KR20150073245A

KR20150073245A - 연경옥고를 유효성분으로 함유하는 주름개선 또는 항노화용 조성물

Info

Publication number: KR20150073245A
Application number: KR1020130160170A
Authority: KR
Inventors: 이희운; 유영법
Original assignee: (주)제이비티; 남부대학교산학협력단
Priority date: 2013-12-20
Filing date: 2013-12-20
Publication date: 2015-07-01

Abstract

본 발명은 연, 인삼, 복령, 지황 및 꿀을 포함하는 연경옥고를 유효성분으로 함유하는 주름개선 또는 항노화용 조성물에 관한 것이다. 상기 주름개선 또는 항노화용 조성물은 인체에 무해하여 안전성이 매우 뛰어난 천연물인 연, 인삼, 복령, 지황 및 꿀을 포함하는 연경옥고를 유효성분으로 함유한다. 본 발명의 조성물은 콜라겐 합성을 증가시키고, 엠엠피-1(MMP-1) 활성을 저해하여 피부 주름을 개선시킬 수 있으며, 열적 스트레스 및 산화적 스트레스에 저항성이 있어서 항노화 효과가 있다.

Description

연경옥고를 유효성분으로 함유하는 주름개선 또는 항노화용 조성물{A composition for anti-wrinkle or anti-aging comprising lotus- Gyoungokgo}

본 발명은 연, 인삼, 복령, 지황 및 꿀을 포함하는 연경옥고를 유효성분으로 함유하는 주름개선 또는 항노화용 조성물에 관한 것이다.

세포의 노화(senescence)가 개체의 노화에 어느 정도 적용되는지 아직 정확히 알려진 바 없다. 단지 염색체 말단부분의 텔로미어(telomere:GGGTTA의 반복배열부분)가 세포분열을 할 때마다 단축되고 한계에 도달하면 세포가 죽는 것으로 알려져 있다. 최근에는 세포 간질의 주성분인 콜라겐이 80대가 되면 20대의 65%로 감소하여 노화에 관여한다는 연구도 있다. 그리고 세포내 소포체 스트레스에 의한 이상 단백질 축적이 노화에 관여한다는 연구도 있다.

피부노화는 콜라겐, 프로테오글리칸(proteoglycan)이 분자간 교차결합(cross linking)이나 측쇄 수식에 의해 경화하여 세포-세포외기질(extra cellular matrix) 상호작용에 변화를 초래한다. 한편, 유극세포의 감소, 표피세포의 회전율(turn over, 보통 28일)은 70대에서 30대의 약 40%로 감소한다. 콜라겐, 세라마이드(ceramide)의 감소는 노화에 따른 피부 주름의 주된 원인이 된다. 에스트로젠의 투여는 피부의 콜라겐 증가뿐만 아니라 히아루론산(hyaluronic acid) 합성을 높여 보습성을 향상시킨다는 보고가 있다. (EL-Domyati M et al: Exp Dermatol 11, 2002)

산화적 스트레스는 노화의 중요한 원인으로 알려져 있다. 세포 스트레스 유발인자로는 과산화물(superoxide), 히드록시 라디칼(hydroxyl radical), 과산화수소(H2O2) 등 reactive oxygen species(ROS)라 불리우는 활성산소종이 있다. 그리고 산화질소(nitric oxide), 페록시나이트 라이트(peroxynitrite) 등 RNS(reactive nitrogen species)가 알려져 있으며, 이외에도 지질과산화물(lipid peroxyl radical)도 산화 스트레스 유발인자로 알려져 있다. 이러한 산화물들은 DNA염기인 구아닌(guanine)에 결합하여 돌연변이를 유발하여 노화나 암 등을 유발하는 것으로 알려져 있다. 산화적 손상을 억제할 수 있는 활성물질로는 수용성으로 vitamin C와 B12 등이 알려져 있고 지용성으로는 천연성분인 라이코펜(lycopene), 베타-카로틴(beta-carotene) 등이 잘 알려져 있다.

본 발명의 연, 인삼, 복령, 지황 및 꿀을 포함하는 연경옥고를 유효성분으로 함유하는 주름개선 또는 항노화용 조성물, 보다 구체적으로, 주름개선 또는 항노화용 약학적 조성물, 건강기능식품 조성물 및 화장료 조성물을 제공하기 위한 것이다.

본 발명은 콜라겐 합성을 증가시키고, 엠엠피-1(MMP-1) 활성을 저해하여 피부주름을 개선시킬 수 있고, 열적 스트레스 및 산화적 스트레스에 저항성이 있어서 항노화 기능을 가지는 주름개선 또는 항노화용 조성물을 제공하기 위한 것이다.

본 발명에서, 상기 연은 연화, 연근, 연잎, 연방 및 연자로 구성된 그룹에서 선택된 하나 이상이다.

본 발명에서, 상기 연은 1 내지 15 중량%, 인삼은 1 내지 15 중량%, 복령은 5 내지 30 중량%, 지황은 15 내지 40 중량%, 꿀은 30 내지 70 중량%인 것을 특징으로 한다.

본 발명에서, 상기 조성물은 콜라겐 합성을 증가시키고, 엠엠피-1(MMP-1) 활성을 저해하며, 열적 스트레스에 저항성이 있고, 산화적 스트레스에 저항성이 있는 것을 특징으로 한다.

본 발명에서, 상기 조성물은 약학적 조성물, 건강기능식품 조성물 또는 화장료 조성물인 것을 특징으로 한다.

본 발명에서, 상기 화장료 조성물은 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 수분로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 수분크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 샴푸, 린스, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 및 바디클린저로 구성된 그룹으로부터 선택된 어느 하나의 제형인 것을 특징으로 한다.

본 발명은 인체에 무해하여 안전성이 매우 뛰어난 천연물을 유효성분으로 함유하는 조성물을 제공할 수 있다.

또한, 본 발명은 콜라겐 합성을 증가시키고, 엠엠피-1(MMP-1) 활성을 저해하여 피부 주름을 개선시킬 수 있다.

또한, 본 발명은 열적 스트레스 및 산화적 스트레스에 저항성이 있어서 항노화 효과가 있다.

도 1은 연방, 연잎, 연화, 연근, 연자의 물 추출물과 에탄올 추출물에 대한 세포생존율을 나타낸다.
도 2는 경옥고, 연근경옥고, 연화경옥고에 대한 세포생존율을 나타낸다.
도 3은 연방, 연잎, 연화, 연근, 연자의 물 추출물과 에탄올 추출물에 대한 인간 피부아 세포의 콜라겐 합성능을 나타낸다.
도 4는 경옥고, 연근경옥고, 연화경옥고에 대한 인간 피부아 세포의 콜라겐 합성능을 나타낸다.
도 5는 연근 에탄올 추출물의 MMP-1 활성 저해 효과를 나타낸다.
도 6은 경옥고, 연근경옥고, 연화경옥고의 MMP-1 활성 저해 효과를 나타낸다.
도 7은 연근 에탄올 추출물의 열적 스트레스 저항 효과를 나타낸다.
도 8은 경옥고, 연근경옥고, 연화경옥고의 열적 스트레스 저항 효과를 나타낸다.
도 9는 연근 에탄올 추출물의 산화적 스트레스 저항 효과를 나타낸다.
도 10은 경옥고, 연근경옥고, 연화경옥고의 산화적 스트레스 저항 효과를 나타낸다.

이하 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명자는 주름개선 효과 및 항노화 효과를 가지는 천연물에 대한 연구를 수행한 결과, 연, 인삼, 복령, 지황 및 꿀을 포함하는 연경옥고가 상기의 효과를 가지는 것을 확인하여 본 발명을 완성하였다.

국내에 자생하는 수련과(Nymphaeaceae)의 다년생 수생 초본으로는 순채(Brasenia schreberi), 개연꽃(Nuphar japonicum), 왜개연꽃(Nuphar pumilum), 가시연꽃(Euryale ferox), 수련(Nymphaea tetragona var. angusta) 및 연꽃(Nelumbo nucifera) 등이 있다.

전통의학에서 연꽃의 과실 및 종자를 연자(蓮子)라 하며, 양심(養心), 익신(益腎), 보비(補脾), 삽장(腸), 강장(强壯), 지사(止寫)의 효능이 있어서 야침다몽(夜寢多夢), 유정(遺精), 구리(久痢), 부인붕루체하(婦人崩漏下) 등의 치료에 사용하고 있다. 근경(연근)인 우절(藕節)은 지혈(止血), 산어(散瘀)의 효능이 있어서 토혈(吐血), 비출혈(鼻出血), 혈뇨(血尿), 혈변(血便) 등의 치료에 사용하고 있다. 잎의 기부를 하엽(荷葉)이라 하고 청서거습(淸暑祛濕), 화혈(和血) 및 안태(安胎)의 효능이 있어서 혈리(血痢), 하리(下痢), 임신태동불안(姙娠胎動不安) 등을 치료하는데 사용하고 있다. 그리고 연꽃의 수술을 연수(蓮鬚)라 하며, 청심(淸心), 익신(益腎), 지혈(止血), 삽정(精)의 효능의 있어 자궁출혈(子宮出血), 토혈(吐血), 비출혈(鼻出血) 등의 치료에 사용하고 있다. 또한, 녹색의 배아를 연자심(蓮子心)이라 하며 청심(淸心), 거열(祛熱), 지혈(止血), 삽정(澁精)의 효능이 있어서 심번(心煩), 구갈(口渴), 토혈(吐血), 목적종통(目赤腫痛) 등의 치료에 사용하고 있다. 그리고 연꽃의 잎을 흔히 연잎이라 하고, 전통의학에서는 하엽(荷葉)이라 하여 청서이습(淸暑利濕), 청양(淸陽)의 기(氣)를 승발(升發)시키며 지혈하는 효능이 있어서 서습(暑濕)에 의한 하비(下秘), 수기부종(水氣浮腫), 토혈(吐血) 등의 치료에 각각 사용하고 있다.

동의보감(東醫寶鑑)에서는 연잎이 '갈증을 멎게 하고 태반을 나오게 하며 버섯으로 인한 심독(毒)을 풀어 주고 혈창(血脹)으로 배가 아픈 것을 치료한다.' 고 기록되어 있다.

한편, 경옥고는 동의보감과 방약합편에 의하면 보혈강장 및 허약체질 개선제로서 기재되어 있으며, 이의 주요성분은 인삼, 꿀(봉밀), 생지황(지황), 백복령(복령)의 약재를 넣고 제조한 고형의 제제이다. 경옥고의 약리활성에 대한 연구가 활발히 진행되고 있는 실정이나 과학적인 임상시험 근거가 제시된 바 없어, 기초 임상연구가 절실히 요구되고 있다.

본 발명의 연, 인삼, 복령, 지황 및 꿀을 포함하는 연경옥고를 유효성분으로 함유하는 주름개선 또는 항노화용 조성물은 인간 피부아 세포를 이용한 콜라겐 합성 실험(도 4 참조)과 MMP-1 활성저해 효과를 측정하는 실험(도 6 참조)을 통해서 주름개선 효과를 확인하였다. 또한, 상기 조성물은 예쁜 꼬마선충(C. elegans)을 이용한 열적 스트레스 실험(도 8 참조)과 산화적 스트레스 실험(도 10 참조)에서 열적 스트레스 및 산화적 스트레스에 대한 저항성을 나타내어 항노화 효과를 입증하였다. 따라서, 연, 인삼, 복령, 지황 및 꿀을 포함하는 연경옥고를 유효성분으로 함유하는 본 발명의 조성물은 주름개선 또는 항노화용 의약품, 건강기능식품, 화장품으로 유용하게 이용될 수 있다.

본 발명의 연경옥고에 포함되는 연은 연화, 연근, 연잎, 연방 및 연자로 구성된 그룹에서 선택된 하나 이상을 의미하고, 상기 조성물의 유효성분인 연은 1 내지 15 중량%, 인삼은 1 내지 15 중량%, 복령은 5 내지 30 중량%, 지황은 15 내지 40 중량%, 꿀은 30 내지 70 중량%가 바람직하다.

본 발명의 주름개선 또는 항노화 효과를 입증하기 위해, 연경옥고와 비교하여 실험에 사용되고 있는 경옥고는 다음과 같은 3단계를 통해서 제조될 수 있다. 1 내지 15 중량%의 인삼, 5 내지 30 중량%의 복령은 분쇄하고, 15 내지 40 중량%의 지황은 즙을 짜고, 30 내지 70 중량%의 꿀은 연밀하는 1단계; 상기 1단계에서 분쇄된 인삼과 복령을 혼합한 후, 지황즙을 혼합하고, 이후 연밀한 꿀을 혼합하는 2단계; 및 상기 2단계의 인삼, 복령, 지황즙, 꿀의 혼합물을 용기에 담아 밀봉하고, 90 내지 110℃에서 60 내지 80시간 동안 중탕 가열한 후, 12 내지 36시간 동안 상온에 방치하여 냉각시킨 다음, 밀봉된 상태로 다시 90 내지 110℃에서 12 내지 36시간 동안 중탕 가열한 후, 70일 내지 110일 동안 숙성시키는 3단계에 의해 제조된다.

본 발명의 주름개선 또는 항노화용 조성물의 유효성분인 연경옥고는 다음과 같은 3단계를 통해서 제조될 수 있다.

1 내지 15 중량%의 연, 1 내지 15 중량%의 인삼, 5 내지 30 중량%의 복령은 분쇄하고, 15 내지 40 중량%의 지황은 즙을 짜고, 30 내지 70 중량%의 꿀은 연밀하는 1단계; 상기 1단계에서 분쇄된 연, 인삼과 복령을 혼합한 후, 지황즙을 혼합하고, 이후 연밀한 꿀을 혼합하는 2단계; 및 상기 2단계의 연, 인삼, 복령, 지황즙, 꿀의 혼합물을 용기에 담아 밀봉하고, 90 내지 110℃에서 60 내지 80시간 동안 중탕 가열한 후, 12 내지 36시간 동안 상온에 방치하여 냉각시킨 다음, 밀봉된 상태로 다시 90 내지 110℃에서 12 내지 36시간 동안 중탕 가열한 후, 70일 내지 110일 동안 숙성시키는 3단계에 의해 제조된다.

상기 연경옥고 제조공정에서, 연화경옥고의 경우, 연 소재로 연꽃을 사용하고, 연근경옥고의 경우, 연 소재로 연근을 사용하여 제조하면 된다.

본 발명의 연경옥고를 유효성분으로 함유하는 주름개선 또는 항노화용 조성물은 바람직하게는 약학적 조성물이며, 경구 또는 비경구 투여할 수 있으며, 비경구 투여시 피부 외용 또는 복강내주사, 직장내 주사, 피하주사, 정맥주사, 근육내 주사 또는 흉부내 주사 주입방식을 선택하는 것이 바람직하다.

상기 약학적 조성물은 통상적으로 사용되는 부형제, 붕해제, 감미제, 활택제, 향미제 등을 추가로 포함할 수 있다. 상기 붕해제로는 전분글리콜산나트륨, 크로스포비돈, 크로스카멜로스나트륨, 알긴산, 카르복시메틸셀룰로오스 칼슘, 카르복시 메틸셀룰로오스 나트륨, 키토산, 구아검, 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 폴라크릴린 칼륨 등이 있다.

또한, 상기 약학적 조성물은 약제학적으로 허용가능한 첨가제를 더 포함할 수 있으며, 이때 약제학적으로 허용가능한 첨가제로는 전분, 젤라틴화 전분, 미결정셀룰로오스, 유당, 포비돈, 콜로이달실리콘디옥사이드, 인산수소칼슘, 락토스, 만니톨, 엿, 아라비아고무, 전호화전분, 옥수수전분, 분말셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 오파드라이, 전분글리콜산나트륨, 합성규산알루미늄, 스테아린산, 스테아린산마그네슘, 스테아린산알루미늄, 스테아린산칼슘, 백당, 덱스트로스, 소르비톨, 탈크 등이 사용될 수 있다. 본 발명에 따른 약제학적으로 허용가능한 첨가제는 상기 약학적 조성물에 대해 0.1~90 중량부 포함되는 것이 바람직하다.

경구투여를 위한 고형제제에는 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 연질캅셀제, 환 등이 포함된다. 경구를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제, 에어로졸 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.

비경구 투여를 위한 제제로는 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 멸균된 수용액, 액제, 비수성용제, 현탁제, 에멀젼, 시럽, 좌제, 에어로졸 등의 외용제 및 멸균 주사제제의 형태로 제형화하여 사용될 수 있으며, 바람직하게는 크림, 젤, 패취, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 또는 카타플라스마제의 피부 외용 약학적 조성물을 제조하여 사용할 수 있으나, 이에 한정하는 것은 아니다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.

상기 약학적 조성물의 바람직한 투여량은 체내에서 활성성분의 흡수도, 불활성화율 및 배설속도, 환자의 연령, 성별 및 상태, 치료할 질병의 중증 정도에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나 바람직한 효과를 위해서, 경구 투여제의 경우 일반적으로 성인에게 1일에 체중 1kg당 본 발명의 조성물을 1일 0.0001 내지 100㎎/㎏으로, 바람직하게는 0.001 내지 100㎎/㎏으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다.

또한, 본 발명의 연경옥고를 유효성분으로 함유하는 주름개선 또는 항노화용 조성물은 바람직하게는 건강기능식품 조성물이며, 건강기능식품 조성물은 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 사용 목적(예방, 건강 또는 위생)에 따라 적합하게 결정될 수 있다.

또한, 상기 건강기능식품 조성물의 형태 및 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 건강기능식품 조성물의 형태는 정제, 캅셀, 분말, 과립, 액상 및 환 등일 수 있고, 건강기능식품 조성물의 종류는 버터, 요구르트, 치즈를 포함한 유제품, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 유산균 제제, 발효유, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있다.

본 발명의 건강기능식품 조성물은 통상의 건강기능식품과 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드, 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다.

상기 외에 본 발명의 건강기능식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부당 0.01~0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

본 발명의 상기 화장료 조성물은 주름개선 또는 항노화 효과를 위한 화장품 및 세안제 등에 다양하게 이용될 수 있다. 본 조성물을 첨가할 수 있는 제품으로는, 예를 들어, 각종 크림, 로션, 스킨 등과 같은 화장품류와 클렌징, 세안제, 샴푸, 린스, 비누, 트리트먼트, 미용액 등이 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 상기 유효성분인 연경옥고 이외에 본 발명의 효과를 저해하지 않는 범위 내에서 보습제, 증점제, 계면활성제, 유상기제, 방부제, 산화방지제, 알코올, 향료, pH 조절제, 천연추출물 등을 비롯하여, 피부 주름개선 또는 항노화 효과를 배가시키기 위한 화학적 성분의 피부 노화 방지 성분을 당업계의 통상적인 사용량으로 배합할 수 있다.

또한, 이외에 첨가해도 되는 성분은 이에 한정되는 것은 아니며, 또, 상기 어느 성분도 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 배합 가능하다.

본 발명의 주름개선 또는 항노화용 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어 유액, 크림, 화장수, 팩, 파운데이션, 로션, 미용액, 모발화장료 등을 들 수 있다. 구체적으로, 본 발명의 화장료 조성물은 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 수분로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 수분크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 샴푸, 린스, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 및 바디클린저의 제형을 포함한다.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나, 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.

<실시예 1> 연 소재 추출물의 제조

1-1. 연화, 연근 , 연자 , 연방, 연잎의 물 추출물 제조

연화, 연근 ,연자, 연방, 연잎을 95℃에서 연화, 연근, 연자, 연방, 연잎에 대한 10배수의 물을 넣어 3시간 동안 끓인 후, 추출액 및 고상 잔류물을 수득하였으며, 이 과정을 3회 반복하였다. 수득된 추출액을 회전식 감압농축기(N-3000, EYELA, JAPAN)를 이용하여 감압농축하여 표 1의 물 추출물을 얻었으며, 이를 동결건조하여 분말로 제조하여 각종 분석용 시료로 사용하였다. 연 소재 물 추출물의 경우, 연잎의 수득율이 가장 높았다.

이용부위	시료량(g)	농축량(g)	수율(%)
연화	100	16.1	16.1
연근	100	2.3	2.3
연자	100	6.3	6.3
연잎	100	16.3	16.2
추 출 : H₂O, 95℃, 3hr, 3회 반복 농 축 : 회전식 감압농축기(N-3000, EYELA, JAPAN) 동결건조 : 동결건조기(PVTFD20R, KOREA)

1-2. 연화, 연근 , 연자 , 연방, 연잎의 에탄올 추출물 제조

연화, 연근, 연자, 연방, 연잎을 70℃에서 연화, 연근, 연자, 연방, 연잎에 대한 10배수의 에탄올을 넣어 3시간 동안 끓인 후, 추출액 및 고상 잔류물을 수득하였으며, 이 과정을 3회 반복하였다. 수득된 추출액을 회전식 감압농축기(N-3000, EYELA, JAPAN)를 이용하여 감압농축하여 표 2의 에탄올 추출물을 얻었으며, 이를 동결건조하여 분말로 제조하여 각종 분석용 시료로 사용하였다. 에탄올 추출물의 경우도 연잎의 수득율이 가장 높았다.

이용부위	시료량(g)	농축량(g)	수율(%)
연화	100	9.3	9.3
연근	100	2.5	2.5
연자	100	2.9	2.9
연잎	100	21.1	21.2
추 출 : EtOH, 70℃, 3hr, 3회 반복 농 축 : 회전식 감압농축기(N-3000, EYELA) 동결건조 : 동결건조기(PVTFD20R, KOREA)

<실시예 2> 연화경옥고의 제조

7.8 중량%의 연꽃, 7.8 중량%의 인삼, 15.6 중량%의 복령은 분쇄하였으며, 25.6 중량%의 지황은 즙을 짜서 준비하였고, 51 중량%의 꿀은 연밀하여 준비하였다. 상기 분쇄된 연꽃, 인삼과 복령을 혼합한 후, 지황즙을 혼합하였으며, 이후 연밀한 꿀을 혼합하였다. 상기 연꽃, 인삼, 복령, 지황즙, 꿀의 혼합물을 용기에 담아 밀봉하고, 99℃에서 72시간 동안 중탕 가열한 후, 24시간 동안 상온에 방치하여 냉각시켰다. 냉각 후, 밀봉된 상태로 다시 99℃에서 24시간 동안 중탕 가열한 후, 90일 동안 숙성하여 연화경옥고를 제조하였다.

<실시예 3> 연근경옥고의 제조

7.8 중량%의 연근, 7.8 중량%의 인삼, 15.6 중량%의 복령은 분쇄하였으며, 25.6 중량%의 지황은 즙을 짜서 준비하였고, 51 중량%의 꿀은 연밀하여 준비하였다. 상기 분쇄된 연근, 인삼과 복령을 혼합한 후, 지황즙을 혼합하였으며, 이후 연밀한 꿀을 혼합하였다. 상기 연근, 인삼, 복령, 지황즙, 꿀의 혼합물을 용기에 담아 밀봉하고, 99℃에서 72시간 동안 중탕 가열한 후, 24시간 동안 상온에 방치하여 냉각시켰다. 냉각 후, 밀봉된 상태로 다시 99℃에서 24시간 동안 중탕 가열한 후, 90일 동안 숙성하여 연근경옥고를 제조하였다.

<비교예 1> 경옥고의 제조

7.8 중량%의 인삼, 15.6 중량%의 복령은 분쇄하였으며, 25.6 중량%의 지황은 즙을 짜서 준비하였고, 51 중량%의 꿀은 연밀하여 준비하였다. 상기 분쇄된 인삼과 복령을 혼합한 후, 지황즙을 혼합하였으며, 이후 연밀한 꿀을 혼합하였다. 상기 인삼, 복령, 지황즙, 꿀의 혼합물을 용기에 담아 밀봉하고, 99℃에서 72시간 동안 중탕 가열한 후, 24시간 동안 상온에 방치하여 냉각시켰다. 냉각 후, 밀봉된 상태로 다시 99℃에서 24시간 동안 중탕 가열한 후, 90일 동안 숙성하여 경옥고를 제조하였다.

<실험예 1> 세포생존율 평가 실험

상기 실시예들 및 비교예에서 수득한 연화, 연근, 연자, 연방, 연잎의 물 추출물과 에탄올 추출물 그리고 경옥고, 연근경옥고, 연화경옥고가 세포에 미치는 독성을 측정하기 위해 실시되었다. 세포 독성은 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2-5-diphenyltetrazolium bromide(MTT) 시약을 이용하여 세포 생존율을 측정하는 Mosmann의 방법을 변형하여 실시하였다.

인간 피부아 세포(HDF, human dermal fibroblast)를 96-well plate에 1 ㅧ 10⁵ cells/well의 농도로 분주하여 37℃, 5% CO2 에서 24 h 동안 배양하였다. 배양 배지를 제거하고 시료를 농도별로 처리한 배지에 24 h 동안 배양한 후 배지를 제거하고 PBS(Phosphate buffered saline) 두 번씩 세척하였다. MTT 를 300μg/mL 로 PBS에 녹여 100μL 첨가하고 37℃, 5%의 CO2 에서 4 h 동안 배양하였다. DMSO를 한 well 당 150μL 넣고 30분 동안 교반한 후 570nm에서 흡광도를 측정하였다.

측정 결과 각 시료의 모든 농도에서 세포 독성은 나타나지 않았다. 이로부터 본 발명의 연화, 연근, 연자, 연방, 연잎의 물 추출물과 에탄올 추출물은 인체에 무해하며 안전성이 매우 우수함을 확인할 수 있었다(도 1 참조). 또한, 경옥고(Gyungokgo, GG), 연근경옥고(NR-G), 연화경옥고(NF-G)를 농도별로 처리한 군 역시 처리하지 않은 대조군과의 비교에서 독성을 나타내지 않았으며, 안정성이 우수함을 확인할 수 있었다(도 2 참조).

< 실험예 2> 주름개선 실험

2-1. 콜라겐 생성 효과 평가

콜라겐 합성능 평가는 콜라겐 전구체(PIP, Procollagen Type 1 C-peptide)의 C-말단을 인식하는 항체 이용법을 활용하였다. 상기 실시예들 및 비교예에서 수득한 연화, 연근, 연자, 연방, 연잎의 물 추출물과 에탄올 추출물 그리고 경옥고, 연근경옥고, 연화경옥고를 농도별로 각각 세포에 처리하여 배양한 후 배양액을 모아서 enzymes-linked immunoassay kit (PIP-kit, Takara사)를 이용하여 콜라겐 전구체의 C-말단의 양을 측정하였다.

콜라겐 합성능 시험 결과, 10가지 시료 중 연근(NR) 에탄올 추출물에서만 콜라겐 합성을 약 36% 증가시켰다(도 3 참조). 콜라겐 합성능이 관찰된 연근 추출물과 경옥고를 조합하여, 연근경옥고(NR-G)를 제조하였으며, 경옥고, 연화경옥고(NF-G)와 비교하여 연근경옥고의 콜라겐 합성능을 평가하였다. 그 결과, 경옥고(GG), 연근경옥고(NR-G), 연화경옥고(NF-G) 200ug/mL에서 모두 대조군과 통계적으로 유의한 차이가 관찰되었다(도 4 참조).

2-2. MMP-1 활성저해효과측정

피부의 광노화에 있어 중요한 역할을 담당하고 있는 MMP-1의 발현은 UVA에 의해 세포에서 JNK/p38 활성도가 증가하고 전사인자인 AP-1의 활성도가 증가되는 신호 전달경로를 통해 MMP-1 발현을 증가시켜 피부에서 교원질의 결핍을 초래한다고 알려져 있다.

시료의 MMP-1 활성저해효과측정은 Wang 등이 사용한 방법을 변형하여 실시하였다. 즉, 반응완충액 100μl에 형광물질이 표지된 DQ collagen (0.25mg/ml, Molecular Probe, USA) 20μl, 시료 40μl와 collagenase (0.5 unit) 40μl를 첨가하였다. 암소, 실온에서 20분 경과 후 형광분광광도계(PERKIN ELMER, USA)를 이용하여 흡수파장 495nm, 방출파장 515nm로 형광값을 측정하였고, 대조그룹으로서 효소액 대신 반응완충액을 효소와 동량첨가하여 형광값을 측정하였다. 시료 자체의 형광값도 측정하여 효소활성 계산시 보정하였다. 양성대조군으로 1,10-PT를 사용하여 측정한 MMP-1 활성억제시험은 시료를 농도별로 처리하여 MMP-1 활성을 50% 소거하는 농도(IC50)를 구하여 시료와 비교하였다.

그 결과 연근(NR) 에탄올 추출물 100ug/mL에서 MMP-1 활성을 유의적으로 억제하였다(도 5 참조). 또한, 경옥고(GG), 연근경옥고(NR-G) 및 연화경옥고(NF-G) 200ug/mL에서도 모두 대조군과 통계적으로 유의한 차이가 관찰되었다(도 6 참조). 따라서, 본 발명의 연근경옥고, 연화경옥고가 주름개선용으로서 매우 뛰어난 효과를 갖는 것을 확인할 수 있었다.

<실험예 3> 항노화실험

3-1. 열 스트레스 저항성 효과

Syncronized L1 stage의 예쁜 꼬마선충 100 마리 정도를 NGM agar plate 옮겨서 72시간 동안 배양하여 L4 stage Lavae가 되도록 하였다. 10마리의 adult worm을 약물이 처리된 6cm plate와 약물이 처리되지 않은 plate에 각각 옮겨 3시간 정도 egg laying을 하고 plate에서 adult worm을 제거하였다.

Reproductive 기간 동안에 매일 약물이 처리된 새로운 배지로 옮겨주고 6일째 되는 날 35℃ 인큐베이터에서 8시간 동안 열 스트레스(Thermal stress)를 주었다. 그리고 죽은 꼬마선충의 수를 세어 대조군과 비교하였다. 그 결과, 연근 에탄올 추출물 100ug/mL, 200ug/mL 처리군이 대조군에 비해 열 스트레스 저항성에 유의적 활성이 있는 것으로 나타났다(도 7 참조). 그리고 경옥고(GG) 200ug/mL, 연근경옥고(NR-G) 200ug/mL 농도에서 열 스트레스 저항성에 유의적 활성이 있는 것으로 나타났다(도 8 참조). 따라서, 본 발명의 연근경옥고가 열 스트레스 저항성에 매우 뛰어난 효과를 갖는 것을 확인할 수 있었다.

3-2. 산화적 스트레스 저항성 효과

C. elegans는 노화에 따라 H2O2 관련 ROS level이 증가되는 경향이 있음이 알려져 있다. 약물투여군의 산화적 스트레스 저항성과 노화억제와의 관련성을 밝히기 위해 H2O2에서의 생존력 실험을 실시하였다. Syncronized L1 stage의 예쁜 꼬마선충 100 마리 정도를 NGM agar plate 옮겨서 65시간 동안 배양하여 L4 stage Lavae가 되도록 하였다. Syncronized L4 stage의 선충을 10-15마리 씩 약물이 처리된 6cm plate와 약물이 처리되지 않은 plate에 각각 옮겨 3시간 정도 egg laying을 하고 plate에서 adult worm을 제거하였다. Reproductive 기간 동안에 매일 약물이 처리된 새로운 배지로 옮겨주고 6일째 되는 날 0.8mM hydrogen peroxide가 포함된 M9 buffer에 옮겨 8시간 동안 처치하여 산화적 스트레스를 측정하였다.

그 결과, 연근 에탄올 추출물 100ug/mL, 200ug/mL 처리군이 대조군에 비해 산화적 스트레스 저항성에 유의적 활성이 있는 것으로 나타났다(도 9 참조). 그리고 연근경옥고(NR-G) 100ug/mL 농도를 제외하고, 경옥고(GG) 100ug/mL, 200ug/mL, 연근경옥고(NR-G) 200ug/mL, 연화경옥고(NF-G) 100ug/mL, 200ug/mL에서 모두 산화적 스트레스 저항성이 대조군에 비해 유의한 활성이 있는 것으로 나타났다. 따라서, 본 발명의 연근경옥고, 연화경옥고가 산화적 스트레스 저항성에 매우 뛰어난 효과를 갖는 것을 확인할 수 있었다.

<제조예 1> 약학적 제제의 제조

1-1. 산제의 제조

연근경옥고 200㎎

유당 100㎎

상기의 성분을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.

1-2. 정제의 제조

연근경옥고 100㎎

옥수수전분 100㎎

유당 100㎎

스테아린산 마그네슘 2㎎

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.

1-3. 캡슐제의 제조

연근경옥고 100㎎

옥수수전분 100㎎

유당 100㎎

스테아린산 마그네슘 2㎎

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.

1-4. 환의 제조

연근경옥고 100㎎

유당 150㎎

글리세린 100㎎

자일리톨 50㎎

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 방법에 따라 1환당 4g이 되도록 제조하였다.

1-5. 과립의 제조

연근경옥고 150㎎

대두 추출물 50㎎

포도당 200㎎

전분 600㎎

상기의 성분을 혼합한 후, 30% 에탄올 100㎎을 첨가하여 섭씨 60℃에서 건조하여 과립을 형성한 후 포에 충진하였다.

<제조예 2> 건강기능식품 조성물의 제조

2-1. 밀가루 식품의 제조

본 발명의 연근경옥고 0.5 ~ 5.0 중량부를 밀가루에 첨가하고, 이 혼합물을 이용하여 빵, 케이크, 쿠키, 크래커 및 면류를 제조하였다.

2-2. 스프 및 육즙(gravies)의 제조

본 발명의 연근경옥고 0.1 ~ 5.0 중량부를 스프 및 육즙에 첨가하여 건강 증진용 수프 및 육즙을 제조하였다.

2-3. 그라운드 비프(ground beef)의 제조

본 발명의 연근경옥고 10 중량부를 그라운드 비프에 첨가하여 건강 증진용 그라운드 비프를 제조하였다.

2-4. 유제품(dairy products)의 제조

본 발명의 연근경옥고 5 ~ 10 중량부를 우유에 첨가하고, 상기 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였다.

< 제제예 3 > 화장료 조성물의 제조

3-1. 화장수의 제조

상기 실시예 2에서 제조한 연근경옥고를 함유한 화장수의 성분 구성을 표 3에 나타내었다. 화장수의 제조는 당업계의 통상적인 방법에 따라 제조하였다.

	원료	함량(중량%)
1	연근경옥고	5.0
2	글리세린	3.0
3	부틸렌 글리콜	2.0
4	프로필렌 글리콜	2.0
5	폴리옥시에칠렌(60)경화 피마자유	1.0
6	에탄올	10.0
7	트리에탄올아민	0.1
8	방부제	미량
9	색소	미량
10	향료	미량
11	정제수	잔량
		100

3-2 로션의 제조

상기 실시예 2에서 제조한 연근경옥고를 함유한 로션의 성분 구성을 표 4에 나타내었다. 로션의 제조는 당업계의 통상적인 방법에 따라 제조하였다.

	원료	함량(중량%)
1	연근경옥고	5.0
2	시토 스테롤	1.7
3	폴리글리세릴 2-올레이트	1.5
4	세라마이드	0.7
5	세테아레스-4	1.2
6	콜레스테롤	1.5
7	디세틸포스페이트	0.4
8	글리세린	5.0
9	선플라우어오일	10
10	카르복시비닐폴리머	0.2
11	산탄검	0.3
12	트리에탄올아민	0.2
13	방부제	미량
14	향료	미량
15	정제수	잔량
		100

3-3. 크림의 제조

상기 실시예 2에서 제조한 연근경옥고를 함유한 크림의 성분 구성을 표 5에 나타내었다. 크림의 제조는 당업계의 통상적인 방법에 따라 제조하였다.

	원료	함량(중량%)
1	연근경옥고	5.0
2	시토 스테롤	4.0
3	폴리글리세릴 2-올레이트	3.0
4	세라마이드	0.7
5	세테아레스-4	2.0
6	콜레스테롤	3.0
7	디세틸포스페이트	5.0
8	글리세린	5.0
9	선플라우어오일	22
10	카르복시비닐폴리머	0.5
11	트리에탄올아민	0.5
12	방부제	미량
13	향료	미량
14	정제수	잔량
		100

Claims

연, 인삼, 복령, 지황 및 꿀을 포함하는 연경옥고를 유효성분으로 함유하는 주름개선 또는 항노화용 조성물.
제1항에 있어서,
상기 연은 연화, 연근, 연잎, 연방 및 연자로 구성된 그룹에서 선택된 하나 이상인 것을 특징으로 하는 주름개선 또는 항노화용 조성물.
제1항에 있어서,
상기 연은 1 내지 15 중량%, 인삼은 1 내지 15 중량%, 복령은 5 내지 30 중량%, 지황은 15 내지 40 중량%, 꿀은 30 내지 70 중량% 인 것을 특징으로 하는 주름개선 또는 항노화용 조성물.
제1항에 있어서,
상기 조성물은 콜라겐 합성을 증가시키는 것을 특징으로 하는 주름개선 또는 항노화용 조성물.
제1항에 있어서,
상기 조성물은 엠엠피-1(MMP-1) 활성을 저해하는 것을 특징으로 하는 주름개선 또는 항노화용 조성물.
제1항에 있어서,
상기 조성물은 열적 스트레스에 저항성이 있는 것을 특징으로 하는 주름개선 또는 항노화용 조성물.
제1항에 있어서,
상기 조성물은 산화적 스트레스에 저항성이 있는 것을 특징으로 하는 주름개선 또는 항노화용 조성물.
제1항에 있어서,
상기 조성물은 약학적 조성물인 것을 특징으로 하는 주름개선 또는 항노화용 조성물.
제1항에 있어서,
상기 조성물은 건강기능식품 조성물인 것을 특징으로 하는 주름개선 또는 항노화용 조성물.
제1항에 있어서,
상기 조성물은 화장료 조성물인 것을 특징으로 하는 주름개선 또는 항노화용 조성물.
제10항에 있어서,
상기 화장료 조성물은 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 수분로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 수분크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 샴푸, 린스, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 및 바디클린저로 구성된 그룹으로부터 선택된 어느 하나의 제형인 것을 특징으로 하는 주름개선 또는 항노화용 조성물.