KR20160068327A - 여리고장미 추출물을 함유하는 환경 스트레스에 대한 피부 보호 효능을 갖는 화장료 조성물 - Google Patents

여리고장미 추출물을 함유하는 환경 스트레스에 대한 피부 보호 효능을 갖는 화장료 조성물 Download PDF

Info

Publication number
KR20160068327A
KR20160068327A KR1020140173873A KR20140173873A KR20160068327A KR 20160068327 A KR20160068327 A KR 20160068327A KR 1020140173873 A KR1020140173873 A KR 1020140173873A KR 20140173873 A KR20140173873 A KR 20140173873A KR 20160068327 A KR20160068327 A KR 20160068327A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
cosmetic composition
extract
extraction
environmental stress
skin
Prior art date
Application number
KR1020140173873A
Other languages
English (en)
Inventor
심성보
홍우진
조진훈
Original Assignee
코웨이 주식회사
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 코웨이 주식회사 filed Critical 코웨이 주식회사
Priority to KR1020140173873A priority Critical patent/KR20160068327A/ko
Publication of KR20160068327A publication Critical patent/KR20160068327A/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/97—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from algae, fungi, lichens or plants; from derivatives thereof
    • A61K8/9783—Angiosperms [Magnoliophyta]
    • A61K8/9789—Magnoliopsida [dicotyledons]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/02—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by special physical form
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/33—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing oxygen
    • A61K8/34—Alcohols
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Cosmetics (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)

Abstract

본 발명은 외부 환경 스트레스로 인한 손상으로부터 세포를 보호하는 것으로 알려진 LEA 단백질을 활성화하여 자외선, 미세먼지, 황사, 담배연기, 매연 등의 환경 스트레스에 대한 저항성을 향상시키고 이로부터 피부 세포를 보호할 수 있는 화장료 조성물에 관한 것이다.

Description

여리고장미 추출물을 함유하는 환경 스트레스에 대한 피부 보호 효능을 갖는 화장료 조성물{Cosmetic Composition Comprising Anastatica hierochuntica extracts for protecting skin from stress due to harmful environment}
본 발명은 외부 환경 스트레스로 인한 손상으로부터 세포를 보호하는 것으로 알려진 LEA 단백질을 활성화하여 자외선, 미세먼지, 황사, 담배연기, 매연 등의 환경 스트레스에 대한 저항성을 향상시키고 이로부터 피부 세포를 보호할 수 있는 화장료 조성물에 관한 것이다.
천연에 존재하는 동, 식물의 세포는 UV, 미세먼지, 황사, 담배연기, 매연 등 과 같은 각종 외부 스트레스 인자로부터 지속적인 손상을 입고 있다. 손상을 입은 각 세포들은 활성이 저하되고 돌연변이를 일으키거나 세포가 사멸하는 등의 손상을 가져온다.
최근 동, 식물의 스트레스에 대한 반응이나 방어 기작에 대한 연구가 활발히 진행되고 있으며, 이러한 스트레스와 관련된 많은 유전자들이 탐색되고 그 기능이 밝혀지고 있다.
이중 LEA 단백질은 처음에 목화의 종자 발달의 후기 과정에서 발견되었는데 lea 유전자는 종자 성숙 과정의 탈수 기간 동안 발현되는 유전자로 처음 동정된 이후 여러 LEA 단백질과 유전자가 다양한 식물에서 규명되었다. LEA 단백질은 종자 발달의 후기에 축적되어 탈수에 관여하지만 발아가 시작되면 점진적으로 수 시간 내에 거의 사라지는데 이 후 가장 먼저 종자 밖으로 나오는 뿌리에서 일시적으로 유도 되었다가 잎이 아직 분화되지 않은 배축(hypocotyl)에 다시 축적된다. 자엽(cotyledon)이 분화되기 시작하면 LEA 단백질의 양은 감소하여 적절한 생육 환경에서는 거의 생성되지 않는다. 그러나 식물이 수분 결핍 상태에 놓이면 이 유전자는 다시 발현된다.
이와 같이 스트레스에 대한 내성을 가진 유전자 및 단백질들은 궁극적으로 동, 식물에 미치는 환경 스트레스에 대한 저항성을 부여하는데 유용한 자원으로 활용될 수 있다.
이에 본 발명자들은 천연 추출물을 유효성분으로 함유 하면서도 외부 환경 스트레스로 인한 피부 손상에 대한 피부 보호 효과 갖는 화장료 조성물을 개발하고자 다각적으로 노력한 결과, 여리고장미(Anastatica hierochuntica) 추출물이 외부 환경 스트레스로 인한 손상으로부터 동, 식물의 세포를 보호하는 LEA 단백질을 활성화하여 피부 세포를 보호할 수 있음을 확인하여 본 발명을 완성하였다.
따라서, 본 발명의 과제는 외부 환경 스트레스로 인한 손상으로부터 세포를 보호하는 것으로 알려진 LEA 단백질을 활성화하여 자외선, 미세먼지, 황사, 담배연기, 매연 등의 환경 스트레스에 대한 저항성을 향상시키고 이로부터 피부 세포를 보호할 수 있는 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
이를 위해 본 발명은
여리고장미(Anastatica hierochuntica) 추출물을 함유하는 환경 스트레스에 대한 피부 보호 효능을 갖는 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명에 따르면, 외부 환경 스트레스로 인한 손상으로부터 세포를 보호하는 LEA 단백질 발현을 활성화하여 자외선, 미세먼지, 황사, 담배연기, 매연 등의 환경 스트레스로 인한 피부 손상을 방지하여 피부 보호 효과를 나타낼 수 있다.
도 1은 외부 환경 스트레스 처리에 따른 LEA 단백질의 발현 정도를 나타낸 것이다.
도 2는 외부 환경 스트레스 처리에 따른 각질세포의 생존율을 나타낸 것이다.
도 3은 외부 환경 스트레스 처리에 따른 진피세포의 생존율을 나타낸 것이다.
도 4는 여리고장미 추출물을 단독 적용한 경우(AH), 여리고장미 추출물과 미로탐누스 플파벨리폴리아 추출물이 적용된 경우(AH+MF) LEA 단백질의 발현 정도를 비교한 그래프이다.
도 5는 여리고장미 추출물을 단독 적용한 경우(AH), 여리고장미 추출물과 미로탐누스 플파벨리폴리아 추출물이 적용된 경우(AH+MF) 각질세포의 생존율을 비교한 그래프이다.
도 6은 여리고장미 추출물을 단독 적용한 경우(AH), 여리고장미 추출물과 미로탐누스 플파벨리폴리아 추출물이 적용된 경우(AH+MF)진피세포의 생존율을 비교한 그래프이다.
이하 본 발명을 더욱 상세히 설명한다.
여리고장미(Anastatica hierochuntica)는 이란, 이집트, 팔레스타인, 이스라엘, 이라크, 요르단, 파키스탄 등의 북 아프리카의 일부 지역을 포함, 중동, 사하라 사막의 건조한 지역에서 주로 자생하는 십자화과 식물로, 건조시에 마른 덤불처럼 수년간을 존재하다가 비가 오는 짧은 시간 동안에 빠르게 성장하여 꽃을 피우고 열매를 맺는 부활식물이다.
전체적인 모습은 줄기 전체가 30츠 정도로 둥글게 말리고, 뿌리와 줄기부분이 쉽게 잘려서 바람이 불면 바람 부는 쪽으로 굴러간다. 씨앗은 둥글게 말린 줄기 안쪽에 위치한다. 바람 부는 대로 여기저기 굴러다니다가 물을 만나면 둥글게 말린 것이 펴지면서 씨를 떨구고, 이 씨앗은 매우 빠른 시간 동안 성장하여 흰 꽃을 피우면서 번식한다.
본 발명에 있어서, 상기 여리고장미 추출물은 다양한 기관 또는 부분으로부터 추출하여 얻은 것으로, 여리고장미의 잎, 꽃, 줄기, 가지, 뿌리, 전초 및 열매 중 선택된 어느 하나 이상에 용매를 가하여 추출한 것을 특징으로 한다.
본 발명에서 원료로 사용하는 여리고장미 추출물은 여리고장미로부터 침출, 전출하여 얻은 침출액, 또는 그 침출액을 다시 일부 또는 전부 농축하여 얻은 농축물, 또는 다시 그 농축물을 건조시켜 제조한 추출 엑기스 및 추출액 중에 함유되고 있는 주 효과를 발휘하는 화학물질 그 자체를 포함한다.
본 발명의 추출물은, 당업계에 공지된 통상의 방법에 따라, 즉, 통상적인 용매를 사용하여, 통상적으로 이용되는 냉침, 환류 냉각추출, 열수추출, 실온추출, 가온추출, 초음파추출, 초임계추출 등의 방법으로 제조될 수 있다.
구체적으로는 정제수, 탄소수 1 내지 6의 알코올, 글리세린, 탄소수 2 내지 6의 알킬렌글리콜, 탄소수 1 내지 6의 알칸, 탄소수 1 내지 6의 할로겐화탄화수소, 탄소수 2 내지 6의 알킬 알카노에이트 및 그의 혼합물로부터 선택된 추출용매를 사용할 수 있다. 좀 더 구체적으로 예시하면 정제수, 메탄올, 에탄올, 1,2-프로판디올, 글리세린, 에틸렌글리콜, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 디클로로메탄, 디클로로에탄, 헥산, 에틸아세테이트 및 그의 혼합물로부터 선택된 추출용매를 사용할 수 있다.
이때 추출용매의 사용량은 원료 중량의 10 내지 30 배 부피량이며, 보다 바람직하게는 10 내지 20 배이다.
추출온도는 당업자가 추출 방법에 적절한 다양한 온도 범위를 채택할 수 있으며, 예를 들어, 20 ℃ 내지 100 ℃ 등에서 수행될 수 있으나, 이에 국한되지 않는다. 또한, 추출시간은 추출방법에 따라 상이하며, 당업자가 적절한 추출 시간을 채택할 수 있으며, 이에 국한되지 않으나, 약 1 시간 내지 수일의 범위에서 단회 또는 복수회로 수행될 수 있다. 상기 1차 추출용매로 추출을 수행하여 얻어진 추출물은 통상의 방법에 따라 여과하여 불순물을 제거한 액상 형태로 얻거나, 얻어진 액상 형태의 추출물을 통상의 방법에 따라 감압농축 및/또는 건조하여 분말 형태로 얻을 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 LEA 단백질의 활성화를 더욱 높여 외부 환경 스트레스에 대한 피부 보호 효과를 향상시키기 위해 추가로 미로탐누스 플라벨리폴리아(Myrothamnus flabellifolia) 추출물을 포함할 수 있으며, 이때 여리고장미(Anastatica hierochuntica) 추출물과 미로탐누스 플라벨리폴리아(Myrothamnus flabellifolia) 추출물의 중량비는 1:4 내지 1:1 이며 바람직하게는 1:2이다.
본 발명에 따른 상기 추출물의 함량은 조성물 전체에 대하여 0.001 내지 30.0 중량% 범위가 바람직하다. 최소한의 LEA 단백질 활성화를 통한 피부 보호 효과를 달성할 수 있도록 추출물의 함량은 상기 최소치 이상인 것이 바람직하며, 과량 첨가에 따른 사용감 저하 및 각종 제형에의 적용 가능성을 고려하여 추출물의 함량은 상기 최대치 이하인 것이 바람직하다. 이때, 추출물의 함량은 제형에 함유되는 성분들의 함량에 따라 상기 범위 내에서 적절히 조절하는 것이 바람직하다.
또한, 본 발명에 따른 추출물을 조성 성분으로 사용함에 있어서는 동결 건조된 분말 형태로는 물론이고, 물 또는 통상의 유기용매에 분산 또는 용해된 액체 형태로도 사용될 수 있다.
또한, 본 발명에 따른 화장료 조성물은 상기 추출물 성분 외에 본 발명이 목적으로 하는 주 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 바람직하게는 주 효과에 상승 효과를 줄 수 있는 다른 성분을 함유할 시 있다.
본 발명의 화장료 조성물에 함유되는 성분은 상기 유효 성분 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 함유하며, 예컨대 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 함유할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 구체적으로는 용액, 현탁액, 유탁액, 겔, 로션, 에센스, 크림, 파우더, 비누, 팩마스크, 클렌징, 오일, 파운데이션, 스프레이 등의 화장료로 제형화 될 수 있다.
본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.
본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 알루미늄 메타히드록시드, 미소결정성 셀룰로오스, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 왁스, 파라핀, 트라칸트, 동물성유, 전분, 셀룰로오스 유도체, 실리콘, 벤토나이트, 폴리에틸렌 글리콜, 실리카, 산화아연 또는 탈크 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 실리카, 탈크, 알루미늄 히드록시기, 락토스, 칼슘 실리케이트, 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.
본 발명의 제형이 계면활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이미다졸리늄 유도체, 이세티오네이트, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 지방족 알코올, 알킬아미도베타인, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 더욱 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.
실시예 1 : 여리고장미 추출물
여리고장미 (Anastatica hierochuntica) 잎과 줄기 건조물 100g을 믹서를 이용하여 분쇄한 후, 40 v/v% 프로판디올(1,2-Propanediol) 수용액 1,000 ml을 첨가하고, 실온에서 초음파 추출기로 4시간 동안 추출하였다. 여과지(Whatman Paper Filter No.3)를 이용하여 1차 감압여과하고 4일 동안 냉장보관하고 침전물이 생성되면 2차 감압여과를 통하여 최종적으로 여리고장미 추출물을 수득하였다.
실시예 2 : 미로탐누스 플라벨리폴리아 추출물
미로탐누스 플라벨리폴리아 (Myrothamnus flabellifolia)의 잎과 잔가지 건조물 100g을 믹서를 이용하여 분쇄한 후, 40 v/v% 프로판디올(1,2-Propanediol) 수용액 1,000 ml을 첨가하고, 실온에서 초음파추출기로 4시간 동안 추출하였다. 여과지(Whatman Paper Filter No.3)를 이용하여 1차 감압여과하고 4일 동안 냉장보관하고 침전물이 생성되면 2차 감압여과를 통하여 최종적으로 미로탐누스 플라벨리폴리아 추출물을 수득하였다.
실험예 1: 외부 환경 스트레스에 의한 LEA 단백질 발현양 측정
세포주는 사람 피부 섬유아세포(Human dermal fibroblast neonatal, HDFn)를 사용하였다.
증식배양용 배지는 10% FBS 와 1% AA 가 첨가된 DMEM 배지, 시료처리용 배지는 1% AA 가 첨가된DMEM 배지를 사용하였고, In cell ELISA Kit로 Pierce Colorimetric In-Cell ELISA Kits를 사용하였다.
HDFn 세포를 96웰에 10,000 세포/웰의 농도로 세포를 씨딩(seeding) 하고 24 시간 동안 배양하여 세포를 플레이트에 부착시켰다. 배지를 제거하고 PBS로 3회 세척하였다. 시료처리용 배지로 배지를 교체한 후 각 웰을 해당하는 스트레스원에 6시간 동안 노출시켰다(UV, 먼지, 황사, 담배연기, 매연). 이때 스트레스원 부여 조건은 아래와 같다:
- UV ; UV-A 파장350nm, 강도 3 J/㎠
- 먼지 ; Asian sand dust(건조된 고비사막 dust, 입자직경 10~50um) 20ug/mL
- 황사 ; Asian sand dust(건조된 고비사막 dust, 입자직경 10um이하) 20ug/mL
- 담배연기 ; 150 ug/mL 담배연기응축물(CSC, Cigarette Smoke Condensate), 10.0 ug/mL 니코틴
- 매연 ; DEP(Diesel Exhaust Particles) 10.0ug/mL
48 시간 동안 배양한 후 배지를 제거하고 PBS로 세척하였다. 4 중량% 포름알데히드 용액을 첨가하고 상온에서 15분간 보관하였다. 용액을 제거하고 TBS로 세척하였다. 침투 용액(Permeabilization sol’n)을 첨가하고 상온에서 15분간 보관하였다. 용액을 제거하고 TBS로 세척하였다. 담금질 용액(Quenching sol’n)을 첨가하고 상온에서 20분간 보관하였다. 용액을 제거하고 TBS로 세척하였다. 차단 용액(Blocking sol’n)을 첨가하고 상온에서 30분간 보관하였다. 용액을 제거하고 LEA 단백질 항체를 첨가하고 냉장에서 하룻밤 뒀다. 항체 제거 후 세척 완충액(washing buffer)로 세척하였다. HRP 콘쥬게이트 용액을 첨가하고 상온에서 30분간 보관한다. 용액을 제거하고 세척 완충액(washing buffer)로 세척하였다. TBS 섭스트레이트를 첨가하고 상온에서 차광하여 15분간 반응시켰다. TBS 중지 용액(stop sol’n)을 첨가하고 마이크로플레이트 리더(Microplate reader, ELISA, 450nm)에서 흡광도를 측정하였다. 그 결과는 도 1에 나타내었다.
도 1에 나타낸 바와 같이, UV, 먼지, 황사, 담배연기, 매연의 스트레스원에 노출시 LEA 단백질의 발현양이 감소함을 알 수 있다.
실험예 2: 외부 환경 스트레스에 의한 각질세포의 생존률 측정
세포주로 사람 피부 각질세포(Human epidermal keratinocyte, HEK)를 사용하였다.
증식배양용 배지는 10% FBS 와 1% AA 가 첨가된 DMEM 배지, 시료처리용 배지는 1% AA 가 첨가된DMEM 배지를 사용하였고, In cell ELISA Kit로 Pierce Colorimetric In-Cell ELISA Kits를 사용하였다.
HEK 세포를 96 웰에 10,000 세포/웰의 농도로 세포를 씨딩(seeding)하고 24 시간 동안 배양하여 세포를 플레이트에 부착시켰다. 배지를 제거하고 PBS로 3회 세척하였다. 시료처리용 배지로 배지를 교체한 후 각 웰을 해당하는 스트레스원에 12시간 동안 노출시켰다(UV, 먼지, 황사, 담배연기, 매연). 이때 스트레스원 부여 조건은 상기 실험예 1과 동일하게 하였다.
96 시간 동안 배양한 후 0.1 ㎎ (50 ㎕ of 2 ㎎/㎖)의 MTT 용액을 모든 웰에 가해주었다. 37℃에서 4시간 더 배양하였다. 플레이트를 450 xg 에서 5분간 원심분리한 후 배지를 30㎕ 정도만 남기고 모두 빨아냈다. 각 웰에 DMSO 150㎕씩을 가한 후 포르마잔 결정이 녹을 때까지 10분간 가볍게 진탕해 주었다. 마이크로플레이트 리터(ELISA, 540nm)에서 흡광도를 측정하였다. 그 결과는 도 2에 나타내었다.
도 2에 나타낸 바와 같이, 자외선, 먼지, 황사, 담배연기, 매연의 외부 환경 스트레스원에 노출된 피부 각질세포의 생존율은 현저히 감소되었다.
실험예 3: 외부 환경 스트레스에 의한 진피세포의 생존률 측정
세포주는 사람 피부 섬유아세포(Human dermal fibroblast neonatal, HDFn)를 사용하였다. 증식배양용 배지는 10% FBS 와 1% AA 가 첨가된 DMEM 배지, 시료처리용 배지는 1% AA 가 첨가된DMEM 배지를 사용하였고, In cell ELISA Kit로 Pierce Colorimetric In-Cell ELISA Kits를 사용하였다.
HDFn세포를 96 웰에 10,000 세포/웰의 농도로 세포를 씨딩(seeding) 하고 24 시간 동안 배양하여 세포를 플레이트에 부착시켰다. 배지를 제거하고 PBS로 3회 세척하였다. 시료처리용 배지로 배지를 교체한 후 각 웰을 해당하는 스트레스원에 12시간 동안 노출시켰다 (UV, 먼지, 황사, 담배연기, 매연). 이때 스트레스원 부여 조건은 상기 실험예 1과 동일하게 하였다.
96 시간 동안 배양한 후 0.1 ㎎ (50 ㎕ of 2 ㎎/㎖)의 MTT 용액을 모든 웰에 가해주었다. 37℃에서 4시간 더 배양하였다. 플레이트를 450 xg 에서 5분간 원심분리한 후 배지를 30㎕ 정도만 남기고 모두 빨아냈다. 각 웰에 DMSO 150㎕씩을 가한 후 포르마잔 결정이 녹을 때까지 10분간 가볍게 진탕해 주었다. 마이크로플레이트 리더(ELISA, 540nm)에서 흡광도를 측정하였다. 그 결과는 도 3에 나타내었다. 도 3을 참조하면, 자외선, 먼지, 황사, 담배연기, 매연의 외부 환경 스트레스원에 노출된 피부 진피세포의 생존율은 현저히 감소되었다.
실험예 4: 추출물에 의한 LEA 단백질 발현양 변화 측정
HDFn 세포를 96 웰에 10,000 세포/웰의 농도로 세포를 씨딩(seeding) 하고 24 시간 동안 배양하여 세포를 플레이트에 부착시켰다. 배지를 제거하고 PBS로 3회 세척하였다. 시료처리용 배지에 시료를 종류별로 희석하여 1 중량%의 농도로 처리한다. 샘플의 종류는 다음과 같다.
(1) 양성 대조군 (+) : 무처리
(2) 음성 대조군 (-) : 200 uM H2O2
(3) 실시예 1의 여리고장미(Anastatica hierochuntica) 추출물
(4) 실시예 1의 여리고장미(Anastatica hierochuntica) 추출물 + 실시예 2의 미로탐누스 플라벨리폴리아(Myrothamnus flabellifolia) 추출물 (중량비 1:2)
48 시간 동안 배양한 후 배지를 제거하고 PBS로 세척하였다. 4 중량% 포름알데히드 용액을 첨가하고 상온에서 15분간 보관하였다. 용액을 제거하고 TBS로 세척하였다. 침투 용액(Permeabilization sol’n)을 첨가하고 상온에서 15분간 보관하였다. 용액을 제거하고 TBS로 세척하였다. 담금질 용액(Quenching sol’n)을 첨가하고 상온에서 20분간 보관하였다. 용액을 제거하고 TBS로 세척하였다. 차단 용액(Blocking sol’n)을 첨가하고 상온에서 30분간 보관하였다. 용액을 제거하고 LEA 단백질 항체를 첨가하고 냉장에서 하룻밤 뒀다. 항체 제거 후 세척 완충액(washing buffer)로 세척하였다. HRP 콘주게이트 용액을 첨가하고 상온에서 30분간 보관하였다. 용액을 제거하고 세척 완충액(washing buffer)로 세척하였다. TBS 섭스트레이트를 첨가하고 상온에서 차광하여 15분간 반응시켰다. TBS 중지 용액(stop sol’n)을 첨가하고 마이크로플레이트 리더(ELISA, 450nm)에서 흡광도를 측정하였다. 그 결과는 도 4에 나타내었다.
도 4를 참조하면, 여리고장미(Anastatica hierochuntica) 추출물을 단독 적용한 경우(AH) LEA 단백질의 발현이 증가하였으며, 여리고장미(Anastatica hierochuntica) 추출물 단독 보다는 미로탐누스 플라벨리폴리아(Myrothamnus flabellifolia) 추출물이 추가된 경우(AH+MF) LEA 단백질의 발현을 더욱 증가됨을 확인할 수 있었다.
실험예 5: 추출 물에 의한 각질세포의 생존률 변화 측정
세포주는 사람 피부 각질세포(Human epidermal keratinocyte, HEK)를 사용하였다.
HEK 세포를 96 웰에 10,000 세포/웰의 농도로 세포를 씨딩(seeding) 하고 24 시간 동안 배양하여 세포를 플레이트에 부착시켰다. 배지를 제거하고 PBS로 3회 세척하였다. 시료처리용 배지에 시료를 종류별로 희석하여 1 중량%의 농도로 처리한다. 샘플의 종류는 다음과 같다.
(1) 양성 대조군 (+) : 무처리
(2) 음성 대조군 (-) : 200 uM H2O2
(3) 실시예 1의 여리고장미(Anastatica hierochuntica) 추출물
(4) 실시예 1의 여리고장미(Anastatica hierochuntica) 추출물 + 실시예 2의 미로탐누스 플라벨리폴리아(Myrothamnus flabellifolia) 추출물 (중량비 1:2)
96 시간 동안 배양한 후 0.1 ㎎ (50 ㎕ of 2 ㎎/㎖)의 MTT 용액을 모든 웰에 가해주었다. 37℃에서 4시간 더 배양하였다. 플레이트를 450 xg 에서 5분간 원심분리한 후 배지를 30㎕ 정도만 남기고 모두 빨아냈다. 각 웰에 DMSO 150㎕씩을 가한 후 포르마잔 결정이 녹을 때까지 10분간 가볍게 진탕해 주었다. 마이크로플레이트 리더(ELISA, 540nm)에서 흡광도를 측정하였다. 그 결과는 도 5에 나타내었다.
도 5를 참조하면, 여리고장미(Anastatica hierochuntica) 추출물을 단독 적용한 경우(AH) 음성 대조군과 비교하여 각질세포의 생존율이 증가하였으며, 여리고장미(Anastatica hierochuntica) 추출물 단독 보다는 미로탐누스 플라벨리폴리아(Myrothamnus flabellifolia) 추출물이 추가된 경우(AH+MF) 각질세포 생존율이 더욱 증가됨을 확인할 수 있었다.
실험예 6: 추출 물에 의한 진피세포의 생존률 변화 측정
세포주는 사람 피부 섬유아세포(Human dermal fibroblast neonatal, HDFn)를 사용하였다. 증식배양용 배지는 10% FBS 와 1% AA 가 첨가된 DMEM 배지, 시료처리용 배지는 1% AA 가 첨가된DMEM 배지를 사용하였고, In cell ELISA Kit로 Pierce Colorimetric In-Cell ELISA Kits를 사용하였다.
HDFn 세포를 96웰에 10,000 세포/웰의 농도로 세포를 씨딩(seeding) 하고 24 시간 동안 배양하여 세포를 플레이트에 부착시켰다. 배지를 제거하고 PBS로 3회 세척하였다.
HDFn세포를 96 웰에 10,000 세포/웰의 농도로 세포를 씨딩(seeding)하고 24h 배양하여 세포를 플레이트에 부착시켰다. 배지를 제거하고 PBS로 3회 세척하였다. 시료처리용 배지에 시료를 종류별로 희석하여 1 중량%의 농도로 처리하였다. 샘플의 종류는 다음과 같다.
(1) 양성 대조군 (+) : 무처리
(2) 음성 대조군 (-) : 200 uM H2O2
(3) 실시예 1의 여리고장미(Anastatica hierochuntica) 추출물
(4) 실시예 1의 여리고장미(Anastatica hierochuntica) 추출물 + 실시예 2의 미로탐누스 플라벨리폴리아(Myrothamnus flabellifolia) 추출물 (중량비 1:2)
96 시간 동안 배양한 후 0.1 ㎎ (50 ㎕ of 2 ㎎/㎖)의 MTT 용액을 모든 웰에 가해주었다. 37℃에서 4시간 더 배양하였다. 플레이트를 450 xg 에서 5분간 원심분리한 후 배지를 30㎕ 정도만 남기고 모두 빨아냈다. 각 웰에 DMSO 150㎕씩을 가한 후 포르마잔 결정이 녹을 때까지 10분간 가볍게 진탕해 주었다. 마이크로플레이트 리더(ELISA, 540nm)에서 흡광도를 측정하였다. 그 결과는 도 6에 나타내었다.
도 6을 참조하면, 여리고장미(Anastatica hierochuntica) 추출물을 단독 적용한 경우(AH) 음성 대조군과 비교하여 진피세포의 생존율이 증가하였으며, 여리고장미(Anastatica hierochuntica) 추출물 단독 보다는 미로탐누스 플라벨리폴리아(Myrothamnus flabellifolia) 추출물이 추가된 경우(AH+MF) 진피세포 생존율이 더욱 증가됨을 확인할 수 있었다.

Claims (8)

  1. 여리고장미(Anastatica hierochuntica) 추출물을 함유하는 환경 스트레스에 대한 피부 보호 효능을 갖는 화장료 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은
    추가로 미로탐누스 플라벨리폴리아(Myrothamnus flabellifolia) 추출물을 함유하는 것을 특징으로 하는 환경 스트레스에 대한 피부 보호 효능을 갖는 화장료 조성물.
  3. 제 1항 또는 제2항에 있어서, 상기 추출물은
    화장료 조성물 총 중량에 대하여 0.001 ~ 30.0 중량% 함유하는 것을 특징으로 하는 환경 스트레스에 대한 피부 보호 효능을 갖는 화장료 조성물.
  4. 제 1항 또는 제2항에 있어서, 상기 추출물은
    액상, 농축된 고상 및 동결 건조된 분말 형태를 갖는 것을 특징으로 하는 환경 스트레스에 대한 피부 보호 효능을 갖는 화장료 조성물.
  5. 제 1항 또는 제2항에 있어서, 상기 추출물은
    정제수, 메탄올, 에탄올, 1,2-프로판디올, 글리세린, 에틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜, 헥산, 디클로로메탄, 디클로로에탄, 에틸아세테이트 및 이의 혼합물로부터 선택된 추출용매를 사용하여 추출한 것을 특징으로 하는 환경 스트레스에 대한 피부 보호 효능을 갖는 화장료 조성물.
  6. 제 1항 또는 제2항에 있어서, 상기 추출물은
    냉침추출, 초음파추출, 환류 냉각추출, 열수추출, 실온추출, 가온추출, 초임계추출 방법으로부터 추출되는 것을 특징으로 하는 환경 스트레스에 대한 피부 보호 효능을 갖는 화장료 조성물.
  7. 제 1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화장료 조성물은
    용액, 현탁액, 유탁액, 겔, 로션, 에센스, 크림, 파우더, 비누, 팩마스크, 클렌징, 오일, 파운데이션, 스프레이로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종의 제형을 갖는 환경 스트레스에 대한 피부 보호 효능을 갖는 화장료 조성물.
  8. 제 1 항 내지 제 6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 환경 스트레스는
    자외선, 먼지, 황사, 담배연기 또는 매연인 것을 특징으로 하는 환경 스트레스에 대한 피부 보호 효능을 갖는 화장료 조성물.
KR1020140173873A 2014-12-05 2014-12-05 여리고장미 추출물을 함유하는 환경 스트레스에 대한 피부 보호 효능을 갖는 화장료 조성물 KR20160068327A (ko)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020140173873A KR20160068327A (ko) 2014-12-05 2014-12-05 여리고장미 추출물을 함유하는 환경 스트레스에 대한 피부 보호 효능을 갖는 화장료 조성물

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020140173873A KR20160068327A (ko) 2014-12-05 2014-12-05 여리고장미 추출물을 함유하는 환경 스트레스에 대한 피부 보호 효능을 갖는 화장료 조성물

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20160068327A true KR20160068327A (ko) 2016-06-15

Family

ID=56135050

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020140173873A KR20160068327A (ko) 2014-12-05 2014-12-05 여리고장미 추출물을 함유하는 환경 스트레스에 대한 피부 보호 효능을 갖는 화장료 조성물

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR20160068327A (ko)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108888539A (zh) * 2018-08-17 2018-11-27 广东丸美生物技术股份有限公司 有机护肤基质及其制备方法和应用及有机化妆品
CN112386532A (zh) * 2019-08-19 2021-02-23 广东丸美生物技术股份有限公司 一种密罗木提取物的制备方法及其应用
KR102333688B1 (ko) * 2021-09-07 2021-12-02 에스엘코스메틱 주식회사 환경 스트레스에 대한 피부 보호 효능을 갖는 화장료 조성물
KR102505375B1 (ko) 2022-11-14 2023-03-02 황지애 개선된 트러블 진정 효과를 제공하는 화장료 조성물 및 이의 제조방법

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108888539A (zh) * 2018-08-17 2018-11-27 广东丸美生物技术股份有限公司 有机护肤基质及其制备方法和应用及有机化妆品
CN108888539B (zh) * 2018-08-17 2021-05-18 广东丸美生物技术股份有限公司 有机护肤基质及其制备方法和应用及有机化妆品
CN112386532A (zh) * 2019-08-19 2021-02-23 广东丸美生物技术股份有限公司 一种密罗木提取物的制备方法及其应用
KR102333688B1 (ko) * 2021-09-07 2021-12-02 에스엘코스메틱 주식회사 환경 스트레스에 대한 피부 보호 효능을 갖는 화장료 조성물
KR102505375B1 (ko) 2022-11-14 2023-03-02 황지애 개선된 트러블 진정 효과를 제공하는 화장료 조성물 및 이의 제조방법

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR102436256B1 (ko) 미로탐누스 플라벨리폴리아 추출물을 함유하는 환경 스트레스에 대한 피부 보호 효능을 갖는 화장료 조성물
JP5322948B2 (ja) 大山蓮華抽出物を含有する光老化防止用及び皮膚皺改善用化粧料組成物
KR101723526B1 (ko) 동백꽃, 벚꽃, 쟈스민꽃, 캐모마일꽃 및 연꽃 혼합추출물을 함유하는 화장료 조성물
KR20160068327A (ko) 여리고장미 추출물을 함유하는 환경 스트레스에 대한 피부 보호 효능을 갖는 화장료 조성물
KR101848881B1 (ko) 미선나무 효모 발효물을 포함하는 주름개선용 화장료 조성물
CN106880561B (zh) 用于调节皮肤温度的含有紫竹提取物的化妆品组合物
KR101395159B1 (ko) 난대수종 및 산림수종의 천연향료를 함유하는 향수제조방법 및 그 향수조성물
KR20160068317A (ko) 아르간 트리 추출물을 함유하는 환경 스트레스에 대한 피부 보호 효능을 갖는 화장료 조성물
KR101517197B1 (ko) 방울 양배추 추출물을 유효성분으로 하는 화장료 조성물
Saeedfar et al. The effect of drought stress on the essential oil content and some of the biochemical characteristics of anise hyssop (Agastache foeniculum [Pursh] Kuntze)
Upadhyay et al. Phytochemical Analysis and Influence of Edaphic Factors on Lawsone Content of Lawsonia inermis L.
KR102402211B1 (ko) 산해박 추출물을 유효성분으로 함유하는 블루라이트에 의한 피부 노화 억제용 화장료 조성물
KR20160036202A (ko) 옥수수 속대 추출물을 유효성분으로 함유하는 자외선 차단용 화장료 조성물
JP2007509133A (ja) アカメガシワ抽出物を含有する皺改善用化粧料組成物｛ＣｏｓｍｅｔｉｃＣｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓＣｏｍｐｒｉｓｉｎｇＥｘｔｒａｃｔｆｒｏｍＭａｌｌｏｔｕｓｊａｐｏｎｉｃｕｓｆｏｒＩｍｐｒｏｖｉｎｇＳｋｉｎＷｒｉｎｋｌｅ｝
KR20210141085A (ko) 편백, 해당화, 및 레몬밤 추출물을 유효성분으로 포함하는 항균 및 항진균 화장료 조성물
KR100909574B1 (ko) 권삼 추출물을 함유하는 자유 라디칼 소거용 화장료 조성물
KR102369110B1 (ko) 둥근매듭풀 및 솜방망이 혼합추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물
KR101894539B1 (ko) 펙톨리나린을 함유하는 피부 주름 개선 및 피부 노화 방지용 화장료 조성물
KR102221718B1 (ko) 산국화로부터 추출한 정유를 함유하는 아토피 피부염 개선용 크림 화장료 조성물
KR20140103633A (ko) 대나무 잎 추출물 및 호장근 추출물을 유효성분으로 함유하는 항산화 또는 주름 개선용 화장료 조성물
KR101592084B1 (ko) 식물 추출물을 함유하는 화장료 조성물
KR102136986B1 (ko) 낙지다리 추출물을 포함하는 피부 재생 촉진용 약제 조성물 및 피부재생 촉진용 화장료 조성물
Newman A new species of Zingiber (Zingiberaceae) from Lao PDR
KR20170122315A (ko) 미선나무 추출액을 이용한 피부용 화장료 조성물
KR101598194B1 (ko) 헤어 및 바디용 다기능 소취 화장료 조성물

Legal Events

Date Code Title Description
WITN Application deemed withdrawn, e.g. because no request for examination was filed or no examination fee was paid