KR20160086905A - 디메틸벤조산 화합물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 EP4 수용체의 억제제로서 사용하기 위한, 하기 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다:
<화학식 I>
Figure pct00077

여기서, A는
Figure pct00078

이고;
W, Y, X, R1, R2, R3, 및 R4는 본원에 정의된 바와 같다.

Description

디메틸벤조산 화합물 {DIMETHYLBENZOIC ACID COMPOUNDS}
본 발명은 특정 신규 디메틸벤조산 화합물, 상기 화합물을 포함하는 제약 조성물, 생리학적 장애를 치료하기 위해 상기 화합물을 사용하는 방법, 및 상기 화합물의 합성에 유용한 중간체 및 방법에 관한 것이다.
본 발명은 골관절염 및 류마티스 관절염을 포함하며, 이들 상태와 연관된 통증을 추가로 포함하는, 염증성 상태, 예컨대 관절염의 치료 분야에 속한다. 관절염은 미국에서만 수백만명의 환자에게 영향을 미치며, 장애의 주요 원인이다. 치료는 원치 않는 심혈관 부작용을 생성할 수 있는, NSAID (비스테로이드성 항염증 약물) 또는 COX-2 억제제를 종종 포함한다. 이에 따라, 불량한 심혈관 프로파일, 예컨대 고혈압을 갖는 환자는 NSAID 또는 COX-2 억제제를 사용하는 것으로부터 배제될 수 있다. 따라서, 바람직하게는 현행 치료의 부작용이 없는, 골관절염 및 류마티스 관절염의 대안적 치료에 대한 필요가 존재한다.
4개의 프로스타글란딘 E2 (PGE2) 수용체 하위유형은 하기와 같이 확인되었다: EP1, EP2, EP3 및 EP4. EP4는 류마티스 관절염 및 골관절염의 설치류 모델에서 관절 염증성 통증에 관련되는 1차 수용체인 것으로 개시되어 있다. 따라서, 선택적 EP4 길항제는 관절염성 통증을 포함하는 관절염을 치료하는데 유용할 수 있다. 추가로, EP4 길항작용이 프로스타노이드, 예컨대 PGI2 및 TxA2의 생합성을 방해하지 않기 때문에, 선택적 EP4 길항제는 NSAID 및 COX-2 억제제에서 보여지던 잠재적 심혈관 부작용을 보유하지 않을 수 있는 것으로 제시되었다.
WO 96/02509는, 예를 들어 폐 장애, CNS 장애, 신경원성 염증, 및 염증성 통증을 포함하는 다양한 장애를 치료하는데 유용한, 선택적, 비-펩티드 NK3 길항제인 특정 퀴놀린 유도체를 개시한다. 추가로, 미국 특허 번호 7,705,035는 다양한 장애, 예컨대 골관절염, 류마티스 관절염, 및 급성 및 만성 통증의 치료에 유용한, EP4 리간드, 효능제, 또는 길항제로서 유용한 특정 인돌린 아미드 유도체를 개시한다.
본 발명은 EP4의 억제제인 특정 신규 화합물, 및 EP1, EP2, 및 EP3에 비해 EP4의 선택적 억제제인 특정 신규 화합물을 제공한다. 추가로, 본 발명은 전통적인 NSAID와 비교하여, 감소된 심혈관 또는 위장 부작용에 대한 잠재력을 갖는 특정 신규 화합물을 제공한다.
따라서, 본 발명은 하기 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다:
<화학식 I>
Figure pct00001
상기 식에서 A는
Figure pct00002
이고;
W는 CH 또는 N이고;
Y는 CH 또는 N이고;
X는 CH 또는 N이고;
R1은 CH3, CF3, 또는 F이고;
R2는 H, F, Cl, CH3, CF3, CH2OH, CH2CH2OH, CH2OCH3, OCH3, OCF3, 또는 CN이고;
R3은 H 또는 F이거나; 또는
R2 및 R3은 함께 이웃자리 탄소 원자에 부착된 OCH2O 기이고;
R4는 H, Cl, 또는 CH2OH이다.
본 발명은 또한 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 관절염의 치료를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 환자에서 관절염을 치료하는 방법을 제공한다. 본 발명은 또한 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 골관절염의 치료를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 환자에서 골관절염을 치료하는 방법을 제공한다. 추가로, 본 발명은 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 류마티스 관절염의 치료를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 환자에서 류마티스 관절염을 치료하는 방법을 제공한다. 본 발명은 또한 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 관절염과 연관된 통증의 치료를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 환자에서 관절염과 연관된 통증을 치료하는 방법을 제공한다. 본 발명은 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 골관절염 또는 류마티스 관절염과 연관된 통증의 치료를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 환자에서 골관절염 또는 류마티스 관절염과 연관된 통증을 치료하는 방법을 추가로 제공한다.
게다가, 본 발명은 요법에 사용하기 위한, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다. 추가로, 본 발명은 관절염의 치료에 사용하기 위한, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다. 특히, 본 발명은 골관절염의 치료에 사용하기 위한, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다. 추가로, 본 발명은 류마티스 관절염의 치료에 사용하기 위한, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다. 본 발명은 또한 관절염과 연관된 통증의 치료에 사용하기 위한, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다. 본 발명은 또한 골관절염 또는 류마티스 관절염과 연관된 통증의 치료에 사용하기 위한, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다. 게다가, 본 발명은 관절염의 치료를 위한 의약의 제조를 위한, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 용도를 제공한다. 추가로, 본 발명은 골관절염의 치료를 위한 의약의 제조를 위한, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 용도를 제공한다. 본 발명은 류마티스 관절염의 치료를 위한 의약의 제조를 위한, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 용도를 제공한다. 본 발명은 또한 골관절염 또는 류마티스 관절염과 연관된 통증의 치료를 위한 의약의 제조를 위한, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 용도를 제공한다.
본 발명은 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을, 1종 이상의 제약상 허용되는 담체, 희석제, 또는 부형제와 함께 포함하는 제약 조성물을 추가로 제공한다. 본 발명은 또한 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 합성을 위한 신규 중간체 및 방법을 포괄한다.
본원에 사용된 용어 "치료하는" 또는 "치료하는 것"은 기존 증상 또는 장애의 진행 또는 중증도를 저지, 둔화, 정지, 또는 역전시키는 것을 포함한다.
본원에 사용된 용어 "환자"는 포유동물, 예컨대 마우스, 기니 피그, 래트, 고양이, 개, 또는 인간을 지칭한다. 바람직한 환자는 인간인 것으로 이해된다.
본원에 사용된 용어 "유효량"은 환자에게 단일 또는 다중 용량 투여시, 진단 또는 치료 하의 환자에서 목적하는 효과를 제공하는, 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 양 또는 용량을 지칭한다.
본원에 사용된 어구 "R2 및 R3은 함께 이웃자리 탄소 원자에 부착된 OCH2O 기이다"는 하기 구조를 지칭하며, 예를 들어, 여기서 상응하는 산소 원자는 페닐 상의 이웃자리 탄소에 부착된다:
Figure pct00003
유효량은, 공지된 기술을 사용함으로써 및 유사한 상황 하에 수득한 결과를 관찰함으로써, 관련 기술분야의 통상의 기술자로서의 담당 진단자에 의해 용이하게 결정될 수 있다. 환자에 대한 유효량을 결정하는데 있어서, 포유동물의 종; 그의 크기, 연령, 및 전반적 건강; 침범된 구체적 질환 또는 장애; 질환 또는 장애의 침범 또는 중증도의 정도; 개별 환자의 반응; 투여되는 특정한 화합물; 투여 방식; 투여되는 제제의 생체사용률 특징; 선택되는 용량 요법; 병용 의약의 사용; 및 다른 관련 상황을 포함하나 이에 제한되지는 않는, 다수의 인자가 담당 진단자에 의해 고려된다.
화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 일반적으로 넓은 투여량 범위에 걸쳐 유효하다. 예를 들어, 1일 투여량은 통상적으로 약 0.01 내지 약 50 mg/kg 체중의 범위에 해당한다. 일부 경우에 상기 언급된 범위의 하한치 미만의 투여량 수준이 보다 적절할 수 있는 반면에, 다른 경우에는 보다 큰 용량이 허용되는 부작용과 함께 사용될 수 있으며, 따라서 상기 투여량 범위는 본 발명의 범위를 어떠한 방식으로도 제한하도록 의도되지 않는다.
본 발명의 화합물은 바람직하게는 화합물을 생체사용가능하게 하는 임의의 경로에 의해 투여되는 제약 조성물로서 제제화된다. 가장 바람직하게는, 이러한 조성물은 경구 투여를 위한 것이다. 이러한 제약 조성물 및 그의 제조 방법은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다. (예를 들면, 문헌 [Remington: The Science and Practice of Pharmacy (D.B. Troy, Editor, 21st Edition, Lippincott, Williams & Wilkins, 2006] 참조).
화학식 I의 화합물은 특히 본 발명의 치료 방법에 유용하나, 특정 기, 치환기, 및 배위가 바람직하다. 하기 단락은 이러한 바람직한 기, 치환기, 및 배위를 기재한다. 이들 바람직한 것은 본 발명의 신규 화합물, 및 본 발명의 치료 방법, 용도, 및 제약 조성물에 적용가능한 것으로 이해될 것이다.
화학식 Ia 및 화학식 Ib의 화합물이 바람직하다:
Figure pct00004
화학식 Ia가 가장 바람직하다.
카르복실산이 상기 화학식 Ib에서와 같이, 페닐 고리 상의 각각의 2개의 메틸 기에 대해 메타 위치에 있는 경우에, W는 CH가 아니라 C여야하는 것이 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 이해된다.
A가
Figure pct00005
인 것이 또한 바람직하다.
A가
Figure pct00006
인 것이 더 바람직하다.
A가
Figure pct00007
인 것이 특히 바람직하다.
A가
Figure pct00008
인 것이 특히 더 바람직하다.
A가
Figure pct00009
인 것이 가장 특히 바람직하다.
W가 CH인 것이 바람직하다.
Y가 CH인 것이 바람직하다.
W가 CH인 경우에, Y는 CH인 것이 가장 바람직하다.
R1이 CH3인 것이 바람직하다.
R2가 CH2OH, CH2CH2OH, 또는 OCH3인 것이 바람직하다.
R2가 CH2OH인 것이 더 바람직하다.
R2 및 R3이 함께 이웃자리 탄소 원자에 부착된 OCH2O 기인 것이 또한 바람직하다.
R3이 H인 것이 더 바람직하다.
R2가 CH2OH, CH2CH2OH, 또는 OCH3인 경우에, R3은 H인 것이 바람직하다.
R2가 CH2OH인 경우에, R3은 H인 것이 더 바람직하다.
R4가 Cl인 것이 바람직하다.
바람직한 화합물은:
3-[[6-(1,3-벤조디옥솔-5-일)-3-메틸-피리딘-2-카르보닐]아미노]-2,4-디메틸-벤조산;
3-[[6-[3-(히드록시메틸)페닐]-3-메틸-피리딘-2-카르보닐]아미노]-2,4-디메틸-벤조산; 및
3-[[3-(3-클로로페닐)나프탈렌-1-카르보닐]아미노]-2,4-디메틸-벤조산;
및 그의 제약상 허용되는 염이다.
본원에 사용된 "kPag"는 킬로파스칼 게이지 압력을 지칭하고; "Boc"는 tert-부톡시카르보닐 보호기를 지칭하고; "DMEM"은 둘베코 변형 이글 배지를 지칭하고; "ACN"은 아세토니트릴을 지칭하고; "TFA"는 트리플루오로 아세트산을 지칭하고; "DIEA"는 N,N-디이소프로필에틸아민을 지칭하고; "DMAP"는 4-(N,N-디메틸아미노)피리딘을 지칭하고; "DMSO"는 디메틸술폭시드를 지칭하고; "DMF"는 N,N-디메틸포름아미드를 지칭하고; "EtOH"는 에탄올을 지칭하고; "THF"는 테트라히드로푸란을 지칭하고; "MeOH"는 메탄올을 지칭하고; "EtOAc"는 에틸 아세테이트를 지칭하고; "Et2O"는 디에틸 에테르를 지칭하고; "TBME"는 tert-부틸 메틸 에테르를 지칭하고; "BOP-Cl"은 비스(2-옥소-3-옥사졸리디닐)포스폰산 클로라이드를 지칭하고; "mCPBA"는 3-클로로퍼벤조산을 지칭하고; "KHMDS"는 칼륨 비스(트리메틸실릴)아미드를 지칭하고; "h"는 시간 또는 시간들을 지칭하고; "PGE2"는 프로스타글란딘 E2를 지칭하고; "FBS"는 소 태아 혈청을 지칭하고; "IBMX"는 (3-이소부틸-1-메틸크산틴)을 지칭하고; "MES"는 (2-(N-모르폴리노)에탄술폰산을 지칭하고; "HEPES"는 (2-[4-(2-히드록시에틸)피페라진-1-일]에탄술폰산)을 지칭하고; "S-Phos"는 2-디시클로헥실포스피노-2',6'-디메톡시비페닐을 지칭하고; "HTRF"는 균질 시간-분해 형광 기술을 지칭하고; "HEK"는 인간 배아 신장을 지칭하고; "HBSS"는 행크 평형 염 용액을 지칭하고; "RT"는 실온을 지칭하고; "EC80"은 작용제에 대하여 가능한 최대 효능의 80%를 생성하는 그 작용제의 농도를 지칭하고; "IC50"은 작용제에 대하여 가능한 최대 억제 반응의 50%를 생성하는 그 작용제의 농도를 지칭한다.
제약상 허용되는 염 및 그를 제조하기 위한 통상의 방법론은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다. 예를 들어, 문헌 [Gould, P.L., "Salt selection for basic drugs," International Journal of Pharmaceutics, 33: 201-217 (1986); Bastin, R.J., et al. "Salt Selection and Optimization Procedures for Pharmaceutical New Chemical Entities," Organic Process Research and Development, 4: 427-435 (2000); 및 Berge, S.M., et al., "Pharmaceutical Salts," Journal of Pharmaceutical Sciences, 66: 1-19, (1977)]을 참조한다. 합성 분야의 통상의 기술자는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 널리 공지된 기술 및 조건을 사용하여, 본 발명의 화합물을 제약상 허용되는 염, 예컨대 히드로클로라이드 염으로 용이하게 전환시키고 그러한 염으로서 단리시킬 수 있음을 인지할 것이다. 추가로, 합성 분야의 통상의 기술자는 화학식 I의 화합물을, 상응하는 제약상 허용되는 염으로부터 상응하는 유리 염기 또는 유리 산으로 용이하게 전환시키고, 그러한 유리 염기 또는 유리 산으로서 단리시킬 수 있음을 인지할 것이다.
본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 관련 기술분야에 공지된 다양한 절차에 의해 제조될 수 있으며, 그 중 일부는 하기 반응식, 제조예, 및 실시예에 예시되어 있다. 기재된 각각의 경로에 대한 구체적 합성 단계는, 상이한 방식으로, 또는 상이한 반응식으로부터의 단계와 함께 합해져서, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제조할 수 있다. 하기 반응식에서의 각 단계의 생성물을 추출, 증발, 침전, 크로마토그래피, 여과, 연화처리, 및 결정화를 포함하는 통상적인 방법에 의해 회수될 수 있다. 시약 및 출발 물질은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 용이하게 입수가능하다. 모든 치환기는 달리 명시되지 않는 한, 이전에 정의된 바와 같다. 이들 반응식, 제조예, 및 실시예는 본 발명의 범위를 어떠한 방식으로도 제한하도록 의도되지 않는 것으로 이해된다.
반응식 1
Figure pct00010
제조예 1
메틸 3-아미노-2,4-디메틸-벤조에이트.
Figure pct00011
반응식 1, 단계 A. 1,3-디메틸-2-니트로-벤젠 (68.5 g, 453.2 mmol)에, 황산 (27.2 mL, 510 mmol), 아세트산 (543.8 mL, 9.49 mol), 아이오딘 (46 g, 181.3 mmol) 및 HIO4 (91.9 g, 403.3 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 7일 동안 90℃로 가열하였다. 반응 혼합물을 주위 온도로 냉각시키고, 물 (500 mL)을 첨가하였다. 생성된 고체를 여과에 의해 수집하고, 냉수로 세척하였다. 고체를 밤새 45℃에서 감압 하에 건조시켜, 1-아이오도-2,4-디메틸-3-니트로-벤젠을 황색 고체 (119 g, 95%)로서 수득하였다. 1H NMR (300.16 MHz, CDCl3): δ 7.80 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 6.85 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 2.37 (s, 3H), 2.23 (s, 3H).
반응식 1, 단계 B. 2 L 파르 오토클레이브에, 기계적으로 교반하면서, 1-아이오도-2,4-디메틸-3-니트로-벤젠 (70 g, 252.7 mmol), Pd(OAc)2 (2.8 g, 12.6 mmol), 1,4-비스(디페닐포스피노)부탄 (6.5 g, 15.2 mmol), 아세토니트릴 (462 mL), 트리에틸아민 (88.2 mL), 및 MeOH (280 mL)을 첨가하였다. 파르 오토클레이브를 밀봉하고, 퍼징하고, CO를 사용하여 551.6 kPa (80 psig)로 가압하였다. 혼합물을 2시간 동안 100℃로 가열하였다. 혼합물을 주위 온도로 냉각시킨 다음, 환기시켰다. 혼합물을 이어서, 감압 하에 농축 건조시켰다. EtOAc (300 mL) 및 물 (300 mL)을 첨가하였다. 층을 분리하고, 수성 층을 폐기하였다. 유기 층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축 건조시켜, 메틸 2,4-디메틸-3-니트로-벤조에이트를 정치 시 결정화하는 적색 오일 (52 g, 98%)로서 수득하였다. 1H NMR (300.13 MHz, CDCl3): δ 7.89 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 7.19 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 3.91 (s, 3H), 2.49 (s, 3H), 2.33 (s, 3H).
반응식 1, 단계 C. MeOH (370 mL) 중의 메틸 2,4-디메틸-3-니트로-벤조에이트 (37 g, 176.9 mmol)의 용액에, 10% 탄소 상 팔라듐 (50% 습윤) (5.6 g)을 첨가하였다. 반응물을 수소로 버블링하고, 6일 동안 수소 분위기 하에 두었다. 혼합물을 규조토를 통해 여과하고, 여과물을 증발 건조시켰다. 생성된 잔류물을 20% EtOAc / 헥산으로 용리하는 실리카 겔 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여, 메틸 3-아미노-2,4-디메틸-벤조에이트를 황색 오일 (20.5 g, 65%)로서 수득하였다. 질량 스펙트럼 (m/z): 180.1 (M+H)+.
반응식 2
Figure pct00012
제조예 2
메틸 4-아미노-3,5-디메틸-벤조에이트.
Figure pct00013
반응식 2, 단계 A. MeOH (150 mL) 중의 3,5-디메틸-4-니트로-벤조산 (10.0 g, 0.0512 mol)의 용액에, 티오닐 클로라이드 (10 ml)를 0℃에서 첨가하고, 반응물을 80℃로 가열하였다. 16시간 후, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 용매를 감압 하에 제거하였다. 잔류물을 물 (50 ml)로 희석하고, 포화 NaHCO3 용액을 사용하여 pH 7-8로 만들고, EtOAc (2 x 120 mL)로 추출하였다. 유기 층을 합하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 용매를 감압 하에 제거하여, 메틸 3,5-디메틸-4-니트로-벤조에이트를 담황색 고체 (10.71 g, 98.3%)로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO): δ 7.83 (s, 2H), 3.88 (s, 3H), 2.30 (s, 6H).
반응식 2, 단계 B. MeOH (100 mL) 중의 메틸 3,5-디메틸-4-니트로벤조에이트 (10.0 g, 0.0478 mol)의 용액에, 철 분말 (15.7 g, 0.2869 mol) 및 37% HCl (1.72 g, 0.0478 mol)을 0℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 16시간 동안 80℃에서 가열하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 규조토를 통해 여과하고, MeOH로 세척하였다. 여과물을 농축시켜, 표제 화합물을 갈색 고체 (7.8 g, 99%)로서 수득하였다. 질량 스펙트럼 (m/z): 180.2 (M+H)+.
반응식 3
Figure pct00014
제조예 3
6-클로로-3-메틸-피리딘-2-카르복실산.
Figure pct00015
반응식 3, 단계 A. CH2Cl2 (130 mL) 중의 메틸 3-메틸피리딘-2-카르복실레이트 (13.0 g, 0.086 mol)의 용액에, 메타-클로로퍼옥시벤조산 (89.05 g, 0.258 mol, 50% w/w)를 0℃에서 조금씩 첨가하였다. 반응 혼합물을 15분 동안 0℃에서 교반한 다음, 주위 온도로 서서히 가온하였다. 16시간 후, 포화 NaHCO3 용액 (100 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 30분 동안 교반하고, CH2Cl2로 추출하였다. 합한 유기 층을 0.5M NaOH 수용액 (2 x 50 mL)으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 메틸 3-메틸-1-옥시도-피리딘-1-윰-2-카르복실레이트를 회백색 고체 (13.0 g, 89.9%)로서 수득하였다. 잔류물을 추가 정제 없이 다음 단계에 사용하였다. 질량 스펙트럼 (m/z): 168.2 (M+H)+.
반응식 3, 단계 B. POCl3 (30.0 mL)을 메틸 3-메틸-1-옥시도-피리딘-1-윰-2-카르복실레이트 (13.0 g, 0.077 mol)에 30분에 걸쳐 0℃에서 천천히 첨가하였다. 반응 혼합물을 15분 동안 0℃에서 교반한 다음, 주위 온도로 서서히 가온하였다. 16시간 후, 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 과량의 POCl3을 감압 하에 제거하였다. 조 잔류물을 이어서, 얼음의 첨가에 의해 켄칭하고, 물 및 CH2Cl2 (50 mL)로 희석하였다. 유기 층을 포화 NaHCO3 용액, 물, 및 염수로 순차적으로 세척하고; 황산나트륨 상에서 건조시키고; 여과하고; 감압 하에 농축시켰다. 조 생성물을 5-10% EtOAc / 헥산으로 용리하는 실리카 겔 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여, 메틸 6-클로로-3-메틸-피리딘-2-카르복실레이트를 백색 고체 (3.00 g, 20.9%)로서 수득하였다. 질량 스펙트럼 (m/z): 186.2 (M+H)+.
반응식 3, 단계 C. 수성 2N NaOH의 용액 (5 ml)을 THF (10 mL) 중의 메틸 6-클로로-3-메틸-피리딘-2-카르복실레이트 (0.500 g, 2.702 mmol)의 교반된 용액에 0℃에서 첨가하였다. 혼합물을 2시간 동안 50℃에서 가열하였다. 반응 혼합물을 수성 시트르산 용액으로 산성화시키고, EtOAc (2 x 10 ml)로 추출하였다. 합한 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜, 표제 화합물을 회백색 고체 (0.45 g, 97%)로서 수득하였다. 잔류물을 추가 정제 없이 다음 단계에 사용하였다. 질량 스펙트럼 (m/z): 172.0 (M+H)+.
반응식 4
Figure pct00016
제조예 4
메틸 3-[(5-브로모-2-메틸-벤조일)아미노]-2,4-디메틸-벤조에이트.
Figure pct00017
반응식 4, 단계 A. THF (5.0 ml), CH2Cl2 (5.0 ml) 및 DMF (50.0 μl, 646.6 μmoles) 중의 5-브로모-2-메틸-벤조산 (1.0 g, 4.7 mmol)의 용액에, 옥살릴 클로라이드 (2.6 ml, 5.1 mmoles)를 0℃에서 적가하였다. 반응 혼합물을 주위 온도로 서서히 가온되도록 하였다. 2시간 후, 용매를 감압 하에 제거하였다. 잔류물을 CH2Cl2 (5 ml)로 희석하고, 혼합물을 0℃로 냉각시켰다. 메틸 3-아미노-2,4-디메틸벤조에이트 (957.9 mg, 4.70 mmol)를 첨가한 다음, N,N-디메틸피리딘-4-아민 (28.4 mg, 0.232 mmoles) 및 피리딘 (1.1 ml, 14.0 mmoles)을 첨가하였다. 냉각 조를 제거하고, 투명한 용액을 주위 온도로 가온되도록 하였다. 2시간 후, 용액을 농축시켰다. 잔류물을 EtOAc로 희석하고, 1N HCl, 중탄산나트륨의 포화 용액, 및 염수로 순차적으로 세척하였다. 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 30% EtOAc / 헥산으로 연화처리하고, 고체를 여과하여, 표제 화합물 (680.0 mg; 38.9%)을 수득하였다. 질량 스펙트럼 (m/z): 376.0 (M+H)+.
하기 화합물을 적절한 카르복실산 및 아민을 사용하여, 본질적으로 상기 방법 (반응식 4, 단계 A)에 의해 제조하였다:
Figure pct00018
제조예 6
메틸 3-[[5-[3-(히드록시메틸)페닐]-2-메틸-벤조일]아미노]-2,4-디메틸-벤조에이트.
Figure pct00019
반응식 4, 단계 B. 1,4-디옥산 (3.0 ml) 및 H2O (0.3 ml) 중의 메틸 3-[(5-브로모-2-메틸-벤조일)아미노]-2,4-디메틸-벤조에이트 (0.18 g, 0.478 mmol)의 용액에, (3-(히드록시메틸)페닐)보론산 (87.2 mg, 0.574 mmol)을 첨가한 다음, K2CO3 (132.2 mg, 0.956 mmol) 및 PdCl2(dppf)·CH2Cl2 (19.5 mg, 0.024 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 5분 동안 아르곤으로 퍼징한 다음, 110℃에서 가열하였다. 2시간 후, 반응물을 실온으로 냉각시키고, 물로 희석하고, EtOAc로 추출하였다. 합한 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 40% EtOAc / 헥산을 사용하는 실리카 겔 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 생성물을 TBME로 연화처리하고 여과하여, 표제 화합물 (0.105 g, 54.4%)을 수득하였다. 질량 스펙트럼 (m/z): 404.2 (M+H)+.
하기 화합물을 적절한 카르복실산 에스테르 및 보론산을 사용하여, 본질적으로 상기 방법에 의해 제조하였다:
Figure pct00020
Figure pct00021
실시예 1
3-[[5-[3-(히드록시메틸)페닐]-2-메틸-벤조일]아미노]-2,4-디메틸-벤조산.
Figure pct00022
반응식 4, 단계 C. 수성 1N NaOH (0.5 ml)를 THF (2.0 ml) 및 MeOH (1.0 ml) 중의 메틸 3-[[5-[3-(히드록시메틸)페닐]-2-메틸-벤조일]아미노]-2,4-디메틸-벤조에이트 (0.102 g, 0.252 mmol)의 교반된 용액에 첨가하였다. 12시간 동안 50℃에서 가열한 후, 반응 혼합물을 수성 1N HCl 용액을 사용하여 pH 1-2로 산성화시켰다. 생성된 침전물을 여과하고, 물로 세척하고, 1시간 동안 진공 오븐에서 40℃에서 건조시켜, 표제 화합물을 백색 고체 (95.0 mg, 96.5%)로서 수득하였다. 질량 스펙트럼 (m/z): 390.2 (M+H)+.
하기 화합물을 제조예에 기재된 상응하는 카르복실산 에스테르로부터, 본질적으로 실시예 1에 기재된 방법에 의해 제조하였다:
Figure pct00023
Figure pct00024
제조예 17
메틸 3-[[5-브로모-2-(트리플루오로메틸)벤조일]아미노]-2,4-디메틸-벤조에이트.
Figure pct00025
CH2Cl2 (6 ml) 중의 5-브로모-2-(트리플루오로메틸)벤조산 (1.0 g, 3.53 mmol)의 용액에 실온에서, 메틸 3-아미노-2,4-디메틸벤조에이트 (0.44 g, 2.47 mmol) 및 트리에틸아민 (1.0 ml, 7.06 mmol)을 첨가하였다. 10분 교반 후, 1-프로판포스폰산 시클릭 무수물 (EtOAc 중의 50% 용액, 5.6 ml, 8.83 mmol)을 시린지를 통해 첨가하였다. 주위 온도에서 14시간 후, 반응 혼합물을 CH2Cl2로 희석하고, 물에 이어서 염수로 세척하였다. 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 20% EtOAc / 헥산을 사용하는 실리카 겔 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여, 표제 화합물을 백색 고체 (0.6 g, 39%)로서 수득하였다. 질량 스펙트럼 (m/z): 430.0 (M+H)+.
하기 화합물을 적절한 카르복실산 및 아민을 사용하여, 본질적으로 상기 제조예 17에 기재된 방법에 의해 제조하였다:
Figure pct00026
실시예 12
4-[[5-[3-(히드록시메틸)페닐]-2-(트리플루오로메틸)벤조일]아미노]-3,5-디메틸-벤조산.
Figure pct00027
반응식 4, 단계 C. 수성 2N NaOH (2.0 ml)를 THF (8.0 ml) 및 MeOH (2.0 ml) 중의 메틸 4-[[5-[3-(히드록시메틸)페닐]-2-(트리플루오로메틸)벤조일]아미노]-3,5-디메틸-벤조에이트 (0.09 g, 0.197 mmol)의 교반된 용액에 첨가하였다. 12시간 동안 실온에서 교반한 후, 반응 혼합물을 농축시키고, 0.1% TFA / 물/아세토니트릴 (10-90%)을 사용하는 정제용 HPLC에 의해 정제하여, 표제 화합물 (25.0 mg, 29.7%)을 수득하였다. 질량 스펙트럼 (m/z): 444.2 (M+H)+.
제조예 19
메틸 3-[(5-브로모-2-플루오로-벤조일)아미노]-2,4-디메틸-벤조에이트.
Figure pct00028
CH2Cl2 (5.0 ml) 중의 5-브로모-2-플루오로-벤조산 (0.5 g, 2.28 mol)의 용액에 실온에서, 메틸 3-아미노-2,4-디메틸벤조에이트 (0.38 g, 2.17 mol) 및 DIEA (1.17 g, 9.13 mol)를 첨가하였다. 10분 교반 후, 1-프로판포스폰산 시클릭 무수물 (EtOAc 중의 50% 용액, 2.0 ml, 3.42 mol)을 시린지를 통해 첨가하였다. 주위 온도에서 16시간 후, 반응 혼합물을 물로 희석하고, CH2Cl2로 추출하였다. 합한 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 22% EtOAc를 사용하는 실리카 겔 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여, 표제 화합물을 회백색 고체 (0.80 g, 93%)로서 수득하였다. 질량 스펙트럼 (m/z): 380.0 (M+H)+.
하기 화합물을 적절한 카르복실산 및 아민을 사용하여, 본질적으로 제조예 19에 상기 기재된 방법에 의해 제조하였다:
Figure pct00029
실시예 13
3-[[2-플루오로-5-[3-(히드록시메틸)페닐]벤조일]아미노]-2,4-디메틸-벤조산.
Figure pct00030
수성 4N NaOH (5.0 ml)를 THF (5.0 ml) 및 t-부탄올 (5.0 ml) 중의 메틸 3-[[2-플루오로-5-[3-(히드록시메틸)페닐]벤조일]아미노]-2,4-디메틸-벤조에이트 (0.30 g, 0.737 mmol)의 교반된 용액에 첨가하였다. 16시간 동안 60℃에서 가열한 후, 반응 혼합물을 수성 1N HCl 용액을 사용하여 pH 1-2로 산성화시키고, CH2Cl2로 추출하였다. 합한 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 표제 화합물을 회백색 고체 (0.19 g, 65.5%)로서 수득하였다. 질량 스펙트럼 (m/z): 392.1 (M-H)+.
하기 화합물을 적절한 카르복실산 에스테르를 사용하여, 본질적으로 상기 실시예 13의 방법에 의해 제조하였다:
Figure pct00031
반응식 5
Figure pct00032
제조예 23
메틸 3-메틸-6-페닐-피리딘-2-카르복실레이트.
Figure pct00033
반응식 5, 단계 A. 1,4-디옥산 (17 mL) 및 물 (3.0 ml) 중의 메틸 6-클로로-3-메틸-피리딘-2-카르복실레이트 (1.0 g, 5.39 mmol), 페닐보론산 (0.79 g, 6.47 mmol)의 용액에, K2CO3 (1.64 g, 11.8 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 15분 동안 아르곤으로 퍼징하고, PdCl2(dppf)·CH2Cl2 (131.9 mg, 0.162 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 5분 동안 아르곤으로 다시 퍼징하였다. 2시간 동안 110℃에서 가열한 후, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물로 희석하고, EtOAc로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을, 0-20% EtOAc / 헥산을 사용하는 실리카 겔 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여, 표제 화합물을 투명한 오일 (985.0 mg, 80.5%)로서 수득하였다. 질량 스펙트럼 (m/z): 228.0 (M-H)+.
제조예 24
3-메틸-6-페닐-피리딘-2-카르복실산.
Figure pct00034
반응식 5, 단계 B. 수성 1N NaOH (8.7 ml)를 THF (5.0 ml) 및 MeOH (5.0 ml) 중의 메틸 6-클로로-3-메틸-피리딘-2-카르복실레이트 (985 mg, 4.33 mmol)의 교반된 용액에 첨가하였다. 혼합물을 3시간 동안 주위 온도에서 교반하고, 감압 하에 농축시키고, 1N HCl을 사용하여 pH 3으로 산성화시켰다. 생성된 침전물을 여과에 의해 단리하고, 물로 세척하고, 진공 오븐에서 40℃에서 건조시켜, 표제 화합물 (685.0 mg, 74.1%)을 수득하였다. 질량 스펙트럼 (m/z): 214.0 (M-H)+.
제조예 25
메틸 2,4-디메틸-3-[(3-메틸-6-페닐-피리딘-2-카르보닐)아미노]벤조에이트.
Figure pct00035
반응식 5, 단계 C. CH2Cl2 (8 ml) 중의 3-메틸-6-페닐-피리딘-2-카르복실산 (342.0 mg, 1.60 mmol)의 용액에 실온에서, 메틸 3-아미노-2,4-디메틸-벤조에이트 (287.4 mg, 1.60 mmol) 및 DIEA (699.3 mg, 4.01 mmol)를 첨가하였다. 10분 동안 교반한 후, 1-프로판포스폰산 시클릭 무수물 (EtOAc 중의 50% 용액, 1.22 g, 1.92 mmol)을 시린지를 통해 첨가하였다. 50℃에서 15시간 후, 반응 혼합물을 CH2Cl2/ TBME로 연화처리하고, 생성된 침전물을 여과에 의해 단리하여, 표제 화합물을 백색 분말 (0.41 g, 68%)로서 수득하였다. 질량 스펙트럼 (m/z): 375.2 (M+H)+.
실시예 15
2,4-디메틸-3-[(3-메틸-6-페닐-피리딘-2-카르보닐)아미노]벤조산.
Figure pct00036
반응식 5, 단계 D. THF (3.0 ml), MeOH (3.0 ml), 및 H2O (1.0 ml) 중의 메틸 2,4-디메틸-3-[(3-메틸-6-페닐-피리딘-2-카르보닐)아미노]벤조에이트 (0.28 g, 0.75 mmol)의 용액에, LiOH·H2O (0.157 g, 3.75 mmol)를 첨가하였다. 1시간 동안 50℃에서 가열한 후, 반응 혼합물을 pH ~6으로 산성화시켰다. 수성 층을 고체 NaCl로 포화시키고, EtOAc (4 x 20 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 디에틸 에테르로 연화처리하여, 표제 화합물을 백색 고체 (0.231 g, 85.7%)로서 수득하였다. 질량 스펙트럼 (m/z): 361.2 (M+H)+.
2,4-디메틸-3-[(3- 메틸 -6-페닐-피리딘-2-카르보닐)아미노]벤조산 ( 실시예 15)의 대안적 합성.
반응식 6
Figure pct00037
반응식 6, 단계 A. 3-메틸피리딘-2-카르보니트릴 (16.8 g, 139 mmoles), 메틸렌 클로라이드 (70 mL), 및 메틸트리옥소레늄 (VII) (1.42 g, 5.57 mmol)을 함유하는 둥근 바닥 플라스크에, 과산화수소 (24 mL, 279 mmoles)를 천천히 첨가하였다. 혼합물을 밤새 및 추가의 24시간 동안 교반하였다. 교반을 정지시키고, 층을 분리하였다. 유기 층을 무수 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 TBME (150 mL)로 연화처리하고, 고체를 여과하고, 진공 하에 건조시켜, 3-메틸-1-옥시도-피리딘-1-윰-2-카르보니트릴을 황색 고체 (16.2 g, 86.7%)로서 수득하였다. 질량 스펙트럼 (m/z): 135.0 (M+H)+.
반응식 6, 단계 B. 둥근 바닥 플라스크에, 3-메틸-1-옥소-피리딘-2-카르보니트릴 (16.2 g, 120.77 mmoles), 톨루엔 (8 mL), 및 포스포릴 클로라이드 (16.83 mL; 181.2 mmoles)를 첨가하였다. 혼합물을 90분 동안 90℃에서 교반하고, 실온으로 냉각시키고, 수성 2M KH2PO4 (483 mL; 966 mmoles)에 적가하였다. 혼합물을 30분 동안 교반하고, 층을 분리하였다. 유기 층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 6-클로로-3-메틸-피리딘-2-카르보니트릴로 농축시켰다: 질량 스펙트럼 (m/z): 153.0 (M+H)+. 페닐보론산 (17.94 g, 144.9 mmoles), 톨루엔 (130 mL), 탄산나트륨 (190.2 g, 362.31 mmoles), 비스(트리페닐포스핀)팔라듐(II) 클로라이드 (856 mg; 1.21 mmoles)를 이 조 물질에 첨가하였다. 혼합물을 1시간 동안 80℃에서 교반하고, 실온으로 냉각시켰다. 층을 분리하고, 유기 층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 물질을 20-100% 메틸렌 클로라이드 / 헥산을 사용하는 실리카 겔 크로마토그래피 (400 g ISCO® 카트리지)에 의해 정제하여, 3-메틸-6-페닐-피리딘-2-카르보니트릴 (6.7 g, 28.6%)을 수득하였다. 질량 스펙트럼 (m/z): 195.1 (M+H)+.
반응식 6, 단계 C. 에탄올 (30 mL) 중의 3-메틸-6-페닐-피리딘-2-카르보니트릴 (6.10 g, 31.41 mmoles)의 연황색 현탁액에, 수성 18N 수산화나트륨 (10.7 mL, 188.43 mmoles) 및 물 (10.98 mL)을 첨가하였다. 황색 현탁액을 18시간 동안 100℃에서 가열하고, 22℃로 냉각시켰다. 혼합물을 물 (100 mL)로 희석하고, 수성 12M HCl (18.6 mL, 219.8 mmoles)로 중화시켜 pH ~ 1을 수득하였다. 고체를 여과하고, 물로 세척하고, 진공 하에 45℃에서 건조시켜, 3-메틸-6-페닐-피리딘-2-카르복실산을 백색 고체 (6.50 g, 94.2%)로서 수득하였다. 질량 스펙트럼 (m/z): 214.1 (M+H)+.
반응식 6, 단계 D. 3-메틸-6-페닐-피리딘-2-카르복실산 (5.52 g, 25.89 mmoles)에, 티오닐 클로라이드 (18.9 mL, 258.9 mmoles)를 22℃에서 첨가하였다. 황색 용액을 8시간 동안 22℃에서 교반하고, 농축시켜 3-메틸-6-페닐-피리딘-2-카르보닐 클로라이드를 담갈색 고체 (7.0 g, 25 mmoles)로서 수득하였다. 이 물질을 THF (70 mL)로 희석하고, THF (35 mL) 중의 메틸 3-아미노-2,4-디메틸-벤조에이트 (4.54 g, 25.32 mmoles)의 용액으로 질소 하에 22℃에서 처리하였다. 피리딘 (6.1 mL, 75.97 mmoles)을 천천히 첨가하고, 반응 혼합물을 45분 동안 교반하였다. 현탁액을 여과하고, 고체를 EtOAc로 헹구고, 여과물을 갈색 오일로 농축시켰다. 오일을 물 (50 mL)로 처리하고, 10분 동안 초음파 조에 두었다. 현탁액을 여과하고, 고체를 물로 세척하고 건조시켜, 메틸 2,4-디메틸-3-[(3-메틸-6-페닐-피리딘-2-카르보닐)아미노]벤조에이트를 담갈색 고체 (9.81 g, 95.8%)로서 수득하였다. 질량 스펙트럼 (m/z): 375.1 (M+H)+.
반응식 6, 단계 E. THF (90 mL) 및 MeOH (36 mL) 중의 메틸 2,4-디메틸-3-[(3-메틸-6-페닐-피리딘-2-카르보닐)아미노]벤조에이트 (9.00 g, 23.80 mmoles)의 용액에, 수성 1M NaOH 용액 (71.4 mL, 71.4 mmoles)을 첨가하였다. 혼합물을 4시간 동안 50℃에서 가열하고, 22℃로 냉각시키고, 농축시켜, 유기 용매를 제거하였다. 수성 잔류물을 물 (50 mL)로 희석하고, EtOAc (20 mL)로 세척하고, 10% 수성 HCl 용액 (13.5 mL, 40.4 mmoles)을 사용하여 최종 pH ~ 3으로 산성화시켰다. 고체를 여과하고, 물로 세척하고, 아세톤/물로부터 재결정화하고, 진공 오븐에서 18시간 동안 45℃에서 건조시켜, 표제 화합물을 회백색 고체 (6.20 g, 72.3%)로서 수득하였다. 질량 스펙트럼 (m/z): 361.1 (M+H)+.
반응식 7
Figure pct00038
제조예 26
메틸 3-[[6-(4-클로로페닐)-3-메틸-피리딘-2-카르보닐]아미노]-2,4-디메틸-벤조에이트.
반응식 7, 단계 A. CH2Cl2 (4 mL) 중의 6-클로로-3-메틸-피리딘-2-카르복실산 (0.8 g, 4.6 mmol)의 용액에 실온에서, 메틸 3-아미노-2,4-디메틸-벤조에이트 (0.84 g, 4.6 mmol) 및 TEA (945.0 mg, 9.3 mmol)를 첨가하였다. 10분 교반 후, 1-프로판포스폰산 시클릭 무수물 (EtOAc 중의 50% 용액, 2.97 g, 9.3 mmol)을 시린지를 통해 첨가하였다. 35℃에서 2시간 후, 반응 혼합물을 포화 NaHCO3 용액으로 희석하고, CH2Cl2로 추출하였다. 합한 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 10% EtOAc / 헥산으로 용리하는 실리카 겔 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여, 메틸 3-[(6-클로로-3-메틸-피리딘-2-카르보닐)아미노]-2,4-디메틸-벤조에이트를 무색 오일 (1.1 g, 72%)로서 수득하였다. 질량 스펙트럼 (m/z): 333.3 (M+H)+.
반응식 7, 단계 B. 1,4-디옥산 (5.0 ml) 및 H2O (1.0 ml) 중의 메틸 3-[(6-클로로-3-메틸-피리딘-2-카르보닐)아미노]-2,4-디메틸-벤조에이트 (230.0 mg, 0.692 mmol)의 용액에, (4-클로로페닐)보론산 (120.0 mg, 0.761 mmol)을 첨가한 다음, Na2CO3 (220.0 mg, 2.08 mmol) 및 PdCl2(dppf)·CH2Cl2 (60.0 mg, 0.069 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 5분 동안 아르곤으로 퍼징한 다음, 100℃에서 가열하였다. 14시간 후, 반응물을 실온으로 냉각시키고, 물로 희석하고, EtOAc로 추출하였다. 합한 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 50% EtOAc / 헥산을 사용하는 실리카 겔 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여, 표제 화합물 (0.17 g, 60.7%)을 수득하였다.
하기 화합물을 적절한 카르복실산 에스테르 및 보론산을 사용하여, 본질적으로 제조예 26에 상기 기재된 방법에 의해 제조하였다:
Figure pct00039
Figure pct00040
실시예 16
3-[[6-(4-클로로페닐)-3-메틸-피리딘-2-카르보닐]아미노]-2,4-디메틸-벤조산.
반응식 7, 단계 C. 수성 1N NaOH (2.0 ml)를 THF (8.0 ml) 및 MeOH (2.0 ml) 중의 메틸 3-[[6-(4-클로로페닐)-3-메틸-피리딘-2-카르보닐]아미노]-2,4-디메틸-벤조에이트 (0.17 g, 0.41 mmol)의 교반된 용액에 첨가하였다. 12시간 동안 40℃에서 가열한 후, 반응 혼합물을 수성 1N HCl 용액을 사용하여 pH 1-2로 산성화시켰다. 생성된 침전물을 여과하고, 물로 세척하고, 0.1% TFA / 물/아세토니트릴을 사용하는 정제용 HPLC에 의해 정제하여, 표제 화합물을 백색 고체 (155 mg, 95.9%)로서 수득하였다. 질량 스펙트럼 (m/z): 395.1 (M+H)+.
실시예 17
3-[[6-(3-클로로페닐)-3-메틸-피리딘-2-카르보닐]아미노]-2,4-디메틸-벤조산.
Figure pct00041
반응식 7, 단계 C. 수성 2N NaOH의 용액 (2.0 ml)을 THF (8.0 ml) 및 MeOH (2.0 ml) 중의 메틸 3-[[6-(1,3-벤조디옥솔-5-일)-3-메틸-피리딘-2-카르보닐]아미노]-2,4-디메틸-벤조에이트 (0.17 g, 0.416 mmol)의 교반된 용액에 0℃에서 첨가하였다. 2시간 동안 60℃에서 가열한 후, 반응 혼합물을 수성 1N HCl 용액을 사용하여 pH 1-2로 산성화시키고, CH2Cl2로 추출하였다. 합한 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜, 표제 화합물을 백색 고체 (0.104 g, 64%)로서 수득하였다. 질량 스펙트럼 (m/z): 395.2 (M+H)+.
하기 화합물을 적절한 카르복실산 에스테르를 사용하여, 본질적으로 실시예 17에 상기 기재된 방법에 의해 제조하였다:
Figure pct00042
실시예 22
3-[[6-[3-(히드록시메틸)페닐]-3-메틸-피리딘-2-카르보닐]아미노]-2,4-디메틸-벤조산.
Figure pct00043
반응식 7, 단계 C. 수성 2N NaOH의 용액 (2 ml)을 THF (10 mL) 중의 메틸 3-[[6-[3-(히드록시메틸)페닐]-3-메틸-피리딘-2-카르보닐]아미노]-2,4-디메틸-벤조에이트 (0.13 g, 0.32 mmol)의 교반된 용액에 0℃에서 첨가하였다. 2시간 동안 50℃에서 가열한 후, 반응 혼합물을 수성 1N HCl 용액을 사용하여 pH 1-2로 산성화시키고, 농축시켰다. 조 생성물을 5mM NH4OAc / 물/CH3CN의 10-90% 구배를 사용하는 정제용 HPLC에 의해 정제하여, 표제 화합물을 백색 고체 (0.122 g, 97%)로서 수득하였다. 질량 스펙트럼 (m/z): 391.12 (M+H)+.
하기 화합물을 적절한 카르복실산 에스테르를 사용하여, 본질적으로 실시예 22에 상기 기재된 방법에 의해 제조하였다:
Figure pct00044
반응식 8
Figure pct00045
3-[[6-[3-( 히드록시메틸 )페닐]-3- 메틸 -피리딘-2-카르보닐]아미노]-2,4-디메틸-벤조산 ( 실시예 22)의 대안적 합성.
반응식 8, 단계 A. 진한 황산 (1.216 L, 21.9 mol)을 에탄올 (10 L) 중의 3-메틸피리딘-2-카르복실산 (1000 g, 7.3 mol)의 용액에 45분에 걸쳐 첨가하였다. 반응물을 19시간 동안 환류 하에 가열하고, 냉각시키고, 고체 중탄산나트륨 (~4 kg)으로 처리하여 pH~8을 수득하였다. 혼합물을 EtOAc (10 L)로 희석하고, 필터 셀을 통해 여과하였다. 용매를 감압 하에 제거하여, 에틸 3-메틸피리딘-2-카르복실레이트 (939 g, 78%)를 수득하였다. MS (m/z) 166 [M+H]+.
반응식 8, 단계 B. 30% 과산화수소 (1.52 L, 13.7 mol)를 HOAc (4.5 L) 중의 에틸 3-메틸피리딘-2-카르복실레이트 (452 g, 2.74 mol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 4.5시간 동안 60℃에서 가열한 다음, 밤새 실온으로 냉각시켰다. 반응물을 아황산나트륨/빙수 (10 L)에 붓고, 메틸렌 클로라이드 (2 x 4 L)로 추출하였다. 합한 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜, 에틸 3-메틸-1-옥시도-피리딘-1-윰-2-카르복실레이트를 연황색 오일 (502 g, 정량적)로서 수득하였다. MS (m/z) 182 [M+H]+.
반응식 8, 단계 C. 옥시염화인 (1.16 L, 12.4 mol)을 DMF (2.45 L, 24.8 mol) 및 메틸렌 클로라이드 (4.5 L)의 용액에 ~1시간에 걸쳐 0℃에서 적가하였다. 반응물을 0℃에서 30분 동안 교반한 다음, 에틸 3-메틸-1-옥시도-피리딘-1-윰-2-카르복실레이트 (450 g, 2.48 mol)를 첨가하였다. 반응물을 밤새 실온으로 천천히 가온되도록 하고, 반응 혼합물을 빙수 (10 L)에 부었다. pH를 10% 탄산나트륨을 사용하여 pH~8로 조정하고, 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. 층을 분리하고, 수성 층을 메틸렌 클로라이드 (2 x 2 L)로 추출하였다. 합한 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜, 에틸 6-클로로-3-메틸-피리딘-2-카르복실레이트를 베이지색 반고체 (425 g, 86%)로서 수득하였다. MS (m/z) 200 [M+H]+.
반응식 8, 단계 D. 에틸 6-클로로-3-메틸-피리딘-2-카르복실레이트 (750 g, 4.05 mol)를 이소프로판올 (14 L) 중의 KOH (272 g, 4.84 mol)의 용액에 ~20분에 걸쳐 여러 부분으로 첨가하였다. 혼합물을 2시간 동안 교반하고, 여과하고, 이소프로판올 (500 mL) 및 헵탄 (2 L)으로 순차적으로 세척하였다. 고체를 진공에서 48시간 동안 50℃에서 건조시켜, 칼륨 6-클로로-3-메틸-피리딘-2-카르복실레이트를 백색 고체 (767 g, 97%)로서 수득하였다. MS (m/z) 210 [M+H]+.
반응식 8, 단계 E. 고체 BOP-Cl (662.9 g, 2.604 mol)을 DMF (4.75 L) 중의 칼륨 6-클로로-3-메틸-피리딘-2-카르복실레이트 (300 g, 1.431 mol)의 혼합물에 첨가하였다. ~5℃에서의 온화한 발열 후, 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. 메틸 3-아미노-2,4-디메틸-벤조에이트 히드로클로라이드 (277.7 g, 1.288 mol) 및 디이소프로필에틸아민 (950 mL, 5.438 mol)을 반응물에 순차적으로 첨가하였다. 혼합물을 밤새 교반하고, 물 (10 L) 및 얼음 (4 Kg)에 부었다. 1시간 동안 교반한 후, 혼합물을 여과하고, 고체를 물로 세척하고, 진공에서 12시간 동안 50℃에서 건조시켰다. 고체를 1시간 동안 헵탄 (12 L) 중에 슬러리화하고, 여과하고, 진공에서 50℃에서 건조시켜, 메틸 3-[(6-클로로-3-메틸-피리딘-2-카르보닐)아미노]-2,4-디메틸-벤조에이트 (430 g, 90%)를 수득하였다. MS (m/z) 333 [M+H]+.
반응식 8, 단계 F. 2 M Na2CO3 (1.13 L, 2.253 mol)을 디옥산 (2.5 L) 중의 메틸 3-[(6-클로로-3-메틸-피리딘-2-카르보닐)아미노]-2,4-디메틸-벤조에이트 (250 g, 0.751 mol) 및 3-(히드록시메틸)페닐 보론산 (137 g, 0.902 mol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 40℃로 가온하고, 1시간 동안 질소의 스트림으로 탈기시켰다. 팔라듐 비스트리페닐포스핀 디클로라이드 (26.4 g, 0.0376 mol)를 첨가하고, 반응물을 추가의 20분 동안 질소의 스트림으로 탈기시켰다. 반응물을 1.5시간 동안 환류 하에 가열하고, 실온으로 냉각시키고, 규조토를 통해 여과하고, 감압 하에 농축시켜 유기 용매를 제거하였다. 수성 혼합물을 EtOAc (2 x 2 L)로 추출하였다. 합한 유기 층을 포화 염수로 추출하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 이 잔류물을 톨루엔 (1.5L) 중에 용해시키고, 실리카 겔 (2 kg) 상에 로딩하였다. 칼럼을 0-50% EtOAc / 헵탄의 구배로 용리하였다. 생성물 분획을 베이지색 고체 (~300 g)로 농축시켰다. 고체를 2-메틸테트라히드로푸란 (2.5 L) 중에 용해시키고, 메르캅토프로필 실리카 겔로 처리하고, 2시간 동안 교반하면서 50℃에서 가열하고, 실온으로 밤새 냉각시켰다. 혼합물을 여과하고, 실리카 겔을 EtOAc (3 L)로 헹구었다. 용매를 감압 하에 제거하여, 백색 고체 (297 g)를 수득하였고, 이를 이소프로판올 (1.5 L)로 희석하고, 투명한 용액을 수득할 때까지 환류 하에 가열하였다. 용액을 밤새 냉각시키고, 침전물을 여과에 의해 단리하고, 진공 오븐에서 50℃에서 건조시켜, 메틸 3-[[6-[3-(히드록시메틸)페닐]-3-메틸-피리딘-2-카르보닐]아미노]-2,4-디메틸-벤조에이트 (256 g, 84%)를 수득하였다. MS (m/z) 405[M+H]+.
반응식 8, 단계 G. 수산화칼륨 (86 g, 1.537 mol, 3 당량)을 MeOH (2 L) 중의 메틸 3-[[6-[3-(히드록시메틸)페닐]-3-메틸-피리딘-2-카르보닐]아미노]-2,4-디메틸-벤조에이트 (207 g, 0.512 mol)의 용액에 첨가하였다. 반응물을 16시간 동안 환류 하에 가열하고, 실온으로 냉각시키고, 감압 하에 농축 건조시켰다. 잔류물을 물 (2 L)과 TBME 사이에 분배하였다. 수성 층을 10% HCl을 사용하여 pH~2로 조정하고, 침전물을 여과하고, 물 (1 L) 및 헵탄 (1 L)으로 세척하고, 진공에서 50℃에서 건조시켰다 (197 g, 98%). 고체를 또 다른 실행으로부터의 물질과 합하고 (총 226 g), 2시간 동안 에탄올 (2 L) 중에서 환류시켰다. 실온으로 냉각시킨 후, 고체를 여과하고, 진공에서 16시간 동안 50℃에서 건조시켜, 표제 화합물 (211 g)을 수득하였다. MS (m/z) 391[M+H]+.
실시예 25
4-[[6-(1,3-벤조디옥솔-5-일)-3-메틸-피리딘-2-카르보닐]아미노]-3,5-디메틸-벤조산.
Figure pct00046
반응식 4, 단계 C. 물 (1.0 ml) 중의 수성 LiOH (50 mg, 1.18 mmol)의 용액에, THF (2.0 ml) 및 MeOH (2.0 ml) 중의 메틸 4-[[6-(1,3-벤조디옥솔-5-일)-3-메틸-피리딘-2-카르보닐]아미노]-3,5-디메틸-벤조에이트 (240.0 mg, 0.573 mmol)를 첨가하였다. 주위 온도에서 3시간 후, 반응 혼합물을 수성 1N HCl 용액을 사용하여 pH 1-2로 산성화시키고, EtOAc로 추출하였다. 합한 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 디에틸 에테르로부터 결정화하여, 표제 화합물 (0.2 g, 86.4%)을 수득하였다. MS (m/z): 405.2 (M+1)+.
반응식 9
Figure pct00047
제조예 39
에틸 4-아미노-3,5-디메틸-피리딘-2-카르복실레이트.
반응식 9, 단계 A. 아세트산 (8 ml) 중의 3,5-디메틸피리딘 (20.0 g, 186.65 mmol)의 용액에 실온에서, 과산화수소 (60.0 ml, 1.96 mol)를 첨가하였다. 24시간 동안 70℃에서 가열한 후, 반응 혼합물을 물로 희석하고, 5% MeOH:CH2Cl2로 추출하였다. 유기 층을 합하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 10% MeOH / CH2Cl2를 사용하는 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제하여, 3,5-디메틸-1-옥시도-피리딘-1-윰을 회백색 분말 (12.2 g, 53.1%)로서 수득하였다. 질량 스펙트럼 (m/z): 124.1 (M+1)+.
반응식 9, 단계 B. 질산 (20.0 ml, 463.08 mmol)에, 황산 (60 ml, 1.13 mol)을 0℃에서 천천히 첨가한 다음, 3,5-디메틸-1-옥시도-피리딘-1-윰 (8.0 g, 64.96 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 6시간 동안 70℃로 가열하고, 물로 희석하고, 5% MeOH:CH2Cl2로 추출하였다. 유기 층을 합하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 10% MeOH / CH2Cl2를 사용하는 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제하여, 3,5-디메틸-4-니트로-1-옥시도-피리딘-1-윰 (3.8 g, 34.8%)을 수득하였다. 질량 스펙트럼 (m/z): 169.09 (M+1)+.
반응식 9, 단계 C. 아세토니트릴 (30 ml) 중의 3,5-디메틸-4-니트로-1-옥시도-피리딘-1-윰 (3.5 g, 20.69 mmol) 및 시안화아연 (4.86 g, 41.38 mmol)의 용액에, N,N-디메틸카르바모일 클로라이드 (2.86 ml, 31.04 mmol)를 아르곤 하에 적가하였다. 16시간 동안 100℃에서 가열한 후, 반응 혼합물을 빙수로 희석하고, EtOAc로 추출하였다. 유기 층을 합하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 20% EtOAc / 헥산을 사용하는 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제하여, 2종의 화합물을 수득하였다: 3,5-디메틸-4-니트로-피리딘-2-카르보니트릴 (0.47 g, 12.8%). 1H NMR (300.16 MHz, CDCl3): δ 8.58 (s, 1H), 2.52 (s, 3H), 2.39 (s, 3H) 및 4-클로로-3,5-디메틸-피리딘-2-카르보니트릴 (1.05 g, 30.5%). 질량 스펙트럼 (m/z): 167.07 (M+1)+.
반응식 9, 단계 D. 에탄올 (2 ml) 중의 3,5-디메틸-4-니트로-피리딘-2-카르보니트릴 (0.45 g, 2.54 mmol)의 용액에, 진한 황산 (2 ml, 37.52 mmol)을 0℃에서 적가하였다. 18시간 동안 90℃에서 가열한 후, 반응 혼합물을 얼음에 붓고, EtOAc로 추출하였다. 유기 층을 합하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 40% EtOAc / 헥산을 사용하는 실리카 겔 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여, 에틸 3,5-디메틸-4-니트로-피리딘-2-카르복실레이트 (0.35 g, 61.5%)를 수득하였다. 질량 스펙트럼 (m/z): 225.1 (M+1)+.
반응식 9, 단계 E. 에탄올 (5 ml) 중의 에틸 3,5-디메틸-4-니트로-피리딘-2-카르복실레이트 (0.30 g, 1.34 mmol)의 용액에, 10% 활성탄 상 Pd (0.06 g)을 첨가하고, 혼합물을 10분 동안 아르곤으로 퍼징한 다음, 수소 기체를 첨가하였다. 5시간 후, 반응 혼합물을 규조토를 통해 여과하고, 에탄올로 세척하였다. 여과물을 감압 하에 농축시켜, 에틸 4-아미노-3,5-디메틸-피리딘-2-카르복실레이트 (0.24 g, 92.3%)를 수득하였다. 질량 스펙트럼 (m/z): 195.17 (M+1)+.
반응식 9, 단계 F. 아르곤으로 퍼징된, 1,4-디옥산 (6 ml) 중의 4-클로로-3,5-디메틸-피리딘-2-카르보니트릴 (0.6 g, 3.60 mmol) 및 페닐메틸아민 (0.58 g, 5.40 mmol)의 용액에, 탄산세슘 (3.52 g, 10.8 mmol), S-Phos (147.5 mg, 0.36 mmol), 및 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (329.7 mg, 0.60 mmol)을 첨가하였다. 4시간 동안 100℃에서 가열한 후, 반응 혼합물을 필터 셀을 통해 여과하고, EtOAc로 세척하였다. 여과물을 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 40% EtOAc / 헥산을 사용하는 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제하여, 4-(벤질아미노)-3,5-디메틸-피리딘-2-카르보니트릴 (0.61 g, 71.4%)을 수득하였다. 질량 스펙트럼 (m/z): 238.06 (M+1)+.
반응식 9, 단계 G. 에탄올 (5.0 ml) 중의 4-(벤질아미노)-3,5-디메틸-피리딘-2-카르보니트릴 (0.6 g, 2.53 mmol)의 용액에 0℃에서, 진한 황산 (5.0 ml)을 적가하고, 반응 혼합물을 실온으로 가온하였다. 32시간 동안 100℃에서 가열한 후, 반응 혼합물을 NaHCO3의 포화 용액으로 희석하고, EtOAc로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 10% MeOH / CH2Cl2를 사용하는 실리카 겔 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여, 표제 화합물 (0.4 g, 81.4%)을 수득하였다. 질량 스펙트럼 (m/z): 195.1 (M+1)+.
반응식 10
Figure pct00048
실시예 26
4-[[6-[3-(히드록시메틸)페닐]-3-메틸-피리딘-2-카르보닐]아미노]-3,5-디메틸-피리딘-2-카르복실산.
반응식 10, 단계 A. THF (15 mL) 중의 6-클로로-3-메틸-피리딘-2-카르복실산 (220 mg, 1.28 mmol)의 용액에 0℃에서 아르곤 하에, 이소부틸 클로로포르메이트 (192.6 mg, 1.41 mmol) 및 N-메틸모르폴린 (259.4 mg, 2.56 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 40분 동안 0℃에서 교반하고, THF (1.5 ml) 중의 에틸 4-아미노-3,5-디메틸-피리딘-2-카르복실레이트 (249 mg, 1.28 mmol)의 용액을 첨가하였다. 50℃에서 18시간 후, 반응 혼합물을 중성 알루미나로 패킹된 칼럼에 붓고, 40% EtOAc / 헥산으로 용리하는 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여, 에틸 4-[(6-클로로-3-메틸-피리딘-2-카르보닐)아미노]-3,5-디메틸-피리딘-2-카르복실레이트 (0.03 g, 7.6%)를 수득하였다. 질량 스펙트럼 (m/z): 348.0 (M+1)+.
반응식 10, 단계 B. 1,4-디옥산 (1.0 mL) 및 물 (0.5 ml) 중의 에틸 4-[(6-클로로-3-메틸-피리딘-2-카르보닐)아미노]-3,5-디메틸-피리딘-2-카르복실레이트 (30 mg, 0.09 mmol)의 용액에, (3-(히드록시메틸)페닐)보론산 (14.4 mg, 0.09 mmol)을 첨가한 다음, Cs2CO3 (56.2 mg, 0.172 mmol) 및 PdCl2(dppf)·CH2Cl2 (14.1 mg, 0.017 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 5분 동안 아르곤으로 퍼징한 다음, 100℃에서 가열하였다. 2시간 후, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 규조토를 통해 여과하고, EtOAc로 세척하였다. 여과물을 농축시키고, 잔류물을 50% EtOAc / 헥산을 사용하는 실리카 겔 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여, 에틸 4-[[6-[3-(히드록시메틸)페닐]-3-메틸-피리딘-2-카르보닐]아미노]-3,5-디메틸-피리딘-2-카르복실레이트를 무색 오일 (0.02 g, 60.8%)로서 수득하였다. 질량 스펙트럼 (m/z): 420.3 (M+1)+.
반응식 10, 단계 C. 물 (1 ml) 중의 수성 LiOH (18.01 mg, 0.429 mmol)의 용액에, THF (1 ml) 및 MeOH (1 ml) 중의 에틸 4-[[6-[3-(히드록시메틸)페닐]-3-메틸-피리딘-2-카르보닐]아미노]-3,5-디메틸-피리딘-2-카르복실레이트 (36 mg, 0.09 mmol)를 첨가하였다. 주위 온도에서 3시간 후, 반응 혼합물을 수성 1N HCl 용액을 사용하여 pH 1-2로 산성화시키고, EtOAc로 추출하였다. 합한 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 펜탄으로 연화처리하고, 여과하여, 표제 화합물 (0.02 g, 56.8%)을 수득하였다. 질량 스펙트럼 (m/z): 392.2 (M+1)+.
반응식 11
Figure pct00049
제조예 40
메틸 5-아미노-4,6-디메틸-피리딘-2-카르복실레이트.
반응식 11, 단계 A. 메틸렌 클로라이드 (40.0 ml) 중의 3-아미노-2,4-디메틸피리딘 (1 g, 8.19 mmol)의 용액에, 메틸렌 클로라이드 (10.0 ml) 중의 브로민 (0.55 ml, 40.64 mmol)의 용액을 5분에 걸쳐 0℃에서 첨가하였다. 주위 온도에서 12시간 후, 반응 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc로 추출하였다. 합한 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 10-100% EtOAc / 헥산을 사용하는 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제하여, 6-브로모-2,4-디메틸-피리딘-3-아민 (992 mg, 60.3%)을 수득하였다. 질량 스펙트럼 (m/z): 201.0 (M+1)+.
반응식 11, 단계 B. 100 ml 파르 오토클레이브에, 기계적으로 교반하면서, 6-브로모-2,4-디메틸-피리딘-3-아민 (0.99 g, 4.92 mmol), Pd(OAc)2 (112 mg, 0.50 mmol), PdCl2(dppf)·CH2Cl2 (331 mg, 0.6 mmol), CH3CN (30.0 ml), 트리에틸아민 (1.75 ml), 및 MeOH (20.0 ml)을 첨가하였다. 파르 오토클레이브를 밀봉하고, 퍼징하고, CO를 사용하여 689.5 kPa (100 psig)로 가압하였다. 혼합물을 3시간 동안 85℃에서 가열하였다. 혼합물을 주위 온도로 냉각시키고, 환기시켰다. 혼합물을 여과하고, MeOH로 헹구고, 감압 하에 농축 건조시켰다. 잔류물을, 0-5% 2M NH3/MeOH / 메틸렌 클로라이드 (용리액)의 구배를 사용하는 실리카 겔 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 생성물 분획을 합하고, 농축시켰다. 잔류물을 EtOAc로 연화처리하고, 여과하였다. 여과물을 농축시켜, 표제 화합물 (537.0 mg, 60.4%)을 수득하였다. 질량 스펙트럼 (m/z): 181.0 (M+1)+.
반응식 12
Figure pct00050
실시예 27
5-[[6-[3-(히드록시메틸)페닐]-3-메틸-피리딘-2-카르보닐]아미노]-4,6-디메틸-피리딘-2-카르복실산.
반응식 12, 단계 A. 1,4-디옥산 (17.9 ml) 및 H2O (2.9 ml) 중의 메틸 6-클로로-3-메틸-피리딘-2-카르복실레이트 (1.0 g, 5.39 mmol)의 용액에, (3-(히드록시메틸)페닐)보론산 (0.982 g, 6.47 mmol)을 첨가한 다음, K2CO3 (1.86 g, 13.47 mmol) 및 PdCl2(dppf)·CH2Cl2 (131.9 mg, 0.13 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 5분 동안 아르곤으로 퍼징한 다음, 110℃에서 가열하였다. 2시간 후, 반응물을 실온으로 냉각시키고, 물로 희석하고, EtOAc로 추출하였다. 합한 유기 층을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 70% EtOAc / 헥산을 사용하는 실리카 겔 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여, 메틸 6-[3-(히드록시메틸)페닐]-3-메틸-피리딘-2-카르복실레이트 (0.713 g, 51.4%)를 수득하였다. 질량 스펙트럼 (m/z): 258.0 (M+1)+.
반응식 12, 단계 B. CH2Cl2 (13.9 ml) 중의 메틸 6-[3-(히드록시메틸)페닐]-3-메틸-피리딘-2-카르복실레이트 (713.0 mg, 2.77 mmoles)의 용액에, 1H-이미다졸 (285.8 mg, 4.16 mmoles)을 첨가한 다음, t-부틸디메틸클로로실란 (516.7 mg, 3.33 mmoles)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반한 다음, 물, 포화 NaHCO3 용액, 및 염수로 순차적으로 세척하였다. 합한 유기 층을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜, 메틸 6-[3-[[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시메틸]페닐]-3-메틸-피리딘-2-카르복실레이트 (920.0 mg, 89.4%)를 수득하였다. 질량 스펙트럼 (m/z): 372.2 (M+1)+.
반응식 12, 단계 C. 수성 1N LiOH (207.8 mg, 4.95 mmol)의 용액을 THF (5.0 ml) 및 MeOH (5.0 mL) 중의 메틸 6-[3-[[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시메틸]페닐]-3-메틸-피리딘-2-카르복실레이트 (920.0 mg, 2.48 mmol)의 교반된 용액에 첨가하였다. 2시간 동안 주위 온도에서 교반한 후, 혼합물을 물로 희석하고, 10% MeOH/메틸렌 클로라이드로 추출하였다. 합한 유기 층을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 0-100% EtOAc / 헥산을 사용하는 실리카 겔 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여, 6-[3-[[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시메틸]페닐]-3-메틸-피리딘-2-카르복실산 (589.0 mg, 66.5%)을 수득하였다. 질량 스펙트럼 (m/z): 358.2 (M+1)+.
반응식 12, 단계 D. THF (8.4 ml) 중의 6-[3-[[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시메틸]페닐]-3-메틸-피리딘-2-카르복실산 (300.0 mg, 0.839 mmol)의 용액에 0℃에서, 이소부틸 클로로포르메이트 (128.6 mg, 0.923 mmol) 및 N-메틸모르폴린 (101.8 mg, 1.01 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 20분 동안 0℃에서 교반하고, THF (2.0 ml) 중의 메틸 5-아미노-4,6-디메틸-피리딘-2-카르복실레이트 (151.2 mg, 0.839 mmol)의 용액을 첨가하였다. 반응 혼합물을 주위 온도로 가온하였다. 12시간 후, 반응 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc로 추출하였다. 합한 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 0-40% EtOAc / 헥산을 사용하는 실리카 겔 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여, 메틸 5-[[6-[3-[[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시메틸]페닐]-3-메틸-피리딘-2-카르보닐]아미노]-4,6-디메틸-피리딘-2-카르복실레이트 (192 mg, 44%)를 수득하였다. 질량 스펙트럼 (m/z): 520.2 (M+1)+.
반응식 12, 단계 E. THF (2.0 ml) 중의 메틸 5-[[6-[3-[[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시메틸]페닐]-3-메틸-피리딘-2-카르보닐]아미노]-4,6-디메틸-피리딘-2-카르복실레이트 (190 mg, 0.366 mmol)의 용액에, THF 중의 1.0 M Bu4NF (0.548 ml, 0.548 mmol)를 0℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 주위 온도로 서서히 가온하였다. 2시간 후, 반응 혼합물을 빙수로 희석하고, EtOAc로 추출하였다. 합한 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 0-40% EtOAc / 헥산을 사용하는 실리카 겔 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여, 메틸 5-[[6-[3-(히드록시메틸)페닐]-3-메틸-피리딘-2-카르보닐]아미노]-4,6-디메틸-피리딘-2-카르복실레이트 (133.0 mg, 89.8%)를 수득하였다. 질량 스펙트럼 (m/z): 406.2 (M+1)+.
반응식 12, 단계 F. 수성 1N NaOH (0.64 ml)의 용액을 THF (2.0 ml) 및 MeOH (2.0 ml) 중의 메틸 5-[[6-[3-(히드록시메틸)페닐]-3-메틸-피리딘-2-카르보닐]아미노]-4,6-디메틸-피리딘-2-카르복실레이트 (130.0 mg, 0.32 mmol)의 교반된 용액에 첨가하였다. 주위 온도에서 2시간 후, 반응 혼합물을 수성 1N HCl 용액을 사용하여 pH 1-2로 산성화시켰다. 생성된 침전물을 여과하고, 물로 세척하고, 진공 오븐에서 1시간 동안 40℃에서 건조시켜, 표제 화합물을 백색 고체 (88.0 mg, 70.0%)로서 수득하였다. 질량 스펙트럼 (m/z): 392.2 (M+1)+.
제조예 41
메틸 4-[[6-클로로-3-(트리플루오로메틸)피리딘-2-카르보닐]아미노]-3,5-디메틸-벤조에이트.
Figure pct00051
CH2Cl2 (8.0 ml) 중의 6-클로로-3-(트리플루오로메틸)피리딘-2-카르복실산 (0.40 g, 1.77 mmol)의 용액에 실온에서, 메틸 4-아미노-3,5-디메틸벤조에이트 (0.318 mg, 1.77 mmol) 및 디이소프로필에틸아민 (0.573 g, 4.43 mmol)을 첨가하였다. 10분 동안 혼합물을 교반한 후, 1-프로판포스폰산 시클릭 무수물 (EtOAc 중의 50% 용액, 1.35 g, 2.13 mmol)을 시린지를 통해 첨가하였다. 주위 온도에서 36시간 후, 반응 혼합물을 7일 동안 50℃에서 가열하였다. 반응 혼합물을 농축시키고, MeOH로 연화처리하여, 표제 화합물을 백색 고체 (456.0 mg, 66.5%)로서 수득하였다. 질량 스펙트럼 (m/z): 387.2 (M+1).
하기 화합물을 적절한 카르복실산 및 아민을 사용하여, 본질적으로 제조예 41에 상기 기재된 방법에 의해 제조하였다:
Figure pct00052
반응식 13
Figure pct00053
제조예 43
메틸 4-[[6-(3-메톡시페닐)-3-메틸-피리딘-2-카르보닐]아미노]-3,5-디메틸-벤조에이트.
Figure pct00054
반응식 13, 단계 A. 디옥산 (4 mL) 및 물 (1 mL) 중의 메틸 4-[(6-클로로-3-메틸-피리딘-2-카르보닐)아미노]-3,5-디메틸-벤조에이트 (200 mg, 1.18 mmol), (3-메톡시페닐)보론산 (198 mg, 1.3 mmol), 탄산칼륨 (170 mg, 1.23 mmol), 및 PdCl2(dppf)·CH2Cl2 (20 mg)의 혼합물을 마이크로웨이브 반응기에서 120분 동안 110℃로 가열하였다. 혼합물을 소수성 프릿을 통해 여과하고, 메틸렌 클로라이드 (2 x 10 mL)로 세척하였다. 여과물을 농축시키고, 15% 에틸 아세테이트 / 헥산을 사용하는 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제하여, 메틸 4-[[6-(3-메톡시페닐)-3-메틸-피리딘-2-카르보닐]아미노]-3,5-디메틸-벤조에이트를 생성물 (194 mg, 41% 수율)로서 수득하였다. 질량 스펙트럼 (m/z): 405.2 (M+H)+.
하기 화합물을 적절한 카르복실산 에스테르 및 보론산을 사용하여, 본질적으로 제조예 43에 상기 기재된 방법에 의해 제조하였다:
Figure pct00055
Figure pct00056
실시예 28
4-[[6-(3-메톡시페닐)-3-메틸-피리딘-2-카르보닐]아미노]-3,5-디메틸-벤조산.
Figure pct00057
반응식 13, 단계 B. MeOH (3 mL), THF (2 mL), 및 1N NaOH (1.2 mL) 중의 메틸 4-[[6-(3-메톡시페닐)-3-메틸-피리딘-2-카르보닐]아미노]-3,5-디메틸-벤조에이트 (194 mg, 0.479 mmol)의 슬러리를 3박에 걸쳐 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 1N HCl (1.2 mL)로 처리하고, 물로 희석하였다. 고체를 진공 여과에 의해 수집하고, 감압 하에 건조시켜, 표제 화합물 (172 mg, 92% 수율)을 수득하였다. 질량 스펙트럼 (m/z): 391.2 (M+H)+.
하기 화합물을 적절한 카르복실산 에스테르를 사용하여, 본질적으로 실시예 28에 상기 기재된 방법에 의해 제조하였다:
Figure pct00058
반응식 14
Figure pct00059
실시예 36
3,5-디메틸-4-[(2-페닐퀴놀린-4-카르보닐)아미노]벤조산.
반응식 14, 단계 A. CH2Cl2 (6.0 ml) 중의 2-페닐퀴놀린-4-카르복실산 (193.5 g, 0.776 mmol)의 용액에 0℃에서, 에틸 4-아미노-3,5-디메틸-벤조에이트 (150.0 g, 0.776 mmol), 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.338 ml, 1.94 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 10분 동안 교반하고, 1-프로판포스폰산 시클릭 무수물 (에틸 아세테이트 중의 50% 용액, 0.555 ml, 0.932 mmol)을 시린지를 통해 첨가하였다. 혼합물을 48시간 동안 주위 온도에서 교반하고, 물로 희석하고, EtOAc로 추출하였다. 합한 유기 층을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 CH2Cl2로 연화처리하고, 여과하여, 에틸 3,5-디메틸-4-[(2-페닐퀴놀린-4-카르보닐)아미노]벤조에이트를 백색 고체 (93.5 mg, 28.4%)로서 수득하였다. 질량 스펙트럼 (m/z): 425.2 (M+H)+.
반응식 14, 단계 B. 수성 1N NaOH (1.0 ml)의 용액을 THF (3.0 ml) 중의 에틸 3,5-디메틸-4-[(2-페닐퀴놀린-4-카르보닐)아미노]벤조에이트 (93.5 mg, 0.220 mmol)의 교반된 용액에 첨가하였다. 8시간 동안 50℃에서 가열한 후, 반응 혼합물을 수성 1N HCl 용액을 사용하여 pH 1-2로 산성화시켰다. 생성된 침전물을 여과하고, 물로 세척하고, 진공 오븐에서 1시간 동안 40℃에서 건조시켜, 표제 화합물을 백색 고체 (70.0 mg, 80.2%)로서 수득하였다. 질량 스펙트럼 (m/z): 397.2 (M+H)+.
반응식 15
Figure pct00060
제조예 51
에틸 4-[(2-클로로퀴놀린-4-카르보닐)아미노]-3,5-디메틸-벤조에이트.
Figure pct00061
반응식 15, 단계 A. CH2Cl2 (15 ml) 중의 2-클로로퀴놀린-4-카르복실산 (1.07 g, 5.17 mmol)의 용액에 0℃에서, 에틸 4-아미노-3,5-디메틸-벤조에이트 (1.00 g, 5.17 mmol), 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (2.26 ml, 12.94 mmol)을 첨가하였다. 10분 동안 반응 혼합물을 교반한 후, 1-프로판포스폰산 시클릭 무수물 (에틸 아세테이트 중의 50% 용액, 3.70 ml, 6.21 mmol)을 시린지를 통해 첨가하였다. 반응 혼합물을 24시간 동안 주위 온도에서 교반하고, 물로 희석하고, EtOAc로 추출하였다. 합한 유기 층을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 MeOH로 연화처리하고, 여과하였다. 여과물을 고 pH 역상 크로마토그래피 (0-100% 10mM 중탄산암모늄 / 물 (5% MeOH/CH3CN 포함))에 의해 정제하여, 표제 화합물을 백색 고체 (0.49 g, 25%)로서 수득하였다. 질량 스펙트럼 (m/z): 383.1 (M+H)+.
하기 화합물을 적절한 카르복실산 및 아민을 사용하여, 본질적으로 제조예 51에 상기 기재된 방법에 의해 제조하였다:
Figure pct00062
제조예 54
에틸 4-[[2-[3-(히드록시메틸)페닐]퀴놀린-4-카르보닐]아미노]-3,5-디메틸-벤조에이트.
Figure pct00063
반응식 15, 단계 B. 1,4-디옥산 (17.0 ml) 및 H2O (2.5 ml) 중의 에틸 4-[(2-클로로퀴놀린-4-카르보닐)아미노]-3,5-디메틸-벤조에이트 (0.49 g, 1.27 mmol)의 용액에, (3-(히드록시메틸)페닐)보론산 (231.9 mg, 1.53 mmol)을 첨가한 다음, K2CO3 (439.2 mg, 3.18 mmol) 및 PdCl2(dppf)·CH2Cl2 (103.9 mg, 0.0127 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 5분 동안 아르곤으로 퍼징한 다음, 110℃에서 가열하였다. 3시간 후, 혼합물을 냉각시키고, 물로 희석하고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 합한 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 40% 에틸 아세테이트 / 헥산을 사용하는 실리카 겔 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여, 표제 화합물 (0.42 g, 72.3%)을 수득하였다. 질량 스펙트럼 (m/z): 455.2 (M+H)+.
하기 화합물을 적절한 카르복실산 에스테르 및 보론산을 사용하여, 본질적으로 제조예 54에 상기 기재된 방법에 의해 제조하였다:
Figure pct00064
Figure pct00065
a) 1H NMR (400 MHz, DMSO): 10.23 (s, 1H), 8.37-8.36 (m, 1H), 8.32-8.30 (m, 1H), 8.12 (d, J= 1.9 Hz, 1H), 8.11-8.08 (m, 1H), 7.83-7.83 (m, 1H), 7.76-7.74 (m, 3H), 7.62-7.59 (m, 2H), 7.49 (t, J= 7.7 Hz, 1H), 7.38-7.36 (m, 1H), 5.29 (t, J= 5.7 Hz, 1H), 4.61-4.60 (m, 2H), 4.30 (q, J= 7.1 Hz, 2H), 2.39 (s, 6H), 1.31 (t, J= 7.1 Hz, 3H).
실시예 37
4-[[2-[3-(히드록시메틸)페닐]퀴놀린-4-카르보닐]아미노]-3,5-디메틸-벤조산.
Figure pct00066
반응식 15, 단계 C. 수성 1N NaOH (1.9 ml)의 용액을 THF (10.0 ml) 및 MeOH (3.0 ml) 중의 에틸 4-[[2-[3-(히드록시메틸)페닐]퀴놀린-4-카르보닐]아미노]-3,5-디메틸-벤조에이트 (0.42 g, 0.920 mmol)의 교반된 용액에 첨가하였다. 12시간 동안 40℃에서 가열한 후, 반응 혼합물을 수성 1N HCl 용액을 사용하여 pH 1-2로 산성화시켰다. 생성된 침전물을 여과하고, 물로 세척하고, 진공 오븐에서 1시간 동안 40℃에서 건조시켜, 표제 화합물을 백색 고체 (333.0 mg, 84.9%)로서 수득하였다. 질량 스펙트럼 (m/z): 427.2 (M+H)+.
하기 화합물을 적절한 카르복실산 에스테르를 사용하여, 본질적으로 실시예 37에 상기 기재된 방법에 의해 제조하였다:
Figure pct00067
Figure pct00068
제조예 61
메틸 3-[(3-브로모나프탈렌-1-카르보닐)아미노]-2,4-디메틸-벤조에이트.
Figure pct00069
CH3CN (10.0 ml) 중의 3-브로모나프탈렌-1-카르복실산 (0.42 g, 1.67 mmol) 및 메틸 3-아미노-2,4-디메틸벤조에이트 (0.30 g, 1.67 mmol)의 용액에 0℃에서, 삼염화인 (0.292 ml, 3.35 mmol)을 첨가하였다. 마이크로웨이브 반응기에서 1.5시간 동안 100℃에서 가열한 후, 반응 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc로 추출하였다. 합한 유기 층을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜, 표제 화합물을 회백색 발포체 (0.60 g, 86.7%)로서 수득하였다. 질량 스펙트럼 (m/z): 412.0 (M+H)+.
반응식 16
Figure pct00070
3-[[3-(3- 클로로페닐 )나프탈렌-1-카르보닐]아미노]-2,4-디메틸-벤조산 ( 실시예 43)의 대안적 제조.
반응식 16, 단계 A. 반응기를 10 L의 물 및 585 g (6.970 mol)의 중탄산나트륨으로 채웠다. 용액을 50℃로 가열하고, 15분 동안 질소로 스파징하였다. 500 g (1.991 mol)의 3-브로모-1-나프탈렌 카르복실산을 첨가하고, 혼합물을 75℃로 가열하였다. 4.47 g (19.9 mmol)의 아세트산팔라듐을 첨가하였다. 358 g (2.290 mol)의 3-클로로페닐보론산을 1시간에 걸쳐 50 g의 부분으로 첨가하였다. 2시간 동안 75℃에서 교반하였다. 25℃로 냉각시키고, 2 L의 물, 0.5 L의 25% 수성 수산화나트륨 및 1.5 L의 THF를 첨가하였다. 수용액을 2 x 2 L의 헵탄으로 세척하였다. 10 L의 THF 및 2.5 L의 에틸 아세테이트를 세척된 수용액에 첨가하였다. 890 g의 37% HCl을 첨가하여, pH가 대략 2가 되도록 하였다. 상을 분리하고, 수상을 2 L의 THF 및 0.5 L의 에틸 아세테이트의 혼합물로 추출하였다. 합한 유기 용액을 1 L의 염수로 세척하였다. 용액을 1시간 동안 20℃에서 100 g의 활성탄으로 처리하고, 혼합물을 규조토 상에서 여과하였다. 400 g의 금속 스캐빈징 실리카를 첨가하고, 현탁액을 50℃로 가열한 다음, 4시간 동안 50℃에서 교반하였다. 20℃로 냉각시키고, 실리카를 여과에 의해 제거하였다. 이러한 작업을 400 g 부분의 스캐빈저의 또 다른 충전으로 반복하였다. 20℃로 냉각시키고, 스캐빈저를 여과에 의해 제거하고, 용액을 감압 하에 증발 건조시켰다. 조 물질을 8 L의 THF 중에 용해시키고, 12 L의 헵탄을 첨가하였다. 용액을 900 g의 실리카의 패드 상에서 여과하고, 4 x 900mL의, THF 및 헵탄 2-3의 혼합물로 용리하였다. 여과물을 감압 하에 증발시켜, 현탁액을 수득하였다. 고체를 여과에 의해 수집하고, 4시간 동안 2-10 mBar 하에 50℃에서 건조시켜, 502 g (89%)의 3-(3-클로로페닐)나프탈렌-1-카르복실산을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 7.48 - 7.51 (m, 1 H), 7.56 (t, J = 8.1 Hz, 1 H), 7.61 - 7.69 (m, 2 H), 7.81- 7.83 (m, 1H), 7.92 (d, J = 2.2 Hz, 1 H), 8.10 - 8.13 (m, 1 H), 8.42 (d, J = 2.2 Hz, 1 H), 8.54 (d, J = 2.2 Hz, 1 H), 8.85 (d, J = 8.4 Hz, 1 H), 13.35 (br s, 1 H).
반응식 16, 단계 B. 20 L 반응기를 485 g (1.715 mol)의 3-(3-클로로페닐)나프탈렌-1-카르복실산, 136 g의 피리딘 (1.715 mol) 및 4.85 L의 톨루엔으로 채웠다. 혼합물을 75℃로 가열하고, 306 g (2.573 mol)의 티오닐 클로라이드를 약 15분에 걸쳐 첨가하였다. 반응 혼합물을 3시간 동안 75℃에서 교반하고, 102 g (0.858 mol)의 티오닐 클로라이드를 첨가하여, 남아있는 출발 산을 소모시켰다. 반응 혼합물을 1시간 동안 교반한 후, 상부 층을 가만히 따라내고, 하부 폐기물 층을 75℃에서 폐기하였다. 102 g (0.858 mol)의 티오닐 클로라이드 및 34g (0.429 mol)의 피리딘을 첨가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 75℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 밤새 20-25℃로 유지하였다. 유기 층을 2 x 0.5 L의 물로 세척하였다. 2.425 L의 물 중의 370 g (1.715 mol)의 메틸 3-아미노-2,4-디메틸-벤조에이트의 용액을 반응기에 한 번에 첨가하였다. 4.850 L의 물 중의 859 g (8.577 mol)의 중탄산칼륨의 용액을 40분에 걸쳐 첨가하였다. 반응 혼합물을 2시간 동안 20-25℃에서 교반하였다. 4.850 L의 THF를 첨가하고, 모든 고체를 용해시킬 때까지 교반하였다. 하부 수성 상을 가만히 따라내고 폐기하였다. 상부 유기 상을 0.970 L의 물 중의 2.57 g의 Na2S-9H2O의 용액으로 세척하고, 수성 상을 폐기하였다. 유기 층을 0.970 L의 염수에 이어서, 0.970 L의 1N 염산, 및 최종적으로 0.970 L의 염수로 3회 세척하였다. 유기 상을 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 생성물 용액 (THF-톨루엔)을 감압 하에 농축시켜, THF를 제거하였다. 배치를 결정질 생성물로 시딩하고, 온도가 대략 1시간에 걸쳐 45℃에서 37℃로 감소되도록 하였다. 결정화가 진행됨에 따라, 1.94 L의 톨루엔을 첨가하고, 온도를 20℃로 낮추었다. 생성물을 2시간 교반 후에 여과에 의해 수집하였다. 생성물 케이크를 1.94 L의 TBME로 세척하고, 2-10 토르 하에 80℃에서 일정한 중량으로 건조시켰다. 고체를 0.970 L의 아세톤 중에 55℃에서 용해시키고, 1.940 L의 TBME를 첨가하였다. 용액을 1시간에 걸쳐 20℃로 냉각시켜, 생성물을 결정화하였다. 백색 결정질 고체를 20℃에서 2시간 교반한 후 여과에 의해 수집하고, 일정한 중량까지 2-10 토르 하에 80℃에서 건조시켰다. 물질을 디클로로메탄으로 용리된 실리카의 짧은 패드 (1.5kg, 3부) 상 크로마토그래피에 의해 정제하여, 442 g (58%)의 메틸 3-[[3-(3-클로로페닐)나프탈렌-1-카르보닐]아미노]-2,4-디메틸-벤조에이트를 백색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 2.41 (s, 3 H), 2.53 (s, 3 H), 3.85 (s, 3 H), 7.30 (d, J = 8.0 Hz, 1 H), 7.51 (d, J = 8.0 Hz, 1 H), 7.59 (d, J = 8.0 Hz, 1 H), 7.63 - 7.65 (m, 2 H), 7.69 (d, J = 8.0 Hz, 1 H), 7.90 (d, J = 8.0 Hz, 1 H), 8.02 (s, 1 H), 8.10 - 8.14 (m, 1H), 8.20 (s, 1 H), 8.37 - 8.40 (m, 1 H), 8.46 (s, 1 H), 10.20 (br s, 1 H).
반응식 16, 단계 C. 20 L 반응기를 178 g (3.176 mol)의 수산화칼륨 및 1.59 L의 물로 채웠다. 혼합물을 완전히 용해될 때까지 교반하였다. 4.70 L의 이소프로판올을 첨가하고, 용액을 65℃로 가열하였다. 1.88 L의 THF 중의 470 g (1.059 mol)의 메틸 3-[[3-(3-클로로페닐)나프탈렌-1-카르보닐]아미노]-2,4-디메틸-벤조에이트의 용액을 반응기에 약 1시간 내에 65℃에서 첨가하였다. 첨가 종료 후, 반응 혼합물을 2시간 동안 65℃에서 교반하였다. 23.5 g의 활성탄을 첨가하고, 혼합물을 1시간 동안 65℃에서 교반하였다. 혼합물을 20℃로 냉각시키고, 규조토 상에서 여과하였다. 케이크를 0.94 L의 이소프로판올에 이어서, 2x0.94 L의 물로 헹구었다. 용액을 감압 하에 농축시켜, 유기 용매를 제거하였다. 수용액을 10 L 반응기로 옮기고, 3.76 L의 물로 희석하였다. 0.95 L의 3 N HCl을 첨가함으로써 pH 3.0으로 산성화시켰다. 0.94 L의 이소프로판올을 첨가하고, 현탁액을 밤새 20℃에서 교반하였다. 생성물을 여과에 의해 수집하고, 2.82 L의 물로 세척하였다. 조 생성물을 주말에 걸쳐 50℃에서 건조시켰다. 건조된 고체를 20 L 반응기로 옮기고, 4.70 L의 아세톤을 첨가하고, 현탁액을 2시간 동안 환류 하에 가열하였다. 현탁액을 3시간에 걸쳐 20℃로 냉각시키고, 밤새 이 온도에서 유지하였다. 현탁액을 8℃로 냉각시키고, 1시간 동안 교반하였다. 생성물을 여과에 의해 수집하고, 케이크를 1.41 L의 아세톤으로 세척하였다. 밤새 2-10 토르 하에 50℃에서 건조시켜, 표제 화합물을 백색 고체 (378.0 g, 83% 수율)로서 수득하였다. 질량 스펙트럼 (m/z): 430.3 (M+H)+.
인간 EP1, EP2, EP3 및 EP4에 대한 시험관내 결합
hEP1 및 hEP4 막을 인간 EP1 (진뱅크 수탁 번호 AY275470) 또는 EP4 (진뱅크 수탁 번호 AY429109) 수용체를 안정하게 발현하는 재조합 HEK293 세포로부터 제조하였다. hEP2 및 hEP3 막을 EP2 (진뱅크 수탁 번호 AY275471) 또는 EP3 (이소형 VI: 진뱅크 수탁 번호 AY429108) 수용체 플라스미드로 일시적으로 형질감염된 HEK293 세포로부터 제조하였다. 동결된 세포 펠릿을 테플론/유리 균질화기를 사용하여 균질화 완충제 중에서 균질화하였다. 막 단백질을 분취하고, 드라이 아이스 상에서 급속 동결시킨 후에 -80℃에서 저장하였다. 균질화 완충제는 10 mM 트리스-HCl, pH 7.4, 250 mM 수크로스, 1 mM EDTA, 0.3 mM 인도메타신, 및 로슈 몰레큘라 바이오케미칼스(Roche Molecular Biochemicals)로부터 입수한, EDTA를 포함하는 플러스 컴플리트(plus Complete)TM (카탈로그 번호 1 697 498)를 함유하였다.
각 수용체에 대한 [3H]-PGE2 결합에 대한 Kd 값을 포화 결합 연구 또는 상동 경쟁에 의해 결정하였다. 화합물을 일련의 3배 희석물을 사용하여 96-웰 포맷에서 시험하여, 10-포인트 곡선을 생성하였다. 희석된 화합물을, 0.3 내지 0.5 nM [3H]-PGE2 (퍼킨엘머(PerkinElmer), 118 내지 180 Ci/mmol)의 존재 하에 25℃에서 90분 동안, 20 μg/웰 EP1, 10 μg/웰 EP2, 1 ug/웰 EP3 또는 10 내지 20 μg/웰 EP4 막과 함께 인큐베이션하였다. 결합 반응을 0.5mL 폴리스티렌 96-웰 딥-웰 플레이트를 사용하여, 200 μL MES 완충제 (KOH, 10 mM MgCl2 및 1 mM EDTA를 포함하는 10 mM MES pH 6.0) 중에서 수행하였다. 비-특이적 결합을 2 μM의 PGE2의 존재 및 부재 하의 결합을 비교함으로써 계산하였다. 막을 여과 (톰텍(TomTek) 수거기)에 의해 수거하고, 차가운 완충제 (KOH, 10 mM MgCl2를 포함하는 10 mM MES pH 6.0)로 4회 세척하고, 60℃ 오븐에서 건조시키고, 방사능을 탑카운트(TopCount) 검출기를 사용하여 분당 카운트 (CPM)로서 정량화하였다. 퍼센트 특이적 결합을, 2 uM의 PGE2의 존재 하의 결합에 대해 보정된, 임의의 억제제의 부재 하의 결합의 퍼센트로서 계산하였다. 데이터를 하기 제시된 바와 같이 4-파라미터 비선형 로지스틱 방정식 (어베이스(ABase) 방정식 205)을 사용하여 분석하였다: y = (A+((B-A)/(1+((C/x)^D)), 여기서 y = % 특이적 억제, A = 곡선의 하단; B = 곡선의 상단; C = 상대 IC50 = 상단에서 하단까지의 데이터의 범위에 기초하여 50% 억제를 유발하는 농도; D = 힐, 기울기 = 곡선의 기울기. IC50 값으로부터의 Ki 전환 (Ki = IC50/(1 + [L]/Kd), 여기서 [L]은 리간드 농도이다). 결과를 기하 평균 ± 표준 편차로 표현하였다; n = 독립적 결정의 수. 표준 편차를 SDlogKi x 기하 평균 x ln(10)인, 델타 방법에 의해 계산하였다.
본원의 실시예 1-43의 화합물을 본질적으로 상기 기재된 바와 같이 시험하였고, 이는 1 μM 미만의 hEP4에 대한 Ki 값을 나타낸다.
표 1: 인간 EP1, EP2, EP3 및 EP4에 대한 실시예 1의 시험관내 결합
Figure pct00071
표 1의 데이터는 실시예 1 및 실시예 22의 화합물이 hEP1, hEP2, 및 hEP3보다 hEP4에 대해 더 강하게 결합함을 입증하였으며, 이는 hEP4 수용체에 대한 선택성을 나타낸다.
시험관내 인간 EP4 기능적 길항제 활성
검정을 인간 EP4 수용체를 안정하게 발현하는 재조합 HEK293 세포에서 수행하였다. 세포주를, 10% 소 태아 혈청 (FBS), 1 mM 피루브산나트륨, 10 mM HEPES, 500 μg/ml 게네티신 및 2 mM L-글루타민이 보충된, 고 글루코스 및 피리독신 히드로클로라이드 (인비트로젠(Invitrogen))를 포함하는 DMEM 중에서 배양함으로써 유지하였다. 전면생장 배양물을 5% CO2를 함유하는 분위기 중에 37℃에서 성장시켰다. 세포를 2.5% 트립신-EDTA를 사용하여 수거하고, 동결 배지 (6% DMSO를 포함하는 FBS) 중에 107개 세포/mL로 현탁시키고, 분취물을 액체 질소 중에 저장하였다. 검정 직전에, 세포를 DMEM 중에서 해동시키고, 원심분리하고, cAMP 완충제 중에 재현탁시켰다.
EP4 길항제에 의한 PGE2-자극된 cAMP 생성의 억제를 HTRF를 사용하여 측정하였다; (시스바이오(Cisbio) 카탈로그 # 62AM4PEB). 4000개 세포와 등가인 분취물을 20분 동안 실온에서, EC80의 PGE2 (시그마(Sigma)로부터의 0.188 nM PGE2, 카탈로그 # P5640-10mg) 및 길항제를 함유하는 50 μL cAMP 검정 완충제와 함께 인큐베이션하였다. cAMP 검정 완충제는 500 mL HBSS (행크 평형 염 용액(Hank's Balanced Salt Solution)), 0.1% BSA, 20 mM HEPES 및 200 μM IBMX (시그마 I5879)를 함유하였다. CJ-042794 (4-{(1S)-1-[({5-클로로-2-[(4-플루오로페닐)옥시]페닐} 카르보닐)아미노]에틸}벤조산)은 양성 대조군으로서 역할을 하였다 (문헌 [Murase, A., et al., Life Sciences, 82:226-232 (2008)] 참조). cAMP 수준을 측정하기 위해, 용해 완충제 중의 cAMP-d2 접합체 및 항 cAMP-크립테이트 접합체를 1시간 동안 실온에서 처리된 세포와 함께 인큐베이션하였다. HTRF 신호를 엔비전(EnVision)® 플레이트 판독기 (퍼킨-엘머)를 사용하여 검출하여, 620 nm에 대한 665 nm에서의 형광의 비를 계산하였다. 미가공 데이터를 각 실험에 대해 생성된 cAMP 표준 곡선을 사용하여 cAMP 양 (pmole/웰)으로 전환시켰다. 데이터를 하기 제시된 바와 같이 4-파라미터 비선형 로지스틱 방정식 (어베이스 방정식 205)을 사용하여 분석하였다: y = (A+((B-A)/(1+((C/x)^D)))), 여기서 y = % 특이적 억제, A = 곡선의 하단; B = 곡선의 상단; C = 상대 IC50 = 상단에서 하단까지의 데이터의 범위에 기초하여 50% 억제를 유발하는 농도; D = 힐, 기울기 = 곡선의 기울기. 결과를 기하 평균 ± 표준 편차로 표현하였다; n = 독립적 결정의 수. 표준 편차를 SDlogIC50 x 기하 평균 x ln(10)인, 델타 방법에 의해 계산하였다.
본질적으로 상기에 기재된 바와 같은 절차에 따르면, 실시예 1의 화합물은 IC50이 2.31±2.02 nM (n=2)이었으며, 이는 실시예 1의 화합물이 시험관내 인간 EP4의 길항제임을 입증한다.
시험관내 래트 EP4 기능적 길항제 활성
래트 EP4 cDNA (진뱅크 수탁# NM_03276)를 pcDNA 3.1 벡터로 클로닝하고, 이후에 수용체 발현을 위해 HEK293 세포에 형질감염시켰다. 래트 EP4 안정한 클론의 규모를 확장한 다음, 향후 화합물 스크리닝을 위한 세포 뱅크로서 동결시켰다. EP4 길항제 화합물을 rEP4 세포에서 시험하기 위해, 동결된 세포를 해동시킨 다음, 세포를 cAMP 검정 완충제 중에 재현탁시켰다. cAMP 완충제를 20 mM HEPES (하이클론(Hyclone), SH30237), 0.1% BSA (깁코(Gibco), 15260) 및 125 μM IBMX (시그마, I5879)로 보충된, 페놀 레드(Phenol Red) 불포함 HBSS (하이클론, SH30268)에 의해 제조하였다. 세포를 96-웰 절반 면적 편평-바닥 폴리스티렌 흑색 플레이트 (코스타(Costar) 3694)에 플레이팅하였다. 화합물을 DMSO로 연속 희석하여, 10-포인트 농도 반응 곡선을 수득하였다. 이어서, 희석된 화합물을, PGE2를 (케이만(Cayman) 14010, EC80이 생성되도록 예정된 농도로) 함유하는 cAMP 검정 완충제에 1/100의 DMSO/완충제의 비로 첨가하였다. 세포를 PGE2 (EC80 농도)의 존재 하에 실온에서 30분 동안 화합물로 처리하였다. 세포로부터 생성된 cAMP 수준을 cAMP HTRF 검정 키트 (시스바이오 62AM4PEC)에 의해 정량화하였다. 플레이트를 HTRF 최적화 프로토콜 (퍼킨엘머)을 사용하는 엔비전 플레이트 판독기에서 판독하였다. IC50을 그래프패드 프리즘(Graphpad Prism) (v. 4) 비선형 회귀, S자형 용량 반응 곡선 피팅을 사용하여 계산하였다.
본질적으로 상기에 기재된 바와 같은 절차에 따르면, 실시예 1의 화합물은 래트 EP4에서 측정된 IC50이 1.51 nM이었다. 이는 실시예 1의 화합물이 시험관내 래트 EP4의 길항제임을 입증한다.
인간 전혈에서의 시험관내 길항제 활성
대식세포/단핵구로부터의 LPS-유도 TNFα 생성에 대한 PGE2의 억제 효과는 EP4 수용체에 의해 매개되는 것으로 여겨진다 (문헌 [Murase, A., et al., Life Sciences, 82:226-232 (2008)] 참조). 인간 전혈에서의 LPS-유도 TNFα 생성에 대한 PGE2의 억제 효과를 역전시키는 실시예 1의 화합물의 능력은 기능적 활성의 지표이다.
정상 지원자 공여자로부터의 혈액을 나트륨 헤파린 바큐테이너 튜브에 수집하였다. 공여자는 공여 48시간 이내에 NSAID 또는 셀레콕시브를 제공받지 않거나 또는 2주 이내에 글루코코르티코이드를 제공받지 않았다. 모든 튜브/공여자를 50 mL 팔콘(Falcon) 원추형 원심분리 튜브에 풀링하고, 98 μL/웰을 96-웰 조직 배양 플레이트 (팔콘 3072)에 분배하였다. 화합물을 DMSO에 최종 100 X로 희석하고, 1 μL/웰을 3중으로 혈액에 첨가하여, 7 포인트 농도 반응 곡선을 수득하였다. 혈액을 5% CO2 가습 분위기 중에서 30분 동안 37℃에서 화합물로 전처리하고, 그 후에 0.2 mg/mL 소 혈청 알부민 (BSA)/PBS +/- 1 mM PGE2 (케이만 14010) 중의 1 mg/mL 리포폴리사카라이드 (LPS) (시그마 0111:B4)의 1 μL/웰의 용액을 첨가하여, 10 μg/mL +/- 10 nM PGE2의 최종 LPS 농도를 수득하였다. 플레이트를 5% CO2 가습 분위기 중에서 20-24시간 동안 37℃에서 인큐베이션하였다. 플레이트를 에펜도르프(Eppendorf) 5810R 원심분리기에서, 10분 동안 22℃에서 1800 x g로 원심분리하였다. 혈장을 세포 층으로부터 분리하고, v-바닥 폴리프로필렌 플레이트로 옮겼다. 2 μL 혈장 중의 TNFα 수준을 이뮬론(Immulon) 4 HBX 플레이트 (써모(Thermo) 3855) 및 3,3',5,5'-테트라메틸비페닐-4,4'-디아민 기질 (KPL 50-76-03)을 사용하여, 상업적으로 입수가능한 효소 면역검정 (알앤디 시스템즈(R&D Systems) DY210)에 의해 정량화하였다. 플레이트를, 소프트맥스프로(SOFTmaxPRO) (v. 4.3.1) 소프트웨어를 사용하여, 플레이트 판독기 (몰레큘라 디바이시스 베르사맥스((Molecular Devices Versamax)) 상에서 A450-A650에서 판독하였다. IC50을 그래프패드 프리즘 (v. 4) 비선형 회귀, S자형 용량 반응 곡선 피팅을 사용하여 계산하였다. 결과를 기하 평균 ± 표준 편차로 표현하였다; n = 독립적 결정의 수. 표준 편차를 SDlogIC50 x 기하 평균 x ln(10)인, 델타 방법에 의해 계산하였다.
본질적으로 상기에 기재된 바와 같은 절차에 따르면, 실시예 1의 화합물은 IC50이 0.0595±0.0378 μM (n=3)이었다. 이는 실시예 1의 화합물이 인간 혈액 TNFα 유도 검정에서 EP4 길항제임을 입증한다.

Claims (19)

  1. 하기 화학식의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
    Figure pct00072

    상기 식에서
    A는
    Figure pct00073

    이고;
    W는 CH 또는 N이고;
    Y는 CH 또는 N이고;
    X는 CH 또는 N이고;
    R1은 CH3, CF3, 또는 F이고;
    R2는 H, F, Cl, CH3, CF3, CH2OH, CH2CH2OH, CH2OCH3, OCH3, OCF3, 또는 CN이고;
    R3은 H 또는 F이거나; 또는
    R2 및 R3은 함께 이웃자리 탄소 원자에 부착된 OCH2O 기이고;
    R4는 H, Cl, 또는 CH2OH이다.
  2. 제1항에 있어서, 하기 화학식의 화합물 또는 염.
    Figure pct00074
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 하기 화학식의 화합물 또는 염.
    Figure pct00075
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, A가
    Figure pct00076

    인 화합물 또는 염.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, R1이 CH3인 화합물 또는 염.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, R3이 H인 화합물 또는 염.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, R2가 CH2OH, CH2CH2OH, 또는 OCH3인 화합물 또는 염.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, R2가 CH2OH인 화합물 또는 염.
  9. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, R2 및 R3이 함께 이웃자리 탄소 원자에 부착된 OCH2O 기인 화합물 또는 염.
  10. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, R4가 Cl인 화합물 또는 염.
  11. 제1항에 있어서,
    3-[[6-(1,3-벤조디옥솔-5-일)-3-메틸-피리딘-2-카르보닐]아미노]-2,4-디메틸-벤조산;
    3-[[6-[3-(히드록시메틸)페닐]-3-메틸-피리딘-2-카르보닐]아미노]-2,4-디메틸-벤조산; 및
    3-[[3-(3-클로로페닐)나프탈렌-1-카르보닐]아미노]-2,4-디메틸-벤조산
    인 화합물 또는 그의 염.
  12. 유효량의 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 골관절염의 치료를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 환자에서 골관절염을 치료하는 방법.
  13. 유효량의 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 류마티스 관절염의 치료를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 환자에서 류마티스 관절염을 치료하는 방법.
  14. 유효량의 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 골관절염 또는 류마티스 관절염과 연관된 통증의 치료를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 환자에서 골관절염 또는 류마티스 관절염과 연관된 통증을 치료하는 방법.
  15. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 요법에 사용하기 위한 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  16. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 골관절염의 치료에 사용하기 위한 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  17. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 류마티스 관절염의 치료에 사용하기 위한 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  18. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 골관절염 또는 류마티스 관절염과 연관된 통증의 치료에 사용하기 위한 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  19. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 1종 이상의 제약상 허용되는 담체, 희석제, 또는 부형제와 함께 포함하는 제약 조성물.
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