KR20160121633A

KR20160121633A - 황칠액 발효대사체를 포함하는 항노화 기능성 조성물

Info

Publication number: KR20160121633A
Application number: KR1020150050096A
Authority: KR
Inventors: 조창수; 최정화; 정영철; 전성식; 송원영; 김훈환; 변소정; 백지윤; 강승용
Original assignee: 한국국제대학교 산학협력단; 조창수; 농업회사법인 휴림황칠(주)
Priority date: 2015-04-09
Filing date: 2015-04-09
Publication date: 2016-10-20

Abstract

본 발명은 황칠액 발효대사체를 유효성분으로 포함하는 항노화 기능성 조성물 및 이를 이용한 황칠 고형환에 관한 것이다. 본 발명에 따른 항노화 조성물은 황칠액 발효대사체를 포함하므로 생체 이용율이 높고 항산화, 항노화 효능을 가지며 농축액 또는 건조 분말의 형태로 제조되어 여러 가지 형태의 제형으로 변화될 수 있으며, 다양한 용도로 사용될 수 있다.

Description

황칠액 발효대사체를 포함하는 항노화 기능성 조성물 {Composition with Antiaging Activity Containing Fermentation Metabolites of Dendropanax morbiferus Produced by Liquid State Fermentation Process}

본 발명은 황칠액 발효대사체를 포함하는 항노화 기능성 조성물에 관한 것이다.

황칠나무는 최대 높이 15 m에 달하는 두릅나무과 나무로, 만병통치 나무라는 뜻의 학명 덴드로 파낙스(Dendropanax morbifera Nakai)를 가지고 있을 정도로 그 약리학적 효능이 매우 뛰어난 약용식물이다. 한국에서만 서식하며, 한국에서도 난대림이 펼쳐진 한반도 남해 도서지역과 해안지역, 특히 해남, 완도 등 서남해안에서 생산되는 것으로 매우 귀한 약용식물이다.

황칠나무의 껍질에 상처를 내면 노란 액체가 흘러나오는데, 이것을 황칠(黃漆)이라고 하며 오래 전부터 가구의 도료로 사용하였으나, 최근의 연구 결과에 따르면 항암 효과, 간세포 재생, 당뇨 치료, 경조직 세포 재생 등에 효과적인 것으로 밝혀졌다.

한편, 최근 과학 및 의학의 발달에 의해 전 세계적으로 고령화 사회에 진입하게 됨에 따라 노화를 방지할 수 있는 제품에 대한 많은 관심이 증대되고 있는 실정이다. 기존에 알려진 노화에 대한 이론에는 여리 가지가 있지만, 최근 가장 각광을 받고 있는 노화설이 자유라디칼 이론으로서 주위 환경 및 인체 내에서 활성산소종(Reactive Oxygen Species, ROS)인 자유 라디칼이 생성되고, 이들이 유전자, 단백질, 지질 등과 화학 반응을 일으켜 세포에 손상을 입히게 되며, 이 같은 형상이 축적되어 노화가 일어난다는 것이다.

현재 활성산소에 의한 산화작용을 억제할 수 있는 항산화제에 관한 연구가 활발하게 진행 되고 있으며, 항산화력이 강력한 천연물이나 물질들의 연구개발은 노화예방 물질로서 각광받고 있다.

대한민국 등록특허 제10-0318019호는 황칠나무 또는 그 수액을 저급 알코올,헥산, 에틸아세테이트 및 부탄올 등을 사용하여 순차적으로 분획한 황칠나무 추출물은 항암제용 또는 항산화제용 약학적 조성물, 식품ㅇ음료 첨가물 및 건강보조식품에 유용하게 사용될 수 있음을 나타내고 있다.

대한민국 등록특허 제10-0988072호는 황칠나무를 당원과 함께 발효시킨 황칠나무의 약리활성이 증가된 황칠나무 발효물로서, 고혈압의 예방 또는 치료용 약학 조성물 및 건강보조식품으로서 보다 효과적으로 사용될 수 있음을 개시하고 있다.

대한민국 공개특허 제10-2011-0078527호는 황칠나무의 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물로서, 황칠나무의 추출물은 MMP-1 생성억제 효과,자외선 유도에 의한 MMP-1 생성억제 효과,콜라겐 합성증진 효과,자외선 조사에 의한 세포독성완화 효과,자외선 조사에 의한 염증성 사이토카인 발현 억제 효과 및 피부 주름개선 효과가 있어 우수한 효과가 있음을 보여주고 있다.

본 발명의 목적은 생체이용율 및 생리활성이 우수한 황칠나무 발효대사체를 이용한 항노화 기능성 조성물, 예를 들어 항노화 기능성 약학적 조성물, 식품 조성물, 및 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 항노화 기능성 고형환을 제공하는 것이다.

본 발명의 일 예에서, 황칠나무의 잎, 줄기, 또는 이들의 혼합물의 액상 추출물을 미생물 발효하여 얻은 황칠액 발효대사체를 유효성분으로 포함하는, 항노화 기능성 제제를 제공한다.

본 발명자들은 황칠나무의 항산화, 항노화 물질을 적극적으로 활용할 수 있는 방법으로서 황칠나무로부터 얻은 항노화 물질을 포함하는 항노화 기능성 약제, 식음료, 화장품 등을 개발하기에 이르렀다.

상기 액체 발효에 의한 황칠액 발효대사체는 미생물에 의하여 황칠 나무의 유용물질이 저분자화된 상태와 미생물에 발효에 따른 2차 대사산물이 복합된 상태로 이해될 수 있다.

일 예에서, 상기 황칠액 발효대사체는 황칠나무의 액상 추출물을 미생물 발효하여 얻은 발효대사체를 농축한 농축액 또는 이의 건조분말일 수 있다.

일 예에서, 항노화 기능성 제제는 약제학적 조성물, 식품 조성물, 및 화장료 조성물일 수 있다.

상기 약제학적 제제는 고지혈증, 고혈압, 동맥경화증, 및 골다공증 중 선택된 질환의 치료 또는 예방용 약제학적 조성물일 수 있다.

일 예에서, 상기 황칠액 발효대사체 30 내지 50 중량%, 유당 10 내지 30 중량%, 및 효모, 클로렐라, 마늘분말, 뽕잎분말, 및 마 분말 중 선택된 1 이상의 보조제 분말 20~40 중량%를 포함할 수 있다.

상기 항산화용 약학 조성물은 노화 방지 등 항산화 효과로 인해 예방 또는 치료할 수 있는 것으로 알려진 임의의 질병의 예방 또는 치료에 사용될 수 있다.

본 발명의 또 다른 측면은 황칠액 발효대사체 30 내지 50 중량%, 유당 10 내지 30 중량%, 및 효모 5~10 중량%, 클로렐라 분말 5~10 중량%, 마늘분말 5~10 중량%, 뽕잎분말 5~10 중량%, 및 마 분말 5~10 중량%를 포함하여 제조된 고형환을 제공한다.

본 발명에 따른 황칠액 발효대사체를 포함하는 항노화 조성물은 액체 발효와 미생물의 전배양 등의 방법을 사용함으로써 발효시간이 단축되고, 그 수율이 향상되어 생산이 용이하며, 황칠액 발효대사체는 농축액 또는 건조 분말의 형태로 제조될 수 있다. 이에 따라 여러 가지 형태의 제형으로 변화될 수 있으며, 다양한 용도로 사용될 수 있다. 이에 제한되는 것은 아니나, 예를 들면 상기 황칠액 발효대사체는 화장료 조성물, 약제학적 조성물, 식품 조성물 등으로 사용될 수 있다.

도 1은 황칠 열수추출물(A) 및 황칠액 발효대사체(B)의 DPPH 라디칼의 소거능(%) 측정결과이다;
도 2는 황칠 열수추출물(A) 및 황칠액 발효대사체(B)의 일산화질소(NO) 소거능(%) 측정 결과이다;
도 3은 황칠 열수추출물(A) 및 황칠액 발효대사체(B)의 ABTs 소거능(%)을 측정한 그래프이다;
도 4는 황칠 열수추출물(A) 및 황칠액 발효대사체(B)의 환원력(흡수파장 700nm)을 측정한 결과이다;
도 5는 고지방·고콜레스테롤 식이 쥐에서 황칠액 발효대사체의 간 카탈라제 활성을 측정한 결과이다(모든 값은 평균±SE (n=10), p<0.05, 이하 같음)(N;정상군, HF;고지방식이군, FDA;황칠 발효 대사체 투여군, 이하 동일) ;
도 6은 고지방·고콜레스테롤 식이 쥐에서 황칠액 발효대사체의 GOT 및 GPT 활성을 측정한 결과이다;
도 7은 고지방·고콜레스테롤 식이 쥐에서 황칠액 발효대사체의 간조직에서 과산화수소(H₂O₂) 활성을 나타낸 그래프이다;
도 8은 고지방·고콜레스테롤 식이 쥐에서 황칠액 발효대사체의 GSH-px 활성을 나타낸 그래프이다;
도 9는 고지방·고콜레스테롤 식이 쥐에서 황칠액 발효대사체의 간조직 슈퍼옥사이드 라디칼(O₂·^-) 함량을 나타낸 그래프이다;
도 10은 고지방·고콜레스테롤 식이 쥐에서 황칠액 발효대사체의 카르보닐 수치 활성을 나타낸 그래프이다;
도 11은 고지방·고콜레스테롤 식이 쥐에서 황칠액 발효대사체의 TBARS 활성을 나타낸 그래프이다;
도 12는 고지방·고콜레스테롤 식이 쥐에서 황칠액 발효대사체에 의한 체중 증가 및 식이섭취량 및 식이효율(FER)을 나타낸 그래프이다;
도 13은 고지방·고콜레스테롤 식이 쥐에서 황칠액 발효대사체에 의한 혈청 트리글리세라이드 수치 변화를 나타낸 그래프이다;
도 14는 고지방·고콜레스테롤 식이 쥐에서 황칠액 발효대사체에 의한 혈청 총콜레스테롤 농도 변화를 나타낸 그래프이다;
도 15는 고지방·고콜레스테롤 식이 쥐에서 황칠액 발효대사체에 의한 혈중 HDL 및 LDD 콜레스테롤의 수준을 관찰한 결과이다;
도 16은 실시예 4에 따른 황칠단의 제조과정도이다;

본 발명에서 사용되는 모든 기술용어는, 달리 정의되지 않는 이상, 하기의 정의를 가지며 본 발명의 관련 분야에서 통상의 당업자가 일반적으로 이해하는 바와 같은 의미에 부합된다. 또한 본 명세서에는 바람직한 방법이나 시료가 기재되나, 이와 유사하거나 동등한 것들도 본 발명의 범주에 포함된다. 본 명세서에 참고문헌으로 기재되는 모든 간행물의 내용은 본 발명에 도입된다.

용어 "약"이라는 것은 참조 양, 수준, 값, 수, 빈도, 퍼센트, 치수, 크기, 양, 중량 또는 길이에 대해 30, 25, 20, 25, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1% 정도로 변하는 양, 수준, 값, 수, 빈도, 퍼센트, 치수, 크기, 양, 중량 또는 길이를 의미한다.

본 명세서를 통해, 문맥에서 달리 필요하지 않으면, "포함하다" 및 "포함하는"이란 말은 제시된 단계 또는 구성요소, 또는 단계 또는 구성요소들의 군을 포함하나, 임의의 다른 단계 또는 구성요소, 또는 단계 또는 구성요소들의 군이 배제되지는 않음을 내포하는 것으로 이해하여야 한다.

본 발명에서, "항노화 기능성"은 항노화 효과로 인해 예방 또는 개선될 수 있는 것으로 알려진 질병의 예방 또는 치료에 기능을 가짐을 의미한다. 여기서, '기능성'이라 함은 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건 용도에 유용한 효과를 얻을 목적으로 섭취하는 것을 의미한다.

본 발명에서, "황칠액 발효대사체"는 황칠나무의 잎, 줄기, 또는 이들의 혼합물의 액상 추출물을 미생물 발효하여 얻은 것을 의미하며, 황칠나무의 잎 등의 고형물을 당원 등과 함께 미생물 발효시킨 고체 발효대사체는 본 발명에 포함되지 않는다. 본 발명의 황칠액 발효대사체를 제조하는 방법은 본 발명자의 선등록된 특허 제10-1482873호에 개시되어 있으며 상기 특허의 내용은 참고로서 여기에 합체된다. 상기 황칠액 발효대사체는 농축액 또는 이의 건조분말의 형태로 항노화 기능성 대사체에 포함될 수 있다. 본 발명의 황칠액 발효대사체는 미생물의 발효에 따른 대사 산물로써, 그 성분 및 구조를 명확하게 특정할 수 없지만, 황칠의 유용물질이 저분자화되어 체내 흡수율을 높일 수 있고, 우수한 생리 활성을 가질 수 있으며, 특히 항산화 효능이 우수한 것으로 검증되었다.

상기 황칠나무는 생 황칠나무의 잎 및/또는 줄기로서 그대로 이용할 수도 있으나, 황칠나무의 잎 및/또는 줄기를 건조한 건조 생약의 형태로 이용할 수도 있다.

본 발명에서, 황칠 액상 추출물은 황칠나무의 잎 및/또는 줄기를 파쇄, 절단한 후 열수추출 또는 유기용매 추출 등의 방법으로 추출한 추출물을 의미한다. 바람직하게는, 열수추출물일 수 있는바, 황칠 잎과 줄기에 물을 약 10배 가하고, 90∼95℃에서 8 내지 10시간 동안 환류 추출될 수 있다. 상기 추출액은 여과된 후 농축될 수 있다. 이에 제한되는 것은 아니나, 감압 농축기로 60℃이하에서 농축될 수 있으며, 농축된 추출액은 110 내지 125℃에서 10 내지 20분간 살균될 수 있다.

상기 얻어진 황칠 추출물의 고형물 함량은 1 내지 10 브릭스(Brix)일 수 있다. 상기 고형분의 함량은 발효 미생물의 종류에 따라 그 범위가 다소 상이해 질 수 있다. 보다 구체적으로 발효 미생물로는 Aspergillus oryzae, Saccharomyces cerevisiae, Phellinus baumii, Ganoderma lucidum를 가 바람직하게 이용될 수 있고, 예를 들어 Bacillus subtilis를 사용하는 경우에는 상기 고형분의 함량은 5 내지 10브릭스 일 수 있으며, Lactobacillus plantarum 를 사용하는 경우 1 내지 5 브릭스일 수 있다.

상기 모든 균주는 본 배양에 앞서 전배양을 수행할 수 있으며, 순수배양한 후 진탕배양할 수 있다. 미생물 전배양을 실시함에 따라 액체 발효 시간을 단축할 수 있다.

본 발명의 항노화 기능성 대사체는 예를 들어, 약제학적 조성물, 식품 조성물, 또는 화장료 조성물일 수 있다.

상기 약제학적 조성물은 당해 기술분야에 공지되어 있는 통상적인 약제학적 제형으로 제제화될 수 있다. 상기 약제학적 제제는 고지혈증, 고혈압, 동맥경화증, 및 골다공증 중 선택된 질환의 치료 또는 예방용으로 이용가능하다.

상기 약학 조성물은 경구투여제제, 주사제, 좌제, 경피투여제제, 및 경비투여제제를 포함하지만, 이에 한정되지 않는 임의의 제형으로 제제화되어 투여될 수도 있으나, 바람직하게는 액제, 현탁제, 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 환제, 또는 엑스제와 같은 경구 투여용 제형으로 제제화될 수 있다.

상기 각각의 제형으로 제제화 시, 각각의 제형의 제조에 필요한 약제학적으로 허용 가능한 담체 또는 첨가제를 부가하여 제조할 수 있다. 대표적으로 경구 투여용 제형으로 제제화 시 상기 담체로서 희석제, 활택제, 결합제, 붕해제, 감미제, 안정제, 및 방부제 중에서 1 종 이상을 선택하여 사용할 수 있으며, 첨가제로는 향료, 비타민류, 및 항산화제 중에서 1 종 이상을 선택하여 사용할 수 있다.

상기 담체 및 첨가제는 약제학적으로 허용 가능한 것은 모두 가능하며, 구체적으로 희석제로는 유당, 옥수수 전분, 대두유, 미정질 셀룰로오스, 또는 만니톨, 활택제로는 스테아린산 마그네슘 또는 탈크, 결합제로는 폴리비닐피롤리돈 또는 히드록시프로필셀룰로오스가 바람직하다. 또한, 붕해제로는 카르복시메틸셀룰로오스 칼슘, 전분글리콜산나트륨, 폴라크릴린칼륨, 또는 크로스포비돈, 감미제로는 백당, 과당, 솔비톨, 또는 아스파탐, 안정제로는 카르복시메틸셀룰로오스나트륨, 베타-사이클로덱스트린, 백납, 또는 잔탄검, 방부제로는 파라옥시안식향산메틸, 파라옥시안식향산프로필, 또는 솔빈산칼륨이 바람직하다.

또한, 상기 성분 이외에도 공지의 첨가제로서 미각을 돋구기 위하여, 매실향, 레몬향, 파인애플향, 허브향 등의 천연향료, 천연과즙, 클로로필린, 플라보노이드 등의 천연색소, 과당, 벌꿀, 당알코올, 설탕과 같은 감미성분, 또는 구연산, 구연산 나트륨과 같은 산미제를 혼합하여 사용할 수도 있다.

상기 약학 조성물은 항산화 효과 또는 항고혈압 효과를 얻기 위해, 유효성분으로서 성인을 기준으로 1 일 총 투여량이 황칠액 발효대사체로서 1 내지 100 g/kg, 황칠나무 생약으로서 0.01 내지 50 g/kg이 되도록 임의로 수회 나누어서 투여할 수 있다. 상기 투여량은 치료 또는 예방하고자 하는 질병의 종류, 질병의 진행 정도, 투여 경로, 성별, 나이, 체중 등에 따라 적절히 증감될 수 있다.

본 발명의 또 다른 일 측면에 있어서, 상기 본 발명에 따른 황칠액 발효대사체를 포함한 항산화용 건강기능식품을 제공한다. 본원발명에서 "건강기능식품" 이란 건강기능식품에 관한 법률 제3727호에 따른 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 제조 및 가공한 식품을 의미한다.

통상 건강기능식품은 식품학적으로 허용 가능한 담체를 이용하여 당해 기술분야에 공지되어 있는 통상적인 건강기능식품의 제형으로 제제화될 수 있다. 상기 건강기능식품은 예를 들어 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽제, 액제, 에어로졸, 엑스제 등으로 제조될 수 있다. 상기 식품학적으로 허용 가능한 담체 또는 첨가제로는 제조하고자 하는 제형의 제조에 당해 기술분야에서 사용 가능한 것으로 공지되어 있는 임의의 담체 또는 첨가제가 이용될 수 있다.

이와 같이 다양한 형태로 가공된 본 발명의 건강기능식품은 항산화 효과, 및 고지혈증, 골다공증의 예방 또는 개선에 사용될 수 있을 뿐만 아니라, 복용이 용이하여 유용하게 사용될 수 있다. 또한, 황칠나무는 오랫동안 한약재 또는 식품으로서 널리 이용되어 왔던 것이어서, 이로부터 유래된 황칠나무의 발효물 역시 독성 또는 부작용의 문제가 없다고 볼 수 있으므로, 본 발명에 따른 약학 조성물 및 건강기능식품은 질병의 예방, 개선 또는 치료 목적으로 장시간 사용 시에도 안심하고 사용할 수 있는 장점이 있다. 상기 약학 조성물 및 건강기능식품의 제형을 제조하는 것은 당해 기술분야에 공지되어 있는 임의의 방법에 따라, 당업자가 용이하게 제조할 수 있다.

하나의 바람직한 예에서, 항노화 기능성 조성물은 황칠액 발효대사체 30 내지 50 중량%, 유당 10 내지 30 중량%, 및 효모, 클로렐라, 마늘분말, 뽕잎분말, 및 마 분말 중 선택된 1 이상의 보조제 분말 20~40 중량%를 포함하는 조성물일 수 있다. 이러한 조성물은 고형 환의 형태로 제형화 될 수 있다. 이러한 환제는 섭취가 용이하고 효능이 우수하다.

본 발명의 또 다른 측면은 상기 본 발명에 따른 황칠액 발효대사체를 포함한 항산화용 화장료 조성물을 제공한다. 본 발명의 조성물을 이용하여 화장료를 제조하기 위한 제형화 방법은 당해 기술분야에 공지되어 있는 임의의 방법에 따라, 당업자가 용이하게 제조할 수 있다.

이하, 본 발명의 일 실시형태에 따라 실시예를 통하여 본 발명을 보다 구체적으로 설명하나, 이들이 본 발명의 범위를 제한하는 것은 아니다.

실험방법

1) in vitro 항산화 효과 검증

① 1,1-Dipicryl-2-picrylhydrazyl (DPPH) radical 소거능 측정

DPPH 라디칼 소거능은 Blois 법을 변형하여 사용한다. sample 100㎕에 1,1-Dipicryl-2- picrylhydrazyl (DPPH, 5㎎/100㎖ methanol) 100㎕를 혼합하여 실온에서 20분 반응 시킨 후 ELISA reader (VERSA, USA)를 사용하여 525nm에서 측정한다. 이를 3회 반복 실험하여 얻은 결과를 백분율(%)로 나타낸다.

② Nitic oxide(NO) 소거 효과

각 농도별 샘플을 5 mM sodium nitroprusside와 혼합하여 25℃에서 150분간 방치한 후 이 반응 혼합액을 1% sulphanilamide (in 5% phosphoric acid)와 0.1% naphtylethylene diamine dihydrochloride를 넣어 실온에서 10분간 방치 후 540 nm에서 흡광도를 측정하였다.

③ ABTS⁺소거효과

7mM의 ABTS [2,2-azinobis-(3-ethylbenzo-6-sulphonate)] 수용액 50㎖에 potassium persulfate를 2.4mM이 되도록 용해시켜 암실에서 12-16시간 동안 반응시킨 후 415nm에서 흡광도가 1.5가 되도록 증류수로 희석시킨 ABTS solution 120㎕에 sample 80㎕을 가하여 실온에서 10분간 반응시킨 후 ELISA reader (VERSA, USA)를 사용하여 415nm에서 흡광도를 측정하였다.

④ Reducing power

Oyaizu의 방법에 따라 시료액 1㎖에 인산 완충액(200mM, pH 6.6) 및 1%의 potassium ferricyanide 각 1㎖를 차례로 가한 다음 50℃의 수욕 상에서 20분간 반응시킨다. 여기에 10% TCA용액을 1㎖ 가하여 5,000 rpm에서 10분간 원심분리한 후 얻은 상징액 1㎖에 증류수 및 ferric chloride 각 1㎖를 가하여 혼합한 후 700nm에서 흡광도를 측정하였으며, 시료의 환원력은 흡광도의 값으로 나타낸다.

⑤ 총 페놀 함량

총 페놀 함량은 Folin-Denis법에 따라 각 추출물 1mL에 Foline-Ciocalteau 시약 및 10% Na2CO3 용액을 각 1 mL 씩 차례로 가한 다음 실온에서 1시간 정치한 후 700nm에서 흡광도를 측정한다. 표준품으로 gallic acid를 사용하여 시료와 동일한 방법으로 분석하여 얻은 검량선으로부터 총 페놀 함량을 산출하였다.

⑥ 총 플라보노이드 함량

총 플라보노이드 함량은 Moreno 등의 방법에 따라 추출물 0.5 ㎖에 10% aluminum nitrate 및 1 M potassium acetate 각 0.1m ㎖, ethanol 4.3 ㎖를 차례로 가하여 혼합하고 실온에서 40분간 정치한 다음 415 nm에서 흡광도를 측정. Quercetin을 표준물질로 하여 얻은 검량선으로 부터 총 플라보노이드 함량을 산출하였다.

2) in vivo 항노화 효과 검증

① 실험동물 사육 및 식이

본 실험에 사용된 동물은 체중 100 ± 10 g 내외의 Sprague-Dawley 종 수컷을 (주)바이오 제노믹스사 (Bio genomics, Inc., Seoul, Korea)에서 구입하여 사용한다. 실험식이 시작 전 일주일간 일반배합사료 (Purina Co., Seoul, Korea)로 예비사육한 후 평균체중이 유사하도록 난괴법 (randomized complete block design)에 의해 대조군과 실험군으로 나눈 후 4주간 사육하였다. 실험 기간 중 식이는 4℃에서 보관하였으며, 매일 일정 시간에 공급하여 자유로이 섭취하게 하였다. 사육실의 온도는 22±2℃, 상대습도 50±10를 유지하였다. 식이 groups은 정상군 (N group)과 1% 고지방ㆍ고콜레스테롤 식이 실험군으로 나눈 후 고지방ㆍ고콜레스테롤 실험군은 고지방ㆍ고콜레스테롤 대조군 (HF group), 고지방ㆍ고콜레스테롤식이 + 황칠발효대사체 5%공급군 (FDA group), 고지방ㆍ고콜레스테롤 + 황칠발효대사체 10% 공급군 (FDB group)으로 총 4군으로 나누어 사육하였다.

- Glutathione reductase (GSHpx) 활성 측정

간조직의 GSHpx 활성은 Lawerence 및 Burk의 방법에 따라 측정하였다. 즉 1 mM의 EDTA를 함유하는 0.1 M potassium phosphate buffer (pH 7.0) 1.72 ㎖에 효소용액 0.05 ㎖와 0.2 mM NADPH 0.3 ㎖, glutathion reductase 100 unit, 1 mM soudium azide 0.3 ㎖ 및 1 mM 환원형 glutathion (GSH) 용액 0.3 ㎖를 넣고 0.25 mM H₂O₂용액 0.3 ㎖를 가함으로서 25℃에서 반응을 시작시켜 340 nm에서 측정하였다. 그리고 효소활성의 1단위를 1분간 1 μnmol의 산화형 NADPH를 생성하는 효소의 양으로 나타내었다.

Catalase (CAT) 활성 측정

간조직의 catalase (CAT) 활성은 Aebi 등의 방법으로 측정하였다. 즉 50 mM potassium phosphate buffer (pH 7.0) 2.89 ㎖에 기질인 30 mM H₂O₂를 100 ㎕를 넣어 25℃에서 5 분간 반응시켰다. 여기에 시료 10 ㎕를 가하여 3.0 ㎖가 되도록 하고 25℃, 240 nm에서 5분간 흡광도를 측정함. H₂O₂의 농도를 구하여 효소활성도를 계산하였다.

Thiobarbituric acid reaction substance (TBARS) 정량

간조직 중의 TBARS는 Uchiyama와 Mihara의 방법에 따라 조직 0.5 g에 9배 부피의 0.01 M sodium phospate buffer (pH7.0)를 넣어 균질화한 후, 0.5 ㎖를 취하여 1% phosphoric acid 3 ㎖과 0.06 M TBA용액 1 ㎖을 첨가하여 2,500 ㅧg에서 10분간 원심분리한 후, TBA 반응물이 존재하는 n-butanol 층을 취하여 535 nm에서 흡광도를 측정하였다.

혈청 중 Glutamate oxaloacetate transaminase (GOT), glutamate pyruvate transaminase (GPT) 활성 측정

혈청 GOT와 GPT 활성도는 Reitman과 Frankel의 방법을 응용한 아산제약의 kit를 사용하여 측정하였다. 즉 GOT 기질로 L-aspartate와 ∝-ketoglutaric acid, GPT 기질로 D,L-alanine과 ∝-ketoglutaric acid 용액에 각각 혈청을 가하여 37℃에서 GOT는 60분, GPT는 30분간 효소반응을 시킨 후 생성된 oxaloacetate 및 pyruvic acid에 2,4-dinitrophenyl hydrazine 정색시약과 0.4 NaOH를 가하여 잘 혼합한 다음 실온에 10분간 방치한 후 505 nm에서 비색정량을 하였다.

간조직의 산화단백질(Carbonyl value) 측정

간조직의 microsome 및 mitochondria중의 산화도니 단백질의 함량은 Levine등의 방법에 따라 측정하였다. 0.1 ㎖의 시료에 trichloroacetic acid(TCA) 0.5 ㎖를 혼합한 후 3,000 rpm에서 10분간 원심분리하여 얻어진 상층 액을 제거한 뒤 잔사에 다시 10 mM dinitrophenylhadrazine (DNPH) 0.5 ㎖ 가하여 15분마다 교반하면서 1시간 동안 실온에 방치한 후 3,000 rpm에서 10분간 원심분리 하였다. 이때 얻어진 상층 액을 제거한 후 잔사에 ethanol/ethyl acetate (1:1, v/v) 3 ㎖를 첨가하여 실온에서 10분간 방치한 다음 다시 3,000 rpm에서 10분간 원심분리한 후 얻어진 잔사를 6 M guanidine [20 mM potassium phosphate buffer (pH 7.3)에 용해] 1.0 ㎖를 첨가하여 혼합한 후 37℃의 항온수조에서 15분간 가온한 후 3,500 rpm에서 10분간 원심 분리하여 상층액을 얻었다. 이때 carbonyl value의 양은 360 nm 흡광도의 파장에서 분자흡광계수 (ε=22,000)를 이용하여 계산하였다.

간조직의 Superoxide radical (O₂·^-) 활성 측정

간 조직 중의 O₂·^- 함량을 측정하기 위하여 1 g의 간 조직을 0.25 M sucrose 용액으로 균질화 시킨 후 8,000 x g에서 원심분리하여 mitochondria 분획을 얻은 후 다시 105,000 x g에서 원심분리 하여 cytosol과 microsome분획을 얻었다. Superoxide radical (O₂·^-) 함량 측정은 AZZI등의 방법에 준해 실시하였다.

간조직의 Hydrogen peroxide (H₂O₂) 활성 측정

간 조직 중의 H₂O₂ 함량을 측정하기 위하여 1 g의 간 조직을 0.25 M sucrose 용액으로 균질화 시킨 후 8,000 x g에서 원심분리하여 mitochondria 분획을 얻은 후 다시 105,000 x g에서 원심분리 하여 cytosol과 microsome분획을 얻었다. Hydrogen peroxide (H₂O₂) 활성 측정은 Gay와 Gebicki의 방법 따라 xylenol orange를 이용하여 560 nm에서 흡광도 증가로 측정하였다.

통계분석

모든 실험결과에 대한 통계처리는 각 실험군 별로 표준차이가 있는가를 검증하기 위해 분산분석을 수행하였으며 분산분석 (ANOVA 검증)결과 유의성이 발견된 경우 Tukey's HSD test에 의해 군 간의 유의도를 분석하였다.

[ 제조예 1] 황칠 열수추출물의 제조

황칠 잎을 세척하고, 수분함량이 10% 내외로 건조한 후 잎은 2~3㎝로 파쇄, 절단하였다. 전처리한 황칠 잎에 물을 10배 가하여 90~95℃에서 4시간 환류추출한 후, 여과, 감압농축(60℃ 이하)하여 고형물 함량이 10Brix가 되게 조절한 후, 동결건조하여 생물전환시료로 사용하였다.

[실시예 1] 황칠액 발효대사체의 제조

1-1. 균주 및 전배양

EM 액체발효액을 유당 1%, 꿀 1%, 맥각 1%를 첨가한 증류수에 37℃, 24시간 정치배양한 후, 본 배양에 사용하였다.

1-2. 생물전환

제조예 1에서 얻은 황칠 열수 추출물(10Brix)에 올리고당 2%, 맥강2%를 가한 후 100℃,10분간 살균한 다음 EM 액체발효액 5%를 접종하여 37℃,5일간 50rpm으로 배양하였다.

1-3. 액체 발효대사체의 제조

상기 1-2에서 얻은 생물전환액을 100℃, 10분간 살균 후 여과하여 감압농축 후 동결건조하여 황칠액 발효대사체를 얻었다

[실험예 1] 황칠나무 발효대사체의 in vitro 실험을 통한 항산화 활성 실험

1-1) DPPH(1,1-Dipicryl -2-picrylhydrazyl) 라디칼 소거능 측정

DPPH는 짙은 자색을 띄는 비교적 안정한 free radical로서 항산화제, 방향족 아민류 등에 환원되어 색이 탈색되는데 이것은 다양한 천연 소재로부터 항산화 물질의 전자공여능을 측정 하는 데 많이 이용되고 있다. 이러한 전자공여능은 활성라디칼에 전자를 공여하여 식품 중의 지방 산화를 억제하는 목적으로 사용되고 있을 뿐만 아니라 인체 내에서 활성라디칼에 의한 노화를 억제하는 작용의 목적으로 이용되고 있다. 이는 식물성 추출물의 항산화 활성을 간단하게 측정할 뿐만 아니라 실제 항산화 활성과도 연관성이 있다. 황칠 열수 및 발효대사체 추출물의 DPPH radical 소거능을 관찰한 결과는 도 1과 같다. 황칠 열수 추출물에서 100㎍/㎖에서 10.95%, 400㎍/㎖에서 42.43%, 800㎍㎖에서 77.75%를, 황칠액 발효대사체 추출물에서는 100㎍/㎖에서 6.85%, 400㎍/㎖에서 29.93%, 800㎍㎖에서 55.56%, 1200㎍/㎖에서 79.97%의 소거효과를 나타내었다.

1-2) NO(Nitric oxide) 소거 효과

Nitric oxide(NO)는 활성산소 중 하나이며, 최근 염증 유발에 중요한 역할을 하는 것으로 알려진 NO 소거 활성을 관찰한 결과 도 2와 같다. NO의 소거능은 시료의 농도가 많아질수록 증가되었으며, 황칠 열수추출물에서 100㎍/㎖에서 39.41%, 400㎍/㎖에서 43.76%, 800㎍/㎖에서 50.35%, 1200㎍/㎖에서 54.59%, 1600㎍/㎖에서 58.06%를, 황칠액 발효대사체 추출물에서 100㎍/㎖에서 58.10%, 400㎍/㎖에서 59.67%, 800㎍㎖에서 60.79%, 1200㎍/㎖에서 63.25%, 1600㎍/㎖에서 67.60%의 소거효과를 나타내었다.

1-3) ABTS ⁺ 소거효과

ABTs⁺ 라디칼 소거능은 항산화 활성을 스크리닝 하는데 많이 이용하는 방법으로, 이 방법에 의한 항산화 활성은 ABTs 라디칼을 억제하거나 소거하는 것에 의해 이루어진다. 황칠 열수 및 발효대사체 추출물의 ABTs+ 소거활성을 측정한 결과는 도 3과 같다.

황칠 열수추출물에서 100㎍/㎖에서 29.99%, 400㎍/㎖에서 88.88%를, 황칠액 발효대사체 추출물에서 100㎍/㎖에서 23.17%, 400㎍/㎖에서 75.76%의 소거효과를 나타내었다. DPPH의 경우 자유 라디칼이지만 ABTs는 양이온 라디칼이라는 점에서 또는 페놀 물질의 종류가 다름에 따라 두 기질에 결합하는 정도가 다르며 결국 라디칼을 제거하는 능력의 차이가 나는데 기인하는 것으로 사료된다.

1-4) 환원력 측정

항산화 활성의 여러 가지 기작 중에서 활성 산소종 및 유리기에 전자를 공여하는 능력을 환원력이라고 하며, 어떤 물질의 환원력은 항산화 활성에 대한 중요한 인자로 작용한다. 물질의 환원력은 항산화 능력과 관련이 있는 중요한 인자로서 항산화제와 같이 환원력을 가진 물질은 Fe3+-ferricyanide Fe3 복합체를 형태로 환원시켜 푸른색을 띠게 되고 이것을 700nm에서 측정하는데, 흡광도 수치는 그 자체가 증가할수록 높은 환원력을 나타낸다. 황칠 열수 및 발효대사체 추출물에서 환원력을 측정한 결과(도 4.), 황칠 열수추출물에서 100㎍/㎖에서 0.22%, 400㎍/㎖에서 0.33%, 800㎍/㎖에서 0.55%, 1200㎍/㎖에서 0.85%, 1600㎍/㎖에서 1.00%, 2000㎍/㎖에서 1.48%를, 황칠액 발효대사체 추출물에서 100㎍/㎖에서 0.09%, 400㎍/㎖에서 0.31%, 800㎍㎖에서 0.56%, 1200㎍/㎖에서 0.79%, 1600㎍/㎖에서 0.90%, 2000㎍/㎖에서 1.18%의 환원력을 보였다.

1-5) 총 페놀 함량

페놀성 화합물은 식물계에 널리 분포되어 있는 2차 대사산물로서 플라보노이드, 카테친(catechin), 탄닌(tannin)류로 크게 구분되며, 이들 물질들은 전자공여 능이 있어 높은 항산화 작용을 나타내는 것으로 알려져 있다. 페놀성 화합물이 반응을 억제시킬 수 있는 것은 페놀이 수소원자를 라디칼에 제공하여 라디칼을 안정하게 만들고, 공명 혼성체를 형성할 수 있기 때문에 비교적 안정하여 산소와 반응이 어려워서 유리 라디칼을 안정화시키기 때문이다. 따라서 일반적으로 식물성분의 항산화 활성은 페놀성 화합물이 원인물질로 관련되어 있는 것으로 알려져 있어 gallic acid를 표준용액으로 하여 작성한 검정곡선으로부터 황칠 열수 및 발효대사체 추출물의 1mg/ml 속의 총 페놀 함량은 조사한 결과는 하기 표 1과 같다

총페놀 함량

	페놀 (mg/g)
황칠 열수추출물 (A)	69.269 ± 0.18
황칠액 발효대사체(B)	63.206 ± 0.70

1-6) 총 플라보노이드 함량

플라보노이드는 천연물에서 분리된 대표적인 항산화 물질로 분류되기도 하며 phenolic acid에 속하는 poly phenol 물질과 유사한 항산화 기능을 가지며, 항산화 물질들은 체내에서 자유기의 생성과 전파를 억제하는데 참여한다. 항산화 기능과 산화 촉진 인자인 금속이온과 착염을 형성하는 기능으로 인해 프리 라디컬이나 electrophiles, 노화방지, 심혈관순환계질환의 예방효과가 있는 것으로 밝혀졌다. 이는 플라보노이드가 중금속류와 킬레이트착화합물을 형성하여 금속들이 산화촉진제로 작용하지 못하도록 하며 또한 스스로가 항산화제로 작용하여 이미 생산된 free radical을 없애는 radical scaven ger로 작용한다는 사실에 근거한다. 따라서 페놀 화합물과 같이 플라보노이드 또한 식물성분의 항산화 활성의 원인 물질로 관련되어 있는 것으로 알려져 있어 quercetin을 표준용액으로 하여 작성한 검정곡선으로부터 황칠 열수 및 발효대사체 추출물의 1mg/ml 속의 총 플라보노이드 함량을 조사한 결과 표 2와 같다.

총 플라보노이드 함량

	플라보노이드 (mg/g)
황칠 열수추출물 (A)	35.925 ± 1.19
황칠액 발효대사체(B)	25.769 ±±.80

[실험예 2] 황칠액 발효대사체의 in vivo 실험을 통한 항노화 활성 실험

2-1) Catalase ( CAT ) 활성 측정

Catalase는 조직 세포 속에 존재하여 대사산물인 H₂O₂를 순간적으로 산화시켜 H₂O와 O₂로 분해함으로써 생체를 산소 독으로부터 보호함으로서 과산화적 손상을 방지하는 간조직의 catalase를 관찰한 결과 도 5와 같다. 정상군에 비해 고지방·고콜레스테롤 공급군에서 유의적이지는 않지만 감소하였으며, 고지방·고콜레스테롤,황칠발효대사5%를 공급한 군에서는 고지방·고콜레스테롤 공급군에 비해 유의적이지는 않았지만 증가하는 경향을 나타내었다.

2-2) 혈청 중 GOT(Glutamate oxaloacetate transaminase) 및 GPT(glutamate pyruvate transaminase) 활성 측정

임상에서 GOT 및 GPT는 간세포에 다량 존재하는 효소로 간 손상 시 세포 외로 다량 유출 되어 혈액에 증가됨으로서 간 손상의 지표로 이용되는 효소이다. 이러한 간의 괴사를 반영하는 GOT와 간조직의 비대화 및 간의 생태를 반영하는 GPT의 활성을 측정한 결과는 도 6과 같다. GOT 활성은 정상군에 비해 고지방·고콜레스테롤 공급군에서 유의적으로 증가되어 졌으며, 고지방·고콜레스테롤 공급군에 비해 황칠발효대사체을 공급한 군에서는 유의적으로 감소하였다. GPT 활성 또한 정상군에 비해 고지방·고콜레스테롤 공급군에서 유의적으로 증가되어졌으며, 고지방·고콜레스테롤 공급군에 비해 황칠발효대사체를 공급한 군에서는 유의적이지는 않았지만 감소하는 경향을 나타내었다. 따라서 황칠발효대사체 내 함유된 성분이 고지방·고콜레스테롤 식이로 유도된 비만쥐의 간 손상 완화에 효과적으로 작용가능 할 것으로 사료된다.

2-3) 간조직의 과산화수소(H ₂ O ₂ ) 활성 측정

과산화수소는 세포내ㅇ외에서 모두 독성을 나타내는 기능을 한다. 지질과산화물을 생성하여 세포의 기능을 손상시키는 과산화수소 (H₂O₂) 활성을 간조직에서 관찰한 결과는 도 7과 같다. 사이토졸에서 측정한 결과 정상군에 비해 고지방·고콜레스테롤 공급군에서 유의적으로 증가하는 경향을 나타내었고, 고지방·고콜레스테롤 공급군에 비해 황칠액 발효대사체 군에서는 유의적이지는 않지만 감소하는 경향을 나타내었다 미토콘드리아에서 측정한 결과 정상군에 비해 고지방·고콜레스테롤 공급군에서 유의적으로 증가하는 경향을 나타내었으며, 고지방·고콜레스테롤 공급군에 비해 황칠발효대사체 공급군에서는 유의적이지는 않지만 감소하는 경향을 나타내었다.

2-4) GSHpx ( Glutathione reductase ) 활성 측정

GSH-px는 생체 내 H₂O₂와 완원형 글루타치온(GSH)으로부터 산화형 글루타치온(GSSG)과 H₂O₂를 생성하는 반응과 기타 과산화물 (ROOH)로부터 알코올 (ROH) 및 H₂O₂를 생성하는 반응을 촉매한다. 또한 셀레늄을 함유하는 항산화 효소로 비타민 E와 함께 관산화물을 제거함으로서 세포막의 손실을 방어하는 GSH-px 활성을 간 조직에서 관찰한 결과 도 8과 같다. 정상군에 비해 고지방·고콜레스테롤 공급군에서 유의적이지는 않지만 감소하였으며, 황칠액 발효대사체 군에서는 고지방·고콜레스테롤 공급군에 비해 유의적이지는 않지만 증가하는 경향을 나타내었다.

2-5) 간조직의 Superoxide radical (O ₂ · ^- ) 활성 측정

유해산소들은 DNA에도 손상을 주어 돌연변이를 일으킬 수 있고 나아가서는 종양이나 암의 원인이 될 수 있다. 특히 superoxide radical (O₂·^-)은 활성산소종 생성의 주요한 원인으로, 세포에 상해를 주며 특히 세포막의 다가불포화지방산에 작용하여 지질과산화물을 생성하고 이로 인해 세포의 기능을 손상시키는 것으로 알려져 있다. 간조직의 microsome과 mitochondria에서 superoxide radical (O₂·^-) 함량을 측정한 결과는 Fig. 9와 같다. 간 조직 microsome에서 superoxide radical (O₂·^-)을 측정한 결과 정상군에 비해 고지방·고콜레스테롤 공급군에서 유의적으로 증가되었으며, 고지방·고콜레스테롤 공급군에 비해 황칠액 발효대사체를 공급한 군에서 유의적이지는 않지만 감소되었으며, 황칠액 발효대사체 공급군에서는 유의적으로 감소하는 경향을 나타내었다. 간조직의 mitochondria에서는 정상군에 비해 고지방·고콜레스테롤 공급군에서 유의적으로 증가되어졌고, 고지방·고콜레스테롤 공급군에비해 황칠액 발효대사체 공급군에서는 유의적이지는 않지만 감소하였다.

2-6) 간조직의 산화단백질 (Carbonyl value) 측정

활성산소에 의해서 단백질의 산화가 쉽게 발생하게 된다. 지질과 단백질은 생체막에 같이 존재함으로 주된 발생장소인 생체막에서 단백질이 활성산소에 의해 쉽게 공격 받는다. 이러한 간조직의 산화적 손상의 지표로 삼고 있는 산화단백질의 생성지표인 carbonly가 함량을 측정한 결과는 Fig. 10과 같다. Microsome에서의 산화단백질 함량은 정상군에 비해 고지방·고콜레스테롤 공급군에서 유의적으로 증가 되었으며, 고지방·고콜레스테롤 공급군에 비해 황칠액 발효대사체군에서는 유의적으로 감소되었다. 간조직의 mitochondria에서는 정상군에 비해 고지방·고콜레스테롤 공급군에서 유의적으로 증가되었으며, 고지방·고콜레스테롤 공급군에 비해 황칠액 발효대사체군에서는 유의적이지는 않았지만 감소하였다.

2-7) TBARS(Thiobarbituric acid reaction substance) 정량

지질과산화 반응은 세포막의 불포화 지방산과 일련의 연쇄반응을 통하여 지질과산화 유발을 촉진하고, 지질과산화의 최종 산물인 말론디알데히드(malondialdehyde)의 농도가 증가되어 세포에 산화적 손상이 일어나게 되면 생리적 기능 저하에 의해 간 질환 등의 여러 가지 질병을 초래하여 노화나 유전적 장애의 원인이 되는 것으로 알려져 있으며, 또한 더 나아가 DNA를 손상하여 돌연변이를 일으키고 퇴행성 질환을 유발시키는 등 유독성이 있는 것으로 알려져 있다. 이러한 산화 스트레스의 주요 지표인 지질과산화물이 생성되는 MDA 함량을 간 조직에서 관찰한 결과 도 11와 같다. 정상군에 비해 고지방·고콜레스테롤 공급군에서 유의적으로 증가되어 졌으며, 고지방·고콜레스테롤 공급군에 비해 황칠액 발효대사체공급군에서는 유의적으로 감소하였다.

2-8) 체중증가량, 식이섭취량 및 식이효율

황칠액 발효대사체의 농도별 체중증가량, 식이섭취량 및 식이효율을 관찰한 결과는 도 12와 같다. 체중증가량은 정상군에 비해 고지방·고콜레스테롤 공급군에서 유의적으로 증가하였으며, 고지방·고콜레스테롤 공급군에 비해 황칠액 발효대사체 5%와 10%군에서 감소하는 경향을 나타내었다. 식이섭취량은 고지방·고콜레스테롤 공급군에서 유의적이지는 않지만 증가하였고, 고지방·고콜레스테롤 공급군에 비해 황칠액 발효대사체군에서는 유의적으로 감소하는 경향을 나타내었다. 식이효율은 정상군에 비해 고지방·고콜레스테롤 공급군에서 유의적이지는 않지만 증가하였고, 고지방·고콜레스테롤 공급군에 비해 황칠액 발효대사체에서도 유의적이지는 않지만 감소하는 경향을 나타내었다.

2-9) 혈청의 중성지질 (triglyceride) 함량

고지혈증, 고혈압, 동맥경화증 등의 심혈관 질환에서는 혈중 콜레스테롤 및 지질 농도의 증가를 흔히 관찰할 수 있다. 이러한 상태에서 지질대사의 변화로는 고지혈증이 초래되는데 황칠발효대사체에 따른 혈청 중의 중성지방을 관찰한 결과는 도 13과 같다. 혈청중의 중성지방 농도는 정상군에 비해 고지방·고콜레스테롤 공급군에서 유의적으로 증가하는 경향을 보였으며, 고지방·고콜레스테롤 공급군에 비해 활칠발효대사체군에서는 유의적이지 않지만 감소하는 경향을 나타내었다.

2-10) 혈중의 총 콜레스테롤 함량

심혈관질환에서는 혈중 콜레스테롤 및 지질 농도의 증가를 흔히 관찰할 수 있는데, 이러한 상태를 반영하는 지표인 total-콜레스테롤 함량의 결과는 도 14와 같다. 혈청중의 총콜레스테롤 농도는 정상군에 비해 고지방·고콜레스테롤 공급군에서 증가하였고, 황칠발효대사체 공급한 군에서는 고지방·고콜레스테롤 공급군에 비해 각각 감소하는 경향을 나타내었으나 모두 유의성은 없었다.

2-11) 혈중의 HDL-콜레스테롤 및 LDL-콜레스테롤 함량

혈중의 HDL 및 LDD 콜레스테롤의 수준을 관찰한 결과는 도 15와 같다. HDL-콜레스테롤은 정상군에 비해 고지방·고콜레스테롤 공급군에서 유의적이지는 않지만 감소하였으며 황칠발효대사체 공급군에서도 고지방·고콜레스테롤 공급군에 비해 유의적이지는 않았지만 각각 증가하는 경향을 보였다. 반면, LDL-콜레스테롤은 고지방·고콜레스테롤 공급군에서 정상군에 비해 유의적으로 증가하였으나 황칠발효대사체 공급군에서는 유의적이지는 않지만 감소하는 경향을 나타내었다. 본 실험 결과에서는 황칠발효대사체의 공급으로 고콜레스테롤을 유도한 경우에 중성지질과 콜레스테롤을 감소시킬 뿐만 아니라 HDL-콜레스테롤을 상승시키고 LDL-콜레스테롤은 감소시키는 결과를 나타냄으로서 지질대사 개선효과를 확인할 수 있다.

[실시예 4] 항노화 기능성 환제 황칠단 제조

실시예 2에 따른 액체발효된 황칠액 발효대사체를 포함하는 환제를 제조하고자 식약청 건강기능식품 허가 소재, KISTI 학술논문, 보고서, 특허, 동향 등을 통해 황칠단 제조에 부합되는 원재료를 검색하였고, 검색결과를 기초로 선정한 원재료 및 그 특징은 하기 표 3과 같다. 또한, 표 6의 재료를 배합한 황칠단의 최적 배합비는 하기 표 4과 같다. 표 4의 조성비로 이루어진 황칠단의 제조과정은 도 16에 나타내었다.

황칠단 원재료의 종류 및 특징

분류	원재료명	특징(기능성 등)	비고
고상	황칠발효대사체	노화방지	자체제조
	효모분말	항암·면역·기력증진, 노화방지	구입
	클로렐라	항암면역·혈행개선 식약처 건기식 인정소재	구입
	마늘분말	항암·기력증진·혈중지질개선 등 식약처 건기식 인정소재	구입
	유당	부형재 장내 유용세균 생육촉진	구입
	뽕잎분말	항당뇨, 노화방지 식약처 인정소재	구입
	마분말	항당뇨	구입

황칠단 최적 배합비율 확립

분류	원료비	함량(%)	시제품(10.000환x5g : 50kg)
고상	황칠발효대사체	40	20kg
	효모분말	8	4kg
	클로렐라분말	8	4kg
	마늘분말	8	4kg
	유당	20	10kg
	뽕잎분말	8	4kg
	마분말	8	4kg
	합계	100%	50kg

본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.

Claims

황칠나무의 잎, 줄기, 또는 이들의 혼합물의 액상 추출물을 발효하여 얻은 황칠액 발효대사체를 유효성분으로 포함하는, 항노화 기능성 조성물.
제1항에 있어서,
상기 황칠액 발효대사체는 황칠나무의 액상 추출물을 발효한 발효대사체를 농축한 농축액 또는 이의 건조분말인 것을 특징으로 하는 항노화 기능성 조성물.
제1항에 있어서,
상기 조성물은 항노화 기능성 약제학적 조성물, 식품 조성물, 및 화장료 조성물 중 선택되는 것을 특징으로 하는 항노화 기능성 조성물.
제1항에 있어서,
상기 약제학적 조성물은 고지혈증, 고혈압, 동맥경화증, 및 골다공증 중 선택된 질환의 치료 또는 예방용인 것을 특징으로 하는 항노화 기능성 조성물.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 황칠액 발효대사체 30 내지 50 중량%, 유당 10 내지 30 중량%, 및 효모, 클로렐라, 마늘분말, 뽕잎분말, 및 마 분말 중 선택된 1 이상의 보조제 분말 20~40 중량%를 포함하는 것을 특징으로 하는, 항노화 기능성 조성물.
황칠액 발효대사체 30 내지 50 중량%, 유당 10 내지 30 중량%, 및 효모 5~10 중량%, 클로렐라 분말 5~10 중량%, 마늘분말 5~10 중량%, 뽕잎분말 5~10 중량%, 및 마 분말 5~10 중량%를 포함하여 제조된 고형환인, 항노화 기능성 황칠단.