KR20140138247A - 이중 alk 및 fak 억제제로서의 융합된 비시클릭 2,4-디아미노피리미딘 유도체 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 하기 화학식 I의 화합물 또는 그의 염 형태를 제공한다. 화학식 I의 화합물은 ALK 및 FAK 억제 활성을 갖고, 증식성 장애를 치료하는데 사용될 수 있다.
<화학식 I>

Description

이중 ALK 및 FAK 억제제로서의 융합된 비시클릭 2,4-디아미노피리미딘 유도체 {FUSED BICYCLIC 2,4-DIAMINOPYRIMIDINE DERIVATIVE AS A DUAL ALK AND FAK INHIBITOR}
역형성 림프종 키나제 (ALK)는 인슐린 수용체 서브패밀리에 속하는 세포 막-횡단 수용체 티로신 키나제이다. ALK의 가장 풍부한 발현은 신생아 뇌에서 발생하며, 이는 뇌 발달에서의 ALK에 대한 가능한 역할을 제시한다 (문헌 [Duyster, J. et al., Oncogene, 2001, 20, 5623-5637]).
ALK는 또한 특정 종양의 진행에 관여한다. 예를 들어, 역형성 대세포 림프종 (ALCL)의 대략 60 퍼센트는, 뉴클레오포스민 (NPM) 및 ALK의 세포내 도메인으로 이루어진 융합 단백질을 생성시키는 염색체 돌연변이와 연관된다. (문헌 [Armitage, J.O. et al., Cancer: Principle and Practice of Oncology, 6th edition, 2001, 2256-2316; Kutok J.L. & Aster J.C., J. Clin. Oncol., 2002, 20, 3691-3702]). 이 돌연변이 단백질, NPM-ALK는 하류 이펙터의 활성화를 통해 그의 종양원성 특성을 담당하는 구성적으로 활성인 티로신 키나제 도메인을 보유한다. (문헌 [Falini, B. et al., Blood, 1999, 94, 3509-3515; Morris, S.W. et al., Brit. J. Haematol., 2001, 113, 275-295; Duyster et al.; Kutok & Aster]). 또한, 형질전환 EML4-ALK 융합 유전자는 비소세포 폐암 (NSCLC) 환자에서 확인되었고 (문헌 [Soda, M., et al., Nature, 2007, 448, 561 - 566]), ALK 억제제 요법을 위한 유망한 표적인 ALK 융합 단백질의 목록에서의 또 다른 것을 나타낸다. 실험 데이터는, 구성적으로 활성인 ALK의 이상 발현이 ALCL의 발병기전에 직접 관여하고, ALK의 억제가 ALK+ 림프종 세포의 성장을 현저하게 손상시킬 수 있음을 입증하였다 (문헌 [Kuefer, Mu et al. Blood, 1997, 90, 2901-2910; Bai, R.Y. et al., Mol. Cell Biol., 1998, 18, 6951-6961; Bai, R.Y. et al., Blood, 2000, 96, 4319-4327; Ergin, M. et al., Exp. Hematol., 2001, 29, 1082-1090; Slupianek, A. et al., Cancer Res., 2001, 61, 2194-2199; Turturro, F. et al., Clin. Cancer Res., 2002, 8, 240-245]). 구성적으로 활성화된 키메라 ALK는 또한 소아 및 청소년을 주로 이환시키는 저속-성장 육종인 염증성 근섬유모세포성 종양 (IMT)의 약 60%에서 입증되었다. (문헌 [Lawrence, B. et al., Am. J. Pathol., 2000, 157, 377-384; Duyster et al.]).
또한, ALK 및 그의 추정 리간드인 플레이오트로핀은 인간 교모세포종에서 과다발현된다 (문헌 [Stoica, G. et al., J. Biol. Chem., 2001, 276, 16772-16779]). 마우스 연구에서, ALK의 고갈은 교모세포종 종양 성장을 감소시키고, 동물 생존을 연장시켰다 (문헌 [Powers, C. et al., J. Biol. Chem., 2002, 277, 14153-14158; Mentlein, R. et al., J. Neurochem., 2002, 83, 747-753]).
ALK 억제제는 ALCL, IMT, 증식성 장애, 교모세포종 및 가능한 다른 고형 종양을 위한 현재 화학요법과 조합되는 경우에 지속적인 치유를 허용하는 것으로 예상되거나, 또는 단일 치료제로서 이들 환자에서 암 재발을 방지하기 위한 유지 역할로 사용될 수 있다. 다양한 ALK 억제제, 예컨대 인다졸로이소퀴놀린 (WO 2005/009389), 티아졸 아미드 및 옥사졸 아미드 (WO 2005/097765), 피롤로피리미딘 (WO 2005080393) 및 피리미딘디아민 (WO 2005/016894)이 보고되었다.
WO 2008/051547은 ALK 및 c-Met 억제제로서의 2,4-디아미노피리미딘의 융합된 비시클릭 유도체를 개시하고 있다. '547 출원에 개시된 선두 약물 후보는 마우스 이종이식편 모델에서 SUP-M2 및 Karpas-299 ALK-의존성 종양에 대한 경구 효능을 갖는 강력한 ALK 억제제인 CEP-28122이다. CEP-28122는 그의 개발이 CEP-28122-치료된 원숭이에서 심각한 폐 독성의 예상치 못한 발생으로 인하여 종결되기까지 IND-가능화 연구로 진행되었다.
Figure pct00001
국소 부착 키나제 (FAK)는, 인테그린 수용체 및 다중 수용체 티로신 키나제 (EGF-R, HER2, IGF-R1, PDGF-R 및 VEGF-R2 및 TIE-2 포함)로부터의 신호전달의 결정적 트랜스듀서로서 작용하며 ECM (세포외 매트릭스)과 세포외 접촉하는 세포 부위인 국소 부착에 국재화된 진화상 보존된 비-수용체 티로신 키나제이다 (문헌 [Parsons, JT; Slack-Davis, J; Tilghman, R; Roberts, WG. Focal adhesion kinase: targeting adhesion signaling pathways for therapeutic intervention. Clin. Cancer Res., 2008, 14, 627-632; Kyu-Ho Han, E; McGonigal, T. Role of focal adhesion kinase in human cancer - a potential target for drug discovery. Anti-cancer Agents Med. Chem., 2007, 7, 681-684]). 인테그린-활성화된 FAK는, 다른 기질을 포스포릴화하고 다중 신호전달 경로를 유발할 수 있는 Src와 함께 2원 복합체를 형성한다. 다중 SH2- 및 SH3- 도메인 이펙터 단백질로의 신호 전달 매개에 있어서 FAK 결합 및 인산화의 중추적 역할 (문헌 [Mitra, SK; Hanson, DA; Schlaeper, DD. Focal adhesion kinase: in command and control of cell motility. Nature Rev. Mol. Cell Biol., 2005, 6, 56-68])을 고려할 때, 활성화된 FAK는 정상 및 악성 세포에서의 세포 부착, 이동, 형태발생, 증식 및 생존의 매개에 있어서 중추적 역할을 한다 (문헌 [Mitra et al. 2005; McLean, GW; Carragher, NO; Avizzienyte, E; et al. The role of focal adhesion kinase in cancer - a new therapeutic opportunity. Nature Reviews Cancer, 2005, 5, 505-515; and Kyu-Ho Han and McGonigal, 2007]). 종양에서, FAK 활성화는 암 세포의 특징 중 하나인 부착-비의존성 세포 생존을 매개한다. 더욱이, FAK 과다 발현 및 활성화는 이들 악성종양에서 증진된 침습성 및 전이성 표현형 및 종양 혈관신생과 연관되고 (문헌 [Owens, LV; Xu, L; Craven, RJ; et al. Over expression of the focal adhesion kinase (p125 FAK) in invasive human tumors. Cancer Res., 1995, 55, 2752-2755; Tremblay, L; Hauck, W. Focal adhesion kinase (pp125FAK) expression, activation and association with paxillin and p50CSK in human metastatic prostate carcinoma. Int. J. Cancer, 1996, 68, 164-171; Kornberg, IJ. Focal adhesion kinase in oral cancers. Head and Neck, 1998, 20: 634-639; Mc Clean et al. 2005; Kyu-Ho Han and McGonigal, 2007]), 불량한 예후 및 보다 단축된 전이-부재 생존과 상관관계가 있는 것으로 보인다.
다양한 고형 종양에서 siRNA (문헌 [Halder, J; Kamat ,AA; Landen, CN; et al. Focal adhesion kinase targeting using in vivo short interfering RNA delivery in neutral liposomes for ovarian carcinoma therapy. Clin. Cancer Res., 2006, 12, 4916-4924]), 우성-음성 FAK 및 소분자 FAK 억제제 (문헌 [Halder, J; Lin, YG; Merritt, WM; et al. Therapeutic efficacy of a novel focal adhesion kinase inhibitor, TAE226 in ovarian carcinoma. Cancer Res., 2007, 67, 10976-10983; Roberts, WG; Ung, E; Whalen, P; et al. Anti-tumor activity and pharmacology of a selective focal adhesion kinase inhibitor, PF-562,271. Cancer Res., 2008, 68, 1935-1944; Bagi CM; Roberts GW; 및 Andersen CJ. Dual focal adhesion kinse/Pyk2 inhibitor has positive effects on bone tumors - implications for bone metastases. Cancer, 2008, 112, 2313-2321])를 사용하여 수행한 다수의 개념 증명 연구는 특히 안드로겐-비의존성 전립선암, 유방암 및 HNSCC를 위한 항종양/항혈관신생 전략으로서의 FAK 억제의 치료 유용성에 대한 전임상 지지를 제공하였다. 누드 래트에서의 인간 유방암 (MDA-MB-231)의 전임상 모델에서, 소분자 FAK 억제제 (PF-562,271)의 투여는 원발성 종양 성장 및 경골내 종양 확산을 억제하고, 종양-유발 골 손실을 회복시켰다 (문헌 [Bagi et al., 2008]). 문헌 [Roberts et al., (2008)]은 PF-562,271이 골 전이를 억제하고, 골 재흡수를 방지하고, 골 전이를 갖거나 갖지 않는 유방암 및 안드로겐-비의존성 전립선암 환자에서의 골형성을 증가시키는 것으로 제시하였으며, 이는 이들 특정한 악성종양에서의 FAK 억제의 추가의 이익을 지지한다.
요약하면, 이상 ALK 활성화 및 FAK의 구성적 활성화를 인간에서의 특정 유형의 암의 발병 및 진행과 관련시키는 명확한 유전적 및 생물학적 증거가 존재한다. 상당한 증거는, ALK- 및 FAK-양성 종양 세포가 증식 및 생존에, 및 FAK의 경우에 원위 부위로의 침습 및 전이에 이들 종양유전자를 필요로 하며, ALK 및 FAK 신호전달 둘 다의 억제는 종양 세포 성장 저지 또는 아폽토시스로 이어져 객관적인 세포감소성 효과가 유발됨을 나타낸다. FAK의 억제는 또한 특히 골 전이성 파종 및 골용해성 질환에 의해 특성화되는 특정한 암에서 종양 이동, 침습성 및 전이성 확산의 감쇠를 유발한다. FAK 활성화는 종양 세포를 화학요법-유도된 아폽토시스로부터 보호하여 종양 내성에 기여하고; FAK 활성의 조절 (siRNA에 의해 또는 약리학적으로)은 생체내 화학요법제 (예를 들어, 독소루비신, 도세탁셀 및 겜시타빈)의 효능을 강화시키며, 이는 특정한 암에서의 합리적 조합 요법에 대한 유용성을 제시한다. ALK 및 FAK는 건강한 성인 내 대부분의 정상 조직에서 최소로 발현되고, 특정한 암에서 종양발생 동안 및/또는 악성 진행의 초기 단계 동안 활성화되고/거나 이상조절된다. 결과적으로, 정상 세포에 대한 이중 ALK 및 FAK 억제제로의 치료의 온-타겟 효과는 최소여서, 유리한 치료 지수를 생성시켜야 한다.
암의 치료를 위한 추가의 안전하고 효과적인 ALK 및/또는 FAK 억제제에 대한 필요성이 존재한다.
본 발명은 하기 화학식 I의 화합물 또는 그의 염 형태를 제공한다.
<화학식 I>
Figure pct00002
화학식 I의 화합물은 ALK 및 FAK 억제 활성을 갖고, ALK- 또는 FAK-매개 장애 또는 상태를 치료하는데 사용될 수 있다.
본 발명은 본 발명의 하나 이상의 화합물을 하나 이상의 제약상 허용되는 부형제와 함께 포함하는 제약 조성물을 추가로 제공한다.
도 1은 CEP-37440의 제조 방법의 개략도를 도시한다.
도 2는 결정질 CEP-37440 트리벤젠술포네이트 염의 XRPD 패턴을 도시한다.
도 3은 결정질 CEP-37440 트리히드로클로라이드 2수화물 염의 XRPD 패턴을 도시한다.
도 4는 마우스 내 Sup-M2 ALCL 종양 이종이식편에서의 경구 CEP-37440의 항종양 효능을 도시한다.
도 5는 CEP-37440으로 경구 투여된 Sup-M2 ALCL 종양 이종이식편 보유 마우스의 체중을 도시한다.
도 6은 경구 투여 후 Sup-M2 ALCL 종양 이종이식편 보유 마우스에서의 CEP-37440의 혈장 및 종양 수준을 도시한다.
도 7은 마우스 내 Karpas-299 종양 이종이식편에서의 경구 CEP-37440의 항종양 효능을 도시한다.
도 8은 CEP-37440으로 경구 투여된 Karpas-299 종양 이종이식편 보유 마우스의 체중을 도시한다.
도 9는 경구 투여 후 Karpas-299 종양 이종이식편 보유 마우스에서의 CEP-37440의 혈장 및 종양 수준을 도시한다.
도 10은 마우스 내 NCI-H2228 NSCL 종양 이종이식편에서의 경구 CEP-37440의 항종양 효능을 도시한다.
도 11은 마우스 내 NCI-H3122 NSCL 종양 이종이식편에서의 경구 CEP-37440의 항종양 효능을 도시한다.
도 12는 경구 투여 후 NCI-H2228 NSCL 종양 이종이식편 보유 마우스에서의 CEP-37440의 혈장 및 종양 수준을 도시한다.
도 13은 경구 투여 후 NCI-H3122 NSCL 종양 이종이식편 보유 마우스에서의 CEP-37440의 혈장 및 종양 수준을 도시한다.
도 14는 CEP-37440으로 경구 투여된 NCI-H2228 NSCL 종양 이종이식편 보유 마우스의 체중을 도시한다.
도 15는 CEP-37440으로 경구 투여된 NCI-H3122 NSCL 종양 이종이식편 보유 마우스의 체중을 도시한다.
도 16은 마우스 내 NCI-H2228 NSCL 종양 이종이식편에서의 경구 CEP-37440의 항종양 효능 및 장기간 종양 퇴행을 도시한다.
도 17은 CEP-37440으로 경구 투여된 NCI-H2228 NSCL 종양 이종이식편 보유 마우스의 체중을 도시한다.
도 18은 구성적 FAK 활성화를 갖는 PC-3 전립선 종양 이종이식편 보유 누드 마우스에서의 경구 CEP-37440 및 PF-562271의 항종양 효능을 도시한다.
도 19는 HCC-827 인간 NSCL 암종 이종이식편 (EML4-ALK 음성) 보유 누드 마우스에서의 경구 CEP-37440 및 PF-562271의 항종양 효능을 도시한다.
도 20은 CEP-37440 또는 PF-562271로 경구 투여된 HCC-827 인간 NSCL 암종 이종이식편 (EML4-ALK 음성) 보유 누드 마우스의 체중을 도시한다.
도 21은 디트로이트 562 인간 HNSCC 암종 이종이식편 (EML4-ALK 음성) 보유 SCID 마우스에서의 경구 CEP-37440 및 PF-562271의, FAK의 종양 약역학적 억제 및 항종양 효능을 도시한다.
I. 정의
본원에 사용된 하기 용어는 달리 명시되지 않는 한 이들에게 부여된 의미를 갖는다.
"제약 조성물"은 인간에게 투여하기에 적합한 안전성/효능 프로파일을 갖는 조성물을 지칭한다.
"제약상 허용되는 부형제"는 인간에게 투여되는 경우에 전형적으로 알레르기 또는 다른 부적당한 반응, 예컨대 급성위연동이상항진, 어지럼증 등을 일으키지 않는 생리학상 허용되는 물질을 지칭한다.
"제약상 허용되는 염"은 인간에게 투여하기에 적합한 안전성/효능 프로파일을 갖는 염을 지칭한다.
"대상체"는 포유동물 강의 구성원을 지칭한다. 포유동물의 예는 제한 없이 인간, 영장류, 침팬지, 설치류, 마우스, 래트, 토끼, 말, 가축, 개, 고양이, 양 및 소를 포함한다.
"치료 유효량"은 특정한 대상체 또는 대상체 집단에서 치료할 장애 또는 상태와 연관된 증상의 악화를 개선시키거나 또는 억제하는데 충분한 화합물의 양을 지칭한다. 적절한 투여 형태, 투여량 및 투여 경로의 결정은 제약 및 의학 업계의 당업자의 수준 내에 있음을 알아야 한다.
"치료"는 치료할 장애와 연관되거나 또는 이에 의해 유발되는 하나 이상의 증상 또는 특성의 급성 또는 예방적 감소 또는 완화를 지칭한다. 예를 들어, 치료는 장애의 증상의 감소 또는 장애의 완전한 근절을 포함할 수 있다.
II. 화합물
본 발명은 하기 화학식 I의 화합물 또는 그의 염 형태를 제공한다.
<화학식 I>
Figure pct00003
화학식 I의 화합물은 화학 명칭 2-[[5-클로로-2-[[(6S)-6-[4-(2-히드록시에틸)피페라진-1-일]-1-메톡시-6,7,8,9-테트라히드로-5H-벤조[7]아눌렌-2-일]아미노]피리미딘-4-일]아미노]-N-메틸-벤즈아미드를 갖고, 또한 CEP-37440으로서 공지되어 있다. 본 발명자들은 화학식 I의 화합물이 CEP-28122 및 다른 관련 화합물과 비교하여 놀랍고 예상치 못한 특성을 보유하고 있음을 발견하였다.
화학식 I의 화합물의 염 형태는 바람직하게는 제약상 허용된다. 화학식 I의 화합물의 제약상 허용되는 산 염 형태는 무기 산, 예컨대 염산, 질산, 인산, 황산, 브로민화수소산, 아이오딘화수소산, 아인산 및 이들의 혼합물로부터 유도된 염, 뿐만 아니라 유기 산, 예컨대 지방족 모노- 및 디카르복실산, 페닐-치환된 알칸산, 히드록시 알칸산, 알칸디오산, 방향족 산, 및 지방족 및 방향족 술폰산으로부터 유도된 염을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 따라서, 이러한 산 염은 술페이트, 피로술페이트, 비술페이트, 술파이트, 비술파이트, 니트레이트, 포스페이트, 모노히드로겐포스페이트, 디히드로겐포스페이트, 메타포스페이트, 피로포스페이트, 클로라이드, 브로마이드, 아이오다이드, 아세테이트, 프로피오네이트, 카프릴레이트, 이소부티레이트, 옥살레이트, 말로네이트, 숙시네이트, 수베레이트, 세바케이트, 푸마레이트, 말레에이트, 만델레이트, 벤조에이트, 클로로벤조에이트, 메틸벤조에이트, 디니트로벤조에이트, 프탈레이트, 벤젠술포네이트, 톨루엔술포네이트, 페닐아세테이트, 시트레이트, 락테이트, 말레에이트, 타르트레이트, 메탄술포네이트 및 이들의 혼합물을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 특정 실시양태에서, 산 염은 벤젠술포네이트 및 클로라이드로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 산 염은 클로라이드이다. 특정 실시양태에서, 산 염은 트리벤젠술포네이트이다. 특정 실시양태에서, 트리벤젠술포네이트 염은 7.62, 13.11, 13.76 및 14.05 ± 0.2도 2θ로부터 선택된 1개 이상의 피크를 갖는 XRPD 패턴을 특징으로 한다. 특정 실시양태에서, 트리벤젠술포네이트 염은 6.85, 7.62, 8.01, 13.11, 13.76, 14.05 및 14.60 ± 0.2도 2θ로부터 선택된 1개 이상의 피크를 갖는 XRPD 패턴을 특징으로 한다. 특정 실시양태에서, 트리벤젠술포네이트 염은 7.62, 13.11, 13.76, 14.05, 17.10, 17.86 및 18.10 ± 0.2도 2θ로부터 선택된 1개 이상의 피크를 갖는 XRPD 패턴을 특징으로 한다. 특정 실시양태에서, 산 염은 트리히드로클로라이드이다. 특정 실시양태에서, 산 염은 트리히드로클로라이드 2수화물이다. 특정 실시양태에서, 트리히드로클로라이드 2수화물 염은 5.42, 8.86, 14.06, 17.52 및 18.51 ± 0.2도 2θ로부터 선택된 1개 이상의 피크를 갖는 XRPD 패턴을 특징으로 한다. 특정 실시양태에서, 트리히드로클로라이드 2수화물 염은 5.42, 5.91, 8.86, 10.80, 11.79, 14.06, 14.72, 17.02, 17.52 및 18.51 ± 0.2도 2θ로부터 선택된 1개 이상의 피크를 갖는 XRPD 패턴을 특징으로 한다. 특정 실시양태에서, 산 염은 트리히드로클로라이드 1수화물이다.
산 부가염은 화학식 I의 화합물을 충분한 양의 목적 산과 접촉시켜 통상의 방식으로 염을 생성시킴으로써 제조될 수 있다. 화학식 I의 화합물의 유리 염기 형태는 염 형태를 염기와 접촉시키고, 유리 염기를 통상의 방식으로 단리시킴으로써 재생될 수 있다.
본 발명은 화학식 I의 화합물, 및 임의의 순도 상태의 임의의 물리적 형태 (무정형 또는 임의의 다형체 형태의 결정질 고체 포함)의 그의 염 형태를 포함한다. 결정질 다형체 형태는 비용매화 형태 뿐만 아니라 용매화 형태, 예컨대 수화 형태를 포함한다. 화학식 I의 화합물의 결정질 및 무정형 형태와 같은 유기 화합물의 제조 방법은 당업자에게 널리 공지되어 있다.
III. 제약 조성물
본 발명은 본 발명의 화합물 (예를 들어, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염)을 제약상 허용되는 부형제와 함께 포함하는 제약 조성물을 추가로 제공한다. 본 발명의 화합물로부터 제약 조성물을 제조하기 위해, 제약상 허용되는 부형제는 고체 또는 액체일 수 있다. 부형제는, 예를 들어 담체, 희석제, 향미제, 결합제, 보존제, 정제 붕해제 또는 캡슐화 물질로서 작용할 수 있는 하나 이상의 물질일 수 있다. 제약 조성물은 본 발명의 2종 이상의 화합물 (예를 들어, 화학식 I의 화합물의 2종 이상의 다양한 염 형태)을 함유할 수 있다. 바람직하게는, 제약 조성물은 치료 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 형태를 함유한다. 한 실시양태에서, 조성물은 ALK- 또는 FAK-매개 장애 또는 상태를 치료하는데 효과적인 양의 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 형태를 함유한다. 바람직하게는, 본 발명의 제약 조성물은 정량적 또는 정성적으로 측정된 바와 같이 ALK- 또는 FAK-매개 장애와 연관된 증상 또는 질환 징후의 감소를 유발할 것이다. 조성물은 또한 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 형태 및 제약상 허용되는 부형제에 더하여, 또 다른 치료 화합물, 예컨대 암의 치료에 유용한 화합물을 함유할 수 있다.
본 발명의 화합물은 임의의 형태, 예컨대 시럽, 엘릭시르, 현탁액, 분말, 과립, 정제, 캡슐, 로젠지, 트로키, 수용액, 크림, 연고, 로션, 겔, 에멀젼 등의 제약 조성물로서 제제화될 수 있다. 고체 형태 제제는 분말, 정제, 환제, 캡슐, 카쉐, 좌제 및 분산성 과립을 포함한다. 바람직하게는, 제약 조성물은 정제 또는 캡슐이다. 한 실시양태에서, 제약 조성물은 정제이다. 또 다른 실시양태에서, 제약 조성물은 캡슐이다.
분말에서, 부형제는 미분된 활성 성분과의 혼합물 중 미분된 고체일 수 있다. 정제에서, 활성 성분은 필요한 결합 특성을 갖는 부형제와 적합한 비율로 혼합되고, 목적 형태 및 크기로 압축될 수 있다. 적합한 부형제는 탄산마그네슘, 스테아르산마그네슘, 활석, 당, 락토스, 펙틴, 덱스트린, 전분, 젤라틴, 트라가칸트, 메틸셀룰로스, 소듐 카르복시메틸셀룰로스, 저융점 왁스, 코코아 버터 등을 포함한다.
제약 조성물은 바람직하게는 1% 내지 95% (w/w)의 활성 화합물을 함유한다. 보다 바람직하게는, 제약 조성물은 5% 내지 70% (w/w)의 활성 화합물을 함유한다.
좌제의 제조를 위해, 저융점 왁스, 예컨대 지방산 글리세리드의 혼합물, 또는 코코아 버터를 용융시키고, 활성 성분을 교반에 의한 바와 같이 그 안에 균질하게 분산시킬 수 있다. 이어서, 용융된 균질 혼합물을 편리한 크기의 금형에 붓고, 냉각시켜 응고되도록 할 수 있다.
액체 형태 제제는 용액, 현탁액 및 에멀젼을 포함한다. 예를 들어 정맥내, 근육내, 피내 및 피하 경로에 의한 것과 같은 비경구 투여에 적합한 제제는 항산화제, 완충제, 정박테리아제, 및 제제가 목적 수용자의 혈액과 등장성이도록 하는 용질을 함유할 수 있는 수성 및 비-수성, 등장성 멸균 주사 용액, 및 현탁화제, 가용화제, 증점제, 안정화제 및 보존제를 포함할 수 있는 수성 및 비수성 멸균 현탁액을 포함한다. 본 발명의 실시에 있어서, 조성물은, 예를 들어 정맥내 주입으로, 경구로, 국소로, 복강내로, 방광내로 또는 척수강내로 투여될 수 있다. 화합물의 제제는 단위-용량 또는 다중-용량 밀봉된 용기, 예컨대 앰플 및 바이알 내에 존재할 수 있다. 주사 용액 및 현탁액은 상기 기재된 종류의 멸균 분말, 과립 및 정제로부터 제조될 수 있다.
본 발명의 화합물은 단독으로 또는 다른 적합한 성분과 조합으로, 흡입을 통해 투여될 에어로졸 제제 (즉, 이들은 "분무될" 수 있음)로 제조될 수 있다. 에어로졸 제제는 가압된 허용되는 추진제, 예컨대 디클로로디플루오로메탄, 프로판, 질소 등 내에 배치될 수 있다.
제약상 허용되는 부형제는 투여할 특정한 조성물, 뿐만 아니라 조성물을 투여하는데 사용되는 특정한 방법에 의해 부분적으로 결정된다. 따라서, 본 발명의 제약 조성물의 광범위하게 다양한 적합한 제제가 존재한다 (예를 들어, 문헌 [Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th ed., Gennaro et al. Eds., Lippincott Williams and Wilkins, 2000] 참조).
제약 조성물 중 활성 성분의 양은 특정한 용도에 따라, 예를 들어 1 mg 내지 1,000 mg, 5 mg 내지 500 mg, 10 mg 내지 300 mg, 또는 25 mg 내지 250 mg로 달라지거나 또는 조정될 수 있다.
대상체에게 투여되는 용량은 바람직하게는 시간이 경과함에 따라 대상체에서 유익한 치료 반응을 발휘하기에 충분하다. 유익한 용량은, 예를 들어 대상체의 상태, 체중, 표면적 및 부작용 감수성에 의존하여 대상체에 따라 달라질 수 있다. 투여는 단일 또는 분할 용량을 통해 달성될 수 있다.
IV. 치료 방법
또 다른 측면에서, 본 발명은 대상체에게 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 형태를 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 ALK- 또는 FAK-매개 장애 또는 상태를 치료하는 방법을 제공한다. 또 다른 측면에서, 본 발명은 대상체에서 ALK- 또는 FAK-매개 장애 또는 상태를 치료하는데 사용하기 위한 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 형태를 제공한다. 또 다른 측면에서, 본 발명은 대상체에서 ALK- 또는 FAK-매개 장애 또는 상태를 치료하기 위한 의약의 제조에 사용하기 위한 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 형태를 제공한다. 바람직하게는, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 형태는 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 제약 조성물로서 대상체에게 투여된다. 바람직하게는, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 형태는 대상체에게 치료 유효량으로 투여된다. 한 실시양태에서, ALK- 또는 FAK-매개 상태 또는 장애는 암이다. 또 다른 실시양태에서, ALK- 또는 FAK-매개 상태 또는 장애는 역형성 대세포 림프종 (ALCL), 비소세포 폐암 (NSCLC), 신경모세포종, 교모세포종, 전립선암, 편평 세포 암종 (SCC) 및 유방암으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, ALK- 또는 FAK-매개 상태 또는 장애는 ALK-양성 ALCL, EML4-ALK-양성 NSCLC, 신경모세포종, 교모세포종, 안드로겐-비의존성 전립선암, 유방암 및 두경부 편평 세포 암종 (HNSCC)으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, ALK- 또는 FAK-매개 상태 또는 장애는 ALK-양성 ALCL, EML4-ALK-양성 NSCLC, 신경모세포종, 안드로겐-비의존성 전립선암, 유방암 및 HNSCC로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, ALK- 또는 FAK-매개 상태 또는 장애는 ALK-양성 ALCL, EML4-ALK-양성 NSCLC, 신경모세포종 및 교모세포종으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, ALK- 또는 FAK-매개 상태 또는 장애는 ALK-양성 ALCL, EML4-ALK-양성 NSCLC 및 신경모세포종으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, ALK- 또는 FAK-매개 상태 또는 장애는 ALK-양성 ALCL 및 EML4-ALK-양성 NSCLC로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, ALK- 또는 FAK-매개 상태 또는 장애는 안드로겐-비의존성 전립선암, 유방암 및 HNSCC로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, ALK- 또는 FAK-매개 상태 또는 장애는 ALK-매개 상태 또는 장애이다. 특정 실시양태에서, ALK- 또는 FAK-매개 상태 또는 장애는 FAK-매개 상태 또는 장애이다. 특정 실시양태에서, ALK- 또는 FAK-매개 상태 또는 장애는 근섬유모세포성 종양이다. 특정 실시양태에서, ALK- 또는 FAK-매개 상태 또는 장애는 TPM3-ALK 또는 TPM4-ALK 종양유전자를 갖는 근섬유모세포성 종양이다. 특정 실시양태에서, ALK- 또는 FAK-매개 상태 또는 장애는 TPM3-ALK 종양유전자를 갖는 근섬유모세포성 종양이다. 특정 실시양태에서, ALK- 또는 FAK-매개 상태 또는 장애는 TPM4-ALK 종양유전자를 갖는 근섬유모세포성 종양이다.
ALK- 또는 FAK-매개 장애 또는 상태는 본 발명의 화합물을 사용하여 장애 또는 상태의 성질에 따라 예방적으로, 급성으로 또는 만성으로 치료될 수 있다. 바람직하게는, 이들 방법 각각에서의 대상체는 인간이다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 대상체에게 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 형태를 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 증식성 장애를 치료하는 방법을 제공한다. 또 다른 측면에서, 본 발명은 대상체에서 증식성 장애를 치료하는데 사용하기 위한 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 형태를 제공한다. 또 다른 측면에서, 본 발명은 대상체에서 증식성 장애를 치료하기 위한 의약의 제조에 사용하기 위한 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 형태를 제공한다. 바람직하게는, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 형태는 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 제약 조성물로 대상체에게 투여된다. 바람직하게는, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 형태는 제약상 허용되는 양으로 대상체에게 투여된다. 특정 실시양태에서, 증식성 장애는 ALK- 또는 FAK-매개된다. 특정 실시양태에서, 증식성 장애는 암이다. 특정 실시양태에서, 증식성 장애는 역형성 대세포 림프종 (ALCL), 비소세포 폐암 (NSCLC), 신경모세포종, 교모세포종, 전립선암, 편평 세포 암종 (SCC) 및 유방암으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 증식성 장애는 ALK-양성 ALCL, EML4-ALK-양성 NSCLC, 신경모세포종, 교모세포종, 안드로겐-비의존성 전립선암, 유방암 및 두경부 편평 세포 암종 (HNSCC)으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 증식성 장애는 ALK-양성 ALCL, EML4-ALK-양성 NSCLC, 신경모세포종, 안드로겐-비의존성 전립선암, 유방암 및 HNSCC로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 증식성 장애는 ALK-양성 ALCL, EML4-ALK-양성 NSCLC, 신경모세포종 및 교모세포종으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 증식성 장애는 ALK-양성 ALCL, EML4-ALK-양성 NSCLC 및 신경모세포종으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 증식성 장애는 ALK-양성 ALCL 및 EML4-ALK-양성 NSCLC로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 증식성 장애는 안드로겐-비의존성 전립선암, 유방암 및 HNSCC로부터 선택된다.
증식성 장애는 본 발명의 화합물을 사용하여 장애 또는 상태의 성질에 따라 예방적으로, 급성으로 또는 만성으로 치료될 수 있다. 바람직하게는, 이들 방법 각각에서의 대상체는 인간이다.
치료 용도에서, 본 발명의 화합물은 광범위하게 다양한 경구 및 비경구 투여 형태로 제조 및 투여될 수 있다. 따라서, 본 발명의 화합물은 주사에 의해, 즉 정맥내로, 근육내로, 피내로, 피하로, 십이지장내로 또는 복강내로 투여될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본 발명의 화합물은 정맥내로 또는 피하로 투여된다. 또한, 본원에 기재된 화합물은 흡입에 의해, 예를 들어 비강내로 투여될 수 있다. 추가로, 본 발명의 화합물은 경피로 투여될 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명의 화합물은 경구로 전달된다. 화합물은 또한 직장으로, 협측으로 또는 취입에 의해 전달될 수 있다.
특정한 상황을 위한 적절한 투여량의 결정은 진료의의 기술 내이다. 일반적으로, 치료는 화합물의 최적 용량 미만인 보다 적은 투여량으로 개시된다. 그 후에, 투여량은 그 상황 하에서 최적 효과가 도달될 때까지 작은 증분만큼 증가된다. 편의상, 총 1일 투여량은 분할될 수 있고, 원하는 경우에 하루 동안 조금씩 투여될 수 있다. 전형적인 용량은 1일에 약 1 mg 내지 약 1,000 mg, 예컨대 1일에 약 5 mg 내지 약 500 mg이다. 특정 실시양태에서, 용량은 1일에 약 10 mg 내지 약 300 mg, 예컨대 1일에 약 25 mg 내지 약 250 mg이다.
V. 화학
CEP-28122
(1S,2S,3R,4R)-3-[5-클로로-2-((S)-1-메톡시-7-모르폴린-4-일-6,7,8,9-테트라히드로-5H-벤조시클로헵텐-2-일아미노)-피리미딘-4-일아미노]-비시클로[2.2.1]헵트-5-엔-2-카르복실산 아미드 (CEP-28122)는 WO 2008/051547 (Ahmed et al.)의 실시예 882에 기재된 바와 같이 제조된다.
CEP-37440
2-(5-클로로-2-{(S)-6-[4-(2-히드록시-에틸)-피페라진-1-일]-1-메톡시-6,7,8,9-테트라히드로-5H-벤조시클로헵텐-2-일아미노}-피리미딘-4-일아미노)-N-메틸-벤즈아미드의 합성은 도 1에 따라 단계 1-8에 개략화된 절차를 따라 수행될 수 있다.
단계 1: 5-메톡시-1-메틸렌-1,2,3,4-테트라히드로-나프탈렌: 실온에서 THF (250 mL) 중 5-메톡시-3,4-디히드로-2H-나프탈렌-1-온 (25g, 0.14 mol) 및 메틸트리페닐포스포늄 아이오다이드 (1.13 eq)의 슬러리에 포타슘 t-부톡시드 (1.6 eq)를 만지기에 따뜻한 것보다 더 높지 않은 온도로 유지하기 위한 그러한 속도로 첨가하였다. 반응물을 1시간 동안 교반하고, 농축시켰다. 이어서 반응물을 3 부피의 헥산과 공비혼합하여 과량의 t-부탄올을 제거하였다. 새로운 헥산을 용액에 첨가하고, 밤새 정치되도록 하여 연화처리를 실행하였다. 적갈색 고체를 여과에 의해 제거하고, 여과물을 물로 2회 세척하고, 농축시켰다. ISCO (330g SiO2 카트리지: 단계적으로 헥산에 이어서 DCM) 상에서 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 미황색 오일 (24 g, 99%)로서 수득하였다.
Figure pct00004
단계 2: 1-메톡시-5,7,8,9-테트라히드로-벤조시클로헵텐-6-온: 150 mL MeOH 중 5-메톡시-1-메틸렌-1,2,3,4-테트라히드로-나프탈렌 (23.8 g, 0.137 mol)을 300 mL MeOH 중 질산탈륨(III) 3수화물 (1.0 eq)의 새로이 제조된 용액에 한번에 첨가하였다. 1분 교반하고, 400 mL 클로로포름을 첨가하였다. 용액을 여과하고, 유기물을 디클로로메탄과 물 사이에 분배하였다. 유기물을 건조 (MgSO4)시키고, 농축시켰다. 크로마토그래피 (ISCO, 330g 실리카 카트리지; 단계적 용리 헥산 (5 min)에 이어서 100% 디클로로메탄 (20 min)으로 7분 구배)에 의해 정제하여 가장 극성의 생성물로서의 표제 화합물을 미황색 오일 (26g, 97%)로서 수득하였다.
Figure pct00005
단계 3: 1-메톡시-2-니트로-5,7,8,9-테트라히드로-벤조시클로헵텐-6-온: 0℃에서 아세토니트릴 (50 mL) 및 트리플루오로아세트산 무수물 (100 mL) 중 질산칼륨에 50 mL 아세토니트릴 중 1-메톡시-5,7,8,9-테트라히드로-벤조시클로헵텐-6-온 (25 g, 0.131 mol)을 적가하였다. 반응물을 실온으로 가온하면서 2.5시간 동안 교반하였다. 반응물을 회전 증발기 상에서 가열 없이 농축시켰다. MeOH를 첨가하고, 간단히 교반하였다. 재농축시키고, 디클로로메탄과 포화 수성 중탄산나트륨 용액 사이에 분배함으로써 후처리하였다. 유기 층을 분리하고, 건조 (Mg2SO4)시키고, 농축시키고, 크로마토그래피 ISCO (330g 실리카 카트리지: 구배 용리 - 60분에 걸쳐 10 → 50% EA:HEX)에 의해 정제하여 2종의 이성질체를 제공하였다. 표제 화합물은 나중에 용리된 것이었다 (10.7 그램, 34.6% 수율).
Figure pct00006
단계 4: 2-[4-(1-메톡시-2-니트로-6,7,8,9-테트라히드로-5H-벤조시클로헵텐-6-일)-피페라진-1-일]-에탄올: 메틸렌 클로라이드 (870 ml) 중 1-메톡시-2-니트로-5,7,8,9-테트라히드로-벤조시클로헵텐-6-온 (15.09 g, 64.15 mmol)을 2-피페라진-1-일-에탄올 (3 eq)에 이어서 아세트산 (10 eq)으로 처리하였다. 혼합물을 50℃에서 2시간 동안 교반하고, 0℃로 냉각시키고, 소듐 트리아세톡시보로히드라이드 (4 eq)를 첨가한 다음, 실온으로 가온하고, 교반하였다. 몇 시간 후에 출발 물질은 여전히 존재하였다. 0.4 eq 추가의 소듐 트리아세톡시보로히드라이드를 첨가한 다음, 6시간 후에 다시 첨가하였다. 밤새 교반하였다. 포화 수성 중탄산나트륨 및 얼음의 용액 상에 붓고, 1N 수산화나트륨을 사용하여 pH 10으로 염기성화시키고, 2X 디클로로메탄으로 추출하고, 건조 (MgSO4)시키고, 여과하고, 농축시켰다. 이 물질을 에탄올 중에 녹이고, HCl/에탄올을 첨가하였다. 생성된 침전물을 2시간 동안 연화처리한 다음, 여과하였다. 고체를 NaOH에 이어서 중탄산나트륨을 사용하여 유리-염기화하고, 디클로로메탄으로 추출하여 표제 화합물 (19g, 85% 수율)을 수득하였다.
Figure pct00007
단계 5: 2-[4-(2-아미노-1-메톡시-6,7,8,9-테트라히드로-5H-벤조시클로헵텐-6-일)-피페라진-1-일]-에탄올. 2-[4-(1-메톡시-2-니트로-6,7,8,9-테트라히드로-5H-벤조시클로헵텐-6-일)-피페라진-1-일]-에탄올 (19.0 g, 54.4 mmol)을 2개의 배치로 나누고, 총 에탄올 (232 mL) 중에 용해시켰다. 10% Pd/C (1.74 g, 1.64 mmol)를 반으로 나누고, 반응물을 50 psi에서 3-4시간 동안 수소화하였다. 각각의 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하여 Pd를 제거하였다. 여과물을 합한 다음, 농축시키고, 표제 화합물을 발포성 고체 (17.25g, 99% 수율)로서 단리시켰다.
Figure pct00008
단계 6: 2-[4-((S)-2-아미노-1-메톡시-6,7,8,9-테트라히드로-5H-벤조시클로헵텐-6-일)-피페라진-1-일]-에탄올: 라세미 2-[4-(2-아미노-1-메톡시-6,7,8,9-테트라히드로-5H-벤조시클로헵텐-6-일)-피페라진-1-일]-에탄올 34 그램을 주입 부피: 0.5 mL, 20 mg/mL 에탄올로 220 nm의 파장을 모니터링하면서 80 mL/min 유량에서 15% 메탄올(0.2% DEA)/CO2, 100 bar 용리액으로 키랄셀(Chiralcel) OJ-H (3 x 15 cm) 808041 칼럼을 사용하는 SFC (초임계 유체 CO2) 크로마토그래피를 사용하여 분리하였다. (R)-거울상이성질체 16.9 그램 및 표제 화합물 17 그램을 화학적 순도 >99% 및 거울상이성질체 과잉률 (ee) >99% (키랄셀 OJ-H 분석 칼럼을 사용하여 측정됨)로 단리시켰다. NMR 및 질량은 라세미 물질과 동등하였다. 제1 용리 이성질체의 절대 배위는 비스-p-브로모벤질 유도체: 4-브로모-벤조산 2-{4-[(R)-2-(4-브로모-벤조일아미노)-1-메톡시-6,7,8,9-테트라히드로-5H-벤조시클로헵텐-6-일]-피페라진-1-일}-에틸 에스테르의 이상 분산을 사용하는 소분자 X선을 통해 (R)-배위로서 분명히 할당되었다. 따라서, 제2 용리 거울상이성질체는 (S)-배위인 것으로 결정되었다.
단계 7: 2-(2,5-디클로로-피리미딘-4-일아미노)-N-메틸-벤즈아미드: DMF (0.5 L) 중 2-아미노-N-메틸-벤즈아미드 (24.4 g, 0.16 mol)에 2,4,5-트리클로로-피리미딘 (39 g, 1.3 eq) 및 탄산칼륨 (1.3 eq)을 첨가하였다. 75℃에서 5시간 동안 아르곤 하에 교반한 다음, 실온에서 밤새 교반하였다. 1 L 물 상에 붓고, 침전물을 여과에 의해 단리시키고, 1:1 아세토니트릴:물로 세척하고, 이어서 공기 스트림에서 진공 하에 건조시켜 표제 화합물을 황색 고체 (38 g, 78% 수율)로서 수득하였다.
Figure pct00009
단계 8: 2-(5-클로로-2-{(S)-6-[4-(2-히드록시-에틸)-피페라진-1-일]-1-메톡시-6,7,8,9-테트라히드로-5H-벤조시클로헵텐-2-일아미노}-피리미딘-4-일아미노)-N-메틸-벤즈아미드: 밀봉된 용기에 2-[4-((S)-2-아미노-1-메톡시-6,7,8,9-테트라히드로-5H-벤조시클로헵텐-6-일)-피페라진-1-일]-에타노 (2.69 g, 8.41 mmol) 및 2-(2,5-디클로로-피리미딘-4-일아미노)-N-메틸-벤즈아미드 (2.00 g, 6.73 mmol)를 1-메톡시-2-프로판올 (120 mL, 1200 mmol) 중에서 합하고, 이어서 메탄술폰산 (2.44 mL, 37.7 mmol)을 첨가하였다. 이어서 반응물을 90℃에서 18시간 동안 가열하였다.
반응 혼합물을 분리 깔때기에 첨가하고, 탁한 침전물이 형성될 때까지 포화 비카르브로 희석하였다. 이것을 디클로로메탄으로 추출하였다 (3x). 이어서 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 펌핑 건조시킨 다음, ISCO 플래쉬 칼럼 상에서 크로마토그래피하였다. 이것을 정상 칼럼 상에 디클로로메탄 중에 주입하고, 0-10% (디클로로메탄:10%NH4OH (MeOH 중))의 구배로 용리시켰다. 목적 생성물은 9-10% 부근에서 용리되었고, 생성물이 완전히 용리될 때까지 10% 구배를 유지하였다. 혼합된 분획을 농축시키고, 길슨(Gilson) 역상 HPLC 구배 용리 0-40% CH3CN 상에서 크로마토그래피하였다. 정상 실리카 및 역상 HPLC를 사용하여 크로마토그래피를 반복함으로써 목적하는 바와 같이 추가의 정제를 실행하였다. 중화 및 모든 물질의 농축 후에, 발포체를 EtOAc 중에 녹이고 수회 농축 건조시켜 생성된 고체를 수득함으로써 표제 화합물 (1.1 g, 28%)을 수득하였다.
Figure pct00010
CEP-37440 무정형 HCl 염
2-(5-클로로-2-{6-[4-(2-히드록시-에틸)-피페라진-1-일]-1-메톡시-6,7,8,9-테트라히드로-5H-벤조시클로헵텐-2-일아미노}-피리미딘-4-일아미노)-N-메틸-벤즈아미드 히드로클로라이드: 2-(5-클로로-2-{6-[4-(2-히드록시-에틸)-피페라진-1-일]-1-메톡시-6,7,8,9-테트라히드로-5H-벤조시클로헵텐-2-일아미노}-피리미딘-4-일아미노)-N-메틸-벤즈아미드 (4.90 g, 8.45 mmol) 및 에탄올 중 HCl 2.5 M (13.5 mL, 33.8 mmol)을 이들이 에탄올 (164 mL) 중에 용해될 때까지 가열하였다. 반응물을 에탄올로부터 2회 농축시킨 다음, 완전히 용해될 때까지 소량의 에탄올 중에서 가온하였다. 이 용액을 교반하면서 (<100 rpm) 서서히 냉각되도록 하였다. 용액이 냉각되기 전에 빠르게 고체 침전물이 형성되었다. 이 혼합물을 주위 온도가 달성될 때까지 교반되도록 한 다음, 여과하였다. 고체를 에탄올에 이어서 에테르로 세척한 다음, 고 진공 하에 직접 펌핑 건조시켜 2-(5-클로로-2-{6-[4-(2-히드록시-에틸)-피페라진-1-일]-1-메톡시-6,7,8,9-테트라히드로-5H-벤조시클로헵텐-2-일아미노}-피리미딘-4-일아미노)-N-메틸-벤즈아미드 히드로클로라이드 (5.3 그램, 정량적 수율)를 수득하였다.
Figure pct00011
CEP-37440 염 스크리닝
염 스크리닝 실험을 (a) 27종의 다양한 산 (아세트산, 아스코르브산, 벤젠술폰산, 시트르산, D - 글루쿠론산, DL 글루탐산, DL - 락트산, 에탄-1,2-디술폰산, 에탄술폰산, 푸마르산, 글리콜산, 히푸르산, 브로민화수소산 (48% aq), 염산(2.5M, EtOH), L - 아스파르트산, L - 타르타르산, L - 피로글루탐산, 락토비온산, 말레산, 말산, 말론산, 나프탈렌-2-술폰산, 오르토 인산, p-톨루엔술폰산 1수화물, 프로피온산, 숙신산 및 황산)을 사용하여 메탄올 중에서, (b) 9종의 다양한 산 (벤젠술폰산, 에탄-1,2-디술폰산, 에탄술폰산, 브로민화수소산 (48% aq), 나프탈렌-2-술폰산, o-인산 (85%), 황산, p-톨루엔술폰산 및 염산 (에탄올))을 사용하여 디클로로메탄 및 테트라히드로푸란 중에서, 및 (c) 벤젠술폰산, 브로민화수소산 (48% aq), o-인산, 황산, p-톨루엔술폰산 및 염산 (에탄올)을 사용하여 클로로포름, 아세톤, 에틸 아세테이트 및 1-프로판올 중에서 수행하였다. 실험 중 다수가 염 형태를 제공하였지만, 단지 몇 개의 실험만이 결정질 염을 생성하였고, 단지 2개의 염 형태: 트리-벤젠술포네이트 형태 및 트리히드로클로라이드 2수화물 형태만이 결정질이며 안정하고 재생가능하였다. 제약적 관점으로부터, HCl은 안전한 것으로서 일반적으로 인식되는 (GRAS) 부류 1 산 부가염인 반면, 벤젠술폰산은 GRAS가 아닌 부류 2 산 부가염이기 때문에 트리히드로클로라이드 2수화물이 트리-벤젠술포네이트보다 유리하다 (문헌 [Stahl, H.P. & Wermuth, C.G., Editors, 2002 Handbook of Pharmaceutical salts; Properties, Selection, and Use. Vwerlag HelveticaChimica Acta and Wiley-VCH] 참조). 덜 독성인 것에 더하여, HCl은 벤젠술폰산보다 더 낮은 분자량을 가지며, 이는 보다 높은 API/산 비 및 보다 낮은 유효 용량을 제공한다.
45 kV 및 40 mA에서 CuKα 방사선을 사용하는 엑셀러레이터(X'celerator) 검출기가 장착된 패널리티컬 엑스 퍼트 프로(PANalytical X Pert Pro) 회절계 상에서 분말 X선 회절 패턴을 기록하였다. 고도로 배향된 결정 (Ge111) 입사 빔 단색기를 사용하여 Kα1 방사선을 얻었다. 10mm 빔 마스크 및 고정된 (1/4°) 발산 및 산란방지 (1/8°) 슬릿을 입사 빔 측 상에 삽입하였다. 고정된 5mm 수용 슬릿 및 0.04 라디안 솔러(Soller) 블록을 회절 빔 측 상에 삽입하였다. 0.0080° 구간 크기 및 96.06 sec 계수 시간을 사용하여 약 2 내지 40° 2θ로부터 X선 분말 패턴 스캔을 수집하였으며, 스캔 속도는 대략 0.5°/min이었다. 측정을 위해 샘플을 실리콘 제로 배경 (ZBG) 플레이트 상에 확산시켰다. 패널리티컬 PW3064 스피너 (15 회전수 / min.)를 사용하여 샘플을 회전시켰다. 데이터 수집 전의 Si 참조 표준물의 측정은, 28.44 < 2θ < 28.50의 허용오차 내에 충분히 있고 150cps의 최소 피크 높이보다 상당히 더 큰 2θ 및 강도에 대한 값을 초래하였다.
CEP-37440 트리벤젠술포네이트
CEP-37440 유리 염기 (500 mg, 0.862 mmole)를 실온에서 5분 동안 교반함으로써 테트라히드로푸란 6 mL 중에 용해시켰다. 이 용액을 유리 20 mL 섬광 바이알 (16x60mm)에서 벤젠술폰산 (545.6 mg, 3.45 mmole)에 한번에 1 mL씩 첨가하였다. 샘플을 첨가 동안 (실온에서) 교반 막대를 사용하여 혼합하였다. CEP-37440 용액 중 모두가 첨가되었을 때 오일과 함께 고체가 주목되었다. 샘플을 5-7℃에서 19시간 동안 HEL 폴리블록(Polyblock)™ 유닛 상에서 교반하였다. 고체를 흡인 여과에 의해 단리시켰다. 고체를 50℃에서 하우스 진공 하에 5시간 동안 건조시켜 약간 황색인 고체 835mg (80% 회수율)을 수득하였다. 616 mg을 물 1.5 mL 중에 현탁시키고, 생성된 슬러리를 실온에서 30분 동안 교반함으로써 HPLC 순도, 검정 및 화합물 색상이 개선되었다. 고체를 흡인 여과에 의해 단리시키고, 필터 패드 상의 고체를 물 1 mL로 세척하였다. 백색 고체를 50℃에서 하우스 진공 하에 68시간 동안 건조시켜 406 mg (67% 회수율)을 수득하였다. 트리벤젠술포네이트 염은 약 20-33 mg/mL의 수용해도를 갖는다.
결정질 트리벤젠술포네이트 염의 X선 회절 데이터 특성은 표 1 및 도 2에 제시된다.
<표 1> CEP-37440 트리벤젠술포네이트 염의 XRPD 패턴에 대한 2 세타 위치 및 d-간격과 함께 보다 높은 상대 강도
Figure pct00012
CEP-37440 트리히드로클로라이드 2수화물
CEP-37440 유리 염기 200 mg을 함유하는 20 mL 섬광 바이알에서 n-부틸 알콜 (5mL)을 실온에서 첨가하였다. 5분 동안 교반한 후에, 유리 염기는 용액 중에 존재하였다. 이어서 HCl (EtOH 중 2.5 M, 0.435 mL, 3.15 eq)을 첨가하여 백색 고체 (무정형 HCl 염)를 즉시 침전시켰다. 생성된 슬러리를 20분에 걸쳐 85℃로 가열하였다. (주의: 대략 60℃에서, 용액으로부터 어떠한 고체도 남아있지 않았다.) 용액을 80 내지 85℃에서 교반하여 30분 후에 자가 핵형성을 유발하였으며, 이는 백색 고체의 추가의 침전을 유발하였다. 반응물을 총 2시간 동안 교반한 후에, 생성된 슬러리를 1시간에 걸쳐 5℃로 냉각시켰다. 0-5℃ 슬러리를 추가 1시간 동안 교반한 다음, 최소량의 차가운 n-부틸 알콜로 세척하면서 여과하였다. 이어서 고체를 55℃에서 밤새 건조시켰다. RH 30-70% 공기로 정치시킴에 따라, CEP-37440-3HCl-2H2O 208 mg을 수득하였다.
결정질 트리히드로클로라이드 2수화물 염의 X선 회절 패턴 특성은 표 2 및 도 3에 제시된다. 염은 30-80% 상대 습도에서 안정하지만, 30% RH 미만에서 트리히드로클로라이드 1수화물 형태로 가역적으로 전환되고, 80% RH 초과에서 고도로 수화된 무정형 형태로 비가역적으로 전환된다.
<표 2> CEP-37440 트리히드로클로라이드 2수화물 염의 XRPD 패턴에 대한 2 세타 위치 및 d-간격과 함께 보다 높은 상대 강도
Figure pct00013
VI. 생물학
4-주 회복 기간을 포함하는, 스프라그-돌리 래트에서의 CEP-28122의 13-주 경구 독성 및 독성동태학적 연구
20마리 래트/성별의 3개의 치료 군에 30, 75 및 150 mg 유리 염기/kg/일의 각각의 용량 수준으로 CEP-28122를 투여하였다 (모노-메탄술폰산, 모노-HCl 염 형태로서 투여됨). 20마리 동물/성별의 1개의 추가의 군은 대조군으로서의 역할을 하였으며, 비히클, 증류수를 투여받았다. 약물 또는 비히클을 10 mL/kg/용량의 투여 용적으로 연속 91일 동안 1일에 1회 경구 위관영양을 통해 모둔 군에 투여하였다. 투여 기간 후에, 5마리 동물/성별/군을 4-주 회복 기간 동안 유지시켰다. 추가로, 3마리 동물/성별의 1개의 군 및 9마리 동물/성별/군의 3개의 군이 독성동태학적 (TK) 동물로서의 역할을 하였으며, 주요 연구 군과 동일한 방식으로 및 동일한 용량 수준으로 비히클 또는 약물을 투여받았다.
이환율, 사망률, 손상, 및 먹이 및 물의 이용률에 대한 관찰을 모든 동물에 대해 1일에 적어도 2회 수행하였다. 임상 관찰을 매주 주요 연구 동물에서 수행하였다. 투여의 개시 전에 (제-1주) 및 연구 동안 매주 체중을 측정하고, 기록하였다. 주요 연구 동물에 대해 매주 먹이 소비를 측정하고, 기록하였다. 검안경 검사를 종결 및 회복 부검 전에 주요 연구 동물 사전검사에서 수행하였다. 지정된 임상 병리상태 평가를 위한 혈액 샘플을 제4주의 말미에 및 종결 및 회복 부검에서 주요 연구 동물로부터 수집하였다. 요분석 평가를 위한 요 샘플을 종결 및 회복 부검 전에 주요 연구 동물로부터 수집하였다. 약물의 혈장 농도의 결정을 위한 혈액 샘플을 제1일, 제4주 및 제13주에 지정된 TK 동물로부터 지정된 시점에 수집하였다. 최종 혈액 수집 후에, TK 동물을 안락사시키고, 사체는 폐기하였다. 종결 및 회복 기간의 말미에, 부검 시험을 수행하고, 기관 중량을 기록하고, 선택된 조직을 현미경으로 검사하였다.
6-주 회복 기간을 포함하는, 시노몰구스 원숭이에서의 CEP-28122의 13-주 경구 독성 및 독성동태학적 연구
CEP-28122 모노-메탄술폰산, 모노-HCl 염을 주사용 멸균수 (SWFI) 중에 용해시켜 목적 용량 농도 수준을 달성함으로써 매주 CEP-28122 용액을 제조하였다.
연구의 서두 (제-1일)에서 수컷의 경우 2.5 내지 4.4령 및 암컷의 경우 2.5 내지 4.0령이고 수컷의 경우 2.1 내지 3.3 kg 체중 및 암컷의 경우 2.0 내지 3.1 kg 체중을 갖는 40마리의 실험적 미치료 시노몰구스 원숭이 (20마리의 수컷 및 20마리의 암컷)를 3개의 용량 군 중 1개 및 비히클 대조군에 할당하였다. 5마리 동물/성별을 각각의 용량 군에 할당하고, 최대 91일 동안 0 (비히클), 20, 40 또는 80 mg/kg의 경구 용량을 매일 제공하였다. 투여의 초기 2주 동안 80 mg/kg/일을 투여받은 여러 동물에서 발작의 발생으로 인하여, 고용량을 60 mg/kg/일로 저하시켰다. 3마리 동물/성별/군을 투여 기간의 말미 (제92일)에 종결을 위해 예정하고, 2마리 동물/성별/군을 6-주 비-투여 회복 기에 할당하고, 제134일에 종결시켰다.
동물을 임상 징후 (케이지 측 관찰 및 먹이 소비 [1일에 2회], 및 투여 후 관찰 [각각의 투여일에 투여 후 1-2시간]), 체중 (제-2주 및 제-1주, 및 제7일에 시작한 후 매주, 및 부검 전에), 심전도, 안과적 검사, 및 혈압 측정 (사전연구 및 제1주, 제4주 및 제13주에), 심장초음파검사 측정 (제11주), 혈청 화학, 혈액학 및 응고를 비롯한 임상 병리상태 지수 (투여의 개시 전 1주 내에 및 제1주, 제4주, 제10주 및 제13주의 말미 부근에; 및 회복 기간의 말미 부근에 남아있는 동물로부터); 및 트로포닌 I (사전연구; 투여 전에, 및 제1주, 제4주 및 제13주에 투여 후 2, 4 및 24시간에, 및 회복 기의 말미 부근의 단일 시점에)에서의 변화에 대해 평가하였다. 부검 동안 방광 천자에 의해 요분석만을 위한 요 샘플을 얻었다. 제-1주, 제1주, 제4주 및 제13주에 특수 스테인레스-스틸 케이지 팬으로부터, 및 회복 기간의 말미 부근에 남아있는 동물로부터 요분석 및 요 화학 분석을 위한 요 샘플을 또한 얻었다.
독성동태학적 분석을 위해 제1일에 및 제4주 및 제13주 동안 다양한 시점에서 혈액 샘플을 수집하였다. 21마리의 동물 (3마리/성별/군 1, 2마리 수컷/3마리 암컷/군 2, 3마리 수컷/2마리 암컷/군 3, 및 2마리 수컷/3마리 암컷/군 4)을 최종 투여 후 1일에 안락사시켰다. 남아있는 14마리의 동물 (군 1 및 2로부터 각각 2마리/성별, 1마리 수컷/2마리 암컷/군 3, 및 2마리 수컷/1마리 암컷/군 4)을 추가의 투여 없이 계속 연구하였고, 최종 투여 후 대략 6주에 안락사시켰다. 종결 시에, 미국 대학 수의 병리학자 협회에 의해 공인된 수의 병리학자에 의해 완전한 부검을 모든 동물에서 수행하였고, 조직을 수집하고, 보존하고, 가공하고, 현미경으로 검사하였다.
4-주 회복 기간을 포함하는, 시노몰구스 원숭이에서의 CEP-28122의 4-주 경구 독성 및 독성동태학적 연구
0 (비히클 대조군), 3, 10, 20 또는 40 mg/kg/일의 용량 수준으로 시노몰구스 원숭이의 군 (5마리/성별/군)에 경구 위관영양을 통해 CEP-28122 (모노-메탄술포네이트, 모노-HCl 염)를 투여하였다. 4-주 치료 기간 후에, 3마리 동물/성별/군을 종결시키고, 2마리 동물/성별/군은 4-주 치료-부재 회복 기간에 돌입하였다.
하기 파라미터 및 종점을 본 연구에서 평가하였다: 임상 징후 (사망률/빈사율 검사, 케이지 측 관찰 및 먹이 소비, 및 투여후 관찰), 체중, 수의학적 신체 검사, 폐 평가, 안과학, 심전도검사, 혈압 및 심박수 측정, 임상 병리상태 파라미터 (혈액학, 응고, 임상 화학, 요분석, 요 화학 및 트로포닌 I 분석), 독성동태학적 파라미터, 육안 부검 소견, 기관 중량 및 조직병리학적 검사.
4-주 회복 기간을 포함하는, 스프라그-돌리 래트에서의 CEP-37440의 4-주 경구 독성 및 독성동태학적 연구
수컷 및 암컷 래트 (15마리/성별/군)를 4개-치료 군 및 비히클 대조군 (pH-조정된 역삼투수)에 할당하고, CEP-37440을 하기 표에 나타낸 바와 같이 트리히드로클로라이드 2수화물 염으로서 투여하였다. 동물은 경구 위관영양을 통해 투여받았다.
Figure pct00014
독성의 평가는 사망률, 임상 관찰, 체중, 체중 변화, 먹이 소비, 안과적 검사, 및 임상 및 해부 병리학을 기초로 하였다. 혈액 샘플을 독성동태학적 평가를 위해 수집하였다.
4-주 회복 기간을 포함하는, 시노몰구스 원숭이에서의 CEP-37440의 4-주 경구 독성 및 독성동태학적 연구
수컷 및 암컷 시노몰구스 원숭이 (마카카 파시쿨라리스(Macaca fascicularis))를 5마리 원숭이/성별/군으로 이루어진 4개의 군 (3개-치료 군 및 비히클 대조군)에 할당하였다. 본 연구에서 평가된 용량 수준은 0 (pH-조정된 역삼투수), 2.5, 7.5 및 20 mg/kg/일이었다. 투여 용적은 5 mL/kg이었다. CEP-37440을 트리히드로클로라이드 2수화물 염 형태로서 투여하였다. 투여 기의 완결 후에, 3마리 원숭이/성별/군을 안락사시키고, 2마리 원숭이/성별/군을 추가 4주 동안 치료-부재 회복 기에서 지속시켰다.
항종양 효능 연구 - 일반적 프로토콜
종양-보유 마우스를 다양한 치료 군 (8-10마리 마우스/군)으로 무작위화하고, 비히클 (PEG-400) 또는 PEG-400 중에 제제화된 시험 화합물을 명시된 용량 (유리 염기의 mg/kg 등가물로서 표현됨) 및 명시된 투여 빈도 (bid 또는 qid)로 투여 용적당 100 μL를 사용하여 경구 투여하였다. 각각의 종양의 길이 (L) 및 폭 (W)을 버니어 캘리퍼를 사용하여 측정하고, 마우스 체중을 2-3일마다 결정하였다. 이어서 종양 부피를 0.5236*L*W*(L+W)/2의 식으로 계산하였다. 만-휘트니(Mann-Whitney) 순위합 검정을 사용하여 종양 부피 및 마우스 체중의 통계적 분석을 수행하였다. 각각의 용량 수준에서 최종 투여 후 2시간에 혈장 및 종양 샘플을 얻고, 혈장 및 종양 용해물에서의 화합물 수준을 LCMS/MS에 의해 측정하였다.
마우스 내 NPM-ALK 양성 Sup-M2 및 Karpas-299 ALCL 종양 이종이식편 모델에서의 항종양 효능
PEG400 중 CEP-37440을 NPM-ALK 양성 Sup-M2 ALCL 종양 이종이식편을 함유하는 마우스에 qd 또는 bid로 12일 동안 po 투여하였다. Scid 마우스 내 제2의 보다 내성인 NPM-ALK-양성 ALCL (Karpas-299) 종양 이종이식편 모델에서의 CEP-37440 (무정형 HCl 염)의 항종양 효능을 또한 평가하였다.
경구 투여된 마우스 내 EML4-ALK 양성 (NCI-H2228 및 NCI-H3122) NSCLC 종양 이종이식편에서의 항종양 활성
인간 폐암 세포주, NCI-H2228 및 NCI-H1650 (ATCC, 버지니아주 마나사스) 및 NCI-H3122 (공급처: 이탈리아 토리노 대학의 지오르지오 잉기라미(Giorgio Inghirami) 박사)를 10% 태아 소 혈청 (FBS, Cat# SH3007003, 하이클론(Hyclone), 유타주 로간)으로 보충된 RPMI-1640 배지 중에서 성장시켰다. NCI-H2228 세포는 EML4-ALK 변이체 3a/b를 보유하고, NCI-H3122 세포는 EML4-ALK 변이체 1을 함유하며, 이는 이전에 보고된 바와 같이 (문헌 [Koivunen JP, Mermel C, Zejnullahu K, Murphy C, Lifshits E, Holmes AJ, et al. EML4-ALK fusion gene and efficacy of an ALK kinase inhibitor in lung cancer. Clin Cancer Res 2008, 14:4275-8]) 형광 계내 혼성화 및 역전사-PCR에 의해 결정되었다.
Scid 마우스 암컷 Scid/베이지 마우스 (6-8주령, 타코닉(Taconic), 뉴욕주 허드슨)에서의 EML4-ALK-양성 및 EML4-ALK-음성 NSCLC 피하 종양 이종이식편의 생성을 표준 실험용 식이 (테클라드 랩차우(Teklad Labchow), 하를란 테클라드(Harlan Teklad), 위스콘신주 매디슨) 상에서 5마리/미세격리기 유닛 내 케이지로 유지하였다. 동물을 습도- 및 온도 조절된 조건 하에 수용하고, 명/암 주기를 12-시간 간격으로 설정하였다. 마우스를 실험 조작 전에 적어도 1주 격리하였다. 모든 동물 연구를 세팔론, 인크.(Cephalon, Inc.)의 동물 실험 윤리 위원회 (IACUC)에 의해 승인된 프로토콜 (#03-023) 하에 수행하였다. 간략하게, EML4-ALK-양성 및 -음성 NSCLC 세포를 수집하고, 5x107개/mL의 밀도로 RPMI-1640 배지 중에 재현탁시켰다. 세포 현탁액의 분취액 (100 μL) (5x106개 세포)을 23 g 니들 (23G1, Cat# 305145, 벡톤 디킨슨(Becton Dickinson), 뉴저지주 프랭클린)을 사용하여 각각의 마우스의 좌측 옆구리로 피하 접종하였다. 종양 이종이식편 부피가 200-500 mm3에 도달할 때까지 마우스를 모니터링하였다.
종양 보유 마우스를 다양한 치료 군 (8-10마리 마우스/군)으로 무작위화하고, 비히클 (PEG-400) 또는 PEG-400 중에 제제화된 CEP-37440 무정형 HCl 염을 명시된 용량에서 bid로 투여 용적당 100 μL를 사용하여 투여하였다. 각각의 종양의 길이 (L) 및 폭 (W)을 버니어 캘리퍼를 사용하여 측정하고, 마우스 체중을 2 내지 3일마다 결정하였다. 종양 부피를 0.5236*L*W*(L+W)/2의 식으로 계산하였다. 종양 성장 억제 퍼센트 (%TGI)를 하기와 같이 계산하였다: (치료 말미에서의 대조군의 종양 부피 - 치료 말미에서의 치료 군의 종양 부피)/치료 말미에서의 대조군의 종양 부피. 부분적 종양 퇴행 (PR)은 치료 말미에서의 치료 군의 종양 부피가 치료 시작에서의 치료 군의 부피보다 더 적은 것으로서 정의된다. 완전한 종양 퇴행 (CR)은 치료 말미에서의 치료 군의 종양 부피가 치료 시작에서의 치료 군의 종양 부피의 5% 미만인 것으로서 정의된다. 만-휘트니 순위합 검정을 사용하여 종양 부피 및 마우스 체중의 통계적 분석을 수행하였다. 각각의 용량 수준에서 최종 투여 후 2시간에 혈장 및 종양 샘플을 얻고, 혈장 및 종양 용해물에서의 화합물의 수준을 LC-MS/MS에 의해 측정하였다.
호르몬-비의존성 전립선 암종, NSCL 암종 및 HNSC 암종의 인간 종양 이종이식편에서의 항종양 효능 연구
인간 전립선 암종 세포주, CWR22 및 PC3, 및 인간 두경부 편평 세포 암종 세포주 디트로이트 562를 아메리칸 티슈 컬쳐 콜렉션 (ATCC, 버지니아주 마나사스)으로부터 입수하였다. CWR22 세포를 10% 태아 소 혈청 (FBS, Cat# SH3007003, 하이클론 래보러토리 인크, 유타주 로간)으로 보충된 RPMI (ATCC, 카탈로그 # 30-2001,) 중에 배양하고, PC3을 10% FBS로 보충된 F12 배지 (ATCC, Cat# 30-2004,) 중에 배양하고, 디트로이트 562를 10% FBS로 보충된 EMEM (ATCC, Cat# 30-2003,) 중에 배양하였다. 인간 비소세포 폐암 세포주 HCC-827 및 인간 유방암 세포주 BT474를 또한 ATCC(버지니아주 마나사스)로부터 구입하고, 10% FBS를 함유하는 RPMI (Cat# 10-040, 미디어테크 인크(Mediatech Inc), 버지니아주 마나사스) 중에 배양하였다. 토끼 포스포-FAK(Tyr397) (Cat# 3283) 및 FAK 항체 (Cat# 3285)를 셀 시그널링 테크놀로지(Cell Signaling Technology) (매사추세츠주 비벌리)로부터 구입하였다.
SCID/베이지 또는 Nu/Nu 마우스 암컷 SCID/베이지 (6-8주령, 타코닉, 뉴욕주 허드슨) 또는 Nu/Nu 마우스 (6-8주령, 찰스 리버 래보러토리(Charles River Laboratory), 매사추세츠주 윌밍톤) 내 피하 인간 종양 이종이식편의 생성을 표준 실험용 식이 (테클라드 랩차우, 하를란 테클라드, 위스콘신주 매디슨) 상에서 5마리/미세격리기 유닛 내 케이지로 유지하였다. 동물을 습도- 및 온도-조절된 조건 하에 수용하고, 명/암 주기를 12-시간 간격으로 설정하였다. 마우스를 실험 조작 전에 적어도 1주 격리하였다. 실험은 세팔론, 인크.의 동물 실험 윤리 위원회에 의해 승인받았다 (프로토콜 03-023). 간략하게, 세포를 수집하고, 5x107개/mL의 밀도로 RPMI 배지 중에 재현탁시키고, 세포 현탁액의 분취액 (100 μL) (4x106 또는 5x106개 세포)을 23 g 니들 (23G1, Cat# 305145, 벡톤 디킨슨, 뉴저지주 프랭클린)을 사용하여 각각의 마우스의 좌측 옆구리로 피하 접종하였다. 이어서 마우스를 매일 모니터링하였다.
종양-보유 마우스를 다양한 치료 군 (8-10마리 마우스/군)으로 무작위화하고, 비히클 (PEG-400) 또는 PEG-400 중에 제제화된 CEP-37440을 명시된 용량 (유리 염기의 mg/kg 등가물로서 표현됨) 및 명시된 투여 빈도로 투여 용적당 100 μL를 사용하여 경구 투여하였다. 버니어 캘리퍼를 사용하여 각각의 종양의 길이 (L) 및 폭 (W)을 측정하고, 마우스 체중을 2-3일마다 결정하였다. 이어서 종양 부피를 0.5236*L*W*(L+W)/2의 식으로 계산하였다. 만-휘트니 순위합 검정을 사용하여 종양 부피 및 마우스 체중의 통계적 분석을 수행하였다. 각각의 용량 수준에서 최종 투여 후 2시간에 혈장 및 종양 샘플을 얻었고, 혈장 및 종양 용해물에서의 화합물 수준을 LC-MS/MS에 의해 측정하였다. 하기 식을 사용하여 각각의 CEP-37440-치료 군의 종양 부피 (TV)를 비히클-치료 군과 비교함으로써 TGI 값을 연구 말미에 계산하였다: [1-(화합물-치료 군의 최종일 TV/비히클 치료 군의 최종일 TV)]*100.
VII. 결과
CEP-37440 및 CEP-28122에 대한 생물학적 데이터는 표 3에 개요화되어 있고, 하기에 제시 및 논의된다.
<표 3> CEP-37440 및 CEP-28122에 대한 데이터의 개요
Figure pct00015
이들 데이터는 CEP-37440 및 CEP-28122 둘 다가 강력한 ALK 억제제임을 나타낸다. 그러나, CEP-37440이 훨씬 더 강력한 FAK 억제제이고, 감소된 단백질 결합 및 인간 혈장에서의 증가된 활성, 증가된 고유 용해도 (흡수를 용이하게 함), 감소된 친지성 (보다 높은 친지성은 증가된 독성과 연관됨), 증가된 대사 안정성 (보다 낮은 용량에서 보다 높은 혈중 농도를 용이하게 하며, 이는 신체에 대한 생체이물 부담을 감소시킴 - 약물 및 대사물에 대한 보다 적은 노출 및 대사 시스템, 즉 간에서의 보다 적은 압력)을 갖고, 특히 CYP3A4 및 CYP2C9에 관하여 감소된 P450 억제로 인한 약물-약물 상호작용에 대한 감소된 용량 (정상 대사와의 간섭 및 공-투여된 약물의 클리어런스의 감소)을 갖고, 개선된 경구 생체이용률 및 보다 낮은 생체내 클리어런스율 (보다 낮은 용량에서 보다 높은 혈중 농도)을 보유한다는 점에서, CEP-37440이 CEP-28122와 비교하여 유리하다. CEP-28122와 비교하여 CEP-37440의 유리한 특성은 놀랍고 예상치 못한 것이다.
4-주 회복 기간을 포함하는, 스프라그-돌리 래트에서의 CEP-28122의 13-주 경구 독성 및 독성동태학적 연구
연구 동안 약물-관련 사망, 및 체중, 음식 소비 또는 심장 트로포닌 농도에 대한 약물-관련 효과는 존재하지 않았다. 혈액학 파라미터에 대한 약물-관련 효과는 암컷 내 적혈구, 헤모글로빈 및 적혈구용적률에서의 최소의 비-유해 감소, 및 두 성별 다에서의 혈소판에서의 최소의 비-유해 증가로 제한되었다. 다른 통계적 차이를 관찰하였고, 이는 크기 또는 방향 변화 및/또는 용량-의존성의 결여로 인하여 의미없는 것으로 간주되었다.
혈소판은 회복 시에 150 mg/kg/일에서의 수컷 및 암컷에서 약간 상승한 채로 남아있었다. 응고 파라미터에 대한 가능한 약물-관련 효과는 150 mg/kg/일을 투여받은 수컷에서의 프로트롬빈 시간 (PT) 및 부분적 트롬보플라스틴 시간 (APTT)의 연장 및 모든 용량 수준의 암컷에서의 AP 및 APTT의 단축 (예상 범위 내에 남아있는 암컷에 대한 값)으로 제한되었다. 회복 기간의 말미에 명백한 의미있는 변화는 존재하지 않았다.
임상 화학 파라미터에서의 약물-관련 변화는 ≥ 75 mg/kg/일을 투여받은 수컷 중에서 알라닌 아미노트랜스퍼라제 (ALT), 전체 빌리루빈, 아스파르테이트 아미노트랜스퍼라제 (AST), γ-글루타밀트랜스퍼라제 (GGT) 및 소르비톨 데히드로게나제 (SDH)에서의 중간 정도의 불일치성 증가로 제한되었다. 이들 효과는 이들이 4-주 중간 샘플 수집의 기간에 있을 때보다 13주 투여 기간의 말미에 보다 뚜렷하였고, 단일 동물에서 효과에 가장 기여하였다. AST 및 ALT는 또한 150 mg/kg/일을 투여받은 암컷에서 증가하였지만, 이들 효과는 일반적으로 수컷에서 관찰된 것보다 훨씬 더 낮은 크기였다. 주목할 만한 것은, 암컷은 또한 모든 용량 수준에서 통계적으로 유의하고 용량-의존성이며 점진적인 콜레스테롤 증가를 나타내었다. 회복 기간의 말미에, AST, ALT 및 SDH는 투여 기간 동안 75 mg/kg/일을 투여받은 개별 수컷에서 상승한 채로 남아있었다. AST, ALT 및 SDH는 투여 기간 동안 150 mg/kg/일을 투여받은 수컷에서 중간 정도로 증가한 채로 남아있었으며, 투여 기간 동안 150 mg/kg/일을 투여받은 암컷에서는 보다 더 적은 크기로 증가한 채로 남아있었다.
≥ 75 mg/kg/일을 투여받은 수컷에서 및 ≥ 30 mg/kg/일을 투여받은 암컷에서 전체 단백질 및 글로불린은 용량-의존성으로 증가하였다. 알부민은 또한 ≥ 75 mg/kg/일을 투여받은 암컷에서 통계적으로 증가하였지만, 값은 예상 범위 내에 남아있었다. 칼슘에서의 통계적 증가는 증가된 알부민 및 전체 단백질에 이차적인 것으로 간주되었다. 다른 산발성의 통계적 차이를 종결 시에 관찰하였고, 이는 변화의 크기 또는 방향 및/또는 용량-의존성의 결여로 인하여 의미없는 것으로 간주되었다. 회복 기간의 말미에 전체 단백질, 글로불린, 알부민 또는 칼슘에 대한 투여의 효과는 존재하지 않았다.
종결 시에 150 mg/kg/일에서의 수컷 및 암컷에서 요 부피는 증가하였고, 비중은 감소하였다. 종결 또는 회복 시에 요분석 파라미터에서 다른 주목할 만한 변화는 관찰되지 않았다.
≥ 30 mg/kg/일을 투여받은 암컷에서 및 ≥ 75 mg/kg/일을 투여받은 수컷에서 (대조군에 대하여) 증가된 간 중량이 주목되었다 (수컷은 또한 75 mg/kg/일에서 대조군에 대하여 감소된 흉선 중량을 가짐). 증가된 신장, 비장 및 부신 중량이 투여량 ≥ 75 mg/kg/일에서 두 성별 다에서 주목되었다. 심장 중량은 또한 투여량 ≥ 75 mg/kg/일에서 중간 정도로 증가하였다. 그러나, 심장에서 상관관계적인 현미경적 소견이 존재하지 않기 때문에, 이 소견의 독성학적 유의성은 명백하지 않다. 수컷의 신장, 심장 및 비장에서의 효과는 4-주 회복 기간의 말미까지 지속되었다. 암컷에서 명백한 지속적인 약물-관련 효과는 존재하지 않았다. 13-주 투여 기간의 말미에, 150 mg/kg/일을 투여받은 수컷에서 및 75 mg/kg/일을 투여받은 암컷에서 신장의 갈색 또는 흑색 변색이 육안으로 관찰되었다. 150 mg/kg/일을 투여받은 1마리의 수컷은 회복의 말미에 세뇨관 색소에 현미경적으로 상관관계가 있는 신장 상의 초점을 가졌다. 13-주 투여 기간의 말미에, 약물-관련 현미경적 변경은 ≥ 30 mg/kg/일을 투여받은 동물의 신장, 부신, 간, 폐, 갈색 지방 조직, 장간막 림프절, 비장 및 갑상선에서 명백하였다. 부신, 간, 폐, 갈색 지방 조직, 장간막 림프절, 비장 및 갑상선에서의 소견은 4-주 회복 기간 동안 낮은 중증도 및 회복의 실질적인 증거로 인하여 유해한 것으로 간주되지 않는다. ≥75 mg/kg/일을 투여받은 동물의 신장에서의 명백한 진행성 신경병증은 4주 회복 기간 전체에 걸쳐 높은 유병률 및 지속성으로 인하여 유해한 것으로 간주되었다. 축적된 약물로 추정되는 색소침착은 또한 회복 시에 여러 조직에서 명백하였지만, 유해한 것으로 간주되지 않는다.
투여 기간 동안 ≥75 mg/kg/일을 투여받은 회복 동물에서 특히 피막하 축방향 피질 내 렌즈핵 섬유의 최소 경도 팽윤이 명백하였다. 이 소견은 이들 동물에서 임상적 백내장과 부합하였다. 그러나, 수정체 섬유의 팽윤은 아세트산과 연관된 세포 팽윤으로부터 유발된, 데이비드슨(Davidson) 유체를 사용한 고정의 인공적 결과일 수 있다. 피막하 피질 영역 내 수정체 섬유의 팽윤은 치료 동물 (상기 열거된 동물 및 임상적 백내장의 기록을 갖지 않는 다른 치료 동물 포함)에서 및 보다 적은 정도로 본 연구의 일부 대조군 동물에서 주목되었다. 추가로, 원주방향의 전방 피질 패턴의 수정체 섬유의 팽윤이 75 및 150 mg/kg/일에서의 몇몇의 치료된 동물에서 주목되었지만, 상응하는 검안경적 소견은 없었으며, 이 소견은 데이비드슨 고정에 이차적인 인공적 결과로서 간주되었다. 이들 이유로, 본 연구에서 관찰된 수정체 섬유의 팽윤은 인공적 결과로서 해석되었으며, 현미경적 소견으로서 기록되지 않았다. 그러나, 인공적 결과에 의해 가려진 실제적인 생전 변화의 가능성을 완전히 배재할 수는 없다.
상기 주목된 결과에 기초하여, 본 연구에 대한 무관찰 부작용 수준 (NOAEL)은 30 mg/kg/일인 것으로 간주되었으며, 이는 투여량 ≥ 75 mg/kg/일에서 4-주 회복 기간 전체에 걸쳐 지속된 신장에서의 유해한 조직병리학적 효과에 의해 제한된다.
6-주 회복 기간을 포함하는, 시노몰구스 원숭이에서의 CEP-28122의 13-주 경구 독성 및 독성동태학적 연구
20, 40 및 80/60 mg/kg의 용량 수준에서 연속 91일 동안 매일 경비위관 영양을 통한 CEP-28122의 투여는, 80/60 mg/kg을 투여받은 2마리의 동물 및 유사하게 2마리의 추가 동물 (40 mg/kg을 투여받은 1마리 및 20 mg/kg을 투여받은 나머지)에서 이환율 및 사망률을 비롯하여 모든 용량 수준에서 여러 약물-관련 부작용을 유발하였다. 조기 부검을 겪은 추가 동물이 있었지만; 이는 CEP-28122 투여와 관련되지 않았다. 80 mg/kg의 투여는 제9일 및/또는 제10일에 2마리 동물에 대해 발작을 유발하였고, 이 군 내의 모든 동물에서 60 mg/kg으로의 용량 수준 감소로 이어졌다. 먹이 소비, 체중, 안과적 검사, 응고 파라미터, 요분석 파라미터 및 심박수에서 CEP-28122-관련 변화는 존재하지 않았으며, 혈압 또는 트로포닌 I에서의 결정적인 CEP-28122-관련 변화는 존재하지 않았다.
조기 부검을 겪은 동물에 대한 임상 병력은 일반적으로 2개의 카테고리로 나누어질 수 있었다: 1) 수일/수주에 걸쳐 건강 상태의 점진적 저하를 가진 동물, 및 2) 조기 부검 당일 투여 직후까지 약물을 잘 허용하는 것으로 임상적으로 나타난 동물. 전자 카테고리의 동물의 경우에, 응고병증, 급성기 반응, 중증의 탈수 및/또는 간 독성을 제시하는 임상 병리상태가 존재한 한편, 후자 카테고리의 동물은 임상 병리상태 변화가 주로 부재하였다. 카테고리 2 동물 내에서의 급속한 이환율 (투여 1-3분 이내) 및 사망 (투여 15분 이내)의 임상 병력이 폐로의 약물 점적주입 또는 흡인을 제시하지만, 폐로의 용량 투여는 조직병리학에 기초하여 확인될 수 없었다. 이환율/사망률의 급속한 발병에 대한 원인이 결정될 수 없지만, 폐로부터의 약물 흡수는 제외될 수는 없다.
조기 사망 동물에서, 약물-관련 조직병리학적 소견이 폐, 간, 비장, 장간막 림프절 및 신장에서 확인되었다. 폐에서, 폐 부종과 부합하는 육안 및 조직학적 소견이 모든 용량 군에서 확인되었고, 이는 일반적으로 만약 있는 경우에 제92일 또는 제134일까지 생존한 동물에서의 소견보다 보다 중증이었다.
생존 동물에서, 모든 용량 수준 (20, 40 및 80/60 mg/kg)으로부터 존재하는 CEP 28122-관련 임상 징후가 있었으며, 이는 구토, 감소된 활성, 등을 구부린 외양 및 물변을 포함하였다. 일반적으로 이들 임상 징후는 용량 의존성이지 않았다 (물변 제외). 이들 임상 징후는 연구의 회복 기 동안 검출되지 않았다. 80/60 mg/kg을 투여받은 동물에서 간 효과를 제시하는 CEP-28122-관련 증가된 알라닌 아미노트랜스퍼라제 (ALT) 및 아스파르테이트 아미노트랜스퍼라제 (AST)가 있었지만; 이들 값은 회복 기간의 말미까지 기준선으로 복귀하였다. 간에서 결정적인 조직학적 상관관계는 존재하지 않았다.
혈액학 파라미터에서의 CEP-28122-관련 변화는 80/60 mg/kg을 투여받은 동물에서 제28일에 시작된 림프구의 감소로 제한되며, 연구의 투여 기 동안 남아있는 시점 전체에 걸쳐 지속되었다. 림프구 계수는 회복 기간의 말미까지 기준선으로 복귀하였다.
제92일에, 약물-관련 조직병리학적 소견이 폐, 간, 비장, 장간막 림프절 및 신장에서 확인되었다. 조기 사망 동물에서 확인된 것과 유사한 폐 부종 및 보다 만성 폐 손상과 부합하는 조직학적 소견은 제92일 및 제134일에 나타났으며, 용량-비례성이 아니었고, 일반적으로 조기 사망 동물에서보다 보다 적은 발생률 및/또는 중증도를 가졌다. 간, 비장 및 장간막 림프절의 대식세포 내 용량-비례 호산구성 입도는 40 및 80/60 mg/kg CEP-28122를 투여받은 동물에서 전형적으로 확인되었으며, 20mg/kg CEP-28122를 투여받은 1마리 동물에서의 최소의 변화를 포함하였다. 이 소견은 1마리의 고용량 동물의 간에서의 간세포 단일-세포 괴사와 연관되었지만, 제134일에서의 후자의 증가된 발생률 및 그의 호산구성 입도 변화와의 연관성은 약물의 투여와의 연관성을 제시하였다. 신장의 세뇨관 상피 내 용량-비례성의 갈색 과립형 색소는 모든 약물-치료 군에서 확인되었고, 조기 사망 동물에서의 최소 중등 정도와는 대조적으로 최소 경한 정도였고, 세뇨관 상피의 변성/괴사와 연관되지 않았다.
제92일에, CEP-28122의 투여에 관한 기관 중량 및/또는 비의 증가는 40 및 80/60 mg/kg CEP-28122 (간 및 신장), 및 20, 40 및 80/60 mg/kg CEP-28122 (폐)를 투여받은 수컷 동물의 간, 폐 및 신장에 대해 확인되었다. 이들 증가는 간의 쿠퍼 세포 및 간세포 내 호산구성 입도, 폐에서의 폐 부종, 및 신장의 세뇨관 상피에서의 갈색 색소 축적과 상관관계가 있었다.
제134일에, 약물-관련 조직병리학적 소견이 폐, 간, 비장, 장간막 및 하악 림프절, 및 신장에서 확인되었다. 폐 부종과 부합하는 조직학적 변화는 종결 부검 동물과 비교하여 모든 용량 군에서 유사하지만 약간 감소된 중증도로 지속되었고, 유사하게는 용량-비례성이 아니었다. 보다 만성 폐 손상과 부합하는 최소의 변화는 1마리의 고용량 동물에서 존재하였다.
간, 비장 및 장간막, 및 하악 림프절의 대식세포 내 호산구성 입도는 40 및/또는 80/60 mg/kg CEP-28122를 투여받은 동물(들)에서 전형적으로 확인되었으며, 1개 초과의 군이 이환되는 경우에 비장을 제외하고는 용량-비례성이었다. 간에서의 이러한 변화는 제92일에서보다 일반적으로 더 심하였다. 비장의 경우에, 80/60 mg/kg 군에 대해 제92일에 비하여 중증도가 감소되었고, 이는 20 및 40 mg/kg 군에서 단일 발생들에서의 중증도가 가변적이었다. 간 및 비장 내 호산구성 입도의 영역 내 갈색 과립형 색소침착의 정도는 일반적으로 보다 이전 시점과 비교하여 이들 회복 군에 대해 증가하였다. 제92일과 비교하여, 신장의 세뇨관 상피 세포 내 용량-비례성의 갈색 과립형 색소는 일반적으로 40 mg/kg CEP-28122를 투여받은 동물에서 지속되었지만 보다 경한 정도였고, 80/60 mg/kg CEP-28122를 투여받은 동물에서는 지속되며 보다 심한 정도였다. 세뇨관 상피의 최소의 변성/괴사는 80/60 mg/kg CEP-28122를 투여받은 일부 동물에서 가장 심한 색소 축적과 함께 확인되었다.
제134일에, CEP-28122의 투여에 관한 기관 중량 및/또는 비의 증가는 간 및 신장의 경우 암컷에서 확인되었고, 40 및/또는 80/60 mg/kg CEP-28122를 투여받은 동물에서 존재하였으며, 종결 부검 동물에서와 유사하게 상관관계가 있었다.
폐 부종은 본 연구에서 중요한 관심이었다. 다수의 경우에, 폐 부종의 발생은 급속한 악화 및 사망률 전에 무증상적이었다. 추가로, 폐 부종의 발생에 대한 지각가능한 심혈관 성분이 존재하지 않았기 때문에, 이 소견은 비심인성 폐 부종으로서 분류된다. 급속한 발병 및 심혈관 효과의 결여는 임상적 설정에서 폐 부종을 진단하거나 또는 예방하는 것을 매우 어렵게 하여, CEP-28122가 인간 사용에 안전하지 못하게 한다.
4-주 회복 기간을 포함하는, 시노몰구스 원숭이에서의 CEP-28122의 4-주 경구 독성 및 독성동태학적 연구
3, 10, 20 및 40 mg/kg/일의 용량 수준에서의 4주 동안 1일에 1회 경구 위관영양에 의한 CEP-28122의 투여는 어떠한 이환율 또는 사망률도 유발하지 않았다. 평가된 임의의 용량 수준에서 먹이 소비, 체중, 폐 (청진법을 통해), 안구, ECG, 혈압, 심박수, 혈액학, 응고, 요분석, 요 화학, 트로포닌 I 또는 육안 병리상태 관찰에 대한 CEP-28122-관련 효과는 존재하지 않았다.
CEP-28122-관련 조직학적 효과는 용량 수준 ≥10 mg/kg/일에서 발생하였다. 이들 소견은 폐 내 공포성 세포 (추정 폐포 상피)에서의 최소 또는 경도의 다초점성 증가 및 최소 II형 폐포세포 증식증 (오직 20 mg/kg/일 용량 수준만)으로 이루어졌다. 증가된 공포성 세포는 용량 수준 ≥10 mg/kg/일에서의 동물로부터의 증가된 폐 중량 및 폐 중량비와 상관관계가 있었지만, 청진법을 통한 임의의 임상적 관찰 또는 임상적 폐 소견과는 상관관계가 없었다. 4-주 회복 기간 후에, 폐 내 공포성 세포의 증가는 비록 보다 적은 발생률 및/또는 중증도라고 할지라도 용량 수준 ≥20 mg/kg/일의 동물에서 여전히 존재하였다. 이 소견의 완전 관해는 10 mg/kg/일 용량 수준에서 발생하였다. II형 폐포세포 증식증은 4-주 회복 기간 후에 20 mg/kg으로 투여된 동물로부터 검출되지 않았으며, 이는 또한 중증도에서의 최소의 전체 감소를 지지하였다.
가능한 CEP-28122-관련 효과는 20 및 40 mg/kg 용량 수준에서 동물에서의 투여 후 구토 및 트리글리세리드의 약간의 증가 (오직 40 mg/kg 용량 수준만)를 포함하였다. 이들 관찰은 회복 기간 동안 검출되지 않았다. 제29일에 10 mg/kg/일을 투여받은 1마리의 암컷 내 망막 층에서의 조직병리학적 변경은 불확실한 CEP-28122-관련 효과로 간주되었다. 안과적 검사에서의 상관관계는 존재하지 않았다.
보다 저용량에서의 이러한 4-주 연구는 CEP-28122를 사용하여 폐 독성을 방지하는 것이 가능하지 않을 것이라는 것을 입증하였다. 폐 손상이 전구 징후 (청진법) 없이 발생한다는 사실이 특히 우려된다. 4- 및 13-주 원숭이 연구에서의 폐 독성의 발생 및 지속성에 기초하여, CEP-28122는 인간 사용을 위해서는 너무 위험하다고 결론지어졌고, 개발 노력은 종결되었다.
4-주 회복 기간을 포함하는, 스프라그-돌리 래트에서의 CEP-37440의 4-주 경구 독성 및 독성동태학적 연구
투여 또는 회복 기 동안 어떠한 약물-관련 임상 관찰도 주목되지 않았다. 임상 관찰은 다소 드물게 나타나거나, 일시적이거나, 대조군과 필적할 만한 발병률을 가지거나, 빈사상태 동물과 연관되거나, 공지된 위관영양 오류와 연관되거나, 또는 사망 또는 희생이 약물-관련된 것으로 간주되지 않는 동물에서 발생하였으므로; 임상 관찰은 약물-관련된 것으로 간주되지 않았다.
30 mg/kg/일을 투여받은 수컷 및 암컷은 투여 기의 모든 간격 동안 대조군보다 더 적게 체중이 증가하였다. 투여 기의 제1일 내지 제28일 동안, 수컷은 대조군 보다 31% 더 적게 증가하였다. 투여 기의 제1일 내지 제28일 동안, 암컷은 대조군보다 65% 더 적게 증가하였다. 30 mg/kg/일을 투여받은 수컷 및 암컷은 회복 기의 모든 간격 동안 대조군만큼 또는 이보다 더 많이 체중이 증가하였다. 회복 기의 제1일 내지 제28일 동안, 수컷은 대조군보다 24% 더 많이 증가하였다. 회복 기의 제1일 내지 제28일 동안, 암컷은 대조군보다 29% 더 많이 증가하였다. 30 mg/kg/일을 투여받은 수컷 및 암컷은 투여 기의 모든 간격 동안 대조군보다 먹이를 덜 소비하였다. 이들 차이는 수컷에서 4 내지 10% 덜 소비하는 범위 및 암컷에서 12 내지 24% 덜 소비하는 범위였다. 회복 기 동안 먹이 소비에 대한 어떠한 약물-관련 효과도 주목되지 않았다. 감소된 평균 종결 체중이 30 mg/kg/일을 투여받은 수컷 및 암컷의 종결 희생 시에 관찰되었고 (각각 0.90x 및 0.79x), 암컷에서 통계적으로 유의하였다.
투여 또는 회복 기 동안 어떠한 약물-관련 안과적 소견도 주목되지 않았다. 10 mg/kg/일까지 임상 병리상태 시험 결과에서 어떠한 약물-관련 효과도 관찰되지 않았다. 최소 크기가 경도인 여러 작은 임상 병리상태 효과가 30 mg/kg/일에서 관찰되었다. 이들 소견 중 어떠한 것도 유해하거나 또는 독성학적으로 중요한 것으로 간주되지 않았다.
30 mg/kg/일에서의 약물 혈액학 및 응고 소견은 다음을 포함하였다.
ㆍ 투여 기의 제29일에 암컷에서의 약간 더 낮은 적혈구 질량 (즉, 적혈구 계수, 헤모글로빈 및 적혈구용적률)
ㆍ 투여 기의 제15일 및 제29일에 수컷에서의 및 투여 기의 제15일에 암컷에서의 약간 더 낮은 절대 망상적혈구 계수
ㆍ 투여 기의 제15일 및 제29일에 수컷에서의 약간 더 낮은 절대 호중구 계수
ㆍ 투여 기의 제29일에 암컷에서의 약간 더 낮은 절대 호산구 계수
ㆍ 투여 기의 제15일 및 제29일에 수컷에서의 최소로 더 높은 피브리노겐
혈소판 계수는 영향을 받지 않는 것으로 나타났다. 적혈구 질량, 절대 망상적혈구, 호중구 및 호산구 계수의 감소는 약간의 골수 억제/독성을 반영하였을 수 있지만, 상관관계적 조직병리학 소견은 골수에서 관찰되지 않았다. 이들 소견은 회복 기의 말미에 가역성을 나타내었다. 30 mg/kg/일을 투여받은 암컷에서 회복 기 말미의 더 높은 평균 적혈구 용적은 전형적으로 크기가 더 큰 보다 어린 적혈구의 보다 높은 비율로 인한 것일 수 있다.
30 mg/kg/일에서의 약물-관련 임상 화학 소견은 다음을 포함하였다.
ㆍ 투여 기의 제29일에 암컷에서의 약간 더 낮은 알부민
ㆍ 투여 기의 제15일 및 제29일에 암컷에서의 최소로 더 높은 글로불린
ㆍ 투여 기의 제15일 및 제29일에 암컷에서의 더 낮은 알부민-대-글로불린 비
ㆍ 투여 기의 제15일 및 제29일에 수컷 및 암컷에서의 최소로 더 높은 콜레스테롤
ㆍ 투여 기의 제29일에 수컷에서의 약간 더 높은 혈청 칼슘 농도
ㆍ 투여 기의 제29일에 수컷 및 암컷에서의 최소로 더 낮은 혈청 클로라이드
더 낮은 알부민 및 알부민-대-글로불린 비 및 더 높은 글로불린은 염증과 부합하였고, 조직학적으로 관찰된 흉강의 만성 염증과 연관되었을 수 있다. 더 높은 콜레스테롤은 이들 동물에서 관찰된 감소된 먹이 소비 및 체중 증가와 관련되었을 수 있다. 더 낮은 혈청 클로라이드는 더 높은 요 배설로 인한 것일 수 있다. 더 높은 칼슘에 대한 메카니즘은 공지되어 있지 않다. 임의의 용량 수준에서 트로포닌 I 농도에서의 어떠한 약물-관련 효과도 관찰되지 않았다. 회복 기의 말미에 모든 임상 화학 소견은 가역성을 나타내었다.
30 mg/kg/일에서의 약물-관련 요 화학 소견은 다음을 포함하였다.
ㆍ 투여 기의 제15일 및 제29일에 수컷 및 암컷에서의 최소로 더 높은 요 클로라이드 배설
ㆍ 투여 기의 제15일 및 제29일에 수컷 및 암컷에서의 최소로 더 높은 클로라이드에 대한 요 분획성 클리어런스
더 낮은 혈청 클로라이드는 30 mg/kg/일을 투여받은 동물의 요에서의 클로라이드의 더 높은 총 배설 및 더 높은 분획성 클리어런스와 연관되었을 수 있다. 상관관계적 조직병리학 소견은 이들 동물의 신장에서 관찰되지 않았다. 모든 요 화학 소견은 회복 기의 말미에 가역성을 나타내었다. 임의의 용량 수준에서 어떠한 명백한 효과도 요분석 시험 결과에서 관찰되지 않았다.
다른 임상 병리상태 시험 결과에서 통계적으로 유의하거나 또는 달리 주목할만한 차이는, 이들이 통상적으로 크기가 작거나, 용량에 대한 관계성이 결여되거나 또는 시간 경과에 따라 및 성별 간에 불일치하기 때문에 부수적인 것으로 간주되었다.
7건의 예정되지 않은 사망이 투여 기 동안 독성 동물에서 발생하였다. 예정되지 않은 사망 중 어떠한 것도 약물에 기인하지 않았다. 1마리의 대조군 수컷 및 30 mg/kg/일을 투여받은 1마리의 암컷은 혈액 수집 후에 곧 사망하였으며; 이들은 약물-관련 효과를 제시하는 임상적 또는 해부학적 병리상태 소견의 결여로 인하여 우발적 사망으로 간주되었다. 3마리의 동물은 위관영양-관련 손상과 부합하는 육안 및/또는 현미경적 소견을 가졌는데, 투여 기의 제25일에 빈사 상태로 희생된 1 mg/kg/일을 투여받은 1마리의 암컷, 투여 기의 제9일에 사망한 것으로 발견된 3 mg/kg/일을 투여받은 1마리의 암컷 및 투여 기의 제25일에 빈사 상태로 희생된 10 mg/kg/일을 투여받은 1마리의 암컷을 포함한다. 사망의 원인은 투여 기의 제10일에 사망한 것으로 발견된 30 mg/kg/일을 투여받은 1마리의 수컷 및 투여 기의 제15일에 빈사 상태로 희생된 10 mg/kg/일을 투여받은 1마리의 암컷에 대해서는 명백하지 않았다. 모든 다른 투여 기 동물 및 모든 회복 독성 동물은 그들의 예정된 희생 때까지 생존하였다.
종결 희생에서, 평균 기관 중량 (종결 체중에 대해 보정됨)의 통계적으로 유의한 증가는 30 mg/kg/일을 투여받은 수컷의 간 및 10 mg/kg/일을 투여받은 수컷의 전립선에서 발생하였다. 이들 변화는 현미경적 상관관계, 성별 간의 일치성 (오직 간) 및/또는 용량 반응의 증거가 결여되었기 때문에, 이들은 약물-관련된 것으로 간주되지 않았다. 보정 평균 흉선 중량은 30 mg/kg/일을 투여받은 수컷 (0.86x) 및 10 mg/kg/일 (0.85x) 또는 30 mg/kg/일 (0.79x)을 투여받은 암컷에서 용량-의존성 방식으로 10%보다 더 크게 감소하였다. 통계적 유의성 또는 현미경적 상관관계가 결여되었기 때문에, 이들 군에서 흉선 중량 감소의 약물에 대한 관계는 불확실하다. 종결 희생 시의 모든 다른 기관 중량 변화 및 회복 희생 시의 모든 기관 중량 변화는 정상적인 생물학적 변화로 인한 것일 수 있고, 약물의 직접적 효과로 간주되지 않았다.
30 mg/kg/일을 투여받은 암컷에서 종결 희생 시에 심장에서의 유착물 및 폐에서의 유착물 또는 덩어리에 대한 육안 소견이 관찰되었고, 30 mg/kg/일을 투여받은 1마리의 암컷에서 회복 희생 시에 심장에서의 유착물이 관찰되었다. 심장 및 폐에서의 섬유증 및/또는 만성 염증에 대한 현미경적 소견과 상관관계가 있는 이들 육안 소견은 약물-관련된 것으로 간주되었다. 모든 다른 육안 소견은 자발적이거나, 부수적이거나, 우발적 사망과 연관된 것으로 간주되었고, 약물에 기인하지 않았다.
종결 희생 시에, 흉강의 만성 염증에 부합하는 현미경적 소견은 30 mg/kg/일을 투여받은 암컷의 심장 및 폐의 장막 표면 상에서 및 흉선주위 결합 조직에서 존재하였다. 30 mg/kg/일을 투여받은 5마리/10마리 암컷에서 심장의 장막/심외막 표면 및 폐의 흉막/흉막하 표면의 만성 염증 및/또는 섬유증이 관찰되었다. 이 소견은 심장 및 폐의 장막 표면을 따라 확산하는 다초점성이었고, 염증 세포가 거의 없는 섬유성 비후에서 보다 중증의 만성 염증으로 변하였다. 30 mg/kg/일을 투여받은 4마리/10마리 암컷에서 만성 내지 만성-활성 염증이 또한 흉선 주위 느슨한 섬유혈관 결합 조직에서 관찰되었다. 회복 희생 시에, 30 mg/kg/일을 투여받은 2마리/5마리 암컷에서 심장 및 폐의 장막 표면의 만성 염증 및/또는 섬유증이 관찰되었다. 회복 희생 시의 소견은 염증이 거의 없는 장막 표면의 섬유성 비후를 확산시키는 다초점성을 특징으로 하며, 이는 부분 관해를 제시한다. 흉강에서의 만성 염증의 소견이 30 mg/kg/일을 투여받은 총 7마리/15마리 암컷에서 예정된 희생 시에 관찰되었고, 이들 소견에 대한 또 다른 원인의 육안 또는 현미경적 증거가 결여되었기 때문에, 30 mg/kg/일을 투여받은 암컷의 심장 및 폐의 장막 표면 상 및 흉선주위 섬유지방 조직에서의 섬유증 및/또는 염증은 대부분 약물-관련 가능성이 있는 것으로 간주되고, 흉막 및 심막 삼출에 이차성인 장막 염증으로부터 유발되었을 수 있다.
폐 내 폐포 대식세포의 발생률의 적은 증가가 종결 희생 시에 30 mg/kg/일을 투여받은 암컷에서 관찰되었고, 이는 대부분 약물-관련 가능성이 있는 것으로 간주되었다. 폐포 대식세포의 증가된 발생률은 회복 희생 시에는 관찰되지 않았고, 이는 이 소견이 가역성임을 제시한다. 예정된 및 예정되지 않은 희생 시의 모든 다른 현미경적 소견은 자발적이거나, 부수적이거나 또는 우발적 사망과 연관되었고, 약물에 기인하지 않았다.
CEP-37440을 사용하여 이전에 수행한 10-일 용량 범위-소견 연구에서, 10, 30 또는 60 mg/kg/일로 위관 영양에 의해 약물을 매일 래트에게 투여하는 것은 10 mg/kg/일에서 잘 허용되었다. ≥30 mg/kg/일을 투여받은 동물에서 골수 (저세포충실성); 비장, 흉선 및 림프절 (감소된 림프구); 및 폐 (폐포 대식세포의 증가)에서의 해부 병리학 소견과 함께 체중에 대한 약물-관련 유해 소견이 관찰되었다. 10 mg/kg/일을 투여받은 동물에서 약물-관련 변화는 관찰되지 않았다. 본 연구에서, 30 mg/kg/일을 투여받은 수컷 및 암컷에서 유해 및 약물-관련 소견이 관찰되었다. 이들 소견은 수컷 및 암컷에서의 보다 낮은 체중 증가, 수컷 및 암컷에서 보다 낮은 먹이 소비 및 흉강의 만성 염증에 부합하는 암컷에서의 현미경적 소견을 포함하였다.
10 mg/kg/일까지 임상 병리상태 시험 결과에서 어떠한 약물-관련 효과도 관찰되지 않았다. 30 mg/kg/일에서 최소 크기가 경도인 여러 작은 임상 병리상태 효과가 관찰되었다. 이들 소견 중 어떠한 것도 유해하거나, 독성학적으로 중요하거나, 또는 생전에 다른 유해한 또는 해부 병리학 소견과 결정적으로 상관관계가 있는 것으로 간주되지 않았다.
적혈구 질량, 절대 망상적혈구, 호중구 및 호산구 계수의 감소는 약간의 골수 억제/독성을 반영하였을 수 있지만, 상관관계적 조직병리학 소견은 골수에서 관찰되지 않았다. 이들 소견은 회복 기의 말미에 가역성을 나타내었다. 30 mg/kg/일을 투여받은 암컷에서 회복 기 말미의 더 높은 평균 적혈구 용적은 전형적으로 크기가 더 큰 보다 어린 적혈구의 보다 높은 비율로 인한 것일 수 있다.
더 낮은 알부민 및 알부민-대-글로불린 비 및 더 높은 글로불린은 염증과 부합하였고, 조직학적으로 관찰된 흉강의 만성 염증과 연관되었을 수 있다. 더 높은 콜레스테롤은 이들 동물에서 관찰된 감소된 먹이 소비 및 체중 증가에 관련되었을 수 있다. 더 낮은 혈청 클로라이드는 더 높은 요 배설로 인한 것일 수 있다. 더 높은 칼슘에 대한 메카니즘은 공지되어 있지 않다. 임의의 용량 수준에서 트로포닌 I 농도에서의 어떠한 약물-관련 효과도 관찰되지 않았다. 회복 기의 말미에 모든 임상 화학 소견은 가역성을 나타내었다.
더 낮은 혈청 클로라이드는 30 mg/kg/일을 투여받은 동물의 요에서의 클로라이드의 더 높은 총 배설 및 더 높은 분획성 클리어런스와 연관되었을 수 있다. 상관관계적 조직병리학 소견은 이들 동물의 신장에서 관찰되지 않았고, 모든 요 화학 소견은 회복 기의 말미에 가역성을 나타내었다.
결론적으로, 28일 동안 용량 ≤10 mg/kg/일로의 래트에의 경구 CEP-37440 투여는 임상적으로 잘 허용되었다. 30 mg/kg/일을 투여받은 암컷에서 흉강의 만성 염증과 부합하는 현미경적 소견이 존재하였다. 30 mg/kg/일을 투여받은 수컷 및 암컷에서 체중 변화 및 먹이 소비의 감소가 존재하였다. 이들 소견에 기초하여, 본 연구에서 무관찰 부작용 수준 (NOAEL)은 10 mg/kg/일이었다.
4-주 회복 기간을 포함하는, 시노몰구스 원숭이에서의 CEP-37440의 4-주 경구 독성 및 독성동태학적 연구
모든 동물은 그의 예정된 희생 때까지 생존하였다.
투여 또는 회복 기 동안 어떠한 약물-관련 임상 관찰도 주목되지 않았다. 임상 관찰은 다소 드물게 나타나거나, 일시적이거나, 대조군과 필적할 만한 발병률을 가졌으므로; 이들은 약물-관련된 것으로 간주되지 않았다.
투여 또는 회복 기 동안 체중 또는 체중 증가에 대한 어떠한 약물-관련 효과도 주목되지 않았다. 어떠한 약물-관련 이상 안과적 소견도 주목되지 않았다. 추가로, 혈압 측정 동안 어떠한 약물-관련 관찰도 주목되지 않았다.
2.5, 7.5 또는 20.0 mg CEP-37440/체중 kg/일 (mg/kg/일)을 투여받은 동물에서 투여 기의 제3일 및 제27일에 또는 회복 기의 제28일에 PR 간격, QRS 지속시간, QT 간격, 보정된 QT (QTc) 간격, RR 간격 또는 심박수에서의 어떠한 약물-관련 변화도 관찰되지 않았다. ECG의 정성적 평가 동안 CEP-37440에 기인하는 어떠한 리듬 이상 또는 정성적 ECG 변화도 관찰되지 않았다.
20.0 mg/kg/일까지의 CEP-37440 투여는 투여 또는 회복 기의 말미에 임상 병리상태 시험 결과에 어떠한 효과도 가지지 않았다.
몇몇의 개별 동물은 투여 기 동안 염증에 부합하는 임상 병리상태 소견 (백혈구 및 절대 호중구 계수, 피브리노겐 및 C-반응성 단백질의 약간 내지 주목할만한 증가 포함)을 가졌지만, 이들 동물은 통상적으로 대조군을 비롯한 모든 군 전체에 산재해 있었다. 이와 관련하여, 이들 소견은, 이들이 용량-관련 패턴이 결여되었고, 종종 시간 경과에 따라 불일치하고 (특히 백혈구 계수에 대해), 일부 대조군 동물을 포함하였기 때문에 약물에 관련되지 않은 것으로 간주되었다.
종결 희생 시에 종결 체중 또는 기관 중량에서 통계적으로 유의한 어떠한 변화도 존재하지 않았다. 예정된 종결 또는 회복 희생 시에 존재하는 모든 기관 중량 변화는 정상적인 생물학적 변화에 기인하였고, 부수적이며 약물에 관련되지 않은 것으로 간주되었다.
종결 또는 회복 희생 시에 어떠한 명확한 약물-관련 육안 소견도 존재하지 않았다. 종결 희생 시에, 7.5 mg/kg/일을 투여받은 모든 (3/3) 수컷 및 20.0 mg/kg/일을 투여받은 2/3 암컷은 위의 점막 표면 상에 1개 내지 몇 개의 적색 내지 암적색 초점을 나타내었다. 20.0 mg/kg/일을 투여받은 1마리의 수컷에서 위의 장막은 몇 개의 적색 영역을 나타내었다. 현미경적 상관관계는 점막 및/또는 점막하/근육 막의 초점성 출혈 (근육 막 내에 평활근 변성이 존재하거나 존재하지 않음)이었다. 1마리의 대조군 암컷에서의 유사한 소견의 존재는 이들 소견이 부수적이고 약물에 관련되지 않음을 제시한다.
종결 또는 회복 희생 시에 어떠한 명확한 약물-관련 현미경적 소견도 존재하지 않았다. CEP-37440을 투여받은 일부 동물에서 위의 점막 또는 장막에서의 육안 소견은 일반적으로 점막 및/또는 점막하/근육 막의 초점성 출혈 (근육 막 내에 평활근 변성이 존재하거나 존재하지 않음)의 현미경적 소견과 상관관계가 있었다. 그러나, 유사하고 보다 중증의 현미경적 소견이 대조 물품을 투여받은 암컷의 위에서 존재하고, 위 평활근 변성이 시노몰구스 원숭이에서 공지된 배경 소견이라는 사실을 고려할 때, 본 연구에서 CEP-37440 투여에 대한 육안 및 현미경적 소견의 연관성은 불확실하다. 다른 현미경적 소견이 1마리 이상의 동물의 위에서 존재하였지만, 이들의 낮은 중증도 및/또는 발생률, 명확한 용량-반응의 결여 또는 대조군 동물에서의 동시적 발생으로 인하여 약물에 대한 이들의 연관성은 불확실하다.
20.0 mg/kg/일을 투여받은 2마리의 암컷의 폐 내 폐포 대식세포의 최소의 초점성 침윤물을 비롯한 종결 또는 회복 희생 시의 모든 나머지 현미경적 소견은 정상적인 생물학적 변화에 기인하며, 부수적인 것으로 간주되었다.
결론적으로, 연속 28일 동안 20 mg/kg/일까지의 용량으로의 시노몰구스 원숭이에의 경구 CEP-37440 투여는 잘 허용되었고, 임의의 용량 수준에서 어떠한 약물-관련 효과도 관찰되지 않았다. 유의하게는, 폐 부종에 대한 어떠한 증거도 존재하지 않았고, CEP-37440은 인간 시험에서 사용하기에 안전한 것으로 결정되었다. CEP-28122와 비교하여 CEP-37440의 보다 우수한 안전성 프로파일, 특히 폐 독성의 결여는 놀랍고 예상치 못한 것이었다.
마우스 내 NPM-ALK 양성 Sup-M2 및 Karpas-299 ALCL 종양 이종이식편 모델에서의 항종양 효능
10 mg/kg 이하, bid에서 CEP-37440으로의 12일 치료 후에 유의한 항종양 활성이 관찰되지 않았고; 30 mg/kg, qd에서 CEP-37440으로의 12일 치료 후에 부분 종양 퇴행이 관찰되었고; 30 mg/kg bid 또는 55 mg/kg, qd에서 CEP-37440으로의 12일 치료 후에 완전하거나 또는 거의 완전한 종양 퇴행이 관찰되었다 (도 4). CEP-37440의 투여는 모든 투여 요법에서 명시적 독성 및 마우스의 유의한 화합물-관련 체중 감소 없이 잘 허용되었다 (도 5). CEP-37440의 용량-관련 수준은 최종 투여 후 2시간에 수집된 혈장 및 종양 용해물에서 밝혀졌다 (도 6). 30 mg/kg, bid 및 55 mg/kg, qd 투여 수준에서 이러한 동물이 종양을 갖지 않기 - 완전한 종양 퇴행 때문에 CEP-37440이 종양에서 관찰가능하지 않음을 주목한다. CEP-37440 수준은 PK/PD 연구에서 단일 경구 투여 후 2시간에서의 수준보다 혈장에서 대략 2-3-배 더 높고, 종양에서 10-배 초과로 더 높으며, 이는 10 및 30 mg/kg에서의 bid 또는 qd 경구 투여 요법으로 혈장 및 종양에서 일부 화합물이 축적되었음을 제시한다.
Karpas-299 종양 이종이식편에서, 30 mg/kg qd에서 유의한 항종양 활성이 관찰되었고, 30 mg/kg bid 또는 55 mg/kg, qd에서 12일 치료 후에 완전하거나 거의 완전한 종양 퇴행이 관찰되었다 (도 7). CEP-37440 투여는 투여 요법에서 명시적 독성 및 유의한 체중 감소 없이 잘 허용되었다 (도 8). CEP-37440의 용량-관련 수준은 최종 투여 후 2시간에 수집된 혈장 및 종양 용해물에서 관찰되었다 (도 9). 50 mg/kg, qd 투여 수준에서 이러한 동물이 종양을 갖지 않기 - 완전한 종양 퇴행 때문에 CEP-37440이 종양에서 관찰가능하지 않음을 주목한다.
경구 투여된 마우스 내 EML4-ALK 양성 (NCI-H2228 및 NCI-H3122) NSCLC 종양 이종이식편에서의 항종양 활성
NCI-H2228 종양 이종이식편 모델에 대해, 12일 동안 30 mg/kg, qd 및 bid 및 55 mg/kg, qd에서 CEP-37440 (HCl 염)으로의 po 치료는 종양 퇴행을 유발하였다 (도 10). NCI-H3122 종양 이종이식편 모델에 대해, 12일 동안 30 mg/kg, bid 또는 55 mg/kg, qd에서 CEP-37440 (HCl 염)으로의 po 치료는 종양 정체 및 부분 퇴행을 유발하였다 (도 11). NCI-H2228 종양 이종이식편에서 관찰된 개선된 항종양 효능은 CEP-37440의 보다 높은 종양 분포로 인한 것일 수 있다 (도 12 및 13). 이들 종양-보유 마우스에서의 치료는 NCI-H3122 종양-보유 마우스에서 30 mg/kg, bid 용량을 제외하고는 (도 15), 명시적 독성 또는 화합물-관련 체중 감소 없이 잘 허용되었다 (도 14 및 15).
55 mg/kg qd에서 NCI-H2228 종양-보유 마우스의 4주의 추가 po 치료는 동물 중 100%에서 지속적인 완전한 종양 퇴행을 제공하였다 (도 16). 추가의 치료는 명시적 독성 및 유의한 체중 감소 없이 잘 허용되었다 (도 17). 치료의 중단 후 40일 동안 마우스 중 100%에서, 어떠한 마우스에서도 종양 재-출현 없이 지속적인 종양 퇴행이 관찰되었다 (도 16).
이것은, 종양이 완전히 근절되고 마우스가 CEP-37440으로의 대략 6주의 치료 후에 효과적으로 "치유"되었음을 제시하기 때문에 중요하다.
호르몬-비의존성 전립선 암종, NSCL 암종 및 HNSC 암종의 인간 종양 이종이식편에서의 항종양 효능 연구
확립된 FAK-양성 PC-3 전립선 종양 이종이식편에서, 36일 기간에 걸친 CEP-37440의 투여는 이 모델에서 등가 용량의 PF-562271의 것 (69% 종양 성장 억제 (TGI) 및 부분적 종양 퇴행의 25% 발생률)과 유사한 프로파일인 55% TGI 및 완전한 종양 퇴행의 10% 발생률을 유발하였다 (도 18). 모든 투여 요법은 명시적 독성 또는 유의한 체중 감소가 관찰되지 않고 잘 허용되었다.
비소세포 폐 (NSCL) 암종
CEP-37440은 연구의 제28일까지 55 mg/kg bid에서 80% TGI 및 종양 퇴행의 60% 발생률 (30% 완전한 종양 퇴행 및 30% 부분적 종양 퇴행) 및 30 mg/kg bid에서 유의한 효능 (60% TGI 및 부분적 종양 퇴행에 대한 증거)을 갖는 용량-관련 항종양 효능을 입증하였다 (도 19). 55 mg/kg bid에서 PF-562271을 사용하여 유의한 항종양 효능 (66% TGI)이 관찰되지만, 제23일에 시작하여 중간 정도의 종양 성장 반동이 관찰되었다. CEP-37440 및 PF-562271의 투여 둘 다는 명시적 독성 또는 유의한 체중 감소가 관찰되지 않고 잘 허용되었다 (도 20). 주목할 것은, 이러한 EML4-ALK 음성 종양 이종이식편 모델에서 CEP-37440으로 달성된 유의한 효능은 EGF-R 인산화 (활성화) 억제의 결과가 아니다.
두경부 편평 세포 암종 (HNSCC)
확립된 디트로이트 562 HNSCC 이종이식편을 보유하는 SCID 마우스에서, CEP-37440 및 PF-562271은 총 FAK 발현 수준에 대한 어떠한 효과도 없이 FAK 활성화의 억제에 대한 명확한 종양 약역학적 효과를 입증하였다 (도 21). 28-일 기간에 걸쳐, CEP-37440 및 PF-562271은 종양 정체, 및 부분적 종양 퇴행의 20% 발생률 (CEP-37440, 30 mg/kg bid) 및 30% 발생률 (CEP-37440 및 PF-562271, 55 mg/kg bid)을 유발하였다. CEP-37440 (두 용량 다)으로 관찰된 효능의 크기는 PF-562271의 55 mg/kg bid로 관찰된 것과 필적할 만하다 (문헌 [Roberts et al., 2008]). 투여 요법은 이환율 또는 사망률이 관찰되지 않고 잘 허용된다.
이들 연구는, 이들이 CEP-37440이 호르몬-비의존성 전립선 암종, NSCL 암종 및 HNSCC - 객관적 종양 반응 포함의 확립된 이종이식편 모델에서 유의한 FAK 약역학적 억제 및 ALK-비의존성 항종양 효능을 입증함을 나타내기 때문에 중요하다.
본원에 기재된 실시예 및 실시양태는 단지 예시적 목적을 위한 것이며, 그에 비추어 다양한 변형 또는 변화가 당업자에게 제시될 것이고, 본원의 취지 및 범주 및 첨부된 특허청구범위의 범위 내에 포함되는 것으로 이해된다. 본원에 인용된 모든 공개물, 특허 및 특허 출원은 모든 목적을 위해 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.

Claims (22)

  1. 하기 화학식 I의 화합물 또는 그의 염.
    <화학식 I>
    Figure pct00016
  2. 제1항에 있어서, 화학식 I의 화합물.
  3. 제1항에 있어서, 산 부가염인 화학식 I의 화합물의 염.
  4. 제1항에 있어서, 트리벤젠술포네이트 염인 화학식 I의 화합물의 염.
  5. 제4항에 있어서, 7.62 ± 0.2도 2θ, 13.11 ± 0.2도 2θ, 13.76 ± 0.2도 2θ 및 14.05 ± 0.2도 2θ로부터 선택된 1개 이상의 피크를 포함하는 XRPD 패턴을 갖는, 화학식 I의 화합물의 트리벤젠술포네이트 염.
  6. 제4항에 있어서, 6.85 ± 0.2도 2θ, 7.62 ± 0.2도 2θ, 8.01 ± 0.2도 2θ, 13.11 ± 0.2도 2θ, 13.76 ± 0.2도 2θ, 14.05 ± 0.2도 2θ 및 14.60 ± 0.2도 2θ로부터 선택된 1개 이상의 피크를 포함하는 XRPD 패턴을 갖는, 화학식 I의 화합물의 트리벤젠술포네이트 염.
  7. 제4항에 있어서, 7.62 ± 0.2도 2θ, 13.11 ± 0.2도 2θ, 13.76 ± 0.2도 2θ, 14.05 ± 0.2도 2θ, 17.10 ± 0.2도 2θ, 17.86 ± 0.2도 2θ 및 18.10 ± 0.2도 2θ로부터 선택된 1개 이상의 피크를 포함하는 XRPD 패턴을 갖는, 화학식 I의 화합물의 트리벤젠술포네이트 염.
  8. 제1항에 있어서, 트리히드로클로라이드 2수화물 염인 화학식 I의 화합물의 염.
  9. 제8항에 있어서, 5.42 ± 0.2도 2θ, 8.86 ± 0.2도 2θ, 14.06 ± 0.2도 2θ, 17.52 ± 0.2도 2θ 및 18.51 ± 0.2도 2θ로부터 선택된 1개 이상의 피크를 포함하는 XRPD 패턴을 갖는, 화학식 I의 화합물의 트리히드로클로라이드 2수화물 염.
  10. 제8항에 있어서, 5.42 ± 0.2도 2θ, 5.91 ± 0.2도 2θ, 8.86 ± 0.2도 2θ, 10.80 ± 0.2도 2θ, 11.79 ± 0.2도 2θ, 14.06 ± 0.2도 2θ, 14.72 ± 0.2도 2θ, 17.02 ± 0.2도 2θ, 17.52 ± 0.2도 2θ 및 18.51 ± 0.2도 2θ로부터 선택된 1개 이상의 피크를 포함하는 XRPD 패턴을 갖는, 화학식 I의 화합물의 트리히드로클로라이드 2수화물 염.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 염 및 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 제약 조성물.
  12. 제11항에 있어서, 정제 또는 캡슐 형태인 제약 조성물.
  13. 대상체에게 치료 유효량의 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항의 화합물 또는 염을 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 ALK- 또는 FAK-매개 상태 또는 장애를 치료하는 방법.
  14. 제13항에 있어서, ALK- 또는 FAK-매개 상태 또는 장애가 역형성 대세포 림프종 (ALCL), 비소세포 폐암 (NSCLC), 신경모세포종, 교모세포종, 전립선암, 편평 세포 암종 (SCC) 및 유방암으로부터 선택된 것인 방법.
  15. 제13항에 있어서, ALK- 또는 FAK-매개 상태 또는 장애가 ALK-양성 ALCL, EML4-ALK-양성 NSCLC, 신경모세포종, 교모세포종, 안드로겐-비의존성 전립선암, 유방암 및 두경부 편평 세포 암종 (HNSCC)으로부터 선택된 것인 방법.
  16. 제13항에 있어서, ALK- 또는 FAK-매개 상태 또는 장애가 ALK-양성 ALCL, EML4-ALK-양성 NSCLC, 신경모세포종, 안드로겐-비의존성 전립선암, 유방암 및 HNSCC로부터 선택된 것인 방법.
  17. 제13항에 있어서, ALK- 또는 FAK-매개 상태 또는 장애가 ALK-양성 ALCL, EML4-ALK-양성 NSCLC, 신경모세포종 및 교모세포종으로부터 선택된 것인 방법.
  18. 제13항에 있어서, ALK- 또는 FAK-매개 상태 또는 장애가 ALK-양성 ALCL, EML4-ALK-양성 NSCLC 및 신경모세포종으로부터 선택된 것인 방법.
  19. 제13항에 있어서, ALK- 또는 FAK-매개 상태 또는 장애가 ALK-양성 ALCL 및 EML4-ALK-양성 NSCLC로부터 선택된 것인 방법.
  20. 제13항에 있어서, ALK- 또는 FAK-매개 상태 또는 장애가 안드로겐-비의존성 전립선암, 유방암 및 HNSCC로부터 선택된 것인 방법.
  21. 제13항에 있어서, ALK- 또는 FAK-매개 상태 또는 장애가 ALK-매개 상태 또는 장애인 방법.
  22. 제13항에 있어서, ALK- 또는 FAK-매개 상태 또는 장애가 FAK-매개 상태 또는 장애인 방법.
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