KR20140147982A - 레티노이드 생산에 관여하는 효소를 코딩하는 유전자를 포함하는 미생물 및 이를 이용한 레티노이드의 생산 방법 - Google Patents

레티노이드 생산에 관여하는 효소를 코딩하는 유전자를 포함하는 미생물 및 이를 이용한 레티노이드의 생산 방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 레티노이드 생산에 관여하는 효소를 코딩하는 유전자를 포함하는 미생물 및 이를 이용한 레티노이드의 생산 방법에 관한 것으로, 보다 상세하게는 레티노이드 생산에 관여하는 효소를 코딩하는 유전자를 포함함으로써, 안전하면서 우수한 효율로 레티노이드를 대량 생산할 수 있는 미생물 및 이를 이용한 레티노이드의 생산 방법에 관한 것이다.

Description

레티노이드 생산에 관여하는 효소를 코딩하는 유전자를 포함하는 미생물 및 이를 이용한 레티노이드의 생산 방법 {Microorganism including genes coding enzymes involved in the production of retinoid and preparing method for retinoid using the same}
본 발명은 레티노이드 생산에 관여하는 효소를 코딩하는 유전자를 포함하는 미생물 및 이를 이용한 레티노이드의 생산 방법에 관한 것이다.
레티노이드는 비타민 A와 화학적으로 관련된 친지질성 이소프레노이드 분자의 클래스이다. 레티노이드는 알코올(예를 들면, 레티놀), 알데히드 (예를 들면, 레티날), 카르복실산 (예를 들면, 레티노산), 또는 에스테르 (예를 들면, 레티닐 아세테이트) 기능기와 함께, β-이논 고리 및 다불포화(polyunsaturated) 곁사슬로 구성된다. 이들은 시력보호, 골 발달 및 재생, 항산화 효과와 더불어 피부 노화 방지와 같은 인체 건강에 있어 필수적인 역할을 하고 특정 암의 위험을 감소시킨다고 알려져 있다.
레티노이드는 최근 수년간 주름개선 및 피부 질환 치료를 위한 효과적인 화장품 및 의약품 원료로서 큰 관심을 받아 왔다. 레티노이드 시장 규모는 세계적으로 약 160억불 정도로 추정된다. 화학적으로 합성된 레티노이드는 대표적인 상업적 원료이다. 레티놀은 펜타디엔 유도체의 환원에 의해 화학적으로 합성된 레티날의 산성화 또는 가수분해로부터 생산된다. 그러나 이러한 화학적 과정은 복잡한 정제 단계 및 원하지 않는 부산물 형성과 같은 단점을 갖는다. 동물은 과일 및 야채로부터 얻은 카로티노이드로부터 레티노이드를 생산하는 반면, 식물은 레티노이드를 합성할 수 없다. 레티노이드 합성의 전체 경로는 보조기(prosthetic group)로서 레티날을 갖는 박테리오로돕신 또는 프로테오로돕신을 포함하는 미생물에서만 가능하다. 그러나, 미생물은 레티날의 단백질 결합 형태를 생산하므로 자유 레티노이드의 대량 생산에는 적합하지 않다. 지금까지 생물학적 생산을 위해서 효소를 이용한 일부 제한적인 시도가 있었지만 성공적인 결과는 없었다. 따라서, 대사적으로 형질전환된 미생물을 사용하는, 레티노이드 생산을 위한 생명공학적 방법의 개발이 필요하다.
레티노이드는 그의 반응성 있는 콘쥬게이트된 이중 결합으로 인해 화학적으로 매우 불안정하고, 열, 산소 및 빛에 의해 쉽게 산화되고 이성체화된다. 또한 레티노이드는 생물학적으로 레티노산을 통해 쉽게 분해된다. 따라서, 레티노이드를 보다 효율적으로 생산하는 방법이 요구되고 있다.
한국공개특허 제2008-42387호에는 이소프레노이드와 카로티노이드 생합성 유전자로 형질전환된 대장균 및 이를 이용한 아스타잔틴의 대량 생산방법이 개시되어 있다.
한국공개특허 제2008-42387호
본 발명은 안전하면서 우수한 효율로 레티노이드를 생산할 수 있는 미생물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
본 발명은 이러한 미생물을 이용하여 레티노이드를 생산하는 방법을 을 제공하는 것을 목적으로 한다.
1. 레티노이드 생산에 관여하는 효소를 코딩하는 유전자를 포함하는 사카로마이세스 속 미생물.
2. 위 1에 있어서, 상기 유전자는 서열번호 2 내지 9로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 아미노산 서열을 코딩하는 것인, 미생물.
3, 위 1에 있어서, 상기 유전자는 서열번호 2, 3 및 10 중 적어도 하나; 서열번호 4 및 11 중 적어도 하나; 서열번호 5, 6 및 12 중 적어도 하나; 서열번호 7; 서열번호 8; 및 서열번호 9, 13 및 21 중 적어도 하나;의 아미노산 서열을 코딩하는 것인, 미생물.
4. 위 3에 있어서, 서열번호 1의 아미노산 서열을 코딩하는 유전자를 더 포함하는, 미생물.
5. 위 1에 있어서, 사카로마이세스 세레비지에인, 미생물.
6. 위 1에 있어서, 사카로마이세스 세레비지에 Y2805인, 미생물.
7. 레티노이드 생산에 관여하는 효소를 코딩하는 유전자를 포함하는 코리네박테리움 속 미생물.
8. 위 7에 있어서, 상기 유전자는 서열번호 2 내지 9로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 아미노산 서열을 코딩하는 것인, 미생물.
9. 위 7에 있어서, 상기 유전자는 서열번호 2, 3 및 10 중 적어도 하나; 서열번호 4 및 11 중 적어도 하나; 서열번호 5, 6 및 12 중 적어도 하나; 서열번호 7; 서열번호 8; 및 서열번호 9, 13 및 21 중 적어도 하나;의 아미노산 서열을 코딩하는 것인, 미생물.
10. 위 9에 있어서, 서열번호 14 및 15 중 적어도 하나의 아미노산 서열을 코딩하는 유전자를 더 포함하는, 미생물.
11. 위 9에 있어서, 서열번호 16 내지 20의 아미노산 서열을 코딩하는 유전자를 더 포함하는, 미생물.
12. 위 7에 있어서, 서열번호 22 내지 24로 이루어진 군에서 선택된 적어도 하나의 아미노산 서열을 코딩하는 유전자를 불활성화 또는 결손화한, 미생물.
13. 위 7에 있어서, 코리네박테리움 글루타미쿰인, 미생물.
14. 위 7에 있어서, 코리네박테리움 글루타미쿰 ATCC13032인, 미생물.
15. 위 1 내지 14 중 어느 한 항에 있어서, 유전자는 벡터에 의해 도입된 것인, 미생물.
16. 위 1 내지 15 중 어느 한 항의 미생물을 배양하는 단계; 및 상기 미생물의 배양물로부터 레티노이드를 분리하는 단계를 포함하는 레티노이드의 생산 방법.
17. 위 16에 있어서, 상기 미생물의 배양은 친유성 물질을 포함하는 배지 중에서 수행되는 것인, 방법.
18. 위 17에 있어서, 상기 분리는 친유성 물질 상으로부터 되는 것인, 방법.
19. 위 17에 있어서, 상기 친유성 물질은 옥탄, 데칸, 도데칸, 테트라데칸, 피토스쿠알란, 미네랄 오일, 이소프로필 미리스테이트, 세틸 에틸헥사노에이트, 디옥타노일 데카노일 글리세롤, 스쿠알란, 또는 이들의 조합인, 방법.
본 발명의 레티노이드 생산에 관여하는 효소를 코딩하는 유전자를 포함하는 미생물은 안전하면서도 우수한 효율로 레티노이드를 대량생산할 수 있다.
본 발명의 미생물을 이용한 레티노이드 생산 방법을 통해 얻어진 레티노이드는 화장품, 식품, 의약품 등의 소재로 널리 활용될 수 있고, 화장품, 식품, 의약품 등의 제조를 위해 특정 레티노이드의 효과적인 생산이 필요할 경우 본 발명의 레티노이드 생산 방법을 활용하기 적합하다.
도 1은 β-카로틴의 레티날, 레티놀, 레티노산, 및 레티닐 에스테르를 포함하는 레티노이드로의 변환을 나타낸 도면이다.
도 2는 레티날 생합성의 MEP 경로 및 외래의 MVA 경로를 도식적으로 나타낸 도면이다.
도 3은 레티노이드 표준화합물(A)과 사카로마이세스(B)를 통해 생산된 레티노이드의 HPLC 피크를 나타낸 것이다.
도 4는 레티노이드 표준화합물(A, C)과 사카로마이세스에서 생산된 레티노이드(B, D)의 LC-MS 피크를 나타낸 것이다.
도 5는 레티노이드 표준화합물(A)과 코리네박테리움(B)를 통해 생산된 레티노이드의 HPLC 피크를 나타낸 것이다.
본 발명은 레티노이드 생산에 관여하는 효소를 코딩하는 유전자를 포함함으로써, 안전하면서 우수한 효율로 레티노이드를 대량 생산할 수 있는 미생물 및 이를 이용한 레티노이드의 생산 방법에 관한 것이다.
이하, 본 발명을 보다 상세히 설명한다.
본 발명은 레티노이드 생산능을 갖는 미생물을 제공한다.
용어 "레티노이드 (retinoids)"는 비타민 A에 화학적으로 관련된 화학물질의 부류를 나타낸다. 레티노이드의 구조는 시클릭 말단기, 폴리엔 측쇄 및 극성 말단기로 구성된다. 상기 폴리엔 측쇄의 C=C 이중결합이 교대로 되어 형성된 공액 시스템 (conjugated system)은 레티노이드의 색 (보통 노란색, 오렌지 또는 적색)을 띄게 한다. 많은 레티노이드는 발색소(chromophore)이다. 측쇄 및 말단기를 변화시킴으로써 다양한 레티노이드가 생성될 수 있다. 상기 레티노이드는 레티날, 레티놀, 레티노산, 레티닐 아세테이트, 또는 이들의 조합일 수 있다. 또한, 상기 레티노이드는 레티날, 레티놀, 레티노산, 레티닐 아세테이트, 또는 이들의 조합의 생체 내 분해 산물일 수 있다.
상기 미생물은 사카로마이세스 속 또는 코리네박테리움 속 일 수 있다.
사카로마이세스 속 미생물은 특별히 한정되지 않고 레티노이드 생산능에 따라 적절히 선택될 수 있으며, 예를 들면 사카로마이세스 세레비지에일 수 있고, 바람직하게는 사카로마이세스 세레비지에 Y2805일 수 있다.
코리네박테리움 속 미생물은 특별히 한정되지 않고 레티노이드 생산능에 따라 적절히 선택될 수 있으며, 예를 들면 코리네박테리움 글루타미쿰일 수 있고, 바람직하게는 코리네박테리움 글루타미쿰 ATCC13032(Corynebacterium glutamcium ATCC13032, taxid: 196627; GenBank NID: NC_003450, ATCC13032)일 수 있다.
본 발명의 레티노이드 생산능을 갖는 미생물은 레티노이드 생산에 관여하는 효소를 코딩하는 유전자를 포함한다.
본 발명에서 레티노이드 생산에 관여하는 효소는 레티노이드의 생산에 필요한 효소, 레티노이드의 생산량을 증가시키는 효소 또는 이들의 조합을 총칭한다.
상기 유전자는 서열번호 2의 판토에아 아글로메란스(Pantoea agglomerans) 유래의 제라닐제라닐 피로포스페이트(GGPP) 신타제의 아미노산 서열, 서열번호 3의 시네코시스티스 종 PCC6803(Synechocystis sp. PCC6803) 유래의 제라닐제라닐 피로포스페이트(GGPP) 신타제의 아미노산 서열, 서열번호 4의 판토에아 아글로메란스 유래의 피토엔 신타제의 아미노산 서열, 서열번호 5의 판토에아 아글로메란스 유래의 피토엔 디히드로게나제의 아미노산 서열, 서열번호 6의 로도수도모나스 팔러스트리스(Rhodopseudomonas palustris) 유래의 피토엔 데히드로게나제의 아미노산 서열, 서열번호 7의 판토에아 아나나티스(Pantoea ananatis) 유래의 라이코펜-베타-시클라제의 아미노산 서열, 서열번호 8의 배양되지 않는 해양 세균 66A03(uncultured marine bacterium 66A03) 유래의 베타-카로틴 모노옥시게나제의 아미노산 서열 및 서열번호 9의 크로노박터 사카자키(Cronobacter sakazakii) 유래의 IPP 이소머라제의 아미노산 서열 등을 코딩하는 것일 수 있다. 이들은 단독 또는 2종 이상 조합하여 사용할 수 있다.
본 발명의 레티노이드 생산능을 갖는 미생물이 사카로마이세스 속인 경우에는, 바람직하게는 상기 유전자는 서열번호 2, 3 및 10 중 적어도 하나; 서열번호 4 및 11 중 적어도 하나; 서열번호 5, 6 및 12 중 적어도 하나; 서열번호 7; 서열번호 8; 및 서열번호 9, 13 및 21 중 적어도 하나;의 아미노산 서열을 코딩하는 것일 수 있다. 그러한 경우에, 보다 효율적으로 레티노이드를 생산하여 생산량을 극대화할 수 있다.
서열번호 10은 내재적인 GGPP 신타제의 아미노산 서열, 서열번호 11은 내재적인 피토엔 신타제의 아미노산 서열, 서열번호 12는 내재적인 피토엔 디히드로게나제의 아미노산 서열, 서열번호 13은 코리네박테리움 글루타미쿰 유래의 이소펜테닐 디포스페이트 (IPP) 이소머라제의 아미노산 서열, 서열번호 21은 대장균 유래의 이소펜테닐 디포스페이트 (IPP) 이소머라제의 아미노산 서열이다.
또한, 사카로마이세스 속 미생물은 서열번호 1의 사카로마이세스 세레비지에 (Saccharomyces cerevisiae) 유래의 하이드록시메틸글루타릴(HMG)-CoA 리덕타제의 아미노산 서열을 코딩하는 유전자를 더 포함할 수 있다. 이는 레티노이드 생산량을 더욱 촉진하는 역할을 한다.
본 발명의 레티노이드 생산능을 갖는 미생물이 코리네박테리움 속인 경우에는, 바람직하게는 상기 유전자는 서열번호 2, 3 및 10 중 적어도 하나; 서열번호 4 및 11 중 적어도 하나; 서열번호 5, 6 및 12 중 적어도 하나; 서열번호 7; 서열번호 8; 및 서열번호 9, 13 및 21 중 적어도 하나;의 아미노산 서열을 코딩하는 것일 수 있다. 그러한 경우에, 보다 효율적으로 레티노이드를 생산하여 생산량을 극대화할 수 있다.
또한, 코리네박테리움 속 미생물은 서열번호 14의 대장균 유래 1-데옥시자일룰로즈-5-포스페이트 (DXP) 신타제의 아미노산 서열, 서열번호 15의 내재적인 1-데옥시자일룰로즈-5-포스페이트 (DXP) 신타제의 아미노산 서열 등을 코딩하는 유전자를 더 포함할 수 있다. 이들은 단독 또는 2종 이상 조합하여 사용할 수 있다. 이는 레티노이드 생산량을 더욱 촉진하는 역할을 한다.
DXP는 내재적 MEP 경로에서 속도 결정 단계에 해당하는 효소이므로, 본 발명의 미생물은 DXP 신타제의 아미노산 서열을 코딩하는 유전자를 더 포함함으로써 베타-카로틴을 고농도로 생산할 수 있다. 도 1은 β-카로틴의 레티날, 레티놀, 레티노산, 및 레티닐 에스테르를 포함하는 레티노이드로의 변환을 나타낸다.
또한, 코리네박테리움 속 미생물은 내재적으로 MEP 경로를 가지고 있는 것이나, 아세틸-CoA로부터 IPP를 생산하는데 관여하는 외래 메발로네이트 경로의 효소를 코딩하는 유전자를 더 포함할 수 있다. 도 2는 레티날 생합성의 MEP 경로 및 외래의 MVA 경로를 도식적으로 나타낸 도면이다.
상기 외래 메발로네이트 경로의 효소를 코딩하는 유전자는 예를 들면, 서열번호 16의 엔테로코커스 패칼리스 (Enterococcus faecalis) 유래의 아세틸-CoA 아세틸트란스퍼라제/하이드록시메틸글루타릴 (HMG)-CoA 리덕타제의 아미노산 서열, 서열번호 17의 엔테로코커스 패칼리스 유래의 HMG-CoA 신타제의 아미노산 서열, 서열번호 18의 스트렙토코커스 뉴모니애 (Streptococcus pneumoniae) 유래의 메발로네이트 키나제의 아미노산 서열, 서열번호 19의 스트렙토코커스 뉴모니애 유래의 포스포메발로네이트 키나제의 아미노산 서열, 서열번호 20의 스트렙토코커스 뉴모니애 유래의 메발로네이트 디포스페이트 데카르복실라제의 아미노산 서열 등을 코딩하는 것일 수 있다. 이들은 단독 또는 2종 이상 조합하여 사용할 수 있다
IPP 이소머라제는 카로테노이드 또는 이소프레노이드 생합성 과정에서 이소프렌 단위의 조합 비율, 즉, 각각의 이소프렌 단위에 대하여 IPP와 DMAPP의 비율을 조절하는 결정적인 역할을 한다.
또한, 본 발명의 미생물은 상기 IPP로부터 베타-카로틴을 합성하는데 관여하는 효소를 코딩하는 유전자가 추가적으로 도입된 것일 수 있고, 두 카피의 IPP 이소머라제가 도입되어 IPP로부터 DMAPP로의 전환이 촉진된 것일 수 있다. 따라서, 상기 미생물은 베타-카로틴을 고농도로 생산할 수 있다.
상기 유전자는 당업계에 알려진 임의의 방법에 의하여 도입되는 것일 수 있다. 상기 유전자는 예를 들면, 벡터에 의하여 도입되는 것일 수 있다.
용어 "벡터"란 연결되어 있는 다른 핵산을 전달할 수 있는 핵산 분자를 의미한다. 특정한 유전자의 도입을 매개하는 핵산 서열이라는 관점에서, 본 발명에서 벡터는, 핵산 구조체, 및 카세트와 상호 교환 가능하게 사용될 수 있는 것으로 해석된다.
벡터에는 예를 들면 플라스미드 또는 바이러스 유래 벡터 등이 포함된다. 플라스미드란 추가의 DNA가 연결될 수 있는 원형의 이중가닥 DNA 고리를 말한다. 본 발명에서 사용되는 벡터에는 예를 들면, 플라스미드 발현벡터, 플라스미드 셔틀벡터, 바이러스 발현벡터(예, 복제결함 레트로바이러스 벡터, 레트로바이러스 벡터, 아데노바이러스 벡터, 헤르페스 심플렉스 바이러스 벡터, 폭스바이러스 벡터, 렌티바이러스 벡터, 아데노 연관 바이러스 벡터 등) 및 이들과 동등한 기능을 수행할 수 있는 바이러스 벡터가 포함되나 이들에 한정되는 것은 아니다.
본 발명은 미생물은 레티노이드의 생산능을 촉진하기 위해 특정 유전자를 활성화시키거나, 불활성화 또는 결손한 것일 수 있다. 예를 들어, 코리네박테리움 속 미생물은 서열번호 22 내지 24로 이루어진 군에서 선택된 적어도 하나의 아미노산 서열을 코딩하는 유전자를 불활성화 또는 결손한 것일 수 있다.
코리네박테리움 속 미생물은 내재적인 crtEb 유전자가 코딩하는 서열번호 24의 아미노산 서열을 갖는 프레닐 트랜스퍼라제에 의해 라이코펜으로부터 플라부크산틴(flavuxanthin)을 합성하고, 합성된 플라부크산틴은 내재적인 crtYe 및 crtYf 유전자가 각각 코딩하는 서열번호 23 및 24의 서열을 갖는 카로티노이드-엡실론-시클라아제(carotenoid-ε-cyclase) 에 의해 데카프레노크산틴으로 전환된다.
본 발명은 서열번호 22 내지 24로 이루어진 군에서 선택된 적어도 하나의 아미노산 서열을 코딩하는 유전자를 불활성화 또는 결손시킴으로써, 데카프레노크산틴 생산을 억제하고 라이코펜을 축적시켜, 이를 최종 산물인 레티노이드의 전구체로 이용할 수 있다.
용어 "결손" 또는 "불활성화"란 상기 유전자의 발현이 감소되거나 발현이 이루어지지 않는 것을 의미한다. 상기 "불활성화"는 당업계에 알려진 방법에 의하여 이루어질 수 있다. 예를 들면, 상동 재조합 (homologuous recombination)에 의하여 불활성화된 것일 수 있다. 상기 상동 재조합은 예를 들면, 전이인자 돌연변이 (transposon mutagenesis) 또는 P1 형질도입 (P1 transduction)에 의하여 매개된 것일 수 있다.
서열번호 1의 아미노산 서열을 코딩하는 유전자(HMG1)는 서열번호 25의 뉴클레오티드 서열을 갖고, 서열번호 2의 아미노산 서열을 코딩하는 유전자(crtE)는 서열번호 26의 뉴클레오티드 서열을 갖고, 서열번호 3의 아미노산 서열을 코딩하는 유전자(crtE)는 서열번호 27의 뉴클레오티드 서열을 갖고, 서열번호 4의 아미노산 서열을 코딩하는 유전자(crtB)는 서열번호 28의 뉴클레오티드 서열을 갖고, 서열번호 5의 아미노산 서열을 코딩하는 유전자(crtI)는 서열번호 29의 뉴클레오티드 서열을 갖고, 서열번호 6의 아미노산 서열을 코딩하는 유전자(crtI)는 서열번호 30의 뉴클레오티드 서열을 갖고, 서열번호 7의 아미노산 서열을 코딩하는 유전자(crtY)는 서열번호 31의 뉴클레오티드 서열을 갖고, 서열번호 8의 아미노산 서열을 코딩하는 유전자(SR)는 서열번호 32의 뉴클레오티드 서열을 갖고, 서열번호 9의 아미노산 서열을 코딩하는 유전자(idi)는 서열번호 33의 뉴클레오티드 서열을 갖고, 서열번호 10의 아미노산 서열을 코딩하는 유전자(crtE)는 서열번호 34의 뉴클레오티드 서열을 갖는다.
서열번호 11의 아미노산 서열을 코딩하는 유전자(crtB)는 서열번호 35의 뉴클레오티드 서열을 갖고, 서열번호 12의 아미노산 서열을 코딩하는 유전자(crtI)는 서열번호 36의 뉴클레오티드 서열을 갖고, 서열번호 13의 아미노산 서열을 코딩하는 유전자(idi)는 서열번호 37의 뉴클레오티드 서열을 갖고, 서열번호 14의 아미노산 서열을 코딩하는 유전자(dxs)는 서열번호 38의 뉴클레오티드 서열을 갖고, 서열번호 15의 아미노산 서열을 코딩하는 유전자(dxs)는 서열번호 39의 뉴클레오티드 서열을 갖고, 서열번호 16의 아미노산 서열을 코딩하는 유전자(mvaE)는 서열번호 40의 뉴클레오티드 서열을 갖고, 서열번호 17의 아미노산 서열을 코딩하는 유전자(mvaS)는 서열번호 41의 뉴클레오티드 서열을 갖고, 서열번호 18의 아미노산 서열을 코딩하는 유전자(mvaK1)는 서열번호 42의 뉴클레오티드 서열을 갖고, 서열번호 19의 아미노산 서열을 코딩하는 유전자(mvaK2)는 서열번호 43의 뉴클레오티드 서열을 갖고, 서열번호 20의 아미노산 서열을 코딩하는 유전자(mvaD)는 서열번호 44의 뉴클레오티드 서열을 갖는다.
서열번호 21의 아미노산 서열을 코딩하는 유전자(idi)는 서열번호 45의 뉴클레오티드 서열을 갖고, 서열번호 22의 아미노산 서열을 코딩하는 유전자(crtYe)는 서열번호 46의 뉴클레오티드 서열을 갖고, 서열번호 23의 아미노산 서열을 코딩하는 유전자(crtYf)는 서열번호 47의 뉴클레오티드 서열을 갖고, 서열번호 24의 아미노산 서열을 코딩하는 유전자(crtEb)는 서열번호 48의 뉴클레오티드 서열을 갖는다.
또한, 본 발명은 레티노이드의 생산능을 갖는 미생물을 이용하여 레티노이드를 생산하는 방법을 제공한다.
본 발명의 일 구현예에 따라 본 발명의 레티노이드의 생산 방법을 단계별로 상세히 설명한다.
먼저, 상기 레티노이드 생산능을 갖는 미생물을 배양한다.
배양은 합성, 반합성, 또는 복합 배양 배지에서 수행될 수 있다.
배양 배지는 특별히 한정되지 않으며, 탄소원, 질소원, 비타민 및 미네랄로 구성된 배지를 사용할 수 있다. 예를 들어, MRS (Man-Rogosa-Sharp) 액체 배지, 우유가 첨가된 액체 배지 등을 사용할 수 있다.
배지의 탄소원으로는 예를 들면 전분, 포도당, 자당, 갈락토스, 과당, 글리세롤 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택된 것을 사용할 수 있으며, 바람직하게는 포도당 또는 갈락토스를 사용할 수 있다.
배지의 질소원으로는 예를 들면 황산암모늄, 질산암모늄, 질산나트륨, 글루탐산, 카사미노산, 사카로마이세스추출물, 펩톤, 트립톤, 대두박 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택된 것을 사용할 수 있으며, 미네랄은 예를 들면 염화나트륨, 인산제이칼륨, 황산마그네슘 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택된 것을 사용할 수 있다.
배지 내에서 탄소원, 질소원 및 미네랄의 함량은 특별히 한정되지 않으며, 예를 들면 리터당 10 내지 100g, 5 내지 40g 및 0.5 내지 4 g일 수 있다.
비타민은 예를 들면, 비타민 B, 비타민 C, 비타민 D, 비타민 E 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 비타민은 탄소원, 질소원, 미네랄 등의 배지와 동시에 첨가하거나, 멸균하여 준비된 배지에 첨가할 수 있다.
배양은 통상의 사카로마이세스 속 또는 코리네박테리움 속의 배양 조건 하에 수행될 수 있으며, 예를 들면 15 내지 45℃에서 24 내지 96시간 동안 수행될 수 있다.
배양액 중의 배양 배지를 제거하고 농축된 균체만을 분리하거나 제거하기 위해 원심분리 또는 여과과정을 거칠 수 있으며 이러한 단계는 당업자의 필요에 따라 수행할 수 있다. 농축된 균체는 통상적인 방법에 따라 냉동하거나 냉동건조하여 그 활성을 잃지 않도록 보존할 수 있다.
레티노이드 생산능을 갖는 미생물이 사카로마이세스 속인 경우, 배양은 탄소원으로서 포도당과 갈락토스를 포함하는 배지에서 수행될 수 있다. 갈락토스는 도입된 유전자의 프로모터 발현을 촉진하므로, 갈락토스를 포함하는 배지에서 배양시 레티노이드의 생산이 더욱 촉진된다.
갈락토스를 포함하는 배지의 갈락토스 함량은 특별히 한정되지 않고 프로모터의 발현을 충분히 촉진하면서 최적의 생육을 나타낼 수 있도록 적절히 선택될 수 있으며, 예를 들면 0.5 내지 2부피%로 포함될 수 있고, 바람직하게는 0.5 내지 1.5부피%로 포함될 수 있다.
상기 배지는 예를 들면, 펩톤 0.5 내지 4중량%, 사카로마이세스 추출물 0.5 내지 2중량%, 포도당 0.5 내지 2부피%, 갈락토스 0.5 내지 2부피%를 포함하는 것일 수 있다.
레티노이드 생산능을 갖는 미생물이 코리네박테리움 속인 경우, 배양은 탄소원으로서 포도당을 포함하는 배지에서 수행될 수 있다.
포도당을 포함하는 배지의 포도당 함량은 특별히 한정되지 않고 최적의 생육을 나타낼 수 있도록 적절히 선택될 수 있으며, 예를 들면 0.5 내지 2부피%로 포함될 수 있고, 바람직하게는 0.5 내지 1.5부피%로 포함될 수 있다.
상기 배지는 예를 들면, 리터 당 K2HPO4 0.5 내지 2g, (NH4)2SO4 5 내지 20g, MgSO47H2O 0.1 내지 1g, FeSO47H2O 5 내지 40mg, MnSO4H2O 5 내지 40mg, NaCl 20 내지 80mg, 요소 0.5 내지 4g, 비오틴 0.05 내지 0.5mg 및 티아민 0.05 내지 0.5mg을 포함하는 것일 수 있다.
본 발명에 따른 레티노이드 생산능을 갖는 미생물의 배양은 친유성 물질 존재하의 배양 배지에서 수행될 수 있다. 그러한 경우에 상기 미생물을 배지 표면의 친유성 물질 상(phase)에 위치시켜 배양한다.
레티노이드 생산능을 갖는 미생물로부터의 레티노이드의 생산량은 일정 시점에서 최고치를 나타내고 그 이후에는 점차 감소한다. 이는 미생물 성장의 정체 상태 동안 추가적인 레티노이드의 합성은 중단되고, 세포 내에서 레티노이드의 산화적 분해가 일어나기 때문이다.
그러나 친유성 물질은 생성된 레티노이드가 세포 내에서 분해되기 전에 흡수함으로써, 레티노이드 생산 효율을 개선할 수 있다.
친유성 물질은 상기 기능을 할 수 있으면서 미생물의 성장에 영향을 미치지 않는 것이라면 특별히 한정되지 않으며, 예를 들면 옥탄, 데칸, 도데칸, 테트라데칸, 피토스쿠알란, 미네랄 오일, 이소프로필 미리스테이트, 세틸에틸헥사노에이트, 디옥타노일 데카노일 글리세롤, 스쿠알란, 또는 이들의 조합일 수 있고, 바람직하게는 데칸, 도데칸, 중량 미네랄 오일, 또는 이들의 조합일 수 있다.
상기 친유성 물질은 미생물의 성장에 영향을 미치지 않으면서, 소수성 레티노이드 추출을 위해 소수성이고 낮은 휘발성을 갖는 것일 수 있다.
본 발명의 미생물이 사카로마이세스 속인 경우 도데칸 또는 데칸을 포함하는 배지, 코리네박테리움 속인 경우 중량 미네랄 오일을 포함하는 배지에서 배양하는 것이 보다 바람직하다.
친유성 물질의 배지 내에서의 함량은 상기 기능을 다 할 수 있는 범위 내라면 특별히 한정되지 않으며, 예를 들면 배지 대 친유성 물질의 부피비가 1:0.1-3.0, 1:0.2-3.0, 1:0.5-3.0, 1:1.0-3.0, 1:1.5-3.0, 1:2.0-3.0, 1:2.5-3.0, 1:0.2-2.5, 1:0.2-2.0, 1:0.2-1.5, 1:0.2-1.0, 1:0.2-0.5, 1:0.5-2.5, 1:0.5-2.0, 1:0.5-1.5, 1:0.5-1.0, 1:0.8-2.5, 1:0.8-2.0, 1:0.8-1.5, 1:0.8-1.2, 1:0.8-1.0 등이 가능하다.
배양은 교반되는 상태로 수행될 수 있다.
교반되는 경우, 100 내지 300rpm, 예를 들면, 100 내지 280rpm, 100 내지 260rpm, 100 내지 240rpm, 100 내지 220rpm, 100 내지 200rpm, 100 내지 180rpm, 100 내지 160rpm, 100 내지 140rpm, 100 내지 120rpm, 120 내지 300rpm, 120 내지 280rpm, 120 내지 260rpm, 120 내지 240rpm, 120 내지 220rpm, 120 내지 200rpm, 120 내지 180rpm, 120 내지 160rpm, 120 내지 140rpm, 150 내지 300rpm, 150 내지 280rpm, 150 내지 260rpm, 150 내지 240rpm, 150 내지 220rpm, 150 내지 200rpm, 150 내지 180rpm, 140 내지 160rpm, 200 내지 300rpm, 200 내지 280rpm, 200 내지 260rpm, 200 내지 240rpm, 200 내지 220rpm 또는 100 내지 150 rpm으로 교반될 수 있다.
배양이 친유성 물질을 포함하는 배지에서 수행되는 경우, 교반 시에 상기 친유성 물질은 배지 중에서 분산되어 세포와 접촉된다. 친유성 물질은 배지 중에 분산됨으로써 미생물과 접촉하는 면적이 넓어져 배양 중 레티노이드를 효율적으로 세포로부터 분리되게 하여 안정화 및/또는 용해시킬 수 있다.
이후, 상기 미생물의 배양물로부터 레티노이드를 분리한다.
미생물의 배양이 친유성 물질 존재하의 배양 배지에서 수행된 경우에는, 분리는 친유성 물질 상으로부터 수행된다.
레티노이드를 분리하는 방법은 특별히 한정되지 않고 당 분야에 공지된 방법에 의할 수 있으며, 예를 들면 원심분리, 여과, 결정화, 이온교환 크로마토그래피, 고성능 액체크로마토그래피(HPLC 등의 방법을 들 수 있다. 구체적으로, 균체를 분리한 후에 아세톤 등의 용매를 이용한 추출 후에 고순도의 제품을 얻기 위해서는 HPLC 또는 결정화 작업등을 통한 분리정제가 진행될 수 있다.
레티노이드는 화장품, 식품 또는 의약품의 소재로 널리 활용된다.
이하, 본 발명을 구체적으로 설명하기 위해 실시예를 들어 상세하게 설명하기로 한다.
실시예 1-1. 사카로마이세스 세레비지에 형질전환체의 제조
사카로마이세스 세레비지에를 레티노이드를 생산하도록 형질전환하기 위하여 우선 레티노이드 생산 유전자 6 종을 프로모터와 종결자(terminator)를 갖는 벡터의 프로모터와 종결자 사이에 도입하여 생산유전자가 각각 프로모터와 종결자를 갖도록 한 벡터 6종을 제조하였다.
상기 재조합 벡터로부터 중합효소연쇄반응(PCR)을 이용하여 GAL10 프로모터와 GAL7 종결자를 갖는 각각의 유전자를 증폭하고 이를 대장균-사카로마이세스 셔틀벡터에 순차적으로 도입하여 최종적으로 레티노이드 생산용 재조합 셔틀벡터를 제조하였다.
상기 재조합 셔틀벡터를 사카로마이세스 세레비지에에 형질전환하여 레티노이드 생산능을 갖는 사카로마이세스 형질전환체를 제조하였다. 상기 내용을 아래의 항목에서 상세히 설명하도록 한다.
(1) 레티노이드 생산에 관여하는 유전자를 포함하는 재조합 셔틀 벡터의 제조
사카로마이세스 세레비지에를 레티노이드를 생산능을 갖도록 형질전환하기 위하여 우선 레티노이드 생산 유전자 6 종을 프로모터와 종결자(terminator)를 갖는 벡터의 프로모터와 종결자 사이에 도입하여 이들 유전자가 각각 프로모터와 종결자를 갖도록 한 벡터 6종을 제조하였다.
레티노이드 생산에 관여하는 유전자 6종의 정보는 하기 표 1에 나타내었고, 해당 유전자를 증폭하기 위한 프라이머는 하기 표 2에 나타내었다.
프라이머 1과 2를 이용하여 사카로마이세스 세레비지에의 게놈으로부터 HMG1 유전자를 증폭한 후 제한 효소 EcoRI과 SalI으로 절단 하고 이를 동일 제한효소로 처리한 YEGα-HIR525(KCTC 8519P, Choi et al., Appl. Microbial. biotechnol., 1994, 42, 587)에 도입하여 재조합 벡터 pGAL-HMG1를 제조하였다.
프라이머 3과 4를 이용하여 판토에아 아글로메란스의 게놈으로부터 crtE를 증폭한 후 제한 효소 EcoRI과 SalI으로 절단하고 이를 동일한 제한효소로 처리한 YEGα-HIR525 벡터에 도입하여 pGAL-YEPAcrtE를 제조하였다.
프라이머 5와 6을 이용하여 판토에아 아글로메란스의 게놈으로부터 crtB를 증폭한 후 제한 효소 EcoRI과 SalI으로 절단하고 이를 동일한 제한효소로 처리한 YEGα-HIR525 벡터에 도입하여 pGAL-YEPAcrtB를 제조하였다.
프라이머 7과 8을 이용하여 판토에아 아글로메란스의 게놈으로부터 crtI를 증폭한 후 제한 효소 EcoRI과 SalI으로 절단하고 이를 동일한 제한효소로 처리한 YEGα-HIR525 벡터에 도입하여 pGAL-YEPAcrtI를 제조하였다.
프라이머 9와 10을 이용하여 판토에아 아나나티스의 게놈으로부터 crtY를 증폭한 후 제한 효소 EcoRI과 SalI으로 절단하고 이를 동일한 제한효소로 처리한 YEGα-HIR525 벡터에 도입하여 pGAL-YEPAUcrtY를 제조하였다.
프라이머 11과 12를 이용하여 pT-DHBSR 재조합 플라스미드 벡터 (HJ Jang et al, 2011, Microbial Cell Factories, 10:59)로부터 SR을 증폭한 후 제한 효소 EcoRI과 SalI으로 절단하고 이를 동일한 제한효소로 처리한 YEGα-HIR525 벡터에 도입하여 pGAL-YESYNSR을 제조하였다.
서열번호 유전자명 효소명 참고문헌 또는 Genbank 허가번호
1 HMG1 HMG-CoA 리덕타제 10-2009-0104505
2 crtE 제라닐제라닐 피로포스페이트 신타제 M87280
4 crtB 피토엔 신타제 M87280
5 crtI 피토엔 데히드로게나제 M87280
7 crtY 라이코펜 베타-시클라제 D90087
8 SR 베타-카로틴 모노옥시게나제 HJ Jang et al, 2011, Microbial Cell Factories, 10:59
프라이머 번호 염기서열 (5'-3') 서열번호
1 GCGCGAATTCATGGACCAATTGGTGAAAACTGAAGTC 49
2 GCGCGTCGACTTTTAGGATTTAATGCAGGTGACGGAC 50
3 GCGCGAATTCAAAAATGGTGAGTGGCAGTAAAGCGG 51
4 GCGCGTCGACTTAGGCGATTTTCATGACCGGTG 52
5 GCGCGAATTCAAAAATGAGCCAACCGCCGCTG 53
6 GCGCGTCGACTTAAACGGGACGCTGCCAAAG 54
7 GCGCGAATTCAAAAATGAAAAAAACCGTTGTGATTGG 55
8 GCGCGTCGACTTATTGCAGATCCTCAATCATCAGG 56
9 GCGCGAATTCAAAAATGCAACCGCATTATGATCTGATTC 57
10 GCGCGTCGACTTAACGATGAGTCGTCATAATGGCTTG 58
11 GCGCGAATTCAAAAATGGGTCTGATGCTGATTGATTGG 59
12 GCGCGTCGACTTAGTTTTTGATTTTGATACGGGAAGAG 60
상기 제조한 재조합 플라스미드 벡터 pGAL-YEPAcrtE, pGAL-HMG1, pGAL-YEPAcrtI, pGAL-YEPAcrtB, pGAL-YEPAUcrtY, pGAL-YESYNSR로부터 하기 표 3의 프라이머를 이용하여 각각 6종의 GAL10 프로모터와 GAL7 종결자를 가진 유전자를 증폭하였으며, 이를 상기에서 사용한 YEGα-HIR525 셔틀벡터에 순차적으로 도입하였다.
상세히 설명하면 우선 프라이머 13과 14를 이용하여 pGAL-YEPAcrtE 으로부터 GAL10 프로모터와 GAL7 종결자를 가진 crtE를 증폭하여 제한효소 KpnI과 NotI으로 절단한 후 동일 효소로 절단한 YEGα-HIR525 셔틀벡터에 삽입하였다.
프라이머 15와 16을 이용하여 pGAL-HMG1으로부터 GAL10 프로모터와 GAL7 종결자를 가진 HMG1을 증폭하여 제한효소 NotI과 SpeI으로 절단한 후 상기 제조한 재조합 벡터의 동일 제한부위에 삽입하였다.
프라이머 17과 18을 이용하여 pGAL-YEPAcrtI로부터 GAL10 프로모터와 GAL7 종결자를 가진 crtI를 증폭하여 제한효소 EcoRV와 NheI으로 절단한 후 상기 제조한 재조합 벡터의 동일 제한부위에 삽입하였다.
프라이머 19와 20을 이용하여 pGAL-YEPAcrtB로부터 GAL10 프로모터와 GAL7 종결자를 가진 crtB를 증폭하여 제한효소 NheI과 BglII로 절단한 후 상기 제조한 재조합 벡터의 동일 제한부위에 삽입하였다.
프라이머 21과 22를 이용하여 pGAL-YEPAUcrtY로부터 GAL10 프로모터와 GAL7 종결자를 가진 crtY를 증폭하여 제한효소 BamHI과 PacI으로 절단한 후 상기 제조한 재조합 벡터의 동일 제한부위에 삽입하였다.
프라이머 23과 24를 이용하여 pGAL-YESYNSR로부터 GAL10 프로모터와 GAL7 종결자를 가진 SR을 증폭하여 제한효소 PacI과 XbaI으로 절단한 후 상기 제조한 재조합 벡터의 동일 제한부위에 최종적으로 삽입하여 사카로마이세스에서 레티노이드를 생합성 하도록 제조된 재조합 셔틀벡터 pGAL-EHIBYSR을 제조하였다.
프라이머 번호 염기서열 (5'-3') 서열번호
13 GCGCGCGGCCGCATCGCTTCGCTGATTAATTACCCC 61
14 GCGCACTAGTACAATGAGCCTTGCTGCAACATC 62
15 GCGCGGTACCATCGCTTCGCTGATTAATTACCCC 63
16 GCGCGCGGCCGCACAATGAGCCTTGCTGCAACATC 64
17 GCGCGATATCACTAGTATCGCTTCGCTGATTAATTACCCC 65
18 GCGCGCTAGCACAATGAGCCTTGCTGCAACATC 66
19 GCGCGCTAGCATCGCTTCGCTGATTAATTACCCC 67
20 GCGCAGATCTACAATGAGCCTTGCTGCAACATC 68
21 GCGCGGATCCATCGCTTCGCTGATTAATTAC 69
22 GCGCTTAATTAAACAATGAGCCTTGCTGCAACATC 70
23 GCGCTTAATTAAATCGCTTCGCTGATTAATTACCCC 71
24 GCGCTCTAGAGGGGAAACTTAAAGAAATTCTATTCTTG 72
(2) 제조된 재조합 셔틀벡터를 이용한 형질전환체의 제조
사카로마이세스 세레비지에 Y2805 균주를 3 mL YPD(리터당 펩톤 20g, 사카로마이세스 추출물 10g, 포도당 20g)배지에 30℃에서 250rpm으로 교반하며 종배양(seed)을 한 뒤, 다음 날 50mL YPD 배지에 종배양액 0.5 mL을 접종하여 30℃에서 180rpm으로 교반하며 3시간 동안 본배양(main)을 하였다.
배양액을 3,000rpm, 4℃ 조건으로 5분간 원심분리하여 상층액은 제거하고, 균체를 25 mL의 1X TE/ 0.1M LiAC 버퍼(10mM Tris-HCl, 1mM EDTA, 100mM LiAC, pH 7.5)로 1회 세척한 후, 0.5mL의 1X TE/ 0.1M LiAC 버퍼에 재현탁하여 수용성 세포(competent cell)를 얻었다.
제조된 수용성 세포 100㎕, 벡터 5㎕, salmon sperm DNA (carrier DNA, Sigma D9156, USA) 5㎕와 0.6mL PEG/LiAC(40% PEG3350 (Quiagen NeXtal Stock PEG3350 (200), Cat. No. 133083), 10mM Tris-HCl, 1mM EDTA, 100mM LiAC, pH 7.5)를 섞은 뒤 혼합액을 30℃에서 30분간 방치 후, 100㎕의 DMSO를 넣고 다시 혼합하였다. 제조된 세포 혼합액을 42℃에서 15분간 열충격 처리 후, 얼음에서 5분을 식히고 4℃에서 1분간 원심분리 후 상층액을 제거하였다. 얻어진 펠렛을 200㎕의 TE 버퍼(10mM Tris-HCl, 1mM EDTA, pH 7.5)에 재현탁하여 선택배지인 UD 고체배지(리터 당 Yeast nitrogen base without Amino Acids (DifcoTM, Cat. No. 291940) 6.7 g, -Ura DO Supplement(Clontech Cat. No. 630416) 0.77g, 덱스트로즈 20g, 한천 20g, pH 5.8)에 도말 한 뒤, 30℃에서 2일간 배양하여 형질전환체를 제조하였다.
실시예 1-2. 사카로마이세스 형질전환체로부터 레티노이드의 생산
(1) 사카로마이세스 형질전환체의 배양
UD 배지 3mL에 단일 집락을 접종하고, 30℃에서 250rpm으로 교반하며 종배양하였다.
본배양은 실험군으로서 갈락토스를 함유하는 YPDG 배지(리터 당 펩톤 20g, 사카로마이세스 추출물 10g, 포도당 10g 및 갈락토스 10g)를 사용하였으며, 그에 대한 대조군으로 갈락토스를 함유하지 않은 YPD 배지 (리터 당 펩톤 20g, 사카로마이세스 추출물 10g, 포도당 20g)를 이용하였다. 배양은 YPDG 배지와 YPD 배지를 300mL 홈이 파인 플라스크(baffled flask)에 25mL씩 분주한 뒤, 레티노이드 생산의 2-상(two-phase) 배양에서, 5mL의 도데칸(Cat. No. 297879, Sigma, USA)을 배양 배지 25 mL 위에 위치시켰다.
초기 배양한 균주를 균체 농도를 OD600nm가 0.1이 되도록 접종하였고, 30℃에서 180rpm으로 교반하면서 96시간 동안 배양하였다. 세포 성장은 배양 72시간 후에 600nm(OD600nm)에서 광학 밀도를 측정함으로써 평가하였다.
(2) 레티노이드의 고성능 액체크로마토그래피( HPLC ) 분석
도데칸 씌움을 갖는 2-상 배양에서, 레티노이드를 포함하는 도데칸 상을 수집하여 14,000rpm에서 10분 동안 원심분리시켜 모든 세포 파편들을 제거한 후에 HPLC 분석에 사용하였다. 도데칸 상을 검출 파장 370nm(레티날) 및 340nm(레티놀 및 레티닐 아세테이트)에서 HPLC(LC-20A, Shimadzu, Kyoto,Japan)로 분석하였다. 분석은 Sentry Guard C18(15mm×4.6mm, 5m)을 갖는 Symmetry C18(250mm×4.6mm, 5m)의 HPLC 컬럼을 사용하여 수행하였다. 이동상으로 부피비 95:5의 메탄올 및 아세토니트릴을 사용하였다. HPLC 분석은 이동상의 유동 속도는 1.0ml/분, 컬럼 온도는 40℃ 조건하에서 수행하였다.
레티날(Cat. No. R2500), 레티놀(Cat. No. R7632) 및 레티닐 아세테이트(Cat. No. R4632)를(Sigma사) 아세톤에 용해시켜 표준 화합물로서 사용하였다(도 3 (A)).
도 3을 참조하면, 상기 형질전환체에서 생산된 레티노이드(도 3 (B))의 피크가 표준화합물로 사용한 레티놀, 레티날 및 레티날 아세테이트 (도 3 (A))와 동일한 머무름 시간에 주요하게 나타나는 것을 확인할 수 있다. 이에 따라, 상기 형질전환체에서 생산된 레티노이드는 표준화합물로서의 레티노이드와 같은 성분으로 판명되었다.
(3) 레티노이드의 액페크로마토그래피 -질량( LC - MS / MS ) 분석
상기의 사카로마이세스 형질전환체로부터 생산된 레티노이드를 분석하기 위하여 액체크로마토그래피-질량분석(LC-MS/MS)을 실시하였다.
상기 형질전환체의 배양액 중의 도데칸 상을 취하여 이를 진공 증발시키고, 증발 전 도데칸 상과 동일 중량의 메탄올에 용해하여 이온포획 질량 분석기(Ion Trap Mass Spectrometer)를 이용하여 생산된 레티노이드의 성분을 분석하였다.
LC-MS 분석에는 Sentry Guard C18(15mm×4.6mm, 5m)을 갖는 Symmetry C18(250mm×4.6mm, 5m) 칼럼과 분석 기기로 AB SCIEX Qtrap 3200(AB SCIEX사)을 사용하였다. 이동상으로 부피비 95:5의 메탄올 및 아세토니트릴을 사용하였다.
HPLC 분석은 이동상의 유동 속도는 1.0ml/분, 컬럼 온도는 30℃ 조건하에서 수행하였다.
레티놀 (Cat. No. R7632) 및 레티닐 아세테이트 (Cat. No. R4632)(Sigma사)를 메탄올에 용해시켜 이를 표준 화합물로서 사용하였다.
분석 결과는 도 4에 나타내었다.
도 4을 참조하면, 상기 형질전환체에서 생산된 레티노이드(도 4 (B), (D))의 피크가 표준화합물로 사용한 레티놀(도 4 (A))과 레티닐 아세테이트(도 4 (C))와 동일한 머무름 시간에 주요하게 나타나는 것을 확인할 수 있다.
이에 따라, 상기 형질전환체에서 생산된 레티노이드는 표준화합물로서의 레티노이드와 같은 성분으로 판명되어, 본 발명의 미생물이 레티노이드를 유효하게 생산해 낼 수 있음을 확인하였다.
(4) 배양 결과
배양 결과는 하기 표 4에 나타내었다.
구분 균체 농도(OD600nm) 레티날 (㎍/L) 레티놀 (㎍/L) 레티닐 아세테이트(㎍/L)
실험군 22.76 ± 0.5 36 ± 0.67 2.8 ± 0.52 32.1 ± 2.6
대조군 18.6 ± 1.2 19.6 ± 0.96 1.49 ± 0.1 30.6 ± 0.98
상기 표 4를 참조하면, 배양 72시간 후의 균체 농도(OD600nm)는 갈락토스를 포함하는 배지에서 배양한 실험군이 22.8로서 갈락토스를 포함하지 않은 배지에서 배양한 대조군의 18.6보다 높은 것을 확인할 수 있다.
실험군은 레티날 36㎍/L, 레티놀 2.8㎍/L, 레티닐 아세테이트 32.1㎍/L를 생산하여 총 레티노이드를 약 71㎍/L를 생산하였으나, 대조군은 레티날 19.6㎍/L, 레티놀 1.49㎍/L, 레티닐 아세테이트 30.6㎍/L를 생산하여 총 레티노이드를 약 51.7㎍/L 생산하였다.
형질전환체의 총 레티노이드 생산량을 균체농도로 나누었을 때 실험군은 3.11, 대조군은 2.78로 실험군이 더 높게 나타나, 갈락토스를 첨가한 배지에서 배양한 실험군에서 레티노이드 생산에 관여하는 효소의 발현이 유도된 것을 확인하였다.
실시예 2-1. 코리네박테리움 형질전환체의 제조
또한 상기와 같이 라이코펜이 축적되는 형질전환체를 제조한 후 이종적으로(heterologous) 선별된 레티노이드 생합성 유전자인 crtE, crtB, crtI, idi, crtY, BCMO를 포함하는 셔틀벡터를 도입하여 레티노이드를 생산할 수 있는 코리네박테리움 형질전환체를 제조하였다. 이에 대하여 하기 항목을 통하여 상세히 설명하도록 한다.
(1) 코리네박테리움 글루타미쿰의 카로티노이드-엡실론- 시클라아제를 코딩하는 유전자 crtYe /f의 불활성화
데카프레노크산틴 생산을 억제하고 라이코펜을 축적시키기 위하여 서열번호 22와 서열번호 23의 아미노산 서열을 코딩하는 crtYe/f 유전자(군)를 불활성화 하였다.
crtYe/f 유전자를 불활성하기 위해 자살 벡터(suicide vector) pK19mobsacB를 사용하였다("Handbook of Corynebacterium glutamicum", Lothar Eggeling 등, ISBN 0-8493-1821-1, 2005 by CRC press).
프라이머 25와 26을 이용하여 crtYe/f 유전자의 업스트림(upstream) 부분인 1036bp를 증폭하였고, 프라이머 27과 28을 이용하여 crtYe/f 유전자의 다운스트림(downstream) 부분인 1057bp를 증폭하였다.
증폭된 두 가지 PCR 산물을 주형으로 사용하고 프라이머 25과 28을 이용하여 PCR 증폭하여 crtYe/f 유전자를 결손시키고, 21bp 링커 서열을 가진 2102bp 길이의 PCR 산물을 얻었다. 얻어진 2102bp 산물을 HindIII와 SbfI으로 절단하여 벡터 pK19mobsacB의 동일 부위에 삽입하여 재조합 자살벡터 pK19mobsacB-KOY를 제조하였다.
제조된 재조합 벡터를 Handbook of Corynebacterium glutamicum에 기재된 방법으로 코리네박테리움 글루타미쿰 ATCC13032에 형질전환시켰다.
2 단계의 상동성 재조합(homologous recombination)을 통해 특정한 유전자 부위를 결손하는 방법은 "Handbook of Corynebacterium glutamicum"(published in 2005 by CRC press)에 보고되어 있다.
첫 번째 재조합은 결손을 위해 상기에서 제조한 pK19mobsacB-KOY 플라스미드를 코리네박테리움에 형질전환 할 경우 일어난다. 이때 벡터 서열이 게놈에 삽입(integration)되는데 이는 카나마이신 저항성을 통해 선별할 수 있으며, 재조합 벡터가 삽입된 게놈을 가진 균주는 sacB 유전자에 의해 레반수크레아제(levansurase)를 생성하기 때문에 10% 수크로스(sucrose)가 있는 경우 민감성을 보인다. 또한 첫 번째 재조합체는 하기 표 5의 프라이머 29와 30을 이용하여 PCR 증폭을 할 경우, 169bp와 987bp 크기의 PCR 산물을 얻는 것으로 재조합을 한번 더 확인 할 수 있다.
두 번째 재조합에 의해 유전자 결손을 위한 재조합 벡터는 제거되며 이는 수크로스에 저항성이 있는 것으로 선별하였다. 상세히 설명하면, 두 번째 재조합을 위하여 5㎖ BHI 배지(리터 당 calf brains(송아지 뇌) 12.5g, beef heart(소 심장) 5g, 펩톤 10g, 염화나트륨 5g, 글루코스 2g, 인산수소이나트륨 2.5g)에 첫 번째 재조합체를 접종하여 30℃에서 250rpm으로 교반하여 12시간 배양하였다.
BHI 배지를 이용하여 10-3, 10-4, 10-5배로 배양액을 희석한 뒤 100㎕씩 10% sucrose를 포함하는 LB(리터 당 트립톤 10g, 사카로마이세스 추추물 5g 및 염화나트륨 10g) 한천 플레이트에 도말하여 30℃에서 3일간 배양하여 콜로니를 얻었다. 이러한 두 번째 재조합체는 프라이머 29와 30을 이용하여 PCR 증폭을 할 경우, 169bp의 PCR 산물을 얻는 것으로 재조합을 한번 더 확인할 수 있으며 이 클론은 20㎍/㎖ 카나마이신에 민감하여 자라지 못하게 되며, 최종적으로 코리네박테리움 글루타미쿰 ATCC 13032의 crtYe/f 유전자가 불활성화된 ΔcrtYe/f 균주를 제조하였다.
프라이머 번호 염기서열 (5'-3') 서열번호
25 ATAAAGCTTCTTCCTGTCTTCCCGACCCACTAC 73
26 CCCATCCACTAAACTTAAACAAATTTAATGATCGTATGAGGTCTTTTGAGATG 74
27 TGTTTAAGTTTAGTGGATGGGTCATGATGGAAAAAATAAGACTAATTCTATTGTC 75
28 AAACCTGCAGGTGATTCTGTTTTGGTTACTCATCCCG 76
29 ACTGCCCGAACCATTGCCG 77
30 AGGCCAGACCAAAGGGGTAGGC 78
(2) 레티노이드 생산에 관여하는 유전자를 포함하는 재조합 셔틀벡터의 제조
코리네박테리움 글루타미쿰에서 레티노이드 생산 유전자군을 발현하기 위하여 대장균-코리네박테리움 셔틀벡터인 pCES208 (J. Microbiol. Biotechnol., 18:639-647, 2008)을 바탕으로 종결자(terminator)와 프로모터가 삽입되어 있는 pSGT208 셔틀벡터를 제조하였다.
상세히 설명하면, 종결자의 삽입을 위하여 pTrc99A 벡터로부터 프라이머 31과 32를 이용하여 유전자를 증폭한 후 제한효소 HindIII와 ClaI으로 절단하고 동일 제한효소로 절단한 pSTV28 (Takara biotech)벡터에 삽입하였다. 상기 재조합 플라스미드에 프로모터 선별과정을 용이하게 하기 위하여 제한부위 및 lacZ 알파 절편을 함유하는 lac 프로모터를 삽입하였다. 이때, lacZ 알파 절편은 프로모터를 대체할 경우 X-gal을 도입하여 식별자로서 기능할 수 있도록 고안된 것이다.
프라이머 33과 34를 이용하여 대장균의 게놈으로부터 lac 프로모터 및 lacZ 알파 절편을 증폭한 후 제한효소 NgoMIV와 EcoRI으로 절단한 후 상기 구축한 재조합 플라스미드의 동일제한효소 부위에 삽입하였다. 이상에서 구축한 재조합 플라스미드로부터 ScaI과 ClaI으로 절단한 후 Klenow 절편효소를 처리하여 blunt 말단을 만든 후 제한효소 NotI과 KpnI으로 절단한 후 blunt 말단을 만든 pCES208 셔틀벡터에 삽입하여 pSGT208 셔틀벡터를 제조하였다.
상기 pSGT208 셔틀벡터는 대장균과 코리네박테리움의 복제원점을 지니며, 카나마이신(kanamycin) 저항성 유전자, 다중제한부위 (multi-cloning site)를 갖고, 프로모터 대체를 용이하게 하기위한 lacZ 알파절편 식별자 및 종결자를 갖도록 구성되었다. 사용된 프라이머의 정보는 표 6 에 나타내었다.
프라이머 번호 염기서열 (5'-3') 서열번호
31 GCTAAGCTTGGCTGTTTTGGCGGATGAGAG 79
32 CGAATCGATAGAGTTTGTAGAAACGCAAAAAGGCC 80
33 GCTGCCGGCAGATCTCATATGCCAATACGCAAACCGCCTCTC 81
34 GCTGAATTCACTAGTGCGGCCGCTTATTCGCCATTCAGGCTGCGC 82
(3) 제조된 재조합 셔틀벡터를 이용한 형질전환체의 제조
상기 제조된 대장균-코리네박테리움 셔틀벡터 pSGT208에 하기 표 7에 나타낸 레티노이드의 합성에 관여하는 6종의 유전자를 표 8에 나타낸 프라이머를 이용하여 순차적으로 도입하였다.
상세히 설명하면 시네코시스티스 종 PCC6803의 게놈으로부터 프라이머 35와 36을 이용하여 crtE를 증폭하여 제한효소 SpeI과 XhoI으로 절단한 후 pSGT208 셔틀벡터의 동일 부위에 삽입하였다.
다음으로 로도수도모나스의 게놈으로부터 프라이머 37과 38을 이용하여 crtI를 증폭하여 XhoI과 NheI으로 절단한 후 상기 제조한 재조합 벡터의 동일 제한부위로 순차적으로 삽입하였다.
다음으로 팔러스트리스판토에아 아글로메란스의 게놈으로부터 프라이머 39와 40을 이용하여 crtB를 증폭하여 NheI과 XbaI으로 절단하고 이를 상기 제조한 재조합 벡터의 동일 부위로 순차적으로 삽입하였다.
다음으로 크로노박터 사카자키의 게놈으로부터 프라이머 41과 42를 이용하여 idi를 증폭한 후 XbaI과 NotI으로 절단 후 상기 제조한 재조합 벡터의 동일 부위로 순차적으로 삽입하였다.
다음으로 판토에아 아나나티스의 게놈으로부터 프라이머 43과 44를 이용하여 crtY를 증폭한 후 SalI과 StuI으로 절단하고 상기 제조한 재조합 벡터의 동일 부위로 순차적으로 삽입하였다.
마지막으로 pT-DHBSR로부터 프라이머 45와 46을 이용하여 SR을 증폭한 후 StuI과 SbfI로 절단한 후 상기 제조한 재조합 벡터의 동일 부위로 삽입하여 레티노이드 생산 유전자가 순차적으로 모두 포함된 재조합 셔틀벡터 pS208-RET를 완성하였다.
서열번호 유전자명 효소명 참고문헌 또는 Ggenbank 허가번호
3 crtE 제라닐제라닐 피로포스페이트 (GGPP) 신타제 slr0739, GI:16329282
4 crtB 피토엔 신타제 M87280
6 crtI 피토엔 디히드로게나제 RPA1512, GI:39934584
9 idi IPP 이소머라제 ESA_00346, GI:156932565
7 crtY 라이코펜-베타-시클라제 D90087
8 SR 베타-카로틴 모노옥시게나제 HJ Jang et al, 2011, Microbial Cell Factories, 10:59
프라이머 번호 염기서열 (5'-3') 서열번호
35 CATACTAGTAGGAGGTAATAAATATGGTTGCCCAACAAACACGA 83
36 CGGCTCGAGTTAATATTTTCTGGCAACAATATATTCGGCG 84
37 GCTCTCGAGGAGGTAATAAATATGCTCGATCCTGGCCCCAATC 85
38 GCAGCTAGCTTATGATGTCACCAGACTGTCGGCCTC 86
39 GCAGCTAGCAGGAGGTAATAAATATGAGCCAACCGCCGCTGC 87
40 CTCCTCTAGATTACTAAACGGGACGCTGC 88
41 CCATCTAGAGGAGGTAATAAAATATGAAGGACAAGGAACTGAGC 89
42 CGTGCGGCCGCTTATTCCTCATCCCCGACGCGC 90
43 CGGTCGACAGGAGGTAATAAATATGCAACCGCATTATGATCTGATTCTC 91
44 CGCCTGCAGGAGGCCTTTAACGATGAGTCGTCATAATGGCTTG 92
45 CGAGGCCTAGGAGGTAATAAATATGGGTCTGATGCTGATTGATTGGTG 93
46 CGCCTGCAGGTTAGTTTTTGATTTTGATACGGGAAGAGTG 94
상기 제조한 재조합 셔틀 벡터 pS208-RET를 제조한 카로테노이드 엡실론-시클라제를 코딩하는 crtYe와 crtYf가 불활성화된 재조합 코리네박테리움 글루타미쿰인 코리네박테리움 글루타미쿰 ATCC13032ΔcrtYe/f에 Handbook of Corynebacterium glutamicum에 기재된 방법으로 형질전환시켰다.
실시예 2-2. 코리네박테리움 형질전환체로부터 레티노이드의 생산
(1) 코리네박테리움 형질전환체의 배양
2YT 배지 3mL에 단일 집락을 접종하였고, 30℃에서 250rpm으로 교반하며 종배양하였다.
본배양은 구명 최소배지(리터 당 K2HPO4 1g, (NH4)2SO4 10g, MgSO47H2O 0.4g, FeSO47H2O 20mg, MnSO4H2O 20mg, 염화나트륨 50mg, 요소 2g, 비오틴 0.1mg 및 티아민 0.1mg)에 항생제 카나마이신을 20㎍/mL로 사용하였다. 배양은 25mL 배지를 포함하는 홈이 파인 플라스크(baffled flask) 중에서 30℃에서 180rpm으로 교반하며 수행하였다.
레티노이드 생산의 2-상 배양에서, 10mL의 중량 미네랄 오일(Cat. No. 5658-4400, 대정화금, 한국)을 배양 배지 25mL 위에 위치시켰다.
세포 성장은 600nm(OD600)에서 광학 밀도를 측정하였다.
(2) 레티노이드의 고성능 액체크로마토그래피( HPLC ) 분석
중량 미네랄 오일층을 갖는 2-상 배양에서, 레티노이드를 포함하는 중량 미네랄 오일을 수집하여 14,000rpm에서 10분 동안 원심분리시켜 모든 잔류 세포 파편 및 수용성 물질들을 제거하였다. 그 후 분리된 중량 미네랄 오일 층의 레티노이드를 상온에서 15분간 아세톤 추출하여 14,000rpm에서 10분 동안 원심분리시켜 모든 중량 미네랄 오일 상은 제거한 후 아세톤 추출물을 분석에 사용하였다.
레티노이드를 함유한 아세톤 추출물을 검출 파장 370nm(레티날) 및 340nm(레티놀 및 레티닐 아세테이트)에서 HPLC(LC-20A, Shimadzu, Kyoto,Japan)로 분석하였다.
분석은 Sentry Guard C18(15mm×4.6mm, 5m)을 갖는 Symmetry C18 (250mm×4.6mm, 5m)의 HPLC 컬럼을 사용하여 수행하였다. 이동상으로 부피비 95:5의 메탄올 및 아세토니트릴을 사용하였다. HPLC 분석은 이동상의 유동 속도는 1.5ml/분, 컬럼 온도는 40℃ 조건하에서 수행하였다.
레티날(Cat. No. R2500), 레티놀(Cat. No. R7632) 및 레티닐 아세테이트(Cat. No. R4632)(Sigma사)를 아세톤에 용해시켜 표준 화합물로서 사용하였다(도 5 (A)).
도 5를 참조하면, 상기 형질전환체에서 생산된 레티노이드(도 5 (B))의 피크가 표준화합물로 사용한 레티날(도 3 (A))과 동일한 머무름 시간에 주요하게 나타나는 것을 확인할 수 있다. 이에 따라, 상기 형질전환체에서 생산된 레티노이드는 표준화합물로서의 레티날과 같은 성분으로 판명되었다.
(3) 배양 결과
배양 결과는 하기 표 9에 나타내었다.
구분 벡터 균체 농도 (OD600nm) 레티날 (㎍/L) 레티놀 (㎍/L) 레티닐 아세테이트(㎍/L)
실시예 pS208-RET 14.9 ± 2.9 3277.87 ± 134.79 - -
비교예 pSGT208 9.5 ± 0.5 - - -
상기 표 9를 참조하면, 48시간 배양한 후의 균체 농도(OD600nm)는 실시예의 레티노이드 생산에 관여하는 효소를 코딩하는 유전자를 포함하는 형질전환체의 경우 15로서, 레티노이드 생산에 관여하는 효소를 코딩하는 유전자를 포함하지 않는 셔틀벡터만이 도입된 비교예의 9.5보다 높은 것을 확인할 수 있다.
실시예는 레티날이 약 3,278㎍/L가 생산되었으나, 비교예는 전혀 생산되지 않았다.
<110> INDUSTRY-ACADEMIC COOPERATION FOUNDATION GYEONGSANG NATIONAL UNIVERSITY <120> Microorganism including genes coding enzymes involved in the production of retinoid and preparing method for retinoid using the same <130> P2013-189 <160> 94 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 525 <212> PRT <213> saccharomyces cerevisiae <400> 1 Met Asp Gln Leu Val Lys Thr Glu Val Thr Lys Lys Ser Phe Thr Ala 1 5 10 15 Pro Val Gln Lys Ala Ser Thr Pro Val Leu Thr Asn Lys Thr Val Ile 20 25 30 Ser Gly Ser Lys Val Lys Ser Leu Ser Ser Ala Gln Ser Ser Ser Ser 35 40 45 Gly Pro Ser Ser Ser Ser Glu Glu Asp Asp Ser Arg Asp Ile Glu Ser 50 55 60 Leu Asp Lys Lys Ile Arg Pro Leu Glu Glu Leu Glu Ala Leu Leu Ser 65 70 75 80 Ser Gly Asn Thr Lys Gln Leu Lys Asn Lys Glu Val Ala Ala Leu Val 85 90 95 Ile His Gly Lys Leu Pro Leu Tyr Ala Leu Glu Lys Lys Leu Gly Asp 100 105 110 Thr Thr Arg Ala Val Ala Val Arg Arg Lys Ala Leu Ser Ile Leu Ala 115 120 125 Glu Ala Pro Val Leu Ala Ser Asp Arg Leu Pro Tyr Lys Asn Tyr Asp 130 135 140 Tyr Asp Arg Val Phe Gly Ala Cys Cys Glu Asn Val Ile Gly Tyr Met 145 150 155 160 Pro Leu Pro Val Gly Val Ile Gly Pro Leu Val Ile Asp Gly Thr Ser 165 170 175 Tyr His Ile Pro Met Ala Thr Thr Glu Gly Cys Leu Val Ala Ser Ala 180 185 190 Met Arg Gly Cys Lys Ala Ile Asn Ala Gly Gly Gly Ala Thr Thr Val 195 200 205 Leu Thr Lys Asp Gly Met Thr Arg Gly Pro Val Val Arg Phe Pro Thr 210 215 220 Leu Lys Arg Ser Gly Ala Cys Lys Ile Trp Leu Asp Ser Glu Glu Gly 225 230 235 240 Gln Asn Ala Ile Lys Lys Ala Phe Asn Ser Thr Ser Arg Phe Ala Arg 245 250 255 Leu Gln His Ile Gln Thr Cys Leu Ala Gly Asp Leu Leu Phe Met Arg 260 265 270 Phe Arg Thr Thr Thr Gly Asp Ala Met Gly Met Asn Met Ile Ser Lys 275 280 285 Gly Val Glu Tyr Ser Leu Lys Gln Met Val Glu Glu Tyr Gly Trp Glu 290 295 300 Asp Met Glu Val Val Ser Val Ser Gly Asn Tyr Cys Thr Asp Lys Lys 305 310 315 320 Pro Ala Ala Ile Asn Trp Ile Glu Gly Arg Gly Lys Ser Val Val Ala 325 330 335 Glu Ala Thr Ile Pro Gly Asp Val Val Arg Lys Val Leu Lys Ser Asp 340 345 350 Val Ser Ala Leu Val Glu Leu Asn Ile Ala Lys Asn Leu Val Gly Ser 355 360 365 Ala Met Ala Gly Ser Val Gly Gly Phe Asn Ala His Ala Ala Asn Leu 370 375 380 Val Thr Ala Val Phe Leu Ala Leu Gly Gln Asp Pro Ala Gln Asn Val 385 390 395 400 Glu Ser Ser Asn Cys Ile Thr Leu Met Lys Glu Val Asp Gly Asp Leu 405 410 415 Arg Ile Ser Val Ser Met Pro Ser Ile Glu Val Gly Thr Ile Gly Gly 420 425 430 Gly Thr Val Leu Glu Pro Gln Gly Ala Met Leu Asp Leu Leu Gly Val 435 440 445 Arg Gly Pro His Ala Thr Ala Pro Gly Thr Asn Ala Arg Gln Leu Ala 450 455 460 Arg Ile Val Ala Cys Ala Val Leu Ala Gly Glu Leu Ser Leu Cys Ala 465 470 475 480 Ala Leu Ala Ala Gly His Leu Val Gln Ser His Met Thr His Asn Arg 485 490 495 Lys Pro Ala Glu Pro Thr Lys Pro Asn Asn Leu Asp Ala Thr Asp Ile 500 505 510 Asn Arg Leu Lys Asp Gly Ser Val Thr Cys Ile Lys Ser 515 520 525 <210> 2 <211> 307 <212> PRT <213> Pantoea agglomerans <400> 2 Met Val Ser Gly Ser Lys Ala Gly Val Ser Pro His Arg Glu Ile Glu 1 5 10 15 Val Met Arg Gln Ser Ile Asp Asp His Leu Ala Gly Leu Leu Pro Glu 20 25 30 Thr Asp Ser Gln Asp Ile Val Ser Leu Ala Met Arg Glu Gly Val Met 35 40 45 Ala Pro Gly Lys Arg Ile Arg Pro Leu Leu Met Leu Leu Ala Ala Arg 50 55 60 Asp Leu Arg Tyr Gln Gly Ser Met Pro Thr Leu Leu Asp Leu Ala Cys 65 70 75 80 Ala Val Glu Leu Thr His Thr Ala Ser Leu Met Leu Asp Asp Met Pro 85 90 95 Cys Met Asp Asn Ala Glu Leu Arg Arg Gly Gln Pro Thr Thr His Lys 100 105 110 Lys Phe Gly Glu Ser Val Ala Ile Leu Ala Ser Val Gly Leu Leu Ser 115 120 125 Lys Ala Phe Gly Leu Ile Ala Ala Thr Gly Asp Leu Pro Gly Glu Arg 130 135 140 Arg Ala Gln Ala Val Asn Glu Leu Ser Thr Ala Val Gly Val Gln Gly 145 150 155 160 Leu Val Leu Gly Gln Phe Arg Asp Leu Asn Asp Ala Ala Leu Asp Arg 165 170 175 Thr Pro Asp Ala Ile Leu Ser Thr Asn His Leu Lys Thr Gly Ile Leu 180 185 190 Phe Ser Ala Met Leu Gln Ile Val Ala Ile Ala Ser Ala Ser Ser Pro 195 200 205 Ser Thr Arg Glu Thr Leu His Ala Phe Ala Leu Asp Phe Gly Gln Ala 210 215 220 Phe Gln Leu Leu Asp Asp Leu Arg Asp Asp His Pro Glu Thr Gly Lys 225 230 235 240 Asp Arg Asn Lys Asp Ala Gly Lys Ser Thr Leu Val Asn Arg Leu Gly 245 250 255 Ala Asp Ala Ala Arg Gln Lys Leu Arg Glu His Ile Asp Ser Ala Asp 260 265 270 Lys His Leu Thr Phe Ala Cys Pro Gln Gly Gly Ala Ile Arg Gln Phe 275 280 285 Met His Leu Trp Phe Gly His His Leu Ala Asp Trp Ser Pro Val Met 290 295 300 Lys Ile Ala 305 <210> 3 <211> 302 <212> PRT <213> Synechocystis sp. PCC6803 <400> 3 Met Val Ala Gln Gln Thr Arg Thr Asp Phe Asp Leu Ala Gln Tyr Leu 1 5 10 15 Gln Val Lys Lys Gly Val Val Glu Ala Ala Leu Asp Ser Ser Leu Ala 20 25 30 Ile Ala Arg Pro Glu Lys Ile Tyr Glu Ala Met Arg Tyr Ser Leu Leu 35 40 45 Ala Gly Gly Lys Arg Leu Arg Pro Ile Leu Cys Ile Thr Ala Cys Glu 50 55 60 Leu Cys Gly Gly Asp Glu Ala Leu Ala Leu Pro Thr Ala Cys Ala Leu 65 70 75 80 Glu Met Ile His Thr Met Ser Leu Ile His Asp Asp Leu Pro Ser Met 85 90 95 Asp Asn Asp Asp Phe Arg Arg Gly Lys Pro Thr Asn His Lys Val Tyr 100 105 110 Gly Glu Asp Ile Ala Ile Leu Ala Gly Asp Gly Leu Leu Ala Tyr Ala 115 120 125 Phe Glu Tyr Val Val Thr His Thr Pro Gln Ala Asp Pro Gln Ala Leu 130 135 140 Leu Gln Val Ile Ala Arg Leu Gly Arg Thr Val Gly Ala Ala Gly Leu 145 150 155 160 Val Gly Gly Gln Val Leu Asp Leu Glu Ser Glu Gly Arg Thr Asp Ile 165 170 175 Thr Pro Glu Thr Leu Thr Phe Ile His Thr His Lys Thr Gly Ala Leu 180 185 190 Leu Glu Ala Ser Val Leu Thr Gly Ala Ile Leu Ala Gly Ala Thr Gly 195 200 205 Glu Gln Gln Gln Arg Leu Ala Arg Tyr Ala Gln Asn Ile Gly Leu Ala 210 215 220 Phe Gln Val Val Asp Asp Ile Leu Asp Ile Thr Ala Thr Gln Glu Glu 225 230 235 240 Leu Gly Lys Thr Ala Gly Lys Asp Val Lys Ala Gln Lys Ala Thr Tyr 245 250 255 Pro Ser Leu Leu Gly Leu Glu Ala Ser Arg Ala Gln Ala Gln Ser Leu 260 265 270 Ile Asp Gln Ala Ile Val Ala Leu Glu Pro Phe Gly Pro Ser Ala Glu 275 280 285 Pro Leu Gln Ala Ile Ala Glu Tyr Ile Val Ala Arg Lys Tyr 290 295 300 <210> 4 <211> 309 <212> PRT <213> Pantoea agglomerans <400> 4 Met Ser Gln Pro Pro Leu Leu Asp His Ala Thr Gln Thr Met Ala Asn 1 5 10 15 Gly Ser Lys Ser Phe Ala Thr Ala Ala Lys Leu Phe Asp Pro Ala Thr 20 25 30 Arg Arg Ser Val Leu Met Leu Tyr Thr Trp Cys Arg His Cys Asp Asp 35 40 45 Val Ile Asp Asp Gln Thr His Gly Phe Ala Ser Glu Ala Ala Ala Glu 50 55 60 Glu Glu Ala Thr Gln Arg Leu Ala Arg Leu Arg Thr Leu Thr Leu Ala 65 70 75 80 Ala Phe Glu Gly Ala Glu Met Gln Asp Pro Ala Phe Ala Ala Phe Gln 85 90 95 Glu Val Ala Leu Thr His Gly Ile Thr Pro Arg Met Ala Leu Asp His 100 105 110 Leu Asp Gly Phe Ala Met Asp Val Ala Gln Thr Arg Tyr Val Thr Phe 115 120 125 Glu Asp Thr Leu Arg Tyr Cys Tyr His Val Ala Gly Val Val Gly Leu 130 135 140 Met Met Ala Arg Val Met Gly Val Arg Asp Glu Arg Val Leu Asp Arg 145 150 155 160 Ala Cys Asp Leu Gly Leu Ala Phe Gln Leu Thr Asn Ile Ala Arg Asp 165 170 175 Ile Ile Asp Asp Ala Ala Ile Asp Arg Cys Tyr Leu Pro Ala Glu Trp 180 185 190 Leu Gln Asp Ala Gly Leu Thr Pro Glu Asn Tyr Ala Ala Arg Glu Asn 195 200 205 Arg Ala Ala Leu Ala Arg Val Ala Glu Arg Leu Ile Asp Ala Ala Glu 210 215 220 Pro Tyr Tyr Ile Ser Ser Gln Ala Gly Leu His Asp Leu Pro Pro Arg 225 230 235 240 Cys Ala Trp Ala Ile Ala Thr Ala Arg Ser Val Tyr Arg Glu Ile Gly 245 250 255 Ile Lys Val Lys Ala Ala Gly Gly Ser Ala Trp Asp Arg Arg Gln His 260 265 270 Thr Ser Lys Gly Glu Lys Ile Ala Met Leu Met Ala Ala Pro Gly Gln 275 280 285 Val Ile Arg Ala Lys Thr Thr Arg Val Thr Pro Arg Pro Ala Gly Leu 290 295 300 Trp Gln Arg Pro Val 305 <210> 5 <211> 492 <212> PRT <213> Pantoea agglomerans <400> 5 Met Lys Lys Thr Val Val Ile Gly Ala Gly Phe Gly Gly Leu Ala Leu 1 5 10 15 Ala Ile Arg Leu Gln Ala Ala Gly Ile Pro Thr Val Leu Leu Glu Gln 20 25 30 Arg Asp Lys Pro Gly Gly Arg Ala Tyr Val Trp His Asp Gln Gly Phe 35 40 45 Thr Phe Asp Ala Gly Pro Thr Val Ile Thr Asp Pro Thr Ala Leu Glu 50 55 60 Ala Leu Phe Thr Leu Ala Gly Arg Arg Met Glu Asp Tyr Val Arg Leu 65 70 75 80 Leu Pro Val Lys Pro Phe Tyr Arg Leu Cys Trp Glu Ser Gly Lys Thr 85 90 95 Leu Asp Tyr Ala Asn Asp Ser Ala Glu Leu Glu Ala Gln Ile Thr Gln 100 105 110 Phe Asn Pro Arg Asp Val Glu Gly Tyr Arg Arg Phe Leu Ala Tyr Ser 115 120 125 Gln Ala Val Phe Gln Glu Gly Tyr Leu Arg Leu Gly Ser Val Pro Phe 130 135 140 Leu Ser Phe Arg Asp Met Leu Arg Ala Gly Pro Gln Leu Leu Lys Leu 145 150 155 160 Gln Ala Trp Gln Ser Val Tyr Gln Ser Val Ser Arg Phe Ile Glu Asp 165 170 175 Glu His Leu Arg Gln Ala Phe Ser Phe His Ser Leu Leu Val Gly Gly 180 185 190 Asn Pro Phe Thr Thr Ser Ser Ile Tyr Thr Leu Ile His Ala Leu Glu 195 200 205 Arg Glu Trp Gly Val Trp Phe Pro Glu Gly Gly Thr Gly Ala Leu Val 210 215 220 Asn Gly Met Val Lys Leu Phe Thr Asp Leu Gly Gly Glu Ile Glu Leu 225 230 235 240 Asn Ala Arg Val Glu Glu Leu Val Val Ala Asp Asn Arg Val Ser Gln 245 250 255 Val Arg Leu Ala Asp Gly Arg Ile Phe Asp Thr Asp Ala Val Ala Ser 260 265 270 Asn Ala Asp Val Val Asn Thr Tyr Lys Lys Leu Leu Gly His His Pro 275 280 285 Val Gly Gln Lys Arg Ala Ala Ala Leu Glu Arg Lys Ser Met Ser Asn 290 295 300 Ser Leu Phe Val Leu Tyr Phe Gly Leu Asn Gln Pro His Ser Gln Leu 305 310 315 320 Ala His His Thr Ile Cys Phe Gly Pro Arg Tyr Arg Glu Leu Ile Asp 325 330 335 Glu Ile Phe Thr Gly Ser Ala Leu Ala Asp Asp Phe Ser Leu Tyr Leu 340 345 350 His Ser Pro Cys Val Thr Asp Pro Ser Leu Ala Pro Pro Gly Cys Ala 355 360 365 Ser Phe Tyr Val Leu Ala Pro Val Pro His Leu Gly Asn Ala Pro Leu 370 375 380 Asp Trp Ala Gln Glu Gly Pro Lys Leu Arg Asp Arg Ile Phe Asp Tyr 385 390 395 400 Leu Glu Glu Arg Tyr Met Pro Gly Leu Arg Ser Gln Leu Val Thr Gln 405 410 415 Arg Ile Phe Thr Pro Ala Asp Phe His Asp Thr Leu Asp Ala His Leu 420 425 430 Gly Ser Ala Phe Ser Ile Glu Pro Leu Leu Thr Gln Ser Ala Trp Phe 435 440 445 Arg Pro His Asn Arg Asp Ser Asp Ile Ala Asn Leu Tyr Leu Val Gly 450 455 460 Ala Gly Thr His Pro Gly Ala Gly Ile Pro Gly Val Val Ala Ser Ala 465 470 475 480 Lys Ala Thr Ala Ser Leu Met Ile Glu Asp Leu Gln 485 490 <210> 6 <211> 511 <212> PRT <213> Rhodopseudomonas palustris <400> 6 Met Leu Asp Pro Gly Pro Asn Pro Ala Pro Arg Pro Ser Arg Asp Arg 1 5 10 15 Ala Pro His Ala Val Val Ile Gly Ser Gly Phe Gly Gly Leu Ala Ala 20 25 30 Ala Val Arg Leu Gly Ala Lys Gly Tyr Arg Val Thr Val Leu Glu Lys 35 40 45 Leu Asp Lys Ala Gly Gly Arg Ala Tyr Val His Lys Gln Asp Gly Phe 50 55 60 Ser Phe Asp Ala Gly Pro Thr Ile Val Thr Ala Pro Tyr Leu Phe Glu 65 70 75 80 Glu Leu Trp Lys Leu Cys Gly Lys Arg Met Ser Asp Asp Ile Thr Leu 85 90 95 Lys Pro Met Ser Pro Phe Tyr Arg Ile Arg Phe Asp Asp Gly Thr His 100 105 110 Phe Asp Tyr Ser Asp Asp Arg Asp Ala Val Leu Asp Gln Ile Ala Lys 115 120 125 Phe Cys Pro Asp Asp Val Pro Ala Tyr Asp Arg Phe Met Ala Ala Ser 130 135 140 His Glu Ile Phe Lys Val Gly Phe Glu Gln Leu Gly Asp Gln Pro Phe 145 150 155 160 Ser His Phe Thr Asp Met Leu Lys Ile Ala Pro Ala Met Ile Lys Leu 165 170 175 Glu Ser Tyr Arg Ser Val Tyr Gly Leu Val Ala Lys His Phe Lys Asp 180 185 190 Pro Lys Leu Arg Gln Val Phe Ser Phe His Pro Leu Leu Ile Gly Gly 195 200 205 Asn Pro Phe Met Ser Ser Ser Val Tyr Cys Leu Ile Thr Tyr Leu Glu 210 215 220 Lys Gln Trp Gly Val His Ser Ala Met Gly Gly Thr Gly Ala Leu Val 225 230 235 240 Thr Gly Leu Val Asn Leu Ile Glu Gly Gln Gly Asn Thr Ile Arg Tyr 245 250 255 Asn Gln Asp Val Arg Gln Ile Val Val Glu Asn Gly Thr Ala Cys Gly 260 265 270 Val Lys Leu Ala Asp Gly Glu Val Ile Lys Ala Asp Ile Val Val Ser 275 280 285 Asn Ala Asp Ser Ala Ser Thr Tyr Arg Tyr Leu Leu Pro Pro Glu Thr 290 295 300 Arg Lys Arg Trp Thr Asp Ala Lys Ile Glu Lys Ser Arg Tyr Ser Met 305 310 315 320 Ser Leu Phe Val Trp Tyr Phe Gly Thr Lys Arg Arg Tyr Glu Asp Val 325 330 335 Lys His His Thr Ile Leu Leu Gly Pro Arg Tyr Lys Glu Leu Ile Ser 340 345 350 Asp Ile Phe Ser Arg Lys Val Val Ala Glu Asp Phe Ser Leu Tyr Leu 355 360 365 His Arg Pro Thr Ala Thr Asp Pro Ser Leu Ala Pro Gln Gly Cys Asp 370 375 380 Thr Phe Tyr Val Leu Ser Pro Val Pro Asn Leu Leu Gly Asp Thr Asp 385 390 395 400 Trp His Thr Lys Ala Glu Thr Tyr Arg Ala Ser Ile Ala Lys Met Leu 405 410 415 Gly Ala Thr Val Leu Pro Asp Leu Glu Asn Gln Ile Ala Thr Ser Lys 420 425 430 Ile Thr Thr Pro Ile Asp Phe Gln Asp Arg Leu Ser Ser Phe Arg Gly 435 440 445 Ala Ala Phe Gly Leu Glu Pro Val Leu Trp Gln Ser Ala Trp Phe Arg 450 455 460 Pro His Asn Gln Ser Glu Asp Val Lys Arg Leu Tyr Leu Val Gly Ala 465 470 475 480 Gly Thr His Pro Gly Ala Gly Leu Pro Gly Val Leu Ser Ser Ala Arg 485 490 495 Val Leu Asp Ala Leu Val Pro Glu Ala Asp Ser Leu Val Thr Ser 500 505 510 <210> 7 <211> 382 <212> PRT <213> Pantoea ananatis <400> 7 Met Gln Pro His Tyr Asp Leu Ile Leu Val Gly Ala Gly Leu Ala Asn 1 5 10 15 Gly Leu Ile Ala Leu Arg Leu Gln Gln Gln Gln Pro Asp Met Arg Ile 20 25 30 Leu Leu Ile Asp Ala Ala Pro Gln Ala Gly Gly Asn His Thr Trp Ser 35 40 45 Phe His His Asp Asp Leu Thr Glu Ser Gln His Arg Trp Ile Ala Pro 50 55 60 Leu Val Val His His Trp Pro Asp Tyr Gln Val Arg Phe Pro Thr Arg 65 70 75 80 Arg Arg Lys Leu Asn Ser Gly Tyr Phe Cys Ile Thr Ser Gln Arg Phe 85 90 95 Ala Glu Val Leu Gln Arg Gln Phe Gly Pro His Leu Trp Met Asp Thr 100 105 110 Ala Val Ala Glu Val Asn Ala Glu Ser Val Arg Leu Lys Lys Gly Gln 115 120 125 Val Ile Gly Ala Arg Ala Val Ile Asp Gly Arg Gly Tyr Ala Ala Asn 130 135 140 Ser Ala Leu Ser Val Gly Phe Gln Ala Phe Ile Gly Gln Glu Trp Arg 145 150 155 160 Leu Ser His Pro His Gly Leu Ser Ser Pro Ile Ile Met Asp Ala Thr 165 170 175 Val Asp Gln Gln Asn Gly Tyr Arg Phe Val Tyr Ser Leu Pro Leu Ser 180 185 190 Pro Thr Arg Leu Leu Ile Glu Asp Thr His Tyr Ile Asp Asn Ala Thr 195 200 205 Leu Asp Pro Glu Cys Ala Arg Gln Asn Ile Cys Asp Tyr Ala Ala Gln 210 215 220 Gln Gly Trp Gln Leu Gln Thr Leu Leu Arg Glu Glu Gln Gly Ala Leu 225 230 235 240 Pro Ile Thr Leu Ser Gly Asn Ala Asp Ala Phe Trp Gln Gln Arg Pro 245 250 255 Leu Ala Cys Ser Gly Leu Arg Ala Gly Leu Phe His Pro Thr Thr Gly 260 265 270 Tyr Ser Leu Pro Leu Ala Val Ala Val Ala Asp Arg Leu Ser Ala Leu 275 280 285 Asp Val Phe Thr Ser Ala Ser Ile His His Ala Ile Thr His Phe Ala 290 295 300 Arg Glu Arg Trp Gln Gln Gln Gly Phe Phe Arg Met Leu Asn Arg Met 305 310 315 320 Leu Phe Leu Ala Gly Pro Ala Asp Ser Arg Trp Arg Val Met Gln Arg 325 330 335 Phe Tyr Gly Leu Pro Glu Asp Leu Ile Ala Arg Phe Tyr Ala Gly Lys 340 345 350 Leu Thr Leu Thr Asp Arg Leu Arg Ile Leu Ser Gly Lys Pro Pro Val 355 360 365 Pro Val Leu Ala Ala Leu Gln Ala Ile Met Thr Thr His Arg 370 375 380 <210> 8 <211> 275 <212> PRT <213> uncultured marine bacterium 66A03 <400> 8 Met Gly Leu Met Leu Ile Asp Trp Cys Ala Leu Ala Leu Val Val Phe 1 5 10 15 Ile Gly Leu Pro His Gly Ala Leu Asp Ala Ala Ile Ser Phe Ser Met 20 25 30 Ile Ser Ser Ala Lys Arg Ile Ala Arg Leu Ala Gly Ile Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Leu Leu Leu Ala Thr Ala Phe Phe Leu Ile Trp Tyr Gln Leu Pro 50 55 60 Ala Phe Ser Leu Leu Ile Phe Leu Leu Ile Ser Ile Ile His Phe Gly 65 70 75 80 Met Ala Asp Phe Asn Ala Ser Pro Ser Lys Leu Lys Trp Pro His Ile 85 90 95 Ile Ala His Gly Gly Val Val Thr Val Trp Leu Pro Leu Ile Gln Lys 100 105 110 Asn Glu Val Thr Lys Leu Phe Ser Ile Leu Thr Asn Gly Pro Thr Pro 115 120 125 Ile Leu Trp Asp Ile Leu Leu Ile Phe Phe Leu Cys Trp Ser Ile Gly 130 135 140 Val Cys Leu His Thr Tyr Glu Thr Leu Arg Ser Lys His Tyr Asn Ile 145 150 155 160 Ala Phe Glu Leu Ile Gly Leu Ile Phe Leu Ala Trp Tyr Ala Pro Pro 165 170 175 Leu Val Thr Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Phe Ile His Ser Arg Arg His 180 185 190 Phe Ser Phe Val Trp Lys Gln Leu Gln His Met Ser Ser Lys Lys Met 195 200 205 Met Ile Gly Ser Ala Ile Ile Leu Ser Cys Thr Ser Trp Leu Ile Gly 210 215 220 Gly Gly Ile Tyr Phe Phe Leu Asn Ser Lys Met Ile Ala Ser Glu Ala 225 230 235 240 Ala Leu Gln Thr Val Phe Ile Gly Leu Ala Ala Leu Thr Val Pro His 245 250 255 Met Ile Leu Ile Asp Phe Ile Phe Arg Pro His Ser Ser Arg Ile Lys 260 265 270 Ile Lys Asn 275 <210> 9 <211> 347 <212> PRT <213> Cronobacter sakazakii <400> 9 Met Lys Asp Lys Glu Leu Ser Gln Arg Lys Asn Asp His Leu Asp Ile 1 5 10 15 Val Leu His Pro Glu Arg Ala Lys Gln Thr Ile Arg Thr Gly Phe Glu 20 25 30 Gln Trp Arg Phe Glu His Cys Ala Leu Pro Glu Leu Ala Leu Asp Asp 35 40 45 Ile Asp Leu Ser Thr Arg Leu Phe Gly Arg Val Met Lys Ala Pro Leu 50 55 60 Leu Ile Ser Ser Met Thr Gly Gly Ala Arg Arg Ala Ser Asp Ile Asn 65 70 75 80 Arg His Leu Ala Glu Ala Ala Gln Thr Leu Gly Leu Ala Met Gly Val 85 90 95 Gly Ser Gln Arg Val Ala Leu Glu Ser Glu Asp Asn Trp Gly Leu Thr 100 105 110 Gly Glu Leu Arg Arg Tyr Ala Pro Asp Ile Pro Leu Leu Ala Asn Leu 115 120 125 Gly Ala Ala Gln Ile Gly Ser Leu Gln Gly Leu Asp Tyr Ala Arg Arg 130 135 140 Ala Val Glu Met Val Glu Ala Asp Ala Leu Ile Ile His Leu Asn Pro 145 150 155 160 Leu Gln Glu Ala Leu Gln Thr Gly Gly Asp Arg Asp Trp Arg Gly Val 165 170 175 Leu Ala Ala Ile Lys Arg Val Val Asn Ala Leu Ser Val Pro Val Val 180 185 190 Val Lys Glu Val Gly Ala Gly Leu Ser Val Pro Val Ala Arg Gln Leu 195 200 205 Ala Glu Ala Gly Val Thr Met Leu Asp Val Ala Gly Ala Gly Gly Thr 210 215 220 Ser Trp Ala Ala Val Glu Gly Glu Arg Ala Ala Ser Asp His Ala Arg 225 230 235 240 Ser Val Ala Met Ala Phe Ala Asp Trp Gly Ile Pro Thr Ala Gln Ala 245 250 255 Leu Arg Gln Ile His Gln Ala Phe Pro Ser Met Pro Leu Ile Ala Ser 260 265 270 Gly Gly Ile Arg Asp Gly Ile Asp Thr Ala Lys Ala Leu Ala Met Gly 275 280 285 Ala Ser Leu Val Gly Gln Ala Ala Ala Val Leu Gly Ser Ala Thr Thr 290 295 300 Ser Thr Ser Ala Val Leu Asp His Phe Ala Val Val Ile Glu Gln Leu 305 310 315 320 Arg Val Ala Cys Phe Cys Thr Gly Ser Ala Ser Leu Ser Ala Leu Arg 325 330 335 Glu Ala Arg Leu Ala Arg Val Gly Asp Glu Glu 340 345 <210> 10 <211> 382 <212> PRT <213> Corynebacterium glutamicum <400> 10 Leu Arg Asp Asn Trp Pro Cys Asp Thr Arg Met Asp Asn Gly Met Thr 1 5 10 15 Ile Thr Thr Glu His Ser Thr His Pro Asp Leu Asp Phe Asn Asp Glu 20 25 30 Ile Tyr Arg Glu Leu Asn Arg Ile Cys Ala Ser Leu Ser Gln Gln Cys 35 40 45 Ser Thr Tyr Gln Pro Glu Phe Arg Thr Cys Leu Asp Ala Ala Phe Gln 50 55 60 Ala Leu Arg Gly Gly Lys Leu Ile Arg Pro Arg Met Leu Leu Gly Leu 65 70 75 80 Tyr Asn Thr Leu Val Asp Asp Asp Ile Glu Val Lys Leu Asn Thr Val 85 90 95 Leu Gln Val Ala Val Ala Leu Glu Leu Leu His Phe Ser Leu Leu Val 100 105 110 His Asp Asp Val Ile Asp Gly Asp Leu Tyr Arg Arg Gly Lys Leu Asn 115 120 125 Phe Ile Gly Gln Ile Leu Met His Arg Thr Pro Glu Ser Phe Ala Gln 130 135 140 Ile Gln Arg Asp Pro Glu His Leu Asp Trp Ala Gln Ser Asn Gly Leu 145 150 155 160 Leu Met Gly Asn Leu Phe Leu Ala Ala Thr His Gln Ile Phe Ala Arg 165 170 175 Leu Asp Leu Pro His His Gln Arg Val Arg Leu Leu Asp Leu Leu Asn 180 185 190 His Thr Ile Asn Asp Thr Ile Val Gly Glu Phe Leu Asp Val Gly Leu 195 200 205 Ser Ser Lys Ala Ile Ser Pro Asn Met Asp Ile Ala Leu Glu Met Ser 210 215 220 Arg Leu Lys Thr Ala Thr Tyr 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PRT <213> Streptococcus pneumoniae <400> 20 Met Asp Arg Glu Pro Val Thr Val Arg Ser Tyr Ala Asn Ile Ala Ile 1 5 10 15 Ile Lys Tyr Trp Gly Lys Lys Lys Glu Lys Glu Met Val Pro Ala Thr 20 25 30 Ser Ser Ile Ser Leu Thr Leu Glu Asn Met Tyr Thr Glu Thr Thr Leu 35 40 45 Ser Pro Leu Pro Ala Asn Val Thr Ala Asp Glu Phe Tyr Ile Asn Gly 50 55 60 Gln Leu Gln Asn Glu Val Glu His Ala Lys Met Ser Lys Ile Ile Asp 65 70 75 80 Arg Tyr Arg Pro Ala Gly Glu Gly Phe Val Arg Ile Asp Thr Gln Asn 85 90 95 Asn Met Pro Thr Ala Ala Gly Leu Ser Ser Ser Ser Ser Gly Leu Ser 100 105 110 Ala Leu Val Lys Ala Cys Asn Ala Tyr Phe Lys Leu Gly Leu Asp Arg 115 120 125 Ser Gln Leu Ala Gln Glu Ala Lys Phe Ala Ser Gly Ser Ser Ser Arg 130 135 140 Ser Phe Tyr Gly Pro Leu Gly Ala Trp Asp Lys Asp Ser Gly Glu Ile 145 150 155 160 Tyr Pro Val Glu Thr Asp Leu Lys Leu Ala Met Ile Met Leu Val Leu 165 170 175 Glu Asp Lys Lys Lys Pro Ile Ser Ser Arg Asp Gly Met Lys Leu Cys 180 185 190 Val Glu Thr Ser Thr Thr Phe Asp Asp Trp Val Arg Gln 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aggccccttg gttatcgatg gtacatctta tcatatacca 540 atggcaacta cagagggttg tttggtagct tctgccatgc gtggctgtaa ggcaatcaat 600 gctggcggtg gtgcaacaac tgttttaact aaggatggta tgacaagagg cccagtagtc 660 cgtttcccaa ctttgaaaag atctggtgcc tgtaagatat ggttagactc agaagaggga 720 caaaacgcaa ttaaaaaagc ttttaactct acatcaagat ttgcacgtct gcaacatatt 780 caaacttgtc tagcaggaga tttactcttc atgagattta gaacaactac tggtgacgca 840 atgggtatga atatgatttc taaaggtgtc gaatactcat taaagcaaat ggtagaagag 900 tatggctggg aagatatgga ggttgtctcc gtttctggta actactgtac cgacaaaaaa 960 ccagctgcca tcaactggat cgaaggtcgt ggtaagagtg tcgtcgcaga agctactatt 1020 cctggtgatg ttgtcagaaa agtgttaaaa agtgatgttt ccgcattggt tgagttgaac 1080 attgctaaga atttggttgg atctgcaatg gctgggtctg ttggtggatt taacgcacat 1140 gcagctaatt tagtgacagc tgttttcttg gcattaggac aagatcctgc acaaaatgtt 1200 gaaagttcca actgtataac attgatgaaa gaagtggacg gtgatttgag aatttccgta 1260 tccatgccat ccatcgaagt aggtaccatc ggtggtggta ctgttctaga accacaaggt 1320 gccatgttgg acttattagg tgtaagaggc ccgcatgcta ccgctcctgg taccaacgca 1380 cgtcaattag caagaatagt tgcctgtgcc gtcttggcag gtgaattatc cttatgtgct 1440 gccctagcag ccggccattt ggttcaaagt catatgaccc acaacaggaa acctgctgaa 1500 ccaacaaaac ctaacaattt ggacgccact gatataaatc gtttgaaaga tgggtccgtc 1560 acctgcatta aatcctaa 1578 <210> 26 <211> 924 <212> DNA <213> Pantoea agglomerans <400> 26 atggtgagtg gcagtaaagc gggcgtttcg cctcatcgcg aaatagaagt aatgagacaa 60 tccattgacg atcacctggc tggcctgtta cctgaaaccg acagccagga tatcgtcagc 120 cttgcgatgc gtgaaggcgt catggcaccc ggtaaacgga tccgtccgct gctgatgctg 180 ctggccgccc gcgacctccg ctaccagggc agtatgccta cgctgctcga tctcgcctgc 240 gccgttgaac tgacccatac cgcgtcgctg atgctcgacg acatgccctg catggacaac 300 gccgagctgc gccgcggtca gcccactacc cacaaaaaat ttggtgagag cgtggcgatc 360 cttgcctccg ttgggctgct ctctaaagcc tttggtctga tcgccgccac cggcgatctg 420 ccgggggaga ggcgtgccca ggcggtcaac gagctctcta ccgccgtggg cgtgcagggc 480 ctggtactgg ggcagtttcg cgatcttaac gatgccgccc tcgaccgtac ccctgacgct 540 atcctcagca ccaaccacct caagaccggc attctgttca gcgcgatgct gcagatcgtc 600 gccattgctt ccgcctcgtc gccgagcacg cgagagacgc tgcacgcctt cgccctcgac 660 ttcggccagg cgtttcaact gctggacgat ctgcgtgacg atcacccgga aaccggtaaa 720 gatcgcaata aggacgcggg aaaatcgacg ctggtcaacc ggctgggcgc agacgcggcc 780 cggcaaaagc tgcgcgagca tattgattcc gccgacaaac acctcacttt tgcctgtccg 840 cagggcggcg ccatccgaca gtttatgcat ctgtggtttg gccatcacct tgccgactgg 900 tcaccggtca tgaaaatcgc ctga 924 <210> 27 <211> 906 <212> DNA <213> Synechocystis sp. PCC6803 <400> 27 atggttgccc aacaaacacg aaccgacttt gatttagccc aatacttaca agttaaaaaa 60 ggtgtggtcg aggcagccct ggatagttcc ctggcgatcg cccggccgga aaagatttac 120 gaagccatgc gttattctct gttggcgggg ggcaaacgat tgcgaccgat tttatgcatt 180 acggcctgcg aactgtgtgg cggtgatgaa gccctggcct tgcccacggc ctgtgccctg 240 gaaatgatcc acaccatgtc cctcatccat gatgatttgc cctccatgga taatgacgat 300 ttccgccggg gtaaacccac taaccacaaa gtgtacgggg aagacattgc cattttggcc 360 ggggatggac tgctagccta tgcgtttgag tatgtagtta cccacacccc ccaggctgat 420 ccccaagctt tactccaagt tattgcccgt ttgggtcgca cggtgggggc cgccggttta 480 gtggggggac aagttctaga cctggaatcg gaggggcgca ctgacatcac cccggaaacc 540 ctaactttta tccataccca taaaaccggg gcattgctgg aagcttccgt gctcacaggc 600 gcaattttgg ccggggccac tggggaacaa caacagagac tggcccgcta tgcccagaat 660 attggcttag cttttcaagt ggtggatgac atcctcgaca tcaccgccac ccaggaagag 720 ttgggtaaaa ccgctggtaa agatgtcaaa gcccaaaaag ccacctatcc cagtctcctc 780 ggtttggaag cttcccgggc ccaggcccaa agtttgattg accaggccat tgtcgccctg 840 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cgatcgccac cgcccgcagc gtctaccggg agatcggtat taaggtaaaa 780 gcggcgggag gcagcgcctg ggatcgccgc cagcacacca gcaaaggtga aaaaattgcc 840 atgctgatgg cggcaccggg gcaggttatt cgggcgaaga cgacgagggt gacgccgcgt 900 ccggccggtc tttggcagcg tcccgtttag 930 <210> 29 <211> 1479 <212> DNA <213> Pantoea agglomerans <400> 29 atgaaaaaaa ccgttgtgat tggcgcaggc tttggtggcc tggcgctggc gattcgcctg 60 caggcggcag ggatcccaac cgtactgctg gagcagcggg acaagcccgg cggtcgggcc 120 tacgtctggc atgaccaggg ctttaccttt gacgccgggc cgacggtgat caccgatcct 180 accgcgcttg aggcgctgtt caccctggcc ggcaggcgca tggaggatta cgtcaggctg 240 ctgccggtaa aacccttcta ccgactctgc tgggagtccg ggaagaccct cgactatgct 300 aacgacagcg ccgagcttga ggcgcagatt acccagttca acccccgcga cgtcgagggc 360 taccggcgct ttctggctta ctcccaggcg gtattccagg agggatattt gcgcctcggc 420 agcgtgccgt tcctctcttt tcgcgacatg ctgcgcgccg ggccgcagct gcttaagctc 480 caggcgtggc agagcgtcta ccagtcggtt tcgcgcttta ttgaggatga gcatctgcgg 540 caggccttct cgttccactc cctgctggta ggcggcaacc ccttcaccac ctcgtccatc 600 tacaccctga tccacgccct tgagcgggag tggggggtct ggttccctga gggcggcacc 660 ggggcgctgg tgaacggcat ggtgaagctg tttaccgatc tgggcgggga gatcgaactc 720 aacgcccggg tcgaagagct ggtggtggcc gataaccgcg taagccaggt ccggctggcg 780 gatggtcgga tctttgacac cgacgccgta gcctcgaacg ctgacgtggt gaacacctat 840 aaaaagctgc tcggccacca tccggtgggg cagaagcggg cggcagcgct ggagcgcaag 900 agcatgagca actcgctgtt tgtgctctac ttcggcctga accagcctca ttcccagctg 960 gcgcaccata ccatctgttt tggtccccgc taccgggagc tgatcgacga gatctttacc 1020 ggcagcgcgc tggcggatga cttctcgctc tacctgcact cgccctgcgt gaccgatccc 1080 tcgctcgcgc ctcccggctg cgccagcttc tacgtgctgg ccccggtgcc gcatcttggc 1140 aacgcgccgc tggactgggc gcaggagggg ccgaagctgc gcgaccgcat ctttgactac 1200 cttgaagagc gctatatgcc cggcctgcgt agccagctgg tgacccagcg gatctttacc 1260 ccggcagact tccacgacac gctggatgcg catctgggat cggccttctc catcgagccg 1320 ctgctgaccc aaagcgcctg gttccgcccg cacaaccgcg acagcgacat tgccaacctc 1380 tacctggtgg gcgcaggtac tcaccctggg gcgggcattc ctggcgtagt ggcctcggcg 1440 aaagccaccg ccagcctgat gattgaggat ctgcaatga 1479 <210> 30 <211> 1533 <212> DNA <213> Rhodopseudomonas palustris <400> 30 atgctcgatc ctggccccaa tcctgctccc cgtccttctc gcgatcgtgc cccgcatgcg 60 gtggtgatcg gctctggttt cggcggcttg gccgcagcgg tgcgtcttgg cgccaagggg 120 tatcgagtaa ccgttcttga aaagctcgat aaggccggcg gccgcgctta cgtccacaag 180 caggacggct tctcattcga cgccggtccg accatcgtca ccgcgccgta tctgttcgaa 240 gagctgtgga agctgtgcgg caagcggatg tcggacgaca tcaccttgaa gccgatgtcg 300 ccgttctatc gcatccgctt cgacgacggc acgcacttcg attactccga cgaccgcgac 360 gcggtgctcg accagatcgc caagttctgc ccggacgacg tgccggccta tgaccgcttc 420 atggcggcct cgcacgagat tttcaaagtc ggtttcgagc agctcggcga tcagccattc 480 agtcacttca ccgacatgct gaagatcgcg ccggcgatga tcaagctgga gagctatcgc 540 agcgtttacg gcctcgtcgc caagcacttc aaggatccga agctgcgcca ggtgttcagc 600 ttccatccgc tgctgatcgg cggcaacccg ttcatgtcca gctcggtgta ctgcctgatc 660 acctatctgg aaaagcagtg gggcgtgcat tcagcgatgg gcggcaccgg cgcgctcgtc 720 accggtctgg tcaacctgat cgagggccag ggcaatacga tccgctacaa tcaggatgtc 780 cgccagatcg tcgtggaaaa cggcaccgcg tgcggcgtca agctcgccga tggcgaggtg 840 attaaggccg atatcgtggt gtccaacgcc gattcggcct cgacttatcg ctatctgctg 900 ccgccggaga cgcgcaagcg ttggaccgac gccaagatcg agaagtcgcg ctattcgatg 960 agcctattcg tctggtactt cggcacgaag cgtcgctacg aagacgtcaa gcaccacacc 1020 attctgctcg gaccgcgcta caaggaactg atcagcgaca tcttcagccg gaaggtggtc 1080 gccgaggatt tcagcctgta tctgcatcgc ccgactgcga ccgacccgtc gctcgcgccg 1140 cagggctgcg acactttcta cgtcctgtcg ccggtgccga atctgctcgg tgatactgat 1200 tggcacacca aggccgagac ttatcgcgcc tcgatcgcca agatgctcgg tgcgaccgtt 1260 ctgcccgatc tggaaaacca gatcgcgacc tccaagatca ccacgccgat cgatttccag 1320 gaccggctgt cgtcgttccg cggcgcggcg ttcggtctgg agccggtgtt gtggcagagc 1380 gcctggttca ggccgcacaa tcagagcgaa gacgtcaaac gcctttatct cgtcggcgcc 1440 ggaacgcatc ccggcgctgg cctgcccggg gtactgtcct cggcgcgggt actcgatgcg 1500 ctggtccccg aggccgacag tctggtgaca tca 1533 <210> 31 <211> 1146 <212> DNA <213> Pantoea ananatis <400> 31 atgcaaccgc attatgatct 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tagctacagg aaatgataca 1980 cgcgctgtta gcgcttcttg tcatgctttt gcggtgaagg aaggtcgcta ccaaggtttg 2040 actagttgga cgctggatgg cgaacaacta attggtgaaa tttcagttcc gcttgcgtta 2100 gccacggttg gcggtgccac aaaagtctta cctaaatctc aagcagctgc tgatttgtta 2160 gcagtgacgg atgcaaaaga actaagtcga gtagtagcgg ctgttggttt ggcacaaaat 2220 ttagcggcgt tacgggcctt agtctctgaa ggaattcaaa aaggacacat ggctctacaa 2280 gcacgttctt tagcgatgac ggtcggagct actggtaaag aagttgaggc agtcgctcaa 2340 caattaaaac gtcaaaaaac gatgaaccaa gaccgagcct tggctatttt aaatgattta 2400 agaaaacaat aa 2412 <210> 41 <211> 1149 <212> DNA <213> Enterococcus faecalis <400> 41 atgacaattg ggattgataa aattagtttt tttgtgcccc cttattatat tgatatgacg 60 gcactggctg aagccagaaa tgtagaccct ggaaaatttc atattggtat tgggcaagac 120 caaatggcgg tgaacccaat cagccaagat attgtgacat ttgcagccaa tgccgcagaa 180 gcgatcttga ccaaagaaga taaagaggcc attgatatgg tgattgtcgg gactgagtcc 240 agtatcgatg agtcaaaagc ggccgcagtt gtcttacatc gtttaatggg gattcaacct 300 ttcgctcgct ctttcgaaat caaggaagct tgttacggag caacagcagg cttacagtta 360 gctaagaatc acgtagcctt acatccagat aaaaaagtct tggttgtagc agcagatatt 420 gcaaaatatg gattaaattc tggcggtgag cctacacaag gagctggggc ggttgcaatg 480 ttagttgcta gtgaaccgcg catcttggct ttaaaagagg ataatgtgat gctgacgcaa 540 gatatctatg acttttggcg tccaacaggc catccgtatc ctatggtcga tggtcctttg 600 tcaaacgaaa cctacatcca atcttttgcc caagtctggg atgaacataa aaaaagaacc 660 ggtcttgatt ttgcagatta tgatgcttta gcgttccata ttccttacac aaaaatgggc 720 aaaaaagcct tattagcaaa aatctccgac caaactgaag cagaacagga acgaatttta 780 gcccgttatg aagaaagcat catctatagt cgtcgcgtag gaaacttgta tacgggttca 840 ctttatctgg gactcatttc ccttttagaa aatgcaacga ctttaaccgc aggcaatcaa 900 attgggttat tcagttatgg ttctggtgct gtcgctgaat ttttcactgg tgaattagta 960 gctggttatc aaaatcattt acaaaaagaa actcatttag cactgctaga taatcggaca 1020 gaactttcta tcgctgaata tgaagccatg tttgcagaaa ctttagacac agatattgat 1080 caaacgttag aagatgaatt aaaatatagt atttctgcta ttaataatac cgttcgctct 1140 tatcgaaac 1149 <210> 42 <211> 879 <212> DNA <213> Streptococcus pneumoniae <400> 42 atgacaaaaa aagttggtgt cggtcaggca catagtaaga taattttaat aggggaacat 60 gcggtcgttt acggttatcc tgccatttcc ctgcctcttt tggaggtgga ggtgacctgt 120 aaggtagttc ctgcagagag tccttggcgc ctttatgagg aggatacctt gtccatggcg 180 gtttatgcct cactggagta tttgaatatc acagaagcct gcattcgttg tgagattgac 240 tcggctatcc ctgagaaacg ggggatgggt tcgtcagcgg ctatcagcat agcggccatt 300 cgtgcagtat ttgactacta tcaggctgat ctgcctcatg atgtactaga aatcttggtc 360 aatcgagctg aaatgattgc ccatatgaat cctagtggtt tggatgctaa gacctgtctt 420 agtgaccaac ctattcgctt tatcaagaac gtaggattta cagaacttga gatggattta 480 tccgcctatt tggtgattgc cgatacgggt gtttatggtc atactcgtga agccatccaa 540 gtggttcaaa ataagggcaa ggatgcccta ccgtttttgc atgccttggg agaattaacc 600 cagcaagcag aagttgcgat ttcacaaaaa gatgctgaag gactgggaca aatcctcagt 660 caagcgcatt tacatttaaa agaaattgga gtcagtagcc ctgaggcaga ctttttggtt 720 gaaacgactc ttagccatgg tgctctgggt gccaagatga gcggtggtgg gctaggaggt 780 tgtatcatag ccttggtaac caatttgaca cacgcacaag aactagcaga aagattagaa 840 gagaaaggag ctgttcagac atggatagag agcctgtaa 879 <210> 43 <211> 1011 <212> DNA <213> Streptococcus pneumoniae <400> 43 atgattgctg ttaaaacttg cggaaaactc tattgggcag gtgaatatgc tattttagag 60 ccagggcagt tagctttgat aaaggatatt cccatctata tgagggctga gattgctttt 120 tctgacagct accgtatcta ttcagatatg tttgatttcg cagtggactt aaggcccaat 180 cctgactaca gcttgattca agaaacgatt gctttgatgg gagacttcct cgctgttcgc 240 ggtcagaatt taagaccttt ttccctaaaa atctgtggca aaatggaacg agaagggaaa 300 aagtttggtc taggttctag tggcagcgtc gttgtcttgg ttgtcaaggc tttactggct 360 ctctataatc tttcggttga tcagaatctc ttgttcaagc tgactagcgc tgtcttgctc 420 aagcgaggag acaatggttc catgggcgac cttgcctgta ttgtggcaga ggatttggtt 480 ctttaccagt catttgatcg ccagaaggcg gctgcttggt tagaagaaga aaacttggcg 540 acagttctgg agcgtgattg gggatttttt atctcacaag tgaaaccaac tttagaatgt 600 gatttcttag tgggatggac caaggaagtg gctgtatcga gtcacatggt ccagcaaatc 660 aagcaaaata tcaatcaaaa ttttttaagt tcctcaaaag aaacggtggt ttctttggtc 720 gaagccttgg agcaggggaa agccgaaaaa gttatcgagc aagtagaagt agccagcaag 780 cttttagaag gcttgagtac agatatttac acgcctttgc ttagacagtt gaaagaagcc 840 agtcaagatt tgcaggccgt tgccaagagt agtggtgctg gtggtggtga ctgtggcatc 900 gccctgagtt ttgatgcgca atcttctcga aacactttaa aaaatcgttg ggccgatctg 960 gggattgagc tcttatatca agaaaggata ggacatgacg acaaatcgta a 1011 <210> 44 <211> 954 <212> DNA <213> Streptococcus pneumoniae <400> 44 atggatagag agcctgtaac agtacgttcc tacgcaaata ttgctattat caaatattgg 60 ggaaagaaaa aagaaaaaga gatggtgcct gctactagca gtatttctct aactttggaa 120 aatatgtata cagagacgac cttgtcgcct ttaccagcca atgtaacagc tgacgaattt 180 tacatcaatg gtcagctaca aaatgaggtc gagcatgcca agatgagtaa gattattgac 240 cgttatcgtc cagctggtga gggctttgtc cgtatcgata ctcaaaacaa tatgcctacg 300 gcagcgggcc tgtcctcaag ttctagtggt ttgtccgccc tggtcaaggc ttgtaatgct 360 tatttcaagc ttggattgga tagaagtcag ttggcacagg aagccaaatt tgcctcaggc 420 tcttcttctc ggagttttta tggaccacta ggagcctggg ataaggatag tggagaaatt 480 taccctgtag agacagactt gaaactagct atgattatgt tggtgctaga ggacaagaaa 540 aaaccaatct ctagccgtga cgggatgaaa ctttgtgtgg aaacctcgac gacttttgac 600 gactgggttc gtcagtctga gaaggactat caggatatgc tgatttatct caaggaaaat 660 gattttgcca agattggaga attaacggag aaaaatgctc tggctatgca tgctacgaca 720 aagactgcta gtccagcctt ttcttatctg acggatgcct cttatgaggc tatggccttt 780 gttcgccagc ttcgtgagaa aggagaggcc tgctacttta ccatggatgc tggtcccaat 840 gttaaggtct tctgtcagga gaaagacttg gagcatttgt cagaaatttt cggtcagcgt 900 tatcgcttga ttgtgtcaaa aacaaaggat ttgagtcaag atgattgctg ttaa 954 <210> 45 <211> 549 <212> DNA <213> escherichia coli <400> 45 atgcaaacgg aacacgtcat tttattgaat gcacagggag ttcccacggg tacgctggaa 60 aagtatgccg cacacacggc agacacccgc ttacatctcg cgttctccag ttggctgttt 120 aatgccaaag gacaattatt agttacccgc cgcgcactga gcaaaaaagc atggcctggc 180 gtgtggacta actcggtttg tgggcaccca caactgggag aaagcaacga agacgcagtg 240 atccgccgtt gccgttatga gcttggcgtg gaaattacgc ctcctgaatc tatctatcct 300 gactttcgct accgcgccac cgatccgagt ggcattgtgg aaaatgaagt gtgtccggta 360 tttgccgcac gcaccactag tgcgttacag atcaatgatg atgaagtgat ggattatcaa 420 tggtgtgatt tagcagatgt attacacggt attgatgcca cgccgtgggc gttcagtccg 480 tggatggtga tgcaggcgac aaatcgcgaa gccagaaaac gattatctgc atttacccag 540 cttaaataa 549 <210> 46 <211> 450 <212> DNA <213> Corynebacterium glutamicum <400> 46 ttgatcccta tcatcgatat ttcacaaaat gagcaagata gcgatatttt tatggccttt 60 atttatctag gtactctcct agttctcatt gggtgcatgg ctttgtgcga ccaccgttgg 120 aagctagcgt tcttccgcca tccgttacga gcaattcttt cggtaggtgc tgcatatatt 180 ggatttcttt tatgggatat atttggcatt attactggca ctttttatcg cggagactca 240 gcgtttatgt ccggtattaa ccttgcaccc catatgccca ttgaagaact ttttttctta 300 ttcttcctct gctacatcac cctcaacctt acctcggcag cagcattatg gcttaaagca 360 ccactgccta aaaaacccgg taaaaagtct cccctcacac cacagcgcga tactttccaa 420 ccaactacca ctcccgaggt tgaaccatga 450 <210> 47 <211> 393 <212> DNA <213> Corynebacterium glutamicum <400> 47 atgacttata tttttataag cattcctttt ttagcaatag ccatggtcct atttgtctta 60 aagctgcagt ctggaacacc taaactttta ccaatcaccg ctgtcagtgc ccttacccta 120 tgttccctaa ctatcatatt tgataacctc atggtttggg ctgatctctt tggatatggc 180 gatacccagc accttggcat ttggctcggt ttaatccccc tagaggatct tttctatccg 240 ctcttcgcag tacttctgat tcctgcccta tggttgcctg gaaatatgtt taaacgcagg 300 aaaaaacgtc cacaccattc cttacccacc atcgccaatg gaagcatcac tactagatcc 360 accaccacgc aatctgagcc agaaaagccg tag 393 <210> 48 <211> 864 <212> DNA <213> Corynebacterium glutamicum <400> 48 atgatggaaa aaataagact aattctattg tcatctcgcc ccattagctg gatcaatacc 60 gcctacccct ttggtctggc ctacctatta aatgcaggag agattgactg gctgttttgg 120 ctaggcatcg tattttttct tatcccgtat aacatcgcca tgtatggtat caacgatgtt 180 tttgattacg aatctgatat gcgtaatccc cgcaaaggcg gcgtcgaggg ggccgtgcta 240 ccgaaaagtt cccacagcac actgttatgg gcctcggcta tctcaacaat tcctttccta 300 gttattcttt tcatatttgg cacctggatg tcgtctttat ggctgacact ctcagtgcta 360 gcagtgattg cttattcagc accgaaattg cgttttaaag aacgcccctt tatcgatgct 420 ctaacatctt ctactcactt cacttcacct gcattaatcg gtgcaacgat cactggaaca 480 tctccttcag cagcgatgtg gatagcactg ggatcctttt tcttgtgggg catggccagt 540 cagatccttg gagcagtaca ggatgttaat gcagaccggg aagctaatct gagctcaatt 600 gccactgtaa ttggggcgcg tggagccatt cggctttcag tagtacttta tttactagct 660 gctgtgttag tcactacttt gcctaatccg gcgtggatca tcgggattgc gattctaact 720 tacgtattta atgccgcacg attttggaac attacagatg ccagttgtga acaggctaat 780 cgcagttgga aagttttcct gtggctgaac tactttgttg gtgctgtgat aacgatactg 840 ctaatagcaa ttcatcagat ataa 864 <210> 49 <211> 37 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 49 gcgcgaattc atggaccaat tggtgaaaac tgaagtc 37 <210> 50 <211> 37 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 50 gcgcgtcgac ttttaggatt taatgcaggt gacggac 37 <210> 51 <211> 36 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 51 gcgcgaattc aaaaatggtg agtggcagta aagcgg 36 <210> 52 <211> 33 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 52 gcgcgtcgac ttaggcgatt ttcatgaccg gtg 33 <210> 53 <211> 32 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 53 gcgcgaattc aaaaatgagc caaccgccgc tg 32 <210> 54 <211> 31 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 54 gcgcgtcgac ttaaacggga cgctgccaaa g 31 <210> 55 <211> 37 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 55 gcgcgaattc aaaaatgaaa aaaaccgttg tgattgg 37 <210> 56 <211> 35 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 56 gcgcgtcgac ttattgcaga tcctcaatca tcagg 35 <210> 57 <211> 39 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 57 gcgcgaattc aaaaatgcaa ccgcattatg atctgattc 39 <210> 58 <211> 37 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 58 gcgcgtcgac ttaacgatga gtcgtcataa tggcttg 37 <210> 59 <211> 38 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 59 gcgcgaattc aaaaatgggt ctgatgctga ttgattgg 38 <210> 60 <211> 38 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 60 gcgcgtcgac ttagtttttg attttgatac gggaagag 38 <210> 61 <211> 36 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 61 gcgcgcggcc gcatcgcttc gctgattaat tacccc 36 <210> 62 <211> 33 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 62 gcgcactagt acaatgagcc ttgctgcaac atc 33 <210> 63 <211> 34 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 63 gcgcggtacc atcgcttcgc tgattaatta cccc 34 <210> 64 <211> 35 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 64 gcgcgcggcc gcacaatgag ccttgctgca acatc 35 <210> 65 <211> 40 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 65 gcgcgatatc actagtatcg cttcgctgat taattacccc 40 <210> 66 <211> 33 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 66 gcgcgctagc acaatgagcc ttgctgcaac atc 33 <210> 67 <211> 34 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 67 gcgcgctagc atcgcttcgc tgattaatta cccc 34 <210> 68 <211> 33 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 68 gcgcagatct acaatgagcc ttgctgcaac atc 33 <210> 69 <211> 31 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 69 gcgcggatcc atcgcttcgc tgattaatta c 31 <210> 70 <211> 35 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 70 gcgcttaatt aaacaatgag ccttgctgca acatc 35 <210> 71 <211> 36 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 71 gcgcttaatt aaatcgcttc gctgattaat tacccc 36 <210> 72 <211> 38 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 72 gcgctctaga ggggaaactt aaagaaattc tattcttg 38 <210> 73 <211> 33 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 73 ataaagcttc ttcctgtctt cccgacccac tac 33 <210> 74 <211> 53 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 74 cccatccact aaacttaaac aaatttaatg atcgtatgag gtcttttgag atg 53 <210> 75 <211> 55 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 75 tgtttaagtt tagtggatgg gtcatgatgg aaaaaataag actaattcta ttgtc 55 <210> 76 <211> 37 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 76 aaacctgcag gtgattctgt tttggttact catcccg 37 <210> 77 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 77 actgcccgaa ccattgccg 19 <210> 78 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 78 aggccagacc aaaggggtag gc 22 <210> 79 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 79 gctaagcttg gctgttttgg cggatgagag 30 <210> 80 <211> 35 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 80 cgaatcgata gagtttgtag aaacgcaaaa aggcc 35 <210> 81 <211> 42 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 81 gctgccggca gatctcatat gccaatacgc aaaccgcctc tc 42 <210> 82 <211> 45 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 82 gctgaattca ctagtgcggc cgcttattcg ccattcaggc tgcgc 45 <210> 83 <211> 44 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 83 catactagta ggaggtaata aatatggttg cccaacaaac acga 44 <210> 84 <211> 40 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 84 cggctcgagt taatattttc tggcaacaat atattcggcg 40 <210> 85 <211> 43 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 85 gctctcgagg aggtaataaa tatgctcgat cctggcccca atc 43 <210> 86 <211> 36 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 86 gcagctagct tatgatgtca ccagactgtc ggcctc 36 <210> 87 <211> 42 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 87 gcagctagca ggaggtaata aatatgagcc aaccgccgct gc 42 <210> 88 <211> 29 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 88 ctcctctaga ttactaaacg ggacgctgc 29 <210> 89 <211> 44 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 89 ccatctagag gaggtaataa aatatgaagg acaaggaact gagc 44 <210> 90 <211> 33 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 90 cgtgcggccg cttattcctc atccccgacg cgc 33 <210> 91 <211> 49 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 91 cggtcgacag gaggtaataa atatgcaacc gcattatgat ctgattctc 49 <210> 92 <211> 43 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 92 cgcctgcagg aggcctttaa cgatgagtcg tcataatggc ttg 43 <210> 93 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 93 cgaggcctag gaggtaataa atatgggtct gatgctgatt gattggtg 48 <210> 94 <211> 40 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 94 cgcctgcagg ttagtttttg attttgatac gggaagagtg 40

Claims (19)

  1. 레티노이드 생산에 관여하는 효소를 코딩하는 유전자를 포함하는 사카로마이세스 속 미생물.
  2. 청구항 1에 있어서, 상기 유전자는 서열번호 1 내지 9로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 아미노산 서열을 코딩하는 것인, 미생물.
  3. 청구항 1에 있어서, 상기 유전자는 서열번호 2, 3 및 10 중 적어도 하나; 서열번호 4 및 11 중 적어도 하나; 서열번호 5, 6 및 12 중 적어도 하나; 서열번호 7; 서열번호 8; 및 서열번호 9, 13 및 21 중 적어도 하나;의 아미노산 서열을 코딩하는 것인, 미생물.
  4. 청구항 3에 있어서, 서열번호 1의 아미노산 서열을 코딩하는 유전자를 더 포함하는, 미생물.
  5. 청구항 1에 있어서, 사카로마이세스 세레비지에인, 미생물.
  6. 청구항 1에 있어서, 사카로마이세스 세레비지에 Y2805인, 미생물.
  7. 레티노이드 생산에 관여하는 효소를 코딩하는 유전자를 포함하는 코리네박테리움 속 미생물.
  8. 청구항 7에 있어서, 상기 유전자는 서열번호 2 내지 9로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 아미노산 서열을 코딩하는 것인, 미생물.
  9. 청구항 7에 있어서, 상기 유전자는 서열번호 2, 3 및 10 중 적어도 하나; 서열번호 4 및 11 중 적어도 하나; 서열번호 5, 6 및 12 중 적어도 하나; 서열번호 7; 서열번호 8; 및 서열번호 9, 13 및 21 중 적어도 하나;의 아미노산 서열을 코딩하는 것인, 미생물.
  10. 청구항 9에 있어서, 서열번호 14 및 15 중 적어도 하나의 아미노산 서열을 코딩하는 유전자를 더 포함하는, 미생물.
  11. 청구항 9에 있어서, 서열번호 16 내지 20의 아미노산 서열을 코딩하는 유전자를 더 포함하는, 미생물.
  12. 청구항 7에 있어서, 서열번호 22 내지 24로 이루어진 군에서 선택된 적어도 하나의 아미노산 서열을 코딩하는 유전자를 불활성화 또는 결손화한, 미생물.
  13. 청구항 6에 있어서, 코리네박테리움 글루타미쿰인, 미생물.
  14. 청구항 6에 있어서, 코리네박테리움 글루타미쿰 ATCC13032인, 미생물.
  15. 청구항 1 내지 14 중 어느 한 항에 있어서, 유전자는 벡터에 의해 도입된 것인, 미생물.
  16. 청구항 1 내지 15 중 어느 한 항의 미생물을 배양하는 단계; 및
    상기 미생물의 배양물로부터 레티노이드를 분리하는 단계
    를 포함하는 레티노이드의 생산 방법.
  17. 청구항 16에 있어서, 상기 미생물의 배양은 친유성 물질을 포함하는 배지 중에서 수행되는 것인, 방법.
  18. 청구항 17에 있어서, 상기 분리는 친유성 물질 상으로부터 되는 것인, 방법.
  19. 청구항 17에 있어서, 상기 친유성 물질은 옥탄, 데칸, 도데칸, 테트라데칸, 피토스쿠알란, 미네랄 오일, 이소프로필 미리스테이트, 세틸 에틸헥사노에이트, 디옥타노일 데카노일 글리세롤, 스쿠알란, 또는 이들의 조합인, 방법.
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2020111890A1 (ko) * 2018-11-30 2020-06-04 한국생산기술연구원 바이오레티놀을 생산하는 미생물 및 이를 이용한 바이오레티놀의 생산방법
KR102518841B1 (ko) * 2021-11-09 2023-04-10 경상국립대학교산학협력단 레티노이드 제조용 조성물 및 이를 이용한 레티노이드의 제조 방법
WO2023182581A1 (ko) * 2022-03-23 2023-09-28 씨제이제일제당 (주) 항산화제를 포함한 레티놀 생산용 미생물 배지 조성물 및 이의 용도

Families Citing this family (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2996711C (en) * 2015-08-28 2021-09-28 Phytowelt Greentechnologies Gmbh Method of fermentative alpha-ionone production
WO2018111194A1 (en) * 2016-12-16 2018-06-21 Temasek Life Sciences Laboratory Limited Targets for improving terpene production in rhodosporidium toruloides
WO2019057999A1 (en) 2017-09-25 2019-03-28 Dsm Ip Assets B.V. PRODUCTION OF TRANS-RETINAL
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JP7472427B2 (ja) 2017-09-25 2024-04-23 ディーエスエム アイピー アセッツ ビー．ブイ． レチノイドの生合成
JP7298812B2 (ja) 2017-09-25 2023-06-27 ディーエスエム アイピー アセッツ ビー．ブイ． レチニルエステルの生産
JP7443656B2 (ja) * 2017-09-25 2024-03-06 ディーエスエム アイピー アセッツ ビー．ブイ． レチニルエステルの生産
CN108949788B (zh) * 2018-07-10 2020-07-14 广东省微生物研究所（广东省微生物分析检测中心） 番茄红素合成相关基因及其应用
WO2020141168A1 (en) 2018-12-31 2020-07-09 Dsm Ip Assets B.V. Novel acetyl-transferases
CA3130763A1 (en) 2019-02-25 2020-09-03 Ginkgo Bioworks, Inc. Biosynthesis of cannabinoids and cannabinoid precursors
WO2021009194A1 (en) 2019-07-16 2021-01-21 Dsm Ip Assets B.V. Novel beta-carotene oxidases
US20230407344A1 (en) * 2020-10-30 2023-12-21 Dsm Ip Assets B.V. Fermentative production of isoprenoids

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ATE364710T1 (de) * 2002-09-27 2007-07-15 Dsm Ip Assets Bv Rekombinante mikroorganismen für die produktion von vitamin b6
KR101111027B1 (ko) 2004-01-30 2012-02-17 디에스엠 아이피 어셋츠 비.브이. 미생물을 이용한 비타민 ｃ의 제조방법
KR101137026B1 (ko) 2009-10-30 2012-04-19 한국생명공학연구원 효모 변이주 및 이를 이용한 스쿠알렌의 생산 방법
WO2013019051A2 (ko) 2011-07-29 2013-02-07 경상대학교산학협력단 미생물로부터 레티노이드를 생산하는 방법
KR101392159B1 (ko) 2011-07-29 2014-05-12 경상대학교산학협력단 미생물로부터 레티노이드를 생산하는 방법

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2020111890A1 (ko) * 2018-11-30 2020-06-04 한국생산기술연구원 바이오레티놀을 생산하는 미생물 및 이를 이용한 바이오레티놀의 생산방법
KR20200066752A (ko) * 2018-11-30 2020-06-11 (주)바이오스플래시 바이오레티놀을 생산하는 미생물 및 이를 이용한 바이오레티놀의 생산방법
KR102518841B1 (ko) * 2021-11-09 2023-04-10 경상국립대학교산학협력단 레티노이드 제조용 조성물 및 이를 이용한 레티노이드의 제조 방법
WO2023182581A1 (ko) * 2022-03-23 2023-09-28 씨제이제일제당 (주) 항산화제를 포함한 레티놀 생산용 미생물 배지 조성물 및 이의 용도

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