KR20160091963A - 히드라지닐-피롤로 화합물 및 콘쥬게이트 제조 방법 - Google Patents

히드라지닐-피롤로 화합물 및 콘쥬게이트 제조 방법 Download PDF

Info

Publication number
KR20160091963A
KR20160091963A KR1020167017098A KR20167017098A KR20160091963A KR 20160091963 A KR20160091963 A KR 20160091963A KR 1020167017098 A KR1020167017098 A KR 1020167017098A KR 20167017098 A KR20167017098 A KR 20167017098A KR 20160091963 A KR20160091963 A KR 20160091963A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
substituted
alkyl
heteroaryl
certain embodiments
cycloalkyl
Prior art date
Application number
KR1020167017098A
Other languages
English (en)
Other versions
KR102320019B1 (ko
KR102320019B9 (ko
Inventor
데이비드 라부카
아론 에드워드 알버스
로마스 알비다스 쿠디르카
앨버트 더블유. 가로팔로
Original Assignee
레드우드 바이오사이언스 인코포레이티드
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 레드우드 바이오사이언스 인코포레이티드 filed Critical 레드우드 바이오사이언스 인코포레이티드
Publication of KR20160091963A publication Critical patent/KR20160091963A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR102320019B1 publication Critical patent/KR102320019B1/ko
Publication of KR102320019B9 publication Critical patent/KR102320019B9/ko

Links

Images

Classifications

    • A61K47/48061—
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/545—Heterocyclic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/5375—1,4-Oxazines, e.g. morpholine
    • A61K31/5386—1,4-Oxazines, e.g. morpholine spiro-condensed or forming part of bridged ring systems
    • A61K47/48215—
    • A61K47/48376—
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6807—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug or compound being a sugar, nucleoside, nucleotide, nucleic acid, e.g. RNA antisense
    • A61K47/6809—Antibiotics, e.g. antitumor antibiotics anthracyclins, adriamycin, doxorubicin or daunomycin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6889—Conjugates wherein the antibody being the modifying agent and wherein the linker, binder or spacer confers particular properties to the conjugates, e.g. peptidic enzyme-labile linkers or acid-labile linkers, providing for an acid-labile immuno conjugate wherein the drug may be released from its antibody conjugated part in an acidic, e.g. tumoural or environment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D209/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D209/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with one carbocyclic ring
    • C07D209/04—Indoles; Hydrogenated indoles
    • C07D209/10—Indoles; Hydrogenated indoles with substituted hydrocarbon radicals attached to carbon atoms of the hetero ring
    • C07D209/14—Radicals substituted by nitrogen atoms, not forming part of a nitro radical
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
    • C07D405/12—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D498/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D498/12—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains three hetero rings
    • C07D498/18—Bridged systems

Abstract

본 개시는 콘쥬게이트 구조 및 이들 콘쥬게이트를 제조하는데 사용되는 히드라지닐-피롤로 화합물 구조를 제공한다. 또한, 본 개시는 이러한 콘쥬게이트의 제조 방법뿐만 아니라 그것의 사용 방법을 포함한다. 본 개시의 양태는 제약 조성물을 포함한다. 제약 조성물은 여기 설명된 콘쥬게이트와 제약학적으로 허용되는 부형제를 포함한다. 본 개시의 양태는 대상에 콘쥬게이트를 송달하는 방법을 포함한다. 이 방법은 대상에 여기 설명된 콘쥬게이트의 유효량을 투여하는 단계를 포함한다. 본 개시의 양태는 대상에서 상태의 치료 방법을 포함한다.

Description

히드라지닐-피롤로 화합물 및 콘쥬게이트 제조 방법{HYDRAZINYL-PYRROLO COMPOUNDS AND METHODS FOR PRODUCING A CONJUGATE}
관련 출원의 상호 참조
35 U.S.C. §119 (e)에 따라서 본 출원은 2013년 11월 27일자로 제출된 미국 임시 출원 No. 61/909,897의 우선권을 주장하며, 이 출원은 그 전체가 여기 참고로 포함된다.
단백질-소분자 치료용 콘쥬게이트의 분야는 상당히 앞서있으며, 다수의 임상적으로 유익한 약물을 제공하며, 수년 내로 더 유망하게 될 것이다. 단백질-콘쥬게이트 치료제는, 예를 들어 특이성, 다중 기능성 및 상대적으로 낮은 표적외(off-target) 활성으로 인하여 몇 가지 이점을 제공할 수 있으며, 이로써 더 적은 부작용을 초래한다. 단백질의 화학적 변형은 이들을 더 효력 있게, 안정하게 또는 다중방식으로 만듦으로써 이들 이점을 확장할 수 있다.
다수의 표준 화학 형질전환이 단백질에 대해 번역 후 변형을 만들고 조작하기 위해서 통상 사용된다. 특정 아미노산의 측쇄를 선택적으로 변형할 수 있는 다수의 방법이 있다. 예를 들어, 카복실산 측쇄(아스파르테이트 및 글루타메이트)는 수용성 카보디이미드 시약으로 초기 활성화에 의해 표적화될 수 있고, 이후 아민과 반응한다. 유사하게, 리신은 활성화된 에스테르 또는 이소티오시아네이트의 사용을 통해서 표적화될 수 있고, 시스테인 티올은 말레이미드 및 α-할로-카보닐로 표적화될 수 있다.
화학적으로 변경된 단백질 치료제나 시약의 생성에서 한 가지 유의한 난관은 생물학적으로 활성인 균질한 형태로 단백질을 생성하는 것이다. 약물 또는 검출가능한 표지와 폴리펩티드의 콘쥬게이션은 제어가 어려울 수 있고, 이로써 화학적 콘쥬게이션의 위치와 부착된 약물 분자의 수에 차이가 있는 콘쥬게이트들의 불균질한 혼합물이 얻어진다. 일부 예에서, 콘쥬게이션 부위 및/또는 폴리펩티드에 콘쥬게이트된 약물 또는 검출가능한 표지를 합성 유기화학의 도구를 사용하여 제어함으로써 폴리펩티드 상에서 화학적 결합의 정확하며 선택적인 형성을 지향하는 것이 바람직할 수 있다.
본 개시는 콘쥬게이트 구조 및 이들 콘쥬게이트를 제조하는데 사용되는 히드라지닐-피롤로 화합물 구조를 제공한다. 또한, 본 개시는 이러한 콘쥬게이트의 제조 방법뿐만 아니라 그것의 사용 방법을 포함한다.
본 개시의 양태는 식 (I)의 적어도 하나의 변형된 아미노산 잔기를 포함하는 콘쥬게이트를 포함한다:
Figure pct00001
상기 식에서,
m은 0 또는 1이고;
R1은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택되고;
R2 및 R3은 각각 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택되거나, 또는 R2와 R3이 선택적으로 환형 연결되어 5 또는 6-원 헤테로시클릴을 형성하고;
Z1, Z2, Z3 및 Z4는 각각 독립적으로 CR11, NR12, O 및 S로부터 선택되며, Z1, Z2, Z3 및 Z4 중 하나는 선택적이고;
X5는 C이고;
Y5, R11 및 R12는 각각 독립적으로 수소, 할로겐, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택되고;
Q1는 Z4 또는 X5와의 결합이며, Q1이 Z4와의 결합이면 Z4는 CR11 또는 NR12이고 R11 또는 R12는 부재하거나, 또는 Q1이 X5와의 결합이면 Y5는 부재하고;
R15는 -L-W1이거나 또는 -L-W1가 Z1, Z2, Z3 또는 Z4 중 하나에 부착되며, -L-W1이 Z1, Z2, Z3 또는 Z4 중 하나에 부착되면 R15는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택되고;
L은 -(T1-V1)a-(T2-V2)b-(T3-V3)c-(T4-V4)d-(T5-V5)e-를 포함하는 링커이며, 여기서 a, b, c, d 및 e는 각각 독립적으로 0 또는 1이고, a, b, c, d 및 e의 합은 1 내지 5이고;
T1, T2, T3, T4 및 T5는 각각 독립적으로 (C1-C12)알킬, 치환된 (C1-C12)알킬, (EDA)w, (PEG)n, (AA)p, -(CR13OH)h-, 피페리딘-4-아미노(P4A), 파라-아미노벤질옥시카보닐(PABC), 메타-아미노벤질옥시카보닐(MABC), 파라-아미노벤질옥시(PABO), 메타-아미노벤질옥시(MABO), 파라-아미노벤질, 아세탈 기, 디설파이드, 하이드라진, 프로테아제-절단성 부분, 글루쿠로니다아제-절단성 부분, 베타-락타마아제 절단성 부분, 및 에스테르로부터 선택되며, 여기서 EDA는 에틸렌 디아민 부분이고, PEG는 폴리에틸렌 글리콜 또는 변형된 폴리에틸렌 글리콜이고, AA는 아미노산 잔기이고;
w는 1 내지 20의 정수이고;
n은 1 내지 30의 정수이고;
p는 1 내지 20의 정수이고;
h는 1 내지 12의 정수이고; 및
V1, V2, V3, V4 및 V5는 각각 독립적으로 공유 결합, -CO-, -NR11-, -CONR11-, -NR11CO-, -C(O)O-, -OC(O)-, -O-, -S-, -S(O)-, -SO2-, -SO2NR11-, -NR11SO2- 및 -P(O)OH-로 구성되는 군으로부터 선택되며,
여기서 W1 및 W2 중 하나는 폴리펩티드이고, 나머지 하나는 화학 물질이며,
a, b, c, d 및 e의 합이 2이고 T1-V1, T2-V2, T3-V3, T4-V4 또는 T5-V5 중 하나가 (PEG)n-CO일 때, n은 6이 아니다.
일부 실시형태에서, 콘쥬게이트는 식 (II)의 적어도 하나의 변형된 아미노산 잔기를 포함한다:
Figure pct00002
상기 식에서,
m, R1, R2, R3, X5, L, Q1, W1, W2, Y5, Z1, Z2, Z3 및 Z4는 식 (I)에서 정의된 것과 같다.
일부 실시형태에서, 콘쥬게이트는 식 (III)의 적어도 하나의 변형된 아미노산 잔기를 포함한다:
Figure pct00003
상기 식에서,
m, R1, R2, R3, X5, L, W1 및 W2는 식 (I)에서 정의된 것과 같고;
X1, X2, X3 및 X4는 각각 독립적으로 C, N, O 및 S로부터 선택되고;
Y1, Y2, Y3, Y4 및 Y5는 존재한다면 각각 독립적으로 수소, 할로겐, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택되며, Y1 및 Y2, Y2 및 Y3, 또는 Y3 및 Y4는 선택적으로 환형 연결되고;
Q1는 X4 또는 X5와의 결합이며, Q1이 X4와의 결합이면 Y4는 부재하거나, 또는 Q1이 X5와의 결합이면 Y5는 부재한다.
일부 실시형태에서, Y1 및 Y2, Y2 및 Y3, 또는 Y3 및 Y4는 환형 연결되어 융합된 벤조 고리를 형성한다.
일부 실시형태에서, 콘쥬게이트는 식 (IVa) 또는 (IVb)의 적어도 하나의 변형된 아미노산 잔기를 포함한다:
Figure pct00004
상기 식에서,
m, R1, R2, R3, R12, X5, Y5, L, W1 및 W2는 식 (I)에서 정의된 것과 같고;
X1 및 X3은 각각 독립적으로 O, S 또는 NR12이고;
Y1, Y2, Y3 및 Y4는 존재한다면 각각 독립적으로 수소, 할로겐, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택되며, Y1 및 Y2 또는 Y3 및 Y4는 선택적으로 환형 연결되고;
Q1는 X4 또는 X5와의 결합이며, Q1이 X4와의 결합이면 X4는 C이고 Y4는 부재하거나, 또는 Q1이 X5와의 결합이면 Y5는 부재하고;
Q2는 X3 또는 X5와의 결합이며, Q2가 X3과의 결합이면 X3은 NR12이고 R12는 부재하거나, 또는 Q2가 X5와의 결합이면 Y5는 부재한다.
일부 실시형태에서, Y1 및 Y2 또는 Y3 및 Y4는 환형 연결되어 융합된 벤조 고리를 형성한다.
일부 실시형태에서,
T1은 (C1-C12)알킬 및 치환된 (C1-C12)알킬로부터 선택되고;
T2, T3, T4 및 T5는 각각 독립적으로 (EDA)w, (PEG)n, (C1-C12)알킬, 치환된 (C1-C12)알킬, (AA)p, -(CR13OH)h-, 피페리딘-4-아미노, MABC, MABO, PABO, PABC, 파라-아미노벤질, 아세탈 기, 디설파이드, 하이드라진, 프로테아제-절단성 부분, 글루쿠로니다아제-절단성 부분, 베타-락타마아제 절단성 부분, 에스테르, (AA)p-MABC-(AA)p, (AA)p-MABO-(AA)p, (AA)p-PABO-(AA)p 및 (AA)p-PABC-(AA)p로부터 선택되고; 및
V1, V2, V3, V4 및 V5는 각각 독립적으로 공유 결합, -CO-, -NR11-, -CONR11-, -NR11CO-, -C(O)O-, -OC(O)-, -O-, -S-, -S(O)-, -SO2- , -SO2NR11-, -NR11SO2-, 및 -P(O)OH-로 구성되는 군으로부터 선택되며;
여기서:
(PEG)n은
Figure pct00005
이며, 여기서 n은 1 내지 30의 정수이고;
EDA는 다음의 구조:
Figure pct00006
를 가진 에틸렌 디아민 부분이며, 여기서 q는 1 내지 6의 정수이고, r은 0 또는 1이고;
피페리딘-4-아미노는
Figure pct00007
이고;
각 R11 및 R12는 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, PEG, 아릴 및 치환된 아릴로부터 선택되며, 임의의 두 인접한 R12 기들은 환형 연결되어 피페라지닐 고리를 형성하고;
R13은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 및 치환된 아릴로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, a, b, c 및 d는 각각 1이고; e는 0이다.
일부 실시형태에서, a, b 및 c는 각각 1이고; d 및 e는 각각 0이다.
일부 실시형태에서, a 및 b는 각각 1이고; c, d 및 e는 각각 0이다.
일부 실시형태에서, T1, T2, T3, T4 및 T5와 V1, V2, V3, V4 및 V5는 다음의 표로부터 선택된다:
Figure pct00008
Figure pct00009
일부 실시형태에서, L은 다음의 구조들 중 하나에 의해서 설명된다:
Figure pct00010
Figure pct00011
Figure pct00012
상기 식에서,
각 f는 독립적으로 0 또는 1 내지 12의 정수이고;
각 w는 독립적으로 0 또는 1 내지 20의 정수이고;
각 n은 독립적으로 0 또는 1 내지 30의 정수이고;
각 p는 독립적으로 0 또는 1 내지 20의 정수이고;
각 h는 독립적으로 0 또는 1 내지 12의 정수이고;
각 R은 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 폴리에틸렌 글리콜 부분, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴이고;
각 R'는 독립적으로 H, 아미노산의 측쇄 기, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴이다.
일부 실시형태에서, Q1는 X4와의 결합이고 Y4는 부재한다.
일부 실시형태에서, Q1는 X5와의 결합이고 Y5는 부재한다.
일부 실시형태에서, m은 1이다.
일부 실시형태에서, R2 및 R3은 각각 독립적으로 알킬 및 치환된 알킬로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, R2 및 R3은 각각 메틸이다.
일부 실시형태에서, X1, X2, X3 및 X4는 각각 C이다.
일부 실시형태에서, Y1, Y2 및 Y3은 각각 H이고, 및 Y4 또는 Y5 중 하나는 H이다.
일부 실시형태에서, 콘쥬게이트는 식 (IIIa)의 적어도 하나의 변형된 아미노산 잔기를 포함한다:
Figure pct00013
일부 실시형태에서, 콘쥬게이트는 식 (IIIb)의 적어도 하나의 변형된 아미노산 잔기를 포함한다:
Figure pct00014
일부 실시형태에서, 콘쥬게이트는 식 (IIId)의 적어도 하나의 변형된 아미노산 잔기를 포함한다:
Figure pct00015
일부 실시형태에서, 콘쥬게이트는 식 (IIIe)의 적어도 하나의 변형된 아미노산 잔기를 포함한다:
Figure pct00016
일부 실시형태에서, 화학 물질은 약물 또는 검출가능한 표지이다.
일부 실시형태에서, W1은 화학 물질이고, W2는 폴리펩티드이다.
일부 실시형태에서, W1이 폴리펩티드이고, W2가 화학 물질이다.
본 개시의 양태는 식 (V)의 화합물을 포함한다:
Figure pct00017
상기 식에서,
Q3 및 Q4 중 하나는 -(CH2)mNR3NHR2이고, 나머지 하나는 Y4이고;
m은 0 또는 1이고;
R2 및 R3은 각각 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택되거나, 또는 R2와 R3이 선택적으로 환형 연결되어 5 또는 6-원 헤테로시클릴을 형성하고;
X1, X2, X3 및 X4는 각각 독립적으로 C, N, O 및 S로부터 선택되며, X1, X2, X3 및 X4 중 하나는 선택적이고;
Y1, Y2, Y3 및 Y4는 각각 독립적으로 수소, 할로겐, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택되며, Y1 및 Y2 또는 Y2 및 Y3은 선택적으로 환형 연결되고, 여기서 Q4가 Y4이면 Y3과 Y4가 선택적으로 환형 연결되고;
R16, Y1, Y2, Y3 또는 Q4 중 하나는 -L-W1이며, 여기서 Q4가 -L-W1이면 Q3은 -(CH2)mNR3NHR2이고 Y4는 부재하며; Y1, Y2, Y3 또는 Q4 중 하나가 -L-W1이면 R16은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택되고;
L은 -(T1-V1)a-(T2-V2)b-(T3-V3)c-(T4-V4)d-(T5-V5)e-를 포함하는 링커이며, 여기서 a, b, c, d 및 e는 각각 독립적으로 0 또는 1이고, a, b, c, d 및 e의 합은 1 내지 5이고;
T1, T2, T3, T4 및 T5는 각각 독립적으로 (C1-C12)알킬, 치환된 (C1-C12)알킬, (EDA)w, (PEG)n, (AA)p, -(CR13OH)h-, 피페리딘-4-아미노(P4A), 파라-아미노벤질옥시카보닐(PABC), 메타-아미노벤질옥시카보닐(MABC), 파라-아미노벤질옥시(PABO), 메타-아미노벤질옥시(MABO), 파라-아미노벤질, 아세탈 기, 디설파이드, 하이드라진, 프로테아제-절단성 부분, 글루쿠로니다아제-절단성 부분, 베타-락타마아제 절단성 부분, 및 에스테르로부터 선택되며, 여기서 EDA는 에틸렌디아민 부분이고, PEG는 폴리에틸렌 글리콜 또는 변형된 폴리에틸렌 글리콜이고, AA는 아미노산 잔기이고;
w는 1 내지 20의 정수이고;
n은 1 내지 30의 정수이고;
p는 1 내지 20의 정수이고;
h는 1 내지 12의 정수이고;
V1, V2, V3, V4 및 V5는 각각 독립적으로 공유 결합, -CO-, -NR11-, -CONR11-, -NR11CO-, -C(O)O-, -OC(O)-, -O-, -S-, -S(O)-, -SO2-, -SO2NR11-, -NR11SO2- 및 -P(O)OH-로 구성되는 군으로부터 선택되고;
W1은 폴리펩티드 및 화학 물질으로부터 선택되고,
여기서 a, b, c, d 및 e의 합이 2이고 T1-V1, T2-V2, T3-V3, T4-V4 또는 T5-V5 중 하나가 (PEG)n-CO일 때, n은 6이 아니다.
일부 실시형태에서, 화합물은 식 (VI)의 화합물이다:
Figure pct00018
상기 식에서,
Q3, Q4, X1, X2, X3, X4, L, W1, Y1, Y2, 및 Y3은 식 (V)에서 정의된 것과 같다.
일부 실시형태에서, 화합물은 식 (VIIa) 또는 (VIIb)의 화합물이다:
Figure pct00019
상기 식에서,
X1 및 X3은 각각 독립적으로 O, S 또는 NR12이고;
식 (VIIa)에서, Q3 및 Q4 중 하나는 -(CH2)mNR3NHR2이며, 나머지 하나는 Y4이고;
식 (VIIb)에서, Q3 및 R12 중 하나는 존재한다면 -(CH2)mNR3NHR2이며, 나머지 하나는 Y3이고;
Y1, Y2, Y3 및 Y4는 존재한다면 각각 독립적으로 수소, 할로겐, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택되며, Y1과 Y2가 선택적으로 환형 연결되고, Q4가 Y4일 때는 Y3과 Y4가 선택적으로 환형 연결되고;
m, R2 및 R3은 식 (V)에서 정의된 것과 같다.
일부 실시형태에서, Y1 및 Y2 또는 Y3 및 Y4는 환형 연결되어 융합된 벤조 고리를 형성한다.
일부 실시형태에서,
T1는 (C1-C12)알킬 및 치환된 (C1-C12)알킬로부터 선택되고;
T2, T3, T4 및 T5는 각각 독립적으로 (EDA)w, (PEG)n, (C1-C12)알킬, 치환된 (C1-C12)알킬, (AA)p, -(CR13OH)h-, 피페리딘-4-아미노, MABC, MABO, PABO, PABC, 파라-아미노벤질, 아세탈 기, 디설파이드, 하이드라진, 프로테아제-절단성 부분, 글루쿠로니다아제-절단성 부분, 베타-락타마아제 절단성 부분, 에스테르, (AA)p-MABC-(AA)p, (AA)p-MABO-(AA)p, (AA)p-PABO-(AA)p 및 (AA)p-PABC-(AA)p로부터 선택되고;
V1, V2, V3, V4 및 V5는 각각 독립적으로 공유 결합, -CO-, -NR11-, -CONR11-, -NR11CO-, -C(O)O-, -OC(O)-, -O-, -S-, -S(O)-, -SO2- , -SO2NR11-, -NR11SO2-, 및 -P(O)OH-;로 구성되는 군으로부터 선택되고;
여기서:
(PEG)n은
Figure pct00020
이며, 여기서 n은 1 내지 30의 정수이고;
EDA는 다음의 구조:
Figure pct00021
를 가진 에틸렌 디아민 부분이며, 여기서 q는 1 내지 6의 정수이고, r은 0 또는 1이고;
피페리딘-4-아미노는
Figure pct00022
이고;
각 R11 및 R12는 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 폴리에틸렌 글리콜 부분, 아릴 및 치환된 아릴로부터 선택되며, 임의의 두 인접한 R12 기들은 환형 연결되어 피페라지닐 고리를 형성하고;
R13은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 및 치환된 아릴로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, a, b, c 및 d는 각각 1이고; e는 0이다.
일부 실시형태에서, a, b 및 c는 각각 1이고; d 및 e는 0이다.
일부 실시형태에서, a 및 b는 각각 1이고; c, d 및 e는 0이다.
일부 실시형태에서, T1, T2, T3, T4 및 T5와 V1, V2, V3, V4 및 V5는 다음의 표로부터 선택된다:
Figure pct00023
Figure pct00024
일부 실시형태에서, L은 다음의 구조들 중 하나에 의해서 설명된다:
Figure pct00025
Figure pct00026
Figure pct00027
Figure pct00028
여기서:
각 f는 독립적으로 0 또는 1 내지 12의 정수이고;
각 w는 독립적으로 0 또는 1 내지 20의 정수이고;
각 n은 독립적으로 0 또는 1 내지 30의 정수이고;
각 p는 독립적으로 0 또는 1 내지 20의 정수이고;
각 h는 독립적으로 0 또는 1 내지 12의 정수이고;
각 R은 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 폴리에틸렌 글리콜 부분, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴이고;
각 R'는 독립적으로 H, 아미노산의 측쇄 기, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴이다.
일부 실시형태에서, Q3은 -(CH2)mNR3NHR2이고, Q4는 Y4이다.
일부 실시형태에서, Q4는 -(CH2)mNR3NHR2이고, Q3은 Y4이다.
일부 실시형태에서, m은 1이다.
일부 실시형태에서, R2 및 R3은 각각 독립적으로 알킬 및 치환된 알킬로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, R2 및 R3은 각각 메틸이다.
일부 실시형태에서, X1, X2, X3 및 X4는 각각 C이다.
일부 실시형태에서, Y1, Y2, Y3 및 Y4는 각각 H이다.
일부 실시형태에서, X1 및 X3은 각각 S이고, X4는 C이다.
일부 실시형태에서, X1 및 X3은 각각 O이고, X4는 C이다.
일부 실시형태에서, X1 및 X3은 각각 NR12이고, X4는 C이다.
일부 실시형태에서, 화합물은 식 (VIII)의 화합물이다:
Figure pct00029
일부 실시형태에서, 화합물은 식 (VIIIa)의 화합물이다:
Figure pct00030
일부 실시형태에서, 화합물은 식 (IX)의 화합물이다:
Figure pct00031
일부 실시형태에서, 화합물은 식 (IXa)의 화합물이다:
Figure pct00032
일부 실시형태에서, W1은 약물 또는 검출가능한 표지이다.
일부 실시형태에서, 검출가능한 표지는 형광단을 포함한다.
본 개시의 양태는 폴리펩티드 콘쥬게이트의 제조 방법을 포함한다. 이 방법은 반응 혼합물에서 여기 설명된 화합물과 반응성 알데하이드 기 또는 반응성 케톤 기를 포함하는 제2 화합물을 조합하는 단계로서, 상기 조합이 화합물과 제2 화합물의 반응성 알데하이드 기 또는 반응성 케톤 기 간의 반응을 촉진하기에 적합한 반응 조건하에 이루어지는 단계, 및 반응 혼합물로부터 콘쥬게이트를 분리하는 단계를 포함한다.
일부 실시형태에서, W1은 화학 물질이고, 제2 화합물은 폴리펩티드를 포함한다.
일부 실시형태에서, W1은 폴리펩티드이고, 제2 화합물은 화학 물질을 포함한다.
일부 실시형태에서, 반응 혼합물은 pH 7을 가진다.
일부 실시형태에서, 반응 조건은 37℃의 온도이다.
본 개시의 양태는 제약 조성물을 포함한다. 제약 조성물은 여기 설명된 콘쥬게이트와 제약학적으로 허용되는 부형제를 포함한다.
본 개시의 양태는 대상에 콘쥬게이트를 송달하는 방법을 포함한다. 이 방법은 대상에 여기 설명된 콘쥬게이트의 유효량을 투여하는 단계를 포함한다.
본 개시의 양태는 대상에서 상태의 치료 방법을 포함한다. 이 방법은 여기 설명된 콘쥬게이트를 포함하는 제약 조성물의 치료적 유효량을 상태를 가진 대상에 투여하는 단계를 포함하며, 여기서 투여는 대상에서 상태를 치료하는데 유효하다.
도 1(패널 A 및 B)은 본 개시의 실시형태에 따른 히드라지닐-피롤로 커플링 부분을 포함하는 폴리펩티드 콘쥬게이트의 제조를 위한 반응도를 도시한다.
도 2(패널 A)는 본 개시의 실시형태에 따른 관능화된 검출가능한 표지의 합성을 위한 반응도를 도시한다.
도 2(패널 B)는 본 개시의 실시형태에 따른 관능화된 검출가능한 표지와 항체의 콘쥬게이션 반응의 도해를 도시한다.
도 3과 도 4는 본 개시의 실시형태에 따른 화합물 HIPS 인돌 E (CO2H) PEG2 메이탄신의 합성을 위한 반응도를 도시하며, 예를 들어 실시예 1을 참조한다.
도 5와 도 6은 본 개시의 실시형태에 따른 화합물 HIPS 인돌 E (CO2H) PEG2 메이탄신의 합성을 위한 반응도를 도시하며, 예를 들어 실시예 2를 참조한다.
도 7과 도 8은 본 개시의 실시형태에 따른 화합물 HIPS 인돌 N (CONH2) PEG2 메이탄신의 합성을 위한 반응도를 도시하며, 예를 들어 실시예 3을 참조한다.
도 9는 본 개시의 실시형태에 따른 화합물 HIPS인돌 카다베린 Alexa Fluor 555의 합성을 위한 반응도를 도시하며, 예를 들어 실시예 4를 참조한다.
도 10과 도 11은 본 개시의 실시형태에 따른 화합물 HIPS인돌 E (CO2H) PEG2 NH ATTO 550의 합성을 위한 반응도를 도시하며, 예를 들어 실시예 5를 참조한다.
도 12와 도 13은 본 개시의 실시형태에 따른 화합물 HIPS인돌 C (SO3H) PEG2 NH ATTO 550의 합성을 위한 반응도를 도시하며, 예를 들어 실시예 6을 참조한다.
도 14 내지 19는 본 개시의 실시형태에 따른 화합물 HIPS 인돌 G PEG6 Val Cit PABC NMC3 메이탄신의 합성을 위한 반응도를 도시하며, 예를 들어 실시예 7을 참조한다(여기서 여기 사용된 NMC3은 기 -N(CH3)-(CH2)3-를 나타낸다).
도 20은 본 개시의 실시형태에 따른 화합물 HIPS 인돌 C (SO3H) 메이탄신의 합성을 위한 반응도를 도시하며, 예를 들어 실시예 8을 참조한다.
도 21과 도 22는 본 개시의 실시형태에 따른 화합물 HIPS 인돌 G PEG6 메이탄신의 합성을 위한 반응도를 도시하며, 예를 들어 실시예 9를 참조한다.
도 23은 본 개시의 실시형태에 따른 화합물 HIPS 인돌 N ((OH)3AcNH-β-Glc) PEG2 메이탄신의 합성을 위한 반응도를 도시하며, 예를 들어 실시예 10을 참조한다.
도 24는 본 개시의 실시형태에 따른 화합물 HIPS 인돌 에틸렌디아민 타르타르산 (OH)2 베타 알라닌 메이탄신의 합성을 위한 반응도를 도시하며, 예를 들어 실시예 11을 참조한다.
도 25는 본 개시의 실시형태에 따른 화합물 HIPS 인돌 글리신 디하이드록시펩토이드 (OH)2 베타 알라닌 메이탄신의 합성을 위한 반응도를 도시하며, 예를 들어 실시예 12를 참조한다.
도 26은 본 개시의 실시형태에 따른 화합물 HIPS 인돌 글리신 트리하이드록시펩토이드 (OH)3 베타 알라닌 메이탄신의 합성을 위한 반응도를 도시하며, 예를 들어 실시예 13을 참조한다.
도 27은 본 개시의 실시형태에 따른 화합물 HIPS 인돌 글리신 트리메톡시펩토이드 베타 알라닌 메이탄신의 합성을 위한 반응도를 도시하며, 예를 들어 실시예 14를 참조한다.
도 28은 본 개시의 실시형태에 따른 화합물 HIPS 인돌 글리신3 메이탄신의 합성을 위한 반응도를 도시하며, 예를 들어 실시예 15를 참조한다.
도 29와 도 30은 본 개시의 실시형태에 따른 화합물 HIPS 인돌 아미노에틸글리신 PEG2 메이탄신의 합성을 위한 반응도를 도시하며, 예를 들어 실시예 16을 참조한다.
도 31과 도 32는 본 개시의 실시형태에 따른 화합물 HIPS 인돌 에틸렌디아민 티오유레아 PEG2 메이탄신의 합성을 위한 반응도를 도시하며, 예를 들어 실시예 17을 참조한다.
도 33은 본 개시의 실시형태에 따른 HIPS 세린 PEG2 메이탄신에 콘쥬게이트된 알데하이드-택부착 항체의 크기 배제 크로마토그래피(SEC) 흔적(도 33, 패널 A), 소수성 상호작용 칼럼(HIC) 흔적(도 33, 패널 B), 및 질량 분광기(MS) 흔적(도 33, 패널 C)을 도시한다.
도 34는 본 개시의 실시형태에 따른 HIPS 포스포세린 PEG2 메이탄신에 콘쥬게이트된 알데하이드-택부착 항체의 크기 배제 크로마토그래피(SEC) 흔적(도 34, 패널 A), 소수성 상호작용 칼럼(HIC) 흔적(도 34, 패널 B), 및 질량 분광기(MS) 흔적(도 34, 패널 C)을 도시한다.
도 35는 본 개시의 실시형태에 따른 HIPS 시스테산 PEG2 메이탄신에 콘쥬게이트된 알데하이드-택부착 항체의 크기 배제 크로마토그래피(SEC) 흔적(도 35, 패널 A), 소수성 상호작용 칼럼(HIC) 흔적(도 35, 패널 B), 및 질량 분광기(MS) 흔적(도 35, 패널 C)을 도시한다.
도 36은 본 개시의 실시형태에 따른 HIPS 글루탐산 PEG2 메이탄신에 콘쥬게이트된 알데하이드-택부착 항체의 크기 배제 크로마토그래피(SEC) 흔적(도 36, 패널 A), 소수성 상호작용 칼럼(HIC) 흔적(도 36, 패널 B), 및 질량 분광기(MS) 흔적(도 36, 패널 C)을 도시한다.
도 37은 본 개시의 실시형태에 따른 HIPS 아스파라긴 PEG2 메이탄신에 콘쥬게이트된 알데하이드-택부착 항체의 크기 배제 크로마토그래피(SEC) 흔적(도 37, 패널 A) 및 소수성 상호작용 칼럼(HIC) 흔적(도 37, 패널 B)을 도시한다.
도 38은 본 개시의 실시형태에 따른 HIPS 포스포티로신 PEG2 메이탄신에 콘쥬게이트된 알데하이드-택부착 항체의 크기 배제 크로마토그래피(SEC) 흔적(도 38, 패널 A) 및 소수성 상호작용 칼럼(HIC) 흔적(도 38, 패널 B)을 도시한다.
도 39는 본 개시의 실시형태에 따른 AzaHIPS 글루탐산 PEG2 메이탄신에 콘쥬게이트된 알데하이드-택부착 항체의 크기 배제 크로마토그래피(SEC) 흔적(도 39, 패널 A), 소수성 상호작용 칼럼(HIC) 흔적(도 39, 패널 B), 및 질량 분광기(MS) 흔적(도 39, 패널 C)을 도시한다.
도 40은 본 개시의 실시형태에 따른 HIPS 타르타르산 메이탄신에 콘쥬게이트된 알데하이드-택부착 항체의 크기 배제 크로마토그래피(SEC) 흔적(도 40, 패널 A), 소수성 상호작용 칼럼(HIC) 흔적(도 40, 패널 B), 및 질량 분광기(MS) 흔적(도 40, 패널 C)을 도시한다.
도 41은 본 개시의 실시형태에 따른 HIPS 디하이드록시 메이탄신에 콘쥬게이트된 알데하이드-택부착 항체의 크기 배제 크로마토그래피(SEC) 흔적(도 41, 패널 A), 소수성 상호작용 칼럼(HIC) 흔적(도 41, 패널 B), 및 질량 분광기(MS) 흔적(도 41, 패널 C)을 도시한다.
도 42는 본 개시의 실시형태에 따른 HIPS 글루탐산 C3 메이탄신에 콘쥬게이트된 알데하이드-택부착 항체의 크기 배제 크로마토그래피(SEC) 흔적(도 42, 패널 A), 소수성 상호작용 칼럼(HIC) 흔적(도 42, 패널 B), 및 질량 분광기(MS) 흔적(도 42, 패널 C)을 도시한다.
도 43은 본 개시의 실시형태에 따른 HIPS 트리메톡시 메이탄신에 콘쥬게이트된 알데하이드-택부착 항체의 크기 배제 크로마토그래피(SEC) 흔적(도 43, 패널 A), 소수성 상호작용 칼럼(HIC) 흔적(도 43, 패널 B), 및 질량 분광기(MS) 흔적(도 43, 패널 C)을 도시한다.
도 44는 본 개시의 실시형태에 따른 HIPS Glc NAc PEG2 Ac3 메이탄신에 콘쥬게이트된 알데하이드-택부착 항체의 소수성 상호작용 칼럼(HIC) 흔적을 도시한다.
도 45는 본 개시의 실시형태에 따른 HIPS Glc NAc PEG2 메이탄신에 콘쥬게이트된 알데하이드-택부착 항체의 소수성 상호작용 칼럼(HIC) 흔적을 도시한다.
도 46은 본 개시의 실시형태에 따른 HIPS Nit PEG2 메이탄신에 콘쥬게이트된 알데하이드-택부착 항체의 소수성 상호작용 칼럼(HIC) 흔적(도 46, 패널 A) 및 질량 분광기(MS) 흔적(도 46, 패널 B)을 도시한다.
도 47은 본 개시의 실시형태에 따른 HIPS PEG2 MMAF에 콘쥬게이트된 알데하이드-택부착 항체의 소수성 상호작용 칼럼(HIC) 흔적(도 47, 패널 A) 및 질량 분광기(MS) 흔적(도 47, 패널 B)을 도시한다.
도 48은 본 개시의 실시형태에 따른 HIPS S PEG4 메이탄신에 콘쥬게이트된 알데하이드-택부착 항체의 소수성 상호작용 칼럼(HIC) 흔적을 도시한다.
도 49는 본 개시의 실시형태에 따른 HIPS S PEG6 메이탄신에 콘쥬게이트된 알데하이드-택부착 항체의 소수성 상호작용 칼럼(HIC) 흔적을 도시한다.
도 50은 본 개시의 실시형태에 따른 HIPS-S-C5-메이탄신에 콘쥬게이트된 알데하이드-택부착 항체의 소수성 상호작용 칼럼(HIC) 흔적을 도시한다.
도 51은 본 개시의 실시형태에 따른 HIPS G PEG6 메이탄신에 콘쥬게이트된 알데하이드-택부착 항체의 소수성 상호작용 칼럼(HIC) 흔적을 도시한다.
도 52는 본 개시의 실시형태에 따른 HIPS PEG6 Val Cit PABC NMC3 메이탄신에 콘쥬게이트된 알데하이드-택부착 항체의 소수성 상호작용 칼럼(HIC) 흔적을 도시한다.
도 53은 본 개시의 실시형태에 따른 HIPS Gly PEG6 Val Cit PABC MMAE에 콘쥬게이트된 알데하이드-택부착 항체의 소수성 상호작용 칼럼(HIC) 흔적을 도시한다.
도 54는 본 개시의 실시형태에 따른 HIPS 시스테산 메이탄신에 콘쥬게이트된 알데하이드-택부착 항체의 소수성 상호작용 칼럼(HIC) 흔적을 도시한다.
도 55는 본 개시의 실시형태에 따른 HIPS인돌 E (CO2H) PEG2 NH Alexa Fluor 488에 콘쥬게이트된 알데하이드-택부착 항체를 나타내는 SDS-PAGE 겔의 이미지를 도시한다.
도 56은 본 개시의 실시형태에 따른 HIPS PEG6 메이탄신에 콘쥬게이트된 알데하이드-택부착 항체의 소수성 상호작용 칼럼(HIC) 흔적을 도시한다.
도 57은 본 개시의 실시형태에 따른 PIPS PEG2 메이탄신에 콘쥬게이트된 알데하이드-택부착 항체의 소수성 상호작용 칼럼(HIC) 흔적을 도시한다.
도 58은 본 개시의 실시형태에 따른 HIPS 트리하이드록시 메이탄신에 콘쥬게이트된 알데하이드-택부착 항체의 소수성 상호작용 칼럼(HIC) 흔적을 도시한다.
도 59는 본 개시의 실시형태에 따른 HIPS 리신 PEG2 메이탄신에 콘쥬게이트된 알데하이드-택부착 항체의 소수성 상호작용 칼럼(HIC) 흔적을 도시한다.
도 60은 본 개시의 실시형태에 따른 (2S)-8-(1-(3-(2-((2-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카보닐)-1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-1-(((14S,16S,33S,2R,4S,10E,12E,14R)-86-클로로-14-하이드록시-85,14-디메톡시-33,2,7,10-테트라메틸-12,6-디옥소-7-아자-1(6,4)-옥사지나나-3(2,3)-옥시라나-8(1,3)-벤제나시클로테트라데카판-10,12-디엔-4-일)옥시)-2,3-디메틸-1,4,7-트리옥소-11,14-디옥사-3,8-디아자헵타데칸-17-오익산(Fmoc-HIPS-PAPip(PEG2(CO2H))-메이탄신)의 합성을 위한 반응도를 도시하며, 예를 들어 실시예 20을 참조한다.
도 61은 본 개시의 실시형태에 따른 (2S,5S,18S)-1-((4-((5S,8S,11S,12R)-11-((S)-sec-부틸)-5,8-디이소프로필-12-(2-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-2-옥소에틸)-4,10-디메틸-3,6,9-트리옥소-2,13-디옥사-4,7,10-트리아자테트라데실)페닐)아미노)-18-(3-(2-((1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)프로판아미드)-5-이소프로필-2-메틸-1,4,7,17-테트라옥소-10,13-디옥사-3,6,16-트리아자헤니코산-21-오익산(HIPS-Glu(OH)-PEG2-Val-Ala-PABC-MMAD)의 합성을 위한 반응도를 도시하며, 예를 들어 실시예 21을 참조한다.
도 62는 본 개시의 실시형태에 따른 13-(1-(3-(2-((2-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카보닐)-1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-2,2-디메틸-4,14-디옥소-3,7,10-트리아자-13-아자헵타데칸-17-오익산(Fmoc-HIPS-PAPip(PEG2(CO2t-Bu))CO2H)의 합성을 위한 반응도를 도시하며, 예를 들어 실시예 22를 참조한다.
도 63은 본 개시의 실시형태에 따른 (2S,5S)-1-((4-((5S,8S,11S,12R)-11-((S)-sec-부틸)-5,8-디이소프로필-12-(2-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-2-옥소에틸)-4,10-디메틸-3,6,9-트리옥소-2,13-디옥사-4,7,10-트리아자테트라데실)페닐)아미노)-11-(1-(3-(2-((1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-5-이소프로필-2-메틸-1,4,7,10-테트라옥소-14,17-디옥사-3,6,11-트리아자이코산-20-오익산의 합성을 위한 반응도를 도시하며, 예를 들어 실시예 23을 참조한다.
도 64는 본 개시의 실시형태에 따른 (6S,9S)-1-아미노-6-((4-((5S,8S,11S, 12R)-11-((S)-sec-부틸)-5,8-디이소프로필-12-(2-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-2-옥소에틸)-4,10-디메틸-3,6,9-트리옥소-2,13-디옥사-4,7,10-트리아자테트라데실)페닐)카바모일)-15-(1-(3-(2-((1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-9-이소프로필-1,8,11,14-테트라옥소-18,21-디옥사-2,7,10,15-테트라아자테트라코산-24-오익산의 합성을 위한 반응도를 도시하며, 예를 들어 실시예 24를 참조한다.
도 65는 본 개시의 실시형태에 따른 (6S,9S)-1-아미노-6-((4-((5S,8S,11S, 12R)-11-((S)-sec-부틸)-5,8-디이소프로필-12-(2-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-2-옥소에틸)-4,10-디메틸-3,6,9-트리옥소-2,13-디옥사-4,7,10-트리아자테트라데실)페닐)카바모일)-15-(1-(3-(2-((1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-9-이소프로필-1,8,11,14-테트라옥소-18,21-디옥사-2,7,10,15-테트라아자테트라코산-24-오익산의 합성을 위한 반응도를 도시하며, 예를 들어 실시예 25를 참조한다.
도 66은 본 개시의 실시형태에 따른 HIPS-PAPip(PEG2(CO2H))-메이탄신에 콘쥬게이트된 알데하이드-택부착 항체의 크기 배제 크로마토그래피(SEC) 흔적(도 66, 패널 A), 소수성 상호작용 칼럼(HIC) 흔적(도 66, 패널 B), 및 질량 분광기(MS) 흔적(도 66, 패널 C)을 도시한다.
도 67은 본 개시의 실시형태에 따른 HIPS-글루탐산-PEG2-발린-알라닌-PABC-메이탄신에 콘쥬게이트된 알데하이드-택부착 항체의 소수성 상호작용 칼럼(HIC) 흔적을 도시한다.
도 68은 본 개시의 실시형태에 따른 HIPS-PAPip(PEG2 (CO2H))-발린-알라닌-PABC-MMAD에 콘쥬게이트된 알데하이드-택부착 항체의 소수성 상호작용 칼럼(HIC) 흔적을 도시한다.
도 69는 본 개시의 실시형태에 따른 HIPS-PAPip(PEG2(CO2H))-발린-시트룰린-PABC-MMAD에 콘쥬게이트된 알데하이드-택부착 항체의 크기 배제 크로마토그래피 (SEC) 흔적(도 69, 패널 A) 및 소수성 상호작용 칼럼(HIC) 흔적(도 69, 패널 B)을 도시한다.
도 70은 본 개시의 실시형태에 따른 AzaHIPS-PAPip(PEG2 (CO2H))-발린-시트룰린-PABC-MMAD에 콘쥬게이트된 알데하이드-택부착 항체의 크기 배제 크로마토그래피(SEC) 흔적(도 70, 패널 A) 및 소수성 상호작용 칼럼(HIC) 흔적(도 70, 패널 B)을 도시한다.
도 71은 본 개시의 실시형태에 따른 HIPS-글루탐산-PEG2-발린-시트룰린-PABC-메이탄신에 콘쥬게이트된 알데하이드-택부착 항체의 크기 배제 크로마토그래피(SEC) 흔적(도 71, 패널 A), 소수성 상호작용 칼럼(HIC) 흔적(도 71, 패널 B), 및 질량 분광기(MS) 흔적(도 71, 패널 C)을 도시한다.
도 72는 본 개시의 실시형태에 따른 HIPS-아스파라긴-PEG2-메이탄신에 콘쥬게이트된 알데하이드-택부착 항체의 크기 배제 크로마토그래피(SEC) 흔적(도 72, 패널 A), 소수성 상호작용 칼럼(HIC) 흔적(도 72, 패널 B), 및 질량 분광기(MS) 흔적(도 72, 패널 C)을 도시한다.
도 73은 본 개시의 실시형태에 따른 HIPS-알라닌-PEG2-메이탄신에 콘쥬게이트된 알데하이드-택부착 항체의 크기 배제 크로마토그래피(SEC) 흔적(도 73, 패널 A), 소수성 상호작용 칼럼(HIC) 흔적(도 73, 패널 B), 및 질량 분광기(MS) 흔적(도 73, 패널 C)을 도시한다.
다음의 용어들은 달리 나타내지 않는다면 다음의 의미를 가진다. 어떤 한정되지 않은 용어들은 해당 분야에서 인정되는 의미를 가진다.
"알킬"은 1 내지 10 탄소 원자 및 예컨대 1 내지 6 탄소 원자, 또는 1 내지 5, 또는 1 내지 4, 또는 1 내지 3 탄소 원자를 가진 1가 포화 지방족 하이드로카빌 기를 말한다. 이 용어는 예로서 선형 및 분지형 하이드로카빌 기, 예컨대 메틸(CH3-), 에틸(CH3CH2-), n-프로필(CH3CH2CH2-), 이소프로필((CH3)2CH-), n-부틸(CH3-CH2CH2CH2-), 이소부틸((CH3)2CHCH2-), sec-부틸((CH3)(CH3CH2)CH-), t-부틸((CH3)3C-), n-펜틸(CH3CH2CH2CH2CH2-), 및 네오펜틸((CH3)3CCH2-)을 포함한다.
용어 "치환된 알킬"은 알킬 사슬에서 하나 이상의 탄소 원자가 헤테로원자, 예컨대 -O-, -N-, -S-, -S(O)n-(여기서 n은 0 내지 2이다), -NR-(여기서 R은 수소 또는 알킬이다)로 치환되고 알콕시, 치환된 알콕시, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 시클로알케닐, 치환된 시클로알케닐, 아실, 아실아미노, 아실옥시, 아미노, 아미노아실, 아미노아실옥시, 옥시아미노아실, 아지도, 시아노, 할로겐, 하이드록실, 옥소, 티오케토, 카복실, 카복실알킬, 티오아릴옥시, 티오헤테로아릴옥시, 티오헤테로시클로옥시, 티올, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 아릴옥시, 헤테로아릴, 헤테로아릴옥시, 헤테로시클릴, 헤테로시클로옥시, 하이드록시아미노, 알콕시아미노, 니트로, -SO-알킬, -SO-아릴, -SO-헤테로아릴, -SO2-알킬, -SO2-아릴, -SO2-헤테로아릴, 및 -NRaRb(여기서 R' 및 R"는 동일하거나 상이하며 수소, 선택적으로 치환된 알킬, 시클로알킬, 알케닐, 시클로알케닐, 알키닐, 아릴, 헤테로아릴 및 헤테로시클릭으로부터 선택된다)로 구성되는 군으로부터 선택된 1 내지 5 치환체를 가진 여기 정의된 알킬 기를 말한다.
"알킬렌"은 직쇄 또는 분재쇄인 바람직하게 1 내지 6 및 더 바람직하게 1 내지 3 탄소 원자를 가지며, 선택적으로 -O-, -NR10-, -NR10C(O)-, -C(O)NR10- 등으로부터 선택된 하나 이상이 기가 개재된 2가 지방족 하이드로카빌 기를 말한다. 이 용어는 예로서 메틸렌(-CH2-), 에틸렌(-CH2CH2-), n-프로필렌(-CH2CH2CH2-), 이소-프로필렌(-CH2CH(CH3)-), (-C(CH3)2CH2CH2-), (-C(CH3)2CH2C(O)-), (-C(CH3)2CH2C(O)NH-), (-CH(CH3)CH2-) 등을 포함한다.
"치환된 알킬렌"은 1 내지 3 수소가 아래 "치환된"의 정의에서 탄소에 대해 설명된 것과 같은 치환기로 치환된 알킬렌 기를 말한다.
용어 "알칸"은 여기 정의된 알킬 기 및 알킬렌 기를 말한다.
용어 "알킬아미노알킬", "알킬아미노알케닐" 및 "알킬아미노알키닐"은 기R'NHR"-를 말하며, 여기서 R'는 여기 정의된 알킬 기이고, R"는 여기 정의된 알킬렌, 알케닐렌 또는 알키닐렌 기이다.
용어 "알카릴" 또는 "아랄킬"은 기 -알킬렌-아릴 및 -치환된 알킬렌-아릴을 말하며, 여기서 알킬렌, 치환된 알킬렌 및 아릴은 여기 정의된다.
"알콕시"는 기 -O-알킬을 말하며, 여기서 알킬은 여기 정의된 대로이다. 알콕시는 예로서 메톡시, 에톡시, n-프로폭시, 이소프로폭시, n-부톡시, t-부톡시, sec-부톡시, n-펜톡시 등을 포함한다. 용어 "알콕시"는 또한 기 알케닐-O-, 시클로알킬-O-, 시클로알케닐-O-, 및 알키닐-O-를 말하며, 여기서 알케닐, 시클로알킬, 시클로알케닐, 및 알키닐은 여기 정의된 대로이다.
용어 "치환된 알콕시"는 기 치환된 알킬-O-, 치환된 알케닐-O-, 치환된 시클로알킬-O-, 치환된 시클로알케닐-O-, 및 치환된 알키닐-O-를 말하며, 여기서 치환된 알킬, 치환된 알케닐, 치환된 시클로알킬, 치환된 시클로알케닐 및 치환된 알키닐은 여기 정의된 대로이다.
용어 "알콕시아미노"는 기 -NH-알콕시를 말하며, 여기서 알콕시는 여기 정의된다.
용어 "할로알콕시"는 알킬 기 상의 하나 이상의 수소 원자가 할로 기로 치환된 알킬-O- 기를 말하며, 예로서 트리플루오로메톡시 등과 같은 기를 포함한다.
용어 "할로알킬"은 알킬 기 상의 하나 이상의 수소 원자가 할로 기로 치환된 상기 설명된 치환된 알킬 기를 말한다. 이러한 기의 예들은, 제한은 아니지만, 플루오로알킬 기, 예컨대 트리플루오로메틸, 디플루오로메틸, 트리플루오로에틸 등을 포함한다.
용어 "알킬알콕시"는 기 -알킬렌-O-알킬, 알킬렌-O-치환된 알킬, 치환된 알킬렌-O-알킬, 및 치환된 알킬렌-O-치환된 알킬을 말하며, 여기서 알킬, 치환된 알킬, 알킬렌 및 치환된 알킬렌은 여기 정의된 대로이다.
용어 "알킬티오알콕시"는 기 -알킬렌-S-알킬, 알킬렌-S-치환된 알킬, 치환된 알킬렌-S-알킬 및 치환된 알킬렌-S-치환된 알킬을 말하며, 여기서 알킬, 치환된 알킬, 알킬렌 및 치환된 알킬렌은 여기 정의된 대로이다.
"알케닐"은 2 내지 6 탄소 원자 및 바람직하게 2 내지 4 탄소 원자를 가지고 적어도 1 및 바람직하게 1 내지 2 부위의 이중 결합 불포화를 가진 직쇄 또는 분지쇄 하이드로카빌 기를 말한다. 이 용어는 예로서 바이-비닐, 알릴, 및 부트-3-엔-1-일을 포함한다. 시스 및 트랜스 이성질체 또는 이들 이성질체의 혼합물도 이 용어 내에 포함된다.
용어 "치환된 알케닐"은 알콕시, 치환된 알콕시, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 시클로알케닐, 치환된 시클로알케닐, 아실, 아실아미노, 아실옥시, 아미노, 치환된 아미노, 아미노아실, 아미노아실옥시, 옥시아미노아실, 아지도, 시아노, 할로겐, 하이드록실, 옥소, 티오케토, 카복실, 카복실알킬, 티오아릴옥시, 티오헤테로아릴옥시, 티오헤테로시클로옥시, 티올, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 아릴옥시, 헤테로아릴, 헤테로아릴옥시, 헤테로시클릴, 헤테로시클로옥시, 하이드록시아미노, 알콕시아미노, 니트로, -SO-알킬, -SO-치환된 알킬, -SO-아릴, -SO-헤테로아릴, -SO2-알킬, -SO2-치환된 알킬, -SO2-아릴 및 -SO2-헤테로아릴로부터 선택된 1 내지 5 치환체, 또는 1 내지 3 치환체를 가진 여기 정의된 알케닐 기를 말한다.
"알키닐"은 2 내지 6 탄소 원자 및 바람직하게 2 내지 3 탄소 원자를 가지고 적어도 1 및 바람직하게 1 내지 2 부위의 삼중 결합 불포화를 가진 직쇄 또는 분지쇄 1가 하이드로카빌 기를 말한다. 이러한 알키닐 기의 예들을 아세틸레닐(-C=CH) 및 프로파르길(-CH2C=CH)을 포함한다.
용어 "치환된 알키닐"은 알콕시, 치환된 알콕시, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 시클로알케닐, 치환된 시클로알케닐, 아실, 아실아미노, 아실옥시, 아미노, 치환된 아미노, 아미노아실, 아미노아실옥시, 옥시아미노아실, 아지도, 시아노, 할로겐, 하이드록실, 옥소, 티오케토, 카복실, 카복실알킬, 티오아릴옥시, 티오헤테로아릴옥시, 티오헤테로시클로옥시, 티올, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 아릴옥시, 헤테로아릴, 헤테로아릴옥시, 헤테로시클릴, 헤테로시클로옥시, 하이드록시아미노, 알콕시아미노, 니트로, -SO-알킬, -SO-치환된 알킬, -SO-아릴, -SO-헤테로아릴, -SO2-알킬, -SO2-치환된 알킬, -SO2-아릴, 및 -SO2-헤테로아릴로부터 선택된 1 내지 5 치환체, 또는 1 내지 3 치환체를 가진 여기 정의된 알키닐 기를 말한다.
"알키닐옥시"는 기 -O-알키닐을 말하며, 여기서 알키닐은 여기 정의된 대로이다. 알키닐옥시는 예로서 에티닐옥시, 프로피닐옥시 등을 포함한다.
"아실"은 기 H-C(O)-, 알킬-C(O)-, 치환된 알킬-C(O)-, 알케닐-C(O)-, 치환된 알케닐-C(O)-, 알키닐-C(O)-, 치환된 알키닐-C(O)-, 시클로알킬-C(O)-, 치환된 시클로알킬-C(O)-, 시클로알케닐-C(O)-, 치환된 시클로알케닐-C(O)-, 아릴-C(O)-, 치환된 아릴-C(O)-, 헤테로아릴-C(O)-, 치환된 헤테로아릴-C(O)-, 헤테로시클릴-C(O)-, 및 치환된 헤테로시클릴-C(O)-를 말하며, 여기서 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 시클로알케닐, 치환된 시클로알케닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로시클릭, 및 치환된 헤테로시클릭은 여기 정의된 대로이다. 예를 들어, 아실은 "아세틸" 기 CH3C(O)-를 포함한다.
"아실아미노"는 기 -NR20C(O)알킬, -NR20C(O)치환된 알킬, NR20C(O)시클로알킬, -NR20C(O)치환된 시클로알킬, -NR20C(O)시클로알케닐, -NR20C(O)치환된 시클로알케닐, -NR20C(O)알케닐, -NR20C(O)치환된 알케닐, -NR20C(O)알키닐, -NR20C(O)치환된 알키닐, -NR20C(O)아릴, -NR20C(O)치환된 아릴, -NR20C(O)헤테로아릴, -NR20C(O)치환된 헤테로아릴, -NR20C(O)헤테로시클릴, 및 -NR20C(O)치환된 헤테로시클릴을 말하며, 여기서 R20은 수소 또는 알킬이고, 여기서 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 시클로알케닐, 치환된 시클로알케닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로시클릭, 및 치환된 헤테로시클릭은 여기 정의된 대로이다.
"아미노카보닐" 또는 용어 "아미노아실"은 기 -C(O)NR21R22를 말하며, 여기서 R21 및 R22는 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴, 치환된 아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 시클로알케닐, 치환된 시클로알케닐, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로시클릭, 및 치환된 헤테로시클릭으로 구성되는 군으로부터 선택되고, R21 및 R22는 선택적으로 그것에 결합된 질소와 함께 이어져서 헤테로시클릭 또는 치환된 헤테로시클릭 기를 형성하며, 여기서 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 시클로알케닐, 치환된 시클로알케닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로시클릭, 및 치환된 헤테로시클릭은 여기 정의된 대로이다.
"아미노카보닐아미노"는 기 -NR21C(O)NR22R23을 말하며, 여기서 R21, R22 및 R23은 독립적으로 수소, 알킬, 아릴 또는 시클로알킬로부터 선택되거나, 또는 두 R 기가 이어져서 헤테로시클릴 기를 형성한다.
용어 "알콕시카보닐아미노"는 기 -NRC(O)OR을 말하며, 각 R은 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 헤테로아릴, 또는 헤테로시클릴이고, 여기서 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 헤테로아릴, 및 헤테로시클릴은 여기 정의된 대로이다.
용어 "아실옥시"는 알킬-C(O)O-, 치환된 알킬-C(O)O-, 시클로알킬-C(O)O-, 치환된 시클로알킬-C(O)O-, 아릴-C(O)O-, 헤테로아릴-C(O)O-, 및 헤테로시클릴-C(O)O- 기를 말하며, 여기서 알킬, 치환된 알킬, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 아릴, 헤테로아릴, 및 헤테로시클릴은 여기 정의된 대로이다.
"아미노설포닐"은 기 -SO2NR21R22를 말하며, 여기서 R21 및 R22는 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴, 치환된 아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 시클로알케닐, 치환된 시클로알케닐, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로시클릭, 치환된 헤테로시클릭으로 구성되는 군으로부터 선택되며, 여기서 R21 및 R22는 선택적으로 그것에 결합된 질소와 함께 이어져서 헤테로시클릭 또는 치환된 헤테로시클릭 기를 형성하고, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 시클로알케닐, 치환된 시클로알케닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로시클릭 및 치환된 헤테로시클릭은 여기 정의된 대로이다.
"설포닐아미노"는 기 -NR21SO2R22를 말하며, 여기서 R21 및 R22는 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴, 치환된 아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 시클로알케닐, 치환된 시클로알케닐, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로시클릭, 및 치환된 헤테로시클릭으로 구성되는 군으로부터 선택되고, 여기서 R21 및 R22는 선택적으로 그것에 결합된 원자와 함께 이어져서 헤테로시클릭 또는 치환된 헤테로시클릭 기를 형성하며, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 시클로알케닐, 치환된 시클로알케닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로시클릭, 및 치환된 헤테로시클릭은 여기 정의된 대로이다.
"아릴" 또는 "Ar"은 단일 고리(예컨대 페닐 기에 존재하는) 또는 다중 축합 고리를 가진 고리 시스템(이러한 방향족 고리 시스템의 예들은 나프틸, 안트릴 및 인다닐을 포함한다)을 가진 6 내지 18 탄소 원자의 1가 방향족 카보시클릭 기를 말하며, 이 축합된 고리는 방향족일 수 있거나 아닐 수 있고, 단 부착 지점은 방향족 고리의 원자를 통한다. 이 용어는 예로서 페닐 및 나프틸을 포함한다. 아릴 치환기에 대한 정의에 의해서 제약되지 않는다면 이러한 아릴 기는 선택적으로 아실옥시, 하이드록시, 티올, 아실, 알킬, 알콕시, 알케닐, 알키닐, 시클로알킬, 시클로알케닐, 치환된 알킬, 치환된 알콕시, 치환된 알케닐, 치환된 알키닐, 치환된 시클로알킬, 치환된 시클로알케닐, 아미노, 치환된 아미노, 아미노아실, 아실아미노, 알카릴, 아릴, 아릴옥시, 아지도, 카복실, 카복실알킬, 시아노, 할로겐, 니트로, 헤테로아릴, 헤테로아릴옥시, 헤테로시클릴, 헤테로시클로옥시, 아미노아실옥시, 옥시아실아미노, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 티오아릴옥시, 티오헤테로아릴옥시, -SO-알킬, -SO-치환된 알킬, -SO-아릴, -SO-헤테로아릴, -SO2-알킬, -SO2-치환된 알킬, -SO2-아릴, -SO2-헤테로아릴 및 트리할로메틸로부터 선택된 1 내지 5 치환체, 또는 1 내지 3 치환체로 치환될 수 있다.
"아릴옥시"는 기 -O-아릴을 말하며, 여기서 아릴은 여기 정의된 대로이고, 예로서 선택적으로 여기 정의된 것과 같은 치환된 아릴 기를 포함하는, 페녹시, 나프톡시 등을 포함한다.
"아미노"는 기 -NH2를 말한다.
용어 "치환된 아미노"는 기 -NRR을 말하며, 여기서 각 R은 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 시클로알케닐, 치환된 시클로알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴, 헤테로아릴, 및 헤테로시클릴로 구성되는 군으로부터 선택되고, 단 적어도 하나의 R은 수소가 아니다.
용어 "아지도"는 기 -N3을 말한다.
"카복실," "카복시" 또는 "카복실레이트"는 -CO2H 또는 그것의 염을 말한다.
"카복실 에스테르" 또는 "카복시 에스테르" 또는 용어 "카복시알킬" 또는 "카복실알킬"은 기 -C(O)O-알킬, -C(O)O-치환된 알킬, -C(O)O-알케닐, -C(O)O-치환된 알케닐, -C(O)O-알키닐, -C(O)O-치환된 알키닐, -C(O)O-아릴, -C(O)O-치환된 아릴, -C(O)O-시클로알킬, -C(O)O-치환된 시클로알킬, -C(O)O-시클로알케닐, -C(O)O-치환된 시클로알케닐, -C(O)O-헤테로아릴, -C(O)O-치환된 헤테로아릴, -C(O)O-헤테로시클릭, 및 -C(O)O-치환된 헤테로시클릭을 말하며, 여기서 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 시클로알케닐, 치환된 시클로알케닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로시클릭, 및 치환된 헤테로시클릭은 여기 정의된 대로이다.
"(카복실 에스테르)옥시" 또는 "카보네이트"는 기 -O-C(O)O-알킬, -O-C(O)O-치환된 알킬, -O-C(O)O-알케닐, -O-C(O)O-치환된 알케닐, -O-C(O)O-알키닐, -O-C(O)O-치환된 알키닐, -O-C(O)O-아릴, -O-C(O)O-치환된 아릴, -O-C(O)O-시클로알킬, -O-C(O)O-치환된 시클로알킬, -O-C(O)O-시클로알케닐, -O-C(O)O-치환된 시클로알케닐, -O-C(O)O-헤테로아릴, -O-C(O)O-치환된 헤테로아릴, -O-C(O)O-헤테로시클릭, 및 -O-C(O)O-치환된 헤테로시클릭을 말하며, 여기서 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 시클로알케닐, 치환된 시클로알케닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로시클릭, 및 치환된 헤테로시클릭은 여기 정의된 대로이다.
"시아노" 또는 "니트릴"은 기 -CN을 말한다.
"시클로알킬"은 융합, 브릿지 및 스피로 고리 시스템을 포함하는 단일 또는 다중 환형 고리를 가진 3 내지 10 탄소 원자의 환형 알킬 기를 말한다. 적합한 시클로알킬 기의 예들은, 예를 들어 아다만틸, 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로옥틸 등을 포함한다. 이러한 시클로알킬은 예로서 단일 고리 구조, 예컨대 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로옥틸 등, 또는 다중 고리 구조, 예컨대 아다만틸 등을 포함한다.
용어 "치환된 시클로알킬"은 알킬, 치환된 알킬, 알콕시, 치환된 알콕시, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 시클로알케닐, 치환된 시클로알케닐, 아실, 아실아미노, 아실옥시, 아미노, 치환된 아미노, 아미노아실, 아미노아실옥시, 옥시아미노아실, 아지도, 시아노, 할로겐, 하이드록실, 옥소, 티오케토, 카복실, 카복실알킬, 티오아릴옥시, 티오헤테로아릴옥시, 티오헤테로시클로옥시, 티올, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 아릴옥시, 헤테로아릴, 헤테로아릴옥시, 헤테로시클릴, 헤테로시클로옥시, 하이드록시아미노, 알콕시아미노, 니트로, -SO-알킬, -SO-치환된 알킬, -SO-아릴, -SO-헤테로아릴, -SO2-알킬, -SO2-치환된 알킬, -SO2-아릴 및 -SO2-헤테로아릴로부터 선택된 1 내지 5 치환체, 또는 1 내지 3 치환체를 가진 시클로알킬 기를 말한다.
"시클로알케닐"은 단일 또는 다중 고리를 가지고 적어도 하나의 이중 결합 및 바람직하게 1 내지 2 이중 결합을 가진 3 내지 10 탄소 원자의 비-방향족 환형 알킬 기를 말한다.
용어 "치환된 시클로알케닐"은 알콕시, 치환된 알콕시, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 시클로알케닐, 치환된 시클로알케닐, 아실, 아실아미노, 아실옥시, 아미노, 치환된 아미노, 아미노아실, 아미노아실옥시, 옥시아미노아실, 아지도, 시아노, 할로겐, 하이드록실, 케토, 티오케토, 카복실, 카복실알킬, 티오아릴옥시, 티오헤테로아릴옥시, 티오헤테로시클로옥시, 티올, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 아릴옥시, 헤테로아릴, 헤테로아릴옥시, 헤테로시클릴, 헤테로시클로옥시, 하이드록시아미노, 알콕시아미노, 니트로, -SO-알킬, -SO-치환된 알킬, -SO-아릴, -SO-헤테로아릴, -SO2-알킬, -SO2-치환된 알킬, -SO2-아릴 및 -SO2-헤테로아릴로부터 선택된 1 내지 5 치환체, 또는 1 내지 3 치환체를 가진 시클로알케닐 기를 말한다.
"시클로알키닐"은 단일 또는 다중 고리를 가지고 적어도 하나의 삼중 결합을 가진 5 내지 10 탄소 원자의 비-방향족 시클로알킬 기를 말한다.
"시클로알콕시"는 -O-시클로알킬을 말한다.
"시클로알케닐옥시"는 -O-시클로알케닐을 말한다.
"할로" 또는 "할로겐"은 플루오로, 클로로, 브로모, 및 요도를 말한다.
"하이드록시" 또는 "하이드록실"은 기 -OH를 말한다.
"헤테로아릴"은 1 내지 15 탄소 원자, 예컨대 1 내지 10 탄소 원자와 고리 내에 산소, 질소, 및 황으로 구성되는 군으로부터 선택된 1 내지 10 헤테로원자의 방향족 기를 말한다. 이러한 헤테로아릴 기는 단일 고리(예컨대 피리디닐, 이미다졸릴 또는 푸릴) 또는 고리 시스템의 다중 축합 고리(예를 들어, 인돌리지닐, 퀴놀리닐, 벤조푸란, 벤즈이미다졸릴 또는 벤조티에닐과 같은 기에서처럼)를 가질 수 있으며, 여기서 고리 시스템 내의 적어도 하나의 고리는 방향족이고, 고리 시스템 내의 적어도 하나의 고리는 방향족이며, 단 부착 지점은 방향족 고리의 원자를 통한다. 특정 실시형태에서, 헤테로아릴 기의 질소 및/또는 황 고리 원자(들)는 선택적으로 산화되어 N-옥시드(NO), 설피닐 또는 설포닐 부분을 제공한다. 이 용어는 예로서 피리디닐, 피롤릴, 인돌릴, 티오페닐, 및 푸라닐을 포함한다.
헤테로아릴 치환체에 대한 정의에 의해서 달리 제약되지 않는다면 이러한 헤테로아릴 기는 선택적으로 아실옥시, 하이드록시, 티올, 아실, 알킬, 알콕시, 알케닐, 알키닐, 시클로알킬, 시클로알케닐, 치환된 알킬, 치환된 알콕시, 치환된 알케닐, 치환된 알키닐, 치환된 시클로알킬, 치환된 시클로알케닐, 아미노, 치환된 아미노, 아미노아실, 아실아미노, 알카릴, 아릴, 아릴옥시, 아지도, 카복실, 카복실알킬, 시아노, 할로겐, 니트로, 헤테로아릴, 헤테로아릴옥시, 헤테로시클릴, 헤테로시클로옥시, 아미노아실옥시, 옥시아실아미노, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 티오아릴옥시, 티오헤테로아릴옥시, -SO-알킬, -SO-치환된 알킬, -SO-아릴, -SO-헤테로아릴, -SO2-알킬, -SO2-치환된 알킬, -SO2-아릴 및 -SO2-헤테로아릴, 및 트리할로메틸로부터 선택된 1 내지 5 치환체, 또는 1 내지 3 치환체로 치환될 수 있다.
용어 "헤테로아랄킬"은 기 -알킬렌-헤테로아릴을 말하며, 여기서 알킬렌 및 헤테로아릴은 여기 정의된다. 이 용어는 예로서 피리딜메틸, 피리딜에틸, 인돌릴메틸 등을 포함한다.
"헤테로아릴옥시"는 -O-헤테로아릴을 말한다.
"헤테로시클" "헤테로시클릭," "헤테로시클로알킬" 및 "헤테로시클릴"은 융합 브릿지 및 스피로 고리 시스템을 포함하는 단일 고리 또는 다중 축합 고리를 가지고 1 내지 10 헤테로원자를 포함하는 3 내지 20 고리 원자를 가진 포화 또는 불포화 기를 말한다. 이들 고리 원자는 질소, 황, 또는 산소로 구성되는 군으로부터 선택되며, 융합 고리 시스템에서 고리 중 하나 이상은 시클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴일 수 있고, 단 부착 지점은 비-방향족 고리를 통한다. 특정 실시형태에서, 헤테로시클릭 기의 질소 및/또는 황 원자(들)는 선택적으로 산화되어 N-옥시드, -S (O)-, 또는 -SO2- 부분을 제공한다.
헤테로시클 및 헤테로아릴의 예들은, 제한은 아니지만, 아제티딘, 피롤, 이미다졸, 피라졸, 피리딘, 피라진, 피리미딘, 피리다진, 인돌리진, 이소인돌, 인돌, 디하이드로인돌, 인다졸, 퓨린, 퀴놀리진, 이소퀴놀리진, 퀴놀린, 프탈라진, 나프틸피리딘, 퀴녹살린, 퀴나졸린, 신놀린, 프테리딘, 카바졸, 카볼린, 페난트리딘, 아크리딘, 페난트롤린, 이소티아졸, 페나진, 이속사졸, 페녹사진, 페노티아진, 이미다졸리딘, 이미다졸린, 피페리딘, 피페라진, 인돌린, 프탈이미드, 1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린, 4,5,6,7-테트라하이드로벤조[b]티오펜, 티아졸, 티아졸리딘, 티오펜, 벤조[b]티오펜, 몰폴리닐, 티오몰폴리닐(티아몰폴리닐이라고도 한다), 1,1-디옥소티오몰폴리닐, 피페리디닐, 피롤리딘, 테트라하이드로푸라닐 등을 포함한다.
헤테로시클릭 치환체에 대한 정의에 의해서 달리 제약되지 않는다면 이러한 헤테로시클릭 기는 선택적으로 알콕시, 치환된 알콕시, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 시클로알케닐, 치환된 시클로알케닐, 아실, 아실아미노, 아실옥시, 아미노, 치환된 아미노, 아미노아실, 아미노아실옥시, 옥시아미노아실, 아지도, 시아노, 할로겐, 하이드록실, 옥소, 티오케토, 카복실, 카복실알킬, 티오아릴옥시, 티오헤테로아릴옥시, 티오헤테로시클로옥시, 티올, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 아릴옥시, 헤테로아릴, 헤테로아릴옥시, 헤테로시클릴, 헤테로시클로옥시, 하이드록시아미노, 알콕시아미노, 니트로, -SO-알킬, -SO-치환된 알킬, -SO-아릴, -SO-헤테로아릴, -SO2-알킬, -SO2-치환된 알킬, -SO2-아릴, -SO2-헤테로아릴, 및 융합 헤테로시클로부터 선택된 1 내지 5, 또는 1 내지 3 치환체로 치환될 수 있다.
"헤테로시클릴옥시"는 기 -O-헤테로시클릴을 말한다.
용어 "헤테로시클릴티오"는 기 헤테로시클릭-S-를 말한다.
용어 "헤테로시클렌"은 여기 정의된 헤테로시클로부터 형성된 2라디칼 기를 말한다.
용어 "하이드록시아미노"는 기 -NHOH를 말한다.
"니트로"는 기 -NO2를 말한다.
"옥소"는 원자 (=O)를 말한다.
"설포닐"은 SO2-알킬, SO2-치환된 알킬, SO2-알케닐, SO2-치환된 알케닐, SO2-시클로알킬, SO2-치환된 시클로알킬, SO2-시클로알케닐, SO2-치환된 시클로알케닐, SO2-아릴, SO2-치환된 아릴, SO2-헤테로아릴, SO2-치환된 헤테로아릴, SO2-헤테로시클릭, 및 SO2-치환된 헤테로시클릭 기를 말하며, 여기서 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 시클로알케닐, 치환된 시클로알케닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로시클릭, 및 치환된 헤테로시클릭은 여기 정의된 대로이다. 설포닐은 예로서 메틸-SO2-, 페닐-SO2-, 및 4-메틸페닐-SO2-을 포함한다.
"설포닐옥시"는 -OSO2-알킬, OSO2-치환된 알킬, OSO2-알케닐, OSO2-치환된 알케닐, OSO2-시클로알킬, OSO2-치환된 시클로알킬, OSO2-시클로알케닐, OSO2-치환된 시클로알케닐, OSO2-아릴, OSO2-치환된 아릴, OSO2-헤테로아릴, OSO2-치환된 헤테로아릴, OSO2-헤테로시클릭, 및 OSO2-치환된 헤테로시클릭 기를 말하며, 여기서 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 시클로알케닐, 치환된 시클로알케닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로시클릭, 및 치환된 헤테로시클릭은 여기 정의된 대로이다.
용어 "아미노카보닐옥시"는 기 -OC(O)NRR을 말하며, 여기서 각 R은 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 헤테로아릴, 또는 헤테로시클릭이고, 여기서 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 헤테로아릴 및 헤테로시클릭은 여기 정의된 대로이다.
"티올"은 기 -SH를 말한다.
"티옥소" 또는 용어 "티오케토"는 원자 (=S)를 말한다.
"알킬티오" 또는 용어"티오알콕시"는 기 -S-알킬을 말하며, 여기서 알킬은 여기 정의된 대로이다. 특정 실시형태에서, 황은 -S(O)-로 산화될 수 있다. 설폭사이드는 하나 이상의 입체이성질체로서 존재할 수 있다.
용어 "치환된 티오알콕시"는 기 -S-치환된 알킬을 말한다.
용어 "티오아릴옥시"는 기 아릴-S-를 말하며, 여기서 아릴 기는 여기 정의된 선택적으로 치환된 아릴을 포함하여 여기 정의된 대로이다.
용어 "티오헤테로아릴옥시"는 기 헤테로아릴-S-를 말하며, 여기서 헤테로아릴 기는 여기 정의된 선택적으로 치환된 아릴을 포함하여 여기 정의된 대로이다.
용어 "티오헤테로시클로옥시"는 기 헤테로시클릴-S-를 말하며, 여기서 헤테로시클릴 기는 여기 정의된 선택적으로 치환된 헤테로시클릴 기를 포함하여 여기 정의된 대로이다.
여기 개시된 것에 더하여, 용어 "치환된"은 특정된 기 또는 라디칼을 수식하기 위하여 사용되었을 때 특정된 기 또는 라디칼의 하나 이상의 수소 원자가 각각 서로 독립적으로 아래 정의된 동일하거나 상이한 치환체 기로 치환되는 것을 의미할 수 있다.
개별 용어와 관련하여 여기 개시된 기에 더하여, 특정된 기 또는 라디칼에서 포화된 탄소 원자 상에서 하나 이상의 탄소 상의 임의의 두 수소는 =O, =NR70, =N-OR70, =N2 또는 =S로 치환될 수 있다)를 치환하기 위한 치환체 기는 달리 특정되지 않는다면 -R60, 할로, =O, -OR70, -SR70, -NR80R80, 트리할로메틸, -CN, -OCN, -SCN, -NO, -NO2, =N2, -N3, -SO2R70, -SO2O-M+, -SO2OR70, -OSO2R70, -OSO2O-M+, -OSO2OR70, -P(O)(O-)2 (M+)2, -P(O)(OR70)O-M+, -P(O)(OR70)2, -C(O)R70, -C(S)R70, -C(NR70)R70, -C(O)O-M+, -C(O)OR70, -C(S)OR70, -C(O)NR80R80, -C(NR70)NR80R80, -OC(O)R70, -OC(S)R70, -OC(O)O-M+, -OC(O)OR70, -OC(S)OR70, -NR70C(O)R70, -NR70C(S)R70, -NR70CO2 -M+, -NR70CO2R70, -NR70C(S)OR70, -NR70C(O)NR80R80, -NR70C(NR70)R70 및 -NR70C(NR70)NR80R80이며, 여기서 R60은 선택적으로 치환된 알킬, 시클로알킬, 헤테로알킬, 헤테로시클로알킬알킬, 시클로알킬알킬, 아릴, 아릴알킬, 헤테로아릴 및 헤테로아릴알킬로 구성되는 군으로부터 선택되고, 각 R70은 독립적으로 수소 또는 R60이고; 각 R80은 독립적으로 R70이거나, 또는 두 R80'가 이들이 결합된 질소 원자와 함께 5-, 6- 또는 7-원 헤테로시클로알킬을 형성하며, 이것은 선택적으로 O, N 및 S로 구성되는 군으로부터 선택된 동일하거나 상이한 추가의 헤테로원자를 1 내지 4개 포함할 수 있고, 이것의 N은 -H 또는 C1-C3 알킬 치환을 가질 수 있고; 각 M+는 순 단일 양전하를 가진 카운터 이온이다. 각 M+는 독립적으로, 예를 들어 알칼리 이온, 예컨대 K+, Na+, Li+; 암모늄 이온, 예컨대 +N(R60)4; 또는 알칼리 토금속 이온, 예컨대 [Ca2 +]0.5, [Mg2 +]0.5, 또는 [Ba2 +]0.5일 수 있다(하첨자 0.5는 이러한 2가 알칼리 토금속 이온에 대한 카운터 이온 중 하나는 본 발명의 화합물의 이온화된 형태이고 나머지 하나는 클로라이드와 같은 다른 전형적인 카운터 이온일 수 있거나, 또는 여기 개시된 두 이온화된 화합물이 이러한 2가 알칼리 토금속 이온에 대한 카운터 이온으로 사용될 수 있거나, 또는 본 발명의 이중으로 이온화된 화합물이 이러한 2가 알칼리 토금속 이온에 대한 카운터 이온으로 사용될 수 있음을 의미한다). 구체적인 예로서, -NR80R80은 -NH2, -NH-알킬, N-피롤리디닐, N-피페라지닐, 4N-메틸-피페라진-1-일 및 N-몰폴리닐을 포함하는 것을 의미한다.
여기 개시에 더하여, "치환된" 알켄, 알킨, 아릴 및 헤테로아릴 기에서 불포화 탄소 원자 상의 수소에 대한 치환체 기는 달리 특정되지 않는다면 -R60, 할로, -O-M+, -OR70, -SR70, -S-M+, -NR80R80, 트리할로메틸, -CF3, -CN, -OCN, -SCN, -NO, -NO2, -N3, -SO2R70, -SO3 -M+, -SO3R70, -OSO2R70, -OSO3 -M+, -OSO3R70, -PO3 -2(M+)2, -P(O)(OR70)O-M+, -P(O)(OR70)2, -C(O)R70, -C(S)R70, -C(NR70)R70, -CO2 -M+, -CO2R70, -C(S)OR70, -C(O)NR80R80, -C(NR70)NR80R80, -OC(O)R70, -OC(S)R70, -OCO2 -M+, -OCO2R70, -OC(S)OR70, -NR70C(O)R70, -NR70C(S)R70, -NR70CO2 -M+, -NR70CO2R70, -NR70C(S)OR70, -NR70C(O)NR80R80, -NR70C(NR70)R70 및 -NR70C(NR70)NR80R80이고, 여기서 R60, R70, R80 및 M+는 앞에서 설명된 대로이며, 단 치환된 알켄 또는 알킨의 경우 치환체는 -O-M+, -OR70, -SR70, 또는 -S-M+가 아니다.
개별 용어와 관련하여 여기 개시된 기들에 더하여, "치환된" 헤테로알킬 및 시클로헤테로알킬 기에서 질소 원자 상의 수소에 대한 치환체 기는 달리 특정되지 않는다면 -R60, -O-M+, -OR70, -SR70, -S-M+, -NR80R80, 트리할로메틸, -CF3, -CN, -NO, -NO2, -S(O)2R70, -S(O)2O-M+, -S(O)2OR70, -OS(O)2R70, -OS(O)2O-M+, -OS(O)2OR70, -P(O)(O-)2(M+)2, -P(O)(OR70)O-M+, -P(O)(OR70)(OR70), -C(O)R70, -C(S)R70, -C(NR70)R70, -C(O)OR70, -C(S)OR70, -C(O)NR80R80, -C(NR70)NR80R80, -OC(O)R70, -OC(S)R70, -OC(O)OR70, -OC(S)OR70, -NR70C(O)R70, -NR70C(S)R70, -NR70C(O)OR70, -NR70C(S)OR70, -NR70C(O)NR80R80, -NR70C(NR70)R70 및 -NR70C(NR70)NR80R80이고, 여기서 R60, R70, R80 및 M+은 앞에서 정의된 대로이다.
여기 개시에 더하여, 특정 실시형태에서, 치환된 기는 1, 2, 3, 또는 4 치환체, 1, 2, 또는 3 치환체, 1 또는 2 치환체, 또는 1 치환체를 가진다.
상기 정의된 모든 치환된 기에서 자체에 추가의 치환체를 가진 치환체를 한정함으로써 도달되는 중합체(예를 들어, 치환된 아릴 기에 의해서 더 치환되는 치환된 아릴 기로 자체 치환된 치환체로서 치환된 아릴 기를 갖는 치환된 아릴 등)는 여기 포함되지 않는 것으로 의도된다. 이러한 경우, 이러한 치환의 최대 수는 3이다. 예를 들어, 여기 구체적으로 고려되는 치환된 아릴 기의 연속 치환은 치환된 아릴-(치환된 아릴)-치환된 아릴에 한정된다.
달리 나타내지 않는다면, 여기 명백히 정의되지 않은 치환체의 명명은 관능기의 말단 부분을 명명한 다음 부착 지점을 향해 인접 관능기를 명명함으로써 도달된다. 예를 들어, 치환체 "아릴알킬옥시카보닐"은 기 (아릴)-(알킬)-O-C(O)-를 말한다.
하나 이상의 치환체를 함유하는 여기 개시된 기 중 어느 것에 관하여, 이러한 기들이 입체적으로 불가능하고 및/또는 합성상 실행할 수 없는 임의의 치환 또는 치환 패턴을 함유하지 않는다는 것이 당연히 이해된다. 이에 더하여, 대상 화합물은 이들 화합물의 치환으로부터 생기는 모든 입체화학적 이성질체를 포함한다.
용어 "제약학적으로 허용되는 염"은 포유류와 같은 환자에 투여하는 것이 허용되는 염을 의미한다(주어진 투약량 섭생에서 허용가능한 포유류 안전성을 가진 카운터 이온을 가진 염). 이러한 염은 제약학적으로 허용되는 무기 또는 유기 염기 및 제약학적으로 허용되는 무기 또는 유기 산으로부터 유래될 수 있다. "제약학적으로 허용되는 염"은 화합물의 제약학적으로 허용되는 염을 말하며, 이 염들은 본 분에 잘 알려진 여러 가지 유기 및 무기 카운터 이온으로부터 유래되고, 예로서 나트륨, 칼륨, 칼슘, 마그네슘, 암모늄, 테트라알킬암모늄 등을 포함하며, 분자가 염기성 관능기를 함유할 때는 유기 또는 무기 산, 예컨대 염산, 브롬화수소산, 포메이트, 타르트레이트, 베실레이트, 메실레이트, 아세테이트, 말레에이트, 옥살레이트 등의 염을 포함한다.
용어 "그것의 염"은 산의 양성자가 금속 양이온이나 유기 양이온 등과 같은 양이온으로 치환되었을 때 형성된 화합물을 의미한다. 적용가능한 경우, 이 염은 제약학적으로 허용되는 염이지만 중간체 화합물의 염에 대해 환자에게 투여되는 것이 의도될 필요는 없다. 예로서, 본 발명의 화합물의 염은 양이온을 형성하기 위해 무기 또는 유기 산에 의해서 양성자화된 것들을 포함하며, 상기 무기 또는 유기 산의 콘쥬게이트 염기가 염의 음이온 성분이 된다.
"용매화합물"은 용질의 분자 또는 이온과 용매 분자의 조합에 의해서 형성된 복합체를 말한다. 용매는 유기 화합물, 무기 화합물 또는 이 둘의 혼합물일 수 있다. 용매의 일부 예들은, 제한은 아니지만, 메탄올, N,N-디메틸폼아미드, 테트라하이드로푸란, 디메틸설폭사이드, 및 물을 포함한다. 용매가 물일 때 형성된 용매화합물은 수화물이다.
"입체이성질체" 및 "입체이성질체들"은 원자 연결은 동일하지만 공간 내 원자 배열은 상이한 화합물을 말한다. 입체이성질체는 시스-트랜스 이성질체, E 및 Z 이성질체, 거울상이성질체, 및 부분입체이성질체를 포함한다.
"토토머"는 엔올-케토 및 이민-엔아민 토토머와 같은 원자의 전자 결합 및/또는 양성자의 위치에만 차이가 있는 분자의 대체 형태, 또는 피라졸, 이미다졸, 벤즈이미다졸, 트리아졸 및 테트라졸과 같은 -N=C(H)-NH- 고리 원자 배열을 함유하는 헤테로아릴 기의 토토머 형태를 말한다. 당업자는 다른 토토머 고리 원자 배열이 가능하다는 것을 인정할 것이다.
용어 "또는 그것의 염 또는 용매화합물 또는 입체이성질체"는 대상 화합물의 입체이성질체의 제약학적으로 허용되는 염의 용매화합물과 같은 염, 용매화합물 및 입체이성질체의 모든 경우를 포함하도록 의도된다는 것이 인정될 것이다.
"제약학적 유효량" 및 "치료적 유효량"은 특정된 장애나 질환 또는 그것의 증상 중 하나 이상을 치료하기에 및/또는 질환이나 장애의 발생을 방지하기에 충분한 화합물의 양을 말한다. 종양 증식성 장애에 대해서 제약학적 또는 치료적 유효량은 특히 종양을 수축시키거나 종양의 성장 속도를 감소시키기에 충분한 양을 포함한다.
"환자"는 사람 및 비-사람 대상, 특히 포유류 대상을 말한다.
여기 사용된 용어 "치료하는" 또는 "치료"는 (a) 대상의 예방적 치료와 같은 질환이나 의학적 상태의 발생의 예방; (b) 환자에서 질환이나 의학적 상태의 제거나 퇴행과 같은 질환이나 의학적 상태의 완화; (c) 예를 들어 환자에서 질환이나 의학적 상태의 발생을 지연시키거나 정지시킴에 의한 질환이나 의학적 상태의 억제; 또는 (d) 환자에서 질환이나 의학적 상태의 증상의 경감을 포함하는 포유류(특히 사람)와 같은 환자에서 질환이나 의학적 상태를 치료하는 것 또는 치료를 의미한다.
용어 "폴리펩티드", "펩티드" 및 "단백질"은 어떤 길이의 아미노산의 중합체 형태를 말하는 것으로서 여기 상호 교환하여 사용된다. 구체적으로 달리 나타내지 않는다면, "폴리펩티드", "펩티드" 및 "단백질"은 유전적으로 암호화된 및 비-암호화된 아미노산, 화학적으로 또는 생화학적으로 변형된 또는 유도체화된 아미노산, 및 변형된 펩티드 백본을 가진 폴리펩티드를 포함할 수 있다. 이 용어는, 제한은 아니지만, 이종 아미노산 서열과의 융합 단백질, 이종 및 동종 리더 서열과의 융합체, 적어도 하나의 N-말단 메티오닌 잔기(예를 들어, 재조합 박테리아 숙주 세포에서의 생산을 촉진하기 위한)를 함유하는 단백질; 면역학적으로 택이 부착된 단백질 등을 포함하는 융합 단백질들을 포함한다.
"자생 아미노산 서열" 또는 "모 아미노산 서열"은 변형된 아미노산 잔기를 포함하기 위한 변형 전의 폴리펩티드의 아미노산 서열을 말하는 것으로서 여기 상호 교환하여 사용된다.
용어 "아미노산 유사체", "비천연 아미노산" 등은 상호 교환하여 사용될 수 있으며, 자연 발생 단백질에서 공통적으로 발견되는 하나 이상의 아미노산과 구조 및/또는 전체 모양이 유사한 아미노산-유사 화합물을 포함한다(예를 들어, Ala 또는 A, Cys 또는 C, Asp 또는 D, Glu 또는 E, Phe 또는 F, Gly 또는 G, His 또는 H, Ile 또는 I, Lys 또는 K, Leu 또는 L, Met 또는 M, Asn 또는 N, Pro 또는 P, Gln 또는 Q, Arg 또는 R, Ser 또는 S, Thr 또는 T, Val 또는 V, Trp 또는 W, Tyr 또는 Y). 아미노산 유사체는 또한 변형된 측쇄 또는 백본을 가진 천연 아미노산을 포함한다. 아미노산 유사체는 또한 자연 발생 D-형태에서와 동일한 입체화학을 가진 아미노산 유사체뿐만 아니라 아미노산 유사체의 L-형태를 포함한다. 일부 예에서, 아미노산 유사체는 하나 이상의 천연 아미노산과 백본 구조, 및/또는 측쇄 구조를 공유하며, 차이(들)는 분자 내 하나 이상의 변형된 기에 있다. 이러한 변형은, 제한은 아니지만, 원자(예컨대 N)의 관련된 원자(예컨대 S)로의 치환, 기(예컨대 메틸, 또는 하이드록실 등) 또는 원자(예컨대 Cl 또는 Br 등)의 부가, 기의 결실, 공유 결합의 치환(단일 결합을 이중 결합으로 등), 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다. 예를 들어, 아미노산 유사체는 α-하이드록시산, 및 α-아미노산 등을 포함할 수 있다.
용어 "탄수화물" 등은 단당류, 이당류, 올리고당류 및 다당류의 단량체 단위 및/또는 중합체를 말하기 위하여 사용될 수 있다. 용어 당은 단당류, 이당류와 같은 작은 탄수화물을 말하기 위하여 사용될 수 있다. 용어 "탄수화물 유도체"는 관심의 탄수화물의 하나 이상의 관능기가 치환되거나(임의의 편리한 치환체로 대체된다), 변형되거나(임의의 편리한 화학을 사용하여 다른 기로 전환된다) 또는 부재하는(예를 들어, 제거되거나 H로 대체된다) 화합물을 포함한다. 여러 가지 탄수화물 및 탄수화물 유도체가 이용가능하며, 대상 화합물 및 콘쥬게이트에서 사용하기 위해 개조될 수 있다.
용어 "항체"는 가장 넓은 의미로서 사용되며, 단클론 항체(전장 단클론성 항체를 포함하여), 다클론 항체 및 다중특이적 항체(예를 들어, 이중특이적 항체), 사람화된 항체, 단쇄 항체, 키메라 항체, 항체 단편(예를 들어, Fab 단편) 등을 포함한다. 항체는 표적 항원과 결합할 수 있다(Janeway, C., Travers, P., Walport, M., Shlomchik (2001) Immuno Biology, 5th Ed., Garland Publishing, New York). 표적 항원은 항체의 하나 이상의 가변 영역에 의해 형성된 상보성 결정 영역(CDR)에 의해 인식되는 소위 말하는 에피토프인 하나 이상의 결합 부위를 가질 수 있다.
용어 "천연 항체"는 항체의 중쇄 및 경쇄가 다세포 생물의 면역 시스템에 의해서 만들어지고 쌍을 이루고 있는 항체를 말한다. 비장, 림프절, 골수 및 혈청이 천연 항체를 생성하는 조직의 예들이다. 예를 들어, 항원으로 면역화된 제1 동물로부터 분리된 항체 생성 세포에 의해서 생성된 항체는 천연 항체이다.
용어 "사람화된 항체" 또는 "사람화된 면역글로불린"은 사람 항체로부터 상응하게 위치된 아미노산으로 치환된 하나 이상의 아미노산을 함유하는(예를 들어, 프레임워크 영역, 불변 영역 또는 CDR 내에) 비-사람(예를 들어, 마우스 또는 토끼) 항체를 말한다. 일반적으로, 사람화된 항체는 동일한 항체의 비-사람화된 버전과 비교했을 때 사람 숙주에서 감소된 면역 반응을 생성한다. 항체는, 예를 들어 CDR-그래프팅(EP 239,400; PCT 공개 WO 91/09967; 미국특허 Nos. 5,225,539; 5,530,101; 및 5,585,089), 베니어링 또는 리서페이싱(EP 592,106; EP 519,596; Padlan, Molecular Immunology 28(4/5):489-498(1991); Studnicka et al., Protein Engineering 7 (6):805-814(1994); Roguska. et al., PNAS 91:969-973(1994)), 및 체인 셔플링(미국특허 No. 5,565,332)을 포함하는 본 분야에 알려진 여러 가지 기술을 사용하여 사람화될 수 있다. 특정 실시형태에서, 프레임워크 치환은 CDR과 프레임워크 잔기의 상호작용을 모델링함으로써 확인되며, 이로써 항원 결합 및 서열 비교에 중요한 프레임워크 잔기를 확인하고 특정 위치에서 일반적이지 않은 프레임워크 잔기를 확인할 수 있다(예를 들어, 미국특허 No. 5,585,089; Riechmann et al., Nature 332:323(1988) 참조). 본 발명에서 사용이 고려되는 항체를 사람화하기 위한 추가의 방법들이 미국특허 Nos. 5,750,078; 5,502,167; 5,705,154; 5,770,403; 5,698,417; 5,693,493; 5,558,864; 4,935,496; 및 4,816,567, 및 PCT 공개 WO 98/45331 및 WO 98/45332에 설명된다. 특정 실시형태에서, 대상 토끼 항체가 US20040086979 및 US20050033031에 제시된 방법에 따라서 사람화될 수 있다. 따라서, 상기 설명된 항체는 본 분야에 잘 알려진 방법을 사용하여 사람화될 수 있다.
용어 "키메라 항체"는 경쇄 및 중쇄 유전자가 상이한 종들에 속하는 항체 가변 및 불변 영역 유전자로부터 전형적으로 유전자 조작에 의해서 구성돈 항체를 말한다. 예를 들어, 마우스 단클론 항체로부터 유전자의 가변 단편이 감마 1 및 감마 3과 같은 사람 불변 단편에 이어질 수 있다. 치료용 키메라 항체의 예는 마우스 항체로부터의 가변 또는 항원-결합 도메인과 사람 항체로부터의 불변 또는 이펙터 도메인으로 이루어진 하이브리드 단백질이며, 다른 포유류 종들로부터의 도메인도 사용될 수 있다.
폴리펩티드, 펩티드 또는 단백질의 아미노산 서열에 대해서 사용된 "유전적으로-암호화가능한"은 아미노산 서열이 이 아미노산 서열을 암호화하는 핵산의 전사 및 번역에 의해서 생성될 수 있는 아미노산 잔기들로 이루어진다는 것을 의미하며, 여기서 전사 및/또는 번역은 세포 또는 세포-무함유 시험관내 전사/번역 시스템에서 일어날 수 있다.
용어 "조절 서열"은 특정 발현 시스템, 예를 들어 포유류 세포, 박테리아 세포, 세포-무함유 합성 등에서 작동 가능하게 연결된 코딩 서열의 발현을 촉진하는 DNA 서열을 말한다. 원핵생물 시스템에 적합한 조절 서열은, 예를 들어 프로모터, 선택적으로 오퍼레이터 서열, 및 리보솜 결합 부위를 포함한다. 진핵생물 세포 시스템은 프로모터, 폴리아데닐화 신호, 및 인핸서를 이용할 수 있다.
핵산은 다른 핵산 서열과 기능적 관계로 배치되었을 때 "작동 가능하게 연결"된다. 예를 들어, 전서열 또는 분비 리더의 DNA는 폴리펩티드의 분비에 참여하는 전단백질로서 발현되면 폴리펩티드의 DNA에 작동 가능하게 연결되고; 프로모터 또는 인핸서는 서열의 전사에 영향을 미치면 코딩 서열에 작동 가능하게 연결되고; 또는 리보솜 결합 부위는 번역의 개시를 촉진하도록 위치되면 코딩 서열에 작동 가능하게 연결된다. 일반적으로, "작동 가능하게 연결된"은 연결될 DNA 서열들이 연속적이며, 분비 리더의 경우 연속적이고 리딩 프레임 내에 있다는 것을 의미한다. 연결은 리게이션에 의해서 또는 증폭 반응을 통해서 달성된다. 합성 올리고뉴클레오티드 어댑터 또는 링커는 종래의 실시에 따라서 연결 서열에 사용될 수 있다.
여기 사용된 용어 "발현 카세트"는 핵산에 삽입될 수 있는 핵산의 단편, 일반적으로 DNA를 말한다(예를 들어, 관심의 구성물에의 리게이션과 양립가능한 제한 부위의 사용에 의해서 또는 관심의 구성물이나 숙주 세포 게놈에의 상동성 재조합에 의해서). 일반적으로, 핵산 단편은 관심의 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하고, 카세트와 제한 부위는 전사 및 번역을 위한 적절한 리딩 프레임에 카세트의 삽입을 촉진하도록 설계된다. 발현 카세트는 또한 숙주 세포에서 관심의 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드의 발현을 촉진하는 요소를 포함할 수 있다. 이들 요소는, 제한은 아니지만, 프로모터, 최소 프로모터, 인핸서, 반응 요소, 터미네이터 서열, 폴리아데닐화 서열 등을 포함할 수 있다.
여기 사용된 용어 "분리된"은 화합물이 자연 발생하는 환경과 상이한 환경에 있는 관심의 화합물을 설명하기 위한 의미이다. "분리된"은 관심의 화합물로 실질적으로 부화된 샘플 내의 화합물 및/또는 관심의 화합물이 부분적으로 또는 실질적으로 정제된 화합물을 포함하는 것을 의미한다.
여기 사용된 용어 "실질적으로 정제된"은 그것의 천연 환경으로부터 제거된, 자연적으로 관련된 다른 성분들이 적어도 60% 없는, 적어도 75% 없는, 적어도 80% 없는, 적어도 85% 없는, 적어도 90% 없는, 적어도 95% 없는, 적어도 98% 없는, 또는 98%를 초과하여 없는 화합물을 말한다.
용어 "생리학적 조건"은 살아 있는 세포와 양립가능한 조건, 예를 들어 살아 있는 세포와 양립가능한 온도, pH, 염도 등의 우세하게 우성인 조건을 포함하는 것을 의미한다.
"반응 파트너"는 다른 반응 파트너와 특이적으로 반응하여 반응 생성물을 생성하는 분자 또는 분자 부분을 의미한다. 예시적인 반응 파트너는 설퍼타아제 모티프의 시스테인 또는 세린과 포밀글리신 생성 효소(FGE)를 포함하며, 이들은 반응하여 해당 모티프 내에 시스테인 또는 세린 대신에 포밀글리신(fGly)을 함유하는 전환된 알데하이드 택의 반응 생성물을 형성한다. 다른 예시적인 반응 파트너는 전환된 알데하이드 택의 fGly 잔기의 알데하이드(예를 들어, 반응성 알데하이드 기)와 "알데하이드-반응성 반응 파트너"이며, 이것은 알데하이드-반응성 기와 관심의 부분을 포함하고, 반응하여 변형된 fGly 잔기를 통해서 변형된 폴리펩티드에 콘쥬게이트된 관심의 부분을 가진 변형된 알데하이드 택부착 폴리펩티드의 반응 생성물을 형성한다.
"N-말단"은 자유 아민 기를 가진 폴리펩티드의 말단 아미노산 잔기를 말하며, 이 아민 기는 비-N-말단 아미노산 잔기에서는 보통 폴리펩티드의 공유 백본의 일부를 형성한다.
"C-말단"은 자유 카복실 기를 가진 폴리펩티드의 말단 아미노산 잔기를 말하며, 이 카복실 기는 비-C-말단 아미노산 잔기에서는 보통 폴리펩티드의 공유 백본의 일부를 형성한다.
폴리펩티드 또는 폴리펩티드의 아미노산 사열에 대해서 사용된 "내부 부위"는 N-말단 또는 C-말단에 있지 않은 폴리펩티드의 영역을 의미한다.
본 발명이 더 설명되기 전에 본 발명은 설명된 특정 실시형태에 제한되지 않으며 당연히 변형될 수 있다는 것이 이해되어야 한다. 또한, 여기 사용된 용어들은 단지 특정 실시형태를 설명하기 위한 목적이고 제한하는 것을 의도하지 않으며, 본 발명의 범위는 단지 첨부된 청구항에 의해서만 제한될 것임이 이해되어야 한다.
값들의 범위가 제공된 경우 문맥상 분명히 다른 의미가 아니라면 해당 범위의 상한과 하한 사이에서 하한의 단위의 1/10까지 각 사이 값 및 해당 언급된 범위 내의 임의의 다른 언급된 또는 사이에 있는 값은 본 발명 내에 포함된다는 것이 이해된다. 이들 더 작은 범위의 상한 및 하한은 독립적으로 이 더 작은 범위에 포함될 수 있으며, 또한 언급된 범위 내의 임의의 구체적으로 배제된 한계를 조건으로 본 발명 내에 포함된다. 언급된 범위가 한계 중 하나 또는 둘 다를 포함하는 경우 이들 포함된 한계의 어느 하나 또는 둘 다를 배제한 범위도 본 발명에 포함된다.
개별 실시형태들과 관련하여 명백히 설명된 본 발명의 특정한 특징들은 또한 단일 실시형태에 조합으로 제공될 수 있음이 인정된다. 반대로, 단일 실시형태와 관련하여 간략히 설명된 본 발명의 다양한 특징들은 또한 임의의 적합한 하위 조합으로 또는 개별적으로 제공될 수 있다. 본 발명에 속하는 실시형태들의 모든 조합은 본 발명에 의해서 구체적으로 포함되며, 각 조합 및 모든 조합이 이러한 조합이, 예를 들어 안정한 화합물인 화합물(즉, 제조되고 분리되고 특성화되고 생물학적 활성에 대해 시험될 수 있는 화합물)인 대상 물질을 포함하는 범위까지 개별적으로 그리고 명백히 개시된 것처럼 여기 개시된다. 이에 더하여, 다양한 실시형태 및 이들의 요소(예를 들어, 이러한 변수들을 설명하는 실시형태에 열거된 화학적 기들의 요소)의 모든 하위-조합도 본 발명에 의해서 구체적으로 포함되며, 각 이러한 하위-조합 및 모든 이러한 하위-조합이 여기 개별적으로 그리고 명백히 개시된 것처럼 여기 개시된다.
달리 정의되지 않는다면 여기 사용된 모든 기술 및 과학 용어들은 본 발명이 속하는 분야의 당업자에 의해서 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 가진다. 여기 개시된 것들과 유사하거나 동등한 임의의 방법 및 재료들도 본 발명의 실시나 시험에 사용될 수 있지만, 바람직한 방법 및 재료는 이제 설명된다. 여기 언급된 모든 간행물은 해당 간행물이 인용된 것과 관련된 방법 및/또는 재료를 개시하고 설명하기 위해 여기 참고로 포함된다.
첨부된 청구항과 여기 사용된 대로 단수형 "한" 및 "그"는 문맥상 분명히 다른 의미가 아니라면 복수의 언급을 포함한다는 것이 주지되어야 한다. 더 나아가, 청구항은 임의의 선택적 요소를 배제하도록 작성될 수 있다는 것이 주지된다. 이와 같이, 이런 언급은 청구항 요소의 인용과 관련하여 "단독으로", "단지" 등과 같은 배타적인 용어의 사용, 또는 "부정적인" 제한의 사용에 대한 선행하는 근거로서 사용되도록 의도된다.
개별 실시형태들과 관련하여 명백히 설명된 본 발명의 특정한 특징들은 또한 단일 실시형태에 조합으로 제공될 수 있음이 인정된다. 반대로, 단일 실시형태와 관련하여 간략히 설명된 본 발명의 다양한 특징들은 또한 임의의 적합한 하위 조합으로 또는 개별적으로 제공될 수 있다.
여기 논의된 간행물은 본 출원의 출원일 전에 개시된 것에 대해서만 제공된다. 어느 것도 본 발명이 선행 발명으로 인하여 이러한 간행물에 앞서서 등재되지 않았다는 것의 승인으로서 해석되지 않는다. 더 나아가, 제공된 간행물의 일자는 실제 간행물 일자와 상이할 수 있으며, 이들은 독립적으로 확인될 필요가 있을 수 있다.
상세한 설명
본 개시는 콘쥬게이트(예를 들어, 폴리펩티드 콘쥬게이트), 콘쥬게이트를 생성하기 위한 히드라지닐-피롤로 화합물 및 그것의 제조 및 사용 방법을 제공한다.
콘쥬게이트
본 개시는 콘쥬게이트를 제공한다. "콘쥬게이트"는 제2 부분과 안정하게 회합된 제1 부분을 의미한다. "안정하게 회합된"은 표준 조건에서 한 부분이 다른 부분이나 구조에 회합된다는 의미이다. 특정 실시형태에서, 제1 및 제2 부분은 하나 이상의 공유 결합을 통해서 서로 결합된다.
특정 실시형태에서, 콘쥬게이트는 폴리펩티드 콘쥬게이트이며, 이것은 제2 부분에 콘쥬게이트된 폴리펩티드를 포함한다. 아래 더 상세히 설명된 대로, 폴리펩티드에 콘쥬게이트된 부분은, 제한은 아니지만 검출가능한 표지, 약물, 수용성 중합체, 또는 막이나 표면에 폴리펩티드의 고정을 위한 부분과 같은 여러 가지 부분 중 어느 것일 수 있다. 관심의 부분이 폴리펩티드의 임의의 원하는 부위에서 폴리펩티드에 콘쥬게이트될 수 있다. 따라서, 본 개시는, 예를 들어 폴리펩티드의 C-말단 또는 근처의 부위에서 콘쥬게이트된 부분을 가진 변형된 폴리펩티드를 제공한다. 다른 예는 폴리펩티드의 N-말단 또는 근처의 위치에서 콘쥬게이트된 부분을 가진 변형된 폴리펩티드를 포함한다. 예들은 또한 폴리펩티드의 C-말단과 N-말단 사이의 위치에서 콘쥬게이트된 부분을 가진 변형된 폴리펩티드를 포함한다(예를 들어, 폴리펩티드의 내부 부위에서). 변형된 폴리펩티드가 둘 이상의 부분에 콘쥬게이트되는 경우 상기한 것들의 조합도 가능하다.
본 개시의 실시형태는 폴리펩티드가 하나 이상의 부분, 예컨대 2 부분, 3 부분, 4 부분, 5 부분, 6 부분, 7 부분, 8 부분, 9 부분, 또는 10 이상의 부분에 콘쥬게이트된 콘쥬게이트를 포함한다. 이 부분들은 폴리펩티드에서 하나 이상의 부위에서 폴리펩티드에 콘쥬게이트될 수 있다. 예를 들어, 하나 이상의 부분이 폴리펩티드의 단일 아미노산 잔기에 콘쥬게이트될 수 있다. 일부 경우, 하나의 부분이 폴리펩티드의 아미노산 잔기에 콘쥬게이트된다. 다른 실시형태에서, 두 부분이 폴리펩티드의 동일한 아미노산 잔기에 콘쥬게이트될 수 있다. 다른 실시형태에서, 제1 부분은 폴리펩티드의 제1 아미노산 잔기에 콘쥬게이트되고 제2 부분은 폴리펩티드의 제2 아미노산 잔기에 콘쥬게이트된다. 예를 들어, 폴리펩티드가 제1 아미노산 잔기에서 제1 부분에 콘쥬게이트되고 제2 아미노산 잔기에서 두 다른 부분에 콘쥬게이트되는 경우 상기한 것들의 조합도 가능하다. 제한은 아니지만, 제1 아미노산 잔기에서 제1 및 제2 부분에 콘쥬게이트되고 제2 아미노산 잔기에서 제3 및 제4 부분에 콘쥬게이트된 폴리펩티드 등과 같은 다른 조합들도 또한 가능하다.
하나 이상의 부분에 콘쥬게이트되는 하나 이상의 아미노산 잔기는 자연 발생 아미노산, 비천연 아미노산, 또는 이들의 조합일 수 있다. 예를 들어, 콘쥬게이트는 폴리펩티드의 자연 발생 아미노산 잔기에 콘쥬게이트된 부분을 포함할 수 있다. 다른 예에서, 콘쥬게이트는 폴리펩티드의 비천연 아미노산 잔기에 콘쥬게이트된 부분을 포함할 수 있다. 하나 이상의 부분이 상기 설명된 대로 단일 천연 또는 비천연 아미노산 잔기에서 폴리펩티드에 콘쥬게이트될 수 있다. 폴리펩티드의 하나 이상의 천연 또는 비천연 아미노산 잔기가 여기 설명된 대로 부분 또는 부분들에 콘쥬게이트될 수 있다. 예를 들어, 폴리펩티드의 두(또는 이상) 아미노산 잔기(예를 들어, 천연 또는 비천연 아미노산 잔기)는 각각 하나 또는 두 부분에 콘쥬게이트될 수 있고, 이로써 폴리펩티드에서 다중 부위가 변형된다.
하나 이상의 부분(예를 들어, 화학 물질, 폴리펩티드 등)에 콘쥬게이트된 폴리펩티드에 관하여 여기 설명되지만, 본 개시의 실시형태는 또한 어떤 부분(예를 들어, 약물 또는 검출가능한 표지와 같은 화학 물질)이 하나 이상의 다른 부분(예를 들어, 화학 물질, 폴리펩티드 등)에 콘쥬게이트된 경우의 콘쥬게이트들도 포함한다. 예를 들어, 약물이 하나 이상의 다른 부분(예를 들어, 화학 물질, 폴리펩티드 등)에 콘쥬게이트될 수 있거나, 또는 다른 실시형태에서는 검출가능한 표지가 하나 이상의 다른 부분(예를 들어, 화학 물질, 폴리펩티드 등)에 콘쥬게이트될 수 있다. 따라서, 예를 들어 본 개시의 실시형태는 제한은 아니지만 다음의 것들을 포함한다: 폴리펩티드와 약물의 콘쥬게이트; 폴리펩티드와 검출가능한 표지의 콘쥬게이트; 둘 이상의 폴리펩티드의 콘쥬게이트; 둘 이상의 약물의 콘쥬게이트; 둘 이상의 검출가능한 표지의 콘쥬게이트; 약물과 검출가능한 표지의 콘쥬게이트; 폴리펩티드, 약물 및 검출가능한 표지의 콘쥬게이트; 폴리펩티드와 둘 이상의 약물의 콘쥬게이트; 폴리펩티드와 둘 이상의 검출가능한 표지의 콘쥬게이트; 약물과 둘 이상의 폴리펩티드의 콘쥬게이트; 검출가능한 표지와 둘 이상의 폴리펩티드의 콘쥬게이트 등.
특정 실시형태에서, 폴리펩티드와 관심의 부분은 커플링 부분을 통해 콘쥬게이트된다. 예를 들어, 폴리펩티드와 관심의 부분이 각각 커플링 부분을 통해 콘쥬게이트될 수 있으며(예를 들어, 공유 결합된다), 따라서 폴리펩티드와 관심의 부분이 커플링 부분을 통해 함께 간접적으로 결합된다. 일부 경우, 커플링 부분은 히드라지닐-피롤로 화합물이나 히드라지닐-피롤로 화합물의 유도체를 포함한다. 예를 들어, 히드라지닐-피롤로 커플링 부분을 통한 관심의 부분과 폴리펩티드의 커플링에 대한 일반적인 반응도가 아래 일반적 반응도에 도시된다.
Figure pct00033
상기 반응도에서, R은 폴리펩티드에 콘쥬게이트된 관심의 부분일 수 있다. 여기 설명된 대로, 이 부분은, 제한은 아니지만, 화학 물질, 예컨대 검출가능한 표지, 약물, 수용성 중합체, 또는 막이나 기질의 표면에 폴리펩티드의 고정을 위한 부분과 같은 여러 가지 부분들 중 어느 것일 수 있다. R' 및 R"는 각각 독립적으로, 제한은 아니지만, 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴과 같은 임의의 원하는 치환체일 수 있다. Z1, Z2, Z3 및 Z4는 CR11, NR12, N, O 또는 S일 수 있으며, 여기서 Z1, Z2, Z3 및 Z4 중 하나는 선택적이고, R11 및 R12는 임의의 원하는 치환체일 수 있다.
다른 히드라지닐-피롤로 커플링 부분도 가능하다. 예를 들어, 히드라지닐-피롤로 커플링 부분을 통한 관심의 부분과 폴리펩티드의 커플링에 대한 다른 일반적인 반응도가 아래 일반적 반응도에 도시된다.
Figure pct00034
상기 반응도에서, R은 폴리펩티드에 콘쥬게이트된 관심의 부분일 수 있다. 상기 설명된 대로, 이 부분은, 제한은 아니지만, 화학 물질, 예컨대 검출가능한 표지, 약물, 수용성 중합체, 또는 막이나 기질의 표면에 폴리펩티드의 고정을 위한 부분과 같은 여러 가지 부분들 중 어느 것일 수 있다. R' 및 R"는 각각 독립적으로, 제한은 아니지만, 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴과 같은 임의의 원하는 치환체일 수 있다. Z1, Z2, Z3 및 Z4는 CR11, NR12, N, O, C 또는 S일 수 있으며, 여기서 Z1, Z2, Z3 및 Z4 중 하나는 선택적이고, R11 및 R12는 임의의 원하는 치환체일 수 있다. 아래 더 상세히 설명된 콘쥬게이트 및 화합물에 도시된 대로 다른 커플링 부분도 가능하다.
특정 실시형태에서, 콘쥬게이트는 식 (I)의 적어도 하나의 변형된 아미노산 잔기를 포함한다:
Figure pct00035
상기 식에서,
m은 0 또는 1이고;
R1은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택되고;
R2 및 R3은 각각 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택되거나, 또는 R2와 R3이 선택적으로 환형 연결되어 5 또는 6-원 헤테로시클릴을 형성하고;
Z1, Z2, Z3 및 Z4는 각각 독립적으로 CR11, NR12, O, N 및 S로부터 선택되며, 여기서 Z1, Z2, Z3 및 Z4 중 하나는 선택적이고;
X5는 C이고;
Y5, R11 및 R12는 각각 독립적으로 수소, 할로겐, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택되고;
Q1은 Z4 또는 X5와 결합되며, 여기서 Q1이 Z4와 결합되면 Z4는 CR11 또는 NR12이고 R11 또는 R12는 부재하거나, Q1이 X5와 결합되면 Y5는 부재하고;
R15는 -L-W1이거나 또는 -L-W1은 Z1, Z2, Z3 또는 Z4 중 하나에 부착되며, 여기서 -L-W1이 Z1, Z2, Z3 또는 Z4 중 하나에 부착되면 R15는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택되고;
L은 링커(예를 들어, 여기 설명된 링커)이고,
W1 및 W2 중 하나는 폴리펩티드이고 나머지 하나는 화학 물질이다.
특정 실시형태에서, m은 0 또는 1이다. 특정 실시형태에서, m은 0이다. 특정 실시형태에서, m은 1이다.
특정 실시형태에서, R1은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택된다. 특정 실시형태에서, R1은 수소이다. 특정 실시형태에서, R1은 알킬 또는 치환된 알킬이다. 특정 실시형태에서, R1은 알케닐 또는 치환된 알케닐이다. 특정 실시형태에서, R1은 알키닐 또는 치환된 알키닐이다. 특정 실시형태에서, R1은 아릴 또는 치환된 아릴이다. 특정 실시형태에서, R1은 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴이다. 특정 실시형태에서, R1은 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬이다. 특정 실시형태에서, R1은 헤테로시클릴 또는 치환된 헤테로시클릴이다.
특정 실시형태에서, R2는 수소, 알킬, 치환k된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택된다. 특정 실시형태에서, R2는 수소이다. 특정 실시형태에서, R2는 알킬 또는 치환된 알킬이다. 특정 실시형태에서, R2는 알케닐 또는 치환된 알케닐이다. 특정 실시형태에서, R2는 알키닐 또는 치환된 알키닐이다. 특정 실시형태에서, R2는 알콕시 또는 치환된 알콕시이다. 특정 실시형태에서, R2는 아미노 또는 치환된 아미노이다. 특정 실시형태에서, R2는 카복실 또는 카복실 에스테르이다. 특정 실시형태에서, R2는 아실 또는 아실옥시이다. 특정 실시형태에서, R2는 아실 아미노 또는 아미노 아실이다. 특정 실시형태에서, R2는 알킬아미드 또는 치환된 알킬아미드이다. 특정 실시형태에서, R2는 설포닐이다. 특정 실시형태에서, R2는 티오알콕시 또는 치환된 티오알콕시이다. 특정 실시형태에서, R2는 아릴 또는 치환된 아릴이다. 특정 실시형태에서, R2는 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴이다. 특정 실시형태에서, R2는 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬이다. 특정 실시형태에서, R2는 헤테로시클릴 또는 치환된 헤테로시클릴이다.
특정 실시형태에서, R2는 알킬 또는 치환된 알킬이다. 예를 들어, R2는 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대 C1-C10 알킬 또는 C1-C10 치환된 알킬(예를 들어, C1-C6 알킬 또는 C1-C6 치환된 알킬)일 수 있다. 일부 경우, R2는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소-프로필, n-부틸, sec-부틸, 이소부틸, t-부틸 등이다. 특정 경우, R2는 메틸이다.
특정 실시형태에서, R3은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택된다. 특정 실시형태에서, R3은 수소이다. 특정 실시형태에서, R3은 알킬 또는 치환된 알킬이다. 특정 실시형태에서, R3은 알케닐 또는 치환된 알케닐이다. 특정 실시형태에서, R3은 알키닐 또는 치환된 알키닐이다. 특정 실시형태에서, R3은 알콕시 또는 치환된 알콕시이다. 특정 실시형태에서, R3은 아미노 또는 치환된 아미노이다. 특정 실시형태에서, R3은 카복실 또는 카복실 에스테르이다. 특정 실시형태에서, R3은 아실 또는 아실옥시이다. 특정 실시형태에서, R3은 아실 아미노 또는 아미노 아실이다. 특정 실시형태에서, R3은 알킬아미드 또는 치환된 알킬아미드이다. 특정 실시형태에서, R3은 설포닐이다. 특정 실시형태에서, R3은 티오알콕시 또는 치환된 티오알콕시이다. 특정 실시형태에서, R3은 아릴 또는 치환된 아릴이다. 특정 실시형태에서, R3은 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴이다. 특정 실시형태에서, R3은 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬이다. 특정 실시형태에서, R3은 헤테로시클릴 또는 치환된 헤테로시클릴이다.
특정 실시형태에서, R3은 알킬 또는 치환된 알킬이다, 예를 들어, R3은 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대 C1-C10 알킬 또는 C1-C10 치환된 알킬(예를 들어, C1-C6 알킬 또는 C1-C6 치환된 알킬)일 수 있다. 일부 경우, R3은 메틸, 에틸, n-프로필, 이소-프로필, n-부틸, sec-부틸, 이소부틸, t-부틸 등이다. 특정 경우, R3은 메틸이다.
특정 실시형태에서, R2 및 R3은 각각 독립적으로 알킬 및 치환된 알킬로부터 선택된다. 예를 들어, R2는 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대 C1-C10 알킬 또는 C1-C10 치환된 알킬(예를 들어, C1-C6 알킬 또는 C1-C6 치환된 알킬)일 수 있고, R3은 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대 C1-C10 알킬 또는 C1-C10 치환된 알킬(예를 들어, C1-C6 알킬 또는 C1-C6 치환된 알킬)일 수 있다. 일부 경우, R2 및 R3은 각각 독립적으로 메틸, 에틸, n-프로필, 이소-프로필, n-부틸, sec-부틸, 이소부틸, t-부틸 등으로부터 선택된다. 특정 경우, R2 및 R3은 각각 메틸이다.
특정 실시형태에서, R2와 R3이 선택적으로 환형 연결되어 5 또는 6-원 헤테로시클릴을 형성할 수 있다. 일부 경우, R2와 R3은(이들이 부착된 원자와 함께) 환형 연결되어 5-원 헤테로시클릴을 형성할 수 있다. 일부 예에서, R2와 R3은(이들이 부착된 원자와 함께) 환형 연결되어 6-원 헤테로시클릴을 형성할 수 있다. 예를 들어, R2 및 R3은 각각 독립적으로 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대 C1-C10 알킬 또는 C1-C10 치환된 알킬(예를 들어, C1-C6 알킬 또는 C1-C6 치환된 알킬)일 수 있으며, 여기서 R2와 R3은 상기 설명된 대로 선택적으로 환형 연결되어 5 또는 6-원 헤테로시클릴을 형성할 수 있다. 일부 경우, R2 및/또는 R3에서 하나 이상의 탄소 원자는 N, O 또는 S와 같은 헤테로원자로 치환될 수 있다.
특정 실시형태에서, Z1은 CR11, NR12, O, N 및 S로부터 선택된다. 특정 실시형태에서, Z1은 CR11이다. 특정 실시형태에서, Z1은 NR12이다. 특정 실시형태에서, Z1은 N이다. 특정 실시형태에서, Z1은 O이다. 특정 실시형태에서, Z1은 S이다.
특정 실시형태에서, Z2는 CR11, NR12, O, N 및 S로부터 선택된다. 특정 실시형태에서, Z2는 CR11이다. 특정 실시형태에서, Z2는 NR12이다. 특정 실시형태에서, Z2는 N이다. 특정 실시형태에서, Z2는 O이다. 특정 실시형태에서, Z2는 S이다.
특정 실시형태에서, Z3은 CR11, NR12, O, N 및 S로부터 선택된다. 특정 실시형태에서, Z3은 CR11이다. 특정 실시형태에서, Z3은 NR12이다. 특정 실시형태에서, Z3은 N이다. 특정 실시형태에서, Z3은 O이다. 특정 실시형태에서, Z3은 S이다.
특정 실시형태에서, Z4는 CR11, NR12, O, N 및 S로부터 선택된다. 특정 실시형태에서, Z4는 CR11이다. 특정 실시형태에서, Z4는 NR12이다. 특정 실시형태에서, Z4는 N이다. 특정 실시형태에서, Z4는 O이다. 특정 실시형태에서, Z4는 S이다.
Z1, Z2, Z3 및 Z4의 다양한 조합이 가능하다. 예를 들어, 특정 실시형태에서 Z1, Z2, Z3 및 Z4는 각각 CR11이다. 다른 예에서, Z1, Z2, Z3 및 Z4 중 3개는 CR11이고, Z1, Z2, Z3 및 Z4 중 하나는 N이다. 다른 실시형태에서, Z1, Z2, Z3 및 Z4 중 2개는 CR11이고, Z1, Z2, Z3 및 Z4 중 2개는 N이다. 다른 실시형태에서, Z1, Z2, Z3 및 Z4 중 하나는 CR11이고, Z1, Z2, Z3 및 Z4 중 3개는 N이다. 다른 실시형태에서, Z1, Z2, Z3 및 Z4 중 하나는 부재하고, Z1, Z2, Z3 및 Z4 중 2개는 CR11이고, Z1, Z2, Z3 및 Z4 중 하나는 NR12이다. 다른 실시형태에서, Z1, Z2, Z3 및 Z4 중 하나는 부재하고, Z1, Z2, Z3 및 Z4 중 2개는 CR11이고, Z1, Z2, Z3 및 Z4 중 하나는 S이다. 다른 실시형태에서, Z1, Z2, Z3 및 Z4 중 하나는 부재하고, Z1, Z2, Z3 및 Z4 중 2개는 CR11이고, Z1, Z2, Z3 및 Z4 중 하나는 O이다. 원한다면 Z1, Z2, Z3 및 Z4에 대해 CR11, N, O 및 S의 다른 조합들도 가능하다.
특정 실시형태에서, X5는 C이다.
특정 실시형태에서, 각 R11은 (존재한다면) 독립적으로 수소, 할로겐, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택된다. 특정 실시형태에서, R11은 수소이다. 특정 실시형태에서, R11은 할로겐, 예컨대 F, Cl, Br 또는 I이다. 특정 실시형태에서, R11은 F이다. 특정 실시형태에서, R11은 Cl이다. 특정 실시형태에서, R11은 Br이다. 특정 실시형태에서, R11은 I이다. 특정 실시형태에서, R11은 알킬 또는 치환된 알킬이다. 특정 실시형태에서, R11은 알케닐 또는 치환된 알케닐이다. 특정 실시형태에서, R11은 알키닐 또는 치환된 알키닐이다. 특정 실시형태에서, R11은 알콕시 또는 치환된 알콕시이다. 특정 실시형태에서, R11은 아미노 또는 치환된 아미노이다. 특정 실시형태에서, R11은 카복실 또는 카복실 에스테르이다. 특정 실시형태에서, R11은 아실 또는 아실옥시이다. 특정 실시형태에서, R11은 아실 아미노 또는 아미노 아실이다. 특정 실시형태에서, R11은 알킬아미드 또는 치환된 알킬아미드이다. 특정 실시형태에서, R11은 설포닐이다. 특정 실시형태에서, R11은 티오알콕시 또는 치환된 티오알콕시이다. 특정 실시형태에서, R11은 아릴 또는 치환된 아릴이다. 특정 실시형태에서, R11은 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴이다. 특정 실시형태에서, R11은 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬이다. 특정 실시형태에서, R11은 헤테로시클릴 또는 치환된 헤테로시클릴이다.
특정 실시형태에서, 각 R12는 (존재한다면) 독립적으로 수소, 할로겐, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택된다. 특정 실시형태에서, R12는 수소이다. 특정 실시형태에서, R12는 할로겐, 예컨대 F, Cl, Br 또는 I이다. 특정 실시형태에서, R12는 F이다. 특정 실시형태에서, R12는 Cl이다. 특정 실시형태에서, R12는 Br이다. 특정 실시형태에서, R12는 I이다. 특정 실시형태에서, R12는 알킬 또는 치환된 알킬이다. 특정 실시형태에서, R12는 알케닐 또는 치환된 알케닐이다. 특정 실시형태에서, R12는 알키닐 또는 치환된 알키닐이다. 특정 실시형태에서, R12는 알콕시 또는 치환된 알콕시이다. 특정 실시형태에서, R12는 아미노 또는 치환된 아미노이다. 특정 실시형태에서, R12는 카복실 또는 카복실 에스테르이다. 특정 실시형태에서, R12는 아실 또는 아실옥시이다. 특정 실시형태에서, R12는 아실 아미노 또는 아미노 아실이다. 특정 실시형태에서, R12는 알킬아미드 또는 치환된 알킬아미드이다. 특정 실시형태에서, R12는 설포닐이다. 특정 실시형태에서, R12는 티오알콕시 또는 치환된 티오알콕시이다. 특정 실시형태에서, R12는 아릴 또는 치환된 아릴이다. 특정 실시형태에서, R12는 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴이다. 특정 실시형태에서, R12는 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬이다. 특정 실시형태에서, R12는 헤테로시클릴 또는 치환된 헤테로시클릴이다.
특정 실시형태에서, Y5는 (존재한다면) 수소, 할로겐, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택된다. 특정 실시형태에서, Y5는 수소이다. 특정 실시형태에서, Y5는 할로겐, 예컨대 F, Cl, Br 또는 I이다. 특정 실시형태에서, Y5는 F이다. 특정 실시형태에서, Y5는 Cl이다. 특정 실시형태에서, Y5는 Br이다. 특정 실시형태에서, Y5는 I이다. 특정 실시형태에서, Y5는 알킬 또는 치환된 알킬이다. 특정 실시형태에서, Y5는 알케닐 또는 치환된 알케닐이다. 특정 실시형태에서, Y5는 알키닐 또는 치환된 알키닐이다. 특정 실시형태에서, Y5는 알콕시 또는 치환된 알콕시이다. 특정 실시형태에서, Y5는 아미노 또는 치환된 아미노이다. 특정 실시형태에서, Y5는 카복실 또는 카복실 에스테르이다. 특정 실시형태에서, Y5는 아실 또는 아실옥시이다. 특정 실시형태에서, Y5는 아실 아미노 또는 아미노 아실이다. 특정 실시형태에서, Y5는 알킬아미드 또는 치환된 알킬아미드이다. 특정 실시형태에서, Y5는 설포닐이다. 특정 실시형태에서, Y5는 티오알콕시 또는 치환된 티오알콕시이다. 특정 실시형태에서, Y5는 아릴 또는 치환된 아릴이다. 특정 실시형태에서, Y5는 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴이다. 특정 실시형태에서, Y5는 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬이다. 특정 실시형태에서, Y5는 헤테로시클릴 또는 치환된 헤테로시클릴이다.
특정 실시형태에서, Q1은 Z4 또는 X5에 결합된다. 특정 실시형태에서, Q1은 Z4에 결합된다. 특정 실시형태에서, Q1이 Z4에 결합되면 Z4는 CR11이고 R11은 부재한다. 특정 실시형태에서, Q1이 Z4에 결합되면 Z4는 NR12이고 R12는 부재한다. 특정 실시형태에서, Q1은 X5에 결합된다. 특정 실시형태에서, Q1이 X5에 결합되면 Y5는 부재한다.
특정 실시형태에서, R15는 -L-W1이거나 또는 -L-W1은 Z1, Z2, Z3 또는 Z4 중 하나에 부착된다. 특정 실시형태에서, R15는 -L-W1이다. 특정 실시형태에서, R15는 -L-W1이 아니다. 특정 실시형태에서, -L-W1은 Z1, Z2, Z3 또는 Z4 중 하나에 부착된다. 특정 실시형태에서, -L-W1은 Z1에 부착된다. 특정 실시형태에서, -L-W1은 Z2에 부착된다. 특정 실시형태에서, -L-W1은 Z3에 부착된다. 특정 실시형태에서, -L-W1은 Z4에 부착된다.
특정 실시형태에서, -L-W1이 Z1, Z2, Z3 또는 Z4 중 하나에 부착되면 R15는 -L-W1.이 아니다. 이들 실시형태에서, R15는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택된다. 일부 예에서, R15는 수소이다. 일부 예에서, R15는 알킬 또는 치환된 알킬이다. 일부 예에서, R15는 알케닐 또는 치환된 알케닐이다. 일부 예에서, R15는 알키닐 또는 치환된 알키닐이다. 일부 예에서, R15는 아릴 또는 치환된 아릴이다. 일부 예에서, R15는 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴이다. 일부 예에서, R15는 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬이다. 일부 예에서, R15는 헤테로시클릴 또는 치환된 헤테로시클릴이다.
특정 실시형태에서, L은 선택적 링커이다. 특정 실시형태에서, L은 존재하지 않으며, 따라서 인돌 고리의 질소가 W1에 직접 결합된다. 특정 실시형태에서, L이 존재하고, 따라서 인돌 고리의 질소가 링커 L을 통해서 W1에 간접 결합된다. 링커 L에 대한 추가의 설명은 여기 개시에서 발견된다.
예를 들어, 특정 실시형태에서, L은 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실 아미노, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택된 기를 포함한다. 특정 실시형태에서, L은 알킬 또는 치환된 알킬 기를 포함한다. 특정 실시형태에서, L은 알케닐 또는 치환된 알케닐 기를 포함한다. 특정 실시형태에서, L은 알키닐 또는 치환된 알키닐 기를 포함한다. 특정 실시형태에서, L은 알콕시 또는 치환된 알콕시 기를 포함한다. 특정 실시형태에서, L은 아미노 또는 치환된 아미노 기를 포함한다. 특정 실시형태에서, L은 카복실 또는 카복실 에스테르 기를 포함한다. 특정 실시형태에서, L은 아실 아미노 기를 포함한다. 특정 실시형태에서, L은 알킬아미드 또는 치환된 알킬아미드 기를 포함한다. 특정 실시형태에서, L은 아릴 또는 치환된 아릴 기를 포함한다. 특정 실시형태에서, L은 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴 기를 포함한다. 특정 실시형태에서, L은 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬 기를 포함한다. 특정 실시형태에서, L은 헤테로시클릴 또는 치환된 헤테로시클릴 기를 포함한다.
특정 실시형태에서, L은 중합체를 포함한다. 예를 들어, 중합체는 폴리에틸렌 글리콜, 메톡시폴리에틸렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜 동종중합체, 폴리프로필렌 글리콜 동종중합체, 에틸렌글리콜과 프로필렌글리콜의 공중합체(예를 들어, 동종중합체와 공중합체가 알킬 기로 한쪽 말단에서 치환되거나 치환되지 않은 경우), 폴리비닐 알코올, 폴리비닐 에틸 에테르, 폴리비닐피롤리돈, 이들의 조합 등을 포함하는 폴리알킬렌 글리콜 및 그것의 유도체들을 포함할 수 있다. 특정 실시형태에서, 중합체는 폴리알킬렌 글리콜이다. 특정 실시형태에서, 중합체는 폴리에틸렌 글리콜이다.
일부 실시형태에서, L은 -(L1)a-(L2)b-(L3)c-(L4)d-(L5)e-를 포함하는 링커이며, 여기서 L1, L2, L3, L4 및 L5는 각각 링커 단위이고, a, b, c, d 및 e는 각각 독립적으로 0 또는 1이며, a, b, c, d 및 e의 합은 1 내지 5이다. 아래 더 상세히 설명된 콘쥬게이트 및 화합물에서 도시된 대로 다른 링커들도 가능하다.
특정 실시형태에서, W1은 폴리펩티드 및 화학 물질으로부터 선택된다. 특정 실시형태에서, W1은 화학 물질이다. 특정 실시형태에서, 화학 물질은 약물이다. 특정 실시형태에서, 화학 물질은 검출가능한 표지이다. 특정 실시형태에서, W1은 검출가능한 표지 및 폴리펩티드로부터 선택된다. 특정 실시형태에서, W1은 약물, 검출가능한 표지 및 폴리펩티드로부터 선택된다. 특정 실시형태에서, W1은 폴리펩티드이다.
특정 실시형태에서, W2는 폴리펩티드 및 화학 물질으로부터 선택된다. 특정 실시형태에서, W2는 화학 물질이다. 특정 실시형태에서, 화학 물질은 약물이다. 특정 실시형태에서, 화학 물질은 검출가능한 표지이다. 특정 실시형태에서, W2는 약물, 검출가능한 표지 및 폴리펩티드로부터 선택된다. 특정 실시형태에서, W2는 약물이다. 특정 실시형태에서, W2는 검출가능한 표지이다. 특정 실시형태에서, W2는 폴리펩티드이다.
특정 실시형태에서, W1 및 W2 중 하나는 폴리펩티드이고 나머지 하나는 화학 물질이다. 특정 실시형태에서, 화학 물질은 약물이다. 특정 실시형태에서, 화학 물질은 검출가능한 표지이다. 특정 실시형태에서, W1은 화학 물질이고, W2는 폴리펩티드이다. 특정 실시형태에서, W1은 폴리펩티드이고, W2는 화학 물질이다.
특정 실시형태에서, 콘쥬게이트는 식 (II)의 적어도 하나의 변형된 아미노산 잔기를 포함한다:
Figure pct00036
상기 식에서,
m, R1, R2, R3, X5, L, Q1, W1, W2, Y5, Z1, Z2, Z3 및 Z4는 식 (I)에서 정의된 것과 같다.
상기 설명된 대로, 식 (I)에서, 일부 예에서, R15는 -L-W1이고, 이것은 상기 도시된 식 (II)의 변형된 아미노산 잔기를 가져온다.
특정 실시형태에서, 식 (II)의 치환체는 상기 설명된 식 (II)에 대한 것과 동일하다. 예를 들어, 특정 실시형태에서, m은 0 또는 1이다. 특정 실시형태에서, m은 0이다. 특정 실시형태에서, m은 1이다. 특정 실시형태에서, 식 (II)의 치환체, 예를 들어 m, R1, R2, R3, X5, L, Q1, W1, W2, Y5, Z1, Z2, Z3 및 Z4는 식 (I)에서 정의된 것과 같다.
일부 실시형태에서, 콘쥬게이트는 식 (III)의 적어도 하나의 아미노산 잔기를 포함한다:
Figure pct00037
상기 식에서,
m, R1, R2, R3, X5, Y5, L, W1 및 W2는 식 (I)에서 정의된 것과 같고;
X1, X2, X3 및 X4는 각각 독립적으로 C, N, O 및 S로부터 선택되며, X1, X2, X3 및 X4 중 하나는 선택적이고;
Y1, Y2, Y3, Y4 및 Y5는 존재한다면 각각 독립적으로 수소, 할로겐, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택되며, Y1 및 Y2, Y2 및 Y3, 또는 Y3 및 Y4는 선택적으로 환형 연결되고;
Q1은 X4 또는 X5에 결합되며, 여기서 Q1이 X4에 결합되면 Y4가 부재하거나, 또는 Q1이 X5에 결합되면 Y5는 부재한다.
특정 실시형태에서, 식 (III)의 치환체는 상기 설명된 식 (I)에 대한 것과 동일하다. 예를 들어, 특정 실시형태에서, m은 0 또는 1이다. 특정 실시형태에서, m은 0이다. 특정 실시형태에서, m은 1이다. 특정 실시형태에서, 식 (III)의 치환체, 예를 들어 m, R1, R2, R3, X5, Y5, L, W1 및 W2는 식 (I)에서 정의된 것과 같다.
특정 실시형태에서, X1은 C, N, O 및 S로부터 선택된다. 특정 실시형태에서, X1은 C이다. 특정 실시형태에서, X1은 N이다. 특정 실시형태에서, X1은 O이다. 특정 실시형태에서, X1은 S이다.
특정 실시형태에서, X2는 C, N, O 및 S로부터 선택된다. 특정 실시형태에서, X2는 C이다. 특정 실시형태에서, X2는 N이다. 특정 실시형태에서, X2는 O이다. 특정 실시형태에서, X2는 S이다.
특정 실시형태에서, X3은 C, N, O 및 S로부터 선택된다. 특정 실시형태에서, X3은 C이다. 특정 실시형태에서, X3은 N이다. 특정 실시형태에서, X3은 O이다. 특정 실시형태에서, X3은 S이다.
특정 실시형태에서, X4는 C, N, O 및 S로부터 선택된다. 특정 실시형태에서, X4는 C이다. 특정 실시형태에서, X4는 N이다. 특정 실시형태에서, X4는 O이다. 특정 실시형태에서, X4는 S이다.
특정 실시형태에서, X1, X2, X3 및 X4 중 하나는 선택적이다. 특정 실시형태에서, X1은 부재한다. 특정 실시형태에서, X2는 부재한다. 특정 실시형태에서, X3은 부재한다. 특정 실시형태에서, X4는 부재한다.
X1, X2, X3 및 X4의 다양한 조합이 가능하다. 예를 들어, 특정 실시형태에서, X1, X2, X3 및 X4는 각각 C이다. 다른 예에서, X1, X2, X3 및 X4 중 3개는 C이고, X1, X2, X3 및 X4 중 하나는 N이다. 다른 실시형태에서, X1, X2, X3 및 X4 중 2개는 C이고, X1, X2, X3 및 X4 중 2개는 N이다. 다른 실시형태에서, X1, X2, X3 및 X4 중 하나는 C이고, X1, X2, X3 및 X4 중 3개는 N이다. 원한다면 X1, X2, X3 및 X4에 대해 C, N, O 및 S의 다른 조합들도 가능하다.
특정 실시형태에서, Y1은 (존재한다면) 수소, 할로겐, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택된다. 특정 실시형태에서, Y1은 수소이다. 특정 실시형태에서, Y1은 할로겐, 예컨대 F, Cl, Br 또는 I이다. 특정 실시형태에서, Y1은 F이다. 특정 실시형태에서, Y1은 Cl이다. 특정 실시형태에서, Y1은 Br이다. 특정 실시형태에서, Y1은 I이다. 특정 실시형태에서, Y1은 알킬 또는 치환된 알킬이다. 특정 실시형태에서, Y1은 알케닐 또는 치환된 알케닐이다. 특정 실시형태에서, Y1은 알키닐 또는 치환된 알키닐이다. 특정 실시형태에서, Y1은 알콕시 또는 치환된 알콕시이다. 특정 실시형태에서, Y1은 아미노 또는 치환된 아미노이다. 특정 실시형태에서, Y1은 카복실 또는 카복실 에스테르이다. 특정 실시형태에서, Y1은 아실 또는 아실옥시이다. 특정 실시형태에서, Y1은 아실 아미노 또는 아미노 아실이다. 특정 실시형태에서, Y1은 알킬아미드 또는 치환된 알킬아미드이다. 특정 실시형태에서, Y1은 설포닐이다. 특정 실시형태에서, Y1은 티오알콕시 또는 치환된 티오알콕시이다. 특정 실시형태에서, Y1은 아릴 또는 치환된 아릴이다. 특정 실시형태에서, Y1은 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴이다. 특정 실시형태에서, Y1은 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬이다. 특정 실시형태에서, Y1은 헤테로시클릴 또는 치환된 헤테로시클릴이다.
특정 실시형태에서, Y2는 (존재한다면) 수소, 할로겐, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택된다. 특정 실시형태에서, Y2는 수소이다. 특정 실시형태에서, Y2는 할로겐, 예컨대 F, Cl, Br 또는 I이다. 특정 실시형태에서, Y2는 F이다. 특정 실시형태에서, Y2는 Cl이다. 특정 실시형태에서, Y2는 Br이다. 특정 실시형태에서, Y2는 I이다. 특정 실시형태에서, Y2는 알킬 또는 치환된 알킬이다. 특정 실시형태에서, Y2는 알케닐 또는 치환된 알케닐이다. 특정 실시형태에서, Y2는 알키닐 또는 치환된 알키닐이다. 특정 실시형태에서, Y2는 알콕시 또는 치환된 알콕시이다. 특정 실시형태에서, Y2는 아미노 또는 치환된 아미노이다. 특정 실시형태에서, Y2는 카복실 또는 카복실 에스테르이다. 특정 실시형태에서, Y2는 아실 또는 아실옥시이다. 특정 실시형태에서, Y2는 아실 아미노 또는 아미노 아실이다. 특정 실시형태에서, Y2는 알킬아미드 또는 치환된 알킬아미드이다. 특정 실시형태에서, Y2는 설포닐이다. 특정 실시형태에서, Y2는 티오알콕시 또는 치환된 티오알콕시이다. 특정 실시형태에서, Y2는 아릴 또는 치환된 아릴이다. 특정 실시형태에서, Y2는 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴이다. 특정 실시형태에서, Y2는 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬이다. 특정 실시형태에서, Y2는 헤테로시클릴 또는 치환된 헤테로시클릴이다.
특정 실시형태에서, Y3은 (존재한다면) 수소, 할로겐, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택된다. 특정 실시형태에서, Y3은 수소이다. 특정 실시형태에서, Y3은 할로겐, 예컨대 F, Cl, Br 또는 I이다. 특정 실시형태에서, Y3은 F이다. 특정 실시형태에서, Y3은 Cl이다. 특정 실시형태에서, Y3은 Br이다. 특정 실시형태에서, Y3은 I이다. 특정 실시형태에서, Y3은 알킬 또는 치환된 알킬이다. 특정 실시형태에서, Y3은 알케닐 또는 치환된 알케닐이다. 특정 실시형태에서, Y3은 알키닐 또는 치환된 알키닐이다. 특정 실시형태에서, Y3은 알콕시 또는 치환된 알콕시이다. 특정 실시형태에서, Y3은 아미노 또는 치환된 아미노이다. 특정 실시형태에서, Y3은 카복실 또는 카복실 에스테르이다. 특정 실시형태에서, Y3은 아실 또는 아실옥시이다. 특정 실시형태에서, Y3은 아실 아미노 또는 아미노 아실이다. 특정 실시형태에서, Y3은 알킬아미드 또는 치환된 알킬아미드이다. 특정 실시형태에서, Y3은 설포닐이다. 특정 실시형태에서, Y3은 티오알콕시 또는 치환된 티오알콕시이다. 특정 실시형태에서, Y3은 아릴 또는 치환된 아릴이다. 특정 실시형태에서, Y3은 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴이다. 특정 실시형태에서, Y3은 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬이다. 특정 실시형태에서, Y3은 헤테로시클릴 또는 치환된 헤테로시클릴이다.
특정 실시형태에서, Y4는 (존재한다면) 수소, 할로겐, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택된다. 특정 실시형태에서, Y4는 수소이다. 특정 실시형태에서, Y4는 할로겐, 예컨대 F, Cl, Br 또는 I이다. 특정 실시형태에서, Y4는 F이다. 특정 실시형태에서, Y4는 Cl이다. 특정 실시형태에서, Y4는 Br이다. 특정 실시형태에서, Y4는 I이다. 특정 실시형태에서, Y4는 알킬 또는 치환된 알킬이다. 특정 실시형태에서, Y4는 알케닐 또는 치환된 알케닐이다. 특정 실시형태에서, Y4는 알키닐 또는 치환된 알키닐이다. 특정 실시형태에서, Y4는 알콕시 또는 치환된 알콕시이다. 특정 실시형태에서, Y4는 아미노 또는 치환된 아미노이다. 특정 실시형태에서, Y4는 카복실 또는 카복실 에스테르이다. 특정 실시형태에서, Y4는 아실 또는 아실옥시이다. 특정 실시형태에서, Y4는 아실 아미노 또는 아미노 아실이다. 특정 실시형태에서, Y4는 알킬아미드 또는 치환된 알킬아미드이다. 특정 실시형태에서, Y4는 설포닐이다. 특정 실시형태에서, Y4는 티오알콕시 또는 치환된 티오알콕시이다. 특정 실시형태에서, Y4는 아릴 또는 치환된 아릴이다. 특정 실시형태에서, Y4는 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴이다. 특정 실시형태에서, Y4는 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬이다. 특정 실시형태에서, Y4는 헤테로시클릴 또는 치환된 헤테로시클릴이다.
특정 실시형태에서, Y1 및 Y2, Y2 및 Y3, 또는 Y3 및 Y4는 환형 연결되어 융합 벤조 고리를 형성한다. 특정 실시형태에서, Y1과 Y2가 환형 연결되어 융합 벤조 고리를 형성한다. 특정 실시형태에서, Y2와 Y3이 환형 연결되어 융합 벤조 고리를 형성한다. 특정 실시형태에서, Y3과 Y4가 환형 연결되어 융합 벤조 고리를 형성한다.
특정 실시형태에서, Q1은 X4 또는 X5에 결합되며, 여기서 Q1이 X4에 결합되면 Y4는 부재하거나, 또는 Q1이 X5에 결합되면 Y5는 부재한다. 특정 실시형태에서, Q1은 X4에 결합되며, Q1이 X4에 결합되면 Y4는 부재한다. 특정 실시형태에서, Q1은 X5에 결합되며, Q1이 X5에 결합되면 Y5는 부재한다.
일부 실시형태에서, 콘쥬게이트는 식 (IVa) 또는 (IVb)의 적어도 하나의 변형된 아미노산 잔기를 포함한다:
Figure pct00038
상기 식에서, m, R1, R2, R3, R12, X5, Y5, L, W1 및 W2는 식 (I)에서 정의된 것과 같고;
X1 및 X3은 각각 독립적으로 O, S 또는 NR12이고;
Y1, Y2, Y3 및 Y4는 존재한다면 각각 독립적으로 수소, 할로겐, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택되며, 여기서 Y1 및 Y2 또는 Y3 및 Y4는 선택적으로 환형 연결되고;
Q1은 X4 또는 X5에 결합되며, 여기서 Q1이 X4에 결합되면 X4는 C이고 Y4는 부재하거나, 또는 Q1이 X5에 결합되면 Y5는 부재하고;
Q2는 X3 또는 X5에 결합되며, 여기서 Q2가 X3에 결합되면 X3은 NR12이고 R12는 부재하거나, 또는 Q2가 X5에 결합되면 Y5는 부재한다.
특정 실시형태에서, 식 (IVa) 및 (IVb)의 치환체들은 식 (I)에 대해 상기 설명된 것과 같다. 특정 실시형태에서, 치환체 m, R1, R2, R3, R12, X5, Y5, L, W1 및 W2는 식 (I)에서 정의된 것과 같다.
식 (IVa)의 특정 실시형태에서, X1은 O, S 또는 NR12이다. 식 (IVa)의 특정 실시형태에서, X1은 O이다. 식 (IVa)의 특정 실시형태에서, X1은 S이다. 식 (IVa)의 특정 실시형태에서, X1은 NR12이다.
식 (IVb)의 특정 실시형태에서, X3은 O, S 또는 NR12이다. 식 (IVb)의 특정 실시형태에서, X3은 O이다. 식 (IVb)의 특정 실시형태에서, X3은 S이다. 식 (IVb)의 특정 실시형태에서, X3은 NR12이다.
식 (IVb)의 특정 실시형태에서, Y1은 수소, 할로겐, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택된다. 특정 실시형태에서, Y1은 수소이다. 특정 실시형태에서, Y1은 할로겐, 예컨대 F, Cl, Br 또는 I이다. 특정 실시형태에서, Y1은 F이다. 특정 실시형태에서, Y1은 Cl이다. 특정 실시형태에서, Y1은 Br이다. 특정 실시형태에서, Y1은 I이다. 특정 실시형태에서, Y1은 알킬 또는 치환된 알킬이다. 특정 실시형태에서, Y1은 알케닐 또는 치환된 알케닐이다. 특정 실시형태에서, Y1은 알키닐 또는 치환된 알키닐이다. 특정 실시형태에서, Y1은 알콕시 또는 치환된 알콕시이다. 특정 실시형태에서, Y1은 아미노 또는 치환된 아미노이다. 특정 실시형태에서, Y1은 카복실 또는 카복실 에스테르이다. 특정 실시형태에서, Y1은 아실 또는 아실옥시이다. 특정 실시형태에서, Y1은 아실 아미노 또는 아미노 아실이다. 특정 실시형태에서, Y1은 알킬아미드 또는 치환된 알킬아미드이다. 특정 실시형태에서, Y1은 설포닐이다. 특정 실시형태에서, Y1은 티오알콕시 또는 치환된 티오알콕시이다. 특정 실시형태에서, Y1은 아릴 또는 치환된 아릴이다. 특정 실시형태에서, Y1은 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴이다. 특정 실시형태에서, Y1은 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬이다. 특정 실시형태에서, Y1은 헤테로시클릴 또는 치환된 헤테로시클릴이다.
식 (IVb)의 특정 실시형태에서, Y2는 수소, 할로겐, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택된다. 특정 실시형태에서, Y2는 수소이다. 특정 실시형태에서, Y2는 할로겐, 예컨대 F, Cl, Br 또는 I이다. 특정 실시형태에서, Y2는 F이다. 특정 실시형태에서, Y2는 Cl이다. 특정 실시형태에서, Y2는 Br이다. 특정 실시형태에서, Y2는 I이다. 특정 실시형태에서, Y2는 알킬 또는 치환된 알킬이다. 특정 실시형태에서, Y2는 알케닐 또는 치환된 알케닐이다. 특정 실시형태에서, Y2는 알키닐 또는 치환된 알키닐이다. 특정 실시형태에서, Y2는 알콕시 또는 치환된 알콕시이다. 특정 실시형태에서, Y2는 아미노 또는 치환된 아미노이다. 특정 실시형태에서, Y2는 카복실 또는 카복실 에스테르이다. 특정 실시형태에서, Y2는 아실 또는 아실옥시이다. 특정 실시형태에서, Y2는 아실 아미노 또는 아미노 아실이다. 특정 실시형태에서, Y2는 알킬아미드 또는 치환된 알킬아미드이다. 특정 실시형태에서, Y2는 설포닐이다. 특정 실시형태에서, Y2는 티오알콕시 또는 치환된 티오알콕시이다. 특정 실시형태에서, Y2는 아릴 또는 치환된 아릴이다. 특정 실시형태에서, Y2는 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴이다. 특정 실시형태에서, Y2는 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬이다. 특정 실시형태에서, Y2는 헤테로시클릴 또는 치환된 헤테로시클릴이다.
식 (IVa)의 특정 실시형태에서, Y3은 (존재한다면) 수소, 할로겐, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택된다. 특정 실시형태에서, Y3은 수소이다. 특정 실시형태에서, Y3은 할로겐, 예컨대 F, Cl, Br 또는 I이다. 특정 실시형태에서, Y3은 F이다. 특정 실시형태에서, Y3은 Cl이다. 특정 실시형태에서, Y3은 Br이다. 특정 실시형태에서, Y3은 I이다. 특정 실시형태에서, Y3은 알킬 또는 치환된 알킬이다. 특정 실시형태에서, Y3은 알케닐 또는 치환된 알케닐이다. 특정 실시형태에서, Y3은 알키닐 또는 치환된 알키닐이다. 특정 실시형태에서, Y3은 알콕시 또는 치환된 알콕시이다. 특정 실시형태에서, Y3은 아미노 또는 치환된 아미노이다. 특정 실시형태에서, Y3은 카복실 또는 카복실 에스테르이다. 특정 실시형태에서, Y3은 아실 또는 아실옥시이다. 특정 실시형태에서, Y3은 아실 아미노 또는 아미노 아실이다. 특정 실시형태에서, Y3은 알킬아미드 또는 치환된 알킬아미드이다. 특정 실시형태에서, Y3은 설포닐이다. 특정 실시형태에서, Y3은 티오알콕시 또는 치환된 티오알콕시이다. 특정 실시형태에서, Y3은 아릴 또는 치환된 아릴이다. 특정 실시형태에서, Y3은 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴이다. 특정 실시형태에서, Y3은 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬이다. 특정 실시형태에서, Y3은 헤테로시클릴 또는 치환된 헤테로시클릴이다.
식 (IVa)의 특정 실시형태에서, Y4는 (존재한다면) 수소, 할로겐, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택된다. 특정 실시형태에서, Y4는 수소이다. 특정 실시형태에서, Y4는 할로겐, 예컨대 F, Cl, Br 또는 I이다. 특정 실시형태에서, Y4는 F이다. 특정 실시형태에서, Y4는 Cl이다. 특정 실시형태에서, Y4는 Br이다. 특정 실시형태에서, Y4는 I이다. 특정 실시형태에서, Y4는 알킬 또는 치환된 알킬이다. 특정 실시형태에서, Y4는 알케닐 또는 치환된 알케닐이다. 특정 실시형태에서, Y4는 알키닐 또는 치환된 알키닐이다. 특정 실시형태에서, Y4는 알콕시 또는 치환된 알콕시이다. 특정 실시형태에서, Y4는 아미노 또는 치환된 아미노이다. 특정 실시형태에서, Y4는 카복실 또는 카복실 에스테르이다. 특정 실시형태에서, Y4는 아실 또는 아실옥시이다. 특정 실시형태에서, Y4는 아실 아미노 또는 아미노 아실이다. 특정 실시형태에서, Y4는 알킬아미드 또는 치환된 알킬아미드이다. 특정 실시형태에서, Y4는 설포닐이다. 특정 실시형태에서, Y4는 티오알콕시 또는 치환된 티오알콕시이다. 특정 실시형태에서, Y4는 아릴 또는 치환된 아릴이다. 특정 실시형태에서, Y4는 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴이다. 특정 실시형태에서, Y4는 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬이다. 특정 실시형태에서, Y4는 헤테로시클릴 또는 치환된 헤테로시클릴이다.
특정 실시형태에서, Y1 및 Y2 또는 Y3 및 Y4는 환형 연결되어 융합 벤조 고리를 형성한다. 식 (IVa)의 특정 실시형태에서, Y3과 Y4가 환형 연결되어 융합 벤조 고리를 형성한다. 식 (IVb)의 특정 실시형태에서, Y1과 Y2가 환형 연결되어 융합 벤조 고리를 형성한다.
식 (IVa)의 일부 실시형태에서, Q1은 X4에 연결되고 Y4는 부재한다.
식 (IVa)의 일부 실시형태에서, Q1은 X5에 연결되고 X5는 C이고 Y5는 부재한다.
식 (IVb)의 일부 실시형태에서, Q2는 X3에 연결되고 X3은 NR12이고 R12는 부재한다.
식 (IVb)의 일부 실시형태에서, Q2는 X5에 연결되고 Y5는 부재한다.
일부 실시형태에서, R2 및 R3은 각각 독립적으로 알킬 및 치환된 알킬로부터 선택된다.
식 (IVa) 및 (IVb)의 일부 실시형태에서, m은 1이다.
식 (IVa) 및 (IVb)의 일부 실시형태에서, R2 및 R3은 각각 메틸이다.
식 (IVa) 및 (IVb)의 일부 실시형태에서, R2와 R3이 식 (I)에서 상기 설명된 대로 선택적으로 환형 연결되어 5 또는 6-원 헤테로시클릴을 형성한다.
식 (IVa) 및 (IVb)의 일부 실시형태에서, X1, X3, X4 및 X5는 각각 C이다.
식 (IVa) 및 (IVb)의 일부 실시형태에서, Y1, Y2 및 Y3은 각각 H이고, Y4 또는 Y5 중 하나는 H이다.
식 (IVa) 및 (IVb)의 일부 실시형태에서, 화학 물질은 약물 또는 검출가능한 표지이다.
식 (IVa) 및 (IVb)의 일부 실시형태에서, W1은 화학 물질이고, W2는 폴리펩티드이다.
식 (IVa) 및 (IVb)의 일부 실시형태에서, W1은 폴리펩티드이고, W2는 화학 물질이다.
일부 실시형태에서, 콘쥬게이트는 식 (IIIa)의 적어도 하나의 변형된 아미노산 잔기를 포함한다:
Figure pct00039
일부 실시형태에서, 콘쥬게이트는 식 (IIIb)의 적어도 하나의 변형된 아미노산 잔기를 포함한다:
Figure pct00040
일부 실시형태에서, 콘쥬게이트는 식 (IIIc)의 적어도 하나의 변형된 아미노산 잔기를 포함한다:
Figure pct00041
일부 실시형태에서, 콘쥬게이트는 식 (IIId)의 적어도 하나의 변형된 아미노산 잔기를 포함한다:
Figure pct00042
일부 실시형태에서, 콘쥬게이트는 식 (IIIe)의 적어도 하나의 변형된 아미노산 잔기를 포함한다:
Figure pct00043
일부 실시형태에서, 콘쥬게이트는 식 (IIIf)의 적어도 하나의 변형된 아미노산 잔기를 포함한다:
Figure pct00044
특정 실시형태에서, 식 (IIIa), (IIIb), (IIIc), (IIId), (IIIe) 및 (IIIf)의 치환체들은 식 (III)에 대해 상기 설명된 것과 같다.
콘쥬게이트 및 화합물에 유용한 링커
본 개시는 여기 설명된 콘쥬게이트 및 화합물, 예컨대 여기 개시된 식들 각각의 콘쥬게이트 및 화합물(예를 들어, 여기 설명된 식 (I), (II), (III), (IIIa), (IIIb), (IIIc), (IIId), (IIIe), (IIIf), (IVa), (IVb), (V), (VI), (VIIa), (VIIb), (VIII), (VIIIa), (VIIIb), (IX), (IXa) 및 (IXb))에 유용한 링커(L)를 제공한다. 링커는 커플링 부분과 관심의 하나 이상의 부분 및/또는 하나 이상의 폴리펩티드를 결합시키는데 이용될 수 있다. 일부 실시형태에서, 링커는 커플링 부분과 폴리펩티드 또는 화학 물질을 결합시킨다. 링커는 임의의 편리한 위치에서 커플링 부분(예를 들어, 여기 설명된 것과 같은)에 결합될 수 있다(예를 들어, 공유 결합된다).
특정 실시형태에서, 링커(L)는 선택적이다. 특정 실시형태에서, L은 존재하지 않고, 따라서 폴리펩티드 또는 화학 물질이 커플링 부분에 직접 결합된다. 특정 실시형태에서, L이 존재하고, 따라서 커플링 부분이 링커 L을 통해서 W1에 간접 결합된다.
임의의 편리한 링커가 대상 콘쥬게이트 및 화합물에서 이용될 수 있다. 특정 실시형태에서, L은 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실 아미노, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택된 기를 포함한다. 특정 실시형태에서, L은 알킬 또는 치환된 알킬 기를 포함한다. 특정 실시형태에서, L은 알케닐 또는 치환된 알케닐 기를 포함한다. 특정 실시형태에서, L은 알키닐 또는 치환된 알키닐 기를 포함한다. 특정 실시형태에서, L은 알콕시 또는 치환된 알콕시 기를 포함한다. 특정 실시형태에서, L은 아미노 또는 치환된 아미노 기를 포함한다. 특정 실시형태에서, L은 카복실 또는 카복실 에스테르 기를 포함한다. 특정 실시형태에서, L은 아실 아미노 기를 포함한다. 특정 실시형태에서, L은 알킬아미드 또는 치환된 알킬아미드 기를 포함한다. 특정 실시형태에서, L은 아릴 또는 치환된 아릴 기를 포함한다. 특정 실시형태에서, L은 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴 기를 포함한다. 특정 실시형태에서, L은 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬 기를 포함한다. 특정 실시형태에서, L은 헤테로시클릴 또는 치환된 헤테로시클릴 기를 포함한다.
특정 실시형태에서, L은 중합체를 포함한다. 예를 들어, 중합체는 폴리에틸렌 글리콜, 메톡시폴리에틸렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜 동종중합체, 폴리프로필렌 글리콜 동종중합체, 에틸렌글리콜과 프로필렌글리콜의 공중합체(예를 들어, 동종중합체 및 공중합체가 알킬 기로 한쪽 단부에서 치환되거나 치환되지 않은 경우), 폴리비닐 알코올, 폴리비닐에틸에테르, 폴리비닐피롤리돈, 이들의 조합 등을 포함하는 폴리알킬렌 글리콜 및 그것의 유도체들을 포함할 수 있다. 특정 실시형태에서, 중합체는 폴리알킬렌 글리콜이다. 특정 실시형태에서, 중합체는 폴리에틸렌 글리콜이다. 아래 더 상세히 설명된 콘쥬게이트 및 화합물에서 도시된 대로 다른 링커들도 가능하다.
일부 실시형태에서, L은 식 -(L1)a-(L2)b-(L3)c-(L4)d-(L5)e-에 의해서 설명되는 링커이며, 여기서 L1, L2, L3, L4 및 L5는 각각 독립적으로 링커 단위이고, a, b, c, d 및 e는 각각 독립적으로 0 또는 1이며, a, b, c, d 및 e의 합은 1 내지 5이다.
특정 실시형태에서, a, b, c, d 및 e의 합은 1이다. 특정 실시형태에서, a, b, c, d 및 e의 합은 2이다. 특정 실시형태에서, a, b, c, d 및 e의 합은 3이다. 특정 실시형태에서, a, b, c, d 및 e의 합은 4이다. 특정 실시형태에서, a, b, c, d 및 e의 합은 5이다. 특정 실시형태에서, a, b, c, d 및 e는 각각 1이다. 특정 실시형태에서, a, b 및 c는 각각 1이고, d 및 e는 각각 0이다. 특정 실시형태에서, a 및 b는 각각 1이고, c, d 및 e는 각각 0이다. 특정 실시형태에서, a는 1이고, b, c, d 및 e는 각각 0이다.
임의의 편리한 링커 단위가 대상 링커에 이용될 수 있다. 관심의 링커 단위는, 제한은 아니지만, 중합체 단위, 예컨대 폴리에틸렌 글리콜, 폴리에틸렌 및 폴리아크릴레이트, 아미노산 잔기(들), 탄수화물계 중합체 또는 탄수화물 잔기 및 이들의 유도체, 폴리뉴클레오티드, 알킬 기, 아릴 기, 헤테로시클 기, 절단성 링커 기, 이들의 조합 및 이들의 치환된 버전을 포함한다. 일부 실시형태에서, L1, L2, L3, L4 및 L5는 각각 (존재한다면) 폴리에틸렌 글리콜, 변형된 폴리에틸렌 글리콜, 아미노산 잔기, 알킬 기, 치환된 알킬, 아릴 기, 치환된 아릴 기, 디아민(예를 들어, 알킬렌 디아민을 포함하는 연결기), 및 절단성 부분(예를 들어, 화학 절단성 부분, 효소 절단성 부분(예컨대 제한은 아니지만 프로테아제 절단성 부분, 글루쿠로니다아제-절단성 부분, 베타-락타마아제 절단성 부분 등), 광절단성 부분 등)로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 기를 포함한다.
일부 실시형태에서, L1은 (존재한다면) 폴리에틸렌 글리콜, 변형된 폴리에틸렌 글리콜, 아미노산 잔기, 알킬 기, 치환된 알킬, 아릴 기, 치환된 아릴 기, 디아민 또는 절단성 부분을 포함한다. 일부 실시형태에서, L1은 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 실시형태에서, L1은 변형된 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 실시형태에서, L1은 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 실시형태에서, L1은 알킬 기 또는 치환된 알킬을 포함한다. 일부 실시형태에서, L1은 아릴 기 또는 치환된 아릴 기를 포함한다. 일부 실시형태에서, L1은 디아민을 포함한다. 일부 실시형태에서, L1은 절단성 부분을 포함한다.
일부 실시형태에서, L2는 (존재한다면) 폴리에틸렌 글리콜, 변형된 폴리에틸렌 글리콜, 아미노산 잔기, 알킬 기, 치환된 알킬, 아릴 기, 치환된 아릴 기, 디아민 또는 절단성 부분을 포함한다. 일부 실시형태에서, L2는 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 실시형태에서, L2는 변형된 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 실시형태에서, L2는 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 실시형태에서, L2는 알킬 기 또는 치환된 알킬을 포함한다. 일부 실시형태에서, L2는 아릴 기 또는 치환된 아릴 기를 포함한다. 일부 실시형태에서, L2는 디아민을 포함한다. 일부 실시형태에서, L2는 절단성 부분을 포함한다.
일부 실시형태에서, L3은 (존재한다면) 폴리에틸렌 글리콜, 변형된 폴리에틸렌 글리콜, 아미노산 잔기, 알킬 기, 치환된 알킬, 아릴 기, 치환된 아릴 기, 디아민 또는 절단성 부분을 포함한다. 일부 실시형태에서, L3은 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 실시형태에서, L3은 변형된 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 실시형태에서, L3은 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 실시형태에서, L3은 알킬 기 또는 치환된 알킬을 포함한다. 일부 실시형태에서, L3은 아릴 기 또는 치환된 아릴 기를 포함한다. 일부 실시형태에서, L3은 디아민을 포함한다. 일부 실시형태에서, L3은 절단성 부분을 포함한다.
일부 실시형태에서, L4는 (존재한다면) 폴리에틸렌 글리콜, 변형된 폴리에틸렌 글리콜, 아미노산 잔기, 알킬 기, 치환된 알킬, 아릴 기, 치환된 아릴 기, 디아민(예를 들어, 알킬렌 디아민을 포함하는 연결기) 또는 절단성 부분으로부터 독립적으로 선택된 기를 포함한다. 일부 실시형태에서, L4는 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 실시형태에서, L4는 변형된 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 실시형태에서, L4는 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 실시형태에서, L4는 알킬 기 또는 치환된 알킬을 포함한다. 일부 실시형태에서, L4는 아릴 기 또는 치환된 아릴 기를 포함한다. 일부 실시형태에서, L4는 디아민을 포함한다. 일부 실시형태에서, L4는 절단성 부분을 포함한다.
일부 실시형태에서, L5는 (존재한다면) 폴리에틸렌 글리콜, 변형된 폴리에틸렌 글리콜, 아미노산 잔기, 알킬 기, 치환된 알킬, 아릴 기, 치환된 아릴 기, 디아민(예를 들어, 알킬렌 디아민을 포함하는 연결기) 또는 절단성 부분으로부터 독립적으로 선택된 기를 포함한다. 일부 실시형태에서, L5는 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 실시형태에서, L5는 변형된 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일부 실시형태에서, L5는 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 실시형태에서, L5는 알킬 기 또는 치환된 알킬을 포함한다. 일부 실시형태에서, L5는 아릴 기 또는 치환된 아릴 기를 포함한다. 일부 실시형태에서, L5는 디아민을 포함한다. 일부 실시형태에서, L5는 절단성 부분을 포함한다.
임의의 편리한 절단성 부분이 대상 콘쥬게이트 및 화합물에서 절단성 링커 단위로 이용될 수 있다. 특정 실시형태에서, 절단성 부분은 파라-아미노-벤질옥시카보닐 기(PABC), 메타-아미노-벤질옥시카보닐 기(MABC), 파라-아미노-벤질옥시 기(PABO), 메타-아미노-벤질옥시 기(MABO), 파라-아미노벤질, 아세탈 기, 디설파이드, 하이드라진, 프로테아제-절단성 부분(예를 들어, Cat B 절단성 부분), 글루쿠로니다아제-절단성 부분, 베타-락타마아제 절단성 부분, 또는 에스테르이다.
일부 실시형태에서, L은 -(L1)a-(L2)b-(L3)c-(L4)d-(L5)e-를 포함하는 링커이며, 여기서:
-(L1)a-은 -(T1-V1)a-이고;
-(L2)b-은 -(T2-V2)b-이고;
-(L3)c-은 -(T3-V3)c-이고;
-(L4)d-은 -(T4-V4)d-이고;
-(L5)e-은 -(T5-V5)e-이며,
여기서 T1, T2, T3, T4 및 T5는 존재한다면 테터 기이고;
V1, V2, V3, Z4 및 V5는 존재한다면 공유 결합 또는 연결 관능기이고;
a, b, c, d 및 e는 각각 독립적으로 0 또는 1이며, a, b, c, d 및 e의 합은 1 내지 5이다.
테터 기 T1, T2, T3, T4 및 T5와 관련하여, 임의의 편리한 테터 기가 대상 링커에 사용될 수 있다. 일부 실시형태에서, T1, T2, T3, T4 및 T5는 각각 (C1-C12)알킬, 치환된 (C1-C12)알킬, (EDA)w, (PEG)n, (AA)p, -(CR13OH)h-, 피페리딘-4-아미노(P4A), MABC, MABO, PABO, PABC, 파라-아미노벤질, 아세탈 기, 디설파이드, 하이드라진, 프로테아제-절단성 부분, 글루쿠로니다아제-절단성 부분, 베타-락타마아제 절단성 부분, 및 에스테르로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 기를 포함하며, 여기서 w는 1 내지 20의 정수이고, n은 1 내지 30의 정수이고, p는 1 내지 20의 정수이고, h는 1 내지 12의 정수이다.
특정 실시형태에서, a, b, c, d 및 e의 합이 2이고, T1-V1, T2-V2, T3-V3, T4-V4 또는 T5-V5 중 하나가 (PEG)n-CO일 때 n은 6이 아니다. 예를 들어, 일부 예에서, 링커는 다음의 구조를 가질 수 있다:
Figure pct00045
상기 식에서, n은 6이 아니다.
특정 실시형태에서, a, b, c, d 및 e의 합이 2이고, T1-V1, T2-V2, T3-V3, T4-V4 또는 T5-V5 중 하나가 (C1-C12)알킬-NR11일 때 (C1-C12)알킬은 C5-알킬이 아니다. 예를 들어, 일부 예에서, 링커는 다음의 구조를 가질 수 있다:
Figure pct00046
상기 식에서, g는 4가 아니다.
특정 실시형태에서, 테터 기는 에틸렌디아민(EDA) 부분, 예를 들어 테터를 함유하는 EDA를 포함한다. 특정 실시형태에서, (EDA)w는 하나 이상의 EDA 부분을 포함하며, 예컨대 여기서 w는 1 내지 50의 정수, 예컨대 1 내지 40, 1 내지 30, 1 내지 20, 1 내지 12 또는 1 내지 6, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이다. 연결된 에틸렌디아민(EDA) 부분은 선택적으로 임의의 편리한 치환체, 예를 들어 알킬, 치환된 알킬, 아실, 치환된 아실, 아릴 또는 치환된 아릴로 하나 이상의 편리한 위치에서 치환될 수 있다. 특정 실시형태에서, EDA 부분은 다음의 구조에 의해서 설명된다:
Figure pct00047
상기 식에서, q는 1 내지 6의 정수이고, r은 0 또는 1이고, 각 R12는 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택된다. 특정 실시형태에서, q는 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이다. 특정 실시형태에서, q는 1이고 r은 0이다. 특정 실시형태에서, q는 1이고 r은 1이다. 특정 실시형태에서, q는 2이고 r은 0이다. 특정 실시형태에서, q는 2이고 r은 1이다. 특정 실시형태에서, 각 R12는 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 아릴 및 치환된 아릴로부터 선택된다. 특정 실시형태에서, EDA의 임의의 두 인접한 R12 기는 환형 연결되어, 예를 들어 피페라지닐 고리를 형성할 수 있다. 특정 실시형태에서, q는 1이고, 두 인접한 R12 기는 알킬 기이며, 환형 연결되어 피페라지닐 고리를 형성한다. 특정 실시형태에서, q는 1이고, 인접한 R12 기는 수소, 알킬(예를 들어, 메틸) 및 치환된 알킬(예를 들어, 저급 알킬-OH, 예컨대 에틸-OH 또는 프로필-OH)로부터 선택된다.
특정 실시형태에서, 테터기는 피페리딘-4-아미노(P4A)부분을 포함한다. P4A 부분은 선택적으로 임의의 편리한 치환체, 예를 들어 알킬, 치환된 알킬, 폴리에틸렌 글리콜 부분, 아실, 치환된 아실, 아릴 또는 치환된 아릴로 하나 이상의 편리한 위치에서 치환될 수 있다. 특정 실시형태에서, P4A 부분은 다음의 구조에 의해서 설명된다:
Figure pct00048
상기 식에서, R12는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 폴리에틸렌 글리콜 부분(예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜 또는 변형된 폴리에틸렌 글리콜), 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택된다. 특정 실시형태에서, R12는 폴리에틸렌 글리콜 부분이다. 특정 실시형태에서, R12는 카복시 변형 폴리에틸렌 글리콜이다.
특정 실시형태에서, 테터는 (PEG)n이고, 여기서 (PEG)n는 폴리에틸렌 글리콜 또는 변형된 폴리에틸렌 글리콜 연결 단위이다. 특정 실시형태에서, (PEG)n은 다음의 구조에 의해서 설명된다:
Figure pct00049
상기 식에서, n은 1 내지 50의 정수, 예컨대 1 내지 40, 1 내지 30, 1 내지 20, 1 내지 12 또는 1 내지 6, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20이다. 일부 예에서, n은 3이다. 일부 예에서, n은 6이다. 일부 예에서, n은 12이다.
특정 실시형태에서, 테터 기는 (AA)p를 포함하며, 여기서 AA는 아미노산 잔기이다. 임의의 편리한 아미노산이 이용될 수 있다. 관심의 아미노산은, 제한은 아니지만 L- 및 D-아미노산, 자연 발생 아미노산, 예컨대 20개 주 알파-아미노산 및 베타-알라닌 중 어느 것, 비-자연 발생 아미노산(예를 들어, 아미노산 유사체), 예컨대 비-자연 발생 알파-아미노산 또는 비-자연 발생 베타-아미노산 등을 포함한다. 특정 실시형태에서, p는 1이다. 특정 실시형태에서, p는 1 내지 50의 정수, 예컨대 1 내지 40, 1 내지 30, 1 내지 20, 1 내지 12 또는 1 내지 6, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20이다.
특정 실시형태에서, 테터 기는 식 -(CR13OH)h-에 의해서 설명되는 부분을 포함하며, 여기서 h는 0이거나 또는 n은 1 내지 50의 정수, 예컨대 1 내지 40, 1 내지 30, 1 내지 20, 1 내지 12 또는 1 내지 6, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12이다. 특정 실시형태에서, R13은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택된다. 특정 실시형태에서, R13은 수소이다. 특정 실시형태에서, R13은 알킬 또는 치환된 알킬이다. 특정 실시형태에서, R13은 알케닐 또는 치환된 알케닐이다. 특정 실시형태에서, R13은 알키닐 또는 치환된 알키닐이다. 특정 실시형태에서, R13은 알콕시 또는 치환된 알콕시이다. 특정 실시형태에서, R13은 아미노 또는 치환된 아미노이다. 특정 실시형태에서, R13은 카복실 또는 카복실 에스테르이다. 특정 실시형태에서, R13은 아실 또는 아실옥시이다. 특정 실시형태에서, R13은 아실 아미노 또는 아미노 아실이다. 특정 실시형태에서, R13은 알킬아미드 또는 치환된 알킬아미드이다. 특정 실시형태에서, R13은 설포닐이다. 특정 실시형태에서, R13은 티오알콕시 또는 치환된 티오알콕시이다. 특정 실시형태에서, R13은 아릴 또는 치환된 아릴이다. 특정 실시형태에서, R13은 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴이다. 특정 실시형태에서, R13은 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬이다. 특정 실시형태에서, R13은 헤테로시클릴 또는 치환된 헤테로시클릴이다. 특정 실시형태에서, R13은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 및 치환된 아릴로부터 선택된다.
V1, V2, V3, V4 및 V5와 관련하여, 임의의 편리한 연결 관능기가 대상 링커에 이용될 수 있다. 관심의 연결 관능기는, 제한은 아니지만, 아미노, 카보닐, 아미도, 옥시카보닐, 카복시, 설포닐, 설폭사이드, 설포닐아미노, 아미노설포닐, 티오, 옥시, 포스포, 포스포라미데이트, 티오포스포라미데이트 등을 포함한다. 일부 실시형태에서, V1, V2, V3, V4 및 V5는 각각 독립적으로 공유 결합, -CO-, -NR11-, -CONR11-, -NR11CO-, -C(O)O-, -OC(O)-, -O-, -S-, -S(O)-, -SO2-, -SO2NR11-, -NR11SO2- 및 -P(O)OH-로 구성되는 군으로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, R11은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택된다. 특정 실시형태에서, R11은 수소이다. 특정 실시형태에서, R11은 알킬 또는 치환된 알킬이다. 특정 실시형태에서, R11은 알케닐 또는 치환된 알케닐이다. 특정 실시형태에서, R11은 알키닐 또는 치환된 알키닐이다. 특정 실시형태에서, R11은 알콕시 또는 치환된 알콕시이다. 특정 실시형태에서, R11은 카복실 또는 카복실 에스테르이다. 특정 실시형태에서, R11은 아실 또는 아실옥시이다. 특정 실시형태에서, R11은 아실 아미노 또는 아미노 아실이다. 특정 실시형태에서, R11은 알킬아미드 또는 치환된 알킬아미드이다. 특정 실시형태에서, R11은 설포닐이다. 특정 실시형태에서, R11은 티오알콕시 또는 치환된 티오알콕시이다. 특정 실시형태에서, R11은 아릴 또는 치환된 아릴이다. 특정 실시형태에서, R11은 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴이다. 특정 실시형태에서, R11은 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬이다. 특정 실시형태에서, R11은 헤테로시클릴 또는 치환된 헤테로시클릴이다.
일부 실시형태에서, 테터는 다음의 구조에 의해서 설명되는 MABC 기를 포함한다:
Figure pct00050
일부 실시형태에서, 테터는 다음의 구조에 의해서 설명되는 MABO 기를 포함한다:
Figure pct00051
상기 도시된 MABO 및 MABC 테터 구조의 일부 실시형태에서, R은 수소, 할로겐, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택된다. 상기 도시된 MABO 및 MABC 테터 구조의 일부 실시형태에서, R은 탄수화물 또는 탄수화물 유도체이다.
일부 실시형태에서, 테터는 다음의 구조에 의해서 설명되는 PABC 기를 포함한다:
Figure pct00052
일부 실시형태에서, 테터는 다음의 구조에 의해서 설명되는 PABO 기를 포함한다:
Figure pct00053
일부 실시형태에서, 테터는 다음의 구조에 의해서 설명되는 파라-아미노벤질(PAB) 기를 포함한다:
Figure pct00054
상기 도시된 PABO, PABC, MABO, MABC 및 PAB 테터 구조의 일부 실시형태에서, R12는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택된다. PABO, PABC, MABO, MABC 및 PAB의 특정 실시형태에서, R12는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 아릴 및 치환된 아릴로부터 선택된다. PABO, PABC, MABO, MABC 및 PAB의 특정 실시형태에서, R12는 수소, 알킬(예를 들어, 메틸) 및 치환된 알킬(예를 들어, 저급 알킬-OH, 예컨대 에틸-OH 또는 프로필-OH)로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, 상기 도시된 PABO, PABC, MABO, MABC 및 PAB 테터 구조 중 어느 것은 하나 이상의 편리한 아릴 및/또는 알킬 치환체로 더 치환될 수 있다. PABO, PABC, MABO, MABC 및 PAB의 특정 실시형태에서, R12는 수소이다. 2가 PABO, PABC, MABO, MABC 및 PAB 테터 기는 임의의 편리한 화학을 통해서 인접 부분들에 공유 결합될 수 있다.
특정 실시형태에서, 테터 기는 아세탈 기, 디설파이드, 하이드라진, 글루쿠로니다아제-절단성 부분, 베타-락타마아제 절단성 부분, 또는 에스테르를 포함한다. 일부 실시형태에서, 테터 기는 아세탈 기이다. 일부 실시형태에서, 테터 기는 디설파이드이다. 일부 실시형태에서, 테터 기는 하이드라진이다. 일부 실시형태에서, 테터 기는 글루쿠로니다아제-절단성 부분이다. 일부 실시형태에서, 테터 기는 베타-락타마아제 절단성 부분이다. 일부 실시형태에서, 테터 기는 에스테르이다.
일부 실시형태에서, 대상 링커에서:
T1은 (C1-C12)알킬 및 치환된 (C1-C12)알킬로부터 선택되고;
T2, T3, T4 및 T5는 각각 독립적으로 (EDA)w, (PEG)n, (C1-C12)알킬, 치환된 (C1-C12)알킬, (AA)p, -(CR13OH)h-, 피페리딘-4-아미노(P4A), MABC, MABO, PABO, PABC, 파라-아미노벤질, 아세탈 기, 디설파이드, 하이드라진, 프로테아제-절단성 부분, 글루쿠로니다아제-절단성 부분, 베타-락타마아제 절단성 부분, 에스테르, (AA)p-MABC-(AA)p, (AA)p-MABO-(AA)p, (AA)p-PABO-(AA)p 및 (AA)p-PABC-(AA)p로부터 선택되고;
V1, V2, V3, V4 및 V5는 각각 독립적으로 공유 결합, -CO-, -NR11-, -CONR11-, -NR11CO-, -C(O)O-, -OC(O)-, -O-, -S-, -S(O)-, -SO2-, -SO2NR11-, -NR11SO2-, 및 -P(O)OH-로 구성되는 군으로부터 선택되고;
여기서:
(PEG)n는
Figure pct00055
이며, 여기서 n은 1 내지 30이고;
EDA는 다음의 구조를 가진 에틸렌 디아민 부분이며:
Figure pct00056
여기서 q는 1 내지 6의 정수이고, r은 0 또는 1이고;
피페리딘-4-아미노(P4A)는
Figure pct00057
이고;
AA는 아미노산 잔기이며, 여기서 p는 1 내지 20의 정수이고;
PABC는 파라-아미노-벤질옥시카보닐이고, MABC는 메타-아미노-벤질옥시카보닐이고, PABO는 파라-아미노-벤질옥시이고, MABO는 메타-아미노-벤질옥시이고;
각 R11 및 R12는 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, PEG, 아릴 및 치환된 아릴로부터 선택되며, 여기서 임의의 두 인접 R12 기는 환형 연결되어 피페라지닐 고리를 형성할 수 있고;
R13은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 및 치환된 아릴로부터 선택된다.
특정 실시형태에서, T1, T2, T3, T4 및 T5 및 V1, V2, V3, V4 및 V5는 다음의 표, 다음의 표 중 한 줄로부터 선택된다:
Figure pct00058
Figure pct00059
일부 실시형태에서, L은 -(L1)a-(L2)b-(L3)c-(L4)d-(L5)e를 포함하는 링커이며, 여기서 -(L1)a-는 -(T1-V1)a-이고; -(L2)b-는 -(T2-V2)b-이고; -(L3)c-는 -(T3-V3)c-이고; -(L4)d-는 -(T4-V4)d-이고; -(L5)e-는 -(T5-V5)e-이다. 특정 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CONR11-이고, T2는 (PEG)n이고, V2는 -CO-이고, T3은 부재하고, V3은 부재하고, T4는 부재하고, V4는 부재하고, T5는 부재하고, V5는 부재한다. 특정 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 (AA)p이고, V2는 -NR11-이고, T3은 (PEG)n이고, V3은 -CO-이고, T4는 부재하고, V4는 부재하고, T5는 부재하고, V5는 부재한다. 특정 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 (AA)p이고, V2는 부재하고, T3은 부재하고, V3은 부재하고, T4는 부재하고, V4는 부재하고, T5는 부재하고, V5는 부재한다. 특정 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CONR11-이고, T2는 (PEG)n이고, V2는 -NR11-이고, T3은 부재하고, V3은 부재하고, T4는 부재하고, V4는 부재하고, T5는 부재하고, V5는 부재한다. 특정 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 (AA)p이고, V2는 -NR11-이고, T3은 (PEG)n이고, V3은 -NR11-이고, T4는 부재하고, V4는 부재하고, T5는 부재하고, V5는 부재한다. 특정 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 (EDA)w이고, V2는 -CO-이고, T3은 부재하고, V3은 부재하고, T4는 부재하고, V4는 부재하고, T5는 부재하고, V5는 부재한다. 특정 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CONR11-이고, T2는 (C1-C12)알킬이고, V2는 -NR11-이고, T3은 부재하고, V3은 부재하고, T4는 부재하고, V4는 부재하고, T5는 부재하고, V5는 부재한다. 특정 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CONR11-이고, T2는 (PEG)n이고, V2는 -CO-이고, T3은 (EDA)w이고, V3은 부재하고, T4는 부재하고, V4는 부재하고, T5는 부재하고, V5는 부재한다. 특정 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 (EDA)w이고, V2는 부재하고, T3은 부재하고, V3은 부재하고, T4는 부재하고, V4는 부재하고, T5는 부재하고, V5는 부재한다. 특정 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 (EDA)w이고, V2는 -CO-이고, T3은 (CR13OH)h이고, V3은 -CONR11-이고, T4는 (C1-C12)알킬이고, V4는 -CO-이고, T5는 부재하고, V5는 부재한다. 특정 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 (AA)p이고, V2는 -NR11-이고, T3은 (C1-C12)알킬이고, V3은 -CO-이고, T4는 부재하고, V4는 부재하고, T5는 부재하고, V5는 부재한다. 특정 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CONR11-이고, T2는 (PEG)n이고, V2는 -CO-이고, T3은 (AA)p이고, V3은 부재하고, T4는 부재하고, V4는 부재하고, T5는 부재하고, V5는 부재한다. 특정 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 (EDA)w이고, V2는 -CO-이고, T3은 (CR13OH)h이고, V3은 -CO-이고, T4는 (AA)p이고, V4는 부재하고, T5는 부재하고, V5는 부재한다. 특정 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 (AA)p이고, V2는 -NR11-이고, T3은 (C1-C12)알킬이고, V3은 -CO-이고, T4는 (AA)p이고, V4는 부재하고, T5는 부재하고, V5는 부재한다. 특정 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 (AA)p이고, V2는 -NR11-이고, T3은 (PEG)n이고, V3은 -CO-이고, T4는 (AA)p이고, V4는 부재하고, T5는 부재하고, V5는 부재한다. 특정 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 (AA)p이고, V2는 -NR11-이고, T3은 (C1-C12)알킬이고, V3은 -CO-이고, T4는 (AA)p이고, V4는 부재하고, T5는 부재하고, V5는 부재한다. 특정 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 (AA)p이고, V2는 -NR11-이고, T3은 (PEG)n이고, V3은 -CO-이고, T4는 (AA)p-PABC-(AA)p이며, 여기서 각 p는 독립적으로 0, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이고, V4는 부재하고, T5는 부재하고, V5는 부재한다. 특정 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 (AA)p이고, V2는 -NR11-이고, T3은 (PEG)n이고, V3은 -CO-이고, T4는 (AA)p-PABO이며, 여기서 p는 0, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이고, V4는 부재하고, T5는 부재하고, V5는 부재한다. 특정 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 (AA)p이고, V2는 -NR11-이고, T3은 (PEG)n이고, V3은 -SO2-이고, T4는 (AA)p이고, V4는 부재하고, T5는 부재하고, V5는 부재한다. 특정 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CONR11-이고, T2는 (PEG)n이고, V2는 -CO-이고, T3은 (AA)p이고, V3은 부재하고, T4는 PABC-(AA)p이며, 여기서 p는 0, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이고, V4는 부재하고, T5는 부재하고, V5는 부재한다. 특정 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 (EDA)w이고, V2는 -CO-이고, T3은 (CR13OH)h이고, V3은 CONR11-이고, T4는 (PEG)n이고, V4는 -CO-이고, T5는 부재하고, V5는 부재한다. 특정 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 (AA)p이고, V2는 -NR11-이고, T3은 (PEG)n이고, V3은 -CO-이고, T4는 MABC-(AA)p-이며, 여기서 p는 0, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이고, V4는 부재하고, T5는 부재하고, V5는 부재한다. 특정 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CONR11-이고, T2는 (PEG)n이고, V2는 -CO-이고, T3은 MABO이고, T3은 부재하고, V3은 부재하고, T4는 부재하고, V4는 부재하고, T5는 부재하고, V5는 부재한다. 특정 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 (AA)p이고, V2는 -NR11-이고, T3은 (PEG)n이고, V3은 -CO-이고, T4는 MABO이고, V4는 부재하고, T5는 부재하고, V5는 부재한다. 특정 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CONR11-이고, T2는 (PEG)n이고, V2는 -CO-이고, T3은 MABC이고, V3은 부재하고, T4는 (AA)p이고, V4는 부재하고, T5는 부재하고, V5는 부재한다. 특정 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 (CR13OH)h이고, V2는 -CO-이고, T3은 부재하고, V3은 부재하고, T4는 부재하고, V4는 부재하고, T5는 부재하고, V5는 부재한다. 특정 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CONR11-이고, T2는 치환된 (C1-C12)알킬이고, V2는 -NR11-이고, T3은 (PEG)n이고, V3은 -CO-이고, T4는 부재하고, V4는 부재하고, T5는 부재하고, V5는 부재한다. 특정 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -SO2-이고, T2는 (C1-C12)알킬이고, V2는 -CO-이고, T3은 부재하고, V3은 부재하고, T4는 부재하고, V4는 부재하고, T5는 부재하고, V5는 부재한다. 특정 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CONR11-이고, T2는 (PEG)n이고, V2는 -CO-이고, T3은 (AA)p이고, V3은 부재하고, T4는 PABC이고, V4는 -NR11-이고, T5는 부재하고, V5는 부재한다. 특정 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CONR11-이고, T2는 (C1-C12)알킬이고, V2는 부재하고, T3은 (CR13OH)h이고, V3은 -CONR11-이고, T4는 부재하고, V4는 부재하고, T5는 부재하고, V5는 부재한다. 특정 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 P4A이고, V2는 -CO-이고, T3은 (C1-C12)알킬이고, V3은 -CO-이고, T4는 (AA)p이고, V4는 부재하고, T5는 부재하고, V5는 부재한다. 특정 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CONR11-이고, T2는 (PEG)n이고, V2는 -CO-이고, T3은 (AA)p이고, V3은 부재하고, T4는 MABO이고, V4는 부재하고, T5는 부재하고, V5는 부재한다. 특정 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CONR11-이고, T2는 (PEG)n이고, V2는 -CO-이고, T3은 (AA)p이고, V3은 부재하고, T4는 PABO이고, V4는 부재하고, T5는 부재하고, V5는 부재한다. 특정 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CONR11-이고, T2는 (PEG)n이고, V2는 -CO-이고, T3은 (AA)p이고, V3은 부재하고, T4는 PABC이고, V4는 부재하고, T5는 부재하고, V5는 부재한다. 특정 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 (AA)p이고, V2는 -NR11-이고, T3은 (PEG)n이고, V3은 -CO-이고, T4는 PABO이고, V4는 부재하고, T5는 부재하고, V5는 부재한다. 특정 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 (AA)p이고, V2는 -NR11-이고, T3은 (PEG)n이고, V3은 -CO-이고, T4는 PABC이고, V4는 부재하고, T5는 부재하고, V5는 부재한다.
일부 실시형태에서, L은 -(L1)a-(L2)b-(L3)c-(L4)d-(L5)e-를 포함하는 링커이며, 여기서 -(L1)a-은 -(T1-V1)a-이고; -(L2)b-은 -(T2-V2)b-이고; -(L3)c-은 -(T3-V3)c-이고; -(L4)d-은 -(T4-V4)d-이고; -(L5)e-은 -(T5-V5)e-이다. 특정 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 (AA)p이고, V2는 -NR11-이고, T3은 (PEG)n이고, V3은 -CO-이고, T4는 (AA)p이고, V4는 부재하고, T5는 PABC-(AA)p이고, V5는 부재한다. 특정 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 (AA)p이고, V2는 -NR11-이고, T3은 (PEG)n이고, V3은 -CO-이고, T4는 (AA)p이고, V4는 부재하고, T5는 PABO이고, V5는 부재한다. 특정 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 (PEG)n이고, V2는 -CO-이고, T3은 (AA)p이고, V3은 부재하고, T4는 PABC이고, V4는 부재하고, T5는 (AA)p이고, V5는 부재한다. 특정 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 (AA)p이고, V2는 -NR11-이고, T3은 (PEG)n이고, V3은 -CO-이고, T4는 MABC이고, V4는 부재하고, T5는 (AA)p이고, V5는 부재한다. 특정 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 P4A이고, V2는 -CO-이고, T3은 (C1-C12)알킬이고, V3은 -CO-이고, T4는 (AA)p이고, V4는 부재하고, T5는 PABO이고, V5는 -CO-이다. 특정 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 P4A이고, V2는 -CO-이고, T3은 (C1-C12)알킬이고, V3은 -CO-이고, T4는 (AA)p이고, V4는 부재하고, T5는 PABO이고, V5는 부재한다. 특정 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 P4A이고, V2는 -CO-이고, T3은 (C1-C12)알킬이고, V3은 -CO-이고, T4는 (AA)p이고, V4는 부재하고, T5는 PABC-(AA)p이고, V5는 부재한다. 특정 실시형태에서, T1은 (C1-C12)알킬이고, V1은 -CO-이고, T2는 P4A이고, V2는 -CO-이고, T3은 (C1-C12)알킬이고, V3은 -CO-이고, T4는 (AA)p이고, V4는 부재하고, T5는 부재하고, V5는 부재한다.
일부 실시형태에서, 링커는 다음의 구조들 중 하나에 의해서 설명된다:
Figure pct00060
Figure pct00061
상기 묘사된 링커 구조의 특정 실시형태에서, 각 f는 독립적으로 0 또는 1 내지 12의 정수이고; 각 w는 독립적으로 0 또는 1 내지 20의 정수이고; 각 n은 독립적으로 0 또는 1 내지 30의 정수이고; 각 p는 독립적으로 0 또는 1 내지 20의 정수이고; 각 h는 독립적으로 0 또는 1 내지 12의 정수이고; 각 R은 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴이고; 및 각 R'는 독립적으로 H, 아미노산의 측쇄, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴이다. 상기 묘사된 링커 구조의 특정 실시형태에서, 각 f는 독립적으로 0, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이고; 각 w는 독립적으로 0, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이고; 각 n은 독립적으로 0, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이고; 각 p는 독립적으로 0, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이고; 각 h는 독립적으로 0, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이다. 상기 묘사된 링커 구조의 특정 실시형태에서, 각 R은 독립적으로 H, 메틸 또는 -(CH2)m-OH이며, 여기서 m은 1, 2, 3 또는 4이다(예를 들어, 2).
특정 실시형태에서, 링커는, 예를 들어 다음의 구조들에 설명된 것과 같은 절단성 기를 포함한다:
Figure pct00062
Figure pct00063
상기 묘사된 링커 구조의 특정 실시형태에서, 각 f는 독립적으로 0 또는 1 내지 12의 정수이고; 각 w는 독립적으로 0 또는 1 내지 20의 정수이고; 각 n은 독립적으로 0 또는 1 내지 30의 정수이고; 각 p는 독립적으로 0 또는 1 내지 20의 정수이고; 각 h는 독립적으로 0 또는 1 내지 12의 정수이고; 각 R은 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 폴리에틸렌 글리콜 부분, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴이고; 각 R'는 독립적으로 H, 아미노산의 측쇄, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴이다. 상기 묘사된 링커 구조의 특정 실시형태에서, 각 f는 독립적으로 0, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이고; 각 w는 독립적으로 0, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이고; 각 n은 독립적으로 0, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이고; 각 p는 독립적으로 0, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이고; 각 h는 독립적으로 0, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이다. 상기 묘사된 링커 구조의 특정 실시형태에서, 각 R은 독립적으로 H, 메틸 또는 -(CH2)m-OH이며, 여기서 m은 1, 2, 3 또는 4이다(예를 들어, 2).
콘쥬게이트를 제조하는데 유용한 화합물
본 개시는 여기 설명된 콘쥬게이트를 제조하는데 유용한 히드라지닐-피롤로 화합물을 제공한다. 특정 실시형태에서, 히드라지닐-피롤로 화합물은 폴리펩티드와 제2 부분의 콘쥬게이션에 유용한 커플링 부분일 수 있다. 예를 들어, 히드라지닐-피롤로 화합물은 폴리펩티드에 결합되고 제2 부분에도 결합될 수 있으며, 따라서 폴리펩티드와 제2 부분을 함께 간접적으로 결합시킨다.
특정 예에서, 히드라지닐-피롤로 화합물은 식 (V)의 화합물일 수 있다:
Figure pct00064
상기 식에서,
Q3 및 Q4 중 하나는 -(CH2)mNR3NHR2이며, 나머지 하나는 Y4이고;
m은 0 또는 1이고;
R2 및 R3은 각각 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택되거나, 또는 R2와 R3이 선택적으로 환형 연결되어 5 또는 6-원 헤테로시클릴을 형성하고;
X1, X2, X3 및 X4는 각각 독립적으로 C, N, O 및 S로부터 선택되며, X1, X2, X3 및 X4 중 하나는 선택적이고;
Y1, Y2, Y3 및 Y4는 각각 독립적으로 수소, 할로겐, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택되며, 여기서 Y1 및 Y2 또는 Y2 및 Y3은 선택적으로 환형 연결되고, Q4가 Y4일 때는 Y3과 Y4가 선택적으로 환형 연결되고;
R16, Y1, Y2, Y3 또는 Q4 중 하나는 -L-W1이며, 여기서 Q4가 -L-W1이면 Q3은 -(CH2)mNR3NHR2이고 Y4는 부재하며; Y1, Y2, Y3 또는 Q4 중 하나가 -L-W1이면 R16은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택되고;
L은 선택적 링커(예를 들어, 여기 설명된 링커)이고;
W1은 폴리펩티드 및 화학 물질으로부터 선택된다.
예를 들어, L은 다음과 같은 링커일 수 있으며, 여기서:
L은 -(T1-V1)a-(T2-V2)b-(T3-V3)c-(T4-V4)d-(T5-V5)e-를 포함하는 링커이며, 여기서 a, b, c, d 및 e는 각각 독립적으로 0 또는 1이고, a, b, c, d 및 e의 합은 1 내지 5이고;
T1, T2, T3, T4 및 T5는 각각 독립적으로 (C1-C12)알킬, 치환된 (C1-C12)알킬, (EDA)w, (PEG)n, (AA)p, -(CR13OH)h-, 피페리딘-4-아미노(P4A), 파라-아미노-벤질옥시카보닐(PABC), 메타-아미노-벤질옥시카보닐(MABC), 파라-아미노-벤질옥시(PABO), 메타-아미노-벤질옥시(MABO), 파라-아미노벤질, 아세탈 기, 디설파이드, 하이드라진, 프로테아제-절단성 부분, 글루쿠로니다아제-절단성 부분, 베타-락타마아제 절단성 부분, 및 에스테르로부터 선택되며, 여기서 EDA는 에틸렌 디아민 부분이고, PEG는 폴리에틸렌 글리콜 또는 변형된 폴리에틸렌 글리콜이고, AA는 아미노산 잔기이고;
w는 1 내지 20의 정수이고;
n은 1 내지 30의 정수이고;
p는 1 내지 20의 정수이고;
h는 1 내지 12의 정수이고;
V1, V2, V3, V4 및 V5는 각각 독립적으로 공유 결합, -CO-, -NR11-, -CONR11-, -NR11CO-, -C(O)O-, -OC(O)-, -O-, -S-, -S(O)-, -SO2-, -SO2NR11-, -NR11SO2- 및 -P(O)OH-로 구성되는 군으로부터 선택된다.
특정 실시형태에서, Q3 및 Q4 중 하나는 -(CH2)mNR3NHR2이고, 나머지 하나는 Y4이다. 특정 실시형태에서, Q3은 -(CH2)mNR3NHR2이고 Q4는 Y4이다. 특정 실시형태에서, Q4는 -(CH2)mNR3NHR2이고 Q3은 Y4이다. 특정 실시형태에서, m은 0 또는 1이다. 특정 실시형태에서, m은 0이다. 특정 실시형태에서, m은 1이다.
특정 실시형태에서, R2는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택된다. 특정 실시형태에서, R2는 수소이다. 특정 실시형태에서, R2는 알킬 또는 치환된 알킬이다. 특정 실시형태에서, R2는 알케닐 또는 치환된 알케닐이다. 특정 실시형태에서, R2는 알키닐 또는 치환된 알키닐이다. 특정 실시형태에서, R2는 알콕시 또는 치환된 알콕시이다. 특정 실시형태에서, R2는 아미노 또는 치환된 아미노이다. 특정 실시형태에서, R2는 카복실 또는 카복실 에스테르이다. 특정 실시형태에서, R2는 아실 또는 아실옥시이다. 특정 실시형태에서, R2는 아실 아미노 또는 아미노 아실이다. 특정 실시형태에서, R2는 알킬아미드 또는 치환된 알킬아미드이다. 특정 실시형태에서, R2는 설포닐이다. 특정 실시형태에서, R2는 티오알콕시 또는 치환된 티오알콕시이다. 특정 실시형태에서, R2는 아릴 또는 치환된 아릴이다. 특정 실시형태에서, R2는 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴이다. 특정 실시형태에서, R2는 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬이다. 특정 실시형태에서, R2는 헤테로시클릴 또는 치환된 헤테로시클릴이다.
특정 실시형태에서, R2는 알킬 또는 치환된 알킬이다. 예를 들어, R2는 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대 C1-C10 알킬 또는 C1-C10 치환된 알킬(예를 들어, C1-C6 알킬 또는 C1-C6 치환된 알킬)일 수 있다. 일부 경우, R2는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소-프로필, n-부틸, sec-부틸, 이소부틸, t-부틸 등이다. 특정 경우, R2는 메틸이다.
특정 실시형태에서, R3은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택된다. 특정 실시형태에서, R3은 수소이다. 특정 실시형태에서, R3은 알킬 또는 치환된 알킬이다. 특정 실시형태에서, R3은 알케닐 또는 치환된 알케닐이다. 특정 실시형태에서, R3은 알키닐 또는 치환된 알키닐이다. 특정 실시형태에서, R3은 알콕시 또는 치환된 알콕시이다. 특정 실시형태에서, R3은 아미노 또는 치환된 아미노이다. 특정 실시형태에서, R3은 카복실 또는 카복실 에스테르이다. 특정 실시형태에서, R3은 아실 또는 아실옥시이다. 특정 실시형태에서, R3은 아실 아미노 또는 아미노 아실이다. 특정 실시형태에서, R3은 알킬아미드 또는 치환된 알킬아미드이다. 특정 실시형태에서, R3은 설포닐이다. 특정 실시형태에서, R3은 티오알콕시 또는 치환된 티오알콕시이다. 특정 실시형태에서, R3은 아릴 또는 치환된 아릴이다. 특정 실시형태에서, R3은 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴이다. 특정 실시형태에서, R3은 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬이다. 특정 실시형태에서, R3은 헤테로시클릴 또는 치환된 헤테로시클릴이다.
특정 실시형태에서, R3은 알킬 또는 치환된 알킬이다. 예를 들어, R3은 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대 C1-C10 알킬 또는 C1-C10 치환된 알킬(예를 들어, C1-C6 알킬 또는 C1-C6 치환된 알킬)일 수 있다. 일부 경우, R3은 메틸, 에틸, n-프로필, 이소-프로필, n-부틸, sec-부틸, 이소부틸, t-부틸 등이다. 특정 경우, R3은 메틸이다.
특정 실시형태에서, R2 및 R3은 각각 독립적으로 알킬 및 치환된 알킬로부터 선택된다. 예를 들어, R2는 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대 C1-C10 알킬 또는 C1-C10 치환된 알킬(예를 들어, C1-C6 알킬 또는 C1-C6 치환된 알킬)일 수 있고, R3은 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대 C1-C10 알킬 또는 C1-C10 치환된 알킬(예를 들어, C1-C6 알킬 또는 C1-C6 치환된 알킬)일 수 있다. 일부 경우, R2 및 R3은 각각 독립적으로 메틸, 에틸, n-프로필, 이소-프로필, n-부틸, sec-부틸, 이소부틸, t-부틸 등으로부터 선택된다. 특정 경우, R2 및 R3은 각각 메틸이다.
특정 실시형태에서, R2와 R3은 선택적으로 환형 연결되어 5 또는 6-원 헤테로시클릴을 형성한다. 일부 예에서, R2와 R3은(이들이 부착된 원자와 함께) 환형 연결되어 5-원 헤테로시클릴을 형성할 수 있다. 일부 예에서, R2와 R3은(이들이 부착된 원자와 함께) 환형 연결되어 6-원 헤테로시클릴을 형성할 수 있다. 예를 들어, R2 및 R3은 각각 독립적으로 알킬 또는 치환된 알킬, 예컨대 C1-C10 알킬 또는 C1-C10 치환된 알킬(예를 들어, C1-C6 알킬 또는 C1-C6 치환된 알킬)일 수 있으며, 여기서 R2와 R3은 상기 설명된 대로 선택적으로 환형 연결되어 5 또는 6-원 헤테로시클릴을 형성한다. 일부 예에서, R2 및/또는 R3에서 하나 이상의 탄소 원자는 N, O 또는 S와 같은 헤테로원자로 치환될 수 있다.
특정 실시형태에서, X1은 C, N, O 및 S로부터 선택된다. 특정 실시형태에서, X1은 C이다. 특정 실시형태에서, X1은 N이다. 특정 실시형태에서, X1은 O이다. 특정 실시형태에서, X1은 S이다. 특정 실시형태에서, X1은 부재한다.
특정 실시형태에서, X2는 C, N, O 및 S로부터 선택된다. 특정 실시형태에서, X2는 C이다. 특정 실시형태에서, X2는 N이다. 특정 실시형태에서, X2는 O이다. 특정 실시형태에서, X2는 S이다. 특정 실시형태에서, X2는 부재한다.
특정 실시형태에서, X3은 C, N, O 및 S로부터 선택된다. 특정 실시형태에서, X3은 C이다. 특정 실시형태에서, X3은 N이다. 특정 실시형태에서, X3은 O이다. 특정 실시형태에서, X3은 S이다. 특정 실시형태에서, X3은 부재한다.
특정 실시형태에서, X4는 C, N, O 및 S로부터 선택된다. 특정 실시형태에서, X4는 C이다. 특정 실시형태에서, X4는 N이다. 특정 실시형태에서, X4는 O이다. 특정 실시형태에서, X4는 S이다. 특정 실시형태에서, X4는 부재한다.
X1, X2, X3 및 X4의 다양한 조합들이 가능하다. 예를 들어, 특정 실시형태에서, X1, X2, X3 및 X4는 각각 C이다. 다른 예에서, X1, X2, X3 및 X4 중 3개는 C이고, X1, X2, X3 및 X4 중 하나는 N이다. 다른 실시형태에서, X1, X2, X3 및 X4 중 2개는 C이고, X1, X2, X3 및 X4 중 2개는 N이다. 다른 실시형태에서, X1, X2, X3 및 X4 중 하나는 C이고, X1, X2, X3 및 X4 중 3개는 N이다. 다른 실시형태에서, X1, X2, X3 및 X4 중 하나는 부재하고, X1, X2, X3 및 X4 중 2개는 C이고, X1, X2, X3 및 X4 중 하나는 N이다. 다른 실시형태에서, X1, X2, X3 및 X4 중 하나는 부재하고, X1, X2, X3 및 X4 중 2개는 C이고, X1, X2, X3 및 X4 중 하나는 S이다. 다른 실시형태에서, X1, X2, X3 및 X4 중 하나는 부재하고, X1, X2, X3 및 X4 중 2개는 C이고, X1, X2, X3 및 X4 중 하나는 O이다. 원한다면 X1, X2, X3 및 X4에 대해 C, N, O 및 S의 다른 조합들이 가능하다.
특정 실시형태에서, Y1은 수소, 할로겐, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택된다. 특정 실시형태에서, Y1은 수소이다. 특정 실시형태에서, Y1은 할로겐, 예컨대 F, Cl, Br 또는 I이다. 특정 실시형태에서, Y1은 F이다. 특정 실시형태에서, Y1은 Cl이다. 특정 실시형태에서, Y1은 Br이다. 특정 실시형태에서, Y1은 I이다. 특정 실시형태에서, Y1은 알킬 또는 치환된 알킬이다. 특정 실시형태에서, Y1은 알케닐 또는 치환된 알케닐이다. 특정 실시형태에서, Y1은 알키닐 또는 치환된 알키닐이다. 특정 실시형태에서, Y1은 알콕시 또는 치환된 알콕시이다. 특정 실시형태에서, Y1은 아미노 또는 치환된 아미노이다. 특정 실시형태에서, Y1은 카복실 또는 카복실 에스테르이다. 특정 실시형태에서, Y1은 아실 또는 아실옥시이다. 특정 실시형태에서, Y1은 아실 아미노 또는 아미노 아실이다. 특정 실시형태에서, Y1은 알킬아미드 또는 치환된 알킬아미드이다. 특정 실시형태에서, Y1은 설포닐이다. 특정 실시형태에서, Y1은 티오알콕시 또는 치환된 티오알콕시이다. 특정 실시형태에서, Y1은 아릴 또는 치환된 아릴이다. 특정 실시형태에서, Y1은 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴이다. 특정 실시형태에서, Y1은 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬이다. 특정 실시형태에서, Y1은 헤테로시클릴 또는 치환된 헤테로시클릴이다.
특정 실시형태에서, Y2는 수소, 할로겐, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택된다. 특정 실시형태에서, Y2는 수소이다. 특정 실시형태에서, Y2는 할로겐, 예컨대 F, Cl, Br 또는 I이다. 특정 실시형태에서, Y2는 F이다. 특정 실시형태에서, Y2는 Cl이다. 특정 실시형태에서, Y2는 Br이다. 특정 실시형태에서, Y2는 I이다. 특정 실시형태에서, Y2는 알킬 또는 치환된 알킬이다. 특정 실시형태에서, Y2는 알케닐 또는 치환된 알케닐이다. 특정 실시형태에서, Y2는 알키닐 또는 치환된 알키닐이다. 특정 실시형태에서, Y2는 알콕시 또는 치환된 알콕시이다. 특정 실시형태에서, Y2는 아미노 또는 치환된 아미노이다. 특정 실시형태에서, Y2는 카복실 또는 카복실 에스테르이다. 특정 실시형태에서, Y2는 아실 또는 아실옥시이다. 특정 실시형태에서, Y2는 아실 아미노 또는 아미노 아실이다. 특정 실시형태에서, Y2는 알킬아미드 또는 치환된 알킬아미드이다. 특정 실시형태에서, Y2는 설포닐이다. 특정 실시형태에서, Y2는 티오알콕시 또는 치환된 티오알콕시이다. 특정 실시형태에서, Y2는 아릴 또는 치환된 아릴이다. 특정 실시형태에서, Y2는 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴이다. 특정 실시형태에서, Y2는 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬이다. 특정 실시형태에서, Y2는 헤테로시클릴 또는 치환된 헤테로시클릴이다.
특정 실시형태에서, Y3은 수소, 할로겐, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택된다. 특정 실시형태에서, Y3은 수소이다. 특정 실시형태에서, Y3은 할로겐, 예컨대 F, Cl, Br 또는 I이다. 특정 실시형태에서, Y3은 F이다. 특정 실시형태에서, Y3은 Cl이다. 특정 실시형태에서, Y3은 Br이다. 특정 실시형태에서, Y3은 I이다. 특정 실시형태에서, Y3은 알킬 또는 치환된 알킬이다. 특정 실시형태에서, Y3은 알케닐 또는 치환된 알케닐이다. 특정 실시형태에서, Y3은 알키닐 또는 치환된 알키닐이다. 특정 실시형태에서, Y3은 알콕시 또는 치환된 알콕시이다. 특정 실시형태에서, Y3은 아미노 또는 치환된 아미노이다. 특정 실시형태에서, Y3은 카복실 또는 카복실 에스테르이다. 특정 실시형태에서, Y3은 아실 또는 아실옥시이다. 특정 실시형태에서, Y3은 아실 아미노 또는 아미노 아실이다. 특정 실시형태에서, Y3은 알킬아미드 또는 치환된 알킬아미드이다. 특정 실시형태에서, Y3은 설포닐이다. 특정 실시형태에서, Y3은 티오알콕시 또는 치환된 티오알콕시이다. 특정 실시형태에서, Y3은 아릴 또는 치환된 아릴이다. 특정 실시형태에서, Y3은 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴이다. 특정 실시형태에서, Y3은 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬이다. 특정 실시형태에서, Y3은 헤테로시클릴 또는 치환된 헤테로시클릴이다.
특정 실시형태에서, Y4는 수소, 할로겐, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택된다. 특정 실시형태에서, Y4는 수소이다. 특정 실시형태에서, Y4는 할로겐, 예컨대 F, Cl, Br 또는 I이다. 특정 실시형태에서, Y4는 F이다. 특정 실시형태에서, Y4는 Cl이다. 특정 실시형태에서, Y4는 Br이다. 특정 실시형태에서, Y4는 I이다. 특정 실시형태에서, Y4는 알킬 또는 치환된 알킬이다. 특정 실시형태에서, Y4는 알케닐 또는 치환된 알케닐이다. 특정 실시형태에서, Y4는 알키닐 또는 치환된 알키닐이다. 특정 실시형태에서, Y4는 알콕시 또는 치환된 알콕시이다. 특정 실시형태에서, Y4는 아미노 또는 치환된 아미노이다. 특정 실시형태에서, Y4는 카복실 또는 카복실 에스테르이다. 특정 실시형태에서, Y4는 아실 또는 아실옥시이다. 특정 실시형태에서, Y4는 아실 아미노 또는 아미노 아실이다. 특정 실시형태에서, Y4는 알킬아미드 또는 치환된 알킬아미드이다. 특정 실시형태에서, Y4는 설포닐이다. 특정 실시형태에서, Y4는 티오알콕시 또는 치환된 티오알콕시이다. 특정 실시형태에서, Y4는 아릴 또는 치환된 아릴이다. 특정 실시형태에서, Y4는 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴이다. 특정 실시형태에서, Y4는 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬이다. 특정 실시형태에서, Y4는 헤테로시클릴 또는 치환된 헤테로시클릴이다.
특정 실시형태에서, Y1 및 Y2 또는 Y2 및 Y3는 환형 연결되어 융합 벤조 고리를 형성한다. 특정 실시형태에서, Y1과 Y2가 환형 연결되어 융합 벤조 고리를 형성한다. 특정 실시형태에서, Y2와 Y3이 환형 연결되어 융합 벤조 고리를 형성한다. 특정 실시형태에서, Q4가 Y4일 때 Y3과 Y4가 선택적으로 환형 연결된다.
특정 실시형태에서, R16, Y1, Y2, Y3 또는 Q4 중 하나는 -L-W1이며, 여기서 Q4가 -L-W1이면 Q3은 -(CH2)mNR3NHR2이고 Y4는 부재한다. 특정 실시형태에서, R16은 -L-W1이다. 특정 실시형태에서, Y1은 -L-W1이다. 특정 실시형태에서, Y2는 -L-W1이다. 특정 실시형태에서, Y3은 -L-W1이다. 특정 실시형태에서, Q4는 -L-W1이다. 특정 실시형태에서, Q4가 -L-W1일 때 Q3은 -(CH2)mNR3NHR2이고 Y4는 부재한다.
특정 실시형태에서, Y1, Y2, Y3 또는 Q4 중 하나가 -L-W1이면 R16은 -L-W1이 아니다. 이들 실시형태에서, R16은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택된다. 일부 예에서, R16은 수소이다. 일부 예에서, R16은 알킬 또는 치환된 알킬이다. 일부 예에서, R16은 알케닐 또는 치환된 알케닐이다. 일부 예에서, R16은 알키닐 또는 치환된 알키닐이다. 일부 예에서, R16은 아릴 또는 치환된 아릴이다. 일부 예에서, R16은 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴이다. 일부 예에서, R16은 시클로 알킬 또는 치환된 시클로알킬이다. 일부 예에서, R16은 헤테로시클릴 또는 치환된 헤테로시클릴이다.
특정 실시형태에서, L은 선택적 링커이다. 특정 실시형태에서, L은 존재하지 않고, 따라서 인돌 고리의 질소가 W1에 직접 결합된다. 특정 실시형태에서, L이 존재하고, 따라서 인돌 고리의 질소가 링커 L을 통해서 W1에 간접 결합된다. 링커 L에 대한 추가의 설명은 여기 개시에서 발견된다.
예를 들어, 특정 실시형태에서, L은 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실 아미노, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택된 기를 포함한다. 특정 실시형태에서, L은 알킬 또는 치환된 알킬 기를 포함한다. 특정 실시형태에서, L은 알케닐 또는 치환된 알케닐 기를 포함한다. 특정 실시형태에서, L은 알키닐 또는 치환된 알키닐 기를 포함한다. 특정 실시형태에서, L은 알콕시 또는 치환된 알콕시 기를 포함한다. 특정 실시형태에서, L은 아미노 또는 치환된 아미노 기를 포함한다. 특정 실시형태에서, L은 카복실 또는 카복실 에스테르 기를 포함한다. 특정 실시형태에서, L은 아실 아미노 기를 포함한다. 특정 실시형태에서, L은 알킬아미드 또는 치환된 알킬아미드 기를 포함한다. 특정 실시형태에서, L은 아릴 또는 치환된 아릴 기를 포함한다. 특정 실시형태에서, L은 헤테로아릴 또는 치환된 헤테로아릴 기를 포함한다. 특정 실시형태에서, L은 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬 기를 포함한다. 특정 실시형태에서, L은 헤테로시클릴 또는 치환된 헤테로시클릴 기를 포함한다.
특정 실시형태에서, L은 중합체를 포함한다. 예를 들어, 중합체는 폴리에틸렌 글리콜, 메톡시폴리에틸렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜 동종중합체, 폴리프로필렌글리콜 동종중합체, 에틸렌글리콜과 프로필렌글리콜의 공중합체(예를 들어, 동종중합체 및 공중합체가 알킬 기로 한쪽 말단에서 치환되거나 치환되지 않은 경우), 폴리비닐 알코올, 폴리비닐 에틸 에테르, 폴리비닐피롤리돈, 이들의 조합 등을 포함하는 폴리알킬렌 글리콜 및 이들의 유도체를 포함할 수 있다. 특정 실시형태에서, 중합체는 폴리알킬렌 글리콜이다. 특정 실시형태에서, 중합체는 폴리에틸렌 글리콜이다.
일부 실시형태에서, L은 -(L1)a-(L2)b-(L3)c-(L4)d-(L5)e-을 포함하는 링커이며, 여기서 L1, L2, L3, L4 및 L5는 각각 링커 단위이고, a, b, c, d 및 e는 각각 독립적으로 0 또는 1이며, a, b, c, d 및 e의 합은 1 내지 5이다. 여기 더 상세히 설명된 콘쥬게이트 및 화합물에서 도시된 대로 다른 링커들도 가능하다.
특정 실시형태에서, W1은 화학 물질 및 폴리펩티드로부터 선택된다. 특정 실시형태에서, W1은 화학 물질(예를 들어, 약물 또는 검출가능한 표지)이다. 특정 실시형태에서, W1은 약물이다. 특정 실시형태에서, W1은 검출가능한 표지이다. 특정 실시형태에서, W1은 폴리펩티드이다.
특정 예에서, 히드라지닐-피롤로 화합물은 식 (VI)의 화합물이다:
Figure pct00065
상기 식에서,
Q3, Q4, X1, X2, X3, X4, L, W1, Y1, Y2, 및 Y3은 식 (V)에서 정의된 것과 같다.
상기 설명된 대로, 식 (V)에서, 일부 예에서 R16은 -L-W1이며, 이것은 상기 도시된 식 (VI)의 화합물을 가져온다.
특정 실시형태에서, 식 (VI)의 치환체는 상기 설명된 식 (V)에 대한 것과 동일하다. 예를 들어, 특정 실시형태에서, 식 (VI)의 치환체들, 예를 들어 Q3, Q4, X1, X2, X3, X4, L, W1, Y1, Y2, 및 Y3은 식 (V)에서 정의된 것과 같다.
일부 실시형태에서, 화합물은 식 (VIIa) 또는 (VIIb)의 화합물이다:
Figure pct00066
상기 식에서,
X1 및 X3은 각각 독립적으로 O, S 또는 NR12이고;
X4는 C이고;
식 (VIIa)에서, Q3 및 Q4 중 하나는 -(CH2)mNR3NHR2이며, 나머지 하나는 Y4이고;
식 (VIIb)에서, Q3 및 R12 중 하나는 존재한다면 -(CH2)mNR3NHR2이며, 나머지 하나는 Y3이고;
Y1, Y2, Y3 및 Y4는, 존재한다면, 각각 독립적으로 수소, 할로겐, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택되며, 여기서 Y1과 Y2가 선택적으로 환형 연결되고, Q4가 Y4일 때는 Y3과 Y4가 선택적으로 환형 연결되고; n, R2 및 R3은 식 (V)에서 정의된 것과 같다.
특정 실시형태에서, 식 (VIIa) 및 (VIIb)의 치환체들은 상기 설명된 식 (V)에 대한 것과 동일하다.
예를 들어, 식 (VIIa)의 특정 실시형태에서, X4는 C이고, Q3 및 R12 중 하나는 -(CH2)mNR3NHR2이고, 나머지 하나는 Y3이다. 식 (VIIa)의 특정 실시형태에서, X4는 C이고, Q3은 -(CH2)mNR3NHR2이고, Q4는 Y3이다. 식 (VIIa)의 특정 실시형태에서, X4는 C이고, Q4는 -(CH2)mNR3NHR2이고, Q3은 Y3이다. 특정 실시형태에서, m은 0 또는 1이다. 특정 실시형태에서, m은 0이다. 특정 실시형태에서, m은 1이다.
식 (VIIb)의 특정 실시형태에서, X3은 NR12이고, Q3 및 R12 중 하나는 -(CH2)m-NR3NHR2이고, 나머지 하나는 Y3이다. 식 (VIIb)의 특정 실시형태에서, X3은 NR12이고, Q3은 -(CH2)m-NR3NHR2이고, R12는 Y3이다. 식 (VIIb)의 특정 실시형태에서, X3은 NR12이고, R12는 -(CH2)m-NR3NHR2이고, Q3은 Y3이다. 특정 실시형태에서, m은 0 또는 1이다. 특정 실시형태에서, m은 0이다. 특정 실시형태에서, m은 1이다.
특정 실시형태에서, Y1과 Y2가 선택적으로 환형 연결되며, 여기서 Q4가 Y4일 때는 Y3과 Y4가 선택적으로 환형 연결되어 융합 벤조 고리를 형성한다. 식 (VIIb)의 특정 실시형태에서, Y1과 Y2가 환형 연결되어 융합 벤조 고리를 형성한다. 식 (VIIa)의 특정 실시형태에서, Q4는 Y4이고, Y3과 Y4가 환형 연결되어 융합 벤조 고리를 형성한다.
일부 실시형태에서, 화합물에서 Q2는 -(CH2)mNR3NHR2이고 Q3은 Y4이다. 일부 실시형태에서, 화합물에서 Q3은 -(CH2)mNR3NHR2이고 Q2는 Y4이다. 특정 실시형태에서, m은 1이다.
일부 실시형태에서, R2 및 R3은 각각 독립적으로 알킬 및 치환된 알킬로부터 선택된다. 특정 실시형태에서, R2 및 R3는 각각 메틸이다.
일부 실시형태에서, X1, X2, X3 및 X4는 각각 C이다.
일부 실시형태에서, Y1, Y2, Y3 및 Y4는 각각 H이다.
일부 실시형태에서, X1 및 X3은 각각 S이고 X4는 C이다. 일부 실시형태에서, X1 및 X3은 각각 O이고 X4는 C이다. 식 (VIIa)의 일부 실시형태에서, X1은 S이고 및 X4는 C이다. 식 (VIIa)의 일부 실시형태에서, X1은 O이고 및 X4는 C이다. 식 (VIIb)의 일부 실시형태에서, X3은 S이다. 식 (VIIb)의 일부 실시형태에서, X3은 O이다.
일부 실시형태에서, X1 및 X3은 각각 NR12이고 X4는 C이다. 식 (VIIa)의 일부 실시형태에서, X1은 NR12이고 X4는 C이다. 식 (VIIa)의 일부 실시형태에서, X1은 NH이고 X4는 C이다. 식 (VIIb)의 일부 실시형태에서, X3은 NR12이다. 식 (VIIb)의 일부 실시형태에서, X3은 NH이다.
일부 실시형태에서, W1은 화학 물질이다. 일부 실시형태에서, W1은 약물 또는 검출가능한 표지이다. 특정 실시형태에서, 검출가능한 표지는 형광단을 포함한다. 일부 실시형태에서, W2는 폴리펩티드이다.
일부 실시형태에서, 화합물은 식 (VIII)의 화합물이다:
Figure pct00067
상기 식에서,
m은 0 또는 1이고;
R2 및 R3은 각각 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택되거나, 또는 R2와 R3이 선택적으로 환형 연결되어 5 또는 6-원 헤테로시클릴을 형성하고;
X1, X2, X3 및 X4는 각각 독립적으로 C, N, O 및 S로부터 선택되고;
Y1, Y2, Y3 및 Y4는 각각 독립적으로 수소, 할로겐, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택되며, 여기서 Y1 및 Y2, Y2 및 Y3, 또는 Y3 및 Y4는 선택적으로 환형 연결되고;
L은 선택적 링커(예를 들어, 여기 설명된 링커)이고;
W1은 화학 물질 및 폴리펩티드로부터 선택된다.
특정 실시형태에서, 식 (VIII)의 치환체는 상기 설명된 식 (V)에 대한 것과 동일하다.
일부 실시형태에서, 화합물은 식 (VIIIa)의 화합물이다:
Figure pct00068
특정 실시형태에서, 식 (VIIIa)의 치환체는 상기 설명된 식 (VIII)에 대한 것과 동일하다.
화합물의 실시형태는 식 (VIIIb)의 화합물을 포함한다:
Figure pct00069
상기 식에서, W1 및 L은 식 (VIII)에 대해 상기 설명된 것과 같다.
일부 실시형태에서, 화합물은 식 (IX)의 화합물이다:
Figure pct00070
상기 식에서,
m은 0 또는 1이고;
R2 및 R3은 각각 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택되거나, 또는 R2와 R3이 선택적으로 환형 연결되어 5 또는 6-원 헤테로시클릴을 형성하고;
X1, X2, X3 및 X4는 각각 독립적으로 C, N, O 및 S로부터 선택되고;
Y1, Y2, Y3 및 Y4는 각각 독립적으로 수소, 할로겐, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택되며, 여기서 Y1 및 Y2 또는 Y2 및 Y3은 선택적으로 환형 연결되고;
L은 선택적 링커(예를 들어, 여기 설명된 링커)이고;
W1은 화학 물질 및 폴리펩티드로부터 선택된다.
특정 실시형태에서, 식 (IX)의 치환체는 상기 설명된 식 (V)에 대한 것과 동일하다. 예를 들어, 특정 실시형태에서, m은 0 또는 1이다. 특정 실시형태에서, m은 0이다. 특정 실시형태에서, m은 1이다.
일부 실시형태에서, 화합물은 식 (IXa)의 화합물이다:
Figure pct00071
특정 실시형태에서, 식 (IXa)의 치환체는 상기 설명된 식 (IX)에 대한 것과 동일하다.
화합물의 실시형태는 식 (IXb)의 화합물을 포함한다:
Figure pct00072
특정 실시형태에서, 식 (IXb)의 치환체는 상기 설명된 식 (IX)에 대한 것과 동일하다.
특정 실시형태에서, 화합물은 다음의 구조를 가진다:
Figure pct00073
특정 실시형태에서, 화합물은 다음의 구조를 가진다:
Figure pct00074
특정 실시형태에서, 화합물은 다음의 구조를 가진다:
Figure pct00075
특정 실시형태에서, 화합물은 다음의 구조를 가진다:
Figure pct00076
특정 실시형태에서, 화합물은 다음의 구조를 가진다:
Figure pct00077
특정 실시형태에서, 화합물은 다음의 구조를 가진다:
Figure pct00078
특정 실시형태에서, 화합물은 다음의 구조를 가진다:
Figure pct00079
특정 실시형태에서, 화합물은 다음의 구조를 가진다:
Figure pct00080
특정 실시형태에서, 화합물은 다음의 구조를 가진다:
Figure pct00081
특정 실시형태에서, 화합물은 다음의 구조를 가진다:
Figure pct00082
특정 실시형태에서, 화합물은 다음의 구조를 가진다:
Figure pct00083
특정 실시형태에서, 화합물은 다음의 구조를 가진다:
Figure pct00084
특정 실시형태에서, 화합물은 다음의 구조를 가진다:
Figure pct00085
특정 실시형태에서, 화합물은 다음의 구조를 가진다:
Figure pct00086
특정 실시형태에서, 화합물은 다음의 구조를 가진다:
Figure pct00087
특정 실시형태에서, 화합물은 다음의 구조를 가진다:
Figure pct00088
특정 실시형태에서, 화합물은 다음의 구조를 가진다:
Figure pct00089
특정 실시형태에서, 화합물은 다음의 구조를 가진다:
Figure pct00090
특정 실시형태에서, 화합물은 다음의 구조를 가진다:
Figure pct00091
특정 실시형태에서, 화합물은 다음의 구조를 가진다:
Figure pct00092
특정 실시형태에서, 화합물은 다음의 구조를 가진다:
Figure pct00093
특정 실시형태에서, 화합물은 다음의 구조를 가진다:
Figure pct00094
특정 실시형태에서, 화합물은 다음의 구조를 가진다:
Figure pct00095
특정 실시형태에서, 화합물은 다음의 구조를 가진다:
Figure pct00096
특정 실시형태에서, 화합물은 다음의 구조를 가진다:
Figure pct00097
특정 실시형태에서, 화합물은 다음의 구조를 가진다:
Figure pct00098
특정 실시형태에서, 화합물은 다음의 구조를 가진다:
Figure pct00099
특정 실시형태에서, 화합물은 다음의 구조를 가진다:
Figure pct00100
특정 실시형태에서, 화합물은 다음의 구조를 가진다:
Figure pct00101
특정 실시형태에서, 화합물은 다음의 구조를 가진다:
Figure pct00102
특정 실시형태에서, 화합물은 다음의 구조를 가진다:
Figure pct00103
특정 실시형태에서, 화합물은 다음의 구조를 가진다:
Figure pct00104
특정 실시형태에서, 화합물은 다음의 구조를 가진다:
Figure pct00105
특정 실시형태에서, 화합물은 다음의 구조를 가진다:
Figure pct00106
특정 실시형태에서, 화합물은 다음의 구조를 가진다:
Figure pct00107
특정 실시형태에서, 화합물은 다음의 구조를 가진다:
Figure pct00108
특정 실시형태에서, 화합물은 다음의 구조를 가진다:
Figure pct00109
특정 실시형태에서, 화합물은 다음의 구조를 가진다:
Figure pct00110
특정 실시형태에서, 화합물은 다음의 구조를 가진다:
Figure pct00111
특정 실시형태에서, 화합물은 다음의 구조를 가진다:
Figure pct00112
특정 실시형태에서, 화합물은 다음의 구조를 가진다:
Figure pct00113
특정 실시형태에서, 화합물은 다음의 구조를 가진다:
Figure pct00114
특정 실시형태에서, 화합물은 다음의 구조를 가진다:
Figure pct00115
특정 실시형태에서, 화합물은 다음의 구조를 가진다:
Figure pct00116
특정 실시형태에서, 화합물은 다음의 구조를 가진다:
Figure pct00117
특정 실시형태에서, 화합물은 다음의 구조를 가진다:
Figure pct00118
특정 실시형태에서, 화합물은 다음의 구조를 가진다:
Figure pct00119
특정 실시형태에서, 화합물은 다음의 구조를 가진다:
Figure pct00120
특정 실시형태에서, 화합물은 다음의 구조를 가진다:
Figure pct00121
특정 실시형태에서, 화합물은 다음의 구조를 가진다:
Figure pct00122
특정 실시형태에서, 화합물은 다음의 구조를 가진다:
Figure pct00123
특정 실시형태에서, 화합물은 다음의 구조를 가진다:
Figure pct00124
특정 실시형태에서, 화합물은 다음의 구조를 가진다:
Figure pct00125
특정 실시형태에서, 화합물은 다음의 구조를 가진다:
Figure pct00126
특정 실시형태에서, 화합물은 다음의 구조를 가진다:
Figure pct00127
특정 실시형태에서, 화합물은 다음의 구조를 가진다:
Figure pct00128
특정 실시형태에서, 화합물은 다음의 구조를 가진다:
Figure pct00129
특정 실시형태에서, 화합물은 다음의 구조를 가진다:
Figure pct00130
특정 실시형태에서, 화합물은 다음의 구조를 가진다:
Figure pct00131
특정 실시형태에서, 화합물은 다음의 구조를 가진다:
Figure pct00132
특정 실시형태에서, 화합물은 다음의 구조를 가진다:
Figure pct00133
특정 실시형태에서, 화합물은 다음의 구조를 가진다:
Figure pct00134
특정 실시형태에서, 화합물은 다음의 구조를 가진다:
Figure pct00135
특정 실시형태에서, 화합물은 다음의 구조를 가진다:
Figure pct00136
특정 실시형태에서, 화합물은 다음의 구조를 가진다:
Figure pct00137
특정 실시형태에서, 화합물은 다음의 구조를 가진다:
Figure pct00138
특정 실시형태에서, 화합물은 다음의 구조를 가진다:
Figure pct00139
특정 실시형태에서, 화합물은 다음의 구조를 가진다:
Figure pct00140
특정 실시형태에서, 화합물은 다음의 구조를 가진다:
Figure pct00141
특정 실시형태에서, 화합물은 다음의 구조를 가진다:
Figure pct00142
특정 실시형태에서, 화합물은 다음의 구조를 가진다:
Figure pct00143
특정 실시형태에서, 화합물은 다음의 구조를 가진다:
Figure pct00144
특정 실시형태에서, 화합물은 다음의 구조를 가진다:
Figure pct00145
상기 구조들에서 제시된 화학 물질, 링커 및 커플링 부분 중 어느 것은 대상 화합물 및 콘쥬게이트에서 사용하도록 개조될 수 있다.
콘쥬게이트를 제조하기 위한 히드라지닐-인돌 화합물 및 방법에 관련된 추가의 개시는 그 개시가 여기 참고로 포함되는 2013년 3월 11일자로 제출된 미국출원 No. 13/794,159에서 발견된다.
표적 폴리펩티드
광범위한 다양한 폴리펩티드 중 어느 것이 상기 설명된 제2 부분에 콘쥬게이트되도록 변형될 수 있다. 변형에 적합한 폴리펩티드는 자연 발생 아미노산 서열, 자연 발생 폴리펩티드의 단편, 및 비-자연 발생 폴리펩티드 및 그것의 단편을 가진 단백질을 모두 포함한다.
다음은 여기 개시된 폴리펩티드 콘쥬게이트를 제조하기 위해 여기 개시된 화합물 및 방법을 사용하여 변형하기 위한 관심의 폴리펩티드의 부류 및 종류의 예들이다.
치료 폴리펩티드
특정 실시형태에서, 콘쥬게이트를 제조하는 방법은, 어떤 부분에의 부착이, 예를 들어 혈청 반감기의 증가, 안 좋은 면역반응의 감소, 추가의 또는 대안적인 생물학적 활성 또는 기능성 등 중 어느 하나, 또는 다른 이익이나 안 좋은 부작용의 감소를 제공할 수 있는 폴리펩티드들과 같은 치료 이점을 제공할 수 있는 폴리펩티드의 변형에 적용된다. 치료 폴리펩티드가 백신에 대한 항원인 경우 변형은 폴리펩티드의 증진된 면역원성을 제공할 수 있다.
치료 단백질의 부류의 예들은 사이토카인, 케모카인, 성장인자, 호르몬, 항체 및 항원을 포함한다. 추가의 예들은, 제한은 아니지만, 에리트로포이에틴(EPO, 예를 들어 자생 EPO 또는 합성 EPO(예를 들어, US2003/0191291 참조), 예컨대 제한은 아니지만 예를 들어 PROCRIT®, EPREX® 또는 EPOGEN®(에포에틴-α), ARANESP®(다베포이에틴-α), NEORECORMON®, EPOGIN®(에포에틴-β) 등); 성장 호르몬(예를 들어 소마토트로핀, 예컨대 GENOTROPIN®, NUTROPIN®, NORDITROPIN®, SAIZEN®, SEROSTIM®, HUMATROPE® 등); 사람 성장 호르몬(hGH); 소 성장 호르몬(bGH); 여포자극 호르몬(FSH); 인터페론(예를 들어 IFN-γ, IFN-α, IFN-β, IFN-ω; IFN-τ, 컨센서스 인터페론 등); 인슐린(예컨대 Novolin, Humulin, Humalog, Lantus, Ultralente 등), 인슐린-유사 성장 인자(예를 들어, IGF-I, IGF-II); 혈액 인자(예를 들어, 인자 X, 조직 플라스미노겐 액티베이터(TPA) 등, 예컨대 제한은 아니지만 예를 들어 ACTIVASE®(알테플라아제) 조직 플라스미노겐 액티베이터, NOVOSEVEN®(재조합 사람 인자 VIIa), 인자 VIIa, 인자 VIII(예를 들어 KOGENATE®), 인자 IX, β-글로빈, 헤모글로빈 등); 콜로니 자극 인자(예를 들어, 과립구-CSF(G-CSF, 예컨대 NEUPOGEN®(필그라스팀)), 대식세포-CSF(M-CSF), 과립구-대식세포-CSF(GM-CSF), Neulasta(페그필그라스팀), 과립구-단핵구 콜로니 자극 인자, 거핵세포 콜로니 자극 인자 등), 형질전환 성장 인자(예를 들어, TGF-베타, TGF-알파); 인터류킨(예를 들어, IL-1, IL-2(예를 들어, Proleukin®), IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-12 등); 성장 인자(예를 들어, 상피 성장 인자(EGF), 혈소판-유래 성장 인자(PDGF, 예를 들어 REGRANEX®(베클라페르민)), 섬유아세포 성장 인자(FGFs, 예를 들어 aFGF, bFGF, 예컨대 FIBLAST®(트라페르민)), 신경교 셀라인-유래 성장 인자(GDNF), 신경 성장 인자(NGF), 줄기세포 인자(예를 들어, STEMGEN®(안세스팀)), 각질세포 성장 인자, 간세포 성장 인자 등); 가용성 수용체(예를 들어, TNF-α-결합 가용성 수용체, 예컨대 ENBREL®(에타너셉트), 가용성 VEGF 수용체, 가용성 인터류킨 수용체, 가용성 γ/δ T 세포 수용체 등); 효소(예를 들어, α-글루코시다아제, CERAZYME®(이미글루카라아제, β-글루코세레브로시다아제, CEREDASE®(알글루세라아제); 효소 액티베이터(예를 들어, 조직 플라스미노겐 액티베이터); 케모카인(예컨대, IP-10, Mig, Groα/IL-8, 조절 및 정상 T 세포 발현 및 분비(RANTES), MIP-1α, MIP-1β, MCP-1, PF-4 등); 혈관형성제(예컨대 혈관내피 성장인자(VEGF); 항-혈관형성제(예컨대 가용성 VEGF 수용체); 단백질 백신; 신경활성 펩티드, 예컨대 브라디키닌, 콜레시스토키닌, 가스틴, 세크레틴, 옥시토신, 고나도트로핀-방출 호르몬, 베타-엔돌핀, 엔케팔린, 섭스턴스 P, 소마토스타틴, 갈라닌, 성장 호르몬-방출 호르몬, 봄베신, 와파린, 디놀핀, 뉴로텐신, 모틸린, 티로트로핀, 뉴로펩티드 Y, 황체형성 호르몬, 칼시토닌, 인슐린, 글루카곤, 바소프레신, 안지오텐신 II, 티로트로핀-방출 호르몬, 혈관활성 장 펩티드, 슬립 펩티드 등; 기타 펩티드, 예컨대 혈전용해제, 심방성 나트륨이뇨 펩티드, 골형성 단백질, 트롬보포에틴, 렐락신, 신경교 섬유질 산성 단백질, 여포 자극 호르몬, 사람 알파-1 안티트립신, 백혈병 억제 인자, 형질전환 성장 인자, 조직 인자, 인슐린-유사 성장 인자, 황체형성 호르몬, 여포 자극 호르몬, 대식세포 활성화 인자, 종양 괴사 인자, 호중구 주화성 인자, 신경 성장 인자, 메탈로프로테이나아제의 조직 억제제; 혈관활성 장 펩티드, 안지오게닌, 안지오트로핀, 피브린; 히루딘; 백혈병 억제 인자; IL-1 수용제 길항제(예를 들어, Kineret®(아나킨라)) 등을 포함한다. 상기 치료 단백질들의 자생 형태들도 본 개시에서 표적 폴리펩티드로서 관심의 대상임이 쉽게 인정될 것이다.
추가의 예들은 항체, 예를 들어 다클론 항체, 단클론 항체, 사람화된 항체, 항원-결합 단편(예를 들어, F(ab)', Fab, Fv), 단쇄 항체 등(예를 들어 RITUXAN®(리툭시맙); REMICADE®(인플릭시맙); HERCEPTIN®(트라스투주맙); HUMIRA™(아달리무맙); XOLAIR®(오말리주맙); BEXXAR®(토시투모맙); RAPTIVA™(에팔리주맙); ERBITUX™(세툭시맙) 등)를 포함한다. 일부 예에서, 항체는 종양 항원, 면역 세포 항원(예를 들어, CD4, CD8 등), 미생물, 특히 병원성 미생물의 항원(예를 들어, 박테리아, 바이러스, 진균 또는 기생충 항원) 등에 특이적으로 결합하는 항체를 포함한다.
일부 예에서, 여기 설명된 방법, 콘쥬게이트 및 화합물은 치료 단백질의 초고글리코실화 형태에서 발견되는 것과 같은 글리코실화의 자생 또는 조작된 부위에 어떤 부분(예를 들어, 수용성 중합체)을 제공하도록 적용될 수 있다.
변형된 표적 폴리펩티드의 생물학적 활성은 본 분야에 알려진 방법에 따라서 분석될 수 있다. 상응하는 모 단백질의 적어도 하나의 바람직한 약물학적 활성을 보유하는 변형된 폴리펩티드가 관심의 대상이다.
면역원성 조성물
또한, 여기 개시된 방법, 콘쥬게이트 및 화합물은 면역원성 조성물(예를 들어, 치료 백신)의 성분들의 제조에서 용도를 찾는다. 예를 들어, 화합물은 폴리펩티드 항원의 혈청 반감기를 증가시키거나, 폴리펩티드의 면역원성을 증가시키거나, 또는 폴리펩티드 캐리어에 비-아미노산 항원을 연결하는 부분의 부착을 촉진하기 위해서 사용될 수 있다. 이와 관련하여, 화합물은 대상에서 면역 반응을 도출하기 위해 대상에 투여하기 위한 관심의 대상인 미생물 항원(예를 들어, 박테리아, 바이러스, 진균 또는 기생충 항원), 종양 항원, 및 다른 항원의 변형을 촉진하기 위해서 사용될 수 있다. 또한, 연구 도구로서 유용할 수 있는 항체를 도출하는데 유용한 항원의 변형이 관심의 대상이다.
여기 개시된 화합물을 사용하여 변형하기 위한 관심의 폴리펩티드의 추가의 예들은 분석에서 검출이나 기능 모니터링을 위한 관심의 대상인 것들을 포함한다(예를 들어, 연구 도구, 약물 스크리닝 분석에서 등). 이 종류의 폴리펩티드의 예들은 수용체(예를 들어, G-단백질 결합 수용체(고아 GPCR를 포함하는 GPCRs), 수용체 리간드(자연 발생 및 합성 포함), 단백질 채널(예를 들어 이온 채널(예를 들어, 칼륨 채널, 칼슘 채널, 나트륨 채널 등) 및 다른 폴리펩티드들을 포함한다. 일부 실시형태에서, 경막 폴리펩티드와 같은 세포 표면-회합된 폴리펩티드의 변형이 관심의 대상이며, 예를 들어 이러한 변형은 폴리펩티드가 막에 존재하는 경우 달성된다. 생리학적 조건에서 폴리펩티드의 변형을 위한 방법이 아래 더 설명된다.
폴리펩티드 제조 방법
일반적으로 여기 설명된 폴리펩티드는 발현 목적에 따라서 종래의 방식에 따라 원핵세포나 진핵세포에서 발현될 수 있다. 따라서, 본 발명은 숙주 세포, 예를 들어 폴리펩티드를 암호화하는 핵산을 포함하는 유전적으로 변형된 숙주 세포를 더 제공한다.
여기 설명된 콘쥬게이트를 형성하기에 적합한 콘쥬게이트되지 않은 또는 변형된 폴리펩티드의 제조(대규모 생산을 포함하는)를 위한 숙주 세포는 여러 가지 이용가능한 숙주 세포 중 어느 것으로부터 분비될 수 있다. 숙주 세포의 예들은 원핵 또는 진핵 단세포 생물, 예컨대 박테리아(예를 들어, Escherichia coli 균주, Bacillus spp.(예컨대 B. subtilis) 등), 효모 및 진균(예를 들어, S.　 cerevisiae, Pichia spp. 등)의 것들을 포함하며, 다른 이러한 숙주 세포들도 사용될 수 있다. 곤충, 포유류를 포함하는 척추동물과 같은 고등 생물로부터 본래 유래된 숙주 세포의 예들(예를 들어, CHO, HEK 등)이 발현 숙주 세포로서 사용될 수 있다.
적합한 포유류 셀라인은, 제한은 아니지만, HeLa 세포(예를 들어, 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션(ATCC) No. CCL-2), CHO 세포(예를 들어, ATCC Nos. CRL9618 및 CRL9096), CHO DG44 세포(Urlaub(1983) Cell 33:405), CHO-K1 세포(ATCC CCL-61), 293 세포(예를 들어, ATCC No. CRL-1573), Vero 세포, NIH 3T3 세포(예를 들어, ATCC No. CRL-1658), Huh-7 세포, BHK 세포(예를 들어, ATCC No. CCL10), PC12 세포(ATCC No. CRL1721), COS 세포, COS-7 세포(ATCC No. CRL1651), RAT1 세포, 마우스 L 세포(ATCC No. CCLI.3), 사람배아신장(HEK) 세포(ATCC No. CRL1573), HLHepG2 세포 등을 포함한다.
관심의 특정한 발현 시스템은 박테리아, 효모, 곤충 세포 및 포유류 세포 유래 발현 시스템을 포함한다.
발현된 폴리펩티드는 본 분야에 알려진 임의의 적합한 수단에 의해서 회수될 수 있다. 더 나아가, 임의의 편리한 단백질 정제 과정이 이용될 수 있으며, 적합한 단백질 정제 방법은 Guide to Protein Purification(Deuthser ed.)(Academic Press, 1990)에 설명된다. 예를 들어, 원하는 폴리펩티드를 발현하는 발현 벡터를 포함하는 세포로부터 세포용해물이 제조되고, 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC), 배제 크로마토그래피, 겔 전기영동, 친화성 크로마토그래피 등을 사용하여 정제될 수 있다.
폴리펩티드 변형 방법
특정 실시형태에서, 폴리펩티드는 폴리펩티드를 먼저 변형하지 않고 관심의 부분에 콘쥬게이트될 수 있다. 예를 들어, 폴리펩티드는 관심의 부분(예를 들어, 여기 설명된 피라졸리논 또는 피라졸리논 유도체와 같은 커플링 부분을 포함하는 부분)에의 콘쥬게이션에 적합한 하나 이상의 반응성 기를 포함할 수 있다. 다른 실시형태에서, 폴리펩티드는 관심의 부분에 콘쥬게이션 전에 변형될 수 있다. 폴리펩티드의 변형은 관심의 부분에의 콘쥬게이션에 적합한 하나 이상의 반응성 기를 함유하는 변형된 폴리펩티드를 생성할 수 있다.
일부 경우, 폴리펩티드는 관심의 부분(예를 들어, 여기 설명된 피라졸리논 또는 피라졸리논 유도체와 같은 커플링 부분을 포함하는 부분)에의 콘쥬게이션에 적합한 하나 이상의 반응성 기를 제공하기 위해 하나 이상의 아미노산 잔기에서 변형될 수 있다. 예를 들어, 폴리펩티드에 도입된 카보닐은 α-친핵구, 예컨대 아미노옥시- 및 히드라지드-보유 화합물과 선택적으로 반응될 수 있다. 증진된 반응속도학, 부위 선택성 및 콘쥬게이트 안정성을 가진 단백질 상의 카보닐 관능기에 선택적인 화학은 개선된 바이오콘쥬게이트를 가져올 수 있고, 여기 개시된 새로운 생성물 및 치료 표적에 대한 접근을 제공할 수 있다.
특정 실시형태에서, 폴리펩티드는 반응성 알데하이드 기(예를 들어, 반응성 알데하이드)를 포함하도록 변형될 수 있다. 반응성 알데하이드는 "알데하이드 택" 또는 "ald-택"에 포함될 수 있으며, 이것은 2-포밀글리신 잔기(여기서 "fGly"라고 언급된다)를 함유하도록 포밀글리신 생성 효소(FGE)의 작용에 의해서 전환된 설파타아제 모티프로부터 유래된 아미노산 서열을 말하는 것을 의미한다. FGE에 의해서 생성된 fGly 잔기는 또한 문헌에서 "포밀글리실"이라고도 언급된다. 달리 말하면, 용어 "알데하이드 택"은 "전환된" 설파타아제 모티프(즉, 시스테인 또는 세린 잔기가 EGF, 예를 들어 L(fGly)TPSR의 작용에 의해서 fGly로 전환된 설파타아제 모티프)를 포함하는 아미노산 서열을 말하기 위해 사용된다. 전환된 설파타아제 모티프는 "비전환" 설파타아제 모티프(즉, 시스테인 또는 세린 잔기가 FGE에 의해서 fGly로 전환되지 않았지만, 예를 들어 서열 L(C/S)TPSR을 가진 비전환 설파타아제 모티프에 의해서 전환될 수 있는 설파타아제 모티프)를 포함하는 아미노산 서열로부터 유래될 수 있다. 설파타아제 모티프 상에서 포밀글리신 생성 효소(FGE)의 작용과 관련하여 사용된 "전환"은 설파타아제 모티프의 시스테인 또는 세린 잔기의 포밀글리신(fGly) 잔기로의 생화학적 변형을 말한다(예를 들어, Cys를 fGly로, 또는 Ser을 fGly로). 부위-특이적 단백질 변형에서 알데하이드 택 및 그것의 사용에 대한 추가의 양태들은 U.S. 7,985,783 및 2009년 3월 20일자 제출된 미국출원 공개 No. 2011/0117621에 설명되며, 그 각각의 개시가 여기 참고로 포함된다.
fGly를 포함하기 위한 폴리펩티드의 전환은 세포-기반(생체내) 또는 세포-무함유 방법(시험관내)에 의해 달성될 수 있다. 유사하게, 콘쥬게이션에 적합한 폴리펩티드를 생성하기 위한 폴리펩티드의 변형(예를 들어, 콘쥬게이션에 적합한 반응성 기를 함유하는 폴리펩티드를 생성하기 위한 변형)은 세포-기반(생체내) 또는 세포-무함유 방법(시험관내)에 의해 달성될 수 있다.
또는 달리, 분리된, 미변형 폴리펩티드가 적합한 효소를 결여하는 숙주 세포에서 재조합 생성 후에 또는 합성 제조에 의해서 분리될 수 있다. 다음에, 분리된 폴리펩티드는 fGly를 포함하기 위한 폴리펩티드의 바람직한 변형을 제공하기 위한 조건에서 적합한 효소와 접촉될 수 있다. 폴리펩티드는 본 분야에 알려진 방법에 의해서(예를 들어, 열, pH 조정, 카오트로픽제(예를 들어, 유레아 등), 유기 용매(예를 들어, 탄화수소; 옥탄, 벤젠, 클로로포름) 등) 폴딩이 풀릴 수 있으며, 변성된 단백질은 적합한 효소와 접촉된다. 다음에, 변형된 폴리펩티드는 적합한 조건에서 다시 폴딩될 수 있다.
일부 경우, fGly를 함유하는 변형된 폴리펩티드는 fGly와 여기 설명된 화합물(예를 들어, 커플링 부분, 예컨대 여기 설명된 피라잘리논 또는 피라잘리논 유도체를 함유하는 화합물)의 반응에 의해서 관심의 부분에 콘쥬게이트될 수 있다. 예를 들어, fGly-함유 폴리펩티드는 제조원(예를 들어, 재조합 숙주 세포 생성, 합성 제조)으로부터 분리될 수 있고, 약물이나 다른 부분과 폴리펩티드의 콘쥬게이션을 제공하기에 적합한 조건에서 반응성 파트너-함유 약물 또는 다른 부분(예를 들어, 검출가능한 표지)와 접촉될 수 있다. 예를 들어, 반응성 파트너-함유 약물 또는 다른 부분은 반응성 부분(예를 들어, 여기 설명된 피라잘리논 또는 피라잘리논 유도체)를 포함할 수 있다. 피라잘리논-함유 약물 또는 다른 부분은 여기 설명된 폴리펩티드 콘쥬게이트를 생성하기 위해 폴리펩티드와 반응될 수 있다. 예를 들어, 도 1은 본 개시의 실시형태에 따른 폴리펩티드 콘쥬게이트의 도식적 도면을 도시한다. 도 1A는 환형 커플링 부분을 포함하는 폴리펩티드 콘쥬게이트의 제조를 위한 반응도를 도시한다. 도 1A에서, fGly를 포함하는 폴리펩티드가 환형 커플링 부분(예를 들어, 피라잘리논 또는 피라잘리논 유도체)와 반응되어 환형 커플링 부분을 포함하는 폴리펩티드 콘쥬게이트를 생성한다. 도 1B는 환형 커플링 부분을 포함하는 폴리펩티드 콘쥬게이트의 제조를 위한 반응도를 도시한다. 도 1B에서, fGly를 포함하는 폴리펩티드는 환형 커플링 부분과 반응되어 환형 커플링 부분을 포함하는 폴리펩티드 콘쥬게이트를 생성한다.
일부 경우, fGly 잔기를 함유하는 변형된 폴리펩티드는, 제한은 아니지만 다음의 화합물 중 하나와 같은 화합물과 fGly의 반응에 의해서 관심의 부분에 콘쥬게이트될 수 있다:
Figure pct00146
(디메돈)
Figure pct00147
(멜드럼 산)
Figure pct00148
(바르비투르산)
Figure pct00149
(테트론산); 또는
Figure pct00150
(4-하이드록시-6-메틸-2H-피란-2-온)
폴리펩티드 콘쥬게이트
폴리펩티드는 광범위한 여러 가지 부분들의 부착을 제공하기 위해 콘쥬게이션될 수 있다. 관심의 부분의 예들은, 제한은 아니지만, 약물, 검출가능한 표지, 소분자, 수용성 중합체, 펩티드 등을 포함한다(여기서는 "페이로드" 또는 "카고"라고도 한다). 따라서, 본 개시는 상기 설명된 폴리펩티드 콘쥬게이트를 제공한다.
관심의 부분은 폴리펩티드의 잔기와의 반응을 위한 반응성 파트너의 성분으로서 제공된다. 특정 실시형태에서, 폴리펩티드 콘쥬게이션의 방법은 폴리펩티드에 적합한 반응 조건과 양립성이다. 예를 들어, 반응 조건은 물을 포함하는 반응 혼합물을 포함할 수 있다. 일부 경우, 반응 혼합물은, 제한은 아니지만 pH 4 내지 11, 또는 pH 5 내지 10, 또는 pH 6 내지 9, 또는 pH 6 내지 8과 같은 폴리펩티드와 양립가능한 pH를 가질 수 있다. 특정 예에서, 반응 혼합물은 pH 7을 가진다. 일부 실시형태에서, 반응 조건은 폴리펩티드와 양립가능한 온도에서 수행된다. 예를 들어, 반응 조건은 20℃ 내지 45℃, 예컨대 25℃ 내지 40℃, 또는 30℃ 내지 40℃, 또는 35℃ 내지 40℃의 온도에서 수행될 수 있다. 일부 경우, 반응 조건은 실온이다(예를 들어, 25℃). 일부 경우, 반응 조건은 37℃의 온도이다.
본 개시에서 당업자는 여기 고려된 폴리펩티드와의 콘쥬게이션을 위한 반응성 파트너를 제공하기 위해 여러 가지 부분들 중 어느 것을 쉽게 개조할 수 있다. 당업자는 pH 및 입체 장애(즉, 관심의 반응성 파트너와의 반응에 대한 변형된 아미노산 잔기의 접근성)와 같은 요인들이 중요하다는 것을 인정할 것이다. 최적의 콘쥬게이션 조건을 제공하기 위한 반응 조건의 변형은 당업자에게 잘 알려져 있으며 본 분야에서 통상적인 일이다. 콘쥬게이션이 살아있는 세포 내에 또는 세포 상에 존재하는 폴리펩티드로 수행되는 경우, 조건은 생리학적으로 양립가능하도록 선택된다. 예를 들어, pH가 반응이 일어나는 것을 허용하기에 충분하지만 세포에 의해서 관용되는 기간 내의 시간 동안 일시적으로 저하될 수 있다(예를 들어, 약 30분 내지 1시간). 세포 표면 상에서 폴리펩티드의 변형을 수행하기 위한 생리학적 조건은 세포-표면 아지드를 보유하는 세포의 변형에서 케톤-아지드 반응에 사용되는 것들과 유사할 수 있다(예를 들어, U.S. 6,570,040 참조).
특정 실시형태에서, 본 개시는 폴리펩티드가 항체인 폴리펩티드 콘쥬게이트를 제공한다. 이와 같이, 실시형태들은 관심의 부분에 콘쥬게이트된 항체를 포함하며, 여기서 관심의 부분에 콘쥬게이트된 항체는 "항체 콘쥬게이트"라고 언급된다. Ig 폴리펩티드는 일반적으로 적어도 Ig 중쇄 불변 영역과 Ig 경쇄 불변 영역을 포함하며, Ig 가변 영역(예를 들어, VL 영역 및/또는 VH 영역)을 더 포함할 수 있다. Ig 중쇄 불변 영역은 비-자연 발생 Ig 중쇄 불변 영역인 임의의 중쇄 동형의 Ig 불변 영역을 포함한다(컨센서스 Ig 중쇄 불변 영역을 포함한다). Ig 불변 영역은 관심의 부분에 콘쥬게이트되도록 변형될 수 있으며, 여기서 관심의 부분은 Ig 불변 영역의 용매-접근가능한 루프 영역에 또는 인접하여 존재한다.
일부 경우, 본 개시의 항체 콘쥬게이트는 1) 관심의 하나 이상의 부분에 콘쥬게이트된 Ig 중쇄 불변 영역, 및 관심의 하나 이상의 부분에 콘쥬게이트된 Ig 경쇄 불변 영역; 2) 관심의 하나 이상의 부분에 콘쥬게이트된 Ig 중쇄 불변 영역, 및 관심의 부분에 콘쥬게이트되지 않은 Ig 경쇄 불변 영역; 또는 3) 관심의 부분에 콘쥬게이트되지 않은 Ig 중쇄 불변 영역, 및 관심의 하나 이상의 부분에 콘쥬게이트된 Ig 경쇄 불변 영역을 포함할 수 있다. 대상 항체 콘쥬게이트는 또한 가변 VH 및/또는 VL 도메인을 포함할 수 있다. 상기 설명된 대로, 관심의 하나 이상의 부분은 단일 아미노산 잔기에서 Ig 중쇄 불변 영역 또는 Ig 경쇄 불변 영역에 콘쥬게이트되거나(예를 들어, 단일 아미노산 잔기에 콘쥬게이트된 관심의 하나 또는 두 부분), 또는 둘 이상의 상이한 아미노산 잔기에서 Ig 중쇄 불변 영역 및/또는 Ig 경쇄 불변 영역에 콘쥬게이트될 수 있다.
본 개시의 항체 콘쥬게이트는 콘쥬게이트된 부분으로서 여기 설명된 여러 가지 화합물, 예를 들어 약물(예를 들어, 펩티드 약물, 소분자 약물 등), 수용성 중합체, 검출가능한 표지, 합성 펩티드 등 중 어느 것을 포함할 수 있다.
항체 콘쥬게이트는, 예를 들어 암세포 상에 존재하는 항원; 자가면역세포 상에 존재하는 항원; 병원성 미생물 상에 존재하는 항원; 바이러스-감염된 세포(예를 들어, 사람 면역결핍 바이러스-감염된 세포 상에 존재하는 항원, 예를 들어 CD4 또는 gp120; 병든 세포 상에 존재하는 항원 등을 포함하여 상기 설명된 것과 같은 여러 가지 항원-결합 특이성들 중 어느 것을 가질 수 있다. 예를 들어, 항체 콘쥬게이트는 상기 주지된 대로 항원과 결합할 수 있으며, 여기서 항원은 세포의 표면에 존재한다. 본 개시의 항체 콘쥬게이트는 적합한 결합 친화성, 예를 들어 5 x 10-6M 내지 10-7M, 10-7M 내지 5 x 10-7M, 5 x 10-7M 내지 10-8M, 10-8M 내지 5 x 10-8M, 5 x 10-8M 내지 10-9M, 또는 10-9M을 초과하는 결합 친화성으로 항원과 결합할 수 있다.
비제한적 예로서, 대상 항체 콘쥬게이트는 암세포 상에 존재하는 항원(예를 들어, 종양-특이적 항원; 암세포 상에서 과발현되는 항원 등)과 결합할 수 있으며, 콘쥬게이트된 부분은 세포독성 화합물(예를 들어, 세포독성 소분자, 세포독성 합성 펩티드 등)일 수 있다. 예를 들어, 대상 항체 콘쥬게이트는 암세포 상의 항원에 특이적일 수 있으며, 여기서 콘쥬게이트된 부분은 세포독성 화합물(예를 들어, 세포독성 소분자, 세포독성 합성 펩티드 등)이다.
추가의 비제한적 예로서, 대상 항체 콘쥬게이트는 바이러스로 감염된 세포 상에 존재하는 항원(예를 들어, 항원이 바이러스에 의해 암호화된 경우, 항원이 바이러스에 의해 감염된 세포 타입에서 발현되는 경우 등)과 결합할 수 있으며, 콘쥬게이트된 부분은 바이러스 융합 억제제일 수 있다. 예를 들어, 대상 항체 콘쥬게이트는 바이러스로 감염된 세포 상에 존재하는 항원과 결합할 수 있으며, 콘쥬게이트된 부분은 바이러스 융합 억제제일 수 있다.
또한, 본 개시의 실시형태들은 폴리펩티드가 캐리어 단백질인 폴리펩티드 콘쥬게이트를 포함한다. 예를 들어, 캐리어 단백질은 약물-함유 스캐폴드를 제공하기 위해 약물과 공유적으로 그리고 부위-특이적으로 결합될 수 있다. 캐리어 단백질은 약물(예를 들어, 펩티드, 소분자 약물 등), 검출가능한 표지 등과 같은 관심의 공유 결합된 분자에 부위-특이적으로 콘쥬게이트될 수 있다. 특정 실시형태에서, 약물-스캐폴드 콘쥬게이트는 약물의 증진된 혈청 반감기를 제공할 수 있다.
일반적으로, "캐리어 단백질"은 생물학적으로 비활성이고 여기 개시된 변형에 민감한 단백질로서, 생리학적 환경에서 캐리어 단백질의 변형된 아미노산 잔기를 통해서(예를 들어, 알데하이드 택부착 캐리어 단백질의 전환된 설파타아제 모티프 내의 옥심 또는 히드라존 결합을 통해서) 캐리어 단백질에 콘쥬게이트된 관심의 부분의 용매-접근가능한 부분을 제공할 수 있다. "생물학적으로 비활성"은 사람 대상에 투여되었을 때 등 적절한 대상에 투여되었을 때 캐리어 단백질이 임상적으로 무의미한 활성을 나타내거나 검출가능한 생물학적 활성을 나타내지 않는다는 것을 의미한다. 따라서, 캐리어 단백질은, 이들이 예를 들어 낮은 면역원성을 갖고, 유의한 또는 검출가능한 표적화 특성을 나타내지 않고(예를 들어, 특정 수용체와의 결합에서 유의하거나 검출가능한 활성을 나타내지 않는다), 알데하이드-택부착 캐리어 단백질과 콘쥬게이트된 부분(예를 들어, 약물 또는 검출가능한 표지)의 활성을 방해할 수 있는 검출가능한 생물학적 활성을 거의 또는 전혀 나타내지 않는다는 점에서 생물학적으로 비활성이다. "낮은 면역원성"은 캐리어 단백질이 대상, 예컨대 포유류 대상, 예를 들어 사람 대상에 투여시 검출가능한 면역 반응을 거의 또는 전혀 도출하지 않는다는 것을 의미한다. 캐리어 단백질은 단량체 또는 다량체(예를 들어, 이량체) 형태로 제공될 수 있다.
변형(및 따라서 관심의 부분에 콘쥬게이션)되기 쉬운 다수의 상이한 용매-접근가능한 부위를 제공하는 폴링되었을 때 3-차원 구조를 갖는 캐리어 단백질이 관심의 대상이다. 일반적으로, 관심의 캐리어 단백질은 콘쥬게이트된 부분이나 관심의 부분의 활성 및 생체이용률을 제공하도록 충분히 공간적으로 분리되는 방식으로 용매 접근가능한 표면 상에서 관심의 콘쥬게이트된 부분을 제공할 수 있는 크기 및 3-차원 폴딩 구조를 갖는 것들이다. 캐리어 단백질은, 제한은 아니지만 캐리어 단백질에 콘쥬게이션되는 부분(예를 들어, 약물 또는 검출가능한 표지)을 포함하여 여러 가지 요인들에 따라서 선택될 수 있다.
따라서, 광범위한 여러 폴리펩티드들 중 어느 것이 본 개시의 캐리어 단백질 콘쥬게이트에 사용하기 위한 캐리어 단백질로서 사용하기에 적합할 수 있다. 이러한 캐리어 단백질은 자연 발생 아미노산 서열, 자연 발생 폴리펩티드의 단편, 및 비-자연 발생 폴리펩티드 및 그것의 단편을 갖는 것들을 포함할 수 있다.
캐리어 단백질의 예들은, 제한은 아니지만, 알부민 및 그것의 단편(예를 들어, 사람 혈청 알부민, 소 혈청 알부민 등), 트랜스페린 및 그것의 단편(예를 들어, 사람 트랜스페린), 및 포유류 Fc 수용체, 특히 사람 Fc 수용체와의 결합이 감소된 Fc 단편(예를 들어, 항체(예를 들어, IgG), 예컨대 포유류 항체, 예를 들어 사람 항체의 변형된 Fc 단편)을 포함한다. 감소된 Fc 수용체 결합을 가진 변형된 Fc 단편의 예들은 Herceptin(트라스투주맙) 및 Rituxan(리툭시맙)의 Fc 단편에 의해 예시되며, 이들은 감소된 Fc 수용체 결합을 제공하는 점 돌연변이를 함유한다(예를 들어, Clynes et al., Nature Medicine (2000), 6, 443-446 참조). 또는 달리, 또는 이에 더하여, Fc 단편의 동형이 Fc 수용체 결합의 원하는 수준에 따라서 선택될 수 있다(예를 들어, IgG1 또는 IgG3보다는 IgG4 동형 사람 중쇄 불변 영역의 Fc 단편의 사용)(예를 들어, Fridman FASEB J 1991 Sep; 5(12): 2684-90 참조). 일반적으로, 캐리어 단백질은 적어도 약 4 kDa(예를 들어, 약 50 아미노산 잔기 길이), 일반적으로 적어도 약 25 kDa일 수 있으며, 더 큰 크기일 수 있다(예를 들어, 트랜스페린은 90 kDa의 분자량을 갖지만 Fc 단편은 30 kDa 내지 50 kDa의 분자량을 가질 수 있다).
여기 설명된 콘쥬게이트는, 제한은 아니지만, 형광 또는 에피토프 표지화를 사용한 시각화(예를 들어, 여기 설명된 화합물 및 콘쥬게이트와의 콘쥬게이션을 위한 반응성 기를 장착한 금 입자를 사용한 전자현미경); 단백질 고정(예를 들어, 단백질 마이크로어레이 생성); 단백질 역학 및 편재화 연구와 적용; 및 관심의 부분(예를 들어, 모 단백질의 반감기를 개선하는 부분(예를 들어, 폴리(에틸렌글리콜)), 표적화 부분(예를 들어, 작용 부위로의 송달을 증진시키기 위한), 및 생물학적 활성 부분(예를 들어, 치료 부분))과 단백질의 콘쥬게이션을 포함하여 여러 용도에 사용될 수 있다.
폴리펩티드 콘쥬게이트는 광범위한 여러 가지 기능이나 특징들 중 하나 이상을 제공하는 어떤 부분 또는 부분들에 콘쥬게이트된 폴리펩티드를 포함할 수 있다. 일반적으로, 부분의 예들은, 제한은 아니지만 검출가능한 표지(예를 들어, 형광 표지); 광-활성화된 동적 부분(예를 들어, 아조벤젠 매개 기공 폐쇄, 아조벤젠 매개 구조 변화, 광분해 인식 모티프); 수용성 중합체(예를 들어, PEG화); 정제 택(예를 들어, 친화성 크로마토그래피에 의한 분리를 촉진하기 위한(예를 들어, FLAG 에피토프의 부착); 막 편재화 도메인(예를 들어, 지질 또는 글리코포스파티딜이노시톨(GPI)-타입 앵커); 고정 택(예를 들어, 선택적 부착을 포함하여 표면에 폴리펩티드의 부착을 촉진하기 위한); 약물(예를 들어, 약물 표적화, 예를 들어 항체에 약물의 부착을 통한 약물 표적화를 촉진하기 위한); 표적화된 송달 부분(예를 들어, 표적 수용체와의 결합을 위한 리간드(예를 들어, 바이러스 부착, 리포솜 상에 존재하는 표적화 단백질의 부착 등을 촉진하기 위한) 등을 포함한다. 구체적인 비제한적 예들이 아래 제공된다.
폴리펩티드와의 콘쥬게이션을 위한 약물
다수의 약물 중 어느 것이 폴리펩티드와의 콘쥬게이트를 위한 반응성 파트너로서 사용하기에 적합하거나, 또는 사용에 적합하게 되도록 변형될 수 있다. 약물의 예들은 소분자 약물 및 펩티드 약물을 포함한다. 따라서, 본 개시는 약물-폴리펩티드 콘쥬게이트를 제공한다.
여기 사용된 "소분자 약물"은 관심의 제약학적 활성을 나타내며 일반적으로 800 Da 이하, 또는 2000 Da 이하의 분자량을 가진 화합물, 예를 들어 유기 화합물을 말하지만, 최대 5 kDa의 분자를 포함할 수 있으며 10 kDa만큼 클 수 있다. 소 무기 분자는 탄소 원자를 함유하지 않는 분자를 말하고, 소 유기 분자는 적어도 하나의 탄소 원자를 함유하는 화합물을 말한다.
여기 사용된 "펩티드 약물"은 중합성 화합물을 함유하는 아미노산을 말하며, 자연 발생 및 비-자연 발생 펩티드, 올리고펩티드, 환형 펩티드, 폴리펩티드 및 단백질, 뿐만 아니라 펩티드 의태체를 포함하여 의미한다. 펩티드 약물은 화학 합성에 의해서 얻어질 수 있거나, 또는 유전적으로 암호화된 공급원(예를 들어, 재조합 공급원)으로부터 생성될 수 있다. 펩티드 약물은 분자량 내의 범위일 수 있으며, 분자량은 200 Da 내지 10 kDa 또는 그 이상일 수 있다.
일부 경우, 약물은 암 화학치료제이다. 예를 들어, 폴리펩티드가 종양 세포에 대해 특이성을 가진 항체(또는 그것의 단편)인 경우, 이 항체는 변형된 아미노산을 포함하도록 여기 설명된 대로 변형될 수 있으며, 이것이 계속해서 암 화학치료제에 콘쥬게이트될 수 있다. 암 화학치료제는 암세포의 증식을 감소시키는 비-펩티드성(즉, 비-단백질성) 화합물을 포함하며, 세포독성제와 세포증식억제제를 포함한다. 화학치료제의 비제한적 예들은 알킬화제, 니트로소유레아, 항대사물질, 항종양 항생물질, 식물(빈카) 알칼로이드, 및 스테로이드 호르몬을 포함한다. 펩티드성 화합물도 또한 사용될 수 있다.
적합한 암 화학치료제는 돌라스타틴 및 그것의 활성 유사체와 유도체; 및 아우리스타틴 및 그것의 활성 유사체와 유도체(예를 들어, 모노메틸 아우리스타틴 D(MMAD), 모노메틸 아우리스타틴 E(MMAE), 모노메틸 아우리스타틴 F(MMAF) 등)을 포함한다. 예를 들어, WO 96/33212, WO 96/14856, 및 U.S. 6,323,315를 참조한다. 예를 들어, 돌라스타틴 10 또는 아우라스타틴 PE가 본 개시의 항체-약물 콘쥬게이트에 포함될 수 있다. 적합한 암 화학치료제는 또한 메이탄시노이드 및 그것의 활성 유사체와 유도체(예를 들어, EP 1391213; 및 Liu et al., (1996) Proc . Natl . Acad. Sci . USA 93:8618-8623 참조); 듀오카미신 및 그것의 활성 유사체와 유도체(예를 들어, 합성 유사체, KW-2189 및 CB 1-TM1을 포함한다); 및 벤조디아제핀 및 그것의 활성 유사체와 유도체(예를 들어, 피롤로벤조디아제핀(PBD))을 포함한다.
세포 증식을 감소시키는 작용을 하는 제제는 본 분야에 알려져 있으며 널리 사용된다. 이러한 제제는 알킬화제, 예컨대 질소 머스타드, 니트로소유레아, 에틸렌이민 유도체, 알킬 설포네이트, 및 트리아젠을 포함하며, 제한은 아니지만 메클로레타민, 시클로포스파미드(Cyt옥사n™), 멜팔란(L-사르콜리신), 카뮤스틴(BCNU), 로뮤스틴(CCNU), 세뮤스틴(메틸-CCNU), 스트렙토조신, 클로로조토신, 우라실 머스타드, 클로르메틴, 이포스파미드, 클로람부실, 피포브로만, 트리에틸렌멜라민, 트리에틸렌티오포스포라민, 부술판, 다카바진, 및 테모졸로미드를 포함한다.
항대사물질 제제는 폴산 유사체, 피리미딘 유사체, 퓨린 유사체, 및 아데노신 디아미나아제 억제제를 포함하며, 제한은 아니지만 시타라빈(CYTOSAR-U), 시토신 아라비노시드, 플루오로우라실(5-FU), 플록수리딘(FudR), 6-티오구아닌, 6-머캡토퓨린(6-MP), 펜토스타틴, 5-플루오로우라실(5-FU), 메토트렉세이트, 10-프로파길-5,8-디데아자폴레이트(PDDF, CB3717), 5,8-디데아제테트라하이드로폴산(DDATHF), 류코보린, 플루다라빈 포스페이트, 펜토스타틴, 및 겜시타빈을 포함한다.
적합한 천연 생성물 및 이들의 유도체(예를 들어, 빈카 알칼로이드, 항종양 항생물질, 효소, 림포카인 및 에피포도필로톡신)는, 제한은 아니지만, Ara-C, 파클리탁셀(Taxol®), 도세탁셀(Taxotere®), 데옥시코포름마이신, 미토마이신-C, L-아스파라기나아제, 아자티오프린; 브레퀴나르; 알칼로이드, 예를 들어 빈크리스틴, 빈블라스틴, 비노렐빈, 빈데신 등; 포도필로톡신, 예를 들어 에토포시드, 테니포시드 등; 항생물질, 예를 들어 안트라시클린, 다우노루비신 염산염(다우노마이신, 루비도마이신, 세루비딘), 이다루비신, 독소루비신, 에피루비신 및 몰폴리노 유도체 등; 페녹시존 비스시클로펩티드, 예를 들어 닥티노마이신; 염기성 글리코펩티드, 예를 들어 블레오마이신; 안트라퀴논 글리코시드, 예를 들어 플리카마이신(미트라마이신); 안트라세네디온, 예를 들어 미톡산트론; 아지리노필롤로 인돌디온, 예를 들어 미토마이신; 거대환형 면역억제제, 예를 들어 시클로스포린, FK-506(타크롤리무스, 프로그라프), 라파마이신 등등을 포함한다.
다른 항증식 세포독성제는 나벨빈, CPT-11, 아나스트라졸, 레트라졸, 카페시타빈, 렐록사핀, 시클로포스파미드, 이포스파미드, 및 드롤록사핀이다.
항증식 활성을 가진 미세관 침범제가 또한 사용에 적합하며, 제한은 아니지만 알로콜치신(NSC 406042), Halichondrin B (NSC 609395), 콜치신 (NSC 757), 콜치신 유도체 (예를 들어, NSC 33410), 돌스타틴 10 (NSC 376128), 메이탄신 (NSC 153858), 리족신 (NSC 332598), 파클리탁셀(Taxol®), Taxol® 유도체, 도세탁셀 (Taxotere®), 티오콜치신 (NSC 361792), 트리틸 시스테린, 빈블라스틴 설페이트, 빈크리스틴 설페이트, 에포틸론 A, 에포틸론 B, 디스코데몰리드를 포함하는 천연 및 합성 에포틸론; 에스트라뮤스틴, 노코다졸 등을 포함한다.
사용하기에 적합한 호르몬 조정제 및 스테로이드(합성 유사체를 포함하여)는, 제한은 아니지만 아드레노코르티코스테로이드, 예를 들어 프레드니손, 덱사메타손 등; 에스트로겐 및 프레게스틴, 예를 들어 하이드록시프로게스테론 카프로에이트, 메드록시 프로게스테론 아세테이트, 메게스트롤 아세테이트, 에스트라디올, 클로미펜, 타목시펜 등; 및 부신피질 억제제, 예를 들어 아미노글루테티미드; 17-에티닐에스트라디올; 디에틸스틸베스트롤, 테스토스테론, 플루옥심에스테론, 드로모스타놀론 프로피오네이트, 테스톨락톤, 메틸프레드니솔론, 메틸-테스토스테론, 프레드니솔론, 트리암시놀론, 클로로트리아니센, 하이드록시프로게스테론, 아미노글루테티미드, 에스트라뮤스틴, 메드록시프로게스테론 아세테이트, 류프롤리드, 플루타미드(Drogenil), 토레미펜(Fareston), 및 Zoladex®를 포함한다. 에스트로겐은 증식과 분화를 자극하며, 따라서 에스트로겐 수용체와 결합하는 화합물이 이 활성을 차단하기 위해 사용된다. 코르티코스테로이드가 T 세포 증식을 억제할 수 있다.
다른 적합한 화학치료제는 금속 복합체, 예를 들어 시스플라틴(cis-DDP), 카보플라틴 등; 유레아, 예를 들어 하이드록시유레아; 및 히드라진, 예를 들어 N-메틸히드라진; 에피도필로톡신; 토포이소머라아제 억제제; 프로카바진; 미톡산트론; 류코보린; 테가푸르 등을 포함한다. 관심의 다른 항증식제는 면역억제제, 예를 들어 미코페놀산, 탈리도미드, 데속시스페르구알린, 아자스포린, 레플루노미드, 미조리빈, 아자스피란(SKF 105685); Iressa® (ZD 1839, 4-(3-클로로-4-플루오로페닐아미노)-7-메톡시-6-(3-(4-몰폴리닐)프로폭시)퀴나졸린) 등을 포함한다.
탁산이 사용에 적합하다. "탁산"은 파클리탁셀, 및 어떤 활성 탁산 유도체 또는 프로드러그를 포함한다. "파클리탁셀"(이것은 유사체, 제제, 및 유도체, 예컨대 예를 들어 도세탁셀, TAXOL™, TAXOTERE™(도세탁셀의 제제), 파클리탁셀의 10-데스아세틸 유사체 및 파클리탁셀의 3'N-데스벤조일-3'N-부톡시카보닐 유사체를 포함하는 것으로서 이해되어야 한다)은 당업자에게 알려진 기술을 이용하여 쉽게 제조될 수 있거나(WO 94/07882, WO 94/07881, WO 94/07880, WO 94/07876, WO 93/23555, WO 93/10076; 미국특허 Nos. 5,294,637; 5,283,253; 5,279,949; 5,274,137; 5,202,448; 5,200,534; 5,229,529; 및 EP 590,267 참조), 또는 예를 들어 Sigma Chemical Co., St. Louis, Mo. (T7402 - Taxus brevifolia; 또는 T-1912 - Taxus yannanensis).를 포함하는 여러 상업적 공급자로부터 얻어질 수 있다.
파클리탁셀은 파클리탁셀의 통상의 화학적으로 이용가능한 형태뿐만 아니라 유사체 및 유도체(예를 들어, 상기 주지된 Taxotere™ 도세탁셀) 및 파클리탁셀 콘쥬게이트(예를 들어, 파클리탁셀-PEG, 파클리탁셀-덱스트란, 또는 파클리탁셀-자일로오스)를 말하는 것으로 이해되어야 한다.
또한, 용어 "탁산"에는 친수성 유도체, 및 소수성 유도체를 포함하여 여러 알려진 유도체가 포함된다. 탁산 유도체는, 제한은 아니지만 International Patent Application No. WO 99/18113에 설명된 갈락토오스 및 만노오스 유도체; WO 99/14209에 설명된 피페라지노 및 다른 유도체; WO 99/09021, WO 98/22451, 및 U.S. Patent No. 5,869,680에 설명된 탁산 유도체; WO 98/28288에 설명된 6-티오 유도체; U.S. Patent No. 5,821,263에 설명된 설펜아미드 유도체; 및 U.S. Patent No. 5,415,869에 설명된 탁솔 유도체를 를 포함한다. 이것은, 제한은 아니지만 WO 98/58927; WO 98/13059; 및 U.S. Patent No. 5,824,701에 설명된 것들을 포함하여 파클리탁셀의 프로드러그들을 포함한다.
사용에 적합한 생물학적 반응 변형제는, 제한은 아니지만 (1) 티로신 키나아제(RTK) 활성 억제제; (2) 세린/트레오닌 키나아제 활성 억제제; (3) 종양-관련 항원 길항제, 예컨대 종양 항원과 특이적으로 결합하는 항체; (4) 아폽토시스 수용체 아고니스트; (5) 인터류킨-2; (6) IFN-α; (7) IFN-γ; (8) 콜로니-자극 인자; 및 (9) 혈관형성 억제제를 포함한다.
반응성 파트너를 함유하기 위한 약물의 변형 방법
폴리펩티드에 콘쥬게이트될 약물은 폴리펩티드와의 반응을 위한 반응성 파트너를 포함시키기 위해서 변형될 수 있다. 약물이 펩티드 약물인 경우, 반응성 부분(예를 들어, 아미드옥시 또는 히드라지드)은 N-말단 영역, N-말단, C-말단 영역, C-말단, 또는 펩티드의 내부 위치에 위치될 수 있다. 예를 들어, 방법의 예는 아미노옥시 기를 가진 펩티드 약물을 합성하는 것을 포함한다. 이 예에서, 펩티드는 Boc-보호된 전구체로부터 합성된다. 펩티드의 아미노 기는 카복실산 기 및 옥시-N-Boc 기를 포함하는 화합물과 반응할 수 있다. 예로서, 펩티드의 아미노 기는 3-(2,5-디옥소피롤리딘-1-일옥시)프로파노익산과 반응한다. 카복실산 기와 옥시-N-보호기를 포함하는 화합물에 대한 다른 변형은 알킬렌 링커 내 탄소 및 알킬렌 링커 상의 치환기의 수를 다르게 하는 것을 포함할 수 있다. 펩티드의 아미노 기와 카복실산 기 및 옥시-N-보호기를 포함하는 화합물의 반응은 표준 펩티드 커플링 화학을 통해서 일어난다. 사용될 수 있는 펩티드 커플링 시약의 예들은, 제한은 아니지만 DCC(디시클로헥실카보디이미드), DIC (디이소프로필카보디이미드), 디-p-톨루오일카보디이미드, BDP (1-벤조트리아졸 디에틸포스페이트-1-시클로헥실-3-(2-몰폴리닐에틸)카보디이미드), EDC (1-(3-디메틸아미노프로필-3-에틸-카보디이미드 하이드로클로라이드), 불화시아누르산, 염화시아누르산, TFFH (테트라메틸플루오로포름아미디늄 헥사플루오로포스페이트), DPPA (디페닐포스포라지데이트), BOP (벤조트리아졸-1-일옥시트리스(디메틸아미노)포스포늄 헥사플루오로포스페이트), HBTU (O-벤조트리아졸-1-일-N,N,N',N'-테트라메틸유로늄 헥사플루오로포스페이트), TBTU (O-벤조트리아졸-1-일-N,N,N',N'-테트라메틸유로늄 테트라플루오로보레이트), TSTU (O-(N-석신이미딜)-N,N,N',N'-테트라메틸유로늄 테트라플루오로보레이트), HATU (N-[ (디메틸아미노)-1-H-1,2,3-트리아졸로[4,5,6]-피리딘-1-일메틸렌]- -N-메틸메탄아미늄 헥사플루오로포스페이트 N-옥시드), BOP-Cl (비스 (2-옥소-3-옥사졸리디닐)포스핀 클로라이드), PyBOP ((1-H-1,2,3-벤조트리아졸-1-일옥시)-트리스(피롤리딘o)포스포늄 테트라플루오로포스페이트), BrOP (브로모트리스(디메틸아미노)포스포늄 헥사플루오로포스페이트), DEPBT (3-(디에톡시포스포릴옥시)-1,2,3-벤조트리아진-4 (3H)-온) PyBrOP (브로모트리스(피롤리딘o)포스포늄 헥사플루오로포스페이트)를 포함한다. 비제한적 예로서, HOBt 및 DIC가 펩티드 커플링 시약으로 사용될 수 있다.
아미노-옥시 관능성을 노출시키기 위한 탈보호는 N-보호기를 포함하는 펩티드 상에서 수행된다. N-옥시석신이미드 기의 탈보호는, 예를 들어 환형 아미드 기의 표준 탈보호 조건에 따라서 일어난다. 탈보호 조건은 Greene and Wuts, Protective Groups in Organic Chemistry, 3rd Ed., 1999, John Wiley & Sons, NY 및 Harrison et al.에서 찾을 수 있다. 특정 탈보호 조건은 히드라진 시약, 아미노 시약, 또는 나트륨 보로하이드라이드를 포함한다. Boc 보호기의 탈보호는 TFA를 사용하여 일어날 수 있다. 탈보호에 대한 다른 시약은, 제한은 아니지만 히드라진, 메틸히드라진, 페닐히드라진, 나트륨 보로하이드라이드, 및 메틸아민을 포함한다. 생성물 및 중간체는 종래의 수단, 예컨대 HPLC 정제에 의해서 정제될 수 있다.
당업자는 pH 및 입체 장애(즉, 관심의 반응성 파트너와의 반응에 대한 아미노산 잔기의 접근성)과 같은 요인들이 중요하다는 것을 인정할 것이다. 최적 콘쥬게이션 조건을 제공하기 위해 반응 조건을 변경하는 것은 당업자에게 잘 알려져 있으며 본 분야에서 통상적이다. 콘쥬게이션이 살아 있는 세포 내에 또는 세포 상에 존재하는 폴리펩티드로 수행되는 경우, 조건은 생리학적으로 양립가능하도록 선택된다. 예를 들어, pH가 반응이 일어나기에 충분한 시간이 동안이지만 세포에 의해서 관용되는 기간 내에 일시적으로 하강될 수 있다(예를 들어, 약 30분 내지 1시간). 세포 표면 상에서 폴리펩티드의 변형을 수행하기 위한 생리학적 조건은 세포-표면 아지드를 보유한 세포의 변형에서 케톤-아지드 반응에서 사용된 것들과 유사할 수 있다(예를 들어, U.S. 6,570,040 참조).
여기 개시된 화합물 또는 콘쥬게이트와의 반응성 파트너로서 사용되는 친핵성 기를 함유하는, 또는 함유하도록 변형된 소분자 화합물이 또한 본 개시의 폴리펩티드-약물 콘쥬게이트에서 약물로서 사용하는 것이 고려된다. 관심의 화합물을 합성하는데 유용한 화학 합성도 및 조건에 대한 일반적인 방법이 본 분야에 알려져 있다(예를 들어, Smith and March, March's Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms, and Structure, Fifth Edition, Wiley-Interscience, 2001; 또는 Vogel, A Textbook of Practical Organic Chemistry, Including Qualitative Organic Analysis, Fourth Edition, New York: Longman, 1978 참조).
펩티드 약물
일부 경우, 콘쥬게이트는 공유 결합된 펩티드를 포함한다. 적합한 펩티드는, 제한은 아니지만 세포독성 펩티드; 혈관형성 펩티드; 항-혈관형성 펩티드; B 세포 활성화 펩티드; T 세포 활성화 펩티드; 항-바이러스 펩티드; 바이러스 융합 억제 펩티드; 하나 이상의 림프구 집단의 생성을 증가시키는 펩티드; 항-미생물 펩티드; 성장인자; 성장 호르몬-방출 인자; 혈관활성 펩티드; 항-염증 펩티드; 글루코오스 대사 조절 펩티드; 항-혈전형성 펩티드; 항-인지 펩티드; 혈관확장 펩티드; 혈소판 응집 억제제; 진통제 등을 포함한다.
일부 실시형태에서, 펩티드는 폴리펩티드의 아미노산 잔기 또는 변형된 아미노산 잔기와 반응성인 기를 포함하도록 화학적으로 합성될 수 있다. 적합한 합성 펩티드는 5 아미노산 내지 100 아미노산, 또는 100 아미노산 초과의 길이를 가지며, 예를 들어, 적합한 펩티드는 5 아미노산(aa) 내지 10 aa, 10 aa 내지 15 aa, 15 aa 내지 20 aa, 20 aa 내지 25 aa, 25 aa 내지 30 aa, 30 aa 내지 40 aa, 40 aa 내지 50 aa, 50 aa 내지 60 aa, 60 aa 내지 70 aa, 70 aa 내지 80 aa, 80 aa 내지 90 aa, 또는 90 aa 내지 100 aa의 길이를 가진다.
특정 실시형태에서, 펩티드는 친핵체-함유 부분(예를 들어, 아미노옥시 또는 히드라지드 부분)을 함유하도록 변형될 수 있으며, 예를 들어 폴리펩티드 및 펩티드가 각각 히드라존 또는 옥심 결합에 의해서 연결된 콘쥬게이트를 수득하기 위해 fGly-함유 폴리펩티드와 반응될 수 있다. 폴리펩티드의 아미노산 잔기 또는 변형된 아미노산 잔기와 반응성인 반응성 기를 포함하는 합성 펩티드와 같은 펩티드 합성 방법의 예들이 상기 설명된다.
적합한 펩티드는, 제한은 아니지만 hLF-11 (락토페린의 11-아미노산 N-말단 단편), 항-미생물 펩티드; 그라눌리신, 항-미생물 펩티드; 플렉타신(NZ2114; SAR 215500), 항-미생물 펩티드; 바이러스 융합 억제제, 예컨대 Fuzeon(엔푸비르티드), TRI-1249(T-1249; 예를 들어, Matos et al. (2010) PLoS One 5:e9830 참조), TRI-2635 (T-2635; 예를 들어, Eggink et al. (2009) J. Biol . Chem . 284:26941 참조), T651, 및 TRI-1144; C5a 수용체 억제제, 예컨대 PMX-53, JPE-1375, 및 JSM-7717; POT-4, 사람 보체 인자 C3 억제제; Pancreate(INGAP 유도체 서열, HIP-사람 프로이슬릿 단백질); 소마토스타틴; 소마토스타틴 유사체, 예컨대 DEBIO 8609 (Sanvar), 옥트레오티드, 옥트레오티드(C2L), 옥트레오티드 QLT, 옥트레오티드 LAR, 산도스타틴 LAR, SomaLAR, Somatuline(란레오티드), 예를 들어, Deghenghi et al. (2001) Endocrine 14:29 참조; TH9507(Tesamorelin, 성장 호르몬-방출 인자); POL7080 (프로테그린 유사체, 항-미생물 펩티드); 렐락신; 코르티코트로핀 방출 인자 아고니스트, 예컨대 유로텐신, 사우바긴 등; 열 충격 단백질 유도체, 예컨대 DiaPep277; 사람 면역결핍 바이러스 진입 억제제; 열 충격 단백질-20 의태체, 예컨대 AZX100; 트롬빈 수용체 활성화 펩티드, 예컨대 TP508 (Chrysalin); 유로코르틴 2 의태체 (예를 들어, CRF2 아고니스트), 예컨대 유로코트린-2; 면역 액티베이터, 예컨대 Zadaxin(티말파신; 티모신-1), 예를 들어, Sjogren (2004) J. Gastroenterol . Hepatol. 19:S69 참조; C형 간염 바이러스(HCV) 진입 억제제 E2 펩티드, 예컨대 HCV3; 심방성 나트륨이뇨 펩티드, 예컨대 HANP (Sun 4936; 카르페리티드); 아넥신 펩티드; 디펜신(항-미생물 펩티드), 예컨대 hBD2-4; 디펜신 (항-미생물 펩티드), 예컨대 hBD-3; 디펜신 (항-미생물 펩티드), 예컨대 PMX-30063; 히스타틴 (항-미생물 펩티드), 예컨대 히스타틴-3, 히스타틴-5, 히스타틴-6, 및 히스타틴-9; 히스타틴 (항-미생물 펩티드), 예컨대 PAC-113; 인돌리시딘 (항-미생물 펩티드), 예컨대 MX-594AN (Omniganin; CLS001); 인돌리시딘 (항-미생물 펩티드), 예컨대 Omnigard (MBI-226; CPI-226); 항-미생물 펩티드, 예컨대 곤충 세크로핀; 항-미생물 펩티드, 예컨대 락토페린(탈락토페린); LL-37/카텔리시딘 유도체(항-미생물 펩티드), 예컨대 P60.4 (OP-145); 마가이닌(항-미생물 펩티드), 예컨대 Pexiganan (MSI-78; Suponex); 프로테그린(항-미생물 펩티드), 예컨대 IB-367 (Iseganan); 아간 펩티드; 베타 나트륨이뇨 펩티드, 예컨대 Natrecor, 또는 Noratak (Nesiritide), 또는 울라리티드; 비발라루딘(Angiomax), 트롬빈 억제제; C 펩티드 유도체; 칼시토닌, 예컨대 Miacalcin (Fortical); 엔케팔린 유도체; 에리트로포이에시스-자극 펩티드, 예컨대 Hematide; 겝 정션 조정제, 예컨대 Danegaptide (ZP1609); 가스트린-방출 펩티드; 그렐린; 글루카곤-유사 펩티드; 글루카곤-유사 펩티드-2 유사체, 예컨대 ZP1846 또는 ZP1848; 글루코사미닐 뮤라밀 디펩티드, 예컨대 GMDP; 글리코펩티드 항생물질, 예컨대 Oritavancin; 테이코플라닌 유도체, 예컨대 Dalbavancin; 고나도트로핀 방출 호르몬(GnRH), 예컨대 Zoladex (Lupon) 또는 Triptorelin; 히스톤 디아세틸라아제(HDAC) 억제제 뎁시펩티드, 예컨대 PM02734 (Irvalec); 인테그린, 예컨대 엡티피바티드; 인슐린 유사체, 예컨대 Humulog; 카할랄리드 뎁시펩티드, 예컨대 PM02734; 칼리크레인 억제제, 예컨대 Kalbitor(에칼란티드); 항생물질, 예컨대 Telavancin; 리포펩티드, 예컨대 Cubicin 또는 MX-2401; 황체형성 호르몬 방출 호르몬(LHRH), 예컨대 고세렐린; LHRH 합성 데카펩티드 아고니스트 유사체, 예컨대 Treistar (트립토렐린 파모에이트); LHRH, 예컨대 Eligard; M2 단백질 채널 펩티드 억제제; 메트렐렙틴; 멜라노코르틴 수용체 아고니스트 펩티드, 예컨대 브레말라노티드/PT-141; 말라노코르틴; 뮤라밀 트리펩티드, 예컨대 Mepact (미파뮤르티드); 미엘린 염기성 단백질 펩티드, 예컨대 MBP 8298(디루코티드); N-타입 전압-게이트 칼슘 채널 차단제, 예컨대 Ziconotide(Prialt); 파라티로이드 호르몬 펩티드; 파라티로이드 유사체, 예컨대 768974; 펩티드 호르몬 유사체, 예컨대 UGP281; 프로스타글란딘 F2-α 수용체 억제제, 예컨대 PDC31; 프로테아제 억제제, 예컨대 PPL-100; 설팍신; 트롬보스폰딘-1(TSP-1) 의태체, 예컨대 CVX-045 또는 ABT 510; 혈관활성 장 펩티드; 바소프레신; Y2R 아고니스트 펩티드, 예컨대 RG7089; 오빈네펩티드; 및 TM30339를 포함한다.
검출가능한 표지
본 개시의 콘쥬게이트, 화합물 및 방법은 폴리펩티드에 검출가능한 표지를 콘쥬게이트하기 위해 사용될 수 있다. 검출가능한 표지의 예들은, 제한은 아니지만 형광 분자(예를 들어, 자가형광 분자, 시약과 접촉시 형광을 발하는 분자 등), 방사선활성 표지(예를 들어, 111In, 125I, 131I, 212B, 90Y, 186Rh 등), 바이오틴(예를 들어, 바이오틴과 아비딘의 반응을 통해서 검출되는), 형광 택, 영상화 시약 등을 포함한다. 검출가능한 표지는 또한 항체 결합에 의해서, 예를 들어 검출가능하게 표지된 항체의 결합이나 샌드위치 타입 분석을 통한 결합된 항체의 검출에 의해서 검출될 수 있는 펩티드 또는 폴리펩티드를 포함한다. 검출가능한 표지의 추가의 예들은, 제한은 아니지만 염료 표지(예를 들어, 발색단, 형광단, 예컨대 제한은 아니지만 Alexa Fluor® 형광 염료(예를 들어, Alexa Fluor® 350, 405, 430, 488, 532, 546, 555, 568, 594, 595, 610, 633, 635, 647, 660, 680, 700, 750, 790, 등), 쿠마린, 로다민(5-카복시로다민 및 그것의 설포 유도체, 예를 들어, 5-카복시-디설포-로다민, 카보피라닌 및 옥사진, 예컨대 ATTO 염료(예를 들어, ATTO 390, 425, 465, 488, 495, 520, 532, 550, 565, 590, 594, 610, 611X, 620, 633, 635, 637, 647, 647N, 655, 665, 680, 700, 725 또는 740), 생물물리학적 프로브(스핀 표지, 핵자기공명(NMR) 프로브), Frster 공명 에너지 전달(FRET)-타입 표지(예를 들어, 플루오로포어/퀀처 쌍의 적어도 한 멤버를 포함하는 FRET 쌍의 적어도 한 멤버), 생물발광 공명 에너지 전달(BRET)-타입 표지(예를 들어, BRET 쌍의 적어도 한 멤버), 면역검출 택(예를 들어, FLAG, His (6) 등), 편재화 택(예를 들어, 조직 또는 분자 세포 수준에서 택부착 폴리펩티드의 회합을 확인하기 위한(예를 들어, 조직 타입, 또는 특정 세포막과의 회합) 등을 포함한다.
표적 부위에 송달을 위한 부분의 부착
본 개시의 실시형태는 또한 하나 이상의 부분, 예컨대 제한은 아니지만 약물(예를 들어, 소분자 약물), 독소, 또는 표적 부위(예를 들어, 세포)에 송달을 위한 다른 분자에 콘쥬게이트된 폴리펩티드를 포함하며, 이들은 제약학적 활성을 제공할 수 있고, 다른 분자의 송달을 위한 표적으로 사용될 수 있다.
또한, 결합 파트너의 쌍 중 하나를 포함하는 콘쥬게이트가 고려된다(예를 들어, 리간드, 수용체의 리간드-결합 부분, 리간드의 수용체-결합 부분 등). 예를 들어, 콘쥬게이트는 바이러스 수용체로서 사용되는 폴리펩티드를 포함할 수 있는데, 이것은 바이러스 외피 단백질 또는 바이러스 캡시드 단백질과 결합시 변형된 폴리펩티드가 발현되는 세포 표면에 바이러스의 부착을 촉진한다. 또는 달리, 콘쥬게이트는 변형된 폴리펩티드를 발현하는 숙주 세포의 검출 및/또는 분리를 촉진하기 위하여, 항체(예를 들어, 단클론 항체)에 의해서 특이적으로 결합되는 항원을 포함할 수 있다.
지지체에 표적 분자의 부착
본 방법은 고체 기질에 폴리펩티드의 부착을 촉진하기 위한 부분(예를 들어, 분석을 촉진하기 위한), 또는 용이한 분리를 촉진하기 위한 부분(예를 들어, 자기 비드에 결합된 항체에 의해서 인식되는 합텐)과 폴리펩티드의 콘쥬게이션을 제공할 수 있다. 일부 실시형태에서, 방법은 한정된 배향으로 어레이(예를 들어, 칩)에 단백질의 부착을 제공하기 위해 사용된다. 예를 들어, 선택된 부위(예를 들어, N-말단 또는 그 근처)에서 변형된 폴리펩티드가 생성될 수 있고, 방법, 콘쥬게이트 및 화합물이 변형된 폴리펩티드에 어떤 부분을 송달하기 위해 사용된다. 다음에, 해당 부분은 지지체에 폴리펩티드를 고정하기 위한 부착 부위로서 사용될 수 있다(예를 들어, 고체 또는 반고체 지지체, 예컨대 고-처리량 분석에서 마이크로칩으로 사용하기에 적합한 지지체).
수용성 중합체
일부 경우, 콘쥬게이트는 공유 결합된 수용성 중합체를 포함한다. 특히 관심있는 부분은 수용성 중합체이다. "수용성 중합체"는 물에 가용성이며 일반적으로 실질적으로 비-면역원성이고 일반적으로 1,000 달톤을 초과하는 원자 분자량을 갖는 중합체를 말한다. 여기 설명된 방법, 콘쥬게이트 및 화합물은 하나 이상의 수용성 중합체를 폴리펩티드에 부착시키는데 사용될 수 있다. 폴리펩티드, 예컨대 제약학적 활성(예를 들어, 치료) 폴리펩티드에 수용성 중합체(예를 들어, PEG)의 부착은 이러한 변형이 증가된 단백질가수분해 안정성 및/또는 감소된 신장 클리어런스의 결과로서 혈청 반감기를 증가시킴으로써 치료 지수를 증가시킬 수 있기 때문에 바람직할 수 있다. 추가로, 하나 이상의 중합체의 부착(예를 들어, PEG화)은 단백질 약제의 면역원성을 감소시킬 수 있다.
일부 실시형태에서, 수용성 중합체는 5,000 Da 초과, 10,000 Da 초과, 20,000 초과 내지 500,000 Da, 40,000 Da 초과 내지 300,000 Da, 50,000 Da 초과 내지 70,000 Da, 예컨대 60,000 Da 초과의 유효 수력학적 분자량을 가진다. 일부 실시형태에서, 수용성 중합체는 10 kDa 내지 20 kDa, 20 kDa 내지 25 kDa, 25 kDa 내지 30 kDa, 30 kDa 내지 50 kDa, 또는 50 kDa 내지 100 kDa의 유효 수력학적 분자량을 가진다. "유효 수력학적 분자량"은 수계 크기 배제 크로마토그래피(SEC)에 의해서 결정된 중합체 사슬의 유효 수-용매화 크기를 의미한다. 수용성 중합체가 폴리알킬렌 옥시드 반복 단위, 예컨대 에틸렌 옥시드 반복 단위를 가진 중합체 사슬을 함유하는 경우, 각 사슬은 2,000 내지 20,000 Da를 포함하여 200 Da 내지 80,000 Da, 또는 1,500 Da 내지 42,000 Da의 원자 분자량을 가질 수 있다. 구체적으로 언급되지 않는다면 분자량은 원자 분자량을 말한다. 선형, 분지형 및 말단 하전된 수용성 중합체(예를 들어, PEG)가 사용될 수 있다.
폴리펩티드에 부착될 수 있는 부분으로서 유용한 중합체는 광범위한 분자량, 및 중합체 하위단위를 가질 수 있다. 이들 하위단위는 생물학적 중합체, 합성 중합체, 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다. 이러한 수용성 중합체의 예들은 덱스트란 설페이트, P-아미노 가교 덱스트란, 및 카복시메틸 덱스트란를 포함하는 덱스트란 및 덱스트란 유도체, 메틸셀룰로오스 및 카복시메틸 셀룰로오스를 포함하는 셀룰로오스 및 셀룰로오스 유도체, 녹말 및 덱스트린, 및 녹말의 유도체 및 가수분해물, 폴리에틸렌 글리콜, 메톡시폴리에틸렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜 동중중합체, 폴리프로필렌글리콜 동종중합체를 포함하는 폴리알킬렌 글리콜 및 이들의 유도체, 에틸렌 글리콜과 프로필렌 글리콜의 공중합체(여기서 상기 동중중합체와 공중합체는 알킬기로 한쪽 단부에서 치환되거나 치환되지 않는다), 헤파린 및 헤파린의 단편, 폴리비닐 알코올 및 폴리비닐 에틸에테르, 폴리비닐피롤리돈, 아스파르타미드, 및 폴리옥시에틸화 폴리올을 포함하며, 덱스트란 및 덱스트란 유도체, 덱스트린 및 덱스트린 유도체도 있다. 구체적으로 인용된 수용성 중합체의 다양한 유도체들도 고려된다는 것이 인정된다.
상기 설명된 것들과 같은 수용성 중합체는 폴리알킬렌 옥시드계 중합체, 예컨대 폴리에틸렌 글리콜 "PEG"를 포함한다(예를 들어 "Poly (ethylene glycol) Chemistry: Biotechnical and Biomedical Applications", J. M. Harris, Ed., Plenum Press, New York, N.Y. (1992); 및 "Poly (ethylene glycol) Chemistry and Biological Applications", J. M. Harris 및 S. Zalipsky, Eds., ACS (1997); 및 International Patent Applications: WO 90/13540, WO 92/00748, WO 92/16555, WO　94/04193,WO 94/14758, WO 94/17039, WO 94/18247, WO 94/28937, WO 95/11924, WO 96/00080, WO 96/23794, WO 98/07713, WO 98/41562, WO 98/48837, WO 99/30727, WO 99/32134, WO 99/33483, WO 99/53951, WO 01/26692, WO 95/13312, WO 96/21469, WO 97/03106, WO 99/45964, 및 미국특허 Nos. 4,179,337; 5,075,046; 5,089,261; 5,100,992; 5,134,192; 5,166,309; 5,171,264; 5,213,891; 5,219,564; 5,275,838; 5,281,698; 5,298,643; 5,312,808; 5,321,095; 5,324,844; 5,349,001; 5,352,756; 5,405,877; 5,455,027; 5,446,090; 5,470,829; 5,478,805; 5,567,422; 5,605,976; 5,612,460; 5,614,549; 5,618,528; 5,672,662; 5,637,749; 5,643,575; 5,650,388; 5,681,567; 5,686,110; 5,730,990; 5,739,208; 5,756,593; 5,808,096; 5,824,778; 5,824,784; 5,840,900; 5,874,500; 5,880,131; 5,900,461; 5,902,588; 5,919,442; 5,919,455; 5,932,462; 5,965,119; 5,965,566; 5,985,263; 5,990,237; 6,011,042; 6,013,283; 6,077,939; 6,113,906; 6,127,355; 6,177,087; 6,180,095; 6,194,580; 6,214,966를 참조한다).
관심의 중합체의 예들은 폴리알킬렌 옥시드, 폴리아미드 알킬렌 옥시드, 또는 식 -(CH2-CH2-O)-의 에틸렌 옥시드 반복 단위를 포함하는 폴리알킬렌 옥시드 및 폴리아미드 알킬렌 옥시드를 포함하는 이들의 유도체를 함유하는 것들을 포함한다. 관심의 중합체의 추가의 예들은 식 -[C (O)-X-C (O)-NH-Y-NH]n- 또는 -[NH-Y-NH-C (O)-X-C (O)]n-의 1,000 달톤 이상의 분자량을 가진 폴리아미드를 포함하며, 여기서 X 및 Y는 동일하거나 상이할 수 있고, 선형 또는 분지형일 수 있는 2가 라디칼이며, n은 2-100, 예컨대 2 내지 50의 정수이고, 여기서 X 및 Y 중 어느 하나 또는 둘 다는 선형 또는 분지형일 수 있는 생체적합성인 실질적으로 비-항원성 수용성 반복 단위를 포함한다. 수용성 반복 단위의 추가의 예들은 식 - (CH2-CH2-O)- 또는 - (O-CH2-CH2)-의 에틸렌 옥시드를 포함한다. 이러한 수용성 반복 단위의 수는 유의하게 변할 수 있으며, 이러한 단위의 수는 2 내지 500, 2 내지 400, 2 내지 300, 2 내지 200, 2 내지 100, 예를 들어 2 내지 50이다. 실시형태의 예는 X 및 Y 중 하나 또는 둘 다가 - ((CH2) n1- (CH2-CH2-O)n2- (CH2)- 또는 - ((CH2)n1- (O-CH2-CH2)n2- (CH2) n-1-)로부터 선택되는 것이며, 여기서 n1은 1 내지 6, 1 내지 5, 1 내지 4, 또는 1 내지 3이고, n2는 2 내지 50, 2 내지 25, 2 내지 15, 2 내지 10, 2 내지 8, 또는 2 내지 5이다. 실시형태의 추가의 예는 X가 - (CH2-CH2)-이고 Y가 - (CH2- (CH2-CH2-O)3-CH2-CH2-CH2)- 또는 - (CH2-CH2-CH2- (O-CH2-CH2)3-CH2)-인 것이다.
합체는 하나 이상의 스페이서 또는 링커를 포함할 수 있다. 스페이서 또는 링커의 예들은 수용성 중합체에서 이용되는 하나 이상의 반복 단위를 포함하는 선형 또는 분지형 부분, 디아미노 및/또는 2산 단위, 천연 또는 비천연 아미노산 또는 그것의 유도체, 뿐만 아니라 알킬, 아릴, 헤테로알킬, 헤테로아릴, 알콕시 등을 포함ㅎ는 지방족 부분을 포함하며, 이들은 예를 들어 최대 18 탄소 원자 또는 심지어 추가의 중합체 사슬을 함유할 수 있다.
중합체 부분, 또는 중합체 부분의 스페이서 또는 링커 중 하나 이상은 존재할 때 생체안정성 또는 생분해성 중합체 사슬이나 단위를 포함할 수 있다. 예를 들어, 반복 결합을 가진 중합체는 결합 용이성에 따라서 생리학적 조건에서 다양한 안정도를 가진다. 이러한 결합을 가진 중합체는 저 분자량 유사체의 알려진 가수분해 속도에 기초하여 생리학적 조건에서 상대적인 가수분해 속도를 특징으로 할 수 있는데, 예를 들어 덜 안정한 것으로부터 더 안정한 순서로, 예를 들어 폴리우레탄(-NH-C (O)-O-) > 폴리오쏘에스테르(-O-C ((OR) (R'))-O-) > 폴리아미드(-C (O)-NH-)이다. 유사하게, 표적 분자에 수용성 중합체를 부착하는 결합 시스템은 생체안정성 또는 생분해성일 수 있으며, 예를 들어 덜 안정한 것으로부터 더 안정한 순서로, 예를 들어 카보네이트(-O-C (O)-O-) > 에스테르 (-C (O)-O-) > 우레탄(-NH-C (O)-O-) > 오쏘에스테르 (-O-C ((OR) (R'))-O-) > 아미드 (-C (O)-NH-)이다. 일반적으로, 설페이트 기의 용이성에 따라서 설페이트 다당류의 사용은 피하는 것이 바람직하다. 이에 더하여, 폴리카보네이트 및 폴리에스테르를 사용하는 것은 덜 바람직하다. 이들 결합은 예로서 제공되며, 여기 개시된 변형된 알데하이드 택부착 폴리펩티드에서 유용한 수용성 중합체의 중합체 사슬 또는 결합 시스템에서 이용가능한 결합의 종류를 제한하지 않는다.
제제
본 개시의 콘쥬게이트(항체 콘쥬게이트를 포함하는)는 여러 상이한 방식으로 조제될 수 있다. 일반적으로, 콘쥬게이트가 폴리펩티드-약물 콘쥬게이트인 경우, 이 콘쥬게이트는 폴리펩티드에 콘쥬게이트된 약물, 치료될 상태, 및 사용된 투여 경로와 양립가능한 방식으로 조제된다.
콘쥬게이트(예를 들어, 폴리펩티드-약물 콘쥬게이트)는 어떤 적합한 형태로, 예를 들어 제약학적으로 허용되는 염의 형태로 제공될 수 있으며, 어떤 적합한 투여 경로, 예를 들어 경구, 국소 또는 비경구 투여를 위해 조제될 수 있다. 콘쥬게이트가 주사가능한 액체로 제공되는 경우(예컨대 이들이 정맥내로 또는 조직에 직접 투여되는 실시형태에서), 콘쥬게이트는 즉시 사용 제형으로서, 또는 복원가능한 저장-안정성 분말이나 제약학적으로 허용되는 담체와 부형제로 이루어진 액체로서 제공될 수 있다.
콘쥬게이트를 조제하는 방법은 본 분야에서 이용가능한 것들로부터 개조될 수 있다. 예를 들어, 콘쥬게이트는 콘쥬게이트의 치료적 유효량과 제약학적으로 허용되는 담체(예를 들어, 식염수)를 포함하는 제약 조성물로 제공될 수 있다. 제약 조성물은 선택적으로 다른 첨가제(예를 들어, 버퍼, 안정제, 보존제 등)을 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 제제는 포유류에 투여하기에 적합하며, 예컨대 사람에 투여하기에 적합한 것들이다.
치료 방법
본 개시의 폴리펩티드-약물 콘쥬게이트는 모 약물(즉, 폴리펩티드와 콘쥬게이션 전의 약물)의 투여에 의해서 치료되기 쉬운 대상에서 상태 또는 질환의 치료에 용도가 있다. "치료"는 숙주를 침범한 상태와 관련된 증상들의 적어도 완화가 달성되는 것을 의미하며, 여기서 완화는, 예를 들어 치료중인 상태와 관련된 변수, 예를 들어 증상의 크기의 적어도 감소를 말하는 광범위한 의미로 사용된다. 이와 같이, 치료는 또한 병리학적 상태, 또는 적어도 그와 관련된 증상이 완전히 억제되는, 예를 들어 발생이 방지되는, 또는 중단되는, 예를 들어 종결되어, 이로써 숙주가 해당 상태나 또는 적어도 그 상태를 특정하는 증상으로 더는 고통받지 않는 상황을 포함한다. 따라서, 치료는 (i) 예방, 즉 임상적 증상이 발생하지 않는 것을 포함하여 임상적 증상의 발생 위험의 감소, 예를 들어 해로운 상태로의 질환 진행의 예방; (ii) 억제, 즉 임상적 증상의 발생 또는 추가적 발생의 중단, 예를 들어 활성 질환의 경감 또는 완전한 억제; 및/또는 (iii) 완화, 즉 임상적 증상의 퇴행의 야기를 포함한다.
암과 관련하여, 용어 "치료하는"은 고상 종양의 성장 감소, 암세포의 복제 억제, 전체 종양 부담의 감소, 및 암과 관련된 하나 이상의 증상의 완화 중 어느 것 또는 전부를 포함한다.
치료 대상은 치료법이 필요한 사람일 수 있으며, 이 경우 치료될 숙주는 모 약물을 사용한 치료를 잘 수용하는 것이다. 따라서, 여러 대상이 여기 개시된 폴리펩티드-약물 콘쥬게이트를 사용한 치료를 잘 수용할 수 있다. 일반적으로, 이러한 대상은 "포유류"이며, 사람이 관심의 대상이다. 다른 대상은 가정 애완동물(예를 들어, 개 및 고양이), 가축(예를 들어, 소, 돼지, 염소, 말 등), 설치류(예를 들어, 마우스, 기니피그 및 래트, 예를 들어 질환의 동물 모델에서), 뿐만 아니라 비-사람 영장류(예를 들어, 침팬지 및 원숭이)를 포함할 수 있다.
투여되는 폴리펩티드-약물 콘쥬게이트의 양은 모 약물의 용량 지침 및 투약량 섭생에 기초하여 초기에 결정될 수 있다. 일반적으로, 폴리펩티드-약물 콘쥬게이트는 결합된 약물의 증진된 혈청 반감기 및/또는 표적화된 송달을 제공할 수 있으며, 따라서 투약량 섭생에서 감소된 용량 또는 감소된 투여 중 적어도 하나를 제공한다. 따라서, 폴리펩티드-약물 콘쥬게이트는 본 개시의 폴리펩티드-약물 콘쥬게이트에서 콘쥬게이트되기 전에 모 약물에 비해 투약량 섭생에서 감소된 용량 및/또는 감소된 투여를 제공할 수 있다.
또한, 상기 주지된 대로 폴리펩티드-약물 콘쥬게이트가 약물 송달의 제어된 화학량론을 제공할 수 있기 때문에 폴리펩티드-약물 콘쥬게이트의 투약량은 폴리펩티드-약물 콘쥬게이트 기준으로 제공되는 약물 분자의 수에 기초하여 계산될 수 있다.
일부 실시형태에서, 폴리펩티드-약물 콘쥬게이트의 다수의 용량이 투여된다. 폴리펩티드-약물 콘쥬게이트의 투여 빈도는 여러 인자들, 예를 들어 증상의 중증도, 대상의 상태 등 중 어느 것에 따라서 변할 수 있다. 예를 들어, 일부 실시형태에서 폴리펩티드-약물 콘쥬게이트는 매월 1회, 매월 2회, 매월 3회, 격주(qow), 매주 1회(qw), 매주 2회(biw), 매주 3회(tiw), 매주 4회, 매주 5회, 매주 6회, 격일(qod), 매일(qd), 매일 2회(qid), 또는 매일 3회(tid) 투여된다.
암 치료 방법
본 개시는 암을 가진 개체에 암 화학치료제를 송달하기 위한 방법을 제공한다. 이 방법은 암종, 육종, 백혈병 및 림프종을 포함하는 광범위한 여러 가지 암들을 치료하는데 유용하다.
대상 방법을 사용하여 치료될 수 있는 암종들은, 제한은 아니지만 식도 암종, 간세포 암종, 기저세포 암종(피부암의 형태), 편평세포 암종(다양한 조직), 과도기 세포 암종을 포함하는 방광 암종(방광의 악성 신생물), 기관지 암종, 결장 암종, 결직장 암종, 위 암종, 폐의 소세포 암종 및 비-소세포 암종을 포함하는 폐 암종, 부신피질 암종, 갑상선 암종, 췌장 암종, 유방 암종, 난소 암종, 전립선 암종, 선암종, 한선 암종, 피지선 암종, 유두 암종, 유두 선암종, 낭종암, 수질 암종, 신장세포 암종, 인시튜 관 암종 또는 담관 암종, 융모암종, 정상피종, 배아 암종, 윌름씨 종양, 경부 암종, 자궁 암종, 고환 암종, 골원성 암종, 상피 암종, 비인두 암종 등을 포함한다.
대상 방법을 사용하여 치료될 수 있는 육종들은, 제한은 아니지만 섬유육종, 점액육종, 지방육종, 연골육종, 척삭종, 골원성 육종, 골육종, 혈관육종, 내피육종, 림프관육종, 림프관내피육종, 활막종, 중피종, 유잉육종, 평활근육종, 횡문근육종 및 다른 연조직 육종들을 포함한다.
대상 방법을 사용하여 치료될 수 있는 다른 고상 종양들은, 제한은 아니지만 신경교종, 성상세포종, 수모세포종, 두개인두종, 상의세포종, 송과체종, 혈관모세포종, 청신경종양, 핍지교종, 뇌수막종, 흑색종, 신경아세포종, 및 망막아세포종을 포함한다.
대상 방법을 사용하여 치료될 수 있는 백혈병들은, 제한은 아니지만 a) 만성 골수증식성 증후군(다능성 조혈 줄기세포의 신생물성 장애); b) 급성 골수성 백혈병(다능성 조혈 줄기세포 또는 계통 잠재성이 제한적인 조혈 세포의 신생물성 변형); c) B-세포 CLL, T-세포 CLL 전림프구성 백혈병, 및 모양 세포 백혈병을 포함하여 만성 림프구성 백혈병(CLL; 면역학적으로 미성숙한 그리고 기능적으로 불능성인 작은 림프구들의 클론성 증식); 및 d) 급성 림프모구성 백혈병(림프모구의 축적을 특징으로 한다). 대상 방법을 사용하여 치료될 수 있는 림프종들은, 제한은 아니지만 B-세포 림프종(예를 들어, 버킷 림프종); 호지킨 림프종; 비-호지킨 B 세포 림프종 등을 포함한다.
실시예
다음의 실시예들은 본 발명을 어떻게 제조하고 사용하는가에 대한 완전한 개시 및 설명을 당업자에게 제공하기 위하여 제시되며, 본 발명자들이 자신의 발명으로서 간주한 범위를 제한하려는 의도가 아닌 것은 물론, 아래 실험들이 수행된 모든 또는 유일한 실험을 나타내지도 않는다. 사용된 숫자들(예를 들어, 양, 온도 등)과 관련하여 정확성을 보장하려는 노력을 기울였지만 일부 실험 오차 및 편차가 고려되어야 한다. 달리 나타내지 않는다면 부는 중량부, 분자량은 중량평균 분자량, 온도는 섭씨 온도, 압력은 대기압 또는 대기압 근처이다. "평균"은 산술 평균을 의미한다. 표준 약자가 사용될 수 있으며, 예를 들어 bp, 염기쌍(들); kb, 킬로베이스(들); pl, 피코리터(들); s 또는 sec, 초(들); min, 분(들); h 또는 hr, 시간(들); aa, 아미노산(들); kb, 킬로베이스(들); bp, 염기쌍(들); nt, 뉴클레오티드(들); i.m., 근육내(근육내로); i.p. 복강내(복강내로); s.c., 피하(피하로) 등이 사용된다.
일반적 합성 과정
개시된 화합물의 합성에 유용한 통상적으로 알려진 화학적 합성 계획 및 조건을 제공하는 많은 일반 참고문헌들이 이용가능하다(예를 들어, Smith and March, March's Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms, and Structure, Fifth Edition, Wiley-Interscience, 2001; 또는 Vogel, A Textbook of Practical Organic Chemistry, Including Qualitative Organic Analysis, Fourth Edition, New York: Longman, 1978 참조).
여기 설명된 화합물들은 크로마토그래피, 예컨대 HPLC, 예비적 박층 크로마토그래피, 플래시 칼럼 크로마토그래피 및 이온교환 크로마토그래피를 포함하여 본 분야에 알려진 임의의 정제 프로토콜에 의해 정제될 수 있다. 정상 및 역상은 물론 이온 수지를 포함하는 임의의 적합한 정지상이 사용될 수 있다. 특정 실시형태에서, 개시된 화합물은 실리카겔 및/또는 알루미나 크로마토그래피를 통해서 정제된다. 예를 들어, Introduction to Modern Liquid Chromatography, 2nd Edition, ed. L. R. Snyder and J. J. Kirkland, John Wiley and Sons, 1979; 및 Thin Layer Chromatography, ed E. Stahl, Springer-Verlag, New York, 1969 참조.
대상 화합물의 제조를 위한 어느 과정 동안에 관련된 분자들 중 어느 것에서 감응성 또는 반응성 기를 보고하는 것이 필요하며 및/또는 바람직할 수 있다. 이것은 표준 작업에서 설명된 것과 같은 종래의 보호기에 의해 달성될 수 있으며, 예컨대 J. F. W. McOmie, "Protective Groups in Organic Chemistry", Plenum Press, London and New York 1973, T. W. Greene and P. G. M. Wuts, "Protective Groups in Organic Synthesis", Third edition, Wiley, New York 1999, "The Peptides"; Volume 3(editors: E. Gross and J. Meienhofer), Academic Press, London and New York 1981, "방법en der organischen Chemie", Houben-Weyl, 4th edition, Vol. 15/1, Georg Thieme Verlag, Stuttgart 1974, in H.-D. Jakubke and H. Jescheit, "aminosauren, Peptide, Proteine", Verlag Chemie, Weinheim, Deerfield Beach, and Basel 1982, and/or Jochen Lehmann, "Chemie der Kohlenhydrate: Mono-saccharide and Derivate", Georg Thieme Verlag, Stuttgart 1974를 참조한다. 보호기는 본 분야에 알려진 방법을 사용하여 편리한 후속 단계에서 제거될 수 있다.
대상 화합물은 상업적으로 이용가능한 출발 물질 및/또는 종래의 합성 방법에 의해 제조된 출발 물질을 사용하여 여러 상이한 합성 경로를 통해서 합성될 수 있다. 여기 개시된 화합물을 합성하는데 사용될 수 있는 합성 경로의 여러 예들이 아래 계획안들에서 설명된다.
HPLC 분석
HPLC 분석은 Model G1322A 탈기장치, Model G1311A 쿼터너리 펌프, Model G1329A 오토샘플러, Model G1314 가변 파장 검출기, 및 Model G1364C 분획 수집장치가 장착된 Agilent 1100 Series 분석적 HPLC에서 아래 설명된 방법에 따라서 실온에서 수행되었다.
방법 A: Agilent Poroshell 120 SB C18, 4.6mm x 150mm(2.7um)(1.0mL/min).
용매 A: H2O(0.1% HCO2H), 용매 B: CH3CN(0.1% HCO2H).
Figure pct00151
방법 B: Agilent Poroshell 120 SB C18, 4.6mm x 50mm(2.7um)(2.5mL/min).
용매 A: H2O(0.1% HCO2H), 용매 B: CH3CN(0.1% HCO2H)
Figure pct00152
방법 C: Agilent Poroshell 120 SB C18, 4.6mm x 150mm(2.7um)(1.0mL/min).
용매 A: H2O(0.1% HCO2H), 용매 B: CH3CN(0.1% HCO2H)
Figure pct00153
방법 D: Agilent Zorbax 300 SB CN, 4.6mm x 250mm(5.0um)(1.0mL/min).
용매 A: NH4OAc(10mM), 용매 B: H2O, CH3CN(0.05, 0.95)
Figure pct00154
실시예 1
방법 1 - (2S,15S)-1-((S)-3-메이탄시닐)-15-(3-(2-((1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)프로판아미드)-2,3-디메틸-1,4,14-트리옥소-7,10-디옥사-3,13-디아자옥타데칸-18-오익산의 제조(HIPS 인돌 E (CO2H) PEG2 메이탄신)(화합물 1)
Figure pct00155
화합물 HIPS 인돌 E (CO2H) PEG2 메이탄신의 합성을 위한 반응도가 도 3 및 도 4에 도시된다.
(S)-5-(3-( tert - 부톡시 )-3- 옥소프로필 )-1-(9H-플루오렌-9-일)-3,6- 디옥소 -2,10,13-트리아자-4,7-디아자헥사데칸-16-오익산의 제조( FMOC E ( CO 2 tBu ) PEG 2 CO 2 H ) (화합물 2)( 도 3)
완두모양 교반막대를 넣은 20mL 유리 섬광 바이알에 H2N PEG2 CO2H(710.3mg, 4.0mmol), Na2CO3(637.9mg, 6.0mmol), 및 H2O(10mL)를 넣었다. 투명한 무색 용액을 실온에서 교반했다. N-α-Fmoc-L-글루탐산 γ-t.-부틸 에스테르 펜타플루오로페닐 에스테르(1185.7mg, 2.0mmol)를 별도의 20mL 유리 섬광 바이알에 넣고 무수 1,4-디옥산(10mL)에 용해하고 수성 용액에 서서히 적가했다. 계속 교반하면 흰색 침전이 생겼다. 반응물을 4h 동안 실온에서 교반하고 H2O(70mL)로 희석하고 1M HCl을 적가하여 pH 3으로 산성화하고 2 x 50mL EtOAc로 추출했다. 유기 분획을 합치고 Na2SO4에서 건조시키고 농축하고 Biotage KP C18 HS 12g 샘플릿 위에 흡착시키고 H2O 중의 0-100% CH3CN의 구배를 사용하여 Biotage KP C18 HS 60g 카트릿지 상에서 정제하여 투명한 점성 오일인 원하는 생성물을 수득했다(1137.3mg, 97% 수율). HPLC 체류 시간 12.260min. 방법 A.
Figure pct00156
( 2S,15S )-18- tert -부틸 1-((S)-3- 메이탄시닐 ) 15-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카보닐)아미노)-2,3-디메틸-4,14-디옥소-7,10-디옥사-3,13-디아자옥타데칸-1,18-디오에이트의 제조( FMOC E ( CO 2 tBu ) PEG 2 메이탄신 )(화합물 3)(도 3)
플리 교반막대를 넣은 건조된 20mL 유리 섬광 바이알에 FMOC E(CO2tBu) PEG2 CO2H(311.3mg, 0.5mmol), HATU(201.0mg, 0.5mmol), 및 무수 DMF(2mL)를 넣었다. 투명한 무색 용액을 15min 동안 실온에서 교반했다. 디아실 메이탄신(343.4mg, 0.5mmol), DIPEA(204.8mg, 276.0uL, 1.6mmol), 및 무수 DMF(1mL)를 별도의 건조된 4mL 유리 섬광 바이알에서 합해서 교반중인 용액에 서서히 적가했다. 반응물을 2h 동안 실온에서 교반하고 Biotage KP C18 HS 12g 샘플릿 위에 직접 흡착시키고 H2O 중의 0-100% CH3CN의 구배를 사용하여 Biotage KP C18 HS 60g 카트릿지 상에서 정제하여 흰색 고체로서 표제 화합물을 수득했다(377.8mg, 59% 수율). HPLC 체류 시간 14.385min. 방법 A.
Figure pct00157
( 2S,15S )-18- tert -부틸 1-((S)-3- 메이탄시닐 ) 15-아미노-2,3-디메틸-4,14- 디 옥소-7,10-디옥사-3,13-디아자옥타데칸-1,18-디오에이트의 제조(E ( CO 2 tBu ) PEG 2 메 이탄신)(화합물 4)( 도 3)
건조된 플리 교반막대를 넣은 건조된 20mL 유리 섬광 바이알에 FMOC E(CO2-tBu) PEG2 메이탄신(377.8mg, 0.3mmol)을 넣었다. 주사기로 DMF(2.452mL) 중의 피페리딘(528.8mg, 0.613mL, 6.2mmol)을 첨가했다. 용액을 20min 동안 실온에서 교반하고 Biotage KP C18 HS 12g 샘플릿 위에 직접 흡착시키고 H2O 중의 0-100% CH3CN의 구배를 사용하여 Biotage KP C18 HS 60g 카트릿지 상에서 정제하여 연황색 고체인 원하는 생성물을 수득했다(269.2mg, 87% 수율). HPLC 체류 시간 9.683min. 방법 A.
Figure pct00158
( 2S,15S )-18- tert -부틸 1-((S)-3- 메이탄시닐 ) 15-(3-(2-((2-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카보닐)-1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)프로판아미드)-2,3-디메틸-4,14-디옥소-7,10-디옥사-3,13-디아자옥타데칸-1,18-디오에이트의 제조 (FMOC HIPS 인돌 E ( CO 2 tBu ) PEG 2 메이탄신 )(화합물 5)(도 4)
건조된 플리 교반막대를 넣은 건조된 4mL 유리 섬광 바이알에 E(CO2tBu)PEG2 메이탄신(269.2mg, 0.3mmol), FMOC HIPS 인돌 CO2PFP(211.5mg, 0.3mmol), DIPEA (105.1mg, 141.6uL, 0.8mmol), 및 무수 DMF(1mL)를 넣었다. 용액을 2h 동안 실온에서 교반하고 Biotage KP C18 HS 12g 샘플릿 위에 직접 흡착시키고 H2O 중의 0-100% CH3CN의 구배를 사용하여 Biotage KP C18 HS 30g 카트릿지 상에서 정제하여 연황색 고체로서 표제 화합물 수득했다(361.6mg, 92% 수율). HPLC 체류 시간 15.989 min. 방법 A.
Figure pct00159
( 2S,15S )-15-(3-(2-((2-(((9H- 플루오렌 -9-일) 메톡시 ) 카보닐 )-1,2- 디메틸히드 라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)프로판아미드)-1-((S)-3-메이탄시닐)-2,3-디메틸-1,4,14-트리옥소-7,10-디옥사-3,13-디아자옥타데칸-18-오익산의 제조( FMOC HIPS 인돌 E ( CO 2 H ) PEG 2 메이탄신 )(화합물 6)(도 4)
건조된 플리 교반막대를 넣은 건조된 20mL 유리 섬광 바이알에 FMOC HIPS 인돌 E (CO2tBu) PEG2 메이탄신(361.6mg, 0.2mmol) 및 무수 CH2Cl2(3mL)를 넣었다. 용액을 얼음 H2O 배쓰에서 0℃로 냉각하고 SnCl4(1.2mL, 1.2mmol, 무수 CH2Cl2 중 1.0M 용액)을 주사기로 적가하여 연황색 침전물을 수득했다. 용액을 0℃에서 5min 동안 교반하며 얼음 H2O 배쓰를 제거해 용액을 실온으로 가온했다. 반응물을 1h 동안 교반하고 Biotage KP C18 HS 3g 샘플릿 위에 직접 흡착시키고 H2O 중의 0-100% CH3CN의 구배를 사용하여 Biotage KP C18 HS 30g 카트릿지 상에서 정제하여 연황색 고체인 원하는 생성물을 수득했다(260.9mg, 75% 수율). HPLC 체류 시간 13.833min. 방법 A.
Figure pct00160
( 2S,15S )-1-((S)-3- 메이탄시닐 )-15-(3-(2-((1,2- 디메틸히드라지닐 ) 메틸 )-1H-인돌-1-일)프로판아미드)-2,3-디메틸-1,4,14-트리옥소-7,10-디옥사-3,13-디아자옥타데칸-18-오익산의 제조(HIPS 인돌 E ( CO 2 H ) PEG 2 메이탄신 )(화합물 7)(도 4)
건조된 플리 교반막대를 넣은 건조된 20mL 유리 섬광 바이알에 FMOC HIPS 인돌 E (CO2H) PEG2 메이탄신(260.9mg, 0.2mmol)을 넣었다. DMA(1.6mL) 중의 피페리딘(344.8mg, 0.4 mL, 4.0mmol)을 주사기로 첨가했다. 용액을 20min 동안 실온에서 교반하고 Biotage KP C18 HS 3g 샘플릿 위에 직접 흡착시키고 H2O 중의 0-100% CH3CN의 구배를 사용하여 Biotage KP C18 HS 30g 카트릿지 상에서 정제하여 흰색 고체로서 표제 화합물 수득했다(218.1mg, 99% 수율).
HPLC 체류 시간 9.372min. 방법 A. C58H82ClN8O16[M+H]+에 대해 계산된 LRMS (ESI) 1181.6; 실측 1181.3.
실시예 2
방법 2 -(2S,15S)-1-((S)-3-메이탄시닐)-15-(3-(2-((1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)프로판아미드)-2,3-디메틸-1,4,14-트리옥소-7,10-디옥사-3,13-디아자옥타데칸-18-오익산의 제조(HIPS 인돌 E (CO2H) PEG2 메이탄신)(화합물 8)
Figure pct00161
화합물 HIPS 인돌 E (CO2H) PEG2 메이탄신의 합성을 위한 반응도가 도 5 및 도 6에 도시된다.
(S)-5-(3-( tert - 부톡시 )-3- 옥소프로필 )-1-(9H-플루오렌-9-일)-3,6- 디옥소 -2,10,13-트리아자-4,7-디아자헥사데칸-16-오익산의 제조( FMOC E( CO 2 tBu ) PEG 2 CO 2 H ) (도 5)
방법 1대로 제조. HPLC 체류 시간 12.260min. 방법 A.
Figure pct00162
(S)-7-아미노-2,2-디메틸-4,8- 디옥소 -3,12,15- 트리아자 -9- 아자옥타데칸 -18-오익산의 제조(E ( CO 2 tBu ) PEG 2 CO 2 H )(화합물 8)(도 5)
건조된 플리 교반막대를 넣은 건조된 20mL 유리 섬광 바이알에 FMOC E(CO2-tBu) PEG2 CO2H(2638.7mg, 4.5mmol)를 넣었다. DMF(8.871mL) 중의 피페리딘(1921.4 mg, 2.229 mL, 22.6mmol)을 주사기로 첨가했다. 용액을 20min 동안 실온에서 교반하여 다량의 흰색 침전물을 수득했다. 반응물을 여과하고 Biotage KP C18 HS 12g 샘플릿 위에 직접 흡착시키고(x2) H2O중의 0-100% CH3CN의 구배를 사용하여 Biotage KP C18 HS 60g 카트릿지 상에서 정제하여(x2) 무색의 점성 오일인 원하는 생성물을 수득했다(813.1mg, 50% 수율). HPLC 체류 시간 5.480min. 방법 A.
Figure pct00163
(S)-7-(3-(2-((2-(((9H- 플루오렌 -9-일) 메톡시 ) 카보닐 )-1,2- 디메틸히드라지 닐)메틸)-1H-인돌-1-일)프로판아미드)-2,2-디메틸-4,8-디옥소-3,12,15-트리아자-9-아자옥타데칸-18-오익산의 제조( FMOC HIPS 인돌 E ( CO 2 tBu ) PEG 2 CO 2 H )(화합물 9)(도 5)
완두모양 교반막대를 넣은 건조된 20mL 유리 섬광 바이알에 E (CO2tBu) PEG2 CO2H(582.4mg, 1.6mmol), FMOC HIPS 인돌 CO2PFP(1253.7mg, 1.9mmol), DIPEA(623.1 mg, 839.8uL, 4.8mmol), 및 무수 DMF(5mL)를 넣었다. 용액을 2h 동안 실온에서 교반하고 Biotage KP C18 HS 12g 샘플릿 위에 직접 흡착시키고 H2O 중의 0-100% CH3CN의 구배를 사용하여 Biotage KP C18 HS 60g 카트릿지 상에서 정제하여 왁스상 고체로서 표제 화합물을 수득했다(406.3mg, 31% 수율). HPLC 체류 시간 4.037min. 방법 B.
Figure pct00164
( 2S,15S )-18- tert -부틸 1-((S)-3- 메이탄시닐 ) 15-(3-(2-((2-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카보닐)-1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)프로판아미드)-2,3-디메틸-4,14-디옥소-7,10-디옥사-3,13-디아자옥타데칸-1,18-디오에이트의 제조 (FMOC HIPS 인돌 E ( CO 2 tBu ) PEG 2 메이탄신 )(화합물 10)(도 6)
건조된 플리 교반막대를 넣은 건조된 4mL 유리 섬광 바이알에 FMOC HIPS 인돌 E (CO2tBu) PEG2 CO2H(289.8mg, 0.4mmol), HATU(133.7mg, 0.4mmol), 및 무수 DMF (1mL)를 넣었다. 투명한 무색 용액을 15min 동안 실온에서 교반했다. 디아실 메이탄신(227.5mg, 0.4mmol), DIPEA(135.7mg, 182.9uL, 1.1mmol), 및 무수 DMF(1mL)를 별도의 건조된 4mL 유리 섬광 바이알에서 합해서 교반중인 용액에 서서히 적가했다. 반응물을 2h 동안 실온에서 교반하고 Biotage KP C18 HS 3g 샘플릿 위에 직접 흡착시키고 H2O 중의 0-100% CH3CN의 구배를 사용하여 Biotage KP C18 HS 30g 카트릿지 상에서 정제하여 흰색 고체인 원하는 생성물을 수득했다(268.4mg, 53% 수율). HPLC 체류 시간 13.833min. 방법 A.
Figure pct00165
( 2S,15S )-15-(3-(2-((2-(((9H- 플루오렌 -9-일) 메톡시 ) 카보닐 )-1,2- 디메틸히드 라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)프로판아미드)-1-((S)-3-메이탄시닐)-2,3-디메틸-1,4,14-트리옥소-7,10-디옥사-3,13-디아자옥타데칸-18-오익산의 제조( FMOC HIPS 인돌 E ( CO 2 H ) PEG 2 메이탄신 )(도 6)
방법 1대로 제조. HPLC 체류 시간 13.833min. 방법 A.
Figure pct00166
( 2S,15S )-1-((S)-3- 메이탄시닐 )-15-(3-(2-((1,2- 디메틸히드라지닐 ) 메틸 )-1H-인돌-1-일)프로판아미드)-2,3-디메틸-1,4,14-트리옥소-7,10-디옥사-3,13-디아자옥타데칸-18-오익산의 제조(HIPS 인돌 E ( CO 2 H ) PEG 2 메이탄신)(도 6)
방법 1대로 제조. HPLC 체류 시간 9.372min. 방법 A. C58H82ClN8O16[M+H]+에 대해 계산된 LRMS(ESI) 1181.6; 실측 1181.3.
실시예 3
방법 3 - (2S,15S)-1-((S)-3-메이탄시닐) 15-(2-아미노-2-옥소에틸)-19-(2-((1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)-2,3-디메틸-4,14,17-트리옥소-7,10-디옥사-3,13,16-트리아자노나데칸-1-오에이트의 제조(HIPS 인돌 N (CONH2) PEG2 메이탄신)(산성 탈보호)
Figure pct00167
화합물 HIPS 인돌 N (CONH2) PEG2 메이탄신의 합성을 위한 반응도가 도 7 및 도 8에 도시된다.
(S)- tert -부틸 1-(9H- 플루오렌 -9-일)-3,6- 디옥소 -5-(2-옥소-2-( 트리틸아미 노)에틸)-2,10,13-트리아자-4,7-디아자헥사데칸-16-오에이트의 제조( FMOC N ( Trt ) PEG 2 CO 2 tBu )(화합물 11)(도 7)
건조된 완두모양 교반막대를 넣은 건조된 20mL 유리 섬광 바이알에 FMOC N (Trt) CO2H(597.0mg, 1.0mmol), HATU(380.9mg, 1.0mmol), 및 무수 DMF(3mL)를 넣었다. 투명한 무색 용액을 15min 동안 실온에서 교반했다. H2N PEG2 CO2tBu(238.2 mg, 1.0mmol), DIPEA(258.5mg, 348.4uL, 2.0mmol), 및 무수 DMF(3mL)를 별도의 건조된 4mL 유리 섬광 바이알에서 합해서 교반중인 용액에 서서히 적가했다. 반응물을 2h 동안 실온에서 교반하고 분리 깔대기에서 H2O(100mL) 및 5M NaCl(25mL)에 첨가하고 5 x 25mL EtOAc로 추출했다. 유기 분획을 합해서 1 x 25mL H2O, 1 x 25mL 1.2M NaHCO3, 및 1 x 25mL 5M NaCl로 세척하고 Na2SO4에서 건조시키고 농축하고 Biotage KP C18 HS 12g 샘플릿 위에 흡착시키고 H2O 중의 0-100% CH3CN의 구배를 사용하여 Biotage KP C18 HS 60g 카트릿지 상에서 정제하여 흰색의 결정질 고체로서 표제 화합물을 수득했다(708.4mg, 87% 수율). HPLC 체류 시간 15.971min. 방법 A.
Figure pct00168
(S)-5-(2-아미노-2- 옥소에틸 )-1-(9H- 플루오렌 -9-일)-3,6- 디옥소 -2,10,13- 트 리아자-4,7-디아자헥사데칸-16-오익산의 제조( FMOC N ( CONH 2 ) PEG 2 CO 2 H )(화합물 12) (도 7)
완두모양 교반막대를 넣은 20mL 유리 섬광 바이알에 TFA, TIPS, H2O(6.8mL, 0.2mL, 0.2mL)의 용액을 넣었다. FMOC N(Trt) PEG2 CO2tBu(708.4mg, 0.9mmol)를 조금씩 첨가하고 반응물을 4h 동안 실온에서 교반했다. 용액을 증발시키고 Biotage KP C18 HS 12g 샘플릿 위에 흡착시키고 H2O 중의 0-100% CH3CN의 구배를 사용하여 Biotage KP C18 HS 60g 카트릿지 상에서 정제하여 흰색 고체인 원하는 생성물을 수득했다(385.3mg, 86% 수율). HPLC 체류 시간 8.084min. 방법 A.
Figure pct00169
( 5S,18S )-1-((S)-3- 메이탄시닐 ) 5-(2-아미노-2-옥소에틸)-1-(9H-플루오렌-9-일)-17,18-디메틸-3,6,16-트리옥소-2,10,13-트리아자-4,7,17-트리아자노나데칸-19-오에이트(FMOC N ( CONH 2 ) PEG 2 메이탄신 )(화합물 13)(도 7)
건조된 플리 교반막대를 넣은 건조된 4mL 유리 섬광 바이알에 FMOC N(CONH2) PEG2 CO2H(98.6mg, 0.2mmol), HATU(72.9mg, 0.2mmol), 및 무수 DMF(1mL)를 넣었다. 투명한 무색 용액을 15min 동안 실온에서 교반했다. 디아실 메이탄신(122.1mg, 0.2mmol), DIPEA(72.8mg, 98.1uL, 0.6mmol) 및 무수 DMF(1mL)를 별도의 건조된 4mL 유리 섬광 바이알에서 합해서 교반중인 용액에 서서히 적가했다. 반응물을 2h 동안 실온에서 교반하고 Biotage KP C18 HS 3g 샘플릿 위에 직접 흡착시키고 H2O 중의 0-100% CH3CN의 구배를 사용하여 Biotage KP C18 HS 30g 카트릿지 상에서 정제하여 흰색 고체로서 표제 화합물을 수득했다(149.1mg, 69% 수율). HPLC 체류 시간 11.569min. 방법 A.
Figure pct00170
( 2S,15S )-1-((S)-3- 메이탄시닐 ) 15,17- 디아미노 -2,3-디메틸-4,14,17- 트리옥 소-7,10-디옥사-3,13-디아자헵타데칸-1-오에이트의 제조(N ( CONH 2 ) PEG 2 메이탄신 ) (화합물 14)( 도 8)
건조된 플리 교반막대를 넣은 건조된 20mL 유리 섬광 바이알에 FMOC N (CO-NH2)PEG2 메이탄신(149.1mg, 0.1mmol)을 넣었다. DMF(1.03mL) 중의 피페리딘(221.6 mg, 0.26mL)을 주사기로 첨가했다. 용액을 20mim 동안 실온에서 교반하고 Biotage KP C18 HS 3g 샘플릿 위에 직접 흡착시키고 H2O 중의 0-100% CH3CN의 구배를 사용하여 Biotage KP C18 HS 30g 카트릿지 상에서 정제하여 흰색 고체인 원하는 생성물을 수득했다(115.0mg, 96% 수율). HPLC 체류 시간 8.154min. 방법 A.
Figure pct00171
( 2S,15S )-1-((S)-3- 메이탄시닐 ) 19-(2-((2-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카보닐)-1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)-15-(2-아미노-2-옥소에틸)-2,3-디메틸-4,14,17-트리옥소-7,10-디옥사-3,13,16-트리아자노나데칸-1-오에이트의 제조 (FMOC HIPS 인돌 N ( CONH 2 ) PEG 2 메이탄신 )(화합물 15)(도 8)
건조된 플리 교반막대를 넣은 건조된 4mL 유리 섬광 바이알에 N(CONH2) PEG2 메이탄신(115.0mg, 0.1mmol), FMOC HIPS 인돌 CO2PFP(86.1mg, 0.1mmol), DIPEA(32.3 mg, 43.5uL, 0.3mmol), 및 무수 DMF(1mL)를 넣었다. 용액을 2h 동안 실온에서 교반하고 Biotage KP C18 HS 3g 샘플릿 위에 직접 흡착시키고 H2O 중의 0-100% CH3CN의 구배를 사용하여 Biotage KP C18 HS 30g 카트릿지 상에서 정제하여 매우 연황색 고체로서 표제 화합물을 수득했다(143.3mg, 83% 수율). HPLC 체류 시간 13.557min. 방법 A.
Figure pct00172
( 2S,15S )-1-((S)-3- 메이탄시닐 ) 15-(2-아미노-2-옥소에틸)-19-(2-((1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)-2,3-디메틸-4,14,17-트리옥소-7,10-디옥사-3,13,16-트리아자노나데칸-1-오에이트의 제조(HIPS 인돌 N ( CONH 2 ) PEG 2 메이탄신 ) (화합물 16)( 도 8)
건조된 플리 교반막대를 넣은 건조된 4mL 유리 섬광 바이알에 FMOC HIPS 인돌 N(CONH2) PEG2 메이탄신(83.3mg, 0.1mmol)을 넣었다. DMA(0.474mL) 중의 피페리딘(102.1mg, 0.118mL, 1.2mmol)을 주사기로 첨가했다. 용액을 20min 동안 실온에서 교반하고 Biotage KP C18 HS 1.2g 샘플릿 위에 직접 흡착시키고 H2O 중의 0-100% CH3CN의 구배를 사용하여 Biotage KP C18 HS 12g 카트릿지 상에서 정제하여 희색 고체인 원하는 생성물을 수득했다(38.8mg, 55% 수율). HPLC 체류 시간 9.084min. 방법 A. C57H80ClN9NaO15[M+Na]+에 대한 LRMS(ESI) 계산 1188.5; 실측 1188.5.
실시예 4
방법 4 - HIPS 인돌 카다베린 Alexa Fluor 555의 제조
화합물 HIPS 인돌 카다베린 Alexa Fluor 555의 합성을 위한 반응도가 도 9에 도시된다.
(9H- 플루오렌 -9-일) 메틸 2-((1-(3-((5-( 카복사미도 ) 펜틸 )아미노)-3- 옥소프로 필)-1H-인돌-2-일)메틸)-1,2-디메틸히드라진카복실레이트 Alexa Fluor 555의 제조 (FMOC HIPS 인돌 카다베린 Alexa Fluor 555)(화합물 17)(도 9)
플리 교반막대를 넣은 4mL 유리 섬광 바이알에 DMF 중의 Alexa Fluor 555 카다베린(8mg, 0.01mmol), H2O(285uL, 15uL), FMOC HIPS 인돌 CO2PFP(36.1mg, 0.06 mmol), 및 DIPEA(5.4mg, 7.3uL, 0.04mmol)를 넣었다. 반응물을 2h 동안 실온에서 교반하고 Biotage KP C18 HS 1.2g 샘플릿 위에 직접 흡착시키고 H2O 중의 0-100% CH3CN의 구배를 사용하여 Biotage KP C18 HS 12g 카트릿지 상에서 정제하여 연자색 필름으로서 표제 화합물을 수득했다(11.8mg, 99% 수율). HPLC 체류 시간 6.092min. 방법 A.
Figure pct00174
N-(5- 카복사미도펜틸 )-3-(2-((1,2- 디메틸히드라지닐 ) 메틸 )-1H-인돌-1-일) 프 로판아미드 Alexa Fluor 555의 제조(HIPS 인돌 카다베린 Alexa Fluor 555)( 화합물 18)(도 9)
플리 교반막대를 넣은 4mL 유리 섬광 바이알에 FMOC HIPS 인돌 카다베린 Alexa Fluor 555(22.1mg, 0.02mmol)를 넣었다. DMA 중의 피페리딘(51.7mg, 0.06 mL, 0.6mmol), H2O(228uL, 12uL)을 주사기로 첨가했다. 용액을 20mim 동안 실온에서 교반하고 Biotage KP C18 HS 1.2g 샘플릿 위에 직접 흡착시키고 H2O 중의 0-100% CH3CN의 구배를 사용하여 Biotage KP C18 HS 12g 카트릿지 상에서 정제하여 연지색 필름인 원하는 생성물을 수득했다(18.4mg, 99% 수율). HPLC 체류 시간 5.085min. 방법 A.
실시예 5
방법 5 - (S)-1-카복사미도-13-(3-(2-((1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)프로판아미드)-1,12-디옥소-5,8-디옥사-2,11-디아자헥사데칸-16-오익산 ATTO 550의 제조(HIPS 인돌 E (CO2H) PEG2 NH ATTO 550)
Figure pct00175
화합물 HIPS 인돌 E (CO2H) PEG2 NH ATTO 550의 합성을 위한 반응도가 도 10 및 도 11에 도시된다.
(S)- tert -부틸 16-((((9H- 플루오렌 -9-일) 메톡시 ) 카보닐 )아미노)-2,2-디메틸-4,15-디옥소-3,8,11-트리아자-5,14-디아자노나데칸-19-오에이트의 제조( FMOC E (CO 2 tBu) PEG 2 NHBOC )(화합물 19)(도 10)
건조된 플리 교반막대를 넣은 건조된 4mL 유리 섬광 바이알에 N-α-Fmoc-L-글루탐산 γ-tert-부틸에스테르 펜타플루오로페닐 에스테르(296.2mg, 0.5mmol), H2N PEG2 NHBOC(124.5mg, 0.5mmol), DIPEA(129.2mg, 174.2uL, 1.0mmol) 및 무수 DMF(0.5 mL)를 넣었다. 투명한 무색 용액을 2h 동안 실온에서 교반하고 H2O(8mL)와 5M NaCl (2mL)로 희석하고 3 x 5 mL EtOAc로 추출했다. 유기 분획을 1 x 5mL H2O, 1 x 5mL 1.2M NaHCO3 및 1x5mL 5M NaCl로 세척하고 Na2SO4에서 건조시키고 농축하고 Biotage KP C18 HS 3g 샘플릿 위에 흡착시키고 H2O 중의 0-100% CH3CN의 구배를 사용하여 Biotage KP C18 HS 30g 카트릿지 상에서 정제하여 흰색의 결정질 고체로서 표제 화합물을 수득했다(253.9mg, 77% 수율). HPLC 체류 시간 14.333min. 방법 A.
Figure pct00176
(S)- tert -부틸 16-아미노-2,2-디메틸-4,15- 디옥소 -3,8,11- 트리아자 -5,14- 디 아자노나데칸-19-오에이트의 제조(E ( CO 2 tBu ) PEG 2 NHBOC )(화합물 20)(도 10)
건조된 플리 교반막대를 넣은 건조된 20mL 유리 섬광 바이알에 FMOC E (CO2-tBu) PEG2 NHBOC (253.9mg, 0.4mmol)를 넣었다. DMF(3.1mL) 중의 피페리딘(659.4 mg, 0.765mL 7.7mmol)을 주사기로 첨가했다. 용액을 20mim 동안 실온에서 교반하고 Biotage KP C18 HS 12g 샘플릿 위에 직접 흡착시키고 H2O 중의 0-100% CH3CN의 구배를 사용하여 Biotage KP C18 HS 60g 카트릿지 상에서 정제하여 무색의 고체인 원하는 생성물을 수득했다(165.7mg, 99% 수율). HPLC 체류 시간 7.599min. 방법 A.
Figure pct00177
(S)- tert -부틸 16-(3-(2-((2-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카보닐)-1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)프로판아미드)-2,2-디메틸-4,15-디옥소-3,8,11-트리아자-5,14-디아자노나데칸-19-오에이트의 제조( FMOC HIPS 인돌 E ( CO 2 tBu ) PEG 2 NHBOC)(화합물 21)( 도 10)
건조된 플리 교반막대를 넣은 건조된 4mL 유리 섬광 바이알에 E (CO2tBu) PEG2 NHBOC(64.8mg, 0.15mmol), FMOC HIPS 인돌 CO2PFP(98.4mg, 0.15mmol), DIPEA (58.0mg, 78.2uL, 0.45mmol), 및 무수 DMF(0.3mL)를 넣었다. 용액을 2h 동안 실온에서 교반하고 Biotage KP C18 HS 1.2g 샘플릿 위에 직접 흡착시키고 H2O 중의 0-100% CH3CN의 구배를 사용하여 Biotage KP C18 HS 12g 카트릿지 상에서 정제하여 무색의 고체로서 표제 화합물을 수득했다(83.4mg, 62% 수율). HPLC 체류 시간 16.054 min. 방법 A.
Figure pct00178
(S)-4-(3-(2-((2-(((9H- 플루오렌 -9-일) 메톡시 ) 카보닐 )-1,2- 디메틸히드라지 닐)메틸)-1H-인돌-1-일)프로판아미드)-5-((2-(2-(2-아미노에톡시)에톡시)에틸)아미노)-5-옥소펜탄오익산의 제조( FMOC HIPS 인돌 E ( CO 2 H ) PEG 2 NH 2)( 화합물 22)(도 11)
건조된 플리 교반막대를 넣은 건조된 4mL 유리 섬광 바이알에 FMOC HIPS 인돌 E(CO2tBu) PEG2 NHBOC(83.4mg, 0.1mmol) 및 무수 CH2Cl2(1mL)를 넣었다. 용액을 얼음 H2O 배쓰에서 0℃로 냉각하고 SnCl4(0.928 mL, 무수 CH2Cl2 중 1.0M 용액)을 주사기로 적가하여 연황색 침전물을 수득했다. 용액을 0℃에서 5min 동안 교반하며 얼음 H2O 배쓰를 제거해 용액을 실온으로 가온했다. 반응물을 1h 동안 교반하고 Biotage KP C18 HS 3g 샘플릿 위에 직접 흡착시키고 H2O 중의 0-100% CH3CN의 구배를 사용하여 Biotage KP C18 HS 30g 카트릿지 상에서 정제하여 흰색 필름인 원하는 생성물을 수득했다(36.2mg, 52% 수율). HPLC 체류 시간 10.380min. 방법 A.
Figure pct00179
(S)-13-(3-(2-((2-(((9H- 플루오렌 -9-일) 메톡시 ) 카보닐 )-1,2- 디메틸히드라지닐 )메틸)-1H-인돌-1-일)프로판아미드)-1-카복사미도-1,12-디옥소-5,8-디옥사-2,11-디아자헥사데칸-16-오익산 ATTO 550의 제조( FMOC HIPS 인돌 E ( CO 2 H ) PEG 2 NH ATTO 550)(화합물 23)( 도 11)
건조된 플리 교반막대를 넣은 건조된 4mL 유리 섬광 바이알에 FMOC HIPS 인돌 E (CO2H) PEG2 NH2(5.3mg, 7.1umol), ATTO 550 NHS(5.0mg, 6.3umol), DIPEA(2.5 mg, 3.4uL, 19.3umol), 및 무수 DMF(0.3mL)를 넣었다. 용액을 2h 동안 실온에서 교반하고 Biotage SNAP Ultra 1g 샘플릿 위에 직접 흡착시키고 CH2Cl2(0.1% AcOH) 중의 0% MeOH(0.1% AcOH)에서 CH2Cl2(0.1% AcOH) 중의 10% MeOH(0.1% AcOH)까지 단계적 구배를 사용하여 Biotage SNAP Ultra 10g 카트릿지 상에서 정제하여 연지색 필름으로서 표제 화합물을 수득했다(4.9mg, 54% 수율). TLC Rf(SiO2) 0.308(10% MeOH, 0.1% AcOH, 89.9% CH2Cl2).
Figure pct00180
(S)-1- 카복사미도 -13-(3-(2-((1,2- 디메틸히드라지닐 ) 메틸 )-1H-인돌-1-일) 프 로판아미드)-1,12-디옥소-5,8-디옥사-2,11-디아자헥사데칸-16-오익산 ATTO 550의 제조(HIPS 인돌 E ( CO 2 H ) PEG 2 NH ATTO 550)( 화합물 24)( 도 11)
건조된 플리 교반막대를 넣은 건조된 4mL 유리 섬광 바이알에 FMOC HIPS 인돌 E (CO2H) PEG2 NH ATTO 550(4.9mg, 3.4umol)을 넣었다. DMA(240uL) 중의 피페리딘(51.7mg, 60.0uL, 0.6mmol)을 주사기로 첨가했다. 용액을 20min 동안 실온에서 교반하고 Biotage KP C18 HS 1.2g 샘플릿 위에 직접 흡착시키고 H2O 중의 0-100% CH3CN의 구배를 사용하여 Biotage KP C18 HS 12g 카트릿지 상에서 정제하여 암적색 필름인 원하는 생성물을 수득했다(3.2mg, 78% 수율). HPLC 체류 시간 10.568min, 10.689min, 10.947min(카다베린 이성질체 혼합물).
실시예 6
방법 6 - (R)-1-카복사미도-13-(3-(2-((1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)프로판아미드)-1,12-디옥소-5,8-디옥사-2,11-디아자테트라데칸-14-설폰산 ATTO 550의 제조(HIPS 인돌 C (SO3H) PEG2 NH ATTO 550)
Figure pct00181
화합물 HIPS 인돌 C (SO3H) PEG2 NH ATTO 550의 합성을 위한 반응도가 도 12 및 도 13에 도시된다.
(R)-16-((((9H- 플루오렌 -9-일) 메톡시 ) 카보닐 )아미노)-2,2-디메틸-4,15- 디옥 소-3,8,11-트리아자-5,14-디아자헵타데칸-17-설폰산의 제조( FMOC C ( SO 3 H ) PEG 2 NHBOC)(도 12)
건조된 완두모양 교반막대를 넣은 건조된 20mL 유리 섬광 바이알에 FMOC C (SO3H) CO2H(361.0mg, 0.9mmol), HATU(403.0mg, 1.1mmol), DIPEA(252.0mg, 339.6uL, 2.0mmol), 및 무수 DMF(10mL)를 넣었다. 투명한 무색 용액을 15min 동안 실온에서 교반했다. H2N PEG2 NHBOC(258.0mg, 1.0mmol) 및 무수 DMF(1mL)를 별도의 건조된 4mL 유리 섬광 바이알에서 합해서 교반중인 용액에 서서히 적가했다. 반응물을 16h 동안 실온에서 교반하고 농축하고 Biotage KP C18 HS 12g 샘플릿 위에 흡착시키고 H2O 중의 0-100% CH3CN의 구배를 사용하여 Biotage KP C18 HS 100g 카트릿지 상에서 정제하여 무색의 반짝이는 고체로서 표제 화합물을 수득했다(262.0mg, 46% 수율). HPLC 체류 시간 8.961min. 방법 A.
Figure pct00182
(R)-16-아미노-2,2-디메틸-4,15- 디옥소 -3,8,11- 트리아자 -5,14- 디아자헵타데 칸-17-설폰산의 제조(C ( SO 3 H ) PEG 2 NHBOC )(도 12)
건조된 플리 교반막대를 넣은 건조된 4mL 유리 섬광 바이알에 FMOC C (SO3H) PEG2 NHBOC(248.0mg,0.4mmol)를 넣었다. DMF(2.0mL) 중의 피페리딘(681.2mg, 0.790 mL, 8.0mmol)을 주사기로 첨가했다. 용액을 1.5h 동안 실온에서 교반하고 농축하고 Biotage KP C18 HS 3g 샘플릿 위에 직접 흡착시키고 H2O 중의 0-100% CH3CN의 구배를 사용하여 Biotage KP C18 HS 30g 카트릿지 상에서 정제하여 흰색 고체인 원하는 생성물을 수득했다(250.0mg, 31% 수율). HPLC 체류 시간 2.311min. 방법 A.
Figure pct00183
(R)-16-(3-(2-((2-(((9H- 플루오렌 -9-일) 메톡시 ) 카보닐 )-1,2- 디메틸히드라지 닐)메틸)-1H-인돌-1-일)프로판아미드)-2,2-디메틸-4,15-디옥소-3,8,11-트리아자-5,14-디아자헵타데칸-17-설폰산의 제조( FMOC HIPS 인돌 C ( SO 3 H ) PEG 2 NHBOC )(도 12)
건조된 플리 교반막대를 넣은 건조된 4mL 유리 섬광 바이알에 C (SO3H) PEG2 NHBOC(50.0mg, 0.13mmol), FMOC HIPS 인돌 CO2PFP(85.0mg, 0.13mmol), NaHCO3(51.0 mg, 0.61mmol), 및 DMA(2.0mL)를 넣었다. 용액을 1.5h 실온에서 교반하고 Biotage KP C18 HS 3g 샘플릿 위에 직접 흡착시키고 H2O 중의 0-100% CH3CN의 구배를 사용하여 Biotage KP C18 HS 30g 카트릿지 상에서 정제하여 흰색의 거품질 고체로서 표제 화합물을 수득했다(41.0mg, 36% 수율). HPLC 체류 시간 11.024min. 방법 A.
Figure pct00184
(R)-2-(3-(2-((2-(((9H- 플루오렌 -9-일) 메톡시 ) 카보닐 )-1,2- 디메틸히드라지 닐)메틸)-1H-인돌-1-일)프로판아미드)-3-((2-(2-(2-아미노에톡시)에톡시)에틸)아미노)-3-옥소프로판-1-설폰산의 제조(FMOC HIPS 인돌 C (SO 3 H) PEG 2 NH 2 )(도 13)
건조된 플리 교반막대를 넣은 건조된 20mL 유리 섬광 바이알에 FMOC HIPS 인돌 C (SO3H) PEG2 NHBOC(41.0mg, 0.05mmol) 및 무수 CH2Cl2(5mL)를 넣었다. 용액을 얼음 H2O 배쓰에서 0℃로 냉각하고 TFA(273.6mg, 0.184mL, 2.4mmol)를 주사기로 적가했다. 용액을 0℃에서 2h 동안 교반하고 Biotage SNAP Ultra 3g 샘플릿 위에 직접 흡착시키고 CH2Cl2 중의 10% MeOH를 사용하여 Biotage SNAP Ultra 25g 카트릿지 상에서 정제하여 흰색 고체인 원하는 생성물을 수득했다(31.0mg, 86% 수율). HPLC 체류 시간 10.284min. 방법 A.
Figure pct00185
(R)-13-(3-(2-((2-(((9H- 플루오렌 -9-일) 메톡시 ) 카보닐 )-1,2- 디메틸히드라지 닐)메틸)-1H-인돌-1-일)프로판아미드)-1-카복사미도-1,12-디옥소-5,8-디옥사-2,11-디아자테트라데칸-14-설폰산 ATTO 550의 제조( FMOC HIPS 인돌 C( SO 3 H ) PEG 2 NH ATTO 550)(화합물 25)( 도 13)
플리 교반막대를 넣은 4mL 유리 섬광 바이알에 FMOC HIPS 인돌 C(SO3H) PEG2 NH2(5.3mg, 7.0umol), ATTO 550 NHS(5.0mg, 6.3umol), DIPEA(4.0mg, 5.5uL, 31.6 umol), DMF(270.0uL), 및 H2O(30.0uL)를 넣었다. 용액을 2h 동안 실온에서 교반하고 Biotage SNAP Ultra 1g 샘플릿 위에 직접 흡착시키고 CH2Cl2(0.1% AcOH) 중의 0% MeOH(0.1% AcOH)에서 CH2Cl2(0.1% AcOH) 중의 10% MeOH(0.1% AcOH)까지 단계적 구배를 사용하여 Biotage SNAP Ultra 10g 카트릿지 상에서 정제하여 연지색 필름으로서 표제 화합물을 수득했다(10.0mg, 99% 수율). HPLC 체류 시간 15.220min, 15.366 min, 15.573min(이성질체 혼합물). 방법 A.
Figure pct00186
(R)-1- 카복사미도 -13-(3-(2-((1,2- 디메틸히드라지닐 ) 메틸 )-1H-인돌-1-일) 프 로판아미드)-1,12-디옥소-5,8-디옥사-2,11-디아자테트라데칸-14-설폰산 ATTO 550의 제조(HIPS 인돌 C ( SO 3 H ) PEG 2 NH ATTO 550)( 화합물 26)( 도 13)
건조된 플리 교반막대를 넣은 건조된 4mL 유리 섬광 바이알에 FMOC HIPS 인돌 C (SO3H) PEG2 NH ATTO 550(10.0mg, 6.3 umol)를 넣었다. DMA(240uL) 중의 피페리딘(51.7mg, 60.0uL, 0.6mmol)을 주사기로 첨가했다. 용액을 20min 동안 실온에서 교반하고 농축하고 Biotage KP C18 HS 1.2g 샘플릿 위에 직접 흡착시키고 H2O 중의 0-100% CH3CN의 구배를 사용하여 Biotage KP C18 HS 12g 카트릿지 상에서 정제하여 암적색 필름인 원하는 생성물을 수득했다(3.3mg, 38% 수율). HPLC 체류 시간 11.343min, 11.499min, 11.771min. 방법 A.
실시예 7
방법 7 - (S)-1-((S)-3-메이탄시닐) 2-(4-((((4-((2S,5S)-34-(2-((1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)-5-이소프로필-4,7,29,32-테트라옥소-2-(3-우레이도프로필)-10,13,16,19,22,25-헥사옥사-3,6,28,31-테트라아자테트라트리아콘탄아미도)벤질)옥시)카보닐)(메틸)아미노)-N-메틸부탄아미도)프로파노에이트의 제조 (HIPS 인돌 G PEG6 Val Cit PABC NMC3 메이탄신)
Figure pct00187
화합물 HIPS 인돌 G PEG6 Val Cit PABC NMC3 메이탄신의 합성을 위한 반응도가 도 14 내지 19에 도시된다; 여기서 NMC3은 기 -N(CH3)-(CH2)3-를 나타낸다.
tert -부틸 1-(9H- 플루오렌 -9-일)-3,6- 디옥소 -2,10,13,16,19,22,25- 헵타옥사 -4,7-디아자옥타코산-28-오에이트의 제조( FMOC G PEG 6 CO 2 tBu )(화합물 27)
건조된 완두모양 교반막대를 넣은 건조된 20mL 유리 섬광 바이알에 FMOC G CO2H(297.6mg, 1.0mmol), HATU(381.0mg, 1.0mmol), 및 무수 DMF(3mL)를 넣었다. 투명한 무색 용액을 15min 동안 실온에서 교반했다. H2N PEG6 CO2tBu(415.7mg, 1.0 mmol), DIPEA(387.7mg, 522.5uL, 3.0mmol), 및 무수 DMF(1mL)를 별도의 건조된 4mL 유리 섬광 바이알에서 합해서 교반중인 용액에 서서히 적가했다. 반응물을 2h 동안 실온에서 교반하고 Biotage KP C18 HS 12g 샘플릿 위에 흡착시키고 H2O 중의 0-100% CH3CN의 구배를 사용하여 Biotage KP C18 HS 60g 카트릿지 상에서 정제하여 연황색 점성 오일로서 표제 화합물을 수득했다(669.0mg, 97% 수율). HPLC 체류 시간 12.481min. 방법 A.
Figure pct00188
1-(9H- 플루오렌 -9-일)-3,6- 디옥소 -2,10,13,16,19,22,25- 헵타옥사 -4,7- 디아자 옥타코산-28-오익산의 제조( FMOC G PEG 6 CO 2 H )(화합물 28)(도 14)
완두모양 교반막대를 넣은 20mL 유리 섬광 바이알에 TFA, TIPS, H2O(7.6mL, 0.2mL, 0.2mL)의 용액을 넣었다. FMOC G PEG6 CO2tBu(669.0mg, 1.0mmol)를 조금씩 첨가하고 반응물을 1h 실온에서 교반했다. 용액을 증발시키고 Biotage KP C18 HS 12g 샘플릿 위에 흡착시키고 H2O 중의 0-100% CH3CN의 구배를 사용하여 Biotage KP C18 HS 60g 카트릿지상에서 정제하여 흰색 고체인 원하는 생성물을 수득했다(500.2 mg, 79% 수율). HPLC 체류 시간 9.686min. 방법 A.
Figure pct00189
(S)-1-((S)-3- 메이탄시닐 ) 2- (4-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시 ) 카보닐 )( 메틸 )아미노)-N-메틸부탄아미도)프로파노에이트의 제조( FMOC NMC 3 메이탄신 )(화합물 29) (도 14)
건조된 플리 교반막대를 넣은 건조된 4mL 유리 섬광 바이알에 FMOC N 메틸 γ-아미노 부티르산(76.3mg, 0.2mmol), HATU(85.4mg, 0.2mmol) 및 무수 DMF(0.6mL)를 넣었다. 투명한 무색 용액을 15min 동안 실온에서 교반했다. 디아실 메이탄신 (145.4mg, 0.2mmol), DIPEA(86.7mg, 116.9uL, 0.7mmol), 및 무수 DMF(0.3mL)를 별도의 건조된 4mL 유리 섬광 바이알에서 합해서 교반중인 용액에 서서히 적가했다. 반응물을 2h 동안 실온에서 교반하고 Biotage KP C18 HS 3g 샘플릿 위에 직접 흡착시키고 H2O 중의 0-100% CH3CN의 구배를 사용하여 Biotage KP C18 HS 30g 카트릿지 상에서 정제하여 흰색 고체로서 표제 화합물을 수득했다(182.7mg, 84% 수율). HPLC 체류 시간 14.220min. 방법 A.
Figure pct00190
(S)-1-((S)-3- 메이탄시닐 ) 2- (N-메틸-4-(메틸아미노)부탄아미도)프로파노에 이트의 제조( NMC 3 메이탄신 )(화합물 30)(도 14)
건조된 플리 교반막대를 넣은 건조된 4mL 유리 섬광 바이알에 FMOC NMC3 메이탄신(182.7mg, 0.2mmol)을 넣었다. DMF(1.6mL) 중의 피페리딘(344.8mg, 0.4mL, 4.0mmol)을 주사기로 첨가했다. 용액을 20min 동안 실온에서 교반하고 Biotage KP C18 HS 3g 샘플릿 위에 직접 흡착시키고 H2O 중의 0-100% CH3CN의 구배를 사용하여 Biotage KP C18 HS 30g 카트릿지 상에서 정제하여 흰색 고체인 원하는 생성물을 수득했다(110.6mg, 79% 수율). HPLC 체류 시간 13.510min. 방법 A.
Figure pct00191
(S)-1-((S)-3- 메이탄시닐 ) 2-(4-((((4-((S)-2-((S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카보닐)(메틸)아미노)-N-메틸부탄아미도)프로파노에이트의 제조( FMOC Val Cit PABC NMC 3 메이탄신)(화합물 31)( 도 15)
건조된 플리 교반막대를 넣은 건조된 4mL 유리 섬광 바이알에 NMC3 메이탄신 (39.8mg, 0.05mmol), FMOC Val Cit PABC PNO2P(42.0mg, 0.06mmol), HOAt(12.8mg, 0.09mmol), DIPEA(20.6mg, 27.8uL, 0.16mmol), 및 무수 DMF(0.7mL)를 넣었다. 용액을 24h 동안 실온에서 교반하고 Biotage KP C18 HS 1.2g 샘플릿 위에 직접 흡착시키고 H2O 중의 0-100% CH3CN의 구배를 사용하여 Biotage KP C18 HS 12g 카트릿지 상에서 정제하여 연황색 고체인 표제 화합물을 수득했다(46.9mg, 64% 수율). HPLC 체류 시간 12.702min. 방법 A.
Figure pct00192
(S)-1-((S)-3- 메이탄시닐 ) 2-(4-((((4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카보닐)(메틸)아미노)-N-메틸부탄아미도)프로파노에이트의 제조(Val Cit PABC NMC 3 메이탄신 )(화합물 32)(도 15)
건조된 플리 교반막대를 넣은 건조된 4mL 유리 섬광 바이알에 FMOC Val Cit PABC NMC3 메이탄신(46.9mg, 0.03mmol)을 넣었다. DMF(0.4mL) 중의 피페리딘(86.2 mg, 0.1 mL, 1.0mmol)을 주사기로 첨가했다. 용액을 20min 동안 실온에서 교반하고 Biotage KP C18 HS 1.2g 샘플릿 위에 직접 흡착시키고 H2O 중의 0-100% CH3CN의 구배를 사용하여 Biotage KP C18 HS 12g 카트릿지 상에서 정제하여 흰색 고체인 원하는 생성물을 수득했다(31.1mg, 79% 수율). HPLC 체류 시간 8.774min. 방법 A.
Figure pct00193
(S)-1-((S)-3- 메이탄시닐 ) 2-(4-((((4-((30S,33S)-1-(9H-플루오렌-9-일)-30-이소프로필-3,6,28,31-테트라옥소-33-(3-우레이도프로필)-2,10,13,16,19,22,25-헵타옥사-4,7,29,32-테트라아자테트라트리아콘탄아미도)벤질)옥시)카보닐)(메틸)아미노)-N-메틸부탄아미도)프로파노에이트의 제조( FMOC G PEG 6 Val Cit PABC NMC 3 메이 탄신)(화합물 33)( 도 16)
건조된 플리 교반막대를 넣은 건조된 4mL 유리 섬광 바이알에 FMOC G PEG6 CO2H(21.5mg, 0.03mmol), HATU(12.7mg, 0.03mmol), 및 무수 DMF(0.2mL)를 넣었다. 투명한 무색 용액을 15min 동안 실온에서 교반했다. Val Cit PABC NMC3 메이탄신 (31.1mg, 0.03mmol), DIPEA (10.5mg, 14.2uL, 0.08mmol), 및 무수 DMF(0.2mL)를 별도의 건조된 4mL 유리 섬광 바이알에서 합해서 교반중인 용액에 서서히 적가했다. 반응물을 2h 동안 실온에서 교반하고 Biotage KP C18 HS 1.2g 샘플릿 위에 흡착시키고 H2O 중의 0-100% CH3CN의 구배를 사용하여 Biotage KP C18 HS 12g 카트릿지 상에서 정제하여 흰색 고체로서 표제 화합물을 수득했다(43.6mg, 91% 수율). HPLC 체류 시간 11.305min. 방법 A.
Figure pct00194
(S)-1-((S)-3- 메이탄시닐 ) 2-(4-((((4-((26S,29S)-1-아미노-26-이소프로필-2,24,27-트리옥소-29-(3-우레이도프로필)-6,9,12,15,18,21-헥사옥사-3,25,28-트리아자트리아콘탄아미도)벤질)옥시)카보닐)(메틸)아미노)-N-메틸부탄아미도)프로파노에이트의 제조(G PEG 6 Val Cit PABC NMC 3 메이탄신 )(화합물 34)(도 17)
건조된 플리 교반막대를 넣은 건조된 4mL 유리 섬광 바이알에 FMOC Val Cit PABC NMC3 메이탄신(43.6mg, 0.03mmol)을 넣었다. DMF(0.4mL) 중의 피페리딘(86.2 mg, 0.1 mL, 1.0mmol)을 주사기로 첨가했다. 용액을 20min 동안 실온에서 교반하고 Biotage KP C18 HS 1.2g 샘플릿 위에 직접 흡착시키고 H2O 중의 0-100% CH3CN의 구배를 사용하여 Biotage KP C18 HS 12g 카트릿지 상에서 정제하여 흰색 고체인 원하는 생성물을 수득했다(33.7mg, 89% 수율). HPLC 체류 시간 8.817min. 방법 A.
Figure pct00195
(9H- 플루오렌 -9-일) 메틸 2-((1-((6S,9S)-1-아미노-6-((4-((10S,13S)-13-((S)-3-메이탄시닐)-4,9,10-트리메틸-3,8,11-트리옥소-2,12-디옥사-4,9-디아자테트라데실)페닐)카바모일)-9-이소프로필-1,8,11,33,36-펜타옥소-14,17,20,23,26,29-헥사옥사-2,7,10,32,35-펜타아자옥타트리아콘탄-38-일)-1H-인돌-2-일)메틸)-1,2-디메틸히드라진카복실레이트의 제조( FMOC HIPS 인돌 G PEG 6 Val Cit PABC NMC 3 메이탄 신)(화합물 35)( 도 18)
건조된 플리 교반막대를 넣은 건조된 4mL 유리 섬광 바이알에 G PEG6 Val Cit PABC NMC3 메이탄신(33.7mg, 0.02mmol), FMOC HIPS 인돌 CO2PFP(17.4mg, 0.03 mmol), DIPEA(8.5mg, 11.5uL, 0.07mmol) 및 무수 DMF(0.3mL)를 넣었다. 용액을 2h 동안 실온에서 교반하고 Biotage KP C18 HS 1.2g 샘플릿 위에 직접 흡착시키고 H2O 중의 0-100% CH3CN의 구배를 사용하여 Biotage KP C18 HS 12g 카트릿지 상에서 정제하여 연황색 고체로서 표제 화합물을 수득했다(39.3mg, 90% 수율). HPLC 체류 시간 12.900min. 방법 A.
Figure pct00196
(S)-1-((S)-3- 메이탄시닐 ) 2-(4-((((4-((2S,5S)-34-(2-((1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)-5-이소프로필-4,7,29,32-테트라옥소-2-(3-우레이도프로필)-10,13,16,19,22,25-헥사옥사-3,6,28,31-테트라아자테트라트리아콘탄아미도)벤질)옥시)카보닐)(메틸)아미노)-N-메틸부탄아미도)프로파노에이트의 제조(HIPS 인돌 G PEG6 Val Cit PABC NMC 3 메이탄신 )(화합물 36)(도 19)
건조된 플리 교반막대를 넣은 건조된 4mL 유리 섬광 바이알에 FMOC HIPS 인돌 G PEG6 Val Cit PABC NMC3 메이탄신(39.3mg, 0.02mmol)을 넣었다. DMA(0.4mL) 중의 피페리딘(86.2mg, 0.1mL, 1.0mmol)을 주사기로 첨가했다. 용액을 20min 동안 실온에서 교반하고 Biotage KP C18 HS 1.2g 샘플릿 위에 직접 흡착시키고 H2O 중의 0-100% CH3CN의 구배를 사용하여 Biotage KP C18 HS 12g 카트릿지 상에서 정제하여 흰색 고체인 원하는 생성물을 수득했다(31.3mg, 90% 수율). HPLC 체류 시간 9.425 min. 방법 A. C87H129ClN14NaO24 +[M+Na]+에 대한 LRMS(ESI) 계산 1811.9; 실측 1811.7.
실시예 8
방법 8 - 3-(((S)-1-((S)-1-시클로프로필에톡시)-1-옥소프로판-2-일)(메틸)아미노)-2-(3-(2-((1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)프로판아미드)-3-옥소프로판-1-설포네이트의 제조(HIPS 인돌 C (SO3H) 메이탄신)
Figure pct00197
화합물 HIPS 인돌 C (SO3H) 메이탄신의 합성을 위한 반응도가 도 20에 도시된다.
(R)-2-(3-(2-((2-(((9H- 플루오렌 -9-일) 메톡시 ) 카보닐 )-1,2- 디메틸히드라지 닐)메틸)-1H-인돌-1-일)프로판아미드)-3-설포프로파노익산의 제조( FMOC HIPS 인돌 C ( SO 3 H ) CO 2 H )(화합물 36)(도 20)
건조된 완두모양 교반막대를 넣은 건조된 20mL 유리 섬광 바이알에 L-시스테산 일수화물(411.1mg, 2.2mmol), FMOC HIPS 인돌 CO2PFP(704.6mg, 1.1mmol), DIPEA (851.8mg, 1.148mL, 6.6mmol), 및 무수 DMF(5mL)를 넣었다. 용액을 4h 동안 실온에서 교반하고 Biotage KP C18 HS 12g 샘플릿 위에 직접 흡착시키고 H2O 중의 0-100% CH3CN의 구배를 사용하여 Biotage KP C18 HS 60g 카트릿지 상에서 정제하여 흰색 고체로서 표제 화합물을 수득했다(654.2mg, 95% 수율). HPLC 체류 시간 10.725 min. 방법 C.
Figure pct00198
2-(3-(2-((2-(((9H- 플루오렌 -9-일) 메톡시 ) 카보닐 )-1,2- 디메틸히드라지닐 ) 메 틸)-1H-인돌-1-일)프로판아미드)-3-(((S)-1-((S)-3-메이탄시닐)-1-옥소프로판-2-일)(메틸)아미노)-3-옥소프로판-1-설포네이트의 제조( FMOC HIPS 인돌 C ( SO 3 H ) 메이 탄신)(화합물 37)( 도 20)
건조된 완두모양 교반막대를 넣은 건조된 20mL 유리섬광 바이알에 FMOC HIPS 인돌 C(SO3H) CO2H(586.2mg, 0.9mmol), HATU(351.3mg, 0.9mmol), 및 무수 DMF(3mL)를 넣었다. 투명한 무색 용액을 15min 동안 실온에서 교반했다. 디아실 메이탄신 (316.9mg, 0.5mmol), DIPEA(388.3mg, 523.3uL, 3.0mmol), 및 무수 DMF(3mL)를 별도의 건조된 4mL 유리 섬광 바이알에서 합해서 교반중인 용액에 서서히 적가했다. 반응물을 2h 동안 실온에서 교반하고 Biotage KP C18 HS 12g 샘플릿 위에 직접 흡착시키고 H2O 중의 0-100% CH3CN의 구배를 사용하여 Biotage KP C18 HS 60g 카트릿지 상에서 정제하여 흰색 고체인 원하는 생성물을 수득했다(505.9mg, 82% 수율). HPLC 체류 시간 16.493min, 16.899min(부분입체이성질체 혼합물). 방법 C.
Figure pct00199
3-(((S)-1-((S)-3- 메이탄시닐 )-1- 옥소프로판 -2-일)( 메틸 )아미노)-2-(3-(2-((1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)프로판아미드)-3-옥소프로판-1-설포네이트의 제조(HIPS 인돌 C ( SO 3 H ) 메이탄신 )(화합물 38)(도 20)
건조된 플리 교반막대를 넣은 건조된 4mL 유리 섬광 바이알에 FMOC HIPS 인돌 C(SO3H)메이탄신(253.0mg, 0.2mmol)을 넣었다. DMA(0.8mL) 중의 피페리딘(172.4 mg, 0.2mL, 2.0mmol)을 주사기로 첨가했다. 용액을 20min 동안 실온에서 교반하고 Biotage KP C18 HS 1.2g 샘플릿 위에 직접 흡착시키고 H2O 중의 0-100% CH3CN의 구배를 사용하여 Biotage KP C18 HS 12g 카트릿지 상에서 정제하여 흰색 고체로서 표제 화합물을 수득했다(83.2mg, 40% 수율). HPLC 체류 시간 13.643min, 13.968min (부분입체이성질체 혼합물). 방법 C. C49H65ClN7O14S-[M-H]-에 대한 계산된 LRMS(ESI) 1042.4; 실측 1042.1.
실시예 9
방법 9 - (S)-1-((S)-3-메이탄시닐) 31-(2-((1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)-2,3-디메틸-4,26,29-트리옥소-7,10,13,16,19,22-헥사옥사-3,25,28-트리아자헨트리아콘탄-1-오에이트의 제조(HIPS 인돌 G PEG6 메이탄신)
Figure pct00200
화합물 HIPS 인돌 G PEG6 메이탄신의 합성을 위한 반응도가 도 21 및 도 22에 도시된다.
(S)-1-((S)-3- 메이탄시닐 ) 1-(9H- 플루오렌 -9-일)-29,30-디메틸-3,6,28- 트리옥소 -2,10,13,16,19,22,25-헵타옥사-4,7,29-트리아자헨트리아콘탄-31-오에이트의 제조(FMOC G PEG 6 메이탄신 )(화합물 39)(도 21)
건조된 플리 교반막대를 넣은 건조된 4mL 유리섬광 바이알에 FMOC G PEG6 CO2H(62.3mg, 0.1mmol), HATU(37.8mg, 0.1mmol), 및 무수 DMF(0.2mL)를 넣었다. 투명한 무색 용액을 15min 동안 실온에서 교반했다. 디아실 메이탄신(63.8mg, 0.1 mmol), DIPEA(38.2mg, 51.4uL, 0.3mmol), 및 무수 DMF(0.2mL)를 별도의 건조된 4mL 유리 섬광 바이알에서 합해서 교반중인 용액에 서서히 적가했다. 반응물을 2h 동안 실온에서 교반하고 Biotage KP C18 HS 1.2g 샘플릿 위에 직접 흡착시키고 H2O 중의 0-100% CH3CN의 구배를 사용하여 Biotage KP C18 HS 12g 카트릿지 상에서 정제하여 흰색 고체로서 원하는 생성물을 수득했다(87.3mg, 70% 수율). HPLC 체류 시간 12.122 min. 방법 A.
Figure pct00201
(S)-1-((S)-3- 메이탄시닐 )1-아미노-25,26-디메틸-2,24- 디옥소 -6,9,12,15,18,21-헥사옥사-3,25-디아자헵타코산-27-오에이트의 제조(G PEG 6 메이탄 신)(화합물 40)( 도 21)
건조된 플리 교반막대를 넣은 건조된 4mL 유리 섬광 바이알에 FMOC G PEG6 메이탄신(87.3mg,0.07mmol)을 넣었다. DMF(0.8mL) 중의 피페리딘(172.4mg, 0.2mL, 2.0mmol)을 주사기로 첨가했다. 용액을 20min 동안 실온에서 교반하고 Biotage KP C18 HS 1.2g 샘플릿 위에 직접 흡착시키고 H2O 중의 0-100% CH3CN의 구배를 사용하여 Biotage KP C18 HS 12g 카트릿지 상에서 정제하여 흰색 고체로서 표제 화합물을 수득했다(59.1mg, 82% 수율). HPLC 체류 시간 14.090min. 방법 A.
Figure pct00202
(S)-1-((S)-3- 메이탄시닐 ) 31-(2-((2-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카보닐)-1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)-2,3-디메틸-4,26,29-트리옥소-7,10,13,16,19,22-헥사옥사-3,25,28-트리아자헨트리아콘탄-1-오에이트의 제조( FMOC HIPS 인돌 G PEG 6 메이탄신 )(화합물 41)(도 21)
건조된 플리 교반막대를 넣은 건조된 4mL 유리 섬광 바이알에 G PEG6 메이탄신(59.1mg, 0.06mmol), FMOC HIPS 인돌 CO2PFP(44.0mg, 0.07mmol), DIPEA(36.6mg, 49.4uL, 0.3mmol), 및 무수 DMF(0.3mL)를 넣었다. 용액을 2h 동안 실온에서 교반하고 Biotage KP C18 HS 1.2g 샘플릿 위에 직접 흡착시키고 H2O 중의 0-100% CH3CN의 구배를 사용하여 Biotage KP C18 HS 12g 카트릿지 상에서 정제하여 흰색 고체인 원하는 생성물을 수득했다(67.2mg, 79% 수율). HPLC 체류 시간 13.963min. 방법 A.
Figure pct00203
(S)-1-((S)-3- 메이탄시닐 ) 31-(2-((1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)-2,3-디메틸-4,26,29-트리옥소-7,10,13,16,19,22-헥사옥사-3,25,28-트리아자헨트리아콘탄-1-오에이트의 제조(HIPS 인돌 G PEG 6 메이탄신 )(화합물 42)(도 22)
건조된 플리 교반막대를 넣은 건조된 4mL 유리 섬광 바이알에 FMOC HIPS 인돌 G PEG6 메이탄신(67.2mg, 0.05mmol)을 넣었다. DMA(0.4mL) 중의 피페리딘(86.2 mg, 0.1mL, 1.0mmol)을 주사기로 첨가했다. 용액을 20min 동안 실온에서 교반하고 Biotage KP C18 HS 1.2g 샘플릿 위에 직접 흡착시키고 H2O 중의 0-100% CH3CN의 구배를 사용하여 Biotage KP C18 HS 12g 카트릿지 상에서 정제하여 흰색 고체로서 표제 화합물을 수득했다(48.0mg, 84% 수율). HPLC 체류 시간 9.416min. 방법 A. LRMS (ESI) C63H94ClN8O18 +[M+H]+: 계산 1285.6; 실측 1285.5.
실시예 10
방법 10 - (2S,15S)-1-((S)-3-메이탄시닐) 15-(2-(((2R,3R,4R,5S,6R)-3-아세타미도-4,5-디하이드록시-6-(하이드록시메틸)테트라하이드로-2H-피란-2-일)아미노)-2-옥소에틸)-19-(2-((1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)-2,3-디메틸-4,14,17-트리옥소-7,10-디옥사-3,13,16-트리아자노나데칸-1-오에이트의 제조(HIPS 인돌 N((OH)3AcNH-β-Glc) PEG2 메이탄신)
Figure pct00204
화합물 HIPS 인돌 N((OH)3AcNH-β-Glc) PEG2 메이탄신의 합성을 위한 반응도가 도 23에 도시된다.
( 2R,3S,4R,5R,6R )-5- 아세타미도 -2-( 아세톡시메틸 )-6-(( 2S,15S )-1-((S)-3- 메 이탄시닐)-15-(3-(2-((1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)프로판아미드)-2,3-디메틸-1,4,14-트리옥소-7,10-디옥사-3,13-디아자헵타데칸아미도)테트라하이드로-2H-피란-3,4-디일 디아세테이트의 제조(HIPS 인돌 N ((Ac) 3 AcNH -?- Glc ) PEG 2 메이탄신)(화합물 43)( 도 23)
방법 3대로 제조. HPLC 체류 시간 9.451min. 방법 A. C71H100ClN10O23 +[M+H]+:에 대한 계산된 LRMS (ESI) 1495.7; 실측 1495.4.
Figure pct00205
( 2S,15S )-1-((S)-3- 메이탄시닐 ) 15-(2-(((2R,3R,4R,5S,6R)-3-아세타미도-4,5-디하이드록시-6-(하이드록시메틸)테트라하이드로-2H-피란-2-일)아미노)-2-옥소에틸)-19-(2-((1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)-2,3-디메틸-4,14,17-트리옥소-7,10-디옥사-3,13,16-트리아자노나데칸-1-오에이트의 제조(HIPS 인돌 N ((OH) 3 AcNH-β-Glc) PEG 2 메이탄신 )(화합물 44)(도 23)
건조된 플리 교반막대를 넣은 건조된 4mL 유리 섬광 바이알에 HIPS 인돌 N ((Ac)3AcNH-β-Glc) PEG2 메이탄신(7.2mg, 4.8umol) 및 무수 MeOH(1.0mL)를 넣었다. NH3(1.0mL, 2.0mmol, 무수 MeOH 중 2.0M 용액)를 주사기로 첨가했다. 용액을 4h 동안 실온에서 교반하고 증발시키고 Biotage KP C18 HS 1.2g 샘플릿 위에 직접 흡착시키고 H2O 중의 0-100% CH3CN의 구배를 사용하여 Biotage KP C18 HS 12g 카트릿지 상에서 정제하여 흰색 필름인 원하는 생성물을 수득했다(6.5mg, 99% 수율). HPLC 체류 시간 8.520min. 방법 A. LRMS(ESI) C65H94ClN10O20 +[M+H]+: 계산 1369.6; 실측 1369.5.
실시예 11
방법 11 - (2S,9S,10R)-1-((S)-3-메이탄시닐) 18-(2-((1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)-9,10-디하이드록시-2,3-디메틸-4,8,11,16-테트라옥소-3,7,12,15-테트라아자옥타데칸-1-오에이트의 제조(HIPS 인돌 에틸렌디아민 타르타르산(OH)2 베타 알라닌 메이탄신)(중간체 화합물 45로부터)
Figure pct00206
화합물 HIPS 인돌 에틸렌디아민 타르타르산(OH)2 베타 알라닌 메이탄신의 합성을 위한 반응도가 도 24에 도시된다.
벤질 tert -부틸 에탄-1,2- 디일디카바메이트의 제조
tert-부틸(2-아미노에틸)카바메이트(1.0g, 6.3mmol), Et3N(0.94g, 9.4mmol), 및 THF(20mL)의 용액에 CbzCl(1.2g, 7.5mmol)을 10min에 걸쳐서 첨가했다. 반응물을 10h 동안 실온에서 교반하고 농축해서 흰색 고체를 수득했고, 이것을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(PE:EtOAc = 10:1 ~ 3:1)에 의해 정제하여 원하는 화합물을 얻었다(1.5g, 83% 수율).
Figure pct00207
2-((( 벤질옥시 ) 카보닐 )아미노) 에탄아미늄 클로라이드의 제조
MeOH(10mL) 중의 벤질 tert-부틸 에탄-1,2-디일디카바메이트(1.5g, 6.3mmol)를 HCl/EtOAc(2mL)로 처리했다. 반응물을 10h 동안 실온에서 교반하고 농축해서 표제 화합물을 얻었다(1.0 g, 85% 수율).
Figure pct00208
벤질 (2- 아미노에틸 ) 카바메이트의 제조
물(5mL) 중의 2-(((벤질옥시)카보닐)아미노)에탄아미늄 클로라이드의 용액에 무수 Na2CO3를 리트머스 시험에서 pH 9가 될때까지 첨가했다. 용매를 제거하여 잔류물을 수득했고, 이것을 CH2Cl2로 분쇄하고 여과했다. 여과물을 농축하여 원하는 자유 아민을 수득했다(0.93 g, 99% 수율).
Figure pct00209
( 2S,3R )-2,3- 디아세톡시 -4-((2-((( 벤질옥시 ) 카보닐 )아미노)에틸)아미노)-4-옥소부타노익산의 제조
THF(2mL) 중의 벤질 (2-아미노에틸)카바메이트(100mg, 0.52mmol)에 0℃에서 (+)-디아세틸-L-타르타르산 무수물(37mg, 0.17mmol)을 첨가했다. 혼합물을 실온으로 가온하고 하룻밤 교반했다. 용매를 제거하여 연황색 고체로서 표제 화합물을 수득했다(212mg, 83% 수율). 이 화합물을 추가의 정제 없이 후속 단계에 사용했다.
Figure pct00210
( 2S,3R )-4-((2-((( 벤질옥시 ) 카보닐 )아미노)에틸)아미노)-2,3- 디하이드록시 -4-옥소부타노익산의 제조
H2O(40mL) 중의 (2S,3R)-2,3-디아세톡시-4-((2-(((벤질옥시)카보닐)아미노)에틸)아미노)-4-옥소부타노익산(3.3g, 8mmol)의 현탁액에 수산화칼륨(0.9g,16mmol)을 첨가했다. 용액을 1.5h 동안 실온에서 교반하고 HCl(1M)로 pH 5까지 산성화하여 흰색 침전물을 얻었다. 고체를 여과하고 물로 세척하고 건조시켜서 표제 화합물을 얻었다(1.2g, 45% 수율). 이 화합물을 추가의 정제 없이 후속 단계에 사용했다.
Figure pct00211
( 9R,10S )- 벤질 9,10- 디하이드록시 -3,8,11- 트리옥소 -1-페닐-2-옥사-4,7,12- 트 리아자펜타데칸-15-오에이트의 제조
DMF(100mL) 중의 (2S,3R)-4-((2-(((벤질옥시)카보닐)아미노)에틸)아미노)-2,3-디하이드록시-4-옥소부타노익산(4g, 12mmol)의 용액에 HOBT(1.66g, 12mmol) 및 EDCI(2.3g, 12mmol)을 첨가했다. 반응물을 30min 동안 실온에서 교반했으며, 이때 벤질 3-아미노프로파노에이트(2.1g, 12mmol)를 첨가했다. 반응물을 하룻밤 실온에서 교반하고 10% Na2CO3 용액을 적가하여 흰색 침전물을 얻었다. 고체를 여과하고 물로 세척하고 진공 건조시켜서 표제 화합물을 수득했다(5.2g, 78% 수율).
Figure pct00212
( 9R,10S )- 벤질 9,10- 비스 (( tert - 부틸디메틸실릴 ) 옥시 )-3,8,11- 트리옥소 -1-페닐-2-옥사-4,7,12-트리아자펜타데칸-15-오에이트의 제조
DMF(20mL) 중의 (9R,10S)-벤질 9,10-디하이드록시-3,8,11-트리옥소-1-페닐-2-옥사-4,7,12-트리아자펜타데칸-15-오에이트(5.8g, 12mmol)의 용액에 TBSCl(18g, 0.72mol) 및 이미다졸(8.1g, 0.72mol)을 첨가했다. 반응물을 하룻밤 실온에서 교반하고 EtOAc(200mL)로 희석하고 1 x 5M NaCl 및 2 x H2O로 세척하고 Na2SO4에서 건조시키고 농축하여 연황색 점성 오일을 얻었다. 이 오일을 실리카겔 플래시 칼럼 크로마토그래피(PE:EA = 6:1 ~ 2:1)에 의해 정제하여 연분홍색 고체로서 표제 화합물을 수득했다(4.9g, 87% 수율).
Figure pct00213
3- ((2S,3R)-4-((2-아미노에틸) 아미노)-2,3- 비스 (( tert - 부틸디메틸실릴 ) 옥시 )-4-옥소부탄아미도)프로파노익산의 제조(화합물 45)(도 24)
THF(400mL) 중의 (9R,10S)-벤질 9,10-비스 ((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-3,8,11-트리옥소-1-페닐-2-옥사-4,7,12-트리아자펜타데칸-15-오에이트(4.0g, 2.46mmol)의 용액에 10% Pd/C(3.7g, 50% wt)를 첨가했다. 혼합물을 이중층 H2 풍선 아래서 하룻밤 실온에서 교반했다. 반응 혼합물을 여과하고 THF로 세척했다. 여과물을 농축하여 표제 화합물을 수득했다(3.7g, 91% 수율). MS: m/z (ESI+): (M+H)+ = 492.55. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.18 (d, J = 2.0 Hz, 1 H), 4.15 (d, J = 2.0 Hz, 1 H), 3.37-3.40 (m, 2 H), 3.34-3.36 (m, 1 H), 3.30-3.32 (m, 1 H), 2.74 (s, 2 H), 2.17-2.24 (m, 2 H), 0.88 (s, 18 H), 0.02 (s, 6 H), -0.04 (s, 6 H).
Figure pct00214
3-(( 2S,3R )-4-((2-(3-(2-((2-(((9H- 플루오렌 -9-일) 메톡시 ) 카보닐 )-1,2- 디메 틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)프로판아미드)에틸)아미노)-2,3-비스((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-4-옥소부탄아미도)프로파노익산의 제조(도 24)
건조된 완두모양 교반 막대를 넣은 건조된 20mL 유리섬광 바이알에 3-((2S, 3R)-4-((2-아미노에틸)아미노)-2,3-비스((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-4-옥소부탄아미도)프로파노익산(236.0mg, 0.5mmol), FMOC HIPS 인돌 CO2PFP(206.0mg, 0.3mmol), NaHCO3(134.0mg, 1.6mmol), 및 DMA(5mL)를 넣었다. 용액을 1h 동안 실온에서 교반하고 H2O(25mL)에 붓고 3 x 10mL EtOAc로 추출했다. 유기 분획을 합해서 1 x 10mL 5M NaCl로 세척하고 Na2SO4에서 건조시키고 농축하고 Biotage KP C18 HS 3g 샘플릿 위에 흡착시키고 H2O 중의 0-100% CH3CN의 구배를 사용하여 Biotage KP C18 HS 30g 카트릿지 상에서 정제하여 흰색 고체인 원하는 생성물을 수득했다(230.0mg, 76% 수율). HPLC 체류 시간 16.21min. 방법 A.
Figure pct00215
( 2S,9S,10R )-1-((S)-3- 메이탄시닐 ) 18-(2-((2-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카보닐)-1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)-9,10-비스((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-2,3-디메틸-4,8,11,16-테트라옥소-3,7,12,15-테트라아자옥타데칸-1-오에이트의 제조( FMOC HIPS 인돌 에틸렌디아민 타르타르산(OTBDMS) 2 베타 알라닌 메이탄 신)(도 24)
건조된 플리 교반 막대를 넣은 건조된 4mL 유리섬광 바이알에 3-((2S,3R)-4-((2-(3-(2-((2-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카보닐)-1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)프로판아미드)에틸)아미노)-2,3-비스 ((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-4-옥소부탄아미도)프로파노익산(129.0mg, 0.1mmol), HATU(52.0mg, 0.1mmol), 및 무수 DMF(0.5mL)를 넣었다. 투명한 무색 용액을 15min 동안 실온에서 교반했다. 디아실 메이탄신(96.0mg, 0.1mmol), DIPEA(36.0mg, 48.5uL, 0.3mmol), 및 무수 DMF (0.5mL)를 별도의 건조된 4mL 유리 섬광 바이알에서 합해서 교반중인 용액에 서서히 적가했다. 반응물을 2h 동안 실온에서 교반하고 Biotage KP C18 HS 3g 샘플릿 위에 직접 흡착시키고 H2O 중의 0-100% CH3CN의 구배를 사용하여 Biotage KP C18 HS 30g 카트릿지 상에서 정제하여 흰색 고체로서 표제 화합물을 수득했다(103.0mg, 48% 수율). HPLC 체류 시간 17.23min. 방법 A.
Figure pct00216
( 2S,9S,10R )-1-((S)-3- 메이탄시닐 ) 18-(2-((1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)-9,10-디하이드록시-2,3-디메틸-4,8,11,16-테트라옥소-3,7,12,15-테트라아자옥타데칸-1-오에이트의 제조(HIPS 인돌 에틸렌디아민 타르타르산 (OH) 2 베타 알라닌 메이탄신 )(도 24)
건조된 플리 교반막대를 넣은 건조된 4mL 유리 섬광 바이알에 FMOC HIPS 인돌 에틸렌디아민 타르타르산(OTBDMS)2 베타 알라닌 메이탄신(102.0mg, 0.06mmol) 및 무수 THF(0.6mL)를 넣었다. 용액을 얼음 H2O 배쓰에서 0℃로 냉각하고 TBAF(0.225 mL, 0.225mmol, 무수 THF 중 1.0M 용액)를 주사기로 적가했다. 용액을 0℃에서 35min 동안 교반하고 Biotage KP C18 HS 1.2 샘플릿 위에 직접 흡착시키고 H2O 중의 0-100% CH3CN의 구배를 사용하여 Biotage KP C18 HS 12g 카트릿지 상에서 정제하여 흰색 고체인 원하는 생성물을 수득했다(45.0mg, 60% 수율). HPLC 체류 시간 8.72 min. 방법 A. C55H76ClN9NaO15 +[M+Na]+에 대한 LRMS(ESI) 계산 1160.5; 실측 1160.5.
실시예 12
방법 12 - (S)-(S)-1-시클로프로필에틸 16-(2-((1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)-7,10-비스(2-하이드록시에틸)-2,3-디메틸-4,8,11,14-테트라옥소-3,7,10,13-테트라아자헥사데칸-1-오에이트의 제조(HIPS 인돌 글리신 디하이드록시펩토이드(OH)2 베타 알라닌 메이탄신)(중간체 화합물 46로부터)
Figure pct00217
화합물 HIPS 인돌 글리신 디하이드록시펩토이드(OH)2 베타 알라닌 메이탄신의 합성을 위한 반응도가 도 25에 도시된다.
2-(( tert - 부틸디메틸실릴 ) 옥시 ) 에탄아민의 제조(화합물 1)
무수 DCM(1L) 중의 2-아미노에탄올(50g, 0.82mol), Et3N(124g, 1.23mol), 및 DMAP(2g)의 교반 용액에 TBSCl(135g, 0.9016mol)을 첨가했다. 반응물을 하룻밤 실온에서 교반하고 수성 NH4Cl로 퀀칭하고 DCM(x3)으로 추출했다. 합친 유기층을 H2O로 세척하고 MgSO4에서 건조시키고 여과하고 농축하고 플래시 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물을 얻었다(30.5g, 22% 수율). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.6 (t, J=5.5 Hz, 2H), 2.74 (t, J=5.5 Hz, 2H), 1.36 (brs, 1 H), 0.87 (s, 9H), 0.04 (s, 6H).
Figure pct00218
벤질 3-((2-(( tert - 부틸디메틸실릴 ) 옥시 )에틸)아미노) 프로파노에이트의 제조 (화합물 2)
0℃에서 MeOH(25mL) 및 THF(25mL) 중의 염화리튬(20mg) 및 화합물 1(1.0g, 5.71mmol)의 교반 용액에 벤질 아크릴레이트(1.0g, 6.28mmol)를 10min에 걸쳐서 적가했다. 반응 혼합물을 점진적으로 실온까지 가온하고 하룻밤 실온에서 교반했다. 반응 혼합물을 감압 농축하고 EtOAc(250mL)로 추출하고 5M NaCl(200mL)로 세척하고 Na2SO4에서 건조시키고 증발시켰다. 잔류물을 플래시 칼럼 크로마토그래피(PE:EA = 5:1 내지 0:1)로 정제하여 원하는 화합물을 수득했다(0.7g, 37% 수율).
Figure pct00219
벤질 3- (2-브로모-N-(2-((tert-부틸디메틸 실릴) 옥시 )에틸) 아세타미도 ) 프로파 노에이트의 제조(화합물 3)
질소하에 0℃에서 THF(20mL) 중의 화합물 2(0.7g, 2.07mmol)의 용액에 Et3N (1.2당량, 0.25g, 2.49mmol)과 브로모아세틸 브로마이드(1.2당량, 0.5g, 2.49mmol)를 첨가했다. 반응물을 1h 동안 0℃에서 교반하고 EtOAc(10mL)로 희석하고 여과했다. 고체를 EtOAc로 헹구고 여과물을 진공 건조시켜 조 브로모아세틸 아미드를 수득했다. 생성물을 플래시 칼럼 크로마토그래피(PE:EA = 10:1 내지 5:1)로 정제하여 순수한 화합물 3(0.3g, 31% 수율)을 수득했다. MS+: 459[M+H]+.
Figure pct00220
벤질 10-(2-(( tert - 부틸디메틸실릴 ) 옥시 )에틸)-2,2,3,3- 테트라메틸 -9-옥소-4-옥사-7,10-디아자-3-실라트리데칸-13-오에이트의 제조(화합물 4)
질소하에 0℃에서 THF(350mL) 중의 화합물 3(36.8g, 80.3mmol, 1.0eq)의 용액에 Et3N(16.3g,160.7mmol, 2eq)과 2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에탄아민(28.1g, 160.7mmol, 2eq)을 첨가했다. 반응물을 하룻밤 실온에서 교반하고 EtOAc(100mL)로 희석하고 여과했다. 고체를 EtOAc로 헹구고 여과물을 농축하여 조 아민을 수득했다. 생성물을 플래시 칼럼 크로마토그래피(PE:EA= 3:1)로 정제하여 화합물 4(27g, 60% 수율)를 수득했다.
Figure pct00221
벤질 7,10- 비스 (2-(( tert - 부틸디메틸실릴 ) 옥시 )에틸)-3,6,9- 트리옥소 -1-페닐-2-옥사-4,7,10-트리아자트리데칸-13-오에이트의 제조(화합물 5)
0℃에서 DCM(20mL) 중의 Cbz-글리신(2.5g, 12mmol), EDCI(2.5g, 13mmol), 및 HOBT(1.75g, 13mmol)의 용액에 DIPEA(4.2g, 32.5mmol)를 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 30min 동안 교반했다. 이 용액에 화합물 4(6g, 11mmol)를 적가했다. 반응물을 하룻밤 실온에서 교반하고 증발시켜 건조시키고 DCM에 현탁하고 여과했다. 여과물을 H2O 및 5M NaCl로 세척하고 Na2SO4에서 건조시키고 농축했다. 잔류물을 플래시 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 5를 수득했다(3.01g, 38% 수율).
Figure pct00222
7-(2- 아미노아세틸 )-10-(2-(( tert - 부틸디메틸실릴 ) 옥시 )에틸)-2,2,3,3- 테트 라메틸-9-옥소-4-옥사-7,10-디아자-3-실라트리데칸-13-오익산의 제조(화합물 46) (도 25)
Parr 쉐이커에서 EtOAc(50mL) 중의 화합물 5(1.9g, 2.55mmol)와 Pd/C(500mg)의 혼합물을 하룻밤 실온에서 H2(50psi)하에 교반했다. 혼합물을 셀라이트 패드를 통해서 여과하고 농축하여 표제 화합물을 얻었다(AB4296)(730mg, 55% 수율). LC-MS: 520(M+1).
Figure pct00223
7-(2-(3-(2-((2-(((9H- 플루오렌 -9-일) 메톡시 ) 카보닐 )-1,2- 디메틸히드라지닐 )메틸)-1H-인돌-1-일)프로판아미드)아세틸)-10-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에틸)-2,2,3,3-테트라메틸-9-옥소-4-옥사-7,10-디아자-3-실라트리데칸-13-오익산의 제조(도 25)
건조된 완두모양 교반 막대를 넣은 건조된 20mL 유리섬광 바이알에 펩토이드 AB4296(264.0mg, 0.5mmol), FMOC HIPS 인돌CO2PFP(220.0mg, 0.3mmol), NaHCO3(120.0 mg, 1.4mmol), 및 DMA(5mL)를 넣었다. 용액을 6h 동안 실온에서 교반하고 H2O(25 mL)에 붓고 3 x 10mL EtOAc로 추출했다. 유기 분획을 합해서 1 x 10mL 5M NaCl로 세척하고 Na2SO4에서 건조시키고 농축하고 Biotage KP C18 HS 3g 샘플릿 위에 흡착시키고 H2O 중의 0-100% CH3CN의 구배를 사용하여 Biotage KP C18 HS 30g 카트릿지 상에서 정제하여 흰색 고체로서 표제 화합물을 수득했다(184.0mg, 55% 수율). HPLC 체류 시간 18.88min. 방법 A.
Figure pct00224
(S)-1-((S)-3- 메이탄시닐 ) 7-(2-(3-(2-((2-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카보닐)-1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)프로판아미드)아세틸)-10-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에틸)-2,2,3,3,14,15-헥사메틸-9,13-디옥소-4-옥사-7,10,14-트리아자-3-실라헥사데칸-16-오에이트의 제조( FMOC HIPS 인돌 글리신 디하 이드록시펩토이드 (OTBDMS) 2 베타 알라닌 메이탄신)(도 25)
건조된 플리 교반막대를 넣은 건조된 4mL 유리 섬광 바이알에 7-(2-(3-(2-((2-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카보닐)-1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)프로판아미드)아세틸)-10-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에틸)-2,2,3,3-테트라메틸-9-옥소-4-옥사-7,10-디아자-3-실라트리데칸-13-오익산(180.0mg, 0.2mmol), HATU(72.0mg, 0.2mmol), 및 무수 DMF(0.5mL)를 넣었다. 투명한 무색 용액을 15min 동안 실온에서 교반했다. 디아실메이탄신(123.0mg, 0.2mmol), DIPEA(51.0mg, 68.7 uL, 0.4mmol), 및 무수 DMF(0.5mL)를 별도의 건조된 4mL 유리 섬광 바이알에서 합해서 교반중인 용액에 서서히 적가했다. 반응물을 2h 실온에서 교반하고 Biotage KP C18 HS 3g 샘플릿 위에 직접 흡착시키고 H2O 중의 0-100% CH3CN의 구배를 사용하여 Biotage KP C18 HS 30g 카트릿지 상에서 정제하여 흰색 고체인 원하는 생성물을 수득했다(235.0mg, 80% 수율). HPLC 체류 시간 20.21min. 방법 A.
Figure pct00225
(S)-1-((S)-3- 메이탄시닐 ) 16-(2-((1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)-7,10-비스(2-하이드록시에틸)-2,3-디메틸-4,8,11,14-테트라옥소-3,7,10,13-테트라아자헥사데칸-1-오에이트의 제조(HIPS 인돌 글리신 디하이드록시펩토이드 (OH) 2 베타 알라닌 메이탄신 )(도 25)
건조된 플리 교반막대를 넣은 건조된 4mL 유리 섬광 바이알에 FMOC HIPS 인돌 글리신디하이드록시펩토이드(OTBDMS)2 베타 알라닌 메이탄신(114.0mg, 0.07mmol) 및 무수 THF(0.5mL)를 넣었다. 용액을 얼음 H2O 배쓰에서 0℃로 냉각하고 TBAF(0.3 mL, 0.3mmol, 무수 THF 중 1.0M 용액)를 주사기로 적가했다. 용액을 0℃에서 1h 동안 교반하고 Biotage KP C18 HS 1.2 샘플릿 위에 직접 흡착시키고 H2O 중의 0-100% CH3CN의 구배를 사용하여 Biotage KP C18 HS 12g 카트릿지 상에서 정제하여 옅은 황백색 고체로서 표제 화합물을 수득했다(41.7mg, 51% 수율). HPLC 체류 시간 8.03min. 방법 A. C57H80ClN9NaO15 +[M+Na]+에 대해 계산된 LRMS(ESI) 1188.5; 실측 1188.4.
실시예 13
방법 13 - (S)-1-((S)-3-메이탄시닐) 19-(2-((1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)-7,10,13-트리스(2-하이드록시에틸)-2,3-디메틸-4,8,11,14,17-펜타옥소-3,7,10,13,16-펜타아자노나데칸-1-오에이트의 제조(HIPS 인돌 글리신 트리하이드록시펩토이드 (OH)3 베타 알라닌 메이탄신)(중간체 화합물 47로부터)
Figure pct00226
화합물 HIPS 인돌 글리신 트리하이드록시펩토이드(OH)3 베타 알라닌 메이탄신의 합성을 위한 반응도가 도 26에 도시된다.
벤질 7-(2- 브로모아세틸 )-10-(2-(( tert - 부틸디메틸실릴 ) 옥시 )에틸)-2,2,3,3-테트라메틸-9-옥소-4-옥사-7,10-디아자-3-실라트리데칸-13-오에이트의 제조(화합물 6)
질소하에 0℃에서 THF(150mL) 중의 화합물 4(16g, 29mmol)의 용액에 Et3N (3.5g, 34.7mmol) 및 브로모아세틸 브로마이드(7g, 34.7mmol)를 적가했다. 반응물을 1h 동안 0℃에서 교반하고 EtOAc(100mL)로 희석하고 여과했다. 고체를 EtOAc로 헹구고 여과물을 농축하여 조 브로모아세틸 아미드를 수득했다. 생성물을 플래시 칼럼 크로마토그래피(PE:EA = 10:1)로 정제하여 화합물 6(12.6 g, 64% 수율)을 수득했다.
Figure pct00227
벤질 10,13- 비스 (2-(( tert - 부틸디메틸실릴 ) 옥시 )에틸)-2,2,3,3- 테트라메틸 -9,12-디옥소-4-옥사-7,10,13-트리아자-3-실라헥사데칸-16-오에이트의 제조(화합물 7)
질소하에 0℃에서 THF(150mL) 중의 화합물 6(12.6g,18.5mmol)의 용액에 Et3N (3.75g, 37mmol) 및 2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에탄아민(6.5g, 37mmol)을 첨가했다. 반응물을 하룻밤 실온에서 교반하고 EtOAc(100mL)로 희석하고 여과하고 고체를 EtOAc로 세척했다. 여과물을 진공 농축하여 조 아민을 수득했다. 생성물을 플래시 칼럼 크로마토그래피(PE:EA = 3:1)로 정제하여 화합물 7(5.8g, 41 % 수율)을 수득했다.
Figure pct00228
벤질 7,10,13- 트리스 (2-(( tert - 부틸디메틸실릴 ) 옥시 )에틸)-3,6,9,12- 테트라 옥소-1-페닐-2-옥사-4,7,10,13-테트라아자헥사데칸-16-오에이트의 제조(화합물 8)
0℃에서 DCM(50mL) 중의 Cbz-글리신(1.74g, 8.3mmol), EDCI(1.73g,9.06mmol) 및 HOBT(1.22g, 9.06mmol)의 용액에 DIPEA(2.91g, 22.6mmol)를 첨가했다. 용액을 30min 동안 교반했다. 이 용액에 DCM(5mL) 중의 화합물 7(5.8g, 7.54mmol)을 적가했다. 혼합물을 하룻밤 실온에서 교반하고 농축하고 DCM에 현탁하고 여과했다. 여과물을 H2O 및 5M NaCl로 세척하고, 생성물을 플래시 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 순수한 화합물 8(2.72g, 38% 수율)을 수득했다. LC-MS: 960(M+1).
Figure pct00229
7-(2- 아미노아세틸 )-10,13- 비스 (2-(( tert - 부틸디메틸실릴) 옥시 )에틸)-2,2,3,3-테트라메틸-9,12-디옥소-4-옥사-7,10,13-트리아자-3-실라헥사데칸-16-오익산의 제조(화합물 47)(도 26)
Parr 쉐이커에서 EtOAc(60mL) 중의 화합물 화합물 8(2.7g, 2.81mmol)과 Pd/C (1g)의 혼합물을 하룻밤 실온에서 H2(60psi)하에 교반했다. 혼합물을 셀라이트 패드를 통해서 여과하고 MeOH로 세척하고 농축하여 잔류물을 얻었고, 이것을 동결건조시켜 AB4297을 수득했다(1.7g, 55% 수율). LC-MS: 735.6(M+1).
Figure pct00230
7-(2-(3-(2-((2-(((9H- 플루오렌 -9-일) 메톡시 ) 카보닐 )-1,2- 디메틸히드라지닐 )메틸)-1H-인돌-1-일)프로판아미드)아세틸)-10,13-비스(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에틸)-2,2,3,3-테트라메틸-9,12-디옥소-4-옥사-7,10,13-트리아자-3-실라헥사데칸-16-오익산의 제조(도 26)
건조된 플리 교반 막대를 넣은 건조된 4mL 유리섬광 바이알에 펩토이드 AB 4297(50.0mg,0.07mmol), FMOC HIPS 인돌 CO2PFP(38.6mg, 0.06mmol), NaHCO3(14.2mg, 0.2mmol), 및 DMA(0.4mL)를 넣었다. 용액을 16h 동안 실온에서 교반하고 1M HCl로 pH 2로 산성화하고 1 x 10mL EtOAc로 추출했다. 유기 분획을 1 x 10mL 1M HCl/5M NaCl(1/1)의 혼합물로 세척하고 Na2SO4에서 건조시키고 여과하고 농축하고 Biotage SNAP Ultra 1g 샘플릿 위에 흡착시키고 CH2Cl2 중의 0-10% MeSO4의 구배를 사용하여 Biotage SNAP Ultra 10g 카트릿지 상에서 정제하여 흰색 고체로서 표제 화합물을 수득했다(40.0mg, 49% 수율). HPLC 체류 시간 7.12min. 방법 A. C47H87N7O9Si3[M-H]-:에 대한 LRMS(ESI) 계산 1198.6; 실측 1198.0.
Figure pct00231
(S)-1-((S)-3- 메이탄시닐 ) 7-(2-(3-(2-((2-(((9H- 플루오렌 -9-일) 메톡시 ) 카보 닐)-1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)프로판아미드)아세틸)-10,13-비스 (2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에틸)-2,2,3,3,17,18-헥사메틸-9,12,16-트리옥소-4-옥사-7,10,13,17-테트라아자-3-실라노나데칸-19-오에이트의 제조( FMOC HIPS 인돌 글리신 트리하이드록시펩토이드 ( OTBDMS ) 3 베타 알라닌 메이탄신 )(도 26)
건조된 플리 교반막대를 넣은 건조된 4mL 유리 섬광 바이알에 7-(2-(3-(2-((2-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카보닐)-1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)프로판아미드)아세틸)-10,13-비스(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에틸)-2,2,3,3-테트라메틸-9,12-디옥소-4-옥사-7,10,13-트리아자-3-실라헥사데칸-16-오익산(28.1mg, 0.03mmol), 디아실 메이탄신(15.2mg, 0.02mmol), 및 DMA(0.13mL)를 넣었다. 용액을 얼음 H2O 배쓰에서 0℃로 냉각하면서 2,4,6-트리메틸피리딘(5.7mg, 6.2uL, 0.05mmol) 및 COMU(10.0mg, 0.02mmol)를 첨가했다. 반응물을 15min 동안 0℃에서 교반한 다음 실온으로 가온하고 3h 동안 교반했다. 반응 혼합물을 EtOAc (7mL)로 희석하고 3 x 2mL 0.5M HCl, 3 x 2mL 1.2M NaHCO3, 및 3 x 2mL 5M NaCl로 세척하고 MgSO4에서 건조시키고 여과하고 점성 오일로 농축했다. 생성물을 Biotage KP C18 HS 1.2g 샘플릿 위에 흡착시키고 H2O 중의 0-100% CH3CN의 구배를 사용하여 Biotage KP C18 HS 12g 카트릿지 상에서 정제하여 흰색 고체인 원하는 생성물을 수득했다(11.7mg, 32% 수율). HPLC 체류 시간 18.72min. 방법 A.
C94H139ClN10O19Si3[M+Na]+에 대한 LRMS(ESI) 계산 1853.9; 실측 1854.7.
Figure pct00232
(S)-1-((S)-3- 메이탄시닐 ) 19-(2-((1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)-7,10,13-트리스(2-하이드록시에틸)-2,3-디메틸-4,8,11,14,17-펜타옥소-3,7,10,13,16-펜타아자노나데칸-1-오에이트의 제조(HIPS 인돌 글리신 트리하이드록 시펩토이드 (OH) 3 베타 알라닌 메이탄신 )(도 26)
건조된 플리 교반막대를 넣은 건조된 4mL 유리 섬광 바이알에 FMOC HIPS 인돌 글리신 트리하이드록시펩토이드(OTBDMS)3 베타 알라닌메이탄신(11.7mg, 6.4umol) 및 무수 THF(63.4uL)를 넣었다. 용액을 얼음 H2O 배쓰에서 0℃로 냉각하고 TBAF (25.0uL, 0.25mmol, 무수 THF 중 1.0M 용액)를 마이크로피펫장치로 적가했다. 용액을 0℃에서 1h 동안 교반하고 Biotage KP C18 HS 1.2g 샘플릿 위에 직접 흡착시키고 H2O 중의 0-100% CH3CN의 구배를 사용하여 Biotage KP C18 HS 12g 카트릿지 상에서 정제하여 옅은 황백색 고체로서 표제 화합물을 수득했다(4.9mg, 61% 수율).
HPLC 체류 시간 8.50min. 방법 A. C61H87ClN10O17[M+H]+에 대한 LRMS(ESI) 계산 1267.6; 실측 1267.3.
실시예 14
방법 14 - (S)-1-((S)-3-메이탄시닐) 19-(2-((1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)-7,10,13-트리스(2-메톡시에틸)-2,3-디메틸-4,8,11,14,17-펜타옥소-3,7,10,13,16-펜타아자노나데칸-1-오에이트의 제조(HIPS 인돌 글리신 트리메톡시펩토이드 베타 알라닌 메이탄신)(중간체 화합물 48로부터)
Figure pct00233
화합물 HIPS 인돌 글리신 트리메톡시펩토이드 베타 알라닌 메이탄신의 합성을 위한 반응도가 도 27에 도시된다.
벤질 3-((2- 메톡시에틸 )아미노) 프로파노에이트의 제조(화합물 1)
0℃에서 MeOH(25mL)와 THF(25mL) 중의 2-메톡시에탄아민(0.42g, 5.6mmol) 및 염화리튬(20mg)의 용액에 10min에 걸쳐서 벤질 아크릴레이트(1.0g, 6.16mmol)를 적가했다. 반응물을 점진적으로 실온까지 가온하고 하룻밤 실온에서 교반했다. 용매를 감압 제거하고 결과의 잔류물을 EtOAc(250mL)에 용해시켰다. 유기 분획을 5M NaCl(200mL)로 세척하고 Na2SO4에서 건조시키고 농축하여 잔류물을 얻었다. 생성물을 플래시 칼럼 크로마토그래피(PE:EA = 5:1 내지 0:1)로 정제하여 화합물 1을 수득했다(0.95g, 71% 수율).
Figure pct00234
벤질 3-(2- 브로모 -N-(2- 메톡시에틸) 아세타미도 ) 프로파노에이트의 제조(화합물 2)
0℃에서 THF(20mL) 중의 화합물 1(0.95g, 4mmol)의 용액에 Et3N(0.49g, 4.8 mmol) 및 브로모아세틸 브로마이드(0.97g, 4.8mmol)를 첨가했다. 반응물을 1h 동안 0℃에서 교반하고 EtOAc(20mL)로 희석하고 여과하고 EtOAc로 세척했다. 여과물을 농축하고 진공 건조시켜서 조 브로모아세틸 아미드를 수득했고, 이것을 플래시 칼럼 크로마토그래피(PE:EA = 5:1)로 정제하여 순수한 화합물 2를 수득했다(1.15g, 80 % 수율). (MS+: 358, 360).
Figure pct00235
벤질 3- (N- (2- 메톡시에틸 )-2-((2- 메톡시에틸 )아미노) 아세타미도 ) 프로파노에 이트의 제조(화합물 3)
0℃에서 THF(20mL) 중의 화합물 2(1.15g, 3.2mmol)의 용액에 Et3N(0.647g, 6.4mmol) 및 2-메톡시에탄아민(0.48g, 6.4mmol)을 첨가했다. 반응물을 하룻밤 교반하고 EtOAc(10mL)로 희석하고 여과하고 EtOAc로 세척했다. 여과물을 농축하고 진공 건조시켜서 조 아민을 수득했고, 이것을 플래시 칼럼 크로마토그래피(PE:EA = 5:1 내지 0:1)로 정제하여 순수한 화합물 3을 수득했다(0.35g, 31% 수율). LC-MS: 353[M+H]+.
Figure pct00236
벤질 3- (2- (2- 브로모 -N-(2- 메톡시에틸 ) 아세타미도 )-N-(2- 메톡시에틸 ) 아세타 미도)프로파노에이트의 제조(화합물 4)
0℃에서 THF(15mL) 중의 화합물3(0.35g, 1mmol)의 용액에 Et3N(0.121g, 1.2 mmol) 및 브로모아세틸 브로마이드(0.242g, 1.2mmol)를 첨가했다. 반응물을 1h 동안 0℃에서 두고 EtOAc(10mL)로 희석하고 여과했다. 고체를 EtOAc로 세척하고 여과물을 진공 농축하여 조 브로모아세틸 아미드를 얻었다. 플래시 칼럼 크로마토그래피(EA)로 정제하여 화합물 4(0.29g, 61% 수율)를 얻었다. LC-MS: 473, 475.
Figure pct00237
벤질 8,11- 비스 (2- 메톡시에틸 )-7,10- 디옥소 -2-옥사-5,8,11- 트리아자테트라 데칸-14-오에이트의 제조(화합물 5)
0℃에서 THF(10mL) 중의 화합물 4(0.29g, 0.61mmol)의 용액에 Et3N(0.124g, 1.23mmol) 및 2-메톡시에탄아민(91mg, 1.23mmol)을 첨가했다. 반응물을 하룻밤 실온에서 교반하고 EtOAc(10mL)로 희석하고 여과했다. 고체를 EtOAc로 세척하고 여과물을 농축하여 조 아민을 얻었으며, 이것을 플래시 칼럼 크로마토그래피(MeOH:EA = 1:5)로 정제하여 순수한 화합물 5를 수득했다(0.15g, 52% 수율). LC-MS: 468 (M+1).
Figure pct00238
벤질 7,10,13- 트리스 (2- 메톡시에틸 )-3,6,9,12- 테트라옥소 -1-페닐-2-옥사-4,7,10,13-테트라아자헥사데칸-16-오에이트의 제조(화합물 6)
0℃에서 Cbz-글리신(181mg, 0.87mmol), DCM(10mL), EDCI(200mg, 1.04mmol) 및 HOBt(140mg, 1.04mmol)의 혼합물에 DIPEA(400mg, 3.13mmol)를 첨가했다. 혼합물을 15min 동안 0℃에서 교반하면서 화합물 5(400mg, 0.87mmol)를 첨가했다. 반응물을 하룻밤 실온에서 교반하고 H2O 및 5M NaCl로 세척하고 Na2SO4에서 건조시켰다. 조 생성물을 농축하고 플래시 칼럼 크로마토그래피(PE:EA = 1:3)로 정제하여 화합물 6을 수득했다(300mg, 62% 수율). LC-MS: 660(M+1).
Figure pct00239
5-(2- 아미노아세틸 )-8,11- 비스 (2- 메톡시에틸 )-7,10-디옥소-2-옥사-5,8,11-트리아자테트라데칸-14-오익산의 제조(화합물 48)(도 27)
Parr 쉐이커에서 EtOAc(60mL) 중의 화합물 6(2.63g, 4.0mmol)과 Pd/C(500mg)의 혼합물을 하룻밤 실온에서 H2(65psi)하에 교반했다. 혼합물을 셀라이트 패드를 통해서 여과하고 MeOH로 세척하고 농축하여 잔류물을 얻었고, 이것을 동결건조시켜 AB4298를 수득했다(1.2g, 69% 수율). LC-MS: 435(M+1).
Figure pct00240
16-(2-((2-(((9H- 플루오렌 -9-일) 메톡시 ) 카보닐 )-1,2- 디메틸히드라지닐 ) 메틸 )-1H-인돌-1-일)-4,7,10-트리스(2-메톡시에틸)-5,8,11,14-테트라옥소-4,7,10,13-테트라아자헥사데칸-1-오익산의 제조(도 27)
건조된 플리 교반막대를 넣은 건조된 4mL 유리 섬광 바이알에 펩토이드 AB 4298(22.0mg, 0.05mmol), FMOC HIPS 인돌 CO2PFP(33.1mg, 0.05mmol), NaHCO3(4.3mg, 0.05mmol), 및 DMA(0.4mL)를 넣었다. 용액을 16h 동안 실온에서 교반하고 1M HCl로 pH 2로 산성화하고 1 x 10 mL EtOAc로 추출했다. 유기 분획을 1 x 10mL 1M HCl/5 M NaCl(1/1)의 혼합물로 세척하고 MgSO4에서 건조시키고 여과하고 농축하고 Biotage SNAP Ultra 1g 샘플릿 위에 흡착시키고 CH2Cl2 중의 0-10% MeOH의 구배를 사용하여 Biotage SNAP Ultra 10g 카트릿지 상에서 정제하여 흰색 고체로서 표제 화합물을 수득했다(28.4mg, 63% 수율). HPLC 체류 시간 12.68min. 방법 A.
C47H61N7O11[M-H]-에 대한 LRMS(ESI) 계산 898.4; 실측 897.7.
Figure pct00241
(S)-1-((S)-3- 메이탄시닐 ) 19-(2-((2-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카보닐)-1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)-7,10,13-트리스(2-메톡시에틸)-2,3-디메틸-4,8,11,14,17-펜타옥소-3,7,10,13,16-펜타아자노나데칸-1-오에이트의 제조 (FMOC HIPS 인돌 글리신 트리메톡시펩토이드 베타 알라닌 메이탄신 )(도 27)
건조된 플리 교반막대를 넣은 건조된 4mL 유리 섬광 바이알에 16-(2-((2-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카보닐)-1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)-4,7,10-트리스(2-메톡시에틸)-5,8,11,14-테트라옥소-4,7,10,13-테트라아자헥사데칸-1-오익산(21.3mg, 0.02mmol), 디아실메이탄신(15.4mg, 0.02mmol), 및 DMA(0.13mL)를 넣었다. 용액을 얼음 H2O 배쓰에서 0℃로 냉각하면서 2,4,6-트리메틸피리딘(5.7 mg, 6.2uL, 0.05mmol) 및 COMU(13.2mg, 0.03mmol)를 첨가했다. 반응물을 0℃에서 15min 동안 교반한 다음 실온으로 가온하고 3h 교반했다. 반응 혼합물을 EtOAc(7 mL)로 희석하고 3 x 2mL 0.5M HCl, 3 x 2mL 1.2M NaHCO3, 및 3 x 2mL 5M NaCl로 세척하고 MgSO4에서 건조시키고 여과하고 점성 오일로 농축했다. 생성물을 Biotage SNAP Ultra 1g 샘플릿 위에 흡착시키고 CH2Cl2 중의 2-15% MeOH의 구배를 사용하여 Biotage SNAP Ultra 10g 카트릿지 상에서 정제하여 흰색 고체인 원하는 생성물을 수득했다(13.2mg, 36% 수율). HPLC 체류 시간 14.40min. 방법 A.
C79H103ClN10O19 [M+Na]+에 대한 LRMS(ESI) 계산 1553.7; 실측 1553.6.
Figure pct00242
(S)-1-((S)-3- 메이탄시닐 ) 19-(2-((1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)-7,10,13-트리스(2-메톡시에틸)-2,3-디메틸-4,8,11,14,17-펜타옥소-3,7,10,13,16-펜타아자노나데칸-1-오에이트의 제조(HIPS 인돌 글리신 트리메톡시펩 토이드 베타 알라닌 메이탄신 )(도 27)
건조된 플리 교반막대를 넣은 건조된 4mL 유리 섬광 바이알에 FMOC HIPS 인돌 글리신 트리메톡시펩토이드 베타 알라닌 메이탄신(13.2mg, 8.6 umol)을 넣었다. DMA(0.3mL) 중의 피페리딘(14.7mg, 17.0uL, 0.17mmol)을 주사기로 첨가했다. 용액을 1h 동안 실온에서 교반하고 Biotage KP C18 HS 1.2g 샘플릿 위에 직접 흡착시키고 H2O 중의 0-100% CH3CN의 구배를 사용하여 Biotage KP C18 HS 12g 카트릿지 상에서 정제하여 흰색 고체로서 표제 화합물을 수득했다(9.3mg, 82% 수율). HPLC 체류 시간 9.71min. 방법 A.
실시예 15
방법 15 - (S)-1-((S)-3-메이탄시닐) 15-(2-((1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)-2,3-디메틸-4,7,10,13-테트라옥소-3,6,9,12-테트라아자펜타데칸-1-오에이트의 제조(HIPS 인돌 글리신3 메이탄신)
Figure pct00243
화합물 HIPS 인돌 글리신3 메이탄신의 합성을 위한 반응도가 도 28에 도시된다.
2-(2-(2-(3-(2-((2-(((9H- 플루오렌 -9-일) 메톡시 ) 카보닐 )-1,2- 디메틸히드라지 닐)메틸)-1H-인돌-1-일)프로판아미드)아세타미도)아세타미도)아세트산의 제조(도 28)
건조된 플리 교반막대를 넣은 건조된 4mL 유리 섬광 바이알에 트리글리신 (27.4mg, 0.15mmol), FMOC HIPS 인돌 CO2PFP(46.4mg, 0.07mmol), NaHCO3(25.9mg, 0.3mmol), DMA(0.6mL), H2O(0.3mL) 및 CH3CN(0.3mL)을 넣었다. 용액을 22h 동안 실온에서 교반하고 1M HCl로 pH 2로 산성화하고 1 x 10 mL EtOAc로 추출했다. 유기 분획을 1 x 10mL 1M HCl/5 M NaCl(1/1)의 혼합물로 세척하고 MgSO4에서 건조시키고 여과하고 농축하고 Biotage SNAP Ultra 1g 샘플릿 위에 흡착시키고 CH2Cl2 중의 0-10% MeOH의 구배를 사용하여 Biotage SNAP Ultra 10g 카트릿지 상에서 정제하여 흰색 고체인 원하는 생성물을 수득했다(53.4mg, 82% 수율).
HPLC 체류 시간 11.41min. 방법 A. C35H37N6O7[M-H]-에 대한 LRMS(ESI) 계산 653.3; 실측 652.9.
Figure pct00244
(S)-1-((S)-3- 메이탄시닐 ) 15-(2-((2-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카보닐)-1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)-2,3-디메틸-4,7,10,13-테트라옥소-3,6,9,12-테트라아자펜타데칸-1-오에이트의 제조( FMOC HIPS 인돌 글리신 3 메이탄신 ) (도 28)
건조된 플리 교반막대를 넣은 건조된 4mL 유리 섬광 바이알에 2-(2-(2-(3-(2-((2-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카보닐)-1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)프로판아미드)아세타미도)아세타미도)아세트산(28.5mg, 0.03mmol), 디아실 메이탄신(28.3mg, 0.04mmol), 및 DMA(0.2mL)를 넣었다. 용액을 얼음 H2O 배쓰에서 0℃로 냉각하면서 2,4,6-트리메틸피리딘(10.5mg, 11.5uL, 0.09mmol)과 COMU(20.5mg, 0.05mmol)를 첨가했다. 반응물을 0℃에서 15min 동안 교반한 다음 실온으로 가온하고 16h 교반했다. 반응 혼합물을 EtOAc(7mL)로 희석하고 3 x 2mL 0.5M HCl, 3 x 2mL 1.2M NaHCO3, 및 3 x 2mL 5M NaCl로 세척하고 MgSO4에서 건조시키고 여과하고 점성 오일로 농축했다. 생성물을 Biotage SNAP Ultra 1g 샘플릿 위에 흡착시키고 CH2Cl2 중의 2-15% MeOH의 구배를 사용하여 Biotage SNAP Ultra 10g 카트릿지 상에서 정제하여 흰색 고체로서 표제 화합물을 수득했다(3.2mg, 6% 수율). HPLC 체류 시간 13.63min. 방법 A. C67H80ClN9O15[M+Na]+에 대한 LRMS(ESI) 계산 1308.5; 실측 1308.7.
Figure pct00245
(S)-1-((S)-3- 메이탄시닐 ) 15-(2-((1,2- 디메틸히드라지닐 ) 메틸 )-1H-인돌-1-일)-2,3-디메틸-4,7,10,13-테트라옥소-3,6,9,12-테트라아자펜타데칸-1-오에이트의 제조(HIPS 인돌 글리신 3 메이탄신 )(도 28)
건조된 플리 교반막대를 넣은 건조된 4mL 유리 섬광 바이알에 FMOC HIPS 인돌 글리신3 메이탄신(3.2mg, 2.5 umol)을 넣었다. DMA(0.2mL) 중의 피페리딘(30.2 mg, 35.0uL, 0.35mmol)을 주사기로 첨가했다. 용액을 1h 동안 실온에서 교반하고 CH2Cl2 중의 14% MeOH를 사용하여 Whatman 1000um 예비 박층 크로마토그래피 플레이트(SiO2) 상에서 예비 박층 크로마토그래피로 정제하여 흰색 고체인 원하는 생성물을 수득했다(1.8mg, 68% 수율). HPLC 체류 시간 8.81min. 방법 A. C52H70ClN9O13 [M+H]+에 대한 LRMS(ESI) 계산 1063.5; 실측 1064.2.
실시예 16
방법 16 - (S)-1-((S)-3-메이탄시닐) 22-(2-((1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)-2,3-디메틸-4,14,20-트리옥소-7,10-디옥사-3,13,16,19-테트라아자도코산-1-오에이트의 제조(HIPS 인돌 아미노에틸글리신 PEG2 메이탄신)
Figure pct00246
화합물 HIPS 인돌 아미노에틸글리신 PEG2 메이탄신의 합성을 위한 반응도가 도 29 및 도 30에 도시된다.
tert -부틸 8-(((9H- 플루오렌 -9-일) 메톡시 ) 카보닐 )-2,2-디메틸-4,10- 디옥소 -3,14,17-트리아자-5,8,11-트리아자이코산-20-오에이트의 제조(도 29)
건조된 플리 교반막대를 넣은 건조된 4mL 유리 섬광 바이알에 2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카보닐)(2-((tert-부톡시카보닐)아미노)에틸)아미노)아세트산(90.7mg, 0.2mmol), H2N PEG2 CO2tBu(62.0mg, 0.3mmol), 및 DMA(0.8mL)를 넣었다. 용액을 얼음 H2O 배쓰에서 0℃로 냉각하면서 2,4,6-트리메틸피리딘(49.5mg, 54.0uL, 0.4mmol) 및 COMU(97.0mg, 0.2mmol)를 첨가했다. 반응물을 15min 동안 0℃에서 교반한 다음 실온으로 가온하고 1h 동안 교반했다. 반응 혼합물을 EtOAc(20mL)로 희석하고 3x 7mL 0.5M HCl, 3x 7mL 1.2M NaHCO3, 및 3x 7mL 5M NaCl로 세척하고 MgSO4에서 건조시키고 여과하고 점성 오일로 농축했다. 생성물을 Biotage SNAP Ultra 3g 샘플릿 위에 흡착시키고 CH2Cl2 중의 2-15% MeOH의 구배를 사용하여 Biotage SNAP Ultra 25g 카트릿지 상에서 정제하여 흰색 고체로서 표제 화합물을 수득했다(132.0mg, 98% 수율).
Figure pct00247
3-(((9H- 플루오렌 -9-일) 메톡시 ) 카보닐 )-14- 카복시 -5-옥소-9,12- 디옥사 -3,6-디아자테트라데칸-1-아미늄 2,2,2- 트리플루오로아세테이트의 제조(도 29)
건조된 플리 교반막대를 넣은 건조된 4mL 유리 섬광 바이알에 tert-부틸 8-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카보닐)-2,2-디메틸-4,10-디옥소-3,14,17-트리아자-5,8,11-트리아자이코산-20-오에이트(65.5mg, 0.1mmol), CH2Cl2(0.5mL), TFA(0.18mL) 및 H2O(0.02mL)를 넣었다. 반응물을 2.5h 동안 교반하고 진공 건조시키고 3 x 2mL Tol로 공비 증류시켜 왁스상 잔류물인 원하는 생성물을 수득했다(55.0mg, 90% 수율). 이 화합물을 추가의 정제 없이 후속 단계에 사용했다.
Figure pct00248
7-(((9H- 플루오렌 -9-일) 메톡시 ) 카보닐 )-1-(2-((2-(((9H- 플루오렌 -9-일) 메톡 시)카보닐)-1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)-3,9-디옥소-13,16-디옥사-4,7,10-트리아자노나데칸-19-오익산의 제조(도 29)
건조된 플리 교반막대를 넣은 건조된 4mL 유리 섬광 바이알에 3-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카보닐)-14-카복시-5-옥소-9,12-디옥사-3,6-디아자테트라데칸-1-아미늄 2,2,2-트리플루오로아세테이트(55.0mg, 0.09mmol), FMOC HIPS 인돌 CO2PFP (38.8mg, 0.06mmol), NaHCO3(30.0mg, 0.4mmol) 및 1,4-디옥산(0.5mL)을 넣었다. 용액을 16h 동안 실온에서 교반하고 1M HCl로 pH 2로 산성화하고 1 x 10 mL EtOAc로 추출했다. 유기 분획을 1 x 10mL 1M HCl/5 M NaCl(1/1)의 혼합물로 세척하고 MgSO4에서 건조시키고 여과하고 농축하고 Biotage SNAP Ultra 1g 샘플릿 위에 흡착시키고 CH2Cl2 중의 2-8% MeOH의 구배를 사용하여 Biotage SNAP Ultra 10g 카트릿지 상에서 정제하여 흰색 고체로서 표제 화합물을 수득했다(28.4mg, 49% 수율). HPLC 체류 시간 15.04min. 방법 A. C55H60N6O10[M+H]+에 대한 LRMS(ESI) 계산 965; 실측 965
Figure pct00249
(S)-1-((S)-3- 메이탄시닐 ) 16-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카보닐)-22-(2-((2-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카보닐)-1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)-2,3-디메틸-4,14,20-트리옥소-7,10-디옥사-3,13,16,19-테트라아자도코산-1-오에이트의 제조( FMOC HIPS 인돌 아미노에틸글리신 ( FMOC ) PEG 2 메이탄신 )(도 30)
건조된 플리 교반막대를 넣은 건조된 4mL 유리 섬광 바이알에 7-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카보닐)-1-(2-((2-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카보닐)-1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)-3,9-디옥소-13,16-디옥사-4,7,10-트리아자노나데칸-19-오익산(30.0mg, 0.03mmol), 디아실 메이탄신(23.7mg, 0.04mmol), 및 무수 DMF(0.3mL)를 넣었다. 용액을 얼음 H2O 배쓰에서 0℃로 냉각하면서 2,4,6-트리메틸피리딘(7.4mg, 8.1uL, 0.06mmol) 및 COMU(15.6mg, 0.04mmol)를 첨가했다. 반응물을 30min 동안 0℃에서 교반한 다음 실온으로 가온하고 2h 동안 교반했다. 반응 혼합물을 EtOAc(7mL)로 희석하고 3 x 2mL 0.5M HCl, 3 x 2mL 1.2M NaHCO3, 및 3 x 2mL 5M NaCl로 세척하고 MgSO4에서 건조시키고 여과하고 점성 오일로 농축했다. 생성물을 Biotage SNAP Ultra 1g 샘플릿 위에 흡착시키고 CH2Cl2 중의 2-7% MeOH의 구배를 사용하여 Biotage SNAP Ultra 10g 카트릿지 상에서 정제하여 흰색 고체인 원하는 생성물을 수득했다(26.7mg, 56% 수율). HPLC 체류 시간 16.28min. 방법 A. C87H102ClN9O18[M+Na]+에 대한 LRMS(ESI) 계산 1618.7; 실측 1619.7.
Figure pct00250
(S)-1-((S)-3- 메이탄시닐 ) 22-(2-((1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)-2,3-디메틸-4,14,20-트리옥소-7,10-디옥사-3,13,16,19-테트라아자도코산-1-오에이트의 제조(HIPS 인돌 아미노에틸글리신 PEG 2 메이탄신)(도 30)
건조된 플리 교반막대를 넣은 건조된 4mL 유리 섬광 바이알에 FMOC HIPS 인돌 아미노에틸글리신 (FMOC) PEG2 메이탄신(26.6mg, 17umol)을 넣었다. DMA(0.16 mL) 중의 피페리딘(28.4mg, 33.0uL, 0.3mmol)을 주사기로 첨가했다. 용액을 1h 동안 실온에서 교반하고 Biotage SNAP Ultra 1g 샘플릿 위에 흡착시키고 CH2Cl2 중의 5% MeOH를 사용하여 Biotage SNAP Ultra 10g 카트릿지 상에서 정제하여 흰색 고체로서 표제 화합물을 수득했다(5.6mg, 29% 수율). HPLC 체류 시간 8.10min. 방법 A. C72H92ClN9O16[M+H]+에 대한 LRMS(ESI) 계산 1152.5; 실측 1152.4.
실시예 17
방법 17 - (S)-1-((S)-3-메이탄시닐) 21-(2-((1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)-2,3-디메틸-4,19-디옥소-14-티옥소-7,10-디옥사-3,13,15,18-테트라아자헤니코산-1-오에이트의 제조(HIPS 인돌 에틸렌디아민 티오유레아 PEG2 메이탄신)
Figure pct00251
화합물 HIPS 인돌 에틸렌디아민 티오유레아 PEG2 메이탄신의 합성을 위한 반응도가 도 31 및 도 32에 도시된다.
tert -부틸 2,2-디메틸-4-옥소-9- 티옥소 -3,13,16-트리아자-5,8,10- 트리아자노 나데칸-19-오에이트의 제조(도 31)
건조된 플리 교반막대를 넣은 건조된 4mL 유리 섬광 바이알에 tert-부틸 (2-이소티오시아나토에틸)카바메이트(129.0mg,0.6mmol), H2N PEG2 CO2tBu(166.0mg, 0.7 mmol), 및 무수 DMF(2.0mL)를 넣었다. 반응물을 16h 동안 교반하고 진공 농축하고 Biotage SNAP Ultra 3g 샘플릿 위에 흡착시키고 Hex 중의 30% EtOAc를 사용하여 Biotage SNAP Ultra 25g 카트릿지 상에서 정제하여 흰색 잔류물인 원하는 생성물을 수득했다(268.0mg, 96% 수율).
Figure pct00252
13- 카복시 -4- 티옥소 -8,11- 디옥사 -3,5-디아자트리데칸 -1- 아미늄 2,2,2- 트리플 루오로아세테이트의 제조(도 31)
건조된 플리 교반막대를 넣은 건조된 4mL 유리 섬광 바이알에 tert-부틸 2,2-디메틸-4-옥소-9-티옥소-3,13,16-트리아자-5,8,10-트리아자노나데칸-19-오에이트(130.0mg, 0.3mmol), CH2Cl2(0.5mL), TFA(0.18mL), 및 H2O(0.02mL)를 넣었다. 반응물을 2.5h 동안 교반하고 진공 건조시키고 3 x 2mL Tol과 함께 공비 증류시켜 왁스상 잔류물로서 표제 화합물을 수득했다(116.0mg, 99% 수율). 이 화합물을 추가의 정제 없이 후속 단계에 사용했다.
Figure pct00253
1-(2-((2-(((9H- 플루오렌 -9-일) 메톡시 ) 카보닐 )-1,2- 디메틸히드라지닐 ) 메틸 )-1H-인돌-1-일)-3-옥소-8-티옥소-12,15-디옥사-4,7,9-트리아자옥타데칸-18-오익산의 제조(도 31)
건조된 플리 교반막대를 넣은 건조된 4mL 유리 섬광 바이알에 13-카복시-4-티옥소-8,11-디옥사-3,5-디아자트리데칸-1-아미늄 2,2,2-트리플루오로아세테이트 (38.4mg, 0.1mmol), FMOC HIPS 인돌 CO2PFP(38.2mg, 0.06mmol), NaHCO3(30.0mg, 0.4 mmol), 및 1,4-디옥산(0.5mL)을 넣었다. 용액을 16h 동안 실온에서 교반하고 1M HCl로 pH 2로 산성화하고 1 x 10mL EtOAc로 추출했다. 유기 분획을 1 x 10mL 1M HCl/5M NaCl(1/1)의 혼합물로 세척하고 MgSO4에서 건조시키고 여과하고 농축하고 Biotage SNAP Ultra 1g 샘플릿 위에 흡착시키고 CH2Cl2 중의 3-8% MeOH의 구배를 사용하여 Biotage SNAP Ultra 10g 카트릿지 상에서 정제하여 흰색 고체인 원하는 생성물을 수득했다(17.6mg, 40% 수율). HPLC 체류 시간 13.02min. 방법 A. C39H48N6O7S [M+H]+에 대한 LRMS(ESI) 계산 743.3; 실측 743.1.
Figure pct00254
(S)-1-((S)-3- 메이탄시닐 ) 21-(2-((2-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카보닐)-1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)-2,3-디메틸-4,19-디옥소-14-티옥소-7,10-디옥사-3,13,15,18-테트라아자헤니코산-1-오에이트의 제조( FMOC HIPS 인돌 에틸렌디아민 티오유레아 PEG 2 메이탄신 )(도 32)
건조된 플리 교반막대를 넣은 건조된 4mL 유리 섬광 바이알에 1-(2-((2-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카보닐)-1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)-3-옥소-8-티옥소-12,15-디옥사-4,7,9-트리아자옥타데칸-18-오익산(17.4mg, 0.02mmol), HATU(8.9mg, 0.02mmol), 및 DMA(0.1mL)를 넣었다. 투명한 무색 용액을 15min 동안 실온에서 교반했다. 디아실메이탄신(15.2mg, 0.02mmol), DIPEA(6.1mg, 8.2uL, 0.05mmol), 및 무수 DMF(0.06mL)를 별도의 1.5mL 원심분리 튜브에서 합해서 교반중인 용액에 서서히 적가했다. 반응물을 2h 동안 실온에서 교반하고 Biotage KP C18 HS 1.2g 샘플릿 위에 직접 흡착시키고 H2O 중의 0-100% CH3CN의 구배를 사용하여 Biotage KP C18 HS 12g 카트릿지 상에서 정제하여 흰색 고체로서 표제 화합물을 수득했다(12.7mg, 39% 수율). HPLC 체류 시간 14.71min. 방법 A. C87H102ClN9O18 [M+Na]+에 대한 LRMS (ESI) 계산 1398.6; 실측 1398.5.
Figure pct00255
(S)-1-((S)-3- 메이탄시닐 ) 21-(2-((1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)-2,3-디메틸-4,19-디옥소-14-티옥소-7,10-디옥사-3,13,15,18-테트라아자헤니코산-1-오에이트의 제조(HIPS 인돌 에틸렌디아민 티오유레아 PEG 2 메이탄신)(도 32)
건조된 플리 교반막대를 넣은 건조된 4mL 유리 섬광 바이알에 FMOC HIPS 인돌 에틸렌디아민 티오유레아 PEG2 메이탄신(12.6mg, 9.2umol)을 넣었다. DMA(0.1 mL) 중의 피페리딘(17.2mg, 20.0uL, 0.2mmol)을 주사기로 첨가했다. 용액을 1h 동안 실온에서 교반하고 Biotage KP C18 HS 1.2g 샘플릿 위에 직접 흡착시키고 H2O 중의 0-100% CH3CN의 구배를 사용하여 Biotage KP C18 HS 12g 카트릿지 상에서 정제하여 흰색 고체인 원하는 생성물을 수득했다(8.6mg, 81% 수율). HPLC 체류 시간 9.82 min. 방법 A. C56H80ClN9O13S[M+H]+에 대한 LRMS(ESI) 계산 1154.5; 실측 1154.4.
실시예 18
Figure pct00256
( 2S,15S )-1-((S)-3- 메이탄시닐 ) 15-(4-아미노부틸)-19-(2-((1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)-2,3-디메틸-4,14,17-트리옥소-7,10-디옥사-3,13,16-트리아자노나데칸-1-오에이트의 제조(HIPS 인돌 K (NH 2 ) PEG 2 메이탄신 )(화합물 49)
방법 1대로 제조. HPLC 체류 시간 8.921min. 방법 D. C59H86ClN9NaO14[M+Na]+에 대한 LRMS(ESI) 계산 1202.6; 실측 1202.7.
Figure pct00257
( 2S,15S )-1-((S)-3- 메이탄시닐 ) 19-(2-((1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)-15-(하이드록시메틸)-2,3-디메틸-4,14,17-트리옥소-7,10-디옥사-3,13,16-트리아자노나데칸-1-오에이트의 제조(HIPS 인돌 S (OH) PEG 2 메이탄신 )
방법 3대로 제조. HPLC 체류 시간 9.147min. 방법 A. C56H79ClN8NaO15 +[M+Na]+:에 대한 LRMS(ESI) 계산 1161.5; 실측 1161.5.
Figure pct00258
( 2S,15S )-1-((S)-3- 메이탄시닐 ) 19-(2-((1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)-2,3-디메틸-4,14,17-트리옥소-15-((포스포노옥시)메틸)-7,10-디옥사-3,13,16-트리아자노나데칸-1-오에이트의 제조(HIPS 인돌 S ( OPO 3 H 2 ) PEG 2 메이탄신 )
방법 3대로 제조. HPLC 체류 시간 8.916min. 방법 A. C56H79ClN8O18P-[M-H]-에 대한 LRMS(ESI) 계산 1217.5; 실측 1217.2.
Figure pct00259
( 2S,15S )-1-((S)-3- 메이탄시닐 ) 19-(2-((1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)-2,3-디메틸-4,14,17-트리옥소-15-(4-(포스포노옥시)벤질)-7,10-디옥사-3,13,16-트리아자노나데칸-1-오에이트의 제조(HIPS 인돌 Y ( OPO 3 H 2 ) PEG 2 메이탄신 )
방법 3대로 제조. HPLC 체류 시간 9.070min. 방법 A. C62H83ClN8O18P-[M-H]-에 대한 LRMS(ESI) 계산 1293.5; 실측 1293.3.
Figure pct00260
( 2S,5S,18R )-2-((S)-3- 메이탄시닐 )-18-(3-(2-((1,2- 디메틸히드라지닐 ) 메틸 )-1H-인돌-1-일)프로판아미드)-5,6-디메틸-4,7,17-트리옥소-3,10,13-트리아자-6,16-디아자노나데칸e-19-설폰산의 제조(HIPS 인돌 C ( SO 3 H ) PEG 2 메이탄신 )
방법 3대로 제조. HPLC 체류 시간 9.128min. 방법 A. C56H78ClN8O17S-[M-H]-:에 대한 LRMS(ESI) 계산 1201.5; 실측 1201.4.
Figure pct00261
( 2S,21S )-1-((S)-3- 메이탄시닐 ) 25-(2-((1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)-21-(하이드록시메틸)-2,3-디메틸-4,20,23-트리옥소-7,10,13,16-테트라옥사-3,19,22-트리아자펜타코산-1-오에이트의 제조(HIPS 인돌 S (OH) PEG 4 메이탄신 )
방법 3대로 제조. HPLC 체류 시간 9.228 min. 방법 A. C60H87ClN8NaO17 +[M+Na]+에 대한 LRMS (ESI) 계산 1249.6; 실측 1249.6.
Figure pct00262
( 2S,27S )-1-((S)-3- 메이탄시닐 ) 31-(2-((1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)-27-(하이드록시메틸)-2,3-디메틸-4,26,29-트리옥소-7,10,13,16,19,22-헥사옥사-3,25,28-트리아자헨트리아콘탄-1-오에이트의 제조(HIPS 인돌 S (OH) PEG 6 메 이탄신)
방법 3대로 제조. HPLC 체류 시간 9.305 min. 방법 A. C64H95ClN8NaO19 +[M+Na]+에 대한 LRMS (ESI) 계산 1337.6; 실측 1337.6.
Figure pct00263
(S)-1-((S)-3- 메이탄시닐 ) 2-(6-((S)-2-(3-(2-((1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)프로판아미드)-3-하이드록시프로판아미드)-N-메틸헥산아미도)프로파노에이트의 제조(HIPS 인돌 S (OH) C 5 메이탄신 )
방법 3대로 제조. HPLC 체류 시간 9.307 min. 방법 A. C55H78ClN8O13 + [M+H]+에 대한 LRMS (ESI) 계산 1093.5; 실측; 실측 1093.4.
Figure pct00264
4-(( 2S,5S )-34-(2-((1,2- 디메틸히드라지닐 ) 메틸 )-1H-인돌-1-일)-5-이소프로필-4,7,29,32-테트라옥소-2-(3-우레이도프로필)-10,13,16,19,22,25-헥사옥사-3,6,28,31-테트라아자테트라트리아콘탄아미도)벤질 ((S)-1-(((S)-1-(((3R,4S,5R)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-하이드록시-1-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)(메틸)카바메이트의 제조(HIPS 인돌 G PEG 6 Val Cit PABC 모노메틸 아우리스타틴 E)
방법 7대로 제조. HPLC 체류 시간 9.832 min. 방법 A. C89H143N15NaO21 +[M+Na]+에 대한 LRMS (ESI) 계산 1781.1; 실측 1780.9.
Figure pct00265
N-(5- 카복사미도펜틸 )-3-(2-((1,2- 디메틸히드라지닐 ) 메틸 )-1H-인돌-1-일) 프 로판아미드 Alexa Fluor 488의 제조(HIPS 인돌 카다베린 Alexa Fluor 488)
방법 4대로 제조. HPLC 체류 시간 6.448 min. 방법 A.
Figure pct00266
N-(5- 카복사미도펜틸 )-3-(2-((1,2- 디메틸히드라지닐 ) 메틸 )-1H-인돌-1-일) 프 로판아미드 Alexa Fluor 594의 제조(HIPS 인돌 카다베린 Alexa Fluor 594)
방법 4대로 제조. HPLC 체류 시간 7.666 min. 방법 A. C54H62N7O11S2 - [M-H]-에 대한 LRMS (ESI) 계산 1048.4; 실측 1048.2.
Figure pct00267
N-(5- 카복사미도펜틸 )-3-(2-((1,2- 디메틸히드라지닐 ) 메틸 )-1H-인돌-1-일) 프 로판아미드 Alexa Fluor 647의 제조 (HIPS 인돌 카다베린 Alexa Fluor 647)
방법 4대로 제조. HPLC 체류 시간 5.415 min. 방법 A.
Figure pct00268
N-(5- 카복사미도펜틸 )-3-(2-((1,2- 디메틸히드라지닐 ) 메틸 )-1H-인돌-1-일) 프 로판아미드 ATTO 488의 제조(HIPS 인돌 카다베린 ATTO 488)
방법 4대로 제조. HPLC 체류 시간 6.699 min. 방법 A.
Figure pct00269
(S)-1- 카복사미도 -13-(3-(2-((1,2- 디메틸히드라지닐 ) 메틸 )-1H-인돌-1-일) 프 로판아미드)-1,12-디옥소-5,8-디옥사-2,11-디아자헥사데칸-16-오익산 ATTO 647N의 제조(HIPS 인돌 E ( CO 2 H ) PEG 2 NH ATTO 647N)
방법 5대로 제조. HPLC 체류 시간 11.595 min, 11.896 min (이성질체 혼합물). 방법 A.
Figure pct00270
(R)-1- 카복사미도 -13-(3-(2-((1,2- 디메틸히드라지닐 ) 메틸 )-1H-인돌-1-일) 프 로판아미드)-1,12-디옥소-5,8-디옥사-2,11-디아자테트라데칸-14-설폰산 ATTO 647N의 제조(HIPS 인돌 C ( SO 3 H ) PEG 2 NH ATTO 647N)
방법 6대로 제조. HPLC 체류 시간 12.519 min, 12.884 min (이성질체 혼합물). 방법 A.
Figure pct00271
(S)-5-((6-(((S)- 1-((S)-3-메이탄시닐)-1-옥소프로판-2-일)(메틸)아미노)-6-옥소헥실)아미노)-4-(3-(2-((1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)프로판아미드)-5-옥소펜타노익산의 제조(HIPS 인돌 E ( CO 2 H ) C 5 메이탄신 )
방법 1대로 제조. HPLC 체류 시간 9.361 min. 방법 A. C57H80ClN8O14 + [M+H]+에 대한 LRMS (ESI) 계산 1135.6; 실측 1135.4.
Figure pct00272
(S)-5-((4-(((S)- 1-((S)-3-메이탄시닐)-1-옥소프로판-2-일)(메틸)아미노)-4-옥소부틸)아미노)-4-(3-(2-((1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)프로판아미드)-5-옥소펜타노익산의 제조(HIPS 인돌 E ( CO 2 H ) C 3 메이탄신 )
방법 1대로 제조. HPLC 체류 시간 9.067 min. 방법 A. C55H76ClN8O14 + [M+H]+에 대한 LRMS (ESI) 계산 1107.5; 실측 1107.3.
Figure pct00273
( 2S,5S,18S )-2-((S)-3- 메이탄시닐 )-18-(3-(2-((1,2- 디메틸히드라지닐 ) 메틸 )-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-1-일)프로판아미드)-5,6-디메틸-4,7,17-트리옥소-3,10,13-트리아자-6,16-디아자헤니코산-21-오익산의 제조(HIPS Aza인돌 E ( CO 2 H ) PEG 2 메이 탄신)
방법 1대로 제조. HPLC 체류 시간 8.534 min. 방법 A. C57H80ClN9NaO16 +[M+H]+에 대한 LRMS (ESI) 계산 1204.5; 실측 1204.5.
Figure pct00274
(S)-1-((S)-3- 메이탄시닐 ) 16-(2-((1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-1-일)-2,3-디메틸-4,14-디옥소-7,10-디옥사-3,13-디아자헥사데칸-1-오에이트의 제조 (HIPS 아자인돌 PEG 2 메이탄신 )
방법 1대로 제조. HPLC 체류 시간 8.867 min. 방법 A. C52H74ClN8O13 + [M+H]+에 대한 LRMS (ESI) 계산 1053.5; 실측 1053.3.
Figure pct00275
(S)-1-((S)-3- 메이탄시닐 ) 2- (3-(2-((1,2-디메틸히드라지닐)메틸 )-1H- 피롤 로[2,3-b]피리딘-1-일)-N-메틸프로판아미드)프로파노에이트의 제조(HIPS 아자인돌 메이탄신)
방법 1대로 제조. HPLC 체류 시간 9.198 min. 방법 A. C45H61ClN7O10 + [M+H]+에 대한 LRMS (ESI) 계산 894.4; 실측 894.3.
실시예 19
알데하이드 - 택부착 항체에 HIPS-링커-약물의 콘쥬게이션을 위한 일반적인 과정
여기 설명된 대로 알데하이드-택부착 항체에 HIPS-링커-약물을 콘쥬게이트하기 위해 다음의 일반적 프로토콜을 사용했다. 1.85mM HIPS-링커-약물(예를 들어, HIPS-링커-메이탄신)을 16-24h 동안 37℃에서 50mM 나트륨 시트레이트 pH 5.5, 2.5% DMA, 및 0.25% Triton X-100을 함유한 PBS 중에서 102μM 알데하이드-택부착 항체(예를 들어, 사슬당 하나의 알데하이드 택을 가진 알데하이드-택부착 항체(이량체)와 반응시켰다. 반응이 완료된 후 미반응 택을 투석여과를 사용하여 제거했다. 다음에, 모노- 및 디-콘쥬게이트 종들을 소수성 상호작용 칼럼(GE Healthcare Life Sciences #17-5195-01; 이동상 A: 25mM NaPO4, 1.0M NH4 SO4, pH 7.0; 이동상 B: 18.75mM NaPO4, 25% IPA, pH 7.0).을 사용하여 비콘쥬게이트 물질로부터 정제했다. 부화된 샘플을 투석여과를 사용하여 PBS의 최종 제제 버퍼에 투입했다. 최종 샘플을 소수성 상호작용 크로마토그래피(Tosoh #14947; 이동상 A: 25mM NaPO4, 1.5M NH4 SO4, pH 7.0; 이동상 B: 18.75mM NaPO4, 25% IPA, pH 7.0)로 분석해서 DAR을 결정하고, 크기 배제 크로마토그래피로는 응집 수준을 결정했다(Tosoh #08541; 이동상 A: 25mM NaPO4 버퍼, 300mM NaCl, pH 6.8).
알데하이드 - 택부착 항체에 HIPS 세린 PEG 2 메이탄신의 콘쥬게이션
HIPS 세린 PEG2 메이탄신을 상기 설명된 콘쥬게이션 방법에 따라서 알데하이드-택부착 항체와 반응시켰다.
결과가 도 33에 도시되며, 이것은 HIPS 세린 PEG2 메이탄신에 콘쥬게이트된 알데하이드-택부착 항체의 크기 배제 크로마토그래피(SEC) 흔적(도 33, 패널 A), 소수성 상호작용 칼럼(HIC) 흔적(도 33, 패널　B), 및 질량 분광기(MS) 흔적(도 33, 패널 C)을 나타낸다. 비콘쥬게이트, 모노콘쥬게이트 및 디콘쥬게이트 단백질 콘쥬게이트가 관찰되었다.
알데하이드 - 택부착 항체에 HIPS 포스포세린 PEG 2 메이탄신의 콘쥬게이션
HIPS 포스포세린 PEG2 메이탄신을 상기 설명된 콘쥬게이션 방법에 따라서 알데하이드-택부착 항체와 반응시켰다.
결과가 도 34에 도시되며, 이것은 HIPS 포스포세린 PEG2 메이탄신에 콘쥬게이트된 알데하이드-택부착 항체의 크기 배제 크로마토그래피(SEC) 흔적(도 34, 패널 A), 소수성 상호작용 칼럼(HIC) 흔적(도 34, 패널　B), 및 질량 분광기(MS) 흔적(도 34, 패널 C)을 나타낸다. 비콘쥬게이트, 모노콘쥬게이트 및 디콘쥬게이트 단백질 콘쥬게이트가 관찰되었다.
알데하이드 - 택부착 항체에 HIPS 시스테산 PEG 2 메이탄신의 콘쥬게이션
HIPS 시스테산 PEG2 메이탄신을 상기 설명된 콘쥬게이션 방법에 따라서 알데하이드-택부착 항체와 반응시켰다.
결과가 도 35에 도시되며, 이것은 HIPS 시스테산 PEG2 메이탄신에 콘쥬게이트된 알데하이드-택부착 항체의 크기 배제 크로마토그래피(SEC) 흔적(도 35, 패널 A), 소수성 상호작용 칼럼(HIC) 흔적(도 35, 패널　B), 및 질량 분광기(MS) 흔적(도 35, 패널 C)을 나타낸다. 비콘쥬게이트, 모노콘쥬게이트 및 디콘쥬게이트 단백질 콘쥬게이트가 관찰되었다.
알데하이드 - 택부착 항체에 HIPS 글루탐산 PEG 2 메이탄신의 콘쥬게이션
HIPS 글루탐산 PEG2 메이탄신을 상기 설명된 콘쥬게이션 방법에 따라서 알데하이드-택부착 항체와 반응시켰다.
결과가 도 36에 도시되며, 이것은 HIPS 글루탐산 PEG2 메이탄신에 콘쥬게이트된 알데하이드-택부착 항체의 크기 배제 크로마토그래피(SEC) 흔적(도 36, 패널 A), 소수성 상호작용 칼럼(HIC) 흔적(도 36, 패널　B), 및 질량 분광기(MS) 흔적(도 36, 패널 C)을 나타낸다. 비콘쥬게이트, 모노콘쥬게이트 및 디콘쥬게이트 단백질 콘쥬게이트가 관찰되었다.
알데하이드 - 택부착 항체에 HIPS 아스파라긴 PEG 2 메이탄신의 콘쥬게이션
HIPS 아스파라긴 PEG2 메이탄신을 상기 설명된 콘쥬게이션 방법에 따라서 알데하이드-택부착 항체와 반응시켰다.
결과가 도 37에 도시되며, 이것은 HIPS 아스파라긴 PEG2 메이탄신에 콘쥬게이트된 알데하이드-택부착 항체의 크기 배제 크로마토그래피(SEC) 흔적(도 37, 패널 A) 및 소수성 상호작용 칼럼(HIC) 흔적(도 37, 패널　B)을 나타낸다. 비콘쥬게이트, 모노콘쥬게이트 및 디콘쥬게이트 단백질 콘쥬게이트가 관찰되었다.
알데하이드 - 택부착 항체에 HIPS 포스포티로신 PEG 2 메이탄신의 콘쥬게이션
HIPS 포스포티로신 PEG2 메이탄신을 상기 설명된 콘쥬게이션 방법에 따라서 알데하이드-택부착 항체와 반응시켰다.
결과가 도 38에 도시되며, 이것은 HIPS 포스포티로신 PEG2 메이탄신에 콘쥬게이트된 알데하이드-택부착 항체의 크기 배제 크로마토그래피(SEC) 흔적(도 38, 패널 A) 및 소수성 상호작용 칼럼(HIC) 흔적(도 38, 패널　B)을 나타낸다. 비콘쥬게이트, 모노콘쥬게이트 및 디콘쥬게이트 단백질 콘쥬게이트가 관찰되었다.
알데하이드 - 택부착 항체에 AzaHIPS 글루탐산 PEG 2 메이탄신의 콘쥬게이션
AzaHIPS 글루탐산 PEG2 메이탄신을 상기 설명된 콘쥬게이션 방법에 따라서 알데하이드-택부착 항체와 반응시켰다.
결과가 도 39에 도시되며, 이것은 AzaHIPS 글루탐산 PEG2 메이탄신에 콘쥬게이트된 알데하이드-택부착 항체의 크기 배제 크로마토그래피(SEC) 흔적(도 39, 패널 A), 소수성 상호작용 칼럼(HIC) 흔적(도 39, 패널　B), 및 질량 분광기(MS) 흔적(도 39, 패널 C)을 나타낸다. 비콘쥬게이트, 모노콘쥬게이트 및 디콘쥬게이트 단백질 콘쥬게이트가 관찰되었다.
알데하이드 - 택부착 항체에 HIPS 타르타르산 메이탄신의 콘쥬게이션
HIPS 타르타르산 메이탄신을 상기 설명된 콘쥬게이션 방법에 따라서 알데하이드-택부착 항체와 반응시켰다.
결과가 도 40에 도시되며, 이것은 HIPS 타르타르산 메이탄신에 콘쥬게이트된 알데하이드-택부착 항체의 크기 배제 크로마토그래피(SEC) 흔적(도 40, 패널 A), 소수성 상호작용 칼럼(HIC) 흔적(도 40, 패널　B), 및 질량 분광기(MS) 흔적(도 40, 패널 C)을 나타낸다. 비콘쥬게이트, 모노콘쥬게이트 및 디콘쥬게이트 단백질 콘쥬게이트가 관찰되었다.
알데하이드 - 택부착 항체에 HIPS 디하이드록시 메이탄신의 콘쥬게이션
HIPS 디하이드록시 메이탄신을 상기 설명된 콘쥬게이션 방법에 따라서 알데하이드-택부착 항체와 반응시켰다.
결과가 도 41에 도시되며, 이것은 HIPS 디하이드록시 메이탄신에 콘쥬게이트된 알데하이드-택부착 항체의 크기 배제 크로마토그래피(SEC) 흔적(도 41, 패널 A), 소수성 상호작용 칼럼(HIC) 흔적(도 41, 패널　B), 및 질량 분광기(MS) 흔적(도 41, 패널 C)을 나타낸다. 모노콘쥬게이트 및 디콘쥬게이트 단백질 콘쥬게이트가 관찰되었다.
알데하이드 - 택부착 항체에 HIPS 글루탐산 C 3 메이탄신의 콘쥬게이션
HIPS 글루탐산 C3 메이탄신을 상기 설명된 콘쥬게이션 방법에 따라서 알데하이드-택부착 항체와 반응시켰다.
결과가 도 42에 도시되며, 이것은 HIPS 글루탐산 C3 메이탄신에 콘쥬게이트된 알데하이드-택부착 항체의 크기 배제 크로마토그래피(SEC) 흔적(도 42, 패널 A), 소수성 상호작용 칼럼(HIC) 흔적(도 42, 패널　B), 및 질량 분광기(MS) 흔적(도 42, 패널 C)을 나타낸다. 비콘쥬게이트, 모노콘쥬게이트 및 디콘쥬게이트 단백질 콘쥬게이트가 관찰되었다.
알데하이드 - 택부착 항체에 HIPS 트리메톡시 메이탄신의 콘쥬게이션
HIPS 트리메톡시 메이탄신을 상기 설명된 콘쥬게이션 방법에 따라서 알데하이드-택부착 항체와 반응시켰다.
결과가 도 43에 도시되며, 이것은 HIPS 트리메톡시 메이탄신에 콘쥬게이트된 알데하이드-택부착 항체의 크기 배제 크로마토그래피(SEC) 흔적(도 43, 패널 A), 소수성 상호작용 칼럼(HIC) 흔적(도 43, 패널　B), 및 질량 분광기(MS) 흔적(도 43, 패널 C)을 나타낸다. 모노콘쥬게이트 및 디콘쥬게이트 단백질 콘쥬게이트가 관찰되었다.
알데하이드 - 택부착 항체에 HIPS Glc NAc PEG 2 Ac 3 메이탄신의 콘쥬게이션
HIPS Glc NAc PEG2 Ac3 메이탄신을 상기 설명된 콘쥬게이션 방법에 따라서 알데하이드-택부착 항체와 반응시켰다.
결과가 도 44에 도시되며, 이것은 HIPS Glc NAc PEG2 Ac3 메이탄신에 콘쥬게이트된 알데하이드-택부착 항체의 소수성 상호작용 칼럼(HIC) 흔적을 나타낸다. 비콘쥬게이트, 모노콘쥬게이트 및 디콘쥬게이트 단백질 콘쥬게이트가 관찰되었다.
알데하이드 - 택부착 항체에 HIPS Glc NAc PEG 2 메이탄신의 콘쥬게이션
HIPS Glc NAc PEG2 메이탄신을 상기 설명된 콘쥬게이션 방법에 따라서 알데하이드-택부착 항체와 반응시켰다.
결과가 도 45에 도시되며, 이것은 HIPS Glc NAc PEG2 메이탄신에 콘쥬게이트된 알데하이드-택부착 항체의 소수성 상호작용 칼럼(HIC) 흔적을 나타낸다. 비콘쥬게이트, 모노콘쥬게이트 및 디콘쥬게이트 단백질 콘쥬게이트가 관찰되었다.
알데하이드 - 택부착 항체에 HIPS Nit PEG 2 메이탄신의 콘쥬게이션
HIPS Nit PEG2 메이탄신을 상기 설명된 콘쥬게이션 방법에 따라서 알데하이드-택부착 항체와 반응시켰다.
결과가 도 46에 도시되며, 이것은 HIPS Nit PEG2 메이탄신에 콘쥬게이트된 알데하이드-택부착 항체의 크기 배제 크로마토그래피(SEC) 흔적(도 46, 패널 A), 소수성 상호작용 칼럼(HIC) 흔적(도 46, 패널　B), 및 질량 분광기(MS) 흔적(도 46, 패널 C)을 나타낸다. 비콘쥬게이트, 모노콘쥬게이트 및 디콘쥬게이트 단백질 콘쥬게이트가 관찰되었다.
알데하이드 - 택부착 항체에 HIPS PEG 2 MMAF의 콘쥬게이션
HIPS PEG2 MMAF을 상기 설명된 콘쥬게이션 방법에 따라서 알데하이드-택부착 항체와 반응시켰다.
결과가 도 47에 도시되며, 이것은 HIPS PEG2 MMAF에 콘쥬게이트된 알데하이드-택부착 항체의 크기 배제 크로마토그래피(SEC) 흔적(도 47, 패널 A) 및 질량 분광기(MS) 흔적(도 47, 패널 B)을 나타낸다. 비콘쥬게이트, 모노콘쥬게이트 및 디콘쥬게이트 단백질 콘쥬게이트가 관찰되었다.
알데하이드 - 택부착 항체에 HIPS S PEG 4 메이탄신의 콘쥬게이션
HIPS S PEG4 메이탄신을 상기 설명된 콘쥬게이션 방법에 따라서 알데하이드-택부착 항체와 반응시켰다.
결과가 도 48에 도시되며, 이것은 HIPS S PEG4 메이탄신에 콘쥬게이트된 알데하이드-택부착 항체의 소수성 상호작용 칼럼(HIC) 흔적을 나타낸다. 비콘쥬게이트, 모노콘쥬게이트 및 디콘쥬게이트 단백질 콘쥬게이트가 관찰되었다.
알데하이드 - 택부착 항체에 HIPS S PEG 6 메이탄신의 콘쥬게이션
HIPS S PEG6 메이탄신을 상기 설명된 콘쥬게이션 방법에 따라서 알데하이드-택부착 항체와 반응시켰다.
결과가 도 49에 도시되며, 이것은 HIPS S PEG6 메이탄신에 콘쥬게이트된 알데하이드-택부착 항체의 소수성 상호작용 칼럼(HIC) 흔적을 나타낸다. 비콘쥬게이트, 모노콘쥬게이트 및 디콘쥬게이트 단백질 콘쥬게이트가 관찰되었다.
알데하이드 - 택부착 항체에 HIPS S C 5 메이탄신의 콘쥬게이션
HIPS S C5 메이탄신을 상기 설명된 콘쥬게이션 방법에 따라서 알데하이드-택부착 항체와 반응시켰다.
결과가 도 50에 도시되며, 이것은 HIPS S C5 메이탄신에 콘쥬게이트된 알데하이드-택부착 항체의 소수성 상호작용 칼럼(HIC) 흔적을 나타낸다. 비콘쥬게이트, 모노콘쥬게이트 및 디콘쥬게이트 단백질 콘쥬게이트가 관찰되었다.
알데하이드 - 택부착 항체에 HIPS G PEG 6 메이탄신의 콘쥬게이션
HIPS G PEG6 메이탄신을 상기 설명된 콘쥬게이션 방법에 따라서 알데하이드-택부착 항체와 반응시켰다.
결과가 도 51에 도시되며, 이것은 HIPS G PEG6 메이탄신에 콘쥬게이트된 알데하이드-택부착 항체의 소수성 상호작용 칼럼(HIC) 흔적을 나타낸다. 비콘쥬게이트, 모노콘쥬게이트 및 디콘쥬게이트 단백질 콘쥬게이트가 관찰되었다.
알데하이드 - 택부착 항체에 HIPS PEG 6 Val Cit PABC NMC 3 메이탄신의 콘쥬게이션
HIPS PEG6 Val Cit PABC NMC3 메이탄신을 상기 설명된 콘쥬게이션 방법에 따라서 알데하이드-택부착 항체와 반응시켰다.
결과가 도 52에 도시되며, 이것은 HIPS PEG6 Val Cit PABC NMC3 메이탄신에 콘쥬게이트된 알데하이드-택부착 항체의 소수성 상호작용 칼럼(HIC) 흔적을 나타낸다. 비콘쥬게이트, 모노콘쥬게이트 및 디콘쥬게이트 단백질 콘쥬게이트가 관찰되었다.
알데하이드 - 택부착 항체에 HIPS Gly PEG 6 Val Cit PABC MMAE의 콘쥬게이션
HIPS Gly PEG6 Val Cit PABC MMAE을 상기 설명된 콘쥬게이션 방법에 따라서 알데하이드-택부착 항체와 반응시켰다.
결과가 도 53에 도시되며, 이것은 HIPS Gly PEG6 Val Cit PABC MMAE에 콘쥬게이트된 알데하이드-택부착 항체의 소수성 상호작용 칼럼(HIC) 흔적을 나타낸다. 비콘쥬게이트, 모노콘쥬게이트 및 디콘쥬게이트 단백질 콘쥬게이트가 관찰되었다.
알데하이드 - 택부착 항체에 HIPS 시스테산 메이탄신의 콘쥬게이션
HIPS 시스테산 메이탄신을 상기 설명된 콘쥬게이션 방법에 따라서 알데하이드-택부착 항체와 반응시켰다.
결과가 도 54에 도시되며, 이것은 HIPS 시스테산 메이탄신에 콘쥬게이트된 알데하이드-택부착 항체의 소수성 상호작용 칼럼(HIC) 흔적을 나타낸다. 비콘쥬게이트, 모노콘쥬게이트 및 디콘쥬게이트 단백질 콘쥬게이트가 관찰되었다.
알데하이드 - 택부착 항체에 HIPS 인돌 E ( CO 2 H ) PEG 2 NH Alexa Fluor 488의 콘쥬게이션
HIPS 인돌 E (CO2H) PEG2 NH Alexa Fluor 488을 상기 설명된 콘쥬게이션 방법에 따라서 알데하이드-택부착 항체와 반응시켰다.
결과가 도 55에 도시되며, 이것은 HIPS 인돌 E (CO2H) PEG2 NH Alexa Fluor 488에 콘쥬게이트된 알데하이드-택부착 항체의 SDS-PAGE 겔의 이미지를 나타낸다. 알데하이드-택부착 콘쥬게이트의 중쇄 및 경쇄에 대한 콘쥬게이트가 관찰되었다.
알데하이드 - 택부착 항체에 HIPS PEG 6 메이탄신의 콘쥬게이션
HIPS PEG6 메이탄신을 상기 설명된 콘쥬게이션 방법에 따라서 알데하이드-택부착 항체와 반응시켰다.
결과가 도 56에 도시되며, 이것은 HIPS PEG6 메이탄신에 콘쥬게이트된 알데하이드-택부착 항체의 소수성 상호작용 칼럼(HIC) 흔적을 나타낸다. 비콘쥬게이트, 모노콘쥬게이트 및 디콘쥬게이트 단백질 콘쥬게이트가 관찰되었다.
알데하이드 - 택부착 항체에 PIPS PEG 2 메이탄신의 콘쥬게이션
PIPS PEG2 메이탄신을 상기 설명된 콘쥬게이션 방법에 따라서 알데하이드-택부착 항체와 반응시켰다.
결과가 도 57에 도시되며, 이것은 PIPS PEG2 메이탄신에 콘쥬게이트된 알데하이드-택부착 항체의 소수성 상호작용 칼럼(HIC) 흔적을 나타낸다. 비콘쥬게이트, 모노콘쥬게이트 및 디콘쥬게이트 단백질 콘쥬게이트가 관찰되었다.
알데하이드 - 택부착 항체에 HIPS 트리하이드록시 메이탄신의 콘쥬게이션
HIPS 트리하이드록시 메이탄신을 상기 설명된 콘쥬게이션 방법에 따라서 알데하이드-택부착 항체와 반응시켰다.
결과가 도 58에 도시되며, 이것은 HIPS 트리하이드록시 메이탄신에 콘쥬게이트된 알데하이드-택부착 항체의 소수성 상호작용 칼럼(HIC) 흔적을 나타낸다. 비콘쥬게이트 및 콘쥬게이트 단백질 콘쥬게이트가 관찰되었다.
알데하이드 - 택부착 항체에 HIPS 리신 PEG 2 메이탄신의 콘쥬게이션
HIPS 리신 PEG2 메이탄신을 상기 설명된 콘쥬게이션 방법에 따라서 알데하이드-택부착 항체와 반응시켰다.
결과가 도 59에 도시되며, 이것은 HIPS 리신 PEG2 메이탄신에 콘쥬게이트된 알데하이드-택부착 항체의 소수성 상호작용 칼럼(HIC) 흔적을 나타낸다. 비콘쥬게이트 및 콘쥬게이트 단백질 콘쥬게이트가 관찰되었다.
알데하이드 - 택부착 항체에 HIPS- PAPip ( PEG2 ( CO2H ))- 메이탄신의 콘쥬게이션
HIPS-PAPip(PEG2 (CO2H))-메이탄신을 상기 설명된 콘쥬게이션 방법에 따라서 알데하이드-택부착 항체와 반응시켰다.
결과가 도 66에 도시되며, 이것은 HIPS-PAPip(PEG2 (CO2H))-메이탄신에 콘쥬게이트된 알데하이드-택부착 항체의 크기 배제 크로마토그래피(SEC) 흔적(도 66, 패널 A), 소수성 상호작용 칼럼(HIC) 흔적(도 66, 패널　B), 및 질량 분광기(MS) 흔적(도 66, 패널 C)을 나타낸다. 비콘쥬게이트, 모노콘쥬게이트 및 디콘쥬게이트 단백질 콘쥬게이트가 관찰되었다.
알데하이드 - 택부착 항체에 HIPS-글루탐산- PEG2 -발린-알라닌- PABC - 메이탄신의 콘쥬게이션
HIPS-글루탐산-PEG2-발린-알라닌-PABC-메이탄신을 상기 설명된 콘쥬게이션 방법에 따라서 알데하이드-택부착 항체와 반응시켰다.
결과가 도 67에 도시되며, 이것은 HIPS-글루탐산-PEG2-발린-알라닌-PABC-메이탄신에 콘쥬게이트된 알데하이드-택부착 항체의 소수성 상호작용 칼럼(HIC) 흔적을 나타낸다. 비콘쥬게이트, 모노콘쥬게이트 및 디콘쥬게이트 단백질 콘쥬게이트가 관찰되었다.
알데하이드 - 택부착 항체에 HIPS- PAPip ( PEG2 ( CO2H ))-발린-알라닌- PABC - MMAD의 콘쥬게이션
HIPS-PAPip(PEG2 (CO2H))-발린-알라닌-PABC-MMAD을 상기 설명된 콘쥬게이션 방법에 따라서 알데하이드-택부착 항체와 반응시켰다.
결과가 도 68에 도시되며, 이것은 HIPS-PAPip(PEG2 (CO2H))-발린-알라닌-PABC-MMAD에 콘쥬게이트된 알데하이드-택부착 항체의 소수성 상호작용 칼럼(HIC) 흔적을 나타낸다. 비콘쥬게이트, 모노콘쥬게이트 및 디콘쥬게이트 단백질 콘쥬게이트가 관찰되었다.
알데하이드 - 택부착 항체에 HIPS- PAPip ( PEG2 ( CO2H ))-발린-시트룰린- PABC -MMAD의 콘쥬게이션
HIPS-PAPip (PEG2 (CO2H))-발린-시트룰린-PABC-MMAD을 상기 설명된 콘쥬게이션 방법에 따라서 알데하이드-택부착 항체와 반응시켰다.
결과가 도 69에 도시되며, 이것은 HIPS-PAPip (PEG2 (CO2H))-발린-시트룰린-PABC-MMAD에 콘쥬게이트된 알데하이드-택부착 항체의 크기 배제 크로마토그래피(SEC) 흔적(도 69, 패널 A) 및 소수성 상호작용 칼럼(HIC) 흔적(도 69, 패널　B)을 나타낸다. 비콘쥬게이트, 모노콘쥬게이트 및 디콘쥬게이트 단백질 콘쥬게이트가 관찰되었다.
알데하이드 - 택부착 항체에 AzaHIPS - PAPip ( PEG2 ( CO2H ))-발린-시트룰린-PABC-MMAD의 콘쥬게이션
AzaHIPS-PAPip (PEG2 (CO2H))-발린-시트룰린-PABC-MMAD을 상기 설명된 콘쥬게이션 방법에 따라서 알데하이드-택부착 항체와 반응시켰다.
결과가 도 70에 도시되며, 이것은 AzaHIPS-PAPip (PEG2 (CO2H))-발린-시트룰린-PABC-MMAD에 콘쥬게이트된 알데하이드-택부착 항체의 크기 배제 크로마토그래피(SEC) 흔적(도 70, 패널 A) 및 소수성 상호작용 칼럼(HIC) 흔적(도 70, 패널　B)을 나타낸다. 비콘쥬게이트, 모노콘쥬게이트 및 디콘쥬게이트 단백질 콘쥬게이트가 관찰되었다.
알데하이드 - 택부착 항체에 HIPS-글루탐산- PEG2 -발린-시트룰린- PABC - 메이탄신의 콘쥬게이션
HIPS-글루탐산-PEG2-발린-시트룰린-PABC-메이탄신을 상기 설명된 콘쥬게이션 방법에 따라서 알데하이드-택부착 항체와 반응시켰다.
결과가 도 71에 도시되며, 이것은 HIPS-글루탐산-PEG2-발린-시트룰린-PABC-메이탄신에 콘쥬게이트된 알데하이드-택부착 항체의 크기 배제 크로마토그래피(SEC) 흔적(도 71, 패널 A), 소수성 상호작용 칼럼(HIC) 흔적(도 71, 패널　B), 및 질량 분광기(MS) 흔적(도 71, 패널 C)을 나타낸다. 비콘쥬게이트 및 모노콘쥬게이트 단백질 콘쥬게이트가 관찰되었다.
알데하이드 - 택부착 항체에 HIPS-아스파라긴- PEG2 - 메이탄신의 콘쥬게이션
HIPS-아스파라긴-PEG2-메이탄신을 상기 설명된 콘쥬게이션 방법에 따라서 알데하이드-택부착 항체와 반응시켰다.
결과가 도 72에 도시되며, 이것은 HIPS-아스파라긴-PEG2-메이탄신에 콘쥬게이트된 알데하이드-택부착 항체의 크기 배제 크로마토그래피(SEC) 흔적(도 72, 패널 A), 소수성 상호작용 칼럼(HIC) 흔적(도 72, 패널　B), 및 질량 분광기(MS) 흔적(도 72, 패널 C)을 나타낸다. 비콘쥬게이트, 모노콘쥬게이트 및 디콘쥬게이트 단백질 콘쥬게이트가 관찰되었다.
알데하이드 - 택부착 항체에 HIPS-알라닌- PEG2 - 메이탄신의 콘쥬게이션
HIPS-알라닌-PEG2-메이탄신을 상기 설명된 콘쥬게이션 방법에 따라서 알데하이드-택부착 항체와 반응시켰다.
결과가 도 73에 도시되며, 이것은 HIPS-알라닌-PEG2-메이탄신에 콘쥬게이트된 알데하이드-택부착 항체의 크기 배제 크로마토그래피(SEC) 흔적(도 73, 패널 A), 소수성 상호작용 칼럼(HIC) 흔적(도 73, 패널　B), 및 질량 분광기(MS) 흔적(도 73, 패널 C)을 나타낸다. 비콘쥬게이트, 모노콘쥬게이트 및 디콘쥬게이트 단백질 콘쥬게이트가 관찰되었다.
실시예 20
(2S)-1-(((14S,16S,33S,2R,4S,10E,12E,14R)-86-클로로-14-하이드록시-85,14-디메톡시-33,2,7,10-테트라메틸-12,6-디옥소-7-아자-1 (6,4)-옥사지나나-3 (2,3)-옥시라나-8 (1,3)-벤제나시클로테트라데카판-10,12-디엔-4-일)옥시)-8-(1-(3-(2-((1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-2,3-디메틸-1,4,7-트리옥소-11,14-디옥사-3,8-디아자헵타데칸-17-오익산의 합성을 위한 반응도가 도 60에 도시된다.
Figure pct00276
tert -부틸 4- 옥소피페리딘 -1- 카복실레이트의 제조 (도 60)
자기 교반막대를 넣은 100mL 둥근바닥 플라스크에 피페리디논 염산염 일수화물(1.53 g, 10mmol), Boc 무수물(2.39 g, 11mmol), 탄산나트륨(1.22 g, 11.5mmol), 디옥산 (10mL), 및 물(1mL)을 넣었다. 반응 혼합물을 1h 동안 실온에서 교반했다. 혼합물을 물(100mL)로 희석하고 EtOAc (3 x 100mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 간수로 세척하고 Na2SO4에서 건조시키고 여과하고 감압 농축했다. 결과의 물질을 진공 건조시켜서 흰색 고체로서 표제 화합물을 수득했다(1.74 g, 87% 수율).
1H NMR (CDCl3) δ 3.73 (t, 4H, J = 6.0), 2.46 (t, 4H, J = 6.0), 1.51 (s, 9H).
Figure pct00277
tert -부틸 4-((2-(2-(3-( tert - 부톡시 )-3- 옥소프로폭시 ) 에톡시 )에틸)아미노)피페리딘-1-카복실레이트의 제조 (도 60)
자기 교반막대를 넣은 건조된 섬광 바이알에 tert -부틸 4-옥소피페리딘-1-카복실레이트 (399mg, 2mmol), H2N-PEG2-COOt-Bu (550mg, 2.4mmol), 4Å 분자체(활성화 분말, 200 mg), 및 1,2-디클로로에탄(5mL)을 넣었다. 혼합물을 실온에서 1h 동안 교반했다. 반응 혼합물에 나트륨 트리아세톡시보로하이드라이드(845mg, 4mmol)를 첨가했다. 혼합물을 실온에서 3일 동안 교반했다. 결과의 혼합물을 EtOAc와 포화 수성 NaHCO3에 분배했다. 유기층을 간수로 세척하고 Na2SO4에서 건조시키고 여과하고 감압 농축하여 점성 오일로서 표제 화합물을 수득했다(850mg, >100% 수율).
ESI-MS 계산 [MH]+: 417.3; 실측 417.2.
Figure pct00278
13-(1-( tert - 부톡시카보닐 )피페리딘-4-일)-2,2-디메틸-4,14-디옥소-3,7,10-트리아자-13-아자헵타데칸-17-오익산의 제조 (도 60)
자긱 교반막대를 넣은 건조된 섬광 바이알에 tert-부틸 4-((2-(2-(3-(tert-부톡시)-3-옥소프로폭시)에톡시)에틸)아미노)피페리딘-1-카복실레이트 (220mg, 0.5mmol), 무수석신산(55mg, 0.55mmol), 4-(디메틸아미노)피리딘 (5mg, 0.04mmol), 및 디클로로메탄(3mL)을 넣었다. 혼합물을 실온에서 24h 동안 교반했다. 반응 혼합물을 플래시 크로마토그래피(용출 50-100% EtOAc/헥산)로 부분 정제하여 투명한 오일로서 표제 화합물을 수득했고(117mg), 이것을 추가의 특성화 없이 사용했다.
Figure pct00279
17-( tert -부틸) 1-((1 4 S,1 6 S,3 3 S,2R,4S,10E,12E,14R)-8 6 - 클로로 -1 4 - 하이드록시 -8 5 ,14-디메톡시-3 3 ,2,7,10-테트라메틸-1 2 ,6-디옥소-7-아자-1 (6,4)-옥사지나나-3 (2,3)-옥시라나-8 (1,3)-벤제나시클로테트라데카판-10,12-디엔-4-일)(2S)-8-(1-(tert-부톡시카보닐)피페리딘-4-일)-2,3-디메틸-4,7-디옥소-11,14-디옥사-3,8-디아자헵타데칸e디오에이트의 제조( Boc - PAPip ( PEG2 ( CO2t - Bu )- 메이탄신 )(도 60)
자기 교반막대를 넣은 건조된 섬광 바이알에 13-(1-(tert-부톡시카보닐)피페리딘-4-일)-2,2-디메틸-4,14-디옥소-3,7,10-트리아자-13-아자헵타데칸-17-오익산 (55mg, 0.1mmol), 디아실 메이탄신 (65mg, 0.1mmol), HATU (43mg, 0.11mmol), DMF (1mL), 및 디클로로메탄 (0.5mL)을 넣었다. 혼합물을 실온에서 8h 교반했다. 반응 혼합물을 C18 플래시 크로마토그래피 (용출 5-100% MeCN/물)로 직접 정제하여 흰색 필름으로서 표제 화합물을 수득했다(18mg, 16% 수율).
ESI-MS 계산 [MH]+: 1148.6;; 실측 1148.7.
Figure pct00280
(2S)-1-(((1 4 S,1 6 S,3 3 S,2R,4S,10E,12E,14R)-8 6 - 클로로 -1 4 - 하이드록시 -8 5 ,14- 디메톡시 -3 3 ,2,7,10-테트라메틸-1 2 ,6-디옥소-7-아자-1 (6,4)- 옥사지나나 -3 (2,3)- 옥시 라나-8 (1,3)- 벤제나시클로테트라데카판 -10,12- 디엔 -4-일) 옥시 )-2,3-디메틸-1,4,7-트리옥소-8-(피페리딘-4-일)-11,14-디옥사-3,8-디아자헵타데칸-17-오익산의 제조 (PAPip ( PEG2 ( CO2H ))- 메이탄신 )(도 60)
자기 교반막대를 넣은 건조된 섬광 바이알에 Boc-PAPip (PEG2 (CO2t-Bu)-메이탄신 (31mg, 0.027mmol) 및 디클로로메탄 (1mL)를 넣었다. 용액을 0℃로 냉각하고 4염화주석(IV)(1.0 M 용액 디클로로메탄, 0.3 mL, 0.3mmol)을 첨가했다. 반응 혼합물을 0℃에서 1h 교반했다. 반응 혼합물을 C18 플래시 크로마토그래피 (용출 5-100% MeCN/물)로 직접 정제하여 흰색 고체로서 표제 화합물을 수득했다(16mg, 60% 수율).
ESI-MS 계산 [MH]+: 992.5; 실측 992.6.
Figure pct00281
(2S)-8-(1-(3-(2-((2-(((9H- 플루오렌 -9-일) 메톡시 ) 카보닐 )-1,2- 디메틸히드라지닐 )메틸)-1H-인돌-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-1-(((1 4 S,1 6 S,3 3 S,2R,4S,10E,12E,14R)-8 6 -클로로-1 4 -하이드록시-8 5 ,14-디메톡시-3 3 ,2,7,10-테트라메틸-1 2 ,6-디옥소-7-아자-1 (6,4)-옥사지나나-3 (2,3)-옥시라나-8 (1,3)-벤제나시클로테트라데카판-10,12-디엔-4-일)옥시)-2,3-디메틸-1,4,7-트리옥소-11,14-디옥사-3,8-디아자헵타데칸-17-오익산의 제조 ( Fmoc -HIPS- PAPip ( PEG2 (CO2H))-메이탄신)(도 60)
자기 교반막대를 넣은 건조된 섬광 바이알에 PAPip (PEG2 (CO2H))-메이탄신 (16mg, 0.016mmol), (9H-플루오렌-9-일)메틸 1,2-디메틸-2-((1-(3-옥소-3-(퍼플루오로페녹시)프로필)-1H-인돌-2-일)메틸)히드라진-1-카복실레이트 (13mg, 0.02mmol), DIPEA (8 μL, 0.05mmol), 및 DMF (1mL)를 넣었다. 용액을 실온에서 18h 교반했다. 반응 혼합물을 C18 플래시 크로마토그래피 (용출 5-100% MeCN/물)로 직접 정제하여 흰색 고체로서 표제 화합물을 수득했다(18mg, 77% 수율).
ESI-MS 계산 [MH]+: 1457.7;; 실측 1457.9.
Figure pct00282
(2S)-1-(((1 4 S,1 6 S,3 3 S,2R,4S,10E,12E,14R)-8 6 - 클로로 -1 4 - 하이드록시 -8 5 ,14- 디메톡시 -3 3 ,2,7,10-테트라메틸-1 2 ,6-디옥소-7-아자-1 (6,4)- 옥사지나나 -3 (2,3)- 옥시 라나-8 (1,3)-벤제나시클로테트라데카판-10,12-디엔-4-일)옥시)-8-(1-(3-(2-((1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-2,3-디메틸-1,4,7-트리옥소-11,14-디옥사-3,8-디아자헵타데칸-17-오익산의 제조 (도 60)
자기 교반막대를 넣은 건조된 섬광 바이알에 Fmoc-HIPS-PAPip (PEG2 (CO2H))-메이탄신 (18mg, 0.012mmol), 피페리딘 (20 μL, 0.02mmol), 및 DMF (1mL)를 넣었다. 용액을 실온에서 20min 교반했다. 반응 혼합물을 C18 플래시 크로마토그래피 (용출 1-60% MeCN/물)로 직접 정제하여 흰색 고체로서 표제 화합물을 수득했다(15mg, 98% 수율).
ESI-MS 계산 [MH]+: 1235.6;; 실측 1236.0.
실시예 21
(2S,5S,18S)-1-((4-((5S,8S,11S,12R)-11-((S)-sec-부틸)-5,8-디이소프로필-12-(2-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-2-옥소에틸)-4,10-디메틸-3,6,9-트리옥소-2,13-디옥사-4,7,10-트리아자테트라데실)페닐)아미노)-18-(3-(2-((1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)프로판아미드)-5-이소프로필-2-메틸-1,4,7,17-테트라옥소-10,13-디옥사-3,6,16-트리아자헤니코산-21-오익산의 합성을 위한 반응도가 도 61에 도시된다(HIPS-Glu (OH)-PEG2-Val-Ala-PABC-MMAD).
Figure pct00283
4-((S)-2-((S)-2-아미노-3- 메틸부탄아미도 ) 프로판아미드 ) 벤질 ((S)-1-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)(메틸)카바메이트의 제조 ( H 2 N -Val-Ala- PABC - MMAD )(도 61)
자기 교반막대를 넣은 건조된 섬광 바이알에 (9H-플루오렌-9-일)메틸 ((S)-3-메틸-1-(((S)-1-((4-((((4-니트로페녹시)카보닐)옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소프로판-2-일)아미노)-1-옥소부탄-2-일)카바메이트 (102mg, 0.15mmol), 모노메틸 아우리스타틴 D (TFA salt, 110mg, 0.125mmol), HOAt (14mg, 0.01mmol), DIPEA (65 mL, 0.37mmol), 및 DMA (1mL)를 넣었다. 용액을 실온에서 20h 교반했다. HPLC에 의해 검출된 대로 MMAD가 소모되었다. 피페리딘 (100 mL, 1mmol)을 반응 혼합물에 첨가하고 결과의 용액을 실온에서 20min 더 교반했다. 반응 혼합물을 C18 플래시 크로마토그래피 (용출 5-100% MeCN/물)로 직접 정제하여 연황색 고체로서 표제 화합물을 수득했다(101mg, 75% 수율).
ESI-MS 계산 [MH]+: 1090.6;; 실측 1090.6.
Figure pct00284
tert -부틸 (2S,5S,18S)-18-(3-(2-((2-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카보닐)-1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)프로판아미드)-1-((4-((5S,8S,11S,12R)-11-((S)-sec-부틸)-5,8-디이소프로필-12-(2-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-2-옥소에틸)-4,10-디메틸-3,6,9-트리옥소-2,13-디옥사-4,7,10-트리아자테트라데실)페닐)아미노)-5-이소프로필-2-메틸-1,4,7,17-테트라옥소-10,13-디옥사-3,6,16-트리아자헤니코산-21-오에이트의 제조( Fmoc -HIPS- Glu ( OtBu )- PEG2 -Val-Ala- PABC - MMAD )(도 61)
자기 교반막대를 넣은 건조된 섬광 바이알에 (S)-7-(3-(2-((2-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카보닐)-1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)프로판아미드)-2,2-디메틸-4,8-디옥소-3,12,15-트리아자-9-아자옥타데칸-18-오익산 (42mg, 0.051mmol), H2N-Val-Ala-PABC-MMAD (50mg, 0.046mmol), HATU (20mg, 0.053mmol), DIPEA (16 mL, 0.09mmol), 및 DCM (1mL)을 넣었다. 용액을 실온에서 18h 교반했다. (S)-7-(3-(2-((2-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카보닐)-1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)프로판아미드)-2,2-디메틸-4,8-디옥소-3,12,15-트리아자-9-아자옥타데칸-18-오익산 (6mg, 0.007mmol), HATU (10mg, 0.03mmol), 및 DIPEA (10 mL, 0.06mmol)의 추가 부분을 첨가하고 결과의 용액을 실온에서 2h 더 교반했다. 반응 혼합물을 감압 농축한 후 C18 플래시 크로마토그래피 (용출 25-100% MeCN/물)로 정제하여 흰색 고체로서 표제 화합물을 수득했다(82mg, 94% 수율).
ESI-MS 계산 [MH]+: 1900.0;; 실측 1900.3.
Figure pct00285
( 2S,5S,18S )-18-(3-(2-((2-(((9H- 플루오렌 -9-일) 메톡시 ) 카보닐 )-1,2- 디메틸히드라지닐 )메틸)-1H-인돌-1-일)프로판아미드)-1-((4-((5S,8S,11S,12R)-11-((S)-sec-부틸)-5,8-디이소프로필-12-(2-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-2-옥소에틸)-4,10-디메틸-3,6,9-트리옥소-2,13-디옥사-4,7,10-트리아자테트라데실)페닐)아미노)-5-이소프로필-2-메틸-1,4,7,17-테트라옥소-10,13-디옥사-3,6,16-트리아자헤니코산-21-오익산의 제조 ( Fmoc -HIPS- Glu (OH)- PEG2 -Val-Ala- PABC - MMAD )(도 61)
자기 교반막대를 넣은 건조된 섬광 바이알에 Fmoc-HIPS-Glu (OtBu)-PEG2-Val-Ala-PABC-MMAD (82mg, 0.043mmol) 및 DCM (0.5mL)을 넣었다. 용액을 0℃로 냉각하고 사염화주석(IV)을 첨가했다(0.25 mL, 1.0 M DCM, 0.25mmol). 결과의 혼합물을 0℃에서 1h 교반했다. 반응 혼합물을 C18 플래시 크로마토그래피 (용출 5-100% MeCN/물)로 직접 정제하여 흰색 고체로서 표제 화합물을 수득했다(62mg, 78% 수율).
ESI-MS 계산 [MH]+: 1844.0;; 실측 1844.2.
Figure pct00286
( 2S,5S,18S )-1-((4-(( 5S,8S,11S,12R )-11-((S)-sec-부틸)-5,8- 디이소프로필 -12-(2-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-2-옥소에틸)-4,10-디메틸-3,6,9-트리옥소-2,13-디옥사-4,7,10-트리아자테트라데실)페닐)아미노)-18-(3-(2-((1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)프로판아미드)-5-이소프로필-2-메틸-1,4,7,17-테트라옥소-10,13-디옥사-3,6,16-트리아자헤니코산-21-오익산의 제조 (HIPS- Glu (OH)- PEG2 -Val-Ala-PABC-MMAD)(도 61)
자기 교반막대를 넣은 건조된 섬광 바이알에 Fmoc-HIPS-Glu (OH)-PEG2-Val-Ala-PABC-MMAD (62mg, 0.034mmol), 피페리딘 (0.1 mL, 1mmol) 및 DMF (0.5mL)을 첨가했다. 반응 혼합물을 실온에서 20min 교반한 다음 C18 플래시 크로마토그래피 (용출 5-75% MeCN/물)로 정제하여 흰색 고체로서 표제 화합물을 수득했다(25mg, 46% 수율).
ESI-MS 계산 [MH]+: 1621.9;; 실측 1622.1.
실시예 22
13-(1-(3-(2-((2-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카보닐)-1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-2,2-디메틸-4,14-디옥소-3,7,10-트리아자-13-아자헵타데칸-17-오익산의 합성을 위한 반응도가도 62에 도시된다 (Fmoc-HIPS-PAPip (PEG2 (CO2t-Bu))CO2H).
Figure pct00287
(9H- 플루오렌 -9-일) 메틸 1,2-디메틸-2-((1-(3-옥소-3-(4- 옥소피페리딘 -1-일)프로필)-1H-인돌-2-일)메틸)히드라진-1-카복실레이트의 제조 ( Fmoc -HIPS-피페리디논)(도 62)
자기 교반막대를 넣은 건조된 섬광 바이알에 (9H-플루오렌-9-일)메틸 1,2-디메틸-2-((1-(3-옥소-3-(퍼플루오로페녹시)프로필)-1H-인돌-2-일)메틸)히드라진-1-카복실레이트 (700mg, 1.08mmol), 4-피페리디논 염산염 일수화물(183mg, 1.2mmol), DIPEA (400 mL, 2.3mmol), 1,2-디클로로에탄 (5mL), 및 DMF (0.5mL)를 넣었다. 용액을 실온에서 2h 교반했다. 반응 혼합물을 EtOAc (100mL)로 희석한 다음 HCl (1 M, 3 x 30mL), 포화 NaHCO3 (3 x 30mL), 물 (2 x 30mL), 및 간수 (1 x 30mL)로 세척했다. 유기층을 Na2SO4에서 건조시키고 여과하고 감압 농축하고 진공 건조시켜서 흰색 고체로서 표제 화합물을 수득했고(355mg, 58% 수율), 이것을 추가의 특성화 없이 사용했다.
Figure pct00288
(9H- 플루오렌 -9-일) 메틸 2-((1-(3-(4-((2-(2-(3-(tert-부톡시)-3-옥소프로폭시)에톡시)에틸)아미노)피페리딘-1-일)-3-옥소프로필)-1H-인돌-2-일)메틸)-1,2-디메틸히드라진-1-카복실레이트의 제조 ( Fmoc -HIPS- PAPip ( PEG2 ( CO2t - Bu ))NH)(도 62)
자기 교반막대를 넣은 건조된 섬광 바이알에 Fmoc-HIPS-피페리디논 (355mg, 0.63mmol), H2N-PEG2-COOtBu (175mg, 0.76mmol), 4Å 분자체 (활성화 분말, 100 mg), 및 1,2-디클로로에탄 (2.5mL)을 넣었다. 혼합물을 실온에서 1h 교반했다. 반응 혼합물을 나트륨 트리아세톡시보로하이드라이드(314mg, 1.48mmol)를 첨가했다. 혼합물을 실온에서 18h 교반했다. 반응 혼합물을 EtOAc와 포화 수성 NaHCO3에 분배했다. 유기층을 포화 수성 NaHCO3 (2 x 5mL), 및 간수(1 x 5mL)로 세척하고 Na2SO4에서 건조시키고 여과하고 감압 농축하여 황색 오일로서 표제 화합물을 수득했고, 이것을 추가의 특성화 없이 사용했다.
Figure pct00289
13-(1-(3-(2-((2-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카보닐)-1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-2,2-디메틸-4,14-디옥소-3,7,10-트리아자-13-아자헵타데칸-17-오익산의 제조 ( Fmoc -HIPS- PAPip ( PEG2 (CO2t-Bu))CO2H)(도 62)
자기 교반막대를 넣은 건조된 섬광 바이알에 이전 단계로부터의 Fmoc-HIPS-PAPip (PEG2 (CO2t-Bu))NH, 무수석신산(153mg, 1.53mmol), 4-(디메틸아미노)피리딘 (5mg, 0.04mmol), 및 디클로로메탄 (2mL)을 첨가했다. 혼합물을 실온에서 1h 교반했다. 메탄올(1mL)을 첨가하고 혼합물을 15min 교반했다. 반응 혼합물을 C18 플래시 크로마토그래피 (용출 5-100% MeCN/물; 0.1% 아세트산 함유)로 정제했다. 생성물-함유 분획을 감압 농축한 다음 톨루엔(3 x 50mL)과 공비 증류시켜 잔류 아세트산을 제거했다. 표제 화합물이 거품질 흰색 고체로서 얻어졌다(366mg, 3 단계에 걸친 38% 수율).
ESI-MS 계산 [MH]+: 882.5; 실측 882.7.
실시예 23
(2S,5S)-1-((4-((5S,8S,11S,12R)-11-((S)-sec-부틸)-5,8-디이소프로필-12-(2-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-2-옥소에틸)-4,10-디메틸-3,6,9-트리옥소-2,13-디옥사-4,7,10-트리아자테트라데실)페닐)아미노)-11-(1-(3-(2-((1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-5-이소프로필-2-메틸-1,4,7,10-테트라옥소-14,17-디옥사-3,6,11-트리아자이코산-20-오익산의 합성을 위한 반응도가 도 63에 도시된다.
Figure pct00290
tert -부틸 (2S,5S)-11-(1-(3-(2-((2-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카보닐)-1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-1-((4-((5S,8S,11S,12R)-11-((S)-sec-부틸)-5,8-디이소프로필-12-(2-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-2-옥소에틸)-4,10-디메틸-3,6,9-트리옥소-2,13-디옥사-4,7,10-트리아자테트라데실)페닐)아미노)-5-이소프로필-2-메틸-1,4,7,10-테트라옥소-14,17-디옥사-3,6,11-트리아자이코산-20-오에이트의 제조 ( Fmoc -HIPS- PAPip ( PEG2 ( CO2t - Bu ))-Val-Ala-PABC-MMAD)(도 63)
자기 교반막대를 넣은 건조된 섬광 바이알에 Fmoc-HIPS-PAPip (PEG2 (CO2t-Bu))CO2H (45mg, 0.051mmol), H2N-Val-Ala-PABC-MMAD (50mg, 0.046mmol), HATU (20mg, 0.053mmol), DIPEA (16 mL, 0.09mmol), 및 DCM (1mL)을 넣었다. 용액을 실온에서 18h 교반했다. 반응 혼합물을 감압 농축한 후 C18 플래시 크로마토그래피 (용출 20-100% MeCN/물)로 정제하여 흰색 고체로서 표제 화합물을 수득했다(89mg, 99% 수율).
ESI-MS 계산 [MH]+: 1954.1;; 실측 1954.3.
Figure pct00291
( 2S,5S )-11-(1-(3-(2-((2-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카보닐)-1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-1-((4-((5S,8S,11S,12R)-11-((S)-sec-부틸)-5,8-디이소프로필-12-(2-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-2-옥소에틸)-4,10-디메틸-3,6,9-트리옥소-2,13-디옥사-4,7,10-트리아자테트라데실)페닐)아미노)-5-이소프로필-2-메틸-1,4,7,10-테트라옥소-14,17-디옥사-3,6,11-트리아자이코산-20-오익산의 제조 ( Fmoc -HIPS- PAPip ( PEG2 ( CO2H ))-Val-Ala-PABC-MMAD)(도 63)
자기 교반막대를 넣은 건조된 섬광 바이알에 Fmoc-HIPS-PAPip (PEG2 (CO2t-Bu))-Val-Ala-PABC-MMAD (89mg, 0.045mmol) 및 DCM (0.5mL)를 넣었다. 용액을 0℃로 냉각하고 사염화주석(IV)을 첨가했다(0.25 mL, 1.0 M in DCM, 0.25mmol). 결과의 혼합물을 0℃에서 1h 교반했다. 반응 혼합물을 C18 플래시 크로마토그래피 (용출 10-100% MeCN/물)로 직접 정제하여 흰색 고체로서 표제 화합물을 수득했다(48mg, 56% 수율).
ESI-MS 계산 [MH]+: 1898.0;; 실측 1898.2.
Figure pct00292
( 2S,5S )-1-((4-(( 5S,8S,11S,12R )-11-((S)-sec-부틸)-5,8-디이소프로필-12-(2-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-2-옥소에틸)-4,10-디메틸-3,6,9-트리옥소-2,13-디옥사-4,7,10-트리아자테트라데실)페닐)아미노)-11-(1-(3-(2-((1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-5-이소프로필-2-메틸-1,4,7,10-테트라옥소-14,17-디옥사-3,6,11-트리아자이코산-20-오익산의 제조(도 63)
자기 교반막대를 넣은 건조된 섬광 바이알에 (Fmoc-HIPS-PAPip (PEG2 (CO2H))-Val-Ala-PABC-MMAD (48mg, 0.025mmol), 피페리딘 (0.1 mL, 1mmol) 및 DMF (0.5mL)를 넣었다. 반응 혼합물을 실온에서 15min 교반한 다음 C18 플래시 크로마토그래피 (용출 5-70% MeCN/물)로 정제하여 흰색 고체로서 표제 화합물을 수득했다(43mg, >99% 수율).
ESI-MS 계산 [MH]+: 1676.0;; 실측 1676.2.
실시예 24
(6S,9S)-1-아미노-6-((4-((5S,8S,11S,12R)-11-((S)-sec-부틸)-5,8-디이소프로필-12-(2-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-2-옥소에틸)-4,10-디메틸-3,6,9-트리옥소-2,13-디옥사-4,7,10-트리아자테트라데실)페닐)카바모일)-15-(1-(3-(2-((1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-9-이소프로필-1,8,11,14-테트라옥소-18,21-디옥사-2,7,10,15-테트라아자테트라코산-24-오익산의 합성을 위한 반응도가 도 64에 도시된다.
Figure pct00293
4-((S)-2-((S)-2-((((9H- 플루오렌 -9-일) 메톡시 ) 카보닐 )아미노)-3- 메틸부탄아미도 )-5-우레이도펜탄아미도)벤질 ((S)-1-(((S)-1-((( 3R,4S,5S )-3- 메톡시 -1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)(메틸)카바메이트의 제조 ( Fmoc -Val-Cit-PABC-MMAD)(도 64)
자기 교반막대를 넣은 건조된 섬광 바이알에 (9H-플루오렌-9-일)메틸 ((S)-3-메틸-1-(((S)-1-((4-((((4-니트로페녹시)카보닐)옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소프로판-2-일)아미노)-1-옥소부탄-2-일)카바메이트 (84mg, 0.11mmol), 모노메틸 아우리스타틴 D (TFA 염, 88mg, 0.1mmol), HOAt (5mg, 0.004mmol), DIPEA (35 mL, 0.2mmol), 및 DMA (0.5mL)를 넣었다. 용액을 실온에서 1h 교반했다. 반응 혼합물에 루티딘(35 mL, 0.3mmol), 추가의 (9H-플루오렌-9-일)메틸 ((S)-3-메틸-1-(((S)-1-((4-((((4-니트로페녹시)카보닐)옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소프로판-2-일)아미노)-1-옥소부탄-2-일)카바메이트 (17mg, 0.02mmol), 및 DIPEA (35 mL, 0.2mmol)를 첨가했다. 반응 혼합물을 40℃로 가열하고 24h 교반했다. 반응 혼합물을 플래시 크로마토그래피(용출 1-20% MeOH/DCM)로 정제하여 흰색 고체로서 표제 화합물을 수득했다(107mg, 76% 수율).
ESI-MS 계산 [MH]+: 1398.8;; 실측 1399.1.
Figure pct00294
4-((S)-2-((S)-2-아미노-3- 메틸부탄아미도 )-5-우레이도펜탄아미도) 벤질 ((S)-1-(((S)-1-((( 3R,4S,5S )-3- 메톡시 -1-((S)-2-(( 1R,2R )-1- 메톡시 -2- 메틸 -3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)(메틸)카바메이트의 제조 ( H 2 N -Val- Cit - PABC - MMAD )(도 64)
자기 교반막대를 넣은 건조된 섬광 바이알에 Fmoc-Val-Cit-PABC-MMAD (107mg, 0.076mmol), 피페리딘 (0.1 mL, 1mmol) 및 DMF (0.5mL)를 넣었다. 반응 혼합물을 실온에서 20min 교반한 다음 C18 플래시 크로마토그래피(용출 5-100% MeCN/물)로 정제하여 흰색 고체로서 표제 화합물을 수득했고(52mg, 58% 수율), 이것을 추가의 특성화 없이 사용했다
Figure pct00295
tert -부틸 ( 6S,9S )-15-(1-(3-(2-((2-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카보닐)-1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-1-아미노-6-((4-((5S,8S,11S,12R)-11-((S)-sec-부틸)-5,8-디이소프로필-12-(2-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-2-옥소에틸)-4,10-디메틸-3,6,9-트리옥소-2,13-디옥사-4,7,10-트리아자테트라데실)페닐)카바모일)-9-이소프로필-1,8,11,14-테트라옥소-18,21-디옥사-2,7,10,15-테트라아자테트라코산-24-오에이트의 제조 ( Fmoc -HIPS-PAPip ( PEG2 ( CO2t - Bu ))-Val- Cit - PABC - MMAD )(도 64)
자기 교반막대를 넣은 건조된 섬광 바이알에 Fmoc-HIPS-PAPip (PEG2 (CO2t-Bu))CO2H (28mg, 0.032mmol), H2N-Val-Cit-PABC-MMAD (36mg, 0.031mmol), HATU (24mg, 0.063mmol), DIPEA (20 mL, 0.12mmol), DMF (0.5mL), 및 DCM (0.6mL)을 넣었다. 용액을 실온에서 1h 교반했다. 반응 혼합물을 C18 플래시 크로마토그래피 (용출 25-100% MeCN/물)로 정제하여 흰색 고체로서 표제 화합물을 수득했다(53mg, 85% 수율).
ESI-MS 계산 [MH]+: 2040.1; 실측 2040.5.
Figure pct00296
( 6S,9S )-15-(1-(3-(2-((2-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카보닐)-1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-1-아미노-6-((4-((5S,8S,11S,12R)-11-((S)-sec-부틸)-5,8-디이소프로필-12-(2-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-2-옥소에틸)-4,10-디메틸-3,6,9-트리옥소-2,13-디옥사-4,7,10-트리아자테트라데실)페닐)카바모일)-9-이소프로필-1,8,11,14-테트라옥소-18,21-디옥사-2,7,10,15-테트라아자테트라코산-24-오익산의 제조 ( Fmoc -HIPS- PAPip ( PEG2 (CO2H))-Val-Cit-PABC-MMAD)(도 64)
자기 교반막대를 넣은 건조된 섬광 바이알에 Fmoc-HIPS-PAPip (PEG2 (CO2t-Bu))-Val-Cit-PABC-MMAD (53mg, 0.026mmol) 및 DCM (0.8mL)를 넣었다. 용액을 0℃로 냉각하고 사염화주석(IV)을 첨가했다(0.2 mL, 1.0 M DCM, 0.2mmol). 결과의 혼합물을 0℃에서 1h 교반했다. 반응 혼합물을 C18 플래시 크로마토그래피 (용출 5-100% MeCN/물)로 직접 정제하여 흰색 고체로서 표제 화합물을 수득했다(24mg, 47% 수율).
ESI-MS 계산 [MH]+: 1984.1;; 실측 1984.3.
Figure pct00297
( 6S,9S )-1-아미노-6-((4-(( 5S,8S,11S,12R )-11-((S)-sec-부틸)-5,8- 디이소프로필 -12-(2-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-2-옥소에틸)-4,10-디메틸-3,6,9-트리옥소-2,13-디옥사-4,7,10-트리아자테트라데실)페닐)카바모일)-15-(1-(3-(2-((1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-9-이소프로필-1,8,11,14-테트라옥소-18,21-디옥사-2,7,10,15-테트라아자테트라코산-24-오익산의 제조 (도 64)
자기 교반막대를 넣은 건조된 섬광 바이알에 (Fmoc-HIPS-PAPip (PEG2 (CO2H))-Val-Cit-PABC-MMAD (24mg, 0.012mmol), 피페리딘 (0.1 mL, 1mmol) 및 DMF (0.5mL)를 넣었다. 반응 혼합물을 실온에서 15min 교반한 다음 C18-플래시 크로마토그래피(용출 5-80% MeCN/물)로 정제하여 흰색 고체로서 표제 화합물을 수득했다(15mg, 70% 수율).
ESI-MS 계산 [MH]+: 1762.0;; 실측 1762.2.
실시예 25
(6S,9S)-1-아미노-6-((4-((5S,8S,11S,12R)-11-((S)-sec-부틸)-5,8-디이소프로필-12-(2-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-2-옥소에틸)-4,10-디메틸-3,6,9-트리옥소-2,13-디옥사-4,7,10-트리아자테트라데실)페닐)카바모일)-15-(1-(3-(2-((1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-9-이소프로필-1,8,11,14-테트라옥소-18,21-디옥사-2,7,10,15-테트라아자테트라코산-24-오익산의 합성을 위한 반응도가 도 65에 도시된다.
Figure pct00298
(9H- 플루오렌 -9-일) 메틸 4- 옥소피페리딘 -1- 카복실레이트의 제조(N- Fmoc -피페리디논)(도 65)
자기 교반막대를 넣은 100mL 둥근바닥 플라스크에 피페리디논 염산염 일수화물(1.53g, 10mmol), Fmoc 클로라이드(2.58g, 10mmol), 탄산나트륨(3.18g, 30mmol), 디옥산 (20mL), 및 물 (2mL)을 넣었다. 반응 혼합물을 실온에서 1h 교반했다. 혼합물을 EtOAc (100mL)로 희석하고 물 (1 x 100mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4에서 건조시키고 여과하고 감압 농축했다. 결과의 물질을 진공 건조시켜서 흰색 고체로서 표제 화합물을 획득했다(3.05 g, 95% 수율).
Figure pct00299
(9H- 플루오렌 -9-일) 메틸 4-((2-(2-(3-( tert - 부톡시 )-3- 옥소프로폭시 ) 에톡시 )에틸)아미노)피페리딘-1-카복실레이트의 제조 (N- Fmoc -피페리딘-4-아미노- PEG2 -COOtBu)(도 65)
자기 교반막대를 넣은 건조된 섬광 바이알에 Fmoc-피페리디논(642mg, 2.0mmol), H2N-PEG2-COOtBu (560mg, 2.4mmol), 4Å 분자체 (활성화 분말, 500 mg), 및 1,2-디클로로에탄 (5mL)을 넣었다. 혼합물을 실온에서 1h 교반했다. 반응 혼합물에 나트륨 트리아세톡시보로하이드라이드(845mg, 4.0mmol)를 첨가했다. 혼합물을 실온에서 5일 교반했다. 결과의 혼합물을 EtOAc로 희석했다. 유기층을 포화 NaHCO3(1 x 50mL), 및 간수(1 x 50mL)로 세척하고 Na2SO4에서 건조시키고 여과하고 감압 농축하여 오일로서 표제 화합물을 수득했고, 이것을 추가의 정제 없이 사용했다.
Figure pct00300
13-(1-(((9H- 플루오렌 -9-일) 메톡시 ) 카보닐 )피페리딘-4-일)-2,2-디메틸-4,14-디옥소-3,7,10-트리아자-13-아자헵타데칸-17-오익산의 제조 ( Fmoc - PAPip (PEG2 ( CO2t - Bu ))- COOH )(도 65)
자기 교반막대를 넣은 건조된 섬광 바이알에 이전 단계로부터의 N--Fmoc-피페리딘-4-아미노-PEG2-COOt-Bu, 무수석신산(270mg, 2.7mmol), 및 디클로로메탄 (5mL)을 넣었다. 혼합물을 실온에서 18h 교반했다. 반응 혼합물을 EtOAc와 포화 NaHCO3에 분배했다. 수성층을 EtOAc (3x)로 추출했다. 수성층을 pH 3까지 HCl(1M)로 산성화했다. 수성층을 DCM (3x)로 추출했다. 조합된 유기층을 Na2SO4에서 건조시키고 여과하고 감압 농축했다. 반응 혼합물을 C18-플래시 크로마토그래피 (용출 10-100% MeCN/물 - 0.1% 아세트산 함유)로 정제했다. 생성물 함유 분획을 감압 농축한 다음 톨루엔(3 x 50mL)과 공비 증류시켜 잔류 아세트산을 제거했다. 표제 화합물이 흰색 고체로서 얻어졌다(534mg, 2 단계에 걸쳐 42% 수율).
ESI-MS 계산 [MH]+: 639.3; 실측 639.2.
Figure pct00301
tert -부틸 ( 6S,9S )-1-아미노-6-((4-(( 5S,8S,11S,12R )-11-((S)-sec-부틸)-5,8-디이소프로필-12-(2-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-2-옥소에틸)-4,10-디메틸-3,6,9-트리옥소-2,13-디옥사-4,7,10-트리아자테트라데실)페닐)카바모일)-9-이소프로필-1,8,11,14-테트라옥소-15-(피페리딘-4-일)-18,21-디옥사-2,7,10,15-테트라아자테트라코산-24-오에이트의 제조 ( PAPip ( PEG2 ( CO2t - Bu ))-Val- Cit - PABC - MMAD )(도 65)
자기 교반막대를 넣은 건조된 섬광 바이알에 Fmoc-PAPip (PEG2 (CO2t-Bu))-COOH (22mg, 0.034mmol), H2N-Val-Cit-PABC-MMAD (36mg, 0.031mmol), HATU (24mg, 0.063mmol), DIPEA (20 mL, 0.12mmol), 및 DMF (1mL)를 넣었다. 용액을 실온에서 18h 교반했다. 피페리딘 (0.2 mL, 2mmol)을 반응 혼합물에 첨가하고 결과의 용액을 실온에서 20min 교반했다. 반응 혼합물을 C18-플래시 크로마토그래피 (용출 5-80% MeCN/물)로 정제하여 흰색 고체로서 표제 화합물을 수득했다(20mg, 85% 수율).
ESI-MS 계산 [MH]+: 1574.9;; 실측 1575.1.
Figure pct00302
tert -부틸 ( 6S,9S )-15-(1-(3-(2-((2-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카보닐)-1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-1-아미노-6-((4-((5S,8S,11S,12R)-11-((S)-sec-부틸)-5,8-디이소프로필-12-(2-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-2-옥소에틸)-4,10-디메틸-3,6,9-트리옥소-2,13-디옥사-4,7,10-트리아자테트라데실)페닐)카바모일)-9-이소프로필-1,8,11,14-테트라옥소-18,21-디옥사-2,7,10,15-테트라아자테트라코산-24-오에이트의 제조 ( Fmoc - AzaHIPS -PAPip ( PEG2 ( CO2t - Bu ))-Val- Cit - PABC - MMAD )(도 65)
자기 교반막대를 넣은 건조된 섬광 바이알에 (PAPip (PEG2 (CO2t-Bu))-Val-Cit-PABC-MMAD (20mg, 0.013mmol), 3-(2-((2-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카보닐)-1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-1-일)프로파노익산 (7mg, 0.014mmol), PyAOP (8mg, 0.015mmol), DIPEA (3 mL, 0.017mmol), 및 DMF (0.5mL)를 넣었다. 용액을 실온에서 2h 교반했다. 반응 혼합물을 C18-플래시 크로마토그래피 (용출 5-100% MeCN/물)로 정제하여 흰색 고체로서 표제 화합물을 수득했다(20mg, 77% 수율).
ESI-MS 계산 [MH]+: 2041.1; 실측 2041.3.
Figure pct00303
( 6S,9S )-15-(1-(3-(2-((2-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카보닐)-1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-1-아미노-6-((4-((5S,8S,11S,12R)-11-((S)-sec-부틸)-5,8-디이소프로필-12-(2-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-2-옥소에틸)-4,10-디메틸-3,6,9-트리옥소-2,13-디옥사-4,7,10-트리아자테트라데실)페닐)카바모일)-9-이소프로필-1,8,11,14-테트라옥소-18,21-디옥사-2,7,10,15-테트라아자테트라코산-24-오익산의 제조 ( Fmoc - AzaHIPS -PAPip ( PEG2 ( CO2H ))-Val- Cit - PABC - MMAD )(도 65)
자기 교반막대를 넣은 건조된 섬광 바이알에 Fmoc-AzaHIPS-PAPip (PEG2 (CO2t-Bu))-Val-Cit-PABC-MMAD (20mg, 0.01mmol) 및 DCM (0.8mL)를 넣었다. 용액을 0℃로 냉각하고 사염화주석(IV)을 첨가했다(0.1 mL, 1.0 M DCM, 0.1mmol). 결과의 혼합물을 0℃에서 1h 교반했다. 반응 혼합물을 C18-플래시 크로마토그래피 (용출 10-100% MeCN/물)로 직접 정제하여 흰색 고체로서 표제 화합물을 수득했다(14mg, 72% 수율).
ESI-MS 계산 [MH]+: 1985.1;; 실측 1985.3.
Figure pct00304
( 6S,9S )-1-아미노-6-((4-(( 5S,8S,11S,12R )-11-((S)-sec-부틸)-5,8- 디이소프로필 -12-(2-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-2-옥소에틸)-4,10-디메틸-3,6,9-트리옥소-2,13-디옥사-4,7,10-트리아자테트라데실)페닐)카바모일)-15-(1-(3-(2-((1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-9-이소프로필-1,8,11,14-테트라옥소-18,21-디옥사-2,7,10,15-테트라아자테트라코산-24-오익산의 제조 (도 65)
자기 교반막대를 넣은 건조된 섬광 바이알에 Fmoc-AzaHIPS-PAPip (PEG2 (CO2H))-Val-Cit-PABC-MMAD (14mg, 0.007mmol), 피페리딘 (0.05 mL, 0.5mmol) 및 DMF (0.5mL)를 넣었다. 반응 혼합물을 실온에서 15min 교반한 다음 C18-플래시 크로마토그래피(용출 5-80% MeCN/물)로 정제하여 흰색 고체로서 표제 화합물을 수득했다(5mg, 40% 수율).
ESI-MS 계산 [MH]+: 1763.0;; 실측 1763.2.
실시예 26
Figure pct00305
tert -부틸 ( 6S,9S,22S )-22-(3-(2-((2-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카보닐)-1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)프로판아미드)-1-아미노-6-((4-((5S,8S,11S,12R)-11-((S)-sec-부틸)-5,8-디이소프로필-12-(2-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-2-옥소에틸)-4,10-디메틸-3,6,9-트리옥소-2,13-디옥사-4,7,10-트리아자테트라데실)페닐)카바모일)-9-이소프로필-1,8,11,21-테트라옥소-14,17-디옥사-2,7,10,20-테트라아자펜타코산-25-오에이트의 제조 ( Fmoc -HIPS- Glu ( OtBu )- PEG2 -Val-Cit-PABC-MMAD)
자기 교반막대를 넣은 건조된 섬광 바이알에 Fmoc-HIPS-Glu (OtBu)-PEG2-COOH (41mg, 0.042mmol), H2N-Val-Cit-PABC-MMAD (52mg, 0.044mmol), HATU (20mg, 0.053mmol), DIPEA (16 mL, 0.1mmol), 및 DCM (1mL)을 넣었다. 용액을 실온에서 2h 교반했다. 반응 혼합물을 플래시 크로마토그래피 (용출 1-15% MeOH/DCM)로 정제하여 흰색 고체로서 표제 화합물을 수득했다(90mg, >99% 수율).
ESI-MS 계산 [MH]+: 1986.1;; 실측 1986.4.
Figure pct00306
( 6S,9S,22S )-22-(3-(2-((2-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카보닐)-1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)프로판아미드)-1-아미노-6-((4-((5S,8S,11S,12R)-11-((S)-sec-부틸)-5,8-디이소프로필-12-(2-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-2-옥소에틸)-4,10-디메틸-3,6,9-트리옥소-2,13-디옥사-4,7,10-트리아자테트라데실)페닐)카바모일)-9-이소프로필-1,8,11,21-테트라옥소-14,17-디옥사-2,7,10,20-테트라아자펜타코산-25-오익산의 제조 ( Fmoc -HIPS- Glu (OH)- PEG2 -Val- Cit - PABC - MMAD )
자기 교반막대를 넣은 건조된 섬광 바이알에 Fmoc-HIPS-Glu (OtBu)-PEG2-Val-Cit-PABC-MMAD (45mg, 0.023mmol) 및 DCM (0.5mL)를 넣었다. 용액을 0℃로 냉각하고 사염화주석(IV)을 첨가했다(0.2 mL, 1.0 M DCM, 0.2mmol). 결과의 혼합물을 0℃에서 1h 교반했다. 반응 혼합물을 C18 플래시 크로마토그래피(용출 10-100% MeCN/물)로 정제하여 흰색 고체로서 표제 화합물을 수득했다(35mg, 71% 수율).
ESI-MS 계산 [MH]+: 1930.0;; 실측 1930.3.
Figure pct00307
( 6S,9S,22S )-1-아미노-6-((4-(( 5S,8S,11S,12R )-11-((S)-sec-부틸)-5,8- 디이소프로필 -12-(2-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-( 티아 졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-2-옥소에틸)-4,10-디메틸-3,6,9-트리옥소-2,13-디옥사-4,7,10-트리아자테트라데실)페닐)카바모일)-22-(3-(2-((1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-인돌-1-일)프로판아미드)-9-이소프로필-1,8,11,21-테트라옥소-14,17-디옥사-2,7,10,20-테트라아자펜타코산-25-오익산의 제조 (HIPS- Glu (OH)-2PEG-Val-Cit-PABC-MMAD)
자기 교반막대를 넣은 건조된 섬광 바이알에 Fmoc-HIPS-Glu-PEG2-Val-Cit-PABC-MMAD (35mg, 0.018mmol), 피페리딘 (0.1 mL, 1mmol) 및 DMF (0.5mL)를 넣었다. 반응 혼합물을 실온에서 30min 교반한 다음 C18 플래시 크로마토그래피 (용출 5-100% MeCN/물)로 정제하여 흰색 고체로서 표제 화합물을 수득했다(25mg, 81% 수율).
ESI-MS 계산 [MH]+: 1708.0;; 실측 1708.1.
실시예 27
Figure pct00308
tert -부틸 ( 6S,9S,22S )-22-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카보닐)아미노)-1-아미노-6-((4-((5S,8S,11S,12R)-11-((S)-sec-부틸)-5,8-디이소프로필-12-(2-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-2-옥소에틸)-4,10-디메틸-3,6,9-트리옥소-2,13-디옥사-4,7,10-트리아자테트라데실)페닐)카바모일)-9-이소프로필-1,8,11,21-테트라옥소-14,17-디옥사-2,7,10,20-테트라아자펜타코산-25-오에이트의 제조 ( Fmoc - Glu (OtBu)-PEG2-Val-Cit-PABC-MMAD)
자기 교반막대를 넣은 건조된 섬광 바이알에 Fmoc-Glu (OtBu)-PEG2-COOH (25mg, 0.042mmol), H2N-Val-Cit-PABC-MMAD (36mg, 0.031mmol), HATU (20mg, 0.053mmol), DIPEA (20 mL, 0.12mmol), DCM (0.6mL), 및 DMF (0.5mL)를 넣었다. 용액을 실온에서 2h 교반했다. 반응 혼합물을 C18 플래시 크로마토그래피 (용출 10-100% MeCN/물 - 0.1% HOAc 함유)로 정제하여 흰색 고체로서 표제 화합물을 수득했다(33mg, 62% 수율).
ESI-MS 계산 [MH]+: 1743.0;; 실측 1743.2.
Figure pct00309
tert -부틸 ( 6S,9S,22S )-1,22- di아미노 -6-((4-(( 5S,8S,11S,12R )-11-((S)-sec-부틸)-5,8-디이소프로필-12-(2-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-2-옥소에틸)-4,10-디메틸-3,6,9-트리옥소-2,13-디옥사-4,7,10-트리아자테트라데실)페닐)카바모일)-9-이소프로필-1,8,11,21-테트라옥소-14,17-디옥사-2,7,10,20-테트라아자펜타코산-25-오에이트의 제조 ( H2N - Glu ( OtBu )- 2PEG -Val- Cit - PABC - MMAD )
자기 교반막대를 넣은 건조된 섬광 바이알에 Fmoc-Glu (OtBu)-PEG2-Val-Cit-PABC-MMAD (33mg, 0.019mmol), 피페리딘(0.1 mL, 1mmol) 및 DMF (0.8mL)를 넣었다. 반응 혼합물을 실온에서 15min 교반한 다음 C18 플래시 크로마토그래피(용출 5-100% MeCN/물)로 정제하여 흰색 고체로서 표제 화합물을 수득했고(24mg, 83% 수율), 이것을 추가의 특성화 없이 사용했다.
Figure pct00310
tert -부틸 ( 6S,9S,22S )-22-(3-(2-((2-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카보닐)-1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-1-일)프로판아미드)-1-아미노-6-((4-((5S,8S,11S,12R)-11-((S)-sec-부틸)-5,8-디이소프로필-12-(2-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-2-옥소에틸)-4,10-디메틸-3,6,9-트리옥소-2,13-디옥사-4,7,10-트리아자테트라데실)페닐)카바모일)-9-이소프로필-1,8,11,21-테트라옥소-14,17-디옥사-2,7,10,20-테트라아자펜타코산-25-오에이트의 제조 ( Fmoc - AzaHIPS -Glu ( OtBu )- PEG2 -Val- Cit - PABC - MMAD )
자기 교반막대를 넣은 건조된 섬광 바이알에 (H2N-Glu (OtBu)-PEG2-Val-Cit-PABC-MMAD (24mg, 0.016mmol), 3-(2-((2-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카보닐)-1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-1-일)프로파노익산 (9mg, 0.019mmol), PyAOP (9mg, 0.017mmol), DIPEA (3 mL, 0.017mmol), 및 DMF (0.5mL)를 넣었다. 용액을 실온에서 2h 교반했다. 반응 혼합물을 C18 플래시 크로마토그래피(용출 5-100% MeCN/물 - 0.1% 포름산 함유)로 정제하여 흰색 고체로서 표제 화합물을 수득했다(32mg, >99% 수율).
ESI-MS 계산 [MH]+: 1987.1;; 실측 1987.3.
Figure pct00311
( 6S,9S,22S )-22-(3-(2-((2-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카보닐)-1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-1-일)프로판아미드)-1-아미노-6-((4-((5S,8S,11S,12R)-11-((S)-sec-부틸)-5,8-디이소프로필-12-(2-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(티아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-2-옥소에틸)-4,10-디메틸-3,6,9-트리옥소-2,13-디옥사-4,7,10-트리아자테트라데실)페닐)카바모일)-9-이소프로필-1,8,11,21-테트라옥소-14,17-디옥사-2,7,10,20-테트라아자펜타코산-25-오익산의 제조 ( Fmoc - AzaHIPS - Glu (OH)- 2PEG -Val-Cit-PABC-MMAD)
자기 교반막대를 넣은 건조된 섬광 바이알에 Fmoc-AzaHIPS-Glu (OtBu)-2PEG-Val-Cit-PABC-MMAD (32mg, 0.016mmol) 및 DCM (0.5mL)를 넣었다. 용액을 0℃로 냉각하고 사염화주석(IV)을 첨가했다(0.2 mL, 1.0 M DCM, 0.2mmol). 결과의 혼합물을 0℃에서 1h 교반했다. 반응 혼합물을 C18 플래시 크로마토그래피(용출 10-100% MeCN/물)로 정제하여 흰색 고체로서 표제 화합물을 수득했다(22mg, 71% 수율).
ESI-MS 계산 [MH]+: 1931.0;; 실측 1921.2.
Figure pct00312
( 6S,9S,22S )-1-아미노-6-((4-(( 5S,8S,11S,12R )-11-((S)-sec-부틸)-5,8- 디이소프로필 -12-(2-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-( 티아 졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-2-옥소에틸)-4,10-디메틸-3,6,9-트리옥소-2,13-디옥사-4,7,10-트리아자테트라데실)페닐)카바모일)-22-(3-(2-((1,2-디메틸히드라지닐)메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-1-일)프로판아미드)-9-이소프로필-1,8,11,21-테트라옥소-14,17-디옥사-2,7,10,20-테트라아자펜타코산-25-오익산의 (AzaHIPS-Glu (OH)- 2PEG -Val- Cit - PABC - MMAD )
자기 교반막대를 넣은 건조된 섬광 바이알에 Fmoc-AzaHIPS-Glu-PEG2-Val-Cit-PABC-MMAD (22mg, 0.011mmol), 피페리딘 (0.05 mL, 0.5mmol) 및 DMF (0.5mL)를 넣었다. 반응 혼합물을 실온에서 15min 교반한 다음 C18 플래시 크로마토그래피(용출 5-100% MeCN/물)로 정제하여 흰색 고체로서 표제 화합물을 수득했다(15mg, 77% 수율).
ESI-MS 계산 [MH]+: 1709.0;; 실측 1709.1.
본 발명은 특정 실시형태를 참조하여 설명되었지만 본 발명의 실제 정신 및 범위를 벗어나지 않고 다양한 변화가 이루어질 수 있고 등가물이 치환될 수 있다는 것이 당업자에게 이해되어야 한다. 이에 더하여, 본 발명의 목적, 정신 및 범위에 맞게 특정 상황, 재료, 물질의 조성, 과정, 과정 단계 또는 단계들을 개조하기 위해 많은 변형이 이루어질 수 있다. 모든 이러한 변형은 여기 첨부된 청구항의 범위 내에 들어간다.

Claims (40)

  1. 식 (I)의 적어도 하나의 변형된 아미노산 잔기를 포함하는 콘쥬게이트:
    Figure pct00313

    상기 식에서,
    m은 0 또는 1이고;
    R1은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택되고;
    R2 및 R3은 각각 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택되거나, 또는 R2와 R3이 선택적으로 환형 연결되어 5 또는 6-원 헤테로시클릴을 형성하고;
    Z1, Z2, Z3 및 Z4는 각각 독립적으로 CR11, NR12, O 및 S로부터 선택되며, Z1, Z2, Z3 및 Z4 중 하나는 선택적이고;
    X5는 C이고;
    Y5, R11 및 R12는 각각 독립적으로 수소, 할로겐, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택되고;
    Q1는 Z4 또는 X5와의 결합이며, Q1이 Z4와의 결합이면 Z4는 CR11 또는 NR12이고 R11 또는 R12는 부재하거나, 또는 Q1이 X5와의 결합이면 Y5는 부재하고;
    R15는 -L-W1이거나 또는 -L-W1가 Z1, Z2, Z3 또는 Z4 중 하나에 부착되며, -L-W1이 Z1, Z2, Z3 또는 Z4 중 하나에 부착되면 R15는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택되고;
    L은 -(T1-V1)a-(T2-V2)b-(T3-V3)c-(T4-V4)d-(T5-V5)e-를 포함하는 링커이며, 여기서 a, b, c, d 및 e는 각각 독립적으로 0 또는 1이고, a, b, c, d 및 e의 합은 1 내지 5이고;
    T1, T2, T3, T4 및 T5는 각각 독립적으로 (C1-C12)알킬, 치환된 (C1-C12)알킬, (EDA)w, (PEG)n, (AA)p, -(CR13OH)h-, 피페리딘-4-아미노(P4A), 파라-아미노벤질옥시카보닐(PABC), 메타-아미노벤질옥시카보닐(MABC), 파라-아미노벤질옥시(PABO), 메타-아미노벤질옥시(MABO), 파라-아미노벤질, 아세탈 기, 디설파이드, 하이드라진, 프로테아제-절단성 부분, 글루쿠로니다아제-절단성 부분, 베타-락타마아제 절단성 부분, 및 에스테르로부터 선택되며, 여기서 EDA는 에틸렌 디아민 부분이고, PEG는 폴리에틸렌 글리콜 또는 변형된 폴리에틸렌 글리콜이고, AA는 아미노산 잔기이고;
    w는 1 내지 20의 정수이고;
    n은 1 내지 30의 정수이고;
    p는 1 내지 20의 정수이고;
    h는 1 내지 12의 정수이고; 및
    V1, V2, V3, V4 및 V5는 각각 독립적으로 공유 결합, -CO-, -NR11-, -CONR11-, -NR11CO-, -C(O)O-, -OC(O)-, -O-, -S-, -S(O)-, -SO2-, -SO2NR11-, -NR11SO2- 및 -P(O)OH-로 구성되는 군으로부터 선택되며,
    여기서 W1 및 W2 중 하나는 폴리펩티드이고, 나머지 하나는 화학 물질이며,
    a, b, c, d 및 e의 합이 2이고 T1-V1, T2-V2, T3-V3, T4-V4 또는 T5-V5 중 하나가 (PEG)n-CO일 때, n은 6이 아니다.
  2. 제 1 항에 있어서, 식 (II)의 적어도 하나의 변형된 아미노산 잔기를 포함하는 것을 특징으로 하는 콘쥬게이트:
    Figure pct00314

    상기 식에서,
    m, R1, R2, R3, X5, L, Q1, W1, W2, Y5, Z1, Z2, Z3 및 Z4는 식 (I)에서 정의된 것과 같다.
  3. 제 1 항에 있어서, 식 (III)의 적어도 하나의 변형된 아미노산 잔기를 포함하는 것을 특징으로 하는 콘쥬게이트:
    Figure pct00315

    상기 식에서,
    m, R1, R2, R3, X5, L, W1 및 W2는 식 (I)에서 정의된 것과 같고;
    X1, X2, X3 및 X4는 각각 독립적으로 C, N, O 및 S로부터 선택되고;
    Y1, Y2, Y3, Y4 및 Y5는 존재한다면 각각 독립적으로 수소, 할로겐, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택되며, Y1 및 Y2, Y2 및 Y3, 또는 Y3 및 Y4는 선택적으로 환형 연결되고;
    Q1는 X4 또는 X5와의 결합이며, Q1이 X4와의 결합이면 Y4는 부재하거나, 또는 Q1이 X5와의 결합이면 Y5는 부재한다.
  4. 제 3 항에 있어서, Y1 및 Y2, Y2 및 Y3, 또는 Y3 및 Y4가 환형 연결되어 융합 벤조 고리를 형성한 것을 특징으로 하는 콘쥬게이트.
  5. 제 1 항에 있어서, 식 (IVa) 또는 (IVb)의 적어도 하나의 변형된 아미노산 잔기를 포함하는 것을 특징으로 하는 콘쥬게이트:
    Figure pct00316

    상기 식에서,
    m, R1, R2, R3, R12, X5, Y5, L, W1 및 W2는 식 (I)에서 정의된 것과 같고;
    X1 및 X3은 각각 독립적으로 O, S 또는 NR12이고;
    Y1, Y2, Y3 및 Y4는 존재한다면 각각 독립적으로 수소, 할로겐, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택되며, Y1 및 Y2 또는 Y3 및 Y4는 선택적으로 환형 연결되고;
    Q1는 X4 또는 X5와의 결합이며, Q1이 X4와의 결합이면 X4는 C이고 Y4는 부재하거나, 또는 Q1이 X5와의 결합이면 Y5는 부재하고;
    Q2는 X3 또는 X5와의 결합이며, Q2가 X3과의 결합이면 X3은 NR12이고 R12는 부재하거나, 또는 Q2가 X5와의 결합이면 Y5는 부재한다.
  6. 제 1 항에 있어서,
    T1이 (C1-C12)알킬 및 치환된 (C1-C12)알킬로부터 선택되고;
    T2, T3, T4 및 T5가 각각 독립적으로 (EDA)w, (PEG)n, (C1-C12)알킬, 치환된 (C1-C12)알킬, (AA)p, -(CR13OH)h-, 피페리딘-4-아미노, MABC, MABO, PABO, PABC, 파라-아미노벤질, 아세탈 기, 디설파이드, 하이드라진, 프로테아제-절단성 부분, 글루쿠로니다아제-절단성 부분, 베타-락타마아제 절단성 부분, 에스테르, (AA)p-MABC-(AA)p, (AA)p-MABO-(AA)p, (AA)p-PABO-(AA)p 및 (AA)p-PABC-(AA)p로부터 선택되고;
    V1, V2, V3, V4 및 V5가 각각 독립적으로 공유 결합, -CO-, -NR11-, -CONR11-, -NR11CO-, -C(O)O-, -OC(O)-, -O-, -S-, -S(O)-, -SO2- , -SO2NR11-, -NR11SO2-, 및 -P (O)OH-로 구성되는 군으로부터 선택되며,
    여기서:
    (PEG)n은
    Figure pct00317

    이며, 여기서 n은 1 내지 30의 정수이고;
    EDA는 다음의 구조:
    Figure pct00318

    를 가진 에틸렌디아민 부분이며, 여기서 q는 1 내지 6의 정수이고, r은 0 또는 1이고;
    피페리딘-4-아미노는
    Figure pct00319

    이고;
    각 R11 및 R12는 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 폴리에틸렌 글리콜 부분, 아릴 및 치환된 아릴로부터 선택되며, 임의의 두 인접한 R12 기들은 환형 연결되어 피페라지닐 고리를 형성하고; R13은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 및 치환된 아릴로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 콘쥬게이트.
  7. 제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서,
    a, b, c 및 d는 각각 1이고, e는 0이거나; 또는
    a, b 및 c는 각각 1이고, d 및 e는 각각 0이거나; 또는
    a 및 b는 각각 1이고, c, d 및 e는 각각 0인 것을 특징으로 하는 콘쥬게이트.
  8. 제 1 항에 있어서, T1, T2, T3, T4 및 T5와 V1, V2, V3, V4 및 V5는 다음의 표로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 콘쥬게이트:
    Figure pct00320

    Figure pct00321
  9. 제 1 항에 있어서, L은 다음의 구조들 중 하나에 의해서 설명되는 것을 특징으로 하는 콘쥬게이트:
    Figure pct00322

    Figure pct00323

    Figure pct00324

    상기 식에서,
    각 f는 독립적으로 0 또는 1 내지 12의 정수이고;
    각 w는 독립적으로 0 또는 1 내지 20의 정수이고;
    각 n은 독립적으로 0 또는 1 내지 30의 정수이고;
    각 p는 독립적으로 0 또는 1 내지 20의 정수이고;
    각 h는 독립적으로 0 또는 1 내지 12의 정수이고;
    각 R은 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 폴리에틸렌 글리콜 부분, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴이고;
    각 R'는 독립적으로 H, 아미노산의 측쇄 기, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴이다.
  10. 제 3 항에 있어서, Q1은 X4와의 결합이며 Y4는 부재하고, 또는 Q1은 X5와의 결합이며 Y5는 부재하는 것을 특징으로 하는 콘쥬게이트.
  11. 제 1 항에 있어서, m이 1인 것을 특징으로 하는 콘쥬게이트.
  12. 제 1 항에 있어서, R2 및 R3이 각각 독립적으로 알킬 및 치환된 알킬로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 것을 특징으로 하는 콘쥬게이트.
  13. 제 3 항에 있어서, X1, X2, X3 및 X4는 각각 C인 것을 특징으로 하는 콘쥬게이트.
  14. 제 3 항에 있어서, Y1, Y2 및 Y3은 각각 H이고, Y4 또는 Y5 중 하나가 H인 것을 특징으로 하는 콘쥬게이트.
  15. 제 3 항에 있어서, 식 (IIIa)의 적어도 하나의 변형된 아미노산 잔기를 포함하는 것을 특징으로 하는 콘쥬게이트:
    Figure pct00325
  16. 제 3 항에 있어서, 식 (IIId)의 적어도 하나의 변형된 아미노산 잔기를 포함하는 것을 특징으로 하는 콘쥬게이트:
    Figure pct00326
  17. 제 1 항 내지 제 16 항 중 어느 한 항에 있어서, 화학 물질은 약물 또는 검출가능한 표지인 것을 특징으로 하는 콘쥬게이트.
  18. 제 1 항 내지 제 16 항 중 어느 한 항에 있어서, W1은 화학 물질이고, W2는 폴리펩티드이거나; 또는 W1이 폴리펩티드이고, W2가 화학 물질인 것을 특징으로 하는 콘쥬게이트.
  19. 식 (V)의 화합물:
    Figure pct00327

    상기 식에서,
    Q3 및 Q4 중 하나는 -(CH2)mNR3NHR2이며, 나머지 하나는 Y4이고;
    m은 0 또는 1이고;
    R2 및 R3은 각각 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택되거나, 또는 R2와 R3이 선택적으로 환형 연결되어 5 또는 6-원 헤테로시클릴을 형성하고;
    X1, X2, X3 및 X4는 각각 독립적으로 C, N, O 및 S로부터 선택되며, X1, X2, X3 및 X4 중 하나는 선택적이고;
    Y1, Y2, Y3 및 Y4는 각각 독립적으로 수소, 할로겐, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택되며, Y1 및 Y2 또는 Y2 및 Y3은 선택적으로 환형 연결되고, 여기서 Q4가 Y4이면 Y3과 Y4가 선택적으로 환형 연결되고;
    R16, Y1, Y2, Y3 또는 Q4 중 하나는 -L-W1이며, 여기서 Q4가 -L-W1이면 Q3은 -(CH2)mNR3NHR2이고 Y4는 부재하며; Y1, Y2, Y3 또는 Q4 중 하나가 -L-W1이면 R16은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택되고;
    L은 -(T1-V1)a-(T2-V2)b-(T3-V3)c-(T4-V4)d-(T5-V5)e-를 포함하는 링커이며, 여기서 a, b, c, d 및 e는 각각 독립적으로 0 또는 1이고, a, b, c, d 및 e의 합은 1 내지 5이고;
    T1, T2, T3, T4 및 T5는 각각 독립적으로 (C1-C12)알킬, 치환된 (C1-C12)알킬, (EDA)w, (PEG)n, (AA)p, -(CR13OH)h-, 피페리딘-4-아미노(P4A), 파라-아미노벤질옥시카보닐(PABC), 메타-아미노벤질옥시카보닐(MABC), 파라-아미노벤질옥시(PABO), 메타-아미노벤질옥시(MABO), 파라-아미노벤질, 아세탈 기, 디설파이드, 하이드라진, 프로테아제-절단성 부분, 글루쿠로니다아제-절단성 부분, 베타-락타마아제 절단성 부분, 및 에스테르로부터 선택되며, 여기서 EDA는 에틸렌디아민 부분이고, PEG는 폴리에틸렌 글리콜 또는 변형된 폴리에틸렌 글리콜이고, AA는 아미노산 잔기이고;
    w는 1 내지 20의 정수이고;
    n은 1 내지 30의 정수이고;
    p는 1 내지 20의 정수이고;
    h는 1 내지 12의 정수이고;
    V1, V2, V3, V4 및 V5는 각각 독립적으로 공유 결합, -CO-, -NR11-, -CONR11-, -NR11CO-, -C(O)O-, -OC(O)-, -O-, -S-, -S(O)-, -SO2-, -SO2NR11-, -NR11SO2- 및 -P(O)OH-로 구성되는 군으로부터 선택되고;
    W1은 폴리펩티드 및 화학 물질으로부터 선택되고,
    여기서 a, b, c, d 및 e의 합이 2이고 T1-V1, T2-V2, T3-V3, T4-V4 또는 T5-V5 중 하나가 (PEG)n-CO일 때, n은 6이 아니다.
  20. 제 19 항에 있어서, 식 (VI)의 화합물인 것을 특징으로 하는 화합물:
    Figure pct00328

    상기 식에서,
    Q3, Q4, X1, X2, X3, X4, L, W1, Y1, Y2, 및 Y3은 식 (V)에서 정의된 것과 같다.
  21. 제 19 항에 있어서, 식 (VIIa) 또는 (VIIb)의 화합물인 것을 특징으로 하는 화합물:
    Figure pct00329

    상기 식에서,
    X1 및 X3은 각각 독립적으로 O, S 또는 NR12이고;
    식 (VIIa)에서, Q3 및 Q4 중 하나는 -(CH2)mNR3NHR2이며, 나머지 하나는 Y4이고;
    식 (VIIb)에서, Q3 및 R12 중 하나는 존재한다면 -(CH2)mNR3NHR2이며, 나머지 하나는 Y3이고;
    Y1, Y2, Y3 및 Y4는 존재한다면 각각 독립적으로 수소, 할로겐, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴로부터 선택되며, Y1과 Y2가 선택적으로 환형 연결되고, Q4가 Y4일 때는 Y3과 Y4가 선택적으로 환형 연결되고;
    m, R2 및 R3은 식 (V)에서 정의된 것과 같다.
  22. 제 19 항에 있어서, Y1 및 Y2 또는 Y3 및 Y4가 환형 연결되어 융합 벤조 고리를 형성한 것을 특징으로 하는 화합물.
  23. 제 19 항에 있어서,
    T1이 (C1-C12)알킬 및 치환된 (C1-C12)알킬로부터 선택되고;
    T2, T3, T4 및 T5가 각각 독립적으로 (EDA)w, (PEG)n, (C1-C12)알킬, 치환된 (C1-C12)알킬, (AA)p, -(CR13OH)h-, 피페리딘-4-아미노, MABC, MABO, PABO, PABC, 파라-아미노벤질, 아세탈 기, 디설파이드, 하이드라진, 프로테아제-절단성 부분, 글루쿠로니다아제-절단성 부분, 베타-락타마아제 절단성 부분, 에스테르, (AA)p-MABC-(AA)p, (AA)p-MABO-(AA)p, (AA)p-PABO-(AA)p 및 (AA)p-PABC-(AA)p로부터 선택되고;
    V1, V2, V3, V4 및 V5가 각각 독립적으로 공유 결합, -CO-, -NR11-, -CONR11-, -NR11CO-, -C(O)O-, -OC(O)-, -O-, -S-, -S(O)-, -SO2- , -SO2NR11-, -NR11SO2-, 및 -P (O)OH-로 구성되는 군으로부터 선택되며,
    여기서:
    (PEG)n은
    Figure pct00330

    이며, 여기서 n은 1 내지 30의 정수이고;
    EDA는 다음의 구조:
    Figure pct00331

    를 가진 에틸렌디아민 부분이며, 여기서 q는 1 내지 6의 정수이고, r은 0 또는 1이고;
    피페리딘-4-아미노는
    Figure pct00332

    이고;
    각 R11 및 R12는 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 폴리에틸렌 글리콜 부분, 아릴 및 치환된 아릴로부터 선택되며, 임의의 두 인접한 R12 기들은 환형 연결되어 피페라지닐 고리를 형성하고; R13은 수소, 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 및 치환된 아릴로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 화합물.
  24. 제 19 항 내지 제 23 항 중 어느 한 항에 있어서,
    a, b, c 및 d는 각각 1이고, e는 0이거나; 또는
    a, b 및 c는 각각 1이고, d 및 e는 각각 0이거나; 또는
    a 및 b는 각각 1이고, c, d 및 e는 각각 0인 것을 특징으로 하는 화합물.
  25. 제 19 항에 있어서, T1, T2, T3 및 T4와 V1, V2, V3 및 V4는 다음의 표로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 화합물:
    Figure pct00333

    Figure pct00334
  26. 제 19 항에 있어서, L은 다음의 구조들 중 하나에 의해서 설명되는 것을 특징으로 하는 화합물:
    Figure pct00335

    Figure pct00336

    Figure pct00337

    Figure pct00338

    상기 식에서,
    각 f는 독립적으로 0 또는 1 내지 12의 정수이고;
    각 w는 독립적으로 0 또는 1 내지 20의 정수이고;
    각 n은 독립적으로 0 또는 1 내지 30의 정수이고;
    각 p는 독립적으로 0 또는 1 내지 20의 정수이고;
    각 h는 독립적으로 0 또는 1 내지 12의 정수이고;
    각 R은 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 폴리에틸렌 글리콜 부분, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴이고;
    각 R'는 독립적으로 H, 아미노산의 측쇄 기, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 알콕시, 치환된 알콕시, 아미노, 치환된 아미노, 카복실, 카복실 에스테르, 아실, 아실옥시, 아실 아미노, 아미노 아실, 알킬아미드, 치환된 알킬아미드, 설포닐, 티오알콕시, 치환된 티오알콕시, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로시클릴, 및 치환된 헤테로시클릴이다.
  27. 제 19 항에 있어서, Q3은 -(CH2)mNR3NHR2이고 Q4는 Y4이거나; 또는
    Q4는 -(CH2)mNR3NHR2이고 Q3은 Y4인 것을 특징으로 하는 화합물.
  28. 제 19 항에 있어서, m이 1인 것을 특징으로 하는 화합물.
  29. 제 19 항에 있어서, R2 및 R3이 각각 독립적으로 알킬 및 치환된 알킬로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 것을 특징으로 하는 화합물.
  30. 제 19 항에 있어서, X1, X2, X3 및 X4는 각각 C인 것을 특징으로 하는 화합물.
  31. 제 19 항에 있어서, Y1, Y2, Y3 및 Y4는 각각 H인 것을 특징으로 하는 화합물.
  32. 제 19 항에 있어서, X1 및 X3은 각각 S이고 X4는 C이거나; 또는 X1 및 X3은 각각 O이고 X4는 C이거나; 또는 X1 및 X3은 각각 NR12이고 X4는 C인 것을 특징으로 하는 화합물.
  33. 제 19 항에 있어서, 식 (VIII)의 화합물인 것을 특징으로 하는 화합물:
    Figure pct00339
  34. 제 19 항에 있어서, 식 (IX)의 화합물인 것을 특징으로 하는 화합물:
    Figure pct00340
  35. 제 19 항 내지 제 34 항 중 어느 한 항에 있어서, W1은 약물 또는 검출가능한 표지인 것을 특징으로 하는 화합물.
  36. 제 19 항 내지 제 34 항 중 어느 한 항의 화합물과 반응성 알데하이드 기 또는 반응성 케톤 기를 포함하는 제2 화합물을 반응 혼합물에서 조합하는 단계로서, 상기 조합이 콘쥬게이트를 형성하기 위해 상기 화합물과 제2 화합물의 반응성 알데하이드 기 또는 반응성 케톤 기 사이의 반응을 촉진하기에 적합한 반응 조건에서 수행되는 단계; 및
    반응 혼합물로부터 콘쥬게이트를 분리하는 단계
    를 포함하는, 폴리펩티드 콘쥬게이트의 제조 방법.
  37. 제 36 항에 있어서, W1이 화학 물질이고, 제2 화합물은 폴리펩티드를 포함하거나; 또는 W1이 폴리펩티드이고, 제2 화합물이 화학 물질을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  38. 제 1 항 내지 제 18 항 중 어느 한 항의 콘쥬게이트; 및 제약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 제약 조성물.
  39. 제 1 항 내지 제 18 항 중 어느 한 항의 콘쥬게이트의 유효량을 대상에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상에 콘쥬게이트를 송달하는 방법.
  40. 제 1 항 내지 제 18 항 중 어느 한 항의 콘쥬게이트를 포함하는 제약 조성물의 치료적 유효량을 질환을 가진 대상에 투여하는 단계를 포함하며, 상기 투여가 대상에서 질환을 치료하기에 효과적인, 대상에서 질환을 치료하는 방법.
KR1020167017098A 2013-11-27 2014-11-26 히드라지닐-피롤로 화합물 및 콘쥬게이트 제조 방법 KR102320019B1 (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201361909897P 2013-11-27 2013-11-27
US61/909,897 2013-11-27
PCT/US2014/067746 WO2015081282A1 (en) 2013-11-27 2014-11-26 Hydrazinyl-pyrrolo compounds and methods for producing a conjugate

Publications (3)

Publication Number Publication Date
KR20160091963A true KR20160091963A (ko) 2016-08-03
KR102320019B1 KR102320019B1 (ko) 2021-11-01
KR102320019B9 KR102320019B9 (ko) 2023-01-13

Family

ID=53199663

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020167017098A KR102320019B1 (ko) 2013-11-27 2014-11-26 히드라지닐-피롤로 화합물 및 콘쥬게이트 제조 방법

Country Status (8)

Country Link
US (5) US9493413B2 (ko)
EP (1) EP3074010A4 (ko)
JP (2) JP6745218B2 (ko)
KR (1) KR102320019B1 (ko)
CN (2) CN115504924A (ko)
AU (1) AU2014354643B2 (ko)
CA (2) CA2927806C (ko)
WO (1) WO2015081282A1 (ko)

Families Citing this family (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2012205301B2 (en) 2011-01-14 2017-01-05 Redwood Bioscience, Inc. Aldehyde-tagged immunoglobulin polypeptides and method of use thereof
US9310374B2 (en) 2012-11-16 2016-04-12 Redwood Bioscience, Inc. Hydrazinyl-indole compounds and methods for producing a conjugate
EP3964237A1 (en) * 2013-03-15 2022-03-09 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Biologically active molecules, conjugates thereof, and therapeutic uses
MX2016002149A (es) 2013-08-26 2016-10-28 Regeneron Pharma Composiciones farmaceuticas que contienen diasteromeros macrolidos, metodos para su sintesis y usos terapeuticos.
JP6745218B2 (ja) * 2013-11-27 2020-08-26 レッドウッド バイオサイエンス， インコーポレイテッド ヒドラジニル−ピロロ化合物及び複合体を生成するための方法
CA2947484C (en) 2014-06-06 2023-05-09 Redwood Bioscience, Inc. Anti-her2 antibody-maytansine conjugates and methods of use thereof
KR20180102065A (ko) * 2015-11-09 2018-09-14 알.피.쉐러 테크놀러지즈 엘엘씨 항-cd22 항체-메이탄신 콘쥬게이트 및 그것의 사용 방법
CN114478801A (zh) 2016-01-25 2022-05-13 里珍纳龙药品有限公司 美登素类化合物衍生物、其偶联物和使用方法
EP3423105B1 (en) 2016-03-02 2021-05-05 Eisai R&D Management Co., Ltd. Eribulin-based antibody-drug conjugates and methods of use
WO2017189432A1 (en) 2016-04-26 2017-11-02 R.P. Scherer Technologies, Llc Antibody conjugates and methods of making and using the same
JP2019522633A (ja) * 2016-05-20 2019-08-15 ジェネンテック， インコーポレイテッド Ｐｒｏｔａｃ抗体コンジュゲート及び使用方法
WO2018169953A1 (en) 2017-03-17 2018-09-20 R.P. Scherer Technologies, Llc Antibody conjugates and methods of making and using the same
CN108690033B (zh) * 2017-04-05 2021-01-01 中国科学院化学研究所 含黄酮类药物活性分子的荧光探针及其制备方法和应用
WO2019036417A2 (en) * 2017-08-14 2019-02-21 University Of North Texas Health Science Center INHIBITION OF NGLY1 FOR THE TREATMENT OF CANCER
AU2018385599A1 (en) * 2017-12-11 2020-06-18 Triphase Research and Development III Corp. Anti-CD22 antibody-maytansine conjugates, combinations, and methods of use thereof
CA3127098A1 (en) * 2019-01-23 2020-07-30 R.P. Scherer Technologies, Llc Glycoside-containing peptide linkers for antibody-drug conjugates
EP4176904A1 (en) * 2019-03-29 2023-05-10 MedImmune Limited Compounds and conjugates thereof
EP3976112A1 (en) * 2019-06-03 2022-04-06 Synaffix B.V. Acetal-based cleavable linkers
AU2019341067B2 (en) 2019-09-29 2021-08-05 Mabplex International Co., Ltd. Method for producing antibody-drug conjugate intermediate by addition of acid and use thereof
CA3155137A1 (en) 2019-10-04 2021-04-08 R.P. Scherer Technologies, Llc Anti-cd25 antibody-maytansine conjugates and methods of use thereof
CA3198788A1 (en) 2021-01-15 2022-07-21 R.P. Scherer Technologies, Llc Camptothecine antibody-drug conjugates and methods of use thereof
WO2023009759A2 (en) * 2021-07-30 2023-02-02 R.P. Scherer Technologies, Llc Antibody-drug conjugates and methods of use thereof

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030069430A1 (en) 1997-09-05 2003-04-10 Davis Stephen Thomas Substituted oxindole derivatives as protein tyrosine and as protein serine/threonine kinase inhibitors and compositions and methods of treating chemotherapy and radiation therapy side effects
US20060116417A1 (en) 2004-10-25 2006-06-01 Jyun-Hung Chen Thrombopoietin activity modulating compounds and methods
WO2011099718A1 (en) * 2010-02-11 2011-08-18 Rohm And Haas Electronic Materials Korea Ltd. Novel organic electroluminescent compounds and organic electroluminescent device using the same

Family Cites Families (125)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES324609A1 (es) 1966-03-24 1966-12-16 Patronato De Investigacien Cie Procedimiento para la preparaciën de indolil-alquil hidrazinas
US4179337A (en) 1973-07-20 1979-12-18 Davis Frank F Non-immunogenic polypeptides
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
JPS61134325A (ja) 1984-12-04 1986-06-21 Teijin Ltd ハイブリツド抗体遺伝子の発現方法
US5618920A (en) 1985-11-01 1997-04-08 Xoma Corporation Modular assembly of antibody genes, antibodies prepared thereby and use
GB8607679D0 (en) 1986-03-27 1986-04-30 Winter G P Recombinant dna product
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
DE3815826A1 (de) 1988-05-09 1989-11-23 Henkel Kgaa Verfahren zur herstellung von vicinal diacyloxysubstituierten verbindungen
US5470829A (en) 1988-11-17 1995-11-28 Prisell; Per Pharmaceutical preparation
DE68925966T2 (de) 1988-12-22 1996-08-29 Kirin Amgen Inc Chemisch modifizierte granulocytenkolonie erregender faktor
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5089261A (en) 1989-01-23 1992-02-18 Cetus Corporation Preparation of a polymer/interleukin-2 conjugate
WO1990013540A1 (en) 1989-04-19 1990-11-15 Enzon, Inc. Active carbonates of polyalkylene oxides for modification of polypeptides
US5324844A (en) 1989-04-19 1994-06-28 Enzon, Inc. Active carbonates of polyalkylene oxides for modification of polypeptides
US5122614A (en) 1989-04-19 1992-06-16 Enzon, Inc. Active carbonates of polyalkylene oxides for modification of polypeptides
IL90193A (en) 1989-05-04 1993-02-21 Biomedical Polymers Int Polurethane-based polymeric materials and biomedical articles and pharmaceutical compositions utilizing the same
US5650388A (en) 1989-11-22 1997-07-22 Enzon, Inc. Fractionated polyalkylene oxide-conjugated hemoglobin solutions
US5312808A (en) 1989-11-22 1994-05-17 Enzon, Inc. Fractionation of polyalkylene oxide-conjugated hemoglobin solutions
GB8928874D0 (en) 1989-12-21 1990-02-28 Celltech Ltd Humanised antibodies
NL194941C (nl) 1990-02-15 2003-08-04 Cordis Corp Werkwijze voor het aanbrengen van een fysiologisch actieve verbinding op een substraatoppervlak.
US5171264A (en) 1990-02-28 1992-12-15 Massachusetts Institute Of Technology Immobilized polyethylene oxide star molecules for bioapplications
US5275838A (en) 1990-02-28 1994-01-04 Massachusetts Institute Of Technology Immobilized polyethylene oxide star molecules for bioapplications
US5219564A (en) 1990-07-06 1993-06-15 Enzon, Inc. Poly(alkylene oxide) amino acid copolymers and drug carriers and charged copolymers based thereon
WO1992000748A1 (en) 1990-07-06 1992-01-23 Enzon, Inc. Poly(alkylene oxide) amino acid copolymers and drug carriers and charged copolymers based thereon
JPH0498240A (ja) * 1990-08-17 1992-03-30 Konica Corp ハロゲン化銀写真感光材料
FR2672053B1 (fr) 1991-01-30 1993-04-23 Atochem Polyether bloc amides, leur procede de synthese.
CA2082160C (en) 1991-03-06 2003-05-06 Mary M. Bendig Humanised and chimeric monoclonal antibodies
FR2673946B1 (fr) 1991-03-15 1993-05-28 Atochem Polyether bloc amides, leur procede de synthese.
JPH06506217A (ja) 1991-03-18 1994-07-14 エンゾン，インコーポレーテッド ポリペプチドまたはグリコポリペプチドとポリマーとのヒドラジン含有結合体
TW197439B (ko) 1991-04-04 1993-01-01 Ueno Pharmaceutics Applic Res Co Ltd
EP0519596B1 (en) 1991-05-17 2005-02-23 Merck & Co. Inc. A method for reducing the immunogenicity of antibody variable domains
US5281698A (en) 1991-07-23 1994-01-25 Cetus Oncology Corporation Preparation of an activated polymer ester for protein conjugation
CA2078539C (en) 1991-09-18 2005-08-02 Kenya Shitara Process for producing humanized chimera antibody
US5283253A (en) 1991-09-23 1994-02-01 Florida State University Furyl or thienyl carbonyl substituted taxanes and pharmaceutical compositions containing them
US5565332A (en) 1991-09-23 1996-10-15 Medical Research Council Production of chimeric antibodies - a combinatorial approach
WO1993010076A1 (en) 1991-11-22 1993-05-27 The University Of Mississippi Synthesis and optical resolution of the taxol side chain and related compounds
GB9125979D0 (en) 1991-12-06 1992-02-05 Wellcome Found Antibody
WO1993016118A1 (en) 1992-02-13 1993-08-19 Carlsberg A/S Polyethylene or polypropylene glycol containing polymer
ATE171472T1 (de) 1992-02-19 1998-10-15 Schering Corp Klonierung und expression von humanisierten monoklonalen antikörpern gegen menschliches interleukin-4
US5200534A (en) 1992-03-13 1993-04-06 University Of Florida Process for the preparation of taxol and 10-deacetyltaxol
EP0642586A4 (en) 1992-05-21 1995-11-29 Penn State Res Found CULTURAL -i (TAXUS) FABRIC AS A SOURCE OF TAXOL, RELATED TAXANS AND OTHER NEW ANTI-TUMOR / ANTI-VIRAL SUBSTANCES (01/20/94).
US5274137A (en) 1992-06-23 1993-12-28 Nicolaou K C Intermediates for preparation of taxols
US5294637A (en) 1992-07-01 1994-03-15 Bristol-Myers Squibb Company Fluoro taxols
US5202448A (en) 1992-08-14 1993-04-13 Napro Biotherapeutics, Inc. Processes of converting taxanes into baccatin III
US5614549A (en) 1992-08-21 1997-03-25 Enzon, Inc. High molecular weight polymer-based prodrugs
WO1994004193A1 (en) 1992-08-21 1994-03-03 Enzon, Inc. Novel attachment of polyalkylene oxides to bio-effecting substances
US5639641A (en) 1992-09-09 1997-06-17 Immunogen Inc. Resurfacing of rodent antibodies
CA2100808A1 (en) 1992-10-01 1994-04-02 Vittorio Farina Deoxy paclitaxels
FR2696461B1 (fr) 1992-10-05 1994-11-10 Rhone Poulenc Rorer Sa Nouveaux dérivés d'analogues du taxol, leur préparation et les compositions qui les contiennent.
FR2696458B1 (fr) 1992-10-05 1994-11-10 Rhone Poulenc Rorer Sa Procédé de préparation de dérivés du taxane.
FR2696464B1 (fr) 1992-10-05 1994-11-10 Rhone Poulenc Rorer Sa Nouveau procédé d'estérification de la baccatine III et de la désacétyl-10 baccatine III.
FR2696463B1 (fr) 1992-10-05 1994-11-25 Rhone Poulenc Rorer Sa Procédé d'obtention de la désacétyl-10 baccatine III.
FR2696462B1 (fr) 1992-10-05 1994-11-25 Rhone Poulenc Rorer Sa Procédé d'obtention de la désacétyl-10 baccatine III.
US5279949A (en) 1992-12-07 1994-01-18 Board Of Trustees Operating Michigan State University Process for the isolation and purification of taxol and taxanes from Taxus spp
US5298643A (en) 1992-12-22 1994-03-29 Enzon, Inc. Aryl imidate activated polyalkylene oxides
US5349001A (en) 1993-01-19 1994-09-20 Enzon, Inc. Cyclic imide thione activated polyalkylene oxides
US5321095A (en) 1993-02-02 1994-06-14 Enzon, Inc. Azlactone activated polyalkylene oxides
WO1994028937A1 (en) 1993-06-16 1994-12-22 Enzon, Inc. Conjugated biodhesives
US5965566A (en) 1993-10-20 1999-10-12 Enzon, Inc. High molecular weight polymer-based prodrugs
US5880131A (en) 1993-10-20 1999-03-09 Enzon, Inc. High molecular weight polymer-based prodrugs
US5840900A (en) 1993-10-20 1998-11-24 Enzon, Inc. High molecular weight polymer-based prodrugs
US5824701A (en) 1993-10-20 1998-10-20 Enzon, Inc. Taxane-based prodrugs
US5605976A (en) 1995-05-15 1997-02-25 Enzon, Inc. Method of preparing polyalkylene oxide carboxylic acids
US5643575A (en) 1993-10-27 1997-07-01 Enzon, Inc. Non-antigenic branched polymer conjugates
US5919455A (en) 1993-10-27 1999-07-06 Enzon, Inc. Non-antigenic branched polymer conjugates
US5446090A (en) 1993-11-12 1995-08-29 Shearwater Polymers, Inc. Isolatable, water soluble, and hydrolytically stable active sulfones of poly(ethylene glycol) and related polymers for modification of surfaces and molecules
US5415869A (en) 1993-11-12 1995-05-16 The Research Foundation Of State University Of New York Taxol formulation
US5618528A (en) 1994-02-28 1997-04-08 Sterling Winthrop Inc. Biologically compatible linear block copolymers of polyalkylene oxide and peptide units
WO1995033490A1 (en) 1994-06-02 1995-12-14 Enzon, Inc. Method of solubilizing substantially water insoluble materials
US5730990A (en) 1994-06-24 1998-03-24 Enzon, Inc. Non-antigenic amine derived polymers and polymer conjugates
US5824784A (en) 1994-10-12 1998-10-20 Amgen Inc. N-terminally chemically modified protein compositions and methods
US5599902A (en) 1994-11-10 1997-02-04 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Cancer inhibitory peptides
US5932462A (en) 1995-01-10 1999-08-03 Shearwater Polymers, Inc. Multiarmed, monofunctional, polymer for coupling to molecules and surfaces
US5705154A (en) 1995-03-08 1998-01-06 Schering Corporation Humanized monoclonal antibodies against human interleukin-4
AU704973B2 (en) 1995-04-21 1999-05-13 Teikoku Hormone Mfg. Co., Ltd. Novel peptide derivatives
US5756593A (en) 1995-05-15 1998-05-26 Enzon, Inc. Method of preparing polyalkyene oxide carboxylic acids
US5672662A (en) 1995-07-07 1997-09-30 Shearwater Polymers, Inc. Poly(ethylene glycol) and related polymers monosubstituted with propionic or butanoic acids and functional derivatives thereof for biotechnical applications
CA2226299A1 (en) 1995-08-11 1997-02-27 Dendritech, Inc. Hyper comb-branched polymer conjugates
EP1704878B1 (en) 1995-12-18 2013-04-10 AngioDevice International GmbH Crosslinked polymer compositions and methods for their use
EP0964702B1 (en) 1996-08-02 2006-10-04 Ortho-McNeil Pharmaceutical, Inc. Polypeptides having a single covalently bound n-terminal water-soluble polymer
WO1998008833A1 (en) 1996-08-26 1998-03-05 Bristol-Myers Squibb Company Sulfenamide taxane derivatives
US6214966B1 (en) 1996-09-26 2001-04-10 Shearwater Corporation Soluble, degradable poly(ethylene glycol) derivatives for controllable release of bound molecules into solution
EP0961619A4 (en) 1996-09-27 2001-09-26 Bristol Myers Squibb Co HYDROLYSABLE DRUGS FOR THE RELEASE OF ANTI-CANCER DRUGS IN METASTATIC CELLS
AU4966597A (en) 1996-11-19 1998-06-10 Daiichi Pharmaceutical Co., Ltd. Taxol derivatives
US5977386A (en) 1996-12-24 1999-11-02 Bristol-Myers Squibb Company 6-thio-substituted paclitaxels
ES2236634T3 (es) 1997-04-07 2005-07-16 Genentech, Inc. Anticuerpos anti-vegf.
KR100794454B1 (ko) 1997-04-07 2008-01-16 제넨테크, 인크. 항-ｖｅｇｆ 항체
CA2288992C (en) 1997-04-30 2012-06-12 Enzon, Inc. Single-chain antigen-binding proteins capable of glycosylation, production and uses thereof
US5990237A (en) 1997-05-21 1999-11-23 Shearwater Polymers, Inc. Poly(ethylene glycol) aldehyde hydrates and related polymers and applications in modifying amines
IL133585A0 (en) 1997-06-20 2001-04-30 Baker Norton Pharma Soluble prodrugs of paclitaxel
US7288665B1 (en) 1997-08-18 2007-10-30 Florida State University Process for selective derivatization of taxanes
JPH1192468A (ja) 1997-09-17 1999-04-06 Yakult Honsha Co Ltd 新規なタキサン誘導体
AU741433B2 (en) 1997-10-08 2001-11-29 Bio Research Corporation Of Yokohama Taxoid derivatives and process for producing the same
US6011042A (en) 1997-10-10 2000-01-04 Enzon, Inc. Acyl polymeric derivatives of aromatic hydroxyl-containing compounds
US6111107A (en) 1997-11-20 2000-08-29 Enzon, Inc. High yield method for stereoselective acylation of tertiary alcohols
US6180095B1 (en) 1997-12-17 2001-01-30 Enzon, Inc. Polymeric prodrugs of amino- and hydroxyl-containing bioactive agents
WO1999030727A1 (en) 1997-12-17 1999-06-24 Enzon, Inc. Polymeric prodrugs of amino- and hydroxyl-containing bioactive agents
US5985263A (en) 1997-12-19 1999-11-16 Enzon, Inc. Substantially pure histidine-linked protein polymer conjugates
US5965119A (en) 1997-12-30 1999-10-12 Enzon, Inc. Trialkyl-lock-facilitated polymeric prodrugs of amino-containing bioactive agents
ES2307865T3 (es) 1998-03-12 2008-12-01 Nektar Therapeutics Al, Corporation Metodo para preparar conjugados polimericos.
US6153655A (en) 1998-04-17 2000-11-28 Enzon, Inc. Terminally-branched polymeric linkers and polymeric conjugates containing the same
DE69925133T2 (de) 1998-08-27 2006-01-19 Spirogen Ltd., Ryde Pyrrolobenzodiazepine
US6323315B1 (en) 1999-09-10 2001-11-27 Basf Aktiengesellschaft Dolastatin peptides
CA2386762C (en) 1999-10-08 2009-06-16 Shearwater Corporation Heterobifunctional poly(ethylene glycol) derivatives and methods for their preparation
DE60120650T2 (de) 2000-03-16 2007-05-31 The Regents Of The University Of California, Oakland Chemoselektive anknüpfung durch verwendung eines phosphins
US7030218B2 (en) 2000-09-08 2006-04-18 Gryphon Therapeutics Pseudo native chemical ligation
WO2004016740A2 (en) 2002-08-15 2004-02-26 Epitomics, Inc. Humanized rabbit antibodies
EP1391213A1 (en) 2002-08-21 2004-02-25 Boehringer Ingelheim International GmbH Compositions and methods for treating cancer using maytansinoid CD44 antibody immunoconjugates and chemotherapeutic agents
US8188116B2 (en) * 2002-09-04 2012-05-29 Vanderbilt University Agents for therapy efficacy monitoring and deep tissue imaging
US7754884B2 (en) * 2005-01-03 2010-07-13 Vanderbilt University Targeted, NIR imaging agents for therapy efficacy monitoring, deep tissue disease demarcation and deep tissue imaging
CN100415765C (zh) 2003-08-07 2008-09-03 宜康公司 兔单克隆抗体的人源化方法
WO2005023818A2 (en) * 2003-09-10 2005-03-17 Gpc Biotech Ag Heterobicyclic compounds as pharmaceutically active agents
JP2007521338A (ja) * 2004-01-07 2007-08-02 アンビット バイオサイエンシス コーポレーション 共役化された低分子
US20050239806A1 (en) * 2004-01-13 2005-10-27 Ambit Biosciences Corporation Pyrrolopyrimidine derivatives and analogs and their use in the treatment and prevention of diseases
CN1560035A (zh) 2004-03-12 2005-01-05 沈阳药科大学 5－羟基吲哚－3－羧酸脂类衍生物
BRPI0510909A2 (pt) 2004-05-19 2008-12-16 Medarex Inc composto de ligaÇço fÁrmaco-ligante citotàxico, formulaÇço farmacÊutica, mÉtodo para matar uma cÉlula e mÉtodo para retardar ou interromper o crescimento de tumor
JP5171621B2 (ja) 2005-07-07 2013-03-27 シアトル ジェネティックス， インコーポレイテッド フェニルアラニン側鎖修飾をｃ末端に有するモノメチルバリン化合物
US7985783B2 (en) 2006-09-21 2011-07-26 The Regents Of The University Of California Aldehyde tags, uses thereof in site-specific protein modification
WO2009120611A2 (en) 2008-03-27 2009-10-01 The Regents Of The University Of California Aldehyde tags, uses thereof in site-specific protein modification
JP2009298735A (ja) * 2008-06-13 2009-12-24 Univ Of Tokyo 修飾タンパク質の製造方法と該製造方法で得られる修飾タンパク質及びタンパク質修飾キット
TW201117814A (en) 2009-10-02 2011-06-01 Sanofi Aventis New maytansinoids and the use of said maytansinoids to prepare conjugates with an antibody
JP2016500058A (ja) * 2012-11-12 2016-01-07 レッドウッド バイオサイエンス， インコーポレイテッド 化合物および抱合体を生成するための方法
US9310374B2 (en) * 2012-11-16 2016-04-12 Redwood Bioscience, Inc. Hydrazinyl-indole compounds and methods for producing a conjugate
JP6745218B2 (ja) * 2013-11-27 2020-08-26 レッドウッド バイオサイエンス， インコーポレイテッド ヒドラジニル−ピロロ化合物及び複合体を生成するための方法
CA2947484C (en) * 2014-06-06 2023-05-09 Redwood Bioscience, Inc. Anti-her2 antibody-maytansine conjugates and methods of use thereof

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030069430A1 (en) 1997-09-05 2003-04-10 Davis Stephen Thomas Substituted oxindole derivatives as protein tyrosine and as protein serine/threonine kinase inhibitors and compositions and methods of treating chemotherapy and radiation therapy side effects
US20060116417A1 (en) 2004-10-25 2006-06-01 Jyun-Hung Chen Thrombopoietin activity modulating compounds and methods
WO2011099718A1 (en) * 2010-02-11 2011-08-18 Rohm And Haas Electronic Materials Korea Ltd. Novel organic electroluminescent compounds and organic electroluminescent device using the same

Also Published As

Publication number Publication date
WO2015081282A1 (en) 2015-06-04
CN105744935B (zh) 2022-09-30
EP3074010A4 (en) 2017-10-25
CN105744935A (zh) 2016-07-06
JP2019142870A (ja) 2019-08-29
AU2014354643A1 (en) 2016-05-12
JP2017501128A (ja) 2017-01-12
KR102320019B1 (ko) 2021-11-01
CA2927806A1 (en) 2015-06-04
US20190389800A1 (en) 2019-12-26
US10604483B2 (en) 2020-03-31
US11180451B2 (en) 2021-11-23
JP6745218B2 (ja) 2020-08-26
US20220153696A1 (en) 2022-05-19
US20150157736A1 (en) 2015-06-11
CN115504924A (zh) 2022-12-23
CA3178867A1 (en) 2015-06-04
KR102320019B9 (ko) 2023-01-13
EP3074010A1 (en) 2016-10-05
US20170049907A1 (en) 2017-02-23
US20200317610A1 (en) 2020-10-08
CA2927806C (en) 2023-01-10
US9493413B2 (en) 2016-11-15
US10464894B2 (en) 2019-11-05
AU2014354643B2 (en) 2020-03-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR102320019B1 (ko) 히드라지닐-피롤로 화합물 및 콘쥬게이트 제조 방법
US11426465B2 (en) Hydrazinyl-indole compounds and methods for producing a conjugate
US9579390B2 (en) Compounds and methods for producing a conjugate
US11376334B2 (en) Hydrazinyl-substituted heteroaryl compounds and methods for producing a conjugate

Legal Events

Date Code Title Description
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant
G170 Re-publication after modification of scope of protection [patent]