KR20160072674A

KR20160072674A - 에르고치오네인 함량이 증진된 느타리버섯 추출물의 제조방법 및 상기 방법으로 제조된 느타리버섯 추출물

Info

Publication number: KR20160072674A
Application number: KR1020140180633A
Authority: KR
Inventors: 김용석
Original assignee: 전북대학교산학협력단; 전라북도 임실군(임실군 농업기술센터장); 주식회사 메트로비앤에프; 재단법인 전라북도생물산업진흥원
Priority date: 2014-12-15
Filing date: 2014-12-15
Publication date: 2016-06-23
Also published as: KR101704381B1

Abstract

본 발명은 느타리버섯(Pleurotus ostreatus) 분말에 당분해효소 및 물을 첨가한 후 가수분해하고 가열 및 여과하여 제조한 느타리버섯 효소 추출물에 물을 첨가한 후 추출하여 제조하는 것을 특징으로 하는 에르고치오네인(ergothioneine) 함량이 증진된 느타리버섯 추출물의 제조방법, 상기 방법으로 제조된 에르고치오네인 함량이 증진된 느타리버섯 추출물 및 상기 에르고치오네인 함량이 증진된 느타리버섯 추출물을 유효성분으로 함유하는 항산화용 조성물에 관한 것이다.

Description

에르고치오네인 함량이 증진된 느타리버섯 추출물의 제조방법 및 상기 방법으로 제조된 느타리버섯 추출물{Method for producing Pleurotus ostreatus extract with enhanced ergothioneine content and Pleurotus ostreatus extract produced by the same method}

느타리버섯(Pleurotus ostreatus)은 육질이 백색이고 유연하며, 영양학적으로도 우수한 식품으로 인정받고 있을 뿐만 아니라, 혈액순환 촉진, 고혈압, 당뇨병에도 효과가 있으며 특히 항암효과 등의 약리 효과가 있는 것으로 보고되고 있다. 전국 버섯류 생산량은 2011년 165,252톤으로 이 중 느타리버섯 생산량은 약 46,597톤으로 전국버섯 생산량의 약 28.20%를 점유하고 있으며, 임실군의 특산품인 느타리버섯 생산량은 약 300여톤에 이른다. 국내 버섯 소비량은 1인당 약 3 kg으로 중국 12 kg, 유럽 8 kg, 일본 6 kg 등에 비해서 적으나 소비 잠재력이 큰 것으로 판단된다.

느타리버섯에 관한 국내 연구로는 느타리버섯의 영양성분 및 생리활성(항산화, 항당뇨, 항암활성 및 혈청 콜레스테롤 저하작용 등)에 관한 많은 연구결과와 함께, 느타리버섯을 활용한 김치, 발효 식초, 돈가스 소스, 통조림 개발에 관한 연구결과가 보고된 바 있다. 그러나 식탁에 오르는 요리의 개념이 아닌 기호식품으로서 느타리버섯을 활용한 연구나 개발은 아직 미비하여, 느타리버섯 추출물을 활용한 기능성 및 기호성을 충족하는 식품의 개발이 필요한 실정이다.

In vitro, in vivo 상에서 느타리버섯의 항산화 효과에 대한 연구가 활발히 진행되어오고 있다. 플라보노이드나 페놀산을 포함한 페놀성 화합물들은 항산화 활성을 지니고 있는 것으로 알려져 있는데, 느타리버섯의 항산화 활성도 이러한 페놀성 화합물에 기인하는 것으로 알려져 있다. 또한, 느타리버섯에는 강력한 항산화 효과가 있는 성분인 에르고치오네인(ergothioneine)은 인체의 혈액, 간, 신장, 뇌, 중추 신경계, 골수 등에서 발견된 물질로서 다른 식품 원료보다 버섯류에 많이 함유되어 있다. 이 성분은 항산화 활성물질로 버섯류 중에서도 담자균류 등의 균류에서만 주로 생합성되는 물질이며, 특히 느타리버섯에 많이 함유되어 있는 것으로 밝혀져 있다. 그러나 이 물질은 인간이나 동물 및 고등식물 내에서는 생합성하지 못하며 버섯이나 육류로부터 흡수, 공급되어야 하는 물질로 알려져 있다. 에르고치오네인의 항산화 활성은 활성산소에 대한 직접적인 소거 작용과 다양한 2가 양이온에 대한 착화합물 형성에 의한 항산화 작용, 인체에서 항산화 작용을 하는 효소의 활성 촉진 및 과산화물을 형성하는 효소의 활성 억제작용 등이 있다. 또한 티올(thiol)과 티온(thione)의 이성질체 형태를 지니며 물에서는 주로 티온(thione)의 형태로 존재해 티올(thiol) 형태로 존재하는 글루타치온(glutathione)보다 산화에 안정한 형태를 지니고 있다.

한국공개특허 제2001-0069432호에는 느타리버섯 추출물을 함유하는 음료 원료 제조방법이 개시되어 있고, 한국공개특허 제2000-0063565호에는 느타리버섯 추출물의 제조방법이 개시되어 있으나, 본 발명의 에르고치오네인 함량이 증진된 느타리버섯 추출물의 제조방법과는 상이하다.

본 발명은 상기와 같은 요구에 의해 안출된 것으로서, 본 발명은 느타리버섯 추출물 내의 에르고치오네인 함량을 증진시키기 위해, 효소 선정, 추출 용매 및 추출조건을 최적화하여 에르기치오네인 함량이 증진된 느타리버섯 추출물을 제조하기 위한 추출 방법을 확립하는 데 그 목적이 있다.

상기 과제를 해결하기 위해, 본 발명은 (a) 느타리버섯(Pleurotus ostreatus) 분말에 당분해효소 및 물을 첨가한 후 가수분해하고, 가열 및 여과하여 느타리버섯 효소 추출물을 제조하는 단계; 및 (b) 상기 (a)단계의 제조한 느타리버섯 효소 추출물에 물을 첨가한 후 추출하는 단계를 포함하여 제조하는 것을 특징으로 하는 에르고치오네인(ergothioneine) 함량이 증진된 느타리버섯 추출물의 제조방법을 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 방법으로 제조된 에르고치오네인 함량이 증진된 느타리버섯 추출물을 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 에르고치오네인 함량이 증진된 느타리버섯 추출물을 유효성분으로 함유하는 항산화용 조성물을 제공한다.

본 발명에 따르면, 본 발명의 느타리버섯 추출물은 기존의 느타리버섯 추출물에 비해 에르고치오네인(ergothioneine)을 효율적으로 추출하여 항산화 활성이 향상되는 이점이 있으며, 상기 느타리버섯 추출물을 이용하여 식품, 의약품, 화장품 산업 등에 유용하게 이용할 수 있는 효과가 있다. 또한, 본 발명의 느타리버섯 추출물은 기존의 유기용매에 의한 추출방법에 비해 환경친화적이고, 장기간 복용하여도 문제를 일으키지 않으며 소비자들도 안전하게 거리낌없이 음용할 수 있어 더욱 선호하는 추출물로 제조할 수 있다.

도 1은 본 발명의 느타리버섯 효소 추출물의 제조공정을 도식화한 것이다.

본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은

(a) 느타리버섯(Pleurotus ostreatus) 분말에 당분해효소 및 물을 첨가한 후 가수분해하고, 가열 및 여과하여 느타리버섯 효소 추출물을 제조하는 단계; 및

(b) 상기 (a)단계의 제조한 느타리버섯 효소 추출물에 물을 첨가한 후 추출하는 단계를 포함하여 제조하는 것을 특징으로 하는 에르고치오네인(ergothioneine) 함량이 증진된 느타리버섯 추출물의 제조방법을 제공한다.

본 발명의 느타리버섯 추출물의 제조방법에서, 상기 (a)단계의 느타리버섯 분말은 바람직하게는 느타리버섯을 동결건조한 후 분쇄하고 30~50 메쉬로 분말화하여 제조할 수 있고, 더욱 바람직하게는 느타리버섯을 동결건조한 후 분쇄하고 40 메쉬로 분말화하여 제조할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

또한, 본 발명의 느타리버섯 추출물의 제조방법에서, 상기 (a)단계의 당분해효소는 바람직하게는 프로모자임(promozyme)과 같은 풀루라나아제(pullulanase)일 수 있다. 또한, 상기 당분해효소는 느타리버섯 분말 중량대비 0.05~2.0% 첨가할 수 있으며, 더욱 바람직하게는 0.05~0.2% 첨가할 수 있으며, 더 더욱 바람직하게는 0.1% 첨가할 수 있다. 상기와 같은 종류의 당분해효소를 상기 첨가량으로 첨가하여 느타리버섯을 가수분해하는 것이 다른 효소 및 다른 첨가량으로 처리하는 것에 비해 느타리버섯으로부터 에르고치오네인을 효과적으로 추출할 수 있었다.

또한, 본 발명의 느타리버섯 추출물의 제조방법에서, 상기 (a)단계의 느타리버섯 효소 추출물은 바람직하게는 느타리버섯 분말에 당분해효소 및 물을 첨가한 후 140~180 rpm 및 55~65℃에서 10~14시간 동안 추출한 후 80~120℃에서 5~15분 동안 가열하고 여과하여 제조할 수 있으며, 더욱 바람직하게는 느타리버섯 분말에 당분해효소 및 물을 첨가한 후 160 rpm 및 60℃에서 12시간 동안 추출한 후 100℃에서 10분 동안 가열하고 여과하여 제조할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

또한, 본 발명의 느타리버섯 추출물의 제조방법에서, 상기 (b)단계의 추출 시 추출용매로 물을 사용하는 것이 추출물 내의 에르기치오네인 함량을 증진시킬뿐만 아니라, 추출한 후 따로 처리공정을 거치지 않고 바로 섭취할 수 있고 장기간 복용하여도 문제를 일으키지 않으며 소비자들도 안전하게 거리낌없이 음용할 수 있어 더욱 선호하는 추출물로 제조할 수 있었다. 상기 추출방법은 바람직하게는 95~120℃에서 5.5~6.5시간 동안 추출할 수 있으며, 더욱 바람직하게는 95~105℃에서 5.5~6.5시간 동안 추출할 수 있으며, 더 더욱 바람직하게는 100℃에서 6시간 동안 추출할 수 있다. 상기 온도 및 시간으로 느타리버섯을 추출하는 것이 다른 조건으로 추출하는 것에 비해 추출물 내 에르고치오네인 함량을 증진시킬 수 있었다.

본 발명의 느타리버섯 추출물의 제조방법은, 보다 구체적으로는

(a) 느타리버섯 분말에 느타리버섯 분말 중량대비 당분해효소 0.05~2.0% 및 물을 첨가한 후 가수분해하고, 가열 및 여과하여 느타리버섯 효소 추출물을 제조하는 단계; 및

(b) 상기 (a)단계의 제조한 느타리버섯 효소 추출물에 물을 첨가한 후 95~120℃에서 5.5~6.5시간 동안 추출하는 단계를 포함할 수 있으며,

더욱 구체적으로는

(a) 느타리버섯 분말에 느타리버섯 분말 중량대비 당분해효소 0.1% 및 물을 첨가한 후 가수분해하고, 가열 및 여과하여 느타리버섯 효소 추출물을 제조하는 단계; 및

(b) 상기 (a)단계의 제조한 느타리버섯 효소 추출물에 물을 첨가한 후 100℃에서 6시간 동안 추출하는 단계를 포함할 수 있다.

본 발명은 또한, 상기 방법으로 제조된 에르고치오네인 함량이 증진된 느타리버섯 추출물을 제공한다.

본 발명은 또한, 상기 에르고치오네인 함량이 증진된 느타리버섯 추출물을 유효성분으로 함유하는 항산화용 조성물을 제공한다. 에르고치오네인은 항산화 물질로 알려져 있으므로, 상기 조성물은 활성산소에 의해 생성되는 산화물들에 기인하는 노화 및 각종 질환, 바람직하게는 노화, 만성알콜중독, 죽상동맥경화증, 암, 관상심장질환, 백내장, 당뇨병, 다운증후군, 간염, 허혈이나 재관류성 손상, 류마티스성 관절염, 관절염, 신부전증, 염증반응, 각종 퇴행성 신경질환, 뇌졸중 발작 및 심근경색 등에서 선택되는 1종 이상의 질환을 억제 또는 치료하기 위한 의약품, 건강보조제, 화장료, 식품, 식품 첨가제 등에 유용하게 이용될 수 있으며, 이에 의해 제한되지 않는다.

본 발명의 조성물이 의약품으로 이용될 경우에는 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있으며, 통상적인 방법에 따라 약학적으로 허용되는 제형으로 제조될 수 있다.

상기 담체 또는 부형제로는 물, 덱스트린, 칼슘카보네이드, 락토스, 프로필렌글리콜, 리퀴드, 파라핀, 생리식염수, 덱스트로스, 수크로즈, 솔비톨, 만니톨, 자이리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 폴리비닐피롤리돈, 메틸하이드록시벤조에이트, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물류가 있으며, 이들은 1종 이상 사용될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니며 통상의 담체 및 부형제는 모두 사용 가능하다.

또한 항산화 조성물을 약제화하는 경우, 통상의 충진제, 증량제, 결합제, 붕해제, 계면활성제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제 또는 방부제 등을 더욱 포함할 수 있다.

본 발명의 조성물이 화장료로 이용될 경우에는 주름개선 및 미백 기능성 화장품, 유연화장수, 영양화장수, 아이크림, 영양크림, 맛사지크림, 클렌징크림, 에센스 등의 제형으로 제조될 수 있으며, 각 제형의 화장료 조성물에 있어서, 에르고치오네인 함량이 증진된 느타리버섯 추출물을 포함하여 주름개선 및 미백 원료 또는 통상의 화장료 원료로서 이외의 성분들을 화장료의 제형 또는 사용목적 등에 따라 당업자가 어려움 없이 적의 선정하여 배합할 수 있다.

이하, 본 발명의 실시예를 들어 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.

재료 및 방법

1. 원료

느타리버섯은 ㈜메트로비앤에프에서 공급받아 동결건조하여 분쇄한 후 40 mesh 체를 이용하여 시료를 균질화하여 사용하였다.

2. 느타리버섯 추출물 제조

1) 느타리버섯 효소 추출물

느타리버섯의 기능성 성분 추출을 위해 당분해효소 10종(viscozyme, promozyme, cellulaclast, termamyl, AMG, dextrozyme, BAN, novamyl은 Novozyme사, sumizyme L, Sumizyme TP5는 Shin Nihon Chemical사)과 단백질분해효소 8종(flavourzyme, protamex, alcalase, neutrase, pepsin, collupulin MG, crystalline porcine trypsin novo 4500k는 Novozyme사, sumizyme LP는 Shin Nihon Chemical사), 펙틴분해효소 1종(pectinex, Novozyme사) 등 총 19종의 효소를 수집하여 각각 실험에 이용하였다. 효소반응 조건은 각 효소별 적정 pH와 온도 조건(표 1)에 맞추어 진행하였으며, 효소가수분해 시험은 동결건조한 느타리버섯 분말에 물과 효소를 첨가한 후 160 rpm에서 12시간 동안 가수분해하고, 100℃에서 10분 동안 가열한 후 여과하여 제조하였다(도 1).

느타리버섯의 효소가수분해 조건

분류	효소	pH	온도(℃)	완충액	함유 효소
당 분해효소	Viscozyme	4.5	50	0.1N SB¹⁾	Beta-glucanase (endo-1,3(4)-)
	Promozyme	5.0	60	0.1N SB	Pullulanase
	Cellulaclast	4.5	50	0.1N SB	Cellulase
	Termamyl	6.0	60	0.1N CB²⁾	Alpha-amylase
	AMG	4.5	60	0.1N SB	Glucoamylase
	Dextrozyme	4.5	60	0.1N SB	Glucoamylase
	BAN	7.0	70	0.1N CB	Alpha-amylase
	Novamyl	5.0	60	0.1N SB	Maltogenic amylase
	Sumizyme L	4.0~5.5	35~55	0.1N SB	Alpha-amylase
	Sumizyme TP5	7.0	50	0.1N CB	Cellulase
단백질 분해효소	Flavourzyme	7.0	50	0.1N CB	Aminopeptidase
	Protamex	7.0	50	0.1N CB	Serine endo protease
	Alcalase	7.0	50	0.1N CB	Serine endo protease
	Neutrase	7.0	50	0.1N CB	metallo endo protease
	Pepsin	2.2	37	0.1N GB³⁾	A digestive enzyme
	Collupulin MG	5.0~7.5	50~70	0.1N CB	Cysteine protease
	Crystalline Porcine Trypsin Novo4500K	7.5	50	0.1N PB⁴⁾	Serine protease
	Sumizyme LP	5.0~8.0	45~60	0.1N CB	Protease
펙틴 분해효소	Pectinex	4.5	50	0.1N SB	Polygalacturonase

¹⁾0.1N SB: 0.1N 구연산나트륨 완충액, ²⁾ 0.1N CB: 0.1N 아세트산나트륨 완충액, ³⁾ 0.1N GB: 0.1N 글리신-염화수소 완충액, ⁴⁾ 0.1N PB: 0.1N 인산염 완충액

2) 추출용매별 추출물 제조

느타리버섯의 추출용매에 따른 기능성 성분 추출을 위해 0(물), 25, 50, 75, 95%의 에탄올을 사용하여 추출하였다. 추출조건은 환류 냉각법으로 느타리버섯 효소 추출물 5 g에 각 추출 용매 200 mL를 첨가하여 80℃에서 3시간 추출한 다음 여과지(Whatman No. 2)로 감압여과하여 200 mL 용량플라스크에 정용한 후 분석을 위한 시료로 사용하였다.

3) 추출온도별 추출물 제조

느타리버섯 효소 추출물 5 g에 에탄올 0%(물) 용매를 200 mL 첨가하여 추출온도(70, 80, 90, 100, 120℃)에 따라 3시간 동안 추출한 다음 여과지(Whatman No. 2)로 감압여과하여 200 mL 용량플라스크에 정용한 후 분석을 위한 시료로 사용하였다.

4) 추출시간별 추출물 제조

느타리버섯 효소 추출물 5 g에 에탄올 0%(물) 용매를 200 mL 첨가하여 80℃에서 추출시간(1 내지 10시간)에 따라 추출한 다음 여과지(Whatman No. 2)로 감압여과하여 200 mL 용량플라스크에 정용한 후 분석을 위한 시료로 사용하였다.

3. 에르고치오네인 함량 측정

느타리버섯 추출물의 에르고치오네인 함량 측정은 각 추출방법에 따른 추출물을 sep-pack C18 카트리지(Waters, Massachusetts, USA)로 색소 및 단백질 성분을 제거한 후 0.45 ㎛ 실린지 필터로 여과하여 HPLC(Shimadzu Co., Kyoto, Japan)를 사용하여 정량하였다. 분석 조건은 표 2와 같다.

에르고치오네인 분석 조건

항목	작동 조건
장비	HPLC (Shimadzu 20A Series, Japan)
컬럼	Shodex Shim-pack GIS-ODS 5 ㎛(4.6 mm×250 mm)
컬럼온도	30℃
용매 시스템	50 mM dibasic sodium phosphate in water with 3% acetonitrile, 0.1% triethylamine at pH 7.3
유량	0.7 mL/min
주입 용량	10 ㎕
검출기	UV detector(Shimadzu, Japan), λ=254 nm

실시예 1: 효소처리에 의한 에르고치오네인 함량 변화

느타리버섯 추출물에 여러 종류의 효소를 농도별로 처리했을 때 에르고치오네인 함량의 변화는 표 3과 같다. 당분해효소인 promozyme 0.10% 처리구의 에르고치오네인 함량이 1.47±0.02 ㎎/g으로 가장 높았으며, Dextrozyme, Protamex, Viscozyme, Termamyl 0.10% 처리구에서 각각 1.24±0.02, 1.16±0.03, 1.14±0.02, 1.13±0.02 ㎎/g 순으로 대조구보다 높게 나타났다. 전반적으로 promozyme, Dextrozyme, Viscozyme, Termamyl 등 당분해효소 처리시 단백질분해효소 처리구보다 에르고치오네인의 함량이 높게 나타났다. 그러나 각 효소의 농도별로 처리했을 때 전반적으로 농도에 따른 유의적인 차이는 보이지 않았다. 따라서 느타리버섯에서 기능성 성분인 에르고치오네인을 추출하기 위해서는 단백질분해효소보다는 당분해효소인 promozyme, Dextrozyme, Viscozyme, Termamyl 등을 0.10% 처리하여 추출하는 것이 효율적인 것으로 판단되며, 특히 promozyme을 이용하는 것이 에르고치오네인을 보다 효율적으로 추출할 수 있었다.

느타리버섯 효소가수분해물의 에르고치오네인 함량 변화

	효소	에르고치오네인 함량 (dry basis, ㎎/g)
	효소	0.10%	0.50%	1.00%	2.00%
당 분해 효소	Viscozyme	1.14±0.02^aCD1)	1.14±0.02^aC	1.14±0.01^aC	1.12±0.01^aDE
	Promozyme	1.47±0.02 ^aA	1.43±0.02^aA	1.43±0.01^aA	1.43±0.01^aA
	Cellulaclast	0.90±0.02^aH	0.98±0.02^aF	0.99±0.01^aH	1.01±0.01^aGH
	Termamyl	1.13±0.02^aCD	1.14±0.02^aC	1.12±0.01^aCD	1.12±0.01^aDE
	AMG	0.99±0.02^aGF	1.11±0.02^aC	1.00±0.01^aH	1.11±0.01^aE
	Dextrozyme	1.24±0.02^aB	1.28±0.02^aB	1.24±0.01^aB	1.22±0.01^aB
	BAN	1.03±0.02^aEFG	1.03±0.02^aE	1.05±0.01^aEF	1.05±0.01^aFG
	Novamyl	0.87±0.02^aH	0.99±0.02^aEF	0.98±0.01^aH	1.01±0.01^aGH
	Sumizyme L	1.01±0.01^aGF	0.98±F0.01^aF	1.01±0.01^aGH	1.00±0.03^aH
	Sumizyme TP5	1.00±0.01^aGF	1.01±0.01^aEF	1.01±0.01^aGH	1.02±0.01^aGH
단백질 분해 효소	Flavourzyme	1.11±0.01^aCD	1.11±0.01^aC	1.12±0.01^aCD	1.11±0.01^aE
	Protamex	1.16±0.03^aC	1.11±0.03^aC	1.12±0.05^aCD	1.17±0.03^aC
	Alcalase	1.11±0.03^aCD	1.10±0.03^aCD	1.12±0.05^aCD	1.13±0.03^aCDE
	Neutrase	1.10±0.03^aCDE	1.12±0.03^aC	1.15±0.05^aC	1.16±0.03^aCD
	Pepsin	0.85±0.03^aH	0.87±0.03^aG	0.86±0.05^aJ	0.88±0.03^aJ
	Collupulin MG	0.98±0.03^aG	1.00±0.03^aEF	1.01±0.05^aGH	1.01±0.03^aGH
	Crystallin porcine trypsin novo 4500k	1.00±0.01^aFG	0.99±0.01^aEF	0.92±0.01^cI	0.94±0.01^bI
	Sumizyme LP	1.01±0.01^aFG	0.98±0.01^aF	1.00±0.01^aH	1.01±0.03^aGH
펙티나아제	Pectinex	0.99±0.02^aFG	1.02±0.05^aEF	1.04±0.01^aFG	1.02±0.06^aGH
복합처리구	Viscozyme +Pectinex	1.07±0.02^aDEF	1.07±0.02^aD	1.08±0.01^aDE	1.08±0.01^aEF
대조구	무처리	1.01±0.01

¹⁾각각의 행 내의 다른 소문자는 유의차가 있음을 의미하고, 각각의 열 내의 다른 대문자는 유의차가 있음을 의미함(p<0.05)

실시예 2: 추출용매에 따른 느타리버섯 추출물의 에르고치오네인 함량 변화

느타리버섯 효소 추출물에서 에르고치오네인을 고농도로 추출하기 위하여 에탄올의 농도별로 환류냉각법을 이용하여 80℃에서 3시간 동안 추출시험을 하였다. 환류냉각법으로 추출했을 때 에탄올 0%(물) 처리구에서 에르고치오네인의 함량이 2.98±0.05 ㎎/g로 유의적으로 가장 높은 함량을 보였고, 에탄올의 농도가 높아질수록 에르고치오네인의 함량이 감소하는 경향을 보여 느타리버섯에서 에르고치오네인을 추출하기에 가장 적합한 추출용매는 에탄올 0%(물)로 판단되었다(표 4).

추출용매에 따른 느타리버섯 추출물의 에르고치오네인 함량

에탄올 함량(%)	에르고치오네인 함량(dry basis, ㎎/g)
0	2.98±0.05 ^a1)
25	2.34±0.01^c
50	2.42±0.02^b
75	2.32±0.01^c
95	1.58±0.01^d

¹⁾ 같은 열 내의 다른 윗첨자는 유의차가 있음을 의미함(p<0.05)

실시예 3: 추출온도에 따른 느타리버섯 추출물의 에르고치오네인 함량 변화

앞의 실험에서 에르고치오네인의 함량이 가장 높았던 에탄올 0%(물) 용매를 사용하여 추출온도(70, 80, 90, 100, 120℃)에 따라 3시간 동안 추출하여 에르고치오네인의 함량 변화를 시험하였다. 시험 결과, 100℃에서 추출했을 때 3.33±0.01 ㎎/g으로 유의적으로 가장 높은 함량을 나타냈으며, 120℃ 추출시 3.29±0.01 ㎎/g으로 100℃의 경우와 유의적 차이는 없고 약간 적게 나타났다. 따라서 느타리버섯 분말을 100℃에서 추출했을 때 에르고치오네인의 함량이 가장 높은 것으로 나타났다(표 5).

추출온도에 따른 느타리버섯 추출물의 에르고치오네인 함량

추출온도(℃)	에르고치오네인 함량(dry basis, ㎎/g)
70	3.24±0.01^b1)
80	3.17±0.01^c
90	3.23±0.01^b
100	3.33±0.01 ^a
120	3.29±0.01^a

실시예 4: 추출시간에 따른 느타리버섯 추출물의 에르고치오네인 함량 변화

앞의 실험에서 에르고치오네인의 함량이 가장 높은 것으로 나타났던 에탄올 0%(물) 용매를 사용하여 80℃에서 추출시간에 따른 에르고치오네인의 함량 변화를 시험하였다. 시험 결과, 10시간 추출시 에르고치오네인의 함량이 3.57±0.01㎎/g으로 가장 높은 함량을 보였다. 그러나 6시간 추출시 3.43±0.07㎎/g으로 10시간 추출의 97.11% 수준으로 큰 차이를 나타내지 않아 추출효율성 측면에서 6시간 추출조건이 가장 적합한 것으로 판단되었다(표 6).

추출시간에 따른 느타리버섯 추출물의 에르고치오네인 함량

추출시간(시간)	에르고치오네인 함량(dry basis, ㎎/g)
1	2.85±0.01^h1)
2	2.96±0.03^g
3	3.09±0.04^f
4	3.29±0.01^d
5	3.18±0.01^e
6	3.43±0.07 ^c
7	3.25±0.01^d
8	3.50±0.01^b
9	3.51±0.01^b
10	3.57±0.01^a

실시예의 실험결과를 종합해볼 때, 느타리버섯 분말에서 기능성 성분인 에르고치오네인 함량 증가를 위한 추출조건은 느타리버섯에 프로모자임(promozyme)과 같은 풀루라나아제(pullulanase)를 0.1% 첨가하여 효소추출한 후, 상기 추출한 느타리버섯 효소 추출물에 물을 첨가하고 추출온도는 100℃, 추출 시간은 6시간 동안 추출하는 것이 최적 조건인 것으로 판단되었다.

Claims

(a) 느타리버섯(Pleurotus ostreatus) 분말에 당분해효소 및 물을 첨가한 후 가수분해하고, 가열 및 여과하여 느타리버섯 효소 추출물을 제조하는 단계; 및
(b) 상기 (a)단계의 제조한 느타리버섯 효소 추출물에 물을 첨가한 후 추출하는 단계를 포함하여 제조하는 것을 특징으로 하는 에르고치오네인(ergothioneine) 함량이 증진된 느타리버섯 추출물의 제조방법.
제1항에 있어서, 상기 (a)단계의 당분해효소는 풀루라나아제(pullulanase)인 것을 특징으로 하는 에르고치오네인 함량이 증진된 느타리버섯 추출물의 제조방법.
제1항에 있어서, 상기 (b)단계의 추출은 95~120℃에서 5.5~6.5시간 동안 추출하는 것을 특징으로 하는 에르고치오네인 함량이 증진된 느타리버섯 추출물의 제조방법.
제1항에 있어서,
(a) 느타리버섯 분말에 느타리버섯 분말 중량대비 풀루라나아제(pullulanase) 0.05~2.0% 및 물을 첨가한 후 가수분해하고, 가열 및 여과하여 느타리버섯 효소 추출물을 제조하는 단계; 및
(b) 상기 (a)단계의 제조한 느타리버섯 효소 추출물에 물을 첨가한 후 95~120℃에서 5.5~6.5시간 동안 추출하는 단계를 포함하여 제조하는 것을 특징으로 하는 에르고치오네인 함량이 증진된 느타리버섯 추출물의 제조방법.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 방법으로 제조된 에르고치오네인 함량이 증진된 느타리버섯 추출물.
제5항의 에르고치오네인 함량이 증진된 느타리버섯 추출물을 유효성분으로 함유하는 항산화용 조성물.