KR20150056777A - 키나제 저해제로서의 피라졸릴-우레아 - Google Patents

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KR20150056777A
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캐서린 엘리자베스 샤론
유안 알렉산더 프레이저 포다이스
다니엘 햄자
매튜 콜린 토르 파이페
카즈히로 이토
존 킹-언더우드
피터 존 머레이
스튜어트 토마스 어니언스
스티븐 말콤 톰
헤일리 티건 안젤라 왓슨
조나단 가레스 윌리엄스
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Abstract

(예를 들어, p38 미토겐-활성화 단백질 키나제 효소류의 일원; Syk 키나제; 및 티로신 키나제의 Src류의 일원의 하나 이상의 저해를 통해) 항염증 활성을 가지며, 특히 염증성 폐, 눈 및 장 질환을 비롯한 염증성 질환의 치료시 약학 조합물을 포함한 치료제에서 용도를 가지는 화학식 (I)의 화합물이 제공된다:
Figure pct00211

상기 식에서, R, R1, Ra, Rb, Q, X 및 Y는 명세서에 주어진 의미를 갖는다.

Description

키나제 저해제로서의 피라졸릴-우레아{PYRAZOLYL-UREAS AS KINASE INHIBITORS}
본 발명은 p38 미토겐-활성화 단백질 키나제 효소류의 저해제(본원에서는 p38 MAP 키나제 저해제라 칭함), 예를 들어 그의 알파 및 감마 서브타입, 및 Syk 키나제와 티로신 키나제의 Src류의 저해제인 화합물 및, 특히 염증성 질환, 그중에서도 천식 및 COPD와 같은 염증성 폐 질환뿐 아니라, 궤양성 대장염 및 크론병과 같은 염증성 위장관 질환, 및 포도막염과 같은 염증성 안 질환의 치료에 있어서 약학 조합물을 포함한 치료제에서의 그의 용도에 관한 것이다.
명백히 본원 명세서에 앞서 공개된 문헌의 목록 또는 논의를 당 기술수준의 일부이거나, 또는 보편적인 일반 지식이라고 반드시 인정하는 것으로 간주하여서는 안된다.
각각 상이한 조직 발현 패턴을 나타내는 4개의 p38 MAPK 이소폼(isoform)(각각 알파, 베타, 감마 및 델타)이 동정되었다. p38 MAPK 알파와 베타 이소폼은 신체 도처에서 발견되며 수많은 상이한 세포 타입에 존재한다. 알파 이소폼은 염증에서 그의 역할에 대해 잘 특성화되어 있다. 마우스에서의 화학적 유전적 접근을 사용한 연구에서는 p38 MAPK 베타 이소폼이 염증에서 작용하지 않는 것으로 나타났지만(O'Keefe, S. J. et al., J. Biol. Chem., 2007, 282 (48):34663-71), 이것은 COX2 발현의 조절을 통해 통증 메카니즘에 관여할 수 있다(Fitzsimmons, B.L. et al., Neuroreport, 2010, 21(4):313-7). 이러한 이소폼은 이전에 기술된 수많은 분자량이 작은 화합물에 의해 저해된다. 초기 분류의 저해제들은 화합물들의 다수의 표적 이탈(off-target) 효과를 유발하는 이러한 이소폼의 광범위한 조직 분포로 인하여 매우 유독하였다. 게다가, 상당한 수의 저해제 개발이 임상시험에서 허용할 수 없는 안전성 프로파일로 인하여 중단되었다(Pettus, L.H. and Wurz, R.P., Curr. Top. Med. Chem., 2008, 8(16):1452-67). 이러한 부작용은 화학형에 따라 다르고 이들 화합물은 각각 상이한 키나제 선택성 패턴을 가지지만, 관찰된 독성은 p38 메카니즘 보다는 구조에 기초할 수 있다.
알파와 베타 아이소자임(isozyme)과 달리 특정 조직 및 세포에서 발현되는 p38 MAPK 감마와 델타 이소폼에 대하여는 덜 알려져 있다. p38 MAPK-델타 이소폼은 췌장, 고환, 폐, 소장 및 신장에서 더 고도로 발현된다. 또한 대식세포에 풍부하고, 호중구, CD4+ T 세포 및 내피세포에서 검출가능하다(Shmueli, O. et al., Comptes Rendus Biologies, 2003, 326(10-11):1067-1072; Smith, S. J. Br. J. Pharmacol., 2006, 149:393-404; Hale, K. K., J. Immunol., 1999, 162(7): 4246-52; Wang, X. S. et al., J. Biol. Chem., 1997, 272(38):23668-23674). p38 MAPK 감마는 림프구와 대식세포뿐만 아니라 뇌, 골격근 및 심장에서 다량으로 발현되지만, 그의 분포에 대하서는 거의 알려져 있지 않다(Shmueli, O. et al., Comptes Rendus Biologies, 2003, 326(10-11):1067-1072, (2003)/; Hale, K. K., J. Immunol., 1999, 162(7):4246-52; Court, N. W. et al., J. Mol. Cell. Cardiol., 2002, 34(4):413-26; Mertens, S. et al., FEBS Lett., 1996, 383(3):273-6.).
p38 MAPK 감마와 p38 MAPK 델타의 선택적 소분자 저해제는 현재 입수가능하지 않지만, 이전에 기술된 화합물인 BIRB 796은 범(pan)-이소폼 저해 활성을 가지는 것으로 알려져 있다. p38 MAPK 감마와 델타 이소폼의 저해는 p38 MAPK 알파와 p38 베타를 저해하는데 필요한 것보다 더 높은 화합물의 농도에서 관찰된다(Kuma, Y., J. Biol. Chem., 2005 280:19472-19479). 또, BIRB 796은 또한 상류 키나제 MKK6 또는 MKK4에 의한 p38 MAPK 또는 JNK의 포스포릴화를 손상시켰다. Kuma는 이 저해제와 MAPK 단백질의 결합으로 야기되는 입체구조 변화가 그의 포스포릴화 부위와 상류 활성체의 도킹 부위 모두의 구조에 영향을 미쳐서 p38 MAPK 또는 JNK의 포스포릴화를 손상시킬 가능성을 언급하였다.
p38 MAP 키나제는 중증 천식, COPD(Chung, F., Chest, 2011, 139(6):1470-1479) 및 염증성 장 질환 (IBD) 등의 인간 질병에서 만성적인 지속성 염증의 개시 및 유지에 연루되는 수많은 시그널링 경로에서 중추적 역할을 하는 것으로 생각된다. p38 MAP 키나제가 일정 범위의 염증전(pro-inflammatory) 사이토카인에 의해 활성화되고 그의 활성화로 인하여 추가 염증유발 사이토카인의 보충 및 분비가 발생한다는 것을 입증하는 많은 문헌들이 있다. 실제로, 일부 임상 연구의 데이터는 p38 MAP 키나제 저해제로 치료하는 동안 환자의 질병 활성에서 유익한 변화를 입증하고 있다. 예를 들어, Smith는 인간 PBMC로부터 (IL-8이 아니라) TNFα 분비에 대한 p38 MAP 키나제 저해제의 저해 효과를 기술하고 있다.
COPD 및 IBD의 치료에 p38 MAP 키나제의 저해제를 사용하는 것도 제안되었다. p38 MAPK α/β를 표적으로 하는 소분자 저해제는 일반적으로 코르티코스테로이드에 무감한 COPD 환자에서 얻어진 세포와 조직(Smith, S. J., Br. J. Pharmacol., 2006, 149:393-404); IBD 환자에서 얻어진 생검(Docena, G. et al., J. of Trans. Immunol., 2010, 162:108-115); 및 생체내 동물 모델(Underwood, D. C. et al., Am. J. Physiol., 2000, 279:L895-902; Nath, P. et al., Eur. J. Pharmacol., 2006, 544:160-167)에서 염증의 다양한 매개변수를 감소시키는데 효과적인 것으로 입증되었다.
Irusen과 그의 동료들은 또한 핵에서 글루코코르티코이드 수용체(GR)의 결합 친화성 감소에 의해 코르티코스테로이드 불감성에 대한 p38 MAPK α/β의 연관 가능성을 제안하였다(Irusen, E. et al., J. Allergy Clin. Immunol., 2002, 109:649-657). 일정 범위의 p38 MAP 키나제 저해제, 예를 들어 AMG548, BIRB 796, VX702, SCIO469 및 SCIO323에 대한 임상 실험이 기술되어 있다 (Lee, M.R. and Dominguez, C., Current Med. Chem., 2005, 12:2979-2994). 그러나, 인간의 만성 염증성 질환을 치료하는데 p38 MAP 키나제 저해제의 사용을 가로막는 주된 장애는 환자에서 관찰되는 독성이다. 이는 상기 특정적으로 언급된 모든 것을 비롯해 진행중인 많은 화합물의 임상 개발을 중단시키기에 충분히 심각하다.
COPD는 기저 염증이 흡입용 코르티코스테로이드의 항염증 효과에 실질적으로 내성이 있는 것으로 보고된 증상이다. 따라서, COPD를 치료하기 위한 고도의 전략은 고유의 항염증 효과와 흡입용 코르티코스테로이드에 대한 COPD 환자의 폐 조직의 민감성을 증가시킬 수 있는 능력을 갖는 중재안을 개발하는 것일 수 있다. Mercado 등의 최근 간행물(Mercado, N., et al., Mol. Pharmacol., 2011, 80(6):1128-1135)에서는 p38 MAPK 감마의 사일런싱(silencing)이 코르티코스테로이드에 대한 민감성을 회복하는 잠재성이 있음을 입증하였다. 그러므로 COPD와 중증 천식 치료를 위해 p38 MAP 키나제 저해제를 사용하는 것은 환자에게 이중적 혜택이 될 수 있다.
천식이나 COPD로 진단된 많은 환자들은 제어되지 않는 증상과 입원을 초래할 수 있는 이들의 의료 상태의 악화로 고통받고 있다. 이것은 흡입 코르티코스테로이드와 장시간 작용하는 β-작용제의 조합물을 포함하는, 가장 최신의 현재 시판중인 치료 요법제 사용에도 불구하고 일어난다. 지난 10년 동안 축적된 데이터는 폐 질환의 기저 염증 성분을 효과적으로 관리하지 못하는 것이 악화가 일어나는 가장 그럴듯한 이유임을 나타내고 있다. 천식 치료에서 항염증제로서 코르티코스테로이드, 특히 흡입 코르티코스테로이드의 확립된 효능을 고려할 때, 이러한 사실은 심도있는 조사를 촉발하였다. 연구에서는 일부 환경적 손상(insults)이 환자의 폐에서 코르티코스테로이드 무감성 염증 변화를 일으키는 것이 확인되었다. 일 예가 바이러스 매개 상기도관 감염(URTI)에서 발생하는 반응으로, 이것은 천식 및 COPD와 연관된 이병률 증가에서 특히 중요하다.
역학 조사는 상기도관의 바이러스 감염과 만성 호흡기 질환으로 이미 진단된 환자가 겪고 있는 실질적인 악화율 사이에 강력한 연관성을 나타내었다. 이와 관련한 일부 가장 주목할 만한 자료는 천식을 앓고 있는 어린이에 대한 종적 연구에서 나왔다(Papadopoulos, N.G., Papi, A., Psarras, S. and Johnston, S.L., Paediatr. Respir. Rev,. 2004, 5(3):255-260). 다양한 추가 시험이 바이러스 감염이 악화에 관여할 수 있고 질환의 심각성을 증가시킨다는 결론을 뒷받침하고 있다. 예를 들어, 실험적인 임상적 리노바이러스(rhinovirus) 감염은 코르티코스테로이드를 사용한 치료에 대해 무반응인 천식 환자에서 히스타민에 대한 기관지 과민반응을 일으키는 것으로 보고되었다(Grunberg, K., Sharon, R.F., et al., Am. J. Respir. Crit. Care Med., 2001, 164(10):1816-1822). 추가 증거는 HRV 감염 및 낭포성 섬유증이 있는 환자의 질병 악화 간에 관찰된 연관성에서 유래하였다(Wat, D., Gelder, C., et al., J. Cyst. Fibros,. 2008, 7:320-328). 또한, 많은 자료들이 리노바이러스를 포함한 호흡기 바이러스 감염이 소아 폐 이식 수령자의 12개월 생존율에 부정적으로 작용하는 독립적 위험 인자를 제시한다는 사실과 일치하고 있다(Liu, M., Worley, S., et al., Transpl. Infect. Dis., 2009, 11(4):304-312).
임상 연구에서는 바이러스 양이 관찰된 증상과 합병증, 및 함축적으로 염증의 심각성에 비례하는 것으로 나타났다. 예를 들어, 실험적인 리노바이러스 감염 후에, 하부 기도 증상과 기관지 과민반응은 바이러스 양과 상당히 연관된다(Message, S.D., Laza-Stanca, V., et al., PNAS, 2008; 105(36):13562-13567). 마찬가지로, 다른 바이러스제가 존재하지 않는 경우, 면역능력이 있는 소아 환자에서 바이러스 양이 높으면 리노바이러스 감염은 일반적으로 하부 기도 감염과 천명음(wheezing)과 연관된다(Gerna, G., Piralla, A., et al., J. Med. Virol,. 2009, 81(8):1498-1507).
흥미롭게도, 최근에 리노바이러스에 선노출은 인간의 폐포 대식세포에서 박테리아 산물에 의해 발생되는 사이토카인 반응을 감소시킨다는 보고가 있다(Oliver, B.G., Lim, S., et al., Thorax, 2008, 63:519-525). 또한, 리노바이러스에 의한 비강 상피세포의 감염이 S. aureus 및 H. influenzae 등의 박테리아 부착을 촉진한다고 기술되었다(Wang, J.H., Kwon, H.J. and Yong, J.J., The Laryngoscope, 2009, 119(7):1406-1411). 이러한 세포 작용은 환자가 상부 기도 감염 후에 하부 기도 감염되는 가능성을 증가시킬 수 있다. 따라서, 임상적 환경에서 그의 이점에 대한 대용 예측인자로서 다양한 시험관내 시스템에서 바이러스 양을 감소시키는 새로운 중재의 능력에 초점을 맞추는 것은 치료상 관련이 있다.
고위험군은 상부 기도의 리노바이러스 감염이 심각한 2차 합병증을 유발할 수 있으며, 만성 호흡기 질환 환자에게 한정되지 않는다. 이들은, 예를 들어 급성의 생명을 위협하는 열병을 앓고 있는 화학요법 치료중인 환자뿐만 아니라 하부 기도가 감염되기 쉬운 면역약화 환자를 포함한다. 또한, 당뇨병 같은 다른 만성 질환이 약화된 면역방어 반응과 관련되는 것으로 나타났다. 이것은 기도 감염 및 그에 따른 입원 가능성 둘 다를 증가시킨다(Peleg, A.Y., Weerarathna, T., et al., Diabetes Metab. Res. Rev., 2007, 23(1):3-13; Kornum, J.B., Reimar, W., et al., Diabetes Care, 2008, 31(8):1541-1545).
상부 기도관 바이러스 감염이 기저 질환 또는 다른 위험 인자를 가진 환자들에서 높은 유병율과 사망율의 원인이지만; 이들은 또한 일반 대중들에 있어서는 상당한 의료 부담이고 학교를 결석하고 직장을 결근하는 주요 원인이 되기도 한다(Rollinger, J.M. and Schmidtke, M., Med. Res. Rev., 2010, Doi 10.1002/ med.20176). 이러한 고려사항들에 따르면 현재의 치료제보다 개선된 효능을 갖는 신규 의약이 리노바이러스 매개 상부 기도관 감염을 예방 및 치료하는데 시급하게 필요한 것이 분명하다. 일반적으로, 개선된 항바이러스제를 발견하기 위해 채택된 전략은 바이러스에 의해 생산된 다양한 단백질을 치료 중재의 포인트로서 표적으로 한다. 그러나, 넓은 범위의 리노바이러스 혈청형은 계속적으로 추구하여야 하는 특별한 도전과제이며, 현재 리노바이러스 감염의 예방 및 치료를 위한 의약이 왜 여전히 관리기관에 의해 승인되지 않고 있는지를 설명할 수 있다.
바이러스의 숙주 세포로의 유입은 염증 과정(Ludwig, S, 2007; Signal Transduction, 7:81-88 리뷰) 및 바이러스 증식의 개시와 후속 방출에서 중요한 역할을 하는 것으로 생각되는 수많은 세포내 시그널링 경로의 활성화와 연관되어 있다.
c-Src 및 Syk 키나제 둘다의 활성을 저해하는 화합물이 리노바이러스 복제에 대한 유효 약물이고(Charron, C.E. et al., WO 2011/158042), p59-HCK를 저해하는 화합물이 인플루엔자 바이러스 복제에 대해 유효하다(Charron, C.E. et al., WO 2011/070369)는 것은 이전에 기술되었다. 위에서 요약한 이유 때문에 이러한 고유 특성과 p38 MAPK의 저해를 결합한 만성 호흡기 질환을 치료하기 위해 설계된 화합물이 특히 효과적일 것으로 기대된다.
특정 p38 MAPK 저해제는 또한 호흡기 세포융합 바이러스 복제의 저해제로서 기술되었다(Cass, L. et al., WO 2011/ 158039).
IBD의 정확한 병인은 분명치 않으나, 상호작용하여 관강내 미생물상의 성분에 대항해 과다 및 잘 제어되지 않는 점막의 염증성 반응을 촉진하는 유전 및 환경적 인자에 의해 통제되는 것으로 여겨진다. 이러한 반응은 말초 유래 염증성 호중구, 수지상 세포 및 T-세포의 침윤을 통해 매개된다. 염증성 세포내 p38의 도처 발현으로 의해, IBD 모델에서의 연구를 위한 명백한 표적이 되고 있다. IBD의 동물 모델 및 IBD 환자 유래 인간 생검에서 p38 저해제의 효능을 조사한 연구에 따라서, p38이 IBD 치료를 위한 표적일 수 있음이 제시되었다(Hove, T. ten et al., Gut, 2002, 50:507-512, Docena, G. et al., J. of Trans. Immunol,. 2010, 162:108-115). 그러나, 이러한 발견은 p38 저해제로 효과를 보이지 않은 것으로 보고된 다른 그룹과 완전히 일치하지는 않는다(Malamut G. et al., Dig. Dis. Sci, 2006, 51:1443-1453). p38 알파 저해제 BIRB796을 사용한 크론병 환자에서의 임상적 연구는 C-반응성 단백질 수준의 개선으로 임상적 혜택의 가능성을 입증하였다. 그러나 이러한 개선은 일시적인 것으로 8주차에 기준선으로 돌아왔다(Schreiber, S. et al., Clin. Gastro. Hepatology, 2006, 4:325-334). 중증의 크론병을 가진 환자에서 CNI-1493, p38 및 Jnk 저해제의 효능을 조사한 소규모 임상 연구는 8주 이상 임상 점수에 상당한 개선을 나타내었다(Hommes, D. et al. Gastroenterology. 2002 122:7-14).
T 세포는 위장관의 염증 매개에 중요한 역할을 하는 것으로 알려져다. 포우리(Powrie) 및 동료들에 의한 선구자적 연구로 나이브(naive) CD4+ 세포의 중도 장애 면역결핍(SCID) 동물로의 전달이 공생 박테리아의 존재에 따라 대장염으로 발달되는 것으로 판명되었다(Powrie F. et al. Int Immunol. 1993 5:1461-71). 또한, IBD 환자로부터의 점막을 조사하여 환자가 크론병인지 궤양성 대장염을 가졌는지에 따라 바이어스되는 Th1 (IFNγ/IL-2) 또는 Th2 (IL5/TGFβ) CD4+ 세포의 상향조절이 나타났다(Fuss IJ. et al. J Immunol. 1996 157:1261-70.). 유사하게, 베체트 환자의 혈청내 T 세포 관련 사이토카인(IL-17 및 IL-23)의 수준 증가를 보고한 다수의 연구로 T 세포는 염증성 안 장애에서 중요한 역할을 하는 것으로 알려졌다(Chi W. et al. Invest Ophthalmol Vis Sci. 2008 49:3058-64). 이의 지지로, 디레스케넬리(Direskeneli) 및 동료들은 베체트 환자가 그의 말초 혈액내에 Th17 세포가 증가하였고 Treg 세포가 감소하였음을 증명하였다(Direskeneli H. et al. J Allergy Clin Immunol. 2011 128:665-6).
T 세포 활성을 저해하기 위한 한가지 접근은 T 세포 수용체 시그널링 복합체의 활성화에 관여하는 키나제를 표적으로 하는 것이다. Syk 및 Src 패밀리 키나제는 이 경로에서 중요한 역할을 하는 것으로 알려졌으며, 여기서는 Src 패밀리 키나제, Fyn 및 Lck가 T 세포 수용체의 활성화 하류가 되는 시그널링 분자이다(Barber EK. et al. PNAS 1989 86:3277-81). 이들은 Syk 패밀리 키나제, ZAP-70의 동원으로 이어지는 T 세포 수용체의 티로신 포스포릴화를 개시한다. 동물 연구는 ZAP-70 녹아웃이 SCID 표현형으로 이어짐을 보여주었다(Chan AC. et al. Science. 1994 10;264(5165):1599-601).
Syk 저해제 포스타마티닙에 의한 류마티스 관절염 환자의 임상 시험은 환자가 개선된 임상 결과 및 감소된 IL-6 및 MMP-3의 혈청 수준을 나타냄으로써, 항-염증성 표적으로서의 Syk 잠재성을 보여주었다(Weinblatt ME. et al. Arthritis Rheum. 2008 58:3309-18). Syk 키나제는 조혈계 세포, 가장 특히는 B 세포 및 성숙 T 세포에서 널리 발현된다. 이는 면역수용체 티로신계 활성(ITAM) 모티브와의 상호작용을 통해 염증 세포에서 면역-수용체 시그널링의 매개뿐만 아니라 T 세포 및 B 세포의 발현을 조절하는데 중요한 역할을 한다. Syk 활성화는 IL-6 및 MMP - IBD 및 류마티스 관절염을 포함한 염증성 장애에서 보통 발견되는 상향조절된 염증 매개체의 방출로 이어진다(Wang YD. et al World J Gastroenterol 2007; 13: 5926-5932, Litinsky I et al. Cytokine. 2006 Jan 33:106-10).
염증전 경로의 활성을 조절하는 세포 시그널링 이벤트에서 중추적인 역할을 하는 것 외에, 키나제 효소는 현재 일정 범위의 세포 기능의 활성을 조절하는 것으로도 알려졌다. 최근에 논의되고 있는 것들 가운데 DNA 통합성의 유지(Shilo, Y. Nature Reviews Cancer, 2003, 3:155-168)와 세포 분열의 복잡한 과정의 조직화 (coordination)가 있다. 최근 발견이 시험관내에서 소핵 형성의 빈도에 대한 소위 "올라하스키 키나제(Olaharsky kinase)"에 따라 작용하는 일련의 저해제 영향을 기술한 간행물에 기재되어 있다(Olaharsky, A.J. et al., PLoS Comput. Biol., 2009, 5(7):e1000446). 소핵 형성은 유사분열 과정의 중단에 연루되거나 연계되어 있어서, 잠재적인 독성의 바람직하지 않은 징후가 된다. 글리코겐 신타제 키나제 3α(GSK3α)의 저해는 소핵 형성을 촉진하는 키나제 저해제의 가능성을 증가시키는 특히 중요 인자인 것으로 확인되었다. 최근에, RNAi로의 키나제 GSK3β의 저해가 또한 소핵 형성을 촉진하는 것으로 보고되었다(Tighe, A. et al., BMC Cell Biology, 2007, 8:34).
GSK3α 같은 올라하스키 키나제와 약물의 상호작용으로 발생하는 부작용은 용량을 최적화하고/하거나 투여 경로를 변경함으로써 약화시킬 수 있다. 그러나, 이러한 오프 타겟 효소에 대해 비검출 내지는 낮은 활성이 입증됨으로써 유사분열 어세이로 측정했을 때 유사분열 과정의 중단을 유도하지 않거나 거의 유도하지 않는 치료적으로 유용한 분자를 동정하는 것이 훨씬 유리할 수 있다.
위에서 인용된 문헌들을 고려하여 볼 때, 현재 이용가능한 치료보다 치료 가능성이 향상된 새로운 p38 MAP 키나제 저해제를 동정하고 개발해야 하는 것은 명백하다. 바람직한 화합물은 적어도 기존 약물과 동등한 효력을 발휘하여 뛰어난 치료 지수를 나타내는 한편, 하나 이상의 측면에서 관련 치료 용량에서 독성이 덜한 화합물이다. 따라서, 본 발명의 목적은, 특히 임의로 Syk 키나제 및 Src류 내의 티로신 키나제(특히 c-Src)와 함께, 예를 들어 특정 서브타입 특이성을 가지는 p38 MAP 키나제의 효소 활성을 저해하여 우수한 항염증성을 가지며 치료 용도에 적합한 신규 화합물을 제공하는 것이다.
하나 이상의 구체예에서, 화합물은 이전에 기술된 알로스테릭(allosteric) p38 MAP 키나제 저해제, 예를 들어 BIRB 796 (Pargellis, C. et al., Nature Struct. Biol., 2002, 9(4):268-272) 등과 비교하여 장기간의 작용 및/또는 작용 지속성을 나타낸다.
발명의 개요
제1 측면으로, 본 발명은 그의 모든 입체이성체 및 호변이성체를 포함한 화학식 (I)의 화합물, 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 제공한다:
Figure pct00001
상기 식에서,
Q는 각각 하이드록실, 할로겐, C1-6 알킬, C1-6 알콕시, C1-6 할로알콕시, C1-6 하이드록시알킬, NH2, N(H)-C1-6 알킬, N(C1-6 알킬)2, C1-6 알킬렌-5-10 원 헤테로사이클 및 C0-3 알킬렌-O-C0-6 알킬렌-5-10 원 헤테로사이클중에서 독립적으로 선택되는 1 내지 3개의 치환체를 임의로 가질 수 있는 티에닐, 페닐 또는 피리디닐을 나타내고;
X는 CH 또는 N을 나타내고,
Y는 NR2R3, 또는 임의로 헤테로원자를 통해 연결된 4-10 헤테로사이클을 나타내고, 여기서 상기 헤테로사이클은 할로, OH, C1-6 알킬, C1-4 할로알킬, C0-3 알킬렌-O-C0-6 알킬, C0-3 알킬렌-O-C1-3 할로알킬, C0-6 알킬렌 아릴, C0-3 알킬렌-O-C0-3 알킬렌 아릴, C0-6 알킬렌 헤테로아릴, C0-3 알킬렌-O-C0-3 알킬렌 헤테로아릴, C(O)C1-6 알킬, SO2NR4R5, C0-3 알킬렌-NR4R5, C0-3 알킬렌-NR4SO2R5 및 C0-3 알킬렌-NR4C(O)R5 중에서 선택되는 0 또는 1개의 치환체를 가지며;
R은
C1-6 알킬,
C2-6 알케닐,
C1-6 하이드록시알킬,
C1-6 할로알킬,
C1-3 알콕시 또는 시아노에 의해 치환된 C1-6 알킬,
C1-3 알킬에 의해 임의로 치환된 C0-2 알킬렌-C3-8 사이클로알킬, 또는
C1-3 알킬에 의해 임의로 치환된 4-5 원 헤테로사이클이고;
Ra 및 Rb는 이들이 결합된 C-원자와 함께, C1-3 알킬, C1-3 할로알킬, 시아노 및 할로중에서 선택되는 하나 이상의 치환체에 의해 임의로 치환된 융합된 페닐 환을 형성하거나,
또는 Ra 및 Rb의 하나는 H, 할로, 시아노, C1-3 알킬 또는 C1-3 할로알킬을 나타내고 다른 하나는 독립적으로 할로, 시아노, C1-3 알킬 또는 C1-3 할로알킬을 나타내고;
R1은 수소, OH, 할로겐, CN, C1-6 알킬, C2-6 알케닐, C2-6 알키닐, C1-6 할로알킬, C0-3 알킬렌-C3-6 사이클로알킬, C0-3 알킬렌-O-C1-3 알킬렌-C3-6 사이클로알킬, C1-6 알콕시, C1-6 할로알콕시, C1-6 하이드록시알킬, C0-3 알킬렌-SO2C1-3알킬, C0-3 알킬렌-SO2NR4R5, C0-3 알킬렌-NR6R7 및 C0-3 알킬렌-NCOR6R7 중에서 선택되고;
R2 및 R3은 각각 독립적으로 H, C1-8 알킬, C0-6 알킬렌 아릴, C0-6 알킬렌 헤테로아릴, C0-6 알킬렌-4-10 원 헤테로사이클, 및 C0-3 알킬렌-O-C0-6 알킬렌-4-10 원 헤테로사이클 중에서 선택되되, 단 여기서 헤테로사이클이 질소를 통해 연결되는 경우에는 치환체의 필수 O 원자에 상기 질소 원자를 연결하는 알킬렌 쇄에 적어도 2개의 C-원자가 있고, 여기서 독립적으로 각 알킬 또는 알킬렌 그룹은 임의로 1개의 옥소 치환체를 갖고, 임의로 알킬 또는 알킬렌 쇄내 1 또는 2개의 탄소 원자는 각각 O, N 또는 S(O)p 중에서 선택되는 헤테로원자로 대체될 수 있으며, 이에 따라 상기 알킬 또는 알킬렌이 아민을 포함하는 경우 상기 아미노 그룹은 삼차 아민이고,
여기서 각 4-10 원 헤테로사이클은 할로, OH, C1-6 알킬, C1-4 할로알킬, C0-3 알킬렌-O-C0-6 알킬, C0-3 알킬렌-O-C1-3 할로알킬, C0-6 알킬렌 아릴, C0-3 알킬렌-O-C0-3 알킬렌 아릴, C0-6 알킬렌 헤테로아릴, C0-3 알킬렌-O-C0-3 알킬렌 헤테로아릴, C(O)C1-6 알킬, SO2NR8R9, 및 C0-3 알킬렌-NR8R9, C0-3 알킬렌-NR8SO2R9 및 C0-3 알킬렌-NR8C(O)R9 중에서 독립적으로 선택되는 1 또는 2개의 그룹에 의해 임의로 치환되며;
R4는 H 또는 C1-4 알킬이고;
R5는 H 또는 C1-4 알킬이고,
R6은 H 또는 C1-4 알킬, C(O)C1-3알킬 및 SO2C1-3 알킬이고;
R7은 H 또는 C1-4 알킬, C(O)C1-3알킬 및 SO2C1-3 알킬이고;
R8은 H 또는 C1-4 알킬이고;
R9는 H 또는 C1-4 알킬이고;
p는 0, 1 또는 2이다.
본 발명의 화합물은 특히 알파 서브-타입의 p38 MAP 키나제 저해제이다.
적어도 일부 구체예에서, 본 발명의 화합물은 낮은 B-Raf 결합, 예를 들어 키노메스칸(Kinomescan) 방법과 같은 검정에 있어서 500 nM에서 키나제 결합의 40% 미만 저해, 예컨대 30% 이하 저해를 가진다.
B-Raf는 세린/트레오닌-특이적 단백질 키나제의 Raf 키나제류 일원이다. 이 단백질은 세포 분열, 분화, 및 분비에 영향을 주는 MAP 키나제/ERK 시그널링 경로를 조절하는 데에 중요한 역할을 한다. 유전자 돌연변이가 인간의 암과 관련이 있다(Davies, H. et al., Nature, 2002, 417(6892):949-54).
세포 시그널링은 B-Raf의 선택적 저해를 바이패스하여 바람직하지 않은 결과를 가져올 수 있다(Lo, R.S., Cell Research, advance online publication 8 May 2012; doi: 10.1038/cr.2012.78). 따라서 항-염증성 의약으로 사용하고자 하는 키나제 저해제는 B-Raf와의 상호작용 가능성이 최소인 것이 바람직하다.
본 발명의 화합물 또한 결합 분석시 GSK3α 키나제에 대해 낮은 친화성을 나타내며, 이는, 특히 생체내 독성을 최소화하는 면에서 치료상 유익한 것으로 여겨진다.
적어도 일부 구체예에서, 본 발명의 화합물은 또한 그의 유리한 치료 프로파일을 높일 수 있는 p59-HCK 저해 활성을 가진다.
발명의 상세한 설명
본원에서 사용된 알킬은 직쇄 또는 분지쇄 알킬, 예컨대, 제한없이, 메틸, 에틸, n-프로필, 이소-프로필, 부틸, n-부틸 및 tert-부틸을 가리킨다. 일 구체예에서, 알킬은 직쇄 알킬을 가리킨다.
본원에서 사용된 알콕시는 직쇄 또는 분지쇄 알콕시, 예를 들어 메톡시, 에톡시, 프로폭시, 부톡시를 가리킨다. 본원에서 사용된 알콕시는 또한 산소 원자 (예를 들면, 단일 산소 원자)가 알킬 쇄내에 위치한 구체예, 예를 들어 -C1-3 알킬OC1-3 알킬, 예컨대 -CH2CH2OCH3 또는 -CH2OCH3까지로 확대된다. 따라서 일 구체예에서, 알콕시는, 예를 들어 -C6-n알킬-O-C6-m알킬(여기서 n=1-5, m=1-5 및 n+m=6-10)과 같이, 탄소를 통해 나머지 분자에 연결된다. 일 구체예에서, 알콕시는, 예를 들어 -OC1-6 알킬과 같이, 산소를 통해 나머지 분자에 연결된다. 일 구체예에서, 알콕시는 직쇄 알콕시에 관한 것이다. 일 구체예에서, 알콕시는 산소를 통해 나머지 분자에 연결되나, 알콕시 그룹은, 예를 들어 -OCH2CH2OCH3과 같이, 추가의 산소 원자를 가진다.
할로 또는 할로겐은 플루오로, 클로로, 브로모 또는 요오도, 특히 플루오로, 클로로 또는 브로모, 특히 플루오로 또는 클로로를 포함한다.
본원에서 사용된 할로에 의해 치환된 알킬 (할로알킬)은 예컨대 할로알킬당 1 내지 6개의 할로겐 원자, 예를 들어 1 내지 5개의 할로겐을 가지는 알킬 그룹, 특히 퍼플루오로알킬, 더욱 특히 -CF2CF3 또는 CF3을 가리킨다.
본원에서 사용된 하이드록시에 의해 치환된 알킬 (하이드록시알킬)은 1 내지 3개의 하이드록시 그룹, 예를 들어 1 또는 2개의 하이드록시 치환체를 가지는 알킬 그룹, 예를 들어 -CH2CH2OH, -C(CH3)CH2OH, -C(CH3)2CH2OH 등을 가리킨다.
본원에서 사용된 할로에 의해 치환된 알콕시 (할로알콕시)는 예컨대 할로알콕시당 1 내지 6개의 할로겐 원자, 예를 들어 1 내지 5개의 할로겐을 가지는 알콕시 그룹, 특히 퍼플루오로알콕시, 더욱 특히 -OCF2CF3 또는 -OCF3을 가리킨다.
달리 언급이 없으면, 본원에서 사용된 알킬렌은 다른 두 부위 사이의 메틸렌을 포함한 직쇄 또는 분지쇄 탄소 연결 그룹이다. 당업자들에게는 예를 들어 C2-8 알케닐 및 C2-8 알키닐로서 정의된 그룹이 알킬렌 부분을 포함할 수 있다는 것이 자명할 것이다. 의심의 여지를 없애기 위해, 용어 "n-알킬렌"은 본원에서 사용되는 경우 직쇄 알킬렌을 가리킨다.
당업자들에게는 헤테로원자가 기술적으로 적절하다면 일급, 이급 또는 삼급 탄소, 즉 CH3, -CH2- 또는 -CH- 그룹을 대체할 수 있고 알킬 또는 알킬렌 쇄내의 수소 및 분지가 그 위치에 적당하다면 헤테로원자의 원자가를 채울 것이며, 예를 들어 말단 일급 탄소가 산소 헤테로원자로 대체되는 경우 말단 그룹은 알콜일 것임이 자명할 것이다.
C1-6 알킬은 C1, C2, C3, C4, C5 및 C6을 포함한다.
C1-6 알콕시는 C1, C2, C3, C4, C5 및 C6을 포함한다.
본원에서 사용된 용어 5-10 원 헤테로사이클은 O, N 및 S 중에서 독립적으로 선택되는 하나 이상, 예를 들어 1, 2, 3 또는 4개의 헤테로원자를 포함하고, 여기서 임의로 고리내 1 또는 2개의 탄소는 옥소 치환체를 가질 수 있는 5 내지 10 원 포화 또는 부분 불포화 비-방향족 고리를 가리킨다. 고리 구조를 형성하거나 유지하는데 사용되지 않은 헤테로원자의 임의의 원자가는 필요에 따라 수소 또는 치환체로 채워질 수 있다. 따라서 헤테로사이클 상의 임의적인 치환체는 탄소에 또는 헤테로원자, 예컨대 경우에 따라 질소 상에 부착될 수 있다. 5-10 원 헤테로사이클의 예로는 피롤린, 피롤리딘, 테트라하이드로푸란, 티에판, 옥세판 피페리딘, 피페라진, 모르폴린, 티오모르폴린, 디옥산, 테트라하이드로티오펜, 피라졸린, 이미다졸린, 피라졸리딘, 옥소이미다졸리딘, 디옥솔란, 티아졸리딘, 이속사졸리딘, 디하이드로피란, 디하이드로인덴, 디하이드로이소벤조푸란, 이소인돌린-1-온, 크로만, 1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린, 2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신아조칸 등을 들 수 있다.
본원에서 사용된 용어 5-6 원 헤테로사이클은 O, N 및 S 중에서 독립적으로 선택되는 하나 이상, 예를 들어 1, 2, 3 또는 4 헤테로원자를 포함하고, 임의로 고리내의 1 또는 2개의 탄소는 옥소 치환체를 가질 수 있는 5 내지 6 원 포화 또는 부분 불포화 비-방향족 고리를 가리킨다. 본원에서 사용된 C5-6 헤테로사이클의 정의는 O, N 및 S 중에서 독립적으로 선택되는 하나 이상, 예를 들어 1, 2, 3 또는 4 헤테로원자자를 포함하고, 여기서 각 헤테로원자는 탄소 원자를 대체하고, 임의로 1 또는 2개의 탄소가 옥소 치환체를 가질 수 있는 5 내지 6 원 포화 또는 부분 불포화 비-방향족 카보사이클릭 고리를 가리킨다. 명백히 고리 구조를 형성하거나 유지하는데 사용되지 않은 헤테로원자의 임의의 원자가는 필요에 따라 수소 또는 치환체로 채워질 수 있다. 따라서 헤테로사이클 상의 치환체는 탄소에 또는 헤테로원자, 예컨대 경우에 따라 N 상에 부착될 수 있다. 헤테로사이클 및 C5-6 헤테로사이클의 예로는 피롤린, 피롤리딘, 테트라하이드로푸란, 테트라하이드로티오펜, 피라졸린, 이미다졸린, 피라졸리딘, 이미다졸리딘, 옥소이미다졸리딘, 디옥솔란, 티아졸리딘, 이속사졸리딘, 피란, 디하이드로피란, 피페리딘, 피페라진, 모르폴린, 디옥산, 티오모르폴린 및 옥사티안을 들 수 있다.
본원에서 사용되는 경우, 그룹 모르폴리닐은 적합하게는 N-모르폴리닐을 나타낸다.
일 구체예에서, 화학식 (Ia1) 또는, 특히, 화학식 (Ia2)의 화합물이 제공된다:
Figure pct00002
상기 식에서, R, Ra, Rb, R1, Q 및 Y는 화학식 (I)의 화합물에 대해 상기 정의된 바와 같다.
일 구체예에서, 화학식 (Ib1) 또는, 특히, 화학식 (Ib2)의 화합물이 제공된다:
Figure pct00003
Figure pct00004
상기 식에서, R, Ra, Rb, R1, Q, X 및 Y는 화학식 (I)의 화합물에 대해 상기 정의된 바와 같다.
일 구체예에서, 화학식 (Ic1) 또는, 특히, 화학식 (Ic2)의 화합물이 제공된다:
Figure pct00005
상기 식에서, R, Ra, Rb, R1, Q 및 Y는 화학식 (I)의 화합물에 대해 상기 정의된 바와 같다.
일 구체예에서, 화학식 (Id1) 또는, 특히, 화학식 (Id2)의 화합물이 제공된다:
Figure pct00006
상기 식에서, R, Ra, Rb, R1, Q 및 Y는 화학식 (I)의 화합물에 대해 상기 정의된 바와 같다.
일 구체예에서, 화학식 (Ie1) 또는, 특히, 화학식 (Ie2)의 화합물이 제공된다:
Figure pct00007
상기 식에서, R, Ra, Rb, R1, Q 및 Y는 화학식 (I)의 화합물에 대해 상기 정의된 바와 같다.
일 구체예에서, 화학식 (If1) 또는, 특히, 화학식 (If2)의 화합물이 제공된다:
Figure pct00008
상기 식에서, R, Ra, Rb, R1, Q 및 Y는 화학식 (I)의 화합물에 대해 상기 정의된 바와 같다.
일 구체예에서, 화학식 (Ig1) 또는, 특히, 화학식 (Ig2)의 화합물이 제공된다:
Figure pct00009
Figure pct00010
상기 식에서, R, Ra, Rb, R1, X, Q 및 Y는 화학식 (I)의 화합물에 대해 상기 정의된 바와 같다.
일 구체예에서, 화학식 (Ih1) 또는, 특히, 화학식 (Ih2)의 화합물이 제공된다:
Figure pct00011
상기 식에서, R, Ra, Rb, R1, X, Q 및 Y는 화학식 (I)의 화합물에 대해 상기 정의된 바와 같다.
일반적으로 예를 들어 R2 또는 R3에서 정의된 바와 같은 C0-3 알킬렌-O-C0-6 알킬렌-5-10 원 헤테로사이클 치환체에서, 상기 헤테로사이클이 질소를 통해 연결되는 경우, 상기 그룹은 C0-3 알킬렌-O-C2-6 알킬렌-5-10 원 헤테로사이클로서 정의될 것이다.
일반적으로 Q가 C1-6 알킬렌-5-10 원 헤테로사이클 또는 C0-3 알킬렌-O-C0-6 알킬렌-5-10 원 헤테로사이클로 치환된 페닐 또는 피리딘을 포함하면, R2 및 R3은 독립적으로 H, C1-8 알킬중에서 선택되고, 여기서 독립적으로 각 알킬 또는 알킬렌 그룹은 임의로 1개의 옥소 치환체를 갖고, 임의로 알킬 또는 알킬렌 쇄내 2개 이하의 탄소 원자는 O, N 또는 S(O)p 중에서 선택되는 헤테로원자로 대체될 수 있어서, 알킬 또는 알킬렌이 아민을 포함하는 경우 상기 아미노 그룹은 삼차 아민이다.
일 구체예에서, Q는 하이드록실, 할로겐, C1-6 알킬, C1-6 알콕시, C1-6 할로알콕시, C1-6 하이드록시알킬, N(C1-6 알킬)2, C1-6 알킬렌-5-10 원 헤테로사이클 및 C0-3 알킬렌-O-C1-6 알킬렌-5-10 원 헤테로사이클중에서 독립적으로 선택되는 1 또는 2개의 치환체(예를 들면, 하이드록실, 할로겐, C1-6 알킬, C1-6 알콕시, C1-6 할로알콕시, C1-6 하이드록시알킬, C1-6 알킬렌-5-10 원 헤테로사이클 및 C0-3 알킬렌-O-C1-6 알킬렌-5-10 원 헤테로사이클중에서 독립적으로 선택되는 1 또는 2개의 치환체)를 가지는 페닐이다.
일 구체예에서, Q는 메틸, 메톡시, -N(CH3)2 또는 -OCH2CH2OCH3 (예를 들면, 메틸, 메톡시, 또는 -OCH2CH2OCH3)을 갖고, 예를 들어 상기 치환체의 하나는 특히 파라 위치에 있는 페닐이다.
일 구체예에서, Q는 디메틸 페닐이고, 예를 들어 여기서 메틸 치환체는 메타 및 파라 위치에 있다.
일 구체예에서, Q는 하이드록실, 할로겐, C1-6 알킬, C1-6 알콕시, C1-6 할로알콕시, C1-6 하이드록시알킬, C1-6 알킬렌-5-10 원 헤테로사이클 및 C0-3 알킬렌-O-C1-6 알킬렌-5-10 원 헤테로사이클중에서 독립적으로 선택되는 하나의 치환체를 가지는피리디닐이다.
일 구체예에서, Q는 메톡시피리디닐, 예를 들어 6-메톡시피리딘-3-일이다.
일 구체예에서, Q는 임의로 하이드록실, 할로겐, C1-6 알킬, C1-6 알콕시, C1-6 할로알콕시, C1-6 하이드록시알킬, C1-6 알킬렌-5-10 원 헤테로사이클 및 C0-3 알킬렌-O-C1-6 알킬렌-5-10 원 헤테로사이클중에서 독립적으로 선택되는 하나의 치환체를 가지는 티에닐이다.
일 구체예에서, Y는 NR2R3이다.
일 구체예에서, Y는 C1-6 알킬 치환체를 가지는 5-10 원 헤테로사이클, 예를 들어 6 원 헤테로사이클이다.
일 구체예에서, Y는 모르폴리닐, 피페라지닐 또는 (메틸)피페라지닐, 예를 들어 4-메틸 피페라진-1-일이다.
일 구체예에서, R은 에틸, 이소프로필, tert-부틸, 사이클로프로필, 1-메틸사이클로프로필, 프로펜-2-일, CF3, C2F5, 옥세타닐, (메틸)옥세타닐 또는 테트라하이드로푸라닐 (예를 들면, 에틸, 이소프로필, tert-부틸, 사이클로프로필, 1-메틸사이클로프로필, CF3, C2F5, 옥세타닐, (메틸)옥세타닐 또는 테트라하이드로푸라닐), 예컨대 이소프로필 또는 tert-부틸이다.
일 구체예에서, R은 C(CH3)2CH2OH 또는 CH(CH3)CH2OH이다.
일 구체예에서, R은 1-하이드록시-2-메틸프로판-2-일이다.
일 구체예에서, R1은 H, Br, Cl, CH3, CN, N(CH3)2, CF3, 에티닐, OCH3, OCH2CH3 또는 OCH2(CH3)2이다.
일반적으로 그룹 NR2R3에서 질소에 결합된 치환체 R2 및 R3의 원자는 수소 및 탄소중에서 독립적으로 선택된다.
일 구체예에서, R2는 H, CH3, -CH2CH2CH3, -(CH2)2OH, -(CH2)2OCH3, -(CH2)2N(CH3)2, -(CH2)2모르폴리닐, -(CH2)2피페라지닐 또는 -(CH2)2(4-메틸)피페라지닐이다.
일 구체예에서, R3은 H 또는 CH3이다.
일 구체예에서, R4는 H 또는 메틸이다.
일 구체예에서, R5는 H 또는 메틸이다.
일 구체예에서, R6은 H 또는 메틸이다.
일 구체예에서, R7은 H 또는 메틸이다.
일 구체예에서, R8은 H 또는 메틸이다.
일 구체예에서, R9는 H 또는 메틸이다.
언급될 수 있는 본 발명의 구체예는
Q는 하이드록실, 할로겐, C1-6 알킬, C1-6 알콕시, C1-6 할로알콕시, C1-6 하이드록시알킬, N(C1-6 알킬)2, C1-6 알킬렌-5-10 원 헤테로사이클 및 C0-3 알킬렌-O-C1-6 알킬렌-5-10 원 헤테로사이클중에서 독립적으로 선택되는 1 또는 2개의 치환체를 가지는 페닐 (예를 들면, Q는 메틸, 메톡시, -N(CH3)2 또는 -OCH2CH2OCH3에 의해 일치환(예를 들면, 파라 위치에서)되거나, 또는 메틸에 의해 이치환된(예를 들면, 메타 및 파라 위치에서) 페닐)을 나타내거나,
또는 Q는 하이드록실, 할로겐, C1-6 알킬, C1-6 알콕시, C1-6 할로알콕시, C1-6 하이드록시알킬, C1-6 알킬렌-5-10 원 헤테로사이클 및 C0-3 알킬렌-O-C1-6 알킬렌-5-10 원 헤테로사이클중에서 독립적으로 선택되는 하나의 치환체를 가지는 피리디닐 (예를 들면, Q는 메톡시피리디닐, 예컨대 6-메톡시피리딘-3-일)을 나타내고;
Ra 및 Rb는 이들이 결합된 C-원자와 함께 융합된 페닐 환을 형성하거나, 또는 Ra 및 Rb의 하나는 할로, C1-3 알킬 또는 C1-3 할로알킬을 나타내고, 다른 하나는 독립적으로 할로, 시아노, C1-3 알킬 또는 C1-3 할로알킬을 나타내고 (예를 들면, Ra 및 Rb는 둘 다 메틸, 플루오로 또는 클로로를 나타낸다);
R은
하이드록시, 시아노 또는 메톡시 또는 하나 이상의 플루오로 그룹에 의해 임의로 치환된 C1-6 알킬,
C2-6 알케닐 또는
C1-3 알킬에 의해 임의로 치환된 C3-4 사이클로알킬을 나타내고
(예를 들면, R은 에틸, 이소프로필, n-프로필, tert-부틸, 사이클로프로필, 1-메틸사이클로프로필, CF3, C2F5, -C(CH3)2CF3 옥세타닐, (메틸)옥세타닐, 테트라하이드로푸라닐 또는 프로펜-2-일, 예컨대 이소프로필, 프로펜-2-일 또는 tert-부틸을 나타낸다); 및/또는
R1은 H, 할로겐 (예를 들면, F, Br 또는 Cl), CN, C1-4 알킬 (예를 들면, 메틸 또는 에틸), C2-4 알키닐 (예를 들면, 에티닐), C1-4 플루오로알킬 (예를 들면, CF3), C1-4 알콕시 (예를 들면, OCH3, OCH2CH3 또는 OCH2(CH3)2), 또는 NR6R7 (예를 들면, N(CH3)2)을 나타내는 (예를 들면, R1은 에티닐 또는 OCH3을 나타낸다)
화학식 (I), (Ia1), (Ia2), (Ib1), (Ib2), (Ic1), (Ic2), (Id1), (Id2), (Ie1), (Ie2), (If1), (If2), (Ig1), (Ig2), (Ih1) 및 (Ih2)의 화합물을 포함한다.
더욱 특히, 언급될 수 있는 본 발명의 구체예는
Q는 C1-6 알킬 (예를 들면, 메틸), C1-6 알콕시 (예를 들면, 메톡시), C1-6 할로알콕시 또는 N(C1-6 알킬)2 (예를 들면, N(CH3)2)에 의해 일치환된(예를 들면, 파라 위치에서) 페닐을 나타내고 (예를 들어, Q는 파라 위치에서 메틸, 메톡시 또는 디메틸아미노에 의해 치환된 페닐을 나타낸다);
Ra 및 Rb는 이들이 결합된 C-원자와 함께 융합된 페닐 환을 형성하고;
R은 하나 이상의 플루오로 그룹, C3-4 알케닐 또는 C3-4 사이클로알킬(이 그룹은 메틸에 의해 임의로 치환된다)에 의해 임의로 치환된 C1-4 알킬을 나타내고 (예를 들면, R은 에틸, 사이클로프로필, CF3, C2F5, -C(CH3)2CF3 또는, 특히, 이소프로필, 1-메틸사이클로프로필, 프로펜-2-일 또는 tert-부틸을 나타낸다); 및/또는
R1은 Br, Cl, CN, 메틸, 에틸, CF3, OCH2CH3, OCH2(CH3)2, N(CH3)2 또는, 특히, 에티닐 또는 OCH3을 나타내는
화학식 (I), (Ia1), (Ia2), (Ib1), (Ib2), (Ic1), (Ic2), (Id1), (Id2), (Ie1), (Ie2), (If1), (If2), (Ig1), (Ig2), (Ih1) 및 (Ih2)의 화합물을 포함한다.
본 발명의 특정 구체예는 다음을 포함한다.
(1) 상기 정의된 바와 같은 화학식 (I)의 화합물, (Ia1), (Ia2), (Ib1), (Ib2), (Ic1), (Ic2), (Id1), (Id2), (Ie1), (Ie2), (If1), (If2), (Ig1), (Ig2), (Ih1) 또는 (Ih2), 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염.
(2) Q는 하이드록실, 할로겐, C1-6 알킬, C1-6 알콕시, C1-6 할로알콕시, C1-6 하이드록시알킬, N(C1-6 알킬)2, C1-6 알킬렌-5-10 원 헤테로사이클 및 C0-3 알킬렌-O-C1-6 알킬렌-5-10 원 헤테로사이클중에서 독립적으로 선택되는 1 또는 2개의 치환체 (예를 들면, 하이드록실, 할로겐, C1-6 알킬, C1-6 알콕시, C1-6 할로알콕시, C1-6 하이드록시알킬, C1-6 알킬렌-5-10 원 헤테로사이클 및 C0-3 알킬렌-O-C1-6 알킬렌-5-10 원 헤테로사이클중에서 독립적으로 선택되는 1 또는 2개의 치환체)를 가지는 페닐을 나타내는 구체예 (1)에 따른 화합물 또는 염.
(3) Q는 메틸, 메톡시, -N(CH3)2 또는 -OCH2CH2OCH3 (예를 들면, 메틸, 메톡시 또는 -OCH2CH2OCH3)을 가지는 페닐을 나타내는 구체예 (1) 또는 구체예 (2)에 따른 화합물 또는 염.
(4) Q는 파라 위치에서 메틸, 메톡시, -N(CH3)2 또는 -OCH2CH2OCH3 (예를 들면, 메틸, 메톡시 또는 -OCH2CH2OCH3)에 의해 치환된 페닐을 나타내는 구체예 (1) 내지 (3) 중 어느 하나에 따른 화합물 또는 염.
(5) Q는 디메틸 페닐을 나타내고, 예를 들어 여기서 메틸 치환체는 메타 및 파라 위치에 있는 구체예 (1) 내지 (3) 중 어느 하나에 따른 화합물 또는 염.
(7) Q는 하이드록실, 할로겐, C1-6 알킬, C1-6 알콕시, C1-6 할로알콕시, C1-6 하이드록시알킬, C1-6 알킬렌-5-10 원 헤테로사이클 및 C0-3 알킬렌-O-C1-6 알킬렌-5-10 원 헤테로사이클중에서 독립적으로 선택되는 하나의 치환체를 가지는 피리디닐을 나타내는 구체예 (1)에 따른 화합물 또는 염.
(8) Q는 메톡시피리디닐, 예를 들어 6-메톡시피리딘-3-일을 나타내는 구체예 (7)에 따른 화합물 또는 염.
(9) Q는 임의로 하이드록실, 할로겐, C1-6 알킬, C1-6 알콕시, C1-6 할로알콕시, C1-6 하이드록시알킬, C1-6 알킬렌-5-10 원 헤테로사이클 및 C0-3 알킬렌-O-C1-6 알킬렌-5-10 원 헤테로사이클중에서 독립적으로 선택되는 하나의 치환체를 가지는 티에닐을 나타내는 구체예 (1)에 따른 화합물 또는 염.
(10) Y는 NR2R3을 나타내는 구체예 (1) 내지 (9) 중 어느 하나에 따른 화합물 또는 염.
(11) Y는 C1-6 알킬 치환체를 가지는 5-10 원 헤테로사이클, 예를 들어 6 원 헤테로사이클을 나타내는 구체예 (1) 내지 (9) 중 어느 하나에 따른 화합물 또는 염.
(12) Y는 모르폴리닐, 피페라지닐 또는 (메틸)피페라지닐, 예를 들어 4-메틸 피페라진-1-일을 나타내는 구체예 (11)에 따른 화합물 또는 염.
(13) R은 에틸, 이소프로필, tert-부틸, 사이클로프로필, 1-메틸사이클로프로필, CF3, C2F5, 옥세타닐, (메틸)옥세타닐 또는 테트라하이드로푸라닐, 예컨대 이소프로필 또는 tert-부틸을 나타내는 구체예 (1) 내지 (12) 중 어느 하나에 따른 화합물 또는 염.
(14) R은 C(CH3)2CH2OH 또는 CH(CH3)CH2OH를 나타내는 구체예 (1) 내지 (12) 중 어느 하나에 따른 화합물 또는 염.
(15) R은 1-하이드록시-2-메틸프로판-2-일을 나타내는 구체예 (1) 내지 (12) 중 어느 하나에 따른 화합물 또는 염.
(16) R1은 H, Br, Cl, CH3, CN, N(CH3)2, CF3, 에티닐, OCH3, OCH2CH3 또는 OCH2(CH3)2인 구체예 (1) 내지 (15) 중 어느 하나에 따른 화합물 또는 염.
(17) R2는 H, CH3, -CH2CH2CH3, -(CH2)2OH, -(CH2)2OCH3, -(CH2)2N(CH3)2, -(CH2)2모르폴리닐, -(CH2)2피페라지닐 또는 -(CH2)2(4-메틸)피페라지닐인 구체예 (1) 내지 (16) 중 어느 하나에 따른 화합물 또는 염.
(18) R3은 H 또는 CH3인 구체예 (1) 내지 (17) 중 어느 하나에 따른 화합물 또는 염.
(19) R4는 H 또는 메틸인 구체예 (1) 내지 (18) 중 어느 하나에 따른 화합물 또는 염.
(20) R5는 H 또는 메틸인 구체예 (1) 내지 (19) 중 어느 하나에 따른 화합물 또는 염.
(21) R6은 H 또는 메틸인 구체예 (1) 내지 (20) 중 어느 하나에 따른 화합물 또는 염.
(22) R7은 H 또는 메틸인 구체예 (1) 내지 (21) 중 어느 하나에 따른 화합물 또는 염.
(23) R8은 H 또는 메틸인 구체예 (1) 내지 (22) 중 어느 하나에 따른 화합물 또는 염.
(24) R9는 H 또는 메틸인 구체예 (1) 내지 (23) 중 어느 하나에 따른 화합물 또는 염.
(25) Q는 C1-6 알킬 (예를 들면, 메틸), C1-6 알콕시 (예를 들면, 메톡시), C1-6 할로알콕시 또는 N(C1-6 알킬)2 (예를 들면, N(CH3)2)에 의해 일치환된(예를 들면, 파라 위치에서) 페닐을 나타내는 구체예 (1) 및 (10) 내지 (24) 중 어느 하나에 따른 화합물 또는 염.
(26) Q는 파라 위치에서 메틸, 메톡시 또는 디메틸아미노에 의해 치환된 페닐을 나타내는 구체예 (25)에 따른 화합물 또는 염.
(27) Ra 및 Rb는 이들이 결합된 C-원자와 함께 융합된 페닐 환을 형성하는 구체예 (1) 내지 (26) 중 어느 하나에 따른 화합물 또는 염.
(28) R3은 H를 나타내는 구체예 (1) 내지 (10) 및 (13) 내지 (27) 중 어느 하나에 따른 화합물 또는 염.
(29) R은 하나 이상의 플루오로 그룹, C3-4 알케닐 또는 C3-4 사이클로알킬(후자 그룹은 메틸에 의해 임의로 치환됨)에 의해 임의로 치환된 C1-4 알킬을 나타내는 (예를 들면, R은 에틸, 사이클로프로필, CF3, C2F5, -C(CH3)2CF3 또는, 특히, 이소프로필, 1-메틸사이클로프로필, 프로펜-2-일 또는 tert-부틸을 나타낸다) 구체예 (1) 내지 (12) 및 (16) 내지 (28) 중 어느 하나에 따른 화합물 또는 염.
(30) R1은 Br, Cl, CN, 메틸, 에틸, CF3, OCH2CH3, OCH2(CH3)2, N(CH3)2, 에티닐 또는 OCH3을 나타내는 구체예 (1) 내지 (15) 및 (17) 내지 (29) 중 어느 하나에 따른 화합물 또는 염.
(31) R1은 에티닐 또는 OCH3을 나타내는 구체예 (30)에 따른 화합물 또는 염
(32) 화합물이 하기 구조 화학식을 가지는 구체예 (1) 내지 (31) 중 어느 하나에 따른 화합물 또는 염:
Figure pct00012
상기 식에서,
Q는 각각 하이드록실, 할로겐, C1-6 알킬, C1-6 알콕시, C1-6 할로알콕시, C1-6 하이드록시알킬, C1-6 알킬렌-5-10 원 헤테로사이클 및 C0-3 알킬렌-O-C0-6 알킬렌-5-10 원 헤테로사이클중에서 독립적으로 선택되는 1 내지 3개의 치환체를 임의로 가질 수 있는 티에닐, 페닐 또는 피리디닐을 나타내고;
R은 C1-6 알킬, C1-6 하이드록시알킬, C1-6 할로알킬, C1-3 알킬, C1-6 할로알킬에 의해 임의로 치환된 C0-2 알킬렌-C3-8 사이클로알킬 또는 C1-3 알킬에 의해 임의로 치환된 4-5 원 헤테로사이클이고; 및/또는
R2 및 R3은 각각 독립적으로 H, C1-8 알킬, C0-6 알킬렌 아릴, C0-6 알킬렌 헤테로아릴, C0-6 알킬렌-4-10 원 헤테로사이클, 및 C0-3 알킬렌-O-C0-6 알킬렌-4-10 원 헤테로사이클 중에서 선택되되, 단 여기서 헤테로사이클이 질소를 통해 연결되는 경우에는 치환체의 필수 O 원자에 상기 질소 원자를 연결하는 알킬렌 쇄에 적어도 2개의 C-원자가 있고, 여기서 독립적으로 각 알킬 또는 알킬렌 그룹은 임의로 1개의 옥소 치환체를 갖고, 임의로 알킬 또는 알킬렌 쇄내 1 또는 2개의 탄소 원자는 각각 O, N 또는 S(O)p 중에서 선택되는 헤테로원자로 대체될 수 있으며, 이에 따라 상기 알킬 또는 알킬렌이 아민을 포함하는 경우 상기 아미노 그룹은 삼차 아민이고,
여기서 각 4-10 원 헤테로사이클은 할로, OH, C1-6 알킬, C1-4 할로알킬, C0-3 알킬렌-O-C0-6 알킬, C0-3 알킬렌-O-C1-3 할로알킬, C0-6 알킬렌 아릴, C0-3 알킬렌-O-C0-3 알킬렌 아릴, C0-6 알킬렌 헤테로아릴, C0-3 알킬렌-O-C0-3 알킬렌 헤테로아릴, C(O)C1-6 알킬, SO2NR8R9, 및 C0-3 알킬렌-NR8R9, C0-3 알킬렌-NR8SO2R9 및 C0-3 알킬렌-NR8C(O)R9 중에서 독립적으로 선택되는 1 또는 2개의 그룹에 의해 임의로 치환된다.
(33) Q는 각각 NH2, N(H)-C1-6 알킬 또는 N(C1-6 알킬)2에 의해 치환되고 임의로 하이드록실, 할로겐, C1-6 알킬, C1-6 알콕시, C1-6 할로알콕시, C1-6 하이드록시알킬, NH2, N(H)-C1-6 알킬, N(C1-6 알킬)2, C1-6 알킬렌-5-10 원 헤테로사이클 및 C0-3 알킬렌-O-C0-6 알킬렌-5-10 원 헤테로사이클중에서 독립적으로 선택되는 1 또는 2개의 치환체에 의해 추가로 치환된 티에닐, 페닐 또는 피리디닐을 나타내고;
R은 C2-6 알케닐 (예를 들면, C3-4 알케닐, 예컨대 프로펜-2-일) 또는 C1-3 알콕시 또는 시아노에 의해 치환된 C1-6 알킬 (예를 들면, 메톡시 또는 시아노에 의해 치환된 이급 C3-6 알킬, 예컨대 -C(CH3)2OCH3 또는 -C(CH3)2CN)을 나타내고; 및/또는
Ra 및 Rb는 이들이 결합된 C-원자와 함께 C1-3 알킬, C1-3 할로알킬, 시아노 및 할로중에서 선택되는 하나 이상의 치환체에 의해 치환된 융합된 페닐 환을 형성하거나,
또는 Ra 및 Rb의 하나는 H, 할로, 시아노, C1-3 알킬 또는 C1-3 할로알킬을 나타내고 다른 하나는 독립적으로 할로, 시아노, C1-3 알킬 또는 C1-3 할로알킬을 나타내는
상기 구체예 (1) 내지 (31) 중 어느 하나에 따른 화합물 또는 염.
(34) R은
C1-6 n-알킬,
C4-6 분지 알킬,
C2-6 알케닐,
C1-6 하이드록시알킬,
C1-6 할로알킬,
C1-3 알콕시 또는 시아노에 의해 치환된 C1-6 알킬,
C1-3 알킬에 의해 임의로 치환된 C0-2 알킬렌-C3-8 사이클로알킬, 또는
C1-3 알킬에 의해 임의로 치환된 4-5 원 헤테로사이클을 나타내는
(예를 들면, R은 에틸, 사이클로프로필, CF3, C2F5, -C(CH3)2CF3 또는, 특히, 1-메틸사이클로프로필, 프로펜-2-일 또는 tert-부틸을 나타냄).
상기 구체예 (1) 내지 (33) 중 어느 하나에 따른 화합물 또는 염.
일 구체예에서, 상기 정의된 바와 같은 화학식 (I)의 화합물, (Ib2), (Ic2), (Id2) 또는 (Ig2), 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염이 제공되나, 단 여기서 화합물은 3-((4-((4-(3-(3-이소프로필-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-메톡시-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염이 아니다.
일 구체예에서, 상기 정의된 바와 같은 화학식 (I)의 화합물, (Ib2), (Ic2), (Id2) 또는 (Ig2), 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염이 제공되나, 단 여기서 화합물은 3-((4-((4-(3-(3-이소프로필-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-메톡시-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드가 아니다.
예시적인 화학식 (I)의 화합물은 다음으로 구성된 그룹중에서 선택된다:
3-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리딘-2-일)아미노)-5-메톡시-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
3-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)벤즈아미드;
3-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
4-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-N-(2-하이드록시에틸)-3-메톡시벤즈아미드;
N-(2-(디메틸아미노)에틸)-3-((4-((4-(3-(3-이소프로필-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-메톡시벤즈아미드;
N-(2-(디메틸아미노)에틸)-3-((4-((4-(3-(3-이소프로필-1-(4-메톡시페닐)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-메톡시벤즈아미드;
3-((4-((4-(3-(3-이소프로필-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-N-(2-모르폴리노에틸)-5-(트리플루오로메틸)벤즈아미드;
3-((4-((4-(3-(3-이소프로필-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-메톡시-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
3-메톡시-N-(2-모르폴리노에틸)-5-((4-((4-(3-(3-(퍼플루오로에틸)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)벤즈아미드;
3-((4-((4-(3-(3-이소프로필-1-(6-메톡시피리딘-3-일)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-메톡시-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
3-((4-((4-(3-(3-이소프로필-1-(4-메톡시페닐)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-메톡시-N-(2-메톡시에틸)벤즈아미드;
1-(3-이소프로필-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)-3-(4-((2-((3-메톡시-5-(모르폴린-4-카보닐) 페닐)아미노)피리미딘-4-일)옥시)나프탈렌-1-일)우레아;
5-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-2-메톡시-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
3-((6-((4-(3-(3-이소프로필-1-(4-메톡시페닐)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-4-일)아미노)-5-메톡시-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
3-((4-((4-(3-(3-이소프로필-1-(4-메톡시페닐)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리딘-2-일)아미노)-5-메톡시-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
3-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-N-메틸벤즈아미드;
3-(4-(4-(3-(3-tert-부틸-1-(4-메톡시페닐)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일옥시)피리미딘-2-일아미노)-N-프로필벤즈아미드;
3-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-N-(2-(디메틸아미노)에틸)벤즈아미드;
3-((4-((4-(3-(3-이소프로필-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
3-((4-((4-(3-(3-이소프로필-1-(4-메톡시페닐)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
3-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(4-메톡시페닐)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
3-((4-((4-(3-(3-(3-메틸옥세탄-3-일)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
3-((4-((4-(3-(1-(4-메톡시페닐)-3-(3-메틸옥세탄-3-일)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
3-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(4-메틸티오펜-2-일)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
3-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-N-(2-(4-메틸피페라진-1-일)에틸)벤즈아미드;
3-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-N,N-디메틸벤즈아미드;
1-(3-(tert-부틸)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)-3-(4-((2-((3-(모르폴린-4-카보닐)페닐)아미노)피리미딘-4-일)옥시)나프탈렌-1-일)우레아;
N-(2-(디메틸아미노)에틸)-3-((4-((4-(3-(3-이소프로필-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-4-메톡시벤즈아미드;
3-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-N-(2-(디메틸아미노)에틸)-4-메톡시벤즈아미드;
3-((4-((4-(3-(3-이소프로필-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-4-메톡시-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
3-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-4-메톡시-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
N-(2-하이드록시에틸)-3-((4-((4-(3-(3-이소프로필-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-4-메톡시벤즈아미드;
3-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-N-(2-하이드록시에틸)-4-메톡시벤즈아미드;
N-(2-하이드록시에틸)-3-((4-((4-(3-(3-이소프로필-1-(4-메톡시페닐)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-4-메톡시벤즈아미드;
N-(2-(디메틸아미노)에틸)-4-((4-((4-(3-(3-이소프로필-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-3-메톡시벤즈아미드;
4-((4-((4-(3-(3-이소프로필-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-3-메톡시-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
4-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-3-메톡시-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
4-((4-((4-(3-(3-이소프로필-1-(4-메톡시페닐)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-3-메톡시-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
N-(2-하이드록시에틸)-4-((4-((4-(3-(3-이소프로필-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-3-메톡시벤즈아미드;
3-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-메틸벤즈아미드;
3-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(4-메톡시페닐)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-메톡시벤즈아미드;
3-브로모-5-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(4-메톡시페닐)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)벤즈아미드;
3-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-N-(2-(디메틸아미노)에틸)-5-메톡시벤즈아미드;
3-((4-((4-(3-(3-이소프로필-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-메틸-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
3-((4-((4-(3-(3-이소프로필-1-(4-메톡시페닐)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-메틸-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
3-((4-((4-(3-(3-이소프로필-1-(4-메톡시페닐)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-N-(2-모르폴리노에틸)-5-(트리플루오로메틸)벤즈아미드;
3-메톡시-N-(2-모르폴리노에틸)-5-((4-((4-(3-(1-(p-톨릴)-3-(트리플루오로메틸)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)벤즈아미드;
3-((4-((4-(3-(3-에틸-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-메톡시-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
3-((4-((4-(3-(3-사이클로프로필-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-메톡시-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
3-메톡시-5-((4-((4-(3-(3-(1-메틸사이클로프로필)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
3-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-메톡시-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
3-((4-((4-(3-(3-이소프로필-1-(4-메톡시페닐)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-메톡시-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
3-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(4-메톡시페닐)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-메톡시-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
3-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(3-(2-메톡시에톡시)페닐)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-메톡시-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
3-((4-((4-(3-(1-(3,4-디메틸페닐)-3-이소프로필-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-메톡시-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
3-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(6-메톡시피리딘-3-일)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-메톡시-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
3-메톡시-5-((4-((4-(3-(1-(4-메톡시페닐)-3-(테트라하이드로푸란-2-일)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
3-메톡시-5-((4-((4-(3-(1-(4-메톡시페닐)-3-(테트라하이드로푸란-3-일)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
3-클로로-5-((4-((4-(3-(3-이소프로필-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
3-클로로-5-((4-((4-(3-(3-이소프로필-1-(4-메톡시페닐)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
3-브로모-5-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
N-(2-하이드록시에틸)-3-((4-((4-(3-(3-이소프로필-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-메톡시벤즈아미드;
3-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-N-(2-하이드록시에틸)-5-메톡시벤즈아미드;
N-(2-하이드록시에틸)-3-((4-((4-(3-(3-이소프로필-1-(4-메톡시페닐)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-메톡시벤즈아미드;
3-((4-((4-(3-(3-이소프로필-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-메톡시-N-(2-메톡시에틸)벤즈아미드;
3-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-메톡시-N-(2-메톡시에틸)벤즈아미드;
3-((4-((4-(3-(3-이소프로필-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-메톡시-N-메틸-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
1-(3-이소프로필-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)-3-(4-((2-((3-메톡시-5-(4-메틸피페라진-1-카보닐)페닐)아미노)피리미딘-4-일)옥시)나프탈렌-1-일)우레아;
5-((4-((4-(3-(3-이소프로필-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-2-메톡시-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
3-((6-((4-(3-(3-이소프로필-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-4-일)아미노)-5-메톡시-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
3-((6-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-4-일)아미노)-5-메톡시-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
3-에티닐-5-((4-((4-(3-(3-이소프로필-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
3-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(6-메톡시피리딘-3-일)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-에티닐-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
3-에티닐-N-(2-모르폴리노에틸)-5-((4-((4-(3-(3-(퍼플루오로에틸)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)벤즈아미드;
3-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-에티닐-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
3-에티닐-N-(2-모르폴리노에틸)-5-((4-((4-(3-(1-(p-톨릴)-3-(1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-일)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)벤즈아미드;
3-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(4-메톡시페닐)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-에티닐-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
3-((4-((4-(3-(3-(2-시아노프로판-2-일)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-에티닐-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
3-에티닐-5-((4-((4-(3-(3-(2-메톡시프로판-2-일)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)-나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
3-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(4-(디메틸아미노)페닐)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-에티닐-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
(S)-3-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-에티닐-N-(1-모르폴리노프로판-2-일)벤즈아미드;
3-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-에티닐-N-(2-메틸-1-모르폴리노프로판-2-일)벤즈아미드;
(R)-3-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-에티닐-N-(1-모르폴리노프로판-2-일)벤즈아미드;
3-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(4-메톡시페닐)-1H-피라졸-5-일)우레이도)-나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-에티닐-N-(2-메톡시에틸)벤즈아미드;
(S)-3-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(4-메톡시페닐)-1H-피라졸-5-일)우레이도)-나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-에티닐-N-(1-메톡시프로판-2-일)벤즈아미드;
3-메톡시-5-((4-((4-(3-(1-(4-메톡시페닐)-3-(프로프-1-엔-2-일)-1H-피라졸-5-일)우레이도)-나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
3-((4-(2,3-디클로로-4-(3-(3-이소프로필-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)페녹시)피리미딘-2-일)아미노)-5-에티닐-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
3-((4-(2,3-디플루오로-4-(3-(3-이소프로필-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)페녹시)피리미딘-2-일)아미노)-5-에티닐-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
3-((4-(2,3-디클로로-4-(3-(3-이소프로필-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)페녹시)피리미딘-2-일)아미노)-5-에티닐벤즈아미드;
3-((4-(2,3-디클로로-4-(3-(3-이소프로필-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)페녹시)피리미딘-2-일)아미노)-N-(2-(디메틸아미노)에틸)-5-에티닐벤즈아미드;
3-((6-(4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(4-메톡시페닐)-1H-피라졸-5-일)우레이도)-2,3-디메틸페녹시)피리미딘-4-일)아미노)-5-메톡시-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드,
및 그의 약학적으로 허용가능한 염.
따라서 일 구체예에서, 본 발명의 화합물은 3-((4-((4-(3-(3-이소프로필-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-메톡시-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염이다.
화학식 (I)의 화합물의 약학적으로 허용가능한 산부가염이란 화학식 (I)의 화합물이 형성할 수 있는 치료적으로 활성인 비독성 산부가염을 포함하는 의미이다. 이들 약학적으로 허용가능한 산부가염은 자유 염기 형태를 적합한 용매 또는 용매의 혼합물중에서 적당한 산으로 처리함으로써 용이하게 수득할 수 있다. 적당한 산은, 할로겐화수소산, 예를 들어, 염산 또는 브롬화수소산, 황산, 질산 및 인산 등과 같은 무기산; 또는, 예를 들어, 아세트산, 프로판산, 하이드록시아세트산, 락트산, 피루브산, 말론산, 숙신산, 말레산, 푸마르산, 말산, 타타르산, 시트르산, 메탄설폰산, 에탄설폰산, 벤젠설폰산, p-톨루엔설폰산, 사이클람산, 살리실산, p-아미노살리실산, 파모산 등과 같은 유기산을 포함한다.
반대로, 상기 염 형태는 적절한 염기로 처리함으로써 자유 염기 형태로 전환될 수 있다.
본원에서 사용된 입체이성체는 분자 화학식 및 결합된 원자의 순서(구성)가 동일하지만, 공간내 그의 원자의 삼차원 배향이 다른 이성체 분자를 가리킨다. 이는 동일한 분자 화학식을 가지지만, 상이한 원자/그룹간에 결합 연결 및/또는 그의 순서가 다른 구조 이성체와 대비된다. 입체이성체에서는, 구성 원자의 순서 및 결합 연결은 동일하게 유지되지만, 공간내 그의 배향이 다르다.
하기 본원에서 사용된 화학식 (I)의 화합물의 정의는 문맥에서 달리 특정되지 않으면, 상기 화합물의 모든 호변이성체, 및 상기 화합물의 용매화물(상기 화합물의 염의 용매화물 포함)을 포함하고자 한다. 용매화물의 예는 수화물을 포함한다.
본원에서 제공된 본 발명은 화학식 (I) 화합물의 프로드럭(prodrug), 즉 생체내에서 분해 및/또는 대사되어 화학식 (I)의 활성 화합물을 제공하는 화합물을 포함한다. 프로드럭의 일반적 예는 단순 에스테르와, 기타 에스테르, 예컨대 혼합 카보네이트 에스테르, 카바메이트, 글리코사이드, 에테르, 아세탈 및 케탈을 포함한다.
본 발명의 추가 측면으로, 화학식 (I) 화합물의 하나 이상의 대사산물, 즉 화학식 (I) 화합물의 치료 활성을 하나 이상 보유하는 대사산물이 제공된다. 본원에서 사용된 대사산물은 화학식 (I) 화합물이 대사되어 생체내에서 생산되는 화합물, 예컨대 제한없이 산화 대사산물 및/또는 예를 들어 O-탈알킬화로부터 생성되는 대사산물이다.
개시된 화합물은 특정된 원자가 자연적으로 발생하거나 자연적으로 발생하지 않은 동위원소인 것들을 포함한다. 일 구체예에서, 동위원소는 안정한 동위원소이다. 따라서, 본 발명의 화합물은, 예를 들어 중수소 함유 화합물 등을 포함한다.
본 발명은 또한 본원에서 정의된 화합물의 모든 다형체를 포함한다.
본 발명의 화합물 실시예를 편리하게 제조할 수 있는 일반 경로를 하기에 요약하였다. 이들 경로는 Ra 및 Rb가 이들이 결합된 C-원자와 함께 융합된 페닐 환을 형성하는 화학식 (I)의 화합물에 대해 특정적으로 예시된다. 그러나, Ra 및 Rb의 기타 정의를 가지는 화학식 (I)의 화합물도 유사 경로로 제조될 수 있다.
즉, 예를 들어, 화학식 (I)의 화합물은 중간체 B로 표시되는 나프틸아민 전구체가 상응하는 아민 전구체, 중간체 A (G = H)로부터 제조된 활성화된, 친전자성 유도체 중간체 A*와 커플링되는 일반 과정 (반응식 1, 경로 A)으로 수득할 수 있다. 중간체 B의 화합물에서 아민 래디칼 NRaRb는 상기 화학식 (I)의 화합물에 대해 정의된 바와 같은 그룹 Y 또는 그의 보호된 유도체를 포함한다. 중간체 A* 중의 단편 LG1은 이미다졸릴 (C3H3N2)과 같은 적합한 이탈 그룹 또는 페녹시 (C6H5O) 그룹과 같은 아릴옥시 래디칼이다. 당업자들이라면, 일부의 경우, 중간체 A*로 표시되는 화합물은 분리될 수 있거나, 또는 다른 경우 분리되지 않고 동소에서 발생되어 직접 사용되는 일시적 중간체일 수 있음을 이해할 것이다.
반응식 1
Figure pct00013
LG1이 이미다졸릴인 경우, 중간체 A*로 표시되는 화합물은 상응하는 아민을 비-극성 비양성자성 용매, 예컨대 DCM 중에서 CDI와 같은 활성화제와 반응시켜 수득되며, RT에서 동소에서 용이하게 생성되며, 분리없이 중간체 B로 표시되는 화합물과 반응된다
LG1이 아릴옥시인 경우, 필요한 활성화된 아민은 아민 전구체를 염기의 존재하에 적합한 클로로포르메이트, 예컨대, 페닐 클로로포르메이트로 처리하여 생성시킬 수 있다. 일부의 경우, 활성 공정을 쇼텐-바우만(Schotten-Baumann) 타입 조건하에즉, 수성 염기, 예컨대 수성 탄산나트륨을 2상 조건하에 사용하여 수행하는 것이 유리하다. 따라서 LG1이 아릴옥시, 예를 들어 페녹시인 중간체 A*로 표시되는 활성화된 아민 유도체를 임의로 동소에서 형성한 후, 분리없이 중간체 B로 표시되는 화합물과 반응시켜 화학식 (I)의 화합물 실시예를 제공할 수 있다.
화학식 (I)의 화합물은 치환체 Y가 커플링 과정중에 보호되는 하나 이상의 작용 그룹을 포함함으로써 후속 탈보호를 필요로 하는 것을 포함할 수 있다 이러한 절차의 예는 적절한 산으로 처리하여 이차 아민으로부터 tert-부톡시카보닐 (Boc) 그룹을 제거하는 것이다.
다른 한편으로, 화학식 (I)의 화합물 실시예는 LG2가 적합한 이탈 그룹, 전형적으로 할로겐 원자, 예를 들어 염소인 중간체 C로 표시되는 친전자성 헤테로아릴옥시 단편과 중간체 D로 표시되는 아닐린 성분간의 SNAr 치환 반응으로 생성될 수 있다 (반응식 2, 경로 B). 반응은 산성 조건하, 예를 들어 p-TSA의 존재하에 극성 비양성자성 용매, 예컨대 THF 중에서 전형적으로 승온, 예를 들어 70 ℃에서 진행된다.
반응식 2
Figure pct00014
임의로, 본 발명의 화합물 실시예는 카복실산 유도체와 아민 RaRbNH 간의 아미드 결합 형성 반응 [여기서 NRaRb는 Y 또는 그의 보호된 유도체를 포함한다]을 포함하는 일반 합성 과정에 의해 제조할 수 있으며 (반응식 3, 경로 C1 및 C2), 여기서 후자의 경우 화학식 (I)의 화합물은 적절한 탈보호 단계(들) 후 나타난다. 아미드 커플링은 트리알킬알루미늄, 예를 들어 트리메틸알루미늄의 존재하에 아민을 사용하여 중간체 E (Rc = 알킬)로 표시되는 알킬 에스테르, 예를 들어 메틸 에스테르에 대해 수행될 수 있다 (반응식 3, 경로 C1). 반응은 편리하게는 비양성자성 용매, 예컨대 THF 중 주변 온도 또는 다소 높은 온도, 전형적으로 RT 내지 40 ℃에서 수행된다.
반응식 3
Figure pct00015
다른 한편으로, 화학식 (I)의 아미드 생성물은 아미드 (펩티드) 커플링 시약의 존재하, 및 비-친핵성 염기의 존재하에 아민 RaRbNH와의 반응에 의해 중간체 F (Rc = H)로 표시되는 모 카복실산으로부터 유도될 수 있다 (반응식 3, 경로 C2). 이러한 변환에 보통 사용되는 시약의 예는 HATU이며, 적합한 염기는 DIPEA 및 N-메틸모르폴린 등을 포함한다. 아미드화 반응은 전형적으로 극성 비양성자성 용매, 예컨대 THF 및 주변 온도에서 수행된다.
중간체 A로 표시되는 화합물은 상업적으로 입수할 수 있거나, 또는 당업계에 주지인 합성법으로 제조할 수 있다. 예를 들어 이러한 일반 구조의 화합물은 임의로 그의 보호된 유도체 또는 적합한 염 형태의 적절한 히드라진을 관련 케토니트릴과 축합하여 제조할 수 있다 (반응식 4). 적절한 염의 예는 하이드로클로라이드 염이고, 이러한 변환에 적합한 보호 그룹은 동소에서 모 히드라진을 발생하기 위해 폐환 조건하에서 용이하게 제거되는 산 불안정성 카바메이트, 예를 들어 Boc 그룹 (Rd = tert-Bu)이다.
반응식 4
Figure pct00016
축합/폐환 반응은 극성 양성자성 용매, 예컨대 에탄올중에 강산 예를 들어 진한 염산의 존재하 및 승온, 전형적으로 환류에서 적절히 수행된다.
일부의 경우에는, 출발 물질의 이용성 및/또는 화합물에서 표시되는 작용기 및/또는 해당 합성 과정동안 또는 후속 변환에서 그의 하나 이상을 보호하기 위한 필요성을 최적화 하기 때문에, 하나 또는 다른 선택적인 방법으로 이러한 중간체를 제조하는 것이 유리할 수 있다. 예를 들어 중간체 A로 표시되는 화합물은 또한 1H-피라졸-5-아민과 적합한 아렌 Q-LG3 (여기서 Q는 화학식 (I)의 화합물에 대해 정의된 바와 같은 임의로 치환된 방향족 핵이고, LG3은 할라이드, 예컨대 요오드 원자이다) 간의 구리 (I) 매개 커플링 반응으로 이뤄질 수 있다 (반응식 5). 반응은 편리하게는 비양성자성 비-극성 용매, 예컨대 톨루엔중에서, 구리(I) 염, 예를 들어 요오드화구리(I)를 촉매로 사용하여 구리 배위 리간드, 예컨대 N 1,N 2-디메틸사이클로헥산-1,2-디아민의 존재하 및 염기, 예를 들어 탄산칼륨의 존재하에 전형적으로 승온, 예를 들어 환류에서 수행된다.
반응식 5
Figure pct00017
당업자들에게는 본원에 기술된 하나의 중간체를 업계에 주지인 선례가 있는 하나 이상의 변환에 의해 그의 다른 예로 전환시키고 추가적인 본 발명의 화합물에 접근토록 하는 것이 유리할 수 있음이 자명할 것이다. 이러한 과정의 일례로서 Q가 알콕시 그룹 (ORe 상기 식에서, Re는 알킬임), 예컨대 메톡시 그룹으로 치환된 페닐 고리인 중간체 A로 표시되는 화합물은 O-탈알킬화 반응에 의해 상응하는 페놀로 전환될 수 있다 (반응식 6). 이러한 타입의 변환은 비-극성, 비양성자성 용매, 예컨대 DCM 중에 저온, 예를 들어 -5 내지 0 ℃에서 삼할로겐화붕소, 예를 들어 삼브롬화붕소로 수행될 수 있다.
반응식 6
Figure pct00018
하나의 중간체를 그의 다른 화합물로 전환시키는 것에 대한 추가 예는 상술된 중간체 A의 페놀 실시예의 작용기화로 제공된다. 예를 들어 이러한 조성의 중간체는 편리하게는 페놀 산소 상에서 알킬 할라이드, 예를 들어 단순 알킬 브로마이드와의 반응으로 알킬화될 수 있다. 다른 한편으로, 페놀 생성물은 작용기화된 알킬 할라이드, 예를 들어 질소 무스타드, 즉 화학식 Rf(CH2)2LG4의 2-할로에틸아민의 염(여기서, LG4는 할로겐, 예컨대 염소이고, Rf은 O(CH2)2Rf이 화학식 (I)의 화합물내 Q의 정의에 맞도록 선택된다) 또는 그의 적절히 보호된 유도체와 반응될 수 있다 (반응식 7)
반응식 7
Figure pct00019
이러한 종류의 O-알킬화에 사용될 수 있는 2-할로에틸아민의 염의 예는 4-(2-클로로에틸)모르폴린 하이드로클로라이드이다. 이러한 종류의 반응은 유용하게는 극성 비-양성자성 용매, 예컨대 아세토니트릴 또는 DMF 중에 염기, 예컨대 탄산칼륨의 존재하에 필요에 따라 가열하여 수행된다.
일부의 경우, 적합한 디아조디카복실레이트 커플링 시약, 예를 들어 디이소프로필 디아젠-1,2-디카복실레이트와 함께, 트리아릴 포스핀, 예컨대 트리페닐포스핀의 존재하에서 페놀과 상응하는 알콜 Rf(CH2)2OH를 상호작용시킴으로써 미츠노부(Mitsunobu) 조건하에 O-알킬화를 수행하는 것이 유리할 수 있다. 이러한 반응은 전형적으로 비-극성, 비양성자성 용매, 예컨대 THF 중에 저온 내지 주변 온도, 예를 들어 -50 ℃ 내지 RT에서 수행된다.
중간체 B로 표시되는 화합물은 중간체 G로 표시되는 친전자성 아릴옥시 나프틸아민 화합물(여기서, LG2는 적합한 이탈 그룹, 예컨대 할로겐 원자, 예를 들어 염소이다)과 중간체 D로 표시되는 아닐린 성분간의 SNAr 치환 반응으로 수득할 수 있다 (반응식 8). 커플링 반응은 자유 나프틸아민 (G1 = H) 또는 임의로, 화학선택성을 조절하고 그에 따라 효율을 증대시키기 위해 그의 보호된 유도체 중간체 G(P) (G1 = 보호 그룹)에 대해 수행될 수 있다.
반응식 8
Figure pct00020
반응은 산성 조건하에, 예를 들어 p-TSA의 존재하 및 극성 비양성자성 용매, 예컨대 THF 중에 전형적으로 승온, 예를 들어 70 ℃에서 진행된다. 보호 그룹이 채용되는 경우, 중간체 B로 표시되는 생성물은 이후 적합한 탈보호 단계(들)에 의해 나타난다. 예를 들어 SNAr 커플링 반응동안 카바메이트, 예컨대 Boc 그룹을 사용하여 나프틸아민 질소 (G1 = tert-BuO2C)를 보호하고 그후에 강산, 예를 들어 TFA로 처리하여 제거할 수 있다.
상술된 합성 과정 (경로 C1 및 C2, 반응식 3)은 중간체 B로 표시되는 화합물을 얻기 위해 채용될 수 있다 (반응식 9). 요컨대, 중간체 B의 실시예들은 중간체 J (Rc = G1 = H)로 표시되는 카복실산의 활성화된 유도체 또는 그의 보호된 유도체 중간체 J(P) (G1= 보호 그룹)를 아민 RaRbNH과 반응시켜(여기서, NRaRb는 Y 또는 그의 보호된 유도체를 포함한다) 제조할 수 있다. 다른 한편으로, 상호전환은 상술된 바와 같이, 트리알킬 알루미늄의 존재하에 아민 RaRbNH를 사용하여 에스테르 중간체 H (Rc = 알킬, G1 = H) 또는 그의 보호된 유도체 중간체 H(P) (Rc = 알킬, G1= 보호 그룹)에 대해 수행될 수 있다. 이러한 변환에 적합한 보호 그룹은 우레탄 유도체 (G1 = RhO2C)이며, 이 경우 중간체 B로 표시되는 목적 아닐린 (G1 = H)은 적절한 탈보호 과정에 따라 수득된다.
반응식 9
Figure pct00021
이러한 목적에 적합한 우레탄 보호 그룹의 예는 Boc 그룹 (G1 = tert-BuO2C)이며, 이는 산 처리에 의해 아미드화 반응후 제거될 수 있다.
중간체 E 및 F로 표시되는 에스테르 및 산 전구체는 본 발명의 화합물 실시예를 제공하는 상기에 기술된 것과 동일하거나 유사한 방법 (반응식 1)으로 수득할 수 있다. 이 방식으로 중간체 E 및 F는 편리하게는 중간체 H 및 J를 각각 활성화된 아미노피라졸 유도체 중간체 A*와 반응시켜 수득된다 (반응식 10). 당업자들은 에스테르: 중간체 H 및 E가 적합한 산성 또는 염기성 조건하에 가수분해에 상응하는 카복실산: 중간체 J 및 F로 용이하게 변환될 수 있음을 자명하게 알 것이다. 예를 들어 이러한 전환은 양성자성 용매 또는 용매의 혼합물, 예를 들어 THF 및 물중에 적당히 높은 온도, 전형적으로 RT 내지 40 ℃에서 염기, 예컨대 수산화리튬을 사용한 비누화에 의해 수행될 수 있다.
반응식 10
Figure pct00022
중간체 G로 표시되는 전구체 화합물은 편리하게는 염 또는 적합한 보호된 유도체 형태의 4-아미노나프탈렌-1-올과 친전자성 헤테로방향족 (반응식 11), 예를 들어 디할로 헤테로방향족(여기서 이탈 그룹 LG2 및 LG5는 둘 다 염소와 같은 할로겐 원자임) 간의 SNAr 치환 반응으로 제조된다.
반응식 11
Figure pct00023
이러한 변환에 적합한 보호 그룹은 예컨대 상술된 바와 같이, 하나 이상의 후속 변환동안 화학선택성을 조절하기 위해 유지될 수 있는 Boc 그룹 (G1 = tert-BuO2C)이다 (반응식 8 및 9). 치환 단계는 편리하게는 극성, 비양성자성 용매, 예컨대 아세토니트릴중 입체장애 염기, 전형적으로 DBU의 존재하에 저온, 예를 들어 0 ℃에서 수행된다.
중간체 H 및 J로 표시되는 화합물은 중간체 D 대신 중간체 K로 표시되는 아닐리노산 또는 아닐리노 에스테르를 채용하여 중간체 B의 제조를 위해 상술된 것 (반응식 8)과 유사한 합성 방법으로 제조할 수 있다 (반응식 12). 유사한 방식으로, 산 매개 SNAr 커플링은 자유 나프틸아민 중간체 G (G1 = H) 상에서 또는 임의로, 상기 및/또는 후속 변환에서 목적하는 화학선택성을 유지하기 위해, 동일한 중간체 G(P) (G1 = 보호 그룹)의 보호된 유도체를 사용하여 수행될 수 있다. SNAr 커플링은 극성 비-양성자성 용매, 예를 들어 THF 또는 IPA 또는 DMF 중 산 촉매, 예컨대 p-TSA 또는 TFA의 존재하에 가장 일반적으로는 승온, 전형적으로 60 내지 70 ℃에서 적절히 수행된다.
반응식 12
Figure pct00024
중간체 D 및 중간체 K로 표시되는 공지 아닐린 성분은 상업적 공급처로부터 입수하거나, 공개된 방법에 따라 제조하였다. 본원에 개시된 신규 실시예는 상업적으로 입수할 수 있는 출발 물질로부터 당업계에 주지인 작용 그룹 상호전환을 이용하여 합성하였다 (반응식 13). 예를 들어, (이탈) 그룹 LG6은 SNAr 반응 또는 전이 금속-촉매화 커플링을 통해 목적 R1 그룹으로 대체될 수 있다. 일부의 경우 목적 아닐린은 후속 반응이 효율적으로 수행될 수 있도록 하기 위해, 임의로 N-보호 (G2 = PG)될 수 있는 적절히 치환된 아미노 벤조산 (Rc = G2 = H) 및/또는 아미노 벤조산 에스테르 (Rc = 알킬 G2 = H)로부터 용이하게 수득할 수 있다. 치환체 Rh가 화학식 (I)의 화합물에 대해 정의된 바와 같은 그룹 R1으로 전환되어 중간체 K로 표시되는 화합물을 제공하며, 이는 가수분해되고 아미드 커플링 반응되어 질소 보호 그룹(사용될 경우)의 제거후 중간체 D의 실시예를 제공할 수 있다.
반응식 13
Figure pct00025
중간체 D의 추가 실시예가 상업적으로 입수할 수 있는 적합한 이탈 그룹 LG6, 예컨대 할로겐, 예를 들어 불소로 치환된 니트로 벤조산으로부터 용이하게 제조된다. 이러한 조성의 화합물은 아미드 커플링후, SNAr 치환 반응 및 니트로 그룹의 아민으로의 환원을 포함하는 일련의 반응에 의해 목적 아닐린의 실시예로 전환될 수 있다.
다른 한편으로, 화학식 (I)의 화합물은 중간체 B를 피라졸-5-이소시아네이트 화합물, 중간체 L에 커플링하여 수득할 수 있다. 이 경로에서, 중간체 L은, 예를 들어, 편리하게는 구리 (II)-매개 챈-램(Chan-Lam) 반응을 통해 편리하게 제조될 수 있으며 (예를 들어: Tetrahedron Lett. 1998, 39, 2941-2944 참조), 여기서는 적합한 피라졸-5-카복실산의 에스테르가 아릴- 또는 헤테로아릴-보론산에 커플링된다. 생성된 N-아릴 피라졸산 에스테르를 비누화하여 상응하는 카복실산 (중간체 M)을 제공하고, 이 산은 중간체 L의 제공을 위해 코티스 재배열(Curtis rearrangement)전에 아실 아지드로 전환된다(예를 들면, 이탈 그룹 및 활성화된 아지드 이온의 공급원, 예컨대 디페닐 포스포르아지데이트 (DPPA) 사용; 예를 들어, Tetrahedron 1974, 30, 2151-2157 참조)).
반응식 14
Figure pct00026
당업자들에게는 일부의 경우 합성 과정의 총 효율을 높이기 위해 대안적인 보호 그룹을 사용하고/하거나 방식이 유사하지만 순서가 다른 상술된 변환을 수행하는 것이 기술적으로 유리하다는 것은 자명할 것이다.
보호 그룹 및 그의 제거 수단은 문헌["Protective Groups in Organic Synthesis", by Theodora W. Greene and Peter G. M. Wuts, published by John Wiley & Sons Inc; 4th Rev Ed., 2006, ISBN-10: 0471697540]에 기술되어 있다.
본원에 기술된 신규 중간체는 본 발명의 일 측면을 이룬다. 이러한 면에서, 본 발명의 추가 측면은 하기 (i) 및 (ii)에 관한 것이다:
(i) 화학식 (II)의 화합물, 또는 그의 염 또는 보호된 유도체:
Figure pct00027
[상기 식에서, Ra, Rb, X, Y 및 R1은 상기 정의된 바와 같다]
(ii) 화학식 (III)의 화합물, 또는 그의 염 또는 보호된 유도체:
Figure pct00028
[상기 식에서, Y 및 R1은 상기 정의된 바와 같다].
화학식 (II) 및 (III)의 화합물로서 언급될 수 있는 것으로는
Ra 및 Rb가 이들이 결합된 C-원자와 함께 C1-3 알킬, C1-3 할로알킬, 시아노 및 할로중에서 선택되는 하나 이상의 치환체에 의해 임의로 치환된 융합된 페닐 환을 형성하고;
X는 N을 나타내고;
Y는 NR2R3을 나타내고; 및/또는
R1은 C2-6 알키닐을 나타내는 것이 포함된다.
화학식 (II) 및 (III)의 화합물로서 특히 언급될 수 있는 것으로는 각각 하기 화학식 (IIa) 및 (IIIa)의 것을 포함한다:
Figure pct00029
상기 식에서, X, R1 및 Y는 상기 정의된 바와 같다.
화학식 (IIa) 및 (IIIa)의 화합물로서 특히 언급될 수 있는 것으로는
X는 N을 나타내고;
Y는 N(H)-CH2CH2-(모르폴린-1-일)을 나타내고; 및/또는
R1은 C2-3 알키닐 (예를 들면, -C≡C-H)을 나타내는 것이 포함된다.
화학식 (II) 및 (III)의 화합물의 보호된 유도체는 필수적인 NH2 그룹이 보호된 것을 포함한다. 이러한 면에서, 보호된 유도체는 상기 화합물의 아미드 또는, 특히, 카바메이트를 포함한다. 예를 들어, 이같은 보호된 유도체는 NH2 그룹의 H-원자가 R'C(O)-[여기서, R'는 H, C1-8 알킬, 페닐 또는 벤질이고, 페닐과 벤질 그룹은 할로, 하이드록시, 메틸 및 메톡시중에서 선택되는 하나 이상의 그룹에 의해 임의로 치환된다]; 또는 R"-O-C(O)-[여기서, R"는 tert-부틸, 페닐, 벤질 또는 플루오레닐이고, 페닐, 벤질과 플루오레닐 그룹은 할로, 하이드록시, 메틸 및 메톡시중에서 선택되는 하나 이상의 그룹에 의해 임의로 치환된다]로 대체된 화합물을 포함한다.
화학식 (I)의 화합물은 (특히 알파 서브타입의) p38 MAP 키나제 저해제이고, 일 측면에서 화합물은 염증성 질환, 예를 들어 COPD 및/또는 천식의 치료에 유용하다.
놀랍게도, 적어도 일부 구체예에서, 화학식 (I)의 화합물은 이전에 기술된 알로스테릭(allosteric) p38 MAP 키나제 저해제, 예컨대, BIRB796 (Pargellis, C et al., Nature Struct. Biol., 2002, 9(4):268-272)과 비교하여 장기간의 작용성 및/또는 작용 지속성을 나타낸다.
일 구체예에서, 화학식 (I)의 화합물은 GSK 3α를 강력히 저해하거나 이에 결합하지 않고, 예를 들어 이들은 GSK 3α에 대한 IC50 값이 1500 nM 이상; 예컨대 2,000, 3,000, 4,000, 5,000, 6,000, 7,000, 8,000, 9,000 또는 10,000 nM 또는 그 초과이다.
여기서 사용된 작용 지속성은 표적(예컨대 수용체)으로부터 화합물의 해리속도 또는 해리상수와 연관된다. 낮은 해리속도가 지속성을 유도할 수 있다.
높은 결합속도와 함께 낮은 해리속도가 강력한 치료 물질을 제공하는 경향이 있다.
화학식 (I)의 화합물은 생체 내에서 효능적일 것으로 예상된다.
전형적으로, 이제까지 개발된 종래 화합물들은 경구 투여를 위한 것이었다. 이러한 전략은 충분한 작용 지속기간을 이루기 위해 약물의 약동학적 프로파일을 최적화하는 것을 포함한다. 이렇게 하면 투여 사이에서 충분히 높은 약물 농도가 구축 및 유지되어 지속적인 임상적 혜택이 제공된다. 이러한 접근 방식의 불가피한 결과는 모든 신체 조직, 특히 간과 소화관이 치료 중인 질환에 의해 부정적으로 영향을 받고 있는지와 상관없이 치료적으로 활성인 농도를 초과하는 약물에 노출된다는 것이다.
대안적인 전략은 약물을 염증이 생긴 기관에 직접 투여하는 치료 패러다임을 설계하는 것, 즉 국소 투여를 이용하는 것이다. 이러한 접근법이 모든 만성 염증성 질환을 치료하는데 적합하지는 않지만, 폐 질환, 예컨대 천식, COPD, 피부 질환, 예컨대 아토피성 피부염 및 건선, 알러지성 비염이 대표적인 비강 질환 및 위장 질환, 예컨대 궤양성 대장염 및 크론병 및 염증성 안질환, 예컨대 포도막염에서 광범위하게 이용되어 왔다.
국소 치료에 있어서, 효능을 달성할 수 있는 한가지 방법은 장기간 지속하는 작용을 갖고 관련 기관에서 유지되어 전신 독성의 위험을 최소화하는 약물을 사용하는 것이다. 선택적으로, 일부의 경우에, 바람직한 효과를 유지하는데 이용할 수 있는, 활성 약물의 "저장소(reservoir)"를 생성하는 제제를 이용할 수 있다. 첫 번째 접근방법은 항콜린성 약물 티오트로퓸 (tiotropium)(Spiriva)으로 예시된다. 이 화합물은 COPD 치료제로서 폐에 국소적으로 투여되며, 표적 수용체에 특히 높은 친화도를 가져서, 매우 낮은 오프율 및 그에 따른 지속적인 작용 기간을 얻게 된다.
본 발명의 일 측면에서, 화학식 (I)의 화합물은 특히 국소 전달, 예컨대 폐로의 국소 전달, 특히 호흡기 질환, 예를 들어 COPD 및/또는 천식 같은 만성 호흡기 질환의 치료에 적합하다.
일 구체예에서, 화학식 (I)의 화합물은 코르티코스테로이드로의 치료 요법에 불응이 된 환자를 코르티코스테로이드에 대해 민감화하는데 적합하다.
화학식 (I)의 화합물은 항바이러스 특성, 예를 들어 피코나바이러스 (picornavirus), 특히 리노바이러스, 인플루엔자 또는 호흡기 세포융합 바이러스에 의한 세포(예컨대 호흡기 상피 세포)의 감염을 예방하는 능력을 가질 수 있다.
따라서, 본 발명의 화합물은 피코나바이러스 감염, 예컨대 리노바이러스 감염, 인플루엔자 또는 호흡기 세포융합 바이러스의 예방, 치료 또는 완화에 특히 적합한 항바이러스제인 것으로 판단된다.
일 구체예에서, 화학식 (I)의 화합물은 리노바이러스 감염과 같은 바이러스성 감염, 및 특히 IL-8 같은 사이토카인을 특히 생체내에서 분비하는 바이러스 감염에 의해 유도된 염증을 감소시킬 수 있다. 이러한 활성은, 예를 들어 본 발명의 실시예에서 기술된 리노바이러스 유도 IL-8 어세이를 채용하여 시험관 내에서 시험할 수 있다.
일 구체예에서, 화학식 (I)의 화합물은 리노바이러스에 의해 특히 생체내에서 유도된 ICAM1 발현을 감소시킬 수 있다. ICAM1은 세포 감염을 위해 소위 주 그루브(major groove) 리노바이러스 혈청형에 의해 사용된 수용체 메카니즘이다. 이 활성은, 예를 들어 본 발명의 실시예에서 기술된 방법에 의해 측정할 수 있다.
상기와 같은 특성으로 의해 화학식 (I)의 화합물은 하나 이상의 만성 병태, 예컨대 울혈성 심부전, COPD, 천식, 당뇨병, 암을 가지는 환자 및/또는 예를 들어 장기 이식후 면역억제된 환자에서 염증성 질환의 악화, 특히 바이러스 항진, 또는 바이러스 감염의 치료(예방 포함)에 사용하기에 특히 적합할 것으로 예상된다. 그의 사용은 항-바이러스제, 예컨대 자나미비르, 오셀타미비르(예를 들어 오셀타미비르 포스페이트) 페라미비르 또는 라니나미비르와 병용될 수 있다.
일반적으로, 화학식 (I)의 화합물은 국소 또는 국부 요법으로 적절히 치료될 수 있는 염증성 성분을 가지는 하나 이상의 병태의 치료에 유용할 수 있다
특히, 화학식 (I)의 화합물은 COPD(만성 기관지염 및 폐기종 포함), 천식, 소아 천식, 낭포성 섬유증, 유육종증, 특발성 폐섬유증, 알러지성 비염, 비염 및 부비강염, 특히 천식, 또는 COPD(만성 기관지염 및 폐기종 포함)를 비롯한 하나 이상의 호흡기 장애의 치료에 유용할 수 있다
화학식 (I)의 화합물은 건성각결막염(건성 안), 알러지성 결막염, 결막염, 당뇨병성 망막증, 황반부종 (습성 황반부종 및 건성 황반부종 포함), 수술후 백내장 염증 또는, 특히, 포도막염(후방, 전방 및 범 포도막염 포함) (예를 들면, 알러지성 결막염, 결막염, 당뇨병성 망막증, 황반부종(습성 황반부종 및 건성 황반부종 포함), 수술후 백내장 염증 또는, 특히, 포도막염 (후방, 전방 및 범 포도막염 포함)을 포함한 안 질환 또는 장애)를 비롯한 안 질환 또는 장애의 치료에 유용할 수 있다.
화학식 (I)의 화합물은 알러지성 피부염, 접촉성 피부염, 아토피성 피부염 또는 건선을 비롯한 피부 질환 또는 장애의 치료에 유용할 수 있다.
화학식 (I)의 화합물은 궤양성 대장염 또는 크론병을 비롯한 위장 질환 또는 장애의 치료에 유용할 수 있다.
화학식 (I)의 화합물은 류마티스 관절염 또는 골관절염 및 특히 이러한 병태에 이은 염증이 생긴 관절을 비롯한 관절 질환 또는 장애의 치료에 유용할 수 있다.
화학식 (I)의 화합물은 위암을 비롯한 암의 치료 및 비-소세포 폐암종, 위암종, 결장직장암종 및 악성 흑색종을 포함하는 종양의 성장 및 증식의 저해에 유용할 수 있다.
화학식 (I)의 화합물은 치주염, 치은염 및 인두염을 비롯한 특정 기타 병태의 치료에 유용할 수 있을 것으로 또한 예상된다.
화학식 (I)의 화합물은 또한 환자의 병태가 코르티코스테로이드에 반응하지 않을 경우에 환자의 상태를 코르티코스테로이드 치료에 대해 다시 민감화시킬 수 있다.
그밖에, 본 발명은 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 희석제 또는 담체와 임의로 조합하여 본 발명에 따른 화합물을 포함하는 약학 조성물을 제공한다.
희석제와 담체는 비경구, 경구, 국소, 점막 및 직장 투여에 적합한 것들을 포함할 수 있다.
본 발명은 또한 성분들을 혼합하는 단계를 포함하는, 약학 조성물(예를 들어 비경구, 경구, 국소, 점막의 또는 직장 투여용 약학 조성물)의 제조방법을 제공한다.
위에서 언급된 바와 같이, 이러한 조성물들은, 예를 들어 비경구, 피하, 근육내, 정맥내, 관절내 또는 관절 주위 투여를 위해, 특히 액체 용액 또는 현탁제의 형태; 경구 투여를 위해, 특히 정제 또는 캡슐의 형태; 국소, 예를 들어, 폐 또는 비강내 투여를 위해, 특히 분말, 점비제(nasal drop) 또는 에어로졸 및 경피 투여의 형태; 예를 들어 볼(buccal), 혀밑(sublingual) 또는 질 점막에 대한 점막 투여, 및 직장 투여(rectal administration)를 위해, 예를 들어, 좌약의 형태로 제조될 수 있다.
조성물은 단위 투약 형태로 편리하게 투여될 수 있으며, 예를 들어, Remington's Pharmaceutical Sciences(17판, Mack Publishing Company, Easton, PA., (1985))에 기술된 바와 같이, 약학 분야에서 잘 알려진 임의 방법으로 제조될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제는 멸균수 또는 식염수(saline), 프로필렌 글리콜과 같은 알킬렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜과 같은 폴리알킬렌 글리콜, 식물성 기원 오일, 수소화된 나프탈렌 등을 부형제로서 함유할 수 있다. 비강내 투여용 제제는 고체일 수 있으며, 부형제, 예를 들어 락토스 또는 덱스트란을 함유할 수 있거나, 점비제 또는 계량 스프레이(metered spray) 형태로 사용하기 위한 수성 또는 유성 용액일 수 있다. 볼 투여의 경우, 전형적인 부형제는 당, 칼슘 스테아레이트, 마그네슘 스테아레이트, 전호화분 녹말(pregelatinated starch) 등을 포함한다.
경구 투여에 적합한 조성물은 하나 이상의 생리적으로 적합한 담체 및/또는 부형제를 포함할 수 있으며 고체 또는 액체 형태일 수 있다. 정제 및 캡슐은, 결합제, 예를 들어 시럽, 아카시아, 젤라틴, 솔비톨, 트라가칸트, 또는 폴리-비닐피롤리돈; 락토스, 슈크로스, 옥수수 전분, 칼슘 포스페이트, 솔비톨, 또는 글리신 같은 충전제; 마그네슘 스테아레이트, 탈크, 폴리에틸렌 글리콜, 또는 실리카 같은 윤활제; 및 소듐 라우릴 설페이트 같은 계면활성제와 함께 제조될 수 있다. 액체 조성물은 일반적인 첨가제, 예컨대 현탁화제, 예를 들어 솔비톨 시럽, 메틸 셀룰로스, 당 시럽, 젤라틴, 카복시메틸-셀룰로스, 또는 식용 지방; 유화제, 예컨대 레시틴, 또는 아카시아; 식물성 오일, 예컨대 아몬드 오일, 코코넛 오일, 대구 간유, 또는 땅콩유; 보존제, 예컨대 부틸레이트화 하이드록시아니솔(BHA) 및 부틸레이트화 하이드록시톨루엔(BHT)을 함유할 수 있다. 액체 조성물은, 예를 들어 젤라틴으로 캡슐화중에 단위 투여 형태를 제공할 수 있다.
고체 경구 투여 형태는 정제, 투-피스 경질 캡슐(two-piece hard shell capsule) 및 연질 탄성 젤라틴(soft elastic gelatin; SEG) 캡슐을 포함한다.
전형적으로, 건조 쉘 제제는 약 40% 내지 60% w/w 농도의 젤라틴, 약 20% 내지 30% 농도의 가소제(예컨대 글리세린, 솔비톨 또는 프로필렌 글리콜) 및 약 30% 내지 40% 농도의 물을 포함한다. 또한, 보존제, 염료, 유백제(opacifier) 및 향미제 같은 기타 물질도 존재할 수 있다. 액체 충전 물질은 (밀납, 수소화된 피마자유 또는 폴리에틸렌 글리콜 4000과 같은 현탁화제와 함께) 용해, 가용화 또는 분산된 고체 약물, 또는 비히클 또는 미네랄 오일, 식물성 오일, 트리글리세리드, 글리콜, 폴리올 같은 비히클 및 표면활성제 조합 중의 액체 약물을 포함한다.
적합하게, 화학식 (I)의 화합물은 폐, 눈 또는 장에 국소적으로 투여된다. 따라서, 본 발명에 따라 본 발명의 화합물과 임의로 하나 이상의 국소적으로 허용가능한 희석제 또는 담체를 함께 포함하는 약학 조성물이 제공된다.
폐로의 국소 투여는 에어로졸 제제를 사용함으로써 가능해질 수 있다. 전형적으로, 에어로졸 제제는 클로로플루오로카본(CFC) 또는 하이드로플루오로카본(HFC)과 같은 적합한 에어로졸 분사제(propellant)에 현탁 또는 용해된 활성 성분을 포함한다. 적합한 CFC 분사제는 트리클로로모노플루오로메탄(분사제 11), 디클로로테트라플루오로메탄(분사제 114), 및 디클로로디플루오로메탄(분사제 12)을 포함한다. 적당한 HFC 분사제는 테트라플루오로에탄(HFC-134a) 및 헵타플루오로프로판(HFC-227)을 포함한다. 전형적으로, 분사제는 전체 흡입 조성물의 40 내지 99.5 중량%, 예를 들어 40 내지 90 중량%로 포함된다. 제제는 공용매(예를 들어, 에탄올) 및 계면활성제(예를 들어, 레시틴, 소르비탄 트리올리에이트 등)를 포함하는 부형제를 포함할 수 있다. 에어로졸 제제는 용기에 포장되거나 적정 투여량이 계량 밸브에 의해 전달된다(예를 들어, Bespack, Valois 또는 3M에 의해 제공).
또한, 폐로의 국소 투여는 수용액 또는 현탁제와 같이 무압 제제를 사용하여 이루어질 수 있다. 이는 네뷸라이저(nebuliser)에 의해 투여될 수 있다. 또한, 폐로의 국소 투여는 건조 분말 제제를 사용하여 이루어질 수도 있다. 건조 분말 제제는 본 발명의 화합물을, 전형적으로 1 내지 10 ㎛의 질량 평균 공기역학 직경(MMAD)을 갖는 미분 형태로 함유할 것이다. 전형적으로 이 제제는, 일반적으로 대형 입자 크기, 예를 들어 100 ㎛ 이상 MMAD의, 락토스 같은 국소적으로 허용가능한 희석제를 함유한다. 건조 분말 전달 시스템의 예는 SPIHALER, DISKHALER, TURBOHALER, DISKUS, 및 CLICKHALER를 포함한다.
본 발명의 화합물(즉, 화학식 (I)의 화합물, (상기 정의된 바와 같은 Ia1), (Ia2), (Ib1), (Ib2), (Ic1), (Ic2), (Id1), (Id2), (Ie1), (Ie2), (If1), (If2), (Ig1), (Ig2), (Ih1) 또는 (Ih2), 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염)은 또한 예를 들어 수성 또는 유성 용액뿐 아니라 현탁액 및 에멀젼을 포함하는 좌약 또는 관장제의 형태로 직장에 투여될 수 있다. 이러한 조성물은 당업자들에게 주지인 표준 방법에 따라 제조된다. 예를 들어, 좌약은 활성 성분을 통상적인 좌약 베이스, 예컨대 코코아 버터 또는 기타 글리세라이드와 혼합하여 제조할 수 있다. 이 경우, 약물은 실온에서 고체이나 직장 온도에서는 액체이어서 직장내에서 녹아 약물을 방출하는 적합한 비자극성 부형제와 혼합된다. 이러한 물질은 코코아 버터 및 폴리에틸렌 글리콜이다.
일반적으로, 점안제 또는 안연고 형태로 눈에 국소 투여되도록 의도된 조성물의 경우, 저해제의 총량은 약 0.0001 내지 4.0% (w/w) 미만일 것이다.
바람직하게는, 국소 안 투여를 위해, 본 발명에 따라 투여되는 조성물은 용액, 현탁액, 에멀젼 및 다른 투약 형태로 제형화될 것이다. 제형화가 용이할 뿐만 아니라 환자가 감염된 눈에 용액 1 내지 2 방울을 주입함으로써 이러한 조성물을 용이하게 투여할 수 있다는 점에서 수성 용액이 일반적으로 바람직하다. 그러나, 조성물은 또한 현탁액, 점성 또는 반점성 겔, 또는 다른 형태의 고체 또는 반고체 조성물일 수도 있다. 수난용성 화합물에 대해 현탁액이 바람직할 수 있다.
눈에 투여하기 위한 대안적인 방법으로서 본 발명의 화합물의 용액 또는 현탁액을 유리체내 주사하는 것이 있다. 또, 본 발명의 화합물은 안내 이식물 또는 삽입물의 수단으로 도입될 수도 있다.
본 발명에 따라 투여되는 조성물은 또한 등장화제, 완충제, 계면활성제, 안정화 폴리머, 보존제, 공-용매 및 점도 구축제를 포함하나 이들에 제한되지 않는 다양한 기타 성분들을 포함할 수 있다. 본 발명의 바람직한 약학 조성물은 등장화제 및 완충제와 함께 저해제를 포함한다. 본 발명의 약학 조성물은 임의로 계면활성제 및/또는 완화제 및/또는 안정화 폴리머를 더 포함할 수 있다.
조성물의 장성을, 바람직하게는 안과 조성물에 대해 자연 눈물의 것으로 유지하기 위해 다양한 등장화제가 사용될 수 있다. 예를 들어, 염화나트륨, 염화칼륨, 염화마그네슘, 염화칼슘, 단당, 예컨대 덱스트로스, 프럭토스, 갈락토스, 및/또는 단순 폴리올, 예컨대 당 알콜 만니톨, 소르비톨, 자일리톨, 락티톨, 이소말티톨, 말티톨, 및 수소화 전분 가수분해물이 생리적 장성에 비슷하게 조성물에 첨가될 수 있다. 이러한 등장화제의 양은 첨가되는 특정 제제에 따라 달라질 것이다. 그러나, 조성물은 일반적으로, 등장화제를 최종 조성물이 안과적으로 허용가능한 오스몰농도(일반적으로 약 150-450 mOsm, 바람직하게는 250-350 mOsm 및 가장 바람직하게는 약 290 mOsm)를 가지게 하기에 충분한 양으로 함유할 것이다. 일반적으로, 본 발명의 등장화제는 2 내지 4% w/w의 범위로 존재할 것이다. 본 발명의 바람직한 등장화제는 단당 또는 당 알콜, 예컨대 D-만니톨을 포함한다.
저장 조건하에서 pH가 변하는 것을 방지하기 위해 적절한 완충제 시스템(예를 들면, 인산나트륨, 아세트산나트륨, 시트르산나트륨, 붕산나트륨 또는 붕산)이 조성물에 첨가될 수 있다. 특정 농도는 사용되는 제제에 따라 달라질 것이다. 그러나, 완충제는 바람직하게는 표적 pH가 pH 5 내지 8, 및 더욱 바람직하게는 pH 5 내지 7의 표적 pH 범위내에서 유지되도록 선택될 것이다.
고농도의 저해제를 전달하기 위해 계면활성제가 임의로 사용될 수 있다. 계면활성제는 저해제를 용해시키고 콜로이드 분산물, 예컨대 미셸 용액, 마이크로에멀젼, 에멀젼 및 현탁액을 안정화시키는 기능을 한다. 임의로 사용될 수 있는 계면활성제의 예로서는 폴리소르베이트, 폴록사머, 폴리오실 40 스테아레이트, 폴리옥실 피마자유, 티록사폴, 트리톤, 및 소르비탄 모노라우레이트를 들 수 있다. 본 발명에서 사용되는 바람직한 계면활성제는 친수/친지/균형 "HLB"가 12.4 내지 13.2의 범위이며, 트리톤X114 및 티록사폴과 같이 안과 용도로 허용가능하다.
본 발명의 안과 조성물에 첨가될 수 있는 추가 제제는 안정화 폴리머로서 기능하는 완화제이다. 안정화 폴리머는 우선적으로 국소 안과 용도의 이온성/전하성 실시예, 더욱 특히, 수중 분산물(즉, 수용성)을 만들 수 있고 물리적 안정성을 위해 그의 표면에 (-)10-50 mV의 제타-전위를 나타낼 수 있는 음전하를 가지는 폴리머여야 한다. 본 발명의 바람직한 안정화 폴리머는 0.1-0.5% w/w의 가교화 폴리아크릴레이트, 예컨대 카보머 및 페뮬렌(R), 특히 카보머 974p (폴리아크릴산) 류로부터 선택되는 폴리전해질, 또는 복수의 경우 폴리전해질들일 수 있다.
담체의 점도를 증가시키기 위해 본 발명의 안과 조성물에 또한 다른 화합물이 첨가될 수 있다. 점도 증진제의 예로는 폴리사카라이드, 예컨대 히알루론산 및 그의 염, 콘드로이틴 설페이트 및 그의 염, 덱스트란, 셀룰로스계의 다양한 폴리머; 비닐 폴리머; 및 아크릴산 폴리머를 들 수 있으나 이들에 한정되지는 않는다.
국소 안과 생성물은 전형적으로 다회투여 형태로 포장된다. 따라서 사용중에 미생물의 오염을 방지하기 위해 보존제가 필요하다. 적합한 보존제는 벤잘코늄 클로라이드, 클로로부탄올, 벤조도데시늄 브로마이드, 메틸 파라벤, 프로필 파라벤, 페닐에틸 알콜, 에덴테이트 디소듐, 소르브산, 폴리쿼터늄-1, 또는 당업자들에게 공지된 다른 제제를 포함한다. 이러한 보존제는 전형적으로 0.001 내지 1.0% w/v의 수준으로 사용된다. 본 발명의 단위 용량 조성물은 멸균될 것이지만, 전형적으로 보존처리되지 않는다. 따라서 조성물은 일반적으로 보존제를 함유하지 않을 것이다.
의사 또는 다른 숙련자들은 본 발명의 화합물에 적합한 용량, 및 따라서 임의의 특정 약학 제형(단위 투여 형태든, 그렇치 않던 간에 상관없이)에 포함되어야 하는 본 발명의 화합물의 양을 결정할 수 있을 것이다.
화학식 (I)의 화합물은 치료 활성을 가진다. 다른 측면으로, 본 발명은 의약으로서 사용하기 위한 본원에 개시된 화합물을 제공한다. 따라서, 추가 측면으로, 본 발명은 상기 언급된 병태의 하나 이상을 치료하는데 사용하기 위한 본원에 개시된 화합물을 제공한다.
일 구체예에서, 본원에 따른 건조 분말 제형은 마그네슘 또는 칼슘 스테아레이트를 포함한다. 이 제형은 특히 락토스를 또한 함유하는 경우 뛰어난 화학적 및/또는 물리적 안정성을 가질 수 있다.
다른 측면으로, 본 발명은 상기 언급된 병태의 하나 이상을 치료하기 위한 의약의 제조를 위한 본원에 개시된 화합물의 용도를 제공한다.
또다른 측면으로, 본 발명은 대상체에 유효량의 본원 화합물 또는 상기 화합물을 포함하는 약학 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 상기 언급된 병태의 하나 이상의 치료방법을 제공한다.
"치료"라는 용어는 치료적 처치뿐만 아니라 예방까지를 포함하는 의미이다. 병태 또는 장애의 치료는 그의 악화 치료도 포괄한다.
또한, 본 발명의 화합물은 하나 이상의 다른 활성 성분, 예를 들어 상기 언급된 병태의 치료에 적합한 활성 성분과 조합하여 투여될 수 있다.
예를 들어, 호흡기 장애의 치료를 위해 가능한 조합은 스테로이드(예를 들어, 부데소니드, 베클로메타손 디프로피오네이트, 플루티카손 프로피오네이트, 모메타손 푸로에이트, 플루티카손 푸로에이트), 베타 작용제(예를 들어, 터부탈린, 살부타몰, 살메테롤, 포모테롤), 잔틴(예를 들어, 테오필린), 항콜린성 약제(예를 들어, 이를테면 브로마이드로서의 이프라트로퓸 또는 티오트로퓸) 및 항바이러스제(예를 들어, 이를테면 포스페이트로서의 자나미비르, 오셀타미비르, 페라미비르 및 라니나미비르)와의 조합을 포함한다.
추가로, 위장 장애(예컨대 크론병 또는 궤양성 대장염)의 치료를 위해 가능한 조합은 예를 들어, 다음을 포함하는 목록중에서 선택되는 하나 이상의 제제를 포함한다:
- 5-아미노살리실산, 또는 그의 프로드럭(예컨대 설파살라진, 올살라진 또는 비살라지드);
- 코르티코스테로이드(예를 들면, 프레드니솔론, 메틸프레드니솔론, 또는 부데소니드);
- 면역억제제(예를 들면, 사이클로스포린, 타클로리무스, 메톡트렉세이트, 아자티오프린 또는 6-머캅토퓨린);
- 항-TNFα 항체(예를 들면, 인플릭시맙, 아달리무맵, 세르톨리주맵 페골 또는 골리무맵);
- 항-IL12/IL23 항체(예를 들면, 우스테키누맵) 또는 소분자 IL12/IL23 저해제 (예를 들면, 아필리모드);
- 항-α4β7 항체(예를 들면, 베돌리주맵);
- MAdCAM-1 블록커(예를 들면, PF-00547659);
- 세포 부착 분자 α4-인테그린에 대한 항체(예를 들면, 나탈리주맵);
- IL2 수용체 α 서브유닛에 대한 항체(예를 들면, 다클리주맵 또는 바실릭시맵);
- JAK3 저해제(예를 들면, 토파시티닙 또는 R348);
- Syk 저해제 및 그의 프로드럭(예를 들면, 포스타마티닙 및 R-406);
- 포스포디에스테라제-4 저해제(예를 들면, 테토밀라스트);
- HMPL-004;
- 항생균(probiotics);
- 데르살라진;
- 세마피모드/CPSI-2364; 및
- 단백질 키나제 C 저해제(예를 들면, AEB-071).
안 장애(예컨대 건성각결막염 또는 포도막염)의 치료를 위해 가능한 조합은 예를 들어, 다음을 포함하는 목록중에서 선택되는 하나 이상의 제제를 포함한다:
- 코르티코스테로이드(예를 들면, 덱사메타손, 프레드니솔론, 트리암시놀론 아세토니드, 디플루프레드네이트 또는 플루오시놀론 아세토니드);
면역억제제(예를 들면, 사이클로스포린, 비클로스포린, 아자티오프린, 메토트렉세이트, 마이코페놀레이트 모페틸 또는 타크롤리무스);
- 항-TNFα항체(예를 들면, 인플릭시맙, 아달리무맵, 세르톨리주맵 페골, ESBA-105 또는 골리무맵);
- 항-IL-17A 항체(예를 들면, 세쿠키누맵);
- mTOR 저해제(예를 들면, 시롤리무스);
- VGX-1027;
- JAK3 저해제(예를 들면, 토파시티닙 또는 R348); 및
- 단백질 키나제 C 저해제(예를 들면, AEB-071).
따라서, 본 발명의 또다른 측면은 하나 이상의 추가 활성 성분, 예를 들어 상술된 하나 이상의 활성 성분과 조합된 화학식 (I)의 화합물을 제공한다.
유사하게, 본 발명의 또다른 측면은
(A) 본 발명의 화합물(즉 상기 정의된 바와 같은 화학식 (I)의 화합물, (Ia1), (Ia2), (Ib1), (Ib2), (Ic1), (Ic2), (Id1), (Id2), (Ie1), (Ie2), (If1), (If2), (Ig1), (Ig2), (Ih1) 또는 (Ih2), 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염); 및
(B) 다른 치료제를 포함하고,
여기에서 성분 (A) 및 (B)는 각각 약학적으로 허용가능한 어쥬번트, 희석제 또는 담체와 혼합하여 제제화된
조합물(combination product)을 제공한다.
본 발명의 이러한 측면에서, 조합물은 단일 (조합) 약학 제제 또는 요소들로 구성된 키트(kit-of-parts)일 수 있다.
따라서, 본 발명의 상기 측면은 본 발명의 화합물과 다른 치료제를 약학적으로 허용가능한 어쥬번트, 희석제 또는 담체와 혼합하여 포함하는 약학 제제를 포함한다(이하, 제제는 "조합 제제"라 칭한다).
또한, 이것은
(i) 약학적으로 허용가능한 어쥬번트, 희석제 또는 담체와 혼합하여 본 발명의 화합물을 포함하는 약학 제제; 및
(ii) 약학적으로 허용가능한 어쥬번트, 희석제 또는 담체와 혼합하여 다른 치료제를 포함하는 약학 제제를 포함하고,
여기서 성분 (i) 및 (ii)는 각각 서로 합하여 투여에 적합한 형태로 제공되는,
요소들로 구성된 키트를 포함한다.
따라서, 요소들로 구성된 키트 중 성분 (i)는 약학적으로 허용가능한 어쥬번트, 희석제 또는 담체와 혼합된 상기한 성분 (A)이다. 마찬가지로, 성분 (ii)는 약학적으로 허용가능한 어쥬번트, 희석제 또는 담체와 혼합된 상기한 성분 (B)이다.
다른 치료제(즉, 상기한 성분 (B))는, 예를 들어 호흡기 장애, 위장 장애 및 안 장애의 치료와 관련하여 위에서 언급된 제제 중 어느 하나일 수 있다.
본 발명의 상기 측면의 조합물(조합 제제 또는 요소들로 구성된 키트)은 염증성 질환(예를 들면, 상기 언급된 염증성 질환, 예컨대:
- COPD(만성 기관지염 및 폐기종 포함), 천식, 소아 천식, 낭포성 섬유증, 유육종증, 특발성 폐섬유증, 알러지성 비염, 비염 및 부비강염, 특히 천식, 또는 COPD(만성 기관지염 및 폐기종 포함)를 비롯한 호흡기 장애;
- 알러지성 결막염, 결막염, 건성각결막염(건성 안), 녹내장, 당뇨병성 망막증, 황반부종(당뇨병성 황반부종 포함), 망막 중심 정맥 폐쇄(CRVO), 건성 및/또는 습성 연령관련황반변성(AMD), 수술후 백내장 염증 또는, 특히, 포도막염 (후방, 전방 및 범 포도막염 포함), 각막 이식편 및 윤부 세포 이식 거부를 비롯한 안 질환 또는 장애;
- 알러지성 피부염, 접촉성 피부염, 아토피성 피부염 또는 건선을 비롯한 피부 질환 또는 장애; 및
- 글루텐 과민성 장질환(만성 소화 장애증), 호산구 식도염, 장 이식편대숙주 질환 또는, 특히, 궤양성 대장염 또는 크론병을 비롯한 위장 질환 또는 장애의 치료 또는 예방에 사용될 수 있다.
본원에 개시된 본 발명의 측면(예를 들면, 상기 언급된 화합물, 조합물, 방법 및 용도)는 본원에 기술된 병태의 치료에 있어서, 상기 병태 또는 다른 것들의 치료에 사용하기 위한 선행기술에 공지된 유사 화합물, 조합물, 방법(치료) 또는 용도에 비해 의료인 및/또는 환자에게 보다 편리하거나, 보다 효과적이거나, 독성이 덜하거나, 더 장기적으로 작용하거나, 선택성이 더 뛰어나거나, 활성 범위가 더 광범하거나, 더 효능적이거나, 부작용의 발생이 더 적거나, 약물동태 및/또는 약력학적 프로파일이 더 좋거나, 고체 상태 형택학상 더 적합하거나, 안정성이 더 뛰어나거나, 또는 기타 유용한 약리학적 특성을 가질 수 있다는 이점을 가질 수 있다.
선행기술의 화합물에 비해, 화학식 (I)의 화합물은 추가적으로(또는 선택적으로):
- 국소/국부 투여에 특히 적합한 성질을 나타내고(예를 들면, 국소/국부 투여후, 화학식 (I)의 화합물의 높은 표적 조직 농도를 발생하지만 혈장 농도는 낮고/낮거나 혈장으로부터 화학식 (I)의 화합물이 신속히 제거된다);
- (예를 들면, 화학식 (I)의 화합물의 분포 부피가 작기 때문에) 정맥내 투여후 혈관밖 노출의 위험이 감소되고;
- 선택 키나제(예를 들면, Syk 및/또는 일단의 키나제, 예컨대 Syk, Src 및 p38 MAPKα)에 대한 효능이 뛰어나고;
- 세포내 감소된 β-카테닌 유도 및/또는 유사분열 저해를 나타내고;
- 사이토크롬 P450 슈퍼패밀리 일원의 시간 의존성 저해를 나타내지 않거나 덜 나타내고; 및/또는
- 예를 들면 환자에 투여후 덜 문제가 되는(예를 들면, 독성이 덜한) 대사산물을 산출할 수 있다.
실험부분
본 원에서 사용된 약어는 하기 표 1에 정의된 의미를 갖는다. 정의되지 않은 모든 약어는 일반적으로 받아들여지는 이들의 의미로 사용되도록 의도된다.
표 1: 약어
AcOH 빙초산
aq 수성
ATP 아데노신-5'-트리포스페이트
BALF 기관지 폐포성 유출액(bronchoalveolae lavage fluid)
br 광폭(broad)
BSA 소 혈청 알부민
CatCart® 촉매성 카트리지
CDI 1,1-카보닐디이미다졸
COPD 만성 폐쇄성 폐 질환
c-Src 세포 sarc(oma) 키나제
d 이중선
DCM 디클로로메탄
DMEM 둘베코 변형 이글 배지
DMSO 디메틸 설폭사이드
DSS 덱스트란 소듐 설페이트
d-U937 세포 PMA 분화 U-937 세포
(ES+) 전기분무 이온화, 양성 모드
Et 에틸
EtOAc 에틸 아세테이트
FCS 소태아혈청
FRET 형광 공명 에너지 전달
GR 글루코코르티코이드 수용체
GSK3α 글리코겐 신타제 키나제 3α
HBEC 일차 인간 기관지 상피 세포
hr 시간
HRP 호스래디쉬 퍼옥시다제
HRV 인간 리노바이러스
IBD 염증성 장 질환
ICAM-1 세포간 부착 분자 1
IL-8 인토류킨 8
JNK c-Jun N-말단 키나제
LPS 리포폴리사카라이드
(M+H)+ 프로톤화된 분자 이온
MAPK 미토겐 활성화 단백질 키나제
MAPKAP-K2 미토겐 활성화 단백질 키나제-활성화 단백질 키나제-2
Me 메틸
MeCN 아세토니트릴
MeOH 메탄올
MHz 메가헤르츠
MMAD 질량 중간 공기 역학적 직경
MOI 감염다중도
min 분
MPO 미엘로퍼옥시다제
MTT 3-(4,5-디메틸티아졸-2-일)-2,5-디페닐테트라졸륨
브로마이드
m/z: 질량 대 전하 비
NMR 핵자기공명(분광학)
NT 검사되지 않음
PBMC 말초혈액 단핵세포
PBS 인산염 완충 식염수
PG 보호 그룹
Ph 페닐
PHA 파이토헤마글루티닌(phytohaemagglutinin)
PMA 포볼(phorbol) 미리스테이트 아세테이트
pTSA 4-메틸벤젠설폰산
q 사중선(quartet)
RT 실온
RP HPLC 역상 고성능 액체 크로마토그래피
RSV 호흡기 세포융합 바이러스
s 단일선
sat 포화
SCX 고체 지지 양이온 교환(수지)
SDS 소듐 도데실 설페이트
SNAr 친핵성 방향족 치환
Syk 비장 티로신 키나제
t 삼중선
T3P 1-프로판포스폰산 사이클릭 언하이드라이드
TBDMS tert-부틸디메틸실릴
TCID50 50% 조직 배양 감염 용량
THF 테트라하이드로푸란
TMB 3,3',5,5'-테트라메틸벤지딘
TNBS 2,4,6-트리니트로벤젠설폰산
TNFα 종양괴사인자 알파
WB 세척 완충제
일반적 방법
모든 출발물질과 용매는 상업적 공급처로부터 입수되거나 인용문헌에 따라 제조되었다. 달리 언급되지 않는 한, 모든 반응물은 교반되었다. 유기 용액은 무수 황산마그네슘에서 통상적으로 건조되었다. 수소화는 Thales H-큐브 유동 반응기에서 기재된 조건하에 수행하였다.
칼럼 크로마토그래피는 미리 충전된 실리카(230-400 메쉬, 40-63 μm) 캐트리지에서 지시된 양을 사용하여 수행하였다. SCX는 Supelco로 구입하여 사용 전에 1M 염산으로 처리하였다. 다른 언급이 없는 한, 정제될 반응 혼합물은 먼저 MeOH로 희석하고 수적의 AcOH로 산성화하였다. 이 용액을 직접 SCX에 로딩하고 MeOH로 세척하였다. 이후, 원하는 물질을 0.7M NH3의 MeOH 용액으로 세척하여 용출하였다.
제조용 역상 고성능 액체 크로마토그래피
Agilent Scalar 칼럼 C18, 5 μm (21.2 x 50 mm), 유속 28 mL min-1, 0.1 % v/v 포름산을 함유하는 H2O-MeCN 구배로 10 분동안 215와 254 nm에서의 UV 검출을 채용하면서 용출. 구배 정보: 0.0 - 0.5 min: 95% H2O-5% MeCN; 0.5-7.0 min; 95% H2O-5% MeCN에서 5% H2O-95% MeCN으로 램프(ramp); 7.0 - 7.9 min: 5% H2O-95% MeCN으로 유지; 7.9 - 8.0 min: 95% H2O-5% MeCN으로 복귀; 8.0 - 10.0 min: 95% H2O-5% MeCN으로 유지.
분석 방법
역상 고성능 액체 크로마토그래피
방법 1: Agilent Scalar 칼럼 C18, 5 μm (4.6 x 50 mm) 또는 Waters XBridge C18, 5 μm (4.6 x 50 mm) 유속 2.5 mL min-1, 0.1 % v/v 포름산(방법 1 산성) 또는 NH3(방법 1 염기성)를 함유하는 H2O-MeCN 구배로 7 분동안 215와 254 nm에서의 UV 검출을 채용하면서 용출. 구배 정보: 0.0-0.1 min, 95% H2O-5% MeCN; 0.1-5.0 min, 95% H2O-5% MeCN에서 5% H2O-95% MeCN으로 램프; 5.0-5.5 min, 5% H2O-95% MeCN으로 유지; 5.5-5.6 min, 5% H2O-95% MeCN으로 유지, 3.5 mL min-1으로 유속 증가; 5.6-6.6 min, 5% H2O-95% MeCN으로 유지, 유속 3.5 mL min-1; 6.6-6.75 min, 95% H2O-5% MeCN으로 복귀, 유속 3.5 mL min-1; 6.75-6.9 min, 95% H2O-5% MeCN으로 유지, 유속 3.5 mL.min-1; 6.9-7.0 min, 95% H2O-5% MeCN으로 유지, 2.5 mL min-1으로 유속 감소.
방법 2: Agilent Extend C18 칼럼, 1.8 μm (4.6 x 30 mm), 40 ℃; 유속 2.5-4.5 mL min-1, 0.1% v/v 포름산 (방법 2 산성) 또는 NH3 (방법 2 염기성)를 함유하는 H2O-MeCN 구배로 4 분동안 254 nm에서의 UV 검출을 채용하면서 용출. 구배 정보: 0-3.00 min, 95% H2O-5% MeCN에서 5% H2O-95% MeCN으로 램프; 3.00-3.01 min, 5% H2O-95% MeCN으로 유지, 4.5 mL min-1으로 유속 증가; 3.01 3.50 min, 5% H2O-95% MeCN으로 유지; 3.50-3.60 min, 95% H2O-5% MeCN으로 복귀, 3.50 mL min-1으로 유속 감소; 3.60-3.90 min, 95% H2O-5% MeCN으로 유지; 3.90-4.00 min, 95% H2O-5% MeCN으로 유지, 2.5 mL min-1으로 유속 감소.
방법 3: Waters Xselect CSH C18 3.5 μm (4.6 x 50 mm) 유속 2.5 mL min-1, 0.1% v/v 포름산을 함유하는 H2O-MeCN 구배로 7 분동안 215 및 254 nm에서의 UV 검출을 채용하면서 용출. 구배 정보: 0.0-0.1 min, 95% H2O-5% MeCN; 0.1-5.0 min, 95% H2O-5% MeCN에서 5% H2O-95% MeCN으로 램프; 5.0-5.5 min, 5% H2O-95% MeCN으로 유지; 5.5-5.6 min, 5% H2O-95% MeCN으로 유지, 3.5 mL min-1으로 유속 증가; 5.6-6.6 min, 5% H2O-95% MeCN으로 유지, 유속 3.5 mL min-1; 6.6-6.75 분, 95% H2O-5% MeCN으로 복귀, 유속 3.5 mL min-1; 6.75-6.9 min, 95% H2O-5% MeCN으로 유지, 유속 3.5 mL.min-1; 6.9-7.0 min, 95% H2O-5% MeCN으로 유지, 2.5 mL min-1으로 유속 감소.
방법 4: Waters Xselect CSH C18 3.5 μm (4.6 x 50 mm); 유속 2.5-4.5 mL min-1, 0.1% v/v 포름산을 함유하는 H2O-MeCN 구배로 4 분동안 254 nm에서의 UV 검출을 채용하면서 용출. 구배 정보: 0-3.00 min, 95% H2O-5% MeCN에서 5% H2O-95% MeCN으로 램프; 3.00-3.01 min, 5% H2O-95% MeCN으로 유지, 4.5 mL min-1으로 유속 증가; 3.01 3.50 min, 5% H2O-95% MeCN으로 유지; 3.50-3.60 min, 95% H2O-5% MeCN으로 복귀, 3.50 mL min-1으로 유속 감소; 3.60-3.90 min, 95% H2O-5% MeCN으로 유지; 3.90-4.00 min, 95% H2O-5% MeCN으로 유지, 2.5 mL min-1으로 유속 감소.
1 H NMR 분광학
Bruker Avance III 분광광도계로 400 MHz에서 중수소화되지 않은 잔류 용매를 기준으로 사용하고 달리 언급이 없으면 DMSO-d6에서 실행하여 1H NMR 스펙트럼을 얻었다.
본 발명의 화합물 실시예를 제조하기 위해 사용된 이미 알려진 중간체는 하기 인용된 문헌에 포함되어 있는 방법에 따라 제조되었다(표 2). 추가 중간체는 본원에 기술된 대표적인 합성 과정에 따라 제조되었다.
Figure pct00030
Figure pct00031
Figure pct00032

중간체 A3*: 페닐 (3-(퍼플루오로에틸)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)카바메이트.
Figure pct00033
DCM (25 mL) 및 THF (10 mL) 중 중간체 A3 (3.00 g, 10.30 mmol) 및 NaHCO3 (1.70 g, 20.24 mmol)의 교반 용액에 페닐 클로로포르메이트 (1.40 ml, 11.14 mmol)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 밤새 교반하였다. 추가량의 0.2 eq. 페닐 클로로포르메이트를 첨가하고, 교반을 60 시간 더 계속하였다. 반응물을 물 및 DCM으로 희석하고, 혼합물을 상 분리 캐트리지에 통과시켰다. 생성된 황색 여액을 진공중에서 농축하여 오렌지색 오일을 얻고 소량의 헥산 첨가와 격렬한 스크래칭으로 연한 오렌지색 고체로 고화시켰다. 고체를 이소헥산에서 연마하고, 여과하여 수집하였다. 생성물을 이소헥산으로 추가 세척하여 중간체 A3* (3.86 g)을 백색 고체로 수득하였다.
1H NMR (400MHz; CDCl3) δ 7.38-7.43 (m, 6H), 7.25-7.29 (m, 1H), 6.89-7.14 (m, 4H), 2.46 (s, 3H).
LCMS m/z 412 (M+H)+ (ES+); 410 (M-H)- (ES-)
중간체 A4*: 페닐 (3-이소프로필-1-( p -톨릴)-1 H -피라졸-5-일)카바메이트.
Figure pct00034
이소프로필 아세테이트 (300 mL) 및 물 (100 mL) 중 Na2CO3 (15.0 g, 142 mmol)의 용액의 2상 혼합물에 중간체 A4 (25.0 g, 116 mmol)를 첨가하였다. 생성된 현탁액을 RT에서 고체가 용해될 때까지 (약 10 분) 교반하고, 페닐 클로로포르메이트 (16.0 mL, 128 mmol)로 처리한 후, 혼합물을 RT에서 2 시간동안 교반하였다. 물 (200 mL)을 첨가하고, 층을 분리하였다. 유기상을 물 (2 x 100 mL) 및 염수 (100 mL)로 세척한 후, 건조시키고, 진공중에서 농축하였다. 생성된 농후 황색 오일을 이소-헥산 (약 250 mL) 중에서 5% 디에틸에테르와 연마하고, 형성된 고체를 여과로 수집하고, 이소헥산 (50 mL)으로 세척하여 표제 화합물 중간체 A4*를 백색 분말로 수득하였다 (28.4 g, 72%); Rt 3.48 min (방법 1 산성); m/z 336 (M+H)+ (ES+); 1H NMR δ: 1.23 (6H, d), 2.37 (3H, s), 2.91 (1H, sept), 6.29 (1H, s), 7.05-7.45 (9H, 중첩 m), 9.95 (1H, s).
중간체 A11*: 페닐 (3-(tert-부틸)-1-(6-메톡시피리딘-3-일)-1H-피라졸-5-일)-카바메이트.
Figure pct00035
DCM (8 mL) 및 THF (2 mL) 중 중간체 A11 (780 mg, 3.17 mmol) 및 NaHCO3 (532 mg, 6.33 mmol)의 교반 현탁액에 페닐 클로로포르메이트 (481 μL, 3.80 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 RT에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 DCM (100 mL) 및 물 (100 mL)로 분배하였다. 수성상을 DCM (100 mL)으로 역추출하고, 유기 추출을 모아 건조시키고 (MgSO4), 여과한 뒤, 진공중에서 농축하여 오일을 얻고, 디에틸 에테르 및 이소헥산의 혼합물로 연마하여 중간체 A11* (736 mg)을 백색 고체로 수득하였다.
1H NMR (DMSO-d6) 400 MHz, δ 10.12 (s, 1H), 8.32-8.31 (m, 1H), 7.85-7.82 (m, 1H), 7.41-7.37 (m, 2H), 7.24 (t, 1H), 7.10 (br s, 2H), 7.00 (d, 1H), 6.37 (s, 1H), 3.92 (s, 3H), 1.28 (s, 9H).
LCMS m/z 367 (M+H)+ (ES+)
중간체 A12: 1-(4-메톡시페닐)-3-(테트라하이드로푸란-3-일)-1 H -피라졸-5-아민.
Figure pct00036
EtOH (20 mL) 중 3-옥소-3-(테트라하이드로푸란-3-일)프로판니트릴 (718 mg, 4.64 mmol)의 용액에 진한 염산 (0.387 mL, 4.64 mmol) 및 (4-메톡시페닐)히드라진 하이드로클로라이드 (737 mg, 4.22 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 4 시간동안 80 ℃로 가열한 다음, RT로 냉각하고, 수성 NaOH (2M, <5 mL)를 첨가하여 pH8로 조절하였다. 생성된 혼합물을 물 (20 mL) 및 Et2O (25 mL)로 분배하고, 수성층을 분리한 후, 에테르 (25 mL)로 추출하였다, 유기 추출을 모아 건조시키고, 진공중에서 증발시킨 뒤, 잔사를 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 (SiO2, 40 g, DCM 중 0-5% MeOH, 구배 용출) 표제 화합물, 중간체 A12를 연한 오렌지색 고체로 수득하였다 (503 mg, 45%); Rt 1.04 min (방법 2); m/z 260 (M+H)+, (ES+).
중간체 A13: 3-(3-메틸옥세탄-3-일)-1-( p -톨릴)-1 H -피라졸-5-아민.
Figure pct00037
무수 톨루엔 (3.0 mL) 중 p-톨릴히드라진 (79 mg, 0.65 mmol) 및 3-(3-메틸옥세탄-3-일)-3-옥소프로판니트릴, (Abraham, S. et al., WO 2011/022473, 24 Feb 2011) (100 mg, 0.65 mmol)의 용액을 6 시간동안 110 ℃로 가열한 후, 18 시간동안 RT로 냉각하였다. 반응 혼합물을 진공중에서 증발시킨 뒤, 잔사를 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 (SiO2, 12 g, 이소헥산중 10-40% EtOAc로 용출, 구배 용출) 표제 화합물, 중간체 A13을 수득하였다 (117 mg, HPLC에 의한 순도 87%, 65%); Rt 1.50 min (방법 2 산성); m/z 244 (M+H)+, (ES+). 수득한 물질을 후속 반응에 추가 정제없이 사용하였다.
중간체 A14: 1-(4-메톡시페닐)-3-(3-메틸옥세탄-3-일)-1 H -피라졸-5-아민.
Figure pct00038
무수 톨루엔 (7.0 mL) 중 3-(3-메틸옥세탄-3-일)-3-옥소프로판니트릴, (750 mg, 5.40 mmol) 및 (4-메톡시페닐)히드라진 (750 mg, 5.40 mmol)의 용액을 딘-스탁(Dean-Stark) 중류 트랩을 갖춘 장치에서 4 시간동안 110 ℃로 가열하였다. 반응 혼합물을 18 시간동안 RT로 냉각한 후, 진공중에서 증발시켰다. 잔사를 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 (SiO2, 40 g, 이소헥산중 10-75%, EtOAc, 구배 용출) 표제 화합물, 중간체 A14를 청색 고체로 수득하였다 (980 mg, 66%); Rt 1.24 min (방법 2 산성); m/z 260 (M+H)+, (ES+).
중간체 A15: 3-( tert -부틸)-1-(3-(2-메톡시에톡시)페닐)-1 H -피라졸-5-아민.
Figure pct00039
무수 톨루엔 (7.0 mL) 중 1-요오도-3-(2-메톡시에톡시)벤젠 (1.18 g, 4.05 mmol)의 용액에 3-(tert-부틸)-1H-피라졸-5-아민 (619 mg, 4.45 mmol)에 이어 (1R,2R)-N 1,N 2-디메틸사이클로헥산-1,2-디아민 (255 μL, 1.62 mmol) 및 탄산칼륨 (1.96 g, 14.2 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 질소로 퍼징한 후, 요오드화구리(I) (77 mg, 0.41 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 18 시간동안 질소하에 가열환류시켰다. 생성된 혼합물을 RT로 냉각하고, EtOAc (250 mL) 및 물 (250 mL)로 분배하였다. 유기층을 분리한 후, 물 (2 x 250 mL) 및 염수 (250 mL)로 세척한 다음, 건조시키고, 진공중에서 증발시켰다. 잔사를 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 (SiO2, 120 g, DCM 중0-5% [MeOH 중 0.7 M NH3], 구배 용출) 표제 화합물, 중간체 A15를 갈색 검으로 수득하였다 (1.04 g, 84%); Rt 2.20 min (방법 1, 산성); m/z 290 (M+H)+ (ES+).
중간체 A16: 3-이소프로필-1-(6-메톡시피리딘-3-일)-1 H -피라졸-5-아민.
Figure pct00040
무수 톨루엔 (7.0 mL) 중 4-메틸-3-옥소펜탄니트릴, (599 mg, 5.39 mmol) 및 5-히드라지닐-2-메톡시피리딘 (750 mg, 5.40 mmol)의 용액을 딘-스탁 증류 트랩을 갖춘 장치에서 4 시간동안 110 ℃로 가열하였다. 반응 혼합물을 18 시간동안 RT로 냉각한 후, 진공중에서 증발시켰다. 잔사를 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 (SiO2, 40 g, 10-80%, 이소헥산중 EtOAc, 구배 용출) 표제 화합물, 중간체 A16을 연황색 고체로 수득하였다 (825 mg, 63%); Rt 1.15 분 (방법 2 산성); m/z 233 (M+H)+, (ES+).
중간체 A17: 1-(4-메톡시페닐)-3-(테트라하이드로푸란-2-일)-1 H -피라졸-5-아민.
Figure pct00041
THF (30 mL) 중 포타슘 2-메틸프로판-2-올레이트 (5.74 g, 51.2 mmol)의 용액에 THF (13.0 mL) 중 메틸 테트라하이드로푸란-2-카복실레이트 (4.0 mL, 34 mmol) 및 MeCN (2.7 mL, 51 mmol)의 용액을 25 분에 걸쳐 첨가하였다. 생성된 혼합물을 RT에서 18 시간동안 유지한 후, 1M 염산 (30 mL)을 첨가하여 퀀칭하고 2상 혼합물을 얻었다. 상을 분리한 뒤, 유기상은 그대로 두고, 수성상을 Et2O (2 x 30 mL) 및 DCM (2 x 30 mL)로 추출하였다. 원래의 유기상 및 두 유기 추출물을 합하고, 생성된 용액을 건조시킨 후, 진공중에서 조심스럽게 농축하여 3-옥소-3-(테트라하이드로푸란-2-일)프로판니트릴, THF 및 tBuOH (1:1:1 w/w/w의 대략적인 비)로 이루어진 혼합물을 수득하였다 (9.07 g, ~30% w/w by 1H-NMR, ~60%); 1H NMR δ: 1.90-2.10 (3H, 중첩 m), 2.26 (1H, m), 3.70 (1H, d), 3.76 (1H, d), 3.90-3.99 (2H, 중첩 m), 4.39 (1H, m). 이 물질을 추가 정제없이 후속 반응에 사용하였다.
EtOH (11.0 mL) 중 상술된 조 케토니트릴, (1.0 g, ~30% 순도, ~2.0 mmol) 및 (4-메톡시페닐)히드라진 하이드로클로라이드 (148 mg, 0.849 mmol)의 용액에 진한 염산 (80 μL, 12 M, 1 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 4 시간동안 가열환류시킨 후, RT로 냉각하고, 진공중에서 증발시켰다. 잔사를 DCM (5.0 mL) 및 포화 aq. NaHCO3 (5.0 mL)로 분배하였다. 수성층을 분리한 후, DCM (3 x 5 mL)으로 추출하고, 유기 추출을 모아 진공중에서 증발시켰다. 잔사를 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 (SiO2, 40 g, DCM 중 0-10% [MeOH 중 0.7 M NH3], 구배 용출, 이어 SiO2, 40 g, 0-100%, 이소헥산중 EtOAc, 구배 용출) 표제 화합물, 중간체 A17을 오렌지색 오일로 수득하였다 (51 mg, 21%); Rt 1.14 min (방법 2 산성); m/z 260 (M+H)+, (ES+).
중간체 A18: 1-(3,4-디메틸페닐)-3-이소프로필-1 H -피라졸-5-아민.
Figure pct00042
EtOH (20 mL) 중 (3,4-디메틸페닐)히드라진 하이드로클로라이드 (3.0 g, 17 mmol) 및 4-메틸-3-옥소펜탄니트릴 (2.3 mL, 19 mmol)의 용액에 진한 염산 (1.7 mL, 12 M, 20 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 18 시간동안 가열환류시킨 후, RT로 냉각하고, 진공중에서 증발시켰다. 잔사를 DCM (50 mL) 및 물 (20 mL)로 분배하였다. 수성상을 분리한 후, DCM (2 x 50 mL)으로 추출하였다. 유기 추출을 모아 건조시키고, 진공중에서 증발시킨 뒤, 잔사를 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 (SiO2, 80 g, 0-100% Et2O 이소헥산중, 구배 용출) 표제 화합물, 중간체 A18을 오렌지색 오일로 수득하였다 (2.69 g, 67%); Rt 1.49 min (방법 2 산성); m/z 230 (M+H)+, (ES+).
중간체 A19*: 페닐 (1-(p-톨릴)-3-(1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-일)-1H-피라졸-5-일)카바메이트.
Figure pct00043
p-톨릴히드라진, HCl (3.2 g, 19.97 mmol) 및 5,5,5-트리플루오로-4,4-디메틸-3-옥소펜탄니트릴 (4.3 g, 20.40 mmol)을 에탄올 (15 mL)에서 8 시간동안 가열환류시켰다. 혼합물을 감압하에 농축하여 갈색 오일을 얻었다. 포화 NaHCO3 (50 mL) 및 물 (50 mL)을 첨가하고, 혼합물을 디에틸 에테르 (3 x 50 mL)로 추출하였다. 모아진 유기상을 농축하고, 잔사를 Companion 상에서 크로마토그래피에 의해 정제하여 (40 g 칼럼, 0-50% 디에틸 에테르/이소-헥산) 방치시 결정화하는 오렌지색 오일을 얻었다. 사이클로헥산 (30 mL)에서 재결정하고 이소-헥산 (2 x 30 mL)으로 세척하여 1-(p-톨릴)-3-(1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-일)-1H-피라졸-5-아민 (중간체 A19, 1.75 g)을 무색 결정성 고체로 수득하였다.
1H NMR (400MHz; CDCl3) δ 7.42 (d, 2H), 7.26 (d, 2H), 5.67-5.64 (m, 1H), 3.72 (s, 2H), 2.39 (s, 3H), 1.52 (s, 6H).
LCMS m/z 284 (M+H)+ (ES+)
페닐 클로로포르메이트 (0.85 ml, 6.79 mmol)를 DCM (20 mL) 및 THF (15 mL) 중 중간체 A19 (1.75 g, 6.18 mmol) 및 NaHCO3 (1.05 g, 12.50 mmol)의 교반 혼합물에 RT에서 첨가하였다. 혼합물을 2 시간동안 교반한 후, DCM (50 mL) 및 물 (50 mL)로 분배하였다. 유기층을 분리한 후, 건조시키고 (MgSO4), 감압하에 증발하여 무색 오일을 얻었다. 오일을 사이클로헥산에서 결정화하여 중간체 A19* (2.14 g)를 백색 고체로 수득하였다.
1H NMR (CDCl3) 400 MHz, δ 7.43-7.31 (m, 6H), 7.30-7.22 (m, 1H), 7.20-7.07 (m, 2H), 7.05-6.88 (m, 1H), 6.68-6.55 (m, 1H), 2.44 (s, 3H), 1.56 (s, 6H).
중간체 A20*: 페닐 (3-(2-시아노프로판-2-일)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)-카바메이트.
Figure pct00044
EtOH (80 mL) 중 p-톨릴히드라진 하이드로클로라이드 (6.5 g, 41.0 mmol) 및 2,2-디메틸-3-옥소펜탄디니트릴 (5.58 g, 20.49 mmol)의 혼합물을 2 시간동안 환류하에 가열하였다. 혼합물을 냉각하고, 용매를 감압하에 증발하였다. 잔사를 EtOAc (200 mL) 및 수성 NaHCO3 용액 (100 mL)으로 분배하고, 유기층을 분리한 후, 물 (100 mL)로 세척한 다음, 건조시키고 (MgSO4), 여과한 뒤, 감압하에 증발하였다. 조 생성물을 실리카겔상에서 크로마토그래피에 의해 정제하여 (120 g 칼럼, 0-40% EtOAc/이소헥산) 2-(5-아미노-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-3-일)-2-메틸프로판니트릴 (중간체 A20, 2.834 g)을 백색 고체로 수득하였다.
1H NMR (400 MHz; CDCl3) δ 7.40 (d, 2H), 7.27 (d, 2H), 5.67 (s, 1H), 3.80 (s, 2H), 2.39 (s, 3H), 1.73 (s, 6H).
LCMS m/z 241 (M+H)+ (ES+)
페닐 클로로포르메이트 (1.6 ml, 12.77 mmol)를 DCM (40 mL) 및 THF (10 mL) 중 중간체 A20 (2.83 g, 11.78 mmol) 및 NaHCO3 (2 g, 23.81 mmol)의 교반 혼합물에 RT에서 첨가하였다. 혼합물을 18 시간동안 교반한 후, DCM (100 mL) 및 물 (100 mL)로 분배하였다. 유기층을 분리한 후, 염수 (100 mL)로 세척한 다음, 건조시키고 (MgSO4), 여과한 뒤, 감압하에 증발하였다. 잔사를 에테르/이소헥산으로 연마하고, 고체를 여과한 뒤, 건조하여 중간체 A20* (3.86 g)을 수득하였다.
LCMS m/z 361 (M+H)+ (ES+); 359 (M-H)- (ES-)
중간체 A21: 3-(프로프-1-엔-2-일)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-아민.
Figure pct00045
EtOH (80 mL) 중 4-플루오로-4-메틸-3-옥소펜탄니트릴 (5.5 g, 36.2 mmol) 및 p-톨릴히드라진 하이드로클로라이드 (8.61 g, 54.3 mmol)의 혼합물을 80 ℃에서 3 시간동안 가열하였다. 혼합물을 냉각하고, 용매를 증발시킨 후, 잔사를 에테르 (200 mL) 및 sat 수성 NaHCO3 용액 (200 mL)로 분배하였다. 유기층을 분리한 후, 물 (100 mL)로 세척한 다음, 건조시키고 (MgSO4), 여과한 뒤, 감압하에 증발하였다. 조 생성물을 실리카겔상에서 크로마토그래피에 의해 정제하여 (120 g 칼럼, 0-40% EtOAc/이소헥산) 중간체 A21 (3.51 g) 을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz; CDCl3) δ 7.44 (d, 2H), 7.26 (d, 2H), 5.77 (s, 1H), 5.46 (s, 1H), 5.06 (s, 1H), 3.73 (s, 2H), 2.39 (s, 3H), 2.13 (s, 3H).
LCMS m/z 214 (M+H)+ (ES+)
중간체 A22*: 페닐 (3-(2-메톡시프로판-2-일)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)-카바메이트.
Figure pct00046
MeOH (20 mL) 중 중간체 A21 (2 g, 9.38 mmol) 및 디옥산내 4M HCl (5 mL, 20 mmol)의 혼합물을 밀봉 튜브내에서 72 시간동안 60 ℃에서 가열하였다. 용매를 증발시키고, 잔사를 EtOAc (150 mL) 및 수성 NaHCO3 용액 (100 mL)로 분배하였다. 유기층을 분리한 후, 염수 (100 mL)로 세척한 다음, 건조시키고 (MgSO4), 여과한 뒤, 감압하에 증발하였다. 조 생성물을 실리카겔상에서 크로마토그래피에 의해 정제하여 (80 g 칼럼, 0-50% EtOAc/이소헥산) 3-(2-메톡시프로판-2-일)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-아민 (중간체 A22, 1.202 g)을 백색 고체로 수득하였다.
1H NMR (400 MHz; CDCl3) δ 7.42 (d, 2H), 7.26 (d, 2H), 5.63 (s, 1H), 3.74 (s, 2H), 3.17 (s, 3H), 2.39 (s, 3H), 1.55 (s, 6H).
LCMS m/z 246 (M+H)+ (ES+)
페닐 클로로포르메이트 (1.1 ml, 8.78 mmol)를 DCM (25 mL) 및 THF (7 mL) 중 중간체 A22 (1.95 g, 7.95 mmol) 및 NaHCO3 (1.4 g, 16.67 mmol)의 교반 혼합물에 RT에서 첨가하였다. 혼합물을 3 시간동안 교반한 후, DCM (150 mL) 및 물 (200 mL)로 분배하였다. 유기층을 분리한 후, 염수 (100 mL)로 세척한 다음, 건조시키고 (MgSO4), 여과한 뒤, 감압하에 증발하였다. 잔사를 사이클로헥산에서 재결정하고, 고체를 여과한 뒤, 건조하여 부제 화합물을 수득하였다 (1.568 g).
1H NMR (400 MHz; CDCl3) δ 7.41-7.23 (m, 7H), 7.17 (brs, 2H), 6.97 (brs, 1H), 6.59 (brs, 1H), 3.18 (s, 3H), 2.44 (s, 3H), 1.58 (s, 6H).
LCMS m/z 366 (M+H)+ (ES+); 364 (M-H)- (ES-)
중간체 B1: 3-((4-((4-아미노나프탈렌-1-일)옥시)피리딘-2-일)아미노)-5-메톡시- N -(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드.
Figure pct00047
NMP (5.0 mL) 중 중간체 G1 (485 mg, 1.79 mmol)의 용액에 3-아미노-5-메톡시-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드 (500 mg, 1.79 mmol) 및 디옥산중 HCl (4.0 M, 900 μL, 3.6 mmol)의 용액을 첨가하고, 생성된 혼합물을 밀봉 튜브내에서 24 시간동안 120 ℃에서 가열하였다. 반응 혼합물을 RT로 냉각하고, 추가 분취량의 디옥산중 HCl (450 μL, 1.8 mmol)을 첨가하고, 혼합물 120 ℃에서 24 시간동안 가열한 후, RT로 다시 냉각하였다. 생성된 혼합물을 SCX 캡쳐 및 방출시키고, 얻은 조 생성물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 (SiO2, 120 g, 30-100% 이소헥산중 EtOAc, 구배 용출 및 이어 0-20% MeOH DCM 중, 구배 용출) 표제 화합물, 중간체 B1을 자주색 고체로 수득하였다 (459 mg, HPLC에 의한 순도 80%, 40%); Rt 1.73 min (방법 3, 80% 순도); m/z 514 (M+H)+, (ES+). 이 물질을 추가 정제없이 후속 단계에 사용하였다.
중간체 B2: 3-((4-((4-아미노나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)- N -프로필벤즈아미드.
Figure pct00048
DMF (2.0 mL) 중 중간체 J1 (50 mg, 0.13 mmol), 프로판-1-아민 (13 μL, 0.16 mmol) 및 DIPEA (47 μL, 0.27 mmol)의 용액에 HATU (61 mg, 0.16 mmol)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 RT에서 유지하였다. 추가 분량의 HATU (61 mg, 0.16 mmol)를 RT에서 17 시간후 및 24 시간후 및 추가 18 시간후에 첨가하고, 혼합물을 EtOAc (5.0 mL) 및 포화 aq. NaHCO3 (5.0 mL)로 분배하였다. 유기상을 분리한 후, 염수 (2 x 5.0 mL)로 세척한 다음, 건조시키고, 진공중에서 증발시켜 표제 화합물, 중간체 B2를 자주색 고체로 수득하였다 (37 mg, 63%); Rt 1.78 min (방법 2 산성); m/z 414 (M+H)+, (ES+).
중간체 B3: 3-((4-((4-아미노나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)- N -(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드.
Figure pct00049
DMF (2.0 mL) 중 중간체 J1 (247 mg, 0.617 mmol), 2-모르폴리노에탄아민 (100 μL, 0.760 mmol) 및 DIPEA (550 μL, 3.2 mmol)의 용액에 HATU (285 mg, 0.750 mmol)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 RT에서 3 시간동안 유지한 후, EtOAc (20 mL) 및 포화 aq. NaHCO3 (20 mL)로 분배하였다. 유기상을 분리한 후, 염산 (1.0 M, 20 mL)으로 추출하였다. 수성 NaOH (2.0 M, 10 mL)을 첨가해 산성 추출물을 중화하고, 생성된 수성상을 EtOAc (2 x 30 mL)로 추출하였다. 중화한 수성상으로부터의 추출물을 합하고, 물 (2 x 30 mL) 및 염수 (2 x 30 mL)로 세척한 후, 건조시키고, 진공중에서 증발시켜 표제 화합물, 중간체 B3을 연적색 고체로 수득하였다 (226 mg, 68%); Rt 1.38 min (방법 2 산성); m/z 485 (M+H)+, (ES+).
중간체 B4: 3-((4-((4-아미노나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)- N -(2-(디메틸아미노)에틸)-4-메톡시벤즈아미드.
Figure pct00050
DMF (25 mL) 중 중간체 J2(P) (243 mg, 0.451 mmol), N 1 ,N 1 -디메틸에탄-1,2-디아민 (74 μL, 0.68 mmol) 및 DIPEA (160 μL, 0.9 mmol)의 용액에 HATU (257 mg, 0.676 mmol)를 0 ℃에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 RT로 가온하고, 3 일후 DCM (10.0 mL) 및 수성 NaOH (1.0 M, 10.0 mL)로 분배하였다. 유기상을 분리한 후, 물 (2 x 15 mL) 및 염수 (2 x 15 mL)로 세척한 다음, 건조시키고, 진공중에서 증발시켰다. 잔사를 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 (SiO2, 12 g, DCM 중 0-10% [MeOH 중 0.7 M NH3], 구배 용출) tert-부틸 (4-((2-((5-((2-(디메틸아미노)에틸)카바모일)-2-메톡시페닐)아미노)피리미딘-4-일)옥시)나프탈렌-1-일)카바메이트를 오렌지색 고체로 수득하였다 (137 mg, 80% 순도, 43%); Rt 2.66 min (방법 3); m/z 573 (M+H)+, (ES+). 이 물질을 추가 정제없이 후속 탈보호 단계에 사용하였다.
DCM (3.0 mL) 중 상술된 Boc-보호된 아민 (137 mg, 80% 순도, 0.239 mmol)의 용액에 TFA (0.50 mL, 6.7 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 RT에서 3 시간동안 유지한 후, 진공중에서 증발시켰다. 잔사를 SCX 캡쳐 및 방출에 의해 정제하여 표제 화합물, 중간체 B4를 연핑크색 고체로 수득하였다 (108 mg, 92%); Rt 1.96 min (방법 3); m/z 473 (M+H)+, (ES+).
중간체 B5: 3-((4-((4-아미노나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-4-메톡시- N -(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드.
Figure pct00051
DMF (3.0 mL) 중 중간체 J2(P) (500 mg, 0.930 mmol), 2-모르폴리노에탄아민 (183 μL, 1.39 mmol) 및 DIPEA (320 μL, 0.900 mmol)의 용액에 HATU (529 mg, 1.39 mmol)를 0 ℃에서 첨가하고, 생성된 혼합물을 RT로 가온하였다. 10 분후 침전이 형성되었고, 30 분후 고체 물질을 여과로 수집하고, 물로 세척한 후, 진공중에서 건조하여 tert-부틸 (4-((2-((2-메톡시-5-((2-모르폴리노에틸)카바모일)페닐)아미노)피리미딘-4-일)옥시)나프탈렌-1-일)카바메이트를 회백색 고체로 수득하였다 (511 mg, 84%); Rt 2.69 min (방법 3); m/z 615 (M+H)+, (ES+).
DCM (10.0 mL) 중 상술된 Boc-보호된 아민 (508 mg, 0.826 mmol)의 용액에 TFA (2.0 mL, 27 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 RT에서 18 시간동안 유지한 후, 진공중에서 증발시켰다. 잔사를 CH2Cl2 (10.0 mL) 및 sat. 수성 NaHCO3 (10.0 mL)로 분배하였다. 유기상을 분리한 후, 물 (2 x 20 mL) 및 염수 (2 x 20 mL)로 세척한 다음, 건조시키고, 진공중에서 증발시켰다. 잔사를 SCX 캡쳐 및 방출에 의해 정제하여 표제 화합물, 중간체 B5를 연핑크색 고체로 수득하였다 (162 mg, HPLC에 의한 순도 85%, 32%); Rt 1.24 min (방법 3); m/z 515 (M+H)+, (ES+). 이 물질을 추가 정제없이 후속 단계에 사용하였다.
중간체 B6: 3-((4-((4-아미노나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)- N -(2-하이드록시에틸)-4-메톡시벤즈아미드.
Figure pct00052
DMF (25 mL) 중 중간체 J2(P) (411 mg, 0.763 mmol), 2-아미노에탄올 (69 μL, 1.1 mmol) 및 DIPEA (270 μL, 1.50 mmol)의 용액에 HATU (435 mg, 1.14 mmol)를 0 ℃에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 18 시간동안 RT로 가온하고, 수성 NaOH (1.0 M, 10.0 mL) 및 DCM (10.0 mL)으로 분배하였다. 유기상을 분리한 후, 염수 (2 x 15 mL) 및 물 (2 x 15 mL)로 세척한 다음, 건조시키고, 진공중에서 증발시켰다. 얻은 잔사를 이전 조 생성물과 합하고, 더 작은 규모의 반응 (100 mg의 중간체 J2(P))을 동일한 방식으로 수행한 다음, 모아진 물질을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 (SiO2, 40 g, DCM 중 0-5% [MeOH 중 0.7 M NH3], 구배 용출) tert-부틸 (4-((2-((3-((2-하이드록시에틸)카바모일)-2-메톡시페닐)아미노)피리미딘-4-일)옥시)나프탈렌-1-일)카바메이트를 연핑크색 고체로 수득하였다 (230 mg, 43%); Rt 3.23 min (방법 3); m/z 546 (M+H)+, (ES+).
DCM (5.0 mL) 중 상술된 Boc-보호된 아민 (228 mg, 0.418 mmol)의 용액에 TFA (1.0 mL, 13 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 RT에서 18 시간동안 유지한 후, 진공중에서 증발시켰다. 잔사를 THF (4.0 mL)에 취하고, 수성 MeOH (1:1 v/v, 2.0 mL) 중 LiOH (15 mg, 0.62 mmol)의 용액을 첨가한 후, 반응 혼합물을 RT에서 3 일동안 유지하고[앞의 탈보호 단계에서 생긴 트리플루오로아세테이트의 비누화를 위해], 진공중에서 증발시켰다. 잔사를 SCX 캡쳐 및 방출에 의해 정제하여 표제 화합물, 중간체 B6을 오렌지색 고체로 수득하였다 (169 mg, 48%); Rt 2.31 min (방법 3); m/z 446 (M+H)+, (ES+).
중간체 B7: 4-((4-((4-아미노나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)- N -(2-(디메틸아미노)에틸)-3-메톡시벤즈아미드.
Figure pct00053
DMF (1.5 mL) 중 중간체 J3(P) (355 mg, 0.706 mmol), N 1 ,N 1 -디메틸에탄-1,2-디아민 (116 μL, 1.06 mmol) 및 DIPEA (250 μL, 1.40 mmol)의 용액에 HATU (403 mg, 0.676 mmol)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 RT에서 3 시간동안 유지한 뒤, DCM (15 mL) 및 수성 NaOH (1.0 M, 15 mL)로 분배하였다. 유기상을 분리한 후, 염수 (2 x 15 mL) 및 물 (2 x 15 mL)로 세척한 다음, 건조시키고, 진공중에서 증발시켰다. 잔사를 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 (SiO2, 40 g, DCM 중 0-10% [MeOH 중 0.7 M NH3], 구배 용출) tert-부틸 (4-((2-((4-((2-(디메틸아미노)에틸)카바모일)-2-메톡시페닐)아미노)피리미딘-4-일)옥시)나프탈렌-1-일)카바메이트를 오렌지색 고체로 수득하였다 (284 mg, 67%); Rt 2.74 min (방법 3); m/z 573 (M+H)+, (ES+).
DCM (3.0 mL) 중 상술된 Boc-보호된 아민 (137 mg, 80% 순도, 0.239 mmol)의 용액에 TFA (1.0 mL, 13 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 RT에서 18 시간동안 유지한 후, 진공중에서 증발시켰다. 잔사를 SCX 캡쳐 및 방출에 의해 정제하여 표제 화합물, 중간체 B7을 연한 오렌지색 고체로 수득하였다 (208 mg, 88%); Rt 2.20 min (방법 3); m/z 473 (M+H)+, (ES+).
중간체 B8: 4-((4-((4-아미노나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-3-메톡시- N -(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드.
Figure pct00054
DMF (2.0 mL) 중 중간체 J3 (320 mg, 0.810 mmol), 2-모르폴리노에탄아민 (159 μL, 1.21 mmol) 및 DIPEA (280 μL, 1.60 mmol)의 용액에 HATU (459 mg, 1.21 mmol)를 0 ℃에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 RT로 가온하고, 3 시간후 DCM (10.0 mL) 및 수성 NaOH (1.0 M, 10.0 mL)로 분배하였다. 유기상을 분리한 후, 물 (2 x 20 mL)로 세척한 다음, 건조시키고, 진공중에서 증발시켰다. 잔사를 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 (SiO2, 12 g, DCM 중 0-60% [MeOH 중 0.7 M NH3], 구배 용출) 표제 화합물, 중간체 B8을 연핑크색 고체로 수득하였다 (338 mg, 78%); Rt 1.53 min (방법 2 산성); m/z 515 (M+H)+, (ES+).
중간체 B9: 4-((4-((4-아미노나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)- N -(2-하이드록시에틸)-3-메톡시벤즈아미드.
Figure pct00055
DMF (1.5 mL) 중 중간체 J3(P) (370 mg, 0.736 mmol), 2-아미노에탄올 (67 μL, 1.1 mmol) 및 DIPEA (260 μL, 1.50 mmol)의 용액에 HATU (529 mg, 1.39 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 RT에서 3 시간동안 유지한 후, DCM (15 mL) 및 수성 NaOH (1.0 M, 15 mL)로 분배하였다. 유기상을 분리한 후, 물 (2 x 15 mL) 및 염수 (2 x 15 mL)로 세척한 다음, 건조시키고, 진공중에서 증발시켰다. 잔사를 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 (SiO2, 40 g, 0-7%, DCM 중 [MeOH 중 0.7 M NH3], 구배 용출) tert-부틸 (4-((2-((4-((2-하이드록시에틸)카바모일)-2-메톡시페닐)아미노)피리미딘-4-일)옥시)나프탈렌-1-일)카바메이트를 연핑크색 고체로 수득하였다 (318 mg, 77%); Rt 3.45 분 (방법 3); m/z 546 (M+H)+, (ES+).
DCM (6.0 mL) 중 상술된 Boc-보호된 아민 (316 mg, 0.579 mmol)의 용액에 TFA (0.80 mL, 11 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 RT에서 1.5 시간동안 유지한 후, 진공중에서 증발시켰다. 잔사를 THF (5.0 mL)에 취하고, 수성 MeOH (1:1 v/v, 2.0 mL) 중 LiOH (10 mg, 0.44 mmol)의 용액으로 처리한 후, 혼합물을 RT에서 18 시간동안 유지한 다음, 진공중에서 증발시켰다. 잔사를 SCX 캡쳐 및 방출에 의해 정제하여 표제 화합물, 중간체 B9를 연자주색 고체로 수득하였다 (253 mg, 81%); Rt 2.66 min (방법 3); m/z 446 (M+H)+, (ES+).
중간체 B10: 3-((4-((4-아미노나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-클로로- N -(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드.
Figure pct00056
DMF (2.0 mL) 중 중간체 J4(P) (500 mg, 1.00 mmol), 2-모르폴리노에탄아민 (229 μL, 1.75 mmol) 및 DIPEA (360 μL, 1.50 mmol)의 용액에 HATU (586 mg, 1.10 mmol)를 0 ℃에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 RT로 가온하고, 4 시간후 물 (20 mL)로 희석하였다. 생성된 현탁액을 10 분동안 초음파처리한 후, 침전을 여과로 수집하여 tert-부틸 (4-((2-((3-메틸-5-((2-모르폴리노에틸)카바모일)페닐)아미노)피리미딘-4-일)옥시)나프탈렌-1-일)카바메이트를 연갈색 고체로 수득하였다 (589 mg, 89%); Rt 2.77 min (방법 3); m/z 599 (M+H)+, (ES+).
DCM (10.0 mL) 중 상술된 Boc-보호된 아민 (580 mg, 0.900 mmol)의 용액에 TFA (2.0 mL, 27 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 RT에서 3.5 시간동안 유지한 후, 진공중에서 증발시켰다. 잔사를 SCX 캡쳐 및 방출에 의해 정제하여 표제 화합물, 중간체 B10을 갈색 고체로 수득하였다 (475 mg, 100%); Rt 2.14 min (방법 3); m/z 499 (M+H)+, (ES+).
중간체 B11: 3-((4-((4-아미노나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)- N -(2-모르폴리노에틸)-5-(트리플루오로메틸)벤즈아미드.
Figure pct00057
DMF (2.0 mL) 중 중간체 J5(P) (577 mg, 1.07 mmol), 2-모르폴리노에탄아민 (210 μL, 1.6 mmol) 및 DIPEA (370 μL, 2.1 mmol)의 용액에 HATU (609 mg, 1.60 mmol)를 0 ℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 3 시간동안 RT로 가온한 후, 물 (40 mL)로 희석하고, 생성된 현탁액 5 분동안 초음파처리하였다. 침전을 여과로 수집하여 tert-부틸 (4-((2-((3-((2-모르폴리노에틸)카바모일)-5-(트리플루오로메틸)페닐)아미노)피리미딘-4-일)옥시)나프탈렌-1-일)카바메이트를 연갈색 고체로 수득하였다 (640 mg, 87%); Rt 2.97 min (방법 3); m/z 653 (M+H)+, (ES+).
DCM (12.0 mL) 중 상술된 Boc-보호된 아민 (637 mg, 0.976 mmol)의 용액에 TFA (2.0 mL, 27 mmol)를 첨가하였다. RT에서 3 시간후, 반응 혼합물을 진공중에서 증발시킨 뒤, 잔사를 SCX 캡쳐 및 방출에 의해 정제하여 표제 화합물, 중간체 B11을 갈색 고체로 수득하였다 (515 mg, 91%); Rt 2.41 min (방법 3); m/z 553 (M+H)+, (ES+).
중간체 B12: 3-((4-((4-아미노나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)- N -(2-(디메틸아미노)에틸)-5-메톡시벤즈아미드.
Figure pct00058
DCM (25 mL) 중 중간체 J6(P) (647 mg, 1.19 mmol), N 1 ,N 1 -디메틸에탄-1,2-디아민 (142 μL, 1.30 mmol) 및 DIPEA (330 μL, 1.90 mmol)의 용액에 HATU (540 mg, 1.42 mmol)를 0 ℃에서 첨가하고, 10 분후 생성된 혼합물을 RT로 가온하였다. 18 시간후 반응 혼합물을 수성 NaOH (1.0 M, 25 mL)로 세척한 후, 건조시키고, 진공중에서 증발시켰다. 잔사를 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 (SiO2, 120 g, DCM 중 0-10% [MeOH 중 0.7 M NH3], 구배 용출) tert-부틸 (4-((2-((3-((2-(디메틸아미노)에틸)카바모일)-5-메톡시페닐)아미노)피리미딘-4-일)옥시)나프탈렌-1-일)카바메이트를 오렌지색 오일로 수득하였다 (425 mg, 60%); Rt 1.67 min (방법 2 산성); m/z 573 (M+H)+, (ES+).
DCM (5.0 mL) 중 상술된 Boc-보호된 아민 (425 mg, 0.742 mmol)의 용액에 TFA (0.60 mL, 8.0 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 RT에서 5 시간동안 유지하였다. 제2 분취량의 TFA (0.60 mL, 8.0 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 RT에서 3 일동안 유지한 후, 진공중에서 증발시켰다. 잔사를 EtOAc (20 mL) 및 sat. 수성 NaHCO3 (20 mL)로 분배하고, 유기상을 분리한 후, 건조시키고, 진공중에서 증발시켜 표제 화합물, 중간체 B12을 오렌지색 오일로 수득하였다 (277 mg, 75%); Rt 1.28 min (방법 2 산성); m/z 473 (M+H)+, (ES+).
중간체 B13: 3-((4-((4-아미노나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-메톡시- N -(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드.
Figure pct00059
THF (150 mL) 중 중간체 G2(P) (15.0 g, 40.0 mmol), p-TSA (12.2 g, 64.0 mmol), 및 3-아미노-5-메톡시-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드 (15.0 g, 52.0 mmol)의 현탁액을 20 시간동안 60 ℃로 가열하였다. 반응 혼합물을 진공중에서 농축하고, 잔사를 포화 aq. NaHCO3 (250 mL)으로 연마하였다. 형성된 고체를 여과로 수집하고, DCM (500 mL)에 취한 뒤, sat. aq. NaHCO3 (2 x 200 mL) 및 물 (2 x 250 mL)로 세척하였다. 유기상을 진공중에서 농축하여 갈색 고체를 얻었다. sat. aq. NaHCO3 세척물을 여과하여 추가 물질을 얻었다. 갈색 고체를 합하고, 감압하에 건조시켜 표제 화합물, 중간체 B13, 및 상응하는 N-Boc 유도체: tert-부틸 (4-((2-((3-메톡시-5-((2-모르폴리노에틸)카바모일)페닐)아미노)피리미딘-4-일)옥시)나프탈렌-1-일)카바메이트의 혼합물 (약 30 : 70)을 수득하였다. 이 물질을 추가 처리없이 다음 단계에 직접 사용하였다.
상술된 조 혼합물을 DCM (300 mL)에 현탁시키고, 0 ℃로 냉각한 후, TFA (60 mL, 0.80 mol)로 10 분간 적가 처리하였다. 생성된 짙은 용액을 RT에서 2 시간동안 교반한 후, 진공중에서 농축하였다. 잔사를 DCM (500 mL)에 취하고, 포화 aq. NaHCO3 (2 x 250 mL)로 세척하였다. 모아진 수성상을 DCM (200 mL)으로 추출하고, 유기 추출을 모아 염수 (2 x 200 mL)로 세척한 다음, 건조시키고, 진공중에서 농축하여 표제 화합물 중간체 B13을 갈색 고체로 수득하였다 (13.4 g, 55%: 2 단계에 걸친 수율); Rt 1.78 min (방법 1 염기성); m/z 515 (M+H)+ (ES+).
중간체 B14: 3-((4-((4-아미노나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-클로로-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드.
Figure pct00060
DMF (1.5 mL) 중 중간체 J7(P) (372 mg, 0.734 mmol), 2-모르폴리노에탄아민 (144 μL, 1.10 mmol) 및 DIPEA (260 μL, 1.5 mmol)의 용액에 HATU (419 mg, 1.10 mmol)를 0 ℃에서 첨가하고, 반응 혼합물을 RT로 가온하였다. 18 시간후 혼합물을 물 (30 mL)로 희석하고, 생성된 현탁액을 5 분동안 초음파처리하였다. 침전을 여과로 수집하고, 건조하여 tert-부틸 (4-((2-((3-클로로-5-((2-모르폴리노에틸)카바모일)페닐)아미노)피리미딘-4-일)옥시)나프탈렌-1-일)카바메이트를 연갈색 고체로 수득하였다 (300 mg, 63%); Rt 2.86 min (방법 3); m/z 619 (M+H)+, (ES+).
DCM (5.0 mL) 중 상술된 Boc-보호된 아민 (300 mg, 0.485 mmol)의 용액에 TFA (0.80 mL, 11 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 RT에서 3.5 시간동안 유지한 후, 진공중에서 증발시켰다. 잔사를 SCX 캡쳐 및 방출에 의해 정제하여 표제 화합물, 중간체 B14를 갈색 고체로 수득하였다 (248 mg, 94%); Rt 2.25 분 (방법 3); m/z 519 (M+H)+, (ES+).
중간체 B15: 3-((4-((4-아미노나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-브로모- N -(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드.
Figure pct00061
DMF (4.5 mL) 중 중간체 J8(P) (1.28 g, 2.32 mmol), 2-모르폴리노에탄아민 (0.52 mL, 4.0 mmol) 및 DIPEA (0.81 mL, 4.6 mmol)의 용액에 HATU (1.32 g, 3.48 mmol)를 0 ℃에서 첨가하고, 반응 혼합물 18 시간동안 RT로 가온하였다. 혼합물을 물 (50 mL)로 희석하고, 얻은 현탁액을 20 분 동안 초음파처리하였다. 형성된 침전을 여과로 수집하여 tert-부틸 (4-((2-((3-브로모-5-((2-모르폴리노에틸)카바모일)페닐)아미노)피리미딘-4-일)옥시)나프탈렌-1-일) 카바메이트를 연회색 고체로 수득하였다 (1.55 g, 96%); Rt 2.89 min (방법 3); m/z 663/665 (M+H)+, (ES+).
DCM (11.0 mL) 중 상술된 Boc-보호된 아민 (633 mg, 0.954 mmol)의 용액에 TFA (2.5 mL, 34 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 RT에서 18 시간동안 유지하였다. 혼합물을 진공중에서 증발시킨 뒤, 잔사를 DCM (50 mL) 및 포화 aq. NaHCO3 (50 mL)로 분배하였다. 유기상을 분리한 후, 포화 aq. NaHCO3 (40 mL), 물 (2 x 30 mL) 및 염수 (2 x 30 mL)로 차례로 세척한 다음, 건조시키고, 진공중에서 증발시켜 표제 화합물, 중간체 B15를 갈색 고체로 수득하였다 (515 mg, 91%); Rt 1.41 min (방법 4); m/z 563/565 (M+H)+, (ES+).
중간체 B16: 3-((4-((4-아미노나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-메톡시- N -메틸- N -(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드.
Figure pct00062
THF (10 mL) 중 중간체 J6(P) (926 mg, 1.71 mmol)의 용액에 EDC.HCl (657 mg, 3.43 mmol) 및 N-메틸-2-모르폴리노에탄아민 (531 mg, 3.69 mmol)을 N2 하에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 RT에서 18 시간동안 유지한 뒤, 24 시간동안 40 ℃로 가열한 다음, 3 일동안 RT로 냉각하였다. 추가 분량의 N-메틸-2-모르폴리노에탄아민 (266 mg, 1.84 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 RT에서 5 시간동안 유지한 다음, 물 (50 mL) 및 EtOAc (50 mL)로 분배하였다. 유기상을 분리한 후, 건조시키고, 진공중에서 증발시킨 뒤, 잔사를 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 (SiO2, 80 g, DCM 중 0-10% [MeOH 중 0.7 M NH3], 구배 용출) tert-부틸 (4-((2-((3-메톡시-5-(메틸(2-모르폴리노에틸)카바모일)페닐)아미노)피리미딘-4-일)옥시)나프탈렌-1-일)카바메이트를 연갈색 고체로 수득하였다 (612 mg, HPLC에 의한 순도 91%, 52%); Rt 1.74 min (방법 2 산성); m/z 629 (M+H)+, (ES+).
DCM (5.0 mL) 중 상술된 Boc-보호된 아민 (612 mg, 91% 순도, 0.886 mmol)의 용액에 TFA (1.5 mL, 20 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 RT에서 18 시간동안 유지한 후, 진공중에서 증발시켰다. 잔사를 EtOAc (20 mL) 및 sat. 수성 NaHCO3 (20 mL)로 분배하였다. 유기상을 분리한 후, 건조시키고, 진공중에서 증발시켜 표제 화합물, 중간체 B16을 오렌지색 오일로 수득하였다 (355 mg, HPLC에 의한 순도 94%, 71%); Rt 1.27 min (방법 2 산성); m/z 529 (M+H)+, (ES+). 이 물질을 추가 정제없이 후속 단계에 사용하였다.
중간체 B17: 3-((4-((4-아미노나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)- N -(2-하이드록시에틸)-5-메톡시벤즈아미드.
Figure pct00063
DCM (25 mL) 중 중간체 J6(P) (795 mg, 1.46 mmol), 2-아미노에탄올 (97 μL, 1.6 mmol) 및 DIPEA (0.41 mL, 2.3 mmol)의 용액에 HATU (664 mg, 1.75 mmol)를 0 ℃에서 첨가하고, 생성된 혼합물을 0 ℃에서 10 분동안 유지한 뒤, RT로 가온하였다. 18 시간후 반응 혼합물을 DMF (5.0 mL)로 희석하고, RT에서 24 시간동안 유지하였다. 제2 분취량의 DMF (5.0 mL)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 4 일동안 40 ℃로 가열한 후, 냉각하고, 수성 NaOH (1.0 M, 100 mL) 및 EtOAc (150 mL)로 분배하였다. 유기상을 분리한 후, 염수 (2 x 100 mL)로 세척한 다음, 건조시키고, 진공중에서 증발시켰다. 잔사를 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 (SiO2, 80 g, DCM 중 0-10% [MeOH 중 0.7 M NH3], 구배 용출) tert-부틸 (4-((2-((3-((2-하이드록시에틸)카바모일)-5-메톡시페닐)아미노)피리미딘-4-일)옥시)나프탈렌-1-일)카바메이트를 연갈색 고체로 수득하였다 (399 mg, 49%); Rt 2.09 min (방법 2 산성); m/z 546 (M+H)+, (ES+).
DCM (5.0 mL) 중 상술된 Boc-보호된 아민 (399 mg, 0.731 mmol)의 용액에 TFA (0.60 mL, 8.0 mmol)를 첨가하였다. RT에서 5 시간후 추가 분취량의 TFA (0.60 mL, 8.0 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 RT에서 3 일동안 유지한 후, 진공중에서 증발시켰다. 잔사를 EtOAc (20 mL) 및 sat. 수성 NaHCO3 (20 mL)로 분배하고, 유기상을 분리한 후, 건조시킨 다음, 진공중에서 증발시켰다. 잔사를 THF (2.0 mL), 물 (1.0 mL) 및 MeOH (0.5 mL)의 혼합물에 취하고, 물 (1.0 mL) 중 LiOH (18 mg, 0.73 mmol)의 용액으로 RT에서 16 시간동안 처리하였다. 생성된 혼합물에 수성 염산 (1.0 M, 0.5 mL)을 첨가하여 중화하고, 물 (20 mL) 및 EtOAc (20 mL)로 분배하였다. 유기상을 분리한 후, 건조시키고, 진공중에서 증발시켜 표제 화합물, 중간체 B17을 갈색 고체로 수득하였다 (160 mg, 48%); Rt 1.51 min (방법 2 산성); m/z 446 (M+H)+, (ES+).
중간체 B18: 3-((4-((4-아미노나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-메톡시- N -(2-메톡시에틸)벤즈아미드.
Figure pct00064
DCM (10.0 mL) 중 중간체 J5(P) (841 mg, 1.67 mmol), 2-메톡시에탄아민 (190 μL, 2.2 mmol) 및 DIPEA (470 μL, 2.7 mmol)의 용액에 HATU (115 mg, 0.301 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 RT에서 18 시간동안 유지하고, 수성 NaOH (1.0 M, 50 mL)로 세척하였다. 수성층을 분리한 후, DCM (50 mL)으로 추출하고, 모아진 유기상을 물 (2 x 50 mL)로 세척한 다음, 건조시키고, 진공중에서 증발시켰다. 잔사를 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 (SiO2, 120 g, DCM 중 0-10% [MeOH 중 0.7 M NH3], 구배 용출) tert-부틸 (4-((2-((3-메톡시-5-((2-메톡시에틸)카바모일)페닐)아미노)피리미딘-4-일)옥시)나프탈렌-1-일)카바메이트를 황색 고체로 수득하였다 (900 mg, 86%); Rt 2.36 min (방법 2 산성); m/z 560 (M+H)+, (ES+).
DCM (10.0 mL) 중 상술된 Boc-보호된 아민 (900 mg, 1.61 mmol)의 용액에 TFA (1.2 mL, 16 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 RT에서 5 시간동안 유지한 후, 진공중에서 증발시켰다. 잔사를 EtOAc (40 mL) 및 sat. 수성 NaHCO3 (40 mL)로 분배하고, 유기상을 분리한 후, 건조시킨 다음, 진공중에서 증발시켜 표제 화합물, 중간체 B18을 수득하였다 (549 mg, 72%); Rt 1.70 min (방법 3); m/z 460 (M+H)+, (ES+).
중간체 B19: 5-((4-((4-아미노나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-2-메톡시- N -(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드.
Figure pct00065
THF (10.0 mL) 중 중간체 G2(P) (950 mg, 2.56 mmol) 및 5-아미노-2-메톡시-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드 (1.07 g, 3.32 mmol)의 혼합물에 p-TSA.H2O (778 mg, 4.09 mmol)를 첨가하였다. 생성된 현탁액을 60 ℃에서 18 시간동안 가열한 뒤, RT로 냉각하고, 디클로로메탄 (50 mL) 및 포화 수성 NaHCO3 (50 mL)로 분배하였다. 유기상을 분리한 후, 물 (2 x 50 mL) 및 염수 (2 x 50 mL)로 세척한 다음, 건조시키고, 진공중에서 증발시켰다. 잔사를 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 (SiO2, 12 g, DCM 중 0-80% [MeOH 중 0.7 M NH3], 구배 용출) tert-부틸 (4-((2-((4-메톡시-3-((2-모르폴리노에틸)카바모일)페닐)아미노)피리미딘-4-일)옥시)나프탈렌-1-일)카바메이트를 복숭아색 고체로 수득하였다 (566 mg, 34%); Rt 2.72 min (방법 3); m/z 615 (M+H)+, (ES+).
DCM (10.0 mL) 중 상술된 Boc-보호된 아미노나프탈렌 (566 mg, 0.875 mmol)의 현탁액에 TFA (2.0 mL, 27 mmol)를 적가하고, 생성된 용액을 RT에서 18 시간동안 유지한 후, 진공중에서 증발시켰다. 잔사를 SCX 캡쳐 및 방출에 의해 정제하여 표제 화합물, 중간체 B19를 연핑크색 고체로 수득하였다 (479 mg, HPLC에 의한 순도 90%, 98%); Rt 2.05 분 (방법 3); m/z 515 (M+H)+, (ES+).
중간체 B20: 3-((6-((4-아미노나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-4-일)아미노)-5-메톡시- N -(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드.
Figure pct00066
THF (6.0 mL) 중 중간체 J9(P) (0.50 g, 1.0 mmol) 및 EDC (381 mg, 1.99 mmol)의 용액에 2-모르폴리노에탄아민 (261 μL, 1.99 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 RT에서 18 시간동안 유지한 후, 물 (15 mL) 로 희석하였다. 생성된 침전을 여과로 수집하고, 물 (3 x 5.0 mL) 및 에테르 (3 x 5.0 mL)로 세척한 후, RT에서 THF (5.0 mL)에 3 일동안 재현탁시켰다. 고체를 여과로 수집하고, THF (2 x 5.0 mL) 및 에테르 (2 x 5.0 mL)로 세척한 후, 진공중에서 건조하여 tert-부틸 (4-((6-((3-메톡시-5-((2-모르폴리노에틸)카바모일)페닐)아미노)피리미딘-4-일)옥시)나프탈렌-1-일)카바메이트를 백색 고체로 수득하였다 (227 mg, 36%); Rt 2.68 min (방법 4); m/z 615 (M+H)+, (ES+).
MeOH (3.5 mL) 중 상술된 Boc-보호된 아민 (227 mg, 0.370 mmol)의 현탁액에 진한 염산 (0.90 mL, 10 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 RT에서 18 시간동안 유지하였다. 생성된 혼합물을 SCX 캡쳐 및 방출에 의해 직접 정제하여 표제 화합물, 중간체 B20을 갈색 고체로 수득하였다 (181 mg, 89%); Rt 2.14 min (방법 4); m/z 515 (M+H)+, (ES+).
중간체 B21: 3-((4-((4-아미노나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-에티닐-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드.
Figure pct00067
DMF (60 mL) 중 중간체 G2(P) (6.46 g, 17.37 mmol), 중간체 D1 (7.12 g, 26.0 mmol) 및 p-TSA 모노하이드레이트 (5.62 g, 29.5 mmol)를 60 ℃ (블록 온도, 55 ℃ 내부 온도)에서 7 시간동안 가열하였다. 혼합물을 냉각하고, sat. 수성 NaHCO3 (1 L)에 적가하였다. 고체를 여과하여 물 (50 mL)에 이어 이소헥산 (100 mL)으로 세척하였다. 무정형 고체를 MeOH (200 mL)에서 교반하고, 생성물을 결정화하였다. 밤새 슬러리화하고, 여과한 뒤, MeOH (20 ml)로 고형화하고 건조하여 tert-부틸 (4-((2-((3-에티닐-5-((2-모르폴리노에틸)카바모일)페닐)아미노)피리미딘-4-일)옥시)나프탈렌-1-일)카바메이트를 수득하였다 (중간체 B21(P), 8 g).
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.76 (s, 1H), 9.32 (s, 1H), 8.45 (d, 1H), 8.41 - 8.33 (m, 1H), 8.16 - 8.03 (m, 2H), 7.90 (t, 1H), 7.85 - 7.78 (m, 1H), 7.67 - 7.51 (m, 3H), 7.48 - 7.37 (m, 2H), 6.58 (d, 1H), 4.16 (s, 1H), 3.56 (t, 4H), 3.46 - 3.27 (m, 2H), 2.49 - 2.30 (m, 6H), 1.52 (s, 9H). 10%w/w 탈-BOC 화합물.
LCMS m/z 609 (M+H)+ (ES+)
TFA (22 ml, 286 mmol)를 DCM (50 mL) 중 중간체 B21(P) (9 g, 14.05 mmol)의 교반 용액에 적가하였다. 반응물을 RT에서 2 시간동안 교반한 뒤, 교반 물 (100 mL) 및 1M 탄산칼륨 용액 (280 mL, 280 mmol)에 적가하고, 교반을 거품이 그칠 때까지 계속하였다. 혼합물을 디클로로메탄 (2 x 250 mL)으로 추출하고, 모아진 유기상을 건조시키고 (MgSO4), 감압하에 농축하였다. 조 생성물을 Companion 상에서 크로마토그래피에 의해 정제하여 (120 g 칼럼, 2% MeOH:DCM - 6%) 중간체 B21 (6.7 g)을 연갈색 폼으로 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.77 (s, 1H), 8.39 (t, 1H), 8.36 (d, 1H), 8.17 - 8.10 (m, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.94 (dd, 1H), 7.67 - 7.59 (m, 1H), 7.49 - 7.38 (m, 3H), 7.15 (d, 1H), 6.70 (d, 1H), 6.37 (d, 1H), 5.79 (s, 2H), 4.20 (s, 1H), 3.56 (t, 4H), 3.41 - 3.30 (m, 2H), 2.48 - 2.34 (m, 6H).
LCMS m/z 509 (M+H)+ (ES+)
중간체 B22: (S)-3-((4-((4-아미노나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-에티닐-N-(1-모르폴리노프로판-2-일)벤즈아미드.
Figure pct00068
DMF (4 mL) 중 (S)-1-모르폴리노프로판-2-아민, HCl (72.6 mg, 0.402 mmol), 중간체 J10(P) (200 mg, 0.402 mmol) 및 HATU (200 mg, 0.526 mmol)의 교반 용액에 휘니히 염기(Hunig's base) (280 μL, 1.608 mmol)를 첨가하고, 반응물을 밤새 교반하였다. 반응물을 물로 희석하고, 베이지색 고체를 얻었다. 현탁액을 20 분 더 교반한 후, 고체를 여과로 수집하고, 물로 세척하였다. 조 생성물을 Companion 상에서 크로마토그래피에 의해 정제하여 (40 g 칼럼, DCM 중 0-5% MeOH) (S)-tert-부틸 (4-((2-((3-에티닐-5-((1-모르폴리노프로판-2-일)카바모일)페닐)아미노)피리미딘-4-일)옥시)나프탈렌-1-일)-카바메이트 (133 mg)를 연한 오렌지색 고체로 수득하였다.
1H NMR (DMSO-d6) 400 MHz, δ 9.73 (s, 1H), 9.30 (s, 1H), 8.44 (d, 1H), 8.08-8.15 (m, 3H), 7.91 (s, 1H), 7.82 (d, 1H), 7.54-7.63 (m, 3H), 7.46 (s, 1H), 7.42 (d, 1H), 6.57 (d, 1H), 4.13-4.20 (m, 1H), 4.15 (s, 1H), 3.54 (t, 4H), 2.23-2.44 (m, 6H), 1.52 (s, 9H), 1.13 (d, 3H).
LCMS m/z 312 (M+2H)2+ (ES+)
DCM (10 ml) 중 바로 전 단계 생성물 (133 mg, 0.214 mmol)의 교반 용액에 TFA (2000 μL, 26.0 mmol)를 첨가하고, 반응물을 RT에서 2 시간동안 교반하였다. 혼합물을 진공중에서 농축하고, 잔사를 SCX 수지의 사전 컨디셔닝시킨 캐트리지에 로딩하였다. 수지를 MeOH로 세척한 후, 생성물을 MeOH 중 1% NH3에서 방출시키고, 진공중에서 농축하여 중간체 B22 (100 mg)를 연갈색 고체로 수득하였다.
1H NMR (DMSO-d6) 400 MHz, δ 9.73 (s, 1H), 8.36 (d, 1H), 8.12-8.15 (m, 2H), 8.05 (s, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.62-7.65 (m, 1H), 7.41-7.46 (m, 3H), 7.14 (d, 1H), 6.71 (d, 1H), 6.36 (d, 1H), 5.77 (s, 2H), 4.12-4.20 (m, 1H), 4.18 (s, 1H), 3.54 (t, 4H), 2.24-2.45 (m, 6H), 1.13 (d, 3H).
LCMS m/z 523 (M+H)+ (ES+)
중간체 B23: 3-((4-((4-아미노나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-에티닐-N-(2-메틸-1-모르폴리노프로판-2-일)벤즈아미드.
Figure pct00069
DMF (4 mL) 중 2-메틸-1-모르폴리노프로판-2-아민 (64.0 mg, 0.404 mmol), 중간체 J10(P) (200 mg, 0.402 mmol) 및 HATU (200 mg, 0.526 mmol)의 교반 용액에 휘니히 염기 (280 μL, 1.608 mmol)를 첨가하고, 반응물을 밤새 교반하였다. 반응물을 물로 희석하여 회백색 고체 침전을 얻고 현탁액을 20 분간 교반시켰다. 현탁액을 진공중에서 여과하고, 고체를 물로 세척하여 tert-부틸 (4-((2-((3-에티닐-5-((2-메틸-1-모르폴리노프로판-2-일)카바모일)페닐)아미노)피리미딘-4-일)옥시)나프탈렌-1-일)카바메이트 (중간체 B23(P), 245 mg)를 크림색 고체로 얻은 후, 40 ℃에서 진공하에 2 시간동안 건조시켰다.
1H NMR (DMSO-d6) 400 MHz, δ 9.70 (s, 1H), 9.30 (s, 1H), 8.43 (d, 1H), 8.10 (d, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.81 (d, 1H), 7.53-7.62 (m, 4H), 7.41 (d, 1H), 7.37 (s, 1H), 7.57 (d, 1H), 4.13 (s, 1H), 3.51-3.54 (m, 4H), 2.61 (s, 2H), 2.45-2.47 (m, 4H), 1.51 (s, 9H), 1.30 (s, 6H). LCMS m/z 637 (M+H)+ (ES+)
DCM (10 ml) 중 중간체 B23(P) (245 mg, 0.385 mmol)의 교반 용액에 TFA (2000 μL, 26.0 mmol)를 첨가하고, 반응물을 RT에서 4 시간동안 교반하였다. 혼합물을 진공중에서 농축하고, 잔사를 SCX 수지의 사전 컨디셔닝시킨 캐트리지에 로딩하였다. 수지를 MeOH로 세척한 후, 생성물을 MeOH 중 1% NH3에서 방출시키고, 진공중에서 농축하여 중간체 B23 (200 mg)을 연갈색 고체로 수득하였다.
1H NMR (DMSO-d6) 400 MHz, δ 9.71 (s, 1H), 8.36 (d, 1H), 8.12-8.15 (m, 1H), 7.95 (d, 2H), 7.62-7.63 (m, 2H), 7.41-7.46 (m, 2H), 7.36 (s, 1H), 7.14 (d, 1H), 6.70 (d, 1H), 6.36 (d, 1H), 5.77 (s, 2H), 4.17 (s, 1H), 3.52-3.55 (m, 4H), 2.61 (s, 2H), 2.46-2.48 (m, 4H), 1.31 (s, 6H).
LCMS m/z 537 (M+H)+ (ES+)
중간체 B24: (R)-3-((4-((4-아미노나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-에티닐-N-(1-모르폴리노프로판-2-일)벤즈아미드.
Figure pct00070
DMF (4 mL) 중 (R)-1-모르폴리노프로판-2-아민, HCl (73 mg, 0.404 mmol), 중간체 J10(P) (200 mg, 0.402 mmol) 및 HATU (200 mg, 0.526 mmol)의 교반 용액에 휘니히 염기 (280 μL, 1.608 mmol)를 첨가하고, 반응물을 밤새 교반하였다. 반응물을 물로 희석하고 베이지색 고체을 얻었다. 현탁액을 20 분동안 교반한 후, 고체를 여과로 수집하여 물로 세척하였다. 조 생성물을 Companion 상에서 크로마토그래피에 의해 정제하여 (40 g 칼럼, DCM 중 0-5% MeOH) (R)-tert-부틸 (4-((2-((3-에티닐-5-((1-모르폴리노프로판-2-일)카바모일)페닐)아미노)피리미딘-4-일)옥시)나프탈렌-1-일)카바메이트 (중간체 B24(P), 153 mg)를 연한 오렌지색 고체로 수득하였다.
1H NMR (DMSO-d6) 400 MHz, δ 9.73 (s, 1H), 9.30 (s, 1H), 8.44 (d, 1H), 8.09-8.15 (m, 3H), 7.91 (s, 1H), 7.82 (d, 1H), 7.54-7.63 (m, 3H), 7.46 (s, 1H), 7.42 (d, 1H), 6.57 (d, 1H), 4.13-4.20 (m, 1H), 4.15 (s, 1H), 3.54 (t, 4H), 2.23-2.44 (m, 6H), 1.52 (s, 9H), 1.13 (d, 3H).
LCMS m/z 312 (M+2H)2+ (ES+)
DCM (10 ml) 중 중간체 B24(P) (153 mg, 0.246 mmol)의 교반 용액에 TFA (2000 μL, 26.0 mmol)를 첨가하고, 반응물을 RT에서 2 시간동안 교반하였다. 혼합물을 진공중에서 농축하고, 잔사를 SCX 수지의 사전 컨디셔닝시킨 캐트리지에 로딩하였다. 수지를 MeOH로 세척한 후, 생성물을 MeOH 중 1% NH3에서 방출시킨 후 진공중에서 농축하여 중간체 B24 (120 mg)를 연갈색, 유리질 고체로 수득하였다.
1H NMR (DMSO-d6) 400 MHz, δ 9.73 (s, 1H), 8.36 (d, 1H), 8.12-8.15 (m, 2H), 8.04 (s, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.62-7.65 (m, 1H), 7.41-7.46 (m, 3H), 7.14 (d, 1H), 6.71 (d, 1H), 6.36 (d, 1H), 5.77 (s, 2H), 4.13-4.20 (m, 1H), 4.18 (s, 1H), 3.54 (t, 4H), 2.24-2.45 (m, 6H), 1.13 (d, 3H).
LCMS m/z 262 (M+2H)2+ (ES+)
중간체 C1: 1-(4-(2-클로로피리미딘-4-일옥시)나프탈렌-1-일)-3-(3-이소프로필-1- p -톨릴-1 H -피라졸-5-일)우레아.
Figure pct00071
이소프로필 아세테이트 (50 mL) 및 무수 THF (50 mL)의 혼합물중 중간체 G2 (5.00 g, 18.4 mmol)의 용액에 페닐 (3-이소프로필-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)카바메이트 중간체 A4* (7.72 g, 23.0 mmol)에 이어 트리에틸아민 (0.64 mL, 4.6 mmol)을 나누어 첨가하고, 반응 혼합물을 RT에서 18 시간동안 유지하였다. 이 시간동안 형성된 농후 자주색 침전을 여과로 수집하고, 이소프로필 아세테이트 및 THF (1:1 v/v, 3 x 40 mL)의 혼합물로 세척하였다. 고체를 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 (SiO2, 330 g, DCM 중 0-5% MeOH, 구배 용출) 표제 화합물, 중간체 C1을 연자주색 고체로 수득하였다 (5.72 g, 47%); Rt 2.48 min (방법 4); m/z 513 (M+H)+ (ES+).
중간체 C2: 1-(3-(tert-부틸)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)-3-(4-((2-클로로피리미딘-4-일)옥시)나프탈렌-1-일)우레아.
Figure pct00072
이소프로필 아세테이트 (100 mL) 중 중간체 A8* (3 g, 8.59 mmol) 및 중간체 G2 (2.333 g, 8.59 mmol)의 교반 현탁액을 트리에틸아민 (0.3 mL, 2.152 mmol)으로 처리한 후, 60 ℃에서 (배쓰) 1 시간동안 교반하였다. 용액을 에틸 아세테이트 (300 mL)로 희석하고, 물 (2x 100 mL)에 이어 염수 (100 mL)로 세척한 후, 건조시키고 (Na2SO4), 증발시켰다. 잔사를 17 칼럼 용적에 대해 5%, 및 이어 톨루엔중 40% 아세톤을 용리제로 사용한 220 g redisep 실리카 캐트리지 및 이어서 0 내지 3% MeOH/DCM을 용리제로 사용한 또다른 220 g redisep 실리카 캐트리지 상에서 정제하여 중간체 C2 (3.703 g)를 담황색 폼으로 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.14 (s, 1H), 8.79 (s, 1H), 8.65 (d, 1H), 8.09 (d, 1H), 7.96 (d, 1H), 7.79 (d, 1H), 7.67-7.64 (m, 1H), 7.60-7.56 (m, 1H), 7.47-7.37 (m, 5H), 7.26 (d, 1H), 6.41 (s, 1H), 2.40 (s, 3H), 1.28 (s, 9H).
LCMS m/z 527/529 (M+H)+ (ES+)
중간체 C3: 1-(3-(tert-부틸)-1-(4-메톡시페닐)-1H-피라졸-5-일)-3-(4-((2-클로로피리미딘-4-일)옥시)나프탈렌-1-일)우레아.
Figure pct00073
100 mL 플라스크에서, 이소프로필 아세테이트 (58 mL) 중 중간체 A9* (1917 mg, 5.24 mmol) 및 중간체 G2 (1500mg, 5.24 mmol)의 용액을 트리에틸아민 (113 μL, 0.813 mmol)으로 처리하였다. 생성된 갈색 용액을 70 ℃에서 2 시간동안 가열한 뒤, 용매를 진공중에서 제거하여 농후 갈색 오일을 얻었다. 조 생성물을 실리카겔상에서 크로마토그래피에 의해 정제하여 (120 g 칼럼, DCM 중 EtOAc 0-15%) 중간체 C3 (2.169 g)을 백색 결정성 고체로 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.14 (s, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.66 (d, 1H), 8.09 (d, 1H), 7.97 (d, 1H), 7.82 - 7.77 (m, 1H), 7.69 - 7.62 (m, 1H), 7.58 (ddd, 1H), 7.51 - 7.46 (m, 2H), 7.43 (d, 1H), 7.27 (d, 1H), 7.15 - 7.10 (m, 2H), 6.40 (s, 1H), 3.84 (s, 3H), 1.29 (s, 9H).
LCMS m/z 544 (M+H)+ (ES+)
중간체 C4: 1-(2,3-디클로로-4-((2-클로로피리미딘-4-일)옥시)페닐)-3-(3-이소프로필-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레아.
Figure pct00074
Et3N (0.1 ml, 0.717 mmol)을 iPrOAc (30 mL) 중 중간체 A4* (1556 mg, 4.64 mmol) 및 중간체 G4 (1348 mg, 4.64 mmol)의 혼합물에 첨가하고, 60 ℃에서 7 시간동안 가열하였다. 혼합물을 EtOAc (200 mL) 및 염수 (100 mL)로 분배하고, 유기층을 분리한 뒤, 물로 세척한 다음, 건조시키고 (MgSO4), 감압하에 증발하였다. 잔사를 에테르로 연마하고, 여과한 후, iPrOAc, 에테르로 세척한 다음, 건조하여 중간체 C4 (986 mg)을 백색 고체로 수득하였다.
1H NMR (400MHz; DMSO-d6) δ 9.23 (s, 1H), 8.88 (s, 1H), 8.71 (d, 1H), 8.15 (d, 1H), 7.47 (d, 1H), 7.42 (d, 2H), 7.37-7.35 (m, 3H), 6.35 (s, 1H), 2.89 (septet, 1H), 2.39 (s, 3H), 1.23 (d, 6H).
LCMS m/z 531/3 (M+H)+ (ES+)
중간체 C5: 1-(4-((2-클로로피리미딘-4-일)옥시)-2,3-디플루오로페닐)-3-(3-이소프로필-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레아.
Figure pct00075
Et3N (0.1 ml, 0.717 mmol)을 iPrOAc (30 mL) 중 중간체 A4* (1.556 g, 4.64 mmol) 및 중간체 G5 (1.195 g, 4.64 mmol)의 혼합물에 첨가하고, 60 ℃에서 7 시간동안 가열하였다. 혼합물을 EtOAc (200 mL) 및 염수 (100 mL)로 분배하고, 유기층을 분리한 뒤, 물로 세척한 다음, 건조시키고 (MgSO4), 감압하에 증발하였다. 잔사를 에테르/이소헥산으로 연마하고, 여과한 뒤, 건조하여 중간체 C5 (1.708 g)를 밝은 황갈색 고체로 수득하였다.
1H NMR (400MHz; CDCl3) δ 8.48 (d, 1H), 7.94-7.89 (m, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.26 (d, 2H), 7.19 (d, 2H), 6.97-6.92 (m, 3H), 6.34 (s, 1H), 2.97 (septet, 1H), 2.34 (s, 3H), 1.29 (d, 6H).
LCMS m/z 499/501 (M+H)+ (ES+)
중간체 D1: 3-아미노-5-에티닐- N -(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드.
Figure pct00076
DCM (20 mL) 중 T3P (2.76 mL, 4.63 mmol), 3-아미노-5-브로모벤조산 (1.00 g, 4.63 mmol) 및 Et3N (1.9 mL, 14 mmol)의 현탁액에 2-모르폴리노에탄아민 (0.91 mL, 6.9 mmol)을 0 ℃에서 첨가하고, 혼합물을 18 시간동안 RT로 가온하였다. 추가 분취량의 T3P (2.76 mL, 4.63 mmol) 및 2-모르폴리노에탄아민 (0.91 mL, 6.9 mmol)을 첨가하고, 1 시간후 생성된 혼합물을 sat. 수성 NaHCO3 (20 mL)로 분배하였다. 수성층을 분리한 후, DCM (20 mL)으로 추출하고, 모아진 유기층을 염수로 세척한 후, 건조시키고, 진공중에서 증발시켰다. 잔사를 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 (SiO2, 40 g, DCM 중 MeOH, 2-5%, 구배 용출) 3-아미노-5-브로모-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드를 황색 결정성 고체로 수득하였다 (1.4 g, 92%); Rt 0.16 min (방법 2 산성); m/z 328/330 (M+H)+ (ES+).
Et3N (3.0 mL) 및 DMF (3.0 mL)의 혼합물중 상기 수득한 벤즈아미드 (500 mg, 1.52 mmol), 요오드화구리(I) (29.0 mg, 0.152 mmol), 및 에티닐트리이소프로필실란 (0.51 mL, 2.3 mmol)의 탈기 현탁액에 Pd(PPh3)4 (176 mg, 0.152 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 1 시간동안 80 ℃로 가열한 다음, RT로 냉각하였다. 고체를 셀라이트를 통해 여과하여 제거하고, 휘발물질을 진공중에서 증발시켜 조 생성물을 얻고 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 (SiO2, 12 g, DCM 중 MeOH, 5-10%, 구배 용출) 3-아미노-N-(2-모르폴리노에틸)-5-((트리이소프로필실릴)에티닐)벤즈아미드를 연황색 검으로 수득하였다 (600 mg, 92%); Rt 1.84 min (방법 2 산성); m/z 430 (M+H)+ (ES+)
THF (5.0 mL) 중 상기 수득한 알키닐실란 (500 mg, 1.164 mmol)의 용액에 TBAF (116 mL, 1.16 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 RT에서 1 시간동안 유지하였다. 추가 분취량의 TBAF (114 μL, 1.16 mmol)를 첨가하고, 30 분후 반응 혼합물을 물 (10 mL) 및 에틸 아세테이트 (10 mL)로 분배하였다. 유기층을 분리한 후, 염수로 세척한 다음, 건조시키고, 진공중에서 증발시켰다. 잔사를 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 (SiO2,12 g, DCM 중 MeOH, 2-5%, 구배 용출) 표제 화합물 중간체 D1을 무색 검으로 수득하였다 (260 mg, 82%); Rt 1.17 min (방법 2 염기성); LCMS m/z 274 (M+H)+ (ES+).
중간체 D2: 3-아미노-5-메톡시- N -(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드.
Figure pct00077
DCM (20 mL) 중 3-아미노-5-메톡시벤조산 (2.00 g, 12.0 mmol)의 용액에 2-모르폴리노에탄아민 (1.90 mL, 14.5 mmol) 및 DIPEA (4.20 mL, 24.1 mmol)를 0 ℃에서 첨가하고, 이어 HATU (5.46 g, 14.4 mmol)를 2 시간에 걸쳐 나누어 첨가하였다. 이동안 농후한 베이지색 침전이 형성되었으며, 교반이 용이하게 되도록 DCM (13 mL)을 추가한 뒤, 반응 혼합물을 18 시간동안 RT로 가온하였다. 생성된 용액을 DCM (50 mL)으로 희석하고, sat. 수성 NaHCO3 (40 mL), sat 수성 NH4Cl (40 mL) 및 염수 (40 mL)로 세척한 후, 건조시키고, 진공중에서 증발시켰다. 잔사를 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 (SiO2, 80 g, DCM 중 [MeOH 중 0.7 M NH3], 0-10%, 구배 용출) 표제 화합물, 중간체 D2를 무색 오일로 수득하였다 (1.95 g, 58%); Rt 0.75 분 (방법 4); m/z 280 (M+H)+ (ES+).
중간체 D3: 3-아미노-5-브로모-N-(2-메톡시에틸)벤즈아미드.
Figure pct00078
DCM (30 mL) 중 3-아미노-5-브로모벤조산 (1.90 g, 8.53 mmol), 2-메톡시에탄아민 (1.50 ml, 17.08 mmol) 및 트리에틸아민 (3.60 mL, 25.8 mmol)의 교반 용액에 EtOAc 중 50 wt% T3P (7.65 ml, 12.85 mmol)를 0 ℃에서 첨가하였다. 반응물을 RT에서 밤새 교반한 뒤, 90 분동안 환류시켰다. 반응물을 RT로 냉각하고, 추가량의 트리에틸아민 (3.60 ml, 25.8 mmol)을 첨가하였다. 반응 베슬을 빙조에서 냉각하고, 새로운 병으로부터 EtOAc 중 50 wt% T3P (7.65 ml, 12.85 mmol)를 첨가하였다. 빙조를 제거하고, 반응물을 RT로 가온한 뒤, 이 온도에서 1 시간동안 교반하였다. 반응물을 sat. NaHCO3 (50 mL) 및 DCM (50 mL)로 분배하였다. 수성상을 새로운 DCM (50 mL)로 역추출하였다. 유기 추출을 모아 건조시키고 (MgSO4), 여과한 뒤, 진공중에서 농축하여 오렌지색 오일 (3.12 g)을 얻었다. 조 생성물을 실리카겔상에서 크로마토그래피에 의해 정제하여 (80 g 칼럼, DCM 중 0-10% MeOH) 중간체 D3 (1.96 g)을 오렌지색 오일로 얻었다.
1H NMR (DMSO-d6) 400 MHz, δ 8.37 (t, 1H), 7.08 (t, 1H), 7.00-6.99 (m, 1H), 6.84 (t, 1H), 5.57 (s, 2H), 3.44-3.41 (m, 2H), 3.39-3.33 (m, 2H), 3.25 (s, 3H).
LCMS m/z 273/275 (M+H)+ (ES+)
중간체 D4: 3-아미노-5-에티닐-N-(2-메톡시에틸)벤즈아미드.
Figure pct00079
TEA (4.1 mL, 29.4 mmol) 및 DMF (20 mL) 중 중간체 D3 (1.91 g, 6.85 mmol), 요오드화구리(I) (0.065 g, 0.343 mmol) 및 에티닐트리이소프로필실란 (2.30 mL, 10.25 mmol)의 탈기 현탁액에 Pd(PPh3)4 (0.396 g, 0.343 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 85 ℃ (외부 온도)에서 4 시간동안 가열하였다. 반응물을 RT로 냉각하고, EtOAc (50 mL) 및 염수 (50 mL)로 분배하였다. 수성상을 EtOAc (50 mL)로 역추출하였다. 유기 추출을 모아 염수 (100 mL)로 세척한 다음, 건조시키고 (MgSO4), 여과한 뒤, 진공중에서 농축하여 갈색 오일 (3.41 g)을 얻었다. 조 생성물을 실리카겔상에서 크로마토그래피에 의해 정제하여 (120 g 칼럼, 이소헥산중 0-100% EtOAc) 3-아미노-N-(2-메톡시에틸)-5-((트리이소프로필실릴)에티닐)벤즈아미드 (1.34 g)를 황색 고체로 수득하였다.
1H NMR (DMSO-d6) 400 MHz, δ 8.43 (t, 1H), 7.06-7.03 (m, 2H), 6.78-6.77 (m, 1H), 5.45 (s, 2H), 3.43-3.40 (m, 2H), 3.38-3.34 (m, 2H), 3.25 (s, 3H), 1.10 (s, 21H).
LCMS m/z 375 (M+H)+ (ES+)
EtOAc (21 mL) 중 바로 위에서 얻은 (트리이소프로필실릴)에티닐-치환된 벤즈아미드 (1.32 g, 3.52 mmol)의 교반 용액에 THF 중 1M TBAF (3.52 mL, 3.52 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 RT에서 1 시간동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (50 mL) 및 EtOAc (50 mL)로 분배하였다. 유기층을 염수 (50 mL)로 세척한 후, 건조시키고 (MgSO4), 여과한 뒤, 농축하여 오렌지색 오일을 얻었다. 조 생성물을 최소량의 MeOH에 용해시켜 SCX 상에 로딩하였다. 칼럼에 MeOH에 이어 MeOH 중 1% NH3을 용출시켰다. 여액을 진공중에서 농축하여 중간체 D4 (534 mg)를 갈색 오일로 수득하였다.
1H NMR (DMSO-d6) 400 MHz, δ 8.37 (t, 1H), 7.07-7.04 (m, 2H), 6.75-6.74 (m, 1H), 5.45 (s, 2H), 4.07 (s, 1H), 3.44-3.40 (m, 2H), 3.38-3.34 (m, 2H), 3.25 (s, 3H).
LCMS m/z 219 (M+H)+ (ES+)
중간체 D5: (S)-3-아미노-5-브로모-N-(1-메톡시프로판-2-일)벤즈아미드.
Figure pct00080
DCM (15 mL) 중 3-아미노-5-브로모벤조산 (900 mg, 4.04 mmol), (S)-1-메톡시프로판-2-아민 (860 μL, 8.14 mmol) 및 트리에틸아민 (1.7 mL, 12.20 mmol)의 교반 혼합물을 빙조에서 냉각하였다. EtOAc 중 50 wt% T3P (3.6 mL, 6.05 mmol)를 적가하고, 빙조를 제거한 뒤, 반응 혼합물 RT로 가온하였다. 용해를 돕기 위해 DMF (2 mL)를 첨가하고, 반응물을 RT에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 sat. aq. NaHCO3 (50 mL) 및 DCM (50 mL)로 분배하였다. 수성상을 새로운 DCM (50 mL)으로 역추출하였다. 유기 추출을 모아 물 (100 mL), 염수 (100 mL)로 세척한 후, 건조시키고 (MgSO4), 여과한 뒤, 진공중에서 농축하여 오렌지색 오일을 얻었다. 조 생성물을 실리카겔상에서 크로마토그래피에 의해 정제하여 (40 g 칼럼, DCM 중 0-5% MeOH) 중간체 D5 (1.07 g)를 오렌지색 오일로 수득하였다.
1H NMR (DMSO-d6) 400 MHz, δ 8.11 (d, 1H), 7.08 (t, 1H), 6.99-6.98 (m, 1H), 6.84 (t, 1H), 5.56 (s, 2H), 4.18-4.08 (m, 1H), 3.39-3.35 (m, 1H), 3.26-3.22 (m, 1H), 3.25 (s, 3H), 1.09 (d, 3H).
LCMS m/z 287/289 (M+H)+ (ES+)
중간체 D6: (S)-3-아미노-5-에티닐-N-(1-메톡시프로판-2-일)벤즈아미드.
Figure pct00081
DMF (10 mL) 중 중간체 D5 (970 mg, 3.31 mmol), 에티닐트리이소프로필실란 (1.12 mL, 4.99 mmol), 요오드화구리(I) (32 mg, 0.168 mmol) 및 TEA (2 mL, 14.35 mmol)의 탈기 용액에 Pd(PPh3)4 (193 mg, 0.167 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 85 ℃에서 3 시간동안 가열하였다. 반응물을 RT로 냉각하고, EtOAc (50 mL) 및 염수 (50 mL)로 분배하였다. 수성상을 EtOAc (50 mL)로 역추출하였다. 유기 추출을 모아 염수 (100 mL)로 세척한 다음, 건조시키고 (MgSO4), 여과한 뒤, 진공중에서 농축하여 오렌지색 오일 (1.5 g)을 얻었다. 조 생성물을 실리카겔상에서 크로마토그래피에 의해 정제하여 (80 g 칼럼, DCM 중 0-3% MeOH) (S)-3-아미노-N-(1-메톡시프로판-2-일)-5-((트리이소프로필실릴)에티닐)벤즈아미드 (894 mg)를 오렌지색 오일로 수득하였다.
1H NMR (DMSO-d6) 400 MHz, δ 8.13 (d, 1H), 7.04-7.03 (m, 1H), 7.01 (t, 1H), 6.79-6.78 (m, 1H), 5.42 (s, 2H), 4.18-4.11 (m, 1H), 3.40-3.36 (m, 1H), 3.26-3.22 (m, 4H), 1.11-1.09 (m, 24H).
LCMS m/z 389 (M+H)+ (ES+)
EtOAc (12 mL) 중 바로 위에서 얻은 (트리이소프로필실릴)에티닐-치환된 벤즈아미드 (875 mg, 2.026 mmol)의 교반 용액에 THF 중 1M TBAF (2026 μL, 2.026 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 RT에서 1 시간동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (30 mL) 및 EtOAc (20 mL)로 분배하였다. 유기층을 염수 (20 mL)로 세척한 후, 건조시키고 (MgSO4), 여과한 뒤, 농축하여 오렌지색 오일 (876 mg)을 얻었다. 조 생성물을 최소량의 MeOH에 용해시켜 SCX 상에 로딩하였다. 칼럼에 MeOH에 이어 MeOH 중 1% NH3을 용출시켰다. 여액을 진공중에서 농축하여 갈색 오일을 얻고 실리카겔상에서 크로마토그래피에 의해 정제하여 (40 g 칼럼, DCM 중 0-5% MeOH) 중간체 D6 (307 mg)을 오렌지색 오일로 수득하였다.
1H NMR (DMSO-d6) 400 MHz, δ 8.11 (d, 1H), 7.07-7.03 (m, 2H), 6.75-6.74 (m, 1H), 5.44 (s, 2H), 4.17-4.12 (m, 1H), 3.39-3.34 (m, 1H), 3.25-3.21 (m, 4H), 1.09 (d, 3H).
LCMS m/z 233 (M+H)+ (ES+)
중간체 D7: 3-아미노-5-에티닐벤즈아미드
Figure pct00082
Pd(PPh3)4 (0.269 g, 0.233 mmol)를 TEA (2 mL) 및 DMF (2 mL)중 3-아미노-5-브로모벤즈아미드 (0.5 g, 2.325 mmol), CuI (0.044 g, 0.233 mmol), 및 에티닐트리이소프로필실란 (0.782 mL, 3.49 mmol)의 탈기 현탁액에 첨가하였다. 80 ℃ (블록 온도)에서 1 시간동안 가열한 후, 냉각하고, 여과하였다 (와트만 유리섬유 패드 GF/A). 용매를 증발시키고, 잔사를 EtOAc (20 mL) 및 20%w/w NaCl 용액 (25 mL)으로 분배하였다. 유기층을 분리한 후, 건조시키고 (MgSO4), 여과한 뒤, 용매를 증발시켜 농후 갈색 오일을 얻었다. 조 생성물을 Companion 상에서 크로마토그래피에 의해 정제하여 (40 g 칼럼, 2% MeOH:DCM - 8%) 3-아미노-5-((트리이소프로필실릴)-에티닐)벤즈아미드 (475 mg)를 연황갈색 고체로 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.87 (s, 1H), 7.21 (s, 1H), 7.13 - 7.02 (m, 2H), 6.79 (dd, 1H), 5.40 (s, 2H), 1.11 (s, 21H).
LCMS m/z 317 (M+H)+ (ES+)
바로 위에서 얻은 (트리이소프로필실릴)에티닐-치환된 벤즈아미드 (475 mg, 1.501 mmol)를 THF (5 mL)에 용해시키고, THF 중 1M TBAF (1501 μL, 1.501 mmol)를 첨가하였다. 1 시간동안 교반한 후, 물 (20 mL) 및 에틸 아세테이트 (20 mL)로 분배하고, 유기층을 분리한 후, 건조시키고 (MgSO4), 여과한 뒤, 용매를 증발시켰다. 조 생성물을 Companion 상에서 크로마토그래피에 의해 정제하여 (12 g 칼럼, 5% MeOH:DCM - 10%) 중간체 D7 (145 mg)을 무색 결정성 고체로 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.82 (s, 1H), 7.22 (s, 1H), 7.09 (dt, 2H), 6.76 (dd, 1H), 5.41 (s, 2H), 4.06 (s, 1H).
LCMS m/z 161 (M+H)+ (ES+)
중간체 D8: 3-아미노-N-(2-(디메틸아미노)에틸)-5-에티닐벤즈아미드
Figure pct00083
Pd(PPh3)4 (0.218 g, 0.189 mmol)를 TEA (2 mL) 및 DMF (2 mL) 중 3-아미노-5-브로모-N-(2-(디메틸아미노)에틸)벤즈아미드 (0.54 g, 1.887 mmol), CuI (0.036 g, 0.189 mmol), 및 에티닐트리이소프로필실란 (0.635 mL, 2.83 mmol)의 탈기 현탁액에 첨가하였다. 80 ℃ (블록 온도)에서 1 시간동안 가열한 후, 냉각하고, 여과하였다 (와트만 유리섬유 패드 GF/A). 용매를 증발시키고, 잔사를 EtOAc (20 mL) 및 20%w/w NaCl 용액 (25 mL)으로 분배하였다. 유기층을 분리한 후, 건조시키고 (MgSO4) 여과한 뒤, 용매를 증발시켜 농후 갈색 오일을 얻었다. 조 생성물을 Companion 상에서 크로마토그래피에 의해 정제하여 (40g 칼럼, 10% MeOH:DCM) 3-아미노-N-(2-(디메틸아미노)에틸)-5-((트리이소프로필실릴)에티닐)벤즈아미드 (600 mg)를 방치시 고화하는 무색 검으로 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.27 (t, 1H), 7.04 (dd, 1H), 7.02 (t, 1H), 6.79 (dd, 1H), 5.43 (s, 2H), 3.33 - 3.26 (m, 2H), 2.37 (t, 2H), 2.17 (s, 6H), 1.11 (s, 21H).
LCMS m/z 388 (M+H)+ (ES+)
바로 위에서 얻은 (트리이소프로필실릴)에티닐-치환된 벤즈아미드 (600 mg, 1.548 mmol)를 THF (50 mL)에 용해시키고, THF 중 1M TBAF (1548 μL, 1.548 mmol)를 첨가하였다. 1 시간동안 교반한 후, 물 (100 mL) 및 에틸 아세테이트 (100 mL)로 분배하고, 유기층을 분리한 다음, 20%w/w NaCl 용액 (100 mL)으로 세척하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과한 뒤, 증발시켰다. 조 생성물을 Companion 상에서 크로마토그래피에 의해 정제하여 (12 g 칼럼, 10% MeOH:DCM) 중간체 D8 (240 mg)을 연황색 검으로 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.22 (t, 1H), 7.10 - 6.99 (m, 2H), 6.76 (dd, 1H), 5.44 (s, 2H), 4.07 (s, 1H), 3.32 - 3.24 (m, 2H), 2.37 (t, 2H), 2.17 (s, 6H).
중간체 E1: 메틸 3-((4-((4-(3-(3-( tert -부틸)-1-( p -톨릴)-1 H -피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)벤조에이트.
Figure pct00084
DCM (35 mL) 중 CDI (1.47 g, 9.08 mmol)의 용액에 중간체 A8 (2.08 g, 9.08 mmol)을 첨가하고, 활성 반응 혼합물을 RT에서 18 시간동안 유지한 후, DCM (20 mL) 중 중간체 H1 (1.3 g, 60% 순도, 2.0 mmol)의 용액에 적가하였다. RT에서 2 시간후, 반응 혼합물을 포화 aq. NaHCO3 (100 mL), 물 (100 mL) 및 염수 (100 mL)의 혼합물로 세척한 다음, 유기층을 분리하여 진공중에서 증발시켰다. 잔사를 MeOH (100 mL)에서 연마하고, 생성된 고체를 여과로 수집하여 MeOH (50 mL)로 세척한 후, 진공중에서 건조하였다. 제2 수득물을 여액으로부터 유사한 방식으로 분리하고, 두 고체를 합쳐 표제 화합물, 중간체 E1을 자주색 고체로 수득하였다 (755 mg, 85% 순도, 50%); Rt 2.64 min (방법 2 산성); m/z 642 (M+H)+ (ES+). 이 물질을 추가 정제없이 후술하는 후속 단계에 사용하였다.
중간체 E2: 메틸 3-((4-((4-(3-(3-( tert -부틸)-1-( p -톨릴)-1 H -피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-메틸벤조에이트.
Figure pct00085
DCM (10.0 mL) 중 CDI (364 mg, 2.25 mmol)의 용액에 중간체 A8 (515 mg, 2.25 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 RT에서 1 시간동안 유지하였다. 생성된 용액의 분취량 (5.0 mL, 1.1 mmol)을 DCM (3.0 mL) 중 중간체 H4 (200 mg, 0.499 mmol)의 용액에 첨가하고, 모은 반응 혼합물을 교반을 돕기 위해 THF (5.0 mL)로 희석하고, RT에서 2 시간동안 유지하였다. 반응물을 MeOH (10 mL)을 첨가하여 퀀칭하고, 생성된 침전을 여과로 수집한 뒤, MeOH (20 mL)로 세척한 다음, 진공중에서 건조하여 메틸 표제 화합물, 중간체 E2를 연핑크색 고체로 수득하였다 (178 mg, 54%); Rt 2.69 min (방법 2 산성); m/z 656 (M+H)+ (ES+).
중간체 E3: 메틸 3-((4-((4-(3-(3-( tert -부틸)-1-(4-메톡시페닐)-1 H -피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-메톡시벤조에이트.
Figure pct00086
DCM (2.0 mL) 중 CDI (82 mg, 0.50 mmol)의 용액에 중간체 A9 (124 mg, 0.50 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 RT에서 18 시간동안 유지하였다. 이 용액의 분취량 (1.0 mL, 0.25 mmol)을 DCM (2.0 mL) 중 중간체 H5 (70 mg, 0.17 mmol)의 용액에 첨가하고, 반응 혼합물을 RT에서 2 시간동안 유지한 후, MeOH (3.0 mL)를 첨가하여 퀀칭하였다. 생성된 혼합물을 진공중에서 증발시킨 뒤, 잔사를 DCM (6.0 mL) 및 sat 수성 NaHCO3 (6.0 mL)으로 분배하였다. 유기상을 분리한 후, 물 (10 mL) 및 염수 (10 mL)로 세척한 다음, 건조시키고, 진공중에서 증발시켰다. 잔사를 MeOH (10 mL)에서 연마하고, 생성물을 여과로 수집한 후, 진공중에서 건조하여 표제 화합물, 중간체 E3을 연핑크색 고체로 수득하였다 (116 mg, 100%); Rt 2.65 분 (방법 2 산성); m/z 688 (M+H)+ (ES+).
중간체 E4: 메틸 3-브로모-5-((4-((4-(3-(3-( tert -부틸)-1-(4-메톡시페닐)-1 H -피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)벤조에이트.
Figure pct00087
DCM (2.0 mL) 중 CDI (73 mg, 0.45 mmol)의 용액에 중간체 A9 (111 mg, 0.45 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 RT에서 18 시간동안 유지하였다. 생성된 용액의 분취량 (1.0 mL, 0.23 mmol)을 DCM (2.0 mL) 중 중간체 H6 (60 mg, 0.13 mmol)의 용액에 첨가하고, 반응 혼합물을 RT에서 2 시간동안 유지한 다음, MeOH (3.0 mL)를 첨가하여 퀀칭하였다. 휘발물질을 진공중에서 증발시킨 뒤, 잔사를 DCM (6.0 mL) 및 포화 aq. NaHCO3 (6.0 mL)으로 분배하였다. 유기상을 분리한 후, 물 (10 mL) 및 염수 (10 mL)로 세척한 다음, 건조시키고, 진공중에서 증발시켰다. 잔사를 MeOH (10 mL)에서 연마하고, 얻은 고체를 여과로 수집한 후, 진공중에서 건조하여 표제 화합물, 중간체 E4를 회백색 고체로 수득하였다 (58 mg, 61%); Rt 2.90 min (방법 2 산성); m/z 736/738 (M+H)+ (ES+).
중간체 E5: 메틸 3-((4-((4-(3-(3-이소프로필-1-( p -톨릴)-1 H -피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-메톡시벤조에이트.
Figure pct00088
DCM (2.0 mL) 중 CDI (320 mg, 1.98 mmol)의 용액에 중간체 A4 (425 mg, 1.98 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 RT에서 18 시간동안 유지하였다. 생성된 용액을 THF 중 (2.0 mL) 중간체 H5 (329 mg, 0.790 mmol)의 용액에 RT에서 첨가하고, 반응 혼합물을 RT에서 2 시간동안 유지하였고, 그후에 침전이 형성되었다. 고체를 여과로 수집하고, THF (10 mL)로 세척한 후, 진공중에서 건조하여 표제 화합물 중간체 E5를 백색 고체로 수득하였다 (407 mg, 76%); Rt 2.65 분 (방법 2 산성); m/z 658 (M+H)+ (ES+);
중간체 F1: 3-((4-((4-(3-(3-( tert -부틸)-1-( p -톨릴)-1 H -피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)벤조산.
Figure pct00089
THF (6.0 mL) 중 상기 수득한 중간체 E1 (750 mg, 0.993 mmol)의 현탁액에 물 (1.0 mL) 및 MeOH (1.0 mL)의 혼합물중 LiOH (36mg, 1.5 mmol)를 첨가하고, 생성된 불균질 혼합물을 40 ℃에서 3 시간동안 가열한 후, 18 시간동안 RT로 냉각하였다. 혼합물을 진공중에서 그의 원래 부피의 절반이 될 때까지 농축한 뒤, 염산 (1.0 M, 40 mL)에 부었다. 혼합물을 EtOAc (10 mL)로 희석하고, 10 분동안 초음파처리하여 수성상중에 백색 침전을 얻은 후 여과로 수집하고, 진공중에서 건조하여표제 화합물, 중간체 F1을 회백색 고체로 수득하였다 (300 mg, 47%); Rt 2.51 min (방법 2 산성); m/z 628 (M+H)+ (ES+).
중간체 F2: 3-((4-((4-(3-(3-( tert -부틸)-1-( p -톨릴)-1 H -피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-메틸벤조산.
Figure pct00090
THF (6.0 mL) 중 상기 수득한 중간체 E2 (175 mg, 0.267 mmol)의 현탁액에 물 (1.0 mL) 및 MeOH (1.0 mL)의 혼합물중 LiOH (9.6 mg, 0.40 mmol)를 첨가하고, 생성된 불균질 혼합물을 50 ℃에서 5 시간동안 가열한 후, RT로 냉각하였다. 18 시간후 반응물을 3 시간동안 50 ℃로 재가열한 후, RT로 냉각하고, 염산 (1.0 M, 4.0 mL)을 첨가하여 산성화하였다. 혼합물을 물 (6.0 mL)로 희석하고, 형성된 침전을 여과로 수집한 후, 물 (3.0 mL)로 세척하고, 진공중에서 건조하여 표제 화합물, 중간체 F2를 백색 고체로 수득하였다 (161 mg, 92%); Rt 2.59 min (방법 2 산성); m/z 642 (M+H)+ (ES+).
중간체 F3: 3-((4-((4-(3-(3-( tert -부틸)-1-(4-메톡시페닐)-1 H -피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-메톡시벤조산.
Figure pct00091
THF (6.0 mL) 중 중간체 E3 (116 mg, 0.174 mmol)의 현탁액에 물 (1.0 mL) 및 MeOH (1.0 mL)의 혼합물중 LiOH (6.3 mg, 0.26 mmol)를 첨가하고, 생성된 불균질 혼합물을 40 ℃에서 2 시간동안 가열한 후, RT로 냉각하였다. 18 시간후 혼합물을 THF (2.0 mL)로 희석하고, 1 시간동안 50 ℃로 재가열한 후에 용액을 얻었다. RT로 냉각후, 혼합물을 염산 (1.0 M, 3.0 mL)으로 산성화하고, 물 (5.0 mL)로 희석하였다. 형성된 침전을 여과로 수집하고, 물 (3.0 mL)로 세척한 후, 진공중에서 건조하여 표제 화합물, 중간체 F3을 연갈색 고체로 수득하였다 (67 mg, 52%); Rt 2.38 min (방법 2 산성); m/z 674 (M+H)+ (ES+).
중간체 F4: 3-브로모-5-((4-((4-(3-(3-( tert -부틸)-1-(4-메톡시페닐)-1 H -피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)벤조산.
Figure pct00092
THF (6.0 mL) 중 중간체 E4 (58 mg, 0.079 mmol)의 현탁액에 물 (1.0 mL) 및 MeOH (1.0 mL)의 혼합물중 LiOH (2.8 mg, 0.12 mmol)를 첨가하고, 생성된 불균질 혼합물을 40 ℃에서 2 시간동안 가열한 뒤, RT로 냉각하였다. 18 시간후 혼합물을 THF (2.0 mL)로 희석하고, 3 시간동안 50 ℃로 가열한 후에 RT로 냉각하였다. 24 시간후, 반응 혼합물을 염산 (1.0 M, 3.0 mL)으로 산성화하고, 물 (5.0 mL)로 희석하였다. 형성된 침전을 여과로 수집하고, 물 (3.0 mL)로 세척한 후, 진공중에서 건조하여 표제 화합물, 중간체 F4를 연핑크색 고체로 수득하였다 (42 mg, 74%); Rt 2.70 min (방법 2 산성); m/z 722/724 (M+H)+ (ES+).
중간체 G1(P): tert-부틸 (4-((2-클로로피리딘-4-일)옥시)나프탈렌-1-일)카바메이트.
Figure pct00093
t-BuOH (10 mL) 중 중간체 G1 (1000 mg, 3.69 mmol) 및 디-tert-부틸 디카보네이트 (750 mg, 3.44 mmol)의 혼합물을 18 시간동안 환류하에 교반하였다. 혼합물을 물 (15 mL)로 희석하고, 여과하여 수집하였다. 고체를 디에틸 에테르에서 연마하여 중간체 G1(P) (1002 mg)를 연회색 고체로 수득하였다.
1H NMR (DMSO-d6) 400 MHz, δ : 9.37 (s, 1H), 8.28 (d, 1H), 8.16 (d, 1H), 8.82 (dd, 1H), 7.66 (d, 1H), 7.66-7.54 (m, 2H), 7.40 (d, 1H), 7.03 (d, 1H), 6.91 (dd, 1H), 1.52 (s, 9H).LCMS m/z 371 (M+H)+ (ES+); 369 (M-H)- (ES-)
중간체 G3: 4-((6-클로로피리미딘-4-일)옥시)나프탈렌-1-아민.
Figure pct00094
아세토니트릴 (80 mL) 중 4-아미노나프탈렌-1-올 하이드로클로라이드 (6.82 g, 31.4 mmol)의 용액에 DBU (11.0 mL, 75.0 mmol)를 0 ℃에서 적가하였다. 10 분후 4,6-디클로로피리미딘 (5.00 g, 34.0 mmol)을 5 분에 걸쳐 나누어 첨가하고, 반응 혼합물을 3 시간동안 RT로 가온한 후, 진공중에서 증발시켰다. 잔사를 물 (250 mL)로 희석하고, 15 분동안 초음파처리한 뒤, RT에서 16 시간동안 교반하였다. 생성된 침전을 여과 분리한 후, 물 (3 x 100 mL)로 세척한 다음, 진공중에서 건조하여 표제 화합물, 중간체 G3을 회색 고체로 수득하였다 (8.27 g, 97%); Rt 1.85 분 (방법 2, 산성); m/z 272 (M+H)+, (ES+).
중간체 G3(P): tert -부틸 (4-((6-클로로피리미딘-4-일)옥시)나프탈렌-1-일)카바메이트.
Figure pct00095
N2 하에 MeCN (75 mL) 중 tert-부틸 (4-하이드록시나프탈렌-1-일)카바메이트 (10.0 g, 29.3 mmol) 및 4,6-디클로로피리미딘 (4.37 g, 29.3 mmol)의 용액에 DBU (5.3 mL, 35 mmol)를 내부 온도가 18-21 ℃의 범위내에서 유지되는 속도로 첨가하였다. 1 시간후 물 (75 mL)을 첨가하고, 생성된 불균질 혼합물을 RT에서 18 시간동안 유지하였다. 생성된 침전을 여과로 수집하고, 물 (2 x 75 mL)로 세척한 후, 진공중에서 건조하여 표제 화합물, 중간체 G3(P)을 갈색 고체로 수득하였다 (10.4 g, 95%); Rt 2.57 min (방법 2 산성); m/z 372 (M+H)+, (ES+).
중간체 G4: 2,3-디클로로-4-((2-클로로피리미딘-4-일)옥시)아닐린
Figure pct00096
MeCN (150 mL) 중 4-아미노-2,3-디클로로페놀 (10 g, 56.2 mmol)의 교반 혼합물에 DBU (11.85 mL, 79 mmol)를 0-5 ℃에서 5 분간 첨가하였다. 5 분동안 교반한 후, 2,4-디클로로피리미딘 (8.95 g, 60.1 mmol)을 5 분에 걸쳐 나누어 첨가하고, 혼합물을 RT로 가온한 뒤, 2 시간동안 교반하였다. 용매를 감압하에 증발하고, 잔사를 에테르 (200 mL) 및 물 (200 mL)로 분배하였다. 수성층을 에테르 (200 mL)로 추출하고, 모아진 유기층을 염수 (200 mL)로 세척한 후, 건조시키고 (MgSO4), 실리카 패드를 통해 여과한 다음, 감압하에 증발하였다. 잔사를 에테르-이소헥산에서 연마하고, 여과한 뒤, 건조하여 중간체 G4 (14.403 g)를 밝은 갈색 고체로 수득하였다.
1H NMR (CDCl3) 400 MHz, δ 8.45 (d, 1H), 6.96 (d, 1H), 6.84 (d, 1H), 6.73 (d, 1H), 4.22 (s, 2H).
LCMS m/z 290/2/4 (M+H)+ (ES+)
중간체 G5: 4-((2-클로로피리미딘-4-일)옥시)-2,3-디플루오로아닐린
Figure pct00097
DBU (7.27 ml, 48.2 mmol)를 0-5 ℃에서 MeCN (100 mL) 중 4-아미노-2,3-디플루오로페놀 (5 g, 34.5 mmol)의 교반 혼합물에 5 분에 걸쳐 첨가하였다. 5 분간 교반한 후, 2,4-디클로로피리미딘 (5.49 g, 36.9 mmol)을 5 분에 걸쳐 나누어 첨가하고, 혼합물을 RT로 가온한 다음, 2 시간동안 교반하였다. 용매를 감압하에 증발하고, 잔사를 에테르 (200 mL) 및 물 (200 mL)로 분배하였다. 수성층을 에테르 (200 mL)로 추출한 후, 모아진 유기층을 염수 (200 mL)로 세척하고, 건조시키고 (MgSO4), 감압하에 증발하였다. 조 생성물을 실리카겔상에서 크로마토그래피에 의해 정제하여 (120 g 칼럼, 0-40% EtOAc/이소헥산) 중간체 G5 (4.827 g)를 고체로 수득하였다.
1H NMR (400MHz; CDCl3) δ 8.46 (d, 1H), 6.89 (d, 1H), 6.81-6.77 (m, 1H), 6.58-6.53 (m, 1H), 3.85 (s, 2H).
LCMS m/z 258/260 (M+H)+ (ES+)
중간체 H1: 메틸 3-((4-((4-아미노나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)벤조에이트.
Figure pct00098
THF 중 (60 mL) 중간체 G2 (5.20 g, 17.0 mmol) 및 메틸 3-아미노벤조에이트 (5.90 g, 39.0 mmol)의 용액에 p-TSA (592 mg, 3.11 mmol)를 첨가하고, 생성된 현탁액을 환류하에 16 시간동안 가열하였다. 반응 혼합물을 RT로 냉각하고, 현탁된 고체를 여과로 수집하여 THF (2 x 50 mL) 및 Et2O (2 x 50 mL)로 세척한 후, 진공중에서 건조하여 표제 화합물, 중간체 H1을 자주색 고체로 수득하였다 (1.91 g, 29%); Rt 2.06 min (방법 2 산성); m/z 387 (M+H)+, (ES+).
중간체 H2(P): 메틸 3-((4-((4-(( tert -부톡시카보닐)아미노)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-4-메톡시벤조에이트.
Figure pct00099
이소프로필 아세테이트 (15 mL) 중 중간체 G2(P) (2.0 g, 5.4 mmol)의 탈기 현탁액에 메틸 3-아미노-4-메톡시벤조에이트 (1.95 g, 10.8 mmol) 및 TFA (0.42 mL, 5.6 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 혼합이 잘 되도록 이소프로필 아세테이트 (15 mL)로 희석하고, 3 일동안 65 ℃로 가열한 후, RT로 냉각하였다. 형성된 침전을 여과하여 제거하였다. LCMS로 고체를 분석하고 필요한 생성물을 함유하지 않는 것으로 확인되면 물질을 버렸다. 여액을 EtOAc (100 mL) 및 포화 수성 NaHCO3 [100 mL]로 분배한 뒤, 유기상을 분리하고, 염수 (2 x 50 mL)로 세척한 다음, 건조시키고, 진공중에서 증발시켰다. 잔사를 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 (SiO2, 80 g, 0-50%, 이소헥산중 EtOAc, 구배 용출) 표제 화합물, 중간체 H2(P)를 연핑크색 고체로 수득하였다 (1.79 g, 64%); Rt 2.70 min (방법 2 산성); m/z 517 (M+H)+, (ES+).
중간체 H3: 메틸 4-((4-((4-아미노나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-3-메톡시벤조에이트.
Figure pct00100
DMF (6.5 mL) 중 중간체 G2 (1.5 g, 5.5 mmol)의 용액에 메틸 4-아미노-3-메톡시벤조에이트 (1.20 g, 6.62 mmol) 및 p-TSA 모노하이드레이트 (1.57 g, 8.28 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 6 시간동안 60 ℃로 가열한 후, RT로 냉각하고, EtOAc (50 mL) 및 포화 수성 NaHCO3 (50 mL)로 분배하였다. 유기상을 분리한 후, 염수 (2 x 50 mL)로 세척하였다. 형성된 침전을 여과하여 수집하였다. LCMS로 고체를 분석하고 필요한 생성물을 함유하지 않는 것으로 확인되면 물질을 버렸다. 여액을 진공중에서 증발시켜 적색 오일을 얻고 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 (SiO2, 80 g, 0-70% 이소헥산중 EtOAc, 구배 용출) 중간체 H3을 암자주색 고체로 수득하였다 (459 mg, 20%); Rt 2.26 min (방법 2 산성); m/z 417 (M+H)+, (ES+).
중간체 H3(P): 메틸 4-((4-((4-(( tert -부톡시카보닐)아미노)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-3-메톡시벤조에이트.
Figure pct00101
이소프로필 아세테이트 (30.0 mL) 중 중간체 G2(P) (4.08 g, 11.0 mmol)의 탈기 현탁액에 메틸 4-아미노-3-메톡시벤조에이트 (2.98 g, 16.5 mmol) 및 TFA (0.85 mL, 11 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 교반을 돕기 위해 이소프로필 아세테이트 (30 mL)로 희석하고, 생성된 현탁액을 3 일동안 65 ℃로 가열한 후, 3RT로 냉각하였다. 현탁된 고체를 여과로 수집하고, 이소프로필 아세테이트로 세척한 후, 얻은 조 생성물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 (SiO2, 80 g, 0-100%, 이소헥산중 EtOAc, 구배 용출) 표제 화합물, 중간체 H3(P)를 연자주색 고체로 수득하였다 (1.65 g, 28%); Rt 2.80 min (방법 2 산성); m/z 517 (M+H)+, (ES+).
중간체 H4: 메틸 3-((4-((4-아미노나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-메틸벤조에이트.
Figure pct00102
DMF (20 mL) 중 중간체 G2 (806 mg, 2.97 mmol) 및 메틸 3-아미노-5-메틸벤조에이트 (490 mg, 2.97 mmol)의 용액에 p-TSA (1.13 g, 5.93 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 16 시간동안 60 ℃로 가열하였다. RT로 냉각후, 혼합물을 EtOAc (30 mL) 및 포화 수성 NaHCO3 (30 mL)로 분배하였다. 유기상을 분리한 후, 물 (30 mL) 및 염수 (40 mL)로 세척한 다음, 건조시키고, 진공중에서 증발시켰다. 잔사를 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 (SiO2, 12.0 g, 0-100% 이소헥산중 EtOAc, 구배 용출) 표제 화합물, 중간체 4를 적색 오일로 수득하였다 (680 mg, 25%); Rt 2.13 min (방법 2 산성); m/z 401 (M+H)+, (ES+).
중간체 H5: 메틸 3-((4-((4-아미노나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-메톡시벤조에이트.
Figure pct00103
THF 중 (200 mL) 중간체 G2(P) (41.0 g, 110 mmol) 및 메틸 3-아미노-5-메톡시벤조에이트 (20.3 g, 111 mmol)의 혼합물에 p-TSA (592 mg, 3.11 mmol)를 첨가하고, 생성된 현탁액을 60 ℃에서 18 시간동안 가열하였다. 반응 혼합물을 RT로 냉각하고, 현탁된 고체를 여과로 수집한 뒤, THF (2 x 100 mL)로 세척하고, MeOH 중 NH3 (0.7 M)의 용액에 재현탁시킨 다음, 격렬히 교반하였다. 30 분후 고체를 여과로 수집하고, MeOH 중 NH3 (0.7 M)으로 세척한 후, 진공중에서 건조하여 메틸 3-((4-((4-((tert-부톡시카보닐)아미노)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-메톡시벤조에이트, 중간체 H5(P)를 베이지색 고체로 수득하였다 (34.0 g, HPLC에 의한 순도 92%, 56%).
DCM (50 mL) 중 중간체 H5(P) (10.2 g, 92% 순도, 18.2 mmol)의 현탁액에 TFA (10 mL, 130 mmol)를 적가하고, 생성된 검은색 용액을 RT에서 21 시간동안 유지하였다. 추가 분취량의 TFA (5.0 mL, 67 mmol)를 첨가하고, 3 시간후 반응 혼합물을 진공중에서 증발시켰다. 잔사를 톨루엔 (100 mL)에 이어 MeOH 중 NH3 (0.7 M, 2 x 100 mL)의 용액과 공증발시키고, MeOH (100 mL)에서 연마한 뒤, 생성된 고체를 여과로 수집하고, MeOH (50 mL)로 세척한 다음, 진공중에서 건조하여 표제 화합물, 중간체 H5를 베이지색 고체로 수득하였다 (7.9 g, 99%); Rt 2.15 분 (방법 2 산성, 92% 순도); m/z 417 (M+H)+, (ES+).
중간체 H6: 메틸 3-((4-((4-아미노나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-브로모벤조에이트.
Figure pct00104
DMF (6.0 mL) 중 중간체 G2 (236 mg, 0.869 mmol) 및 메틸 3-아미노-5-브로모벤조에이트 (200 mg, 0.869 mmol)의 용액에 p-TSA (331 mg, 1.74 mmol)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 60 ℃에서 8 시간동안 가열하였다. RT로 냉각후, 반응 혼합물을 EtOAc (10 mL) 및 포화 수성 NaHCO3 (10 mL)로 분배하였다. 유기상을 분리한 후, 염수 (10 mL)로 세척한 다음, 건조시키고, 진공중에서 증발시켰다. 잔사를 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 (SiO2, 12 g, 0-100% 이소헥산중 EtOAc, 구배 용출) 표제 화합물, 중간체 H6을 갈색 고체로 수득하였다 (124 mg, HPLC에 의한 순도 82%, 25%); Rt 2.15 분 (방법 2 산성, 82% 순도); m/z 465/467 (M+H)+, (ES+). 이 물질을 추가 정제없이 후속 단계에 사용하였다.
중간체 J1: 3-((4-((4-아미노나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)벤조산.
Figure pct00105
THF (5.0 mL) 및 물 (2.0 mL)의 혼합물중 중간체 H1, (905 mg, 2.34 mmol)의 용액에 aq. NaOH (2.0 M, 1.4 mL, 2.8 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 RT에서 3 시간동안 유지하였다. 2 M 염산을 첨가하여 생성된 혼합물을 pH 6으로 산성화하고, 자주색 침전을 얻었다. 고체를 여과로 수집하고, 물로 세척한 후, 진공중에서 건조하여 표제 화합물, 중간체 J1을 연자주색 고체로 수득하였다 (643 mg, 73%); Rt 1.62 min (방법 2 염기성); m/z 373 (M+H)+, (ES+).
중간체 J2(P): 3-((4-((4-(( tert -부톡시카보닐)아미노)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-4-메톡시벤조산.
Figure pct00106
THF 중 (12 mL) 메틸 에스테르 중간체 H2(P) (1.75 g, 3.39 mmol)의 현탁액에 수성 MeOH (1:1 v/v, 6.0 mL) 중 LiOH (122 mg, 5.08 mmol)의 용액을 첨가하였다. 반응 혼합물을 40 분동안 40 ℃로 가열한 후, 18 시간동안 RT로 냉각하고, 2 시간동안 40 ℃로 재가열하였다. LiOH의 제2 배치 (41 mg, 1.7 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 RT에서 24 시간동안 유지한 후, 진공중에서 그의 원래 부피의 절반이 되도록 증발시켰다. 농축물을 염산 (1.0 M, 20 mL)에 부어 회백색 침전을 얻었다. 고체를 여과로 수집하고, 물로 세척한 후, 진공중에서 건조하여 표제 화합물, 중간체 J2(P)를 백색 고체로 수득하였다 (1.25 g, 64%); Rt 2.46 min (방법 2 산성); m/z 503 (M+H)+, (ES+).
중간체 J3: 4-((4-((4-아미노나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산.
Figure pct00107
THF 중 (4.0 mL) 중간체 H3 (450 mg, 1.08 mmol)의 현탁액에 물 및 MeOH (1:1 v/v, 2.0 mL)의 혼합물중 LiOH (39 mg, 1.6 mmol)의 용액을 첨가하고, 반응 혼합물 4 시간동안 40 ℃로 가열한 후, RT에서 3 일동안 유지하였다 생성된 혼합물을 진공중에서 그의 원래 부피의 절반이 되도록 농축하고, 농축물을 수성 염산 (1.0 M, 10.0 mL)에 부었다. 혼합물을 수성 NaOH (2.0 M)로 중화시키고, DCM으로 추출하였다. 유기 추출물 염수 (2 x 30 mL)로 세척한 후, 건조시키고, 진공중에서 증발시켜 표제 화합물, 중간체 J3을 갈색 고체로 수득하였다 (328 mg, 72%); Rt 1.92 min (방법 2 산성); m/z 403 (M+H)+, (ES+).
중간체 J3(P): 4-((4-((4-(( tert -부톡시카보닐)아미노)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산.
Figure pct00108
THF 중 (12 mL) 메틸 에스테르 중간체 H3(P) (1.65 g, 3.19 mmol)의 현탁액에 수성 MeOH 중 LiOH (115 mg, 4.79 mmol) (1:1 v/v, 6.0 mL)의 용액을 첨가하고, 혼합물을 18 시간동안 40 ℃로 가열하였다. RT로 냉각후, 혼합물을 진공중에서 그의 원래 부피의 절반이 되도록 증발시키고, 생성된 농축물을 염산 (1.0 M, 20 mL)에 부었다. 형성된 침전을 여과로 수집하고, 물로 세척한 후, 진공중에서 건조하여 표제 화합물, 중간체 J3(P)을 연핑크색 고체로 수득하였다 (1.12 g, 68%); Rt 3.86 min (방법 3); m/z 503 (M+H)+, (ES+).
중간체 J4(P): 3-((4-((4-(( tert -부톡시카보닐)아미노)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-메틸벤조산.
Figure pct00109
무수 THF (15 mL) 중 중간체 G2(P) (950 mg, 2.56 mmol)의 용액에 3-아미노-5-메틸벤조산 (772 mg, 5.11 mmol) 및 p-TSA 모노하이드레이트 (97 mg, 0.51 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 24 시간동안 65 ℃로 가열한 후, RT로 냉각하였다. 생성된 혼합물을 MeOH 중 NH3 (0.7 M, 50 mL)으로 희석하고, 진공중에서 재증발시켰다. 잔사를 MeOH (30 mL)에서 연마하여 표제 화합물, 중간체 J4(P)를 갈색 고체로 수득하였다 (727 mg, 56%); Rt 3.81 min (방법 3); m/z 487 (M+H)+, (ES+).
중간체 J5(P): 3-((4-((4-((tert-부톡시카보닐)아미노)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-(트리플루오로메틸)벤조산.
Figure pct00110
무수 THF (15 mL) 중 중간체 G2(P) (1.00 g, 2.71 mmol)의 탈기 용액에 3-아미노-5-(트리플루오로메틸)벤조산 (1.11 g, 5.42 mmol) 및 p-TSA 모노하이드레이트 (103 mg, 0.542 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 24 시간동안 65 ℃로 가열한 후, RT로 냉각하였다. 생성된 혼합물을 MeOH 중 NH3 (0.7 M, 30 mL)으로 희석하고, 진공중에서 재증발시킨 뒤, 잔사를 MeOH 중 NH3 (0.7 M, 60 mL)에 재현탁시키고, 진공중에서 증발시켰다. 공증발을 한번 더 반복하고, 얻은 잔사를 MeOH (20 mL)와 연마하였다. 고체 생성물을 여과로 수집하고, 진공중에서 건조하여 표제 화합물, 중간체 J5(P)를 연갈색 고체로 수득하였다 (577 mg, 37%); Rt 4.02 min (방법 3); m/z 541 (M+H)+, (ES+).
중간체 J6(P): 3-((4-((4-(( tert -부톡시카보닐)아미노)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-메톡시벤조산.
Figure pct00111
무수 THF (150 mL) 중 중간체 G2(P) (10.0 g, 27.0 mmol)의 탈기 용액에 3-아미노-5-메톡시벤조산 (8.99 g, 53.8 mmol) 및 p-TSA 모노하이드레이트 (1.02 g, 5.38 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 24 시간동안 65 ℃로 가열한 후, RT로 냉각하고, 진공중에서 증발시켰다. 잔사를 MeOH 중 NH3 (0.7 M, 100 mL)에 현탁시키고, 진공중에서 증발시켰다. 이 과정을 반복하고 (MeOH 중 0.7 M, 250 mL), 얻은 물질을 동일한 스케일로 동일하게 반응시킨 조 생성물과 합했다. 합한 물질을 MeOH (4 x 125 mL)로 슬러리화하고, 생성된 고체를 여과로 수집한 후, 진공중에서 건조하여 표제 화합물, 중간체 J6(P)를 연한 갈색 고체로 수득하였다 (11.3 g, 30%); Rt 1.60 min (방법 2 염기성); m/z 503 (M+H)+, (ES+).
중간체 J7(P): 3-((4-((4-(( tert -부톡시카보닐)아미노)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-클로로벤조산.
Figure pct00112
무수 THF (15 mL) 중 중간체 G2(P) (1.01 g, 2.72 mmol)의 용액에 3-아미노-5-클로로벤조산 (1.11 g, 5.42 mmol) 및 p-TSA 모노하이드레이트 (103 mg, 0.542 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 24 시간동안 65 ℃로 가열한 후, 생성된 혼합물을 RT로 냉각하고, MeOH 중 NH3 (0.7 M, 60 mL)로 희석한 뒤, 진공중에서 증발시켰다. 동일 과정을 두번 더 반복하고, 잔사를 MeOH (30 mL)에서 연마하였다. 생성된 고체를 여과로 수집하여 표제 화합물, 중간체 J7(P)를 갈색 고체로 수득하였다 (374 mg, 27%); Rt 4.06 min (방법 3); m/z 507 (M+H)+, (ES+).
중간체 J8(P): 3-브로모-5-((4-((4-(( tert -부톡시카보닐)아미노)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)벤조산.
Figure pct00113
무수 THF (20 mL) 중 중간체 G2(P) (1.5 g, 4.0 mmol)의 탈기 용액에 3-아미노-5-브로모벤조산 (1.57 g, 7.26 mmol) 및 p-TSA 모노하이드레이트 (153 mg, 0.807 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 24 시간동안 65 ℃로 가열하였다. 생성된 혼합물을 RT로 냉각하고, MeOH 중 NH3 (0.7 M, 60 mL)으로 희석한 후, 진공중에서 증발시켰다. 동일 과정을 반복하고, 얻은 잔사를 MeOH (60 mL)와 연마하였다. 얻은 고체를 여과로 수집하고, 진공중에서 건조하여 표제 화합물, 중간체 J8(P)를 연갈색 고체로 수득하였다 (1.33 g, 57%); Rt 4.21 min (방법 3); m/z 552/554 (M+H)+, (ES+).
중간체 J9(P): 3-((6-((4-(( tert -부톡시카보닐)아미노)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-4-일)아미노)-5-메톡시벤조산.
Figure pct00114
무수 THF (50 mL) 중 중간체 G3(P) (5.00 g, 2.56 mmol)의 용액에 3-아미노-5-메톡시벤조산 (4.50 g, 26.9 mmol) 및 p-TSA 모노하이드레이트 (512 mg, 2.69 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 18 시간동안 65 ℃로 가열한 후, 4 시간동안 환류하에 더 가열하였다. 생성된 혼합물을 DMF (20 mL)로 희석하고, 2 시간동안 95 ℃로 가열한 후, RT에서 3 일동안 유지하였다. 혼합물을 24 시간동안 95 ℃로 재가열한 후, 냉각하고, 진공중에서 증발시켰다. 잔사를 MeOH에 용해시키고, SCX 수지 (25 g) 상에 로딩하였다. 목적 물질이 수지상에 남아 있지 않아, 로딩 분획을 수집하여 진공중에서 증발시켰다. 잔사를 NH3 (0.7 M, 200 mL)와 2회 공증발시킨 후, EtOAc/THF (10:1 v/v, 250 mL)에 용해시키고, 염수 (3 x 100 mL)로 세척하였다. 유기상을 진공중에서 증발시킨 뒤, 잔사를 MeOH (100 mL)와 연마하고, 여과로 수집한 다음, MeOH (3 x 10 mL)로 추가 세척하여 표제 화합물, 중간체 J9(P)를 갈색 고체로 수득하였다 (2.67 g, 34%); Rt 1.58 min (방법 2 염기성); m/z 503 (M+H)+, (ES+).
중간체 J10(P): 3-((4-((4-((tert-부톡시카보닐)아미노)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-에티닐벤조산.
Figure pct00115
IPA (70 mL) 중 부분 용해된 염화암모늄 (0.065 g, 1.219 mmol)의 현탁액에 메틸 3-에티닐-5-니트로벤조에이트 (0.5 g, 2.437 mmol) 및 물 (5 mL) 중 철 분말 (1.36 g, 24.35 mmol)의 혼합물을 첨가하였다. 반응물을 환류하에 2 시간동안 가열하였다. 반응물을 RT로 냉각하고, 셀라이트를 통해 여과하였다. 여액을 진공중에서 농축하여 오렌지색 왁스성 고체를 얻었다. 조 생성물을 Companion 상에서 크로마토그래피에 의해 정제하여 (40 g 칼럼, DCM 중 0-5% MeOH) 메틸 3-아미노-5-에티닐벤조에이트 (332 mg)를 연황색 고체로 수득하였다.
1H NMR (DMSO-d6) 400 MHz, δ 7.21 (t, 1H), 7.12 (s, 1H), 6.87 (t, 1H), 5.62 (s, 2H), 4.13 (s, 1H), 3.81 (s, 3H).
LCMS m/z 176 (M+H)+ (ES+)
THF/DMF (60 mL, 1:1) 중 중간체 G2(P) (1.5 g, 4.03 mmol), 상기 직전 단계에서 얻은 생성물 (1.41 g, 8.05 mmol) 및 p-TSA 모노하이드레이트 (0.15 g, 0.789 mmol)의 현탁액을 60 ℃에서 밤새 가열하였다. 반응물을 RT로 냉각하고, EtOAc (60 mL) 및 sat. aq. NaHCO3 (100 mL)로 분배하였다. 수성층을 EtOAc (2 x 60 mL)로 추출하였다. 유기 추출을 모아 물 (2 x 100 mL), 염수 (2 x 50 mL)로 세척한 후, 건조시키고 (MgSO4), 여과한 뒤, 진공중에서 농축하였다. 조 생성물을 Companion 상에서 크로마토그래피에 의해 정제하여 (80 g 칼럼, DCM 중 0-5% MeOH) 생성물을 오렌지색 고체로 얻었다. 고체를 MeOH 및 헥산의 혼합물에서 연마하여 생성물을 90% 순도의 백색 고체로 수득하였다. 나머지 10%는 탈-boc 물질인 것으로 확인되었다. 혼합물을 DCM (70 ml)에 현탁시키고, 용해를 위해 소량의 THF (5 ml)를 첨가하였다. 트리에틸아민 (0.14 ml, 0.8 mmol)에 이어 디-tert-부틸 디카보네이트 (90 mg, 0.4 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 RT에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 실리카 상에서 농축하고, 조 생성물을 Companion 상에서 크로마토그래피에 의해 정제하여 (80 g 칼럼, 헥산중 10-50% EtOAc) 메틸 3-((4-((4-((tert-부톡시카보닐)아미노)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-에티닐벤조에이트 (476 mg)를 백색 고체로 수득하였다.
1H NMR (DMSO-d6) 400 MHz, δ 9.87 (s, 1H), 9.34 (s, 1H), 8.48 (d, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.10 (d, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.82 (d, 1H), 7.49-7.54 (m, 3H), 7.49 (s, 1H), 7.43 (d, 1H), 6.63 (d, 1H), 4.21 (s, 1H), 3.83 (s, 3H), 1.52 (s, 9H).
THF (10 mL) 중 상기 직전 단계에서 얻은 생성물 (0.476 g, 0.932 mmol)의 교반 용액에 수산화나트륨 (1.0 M aq.) (10 mL, 10.00 mmol)을 첨가하고, 반응물을 RT에서 밤새 격렬히 교반하였다. 반응물의 온도를 50 ℃로 증가시키고, 교반을 6 시간동안 계속하였다. 반응물을 RT로 냉각하고, 물 (40 ml)로 희석한 뒤, THF를 진공중에서 제거하여 탁한 현탁액을 얻었다. 현탁액을 1M HCl로 pH 2가 되도록 산성화하고, 생성된 고체를 여과 분리한 후, 물로 세척하였다. 고체를 진공하에 40 ℃에서 4 시간동안 건조하여 중간체 J10(P) (436 mg)을 백색 고체로 수득하였다.
1H NMR (DMSO-d6) 400 MHz, δ 13.09 (s, 1H), 9.84 (s, 1H), 9.33 (s, 1H), 8.48 (d, 1H), 8.28 (s, 1H), 8.10 (d, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.82 (d, 1H), 7.54-7.63 (m, 3H), 7.42-7.48 (m, 2H), 6.61 (d, 1H), 4.18 (s, 1H), 1.52 (s, 9H).
중간체 M1: 3-(tert-부틸)-1-(4-(디메틸아미노)페닐)-1H-피라졸-5-카복실산.
Figure pct00116
피리딘 (350 μL, 4.33 mmol)에 이어 활성화 4A 분자체 (0.5 g)를 DCM (15 mL) 중 (4-(디메틸아미노)페닐)보론산 (575 mg, 3.48 mmol), 에틸 3-(tert-부틸)-1H-피라졸-5-카복실레이트 (425 mg, 2.166 mmol) 및 코퍼 (II)아세테이트 (590 mg, 3.25 mmol)의 교반 혼합물에 RT에서 공기 개방 상태로 첨가하였다. 혼합물을 4 시간동안 교반하였다. 에테르/이소헥산 (3:1, 300 mL)의 혼합물을 첨가하고, 고체를 여과해 냈다. 여액을 감압하에 증발하고, 잔사를 Companion 상에서 크로마토그래피에 의해 정제하여 (80 g 칼럼, 0-60% 에테르/이소헥산) 에틸 3-(tert-부틸)-1-(4-(디메틸아미노)페닐)-1H-피라졸-5-카복실레이트 (464 mg)를 무색 오일로 수득하였다.
LCMS m/z 316 (M+H)+ (ES+)
1 M 수산화나트륨 용액 (1.5 mL, 1.500 mmol)을 테트라하이드로푸란 (3 mL) 중 상기 단계 (i)에서의 생성물 (0.46 g, 1.458 mmol)의 교반 용액에 RT에서 첨가하였다. 혼합물을 RT에서 3 시간동안 교반한 후, 메탄올 (1 mL)을 첨가하고, 혼합물을 1 시간 더 교반하였다. 이어 혼합물을 1 시간동안 40 ℃로 가열한 후, 물 (10 mL)로 희석하고, 디에틸 에테르 (2 x 10 mL)로 세척하였다. 수성상을 1 M HCl (1.5 mL)로 처리한 후, 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 추출하였다. 모아진 유기상을 포화 염수 (10 mL)로 세척한 후, 건조시키고 (MgSO4), 농축하여 중간체 M1 (395 mg)을 회백색 고체로 수득하였다.
1H NMR (400 MHz; CDCl3) δ 7.28-7.22 (m, 2H), 6.91 (s, 1H), 6.74-6.67 (m, 2H), 2.98 (s, 6H), 1.35 (s, 9H).
LCMS m/z 288 (M+H)+ (ES+); 286 (M-H)- (ES-)
본 발명의 화합물 실시예
실시예 1: 3-((4-((4-(3-(3-( tert -부틸)-1-( p -톨릴)-1 H -피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리딘-2-일)아미노)-5-메톡시- N -(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드.
Figure pct00117
DCM (1.0 mL) 중 중간체 A8 (74 mg, 0.32 mmol)의 용액에 CDI (54 mg, 0.34 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 40 ℃에서 2 시간동안 유지하였다. 사전 형성된 피라졸 CDI 부가물을 함유하는 이 용액의 분취량 (310 μL, 0.099 mmol)을 THF 중 (1.0 mL) 중간체 B1 (50 mg, 0.078 mmol)의 용액에 RT에서 첨가하고, 생성된 혼합물을 이 온도에서 18 시간동안 유지하였다. 제2 분취량의 피라졸 CDI 부가물 (160 μL, 0.05 mmol)을 첨가하고, RT에서 3 시간후 반응 혼합물을 EtOAc (50 mL) 및 포화 수성 NaHCO3 (50 mL)로 분배하였다. 유기상을 분리한 후, 포화 수성 NaHCO3 (2 x 50 mL), 물 (2 x 50 mL) 및 염수 (2 x 50 mL)로 차례로 세척한 다음, 건조시키고, 진공중에서 증발시켰다. 잔사를 제조용 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물, 실시예 1을 연자주색 고체로 수득하였다 (16 mg, 22%); Rt 2.63 min (방법 3); m/z 767 (M-H)- (ES-); 1H NMR δ: 1.29 (9H, s), 2.37-2.45 (9H, 중첩 m), 3.34 (2H, m), 3.55-3.57 (4H, 중첩 m), 3.73 (3H, s), 6.11 (1H, d), 6.41 (1H, s), 6.56 (1H, dd), 6.85 (1H, m), 7.34-7.40 (3H, 중첩 m), 7.45-7.50 (3H, 중첩 m), 7.56 (1H, m), 7.65 (1H, m), 7.84 (1H, d), 7.97 (1H, d), 8.09-8.12 (2H, 중첩 m), 8.22-8.27 (2H, 중첩 m), 8.84 (1H, br s), 9.07 (1H, br s), 9.19 (1H, br s).
실시예 2: 3-((4-((4-(3-(3-( tert -부틸)-1-( p -톨릴)-1 H -피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)벤즈아미드.
Figure pct00118
THF (1.5 mL) 중 중간체 F1 (50 mg, 0.080 mmol)의 현탁액에 DIPEA (28 μL, 0.16 mmol) 및 HATU (36 mg, 0.096 mmol)를 첨가하고, RT에서 10 분후 반응 혼합물을 NH4Cl (4.7 mg, 0.088 mmol)로 처리하였다. 생성된 혼합물을 RT에서 18 시간동안 유지하고, 포화 수성 NaHCO3 (3.0 mL) 및 EtOAc (3.0 mL)로 분배하였다. 유기상을 분리한 후, 염산 (1.0 M, 3.0 mL) 및 염수 (3.0 mL)로 세척한 다음, 건조시키고, 진공중에서 증발시켰다. 잔사를 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 (SiO2, 4.0g, EtOAc 중 MeOH, 0-100%, 구배 용출) 표제 화합물, 실시예 2를 백색 고체로 수득하였다 (8 mg, 16%); Rt 2.30 min (방법 2 산성); m/z 627 (M+H)+ (ES+); m/z 625 (M-H)- (ES-); 1H NMR δ: 1.29 (9H, s), 2.40 (3H, s), 6.42 (1H, s), 6.55 (1H, d), 6.99 (1H, m), 7.23 (1H, br s), 7.29 (1H, d), 7.36-7.42 (3H, 중첩 m), 7.44-7.50 (3H, 중첩 m), 7.53-7.65 (2H, 중첩 m), 7.75 (1H, br s), 7.81 (1H, d), 7.89-7.94 (2H, 중첩 m), 8.07 (1H, d), 8.40 (1H, d), 8.75 (1H, br s), 9.13 (1H, br s), 9.60 (1H, br s).
실시예 3: 3-((4-((4-(3-(3-( tert -부틸)-1-( p -톨릴)-1 H -피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)- N -(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드.
Figure pct00119
DCM (10 ml) 중 중간체 F1 (680 mg, 1.08 mmol)의 현탁액에 옥살릴 클로라이드 (110 μL, 1.30 mmol) 및 DMF (1 방울)를 0 ℃에서 첨가하고, 생성된 적색 혼합물을 0 ℃에서 20 분동안 유지한 후, RT로 가온하였다. 1 시간후 제2 분취량의 옥살릴 클로라이드 (110 μL, 1.30 mmol)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 RT에서 2 시간동안 유지한 뒤, 진공중에서 증발시켜 적색 고체 (800 mg)를 얻었다. 이 물질을 정제 또는 특성화없이 후속 아미드 커플링에 사용하였다. DCM (1.5 mL) 중 제1 분량의 상기 수득한 고체 (60 mg, 0.080 mmol)의 현탁액에 DIPEA (32 μL, 0.19 mmol) 및 2-모르폴리노에탄아민 (13 μL, 0.10 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 RT에서 3 시간동안 유지하였다. 생성된 혼합물을 포화 aq. NaHCO3 (5.0 mL), 물 (5.0 mL) 및 염수 (5.0 mL)로 차례로 세척한 다음, 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 직접 정제하여 (SiO2, 12 g, EtOAc 중 MeOH, 0-100%, 구배 용출) 표제 화합물, 실시예 3을 연황색 고체로 수득하였다 (35 mg, 50%); Rt 1.82 min (방법 2 산성); m/z 740 (M+H)+ (ES+); 1H NMR δ: 1.29 (9H, s), 2.36-2.45 (9H, 중첩 m), 3.32 (2H, m), 3.54-3.56 (4H, 중첩 m), 6.42 (1H, s), 6.56 (1H, d), 7.01 (1H, m), 7.24 (1H, d), 7.35-7.50 (6H, 중첩 m), 7.53-7.65 (2H, 중첩 m), 7.81 (1H, d), 7.87 (1H, br s), 7.92 (1H, d), 8.07 (1H, d), 8.18 (1H, m), 8.40 (1H, d), 8.75 (1H, br s), 9.13 (1H, br s), 9.62 (1H, br s).
실시예 4: 4-((4-((4-(3-(3-( tert -부틸)-1-( p -톨릴)-1 H -피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)- N -(2-하이드록시에틸)-3-메톡시벤즈아미드.
Figure pct00120
DCM (1.0 mL) 중 CDI (55 mg, 0.34 mmol)의 용액에 중간체 A8 (77 mg, 0.34 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 RT에서 3 시간동안 유지하였다. 이 용액의 제1 분취량 (0.80 mL, 0.27 mmol)을 THF 중 (1.0 mL) 중간체 B6 (50 mg, 0.11 mmol)의 용액에 RT에서 첨가하고, 혼합물을 이 온도에서 18 시간동안 유지한 후, MeOH (2.0 mL)를 첨가하여 퀀칭하였다. 휘발물질을 진공중에서 증발시킨 뒤, 잔사를 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 (SiO2, DCM 중 12 g [MeOH 중 0.7 M NH3], 0-10%, 구배 용출) 표제 화합물, 실시예 4를 연핑크색 고체로 수득하였다 (28 mg, 34%); Rt 3.83 min (방법 3); m/z 701 (M+H)+ (ES+); 1H NMR δ: 1.29 (9H, s), 2.40 (3H, s), 3.27 (2H, m), 3.47 (2H, m), 3.84 (3H, s), 4.70 (1H, m), 6.45 (1H, s), 6.63 (1H, d), 7.14 (1H, m), 7.38-7.43 (4H, 중첩 m), 7.48 (2H, m), 7.54-7.66 (3H, 중첩 m), 7.82 (1H, m), 7.96-7.98 (2H, 중첩 m), 8.09 (1H, d), 8.25 (1H, m), 8.43 (1H, d), 8.81 (1H, s), 9.17 (1H, s).
실시예 5: N -(2-(디메틸아미노)에틸)-3-((4-((4-(3-(3-이소프로필-1-( p -톨릴)-1 H -피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-메톡시벤즈아미드.
Figure pct00121
DCM (5.0 mL) 중 CDI (380 mg, 2.30 mmol)의 용액에 중간체 A4 (0.50 g, 2.3 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 RT에서 3 시간동안 유지하였다. 생성된 용액의 분취량 (1.0 mL, 0.46 mmol)을 THF 중 (2.0 mL) 중간체 B12 (50 mg, 0.11 mmol)의 용액에 RT에서 첨가하고, 18 시간후 반응 혼합물에 MeOH (3.0 mL)를 첨가하여 퀀칭하였다. 혼합물을 진공중에서 증발시킨 뒤, 잔사를 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 (SiO2, DCM 중 12 g [MeOH 중 0.7 M NH3], 3-5%, 구배 용출) 표제 화합물, 실시예 5를 연핑크색 고체로 수득하였다 (60 mg, 76%); Rt 1.91 min (방법 2, 산성); m/z 714 (M+H)+ (ES+); 1H NMR δ: 1.24 (6H, d), 2.16 (6H, s), 2.35 (2H, t), 2.40 (3H, s), 2.88 (1H, m), 3.30 (2H, m), 3.57 (3H, s), 6.37 (1H, s), 6.53 (1H, d), 6.86 (1H, br s), 7.33 (1H, br s), 7.37-7.40 (3H, 중첩 m), 7.47 (2H, d), 7.56-7.63 (3H, 중첩 m), 7.82 (1H, d), 7.93 (1H, d), 8.05 (1H, d), 8.16 (1H, t), 8.41 (1H, d), 8.78 (1H, br s), 9.09 (1H, br s), 9.59 (1H, br s).
실시예 6: N -(2-(디메틸아미노)에틸)-3-((4-((4-(3-(3-이소프로필-1-(4-메톡시페닐)-1 H -피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-메톡시벤즈아미드.
Figure pct00122
DCM (2.0 mL) 중 CDI (43 mg, 0.26 mmol)의 용액에 중간체 A5 (61 mg, 0.26 mmol)를 RT에서 첨가하고, 혼합물을 이 온도에서 18 시간동안 유지하였다. 생성된 용액을 THF 중 (2.0 mL) 중간체 B12 (50 mg, 0.11 mmol)의 용액에 RT에서 첨가하고, 24 시간후 반응 혼합물에 MeOH (3.0 mL)를 첨가하여 퀀칭하였다. 휘발물질을 진공중에서 증발시킨 뒤, 잔사를 제조용 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물, 실시예 6의 포르메이트 염을 백색 고체로 수득하였다 (31 mg, 38%); Rt 1.78 min (방법 2 산성); m/z 367 (M+2H)2+ (ES+); 1H NMR δ: 1.24 (6H, d), 2.21 (6H, s), 2.44 (2H, t), 2.89 (1H, m), 3.32 (2H, m), 3.56 (3H, s), 3.83 (3H, s), 6.35 (1H, s), 6.53 (1H, d), 6.86 (1H, br s), 7.10 (2H, m), 7.33 (1H, br s), 7.39 (1H, d), 7.48 (2H, m), 7.56-7.62 (3H, 중첩 m), 7.82 (1H, d), 7.92 (1H, d), 8.06 (1H, d), 8.19 (1H, m), 8.41 (1H, d), 8.82 (1H, br s), 9.16 (1H, br s), 9.59 (1H, br s).
실시예 7: 3-((4-((4-(3-(3-이소프로필-1-( p -톨릴)-1 H -피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)- N -(2-모르폴리노에틸)-5-(트리플루오로메틸)벤즈아미드.
Figure pct00123
DCM (5.0 mL) 중 CDI (380 mg, 2.30 mmol)의 용액에 중간체 A4 (500 mg, 2.32 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 RT에서 3 시간동안 유지하였다. 생성된 용액의 분취량 (0.80 mL, 0.37 mmol)을 THF (1.5 mL) 중 중간체 B11 (100 mg, 0.181 mmol)의 용액에 RT에서 첨가하고, 24 시간후 반응 혼합물에 MeOH (2.0 mL)를 첨가하여 퀀칭하였다. 휘발물질을 진공중에서 증발시킨 뒤, 잔사를 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 (SiO2, 12 g, DCM 중 [MeOH 중 0.7 M NH3], 0-5%, 구배 용출) 표제 화합물, 실시예 7을 연핑크색 고체로 수득하였다 (52 mg, 34%); Rt 3.03 min (방법 3); m/z 794 (M+H)+ (ES+), m/z 792 (M-H)- (ES-); 1H NMR δ: 1.24 (6H, d), 2.44-2.47 (9H, 중첩 m), 2.89 (1H, m), 3.37 (2H, m), 3.55-3.57 (4H, 중첩 m), 6.36 (1H, s), 6.63 (1H, d), 7.36-7.42 (3H, 중첩 m), 7.46 (2H, m), 7.57 (1H, m), 7.60-7.64 (2H, 중첩 m), 7.82 (1H, m), 7.93 (1H, d), 8.06 (1H, m), 8.11 (1H, br s), 8.28 (1H, br s), 8.47 (1H, m), 8.51 (1H, m), 8.78 (1H, s), 9.09 (1H, s), 9.97 (1H, s).
실시예 8: 3-((4-((4-(3-(3-이소프로필-1-( p -톨릴)-1 H -피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-메톡시- N -(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드.
Figure pct00124
DCM (150 mL) 중 CDI (12.3 g, 76.0 mmol)의 용액에 중간체 A4 (15.0 g, 69.0 mmol)를 나누어 첨가하고, 생성된 혼합물을 RT에서 5 시간동안 유지하였다. 이 용액의 제1 분취량 (60 mL, 28 mmol)을 DCM (150 mL) 중 중간체 B13 (13.4 g, 22.0 mmol)의 용액에 RT에서 첨가하였다. 2 시간후 제2 분취량의 CDI 부가물 (9.0 mL, 4.1 mmol)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 RT에서 17 시간동안 유지한 다음, DCM (200 mL) 및 sat. aq. NaHCO3 (200 mL)로 분배하였다. 수성상을 분리한 후, DCM (2 x 200 mL)으로 추출하고, 유기 추출을 모아 aq. NaOH (2.0 M, 2 x 200 mL) 및 이어 염수 (2 x 200 mL)로 세척하였다. aq. NaHCO3 및 NaOH 세척물을 합하고, 현탁된 고체를 여과 분리하였다. 수성 여액을 DCM (2 x 200 mL) 및 2-Me THF (2 x 200 mL)로 추출하였다. 모든 유기 추출물을 합해 건조시키고, 진공중에서 농축하였다. 잔사를 수성 세척물의 여과로 분리된 고체와 합하고, 이 물질을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다 (SiO2, 330 g, EtOAc 중 [MeOH 중 0.7 M NH3], 5-10%, 구배 용출). 얻은 조 생성물을 IPA (200 mL)에서 16 시간동안 교반한 후, 여과 분리하여 표제 화합물, 실시예 8을 연갈색 고체로 수득하였다 (8.83 g, 52%); Rt 2.30 min (방법 2 염기성); m/z 756 (M+H)+ (ES+); 1H NMR δ: 1.24 (6H, d), 2.38-2.44 (9H, 중첩 m), 2.90 (1H, m), 3.31-3.36 (2H, 중첩 m), 3.54-3.56 (7H, 중첩 m), 6.37 (1H, s), 6.53 (1H, d), 6.85 (1H, m), 7.31 (1H, br. s), 7.36-7.41 (3H, 중첩 m), 7.45-7.47 (2H, 중첩 m), 7.54-7.64 (3H, 중첩 m), 7.82 (1H, m), 7.94 (1H, d), 8.06 (1H, d), 8.19 (1H, m), 8.40 (1H, d), 8.79 (1H, s), 9.10 (1H, s).
Figure pct00125
DMF (1.5 mL) 중 중간체 C1 (150 mg, 0.292 mmol) 및 중간체 D2 (163 mg, 0.585 mmol)의 현탁액에 p-TSA.H2O (111 mg, 0.555 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 3 시간동안 70 ℃로 가열한 다음, RT로 냉각하고, sat. aq. NaHCO3 (20 mL)에 부었다. 형성된 침전을 여과로 수집하고, 물 (2 x 10 mL) 및 Et2O (20 mL)로 세척한 후, 진공중에서 3 시간동안 50 ℃에서 건조하였다. 생성된 고체를 교반하면서 MeOH (10 mL)에 5 시간동안 현탁시킨 후, 여과로 수집하고, MeOH (2 x 5 mL) 및 Et2O (2 x10 mL)로 세척한 다음, 건조하여 표제 화합물, 실시예 8을 연핑크색 고체로 수득하였다 (88 mg, 40%); Rt 1.81 min (방법 4); m/z 378.5 (M+2H)2+ (ES+).
실시예 9: 3-메톡시- N -(2-모르폴리노에틸)-5-((4-((4-(3-(3-(퍼플루오로에틸)-1-( p -톨릴)-1 H -피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)벤즈아미드.
Figure pct00126
DCM (0.6 mL) 중 CDI (56 mg, 0.34 mmol)의 용액에 DCM (0.6 mL) 중 중간체 A3 (100 mg, 0.34 mmol)의 용액을 적가하고, 혼합물을 RT에서 18 시간동안 유지하였다. 생성된 용액을 THF 중 (0.5 mL) 중간체 B13 (124 mg, 0.240 mmol)의 용액에 첨가하고, 반응 혼합물을 RT에서 3 시간동안 유지한 뒤, MeOH (2.0 mL)를 첨가하여 퀀칭하였다. 휘발물질을 진공중에서 증발시킨 뒤, 잔사를 제조용 HPLC에 의해 정제하였다. 얻은 포르메이트 염을 DCM 및 포화 aq. NaHCO3으로 분배하고, 유기상을 분리한 후, 건조시키고, 진공중에서 증발시켰다. 잔사를 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 (SiO2, 12 g, DCM 중 [MeOH 중 0.7 M NH3], 0.5-6%, 구배 용출) 표제 화합물, 실시예 9를 회백색 고체로 수득하였다 (37 mg, 12%); Rt 3.14 min (방법 3); m/z 832 (M+H)+ (ES+); 1H NMR δ: 2.36-2.46 (9H, 중첩 m), 3.33 (2H, m), 3.54-3.57 (7H, 중첩 m), 6.54 (1H, d), 6.85 (1H, s), 6.93 (1H, s), 7.31 (1H, s), 7.42 (1H, d), 7.47 (2H, d), 7.54-7.59 (4H, 중첩 m), 7.63 (1H, dd), 7.83 (1H, d), 7.93 (1H, d), 8.05 (1H, d), 8.17 (1H, t), 8.40 (1H, d), 9.12 (1H, s), 9.23 (1H, s), 9.59 (1H, s).
실시예 10: 3-((4-((4-(3-(3-이소프로필-1-(6-메톡시피리딘-3-일)-1 H -피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-메톡시- N -(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드.
Figure pct00127
DCM (0.4 mL) 중 CDI (59 mg, 0.37 mmol)의 용액에 DCM (0.6 mL) 중 중간체 A16 (85 mg, 0.34 mmol)의 용액을 적가하고, 반응 혼합물을 RT에서 5 시간동안 유지하였다. 생성된 용액을 THF 중 (0.3 mL) 중간체 B13 (47 mg, 0.092 mmol)의 용액에 RT에서 첨가하고, 반응 혼합물을 RT에서 1.5 시간동안 유지한 뒤, MeOH (1.5 mL)를 첨가하여 퀀칭하였다. 휘발물질을 진공중에서 증발시킨 뒤, 잔사를 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다 (SiO2, 12 g, DCM 중 [MeOH 중 0.7 M NH3], 0-10%, 구배 용출). 얻은 순수하지 않은 물질을 제조용 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물, 실시예 10을 회백색 고체로 수득하였다 (18 mg, 6%); Rt 2.68 min (방법 3); m/z 773 (M+H)+ (ES+); 1H NMR δ: 1.24 (6H, d), 2.36-2.45 (6H, 중첩 m), 2.90 (1H, sept), 3.32 (2H, m), 3.53-3.57 (7H, 중첩 m), 3.94 (3H, s), 6.39 (1H, s), 6.54 (1H, d), 6.85 (1H, s), 7.03 (1H, d), 7.32 (1H, s), 7.40 (1H, d), 7.53-7.58 (2H, 중첩 m), 7.62 (1H, dd), 7.82 (1H, d), 7.90-7.93 (2H, 중첩 d), 8.05 (1H, d), 8.21 (1H, t), 8.39-8.41 (2H, 중첩 m), 8.85 (1H, s), 9.08 (1H, s), 9.61 (1H, s).
실시예 11: 3-((4-((4-(3-(3-이소프로필-1-(4-메톡시페닐)-1 H -피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-메톡시- N -(2-메톡시에틸)벤즈아미드.
Figure pct00128
DCM (1.0 mL) 중 CDI (88 mg, 0.54 mmol)의 용액에 중간체 A5 (126 mg, 0.540 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 RT에서 18 시간동안 유지하였다. 생성된 용액을 THF 중 (1.0 mL) 중간체 B18 (50 mg, 0.11 mmol)의 용액에 RT에서 첨가하고, 혼합물을 RT에서 5 시간동안 유지한 후, MeOH (3.0 mL)를 첨가하여 퀀칭하였다. 휘발물질을 진공중에서 증발시킨 후, 잔사를 제조용 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물, 실시예 11의 포르메이트 염을 회백색 고체로 수득하였다 (5.0 mg, 6%); Rt 2.22 min (방법 2 산성); m/z 717 (M+H)+ (ES+); 1H NMR δ: 1.24 (6H, d), 2.89 (1H, m), 3.25 (3H, s), 3.38-3.42 (4H, 중첩 m), 3.57 (3H, s), 3.83 (3H, s), 6.34 (1H, s), 6.53 (1H, d), 6.88 (1H, t), 7.10 (2H, m), 7.33 (1H, br s), 7.40 (1H, d), 7.49 (2H, m), 7.55-7.61 (3H, 중첩 m), 7.81 (1H, d), 7.92 (1H, d), 8.07 (1H, d), 8.30 (1H, t), 8.39 (1H, d), 8.47 8.93 (1H, br s), 9.25 (1H, br s), 9.59 (1H, br s).
실시예 12: 1-(3-이소프로필-1-( p -톨릴)-1 H -피라졸-5-일)-3-(4-((2-((3-메톡시-5-(모르폴린-4-카보닐)페닐)아미노)피리미딘-4-일)옥시)나프탈렌-1-일)우레아.
Figure pct00129
THF 중 (3.0 mL) 모르폴린 (13 μL, 0.15 mmol)의 용액에 트리메틸알루미늄의 용액 (헥산중 2M, 76 μL, 0.15 mmol)을 RT에서 첨가하고, 반응 혼합물을 RT에서 20 분동안 유지하였다. 생성된 혼합물을 THF 중 (3.0 mL) 중간체 E5 (50 mg, 0.076 mmol)의 용액에 첨가하고, 혼합물을 RT에서 3 일동안 유지하였다. 제2 분취량의 모르폴린-트리메틸알루미늄 부가물을 원래 부피의 절반 스케일로 하여 동일한 방식으로 제조하고, 반응 혼합물에 첨가하였다. RT에서 18 시간후 혼합물을 24 시간동안 40 ℃로 가열한 후, RT로 냉각하고, 염산 (1.0 M, 6.0 mL)으로 희석하였다. 혼합물을 EtOAc (20 mL) 및 물 (20 mL)로 분배하고, 유기상을 분리한 후, 건조시키고, 진공중에서 증발시켜 표제 화합물, 실시예 12를 회백색 고체로 수득하였다 (33 mg, 60%); Rt 2.38 min (방법 2, 산성); m/z 713 (M+H)+ (ES+); 1H NMR δ: 1.24 (6H, d), 2.40 (3H, s), 2.90 (1H, m), 3.30 (2H, m), 3.55-3.58 (9H, 중첩 m), 6.37 (1H, s), 6.43 (1H, br s), 6.57 (1H, d), 7.16 (1H, br s), 7.25 (1H, br s), 7.36-7.40 (3H, 중첩 m), 7.46 (2H, m), 7.56-7.62 (2H, 중첩 m), 7.81 (1H, d), 7.93 (1H, d), 8.06 (1H, d), 8.42 (1H, d), 8.80 (1H, br s), 9.09 (1H, br s), 9.61 (1H, br s).
실시예 13: 5-((4-((4-(3-(3-( tert -부틸)-1-( p -톨릴)-1 H -피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-2-메톡시- N -(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드.
Figure pct00130
DCM (1.0 mL) 중 CDI (44 mg, 0.27 mmol)의 용액에 중간체 A8 (62 mg, 0.27 mmol)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 RT에서 4 일동안 유지하였다. 이 용액의 제1 분취량 (0.50 mL, 0.14 mmol)을 THF 중 (1.0 mL) 중간체 B19 (50 mg, 0.089 mmol)의 용액에 RT에서 첨가하고, 반응 혼합물을 RT에서 3 일동안 유지한 뒤, MeOH (1.0 mL)를 첨가하여 퀀칭하였다. 휘발물질을 진공중에서 증발시킨 뒤, 잔사를 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 (SiO2, 12 g, DCM 중 [MeOH 중 0.7 M NH3], 0-5%, 구배 용출) 표제 화합물, 실시예 13을 연한 오렌지색 고체로 수득하였다 (41 mg, 57%); Rt 2.98 min (방법 3); m/z 770 (M+H)+ (ES+); 1H NMR δ: 1.29 (9H, s), 2.40-2.45 (9H, 중첩 m), 3.36 (2H, m), 3.57-3.59 (4H, 중첩 m), 3.80 (3H, s), 6.40 (1H, s), 6.56 (1H, d), 6.79 (1H, m), 7.38-7.43 (4H, 중첩 m), 7.47 (2H, m), 7.53-7.63 (2H, 중첩 m), 7.81 (2H, m), 7.90 (1H, d), 8.06 (1H, d), 8.30 (1H, m), 8.35 (1H, d), 8.78 (1H, s), 9.14 (1H, s), 9.51 (1H, s).
실시예 14: 3-((6-((4-(3-(3-이소프로필-1-(4-메톡시페닐)-1 H -피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-4-일)아미노)-5-메톡시- N -(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드.
Figure pct00131
DCM (1.0 mL) 중 CDI (44 mg, 0.27 mmol)의 용액에 중간체 A5 (60 mg, 0.26 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 40 ℃에서 4 시간동안 유지하였다. 생성된 용액의 분취량 (0.42 mL, 0.11 mmol)을 THF 중 (1.0 mL) 중간체 B20 (50 mg, 0.089 mmol)의 용액에 RT에서 첨가하고, 혼합물을 RT에서 18 시간동안 유지한 다음, EtOAc (50 mL) 및 포화 수성 NaHCO3 (50 mL)로 분배하였다. 유기상을 분리한 후, 포화 수성 NaHCO3 (2 x 50 mL), 물 (2 x 50 mL) 및 염수 (2 x 50 mL)로 차례로 세척한 다음, 건조시키고, 진공중에서 증발시켰다. 잔사를 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 (SiO2, 12 g, DCM 중 [MeOH 중 0.7 M NH3], 0-10%, 구배 용출) 표제 화합물, 실시예 14를 연한 오렌지색 고체로 수득하였다 (52 mg, 67%); Rt 1.68 min (방법 4); m/z 772 (M+H)+ (ES+); m/z 770 (M-H)- (ES-); 1H NMR δ: 1.24 (6H, d), 2.38-2.47 (6H, 중첩 m), 2.89 (1H, m), 3.36 (2H, m), 3.55-3.57 (4H, 중첩 m), 3.77 (3H, s), 3.84 (3H, s), 6.16 (1H, s), 6.35 (1H, s), 7.02 (1H, m), 7.12 (2H, m), 7.35 (1H, d), 7.46-7.51 (3H, 중첩 m), 7.53-7.66 (3H, 중첩 m), 7.79 (1H, d), 7.92 (1H, d), 8.05 (1H, d), 8.30-8.35 (2H, 중첩 m), 8.72 (1H, br s), 9.09 (1H, br s), 9.67 (1H, br s).
실시예 15 내지 72
Figure pct00132
Figure pct00133
Figure pct00134
Figure pct00135
Figure pct00136
Figure pct00137
Figure pct00138
Figure pct00139
Figure pct00140
Figure pct00141
Figure pct00142
Figure pct00143

Figure pct00144
Figure pct00145
Figure pct00146

Figure pct00147
Figure pct00148
Figure pct00149
Figure pct00150
Figure pct00151

실시예 73: 3-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(6-메톡시피리딘-3-일)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-에티닐-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드.
Figure pct00152
이소-프로필 아세테이트 (5 mL) 중 중간체 A11* (150 mg, 0.389 mmol) 및 중간체 B21 (198 mg, 0.389 mmol)의 교반 용액에 트리에틸아민 (10 μL, 0.072 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 70 ℃에서 90 분동안 가열하였다. 반응물을 RT로 냉각하고, 용매를 진공중에서 제거하였다. 조 생성물을 실리카겔상에서 크로마토그래피에 의해 정제하여 (40 g 칼럼, DCM 중 0-10% MeOH) 백색 고체를 얻고, 디에틸 에테르와 연마하여 표제 화합물 (198 mg)을 백색 고체로 수득하였다.
1H NMR (DMSO-d6) 400 MHz, δ 9.76 (s, 1H), 9.07 (s, 1H), 8.82 (s, 1H), 8.43 (d, 1H), 8.41-8.40 (m, 1H), 8.39-8.34 (br m, 1H), 8.05-8.03 (m, 2H), 7.93-7.90 (m, 2H), 7.87-7.83 (br s, 1H), 7.83-7.80 (m, 1H), 7.64-7.60 (m, 1H), 7.59-7.55 (m, 1H), 7.43-7.41 (m, 2H), 7.04-7.02 (m, 1H), 6.56 (d, 1H), 6.43 (s, 1H), 4.12 (s, 1H), 3.94 (s, 3H), 3.58-3.52 (br m, 4H), 3.34 ppm에서 H2O 하의 2H, 2.47-2.34 (m, 6H), 1.29 (s, 9H).
LCMS m/z 781 (M+H)+ (ES+); 779 (M-H)- (ES-)
실시예 74: 3-에티닐-N-(2-모르폴리노에틸)-5-((4-((4-(3-(3-(퍼플루오로에틸)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)벤즈아미드.
Figure pct00153
트리에틸아민 (4.00 μL, 0.029 mmol)을 이소프로필 아세테이트 (1.6 mL) 중 중간체 A3* (56.6 mg, 0.138 mmol) 및 중간체 B21 (70 mg, 0.138 mmol)의 혼합물에 첨가하고, 혼합물을 60 ℃에서 1 시간동안 가열하는 중에 농후 현탁액이 형성되었다. 반응물을 RT로 냉각하고, DCM 및 MeOH (3:1, 15 mL)로 희석하였다. 용액을 실리카겔 상에서 농축하였다. 조 생성물을 Companion 상에서 크로마토그래피에 의해 정제하여 (40 g 칼럼, DCM 중 0-10% MeOH) 표제 화합물 (78 mg)을 백색 고체로 수득하였다.
1H NMR (DMSO-d6) 400 MHz, δ 9.77 (s, 1H), 9.24 (s, 1H), 9.13 (s, 1H), 8.45 (d, 1H), 8.37 (t, 1H), 8.04-8.06 (m, 2H), 7.94 (d, 1H), 7.82-7.85 (m, 2H), 7.56-7.66 (m, 4H), 7.43-7.49 (m, 4H), 6.94 (s, 1H), 6.58 (d, 1H), 4.13 (s, 1H), 3.55 (t, 4H), 3.32-3.37 (m, 2H), 2.39-2.45 (m, 9H).
LCMS m/z 826 (M+H)+ (ES+)
실시예 75: 3-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-에티닐-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드.
Figure pct00154
RT에서 N2 하에 이소-프로필 아세테이트 (5 mL)에서 교반되는 중간체 A8* (150 mg, 0.429 mmol)에 중간체 B21 (218 mg, 0.429 mmol)에 이어 트리에틸아민 (9.27 μL, 0.067 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 90 분동안 70 ℃로 가열하였다. 반응을 중단시키고, 혼합물을 EtOAc (5 mL)로 희석한 뒤, 여과하고 EtOAc (2 x 20 mL)로 세척하였다. 침전을 진공하에 건조하여 표제 화합물 (228 mg)을 백색 고체로 수득하였다.
1H NMR (DMSO-d6) 400 MHz, δ 9.76 (s, 1H), 9.10 (s, 1H), 8.78 (s, 1H), 8.44 (d, 1H), 8.42 (br s, 1H), 8.04 (d, 2H), 7.93 (d, 1H), 7.85 (br s, 1H), 7.81(d, 1H), 7.63 (t, 1H), 7.57 (t, 1H), 7.42 (m, 6H), 6.56 (d, 1H), 6.41 (s, 1H), 4.12 (s, 1H), 3.55 (br s, 4H), 3.33 (m, 2H), 2.40 (m, 9H), 1.29 (s, 9H).
LCMS m/z 764 (M+H)+ (ES+)
실시예 76: 3-에티닐-N-(2-모르폴리노에틸)-5-((4-((4-(3-(1-(p-톨릴)-3-(1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-일)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)벤즈아미드.
Figure pct00155
트리에틸아민 (5 μL, 0.036 mmol)을 이소프로필 아세테이트 (2 mL) 중 중간체 A19* (70 mg, 0.174 mmol) 및 중간체 B21 (100 mg, 0.189 mmol)의 혼합물에 첨가하고, 혼합물을 50 ℃에서 2 시간동안 가열하였다. 생성된 고체를 여과로 수집하고, 이소프로필 아세테이트 (2 mL)에 이어 이소헥산 (2 mL)으로 세척하였다. 필터 케이크를 아세토니트릴 (2 mL)에 재현탁시키고, 여과로 수집하여 표제 화합물 (65 mg)을 백색 고체로 수득하였다.
1H NMR (DMSO-d6) 400 MHz, δ 9.75 (s, 1H), 9.14 (s, 1H), 8.88 (s, 1H), 8.44 (d, 1H), 8.35 (d, 1H), 8.10-8.01 (m, 2H), 7.94 (d, 1H), 7.89-7.79 (m, 2H), 7.68-7.54 (m, 2H), 7.54-7.37 (m, 6H), 6.60 (s, 1H), 6.56 (d, 1H), 4.11 (s, 1H), 3.60-3.51 (m, 4H), 물 피크하의 2H, 2.48-2.31 (m, 6H), 2.42 (s, 3H), 1.53 (s, 6H).
LCMS m/z 818 (M+H)+ (ES+); 816 (M-H)- (ES-)
실시예 77: 3-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(4-메톡시페닐)-1H-피라졸-5-일)우레이도)-나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-에티닐-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드.
Figure pct00156
트리에틸아민 (5 μL, 0.036 mmol)을 이소프로필 아세테이트 (2 mL) 중 중간체 A9* (70 mg, 0.192 mmol) 및 중간체 B21 (111 mg, 0.209 mmol)의 혼합물에 첨가하고, 혼합물을 50 ℃에서 2 시간동안 가열하였다. 생성된 고체를 여과로 수집하고, 이소프로필 아세테이트 (2 mL)에 이어 이소헥산 (2 mL)으로 세척하였다. 필터 케이크를 아세토니트릴 (4 mL)에 재현탁시키고, 여과로 수집하여 표제 화합물 (45 mg)을 백색 고체로 수득하였다.
1H NMR (DMSO-d6) 400 MHz, δ 9.75 (s, 1H), 9.08 (s, 1H), 8.72 (s, 1H), 8.43 (s, 1H), 8.39-8.30 (m, 1H), 8.09-8.01 (m, 2H), 7.94 (d, 1H), 7.88-7.79 (m, 2H), 7.66-7.60 (m, 1H), 7.60-7.54 (m, 1H), 7.52-7.46 (m, 2H), 7.45-7.40 (m, 2H), 7.15-7.10 (m, 2H), 6.55 (d, 1H), 6.40 (s, 1H), 4.11 (s, 1H), 3.84 (s, 3H), 3.60-3.50 (m, 4H), 3.39-3.31 (m, 2H), 2.48-2.32 (m 6H), 1.29 (s, 9H).
LCMS m/z 780 (M+H)+ (ES+); 778 (M-H)- (ES-)
실시예 78: 3-((4-((4-(3-(3-(2-시아노프로판-2-일)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)-나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-에티닐-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드.
Figure pct00157
트리에틸아민 (6.00 μL, 0.043 mmol)을 이소프로필 아세테이트 (2 mL) 중 중간체 A20* (70 mg, 0.194 mmol) 및 중간체 B21 (99 mg, 0.194 mmol)의 혼합물에 첨가하고, 혼합물 60 ℃에서 1 시간동안 가열하였더니 농후 현탁액이 형성되었다. 현탁액을 여과한 뒤, 얻은 고체를 40 ℃에서 진공하에 건조하여 표제 화합물 (118 mg)을 백색 고체로 수득하였다.
1H NMR (DMSO-d6) 400 MHz, δ 9.77 (s, 1H), 9.16 (s, 1H), 8.94 (s, 1H), 8.44 (d, 1H), 8.37 (t, 1H), 8.05-8.07 (m, 2H), 7.95 (d, 1H), 7.82-7.86 (m, 2H), 7.56-7.66 (m, 2H), 7.51 (d, 2H), 7.42-7.45 (m, 4H), 6.63 (s, 1H), 6.57 (d, 1H), 4.12 (s, 1H), 3.56 (t, 4H), 물 피크하의 2H, 2.39-2.45 (m, 6H), 2.43 (s, 3H), 1.71 (s, 6H).
LCMS m/z 388 (M+2H)2+ (ES+)
실시예 79: 3-에티닐-5-((4-((4-(3-(3-(2-메톡시프로판-2-일)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드.
Figure pct00158
트리에틸아민 (6.00 μL, 0.043 mmol)을 이소프로필 아세테이트 (2 mL) 중 중간체 A22* (70 mg, 0.192 mmol) 및 중간체 B21 (97 mg, 0.192 mmol)의 혼합물에 첨가하고, 혼합물을 60 ℃에서 1 시간동안 가열하였더니 농후 현탁액이 형성되었다 혼합물을 여과한 뒤, 생성된 고체를 40 ℃에서 진공하에 밤새 건조하였다. 물질을 Et2O 및 EtOAc (2:1)의 혼합물에서 초음파처리로 연마하고, 현탁된 고체를 여과에 의해 재분리한 후, EtOAc로 세척하였다. 물질을 40 ℃에서 진공하에 건조하여 표제 화합물 (38 mg)을 연회색 고체로 수득하였다.
1H NMR (DMSO-d6) 400 MHz, δ 9.77 (s, 1H), 9.12 (s, 1H), 8.85 (s, 1H), 8.44 (d, 1H), 8.37 (t, 1H), 8.06-8.08 (m, 2H), 7.94 (d, 1H), 7.86 (s, 1H), 7.82 (d, 1H), 7.56-7.65 (m, 2H), 7.49 (d, 2H), 7.40-7.45 (m, 4H), 6.57 (d, 1H), 6.48 (s, 1H), 4.13 (s, 1H), 3.56 (t, 4H), 물 피크하의 2H, 3.05 (s, 3H), 2.40-2.45 (m, 6H), 2.42 (s, 3H), 1.48 (s, 6H).
LCMS m/z 391 (M+2H)2+ (ES+)
실시예 80: 3-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(4-(디메틸아미노)페닐)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-에티닐-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드.
Figure pct00159
DPPA (107 μL, 0.496 mmol)를 DMF (3 mL) 중 중간체 M1 (95 mg, 0.331 mmol) 및 트리에틸아민 (92 μL, 0.661 mmol)의 교반 용액에 0 ℃에서 첨가하였다. 혼합물을 RT로 가온하고, 45 분동안 교반하였다. 중간체 B21 (177 mg, 0.347 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 2 시간동안 100 ℃로 가열하였다. 혼합물을 물 (10 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 추출하였다. 모아진 유기상을 포화 염수 (10 mL)로 세척한 후, 건조시키고 (MgSO4), 감압하에 농축하였다. 조 생성물을 Companion 상에서 크로마토그래피에 의해 정제하여 (40 g 칼럼, 0-10% MeOH/DCM) 연갈색 검을 얻었다. 검을 아세토니트릴에서 18 시간동안 교반하고, 침전을 여과로 수집하여 표제 화합물 (88 mg)을 백색 고체로 수득하였다.
1H NMR (DMSO-d6) 400 MHz, δ 9.76 (s, 1H), 9.13 (s, 1H), 8.68 (s, 1H), 8.44 (d, 1H), 8.41-8.31 (m, 1H), 8.11-8.03 (m, 2H), 7.97 (d, 1H), 7.86 (s, 1H), 7.82 (d, 1H), 7.66-7.60 (m, 1H), 7.60-7.54 (m, 1H), 7.45-7.39 (m, 2H), 7.38-7.31 (m, 2H), 6.91-6.83 (m, 2H), 6.46 (d, 1H), 6.38 (s, 1H), 4.12 (s, 1H), 3.60-3.50 (m, 4H), 물 피크하의 2H, 3.02-2.93 (m, 6H), 2.48-2.30 (s, 6H), 1.28 (s, 9H).
LCMS m/z 793 (M+H)+ (ES+); 791 (M-H)- (ES-)
LCMS m/z 813 (M+H)+ (ES+)
실시예 81: (S)-3-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-에티닐-N-(1-모르폴리노프로판-2-일)벤즈아미드.
Figure pct00160
트리에틸아민 (5.00 μL, 0.036 mmol)을 이소프로필 아세테이트 (3 mL) 중 중간체 A8* (60 mg, 0.172 mmol) 및 중간체 B22 (100 mg, 0.191 mmol)의 혼합물에 첨가하고, 혼합물을 60 ℃에서 1 시간동안 가열하였더니 겔과 같은 고체가 형성되었다. 반응물을 RT로 냉각하고, EtOAc로 희석하였다. 현탁된 고체를 여과로 수집하고, EtOAc로 세척하였다. 회수한 고체를 40 ℃에서 진공하에 밤새 건조하여 표제 화합물 (87 mg)을 베이지색 고체로 수득하였다.
1H NMR (DMSO-d6) 400 MHz, δ 9.74 (s, 1H), 9.08 (s, 1H), 8.76 (s, 1H), 8.44 (d, 1H), 8.13 (d, 1H), 8.05-8.08 (m, 2H), 7.94 (d, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.83 (d, 1H), 7.56-7.65 (m, 2H), 7.37-7.48 (m, 6H), 6.55 (d, 1H), 6.41 (s, 1H), 4.13-4.20 (m, 1H), 4.11 (s, 1H), 3.53 (t, 4H), 2.34-2.44 (m, 8H), 2.26 (dd, 1H), 1.30 (s, 9H), 1.12 (d, 3H).
LCMS m/z 778 (M+H)+ (ES+)
실시예 82: 3-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-에티닐-N-(2-메틸-1-모르폴리노프로판-2-일)벤즈아미드.
Figure pct00161
트리에틸아민 (10.0 μL, 0.072 mmol)을 이소프로필 아세테이트 (4 mL) 중 중간체 A8* (118 mg, 0.339 mmol) 및 중간체 B23 (200 mg, 0.373 mmol)의 혼합물에 첨가하고, 혼합물을 60 ℃에서 1 시간동안 가열하였더니 겔과 같은 고체가 형성되었다. 반응 혼합물을 RT로 냉각하고, EtOAc로 희석하였다. 고체를 여과로 수집하고 EtOAc로 세척하였다. 얻은 고체를 40 ℃에서 진공하에 건조하여 표제 화합물 (201 mg)을 백색 고체로 수득하였다.
1H NMR (DMSO-d6) 400 MHz, δ 9.72 (s, 1H), 9.09 (s, 1H), 8.76 (s, 1H), 8.44 (d, 1H), 8.07 (d, 1H), 7.93-7.97 (m, 2H), 7.87 (s, 1H), 7.83 (d, 1H), 7.56-7.66 (m, 3H), 7.37-7.46 (m, 6H), 6.55 (d, 1H), 6.41 (s, 1H), 4.09 (s, 1H), 3.53 (t, 4H), 2.61 (s, 2H), 2.47 (t, 4H), 2.41 (s, 3H), 1.31 (s, 6H), 1.30 (s, 9H).
LCMS m/z 793 (M+H)+ (ES+)
실시예 83: (R)-3-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-에티닐-N-(1-모르폴리노프로판-2-일)벤즈아미드.
Figure pct00162
트리에틸아민 (6.00 μL, 0.043 mmol)을 이소프로필 아세테이트 (4 mL) 중 중간체 A8* (72.9 mg, 0.209 mmol) 및 중간체 B24 (120 mg, 0.230 mmol)의 혼합물에 첨가하고, 혼합물을 60 ℃에서 시간동안 가열하였더니 겔과 같은 고체가 형성되었다. 반응물을 RT로 냉각하고, EtOAc로 희석하였다. 현탁된 고체를 여과로 수집하고, EtOAc로 세척하였다. 회수한 고체를 40 ℃에서 진공하에 밤새 건조하여 표제 화합물 (111 mg)을 연한 베이지색 고체로 수득하였다.
1H NMR (DMSO-d6) 400 MHz, δ 9.74 (s, 1H), 9.08 (s, 1H), 8.76 (s, 1H), 8.44 (d, 1H), 8.13 (d, 1H), 8.05-8.08 (m, 2H), 7.94 (d, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.83 (d, 1H), 7.56-7.65 (m, 2H), 7.37-7.48 (m, 6H), 6.55 (d, 1H), 6.41 (s, 1H), 4.13-4.20 (m, 1H), 4.11 (s, 1H), 3.53 (t, 4H), 2.34-2.44 (m, 8H), 2.26 (dd, 1H), 1.30 (s, 9H), 1.12 (d, 3H).
LCMS m/z 390 (M+2H)2+ (ES+)
실시예 84: 3-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(4-메톡시페닐)-1H-피라졸-5-일)우레이도)-나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-에티닐-N-(2-메톡시에틸)벤즈아미드.
Figure pct00163
DMF (4 mL) 중 중간체 C3 (152 mg, 0.274 mmol) 및 중간체 D4 (95 mg, 0.411 mmol)의 교반 용액에 p-TSA 모노하이드레이트 (26 mg, 0.137 mmol)를 첨가하였다. 생성된 용액을 60 ℃에서 밤새 가열하였다. 반응물을 RT로 냉각하고, EtOAc (30 mL) 및 sat aq. NaHCO3 (30 mL)로 분배하였다. 수성상을 EtOAc (30 mL)로 역추출하였다. 유기 추출을 모아 물 (2 x 50 mL), 염수 (50 mL)로 세척한 후, 건조시키고 (MgSO4), 여과한 뒤, 진공중에서 농축하여 오렌지색 고체 (236 mg)를 얻었다. 조 생성물을 실리카겔상에서 크로마토그래피에 의해 정제하여 (40 g 칼럼, DCM 중 0-10% MeOH) 핑크색 고체를 얻고 Et2O와 연마하여 표제 화합물 (79 mg)을 백색 고체로 수득하였다.
1H NMR (DMSO-d6) 400 MHz, δ 9.75 (s, 1H), 9.07 (s, 1H), 8.72 (s, 1H), 8.47 (t, 1H), 8.43 (d, 1H), 8.06-8.04 (m, 2H), 7.93 (d, 1H), 7.86 (br s, 1H), 7.81 (d,1H), 7.64-7.54 (m, 2H), 7.50-7.46 (m, 2H), 7.44-7.41 (m, 2H), 7.14-7.10 (m, 2H), 6.55 (d, 1H), 6.39 (s, 1H), 4.11 (s, 1H), 3.84 (s, 3H), 3.45-3.35 (m, 4H), 3.25 (s, 3H), 1.28 (s, 9H).
LCMS m/z 725 (M+H)+ (ES+); 723 (M-H)- (ES-)
실시예 85: (S)-3-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(4-메톡시페닐)-1H-피라졸-5-일)우레이도)-나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-에티닐-N-(1-메톡시프로판-2-일)벤즈아미드.
Figure pct00164
DMF (4 mL) 중 중간체 C3 (150 mg, 0.271 mmol) 및 중간체 D6 (103 mg, 0.406 mmol)의 교반 용액에 p-TSA 모노하이드레이트 (26 mg, 0.137 mmol)를 첨가하였다. 생성된 용액을 60 ℃에서 밤새 가열하였다. 반응물을 RT로 냉각하고, EtOAc (30 mL) 및 sat aq. NaHCO3 (30 mL)로 분배하였다. 수성상을 EtOAc (30 mL)로 역추출하였다. 유기 추출을 모아 물 (2 x 50 mL), 염수 (50 mL)로 세척한 후, 건조시키고 (MgSO4), 여과한 뒤, 진공중에서 농축하여 오렌지색 고체 (221 mg)를 얻었다. 조 생성물을 실리카겔상에서 크로마토그래피에 의해 정제하여 (40 g 칼럼, DCM 중 0-10% MeOH) 연핑크색 고체 (96 mg)를 얻고, Et2O에 이어 MeCN과 연마하여 표제 화합물 (50 mg)을 연핑크색 고체로 수득하였다.
1H NMR (DMSO-d6) 400 MHz, δ 9.75 (s, 1H), 9.08 (s, 1H), 8.72 (s, 1H), 8.43 (d, 1H), 8.21 (d, 1H), 8.06-8.04 (m, 2H), 7.94 (d, 1H), 7.88 (br s, 1H), 7.83-7.81 (m,1H), 7.64-7.55 (m, 2H), 7.50-7.46 (m, 3H), 7.42 (d, 1H), 7.14-7.10 (m, 2H), 6.54 (d, 1H), 6.39 (s, 1H), 4.18-4.11 (m, 2H), 3.84 (s, 3H), 3.39-3.35 (m, 1H), 3.26-3.23 (m, 4H), 1.28 (s, 9H), 1.10 (d, 3H).
LCMS m/z 739 (M+H)+ (ES+); 737 (M-H)- (ES-)
실시예 86: 3-메톡시-5-((4-((4-(3-(1-(4-메톡시페닐)-3-(프로프-1-엔-2-일)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드.
Figure pct00165
표제 화합물을 상술된 것과 유사한 방법으로 제조할 수 있다 (예를 들어 중간체 A21을 페닐 클로로포르메이트와 반응시킨 다음, 생성된 페닐 카바메이트를 중간체 B13과 반응시킴).
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.59 (s, 1H), 9.11 (s, 1H), 8.78 (s, 1H), 8.40 (d, 1H), 8.18 (br t, 1H), 8.05 (d, 1H), 7.94 (d, 1H0, 7.82 (d, 1H), 7.64-7.50 (m, 5H), 7.41(d, 1H), 7.32 (s, 1H), 7.14 (d, 2H), 6.85 (s, 1H), 6.70 (s, 1H), 6.54 (d, 1H), 5.52 (s, 1H), 5.10 (s, 1H), 3.85 (s, 3H), 3.58-3.52 (m, 7H), 3.37-3.34 (m, 2H), 2.44-2.36 (m, 6H), 2.06 (s, 3H).
LCMS m/z 768 (M-H)- (ES-)
실시예 87: 3-((4-(2,3-디클로로-4-(3-(3-이소프로필-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)페녹시)피리미딘-2-일)아미노)-5-에티닐-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드.
Figure pct00166
중간체 C4 (150 mg, 0.282 mmol)를 DMF (1.5 mL)에 용해시키고 중간체 D1 (100 mg, 0.367 mmol) 및 p-TSA 모노하이드레이트 (80 mg, 0.423 mmol)에 첨가하였다. 70 ℃ (블록 온도)에서 4 시간동안 교반한 뒤, sat. aq. NaHCO3 용액 (20 mL)에 붓고, 생성물을 EtOAc (2 x 20 mL)로 추출하였다. 유기물을 20%w/w 염수 용액 (20 mL)으로 벌키화하고 세척한 후, 건조시키고 (MgSO4), 여과한 뒤, 증발하여 갈색 고체를 얻었다. 조 생성물을 Companion 상에서 크로마토그래피에 의해 정제하고 (40 g 칼럼, 2% MeOH:DCM - 8%), 3 x MeCN (3 ml)과 연마하여 표제 화합물 (93 mg)을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.87 (s, 1H), 9.20 (s, 1H), 8.80 (s, 1H), 8.45 (d, 1H), 8.37 (s, 1H), 8.14 (d, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.84 (s, 1H), 7.52 - 7.26 (m, 6H), 6.63 (d, 1H), 6.35 (s, 1H), 4.05 (s, 1H), 3.59 - 3.52 (m, 4H), 2.97 - 2.82 (m, 1H), 2.47 - 2.33 (m, 9H), 1.23 (d, 6H). 물 피크로 가려진 2H 3.32 ppm
LCMS m/z 768/770 (M+H)+ (ES+)
실시예 88: 3-((4-(2,3-디플루오로-4-(3-(3-이소프로필-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)페녹시)피리미딘-2-일)아미노)-5-에티닐-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드.
Figure pct00167
THF/DMF (4 mL,1:1) 중 중간체 C5 (151 mg, 0.303 mmol)의 교반 용액에 p-TSA 모노하이드레이트 (86 mg, 0.454 mmol)에 이어 중간체 D1 (124 mg, 0.454 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 60 ℃에서 밤새 가열한 후, RT로 냉각하고, EtOAc (30 mL) 및 sat. aq. NaHCO3 용액 (20 mL)로 분배하였다. 수성층을 EtOAc (2 x 30 mL)로 추출하였다. 유기 추출을 모아 물 (3 x 40 mL), 염수 (50 mL)로 세척한 후, 건조시키고 (MgSO4), 여과한 뒤, 진공중에서 농축하여 크림색 고체를 얻었다. 조 생성물을 실리카겔상에서 크로마토그래피에 의해 정제 (80 g 칼럼, DCM 중 0-10% MeOH)한 후 제조용 HPLC에 의해 정제하여 (Waters, 산성 (0.1% 포름산), Waters X-Select Prep-C18, 5 μL, 19x50 mm 칼럼, 물중 25-50% MeCN) 표제 화합물 0.2포름산 (65 mg)을 백색 고체로 수득하였다.
1H NMR (DMSO-d6) 400 MHz, δ 9.88 (s, 1H) 9.14 (s, 1H) 8.88 (s, 1H) 8.46 (d, 1H) 8.34 (t, 1H) 7.97-7.92 (br m, 2H) 7.84 (s, 1H) 7.43-7.40 (m, 3H) 7.37-7.35 (m, 2H) 7.23-7.18 (m, 1H) 6.65 (d, 1H) 6.35 (s, 1H) 4.01 (s, 1H) 3.56-3.53 (m, 4H), 3.32 ppm에서 물 피크하의 2H, 2.92-2.85 (m, 1H) 2.43 (t, 2H) 2.41-2.35 (br m, 7H) 1.23 (d, 6H).
LCMS m/z 736 (M+H)+ (ES+); 734 (M-H)- (ES-)
실시예 89: 3-((4-(2,3-디클로로-4-(3-(3-이소프로필-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)페녹시)피리미딘-2-일)아미노)-5-에티닐벤즈아미드.
Figure pct00168
중간체 C4 (150 mg, 0.282 mmol)를 DMF (2 mL)에 용해시키고, 중간체 D7 (90 mg, 0.564 mmol) 및 p-TSA 모노하이드레이트 (26.8 mg, 0.141 mmol)에 첨가하였다. 70 ℃ (블록 온도)에서 4 시간동안 교반한 후, sat. aq. NaHCO3 용액 (20 mL)에 붓고, 생성물을 EtOAc (2 x 20 mL)로 추출하였다. 유기물을 20%w/w 염수 용액 (20 mL)로 벌키화하고 세척한 후, 건조시키고 (MgSO4), 여과한 뒤, 증발하여 황색 고체를 얻었다. 실리카 상에 사전 흡착시키고, 실리카겔상에서 크로마토그래피에 의해 정제 (40 g 칼럼, 4%MeOH:DCM - 8%)한 후, MeCN (4 x 3 mL)과 연마하여 표제 화합물 (40 mg)을 무색 고체로 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.83 (s, 1H), 9.17 (s, 1H), 8.78 (s, 1H), 8.46 (d, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.92 (s, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.49 (t, 2H), 7.46 - 7.40 (m, 3H), 7.39 - 7.33 (m, 3H), 6.62 (d, 1H), 6.35 (s, 1H), 4.01 (s, 1H), 2.90 (hept, 1H), 2.39 (s, 3H), 1.24 (d, 6H).
LCMS m/z 655/657(M+H)+ (ES+)
실시예 90: 3-((4-(2,3-디클로로-4-(3-(3-이소프로필-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)페녹시)피리미딘-2-일)아미노)-N-(2-(디메틸아미노)에틸)-5-에티닐벤즈아미드.
Figure pct00169
중간체 C4 (150 mg, 0.282 mmol)를 DMF (2 mL)에 용해시키고, 중간체 D8 (130 mg, 0.564 mmol) 및 p-TSA 모노하이드레이트 (80 mg, 0.423 mmol)에 첨가하였다. 70 ℃ (블록 온도)에서 4 시간동안 교반한 후, sat. NaHCO3 용액 (20 mL)에 붓고, 생성물을 EtOAc (2 x 20 mL)로 추출하였다. 유기물을 20%w/w 염수 용액 (20 mL)로 벌키화하고 세척한 후, 건조시키고 (MgSO4), 여과한 뒤, 증발하여 무색 고체를 얻었다. MeCN (3 x 2 mL)과 연마하여 표제 화합물 (90 mg)을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.84 (s, 1H), 9.18 (s, 1H), 8.78 (s, 1H), 8.45 (d, 1H), 8.34 (t, 1H), 8.13 (d,1H), 7.97 (s, 1H), 7.85 (s, 1H), 7.46 - 7.39 (m, 4H), 7.38 - 7.33 (m, 2H), 6.62 (d, 1H), 6.35 (s, 1H), 4.02 (s, 1H), 3.37 - 3.26 (m, 2H), 2.89 (hept, 1H), 2.43 - 2.33 (m, 5H), 2.17 (s, 6H), 1.24 (d, 6H).
LCMS m/z 726/728 (M+H)+ (ES+)
실시예 91: 3-((6-(4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(4-메톡시페닐)-1H-피라졸-5-일)우레이도)-2,3-디메틸페녹시)피리미딘-4-일)아미노)-5-메톡시-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드.
Figure pct00170
표제 화합물을 상술된 것과 유사한 방법으로 제조할 수 있다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.70 (s, 1H), 8.60 (s, 1H), 8.38-8.35 (m, 2H), 8.18 (s, 1H), 7.56-7.43 (m, 5H), 7.10 (d, 2H), 7.02 (s, 1H), 6.94 (d, 1H), 6.33 (s, 1H), 6.04 (s, 1H), 3.83 (s, 3H), 3.79 (s, 3H), 3.57 (t, 4H), 2.47-2.38 (m, 6H), 2.12 (s, 3H), 2.02 (s, 3H), 1.27 (s, 9H). 3.35에서 물 피크하의 2H
LCMS m/z 382.6 (M+2H)2+ (ES+)
생물학적 시험: 실험 방법
효소 결합 분석 (키노메스칸)
본원에 기술된 화합물의 키나제 효소 결합 활성을 고정화 리간드에 대한 활성 부위-특이적 경쟁 결합을 측정하는 독점 어세이를 사용하여 측정하였다(Fabian, M.A. et al., Nature Biotechnol., 2005, 23:329-336). 이 어세이는 DiscoverX(이전 명칭 Ambit; San Diego, CA)로 수행되었다. 시험 화합물과의 인큐베이션으로 생성된 저해 백분율이 비-저해 대조군에 대해 계산되었다.
효소 저해 어세이
본원에 기술된 화합물의 효소 저해 활성을 공여체와 수용체 형광단(fluorophore)(Z-LYTE, Invitrogen Ltd., Paisley, UK) 둘다로 표지된 합성 펩티드를 사용하여 FRET에 의해 측정하였다.
p38 MAPKα 효소 저해
하기 두 어세이 변법을 이용하여 p38 MAPKα 저해를 결정하였다.
방법 1
p38 MAPKα 이소폼(MAPK14: Invitrogen)에 대한 시험 화합물의 저해 활성을 하류 분자, MAPKAP-K2의 활성화/인산화 수준을 측정하여 간접적으로 평가하였다. p38 MAPKα 단백질(80 ng/mL, 2.5 μL)을 시험 화합물(4 μg/mL, 0.4 μg/mL, 0.04 μg/mL 또는 0.004 μg/mL 농도, 2.5 μL)과 2 시간동안 RT에서 혼합하였다. p38α 불활성 표적 MAPKAP-K2(Invitrogen, 600 ng/mL)와 FRET 펩티드(8 μM; MAPKAP-K2의 인산화 표적)의 혼합 용액(2.5 μL)을 첨가하고, ATP(40 μM, 2.5μL)를 첨가하여 키나제 반응을 개시하였다. 혼합물을 1 시간동안 RT에서 인큐베이션하였다. 형광 마이크로플레이트 판독기(Varioskan® Flash, ThermoFisher Scientific)에서 검출하기 전에 전개 시약(프로테아제, 5μL)을 1 시간동안 첨가하였다.
방법 2
이 방법은 시험 화합물과의 혼합을 위해 더 높은 농도의 p38 MAPKα 단백질(80 ng/mL 단백질 2.5 μL 대신 200 ng/mL 단백질 2.5 μL)을 사용하는 것만을 제외하고 상기 방법 1과 동일한 단계를 따랐다.
p38 MAPKγ 효소 저해
p38MAPKγ(MAPK12: Invitrogen)에 대한 본 발명 화합물의 저해 활성을 상기한 것과 유사한 방법으로 평가하였다. 효소(800 ng/mL, 2.5 μL)를 시험 화합물(4 μg/mL, 0.4 μg/mL, 0.04 μg/mL 또는 0.004 μg/mL 농도, 2.5 μL)과 2 시간동안 RT에서 인큐베이션하였다. FRET 펩티드(8 μM, 2.5 μL), 및 적절한 ATP 용액(2.5 μL, 400 μM)을 효소/화합물 혼합물에 첨가하고 1 시간동안 인큐베이션하였다. 형광 마이크로플레이트 판독기(Varioskan® Flash, ThermoFisher Scientific)에서 검출하기 전에 전개 시약(프로테아제, 5 μL)을 1 시간동안 첨가하였다.
c-Src 및 Syk 효소 저해
c-Src 및 Syk 효소(Invitrogen)에 대한 본 발명 화합물의 저해 활성을 상기한 것과 유사한 방법으로 평가하였다. 관련 효소(각각 3000 ng/mL 또는 2000 ng/mL 농도, 2.5 μL)를 시험 화합물(4 μg/mL, 0.4 μg/mL, 0.04 μg/mL, 또는 0.004 μg/mL, 각각 2.5 μL)과 2 시간동안 RT에서 인큐베이션하였다. FRET 펩티드(8 μM, 2.5 μL), 및 적절한 ATP 용액(2.5μL, c-Src에 대해 800 μM, 및 Syk에 대해 60 μM ATP)을 효소/화합물 혼합물에 첨가하고 1 시간동안 인큐베이션하였다. 형광 마이크로플레이트 판독기(Varioskan® Flash, ThermoFisher Scientific)에서 검출하기 전에 전개 시약(프로테아제, 5μL)을 1 시간동안 첨가하였다.
GSK 3α 효소 저해
하기 두 어세이 변법을 이용하여 GSK 3α 저해를 결정하였다.
방법 1
GSK 3α 효소 이소폼(Invitrogen)에 대한 시험 화합물의 저해 활성을, 표적 펩티드의 활성화/인산화 수준을 측정하여 평가하였다. GSK3-α 단백질(500 ng/mL, 2.5 μL)을 시험 화합물(4 μg/mL, 0.4 μg/mL, 0.04 μg/mL, 또는 0.004 μg/mL 농도, 2.5 μL)과 2 시간동안 RT에서 혼합하였다. GSK3α의 인산화 표적인 FRET 펩티드(8 μM, 2.5 μL)와 ATP(40 μM, 2.5 μL)를 효소/화합물 혼합물에 첨가하고 얻은 혼합물을 1 시간동안 인큐베이션하였다. 형광 마이크로플레이트 판독기(Varioskan® Flash, ThermoFisher Scientific)에서 검출하기 전에 전개 시약(프로테아제, 5 μL)을 1 시간동안 첨가하였다.
모든 경우에, 부위-특이적 프로테아제가 인산화되지 않은 펩티드만을 절단하여 FRET 시그널을 제거하였다. 각 반응의 인산화 수준을 플루오레신 방출(수용체)에 대한 쿠마린 방출(공여체)의 비율로 계산하였으며, 여기서 높은 비율은 높은 인산화 수준을 나타내고, 낮은 비율은 낮은 인산화 수준을 나타낸다. 각 반응의 저해 백분율을 비저해 대조군에 대해 계산하고, 이어서 50% 저해 농도(IC50 값)를 농도-반응 곡선으로부터 계산하였다.
방법 2
이 방법은 시험 화합물과 GSK3-α 단백질의 혼합 시간을 단축(2 시간 대신 105 분)시킨 것만을 제외하고 상기 방법 1과 동일한 단계를 따랐다.
세포 어세이
(a) d-U937 세포에서 LPS로 유도된 TNFα / IL-8의 분비
인간 단핵구 세포주인 U937 세포를 PMA(100 ng/mL)와 48 내지 72 시간동안 인큐베이션하여 대식세포 종류 세포로 분화시켰다. 세포를 최종 농도의 시험 화합물과 2 시간동안 사전 인큐베이션한 다음, LPS(0.1 μg/mL; E. Coli에서 유래: O111:B4, Sigma)로 4 시간동안 자극하였다. 상등액을 샌드위치 ELISA(Duo-set, R&D systems)로 TNFα 및 IL-8 농도 측정을 위해 수집하였다. TNFα 생산의 저해를 각 농도의 시험 화합물에서 10 μg/mL의 BIRB796에 의해 비히클 대조군에 대한 비교로 얻어진 것의 백분율로서 계산하였다. 상대적 50% 유효 농도(REC50)를 얻어진 농도-반응 곡선으로부터 결정하였다. IL-8 생산의 저해를 각 농도의 시험 화합물에서 비히클 대조군과 비교하여 계산하였다. 50% 저해 농도(IC50)를 얻어진 농도-반응 곡선으로부터 결정하였다.
(b) PBMC 세포에서 LPS로 유도된 TNFα/ IL-8의 분비
건강한 대상체로부터의 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC)를 밀도 구배(Lymphoprep, Axis-Shield Healthcare)를 이용하여 전혈에서 분리하였다. PBMC를 96 웰 플레이트에 시딩하고 목적 농도의 화합물로 2 시간 처리한 후, 1 ng/ml LPS (Escherichi Coli 0111:B4, Sigma Aldrich 제품)를 정상 조직 배양 조건 (37℃, 5% CO2) 하에서 24 시간동안 첨가하였다. 상등액을 샌드위치 ELISA(Duo-set, R&D systems)로 TNFα 농도 측정을 위해 수집하고, 형광 마이크로플레이트 판독기(Varioskan® Flash, ThermoFisher Scientific)에서 판독하였다. IL-8 및 TNFα 생산의 50% 저해 농도(IC50)를 용량 반응 곡선으로부터 계산하였다.
(c) CD3/CD28 자극 PBMC 세포에서 IL-2 및 IFN 감마 분비
건강한 대상체로부터의 PBMC를 밀도 구배(Lymphoprep, Axis-Shield Healthcare)를 이용하여 전혈에서 분리하였다. 세포를 CD3/CD38 단클론 항체(각각 0.3ug/ml eBioscience 및 3ug/ml BD Pharmingen)의 혼합물로 예비코팅한 96 웰 플레이트에 첨가하였다. 이어 목적 농도의 화합물을 웰에 첨가하고, 플레이트를 3 일동안 전상 조직 배양 조건하에 두었다. 상등액을 수집하고, IL-2 및 IFN 감마 방출을 샌드위치 ELISA(Duo-set, R&D System)로 측정하였다. IC50을 용량 반응 곡선으로부터 결정하였다.
(d) HT29 세포에서 IL-1β로 유도된 IL-8의 분비
HT29 세포의 인간 결장 선암 세포주를 96 웰 플레이트에 플레이팅하고(24 시간), 목적 농도의 화합물로 2 시간동안 예비 처리한 뒤, 5ng/ml의 IL-1β(Abcam)를 24 시간에 걸쳐 첨가하였다. 상등액을 수집하고, IL-8을 샌드위치 ELISA(Duo-set, R&D System)로 정량하였다. IC50을 용량 반응 곡선으로부터 결정하였다.
(e) 초기 대식세포에서 LPS로 유도된 IL-8 및 TNFα의 분비
건강한 대상체로부터의 PBMC를 밀도 경사 (Lymphoprep, Axis-Shield Healthcare)를 이용하여 전혈에서 분리하였다. 세포를 2 시간동안 인큐베이션하고, 세척에 의해 비부착 세포를 제거하였다. 세포를 대식세포와 구별하기 위해, 세포를 5ng/ml의 GM-CSF(Peprotech)와 7 일동안 정상 조직 배양 조건하에 인큐베이션하였다. 그 후, 10 ng/ml LPS로 24 시간동안 자극하기 이전에, 2 시간의 전처리 동안 화합물을 목적 농도로 세포에 첨가하였다. 상등액을 거둬들이고, IL-8 및 TNFα의 분비를 샌드위치(Sandwich) ELISA(Duo-set, R&D System)로 결정하였다. IC50을 용량 반응 곡선으로부터 결정하였다.
(f) BEAS2B 세포에서 폴리 I:C로 유도된 ICAM-1의 발현
폴리 I:C가 본 연구에서 간단한, RNA 바이러스 미믹(mimic)으로 사용되었다. 폴리 I:C-올리고펙타민 혼합물 (각각, 1 ㎍/mL 폴리 I:C, ±2% 올리고펙타민, 25 μL; Invivogen Ltd., San Diego, CA, 및 Invitrogen, Carlsbad, CA)을 BEAS2B 세포 (인간 기관지 상피세포, ATCC)로 감염시켰다. 세포를 최종 농도의 시험 화합물로 2 시간동안 예비인큐베이션(pre-incubate)하고, 세포 표면에서의 ICAM1의 발현 수준을 세포-기반 ELISA를 통해 측정하였다. 폴리 I:C 감염 후 18 시간이 된 시점에서, 세포를 PBS(100 μL) 내의 4% 포름알데히드로 고정한 후, 0.1% 아지드화 나트륨 및 1% 과산화수소를 포함하는 세척 완충제(100 μL, PBS 내 0.05% Tween: PBS-Tween)을 첨가하여 내인성 퍼옥시다제(endogenous peroxidase)를 퀀칭하였다. 세포를 세척 완충제(3 x 200μL)로 세척하고, PBS-Tween(100 μL) 내의 5% 우유로 1 시간동안 웰(well)을 블록킹한 후, 세포를 1% BSA PBS 내의 항-인간 ICAM-1 항체(50μL; Cell Signalling Technology, Danvers, MA)와 밤새 4 ℃에서 인큐베이션하였다.
세포를 PBS-Tween(3 x 200 μL)으로 세척한 후, 제2차 항체(100μL; HRP가 콘쥬게이션된 항-토끼 IgG, Dako Ltd., Glostrup, Denmark)와 인큐베이션하였다. 그 후, 세포를 기질(50 μL)과 2-20 분동안 인큐베이션하고, 뒤이어 정지액(50 μL, 1N H2SO4)을 첨가하였다. 분광 광도계를 이용하여 기준 파장 655 nm에 대한 450 nm의 흡광도를 확인하여 ICAM-1를 측정하였다. 세포를 PBS-Tween(3 x 200 μL)으로 세척하고, 크리스탈 바이올렛 염색(PBS 내의 2% 용액 50 μL) 및 증류수 내의 1% SDS 용액(100 μL)으로 용리(elution)시킨 후 595 nm에서의 흡광도를 확인하여 각각의 웰 내의 총 세포 수를 측정하였다. 측정된 OD 450-655 값을 각각의 웰 내의 OD595 값으로 나누어 세포 수에 대해 보정하였다. 비히클 대조군(vehicle control)과 비교하여 시험 화합물의 각각의 농도에서의 ICAM-1 발현 저해를 계산하였다. 50% 저해 농도(IC50)를 생성된 농도-반응 곡선으로부터 결정하였다.
(g) T 세포 증식
건강한 대상체로부터의 PBMC를 밀도 경사(Lymphoprep, Axis-Shield Healthcare)를 이용하여 전혈에서 분리하였다. 제조자의 지시(Miltenyi Biotec 130-091-155)에 따라 음성 자기 세포 분류(negative magnetic cell sorting)에 의하여 림프구 분율을 먼저 CD4+ T 세포에 대해 가장 풍부하게 하였다. 그 후, 제조자의 지시(130-045-901)에 따라 마이크로비드를 이용한 CD45RA+ 세포의 양성 자기 선택(positive magnetic selection)을 이용하여 미접촉(Naive) CD4+ T 세포를 분리하였다. 96 웰 평평한 바닥 플레이트(Corning Costar) 상의 100 μL RPMI/10%FBS에 각 웰 당 2x105 개의 세포를 플레이팅하였다. 25 μL의 시험 화합물을 정상 배지에서 적절한 농도(8x 최종 농도)로 희석하고, 플레이트 상의 듀플리케이트 웰(duplicate well)에 첨가하여 0.03 ng/mL-250 ng/mL 범위의 용량 반응을 달성하였다. DMSO를 음성 대조군으로서 첨가하였다. 플레이트를 1 ㎍/mL의 항-CD3(OKT3; eBioscience)로 자극하기 전에 2 시간동안 예비인큐베이션 하였다. 72 시간 후, 각각의 웰 내의 배지를 10 μM BrdU (Roche)를 포함하는 새로운 배지 150 μL로 교체하였다. 16 시간 후, 상등액을 제거하고, 플레이트를 건조시킨 후, 제조자의 지시(Roche)에 따라 각각의 웰에 100 μL의 고정/변성 용액을 첨가하여 세포를 고정시켰다. 항-BrdU 검출 항체의 첨가 및 실온에서 90 분동안 인큐베이션하기 전에 플레이트를 PBS로 한번 세척하였다. 그 후, 100 μL 기질 용액의 첨가에 의해 공급 및 전개된 세척 완충제로 플레이트를 부드럽게 3번 세척하였다. 50 μL의 1M H2SO4를 첨가하여 반응을 중지시키고, 플레이트 판독기(Varioskan® Flash, ThermoFisher Scientific) 상의 450 nm에서의 흡광도를 확인하였다. IC50을 용량 반응 곡선으로부터 결정하였다.
(h) 인간 생검 분석
장점막 생검을 IBD 환자의 결장의 염증이 생긴 부위로부터 획득하였다. 생검 물질을 작은 조각(2-3 mm)으로 절단하고, 5% CO2/95% O2 분위기의 무혈청 배지에서 37 ℃의 기관 배양 챔버의 강철 격자 상에 두었다. DMSO 대조군 또는 목적 농도에서의 시험 화합물을 조직에 첨가하고, 기관 배양 챔버에서 24 시간동안 인큐베이션하였다. R&D ELISA에 의한 IL-6, IL-8, IL-1β 및 TNFα의 수준 측정을 위해 상등액을 거둬들였다. 시험 화합물에 의한 사이토카인 분비의 저해 백분율을 DMSO 대조군(100%)에 대해 측정한 사이토카인 분비에 대해 계산하였다.
(i) 세포 유사분열 분석
건강한 대상로부터의 PBMC을 밀도 경사(Histopaque®-1077, Sigma-Aldrich, Poole, UK)를 이용하여 전혈(Quintiles, London, UK)에서 분리하였다. 그 후, PBMC(샘플당 3백만개의 세포)를 2% PHA(Sigma-Aldrich, Poole, UK)로 48 시간동안 처리한 후, 뒤이어 시험 화합물의 농도를 변화시켜 20 시간동안 노출시켰다. 수집하기 2 시간 전에, PBMC를 데메콜친(0.1 ㎍/mL; Invitrogen, Paisley, UK)으로 처리하여 중기(metaphase)의 세포를 억제하였다. 유사분열 세포를 관찰하기 위해, 이전에 기술된 바와 같이(Muehlbauer P.A. and Schuler M.J., Mutation Research, 2003, 537:117-130), 인트라프렙(Intraprep)(50 μL; Beckman Coulter, France)을 첨가하여 PBMC를 투과 및 고정시키고, 항-포스포-히스톤 3(0.26 ng/L; #9701; Cell Signalling, Danvers, MA) 및 프로피듐 요오드화물(1 mg/mL; Sigma-Aldrich, Poole, UK)로 염색하였다. 림프구에 대한 통로인, ATTUNE 유세포 분석기(Invitrogen, Paisley, UK)를 이용하여 발광을 관찰하였다. 각 처리에 대한 유사분열의 저해 백분율을 비히클(0.5% DMSO) 처리에 대해 계산하였다.
(j) MRC5 세포에서 HRV16로 유도된 CPE의 평가
MRC-5 세포를 5% FCS 및 1.5 mM 염화마그네슘을 포함하는 DMEM 내에서 1 MOI로 HRV16로 감염시키고, 뒤이어 33 ℃에서 1 시간동안 인큐베이션하여 흡착을 촉진시켰다. 상등액을 흡입시키고 새로운 배지를 첨가한 후, 4 일동안 인큐베이션하였다. 필요에 따라, 화합물 또는 DMSO로 2 시간동안 세포를 예비인큐베이션하고, 바이러스를 세척한 후 화합물 및 DMSO를 다시 첨가하였다.
상등액을 흡입시키고, 메틸렌블루 용액(100 μL, 2% 포름알데히드, 10% 메탄올 및 0.175 % 메틸렌블루)과 실온에서 2 시간동안 인큐베이션하였다. 세척 후, 증류수(100 μL) 내의 1% SDS를 각각의 웰에 첨가하고, 660 nm에서의 흡광도를 확인하기에 앞서 플레이트를 1-2 시간동안 가볍게 흔들었다. 각각의 웰에 대한 저해 백분율을 계산하였다. 시험 화합물의 연속 희석(serial dilution)에 의해 생성된 농도-반응 곡선으로부터 IC50 값을 계산하였다.
(k) 초기 기관지 상피세포에서 시험관내 RSV 바이러스 부하
96 웰 플레이트에서 증식된 정상 인간 기관지 상피세포(NHBEC)를 15 mM 염화마그네슘을 포함하는 LHC8 배지:RPMI-1640 (50:50) 중에 0.001 MOI로 RSV A2(Strain A2, HPA, Salisbury, UK)에 감염시키고, 흡착을 위해 37 ℃에서 1 시간동안 인큐베이션하였다. 세포를 PBS(3 x 200 μL)로 세척하고, 새로운 배지(200 μL)를 첨가한 후, 4 일동안 계속 인큐베이션하였다. 필요에 따라, 세포를 화합물 또는 DMSO와 2 시간동안 예비인큐베이션하고, 바이러스를 세척한 후 다시 첨가하였다.
세포를 PBS 용액(50 μL) 내 4% 포름알데히드로 20 분동안 고정시키고, WB(3 x 200 μL) (세척 완충제, 0.5% BSA 및 0.05% Tween-20을 포함하는 PBS)로 세척한 후, 블록킹 용액(PBS 내의 5% 연유)과 1 시간동안 인큐베이션하였다. 세포를 WB(3 x 200 μL)로 세척하고, PBS-tween에서 5% BSA 내의 항-RSV(2F7) F-융합 단백질 항체(40 μL; 쥐 단클론성, lot 798760, Cat. No.ab43812, Abcam)와 1 시간동안 실온에서 인큐베이션하였다. 세척 후에, PBS-Tween(lot 00053170, Cat.No. P0447, Dako) 내의 5% BSA에서 HRP가 콘쥬게이션된 제2 항체 용액(50 μL)과 세포를 인큐베이션하고, 그 후 TMB 기질을 첨가하였다(50 μL; 기질 시약 팩, lot 269472, Cat. No. DY999, R&D Systems, Inc.). 2N H2SO4 (50 μL)을 첨가하여 반응을 중지시키고, 생성된 신호를 비색법을 이용하여(OD: 655 nm의 기준 파장에서 450 nm) 마이크로플레이트 판독기(Varioskan® Flash, ThermoFisher Scientific)에서 측정하였다.
세포를 세척하고, 2.5% 크리스탈 바이올렛 용액(50 μL; lot 8656, Cat. No. PL7000, Pro-Lab Diagnostics)을 30 분동안 적용하였다. WB로 세척한 후, 증류수(100 μL) 내의 1% SDS를 각각의 웰에 첨가하고, 595 nm에서의 흡광도를 확인하기에 앞서 플레이트를 1 시간동안 진탕기에서 가볍게 흔들었다. OD450-655 값을 OD595 값으로 나누어 측정된 OD450-655 값을 세포 수에 대해 보정하였다. 각각의 웰에 대한 저해 백분율을 계산하고, 화합물의 연속 희석으로부터 생성된 농도-반응 곡선으로부터 IC50 값을 계산하였다.
(l) 시험 화합물이 세포 생존도에 미치는 효과: MTT 분석
구별된 U937 세포를 각각의 시험 화합물(아래에 표시된 200 μL 배지 내의 최종 농도 1 ㎍/mL 또는 10 ㎍/mL)과 2개의 프로토콜 하에서 예비인큐베이션하였다: 첫번째는 5% FCS RPMI1640 배지에서 4 시간동안이고, 두번째는 10% FCS RPMI1640 배지에서 24 시간동안이다. 상등액을 새로운 배지(200 μL)로 교체하고, MTT 저장용액(10 μL, 5 mg/mL)을 각각의 웰에 첨가하였다. 1 시간동안 인큐베이션한 후 배지를 제거하고, DMSO(200 μL)을 각각의 웰에 첨가한 후, 550 nm에서의 흡광도를 확인하기에 앞서 플레이트를 1 시간동안 가볍게 흔들었다. 비히클(0.5% DMSO) 처리와 비교하여 각각의 웰에 대한 세포 생존도의 손실 백분율을 계산하였다. 그 결과 비히클에 대하여 약물 처리를 한 세포 생존도의 명백한 증가가 음수의 백분율로서 도표화되었다.
(m) d-U937 세포내 β 카테닌의 축적
U937 세포, 인간 단핵구성 세포주를 PMA; (100 ng/mL)와 48 내지 72 시간 동안 인큐베이션하여 대식세포-타입 세포로 분화시켰다. 그 후 세포를 최종 농도의 시험 화합물 또는 비히클 중 어느 하나와 18 시간동안 인큐베이션하였다. 배지를 4% 포름알데히드 용액으로 교체함으로써 시험 화합물에 의한 β-카테닌의 유도를 중단시켰다. 퀀칭 완충제 (100 μL, 0.1% 아지드화 나트륨, 0.05% Tween-20를 포함하는 PBS 내의 1% H2O2)와 20 분동안 인큐베이션하여 내인성 과산화물의 활성도를 상쇄시켰다. 세포를 세척 완충제(200 μL; 0.05% Tween-20을 포함하는 PBS)로 세척하고, 블록킹 용액(200 μL; PBS 내의 5% 우유)과 1 시간동안 인큐베이션한 후, 세척 완충제(200 μL)로 재세척하고, 그 후 1% BSA/PBS(BD, Oxford, UK) 내의 항-β-카테닌 항체 용액(50 μL)과 밤새 인큐베이션하였다.
세척 완충제(3 x 200 μL; 0.05% Tween-20를 포함하는 PBS)로 세척한 후, 세포를 1% BSA/PBS(Dako, Cambridge, UK) 내의 HRP가 콘쥬게이션된 제2 항체 용액(100 μL)과 인큐베이션하고, 생성된 신호를 비색법으로 (OD: 655 nm의 기준 파장에서 450 nm) TMB 기질(50 μL; R&D Systems, Abingdon, UK)을 이용하여 측정하였다. 1N H2SO4 용액 (50 μL)을 첨가하여 반응을 중단시켰다. 그 후 세포를 세척 완충제로 세척하고, 2% 크리스탈 바이올렛 용액(50 μL)을 30 분동안 적용하였다. 세척 완충제(3 x 200 μL)로 세척한 후, 1% SDS(100 μL)을 각각의 웰에 첨가하고, 595 nm에서의 흡광도를 측정하기 전에(Varioskan® Flash, ThermoFisher Scientific) 플레이트를 1 시간동안 가볍게 흔들었다.
OD450-655값을 OD595 값으로 나누어 측정된 OD450-655 값을 세포 수에 대해 보정하였다. 각가의 웰에 대한 백분율 유도를 비히클에 대하여 계산하였고, 단일체(unity)로 정의되는 참조 화합물 (N-(4-(4-(3-(3-tert-부틸-1-p-톨릴-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일옥시)피리딘-2-일)-2-메톡시아세트아미드)(1 ㎍/mL)을 포함하는 표준 대조군에 의해 생성된 유도에 비해서 유도와 비교하여 비율을 정상화하였다. 표준 대조군에 대해 관측된 것이 0.15 (15%) 미만인 신호는 "-ve"로 지정하였다.
(n) IBD 환자로부터 유래된 CD3/CD28 자극 LPMC 세포에서 IL-2 및 IFNγ의 분비
다음과 같이 염증이 생긴 IBD 점막의 수술 적출물 또는 정상 점막의 수술 적출물로부터 프로프리아층 단핵 세포를 분리한 후 정제하였다:
수술용 메스를 이용하여 수술 적출물의 심층으로부터 점막을 제거하고, 그 점막을 3-4 mm 크기의 단편으로 절단하였다. 자석 교반기를 이용한 교반으로 조직의 단편을 HBSS(Sigma-Aldrich) 내의 1 mM EDTA(Sigma-Aldrich, Poole, UK)로 3번 세척하고, 각각의 세척 후 상등액을 버려서 제거하여 버려서 상피를 제거하였다. 뒤이어 샘플을 타입 1A 콜라게나아제(1 mg/mL; Sigma-Aldrich)로 37 ℃에서 1 시간동안 교반하면서 처리하였다. 그 후 생성된 세포 현탁액을 100 ㎛ 세포 스트레이너를 이용하여 여과하고, 2번 세척하고, 10% 소태아 혈청, 100 U/mL 페니실린 및 100 ㎍/mL 스트렙토마이신을 포함하는 RPMI-1640 배지(Sigma-Aldrich)에 재현탁시킨 후, 이를 세포 배양을 위해 사용하였다.
DMSO 대조군 또는 적절한 농도의 화합물 중 어느 하나의 존재하에, 새롭게 분리된 LPMC(2x105 세포/웰)를 1 ㎍/mL α-CD3/α-CD28로 48 시간동안 자극하였다. 48 시간 후, 상등액을 제거하고, R&D ELISA로 TNFα 및 IFNγ의 존재를 분석하였다. DMSO 대조군(100%)에 대해 측정된 사이토카인 분비와 비교하여 시험 화합물에 의해 분비된 사이토카인의 저해 백분율을 계산하였다.
(o) IBD 환자에서 분리된 근섬유모세포로부터 사이토카인 분비의 저해
염증이 생긴 IBD 점막에서 유래된 근섬유모세포를 다음과 같이 분리하였다:
점막을 절개하여 불필요한 부분을 폐기하고, 37 ℃의 가습 CO2 인큐베이터에서 1 mm 사이즈의 점막 샘플을 20% FBS, 1% 비필수 아미노산 (Invitrogen, Paisley, UK), 100 U/mL 페니실린, 100 ㎍/mL 스트렙토마이신, 50 ㎍/mL 겐타마이신 및 1 ㎍/mL 암포테리신(Sigma-Aldrich)이 보충된 듈베코(Dulbecco) 변형 이글Eagle) 배지(DMEM, Sigma-Aldrich)에서 배양하였다. 생성된 근섬유모세포의 콜로니들을 25-cm2 배양 플라스크에 넣고, 자극 실험에 사용되기에 충분한 양을 제공하기 위해 20% FBS 및 적어도 4계대에 대한 항생제로 보충된 DMEM에서 배양하였다.
근섬유모세포의 부융합성(Subconfluent) 단일막을 12-웰 플레이트에 웰 당 3x105 세포씩 넣고, DMSO 대조군 또는 적절한 농도의 화합물 중 어느 하나의 존재하에서 24 시간동안 배양되기 전에, 무혈청 배지에서 37 ℃로 24 시간동안 5% CO2 분위기에서 영양분을 공급하지 않았다. 24 시간 경과 후 상등액을 제거하고 R&D ELISA로 IL-8 및 IL-6의 존재를 분석하였다. DMSO 대조군(100%)에 대해 측정된 사이토카인의 분비와 비교하여 시험 화합물에 의한 사이토카인 분비의 저해 백분율을 계산하였다.
(p) 인간 호중구 탈과립
인간 말초 혈액으로부터 호중구를 다음과 같이 분리하였다:
정맥 천자(venepuncture)로 혈액을 수집하고, 1:1 EDTA: 살균한 인산완충식염수(PBS, 무 Ca+/Mg+)를 첨가하여 항응고 처리하였다. 덱스트란(3% w/v)을 첨가하고(혈액 4에 대해 덱스트란 용액 1), 혈액을 실온에서 약 20 분간 방치하였다. 상등액을 밀도 경사(Lymphoprep, Axis-Shield Healthcare) 상에 조심스럽게 놓고 원심분리(15 분, 2000 rpm, 브레이크 없음)하였다. 상등액을 흡입하고, (오염시키고 있는 적혈구를 용해시키기 위해) 세포 펠렛을 식염수(0.2%)에 60 초 이내로 재현탁시켰다. 그 후, 10배 부피의 PBS를 첨가하고 세포를 원심분리하였다(5 분, 1200 rpm). 세포를 HBSS+(시토칼라신 B (5 ㎍/mL) 및 1 mM CaCl2를 포함하는 Hanks 완충 염 용액(페놀 레드 없음)에 재현탁시켜 5 x 106 세포/mL를 얻었다.
5 x 104 세포를 V-바닥 96 웰 플레이트의 각각의 웰에 첨가하고, 적절한 농도의 시험 화합물(0.3-1000 ng/mL) 또는 비히클(DMSO, 0.5% 최종 농도)과 인큐베이션하였다(30 분, 37 ℃). fMLP (최종 농도 1 μM)을 첨가하여 탈과립을 자극하고, 추가적인 인큐베이션(30 분, 37 ℃) 후에 원심분리하여 세포를 제거하고(5 분, 1500 rpm), 상등액을 평평한 바닥 96 웰 플레이트로 옮겼다. 동일한 부피의 테트라메틸벤지딘(TMB)을 첨가하고, 10 분후 동일 부피의 황산(0.5 M)을 첨가하여 반응을 중단시키고, 450 nm에서 흡광도를 확인하였다(655 nm에서의 백그라운드를 제함). 생성된 농도-반응 곡선으로부터 50% 저해 농도(IC50)를 측정하였다.
(q) 세포독성 분석
5 x 104 TK6 세포 (림프구성 T 세포주)를 195 μL의 배지(10% 소태아 혈청으로 보충된 RPMI)가 있는 96 웰 플레이트의 적절한 수의 웰에 첨가하였다. 5 μL의 DMSO 대조군(최종 농도 0.5% v/v) 또는 시험 화합물(최종 농도 5 또는 1 ㎍/mL 중 어느 하나)을 웰에 첨가하고, 37 ℃, 5% CO2 하에서 인큐베이션하였다. 24 시간 경과 후, 플레이트를 1300 rpm으로 3 분동안 원심분리하고, 상등액을 버렸다. 세포를 PBS 내의 7.5 ㎍/mL 프로피듐 요오드화물(PI)에 재현탁시켰다. 15 분후, 유세포 분석기(BD accuri)로 세포를 분석하였다. DMSO 대조군에 대해 정상화된 시험 웰에서 PI 음성인 세포의 %에 따라 % 생존율을 계산하였다.
생체내 스크리닝(In Vivo Screening): 약력학 및 항-염증 활성
(A) 마우스에서 LPS로 유도된 호중구의 축적
LPS 도전(challenge)의 적용에 의한 염증성 반응의 자극 이전에, 단식시키지 않은 Balb/c 마우스에 기관내 경로를 통해 비히클 또는 시험 물질을 지시된 시간에(2-8 시간 범위 내에서) 투여하였다. T=0일 때, 마우스를 노출 챔버에 두고 30 분동안 LPS(7.0 mL, PBS 내 0.5 mg/mL 용액)에 노출시켰다. 추가적인 8 시간 이후 동물들을 마취시키고, 기도에 캐뉼러를 꽂고, 주입에 의해 폐포세척액(BALF)을 추출하고, 그 후 기관 카테터를 경유하여 폐로부터 1.0 mL의 PBS를 빼내었다. Neubaur 혈구계를 이용하여 BALF 샘플내의 총 백혈구 수 및 분화된 백혈구 수를 측정하였다. 200 rpm으로 5 분간 실온에서 원심분리하여 BALF 샘플의 사이토스핀 스미어(Cytospin smear)를 제조하고, DiffQuik 스테인 시스템(stain system)(Dade Behring)을 이용하여 염색하였다. 유침 현미경(oil immersion microscopy)을 이용하여 세포의 수를 세었다. BAL 내의 호중구 수에 대한 데이터는 평균±S.E.M. (평균 표준오차)로 나타내었다. 비히클 처리와 비교하여 각각의 처리에 대해 호중구 축적의 저해 백분율을 계산하였다.
(B) 마우스에서 DSS로 유도된 대장염
DSS로 처리함에 따른 염증성 반응의 자극 하루 전에(Day -1), 단식하지 않고, 생후 10-12주인, 숫컷 BDF1 마우스에 하루에 두번씩 경구 위관 영양을 통해 비히클, 참조 물질 (5-ASA) 또는 시험 화합물을 투여하였다. 연구 0 일째 (Day 0)에 DSS(5% w/v)를 음료수와 함께 투여하고, 뒤이어 비히클(5 mL/kg), 참조 화합물 (100 mg/kg) 또는 시험 화합물 (5 mg/kg)의 1일 2회 투여를 7 일동안 수행하였다. DSS와 함께 음료수를 3 일마다 보충하였다. 연구 동안에 매일 동물의 체중을 재었고 대변 관찰이 이루어졌고, 대변의 일관성에 기반을 두어 점수로 기록되었다. 6 일째(Day +6)에 수술로 대장을 제거하고 길이와 무게를 기록하였다. 결장의 부위들은 호중구 침윤을 측정하기 위한 MPO 분석을 위해 또는 발병도 측정을 위한 조직병리학 기록을 위해 취하여졌다.
(C) 마우스에서 TNBS로 유도된 대장염
2,4,6-트리니트로벤젠설폰산(TNBS)(50% 에탄올중 15 mg/mL/ 50% 식염수)로 처리함에 따른 염증성 반응의 자극 하루 전에(Day -1), 단식하지 않고, 생후 10-12주인, 숫컷 BDF1 마우스에 하루에 두번씩 경구 위관 영양을 통해 비히클(5 mL/kg), 참조 물질(부데소니드 2.5 mg/kg) 또는 시험 화합물(1, 5 또는 50 mg/kg)을 하루에 두번씩 투여하였다. 연구의 0일째 (Day 0)에 TNBS (200 μL)를 플라스틱 카테터를 경유하여 결장 내부로 투여하고, 뒤이어 비히클, 참조 또는 시험 화합물의 1일 2회 투여를 2일 또는 4 일동안 수행하였다. 연구 동안에 매일 동물의 체중을 재었고 대변 관찰이 이루어졌고, 대변의 일관성에 기반을 두어 점수로 기록되었다. 2 일째(또는 4 일째)에 수술로 대장을 제거하고 길이와 무게를 기록하였다. 결장 부위들을 호중구 침윤을 측정하기 위한 MPO 분석을 위해 또는 발병도 측정을 위한 조직병리학 기록을 위해 취하였다.
(D) 마우스에서 입양 전달
연구 0일째에, 암컷 Balb/C 마우스를 사멸시키고, CD45RBhigh 세포 분리(SCID IBD 세포 분리 프로토콜을 이용)를 위한 비장을 얻었다. 대략 4X105 세포/mL의 CD45RBhigh 세포를 암컷 SCID 동물에 IP(100 μL/마우스)로 주입하였다. 연구 14 일째에, 마우스의 무게를 재고, 몸무게에 따라 처리 그룹으로 무작위로 분류하였다. 21 일째에, 화합물을, 경구 위관 영양을 통해, 하기의 투여 수준 및 5 mL/kg의 투여 부피의 땅콩유 비히클에서 1일 2회씩 투여하였다. 연구 42 일째까지 처리를 계속하였고, 그 시점에서 투여 후 4 시간에 동물을 부검하였다. 결장의 길이 및 무게를 기록하고, 이를 결장 부종의 측정시 연구에서의 제2 종점(endpoint)으로 사용하였다. 그 후 결장을 6 등분으로 나누고, 그 중 넷을 조직병리학 기록(제1 종점)으로 사용하고, 둘을 사이토카인 분석을 위해 균질화하였다. 제시된 데이터는 미접촉 동물과 비히클 동물(vehicle animal) 간 유도 창(window)의 % 저해인데, 더 높은 저해는 질병에 걸리지 않고, 미접촉 표현형에 대해 더 근접한 것을 암시한다.
시험관내 및 생체내 스크리닝 결과의 요약
본 연구는 키나제 B-Raf 및 B-Raf(V600e)가 그들의 표준 리간드에 대한 결합에 대해 어떤 영향도 미치지 않았음을 확인했던 KINOMEscanTM 기술을 사용하는 LeadHunter Discover Services (DiscoveRx Corporation, Fremont, CA)에 의해 수행되었다.
아래에 기술된 프로토콜을 이용하여 측정된 바와 같은 본 발명의 화합물 실시예의 생체내 프로필을 다음에 나타내었다(표 4a-c). 구조적으로 관련된 참조 화합물과 비교가 이루어졌는데, 이는 N-(4-(4-(3-(3-tert-부틸-1-p-톨릴-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일옥시)피리딘-2-일)-2-메톡시아세트아미드로서 항-바이러스 활성이 있는 효능있는 항-염증제이다(Ito, K. et al., WO 2010/112936, PCT/GB2010/050575, 2010. 10. 7 및 Ito, K. et al., WO 2010/067130, PCT/GB2009/051702, 2010. 6. 17). 본 발명의 화합물은 참조 화합물이 나타내는 것보다 훨씬 약한 효소 GSK3α에 대해 갖는 현저한 저해는 예외로, 키나제 효소 분석의 범위에서 참조 화합물과 매우 유사한 저해 프로필을 보여준다(표 4a).
표 4a1: 화합물 실시예들의 p38 MAPK (방법 1), c-Src, Syk 및 GSK3α(방법 1) 효소 프로필
Figure pct00171
Figure pct00172
Figure pct00173
표 4a2: 화합물 실시예들의 p38 MAPK (방법 2), c-Src, Syk 및 GSK3α(방법 2) 효소 프로필
Figure pct00174
표 4a2의 데이터는 다음과 같이 수행된 분석으로부터 얻었다:
- 표 4a1의 데이터를 얻기 위해 사용된 것과 동일한 절차에 따름(표4a1의 데이터를 얻기 위해 사용된 방법 1의 분석 변수 대신, 방법 2의 분석 변수에 의해 각각 얻은 p38 MAPK 및 GSK3α 저해 데이터는 제외); 및
- 다른 연구실에서 수행됨
화합물 실시예 (8)의 키나제 결합 프로필 및 참조 화합물 대 B-RAF p38 MAPK, HCK, cSrc, Syk, 및 GSK3α의 키나제 결합 프로필을 500 nM에서 조사하였다. 화합물 실시예 8은 참조 화합물과 유사한 표현형을 나타내었는데, p38 MAPK, HCK, cSrc 및 Syk 키나제에 대한 결합에 대해 엄청난 저해를 보여주었다. 그러나, 주목할 만한 차이점은 화합물 실시예 (8)이 B-Raf 및 GSK3α으로의 결합에 대해 참조 화합물에 비해 훨씬 낮은 저해를 보여주었다는 것이다(표 4b).
표 4b: 화합물 실시예 (8)과 참조 화합물의 효소 결합 프로필의 비교.
Figure pct00175
본 발명의 화합물은, RNA 바이러스 미믹: 폴리IC로 유도된 ICAM-1의 발현에 대해서 뿐만 아니라, TNFα및 IL-8 양자의 내독소 매개 분비에 대한 항-염증성을 밝힌 세포 분석에서 참조 화합물과 유사한 프로필을 나타내었다(표 4c).
표 4c1: LPS로 유도된 TNFα및 IL-8의 분비의 저해(상기 분석 (a)) 및 화합물 실시예에 대한 폴리IC로 유도된 ICAM-1의 발현
Figure pct00176
Figure pct00177
Figure pct00178
Figure pct00179
본 발명의 화합물의 생물학적 프로필은, HRV로 유도된 CPE의 발현으로 결정된 호흡기 바이러스 복제에 대한 효과를 측정하는 세포 시스템에서 참조 화합물에 의해 나타난 것과 유사하다(표 4d).
표 4c2: 자극된 세포에서 사이토카인 분비의 저해(상기 분석 (a), (b), (c) 및 (d))
Figure pct00180
Figure pct00181
분석 (a)에서 파생되는 표 4c2의 데이터는 다음과 같이 수행된 분석으로부터 얻었다:
- 표 4c1의 분석 (a) 데이터를 얻기 위해 사용된 것과 동일한 절차에 따름;
- 단, 다른 실험실에서 수행됨
표 4d: 바이러스 증식에 대한 화합물 실시예들의 효과: HRV-16로 유도된 CPE의 발현
Figure pct00182
그러나, 유리하게도, 본 발명의 화합물은, 일반적으로 참조 화합물에 비해 개선된 부작용 프로필 및 우수한 치료지수를 가질 수 있는 가능성을 나타내는 세포 생존도 및 세포 분열(유사분열)에 대한 그의 효과를 측정하는 분석시스템에서 현저히 낮은 활성을 보여준다(표 4e).
표 4e: 세포 생존도 및 세포 분열에 있어서 화합물 실시예들의 효과
Figure pct00183
Figure pct00184
Figure pct00185
Figure pct00186
Figure pct00187
1. 세포 생존도 선별(MTT 분석): -ve 및 +ve 는 수치값이 각각, 지시된 시점에서 1 ㎍/mL일 때의 30% 저해로 정의된, 유의미하지 않은 효과 역치보다 낮거나 또는 높은 것을 의미함.
추가적인 생체내 프로파일링을 위해 본 발명의 화합물 실시예 (8), 화합물 실시예 (9) 및 화합물 실시예 (86)을 선정하였다. 이 화합물들의 β-카테닌 세포 농도 증가 가능성을 평가하였고, 그 결과 부정적인 것으로 나타났는데, 즉 10 ㎍/mL의 시험 농도에서 그들의 유도 효과는 1 ㎍/mL의 참조 화합물에 의해 생성된 효과의 15% 미만이었다. 상기 추가 화합물의 실시예에 대한 분석 (m)으로부터 얻은 결과를 하기 표 4f에 나타내었다.
표 4f: β-카테닌 유도에 대한 화합물 실시예의 효과(NT는 시험되지 않았음을 의미함)
Figure pct00188
시험 물질로 마우스를 처리하는 것이 폐내 LPS로 유도된 호중구의 축적에 대해 현저한 저해 효과를 발생시키는 것으로 나타났다. 내독소 도전 8 시간 전에 화합물이 오직 한번만 투여되었기 때문에, 이러한 실험들은 약 물질이 이러한 염증 모델에서 긴 활성 기간을 가짐을 나타낸다(표 5a).
표 5a: 선택된 화합물 실시예로 처리하였을 때 마우스에서 LPS로 유도된 상기도(airways) 호중구에 대한 효과
Figure pct00189
N = 그룹당 8마리 동물, 평균 +/- SEM
또한, 화합물 실시예 (8)로 마우스를 처리하는 경우 BALF에서 호중구의 축적에 대한 용량-의존성 저해 및 내독소 자극이 발생함을 발견하였으며, 또한 내독소에 노출되기 12 시간 전에 처리된 경우에도 저해 효과가 발견되었다(표 5b).
표 5b: 화합물 실시예 (8)로 처리하였을 때 마우스에서 LPS로 유도된 상기도(airways) 호중구에 대한 효과
Figure pct00190
N = 그룹당 8 마리의 동물, 평균 +/- SEM
마우스 담배 연기 모델에서 화합물 실시예 (8)로 처리한 결과와 대식세포 및 BALF 내 호중구의 축적에 대한 결과를 조사하였다(표 5). 본 연구에서 사용한 담배 연기 모델은 코르티코스테로이드 불응 시스템(corticosteroid refractory system)으로 보고되었고(Medicherla S. et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 2008, 324(3):921-9.), 플루티카손 프로피오네이트를 기도로 마우스당 1.75 ㎍(35 μL, bid, i.n.)를 주입한 경우 호중구 또는 대식세포 축적을 저해하지 않았음을 확인하였는데, 이는 LPS로 유도된 호중구의 축적을 >80%로 저해한 것과 동일한 투여량이다.
표 5: 마우스에서 화합물 실시예 (8)를 처리한 경우 담배 연기로 유도된 기도 호중구에 대한 효과
Figure pct00191
세포수에 대한 데이터는 평균 ± SEM, N=6으로 나타냄.
하기 표 6a 및 6b에 나타낸 바와 같이, 2 일 이상 수행된 상기 인간 생검 분석(h) 및 생체내 분석(C)에 실시예 46 및 77의 화합물이 또한 선별되었다. 조직병리학 분석으로 실시예 46 및 77의 화합물이 모두 결장 염증의 생체내 모델에서 중요한 활성을 보인다는 것을 알았다. 특히, 구강으로 5 mg/kg 투여되었을 때 이러한 화합물들은 비히클 대조군과 비교하였을 때 궤양의 단계 및 상피 보수에 있어서 뚜렷한 향상을 보여주었다. 또한, 실시예 46 및 77의 화합물은 세망판 및 고유판 영역에서 염증성 세포 침윤물을 뚜렷하게 감소시켰다. 실시예 46 및 77의 화합물은 또한 궤양성 대장염(UC) 환자의 생검에서 뚜렷한 항-염증 효과를 보여주었다. 건강한 지원자와 달리, UC 환자들의 장 점막 생검은 생체내의 염증촉진성 사이토카인의 자발적인 분비를 보여주었다(Onken,J.E. et al., J Clin Immunol, 2008, 126(3): 345-352). 실시예 46 및 77을 생체내 생검에 첨가하는 경우, IL-1b, IL-6 및 IL-8의 분비를 뚜렷하게 감소시켰다.
표 6a: 마우스에서 TNBS로 유도된 대장염에 대한 연구 결과의 요약
Figure pct00192
표 6b: 궤양성 대장염(IBD의 형태)을 앓는 여러 환자의 염증이 생긴 결장 부위 유래 장점막 생검을 이용한 분석 결과의 요약.
Figure pct00193
하기 표 7에 나타낸 바와 같이, 생체내(입양 전이) 분석(D)에 화합물 실시예 77의 화합물이 또한 선별되었다. 결장 무게:길이 비 및 사이토카인 분비의 상대적 저해 분석을 통해 실시예 77의 화합물 또한 이러한 추가적인 결장 염증의 생체내 모델에서 중요한 활성을 나타낸다는 것을 알았다.
표 7: 입양 전이 마우스 모델로부터 얻은 결과의 요약.
Figure pct00194
* P<0.05 ANOVA 대 비히클
NT: 시험되지 않음
추가 연구의 요약
약물동력학적 파라미터의 측정
(i) 마우스에서의 연구
단일 경구 투여후 숫컷 C57BL/6 마우스에서 화합물 실시예 77의 약물동력학 및 총 결장 조직 분배를 조사하기 위해 Sai Life Sciences (Hinjewadi, Pune, India)에서 연구를 수행하였다.
21 마리의 숫컷 마우스 그룹에 실시예 77의 화합물의 (땅콩유에서의) 현탁액 제형을 5 mg/kg의 투여량으로 투여하였다. 안와정맥총(retro orbital plexus)으로부터 혈액 샘플(약 60 μL)을 1, 2, 4, 6, 8, 12 및 24 시간에 수집하였다. 각각의 시점에서 한 세트의 3 마리 마우스로부터 얻은 혈액 샘플을 혈액응고 방지제인 K2EDTA가 포함된 표시된 마이크로 원심분리 튜브에 수집하였다. 전혈을 10 분동안 4000 rpm으로 원심분리하여 혈장 샘플을 분리하고, 생분석 전까지 -70 ℃ 이하에서 보관하였다. 혈액 샘플의 수집 후, 총 결장 조직의 수집을 위해 이산화탄소 질식으로 동물들을 인도적으로 안락사시켰다. 결장을 냉 인산염 완충 식염수(pH 7.4)로 씻어 내어 내용물을 제거하였다. 결장 조직의 2배 무게의 인산염 완충 식염수(pH 7.4)로 총 결장 조직을 균질화하고, -70 ℃ 이하에서 보관하였다. 총 부피는 총 결장 조직 무게의 3배였다. 모든 샘플들을 아세토니트릴을 이용한 단백질 침전에 의한 분석으로 처리하고, 개선된 LC-MS/MS 방법(LLOQ: 혈장 내 2.02 ng/mL 및 결장 조직 내 1.01 ng/mL)으로 분석하였다. 비구획적 분석 도구인 Phoenix WinNonlin® 소프트웨어(version 6.3)을 이용하여 약물동력학적 파라미터를 계산하였다.
(ii) 쥐(rat)에서의 연구
단일 정맥 또는 경구 투여후 숫컷 Wistar 쥐에서 화합물 실시예 77의 혈장 및 총 결장 조직 분배뿐만 아니라, 약물동력학을 조사하기 위해 Sai Life Sciences (Hinjewadi, Pune, India)에서 연구를 수행하였다.
30 마리의 숫컷 Wistar 쥐를 두 그룹으로 나누었다: 그룹 I(p.o.: 5 mg/kg; 쥐 27 마리) 및 그룹 II (i.v.: 0.25 mg/kg; 쥐 3 마리). 그룹 I의 동물에 실시예 77의 화합물의 수성 현탁액 제형(2% HPMC 및 0.5% Tween 80를 포함)을 5 mg/kg의 투여량으로 경구 투여하였다. 그룹 II의 동물에 실시예 77의 화합물의 용액 제형(5% v/v DMSO 내에, 7.5% w/v Solutol HS 15 및 87.5% 식염수(0.9% w/v NaCl))을 0.25 mg/kg의 투여량으로 정맥 투여하였다. 각각의 쥐에서, 안와정맥총으로부터 혈액 샘플(약 120 μL)을 투여 전, 0.05, 0.13, 0.25, 0.5, 1, 2, 4, 8, 및 24 시간 (i.v.) 및 투여 전, 0.5, 1, 2, 4, 6, 8, 12 및 24 시간 (p.o.)에 수집하였다. 수집 후 즉시, 원심분리를 통해 혈액으로부터 혈장을 수집하고, 분석 전까지 -70 ℃에서 보관하였다. 혈액 샘플을 수집하고, 이산화탄소 질식으로 동물들(그룹 I)을 인도적으로 안락사시켰다. 총 결장을 분리하고, 냉 인산염 완충 식염수(pH 7.4)로 씻어내어 내용물을 제거한 후 무게를 재었다. 총 결장 조직을 얼음으로 냉각된 인산염 완충 식염수(pH 7.4)로 균질화하였다. 균질화를 위해 사용된 완충제 부피는 조직 무게의 2배였다. 생분석 전까지 모든 샘플을 -70 ℃에서 보관하였다. 총 결장 조직의 균질화 부피는 3배였다. 혈장 및 총 결장 조직 샘플을 LC-MS/MS 방법(혈장 및 총 결장 조직 내의 LLOQ = 0.5 ng/mL)으로 정량하였다.
(iii) 비글견에서의 연구
단일 정맥 또는 경구 투여후 숫컷 비글견에서 화합물 실시예 77의 혈장 약물동력학을 조사하기 위해 Sai Life Sciences (Hinjewadi, Pune, India)에서 연구를 수행하였다.
숫컷 비글견 3 마리의 그룹에 실시예 77의 화합물의 수성 현탁액 제형(2% HPMC 및 0.5% Tween 80 포함)을 1 mg/kg의 투여량으로 경구 투여하였다. 또한, 숫컷 비글견 3 마리의 그룹에 실시예 77의 화합물의 용액 제형(5% v/v DMSO 내에, 7.5% w/v Solutol HS 15 및 87.5% 식염수(0.9% w/v NaCl))을 0.05 mg/kg의 투여량으로 정맥 투여하였다. 목정맥으로부터 혈액 샘플(약 1.5 mL)을 투여 전, 0.25, 0.5, 1, 2, 4, 6, 8, 및 24 시간 (p.o.) 및 투여 전, 0.08, 0.25, 0.5, 1, 2, 4, 8, 12, 24 및 32 시간 (i.v.) 투여 후에 수집하였다. 각각의 시점에서 한 세트의 3 마리 개로부터 얻은 혈액 샘플을 혈액응고 방지제인 K2EDTA가 포함된 표시된 마이크로 원심분리 튜브에 수집하였다. 전혈을 10 분동안 2500g로 원심분리하여 혈장 샘플을 분리하고, 생분석 전까지 -70 ℃ 이하에서 보관하였다. 모든 샘플들을 아세토니트릴을 이용한 단백질 침전에 의한 분석으로 처리하고, LC-MS/MS 방법(LLOQ = 0.50 ng/mL)으로 분석하였다. 비구획적인 분석 도구인 Phoenix WinNonlin® 소프트웨어(version 6.3)을 이용하여 약물동력학적 파라미터를 계산하였다.
하기 표 8a에 나타낸 바와 같이, 실시예 77의 화합물을 경구 투여한 경우 혈장 노출에 비해 훨씬 높은 결장 조직 노출이 야기되었으며, 특히 개의 연구에서 그러하였다(혈장 노출은 전혀 관측되지 않았다).
표 8a: 실시예 77 화합물의 경구 투여와 관련된 연구로부터 측정된 약물동력학적 파라미터
Figure pct00195
표 8b: 실시예 77 화합물의 정맥 투여와 관련된 연구로부터 측정된 약물동력학적 파라미터
Figure pct00196

ADME 파라미터의 측정
실시예 77 및 80의 화합물에 대한 특정 시험관내 ADME(흡수, 분배, 대사 및 배설) 파라미터의 평가를 BioFocus (Saffron Walden, UK)에서 수행하였다.
(i) 대사 안정성
간 미세소체 안정성
0.1 μM(n=2, 최종 DMSO 농도 0.25%)에서의 시험 화합물의 인큐베이션과 함께 미세소체 안정성 분석을 수행하였고, 보조인자인 NADPH의 존재하에, Xenotech(각각 Lots 1210153, 0810143 및 1110042)에서 유래된 풀화한 인간, 개, 쥐 간 미세소체 0.25 mg 단백질/mL을 이용하여 수행하였다. 0, 2, 5, 10 및 20 분의 인큐베이션에서 취하여진 100 μL 분취액으로 37 ℃에서 인큐베이션을 수행하였고, 분석 내부 표준으로서 카바마제핀을 포함하는 아세토니트릴 100 μL을 첨가하여 반응을 종결시켰다. 샘플을 원심분리하고, 상등액 부분을 LC-MS/MS로 분석하였다.
잔존 화합물의 백분율을 측정하기 위해 기기 반응(피크 높이)을 제로 타임-포인트 샘플(100%로서)로 기준화하였다.
미세소체 인큐베이션의 반감기를 측정하기 위해 각각의 화합물에 대한 % 잔존의 Ln 플롯을 사용하였다. 다음 관계식으로부터 반감기 값을 계산하였다.
T1/2 (분) = -0.693/λ
상기 λ은 Ln 농도 대 시간 곡선의 기울기이다.
시험관내 고유 제거(intrinsic clearance), Clint(mL/min/kg)를 계산하고, 다음 스케일링 파라미터 및 화학식을 이용한 간 추출 비에 스케일화하였다.
파라미터
Figure pct00197
공식
Clint (조직 제거) mL/min/kg = [0.693 /t½(분)] × [1/미세소체 단백질 농도 mg/mL] × [mg 미세소체/g 간] × [g 간/kg 체 중량]
Clint (간 제거) mL/min/kg = 간 혈류량 × Clint / (간 혈류량 + Clint)
간 추출 비(Eh) = Clint (간 제거) mL/min/kg / 간 혈류량(mL/min/kg)
저온 보존된 간세포 안정성
시험 화합물 (0.1 μM 초기 농도, n=2)의 인큐베이션과 함께 간세포 안정성 분석을 수행하였으며, Celsis로부터 풀화한 인간, 개 및 쥐의 저온 보존된 간세포(로트 넘버는 각각 RRW, KLI 및 WAP)를 0.5백만 세포/mL의 세포 밀도로 사용하여 수행하였다. 0, 10, 20, 45 및 90 분의 인큐베이션에서 취하여진 100 μL 샘플로 37 ℃에서 인큐베이션을 수행하였고, 분석 내부 표준으로서 카바마제핀을 포함하는 아세토니트릴 100 μL을 첨가하여 반응을 종결시켰다. 샘플을 원심분리하고, 상등액 부분을 LC-MS/MS로 분석하였다.
잔존 화합물의 백분율을 측정하기 위해 기기 반응(피크 높이)을 제로 타임-포인트 샘플(100%로서)에 참조 표시를 하였다.
간세포 인큐베이션의 반감기를 측정하기 위해 각각의 화합물에 대한 % 잔존의 Ln 플롯을 사용하였다. 다음 관계식으로부터 반감기 값을 계산하였다.
T1/2 (분) = -0.693/λ
상기 λ은 Ln 농도 대 시간 곡선의 기울기이다.
표준 화합물인 테스토스테론, 미다졸람 및 4-메틸움벨리페론을 분석 설계에 포함시켰다. 이러한 화합물은 I 상 및 II 상 반응에 대한 저온 보존된 표본의 신진대사 용량의 지침을 준다.
반감기 값을 다음 식에 적용하여, μL/min/세포 백만개 단위로서 시험관내 고유 제거(Clint)를 계산하였다:
Clint = 0.693/T½(분) × 인큐베이션 부피(μL)/세포 백만개
하기 스케일링 인자 및 공식을 이용하여 간 추출 비에 반감기 값을 스케일화하였다.
파라미터
Figure pct00198
Clint (조직 제거) mL/min/kg = [0.693/t½(분)] × [1/간세포 농도 (백만개 세포/mL)] × [백만개 세포/g 간] x [g 간/kg 체 중량]
Clint(간 제거) mL/min/kg = 간 혈류량 × Clint / (간 혈류량 + Clint)
간 추출 비(Eh) = Clint (간 제거) mL/min/kg / 간 혈류량 (mL/min/kg)
표 9a 및 9b 에 나타낸 결과는 실시예 77 및 80의 화합물이 생체내 조건에서 높은 간 제거를 나타내고 낮은 전신 노출의 특징을 보임을 나타낸다
표 9a: 실시예 77 및 80의 화합물에 대한 간 미세소체 안정성 시험의 요약 (결과는 두 실험의 산술평균으로 나타냄).
Figure pct00199
표 9b: 실시예 77 및 80의 화합물에 대한 간세포 안정성 시험의 요약 (결과는 두 실험의 산술평균으로 나타냄).
Figure pct00200

(ii) 사이토크롬의 시간 의존적 저해
시험 화합물에 대해 0.062 μM에서 15 μM (n=2)까지 6 개의 시험 농도로 CYP450 시간 의존적 저해(TDI) 분석을 수행하였다. 풀화한 인간 간 미세소체로 시험 화합물을 pH 7.4, 37 ℃의 0.1 M Tris 완충제에서 보조인자 NADPH의 존재하에 30 분동안 예비인큐베이션하였다. 예비인큐베이션 없이 인큐베이션의 평행 시리즈(n=2)를 제조하였다. 그 후 프로브 기질을 (추가적인 보조인자와 함께) 첨가하고, 특정된 시간동안 더 인큐베이션하였다. 인큐베이션할 때 프로브 기질의 농도를 최적화하여 제1 순서 반응 조건을 유지하였다.
분석 내부 표준(카바마제핀)을 포함하는 아세토니트릴로 반응을 종결시키고, 그 후 샘플들을 원심분리하여 미세소체 단백질을 제거하고, 최적화된 LC/MS-MS 조건을 이용하여 분석하였다. MS 데이터를 내부 표준에 대해 정상화하고, "저해되지 않은" 대조군과 비교하여 프로브 기질로부터 형성된 대사산물의 양을 측정하기 위해 적절한 용매 대조군과 비교하였다. 결과를 % 저해로 나타내었다. 그 후 이 값들을 (하기의) S자형(sigmoidal) 투여 반응 공식을 이용하여 플로팅하고, IC50 값을 계산하였다.
Y = 바닥 + ((꼭대기-바닥)/1 + 10^((Log IC50-X) * 기울기))
X = Log 농도
Y = 반응
저해가 대조군 값의 50%인 시점에서 IC50은 μM으로 표시되었음.
사용된 조건 하에서의 특이 및 효능적 상호작용에 대한 잠재성을 나타내기 위해 양성 및 음성 시간 의존성 억제제를 포함하였다. 플레이트 웰 사이의 프로브 전환의 다양성은 10-15% 이하로 기록된 저해 값이 중요하지 않을 수 있음을 의미한다.
특정 조건의 요약을 하기 표에 나타내었다.
Figure pct00201
표 10: 실시예 77의 화합물에 대한 CYP 저해 연구의 요약 (결과는 두 실험의 산술 평균으로 기록됨).
Figure pct00202

hERG 저해 연구
실시예 75, 77, 80 및 81의 화합물로 IonWorksTM 패치 클램프 전기생리학을 사용하여 Essen Bioscience (Welwyn Garden City, England)에서 hERG(Human Ether a-go-go)의 저해를 시험하였다. 최대 최종 분석 농도(3 μM)로부터 연속적인 3-배 희석을 이용하여 8-포인트 농도 커브를 생성하였다. 전체 길이의 hERG 채널을 안정적으로 발현하는 중국 햄스터 폐 세포주로부터 전기생리학적 기록을 만들었다. IonWorks Quattro 기구를 이용하여 실온(21-23 ℃)의 천공된 패치 클램프 구성(100 ㎍/mL) 암포테리신)에서 단일 세포의 이온 전류를 측정하였다. 내부 용액은 다음을 포함하였고(mM): 140 KCl, 1 MgCl2, 1 EGTA, 20 HEPES; pH 7.3으로 완충되었다. 외부 용액은 다음을 포함하였고(mM): 138 NaCl, 2.7 KCl, 0.9 CaCl2, 0.5 MgCl2, 8 Na2HPO4, 1.5 KH2PO4; 또한 pH 7.3으로 완충되었다. 세포를 -70 mV의 고정 전압(holding potential)으로 30 초간 고정시키고, 그 후 +40 mV로 1 초간 넘어갔다. 그 후 1 초의 -30 mV로 과다분극(hyperpolarising) 단계로 진행되어 hERG 후미 전류(tail current)를 일으켰다. 이러한 순서를 0.25 Hz의 진동수로 5번 반복하였다. 5번째 펄스에서의 후미 단계(tail step)로부터 전류를 측정하고, 고정 전압에 참조하였다. 그 후, 동일한 펄스 열(pulse train)을 이용한 hERG 신호의 2차 측정을 하기에 앞서 화합물을 6-7 분동안 인큐베이션하였다. 최대 최종 분석 농도(3μM)로부터 연속적인 3-배 희석을 이용하여 8-포인트 농도 커브를 생성하였다.
이러한 연구를 통해 실시예 75, 77, 80 및 81의 화합물 모두 hERG 채널에 대한 IC50 값이 3μM 이상임을 확인하였다.
다양성 프로필
실시예 77의 화합물의 수용체의 다양한 선택에 대한 결합 및 효소의 선택(총 71개 수용체와 26개 효소를 포함하는 "다양성 프로필")에 대한 저해 또는 활성화를 조사하기 위해 Cerep (Celle-L?escault, France)에서 연구를 수행하였다.
300 nM의 농도에서 연구하였을 때 실시예 77의 화합물은 어떤 수용체와도 의미있게 결합하지 못했고, 시험된 효소를 저해/활성화시키지 못했다(즉, 각 수용체에 대해 적합한 방사리간드를 사용하거나, 각 효소에 대해 적합한 참조 기질을 사용하여 평가하였을 때, 수용체 결합 분석 또는 효소 분석에서 대조군의 특정 결합을 25% 미만으로 저해하였다).
돌연변이 유발성 평가(박테리아 역돌연변이 선별)
실시예 77의 화합물에 대해 2개의 쥐티프스균의 히스티딘 의존적 영양요구성 돌연변이인 TA98 및 TA100를 유도하는 능력을 시험관내 평가하기 위해 Sequani (Ledbury, Herefordshire, UK)에서 연구를 수행하였다.
플레이트 도입 방법(plate incorporation method)을 이용하여 돌연변이 선별을 수행하였으며, S-9 mix(Aroclor 1254로 처리된 쥐의 간에서 유래된 간의 포스트-미토콘드리아(post-mitochondrial) 분획의 존재 및 부재의 상태에서 모두 수행하였다. 박테리아를 디메틸설폭사이드에 용해된 실시예 77의 화합물에 노출시켰는데, 상기 용매를 또한 음성 대조군으로 사용하였다. 사용된 투여 수준은 0.32, 1.6, 8, 40, 200, 1000 또는 5000 ㎍/플레이트였다.
실시예 77의 화합물은 S-9 mix의 존재 또는 부재하에서 쥐티프스균주내 복귀 돌연변이체의 콜로니에 대해 용량 증가 또는 통계적으로 의미있는 증가를 보여주지 않았다. 이는 연구된 쥐티프스균에서 실시예 77의 화합물에 어떠한 돌연변이 유발성 효과도 존재하지 않음을 나타낸다.
위에서 밝힌 바와 같이 본 발명의 실시예 화합물의 생물학적 프로필은, 전술한 바와 같이 화학식 (I)의 화합물이 참조 화합물과 유사한 항염증 성질을 가짐을 나타낸다. 또한, 약학상의 효과가 12 시간동안 생체내에서 유지되었는데, 이는 치료 목적으로 사용된 경우 장기간의 활성을 보여줄 것을 시사한다. 유리하게도 화학식 (I)의 화합물은 참조 화합물, 즉 이러한 목적을 위해 설계된 많은 선행 기술 분자의 전형적인 예에 비해 보다 좁은 키나제 저해 활성의 스펙트럼을 나타내었으며, 세포 생존도 및 세포 분열에 대한 부정적인 효과의 잠재성을 감소시켰다. 따라서, 화학식 (I)의 화합물이 보여주는 약학적 프로필은 임상적인 사용에서 독성 유도에 대한 위험이 감소된 강력한 항-염증제와 다름없다.
명세서 전체 및 청구범위에서, 문맥 상에 다른 요구가 없는 한, '포함한다'는 단어 및 그 변형은, 기재된 정수, 단계, 정수의 그룹 또는 단계의 그룹을 포함하는 것을 내포하는 것으로 이해되나, 어떠한 정수, 단계, 정수의 그룹 또는 단계의 그룹도 배제하는 것을 암시하는 것으로 이해되지 않을 것이다.
본 명세서에서 인용된 모든 특허 및 특허출원은 모두 참조로서 포함된 것이다.
본원의 상세한 설명 및 청구범위가 각 부분을 형성하는 출원은 임의의 후속 출원에 대한 우선권의 근거로 사용될 수 있다. 그러한 후속 출원의 청구범위는 본 명세서에 기재된 임의의 특징 또는 그러한 특징들의 조합에 관한 것일 수 있다. 이는 제품, 조성물, 공정 또는 방법 청구항의 형태를 취할 수 있으며, 청구항을 예시적으로 제한없이 포함할 수 있다.

Claims (21)

  1. 모든 입체이성체 및 호변이성체를 포함한 화학식 (I)의 화합물, 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염:
    Figure pct00203

    상기 식에서,
    Q는 각각 하이드록실, 할로겐, C1-6 알킬, C1-6 알콕시, C1-6 할로알콕시, C1-6 하이드록시알킬, NH2, N(H)-C1-6 알킬, N(C1-6 알킬)2, C1-6 알킬렌-5-10 원 헤테로사이클 및 C0-3 알킬렌-O-C0-6 알킬렌-5-10 원 헤테로사이클중에서 독립적으로 선택되는 1 내지 3개의 치환체를 임의로 가질 수 있는 티에닐, 페닐 또는 피리디닐을 나타내고;
    X는 CH 또는 N을 나타내고,
    Y는 NR2R3, 또는 임의로 헤테로원자를 통해 연결된 4-10 헤테로사이클을 나타내고, 여기서 상기 헤테로사이클은 할로, OH, C1-6 알킬, C1-4 할로알킬, C0-3 알킬렌-O-C0-6 알킬, C0-3 알킬렌-O-C1-3 할로알킬, C0-6 알킬렌 아릴, C0-3 알킬렌-O-C0-3 알킬렌 아릴, C0-6 알킬렌 헤테로아릴, C0-3 알킬렌-O-C0-3 알킬렌 헤테로아릴, C(O)C1-6 알킬, SO2NR4R5, C0-3 알킬렌-NR4R5, C0-3 알킬렌-NR4SO2R5 및 C0-3 알킬렌-NR4C(O)R5 중에서 선택되는 0 또는 1개의 치환체를 가지며;
    R은
    C1-6 알킬,
    C2-6 알케닐,
    C1-6 하이드록시알킬,
    C1-6 할로알킬,
    C1-3 알콕시 또는 시아노에 의해 치환된 C1-6 알킬,
    C1-3 알킬에 의해 임의로 치환된 C0-2 알킬렌-C3-8 사이클로알킬, 또는
    C1-3 알킬에 의해 임의로 치환된 4-5 원 헤테로사이클이고;
    Ra 및 Rb는 이들이 결합된 C-원자와 함께, C1-3 알킬, C1-3 할로알킬, 시아노 및 할로중에서 선택되는 하나 이상의 치환체에 의해 임의로 치환된 융합된 페닐 환을 형성하거나,
    또는 Ra 및 Rb의 하나는 H, 할로, 시아노, C1-3 알킬 또는 C1-3 할로알킬을 나타내고 다른 하나는 독립적으로 할로, 시아노, C1-3 알킬 또는 C1-3 할로알킬을 나타내고;
    R1은 수소, OH, 할로겐, CN, C1-6 알킬, C2-6 알케닐, C2-6 알키닐, C1-6 할로알킬, C0-3 알킬렌-C3-6 사이클로알킬, C0-3 알킬렌-O-C1-3 알킬렌-C3-6 사이클로알킬, C1-6 알콕시, C1-6 할로알콕시, C1-6 하이드록시알킬, C0-3 알킬렌-SO2C1-3알킬, C0-3 알킬렌-SO2NR4R5, 및 C0-3 알킬렌-NR6R7 및 C0-3 알킬렌-NCOR6R7 중에서 선택되고;
    R2 및 R3은 각각 독립적으로 H, C1-8 알킬, C0-6 알킬렌 아릴, C0-6 알킬렌 헤테로아릴, C0-6 알킬렌-4-10 원 헤테로사이클, 및 C0-3 알킬렌-O-C0-6 알킬렌-4-10 원 헤테로사이클 중에서 선택되되, 단 여기서 헤테로사이클이 질소를 통해 연결되는 경우에는 치환체의 필수 O 원자에 상기 질소 원자를 연결하는 알킬렌 쇄에 적어도 2개의 C-원자가 있고, 여기서 독립적으로 각 알킬 또는 알킬렌 그룹은 임의로 1개의 옥소 치환체를 갖고, 임의로 알킬 또는 알킬렌 쇄내 1 또는 2개의 탄소 원자는 각각 O, N 또는 S(O)p 중에서 선택되는 헤테로원자로 대체될 수 있으며, 이에 따라 상기 알킬 또는 알킬렌이 아민을 포함하는 경우 상기 아미노 그룹은 삼차 아민이고,
    여기서 각 4-10 원 헤테로사이클은 할로, OH, C1-6 알킬, C1-4 할로알킬, C0-3 알킬렌-O-C0-6 알킬, C0-3 알킬렌-O-C1-3 할로알킬, C0-6 알킬렌 아릴, C0-3 알킬렌-O-C0-3 알킬렌 아릴, C0-6 알킬렌 헤테로아릴, C0-3 알킬렌-O-C0-3 알킬렌 헤테로아릴, C(O)C1-6 알킬, SO2NR8R9, 및 C0-3 알킬렌-NR8R9, C0-3 알킬렌-NR8SO2R9 및 C0-3 알킬렌-NR8C(O)R9 중에서 독립적으로 선택되는 1 또는 2개의 그룹에 의해 임의로 치환되며;
    R4는 H 또는 C1-4 알킬이고;
    R5는 H 또는 C1-4 알킬이고,
    R6은 H 또는 C1-4 알킬, C(O)C1-3알킬 및 SO2C1-3 알킬이고;
    R7은 H 또는 C1-4 알킬, C(O)C1-3알킬 및 SO2C1-3 알킬이고;
    R8은 H 또는 C1-4 알킬이고;
    R9는 H 또는 C1-4 알킬이고;
    p는 0, 1 또는 2이다.
  2. 제1항에 있어서 화학식 (Ia2)의 화합물:
    Figure pct00204

    상기 식에서, R, R1, Q 및 Y는 제1항에서 정의된 바와 같다.
  3. 제1항에 있어서 화학식 (Ib2)의 화합물:
    Figure pct00205

    상기 식에서, R, R1, Q, X 및 Y는 제1항에서 정의된 바와 같다.
  4. 제1항에 있어서 화학식 (Ic)의 화합물:
    Figure pct00206

    상기 식에서, R, R1, Q 및 Y는 제1항에서 정의된 바와 같다.
  5. 제1항에 있어서 화학식 (Id2)의 화합물:
    Figure pct00207

    상기 식에서, R, R1, Q 및 Y는 제1항에서 정의된 바와 같다.
  6. 제1항에 있어서 화학식 (Ie2)의 화합물:
    Figure pct00208

    상기 식에서, R, R1, Q 및 Y는 제1항에서 정의된 바와 같다.
  7. 제1항에 있어서 화학식 (If2)의 화합물:
    Figure pct00209

    상기 식에서, R, R1, Q 및 Y는 제1항에서 정의된 바와 같다.
  8. 제1항에 있어서 화학식 (Ig2)의 화합물:
    Figure pct00210

    상기 식에서, R, R1, X, Q 및 Y는 제1항에서 정의된 바와 같다.
  9. 제1항 내지 제8항중 어느 한 항에 있어서,
    R이
    C1-6 n-알킬,
    C4-6 분지 알킬,
    C2-6 알케닐,
    C1-6 하이드록시알킬,
    C1-6 할로알킬,
    C1-3 알콕시 또는 시아노에 의해 치환된 C1-6 알킬,
    C1-3 알킬에 의해 임의로 치환된 C0-2 알킬렌-C3-8 사이클로알킬, 또는
    C1-3 알킬에 의해 임의로 치환된 4-5 원 헤테로사이클인 화합물.
  10. 제1항에 있어서,
    3-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리딘-2-일)아미노)-5-메톡시-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
    3-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)벤즈아미드;
    3-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
    4-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-N-(2-하이드록시에틸)-3-메톡시벤즈아미드;
    N-(2-(디메틸아미노)에틸)-3-((4-((4-(3-(3-이소프로필-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-메톡시벤즈아미드;
    N-(2-(디메틸아미노)에틸)-3-((4-((4-(3-(3-이소프로필-1-(4-메톡시페닐)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-메톡시벤즈아미드;
    3-((4-((4-(3-(3-이소프로필-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-N-(2-모르폴리노에틸)-5-(트리플루오로메틸)벤즈아미드;
    3-((4-((4-(3-(3-이소프로필-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-메톡시-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
    3-메톡시-N-(2-모르폴리노에틸)-5-((4-((4-(3-(3-(퍼플루오로에틸)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)벤즈아미드;
    3-((4-((4-(3-(3-이소프로필-1-(6-메톡시피리딘-3-일)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-메톡시-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
    3-((4-((4-(3-(3-이소프로필-1-(4-메톡시페닐)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-메톡시-N-(2-메톡시에틸)벤즈아미드;
    1-(3-이소프로필-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)-3-(4-((2-((3-메톡시-5-(모르폴린-4-카보닐)페닐)아미노)피리미딘-4-일)옥시)나프탈렌-1-일)우레아;
    5-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-2-메톡시-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
    3-((6-((4-(3-(3-이소프로필-1-(4-메톡시페닐)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-4-일)아미노)-5-메톡시-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
    3-((4-((4-(3-(3-이소프로필-1-(4-메톡시페닐)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리딘-2-일)아미노)-5-메톡시-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
    3-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-N-메틸벤즈아미드;
    3-(4-(4-(3-(3-tert-부틸-1-(4-메톡시페닐)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일옥시)피리미딘-2-일아미노)-N-프로필벤즈아미드;
    3-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-N-(2-(디메틸아미노)에틸)벤즈아미드;
    3-((4-((4-(3-(3-이소프로필-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
    3-((4-((4-(3-(3-이소프로필-1-(4-메톡시페닐)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
    3-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(4-메톡시페닐)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
    3-((4-((4-(3-(3-(3-메틸옥세탄-3-일)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
    3-((4-((4-(3-(1-(4-메톡시페닐)-3-(3-메틸옥세탄-3-일)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
    3-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(4-메틸티오펜-2-일)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
    3-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-N-(2-(4-메틸피페라진-1-일)에틸)벤즈아미드;
    3-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-N,N-디메틸벤즈아미드;
    1-(3-(tert-부틸)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)-3-(4-((2-((3-(모르폴린-4-카보닐)페닐)아미노)피리미딘-4-일)옥시)나프탈렌-1-일)우레아;
    N-(2-(디메틸아미노)에틸)-3-((4-((4-(3-(3-이소프로필-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-4-메톡시벤즈아미드;
    3-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-N-(2-(디메틸아미노)에틸)-4-메톡시벤즈아미드;
    3-((4-((4-(3-(3-이소프로필-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-4-메톡시-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
    3-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-4-메톡시-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
    N-(2-하이드록시에틸)-3-((4-((4-(3-(3-이소프로필-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-4-메톡시벤즈아미드;
    3-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-N-(2-하이드록시에틸)-4-메톡시벤즈아미드;
    N-(2-하이드록시에틸)-3-((4-((4-(3-(3-이소프로필-1-(4-메톡시페닐)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-4-메톡시벤즈아미드;
    N-(2-(디메틸아미노)에틸)-4-((4-((4-(3-(3-이소프로필-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-3-메톡시벤즈아미드;
    4-((4-((4-(3-(3-이소프로필-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-3-메톡시-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
    4-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-3-메톡시-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
    4-((4-((4-(3-(3-이소프로필-1-(4-메톡시페닐)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-3-메톡시-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
    N-(2-하이드록시에틸)-4-((4-((4-(3-(3-이소프로필-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-3-메톡시벤즈아미드;
    3-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-메틸벤즈아미드;
    3-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(4-메톡시페닐)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-메톡시벤즈아미드;
    3-브로모-5-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(4-메톡시페닐)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)벤즈아미드;
    3-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-N-(2-(디메틸아미노)에틸)-5-메톡시벤즈아미드;
    3-((4-((4-(3-(3-이소프로필-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-메틸-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
    3-((4-((4-(3-(3-이소프로필-1-(4-메톡시페닐)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-메틸-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
    3-((4-((4-(3-(3-이소프로필-1-(4-메톡시페닐)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-N-(2-모르폴리노에틸)-5-(트리플루오로메틸)벤즈아미드;
    3-메톡시-N-(2-모르폴리노에틸)-5-((4-((4-(3-(1-(p-톨릴)-3-(트리플루오로메틸)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)벤즈아미드;
    3-((4-((4-(3-(3-에틸-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-메톡시-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
    3-((4-((4-(3-(3-사이클로프로필-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-메톡시-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
    3-메톡시-5-((4-((4-(3-(3-(1-메틸사이클로프로필)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
    3-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-메톡시-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
    3-((4-((4-(3-(3-이소프로필-1-(4-메톡시페닐)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-메톡시-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
    3-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(4-메톡시페닐)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-메톡시-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
    3-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(3-(2-메톡시에톡시)페닐)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-메톡시-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
    3-((4-((4-(3-(1-(3,4-디메틸페닐)-3-이소프로필-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-메톡시-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
    3-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(6-메톡시피리딘-3-일)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-메톡시-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
    3-메톡시-5-((4-((4-(3-(1-(4-메톡시페닐)-3-(테트라하이드로푸란-2-일)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
    3-메톡시-5-((4-((4-(3-(1-(4-메톡시페닐)-3-(테트라하이드로푸란-3-일)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
    3-클로로-5-((4-((4-(3-(3-이소프로필-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
    3-클로로-5-((4-((4-(3-(3-이소프로필-1-(4-메톡시페닐)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
    3-브로모-5-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
    N-(2-하이드록시에틸)-3-((4-((4-(3-(3-이소프로필-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-메톡시벤즈아미드;
    3-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-N-(2-하이드록시에틸)-5-메톡시벤즈아미드;
    N-(2-하이드록시에틸)-3-((4-((4-(3-(3-이소프로필-1-(4-메톡시페닐)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-메톡시벤즈아미드;
    3-((4-((4-(3-(3-이소프로필-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-메톡시-N-(2-메톡시에틸)벤즈아미드;
    3-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-메톡시-N-(2-메톡시에틸)벤즈아미드;
    3-((4-((4-(3-(3-이소프로필-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-메톡시-N-메틸-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
    1-(3-이소프로필-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)-3-(4-((2-((3-메톡시-5-(4-메틸피페라진-1-카보닐)페닐)아미노)피리미딘-4-일)옥시)나프탈렌-1-일)우레아;
    5-((4-((4-(3-(3-이소프로필-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-2-메톡시-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
    3-((6-((4-(3-(3-이소프로필-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-4-일)아미노)-5-메톡시-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
    3-((6-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-4-일)아미노)-5-메톡시-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
    3-에티닐-5-((4-((4-(3-(3-이소프로필-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
    3-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(6-메톡시피리딘-3-일)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-에티닐-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
    3-에티닐-N-(2-모르폴리노에틸)-5-((4-((4-(3-(3-(퍼플루오로에틸)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)벤즈아미드;
    3-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-에티닐-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
    3-에티닐-N-(2-모르폴리노에틸)-5-((4-((4-(3-(1-(p-톨릴)-3-(1,1,1-트리플루오로-2-메틸프로판-2-일)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)벤즈아미드;
    3-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(4-메톡시페닐)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-에티닐-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
    3-((4-((4-(3-(3-(2-시아노프로판-2-일)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-에티닐-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
    3-에티닐-5-((4-((4-(3-(3-(2-메톡시프로판-2-일)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)-나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
    3-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(4-(디메틸아미노)페닐)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-에티닐-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
    (S)-3-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-에티닐-N-(1-모르폴리노프로판-2-일)벤즈아미드;
    3-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-에티닐-N-(2-메틸-1-모르폴리노프로판-2-일)벤즈아미드;
    (R)-3-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-에티닐-N-(1-모르폴리노프로판-2-일)벤즈아미드;
    3-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(4-메톡시페닐)-1H-피라졸-5-일)우레이도)-나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-에티닐-N-(2-메톡시에틸)벤즈아미드;
    (S)-3-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(4-메톡시페닐)-1H-피라졸-5-일)우레이도)-나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-에티닐-N-(1-메톡시프로판-2-일)벤즈아미드;
    3-메톡시-5-((4-((4-(3-(1-(4-메톡시페닐)-3-(프로프-1-엔-2-일)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
    3-((4-(2,3-디클로로-4-(3-(3-이소프로필-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)페녹시)피리미딘-2-일)아미노)-5-에티닐-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
    3-((4-(2,3-디플루오로-4-(3-(3-이소프로필-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)페녹시)피리미딘-2-일)아미노)-5-에티닐-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드;
    3-((4-(2,3-디클로로-4-(3-(3-이소프로필-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)페녹시)피리미딘-2-일)아미노)-5-에티닐벤즈아미드;
    3-((4-(2,3-디클로로-4-(3-(3-이소프로필-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)페녹시)피리미딘-2-일)아미노)-N-(2-(디메틸아미노)에틸)-5-에티닐벤즈아미드;
    3-((6-(4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(4-메톡시페닐)-1H-피라졸-5-일)우레이도)-2,3-디메틸페녹시)피리미딘-4-일)아미노)-5-메톡시-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드를 포함하거나 이로 구성된 그룹중에서 선택되는 화합물 및 이들의 약학적으로 허용가능한 염.
  11. 제1항, 제3항 내지 제5항, 제8항 및 제10항중 어느 한 항에 있어서, 3-((4-((4-(3-(3-이소프로필-1-(p-톨릴)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-메톡시-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드가 아닌 화합물.
  12. 제1항에 있어서, 3-((4-((4-(3-(3-(tert-부틸)-1-(4-메톡시페닐)-1H-피라졸-5-일)우레이도)나프탈렌-1-일)옥시)피리미딘-2-일)아미노)-5-에티닐-N-(2-모르폴리노에틸)벤즈아미드인 화합물, 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염.
  13. 제1항 내지 제12항중 어느 한 항에 따른 화합물을 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 희석제 또는 담체와 조합하여 포함하는 약학 조성물.
  14. (A) 제1항 내지 제12항중 어느 한 항에 따른 화합물; 및
    (B) 다른 치료제를 포함하며,
    여기서 성분 (A) 및 (B)는 각각 약학적으로 허용가능한 애쥬번트, 희석제 또는 담체와 혼합하여 제제화된,
    조합물(combination product).
  15. 의약으로 사용하기 위한, 제1항 내지 제12항중 어느 한 항에 따른 화합물, 제13항에 따른 조성물, 또는 제14항에 따른 조합물.
  16. COPD (만성 기관지염 및 폐기종 포함), 천식, 소아 천식, 낭포성 섬유증, 유육종증, 특발성 폐섬유증, 알러지성 비염, 비염, 부비강염, 알러지성 결막염, 결막염, 건성각결막염 (건성 안), 녹내장, 당뇨병성 망막증, 황반부종 (당뇨병성 황반부종 포함), 망막 중심 정맥 폐쇄 (CRVO), 건성 및/또는 습성 연령관련황반변성(AMD), 수술후 백내장 염증, 포도막염 (후방, 전방 및 범 포도막염 포함), 각막 이식편 및 윤부 세포 이식 거부, 글루텐 과민성 장질환 (만성 소화 장애증), 호산구 식도염, 장 이식편대숙주 질환, 크론병, 궤양성 대장염, 류마티스 관절염 또는 골관절염의 치료에 사용하기 위한, 제1항 내지 제12항중 어느 한 항에 따른 화합물, 제13항에 따른 조성물, 또는 제14항에 따른 조합물.
  17. COPD, 천식, 건성각결막염 (건성 안), 포도막염 (후방, 전방 및 범 포도막염 포함), 크론병 또는 궤양성 대장염의 치료에 사용하기 위한, 제1항 내지 제12항중 어느 한 항에 따른 화합물, 제13항에 따른 조성물, 또는 제14항에 따른 조합물.
  18. COPD (만성 기관지염 및 폐기종 포함), 천식, 소아 천식, 낭포성 섬유증, 유육종증, 특발성 폐섬유증, 알러지성 비염, 비염, 부비강염, 알러지성 결막염, 결막염, 건성각결막염 (건성 안), 녹내장, 당뇨병성 망막증, 황반부종 (당뇨병성 황반부종 포함), 망막 중심 정맥 폐쇄 (CRVO), 건성 및/또는 습성 연령관련황반변성(AMD), 수술후 백내장 염증, 포도막염 (후방, 전방 및 범 포도막염 포함), 각막 이식편 및 윤부 세포 이식 거부, 글루텐 과민성 장질환 (만성 소화 장애증), 호산구 식도염, 장 이식편대숙주 질환, 크론병, 궤양성 대장염, 류마티스 관절염 또는 골관절염 치료용 의약의 제조를 위한, 제1항 내지 제12항중 어느 한 항에 따른 화합물, 제13항에 따른 조성물, 또는 제14항에 따른 조합물의 용도.
  19. 제1항 내지 제12항중 어느 한 항에 따른 화합물, 제13항에 따른 약학 조성물, 또는 제14항에 따른 조합물의 유효량을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, COPD (만성 기관지염 및 폐기종 포함), 천식, 소아 천식, 낭포성 섬유증, 유육종증, 특발성 폐섬유증, 알러지성 비염, 비염, 부비강염, 알러지성 결막염, 결막염, 건성각결막염 (건성 안), 녹내장, 당뇨병성 망막증, 황반부종 (당뇨병성 황반부종 포함), 망막 중심 정맥 폐쇄 (CRVO), 건성 및/또는 습성 연령관련황반변성(AMD), 수술후 백내장 염증, 포도막염 (후방, 전방 및 범 포도막염 포함), 각막 이식편 및 윤부 세포 이식 거부, 글루텐 과민성 장질환 (만성 소화 장애증), 호산구 식도염, 장 이식편대숙주 질환, 크론병, 궤양성 대장염, 류마티스 관절염 및 골관절염중에서 선택되는 병태의 치료방법.
  20. 하나 이상의 만성 병태, 예컨대 울혈성 심부전, COPD, 천식, 당뇨병, 암을 가진 환자 및/또는 예를 들어 장기 이식후 면역억제 환자에서 염증성 질환의 악화, 특히 바이러스 항진의 치료, 또는 바이러스 감염의 치료에 사용하기 위한, 제1항 내지 제12항중 어느 한 항에 따른 화합물, 제13항에 따른 조성물, 또는 제14항에 따른 조합물.
  21. 제20항에 있어서, 자나미비르, 오셀타미비르 (예를 들어 오셀타미비르 포스페이트), 페라미비르 또는 라니나미비르와 같은 항-바이러스 치료제와 조합하여 사용하기 위한 화합물, 조성물 또는 조합물.
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