KR20140145192A - 생균제 및 벌 화분/점토 복합체를 포함하는 조성물, 이의 제조 방법 및 영양 및 치료에 동일한 것의 용도 - Google Patents

생균제 및 벌 화분/점토 복합체를 포함하는 조성물, 이의 제조 방법 및 영양 및 치료에 동일한 것의 용도 Download PDF

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Abstract

본 발명은 생균제의 투여를 돕는 벌 화분/점토 복합체의 용도뿐만 아니라, 하나 또는 다수의 생균제 및 상기 벌 화분/점토 복합체를 포함하는 조성물에 관한 것이다.

Description

생균제 및 벌 화분/점토 복합체를 포함하는 조성물, 이의 제조 방법 및 영양 및 치료에 동일한 것의 용도{Compositions containing probiotics and a beepollen/clay complex, preparation method thereof and uses of same in nutrition and therapeutics}
본 발명은 벌 화분(beepollen) 및 점토에 기초한 지지(support) 방법에 의해 생균제 목적을 갖는 미생물(박테리아 또는 효모)의 투여뿐만 아니라 상기 미생물 및 상기 벌 화분/점토 복합체를 포함하는 조성물에 관한 것이다.
본 발명에 따라서, 용어 미생물은 생균제 목적을 갖는 미생물(박테리아 또는 효모)를 의미한다.
생균제는 세균총(flora)의 평형을 유지하며 장 점막의 강화에 기여하는, 장에서 충분한 양으로 살아있는 것에서 유래된, 비병원성 및 비독성 박테리아 또는 효모와 같은 미생물이다. 그들은 현재 영양 및 건강의 관점에서 그들이 제공할 수 있는 유익한 효과를 위해 매우 인기가 있다.
따라서 건강의 평가 및 생균제의 영양상의 성질에 식량 농업 기구(Food and Agriculture Organization, FAO)/WHO의 2001년 10월에 전문가들의 회담은 생균제를 <<그들이 충분한 양으로 투여될 때 이를 흡수하는 개체에 건강상 이익을 주는 살아있는 미생물>>로 정의하였고 생균제는 면역, 소화 및 호흡 기능에 중요한 역할을 할 수 있으며 감염성 질병의 치료에, 특히 어린이에게, 현저한 효과를 갖는 것을 보고하였다.
생균제 목적을 갖는 시판중인 미생물은 일반적으로 동결 건조되고 여러가지 형태(젤라틴 캡슐, 새쉬(sachets) 등)로 포장된다. 그럼에도 불구하고, 산업화, 위산 및 담즙 및 췌액에 접촉하는 그들을 투입하는 것은, 만약 그들이 동결 건조되는 경우 게다가 재활성화되어야 하는, 이들 미생물의 대다수의 손실의 원인일 수 있다. 논문(literature)에서, 다수의 연구는 산성 배지 내 생균제의 활성에 공헌되었다. 따라서 특정한 생균제 균주(비피도박테리움(Bifido bacterium) 및 락토바실러스(Lactobacillus))의 생존에 산성도의 유해 효과는 Sun and al. International Journal of Food Microbiology, 61,17-25 (2000), Sultana and al. International Journal of Food Microbiology, 62, 47-55 (2000), Favaro-Trindade and al. Journal of Microencapsulation, 19(4), 485-494 (2002) 및 Hansen and al. Food Microbiology, 19, 35-45 (2002)에 의해 명확하게 보고되었다.
발효유 및 요거트를 만드는 낙농 산업에 의해 사용된 락토바실러스 가운데 조차, 많은 수는 위의 산성 환경 내 생존하지 못하며 따라서 생균제의 정의에 부합할 수 없었다. 실제로 "생균제"로써 설명되기 위해서, 미생물 균주는 장내에서 충분한 양으로 살아 남아야 하며 장내균총(intestinal microflora)으로 성립되어야 한다.
생균제의 이익을 고려할 때, 따라서 숙주의 장 내에 미생물이 살아서 충분한 양으로 생존하게 하는 활용가능한 제형으로 만드는 것이 필요하다.
따라서 그들의 생체 이용률(bioavailability) 및 그들의 생물학적 활성을 보증함으로써, 벌 화분에 첨가된 미생물의 생균제 효과를 보장하는 조성물을 제공하는 것이 필요하다.
국제 출원 PCT/EP2011/072756는 투여(doses)로써 안정화, 제형화 및 신선한 벌 화분의 투여를 허용하는, 벌 화분/점토 복합체로 본 발명에 지정된, 벌 화분 및 점토의 조합을 설명하며, 사전에 특성화되고 배양된 생균제 목적을 갖는 미생물, 특히 동결 건조된 것의 투여를 지지하는 이의 용도를 어떻게 해서든 고려하지 않는다.
현재 밝혀진 본 발명의 목적 가운데 하나는 상기 점토 및 벌 화분의 조합이 이는 위산, 담즙 및 췌액에 대해 필요한 방어를 줌으로써; 그들의 발달을 위한 필수 식품을 제공함으로써 및 동결 건조된 미생물의 경우에는 그들의 재활성화 이전에, 소화 환경에 자연적으로 적응된, 높은 활성을 갖는 미생물을 신체 내부에 증가를 허용함으로써; 장에 그들을 살아서 전달함으로써, 그 안에 그들을 결합하고 그 안에 그들을 방출함으로써, 생균제 목적을 갖는 미생물의 이상적인 투여 시스템을 형성하는 것이다.
첫번째 목적에 따르면, 본 발명은 따라서 하기를 포함하는 조성물에 관한 것이다:
- 생균제 목적을 갖는 하나 또는 다수의 미생물, 및
- 벌 화분 및 점토에 기초한 복합체.
다른 목적에 따르면, 본 발명은 또한 생균제 목적을 갖는 미생물, 특히 동결 건조된 것의 투여를 위해, 특히 상기 미생물의 바이오로드(bioload) 및 생체 이용률을 향상시키기 위해 지지하는 벌 화분/점토에 기초한 복합체의 용도에 관한 것이다.
따라서 본 발명에 따르면, 벌 화분/점토 복합체는 그들의 발달을 위한 필요한 식품을 제공하고, 동결 건조된 미생물의 경우 그들의 재활성화 이전에, 위 통로에 대해, 담즙 및 췌액과 접촉에 대해 그들의 보호를 보장할 수 있는 생균제 목적을 갖는 미생물을 위해 이상적인 방어 및 영양 배지를 형성하는 것으로 설명된다.
복합체와 함께 장까지 살아갈 미생물을 유지하고 그들의 생물학적 특성을 보존하며, 따라서 숙주의 장내 균총의 평형에 그들의 생리학적 이익이 가능하다.
특히 벌 화분/점토 복합체는 소화 환경에 적응된, 큰 활력의, 생균제 목적을 갖는 살아있는 미생물의 생체 내부 증식을 위해 유리한 환경을 제공한다. 추가적으로, 생균제 목적을 갖는 미생물의 생존이 pH 3 이하의 문제가 되는 동안, 본 발명에 따르는 조성물의 벌 화분/점토의 지지는 버퍼 효과에 의해 세포 수명과 호환가능한 수준의 pH를 유지함으로써, 그에 따라 위 pH로부터 미생물을 분리하고 위 통로의 끝에 미생물의 신체 내부의 발생을 허용하는, 위산으로부터 미생물을 보호하는 가능성을 주는 것으로 설명된다. 또한 이러한 방어는 장을 통과하는 동안 계속되는 것으로 설명된다.
신체 내부 발생은 벌 화분/점토 복합체 내 증식의 및 그들이 투여되는 숙주의 생리학적 환경(특히 소화 시스템의 조건)에 적응의 미생물의 용량으로 이해된다.
<<벌 화분/점토 복합체>>는 규산염 층상 구조에 어느 식물 종으로부터 벌 화분의 결합으로부터 초래되는 어느 안정한 또는 <<무수>> 물질을 의미한다. 국제 출원 PCT/EP2011/072756는 벌 화분 및 점토의 조합을 설명하였으며, 이의 내용은 본 발명에 참조로 인용된다.
본 발명의 의미 내, <<벌 화분>>은 벌에 의해 획득된 화분을 의미한다. 이는 꽃의 수기관(male organ)으로부터 벌에 의해 추출된, 꽃에 꽃으로부터 응집되고 벌집까지 운송된 식물 화분 매개자(pollinator) 요소이다. 이는 통상적인 방법에 따르는 어떠한 수단에 의해, 특히 벌집에 들어가기 직전에(화분 해치(hatch)의 수단에 의해) 획득될 수 있다.
본 발명의 의미 내, 본 용어 <<벌 화분>>은 이의 추출 방법 및/또는 보존에 관계 없이 벌에 의해 수확된 화분에 적용된다.
본 발명의 의미 내, 용어 <<벌 화분>>은 신선한 화분의 특징을 유지할 수 있는 어떠한 형태의 벌 화분을 가리킨다. 따라서 이는 특히 신선한 벌 화분뿐만 아니라 사전에 동결된 벌 화분을 포함한다.
본 발명의 범위 내에, 벌 화분은 다양한 식물로부터 유래될 수 있으며, 특정 꽃에 제한되지 않는다. 상기(Mention)는 따라서 호밀(rye), 옥수수(maize), 해바라기(sunflower), 록 로즈(rockrose), 밤나무(chestnut), 키위(kiwi), 버드나무(willow), 양귀비(poppy), 라벤더(lavender), 및 헤더(heather) 등으로부터 벌 화분으로 만들어진다.
벌 화분, 특히 동결된 벌 화분은 예를 들어 폴른에너지(Pollenenergie)에서 시판중일 수 있다.
벌 화분은 또한 본래 식물의 성질뿐만 아니라 수확 시기, 수확 방법 또는 나아가 지리적 영역(국가, 지역)에 선천적으로 의존하는, 다양한 조성물일 수 있다.
따라서, 본 발명에 적합한 신선한 벌 화분은 일반적으로 물 5% 내지 36% 및 하기 가운데 건조 물질 64% 내지 95%를 포함한다:
- 미네랄염 2.5% 내지 3.8%;
- 지질 4.2% 내지 19.8%;
- 알부민 8% 내지 30%;
- 전분 5% 내지 7%;
- 비타민;
- 성장 요소;
- 엽산;
- 폴리페놀;
- 파이토스테롤(phytosterols);
- 효소(ferments) 및 효모.
<<점토>>는 규산염 수화물, 특히 알루미늄 또는 마그네슘 규산염과 같은 점토 미네랄을 포함하는 물질을 의미한다. 하나 또는 다수의 층으로 이루어진 층상 구조를 갖는 층상규산염(Phyllosilicate)은 특히 바람직하다.
조자(Jozja) 분류에 따르면, 층의 구조의 두께에 기초하여, 점토의 네 그룹이 구분된다:
i) 7 Å 미네랄: 이의 두께는 약 7 Å, 이는 카올리나이트(kaolinites) (카올린, 할로이사이트(halloysite)…)의 범주임
ii) 10 Å 미네랄: 이의 두께는 약 10 Å, 이는 일라이트(illite) (일라이트, 글라우코나이트(glauconite)…)의 범주임
iii) 14 Å 미네랄: 이의 두께는 약 14 Å, 이는 스멕타이트(smectites) (몬트모릴로나이트(montmorillonite), 벤토나이트(bentonite), 가슬(ghassoul)…)의 범주임
iv) 섬유질(fiber) 미네랄: 층의 두께는 가변적임; 그들은 클로라이트(chlorites) 또는 섬유질 미네랄(세피올라이트(sepiolite), 애터펄자이트(attapulgite)…)로 불림.
본 발명에 따르는 용어 <<점토>>는 따라서 점토의 이들 네가지 타입을 의미한다. 점토질의 미네랄과 같은, 상기(mention)는 일라이트, 클로라이트; 글라우코나이트, 카올리나이트, 애터펄자이트, 세피올라이트 및 몬트모릴로나이트로 이루어질 수 있다. 점토와 같은, 카올린, 일라이트, 몬트모릴로나이트, 애터펄자이트, 더욱 바람직하게는 몬트모릴로나이트가 특히 바람직하다.
본 발명의 의미 내, 미생물은 특히 박테리아 및 효모를 포함하고, 특히 비병원성 및 비독성인 현미경으로 관찰가능한(microscopic) 유기체를 의미한다.
본 발명의 의미 내, 생균제 목적을 갖는 미생물은 그들이 장에 충분한 양으로 살아서 전달될 때 숙주에 건강 및/또는 영양적 장점을 줄 수 있는, 그들의 제형화 전에 특성화되고 배양된 미생물을 의미한다.
본 발명에 사용된 용어 <<특성화된>>은 본 발명에서 특히 균주(들)의 성질 및 선택적으로 그들의 농도(들)을 알 수 있도록, 선별된 것으로 구성하는 균주(들)인 미생물을 의미한다.
실시예에 따르면, 본 발명에 따르는 특성화된 미생물은 벌 화분에 추가된다. 실시예에 따르면, 벌 화분에 추가된 미생물은 벌 화분에 본래 존재하는 미생물로부터, 특히 그들의 성질, 수, 구조에 의해 분명하다. 실시예에 따르면, 동결 건조된 미생물이 추가된다.
효모와 같이, 상기(mention)은 사카로미세스 세리비지에(Saccharomyces cerivisiae)로 이루어질 수 있다. 박테리아와 같이, 상기(mention)은 필수적으로 락토바실러스(lactobacilli), 비피도박테리아(bifidobacteria) 및 다른 젖산균과 같은, 젖산균(lactic bacteria)으로 이루어질 수 있다.
본 발명에 따라:
- 락토바실러스(lactobacilli)와 같이, 상기(mention)는 특히 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus), 락토바실러스 아밀로바이러스(Lactobacillus amylovirus), 락토바실러스 브레비스(Lactobacillus brevis), 락토바실러스 카제이(Lactobacillus casei), 락토바실러스 셀로비우스(Lactobacillus cellobius), 락토바실러스 크리스파투스(Lactobacillus crispatus), 락토바실러스 컬바투스(Lactobacillus curvatus), 락토바실러스 델브루에키(Lactobacillus delbrueckii), 락토바실러스 파시미니스(Lactobacillus farciminis), 락토바실러스 펄멘툼(Lactobacillus fermentum), 락토바실러스 가세리(Lactobacillus gasseri), 락토바실러스 갈리나룸(Lactobacillus gallinarum), 락토바실러스 헬베티쿠스(Lactobacillus helveticus), 락토바실러스 존소니(Lactobacillus johnsonii), 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei), 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum), 락토바실러스 루터리(Lactobacillus reuteri), 락토바실러스 람모서스(Lactobacillus rhamnosus), 락토바실러스 락티스(Lactobacillus lactis)로 이루어질 수 있다.
- 비피도박테리아와 같이, 상기(mention)는 비피도박테리움 아돌레센티스(Bifidobacterium adolescentis), 비피도박테리움 비피덤(Bifidobacterium bifidum), 비피도박테리움 브레베(Bifidobacterium breve), 비피도박테리움 인팬티스(Bifidobacterium infantis), 비피도박테리움 락티스(Bifidobacterium lactis) (비피도박테리움 애니말리스(Bifidobacterium animalis)로 재분류), 비피도박테리움 라테로스포러스(Bifidobacterium laterosporus), 비피도박테리움 롱검(Bifidobacterium longum), 비피도박테리움 털모필룸(Bifidobacterium thermophilum)으로 이루어질 수 있다.
- 다른 젖산균은 특히 엔테로코커스 패칼리스(Enterococcus faecalis), 엔테로코커스 패시움(Enterococcus faecium), 락토코커스 락티스(Lactococcus lactis), 류코노스톡 메센테로이드(Leuconostoc mesenteroides), 페디오코커스 애시디락티시(Pediococcus acidilactici), 스포로락토바실러스 이눌리누스(Sporolactobacillus inulinus), 스트렙토코커스 디아세틸락티스(Streptococcus diacetylactis), 스트렙토코커스 인터메디우스(Streptococcus intermedius), 스트렙토코커스 털모필러스(Streptococcus thermophiles)를 포함한다.
- 다른 비-젖산균과 같이, 상기(mention)는 바실러스 종(Bacillus spp), 대장균(Escherichia coli) (니슬(Nissle) 균주), 프로피오니박테리움 프레덴레이키(Propionibacterium freudenreichii)로 이루어질 수 있다.
락토바실러스 및 비피도박테리아는 비피도박테리움 비피덤(Bifidobacterium bifidum)(비피더스(bifidus)), 비피도박테리움 락티스(Bifidobacterium lactis), 비피도박테리움 롱검(Bifidobacterium longum), 비피도박테리움 브레베(Bifidobacterium breve), 락토바실러스 루터리(Lactobacillus reuteri), 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus), 락토바실러스 카제이(Lactobacillus casei), 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum), 락토바실러스 람모서스(Lactobacillus rhamnosus) 종과 같은 것이 특히 바람직하다.
이들 생균제 목적을 갖는 미생물은 일반적으로 시판 중이다.
본 발명에 적절한 상기 미생물은 일반적으로 벌 화분/점토 복합체 내 추가 및 포함되기 전에 분리, 동결 건조, 특성화 및/또는 배양된다.
실제로, 바람직한 실시예에 따르면, 이러한 정의는 벌 화분/점토 복합체 내 본래 존재하며, 복합체 내 그들이 포함되기 전에 분리, 특성화, 배양 및/또는 동결 건조되지 않은 미생물을 커버(cover)하지 않는다.
생균제 목적을 갖는 동결 건조된 미생물은 본 발명의 범위에 들어간다.
생균제 목적을 갖는 미생물은 동결 건조 형태로 대부분 판매된다. 저온 조건하에 동결 건조 또는 건조는 이를 상온에서 안정화하고 그에 따라 이의 보존을 촉진하기 위해 물질 내, 식자재(foodstuff) 또는 생산품 내 포함된 물을 제거하는 세분(subdivision)에 기초한 방법이다.
동결 건조는 다른 건조 또는 보존 방법에 비해 많은 장점을 포함한다.
·동결 건조는 승화 동안 어는 점 이하의 온도를 이후 유지하는 것을 고려하면 식자재의 양의 많은 부분을 보존하는 가능성을 준다. 동결 건조의 용도는 젖산균의 경우에 그들은 열에 매우 민감하기 때문에 특히 중요하다.
·동결 건조 식자재는 일반적으로 그들을 유지하기 위한 냉장을 필요로 하지 않는다. 저장 및 운송 비용은 따라서 뚜렷한 방법으로 감소될 수 있다.
·동결 건조는 동결 건조된 식자재의 운송을 크게 촉진하는 중량에 현저한 감소를 초래한다. 예를 들어, 다수의 식자재는 90% 까지의 물을 포함한다. 그들은 따라서 동결 건조 이후에 10배 가벼워질 것이다.
·대부분 동결 건조된 식자재는 그들의 다공 조직에 의해 매우 빠르게 재수화된다. 실제로 동결 건조는 부피에 어느 뚜렷한 감소를 유발하지 않는다. 물은 따라서 식자재의 분자 구조 내 이의 위치를 쉽게 되찾을 수 있다.
동결 건조된 미생물은 건조에 의해 휴면 상태(dormant state)로 놓여진다. 그들은 따라서 본 발명에 따라, 장내 살아서 도착하고 그 안에서 숙주의 건강을 위해 유익한 활성을 수행하기 위해 재활성화 되어야 한다.
본 발명에 따르면, 이는 벌 화분/점토 복합체가 이들 동결 건조된 박테리아의 재활성을 돕는 것을 나타내는 것으로 설명된다.
이러한 지지는 따라서 그들이 경구로 투여될 때를 포함하는, 영양, 보호, 발달을 위한 및 동결 건조된 미생물, 미생물의 재활성화를 위한 바람직한 환경 및 이상(ideal)을 나타낸다.
일반적으로 청구항에 따르는 조성물은 하기를 포함한다:
- 0.1% 내지 70%의 동결 건조된 생균제; 및
- 30% 내지 99.9%의 상기 복합체,
백분율은 중량비로 이해됨;
및 더욱 바람직하게는:
- 3% 내지 30%의 동결 건조된 생균제; 및
- 70% 내지 97%의 상기 복합체,
백분율은 중량비로 이해됨.
벌 화분/점토 복합체는 일반적으로 하기를 포함한다:
- 4% 내지 90%의 벌 화분, 및
- 10% 내지 96%의 점토
백분율은 중량비로 이해됨.
더욱 바람직하게는, 본 발명에 따르는 복합체는 하기를 포함한다:
- 20% 내지 40%의 벌 화분
- 60% 내지 80%의 점토
및 더욱 바람직하게는:
- 30% 내지 35%의 벌 화분 및
- 65% 내지 70%의 점토.
본 발명에 따르는 복합체는 유리하게 500 ㎛ 미만의 입자 크기, 15% 미만의 습도 및/또는 0.75 미만의 수분 활성(aw)을 갖는다.
일반적으로 본 발명에 따르는 조성물은 분말로써 나타나며 특히 하기 특징을 갖는다:
분석(ANALYSES) 특징(SPECIFICATIONS)
상태(ASPECT) 분말
색 동결 건조된 박테리아의 양에 따른 어두운 녹-회색 내지 밝은 녹-회색
냄새 구체적(Specific)
PH NA
밀도 NA
중금속(Pb, As) - Pb < 2　ppm
- As < 1　ppm
유리하게, 본 발명에 따르는 조성물은 위 저항성 형태, 특히 위 저항성 젤라틴 캡슐의 형태로 제형화될 수 있다.
본 발명에 따르면, 이는 또한 예상치 못하게 생균제 목적의 미생물 및 벌 화분/점토 복합체의 위 저항성 제형이 발효의 신체 내부 발생을 증가시키는 바이오로드(bioload)를 허용하는 반면, 벌 화분/점토 복합체 없이 위 저항성 젤라틴 캡슐의 형태로 제형화된 미생물은 생존력 수준에 상당히 영향을 받는 것으로 설명된다.
유리하게, 동결 건조된 생균제를 실은(loaded) 벌 화분/점토 복합체가 위 저항성 젤라틴 캡슐로 제형화될 때, 위에서 통과는 증식에 바람직한 인자로써 적합하다. 위에 포함된 위의 흐름(gastric flow)와 접촉시, 위 저항성 젤라틴 캡슐은 투과성이 된다; 물이 통과하고 미생물이 증식 상태를 시작하는데 필요한 습도를 제공한다.
본 발명에 따르면, 생균제 목적을 갖는 미생물의 경구 투여를 위한 지지로써 벌 화분/점토 복합체의 용도는 하기의 가능성을 준다
- 포장의 유해한 효과로부터 생균제 목적을 갖는 미생물의 보호;
- 조성물 내 포함된 생균제 목적을 갖는 동결 건조된 미생물의 재활성화;
- 조성물 내 포함된 생균제 목적을 갖는 활성 미생물의 섭식(feeding) 및 유지;
- 위산으로부터 생균제 목적을 갖는 미생물의 보호;
- 담즙 및 췌액으로부터 생균제 목적을 갖는 미생물의 보호;
- 소화 환경에 적응된 생균제 목적을 갖는 미생물에 신체 내부 발생 제공;
- 장점막에 그들의 접촉 및 상호작용을 촉진하는 동안 장 미디엄(medium) 내 미생물의 방출.
미생물은 장 배리어(barrier)의 강화 및 숙주의 건강에 그들의 유익한 활성을 수행하기 위해 장에 결합해야 한다. 따라서 예를 들어 비피도박테리아는 그들이 장 상피의 다양한 수용체를 인지하는 곳에서 장 점막에 접착 능력을 갖는다. 그들과 같이 젖산균은 해로운 항원의 침투를 방어하는 동안 병원체에 의한 군집화(colonization)의 잠재적 위치를 차지하여 따라서 병원성 세균의 증식을 회피한다. 그들은 병원체를 위한 영양의 원천을 제한하고 숙주의 수용체에 접근하는 병원체와 경쟁하는 사용 가능한 영양을 흡수한다. 나아가, 그들은 상피 표면 및 또한 미디엄(medium)(예를 들어 산성화)에 박테리오신과 같은 항균성 분자를 분비한다.
장 내 생균제 목적을 갖는 미생물의 유지를 증가시킴으로써, 벌 화분/점토 복합체는 장점막과 함께 이들 미생물의 유익한 상호작용을 촉진한다. 장 미생물군(microbiota)은 숙주의 건강을 유지하는데 유익한 많은 필요한 생리적 기능을 수행한다. 장내 균총(intestinal flora)의 평형 및 장내 배리어의 강화를 유지하는 것은 주요한 장점을 갖는다. 생균제 목적을 갖는 미생물은 이러한 목적을 달성하는데 좋은 후보자이다. 그러나, 주요한 어려움들은 일반적으로 생균제 활성을 수행하는 것으로부터 미생물을 막는다: 그들이 살아있게 유지하기 위해 미생물을 적절히 섭식(feeding)의 필요; 동결 건조된 미생물 재활성화의 필요; 산업화의 충격에 미생물의 낮은 저항; 위산에, 담즙 및 췌액에 미생물의 낮은 저항: 소화 환경에 미생물의 적응의 부족 및 점막에 그들의 접착 및 그것과 함께 그들의 상호작용에 장애인 미생물의 플랑크톤성(planktonic) 성질. 이러한 어려움을 회피하는 전략은 존재하나 그들 중 어느 것도 모든 어려움을 회피하는 가능성을 주지는 않는다. 예를 들어, 장 산성에 그들의 저항성을 위해 분리 및 배양된 유익한 박테리아 균주는 재활성화되지 않으며, 장에 도달할 수 있는 작은 비율은 그 안에 결합 또는 장에 효과적으로 상호작용하지 못한다. 현재 어떠한 지지도 목표 부위에 활성을 보증함으로써 다양한 생물학적 및/또는 생리학적 장애를 동시에 극복하는 것이 가능하지 않다. 본 발명은 이러한 어려움의 넓은 범위를 제거하는 가능성을 주며 장에 그들의 생균제 활성을 위해 필요한 환경을 갖는 미생물을 제공한다.
벌 화분/점토 복합체는 하기 요소를 제공함으로써 생균제 활성에 산업적, 생물학적 및/또는 생리학적 장애의 모두를 동시에 제거하는 가능성을 준다:
·박테리아를 유지하는데 필요한 영양 환경
·동결 건조된 박테리아를 재활성화하는데 필요한 영양 환경
·위산에 저항
·담즙 및 췌액에 저항
·소화 환경에 적응
·장 벽에 결합 및 전달
본 발명은 또한 본 발명에 따르는 조성물을 제조하는 방법에 관련되며, 상기 방법은 하기를 포함한다:
- 벌 화분 및 점토의 혼합;
- 생균제 목적을 갖는 미생물의 추가 및 혼합.
상기 생균제 목표를 갖는 미생물은 동결 건조될 수 있으며, 특히 분말로써 나타날 수 있다.
바람직하게는 수득된 혼합물은 원하는 입자크기를 얻기 위해 체로 걸러질 수 있다. 유리하게 500 ㎛의 그물망을 갖는 체가 사용된다.
본 발명은 또한 장까지 생균제 목적을 갖는 미생물을 이송하기 위한, 장에 그들에 결합, 그들의 생체 이용률 및/또는 그들의 생균제의 생물학적 활성을 위한 벌 화분 및 점토에 기초한 복합체의 용도에 관한 것이다. 상기 복합체는 따라서 생균제 목적을 갖는 미생물의 투여를 위한 생물 벡터(biovector)이다.
<<생물학적 활성>>은 본 발명에서 그들을 흡수한 개체 내 상기 미생물에 의해 수행되는 생균제 및 치료적 효과와 같은 영양적(특히 다이어트 효과) 및/또는 생리학적 효과를 의미한다.
본 발명은 따라서 특히 본 발명에 따르는 조성물을 포함하는 식품, 화장품, 약학적 및/또는 생약학 조성물 및/또는 의학적 장치와 관련된다.
본 발명에 따르는 상기 조성물/장치는 따라서 예방 및/또는 치유(curative), 인간 및/또는 동물 용도를 위한 치료적 및/또는 영양적 목적(특히 다이어트 목적)에 유용하다. 생산물의 산업적 성형에 필요한 첨가제는 이들 생산물을 규제하는 규칙(식자재, 식품 첨가물, 기능성 식자재, 화장품, 의학적, 약학적 장치)에 따르는 모든 허용가능한 물질로부터 선택될 수 있다.
이는 또한 따라서 특히 셀룰로스 또는 미정질 셀룰로스, 알칼리 토류 탄산염(earth alkaline carbonates), 마그네슘 포스페이트, 전분, 변형된 전분, 고체 형태의 락토스, 물, 수성 용질, 식염수, 등장성 용질 등의 첨가제 유도체와 같은 상기(mention)에 가능하다.
실시예에 따르면, 조성물은 또한 박테리아가 발달할 수 있는 글루코스와 같은 당의 원천을 포함한다.
본 발명에 따르는 조성물은 구강, 설하, 국부(topical), 국소(local), 기관내(intratracheal), 비강내 또는 직장 경로, 특히 구강 경로를 통한 투여를 위한 형태로 나타날 수 있다.
그들은 따라서 특히 용질 또는 다중투여(multidose) 플라스크로써 또는 벗겨진 또는 코팅된 정제, 당제, 캡슐, 소프트 또는 하드 젤라틴 캡슐, 과립, 알약(pills), 정제, 분말, 좌약 또는 직장 캡슐, 용액 또는 현탁액으로써 또는 나아가 크림, 겔, 연고, 페이스트, 패치, 요거트 등과 같은 식품 생산물로 존재할 수 있다.
본 발명은 더욱 바람직하게는 페이스트 또는 젤라틴 캡슐과 같은 위 저항성 제형, 특히 본 발명에 따르는 조성물을 포함하는 위 저항성 젤라틴 캡슐과 직결된다.
바람직하게, 상기 조성물은 본 발명에 따르는 조성물의 유효량을 포함한다.
투여량 및/또는 복용량(dosage)은 넓은 한계(0.5 mg 내지 1,000 mg) 내에서 다양할 수 있으며 투여 경로뿐만 아니라 개체의 연령 및 체중에 의존할 수 있다.
높거나 낮은 복용량이 적절할 때 특정한 경우일 수 있다; 이러한 복용량은 본 발명의 범위로부터 벗어나지 않는다. 관행에 따르면, 각 개체에 적절한 복용량은 투여 방법, 상기 개체의 체중 및 반응뿐만 아니라 상기 조성물 내 미생물의 농도에 따라 결정된다.
본 발명에 따르는 식품 조성물은 특히 식자재(foodstuff), 기능성 식품(기능 식품) 또는 식품 첨가물일 수 있다.
기능성 식자재 또는 약효식품(nutraceuticals)은 일반적으로 통상적인 식자재 또는 이의 양상을 갖는 것, 보통의 식사의 일부인 것, 및 이의 통상적인 영양적 기능을 초과하는 유익한 생리학적 효과를 제공하는 또는 만성 질병의 위험을 감소시키는 특성을 갖는 것으로 정의된다.
본 발명은 따라서 본 발명에 따르는 조성물을 포함하는 요거트와 같은 기능성 식자재에 직결된다.
상기 조성물은 또한 유럽 지침 2002/46/EC의 범위 내 보충 식품을 형성할 수 있다.
상기 보충 식품은 유리하게 "젤라틴 캡슐, 정제(lozenges), 타블렛(tablets), 알약(pills) 및 다른 유사한 형태뿐만 아니라 파우더 새쉬(sachets), 액체 앰플, 점적기를 제공하는 플라스크 및 액체의 다른 유사한 형태 또는 소량 단위로 얻을 수 있는 파우더 제조(preparations)"와 같은 투여량, 즉 유럽 지침 2002/46/EC에 의해 정의된 제시 형식 내로 제형화된다.
상기 조성물은 또한 특히 유럽 지침 2001/83/EC의 범위 내 약학적 특성(specialty)을 형성할 수 있다.
상기 조성물은 생균제가 일반적으로 유익한 것으로 고려되는 질병의 예방 및/또는 치료에 유용할 수 있다. 상기(mention)는 따라서 특히 골다공증(osteoporosis), 심혈관 질병(cardio-vascular diseases), 암, 간 및 대사성 질환, 피로, 순환계 질환(circulatory disorders), 관절 질환(articular disorders), 갱년기 증상(menopausal symptoms), 중추 신경계 질환(central nervous system disorders), 위장 시스템 질환(gastro-intestinal system disorders), 안 질환(eye disorders), 비뇨기 질환(urinary disorders), 및 양성 전립선 발육 부전(benign prostate hypotrophy), 만성 전립선염(chronic prostatitis), 전립선통(prostatodynia) 및 전립선 암과 같은 전립선의 질환, 영양상, 피부상 및 화장-피부상(cosmeto-dermatological) 질환, 무기력증(asthenia) 및 피로(fatigability), 요양(convalescence) 및 수술 후(post-surgery), 수력전해 불균형(hydroelectrolytic unbalances), 육체 조건의 향상 등으로 이루어질 수 있다.
본 발명에 따르는 약학적 조성물은 또한 하나 또는 다수의 활성 성분을 포함할 수 있다.
본 발명은 또한 본 발명에 따르는 조성물을 포함하는 의학적 장치와 관련된다. 상기 조성물은 따라서 유럽 지침 93/42 EEC의 범위 내 의학적 장치를 형성할 수 있다.
본 발명은 생균제의 투여를 돕는 벌 화분/점토 복합체의 용도뿐만 아니라, 하나 또는 다수의 생균제 및 상기 벌 화분/점토 복합체를 포함하는 조성물을 제공한다.
도 1은 이상적인 배지(medium) 내 및 벌 화분/점토 복합체 내 동결 건조된 박테리아(Bifidobacterium longum)의 발달을 나타낸다.
도 2는 위 저항성 젤라틴 캡슐의 형태로 제형화된 네가지 조성물이 위를 통과한 후에 발효의 백분율 증가 및 감소를 나타낸다:
i) 벌 화분/점토 지지(support)에;
ii) 비온 트랜시트(Bion Transit) 생산품,
iii) 락티비안(Lactibiane) 생산품 ref 2.5G,
iv) 아르코프로바이오틱스 디펜스+(Arkoprobiotics defense+)
도 3은 위 통과 후에 위 저항성 젤라틴 캡슐 내 동결 건조된 박테리아의 생존을 나타낸다.
도 4는 위 통과 후에, 위 저항성 젤라틴 캡슐 내, 벌 화분/점토 복합체와 관련된 동결 건조된 박테리아의 재활성화를 나타낸다.
도 5는 위 통과 후에 발효의 증가 및 감소 및 어떤 복합체와 함께 또는 제외하고 담즙 및 췌장의 활성을 나타낸다.
도 6은 위, 유미즙(chime), 점막 및 장액 내 발효의 증가에 벌 화분 및 점토의 시너지 효과를 나타낸다.
하기 실시예는 본 발명을 설명하나 이를 제한하지 않는다. 사용된 시작 생산물은 알려진 생산물 또는 알려진 작업 절차에 따라 제조된 것이다.
백분율은 다른 지시가 없는 한 중량비로 나타냈다.
실시예
- 장비:
정확한 전자 스케일(Accurate electronic scales)- Mettler Toledo PG803
A WTB 바인더 오븐(binder oven)
교반기 - IKA Labotechnik Eurostar
HANNA 기구(instruments)로부터 pH-미터(meter)
250mL의 유리 비커 - Bomex
휘어진, 숟가락 모양의 주걱, 스테인레스 스틸 18/8 - Labo-moderne
- 원자재의 공급자(Supplier)
질소 가스 하에 동결된 해바라기 화분
Pollenergie
La Grabere - 47450 St Hilaire de Lusignan
Telephone. 05 53 68 11 11 - Fax. 05 53 68 11 12
몬트모릴로나이트 점토
Argiletz
14 route d'Echampeau - 77 440 Lizy sur Ourcq
Tel. 01 60 61 20 88 - Fax. 01 60 61 27 39.
복합체는 하기 방법으로 제조되었다.
벌 화분/점토 복합체의 150g의 제조를 위해: 각각의 구성 성분의 비율은 66.66의 점토 33.33 퍼센트의 벌 화분이다.
- 200 ml 비커 내 점토의 100 g 중량;
- 250 ml 비커 내 동결된 벌 화분의 50 g 중량;
- 교반기의 부분은 복합체의 수화를 회피하기 위해 바람직하게는 건조하다;
- 점토를 혼합;
- 벌 화분을 첨가 및 그들을 30초 동안 혼합.
바람직한 입자 크기는 500 ㎛ 망을 갖는 체의 수단에 의해 체로 걸러서 얻어진다.
벌 화분/점토 및 생균제 목적을 갖는 미생물에 기초한 조성물은 미생물의 10%를 갖는 최종 생산물의 166.67 g에 대해 하기 방법으로 제조된다:
- 200 ml 비커 내 점토의 100 g 중량;
- 250 ml 비커 내 동결된 벌 화분의 50 g 중량;
- 200 ml 비커 내 미생물의 16.67 g 중량;
- 교반기의 부분은 복합체의 수화를 피하기 위해 바람직하게 건조된다;
- 점토를 혼합;
- 벌 화분을 추가 및 그들을 30초 동안 혼합;
- 미생물 추가 및 그들을 30초 동안 혼합;
원하는 입자 크기는 500 ? 그물을 갖는 체의 수단을 통해 체로 걸러서 얻어진다
실시예 1: 영양적 배지 제공 및 동결 건조된 박테리아의 재활성화 하는 벌 화분/점토 복합체 능력의 입증.
동결 건조된 박테리아의 재활성화를 위한 필수적인 성분에 대한 필요는 논문(literature) 내 보고되었다.
동결 건조된 박테리아의 재활성화를 위한 이들 성분(당, 단백질, 소듐 등) 및 최적의 비율(% 비율(needs in%))은 하기 표의 첫번째 두 열에 나타냈다. 이 표의 세번째 열은 벌 화분/점토 복합체 내 포함된 이들 다른 성분의 백분율을 가리킨다.
성분 % 비율
(Needs in %) 		% 벌 화분/점토 내 서포트
(In the beepollen/clay support in%)
펩톤 (단백질 가수분해) 16 35
단백질 13
효모
탄수화물 및 지방의 대사에 필요한 비타민 B1 (12 mg/100 g)의 가장 큰 원천		 6.6 6 및 13 사이
글루코스 32 20 내지 40%
소듐 아세테이트 트리하이드레이트(Sodium acetate trihydrate) 8 점토에 의해 제공된 소듐
암모늄 시트레이트(Ammonium citrate ) 3.2 점토에 의해 제공
Tween (혼화되지 않는 물질을 함께 조합하기 위해 필요한 가용화제) 1.6 해당 없음(Not applicable)
포타슘 하이드로겐포스페이트(potassium hydrogenphosphate) 3.2 회분(ashes)의 20 내지 45%
마그네슘 설페이트 헵타하이드레이트(Magnesium sulfate heptahydrate) 0.3 회분의 1 내지 12%
망간 설페이트 테트라하이드레이트(Manganese sulfate tetrahydrate) 0.1 회분의 1.4% *
한천(다당류) 16 13 및 55% 사이
pH 6.2 점토에 의해 pH 6.0 유지된 산에 화분
많은 비타민, 아미노산 및 성장 물질
완벽한 동의는 따라서 논문에 보고된 것처럼 동결 건조된 박테리아 재활성화를 위해 필수적인 요소 및 벌 화분/점토 지지(support) 내 포함된 요소 사이에 발견된다.
이상적인 영양 배지 내 및 벌 화분/점토 복합체 내 비피도박테리움 롱검(Bifidobacterium longum) 박테리아의 발달은 하기 방법으로 설명된다.
1- 박테리아는 이상적인 배양 배지 내 파종되었으며 다른 하나는 동일한 양으로 벌 화분/점토 복합체와 함께 파종되었다.
2- 카운트(Counts)가 이들 실시예의 모두에 대해 수행되었다.
도 1에 나타난 결과는 벌 화분/점토 복합체는 박테리아의 재활성화 및 증식을 허용하는 것을 보였다.
실시예 2: 시판중인 생산품에 비해 벌 화분/점토의 산성 저항성의 입증
세가지 하기 시판중인 생산품이 사용되었다.
비온 트랜시트(Bion transit)
비온 트랜시트(Bion transit)는 특정한 생균제 균주: 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) 299v를 제공한다.
비온 트랜시트(Bion transit)는 장이 민감하고 잦은 장 질환: 불편(discomfort), 곤란(difficulties), 소화 문제, 고창(flatulence), 불규칙한 수송 등의 대상인 사람을 위한 것이다.
생산물에, 젤라틴 캡슐 당 생균제의 10,000,000,000 (100 억)의 공급이 청구된다.
락티비안 레퍼런스(Lactibiane Reference) 2.5G
락티비안 레퍼런스(Lactibiane Reference)의 생균제 균주는 GRAS(Generally Regarded As Safe)로 보증되고 "Collection Nationale de Cultures de Micro-organismes de l'institut Pasteur"에 보관된다. 이들은 네가지 하기 균주이다:
- 비피도박테리움 롱검(Bifidobacterium longum) LA 101
- 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus) LA 102
- 락토코커스 락티스(Lactococcus Lactis) LA 103
- 스트렙토코커스 털모필루스(Streptococcus thermophiles) LA 104
락티비안 레퍼런스(Lactibiane Reference) 2,5G는 장내 균총을 유지하는데 기여하고 소화 안정을 증진시키고 첫주가 지나자마자 통과(transit)를 조절한다. 이는 소화성 질환(고창 등)의 경우 및 겨울 질환의 예방에 도움이 될 수 있다.
생산물에, 젤라틴 캡슐 당 생균제의 10,000,000,000 (100 억) 공급이 청구된다.
아르코프로바이오틱스 디펜스+(Arkoprobiotics defenses +)
아르코프로바이오틱스 디펜스+(Arkoprobiotics defenses +)는 다수 균주로부터 저지하는 동결 건조된 생균제의 선별을 포함한다:
- 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei)
- 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum)
- 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus)
아르코프로바이오틱스 디펜스+(Arkoprobiotics defenses+)는 특히 겨울 및 계절의 변화 동안 유기체의 자연적 방어를 강화하는데 뿐만 아니라 장내 균총을 재균등화 하는데 도움을 준다. 이는 유기체의 활력(vitality)의 평형에 기여한다.
생산물에, 젤라틴 캡슐 당 생균제의 50,000,000,000 (500 억) 공급이 청구된다.
작업 절차(Operating procedure):
벌 화분/점토 복합체 또는 시판중인 생산품의 박테리아 균주를 포함하는 위 저항성 젤라틴 캡슐이, 위 저항성 젤라틴 캡슐 ApproPharm (254 chemin de la Farlede - 83500 La Seyne sur Mer)에 대한 키트의 수단에 의해 제조되었다.
코팅을 위한 작업 절차는 하기와 같다:
·액체에 10초 동안 벌 화분/점토 복합체 및 시판중인 생산품의 젤라틴 캡슐 전체를 담금.
·그들을 체 위에 건조시키고, 어떠한 접착을 피하기 위해 여러 번 교반.
·10분 대기 이후 두번째 층을 추가: 용액 내 5초 동안 젤라틴 캡슐을 담근 후, 그들을 상기와 같이 건조.
·10분 대기 이후 세번째 층을 추가: 용액 내 5초 동안 젤라틴 캡슐을 담근 후, 그들을 상기와 같이 건조.
·10분 대기 이후 네번째 층을 추가: 용액 내 5초 동안 젤라틴 캡슐을 담근 후, 그들을 상기와 같이 건조.
·10분 대기 이후 다섯번째 층을 추가: 용액 내 5초 동안 젤라틴 캡슐을 담근 후, 그들을 상기와 같이 건조.
실험은 산성 미디엄(medium) 내 젤라틴 캡슐의 특정한 저항성을 얻기 위해 수행되었다. 그들은 캡슐이 4시간 경과 이후에도 부서지지 않았으므로 산성 미디엄(medium)에 훌륭한 저항성을 보였다.
실험 조건(Experimental conditions)
따라서 제조된 위 저항성 젤라틴 캡슐은 하기 실험 조건의 대상이다.
따라서 젤라틴 캡슐은
- 500 ml(위의 식전 부피) 내 놓여짐
- pH 2의 산성 용액의(위 내용물의 산도)
- 37℃ 온도(체온)에서 오븐 내 유지
- 4시간(위에서 통과의 기간)의 총 기간 동안
- 기계적 교반 하에(위의 수축)
실험의 끝에, 젤라틴 캡슐은 온전하게 남았으나(이의 내용물의 확산을 초래하지 않는 젤라틴 캡슐의 부서짐이 없음) 약간 투과성으로 되었다. 젤라틴 캡슐의 내용물은 젖산 발효물의 카운팅(counting)을 수행하기 위해 분리되고 분석되었다.
젖산 발효물의 카운팅(counting)
젖산 발효물의 카운팅은 QSA - Qualite Seurite Alimentation - Site d'Agropole - BP 125 - 47931 Agen Cedex 9에 의해 수행되었다.
위 저항성 젤라틴 캡슐 내 벌 화분/점토 복합체 내 존재하는 젖산 발효물의 카운팅 및 소화 전에 그램 당 60,000 CFU를 가리킨다. 소화 이후, 벌 화분/점토 복합체는 그램 당 80,000 CFU의 젖산균의 양(load)을 갖는다.
어떠한 복합체도 없는 위 저항성 젤라틴 캡슐에 놓여진 시판중인 생산품에 대해, 소화 이후 젖산 발효물의 카운팅은 하기와 같다:
비온 트랜시트(Bion Transit) 40 CFU/g
락티비안 레퍼런스(Lactibiane reference) 2,5G 190,000 CFU/g
아르코프로바이오틱스 디펜스+(Arkoprobiotics defenses +) 40,000 CFU/g
벌 화분/점토 복합체 및 세가지 시판중인 생산품 내 발효물의 소화 동안 차이(variations)는 도 2에 나타냈다. 위 저항성 젤라틴 캡슐로 제형화된 시판중인 생산품은 발효물의 1% 미만이 재활성화 됨을 보였다. 위 저항성 젤라틴 캡슐로 벌 화분/점토 지지(support)는 소화 동안 33%의 발효물의 양(load) 증가의 가능성을 준다.
실시예 3: 동결 건조된 박테리아의 재활성화에 벌 화분/점토 복합체의 영향
1) 배치(batches)의 제조
- 동결 건조된 박테리아 단독(순수한 시판중인 균주)
대(versus)
- 벌 화분/점토 복합체 내 포함된 동일한 동결 건조된 박테리아.
미생물의 유사한 양이 참조 생산품(1,000,000 및 2,000,000 사이)의 양 및/또는 생약학 형태의 독립적으로, 각각 배치에 포함되었다.
벌 화분/점토 복합체 내 포함된 동결 건조된 박테리아는 하기 방법으로 제조되었다:
1,000,000-2,000,000의 양에 상응하는 동결 건조된 박테리아의 부피는 복합체에 추가되었다. 혼합물은 30초 동안 교반기의 수단에 의해 균질화 되었다.
2) 위 저항성 젤라틴 캡슐은 실시예 2의 절차에 따라 준비되었다.
3) 젤라틴 캡슐은 이후 하기 실험 조건의 대상이다. 따라서 젤라틴 캡슐은:
- 500 ml(위의 식전 부피) 내 놓여짐
- pH 2의 산성 용액의(위 내용물의 산도)
- 37℃ 온도(체온)를 갖는 오븐 내 유지
- 4시간(위에서 통과의 기간)의 총 기간 동안
- 기계적 교반 하에(위의 수축)
젖산 발효물의 카운팅은 승인 동의 no. 1344의 범위 내에, 프로그램 59 - 농업 사료 생산품의 미생물학적 분석을 위한 COFRAC (a French Approval Committee)에 의해 승인된 독립적인 미생물학적 분석 연구실에 의해 실험 전 및 후에 수행되었다.
수득된 결과는 하기와 같음:
1. 벌 화분/점토 복합체가 없는 샘플
위를 통과하기 전에, 젤라틴 캡슐 내 그들을 넣기 전에, 동결 건조된 시판중인 박테리아(절차가 수행되지 않은 단계 2 및 3):
위롤 통과하기 전에 동결 건조된 박테리아:
비피도박테리움 롱검(Bifidobacterium longum) 800 CFU/g
락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus) 41,000,000 CFU /g
비피도박테리움 비피덤(Bifidobacterium bifidum) 75,000,000 CFU /g
위를 통과한 이후 위 저항성 젤라틴 캡슐에 넣은, 동결 건조된 시판중인 박테리아(절차의 단계 1, 2 및 3):
비피도박테리움 롱검(Bifidobacterium longum) 40 CFU /g
락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus) 160,000 CFU /g
비피도박테리움 비피덤(Bifidobacterium bifidum) 32,000 CFU /g
위를 통과한 후 젖산 발효물의 증가 또는 감소의 백분율이 계산되었다. 그들은 도 3 내 각 박테리움에 나타냈다.
2. 벌 화분/점토 복합체와 관련된 샘플
위를 통과하기 전, 젤라틴 캡슐에 그들을 넣기 전에 복합체와 관련된 동결 건조된 박테리아(절차의 단계 2 및 3이 수행되지 않음):
비피도박테리움 롱검(Bifidobacterium longum) 1,900,000 CFU/g
락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus) 1,800,000 CFU /g
비피도박테리움 비피덤(Bifidobacterium bifidum) 1,100,000 CFU /g
위를 통과한 이후 위 저항성 젤라틴 캡슐에 넣은, 복합체와 관련된 동결 건조된 박테리아(절차의 단계 2 및 3이 수행되지 않음):
비피도박테리움 롱검(Bifidobacterium longum) 7,400,000 CFU /g
락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus) 2,600,000 CFU /g
비피도박테리움 비피덤(Bifidobacterium bifidum) 2,600,000 CFU /g
위를 통과한 후 젖산 발효물의 증가 또는 감소의 백분율은 계산되었다. 그들은 단독 또는 벌 화분/점토 복합체와 관련된, 각 박테리움에 대해 도 4에 나타냈다.
위 저항성 젤라틴 캡슐 내 제형화된 벌 화분/점토 복합체는 소화 중 동결 건조된 생균제 내 발효물 내 증가를 허용한다.
위 저항성 젤라틴 캡슐로 제형화된 동결 건조된 생균제는 소화 중 그들의 발효물의 적어도 95% 감소했다.
이들 결과는 하기를 나타낸다:
√ 신선한 벌 화분 내 자연적으로 포함된 박테리아에 벌 화분/점토 복합체에 의해 유도된 발효물의 증식의 효과는 동결 건조된 박테리아까지 확장될 수 있다.
√ 벌 화분/점토 복합체는 동결 건조된 생균제를 재활성화하기 위한 선택의 지지(support)이다.
√ 벌 화분/점토 복합체는 증식, 이식 및 그에 따른 생균제의 투입을 위한 지지로써 사용되었다.
실시예 4: 장(intestinal) 연구
장에 도달하는 박테리아가 다른 분비된 즙(juices)에 의해 분해되지 않으며 그들이 장 점막에 결합하는 사실은 중요한 도전(significant challenge)이며 과학적 및 산업적 잠재성을 나타낸다.
실제로 생균제가 장에 도달할 때, 건강에 그들의 활성을 수행하기 위해, 그들은 위 및 십이지장 사이의 pH의 증가에 저항, 담즙 염 및 췌장 효소의 영향에 저항해야 하고, 장 벽에 결합하기 위해 박테리아의 특이성에 의존하여 지지와 함께 상호작용할 수 있어야 한다.
본 연구는 하기 평가의 목적을 갖는다:
- pH(위 및 장 pH)의 변화(variations) 및 다양한 액(담즙 염 및 췌장 효소)에 생균제의 저항성
- 장 벽에 생균제의 결합.
이는 따라서 하기 두 실험을 포함한다:
- 위 내지 십이지장에 pH의 생리학적 변화 및 효소에 의한 영향(affections)에 생균제의 저항을 측정하는 가능성을 주는 인공 배지(medium)의 연구: 이는 위 미디엄(medium)에 생균제의 저항성을 연구한(및 결과가 사전에 상기된 것) 장 수준 종전의 연구에서 어느 정도 완성될 것이다;
- 장관(intestinal lumen) 내 생균제의 생존 및 및 장점막에 그들의 결합 모두를 측정하는데 장 외식(explants)에 대한 체외 연구.
절차(PROCEDURE)
1. 실험되는 샘플
본 연구에 실험될 샘플은 하기와 같다:
- 점토 단독
- 화분 단독
- 생균제 단독 (비피도박테리움(Bifidobacterium longum))
- 벌 화분 / 점토 복합체
- 벌 화분 / 점토 복합체 + 생균제
- 비온(Bion), 락티비안(Lactibiane), 아르코프로바이오틱스(Arkoprobiotics) 생산품
대조군(식염수)는 이들 샘플과 같은 시간에 병행하여 생산될 것이다.
균질성(homogeneity) 원인을 위해, 모든 샘플은 사이즈 1의 젤라틴 캡슐에 놓여지고, 4℃에 보관되었다.
실시예 1-3은 비피도박테리움 롱검(Bifidobacterium longum) 같은 시판중인 생균제의 위 저항성 젤라틴 캡슐로 넣는 것은 통상적인 젤라틴 캡슐을 사용하는 것에 비해 그들의 생존에 어떠한 장점을 갖지 않음을 보였으며, 오직 벌 화분/점토 복합체 및 생균제와 관련된 벌 화분/점토 복합체를 포함하는 샘플이 하기 절차에 따르는 위 저항성 젤라틴 캡슐에 포장되었다.
·액체 내 10초 동안 생균제를 갖거나 갖지 않는 벌 화분/점토 복합체의 젤라틴 캡슐 전체를 담금.
·어떤 접착을 피하기 위해 여러번 교반하여, 체 위에 그들을 건조.
·10분 대기 이후 두번째 층을 추가: 용액 내 5초 동안 젤라틴 캡슐을 담근 후, 그들을 상기와 같이 건조.
·10분 대기 이후 세번째 층을 추가: 용액 내 5초 동안 젤라틴 캡슐을 담근 후, 그들을 상기와 같이 건조.
·10분 대기 이후 네번째 층을 추가: 용액 내 5초 동안 젤라틴 캡슐을 담근 후, 그들을 상기와 같이 건조.
·10분 대기 이후 다섯번째 층을 추가: 용액 내 5초 동안 젤라틴 캡슐을 담근 후, 그들을 상기와 같이 건조.
2. 위 상(phase)의 체외 자극
전체 샘플은 실시예 2의 절차를 대상으로 한다.
위(stomach)에서, 샘플은 하기 방법으로 재생산된 많은 생리학적 파라미터를 대상으로 한다:
- 그들은 500 ml(위의 식전 부피) 내 희석됨
- pH 2의 산성 용액의(위 내용물의 산도)
- 37℃ 온도(체온)에서 오븐 내 유지
- 4시간(위에서 통과의 기간)의 총 기간 동안
- 교반과 함께(위의 수축)
배양 후:
- 비피도박테리움 롱검(Bifidobacterium longum)과 관련된 벌 화분/점토 복합체의 경우에, 이들 젤라틴 캡슐의 내용물은 미생물학적 관점으로부터 분석되었다;
- 비-위 저항성 젤라틴 캡슐의 경우에, 위 액체는 또한 미생물학적 관점으로부터 분석되었다;
- 담즙 액 및 췌액의 추출물의 62.5 mm는 위 액체에 추가되었다. 이 액체(장 유미즙(intestinal chime))의 샘플은 미생물학적 관점으로부터 분석되었다.
3. 위 pH 내지 장 pH의 통과
배양 4시간 이후, 담즙 추출물(bile extract)의 1.2% 및 췌액의 0.2%를 갖는 0.2 M 중탄산나트륨 용액으로 이루어진 용액의 62.5 ml는 위(gastric)의 액체에 추가되었다.
4. 외식(explants)에 대한 연구: 예비적 연구
4.1. 동물 모델의 선택
돼지는 동물 모델로 선택되었으며, 이 동물은 인간의 소화 생리와 가장 가까우며: 이의 위-장 관은 구조적 관점으로부터 이와 유사하다(Heinz et al., 1987, J. Gen. Virol. 68, 2495-2499).
4.2. 돼지 장의 복구(recovery)
식품을 위해(어떠한 병리(pathology) 없이) 동물을 도축한 이후 복구된 장은 생리학적 용액 내 놓였다. 증류수 및 소듐 클로라이드(NaCl)로 이루어진 용액은 1,000 당 9로(=NaCl의 0,9% 중량/부피의 용액, 즉 9 g/l) 희석되었다. 이는 사용 전 Na+ 및 Cl-의 154 mequiv./l 포함하며, 장은 이후 링거 용액으로 세척되었다.
27 cm의 6 cm의 세로 부분(segments)은 십이지장-공장(duodeno-jejunum) 내 준비되었고 링거 용액 내 보관되었다.
5. 장 상(phase)의 시뮬레이션
장 점막에 미생물의 접착을 보기 위해, 기구가 개발되었고, 하기 파라미터를 갖는, 돼지 장의 외식(explants)에 소화의 시뮬레이션을 허용한다:
적절한 pH로 조절된 위 유미즙의 내용물은 700 mm 스테인레스 스틸 용기의 하나에 놓였다. 내용물은 프로펠러 수단에 의한 위 장 운동을 시뮬레이션 하기 위해 계속적으로 교반되었다 (분당 20 회전)
돼지 장은 하기 특징을 갖는 플레이트에 놓였다:
- 연동운동(peristaltism)의 모델링을 허용하는 유연하고 이가 있는(toothed) 막으로 커버된 22 cm로 6.8cm의 경사진(11°) 스테인레스 스틸 플레이트. 이 운동은 0,5 cm/분의 속도로 컨베이어 벨트 수단에 의해 생산될 것이다.
장은 이후 플레이트에 놓였다. 장이 플레이트 위에 적절하게 위치할 때, 벨트는 활성화되고 장 액체의 흐름은 하기 조건 하에 2시간의 기간 동안 시작되었다:
- 37℃의 지속적인 온도에 돼지 장을 유지.
- 습도계(hygrometry)는 돼지 장이 건조하지 않게 조절됨(80%).
- 챔버의 내부 공기는 95%의 질소(N2) 및 5%의 공기로 이루어짐.
- 실험적 상(phase) 동안 암실(darkness) 내 돼지 장을 유지.
6. 측정
2시간 이후, 장은
- 그들의 지지로부터 제거되고;
- 횡단면으로 절단되고;
- 현미경으로 관찰되고 미생물학적 카운트(count)를 생산하기 위해 긁어냈다.
장을 통과하고 복구 팬(pans) 내 수집된 액체는 미생물학적 관점으로부터 분석되었다.
장을 통과하기 전 액체는 또한 미생물학적 관점으로부터 분석되었다. 샘플에 젖산 균총의 미생물학적 분석이 수행되었다(NF ISO 15214).
장을 통과하기 전, 중 및 이후 미생물학적 카운트(counts)에 관한 결과는 그램 당 콜로니 형성 단위(CFU)로 전송되었다. 이는 다른 수준의 비교 및 가능한 증식의 평가를 허용한다. 비율: 장의 총 표면적 대비 분석된 장 표면적이 고려되었다.
세포 형태가 평가되었다. 화분립의 온전함(integrity) 또한 평가되었다.
결과 및 토론
본 연구의 목적은 위산에 대해, 및 이후 통과 동안 pH의 증가에 대해, 담즙 염 및 췌장 효쇼와 그들의 접촉, 다른 장 액에 그들의 생존 및 장 벽에 그들의 접촉에 대한 생균제의 저항성을 평가하는 것이다.
1. 장 상에 발효물의 생존의 평가
실시예 1-3은 만약 그들이 벌 화분/점토 복합체와 관련되지 않은 경우 소화는 박테리아가 생존하는 것을 허용하지 않음을 보인다.
동일한 생리학적 맥락에서, 벌 화분/점토 복합체는 섭취된 생균제의 양의 증가를 촉진한다. 바이오로드(bioload)는 복합체의 존재 하에 증가한 반면, 동시에 복합체의 보호가 없는 생균제(비피도박테리움 롱검(Bifidobacterium longum))은 거의(quasi) 모두 사멸되었다.
따라서 위에 통과하는 것은 만약 그들이 복합체에 의해 보호되는 경우 박테리아의 증식에 바람직한 요소로써 포함된다. 위에 포함된 물과 접촉하는, 위 저항성 젤라틴 캡슐은 투과성이 되고, 박테리아가 복합체를 갖는 경우에 충분한 영양적 예비(reserve)를 갖는다면, 박테리아가 재활성화되고 증식 상을 시작하기 위해 필요한 물 침투 및 습도를 제공한다.
복합체 내 중요한 재활성화 및 증식 단계는 복합체의 생균제 활성에 주요 중심 라인이다.
1. 담즙 염 및 췌액에 발효물의 생존의 평가.
위 산성 및 담즙-췌액 분비는 섭취된 생균제 박테리아의 재활성화를 위한 주요 내인성 메커니즘이다.
복합체는 위 상이 시작하자 마자 새로운 박테리아의 신체 내부 발달을 촉진하며, 나아가 담즙 및 효소 액과 접촉 중에 향상된다. 장을 통과하기 전 장 액체 내 포함된 균총의 수(counts)는 담즙 및 췌액과 접촉하는 생균제의 생존에 복합체의 기여를 결정하는 가능성을 준다. 생존에서 나아가, 생균제는 그들의 증식을 계속 및 향상시켰다.
얻어진 결과는 어떠한 복합체가 없는, 78,750 생균제(비피도박테리움 롱검( Bifidobacterium longum ))가 장 액체에서 계속됨(persist)을 보였다. 박테리아를 포함하는 복합체를 가지는 것은, 101,250, 000이 카운트 되었다. 이는 복합체가 없이 실험된 시판중인 생산품(비온(Bion), 락티비안(Lactibiane), 아르코프로바이오틱스(Arkoprobiotics), 각각)에 비해 각각 46, >100,000,000, 600의 요소를 나타낸다.
그들을 살아있게 유지하는 사실 뒤에, 벌 화분/점토 복합체는 장 액체 내 젖산균의 발달을 허용한다.
더 나은 여전히(Better still): 위 내 생존 및 증식하는 동안 배지(medium)는 필수적이며 특징의 결정, 저항의 현상 및 신체 내부 증식은 담즙과 접촉 시 강화된다. 위 상의 끝 및 장 상의 시작 사이 7.79 인자의 증가는 따라서 관찰된다.
이들 결과는 박테리아가 복합체에 의해 보호되는 것 뿐만 아니라 나아가 그들의 발달을 보장함을 가리킨다.
도 5에 나타난 것처럼, 실제로 초기 생균제의 오직 0.05%가 만약 그들이 보호되지 않는 경우 위 통과 및 담즙 및 췌장 효소의 영향 이후 남는다. 반면, 동일한 조건을 대상으로, 동일한 생균제는 만약 그들이 복합체에 포함되는 경우 1,165. 63%의 증가를 갖는다.
이들 결과는 벌 화분/점토 복합체가 위 산성 또는 췌액 및 담즙 모두 에 대해 소화 동안 박테리아를 보호하고 그들의 발달을 촉진하는 것을 보인다.
3. 그들의 흐름의 끝에 수집된 장 액체 내 존재하는 생균제의 평가.
이는 또한 장 및 결장에 따라 이의 경로를 계속하는 장 액체에 포함된 로드(load)를 관찰하는데 중요하다.
얻어진 결과는 흐름의 끝에 수집된 장 액체 내 포함된 바이오로드(bioload)는 복합체를 갖는 7 700만 발효물인 것으로 보인다. 복합체가 없으면, 장 액체 내 오직 3.4백만, 즉 22.65 배 낮게 있다.
복합체는 또한 시판중인 생산품(비온(Bion), 락티비안(Lactibiane) 및 아르코프로바이오틱스(Arkoprobiotics) 각각)에 비해, 각각 23.424 및 636 배 많은 박테리아를 갖는 가능성을 준다.
4. 장 점막에 복합체의 접착의 평가.
연구의 또 다른 결정 포인트는 장 점막에 복합체 및 박테리아의 접착에 관련된다. 점막에 유익한 활성을 기 위해, 생균제는 그에 접착되어야 한다.
4.1. 현미경 평가
사진은 연구의 장 상 전후, 즉 비피도박테리움 롱검(Bifidobacterium longum)을 갖는 복합체를 포함하는 장 액체의 흐름 전후에 찍었다. 흐름 전후에 점막 사이에 매우 현저한 차이가 발견되었다. 실제로 오렌지(orangey) 커버링(covering)이 장 액체와 접촉하는 장의 전체 표면에 걸쳐 관찰 가능했다. 사진은 불명료하지 않게, 화분의 노란 존재 특성을 보였고, 이번에는 이의 점토 "맨틀(mantle)"로부터 방출되었다.
이 시각적 관찰은 확실하게 보였다:
- 흐름 및 기계적 힘과 관련됨에도 불구하고 장 벽에 복합체의 존재,
- 원 위치에 분리되는 복합체의 능력
장의 현미경을 통한 관찰은 점토 및 화분(이의 점토 "맨틀"에 의해 둘러싸이거나 그렇지 않은)의 분리된 존재를 정확하게 보는 가능성을 주었다.
보다 높은 배율로, 이는 점막, 그들의 점토 "맨틀"을 갖는 화분립, 그러나 또한 및 그들의 점토 코팅의 제거의 화분립의 능력을 설명하는, 특히 그들의 점토질의 구조가 제거된(cleared) 화분립을 보는 것이 가능하다. 이 단계에서 방출되지 않은 입자는 장 경로를 따라 모두 방출될 수 있다.
이러한 관찰은 화분 및 점토 사이의 연결이 장에서 깨어지고 발효물 및 화분의 내용물이 방출됨을 가리킨다. 특정한 화분립은 여전히 점토로 커버된 것과 같이, 그들은 장 내 그들의 경로를 계속할 수 있으며 소화 통로를 따라 점진적으로 떨어진다.
4.2. 미생물학적 평가
돼지 장의 불균등(heterogeneity) 때문에, 미생물학적 데이터는 조사된 장의 표면에 세 추가된 부분의 카운트의 평균으로 분석되었다.
장에 장 액체의 흐름의 끝(소화의 끝)에, 점막을 긁어 샘플링된 장 점막 내 포함된 바이오로드(bioload)는 동결 건조된 박테리아 (비피도박테리움 롱검( Bifidobacterium longum ))에 582,650 CFU/g 대 후자가 복합체에 포함된 직후 5,160,000이다. 따라서 9배 많은 박테리아는 벌 화분/점토 복합체가 벡터로써 사용될 때 장 점막에 발견되었다. 복합체는 시판중인 생산품(비온(Bion), 락티비안(Lactibiane) 및 아르코프로바이오틱스(Arkoprobiotics) 각각)에 비해 장 점막에 각각 69, 301 및 818 배 많은 박테리아를 갖는 가능성을 준다.
장을 통과한 이후 수확된 액체 내, 복합체 내 존재하는 박테리아 및 어떠한 복합체도 없는 박테리아 사이의 비율은 22배 이상이다. 이들 비율 양쪽 사이의 이러한 차이는 생균제를 위해 지지로써 복합체의 사용 동안 장 액체의 매우 현저한 바이오로드가 미생물 발효물(microferments)과 함께 장 점막 포화된 사실에 의해 설명된다.
나아가, 이는 소화 관의 다음 부분을 군집화(colonize)하기 위해 장 액체 내 포함된 박테리아를 허용한다(그리고 장 경로를 따라 나중에 증가를 계속할 것이다).
벌 화분/점토 복합체는 따라서 장 점막에 생균제의 접착을 촉진하는 좋은 인자이다.
4.3. 임프린트(imprints)의 평가
젖산 균총은 이가 복합체와 관련될 때 더욱 부착된다. 주변적인 활동은 또한 총 세균총에 관찰되었다. 젖산 균총을 위한 복합체의 장점에 추가적으로, 이는 총 균총의 조절에 활동하며, 이후 복합체의 존재 내 현저하게 덜 상당하게 되는 것으로 보인다.
총 균총의 발달은 복합체가 있거나 없는 장 부분의 임프린트에 완전히 다르다. 단독 비피도박테리움 롱검(Bifidobacterium longum) 박테리아는 총 균총의 매우 현저한 발달을 갖는 임프린트(임프린트에 무수한)를 발생시킨다. 반면, 비피도박테리움 롱검(Bifidobacterium longum) 박테리아와 관련된 복합체를 가지면, 매우 적은 콜로니가 (10 및 20 사이) 발달한다. 반대 위치에, 젖산 균총의 현저한 발달이 관찰되었다. 이는 바람직하게 임프린트된 균총은(생균제) 실제로 이것이 다음의 손상에 이식되는 곳에 소화 점막에 총 균총과 함께 완성할 수 있는 것을 의미한다: 이것은 정확히 생균제의 사용 동안 바람직한 것이다.
본 파트의 단락 2 내지 4 내 언급된 결과들의 전반적인 결론은 따라서 하기와 같다:
- 복합체는 담즙 및 췌액으로부터 공격에 생균제의 생존을 허용한다;
- 더 나은, 이는 다음에 이 배지(medium)에 적응되는 이들 생균제의 매우 현저한 증식을 허용한다;
- 복합체는 장 점막에 이들 생균제의 접착을 허용한다;
- 화분은 박테리아를 방출시키기 위해 복합체로부터 점진적으로 분리될 수 있다;
- 제공된 균총의 매우 많은 양 및 이의 큰 활력은 이것이 국소 세균총 내 이식되는 것을 허용한다.
5. 벌 화분/점토 복합체의 성분의 시너지의 평가
본 연구에 사용된 샘플들 가운데, 하나는 점토 단독을 포함하고 다른 하나는 화분 단독을 포함한다. 이것은 따라서 중량(weighting)으로, 계산, 개별적으로 얻어진 성분의 효과 및 연구에 의해 획득된 결과에 의해 예상되는 효과를 비교함으로써 복합체의 장점을 측정하는 것이 가능하다: 복합체의 시너지 효과가 관찰되었다:
위(STOMACH) 유미즙(CHYME) 점막(MUCOSA) 장액(INTESTINAL LIQUIDE)
% UFC/g % CFU/g % CFU/g % CFU/g
비피도박테리움 롱검(Bifidobacterium longum (BL)) 0.00% 0 0.08% 78,750 11.29% 582,650 4,00% 3,080,000
점토 0.00% 0 0.03% 30,375 3.38% 174,580 0.14% 108,900
화분 0,00% 0 0.00% 0 2.29% 118,250 0.08% 57,750
복합체 +BL
(예상되는 전체) 		0.00% 0 0.11% 109,125 16.97% 875,480 4.22% 3,246,650
복합체 +BL (결과) 100% 13,000,000 100% 101,250,000 100% 5,160,000 100% 77,000,000
시너지 효과 92,600% x 927.8 + 489% x 5.9 + 2,271% x 23.7
이는 따라서 복합체의 모든 단계에 시너지 효과를 관찰함에 따라 가능하다:
위, 유미즙, 점막, 장 액 내 발효물에 증가에 벌 화분 및 점토의 시너지 효과는 도 6에 나타냈다.
복합체는 예상되는 값에 비해, 유미즙 내 92,683%의 젖산균, 장 점막에 489% 및 장 액 내 2,271%의 수의 증가를 허용한다.
돼지 장에 얻어진 이들 체외 결과는 통과 동안 위 산성 및 pH의 증가, 담즙 염 및 췌액과의 접촉에 생균제의 저항성의 평가 및 다른 장 액뿐만 아니라 장 벽에 그들의 접착에 그들의 생존을 허용한다.
벌 화분/점토 복합체의 유익한 기여는 소화의 모든 상(phases)에서 설명된다.
결론:
위 상(phase) 동안, 이 것이 위 저항성 젤라틴 캡슐에 포장될 때, 벌 화분/점토 복합체는 재활성화되는 그들과 관련된 발효물을 허용한다. 이는 "새로운" 젖산균의 재활성화 및 증식을 위한 지지적(supportive) 선택이다.
장 상(phase) 동안, 복합체는 반대로, 증식 능력은 남으며 증가하기 때문에, 세포 활성에 이러한 영향 없이 담즙 및 췌액과 접촉하는 첫번째 상(phase) 내이다.
장 통과 동안, 복합체는 점막에 용이하게 결합한다. 현미경 관찰은 그들의 세포질 원위치에 방출하는, 화분립이 그들의 점토 "맨틀"로부터 방출되는 것을 보인다. 장 점막에 발효물의 수(count)는 복합체는 실제로 장 벽 및 장 관(lumen)의 흐름 모두에 장에 이의 바이오로드(bioload)를 방출하는 것을 진술하는 가능성을 준다. 복합체를 구별하는 주요 장점은 점토의 흡수 효과와 같은 구성 요소의 특정한 고유 특징의 시너지 활동으로 이루어진다. 화분의 영양적 기여는 따라서 점토에 박테리아의 비가역적인 흡수를 반대하는 이의 능력에 의해 완성된다. 장 점막의 표면에 생균제의 이러한 증가는 또한 총 균총, 감소된 것의 발달에 역할을 수행한다.

Claims (16)

  1. - 벌 화분(beepollen) 및 점토에 기초한 복합체에 첨가된
    - 생균제(probiotic) 목적을 갖는 하나 또는 다수(several)의 미생물
    을 포함하는 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 미생물은 동결 건조된 것을 특징으로 하는 조성물.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 미생물은 젖산균으로부터 선택된 것을 특징으로 하는 조성물.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 미생물은 비피도박테리움(Bifidobacterium spp) 및 락토바실러스(Lactobacillus spp) 속의 박테리아로부터 선택된 것을 특징으로 하는 조성물.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
    - 동결 건조된 미생물 0.1% 내지 70%; 및
    - 상기 복합체 30% 내지 99.9%를 포함하며,
    백분율은 중량비인 것을 특징으로 하는 조성물.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
    - 동결 건조된 미생물 3% 내지 30%; 및
    - 상기 복합체 70% 내지 97%를 포함하며,
    백분율은 중량비인 것을 특징으로 하는 조성물.
  7. 제1항 내지 제 6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 복합체는
    - 벌 화분 20% 내지 40% 및
    - 점토 60% 내지 80%
    를 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 분말(powder)로 나타나는 것을 특징으로 하는 조성물.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 위 저항성(gastro-resistant) 제형인 것을 특징으로 하는 조성물.
  10. 제9항에 있어서, 상기 조성물은 위 저항성 젤라틴 캡슐로 제조된(formulated) 것을 특징으로 하는 조성물.
  11. - 벌 화분 및 점토를 혼합하는 단계; 및
    - 미생물을 추가 및 혼합하는 단계
    를 포함하는 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따르는 조성물의 제조 방법.
  12. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따르는 조성물을 포함하는 식품, 화장품, 및/또는 생약(galenic) 조성물.
  13. 제12항에 있어서, 상기 식품은 식자재(foodstuff), 기능성 식자재, 또는 식품 첨가물인 것을 특징으로 하는 식품 조성물.
  14. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따르는 조성물을 포함하는 약학적 조성물.
  15. 생균제 목적을 갖는 미생물의 생체 이용률(bioavailability) 및/또는 활성을 증가시키기 위한 벌 화분 및 점토에 기초한 복합체의 용도.
  16. 제14항에 있어서, 상기 약학적 조성물은 생균제 목적을 갖는 미생물의 생체 이용률 및/또는 활성을 증가시키기 위한 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
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