및 대두유와 같은 오일; (10) 프로필렌 글리콜과 같은 글리콜; (11) 글리세린, 소르비톨, 만니톨 및 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)과 같은 폴리올; (12) 에틸 올리에이트 및 에틸 라우레이트와 같은 에스테르; (13) 한천; (14) 수산화마그네슘 및 수산화알루미늄과 같은 완충제; (15) 알긴산; (16) 무발열원(pyrogen-free) 물; (17) 등장 염수; (18) 링거 용액; (19) 에틸 알코올; (20) pH 완충 용액; (21) 폴리에스테르, 폴리카보네이트 및/또는 폴리안하이드라이드; (22) 벌크화제, 예컨대 폴리펩타이드 및 아미노산 (23) 혈청 알부민, HDL 및 LDL과 같은 혈청 성분; (22) 에탄올과 같은 C2-C12 알코올; 및 (23) 의약 제형에서 사용되는 그 밖의 비독성의 공존가능한 물질을 들 수 있다. 습윤제, 착색제, 방출제, 코팅제, 감미료, 풍미제, 향료, 보존제 및 항산화제 역시도 제형 내에 존재할 수 있다. "부형제", "담체", "약학적으로 허용가능한 담체" 등의 용어는 본 발명에서 서로 호환적으로 사용된다. 몇몇 구체예에서, 담체는 활성물질, 예컨대 본 발명에 설명된 조성물의 분해를 억제한다.
[00136] 몇몇 구체예에서, 초분자 조합 치료제를 포함하는 의약 조성물은 비경구 투여 형태일 수 있다. 비경구 투여 형태의 투여는 일반적으로 오염물질에 대한 환자의 자연적인 방어기제를 우회하므로 비경구 투여 형태는 멸균된 것이거나 또는 환자에게 투여되기 전에 멸균처리하는 것이 바람직하다. 비경구 투여 형태의 비제한적인 예로는 주사용 용액, 주사를 위한 약학적으로 허용가능한 비히클에 용해 또는 현탁되기 쉬운 건조 제품, 주사하기 쉬운 서스펜션 및 에멀젼을 들 수 있다. 이에 더해, 환자에게 투여하기 위해 조절방출형 비경구 투여 형태를 제조할 수도 있는데, 이의 비제한적인 예로는, DUROS®-형 투여 형태 및 투여량-덤핑(dose-dumping)을 들 수 있다.
[00137] 본 발명에 설명된 조성물의 비경구 투여 형태를 제공하는데 이용될 수 있는 적절한 비히클은 통상의 기술자에게 공지이다. 이의 비제한적인 예로는: 멸균수; USP 주사용수; 염수 용액; 글루코스 용액; 수성 비히클, 예컨대 염화나트륨 주사, 링커 주사, 덱스트로스 주사, 덱스트로스 및 염화나트륨 주사 및 락테이트화된 링커 주사제 (그러나 이에 한정되지 않음); 물과 섞이는 비히클, 비제한적인 예로서, 에틸 알코올, 폴리에틸렌 글리콜, 및 프로필렌 글리콜; 및 비수성 비히클, 비제한적인 예로서 옥수수유, 면실유, 낙화생유, 참기름, 에틸 올리에이트, 이소프로필 미리스테이트, 및 벤질 벤조에이트를 들 수 있다. 약학적으로 허용가능한 염의 용해도를 변경 또는 변형시키는 화합물 역시도 본 발명의 비경구 투여 형태에 통합시킬 수 있으며 이의 예로는 통상적인 투여 형태와 조절-방출형 비경구 투여 형태를 들 수 있다.
[00138] 의약 조성물은 또한 경구 투여에 적합한 제형으로, 예컨대 불연속 투여 제형, 예컨대 비제한적인 예로서 정제(제한 없이 눈금이 있거나 코팅된 정제를 포함함), 알약, 카플렛, 캡슐, 씹을 수 있는 정제, 분말 패킷, 카세(cachets), 트로쉬, 웨이퍼, 에어로졸 스프레이 또는 액체, 예컨대 비제한적인 예로서 시럽, 엘릭시르, 수성 액체, 비수성 액체 중의 용액 또는 현탁액, 수중유형 에멀젼 또는 유중수형 에멀젼을 들 수 있다. 이러한 조성물은 개시된 화합물의 약학적으로 허용되는 염의 소정량을 함유하며 통상의 기술자에게 공지인 제약학적 방법에 의해 제조될 수 있다. 일반적으로 문헌 [Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st Ed., Lippincott, Williams, 및 Wilkins, Philadelphia PA. (2005)]을 참조할 수 있다.
[00139] 통상적인 투여 형태는 일반적으로 제형으로부터 약물을 신속히 또는 즉시 방출한다. 약물의 약리학 및 약동학에 따라, 통상적인 투여 제형의 사용은 환자의 혈액 및 기타 조직에서 약물의 농도를 크게 요동시킬 수 있다. 이러한 요동은 투여 빈도, 작용 개시, 효능 기간, 치료 혈중농도의 유지, 독성, 부작용 등과 같은 몇몇 파라미터에 영향을 미칠 수 있다. 유리하게는, 약물의 작용 개시시점, 작용 기간, 치료창 범위 내에서의 혈중 농도 및 피크 혈중 농도를 제어하기 위해 조절-방출 제형을 이용하는 것이 바람직하다. 특히, 약물의 최대 효능을 달성하는 한편, 약물을 언더 도징(즉 최소 치료 수준을 밑도는 양)하거나 약물을 독성 수준을 초과하는 양으로 투여하는 것 두 가지 모두에 기인할 수 있는, 잠재적인 부작용과 안전성 측면의 우려를 최소화하기 위해 조절 방출 또는 연장 방출 투여 형태 또는 제형을 이용할 수 있다. 몇몇 구체예에서, 본 발명에 설명된 조성물은 서방형 제형으로 투여할 수 있다.
[00140] 조절-방출형 의약 제품은 그에 대응하는 비조절 방출형 제품에 비해 약물 치료 효능을 향상시키기 위한 일반적인 목표를 갖는다. 이상적으로는, 약물 치료시 최적으로 설계된 조절-방출 제제를 사용하는 것은 최단 기간 동안 병태를 치유 또는 제어하기 위해 사용되는 최소량의 약물 물질에 의해 특징지어진다. 조절-방출 제형의 장점으로는: 1) 약물의 연장된 활성; 2) 감소된 투여 빈도; 3) 증가된 환자 순응성; 4) 총 약물량 사용 감소; 5) 국소 또는 전신적인 부작용 감소; 6) 약물 누적량 최소화; 7) 혈중 농도의 요동 감소; 8) 치료 효능 개선; 9) 약물 활성 손실 또는 상승작용의 감소; 및 10) 질병 또는 병태의 제어 속도 개선을 들 수 있다. Kim, Cherng-ju, Controlled Release Dosage Form Design, 2 (Technomic Publishing, Lancaster, Pa.: 2000).
[00141] 대부분의 조절-방출 제형은 소망되는 치료 효과를 즉시 낼 수 있도록 하는 약물(활성성분)의 양을 초기 방출시킨 다음 장기간 동안 이러한 치료 또는 예방 효과를 유지하도록 약물의 또 다른 양을 점진적 및 연속적으로 방출하도록 설계된다. 체내에서 약물의 이러한 일정한 수준을 유지하기 위해, 약물은 체내에서 대사 및 체외 배출되는 양을 대체하는 속도로 투여 제형으로 방출되어야 한다. 활성성분의 조절-방출은 비제한적인 예로서 pH, 이온 강도, 삼투압, 온도, 효소, 물 및 기타 생리적 조건이나 화합물과 같은 다양한 조건에 의해 자극될 수 있다.
[00142] 다양한 공지의 조절- 또는 연장-방출 투여 형태, 제형 및 장치를 이용하여 본 발명의 염 및 조성물을 최적화할 수 있다. 이러한 내용이 설명되어 있는 문헌의 비제한적인 예로는 미국특허 Nos.: 3,845,770; 3,916,899; 3,536,809; 3,598,123; 4,008,719; 5674,533; 5,059,595; 5,591 ,767; 5,120,548; 5,073,543; 5,639,476; 5,354,556; 5,733,566; 및 6,365,185 B1을 들 수 있으며 이들 문헌은 그 내용 전체가 본 발명에 참조 통합되었다. 예컨대, 히드록시프로필메틸 셀룰로스, 기타 폴리머 매트릭스, 겔, 투과막, 삼투압 시스템 (예컨대 OROS® (Alza Corporation, Mountain View, Calif. USA)), 또는 이들의 조합을 이용하여 1종 이상의 활성물질을 서히 또는 조절적으로 방출시시켜 다양한 비율로 원하는 방출 프로파일을 제공하도록, 이들 투여 형태를 이용할 수 있다.
[00143] 몇몇 구체예에서, 본 발명에 설명된 치료 방법은 컨쥬게이트 또는 컨쥬게이트를 포함하는 조성물을 투여하는 것에 더해 환자에게 1종 이상의 부가적인 항암 요법을 공동-투여하는 것을 포함한다. 예시적인 항암 요법의 비제한적인 예로는, 외과수술, 화학요법, 방사선요법, 열요법, 면역요법, 호르몬요법, 레이저요법, 항혈관신생 요법, 및 이들의 조합을 들 수 있다.
[00144] 몇몇 구체예에서, 이 방법은 대상자에게 컨쥬게이트 및 항암제 또는 화학치료제를 공동-투여하는 것을 포함한다. 본 발명에서, "공동-투여(co-administering)"라는 용어는 대상자에게 2종 이상의 치료제를 투여하는 것을 가리키며, 여기서 2종 이상의 치료제는 동일하거나 상이한 투여 형태(예컨대, 경구, 비경구, 정맥내, 근육내, 피하, 피내, 기도(에어로졸), 폐, 경피, 국소, 주사, 또는 종양내 투여)를 이용하여, 동일 또는 상이한 의약 조성물로서 투여될 수 있으며, 상기 2종 이상의 치료제는 치료 경과 동안 동시에 또는 이시에 투여될 수도 있다 (예컨대 동일한 시간 내에 다른 시점, 같은 날 다른 시점, 같은 주일에 다른 시점, 같은 달의 다른 시점). 본 발명에서, "항암제"라는 용어는 암을 치료하는데 이용될 수 있는 여늬 화합물(그의 유사체, 유도체, 전구약물 및 약학적 염) 또는 조성물을 가리킨다. 본 발명에서 사용되기 위한 항암 화합물의 비제한적인 예로는 토포이소머라제 I 및 II의 저해제, 알킬화제, 미세관 저해제 (예컨대, 탁솔), 및 혈관형성 저해제를 들 수 있다. 예시적인 항암 화합물의 비제한적인 예로는, 파클리탁셀 (탁솔); 도세탁셀; 저미시티빈; 알데스류킨; 알렘투주맙, 알리트레티노인; 알로퓨리놀; 알트레타민; 아미포스틴; 아나스트로졸; 삼산화비소; 아스파라기나제; BCG Live; 벡사로텐 캡슐; 벡사로텐 겔; 블레오마이신; 부술판 정맥제; 부술판오랄; 칼루스테론; 카페시타빈; 플라티네이트; 카르무스틴; 폴리페프로산 임플란트가 있는 카르무스틴; 셀레콕시브; 클로람부실; 클라드리빈; 시클로포스파미드; 시타라빈; 시타라빈 리포조말; 다카르바진; 닥티노마이신; 악티노마이신 D; 다르베포에틴 알파; 다우노루비신 리포조말; 다우노루비신 다우노마이신; 데니류킨 디피티톡스, 덱스라족산; 도세탁셀; 독소루비신; 독소루비신 리포조말; 드로모스타놀론 프로피오네이트; 엘리엇 B 용액; 에피루비신; 에포에틴 알파 에스트라무스틴; 에토포시드포스페이트; 에토포시드 (VP-16); 엑세메스탄; 필그라스팀; 플록스우리딘 (동맥내); 플루다라빈; 플루오로우라실 (5-FU); 풀베스트란트; 겜투주맙 오조가미신; 고세렐린 아세테이트; 히드록시우레아; 이브리투모맙 티욱세탄; 이다루비신; 이포스파미드; 이마티닙 메실레이트; 인터페론 알파-2a; 인터페론 알파-2b; 이리노테칸; 레트로졸; 류코보린; 레바미솔; 로무스틴 (CCNU); 메클로레타민 (니트로겐머스타드); 메게스트롤 아세테이트; 멜팔란 (L-PAM); 머캅토퓨린 (6-MP); 메스나; 메토트렉세이트; 메톡살렌; 미토마이신 C; 미토테인; 미토잔트론; 난드롤론; 펜프로피오네이트; 노페투모맙; LOddC; 오프렐베킨; 파미드로네이트; 페가데마제; 페가스파르가제; 페그필그라스팀; 펜토스타틴; 피포브로만; 플리카마이신; 미트라마이신; 포르피머 나트륨; 프로카르바진; 퀴나크린; 라스부리카제; 리툭시맙; 사르그라모스팀; 스트렙토조신; 탈부비딘 (LDT); 탈크; 타목시펜; 테모졸로미드; 테니포시드 (VM-26); 테스토락톤; 티오구아닌 (6-TG); 테오테파; 토포테칸; 토레미펜; 토시투모맙; 트라스투주맙; 트레티노인 (ATRA); 우라실 머스타드; 발루비신; 발토르시타빈 (모노발 LDC); 빈블라스틴; 비노렐빈; 졸레드로네이트; 및 이의 혼합물을 들 수 있다. 몇몇 구체예에서, 항암제는파클리탁셀-탄수화물 컨쥬게이트, 예컨대, 파클리탁셀-글루코스 컨쥬게이트이며, 이에 관하여는 그 내용이 본 발명에 참조 통합된 미국특허 No. 6,218,367에 설명된 것을 참조할 수 있다.
[00145] 몇몇 구체예에서, 항암제는 시스플라틴, 옥살리플라틴, 카보플라틴, 파라플라틴, 사르트라플라틴, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 백금산염이다.
[00146] 몇몇 구체예에서, 항암제는 면역조절제이다. 이들 구체예의 방법은컨쥬게이트와 면역조절제를 대상자에게 공동-투여하는 것을 포함한다. 몇몇 구체예에서, 컨쥬게이트와 면역조절제는 서로 다른 의약 조성물로서, 서로 다른 시점에서 공동-투여된다. 몇몇 구체예에서, 컨쥬게이트와 면역조절제는 동일한 의약 조성물로서 동시에 공동-투여된다. 몇몇 구체예에서, 면역조절제는 암세포에 대한 면역 반응을 활성화 및 자극한다. 면역조절제는 면역 반응을 5%, 10%, 25%, 50%, 75%, 90%, 100% 또는 그 이상으로 증가시킬 수 있다. 면역조절제는 암세포의 수 및/또는 암 세포의 성장을 5%, 10%, 25%, 50%, 75%, 90%, 100% 또는 그 이상으로 감소시킬 수 있다. 예시적인 면역조절제의 비제한적인 예로는 면역세포 (예컨대, 내추럴 킬러 세포, 림포카인-활성화된 킬러 세포, 세포독성 T 세포 및 수지상 세포), 항체 (예컨대, 항-PD-L1 및 항-PD-1 항체, 항-CD52, 항-VEGF-A, 항-CD30, 항-EGFR, 항-CD33, 항-CD20, 항-CTLA4, 및 항-HER-2 항체), 및 시토카인 (예컨대, 인터페론 및 인터류킨)을 들 수 있다. 몇몇 구체예에서, 면역조절제는 항-PD-L1, an 항-PD-1 항체, 또는 그의 혼합물이다. 특정한 예시적인 구체예에서, the 면역조절제는 지질과 컨쥬게이트되어 있다.
[00147] 이에 더해, 치료 방법은 방사능 또는 방사선요법의 사용을 추가로 포함할 수 있다. 또한, 치료 방법은 외과 수술에 의한 치료를 더 포함할 수도 있다.
[00148] 특정 구체예에서, 본 발명의 조성물의 유효량을 환자에게 한 번 투여할 수 있다. 특정 구체예에서, 본 발명의 조성물의 유효량을 환자에게 반복적으로 투여할 수 있다. 전신 투여를 위해 대상자에게 본 발명의 조성물을 치료량, 에컨대 0.1 mg/kg, 0.5 mg/kg, 1.0 mg/kg, 2.0 mg/kg, 2.5 mg/kg, 5 mg/kg, 10 mg/kg, 15 mg/kg, 20 mg/kg, 25 mg/kg, 30 mg/kg, 40 mg/kg, 50 mg/kg, 또는 그 이상의 양으로 투여할 수 있다.
[00149] 몇몇 구체예에서, 초기 투여량 투여 후, 치료제 투여 빈도를 낮추어 투여할 수 있다. 예컨대, 3개월간 2주에 한 번 치료 후, 6개월 또는 1년 또는 그 이상의 기간 동안 한달에 한번 투여할 수도 있다. 본 발명의 방법에 따른 치료는 병태의 마커 또는 증상, 예컨대 종양 크기 및/또는 성장을 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80% 또는 적어도 90% 또는 그 이상의 수준으로 감소시킬 수 있다.
[00150] 본 발명의 조성물의 투여량은 치료의 관찰된 효과를 최적화하기 위해, 의사가 결정 및 조정할 수 있다. 치료 기간 및 빈도와 관련해서는, 치료가 언제 치료 잇점을 제공하는지 그리고 투여량을 증가시킬지 또는 감소시킬지, 투여 빈도를 증가시킬지 또는 감소시킬지, 치료를 중단할지, 재개할지, 또는 치료법의 다른 대안법을 찾아야 할지를 결정하기 위해 의사가 대상자를 모니터링하는 것이 일반적이다. 투여 스케쥴은 다양한 임상 인자 예컨대, 본 발명의 조성물에 대한 대상자의 민감성 등을 감안하여 주1회로부터 매일 투여하는 식으로 변화될 수 있다. 소망되는 투여량 또는 활성화양을 한번에 투여하거나 또는 나누어, 예컨대 2-4회 서브 투여량으로 나누어서, 그리고 일정 기간 동안, 예컨대 하루동안 적절한 간격을 두고 투여하거나 또는 기타 적절한 투여 스케쥴에 따라 투여할 수 있다. 몇몇 구체예에서, 투여는 수주일 또는 수개월간에 걸쳐 매일 치료하는 것 및/또는 1회 이상 투여하는 것과 같이 만성적일 수 있다. 투여 및/또는 치료 스케쥴의 예는 1 주일, 2 주일, 3 주일, 4 주일, 1 개월, 2 개월, 3 개월, 4 개월, 5 개월, 또는 6 개월, 또는 그 이상의 기간 동안 하루 1회, 하루 2회, 하루 3회 또는 하루 4회 또는 그 이상의 빈도로 투여된다. 본 발명의 조성물은 예컨대 5분, 10분, 15분, 20분, 또는 25분 기간 동안 투여될 수 있다.
[00151] 본 발명의 조성물의 투여량 범위는, 본 발명의 방법에 따라 예컨대 본 발명에 설명된 조성물의 형태, 그의 강도 및 본 발명에 설명된 병태의 증상, 마커 또는 표시자를 감소시키고자 하는 정도, 에컨대 종양 성장의 원하는 감소 백분율 등에 따라 달라진다. 투여량은 부작용을 일으킬 정도로 많아서는 아니된다. 일반적으로, 투여량은 환자의 연령, 병태 및 성별에 따라 달라지며 통상의 기술자가 결정할 수 있다. 투여향은 또한 합병증이 나타날 시 주치의가 조정할 수도 있다.
[00152] 본 발명에 설명된 조성물의 효능은, 예컨대 본 발명에 설명된 병태의 치료또는 본 발명에 설명된 응답을 이글어내기 위해 숙련된 의사에 의해 구해질 수있다. 그러나, 치료는 본 발명에서 사용되는 용어의 의미상 "유효 치료"인 것으로 간주되며, 본 발명에 설명된 병태의 징후 또는 증상 중 한 가지 이상을 이로운 방식으로, 기타 임상적으로 허용되는 방식으로 개선시키거나 심지어 경감시키거나 또는 원하는 반응이 예컨대 본 발명의 방법에 의한 치료시 적어도 10% 이상 유도되도록 하는 것을 의미한다. 효능은 예컨대 본 발명의 방법에 따라 치료되는 병태의 마커, 표시자, 증상 및/또는 발생률, 또는 그 밖의 측정가능한 적절한 파라미터, 예컨대 종양 크기 및/또는 성장율을 측정함으로써 평가할 수 있다. 효능은 또한 의료적 개입(즉 질병의 진행이 중단)에 대한 필요성 또는 입원에 의해 평가되는 바와 같이 개체의 병세 악화에 의해 측정될 수 있다. 이러한 표시자들을 측정하는 방법은 기술분야 및/또는 본 명세서에 설명되어 있다. 치료에는 개체 또는 동물(몇몇 비제한적인 예에는 인간 또는 동물이 포함된다)에서의 질병의 여하한 치료가 포함되며; (1) 질병 억제, 예컨대, 증상(예컨대 통증 또는 염증)의 악화 방지; 또는 (2) 질병의 위중도 경감, 예컨대 증상의 퇴행 야기가 이에 포함된다. 질병의 치료를 위한 유효량은 이를 필요로 하는 대상자에게 투여될 경우, 그 투여량이 그 질병에 대해 정의된 유효한 치료 효과를 결과시키는데 충분한 양을 의미한다. 어떤 물질의 효능은 질병의 물리적 표시자 또는 원하는 반응 (예컨대 종양 크기 및/또는 성장)을 평가함으로써 정해질 수 있다. 통상의 기술자라면 이러한 파라미터 또는 파라미터의 조합을 측정함으로써 투여량 및/또는 치료의 효능을 능히 모니터링할 수 있을 것이다. 효능은 예컨대 암 치료시 본 발명에 설명된 병태의 동물 모델을 이용하여 평가될 수 있다. 실험 동물을 이용할 경우, 치료 효능은 예컨대 종양 크기 및/또는 성장의 감소와 같은 어떤 마커의 통계적으로 유의한 변화가 관찰된 경우 입증된다.
[00153] 본 발명에 설명된 인 비트로 및 동물 분석에 의해 본 발명에 설명된 조성물의 주어딘 투여량을 평가할 수 있다. 비제한적인 예로서, 조성물의 어떤 투여량의 효과는 인 비트로 세포 생존능 분석에 의해 평가될 수 있다. 이러한 분석법을 위한 프로토콜의 비제한적인 예는 다음과 같다: 세포, 예컨대 암세포주를 본 발명의 조성물과 접촉시키고 세포 생존능 시약, 예컨대, CellTiter 96 Aqueous One Solution reagents (PROMEGA, WI)를 이용하여 1 이상의 시점에서 생존능을 시험한다.
[00154] 주어진 투여량의 효능은 또한 동물 모델, 에컨대 본 발명의 실시예에 설명된 쥐의 난소암 모델과 같은 동물 모델을 이용하여 평가할 수도 있다. 간단히 설명하면, 아데노바이러스를 지니는 Cre 레콤비나제를 점액낭을 통해 전달하여 K-Ras LSL /+/Ptenfl /fl 마우스에서 난소 선암종을 유도시킬 수있다. 일단 마우스에서 중형 내지 대형 종양이 생기면, 본 발명의 조성물을 예컨대 꼬리 정맥 주사를 통해 투여하고, 종양 이미징을 실시하거나 및/또는 마우스를 희생시킬 수 있다.
[00155] 분자의 세포 내로의 세포 흡수는 종종 세포내섭취(endocytosis)를 통해 일어나는데, 이것은 클라트린-코팅된 피트(pits) 또는 포낭(caveolae)에 의해 매개된다. 포낭은 주로, 수많은 생화학적 및 세포 프로세스에서 중요한 역할을 하는 카베올린이라 칭해진 단백질로 이루어진, 혈장막의 특수한 함입부(invaginations)이다. 카베올린-1 (CAV1)은 세포내섭취 트래피킹에 관여된, 포낭의 중요한 궈엉분이다. 포낭과 자가-조립된 초분자 입자와의 연합(association)은 세포 내로의 이들의 흡수를 도와, 암세포에서의 치료적 개재를 용이하게 할 수 있다. 본 발명은 백금산염이나 탁산에 비해 자가-조립된 초분자 입자에 대하여 암 환자가 더 나은 반응을 나타낼 가능성을 예측하는 방법을 제공한다. 이 방법은 자가-조립된 초분자 입자에 대한 보다 나은 치료 효능과 페이로드 약물의 보다 높은 내면화를 예견해주는, 자가-조립된 초분자 입자를 이용한 치료에 대한 반응성과 상관이 있는 유전자 산물의 발현 수준을 측정하는 것을 포함한다.
[00156] 따라서, 본 발명은 암 환자가 백금산염 또는 탁산에 비해 자가-조립된 초분자 입자에 대해 더 우수한 반응을 나타낼 가능성을 예측하는 방법도 제공한다. 일반적으로 이 방법은: (a) 환자로부터 수득된 종양 샘플 중 EEA1, SRSF5, SMAD2, SNX3, PLCD1, OSBP, DNM1, DNM2, DNM3, SGK3, FAPP1, SMAD7, SMURF2, NEDD4, PRKCA, CDH-1, LDLR, CP, CD36, LYN, FLOT-1, FLOT-2, CA4, APOE, CAV1, CAV2, CAV3, LMAN2, LAT 및 STOM의 발현 수준을 분석하고; 및 (b) 환자가 긍정적인 반응을 나타낼 가능성을 예측하되, 여기서: CAV1, CAV2, CAV3, LDLR, SMAD7, SMURF2, NEDD4, PRKCA로부터 선택된 1종 이상의 유전자의 발현 수준 증가는 자가-조립된 초분자 입자를 포함하는 치료에 대한 반응이 긍정적일 가능성과 긍정적으로 상관이 있는 것으로 평가하는 것이다. 1종 이상의 유전자의 발현 수준 증가는 레퍼런스 또는 대조군에 대한 것일 수 있다. 예컨대, 비-암세포에서의 발현 수준.
[00157] 본 발명에서 "분석(assay)" 또는 "분석하다" 등의 용어는 샘플 내의 어떤 성분을 정량적 또는 정성적으로 분석하는 것을 의미한다. 이 용어는 샘플 중 어떤 성분의 수준을 실험실 또는 임상 관찰하는 것 및/또는 측정하는 것을 포함한다.
[00158] 본 발명에서 "발현 수준"이라는 용어는 발현 산물 또는 유전자 산물의 정성적 또는 정량적 측정치를 일컫는다. 발현 수준은 어떤 유전자의 RNA 수준의 발현 또는 어떤 유전자의 폴리펩타이드 발현 수준에 대한 것일 수 있다. 본 발명에서 "정규화된(normalized)" 발현 수준이라는 용어는 어떤 레퍼런스 유전자(들)의 발현 산물 수준에 상대적인 표시자 유전자의 발현 반응 수준을 가리키는 것으로, 샘플, 단일 레퍼런스 발현 산물 또는 발현 산물의 특정 세트에서의 측정된 모든 발현 산물에 대한 것일 수 있다. 발현 산물의 발현 수준이 정상적인 세포 또는 비-종양 세포와 같은 제2 샘플에 비해 종양세포와 같은 제1 샘플에서 더 높을 경우 그 유전자 "증가된 발현 수준"을 갖는 것이다. 마찬가지로, 발현 산물의 정규화된 발현 수준이 제2 샘플에서보다 제1 샘플에서 더 높을 경우 그 유전자는 "증가된 정규화된 발현 수준"을 나타내는 것이다.
[00159] 본 발명에서 "레퍼런스 유전자"라는 용어는 그의 발현 수준을 테스트 샘플 중의 유전자 산물의 발현 수준과 비교하는데 이용될 수 있는 유전자를 카리킨다. 본 발명의 일 구체예에서, 레퍼런스 유전자에는 하우스키핑 유전자, 에컨대 베타-글로빈, 알코올 탈수소효소, 또는 그 밖의 유전자가 포함되며, 이의 발현은 그 유전자를 함유하는 세포의 질병 상태에 따라 변하는 것이 아니다. 또 다른 구체예에서, 분석된 유전자 또는 그의 큰 서브세트 모두가 레퍼런스 유전자 역할을 할 수도 있다.
[00160] "발현 산물" 또는 "유전자 산물"이라는 용어는 본 발명에서 mRNA를 비롯한 어떤 유전자의 RNA 전사 산물(전사체) 및 RNA 전사체의 폴리펩타이드 번역 산물을 가리킨다. 발현 산물은 예컨대 스플라이스되지 않은 RNA, an mRNA, a 스플라이스 변이체 mRNA, a 마이크로RNA, a 단편화된 RNA, a 폴리펩타이드, a 번역후-번역적으로 변형된 폴리펩타이드, 스플라이스 변이체 폴리펩타이드 등일 수 있다.
[00161] 본 발명에서 "측정하다"라는 표현은 샘플 내의 어떤 성분의 크기, 양 또는 능력을 결정하기 위한 물리적 작용을 수행함을 가리킨다.
[00162] 본 발명에서 "마이크로어레이"라 함은 기판 위에 예컨대, 올리고뉴클레오타이드 또는 폴리뉴클레오타이드 프로브와 같은, 혼성화 가능한 어레이 요소들이 정렬된 어레인지먼트를 의미한다.
[00163] "폴리뉴클레오타이드"라는 용어는 일반적으로 폴리리보뉴클레오타이드 또는 폴리데옥시리보뉴클레오타이드를 가리키는 것으로, 변형되지 않은 RNA 또는 DNA 또는 변형된 RNA 또는 DNA일 수 있다. 그러므로, 예컨대, 본 발명에서 폴리뉴클레오타이드는 단일 및 이중가닥 DNA, 단일- 및 이중가닥 부분을 포함하는 DNA, 단일- 및 이중가닥 RNA, 및 단일- 및 이중가닥 부분을 포함하는 RNA, 단일-가닥일 수 있는 DNA와 RNA, 또는 보다 일반적으로는 이중가닥 또는 단일-및 이중가닥 부분 포함하는 하이브리드 분자를 가리킨다. 또한, 본 발명에서 "폴리뉴클레오타이드"라는 용어는 RNA 또는 DNA 또는 RNA와 DNA 양자를 모두 포함하는 삼중-가닥 부분을 가리킨다. 이러한 영역에서의 가닥들은 동일한 분자로부터 또는 상이한 분자로부터 유래한 것일 수 있다. 상기 영역들은 이들 1종 이상의 분자 모두를 포함할 수 있으나, 보다 일반적으로는 몇몇 분자들의 한 영역만을 포함한다. 삼중나선 영역의 분자들 중 하나는 종종 올리고뉴클레오타이드이다. "폴리뉴클레오타이드"라는 용어는 또한 1개 이상의 변형된 염기를 함유하는 DNAs (cDNAs 포함) 및 RNAs도 포괄한다. 그러므로, 안정성이나 그 밖의 다른 이유로 변형된 백본을 갖는 DNAs 또는 RNAs도 본 발명에서 말하는 "폴리뉴클레오타이드"이다. 뿐만 아니라, 이노신과 같은 통상적인 염기 또는 삼중수소화 염기와 같은 변형 염기를 포함하는 DNAs 또는 RNAs 역시도 본 발명의 "폴리뉴클레오타이드"에 포괄된다. 일반적으로, "폴리뉴클레오타이드"라는 용어는 비변형 폴리뉴클레오타이드의 화학적, 효소적 및/또는 대사적으로 변형된 모든 형태 뿐만 아니라, 단세포 및 다세포를 비롯한 세포 및 바이러스의 특징적인 DNA 및 RNA의 화학적 형태를 모두 포괄한다.
[00164] "올리고뉴클레오타이드"라는 용어는 제한 없이 단일-가닥 데옥시리보뉴클레오타이드, 단일- 또는 이중가닥 리보뉴클레오타이드, RNA/DNA 하이브리드 및 이중가닥 DNAs를 포함한, 비교적 짧은 폴리뉴클레오타이드를 가리킨다. 단일-가닥 DNA 프로브 올리고뉴클레오타이드와 같은 올리고뉴클레오타이드는 예컨대 흔히 구득가능한 자동화 올리고뉴클레오타이드 합성기를 이용하는 화학적 방법에 의해 종종 합성된다. 그러나, 올리고뉴클레오타이드는 인 비트로 재조합 DNA-매개된 기술 및 세포 및 생명체에서의 DNA 발현을 비롯한 다른 다양한 방법으로 만들어질 수도 있다.
[00165] 본 발명에서 "프라이머" 또는 "올리고뉴클레오타이드 프라이머"라는 용어는 프라이머 연장 산물 합성이 유도될 경우, 예컨대 뉴클레오타이드 및 a 폴리머화-유도제 예컨대 DNA 또는 RNA 폴리머라제의 존재 하 및 적합한 온도, pH, 금속이온 농도 및 염 농도 하에서 놓일 경우 상보적인 핵산 가닥의 합성을 개시하는 작용을 하는 올리고뉴클레오타이드를 가리킨다. 프라이머는 일반적으로 프라이머 연장 산물 합성에 이용될 경우, 상용가능한 길이를 가지며, 대체로 약 8 뉴클레오타이드 내지 약 100 뉴클레오타이드 (nt) 길이 범위, 예컨대 약 10 nt 내지 약 75 nt, 약 15 nt 내지 약 60 nt, 약 15 nt 내지 약 40 nt, 약 18 nt 내지 약 30 nt, 약 20 nt 내지 약 40 nt, 약 21 nt 내지 약 50 nt, 약 22 nt 내지 약 45 nt, 약 25 nt 내지 약 40 nt, 등의 길이 범위, 예컨대, 약 18 nt 내지 약 40 nt, 약 20 nt 내지 약 35 nt, 약 21 내지약 30 nt 길이 범위를 가지며, 이 때 상기 표현된 범위 양 말단의 수치를 포함한다. 프라이머들은 약 10-50 뉴클레오타이드 길이, 예컨대 약 15-45, 약 18-40, 약 20-30, 약 21-25 nt 길이 범위를 가지며 상기 범위 양 말단의 수치를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 프라이머의 길이는 약 10, 12, 15, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 또는 70 뉴클레오타이드 이하이다. 문맥 상, "약"이라는 용어는 어느 한쪽 또는 양쪽 말단 모두의 5' 또는 3'로부터 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20개 이상의 뉴클레오타이드를 의미한다.
[00166] 많은 구체예에서 프라이머는 증폭시 최대 효능을 위해 단일 가닥이지만, 이중-가닥일 수도 있다. 이중-가닥일 경우, 프라이머는 많은 구체예에서 먼저 연장 산물 제조에 이용되기에 앞서 그의 가득들이 분리되도로 처리된다. 이러한 변성 단계는 일반적으로 열에 의해 수행되지만, 알칼리 처리 및 후속적으로 중화 처리를 수행할 수도 있다. 그러므로, "프라이머"는 템플레이트(주형)에 상보적이며 템플레이트와 수소 결합 또는 혼성화에 의해 복합체를 형성하여 폴리머라제에 의한 합성 개시를 위한 프라이머/템플레이트 복합체를 형성하고, 이는 그의 3' 말단에서 염기의 공유 부가에 의해 연장된다.
[00167] 본 발명에서 "프라이머 쌍(pair)"이라는 용어는 표적 핵산의 핵산-기반 증폭에 적합한 핵산 서열을 갖는 제1 및 제2 프라이머를 가리킨다. 이러한 프라이머 쌍은 표적 핵산 또는 그의 단편을 증폭시키기 위해 일반적으로 표적 핵산의 제1 부분의 그것과 동일 또는 유사한 서열을 갖는 제1 프라이머 및 표적 핵산의 제2 부분과 상보적인 서열을 갖는 제2 프라이머를 포함한다. 본 발명에서 "제1" 및 "제2" 프라이머라는 표현은 달리 명시하지 않는 한 임의적인 것이다. 예컨대, 제1 프라이머는 "정방향 프라이머" (표적 핵산의 5' 말단에서 핵산 합성을 개시하는 것) 또는 "역방향 프라이머" (정방향 프라이머로부터 개시된 합성에 의해 생산된 연장 산물의 5' 말단에서 핵산 합성을 개시하는 것)로서 설계될 수 있다. 마찬가지로, 제2 프라이머도 정방향 프라이머 또는 역방향 프라이머로서 만들어질 수 있다.
[00168] 본 발명에서, "프로브" 또는 "올리고뉴클레오타이드 프로브"라는 용어는 호환적으로 사용되며 표적 색산 분석물(예컨대 핵산 증폭 산물)에 존재하는 핵산 서열과 상보적인 핵산 서열을 함유하는, 상기 정의된 바와 같은 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 구조물을 가리킨다. 프로브의 폴리뉴클레오타이드 영역은 DNA, 및/또는 RNA, 및/또는 합성 뉴클레오타이드 유사체로 이루어질 수 있다. 프로브는 일반적으로 어떤 표적 핵산의 표적 서열의 전부 또는 일부를 특이적으로 검출하는데 사용되는 길이를 가지며, 많은 구체예에서 약 8 nt 내지 약 100 nt 길이, 예컨대 약 8 내지 약 75 nt, 약 10 내지 약 74 nt, 약 12 내지 약 72 nt, 약 15 내지 약 60 nt, 약 15 내지 약 40 nt, 약 18 내지 약 30 nt, 약 20 내지 약 40 nt, 약 21 내지 약 50 nt, 약 22 내지 약 45 nt, 약 25 내지 약 40 nt 길이, 예컨대, 약 18-40 nt, 약 20-35 nt, 또는 약 21-30 nt 길이를 가지며 상기 명시된 범위 내의 여하한 길이를 가질 수 있다. 몇몇 구체예에서, 프로브의 길이는 약 10-50 뉴클레오타이드 범위, 예컨대 약 15-45, 약 18-40, 약 20-30, 약 21-28, 약 22-25 길이를 가지며 길이를 가지며 상기 명시된 범위 내의 여하한 길이를 가질 수 있다. 몇몇 구체예에서, 프로브의 길이는 약 10, 12, 15, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 또는 70 뉴클레오타이드 이하이다. 문맥상 "약"이라는 용어는 어느 한쪽의 말단 또는 양말단 모두로부터 5' 또는 3'에서 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20 이상의 뉴클레오타이드를 의미한다.
[00169] 몇몇 구체예에서, 유전자의 발현 수준을 측정하기 위해 유전자 산물을 분석할 수 있다. 몇몇 구체예에서, 1종 이상의 유전자의 발현 수준은 대응하는 유전자(들)의 RNA 전사체의 수준이다. 본 발명에서 "RNA 전사체"라는 용어는 예컨대, mRNA, 스플라이스되지 않은 RNA, 스플라이스 변이체 mRNA, 마이크로RNA, 및 단편화된 RNA를 비롯한, 유전자의 RNA 전사 산물을 가리킨다.
[00170] 유전자 발현 수준을 분석하기 위한 샘플은 대상자로부터의 소망되는 생물학적 샘플이면 어느 것이든 무방하다. 본 발명에서 "생물학적 샘플"이라는 용어는 생물학적 생명체, 예컨대 대상자로부터의 세포 용해물, 조직 샘플의 균질물로부터 채취 또는 분리된 샘플을 말한다. "생물학적 샘플"이라는 용어에는 미처리 또는 전처리된(또는 예비가공된) 생물학적 샘플도 포함된다. 몇몇 구체예에서, the 생물학적 샘플은 조직 샘플, 생물학적 체액, 예컨대 혈액(전혈, 혈장, 태반 혈액 및 혈청), 락테이트화 산물(예컨대 밀크), 양수, 가래, 타액, 뇨, 정자, 뇌척수액, 기관지 흡입물, 땀, 점액질, 액상 대변, 활액, 림프액, 눈물, 기관 흡인물, 및 이의 분획을 포함하나 이에 한정되지 않는다. 또 다른 구체예에서, 생물학적 샘플은 세포 용해물 및 그의 분획을 포함할 수 있다. 예컨대, 세포를 용해하여 세포 용해물을 얻는다. 몇몇 구체예에서, 샘플은 절제술, 생검 또는 중심부 바늘생검법에 의해 얻는다. 이에 더해, 미세한 바늘 흡인물 샘플을 얻을 수 있다. 샘플은 파라핀-포매되거나 냉동조직일 수 있다. 몇몇 구체예에서, 샘플은 고정된, 왁스-포매된 조직 샘플이다.
[00171] 몇몇 구체예에서, 샘플은 종양 샘플일 수 있다. 예컨대, 종양 샘플은 생검 샘플이거나 또는 복수로부터의 세포 또는 흉막 삼출 세포일 수 있다.
[00172] 본 발명에서 "종양"이라는 용어는 모든 악성 및양성, 그리고 전암성및 암성 세포 및 조직인지를 가리지 않고 모든 신생물 세포 성장물 및 증식물을 가리킨다. 본 발명에서 "종양 세포"라는 용어는 암세포주 또는 암 환자로부터 수득된 암성 세포를 가리킨다. 이 용어는 종양 조직 샘플, 에컨대 외과적 절제술에 의해 수득된 조직 및 예컨대 중심 생검 또는 미세바늘 생검과 같은 생검에 의해 얻은 조직으로부터의 종양 세포를 포괄한다. "종양 세포"라는 용어는 또한 원발 종양 이외의 부위, 예컨대 순환 종양 세포로부터 수득된 종양 세포도 포괄한다. 이 용어는 또한 원발성 종양 세포 또는 순환 종양 세포로부터 유래된 세포배양 샘플과 같은 환자의 종양 세포의 자손 세포도 포함한다. 이 용어는 또한 예컨대, 골수, 혈액, 혈장, 혈청, 등과 같이 인 비보 종양 세포로부터 파생된 단백질 또는 핵산 물질을 포함할 수 있는 샘플도 포괄한다. 이 용어는 또한 종양 세포가 농축되거나 이들의 입수 후 달리 조작된 샘플 또는 환자의 종양 물질로부터 수득된 폴리뉴클레오타이드 및/또는 폴리펩타이드를 포함하는 샘플도 포괄한다.
[00173] 생물학적 샘플은 임상 샘플일 수 있다. "임상 샘플(clinical sampe)"이라는 용어는 인간 대상자로부터 유래된 샘플을 가리킨다. 생물학적 샘플은 또한 "대상자 샘플"이라 칭할 수도 있다. 테스트 생물학적 샘플은 분석, 모니터링 또는 관찰 대상이 된 생물학적 샘플이다. 생물학적 대조군 샘플은 테스트 생물학적 샘플에 대한 양성 또는 음성 대조군일 수 있다. 종종, 생물학적 대조군 샘플은 테스트 생물학적 샘플과 동일한 종류의 조직, 세포 및 생물학적 체액을 함유한다. 샘플은 대상자로부터의 세포 샘플을 취하여 얻을 수 있지만, 이전에 분리된 세포를 이용함으로써 달성될 수도 있다. 이에 더해, 생물학적 샘플은 갓 수집한 샘플이거나 또는 이전에 수집해둔 샘플일 수도 있다.
[00174] 몇몇 구체예에서, 테스트 샘플 또는 생물학적 샘플은 냉동된 생물학적 샘플, 예컨대, 냉동된 조직 또는 세포일 수 있다. 냉동된 샘플은 본 발명의 방법, 분석법 및 시스템에 사용되기 전에 해동시킬 수 있다. 해동 후, 냉동 샘플을 본 발명에 설명된 방법으로 분석하기 전에 원심분리할 수 있다.
[00175] 몇몇 구체예에서, 생물학적 샘플은 폴리머라제 연쇄 반응 (PCR) 후에 증폭된 핵산 산물일 수 있다. 핵산 산물 예컨대 DNA, RNA 및 mRNA는 몇가지 공지 기술을 이용하여 특정한 생물학적 샘플로부터 분리될 수 있으며, 특정 분리 공정은 그 특정 생물학적 샘플에 적합하도록 선택된다. 전술한 핵산 변이체의 분리 및 분석 방법은 기술분야에 잘 알려져 있으며, 예컨대 문헌 [Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3rd Ed., Sambrook 및 Russel, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2001]에 설명되어 있다.
[00176] 몇몇 구체예에서, 테스트 샘플 또는 생물학적 샘플은 화학적 및/또는 생물학적 시약으로 처리될 수 있다. 화학적 및/또는 생물학적 시약은 프로세싱동안, 샘플 내부의 바이오분자(예컨대, 핵산 및 단백질)를 비롯하여 샘플의 안정성을 보호 및/또는 유지하기 위해 사용될 수 있다. 한 가지 예시적인 시약은 프로세싱 동안 단배질의 안정성을 보호 또는 유지하는데 일반적으로 이용되는 프로테아제 저해제이다. 이에 더해 또는 별법으로, 화학적 및/또는 생물학적 시약을 이용하여 샘플로부터 핵산 또는 단백질을 방출시킬 수도 있다.
[00177] 몇몇 구체예에서, 종양 세포 또는 종양 샘플은 표시자 유전자 산물(들)의 발현 수준을 알아내기 위해 분석 또는 측정된다. 종양 샘플은 예컨대 생검에 의해 고형 종양으로부터 또는 종양을 떼어 내기 위해 수행되는 외과적 수술로부터 수득되며; 또는 암세포를 포함하는 체액이나 조직으로부터도 얻는다. 본 발명의 일 구체예에서, 종양 세포 또는 종양 샘플은 상피 기원의 종양으로부터 얻는다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 종양 세포는 유방, 결장, 비소세포 폐, 신장, 난소, 전립선, 또는 흑색종 종양 세포이다. 또 다른 구체예에서, 종양 샘플은 유방암, 결장암, 비소세포 폐암, 직장암, 난소암, 전립선암, 또는 흑색종 환자로부터 얻는다.
[00178] 유전자 발현 프로파일링 방법에는 폴리뉴클레오타이드의 혼성화 분석에 기반한 방법, 폴리뉴클레오타이드의 서열결정(시퀀싱)에 기반한 방법 및 프로테오믹스-기반 방법이 포함된다. 샘플 중 mRNA 발현을 정량하기 위한 공지의 예시적인 방법으로는 노던 블로팅 및 인 시투 혼성화법 (Parker & Barnes, Methods in Molecular Biology 106:247-283 (1999)); RNAse 보호 분석법 (Hod, Biotechniques 13:852-854 (1992)); 및 PCR-기반 방법, 예컨대 역전사 PCT (RT-PCR) (Weis 등, Trends in Genetics 8:263-264 (1992))을 들 수 있다. 항체는 DNA 듀플렉스, RNA 듀플렉스, 및 DNA-RNA 하이브리드 듀플렉스 또는 DNA-단백질 듀플렉스를 비롯한 서열-특이적 듀플렉스를 인식할 수 있는 항체를 이용할 수도 있다. 시퀑싱-기반 유전자 발현 분석의 대표적인 방법으로는 Serial Analysis of Gene Expression (SAGE), 및 대량 병행 시그니춰 시퀀싱에 의한 유전자 발현 분석법(massively parallel signature sequencing: MPSS)을 들 수 있다.
[00179] 몇몇 구체예에서, 1종 이상의 RNA 전사체의 수준을 정량적 역전사 폴리머라제 연쇄 반응 (RT-PCR 또는 qPCR)에 의해 분석한다. 가장 민감하고도 유연한 정량적 PCR-기반 유전자 발현 프로파일링 방법 중 하나는 RT-PCR로서, 이 방법은 상이한 샘플 집단에서, 정상적인 조직 및 종양 조직에서 mRNA 수준을 비교함으로써 유전자 발현 패턴을 특징짓고, 밀접히 연관된 mRNA들을 구별하거나, RNA 구조를 분석할 수 있다.
[00180] 그 첫 번째 단계는 표적 샘플로부터 mRNA를 분리하는 것이다. 출발물질은 일반적으로 정상적인 조직이나 세포주에 각각 대응하는 종양 또는 종양 세포주로부터 분리된 총 RNA이다. 그러므로 RNA를 건강한 도너로부터의 DNA 풀을 확보하는 한편, 유방, 폐, 직장결장, 전립선, 뇌, 간, 신장, 췌장, 비장, 흉선, 고환, 난소, 자궁 등, 종양, 또는 종양 세포주를 비롯하여 다양한 원발 종양으로부터 RNA를 분리할 수 있다. mRNA의 소스가 원발 종양이면, mRNA는 예컨대 냉동 또는 아카이브 파라핀-포매 및 고정된(예컨대 포르말린-고정된) 조직 샘플로부터 추출할 수 있다.
[00181] mRNA 추출을 위한 일반적인 방법은 기술분야에 공지이며 문헌 [Ausubel et ah, Current Protocols of Molecular Biology, John Wiley 및 Sons (1997)]을 비롯한 표준적인 분자생물학 교과서에 기술되어 있다. 파라핀 포매된 조직으로부터 RNA를 추출하는 방법은 예컨대 문헌 [Rupp 및 Locker, Lab Invest. 56:A67 (1987), 및 De Andres 등, BioTechniques 18:42044 (1995)]에 설명되어 있다. 특히, RNA 분리는 제조사 지침에 따라, Qiagen과 같은 시판업체의 프로테아제 및 정제 키트, 버퍼 세트를 이용하여 수행될 수 있다. 예컨대, Qiagen RNeasy 미니-컬럼을 이용하여 배양중 세포로부터의 총 RNA를 수득할 수 있다. 그 밖의 상업적으로 구득가능한 RNA 분리 키트로는 MasterPure™ Complete DNA and RNA Purification Kit (EPICENTRE®, Madison, WT), 및 Paraffin Block RNA Isolation Kit (Ambion, Inc.)를 들 수 있다. 조직 샘플로부터의 총 RNA는 RNA Stat-60 (Tel-Test)를 이용하여 분리가능하다. 종양으로부터 준비된 RNA는 예컨대 염화세슘 밀도구배 원심분리에 의해 분리가능하다.
[00182] RNA는 PCR을 위한 템플레이트 기능을 할 수 없으므로, RT-PCR에 의한 유전자 발현 프로파일링의 첫 번째 단계는 RNA 템플레이트를 cDNA로 역전사시킨 다음, 이것을 PCR 반응으로 대수 증식시키는 것이다. 두 번째로 가장 널리 이용되는 역전사효소는 조류의 골수아세포증 바이러스 역전사효소 (AMV- RT) 및 Moloney 쥐 백혈병 바이러스 역전사효소 (MMLV-RT)이다. 역전사 단계는 일반적으로 발현 프로파일링의 환경과 목표에 따라, 특이적인 프라이머, 랜덤 헥사머 또는 올리고-dT 프라이머를 이용하여 프라임된다. 예컨대, 제조사 지침에 따라, 추출된 RNA를 GeneAmp RNA PCR 키트 (Perkin Elmer, CA, USA)를 이용하여 역전사시킨 시킬 수 있다. 이렇게 유도된 cDNA를 후속 PCR 반응에서 템플레이트로서 사용할 수 있다.
[00183] 비록 PCR 단계는 열에 안정한 다양한 DNA-의존성 DNA 폴리머라제를 이용할 수 있지만, 일반적으로는 5'-3' 뉴클리아제 활성은 갖지만 3'-5' 프루프리딩 엔도뉴클리아제 활성은 결여하는 Taq DNA 폴리머라제를 이용한다. 그러므로, TaqMan® PCR은 일반적으로 Taq 또는 Tth 폴리머라제의 5'-뉴클리아제 활성을 이용하여 그의 표적 앰플리콘에 결합된 혼성화 프로브를 가수분해하지만, 동등한 5' 뉴틀리아제 활성을 갖는 효소이면 어느 것이든 이용가능하다. 2개의 올리고뉴클레오타이드 프라이머를 이용하여 전형적인 PCR 반응 앰플리콘을 만들 수 있다. 세 번째 올리고뉴클레오타이드, 또는 프로브는 2개의 PCR 프라이머들 사이에 위치한 뉴클레오타이드 서열을 찾아내기 위해 설계된다. 이 프로브는 Taq DNA 폴리머라제 효소에 의해서는 연장되지 못하며, 리포터 형광 염료와 소광 형광 염료에 의해 표지된다. 리포터 염료로부터의 여하한 레이저-유도 방출은 이들 2종의 염료가 프로브 상에 있음에 따라 근접 위치할 때 소광에 의해 소광된다. 증폭 반응 동안, Taq DNA 폴리머라제 효소는 템플레이트-의존 방식으로 프로브를 절단한다. 결과적인 프로브 단편은 용액에 해리되어, 방출된 리포터 염료로부터의 시그널은 제2 플루오로포어의 소광 효과가 없다. 리포터 염료의 한 분자는 매번 새로운 분자가 합성될 때마다 방출되므로 소광되지 않은 리포터 염료의 검색은 데이터의 정량적 해석의 기반을 제공해준다.
[00184] TaqMan® RT-PCR은 시판되는 장비, 예컨대, ABI PRISM 7700™ Sequence Detection System™ (Perkin-Elmer- Applied Biosystems, Foster City, CA, USA), 또는 Lightcycler (Roche Molecular Biochemicals, Mannheim, Germany)를 이용하여 수행될 수 있다. 바람직한 일 구체예에서,5' 뉴클리아제 공정은 ABI PRISM 7700™ Sequence Detection System™과 같은 실시간 정량 PCR 장치 상에서 실시된다. 이 시스템은 써모사이클러, 레이저, 전하-커플링 장치 (CCD: charge-coupled device (CCD)), 카메라 및 컴퓨터로 이루어져 있다. 이 시스템은 써모사이클러 상에서 96-웰 포맷으로 샘플을 증폭시킨다. 증폭이 일어나는 동안, 레이저-유도된 형광 시그널이 모든 96 웰에 대한 파이버옵틱 케이블을 통해 실시간 수집되어 CCD에서 검출된다. 이 시스템은 장비 구동 및 데이터 분석을 위한 소프트웨어를 포함한다.
[00185] 5'-뉴클리아제 분석 데이터는 역치(threshold) 사이클로서 처음에 표현된다. 전술한 바와 같이, 형광값은 매 사이클마다 기록되어 증폭 반응에서 그 지점까지 증폭된 생성물의 양을 나타낸다. 형광 시그널이 통계적으로 유의한 것으로 처음 기록된 지점이 역치 사이클 (Ct)이다. 오차를 최소화하고 샘플-대 샘플 배리에이션 효과를 최소화하기 위해, RT-PCR은 대체로 내부 표준을 이용하여 수행된다. 이상적인 내부 표준은 여러 조직들 중에서 일정 수준으로 발현되며, 실험 처리에 의해 영향을 받지않는 것이다. 유전자 발현의 패턴을 정규화시키는데 가장 흔히 사용되는 RNAs는 하우스키핑 유전자인 글리세르알데히드-3-포스페이트-탈수소효소 (GAPDH) 및 β-액틴이다.
[00186] RT-PCR 기술의 보다 최근의 배리에이션은 실시간 정량 PCR인데 이 기술은 이중-표지된 불소형성(fluorigenic) 프로브(즉, TaqMan® 프로브)를 통한 PCR 산물의 누적량을 측정한다. 실시간 PCR은 각 표적 서열에 대해 내부 경쟁자가 정규화를 위해 사용되는 정량적 경쟁적 PCR 및 샘플 내에 함유된 정규화 유전자 또는 RT-PCR용 하우스키핑 유전자를 이용한 정량적 경쟁적 PCR 양자 모두와 공용성을 갖는다. 이에 대한 추가 상세는 예컨대 Held et αl, Genome Research 6:986-994 (1996). b. Mass ARRA Y System을 참조할 수 있다.
[00187] Sequenom, Inc. (San Diego, CA)에 의해 개발된 MassARRAY-기반 유전자 발현 프로파일링 방법에서는, RNA 분리 및 역전사 후, 수득된 cDNA는 단일 염기를 제외한 모든 위치에서 표적 cDNA 영역과 맷칭되어, 내부 표준 역할을 하는 합성 DNA 분자(경쟁자)와 스파이크된다. cDNA/경쟁자 혼합물은 PCR 증폭되고 포스트-PCR 쉬림프 알칼라인 포스파타제 (SAP) 효소 처리되어, 잔류 뉴클레오타이드의 탈인산화를 일으킨다. 알칼라인 포스파타제의 불활성화 후, cDNA 및 경쟁자로부터의 PCR 산물들이 프라이머 연장되고, 이에 의해 경쟁자- 및 cDNA- PCR 산물에 대한 독특한 대량 시그널이 생성된다. 정제 후, 이들 산물들을, 매트릭스-보조된 레이저 탈착 이온화 tinie-of flight 질량분광계 (MAL-DI-TOF MS) 분석에 필요한 성분들이 미리 로딩되어 있는칩 어레이상에 분배한다. 이어서 반응물에 존재하는 cDNA를 생성된 질량 스펙트럼 내의 피크 면적비를 분석함으로써 정량한다. 추가 상세에 관하여는, 예컨대 Ding 및 Cantor, Proc. Natl. Acad. Sd. USA 100:3059-3064 (2003)을 참조할 것. 그 밖의 PCR-기반 방법 기술에는, 예컨대, 차등 디스플레이 (Liang 및 Pardee, Science 257:967-971 (1992)); 증폭된 단편 길이 폴리모르피즘(iAFLP) (Kawamoto 등, Genome Res. 12:1305-1312 (1999)); BeadArray™ 기술 (Illumina, San Diego, CA; Oliphant 등, Discovery of Markers for Disease (Supplement to Biotechniques), June 2002; Ferguson 등, Analytical Chemistry 72:5618 (2000)); BeadsArray for Detection of Gene Expression (BADGE) (상업적으로 구득가능한 Luminex100 LabMAP 시스템 및 다중 컬러-코딩된 미소구체를 이용함) (Luminex Corp., Austin, TX) 유전자 발현을 위한 신속 분석법 (Yang 등, Genome Res. 11:1888-1898 (2001)); 및 고 커버리지 발현 프로파일링 (HiCEP) 분석법 (Fukumura 등, Nucl Acids. Res. 31(16) e94 (2003))이 있다.
[00188] 차등 유전자 발현(dierential gene expression) 역시도 마이크로어레이 기술을 이용하여 동정 또는 확인할 수 있다. 그러므로, 유방암-관련 발현 프로파일은 마이크로어레이 기술을 이용하여 신선한 종양 조직 또는 파라핀-포매된 종양 조직에서 측정될 수 있는데, 이 방법에서는 관심 대상 폴리뉴클레오타이드 서열 (cDNAs 및 올리고뉴클레오타이드를 포함한다)을 마이크로칩 기판 상에 플레이팅하거나 배치한다. 배치된 서열은 이어서 관심 대상 세포나 조직으로부터의 특이적인 DNA프로브와 혼성화된다. RT-PCR 법에서와 마찬가지로, niRNA 소스는 일반적으로 인간 종양 또는 종양 세포주로부터 분리된 총 RNA이다. 그러므로, RNA는 다양한 원발 종양 또는 종양 세포주로부터 분리될 수 있다. 만일 mRNA의 소스가 원발 종양이면, mRNA는 매일의 임상 실무에서 일상적으로 제조 및 보존되는, 예컨대 냉동 또는 보관된 파라핀-포매 및 고정된(예컨대 포르말린-고정) 조직 샘플로부터 추출될 수 있다.
[00189] 마이크로어레이 기술의 특정 구체예에서, cDNA 클론의 PCR 증폭 삽입물을 조밀한 어레이로 기판에 적용한다. 좋기로는 적어도 10,000 뉴클레오타이드 서열이 기판에 적용된다. 각각 10,000 엘리먼트로 마이크로칩 상에 고정된 마이크로어레이된 유전자들은 스트린젠트 조건 하에서 혼성화되기에 적합하다. 관심대상 조직으로부터 추출된 RNA를 역전사시킴으로써 형광 뉴클레오타이드의 통합을 통해 형광 표지된 cDNA 프로브를 생성할 수 있다. 칩에 적용된 표지된 cDNA 프로브들은 어레이 상의 DNA의 각 스팟에 특이적으로 혼성화한다. 비특이적으로 결합된 프로브를 제거하기 위해 스트린젠트 워싱을 실시한 후, 공초점 레이저 현미경 또는 다른 검색법 예컨대 CCD 카메라를 이용하여 칩을 스캐닝한다. 각 어레이된 엘리먼트의 혼성화를 정량함으로서 대응하는 mRNA 풍부도를 평가할 수 있다. 이중색 형광을 이용하여, 2종의 RNA 소스로부터 생성된 별도 표지된 cDNA 프로브들이 어레이에 쌍을 이루어 혼성화된다. 각각의 특정 유전자에 대응하는 2종의 소스로부터의 전사체의 상대적인 풍부도가 이에 따라 동시에 결정된다. 미니어쳐 스케일의 혼성화로부터 다수의 유전자에 대한 발현 패턴을 간편하고도 신속하게 평가할 수 있다. 이러한 방법은 세포 당 적은 수의 카피로 발현되는, 희귀한 전사체를 검색하는데 필요한 민감도를 가지며, 발현 수준에서 적어도 약 2배 차이를 재현적으로 검출할 수 있는 것으로 나타났다 (Schena 등, Proc. Natl. Acad. ScL USA 93(2): 106-149 (1996)). 마이크로어레이 분석은 Affymetrix GenChip 기술, 또는 Incyte's 마이크로어레이 기술을 이용하는 등의 제조사 프로토콜에 따라 상업적으로 구득가능한 장비에 의해 수행될 수 있다.
[00190] The 유전자 발현의 대규모 분석을 위한 마이크로어레이법의 개발에 의해 다양한 종양 유형에서의 결과 예측 및 암 분류용 분자 마커를 조직적으로 조사하 것이 가능해졌다. 4. Serial Analysis of Gene Expression (SAGE)
[00191] 유전자 발현의 시리즈 분석(serial analysis of gene expression: SAGE)은 각 전사체에 대한 개별적인 혼성화 프로브를 제공할 필요 없이, 다수의 유전자 전사체를 동시적이고 정량적으로 분석할 수 있게 해준다. 먼저, 전사체를 유니크하게 동정하는데 충분한 정보를 함유하는 짧은 서열 태그(약 10-14 bp)를 만든다 (단 상기 태그는 각 전사체 내에 독특한 위치로부터 얻어지는 것임). 이어서, 많은 전사체들이 한데 연결되어 시퀀싱될 수 있는 보다 긴 연속 분자를 형성하므로 해서, 복수개의 태그들의 정체를 동시에 밝혀낼 수 있다. 여하한 전사체 집단의 발현 패턴은 개별 태그의 풍부성을 측정하고 각 태그에 대응하는 유전자를 동정함으로써 정량적으로 평가할 수 있다. 이에 대한 보다 상세한 내용은, 예컨대 문헌 [Velculescu 등, Science 270:484-487 (1995); 및 Velculescu 등, 세포 88:243-51 (1997)]을 참조하면 된다.
[00192] Massively Parallel Signature Sequencing (MPSS)에 의한 유전자 발현 분석이 Brenner 등, Nature Biotechnology 18:630-634(2000)에 설명되어 있다. 이 방법은 별도의 5 ㎛ 직경 마이크로비드 상의 수백만개 템플레이트를 인 비트로 클로닝하는 것과 비-겔-기반 시그니쳐 시퀀싱하는 것을 조합한 시퀀싱 접근법이다. 우선, DNA 템플레이트의 마이크로비드 라이브러리를 인 비트로 클로닝에 의해 구축한다. 이어서 고밀도(일반적으로 3 x 106 마이크로비드/cm2를 초과함) 유동 세포 중 템플레이트-함유 마이크로비드의 평면 어레이의 어셈블리를 실시한다. 각 마이크로비드 상의 클로닝된 템플레이트의 자유 말단을, DNA 단편의 분리를 필요로 하지 않는 형광-기반 시그니쳐 시퀀싱법을 이용하여 동시에 분석한다. 이 방법은 한번의 조작을, 효모 cDNA 라이브러리로부터 수십만개의 유전자 시그니쳐 서열을 동시적으로 정확하게 제공해주는 것으로 나타났다.
[00193] 면역조직화학법 역시 유전자의 발현 수준을 검색하는데 적합하다. 그러므로, 각 마커에 특이적인 항체 또는 항혈청, 좋기로는 폴리클로날 항혈청, 및 가장 좋기로는 모노클로날 항체를 이용하여 발현을 검색한다. 항체는 항체 자체를 직접 표지하는 방식, 예컨대 방사능활성 표지, 형광 표지, 예컨대 바이오틴과 같은 합텐 표지, 또는 호스 래디쉬 퍼옥시다제 또는 알칼라인 포스파타제아 같은 효소에 의해 검색가능하다. 별법으로, 일차 항체에 대해 특이적인 항혈청, 폴리클로날 항혈청 또는 모노클로날 항체를 포함하는 이차 항체와 일차 항체를 연계시켜 사용하기도 한다. 면역조직화학 프로토콜 및 키트는 기술분야에 공지이며 상업적으로 구득가능하다.
[00194] 샘플 중 비생물학적 다양성으로 인한 발현 측정 다양성을 최소화하기 위해, 예컨대 측정하고자 하는 발현 산물의 양 및 품질, 유전자 산물에 대해 측정된 미가공 발현 수준 데이터(예컨대, qRT-PCR에 의해 수득된 사이클 역치 (Ct) 측정값)을, 1종 이상의 레퍼런스 유전자에 대해 수득된 평균 발현 수준 데이터와 비교하여 정규화시킬 수 있다. 레퍼런스 유전자의 예로는 하우스키핑 유전자 예컨대 GAPDH를 들 수 있다. 별법으로, 분석된 모든 유전자 또는 그의 큰 서브세트 역시 동시에 레퍼런스 유전자로서 작용할 수 있으며 정규화가, 분석된 모든 유전자 또는 그의 서브세트의 평균 또는 중앙 시그널(Ct)에 기반할 수 있다 (종종 "글로벌 정규화" 접근법이라 칭함). gene-by-gene 기반에서, 환자의 종양 mRNA의 정규화된 측정량을 암 조직 레퍼런스 세트에서 발견된 양과 비교할 수 있다. 예컨대, Cronin, M. 등, Am. Soc . Investigative Pathology 164:35-42 (2004) 참조. 정규화는 유전자 산물의 정규화된 발현 수준의 1 유닛 증가가 일반적으로 샘플내에 존재하는 발현 산물의 양의 2배 증가를 발현하도록 수행될 수 있다. 종양 조직으로부터의 qRT-PCR 데이터에 적용가능한 정규화 기술에 관한 추가 정보는 예컨대, 문헌 [Silva, S. 등 (2006) BMC Cancer 6, 200; deKok, J. 등 (2005) Laboratory Investigation 85, 154-159]에서 찾아볼 수 있다.
[00195] 본 발명의 방법에 사용되기 위한 물질들은 공지 공정에 따라 제조되는 키트의 제조에 적합하다. 그러므로 본 발명은 개시된 유전자의 발현으르 정량하기 위한 유전자-특이적 또는 유전자-선택적 프로브 및/또는 프라이머를 포함할 수 있는 물질들을 포함하는 키트를 제공한다. 이러한 키트는 임의로 종양 샘플로부터의 RNA의 추출을 위한 시약, 특히 고정된 파라핀-포매된 조직 샘플 및/또는 RNA 증폭 시약을 함유할 수 있다. 이에 더해, 키트는 본 발명의 방법에서 사용시 관련있는 설명 또는 표지 또는 지침과 함께 시약(들)을 임의로 포함할 수 있다. 키트는 본 발명의 방법에 사용되는 1종 이상의 다양한 시약(주로 농축된 형태)이 각각 들어있는 컨테이너들(방법을 자동화 실시하는데 적합한 마이크로리터 플레이트를 포함한다)을 포함할 수 있으며, 여기에는 예컨대 예비-조립된 마이크로어레이, 버퍼, 적절한 뉴클레오타이드 트리포스페이트 (예컨대, dATP, dCTP, dGTP 및 dTTP; 또는 rATP, rCTP, rGTP 및 UTP), 역전사효소, DNA 폴리머라제, RNA 폴리머라제, 및 본 발명의 1종 이상의 프로브 및 프라이머 (예컨대, RNA 폴리머라제와 반응성인 프로모터에 연결된 적절한 길이의 폴리(T) 또는 랜덤 프라이머)가 포함될 수 있다. 예후 또는 예측 정보를 평가 또는 정량화하는데 이용되는 수학적 알고리듬 역시 키트의 적절한 잠재 요소가 된다.
[00196] 본 발명에 설명된 방법과 시스템은 다양한 방식으로 실시될 수 있다. 일 구체예에서, 이 방법은 예컨대 인터넷과 같은 커뮤니케이션 인프라구조의 사용을 포함한다. 본 발명의 몇몇 구체예를 이하에 설명한다. 본 발명은 또한 하드웨어, 소프트웨어, 펌웨어, 프로세서 또는 이의 조합의 다양한 형태로 실시될 수도 있다. 본 발명의 방법 및 시스템은 하드웨어와 소프트웨어의 조합으로서 실시될 수도 있다. 소프트웨어는 프로그램 저장 장치 상에 유형적으로(tangibly) 구현된 응용 프로그램으로서 또는 사용자의 컴퓨터 환경 및 리뷰어의 컴퓨터 환경에서 구동되는 소프트웨어의 상이한 일부로서 수행될 수 있는데, 후자의 경우 리뷰어는 원거리에 위치할 수 있다 (예컨대, 서비스 제공자의 설비에).
[00197] 본 발명의 일 구체예에서, 사용자가 데이터를 입력하는 동안 또는 입력한 후, 사용자측의 컴퓨터 환경에서 데이터 프로세싱의 일부가 수행될 수 있다. 예컨대, 사용자측의 컴퓨터 환경을 가능성 "점수"를 인식하기 위한 소정의 테스트 코드를 제공하도록 프로그래밍할 수 있으며, 여기서 상기 점수는 리뷰어의 컴퓨터 환경에서 보고서를 생성하거나 및/또는 결과를 제공하기 위한 1개 이상의 알고리듬을 후속 실행하기 위한 테스트 코드 형태로 리뷰어의 컴퓨터 환경으로, 가공된 채로 전송되거나 또는 부분 가공된 반응으로 전송된다. 점수는 숫자 점수(수치값으로 나타냄)이거나 또는 수치값 또는 수치값 범위를 비수치 점수로 나타낸 것 (예컨대, "A": PI3K 저해제의 민감도의 90-95% 가능성을 나타냄; "High": 50% 챈스를 초과하는 민감도를 나타냄(또는 그 밖에 선택된 역치 가능성); "Low": 50% 챈스를 밑도는 민감도를 나타냄(또는 그 밖에 선택된 역치 가능성), 등
[00198] 컴퓨터 시스템으로서, 이 시스템은 일반적으로 프로세서 유닛을 포함한다. 프로세서 유닛은 정보를 받도록 작동되며, 테스트 데이터를 포함할 수 있다 (예컨대 예측적 유전자 산물(들)의 수준; 레퍼런스 유전자 산물(들)의 수준; 예측적 유전자 산물(들)의 정규화 수준; 및 환자 데이터로서 기타 데이터 역시도 포함할 수 있다). 수집된 이러한 정보는 데이터베이스에 적어도 일시적으로 보관될 수 있어 전술된 바와 같이 데이터를 분석하여 리포트를 만들 수 있다.
[00199] 입력 또는 출력 데이터의 부분 또는 전부 역시 전자적으로 전송가능하다. 특정의 출력 데이터(예컨대 리포트)를 전자적으로 또는 전화 방식(예컨대 팩스 백과 같은 장치를 이용한 팩시밀리에 의해)으로 전송할 수 있다. 예시적인 출력 수집 장치로는 디스플레이 엘리먼트, 프린터, 팩시밀리 장치 등을 들 수 있다. 전송 및/또는 디스플레이의 전자 형태에는 이메일, 상호반응식 텔레비젼 등이 있다. 본 발명의 일 구체에에서, 입력 데이터 및/또는 출력 데이터의 전부 또는 일부(예컨대 대체로 적어도 최종 리포트)는 일반적인 브라우저와 함께 접근, 좋기로는 비밀 접근을 위한 웹 서버에 유지될 수 있다. 데이터는 필요에 따라 건강 전문가에 의해 접근될 수 있거나 전문가에게 보내질 수 있다. 최종 리포트의 전부 또는 일부를 포함하는 입출력 데이터를 이용하여 존재할 수 있는 환자의 의료 리포트를 건강관리 설비로서 비밀 데이터베이스에 보관할 수있다.
[00200] 본 발명은 또한 컴퓨터 환경에서 실행시, 본 발명에 설명된 바와 같은 반응 가능성 평가 결과의 전부 또는 일부를 수행하기 위한 실행 알고리듬을 제공하는 프로그램이 저장된 컴퓨터-판독가능한 저장매체 (예컨대, CD-ROM, 메모리 키, 플래시 메모리 카드, 디스켓 등)도 제공한다. 컴퓨터-판독 매체가 본 발명의 방법을 실시하기 위한 완전한 프로그램을 함유하는 경우, 이 프로그램은 출력을 수집, 분석 및 생성하기 위한 프로그램 지시사항을 포함하고 일반적으로 전술한 바와 같이 사용자와 상호반응하기 위한 컴퓨터 판독 코드 장치, 분석 정보와 연계하여 데이터를 가공하고, 그 사용자를 위하여 독특한 인쇄물 또는 전자 매체를 생성할 수 있게 해주는 장치도 포함한다.
[00201] 저장 매체가 본 발명에 설명된 방법의 일부를 실행하기 위해 제공되는 프로그램을 포함할 경우 (예컨대 방법의 사용자 측면 (예컨대 데이터 입력, 리포트 수집 능력 등)), 프로그램은 원거리 컴퓨터 환경으로 사용자에 의해 입력된 데이터를 전송한다 (예컨대 인터넷, 인트라넷 등을 통해서). 데이터의 가공 또는 가공 완결은 원거리에서 수행되어 리포트가 생성된다. 리포트 리뷰 후 그리고 완결된 리포트 제공을 위한 필요한 매뉴얼 개재 완결 후, 완성된 리포트는 전자문서 또는 인쇄 문서(에컨대 팩스 또는 송부된 종이 리포트)로서 사용자에게 제공된다. 본 발명에 따른 프로그램을 함유하는 저장 매체는 지침서(예컨대 프로그램 설치, 사용 등을 위한 지침)와 함께 적절한 기질 또는 이러한 지침서를 얻을 수 있는 웹 어드레스 상에 기록되어 포장될 수 있다. 컴퓨터-판독가능한 저장 매체는 또한 반응 가능성 평가를 수행하기 위한 1종 이상의 시약과 조합적으로 제공될 수도 있다 (예컨대, 프라이머, 프로브, 어레이, 또는 그러한 다른 키트 성분).
[00202] 편의상, 본 명세서, 실시예 및 첨부된 청구범위에서 사용된 몇 가지 용어와 문구들의 의미를 이하에 제공한다. 달리 명시되지 않는 한 또는 문맥상 암시되지 않는 한, 다음 용어들과 문구들은 후술하는 의미를 갖는다. 본 발명의 범위는 오로지 청구범위에 의해서만 한정되므로, 특정 구체예의 설명을 보조하기 위해 정의가 제공되는 것이며 본 발명의 보호범위를 제한하려는 의도는 없다. 달리 정의되지 않는 한, 본 발명에 사용된 모든 기술 및 과학 용어들은 본 발명이 속한 분야의 통상의 기술자에 의해 흔히 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 만일 본 발명에서 제공되는 정의와 기술분야에서의 용례 사이에 분명한 차이가 있을 경우, 본 명세서에서 제공된 정의에 따른다.
[00203] 편의상, 명세서, 실시예 및 청구범위에서 사용된 몇몇 용어들을 이하에 모았다.
[00204] "감소하다", "저감되다", "감소" 또는 "저해" 등의 용어는 모두 통계적으로 유의한 양으로 감소되는 것을 의미한다. 몇몇 구체예에서, "감소", "저감" 또는 "감소 또는 "저해"는 일반적으로 레퍼런스 수준(예컨대 주어진 처리 부재시)에 비해 적어도 10% 감소함을 의미하며 예컨대 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 35%, 적어도 약 40%, 적어도 약 45%, 적어도 약 50%, 적어도 약 55%, 적어도 약 60%, 적어도 약 65%, 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 그 이상의 감소를 의미한다. 본 발명에서, "감소" 또는 "저해"는 레퍼런스 수준과 빅할 때 완전한 저해 또는 감소를 포함하지는 않는다. "완전한 저해"는 레퍼런스 수준에 비해 100% 저해이다. 감소는 주어진 질병에 걸리지 않은 개체에서 정상 범위 내로 허용되는 수준까지의 감소가 바람직하다.
[00205] "증가하다", "증가", "향상" 또는 "활성화" 등의 용어는 본 발명에서 모두 통계적으로 유의한 양으로 증가함을 의미한다. 몇몇 구체예에서, "증가하다", "증가", "향상" 또는 "활성화"라는 용어는 레퍼런스 수준에 비해 적어도 10%wmdrk, 에컨대, 적어도 약 20%, 또는 적어도 약 30%, 또는 적어도 약 40%, 또는 적어도 약 50%, 또는 적어도 약 60%, 또는 적어도 약 70%, 또는 적어도 약 80%, 또는 적어도 약 90% 또는 그 이상 및 100% 증가를 포함한 증가를 의미하거나 또는 레퍼런스 수준에 비해 10-100% 증가를 의미하거나 또는 레퍼런스 수준에 비해 또는 적어도 약 2배, 또는 적어도 약 3배, 또는 적어도 약 4배, 또는 적어도 약 5배 또는 적어도 약 10배 증가 또는 2배 내지 10배 사이의 증가 또는 레퍼런스 수준과 비교하여 그 이상의 증가를 의미한다. 마커 또는 증상이 관계된 문맥에서 "증가"는 그러한 수준에서 통계적으로 유의한 증가이다.
[00206] 본 발명에서, "대상자"는 인간 또는 동물이다. 대체로 동물은 척추동물 예컨대 영장류, 설치류, 가축 또는 사냥감 동물이다. 영장류에는 침팬지, 시노몰구스 원숭이, 거미 원숭이, 마카크, 예컨대, 레수스 원숭이가 포함된다. 설치류에는 마우스, 래트, 우드척, 페렛, 토끼 및 햄스터가 포함된다. 가축 및 사냥감 동물에는 소, 말, 돼지, 사슴, 들소, 버팔로, 고양이종, 예컨대 애완용 고양이, 개, 예컨대 개, 여우, 늑대, 조류, 예컨대 닭, 에뮤, 타조, 및 물고기, 예컨대, 송어, 메기 및 연어가 포함된다. 몇몇 구체예에서, 대상자는 포유동물, 예컨대 영장류, 예컨대 인간이다. "개체", "환자" 및 "대상자" 등의 용어는 본 발명에서 호환적으로 사용된다.
[00207] 좋기로는, 대상자는 포유동물이다. 포유동물은 인간, 비-인간 영장류, 마우스, 래트, 개, 고양이, 말, 또는 소이지만 이들로 한정되지 않는다. 인간을 제외한 포유동물은 암의 대표적인 동물 모델이므로 유리하다. 대상자는 남성 또는 여성일 수 있다.
[00208] 대상자는 치료를 필요로 하는 병태(예컨대 암) 또는 이러한 증상과 연관된 1종 이상의 합병증을 겪고에 걸린 것으로 진단된 바 있거나 또는 걸려 있을 수 있고, 임의로 암 또는 암과 관련된 1종 이상의 합병증에 대해 치료받은 적이 있을 수 있다. 별법으로, 대상자는 암 또는 암 관련된 1종 이상의 합병증에 걸린 것으로 이전에 진단받은 적이 없을 수 있다. 예컨대, 대상자는 암 또는 암과 관련된 1 이상의 합병증의 1 이상의 위험 인자 합병증을 나타낼 수도 있고 위험 인자를 나타내지 않을 수도 있다.
[00209] 특정 병태에 대한 치료를 "필요로 하는 대상자"는 그 병태를 갖는 대상자, 그 병태를 갖는 것으로 진단된 대상자 또는 그 병태가 진행될 위험이 있는 대상자일 수 있다.
[00210] 본 발명에서, 용어 "단백질" 및 "폴리펩타이드"는 인접 잔기들의 알파-아미노기와 카복시기 사이의 펩타이드 결합에 의해 서로 연결되어 있는, 일련의 아미노산 잔기들을 나타내는 용어로 호환적으로 사용된다. "단백질", 및 "폴리펩타이드"라는 용어는 변형된 아미노산(예컨대 인산화, 글리케이트화, 글리코실화 등) 및 아미노산 유사체를 비롯하여, 그의 크기와 기능과 상관없이 아미노산의 폴리머를 가리킨다. "단백질"과 "폴리펩타이드"는 비교적 큰 폴리펩타이드를 나타낼 때 사용되는 반면, "펩타이드"라는 용어는 비교적 작은 폴리펩타이드를 나타낼 때 사용되지만, 기술 분야에서 이들 용어의 사용은 서로 중복된다. "단백질" 및 "폴리펩타이드"라는 용어는 유전자 산물 및 그의 단편을 나타낼 때 호환적으로 사용된다. 그러므로, 예시적인 폴리펩타이드 또는 단백질에는 유전자 산물, 자연발생적인 단백질, 동족체(homologs), 오솔로그(orthologs), 파라로그(paralogs), 전술한 것들의 단편 및 균등물, 변이체, 단편 및 유사체가 포함된다.
[00211] 본 발명에서, "핵산" 또는 "핵산 서열"이라는 용어는 리보핵산, 데옥시리보핵산 또는 이의 유사체 유닛이 통합된 여하한 분자, 좋기로는 폴리머 분자를 가리킨다. 핵산은 단일-가닥 또는 이중-가닥일 수 있다. 단일-가닥 핵산은 변성되니 이중-가닥 DNA의 하나의 핵산 가닥일 수 있다. 별법으로, 이것은 여늬 이중가닥 DNA로부터 유래되지 않은 단일-가닥 핵산일 수 있다. 일 측면에서, 핵산은 DNA일 수 있다. 또 다른 측면에서, 핵산은 RNA일 수 있다. 적절한 핵산 분자는 DNA이며 여기에는 게놈 DNA 또는 cDNA가 포함된다. 그 밖의 적절한 핵산 분자는 mRNA를 비롯한 RNA이다.
[00212] "물질/제제(agent)"라는 용어는 일반적으로 세포, 조직 또는 대상자에게 투여되는 수준으로 존재하지 않거나 정상적으로는 존재하지 않는 여하한 물질(entity)를 가리킨다. 물질/제제는: 폴리뉴클레오타이드; 폴리펩타이드; 소분자; 및 항체 또는 그의 항원-결합 단편으로부터 선택될 수 있으나 이에 한정되지 않는다. 폴리뉴클레오타이드는 RNA 또는 DNA일 수 있으며, 단일가닥 또는 이중가닥일 수 있고 예컨대, 핵산 및 폴리펩타이드를 인코딩하는 핵산 유사체로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 폴리펩타이드는 자연발생적인 폴리펩타이드, 돌연변이된 폴리펩타이드 또는 관심대상의 기능을 유지하는 그의 단편일 수 있으나 이에 한정되지 않는다. 물질/제제의 추가적인 예로는 핵산 압타머, 펩타이드-핵산 (PNA), 잠금 핵산 (LNA), 소형 유기분자 또는 무기분자; 당류; 올리고당; 다당류; 생물학적 마크로분자, 펩티도미메틱; 핵산 유사체 및 유도체; 세균, 식물, 진균 또는 포유동물 세포나 조직과 같은 생물학적 물질 및 자연발생적 또는 합성 조성물로부터의 추출물을 들 수 있으나 이에 한정되지 않는다. 물질/제제는 이것이 세포와 접촉하여 그의 효능을 발휘하는 매질에 적용될 수 있다. 별법으로, 물질/제제는 그 물질/제제를 인코딩하는 핵산 서열을 세포 내로 도입한 결과로서 세포내(intracellular)일 수 있으며 그의 전사가 세포내 핵산 및/또는 단백질 환경 자극을 일으킬 수 있다. 몇몇 구체예에서, 물질/제제는 화학적 총체 또는 모이어티로서, 비제한적인 예로서 합성적이거나 자연발생적인 비단백질성 총체일 수 있다. 특정 구체예에서, 물질은 예컨대 치환되지 않거나 치환된 알킬, 방향족, 또는 헤테로시클릴 모이어티로부터 선택된 화학 모이어티를 갖는 소분자이며, 여기에는 마크롤라이드, 렙토마이신 및 관련된 천연 산물 또는 그의 유사체가 포함된다. 물질/제제는 목적하는 활성 및/또는 특성을 갖는 것으로 알려져있을 수 있고, 또는 다양한 화합물 라이브러리로부터 선택될 수 있다. 본 발명에서, "소분자"라는 용어는 "자연적인 산물과 유사한(natural product-유사)"인 화합물을 가리킬 수 있지만, "소분자"라는 용어가 "자연적인 산물과 유사한" 화합물로 한정되는 것은 아니다. 오히려, 소분자는 일반적으로 몇개인가의 탄소-탄소 결합을 함유하고, 분자량이 50 달톤 초과, 그러나 약 5000 달톤(5 kD) 미만인 것을 특징으로 한다. 좋기로는 소분자는 3 kD 미만, 더욱 좋기로는 2 kD 미만, 가장 좋기로는 1 kD 미만의 분자량을 갖는다. 몇몇 경우 소분자는 700 달톤 이하의 분자 질량을 갖는다.
[00213] 본 발명에서, "저해제"라는 용어는 표적화된 발현 산물 (예컨대 표적 또는 표적 폴리펩타이드를 인코딩하는 mRNA)의 발현 및/또는 활성을, 예컨대 적어도 10% 이상, 예컨대 by 10% 이상, 50% 이상, 70% 이상, 80% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 또는 98% 이상 저감시킬 수 있는 물질이다. 예컨대, PI3K 저해제의 효능, 예컨대 PI3K의 수준 및/또는 활성을 감소시키는 그의 능력은, 예컨대 PI3K 폴리펩타이드 (및/또는 이러한 폴리펩타이드를 인코딩하는 mRNA)의 수준 및/또는 PI3K의 활성을 측정함으로서 알아낼 수 있다. 주어진 mRNA 및/또는 폴리펩타이드의 수준을 측정하는 방법은 기술 분야에 잘 알려져 있으며, 예컨대 RNA 수준을 구하기 위해 프라이머를 이용하여 RTPCR을 실시하거나, 폴리펩타이드의 수준을 구하기 위해 항체를 이용하여 웨스턴 블로팅을 실시할 수 있다. 예컨대 PI3K의 활성은 기술분야에 공지인 방법과 전술한 방법을 이용하여 측정될 수 있다.
[00214] 본 발명에서, "치료하다", "치료", "치료하는", 또는 "완화" 등의 용어는 진행 중단, 질병 또는 장애와 관련된 병태, 예컨대 암의 위중도 또는 진행을 역전, 경감, 완화, 저해, 둔화 또는 중단시키는 것이 목적인 의료적 처치이다. "치료하다"라는 용어는 암과 관련된 병태, 질환 또는 장애의 증상 또는 적어도 한 가지 유해한 효과를 감소 또는 경감시키는 것을 포함한다. 치료는 일반적으로 하나 이상의 증상 또는 임상적 마커가 감소될 경우 "효과적"이다. 별법으로, 치료는 질병의 진행이 감소 또는 중단된 경우 "효과적"이다. 즉, "치료"는 증상 또는 마커의 개선 뿐만 아니라, 그러한 처치를 하지 않을 경우 예상되는 것보다 증상의 진행 또는 악화를 멈추거나 또는 적어도 둔화시키는 것도 포함한다. 이로운 또는 요망되는 임상 결과의 비제한적인 예로는 1 이상의 증상(들)의 경감, 질병 정도의 감소, 질병의 안정화(즉, 악화가 아닌) 상태, 질병 진행의 지연 또는 둔화, 질병 상태의 경감 또는 고식(palliation), 진정(remission: 부분적이건 총체적이건), 및/또는 검출가능하건 아니건 간에 치사율 감소를 들 수 있다. 질병의 "치료"라는 용어는 또한 질병의 증상 또는 부작용의 완화를 제공하는 것을 포함한다(완화요법을 포함한다).
[00215] 본 발명에서, "의약 조성물"이라는 용어는 약학적으로 허용가능한 담체 예컨대 의약 분야에서 흔히 사용되는 담체와 조합된 활성 물질을 가리킨다. "약학적으로 허용가능한"이라는 문구는 본 명세서에서 이들 화합물, 물질, 조성물 및/또는 투여 형태가 건강한 의학적 판단 범위에서, 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응, 또는 기타 문제점이나 합병증 없이, 인간 및 동물의 조직과 접촉되어 사용시 합리적인 장점/위험 비율에 비례하여 적합함을 의미한다.
[00216] 본 발명에서, "투여하다"라는 용어는 소망되는 부위에서 물질/제제를 적어도 부분적으로 전달시켜주는 방법 또는 경로에 의해 대상자에게 본 발명의 화합물이 전달되는 것을 의미한다. 본 발명에 기재된 화합물을 포함하는 의약 조성물은 대상자에서 효과적인 치료를 결과시키는 적절한 경로에 의해 투여될 수 있다.
[00217] 본 발명에서, "양친성"이라는 용어는 소수성 부분과 소유성(lipophobic) 부분 양자 모두를 갖는 분자, 즉 적어도 하나의 극성, 수용성기 및 적어도 하나의 비극성, 비수용성기를 갖는 분자를 가리킨다. 일반적으로, 극성, 수성상, 및 비극성, 비수성상을 갖는 2상 시스템인 양친성 분자는 2상의 계면으로 분자가 분별(partition)된다. 보다 간단한 비제한적인 용어에서, 양친성은 수성 환경과 비수성 환경 모두에서 용해되는 분자이다. "양친성"이라는 용어는 양친성 분자를 가리킨다.
[00218] "통계적으로 유의한" 또는 "유의한"이라는 용어는 통계 유의성을 나타내며 일반적으로 2 표준편차(2SD) 또는 보다 큰 편차를 나타낸다
[00219] 작업 실시예 이외, 또는 달리 표시되지 않는 한, 본 명세서에서 성분 또는 반응 조건의 양을 표현하는 모든 숫자는 "약"이라는 용어에 의해 변형가능한 것으로 이해되어야 한다. "약"이라는 용어가 백분율과 함께 사용될 경우에는 ±1%를 의미할 수 있다.
[00220] 본 발명에서 용어 "포함하는(comprising)" 또는 "포함하다"는 조성물, 방법 및 그의 각 성분(들)과 관련하여, 그 방법이나 조성물에 필수적인 것을 나타내는데 사용되지만, 명시되지 않은 다른 요소들도 그것이 필수적이건 아니건 포함될 수 있다.
[00221] "구성되다(consisting of)"라는 표현은 본 발명의 조성물, 방법 및 대응 성분이 그 구체예 설명시 인용된 것 이외의 다른 요소는 포함하지 않음을 의미한다.
[00222] 본 발명에서 "기본적으로 구성되다(consisting essentially of)"라는 용어는 주어진 구체예에 요구되는 요소들을 가리킨다. 이 용어는 그 구체예의 기본적인 그리고 신규한 또는 기능적 특징(들)에 실질적인 영향을 미치지 않는 요소들의 존재를 허용한다.
[00223] 단수 용어인 "a," "an," 및 "the"는 문맥상 그 자체로 반대의미를 나타내지 않는 한 복수 개념을 포괄한다. 마찬가지로, "또는"이라는 표현은 문맥상 반대 의미를 나타내는 것이 명백한 것이 아닌 한 "및"을 포괄하는 것으로 의도된다. 비록 본 발명에 설명된 것과 유사 또는 균등한 방법 및 물질이 이 공정을 실시 또는 시험하는데 이용될 수 있지만, 적절한 방법과 재료는 후술되는 바와 같다. 약어 "e.g."는 라틴어 exempli gratia로부터 유래된 것으로 본 발명에서 비제한적인 에를 가리키는 것이다. 따라서, 약어 "e.g."는 "예컨대"라는 용어와 동의어이다.
[00224] "아로마타제 저해제"라는 용어는 본 발명에서 에스트로겐 생성을 저해, 즉 각각 기질 안드로스텐디온과 테스토스테론을 각각 에스트론과 에스트라디올로의 전환을 저해하는 화합물에 관한 것이다. 이 용어의 비제한적인 예로는, 스테로이드, 특히 아타메스탄, 엑세메스탄 및 포스메스탄; 그리고 특히 비스테로이드, 특히 아미노글루테티미드, 로글레티미드, 피리도글루테티미드, 트릴로스탄, 테스토락톤, 케토코나졸, 보로졸, 파드로졸, 아나스트로졸 및 레트로졸을 들 수 있다.
[00225] 본 발명에서 "항-에스트로겐"이라는 용어는 에스트로겐 수용체 수준에서 에스트로겐의 효과를 길항하는 화합물과 관계된다. 이 용어에는, 타목시펜, 풀베스트란트, 랄록시펜 및 랄록시펜 염산염이 포함되나 이에 한정되지 않는다.
[00226] 본 발명에서 "항-안드로겐"이라는 용어는 안드로겐 호르몬의 생물학적 효과를 억제할 수 있는 여하한 물질과 관계된 것으로서 그의 비제한적인 예로서 바이칼루타미드를 들 수 있다.
[00227] 본 발명에서 "고나도렐린 작용제"에는 아바렐릭스, 고세렐린 및 고세렐린 아세테이트가 포함되나 이에 한정되지 않는다. 고세렐린은 미국특허 No. 4,100,274에 설명되어 있고 ZOLADEX로서 시판되고 있다. 아브렐릭스는 예컨대 미국특허 No. 5,843,901에 설명된 바와 같이 만들 수 있다. 본 발명에서 "토포이소머라제 I 저해제"의 예로는 토포테칸, 이리노테칸, 기마테칸, 캄토테신 및 그의 유사체, 9-니트로캄토테신 및 마크로분자 캄토테신 컨쥬게이트 PNU-166148 (WO 99/17804의 화합물 A1)을 들 수 있으나 이에 한정되지 않는다.
[00228] 본 발명에서 "토포이소머라제 II 저해제"라는 용어에는 예컨대 독소루비신, 다우노루비신, 에피루비신, 이다루비신, 및 네모루비신과 같은 안트라사이클린; 안트라뮈톤 미토잔트론 및 로소잔트론; 및 포도필로톡신 에토포시드 및 테니포시드가 포함되어 이에 한정되지 않는다.
[00229] "미세관 활성제(microtubule active agent)"라는 용어는 미세관 안정화, 미세관 불안정화제 및 미세관 폴리머화 저해제와 관계되며, 이의 예로는 탁산, 예컨대, 파클리탁셀 및 도세탁셀; 빈카 알칼로이드, 예컨대 빈블라스틴, 특히 빈블라스틴 설페이트; 빈크리스틴, 특히 빈크리스틴 설페이트 및 비노렐빈; 디스코더몰라이드; 콜히친; 및 에포틸론 및 그의 유도체, 예컨대 에포틸론 B 또는 D 또는 그의 유도체를 들 수 있으나 이에 한정되지 않는다. 또한 미국특허 No. 6,194,181, WO 98/10121, WO 98/25929, WO 98/08849, WO 99/43653, WO 98/22461 및 WO 00/31247에 개시된 에포틸론 유도체도 포함된다. 특히 바람직한 것은 에포틸론 A 및/또는 B이다.
[00230] 알킬화제는 수소 이온을 알킬기로 치환할 수 있는 능력이 있는 다관능 화합물이다. 알킬화제의 비제한적인 예로는 비스클로로에틸아민 (질소 머스타드, 예컨대 클로람부실, 시클로포스파미드, 이포스파미드, 메클로레타민, 멜팔란, 우라실 머스타드), 아지리딘(예컨대 티오테파), 알킬 알콘 설포네이트(예컨대 부술판), 니트로소우레아(예컨대 카르무스틴, 로무스틴, 스트렙토조신, BCNU, Gliadel), 테모졸로마이드, 비전통적 알킬화제 (알트레타민, 다카바진, 및 프로카르바진), 백금 화합물 (카보플라틴 및 시스플라틴)을 들 수 있으나 이에 한정되지 않는다. 이들 화합물은 포스페이트, 아미노, 히드록실, 설프히드릴, 카복실, 및 이미다졸기와 반응한다. 생리적 조건 하에서, 이들 약물들은 이온화하여 민감한 핵산 및 단백질에 부착되는 양하전 이온을 생성하여, 세포 사이클을 중단시키거나 및/또는 세포 사멸을 일으킨다.
[00231] "항-신생물" 및 "항-대사산물"이라는 용어는 암세포의 생리학 및 증식에 필수적인 대사 과정을 간섭하는 일군의 화합물을 가리킨다. 왕성하게 증식하는 암세포는 핵산, 단백질, 지질, 및 기타 생명에 필요한 세포 성분들을 끊임없이 대량 합성할 것을 필요로 한다. 많은 항대사산물들은 퓨린 또는 피리미딘 뉴클레오사이드 합성을 저해하거나 DNA 복제 효소를 저해한다. 몇몇 항대사산물들은 또한 리보뉴클레오사이드의 합성 및/또는 RNA 및/또는 아미노산 대사 및 단백질 합성도 간섭한다. 생명에 필수적인 세포 성분들의 합성을 간섭함으로써, 항대사산물은 암세포 성장을 지연 또는 중단시킬 수 있다. 항대사산물의 예로는 5-플루오로우라실(5-FU); 아스파라기나제; 카페시타빈; 클라드리빈(2-CDA); 시타라빈; DNA 탈메틸화제, 예컨대 5-아자시티딘 및 데시타빈; 에다트렉세이트; 플록스우리딘(5-FUdR);플루다라빈 포스페이트; 엽산 길항제 예컨대 페메트렉세드; 겜시타빈; 히드록시우레아; 류코보린; 머캅토퓨린(6-MP); 메토트렉세이트; 펜토스타틴; 및 티오구아닌(6-TG)을 들 수 있으나 이에 한정되지 않는다.
[00232] 본 발명에서 "단백질 또는 지질 키나아제 활성을 표적화/감소시키는 화합물"로의 비제한적인 예로는: 단백질 티로신 키나아제 및/또는 세린 및/또는 트레오닌 키나아제 저해제 또는 지질 키나아제 저해제, 예컨대, i) 혈소판-유도된 성장인자-수용체의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물, 특히 PDGF 수용체를 저해하는 화합물, 예컨대 /V-페닐-2-피리미딘-아민 유도체, 예컨대, 이마티닙, SU101 , SU6668 및 GFB-111 ; ii) 섬유모세포 성장인자-수용체(FGFR)의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물; iii) 인슐린-유사 성장 인자 I 수용체 (IGF-IR)의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물, 특히 IGF-IRd을 저해하는 화합물, 예컨대 WO 02/092599에 기재된 화합물,특히, 트랜스-5- (3-벤질옥시-페닐)-7-(3-피롤리딘-1-일메틸-시클로부틸)-7H-피롤로[2,3- d]피리미딘-4-일아민 및 시스-7-(3-아제티딘-1 -일메틸-시클로부틸)-5-(3- 벤질옥시-페닐)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일아민 또는 이들 화합물의 약학적으로 허용가능한 염; iv) Trk 수용체 티로신 키나아제 패밀리의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물; v) Axl 수용체 티로신 키나아제 패밀리의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물; vi) RET 수용체 티로신 키나아제의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물; vii) c-kit 수용체 티로신 키나아제의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물, 특히 c-Kit 수용체를 억제하는 화합물, 예컨대, 이마티닙; viii) c-Abl 패밀리 멤버 및 이들의 유전자-융합 산물의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물, 예컨대, Bcr-Abl 키나아제, 예컨대 특히 /V-페닐-2-피리미딘-아민 유도체, 예컨대, 이마티닙, PD180970, AG957, NSC 680410 또는 PD173955, ParkeDavis; ix) 단백질 키나아제 C (PKC)의 멤버 및 세린/트레오닌 키나아제의 Raf 패밀리, MEK, SRC, JAK, FAK, PDK의 멤버 및 Ras/MAPK 패밀리 멤버, 또는 PI3 키나아제 (PI3K) 패밀리, 또는 PI3-키나아제-관련 키나아제 패밀리, 및/또는 사이클린-의존성 키나아제 패밀리 (CDK)의 멤버의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물 및 특히 미국특허 No. 5,093,330에 개시된 스타우로스포린 유도체, 예컨대 미도스타우린을 들 수 있고 추가의 화합물의 예로는, 예컨대, UCN-01; 사핀골; BAY 43-9006; 브리오스타틴 1; 페리포신; 일모포신; RO 318220 및 RO 320432; GO 6976; Isis 3521; LY333531/LY379196; 이소키놀린 화합물, 예컨대 WO 00/09495에 개시된 화합물; FTIs; PD184352 또는 QAN697 (PI3K 저해제); x) 단백질 티로신 키나아제 저해제의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물에는 이마티닙 메실레이트 (GLEEVEC/GLIVEC) 또는 트리포스틴이 포함된다. 트리포스틴은 저분자량 (Mr<1500) 화합물, 또는 그의 약학적으로 허용되는 염, 특히 벤질리덴말로니트릴 클래스 또는 S-아릴벤젠말로니릴 또는 이치환 퀴놀론 클래스 화합물인 것이 바람직하고, 더욱 특히는 트리포스틴 A23/RG-50810, AG 99, 트리포스틴 AG 213, 트리포스틴 AG 1748, 트리포스틴 AG 490, 트리포스틴 B44, 트리포스틴 B44 (+) 에난티오머, 트리포스틴 AG 555, AG 494, 트리포스틴 AG 556 및 AG957 및 아다포스틴 (4-{[(2,5-디히드록시페닐)메틸]아미노}-벤조산 아다만틸 에스테르, NSC 680410)로부터 선택된 것일 수 있다; 및 xi) 수용체 티로신 키나아제 (호모다이머 또는 헤테로다이머로서 EGFR, ErbB2, ErbB3, ErbB4)의 상피성장인자 패밀리의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물, 예컨대, 상피성장인자수용체 패밀리의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물은 특히, EGF 수용체 티로신 키나아제 패밀리, 예컨대, EGF 수용체, ErbB2, ErbB3 및 ErbB4의 멤버를 억제하는 화합물, 단백질 또는 항체이거나 또는 EGF 또는 EGF-관련 리간드에 결합하는 화합물이며 특히 WO 97/02266에 일반적으로 및 구체적으로 예컨대 실시예 39에 개시된 화합물, 단백질 또는 항체, 또는 EP 0 564409, WO 99/03854, EP 0520722, EP 0 566 226, EP 0 787 722, EP 0 837 063, 미국특허 No. 5,747,498, WO 98/10767, WO 97/30034, WO 97/49688, WO 97/38983 및 특히, WO 96/30347에 개시된 화합물, 예컨대, CP 358774로 알려진 화합물, WO 96/33980, 예컨대, 화합물 ZD 1839; 및 WO 95/03283, 예컨대, 화합물 ZM105180, 예컨대, 트라스투주맙 (Herceptin®), 세툭시맙, 게피티닙(Iressa), 엘로티닙(Tarceva™), CI-1033, EKB-569, GW-2016, E1.1, E2.4, E2.5, E6.2, E6.4, E2.11, E6.3 또는 E7.6.3, 및 7H-피롤로-[2,3- 피리미딘 유도체 (WO 03/013541에 개시됨)을 들 수 있다.
[00233] 추가적인 항혈관신생 화합물에는 또 다른 활성 메카니즘을 갖는 화합물, 예컨대 단백질 또는 지질 키나아제 억제와 무관한 화합물, 예컨대, 탈리도마이드(THALOMID) 및 TNP-470이 포함된다.
[00234] 본 발명에서 "시클로옥시게나제 저해제"에는, 예컨대, Cox-2 저해제, 5-알킬 치환된 2-아릴아미노페닐아세트산 및 유도체, 예컨대 셀레콕시브(CELEBREX), 로페콕시브(VIOXX), 에토리콕시브, 발데콕시브(BEXTRA) 또는 5-알킬- 2-아릴아미노페닐아세트산, 예컨대, 5-메틸-2-(2'-클로로-6'-플루오로아닐리노)페닐 아세트산 (루미라콕시브, PREXIGE)가 포함되나 이에 한정되지 않는다.
[00235] 본 발명에서 "비스포스포네이트"에는 에트리도닉, 클로드로닉, 틸루드로닉, 파미드로닉, 알렌드로닉, 이반드로닉, 리센드로닉 및 졸렌드로닉산이 포함되나 이에 한정되지 않는다.
[00236] 본 발명에서 "헤파라나제 저해제"는 헤파린 설페이트 분해를 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물을 가리킨다. 이 용어에는, PI-88이 포함되나 이에 한정되지 않는다
[00237] 본 발명에서 "텔로머라제 저해제"라 함은 텔로머라제의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물을 가리킨다. 텔로머라제의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물은 특히 텔로머라제 수용체, 예컨대, 텔로메스타틴을 억제하는 화합물이다.
[00238] 본 발명에서 "메티오닌아미노펩티다제 저해제"라 함은, 메티오닌아미노펩티다제의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물을 가리킨다. 메티오닌아미노펩티다제의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물은 예컨대 벵가미드 또는 그의 유도체이다.
[00239] 본 발명에서 "프로테아좀 저해제"라 함은 프로테아좀의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물을 가리킨다. 프로테아좀의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물에는 예컨대, PS-341 및 MLN 341이 포함된다.
[00240] 본 발명에서 "매트릭스 메탈로프로테이나제 저해제" 또는 "MMP 저해제"라는 용어의 비제한적인 예로는 콜라겐 펩티도미메틱 및 비-펩티도미메틱 저해제; 테트라사이클린 유도체, 예컨대 히드록사메이트 펩티도미메틱 저해제 바티마스타트; 및 그의 경구-생체이용가능한 유사체인 마리마스타트 (BB-2516), 프리노마스타트(AG3340), 메타스타트 (NSC 683551) BMS-279251, BAY 12-9566, TAA211 , MMI270B 또는 AAJ996을 들 수 있다.
[00241] 본 발명에서 "혈액학적 악성종양의 치료에 사용되는 제제"라는 용어에는, FMS-유사 티로신 키나아제 저해제, 예컨대, Flt-3의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물; 인터페론; 시토신 아라비노사이드(Ara- C); 바이술판; 및 ALK 저해제, 즉 역형성 림프종 키나아제(ALK)를 표적화, 감소 또는 특히 억제하는 화합물이 포함되나 이에 한정되지 않는다.
[00242] 본 발명에서 "FMS-유사 티로신 키나아제 저해제"라는 용어에는 FMS-유사 티로신 키나아제 수용체의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물이 포함되며 예컨대 특히 Flt-3을 억제하는 화합물, 단백질 또는 항체, 예컨대, PKC412, 미도스타우린, 스타우로스포린 유도체, SU 11248 및 MLN518가 포함된다.
[00243] 본 발명에서 "HSP90 저해제"라는 용어에는 내재적인 HSP90의 ATPase 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물; 유비퀴틴 프로테아좀 경로를 경유하여 HSP90 클라이언트 단백질을 분해, 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물이 포함되나 이에 한정되지 않는다. HSP90의 ATPase 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물은 특히 HSP90의 ATPase 활성을 억제하는 화합물, 단백질 또는 항체, 예컨대, 겔다나마이신 유도체인 17-알릴아미노,17-데메톡시겔다나마이신 (17-AAG); 또 다른 겔다나마이신-관련 화합물; 라디시콜 및 HDAC 저해제이다.
[00244] "히스톤 데아세틸라제 저해제" 또는 "HDAC 저해제"라는 용어는 소듐 부티레이트 및 수베로일아닐리드 히드록삼산(SAHA)과 같이, 히스톤 데아세틸라제 (HDAC)의 활성을 표적화, 감소 또는 특히 억제하는 화합물에 관계된다. 특별한 HDAC 저해제로는 MS275, SAHA, FK228 (종전의 FR901228), 미국특허 No. 6,552,065에 개시된 트리코스타틴 A 및 특히, N-히드록시-3-[4-[[[2-(2-메틸-7H-인돌- 3-일)-에틸]-아미노]메틸]페닐]-2E-2-프로펜아미드, 또는 약학적으로 허용되는 그의 염 및 /V-히드록시-3-[4-[(2-히드록시에틸){2-( 7H-인돌-3-일)에틸]-아미노]메틸]페닐]- 2E-2-프로펜아미드, 또는 또는 약학적으로 허용되는 그의 염, 특히 락테이트 염을 들 수 있다.
[00245] "mTOR 저해제"라는 용어는 세린/트레오닌 mTOR 키나아제 패밀리의 활성/기능을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물에 관계되며 특히 mTOR 키나아제 패밀리의 멤버를 억제하는 화합물, 단백질 또는 항체, 예컨대, CCI-779, ABT578, SAR543, 라파마이신 및 그의 유도체/유사체, AP23573 및 AP23841(Ariad), 에베롤리무스(CERTICAN, RAD001 ) 및 시롤리무스 (RAPAMUNE)가 이에 포함된다.
[00246] 본 발명에서 "소마토스타틴 수용체 길항제"라 함은 옥트레오타이드 및 SOM230과 같이 소마토스타틴 수용체를 표적화, 치료 또는 억제하는 물질을 가리킨다. 본 발명에서 "인테그린 길항제"라는 용어의 비제한적인 예로는 예컨대 αvβ3 길항제 및 αvβ5 길항제를 들 수 있다.
[00247] "종양 세포 손상 접근법"이라 함은 이온화 방사선조사와 같은 접근법을 가리킨다. "이온화 방사선(ionizing radiation)"이라는 용어는 x-선 및 감마선과 같은 전자기파로서 발생되는 이온화 방사선; 또는 알파 및 베타 입자와 같은 입자로서 발생되는 것을 가리킨다. 이온화 방사선은 방사선요법으로서 제공되며 기술분야에 공지이나 이에 한정되지 않는다. 예컨대 문헌 [Hellman, Cancer, 4th Edition, Vol. 1 , Devita 등, Eds., pp. 248-275 (1993)] 참조.
[00248] "항-백혈병 화합물"이라는 용어에는 예컨대 데옥시시티딘의 2'-α-히드록시 리보스(아라비노사이드) 유도체인, Ara-C, 피리미딘 유사체가 포함된다. 또한, 하이포잔틴의 퓨린 유사체, 6-머캅토퓨린 (6-MP) 및 플루다라빈 포스페이트도 포함된다.
[00249] 본 발명에서 "EDG 바인더"라 함은 FTY720와 같이, 림프구 재순환을 조절하는 면역억제제 부류를 가리킨다.
[00250] "리보뉴클레오타이드 리덕타제 저해제"는 피리미딘 또는 퓨린 뉴클레오사이드 유사체를 칭하는 것으로 이의 비제한적인 예로는, 플루다라빈 및/또는 Ara-C; 6-티오구아닌; 5- FU; 클라드리빈; 6-머캅토퓨린, 특히 ALL에 대한 Ara-C아의 조합 형태; 및/또는 펜토스타틴을 들 수 있다. 리보뉴클레오타이드 리덕타제 저해제는 특히 히드록시우레아 또는 2-히드록시- 7H-이소인돌-1,3-디온 유도체, 예컨대 PL-1, PL-2, PL-3, PL-4, PL-5, PL-6, PL-7 또는 PL-8이다. 예컨대 문헌[Nandy 등, Ada Oncologica, Vol. 33, No. 8, pp. 953-961 (1994)] 참조.
[00251] 본 발명에서, "S-아데노실메티오닌데카복실라제 저해제"라 함은 미국특허 No. 5,461,076에 개시된 화합물을 나타내나 이에 한정되지 않는다.
[00252] ACE 저해제에는 베나제프릴 (CIBACEN), 에나제프릴(LOTENSIN), 캡토프릴, 에날라프릴, 포시노프릴, 리시노프릴, 모엑시프릴, 퀴나프릴, 라미프릴, 페린도프릴 및 트란돌라프릴이 포함된다.
[00253] 세포 생물학 및 분자 생물학에서 흔히 사용되는 용어의 정의는 문헌 ["The Merck Manual of Diagnosis and Therapy", 19th Edition, published by Merck Research Laboratories, 2006 (ISBN 0-911910-19-0); Robert S. Porter 등 (eds.), The Encyclopedia of Molecular Biology, published by Blackwell Science Ltd., 1994 (ISBN 0-632-02182-9); Benjamin Lewin, Genes X, published by Jones & Bartlett Publishing, 2009 (ISBN-10:　0763766321); Kendrew 등 (eds.), Molecular Biology and Biotechnology: a Comprehensive Desk Reference, published by VCH Publishers, Inc., 1995 (ISBN 1-56081-569-8) 및 Current Protocols in Protein Sciences 2009, Wiley Intersciences, Coligan 등]에서 찾아볼 수 있다.
[00254] 달리 언급하지 않는 한, 본 발명은 예컨대 문헌 [Sambrook 등, Molecular Cloning: A Laboratory Manual (3 ed.), Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., USA (2001); Davis 등, Basic Methods in Molecular Biology, Elsevier Science Publishing, Inc., New York, USA (1995); Current Protocols in Cell Biology (CPCB) (Juan S. Bonifacino et. al. ed., John Wiley and Sons, Inc.), and Culture of Animal Cell: A Manual of Basic Technique by R. Ian Freshney, Publisher: Wiley-Liss; 5th edition (2005), Animal 세포 Culture Methods (Methods in Cell Biology, Vol. 57, Jennie P. Mather and David Barnes editors, Academic Press, 1st edition, 1998)]에 설명된 표준 공정을 이용하여 수행되었으며, 상기 문헌은 그 내용 전체가 본 발명에 참조 통합되었다.
[00255] 기타 용어들은 본 발명의 다양한 측면의 설명과 함께 본 명세서에 정의된다.
[00256] 본 발명의 다양한 측면의 예시적인 구체예들은 하기 번호 붙인 문단 중 한 가지 이상에 의해 설명될 수 있다:
1. 탁산-지질 컨쥬게이트를 포함하는 초분자 조합 치료제 (SCT).
2. 문단 1에 있어서, 초분자 조합 치료제는 리포좀, 에멀젼, 미셀, 또는 입자인 초분자 조합 치료제.
3. 문단 1 또는 2에 있어서, 초분자 조합 치료제는 약 1% 내지 약 99% (w/w)의 탁산 컨쥬게이트를 포함하는 것인 초분자 조합 치료제.
4. 문단 1-3 중 어느 하나에 있어서, 탁산 컨쥬게이트는 카바지탁셀-지질 컨쥬게이트, 파클리탁셀-지질 컨쥬게이트 또는 도세탁셀-지질 컨쥬게이트인 것인 초분자 조합 치료제.
5. 문단 1-4 중 어느 하나에 있어서, 탁산 컨쥬게이트는 컨쥬게이트1 -33으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 초분자 조합 치료제.
6. 문단 1-5 중 어느 하나에 있어서, 초분자 조합 치료제는 지질 컨쥬게이트된 PI3K 저해제를 더 포함하는 것인 초분자 조합 치료제.
7.문단 6에 있어서, 초분자 조합 치료제는 약 1% 내지 약 99% (w/w)의 PI3K 저해제 컨쥬게이트를 포함하는 것인 초분자 조합 치료제.
8. 문단 6 또는 7에 있어서, 초분자 조합 치료제는 탁산 컨쥬게이트와 PI3K 저해제 컨쥬게이트를 약 10:1 내지 약 1:10의 비율로 포함하는 것인 초분자 조합 치료제.
9. 문단 1-8 중 어느 하나에 있어서, 초분자 조합 치료제는 지질 컨쥬게이트된 백금 화합물을 더 포함하는 것인 초분자 조합 치료제.
10. 문단 9에 있어서, 초분자 조합 치료제는 약 1% 내지 약 99% (w/w)의 백금 컨쥬게이트를 포함하는 것인 초분자 조합 치료제.
11. 문단 9 또는 10에 있어서, 초분자 조합 치료제는 탁산 컨쥬게이트와 백금 컨쥬게이트를 약 10:1 내지 약 1:10의 비율로 포함하는 것인 초분자 조합 치료제.
12. 문단 1-11 중 어느 하나에 있어서, 초분자 조합 치료제는 지질 컨쥬게이트된 항체를 더 포함하는 것인 초분자 조합 치료제.
13. 문단 12에 있어서, 항체는 치료제 또는 표적화 리간드인 초분자 조합 치료제.
14. 문단 12 또는 13에 있어서, 항체는 항-PD-1 항체, 항-PD-L1 항체 및 그의 조합을 포함하는 면역조절제인 것인 초분자 조합 치료제.
15. 문단 12-14 중 어느 하나에 있어서, 초분자 조합 치료제는 약 1% 내지 약 99% (w/w)의 항체 컨쥬게이트를 포함하는 것인 초분자 조합 치료제.
16. 문단 12-15 중 어느 하나에 있어서, 초분자 조합 치료제는 탁산 컨쥬게이트 와 항체 컨쥬게이트를 약 10:1 내지 약 1:10의 비율로 포함하는 것인 초분자 조합 치료제.
17. 문단 1-16 중 어느 하나에 있어서, 지질은 콜레스테롤; 1,3-프로판디올 디카프릴레이트/디카프레이트; 10-운데센산; 1--도트리아콘탄올; 1-헵타코산올; 1-노나코산올; 2-에틸 헥산올; 안드로스탄; 아라키드산; 아라키돈산; 아라키딜 알코올; 베헨산; 베헤닐 알코올; 캄풀 MCM C10; 카프르산; 카프릭 알코올; 카프릴 알코올; 카프릴산; 카프릴/카프르산 포화 지방 알코올 C12-C18의 에스테르; 카프릴/카프르 트리글리세라이드; 카프릴/카프르 트리글리세라이드; 세라마이드 포스포릴콜린 (스핑고미엘린, SPH); 세라마이드 포스포릴에탄올아민 (스핑고미엘린, Cer-PE); 세라마이드 포스포릴글리세롤; 세로플라스틱산; 세로트산; 세릴 알코올; 세테아릴 알코올; Ceteth-10; 세틸 알코올; 콜란; 콜레스탄; 콜레스테롤; 시스-11-에이코센산; 시스-11-옥타데센산; 시스-13-도코센산; 클루이틸 알코올; 디호모-γ-리놀렌산; 도코사헥산산; 난 레시틴; 에이코사펜타엔산; 에이코센산; 엘라이드산; 엘라이도리놀레닐알코올; 엘라이도리놀레일 알코올; 엘라이딜 알코올; 에루식산; 에루실 알코올; 에스트란; 에틸렌 글리콜 디스테아레이트 (EGDS); 게딕산; 게딜 알코올; 글리세롤 디스테아레이트 (I형) EP (Precirol ATO 5); 글리세롤 트리카프릴레이트/카프레이트; 글리세롤 트리카프릴레이트/카프레이트 (CAPTEX® 355 EP/NF); 글리세릴 모노카프릴레이트 (Capmul MCM C8 EP); 글리세릴 트리아세테이트; 글리세릴 트리카프릴레이트; 글리세릴 트리카프릴레이트/카프레이트/라우레이트; 글리세릴 트리카프릴레이트/트리카프레이트; 글리세릴 트리팔미테이트 (트리팔미틴); 헤나트리아콘틸산; 헤네이코실 알코올; 헤네이코실산; 헵타코실산; 헵타데칸산; 헵타데실 알코올; 헥사트리아콘틸산; 이소스테아르산; 이소스테아릴 알코올; 라세르산; 라우르산; 라우릴 알코올; 리그노세르산; 리그노세릴 알코올; 리노엘라이드산; 리놀레산; 리놀레닐 알코올; 리놀레일 알코올; 마르가르산; 미드(Mead); 멜리식산; 멜리실 알코올; 몬탄산; 몬타닐 알코올; 미리실 알코올; 미리스트산; 미리스톨산; 미리스틸 알코올; 네오데칸산; 네오헵탄산; 네오노난산; 네르본; 노나코실산; 노나데실 알코올; 노나데실산; 노나데실산; 올레산; 올레일 알코올; 팔미트산; 팔미톨레산; 팔미톨레일 알코올; 펠라곤산; 펠라곤 알코올; 펜타코실산; 펜타데실 알코올; 펜타데실산; 포스파티드산(포스파티데이트, PA); 포스파티딜콜린 (레시틴, PC); 포스파티딜에탄올아민 (세팔린, PE); 포스파티딜이노시톨 (PI); 포스파티딜이노시톨 비스포스페이트 (PIP2); 포스파티딜이노시톨 포스페이트(PIP); 포스파티딜이노시톨 트리포스페이트(PIP3); 포스파티딜세린 (PS); 폴리글리세릴-6-디스테아레이트; 프레그난; 프로필렌 글리콜디카프레이트; 프로필렌 글리콜 디카프릴로카프레이트; 프로필렌 글리콜 디카프릴로카프레이트; 프실산; 레시놀레아산; 레시놀레일 알코올; 사피엔산; 대두 레시틴; 스테아르산; 스테아리돈; 스테아릴 알코올; 트리코실산; 트리데실 알코올; 트리데실산; 트리올레인; 운데실 알코올; 운데실렌산; 운데실산; 바센산; α-리놀렌산; 및 γ-리놀렌산로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 초분자 조합 치료제.
18. 문단 1-17 중 어느 하나에 있어서, 지질은 콜레스테롤, 알파-토코페롤, 또는 지방산인 것인 초분자 조합 치료제.
19. 문단 1-18 중 어느 하나에 있어서, PI3K 저해제 컨쥬게이트는:
Figure pct00006
또는
Figure pct00007
인 것인 초분자 조합 치료제.
20. 문단 1-19 중 어느 하나에 있어서, 백금 컨쥬게이트는:
Figure pct00008
또는
IO-125:
Figure pct00009
인 것인 초분자 조합 치료제.
21. 문단 1-20 중 어느 하나에 있어서, 초분자 조합 치료제는 탁산 컨쥬게이트에 더해 제1 지질을 더 포함하는 것인 초분자 조합 치료제.
22. 문단 21에 있어서, 제1 지질은 인지질인 것인 초분자 조합 치료제.
23. 문단 21 또는 22에 있어서, 조성물은 제2 지질을 더 포함하는 것인 초분자 조합 치료제.
24. 문단 23에 있어서, 제2 지질인 인지질인 것인 초분자 조합 치료제.
25. 문단 22-24 중 어느 하나에 있어서, 인지질은 포스파티딜 콜린, 6 내지 22개의 탄소 원자를 갖는 아실기가 있는 포스파티딜 콜린, 포스파티딜 에탄올아민, 포스파티딜 이노시톨, 포스파티드산, 포스파티딜 세린, 스핑고미엘린, 포스파티딜 글리세롤, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 초분자 조합 치료제.
26. 문단 25에 있어서, 인지질은 포스파티딜콜린, 포스파티딜글리세롤, 레시틴, β,γ-디팔미토일-α-레시틴, 스핑고미엘린, 포스파티딜세린, 포스파티드산, N-(2,3-디(9-(Z)-옥타데세닐옥시))-프로-1-필-N,N,N-트리메틸암모늄 클로라이드, 포스파티딜에탄올아민, 리소레시틴, 리소포스파티딜에탄올아민, 포스파티딜이노시톨, 세팔린, 카르디올리핀, 세레브로사이드, 디세틸포스페이트, 디올레오일포스파티딜콜린, 디팔미토일포스파티딜콜린, 디팔미토일포스파티딜글리세롤, 디올레오일포스파티딜글리세롤, 팔미토일-올레오일-포스파티딜콜린, 디-스테아로일-포스파티딜콜린, 스테아로일-팔미토일-포스파티딜콜린, 디-팔미토일-포스파티딜에탄올아민, 디-스테아로일-포스파티딜에탄올아민, 디-미리스토일-포스파티딜세린, 디-올레일-포스파티딜콜린, 디미리스토일 포스파티딜 콜린 (DMPC), 디올레오일포스파티딜에탄올아민 (DOPE), 팔미토일올레오일포스파티딜콜린 (POPC), 계란 포스파티딜콜린 (EPC), 디스테아로일포스파티딜콜린 (DSPC), 디올레오일포스파티딜콜린 (DOPC), 디팔미토일포스파티딜콜린 (DPPC), 디올레오일포스파티딜글리세롤 (DOPG), 디팔미토일포스파티딜글리세롤 (DPPG), -포스파티딜에탄올아민 (POPE), 디올레오일-포스파티딜에탄올아민 4-(N-말레이미도메틸)-시클로헥산-1-카르복실레이트 (DOPE-mal), 1-스테아로일-2-올레오일 포스파티딜콜린 (SOPC), 1,2-디스테아로일-sn-글리셈-3-포스포에탄올아민 (DSPE), 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 초분자 조합 치료제.
27. 문단 26에 있어서, 인지질은 SOPC인 것인 초분자 조합 치료제.
28. 문단 24-27 중 어느 하나에 있어서, 제1 및 제2 지질은 약 10:1 내지 약 1:10의 비율로 존재하는 것인 초분자 조합 치료제.
29. 문단 21-28 중 어느 하나에 있어서, 초분자 조합 치료제는 약 1% 내지 약 99%의 총 지질을 포함하는 것인 초분자 조합 치료제.
30. 문단 21-29 중 어느 하나에 있어서, 초분자 조합 치료제는 컨쥬게이트와 총 지질을 약 10:1 내지 약 1:10의 비율로 포함하는 것인 초분자 조합 치료제.
31. 문단 1-30 중 어느 하나에 있어서, 초분자 조합 치료제는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)을 더 포함하는 것인 초분자 조합 치료제.
32. 문단 31에 있어서, PEG는 초분자 조합 치료제의 한 성분과 컨쥬게이트된 것인 초분자 조합 치료제.
33. 문단 31 또는 32에 있어서, PEG는 지질에 컨쥬게이트된 것인 초분자 조합 치료제.
34. 문단 33에 있어서, PEG 컨쥬게이트된 지질은 PEG 컨쥬게이트된 디아실글리세롤 및 디알킬글리세롤, PEG- 컨쥬게이트된 포스파티딜에탄올아민 및 포스파티드산, PEG 컨쥬게이트된 세라마이드, PEG 컨쥬게이트된 디알킬아민, PEG 컨쥬게이트된 1,2-디아실옥시프로판-3-아민, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 초분자 조합 치료제.
35. 문단 34에 있어서, PEG 컨쥬게이트된 지질은 1,2-디스테아로일-sn-글리셈-3-포스포에탄올아민-N-[아미노(폴리에틸렌 글리콜)-2000] (DSPE-PEG2000)인 것인 초분자 조합 치료제.
36. 문단 1-35 중 어느 하나에 있어서, 표적화 리간드를 더 포함하는 것인 초분자 조합 치료제.
37. 문단 36에 있어서, 표적화 리간드는 펩타이드, 폴리펩타이드, 단백질, 효소, 펩티도미메틱, 당단백질, 항체 (모노클로날 또는 폴리클로날) 및 그의 일부 또는 단편, 렉틴, 뉴클레오사이드, 뉴클레오타이드, 뉴클레오사이드 및 뉴클레오타이드 유사체, 핵산, 단당류, 이당류, 삼당류 올리고당, 다당류, 리포다당류, 비타민, 스테로이드, 호르몬, 코팩터(cofactors), 수용체, 수용체 리간드, 및 그의 유사체 및 유도체로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 초분자 조합 치료제.
38. 문단 37에 있어서, 표적화 리간드는 암세포 표면 상에 발현되는 단백질, 수용체, 또는 마커에 결합하는 것인 초분자 조합 치료제.
39. 문단 36-38 중 어느 하나에 있어서, 표적화 리간드는 조성물의 한 성분과 컨쥬게이트된 것인 초분자 조합 치료제.
40. 문단 39에 있어서, 표적화 리간드는 지질 또는 PEG와 컨쥬게이트된 것인 초분자 조합 치료제.
41. 문단 1-40 중 어느 하나에 있어서, 초분자 조합 치료제는 탁산 컨쥬게이트에 더해 화학치료제를 더 포함하는 것인 초분자 조합 치료제.
42. 문단 41에 있어서, 초분자 조합 치료제는 약 1% 내지 약 99% (w/w)의 화학치료제를 포함하는 것인 초분자 조합 치료제.
43. 문단 41 또는 42에 있어서, 화학치료제는 PI3K 저해제; 백금 화합물; 토포이소머라제 I 및 II의 저해제; 알킬화제; 미세관 저해제; 혈관신생 저해제; 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 초분자 조합 치료제.
44. 문단 41-43 중 어느 하나에 있어서, 화학치료제는 PI3K 저해제, 백금 화합물, 저미시티빈; 알데스류킨; 알렘투주맙, 알리트레티노인; 알로퓨리놀; 알트레타민; 아미포스틴; 아나스트로졸; 삼산화비소; 아스파라기나제; BCG Live; 벡사로텐 캡슐; 벡사로텐 겔; 블레오마이신; 부술판 정맥제; 부술판오랄; 칼루스테론; 카페시타빈; 플라티네이트; 카르무스틴; 폴리페프로산 임플란트가 있는 카르무스틴; 셀레콕시브; 클로람부실; 클라드리빈; 시클로포스파미드; 시타라빈; 시타라빈 리포조말; 다카르바진; 닥티노마이신; 악티노마이신 D; 다르베포에틴 알파; 다우노루비신 리포조말; 다우노루비신 다우노마이신; 데니류킨 디피티톡스, 덱스라족산; 도세탁셀; 독소루비신; 독소루비신 리포조말; 드로모스타놀론 프로피오네이트; 엘리엇 B 용액; 에피루비신; 에포에틴 알파 에스트라무스틴; 에토포시드포스페이트; 에토포시드 (VP-16); 엑세메스탄; 필그라스팀; 플록스우리딘 (동맥내); 플루다라빈; 플루오로우라실 (5-FU); 풀베스트란트; 겜투주맙 오조가미신; 고세렐린 아세테이트; 히드록시우레아; 이브리투모맙 티욱세탄; 이다루비신; 이포스파미드; 이마티닙 메실레이트; 인터페론 알파-2a; 인터페론 알파-2b; 이리노테칸; 레트로졸; 류코보린; 레바미솔; 로무스틴 (CCNU); 메클로레타민 (니트로겐머스타드); 메게스트롤 아세테이트; 멜팔란 (L-PAM); 머캅토퓨린 (6-MP); 메스나; 메토트렉세이트; 메톡살렌; 미토마이신 C; 미토테인; 미토잔트론; 난드롤론; 펜프로피오네이트; 노페투모맙; LOddC; 오프렐베킨; 파미드로네이트; 페가데마제; 페가스파르가제; 페그필그라스팀; 펜토스타틴; 피포브로만; 플리카마이신; 미트라마이신; 포르피머 나트륨; 프로카르바진; 퀴나크린; 라스부리카제; 리툭시맙; 사르그라모스팀; 스트렙토조신; 탈부비딘 (LDT); 탈크; 타목시펜; 테모졸로미드; 테니포시드 (VM-26); 테스토락톤; 티오구아닌 (6-TG); 테오테파; 토포테칸; 토레미펜; 토시투모맙; 트라스투주맙; 트레티노인 (ATRA); 우라실 머스타드; 발루비신; 발토르시타빈 (모노발 LDC); 빈블라스틴; 비노렐빈; 졸레드로네이트; 및 및 이의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 초분자 조합 치료제.
45. 문단 43 또는 44에 있어서, PI3K 저해제는 PI103; P1828; LY294002; 워르트만닌; 데메톡시비리딘; IC486068; IC87114; GDC-0941; 페리포신; CAL101; PX-866; IPI-145; BAY 80-6946; BEZ235; P6503; TGR1202; SF1126; INK1117; BKM120; IL147; XL765; 팔로미드 529; GSK1059615; ZSTK474; PWT33597; TG100-115; CAL263; GNE-447; CUDC-907; 및 AEZS-136, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 초분자 조합 치료제.
46. 문단 41-45 중 어느 하나에 있어서, 화학치료제는 조성물의 한 성분과 컨쥬게이트된 것인 초분자 조합 치료제.
47. 문단 46에 있어서, 화학치료제는 지질 또는 PEG와 컨쥬게이트된 것인 초분자 조합 치료제.
48. 문단 47에 있어서, 화학치료제는 콜레스테롤과 컨쥬게이트된 것인 초분자 조합 치료제.
49. 문단 1-48 중 어느 하나에 있어서, 초분자 조합 치료제는 중성 지질, 양이온 지질, 음이온 지질, 양친성 지질, 스테롤, 프로그램가능한 융합 지질, 또는 그의 조합을 더 포함하는 것인 초분자 조합 치료제.
50. 문단 1-49 중 어느 하나에 있어서, 초분자 조합 치료제는 적어도 1종 (예컨대, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10종 이상의 상이한) 탁산 컨쥬게이트 및 적어도 1종 (예컨대, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10종 이상의 상이한) PI3K 저해제-지질 컨쥬게이트를 포함하는 것인 초분자 조합 치료제.
51. 문단 1-50 중 어느 하나에 있어서, 초분자 조합 치료제는 적어도 1종 (예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10종 이상의 상이한) 탁산 컨쥬게이트 및 적어도 1종 (예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10종 이상의 상이한) 백금-지질 컨쥬게이트를 포함하는 것인 초분자 조합 치료제.
52. 문단 1-51 중 어느 하나에 있어서, 초분자 조합 치료제는 적어도 1종 (예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10종 이상의 상이한) 탁산 컨쥬게이트 및 적어도 1종 (예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10종 이상의 상이한) 항체-지질 컨쥬게이트를 포함하는 것인 초분자 조합 치료제.
53. 문단 1-52 중 어느 하나에 있어서, 초분자 조합 치료제는 적어도 1종의 탁산 컨쥬게이트, 인지질 및 PEG 컨쥬게이트된 지질을 포함하는 것인 초분자 조합 치료제.
54. 문단 53에 있어서, 조성물은 컨쥬게이트, 인지질 및 PEG 컨쥬게이트된 지질을 약 10-0.1 : 10-0.1 : 10-0.01의 비율로 포함하는 것인 초분자 조합 치료제.
55. 문단 53 또는 54에 있어서, 인지질은 포스파티딜콜린이고 PEG 컨쥬게이트된 지질은 DSPE-PEG2000인 것인 초분자 조합 치료제.
56. 문단 53-55 중 어느 하나에 있어서, 인지질은 포스파티딜콜린인 것인 초분자 조합 치료제.
57. 문단 56에 있어서, 포스파티딜콜린은 SOPC, Egg PC, HSPC, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 초분자 조합 치료제.
58. 문단 1-57 중 어느 하나에 있어서, 초분자 조합 치료제는 나노입자인 것인 초분자 조합 치료제.
59. 문단 58에 있어서, 나노입자는 직경이 약 5 nm 내지 약 500 nm인 것인 초분자 조합 치료제.
60. 문단 59에 있어서, 나노입자는 직경이 약 50 nm 내지 약 200 nm인 것인 초분자 조합 치료제.
61. 문단 1-60 중 어느 하나에 있어서, 조성물은 약학적으로 허용가능한 담체를 더 포함하는 것인 초분자 조합 치료제.
62. 암 치료를 필요로 하는 대상자에게 문단 1-61 중 어느 하나에 기재된 초분자 조합 치료제를 투여하는 것을 포함하는, 암의 치료 방법.
63. 문단 62에 있어서, 암은 유방암; 난소암; 신경아교종; 위장관암; 전립선암; 암종, 폐암종, 간세포 암종, 고환암; 자궁경부암; 자궁내막암; 방광암; 두경부암; 폐암; 위식도암, 및 부인과암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
64. 문단 63에 있어서, 대상자에게 1종 이상의 부가적인 항암요법을 추가로 공동 투여하는 방법.
65. 문단 64에 있어서, 부가적인 요법은 외과수술, 화학요법, 방사선요법, 열요법, 면역요법, 호르몬요법, 레이저요법, 항혈관신생 요법, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
66. 문단 65에 있어서, 부가적인 요법은 환자에게 화학치료제를 투여하는 것을 포함하는 것인 방법.
67. 문단 62-66 중 어느 하나에 있어서, 대상자에게 면역조절제를 공동 투여하는 것을 더 포함하는 것인 방법.
68. 문단 67에 있어서, 면역조절제는 암세포에 대한 면역 반응을 활성화시키는 것인 방법.
69. 문단 68에 있어서, 면역조절제는 내추럴 킬러 세포, 림포카인-활성화된 킬러 세포, 세포독성 T 세포 및 수지상 세포, 항-PD-L1 항체, 항-PD-1 항체, 항-CD52 항체, 항-VEGF-A 항체, 항-CD30 항체, 항-EGFR 항체, 항-CD33 항체, 항-CD20 항체, 항-CTLA4 항체, 항-HER-2 항체, 인터페론 및 인터류킨으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
[00257] 하기 번호가 붙여진 문단 중 하나 이상에 의해 부가적인 예시적 구체예가 설명될 수 있다:
1. 암 환자가 백금산염 또는 탁산에 비해 자가-조립된 초분자 입자에 대해 더 개선된 반응을 나타낼 가능성을 예측하는 방법으로서, 상기 방법은 환자로부터 수득된 샘플 중의 1종 이상의 유전자의 발현 수준을 분석하고; 및 상기 환자가 긍정적인 반응을 나타낼 가능성을 예측하는 것을 포함하되, 여기서; 레퍼런스 또는 대조군에 비해 CAV1, CAV2, CAV3, LDLR, SMAD7, SMURF2, NEDD4, 또는 PRKCA로부터 선택왼 1종 이상의 유전자의 증가된 발현 수준은 자가-조립된 초분자 입자를 포함하는 치료에 대해 긍정적인 반응의 가능성과 긍정적으로 상관된 것인 방법.
2. 문단 1에 있어서, 1종 이상의 유전자는 EEA1, SRSF5, SMAD2, SNX3, PLCD1, OSBP, DNM1, DNM2, DNM3, SGK3, FAPP1, SMAD7, SMURF2, NEDD4, PRKCA, CDH-1, LDLR, CP, CD36, LYN, FLOT-1, FLOT-2, CA4, APOE, CAV1, CAV2, CAV3, LMAN2, LAT 및 STOM으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
3. 문단 1 또는 2에 있어서, 1종 이상의 유전자의 정규화된 발현 수준을 얻기 위해, 1종 이상의 레퍼런스 유전자의 발현 수준에 대해 1종 이상의 유전자의 발현 수준을 정규화시키는 것인 방법.
4. 문단 1-3 중 어느 하나에 있어서, 1종 이상의 유전자의 발현 수준은 1종 이상의 유전자의 RNA 전사체의 수준인 것인 방법.
5. 문단 1-4 중 어느 하나에 있어서, 1종 이상의 유전자의 발현 수준은 1종 이상의 유전자의 폴리펩타이드 수준인 것인 방법.
6. 문단 1-5 중 어느 하나에 있어서, 1종 이상의 유전자의 RNA 전사체의 수준은 역전사 폴리머라제 연쇄 반응 (RT-PCR)을 이용하여 분석되는 것인 방법.
7. 문단 1-6 중 어느 하나에 있어서, 샘플은 생검 샘플인 것인 방법.
8. 문단 1-7 중 어느 하나에 있어서, 샘플은 종양 세포인 것인 방법.
9. 문단 1-8 중 어느 하나에 있어서, 샘플은 고정되어, 왁스-포매된 조직 샘플인 것인 방법.
10. 문단 1-9 중 어느 하나에 있어서, 대상자에게 초분자 조합 치료제를 투여하는 것을 더 포함하는 것인 방법.
[00258] 본 발명에 개시된 다양한 측면의 부가적인 예시적 구체예들을 하기 하나 이상의 번호 매긴 문단들에 의해 설명할 수 있다:
1. 지질에 컨쥬게이트된 탁산을 포함하는 컨쥬게이트로서, 좋기로는 탁산이 카바지탁셀, 파클리탁셀 또는 도세탁셀, 더욱 좋기로는 탁산이 카바지탁셀인 컨쥬게이트.
2. 문단 1에 있어서, 탁산은 링커를 통해 지질에 컨쥬게이트된 것인 컨쥬게이트.
3. 문단 2에 있어서, 링커는 직접 결합 또는 산소 또는 황과 같은 원자, 유닛 예컨대 NR1, C(O), C(O)O, C(O)NR1, SO, SO2, SO2NH 또는 원자 사슬, 예컨대, 치환되거나 치환되지 않은 알킬, 치환되거나 치환되지 않은 알케닐, 치환되거나 치환되지 않은 알키닐, 아릴알킬, 아릴알케닐, 아릴알키닐, 헤테로아릴알킬, 헤테로아릴알케닐, 헤테로아릴알키닐, 헤테로시클릴알킬, 헤테로시클릴알케닐, 헤테로시클릴알키닐, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로시클릴, 시클로알킬, 시클로알케닐, 알킬아릴알킬, 알킬아릴알케닐, 알킬아릴알키닐, 알케닐아릴알킬, 알케닐아릴알케닐, 알케닐아릴알키닐, 알키닐아릴알킬, 알키닐아릴알케닐, 알키닐아릴알키닐, 알킬헤테로아릴알킬, 알킬헤테로아릴알케닐, 알킬헤테로아릴알키닐, 알케닐헤테로아릴알킬, 알케닐헤테로아릴알케닐, 알케닐헤테로아릴알키닐, 알키닐헤테로아릴알킬, 알키닐헤테로아릴알케닐, 알키닐헤테로아릴알키닐, 알킬헤테로시클릴알킬, 알킬헤테로시클릴알케닐, 알킬헤테로시클릴알키닐, 알케닐헤테로시클릴알킬, 알케닐헤테로시클릴알케닐, 알케닐헤테로시클릴알키닐, 알키닐헤테로시클릴알킬, 알키닐헤테로시클릴알케닐, 알키닐헤테로시클릴알키닐, 알킬아릴, 알케닐아릴, 알키닐아릴, 알킬헤테로아릴, 알케닐헤테로아릴, 알키닐헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되되, 1개 이상의 메틸렌은 O, S, S(O), SO2, N(R1)2, C(O), 절단가능한 연결기, 치환되거나 치환되지 않은 아릴, 치환되거나 치환되지 않은 헤테로아릴, 치환되거나 치환되지 않은 헤테로시클릭에 의해 간섭 또는 종결될 수 있고; 여기서 R1은 수소, 아실, 지방족 또는 치환된 지방족인 것인 컨쥬게이트.
4. 문단 2 또는 3에 있어서, 링커는 적어도 1개의 절단가능한 기를 포함하는 것인 컨쥬게이트.
5. 문단 2-4 중 어느 하나에 있어서, 링커는 숙신산, 푸마르산, 프로파르길산, 에틸렌 글리콜, 디에틸렌 글리콜, 및 천연 또는 비천연 아미노산 중 1종 이상을 포함하는 것인 컨쥬게이트.
6. 문단 2-5 중 어느 하나에 있어서, 링커는 옥살산, 말론산, 숙신산, 글루타르산, 숙신산, 에틸렌 디아민, 천연 또는 비천연 아미노산, 에틸렌 글리콜, 디에틸렌 글리콜, 아세트산, 프로피온산, 부티르산, 발레르산, 아크릴산, 부-2-텐산, 펜-2-텐산, 헥-2-센산, 2-프로핀산, 부-2-틴산, 펜-2-틴산, 헥-2-신산, 에틸렌, 프로필렌, 1-부텐, 1-펜텐, 1-헥센, 아세틸렌, 프로핀, 부-1-틴, 펜-1-틴, 및 이들의 조합 중 적어도 1종을 포함하는 것인 컨쥬게이트.
7. 문단 2-6 중 어느 하나에 있어서, 링커는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 컨쥬게이트: -C(O)CH2CH2C(O)NHCH2CH2NHC(O)-; -C(O)CH2CH2C(O)NHCH2NHC(O)-; -C(O)CH2OCH2CH2-; -C(O)CH2CH2OCH2CH2-; -C(O)CH2OCH2CH2OCH2CH2-; -C(O)CH(R)NHC(O)CH2-, 여기서 R은 H, CH3, CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2, C(CH3)CH2CH3, 또는 CH2-페닐; -C(O)CH(R)NHC(O)CH2CH2-, 여기서 R은 H, CH3, CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2, C(CH3)CH2CH3, 또는 CH2-페닐; -C(O)CH(R)NHC(O)(CH2)nC(O)-, 여기서 R은 H, CH3, CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2, C(CH3)CH2CH3, 또는 CH2-페닐, 및 n은 1 , 2, 또는 3; -C(O)CH(R)NHC(O)CH2OCH2CH2 -, 여기서 R은 H, CH3, CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2, C(CH3)CH2CH3, 또는 CH2-페닐; -C(O)C=C(CH2)n-C(O)-, 여기서, n은 1, 2 또는 3; -C(O)C=C(CH2)n-, 여기서, n은 0, 1, 또는 2; -C(O)CH=CH(CH2)nC(O)-, 여기서, n은 0, 1, 2, 또는 3; -C(O)CH=CH(CH2)n-, 여기서, n은 1, 2, 또는 3; 및 -C(O)CH2CH2C(O)NHCH2C(O)-이다.
8. 문단 1-7 중 어느 하나에 있어서, 지질은 콜레스테롤; 1,3-프로판디올 디카프릴레이트/디카프레이트; 10-운데센산; 1--도트리아콘탄올; 1-헵타코산올; 1-노나코산올; 2-에틸 헥산올; 안드로스탄; 아라키드산; 아라키돈산; 아라키딜 알코올; 베헨산; 베헤닐 알코올; 캄풀 MCM C10; 카프르산; 카프릭 알코올; 카프릴 알코올; 카프릴산; 카프릴/카프르산 포화 지방 알코올 C12-C18의 에스테르; 카프릴/카프르 트리글리세라이드; 카프릴/카프르 트리글리세라이드; 세라마이드 포스포릴콜린 (스핑고미엘린, SPH); 세라마이드 포스포릴에탄올아민 (스핑고미엘린, Cer-PE); 세라마이드 포스포릴글리세롤; 세로플라스틱산; 세로트산; 세로트산; 세릴 알코올; 세테아릴 알코올; Ceteth-10; 세틸 알코올; 콜란; 콜레스탄; 콜레스테롤; 시스-11-에이코센산; 시스-11-옥타데센산; 시스-13-도코센산; 클루이틸 알코올; 디호모-γ-리놀렌산; 도코사헥산산; 난 레시틴; 에이코사펜타엔산; 에이코센산; 엘라이드산; 엘라이도리놀레닐알코올; 엘라이도리놀레일 알코올; 엘라이딜 알코올; 에루식산; 에루실 알코올; 에스트란; 에틸렌 글리콜 디스테아레이트 (EGDS); 게딕산; 게딜 알코올; 글리세롤 디스테아레이트 (I형) EP (Precirol ATO 5); 글리세롤 트리카프릴레이트/카프레이트; 글리세롤 트리카프릴레이트/카프레이트 (CAPTEX® 355 EP/NF); 글리세릴 모노카프릴레이트 (Capmul MCM C8 EP); 글리세릴 트리아세테이트; 글리세릴 트리카프릴레이트; 글리세릴 트리카프릴레이트/카프레이트/라우레이트; 글리세릴 트리카프릴레이트/트리카프레이트; 글리세릴 트리팔미테이트 (트리팔미틴); 헤나트리아콘틸산; 헤네이코실 알코올; 헤네이코실산; 헵타코실산; 헵타데칸산; 헵타데실 알코올; 헥사트리아콘틸산; 이소스테아르산; 이소스테아릴 알코올; 라세르산; 라우르산; 라우릴 알코올; 리그노세르산; 리그노세릴 알코올; 리노엘라이드산; 리놀레산; 리놀레닐 알코올; 리놀레일 알코올; 마르가르산; 미드(Mead); 멜리식산; 멜리실 알코올; 몬탄산; 몬타닐 알코올; 미리실 알코올; 미리스트산; 미리스톨산; 미리스틸 알코올; 네오데칸산; 네오헵탄산; 네오노난산; 네르본; 노나코실산; 노나데실 알코올; 노나데실산; 노나데실산; 올레산; 올레일 알코올; 팔미트산; 팔미톨레산; 팔미톨레일 알코올; 펠라곤산; 펠라곤 알코올; 펜타코실산; 펜타데실 알코올; 펜타데실산; 포스파티드산(포스파티데이트, PA); 포스파티딜콜린 (레시틴, PC); 포스파티딜에탄올아민 (세팔린, PE); 포스파티딜이노시톨 (PI); 포스파티딜이노시톨 비스포스페이트 (PIP2); 포스파티딜이노시톨 포스페이트(PIP); 포스파티딜이노시톨 트리포스페이트(PIP3); 포스파티딜세린 (PS); 폴리글리세릴-6-디스테아레이트; 프레그난; 프로필렌 글리콜디카프레이트; 프로필렌 글리콜 디카프릴로카프레이트; 프로필렌 글리콜 디카프릴로카프레이트; 프실산; 레시놀레아산; 레시놀레일 알코올; 사피엔산; 대두 레시틴; 스테아르산; 스테아리돈; 스테아릴 알코올; 트리코실산; 트리데실 알코올; 트리데실산; 트리올레인; 운데실 알코올; 운데실렌산; 운데실산; 바센산; α-리놀렌산; 및 γ-리놀렌산으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 컨쥬게이트.
9. 문단 1-8 중 어느 하나에 있어서, 지질은 콜레스테롤, 알파-토코페롤, 또는 지방산인 것인 컨쥬게이트.
10. 문단 1-9 중 어느 하나에 있어서, 컨쥬게이트는 컨쥬게이트 1-15 및 21-32로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 컨쥬게이트.
11. 문단 1-10 중 어느 하나에 기재된 컨쥬게이트를 포함하는 조성물.
12. 문단 11에 있어서, 조성물은 약 1% 내지 약 99% (w/w)의 컨쥬게이트를 포함하는 것인 조성물.
13. 문단 11 또는 12에 있어서, 조성물은 컨쥬게이트에 더해 제1 지질을 더 포함하는 것인 조성물.
14. 문단 13에 있어서, 제1 지질은 인지질인 것인 조성물.
15. 문단 13 또는 14에 있어서, 조성물은 제2 지질을 더 포함하는 것인 조성물.
16. 문단 15에 있어서, 제2 지질은 인지질인 것인 조성물.
17. 문단 14-16 중 어느 하나에 있어서, 인지질은 포스파티딜 콜린, 6 내지 22개의 탄소 원자를 갖는 아실기를 갖는 포스파티딜 콜린, 포스파티딜 에탄올아민, 포스파티딜 이노시톨, 포스파티드산, 포스파티딜 세린, 스핑고미엘린, 포스파티딜 글리세롤, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 조성물.
18. 문단 17에 있어서, 인지질은 포스파티딜콜린, 포스파티딜글리세롤, 레시틴, β,γ-디팔미토일-α-레시틴, 스핑고미엘린, 포스파티딜세린, 포스파티드산, N-(2,3-디(9-(Z)-옥타데세닐옥시))-프로-1-필-N,N,N-트리메틸암모늄 클로라이드, 포스파티딜에탄올아민, 리소레시틴, 리소포스파티딜에탄올아민, 포스파티딜이노시톨, 세팔린, 카르디올리핀, 세레브로사이드, 디세틸포스페이트, 디올레오일포스파티딜콜린, 디팔미토일포스파티딜콜린, 디팔미토일포스파티딜글리세롤, 디올레오일포스파티딜글리세롤, 팔미토일-올레오일-포스파티딜콜린, 디-스테아로일-포스파티딜콜린, 스테아로일-팔미토일-포스파티딜콜린, 디-팔미토일-포스파티딜에탄올아민, 디-스테아로일-포스파티딜에탄올아민, 디-미리스토일-포스파티딜세린, 디-올레일-포스파티딜콜린, 디미리스토일 포스파티딜 콜린 (DMPC), 디올레오일포스파티딜에탄올아민 (DOPE), 팔미토일올레오일포스파티딜콜린 (POPC), 계란 포스파티딜콜린 (EPC), 디스테아로일포스파티딜콜린 (DSPC), 디올레오일포스파티딜콜린 (DOPC), 디팔미토일포스파티딜콜린 (DPPC), 디올레오일포스파티딜글리세롤 (DOPG), 디팔미토일포스파티딜글리세롤 (DPPG), -포스파티딜에탄올아민 (POPE), 디올레오일-포스파티딜에탄올아민 4-(N-말레이미도메틸)-시클로헥산-1-카르복실레이트 (DOPE-mal), 1-스테아로일-2-올레오일 포스파티딜콜린 (SOPC), 1,2-디스테아로일-sn-글리셈-3-포스포에탄올아민 (DSPE), 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 조성물.
19. 문단 18에 있어서, 인지질은 SOPC인 것인 조성물.
20. 문단 16-18 중 어느 하나에 있어서, 제1 지질과 제2 지질은 약 10:1 내지 약 1:10의 비율인 것인 조성물.
21. 문단 13-20 중 어느 하나에 있어서, 조성물은 약 1% 내지 약 99%의 총 지질을 포함하는 것인 조성물.
22. 문단 13-21 중 어느 하나에 있어서, 조성물은 컨쥬게이트와 총 지질을 약 10:1 내지 약 1:10의 비율로 포함하는 것인 조성물.
23. 문단 11-22 중 어느 하나에 있어서, 조성물은 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)을 더 포함하는 것인 조성물.
24. 문단 23에 있어서, PEG는 조성물 중 한 성분에 컨쥬게이트된 것인 조성물.
25. 문단 23 또는 24에 있어서, PEG는 지질에 컨쥬게이트된 것인 조성물.
26. 문단 25에 있어서, PEG 컨쥬게이트된 지질은 PEG 컨쥬게이트된 디아실글리세롤 및 디알킬글리세롤, PEG- 컨쥬게이트된 포스파티딜에탄올아민 및 포스파티드산, PEG 컨쥬게이트된 세라마이드, PEG 컨쥬게이트된 디알킬아민, PEG 컨쥬게이트된 1,2-디아실옥시프로판-3-아민, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 조성물.
27. 문단 26에 있어서, PEG 컨쥬게이트된 지질은 1,2-디스테아로일-sn-글리셈-3-포스포에탄올아민-N-[아미노(폴리에틸렌 글리콜)-2000] (DSPE-PEG2000)인 것인 조성물.
28. 문단 11-27 중 어느 하나에 있어서, 표적화 리간드를 더 포함하는 것인 조성물.
29. 문단 28에 있어서, 표적화 리간드는 펩타이드, 폴리펩타이드, 단백질, 효소, 펩티도미메틱, 당단백질, 항체 (모노클로날 또는 폴리클로날) 및 이의 일부분 및 단편, 렉틴, 뉴클레오사이드, 뉴클레오타이드, 뉴클레오사이드 및 뉴클레오타이드 유사체, 핵산, 단당류, 이당류, 삼당류 올리고당, 다당류, 리포다당류, 비타민, 스테로이드, 호르몬, 코팩터(cofactors), 수용체, 수용체 리간드, 및 이의 유사체 및 유도체로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 조성물.
30. 문단 29에 있어서, 표적화 리간드는 암세포의 표면에서 발현되는 단백질, 수용체 또는 마커에 결합하는 것인 조성물.
31. 문단 28 또는 29에 있어서, 표적화 리간드는 조성물의 한 성분과 컨쥬게이트된 것인 조성물.
32. 문단 31에 이어서, 표적화 리간드는 지질 또는 PEG와 컨쥬게이트된 것인 조성물.
33. 문단 11-32 중 어느 하나에 있어서, 조성물은 컨쥬게이트에 더해 화학치료제를 더 포함하는 것인 조성물.
34. 문단 33에 이어서, 조성물은 약 1% 내지 약 99% (w/w)의 화학치료제를 포함하는 것인 조성물.
35. 문단 34에 있어서, 화학치료제는 of PI3K 저해제; 백금 화합물; 토포이소머라제 I 및 II의 저해제; 알킬화제; 미세관 저해제; 혈관신생 저해제; 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 조성물.
36. 문단 33-35 중 어느 하나에 있어서, 화학치료제는 PI3K 저해제, 백금 화합물, 저미시티빈; 알데스류킨; 알렘투주맙, 알리트레티노인; 알로퓨리놀; 알트레타민; 아미포스틴; 아나스트로졸; 삼산화비소; 아스파라기나제; BCG Live; 벡사로텐 캡슐; 벡사로텐 겔; 블레오마이신; 부술판 정맥제; 부술판오랄; 칼루스테론; 카페시타빈; 플라티네이트; 카르무스틴; 폴리페프로산 임플란트가 있는 카르무스틴; 셀레콕시브; 클로람부실; 클라드리빈; 시클로포스파미드; 시타라빈; 시타라빈 리포조말; 다카르바진; 닥티노마이신; 악티노마이신 D; 다르베포에틴 알파; 다우노루비신 리포조말; 다우노루비신 다우노마이신; 데니류킨 디피티톡스, 덱스라족산; 도세탁셀; 독소루비신; 독소루비신 리포조말; 드로모스타놀론 프로피오네이트; 엘리엇 B 용액; 에피루비신; 에포에틴 알파 에스트라무스틴; 에토포시드포스페이트; 에토포시드 (VP-16); 엑세메스탄; 필그라스팀; 플록스우리딘 (동맥내); 플루다라빈; 플루오로우라실 (5-FU); 풀베스트란트; 겜투주맙 오조가미신; 고세렐린 아세테이트; 히드록시우레아; 이브리투모맙 티욱세탄; 이다루비신; 이포스파미드; 이마티닙 메실레이트; 인터페론 알파-2a; 인터페론 알파-2b; 이리노테칸; 레트로졸; 류코보린; 레바미솔; 로무스틴 (CCNU); 메클로레타민 (니트로겐머스타드); 메게스트롤 아세테이트; 멜팔란 (L-PAM); 머캅토퓨린 (6-MP); 메스나; 메토트렉세이트; 메톡살렌; 미토마이신 C; 미토테인; 미토잔트론; 난드롤론; 펜프로피오네이트; 노페투모맙; LOddC; 오프렐베킨; 파미드로네이트; 페가데마제; 페가스파르가제; 페그필그라스팀; 펜토스타틴; 피포브로만; 플리카마이신; 미트라마이신; 포르피머 나트륨; 프로카르바진; 퀴나크린; 라스부리카제; 리툭시맙; 사르그라모스팀; 스트렙토조신; 탈부비딘 (LDT); 탈크; 타목시펜; 테모졸로미드; 테니포시드 (VM-26); 테스토락톤; 티오구아닌 (6-TG); 테오테파; 토포테칸; 토레미펜; 토시투모맙; 트라스투주맙; 트레티노인 (ATRA); 우라실 머스타드; 발루비신; 발토르시타빈 (모노발 LDC); 빈블라스틴; 비노렐빈; 졸레드로네이트; 및 이의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 조성물.
37. 문단 35 또는 36에 있어서, PI3K 저해제는 PI103; P1828; LY294002; 워르트만닌; 데메톡시비리딘; IC486068; IC87114; GDC-0941; 페리포신; CAL101; PX-866; IPI-145; BAY 80-6946; BEZ235; P6503; TGR1202; SF1126; INK1117; BKM120; IL147; XL765; 팔로미드 529; GSK1059615; ZSTK474; PWT33597; TG100-115; CAL263; GNE-447; CUDC-907; 및 AEZS-136, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 조성물.
38. 문단 33-37 중 어느 하나에 있어서, 화학치료제는 조성물의 한 성분과 컨쥬게이트된 것인 조성물.
39. 문단 38에 있어서, 화학치료제는 지질 또는 PEG에 컨쥬게이트된 것인 조성물.
40. 문단 39에 있어서, 화학치료제는 콜레스테롤과 컨쥬게이트된 것인 조성물.
41. 문단 40에 있어서, 지질 컨쥬게이트된 화학치료제는:
Figure pct00010
,
Figure pct00011
,
Figure pct00012
또는
Figure pct00013
인 것인 조성물.
42. 문단 11-41 중 어느 하나에 있어서, 조성물은 항-PD-1 항체, 항-PD-L1 항체 및 이의 조합을 포함하는 면역조절제를 더 포함하는 것인 조성물.
43. 문단 42에 있어서, 면역조절제는 지질에 컨쥬게이트된 것인 조성물.
44. 문단 43에 있어서, 면역조절제는 콜레스테롤에 컨쥬게이트된 것인 조성물.
45. 문단 11-44 중 어느 하나에 있어서, 조성물은 중성 지질, 양이온 지질, 음이온 지질, 양친성 지질, 스테롤, 프로그램가능한 융합 지질, 또는 이의 조합을 더 포함하는 것인 조성물.
46. 문단 11-45 중 어느 하나에 있어서, 조성물은 컨쥬게이트, 인지질, 및 PEG 컨쥬게이트된 지질을 포함하는 것인 조성물.
47. 문단 46에 있어서, 조성물은 컨쥬게이트, 인지질 및 PEG 컨쥬게이트된 지질을 약 10-0.1 : 10-0.1 : 10-0.1의 비율로 포함하는 것인 조성물.
48. 문단 46-47에 있어서, 인지질은 포스파티딜콜린이고 PEG 컨쥬게이트된 지질은 DSPE-PEG2000인 것인 조성물.
49. 문단 46-48 중 어느 하나에 있어서, 인지질은 포스파티딜콜린인 것인 조성물.
50. 문단 49에 있어서, 포스파티딜콜린은 SOPC, POPC, Egg PC, HSPC, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 조성물.
51. 문단 11-50 중 어느 하나에 있어서, 조성물은 리포좀, 에멀젼, 또는 미셀인 것인 조성물.
52. 문단 11-51중 어느 하나에 있어서, 조성물은 나노입자인 것인 조성물.
53. 문단 52에 있어서, 나노입자는 직경이 약 5 nm 내지 약 500 nm인 것인 조성물.
54. 문단 53에 있어서, 나노입자는 직경이 약 50 nm 내지 약 200 nm인 것인 조성물.
55. 문단 11-54 중 어느 하나에 있어서, 조성물은 약학적으로 허용되는 담체를 더 포함하는 것인 조성물.
56. 암 치료를 필요로 하는 대상자에게 문단 11-55 중 어느 하나의 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 암의 치료 방법.
57. 문단 56에 있어서, 암은 유방암; 난소암; 신경아교종; 위장관암; 전립선암; 암종, 폐암종, 간세포 암종, 고환암; 자궁경부암; 자궁내막암; 방광암; 두경부암; 폐암; 위식도암, 및 부인과암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
58. 문단 56에 있어서, 대상자에게 1종 이상의 부가적인 항암 요법을 공동-투여하는 것을 더 포함하는 것인 방법.
59. 문단 58에 있어서, 부가적인 요법은 외과수술, 화학요법, 방사선요법, 열요법, 면역요법, 호르몬요법, 레이저요법, 항혈관신생 요법, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
60. 문단 59에 있어서, 부가적인 요법은 환자에게 화학치료제를 투여하는 것을 포함하는 것인 방법.
61. 문단 56-60 중 어느 하나에 있어서, 대상자에게 면역조절제를 공동-투여하는 것을 더 포함하는 것인 방법.
62. 문단 61에 있어서, 면역조절제는 암세포에 대한 면역 반응을 활성화시키는 것인 방법.
63. 문단 62에 있어서, 면역조절제는 내추럴 킬러 세포, 림포카인-활성화된 킬러 세포, 세포독성 T 세포 및 수지상 세포, 항-PD-L1 항체, 항-PD-1 항체, 항-CD52 항체, 항-VEGF-A 항체, 항-CD30 항체, 항-EGFR 항체, 항-CD33 항체, 항-CD20 항체, 항-CTLA4 항체, 항-HER-2 항체, 인터페론 및 인터류킨으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
[00259] 본 발명의 구체예 설명은 그에 관한 설명으로 한정되거나 완전히 정밀한 형태로 한정지으려는 의도가 아니다. 설명 목적을 위해 본 발명에 설명된 개시 내용의 특정한 구체예 및 예시가 제공되었지만, 본 발명의 개시 범위 내에서 다양하고도 균등한 변형이 얼마든지 가해질 수 있으며 이는 당업자라면 쉽게 이해할 것이다. 예컨대, 방법 단계 또는 기능이 주어진 순서로 제시되었지만, 순서를 달리하여 별법 구체예를 실시하여 기능을 구현할 수도 있으며 또는 기능이 실제로 동시에 수행될 수도 있다. 본 발명의 교시 내용은 다른 방법이나 공정에도 적절히 응용될 수 있다. 본 발명에 설명된 다양한 구체예들을 조합하여 추가 구체예를 제공할 수도 있다. 본 발명의 여러 측면들을 필요에 따라 여러 조성물, 기능, 전술한 레퍼런스 개념을 이용하여 변형시킴으로서 본 발명의 또 다른 구체예를 제공할 수 있다. 이러한 변화 및 그 밖의 변화는 상세한 설명에 비추어 얼마든지 가해질 수 있다. 이러한 모든 변형 역시 첨부된 청구범위에 포괄되는 것으로 의도된다.
[00260] 전술한 구체예들의 어느 요소들이건 이들을 조합하거나 다른 구체예의 다른 요소로 치환할 수 있다. 또한, 본 발명의 구체예의 장점이 이러한 구체예 문맥성 설명되어 있지만, 다른 구체예들 역시 이러한 장점을 나타낼 수 있으며 본 발명의 범위 내에 속하기 위해 모든 구체예들이 반드시 그러한 장점을 나타내야만 하는 것은 아니다.
실시예
[00261] 다음 실시예들은 본 발명의 몇몇 구체예 및 측면을 더욱 구체적으로 설명하는 것이다. 통상의 기술자에게는 본 발명의 정신이나 범위를 변경함이 없이 다양한 변형, 부가, 치환이 행해질 수 있음과, 이러한 변형 및 변화 역시 첨부된 청구범위에 정의된 본 발명의 범위에 포괄되는 것임이 자명할 것이다. 다음 실시예들은 어떠한 식으로든 본 발명을 한정하는 것이 아니다.
실시예 1
[00262] 탁산-지질 컨쥬게이트 1에서 약물 카바지탁셀을 숙신산 및 에틸렌 디아민을 포함하는 링커를 통해 콜레스테롤에 컨쥬게이트시킨다. 콜레스테롤 및 에틸렌 디아민의 하나의 말단은 카바메이트 연결을 통해 공유결합되며 또 다른 말단은 아미드 결합을 통해 숙신산에 커플링된다. 숙신산 및 카바지탁셀의 C-2' 히드록실기는 에스테르 결합을 통해 커플링된다.
Figure pct00014
[00263] 탁산-지질 컨쥬게이트 2에서 약물 카바지탁셀은 숙신산 및 천연 또는 비천연 아미노산으로 이루어진 링커를 통해 콜레스테롤에 컨쥬게이트된다. 아미노산의 산 기는 에스테르 결합을 통해 콜레스테롤에 연결되고 아민기는 아미드 결합을 통해 숙신산에 연결된다. 카바지탁셀 C-2' 히드록실기는 에스테르 결합을 통해 숙신산에 연결된다.
Figure pct00015
[00264] 탁산-지질 컨쥬게이트 3에서 약물 카바지탁셀은 숙신산 및 천연 또는 비천연 아미노산을 포함하는 링커를 통해 알파 토코페롤에 컨쥬게이트된다. 아미노산의 산 기는 에스테르 결합을 통해 알파 토코페롤에 연결되는 반면 아민기는 아미드 결합을 통해 숙신산에 연결된다. 카바지탁셀 C-2' 히드록실기는 에스테르 결합을 통해 숙신산에 연결된다.
Figure pct00016
[00265] 탁산-지질 컨쥬게이트 4에서 약물 카바지탁셀은 에틸렌 글리콜 및 아세트산을 포함하는 링커를 통해 콜레스테롤에 컨쥬게이트된다. 에틸렌 글리콜의 한쪽 말단은 에테르 결합을 통해 콜레스테롤에 연결되고 다른 히드록실기는 메틸렌 스페이서를 경유하여 산 기에 연결된다. 카바지탁셀의 C-2' 히드록실기에 연결된 산 기는 에스테르 결합을 통해 커플링된다.
Figure pct00017
[00266] 탁산-지질 컨쥬게이트 5에서 약물 카바지탁셀은 에틸렌 글리콜 및 아크릴산을 포함하는 링커를 통해 콜레스테롤에 컨쥬게이트된다. 에틸렌 글리콜의 한쪽 말단은 에테르 결합을 통해 콜레스테롤에 연결되고 다른 히드록실기는 2개의 메틸렌 유닛을 통해 산 기에 연결된다. 카바지탁셀의 C-2' 히드록실기에 연결된 산 기는 에스테르 결합을 통해 커플링된다.
Figure pct00018
[00267] 탁산-지질 컨쥬게이트 6에서 약물 카바지탁셀은 디에틸렌 글리콜 및 아세트산을 포함하는 링커를 통해 콜레스테롤에 컨쥬게이트된다. 디에틸렌 글리콜의 한쪽 말단은 에테르 결합을 통해 콜레스테롤에 연결되고 또 다른 히드록실기는 메틸렌 스페이서를 통해 산 기에 연결된다. 카바지탁셀의 C-2' 히드록실기에 연결된 산 기는 에스테르 결합을 통해 커플링된다.
Figure pct00019
[00268] 탁산-지질 컨쥬게이트 7에서 약물 카바지탁셀은 소수성 아미노산 및 글리콜산을 포함하는 링커를 통해 콜레스테롤에 컨쥬게이트된다. 글리콜산의 히드록실기는 에테르 결합을 통해 콜레스테롤에 연결되고 산 말단은 아미노산의 아민기와의 아미드 결합을 통해 연결된다. 카바지탁셀의 C-2' 히드록실기는 에스테르 결합을 통해 아미노산의 산 기에 연결된다.
Figure pct00020
[00269] 부가적인 탁산-지질 컨쥬게이트:
Figure pct00021
Figure pct00022
Figure pct00023
Figure pct00024
Figure pct00025
Figure pct00026
Figure pct00027
Figure pct00028
[00270] 파클리탁셀-지질 컨쥬게이트(16 및 17)
Figure pct00029
Figure pct00030
[00271] 도세탁셀-지질 컨쥬게이트(18-20 및 33) 및 카바지탁셀-지질 컨쥬게이트(21-32)
Figure pct00031
Figure pct00032
Figure pct00033
Figure pct00034
Figure pct00035
Figure pct00036
Figure pct00037
Figure pct00038
실시예 2: 콜레스테롤 카바지탁셀 컨쥬게이트 1의 합성
Figure pct00039
[00272] 단계 a: 디클로로메탄 (50 mL) 중 콜레스테릴 클로로포르메이트1 .01 (5g, 11.13 mmol)의 용액에 디클로로메탄 (40 mL) 중 에틸렌디아민(22.2 mL)의 빙냉 용액을 45분에 걸쳐 적가하고 동일한 온도에서 1 시간 교반하였다. 아이스배쓰를 제거하고 반응 혼합물을 실온에서 20시간 더 교반하였다. 반응 완료 후 (TLC로 체크함) 반응 혼합물을 물로 급냉(quenched)하고 디클로로메탄 (4x50 mL)으로 추출한 다음 유기층을 무수 Na2SO4로 건조 및 감압 농축하였다. 이동상으로서 메탄올-클로로포름을 이용하여 실리카겔 크로마토그래피에 의해 잔사를 정제하여 중간체 1.02를 80% 수율로 얻었다. 1.02의 1 H NMR ( 500 MHz , CDCl 3 ) δ: 5.30 (s, 1H), 5.05 (s, 1H), 4.42 (s, 1H), 3.18 (s, 2H), 2.79 (s, 2H), 2.35- 2.05 (m, 4H), 2.0-1.85 (m, 2H), 1.85-1.7 (m, 3H), 1.67-0.78 (m, 33H of 콜레스테롤 백본), 0.70 (bs, 3H). 1.02의 13 C NMR ( 125 MHz , CDCl 3 ) δ: 156.48, 139.84, 122.46, 77.23, 76.98, 76.73, 74.41, 56.71, 56.20, 50.04, 43.02, 42.32, 41.51, 39.76, 39.51, 38.56, 37.01, 36.56, 36.19, 35.78, 31.89, 28.20, 28.17, 27.98, 24.27, 23.85, 22.80, 22.76, 22.54, 22.52, 21.05, 19.31, 18.71, 11.84. 1.02의 IR (KBr) δ: 1363.9, 1338.8, 2945.3, 2891.3, 2868.2, 2850.8, 1716.7, 1697.4, 1546.9, 1535.3, 1460.1, 1369.5, 1247.9, 1018.4 cm- 1 ESIMS m/z = 472 [M+Na]+ for [C30H52N2O2Na].융점: 163℃.
[00273] 단계 b: 건조 디클로로메탄 (20 mL) 중 중간체 1.02 (1.0 g, 2.12 mmol)의 빙냉 용액에 피리딘(3.41 mL, 42.3 mmol)을 첨가하고 질소 분위기 하에서 20분간 교반하였다. 무수 숙신산 (1.06 g, 10.6mmol)을 반응 혼합물에 첨가하고 실온에서 다시 12 시간 교반하였다. 반응 완결 후 반응 혼합물을 클로로포름 (50 mL)으로 희석하고 0.1N HCl (3 x 100 mL) 및 염수 (1 x 100 mL)로 연속 세척하였다. 유기층을 무수 황산나트륨으로 건조, 감압 농축한 다음 잔사를 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 중간체 1.03을 우수한 수율로 얻었다 (1.06g, 87%). 1.03의 1 H NMR ( 500 MHz , CDCl 3 ) δ:6.79 (s, 1H), 6.23 (s, 1H), 5.39 (s, 1H), 5.17 (s, 1H), 4.50 (bs, 1H), 3.38-3.23 (m, 4H), 2.72 (bs, 2H), 2.56 (bs, 2H), 2.41-2.25 (m, 2H), 2.08-1.94 (m, 2H), 1.94-1.80 (m, 3H),1.67-0.78 (m, 33H), 0.70 (bs, 3H). 1.03의 13 C NMR ( 125 MHz , CDCl 3 ) δ:173.63, 166.59, 157.03, 139.55, 122.30, 74.49, 56.50, 55.93, 49.84, 49.03, 48.87, 48.71, 42.11, 39.53, 39.31, 38.31, 36.77, 36.36, 35.98, 35.60, 31.69, 31.66, 30.38, 29.06, 28.02, 27.91, 27.80, 24.07, 23.61, 22.56, 22.30, 20.83, 19.07, 18.47, 11.62. 1.03의 IR (KBr) δ: 3313.7, 3267.4, 3107.3, 3080.3, 2953.0, 2935.6, 2906.7, 2889.4, 2866.2, 2850.8, 1707.0, 1649.1, 1550.8, 1533.4, 1467.8, 1415.8, 1338.6, 1246.0, 1193.9 1149.6, 1103.3, 1031.9 cm- 1 ESIMS m/z = 595.4 [M+Na]+for [C35H56N2O5Na]+.융점: (160-170)℃.
[00274] 단계 c: 질소 분위기 하 0℃에서 10 mL 단일 목 둥근바닥 플라스크에 무수 CH2Cl2 (3 mL) 중 산 중간체 1.03 (68 mg, 0.1196 mmol)를 첨가하였다. 이 차가운 용액에 DIPC (18 μL, 0.1196 mmol)와 이어서 DMAP (14.6 mg, 0.1196 mmol)를 첨가하고 동일한 온도에서 1 시간 교반하였다. 이 활성화된 산 용액에 카바지탁셀 (50 mg, 0.1196 mmol)을 첨가하고 실온에서 3시간 더 교반한 다음 TLC로 체크하였다. 반응 완결 후 반응 혼합물을 물로 급냉하고, CH2Cl2로 추출, 무수 황산나트륨으로 건조, 및 감압 농축한 다음 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 신규한 탁산 1을 92% 수율로 수득하였다. 1의 1 H NMR ( 500 MHz , CDCl 3 ) δ:8.05 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.56 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.45 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 7.38 - 7.17 (m, 5H), 6.34 (s, 1H), 6.14 (bs, 1H), 5.66-5.57 (bs, 1H), 5.57 (d, J = 6.5 Hz, 1H), 5.41 (bs, 1H), 5.34 (s, 1H), 5.25 (s, 1H), 5.16 (s, 1H), 4.93 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 4.75 (s, 1H), 4.42 (m, 1H), 4.24 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 4.10 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 3.88-3.68 (m, 3H), 3.37 (s, 3H), 3.35-3.14 (m, 5H), 3.23 (s, 3H), 2.75-2.57 (m, 4H), 2.48-2.10 (m, 9H), 2.00-0.73 (m, 57H), 0.64 (s, 3H); 1의 13 C NMR ( 100 MHz , CDCl 3 ) δ:205.04, 171.82, 171.48, 169.72, 168.43, 166.97, 155.26, 139.65, 139.54, 134.88, 133.58, 130.15, 129.24, 128.87, 128.59, 128.29, 126.56, 122.60, 84.14, 82.44, 81.45, 80.61, 80.36, 78.82, 76.40, 74.69, 72.07, 57.06, 56.76, 56.64, 56.08, 49.97, 47.26, 43.27, 42.38, 42.26, 40.63, 40.52, 39.67, 39.47, 38.49, 36.92, 36.52, 36.13, 35.75, 34.80, 31.96, 31.86, 31.81, 30.92, 29.40, 28.14, 27.98, 26.63, 24.25, 23.78, 23.36, 22.79, 22.74, 22.53, 20.99, 19.29, 18.67, 14.42, 11.82, 10.35. 1의 IR ( KBr ) δ: 3342.7, 2965.6, 2959.9, 2939.6, 2905.8, 2869.2, 2853.8, 2825.8, 1714.7, 1660.78, 1643.4, 1529.6, 1493.9, 1466.9, 1453.4, 1367.5, 1266.3, 1247.0, 1168.9, 1103.3, 1071.5, 1060.8, 1027.1, 998.2 cm-1.ESIMS m/z = 1412.6 [M+Na]+for [C79H111N3O18Na]+. 융점: 143℃. 비선광도
Figure pct00040
Figure pct00041
= - 14 (C = 0.1, 메탄올).
실시예 3: 카바지탁셀 컨쥬게이트 2의 합성
[0004] 단계 a: 질소 분위기 하 250 mL 단일 목 둥근바닥 플라스크에서 BocHNCH2COOH (2g, 11.417 mmol), 콜레스테롤 2.01 (4.414g, 11.417 mmol) 및 DMAP (697 mg, 5.708 mmol)를 무수 디클로로메탄 (75 mL)에 첨가하고 0℃에서 20분간 교반하였다. 이 냉각 용액에 DCC (2.591g, 12.558 mmol)를 첨가하고 실온에서 다시 24 시간 교반한 다음 TLC를 체크하였다. 반응 완결 후 반응 혼합물을 물로 급냉하고, CHCl3로 추출, 무수 황산나트륨으로 건조, 농축한 다음 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 중간체 2.02를 60% 수율로 수득하였다. 2.02의 1 H NMR ( 400 MHz , CDCl 3 ) δ:5.36 (d, J = 4.3 Hz, 1H), 4.98 (s, 1H), 4.72 - 4.59 (m, 1H), 3.86 (d, J = 5.3 Hz, 2H), 2.36-0.65 (m, 52H of 콜레스테롤 백본). 2.02의 13 C NMR ( 125 MHz , CDCl 3 ) δ:169.72, 155.67, 139.35, 122.90, 79.86, 75.15, 56.68, 56.14, 50.01, 42.66, 42.30, 39.71, 39.51, 38.01, 36.91, 36.55, 36.18, 35.77, 31.88, 31.84, 28.31, 28.20, 27.99, 27.69, 24.26, 23.82, 22.79, 22.54, 21.02, 19.26, 18.70, 11.84. 2.02의 IR ( KBr ) δ:3384.1, 2938.7, 2868.7, 1754.2, 1726.7, 1696.4, 1677.9, 1538.3, 1519.4, 1467.3, 1424.3, 1366.9, 1283.9, 1270.1, 1202.3, 1171.9, 1055.6, 1028.8, 1007.4 cm- 1 ESIMS m/z = 566.2 [M+Na]+ for [C34H57NO4Na]+ 및 1109.5 [2M+Na]+ for 2[C34H57NO4]Na+. 융점 : 84℃.
Figure pct00042
[00276] 단계 b: 질소 분위기 하 0℃에서 25 mL 단일 목 둥근바닥 플라스크에 중간체 2.02 (1 g 조질, 1.838mmol)를 무수 CH2Cl2 (5 mL)에 첨가하였다. 이 반응 혼합물에 TFA (2 mL)를 5분에 걸쳐 서서히 첨가하고 실온에서 3 시간 교반한 다음 TLC로 체크하였다. 반응 완결 후 용매를 감압 제거하고 조질의 아민 화합물 2.03을 추가 jd제 없이 다음 반응에 이용하였다.
[00277] 단계 c: 이전 반응로부터 수득한 조질의 아민 화합물 2.03을 디클로로메탄 (20 mL)으로 희석하고 0℃로 냉각하였다. 이 빙냉 용액에 DIPEA (3 mL, 17.12 mmol)를 서서히 첨가하고 이어서 무수 숙신산 (856 mg, 8.56 mmol)을 첨가한 다음 실온에서 12 시간 교반하였다. 반응 완결 후 반응 혼합물을 물로 급냉하고 (10 mL), 1% HCl 용액으로 세척하고, CH2Cl2 (3 X 10 mL)로 추출한 다음, 무수 Na2SO4로 건조하고 실리카겔 정제하여 순수한 산 중간체2 .04를 88% 수율로 얻었다. 2.04의 1 H NMR ( 500 MHz , CDCl 3 ) δ: 6.47 (t,J = 5 Hz, 1H), 5.35 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.65 (m,1H), 3.99 (d, J = 5.1 Hz, 2H), 2.68 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 2.56 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 2.37-0.57 (m, 43H of 콜레스테롤 백본). 2.04의 13 C NMR (125 MHz, CDCl 3 ) δ:176.67, 172.28, 169.49, 139.18, 122.99, 75.57, 56.61, 56.07, 49.91, 42.24, 41.68, 39.64, 39.45, 37.89, 36.82, 36.49, 36.12, 35.76, 31.84, 31.75, 30.29, 29.66, 29.30, 28.19, 27.97, 27.59, 24.23, 23.80, 22.80, 22.53, 20.97, 19.24, 18.67, 11.81. 2.04의 IR ( KBr ) δ:3311.1, 2935.7, 2902.8, 2850.8, 1751.4, 1748.5, 1745.5, 1637.6, 1544.9, 1203.6 cm- 1.MAL디 - TOF MS m/z = 566.29 [M+Na]+for [C33H53NO5Na]+ 및 582.27 [M+K]+for [C33H53NO5K]+. 융점: (170-180)℃
[00278] 단계 d: 질소 분위기 하 0℃에서 10 mL 단일 목 둥근바닥 플라스크에 산 중간체 2.04 (137 mg, 0.2392 mmol)를 무수 CH2Cl2 (10 mL)에 첨가하였다. 이 차가운 용액에 DMAP (29 mg, 0.2392 mmol) 및 이어서 DIPC (37 μL, 0.2392 mmol)를 첨가하고 동일한 온도에서 1 시간 교반하였다. 이 활성화된 산 용액에 카바지탁셀 (100 mg, 0.1196 mmol)을 첨가하고 실온에서 다시 4 시간 교반한 다음 TLC로 체크하였다. 반응 완결 후 반응 혼합물을 물로 급냉하고, CHCl3로 추출하고, 무수 황산나트륨으로 건조, 농축한 다음 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 컨쥬게이트 2를 얻고 이것을 아세톤-헥산에서 추가 침전시켜 순수한 생성물을 76% 수율로 얻었다. 2의 1 H NMR ( 400 MHz , CDCl 3 ) δ: 8.10 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.61 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 7.50 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 7.39 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 7.31 (d, J = 7.5 Hz, 3H), 6.19 (bs, 2H), 5.62 (m, 2H), 5.44 (bs, 1H), 5.38 (d, J = 4.1 Hz, 1H), 5.30 (s, 1H), 4.98 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 4.81 (s, 1H), 4.72 - 4.61 (m, 1H), 4.29 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.15 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 3.99 (m, 2H), 3.92-3.77 (m, 5H), 3.42 (s, 3H), 3.29 (s, 3H), 2.85 - 2.63 (m, 3H), 2.58-2.50 (m, 2H), 2.45-2.30 (m, 5H), 2.29-0.77 (m, 60H), 0.67 (s, 3H). 2의 13 C NMR ( 100 MHz , CDCl 3 ) δ:204.98, 171.64, 170.95, 169.67, 168.43, 166.98, 155.24, 139.55, 139.23, 137.28, 134.93, 133.56, 130.16, 129.29, 128.86, 128.59, 128.26, 126.56, 123.05, 84.17, 82.48, 81.49, 80.63, 80.40, 78.84, 76.42, 75.58, 74.74, 72.07, 57.12, 57.06, 56.78, 56.67, 56.10, 54.23, 50.04, 47.31, 43.28, 42.28, 41.67, 39.69, 39.48, 37.97, 36.90, 36.55, 36.14, 35.75, 34.86, 31.98, 31.87, 31.80, 30.69, 29.36, 28.17, 27.99, 27.68, 26.64, 24.24, 23.79, 22.79, 22.74, 22.54, 21.01, 19.27, 18.69, 14.45, 11.83, 10.35. IO -502_01의 IR ( KBr ) δ:3341.8, 2967.6, 2959.9, 2938.6, 2905.8, 2870.2, 2825.8, 1724.4, 1673.5, 166.5, 1661.7, 1615.4, 1573.9, 1563.3, 1523.8, 1519.0, 1497.7, 1494.9, 1464.0, 1455.3, 1440.8, 1384.9, 1326.1, 1316.4, 1267.2, 1247.0, 1224.8, 1194.9, 1169.8, 1130.3, 1103.3, 1071.5, 1060.8, 1027.1, 1018.4, 997.2, 949.0, 920.0 cm- 1.ESIMS m/z = 1383.6 [M+Na]+for [C78H108N2O18Na]+.융점: 141℃. 비선광도
Figure pct00043
Figure pct00044
= - 16 (C = 0.1, 메탄올).
실시예 4: 콜레스테롤 카바지탁셀 컨쥬게이트 6의 합성
Figure pct00045
[00279] 단계 b: 디옥산 (30 mL) 중 중간체6.02 (조질 6 g, 0.011 mol)의 용액에 디에틸렌 글리콜 (20 mL)을 첨가하고 6 시간동안 환류시켰다. 반응 완결 후 반응 혼합물을 물로 급냉하고 (20 mL) 및 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 물 (3 X 50 mL) 및 염수 (20 mL)로 연속 세척하고 무수 Na2SO4로 건조시켰다. 유기층을 감압 농축하고 이동상으로서 메탄올-클로로포름을 이용하여 실리카겔 크로마토그래피 정제하여 중간체 6.03을 점성 액체로서 수득하였다 (2 단계에 걸쳐 52%). 6.03의 1 H NMR( 500 MHz , CDCl 3 ) δ: 5.34-5.31 (m, 1H), 3.73-3.69 (m, 2H), 3.67-3.58 (m, 6H), 3.18 (tt, J = 11.3, 4.5 H, 1H), 2.42-0.61 (m, 43H, 콜레스테롤 백본);
[00280] 6.03의 13CNMR (125 MHz, CDCl3) δ: 140.69, 121.73, 79.62, 72.50, 70.72, 67.38, 61.81, 56.73, 56.11, 50.13, 42.29, 39.74, 39.48, 38.91, 37.15, 36.83, 36.15, 35.76, 31.91, 31.84, 28.26, 28.21, 27.99, 24.26, 23.79, 22.80, 22.54, 21.03, 19.35, 18.69, 11.83;ESIMS m/z = 497.1 [M+Na]+ for [C31H54O3Na].
[00281] 단계 c: 질소 분위기 하 100 mL 단일 목 둥근바닥 플라스크에서 NaH (594 mg, 14.84 mmol)를 THF (10 mL)에 첨가하였다. 반응물을 아이스배쓰를 이용하여 0℃로 냉각하고 THF (15 mL) 중 중간체 6.03 (2.35 g, 4.95 mmol)의 용액을 서서히 첨가하였다. 결과적인 용액을 1 시간 교반하고 에틸 브로모아세테이트를 서서히 첨가하고 실온에서 6 시간 교반한 다음 TLC로 체크하였다. 반응 완결 후 반응 혼합물을 0℃로 냉각하고, 물로 급냉한 다음, 에틸 아세테이트 (3 X 15 mL)로 추출하였다. 유기층을 물로 세척하고 무수 Na2SO4로 건조, 농축하고 잔사를 실리카겔 크로마토그래피 정제하여 중간체 6.04를 46% 수율로 얻었다. 6.04의 1 H NMR( 500 MHz , CDCl 3 ) δ: 5.34-5.29 (m, 1H), 4.19 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 4.14 (s, 2H), 3.73-3.66 (m, 4H), 3.62 (s, 4H), 3.16 (tt, J = 11.3, 4.4 H, 1H), 2.41-0.58 (m, 46H, 콜레스테롤 백본); 6.04의 13 CNMR ( 125 MHz , CDCl 3 ) δ: 170.49, 140.93, 121.53, 79.48, 70.87, 70.84, 70.66, 68.72, 67.23, 60.78, 56.74, 56.11, 50.14, 42.28, 39.74, 39.48, 39.01, 37.20, 36.83, 36.15, 35.76, 31.91, 31.85, 28.31, 28.21, 27.98, 24.26, 23.79, 22.80, 22.53, 21.03, 19.35, 18.68, 14.19, 11.82.ESIMS m/z = 583.2 [M+Na] for [C35H60O5Na].
[00282] 단계 d: 100 mL 단일 목 둥근바닥 플라스크에서 에스테르 중간체 6.04(1.272 g, 2.27 mmol)를 20 mL의 THF/H2O (3:1)에 첨가하고 0℃로 아이스배스에서 냉각하였다. 이 빙냉 용액에 LiOH (136 mg, 5.67 mmol)를 첨가하고 실온에서 4 시간 교반한 다음 TLC로 체크하였다. 반응 완결 후 반응 혼합물을 Na2HSO4로 산성화시키고 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조 및 진공 농축하고 컬럼 크로마토그래피 정제하여 순수한 산 중간체 6.05를 50% 수율로 수득하였다. 산 6.05의 1 H NMR ( 500 MHz , CDCl 3 ) δ: 5.31 (dd, J = 13.6, 10.7 Hz, 1H), 4.15 (s, 2H), 3.77-3.59 (m, 8H), 3.17 (tt, J = 11.3, 4.4 Hz, 1H), 2.45-0.85 (m, 41 H, from 콜레스테롤 백본), 070 (s, 3H); 산 6.05의 13 C NMR ( 125 MHz , CDCl 3 ) δ: 172.25, 140.82, 121.70, 79.68, 71.49, 71.04, 70.13, 68.87, 67.06, 56.80, 56.19, 50.20, 42.35, 39.81, 39.54, 38.97, 37.22, 36.88, 36.21, 35.80, 31.96, 31.91, 28.28, 28.25, 28.03, 24.31, 23.85, 22.82, 22.57, 21.09, 19.39, 18.74, 11.87.ESIMS m/z = 555.366 [M+Na]+ for [C33H56O3Na].
[00283] 단계 e: 질소 분위기 하 0℃에서 25 mL 단일 목 둥근바닥 플라스크에서 산 6.05 (25.46 mg, 0.047 mmol)를 무수 CH2Cl2 (5 mL)에 첨가하였다. 이 차가운 용액에 DIPC (7 μL, 0.0478 mmol) 및 이어서 DMAP (5.84 mg, 0.0478 mmol)를 첨가하고 동일한 온도에서 2 시간 교반하였다. 이 활성화된 산 용액에 카바지탁셀 (20 mg, 0.0239 mmol)를 첨가하고 실온에서 3 시간 더 교반하고 TLC로 체크하였다. 반응 완결 후 반응 혼합물을 물로 급냉하고, CHCl3으로 추출하고, 무수 황산나트륨으로 건조, 농축 및 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 컨쥬게이트 6을 92% 수율로 얻었다. 6의 1 H NMR( 400 MHz , CDCl 3 ) δ: 8.09 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 7.58 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 7.47 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 7.37 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 7.33-7.26 (m, 3H), 6.24 (t, J = 8.9 Hz, 1H), 5.73 (bs, 1H), 5.63 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 5.47 (bs, 1H), 5.35 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 5.29 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 4.97 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 4.80 (s, 1H), 4.33-4.24 (m, 1H), 4.22 (s, 1H), 4.18-4.09 (m, 2H), 3.92-3.79 (m, 2H), 3.79-3.54 (m, 8H), 3.41 (s, 3H), 3.28 (s, 3H), 3.17-3.05 (m, 1H), 2.74-2.62 (m, 1H), 2.42 (s, 3H), 2.37-0.73 (m, 66H from 콜레스테롤 백본), 0.64 (s, 3H); 6의 13 CNMR ( 100 MHz , CDCl 3 ) δ: 204.97, 169.84, 169.66, 168.00, 167.00, 155.30, 140.86, 139.50, 137.22, 134.99, 133.54, 130.16, 129.27, 128.89, 128.61, 128.21, 126.52, 121.58, 84.17, 82.50, 81.58, 80.66, 80.29, 79.51, 78.82, 77.32, 76.46, 74.69, 72.28, 70.88, 70.62, 68.16, 67.16, 57.07, 56.81, 56.75, 56.13, 54.11, 50.16, 47.33, 43.33, 42.29, 39.75, 39.49, 38.98, 37.19, 36.83, 36.16, 35.75, 34.95, 32.01, 31.92, 31.86, 28.29, 28.19, 28.15, 27.98, 26.63, 24.26, 23.79, 22.78, 22.53, 21.03, 20.99, 19.34, 18.69, 14.41, 11.82, 10.35. 6의 융점: 138-142℃.ESIMS m/z = 1372.5 [M+Na]+for [C78H111NO18Na]+ 비선광도
Figure pct00046
Figure pct00047
= - 15 (C = 0.1, 메탄올).
실시예 5: 콜레스테롤 카바지탁셀 컨쥬게이트 7의 합성
Figure pct00048
[00284] 단계 a: 디클로로메탄 (45 mL) 중 콜레스테롤 2.01(10 g, 0.026 mol)의 빙냉 용액에 피리딘 (15 mL)을 첨가하고 15분간 교반하였다. 이 용액에 p-톨루엔 설포닐 클로라이드 (9.8 g, 0.052 mol)를 첨가하고 0℃에서 6 시간 교반한 다음 TLC로 체크하였다. 반응 완결 후 반응 혼합물을 CHCl3 (20 mL)로 희석하고 1N HCl (3 X 50 mL) 및 염수 (20 mL)로 연속 세척하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조 및 진공 농축하여 중간체 7.01을 얻고 이를 추가 정제 없이 다음 반응에 직접 사용하였다.
[00285] 단계 b: 디옥산 (45 mL) 중 조질의 중간체 7.01 (10 g, 0.018 mol) 용액에 에틸렌 글리콜 (15 mL)을 첨가하고 4 시간 동안 환류시켰다. TLC로 체크하였다. 반응 완결 후 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하고 물 (3 X 50 mL) 및 염수 (20 mL)로 연속 세척하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조, 진공 농축하고 컬럼 정제하여 중간체 7.02를 2 단계에 걸쳐 55% 수율로 얻었다 7.02의 1 H NMR ( 400 MHz , CDCl 3 ) δ: 5.33 (d, J = 4 Hz, 1H), 3.70 (t, J = 4 Hz, 2H), 3.57 (t, J = 4 Hz, 2H), 3.23-3.12 (m, 1H), 2.42-0.56 (m, 44H 콜레스테롤 백본); 7.02의 13 C NMR(125 MHz, CDCl 3 ) δ: 140.71, 121.73, 79.45, 68.95, 62.07, 56.77, 56.17, 50.18, 42.32, 39.78, 39.51, 39.10, 37.17, 36.85, 36.18, 35.77, 31.93, 31.56, 28.41, 28.21, 27.99, 24.27, 23.82, 22.79, 22.54, 21.06, 19.35, 18.70, 11.84. 7.02의 IR ( KBr ) δ: 3452.2, 2932.9, 2862.7, 1632.5, 1466.2, 1365.8, 1275.5, 1110.6, 1062.8 cm-1. ESIMS m/z = 453.1 [M+Na]+ for [C29H50O2Na]+ 및 883.4 [2M+Na]+ for 2[C29H50O2]Na+ 7.02의 융점: 91℃
[00286] 단계 c: 아세톤-THF 혼합물 (30+5 mL) 중 중간체 7.02(1 g, 2.322 mmol)의 용액에 크롬산 (4 mL)을 실온에서 격렬히 교반하면서 1 시간 동안 적가하고 TLC로 체크하였다. 반응 완결 후 반응 혼합물을 실리카겔 박판을 통해 여과하고, 아세톤으로 세척한 다음 Na2SO4로 건조하고 감압 농축한 다음 물 (10 mL)로 세척하고 EtOAc (2 X 10 mL)로 추출하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조 농축 및 컬럼 정제하여 중간체 7.03을 83% 수율로 얻었다. 7.03의 1 H NMR ( 500 MHz , CDCl 3 ) δ: 5.42-5.36 (m, 1H), 4.18 (s, 2H), 3.38-3.29 (m, 1H), 2.43-0.65 (m, 43H, from 콜레스테롤 백본). 7.03의 13 C NMR ( 125 MHz , CDCl 3 ) δ: 173.95, 139.98, 122.33, 80.33, 65.14, 56.69, 56.10, 50.06, 42.27, 39.70, 39.48, 38.62, 36.95, 36.73, 36.14, 35.75, 31.88, 31.81, 29.67, 28.19, 28.03, 27.98, 24.25, 23.79, 22.80, 22.53, 21.02, 19.30, 18.68, 11.82. ESIMS m/z = 443.3 [M-1]+ for [C29H48O3].
[00287] 단계 d: 질소 분위기 하 0℃에서 50 mL 단일 목 둥근바닥 플라스크에서 산 중간체 7.03 (500 mg, 1.124 mmol)를 무수 CH2Cl2 (15 mL)에 첨가하였다. 이 차가운 용액에 EDCI (430 mg, 2.248 mmol) 및 이어서 HOBT (303 mg, 2.248 mmol)를 첨가하고 동일한 온도에서 1 시간 교반하였다. 이 활성화된 산 용액에 DIPEA (0.8 mL, 4.497) 및 이어서 글리신 메틸 에스테르 (282 mg, 2.248 mmol)을 첨가하고 실온에서 5 시간 더 교반한 다음 TLC로 체크하였다. 반응 완결 후 반응 혼합물을 물로 급냉하고, CHCl3으로 추출하고, 무수 황산나트륨으로 건조, 농축 및 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 중간체 7.04를 92% 수율로 얻었다. 7.04의 1 H NMR ( 500 MHz, CDCl 3 ) δ: 7.11 (s, 1H), 5.34 (s, 1H), 4.07 (s, 2H), 4.01 (s, 1H), 3.75 (s, 3H), 3.27-3.17 (m, 1H), 2.40-0.57 (m, 43H, 콜레스테롤 백본). 7.04의 13 C NMR ( 125 MHz , CDCl 3 ) δ: 170.66, 170.10, 140.05, 122.27, 80.29, 67.40, 56.69, 56.10, 52.38, 50.07, 42.29, 40.51, 39.71, 39.49, 38.87, 36.97, 36.76, 36.15, 35.76, 31.89, 31.83, 28.26, 28.21, 27.99, 24.26, 23.79, 22.80, 22.54, 21.04, 19.34, 18.69, 11.83.ESIMS m/z = 538.1 [M+Na]+for [C33H57NO4Na] 및 1053.3 [2M+Na]+ for 2[C33H57NO4]Na.
[00288] 단계 e: 50 mL 단일 목 둥근바닥 플라스크에서 에스테르 화합물 7.04 (560 mg, 1.086 mmol)을 THF / 물 (12 mL, 3:1)에 첨가하고 0℃로 냉각하였다. 이 빙냉 용액에 LiOH (136 mg, 3.258 mmol)을 첨가하고 실온에서 3 시간 교반한 다음 TLC로 체크하였다. 반응 완결 후 반응 혼합물을 포화 NaHSO4로 PH 3까지 산성화시키고 에틸 아세테이트 (3 X 10 mL)로 추출하였다. 유기층을 한데 모아 무수 Na2SO4로 건조하고 컬럼 정제하여 순수한 산 7.05을 우수한 수율 (390 mg, 65%)로 얻었다. 7.05의 1 H NMR ( 500 MHz , CDCl 3 ) δ: 7.20 (s, 1H), 5.34 (s, 1H), 4.10 (s, 1H), 4.03 (s, 1H), 3.29-3.17 (m, 1H), 2.39-0.61 (m, 43H, 콜레스테롤 백본). 7.05의 13 C NMR ( 125 MHz , CDCl 3 + 5μL CD3OD ) δ: 170.89, 170.82, 170.06, 139.97, 122.25, 80.28, 67.28, 56.64, 56.05, 50.02, 42.24, 40.47, 40.37, 39.66, 39.44, 38.80, 36.91, 36.71, 36.10, 35.72, 31.84, 31.78, 28.19, 28.16, 27.95, 24.21, 23.74, 22.75, 22.49, 20.99, 19.28, 18.64, 11.78. 7.05의 IR (KBr) δ: 3388.9, 2900.9, 2868.1, 2850.8, 2632.8, 1724.4, 1710.8, 1629.8, 1544.9, 1438.9, 1350.2, 1240.2, 1226.7, 1116.8cm- 1 ESIMS m/z = 500.3 [M]+for [C31H51NO4].
[00289] 단계 f: 질소 분위기 하 0℃에서 10 mL 단일 목 둥근바닥 플라스크에서 산 중간체 7.05 (23.9 mg, 0.0478 mmol)을 무수 CH2Cl2 (2 mL)에 첨가하였다. 이 차가운 용액에 DIPC (7 μL, 0.0478 mmol) 및 이어서 DMAP (5.84 mg, 0.0478 mmol)를 첨가하고 동일한 온도에서 1 시간 교반하였다. 이 활성화된 산 용액에 카바지탁셀 (20 mg, 0.0239 mmol)을 첨가하고 실온에서 3 시간 더 교반하고 TLC로 체크하였다. 반응 완결 후 반응 혼합물을 물로 급냉하고, CHCl3으로 추출하고, 무수 황산나트륨으로 건조, 농축 및 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 신규한 탁산 7을 75% 수율로 수득하였다. 7의 1 H NMR ( 400 MHz , CDCl 3 ) δ: 8.11 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 7.61 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.50 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 7.40 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 7.33 (d, J =7 Hz, 1H), 7.28 (d, J = 7.4 Hz, 2H), 7.05 (t, J = 5.5 Hz, 1H), 6.25 (t,J = 7 Hz, 1H), 5.64 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 5.48 (bs, 1H), 5.35 (s, 3H), 4.99 (d, J = 9.4 Hz, 1H), 4.82 (s, 1H), 4.31 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 4.21 - 4.10 (m, 3H), 4.00 (s, 2H), 4.03-3.93 (m, 1H), 3.89 (dd, J = 10.6, 6.5 Hz, 1H), 3.83 (t,J = 9.2 Hz, 2H), 3.44 (s, 3H), 3.30 (s, 3H),3.30-3.17 (m, 1H), 2.70 (m, 1H), 2.47-0.74 (m, 66H), 0.68 (d, J = 8.8 Hz, 2H). 7의 13 CNMR ( 100 MHz , CDCl 3 ) δ: 205.02, 170.73, 169.76, 169.01, 167.94, 167.12, 155.17, 140.08, 139.44, 135.18, 133.67, 130.25, 129.32, 129.11, 128.72, 128.48, 126.40, 122.43, 84.24, 82.59, 81.68, 80.75, 80.67, 80.38, 78.95, 75.22, 74.81, 72.45, 67.40, 57.25, 57.16, 56.91, 56.78, 56.21, 50.16, 47.42, 43.43, 42.38, 40.39, 39.79, 39.58, 38.97, 37.04, 36.85, 36.24, 35.84, 35.01, 32.10, 31.99, 31.93, 28.29, 28.21, 28.08, 26.75, 24.35, 23.89, 23.05, 22.88, 22.63, 22.41, 21.13, 21.08, 19.43, 18.78, 14.52, 11.92, 10.45. 7의 IR ( KBr ) δ: 1723.5, 1677.2, 1617.4, 1573.0, 1568.2, 1464.0, 1384.9, 1365.6, 1265.4, 1247.0, 1104.3 cm-1 7의 융점:155-160℃ESIMS m/z = 1341.6 [M+Na]+for C76H106N2O17Na. 비선광도
Figure pct00049
Figure pct00050
= - 27 (C = 0.1, 메탄올).
실시예 6: 콜레스테롤 탁산 컨쥬게이트 8의 합성
[00290] 단계 a: 질소 분위기 하 0℃에서 250 mL 단일 목 둥근바닥 플라스크에서 콜레스테롤 (10 g, 25.862 mmol)을 THF (60 mL)에 첨가하였다. 소듐 하이드라이드 (2.068 g, 51.724 mmol) 소량(by pinch) 반응 혼합물에 10분에 걸쳐 첨가하였다. 결과적인 용액을 20분간 교반하고 THF (20 mL) 중 메틸 아크릴레이트 (11.6 mL, 129.31 mmol)을 서서히 적가하고 0℃에서 2 시간 교반한 다음 TLC로 체크하였다. 반응 완결 후 반응 혼합물을 0℃로 냉각하고 물로 급냉하고 에틸 아세테이트로 추출한 다음 무수 Na2SO4로 건조, 농축 및 실리카겔 크로마토그래피로 컬럼 정제하여 생성물 8.01을 20% 수율로 얻었다.
[00291] 단계 b: 50 mL 단일 목 둥근바닥 플라스크에서 에스테르 중간체 8.01 (1 g, 4.231 mmol)을 THF / 물 (12 mL, 3:1)에 첨가하고 0℃로 냉각하였다. 이 빙냉 용액에 LiOH (355 mg 8.462 mmol)를 첨가하고 실온에서 2시간 교반한 다음 TLC로 체크하였다. 반응 완결 후 반응 혼합물을 포화 NaHSO4로 pH 3까지 산성화하고 에틸 아세테이트 (3 X 10 mL)로 추출하였다. 유기층을 한데 모아 무수 Na2SO4 로 건조하고 컬럼 정제하여 순수한 화합물 8.02를 우수한 수율로 얻었다 (80%). 8.02의 1 H NMR ( 400 MHz , CDCl 3 ) δ: 5.36-5.29 (m, 1H), 3.74 (t, J = 8 Hz, 2H), 3.23-3.13 (m, 1H), 2.60 (td, J = 8 Hz, J = 4 Hz, 2H), 2.39-0.56 (m, 43H, 콜레스테롤 백본). 8.02의 13 CNMR (100 MHz , CDCl 3 ) δ:176.80, 140.71, 121.88, 79.66, 63.11, 56.84, 56.24, 50.24, 42.39, 39.85, 39.59, 38.98, 37.23, 36.91, 36.27, 35.86, 35.30, 32.01, 31.95, 28.31, 28.08, 24.36, 23.91, 22.89, 22.64, 21.14, 19.44, 18.79, 11.93. 8.02의 IR ( KBr ) δ:3784.1, 2939.7, 1713.8, 1600.0, 1444.3, 1230.7, 1107.5 cm-1 ESIMS m/z = 481 [M+Na]+for [C30H50O3Na]+.
Figure pct00051
[00292] 단계 c: 질소 분위기 하 0℃에서 100 mL 단일 목 둥근바닥 플라스크에서 산 중간체 8.02 (1 g, 2.179 mmol)를 무수 디클로로메탄 (15 mL)에 첨가하였다. 이 차가운 용액에 DIPC (0.67 ml, 4.359 mmol) 및 이어서 DMAP (133 mg, 1.089 mmol)를 첨가하고 동일한 온도에서 0.5 시간 교반하였다. 이 활성화된 산 용액에 DIPEA (1.5 mL. 8.716 mmol) 및 이어서 글리신 메틸 에스테르 (547 mg, 4.359 mmol)를 첨가하고 실온에서 6시간 더 교반하고 TLC로 체크하였다. 반응 완결 후 반응 혼합물을 물로 급냉하고, CHCl3 (2 X 10 mL)로 추출, 무수 황산나트륨으로 건조, 농축 및 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 중간체 8.03을 검과 같은(gummy) 고체로서 얻었다 (92% 수율). 8.03의 1 H NMR( 400 MHz , CDCl 3 ) δ: 7.02 (bs, 1H), 5.31-5.25 (m, 1H), 3.99 (d, J = 5 Hz, 2H), 3.69 (s, 3H), 3.71-3.62 (m, 2H), 3.21-3.10 (m, 1H), 2.49 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 2.37-0.55 (m, 43H, 콜레스테롤 백본).8.03의 13 CNMR ( 100 MHz , CDCl 3 ) δ:172.05, 170.41, 140.60, 121.96, 79.56, 63.72, 56.82, 56.22, 52.34, 50.22, 42.39, 42.30, 41.31, 39.83, 39.58, 38.95, 37.21, 36.99, 36.93, 36.25, 35.85, 32.00, 31.95, 28.33, 28.30, 28.08, 24.35, 23.89, 23.51, 22.88, 22.62, 21.13, 19.42, 18.78, 11.92. 8.03의 IR ( KBr) δ:3787.1, 3338.9, 2934.0, 1742.6, 1643.4, 1451.7, 1208.4, 1104.9 cm- 1 ESIMS m/z = 552 [M+Na]+for [C33H55NO4Na]+.
[00293] 단계 d: 50 mL 단일 목 둥근바닥 플라스크에서 에스테르 중간체 8.03 (1 g, 1.887 mmol)를 THF / 물 (21 mL, 3:1)에 첨가하고 0℃로 냉각하였다. 이 빙냉 용액에 LiOH (230 mg, 5.662 mmol)을 첨가하고 실온에서 3 시간 교반한 다음 TLC로 체크하였다. 반응 완결 후 반응 혼합물을 포화 NaHSO4로 pH 3으로 산성화하고 에틸 아세테이트 (3 X 10 mL)로 추출하였다. 유기층을 한데 모아 무수 Na2SO4로 건조하고 컬럼 정제하여 순수한 화합물 8.04를 백색 고체 (800 mg, 82%)로 얻었다. 8.04의 1 H NMR ( 400 MHz , CDCl 3 ) δ: 5.32 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.03 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 3.72 (dd, J = 12.4, 7.9 Hz, 2H), 3.25-3.14 (m, 1H), 2.51 (t, J = 5.5 Hz, 2H), 2.37-0.55 (m, 43H, 콜레스테롤 백본). 8.04의 13 CNMR ( 100 MHz , CDCl 3 ) δ: 172.76, 172.49, 140.54, 121.98, 79.67, 63.68, 56.82, 56.24, 50.22, 42.71, 42.39, 41.67, 39.84, 39.59, 38.89, 37.20, 36.90, 36.77, 36.26, 35.86, 32.00, 31.95, 28.30, 28.26, 28.08, 24.36, 23.91, 23.28, 22.89, 22.63, 21.14, 19.43, 18.79, 11.94. 8.04의 IR ( KBr ) δ: 3366.9, 3309.0, 2954.1, 2907.8, 2868.3, 2849.9, 1933.7, 1718.6, 1601.9, 1536.4, 1465.9, 1443.7, 1365.6, 1331.9, 1280.8, 1224.8, 1202.7, 1104.3cm-1. 융점: 146℃.ESIMS m/z = 538.2 [M+Na]+for [C32H53NO4Na]+ 및 1053.6 [2M+Na]+ for 2[C32H53NO4]Na+.
[00294] 단계 e: 질소 분위기 하 0℃에서 10 mL 단일 목 둥근바닥 플라스크에서 산 중간체 8.04 (184 mg, 0.3588 mmol)를 무수 CH2Cl2 (10 mL)에 첨가하였다. 이 차가운 용액에 DIPC (111 μL, 0.7176 mmol) 및 이어서 DMAP (58.4 mg, 0.4758 mmol)를 첨가하고 동일한 온도에서 0.5 시간 교반하였다. 이 활성화된 산 용액에 카바지탁셀 (200 mg, 0.2392 mmol)을 첨가하고 실온에서 5시간 더 교반하고 TLC로 체크하였다. 반응 완결 후 반응 혼합물을 물로 급냉하고, CHCl3으로 추출하고, 무수 황산나트륨으로 건조, 농축 및 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 신규한 탁산 8을 백색 고체로서 얻고 이를 아세톤 - 헥산에서 추가 침전시켜 순수한 생성물을 91% 수율로 얻었다. 8의 1 H NMR ( 400 MHz , CDCl 3 ) δ: 8.09 (d, J = 7.6 Hz, 4H), 7.58 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 7.47 (t, J = 7.6 Hz, 4H), 7.38 (t, J = 7.4 Hz, 4H), 7.29 (dd, J = 16.6, 7.4 Hz, 6H), 7.05 (t, J = 5.0 Hz, 2H), 6.23 (t, J = 8.8 Hz, 2H), 5.62 (d, J = 7.0 Hz, 2H), 5.50 - 5.29 (m, 8H), 4.97 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 4.78 (s, 2H), 4.29 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 4.18 - 4.08 (m, 6H), 3.91 - 3.78 (m, 4H), 3.73 - 3.61 (m, 4H), 3.41 (s, 6H), 3.28 (s, 6H), 3.17 (dt, J = 15.6, 5.6 Hz, 2H), 2.74 - 2.62 (m, 2H), 2.61 (s, 1H), 2.46 (t, J = 5.5 Hz, 4H), 2.43 - 0.75 (m, 153H), 0.64 (d, J = 6.7 Hz, 6H). 8의 13 CNMR ( 100 MHz , CDCl 3 ) δ: 204.95, 172.02, 169.70, 169.25, 167.87, 167.02, 155.12, 140.43, 139.34, 136.96, 135.12, 133.57, 130.16, 129.25, 129.00, 128.63, 128.37, 126.35, 121.93, 84.14, 82.51, 81.59, 80.71, 80.54, 79.50, 78.82, 77.20, 76.45, 75.08, 74.73, 72.27, 63.51, 57.17, 57.05, 56.80, 56.69, 56.12, 54.02, 53.77, 50.12, 47.32, 43.34, 42.28, 41.04, 39.72, 39.48, 38.82, 37.12, 36.82, 36.76, 36.15, 35.74, 34.95, 32.01, 31.91, 31.86, 31.71, 29.24, 28.21, 28.18, 28.13, 27.99, 26.67, 24.27, 23.79, 22.80, 22.54, 21.06, 21.01, 19.39, 18.70, 14.31, 11.82, 10.36, -0.03. 8의 IR ( KBr ) δ: 3334.6, 2934.2, 1716.9, 1520.0, 1454.5, 1367.8, 1264.3, 1245.7, 1172.5, 1102.6, 1068.5cm-1. 융점: 143℃.ESIMS m/z = 1355.2 [M+Na]+for [C77H108N2O17Na]+. 비선광도
Figure pct00052
Figure pct00053
-26 (C = 0.1, 메탄올).
실시예 7: 콜레스테롤 탁산 컨쥬게이트 14의 합성
[00295] 단계 a: CH2Cl2 (45 mL) 중 콜레스테롤 (10 g, 0.026 mol)의 빙냉 용액에 피리딘(15 mL)을 첨가하고 15분간 교반하였다. 이 용액에 p-톨루엔 설포닐 클로라이드(9.8 g, 0.052 mol)을 첨가하고 0℃에서 6 시간 교반한 다음 TLC로 체크하였다. 반응 완결 후 반응 혼합물을 CHCl3 (20 mL)로 희석하고 1N HCl (3 X 50 mL) 및 염수 (20 mL)로 연속 세척하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조 및 진공 농축하여 중간체 14.01를 얻고 이를 추가 정제없이 다음 단계에 사용하였다.
[00296] 단계 b: 디옥산 (45 mL) 중 조질의 중간체 14.01 (0.026 mol) 용액에 에틸렌 글리콜 (15 mL)을 첨가하고 4 시간 환류시켰다. TLC로 체크하였다. 반응 완결 후 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하고 물 (3 X 50 mL) 및 염수 (20 mL)로 연속 세척하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조 및 진공 농축하고 컬럼 정제하여 중간체 14.02를 백색 고체로서 얻었다 (2 단계에 걸쳐 55% 수율). 14.02의 1 H NMR ( 400 MHz , CDCl 3 ) δ: 5.33 (d, J = 4 Hz, 1H), 3.70 (t, J = 4 Hz, 2H), 3.57 (t, J = 4 Hz, 2H), 3.23-3.12 (m, 1H), 2.42-0.56 (m, 44H 콜레스테롤 백본); 14.02의 13 C NMR ( 125 MHz , CDCl 3 ) δ: 140.71, 121.73, 79.45, 68.95, 62.07, 56.77, 56.17, 50.18, 42.32, 39.78, 39.51, 39.10, 37.17, 36.85, 36.18, 35.77, 31.93, 31.89, 31.56, 28.41, 28.21, 27.99, 24.27, 23.82, 22.79, 22.54, 21.06, 19.35, 18.70, 14.08, 11.84. 14.02의 IR ( KBr ) δ: 3452.2, 2932.9, 2862.7, 1632.5, 1466.2, 1365.8, 1275.5, 1110.6, 1062.8, cm-1. ESIMS m/z = 453.1 [M+Na]+for [C29H50O2Na]+. 14.02의 융점 : 91℃.
Figure pct00054
[00297] 단계 c: 질소 분위기 하 50 ml 둥근바닥 플라스크에서 계산된 양의 IBX (650 mg, 2.322 mmol)를 DMSO (1.5 ml)에 첨가하고 실온에서 15분간 교반하였다. 건조 THF (10 ml) 중 알코올 중간체 14.02 (500 mg, 1.160 mmol)를 반응 혼합물에 첨가하고 실온에서 1.5 시간 더 교반하고 TLC로 체크하였다. 반응 완결 후 반응 혼합물을 과량의 디에틸에테르로 급냉하고 셀라이트 박막 패드로 여과하였다. 유기층을 한데 모아 진공 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 알데히드 중간체 14.03을 78% 수율로 얻었다. 알데히드 중간체 14.03은 보관시 덜 안정하기 때문에, 추가 특징화하지 않고 다음 반응에 이용하였다.
[00298] 단계 d: 50 ml 단일 목 둥근바닥 플라스크에서 Wittig 염 (1 g, 2.733 mmol)을 톨루엔 (7 ml)에 첨가하고 80℃로 가열하였다. 이 용액에 톨루엔 (5 mL) 중 알데히드 중간체 14.03 (390 mg, 0.911 mmol)을 첨가하고 동일한 온도에서 밤새 교반한 다음 TLC로 체크하였다. 반응 완결 후, 반응을 헥산으로 중단시켜 미반응 Wittig 시약을 석출하고 박막 셀라이트 패드로 여과한 다음 헥산(15 mL)으로 세척하였다. 유기층들을 한데 모아 진공 농축하고 컬럼 크로마토그래피 정제하여 에스테르 중간체 14.04를 우수한 수율(85%)로 수득하였다. 14.04의 1 H NMR ( 400 MHz , CDCl 3 ) δ: 6.84 (dt,J = 16, 4.4 Hz, 1H), 5.97 (dd, J = 16, 1.5 Hz, 1H), 5.33 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 4.18 - 4.09 (m, 2H), 3.24-3.13 (m, 1H), 2.40 - 0.76 (m, 49H 콜레스테롤 백본), 0.66 (s, 3H). 14.04의 13 C NMR ( 100 MHz , CDCl 3 ) δ:165.72, 143.80, 140.69, 122.96, 121.79, 80.28, 79.18, 66.61, 56.77, 56.15, 50.18, 42.32, 39.77, 39.51, 39.01, 37.15, 36.86, 36.19, 35.77, 31.93, 31.88, 28.33, 28.22, 28.12, 28.00, 24.28, 23.82, 22.80, 22.55, 21.06, 19.36, 18.71, 11.85. 14.04의 IR ( KBr ) δ:2934.4, 1714.7, 1448.9, 1303.4, 1278.3, 1250.3, 1153.4, 1124.5, 990.2, 959.4 cm- 1.ESIMS m/z = 549 [M+Na]+for [C35H58O3Na]+. 14.04의 융점 : 108℃.
[00299] 단계 e: 50 ml 단일 목 둥근바닥 플라스크에서 에스테르 중간체14.04 (380 mg, 0.722 mmol)를 건조 DCM (3 ml)에 첨가하고 0℃로 냉각하였다. 이 용액에 TFA (1 mL)를 첨가하고 실온에서 2.5 시간 교반한 다음 TLC로 체크하였다. 반응 완결 후 반응 혼합물을 진공 농축하여 TFA를 제거하였다 (rota vapour 상에서 NaOH 트랩을 이용함). 고체 잔사를 실리카겔 크로마토그래피 정제하여 산 중간체 14.05를 우수한 수율로 얻었다. 14 .05의 1 H NMR ( 400 MHz , CDCl 3 ) δ:7.07 (dt, J = 15.8, 3.9 Hz, 1H), 6.14 - 6.03 (m, 2H), 5.37 - 5.28 (m, 1H), 4.22-4.17 (m, 2H), 3.19 (dt, J = 15.4, 5.4 Hz, 1H), 2.42 - 0.73 (m, 42H 콜레스테롤 백본), 0.64 (s, 3H). 14.05의 13 C NMR ( 100 MHz , CDCl 3 ) δ:171.50, 148.06, 140.53, 121.90, 120.09, 79.46, 66.47, 56.76, 56.16, 50.17, 42.31, 39.77, 39.51, 38.98, 37.13, 36.85, 36.18, 35.77, 31.92, 31.87, 28.32, 28.22, 28.00, 24.27, 23.82, 22.80, 22.55, 21.06, 19.35, 18.71, 11.85. 14.05의 IR ( KBr ) δ:2935.4, 1694.1, 1448.9, 1302.0, 1194.4, 959.4 cm- 1 ESIMS m/z = 469.2 [M-1]+ for [C31H50O3]+. 14.05의 융점 : 180℃.
[00300] 단계 f: 질소 분위기 하 0℃에서 25 mL 단일 목 둥근바닥 플라스크에서 산 14. 05(112 mg, 0.2393 mmol)을 무수 CH2Cl2 (10 mL)에 첨가하였다. 이 차가운 용액에 DMAP (14 mg, 0.1196 mmol) 및 이어서 DIPC (37 μL, 0.2393 mmol)를 첨가하고 동일한 온도에서 1 시간 교반하였다. 이 활성화된 산 용액에 카바지탁셀 (100 mg, 0.1196 mmol)을 첨가하고 실온에서 4시간 더 교반하고 TLC로 체크하였다. 반응 완결 후 반응 혼합물을 물로 급냉하고, CHCl3으로 추출하고, 무수 황산나트륨으로 건조, 농축 및 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 신규한 탁산 14를 백색 고체로서 얻고 이를 아세톤-헥산에서 추가 침전시켜 순수한 생성물을 68% 수율로 얻었다. 14의 1 H NMR ( 400 MHz , CDCl 3 ) δ: 8.08 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 7.59 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.48 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 7.40-7.33 (m, 2H), 7.32-7.25 (m, 2H), 7.02 (d, J = 15.8 Hz, 1H), 6.32 (t, J = 8 Hz, 1H), 6.14 (d, J = 15.8 Hz, 1H), 5.62 (d, J = 7 Hz, 1H), 5.44 (bs, 1H), 5.39-5.29 (m, 3H), 4.97 (d, J = 9.5 Hz, 1H), 4.81 (s, 1H), 4.29 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.21-4.11 (m, 1H), 3.88 (dd, J = 10.5 Hz, 6.4 Hz, 1H), 3.83 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 3.40 (s, 3H), 3.28 (s, 3H), 3.24-3.13 (m, 1H), 2.74-2.62 (m, 1H), 2.41 (s, 3H), 2.37-0.74 (m, 66 H, 콜레스테롤 백본), 0.66 (s, 3H). 14의 13 CNMR ( 125 MHz , CDCl 3 ) δ: 204.97, 169.68, 168.32, 167.01, 165.30, 155.19, 147.97, 140.45, 139.68, 137.38, 134.87, 133.55, 130.15, 129.30, 128.87, 128.61, 128.18, 126.41, 121.99, 118.84, 84.18, 82.50, 81.54, 80.65, 80.43, 79.52, 78.88, 76.44, 74.77, 74.36, 71.99, 66.47, 57.07, 56.81, 56.74, 56.14, 50.16, 47.35, 43.30, 42.31, 42.22, 39.75, 39.49, 38.96, 37.10, 36.84, 36.17, 35.76, 34.94, 32.00, 31.92, 31.86, 31.56, 28.31, 28.20, 28.14, 27.99, 26.63, 24.26, 23.80, 23.47, 22.79, 22.75, 22.53, 21.06, 20.99, 19.35, 18.70, 14.44, 14.09, 11.84, 10.36. 14의 IR ( KBr ) δ:3809.5, 3518.2, 2924.3, 1728.7, 1608.4, 1474.1, 1267.1, 1172.0 cm- 1.ESIMS m/ zof 14 = 1310.3 [M+Na]+for [C76H105NO16Na]+. 14의 융점 : 142℃.비선광도
Figure pct00055
Figure pct00056
= - 8 (C = 0.1, 메탄올).
실시예 8: 콜레스테롤 탁산 컨쥬게이트 16의 합성
[00301] 단계 a: 250 mL 단일 목 둥근바닥 플라스크에서 BocHNCH2COOH (2g, 11.417 mmol), 콜레스테롤 2.01 (4.414g, 11.417 mmol) 및 DMAP (697 mg, 5.708 mmol)를 질소 분위기 하에 무수 디클로로메탄 (75 mL)에 첨가하고 0℃에서 20분간 ryr반하였다. 이 차가운 용액에 DCC (2.591g, 12.558 mmol)를 첨가하고 실온에서 24시간 더 교반한 다음 TLC로 체크하였다. 반응 완결 후 반응 혼합물을 물로 급냉하고, CHCl3으로 추출하고, 무수 황산나트륨으로 건조, 농축 및 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 중간체 2.02를 60% 수율로 얻었다. 2.02의 1 H NMR ( 400 MHz , CDCl 3 ) δ: 5.36 (d, J = 4.3 Hz, 1H), 4.98 (s, 1H), 4.72 - 4.59 (m, 1H), 3.86 (d, J = 5.3 Hz, 2H), 2.36-0.65 (m, 52H of 콜레스테롤 백본). 2.02의 13 C NMR ( 125 MHz , CDCl 3 ) δ: 169.72, 155.67, 139.35, 122.90, 79.86, 75.15, 56.68, 56.14, 50.01, 42.66, 42.30, 39.71, 39.51, 38.01, 36.91, 36.55, 36.18, 35.77, 31.88, 31.84, 28.31, 28.20, 27.99, 27.69, 24.26, 23.82, 22.79, 22.54, 21.02, 19.26, 18.70, 11.84. 2.02의 IR ( KBr ) δ: 3384.1, 2938.7, 2868.7, 1754.2, 1726.7, 1696.4, 1677.9, 1538.3, 1519.4, 1467.3, 1424.3, 1366.9, 1283.9, 1270.1, 1202.3, 1171.9, 1055.6, 1028.8, 1007.4 cm- 1. ESIMS m/z = 566.2 [M+Na]+ for [C34H57NO4Na]+ 및 1109.5 [2M+Na]+ for 2[C34H57NO4]Na+. 융점 : 84℃.
Figure pct00057
[00302] 단계 b: 질소 분위기 하 0℃에서 25 mL 단일 목 둥근바닥 플라스크에서 중간체 2.02 (1 g crude, 1.838mmol)를 무수 CH2Cl2 (5 mL)에 첨가하였다. 이 반응 혼합물에 TFA (2 mL)를 5분에 걸쳐 서서히 첨가하고 실온에서 3 시간 교반한 다음 TLC로 체크하였다. 반응 완결 후 용매를 감압 제거하고 조질의 아민 화합물 2.03을 추가 정제 없이 다음 반응에 이용하였다.
[00303] 단계 c: 이전 반응에서 수득한 조질의 아민 중간체 2.03을 디클로로메탄 (20 mL)으로 희석하고 0℃로 냉각하였다. 이 빙냉 용액에 DIPEA (3 mL, 17.12 mmol)를 서서히 첨가하고 이어서 무수 숙신산 (856 mg, 8.56 mmol)을 첨가한 다음 실온에서 12 시간 교반하였다. 반응 완결 후 반응 혼합물을 물로 급냉하고 (10 mL), 1% HCl 용액으로 세척하고, CH2Cl2 (3 X 10 mL)로 추출한 다음 무수 Na2SO4로 건조 및 실리카겔 정제하여 순수한 산 중간체 2.04를 88% 수율로 얻었다. 2.04의 1 H NMR ( 500 MHz , CDCl 3 ) δ: 6.47 (t,J = 5 Hz, 1H), 5.35 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.65 (m,1H), 3.99 (d, J = 5.1 Hz, 2H), 2.68 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 2.56 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 2.37-0.57 (m, 43H of 콜레스테롤 백본).2.04의 13 C NMR ( 125 MHz , CDCl 3 ) δ: 176.67, 172.28, 169.49, 139.18, 122.99, 75.57, 56.61, 56.07, 49.91, 42.24, 41.68, 39.64, 39.45, 37.89, 36.82, 36.49, 36.12, 35.76, 31.84, 31.75, 30.29, 29.66, 29.30, 28.19, 27.97, 27.59, 24.23, 23.80, 22.80, 22.53, 20.97, 19.24, 18.67, 11.81. 2.04의 IR ( KBr ) δ: 3311.1, 2935.7, 2902.8, 2850.8, 1751.4, 1748.5, 1745.5, 1637.6, 1544.9, 1203.6 cm- 1.MAL디 - TOF MS m/z = 566.29 [M+Na]+for [C33H53NO5Na] 및 582.27 [M+K]+for [C33H53NO5K]. 융점: (170-180)℃
[00304] 단계 d: 질소 분위기 하 0℃에서 10 mL 단일 목 둥근바닥 플라스크에서 산 2.04 (286 mg, 0.5269 mmol)을 무수 CH2Cl2 (10 mL)에 첨가하였다. 이 차가운 용액에 DMAP (85 mg, 0.7026 mmol) 및 이어서 DIPC (109 μL, 0.7026 mmol)를 첨가하고 동일한 온도에서 1 시간 교반하였다. 이 활성화된 산 용액에 파클리탁셀 (300 mg, 0.3513 mmol)을 첨가하고 실온에서 다시 4 시간 교반한 다음 TLC로 체크하였다. 반응 완결 후 반응 혼합물을 물로 급냉하고, CHCl3으로 추출하고, 무수 황산나트륨으로 건조, 농축 및 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 (에틸 아세테이트-헥산으르 이동상으로 이용하였음) 신규한 탁산 16을 고체로서 수득하였다. 16의 1 H NMR ( 500 MHz , CDCl 3 ) δ: 8.13 - 8.08 (m, 2H), 7.79 - 7.73 (m, 2H), 7.59 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 7.53 - 7.25 (m, 10H), 6.26 (s, 1H), 6.17 (t, J = 8.7 Hz, 1H), 6.08 (bs, 1H), 5.89 (dd, J = 8.7, 4.1 Hz, 1H), 5.64 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 5.44 (d, J = 4.1 Hz, 1H), 5.35 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 4.94 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 4.62 - 4.55 (m, 1H), 4.41 (dd, J = 10.9, 6.7 Hz, 1H), 4.28 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 4.16 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.85 (qd, J = 18.4, 5.1 Hz, 2H), 3.77 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 2.75 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 2.58 - 2.46 (m, 3H), 2.38 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 1.89 (s, 3H), 1.65 (s, 3H), 1.20 (s, 3H), 1.10 (s, 3H), 2.34-0.63 (m, 35H 지방족 proton from pacli탁솔 및 콜레스테롤 백본). 16의 13 C NMR ( 125 MHz , CDCl 3 ) δ: 203.81, 171.66, 171.19, 171.01, 169.81, 169.38, 168.11, 167.26, 166.97, 142.79, 139.22, 137.06, 133.74, 133.65, 132.72, 131.87, 130.20, 129.22, 129.00, 128.68, 128.59, 128.45, 127.28, 126.75, 123.04, 84.42, 81.00, 79.09, 76.39, 75.58, 75.08, 74.36, 72.07, 71.77, 58.46, 56.66, 56.11, 53.13, 49.99, 45.56, 43.12, 42.29, 41.59, 39.68, 39.48, 37.96, 36.83, 36.54, 36.15, 35.75, 35.50, 35.44, 31.88, 31.81, 30.62, 29.34, 28.18, 27.98, 27.63, 26.77, 24.25, 23.79, 22.78, 22.62, 22.53, 22.08, 21.00, 20.79, 19.25, 18.69, 14.79, 11.83, 9.57.ESIMS m/z = 1403.1 [M+Na]+for [C80H102N2O18Na]+. CHN 분석 (백분율로 얻음): C = 69.45, H = 7.74, N = 2.21 (계산된 백분율: C = 69.64, H = 7.45, N = 2.03).
실시예 9: 신규한 MEK 저해제 34의 합성
Figure pct00058
[00305] 단계 a: 질소 분위기 하 250 mL 단일 목 둥근바닥 플라스크에서 BocHNCH2COOH (2g, 11.417 mmol), 콜레스테롤 2.01 (4.414g, 11.417 mmol) 및 DMAP (697 mg, 5.708 mmol)을 무수 디클로로메탄 (75 mL)에 첨가하고 0℃에서 20분간 교반하였다. 이 차가운 용액에 DCC (2.591g, 12.558 mmol)를 첨가하고 실온에서 24시간 더 교반한 다음 TLC로 체크하였다. 반응 완결 후 반응 혼합물을 물로 급냉하고, CHCl3으로 추출하고, 무수 황산나트륨으로 건조, 농축 및 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 중간체 2.02를 60% 수율로 수득하였다. 2.02의 1 H NMR ( 400 MHz , CDCl 3 ) δ: 5.36 (d, J = 4.3 Hz, 1H), 4.98 (s, 1H), 4.72 - 4.59 (m, 1H), 3.86 (d, J = 5.3 Hz, 2H), 2.36-0.65 (m, 52H of 콜레스테롤 백본). 2.02의 13 C NMR (125 MHz, CDCl 3 ) δ: 169.72, 155.67, 139.35, 122.90, 79.86, 75.15, 56.68, 56.14, 50.01, 42.66, 42.30, 39.71, 39.51, 38.01, 36.91, 36.55, 36.18, 35.77, 31.88, 31.84, 28.31, 28.20, 27.99, 27.69, 24.26, 23.82, 22.79, 22.54, 21.02, 19.26, 18.70, 11.84. 2.02의 IR ( KBr ) δ: 3384.1, 2938.7, 2868.7, 1754.2, 1726.7, 1696.4, 1677.9, 1538.3, 1519.4, 1467.3, 1424.3, 1366.9, 1283.9, 1270.1, 1202.3, 1171.9, 1055.6, 1028.8, 1007.4 cm- 1 ESIMS m/z = 566.2 [M+Na]+ for [C34H57NO4Na]+ 및 1109.5 [2M+Na]+ for 2[C34H57NO4]Na+.융점: 84℃.
[00306] 단계 b: 질소 분위기 하 0℃에서 25 mL 단일 목 둥근바닥 플라스크에서 중간체 2.02 (1 g crude, 1.838mmol)를 무수 CH2Cl2 (5 mL)에 첨가하였다. 이 반응 혼합물에 TFA (2 mL)를 5분에 걸쳐 서서히 첨가하고 실온에서 3시간 교반한 다음 TLC로 체크하였다. 반응 완결 후 용매를 감압 제거하고 조질의 아민 화합물 2.03을 추가 정제 없이 다음 반응에 그대로 사용하였다.
[00307] 단계 c: 이전 반응에서 얻은 조질의 아민 화합물 2.03을 디클로로메탄 (20 mL)으로 희석하고 0℃로 냉각하였다. 이 빙냉 용액에 DIPEA (3 mL, 17.12 mmol) 및 무수 숙신산 (856 mg, 8.56 mmol)을 서서히 첨가하고 실온에서 12시간 교반하였다. 반응 완결 후 반응 혼합물을 물로 급냉하고 (10 mL), 1% HCl 용액으로 세척하고, CH2Cl2 (3 X 10 mL)로 추출하고, 무수 Na2SO4로 건조 및 실리카겔 정제하여 순수한 산 중간체 2.04를 88% 수율로 얻었다. 2.04의 1 H NMR ( 500 MHz , CDCl 3 ) δ: 6.47 (t,J = 5 Hz, 1H), 5.35 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.65 (m,1H), 3.99 (d, J = 5.1 Hz, 2H), 2.68 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 2.56 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 2.37-0.57 (m, 43H of 콜레스테롤 백본). 2.04의 13 C NMR ( 125 MHz , CDCl 3 ) δ: 176.67, 172.28, 169.49, 139.18, 122.99, 75.57, 56.61, 56.07, 49.91, 42.24, 41.68, 39.64, 39.45, 37.89, 36.82, 36.49, 36.12, 35.76, 31.84, 31.75, 30.29, 29.66, 29.30, 28.19, 27.97, 27.59, 24.23, 23.80, 22.80, 22.53, 20.97, 19.24, 18.67, 11.81. 2.04의 IR ( KBr ) δ: 3311.1, 2935.7, 2902.8, 2850.8, 1751.4, 1748.5, 1745.5, 1637.6, 1544.9, 1203.6 cm- 1.MAL디 - TOF MS m/z = 566.29 [M+Na]+for [C33H53NO5Na] 및 582.27 [M+K]+for [C33H53NO5K]. 융점: (170-180)℃
[00308] 단계 d: 질소 분위기 하 0℃에서a 25 mL 단일 목 둥근바닥 플라스크에서 산 중간체 2.04 (137 mg, 0.2392 mmol)를 무수 CH2Cl2 (10 mL)에 첨가하였다. 이 차가운 용액에 DMAP (29 mg, 0.2392 mmol) 및 이어서 DIPC (37 μL, 0.2392 mmol)를 첨가하고 동일한 온도에서 1 시간 교반하였다. GDC 0623 (100 mg, 0.1196 mmol)를 활성화된 산 용액에 첨가하고 실온에서 4시간 교반한 다음 TLC로 체크하였다. 반응 완결 후 반응 혼합물을 물로 급냉하고, CHCl3으로 추출하고, 무수 황산나트륨으로 건조, 농축 및 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 신규한 MEK 저해제 33을 수득하였다.
실시예 10: 신규한 탁산 28의 합성
[00309] 단계 a: 불꽃 건조된 2구 둥근바닥 플라스크에서 옥시염화인 (1.3 mL, 13.930 mmol)을 무수 THF (50 mL)에 0℃에서 첨가하였다. THF (100 mL) 중 콜레스테릴 알코올 7.02 (5 g, 11.609 mmol) 및 트리에틸아민 (1.78 mL, 24.18 mmol)을 반응 혼합물에 격렬히 교반하면서 서서히 첨가하였다. 트리에틸암모늄 클로라이드를 반응 혼합물로부터 서서히 침전시켰다. 아르곤 보호 하에 5시간 더 반응을 지속시키고 중간체 28.01을 아무런 처리 없이 다음 반응에 직접 사용하였다.
[00310] 단계 b: THF (50 mL) 중 트리에틸아민 (3.88 mL, 34.825 mmol) 및 에탄올아민 (0.834 mL. 13.93 mmol)을 상기 반응 혼합물에 격렬한 교반과 함께 0℃서서히 첨가하였다. 트리에틸암모늄 클로라이드가 용액으로부터 서서히 침전되며 반응을 질소 보호 하에 5시간 더 지속시켰다. 완결 후 트리에틸암모늄 클로라이드를 흡입 여과에 의해 제거하고 용매를 증발시켜 중간체 28.02를 백색 검으로서 수득하고 이를 추가 정제하지 않고 다음 단계에 직접 사용하였다.
Figure pct00059
[00311] 단계 c: 중간체 28.02를 실온에서 THF (50 mL)에 용해시킨다. 아세트산- 물 용액 (40 mL 물 중 15g 아세트산)을 한 번에 첨가하고 질소 분위기 보호 하에 70℃로 5시간 동안 가열한다. 이어서 혼합물을 에탄올로 공비증류하여 응축시키고 개환 산물인 28.03을 격렬히 교반하면서 아세톤으로 서서히 용액을 적하하여 침전시킨다. 침전물을 흡입 여과에 의해 수집하고, 고진공 하에 건조시킨 다음 다음 단계에 직접 사용하였다.
[00312] 단계 d: 백색의 검 같은 중간체 28. 03 을 디클로로메탄 (50 mL)에 첨가하고 피리딘 (10 mL)을 실온에서 반응 혼합물에 첨가하였다. 이 용액에 숙신산 수화물 (5.5 g, 55.6 을 한 번에 첨가하고 질소 보호하, 실온에서 12 시가 s동안 교반하였다. 반응 완결 후 반응물을 CHCl3 (20 mL)로 희석하고 HCl 용액 (1 N, 250 mL)으로 세척한 다음 감압 농축하였다. 슬러리를 아세톤에서 침전하여 중간체 28.04 (28.01로부터 시작하여 4 단계에 걸쳐 1.5 g, 19.7%)를 얻었다.
[00313] 단계 e: 질소 분위기 하 0℃에서 25 mL 단일 목 둥근바닥 플라스크에서 산 중간체 28.04 (152 mg, 0.2392 mmol)을 무수 디클로로메탄 (5 mL)에 첨가하였다. 이 차가운 용액에 DIPC (37μL, 0.2392 mmol) 및 이어서 DMAP (29 mg, 0.2392 mmol)를 첨가하고 동일한 온도에서 1시간 교반하였다. 이 활성화된 산 용액에 카바지탁셀 (100 mg, 0.1196 mmol)을 첨가하고 실온에서 5 시간 더 교반한 다음 TLC를 체크하였다. 반응 완결 후 반응 혼합물을 클로로포름 (10 mL)으로 희석하고 0.1N HCl (10 mL) 용액으로 세척하였다. 유기층을 감압 증발하고 잔사를 실리카 상에서 정제하여 신규한 탁산 28을 얻었다.
실시예 11: 신규한 탁산 29의 합성
[00314] 단계 a: a 100 mL 단일 목 둥근바닥 플라스크에서 옥타데실 브로마이드 29.01 (31.122 g, 93.632 mmol) 및 모노 NBoc 에틸렌디아민 29.02 (5 g, 31.211 mmol)를 아세토니트릴(100 mL)에 첨가하고 질소 분위기 하 무수 K2CO3 (17.253 g, 124.844 mmol)의 존재 하에 24 시간 환류시켰다. 반응 완결 후 반응 혼합물을 감압 농축하고 에틸 아세테이트 (100 mL)로 희석하였다. 유기층을 물 (100 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조, 및 농축하였다. 잔사를 실리카겔 정제하여 29.03를 얻었다.
[00315] 단계 b: 250 mL 단일 목 둥근바닥 플라스크에서 중간체 29.03 (5 g, 82.685 mmol) 및 메틸 요오다이드 (7.72 mL, 124.028 mmol)를 아세톤 (100 mL)에 첨가하고 질소 분위기 하에 24 시간 환류시킨다. 반응 완결 후 반응 혼합물을 감압 농축하고 고체 잔사를 헥산(10 mL X 2)으로 세척하여 중간체 29.04를 백색 분말로서 얻는다.
Figure pct00060
[00316] 단계 c: 0℃ 질소 분위기 하에서 100 mL 단일 목 둥근바닥 플라스크에서 중간체 29.04 (2 g, 2.477 mmol)를 무수 디클로로메탄 (12 mL)에 첨가한다. 이 용액에 TFA (3 mL)를 첨가하고 동일한 온도에서 4 시간 교반한 다음 TLC를 체크한다. 반응 완결 후 반응 혼합물을 감압 농축하고 29.05의 고체 잔사를 추가 정제 없이 다음 반응에 사용한다.
[00317] 단계 d: 이전 반응으로부터 수득한 조질의 아민 중간체29 .05를 디클로로메탄 (20 mL)으로 희석하고 0℃로 냉각한다. 이 빙냉 용액에 DIPEA (2.21 mL, 12.385 mmol) 및 이어서 무수 숙신산 (495 mg, 4.954 mmol)을 서서히 첨가하고 실온에서 12 시간 교반한다. 반응 완결 후 반응 혼합물을 물 (10 mL)로 세척하고 CH2Cl2 (3 X 10 mL)로 추출, 무수 Na2SO4로 건조 및 실리카겔 정제하여 순수한 중간체 29.06를 얻는다.
[00318] 단계 e: 질소 분위기 하 0℃에서 25 mL 단일 목 둥근바닥 플라스크에서 산 중간체 29.06 (193 mg, 0.2392 mmol)를 무수 디클로로메탄 (5 mL)에 첨가한다. 이 차가운 용액에 DIPC (37μL, 0.2392 mmol) 및 이어서 DMAP (29 mg, 0.2392 mmol)를 첨가하고 동일한 온도에서 1 시간 교반한다. 이 활성화된 산 용액에 카바지탁셀 (100 mg, 0.1196 mmol)을 첨가하고 실온에서 5 시간 더 교반한 다음 TLC를 체크한다. 반응 완결 후 반응 혼합물을 클로로포름 (10 mL)으로 희석하고 0.1N HCl (10 mL) 용액으로 세척한다. 유기층을 감압 증발하고 잔사를 실리카 정제하여 신규 탁산 29을 얻는다.
실시예 12: 지질 관능화된 겜시타빈의 합성
[00319] 광범한 종양에 대해 활성을 갖는 항암제인 겜시타빈은 그의 매우 짧은 혈중 반감기로 인해 매우 높은 투여량 (1000 mg/m2)으로 투여디어야 하는 것으로 알려져 있다. 겜시타빈 자체는 수용성이다. 링커를 통해 소수성 지질로 이 분자를 관능화시키면 이 분자에 양친성 특성이 부여된다. 초분자 어셈블리를 만들기 위한 이들 화합물의 제형은 그의 짧은 혈중 반감기로부터 보호해줄 뿐 아니라 증강된 침투 및 보유(EPR: enhanced permeation and retention) 효과를 부여한다. 본 발명자들은 이 실시예에서 상이한 링커로 지질에 의해 겜시타빈의 N (반응식 11) 및 O (반응식 12) 말단을 관능화시켜 일련의 양친성 물질(화합물 35 내지 41)을 생산하는 것을 설명한다. 이들 분자들로부터 초분자 어셈블리(제형)의 형성에 관하여는 본 명세서의 다른 섹션에서 설명된 바 있다.
Figure pct00061
Figure pct00062
Figure pct00063
지질 관능화된 겜시타빈 화합물 35, 37, 39 및 41의 합성 반응식
Figure pct00064
Figure pct00065
Figure pct00066
실시예 13: 콜레스테롤 탁산 컨쥬게이트 7의 별법 합성
[00320] 단계 a: 질소 분위기 하 0℃에서 100 mL 단일 목 R.B 플라스크에서 콜레스테롤 2.01 (2 g, 5.172 mmol)을 무수 THF (20 mL)에 첨가하였다. NaH (2.859 mg, 20.690 mmol)을 반응 혼합물에 소량 5분에 걸쳐 첨가하였다. 결과적인 용액을 20분간 교반한 다음 에틸 브로모 아세테이트 (1.191 mL, 10.354 mmol)를 서서히 첨가하고 실온에서 4 시간 더 교반한 다음 TLC로 체크하였다. 반응 완결 후 반응 혼합물을 물로 급냉하고 및 화합물을 에틸 아세테이트 (2 X 20 mL)로 추출하였다. 유기층들을 모아 무수 황산나트륨으로 건조, 농축 및 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 중간체 7.01을 10% 수율로 얻었다.
[00321] 단계 b: 100 mL 단일 목 둥근바닥 플라스크에서 에스테르 중간체 7.01 (200 mg, 0.432 mmol)를 8 mL의 THF/H2O (3:1)에 첨가하고 아이스배쓰로 0℃로 냉각하였다. 이 빙냉 용액에 LiOH (35 mg, 0.846 mmol)를 첨가하고 실온에서 4 시간 교반한 다음 TLC로 체크하였다. 반응 완결 후 반응 혼합물을 Na2HSO4로 산성화시키고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조 및 진공 농축하고 컬럼 정제하여 순수한 산 중간체 7.02를 60% 수율로 얻었다.
Figure pct00067
[00322] 단계 c: 질소 분위기 하 0℃에서 25 mL 단일 목 둥근바닥 플라스크에서 산 7.02 (100 mg, 0.2248 mmol)를 무수 CH2Cl2 (5 mL)에 첨가하였다. 이 차가운 용액에 EDCI (86.2 mg, 0.4497 mmol) 및 이어서 HOBT (60 mg, 0.4497 mmol)를 첨가하고 동일한 온도에서 1 시간 교반하였다. 이 활성화된 산 용액에 DIPEA (0.15 mL, 0.8995) 및 이어서 글리신 메틸 에스테르 (56 mg, 0.4497 mmol)을 첨가하고 실온에서 3 시간 더 교반한 다음 TLC로 체크하였다. 반응 완결 후 반응 혼합물을 물로 급냉하고, CHCl3으로 추출하고, 무수 황산나트륨으로 건조, 농축 및 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 커플링 생성물 7.03을 82% 수율로 얻었다.
[00323] 단계 d: 50 mL 단일 목 둥근바닥 플라스크에서 에스테르 중간체 7.03 (96 mg, 0.186 mmol)를 THF / 물 (4 mL, 3:1)에 첨가하고 0℃로 냉각하였다. 이 빙냉 용액에 LiOH (23.4 mg, 0.558 mmol)를 첨가하고 실온에서 2 시간 교반한 다음 TLC로 체크하였다. 반응 완결 후 반응 혼합물을 포화 NaHSO4로 pH 3으로 산성화시키고 에틸 아세테이트로 추출하였다 (3 X 10 mL). 유기층을 한데 모아 무수 Na2SO4로 건조하고 컬러머 정제하여 순수한 화합물 7.04를 80% 수율로 얻었다.
[00324] 단계 e: 질소 분위기 하 0℃에서 10 mL 단일 목 둥근바닥 플라스크에서 산 중간체 7.04 (23.9 mg, 0.0478 mmol)를 무수 CH2Cl2 (2 mL)에 첨가하였다. 이 차가운 용액에 DIPC (7 마이크로리터, 0.0478 mmol) 및 이어서 DMAP (5.84 mg, 0.0478 mmol)를 첨가하고 동일한 온도에서 1 시간 교반하였다. 이 활성화된 산 용액에 카바지탁셀 (20 mg, 0.0239 mmol)을 첨가하고 실온에서 3 시간 더 교반하고 TLC로 체크하였다. 반응 완결 후 반응 혼합물을 물로 급냉하고, CHCl3으로 추출하고, 무수 황산나트륨으로 건조, 농축 및 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 컨쥬게이트 7을 79% 수율로 얻었다. 7의 1 H NMR ( 400 MHz , CDCl 3 ) δ 8.11 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 7.61 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.50 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 7.40 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 7.33 (d, J =7 Hz, 1H), 7.28 (d, J = 7.4 Hz, 2H), 7.05 (t, J = 5.5 Hz, 1H), 6.25 (t, J = 7 Hz, 1H), 5.64 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 5.48 (bs, 1H), 5.35 (s, 3H), 4.99 (d, J = 9.4 Hz, 1H), 4.82 (s, 1H), 4.31 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.21 - 4.10 (m, 3H), 4.00 (s, 2H), 4.03-3.93 (m, 1H), 3.89 (dd, J = 10.6, 6.5 Hz, 1H), 3.83 (t, J = 9.2 Hz, 2H), 3.44 (s, 3H), 3.30 (s, 3H), 3.30-3.17 (m, 1H), 2.70 (m, 1H), 2.47-0.74 (m, 66H), 0.68 (d, J = 8.8 Hz, 2H).ESIMS m/z = 1341.6 [M+Na]+ for C76H106N2O17
실시예 14: 콜레스테롤 탁산 컨쥬게이트 14의 합성
[00325] 단계 a: CH2Cl2 (20 mL) 중 콜레스테롤 2.01 (5 g, 0.013 mol)의 빙냉 용액에 피리딘 (5 mL)을 첨가하고 15분간 교반하였다. 이 용액에 파라톨루엔 설포닐 클로라이드 (4.9 g, 0.026 mol)르르 첨가하고 0℃에서 4시간 더 교반한 다음TLC를 체크한다. 반응 완결 후 반응 혼합물을 CHCl3 (20 mL)로 희석하고 1N HCl (3 X 50 mL) 및 염수 (20 mL)로 연속 세척한다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조하고 진공 농축하여 중간체 6.02룰 얻고 이를 추가 정제 없이 다음 단계에 이용한다.
Figure pct00068
[00326] 단계 b: 디옥산 (30 mL) 중 중간체 6.02 (조질 6 g, 0.011 mol)의 용액에 에틸렌 글리콜 (20 mL)을 첨가하고 12시간 환류시킨다.. 반응 완결 후 디옥산을 진공 제거하고 물 (20 mL)로 급냉한다. 화합물을 에틸 아세테이트로 추출하고 물 (3 X 50 mL) 및 염수 (20 mL)로 연속 세척한다. 결합된 유기층을 무수 Na2SO4로 건조하고 감압 농축한다. 이동상으로서 메탄올-클로로포름을 이용하여 잔사를 실리카겔 정제하여 중간체 14.01를 얻는다.
[00327] 단계 c: 50 mL 단일 목 둥근바닥 플라스크에서 IBX (1.301 g, 4.647 mmol)를 무수 디메틸 설폭사이드(3 mL)에 첨가하고 30분간 교반하여 맑은 용액을 얻는다. 이 용액에 무수 THF (10 mL) 중 알코올 중간체 14.01 (1 g, 2.323 mmol)를 10분에 걸쳐 첨가한다. 얻어진 용액을 실온에서 3시간 더 교반하고 TLC를 체크한다. 반응 완결 후 반응 혼합물을 디에틸 에테르로 희석하고 백색 고체를 셀라이트 박막 패드를 통해 여과시키고 물 (2 X 15 mL)로 세척한다. 유기층을 무수 Na2SO4로 건조, 진공 농축 및 실리카겔 크로마토그래피 정제하여 알데히드 중간체 14.02를 얻는다.
[00328] 단계 d: 50 mL 단일 목 둥근바닥 플라스크에서 포스포늄 일리드 Ph3P=CH2COOBut (1.404 g, 3.732 mmol)을 톨루엔 (20 mL)에 첨가하고 40℃로 가열한다. 이 용액에 톨루엔 (2 mL) 중 알데히드 중간체 14.02 (800 mg, 1.866 mmol)를 첨가한다. 오일 배쓰 온도를 80℃로 승온시키고 2시간 교반한 다음 TLC를 체크한다. 반응 완결 후 유기 용매를 감압 제거하고 잔사를 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 중간체 14.03를 얻는다.
[00329] 단계 e: 질소 분위기 하 0℃에서 25 mL 단일 목 둥근바닥 플라스크에서 중간체 14.03 (500 mg, 0.949 mmol)를 무수 CH2Cl2 (5 mL)에 첨가한다. 이 반응 혼합물에 TFA (2 mL)를 5분에 걸쳐 서서히 첨가하고 실온에서 3 시간 교반한 다음 TLC를 체크한다. 반응 완결 후 용매를 감압 제거하고 헥산(5 mL)으로 세척한다. 잔사를 실리카겔 크로마토그래피 정제하여 산 중간체 14.04를 얻는다.
[00330] 단계 f: 질소 분위기 하 0℃에서 25 mL 단일 목 둥근바닥 플라스크에서 산 중간체 14.04 (112 mg, 0.2392 mmol)를 무수 CH2Cl2 (7 mL)에 첨가한다. 이 차가운 용액에 DIPC (37 μL, 0. 2392 mmol) 및 이어서 DMAP (29 mg, 0. 2392 mmol)를 첨가하고 동일한 온도에서 2 시간 교반한다. 이 활성화된 산 용액에 카바지탁셀 (100 mg, 0.1196 mmol)을 첨가하고 실온에서 3시간 더 교반하고 TLC를 체크한다. 반응 완결 후 반응 혼합물을 물로 급냉하고, CHCl3으로 추출하고, 무수 황산나트륨으로 건조, 농축 및 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 컨쥬게이트 14를 얻는다.
실시예 15 초분자 조합 치료제
[00331] 인지질 (예컨대 POPC, SOPC, Egg PC 또는 HSPC), 탁산 초분자 및 PEG화-인지질 (예컨대 DSPE-PEG)을 상이한 몰 비율로 이용하여 초분자 나노구조물을 만들었다.
[00332] POPC, New 탁산 2 및 DSPE-PEG를 34:16:50의 mol% 비율로 하여 클로로포름에 용해시켰다. 모든 지질 용액을 둥근바닥 플라스크에서 균질하게 혼합하고 유기 용매를 회전 증발기로 증발시켜 지질막을 고진공 하에 3-4시간 동안 유지시켰다. 이어서 열수탕 중 70℃에서 1 시간 동안 박막을 수화시켰다 (5% 락토스 용액을 첨가함으로써). 이어서, 핫플레이트 상에 지지된 Avanti 사출기를 이용하여 70℃에서 11회 필터 서포트에 의해 지지된 400 nm 및 200 nm 포어 크기의 막을 통해 수화된 리포좀을 순차 사출시켰다. UV 측정 결과 이 제형의 % 캡슐화 효율은 탁산 초분자의 14 mol%인 것으로 나타났다. 얻어진 용액을 동결건조시키고 -20℃에서 보관하였다. 이 시스템의 중량 컷-오프(총 지질 대 탁산 초분자의 최종 중량 비율)는 ~8.66:1인 것으로 나타났다.
[00333] 여러가지 상이한 지질들의 조합 변화로부터 전술한 초분자 제형은 지질 이중층의 강성(rigidity)와 유동성(fluidity)을 최적하게 요구한다는 것이 입증되었다. 이에 따라 DOPO(2개의 테일(tails)에 2개의 이중 결합을 가짐)에 비해 이중층에 더해 강성을 약간 더 제공하는 것으로 추정되는 POPC/SOPC가 사용되게 되었다 (이들 양자 모두 하나의 사슬에 오직 하나의 이중 결합만을 함유하고 다른 사슬은 POPC의 경우 16-탄소 길이이고 SOPO의 경우 18-탄소 길이이므로). 또한 HSPC (18-테일이 포화됨)의 mol%가 높은 것은 이 초분자 형성에 적합치 않은 것으로 입증되었다. DSPE-PEG는이 초분자 자가-어셈블리에서 이분법적(dichotomous) 역할을 갖는데; API의 mol% 로딩이 높을 경우 요구되는 초기 분자량을 밸런싱해줄 뿐 아니라 이중층으로부터 API의 침전을 방지하는 것이 그것이다.
[00334] 이 초분자를 16-20 시간에 걸쳐 동결건조하였다 (동결보호제로서 5% 락토스 용액을 사용함). 그 후 형성된 백색 고체 분말에 필요량의 물을 첨가함으로서 이를 재조성시켰다. 이 재조성된 초분자 제형의 DLS 연구 결과, 동결건조 전에 비해 초분자의 크기, PDI, 초분자의 표면 전위는 유사한 것으로 나타났다.
[00335] 본 발명의 특징을 밝혀내기 위해, DSPE-PEG의 mol%비율을 달리하고 탁산 초분자의 mol%를 다양하게 하여 몇몇 실시예를 제공한다.
실시예 15.1
[00336] 34:16:50 mol% 비율의 POPC, 신규 탁산 2 및 DSPE-PEG를 클로로포름에 용해시켰다. 모든 지질 용액을 둥근바닥 플라스크에서 균질하게 혼합하고 유기 용매를 회전 증발기로 증발시킨 다음 지질막을 고진공 하에 3-4 시간 동안 유지시켰다. 이어서 열수탕 중 70℃에서 1 시간 동안 박막을 수화시켰다 (5% 락토스 용액을 첨가함으로써). 이어서, 핫플레이트 상에 지지된 Avanti 사출기를 이용하여 70℃에서 11회 필터 서포트에 의해 지지된 400 nm 및 200 nm 포어 크기의 막을 통해 수화된 리포좀을 순차 사출시켰다. UV 측정 결과 이 제형의 % 캡슐화 효율은 탁산 초분자의 14 mol%인 것으로 나타났다. 얻어진 용액을 동결건조시키고 -20℃에서 보관하였다. 이 시스템의 중량 컷-오프(총 지질 대 탁산 초분자의 최종 중량 비율)는 ~8.66:1인 것으로 나타났다.
[00337] 이 용액을 16-20 시간에 걸쳐 동결건조하고 (동결보호제로서 5% 락토스 용액을 사용함) 형성된 백색 고체 분말에 필요량의 물을 첨가함으로써 이를 재조성시켰다. 이 재조성된 초분자 제형의 DLS 연구 결과, 동결건조 전에 비해 초분자의 크기, PDI, 초분자의 표면 전위는 유사한 것으로 나타났다.
실시예 15.2
[00338] 30:20:50 mol% 비율의 POPC, 신규 탁산 2 및 DSPE-PEG를 클로로포름에 용해시켰다. 모든 지질 용액을 둥근바닥 플라스크에서 균질하게 혼합하고 유기 용매를 회전 증발기로 증발시킨 다음 지질막을 고진공 하에 3-4 시간 동안 유지시켰다. 이어서 열수탕 중 70℃에서 1 시간 동안 박막을 수화시켰다 (5% 락토스 용액을 첨가함으로써). 이어서, 핫플레이트 상에 지지된 Avanti 사출기를 이용하여 70℃에서 11회 필터 서포트에 의해 지지된 400 nm 및 200 nm 포어 크기의 막을 통해 수화된 리포좀을 순차 사출시켰다. UV 측정 결과 이 제형의 % 캡슐화 효율은 탁산 초분자의 14 mol%인 것으로 나타났다. 얻어진 용액을 동결건조시키고 -20℃에서 보관하였다. 이 시스템의 중량 컷-오프(총 지질 대 탁산 초분자의 최종 중량 비율)는 ~8.5:1인 것으로 나타났다.
[00339] 이 용액을 16-20 시간에 걸쳐 동결건조하고 (동결보호제로서 5% 락토스 용액을 사용함) 형성된 백색 고체 분말에 필요량의 물을 첨가함으로써 이를 재조성시켰다. 이 재조성된 초분자 제형의 DLS 연구 결과, 동결건조 전에 비해 초분자의 크기, PDI, 초분자의 표면 전위는 유사한 것으로 나타났다.
실시예 15.3
[00340] 40:10:50 mol% 비율의 POPC, 신규 탁산 2 및 DSPE-PEG를 클로로포름에 용해시켰다. 모든 지질 용액을 둥근바닥 플라스크에서 균질하게 혼합하고 유기 용매를 회전 증발기로 증발시킨 다음 지질막을 고진공 하에 3-4 시간 동안 유지시켰다. 이어서 열수탕 중 70℃에서 1 시간 동안 박막을 수화시켰다 (5% 락토스 용액을 첨가함으로써). 이어서, 핫플레이트 상에 지지된 Avanti 사출기를 이용하여 70℃에서 11회 필터 서포트에 의해 지지된 400 nm 및 200 nm 포어 크기의 막을 통해 수화된 리포좀을 순차 사출시켰다. UV 측정 결과 이 제형의 % 캡슐화 효율은 탁산 초분자의 9.7 mol%인 것으로 나타났다. 이 시스템의 총 지질 대 탁산 초분자의 최종 중량 비율은 ~12.9:1인 것으로 나타났다.
실시예 15.4
[00341] 55:34:10:1 mol% 비율의 POPC, HSPC, 신규 탁산 2 및 DSPE-PEG를 클로로포름에 용해시켰다. 모든 지질 용액을 둥근바닥 플라스크에서 균질하게 혼합하고 유기 용매를 회전 증발기로 증발시킨 다음 지질막을 고진공 하에 3-4 시간 동안 유지시켰다. 이어서 열수탕 중 60℃에서 1 시간 동안 박막을 수화시켰다. 이어서, 핫플레이트 상에 지지된 Avanti 사출기를 이용하여 70℃에서 11회 필터 서포트에 의해 지지된 400 nm 및 200 nm 포어 크기의 막을 통해 수화된 리포좀을 순차 사출시켰다. UV 측정 결과 이 제형의 % 캡슐화 효율은 탁산 초분자의 5.7 mol%인 것으로 나타났다. 이 시스템의 총 지질 대 탁산 초분자의 최종 중량 비율은 ~9.1:1인 것으로 나타났다.
실시예 15.5
[00342] 55:34:10:1 mol% 비율의 POPC, HSPC, 신규 탁산 2 및 DSPE-PEG를 클로로포름에 용해시켰다. 모든 지질 용액을 둥근바닥 플라스크에서 균질하게 혼합하고 유기 용매를 회전 증발기로 증발시킨 다음 지질막을 고진공 하에 3-4 시간 동안 유지시켰다. 이어서 열수탕 중 60℃에서 1 시간 동안 박막을 수화시켰다 (5% 락토스 용액을 첨가함으로써). 이어서, 핫플레이트 상에 지지된 Avanti 사출기를 이용하여 70℃에서 11회 필터 서포트에 의해 지지된 400 nm 및 200 nm 포어 크기의 막을 통해 수화된 리포좀을 순차 사출시켰다. UV 측정 결과 이 제형의 % 캡슐화 효율은 탁산 초분자의 5.7 mol%인 것으로 나타났다. 얻어진 용액을 동결건조하고 -20℃에서 보관하였다. 이 시스템의 총 지질 대 탁산 초분자의 최종 중량 비율은 ~9.1:1인 것으로 나타났다.
[00343] 이 용액을 16-20 시간에 걸쳐 동결건조하고 (동결보호제로서 5% 락토스 용액을 사용함) 형성된 백색 고체 분말에 필요량의 물을 첨가함으로써 이를 재조성시켰다. 이 재조성된 초분자 제형의 DLS 연구 결과, 동결건조 전에 비해 초분자의 크기, PDI, 초분자의 표면 전위는 유사한 것으로 나타났다.
생물분석 (Bioassays)
[00344] 세포 배양 : 37℃, 5% CO2를 함유하는 습한 분위기에서 10% 소 태아 혈청(FBS) 및 항생제가 보강된 특수 배양 배지에서 포유동물 세포를 성장시켰다.
[00345] 세포 생존능 분석(cell viability assay) : 암 세포의 생존능에 미치는 초분자 탁산 컨쥬게이트의 효과를 MTT 분석법 (6,7, 8)을 이용하여 측정하였다. 100 μl 배양 배지 중 세포를 96-웰 플레이트 (3000-5000 세포/웰)에 플레이팅하고, 37℃, 5% CO2를 함유하는 습한 분위기에서 밤새 흡착시켰다. 화합물을 상이한 농도로 함유하는 신선한 배지 (100μL)를 세포에 첨가하고 48, 72 및 96 시간 동안 인큐베이션하였다. 인큐베이션 후, MTT 분석법을 이용하여 세포 생존능을 알아내었다. 암세포에 사용된 것과 동일한 인큐베이션 기간 및 화합물 투여량 하에서, 96-웰 플레이트 중 100 μl 배지에 접종된 정상적인 인간 상피 세포 (웰 당 5000-10,000 세포)에 대하여 유사한 분석법을 실시하여 정상 세포에 미치는 이 표적화 치료법의 효과를 알아보았다. 곡선 맞춤을 이용하여 세포 생존능을 투여량-반응 곡선으로서 플롯팅하였다.
[00346] 화합물 (신규 탁산 2 및 16)의 효과를 유방암 (MDA-MB-231), 난소암 (SKOV-3), 폐암 (A549), 전립선암 (DU-145), 및 직장결장암 (HCT-116) 세포주에서 표준 탁산과 비교하여 인 비트로 평가하였다 (도 . 1, 2 및 4 참조).
실시예 16: 면역치료제를 포함하는 초분자 조합 치료제
[00347] 세포 배양 : 37℃, 5% CO2를 함유하는 습한 분위기에서 10% 소 태아 혈청(FBS) 및 항생제가 보강된 특수 배양 배지에서 포유동물 세포를 성장시켰다.
[00348] 조합 요법 (Combinatorial therapy): 흑색종, 유방암 또는 폐암종 모델에서 초분자 및 PD-L1 또는 PD-1의 치료 효과를 시험하였다. 마우스(그룹 당 4-6 마리)에게 세포 (흑색종 (B16F10): 3 x 105 세포; 유방 (4T1): 5 x 105 세포; 폐 (LLC): 5 x 105 세포)를 피하 접종하였다. 종양 산생 마우스에서는 일단 평균 종양 크기가 60-90 mm3이 되면, 약물 요법은 다음의 투여분으로 구성되었다: 염수 (대조군용), 백금 약물 (5mg/kg); 백금 약물 (5mg/kg) 플러스 항-PD-1 또는 PD-L1항체 (2mg/kg); 백금 약물 (10mg/kg); 백금 약물 (10mg/kg) 플러스 항-PD-1 또는 PD-L1항체 (2mg/kg); 항-PD-1 또는 PD-L1 항체 (2mg/kg); 백금-초분자 (5mg/kg); 백금-초분자 (5mg/kg) 플러스 항-PD-1 또는 PD-L1항체 (2mg/kg); 백금-초분자 (10mg/kg); 백금-초분자 (10mg/kg) 플러스 항-PD-1 또는 PD-L1항체 (2mg/kg); 탁산 (5mg/kg); 탁산 (5mg/kg) 플러스 항-PD-1 또는 PD-L1항체 (2mg/kg); 탁산 (10mg/kg); 탁산 (10mg/kg) 플러스 항-PD-1 또는 PD-L1항체 (2mg/kg); 탁산-초분자 (5mg/kg); 탁산-초분자 (5mg/kg) 플러스 항-PD-1 또는 PD-L1항체 (2mg/kg); 탁산-초분자 (10mg/kg); 탁산-초분자 (10mg/kg) 플러스 항-PD-1 또는 PD-L1항체 (2mg/kg).
[00349] 화합물들을 꼬리 정맥에 투여하되, 백금/탁산 화합물은 q2d 투여하고 항-PD-1 또는 PD-L1항체는 후속일로부터 동일한 투여 스케쥴로 투여하였다. 종양의 크기와 체중을 2주일 동안 이틀에 한번 기록하였다. 종양 크기는 개개의 마우스에서 2개의 반대되는 직경들을 측정하여 mm3로 나타내었다. 평균 종양 크기가 2000 mm3를 초과하면 동물을 희생시켰다. 희생 직후 종양을 수확하여 10% 포르말린에 저장하거나 추가 분석을 위해 플래쉬 동결시켰다.
실시예 17: 면역치료제를 포함하는 초분자 조합 치료제
[00350] 조합 요법: 백금 초분자와 PD-L1의 치료 효과를 TNBC 모델에서 시험하였다. 마우스 (그룹 당 6 마리)에게 TNBC 세포 (4 x 105 세포)를 피하 접종하였다. 종양 산생 마우스에서는 일단 평균 종양 크기가 60-80 mm3이 되면, 약물 요법은 다음의 투여분으로 구성되었다: 염수 (대조군용), 카보플라틴 (5mg/kg); 항-PD-L1항체 (2mg/kg); IO-125 (5mg/kg); IO-125 (5mg/kg) 플러스 항-PD-L1항체 (2mg/kg).
[00351] 화합물들을 꼬리 정맥에 투여하되, 백금 화합물은 q2d 투여하고 항-PD-L1 항체는 후속일로부터 동일한 투여 스케쥴로 투여하였다. 종양의 크기와 체중을 1주일 동안 이틀에 한번 기록하였다. 희생 직후 종양을 수확하여 10% 포르말린에 저장하거나 추가 분석을 위해 플래쉬 동결시켰다.
[00352] 도 5는 4T1 (TNBC) 종양에 대한 항-PD-L1 및 IO-125의 치료 효과를 나타낸다. 종양-산생 마우스에게 백금 약물을 투여하거나 (회색 화살표) 항-PD-L1으로 면역화시켰다 (오렌지색 화살표). TNBC를 치료하기 위해 IO-125와 항-PD-L1의 조합이 사용된 경우 투여 후 5일까지 종양 크기가 35%까지 감소하였다. 종양 크기는 방정식 (LxWxW)/2에 따라 구하였으며, 여기서 측정된 최장 직경은 'L'이고 최단 직경은 'W'이다.
참고문헌
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[00353] 본 명세서 및 실시예에 인용된 모든 특허 및 기타 간행물은 목적을 불문하고 본 발명에 참고 통합되었음을 밝혀둔다. 이들 간행물들은 오직 본 발명 출원일 전에 개시된 것들이다. 이와 관련하여 이들 참고문헌에 기재된 내용이 어떠한 방식으로든 본 발명의 내용보다 앞선다는 것을 인정하는 것으로 이해되어서는 아니된다. 이들 문헌의 내용 및 일자에 관한 모든 진술은 출원인에게 입수가능한 정보에 기반한 것이며 이들 문헌의 발행일이나 내용물의 정확성까지 보장하는 것은 아니다.
[00354] 비록 바람직한 구체예들만을 설명하고 상세히 기재하였으나, 통상의 기술자에게는 다양한 변형, 부가, 치환등이 본 발명의 정신을 벗어남이 없이 얼마든지 행해질 수 있고 이러한 변형, 부가 치환도 첨부된 본 발명의 청구범위에 속한다는 것이 자명할 것이다. 또한, 앞서 표시되지 않은 한도에서, 통상의 기술자라면 본 명세서에서 설명 및 기재된 다양한 구체예들이 본 명세서에 기재된 다른 구체예의 특징들과 통합되도록 추가 변형될 수 있음도 이해할 것이다.

Claims (142)

  1. 탁산-지질 컨쥬게이트를 포함하는 초분자 조합 치료제 (SCT).
  2. 청구항 1에 있어서, 초분자 조합 치료제는 리포좀, 에멀젼, 미셀, 또는 입자인 초분자 조합 치료제.
  3. 청구항 1 또는 2에 있어서, 초분자 조합 치료제는 약 1% 내지 약 99% (w/w)의 탁산 컨쥬게이트를 포함하는 것인 초분자 조합 치료제.
  4. 청구항 1에 있어서, 탁산 컨쥬게이트는 카바지탁셀-지질 컨쥬게이트, 파클리탁셀-지질 컨쥬게이트 또는 도세탁셀-지질 컨쥬게이트인 것인 초분자 조합 치료제.
  5. 청구항 1에 있어서, 탁산 컨쥬게이트는 컨쥬게이트 1-33으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 초분자 조합 치료제.
  6. 청구항 1에 있어서, 초분자 조합 치료제는 지질 컨쥬게이트된 PI3K 저해제를 더 포함하는 것인 초분자 조합 치료제.
  7. 청구항 6에 있어서, 초분자 조합 치료제는 약 1% 내지 약 99% (w/w)의 PI3K 저해제 컨쥬게이트를 포함하는 것인 초분자 조합 치료제.
  8. 청구항 6 또는 7에 있어서, 초분자 조합 치료제는 탁산 컨쥬게이트와 PI3K 저해제 컨쥬게이트를 약 10:1 내지 약 1:10의 비율로 포함하는 것인 초분자 조합 치료제.
  9. 청구항 1에 있어서, 초분자 조합 치료제는 지질 컨쥬게이트된 백금 화합물을 더 포함하는 것인 초분자 조합 치료제.
  10. 청구항 9에 있어서, 초분자 조합 치료제는 약 1% 내지 약 99% (w/w)의 백금 컨쥬게이트를 포함하는 것인 초분자 조합 치료제.
  11. 청구항 9 또는 10에 있어서, 초분자 조합 치료제는 탁산 컨쥬게이트와 백금 컨쥬게이트를 약 10:1 내지 약 1:10의 비율로 포함하는 것인 초분자 조합 치료제.
  12. 청구항 1에 있어서, 초분자 조합 치료제는 지질 컨쥬게이트된 항체를 더 포함하는 것인 초분자 조합 치료제.
  13. 청구항 12에 있어서, 항체는 치료제 또는 표적화 리간드인 초분자 조합 치료제.
  14. 청구항 12 또는 13에 있어서, 항체는 항-PD-1 항체, 항-PD-L1 항체 및 그의 조합을 포함하는 면역조절제인 것인 초분자 조합 치료제.
  15. 청구항 12에 있어서, 초분자 조합 치료제는 약 1% 내지 약 99% (w/w)의 항체 컨쥬게이트를 포함하는 것인 초분자 조합 치료제.
  16. 청구항 12에 있어서, 초분자 조합 치료제는 탁산 컨쥬게이트 와 항체 컨쥬게이트를 약 10:1 내지 약 1:10의 비율로 포함하는 것인 초분자 조합 치료제.
  17. 청구항 1 또는 12에 있어서, 지질은 콜레스테롤; 1,3-프로판디올 디카프릴레이트/디카프레이트; 10-운데센산; 1--도트리아콘탄올; 1-헵타코산올; 1-노나코산올; 2-에틸 헥산올; 안드로스탄; 아라키드산; 아라키돈산; 아라키딜 알코올; 베헨산; 베헤닐 알코올; 캄풀 MCM C10; 카프르산; 카프릭 알코올; 카프릴 알코올; 카프릴산; 카프릴/카프르산 포화 지방 알코올 C12-C18의 에스테르; 카프릴/카프르 트리글리세라이드; 카프릴/카프르 트리글리세라이드; 세라마이드 포스포릴콜린 (스핑고미엘린, SPH); 세라마이드 포스포릴에탄올아민 (스핑고미엘린, Cer-PE); 세라마이드 포스포릴글리세롤; 세로플라스틱산; 세로트산; 세릴 알코올; 세테아릴 알코올; Ceteth-10; 세틸 알코올; 콜란; 콜레스탄; 콜레스테롤; 시스-11-에이코센산; 시스-11-옥타데센산; 시스-13-도코센산; 클루이틸 알코올; 디호모-γ-리놀렌산; 도코사헥산산; 난 레시틴; 에이코사펜타엔산; 에이코센산; 엘라이드산; 엘라이도리놀레닐알코올; 엘라이도리놀레일 알코올; 엘라이딜 알코올; 에루식산; 에루실 알코올; 에스트란; 에틸렌 글리콜 디스테아레이트 (EGDS); 게딕산; 게딜 알코올; 글리세롤 디스테아레이트 (I형) EP (Precirol ATO 5); 글리세롤 트리카프릴레이트/카프레이트; 글리세롤 트리카프릴레이트/카프레이트 (CAPTEX® 355 EP/NF); 글리세릴 모노카프릴레이트 (Capmul MCM C8 EP); 글리세릴 트리아세테이트; 글리세릴 트리카프릴레이트; 글리세릴 트리카프릴레이트/카프레이트/라우레이트; 글리세릴 트리카프릴레이트/트리카프레이트; 글리세릴 트리팔미테이트 (트리팔미틴); 헤나트리아콘틸산; 헤네이코실 알코올; 헤네이코실산; 헵타코실산; 헵타데칸산; 헵타데실 알코올; 헥사트리아콘틸산; 이소스테아르산; 이소스테아릴 알코올; 라세르산; 라우르산; 라우릴 알코올; 리그노세르산; 리그노세릴 알코올; 리노엘라이드산; 리놀레산; 리놀레닐 알코올; 리놀레일 알코올; 마르가르산; 미드(Mead); 멜리식산; 멜리실 알코올; 몬탄산; 몬타닐 알코올; 미리실 알코올; 미리스트산; 미리스톨산; 미리스틸 알코올; 네오데칸산; 네오헵탄산; 네오노난산; 네르본; 노나코실산; 노나데실 알코올; 노나데실산; 노나데실산; 올레산; 올레일 알코올; 팔미트산; 팔미톨레산; 팔미톨레일 알코올; 펠라곤산; 펠라곤 알코올; 펜타코실산; 펜타데실 알코올; 펜타데실산; 포스파티드산(포스파티데이트, PA); 포스파티딜콜린 (레시틴, PC); 포스파티딜에탄올아민 (세팔린, PE); 포스파티딜이노시톨 (PI); 포스파티딜이노시톨 비스포스페이트 (PIP2); 포스파티딜이노시톨 포스페이트(PIP); 포스파티딜이노시톨 트리포스페이트(PIP3); 포스파티딜세린 (PS); 폴리글리세릴-6-디스테아레이트; 프레그난; 프로필렌 글리콜디카프레이트; 프로필렌 글리콜 디카프릴로카프레이트; 프로필렌 글리콜 디카프릴로카프레이트; 프실산; 레시놀레아산; 레시놀레일 알코올; 사피엔산; 대두 레시틴; 스테아르산; 스테아리돈; 스테아릴 알코올; 트리코실산; 트리데실 알코올; 트리데실산; 트리올레인; 운데실 알코올; 운데실렌산; 운데실산; 바센산; α-리놀렌산; 및 γ-리놀렌산으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 초분자 조합 치료제.
  18. 청구항 1 또는 12에 있어서, 지질은 콜레스테롤, 알파-토코페롤, 또는 지방산인 것인 초분자 조합 치료제.
  19. 청구항 6에 있어서, PI3K 저해제 컨쥬게이트는:
    Figure pct00069
    또는
    Figure pct00070
    인 것인 초분자 조합 치료제.
  20. 청구항 9에 있어서, 백금 컨쥬게이트는:
    IO-125:
    Figure pct00071
    인 것인 초분자 조합 치료제.
  21. 청구항 1에 있어서, 초분자 조합 치료제는 탁산 컨쥬게이트에 더해 제1 지질을 더 포함하는 것인 초분자 조합 치료제.
  22. 청구항 21에 있어서, 제1 지질은 인지질인 것인 초분자 조합 치료제.
  23. 청구항 21에 있어서, 조성물은 제2 지질을 더 포함하는 것인 초분자 조합 치료제.
  24. 청구항 23에 있어서, 제2 지질은 인지질인 것인 초분자 조합 치료제.
  25. 청구항 22 또는 24에 있어서, 인지질은 포스파티딜 콜린, 6 내지 22개의 탄소 원자를 갖는 아실기가 있는 포스파티딜 콜린, 포스파티딜 에탄올아민, 포스파티딜 이노시톨, 포스파티드산, 포스파티딜 세린, 스핑고미엘린, 포스파티딜 글리세롤, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 초분자 조합 치료제.
  26. 청구항 22 또는 24에 있어서, 인지질은 포스파티딜콜린, 포스파티딜글리세롤, 레시틴, β,γ-디팔미토일-α-레시틴, 스핑고미엘린, 포스파티딜세린, 포스파티드산, N-(2,3-디(9-(Z)-옥타데세닐옥시))-프로-1-필-N,N,N-트리메틸암모늄 클로라이드, 포스파티딜에탄올아민, 리소레시틴, 리소포스파티딜에탄올아민, 포스파티딜이노시톨, 세팔린, 카르디올리핀, 세레브로사이드, 디세틸포스페이트, 디올레오일포스파티딜콜린, 디팔미토일포스파티딜콜린, 디팔미토일포스파티딜글리세롤, 디올레오일포스파티딜글리세롤, 팔미토일-올레오일-포스파티딜콜린, 디-스테아로일-포스파티딜콜린, 스테아로일-팔미토일-포스파티딜콜린, 디-팔미토일-포스파티딜에탄올아민, 디-스테아로일-포스파티딜에탄올아민, 디-미리스토일-포스파티딜세린, 디-올레일-포스파티딜콜린, 디미리스토일 포스파티딜 콜린 (DMPC), 디올레오일포스파티딜에탄올아민 (DOPE), 팔미토일올레오일포스파티딜콜린 (POPC), 계란 포스파티딜콜린 (EPC), 디스테아로일포스파티딜콜린 (DSPC), 디올레오일포스파티딜콜린 (DOPC), 디팔미토일포스파티딜콜린 (DPPC), 디올레오일포스파티딜글리세롤 (DOPG), 디팔미토일포스파티딜글리세롤 (DPPG), -포스파티딜에탄올아민 (POPE), 디올레오일-포스파티딜에탄올아민 4-(N-말레이미도메틸)-시클로헥산-1-카르복실레이트 (DOPE-mal), 1-스테아로일-2-올레오일 포스파티딜콜린 (SOPC), 1,2-디스테아로일-sn-글리셈-3-포스포에탄올아민 (DSPE), 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 초분자 조합 치료제.
  27. 청구항 22 또는 24에 있어서, 인지질은 SOPC인 것인 초분자 조합 치료제.
  28. 청구항 24에 있어서, 제1 및 제2 지질은 약 10:1 내지 약 1:10의 비율로 존재하는 것인 초분자 조합 치료제.
  29. 청구항 21에 있어서, 초분자 조합 치료제는 약 1% 내지 약 99%의 총 지질을 포함하는 것인 초분자 조합 치료제.
  30. 청구항 21에 있어서, 초분자 조합 치료제는 컨쥬게이트와 총 지질을 약 10:1 내지 약 1:10의 비율로 포함하는 것인 초분자 조합 치료제.
  31. 청구항 1에 있어서, 초분자 조합 치료제는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)을 더 포함하는 것인 초분자 조합 치료제.
  32. 청구항 31에 있어서, PEG는 초분자 조합 치료제의 한 성분과 컨쥬게이트된 것인 초분자 조합 치료제.
  33. 청구항 31에 있어서, PEG는 지질에 컨쥬게이트된 것인 초분자 조합 치료제.
  34. 청구항 33에 있어서, PEG 컨쥬게이트된 지질은 PEG 컨쥬게이트된 디아실글리세롤 및 디알킬글리세롤, PEG- 컨쥬게이트된 포스파티딜에탄올아민 및 포스파티드산, PEG 컨쥬게이트된 세라마이드, PEG 컨쥬게이트된 디알킬아민, PEG 컨쥬게이트된 1,2-디아실옥시프로판-3-아민, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 초분자 조합 치료제.
  35. 청구항 34에 있어서, PEG 컨쥬게이트된 지질은 1,2-디스테아로일-sn-글리셈-3-포스포에탄올아민-N-[아미노(폴리에틸렌 글리콜)-2000] (DSPE-PEG2000)인 것인 초분자 조합 치료제.
  36. 청구항 1에 있어서, 표적화 리간드를 더 포함하는 것인 초분자 조합 치료제.
  37. 청구항 36에 있어서, 표적화 리간드는 펩타이드, 폴리펩타이드, 단백질, 효소, 펩티도미메틱, 당단백질, 항체 (모노클로날 또는 폴리클로날) 및 그의 일부 또는 단편, 렉틴, 뉴클레오사이드, 뉴클레오타이드, 뉴클레오사이드 및 뉴클레오타이드 유사체, 핵산, 단당류, 이당류, 삼당류 올리고당, 다당류, 리포다당류, 비타민, 스테로이드, 호르몬, 코팩터(cofactors), 수용체, 수용체 리간드, 및 그의 유사체 및 유도체로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 초분자 조합 치료제.
  38. 청구항 37에 있어서, 표적화 리간드는 암세포 표면 상에 발현되는 단백질, 수용체, 또는 마커에 결합하는 것인 초분자 조합 치료제.
  39. 청구항 36에 있어서, 표적화 리간드는 조성물의 한 성분과 컨쥬게이트된 것인 초분자 조합 치료제.
  40. 청구항 39에 있어서, 표적화 리간드는 지질 또는 PEG와 컨쥬게이트된 것인 초분자 조합 치료제.
  41. 청구항 1에 있어서, 초분자 조합 치료제는 탁산 컨쥬게이트에 더해 화학치료제를 더 포함하는 것인 초분자 조합 치료제.
  42. 청구항 41에 있어서, 초분자 조합 치료제는 약 1% 내지 약 99% (w/w)의 화학치료제를 포함하는 것인 초분자 조합 치료제.
  43. 청구항 41에 있어서, 화학치료제는 PI3K 저해제; 백금 화합물; 토포이소머라제 I 및 II의 저해제; 알킬화제; 미세관 저해제; 혈관신생 저해제; 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 초분자 조합 치료제.
  44. 청구항 41에 있어서, 화학치료제는 PI3K 저해제, 백금 화합물, 저미시티빈; 알데스류킨; 알렘투주맙, 알리트레티노인; 알로퓨리놀; 알트레타민; 아미포스틴; 아나스트로졸; 삼산화비소; 아스파라기나제; BCG Live; 벡사로텐 캡슐; 벡사로텐 겔; 블레오마이신; 부술판 정맥제; 부술판오랄; 칼루스테론; 카페시타빈; 플라티네이트; 카르무스틴; 폴리페프로산 임플란트가 있는 카르무스틴; 셀레콕시브; 클로람부실; 클라드리빈; 시클로포스파미드; 시타라빈; 시타라빈 리포조말; 다카르바진; 닥티노마이신; 악티노마이신 D; 다르베포에틴 알파; 다우노루비신 리포조말; 다우노루비신 다우노마이신; 데니류킨 디피티톡스, 덱스라족산; 도세탁셀; 독소루비신; 독소루비신 리포조말; 드로모스타놀론 프로피오네이트; 엘리엇 B 용액; 에피루비신; 에포에틴 알파 에스트라무스틴; 에토포시드포스페이트; 에토포시드 (VP-16); 엑세메스탄; 필그라스팀; 플록스우리딘 (동맥내); 플루다라빈; 플루오로우라실 (5-FU); 풀베스트란트; 겜투주맙 오조가미신; 고세렐린 아세테이트; 히드록시우레아; 이브리투모맙 티욱세탄; 이다루비신; 이포스파미드; 이마티닙 메실레이트; 인터페론 알파-2a; 인터페론 알파-2b; 이리노테칸; 레트로졸; 류코보린; 레바미솔; 로무스틴 (CCNU); 메클로레타민 (니트로겐머스타드); 메게스트롤 아세테이트; 멜팔란 (L-PAM); 머캅토퓨린 (6-MP); 메스나; 메토트렉세이트; 메톡살렌; 미토마이신 C; 미토테인; 미토잔트론; 난드롤론; 펜프로피오네이트; 노페투모맙; LOddC; 오프렐베킨; 파미드로네이트; 페가데마제; 페가스파르가제; 페그필그라스팀; 펜토스타틴; 피포브로만; 플리카마이신; 미트라마이신; 포르피머 나트륨; 프로카르바진; 퀴나크린; 라스부리카제; 리툭시맙; 사르그라모스팀; 스트렙토조신; 탈부비딘 (LDT); 탈크; 타목시펜; 테모졸로미드; 테니포시드 (VM-26); 테스토락톤; 티오구아닌 (6-TG); 테오테파; 토포테칸; 토레미펜; 토시투모맙; 트라스투주맙; 트레티노인 (ATRA); 우라실 머스타드; 발루비신; 발토르시타빈 (모노발 LDC); 빈블라스틴; 비노렐빈; 졸레드로네이트; 및 및 이의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 초분자 조합 치료제.
  45. 청구항 43에 있어서, PI3K 저해제는 PI103; P1828; LY294002; 워르트만닌; 데메톡시비리딘; IC486068; IC87114; GDC-0941; 페리포신; CAL101; PX-866; IPI-145; BAY 80-6946; BEZ235; P6503; TGR1202; SF1126; INK1117; BKM120; IL147; XL765; 팔로미드 529; GSK1059615; ZSTK474; PWT33597; TG100-115; CAL263; GNE-447; CUDC-907; 및 AEZS-136, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 초분자 조합 치료제.
  46. 청구항 41에 있어서, 화학치료제는 조성물의 한 성분과 컨쥬게이트된 것인 초분자 조합 치료제.
  47. 청구항 46에 있어서, 화학치료제는 지질 또는 PEG와 컨쥬게이트된 것인 초분자 조합 치료제.
  48. 청구항 47에 있어서, 화학치료제는 콜레스테롤과 컨쥬게이트된 것인 초분자 조합 치료제.
  49. 청구항 1에 있어서, 초분자 조합 치료제는 중성 지질, 양이온 지질, 음이온 지질, 양친성 지질, 스테롤, 프로그램가능한 융합 지질, 또는 그의 조합을 더 포함하는 것인 초분자 조합 치료제.
  50. 청구항 1에 있어서, 초분자 조합 치료제는 적어도 1종 (예컨대, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10종 이상의 상이한) 탁산 컨쥬게이트 및 적어도 1종 (예컨대, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10종 이상의 상이한) PI3K 저해제-지질 컨쥬게이트를 포함하는 것인 초분자 조합 치료제.
  51. 청구항 1에 있어서, 초분자 조합 치료제는 적어도 1종의 탁산 컨쥬게이트 및 적어도 1종 (예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10종 이상의 상이한) 백금-지질 컨쥬게이트를 포함하는 것인 초분자 조합 치료제.
  52. 청구항 1에 있어서, 초분자 조합 치료제는 적어도 1종의 탁산 컨쥬게이트 및 적어도 1종의 항체-지질 컨쥬게이트를 포함하는 것인 초분자 조합 치료제.
  53. 청구항 1에 있어서, 초분자 조합 치료제는: (i) 적어도 1종의 탁산 컨쥬게이트,; 및 (ii) 인지질 및 PEG 컨쥬게이트된 지질을 포함하는 것인 초분자 조합 치료제.
  54. 청구항 53에 있어서, 조성물은 컨쥬게이트, 인지질 및 PEG 컨쥬게이트된 지질을 약 10-0.1 : 10-0.1 : 10-0.01의 비율로 포함하는 것인 초분자 조합 치료제.
  55. 청구항 53에 있어서, 인지질은 포스파티딜콜린이고 PEG 컨쥬게이트된 지질은 DSPE-PEG2000인 것인 초분자 조합 치료제.
  56. 청구항 53에 있어서, 인지질은 포스파티딜콜린인 것인 초분자 조합 치료제.
  57. 청구항 56에 있어서, 포스파티딜콜린은 SOPC, POPC, Egg PC, HSPC, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 초분자 조합 치료제.
  58. 청구항 1에 있어서, 초분자 조합 치료제는 나노입자인 것인 초분자 조합 치료제.
  59. 청구항 58에 있어서, 나노입자는 직경이 약 5 nm 내지 약 500 nm인 것인 초분자 조합 치료제.
  60. 청구항 59에 있어서, 나노입자는 직경이 약 50 nm 내지 약 200 nm인 것인 초분자 조합 치료제.
  61. 청구항 1에 있어서, 조성물은 약학적으로 허용가능한 담체를 더 포함하는 것인 초분자 조합 치료제.
  62. 암 치료를 필요로 하는 대상자에게 청구항 1에 기재된 초분자 조합 치료제를 투여하는 것을 포함하는, 암의 치료 방법.
  63. 청구항 62에 있어서, 암은 유방암; 난소암; 신경아교종; 위장관암; 전립선암; 암종, 폐암종, 간세포 암종, 고환암; 자궁경부암; 자궁내막암; 방광암; 두경부암; 폐암; 위식도암, 및 부인과암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  64. 청구항 63에 있어서, 대상자에게 1종 이상의 부가적인 항암요법을 추가로 공동 투여하는 방법.
  65. 청구항 64에 있어서, 부가적인 요법은 외과수술, 화학요법, 방사선요법, 열요법, 면역요법, 호르몬요법, 레이저요법, 항혈관신생 요법, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  66. 청구항 65에 있어서, 부가적인 요법은 환자에게 화학치료제를 투여하는 것을 포함하는 것인 방법.
  67. 청구항 62에 있어서, 대상자에게 면역조절제를 공동 투여하는 것을 더 포함하는 것인 방법.
  68. 청구항 67에 있어서, 면역조절제는 암세포에 대한 면역 반응을 활성화시키는 것인 방법.
  69. 청구항 68에 있어서, 면역조절제는 내추럴 킬러 세포, 림포카인-활성화된 킬러 세포, 세포독성 T 세포 및 수지상 세포, 항-PD-L1 항체, 항-PD-1 항체, 항-CD52 항체, 항-VEGF-A 항체, 항-CD30 항체, 항-EGFR 항체, 항-CD33 항체, 항-CD20 항체, 항-CTLA4 항체, 항-HER-2 항체, 인터페론 및 인터류킨으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  70. 암 환자가 백금산염 또는 탁산에 비해 자가-조립된 초분자 입자에 대해 더 개선된 반응을 나타낼 가능성을 예측하는 방법으로서, 상기 방법은 환자로부터 수득된 샘플 중의 1종 이상의 유전자의 발현 수준을 분석하고; 및 상기 환자가 긍정적인 반응을 나타낼 가능성을 예측하는 것을 포함하되, 여기서; 레퍼런스 또는 대조군에 비해 CAV1, CAV2, CAV3, LDLR, SMAD7, SMURF2, NEDD4, 또는 PRKCA로부터 선택왼 1종 이상의 유전자의 증가된 발현 수준은 자가-조립된 초분자 입자를 포함하는 치료에 대해 긍정적인 반응의 가능성과 긍정적으로 상관된 것인 방법.
  71. 청구항 70에 있어서, 1종 이상의 유전자는 EEA1, SRSF5, SMAD2, SNX3, PLCD1, OSBP, DNM1, DNM2, DNM3, SGK3, FAPP1, SMAD7, SMURF2, NEDD4, PRKCA, CDH-1, LDLR, CP, CD36, LYN, FLOT-1, FLOT-2, CA4, APOE, CAV1, CAV2, CAV3, LMAN2, LAT 및 STOM으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  72. 청구항 70에 있어서, 1종 이상의 유전자의 정규화된 발현 수준을 얻기 위해, 1종 이상의 레퍼런스 유전자의 발현 수준에 대해 1종 이상의 유전자의 발현 수준을 정규화시키는 것인 방법.
  73. 청구항 70에 있어서, 1종 이상의 유전자의 발현 수준은 1종 이상의 유전자의 RNA 전사체의 수준인 것인 방법.
  74. 청구항 70에 있어서, 1종 이상의 유전자의 발현 수준은 1종 이상의 유전자의 폴리펩타이드 수준인 것인 방법.
  75. 청구항 73에 있어서, 1종 이상의 유전자의 RNA 전사체의 수준은 역전사 폴리머라제 연쇄 반응 (RT-PCR)을 이용하여 분석되는 것인 방법.
  76. 청구항 70에 있어서, 샘플은 생검 샘플인 것인 방법.
  77. 청구항 70에 있어서, 샘플은 종양 세포인 것인 방법.
  78. 청구항 70에 있어서, 샘플은 고정되어, 왁스-포매된 조직 샘플인 것인 방법.
  79. 청구항 70에 있어서, 대상자에게 초분자 조합 치료제를 투여하는 것을 더 포함하는 것인 방법.
  80. 지질에 컨쥬게이트된 카바지탁셀을 포함하는 컨쥬게이트.
  81. 청구항 80에 있어서, 카바지탁셀은 링커를 통해 지질에 컨쥬게이트된 것인 컨쥬게이트.
  82. 청구항 81에 있어서, 링커는 직접 결합 또는 산소 또는 황과 같은 원자, 유닛 예컨대 NR1, C(O), C(O)O, C(O)NR1, SO, SO2, SO2NH 또는 원자 사슬, 예컨대, 치환되거나 치환되지 않은 알킬, 치환되거나 치환되지 않은 알케닐, 치환되거나 치환되지 않은 알키닐, 아릴알킬, 아릴알케닐, 아릴알키닐, 헤테로아릴알킬, 헤테로아릴알케닐, 헤테로아릴알키닐, 헤테로시클릴알킬, 헤테로시클릴알케닐, 헤테로시클릴알키닐, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로시클릴, 시클로알킬, 시클로알케닐, 알킬아릴알킬, 알킬아릴알케닐, 알킬아릴알키닐, 알케닐아릴알킬, 알케닐아릴알케닐, 알케닐아릴알키닐, 알키닐아릴알킬, 알키닐아릴알케닐, 알키닐아릴알키닐, 알킬헤테로아릴알킬, 알킬헤테로아릴알케닐, 알킬헤테로아릴알키닐, 알케닐헤테로아릴알킬, 알케닐헤테로아릴알케닐, 알케닐헤테로아릴알키닐, 알키닐헤테로아릴알킬, 알키닐헤테로아릴알케닐, 알키닐헤테로아릴알키닐, 알킬헤테로시클릴알킬, 알킬헤테로시클릴알케닐, 알킬헤테로시클릴알키닐, 알케닐헤테로시클릴알킬, 알케닐헤테로시클릴알케닐, 알케닐헤테로시클릴알키닐, 알키닐헤테로시클릴알킬, 알키닐헤테로시클릴알케닐, 알키닐헤테로시클릴알키닐, 알킬아릴, 알케닐아릴, 알키닐아릴, 알킬헤테로아릴, 알케닐헤테로아릴, 알키닐헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되되, 1개 이상의 메틸렌은 O, S, S(O), SO2, N(R1)2, C(O), 절단가능한 연결기, 치환되거나 치환되지 않은 아릴, 치환되거나 치환되지 않은 헤테로아릴, 치환되거나 치환되지 않은 헤테로시클릭에 의해 간섭 또는 종결될 수 있고; 여기서 R1은 수소, 아실, 지방족 또는 치환된 지방족인 것인 컨쥬게이트.
  83. 청구항 81에 있어서, 링커는 적어도 1개의 절단가능한 기를 포함하는 것인 컨쥬게이트.
  84. 청구항 81에 있어서, 링커는 숙신산, 푸마르산, 프로파르길산, 에틸렌 글리콜, 디에틸렌 글리콜, 및 천연 또는 비천연 아미노산 중 1종 이상을 포함하는 것인 컨쥬게이트.
  85. 청구항 81에 있어서, 링커는 옥살산, 말론산, 숙신산, 글루타르산, 숙신산, 에틸렌 디아민, 천연 또는 비천연 아미노산, 에틸렌 글리콜, 디에틸렌 글리콜, 아세트산, 프로피온산, 부티르산, 발레르산, 아크릴산, 부-2-텐산, 펜-2-텐산, 헥-2-센산, 2-프로핀산, 부-2-틴산, 펜-2-틴산, 헥-2-신산, 에틸렌, 프로필렌, 1-부텐, 1-펜텐, 1-헥센, 아세틸렌, 프로핀, 부-1-틴, 펜-1-틴, 및 이들의 조합 중 적어도 1종을 포함하는 것인 컨쥬게이트.
  86. 청구항 81에 있어서, 링커는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 컨쥬게이트: -C(O)CH2CH2C(O)NHCH2CH2NHC(O)-; -C(O)CH2CH2C(O)NHCH2NHC(O)-; -C(O)CH2OCH2CH2-; -C(O)CH2CH2OCH2CH2-; -C(O)CH2OCH2CH2OCH2CH2-; -C(O)CH(R)NHC(O)CH2-, 여기서 R은 H, CH3, CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2, C(CH3)CH2CH3, 또는 CH2-페닐; -C(O)CH(R)NHC(O)CH2CH2-, 여기서 R은 H, CH3, CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2, C(CH3)CH2CH3, 또는 CH2-페닐; -C(O)CH(R)NHC(O)(CH2)nC(O)-, 여기서 R은 H, CH3, CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2, C(CH3)CH2CH3, 또는 CH2-페닐, 및 n은 1 , 2, 또는 3; -C(O)CH(R)NHC(O)CH2OCH2CH2-, 여기서 R은 H, CH3, CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2, C(CH3)CH2CH3, 또는 CH2-페닐; -C(O)C=C(CH2)n-C(O)-, 여기서, n은 1, 2 또는 3; -C(O)C=C(CH2)n-, 여기서, n은 0, 1, 또는 2; -C(O)CH=CH(CH2)nC(O)-, 여기서, n은 0, 1, 2, 또는 3; -C(O)CH=CH(CH2)n-, 여기서, n은 1, 2, 또는 3; 및 -C(O)CH2CH2C(O)NHCH2C(O)-이다.
  87. 청구항 80에 있어서, 지질은 콜레스테롤; 1,3-프로판디올 디카프릴레이트/디카프레이트; 10-운데센산; 1--도트리아콘탄올; 1-헵타코산올; 1-노나코산올; 2-에틸 헥산올; 안드로스탄; 아라키드산; 아라키돈산; 아라키딜 알코올; 베헨산; 베헤닐 알코올; 캄풀 MCM C10; 카프르산; 카프릭 알코올; 카프릴 알코올; 카프릴산; 카프릴/카프르산 포화 지방 알코올 C12-C18의 에스테르; 카프릴/카프르 트리글리세라이드; 카프릴/카프르 트리글리세라이드; 세라마이드 포스포릴콜린 (스핑고미엘린, SPH); 세라마이드 포스포릴에탄올아민 (스핑고미엘린, Cer-PE); 세라마이드 포스포릴글리세롤; 세로플라스틱산; 세로트산; 세로트산; 세릴 알코올; 세테아릴 알코올; Ceteth-10; 세틸 알코올; 콜란; 콜레스탄; 콜레스테롤; 시스-11-에이코센산; 시스-11-옥타데센산; 시스-13-도코센산; 클루이틸 알코올; 디호모-γ-리놀렌산; 도코사헥산산; 난 레시틴; 에이코사펜타엔산; 에이코센산; 엘라이드산; 엘라이도리놀레닐알코올; 엘라이도리놀레일 알코올; 엘라이딜 알코올; 에루식산; 에루실 알코올; 에스트란; 에틸렌 글리콜 디스테아레이트 (EGDS); 게딕산; 게딜 알코올; 글리세롤 디스테아레이트 (I형) EP (Precirol ATO 5); 글리세롤 트리카프릴레이트/카프레이트; 글리세롤 트리카프릴레이트/카프레이트 (CAPTEX® 355 EP/NF); 글리세릴 모노카프릴레이트 (Capmul MCM C8 EP); 글리세릴 트리아세테이트; 글리세릴 트리카프릴레이트; 글리세릴 트리카프릴레이트/카프레이트/라우레이트; 글리세릴 트리카프릴레이트/트리카프레이트; 글리세릴 트리팔미테이트 (트리팔미틴); 헤나트리아콘틸산; 헤네이코실 알코올; 헤네이코실산; 헵타코실산; 헵타데칸산; 헵타데실 알코올; 헥사트리아콘틸산; 이소스테아르산; 이소스테아릴 알코올; 라세르산; 라우르산; 라우릴 알코올; 리그노세르산; 리그노세릴 알코올; 리노엘라이드산; 리놀레산; 리놀레닐 알코올; 리놀레일 알코올; 마르가르산; 미드(Mead); 멜리식산; 멜리실 알코올; 몬탄산; 몬타닐 알코올; 미리실 알코올; 미리스트산; 미리스톨산; 미리스틸 알코올; 네오데칸산; 네오헵탄산; 네오노난산; 네르본; 노나코실산; 노나데실 알코올; 노나데실산; 노나데실산; 올레산; 올레일 알코올; 팔미트산; 팔미톨레산; 팔미톨레일 알코올; 펠라곤산; 펠라곤 알코올; 펜타코실산; 펜타데실 알코올; 펜타데실산; 포스파티드산(포스파티데이트, PA); 포스파티딜콜린 (레시틴, PC); 포스파티딜에탄올아민 (세팔린, PE); 포스파티딜이노시톨 (PI); 포스파티딜이노시톨 비스포스페이트 (PIP2); 포스파티딜이노시톨 포스페이트(PIP); 포스파티딜이노시톨 트리포스페이트(PIP3); 포스파티딜세린 (PS); 폴리글리세릴-6-디스테아레이트; 프레그난; 프로필렌 글리콜디카프레이트; 프로필렌 글리콜 디카프릴로카프레이트; 프로필렌 글리콜 디카프릴로카프레이트; 프실산; 레시놀레아산; 레시놀레일 알코올; 사피엔산; 대두 레시틴; 스테아르산; 스테아리돈; 스테아릴 알코올; 트리코실산; 트리데실 알코올; 트리데실산; 트리올레인; 운데실 알코올; 운데실렌산; 운데실산; 바센산; α-리놀렌산; 및 γ-리놀렌산으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 컨쥬게이트.
  88. 청구항 80에 있어서, 지질은 콜레스테롤, 알파-토코페롤, 또는 지방산인 것인 컨쥬게이트.
  89. 청구항 80에 있어서, 컨쥬게이트는 컨쥬게이트 1-15 및 21-32로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 컨쥬게이트.
  90. 청구항 80에 기재된 컨쥬게이트를 포함하는 조성물.
  91. 청구항 90에 있어서, 조성물은 약 1% 내지 약 99% (w/w)의 컨쥬게이트를 포함하는 것인 조성물
  92. 청구항 90에 있어서, 조성물은 컨쥬게이트에 더해 제1 지질을 더 포함하는 것인 조성물.
  93. 청구항 92에 있어서, 제1 지질은 인지질인 것인 조성물.
  94. 청구항 92에 있어서, 조성물은 제2 지질을 더 포함하는 것인 조성물.
  95. 청구항 94에 있어서, 제2 지질은 인지질인 것인 조성물.
  96. 청구항 93 또는 95에 있어서, 인지질은 포스파티딜 콜린, 6 내지 22개의 탄소 원자를 갖는 아실기를 갖는 포스파티딜 콜린, 포스파티딜 에탄올아민, 포스파티딜 이노시톨, 포스파티드산, 포스파티딜 세린, 스핑고미엘린, 포스파티딜 글리세롤, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 조성물.
  97. 청구항 96에 있어서, 인지질은 포스파티딜콜린, 포스파티딜글리세롤, 레시틴, β,γ-디팔미토일-α-레시틴, 스핑고미엘린, 포스파티딜세린, 포스파티드산, N-(2,3-디(9-(Z)-옥타데세닐옥시))-프로-1-필-N,N,N-트리메틸암모늄 클로라이드, 포스파티딜에탄올아민, 리소레시틴, 리소포스파티딜에탄올아민, 포스파티딜이노시톨, 세팔린, 카르디올리핀, 세레브로사이드, 디세틸포스페이트, 디올레오일포스파티딜콜린, 디팔미토일포스파티딜콜린, 디팔미토일포스파티딜글리세롤, 디올레오일포스파티딜글리세롤, 팔미토일-올레오일-포스파티딜콜린, 디-스테아로일-포스파티딜콜린, 스테아로일-팔미토일-포스파티딜콜린, 디-팔미토일-포스파티딜에탄올아민, 디-스테아로일-포스파티딜에탄올아민, 디-미리스토일-포스파티딜세린, 디-올레일-포스파티딜콜린, 디미리스토일 포스파티딜 콜린 (DMPC), 디올레오일포스파티딜에탄올아민 (DOPE), 팔미토일올레오일포스파티딜콜린 (POPC), 계란 포스파티딜콜린 (EPC), 디스테아로일포스파티딜콜린 (DSPC), 디올레오일포스파티딜콜린 (DOPC), 디팔미토일포스파티딜콜린 (DPPC), 디올레오일포스파티딜글리세롤 (DOPG), 디팔미토일포스파티딜글리세롤 (DPPG), -포스파티딜에탄올아민 (POPE), 디올레오일-포스파티딜에탄올아민 4-(N-말레이미도메틸)-시클로헥산-1-카르복실레이트 (DOPE-mal), 1-스테아로일-2-올레오일 포스파티딜콜린 (SOPC), 1,2-디스테아로일-sn-글리셈-3-포스포에탄올아민 (DSPE), 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 조성물.
  98. 청구항 97에 있어서, 인지질은 SOPC 또는 POPC인 것인 조성물.
  99. 청구항 94에 있어서, 제1 지질과 제2 지질은 약 10:1 내지 약 1:10의 비율인 것인 조성물.
  100. 청구항 92에 있어서, 조성물은 약 1% 내지 약 99%의 총 지질을 포함하는 것인 조성물.
  101. 청구항 92에 있어서, 조성물은 컨쥬게이트와 총 지질을 약 10:1 내지 약 1:10의 비율로 포함하는 것인 조성물.
  102. 청구항 92에 있어서, 조성물은 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)을 더 포함하는 것인 조성물.
  103. 청구항 102에 있어서, PEG는 조성물 중 한 성분에 컨쥬게이트된 것인 조성물.
  104. 청구항 102 또는 103에 있어서, PEG는 지질에 컨쥬게이트된 것인 조성물.
  105. 청구항 104에 있어서, PEG 컨쥬게이트된 지질은 PEG 컨쥬게이트된 디아실글리세롤 및 디알킬글리세롤, PEG- 컨쥬게이트된 포스파티딜에탄올아민 및 포스파티드산, PEG 컨쥬게이트된 세라마이드, PEG 컨쥬게이트된 디알킬아민, PEG 컨쥬게이트된 1,2-디아실옥시프로판-3-아민, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 조성물.
  106. 청구항 105에 있어서, PEG 컨쥬게이트된 지질은 1,2-디스테아로일-sn-글리셈-3-포스포에탄올아민-N-[아미노(폴리에틸렌 글리콜)-2000] (DSPE-PEG2000)인 것인 조성물.
  107. 청구항 90에 있어서, 표적화 리간드를 더 포함하는 것인 조성물.
  108. 청구항 107에 있어서, 표적화 리간드는 펩타이드, 폴리펩타이드, 단백질, 효소, 펩티도미메틱, 당단백질, 항체 (모노클로날 또는 폴리클로날) 및 이의 일부분 및 단편, 렉틴, 뉴클레오사이드, 뉴클레오타이드, 뉴클레오사이드 및 뉴클레오타이드 유사체, 핵산, 단당류, 이당류, 삼당류 올리고당, 다당류, 리포다당류, 비타민, 스테로이드, 호르몬, 코팩터(cofactors), 수용체, 수용체 리간드, 및 이의 유사체 및 유도체로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 조성물.
  109. 청구항 108에 있어서, 표적화 리간드는 암세포의 표면에서 발현되는 단백질, 수용체 또는 마커에 결합하는 것인 조성물.
  110. 청구항 107에 있어서, 표적화 리간드는 조성물의 한 성분과 컨쥬게이트된 것인 조성물.
  111. 청구항 110에 이어서, 표적화 리간드는 지질 또는 PEG와 컨쥬게이트된 것인 조성물.
  112. 청구항 90에 있어서, 조성물은 컨쥬게이트에 더해 화학치료제를 더 포함하는 것인 조성물.
  113. 청구항 112에 있어서, 조성물은 약 1% 내지 약 99% (w/w)의 화학치료제를 포함하는 것인 조성물.
  114. 청구항 113에 있어서, 화학치료제는 of PI3K 저해제; 백금 화합물; 토포이소머라제 I 및 II의 저해제; 알킬화제; 미세관 저해제; 혈관신생 저해제; 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 조성물.
  115. 청구항 112에 있어서, 화학치료제는 PI3K 저해제, 백금 화합물, 저미시티빈; 알데스류킨; 알렘투주맙, 알리트레티노인; 알로퓨리놀; 알트레타민; 아미포스틴; 아나스트로졸; 삼산화비소; 아스파라기나제; BCG Live; 벡사로텐 캡슐; 벡사로텐 겔; 블레오마이신; 부술판 정맥제; 부술판오랄; 칼루스테론; 카페시타빈; 플라티네이트; 카르무스틴; 폴리페프로산 임플란트가 있는 카르무스틴; 셀레콕시브; 클로람부실; 클라드리빈; 시클로포스파미드; 시타라빈; 시타라빈 리포조말; 다카르바진; 닥티노마이신; 악티노마이신 D; 다르베포에틴 알파; 다우노루비신 리포조말; 다우노루비신 다우노마이신; 데니류킨 디피티톡스, 덱스라족산; 도세탁셀; 독소루비신; 독소루비신 리포조말; 드로모스타놀론 프로피오네이트; 엘리엇 B 용액; 에피루비신; 에포에틴 알파 에스트라무스틴; 에토포시드포스페이트; 에토포시드 (VP-16); 엑세메스탄; 필그라스팀; 플록스우리딘 (동맥내); 플루다라빈; 플루오로우라실 (5-FU); 풀베스트란트; 겜투주맙 오조가미신; 고세렐린 아세테이트; 히드록시우레아; 이브리투모맙 티욱세탄; 이다루비신; 이포스파미드; 이마티닙 메실레이트; 인터페론 알파-2a; 인터페론 알파-2b; 이리노테칸; 레트로졸; 류코보린; 레바미솔; 로무스틴 (CCNU); 메클로레타민 (니트로겐머스타드); 메게스트롤 아세테이트; 멜팔란 (L-PAM); 머캅토퓨린 (6-MP); 메스나; 메토트렉세이트; 메톡살렌; 미토마이신 C; 미토테인; 미토잔트론; 난드롤론; 펜프로피오네이트; 노페투모맙; LOddC; 오프렐베킨; 파미드로네이트; 페가데마제; 페가스파르가제; 페그필그라스팀; 펜토스타틴; 피포브로만; 플리카마이신; 미트라마이신; 포르피머 나트륨; 프로카르바진; 퀴나크린; 라스부리카제; 리툭시맙; 사르그라모스팀; 스트렙토조신; 탈부비딘 (LDT); 탈크; 타목시펜; 테모졸로미드; 테니포시드 (VM-26); 테스토락톤; 티오구아닌 (6-TG); 테오테파; 토포테칸; 토레미펜; 토시투모맙; 트라스투주맙; 트레티노인 (ATRA); 우라실 머스타드; 발루비신; 발토르시타빈 (모노발 LDC); 빈블라스틴; 비노렐빈; 졸레드로네이트; 및 이의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 조성물.
  116. 청구항 114에 있어서, PI3K 저해제는 PI103; P1828; LY294002; 워르트만닌; 데메톡시비리딘; IC486068; IC87114; GDC-0941; 페리포신; CAL101; PX-866; IPI-145; BAY 80-6946; BEZ235; P6503; TGR1202; SF1126; INK1117; BKM120; IL147; XL765; 팔로미드 529; GSK1059615; ZSTK474; PWT33597; TG100-115; CAL263; GNE-447; CUDC-907; 및 AEZS-136, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 조성물.
  117. 청구항 112에 있어서, 화학치료제는 조성물의 한 성분과 컨쥬게이트된 것인 조성물.
  118. 청구항 117에 있어서, 화학치료제는 지질 또는 PEG에 컨쥬게이트된 것인 조성물.
  119. 청구항 118에 있어서, 화학치료제는 콜레스테롤과 컨쥬게이트된 것인 조성물.
  120. 청구항 119에 있어서, 지질 컨쥬게이트된 화학치료제는:
    Figure pct00072

    Figure pct00073

    인 것인 조성물.
  121. 청구항 90에 있어서, 조성물은 항-PD-1 항체, 항-PD-L1 항체 및 이의 조합을 포함하는 면역조절제를 더 포함하는 것인 조성물.
  122. 청구항 121에 있어서, 면역조절제는 지질에 컨쥬게이트된 것인 조성물.
  123. 청구항 122에 있어서, 면역조절제는 콜레스테롤에 컨쥬게이트된 것인 조성물.
  124. 청구항 90에 있어서, 조성물은 중성 지질, 양이온 지질, 음이온 지질, 양친성 지질, 스테롤, 프로그램가능한 융합 지질, 또는 이의 조합을 더 포함하는 것인 조성물.
  125. 청구항 90에 있어서, 조성물은 컨쥬게이트, 인지질, 및 PEG 컨쥬게이트된 지질을 포함하는 것인 조성물.
  126. 청구항 125에 있어서, 조성물은 컨쥬게이트, 인지질 및 PEG 컨쥬게이트된 지질을 약 10-0.1 : 10-0.1 : 10-0.1의 비율로 포함하는 것인 조성물.
  127. 청구항 125에 있어서, 인지질은 포스파티딜콜린이고 PEG 컨쥬게이트된 지질은 DSPE-PEG2000인 것인 조성물.
  128. 청구항 125에 있어서, 인지질은 포스파티딜콜린인 것인 조성물.
  129. 청구항 128에 있어서, 포스파티딜콜린은 SOPC, POPC, Egg PC, HSPC, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 조성물.
  130. 청구항 90에 있어서, 조성물은 리포좀, 에멀젼, 또는 미셀인 것인 조성물.
  131. 청구항 90에 있어서, 조성물은 나노입자인 것인 조성물.
  132. 청구항 131에 있어서, 나노입자는 직경이 약 5 nm 내지 약 500 nm인 것인 조성물.
  133. 청구항 132에 있어서, 나노입자는 직경이 약 50 nm 내지 약 200 nm인 것인 조성물.
  134. 청구항 90에 있어서, 조성물은 약학적으로 허용되는 담체를 더 포함하는 것인 조성물.
  135. 암 치료를 필요로 하는 대상자에게 청구항 90의 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 암의 치료 방법.
  136. 청구항 135에 있어서, 암은 유방암; 난소암; 신경아교종; 위장관암; 전립선암; 암종, 폐암종, 간세포 암종, 고환암; 자궁경부암; 자궁내막암; 방광암; 두경부암; 폐암; 위식도암, 및 부인과암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  137. 청구항 135에 있어서, 대상자에게 1종 이상의 부가적인 항암 요법을 공동-투여하는 것을 더 포함하는 것인 방법.
  138. 청구항 137에 있어서, 부가적인 요법은 외과수술, 화학요법, 방사선요법, 열요법, 면역요법, 호르몬요법, 레이저요법, 항혈관신생 요법, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  139. 청구항 138에 있어서, 부가적인 요법은 환자에게 화학치료제를 투여하는 것을 포함하는 것인 방법.
  140. 청구항 135에 있어서, 대상자에게 면역조절제를 공동-투여하는 것을 더 포함하는 것인 방법.
  141. 청구항 140에 있어서, 면역조절제는 암세포에 대한 면역 반응을 활성화시키는 것인 방법.
  142. 청구항 141에 있어서, 면역조절제는 내추럴 킬러 세포, 림포카인-활성화된 킬러 세포, 세포독성 T 세포 및 수지상 세포, 항-PD-L1 항체, 항-PD-1 항체, 항-CD52 항체, 항-VEGF-A 항체, 항-CD30 항체, 항-EGFR 항체, 항-CD33 항체, 항-CD20 항체, 항-CTLA4 항체, 항-HER-2 항체, 인터페론 및 인터류킨으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
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