KR20150130066A - 가금류용 유산균 발효 조성물 및 이의 제조방법 - Google Patents

가금류용 유산균 발효 조성물 및 이의 제조방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 육계의 성장 및 계육의 저장성 증진을 목적으로 하는, 유산균발효 조성물을 함유하는 가금류용 사료 및 이의 제조방법에 관한 것이다. 3종류의 유산균 발효 조성물(일반 유산균 발효 조성물;LC, 유산균을 강화한 유산균 강화 발효 조성물;FLC, 및 복합 유산균 발효 조성물;CLC)의 어느 한 항의 발효 조성물을 총 중량 대비 3% 또는 6%로 포함하는 가금류용 사료를 육계에 식이시키고, 대조군(무첨가구)과 비교하여 증진된 증체량, 감소된 사료요구율과 장내 대장균 수, 안정된 장내 pH 효과를 확인하였으며, 장기 저장시 계육의 현저한 산패 진행 저하가 발생되었다. 따라서 본 발명의 유산균 발효 조성물을 함유하는 가금류용 사료는, 가금류의 가축사육에서 고품질 가금류 생산용 사료로서 큰 활용이 기대된다.

Description

가금류용 유산균 발효 조성물 및 이의 제조방법{A Composition for poultry comprising fermented broth of Lactic acid bacteria and method for manufacturing the same}
본 발명은 유산균 발효 조성물을 함유하는 가금류용 사료 및 이의 제조방법에 관한 것이다.
미생물 중에는 생육하면서 유산을 대사 산물로서 많이 생성하는 것이 있는데, 이러한 세균들을 총칭하여 유산균(lactic acid bacteria)이라고 한다. 유산균은 사람의 장관 내, 구강, 질 등에 상재균으로서 존재하고 있다. 사람이 태아로 있을 당시 인체 내는 무균 상태이나, 분만시 산도, 질, 공기 등을 통하여 대장균, 부패균, 포도상구균 등의 유해균과, 유산간균 등의 유익균에 감염되게 된다. 장내에 정착한 유산균은 병원성 세균이 소화관 상피에 부착하는 것을 방해하여 질병 발생을 막아주며, 유산균에 의해 생성된 항생 물질이 설사를 일으키는 병원성 미생물이나 장내 유해균을 죽이거나 증식을 억제한다. 그러나 현대인에게서 노화, 불규칙한 식생활 및 스트레스 등의 원인으로 인해 유산균을 비롯한 장내 유익균의 수가 감소하고 있는 추세이다.
이와 같이, 장내 유익균으로서 유산균의 수가 감소하기 때문에, 외부에서 인위적인 섭취 방법을 통해 장내 유산균 수를 증가시키고자 하는 기술이 개발되고 있다. 또한 축산 분야에서도, 한정된 공간에서의 대량 사육으로 인한 가축의 면역력 저하 및 세균 감염을 방지하기 위하여, 유산균을 첨가한 사료의 배합 기술이 개발되고 있다. 특별히, 유산균 생균을 접종한 사료첨가제 기술(KR 10-1201337)에 관한 개발이 활발히 이루어지고 있다. 그러나 이러한 배합을 이용한 사료는 사료 조성물 내에서 유산균의 생존 기한이 짧고, 유산균 증식에 따른 사료의 수소이온농도지수(pH) 저하가 야기되기 때문에 사용이 용이하지 못하다. 또한 유산균을 배양하는 과정에서 발생하는 발효 조성물 내의 유익한 효소 및 유기산을 이용할 수 없다.
이와 같이, 유산균의 증식 및 보존 기간을 증대하며 유산균 발효 조성물의 유익 성분을 포함하는 사료의 개발이 요구되고 있는 실정이다.
본 발명은 상기와 같은 종래 기술상의 문제점을 해결하기 위해 안출된 것으로, 유산균 발효 조성물의 유익 성분을 포함하는 가금류용 유산균 발효 조성물 및 이의 제조방법을 제공하는 것을 그 목적으로 한다.
그러나 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 당 업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.
이하, 본원에 기재된 다양한 구체예가 도면을 참조로 기재된다. 하기 설명에서, 본 발명의 완전한 이해를 위해서, 다양한 특이적 상세사항, 예컨대, 특이적 형태, 조성물 및 공정 등이 기재되어 있다. 그러나, 특정의 구체예는 이들 특이적 상세 사항 중 하나 이상 없이, 또는 다른 공지된 방법 및 형태와 함께 실행될 수 있다. 다른 예에서, 공지된 공정 및 제조 기술은 본 발명을 불필요하게 모호하게 하지 않게 하기 위해서, 특정의 상세사항으로 기재되지 않는다. "한 가지 구체예" 또는 "구체예"에 대한 본 명세서 전체를 통한 참조는 구체예와 결부되어 기재된 특별한 특징, 형태, 조성 또는 특성이 본 발명의 하나 이상의 구체예에 포함됨을 의미한다. 따라서, 본 명세서 전체에 걸친 다양한 위치에서 표현된 "한 가지 구체예에서" 또는 "구체예"의 상황은 반드시 본 발명의 동일한 구체예를 나타내지는 않는다. 추가로, 특별한 특징, 형태, 조성, 또는 특성은 하나 이상의 구체예에서 어떠한 적합한 방법으로 조합될 수 있다.
본 발명의 일 구체예에서, 유산균(Lactic Acid Bacteria, 이하 LAB)이란 미생물 중에서 생육하면서 유산을 대사 산물로서 생성하는 균을 포함하는 광의의 개념을 말한다. 구체적으로, 소비하는 당에 대하여 약 50% 이상의 유산을 대사 생성물로 생성하는 세균으로서, 락토바실러스(Lactobacillus), 비피도박테리엄(Bifidobacterium), 카르노박테리움(Carnobacterium), 아토포비움(Atopobium), 락토코쿠스(Lactococcus), 페디오코쿠스(Pediococcus), 테트라게노코쿠스(Tetragenococcus), 류코노스토크(Leuconostoc), 바이셀라(Weisella), 오에노코쿠스(Oenococcus), 엔테로코쿠스(Enterococcus), 스트렙토코쿠스(Streptococcus), 베이고코쿠스(Vagococus)의 13개 속을 포함한다.
본 발명의 일 구체예에서, 유산균 발효 조성물이란, 미생물용 증식 배지에서 유산균을 혐기 배양한 후의 유산균 또는 유산균 대사 산물을 포함하는 결과물을 말한다. 생균 또는 사균으로서의 유산균이나 유산균의 구성 성분 중 일부가 포함되거나 포함되지 않아도 이를 모두 총칭하여 명명할 수 있다.
본 발명의 일 구체예에서, 가금류란 고기, 알, 털, 깃털 등 인간에게 유용한 축산물을 얻기 위해서 사람에 의해 사육되는 조류를 의미하며, 이에 한정하지는 않지만, 예를 들어 닭(육계), 칠면조, 거위, 집오리, 화조, 집비둘기 및 메추리 등을 말한다. 특히, 육계는 가금류에 속하는 다른 조류와 알에서 부화되는 특징, 날개와 부리를 가지고 있는 특징, 몸이 깃털로 덮이는 특징 및 폐호흡을 하며 척추를 가지는 특징의 공통점이 있다는 점에서, 육계의 생육과 관련된 효과는 기타 다른 가금류에도 그 효과가 있다고 할 것이다. 또한 본 명세서에 있어서, 가금류용 사료란 가금류의 양적, 질적 크기를 변화시키기 위해 공급하는 식용 물질을 말한다. 여기에 함유되는 유산균 발효 조성물은, 농축액 또는 분말 등의 형태 변화를 포함한다.
본 발명의 일 구체예에서, 사료는 시판되고 있는 일반사료를 모두 포함할 수 있으며, 이에 한정되지는 않으나, 미강, 옥수수, 대두박, 콩, 수수, 쌀, 보리, 밀, 귀리, 호밀, 좁쌀, 메밀, 티리티게일, 고구마, 타피오카, 밀기울, 맥강, 대두피, 옥수수겨, 맥아근, 전분박, 커피박, 잠분, 잠사, 해조분, 면실박, 채종박, 캐놀라밀, 임자박, 호마박, 아마박, 해바라기씨박, 낙화생박, 야자박, 옥수수 글루텐, 주정박, 옥수수 배아박, 고추씨박, 루핀종실, 어분, 우모분 및 육분일 수 있으며, 이러한 사료에 상기의 유산균 발효 조성물을 함유하는 것을 포함한다. 본 발명의 사료에는 일반적인 사료 첨가제, 예를 들면 소금, 골분, 인산칼슘제, 무기물 혼합제, 비타민제, 아미노산제, 항생물질, 호르몬제 등의 특수목적을 위한 사료 첨가제가 포함될 수 있다.
본 발명의 일 구체예에서, 유산균 발효 조성물은, 그 사용 배지에의 유산균 접종에 앞서, 배지를 고온 순간 살균하는 제조 공정을 포함한다. 통상적으로 미생물 배양용 배지를 살균할 때 발효탱크(관)에서 121℃, 15분간 살균을 행하게 되며, 이러한 살균 방법을 직접살균이라고 한다. 직접살균을 통한 배지의 살균은 열원이 배지(영양)성분에 과량 가해지므로 영양소의 파괴, 활성 저하, 탄화등의 문제점이 발생된다. 또한 배지 살균 후 유산균 종균을 접종하여 배양이 완료되었을 때, 생산성이 저하되고, 배양액의 성상이 진한 갈색을 나타내게 된다. 이는 살균을 위해 탱크의 온도가 121℃까지 도달하는데 30~60분이 소요되며, 121℃ 에서 15분간 살균 후 다시 배양온도인 37℃로 냉각하는데 약 90~120분 이상이 소요되기 때문이다. 그러나, 열교환기를 이용한 고온 순간 살균 방법을 이용하면, 살균시간은 130℃, 60초이고, 동시에 냉각이 이루어져 발효관으로 투입되는 배양액의 온도는 37℃가 된다. 이러한 열교환기는 살균용으로 스팀을 직접 투입하지 않고, 물의 온도를 올리는데 스팀을 사용하여, 이 높은 온도의 물로 배지를 살균하게 된다.
본 발명의 일 구체예에서, 유산균 발효 조성물은, 그 제조 과정에 있어 자동 pH 조절 장치를 사용하여 발효 공정 동안 일정한 pH를 유지하는 공정을 포함한다. 유산균의 발효가 계속 진행되면 산화환원반응 및 유기산의 배출에 의해 pH가 하락하게 된다. pH의 하락은 유산균의 성장을 저해하는데, 유산균 세포벽과 세포막의 투과성이 현저히 저하되어 세포막을 통한 세포 내로 영양분 이동이 방해되기 때문이다. 또한 배양액의 pH가 적절하지 않으면 균이 분열되지 않고 균이 길어지는 현상, 배양시간이 지나치게 길어지는 현상, 항균 활성물질 생산 및 배출 시스템 불량현상 등을 초래하게 된다. 따라서 본 배양 시스템에서는 전기적 센서에 의한 pH 조절용 On-Off 자동밸브의 사용으로, 배양기간 중 유산균의 적정 pH가 일정하게 유지되도록 조절한다.
본 발명의 일 구체예에서, 상기의 유산균 발효 조성물 함유 사료를 이용하여 사육한 육계의 양적 및 질적 성장평가 능력 시험으로서, 육계의 증체량 분석, 사료 섭취량 분석, 사료 요구율 분석, 장내 미생물 분석, 장내물의 pH 분석, 영양소 소화율 분석 시험 및 계육의 산패진행률 분석 시험 방법 및 결과를 포함한다.
본 발명의 일 구체예에서, 락토바실러스 엑시도필로스 (Lactobacillus acidophilus), 락토바실러스 플란타륨 (Lactobacillus plantarum), 비피도박테리엄 비피덤 (Bifidobacterium bifidum), 스트렙토코쿠스 써모필러스(Streptococcus thermophilus)로 구성된 군으로부터 선택된 어느 하나 이상을 포함하는 유산균으로 발효한 가금류용 유산균 발효 조성물을 제공한다. 상기 구체예에서, 상기 유산균은 15 X 106 cfu/ml 이상으로 접종하는 가금류용 유산균 발효 조성물을 제공하고, 유산균은 락토바실러스 엑시도필로스 (Lactobacillus acidophilus)인 가금류용 유산균 발효 조성물을 제공하며, 유산균은 락토바실러스 엑시도필로스 (Lactobacillus acidophilus), 락토바실러스 플란타륨 (Lactobacillus plantarum), 비피도박테리엄 비피덤 (Bifidobacterium bifidum) 및 스트렙토코쿠스 써모필러스(Streptococcus thermophilus)을 포함하는 가금류용 유산균 발효 조성물을 제공하며, 상기 발효 조성물은 류신 아릴아미다제(Leucine arylamidase), 알파-갈락토시다아제(galactosidase), 베타-갈락토시다아제(galactosidase), 알파-글루코시다아제(glucosidase) 및 베타-글루코시다아제(glucosidase)로 구성된 군으로부터 선택된 어느 하나 이상을 포함하는 가금류용 유산균 발효 조성물을 제공하며, 에스트라아제(Esterase), 발린 아릴아미다제(Valine arylamidase), 넵톨-AS-BI-포스포하이드롤라아제(Naphol-AS-BI-phosphohydrolase) 및 N-아세틸-베타-글루코시다아제(N-acetyl- glucosidase)를 추가로 포함하는 가금류용 유산균 발효 조성물을 제공하며, 발효시에 배지는 120~140℃의 온도에서 120초 이내로 살균하는 가금류용 유산균 발효 조성물을 제공하며, 발효시에 배지는 pH를 5.0~6.0으로 일정하게 유지하는 가금류용 유산균 발효 조성물을 제공한다.
본 발명의 다른 구체예에서, 상기의 어느 하나의 발효 조성물을 포함하는 가금류용 사료를 제공하고, 여기에서의 가금류는 고기, 알, 털, 깃털 등 인간에게 유용한 축산물을 얻기 위해서 사람에 의해 사육되는 조류로 구성된 군으로부터 선택된 어느 하나인 가금류용 사료를 제공한다.
본 발명의 또 다른 구체예에서, 상기의 어느 하나의 발효 조성물 또는 상기의 어느 하나의 가금류용 사료로 가금류를 사육시키는 방법을 제공한다.
본 발명의 또 다른 구체예에서, 락토바실러스 엑시도필로스 (Lactobacillus acidophilus), 락토바실러스 플란타륨 (Lactobacillus plantarum), 비피도박테리엄 비피덤 (Bifidobacterium bifidum), 스트렙토코쿠스 써모필러스(Streptococcus thermophilus)로 구성된 군으로부터 선택된 어느 하나 이상을 포함하는 유산균을 배지에 첨가하여 발효시켜서 가금류용 유산균 발효 조성물을 제조하는 방법을 제공하고, 상기 유산균은 15 X 106 cfu/ml 이상으로 접종하는 가금류용 유산균 발효 조성물을 제조하는 방법을 제공하며, 유산균은 락토바실러스 엑시도필로스 (Lactobacillus acidophilus)인 가금류용 유산균 발효 조성물을 제조하는 방법을 제공하며, 유산균은 락토바실러스 엑시도필로스 (Lactobacillus acidophilus), 락토바실러스 플란타륨 (Lactobacillus plantarum), 비피도박테리엄 비피덤 (Bifidobacterium bifidum) 및 스트렙토코쿠스 써모필러스 (Streptococcus thermophilus)를 포함하는 가금류용 유산균 발효 조성물을 제조하는 방법을 제공하며, 상기 발효 조성물은 류신 아릴아미다제(Leucine arylamidase), 알파-갈락토시다아제(α-galactosidase), 베타-갈락토시다아제(β-galactosidase), 알파-글루코시다아제(α-glucosidase) 및 베타-글루코시다아제(β-glucosidase)로 구성된 군으로부터 선택된 어느 하나 이상을 포함하는 가금류용 유산균 발효 조성물을 제조하는 방법을 제공하며, 에스트라아제(Esterase), 발린 아릴아미다제(Valine arylamidase), 넵톨-AS-BI-포스포하이드롤라아제(Naphol-AS-BI-phosphohydrolase) 및 N-아세틸-베타-글루코시다아제(N-acetyl-β-glucosidase)를 추가로 포함하는 가금류용 유산균 발효 조성물을 제조하는 방법을 제공하며, 발효시에 배지는 120~140℃의 온도에서 120초 이내로 살균하는 가금류용 유산균 발효 조성물을 제조하는 방법을 제공하며, 발효시에 배지는 pH를 5.0~6.0으로 일정하게 유지하는 가금류용 유산균 발효 조성물을 제조하는 방법을 제공한다.
본 발명의 또 다른 구체예에서, 상기의 어느 하나의 발효 조성물을 포함하는 가금류용 사료를 제조하는 방법을 제공하고, 여기에서의 가금류는 고기, 알, 털, 깃털 등 인간에게 유용한 축산물을 얻기 위해서 사람에 의해 사육되는 조류로 구성된 군으로부터 선택된 어느 하나인 가금류용 사료를 제조하는 방법을 제공한다.
이하 상기 본 발명을 단계별로 상세히 설명한다.
본 발명은 공정 중 배지의 고온 순간 살균과 pH 자동 조절 장치를 사용함으로써, 안정적이고 효율적인 고품질의 유산균 발효 조성물 제조 방법을 제공한다. 또한 본 발명에 따른 유산균 발효 조성물을 함유하는 사료는 육계의 사료 요구율을 개선시켰고, 계육의 산패진행을 억제함으로써 장기 저장성을 크게 향상시켰다. 이러한 효과는 유산균 발효 조성물의 종류와 사료 내 함유 비율을 달리함으로써 조절 가능하다. 따라서 본 발명의 유산균 발효 조성물을 함유하는 가금류용 사료는, 육계의 가축사육에서 고품질 육계 생산용 사료로서 큰 활용이 기대된다.
도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 유산균 배양액 발효 공정도를 나타낸 도면이다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
실시예
실시예 1: 유산균 발효 조성물 및 이를 포함하는 사료의 제조
실시예 1. 1. 유산균의 준비
본 발명의 유산균 발효 조성물은 일반 유산균 발효 조성물(LAB culture broth, 이하 LC), 유산균을 강화한 유산균 강화 발효액(LAB fortified LCB, 이하 FLC), 그리고 복합유산균발효 조성물(Complex LAB culture broth, 이하 CLC)으로 구분되며, 각각의 발효 조성물 제조에 사용된 유산균 종류와 수는 [표1]과 같았다.
유산균 종류 기탁번호 유산균 수 ( cfu / ml )
LC 락토바실러스 엑시도필로스
(Lactobacillus acidophilus)
11906 BP 1∼5 X 106
FLC 락토바실러스 엑시도필로스
(Lactobacillus acidophilus)
11906 BP 1~5 X 10 8
CLC 락토바실러스 엑시도필로스
(Lactobacillus acidophilus)
11906 BP 1∼5 X 106
락토바실러스 플란타륨
(Lactobacillus plantarum)
10782 BP 1∼5 X 106
비피도박테리엄 비피덤
(Bifidobacterium bifidum)
12199 BP 1∼5 X 106
스트렙토코쿠스 써모필러스
(Streptococcus thermophilus)
11870 BP 1∼5 X 106
-70℃의 초저온 냉동고(Deep freezer)에 보관되어 있던 상기 유산균의 종균을 해동 후 일정 기간 계대 배양하여 증식시키고, 대장균 집락을 제외한 유산균 집락을 분리하였다.
실시예 1. 2. 유산균 배양배지의 준비
실시예 1. 1.의 유산균 배양을 위한 배양배지는 당류로 포도당, 과당, 자당중 한 성분이상을 포함하고 사용농도는 15%, 단백질원으로 소이펩톤, 효모추출물, 대두분리단백중 두 성분이상을 포함하고 사용농도는 13% , 제일인산칼륨 0.05~0.2%, 제이인산칼륨 0.05~0.2%, 초산나트륨 0.1~0.5%, 구연산 암모늄 0.05~0.2%, 황산마그네슘 0.01~0.25%, 황산망간 0.0005~0.005%, Tween-80 0.05~0.2%, 비타민류, 아미노산류 등을 포함하는 영양 배지를 사용하였다. 각각의 성분이 칭량되어 혼합된 배지는 열교환기 살균 방법을 이용하여 130℃ 고온에서 살균시간은 60초간 순간 살균되었다. 살균과 동시에 냉각되어, 최종 온도 37℃의 배양액이 발효관으로 투입되었다.
배양용 배지의 고온 순간 살균 효과를 탱크에서의 직접 살균 효과와 비교하기 위하여, 락토바실러스 엑시도필로스(Latobacillus acidophilus) 균을 배지에 접종하고, 배양하였다. 배양된 유산균은 증류수로 20배 희석하여, Shimazu사 Spectrophotometer 를 이용하여 610nm에서 OD 측정하였다. 살균 효과의 비교는 [표 2]에 나타내었다.
열교환기의 고온 순간 살균 탱크의 직접 살균
살균 효과 승온 시간 순간 30~60분
살균 시간 1분 15분
냉각 시간 순간 90~120분
배양 효과 배양 시간 12~14 시간 15 ~20 시간
OD (610 nm ) 550 450
생균수 1~3 X 109 5 X 108 ~ 1 X 109
성상 옅은 갈색 진한 갈색
흡광도 측정 결과는 고온 순간 살균이 550, 직접 살균이 450으로 큰 차이를 나타내었다. 이에 따른 유산균 생균 수는 고온 순간 살균이 13 X 109, 직접 살균이 5 X 108 ~ 1 X 109으로, 최대 6배까지 차이가 날 수 있다. 배양 배지의 성상은 고온 순간 살균이 옅은 갈색, 직접 살균이 진한 갈색으로, 직접 살균된 배지는 그 내부의 영양성분이 탄화되었다는 것을 나타낸다.
실시예 1. 3. 유산균 배양
실시예의 1. 1.의 유산균을 실시예 1. 2의 배양 배지에 적정 수만큼 접종하고, 30-37℃ 및 N2 99.9% 이상의 혐기 조건에서 8-20 시간 동안 배양하였다. 배양 과정 중 증식되는 유산균에 의한 발효 조성물의 pH 저하는 자동 조절 장치로 조절하였다. 발효 조성물이 적정 pH 이하이면 전기적 신호에 의해 알칼리 On-Off 자동 밸브가 개방되어 알칼리 성분이 배양액 내로 공급되고, 다시 적정 pH에 도달하게 되면 전기적 신호에 의해 On-Off 자동 밸브가 닫히게 되어 더 이상 알칼리 성분이 배양액 내로 투입되지 않게 되는 조절을 발효 과정 중 계속 반복되었고, 균체량이 목표 수준에 도달하면 자동 밸브를 차단하여 알칼리 성분이 더 이상 배양액 내로 공급되지 않게 함으로서, 배양액의 pH를 5.0~6.0으로 일정하게 유지하였다. 유산균 준비 및 유산균 배양의 흐름은 [도 1]에 나타내었다.
실시예 1. 4. 사료의 제조
실시예 1.3.의 배양물과 가금류용 사료를 중량 대비 혼합하여 제조예 1~7을 제조하였고, [표 3]에 상세히 나타내었다.
사료의 명칭 유산균 발효 조성물의 혼합 비율
제조예 1 유산균 발효 조성물을 포함하지 않는 가금류용 사료
제조예 2 총 중량 중 3% 중량의 LC를 포함하는 가금류용 사료
제조예 3 총 중량 중 6% 중량의 LC를 포함하는 가금류용 사료
제조예 4 총 중량 중 3% 중량의 FLC를 포함하는 가금류용 사료
제조예 5 총 중량 중 6% 중량의 FLC를 포함하는 가금류용 사료
제조예 6 총 중량 중 3% 중량의 CLC를 포함하는 가금류용 사료
제조예 7 총 중량 중 6% 중량의 CLC를 포함하는 가금류용 사료
실시예 2: 유산균 발효 조성물에 대한 효소 분석
락토바실러스 엑시도필로스 (Lactobacillus acidophilus), 락토바실러스 플란타륨 (Lactobacillus plantarum), 비피도박테리엄 비피덤 (Bifidobacterium bifidum), 스트렙토코쿠스 써모필러스(Streptococcus thermophilus) 를 동일한 비율로 혼합하여 발효한 발효 조성물(CLC)으로부터 함유된 소화 효소 검출 시험을 진행하였다. 시험에는 상용화된 API ZYM kit (bioMerieux, 미생물의 효성활성연구를 위한 키트)가 사용되었고, kit 내의 권장 프로토컬에 따라 준비된 kit의 기질 용액에 유산균 발효 조성물을 각 65㎕ 넣고, 37℃에서 4시간 동안 반응시켜 발색 정도를 확인하였다. 유산균 발효 조성물에서 총 9가지의 소화 효소가 검출되었으며, 그 결과는 발색 정도에 따라 약함(w), 보통(+), 강함(++) 으로 표기하여 [표 4]에 나타내었다.
효소 번호 효소 종류 판독 결과
# 03 Esterase w
# 06 Leucine arylamidase ++
# 07 Valine arylamidase +
# 12 Naphol-AS-BI-phosphohydrolase w
# 13 α-galactosidase w
# 14 β-galactosidase ++
# 16 α-glucosidase ++
# 17 β-glucosidase ++
# 18 N-acetyl-β-glucosidase w
락토바실러스 계열은 소화효소중 상대적으로 protease, amylase의 효소활성이 높고, 비피도박테리움 계열은 상대적으로 cellulase, phytase의 활성이 높다. 따라서 유산균 발효 조성물을 혼합하여, 복합 유산균 발효 조성물을 사용하였을 때 체내 소화율을 높일 것으로 기대된다.
실시예 3: 유산균 발효 조성물 함유 사료의 육계에 대한 영향발효 조성물
실시예 3.1. 육계의 성장능력 평가 시험
제조예 1 내지 7의 사료를 육계가 식이하도록 하되, 6회 반복하고, 반복 당 3일령 육계 15 수를 공시하여 28일간 사양시험을 수행하였다. 사료 처리 28일 후, 육계의 증체량(g)과 사료섭취량(g)을 측정하였으며, 수당사료섭취량/수당증체량의 식으로 사료요구율을 계산하여 [표 5] 에 나타내었다.
처리 명칭 수당 증체량 (%) 사료요구율(%)
제조예 1 100.00 100.00
제조예 2 101.81 99.63
제조예 3 101.99 99.20
제조예 4 105.34 96.42
제조예 5 105.67 98.21
제조예 6 109.20 97.96
제조예 7 114.65 93.52
시험에 사용된 모든 유산균 발효 조성물 첨가구에서 육계의 사료 요구율이 개선되는 것을 확인하였다. 특히 CLC 6% (제조예7) 첨가시 육계의 사료요구율 저하가 가장 두드러졌다.
실시예 2.2. 육계의 장내 미생물 및 장 내용물의 pH 측정 시험
실시예 2.1.의 방법으로 제조예 1 내지 7의 사료를 육계가 28일간 식이하도록 하고, 대조군과 비교하였다. 28일 후, 처리구당 4수씩을 무작위로 선정하여 도계한 후 장 내용물을 수거하여, pH 및 장 내용물내 주요 미생물의 수를 분석하였다.
장내 미생물 및 장 내용물의 pH 측정 결과는 [표 6]에 나타내었다.
처리 명칭 총 유산균 (%) 장내 살모넬라 (%) 장내 대장균 (%) 장 내용물의 pH
제조예 1 100.0 0 100.00 6.12
제조예 2 175.0 0 34.78 6.24
제조예 3 100.0 0 21.74 6.32
제조예 4 100.0 0 52.17 6.21
제조예 5 112.5 0 65.22 6.23
제조예 6 150.0 0 52.17 6.25
제조예 7 150.0 0 40.00 6.25
시험에 사용된 모든 유산균 발효 조성물 처리구에서 대조군과 비교하여 등가 또는 증가된 장내 총유산균 수가 관찰되었고, 대장균 수가 유의하게 감소하였다. 살모넬라는 처리구에 상관없이 본 시험에서는 검출되지 않았으나, 이는 시험에 사용된 육계가 식용을 목적으로 하는 사육 육계라는 점에서 당연히 예측된 결과이다. 상기의 증가된 장내 총 유산균 수의 결과로서 유산균 발효 조성물 내의 다양한 효소 및 기능 성분의 효과로 육계의 증체량이 증가하였으며 사료요구율이 감소하였음을 알 수 있다 (실시예 2-1). 특히 모든 유산균 발효 조성물 처리구에서 대조군에 비하여 장내 대장균 수가 크게 감소하였다. 대장균(Escherichia coli, E. coli )은 사람의 식중독을 일으키는 주된 원인균으로서, 식품에 있어 그 수가 엄격히 조절되어야 한다. 장내 pH 산성화는 설사와 복통을 동반한다. 따라서 장내 pH 5.5~6.5를 유지하는 것이 중요하며, 유산균 발효 조성물이 처리된 모든 처리구에서 대조군과 비슷한 수준의 장내 적정 pH를 유지하는 것을 확인하였다.
실시예 2.3. 계육의 산패 진행 측정 시험
실시예 2.1.의 방법으로 제조예 1 내지 7의 사료를 육계가 28일간 식이하도록 하고, 대조군과 비교하였다. 28일 후, 처리구당 4수씩을 무작위로 선정하여 도계한 후 가슴육을 수거하여 10일간 저장하며 계육의 산패 진행 정도를 평가하였다. 산패진행은 TBARS assay kit (Cell biolanbs, STA-330)을 사용하여, 가슴육의 유지 산화로 생성되는 말론디알데히드(malondialdehyde)의 양을 측정함으로서 분석하였다.
사료 내 유산균 발효 조성물의 첨가가 계육의 저장 중 산패 진행에 미치는 효과를 [표 7]에 나타내었다.
처리 명칭 저장 경과 일 수에 따른 산패 진행 (%)
1 3 5 10
제조예 1 100.00 100.00 100.00 100.00
제조예 2 95.01 98.78 98.99 95.91
제조예 3 98.34 101.22 97.98 94.33
제조예 4 98.34 103.88 97.98 93.93
제조예 5 95.01 101.22 98.99 90.90
제조예 6 98.34 102.45 95.96 91.29
제조예 7 100.00 101.22 95.96 88.92
저장 1일과 3일 후의 산패 진행(TBARS) 결과에서 모든 유산균 발효 조성물 처리구는 대조군과 비교하여 유의한 차이가 없었다. 그러나 식품의 저장 이라는 특성상 산패 진행은 장기 결과가 중요하며, 시험 결과에서 5일 및 10일이 경과한 시점에서는 모든 유산균 발효 조성물 처리구에서 대조군과 비교하여 산패 진행이 지연되었다. 특히 10일 경과 시점에서 모든 유산균 발효 조성물 처리구에서 눈에 띄는 산패 지연이 확인되었으며, 6% 복합유산균 발효 조성물 처리구 (제조예7)의 경우 10% 이상의 산패 지연 효과를 보였다.
이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당 업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현 예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.
한국생명공학연구원 KCTC10782BP 20050516 한국생명공학연구원 KCTC11870BP 20110217 한국생명공학연구원 KCTC11906BP 20110330 한국생명공학연구원 KCTC12199BP 20120427

Claims (21)

  1. 락토바실러스 엑시도필로스 (Lactobacillus acidophilus), 락토바실러스 플란타륨 (Lactobacillus plantarum), 비피도박테리엄 비피덤 (Bifidobacterium bifidum), 스트렙토코쿠스 써모필러스(Streptococcus thermophilus)로 구성된 군으로부터 선택된 어느 하나 이상을 포함하는 유산균으로 발효한 가금류용 유산균 발효 조성물.
  2. 제 1항에 있어서,
    상기 유산균은 15 X 106 cfu/ml 이상으로 접종하는 가금류용 유산균 발효 조성물.
  3. 제 1항에 있어서,
    유산균은 락토바실러스 엑시도필로스 (Lactobacillus acidophilus)인 가금류용 유산균 발효 조성물.
  4. 제 1항에 있어서,
    유산균은 락토바실러스 엑시도필로스 (Lactobacillus acidophilus), 락토바실러스 플란타륨 (Lactobacillus plantarum), 비피도박테리엄 비피덤 (Bifidobacterium bifidum) 및 스트렙토코쿠스 써모필러스 (Streptococcus thermophilus)를 포함하는 가금류용 유산균 발효 조성물.
  5. 제 1항에 있어서,
    발효 조성물은 류신 아릴아미다제(Leucine arylamidase), 알파-갈락토시다아제(α-galactosidase), 베타-갈락토시다아제(β-galactosidase), 알파-글루코시다아제(α-glucosidase) 및 베타-글루코시다아제(β-glucosidase)로 구성된 군으로부터 선택된 어느 하나 이상을 포함하는 가금류용 유산균 발효 조성물.
  6. 제 1항에 있어서,
    에스트라아제(Esterase), 발린 아릴아미다제(Valine arylamidase), 넵톨-AS-BI-포스포하이드롤라아제(Naphol-AS-BI-phosphohydrolase) 및 N-아세틸-베타-글루코시다아제(N-acetyl-β-glucosidase)를 포함하는 가금류용 유산균 발효 조성물.
  7. 제 1항에 있어서,
    발효시에 배지는 120~140℃의 온도에서 1초 내지 120초 동안 살균하는 가금류용 유산균 발효 조성물.
  8. 제 1항에 있어서,
    발효시에 배지는 pH를 5.0~6.0으로 유지하는 가금류용 유산균 발효 조성물.
  9. 제 1항 내지 제 8항 중 어느 한 항의 발효 조성물을 포함하는 가금류용 사료.
  10. 제 9항에 있어서,
    가금류는 닭, 칠면조, 거위, 집오리, 화조, 집비둘기 및 메추리로 구성된 군으로부℃터 선택된 어느 하나 가금류용 사료.
  11. 제 1항 내지 제 8항 중 어느 하나의 조성물 또는 제 9항의 사료로 가금류를 사육하는 방법.
  12. 락토바실러스 엑시도필로스 (Lactobacillus acidophilus), 락토바실러스 플란타륨 (Lactobacillus plantarum), 비피도박테리엄 비피덤 (Bifidobacterium bifidum), 스트렙토코쿠스 써모필러스(Streptococcus thermophilus)로 구성된 군으로부터 선택된 어느 하나 이상을 포함하는 유산균을 배지에 첨가하여 발효시켜서 가금류용 유산균 발효 조성물을 제조하는 방법.
  13. 제 12항에 있어서,
    상기 유산균은 15 X 106 cfu/ml 이상으로 접종하는 가금류용 유산균 발효 조성물을 제조하는 방법.
  14. 제 12항에 있어서,
    유산균은 락토바실러스 엑시도필로스 (Lactobacillus acidophilus)인 가금류용 유산균 발효 조성물을 제조하는 방법.
  15. 제 12항에 있어서,
    유산균은 락토바실러스 엑시도필로스 (Lactobacillus acidophilus), 락토바실러스 플란타륨 (Lactobacillus plantarum), 비피도박테리엄 비피덤 (Bifidobacterium bifidum) 및 스트렙토코쿠스 써모필러스 (Streptococcus thermophilus)를 포함하는 가금류용 유산균 발효 조성물을 제조하는 방법.
  16. 제 12항에 있어서,
    발효 조성물은 류신 아릴아미다제(Leucine arylamidase), 알파-갈락토시다아제(α-galactosidase), 베타-갈락토시다아제(β-galactosidase), 알파-글루코시다아제(α-glucosidase) 및 베타-글루코시다아제(β-glucosidase)로 구성된 군으로부터 선택된 어느 하나 이상을 포함하는 가금류용 유산균 발효 조성물을 제조하는 방법.
  17. 제 12항에 있어서,
    에스트라아제(Esterase), 발린 아릴아미다제(Valine arylamidase), 넵톨-AS-BI-포스포하이드롤라아제(Naphol-AS-BI-phosphohydrolase) 및 N-아세틸-베타-글루코시다아제(N-acetyl-β-glucosidase)를 추가로 포함하는 가금류용 유산균 발효 조성물을 제조하는 방법.
  18. 제 12항에 있어서,
    발효시에 배지는 120~140℃의 온도에서 1초 내지 120초로 살균하는 가금류용 유산균 발효 조성물을 제조하는 방법.
  19. 제 12항에 있어서,
    발효시에 배지는 pH를 5.0~6.0으로 유지하는 가금류용 유산균 발효 조성물을 제조하는 방법.
  20. 제 12항 내지 제 19항 중 어느 한 항의 발효 조성물을 사료 첨가하여 가금류용 사료를 제조하는 방법.
  21. 제 20항에 있어서,
    가금류는 닭, 칠면조, 거위, 집오리, 화조, 집비둘기 및 메추리로 구성된 군으로부터 선택된 어느 하나인 가금류용 사료를 제조하는 방법.
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