KR20160132029A - 에스트로젠 수용체 돌연변이체의 조절을 위한 방법 및 조성물 - Google Patents

에스트로젠 수용체 돌연변이체의 조절을 위한 방법 및 조성물 Download PDF

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KR20160132029A
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로리 프리드만
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Abstract

본 발명은 에스트로젠 수용체 조절제를 투여함으로써 ESR1 유전자 중의 돌연변이를 특징으로 하는 ER-관련된 질병 또는 병태를 치료하기 위한 방법 및 조성물을 개시한다. 또한 본 발명은 에스트로젠 수용체 조절제를 투여함으로써 상기 ESR1 유전자 중의 돌연변이를 특징으로 하는 호르몬 내성-에스트로젠 수용체(ER) 양성 유방암을 치료하는 방법을 개시한다.

Description

에스트로젠 수용체 돌연변이체의 조절을 위한 방법 및 조성물{METHODS AND COMPOSITIONS FOR MODULATING ESTROGEN RECEPTOR MUTANTS}
서열 목록
본 출원은, EFS-웹을 통해 ASCII 포맷으로 컴퓨터 해독 가능한 텍스트 파일로서 제출되고 내용 전체가 본 발명에 참고로 인용된 서열 목록을 함유한다. 2014년 3월 13일자로 생성된 상기 텍스트 파일의 명칭은 45202-739-101seqlist.txt이고 크기는 8 KB이다.
발명의 분야
본 발명은 에스트로젠 수용체 조절제를 투여함으로써, 여성에서 하나 이상의 종양 세포의 에스트로젠 수용체(ER) 유전자 중의 돌연변이를 특징으로 하는 호르몬 내성-ER 양성 유방암을 치료하는 방법을 개시한다.
유방암은 가장 흔한 형태의 암이며 전 세계 여성의 주된 암 사망 원인이다. 전체 유방암의 대략 80%는 에스트로젠 수용체(ER)를 발현하며 종양 성장 및 진행이 상기 수용체에 따라 변한다. 상기 에스트로젠 수용체("ER")는 내인성 에스트로젠과의 상호작용을 통해 다양한 생물학적 효과의 유도를 매개하는 리간드-활성화된 전사 조절 단백질이다. 내인성 에스트로젠은 17β-에스트라디올 및 에스트론을 포함한다. ER은 2개의 동형인 ER-α 및 ER-β를 갖는 것으로 밝혀졌다. 에스트로젠 및 에스트로젠 수용체는 다수의 질병 또는 병태, 예를 들어 유방암, 난소암, 결장암, 폐암, 전립선암, 자궁내막암, 자궁암뿐만 아니라 다른 질병 또는 병태에 관련된다.
대부분의 유방암 환자들은, 에스트로젠 합성을 차단하거나(예를 들어 아로마타제 억제제; AI) 또는 경쟁적인 ER 결합을 통해 에스트라디올의 효과를 길항하는(예를 들어 타목시펜) 작용제들로 치료된다(문헌[Puhalla S, et al Mol Oncol 2012; 6(2):222-236]). 질병의 다양한 병기에서 이들 작용제의 충분히 기록된 치료학적 유용성에도 불구하고, 다수의 ER+ 유방암이 재발하며 환자들은 결국 사망한다. 최근에, 차세대 전체 게놈 및 표적화된 서열분석은, 내분비 요법, 주로 아로마타제 억제제를 진행한, 진행된 유방암 환자의 종양의 20% 이하에서 ESR1(에스트로젠 수용체 알파 유전자) 돌연변이를 확인하였다(문헌[Li S, et al. Cell Rep (2013); 4(6): 1116-1130]; 문헌[Merenbakh-Lamin K, et al. Cancer Res (2013); 73(23): 6856-6864]; 문헌[Robinson DR, et al. Nat Genet (2013); 45(12): 1446-1451]; 문헌[Toy W, et al. Nat Genet (2013); 45(12): 1439-1445]; 문헌[Jeselsohn R, et al. Clin Cancer Res (2014); 20: 1757-1767]). 이들 리간드-결합 도메인(LBD) 돌연변이는 아포-수용체의 높은 기본 활성을 부여하여 상기 수용체를 리간드-독립성으로 만들고 따라서 낮은 에스트라디올 환경에서 활성으로 만든다. ESR1 돌연변이 종양을 갖는 환자들의 부분집합을 포함하여 AI 또는 타목시펜 치료 후 진행성 질병의 환경에서 확고한 활성으로 ER 신호전달을 표적화하는 치료법이 대단히 요구된다.
ARN-810(GDC-0810, 세라곤 파마슈티칼스 제넨테크 인코포레이티드(Seragon Pharmaceuticals, Genentech Inc.))은, 에스트로젠의 효과를 길항하고 프로테아솜을 통해 ER 분해를 유도하는 효능 있는 소분자, 비스테로이드성, 선택성 ER 조절제이다. ARN-810은 진행된 전이성 ER-α 양성(ER+) 유방암을 치료하기 위한 경구-전달요법으로서 임상 시험 중에 있다.
비-스테로이드성, 선택성 에스트로젠 수용체 분해제(SERD)가 개시되었다(WO 2011/156518; 미국특허 제 8703810 호; WO 2012/037411; WO 2012/037410; 미국특허 제 8299112 호; 미국특허 제 8455534 호; WO 2013/090829; WO 2013/142266; WO 2014/151899; WO 2013/090836; WO 2014/025138; WO 2014/205136).
몇몇 실시태양에서, 본 발명은 ESR1 유전자 중에 돌연변이를 가짐을 특징으로 하는 환자에서 호르몬 내성-에스트로젠 수용체(ER) 양성 유방암을 치료하기 위한 방법을 개시하며, 상기 방법은 에스트로젠 수용체 조절제(ERM)를 투여함을 포함한다. 일부 실시태양에서, 상기 에스트로젠 수용체 조절제는 선택성 에스트로젠 수용체 분해제(SERD)이다. 일부 실시태양에서, 상기 에스트로젠 수용체 조절제는 선택성 에스트로젠 수용체 조절제(SERM)이다. 일부 실시태양에서, 상기 에스트로젠 수용체 조절제는 화학식 A, B, C 또는 D의 구조를 갖는 화합물이다. 일부 실시태양에서, 화학식 A의 구조를 갖는 화합물은 화학식 A-1의 구조를 갖는 화합물이다. 일부 실시태양에서, 화학식 C의 구조를 갖는 화합물은 화학식 C-1의 구조를 갖는 화합물이다. 일부 실시태양에서, 화학식 D의 구조를 갖는 화합물은 화학식 D-1, D-2, D-3, D-4, D-5 또는 D-6의 구조를 갖는 화합물이다. 일부 실시태양에서, 상기 ESR1 유전자 중의 돌연변이는 서열번호 2의 아미노산 위치 6, 118, 269, 311, 341, 350, 380, 392, 394, 433, 463, 503, 534, 535, 536, 537, 538 및 555 중에서 선택된 위치에서 아미노산 치환을 갖는 ER 폴리펩타이드를 생성시킨다. 일부 실시태양에서, 상기 돌연변이는 H6Y, S118P, R269C, T311M, S341L, A350E, E380Q, V392I, R394H, S433P, S463P, R503W, V534E, P535H, L536R, L536P, L536Q, Y537N, Y537C, Y537S, D538G, 및 R555C 중에서 선택된 아미노산 치환을 갖는 ER 폴리펩타이드를 생성시킨다. 일부 실시태양에서, 상기 환자는 상기 ESR1 유전자 중에 2개 이상의 돌연변이를 갖는다.
본 발명은 몇몇 실시태양에서 상기 ESR1 유전자에 돌연변이를 갖는 환자에게 화학식 A, B, C 또는 D의 에스트로젠 수용체 조절제(ERM) 화합물을 투여함을 포함하는 ER-관련된 질병 또는 병태의 치료 방법을 개시한다.
상기 화학식 A의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물은 하기의 구조를 갖는다:
[화학식 A]
Figure pct00001
상기 식에서,
Ra는 -CO2H 또는
Figure pct00002
및
Figure pct00003
로 이루어지는 군 중에서 선택된 5-원 헤테로사이클이고;
Rb는 C1-C6알킬 또는 C3-C6사이클로알킬이고;
Rc는 H 또는 F이고;
각각의 Rd는 H, 할로겐, -CN, -ORe, -NHRe, -NReRf, -SRe, -S(=O)Rf, -S(=O)2Rf, C1-C6알킬, 및 C1-C6플루오로알킬 중에서 독립적으로 선택되고;
각각의 Re는 H, -C(=O)Rf, -C(=O)ORf, -C(=O)NHRf, C1-C6알킬, C1-C6플루오로알킬, C3-C6사이클로알킬, 치환되거나 비치환된 모노사이클릭 C2-C6헤테로사이클로알킬, 치환되거나 비치환된 페닐, 및 치환되거나 비치환된 모노사이클릭 헤테로아릴 중에서 독립적으로 선택되고;
각각의 Rf는 C1-C6알킬, C1-C6플루오로알킬, C3-C6사이클로알킬, 치환되거나 비치환된 모노사이클릭 C2-C6헤테로사이클로알킬, 치환되거나 비치환된 페닐, 및 치환되거나 비치환된 모노사이클릭 헤테로아릴 중에서 독립적으로 선택되고;
X는 CH 또는 N이고;
n은 0, 1 또는 2이다.
일부 실시태양에서, 상기 에스트로젠 수용체 조절제는 하기 화학식 A-1의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물이다:
[화학식 A-1]
Figure pct00004
일부 실시태양에서, 상기 에스트로젠 수용체 조절제는 화합물 1-1, 1-2, 1-3, 1-4, 1-5, 1-6, 1-7, 1-8, 1-9, 1-10, 1-11, 및 1-12 중에서 선택된다.
일부 실시태양에서, 상기 에스트로젠 수용체 조절제는 화합물 1-3이다.
상기 화학식 B의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물은 하기의 구조를 갖는다:
[화학식 B]
Figure pct00005
상기 식에서,
Ra는 -CO2H 또는
Figure pct00006
및
Figure pct00007
로 이루어지는 군 중에서 선택된 5-원 헤테로사이클이고;
고리 C는
Figure pct00008
또는
Figure pct00009
이고;
고리 D는 페닐 또는 티에닐이고;
각각의 Rd는 H, 할로겐, -CN, -ORe, -NHRe, -NReRf, -SRe, -S(=O)Rf, -S(=O)2Rf, C1-C6알킬, 및 C1-C6플루오로알킬 중에서 독립적으로 선택되고;
각각의 Re는 H, -C(=O)Rf, -C(=O)ORf, -C(=O)NHRf, C1-C6알킬, C1-C6플루오로알킬, C3-C6사이클로알킬, 치환되거나 비치환된 모노사이클릭 C2-C6헤테로사이클로알킬, 치환되거나 비치환된 페닐, 및 치환되거나 비치환된 모노사이클릭 헤테로아릴 중에서 독립적으로 선택되고;
각각의 Rf는 C1-C6알킬, C1-C6플루오로알킬, C3-C6사이클로알킬, 치환되거나 비치환된 모노사이클릭 C2-C6헤테로사이클로알킬, 치환되거나 비치환된 페닐, 및 치환되거나 비치환된 모노사이클릭 헤테로아릴 중에서 독립적으로 선택되고;
n은 0, 1 또는 2이다.
일부 실시태양에서, 상기 에스트로젠 수용체 조절제는 화합물 2-1, 2-2, 2-3, 2-4 및 2-5 중에서 선택된다.
상기 화학식 C의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물은 하기의 구조를 갖는다:
[화학식 C]
Figure pct00010
상기 식에서,
Ra는 -CO2H 또는
Figure pct00011
및
Figure pct00012
로 이루어지는 군 중에서 선택된 5-원 헤테로사이클이고;
Rb는 C1-C6알킬 또는 C3-C6사이클로알킬이고;
각각의 Rd는 H, 할로겐, -CN, -ORe, -NHRe, -NReRf, -SRe, -S(=O)Rf, -S(=O)2Rf, C1-C6알킬, 및 C1-C6플루오로알킬 중에서 독립적으로 선택되고;
각각의 Re는 H, -C(=O)Rf, -C(=O)ORf, -C(=O)NHRf, C1-C6알킬, C1-C6플루오로알킬, C3-C6사이클로알킬, 치환되거나 비치환된 모노사이클릭 C2-C6헤테로사이클로알킬, 치환되거나 비치환된 페닐, 및 치환되거나 비치환된 모노사이클릭 헤테로아릴 중에서 독립적으로 선택되고;
각각의 Rf는 C1-C6알킬, C1-C6플루오로알킬, C3-C6사이클로알킬, 치환되거나 비치환된 모노사이클릭 C2-C6헤테로사이클로알킬, 치환되거나 비치환된 페닐, 및 치환되거나 비치환된 모노사이클릭 헤테로아릴 중에서 독립적으로 선택되고;
n은 0, 1 또는 2이다.
일부 실시태양에서, 상기 에스트로젠 수용체 조절제는 하기 화학식 C-1의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물이다:
[화학식 C-1]
Figure pct00013
일부 실시태양에서, 상기 에스트로젠 수용체 조절제는 화합물 3-1, 3-2, 3-3, 3-4이다.
상기 화학식 D의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물은 하기의 구조를 갖는다:
[화학식 D]
Figure pct00014
상기 식에서,
R1은 H, C1-C4알킬 또는 C1-C4플루오로알킬이고;
R2는 H, F, C1-C4알킬 또는 C1-C4플루오로알킬이고;
R3은 H, 할로겐, -CN, -OR6, -NHR6, -NR6R7, -SR6, -S(=O)R7, -S(=O)2R7, C1-C4알킬 또는 C1-C4플루오로알킬이고;
각각의 R4는 H, 할로겐, -CN, -OH, C1-C6알킬, C1-C4플루오로알킬, C1-C4플루오로알콕시, 및 C1-C4알콕시 중에서 독립적으로 선택되고;
각각의 R5는 H, F, Cl, -OH, -CH3, -CF3 또는 -OCH3이고;
각각의 R6은 H, -C(=O)R7, -C(=O)OR7, -C(=O)NHR7, C1-C6알킬, C1-C6플루오로알킬, C3-C6사이클로알킬, 치환되거나 비치환된 C2-C6헤테로사이클로알킬, 치환되거나 비치환된 페닐, 및 치환되거나 비치환된 모노사이클릭 헤테로아릴 중에서 독립적으로 선택되고;
각각의 R7은 C1-C6알킬, C1-C6플루오로알킬, 치환되거나 비치환된 C3-C6사이클로알킬, 치환되거나 비치환된 모노사이클릭 C2-C6헤테로사이클로알킬, 치환되거나 비치환된 페닐, 및 치환되거나 비치환된 모노사이클릭 헤테로아릴 중에서 독립적으로 선택되고;
n은 0, 1 또는 2이고;
t는 1 또는 2이다.
일부 실시태양에서, 상기 에스트로젠 수용체 조절제는 하기 화학식 D-1의 화합물이다:
[화학식 D-1]
Figure pct00015
일부 실시태양에서, 상기 에스트로젠 수용체 조절제는 하기 화학식 D-2의 화합물이다:
[화학식 D-2]
Figure pct00016
일부 실시태양에서, 상기 에스트로젠 수용체 조절제는 하기 화학식 D-3의 화합물이다:
[화학식 D-3]
Figure pct00017
일부 실시태양에서, 상기 에스트로젠 수용체 조절제는 하기 화학식 D-4의 화합물이다:
[화학식 D-4]
Figure pct00018
일부 실시태양에서, 상기 에스트로젠 수용체 조절제는 화합물 4-1, 4-2, 4-3, 4-4, 4-5, 4-6, 4-7, 4-8, 4-9, 4-10, 4-11, 4-12, 4-13, 4-14, 4-15, 4-16, 4-17, 4-18, 4-19, 4-20, 4-21, 4-22, 4-23, 4-24, 4-25, 4-26, 4-27, 4-28, 4-29, 4-30, 4-31, 4-32, 4-33, 4-34, 4-35, 4-36, 4-37, 4-38, 4-39, 4-40, 4-41, 4-42, 4-43, 4-44 및 4-45 중에서 선택된다.
일부 실시태양에서, 상기 에스트로젠 수용체 조절제는 화합물 4-23이다.
일부 실시태양에서, 상기 에스트로젠 수용체 조절제는 화합물 1-3 또는 4-23이다.
일부 실시태양에서, 상기 에스트로젠 수용체 조절제는 (E)-3-(4-((E)-2-(2-클로로-4-플루오로페닐)-1-(1H-인다졸-5-일)부트-1-엔-1-일)페닐)아크릴산 또는 (S)-2-(4-(2-(3-(플루오로메틸)아제티딘-1-일)에톡시)페닐)-3-(3-하이드록시페닐)-4-메틸-2H-크로멘-6-올이다.
일부 실시태양에서, 상기 에스트로젠 수용체 조절제는 (E)-3-(4-((E)-2-(2-클로로-4-플루오로페닐)-1-(1H-인다졸-5-일)부트-1-엔-1-일)페닐)아크릴산이다.
일부 실시태양에서, 상기 에스트로젠 수용체 조절제는 (S)-2-(4-(2-(3-(플루오로메틸)아제티딘-1-일)에톡시)페닐)-3-(3-하이드록시페닐)-4-메틸-2H-크로멘-6-올이다.
일부 실시태양에서, 상기 ER-관련된 질병 또는 병태는 암이다. 일부 실시태양에서, 상기 암은 유방암이다. 일부 실시태양에서, 상기 유방암은 전이성 유방암이다. 일부 실시태양에서, 상기 유방암은 호르몬 내성 유방암이다. 일부 실시태양에서, 상기 유방암은 에스트로젠 수용체 양성 유방암이다. 일부 실시태양에서, 상기 유방암은 HER2 양성 유방암이다. 일부 실시태양에서, 상기 유방암은 HER2 음성 유방암이다. 일부 실시태양에서, 상기 유방암은 아로마타제 억제제에 의한 치료에 내성이다. 일부 실시태양에서, 상기 ESR1 유전자 중의 돌연변이는 체세포 돌연변이이다. 일부 실시태양에서, 상기 환자는 야생형 ER 및 돌연변이 ER을 발현한다. 일부 실시태양에서, 상기 환자는 2개의 돌연변이 ER-α 폴리펩타이드의 동종이량체를 발현한다. 일부 실시태양에서, 상기 환자는 하나의 야생형 ER-α 폴리펩타이드 및 하나의 돌연변이 ER-α 폴리펩타이드의 이종이량체 또는 하나의 야생형 ER-β 폴리펩타이드 및 하나의 돌연변이 ER-α 폴리펩타이드의 이종이량체를 발현한다. 일부 실시태양에서, 상기 환자는 종양을 갖는다. 일부 실시태양에서, 상기 종양 세포 중 다수는 돌연변이 ER을 발현한다. 일부 실시태양에서, 상기 환자는 폐경-전 또는 폐경-후이다. 일부 실시태양에서, 상기 환자는 하나 이상의 항암 요법에 실패한 적이 있다. 일부 실시태양에서, 상기 환자는 화학요법제, 생물학적 요법, 암 백신, 혈관형성 억제제, 호르몬 요법, 방사선 요법, 수술, 또는 이들의 임의의 조합을 받은 적이 있다. 일부 실시태양에서, 상기 생물학적 요법은 펩타이드, 사이토킨, 항체, 치료학적 바이러스, 치료학적 세균, 유전자 요법, siRNA, 양자 T-세포 전이, 또는 이들의 임의의 조합이다. 일부 실시태양에서, 상기 환자는 아로마타제 억제제, 선택성 에스트로젠 수용체 조절제(SERM), 선택성 에스트로젠 분해제(SERD), 포스포이노시티드 3-키나제(PI3K)/mTOR 경로 억제제, CDK 4/6 억제제, HER-2 억제제, EGFR 억제제, PD-1 억제제, 폴리 ADP-리보스 폴리머라제(PARP) 억제제, 히스톤 데아세틸라제(HDAC) 억제제, HSP90 억제제, VEGFR 억제제, AKT 억제제, 화학요법, 또는 이들의 임의의 조합을 받은 적이 있다. 일부 실시태양에서, 상기 환자는 풀베스트란트, 타목시펜, 아나스트로졸, 레트로졸, 엑세메스탄, GDC0032, 고세렐린, 류프로리드, 랄록시펜, 토레미펜, 메제스트롤 아세테이트, 바제독시펜, 또는 이들의 임의의 조합을 받은 적이 있다. 일부 실시태양에서, 상기 환자는 안트라사이클린, 탁산, 백금제, 에포틸론, 또는 뉴클레오사이드 유사체를 받은 적이 있다. 일부 실시태양에서, 상기 환자는 시스플라틴, 카르보플라틴, 카페시타빈, 사이클로포스파미드, 도세탁셀, 독소루비신, 에피루비신, 에리뷸린, 플루오로유라실, 젬시타빈, 익사베필론, 미톡산트론, 메토트렉세이트, 패클리탁셀, 파미드로네이트, 비노렐빈, 또는 이들의 임의의 조합을 받은 적이 있다. 일부 실시태양에서, 상기 환자는 페르투주맵, 트라스투주맵, 라파티니브, 에베로리무스, 베바시주맵, 템시로리무스, 또는 이들의 임의의 조합을 받은 적이 있다. 일부 실시태양에서, 상기 ESR1 돌연변이는 ER 폴리펩타이드 중에 하나 이상의 아미노산의 치환, 삽입 또는 결실을 생성시킨다. 일부 실시태양에서, 상기 ESR1 돌연변이는 상기 에스트로젠 수용체의 N-말단 도메인, DNA 결합 도메인, 힌지 영역 또는 리간드 결합 도메인 중에 아미노산 치환을 생성시킨다. 일부 실시태양에서, 상기 ESR1 돌연변이는 상기 에스트로젠 수용체의 리간드 결합 도메인 중에 아미노산 치환을 생성시킨다. 일부 실시태양에서, 상기 아미노산 치환은 서열번호 2의 아미노산 위치 6, 118, 269, 311, 341, 350, 380, 392, 394, 433, 463, 503, 534, 535, 536, 537, 538 및 555번에 있다. 일부 실시태양에서, 상기 아미노산 치환은 H6Y, S118P, R269C, T311M, S341L, A350E, E380Q, V392I, R394H, S433P, S463P, R503W, V534E, P535H, L536R, L536P, L536Q, Y537N, Y537C, Y537S, D538G, 및 R555C 중에서 선택된다. 일부 실시태양에서, 상기 아미노산 치환은 Y537N, Y537C, Y537S, 및 D538G 중에서 선택된다. 일부 실시태양에서, 상기 방법은 상기 ER-관련된 질병 또는 병태의 치료를 위한 하나 이상의 치료제의 투여를 추가로 포함한다. 일부 실시태양에서, 상기 방법은 추가적인 항암제의 투여를 추가로 포함한다. 일부 실시태양에서, 상기 방법은 아로마타제 억제제의 투여를 추가로 포함한다.
본 발명은 일부 실시태양에서, ER-관련된 질병 또는 병태를 갖는 환자를 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물에 의한 치료를 위해 선택하는 방법을 개시하며, 상기 방법은 1) 상기 환자로부터의 핵산을 포함하는 샘플에서 상기 ESR1 유전자 중의 돌연변이를 검출하고; 2) 상기 환자가 상기 ESR1 돌연변이를 갖는 경우 상기 환자를 상기 화합물에 의한 치료를 위해 선택함을 포함한다.
일부 실시태양에서, 상기 핵산은 RNA 또는 DNA이다. 일부 실시태양에서, 상기 DNA는 게놈 DNA이다. 일부 실시태양에서, 상기 방법은 상기 핵산 샘플로부터 mRNA를 단리함을 추가로 포함한다. 일부 실시태양에서, 상기 방법은 상기 핵산 샘플로부터의 돌연변이를 포함하는 핵산 분자를 증폭시킴을 추가로 포함한다. 일부 실시태양에서, 증폭은 폴리머라제 쇄 반응(PCR) 또는 디지털 PCR에 의한다. 일부 실시태양에서, PCR 증폭은 상기 돌연변이를 포함하는 영역에 인접한 한 쌍의 올리고뉴클레오타이드 프라이머를 사용함을 포함한다. 일부 실시태양에서, 상기 방법은 상기 핵산을 서열 특이적 핵산 탐침과 접촉시킴을 포함하며, 여기에서 상기 서열 특이적 핵산 탐침은 상기 돌연변이를 갖는 핵산에 결합하고 야생형 핵산에는 결합하지 않는다. 일부 실시태양에서, 상기 샘플은 하나 이상의 종양 세포로부터의 핵산을 포함한다. 일부 실시태양에서, 상기 종양 세포를 종양 생검 샘플, 혈액 샘플, 혈청 샘플, 림프 샘플, 또는 골수 흡인물로부터 취한다. 일부 실시태양에서, 상기 종양 세포는 순환하는 종양 세포이다. 일부 실시태양에서, 상기 샘플은 순환하는 종양 DNA(ctDNA)이다.
본 발명은 몇몇 실시태양에서 ESR1 중의 돌연변이의 검출을 위한 하나 이상의 시약 및 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물을 포함하는 키트를 개시한다. 일부 실시태양에서, 상기 키트는 ESR1 중의 돌연변이의 검출을 위한 하나 이상의 프라이머 또는 탐침을 포함한다. 일부 실시태양에서, 상기 ESR1 돌연변이는 상기 ER 폴리펩타이드 중에 하나 이상의 아미노산의 치환, 삽입 또는 결실을 생성시킨다. 일부 실시태양에서, 상기 ESR1 돌연변이는 상기 에스트로젠 수용체의 N-말단 도메인, DNA 결합 도메인, 힌지 영역 또는 리간드 결합 도메인 중에 아미노산 치환을 생성시킨다. 일부 실시태양에서, 상기 ESR1 돌연변이는 상기 에스트로젠 수용체의 리간드 결합 도메인 중에 아미노산 치환을 생성시킨다. 일부 실시태양에서, 상기 아미노산 치환은 서열번호 2의 아미노산 위치 6, 118, 269, 311, 341, 350, 380, 392, 394, 433, 463, 503, 534, 535, 536, 537, 538 및 555번에 있다. 일부 실시태양에서, 상기 아미노산 치환은 H6Y, S118P, R269C, T311M, S341L, A350E, E380Q, V392I, R394H, S433P, S463P, R503W, V534E, P535H, L536R, L536P, L536Q, Y537N, Y537C, Y537S, D538G, 및 R555C 중에서 선택된다. 일부 실시태양에서, 상기 아미노산 치환은 Y537N, Y537C, Y537S, 및 D538G 중에서 선택된다.
일부 실시태양에서, 상기 화학식 A, B, C, D의 에스트로젠 수용체 조절제를 환자에게 경구로 투여한다. 일부 실시태양에서, 상기 화학식 A, B, C, D의 에스트로젠 수용체 조절제를 매일 투여한다. 일부 실시태양에서, 상기 화학식 A, B, C, D의 에스트로젠 수용체 조절제를 연속적인 매일 투여 스케줄로 투여한다.
일부 실시태양에서, 상기 화학식 A, B, C, D의 에스트로젠 수용체 조절제를 하루에 약 5 ㎎ 내지 하루에 약 1000 ㎎으로 투여한다. 일부 실시태양에서, 상기 화학식 A, B, C, D의 에스트로젠 수용체 조절제의 치료 유효량은 하루에 약 10 ㎎ 내지 하루에 약 100 ㎎이다.
일부 실시태양에서, 상기 화학식 A, B, C, D의 에스트로젠 수용체 조절제를 하루에 1회 또는 하루에 수회 투여한다. 일부 실시태양에서, 상기 화학식 A, B, C, D의 에스트로젠 수용체 조절제를 하루에 1회, 하루에 2회, 하루에 3회, 또는 하루에 4회 투여한다.
본 발명에 개시된 방법, 용도 및 조성물의 다른 목적, 특징 및 이점들은 하기의 상세한 설명으로부터 자명해질 것이다. 그러나, 상기 상세한 설명 및 특정한 실시예들은 특정한 실시태양을 가리키지만 단지 예시로 제공되며, 따라서 본 명세의 진의 및 범위 내의 다양한 변화 및 변형들이 상기 상세한 설명으로부터 당해 분야의 숙련가들에게 자명해질 것임은 물론이다.
유방암은 가장 흔한 형태의 암이며 전 세계 여성의 주된 암 사망 원인이다. 전체 유방암의 대략 80%는 에스트로젠 수용체(ER)를 발현하며 종양 성장 및 진행이 상기 수용체에 따라 변한다. 다른 암들, 예를 들어 난소 및 자궁내막암들도 또한 성장 및 생존이 ER-α 신호전달에 따라 변하는 것으로 생각된다.
에스트로젠 수용체 알파(ER-α) 및 에스트로젠 수용체 베타(ER-β)는 큰 핵 수용체 상과의 일원인 스테로이드 호르몬 수용체들이다. 핵 수용체는 공통의 모듈 구조를 공유하며, 상기 구조는 DNA 결합 도메인(DBD) 및 리간드 결합 도메인(LBD)을 최소로 포함한다. 스테로이드 호르몬 수용체는 리간드-조절된 전사 인자로서 작용하는 용해성의 세포내 단백질이다. 척추동물들은 5개의 밀접하게 관련된 스테로이드 호르몬 수용체(에스트로젠 수용체, 안드로젠 수용체, 프로제스테론 수용체, 글루코코르티코이드 수용체, 미네랄코르티코이드 수용체)를 함유하며, 상기 수용체는 광범위한 생식, 대사 및 발생 활성을 조절한다. 상기 ER의 활성은 17β-에스트라디올 및 에스트론을 포함한 내인성 에스트로젠의 결합에 의해 조절된다.
상기 ER-α 유전자는 6q25.1상에 위치하며 595 AA 단백질을 암호화한다. 상기 ER-β 유전자는 염색체 14q23.3상에 존재하며 530 AA 단백질을 생산한다. 그러나, 또 다른 이어맞추기 및 번역 개시 부위로 인해, 이들 유전자는 각각 다수의 동형들을 생성시킬 수 있다. 상기 DNA 결합 도메인(C 도메인이라 칭한다) 및 리간드 결합 도메인(E 도메인) 외에, 이들 수용체는 N-말단(A/B) 도메인, 상기 C와 E 도메인을 연결시키는 힌지(D) 도메인, 및 C-말단 연장부(F 도메인)를 함유한다(문헌[Gronemeyer and Laudet; Protein Profile 2: 1173-1308, 1995]). 상기 ER-α 및 ER-β의 C 및 E 도메인은 상당히 보존되는 반면(각각 95% 및 55% 아미노산 일치성), 상기 A/B, D 및 F 도메인의 보존은 불량하다(30% 이하의 아미노산 일치성). 상기 두 수용체 모두 자성생식수관의 조절 및 발생에 관련되지만 중추 신경계, 심혈관계 및 골 대사에도 또한 다양한 역할을 한다.
상기 스테로이드 호르몬 수용체의 리간드 결합 포켓은 상기 리간드 결합 도메인내에 깊이 묻혀있다. 결합시 상기 리간드는 상기 도메인의 소수성 코어 부분으로 된다. 결과적으로 대부분의 스테로이드 호르몬 수용체는 호르몬의 부재하에서 불안정하며 호르몬-결합 능력을 유지하기 위해서 샤프론, 예를 들어 Hsp90으로부터의 내성을 필요로 한다. 상기 Hsp90과의 상호작용이 또한 이들 수용체의 핵 전위를 조절한다. 리간드-결합은 상기 수용체를 안정화시키며, 상기 샤프론을 방출하고 상기 다양한 수용체 도메인들간의 상호작용을 변경시키며 이들 수용체가 핵내로 전위하여 DNA와 결합하고 크로마틴 리모델링 복합체 및 전사 기구와의 상호작용에 참여하게 하는 단백질 상호작용 표면을 리모델링하는 순차적인 입체형태적 변화를 개시시킨다. ER은 Hsp90과 상호작용할 수 있지만, 상기 상호작용은 호르몬 결합에 필요하지 않으며, 세포 환경에 따라 아포-ER은 세포질이고 핵일 수 있다. 생물물리학적 연구는 리간드 결합보다는 DNA 결합이 상기 수용체의 안정성에 기여함을 지적하였다(문헌[Greenfield et al., Biochemistry 40: 6646-6652, 2001]).
ER은 에스트로젠 응답 요소(ERE)라 칭하는 특이적인 DNA 서열 동기에 결합함으로써 직접적으로(고전적인 경로), 또는 단백질-단백질 상호작용을 통해 간접적으로(비고전적인 경로) DNA와 상호작용할 수 있다(문헌[Welboren et al., Endocrine-Related Cancer 16: 1073-1089, 2009]). 상기 비고전적인 경로에서, ER은 SP-1, AP-1 및 NF-κB를 포함한 다른 전사 인자들에 속박되는 것으로 나타났다. 이들 상호작용은 세포 증식 및 분화를 조절하는 ER의 능력에서 중요한 역할을 하는 것으로 보인다.
상기 2가지 유형의 ER DNA 상호작용은 모두 각각의 ER-ERE 복합체에 의해 모집되는 전사 공조절제에 따른 유전자 활성화 또는 억제를 발생시킬 수 있다(문헌[Klinge, Steroid 65: 227-251, 2000]). 상기 공조절제의 모집은 주로 2개의 단백질 상호작용 표면, AF2 및 AF1에 의해 매개된다. AF2는 상기 ER E-도메인에 위치하고 그의 배치는 상기 리간드에 의해 직접 조절된다(문헌[Brzozowski et al., Nature 389: 753-758, 1997]). 완전한 작용물질들은 공-활성제들의 모집을 촉진하는 것으로 보이는 반면, 약한 작용물질 및 길항물질은 공-억제제들의 결합을 촉진한다. 상기 AF1에 의한 단백질의 조절은 그다지 충분히 이해되지 않고 있지만 세린 인산화에 의해 조절될 수 있다(문헌[Ward and Weigel, Biofactors 35: 528-536, 2009]). 상기 관련된 인산화 부위들 중 하나(S118)는 유방암의 치료에 중요한 역할을 하는 타목시펜과 같은 길항물질의 존재하에서 ER의 전사 활성을 조절하는 것으로 보인다. 완전한 작용물질은 몇몇 배치에서 ER을 억제하는 것으로 보이지만, 약한 작용물질은 상이한 배치들 사이에서 ER을 평형하게 유지시키는 경향이 있으며, 이는 공-조절제 레퍼토리에서 세포-의존적인 차이를 허용하여 ER의 활성을 세포-의존적인 방식으로 조절하게 한다(문헌[Tamrazi et al., Mol. Endocrinol. 17: 2593-2602, 2003]). ER과 DNA와의 상호작용은 동적이며, 비제한적으로 프로테아솜에 의한 ER의 분해를 포함한 과정들에 의해 조절된다(문헌[Reid et al., Mol Cell 11: 695-707, 2003]). 리간드에 의한 ER의 분해는, 에스트로젠-민감성이고/이거나 이용 가능한 항-호르몬 치료에 내성인 질병 또는 병태에 매력적인 치료 전략을 제공한다.
ER 신호전달은 유방을 포함한 자성생식기관의 발생 및 유지, 배란 및 자궁내막의 비후에 중요하다. ER 신호전달은 또한 골질량, 지질 대사, 암 등에 한 역할을 한다.
에스트로젠 활성 및/또는 합성의 조절은 ER-양성(ER+) 유방암이 있는 여성에서 치료학적 접근법의 지주이다. ER-α 길항물질 타목시펜이 폐경전후 여성에서 초기 및 진행된 ER-α 양성 유방암의 치료에 사용되었다. 스테로이드-기반 ER 길항물질인 풀베스트란트(파스로덱스(FASLODEX)(상표), 아스트라 제네카(Astra Zeneca))는 타목시펜에 의한 요법에도 불구하고 진행된 여성의 유방암 치료에 사용된다. 스테로이드성 및 비-스테로이드성 아로마타제 억제제가 또한 인간의 암 치료에 사용된다. 일부 실시태양에서, 상기 스테로이드성 및 비-스테로이드성 아로마타제 억제제(예를 들어 아나스트로졸, 레트로졸 및 엑세메스탄)는 폐경후 여성에서 안드로스테네디온 및 테스토스테론으로부터 에스트로젠의 생산을 차단하여, 암의 ER 의존적인 성장을 차단한다. 이들 항-호르몬제 외에, 진행성 ER 양성 유방암은 일부의 경우 다양한 다른 화학요법제들, 예를 들어 안트라사이클린, 플라틴, 탁산에 의해 치료된다. 일부의 경우에, ERB-B/HER2 타이로신 카니제 수용체의 유전자 증폭이 잠복된 ER 양성 유방암이 단클론 항체 트라스투주맵(허셉틴(HERCEPTIN)(상표), 제넨테크 인코포레이티드(Genentech Inc.)) 또는 소분자 범-ERB-B 억제제 라파티니브로 치료된다. 이러한 일련의 항-호르몬성, 화학요법제 및 소-분자 및 항체-기반 표적 요법에도 불구하고, ER-α 양성 유방을 갖는 다수의 여성들은 진행성 전이성 질병을 나타내며 새로운 치료법을 필요로 한다. 중요하게, 기존의 항-호르몬성뿐만 아니라 다른 치료법들을 진행하고 있는 ER 양성 종양의 대부분은 성장 및 생존이 여전히 ER-α에 의존성인 것으로 생각된다. 따라서, 전이성 질병 및 후천적인 내성의 환경에서 활성을 갖는 신규의 ER-α 표적제가 필요하다.
아로마타제 억제제 또는 타목시펜에 무반응성으로 됨에도 불구하고, 내성 종양 세포의 성장 및 생존은 여전히 ER 신호전달에 의존적이며; 따라서, ER+ 유방암이 있는 환자는 선행 호르몬요법 진행 후 제2/제3 계열 호르몬 치료에 여전히 응답할 수 있다. 일부 실시태양에서, 내분비 내성 상태에서, ER은 리간드-독립적인 방식으로 신호를 전달할 수 있다. 일부 실시태양에서, 이중 작용 기전, 예를 들어 ER 길항작용 + 분해를 갖는 작용제는 리간드-의존성 및 독립성 ER 신호전달을 표적화하고 결과적으로 말기 ER+ 유방암에서 치료 결과를 개선시킬 가능성을 갖는다.
호르몬-내성 유방암 환자로부터의 종양 샘플의 게놈 분석은 ER+ 유방암에서 호르몬 내성에 기여하는 에스트로젠 수용체 알파 유전자, ESR1의 돌연변이를 밝혀내었다. 몇몇 경우에, 상기와 같은 돌연변이는 상기 에스트로젠 수용체의 리간드-독립적인 활성화를 생성시킨다. 본 발명에 개시된 바와 같이, 특정한 ER 조절제 화합물은 ER 돌연변이 환경에서 ER 신호전달을 억제하는데 유효하다. 상응하게, 상기와 같은 ER 조절제 화합물은 돌연변이 ER을 갖는 ER+ 유방암 환자의 치료에 유용하다.
몇몇 경우에, 상기 ER 돌연변이는 ESR1 유전자 중의 체세포 돌연변이이다. 일부 실시태양에서, 상기 체세포 돌연변이는 암 치료 과정 동안 암세포(예를 들어 유방암 세포)에서 발생한다. 일부 실시태양에서, 상기 환자는 야생형 ESR1 유전자 및 돌연변이 ESR1 유전자를 모두 갖는다(즉 이형접합성). 일부 실시태양에서, 암세포는 체세포 돌연변이를 겪어 돌연변이 ESR1 유전자를 생산한다. 일부 실시태양에서, 상기 돌연변이 암세포는 복제되어 다수의 돌연변이 암세포(예를 들어 체세포 돌연변이로 인해 돌연변이 ESR1 유전자를 갖는 암세포의 확대된 집단)를 생산한다. 일부 실시태양에서, 상기 환자는 야생형 ER-α 및 돌연변이 ER-α를 발현한다(즉 이종 발현). 일부 실시태양에서, 상기 돌연변이 ER-α는 2개의 돌연변이 ER-α 폴리펩타이드를 포함한다(즉 동종이량체). 일부 실시태양에서, 상기 돌연변이 ER-α는 야생형 ER-α 폴리펩타이드 및 돌연변이 ER-α를 포함한다(즉 이종이량체). 일부 실시태양에서, 상기 체세포 돌연변이는 암 치료에 대한 암세포의 내성을 부여한다. 일부 실시태양에서, 다수의 암세포에서 체세포 돌연변이는 암 치료에 대한 환자의 내성을 부여한다. 일부 실시태양에서, 상기 돌연변이는 암(예를 들어 유방암)의 치료를 위한 호르몬 기반 요법에 대한 내성을 부여한다. 일부 실시태양에서, 상기 암은 ER+ 유방암이다.
일부 실시태양에서, 상기 ER 돌연변이는 유전되는 ESR1 유전자 중의 생식세포계열 돌연변이이다. 일부 실시태양에서, 상기 돌연변이는 유방암 발병 위험을 증가시킨다. 일부 실시태양에서, 상기 생식세포계열 돌연변이는 암 치료에 대한 암세포의 내성을 부여한다. 일부 실시태양에서, 다수의 암세포(예를 들어 유방암 세포)의 생식세포계열 돌연변이는 암치료에 대한 환자의 내성을 부여한다. 일부 실시태양에서, 상기 생식세포계열 돌연변이는 암(예를 들어 유방암)의 치료를 위한 호르몬 기반 요법에 대한 내성을 부여한다. 일부 실시태양에서, 상기 암은 ER+ 유방암이다.
하나의 태양에서, 본 발명은 ESR1 유전자의 하나 이상의 돌연변이를 갖는 환자의 치료를 위한 에스트로젠 수용체 조절제인 화합물을 개시한다. 일부 실시태양에서, 상기 환자는 하나 이상의 암세포, 또는 다수의 암세포에서 ESR1 유전자의 하나 이상의 돌연변이를 갖는다. 일부 실시태양에서, 상기 ER 조절제 화합물은, 분해를 위해 ER-α를 표적화하는 선택성 에스트로젠 수용체 분해제(SERD)이다. 일부 실시태양에서, 상기 ER 조절제 화합물은 조직 특이성 ER 성질을 갖는 선택성 에스트로젠 수용체 조절제(SERM)이다.
일부 실시태양에서, 세포-기반 분석에서 본 발명에 개시된 화합물은 정상 상태 ER-α 수준의 감소(예를 들어 ER 분해)를 생성시키며 에스트로젠 민감성 질병 또는 병태 및/또는 항-호르몬 요법에 내성을 나타낸 질병 또는 병태의 치료에 유용하다. 일부 실시태양에서, 본 발명에 개시된 ER 조절제 화합물은 핵 중의 에스트로젠 수용체의 수준을 최소화한다. 일부 실시태양에서, 상기 ER 조절제 화합물은 에스트로젠 수용체에 대한 결합에 대해 에스트로젠과 경쟁한다. 일부 실시태양에서, 상기 ER 조절제 화합물은 에스트로젠 수용체에의 결합에 대해 에스트로젠과 경쟁하는 비-스테로이드성 ERα 길항물질이다. 일부 실시태양에서, 상기 ER 조절제 화합물은 에스트로젠에 대한 야생형 ER-α의 응답을 완전히 길항한다. 일부 실시태양에서, 상기 ER 조절제 화합물은 에스트로젠에 대한 돌연변이 ER-α의 응답을 완전히 길항한다. 일부 실시태양에서, 상기 돌연변이 ER-α는 야생형 ER-α에 비해 증가된 기본 활성을 나타낸다. 일부 실시태양에서, 상기 돌연변이 ER-α는 리간드 독립적인 활성(예를 들어 구성 활성)을 나타낸다. 일부 실시태양에서, 상기 돌연변이 ER-α는 에스트라디올의 부재하에서 구성 활성을 나타낸다. 일부 실시태양에서, 상기 ER 조절제는 돌연변이 ER-α의 리간드 독립적인 활성(예를 들어 구성 활성)을 억제한다. 일부 실시태양에서, 상기 ER 조절제는 돌연변이 ER-α의 입체형태적 변화를 유도한다. 일부 실시태양에서, 상기 ER 조절제는 상기 돌연변이 ER-α의 활성을 억제하는 돌연변이 ER-α의 입체형태적 변화를 유도한다. 일부 실시태양에서, 상기 ER 조절제는 유방암 세포에서 야생형 ER-α의 프로테오솜 분해를 유도한다. 일부 실시태양에서, 상기 ER 조절제는 유방암 세포에서 돌연변이 ER-α의 프로테오솜 분해를 유도한다. 일부 실시태양에서, 상기 ER 조절제는 프로테오솜 분해와 별개로 유방암 세포에서 돌연변이 ER-α를 억제한다. 일부 실시태양에서, 상기 ER 조절제는 에스트로젠에 대한 ER-α의 응답을 완전히 길항하고 유방암 세포에서 야생형 ER-α의 프로테오솜 분해를 유도한다. 일부 실시태양에서, 상기 ER 조절제 화합물은 에스트로젠에 대한 돌연변이 ER-α의 응답을 완전히 길항하고 유방암 세포에서 돌연변이 ER-α의 프로테오솜 분해를 유도한다. 일부 실시태양에서, 상기 ER 조절제 화합물은 에스트로젠에 대한 돌연변이 ER-α의 응답을 완전히 길항하고 유방암 세포에서 돌연변이 ER-α의 프로테오솜 분해를 유도하지 않는다. 일부 실시태양에서, 상기 ER 조절제 화합물은 돌연변이 ER-α를 발현하는 유방암 세포의 증식을 억제한다. 일부 실시태양에서, 상기 ER 조절제 화합물은 양호한 경구 생물학적 이용효능을 나타낸다.
본 발명에 개시된 ER 조절제 화합물은 ESR1 유전자 중의 하나 이상의 돌연변이를 특징으로 하는 호르몬 내성 ER-양성 유방암의 치료에 단독으로, 또는 유방암의 다른 중요한 경로들을 조절하는 다른 작용제들, 예를 들어 비제한적으로 IGF1R, EGFR, Erb-B2, Erb-B3, PI3K/AKT/mTOR 경로, HSP90, PARP, 사이클린 의존성 키나제(즉 CDK 4/6), VEGF 수용체 또는 히스톤 데아세틸라제를 억제하는 것들과 함께 유용하다. 일부 실시태양에서, 본 발명에 개시된 ER 조절제 화합물은 ESR1 유전자 중의 하나 이상의 돌연변이를 특징으로 하는 호르몬 내성 ER-양성 유방암의 치료에 단독으로, 또는 유방암 치료에 사용되는 다른 작용제들, 예를 들어 비제한적으로 아로마타제 억제제, 안트라사이클린, 플라틴, 질소 머스터드, 알킬화제, 탁산, 뉴클레오사이드 유사체, 포스포이노시티드 3-키나제(PI3K)/mTOR 경로 억제제, CDK 4/6 억제제, HER-2 억제제, EGFR 억제제, PD-1 억제제, 폴리 ADP-리보스 폴리머라제(PARP) 억제제, 히스톤 데아세틸라제(HDAC) 억제제, HSP90 억제제, VEGFR 억제제, AKT 억제제, 및 화학요법과 함께 유용하다. 유방암 치료에 사용되는 예시적인 작용제는 비제한적으로 풀베스트란트, 타목시펜, 아나스트로졸, 레트로졸, 엑세메스탄, GDC-0032, GDC-0068, 고세렐린, 류프로리드, 랄록시펜, 토레미펜, 메제스트롤 아세테이트, 바제독시펜, 시스플라틴, 카르보플라틴, 카페시타빈, 사이클로포스파미드, 도세탁셀, 독소루비신, 에피루비신, 에리뷸린, 필그라스팀, 플루오로유라실, 젬시타빈, 익사베필론, LEE011, LY2835219, 미톡산트론, 메토트렉세이트, 패클리탁셀, 파미드로네이트, 비노렐빈, 페그필그라스팀, 페르투주맵, 트라스투주맵, 라파티니브, 에베로리무스, 베바시주맵, 템시로리무스, 및 이들의 조합뿐만 아니라 본 발명에 개시된 다른 것들을 포함한다. 유방암의 치료를 위한 추가의 비제한적인 예시적인 작용제를 본 발명의 어딘가에 제공한다.
하나의 실시태양에서, 본 발명은 본 발명에 개시된 바와 같은 ER-관련된 질병 또는 병태의 치료에 사용하기 위한, 본 발명에 개시된 바와 같은 에스트로젠 수용체 조절제 화합물에 관한 것이다.
하나의 실시태양에서, 본 발명은 본 발명에 개시된 바와 같은 ER-관련된 질병 또는 병태의 치료에 사용하기 위한 본 발명에 개시된 바와 같은 에스트로젠 수용체 조절제 화합물 및 하나 이상의 약학적으로 허용 가능한 부형제를 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다.
하나의 실시태양에서, 본 발명은 본 발명에 개시된 바와 같은 ER-관련된 질병 또는 병태의 치료에 사용하기 위한 약제의 제조를 위한 본 발명에 개시된 바와 같은 에스트로젠 수용체 조절제 화합물의 용도에 관한 것이다.
하나의 실시태양에서, 본 발명은 본 발명에 개시된 바와 같은 ER-관련된 질병 또는 병태의 치료를 위한 본 발명에 개시된 바와 같은 에스트로젠 수용체 조절제 화합물의 용도에 관한 것이다.
하나의 실시태양에서, 본 발명은 본 발명에 개시된 바와 같은 에스트로젠 수용체 조절제 화합물을 투여함을 포함하는, 환자에서 ER-관련된 질병 또는 병태를 치료하기 위한 방법에 관한 것이다.
도 1 및 2는 E2(에티닐 에스트라디올)의 부재하에서 WT 및 돌연변이 ERα를 유도 발현하는 MCF7에서의 ERα 분해 분석을 도시한다. 세포를 100 ng/㎖ Dox(독소루비신)를 함유하는 에스트로젠-고갈된 배지에서 24시간 동안 증가하는 용량의 풀베스트란트(도 1)로 처리하였다. 표 1로부터의 에스트로젠 수용체 조절제(ERM) 1-3(도 1) 및 ERM 4-23(도 2)에 대해서 돌연변이 ERa 분해가 관찰되었으나, 타목시펜(도 2)에 대해서는 관찰되지 않았다. 기능적 출력은 PR 및 사이클린 D1 수준에 의해 분명하다.
도 3은 비히클, 고용량, 200 ㎎/㎏의 풀베스트란트; 임상 노출의 약 20 내지 30x 이상 AUC, 및 표 1로부터의 에스트로젠 수용체 조절제(ERM) 1-3 100 ㎎/㎏/일 및 표 4로부터의 ERM 4-23 100 ㎎/㎏/일이 매일 1회 PO(경구) 투여된, MCF-7 EF1:Y537S ESR1-돌연변이(Y537S) 마우스를 갖는 7마리의 면역저하된 마우스의 코호트에서 28일에 걸친 적합된 종양 부피 변화를 도시한다.
도 4는 비히클(+), 비히클(-), 타목시펜 60 ㎎/㎏/일, 풀베스트란트 200 ㎎/㎏(QD 3x/wk), ERM 1-3 100 ㎎/㎏/일, 및 ERM 4-23 100 ㎎/㎏/일이 매일 1회 PO(경구) 투여된, ESR1 L536P 돌연변이체, ER+, PR+, HER2+가 잠복된 HCI-005 유방 종양(NOD.SCID OVX에서 BC PDX 모델) 이종이식편을 갖는 5마리의 면역저하된 마우스의 코호트에서 40일에 걸친 적합된 종양 부피 변화를 도시한다. 비히클(+)은 에티닐 에스트라디올(0.1 ㎎/㎏)이 있는 용매/완충제이다. 비히클(-)은 에티닐 에스트라디올이 없는 용매/완충제이다.
도 5는 비히클(+E2), 비히클(-E2), 타목시펜 60 ㎎/㎏/일, 풀베스트란트 200 ㎎/㎏(QD 3x/wk), ERM 1-3 100 ㎎/㎏/일, 및 ERM 4-23 100 ㎎/㎏/일이 매일 1회 PO(경구) 투여된, ESR1 L536P 돌연변이체, ER+, PR+, HER2+가 잠복된 HCI-005 유방 종양(NOD.SCID OVX에서 BC PDX 모델) 이종이식편을 갖는 7마리의 면역저하된 마우스의 코호트에서 출발에 대한 배수로 56일에 걸친 적합된 종양 부피 변화를 도시한다. 비히클(+E2)은 에티닐 에스트라디올(0.1 ㎎/㎏)이 있는 용매/완충제이다. 비히클(-E2)은 에티닐 에스트라디올이 없는 용매/완충제이다.
도 6은 비히클(+E2), 비히클(-E2), 타목시펜 시트레이트 60 ㎎/㎏/일, 풀베스트란트 50 ㎎/㎏, ERM 1-3 100 ㎎/㎏/일, 및 ERM 4-23 100 ㎎/㎏/일이 매일 1회 PO(경구) 투여된, WHIM 20 Y537S ESR1-돌연변이(Y537S), PIK3CA 돌연변이(E542K) 유방 종양(NOD.SCID OVX에서 BC PDX 모델) 이종이식편을 갖는 7-8마리의 면역저하된 마우스의 코호트에서 35일에 걸친 적합된 종양 부피 변화를 도시한다.
도 7은 비히클(+E2), 비히클(-E2), 풀베스트란트 200 ㎎/㎏ 주당 3회 피하, ERM 1-3 10 ㎎/㎏/일, 및 ERM 4-23 10 및 100 ㎎/㎏/일이 매일 PO(경구) 투여된, WHIM 20 Y537S ESR1-돌연변이(Y537S), PIK3CA 돌연변이(E542K) 유방 종양(NSG OVX에서 BC PDX 모델) 이종이식편을 갖는 7마리의 면역저하된 마우스의 코호트에서 28일에 걸친 적합된 종양 부피 변화를 도시한다.
도 8 및 9는 비히클, 풀베스트란트 200 ㎎/㎏, ERM 1-3 100 ㎎/㎏, 및 ERM 4-23 100 ㎎/㎏이 4일 동안 매일 1회 100 마이크로리터(㎕)까지 PO(경구) 투여된, WHIM 20 Y537S ESR1-돌연변이(Y537S), PIK3CA 돌연변이(E542K) 유방 종양, 환자 유래된(BC PDX 모델) 이종이식 모델을 갖는 면역저하된 마우스에서 ERα(알파) 대 액틴 단백질 수준의 비(도 8) 및 PR-A 대 액틴 단백질 수준의 비(도 9)의 막대 플롯을 도시한다.
도 10은 기준선, 전-처리(좌측) 및 ERM 1-3(ARN-810) 600 ㎎/㎏을 연속해서 매일 1개월 경구 투여한(우측) 유방암 환자의 [18F]FES-PET 영상화를 도시하며 이때 상은 투여-후 23시간째에 수집되었다. 상기 환자는 ESR1 D538G 돌연변이가 있는 연조직 병변이 잠복된 것으로 확인되었다.
정의
달리 정의되지 않는 한, 본 발명에 사용된 모든 과학기술 용어들은 특허청구된 발명의 요지가 속하는 분야의 숙련가에 의해 통상적으로 이해되는 바와 동일한 의미를 갖는다. 본 발명의 전체 명세 전체를 통해 언급되는 모든 특허, 특허 출원, 공개 출원 및 간행물, GENBANK 서열, 웹사이트 및 다른 공개된 자료들은 달리 나타내지 않는 한 내용 전체가 참고로 인용된다. 본 발명의 용어들에 대해서 다수의 정의가 존재하는 경우, 본 섹션의 정의들이 우세하다. URL 또는 다른 상기와 같은 식별자 또는 주소를 언급하는 경우, 상기와 같은 식별자들은 변할 수 있으며 인터넷상의 특정 정보를 오갈 수 있으나, 동등한 정보가 공지되어 있고 예를 들어 상기 인터넷 및/또는 적합한 데이터베이스를 탐색함으로써 상기 정보를 쉽게 입수할 수 있는 것으로 생각된다. 게다가 참고문헌은 상기와 같은 정보의 유효성 및 공개 보급을 입증한다. 일반적으로, 세포 배양, 세포 감염, 항체 생산 및 분자 생물학 방법에 대한 과정은 당해 분야에 통상적으로 사용되는 방법들이다. 상기와 같은 표준 기법들을 예를 들어 참고서, 예를 들어 문헌[Sambrook et al.(2000)] 및 문헌[Ausubel et al.(1994)]에서 찾을 수 있다.
본 발명에 사용되는 바와 같이, 단수형은 문맥상 달리 명백히 지시되지 않는 한 복수의 지시대상을 포함한다. 본 출원에서 상기 단수형의 사용은 구체적으로 달리 서술되지 않는 한 복수를 포함한다. 본 발명에 사용되는 바와 같이, "또는"은 달리 서술되지 않는 한 "및/또는"을 의미한다. 더욱 또한, "포함하는"이란 용어뿐만 아니라 다른 형태(예를 들어 "포함하다" 및 "포함된")의 사용은 제한이 아니다.
본 발명에 사용되는 바와 같이, 범위 및 양을 "약" 특정 값 또는 범위로서 나타낼 수 있다. 약은 또한 정확한 양을 포함한다. 따라서 "약 5 ㎍"은 "약 5 ㎍" 및 또한 "5 ㎍"을 의미한다. 일반적으로, 상기 "약"이란 용어는 실험 오차 이내인 것으로 예상될 수 있는 양을 포함한다.
본 발명에 사용되는 바와 같이, "에스트로젠 수용체 폴리펩타이드" 또는 "ER 폴리펩타이드"는 임의의 에스트로젠 수용체 단백질 또는 폴리펩타이드, 예를 들어 비제한적으로 재조합적으로 생성된 단백질, 합성적으로 생성된 단백질, 고유의 에스트로젠 수용체 단백질, 및 세포 또는 조직으로부터 추출된 에스트로젠 수용체 단백질을 지칭한다. ER 폴리펩타이드는 여러가지 종들, 예를 들어 비제한적으로 인간 및 비-인간 기원의 동물들로부터의 관련된 폴리펩타이드를 포함한다. 비-인간 기원의 ER 폴리펩타이드는 비제한적으로 비-인간 영장류(예를 들어 침팬지 및 유인원), 쥣과(예를 들어 마우스 및 래트), 개과(개), 고양이과(고양이), 토끼(토끼), 조류(새), 소속(소), 양(양), 돼지(돼지), 말과(말), 어류(생선), 개구리(개구리) 및 다른 포유동물 또는 비-포유동물 ER 폴리펩타이드를 포함한다. 예시적인 ER 폴리펩타이드는 예를 들어 서열번호 2를 포함한다. ER 폴리펩타이드는 야생형 ER, 대립유전자 변체 동형, 종양에서 발견되는 것들을 포함한 체세포 돌연변이, 핵산으로부터의 합성 분자, 인간 조직 및 세포로부터 단리된 단백질, 및 이들의 변형된 형태를 포함한다. 본 발명에 제공된 ER 폴리펩타이드를 1차 아미노산 서열의 변형에 의해, 하나 이상의 아미노산의 결실, 부가 또는 치환에 의해 추가로 변형시킬 수 있다. 본 발명에 사용되는 바와 같이, ER 단백질은 ER 폴리펩타이드의 단량체 및 이량체 형태, 예를 들어 ER-α 및 ER-β 폴리펩타이드(예를 들어 ER-α(αα) 또는 ER-β(ββ) 동종이량체 또는 ERαβ(αβ) 이종이량체)의 이량체 형태를 포함한다.
본 발명에 사용되는 바와 같이, "돌연변이 에스트로젠 수용체" 또는 "돌연변이 ER"은 야생형 ER에 비해 하나 이상의 아미노산의 결실, 부가 또는 치환에 의한 1차 아미노산 서열의 변형에 의해 변형되는 임의의 에스트로젠 수용체 단백질 또는 폴리펩타이드를 지칭한다. 일부 실시태양에서, 돌연변이 ER은 돌연변이 ER 폴리펩타이드 및 야생형 폴리펩타이드의 이종이량체를 포함한다. 일부 실시태양에서, 돌연변이 에스트로젠 수용체(ER)는 2개의 돌연변이 ER 폴리펩타이드의 동종이량체를 포함한다.
본 발명에 사용되는 바와 같은 "조절하다"란 용어는 표적의 활성을 변경시키기 위해서, 예를 들어 단지 예로서 상기 표적의 활성을 증대시키거나, 상기 표적의 활성을 억제하거나, 상기 표적의 활성을 제한하거나, 또는 상기 표적의 활성을 연장시키기 위해서 직접적으로 또는 간접적으로 상기 표적과 상호작용함을 의미한다.
본 발명에 사용되는 바와 같은 "조절제"란 용어는 표적과 직접적으로 또는 간접적으로 상호작용하는 분자를 지칭한다. 상기 상호작용은 비제한적으로 작용물질, 부분 작용물질, 역 작용물질, 길항물질, 분해제, 또는 이들의 조합의 상호작용을 포함한다. 일부 실시태양에서, 조절제는 길항물질이다. 본 발명에 사용되는 바와 같이, 에스트로젠 수용체(ER) 조절제는 에스트로젠 수용체(예를 들어 ER-α)와 상호작용하는 분자이다. 일부 실시태양에서, 조절제는 분해제이다.
본 발명에 사용되는 바와 같은 "선택성 에스트로젠 수용체 조절제" 또는 "SERM"은 에스트로젠 수용체의 활성을 상이한 조직들에서 차별적으로 조절하는 분자를 지칭한다. 예를 들어, 일부 실시태양에서, SERM은 일부 조직에서는 ER 길항물질 활성을 나타내고 다른 조직에서는 ER 작용물질 활성을 나타낸다. 일부 실시태양에서, SERM은 일부 조직에서는 ER 길항물질 활성을 나타내고 다른 조직에서는 최소의 ER 작용물질 활성을 나타내거나 활성을 나타내지 않는다. 일부 실시태양에서, SERM은 유방 조직, 난소 조직, 자궁내막 조직, 및/또는 경부 조직에서 ER 길항물질 활성을 나타내지만 자궁 조직에서는 최소의 ER 작용물질 활성을 나타내거나 활성을 나타내지 않는다. 일부 실시태양에서, SERM은 ER 분해 성질을 나타낸다. 일부 실시태양에서, SERM은 일부 조직에서는 ER 분해 성질을 나타내고 다른 조직에서는 ER 분해 성질을 나타내지 않는다. 일부 실시태양에서, SERM은 ER 분해 및 ER 길항물질 성질을 나타낸다. 일부 실시태양에서, SERM은 일부 조직에서 ER 분해 및 ER 길항물질 성질을 나타내고 다른 조직에서는 ER 분해는 나타내지만 ER 작용물질 활성은 나타내지 않는다. 일부 실시태양에서, SERM은 일부 조직에서 ER 분해 및 ER 길항물질 성질을 나타내고 다른 조직에서는 ER 분해 및 ER 길항물질 성질을 나타내지만 ER 분해 성질은 나타내지 않는다. 일부 실시태양에서, SERM은 유방 조직, 난소 조직, 자궁내막 조직, 및/또는 경부 조직에서 ER 분해 및 ER 길항물질 성질을 나타내지만 자궁 조직에서는 최소의 ER 분해 및/또는 ER 길항물질 성질을 나타내거나 상기 성질을 나타내지 않는다.
본 발명에 사용되는 바와 같은 "길항물질"이란 용어는 핵 호르몬 수용체에 결합하여 후속으로 상기 핵 호르몬 수용체의 작용물질 유도된 전사 활성을 감소시키는 소분자 작용제를 지칭한다.
본 발명에 사용되는 바와 같은 "작용물질"이란 용어는 핵 호르몬 수용체에 결합하여 후속으로 공지된 작용물질의 부재하에서 핵 호르몬 수용체 전사 활성을 증가시키는 소분자 작용제를 지칭한다.
본 발명에 사용되는 바와 같은 "역 작용물질"이란 용어는 핵 호르몬 수용체에 결합하여 후속으로 공지된 작용물질의 부재하에서 존재하는 핵 호르몬 수용체 전사 활성의 기본 수준을 감소시키는 소분자 작용제를 지칭한다.
본 발명에 사용되는 바와 같은 "분해제"란 용어는 핵 호르몬 수용체에 결합하여 후속으로 상기 수용체의 정상 상태 단백질 수준을 저하시키는 소분자 작용제를 지칭한다. 일부 실시태양에서, 본 발명에 개시된 바와 같은 분해제는 정상 상태 에스트로젠 수용체 수준을 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%만큼 저하시킨다.
본 발명에 사용되는 바와 같은 "선택성 에스트로젠 수용체 분해제" 또는 "SERD"란 용어는 다른 수용체에 비해 에스트로젠 수용체 우선적으로 결합하고 후속으로 정상 상태 에스트로젠 수용체 수준을 저하시키는 소분자 작용제를 지칭한다.
본 발명에 사용되는 바와 같은 "ER-의존성"이란 용어는, 에스트로젠 수용체의 부재하에서는 발생하지 않거나, 또는 동일한 정도로 발생하지 않는 질병 또는 병태를 지칭한다.
본 발명에 사용되는 바와 같은 "ER-매개된"이란 용어는 에스트로젠 수용체의 부재하에서 발생하지 않지만 에스트로젠 수용체의 존재하에서는 발생할 수 있는 질병 또는 병태를 지칭한다.
본 발명에 사용되는 바와 같은 "ER-민감성"이란 용어는 에스트로젠의 부재하에서 발생하지 않거나, 또는 동일한 정도로 발생하지 않는 질병 또는 병태를 지칭한다.
본 발명에 사용되는 바와 같은 "암"이란 용어는 통제되지 않는 방식으로 증식하고 일부의 경우에 전이되는(확산) 경향이 있는 세포의 이상 성장을 지칭한다. 암의 유형은 비제한적으로 전이가 있거나 없는 질병의 임의의 병기의 고형 종양(예를 들어 방광, 결장, 뇌, 유방, 자궁내막, 심장, 신장, 폐, 자궁, 림프 조직(림프종), 난소, 췌장 또는 다른 내분비 기관(갑상선), 전립선, 피부(흑색종 또는 기저세포암) 또는 혈액 종양(예를 들어 백혈병 및 림프종)을 포함한다. 일부 실시태양에서, 상기 암은 암종(예를 들어 선암종) 또는 육종이다.
암의 추가적인 비제한적인 예는 급성 림프모구성 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 부신피질암종, 항문암, 충수암, 성상세포종, 비정형 유기형/간상 종양, 기저세포암종, 담도암, 방광암, 골암(골육종 및 악성 섬유성 조직구종), 뇌간 신경교종, 뇌종양, 뇌 및 척수 종양, 유방암, 기관지 종양, 버킷 림프종, 경부암, 만성 림프구성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 결장암, 결장직장암, 두개인두종, 피부 T-세포 림프종, 태생기암, 자궁내막암, 상의모세포종, 상의세포종, 식도암, 유잉육종계열 종양, 눈암, 망막모세포종, 담낭암, 위장(위)암, 위장 유암종, 위장관 기질 종양(GIST), 위장관 기질세포 종양, 생식세포 종양, 신경교종, 털세포 백혈병, 두경부암, 간세포(간)암, 호지킨 림프종, 하인두암, 안내 흑색종, 섬세포 종양(내분비 췌장), 카포시육종, 신장암, 랑게르한스 세포 조직구종, 후두암, 백혈병, 급성 림프모구성 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 털세포 백혈병, 간암, 폐암, 비-소세포 폐암, 소세포 폐암, 버킷 림프종, 피부 T-세포 림프종, 호지킨 림프종, 비-호지킨 림프종, 림프종, 발덴스트롬 마크로글로불린혈증, 수모세포종, 수질상피종, 흑색종, 중피종, 구강암, 만성 골수성 백혈병, 골수성 백혈병, 다발성 골수종, 비인두암, 신경모세포종, 비-호지킨 림프종, 비-소세포 폐암, 구강암, 구강인두암, 골육종, 뼈의 악성 섬유성 조직구종, 난소암, 난소 상피암, 난소 생식세포 종양, 난소 저악성 잠재성 종양, 췌장암, 유두종증, 부갑상선암, 음경암, 인두암, 중간 분화된 송과체 실질 종양, 송과체모세포종 및 천막상 원시신경 외배엽성 종양, 뇌하수체 종양, 혈장세포 신생물/다발성 골수종, 흉막폐 모세포종, 원발성 중추신경계 림프종, 전립선암, 직장암, 신세포(신장)암, 망막모세포종, 횡문근육종, 침샘암, 육종, 유잉육종계열의 종양, 육종, 카포시, 세자리 증후군, 피부암, 소세포 폐암, 소장암, 연조직 육종, 편평세포 암종, 위장(위)암, 천막상 원시신경 외배엽성 종양, T-세포 림프종, 고환암, 인후암, 흉선종 및 흉선암종, 갑상선암, 요도암, 자궁암, 자궁육종, 질암, 외음부암, 발덴스트롬 마크로글로불린혈증, 빌름 종양을 포함한다.
본 발명에 사용되는 바와 같은 "유방암"이란 용어는 유방의 조직학적으로 또는 세포학적으로 확인된 암을 지칭한다. 일부 실시태양에서, 상기 유방암은 암종이다. 일부 실시태양에서, 상기 유방암은 선암종이다. 일부 실시태양에서, 상기 유방암은 육종이다.
"국소적으로 진행된 유방암"이란 용어는 유방에서 시작하여 근처 조직 또는 림프절로 확산된, 그러나 신체의 다른 부분까지는 확산되지 않은 암을 지칭한다.
"전이성 유방암"이란 용어는 유방으로부터 신체의 다른 부분, 예를 들어 뼈, 간, 폐 또는 뇌로 확산된 암을 지칭한다. 전이성 유방암을 또한 IV기 유방암이라 칭한다.
본 발명에 사용되는 바와 같은 "공-투여" 등의 용어는 선택된 치료제들을 단일 환자에게 투여함을 포함함을 의미하며, 상기 작용제들을 동일한 또는 상이한 투여 경로에 의해 또는 동시에 또는 상이한 시간에 투여하는 치료 섭생을 포함하고자 한다.
본 발명에 사용되는 바와 같은 "유효량" 또는 "치료 유효량"이란 용어는 치료되는 질병 또는 병태의 증상들 중 하나 이상을 어느 정도 경감시키기에 충분한, 투여되는 작용제 또는 화합물의 양을 지칭한다. 그 결과는 질병의 징후, 증상 또는 원인의 감소 및/또는 경감, 또는 생물계의 임의의 다른 목적하는 변경을 포함한다. 예를 들어, 치료학적 용도를 위한 "유효량"은 질병 증상의 임상적으로 현저한 감소를 제공하기 위해 필요한 본 발명에 개시된 바와 같은 화합물을 포함하는 조성물의 양이다. 임의의 개별적인 경우에 적합한 "유효"량은 용량 점증 연구와 같은 기법들을 사용하여 임의로 측정된다.
본 발명에 사용되는 바와 같은 "치료하다", "치료하는", "치료"란 용어들은 예방학적 또는 치료학적, 질병 또는 병태의 적어도 하나의 증상의 경감, 감소 또는 개선, 추가적인 증상의 예방, 상기 질병 또는 병태의 억제, 예를 들어 상기 질병 또는 병태의 발병의 저지, 상기 질병 또는 병태의 완화, 상기 질병 또는 병태의 역행을 일으킴, 병태 진행의 지연, 상기 질병 또는 병태에 의해 야기된 병태의 완화, 또는 상기 질병 또는 병태의 증상의 정지를 포함한다. 일부 실시태양에서, 치료는 무진행 생존의 연장을 포함한다. 일부 실시태양에서, 치료는 다른 치료 선택권들에 비해 질병 진행의 상대적인 위험성의 감소를 포함한다. 일부 실시태양에서, 다른 치료 선택권은 비제한적으로 호르몬 치료(예를 들어 항-에스트로젠 요법, 예를 들어 타목시펜 및/또는 풀베스트란트 또는 아로마타제 요법)를 포함한다.
"무진행 생존"이란 용어는 환자가 질병, 예를 들어 암과 함께 생존하지만 더 악화되지 않는 상기 질병의 치료 중 및 치료 후의 시간의 양이다. 임상 시험에서, 무진행 생존의 측정은 치료가 얼마나 잘 수행되고 있는지를 알아보기 위한 한 가지 방법이다.
"무전이 생존" 또는 "MFS"란 용어는 하나의 연구에서 한정된 기간 동안 암 확산 없이 또는 사망 없이 생존한 피실험자들의 비율을 지칭한다. MFS는 대개 상기 연구에서 치료 시작으로부터의 시간으로서 기록된다. MFS는 개인 또는 연구 집단에 대해 보고된다. 일부 실시태양에서, 상기 무전이 생존의 증가는 약 1개월, 약 2개월, 약 2개월, 약 3개월, 약 4개월, 약 5개월, 약 6개월, 약 7개월, 약 8개월, 약 10개월, 약 11개월, 약 12개월, 약 13개월, 약 14개월, 약 15개월, 약 16개월, 약 17개월, 약 18개월, 약 19개월, 약 20개월, 또는 약 20개월 초과이다.
본 발명에 사용되는 바와 같은 "약학 조합"이란 용어는 하나 초과의 활성 성분의 혼합 또는 병용으로부터 생성되고 상기 활성 성분의 고정된 및 비-고정된 조합을 모두 포함하는 생성물을 의미한다. "고정된 조합"이란 용어는 상기 활성 성분, 예를 들어 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물 및 공-작용제를 모두 환자에게 단일의 존재 또는 투여형의 형태로 동시에 투여함을 의미한다. "비-고정된 조합"이란 용어는 상기 활성 성분, 예를 들어 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물 및 공-작용제를 환자에게 별도의 존재로서 동시에, 동반하여 또는 특별한 개입 시간 제한 없이 연속적으로 투여함을 의미하며, 여기에서 상기와 같은 투여는 상기 환자의 신체에 상기 두 화합물의 유효 수준을 제공한다. 상기 비-고정된 조합을 또한 칵테일 요법, 예를 들어 3개 이상의 활성 성분들의 투여에 적용한다.
본 발명에 개시된 화합물의 "대사산물"은 상기 화합물이 대사될 때 형성되는 상기 화합물의 유도체이다. "활성 대사산물"이란 용어는 상기 화합물이 대사될 때 형성되는 화합물의 생물학적 활성 유도체를 지칭한다. 본 발명에 사용되는 바와 같은 "대사된"이란 용어는 특정 물질이 유기체에 의해 변화되는 과정들(예를 들어 비제한적으로 가수분해 반응 및 효소에 의해 촉매화되는 반응)의 합을 지칭한다. 따라서, 효소는 하나의 화합물에 대해 특이적인 구조적 변경을 생성시킬 수 있다. 예를 들어, 시토크롬 P450은 다양한 산화 및 환원 반응들을 촉매화하는 반면 유리딘 다이포스페이트 글루쿠로닐트랜스퍼라제는 활성화된 글루쿠론산 분자의 방향족 알콜, 지방족 알콜, 카복실산, 아민 및 유리 설프하이드릴기로의 전이를 촉매화한다. 본 발명에 개시된 화합물들의 대사산물을, 화합물의 숙주에의 투여 및 상기 숙주로부터의 조직 샘플의 분석에 의해, 또는 시험관내에서 화합물들과 간세포와의 배양 및 생성 화합물의 분석에 의해 임의로 확인한다.
본 발명에 사용되는 바와 같은 "약학적으로 허용 가능한"이란 용어는 본 발명에 개시된 ER 억제제 화합물의 생물 활성 또는 성질을 없애지 않고 비교적 무독성인 물질(예를 들어 담체 또는 희석제)을 지칭한다(즉 상기 물질은 바람직하지 못한 생물학적 효과를 야기하거나 또는 조성물 중에 함유된 상기 조성물의 성분들 중 임의의 성분과 유해한 방식으로 상호작용하지 않으면서 개인에게 투여된다).
본 발명에 사용되는 바와 같이, "대조용"은, 샘플이 시험 매개변수로 처리되지 않거나 또는 상기 샘플이 혈장 샘플인 경우 상기 샘플이 관심 상태에 침범되지 않은 정상적인 자원자로부터의 것일 수 있음을 제외하고, 시험 샘플과 실질적으로 동일한 샘플을 지칭한다.
본 발명에 사용되는 바와 같이, "피실험자", "개인" 및 "환자"란 용어들은 호환적으로 사용된다. 상기 용어들 중 어느 것도 의학 전문가(예를 들어 의사, 간호사, 의료 보조자, 병원 잡역부, 호스피스 종사자)의 관리를 필요로 하는 것으로서 해석되지는 않는다. 본 발명에 사용되는 바와 같이, 상기 피실험자는 임의의 동물, 예를 들어 포유동물(예를 들어 인간 또는 비-인간 동물, 예를 들어 침팬지, 유인원, 원숭이, 소, 말, 양, 염소, 돼지, 토끼, 개, 고양이, 래트, 마우스, 기니 피그 등) 및 비-포유동물일 수 있다. 본 발명에 제공된 방법 및 조성물의 하나의 실시태양에서, 상기 포유동물은 인간이다.
"연속적인 매일 투여 스케줄"이란 용어는 에스트로젠 수용체 조절제, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염의, 임의의 약물 휴일 없는 매일의 투여를 지칭한다. 일부 실시태양에서, 연속적인 매일 투여 스케줄은 에스트로젠 수용체 조절제 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염의 매일의, 매일 대충 동일한 시간의 투여를 포함한다.
"알킬"기는 지방족 탄화수소기를 지칭한다. 상기 알킬 부분은 분지되거나 직쇄일 수 있다. "알킬"기는 탄소수 1 내지 6을 가질 수 있다(상기 알킬기가 본 발명에 나타날 때마다, "1 내지 6"과 같은 숫자 범위는 상기 주어진 범위내의 각각의 정수를 지칭한다; 예를 들어 "탄소수 1 내지 6"은 상기 알킬기가 하나의 탄소 원자, 2개의 탄소 원자, 3개의 탄소 원자 등 내지 6개(포함)의 탄소 원자로 이루어질 수 있지만, 본 정의는 또한 숫자 범위가 지정되지 않은 "알킬"이란 용어의 존재를 포함한다). 하나의 태양에서 상기 알킬은 메틸, 에틸, 프로필, 아이소-프로필, n-부틸, 아이소-부틸, 2급-부틸, 및 t-부틸로 이루어지는 군 중에서 선택된다. 전형적인 알킬기는 비제한적으로 메틸, 에틸, 프로필, 아이소프로필, 부틸, 아이소부틸, 2급-부틸, 3급 부틸, 펜틸, 네오펜틸, 헥실 등을 포함한다. 일부 실시태양에서, 알킬의 하나 이상의 수소 원자는 하나 이상의 중수소 원자로 치환된다.
"알콕시"는 (알킬)O-기를 지칭하며, 이때 알킬은 본 발명에서 정의된 바와 같다.
"방향족"이란 용어는 4n+2π 전자를 함유하는 비국소 π-전자 시스템을 갖는 평면 고리를 지칭하며, 이때 n은 정수이다. 방향족 화합물은 임의로 치환된다. "방향족"이란 용어는 카보사이클릭 아릴("아릴", 예를 들어 페닐) 및 헤테로사이클릭 아릴(또는 "헤테로아릴" 또는 "헤테로방향족")기(예를 들어 피리딘)을 모두 포함한다. 상기 용어는 모노사이클릭 또는 축합된-고리 폴리사이클릭(즉 인접한 탄소 원자쌍을 공유하는 고리)기를 포함한다.
"카보사이클릭" 또는 "카보사이클"이란 용어는 고리 또는 고리 시스템의 주쇄를 형성하는 원자들이 모두 탄소 원자인 상기 고리를 지칭한다. 따라서 상기 용어는 카보사이클릭을, 고리 주쇄가 탄소와 상이한 적어도 하나의 원자를 함유하는 헤테로사이클릭 고리와 구분한다.
본 발명에 사용되는 바와 같이, "아릴"이란 용어는 고리를 형성하는 원자들이 각각 탄소 원자인 방향족 고리를 지칭한다. 하나의 태양에서, 아릴은 페닐 또는 나프탈레닐이다. 하나의 태양에서, 아릴은 페닐이다. 하나의 태양에서, 아릴은 C6-C10아릴이다. 일부 실시태양에서, 아릴의 하나 이상의 수소 원자는 하나 이상의 중수소 원자로 치환된다.
"사이클로알킬"이란 용어는 사이클릭 지방족 탄화수소 라디칼을 지칭한다. 사이클로알킬기는 3 내지 10개의 고리 원자를 갖는 기를 지칭한다. 일부 실시태양에서, 사이클로알킬기는 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로펜테닐, 사이클로헥실, 사이클로헥세닐, 사이클로헵틸 및 사이클로옥틸 중에서 선택된다. 하나의 태양에서, 사이클로알킬은 C3-C6사이클로알킬이다.
"할로", 또는 한편으로, "할로겐" 또는 "할라이드"란 용어는 플루오로(F), 클로로(Cl), 브로모(Br) 또는 요오도(I)를 의미한다. 일부 실시태양에서, 할로겐은 F 또는 Cl이다. 일부 실시태양에서, 할로겐은 F이다.
"플루오로알킬"이란 용어는 하나 이상의 수소 원자가 불소 원자로 치환된 알킬을 지칭한다. 하나의 태양에서, 플루오르알킬은 C1-C6 플루오로알킬이다. 일부 실시태양에서, 플루오로알킬은 모노플루오로알킬이며, 여기에서 상기 알킬의 하나의 수소 원자가 불소 원자에 의해 치환된다. 일부 실시태양에서, 플루오로알킬은 다이플루오로알킬이며, 여기에서 상기 알킬의 2개의 수소 원자가 불소 원자에 의해 치환된다. 일부 실시태양에서, 플루오로알킬은 트라이플루오로알킬이며, 여기에서 상기 알킬의 3개의 수소 원자가 불소 원자에 의해 치환된다. 일부 실시태양에서, 플루오로알킬은 모노플루오로알킬, 다이플루오로알킬, 또는 트라이플루오로알킬이다. 일부 실시태양에서, 모노플루오로알킬은 -CH2F, -CHF2, -CF3, -CHFCH3, -CH2CH2F, -CH2CHF2, -CH2CF3, -CH2CH2CF3, -CH2CH2CH2CF3, -CHCH3CF3, -CH(CF3)2, 또는 -CF(CH3)2이다.
"헤테로사이클" 또는 "헤테로사이클릭"이란 용어는 고리 중에 1 내지 4개의 헤테로원자를 함유하는 헤테로방향족 고리(또한 헤테로아릴로서 공지됨) 및 헤테로사이클로알킬 고리(또한 헤테로지환족기로서 공지됨)를 지칭하며, 이때 상기 고리 중 각각의 헤테로원자는 O, S 및 N 중에서 선택되고, 여기에서 각각의 헤테로사이클릭기는 그의 고리 시스템 중에 3 내지 10개의 원자를 가지나, 단 어떠한 고리도 2개의 인접한 O 또는 S 원자를 함유하지 않는다. 비-방향족 헤테로사이클릭기(또한 헤테로사이클로알킬로서 공지됨)는 그의 고리 시스템 중에 단지 3개의 원자만을 갖는 기를 포함하지만, 방향족 헤테로사이클릭기는 그의 고리 시스템 중에 적어도 5개의 원자를 가져야 한다. 상기 헤테로사이클릭기는 벤조-축합된 고리 시스템을 포함한다. 3-원 헤테로사이클릭기의 예는 아지리디닐이다. 4-원 헤테로사이클릭기의 예는 아제티디닐이다. 5-원 헤테로사이클릭기의 예는 티아졸릴이다. 6-원 헤테로사이클릭기의 예는 피리딜이고 10원 헤테로사이클릭기의 예는 퀴놀리닐이다. 비-방향족 헤테로사이클릭기의 예는 피롤리디닐, 테트라하이드로퓨라닐, 다이하이드로퓨라닐, 테트라하이드로티에닐, 옥사졸리디노닐, 테트라하이드로피라닐, 다이하이드로피라닐, 테트라하이드로티오피라닐, 피페리디닐, 모폴리닐, 티오모폴리닐, 티옥사닐, 피페라지닐, 아지리디닐, 아제티디닐, 옥세타닐, 티에타닐, 호모피페리디닐, 옥세파닐, 티에파닐, 옥사제피닐, 다이아제피닐, 티아제피닐, 1,2,3,6-테트라하이드로피리디닐, 피롤린-2-일, 피롤린-3-일, 인돌리닐, 2H-피라닐, 4H-피라닐, 다이옥사닐, 1,3-다이옥솔라닐, 피라졸리닐, 다이티아닐, 다이티올라닐, 다이하이드로피라닐, 다이하이드로티에닐, 다이하이드로퓨라닐, 피라졸리디닐, 이미다졸리닐, 이미다졸리디닐, 3-아자바이사이클로[3.1.0]헥사닐, 3-아자바이사이클로[4.1.0]헵타닐, 3H-인돌릴 및 퀴놀리지닐이다. 방향족 헤테로사이클릭기의 예는 피리디닐, 이미다졸릴, 피리미디닐, 피라졸릴, 트라이아졸릴, 피라지닐, 테트라졸릴, 퓨릴, 티에닐, 아이속사졸릴, 티아졸릴, 옥사졸릴, 아이소티아졸릴, 피롤릴, 퀴놀리닐, 아이소퀴놀리닐, 인돌릴, 벤즈이미다졸릴, 벤조퓨라닐, 신놀리닐, 인다졸릴, 인돌리지닐, 프탈라지닐, 피리다지닐, 트라이아지닐, 아이소인돌릴, 프테리디닐, 퓨리닐, 옥사다이아졸릴, 티아다이아졸릴, 퓨라자닐, 벤조퓨라자닐, 벤조티오페닐, 벤조티아졸릴, 벤즈옥사졸릴, 퀴나졸리닐, 퀴녹살리닐, 나프티리디닐 및 퓨로피리디닐이다. 상기 기들은 가능한 경우, C-부착(또는 C-연결)되거나 N-부착될 수 있다. 예를 들어, 피롤로부터 유도된 기는 피롤-1-일(N-부착된) 또는 피롤-3-일(C-부착된)일 수 있다. 더욱이, 이미다졸로부터 유래된 기는 이미다졸-1-일 또는 이미다졸-3-일(둘 다 N-부착된) 또는 이미다졸-2-일, 이미다졸-4-일 또는 이미다졸-5-일(모두 C-부착된)일 수 있다. 상기 헤테로사이클릭기는 벤조-축합된 고리 시스템을 포함한다.
"헤테로아릴"이란 용어는 질소, 산소 및 황 중에서 선택된 하나 이상의 고리 헤테로원자를 포함하는 아릴기를 지칭한다. 모노사이클릭 헤테로아릴은 피리디닐, 이미다졸릴, 피리미디닐, 피라졸릴, 트라이아졸릴, 피라지닐, 테트라졸릴, 퓨릴, 티에닐, 아이속사졸릴, 티아졸릴, 옥사졸릴, 아이소티아졸릴, 피롤릴, 피리다지닐, 트라이아지닐, 옥사다이아졸릴, 티아다이아졸릴 및 퓨라자닐을 포함한다. 일부 실시태양에서, 헤테로아릴은 고리 중에 0 내지 3개의 N 원자를 함유한다. 일부 실시태양에서 헤테로아릴은 고리 중에 1 내지 3개의 N 원자를 함유한다. 일부 실시태양에서, 헤테로아릴은 고리 중에 0 내지 3개의 N 원자, 0 내지 1개의 O 원자 및 0 내지 1개의 S 원자를 함유한다. 일부 실시태양에서, 모노사이클릭 헤테로아릴은 5-원 또는 6-원 헤테로아릴이다.
"헤테로사이클로알킬" 또는 "헤테로지환족"기는 상기 사이클로알킬의 탄소 원자 중 적어도 하나가 질소(비치환되거나 치환된, 예를 들어 -NH-, -NRe-), 산소(-O-) 또는 황(예를 들어 -S-, -S(=O)- 또는 -S(=O)2-)으로 치환된 사이클로알킬기를 지칭한다. 상기 라디칼은 아릴 또는 헤테로아릴과 축합될 수도 있다. 일부 실시태양에서, 상기 헤테로사이클로알킬은 옥사졸리디노닐, 피롤리디닐, 테트라하이드로퓨라닐, 테트라하이드로티에닐, 테트라하이드로피라닐, 테트라하이드로티오피라닐, 피페리디닐, 모폴리닐, 티오모폴리닐, 피페라지닐, 및 인돌리닐 중에서 선택된다. 헤테로지환족이란 용어는 또한 비제한적으로 모노사카라이드, 다이사카라이드 및 올리고사카라이드를 포함한 탄수화물의 모든 고리형들을 포함한다. 하나의 태양에서, 헤테로사이클로알킬은 C2-C10헤테로사이클로알킬이다. 또 다른 태양에서, 헤테로사이클로알킬은 C4-C10헤테로사이클로알킬이다. 일부 실시태양에서, 헤테로사이클로알킬은 고리 중에 0 내지 2개의 N 원자를 함유한다. 일부 실시태양에서 헤테로사이클로알킬은 고리 중에 고리 중에 0 내지 2개의 N 원자, 0 내지 2개의 O 원자 및 0 내지 1개의 S 원자를 함유한다.
"임의로 치환된" 또는 "치환된"이란 용어는 언급된 기가 알킬, 사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로지환족, 하이드록시, 알콕시, 아릴옥시, 알킬티오, 아릴티오, 알킬설폭사이드, 아릴설폭사이드, 알킬설폰, 아릴설폰, 시아노, 할로, 나이트로, 할로알킬, 플루오로알킬, 플루오로알콕시, 및 일- 및 이-치환된 아미노기를 포함한 아미노, 및 이들의 보호된 유도체 중에서 개별적으로 및 독립적으로 선택된 하나 이상의 추가적인 기로 치환될 수 있음을 의미한다. 일부 실시태양에서, 임의의 치환체는 할로겐, -CN, -NH2, -NH(알킬), -N(알킬)2, -OH, -CO2H, -CO2알킬, -C(=O)NH2, -C(=O)NH(알킬), -C(=O)N(알킬)2, -S(=O)2NH2, -S(=O)2NH(알킬), -S(=O)2N(알킬)2, 알킬, 사이클로알킬, 플루오로알킬, 헤테로알킬, 알콕시, 플루오로알콕시, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴, 아릴옥시, 알킬티오, 아릴티오, 알킬설폭사이드, 아릴설폭사이드, 알킬설폰 및 아릴설폰 중에서 독립적으로 선택된다. 일부 실시태양에서, 임의의 치환체는 할로겐, -CN, -NH2, -OH, -NH(CH3), -N(CH3)2, -CH3, -CH2CH3, -CF3, -OCH3, 및 -OCF3 중에서 독립적으로 선택된다. 일부 실시태양에서, 치환된 기는 선행 기들 중 하나 또는 2개로 치환된다. 일부 실시태양에서, 지방족 탄소원자(방향족 탄소 원자를 제외한, 비환상 또는 환상, 포화된 또는 불포화된 탄소 원자)상의 임의의 치환체는 옥소(=O)를 포함한다.
진단 및 치료를 위한 예시적인 에스트로젠 수용체 돌연변이체
일부 실시태양에서, 본 발명에 제공된 진단 방법은 ESR1 유전자 중의 하나 이상의 돌연변이를 검출함을 포함한다. 일부 실시태양에서, 본 발명에 제공된 방법은 ESR1 중의 하나 이상의 돌연변이를 갖는 환자를 치료함을 포함한다. 진단 및 치료를 위한 예시적인 ESR1 돌연변이는 비제한적으로 뉴클레오타이드 삽입, 결실 또는 치환을 포함한다. 일부 실시태양에서, 상기 돌연변이는 암호화된 ER 폴리펩타이드 중의 아미노산의 치환을 생성시키는 뉴클레오타이드 치환(즉 미스센스 돌연변이)이다. 일부 실시태양에서, 상기 돌연변이는 암호화된 ER 폴리펩타이드 중의 아미노산의 결실 및/또는 하나 이상의 아미노산의 치환을 생성시키는 뉴클레오타이드 삽입이다. 일부 실시태양에서, 상기 돌연변이는 암호화된 ER 폴리펩타이드 중의 아미노산의 결실 및/또는 하나 이상의 아미노산의 치환을 생성시키는 뉴클레오타이드 결실이다. 일부 실시태양에서, 상기 돌연변이는 ER 폴리펩타이드의 하나 이상의 도메인이 또 다른 단백질 또는 그의 일부에 융합된 하이브리드 ER 폴리펩타이드를 생성시키는 게놈 전좌이다. 일부 실시태양에서, 상기 돌연변이는 절두된 ER 폴리펩타이드를 생성시키는 뉴클레오타이드 삽입, 결실 또는 치환(즉 넌센스 돌연변이)이다. 일부 실시태양에서, 상기 ESR1 돌연변이는 암호화된 돌연변이 ER-α 폴리펩타이드의 활성의 증가를 생성시킨다. 일부 실시태양에서, 상기 돌연변이는 암호화된 돌연변이 ER-α 폴리펩타이드의 리간드-독립적인 활성화를 부여한다. 일부 실시태양에서, 상기 돌연변이는 구성적으로 활성인 돌연변이 ER-α 폴리펩타이드를 생성시킨다. 일부 실시태양에서, 상기 돌연변이 ER-α는 에스트라디올의 부재하에서 구성적 활성을 나타낸다. 일부 실시태양에서, 상기 ESR1 돌연변이는 상기 ESR1 유전자 산물의 발현을 증가시킨다(즉 야생형 ER-α 폴리펩타이드의 발현을 증가시킨다).
일부 실시태양에서, 상기 돌연변이는 서열번호 2의 아미노산 위치 6, 118, 269, 311, 341, 350, 380, 392, 394, 433, 463, 503, 534, 535, 536, 537, 538 및 555번 중에서 선택된 위치에서 아미노산 치환을 갖는 ER 폴리펩타이드를 생성시킨다. 일부 실시태양에서, 상기 돌연변이는 서열번호 2의 380, 463, 534, 535, 536, 537, 및 538번 중에서 선택된 위치에서 아미노산 치환을 갖는 ER 폴리펩타이드를 생성시킨다. 일부 실시태양에서, 상기 돌연변이는 H6Y, S118P, R269C, T311M, S341L, A350E, E380Q, V392I, R394H, S433P, S463P, R503W, V534E, P535H, L536R, L536P, L536Q, Y537N, Y537C, Y537S, D538G, 및 R555C 중에서 선택된 아미노산 치환을 갖는 ER 폴리펩타이드를 생성시킨다. 일부 실시태양에서, 상기 환자는 ESR1 유전자에 2개 이상의 돌연변이를 갖는다.
일부 실시태양에서, 상기 ESR1 돌연변이는 서열번호 2의 6번 위치에서 아미노산 치환을 야기하는 상기 ESR1 유전자 중의 미스센스 돌연변이를 포함한다. 일부 실시태양에서, 상기 아미노산 치환은 H6Y 치환이다. 일부 실시태양에서, 상기 미스센스 돌연변이는 서열번호 1의 뉴클레오타이드 서열에 따른 H6을 암호화하는 코돈 중의 C16T 치환(예를 들어 CAC에서 TAC로)이다.
일부 실시태양에서, 상기 ESR1 돌연변이는 서열번호 2의 118번 위치에서 아미노산 치환을 야기하는 상기 ESR1 유전자 중의 미스센스 돌연변이를 포함한다. 일부 실시태양에서, 상기 아미노산 치환은 S118P 치환이다. 일부 실시태양에서, 상기 미스센스 돌연변이는 서열번호 1의 뉴클레오타이드 서열에 따른 S118을 암호화하는 코돈 중의 T352C 치환(예를 들어 TCG에서 CCG로)이다.
일부 실시태양에서, 상기 ESR1 돌연변이는 서열번호 2의 269번 위치에서 아미노산 치환을 야기하는 상기 ESR1 유전자 중의 미스센스 돌연변이를 포함한다. 일부 실시태양에서, 상기 아미노산 치환은 R269C 치환이다. 일부 실시태양에서, 상기 미스센스 돌연변이는 서열번호 1의 뉴클레오타이드 서열에 따른 R269를 암호화하는 코돈 중의 C805T 치환(예를 들어 CGC에서 TGC로)이다.
일부 실시태양에서, 상기 ESR1 돌연변이는 서열번호 2의 311번 위치에서 아미노산 치환을 야기하는 상기 ESR1 유전자 중의 미스센스 돌연변이를 포함한다. 일부 실시태양에서, 상기 아미노산 치환은 T311M 치환이다. 일부 실시태양에서, 상기 미스센스 돌연변이는 서열번호 1의 뉴클레오타이드 서열에 따른 C932T 치환이다.
일부 실시태양에서, 상기 ESR1 돌연변이는 서열번호 2의 341번 위치에서 아미노산 치환을 야기하는 상기 ESR1 유전자 중의 미스센스 돌연변이를 포함한다. 일부 실시태양에서, 상기 아미노산 치환은 S341L 치환이다. 일부 실시태양에서, 상기 미스센스 돌연변이는 서열번호 1의 뉴클레오타이드 서열에 따른 C1022T 치환이다.
일부 실시태양에서, 상기 ESR1 돌연변이는 서열번호 2의 아미노산 G344와 L345 사이의 아미노산 삽입을 야기하는 상기 ESR1 유전자 중의 미스센스 돌연변이를 포함한다. 일부 실시태양에서, 상기 아미노산 삽입은 C 아미노산이다. 일부 실시태양에서, 상기 미스센스 돌연변이는 서열번호 1의 뉴클레오타이드 1032와 1033 사이의 뉴클레오타이드 GCT의 삽입이다.
일부 실시태양에서, 상기 ESR1 돌연변이는 서열번호 2의 350번 위치에서 아미노산 치환을 야기하는 상기 ESR1 유전자 중의 미스센스 돌연변이를 포함한다. 일부 실시태양에서, 상기 아미노산 치환은 A350E 치환이다. 일부 실시태양에서, 상기 미스센스 돌연변이는 서열번호 1의 뉴클레오타이드 서열에 따른 C1049A 치환이다.
일부 실시태양에서, 상기 ESR1 돌연변이는 서열번호 2의 380번 위치에서 아미노산 치환을 야기하는 상기 ESR1 유전자 중의 미스센스 돌연변이를 포함한다. 일부 실시태양에서, 상기 아미노산 치환은 E380Q 치환이다. 일부 실시태양에서, 상기 미스센스 돌연변이는 서열번호 1의 뉴클레오타이드 서열에 따른 E380을 암호화하는 코돈 중의 G1138C 치환(예를 들어 GAA에서 CAA로)이다.
일부 실시태양에서, 상기 ESR1 돌연변이는 서열번호 2의 392번 위치에서 아미노산 치환을 야기하는 상기 ESR1 유전자 중의 미스센스 돌연변이를 포함한다. 일부 실시태양에서, 상기 아미노산 치환은 V392I 치환이다. 일부 실시태양에서, 상기 미스센스 돌연변이는 서열번호 1의 뉴클레오타이드 서열에 따른 V392를 암호화하는 코돈 중의 G1174A 치환(예를 들어 GTC에서 ATC로)이다.
일부 실시태양에서, 상기 ESR1 돌연변이는 서열번호 2의 394번 위치에서 아미노산 치환을 야기하는 상기 ESR1 유전자 중의 미스센스 돌연변이를 포함한다. 일부 실시태양에서, 상기 아미노산 치환은 R394H 치환이다. 일부 실시태양에서, 상기 미스센스 돌연변이는 서열번호 1의 뉴클레오타이드 서열에 따른 G1181A 치환이다.
일부 실시태양에서, 상기 ESR1 돌연변이는 서열번호 2의 413번 위치에서 끝나는 절두된 단백질을 야기하는 상기 ESR1 유전자 중의 미스센스 돌연변이를 포함한다. 일부 실시태양에서, 상기 아미노산 절두는 정지 코돈을 도입시키는 상기 뉴클레오타이드 서열 중의 돌연변이로 인한 Q414* 돌연변이이다. 일부 실시태양에서, 상기 돌연변이는 서열번호 1의 뉴클레오타이드 서열에 따른 C1240T 치환이다.
일부 실시태양에서, 상기 ESR1 돌연변이는 서열번호 2의 433번 위치에서 아미노산 치환을 야기하는 상기 ESR1 유전자 중의 미스센스 돌연변이를 포함한다. 일부 실시태양에서, 상기 아미노산 치환은 S433P 치환이다. 일부 실시태양에서, 상기 미스센스 돌연변이는 서열번호 1의 뉴클레오타이드 서열에 따른 T1297C 치환이다.
일부 실시태양에서, 상기 ESR1 돌연변이는 서열번호 2의 463번 위치에서 아미노산 치환을 야기하는 상기 ESR1 유전자 중의 미스센스 돌연변이를 포함한다. 일부 실시태양에서, 상기 아미노산 치환은 S463P 치환이다. 일부 실시태양에서, 상기 미스센스 돌연변이는 서열번호 1의 뉴클레오타이드 서열에 따른 S463을 암호화하는 코돈 중의 T1387C 치환(예를 들어 TCC에서 CCC로)이다.
일부 실시태양에서, 상기 ESR1 돌연변이는 서열번호 2의 503번 위치에서 아미노산 치환을 야기하는 상기 ESR1 유전자 중의 미스센스 돌연변이를 포함한다. 일부 실시태양에서, 상기 아미노산 치환은 R503W 치환이다. 일부 실시태양에서, 상기 미스센스 돌연변이는 서열번호 1의 뉴클레오타이드 서열에 따른 C1507T 치환이다.
일부 실시태양에서, 상기 ESR1 돌연변이는 서열번호 2의 534번 위치에서 아미노산 치환을 야기하는 상기 ESR1 유전자 중의 미스센스 돌연변이를 포함한다. 일부 실시태양에서, 상기 아미노산 치환은 V534E 치환이다. 일부 실시태양에서, 상기 미스센스 돌연변이는 서열번호 1의 뉴클레오타이드 서열에 따른 V534를 암호화하는 코돈 중의 T1601A 치환(예를 들어 GTG에서 GAG로)이다.
일부 실시태양에서, 상기 ESR1 돌연변이는 서열번호 2의 535번 위치에서 아미노산 치환을 야기하는 상기 ESR1 유전자 중의 미스센스 돌연변이를 포함한다. 일부 실시태양에서, 상기 아미노산 치환은 P535H 치환이다. 일부 실시태양에서, 상기 미스센스 돌연변이는 서열번호 1의 뉴클레오타이드 서열에 따른 P535를 암호화하는 코돈 중의 C1604A 치환(예를 들어 CCC에서 CAC로)이다.
일부 실시태양에서, 상기 ESR1 돌연변이는 서열번호 2의 536번 위치에서 아미노산 치환을 야기하는 상기 ESR1 유전자 중의 미스센스 돌연변이를 포함한다. 일부 실시태양에서, 상기 아미노산 치환은 L536R 치환이다. 일부 실시태양에서, 상기 아미노산 치환은 L536P 치환이다. 일부 아미노산에서, 상기 아미노산 치환은 L536Q 치환이다. 일부 실시태양에서, 상기 미스센스 돌연변이는 서열번호 1의 뉴클레오타이드 서열에 따른 L536을 암호화하는 코돈 중의 T1607A 치환 및 C1608A 치환(예를 들어 CTC에서 CAA로)이다.
일부 실시태양에서, 상기 ESR1 돌연변이는 서열번호 2의 537번 위치에서 아미노산 치환을 야기하는 상기 ESR1 유전자 중의 미스센스 돌연변이를 포함한다. 일부 실시태양에서, 상기 아미노산 치환은 Y537N 치환이다. 일부 실시태양에서, 상기 아미노산 치환은 Y537C 치환이다. 일부 아미노산에서, 상기 아미노산 치환은 Y537S 치환이다. 일부 실시태양에서, 상기 미스센스 돌연변이는 서열번호 1의 뉴클레오타이드 서열에 따른 T1609A 치환이다. 일부 실시태양에서, 상기 미스센스 돌연변이는 서열번호 1의 뉴클레오타이드 서열에 따른 A1610G 치환이다.
일부 실시태양에서, 상기 ESR1 돌연변이는 서열번호 2의 538번 위치에서 아미노산 치환을 야기하는 상기 ESR1 유전자 중의 미스센스 돌연변이를 포함한다. 일부 실시태양에서, 상기 아미노산 치환은 D538G 치환이다. 일부 실시태양에서, 상기 미스센스 돌연변이는 서열번호 1의 뉴클레오타이드 서열에 따른 A1613G 치환이다.
일부 실시태양에서, 상기 ESR1 돌연변이는 서열번호 2의 555번 위치에서 아미노산 치환을 야기하는 상기 ESR1 유전자 중의 미스센스 돌연변이를 포함한다. 일부 실시태양에서, 상기 아미노산 치환은 R555C 치환이다. 일부 실시태양에서, 상기 미스센스 돌연변이는 서열번호 1의 뉴클레오타이드 서열에 따른 R555를 암호화하는 코돈 중의 C1663T 치환(예를 들어 CGT에서 TGT로)이다.
일부 실시태양에서, 상기 ESR1 돌연변이는 ESR1 유전자의 리간드 결합 도메인 중의 결실이다. 일부 실시태양에서, 상기 ESR1 돌여변이는 3개 이상의 뉴클레오타이드의 인프레임 결실이다. 일부 실시태양에서, 상기 돌연변이는 하나 이상의 ESR1 엑손 중의 3개 이상의 뉴클레오타이드의 인프레임 결실이다. 일부 실시태양에서, 상기 돌연변이는 ESR1 유전자의 엑손 8, 9, 10, 11 또는 12 중의 3개 이상의 뉴클레오타이드의 인프레임 결실이다. 일부 실시태양에서, 상기 ESR1 돌연변이는 서열번호 1에 따른 뉴클레오타이드 1046-1051(TGGCAG)의 6개 뉴클레오타이드 결실이며, 이는 서열번호 2의 ER 폴리펩타이드의 아미노산 349-351(LAD)의 결실 및 아미노산 위치 349번의 H의 삽입을 생성시킨다.
일부 실시태양에서, 상기 ESR1 유전자에서 미스센스 돌연변이는 하기 중 하나 이상으로부터 선택된 아미노산 치환을 생성시킨다: 서열번호 2의, 6번 위치에서 히스티딘의 타이로신으로의 치환(H6Y); 118번 위치에서 세린의 프롤린으로의 치환(S118P); 269번 위치에서 아르기닌의 시스테인으로의 치환(R269C); 311번 위치에서 쓰레오닌의 메티오닌으로의 치환(T311M); 341번 위치에서 세린의 류신으로의 치환(S341L); 350번 위치에서 알라닌의 글루타메이트로의 치환(A350E); 380번 위치에서 글루탐산의 글루타민으로의 치환(E380Q); 392번 위치에서 발린의 아이소류신으로의 치환(V392I); 394번 위치에서 아르기닌의 히스티딘으로의 치환(R394H); 414번 위치에서 글루타민 치환, 예를 들어 정지 코돈으로의 삽입(Q414*); 433번 위치에서 세린의 프롤린으로의 치환(S433P); 463번 위치에서 세린의 프롤린으로의 치환(S463P); 503번 위치에서 아르기닌의 트립토판으로의 치환(R503W); 534번 위치에서 발린의 글루탐산으로의 치환(V534E); 535번 위치에서 프롤린의 히스티딘으로의 치환(P535H); 536번 위치에서 류신의 아르기닌으로의 치환(L536R); 536번 위치에서 류신의 프롤린으로의 치환(L536P); 536번 위치에서 류신의 글루타민으로의 치환(L536Q); 537번 위치에서 타이로신의 아스파라진으로의 치환(Y537N); 537번 위치에서 타이로신의 시스테인으로의 치환(Y537C); 537번 위치에서 타이로신의 세린으로의 치환(Y537S); 538번 위치에서 아스파테이트의 글리신으로의 치환(D538G); 및 555번 위치에서 아르기닌의 시스테인으로의 치환(R555C).
일부 실시태양에서, 상기 ESR1 돌연변이는 ESR1 유전자와 yes 활성화된 단백질 1(YAP1) 유전자간의 게놈 전좌이며, 이는 ER-YAP1 융합 단백질을 생성시킨다.
일부 실시태양에서, 상기 ESR1 유전자는 2개 이상의 돌연변이를 포함한다. 일부 실시태양에서, 상기 ESR1 유전자는 힌지 도메인 및/또는 리간드 결합 도메인 중에 2개 이상의 돌연변이를 포함한다.
에스트로젠 수용체 조절제 화합물
본 발명은 ESR1 유전자 중에 돌연변이를 갖는 피실험자의 치료를 위한 에스트로젠 수용체 조절제(ERM) 화합물을 제공한다. 일부 실시태양에서, 에스트로젠 수용체 조절제 화합물은 약학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, N-산화물, 대사산물 및 전구약물을 포함한 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물이다.
하나의 태양에서, 본 발명에 개시된 방법 및 조성물에 사용하기 위한 에스트로젠 수용체 조절제 화합물은 하기 화학식 A의 화합물, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물이다:
화학식 A
Figure pct00019
상기 식에서,
Ra는 -CO2H 또는
Figure pct00020
및
Figure pct00021
로 이루어지는 군 중에서 선택된 5-원 헤테로사이클이고;
Rb는 C1-C6알킬 또는 C3-C6사이클로알킬이고;
Rc는 H 또는 F이고;
각각의 Rd는 H, 할로겐, -CN, -ORe, -NHRe, -NReRf, -SRe, -S(=O)Rf, -S(=O)2Rf, C1-C6알킬, 및 C1-C6플루오로알킬 중에서 독립적으로 선택되고;
각각의 Re는 H, -C(=O)Rf, -C(=O)ORf, -C(=O)NHRf, C1-C6알킬, C1-C6플루오로알킬, C3-C6사이클로알킬, 치환되거나 비치환된 모노사이클릭 C2-C6헤테로사이클로알킬, 치환되거나 비치환된 페닐, 및 치환되거나 비치환된 모노사이클릭 헤테로아릴 중에서 독립적으로 선택되고;
각각의 Rf는 C1-C6알킬, C1-C6플루오로알킬, C3-C6사이클로알킬, 치환되거나 비치환된 모노사이클릭 C2-C6헤테로사이클로알킬, 치환되거나 비치환된 페닐, 및 치환되거나 비치환된 모노사이클릭 헤테로아릴 중에서 독립적으로 선택되고;
X는 CH 또는 N이고;
n은 0, 1 또는 2이다.
일부 실시태양에서, Ra는 -CO2H이다. 일부 실시태양에서, Ra는
Figure pct00022
및
Figure pct00023
로 이루어지는 군 중에서 선택된 5-원 헤테로사이클이다.
일부 실시태양에서, Rc는 H이다. 일부 실시태양에서, Rc는 F이다.
일부 실시태양에서, Rb는 -CH3, -CH2CH3, 사이클로프로필 또는 사이클로부틸이다. 일부 실시태양에서, Rb는 -CH2CH3이다. 일부 실시태양에서, Rb는 사이클로부틸이다.
일부 실시태양에서, X는 CH이다. 일부 실시태양에서 X는 N이다.
일부 실시태양에서, n은 1 또는 2이다. 일부 실시태양에서, n은 1이다. 일부 실시태양에서, n은 2이다. 일부 실시태양에서, n은 0이다.
일부 실시태양에서, 각각의 Rd는 H, F, Cl, -CN, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, -S(=O)2CH3, -CH3, -CH2H3, 및 -CF3 중에서 독립적으로 선택된다. 일부 실시태양에서, 각각의 Rd는 H, F, Cl, -CN, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, -CH3, -CH2H3, 및 -CF3 중에서 독립적으로 선택된다.
일부 실시태양에서, 상기 에스트로젠 수용체 조절제는 Ra가 -CO2H이고, Rb가 C1-C6알킬이고, Rc가 H이고, 각각의 Rd가 할로겐 중에서 독립적으로 선택되고, X가 CH이고; n이 2인 화학식 A의 화합물, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물이다.
일부 실시태양에서, 상기 에스트로젠 수용체 조절제는 Ra가 -CO2H이고, Rb가 에틸이고, Rc가 H이고, 각각의 Rd가 F 및 Cl 중에서 독립적으로 선택되고, X가 CH이고; n이 2인 화학식 A의 화합물, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물이다.
일부 실시태양에서, 상기 화학식 A의 에스트로젠 수용체 조절제 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물은 하기 화학식 A-1의 구조를 갖는다:
화학식 A-1
Figure pct00024
일부 실시태양에서, 상기 화학식 A의 에스트로젠 수용체 조절제 화합물은 하기 표 1에 개시된 화합물, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물이다:
[표 1]
Figure pct00025
Figure pct00026
Figure pct00027
또 다른 태양에서, 본 발명에 개시된 방법 및 조성물에 사용하기 위한 에스트로젠 수용체 조절제 화합물은 하기 화학식 B의 화합물, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물이다:
화학식 B
Figure pct00028
상기 식에서,
Ra는 -CO2H 또는
Figure pct00029
및
Figure pct00030
로 이루어지는 군 중에서 선택된 5-원 헤테로사이클이고;
고리 C는
Figure pct00031
또는
Figure pct00032
이고;
고리 D는 페닐 또는 티에닐이고;
각각의 Rd는 H, 할로겐, -CN, -ORe, -NHRe, -NReRf, -SRe, -S(=O)Rf, -S(=O)2Rf, C1-C6알킬, 및 C1-C6플루오로알킬 중에서 독립적으로 선택되고;
각각의 Re는 H, -C(=O)Rf, -C(=O)ORf, -C(=O)NHRf, C1-C6알킬, C1-C6플루오로알킬, C3-C6사이클로알킬, 치환되거나 비치환된 모노사이클릭 C2-C6헤테로사이클로알킬, 치환되거나 비치환된 페닐, 및 치환되거나 비치환된 모노사이클릭 헤테로아릴 중에서 독립적으로 선택되고;
각각의 Rf는 C1-C6알킬, C1-C6플루오로알킬, C3-C6사이클로알킬, 치환되거나 비치환된 모노사이클릭 C2-C6헤테로사이클로알킬, 치환되거나 비치환된 페닐, 및 치환되거나 비치환된 모노사이클릭 헤테로아릴 중에서 독립적으로 선택되고;
n은 0, 1 또는 2이다.
일부 실시태양에서, 고리 C는
Figure pct00033
이다.
일부 실시태양에서, 고리 C는
Figure pct00034
이다.
일부 실시태양에서,
Figure pct00035
는
Figure pct00036
또는
Figure pct00037
이다.
일부 실시태양에서,
Figure pct00038
는
Figure pct00039
이다.
일부 실시태양에서,
Figure pct00040
는
Figure pct00041
이다.
일부 실시태양에서, Ra는 -CO2H이다.
일부 실시태양에서, n은 1 또는 2이다.
일부 실시태양에서, n은 1이다.
일부 실시태양에서, n은 2이다. 일부 실시태양에서, n은 0이다.
일부 실시태양에서, 각각의 Rd는 H, F, Cl, -CN, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, -S(=O)2CH3, -CH3, -CH2H3, 및 -CF3 중에서 독립적으로 선택된다.
일부 실시태양에서, 각각의 Rd는 H, F, Cl, -CN, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, -CH3, -CH2H3, 및 -CF3 중에서 독립적으로 선택된다.
일부 실시태양에서, 상기 화학식 B의 에스트로젠 수용체 조절제 화합물은 하기 표 2에 개시된 화합물, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물이다:
[표 2]
Figure pct00042
더욱 또 다른 태양에서, 본 발명에 개시된 방법 및 조성물에 사용하기 위한 에스트로젠 수용체 조절제 화합물은 하기 화학식 C의 화합물, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물이다:
화학식 C
Figure pct00043
상기 식에서,
Ra는 -CO2H 또는
Figure pct00044
및
Figure pct00045
로 이루어지는 군 중에서 선택된 5-원 헤테로사이클이고;
Rb는 C1-C6알킬 또는 C3-C6사이클로알킬이고;
각각의 Rd는 H, 할로겐, -CN, -ORe, -NHRe, -NReRf, -SRe, -S(=O)Rf, -S(=O)2Rf, C1-C6알킬, 및 C1-C6플루오로알킬 중에서 독립적으로 선택되고;
각각의 Re는 H, -C(=O)Rf, -C(=O)ORf, -C(=O)NHRf, C1-C6알킬, C1-C6플루오로알킬, C3-C6사이클로알킬, 치환되거나 비치환된 모노사이클릭 C2-C6헤테로사이클로알킬, 치환되거나 비치환된 페닐, 및 치환되거나 비치환된 모노사이클릭 헤테로아릴 중에서 독립적으로 선택되고;
각각의 Rf는 C1-C6알킬, C1-C6플루오로알킬, C3-C6사이클로알킬, 치환되거나 비치환된 모노사이클릭 C2-C6헤테로사이클로알킬, 치환되거나 비치환된 페닐, 및 치환되거나 비치환된 모노사이클릭 헤테로아릴 중에서 독립적으로 선택되고;
n은 0, 1 또는 2이다.
일부 실시태양에서, Ra는 -CO2H이다.
일부 실시태양에서, Rb는 -CH3, -CH2CH3, 사이클로프로필 또는 사이클로부틸이다.
일부 실시태양에서, Rb는 -CH2CH3이다.
일부 실시태양에서, Rb는 사이클로부틸이다.
일부 실시태양에서, n은 1 또는 2이다. 일부 실시태양에서, n은 1이다. 일부 실시태양에서, n은 2이다. 일부 실시태양에서, n은 0이다.
일부 실시태양에서, 각각의 Rd는 H, F, Cl, -CN, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, -S(=O)2CH3, -CH3, -CH2H3, 및 -CF3 중에서 독립적으로 선택된다.
일부 실시태양에서, 각각의 Rd는 H, F, Cl, -CN, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, -CH3, -CH2H3, 및 -CF3 중에서 독립적으로 선택된다.
일부 실시태양에서, 상기 화학식 C의 에스트로젠 수용체 조절제 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물은 하기 화학식 C-1의 구조를 갖는다:
화학식 C-1
Figure pct00046
일부 실시태양에서, 상기 화학식 C의 에스트로젠 수용체 조절제 화합물은 하기 표 3에 개시된 화합물, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물이다:
[표 3]
Figure pct00047
또 다른 태양에서, 본 발명에 개시된 방법 및 조성물에 사용하기 위한 에스트로젠 수용체 조절제 화합물은 하기 화학식 D의 화합물, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물이다:
화학식 D
Figure pct00048
상기 식에서,
R1은 H, C1-C4알킬 또는 C1-C4플루오로알킬이고;
R2는 H, F, C1-C4알킬 또는 C1-C4플루오로알킬이고;
R3은 H, 할로겐, -CN, -OR6, -NHR6, -NR6R7, -SR6, -S(=O)R7, -S(=O)2R7, C1-C4알킬 또는 C1-C4플루오로알킬이고;
각각의 R4는 H, 할로겐, -CN, -OH, C1-C6알킬, C1-C4플루오로알킬, C1-C4플루오로알콕시, 및 C1-C4알콕시 중에서 독립적으로 선택되고;
각각의 R5는 H, F, Cl, -OH, -CH3, -CF3 또는 -OCH3이고;
각각의 R6은 H, -C(=O)R7, -C(=O)OR7, -C(=O)NHR7, C1-C6알킬, C1-C6플루오로알킬, C3-C6사이클로알킬, 치환되거나 비치환된 C2-C6헤테로사이클로알킬, 치환되거나 비치환된 페닐, 및 치환되거나 비치환된 모노사이클릭 헤테로아릴 중에서 독립적으로 선택되고;
각각의 R7은 C1-C6알킬, C1-C6플루오로알킬, 치환되거나 비치환된 C3-C6사이클로알킬, 치환되거나 비치환된 모노사이클릭 C2-C6헤테로사이클로알킬, 치환되거나 비치환된 페닐, 및 치환되거나 비치환된 모노사이클릭 헤테로아릴 중에서 독립적으로 선택되고;
n은 0, 1 또는 2이고;
t는 1 또는 2이다.
일부 실시태양에서, R1은 H, -CH3, -CH2F, -CHF2, 또는 -CF3이다.
일부 실시태양에서, 각각의 R2는 독립적으로 F, -CH3, -CH2CH3, -CH2F, -CHF2, -CF3, -CHFCH3, -CH2CH2F, -CH2CHF2, -CH2CF3, -CH2CH2CF3, -CH2CH2CH2CF3, -CHCH3CF3, -CH(CF3)2, 또는 -CF(CH3)2이다. 일부 실시태양에서, 각각의 R2는 독립적으로 F, -CH3, -CH2F, -CHF2, 또는 -CF3이다. 일부 실시태양에서, 각각의 R2는 독립적으로 -CH3, -CH2F, -CHF2, 또는 -CF3이다. 일부 실시태양에서, 각각 R2는 독립적으로 -CH2F이다. 일부 실시태양에서, 각각의 R2는 독립적으로 -CH3이다.
일부 실시태양에서, t는 1이다. 일부 실시태양에서, t는 2이다.
일부 실시태양에서, R3은 -OR6이다. 일부 실시태양에서, R3은 -OH이다.
일부 실시태양에서, 각각의 R4는 H, F, Cl, -OH, -CH3, -CF3, 및 -OCH3 중에서 독립적으로 선택된다.
일부 실시태양에서, 각각의 R5는 H 및 F 중에서 독립적으로 선택된다.
일부 실시태양에서, 각각의 R6은 H, -C(=O)R7, -C(=O)OR7, -C(=O)NHR7, C1-C6알킬, C1-C6플루오로알킬, 및 치환되거나 비치환된 페닐 중에서 독립적으로 선택된다. 일부 실시태양에서, 각각의 R6은 H이다.
일부 실시태양에서, 각각의 R7은 C1-C6알킬, C1-C6플루오로알킬, 및 치환되거나 비치환된 페닐 중에서 독립적으로 선택된다.
일부 실시태양에서,
Figure pct00049
는
Figure pct00050
또는
Figure pct00051
이다.
일부 실시태양에서,
Figure pct00052
는
Figure pct00053
또는
Figure pct00054
이다.
일부 실시태양에서,
Figure pct00055
는
Figure pct00056
이다.
일부 실시태양에서,
Figure pct00057
는
Figure pct00058
이다.
일부 실시태양에서,
Figure pct00059
는
Figure pct00060
이다.
일부 실시태양에서,
Figure pct00061
는
Figure pct00062
Figure pct00063
이다.
일부 실시태양에서,
Figure pct00064
는
Figure pct00065
또는
Figure pct00066
이다.
일부 실시태양에서,
Figure pct00067
는
Figure pct00068
이다.
일부 실시태양에서,
Figure pct00069
는
Figure pct00070
또는
Figure pct00071
이다.
일부 실시태양에서,
Figure pct00072
는
Figure pct00073
이다.
일부 실시태양에서,
Figure pct00074
는
Figure pct00075
이다.
일부 실시태양에서, 상기 화학식 D의 에스트로젠 수용체 조절제 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물은 하기 화학식 D-1의 구조를 갖는다:
화학식 D-1
Figure pct00076
일부 실시태양에서, 상기 화학식 D의 에스트로젠 수용체 조절제 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물은 하기 화학식 D-2의 구조를 갖는다:
화학식 D-2
Figure pct00077
일부 실시태양에서, 상기 화학식 D의 에스트로젠 수용체 조절제 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물은 하기 화학식 D-3의 구조를 갖는다:
화학식 D-3
Figure pct00078
일부 실시태양에서, 상기 화학식 D의 에스트로젠 수용체 조절제 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물은 하기 화학식 D-4의 구조를 갖는다:
화학식 D-4
Figure pct00079
일부 실시태양에서, 상기 화학식 D의 에스트로젠 수용체 조절제 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물은 하기 화학식 D-5의 구조를 갖는다:
[화학식 D-5]
Figure pct00080
일부 실시태양에서, 상기 화학식 D의 에스트로젠 수용체 조절제 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물은 하기 화학식 D-6의 구조를 갖는다:
[화학식 D-6]
Figure pct00081
일부 실시태양에서,
Figure pct00082
는
Figure pct00083
또는
Figure pct00084
이다.
일부 실시태양에서, 상기 에스트로젠 수용체 조절제는 R1이 H이고, R2가 C1-C4플루오로알킬이고, R3이 H이고, R4가 -OH이고, R5가 H이고, R6이 H이고, n이 1이고, t가 1인 화학식 D, 화학식 D-1, 또는 화학식 D-3의 화합물, 또는 이들의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물이다.
일부 실시태양에서, 상기 에스트로젠 수용체 조절제는 R1이 H이고, R2가 -CH2F이고, R3이 H이고, R4가 -OH이고, R5가 H이고, R6이 H이고, n이 1이고, t가 1인 화학식 D, 화학식 D-1, 또는 화학식 D-3의 화합물, 또는 이들의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물이다.
일부 실시태양에서, 상기 화학식 D의 에스트로젠 수용체 조절제 화합물은 하기 표 4에 개시된 화합물, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물이다:
[표 4]
Figure pct00085
Figure pct00086
Figure pct00087
Figure pct00088
Figure pct00089
Figure pct00090
Figure pct00091
Figure pct00092
에스트로젠 수용체 조절제 화합물의 추가적인 형태들
일부 실시태양에서, 개시된 에스트로젠 수용체 조절제 화합물은 약학적으로 허용 가능한 염으로서 사용된다. 상기 약학적으로 허용 가능한 염의 유형은 비제한적으로 (1) 상기 화합물의 유리 염기 형태와 약학적으로 허용 가능한 무기산이 반응하여 염, 예를 들어 염산염, 브롬화수소산염, 황산염, 인산염, 메타인산염 등을 형성하거나; 또는 유기산과 반응하여 염, 예를 들어 아세트산염, 프로피온산염, 헥산산염, 사이클로펜탄프로피온산염, 글리콜산염, 피루브산염, 락트산염, 말론산염, 숙신산염, 말산염, 말레산염, 퓨마르산염, 트라이플루오로아세트산염, 타타르산염, 시트르산염, 벤조산염, 3-(4-하이드록시벤조일)벤조산염, 신남산염, 만델산염, 메탄설폰산염, 에탄설폰산염, 1,2-에탄다이설폰산염, 2-하이드록시에탄설폰산염, 벤젠설폰산염, 톨루엔설폰산염, 2-나프탈렌설폰산염, 4-메틸바이사이클로-[2.2.2]옥트-2-엔-1-카복실산염, 글루코헵톤산염, 4,4'-메틸렌비스-(3-하이드록시-2-엔-1-카복실산)염, 3-페닐프로피온산염, 트라이메틸아세트산염, 3급 부틸아세트산염, 라우릴 황산염, 글루콘산염, 글루탐산염, 하이드록시나프토산염, 살리실산염, 스테아르산염, 뮤콘산염, 부티르산염, 페닐아세트산염, 페닐부티르산염, 발프로산염 등을 형성함으로써 형성된 산부가염; (2) 모 화합물 중에 존재하는 산성 양성자가 금속 이온, 예를 들어 알칼리 금속 이온(예를 들어 리튬염, 나트륨염 또는 칼륨염), 알칼리 토 이온(예를 들어 마그네슘염, 또는 칼슘염), 또는 알루미늄 이온(예를 들어 알루미늄염)에 의해 치환되는 경우 형성된 염을 포함한다. 일부의 경우에, 본 발명에 개시된 화합물들을 유기 염기와 배위결합시켜 염, 예를 들어 비제한적으로 에탄올아민염, 다이에탄올아민염, 트라이에탄올아민염, 트로메타민염, N-메틸글루카민염, 다이사이클로헥실아민염, 또는 트리스(하이드록시메틸)메틸아민염을 형성시킬 수 있다. 다른 경우에, 본 발명에 개시된 화합물은 아미노산과 염, 예를 들어 아르기닌염, 리신염 등을 형성할 수 있다. 산성 양성자를 포함하는 화합물과 염을 형성하는데 사용되는 허용 가능한 무기 염기는 비제한적으로 수산화 알루미늄, 수산화 칼슘, 수산화 칼륨, 탄산 나트륨, 수산화 나트륨 등을 포함한다.
약학적으로 허용 가능한 염에 대한 언급이 용매 부가 형태를 포함함은 물론이다. 용매화물은 화학량론적 또는 비-화학량론적 양의 용매를 함유하며, 결정화 과정 동안 약학적으로 허용 가능한 용매, 예를 들어 물, 에탄올 등과 형성될 수 있다. 수화물은 상기 용매가 물인 경우 형성되거나, 알콜화물은 상기 용매가 알콜인 경우 형성된다. 본 발명에 개시된 화합물의 용매화물을 편의상 본 발명에 개시된 과정 동안 제조하거나 형성시킬 수 있다. 또한, 본 발명에 제공된 화합물은 용매화된 형태뿐만 아니라 용매화되지 않은 형태로 존재할 수 있다.
일부 실시태양에서, 본 발명에 개시된 에스트로젠 수용체 조절제 화합물은 하나 이상의 입체중심을 포함할 수 있다. 입체중심이 존재하는 경우, 상기와 같은 입체중심을 R 배열 또는 S 배열로 작성할 수 있는 것으로 이해된다. 입체중심의 특정한 배열이 작성되지 않은 경우, 본 발명에 개시된 화합물들은 모든 상기와 같은 가능한 입체화학 배열들(즉 라세미 형태, R 배열, S 배열)을 포함하는 것으로 이해된다.
일부 실시태양에서, 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 N-산화물은 돌연변이 ER의 활성을 감소시킨다. 일부 실시태양에서, 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 N-산화물은 야생형 ER의 활성을 감소시킨다. 일부 실시태양에서, 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 N-산화물은 하나의 야생형 ER-α 폴리펩타이드 및 하나의 돌연변이 ER-α 폴리펩타이드를 갖는 돌연변이 ER-α(즉 이종이량체)의 활성을 감소시킨다. 일부 실시태양에서, 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 N-산화물은 2개의 돌연변이 ER-α 폴리펩타이드를 갖는 돌연변이 ER-α(동종이량체)의 활성을 감소시킨다. 일부 실시태양에서, 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 N-산화물은 야생형 및 돌연변이 ER-α를 모두 발현하는(즉 이종 발현) 세포에서 돌연변이 ER-α의 활성을 감소시킨다. 일부 실시태양에서, 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 N-산화물은 야생형 및 돌연변이 ER을 모두 발현하는 세포에서 야생형 ER-α의 활성을 감소시킨다. 일부 실시태양에서, 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 N-산화물은 오직 돌연변이 ER-α만을 발현하는(즉 동종 발현) 세포에서 돌연변이 ER-α의 활성을 감소시킨다. 일부 실시태양에서, 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 N-산화물은 서열번호 2의 아미노산 위치 6, 118, 269, 311, 341, 350, 380, 392, 394, 433, 463, 503, 534, 535, 536, 537, 538 및 555 중에서 선택된 위치에서 아미노산 치환을 갖는 ER의 활성을 감소시킨다. 일부 실시태양에서, 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 N-산화물은 H6Y, S118P, R269C, T311M, S341L, A350E, E380Q, V392I, R394H, S433P, S463P, R503W, V534E, P535H, L536R, L536P, L536Q, Y537N, Y537C, Y537S, D538G, 및 R555C 중에서 선택된 아미노산 치환을 갖는 ER의 활성을 감소시킨다.
일부 실시태양에서, 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 N-산화물은 돌연변이 ER을 길항한다. 일부 실시태양에서, 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 N-산화물은 야생형 ER을 길항한다. 일부 실시태양에서, 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 N-산화물은 하나의 야생형 ER-α 폴리펩타이드 및 하나의 돌연변이 ER-α 폴리펩타이드를 갖는 돌연변이 ER-α(즉 이종이량체)를 길항한다. 일부 실시태양에서, 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 N-산화물은 2개의 돌연변이 ER-α 폴리펩타이드를 갖는 돌연변이 ER-α(동종이량체)를 길항한다. 일부 실시태양에서, 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 N-산화물은 야생형 및 돌연변이 ER-α를 모두 발현하는(즉 이종 발현) 세포에서 돌연변이 ER-α를 길항한다. 일부 실시태양에서, 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 N-산화물은 야생형 및 돌연변이 ER을 모두 발현하는 세포에서 야생형 ER-α를 길항한다. 일부 실시태양에서, 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 N-산화물은 오직 돌연변이 ER-α만을 발현하는(즉 동종 발현) 세포에서 돌연변이 ER-α를 길항한다. 일부 실시태양에서, 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 N-산화물은 서열번호 2의 아미노산 위치 6, 118, 269, 311, 341, 350, 380, 392, 394, 433, 463, 503, 534, 535, 536, 537, 538 및 555 중에서 선택된 위치에서 아미노산 치환을 갖는 ER을 길항한다. 일부 실시태양에서, 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 N-산화물은 H6Y, S118P, R269C, T311M, S341L, A350E, E380Q, V392I, R394H, S433P, S463P, R503W, V534E, P535H, L536R, L536P, L536Q, Y537N, Y537C, Y537S, D538G, 및 R555C 중에서 선택된 아미노산 치환을 갖는 ER을 길항한다.
일부 실시태양에서, 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 N-산화물은 돌연변이 ER의 세포 농도를 낮춘다. 일부 실시태양에서, 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 N-산화물은 야생형 ER의 세포 농도를 낮춘다. 일부 실시태양에서, 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 N-산화물은 하나의 야생형 ER-α 폴리펩타이드 및 하나의 돌연변이 ER-α 폴리펩타이드를 갖는 돌연변이 ER-α(즉 이종이량체)의 세포 농도를 낮춘다. 일부 실시태양에서, 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 N-산화물은 2개의 돌연변이 ER-α 폴리펩타이드를 갖는 돌연변이 ER-α(동종이량체)의 세포 농도를 낮춘다. 일부 실시태양에서, 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 N-산화물은 야생형 및 돌연변이 ER-α를 모두 발현하는(즉 이종 발현) 세포에서 돌연변이 ER-α의 세포 농도를 낮춘다. 일부 실시태양에서, 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 N-산화물은 야생형 및 돌연변이 ER을 모두 발현하는 세포에서 야생형 ER-α의 세포 농도를 낮춘다. 일부 실시태양에서, 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 N-산화물은 오직 돌연변이 ER-α만을 발현하는(즉 동종 발현) 세포에서 돌연변이 ER-α의 세포 농도를 낮춘다. 일부 실시태양에서, 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 N-산화물은 서열번호 2의 아미노산 위치 6, 118, 269, 311, 341, 350, 380, 392, 394, 433, 463, 503, 534, 535, 536, 537, 538 및 555 중에서 선택된 위치에서 아미노산 치환을 갖는 ER의 세포 농도를 낮춘다. 일부 실시태양에서, 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 N-산화물은 H6Y, S118P, R269C, T311M, S341L, A350E, E380Q, V392I, R394H, S433P, S463P, R503W, V534E, P535H, L536R, L536P, L536Q, Y537N, Y537C, Y537S, D538G, 및 R555C 중에서 선택된 아미노산 치환을 갖는 ER의 세포 농도를 낮춘다.
화학식 A, B, C 또는 D의 화합물, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 N-산화물은 에스트로젠 및/또는 에스트로젠 수용체의 작용이 질병 또는 병태의 병인학 또는 병리학에 관련되거나 또는 상기 질병 또는 병태의 적어도 하나의 증상에 기여하는 상기 질병 또는 병태의 치료 또는 예방을 위한 작용제로서 유용하며, 여기에서 에스트로젠 및/또는 에스트로젠 수용체의 상기와 같은 작용은 바람직하지 않다. 일부 실시태양에서, 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물은 에스트로젠 수용체 길항물질이다. 일부 실시태양에서, 본 발명에 개시된 화합물은 선택성 에스트로젠 수용체 분해제 화합물(SERD)이다. 일부 실시태양에서, 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물은 에스트로젠 수용체 길항물질뿐만 아니라 에스트로젠 수용체 분해제이다. 일부 실시태양에서, 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물은 에스트로젠 수용체 작용물질 활성을 최소로 나타내거나 나타내지 않는다. 일부 실시태양에서, 암의 치료와 관련하여, 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물은 완전하거나 보다 오래 지속되는 종양 퇴화, 치료에 대한 내성의 보다 낮은 발생 빈도 또는 발생률 및/또는 종양 침습성의 감소를 특징으로 하는 개선된 치료 활성을 제공한다. 일부 실시태양에서, 본 발명에 개시된 화합물은 무시할 정도 또는 최소의 에스트로젠 수용체 작용물질 활성과 함께 완전한 에스트로젠 수용체 길항물질 활성을 나타내는 에스트로젠 수용체 분해제이다. 일부 실시태양에서, 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물은 조직 특이적 ER 성질을 갖는 선택성 에스트로젠 수용체 조절제(SERM)이다.
진단 및 치료 방법
본 발명은 몇몇 실시태양에서 에스트로젠 수용체 조절제에 의한 치료법을 위해 환자를 선택하는 방법을 개시한다. 일부 실시태양에서, 상기 에스트로젠 수용체 조절제는 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물이다. 일부 실시태양에서, 상기 방법은 상기 환자가 ESR1 유전자 중에 돌연변이를 갖는지의 여부를 측정함을 포함한다. 일부 실시태양에서, 상기 환자는 ER-매개된 질병 또는 병태를 갖는다. 일부 실시태양에서, 상기 환자는 암을 갖는다. 일부 실시태양에서, 상기 환자는 유방암을 갖는다. 일부 실시태양에서, 상기 환자는 ER+ 유방암을 갖는다. 일부 실시태양에서, 상기 환자는 호르몬 내성 유방암을 갖는다. 일부 실시태양에서, 상기 환자는 호르몬 내성 ER+ 유방암을 갖는다. 일부 실시태양에서, 상기 환자는 호르몬 요법에 이어서 질병 진행을 나타낸다. 일부 실시태양에서, 상기 환자는 항-에스트로젠 요법에 이어서 질병 진행을 나타낸다. 일부 실시태양에서, 상기 유방암은 치유를 목적으로 한 절제 또는 방사선 요법을 받을 수 없다. 일부 실시태양에서, 상기 유방암은 에스트로젠 수용체 양성 유방암에 대한 적어도 6개월의 호르몬 요법 후에 진행되었다. 일부 실시태양에서, 상기 유방암은 앞서 풀베스트란트에 의한 치료법의 존재하에서 진행되었다. 일부 실시태양에서, 상기 유방암은 앞서 아로마타제 억제제에 의한 치료법의 존재하에서 진행되었다. 일부 실시태양에서, 상기 유방암은 앞서 아나스트라졸, 레트로졸 또는 엑세메스탄에 의한 치료법의 존재하에서 진행되었다.
일부 실시태양에서 화학식 A, B, C 또는 D의 에스트로젠 수용체 조절제에 의한 치료법을 위해서 호르몬 내성 에스트로젠 수용체(ER) 양성 유방암을 갖는 환자를 선택하는 방법은 a) 상기 환자가 ESR1 유전자 중에 돌연변이를 갖는지를 측정하고; b) 상기 환자가 돌연변이를 갖는 경우 상기 환자를 치료법을 위해 선택함을 포함한다. 일부 실시태양에서, 화학식 A, B, C 또는 D의 에스트로젠 수용체 조절제는 선택성 에스트로젠 수용체 분해제(SERD)이다. 일부 실시태양에서 상기 돌연변이는 서열번호 2의 아미노산 위치 6, 118, 269, 311, 341, 350, 380, 392, 394, 433, 463, 503, 534, 535, 536, 537, 538 및 555 중에서 선택된 위치에서 아미노산 치환을 갖는 ER 폴리펩타이드를 생성시킨다. 일부 실시태양에서, 상기 돌연변이는 H6Y, S118P, R269C, T311M, S341L, A350E, E380Q, V392I, R394H, S433P, S463P, R503W, V534E, P535H, L536R, L536P, L536Q, Y537N, Y537C, Y537S, D538G, 및 R555C 중에서 선택된 아미노산 치환을 갖는 ER 폴리펩타이드를 생성시킨다. 일부 실시태양에서, 상기 환자는 상기 ESR1 유전자 중에 2개 이상의 돌연변이를 갖는다. 일부 실시태양에서, 상기 돌연변이는 ER-YAP1 융합 폴리펩타이드를 생성시키는 전좌이다.
일부 실시태양에서, 상기 환자는 호르몬 요법에 이어서 질병 진행을 나타낸다. 일부 실시태양에서, 상기 환자는 항-에스트로젠 요법에 이어서 질병 진행을 나타낸다. 일부 실시태양에서, 상기 유방암은 치유를 목적으로 한 절제 또는 방사선 요법을 받을 수 없다. 일부 실시태양에서, 상기 유방암은 에스트로젠 수용체 양성 유방암에 대한 적어도 6개월의 호르몬 요법 후에 진행되었다. 일부 실시태양에서, 상기 유방암은 앞서 풀베스트란트에 의한 치료법의 존재하에서 진행되었다. 일부 실시태양에서, 상기 유방암은 앞서 아로마타제 억제제에 의한 치료법의 존재하에서 진행되었다. 일부 실시태양에서, 상기 유방암은 앞서 아나스트라졸, 레트로졸 또는 엑세메스탄에 의한 치료법의 존재하에서 진행되었다.
일부 실시태양에서, 환자가 상기 ESR1 유전자 중에 돌연변이를 갖는지의 여부를 측정하기 위한 방법은 하나 이상의 종양 세포를 함유하는 샘플을 시험함을 포함한다. 일부 실시태양에서, 상기 샘플은 종양 생검 샘플 또는 체액 샘플(예를 들어 혈액 또는 림프 샘플)이다. 일부 실시태양에서, 상기 샘플은 하나 이상의 순환하는 종양 세포(CTC) 종양 세포를 포함한다. 상응하게, 일부 실시태양에서, ESR1의 돌연변이 상태를 하나 이상의 종양 세포를 함유하는 샘플에서 평가한다. 일부 실시태양에서, ESR1 유전자의 돌연변이 상태를 하나 이상의 CTC를 함유하는 샘플에서 평가한다. 일부 실시태양에서, 하나 이상의 순환하는 종양 세포를 함유하는 샘플을 환자로부터 단리한다. 일부 실시태양에서, 상기 환자는 유방암을 갖는다. 일부 실시태양에서, 상기 환자는 ER 양성 유방암을 갖는다. 일부 실시태양에서, 상기 환자는 전이성 유방암을 갖는다. 일부 실시태양에서, 상기 환자는 앞서 하나 이상의 항암제로 치료된 적이 있다. 일부 실시태양에서, 상기 환자는 앞서 하나 이상의 호르몬 요법으로 치료된 적이 있다. 일부 실시태양에서, 상기 CTC를 하나 이상의 ESR1 돌연변이의 존재 또는 부재에 대해 분석한다. 일부 실시태양에서, 상기 ESR1 돌연변이는 암호화된 ER 폴리펩타이드의 리간드-독립적인 활성을 부여한다. 일부 실시태양에서, 서열번호 2의 아미노산 위치 6, 118, 269, 311, 341, 350, 380, 392, 394, 433, 463, 503, 534, 535, 536, 537, 538 및 555 중에서 선택된 위치에서 아미노산 치환을 갖는 ER 폴리펩타이드를 생성시키는 ESR1 돌연변이가 측정된다. 일부 실시태양에서, H6Y, S118P, R269C, T311M, S341L, A350E, E380Q, V392I, R394H, S433P, S463P, R503W, V534E, P535H, L536R, L536P, L536Q, Y537N, Y537C, Y537S, D538G, 및 R555C 중에서 선택된 아미노산 치환을 갖는 ER 폴리펩타이드를 생성시키는 ESR1 돌연변이가 측정된다. 일부 실시태양에서, ER-YAP1 융합 폴리펩타이드를 생성시키는 전좌인 돌연변이가 측정된다.
일부 실시태양에서, 하나 이상의 종양 세포를 함유하는 샘플을 하나 이상의 추가적인 유전자 돌연변이의 존재 또는 부재에 대해 분석한다. 일부 실시태양에서, 하나 이상의 종양 세포를 함유하는 샘플을 BRCA1, BRCA2, CDH1, STK11, TP53, PIK3CA, PTEN, EGFR ( ERBB1 ), HER2 (ERBB2), AR , ATM , BARD1 , BRIP1 , CHEK2, DIRAS3, ERBB2 , NBN , PALB2 , RAD50 , 및 RAD51 중에서 선택된 유전자 중의 돌연변이들로부터 선택된 하나 이상의 추가적인 유전자 돌연변이의 존재 또는 부재에 대해 분석한다.
일부 실시태양에서, 상기 ER을 암호화하는 핵산을 하나 이상의 종양 세포를 함유하는 샘플로부터 단리한다. 일부 실시태양에서, 상기 ER을 암호화하는 핵산을 순환하는 종양 세포로부터 단리한다.
일부 실시태양에서, 샘플 중 상기 ESR1 유전자 중에 하나 이상의 돌연변이를 갖는 종양 세포의 비율을 측정한다. 일부 실시태양에서, 치료학적 예후는 상기 ESR1 유전자 중에 하나 이상의 돌연변이를 갖는 종양 세포의 비율을 근거로 측정된다.
일부 실시태양에서, 상기 ESR1 유전자 중에 하나 이상의 돌연변이를 갖는 CTC의 비율을 측정한다. 일부 실시태양에서, 치료학적 예후는 상기 ESR1 유전자 중에 하나 이상의 돌연변이를 갖는 CTC의 비율을 근거로 측정된다.
일부 실시태양에서, 하나 이상의 종양 세포를 함유하는 샘플을 환자로부터 단리 후에 시험관내에서 배양한다. 일부 실시태양에서, 상기 하나 이상의 종양 세포를 함유하는 샘플을 하나 이상의 ESR1 돌연변이의 존재 또는 부재에 대해 분석하기 전에 시험관내에서 배양한다.
일부 실시태양에서, 상기 하나 이상의 순환하는 종양 세포(CTC)를 함유하는 샘플을 환자로부터 단리 후에 시험관내에서 배양한다. 일부 실시태양에서, 상기 순환하는 종양 세포(CTC)를 하나 이상의 ESR1 돌연변이의 존재 또는 부재에 대해 분석하기 전에 시험관내에서 배양한다.
일부 실시태양에서, 환자의 ESR1 돌연변이 상태를 시간에 따라 모니터한다. 일부 실시태양에서, 환자의 ESR1 돌연변이 상태를 암 치료 과정에 걸쳐 모니터한다. 일부 실시태양에서, 환자의 ESR1 돌연변이 상태를 암 치료 과정에 걸쳐 1회 이상 평가한다. 일부 실시태양에서, 환자의 ESR1 돌연변이 상태를 매주, 2주마다, 3주마다, 4주마다, 매달, 2개월마다, 3개월마다, 4개월마다, 5개월마다, 6개월마다, 7개월마다, 8개월마다, 9개월마다, 10개월마다, 11개월마다, 매년, 2년마다, 3년마다, 4년마다, 5년마다, 또는 그 이상의 기간에 평가한다.
본 발명에 제공된 화합물들의 활성을 당해 분야에 주지된 표준 방법들, 예를 들어 비제한적으로 시험관내 분석, 예를 들어 리포터 분석, 결합 분석, 및 세포 생육력 분석 또는 생체내 분석, 예를 들어 이종이식편 종양 동물 모델을 사용하여 평가할 수 있다.
일부 실시태양에서, 상기 종양 샘플은 유기체로부터의 임의의 조직 또는 체액으로부터의 샘플이다. 샘플은 비제한적으로 전혈, 분리된 골수, 골수 흡인물, 흉수, 복막 투석액, 중추 척수액, 복부액, 췌장액, 뇌척수액, 뇌수, 복수, 심막액, 뇨, 타액, 기관지 세척액, 땀, 눈물, 귓물, 가래, 음낭수종액, 정액, 질분비물, 젖, 양수, 및 호흡기, 장 또는 비뇨생식기의 분비물을 포함한다. 특정한 실시태양에서, 상기 샘플은 종양 생검 샘플이다. 특정한 실시태양에서, 상기 샘플은 림프계 또는 순환계의 부분 또는 이와 관련된 체액 또는 조직으로부터의 것이다. 일부 실시태양에서, 상기 샘플은 정맥, 동맥, 말초, 조직, 제대혈 샘플인 혈액 샘플이다. 특정한 실시태양에서, 상기 샘플은 혈청 샘플이다. 일부 실시태양에서, 상기 샘플은 하나 이상의 순환하는 종양 세포(CTC)를 함유한다. 일부 실시태양에서, 상기 샘플은 하나 이상의 파종성 종양 세포(DTC, 예를 들어 골수 흡인물 샘플 중의)를 함유한다.
조직 및 체액 샘플 중에 함유된 세포로부터 핵산 및 단백질의 단리 방법은 당해 분야에 주지되어 있다. 특정한 실시태양에서, 피실험자로부터 수득한 핵산 샘플은 상기 피실험자의 종양 생검 중에 함유된 세포로부터 단리된다. 특정한 실시태양에서, 피실험자로부터 수득한 핵산 샘플은 골수 흡인물 중의 세포로부터 단리된다. 특정한 실시태양에서, 피실험자로부터 수득한 핵산 샘플은 혈액 샘플 중에 함유된 세포로부터 단리된다. 특정한 실시태양에서, 피실험자로부터 수득한 핵산 샘플은 림프액 샘플 중에 함유된 세포로부터 단리된다. 일부 실시태양에서, 상기 세포는 순환하는 종양 세포(CTC)이다.
일부 실시태양에서, 상기 샘플을 주지되고 통상적인 임상 방법을 사용하여 상기 샘플의 임의의 적합한 획득 수단에 의해 피실험자로부터 수득한다. 피실험자로부터 체액 샘플을 수득하기 위한 과정은 주지되어 있다. 예를 들어, 전혈 및 림프를 채혈하고 처리하는 과정이 주지되어 있으며, 상기 과정을 사용하여 상기 제공된 방법에 사용하기 위한 샘플을 수득할 수 있다. 전형적으로, 혈액 샘플의 수집을 위해서, 응고방지제(예를 들어 EDTA, 또는 시트레이트 및 헤파린 또는 CPD(시트레이트, 포스페이트, 덱스트로스) 또는 필적하는 물질)를 상기 샘플에 가하여 상기 혈액의 응고를 방지한다. 일부 예에서, 상기 혈액 샘플을 상기 혈액 샘플의 응고를 방지하기 위한 양의 EDTA를 함유하는 수집 튜브에 수집한다.
일부 실시태양에서, 상기 샘플은 조직 생검이며, 예를 들어 바늘 생검, CT-유도 바늘 생검, 흡출 생검, 내시경 생검, 기관지경 생검, 기관지 세척, 심부절개 생검, 절제 생검, 천공 생검, 면도 생검, 피부 생검, 골수 생검, 및 루프 전기절제술(LEEP)에 의해 수득된다. 전형적으로, 100 ㎎을 초과하는 비-괴사성, 멸균 생검 또는 시편이 수득되나, 상기 량은 더 적거나, 예를 들어 100 ㎎ 미만, 50 ㎎ 이하, 10 ㎎ 이하 또는 5 ㎎ 이하이거나; 또는 더 많을 수 있다, 예를 들어 100 ㎎ 초과, 200 ㎎ 이상, 또는 500 ㎎ 이상, 1 g 이상, 2 g 이상, 3 g 이상, 4 g 이상, 또는 5 g 이상일 수 있다. 상기 분석을 위해 추출되는 샘플 크기는 다수의 인자들, 예를 들어 비제한적으로, 수행되는 분석의 수, 조직 샘플의 건강, 암의 유형 및 환자의 상태에 따라 변한다. 일부 실시태양에서, 상기 조직을 멸균 용기, 예를 들어 멸균 튜브 또는 배양 플레이트에 놓고 적합한 매질 중에 임의로 침지시킨다. 전형적으로, 상기 세포를 당해 분야에 주지된 바와 같은 기계적 수단 및/또는 효소 처리에 의해 세포 현탁액내에 해리시킨다. 전형적으로, 상기 세포를 수집하고 이어서 상기 분석을 위한 핵산의 단리를 위해 표준 과정을 수행한다.
일부 실시태양에서, 상기 샘플을 피실험자로부터 규칙적인 간격으로, 예를 들어 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 1주, 2주, 주, 4주, 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 6개월, 1년, 매일, 매주, 격월, 1년에 4회, 격년 또는 매년 수득한다. 일부 실시태양에서, 상기 샘플의 수집을 하나 이상의 항암제에 의한 치료에 대해 소정의 시간에 또는 규칙적인 간격으로 수행한다. 일부 실시태양에서, 상기 샘플의 수집을 호르몬 요법에 의한 치료에 대해 소정의 시간에 또는 규칙적인 간격으로 수행한다. 예를 들어, 샘플을 치료 전에, 치료 중에, 또는 치료에 이어서, 또는 연속적인 치료 사이에 소정의 시간에 또는 규칙적인 간격으로 수집한다. 특정한 예에서, 샘플을 항암 요법의 투여 전에 피실험자로부터 수득하고 이어서 치료를 수행한 후에 다시 규칙적인 간격으로 수득한다. 특정한 예에서, 샘플을 호르몬 요법의 투여 전에 피실험자로부터 수득하고 이어서 치료를 수행한 후에 다시 규칙적인 간격으로 수득한다.
체액 샘플의 부피는 상기 제공된 방법들에서 ER 돌연변이체의 검출에 적합한 임의의 부피일 수 있다. 일부 예에서, 상기 체액 샘플의 부피는 사용되는 특정 분석 방법에 따라 변한다. 예를 들어, 상기 특정 분석 방법은 인자들, 예를 들어 비제한적으로, 사용되는 장치 또는 방법의 용량 및 분석 방법의 처리량 수준에 따라 보다 많거나 보다 적은 체액 샘플 부피를 요할 수 있다. 일부 예에서 체액 샘플을 분석 방법의 적용 전에 적합한 매질 중에서 희석한다. 일부 예에서, 체액 샘플을 피실험자로부터 수득하고 상기 샘플의 일부 또는 분액을 분석 방법에 사용한다. 상기 일부 또는 분액을 분석 방법의 적용 전에 적합한 매질 중에서 희석할 수 있다.
일부 실시태양에서, 상기 샘플을 포유동물인 피실험자로부터 수득한다. 예시적인 포유동물 피실험자는 비제한적으로 영장류, 예를 들어 인간, 유인원 및 원숭이; 설치류, 예를 들어 마우스, 래트, 토끼 및 흰족제비; 반추류, 예를 들어 염소, 소, 사슴 및 양; 말, 돼지, 개, 고양이 및 다른 동물을 포함한다. 일부 실시태양에서, 상기 샘플을 환자로부터 수득한다. 일부 실시태양에서, 상기 환자는 인간 환자이다.
일부 실시태양에서, 상기 피실험자로부터 수득한 핵산 샘플은 게놈 핵산 샘플이다. 일부 실시태양에서, 상기 피실험자로부터 수득한 핵산 샘플은 RNA 샘플이다. 일부 실시태양에서, mRNA는 RNA 샘플 중의 전체 RNA로부터 단리된다. 일부 실시태양에서, 상기 RNA 샘플은 cDNA로 역 전사된다. 일부 실시태양에서, 상기 게놈 핵산 샘플을 핵산 증폭 방법에 의해 증폭시킨다. 일부 실시태양에서, 상기 핵산 증폭 방법은 폴리머라제 쇄 반응(PCR)이다. 일부 실시태양에서, 상기 게놈 핵산 샘플을 상기 ER 유전자에 특이적인 일련의 뉴클레오타이드 프라이머를 사용하여 증폭시킨다. 일부 실시태양에서, 상기 일련의 뉴클레오타이드 프라이머는 상기 ER 폴리펩타이드의 돌연변이 아미노산 위치를 암호화하는 핵산 서열에 인접한다. 일부 실시태양에서, 상기 증폭 산물은 상기 ER 폴리펩타이드의 돌연변이 아미노산 위치를 암호화하는 핵산이다. 일부 실시태양에서, 서열 특이성 프라이머를 검출성 분자, 예를 들어 형광 표지, 생물발광 표지, 화학발광 표지, 방사성표지, 효소 표지, 검출성 기질, 또는 제2 검출성 분자에 결합하는 펩타이드 또는 분자에 접합시킨다.
일부 실시태양에서, 상기 샘플은 순환하는 종양 DNA(ctDNA), RNA(ctRNA) 또는 마이크로RNA를 함유하는 혈장 또는 혈청 샘플이다(예를 들어 문헌[Chan et al. (2007) Br J Cancer 96(5):681-5]을 참조하시오). 일부 실시태양에서, 상기 핵산을 검출에 앞서 상기 샘플로부터 단리시킨다.
검출 방법
일부 실시태양에서, 분석은 상기 핵산 샘플의 서열분석을 포함한다. 일부 실시태양에서, 핵산 샘플 중의 ER을 암호화하는 핵산을 먼저 서열 특이성 프라이머를 사용하여 폴리머라제 쇄 반응(PCR)과 같은 방법에 의해 증폭시키고 이어서 상기 증폭된 PCR 단편을 서열분석한다. 본 발명에 제공된 방법에 사용하기 위한 예시적인 서열분석 방법은 당해 분야에 주지되어 있으며 비제한적으로 다이데옥시 또는 쇄 종결 방법, 막삼 길버트(Maxam-Gilbert) 서열분석, 초병렬 서명 서열분석(또는 MPSS), 폴로니 서열분석, 파이로서열분석, 일루미나 염료 서열분석, SOLiD(또는 이어맞추기에 의한 서열분석) 서열분석, 이온 반도체 서열분석, DNA 나노볼 서열분석, 헬리스코프 서열분석, 및 단분자 실시간(SMRT) 서열분석을 포함한다.
일부 실시태양에서, 상기 돌연변이 ER-α를 암호화하는 DNA를 BEAMing(비드, 증폭, 유화, 자기) PCR 서열분석 방법(예를 들어 문헌[Li et al. (2006) Nat Methods 3(2):95-7]; 문헌[Li et al. (2006) Nat Methods 3(7):551-9]; 및 문헌[Diehl et al. (2008) Nat Med. 14(9): 985-990]을 참조하시오)에 의해 평가한다. BEAMing는 개별적인 DNA 분자를 유중 수적형 유화액 중의 자기 비드에 부착시키고 이어서 구획화된 PCR 증폭을 수행하는 기법이다. 이어서 비드에 결합된 DNA의 돌연변이 상태를 돌연변이 또는 야생형 ER에 대한 형광 대립유전자-특이성 탐침에 하이브리드화하여 측정한다. 이어서 유식 세포측정을 사용하여 혈장 또는 혈청 중에 존재하는 돌연변이 DNA의 수준을 정량분석한다(예를 들어 문헌[Higgins et al.(2012) Clin Cancer Res 18:3462-3469]을 참조하시오).
일부 실시태양에서, 상기 돌연변이 ER-α를 암호화하는 DNA를 핵산 샘플의 클론 증폭에 의해 평가한다. 일부 실시태양에서, 상기 돌연변이 ER-α를 암호화하는 DNA를 디지털 폴리머라제 쇄 반응에 의해 평가한다. 일부 실시태양에서, 상기 돌연변이 ER-α를 암호화하는 DNA를 소적 디지털 폴리머라제 쇄 반응에 의해 평가한다.
일부 실시태양에서, 상기 돌연변이 ER-α를 암호화하는 DNA의 존재를 검출하기 위한 샘플의 분석은 상기 돌연변이 ER-α는 암호화하지만 야생형 ER은 암호화하지 않는 핵산에 특이적인 서열 특이성 올리고뉴클레오타이드 탐침에 의한 돌연변이의 검출을 포함한다. 일부 실시태양에서, 분석은 (a) 샘플을 돌연변이 ER-α 핵산 서열 특이성 올리고뉴클레오타이드 탐침과 접촉시키고, 이때 상기 돌연변이 핵산 서열이 상기 샘플 중에 존재하는 경우, 탐침-DNA 복합체가 형성되며, (b) 상기 탐침-DNA 복합체를 검출함을 포함한다. 일부 실시태양에서, 상기 서열 특이성 탐침을 검출성 분자, 예를 들어 형광 표지, 생물발광 표지, 화학발광 표지, 방사성표지, 효소 표지, 검출성 기질, 또는 제2 검출성 분자에 결합하는 펩타이드 또는 분자에 접합시킨다.
일부 실시태양에서, 단일 뉴클레오타이드 변화를, 돌연변이 서열 중에 제한 부위를 생성시키는 PCR-기반 절단된 증폭된 다형성 서열(CAPS) 마커를 사용하는 PCR(문헌[Michaels et al (1998) Plant J. 14(3):381-5]) 또는 검출성 부분, 예를 들어 비제한적으로 형광단에 부착된 서열 특이성 헤어핀 탐침(문헌[Mhlanga and Malmberg (2001) Methods 25:463-471])에 의해 검출할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 서열 특이성 탐침을 검출성 분자, 예를 들어 형광 표지, 생물발광 표지, 화학발광 표지, 방사성표지, 효소 표지, 검출성 기질, 또는 제2 검출성 분자에 결합하는 펩타이드 또는 분자에 접합시킨다.
일부 실시태양에서, 돌연변이 ER-α를 암호화하는 DNA의 존재를 검출하기 위한 샘플의 분석을 올리고뉴클레오타이드 배열(예를 들어 문헌[Hastia et al. (1999) J Med Genet. 36(10):730-6]을 참조하시오)을 사용하여 수행한다. 일부 실시태양에서, 피실험자로부터의 핵산을 함유하는 샘플을 칩에 직접 하이브리드화시킨다. 일부 실시태양에서, 상기 피실험자로부터의 핵산을 함유하는 샘플을 증폭 방법, 예를 들어 비제한적으로 폴리머라제 쇄 반응(PCR)을 사용하여 증폭시키고, 상기 증폭된 핵산을 상기 칩에 하이브리드화시킨다. 일부 실시태양에서, 상기 올리고뉴클레오타이드 배열을 마이크로칩상에 함유시킨다. 일부 실시태양에서, 단일 뉴클레오타이드 변화를 마이크로칩을 사용하여 검출할 수 있다.
일부 실시태양에서, 샘플의 분석은 상기 돌연변이 ER-α 폴리펩타이드에 특이적인 항체에 의한 돌연변이의 검출을 포함한다. 일부 실시태양에서, 돌연변이 ER-α 폴리펩타이드의 검출 방법은 피실험자로부터 샘플을 수득하고(여기에서 상기 샘플은 ER 폴리펩타이드를 포함한다) 상기 샘플을 상기 돌연변이 ER-α 폴리펩타이드에 대한 결합에 특이적이고 야생형 돌연변이 ER-α 폴리펩타이드에 대해서는 결합하지 않거나 감소된 친화성으로 결합하는 항체와 접촉시킴으로써 상기 샘플을 상기 돌연변이 ER-α 폴리펩타이드의 존재에 대해 시험함을 포함하며, 여기에서 상기 돌연변이 ER-α 폴리펩타이드의 존재는 항체-돌연변이 ER-α 폴리펩타이드 복합체를 생성시킨다. 일부 실시태양에서, 상기 방법은 상기 항체-돌연변이 ER-α 폴리펩타이드 복합체를 검출함을 추가로 포함한다. 일부 실시태양에서, 상기 방법은 상기 항체-돌연변이 ER-α 폴리펩타이드 복합체를 검출 시약으로 검출함을 추가로 포함한다. 일부 실시태양에서, 상기 돌연변이 ER-α 특이성 항체를 검출성 분자, 예를 들어 형광 표지, 생물발광 표지, 화학발광 표지, 방사성표지, 효소 표지, 검출성 기질, 또는 제2 검출성 단백질(예를 들어 2차 항체)에 결합하는 펩타이드 또는 분자에 접합시킨다. 일부 실시태양에서, 상기 돌연변이 ER-α 특이성 항체의 결합을 검출성 분자의 분석에 의해 검출한다. 일부 실시태양에서, 상기 돌연변이 ER-α 특이성 항체의 결합을 2차(예를 들어 항-IgG) 항체를 사용하여 검출한다. 일부 실시태양에서, 상기 샘플은 종양 생검 샘플, 골수 흡인물, 혈액 샘플, 혈청 샘플 또는 림프 샘플이다.
에스트로젠 수용체 조절제 시험관내 활성
비제한적으로 표 1 내지 4의 화합물들을 포함하여, 에스트로젠 수용체 조절제(ERM) 화합물들의 조합의 세포독성 또는 세포발육정지 활성을, 세포 배양 배지 중에 증식성 포유동물 종양 세포주를 확립시키고, 시험 화합물을 가하고, 약 6시간 내지 약 5일의 기간 동안 상기 세포를 배양하고; 세포 생육력을 측정함으로써 측정한다(실시예 7). 세포-기반 시험관내 분석을 사용하여 생육력, 즉 증식(IC50), 세포독성(EC50), 및 세포사멸의 유도(카스파제 활성화)를 측정하였다.
상기 ERM 화합물의 시험관내 효력을 실시예 7의 세포 증식 분석; 셀티터 글로(CellTiter-Glo)(등록상표) 발광 세포 생육력 분석(프로메가 코포레이션(Promega Corp.)(미국 위스콘신주 매디슨 소재)으로부터 상업적으로 입수할 수 있다)에 의해 측정한다. 상기 동종 분석 방법은 콜레오프테라(Coleoptera) 루시페라제(미국특허 제 5583024 호; 미국특허 제 5674713 호; 미국특허 제 5700670 호)의 재조합 발현에 기반하며 대사 활성 세포의 지표인, 존재하는 ATP의 정량분석을 기초로 배양물 중의 생육성 세포의 수를 측정한다(문헌[Crouch et al (1993) J. Immunol. Meth. 160:81-88]; 미국특허 제 6602677 호). 상기 셀티터 글로(등록상표) 분석을 96 또는 384 웰 포맷으로 수행하였으며, 상기 포맷은 자동화된 대량 처리량 선별(HTS)을 가능하게 한다(문헌[Cree et al (1995) AntiCancer Drugs 6:398-404]). 상기 동종 분석 과정은 단일 시약(셀티터 글로(등록상표) 시약)을 혈청-보충된 배지에서 배양된 세포에 직접 가함을 수반한다. 세포 세척, 배지의 제거 및 수회의 피펫팅 단계는 필요하지 않다. 상기 시스템은 시약의 첨가 및 혼합 후에 10분간 384-웰 포맷에서 15 세포/웰 정도로 적게 검출한다.
ERM 화합물 조합의 증식 억제 효과를 종양 세포주에 대한 셀티터 글로(등록상표) 분석(실시예 7)에 의해 측정하였다. EC50 값을 상기 시험된 화합물 및 조합에 대해 확립시킨다. 시험관내 세포 효력 활성의 범위는 약 100 nM 내지 약 10 μM일 수 있다.
에스트로젠 수용체 조절제 생체내 종양 이종이식 활성
ERM 화합물 및 다양한 화학요법제의 효능을 설치류에서 암세포의 동종이식편 또는 이종이식편 이식 및 약물 및 대조용(비히클) 제형에 의한 종양-함유 동물의 처리에 의해 생체내에서 측정하였다. 결과는 세포주, 종양 세포 중 몇몇 돌연변이의 존재 또는 부재, ERM 화합물 및 화학요법제의 투여 순서, 투여 섭생, 및 다른 인자들에 따라 변한다. 피실험 마우스를 약물 또는 대조용(비히클)으로 처리하고 수주 이상에 걸쳐 모니터하여 종양 배가, 로그 세포 살해, 및 종양 억제까지의 시간을 측정하였다(실시예 8). 도 1 내지 13은 실시예 8의 프로토콜에 따른 ERM 화합물 및 다양한 화학요법제로 처리된 종양-함유 마우스의 처리 후 시간에 따른 종양 부피 변화의 플롯을 도시한다.
도 1 및 2는 E2의 부재하에서 WT 및 돌연변이 ERα를 유도 발현하는 MCF7에서의 ERα 분해 분석을 도시한다. 세포를 100 ng/㎖ Dox를 함유하는 에스트로젠-고갈된 배지에서 24시간 동안 증가하는 용량의 풀베스트란트(도 1)로 처리하였다. 돌연변이 ERa 분해가 표 1의 에스트로젠 수용체 조절제(ERM) 1-3(도 1) 및 ERM 4-23(도 2)에서 관찰되었지만 타목시펜에서는 관찰되지 않았다(도 2). 기능적 출력은 PR 및 사이클린 D1 수준에 의해 분명하다.
도 3은 비히클, 고용량, 200 ㎎/㎏의 풀베스트란트; 임상 노출의 약 20 내지 30x 이상 AUC, 및 표 1로부터의 에스트로젠 수용체 조절제(ERM) 1-3 100 ㎎/㎏/일 및 표 4로부터의 ERM 4-23 100 ㎎/㎏/일이 매일 1회 PO(경구) 투여된, MCF-7 EF1:Y537S ESR1-돌연변이(Y537S) 마우스를 갖는 7마리의 면역저하된 마우스의 코호트에서 28일에 걸친 적합된 종양 부피 변화를 도시한다. 상기 조작된 MCF7 돌연변이 세포는 내인성 야생형(WT) MCF7 세포의 4-5x 이상 단백질을 발현한다. 풀베스트란트는 E2의 부재하에서, 및 30x 이상의 임상 노출에서조차 확고한 생체내 효능을 나타내지 않는다.
도 4는 비히클(+E2), 비히클(-E2), 타목시펜 60 ㎎/㎏/일, 풀베스트란트 200 ㎎/㎏(QD 3x/wk), ERM 1-3 100 ㎎/㎏/일, 및 ERM 4-23 100 ㎎/㎏/일이 매일 1회 PO(경구) 투여된, ESR1 L536P 돌연변이체, ER+, PR+, HER2+가 잠복된 HCI-005 유방 종양(NOD.SCID OVX에서 BC PDX 모델) 이종이식편을 갖는 5마리의 면역저하된 마우스의 코호트에서 40일에 걸친 적합된 종양 부피 변화를 도시한다. ERM 4-23은 상기 ESR1 L536P 돌연변이 모델에서 ERM 1-3보다 더 큰 효능을 갖는다.
도 5는 비히클(+E2), 비히클(-E2), 타목시펜 60 ㎎/㎏/일, 풀베스트란트 200 ㎎/㎏(QD 3x/wk), ERM 1-3 100 ㎎/㎏/일, 및 ERM 4-23 100 ㎎/㎏/일이 매일 1회 PO(경구) 투여된, ESR1 L536P 돌연변이체, ER+, PR+, HER2+가 잠복된 HCI-005 유방 종양(NOD.SCID OVX에서 BC PDX 모델) 이종이식편을 갖는 7마리의 면역저하된 마우스의 코호트에서 출발에 대한 배수로 56일에 걸친 적합된 종양 부피 변화를 도시한다.
도 6은 비히클(+E2), 비히클(-E2), 타목시펜 시트레이트 60 ㎎/㎏/일, 풀베스트란트 50 ㎎/㎏, ERM 1-3 100 ㎎/㎏/일, 및 ERM 4-23 100 ㎎/㎏/일이 매일 1회 PO(경구) 투여된, WHIM 20 Y537S ESR1-돌연변이(Y537S), PIK3CA 돌연변이(E542K) 유방 종양(NOD.SCID OVX에서 BC PDX 모델) 이종이식편을 갖는 7-8마리의 면역저하된 마우스의 코호트에서 35일에 걸친 적합된 종양 부피 변화를 도시한다.
도 7은 비히클(+E2), 비히클(-E2), 풀베스트란트 200 ㎎/㎏ 주당 3회 피하, ERM 1-3 10 ㎎/㎏/일, 및 ERM 4-23 10 및 100 ㎎/㎏/일이 매일 PO(경구) 투여된, WHIM 20 Y537S ESR1-돌연변이(Y537S), PIK3CA 돌연변이(E542K) 유방 종양(NSG OVX에서 BC PDX 모델) 이종이식편을 갖는 7마리의 면역저하된 마우스의 코호트에서 28일에 걸친 적합된 종양 부피 변화를 도시한다.
도 8 및 9는 비히클, 풀베스트란트 200 ㎎/㎏, ERM 1-3 100 ㎎/㎏, 및 ERM 4-23 100 ㎎/㎏이 4일 동안 매일 1회 100 마이크로리터(㎕)까지 PO(경구) 투여된, WHIM 20 Y537S ESR1-돌연변이(Y537S), PIK3CA 돌연변이(E542K) 유방 종양, 환자 유래된(BC PDX 모델) 이종이식 모델을 갖는 면역저하된 마우스에서 ERα(알파) 대 액틴 단백질 수준의 비(도 8) 및 PR-A 대 액틴 단백질 수준의 비(도 9)의 막대 플롯을 도시한다.
도 10은 기준선, 전-처리(좌측) 및 ERM 1-3(ARN-810) 600 ㎎/㎏을 연속해서 매일 1개월 경구 투여한(우측) 유방암 환자의 [18F]FES-PET 영상화를 도시하며 이때 상은 투여-후 23시간째에 수집되었다. 상기 환자는 ESR1 D538G 돌연변이가 있는 연조직 병변이 잠복된 것으로 확인되었다.
ERM 1-3 및 ERM 4-23은 ER 돌연변이 유방암 이종이식 모델에서 종양 퇴화에서부터 종양 성장 지연까지의 항-종양 활성 범위를 입증하였다. 더욱이, ERM 1-3 및 EMR 4-23은 환자로부터의 원발성 또는 전이성 종양을 면역저하된 마우스에 이식한 모델(또한 환자 유래된 이종이식 모델)에서 효능이 있었다. ERM 1-3 및 ERM 4-23의 약역학적 활성이, 감소된 ER 단백질 수준 및 프로제스테론 수용체 수준: ER 표적 유전자의 감소를 근거로 환자-유래된 이종이식 모델에서 관찰되었다. 추가로, 하나의 모델에서 ERM 1-3 및 ERM 4-23이 치유 약물들의 표준(풀베스트란트 또는 타목시펜)보다 더 효능이 있었으며 다른 모델에서 개선된 효능으로의 동향이 관찰되었다.
ER -관련된 질병 또는 병태의 치료
일부 실시태양에서, ESR1 유전자 중에 하나 이상의 돌연변이를 갖는 환자의 치료 방법을 제공한다. 일부 실시태양에서, 치료는 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물의, ESR1 유전자 중에 하나 이상의 돌연변이를 갖는 환자에의 투여를 포함한다. 일부 실시태양에서, 상기 돌연변이는 H6Y, S118P, R269C, T311M, S341L, A350E, E380Q, V392I, R394H, S433P, S463P, R503W, V534E, P535H, L536R, L536P, L536Q, Y537N, Y537C, Y537S, D538G, 및 R555C 중에서 선택된 아미노산 치환을 갖는 ER 폴리펩타이드를 생성시킨다. 일부 실시태양에서, 상기 환자는 상기 ESR1 유전자 중에 하나 이상의 돌연변이를 갖는다. 일부 실시태양에서, 상기 돌연변이는 ER-YAP1 융합 폴리펩타이드를 생성시키는 전좌이다. 일부 실시태양에서, 상기 환자는 암을 갖는다. 일부 실시태양에서, 상기 환자는 고형 종양을 갖는다. 일부 실시태양에서, 상기 암은 유방암, 난소암, 자궁내막암, 자궁암, 자궁경부암, 전립선암, 간암, 폐암 또는 방광암이다. 일부 실시태양에서, 상기 암은 유방암이다. 일부 실시태양에서, 상기 암은 에스트로젠 양성 유방암이다. 일부 실시태양에서, 상기 암은 HER2 양성 유방암이다. 일부 실시태양에서, 상기 암은 HER2 음성 유방암이다. 일부 실시태양에서, 상기 암은 전이성 암이다. 일부 실시태양에서, 상기 암은 전이성 유방암이다.
일부 실시태양에서, 상기 암은 호르몬 의존성 암이다. 일부 실시태양에서, 상기 암은 에스트로젠 수용체 의존성 암이다. 일부 실시태양에서, 상기 암은 에스트로젠 수용체 양성 암이다. 일부 실시태양에서, 상기 암은 에스트로젠-민감성 암이다. 일부 실시태양에서, 상기 암은 항-호르몬 치료에 내성이다. 일부 실시태양에서, 상기 암은 항-호르몬 치료에 내성인 에스트로젠-민감성 암 또는 에스트로젠 수용체 의존성 암이다. 일부 실시태양에서, 항-호르몬 치료는 타목시펜, 풀베스트란트, 스테로이드성 아로마타제 억제제, 및 비-스테로이드성 아로마타제 억제제-내성 중에서 선택된 적어도 하나의 작용제에 의한 치료를 포함한다. 일부 실시태양에서, 항-호르몬 치료는 아나스트라졸, 레트로졸 또는 엑세메스탄에 의한 치료를 포함한다.
일부 실시태양에서, 상기 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물로 치료된 환자는 항-에스트로젠 요법에 이어서 질병 진행이 있는 여성이다. 일부 실시태양에서, 상기 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물로 치료된 환자는 아로마타제 억제제에 의한 치료법에 이어서 질병 진행이 있는 여성이다. 일부 실시태양에서, 상기 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물로 치료된 환자는 아나스트라졸, 레트로졸 또는 엑세메스탄에 의한 치료법에 이어서 질병 진행이 있는 여성이다.
일부 실시태양에서, 상기 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물로 치료된 환자는 폐경후 여성이다. 일부 실시태양에서, 상기 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물로 치료된 환자는 항-에스트로젠 요법에 이어서 질병 진행이 있는 폐경후 여성이다. 일부 실시태양에서, 상기 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물로 치료된 환자는 아로마타제 억제제에 의한 치료법에 이어서 질병 진행이 있는 폐경후 여성이다. 일부 실시태양에서, 상기 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물로 치료된 환자는 아나스트라졸, 레트로졸 또는 엑세메스탄에 의한 치료법에 이어서 질병 진행이 있는 폐경후 여성이다.
일부 실시태양에서, 상기 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물로 치료된 환자는 화학요법 경험이 없다.
일부 실시태양에서, 상기 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물로 치료된 환자는 적어도 하나의 항암제에 의해 암 치료중이다. 하나의 실시태양에서, 상기 암은 호르몬 불응성 암이다.
일부 실시태양에서, 상기 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물을 하나 이상의 ESR1 돌연변이를 갖는 환자에서 ER-관련된 질병 또는 병태의 치료에 사용한다. 예시적인 ER-관련된 질병 또는 병태는 비제한적으로 암(예를 들어 골암, 유방암, 결장직장암, 폐암, 자궁내막암, 전립선암, 난소 및 자궁암), 자궁내막증, 자궁 섬유종, 근종(예를 들어 자궁근종), 중추신경계(CNS) 결함(예를 들어 알콜중독, 편두통), 심혈관계 결함(예를 들어 대동맥류, 심근경색에 대한 민감성, 대동맥판 경화증, 심혈관 질병, 관상 동맥 질병, 고혈압), 혈액계 결함(예를 들어 심부정맥 혈전증), 면역 및 염증 질병(예를 들어 그레이브스병, 관절염, 다발성 경화증, 경변증), 감염에 대한 민감성(예를 들어 B형 간염, 만성 간 질환), 대사 결함(예를 들어 골밀도, 담즙울혈, 요도하열, 비만증, 골관절염, 골감소증, 골다공증), 신경학적 결함(예를 들어 알쯔하이머병, 파킨슨병, 편두통, 현기증), 정신적 결함(예를 들어 신경성 식욕부진증, 주의력 결핍성 과잉행동 장애(ADHD), 치매, 주요 우울 장애, 정신병) 및 생식 결함(예를 들어 초경 연령, 자궁내막증, 불임)과 관련된 ER-α 기능장애를 포함한다.
또한 본 발명은 포유동물에게 화학식 A, B, C 또는 D의 구조를 갖는 적어도 하나의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 N-산화물을 투여함을 포함하는, 하나 이상의 ESR1 돌연변이를 갖는 환자에서 ER 활성화를 감소시키는 방법을 제공한다. 일부 실시태양에서, 상기 방법은 포유동물의 유방세포, 난소세포, 결장세포, 전립선세포, 자궁내막세포 또는 자궁세포에서 ER 활성화를 감소시킴을 포함한다. 일부 실시태양에서, 상기 포유동물에서 ER 활성화를 감소시키는 방법은 상기 포유동물에서 에스트로젠 수용체에 대한 에스트로젠의 결합을 감소시킴을 포함한다. 일부 실시태양에서, 상기 포유동물에서 ER 활성화를 감소시키는 방법은 상기 포유동물에서 ER 농도를 감소시킴을 포함한다.
투여 경로
본 발명에 개시된 바와 같은 에스트로젠 수용체 조절제 화합물의 적합한 투여 경로는 비제한적으로 경구, 비경구(예를 들어 정맥내, 피하, 근육내), 비내, 구강, 국소, 직장, 에어로졸, 눈, 폐, 점막통과, 경피, 질, 귀, 코 및 국소 투여를 포함한다. 또한, 단지 예로서, 비경구 전달은 근육내, 피하, 정맥내, 골수내 주사뿐만 아니라 척추강내, 직접적인 뇌실내, 복강내, 림프내, 및 비내 주사를 포함한다. 몇몇 실시태양에서, 본 발명에 개시된 바와 같은 에스트로젠 수용체 조절제 화합물을 전신 방식으로 투여한다. 몇몇 다른 실시태양에서 본 발명에 개시된 바와 같은 에스트로젠 수용체 조절제 화합물을 전신 방식으로보다는 오히려 국소로 투여한다. 일부 실시태양, 몇몇 실시태양에서, 본 발명에 개시된 바와 같은 에스트로젠 수용체 조절제 화합물을 경구로 투여한다.
약학 조성물/제형
일부 실시태양에서, 본 발명에 개시된 바와 같은 에스트로젠 수용체 조절제 화합물을 약학 조성물로 제형화한다. 약학 조성물을, 활성 화합물들의 약학적으로 사용되는 제제로의 가공을 촉진하는 하나 이상의 약학적으로 허용 가능한 불활성 성분들을 사용하여 통상적인 방식으로 제형화한다. 적합한 제형은 선택된 투여 경로에 따라 변한다. 본 발명에 개시된 약학 조성물의 요약은 예를 들어 문헌[Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Nineteenth Ed (Easton, Pa.: Mack Publishing Company, 1995)]; 문헌[Hoover, John E., Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pennsylvania 1975]; 문헌[Liberman, H.A. and Lachman, L., Eds., Pharmaceutical Dosage Forms, Marcel Decker, New York, N.Y., 1980]; 및 문헌[Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Seventh Ed. (Lippincott Williams & Wilkins1999)]에서 발견되며, 상기와 같은 명세는 본 발명에 참고로 인용된다.
본 발명에 사용되는 바와 같은 약학 조성물은 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물과 다른 화학적 성분들(즉 약학적으로 허용 가능한 불활성 성분들), 예를 들어 담체, 부형제, 결합제, 충전제, 현탁제, 풍미제, 감미제, 붕해제, 분산제, 계면활성제, 윤활제, 착색제, 희석제, 용해제, 보습제, 가소제, 안정제, 침투 촉진제, 습윤제, 소포제, 산화방지제, 보존제, 또는 이들의 하나 이상의 조합과의 혼합물을 지칭한다. 상기 약학 조성물은 상기 화합물의 포유동물에의 투여를 촉진한다.
상기 약학 조성물은 활성 성분으로서 적어도 하나의 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 유리-산 또는 유리-염기 형태로, 또는 약학적으로 허용 가능한 염 형태로 포함할 것이다. 또한, 본 발명에 개시된 방법 및 약학 조성물은 동일한 유형의 활성을 갖는 상기 화합물의 활성 대사산물뿐만 아니라 N-산화물(적합한 경우), 결정형, 비결정성 상을 포함한다. 일부 실시태양에서, 본 발명에 개시된 화합물은 용매화되지 않은 형태 또는 약학적으로 허용 가능한 용매, 예를 들어 물, 에탄올 등에 의해 용매화된 형태로 존재한다.
본 발명에 개시된 약학 제형은 비제한적으로 수성 액체 분산액, 자기-유화성 분산액, 고체 용액, 리포솜 분산액, 에어로졸, 고체 투여형, 분말, 즉시 방출 제형, 조절 방출 제형, 빨리 녹는 제형, 정제, 캡슐, 환제, 지연 방출 제형, 연장 방출 제형, 장용 코팅 제형, 맥동 방출 제형, 다중미립자 제형, 및 혼합된 즉시 및 조절 방출 제형을 포함한다.
일부 실시태양에서, 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 전신적으로 투여한다.
일부 실시태양에서, 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 경구로 투여한다. 경구 투여용 모든 제형은 상기와 같은 투여에 적합한 투여량으로 존재한다. 일부 실시태양에서, 본 발명에 개시된 고체 투여형은 정제, 환제, 분말, 캡슐, 고체 분산액, 고체 용액, 생분해성 투여형, 조절 방출 제형, 맥동 방출 투여형, 다중미립자 투여형, 비드, 펠릿, 과립의 형태로 존재한다. 다른 실시태양에서, 상기 약학 제형은 분말의 형태로 존재한다. 더욱 다른 실시태양에서, 상기 약학 제형은 정제의 형태로 존재한다. 더욱 다른 실시태양에서, 상기 약학 제형은 현탁 정제, 빨리 녹는 정제, 한입 물기-붕해성 정제, 빠른-붕해성 정제, 발포정, 또는 캐플릿의 형태로 존재한다. 다른 실시태양에서, 상기 약학 제형은 캡슐의 형태로 존재한다.
일부 실시태양에서, 상기 약학적 고체 경구 투여형을 활성 화합물의 조절 방출을 제공하도록 제형화한다. 조절 방출 프로파일은 예를 들어 서방성, 연장된 방출, 맥동 방출, 및 지연 방출 프로파일을 포함한다.
하나의 태양에서, 경구 투여용 액체 제형 투여형은 비제한적으로 약학적으로 허용 가능한 수성 경구 분산액, 유화액, 용액, 엘릭서, 젤 및 시럽을 포함한 군 중에서 선택된 수성 현탁액의 형태로 존재한다. 예를 들어 문헌[Singh et al., Encyclopedia of Pharmaceutical Technology, 2nd Ed., pp. 754-757 (2002)]을 참조하시오.
구강 또는 설하 투여를 위해서, 상기 조성물은 임의로 통상적인 방식으로 제형화된 정제, 로젠지 또는 젤의 형태를 취한다.
하나의 태양에서, 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 근육내, 피하, 또는 정맥내 주사에 적합한 약학 조성물로 제형화한다. 비경구 주사는 일시 주사 및/또는 연속 주입을 포함한다.
일부 실시태양에서, 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 정맥내로 투여한다. 일부 실시태양에서, 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 피하로 투여한다.
일부 실시태양에서, 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 국소로 투여한다. 상기와 같은 실시태양에서, 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 다양한 국소 투여성 조성물, 예를 들어 용액, 현탁액, 로션, 젤, 페이스트, 샴푸, 스크럽제, 러빙제, 도말제, 약물처리된 스틱, 약물처리된 붕대, 밤, 크림 또는 연고로 제형화한다. 일부 실시태양에서, 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 포유동물의 피부에 국소로 투여한다. 일부 실시태양에서, 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물을 경피 투여형으로서 제조한다.
또 다른 태양은 에스트로젠 수용체의 활성이 질병 또는 병태(예를 들어 ESR1 유전자 중의 돌연변이를 특징으로 하는 호르몬-내성 암)의 병리 및/또는 증상에 기여하는 질병, 질환 또는 병태의 치료를 위한 약제의 제조에서 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염의 용도이다. 하나의 태양에서, 상기 질병 또는 병태는 본 발명에 명시된 질병 또는 병태 중 어느 하나이다.
치료 유효량의 에스트로젠 수용체 조절제, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염은 질병의 중증도, 피실험자의 연령 및 상대적인 건강, 및 다른 인자들에 따라 광범위하게 변할 수 있다.
투여 및 치료 섭생
하나의 실시태양에서, 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을, 에스트로젠 수용체 활성의 감소가 이로울 수 있는 포유동물의 질병 또는 병태(예를 들어 ESR1 유전자 중의 돌연변이를 특징으로 하는 호르몬-내성 유방암)를 포함하여, 하나 이상의 ESR1 돌연변이를 갖는 환자의 치료를 위한 약제의 제조에 사용한다. 상기와 같은 치료가 필요한 포유동물에서 본 발명에 개시된 질병 또는 병태 중 어느 하나의 치료 방법은 적어도 하나의 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물, 또는 약학적으로 허용 가능한 염, N-산화물, 활성 대사산물, 전구약물, 또는 이들의 약학적으로 허용 가능한 용매화물을 포함하는 약학 조성물을 치료 유효량으로 상기 환자에게 투여함을 포함한다.
치료 유효량은 상기 질병 또는 병태의 중증도 및 과정, 선행 치료법, 환자의 건강 상태, 체중, 및 약물에 대한 반응, 및 치료 의사의 판단에 따라 변한다. 치료 유효량을, 비제한적으로 용량 점증 임상 시험을 포함한 방법들에 의해 임의로 측정한다.
본 발명에 개시된 치료 방법 중 어느 하나에서, 유효량의 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물을 (a) 상기 포유동물에게 전신적으로 투여하고/하거나; (b) 상기 포유동물에게 경구로 투여하고/하거나; (c) 상기 포유동물에게 정맥내로 투여하고/하거나; (d) 상기 포유동물에게 주사에 의해 투여하고/하거나; (e) 상기 포유동물에게 국소로 투여하고/하거나; (f) 상기 포유동물에게 비-전신적으로 또는 국소로 투여한다.
일부 상황에서 상기 치료 방법은 (i) 상기 화합물을 1회 투여하거나; (ii) 상기 화합물을 상기 포유동물에게 하루에 걸쳐 수회 투여하거나; (iii) 되풀이해서; 또는 (iv) 연속적으로 투여하는 추가의 실시태양들을 포함하여, 유효량의 상기 화합물의 단일 투여를 포함하다.
상기 언급한 태양들 중 어느 하나는 (i) 상기 화합물을 연속적으로 또는 간헐적으로: 단일 용량에서와 같이 투여하고; (ii) 수회 투여 사이의 시간이 6시간 마다이고; (iii) 상기 화합물을 상기 포유동물에게 8시간마다 투여하고; (iv) 상기 화합물을 상기 포유동물에게 12시간마다 투여하고; (v) 상기 화합물을 상기 포유동물에게 24시간마다 투여하는 추가의 실시태양들을 포함하여, 유효량의 상기 화합물의 수회 투여를 포함하는 추가의 실시태양이다. 추가의 또는 대안의 실시태양에서, 상기 방법은 약물 휴일을 포함하며, 상기 약물 휴일에서 상기 화합물의 투여는 일시적으로 중지되거나 또는 상기 투여되는 화합물의 용량이 일시적으로 감소되며; 상기 약물 휴일의 끝에서, 상기 화합물의 투여가 재개된다. 하나의 실시태양에서, 상기 약물 휴일의 길이는 2일에서부터 1년까지 다양하다.
환자의 병태가 개선되지 않는 몇몇 실시태양에서, 의사의 판단에 따라 상기 화합물을 만성적으로, 즉 연장된 기간 동안 투여한다.
환자의 병태가 개선되지 않는 몇몇 실시태양에서, 투여되는 약물의 용량을 일시적으로 감소시키거나 또는 일정 길이의 시간 동안 일시적으로 중지한다(즉 "약물 휴일").
일부 실시태양에서, 성인 인간 치료에 사용되는 용량은 전형적으로 하루에 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물 0.01 ㎎ 내지 5000 ㎎의 범위이다. 하나의 태양에서, 성인 인간 치료에 사용되는 용량은 하루에 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물 약 1 ㎎ 내지 약 2000 ㎎이다. 하나의 실시태양에서, 상기 목적하는 용량을 편의상 단일 용량으로, 또는 동시에 또는 적합한 간격으로, 예를 들어 하루에 2회, 3회, 4회 또는 그 이상의 하위 용량으로 투여되는 분할 용량으로 제공한다. 하나의 실시태양에서, 본 발명에 개시된 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염에 적합한 1일 투여량은 체중 ㎏당 약 0.01 내지 약 50 ㎎이다.
일부 실시태양에서, 에스트로젠 수용체 조절제, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 폐경후 여성에게 경구로 투여한다.
일부 실시태양에서, 화학식 A, B, C 또는 D의 에스트로젠 수용체 조절제, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 상기 환자에게 매일 투여한다. 일부 실시태양에서, 화학식 A, B, C 또는 D의 에스트로젠 수용체 조절제, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 상기 환자에게 2일마다 투여한다. 일부 실시태양에서, 화학식 A, B, C 또는 D의 에스트로젠 수용체 조절제, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 상기 환자에게 매일, 2일마다, 3일마다, 4일마다, 5일마다, 6일마다, 1주일에 1회, 2주일에 1회, 3주일에 1회, 또는 한 달에 1회 투여한다.
일부 실시태양에서, 화학식 A, B, C 또는 D의 에스트로젠 수용체 조절제, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 상기 환자에게 연속적인 매일 투여 스케줄로 경구로 투여한다.
일부 실시태양에서, 하루에 약 5 ㎎ 내지 하루에 약 1000 ㎎의 화학식 A, B, C 또는 D의 에스트로젠 수용체 조절제, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 상기 환자에게 투여한다. 일부 실시태양에서, 하루에 약 10 ㎎ 내지 하루에 약 100 ㎎의 화학식 A, B, C 또는 D의 에스트로젠 수용체 조절제, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 상기 환자에게 투여한다.
일부 실시태양에서, 하루에 약 10 ㎎, 하루에 약 15 ㎎, 하루에 약 20 ㎎, 하루에 약 25 ㎎, 하루에 약 30 ㎎, 하루에 약 35 ㎎, 하루에 약 35 ㎎, 하루에 약 40 ㎎, 하루에 약 45 ㎎, 하루에 약 50 ㎎, 하루에 약 55 ㎎, 하루에 약 60 ㎎, 하루에 약 65 ㎎, 하루에 약 70 ㎎, 하루에 약 75 ㎎, 하루에 약 80 ㎎, 하루에 약 85 ㎎, 하루에 약 90 ㎎, 하루에 약 100 ㎎, 하루에 약 150 ㎎, 하루에 약 200 ㎎, 하루에 약 250 ㎎, 하루에 약 300 ㎎, 하루에 약 350 ㎎, 하루에 약 400 ㎎, 하루에 약 450 ㎎, 하루에 약 500 ㎎, 하루에 약 550 ㎎, 하루에 약 600 ㎎, 하루에 약 650 ㎎, 하루에 약 700 ㎎, 하루에 약 750 ㎎, 하루에 약 800 mg, 하루에 850 ㎎, 하루에 약 900 ㎎, 하루에 약 950 ㎎, 하루에 약 1000 mg의 화학식 A, B, C 또는 D의 에스트로젠 수용체 조절제, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 상기 환자에게 투여한다.
일부 실시태양에서, 하루에 약 600 ㎎의 화학식 A, B, C 또는 D의 에스트로젠 수용체 조절제, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 상기 환자에게 투여한다.
일부 실시태양에서, 하루에 약 1000 ㎎의 화학식 A, B, C 또는 D의 에스트로젠 수용체 조절제, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 상기 환자에게 투여한다.
하나의 실시태양에서, 상기 목적하는 1일 용량을 편의상 단일 용량으로, 또는 동시에(또는 짧은 기간에 걸쳐) 또는 적합한 간격으로, 예를 들어 하루에 2회, 3회, 4회 또는 그 이상의 하위 용량으로 투여되는 분할 용량으로 제공한다. 일부 실시태양에서, 상기 목적하는 1일 용량을 편의상 하루에 1회 동시에(또는 짧은 기간에 걸쳐) 투여되는 분할 용량으로 제공한다. 일부 실시태양에서, 상기 목적하는 1일 용량을 균등한 부분으로 하루에 2회, 하루에 3회, 또는 하루에 3회를 초과하여 투여되는 분할 용량으로 제공한다.
일부 실시태양에서, 환자에게 투여되는, 목적하는 1일 량의 화학식 A, B, C 또는 D의 에스트로젠 수용체 조절제 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 하루에 1회 투여한다.
일부 실시태양에서, 환자에게 투여되는, 상기 1일 량의 화학식 A, B, C 또는 D의 에스트로젠 수용체 조절제 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 하루에 2회, 균등한 분할 용량으로 투여한다.
일부 실시태양에서, 환자에게 투여되는, 상기 1일 량의 화학식 A, B, C 또는 D의 에스트로젠 수용체 조절제 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 하루에 3회, 균등한 분할 용량으로 투여한다.
일부 실시태양에서, 환자에게 투여되는, 상기 1일 량의 화학식 A, B, C 또는 D의 에스트로젠 수용체 조절제 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 하루에 3회를 초과하여, 균등한 분할 용량으로 투여한다.
상기 환자의 유방암 상태의 개선이 관찰되지 않는 몇몇 실시태양에서, 화학식 A, B, C 또는 D의 에스트로젠 수용체 조절제 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염의 상기 1일 용량을 증가시킨다. 일부 실시태양에서, 하루에 1회 투여 스케줄을 하루에 2회 투여 스케줄로 바꾼다. 일부 실시태양에서, 하루에 3회 투여 스케줄을 사용하여 투여되는 에스트로젠 수용체 조절제 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염의 양을 증가시킨다.
일부 실시태양에서, 화학식 A, B, C 또는 D의 에스트로젠 수용체 조절제 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 환자에게 공복 상태로 투여한다. 일부 실시태양에서, 화학식 A, B, C 또는 D의 에스트로젠 수용체 조절제 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 환자에게 만복 상태로 투여한다.
일부 실시태양에서, 환자에게 제공되는 화학식 A, B, C 또는 D의 에스트로젠 수용체 조절제 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염의 양은 인자들, 예를 들어 비제한적으로 유방암의 상태 및 중증도, 및 여성의 정체(예를 들어 체중)에 따라 변한다.
18F-플루오로에스트라디올(FES)은 신규 치료법의 충분히-허용되는 용량에서 충분한 표적 연동에 대한 비-침습적 모니터링에 의해 임상 약물 개발을 지원할 수 있는 에스트로젠 수용체에 대한 특이적이고 선택적인 방사성추적자이다. 18F-FES를 갖는 양전자 단층 촬영(PET)을 사용하여, 진행된 또는 전이성 ER+ 유방암이 있는 여성에서 다기관, I기, 용량-조사 결과, 안전성 및 약동학적 임상 시험으로 ERM 1-3과의 에스트로젠 수용체 표적 연동을 확인하였다. 도 10은 기준선, 전-처리(좌측) 및 약학 제형 ERM 1-3(ARN-810)(우측) 600 ㎎/㎏을 연속해서 매일 1개월 경구 투여한 유방암 환자의 [18F]FES-PET(플루오로에스트라디올-양전자 단층 촬영) 영상화를 도시하며 이때 상은 투여-후 23시간째에 수집되었다. 상기 환자는 ESR1 D538G 돌연변이가 있는 연조직 병변이 잠복된 것으로 확인되었다. 상기 환자 상태는 부분 관해이다. FES-PET/CT는 ERM 1-3의 임상 시험에서의 표적 연동을 성공적으로 입증한다. 상기 임상 시험의 다른 환자들은 상기 ERM 1-3 약학 제형에 의한 치료에 대해 유사한 응답을 나타내었다.
복합 요법
일부 실시태양에서, 하나 이상의 ESR1 돌연변이를 갖는 환자의 치료를 위한 약학 조성물은 코르티코스테로이드, 구토 억제제, 진통제, 항암제, 소염제, 키나제 억제제, 수용체 억제제, 항체, HSP90 억제제, 히스톤 데아세틸라제(HDAC) 억제제, 면역계의 조절제, PD-1 억제제, 폴리 ADP-리보스 폴리머라제(PARP) 억제제, 및 아로마타제 억제제 중에서 선택된 하나 이상의 추가적인 치료 활성제를 추가로 포함한다.
몇몇 경우에, 적어도 하나의 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 하나 이상의 다른 치료제와 함께 투여하는 것이 적합하다. 몇몇 실시태양에서, 상기 약학 조성물은 하나 이상의 항암제를 추가로 포함한다.
하나의 특정한 실시태양에서, 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 제2 치료제와 함께 투여하며, 여기에서 상기 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염, 및 제2 치료제는 치료되는 질병, 질환 또는 병태의 상이한 태양들을 조절하고, 이에 의해 어느 하나의 치료제를 단독으로 투여하는 것보다 더 큰 전체적인 이점을 제공한다.
어쨌든, 상기 치료되는 질병, 질환 또는 병태와 관계 없이, 상기 환자가 경험하는 전체적인 이점은 상기 두 치료제의 부가적인 효과이거나 또는 상기 환자는 상승작용적 이점을 경험할 수 있다.
복합 요법에서, 다수의 치료제들(이중 하나는 본 발명에 개시된 화합물들 중 하나이다)을 임의의 순서로 또는 심지어 동시에 투여한다. 투여가 동시적인 경우, 상기 다수의 치료제들을 단지 예로서 단일의 통합된 형태로 또는 다수의 형태로(예를 들어 단일 환제로서 또는 2개의 별도의 환제로서) 제공한다.
일부 실시태양에서, 에스트로젠 수용체-의존성 또는 에스트로젠 수용체-매개된 병태 또는 질병, 예를 들어 암을 포함한 증식성 질환의 치료 방법은 포유동물에게 상기 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 적어도 하나의 추가적인 치료제와 함께 투여함을 포함한다.
일부 실시태양에서, 상기 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 호르몬 차단요법, 화학요법, 방사선요법, 수술, 암 백신, 생물학적 요법, 또는 이들의 조합과 함께 투여한다. 일부 실시태양에서, 상기 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 펩타이드, 사이토킨, 치료학적 바이러스, 치료학적 세균, 유전자요법, siRNA, 양자 T-세포 전이, 항체, 단클론 항체 또는 이들의 조합과 함께 투여한다.
일부 실시태양에서, 상기 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 아로마타제 억제제, 포스포이노시티드 3-키나제(PI3K)/mTOR 경로 억제제, CDK 4/6 억제제, HER-2 억제제, EGFR 억제제, PD-1 억제제, 폴리 ADP-리보스 폴리머라제(PARP) 억제제, 히스톤 데아세틸라제(HDAC) 억제제, HSP90 억제제, VEGFR 억제제, AKT 억제제, 화학요법, 또는 이들의 임의의 조합과 함께 투여한다.
일부 실시태양에서, 상기 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 아로마타제 억제제와 함께 투여한다. 일부 실시태양에서, 상기 아로마타제 억제제는 아나스트로졸, 레트로졸 또는 엑세메스탄이다.
일부 실시태양에서, 상기 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 CDK 4/6 억제제와 함께 투여한다. 일부 실시태양에서, 상기 CDK 4/6 억제제는 LEE011 또는 LY283519이다.
일부 실시태양에서, 상기 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 포스포이노시티드 3-키나제(PI3K)/mTOR 경로 억제제와 함께 투여한다. 일부 실시태양에서, 상기 포스포이노시티드 3-키나제(PI3K)/mTOR 경로 억제제는 에베로리무스, 템시로리무스, BEZ235, BYL719, GDC0032, BKM120, BGT226, GDC0068, GDC-0980, GDC0941, INK128 (MLN0128), INK1117, MK-2206, OSI-027, CC-223, AZD8055, SAR245408, SAR245409, PF04691502, WYE125132, GSK2126458, GSK-2636771, BAY806946, PF-05212384, SF1126, PX866, AMG319, ZSTK474, Cal101, PWT33597, CU-906, 또는 CUDC-907이다.
일부 실시태양에서, 상기 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 히스톤 데아세틸라제 억제제(HDAC)와 함께 투여한다. 일부 실시태양에서, 상기 HDAC 억제제는 엔티노스태트 또는 모세티노스태트이다.
일부 실시태양에서, 상기 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 HER-2 억제제와 함께 투여한다. 일부 실시태양에서, 상기 HER-2 억제제는 트라스투주맵, 페르투주맵 또는 TDM-1이다.
일부 실시태양에서, 상기 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 표피 성장 인자 수용체(EGFR) 억제제와 함께 투여한다. 일부 실시태양에서, 상기 EGFR 억제제는 라파티니브, 제피티니브, 에를로티니브, 세툭시맵, 카네르티니브, 파니투뮤맵, 니모투주맵, OSI-632, 반데타니브, 아파티니브, MP-412, AEE-788, 네라티니브, XL-647, 다코미티니브, AZD-8931, CUDC-101, AP-26113 또는 CO-1686이다.
일부 실시태양에서, 상기 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 혈관형성 억제제와 함께 투여한다. 일부 실시태양에서, 상기 혈관형성 억제제는 VEGFR 억제제이다. 일부 실시태양에서, 상기 혈관형성 억제제는 다중 키나제를 억제한다(예를 들어 다중-키나제 표적화제이다). 일부 실시태양에서, 상기 혈관형성 억제제는 베바시주맵, ABR-215050(타스퀴니모드), CHIR-258(도비티니브), EXEL-7647, OSI-930, BIBF-1120, BAY-73-4506, BMS-582664(브리바니브), RO-4929097, JNJ-26483327, AZD-2171(세디라니브), 소라페니브, 아플리베르셉트, 엔자스타우린, AG-013736(악시티니브), GSK-786034(파조파니브), AP-23573, 또는 수니티니브이다.
일부 실시태양에서, 상기 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 항-PD-1제와 함께 투여한다. 일부 실시태양에서, 상기 항-PD-1제는 MK-3475, 니볼루맵, MPDL3280A, 또는 MEDI4736이다.
일부 실시태양에서, 상기 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 AKT 억제제와 함께 투여한다. 일부 실시태양에서, 상기 AKT 억제제는 GDC0068, MK-2206, AT7867, GSK2110183, GSK2141795, 또는 GSK690693이다.
일부 실시태양에서, 상기 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 독소루비신, 사이클로포스파미드, 카페시타빈, 비노렐빈, 패클리탁셀, 도세탁셀, 또는 시스플라틴과 함께 투여한다.
일부 실시태양에서, 상기 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염과 함께 사용하기 위한 추가적인 치료제는 하기 중 하나 이상을 포함한다: 아비라테론; 아바렐릭스; 아드리아마이신; 액티노마이신; 애시비신; 아클라루비신; 아코다졸 하이드로클로라이드; 아크로닌; 아도젤레신; 알데스류킨; 알렘투주맵; 알로퓨리놀; 알리트레티노인; 알트레타민; 암보마이신; 아메탄트론 아세테이트; 아미노글루테티미드; 아미노레뷸린산; 아미포스틴; 암사크린; 아나스트로졸; 안트라마이신; 아프레피탄트; 아르세닉 트라이옥사이드; 아스파라기나제; 아스펄린; 아자시티딘; 아제테파; 아조토마이신; 바티마스태트; 벤다머스틴 하이드로클로라이드; 벤조데파; 베바시주맵; 벡사로텐; 바이칼루타미드; 비스안트렌 하이드로클로라이드; 비스나파이드 다이메실레이트; 비젤레신; 블레오마이신; 블레오마이신 설페이트; 보르테조밉; 브레퀴나르 나트륨; 브로피리민; 부설판; 칵티노마이신; 칼류스테론; 카라세미드; 카르베티머; 카르보플라틴; 카머스틴; 카루비신 하이드로클로라이드; 카르젤레신; 카페시타빈; 세데핑골; 세툭시맵; 클로람부실; 시롤레마이신; 시스플라틴; 클라드리빈; 클로파라빈; 크리스나톨 메실레이트; 사이클로포스파미드; 시타라빈; 다카바진; 다사티니브; 다우노루비신 하이드로클로라이드; 닥티노마이신; 다르베포에틴 알파; 데시타빈; 데가렐릭스; 데니류킨 디프티톡스; 덱솔마플라틴; 덱스라족산 하이드로클로라이드; 데자구아닌; 데자구아닌 메실레이트; 디아지쿠온; 도데탁셀; 독소루비신; 독소루비신 하이드로클로라이드; 드롤록시펜; 드롤록시펜 시트레이트; 드로모스타놀론 프로피오네이트; 듀아조마이신; 에다트렉세이트; 에플로르니틴 하이드로클로라이드; 엘사미트루신; 엘트롬보파그 올라민; 엔로플라틴; 엔프로메이트; 에피프로피딘; 에피루비신 하이드로클로라이드; 에포에틴 알파; 에르불로졸; 에를로티니브 하이드로클로라이드; 에소루비신 하이드로클로라이드; 에스트라머스틴; 에스트라머스틴 포스페이트 나트륨; 에타니다졸; 에토포시드; 에토포시드 포스페이트; 에토프린; 에베로리무스; 엑세메스탄; GDC0032; 파드로졸 하이드로클로라이드; 파자라빈; 펜레티니드; 필그라스팀; 플록슈리딘; 플루다라빈 포스페이트; 플루오로유라실; 플루로시타빈; 포스퀴돈; 포스트리에신 나트륨; 풀베스트란트; 제피티니브; 젬시타빈; 젬시타빈 하이드로클로라이드; 젬시타빈-시스플라틴; 젬투주맵 오조가미신; 고세렐린 아세테이트; 히스트렐린 아세테이트; 하이드록시유레아; 이다루비신 하이드로클로라이드; 이포스파미드; 이모포신; 이브리튜모맵 티툭세탄; 이다루비신; 이포스파미드; 이마티니브 메실레이트; 이미퀴모드; 인터류킨 II(재조합 인터류킨 II, 또는 rIL2 포함), 인터페론 알파-2a; 인터페론 알파-2b; 인터페론 알파-n1; 인터페론 알파-n3; 인터페론 베타-1a; 인터페론 베타-1b; 이프로플라틴; 이리노테칸 하이드로클로라이드; 익사베필론; 란레오티드 아세테이트; 라파티니브; 레날리도미드; 레트로졸; 류프로리드 아세테이트; 류코보린 칼슘; 류프로리드 아세테이트; 레바미솔; 리포솜 시타라빈; 리아로졸 하이드로클로라이드; 로메트렉솔 나트륨; 로머스틴; 로속산트론 하이드로클로라이드; 마소프로콜; 메이탄신; 메클로르에타민 하이드로클로라이드; 메제스트롤 아세테이트; 멜렌제스트롤 아세테이트; 멜팔란; 메노가릴; 머캅토퓨린; 메토트렉세이트; 메토트렉세이트 나트륨; 메톡살렌; 메토프린; 메튜레데파; 미틴도미드; 미토카르신; 미토크로민; 미토길린; 미토말신; 미토마이신 C; 미토스페르; 미토탄; 미톡산트론 하이드로클로라이드; 마이코페놀산; 난드롤론 펜프로피오네이트; 넬라라빈; 닐로티니브; 노코다조이; 노페투모맵; 노갈라마이신; 오파투뮤맵; 오프렐베킨; 오르마플라틴; 옥살리플라틴; 옥시슈란; 패클리탁셀; 팔리페르민; 팔로노세트론 하이드로클로라이드; 파미드로네이트; 페그필그라스팀; 페메트렉시드 이나트륨; 펜토스타틴; 파니투뮤맵; 파조파니브 하이드로클로라이드; 페메트렉시드 이나트륨; 플레릭사포어; 프랄라트렉세이트; 페가스파르가세; 펠리오마이신; 펜타머스틴; 페플로마이신 설페이트; 페르포스파미드; 피포브로만; 피포설판; 피록산트론 하이드로클로라이드; 플리카마이신; 플로메스탄; 포르피머 나트륨; 포르피로마이신; 프레드니머스틴; 프로카바진 하이드로클로라이드; 퓨로마이신; 퓨로마이신 하이드로클로라이드; 피라조퓨린; 퀴나크린; 랄록시펜 하이드로클로라이드; 라스뷰리카세; 재조합 HPV 2가 백신; 재조합 HPV 4가 백신; 리보프린; 로글레티미드; 리툭시맵; 로미뎁신; 로미플로스팀; 사핑골; 사핑골 하이드로클로라이드; 사르그라모스팀; 세머스틴; 심트라젠; 시풀류셀-T; 소라페니브; 스파르포세이트 나트륨; 스파르소마이신; 스피로제르마늄 하이드로클로라이드; 스피로머스틴; 스피로플라틴; 스트렙토니그린; 스트렙토조신; 슐로페누어; 수니티니브 말레이트; 탈리소마이신; 타목시펜; 타목시펜 시트레이트; 테코갈란 나트륨; 테가퓨어; 텔록산트론 하이드로클로라이드; 테모졸로미드; 테모포르핀; 템시로리무스; 테니포시드; 테록시론; 테스톨락톤; 탈리도미드; 티아미프린; 티오구아닌; 티오테파; 티아조퓨린; 티라파자민; 토포테칸 하이드로클로라이드; 토레미펜; 토시튜모맵 및 I131 요오드 토시튜모맵; 트라스투주맵; 트레스톨론 아세테이트; 트레티노인; 트라이시리빈 포스페이트; 트라이메트렉세이트; 트라이메트렉세이트 글루쿠로네이트; 트립토렐린; 투뷸로졸 하이드로클로라이드; 유라실 머스터드; 유레데파; 발루비신; 바프레오티드; 베르테포르핀; 빈블라스틴; 빈블라스틴 설페이트; 빈크리스틴 설페이트; 빈데신; 빈데신 설페이트; 비네피딘 설페이트; 빈글리시네이트 설페이트; 빈류로신 설페이트; 비노렐빈 타르트레이트; 빈로시딘 설페이트; 빈졸리딘 설페이트; 보리노스태트; 보로졸; 제니플라틴; 지노스타틴; 졸레드론산; 및 조루비신 하이드로클로라이드.
일부 실시태양에서, 상기 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 오심 또는 구토를 치료하기 위해 구토 억제제와 함께 사용하며, 상기 치료는 상기 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물, 항암제 및/또는 방사선요법의 사용으로부터 생성된다.
일부 실시태양에서, 상기 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 빈혈 또는 호중구감소증의 치료에 유용한 작용제와 함께 사용한다.
일부 실시태양에서, 상기 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 코르티코스테로이드와 함께 투여한다.
일부 실시태양에서, 상기 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 진통제와 함께 투여한다.
일부 실시태양에서, 상기 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 방사선요법(또는 방사요법)과 함께 사용한다. 방사선요법은 이온화 방사선에 의한 암 및 다른 질병의 치료이다. 방사선요법은 국소 고형 종양, 예를 들어 피부, 혀, 후두, 뇌, 유방, 전립선, 결장, 자궁 및/또는 경부의 암을 치료하는데 임의로 사용된다. 상기 요법은 또한 백혈병 및 림프종(각각 혈액형성세포 및 림프계의 암)의 치료에 임의로 사용된다.
암세포에 방사선을 전달하기 위한 기법은 방사성 이식물을 종양 또는 체강에 직접 놓는 것이다. 이를 내부 방사선요법(근접요법, 조직내 조사, 및 강내조사는 내부 방사선요법의 유형들이다)이라 칭한다. 내부 방사선요법을 사용하는 경우, 조사 용량을 작은 구역에 농축시키며, 환자가 수일간 병원에 머무른다. 내부 방사선요법은 흔히 혀, 자궁, 전립선, 결장 및 경부의 암에 사용된다. "방사선요법" 또는 "이온화 방사선"란 용어는 모든 형태의 방사선, 예를 들어 비제한적으로 α, β 및 γ 방사선 및 자외선을 포함한다.
일부 실시태양에서, 상기 화학식 A, B, C 또는 D의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 유방암의 치료에, 상기 유방암에 대한 적어도 하나의 추가적인 치료 선택권과 함께 사용한다. 일부 실시태양에서, 상기 추가적인 치료 선택권은 유방암 수술을 포함한다. 일부 실시태양에서, 유방암 수술은 유방보존술, 유방절제술, 감시림프절 생검, 또는 액와 결절 절제를 포함한다. 일부 실시태양에서, 상기 추가적인 치료 선택권은 방사선요법을 포함한다. 일부 실시태양에서, 방사선은 외부 방사선 또는 근접요법을 포함한다. 일부 실시태양에서, 상기 추가적인 치료 선택권은 호르몬요법(즉 호르몬 차단 요법)을 포함한다. 일부 실시태양에서, 호르몬요법은 선택성 에스트로젠 수용체 조절제(예를 들어 타목시펜), 아로마타제 억제제, 또는 풀베스트란트의 사용을 포함한다. 일부 실시태양에서, 상기 추가적인 치료 선택권은 난소가 에스트로젠을 만드는 것을 정지시키기 위해서 난소를 제거하기 위해 수술하거나 약물치료함을 포함한다. 일부 실시태양에서, 상기 추가적인 치료 선택권은 트라스투주맵, 라파티니브, 또는 베바시주맵의 사용을 포함한다. 일부 실시태양에서, 상기 추가적인 치료 선택권은 유방암 재발을 예방하기 위한 골-형성 약물(예를 들어 졸레드론산(레클라스트, 조메타))을 포함한다.
제조 키트 /물품
본 발명에 개시된 진단 및 치료 용도에 사용하기 위해서, 제조 키트 및 물품을 또한 본 발명에 개시한다. 상기와 같은 키트는 담체, 패키지, 또는 하나 이상의 용기, 예를 들어 바이알, 튜브 등을 수용하기 위해 구획화된 용기를 포함할 수 있으며, 상기 용기는 각각 본 발명에 개시된 방법에 사용되는 별도의 요소들 중 하나를 포함한다. 적합한 용기는 예를 들어 병, 바이알, 주사기 및 시험관을 포함한다. 상기 용기는 예를 들어 유리 또는 플라스틱을 포함한 임의의 허용 가능한 물질로부터 형성된다.
일부 실시태양에서, 본 발명에 제공된 키트는 피실험자에서 돌연변이 ER-α 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산의 검출 또는 피실험자에서 돌연변이 ER-α 폴리펩타이드의 검출에 사용하기 위한 것이다(즉 진단 키트). 일부 실시태양에서 상기 키트는 화학식 A, B, C 또는 D의 에스트로젠 수용체 조절제 화합물로 치료하기 위한 환자를 선택하거나, 호르몬요법에 내성이거나 또는 내성으로 되는 듯한 피실험자를 확인하거나, 호르몬요법에 대한 내성의 발생을 모니터하거나, 또는 이들의 조합에 사용된다. 본 발명에 제공된 키트는 돌연변이 ER-α 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산의 검출, 돌연변이 ER-α 폴리펩타이드의 검출, 피실험자로부터의 세포 중의 ER 활성의 검출, 또는 이들의 조합을 위한 하나 이상의 시약을 함유한다. 예시적인 시약은 비제한적으로 완충제, PCR 시약, 항체, 효소 염색을 위한 기질, 크로마젠 또는 다른 물질, 예를 들어 슬라이드, 용기, 미세적정 플레이트, 및 임의로 상기 방법들을 수행하기 위한 설명서를 포함한다. 당해 분야의 숙련가들은 다양한 물질들의 접촉에 사용될 수 있는 다수의 다른 가능한 용기 및 플레이트 및 시약들을 알 것이다. 키트는 또한 대조용 샘플, 예를 들어 핵산 또는 단백질, 예를 들어 본 발명에 제공된 돌연변이 ER-α 폴리펩타이드 또는 본 발명에 제공된 돌연변이 ER-α 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산을 함유할 수 있다. 일부 실시태양에서, 키트는 내인성 ER 유전자 발현의 검출을 위한 올리고뉴클레오타이드 프라이머의 하나 이상의 세트를 함유한다.
일부 실시태양에서, 상기 용기는 하나 이상의 화학식 A, B, C 또는 D의 에스트로젠 수용체 조절제 화합물을, 임의로 조성물 중에 또는 본 발명에 개시된 바와 같은 또 다른 작용제와 함께 포함할 수 있다. 상기 용기는 멸균 출입구를 임의로 갖는다(예를 들어 상기 용기는 피하 주사 바늘에 의해 뚫을 수 있는 마개를 갖는 정맥내 용액 주머니 또는 바이알일 수 있다). 상기와 같은 키트는 화합물을 임의로, 본 발명에 개시된 방법에서 상기 화합물의 용도와 관련된 식별 명세서 또는 표지 또는 설명서와 함께 포함한다.
키트는 전형적으로 하나 이상의 추가적인 용기를 포함할 것이며, 각각의 용기는 본 발명에 개시된 화합물의 용도를 위해 상업적인 및 사용자 관점에서 바람직한 다양한 물질들(예를 들어 임의로 농축된 형태의 시약 및/또는 장치) 중 하나 이상을 갖는다. 상기와 같은 물질의 비제한적인 예는 비제한적으로 완충제, 희석제, 필터, 바늘, 주사기; 내용물을 나열하는 담체, 패키지, 용기, 바이알 및/또는 튜브 표지 및/또는 사용 설명서, 및 사용 설명서가 있는 패키지 삽입물을 포함한다. 일련의 설명서가 또한 전형적으로 포함될 것이다.
표지는 상기 용기상에 있거나 또는 상기 용기와 결합될 수 있다. 표지는 상기 표지를 형성하는 문자, 숫자 또는 다른 기호가 상기 용기 자체에 부착되거나, 성형되거나 또는 식각되는 경우 용기상에 있을 수 있으며; 상기 표지가 상기 용기를 또한 유지하는 용기 또는 담체내에 존재할 때, 예를 들어 패키지 삽입물로서 존재할 때 용기와 결합될 수 있다. 표지를 사용하여 내용물이 특정한 치료 용도에 사용됨을 가리킬 수 있다. 상기 표지는 또한 예를 들어 본 발명에 개시된 방법에서와 같이, 내용물의 사용을 위한 사용법을 가리킬 수 있다.
패키징 물질, 상기 패키징 물질내의 화학식 A, B, C 또는 D의 에스트로젠 수용체 조절제 화합물, 및 상기 화합물 또는 조성물, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염, 토오토머, 약학적으로 허용 가능한 N-산화물, 약학적으로 활성인 대사산물, 약학적으로 허용 가능한 전구약물, 또는 약학적으로 허용 가능한 용매화물이 활성화된 에스트로젠 수용체의 효과를 감소시키거나, 축소시키거나 또는 제거하기 위해, 또는 에스트로젠 수용체 활성의 감소 또는 제거가 이로울 수 있는 질병 또는 병태의 하나 이상의 증상의 치료, 예방 또는 개선에 사용됨을 가리키는 표지를 포함하는 제조 물품을 제공한다.
실시예
본 실시예들은 단지 예시를 목적으로 제공되며 본 발명에 제공된 특허청구범위의 범위를 제한하고자 하는 것은 아니다.
실시예 1: MCF-7 3x ERE 루시페라제 전사 리포터 분석
본 실시예에서, 선택된 돌연변이 에스트로젠 수용체의 구성적 전사 활성 및 자극된 야생형 에스트로젠 수용체 활성의 억제를 위한 최대의 상대적인 IC50을 MCF7 유방암 세포에서 3x ERE-루시페라제 리포터를 사용하여 ER 조절제 에스트라디올, 4-OH 타목시펜, 풀베스트란트, 및 화합물 패널에 대해 평가하였다. 본 분석에 사용된 조건하에서, 야생형 및 모든 돌연변이 에스트로젠 수용체는 ER 리간드에 의해 조절될 수 있는, 측정 가능한 구성적, 서열 의존적 및 에스트라디올 독립적인 기본 활성을 나타낸다. 따라서, 제공된 모든 데이터는 에스트라디올 부재하에서의 야생형 에스트로젠 수용체에 관한 것이다.
MCF7 세포를 10% FCS가 보충된 RPMI 1640에서 유지시켰다. 전사 분석을, 100 ㎕의 세포를 10% 목탄 스트립핑된 혈청이 보충된 RPMI 1640 중에 96-웰 세포 배양 플레이트에서 250,000 세포/㎖의 밀도로 시딩하여 수행하고 밤새 부착되게 하였다. 세포를 제조사의 프로토콜에 따라 리포펙틴(라이프 테크놀로지스(Life Technologies))을 사용하여 일시 형질감염시켰다. 3중 형질감염을 150 ng 3X ERE-TK-Luc(리포터 벡터), 30 ng CMVpRL(표준화 백터) 및 300 ng pCDNA ERα(또는 ERα 돌연변이체)를 사용하여 수행하였다. 형질감염된 세포를 밤새 배양하고 이어서 리간드로 처리하였다. 상기 화합물을 연속 희석하고 50 ㎕의 화합물 + 목탄 스트립핑된 혈청이 보충된 RPMI 1640을 상기 세포에 가하였다. 24시간 배양에 이어서, 상기 배지를 제거하고 상기 세포를 40 ㎕의 용해 완충제(25 mM 트리스 포스페이트, 2 mM CDTA, 10% 글리세롤, 0.5% 트리톤 X-100, 2 mM DTT)에 용해시켰다. 개똥벌레 루시페라제 활성을 40 ㎕ 루시페라제 완충제(20 mM 트리신, 0.1 mM EDTA, 1.07 mM(MgCO3)4 Mg(OH)2·5H2O, 2.67 mM MgSO4, 33.3 mM DTT, 270 μM 조효소 A, 470 μM 루시페린, 530 μM ATP)의 첨가 직후에 측정하였다. 레닐라(Renilla) 루시페라제를 40 ㎕ 콜렐렌테라진 완충제(1.1 M NaCl, 2.2 mM Na2EDTA, 0.22 M KχPO4(pH 5.1), 0.44 ㎎/㎖ BSA, 1.3 mM NaN3, 1.43 μM 코엘렌테라진, 5.0으로 조절된 최종 pH)의 첨가에 이어서 측정하였다. 각 화합물의 최대의 상대적인 작용물질 활성을 하기와 같이 그래프화된 각 돌연변이 수용체에 대한 최대 반응(용량 반응 곡선의 기부)을 나타내는 용량 반응 곡선상의 점으로부터 유도하였다: RLU 샘플/RLU wtER-α DMSO x 100 = 상대 활성. 각 화합물에 대한 상대적인 IC50을 하기와 같이 측정한다: IC50 ER-α 돌연변이체/IC50 wtER-α.
본 발명에 개시된 전형적인 화합물들에 대한 예시적인 전사 데이터를 하기 표 5에 나타낸다:
[표 5]
Figure pct00093
실시예 2: 국소적으로 진행된 또는 전이성 ER+ 유방암 및 국소적으로 확인된 ESR1 돌연변이를 갖는 폐경후 여성에서 ERM 화합물 1-3의 임상 시험
본 실시예는 확인된 ESR1 돌연변이를 갖는 국소적으로 진행된 또는 전이성 ER+(HER2-) 유방암을 갖는 폐경후 여성에서 ERM 화합물 1-3, (E)-3-(4-((E)-2-(2-클로로-4-플루오로페닐)-1-(1H-인다졸-5-일)부트-1-엔-1-일)페닐)아크릴산, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염의 효능 및 안전성을 평가하는 공개 표지 임상 시험이다.
목적: 국소적으로 진행된 또는 전이성 ER+(HER2-) 유방암 및 확인된 ESR1 돌연변이를 갖는 폐경후 여성에서 ERM 화합물 1-3, (E)-3-(4-((E)-2-(2-클로로-4-플루오로페닐)-1-(1H-인다졸-5-일)부트-1-엔-1-일)페닐)아크릴산, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염의 약동학(PK), 안전성 및 허용성을 평가하고 항종양 활성의 예비 증거를 평가하기 위함. 추가적인 목적은 [18F]-플루오로에스트라디올(FES) 양전자 단층 촬영(PET)[FES PET]에 의한 약역학적(PD) 반응의 생물마커의 탐구 평가를 수행하고; ER 표적 유전자 발현의 탐구 평가를 수행하고; 단일 및 수회 용량 처리에 따른 (E)-3-(4-((E)-2-(2-클로로-4-플루오로페닐)-1-(1H-인다졸-5-일)부트-1-엔-1-일)페닐)아크릴산, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염에 대한 내성 기전의 탐구 평가(예를 들어 Cmax, Tmax, AUC, T1/2)를 수행함을 포함한다.
시험 설계: 본 연구에서 여성들에게, 하루에 약 400 ㎎의 출발 용량의 (E)-3-(4-((E)-2-(2-클로로-4-플루오로페닐)-1-(1H-인다졸-5-일)부트-1-엔-1-일)페닐)아크릴산, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염에 이어서 그 후에 대략 200 ㎎ 증분에 의한 용량 점증으로, 권장된 2기 용량의 (E)-3-(4-((E)-2-(2-클로로-4-플루오로페닐)-1-(1H-인다졸-5-일)부트-1-엔-1-일)페닐)아크릴산, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공하거나, 또는 점증 용량의 (E)-3-(4-((E)-2-(2-클로로-4-플루오로페닐)-1-(1H-인다졸-5-일)부트-1-엔-1-일)페닐)아크릴산, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 할당할 것이다. 환자는 아로마타제 억제제에 의한 선행 치료에 이어서 측정 가능한 질병 진행, 및 입증된 ESR1 돌연변이를 가져야 한다.
모든 환자를 질병 진행, 허용 가능하지 않은 독성, 또는 환자 동의의 철회시까지 치료할 것이다.
환자 선택
포함 기준:
1. 치유 의도의 절제 또는 방사선요법을 받아들일 수 없는 국소 재발성 질병, 또는 전이성 질병(둘 다 ER+ 유방암에 대한 적어도 6개월의 호르몬요법 후에 진행된다)의 증거를 갖는 유방 선암종의 조직학적 또는 세포학적으로 입증된 진단
2. ER-양성 종양(실험실 시험에 따라 면역조직화학[IHC]에 의해 ≥1% 세포로 염색됨)
3. 국소 실험실 시험에 따른 HER2-음성 유방암(세포막 단백질 발현에 대해 0 또는 +1의 IHC 결과 또는 내부 대조용 탐침이 없는 시스템에 대해서 HER2/CEP17 비 < 1.8 또는 핵당 평균 4 사본수 미만의 HER2 유전자를 나타내는 FISH 결과)
4. 하기와 같이 추가로 정의된 RECIST v1.1에 따른 평가 가능한 질병:
·측정 가능한 질병, 또는 평가 가능한 골 질병, 즉 측정 가능한 병변의 부재하에서 세포용해성 또는 혼합된(용해성 + 경화성) 골 병변. 주: 사전에 조사된 병변은 조사의 완료 후에 상기 부위에서 진행이 기록되는 경우에만 측정 가능한 것으로 간주된다. 측정될 수 없는, 평가될 수 없는 병변(예를 들어 흉수)을 갖는 환자는 상기 시험의 용량 확대 부분에 바람직하지 않을 것이다.
5. 실험실 시험에 따른 ESR1 돌연변이. 아로마타제 억제제에 의한 치료에 이은 질병 진행.
6. 타목시펜의 사용으로부터 적어도 2개월이 경과했어야 한다
7. 임의의 다른 항암 호르몬요법의 사용으로부터 적어도 2주가 경과했어야 한다.
8. 임의의 화학요법의 사용으로부터 적어도 3주가 경과했어야 한다.
9. 여성, 18세 이상
10. 하기와 같이 정의되는 폐경후 상태:
·선행의 외과적 양측 난소적출술
·≥56세 연령: 마지막 월경일 이래 ≥1년의 자연적인 무월경
·마지막 월경일 이래 ≥1년의 무월경 및 폐경후 범위 중의 혈청 에스트라디올 수준(<20 pg/㎖) 및 FSH 수준(>40 mIU/㎖)을 갖는 <56세 연령
·제자리에 한쪽 또는 양쪽 난소를 갖거나 또는 ≥1년의 타목시펜 중단 및 폐경후 범위 중의 혈청 에스트라디올 수준(<20 pg/㎖) 및 FSH 수준(>40 mIU/㎖)과 함께 타목시펜-유발된 무월경을 갖는 <56세 연령
11. 동부 종양학 협력 군(ECOG) 수행 상태 ≤2(코호트 A의 경우) 또는 ≤1(코호트 B1 및 B2의 경우)
12. 선행 요법 또는 수술 과정의 모든 급성 독성 효과의 기준선 또는 등급 ≤1까지의 해결(탈모증 또는 환자에게 안전성 위험인 것으로 간주되지 않는 다른 독성 제외)
13. 하기의 기준에 의해 한정되는 바와 같은 적합한 기관 기능:
·절대 호중구 수(ANC) ≥1500/㎕
·혈소판 ≥100,000/㎕
·혈청 아스파테이트 트랜스아미나제(AST) 및 혈청 알라닌 트랜스아미나제(ALT) ≤3x 정상의 상한(ULN), 또는 간기능 이상이 근원적인 암에 기인하는 경우 AST 및 ALT≤5x ULN
·종양에 부차적인 간 연루와 관계 없이 총 혈청 빌리루빈 ≤1.5x ULN. 길버트 증후군으로 인한 증가된 혈청 간접 빌리루빈(≤3x ULN)을 갖는 환자의 포함은 허용된다
·혈청 크레아티닌 ≤1.5x ULN
·QTc ≤460 msec
14. 피실험자(또는 법적으로 허용 가능한 대리인)에게 등록에 앞서 상기 시험의 모든 관련 태양들을 고지했음을 가리키는 서명 및 날짜를 알 수 있는 동의 문서
15. 예정된 방문, 치료 계획, 실험실 시험 및 다른 시험 과정에 응하는 의지 및 능력
제외 기준:
1. 치료되지 않았거나 증상을 보이는 CNS 전이. 주: 등록 전 12주 이내에 방사선사진상 안정한 치료되고 무증상인 CNS 전이를 갖는 환자는 허용될 것이나, 단 코르티코스테로이드의 장기간 사용은 등록 전 4주 이내에 중단했어야 한다
2. 자궁내막 질환
3. 진행된/전이성 환경에서 1년 초과의 선행 화학요법.
4. 진행된 질병에 대해 임의의 전신 항암 요법에 의해 현재 치료 중이거나 또는 또 다른 임상 시험상의 임의의 전신적인 실험 치료중임
5. 등록 전 2년 이내에 임의의 2차 암의 진단, 단 적절하게 치료된 기저세포 또는 편평세포 피부암, 또는 원위치 암종은 제외
6. 등록 전 12개월 이내에 하기 중 어느 하나: 심근 경색, 중증/불안정한 협십증, 등급 ≥2의 진행중인 부정맥, 임의의 등급의 심방 세동, 관상/말초 동맥 우회술, 증상을 보이는 울혈성 심부전, 또는 일시적인 허혈성 쇼크를 포함한 뇌혈관 장애
7. 활동성 염증성 장 질환 또는 만성 설사, 단장 증후군, 또는 위 절제를 포함한 상부 위장관 수술
8. 공지된 인간 면역결핍 바이러스 감염
9. 등록 전 4주 이내의 대수술 또는 방사선요법
10. 연구 참여 또는 연구 제품 투여와 관련된 위험을 증가시킬 수 있거나 또는 연구 결과의 해석을 방해할 수 있고 연구자의 판단에 피실험자를 본 연구에 참가시키기에 부적합하게 하는 다른 중증 급성 또는 만성 의학적 또는 정신병 병태 또는 실험 이상
종양 평가: 질병 평가를 수행할 것이다. 영상화 연구는 흉부, 복부 및 골반의 CT 스캔, + 골 스캔을 포함할 것이다. 객관적인 종양 반응 또는 질병 진행의 방사선사진 확인은 RECIST v1.1(문헌[Eisenhauser, 2009])에 기반할 것이다. 골 스캔상에서 검출된 새로운 골 병변의 경우, 2차 영상화 양식(예를 들어 CT 또는 MRI)이 진행의 확인에 필요할 것이다.
동일한 평가 방법 및 동일한 기법이 선별 및 추적 검사 동안 사용될 것이다. 정맥내(IV) 콘트라스트는 의학적으로 금기를 나타내는 경우 요구된다. IV 콘트라스트에 대한 금기를 갖는 환자들은 CT 대신에 수행된 복부 및 골반의 MRI 검사 및 흉부의 비-콘트라스트 CT를 가질 수 있다. 양전자 단층촬영(PET) 스캔에 의한 또는 초음파에 의한 종양 평가가 CT를 대용할 수는 없다.
상관 연구
18FES-PET 표적 연동을 갖는 약역학: [18F]-플루오로에스트라디올(FES) 양전자 단층촬영(PET)에 의한 영상화를 수행하여 종양에서의 ER 발현을 정량분석하고 (E)-3-(4-((E)-2-(2-클로로-4-플루오로페닐)-1-(1H-인다졸-5-일)부트-1-엔-1-일)페닐)아크릴산, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염에 의한 치료법에 대한 약역학적 반응에 대해 평가할 것이다. FES 흡수는 환자들간에 상이할 수 있지만, 일반적으로 상기 FES 흡수는 주어진 시점에서 병변들에 걸쳐 매우 일관되며, 평균 흡수는 개인 환자의 ER 발현의 합당한 요약을 제공한다. 표준화된 흡수값(SUV)에 영향을 미칠 수 있는 인자들, 예를 들어 성 호르몬-결합 글로불린(SHBG)이 표준 프로토콜(문헌[Peterson, 2011])에 따라 조절될 것이다. 또한, 사전에 타목시펜(적어도 2개월) 또는 풀베스트란트(적어도 6개월)로 치료된 환자들에 대한 세척 기간이, 각 약물의 긴 반감기 및 FES 흡수를 방해할 가능성으로 인해 필요할 수도 있다. FES-PET 연구가 약독화 교정 및 병변 국소화를 위한 하이브리드 PET/CT 영상화로서 수행될 것이다.
코어 생검: 치료 전후 종양 생검(연조직 또는 내장 병변)을 하기의 평가를 위해 수집할 것이다:
- 종양 조직학: 종양 대 기질, 대 섬유성 조직
- 면역조직화학 또는 면역형광에 의한 ERα 및 PR 단백질 수준
- 증식성 지수(Ki67)
- 모니터할 수 있는 ER 표적 유전자의 ER 표적 유전자 조절 예는 비제한적으로 AGR2, AREG, C3, CCND1, CXCL12, ERBB2, GREB1, IL6, IRS1, PDZK1, PGR, SEMA3B, TFF1, TFF2, TFF3, TOP2A, WISP2를 포함한다.
순환하는 종양 DNA(ctDNA): 모든 환자에서 용량 점증 및 용량 확대 동안 추가적인 혈액 샘플을, 선별시, 치료시 및 순환하는 종양 DNA(ctDNA)의 분석을 위한 연구 중단시에 수집할 것이다.
최근의 전임상 및 임상 데이터는 ER-α 및 포스파티딜이노시톨-4,5-비스포스페이트 3-키나제, 촉매 서브유닛 알파(PIK3CA) 중의 돌연변이가 내분비 내성 유방암과 관련있음을 암시한다. (E)-3-(4-((E)-2-(2-클로로-4-플루오로페닐)-1-(1H-인다졸-5-일)부트-1-엔-1-일)페닐)아크릴산, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염의 임상 활성과 내성 기전간의 잠재적 인과 관계에 대한 통찰을 얻기 위해서, 이들 유전자 모두의 돌연변이 상태를 진행된 DNA 분석 기법, 예를 들어 민감성, 유화 PCR-기반 BEAMing(비드, 유화, 증폭 및 자기학) 방법(문헌[Dressman, 2003]) 또는 차세대 서열분석을 사용하여 혈장으로부터 단리된 ctDNA에서 모니터할 것이다.
실시예 3: 임상적으로 관련된 ESR1 돌연변이에 대한 ERM 화합물 1-3(ARN-810)의 활성
본 연구의 목적은 아로마타제 억제제와 같은 항-호르몬요법에 대해 내성을 부여하는 것으로 제안된 임상적으로 관련된 에스트로젠 수용체 돌연변이에 대한 ERM 1-3, (E)-3-(4-((E)-2-(2-클로로-4-플루오로페닐)-1-(1H-인다졸-5-일)부트-1-엔-1-일)페닐)아크릴산의 효능을 평가하기 위한 것이었다. ERM 1-3의 효능 및 효력을 시험관내에서 ER 의존성 전사 리포터 분석 및 ER-α를 안정하게 발현하는 MCF-7 세포의 생육력 분석으로 측정하였다. ERM 1-3 활성을 임상적으로 관련된 ER-α 표적화 유방암 치료제 4-하이드록시타목시펜(타목시펜의 활성 대사산물) 및 풀베스트란트와 비교하였다. 세포-기반 전사 리포터 분석에서, ERM 1-3은 모든 시험된 ER-α 돌연변이(E380Q, L536R, L536P, Y537C, Y537N, Y537S 및 D538G)의 활성을 나노몰 효력으로 억제하였으며, 효능은 야생형 수용체에 대해 관찰된 경우에 접근하거나 이보다 컸다. ER-α 돌연변이체를 안정하게 발현하는 MCF-7 세포에서, ERM 1-3은 생육성 세포의 수를 상기 돌연변이 및 분석 포맷에 따라 44% 내지 78%(5일 증식 분석에서 DMSO 대조용에 비해)만큼 감소시켰다. 상기 리포터 및 증식 분석 모두에서, ERM 1-3은 야생형 ER-α에 비해 ESR1 돌연변이 패널 전체를 통해 0.8 내지 210배의 감소된 효력을 나타내었다. 그러나, 상기 전사 리포터 분석과 대조적으로, 상기 생육력 분석에서 ERM 1-3은 일반적으로 야생형 ER-α를 안정하게 발현하는 세포에 비해 감소된 효능을 나타내었다.
화합물 및 제형:
ERM 1-3을 WO 2012/037410, 실시예 36 및 WO 2012/037411, 실시예 50에 개시된 바와 같이 제조하였다. 상기 약물 물질 샘플은 >95% 순도(순도 평가: 핵자기 공명/액체 크로마토그래피-질량 분광분석)를 가졌으며 회색 분말이었다. 상기 분자의 나트륨 또는 N-메틸-D-글루카민염 형태가 사용되었다. ARN-810이 DMSO 중에 용해된 10 mM 모액으로서 공급되었으며 -20 ℃에서 보관되었다.
풀베스트란트(중성 형태)를 워터스톤 테크놀로지(Waterstone Technology)(WS10032)로부터 구입하였으며 무수 DMSO에 10 mM의 최종 농도로 재-현탁하고, 이어서 분배하여 -80 ℃에서 보관하였다.
4-하이드록시타목시펜을 시그마 알드리치(Sigma Aldrich)로부터 구입하였으며, 무수 DMSO에 10 mM의 최종 농도로 재-현탁하고, 이어서 분배하여 -80 ℃에서 보관하였다.
MCF-7 세포를 ATCC로부터 수득하였다(ATCC(등록상표) HTB-22(상표)). 상기 세포를 확대시키고 1회 계대배양 후에 액체 질소 중에 보관하였다. 동결된 세포의 바이알을 2개월마다 해동시켜 배양하고, 이어서 매주 2회 분할하였다. 해동된 세포를 임의의 분석에 사용하기 전에 상기 동결 과정으로부터 회복시키기 위해 2주간 배양하였다. 본 보고서에 상세히 설명된 분석에 사용되는 세포는 초기 해동으로부터 5 내지 2회 계대배양되었다.
세포 배양 생육 배지
코닝(Corning)(상표) 셀그로(cellgro)(상표) RPMI 1640(코닝, 카탈로그 번호 15-040)
페놀 레드 없는 코닝(상표) 셀그로(상표) RPMI 1640(코닝, 카탈로그 번호 17-105)
써모 사이언티픽(Thermo Scientific)(상표) 하이클론(HyClone)(상표) 소 태아 혈청(미국), 특성화된 - (FBS)(써모 사이언티픽 카탈로그 번호 SH3007103)
써모 사이언티픽(상표) 하이클론(상표) 소 태아 혈청(미국), 목탄/덱스트란 처리된 - (써모 사이언티픽 카탈로그 번호 SH3006803)
다른 시약
셀티터 글로(등록상표) 시약(프로메가, 카탈로그 번호 G7572)
분석 플레이트, 384 웰, 뚜껑있음, 편평 바닥, 낮은 플랜지, 조직 배양물 처리된, 멸균, 백색 폴리스타이렌. (코닝, 카탈로그 번호 3570)
다이메틸 설폭사이드, 무수(시그마 알드리치, 카탈로그 번호 276855-100 ㎖)
매트릭스 12 채널 전자 피펫, 0.5 내지 12.5 ㎕, 2 내지 125 ㎕, 및 매트릭스 8 채널 전자 피펫, 15 내지 1250 ㎕
96-웰 TC-처리된 멸균 폴리스타이렌 플레이트(코닝 인코포레이티드, 카탈로그 번호 3903, 3904 또는 3917)
리포펙틴(인비트로젠, 카탈로그 번호 18292037)
D-루시페린, 칼륨염(골드 바이오테크놀로지(Gold Biotechnology), 카탈로그 번호 LUCK-500)
퍼킨 엘머 엔비젼(Perkin Elmer EnVision) 2103(상표) 멀티라벨 리더
몰레큘라 디바이시즈 애널리스트(Molecular Devices Anaylst)(상표) GT 멀티모드 리더
라이케르트 브라이트 라인(Reichert Bright-Line)(등록상표) 개선된 노이바우어(Neubauer) 혈구계(하우저 사이언티픽(Hausser Scientific), 카탈로그 번호 1490)
통계학적 분석: 곡선 적합 및 IC50 및 Emax 값들을 그래프패드 프리즘(GraphPad Prism) 버전 6.01 및 마이크로소프트 오피스 엑셀(Microsoft Office Excel)(2010)을 사용하여, 로그(억제제) 대 반응 변수 기울기(4개 매개변수) 곡선 적합을 사용하는 그래프패드 프리즘(등록상표) 소프트웨어로 생성시켰다.
실시예 4: ER-α 전사 리포터 분석
MCF-7 세포를 10% FCS가 보충된 RPMI 1640에서 유지시켰다. 전사 분석을, 100 ㎕의 세포를 10% 목탄 스트립핑된 혈청이 보충된 RPMI 1640 중에 96-웰 세포 배양 플레이트에서 250,000 세포/㎖의 밀도로 시딩하여 수행하고 밤새 부착되게 하였다. 세포를 제조사의 프로토콜에 따라 리포펙틴(라이프 테크놀로지스)을 사용하여 일시 형질감염시켰다. 3중 형질감염을 180 ng 3X ERE-TK-Luc(리포터 벡터), 30 ng pRL-CMV(표준화 백터) 및 270 ng pCDNA ER-α(또는 ER-α 돌연변이)를 사용하여 수행하였다. 형질감염된 세포를 밤새 배양하고 이어서 리간드로 처리하였다. ER 작용물질 분석을 위해서, 상기 화합물을 연속 희석하고 50 ㎕의 화합물 + 목탄 스트립핑된 혈청이 보충된 RPMI 1640을 상기 세포에 가하였다.
ER 길항물질 분석을 위해서, 상기 화합물을 연속 희석하고 50 ㎕의 화합물 + 목탄 스트립핑된 혈청이 보충된 RPMI 1640 중의 3 nM 17β-에스트라디올을 상기 세포에 가하였다. 24시간 배양에 이어서, 상기 배지를 제거하고 상기 세포를 40 ㎕의 용해 완충제(25 mM 트리스 포스페이트, 2 mM CDTA, 10% 글리세롤, 0.5% 트리톤 X-100, 2 mM DTT)에 용해시켰다.
개똥벌레 루시페라제 활성을 40 ㎕ 루시페라제 완충제(20 mM 트리신, 0.1 mM EDTA, 1.07 mM(MgCO3)4 Mg(OH)2·5H2O, 2.67 mM MgSO4, 33.3 mM DTT, 270 μM 조효소 A, 470 μM 루시페린, 530 μM ATP)의 첨가 직후에 측정하였다. 레닐라 루시페라제를 40 ㎕ 코엘렌테라진 완충제(1.1 M NaCl, 2.2 mM Na2EDTA, 0.22 M KχPO4(pH 5.1), 0.44 ㎎/㎖ BSA, 1.3 mM NaN3, 1.43 μM 코엘렌테라진, 5.0으로 조절된 최종 pH)의 첨가에 이어서 측정하였다. 각 화합물의 최대의 상대적인 작용물질 활성을 하기와 같이 그래프화된 각 돌연변이 수용체에 대한 용량 반응 곡선의 기부로부터 유도하였다: RLU 샘플/RLU wtER-α DMSO = 상대 활성.
MCF-7 돌연변이 ER-α 안정성 세포주 생성: 야생형 또는 ER-α 돌연변이체를 안정하게 발현하는 MCF-7 세포를, 아미노 말단 헤마글루티닌 태그를 함유하는 ESR1 야생형 및 돌연변이 cDNA를 pCDH-EF1-MCS-(PGK-퓨로)(EF1 HA-ER-α라 칭한다) 및 pCDH-UbC-MCS-EF1-하이그로(Hygro)(Ubc HA-ER-α라 칭한다)(시스템 바이오사이언시즈(System Biosciences)) 내로 서브클로닝함으로써 생성시켰다. 빈 벡터 음성 대조용 외에, 상기 생성 플라스미드를 후속으로 제조사의 프로토콜에 따라 pPACKH1 패키징 플라스미드 혼합물(시스템 바이오사이언시즈)과 함께 HEK293T 세포내로 공형질감염시켰다. 형질감염 4일 후에 렌티바이러스 입자를 상기 세포 배지로부터 정제시키고, 겹쳐 놓아 -80 ℃에서 보관하였다. MCF-7 세포를 정제된 바이러스 입자로 형질도입시키고 안정한 세포주를, 각각 pCDH-EF1-MCS-(PGK-퓨로) 및 pCDH-UbC-MCS-EF1-하이그로에 대해 10% FBS + 1 μG/㎖ 퓨로마이신 또는 200 μG/㎖ 하이그로마이신을 함유하는 RPMI에서 생육에 의해 선택하였다. 선택에 이어서, 야생형 및 돌연변이 ER-α의 발현을 6E2 마우스 단클론 HA 항체(셀 시그널링(Cell Signaling))를 사용하여 웨스턴 블럿에 의해 확인하였다.
MCF-7 안정성 세포주 생육력: MCF-7 세포를 NEAA 및 나트륨 피루베이트와 함께 10% CSS를 함유하는 무페놀 RPMI 중 ㎖당 40,000 세포의 농도로 조절된 혈구계로 세었다. 16 마이크로리터의 상기 세포 현탁액을 매트릭스 16 채널 전자 피펫을 사용하여 384 웰 조직 배양물 처리된 백색 투명 바닥 폴리스타이렌 플레이트(코닝)의 각 웰에 가하였다. 상기 세포를 밤새 배양하여 상기 세포가 부착되게 하였다. 다음날, NEAA 및 나트륨 피루베이트와 함께 10% CSS를 함유하는 무페놀 RPMI 16 마이크로리터를 하나의 플레이트의 웰들에 가한 다음, 매트릭스 16 채널 전자 피펫을 사용하여 16 ㎕의 셀티터 글로(프로메가, 미국 위스콘신주 매디슨 소재) 발광 세포 생육력 시약을 가하였다. 실온에서 20분 배양에 이어서, 발광을 퍼킨 엘머 엔비젼 2103 멀티라벨 리더상에서 6.5 ㎜로 고정된 발광 측정 높이 및 1초의 최대 적분시간으로 측정하였다. 상기 웰들의 상대 발광 단위(RLU)의 "평균"은 시간 = 0에서의 기준선 값으로 간주된다. 또한, DMSO(시그마 알드리치) 중의 10점, 1:5 연속 희석을, 양성 대조용으로서 DMSO만을 포함하는 매트릭스 12 채널 전자 피펫을 사용하여 수행하였다. 이어서 4 ㎕의 각 희석물을 NEAA 및 나트륨 피루베이트와 함께 10% CSS를 함유하는 196 ㎕의 RPMI에 가하였다. 16 ㎕의 화합물 함유 배지를 10 μM 내지 5 pM 범위의 최종 농도로 상기 세포에 가하였다. 배지 중의 화합물 희석 및 세포에의 후속 첨가를 매트릭스 12 채널 전자 피펫을 사용하여 수행하였다. 5일 화합물 노출 후에, 16 ㎕의 셀티터 글로(프로메가, 미국 위스콘신주 매디슨 소재) 발광 세포 생육력 시약을 매트릭스 16 채널 전자 피펫을 사용하여 상기 세포에 가하였다. 세포 없이 32 ㎕의 배지에 첨가된 셀티터 글로를 사용하여 배경 값을 획득하였다. 발광을 퍼킨 엘머 엔비젼 2103 멀티라벨 리더상에서 0 ㎜로 고정된 발광 측정 높이 및 0.1초의 최대 적분시간으로 측정하였다. 각 웰의 상대 발광 단위(RLU)를 측정하고, 각 샘플의 상대 증식(배수)을 하기와 같이 측정하였다: (RLU 샘플 - RLU 배경)/(T=0에서의 RLU) = 상대 증식
실시예 5: 화합물 1-3(ARN-810) 및 ER 전사 리포터 분석
임상적으로 관련된 ESR1 돌연변이(E380Q, L536R, L536P, Y537C, Y537N, Y537S 및 D538G)의 전사 활성에 대한 화합물 1-3(ARN-810), 4-하이드록시타목시펜 및 풀베스트란트 효과를 야생형 ER-α 또는 ER-α 돌연변이체를 일시적으로 발현하는 MCF-7 유방암 세포에서 평가하였다. MCF-7 세포를 ER 반응성 전사 리포터 + 야생형 또는 돌연변이 ER-α 발현 플라스미드로 일시적으로 형질감염시키고, 0.1 pM 내지 10 μM 범위의 ARN-810, 4-하이드록시타목시펜 또는 풀베스트란트 또는 0.1 pM 내지 1 μM 범위의 17β-에스트라디올로 처리하였다. 상기 화합물의 잠재적인 작용물질 활성을 평가하기 위해서, 상기 세포를 에스트라디올의 부재하에서 처리하였다. 길항물질 분석을 1 nM 에스트라디올의 존재하에서 실행하였다. 표 6에 나타낸 바와 같이, 에스트라디올의 부재하에서, 분석된 임상 돌연변이는 모두 ARN-810, 4-하이드록시타목시펜 및 풀베스트란트에 의해 야생형에 접근하는 수준으로 억제되는 검출 가능한 리간드-독립적인 활성을 나타낸다. 모든 길항물질은 시험된 돌연변이에 대해 나노몰 효력을 유지한다(표 7). 그러나, 몇 가지를 제외하고(E380Q 및 L536P에대한 4-하이드록시타목시펜 활성), 작용물질 방식으로, 모든 길항물질은 야생형 ER-α에 비해 상기 돌연변이 수용체에 대한 효력의 적당한 감소(1.1 내지 61배)를 나타내며, 이때 Y537S 돌연변이에 대해 ARN-810의 경우 최대 61배가 관찰되었다. 효능에 대한 유사한 효과들이, 상기 ESR1 돌연변이(L536R, Y537C, Y537N, Y537S 및 D538G)의 부분집합을 길항물질 방식 전사 분석에서 분석시 관찰되었다. 그러나, 에스트라디올의 존재하에서 ARN -810에 대해 관찰된 효력 이동은 덜 현저하였다. 구체적으로, 상기 임상적으로 관련된 돌연변이들에 대해서 ARN-810 IC50은 0.8 내지 1.7배로 변하였으며 최대 효능은 상기 야생형 수용체에 대해 관찰된 효능에 접근하였다(표 8 및 9).
[표 6]
Figure pct00094
[표 7]
Figure pct00095
[표 8]
Figure pct00096
[표 9]
Figure pct00097
생육력 분석: 환자들에서 확인된 구성적으로 활성인 ER-α 돌연변이의 리간드-독립적인 증식 활성을 길항하는 ARN-810의 능력을 평가하기 위해서, 야생형, E380Q, L536P, L536R, Y537N, Y537S, Y537C 및 D538G 아미노-말단 헤마글루티닌-태그된 ER-α(HA-ER-α)를 안정하게 발현하는 MCF-7 세포주를 생성시켰다. ER-α 과발현은 리간드-독립적인 생육을 유도할 수 있고 또한 포화시킬 수 있기 때문에 ER-α 발현을 구동하기 위해서 리간드 매개된 분해 경로 독립적인 안정한 세포주를 상기 UbC 및 EF1 프로모터를 사용하여 각각의 수용체에 대해 생성시켰다(문헌[Li S, , et al. Cell Rep (2013); 4(6): 1116-1130]; 문헌[Wardell SE, et al. Biochem Pharmacol (2011); 82(2): 122-130]). 상기 UbC 프로모터는 제조사(시스템 바이오사이언시즈)에 의해, RNA 수준을 낮게 내지 보통으로 발현하는 반면 상기 EF1 프로모터는 높은 수준을 발현하는 것으로 보고된다(시스템 바이오사이언시즈). 정량적인 웨스턴 블럿 분석에 의해 측정되는 바와 같이, 상기 UbC 기반 세포주는 HA-ER-α 단백질을 내인성 ER-α의 10% 미만의 수준으로 발현한다. 다른 한편으로, 상기 EF1 프로모터 기반 주는 HA-ER-α 및 돌연변이체를 상기 내인성 단백질보다 2 내지 6배 더 높은 수준으로 발현한다.
상기 전사 리포터 분석에서 상기 임상적으로 확인된 MCR-7 세포 중의 ER-α 돌연변이체의 활성과 일치하게, 상기 UbC 또는 EF1 프로모터에 의한 상기 돌연변이체의 발현은 상기 세포에 17β-에스트라디올의 부재하에서 증식하는 능력을 부여하였다(표 10 및 14). 그러나, 상기 EF1 프로모터를 사용하여 획득한 야생형 ER-α 발현의 높은 수준(내인성 단백질 수준보다 대략 2 내지 3배 더)은 또한 리간드 독립적인 생육을 촉진하기에 충분하였다.
상기 UbC 프로모터 기반 세포주에서, 화합물 1-3(ARN-810), 4-하이드록시타목시펜 및 풀베스트란트는 야생형, E380Q, L536P, L536R, Y537N, Y537S, Y537C 및 D538G HA-ER-α를 안정하게 발현하는 세포주의 증식을 작용물질 및 길항물질 모드 둘 다로 길항하였다(표 10 및 12). 상기 풀베스트란트 및 ARN-810은 유사한 효능(각각 상기 작용물질 및 길항물질 모드에 대해서 47% 내지 67% 및 71% 내지 78% 억제 범위)을 나타내는 반면 4-하이드록시타목시펜은 시험된 모든 돌연변이에 대해 감소된 효능을 나타내었다. 작용물질 및 길항물질 모드에서 3개의 길항물질은 모두 상기 UbC HA-ER-α 돌연변이 세포주에 대해서 높은 피코몰 내지 낮은 나노몰의 IC50을 나타내었다(표 11 및 13). 작용물질 모드에서, 상기 UbC 야생형 HA-ER-α 세포주는 정확한 IC50을 유도하기에 충분히 증식하지 않았으나, 길항물질 모드에서 모든 길항물질은 야생형 ER-α에 비해 알맞은 효력 감소를 나타낸다(1.3 내지 5.4배, 표 13).
상기 EF1-유도된 주에서, 작용물질 모드로, 모든 길항물질은 야생형에 비해 돌연변이 수용체상에서 감소된 효력을 나타낸다(각각 4-하이드록시타목시펜, 풀베스트란트 및 ARN-810에 대해서 8- 내지 140배, 2- 내지 47배 및 2- 내지 210배). 추가로, ARN-810은 풀베스트란트 및 4-하이드록시타목시펜 모두에 비해 상기 Y537 돌연변이체상에서 감소된 효능을 나타내었다(표 15 및 16). 길항물질 효력 및 효능의 유사한 관찰이, 상기 증식 분석을 길항물질 모드로 수행시 관찰되었다(표 16 및 17). 그러나, 17β-에스트라디올의 존재하에서, 상기 야생형과 돌연변이 HA-ER-α 함유 세포주간의 길항물질 효능의 차이는 상기 EF-1 작용물질 분석에서 관찰된 경우보다 덜 현저하였다(최대 15배).
[표 10]
Figure pct00098
[표 11]
Figure pct00099
[표 12]
Figure pct00100
[표 13]
Figure pct00101
[표 14]
Figure pct00102
[표 15]
Figure pct00103
[표 16]
Figure pct00104
[표 17]
Figure pct00105
결론: 화합물 1-3(ARN-810)은 세포-기반 전사 리포터 및 세포 생육력 분석에서 임상적으로 관련된 ESR1 돌연변이, E380Q, L536R, L536P, Y537C, Y537N, Y537S 및 D538G의 활성을 억제한다. ARN-810은 ER-의존성 전사 리포터 분석에서 상기 ESR1 돌연변이 모두의 전사 활성을 야생형 수용체에 대해 관찰되는 것에 접근하는 수준으로 억제하였다. UBC 프로모터를 통해 상기 ER-α 돌연변이체를 안정하게 발현하는 MCF-7 세포에서, ARN-810은 생육성 세포의 수를 DMSO 대조용에 비해 47% 내지 78%까지 감소시켰다. ARN-810이 상기 분석에서 나노몰 효력을 나타내지만, ARN-810은 야생형에 비해 돌연변이 ER-α상에서 1.3 내지 2.7배 감소된 효력을 나타내었다. 환언하면, 상기 ER-α 돌연변이체가 상기 EF1 프로모터를 통해 과발현되는 경우, ARN-810은 야생형 수용체에 비해 효력의 0.6 내지 210배 감소를 나타내고, 4-하이드록시타목시펜 및 풀베스트란트의 경우에 비해 감소된 최대 효능(Emax) 반응을 나타낸다.
실시예 6: 임상적으로 관련된 ESR1 돌연변이에 대한 ERM 화합물 4-23의 활성
본 연구의 목적은 아로마타제 억제제와 같은 항-호르몬 요법에 내성을 부여하는 것으로 제안된 임상적으로 관련된 에스트로젠 수용체 돌연변이에 대한 ERM 4-23, (S)-2-(4-(2-(3-(플루오로메틸)아제티딘-1-일)에톡시)페닐)-3-(3-하이드록시페닐)-4-메틸-2H-크로멘-6-올, 표 4의 효능을 평가하기 위한 것이었다. ERM 4-23의 효력 및 효능을 시험관내에서 ER-α 돌연변이체를 안정하게 발현하는 MCF-7 세포의 ER 의존성 전사 리포터 분석 및 생육력 분석에서 측정하였다. ERM 4-23 활성을 임상적으로 관련된 ER-α 표적화 유방암 치료제 4-하이드록시타목시펜(타목시펜의 활성 대사산물) 및 풀베스트란트와 비교하였다. 세포-기반 전사 리포터 분석에서, ERM 4-23은 모든 시험된 ER-α 돌연변이(E380Q, L536R, L536P, Y537C, Y537N, Y537S 및 D538G)의 활성을 나노몰 효력으로 억제하였으며, 효능은 야생형 수용체에 대해 관찰된 경우에 접근하였다. 유사하게, ER-α 돌연변이체를 안정하게 발현하는 MCF-7 세포에서, ERM 4-23은 생육성 세포의 수를 상기 돌연변이 및 분석 포맷에 따라 49% 내지 90%(DMSO 대조용에 비해)까지 감소시켰다. 그러나, 상기 두 분석 모두에서, ERM 4-23은 야생형 ER-α에 비해 ESR1 돌연변이 패널 전체를 통해 0.7 내지 23배의 감소된 효력을 나타내었다.
실시예 3에서와 같이, 본 연구의 목적은 임상적으로 관련된 ER-α 돌연변이에 대한 ERM 4-23의 활성을 측정하기 위한 것이었다. ERM 4-23 활성을, 야생형 또는 돌연변이 ER-α(알파)를 안정하게 발현하는 MCF-7 세포의 ER-α 전사 리포터 및 세포 생육력에서 모니터하였다.
ERM 4-23을 WO 2014/025138에 개시된 바와 같이 제조하였다. 상기 분자의 하이드로클로라이드염 형태를 사용하였다. 상기 약물 물질 샘플은 >95% 순도(순도 평가: 핵자기 공명/액체 크로마토그래피-질량 분광분석)를 가졌으며 회색 분말이었다. ERM 4-23을 10 mM 모액으로서 다이메틸 설폭사이드(DMSO)에 용해시키고 -20 ℃에서 보관하였다. 다른 화합물 및 제형들을 실시예 3에 개시된 바와 같이 사용하였다.
임상적으로 관련된 ESR1 돌연변이(E380Q, L536R, L536P, Y537C, Y537N, Y537S 및 D538G)의 전사 활성에 대한 ERM 화합물 4-23, 하이드록시타목시펜, 및 풀베스트란트 효과를 실시예 5에서와 같이 야생형 ER-α 또는 ER-α 돌연변이체를 일시적으로 발현하는 MCF-7 유방암 세포에서 평가하였다. MCF-7 세포를 ER 반응성 전사 리포터 + 야생형 또는 돌연변이 ER-α 발현 플라스미드로 일시적으로 형질감염시키고, 0.1 pM 내지 10 μM 범위의 ERM 4-23, 4-하이드록시타목시펜 또는 풀베스트란트 또는 0.1 pM 내지 1 μM 범위의 17β-에스트라디올로 처리하였다. 상기 화합물들의 잠재적인 작용물질 활성을 평가하기 위해서, 상기 세포를 에스트라디올의 부재하에서 처리하였다. 길항물질 분석을 1 nM 에스트라디올의 존재하에서 실행하였다. 표 18에 나타내는 바와 같이, 에스트라디올의 부재하에서, 분석된 임상적 돌연변이는 모두, ERM 4-23, 4-하이드록시타목시펜 및 풀베스트란트에 의해 야생형에 접근하는 수준으로 억제된 검출 가능한 리간드-독립적인 활성을 나타낸다. 모든 길항물질은 시험된 돌연변이에 대해서 나노몰 효력을 유지한다(표 19). 그러나, 몇 가지를 제외하고(E380Q 및 L536P에 대한 4-하이드록시타목시펜 활성), 작용물질 모드로, 모든 길항물질은 야생형 ER-α에 비해 상기 돌연변이 수용체에 대한 효력의 적당한 감소(1.1 내지 5.9배)를 나타내며, 이때 Y537S 돌연변이에 대해 ERM 4-23의 경우 최대 5.9배가 관찰되었다. 효능 및 효력에 대한 유사한 효과들이, 상기 ESR1 돌연변이(L536R, Y537C, Y537N, Y537S 및 D538G)의 부분집합을 길항물질 모드 전사 분석에서 분석시 관찰되었다. 구체적으로, 상기 임상적으로 관련된 돌연변이들에 대해서 ERM 4-23 IC50은 2.2 내지 10.2배로 증가하였으나 최대 효능은 상기 야생형 수용체에 대해 관찰된 효능에 접근하였다(표 20 및 21).
[표 18]
Figure pct00106
[표 19]
Figure pct00107
[표 20]
Figure pct00108
[표 21]
Figure pct00109
생육력 분석: 환자들에서 확인된 구성적으로 활성인 ER-α 돌연변이의 리간드-독립적인 증식 활성을 길항하는 ERM 4-23의 능력을 평가하기 위해서, 야생형, E380Q, L536P, L536R, Y537N, Y537S, Y537C 및 D538G 아미노-말단 헤마글루티닌-태그된 ER-α(HA-ER-α)를 안정하게 발현하는 MCF-7 세포주를 생성시켰다. ER-α 과발현은 리간드-독립적인 생육을 유도할 수 있고 또한 포화시킬 수 있기 때문에 ER-α 발현을 구동하기 위해서 리간드 매개된 분해 경로 독립적인 안정한 세포주를 상기 UbC 및 EF1 프로모터를 사용하여 각각의 수용체에 대해 생성시켰다. 상기 UbC 프로모터는 제조사(시스템 바이오사이언시즈)에 의해, RNA 수준을 낮게 내지 보통으로 발현하는 반면 상기 EF1 프로모터는 높은 수준을 발현하는 것으로 보고된다(시스템 바이오사이언시즈). 정량적인 웨스턴 블럿 분석에 의해 측정되는 바와 같이, 상기 UbC 기반 세포주는 HA-ER-α 단백질을 내인성 ER-α의 10% 미만의 수준으로 발현한다. 다른 한편으로, 상기 EF1 프로모터 기반 주는 HA-ER-α 및 돌연변이체를 상기 내인성 단백질보다 2 내지 6배 더 높은 수준으로 발현한다.
상기 전사 리포터 분석에서 상기 임상적으로 확인된 MCR-7 세포 중의 ER-α 돌연변이체의 활성과 일치하게, 상기 UbC 또는 EF1 프로모터에 의한 상기 돌연변이체의 발현은 상기 세포에 17β-에스트라디올의 부재하에서 증식하는 능력을 부여하였다(표 22 및 26 5). 그러나, 상기 EF1 프로모터를 사용하여 획득한 야생형 ER-α 발현의 높은 수준(내인성 단백질 수준보다 대략 2 내지 3배 더)은 또한 리간드 독립적인 생육을 촉진하기에 충분하였다. 작용물질 모드에서, ERM 4-23, 4-하이드록시타목시펜 및 풀베스트란트는 야생형, E380Q, L536P, L536R, Y537N, Y537S, Y537C 및 D538G HA-ER-α를 안정하게 발현하는 MCF-7 세포주의 증식을 길항하였다(표 22 및 26). 상기 풀베스트란트 및 ERM 4-23은 유사한 효능(각각 상기 UbC 및 EF1-유도된 주에 대해서 47% 내지 66% 및 42% 내지 96% 억제 범위)을 나타내는 반면 4-하이드록시타목시펜은 시험된 모든 돌연변이에 대해 감소된 효력을 나타내었다. 작용물질 모드에서 3개의 길항물질은 모두 상기 UbC HA-ER-α 돌연변이 세포주에 대해서 높은 피코몰 내지 낮은 나노몰의 IC50 및 EF1-유래된 주에서 낮은 나노몰 효력을 나타내었다(표 23 및 27). 상기 UbC 야생형 HA-ER-α 세포주는 E2의 부재하에서 정확한 IC50을 유도하기에 충분히 증식하지 않았으나, EF1-유래된 주에서 모든 길항물질은 야생형에 비해 돌연변이 수용체상에서 감소된 효력을 나타낸다(각각 4-하이드록시타목시펜, 풀베스트란트 및 ERM 40-23에 대해서 8- 내지 140배, 2- 내지 47배 및 0.7 내지 24배). 길항물질 효능 및 효력의 유사한 관찰이, 상기 증식 분석을 길항물질 모드로 수행시 관찰되었다(표 24, 25, 28, 29). 그러나, 17β-에스트라디올의 존재하에서, 상기 야생형과 돌연변이 HA-ER-α 함유 세포주간의 길항물질 효능의 차이는 상기 EF-1 작용물질 분석에서 관찰된 경우보다 덜 현저하였다(최대 13배).
[표 22]
Figure pct00110
[표 23]
Figure pct00111
[표 24]
Figure pct00112
[표 25]
Figure pct00113
[표 26]
Figure pct00114
[표 27]
Figure pct00115
[표 28]
Figure pct00116
[표 29]
Figure pct00117
결론: ERM 4-23은 세포-기반 전사 리포터 및 세포 생육력 분석에서 임상적으로 관련된 ESR1 돌연변이, E380Q, L536R, L536P, Y537C, Y537N, Y537S 및 D538G의 활성을 억제한다. ERM 4-23은 ER-의존성 전사 리포터 분석에서 상기 ESR1 돌연변이 모두의 전사 활성을 야생형 수용체에 대해 관찰되는 것에 접근하는 수준으로 억제하였다. ER-α 돌연변이를 안정하게 발현하는 MCF-7 세포에서, ERM 4-23은 생육성 세포의 수를 DMSO 대조용에 비해 49% 내지 90%만큼 감소시켰다. ERM 4-23이 상기 분석에서 낮은 나노몰 효력을 나타내지만, ERM 4-23은 야생형에 비해 돌연변이 ER-α상에서 0.7 내지 24배 감소된 효력을 나타내었다. ERM 4-23은 4-하이드록시타목시펜 및 풀베스트란트와 유사한 IC50 효력, 및 풀베스트란트의 경우와 유사한 최대 효능(Emax) 반응을 나타낸다.
실시예 7: 시험관내 세포 증식 분석
에스트로젠 수용체 조절제 화합물 및 화학요법 화합물의 효능을 하기의 프로토콜을 사용하는 세포 증식 분석에 의해 측정한다(문헌[Mendoza et al(2002) Cancer Res. 62:5485-5488]).
셀티터 글로(등록상표) 발광성 세포 생육력 분석은 대사적으로 활성인 세포의 존재를 신호하는, 존재하는 ATP의 정량분석에 기반한 배양물 중의 생육성 세포의 수를 측정하는 동종 방법이다. 상기 셀티터 글로(등록상표) 분석은, 다중웰 플레이트 포맷과 함께 사용하여, 자동화된 대량 처리량 선별(HTS), 세포 증식 및 세포독성 분석에 적합하도록 설계된다. 상기 동종 분석 과정은 단일 시약(셀티터 글로(등록상표) 시약)을 혈청-보충된 배지에서 배양된 세포에 직접 가하는 것을 포함한다. 세포 세척, 배지의 제거 또는 다중 피펫팅 단계는 필요하지 않다. 시약 및 프로토콜을 포함하여, 상기 셀티터 글로(등록상표) 발광성 세포 생육력 분석을 상업적으로 입수할 수 있다(프로메가 코포레이션(미국 위스콘신주 매디슨 소재), 기술 회보 TB288).
상기 분석은 세포에 진입하여 세포 증식을 억제하는 화합물의 능력을 평가한다. 상기 분석 원리는 상기 셀티터 글로(등록상표) 시약의 첨가가 세포 용해 및 루시페라제 반응을 통한 발광 신호의 발생을 생성시키는 동종 분석에서, 존재하는 ATP를 정량분석함으로써 존재하는 생육성 세포의 수를 측정함을 기본으로 한다. 상기 발광 신호는 존재하는 ATP의 양에 비례한다.
과정: 제1일 - 세포 플레이트(384 웰 흑색, 투명 바닥, 마이크로클리어, 뚜껑이 있는 TC 플레이트, 팔콘(Falcon)으로부터 #353962) 시딩, 세포 수확, 3일의 분석 동안 384 웰 세포 플레이트내로 웰당 54 ㎕당 1000개 세포로 세포 시딩. 세포 배양 배지: RPMI 또는 DMEM 고 글루코스, 10% 소 태아 혈청, 2 mM L-글루타민, P/S. 37 ℃, 5% CO2에서 O/N(밤새) 배양.
제2일 - 세포에 약물 첨가, 화합물 희석, DMSO 플레이트(9개 점에 대해서 연속 1:2). 96 웰 플레이트의 두 번째 컬럼에서 10 mM의 화합물 20 ㎕ 첨가. 넝크(Nunc)(카탈로그 #249946)로부터의 정밀 배지 플레이트 96-웰 원추 바닥 폴리프로필렌 플레이트를 사용하여 총 9개 점에 대해서 상기 플레이트(10 ㎕ + 20 ㎕ 100% DMSO) 전체를 통해 연속해서 1:2로 수행(1:50 희석). 147 ㎕의 배지를 모든 웰에 첨가. 래피드플레이트(Rapidplate)(등록상표)(캘리퍼, 퍼킨 엘머 캄파니)를 사용하여 상기 DMSO 플레이트 중의 각 웰로부터 배지 플레이트상의 각각의 상응하는 웰로 3 ㎕의 DMSO + 화합물을 옮김. 2개 약물 조합 연구의 경우, 하나의 약물 1.5 ㎕의 DMSO + 화합물을 상기 DMSO 플레이트 중의 각 웰로부터 래피드플레이트를 사용하여 배지 플레이트상의 각각의 상응하는 웰로 옮김. 이어서 또 다른 약물 1.5 ㎕를 상기 배지 플레이트로 옮김.
세포, 세포 플레이트에 약물 첨가(1:10 희석): 6 ㎕의 배지 + 화합물을 세포에 직접 첨가(이미 상기 세포상에 54 ㎕의 배지). 배양기(종종 개방되지 않을 것이다) 중에서 37 ℃, 5% CO2에서 3일 배양.
제5일 - 플레이트 전개, 실온에서 셀티터 글로 완충제 해동: 세포 플레이트를 37 ℃로부터 제거하고 약 30분 동안 실온으로 평형화시킴. 셀티터 글로(등록상표) 완충제를 셀티터 글로(등록상표) 기질에 첨가(병에서 병으로). 30 ㎕의 셀티터 글로(등록상표) 시약(프로메가 카탈로그 #G7572)을 세포의 각 웰에 첨가. 플레이트 진탕기상에 약 30분간 둠. 어낼리스트(Analyst) HT 플레이트 판독기상에서 발광 판독(웰당 1/2초).
세포 생육력 분석 및 병용 분석: 세포를 16시간 동안 384-웰 플레이트에서 1000 내지 2000 세포/웰로 시딩하였다. 제2일에, 9개의 일련의 1:2 화합물 희석을 96 웰 플레이트에서 DMSO 중에서 수행하였다. 상기 화합물을 래피드플레이트(등록상표) 로봇(자이마크 코포레이션(Zymark Corp.), 미국 매사추세츠주 홉킨톤 소재)을 사용하여 생육 배지로 추가 희석하였다. 이어서 상기 희석된 화합물을 384-웰 세포 플레이트 중의 4중 웰에 가하고 37 ℃ 및 5% CO2에서 배양하였다. 4일 후에, 생육성 세포의 상대적인 수를 제조사의 설명에 따라 셀티터 글로(등록상표)(프로메가)를 사용하여 발광에 의해 측정하고 왈락 멀티라벨 리더(Wallac Multilabel Reader)(등록상표)(퍼킨엘머, 미국 포스터 시티 소재)상에서 판독하였다. EC50 값을 프리즘(등록상표) 4.0 소프트웨어(그래프패드, 미국 샌디에고 소재)를 사용하여 계산하였다. 병용 분석에서 약물들을 4X EC50 농도로 출발하여 투여하였다. 상기 약물의 EC50이 >2.5 μM인 경우에, 사용된 최고 농도는 10 μM이었다. 에스트로젠 수용체 조절제 화합물 및 화학요법제를 모든 분석에서 동시에 또는 4시간까지 분리하여(하나 뒤에 다른 하나) 첨가하였다.
추가의 예시적인 시험관내 세포 증식 분석은 하기의 단계들을 포함한다:
1. 배지 중에 약 104 세포(세포주 및 종양 유형에 대해서 표 3을 참조하시오)를 함유하는 100 ㎕의 세포 배양물의 분액을 384-웰, 불투명벽 플레이트의 각 웰에 놓았다.
2. 배지를 함유하고 세포는 없는 대조용 웰을 제조하였다.
3. 상기 화합물을 상기 실험 웰에 가하고 3 내지 5일간 배양하였다.
4. 상기 플레이트를 대략 30분 동안 실온으로 평형화시켰다.
5. 각 웰 중에 존재하는 세포 배양 배지의 부피와 동일한 부피의 셀티터 글로(등록상표) 시약을 가하였다.
6. 상기 내용물을 2분 동안 궤도 진탕기상에서 혼합하여 세포 용해를 유도하였다.
7. 상기 플레이트를 실온에서 10분 동안 배양하여 발광 신호를 안정화시켰다.
8. 발광을 기록하고 그래프에 RLU = 상대 발광 단위로서 보고하였다.
9. 병용 지수를 획득하기 위해서 쵸우와 탈랄레이(Chow and Talalay) 병용 방법 및 CalcuSyn(등록상표) 소프트웨어(바이오소프트(Biosoft), 영국 캠브리지 소재)에 의한 용량-효과 분석을 사용하여 분석한다.
한편으로, 세포를 96 웰 플레이트에 최적 밀도로 시딩하고 시험 화합물의 존재하에서 4일 동안 배양하였다. 알라마 블루(Alamar Blue)(상표)를 후속으로 상기 분석 배지에 가하고, 세포를 6시간 동안 배양한 후에 544 ㎚에서 여기, 590 ㎚에서 방출을 판독하였다. EC50 값을 s자 용량 반응 곡선 적합을 사용하여 계산하였다.
한편으로, 증식/생육력을 셀티터 글로(등록상표) 시약(프로메가 인코포레이티드, 미국 위스콘신주 매디슨 소재)을 사용하여 48시간의 약물 처리 후 분석하였다. DMSO 처리를 모든 생육력 분석에서 대조용으로서 사용하였다. IC50 값을 XL 적합 소프트웨어(IDBS, 미국 캘리포니아주 알라메다 소재)를 사용하여 계산하였다.
상기 세포주는 ATCC(아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션, 미국 버지니아주 마나사스 소재) 또는 DSMZ(도이치 잠룽 폰 미크로오르가니스멘 운트 젤쿨투렌(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zelkulturen) GmbH, 독일 브라운슈바이그 소재)로부터 수득하였다. 세포를 10% 소 태아 혈청, 100 단위/㎖ 페니실린, 2 mM L-글루타민, 및 100 ㎎/㎖ 스트렙토마이신(라이프 테크놀로지(Life Technology), 미국 뉴욕주 그랜드 아일랜드 소재)이 보충된 RPMI 1640 배지에서 5% CO2 하에 37 ℃에서 배양하였다.
실시예 8: 생체내 마우스 종양 이종이식 효능
마우스: 암컷 중증 복합 면역결핍 마우스(폭스 체이스(Fox Chase) SCID(등록상표), C.B-17/IcrHsd, 할런 소재) 또는 누드 마우스(타코닉 팜스(Taconic Farms), 할런 소재)는 8 내지 9 주 된 것이며 연구 0일째에 15.1 내지 21.4 그램의 BW 범위를 가졌다. 상기 동물에게 물(역삼투, 1 ppm Cl) 및 18.0% 조 단백질, 5.0% 조 지방, 및 5.0% 조 섬유로 이루어진 NIH 31 변형 및 조사된 랩 다이어트(Lab Diet)(등록상표)를 자유롭게 공급하였다. 상기 마우스를 21 내지 22 ℃(70 내지 72 ℉) 및 40 내지 60% 습도에서 12-시간 명주기로 정적 미생물격리장치(static microisolator)에서 조사된 ALPHA-Dri(등록상표) bed-o'cobs(등록상표) 실험 동물 침구상에 수용하였다. PRC는 특별히 감금, 관리, 수술 절차, 사료 및 유동액 조절, 및 가축 보호에 관하여 실험 동물 보호 및 사용 지침의 권장사항에 따른다. PRC에서 상기 동물 보호 및 사용 프로그램은 실험 동물의 보호 및 사용에 관한 허용 기준을 확실히 준수하는 국제 실험 동물 인증 협회(AAALAC)에 의해 승인되었다.
종양 이식: 이종이식을 암세포로 개시하였다. 세포를 10% 소 태아 혈청, 2 mM 글루타민, 100 유닛/㎖ 페니실린, 100 ㎍/㎖ 스트렙토마이신 설페이트 및 25 ㎍/㎖ 젠타마이신이 보충된 RPMI 1640 배지에서 배양하였다. 상기 세포를 지수 증식기 동안 수확하고 상기 세포주의 배가 시간에 따라 5 x 106 또는 10 x 106 세포/㎖의 농도로 포스페이트 완충된 염수(PBS)에 재현탁시켰다. 종양 세포를 오른쪽 옆구리에 피하 이식하고, 종양 성장을 평균 크기가 100 내지 150 ㎣의 표적 범위에 접근하는 것으로서 모니터하였다. 제0 연구일로서 지정된, 종양 이식 후 21일째에, 상기 마우스를 4개의 군으로 놓았으며, 각각의 군은 75 내지 172 ㎣ 범위의 개별적인 종양 부피를 갖는 10마리의 마우스로 이루어졌고 군 평균 종양 부피는 120 내지 121 ㎣이었다(부록 A 참조). 부피를 하기 식을 사용하여 계산하였다:
종양 부피(㎣) = (w2 x l)/2(여기에서 w는 종양의 폭이고 l은 길이(㎜)이다). 종양 중량은 1 ㎎이 1 ㎣의 종양 부피와 같은 것으로 가정하여 추정할 수 있다.
치료제: 에스트로젠 수용체 조절제 화합물 및 화학요법제를 전형적으로는 건조 분말로부터 제조하고, 실온에서 보관하고, 빛으로부터 보호하였다. 약물 용량을 탈이온수("비히클") 중의 0.5% 메틸셀룰로스:0.2% 트윈 80으로 매주 제조하고 4 ℃에서 보관하였다. 화합물의 용량을 각 투여 당일에 상기 모액의 분액을 멸균 염수(0.9% NaCl)로 희석하여 제조하였다. 모든 용량을 체중 20 그램당 0.2 ㎖의 부피(10 ㎖/㎏)로 서술된 ㎎/㎏ 투여량이 전달되도록 제형화하였다.
처리: 모든 용량을 개별적인 동물들의 체중에 대해 비율에 따라 정하고 각각의 도면에 지시된 경로에 의해 제공하였다.
종점: 종양 부피를 하기와 같이, 울트라 Cal IV 캘리퍼스(모델 54 10 111; 프레드 브이 파울러 캄파니(Fred V. Fowler Company))를 사용하여 2개의 치수(길이 및 폭)로 측정하고: 종양 부피(㎣) = (길이 x 폭2) x 0.5, 엑셀 버전 11.2(마이크로소프트 코포레이션)를 사용하여 분석하였다. 선형 혼합 효과(LME) 모델링 접근법을 사용하여 시간에 따른 동일한 동물로부터의 종양 부피의 반복된 측정을 분석하였다(문헌[(Pinheiro J, et al. nlme: linear and nonlinear mixed effects models. R package version 3.1 92. 2009]; 문헌[Tan N, et al. Clin. Cancer Res. 2011;17(6):1394-1404]). 상기 접근법은 반복된 측정 및 연구 종결 전 동물의 임의의 비-처리-관련된 사망으로 인한 소소한 탈락을 모두 다룬다. 3차 회귀 스플라인을 사용하여 각각의 용량 수준에서 로그2 종양 부피의 시간 과정에 비선형 프로파일을 적합시켰다. 이러한 비선형 프로파일을 상기 혼합 모델내의 용량에 관련시켰다. 비히클 대조용의 비율로서 종양 성장 억제(%TGI)를 하기 식을 사용하여, 비히클에 관하여 하루에 각각의 용량 군에 대한 적합 곡선 아래 면적(AUC)의 비율로서 계산하였다: %TGI = 100 x (1 - AUC용량/ACU비히클). 상기 식을 사용하여, 100%의 TGI 값은 종양 정체를 가리키고, >1%이나 <100%인 TGI 값은 종양 성장 지연을 가리키며, >100%의 TGI 값은 종양 퇴화를 가리킨다. 동물에 대한 부분 반응(PR)은 출발 종양 부피의 >50%이지만 <100%인 종양 퇴화로서 정의되었다. 완전한 반응(CR)은 연구 중 임의의 날에 100% 종양 퇴화(즉 측정 가능한 종양 없음)로서 정의되었다.
독성: 동물을 연구의 처음 5일 동안 및 그 후 매주 2회 매일 칭량하였다. 동물 체중을 어드벤추어러 프로(Adventurer Pro)(등록상표) AV812 스케일(오하우스 코포레이션(Ohaus Corporation))을 사용하여 측정하였다. 체중 변화 퍼센트를 하기와 같이 계산하였다: 체중 변화(%) = [(체중새로운 날 - 체중0일)/체중0일] x 100. 상기 마우스를 임의의 불리한, 처리-관련된 부작용의 명백한 징후에 대해서 빈번히 관찰하였으며, 관찰시 임상적인 독성 징후를 기록하였다. 허용 가능한 독성은 상기 연구 중 20% 미만의 군 평균 체중(BW) 손실 및 10마리의 처리된 동물 중 하나 이하의 처리-관련(TR) 사망으로서 정의된다. 보다 큰 독성을 생성시키는 임의의 투여 섭생은 최대 허용 용량(MTD) 이상으로 간주된다. 사망은 임상적 징후 및/또는 부검에 의해 입증되는 바와 같이 처리 부작용에 기인하는 경우 TR로서 분류되거나, 또는 투여 기간 또는 최종 투여 10일 이내에 미지의 원인으로 인한 경우 TR로서 또한 분류될 수 있다. 사망은 상기 사망이 처리 부작용과 관련되었다는 증거가 없는 경우 NTR로서 분류된다.
상기 발명을 이해의 명확성을 목적으로 예시 및 실시예에 의해 일부 상세히 개시하였지만, 상기 설명 및 실시예들을 본 발명의 범위를 제한하는 것으로서 해석해서는 안 된다. 본 발명에 인용된 모든 특허 및 과학문헌의 개시는 내용 전체가 참고로 명백히 인용된다. 본 발명에 개시된 실시예 및 실시태양들은 단지 예시를 목적으로 하며 당해 분야의 숙련가에게 암시된 다양한 변형 또는 변화들을 본 출원의 진의 및 범위 및 첨부된 특허청구범위의 범위내에 포함시키고자 한다.
SEQUENCE LISTING <110> F.HOFFMANN-LA ROCHE AG <120> METHODS AND COMPOSITIONS FOR MODULATING ESTROGEN RECEPTOR MUTANTS <130> P32309 WO <140> PCT/EP2015/055120 <141> 2015-03-12 <150> US 61/952,728 <151> 2014-03-13 <150> US 61/981,708 <151> 2014-04-18 <160> 2 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 1788 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1 atgaccatga ccctccacac caaagcatct gggatggccc tactgcatca gatccaaggg 60 aacgagctgg agcccctgaa ccgtccgcag ctcaagatcc ccctggagcg gcccctgggc 120 gaggtgtacc tggacagcag caagcccgcc gtgtacaact accccgaggg cgccgcctac 180 gagttcaacg ccgcggccgc cgccaacgcg caggtctacg gtcagaccgg cctcccctac 240 ggccccgggt ctgaggctgc ggcgttcggc tccaacggcc tggggggttt ccccccactc 300 aacagcgtgt ctccgagccc gctgatgcta ctgcacccgc cgccgcagct gtcgcctttc 360 ctgcagcccc acggccagca ggtgccctac tacctggaga acgagcccag cggctacacg 420 gtgcgcgagg ccggcccgcc ggcattctac aggccaaatt cagataatcg acgccagggt 480 ggcagagaaa gattggccag taccaatgac aagggaagta tggctatgga atctgccaag 540 gagactcgct actgtgcagt gtgcaatgac tatgcttcag gctaccatta tggagtctgg 600 tcctgtgagg gctgcaaggc cttcttcaag agaagtattc aaggacataa cgactatatg 660 tgtccagcca ccaaccagtg caccattgat aaaaacagga ggaagagctg ccaggcctgc 720 cggctccgta aatgctacga agtgggaatg atgaaaggtg ggatacgaaa agaccgaaga 780 ggagggagaa tgttgaaaca caagcgccag agagatgatg gggagggcag gggtgaagtg 840 gggtctgctg gagacatgag agctgccaac ctttggccaa gcccgctcat gatcaaacgc 900 tctaagaaga acagcctggc cttgtccctg acggccgacc agatggtcag tgccttgttg 960 gatgctgagc ccccgatact ctattccgag tatgatccta ccagaccctt cagtgaagct 1020 tcgatgatgg gcttactgac caacctggca gacagggagc tggttcacat gatcaactgg 1080 gcgaagaggg tgccaggctt tgtggatttg accctccatg atcaggtcca ccttctagaa 1140 tgtgcctggc tagagatcct gatgattggt ctcgtctggc gctccatgga gcacccaggg 1200 aagctactgt ttgctcctaa cttgctcttg gacaggaacc agggaaaatg tgtagagggc 1260 atggtggaga tcttcgacat gctgctggct acatcatctc ggttccgcat gatgaatctg 1320 cagggagagg agtttgtgtg cctcaaatct attattttgc ttaattctgg agtgtacaca 1380 tttctgtcca gcaccctgaa gtctctggaa gagaaggacc atatccaccg agtcctggac 1440 aagatcacag acactttgat ccacctgatg gccaaggcag gcctgaccct gcagcagcag 1500 caccagcggc tggcccagct cctcctcatc ctctcccaca tcaggcacat gagtaacaaa 1560 ggcatggagc atctgtacag catgaagtgc aagaacgtgg tgcccctcta tgacctgctg 1620 ctggagatgc tggacgccca ccgcctacat gcgcccacta gccgtggagg ggcatccgtg 1680 gaggagacgg accaaagcca cttggccact gcgggctcta cttcatcgca ttccttgcaa 1740 aagtattaca tcacggggga ggcagagggt ttccctgcca cggtctga 1788 <210> 2 <211> 595 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Met Thr Met Thr Leu His Thr Lys Ala Ser Gly Met Ala Leu Leu His 1 5 10 15 Gln Ile Gln Gly Asn Glu Leu Glu Pro Leu Asn Arg Pro Gln Leu Lys 20 25 30 Ile Pro Leu Glu Arg Pro Leu Gly Glu Val Tyr Leu Asp Ser Ser Lys 35 40 45 Pro Ala Val Tyr Asn Tyr Pro Glu Gly Ala Ala Tyr Glu Phe Asn Ala 50 55 60 Ala Ala Ala Ala Asn Ala Gln Val Tyr Gly Gln Thr Gly Leu Pro Tyr 65 70 75 80 Gly Pro Gly Ser Glu Ala Ala Ala Phe Gly Ser Asn Gly Leu Gly Gly 85 90 95 Phe Pro Pro Leu Asn Ser Val Ser Pro Ser Pro Leu Met Leu Leu His 100 105 110 Pro Pro Pro Gln Leu Ser Pro Phe Leu Gln Pro His Gly Gln Gln Val 115 120 125 Pro Tyr Tyr Leu Glu Asn Glu Pro Ser Gly Tyr Thr Val Arg Glu Ala 130 135 140 Gly Pro Pro Ala Phe Tyr Arg Pro Asn Ser Asp Asn Arg Arg Gln Gly 145 150 155 160 Gly Arg Glu Arg Leu Ala Ser Thr Asn Asp Lys Gly Ser Met Ala Met 165 170 175 Glu Ser Ala Lys Glu Thr Arg Tyr Cys Ala Val Cys Asn Asp Tyr Ala 180 185 190 Ser Gly Tyr His Tyr Gly Val Trp Ser Cys Glu Gly Cys Lys Ala Phe 195 200 205 Phe Lys Arg Ser Ile Gln Gly His Asn Asp Tyr Met Cys Pro Ala Thr 210 215 220 Asn Gln Cys Thr Ile Asp Lys Asn Arg Arg Lys Ser Cys Gln Ala Cys 225 230 235 240 Arg Leu Arg Lys Cys Tyr Glu Val Gly Met Met Lys Gly Gly Ile Arg 245 250 255 Lys Asp Arg Arg Gly Gly Arg Met Leu Lys His Lys Arg Gln Arg Asp 260 265 270 Asp Gly Glu Gly Arg Gly Glu Val Gly Ser Ala Gly Asp Met Arg Ala 275 280 285 Ala Asn Leu Trp Pro Ser Pro Leu Met Ile Lys Arg Ser Lys Lys Asn 290 295 300 Ser Leu Ala Leu Ser Leu Thr Ala Asp Gln Met Val Ser Ala Leu Leu 305 310 315 320 Asp Ala Glu Pro Pro Ile Leu Tyr Ser Glu Tyr Asp Pro Thr Arg Pro 325 330 335 Phe Ser Glu Ala Ser Met Met Gly Leu Leu Thr Asn Leu Ala Asp Arg 340 345 350 Glu Leu Val His Met Ile Asn Trp Ala Lys Arg Val Pro Gly Phe Val 355 360 365 Asp Leu Thr Leu His Asp Gln Val His Leu Leu Glu Cys Ala Trp Leu 370 375 380 Glu Ile Leu Met Ile Gly Leu Val Trp Arg Ser Met Glu His Pro Gly 385 390 395 400 Lys Leu Leu Phe Ala Pro Asn Leu Leu Leu Asp Arg Asn Gln Gly Lys 405 410 415 Cys Val Glu Gly Met Val Glu Ile Phe Asp Met Leu Leu Ala Thr Ser 420 425 430 Ser Arg Phe Arg Met Met Asn Leu Gln Gly Glu Glu Phe Val Cys Leu 435 440 445 Lys Ser Ile Ile Leu Leu Asn Ser Gly Val Tyr Thr Phe Leu Ser Ser 450 455 460 Thr Leu Lys Ser Leu Glu Glu Lys Asp His Ile His Arg Val Leu Asp 465 470 475 480 Lys Ile Thr Asp Thr Leu Ile His Leu Met Ala Lys Ala Gly Leu Thr 485 490 495 Leu Gln Gln Gln His Gln Arg Leu Ala Gln Leu Leu Leu Ile Leu Ser 500 505 510 His Ile Arg His Met Ser Asn Lys Gly Met Glu His Leu Tyr Ser Met 515 520 525 Lys Cys Lys Asn Val Val Pro Leu Tyr Asp Leu Leu Leu Glu Met Leu 530 535 540 Asp Ala His Arg Leu His Ala Pro Thr Ser Arg Gly Gly Ala Ser Val 545 550 555 560 Glu Glu Thr Asp Gln Ser His Leu Ala Thr Ala Gly Ser Thr Ser Ser 565 570 575 His Ser Leu Gln Lys Tyr Tyr Ile Thr Gly Glu Ala Glu Gly Phe Pro 580 585 590 Ala Thr Val 595

Claims (56)

  1. ESR1 유전자 중에 돌연변이를 갖는 환자에서 에스트로젠 수용체(ER)-관련된 질병 또는 병태의 치료에 사용하기 위한 하기 화학식 A, B, C 또는 D의 에스트로젠 수용체 조절제 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물:
    화학식 A
    Figure pct00118

    [상기 식에서,
    Ra는 -CO2H 또는
    Figure pct00119
    및
    Figure pct00120
    로 이루어지는 군 중에서 선택된 5-원 헤테로사이클이고;
    Rb는 C1-C6알킬 또는 C3-C6사이클로알킬이고;
    Rc는 H 또는 F이고;
    각각의 Rd는 H, 할로겐, -CN, -ORe, -NHRe, -NReRf, -SRe, -S(=O)Rf, -S(=O)2Rf, C1-C6알킬, 및 C1-C6플루오로알킬 중에서 독립적으로 선택되고;
    각각의 Re는 H, -C(=O)Rf, -C(=O)ORf, -C(=O)NHRf, C1-C6알킬, C1-C6플루오로알킬, C3-C6사이클로알킬, 치환되거나 비치환된 모노사이클릭 C2-C6헤테로사이클로알킬, 치환되거나 비치환된 페닐, 및 치환되거나 비치환된 모노사이클릭 헤테로아릴 중에서 독립적으로 선택되고;
    각각의 Rf는 C1-C6알킬, C1-C6플루오로알킬, C3-C6사이클로알킬, 치환되거나 비치환된 모노사이클릭 C2-C6헤테로사이클로알킬, 치환되거나 비치환된 페닐, 및 치환되거나 비치환된 모노사이클릭 헤테로아릴 중에서 독립적으로 선택되고;
    X는 CH 또는 N이고;
    n은 0, 1 또는 2이다]
    화학식 B
    Figure pct00121

    [상기 식에서,
    Ra는 -CO2H 또는
    Figure pct00122
    Figure pct00123
    및
    Figure pct00124
    로 이루어지는 군 중에서 선택된 5-원 헤테로사이클이고;
    고리 C는
    Figure pct00125
    또는
    Figure pct00126
    이고;
    고리 D는 페닐 또는 티에닐이고;
    각각의 Rd는 H, 할로겐, -CN, -ORe, -NHRe, -NReRf, -SRe, -S(=O)Rf, -S(=O)2Rf, C1-C6알킬, 및 C1-C6플루오로알킬 중에서 독립적으로 선택되고;
    각각의 Re는 H, -C(=O)Rf, -C(=O)ORf, -C(=O)NHRf, C1-C6알킬, C1-C6플루오로알킬, C3-C6사이클로알킬, 치환되거나 비치환된 모노사이클릭 C2-C6헤테로사이클로알킬, 치환되거나 비치환된 페닐, 및 치환되거나 비치환된 모노사이클릭 헤테로아릴 중에서 독립적으로 선택되고;
    각각의 Rf는 C1-C6알킬, C1-C6플루오로알킬, C3-C6사이클로알킬, 치환되거나 비치환된 모노사이클릭 C2-C6헤테로사이클로알킬, 치환되거나 비치환된 페닐, 및 치환되거나 비치환된 모노사이클릭 헤테로아릴 중에서 독립적으로 선택되고;
    n은 0, 1 또는 2이다]
    화학식 C
    Figure pct00127

    [상기 식에서,
    Ra는 -CO2H 또는
    Figure pct00128
    Figure pct00129
    및
    Figure pct00130
    로 이루어지는 군 중에서 선택된 5-원 헤테로사이클이고;
    Rb는 C1-C6알킬 또는 C3-C6사이클로알킬이고;
    각각의 Rd는 H, 할로겐, -CN, -ORe, -NHRe, -NReRf, -SRe, -S(=O)Rf, -S(=O)2Rf, C1-C6알킬, 및 C1-C6플루오로알킬 중에서 독립적으로 선택되고;
    각각의 Re는 H, -C(=O)Rf, -C(=O)ORf, -C(=O)NHRf, C1-C6알킬, C1-C6플루오로알킬, C3-C6사이클로알킬, 치환되거나 비치환된 모노사이클릭 C2-C6헤테로사이클로알킬, 치환되거나 비치환된 페닐, 및 치환되거나 비치환된 모노사이클릭 헤테로아릴 중에서 독립적으로 선택되고;
    각각의 Rf는 C1-C6알킬, C1-C6플루오로알킬, C3-C6사이클로알킬, 치환되거나 비치환된 모노사이클릭 C2-C6헤테로사이클로알킬, 치환되거나 비치환된 페닐, 및 치환되거나 비치환된 모노사이클릭 헤테로아릴 중에서 독립적으로 선택되고;
    n은 0, 1 또는 2이다]
    화학식 D
    Figure pct00131

    [상기 식에서,
    R1은 H, C1-C4알킬 또는 C1-C4플루오로알킬이고;
    R2는 H, F, C1-C4알킬 또는 C1-C4플루오로알킬이고;
    R3은 H, 할로겐, -CN, -OR6, -NHR6, -NR6R7, -SR6, -S(=O)R7, -S(=O)2R7, C1-C4알킬 또는 C1-C4플루오로알킬이고;
    각각의 R4는 H, 할로겐, -CN, -OH, C1-C6알킬, C1-C4플루오로알킬, C1-C4플루오로알콕시, 및 C1-C4알콕시 중에서 독립적으로 선택되고;
    각각의 R5는 H, F, Cl, -OH, -CH3, -CF3 또는 -OCH3이고;
    각각의 R6은 H, -C(=O)R7, -C(=O)OR7, -C(=O)NHR7, C1-C6알킬, C1-C6플루오로알킬, C3-C6사이클로알킬, 치환되거나 비치환된 C2-C6헤테로사이클로알킬, 치환되거나 비치환된 페닐, 및 치환되거나 비치환된 모노사이클릭 헤테로아릴 중에서 독립적으로 선택되고;
    각각의 R7은 C1-C6알킬, C1-C6플루오로알킬, 치환되거나 비치환된 C3-C6사이클로알킬, 치환되거나 비치환된 모노사이클릭 C2-C6헤테로사이클로알킬, 치환되거나 비치환된 페닐, 및 치환되거나 비치환된 모노사이클릭 헤테로아릴 중에서 독립적으로 선택되고;
    n은 0, 1 또는 2이고;
    t는 1 또는 2이다].
  2. 제 1 항에 있어서,
    에스트로젠 수용체 조절제가 하기 화학식 A-1의 화합물인 ER-관련된 질병 또는 병태의 치료에 사용하기 위한 에스트로젠 수용체 조절제 화합물:
    화학식 A-1
    Figure pct00132
  3. 제 1 항에 있어서,
    에스트로젠 수용체 조절제가 하기 화학식 C-1의 화합물인 ER-관련된 질병 또는 병태의 치료에 사용하기 위한 에스트로젠 수용체 조절제 화합물:
    화학식 C-1
    Figure pct00133
  4. 제 1 항에 있어서,
    에스트로젠 수용체 조절제가 하기 화학식 D-1, D-2, D-3 및 D-4 중에서 선택된 화합물인 ER-관련된 질병 또는 병태의 치료에 사용하기 위한 에스트로젠 수용체 조절제 화합물:
    화학식 D-1
    Figure pct00134

    화학식 D-2
    Figure pct00135

    화학식 D-3
    Figure pct00136

    화학식 D-4
    Figure pct00137
  5. 제 1 항에 있어서,
    에스트로젠 수용체 조절제가 화합물 1-1, 1-2, 1-3, 1-4, 1-5, 1-6, 1-7, 1-8, 1-9, 1-10, 1-11, 및 1-12 중에서 선택되는 ER-관련된 질병 또는 병태의 치료에 사용하기 위한 에스트로젠 수용체 조절제 화합물.
  6. 제 1 항에 있어서,
    에스트로젠 수용체 조절제가 화합물 1-3인 ER-관련된 질병 또는 병태의 치료에 사용하기 위한 에스트로젠 수용체 조절제 화합물.
  7. 제 1 항에 있어서,
    에스트로젠 수용체 조절제가 화합물 2-1, 2-2, 2-3, 2-4 및 2-5 중에서 선택되는 ER-관련된 질병 또는 병태의 치료에 사용하기 위한 에스트로젠 수용체 조절제 화합물.
  8. 제 1 항에 있어서,
    에스트로젠 수용체 조절제가 화합물 3-1, 3-2, 3-3, 및 3-4 중에서 선택되는 ER-관련된 질병 또는 병태의 치료에 사용하기 위한 에스트로젠 수용체 조절제 화합물.
  9. 제 1 항에 있어서,
    에스트로젠 수용체 조절제가 화합물 4-1, 4-2, 4-3, 4-4, 4-5, 4-6, 4-7, 4-8, 4-9, 4-10, 4-11, 4-12, 4-13, 4-14, 4-15, 4-16, 4-17, 4-18, 4-19, 4-20, 4-21, 4-22, 4-23, 4-24, 4-25, 4-26, 4-27, 4-28, 4-29, 4-30, 4-31, 4-32, 4-33, 4-34, 4-35, 4-36, 4-37, 4-38, 4-39, 4-40, 4-41, 4-42, 4-43, 4-44 및 4-45 중에서 선택되는 ER-관련된 질병 또는 병태의 치료에 사용하기 위한 에스트로젠 수용체 조절제 화합물.
  10. 제 1 항에 있어서,
    에스트로젠 수용체 조절제가 화합물 4-23인 ER-관련된 질병 또는 병태의 치료에 사용하기 위한 에스트로젠 수용체 조절제 화합물.
  11. 제 1 항에 있어서,
    ER-관련된 질병 또는 병태가 암인 ER-관련된 질병 또는 병태의 치료에 사용하기 위한 에스트로젠 수용체 조절제 화합물.
  12. 제 11 항에 있어서,
    암이 유방암, 경부암, 결장암, 자궁내막암, 신경교종, 폐암, 흑색종, 난소암, 췌장암 및 전립선암 중에서 선택되는 ER-관련된 질병 또는 병태의 치료에 사용하기 위한 에스트로젠 수용체 조절제 화합물.
  13. 제 12 항에 있어서,
    암이 유방암인 ER-관련된 질병 또는 병태의 치료에 사용하기 위한 에스트로젠 수용체 조절제 화합물.
  14. 제 13 항에 있어서,
    유방암이 전이성, 호르몬 내성, 에스트로젠 수용체 양성, 에스트로젠 수용체 음성, 프로제스테론 수용체 음성, HER2 양성, 또는 HER2 음성 유방암인 ER-관련된 질병 또는 병태의 치료에 사용하기 위한 에스트로젠 수용체 조절제 화합물.
  15. 제 12 항에 있어서,
    유방암이 아로마타제 억제제에 의한 치료에 내성인 ER-관련된 질병 또는 병태의 치료에 사용하기 위한 에스트로젠 수용체 조절제 화합물.
  16. 제 15 항에 있어서,
    아로마타제 억제제가 아나스트로졸, 레트로졸 또는 엑세메스탄인 ER-관련된 질병 또는 병태의 치료에 사용하기 위한 에스트로젠 수용체 조절제 화합물.
  17. 제 13 항에 있어서,
    유방암이 기저 또는 관강 하위유형인 ER-관련된 질병 또는 병태의 치료에 사용하기 위한 에스트로젠 수용체 조절제 화합물.
  18. 제 1 항에 있어서,
    환자가 폐경전 또는 폐경후 여성 환자인 ER-관련된 질병 또는 병태의 치료에 사용하기 위한 에스트로젠 수용체 조절제 화합물.
  19. 제 1 항에 있어서,
    환자가 1회 이상 항암요법에 실패한 적이 있는 ER-관련된 질병 또는 병태의 치료에 사용하기 위한 에스트로젠 수용체 조절제 화합물.
  20. 제 1 항에 있어서,
    ESR1 유전자 중의 돌연변이가 체세포 돌연변이인 ER-관련된 질병 또는 병태의 치료에 사용하기 위한 에스트로젠 수용체 조절제 화합물.
  21. 제 1 항에 있어서,
    환자가 야생형 ER 및 돌연변이 ER을 발현하는 ER-관련된 질병 또는 병태의 치료에 사용하기 위한 에스트로젠 수용체 조절제 화합물.
  22. 제 1 항에 있어서,
    환자가 2개의 돌연변이 ER-α 폴리펩타이드의 동종이량체를 발현하는 ER-관련된 질병 또는 병태의 치료에 사용하기 위한 에스트로젠 수용체 조절제 화합물.
  23. 제 1 항에 있어서,
    환자가 2개의 야생형 ER-α 폴리펩타이드의 동종이량체를 발현하는 ER-관련된 질병 또는 병태의 치료에 사용하기 위한 에스트로젠 수용체 조절제 화합물.
  24. 제 1 항에 있어서,
    환자가 하나의 야생형 ER-α 폴리펩타이드 및 하나의 돌연변이 ER-α 폴리펩타이드의 이종이량체 또는 하나의 야생형 ER-β 폴리펩타이드 및 하나의 돌연변이 ER-α 폴리펩타이드의 이종이량체를 발현하는 ER-관련된 질병 또는 병태의 치료에 사용하기 위한 에스트로젠 수용체 조절제 화합물.
  25. 제 24 항에 있어서,
    환자가 종양을 가지며 상기 종양 세포 중 다수가 돌연변이 ER을 발현하는 ER-관련된 질병 또는 병태의 치료에 사용하기 위한 에스트로젠 수용체 조절제 화합물.
  26. 제 1 항에 있어서,
    환자가 화학요법제, 생물학적 요법, 암 백신, 혈관형성 억제제, 호르몬 요법, 방사선 요법, 수술, 또는 이들의 임의의 조합을 받은 적이 있는 ER-관련된 질병 또는 병태의 치료에 사용하기 위한 에스트로젠 수용체 조절제 화합물.
  27. 제 26 항에 있어서,
    생물학적 요법이 펩타이드, 사이토킨, 항체, 치료학적 바이러스, 치료학적 세균, 유전자 요법, siRNA, 양자 T-세포 전이, 또는 이들의 임의의 조합인 ER-관련된 질병 또는 병태의 치료에 사용하기 위한 에스트로젠 수용체 조절제 화합물.
  28. 제 1 항에 있어서,
    환자가 아로마타제 억제제, 선택성 에스트로젠 수용체 조절제(SERM), 선택성 에스트로젠 분해제(SERD), PI3 키나제/mTOR 경로 억제제, CDK 4/6 억제제, HER-2 억제제, EGFR 억제제, PD-1 억제제, 폴리 ADP-리보스 폴리머라제(PARP) 억제제, 히스톤 데아세틸라제(HDAC) 억제제, HSP90 억제제, VEGFR 억제제, AKT 억제제, 화학요법, 또는 이들의 임의의 조합을 받은 적이 있는 ER-관련된 질병 또는 병태의 치료에 사용하기 위한 에스트로젠 수용체 조절제 화합물.
  29. 제 1 항에 있어서,
    환자가 풀베스트란트, 타목시펜, 아나스트로졸, 레트로졸, 엑세메스탄, 고세렐린, 류프로리드, 랄록시펜, 토레미펜, 메제스트롤 아세테이트, 바제독시펜, 또는 이들의 임의의 조합을 받은 적이 있는 ER-관련된 질병 또는 병태의 치료에 사용하기 위한 에스트로젠 수용체 조절제 화합물.
  30. 제 1 항에 있어서,
    환자가 안트라사이클린, 탁산, 백금제, 에포틸론, 또는 뉴클레오사이드 유사체를 받은 적이 있는 ER-관련된 질병 또는 병태의 치료에 사용하기 위한 에스트로젠 수용체 조절제 화합물.
  31. 제 1 항에 있어서,
    환자가 시스플라틴, 카르보플라틴, 카페시타빈, 사이클로포스파미드, 도세탁셀, 독소루비신, 에피루비신, 에리뷸린, 플루오로유라실, 젬시타빈, 익사베필론, 미톡산트론, 메토트렉세이트, 패클리탁셀, 파미드로네이트, 비노렐빈, 또는 이들의 임의의 조합을 받은 적이 있는 ER-관련된 질병 또는 병태의 치료에 사용하기 위한 에스트로젠 수용체 조절제 화합물.
  32. 제 1 항에 있어서,
    환자가 페르투주맵, 트라스투주맵, 라파티니브, 에베로리무스, 베바시주맵, 템시로리무스, 또는 이들의 임의의 조합을 받은 적이 있는 ER-관련된 질병 또는 병태의 치료에 사용하기 위한 에스트로젠 수용체 조절제 화합물.
  33. 제 1 항에 있어서,
    ESR1 돌연변이가 ER 폴리펩타이드 중에 하나 이상의 아미노산의 치환, 삽입 또는 결실을 생성시키는 ER-관련된 질병 또는 병태의 치료에 사용하기 위한 에스트로젠 수용체 조절제 화합물.
  34. 제 33 항에 있어서,
    ESR1 돌연변이가 에스트로젠 수용체의 N-말단 도메인, DNA 결합 도메인, 힌지 영역 또는 리간드 결합 도메인 중에 아미노산 치환을 생성시키는 ER-관련된 질병 또는 병태의 치료에 사용하기 위한 에스트로젠 수용체 조절제 화합물.
  35. 제 33 항에 있어서,
    ESR1 돌연변이가 에스트로젠 수용체의 리간드 결합 도메인 중에 아미노산 치환을 생성시키는 ER-관련된 질병 또는 병태의 치료에 사용하기 위한 에스트로젠 수용체 조절제 화합물.
  36. 제 35 항에 있어서,
    아미노산 치환이 서열번호 2의 아미노산 위치 6, 118, 269, 311, 341, 350, 380, 392, 394, 433, 463, 503, 534, 535, 536, 537, 538 또는 555번에 있는 ER-관련된 질병 또는 병태의 치료에 사용하기 위한 에스트로젠 수용체 조절제 화합물.
  37. 제 36 항에 있어서,
    아미노산 치환이 H6Y, S118P, R269C, T311M, S341L, A350E, E380Q, V392I, R394H, S433P, S463P, R503W, V534E, P535H, L536R, L536P, L536Q, Y537N, Y537C, Y537S, D538G, 및 R555C 중에서 선택되는 ER-관련된 질병 또는 병태의 치료에 사용하기 위한 에스트로젠 수용체 조절제 화합물.
  38. 제 37 항에 있어서,
    아미노산 치환이 L536R, Y537N, Y537C, Y537S, 및 D538G 중에서 선택되는 ER-관련된 질병 또는 병태의 치료에 사용하기 위한 에스트로젠 수용체 조절제 화합물.
  39. 제 1 항에 있어서,
    환자가 하기의 단계들에 의해 에스트로젠 수용체 조절제 화합물에 의한 치료를 위해 선택되는 ER-관련된 질병 또는 병태의 치료에 사용하기 위한 에스트로젠 수용체 조절제 화합물:
    1) 상기 환자로부터의 핵산을 포함하는 샘플에서 ESR1 유전자 중의 돌연변이를 검출하고;
    2) 상기 환자가 상기 ESR1 돌연변이를 갖는 경우 상기 환자를 상기 에스트로젠 수용체 조절제 화합물에 의한 치료를 위해 선택한다.
  40. 제 39 항에 있어서,
    핵산이 RNA 또는 DNA인 ER-관련된 질병 또는 병태의 치료에 사용하기 위한 에스트로젠 수용체 조절제 화합물.
  41. 제 40 항에 있어서,
    DNA가 게놈 DNA인 ER-관련된 질병 또는 병태의 치료에 사용하기 위한 에스트로젠 수용체 조절제 화합물.
  42. 제 39 항에 있어서,
    방법이 핵산 샘플로부터 mRNA를 단리함을 또한 포함하는 ER-관련된 질병 또는 병태의 치료에 사용하기 위한 에스트로젠 수용체 조절제 화합물.
  43. 제 39 항에 있어서,
    방법이 핵산 샘플로부터의 돌연변이를 포함하는 핵산 분자를 증폭시킴을 또한 포함하는 ER-관련된 질병 또는 병태의 치료에 사용하기 위한 에스트로젠 수용체 조절제 화합물.
  44. 제 43 항에 있어서,
    증폭이 폴리머라제 쇄 반응(PCR) 또는 디지털 PCR에 의해서 수행되는 ER-관련된 질병 또는 병태의 치료에 사용하기 위한 에스트로젠 수용체 조절제 화합물.
  45. 제 44 항에 있어서,
    PCR 증폭이 돌연변이를 포함하는 영역에 인접한 한 쌍의 올리고뉴클레오타이드 프라이머를 사용함을 포함하는 ER-관련된 질병 또는 병태의 치료에 사용하기 위한 에스트로젠 수용체 조절제 화합물.
  46. 제 39 항에 있어서,
    핵산을 서열 특이적 핵산 탐침과 접촉시킴을 포함하며, 상기 서열 특이적 핵산 탐침이 돌연변이를 갖는 핵산에 결합하고 야생형 핵산에는 결합하지 않는 ER-관련된 질병 또는 병태의 치료에 사용하기 위한 에스트로젠 수용체 조절제 화합물.
  47. 제 37 항에 있어서,
    샘플이 하나 이상의 종양 세포로부터의 핵산을 포함하는 ER-관련된 질병 또는 병태의 치료에 사용하기 위한 에스트로젠 수용체 조절제 화합물.
  48. 제 47 항에 있어서,
    종양 세포를 종양 생검 샘플, 혈액 샘플, 혈청 샘플, 림프 샘플, 또는 골수 흡인물로부터 취하는 ER-관련된 질병 또는 병태의 치료에 사용하기 위한 에스트로젠 수용체 조절제 화합물.
  49. 제 48 항에 있어서,
    종양 세포가 순환하는 종양 세포인 ER-관련된 질병 또는 병태의 치료에 사용하기 위한 에스트로젠 수용체 조절제 화합물.
  50. 제 49 항에 있어서,
    샘플이 순환하는 종양 DNA(ctDNA)인 ER-관련된 질병 또는 병태의 치료에 사용하기 위한 에스트로젠 수용체 조절제 화합물.
  51. ESR1 중의 돌연변이의 검출을 위한 하나 이상의 시약 및 제 1 항에 따른 화학식 A, B, C 또는 D의 에스트로젠 수용체 조절제 화합물을 포함하는 키트.
  52. 제 1 항 내지 제 50 항 중 어느 한 항에 따른 ER-관련된 질병 또는 병태의 치료에 사용하기 위한 에스트로젠 수용체 조절제 화합물 및 하나 이상의 약학적으로 허용 가능한 부형제를 포함하는 약학 조성물.
  53. ER-관련된 질병 또는 병태의 치료에 사용하기 위한 약제의 제조를 위한 제 1 항 내지 제 50 항 중 어느 한 항에 따른 에스트로젠 수용체 조절제 화합물의 용도.
  54. ER-관련된 질병 또는 병태의 치료를 위한 제 1 항 내지 제 50 항 중 어느 한 항에 따른 에스트로젠 수용체 조절제 화합물의 용도.
  55. 환자에게 제 1 항 내지 제 34 항 중 어느 한 항에 따른 에스트로젠 수용체 조절제 화합물을 투여함을 포함하는, 환자에서 ER-관련된 질병 또는 병태를 치료하는 방법.
  56. 본 발명에서 앞서 개시한 바와 같은 발명.
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