KR20140112495A - 인플루엔자 a 바이러스 특이적 항체 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 다중 인플루엔자 A 바이러스 서브타입에 특이적인, 분리된, 합성 또는 재조합 항체 및 이것의 기능적 부분에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 인플루엔자 A 바이러스 감염의 진단 및 인플루엔자 A 바이러스 감염의 증상을 적어도 부분적으로 치료 및 완화하기 위한 의약 및/또는 예방적 제제로서의 용도에 관한 것이다.
Description
본 발명은 생물학, 면역학 및 의학 분야에 관련된 것이다. 특히, 본 발명은 인플루엔자 A 바이러스 특이적 항체에 관한 것이다.
인플루엔자는 3가지 유형의 인플루엔자 바이러스, 유형 A, B 및 C에 의하여 야기될 수 있는 조류 및 포유류의 감염성 질환이다. 인플루엔자 바이러스는 오르토믹소바이러스(Orthomyxoviridae) 류에 속하는 RNA 바이러스이다. 인플루엔자 바이러스는 9개의 단백질(인플루엔자 C)을 암호화하는 7개의 음성 단일-스트랜드 RNA-단편 또는 11개의 단백질(인플루엔자 A 및 B)를 암호화하는 8개의 음성 단일-스트랜드 RNA-단편로 구성되는 RNA 바이러스이다. 인플루엔자 바이러스는 매년 수백만의 사람들을 감염시킨다. 인플루엔자 증상은 일반 감기, 예를 들면 고열, 두통, 오한, 근육통 및 후두염에 비견할만한 증상을 포함한다. 그러나, 인플루엔자는 생명을 위협하는 합병증, 예를 들면 폐렴을 유도할 수 있고, 유아, 고령자 및 면역력이 약화되거나 또는 만성 질환자와 같은 고위험군에서 사망에 이르게 할 수 있다.
인플루엔자 A 바이러스는 외피 단백질 발현에 기초하여 다양한 유형으로 하위 분류될 수 있다. 최근에 16개 헤마글루티닌(HA) 항원형(H1-H16) 및 9개 뉴라미디나아제(neuraminidase, NA) 항원형(N1-N9)을 동정하였고, 이들은 인플루엔자 바이러스(예를 들면, H1N1)으로 분류되하는데 사용되었다. HA는 2개의 서브유닛, HA1 및 HA2로 구성되며, 이황화 결합에 의하여 연결된다. HA는 숙주 프로테아제에 의하여 절단되어 감염성이 되도록 2개의 폴리펩티드 HA1 및 HA2 를 생산한다. HA1의 주요 부분은 HA의 둥근 머리 부분을 형성하고, HA2는 HA의 줄기 부분을 주로 형성한다. 둥근 머리 부분은 다양한 HA 서브타입 간에 상당히 다양하지만, 줄기 부분은 보존성이 강하다. HA는 숙주 세포 진입을 위하여 필요하다. 절단 후에, HA 폴리펩티드의 노출된 N-말단이 숙주 세포막과 함께 바이러스 막의 융합을 매개하는 역할을 하여, 바이러스가 숙주 세포를 감염시킬 수 있게 된다. NA는 새로운 비리온(virion)의 방출에 필요하다. NA는 숙주 세포의 당단백질의 말단 시알산 잔기의 가수분해를 촉매함으로써 HA가 이러한 단백질에 결합하는 것을 방해한다. NA는 따라서 세포로부터 바이러스의 방출을 용이하게 하고, 결과적으로 바이러스의 전파를 가능하게 한다. 도1에서는, 인플루엔자 바이러스의 도면이 나타나 있다.
인플루엔자 바이러슨 감염은 겨울에 가장 유행한다. 매년 인플루엔자 유행시 5-15%의 인구가 상기도 감염으로 고통받는다. 입원 및 사망은 주로 고위험군(유아, 노령자, 면역약화자 및 만성질환자)에서 발생한다. 매년 유행성 전염(epidemic)은 3백만 내지 5백만의 심각한 질환 케이스를 만드는 것으로 사료되고, 전세계적으로 매년 25,000 내지 500,000 명의 사망을 일으킨다. 미국 경제에 미치는 인플루엔자 유행성 전염의 추정 비용은 보건 비용 및 상실 생산량으로부터 매년 710억 내지 1670억이다. 계절 인플루엔자 백신은 인플루엔자 바이러스의 항원연속변이(antigenic drift) 때문에 매년 개발되어야 한다. 인플루엔자 게놈에서 돌연변이는 HA 및 NA 단백질에서 항원 변화를 야기하는 아미노산 치환(들)을 유도할 수 있으며, 이는 숙주의 면역원의 면역 탈출을 야기한다. 그래서, 인플루엔자 균주는 높은 상동성을 갖지만, 특정 백신이 동일한 인플루엔자 A 서브타입과 다른 균주에 대하여 보호할 수 없다. 또한, 새롭게 개발된 인플루엔자 백신은 내년의 우성 서브타입의 예측에 기초하기 때문에, 백신은 실제로 발생하는 인플루엔자 서브타입에 대하여 항상 보호가 되지는 못한다.
게다가, 항원연속변이라 불리는 과정은 다양한 인플루엔자 바이러스 서브타입으로부터 HA 및 NA의 조합을 통해 신규한 바이러스 서브타입이 형성되는 것이다. 인간 및 조류 및/또는 돼지 인플루엔자의 돌연변이 및 유전적 혼합은 판데믹(pandemic)을 일으킬 수 있다. 세계보건기구(WHO)에 따르면, 판데믹은 3개의 조건이 만족되는 경우에 시작될 수 있는데, 즉, 인구에 새로운 질병의 출현, 인간을 감염시켜 심각한 질환을 일으키는 에이전트, 및 인간 사이에 쉽게 전파되어 지속가능한 에이전트이다. 과거에, 여러번의 판데믹 인플루엔자 발생이 일어났는데, 예를 들면 1889년 아시아 판데믹(H2N8), 1918년 스페인 독감 판데믹(H1N1), 1957년 아시아 독감 판데믹(H2N2), 1968 홍콩 독감(H3N2) 및 2009년 판데믹(H1N1)이다. 이러한 판데믹은 수백만의 사람들의 사망의 원인이 되었다.
항바이러스 약물은 인플루엔자의 예방 및 치료에 효과적일 수 있다: 항바이러스 약물의 2종류가 사용가능하다: M2 단백질 저해제 및 뉴라미다제 저해제이다. 그러나, 이러한 저해제에 대한 내성을 나타내는 다수의 인플루엔자 종이 증가하고 있다.
인플루엔자 감염의 예방 및 치료에 대한 또다른 접근법은 인플루엔자 단백질에 대한 항체의 투여가 있다. 교차-중화된 항체(cross-neutralizing antibodies)는 계통발생군 1에 속하는 인플루엔자 바이러스로 설명되어 왔다(Throsby et al. PLoS ONE, 2008 & Sui et al. Nature structural & molecular biology, 2009). 이러한 항체들은 HA 단백질의 줄기에서 보존 영역을 인식하고, 마우스에서 인플루엔자 감염을 치료할 수 있다. 마우스 모노클론 항체(mAb)는 HA1 서브유니트의 수용체 결합 도메인을 포함하는 영역에서 보존성 에피토프를 인식하는 것으로 설명되었다. 이 항체는 H1N1, H2N2 및 H3N2 인플루엔자 바이러스를 중화시킨다(Yoshida et al. PLoS Pathogen. 2009). 그러나, 도주 돌연변이체(escape mutant)가 발생되는 것으로 보고되었다. 이 항체는 인간에 사용되는 경우 부작용이 발생할 수 있는 문제점을 갖는 마우스 항체이다.
WO 2009/115972는 H1N1 및 H3N2에 대한 중화 활성을 갖는 인간 모노클론 항체를 개시한다. 그러나, H1N1 및 H3N2에 대한 중화 활성은 불충분하고, IC50 값은 약 10 ㎍/㎖를 갖는다. WO 2010/010466 에서, 인간 항체, FI6는 H5N1(그룹 1) 및 H7N1(그룹 2)슈도타입 인플루엔자 바이러스 및 H1N1 및 H3N2 감염성 바이러스를 중화시키는 것으로 설명된다. 또한, 감염성 바이러스 모두에 대하여 중화 활성은 불충분하고, IC50 값은 2 내지 12.5 ㎍/㎖를 갖는다. WO 2010/130636 에 개시된 인간 항체는 H3 및 H7 교차-결합 활성을 갖는다. H3 및 H7은 모두 그룹 2 인플루엔자 바이러스이다. 이러한 항체의 일부는 또한 H1(그룹 1)에 결합할 수 있다. 그러나, 이러한 항체 어느 것도 그룹 1 및 그룹 2 모두의 인플루엔자 바이러스를 중화시킬 수 없다. 결과적으로, 항체의 칵테일이 그룹 1 및 그룹 2의 인플루엔자 서브타입 모두의 중화에 필요하다. 또한, H3 및 H7 인플루엔자 바이러스 서브타입을 중화시킬 수 있는 항체의 H3N2 중화 활성은 1 ㎍/㎖ 이상이다. 예를 들면 실시예 및 표 7에서 나타난 바와 같이, WO 2010/130636에 개시된 항체 CR8020은 H3N2 A/swine/Neth/St.Oedenrode/96에 대한 중화 활성이 불충분하고, IC50 값은 15 ㎍/㎖ 이상을 갖는다.
이러한 이유로 인하여, 추가적인 인플루엔자 A 바이러스 항체 및 인플루엔자 A 바이러스 감염에 대한 치료법이 요구된다.
본 발명의 목적은 다중 인플루엔자 A 바이러스 서브타입에 특이적인 추가적 항체, 또는 이러한 항체의 기능적 등가물 및 이러한 항체를 포함하는 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다. 바람직하게는, 항체는 높은 인플루엔자 바이러스 중화 활성을 갖는 것이다. 또한, 바람직하게는, 항체는 적어도 2개의 인플루엔자 바이러스 서브타입을 중화(neutralizing)할 수 있는 것이다.
본 발명은 다중 인플루엔자 A 바이러스 서브타입에 특이적인 항체를 제공한다. 실시예에서 설명하는 바와 같이, 상기 항체는 적어도 2개의 인플루엔자 A 바이러스 서브타입, 바람직하게는 그룹 1 및 그룹 2 인플루엔자 A 바이러스 서브타입 모두에 결합할 수 있는 것이다. 또한, 상기 항체는 높은 인플루엔자 바이러스 A 중화 활성을 갖는 것이다.
본 발명은 일 양태로서, 인 비트로(인 비트로) H3N2 인플루엔자 A 바이러스 중화 활성을 갖고, IC50 값이 1 ㎍/㎖ 미만, 바람직하게는 0.7 ㎍/㎖ 미만, 더욱 바람직하게는 0.3 ㎍/㎖ 이하, 더욱 바람직하게는 0.2 ㎍/㎖ 미만을 갖는, 분리된 합성 또는 재조합 항체 또는 이것의 기능적 부분 또는 면역글로불린 체인 또는 이것의 기능적 등가물을 제공하며, 상기 항체 또는 기능적 부분 또는 면역글로불린 체인 또는 기능적 등가물이 적어도 하나의 다른 인플루엔자 A 바이러스 서브타입에 특이적으로 결합할 수 있는 것을 특징으로 한다. 상기 H3N2 인플루엔자 A 바이러스는 바람직하게는 H3N2 A/Ned/177/2008, H3N2 HKX-31 또는 H3N2 A/swine/Neth/St.Oedenrode/96 종을 포함하고, 가장 바람직하게는 H3N2 A/Ned/177/2008 종을 포함한다.
H3N2 인플루엔자 바이러스는 인간을 감염시킬 수 있는 인플루엔자 바이러스 중 하나이다. H3N2는 인간에서 인간으로 전이될 수 있다. 따라서 H3N2 인플루엔자 바이러스를 중화시킬 수 있는 항체는 인간서의 적용에 특히 중요하다.
또다른 바람직한 구체예로서, 본 발명은 인 비트로 H7N1 인플루엔자 A 바이러스 중화 활성을 갖고, IC50 값이 5.0 ㎍/㎖ 미만, 바람직하게는 4.0 ㎍/㎖ 미만, 더욱 바람직하게는 1.0 ㎍/㎖ 미만, 더욱 바람직하게는 약 0.6 ㎍/㎖ 이하를 갖는, 분리된 합성 또는 재조합 항체 또는 이것의 기능적 부분 또는 면역글로불린 체인 또는 이것의 기능적 등가물을 제공한다. 상기 H7N1 인플루엔자 A 바이러스는 바람직하게는 H7N1 A/ck/Italy/1067/99 종을 포함한다. 특히 바람직한 구체예로서, 상기 항체 또는 기능적 부분 또는 면역글로불린 체인 또는 기능적 등가물은 적어도 하나의 다른 인플루엔자 A 바이러스 서브타입에 특이적으로 결합할 수 있으므로, 다수의 종에 대한 보호가 가능할 수 있다. 최근까지 H7N1의 전파는 조류에서 인간에 대한 사례가 보고된 바가 없으나, 돌연변이에 의하여 인간에 대한 바이러스 감염이 일어날 수 있을 것이다.
또다른 바람직한 구체예로서, 본 발명은 인 비트로 H7N7 인플루엔자 A 바이러스 중화 활성을 갖고, IC50 값이 0.5 ㎍/㎖ 미만, 바람직하게는 약 0.4 ㎍/㎖ 이하, 더욱 바람직하게는 약 0.2 ㎍/㎖ 이하, 가장 바람직하게는 약 0.1 ㎍/㎖ 이하를 갖는, 분리된 합성 또는 재조합 항체 또는 이것의 기능적 부분 또는 면역글로불린 체인 또는 이것의 기능적 등가물을 제공한다. 상기 H7N7 인플루엔자 A 바이러스는 바람직하게는 H7N7 A/ck/Neth/621557/03 종을 포함한다. 특히 바람직한 구체예로서, 상기 항체 또는 기능적 부분 또는 면역글로불린 체인 또는 기능적 등가물은 적어도 하나의 다른 인플루엔자 A 바이러스 서브타입에 특이적으로 결합할 수 있으므로, 다수의 종에 대한 보호가 가능할 수 있다. H7N7 인플루엔자 바이러스는 조류에서 인간으로의 전파를 따라 인간을 감염시킬 수 있다. 따라서 H7N7 인플루엔자 바이러스 중화가능한 항체는 인간에서의 적용이 특히 중요하다.
또다른 바람직한 구체예로서, 본 발명은 인 비트로 H1N1 인플루엔자 A 바이러스 중화 활성을 갖고, IC50 값이 5.0 ㎍/㎖ 미만, 바람직하게는 4.0 ㎍/㎖ 미만, 더욱 바람직하게는 3.0 ㎍/㎖ 미만, 더욱 바람직하게는 약 2.7 ㎍/㎖ 이하를 갖는, 분리된 합성 또는 재조합 항체 또는 이것의 기능적 부분 또는 면역글로불린 체인 또는 이것의 기능적 등가물을 제공한다. 상기 H1N1 인플루엔자 A 바이러스는 바람직하게는 H1N1 A/Neth/601/2009 종을 포함하고, 가장 바람직하게는 H1N1/Hawaii/31/2007 종을 포함한다. 특히 바람직한 구체예로서, 상기 항체 또는 기능적 부분 또는 면역글로불린 체인 또는 기능적 등가물은 적어도 하나의 다른 인플루엔자 A 바이러스 서브타입에 특이적으로 결합할 수 있으므로, 다수의 종에 대한 보호가 가능할 수 있다. H1N1 인플루엔자 바이러스는 인간에서 인간으로의 전파를 따라 인간을 감염시킬 수 있다. 따라서 H1N1 인플루엔자 바이러스 중화가능한 항체는 인간에서의 적용이 특히 중요하다.
또다른 바람직한 구체예로서, 본 발명은 인 비트로 H5N1 인플루엔자 A 바이러스 중화 활성을 갖고, IC50 값이 5.0 ㎍/㎖ 미만, 바람직하게는 4.0 ㎍/㎖ 미만, 더욱 바람직하게는 3.0 ㎍/㎖ 미만, 더욱 바람직하게는 2.0 ㎍/㎖ 미만, 더욱 바람직하게는 약 1.3 ㎍/㎖ 이하를 갖는, 분리된 합성 또는 재조합 항체 또는 이것의 기능적 부분 또는 면역글로불린 체인 또는 이것의 기능적 등가물을 제공한다. 상기 H5N1 인플루엔자 A 바이러스는 바람직하게는 H5N1 A/turkey/Turkey/05 종을 포함한다. 특히 바람직한 구체예로서, 상기 항체 또는 기능적 부분 또는 면역글로불린 체인 또는 기능적 등가물은 적어도 하나의 다른 인플루엔자 A 바이러스 서브타입에 특이적으로 결합할 수 있으므로, 다수의 종에 대한 보호가 가능할 수 있다. H5N1 인플루엔자 바이러스는 인간에서 인간으로의 전파를 따라 인간을 감염시킬 수 있다. 따라서 H5N1 인플루엔자 바이러스 중화가능한 항체는 인간에서의 적용이 특히 중요하다.
용어 "항체의 기능적 부분(functional part of an antibody)"은 본원에서 반드시 상기 항체와 양에서 공통된 것이 아니며, 상기 항체의 종류에서 적어도 하나의 공통된 성질을 갖는 부분으로서 정의된다. 상기 기능적 부분은 동일한 양은 아니지만, 상기 항체와 동일한 항원에 결합할 수 있다. 항체의 기능적 부분은 바람직하게는 단일 도메인 항체, 단쇄 항체, 나노바디, 유니바디, 단쇄 가변성 단편(scFv), Fab 단편 또는 F(ab')2 단편을 포함한다.
항체의 기능적 부분은 또한 항체를 변경시켜 제조됨으로써 제조된 화합물의 적어도 하나의 성질-바람직하게는 항체-결합 성질-이 동일한 종류인 것이 필수적이지만, 반드시 동일한 양일 필요는 없다. 이는 다양한 방식으로 제조되며, 예를 들면 보존성 아미노산 치환을 통하여 제조되고, 이러한 방식은 아미노산 잔기가 일반적으로 유사한 성질(크기, 소수성 등)을 갖는 또다른 잔기에 의하여 치환되어 전체 기능이 심각하게 영향을 받지는 않는다.
용어 "면역글로불린 체인의 기능적 등가물(functional equivalent of an immunoglobulin chain)"은 본원에서 인공 결합 화합물로 정의되며, 면역글로불린 체인의 적어도 하나의 CDR 서열을 포함한다.
본원에서 사용된 용어 "중화 활성(neutralizing activity)"은 숙주 세포를 감염시킬 수 있는 인플루엔자 바이러스 능력의 저해 또는 감소로서 정의된다. 중화 활성은 당업계에 공지된 임의의 방법에 의하여 측정될 수 있다. 이러한 방법 중 하나가 본 명세서의 실시예에 설명되어 있으며, 모노클론 항체에 의하여 배양 세포의 인플루엔자 감염의 저해와 관련되어 있다. 이 방법에서, 인플루엔자 바이러스는 항체와 함께 혼합되어 있고, 세포에 1시간 배양 후 첨가된다. 24시간후 세포의 인플루엔자 감염이 표적 세포의 인플루엔자의 핵 단백질의 발현을 검색함으로써 측정될 수 있다. 능력이 있는 항체는 표적 세포에서 인플루엔자 감염 및 연이은 인플루엔자 핵 단백질 발현을 저해 또는 감소시킬 것이다. 용어 "IC50"은 당업계에 공지된 용어로서, 숙주 세포의 인플루엔자 A 바이러스 감염성을 반으로 저해 또는 감소시키기 위하여 필요한 인플루엔자 A 중화 항체의 농도를 의미한다.
용어 "그룹 2 서브타입 인플루엔자 A 바이러스"는 그룹 2 인플루엔자 A 바이러스의 HA 항원형(serotype)을 갖는 인플루엔자 A 바이러스이다. 최근, H3, H4, H7, H10, H14 및 H15 항원형을 갖는 바이러스는 그룹 2 인플루엔자 A 바이러스이다. 용어 "그룹 1 서브타입 인플루엔자 A 바이러스"는 그룹 1 인플루엔자 A 바이러스의 HA 항원형을 갖는 인플루엔자 A 바이러스이다. 최근, H1, H2, H5, H6, H8, H9, H11, H12, H13 및 H16 항원형을 갖는 바이러스는 그룹 1 인플루엔자 A 바이러스이다.
본원에서 사용된 용어 "특이적 결합"은 항체와 이것의 에피토프 간의 상호작용을 의미하는 것이며, 상기 항체가 상기 에피토프에 우선적으로 결합하는 것을 지칭하는 것이다. 따라서 항체는 다른 항원 또는 아미노산 서열에 비특이적으로 결합할 수 있지만, 이것의 에피토프에 대한 상기 항체의 결합 친화도는 임의의 다른 항원 또는 아미노산 서열에 대한 상기 항체의 비특이적 결합 친화도보다 상당히 높다.
본원에서 사용된 용어 "인플루엔자 A 바이러스 서브타입"은 다양한 인플루엔자 A 바이러스를 의미하는 것으로서, 예를 들면, H1N1,H1N2, H1N7, H2N2, H3N2, H3N8, H4N8, H5N1, H5N2, H5N9, H6N2, H6N5, H7N2, H7N3, H7N7, H8N4, H9N2, H10N7, H11N6, H12N5 또는 H13N6이다.
본원에서 사용된 용어 "인플루엔자 A 바이러스 종"은 동일한 서브타입에 속하는 다양한 인플루엔자 A 바이러스를 의미하며, 예를 들면, H3N2 A/Ned/177/2008, H3N2 A/Wyoming/03/2003 및 H3N2 A/Panama/2007/99이다.
또한, 본원에서 본 발명에 따른 분리된 합성 또는 재조합 항체 또는 이것의 기능적 부분 또는 면역글로불린 체인 또는 이것의 기능적 등가물은 "본 발명에 따른 항체"로 지칭한다.
본 발명에 따른 바람직한 인플루엔자 A 중화 항체는 AT10_004, AT10_002 및 AT10_001이며, 이러한 항체는 특히 원하는 교차-결합 및/또는 중화 특성을 갖는 것으로 알려져 있다. AT10_004, AT10_002 및 AT10_001은 표 1에 나타난 서열번호 31, 33 및 34의 중쇄 서열 및 표 1에 나타난 서열번호: 36, 38 및 39의 경쇄 서열을 각각 갖는다. 이러한 바람직한 항체의 중쇄 및 경쇄 CDR 서열은 또한 표 1에 나타나 있다. 서열번호 1, 3 및 4는 각각 항체 AT10_004, AT10_002 및 AT10_001의 중쇄 CDR1 서열이고, 서열번호 6, 8 및 9는 이러한 항체의 중쇄 CDR2 서열이고, 서열번호 11, 13 및 14는 이러한 항체의 중쇄 CDR3 서열이다. 서열번호 16, 18 및 19는 각각 항체 AT10_004, AT10_002 및 AT10_001의 경쇄 CDR1 서열이고, 서열번호 21, 23 및 24는 이러한 항체의 경쇄 CDR2 서열이고, 서열번호 21, 28 및 29는 이러한 항체의 경쇄 CDR3 서열이다
항체 AT10_004는 그룹 1 및 그룹 2 인플루엔자 A 바이러스 모두에 특이적으로 결합할 수 있기 때문에 바람직한 항체이다. 실시예에 나타난 바와 같이, 항체 AT10_004는 적어도 H1, H3 및 H7 서브타입 인플루엔자 A 바이러스에 교차-결합 활성을 갖는다. AT10_004는 다양한 재조합 HA 서브타입 및 인플루엔자 A 바이러스에 결합할 수 있다. 이것은 적어도 인간 인플루엔자 H1N1(A/Hawaii/31/2007) 감염된 세포 및 인간 인플루엔자 H3N2(A/Netherlands/177/2008) 감염된 세포, 및 인간 인플루엔자 H1N1(A/New Caledonia/20/1999), H3N2(A/Wyoming/03/2003, A/Aichi/2/1968 및 A/Wisconsin/67/2005), H7N7(A/Netherlands/219/2003) 및 H9N2(A/HongKong/1073/1999)의 HA에 결합할 수 있다. 항체 AT10_004는 또한 인간 인플루엔자 바이러스의 HA 및 인간 인플루엔자 바이러스 감염된 세포를 인식할 뿐만 아니라, 비인간 동물, 즉 칠면조 H5N1 (A/Turkey/Turkey/2004), 돼지 H3N2 (A/swine/St.oedenrode/1996), 닭 H7N1 (A/Ch/Italy/1067/1999) 및 닭 H7N7 (A/Ch/Neth/621557/2003) 으로 감염된 세포를 감염시키는 일부 인플루엔자 바이러스로 감염된 세포를 인식할 수 있고, 돼지 H4N6 (A/Swine/Ontario/01911-1/1999)의 HA 및 오리 H15N8 (A/duck/AUS/341-1983)의 HA에 결합할 수 있기 때문에 바람직하다. 또한, 항체 AT10_004는 H3N2 바이러스에 대한 높은 중화 활성을 갖고, 인 비트로 H3N2 A/Ned/177/2008 중화 활성을 가지며, 그 IC50 값은 약 0.17 ㎍/㎖을 갖고, 인 비트로 H3N2 A/swine/Neth/St. Oedenrode/96 중화 활성을 갖고, 그 IC 50 값은 약 2.3 ㎍/㎖을 가지며, 심지어, 인 비트로 H3N2 HKX-31 중화 활성을 갖고 그 IC 값은 약 0.017 ㎍/㎖을 갖는다. 항체 AT10_004는 또한 H3N2 바이러스(인플루엔자 A/HKx-31) 인 비보에 대한 보호 활성을 갖는다. 항체 AT10_004는 또한 H7N1 바이러스에 대한 특히 높은 중화 활성을 갖고, 인 비트로 H7N1 A/ck/Italy/1067/99 중화 활성을 가지며, IC50 값이 약 0.6 ㎍/㎖을 갖는다. 표 7에 나타난 바와 같이, H3N2 A/swine/Neth/St.Oedenrode/96에 대한 항체 AT10_004의 보호효과에 비하여, 항체 H7N1 A/cK/Italy/1067/99에 대한 AT10_004의 보호 효과는 매우 높으며, 이는 낮은 IC50 값을 의미한다. 항체 AT10_004는 또한 H7N7 바이러스에 대한 특히 높은 중화 활성을 갖고, 인 비트로 H7N7 A/ck/Neth/621557/03 중화 활성을 가지며, IC50 값이 약 0.2 ㎍/㎖을 갖는다. 항체 AT10_004는 HA 단백질의 보존된 줄기 영역에서 에피토프에 결합하기 때문에 더욱 바람직하다. 이러한 영역에서 존재하는 제한된 변화로 인하여, 에피토프가 줄기 영역에 위치하는 항체는 넓은 범위의 인플루엔자 바이러스에 결합할 수 있다. 따라서 일 구체예는, 서열번호: 1, 서열번호: 6, 서열번호: 11, 서열번호: 16, 서열번호: 21 및 서열번호: 26, 또는 이것에 70 % 이상 동일한 서열을 포함하는, 항체 AT10_004의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열 및 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 갖는 항체 또는 기능적 부분 또는 면역글로불린 체인 또는 기능적 등가물을 제공한다.
또다른 구체예로서, 서열번호: 3, 서열번호: 8, 서열번호: 13, 서열번호: 18, 서열번호: 23 및 서열번호: 28, 또는 이것에 70 % 이상 동일한 서열을 포함하는, 항체 AT10_002의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열 및 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 항체 또는 기능적 부분 또는 면역글로불린 체인 또는 기능적 등가물이 제공된다. 항체 AT10_002는 적어도 H3 및 H7 서브타입 인플루엔자 A 바이러스에 교차-결합 활성을 갖기 때문에 바람직한 항체이다. AT10_002는 다양한 재조합 HA 서브타입 및 인플루엔자 A 바이러스에 결합할 수 있다. 이것은 적어도 인간 인플루엔자 H3N2(A/Netherlands/177/2008) 감염된 세포, 및 인간 인플루엔자 H3N2 (A/Wyoming/03/2003, A/Aichi/2/1968 및 A/Wisconsin/67/2005) 및 H7N7 (A/Netherlands/219/2003)의 HA에 결합할 수 있다. 항체 AT10_002는 또한 인간 인플루엔자 바이러스의 HA 및 인간 인플루엔자 바이러스 감염된 세포를 인식할 수 있을 뿐만 아니라, 수개의 인플루엔자 바이러스 감염된 비인간 동물, 즉 돼지 H3N2(A/swine/St.oedenrode/1996), 닭 H7N1 (A/Ch/Italy/1067/1999) 및 닭 H7N7 (A/Ch/Neth/621557/2003)에 감염된 세포를 인식할 수 있고, 오리 H10N3 (A/duck/Hong Kong/786/1979)의 HA 및 오리 H15N8 (A/duck/AUS/341-1983)의 HA에 결합할 수 있기 때문에 바람직하다. 또한, 항체 AT10_002는 적어도 하나의 H3 서브타입 인플루엔자 A 바이러스를 중화한다. 항체 AT10_002는 H3N2 바이러스에 대한 높은 중화 활성을 갖고, 또한 인 비트로 H3N2 A/Ned/177/2008 중화 활성을 갖고, IC50값이 약 0.18 ㎍/㎖를 갖고, 또한 인 비트로 H3N2 A/swine/Neth/St.Oedenrode/96 중화 활성을 갖고, IC50 값이 약 0.3 ㎍/㎖를 갖고, 또한 인 비트로 H3N2 NKX-31 중화 활성을 갖고, IC50 값이 약 0.25 ㎍/㎖를 갖기 때문에 바람직하다. AT10_002는 또한 H3N2 바이러스 (인플루엔자 A/HKx-31) 인 비보에 대한 보호 활성을 갖는다. 실시예에 나타난 바에 따르면, 항체 AT10_002는 시험된 항체의 최고의 보호 활성을 제공하므로 특히 바람직하다. 항체 AT10_002는 또한 H7N1 바이러스에 대한 높은 중화 활성을 갖고, 인 비트로 H7N1 A/ck/Italy/1067/99 중화 활성을 가지며, IC50 값이 약 3.6 ㎍/㎖를 갖는다. 항체 AT10_002는 또한 H7N7 바이러스에 대한 특히 높은 중화 활성을 갖고, 인 비트로 H7N7 A/ck/Neth/621557/03 중화 활성을 가지며, 그 IC50 값이 약 0.1 ㎍/㎖를 갖는다. 항체 AT10_002는 또한 HA 단백질의 보존된 줄기 영역에서 에피토프에 결합하기 때문에 바람직하다. 이 영역에서 나타나는 제한된 변형으로 인하여, 에피토프가 줄기 영역에 위치하는 항체는 다양한 인플루엔자 바이러스에 결합할 수 있다.
또다른 구체예로서, 서열번호: 4, 서열번호: 9, 서열번호: 14, 서열번호: 19, 서열번호: 24 및 서열번호: 29, 또는 이것에 70 % 이상 동일한 서열을 포함하는, 항체 AT10_001의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열 및 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 항체 또는 기능적 부분 또는 면역글로불린 체인 또는 기능적 등가물이 제공된다. 항체 AT10_001은 적어도 H3 및 H7 서브타입 인플루엔자 A 바이러스에 교차-결합 활성을 갖기 때문에 바람직한 항체이다. AT10_001은 다양한 재조합 HA 서브타입 및 인플루엔자 A 바이러스에 결합할 수 있다. 이것은 적어도 인간 인플루엔자 H1N1(A/Nethe/602/2009) 감염된 세포, 인간 인플루엔자 H3N2(A/Netherlands/177/2008) 감염된 세포 및 인간 인플루엔자 H3N2 (A/Wyoming/03/2003, A/Aichi/2/1968 및 A/Wisconsin/67/2005) 및 H7N7 (A/Netherlands/219/2003)의 HA에 결합할 수 있다. 항체 AT10_001은 또한 인간 인플루엔자 바이러스의 HA 및 인간 인플루엔자 바이러스 감염된 세포를 인식할 수 있을 뿐만 아니라, 수개의 인플루엔자 바이러스 감염된 비인간 동물, 즉, 닭 H7N1 (A/Ch/Italy/1067/1999) 및 닭 H7N7(A/Ch/Neth/621557/2003)에 감염된 세포를 인식할 수 있고, 돼지 H4N6(A/Swine/Ontario/019111/1999)의 HA에 결합할 수 있기 때문에 바람직하다. 또한, 항체 AT10_001은 적어도 하나의 H3 서브타입 인플루엔자 A 바이러스를 중화한다. 항체 AT10_001은 H3N2 바이러스에 대한 높은 중화 활성을 갖고, 또한 인 비트로 H3N2 A/Ned/177/2008 중화 활성을 갖고, 그 IC50값이 약 0.64 ㎍/㎖를 갖고, 또한 인 비트로 H3N2 HKX-31 중화 활성을 갖고, 그 IC50 값이 약 2.1 ㎍/㎖를 갖기 때문에 바람직하다. AT10_001은 또한 H3N2 바이러스 (인플루엔자 A/HKx-31) in vivo에 대한 보호 활성을 갖는다. 항체 AT10_001은 H7N7 바이러스에 대한 특히 높은 중화 활성을 갖고, 인 비트로 H7N1 A/ck/Neth/621557/03 중화 활성을 가지며, 그 IC50 값이 약 0.4 ㎍/㎖를 갖는다. 항체 AT10_001은 또한 HA 단백질의 보존된 줄기 영역에서 에피토프에 결합하기 때문에 바람직하다. 이 영역에서 나타나는 제한된 변형으로 인하여, 에피토프가 줄기 영역에 위치하는 항체는 다양한 인플루엔자 바이러스에 결합할 수 있다.
바람직하게는, 본 발명에 따른 인플루엔자 A 중화 항체는 표 1에 도시된 서열에 75% 이상, 더욱 바람직하게는 80% 이상, 더욱 바람직하게는 85% 이상, 더욱 바람직하게는 86% 이상, 더욱 바람직하게는 87% 이상, 더욱 바람직하게는 88% 이상, 더욱 바람직하게는 89% 이상, 더욱 바람직하게는 90% 이상, 더욱 바람직하게는 91% 이상, 더욱 바람직하게는 92% 이상, 더욱 바람직하게는 93% 이상, 더욱 바람직하게는 94% 이상, 더욱 바람직하게는 95% 이상, 더욱 바람직하게는 96% 이상, 더욱 바람직하게는 97% 이상, 더욱 바람직하게는 98% 이상, 더욱 바람직하게는 99% 이상 동일한 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열 및 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함한다.
본원에 사용된 용어 "AT10_004", "AT10_002" 및 "AT10_001"은 지정된 중쇄 및 경쇄 서열을 갖는 모든 항체 및 기능적 등가물, 예를 들면 분리된 및/또는 정제된 또는 재조합적으로 생산된 것을 포함한다.
당업자에게 공지된 바와 같이, 항체의 중쇄는 면역글로불린 분자를 구성하는 2 타입의 체인 중 더 큰 부분이다. 중쇄는 불변부 및 가변부를 포함하고, 여기서 가변부는 항원 결합에 관여한다. 항체의 경쇄는 면역글로불린 분자를 구성하는 2 타입의 체인 중 더 작은 부분이다. 경쇄는 불변부 및 가변부를 포함한다. 가변부는 종종 중쇄의 가변부와 함께 항원 결합에 관여한다.
상보성 결정 영역(CDRs)은 중쇄 가변부 및 경쇄 가변부에 존재하는 초가변 영역(hypervariable regions)이다. 전체 항체에 있어서, 항체에서 중쇄의 CDR 및 연결된 경쇄가 함께 항원-결합 부위를 형성한다.
표 1에 기재된 항체를 기초로, 인플루엔자 A 바이러스를 중화할 수 있고 특이적인, 표 1에 기재된 면역글로불린 가변부의 적어도 하나의 CDR 서열을 포함하는 면역글로불린 체인 또는 이것의 기능적 등가물을 제조할 수 있다. 또한, 표 1에 기재된 면역글로불린 가변부의 적어도 하나의 CDR 서열을 포함하는, 분리된 재조합 또는 합성 면역글로불린 체인 또는 이것의 기능적 등가물이 제공된다. 바람직하게는, 표 1에 기재된 동일한 항체의 적어도 2개의 CDR, 더욱 바람직하게는 적어도 3개의 CDR을 포함하는 항체가 제공된다. 따라서, AT10_004 또는 AT10_003 또는 AT10_002 또는 AT10_001 또는 AT10_005의 적어도 2개 또는 3개의 CDR이 본 발명에 따른 하나의 항체 또는 기능적 부분에 연결되어 존재하는 것이 바람직하다. 바람직한 구체예로서, 인간 항체의 사용이 인간 개체에서 면역학적 반응에 기인한 부작용을 감소시키기 때문에, 인간 항체가 제공된다. 선택적으로, 상기 적어도 하나의 CDR 서열이 최적화되어, 결합 효능 또는 안정성을 향상시키는 것이 바람직하다. 이는 예를 들면, 생성된 화합물의 안정성 및/또는 결합 효능이 바람직하게 테스트되고 향상된 인플루엔자 A 중화 항체가 선택된 후 돌연변이유발법에 의하여 이루어진다.
당업자는 본 발명에 따라 적어도 하나의 변경된 CDR 서열을 포함하는 돌연변이체를 제조할 수 있다. 예를 들면, 보존성 아미노산 치환이 적용된다. 또한 표 1에 기재된 적어도 하나의 CDR 서열을 변경하여, 천연 항체와 비교하여 적어도 하나의 변경된 성질을 갖는 변이 항체 또는 이것의 기능적 등가물을 제조할 수 있다. 바람직하게는, 표1에 기재된 CDR 서열과 적어도 70% 동일한 CDR 서열을 갖는 항체 또는 기능적 부분이 제공되며, 본 발명에 따른 인플루엔자 A 중화 항체의 우호적인 결합 및 중화 특징은 적어도 부분적으로 유지 또는 향상된다. 표 1에 기재된 CDR 서열은 바람직하게는 변경되어 생성된 항체 또는 이것의 기능적 부분이 천연 항체와 비교하여 적어도 하나의 향상된 성질, 예컨대, 향상된 결합 친화성, 선택성 및/또는 안정성을 갖는다. 따라서, 표 1에 기재된 CDR 서열에 적어도 70% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 변이 항체 또는 이것의 기능적 부분은 본 발명의 범위에 속한다. 아미노산 변경을 위한 다양한 방법이 당업계에 공지되어 있다. 예를 들면, 원하는 CDR 서열을 갖는 중쇄 또는 경쇄 서열이 인공적으로 합성된다. 바람직하게는, 본 발명에 따라 CDR 서열을 암호화하는 핵산 분자는 랜덤-또는 사이트 지정된-돌연변이형성 방법을 이용하여 돌연변이를 만든다.
게다가, 결합 효능 또는 안정성을 향상시키기 위하여 CDR 서열을 최적화하면서, 골격 영역(framework region)의 적어도 하나에서 적어도 하나의 서열을 최적화시키는 장점이 있다. 이는 결합 효능 또는 안정성을 향상시키기 위하여 수행되는 것이 바람직하다. 골격 서열은 예를 들면 그와 같은 골격 서열을 암호화하는 핵산 분자를 돌연변이시킴으로써 최적화되고, 이후 생성된 항체- 또는 기능적 부분- 특성을 테스트하는 것이 바람직하다. 이러한 방식으로, 향상된 항체 또는 기능적 부분을 획득할 수 있다. 바람직한 구체예로서, 인간 생식세포 서열은 본 발명에 따라 항체 또는 이것의 기능적 부분 또는 면역글로불린 체인 또는 기능적 등가물에서 골격 영역에 사용된다. 생식세포 서열의 사용은 바람직하게는 상기 항체 또는 기능적 부분, 면역글로불린 체인 또는 기능적 등가물의 위험을 최소화시킨다. 왜냐하면 이러한 서열은 골격 영역이 유래하는 개인의 독특한 신체 변형을 포함하지 않을 수 있기 때문이다. 이러한 신체 변형은 또다른 인간에 적용되는 경우 면역 반응을 야기할 수 있기 때문이다.
따라서, 본 발명은 분리된 합성 또는 재조합 항체 또는 이것의 기능적 부분 또는 면역글로불린 체인 또는 이것의 기능적 등가물을 제공하며, 하기 서열을 포함한다:
- 서열번호: 1, 3 및 4로 구성된 군에서 선택되는 서열에 적어도 70% 동일한 서열을 포함하는 중쇄 CDR1, 및/또는
- 서열번호: 6, 8 및 9로 구성된 군에서 선택되는 서열에 적어도 70% 동일한 서열을 포함하는 중쇄 CDR2, 및/또는
- 서열번호: 11, 13 및 14로 구성된 군에서 선택되는 서열에 적어도 70% 동일한 서열을 포함하는 중쇄 CDR3, 및/또는
- 서열번호: 16, 18 및 19로 구성된 군에서 선택되는 서열에 적어도 70% 동일한 서열을 포함하는 경쇄 CDR1, 및/또는
- 서열번호: 21, 23 및 24로 구성된 군에서 선택되는 서열에 적어도 70% 동일한 서열을 포함하는 경쇄 CDR2, 및/또는
- 서열번호: 26, 28 및 29로 구성된 군에서 선택되는 서열에 적어도 70% 동일한 서열을 포함하는 경쇄 CDR3.
바람직하게는, 상기 항체 또는 기능적 부분 또는 면역글로불린 체인 또는 기능적 등가물은 중쇄 CDR1, CDR2 및/또는 CDR3 서열 및/또는 경쇄 CDR1, CDR2 및/또는 CDR3 서열을 포함하며, 이들 서열에 75% 이상, 더욱 바람직하게는 80% 이상, 더욱 바람직하게는 85% 이상, 더욱 바람직하게는 86% 이상, 더욱 바람직하게는 87% 이상, 더욱 바람직하게는 88% 이상, 더욱 바람직하게는 89% 이상, 더욱 바람직하게는 90% 이상, 더욱 바람직하게는 91% 이상, 더욱 바람직하게는 92% 이상, 더욱 바람직하게는 93% 이상, 더욱 바람직하게는 94% 이상, 더욱 바람직하게는 95% 이상, 더욱 바람직하게는 96% 이상, 더욱 바람직하게는 97% 이상, 더욱 바람직하게는 98% 이상, 더욱 바람직하게는 99% 이상, 가장 바람직하게는 100% 동일하다.
또다른 구체예로서, 본 발명에 따른 항체는 항체 AT10_003의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열 및 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하고, 표 1에 기재된 서열번호: 32의 중쇄 서열을 갖고, 표 1에 기재된 서열번호: 37의 경쇄 서열을 갖는다. 서열번호: 2는 항체 AT10_003의 중쇄 CDR1 서열이고, 서열번호: 7은 중쇄 CDR2 서열이며, 서열번호:12는 중쇄 CDR3 서열이고, 서열번호: 17은 경쇄 CDR1 서열이며, 서열번호 22:는 경쇄 CDR2 서열이고, 서열번호: 27은 경쇄 CDR3 서열이다. 항체 AT10_003는 그룹 1 및 그룹 2 인플루엔자 A 바이러스 모두에 특이적으로 결합할 수 있기 때문에 바람직한 항체이다. 항체 AT10_003은 적어도 H3, H5 및 H7 서브타입 인플루엔자 A 바이러스에 교차-결합 활성을 갖는다. AT10_003은 다양한 재조합 HA 서브타입 및 인플루엔자 A 바이러스에 결합할 수 있다. 이것은 적어도 인간 인플루엔자 H1N1(A/Hawaii/31/2007) 감염된 세포 및 인간 인플루엔자 H3N2(A/Netherlands/177/2008) 감염된 세포, 및 인간 인플루엔자 H3N2(A/Wyoming/03/2003, A/Aichi/2/1968 및 A/Wisconsin/67/2005) 및 H5N1 (A/Vietnam/1203/2004 및 A/Thailand/Vietnam Consensus/2004), H7N7(A/Netherlands/219/2003) 및 H9N2(A/HongKong/1073/1999)의 HA에 결합할 수 있다. 항체 AT10_003은 또한 인간 인플루엔자 바이러스의 HA 및 인간 인플루엔자 바이러스 감염된 세포를 인식할 수 있을 뿐만 아니라, 수개의 인플루엔자 바이러스 감염된 비인간 동물, 즉 닭 H7N7 (A/Ch/Neth/621557/2003) 및 돼지 H3N2(A/swine/St.oedenrode/1996)에 감염된 세포를 인식할 수 있고, 돼지 H4N6 (A/Swine/Ontario/01911-1/1999)의 HA, 오리 H10N3 (A/duck/Hong Kong/786/1979)의 HA 및 오리 H15N8 (A/duck/AUS/341-1983)의 HA에 결합할 수 있기 때문에 바람직하다. 본원에서 사용되는 용어 "AT10_003"은 표1에 기재된 AT10_03의 중쇄 및 경쇄 서열을 갖는 모든 항체 및 기능적 등가물을 포괄하고, 예를 들면 분리된 및/또는 정제된 또는 재조합적으로 제조된 것을 포함한다.
상술한 바와 같이, 당업자는 본 발명에 따른 적어도 하나의 변경된 CDR 서열을 포함하는 변이체를 생성할 수 있고, 인플루엔자 A 바이러스에 특이적인 표 1에 기재된 면역글로불린 가변부의 적어도 하나의 CDR 서열을 포함하는 면역글로불린 체인 또는 이것의 기능적 등가물을 제조할 수 있다.
따라서, 본 발명은 분리된 합성 또는 재조합 항체 또는 이것의 기능적 부분 또는 면역글로불린 체인 또는 이것의 기능적 등가물을 제공하며, 하기 서열을 포함한다:
- 서열번호: 2에 적어도 70% 동일한 서열을 포함하는 중쇄 CDR1 서열, 및/또는
- 서열번호: 7에 적어도 70% 동일한 서열을 포함하는 중쇄 CDR2, 및/또는
- 서열번호: 12에 적어도 70% 동일한 서열을 포함하는 중쇄 CDR3, 및/또는
- 서열번호: 17에 적어도 70% 동일한 서열을 포함하는 경쇄 CDR1, 및/또는
- 서열번호: 22에 적어도 70% 동일한 서열을 포함하는 경쇄 CDR2, 및/또는
- 서열번호: 27에 적어도 70% 동일한 서열을 포함하는 경쇄 CDR3.
바람직하게는, 상기 항체 또는 기능적 부분 또는 면역글로불린 체인 또는 기능적 등가물은 중쇄 CDR1, CDR2 및/또는 CDR3 서열 및/또는 경쇄 CDR1, CDR2 및/또는 CDR3 서열을 포함하며, 이들 서열에 75% 이상, 더욱 바람직하게는 80% 이상, 더욱 바람직하게는 85% 이상, 더욱 바람직하게는 86% 이상, 더욱 바람직하게는 87% 이상, 더욱 바람직하게는 88% 이상, 더욱 바람직하게는 89% 이상, 더욱 바람직하게는 90% 이상, 더욱 바람직하게는 91% 이상, 더욱 바람직하게는 92% 이상, 더욱 바람직하게는 93% 이상, 더욱 바람직하게는 94% 이상, 더욱 바람직하게는 95% 이상, 더욱 바람직하게는 96% 이상, 더욱 바람직하게는 97% 이상, 더욱 바람직하게는 98% 이상, 더욱 바람직하게는 99% 이상, 가장 바람직하게는 100% 동일하다.
또다른 구체예로서, 본 발명에 따른 항체는 항체 AT10_005의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열 및 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하고, 표1에 기재된 서열번호: 35의 중쇄 서열을 갖고, 표 1에 기재된 서열번호: 40의 경쇄 서열을 갖는다. 서열번호: 5는 항체 AT10_005의 중쇄 서열 CDR1 서열이고, 서열번호: 10은 중쇄 서열 CDR2 서열이며, 서열번호:15는 중쇄 CDR3 서열이고, 서열번호: 20은 경쇄 CDR1 서열이며, 서열번호 25:는 경쇄 CDR2 서열이고, 서열번호: 30은 경쇄 CDR3 서열이다. 항체 AT10_005는 적어도 H1, H5 및 H9 서브타입 인플루엔자 A 바이러스에 교차-결합 활성을 갖기 때문에 바람직하다. AT10_005는 다양한 재조합 HA 서브타입 및 인플루엔자 A 바이러스에 결합할 수 있다. 이것은 적어도 인간 인플루엔자 H1N1(A/Neth/602/2009) 감염된 세포 및 인간 인플루엔자 H1N1(A/California/07/2009, 및 A/New Caledonia/20/1999), H5N1 (A/Vietnam/1203/2004) 및 H9N2(A/HongKong/1073/1999)의 HA에 결합할 수 있다. 항체 AT10_005는 또한 인간 인플루엔자 바이러스의 HA 및 인간 인플루엔자 바이러스 감염된 세포를 인식할 수 있을 뿐만 아니라, 수개의 인플루엔자 바이러스 감염된 비인간 동물, 즉 칠면조 H5N1 (A/Turkey/Turkey/2004)에 감염된 세포를 인식할 수 있다. 또한, 항체 AT10_005는 H1N1 바이러스에 대한 높은 중화 활성을 갖고, 또한 인 비트로 H1N1 A/Hawaii/31/2007 중화 활성을 갖고, 그 IC50값이 약 0.24 ㎍/㎖를 갖고, 또한 인 비트로 H1N1 A/Neth/602/2009(돼지 기원) 중화 활성을 갖고, 그 IC50 값이 약 2.7 ㎍/㎖를 갖기 때문에 바람직하다. AT10_005는 또한 H1N1 인 비보에 대한 보호 활성을 갖는다. 항체 AT10_005는 H5N1 바이러스에 대한 특히 높은 중화 활성을 갖고, 인 비트로 H5N1 A/Turkey/Turkey/2005 중화 활성을 가지며, 그 IC50 값이 약 1.3 ㎍/㎖를 갖는다. 항체 AT10_005는 또한 HA 단백질의 보존된 줄기 영역에서 에피토프에 결합하기 때문에 바람직하다. 이 영역에서 나타나는 제한된 변형으로 인하여, 에피토프가 줄기 영역에 위치하는 항체는 다양한 인플루엔자 바이러스에 결합할 수 있다. 본원에서 사용되는 용어 "AT10_005"는 중쇄 및 경쇄 서열을 갖는 모든 항체 및 기능적 등가물을 포괄하고, 예를 들면 분리된 및/또는 정제된 또는 재조합적으로 제조되는 것을 포함한다.
상술한 바와 같이, 당업자는 본 발명에 따른 적어도 하나의 변경된 CDR 서열을 포함하는 변이체를 생성할 수 있고, 인플루엔자 A 바이러스에 특이적인 표 1에 기재된 면역글로불린 가변부의 적어도 하나의 CDR 서열을 포함하는 면역글로불린 체인 또는 이것의 기능적 등가물을 제조할 수 있다.
따라서, 본 발명은 분리된 합성 또는 재조합 항체 또는 이것의 기능적 부분 또는 면역글로불린 체인 또는 이것의 기능적 등가물을 제공하며, 하기 서열을 포함한다:
- 서열번호: 5에 적어도 70% 동일한 서열을 포함하는 중쇄 CDR1 서열, 및/또는
- 서열번호: 10에 적어도 70% 동일한 서열을 포함하는 중쇄 CDR2, 및/또는
- 서열번호: 15에 적어도 70% 동일한 서열을 포함하는 중쇄 CDR3, 및/또는
- 서열번호: 20에 적어도 70% 동일한 서열을 포함하는 경쇄 CDR1, 및/또는
- 서열번호: 25에 적어도 70% 동일한 서열을 포함하는 경쇄 CDR2, 및/또는
- 서열번호: 30에 적어도 70% 동일한 서열을 포함하는 경쇄 CDR3.
바람직하게는, 상기 항체 또는 기능적 부분 또는 면역글로불린 체인 또는 기능적 등가물은 중쇄 CDR1, CDR2 및/또는 CDR3 서열 및/또는 경쇄 CDR1, CDR2 및/또는 CDR3 서열을 포함하며, 이들 서열에 75% 이상, 더욱 바람직하게는 80% 이상, 더욱 바람직하게는 85% 이상, 더욱 바람직하게는 86% 이상, 더욱 바람직하게는 87% 이상, 더욱 바람직하게는 88% 이상, 더욱 바람직하게는 89% 이상, 더욱 바람직하게는 90% 이상, 더욱 바람직하게는 91% 이상, 더욱 바람직하게는 92% 이상, 더욱 바람직하게는 93% 이상, 더욱 바람직하게는 94% 이상, 더욱 바람직하게는 95% 이상, 더욱 바람직하게는 96% 이상, 더욱 바람직하게는 97% 이상, 더욱 바람직하게는 98% 이상, 더욱 바람직하게는 99% 이상, 가장 바람직하게는 100% 동일하다.
또다른 구체예로서, 본 발명에 따른 항체는 상술한 항체의 하나의 중쇄 및 경쇄 CDR 서열 모두를 포함한다. 따라서, 서열번호: 1, 서열번호: 6, 서열번호: 11, 서열번호: 16, 서열번호:21 및 서열번호: 26 또는 이들과 적어도 70% 동일한 서열을 포함하는, 항체 AT10_004의 중쇄 서열 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열 및 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 갖는 항체가 제공된다.
또다른 구체예로서, 서열번호: 2, 서열번호: 7, 서열번호: 12, 서열번호: 17, 서열번호:22 및 서열번호: 27 또는 이들과 적어도 70% 동일한 서열을 포함하는, 항체 AT10_003의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열 및 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 갖는 항체가 제공된다.
또다른 구체예로서, 서열번호: 3, 서열번호: 8, 서열번호: 13, 서열번호: 18, 서열번호:23 및 서열번호: 28 또는 이들과 적어도 70% 동일한 서열을 포함하는, 항체 AT10_002의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열 및 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 갖는 항체가 제공된다.
또다른 구체예로서, 서열번호: 4, 서열번호: 9, 서열번호: 14, 서열번호: 19, 서열번호:24 및 서열번호: 29 또는 이들과 적어도 70% 동일한 서열을 포함하는, 항체 AT10_001의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열 및 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 갖는 항체가 제공된다.
또다른 구체예로서, 서열번호: 5, 서열번호: 10, 서열번호: 15, 서열번호: 20, 서열번호:25 및 서열번호: 30 또는 이들과 적어도 70% 동일한 서열을 포함하는, 항체 AT10_005의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열 및 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 갖는 항체가 제공된다.
상술한 바와 같이, 용어 "항체"는 기능적 부분, 면역글로불린 체인 또는 이것의 기능적 등가물을 포괄한다.
바람직하게는, 상기 항체 또는 기능적 부분 또는 면역글로불린 체인 또는 이것의 기능적 등가물은 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열 및 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하며, 상기 언급한 CDR 서열에 75% 이상, 더욱 바람직하게는 80% 이상, 더욱 바람직하게는 85% 이상, 더욱 바람직하게는 86% 이상, 더욱 바람직하게는 87% 이상, 더욱 바람직하게는 88% 이상, 더욱 바람직하게는 89% 이상, 더욱 바람직하게는 90% 이상, 더욱 바람직하게는 91% 이상, 더욱 바람직하게는 92% 이상, 더욱 바람직하게는 93% 이상, 더욱 바람직하게는 94% 이상, 더욱 바람직하게는 95% 이상, 더욱 바람직하게는 96% 이상, 더욱 바람직하게는 97% 이상, 더욱 바람직하게는 98% 이상, 더욱 바람직하게는 99% 이상, 가장 바람직하게는 100% 동일하다.
바람직한 구체예로서, 본 발명에 따른 항체는 표 1에 기재된 바와 같이 중쇄 서열 및/또는 경쇄 서열, 또는 이들의 적어도 70% 동일한 서열을 포함한다. 또한, 항체 또는 기능적 부분 또는 면역글루불린 체인 또는 이것의 기능적 등가물은 서열번호: 31-35로 구성된 군에서 선택되는 서열에 적어도 70% 동일한 서열을 포함하는 중쇄 서열을 갖고, 및/또는 서열번호: 36-40로 구성된 군에서 선택되는 서열에 적어도 70% 동일한 경쇄 서열을 갖고, 또는 이러한 중쇄 또는 경쇄 중 임의의 하나에 75% 이상, 더욱 바람직하게는 80% 이상, 더욱 바람직하게는 85% 이상, 더욱 바람직하게는 86% 이상, 더욱 바람직하게는 87% 이상, 더욱 바람직하게는 88% 이상, 더욱 바람직하게는 89% 이상, 더욱 바람직하게는 90% 이상, 더욱 바람직하게는 91% 이상, 더욱 바람직하게는 92% 이상, 더욱 바람직하게는 93% 이상, 더욱 바람직하게는 94% 이상, 더욱 바람직하게는 95% 이상, 더욱 바람직하게는 96% 이상, 더욱 바람직하게는 97% 이상, 더욱 바람직하게는 98% 이상, 더욱 바람직하게는 99% 이상, 가장 바람직하게는 100% 동일한 서열을 갖는다.
바람직하게는, 본 발명에 따른 항체는 서열번호: 31-35로 구성된 군에서 선택되는 서열에 75% 이상, 더욱 바람직하게는 80% 이상, 더욱 바람직하게는 85% 이상, 더욱 바람직하게는 86% 이상, 더욱 바람직하게는 87% 이상, 더욱 바람직하게는 88% 이상, 더욱 바람직하게는 89% 이상, 더욱 바람직하게는 90% 이상 동일한 중쇄를 포함하고, 및/또는 서열번호: 36-40로 구성된 군에서 선택되는 서열에 75% 이상, 더욱 바람직하게는 80% 이상, 더욱 바람직하게는 85% 이상, 더욱 바람직하게는 86% 이상, 더욱 바람직하게는 87% 이상, 더욱 바람직하게는 88% 이상, 더욱 바람직하게는 89% 이상, 더욱 바람직하게는 90% 이상 동일한 경쇄를 포함한다. 가장 바람직하게는, 본 발명에 따른 항체는 서열번호: 31-35로 구성된 군에서 선택되는 서열에 91% 이상, 더욱 바람직하게는 92% 이상, 더욱 바람직하게는 93% 이상, 더욱 바람직하게는 94% 이상, 더욱 바람직하게는 95% 이상, 더욱 바람직하게는 96% 이상, 더욱 바람직하게는 97% 이상, 더욱 바람직하게는 98% 이상, 더욱 바람직하게는 99%이상 동일한 중쇄를 포함하고, 및/또는 서열번호: 36-40로 구성된 군에서 선택되는 서열에 91% 이상, 더욱 바람직하게는 92% 이상, 더욱 바람직하게는 93% 이상, 더욱 바람직하게는 94% 이상, 더욱 바람직하게는 95% 이상, 더욱 바람직하게는 96% 이상, 더욱 바람직하게는 97% 이상, 더욱 바람직하게는 98% 이상, 더욱 바람직하게는 99%이상, 가장 바람직하게는 100% 동일한 경쇄를 포함한다. 동일성이 높을수록, 표 1에 기재된 항체와 더욱 유사한 항체가 된다.
본 발명에 따른 항체, 기능적 부분 또는 면역글로불린 체인 또는 기능적 등가물이 표 1에 기재된 동일한 항체의 중쇄 및 경쇄와 닮은 중쇄 및 경쇄를 포함하는 것이 바람직하다. 따라서, 바람직한 구체예로서, 본 발명에 따른 항체는 주어진 항체, 바람직하게는 항체 AT10_004의 중쇄, 즉, 서열번호: 31의 서열를 포함하며, 및 동일한 항체, 바람직하게는 AT10_004의 경쇄 서열, 즉, 서열번호:36의 서열을 포함하며, 또는 이들에 75% 이상, 더욱 바람직하게는 75% 이상, 더욱 바람직하게는 80% 이상, 더욱 바람직하게는 85% 이상, 더욱 바람직하게는 86% 이상, 더욱 바람직하게는 87% 이상, 더욱 바람직하게는 88% 이상, 더욱 바람직하게는 89% 이상, 더욱 바람직하게는 90% 이상, 더욱 바람직하게는 91% 이상, 더욱 바람직하게는 92% 이상, 더욱 바람직하게는 93% 이상, 더욱 바람직하게는 94% 이상, 더욱 바람직하게는 95% 이상, 더욱 바람직하게는 96% 이상, 더욱 바람직하게는 97% 이상, 더욱 바람직하게는 98% 이상, 더욱 바람직하게는 99% 이상 동일한 서열을 포함한다.
또다른 구체예로서, 본 발명에 따른 항체 또는 이것의 기능적 부분은 항체 AT10_003의 중쇄 서열, 즉, 서열번호: 32의 서열을 포함하며, 및 항체 AT10_003의 경쇄 서열, 즉, 서열번호:37의 서열을 포함하며 또는, 이들에 70% 이상, 더욱 바람직하게는 75% 이상, 더욱 바람직하게는 80% 이상, 더욱 바람직하게는 85% 이상, 더욱 바람직하게는 86% 이상, 더욱 바람직하게는 87% 이상, 더욱 바람직하게는 88% 이상, 더욱 바람직하게는 89% 이상, 더욱 바람직하게는 90% 이상, 더욱 바람직하게는 91% 이상, 더욱 바람직하게는 92% 이상, 더욱 바람직하게는 93% 이상, 더욱 바람직하게는 94% 이상, 더욱 바람직하게는 95% 이상, 더욱 바람직하게는 96% 이상, 더욱 바람직하게는 97% 이상, 더욱 바람직하게는 98% 이상, 더욱 바람직하게는 99% 이상 동일한 서열을 포함한다.
또다른 구체예로서, 본 발명에 따른 항체 또는 이것의 기능적 부분은 항체 AT10_002의 중쇄 서열, 즉, 서열번호: 33의 서열를 포함하며, 및 항체 AT10_002의 경쇄 서열, 즉, 서열번호:38의 서열을 포함하며 또는, 이들에 70% 이상, 더욱 바람직하게는 75% 이상, 더욱 바람직하게는 80% 이상, 더욱 바람직하게는 85% 이상, 더욱 바람직하게는 86% 이상, 더욱 바람직하게는 87% 이상, 더욱 바람직하게는 88% 이상, 더욱 바람직하게는 89% 이상, 더욱 바람직하게는 90% 이상, 더욱 바람직하게는 91% 이상, 더욱 바람직하게는 92% 이상, 더욱 바람직하게는 93% 이상, 더욱 바람직하게는 94% 이상, 더욱 바람직하게는 95% 이상, 더욱 바람직하게는 96% 이상, 더욱 바람직하게는 97% 이상, 더욱 바람직하게는 98% 이상, 더욱 바람직하게는 99% 이상 동일한 서열을 포함한다.
또다른 구체예로서, 본 발명에 따른 항체 또는 이것의 기능적 부분은 항체 AT10_001의 중쇄 서열, 즉, 서열번호: 34의 서열를 포함하며, 및 항체 AT10_001의 경쇄 서열, 즉, 서열번호:39의 서열을 포함하며 또는, 이들에 70% 이상, 더욱 바람직하게는 75% 이상, 더욱 바람직하게는 80% 이상, 더욱 바람직하게는 85% 이상, 더욱 바람직하게는 86% 이상, 더욱 바람직하게는 87% 이상, 더욱 바람직하게는 88% 이상, 더욱 바람직하게는 89% 이상, 더욱 바람직하게는 90% 이상, 더욱 바람직하게는 91% 이상, 더욱 바람직하게는 92% 이상, 더욱 바람직하게는 93% 이상, 더욱 바람직하게는 94% 이상, 더욱 바람직하게는 95% 이상, 더욱 바람직하게는 96% 이상, 더욱 바람직하게는 97% 이상, 더욱 바람직하게는 98% 이상, 더욱 바람직하게는 99% 이상 동일한 서열을 포함한다.
또다른 구체예로서, 본 발명에 따른 항체 또는 이것의 기능적 부분은 항체 AT10_005의 중쇄 서열, 즉, 서열번호: 35의 서열를 포함하며, 및 항체 AT10_005의 경쇄 서열, 즉, 서열번호:40의 서열을 포함하며 또는, 이들에 70% 이상, 더욱 바람직하게는 75% 이상, 더욱 바람직하게는 80% 이상, 더욱 바람직하게는 85% 이상, 더욱 바람직하게는 86% 이상, 더욱 바람직하게는 87% 이상, 더욱 바람직하게는 88% 이상, 더욱 바람직하게는 89% 이상, 더욱 바람직하게는 90% 이상, 더욱 바람직하게는 91% 이상, 더욱 바람직하게는 92% 이상, 더욱 바람직하게는 93% 이상, 더욱 바람직하게는 94% 이상, 더욱 바람직하게는 95% 이상, 더욱 바람직하게는 96% 이상, 더욱 바람직하게는 97% 이상, 더욱 바람직하게는 98% 이상, 더욱 바람직하게는 99% 이상 동일한 서열을 포함한다.
본 발명은 인 비트로 H3N2 인플루엔자 A 바이러스 중화 활성을 갖고 그 IC50 값이 1 ㎍/㎖ 미만을 갖는 항체를 제공한다. 상기 항체의 장점은 중화 능력 획득을 위하여 저용량만이 필요하다는 점이다. 따라서, 상기 인플루엔자 A 중화 항체의 소량이 인플루엔자 A 감염의 치료 및/또는 예방을 위해 개체에 투여될 필요가 있다. 경제적 관점 및 보건학적 관점 모두에서 원하는 효과를 달성하는데 가능한 저용량을 사용할 수 있다는 장점이 있다. 치료적 항체를 가능한 적은 양으로 개체에 투여하는 것이 바람직하다. 왜냐하면 이는 항체에 대한 면역 반응과 같은 원치않는 효과의 발생을 감소시키기 때문이다. 나아가, 항체를 저용량으로 사용하게 되면, 인플루엔자 감염에 대항 또는 예방하기 위한 개체의 치료 비용을 감소시킬 수 있다.
일반적으로, 항체의 중화 활성이 높아질수록, 개체의 치료에 필요한 항체의 양은 낮아진다. 실시예에서 보는 바와 같이, 항체 AT10_001은 인 비트로 H3N2 A/Ned/177/2008 바이러스 중화 활성을 갖고, 그 IC50 값은 약 0.64 ㎍/㎖ 이며, 항체 AT10_004는 인 비트로 H3N2 A/Ned/177/2008 바이러스 중화 활성을 갖고, 그 IC50 값은 약 0.17 ㎍/㎖ 이며, 항체 AT10_002는 인 비트로 H3N2 A/Ned/177/2008 바이러스 중화 활성을 갖고, 그 IC50 값은 약 0.18 ㎍/㎖ 이다. 따라서, 본 발명에 따른 항체는 바람직하게는 인 비트로 H3N2 인플루엔자 A 바이러스 중화 활성을 갖고, 그 IC50 값은 0.8 ㎍/㎖ 미만이며, 더욱 바람직하게는 0.6 ㎍/㎖ 미만이고, 더욱 바람직하게는 0.5 ㎍/㎖ 미만이고, 더욱 바람직하게는 0.4 ㎍/㎖ 미만이고, 더욱 바람직하게는 0.3 ㎍/㎖ 미만이고, 더욱 바람직하게는 0.2 ㎍/㎖ 미만이다. 실시예는 추가로 항체 AT10_001, AT10_002 및 AT10_004가 인비보 H3N2 중화 활성을 갖는 것을 보여준다. 이러한 항체는 인플루엔자 A 바이러스 H3N2 HKx-31에 대하여 마우스를 보호하는 것으로 보여졌다. 항체 AT10_001, AT10_002 또는 AT10_004 처리를 한 모든 마우스들은 H3N2 바이러스 항원 투여(challenge)에서 생존하였으나, 대조구 항체로 처리된 모든 대조구 마우스들은 체중이 25% 감소하고 연구 중에 처분되어야 했다. 바람직한 구체예로서, 본 발명에 따른 항체는 예를 들면, 실시예에서 설명된 바와 같이 마우스 모델에서 인플루엔자 H3N2 감염에 대한 보호 활성에 의하여 측정되면 인 비보 H3N2 중화 활성을 갖는다.
바람직하게는, 본 발명에 따른 인플루엔자 A 중화 활성은 실시예에 기재된 바와 같이 중화 분석에서 결정되는 바와 같이 상술한 인 비트로 중화 활성을 갖는다.
동일한 서브타입의 인플루엔자 A 바이러스의 수개 종이 존재한다. 동일한 인플루엔자 A 바이러스 서브타입의 다양한 종이 숙주 감염성에서 상이할 수 있다. 따라서, 바람직한 구체예로서, 본 발명에 따른 인플루엔자 A 중화 항체는 설명된 중화 활성을 갖고 적어도 하나의 H3N2 인플루엔자 바이러스 종, 더욱 바람직하게는 적어도 2개, 더욱 바람직하게는 적어도 3개, 더욱 바람직하게는 4개, 더욱 바람직하게는 적어도 5개의 상이한 H3N2 인플루엔자 바이러스 종을 중화시킨다. 바람직한 구체예로서, 본 발명에 따른 인플루엔자 A 중화 항체는 적어도 H3N2 A/Ned/177/2008 인플루엔자 바이러스 종, 및/또는 H3N2 HKx-31, 및/또는 H3N2 A/swine/Neth/St.Oedenrode/96을 중화시킨다.
본 발명에 따라 제공된 항체는 적어도 2개의 상이한 인플루엔자 서브타입에 결합할 수 있다. 한 구체예로서, 항체는 H3N2 및 적어도 하나의 그룹 2 인플루엔자 A 바이러스 서브타입에 결합할 수 있는 항체를 제공한다. 또다른 구체예에서, 항체는 H1N1 및 적어도 하나의 그룹 1 인플루엔자 A 바이러스 서브타입에 결합할 수 있는 항체를 제공한다. 이러한 항체의 장점은 이들이 교차-결합 활성을 가지고 있으며, 즉 적어도 2개의 상이한 인플루엔자 A 바이러스 서브타입에 결합할 수 있다는 점이다. 바람직한 구체예에서, 인플루엔자 A 중화 항체는 적어도 하나의 다른 그룹 서브타입 A 바이러스를 중화할 수 있는 것이 제공된다. 이러한 항체는 교차-중화 활성을 가지고, 즉 적어도 2개의 상이한 인플루엔자 A 바이러스 서브타입에 대한 중화 활성을 갖는다. 이러한 항체는 단일 항체의 용도가 다중 인플루엔자 서브타입의 중화를 가능하게 하는 장점을 갖는다. 이러한 항체는 넓은 중화 활성을 갖는다.
또다른 바람직한 구체예로서, 인플루엔자 A 중화 항체는 적어도 하나의 그룹 2 서브타입 인플루엔자 A 바이러스 및 적어도 하나의 그룹 1 서브타입 인플루엔자 A 바이러스와 결합할 수 있는 것이다. 더욱 바람직한 구체예로서, 인플루엔자 A 중화 항체는 상기 적어도 하나의 그룹 2 및/또는 적어도 하나의 그룹 1 서브타입 인플루엔자 A 바이러스를 추가로 중화시킬 수 있는 것이다.
적어도 2개의 그룹 2 인플루엔자 A 바이러스 서브타입 또는 적어도 하나의 그룹 1 및 하나의 그룹 2 인플루엔자 A 바이러스 서브타입에 특이적으로 결합할 수 있는 본 발명에 따른 인플루엔자 A 중화 항체는 인플루엔자 서브타입 간에 공통되는 인플루엔자 A 바이러스 단백질의 헤마글루티닌 안에서 에피토프에 결합하는 것이 바람직하다. 바람직하게는, 상기 에피토프는 인플루엔자 A 바이러스의 헤마글루티닌 단백질의 불변 연역에 위치한다. 상술한 바와 같이, H3, H4, H7, H10, H14 및 H15는 그룹 2로부터의 현재 공지된 인플루엔자 바이러스들이다. 상기 적어도 2개 그룹 2 서브타입 인플루엔자 A 바이러스 서브타입은 인플루엔자 A 바이러스 서브타입을 포함하는 H3, H4, H7, H10, H14 및 H15로 구성된 군에서 선택되는 것이 바람직하다. 일 구체예로서, H4, H7, H10, H14, 또는 H15 함유 인플루엔자 A 바이러스 에 결합할 수 있고 H3N2 인플루엔자 A 바이러스에 결합 및/또는 중화할 수 있는 본 발명에 따른 항체가 제공된다. 바람직하게는, 이러한 항체는 H7 함유 인플루엔자 A 바리어스 서브타입에 결합할 수 있다. H7 함유 인플루엔자 바이러스는 종종 가금류를 감염시킨다. 인간은 감염된 가금류와 직접 접촉하기 때문에, H7 인플루엔자 바이러스 및 조류 H7 및 인간 인플루엔자 바이러스의 혼합으로 인한 인간 감염의 위험이 상당하다. H7 함유 인플루엔자 바이러스로 인한 인간 감염이 사망으로 이어진 사례가 보고되었다. 따라서, 바람직한 구체예로서, 본 발명은 H3 및 H7 서브타입 인플루엔자 A 바이러스에 결합할 수 있는 인플루엔자 A 중화 항체를 제공한다. 바람직하게는, 상기 항체는 또한 H3 및 H7 서브타입 인플루엔자 A 바이러스 모두를 중화시킬 수 있다.
상술한 바와 같이, H1, H2, H5, H6, H8, H9, H11, H12, H13 및 H16은 최근 그룹 1로부터 공지된 인플루엔자 바이러스들이다. 상술된 적어도 하나의 그룹 1 서브타입 인플루엔자 A 바이러스는 인플루엔자 A 바이러스 서브타입을 함유하는 H1, H2, H5, H6, H8, H9, H11, H12, H13 및 H16 으로 구성된 군에서 선택되는 것이 바람직하다. 따라서 한 구체예에서 본 발명에 따른 항체는 H3N2 인플루엔자 A 바이러스와 결합 및/또는 중화할 수 있고 H1, H2, H5, H6, H8, H9, H11, H12, H13 또는 H16 함유 인플루엔자 A 바이러스에 결합할 수 있는 것이다. 바람직하게는 상기 적어도 하나의 그룹 1 서브타입 인플루엔자 A 바이러스는 H1 및 H5 함유 인플루엔자 A 바이러스 서브타입으로 구성된 군에서 선택된다. H1N1은 인간을 감염시킬 수 있는 인플루엔자 A 바이러스 중의 하나이고 일반적으로 계절 인플루엔자 유행성 감염은 적어도 하나의 H1N1 인플루엔자 바이러스를 포함한다. H5 함유 바이러스, 예를 들면 H5N1, H5N3, H5N4 및 H5N9는 주로 조류를 감염시킨다. 그러나, 일부 H5 인플루엔자 서브타입들은 조류에서 인간으로 전파될 수 있다. H5 인플루엔자 서브타입에 의한 인간의 감염은 생명을 위협하는 합병증, 예컨대, 폐렴 및 사망으로 인하여 특히 위험하다.
특히 바람직한 구체예로서, 본 발명은 H3, H7 및 H1 서브타입 인플루엔자 A 바이러스와 결합 및/또는 중화시킬 수 있는 인플루엔자 A 중화 항체를 제공한다.
일 구체예로서, 본 발명에 따른 항체는 닭, 오리, 거위, 칠면조 및 꿩과 같은 조류, 및 돼지, 페렛, 토끼, 고양이, 개 및 말을 포함하나 이에 제한되지 않는 비인간 동물을 감염시키는 적어도 하나의 인플루엔자 바이러스에 결합할 수 있다. 이러한 항체는 가축 또는 애완동물로 사육되는 동물에 한정되지 않는 상기 비인간 동물에서 인플루엔자 바이러스 감염에 대항하여 사용될 수 있다. 또한, 인간은 상기 동물과 직접 접촉하기 때문에, 상기 동물을 감염시키는 인플루엔자 바이러스에 의하여 인간이 감염될 수 있는 위험성이 상당히 존재한다. 또다른 위험은 비인간 동물을 감염시킬 수 있는 인플루엔자 바이러스와 인간을 감염시킬 수 있는 인플루엔자 바이러스의 혼합(mixing)에 의하여 신규한 강력한 병원성 인플루엔자 바이러스를 만들 수 있다는 점이다. 따라서, 바람직하게는 본 발명에 따른 항체는 비인간 동물을 감염시키는 인플루엔자 A 바이러스 서브타입에 결합할 수 있는 것이다. 바람직한 구체예로서, 상기 항체는 조류 및/또는 돼지 인플루엔자 A 바이러스 서브타입에 결합할 수 있다. 이러한 조류 및/또는 돼지 인플루엔자 A 바이러스 서브타입의 예들은 H4, H10, H15, H5 및 H7 함유 인플루엔자 바이러스, 예를 들면 H4N6, H10N3, H15N8, H7N1, H7N7 및/또는 H5N1을 포함하며, 이에 제한되지 않는다.
상술한 바와 같이, H7 함유 인플루엔자 바이러스는 종종 가금류를 감염시키고, H7 인플루엔자 바이러스 및 조류 H7 및 인간 인플루엔자 바이러스의 혼합에 의하여 인간을 감염시키는 상당한 위험이 존재한다. 따라서, 한 구체예로서, 본 발명에 따른 항체는 H7 서브타입 인플루엔자 A 바이러스에 결합할 수 있다. 더욱 바람직하게는, 항체는 H7 서브타입 인플루엔자 A 바이러스를 중화시킬 수 있다. 예를 들면,상기 항체는 인 비트로 H7N7(예컨대, A/Ch/Neth/621557/03) 및/또는 H7N1 (예컨대 A/Ch/Italy/1067/99) 인플루엔자 A 바이러스 중화 항체를 갖는다. 바람직하게는, 상기 항체는 인 비트로 H7N1 및/또는 H7N7 인플루엔자 A 바이러스 중화 항체를 갖고, 그 IC50 값은 10 ㎍/㎖ 미만, 더욱 바람직하게는 5 ㎍/㎖ 미만, 더욱 바람직하게는 0.4 ㎍/㎖ 미만, 더욱 바람직하게는 0.3 ㎍/㎖ 미만, 더욱 바람직하게는 0.2 ㎍/㎖ 미만을 갖는다. 바람직하게는, 본 발명에 따른 상기 인플루엔자 A 중화 항체는 실시예에 기재된 바와 같은 중화 분석에서 결정된 바와 같이 인 비트로 중화 활성을 갖는다. 바람직한 구체예로서, 본 발명에 따른 인플루엔자 A 중화 항체는 기재된 중화활성을 갖는 적어도 하나의 H7N1 및/또는 H7N7 인플루엔자 바이러스 종, 더욱 바람직하게는 적어도 2개, 더욱 바람직하게는 적어도 3개, 더욱 바람직하게는 적어도 4개, 더욱 바람직하게는 적어도 5개의 상이한 H1N1 및/또는 H7N7 인플루엔자 바이러스 종을 중화시킨다. 바람직한 구체예로서, 본 발명에 따른 인플루엔자 A 중화 항체는 적어도 H7N7(A/Ch/Neth/621557/03) 및/또는 H7N1 (A/Ch/Italy/1067/99)를 중화시킨다.
H7 서브타입 인플루엔자 A 바이러스에 결합할 수 있는 본 발명의 특히 바람직한 항체는 AT10_004이고, 이것은 도 1에 기재된 서열번호: 31의 중쇄 서열 및 도 1에 기재된 서열번호:36의 경쇄 서열을 갖는다. H7 서브타입 인플루엔자 A 바이러스에 결합할 수 있는 본 발명의 또다른 특히 바람직한 항체는 AT10_002이고, 이것은 도 1에 기재된 서열번호: 33의 중쇄 서열 및 도 1에 기재된 서열번호:38의 경쇄 서열을 갖는다. H7 서브타입 인플루엔자 A 바이러스에 결합할 수 있는 본 발명의 또다른 특히 바람직한 항체는 AT10_001이고, 이것은 도 1에 기재된 서열번호: 34의 중쇄 서열 및 도 1에 기재된 서열번호:39의 경쇄 서열을 갖는다.
이러한 바람직한 항체의 중쇄 및 경쇄 CDR 서열은 도 1에 기재되어 있다. 서열번호: 1은 항체 AT10_004에 있어서 중쇄 CDR1 서열이고, 서열번호: 6은 중쇄 CDR2 서열이며, 서열번호: 11은 중쇄 CDR3 서열이고, 서열번호:16은 경쇄 CDR1 서열이며, 서열번호: 21은 경쇄 CDR2 서열이고, 서열번호: 26은 경쇄 CDR3의 서열이다. 서열번호: 3은 항체 AT10_002에 있어서 중쇄 CDR1 서열이고, 서열번호: 8은 중쇄 CDR2 서열이며, 서열번호: 13은 중쇄 CDR3 서열이고, 서열번호:18은 경쇄 CDR1 서열이며, 서열번호: 23은 경쇄 CDR2 서열이고, 서열번호: 28은 경쇄 CDR3의 서열이다. 서열번호: 4는 항체 AT10_001에 있어서 중쇄 CDR1 서열이고, 서열번호: 9은 중쇄 CDR2 서열이며, 서열번호: 14은 중쇄 CDR3 서열이고, 서열번호:19는 경쇄 CDR1 서열이며, 서열번호: 24는 경쇄 CDR2 서열이고, 서열번호: 29는 경쇄 CDR3의 서열이다.
따라서, 본 발명은 분리된 합성 또는 재조합 항체 또는 이것의 기능적 부분, 또는 면역글로불린 체인 또는 이것의 기능적 등가물을 제공하며, 다음을 포함한다:
-. 서열번호: 1에 적어도 70% 동일한 서열을 포함하는 중쇄 CDR1 서열, 및
-. 서열번호: 6에 적어도 70% 동일한 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 서열, 및
-. 서열번호: 11에 적어도 70% 동일한 서열을 포함하는 중쇄 CDR3 서열, 및
-. 서열번호: 16에 적어도 70% 동일한 서열을 포함하는 경쇄 CDR1 서열, 및
-. 서열번호: 21에 적어도 70% 동일한 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 서열 , 및
-. 서열번호: 26에 적어도 70% 동일한 서열을 포함하는 경쇄 CDR3 서열.
또한, 본 발명은 분리된 합성 또는 재조합 항체 또는 이것의 기능적 부분, 또는 면역글로불린 체인 또는 이것의 기능적 등가물을 제공하며, 다음을 포함한다:
-. 서열번호: 3에 적어도 70% 동일한 서열을 포함하는 중쇄 CDR1 서열, 및
-. 서열번호: 8에 적어도 70% 동일한 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 서열, 및
-. 서열번호: 13에 적어도 70% 동일한 서열을 포함하는 중쇄 CDR3 서열, 및
-. 서열번호: 18에 적어도 70% 동일한 서열을 포함하는 경쇄 CDR1 서열, 및
-. 서열번호: 23에 적어도 70% 동일한 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 서열, 및
-. 서열번호: 28에 적어도 70% 동일한 서열을 포함하는 경쇄 CDR3 서열.
또한, 본 발명은 분리된 합성 또는 재조합 항체 또는 이것의 기능적 부분, 또는 면역글로불린 체인 또는 이것의 기능적 등가물을 제공하며, 다음을 포함한다:
-. 서열번호: 4에 적어도 70% 동일한 서열을 포함하는 중쇄 CDR1 서열, 및
-. 서열번호: 9에 적어도 70% 동일한 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 서열, 및
-. 서열번호: 14에 적어도 70% 동일한 서열을 포함하는 중쇄 CDR3 서열, 및
-. 서열번호: 19에 적어도 70% 동일한 서열을 포함하는 경쇄 CDR1 서열, 및
-. 서열번호: 24에 적어도 70% 동일한 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 서열, 및
-. 서열번호: 29에 적어도 70% 동일한 서열을 포함하는 경쇄 CDR3 서열.
바람직하게는, 상기 항체 또는 기능적 부분 또는 면역글로불린 체인 또는 기능적 등가물은 중쇄 CDR1, CDR2 및/또는 CDR3 서열 및/또는 경쇄 CDR1, CDR2 및/또는 CDR3 서열을 포함하며, 이들 서열에 75% 이상, 더욱 바람직하게는 80% 이상, 더욱 바람직하게는 85% 이상, 더욱 바람직하게는 86% 이상, 더욱 바람직하게는 87% 이상, 더욱 바람직하게는 88% 이상, 더욱 바람직하게는 89% 이상, 더욱 바람직하게는 90% 이상, 더욱 바람직하게는 91% 이상, 더욱 바람직하게는 92% 이상, 더욱 바람직하게는 93% 이상, 더욱 바람직하게는 94% 이상, 더욱 바람직하게는 95% 이상, 더욱 바람직하게는 96% 이상, 더욱 바람직하게는 97% 이상, 더욱 바람직하게는 98% 이상, 더욱 바람직하게는 99% 이상, 가장 바람직하게는 100% 동일하다.
상술한 바와 같이, 일부 H5 인플루엔자 서브타입은 인간을 감염시킬 수 있다. H5 인플루엔자 서브타입에 의한 인간의 감염은 폐렴과 같은 생명을 위협하는 합병증의 위험 및 사망으로 인하여 특히 위험하다. 따라서, 일 구체예로서, 본 발명에 따른 항체는 H5 서브타입 인플루엔자 A 바이러스에 결합할 수 있는 것이다. 더욱 바람직하게는, 항체는 H5 서브타입 인플루엔자 A 바이러스를 중화시킬 수 있는 것이다. 에를 들면, 이러한 항체는 인 비트로 H5N1(예컨대, A/Turkey/Turkey/04) 인플루엔자 A 바이러스 중화 활성을 갖는다. 바람직하게는, 상기 항체는 인 비트로 H5N1 인플루엔자 A 바이러스 중화 활성을 갖고, 그 IC50 값은 10 ㎍/㎖ 미만, 더욱 바람직하게는 5 ㎍/㎖ 미만, 더욱 바람직하게는 4 ㎍/㎖ 미만, 더욱 바람직하게는 3 ㎍/㎖ 미만, 더욱 바람직하게는 2 ㎍/㎖ 미만, 더욱 바람직하게는 1 ㎍/㎖ 미만, 더욱 바람직하게는 0.8 ㎍/㎖ 미만, 더욱 바람직하게는 0.6 ㎍/㎖ 미만, 더욱 바람직하게는 0.5 ㎍/㎖ 미만, 더욱 바람직하게는 0.4 ㎍/㎖ 미만, 더욱 바람직하게는 0.3 ㎍/㎖ 미만, 더욱 바람직하게는 0.2 ㎍/㎖ 미만을 갖는다. 바람직하게는, 본 발명에 따른 이러한 인플루엔자 A 중화 항체는 실시예에 기재된 중화 분석에서 결정된 바와 같은 상기 인 비트로 중화 활성을 갖는다. 바람직한 구체예로서, 본 발명에 따른 인플루엔자 A 중화 항체는 기재된 중화 활성을 갖는 적어도 하나의 H5N1 인플루엔자 바이러스 종, 더욱 바람직하게는 적어도 2개, 더욱 바람직하게는 적어도 3개, 더욱 바람직하게는 적어도 4개, 더욱 바람직하게는 적어도 5개의 상이한 H5N1 인플루엔자 바이러스 종을 중화시킨다. 바람직한 구체예로서, 본 발명에 따른 인플루엔자 A 중화 항체는 적어도 H5N1(A/Turkey/Turkey/04)를 중화시킨다. H5 서브타입 인플루엔자 A 바이러스에 결합할 수 있는 본 발명의 특히 바람직한 항체는 AT10_003이고, H5 서브타입 인플루엔자 A 바이러스에 결합할 수 있는 본 발명의 또다른 바람직한 항체는 AT10_005이다. 따라서 AT10_003 또는 AT10_005의 CDR 서열에 70% 이상 동일한 서열을 갖는 항체 또는 기능적 부분은 H5 서브타입 인플루엔자 A 바이러스를 대항하는데 바람직하다.
본 발명에 따른 항체는 인간 항체가 바람직하다. 인간에서 예방 및 치료용 인간 항체의 사용은 비인간 서열에 대하여 인간 개체에서 면역 반응으로 인한 부작용 발생을 감소시킨다. 또다른 구체예로서, 본 발명에 따른 항체는 인간화 항체이다. 인간화 항체는 비인간 초가변부를 인간 항체에 결합시킴으로써 제조되며, 따라서, 면역원성(immunogenic property)이 전체 비인간 항체와 비교하여 볼때 감소된다. 또다른 구체예로서, 본 발명에 따른 항체는 키메릭 항체이다. 키메릭 항체에서, 관심대상 서열, 예를 들면 관심대상의 결합 부위가 본 발명에 따른 항체내로 포함된다.
본 발명에 따른 바람직한 항체는 헤마글루티닌 단백질에 대한 높은 결합 친화성을 갖는다. 친화도 상수 및 항체와 항원간의 결합 특이성의 측정은 본 발명의 항-인플루엔자 A 항체를 이용한 예방, 치료, 진단 및 연구 방법의 효능을 결정하는데 우선한다. "결합 친화도(Binding affinity)"는 일반적으로 분자의 단일 결합 부위(예, 항체)와 이것의 결합 파트너(예, 항체) 사이의 비공유적 상호작용의 총 합계의 힘을 의미한다. 달리 기재되지 않았다면, 본원에서 사용된 "결합 친화도"는 결합 쌍(예, 항체 및 항원)의 일원간에 1:1 상호작용을 보여주는 고유의 결합 친화도를 의미한다. 친화도는 일반적으로 평형 해리 상수(equilibrium dissociation constant, KD)에 의하여 표시되며, 이것은 Kd에 대한 Ka 비율로 계산된다(참조, Chen, Y., et al., (1999) J. Mol Biol 293:865-881). 친화도는 당업계에 공지된 통상의 방법, 예를 들면, IBIS Technologies BV(Hengelo, the Netherlands)의 BiaCore 또는 IBIS-iSPR 기구와 같은 표면 플라스몬 공명(SPR) 분석법 또는 Kinexa와 같은 용액 상 분석법에 의하여 측정된다. 바람직하게는, 본 발명에 따른 항체는 해리상수(KD)가 최대 100 nM, 더욱 바람직하게는 최대 50 nM, 더욱 바람직하게는 최대 25 nM,더욱 바람직하게는 최대 10 nM, 더욱 바람직하게는 최대 5 nM, 더욱 바람직하게는 최대 2 nM, 더욱 바람직하게는 최대 1 nM, 더욱 바람직하게는 최대 0.5 nM, 더욱 바람직하게는 최대 0.3 nM, 더욱 바람직하게는 최대 0.1 nM에 의하여 특성화되는 인플루엔자 HA 단백질에서 에피토프에 대한 결합 친화도를 갖는다.
본 발명은 또한 본 발명에 따른 항체 또는 기능적 부분 또는 면역글로불린 체인 또는 기능적 등가물의 적어도 하나의 CDR 서열을 암호화하고, 적어도 15개 뉴클레오티드의 길이를 갖는, 분리된 합성 또는 재조합 핵산 분자 또는 이것의 기능적 등가물을 제공한다. 바람직하게는, 본 발명에 따른 핵산은 적어도 30개 뉴클레오티드의 길이를 갖고, 더욱 바람직하게는 적어도 50개 뉴클레오티드, 더욱 바람직하게는 적어도 75개 뉴클레오티드를 갖는다. 본 발명에 따른 핵산은 예를 들면 본 발명에 따른 항체를 제조할 수 있는 B-세포로부터 분리된다. 바람직한 구체예로서 본 발명에 따른 항체를 암호화하는 핵산이 제공된다.
본원에서 사용된 바와 같이 "본 발명에 따른 항체 또는 기능적 부분 또는 면역글로불린 체인 또는 기능적 등가물의 적어도 하나의 CDR 서열을 암호화하고, 적어도 15개 뉴클레오티드의 길이를 갖는, 분리된 합성 또는 재조합 핵산 분자 또는 이것의 기능적 등가물"은 본원에서 "본 발명에 따른 핵산 분자 또는 이것의 기능적 등가물"을 의미한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 본 발명의 핵산 분자 또는 핵산 서열은 바람직하게는 뉴클레오티드의 체인, 더욱 바람직하게는 DNA 및/또는 RNA를 포함한다. 다른 구체예로서, 본 발명의 핵산 분자 또는 핵산 서열은 DNA/RNA 헬릭스, 펩티드 핵산(PNA), 잠긴 핵산(LNA) 및/또는 리보자임과 같은 핵산 구조의 다른 종류를 포함한다. 이러한 핵산 구조는 핵산 서열의 기능적 등가물을 의미한다. 용어 "핵산 분자의 기능적 등가물"은 천연 뉴클레오티드와 동일한 기능을 나타내는 비천연 뉴클레오티드, 개질된 뉴클레오티드 및/또는 비뉴클레오티드 빌딩 블록을 모두 포괄한다.
항체 AT10_004, AT10_003, AT10_002, AT10_001 및 AT10_005의 바람직한 중쇄 및 경쇄 CDR을 암호화하는 핵산 서열은 표 1에 나타나 있다. 본 발명은 표 1에 나타난 CDR 핵산 서열과 다르지만 상기 중쇄 또는 경쇄 CDR의 동일한 아미노산을 암호화하는 핵산 코돈을 갖는 본 발명에 따른 항체의 중쇄 또는 경쇄 CDR을 암호화하는 핵산 분자를 포함된다. 생성된 CDR이 표 1에 나타난 CDR과 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 한, 본 발명은 예를 들면 일반적으로 유사한 성질(크기, 소수성 등)을 갖는 또다른 잔기에 의하여 치환되는 아미노산 잔기에 의하여 보존성 아미노산 치환을 통하여 변경된 표 1에 나타난 항체의 중쇄 또는 경쇄 CDR을 암호화하는 핵산 분자를 포함한다.
본 발명에 따른 바람직한 핵산 분자는 다음을 포함한다:
-. 서열번호: 41-45로 구성된 군에서 선택되는 서열에 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 중쇄 CDR1 암호화 서열, 및/또는
-. 서열번호: 46-50로 구성된 군에서 선택되는 서열에 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 중쇄 CDR2 암호화 서열, 및/또는
-. 서열번호: 51-55로 구성된 군에서 선택되는 서열에 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 중쇄 CDR3 암호화 서열, 및/또는
-. 서열번호: 56-60로 구성된 군에서 선택되는 서열에 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 경쇄 CDR1 암호화 서열, 및/또는
-. 서열번호: 61-65로 구성된 군에서 선택되는 서열에 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 경쇄 CDR2 암호화 서열, 및/또는
-. 서열번호: 66-70로 구성된 군에서 선택되는 서열에 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 경쇄 CDR3 암호화 서열.
바람직하게는, 본 발명에 따른 핵산 분자는 상기 서열에 75% 이상, 더욱 바람직하게는 80% 이상, 더욱 바람직하게는 85% 이상, 더욱 바람직하게는 90% 이상, 더욱 바람직하게는 95% 이상, 가장 바람직하게는 100% 동일하다. 바람직하게는, 상기 핵산 분자는 적어도 하나의 CDR 암호화 서열을 포함한다. 추가로 본 발명은 서열번호: 41-70에서 선택되는 핵산 분자에 바람직하게는 75% 이상, 더욱 바람직하게는 80% 이상, 더욱 바람직하게는 85% 이상, 더욱 바람직하게는 90% 이상, 더욱 바람직하게는 95% 이상, 가장 바람직하게는 100% 동일한 서열을 포함하는 핵산 분자 또는 이것의 기능적 등가물을 제공하며, 상기 핵산 분자 또는 기능적 등가물은 적어도 15개 뉴클레오티드를 갖는다.
본 발명에 따른 핵산 분자 또는 이것의 기능적 등가물은 표 1에 나타난 바와 같이 중쇄 및/또는 경쇄에 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 영역을 암호화하는 것이 바람직하다. 따라서, 바람직한 핵산 분자 또는 기능적 등가물은 서열번호: 71-75로 구성된 군에서 선택되는 서열에 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 서열 및/또는 서열번호: 76-80으로 구성된 군에서 선택되는 서열에 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함한다. 더욱 바람직하게는, 본 발명에 따른 핵산 분자 또는 기능적 등가물을 표 1에 기재된 동일한 항체의 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 서열과 닮은 중쇄 암호화 서열 및 경쇄 암호화 서열을 포함한다. 따라서, 바람직한 구체예로서 본 발명에 따른 핵산 또는 기능적 등가물이 서열번호: 71의 서열을 포함하는 항체 AT10_004의 중쇄 암호화 서열 및 서열번호:76의 서열을 포함하는 항체 AT10_004의 경쇄 암호화 서열, 또는 이들 서열에 70% 이상, 바람직하게는 75% 이상, 더욱 바람직하게는 80% 이상, 더욱 바람직하게는 85% 이상, 더욱 바람직하게는 86% 이상, 더욱 바람직하게는 87% 이상, 더욱 바람직하게는 88% 이상, 더욱 바람직하게는 89% 이상, 더욱 바람직하게는 90% 이상, 더욱 바람직하게는 91% 이상, 더욱 바람직하게는 92% 이상, 더욱 바람직하게는 93% 이상, 더욱 바람직하게는 94% 이상, 더욱 바람직하게는 95% 이상, 더욱 바람직하게는 96% 이상, 더욱 바람직하게는 97% 이상, 더욱 바람직하게는 98% 이상, 더욱 바람직하게는 99% 이상의 동일성을 갖는 서열을 포함한다.
또다른 구체예로서, 본 발명에 따른 핵산 또는 기능적 등가물은 서열번호: 72의 서열을 포함하는 항체 AT10_003의 중쇄 암호화 서열 및 서열번호:77의 서열을 포함하는 항체 AT10_003의 경쇄 암호화 서열, 또는 이들 서열에 70% 이상, 바람직하게는 75% 이상, 더욱 바람직하게는 80% 이상, 더욱 바람직하게는 85% 이상, 더욱 바람직하게는 86% 이상, 더욱 바람직하게는 87% 이상, 더욱 바람직하게는 88% 이상, 더욱 바람직하게는 89% 이상, 더욱 바람직하게는 90% 이상, 더욱 바람직하게는 91% 이상, 더욱 바람직하게는 92% 이상, 더욱 바람직하게는 93% 이상, 더욱 바람직하게는 94% 이상, 더욱 바람직하게는 95% 이상, 더욱 바람직하게는 96% 이상, 더욱 바람직하게는 97% 이상, 더욱 바람직하게는 98% 이상, 더욱 바람직하게는 99% 이상 동일성을 갖는 서열을 포함한다.
또다른 구체예로서, 본 발명에 따른 핵산 또는 기능적 등가물은 서열번호: 73의 서열을 포함하는 항체 AT10_002의 중쇄 암호화 서열 및 서열번호:78의 서열을 포함하는 항체 AT10_002의 경쇄 암호화 서열, 또는 이들 서열에 70% 이상, 바람직하게는 75% 이상, 더욱 바람직하게는 80% 이상, 더욱 바람직하게는 85% 이상, 더욱 바람직하게는 86% 이상, 더욱 바람직하게는 87% 이상, 더욱 바람직하게는 88% 이상, 더욱 바람직하게는 89% 이상, 더욱 바람직하게는 90% 이상, 더욱 바람직하게는 91% 이상, 더욱 바람직하게는 92% 이상, 더욱 바람직하게는 93% 이상, 더욱 바람직하게는 94% 이상, 더욱 바람직하게는 95% 이상, 더욱 바람직하게는 96% 이상, 더욱 바람직하게는 97% 이상, 더욱 바람직하게는 98% 이상, 더욱 바람직하게는 99% 이상 동일성을 갖는 서열을 포함한다.
또다른 구체예로서, 본 발명에 따른 핵산 또는 기능적 등가물은 서열번호: 74의 서열을 포함하는 항체 AT10_001의 중쇄 암호화 서열 및 서열번호:79의 서열을 포함하는 항체 AT10_001의 경쇄 암호화 서열, 또는 이들 서열에 70% 이상, 바람직하게는 75% 이상, 더욱 바람직하게는 80% 이상, 더욱 바람직하게는 85% 이상, 더욱 바람직하게는 86% 이상, 더욱 바람직하게는 87% 이상, 더욱 바람직하게는 88% 이상, 더욱 바람직하게는 89% 이상, 더욱 바람직하게는 90% 이상, 더욱 바람직하게는 91% 이상, 더욱 바람직하게는 92% 이상, 더욱 바람직하게는 93% 이상, 더욱 바람직하게는 94% 이상, 더욱 바람직하게는 95% 이상, 더욱 바람직하게는 96% 이상, 더욱 바람직하게는 97% 이상, 더욱 바람직하게는 98% 이상, 더욱 바람직하게는 99% 이상 동일성을 갖는 서열을 포함한다.
또다른 구체예로서, 본 발명에 따른 핵산 또는 기능적 등가물은 서열번호: 75의 서열을 포함하는 항체 AT10_005의 중쇄 암호화 서열 및 서열번호: 80의 서열을 포함하는 항체 AR10_005의 경쇄 암호화 서열, 또는 이들 서열에 70% 이상, 바람직하게는 75% 이상, 더욱 바람직하게는 80% 이상, 더욱 바람직하게는 85% 이상, 더욱 바람직하게는 86% 이상, 더욱 바람직하게는 87% 이상, 더욱 바람직하게는 88% 이상, 더욱 바람직하게는 89% 이상, 더욱 바람직하게는 90% 이상, 더욱 바람직하게는 91% 이상, 더욱 바람직하게는 92% 이상, 더욱 바람직하게는 93% 이상, 더욱 바람직하게는 94% 이상, 더욱 바람직하게는 95% 이상, 더욱 바람직하게는 96% 이상, 더욱 바람직하게는 97% 이상, 더욱 바람직하게는 98% 이상, 더욱 바람직하게는 99% 이상 동일성을 갖는 서열을 포함한다.
아미노산 또는 핵산 서열의 동일성 백분율 또는 용어 "% 서열 동일성"은 본원에서, 필요하다면, 최대 퍼센트 동일성을 달성하기 위하여 2개 서열과 도입 갭을 정렬시킨 후 참조 서열의 잔기와 동일한 후보 아미노산 또는 핵산 서열의 잔기 백분율을 의미한다. 정렬을 위한 방법 및 컴퓨터 프로그램은 당업계에 공지되어 있다.
또한, 본 발명에 따른 핵산 분자 또는 서열 또는 기능적 등가물을 포함하는 벡터가 제공된다. 본원에 사용된 용어 "본 발명에 따른 핵산 서열 또는 분자 또는 기능적 등가물을 포함하는 벡터"는 "본 발명에 따른 벡터"로 지칭된다. 본 발명에 따른 핵산 또는 기능적 등가물로 벡터를 제작하는 방법이 공지되어 있다. 본 발명의 벡터를 제조하기에 적절한 벡터의 비한정적인 예는 레트로바이러스 및 렙티바이러스 벡터이다. 이러한 벡터는 다양한 응용에 적절하다. 예를 들면, 치료적으로 이로운 핵산 서열을 포함하는 본 발명의 벡터는 인플루엔자에 대한 예방적 또는 치료적 용도에 적합하다. 이러한 벡터의 개체 투여, 바람직하게는 인간 투여는, 필요시 상기 예방적 또는 치료적 핵산 서열의 발현에 의하여 인 비보에서 인플루엔자에 대한 적어도 부분 치료 또는 예방적 적용이 가능하게 만든다. 이러한 벡터는 또한 관심대상 핵산 분자의 인 비트로 발현과 관련된 적용, 예를 들면 본 발명에 따른 항체 또는 기능적 등가물의 (상업적) 생산에 사용될 수 있다. 또한 본 발명에 따른 핵산 분자 또는 기능적 등가물을 포함하는 분리된 또는 재조합 세포가 제공된다.
본 발명에 따른 핵산 분자 또는 벡터는 인플루엔자 A 바이러스 HA 단백질에 특이적인 항체 또는 기능적 부분 또는 면역글로불린 체인 또는 기능적 등가물을 생성하는데 특히 유용하다. 이는 세포내로 이러한 핵산 분자 또는 벡터를 도입함으로써 수행되며, 세포의 핵산 번역 기구는 암호화된 항체 또는 기능적 부분, 면역글로불린 체인 또는 기능적 등가물을 생산할 것이다. 한 구체예로서, 본 발명에 따른 중쇄 및/또는 경쇄를 암호화하는 핵산 분자 또는 벡터는 예를 들면, 차이니즈 햄스터 난소(CHO)의 세포, NSO(마우스 골수종) 또는 293(T) 세포주와 같은 소위 생산자 세포에서 발현된다. 상기 세포중 일부는 상업적 항체 생산에 맞게 개조되었다. 상기 생산자 세포를 증식시켜 본 발명에 따른 항체를 생산할 수 있는 생산자 세포주를 만든다. 바람직하게는, 상기 생산자 세포주는 인간에 유용한 항체를 제조하는데 적합하다. 따라서, 상기 생산자 세포주에 병원성 미생물 같은 병원성 매개자가 없는 것이 바람직하다. 가장 바람직하게는, 인간 서열로 구성된 항체가 본 발명에 따른 적어도 하나의 핵산 분자 또는 벡터를 이용하여 제조되는 것이다.
따라서, 본 발명에 따른 항체 생산가능한 분리된 또는 재조합 항체 생산 세포가 제공된다. 본원에서 항체 생산 세포는 항체 또는 이것의 기능적 등가물을 생산 및/또는 분비할 수 있는 세포, 및/또는 항체 또는 이것의 기능적 등가물을 생산 및/또는 분비할 수 있는 세포로 개발될 수 있는 세포로 정의된다. 본 발명에 따른 항체 생산 세포는 상업적으로 항체 생산에 적합하게 개조된 생산자 세포가 바람직하다. 바람직하게는, 상기 생산자 세포는 인간에 사용되는 항체를 생산하는데 적합하다. 본 발명에 따른 항체를 생산하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 세포, 바람직하게는 본 발명에 따른 핵산 분자 또는 기능적 등가물 또는 벡터를 갖는 항체 생산 세포를 제공하는 단계; 및 상기 세포가 상기 핵산 분자 또는 기능적 등가물 또는 벡터를 번역하여 본 발명에 따른 항체를 생산하는 단계를 포함한다. 본 발명에 따른 방법은 바람직하게는 본 발명에 따른 항체의 수확, 정제 및/또는 분리의 단계를 포함한다. 본 발명에 따른 획득된 항체는 인간 치료에 사용되는 것이 바람직하고, 선택적으로 추가적 정제, 분리 또는 처리 단계를 포함한다.
일 구체예로서, 본 발명에 따른 항체는 또다른 분체(moiety)와 쌍을 이루어 항체-약물 콘쥬게이트를 형성한다. 본 발명에 따른 항체는 항바이러스 제제, 예를 들면 아실클로버(acyclovir), 펜시클로바(penciclovar), 라미부딘(lamivudine), 리바비린(ribavirin), 자나미버(zanamivir), 라니나미버(laninamivir), 페라미버(peramivir), 이독서리딘(idoxuridine), 오셀타미버(oseltamivir), 아만타딘(amantadine), 레만티딘(remantidine), 막사민(maxamine), 페라미버(peramivir)또는 피말파신(thymalfasin)과 쌍을 이룬다. 본원에서 사용되는 용어 "항바이러스 제제"는 바이러스의 기능 또는 성장을 저하 또는 차단하고/차단하거나 바이러스 파괴를 일으키는 임의의 물질을 의미한다. 또다른 구체예에서, 본 발명에 따른 항체와 쌍을 이루는 분체는 항균성 펩티드이다. 본원에서 사용되는 용어 "항균성 펩티드"는 박테리아, 원생동물, 효모, 곰팡이 및/또는 바이러스와 같인 미생물에 대한 활성을 갖는 가변 길이(통상 6 내지 100 아미노산)의 작은 양친매성 펩티드, 서열 및 구조를 의미한다. 항균성 펩티드는 통상 상대적으로 비특이적 메카니즘을 통하여 작용하여 세포막 파괴 활성을 일으키지만, 수개의 항균성 펩티드는 또한 본래의 면역 반응을 자극할 수 있다. 바람직한 구체예로서, 상기 항균성 펩티드는 항바이러스 활성을 갖는다. 항균성 펩티드의 비제한적 예로서 마가이닌(magainin), PGL, 카테리시딘(cathelicidin)(예를 들면, LL-37 및 카테리시딘-관련 항균성 펩티드(CRAMP)), 알라메티신, 멜리틴 및 세크로핀, 히드라마이신-1, 펙시가난, MSI-78, MSI-843, MSI-594, 폴리페뮤신, 인간 항균성 펩티드, 디펜신, 프로데그린 및 인돌리시딘을 들 수 있다. 또다른 구체예로서, 본 발명에 따른 항체와 쌍을 이루는 분체는 CD3 항체와 같은 면역조절성 분자이다. 이러한 CD3 항체는 T 세포에 결합할 수 있고, 본 발명에 항체와 쌍을 이룬다면, T 세포를 인플루엔자 A 바이러스 감염된 세포에 표적화할 수 있다.
상기 다른 분체, 예를 들면, 세포독성 제제는, 산-불안정 히드라존 링커와 같은 링커, 또는 시트룰린-발린과 같은 펩티드 링커, 또는 티오에테르 링커를 통하여 또는 소르타제 촉매된 아미드전이반응에 의하여 본 발명에 따른 항체와 쌍을 이루는 것이 바람직하다(WO 2010/087994에 자세히 기술됨).
소르타제 촉매된 아미드전이반응(sortase catalized transamidation)은 항체의 중쇄 상에, 바람직하게는 중쇄의 C-말단 부분에, 그리고 상기 항체와 쌍을 이룬 분체 상에서 소르타제 인식 부위(LPETGG)의 조작과 관련이 있다. 항체 및 분체는 또한 통상적으로 GGGGS 서열 및, 정제 목적을 위한 태그, 예를 들면 HIS 태그를 포함한다. 이어서, 소르타제 매개된 아미드전이반응은 클릭 케미스트리 링키지에 의하여 수행된다. 소르타제 매개된 아미드전이반응에서, "클릭 케미스트리 링키지(click chemistry linkage)"는 통상적으로, 예를 들면, 알킨-함유 시약 및 아지드-함유 시약과의 화학적 커플링을 의미하고, 이는 항체에 커플링되는 분체(예를 들면 단백질, 펩티드 또는 항체)의 소르타제 모티프에 그리고 항체의 중쇄의 소르타제 모티프에 글리신의 첨가를 통한 소르타제에 의하여 첨가된다. 일 구체예로서, 본 발명은 소르타제 인식 부위(LPETGG)가 항체의 중쇄 상, 바람직하게는 중쇄의 C-말단 부분에 조작된 항체를 제공하며, 바람직하게는 상기 항체는 추가적으로 GGGGS 서열 및 HIS 태그와 같은 정제 태그를 함유한다.
또다른 구체예로서, 본 발명에 따른 항체는 티오에테르 링크에 의해서 또다른 분체와 쌍을 이룬다. 이러한 경우에, 하나 또는 그 이상의 시스테인은 본 발명에 따른 항체내로 바람직하게는 추가된다. 시스테인은 티올기를 함유하고, 하나 또는 그 이상의 시스테인이 본 발명에 따른 항체로 추가, 또는 본 발명에 따른 항체의 하나 또는 그 이상의 시스테인에 의한 하나 또는 그 이상의 산의 치환, 상기 항체를 또다른 분체와 커플링시킨다. 상기 하나 또는 그 이상의 시스테인은 특정 위치에서 바람직하게는 본 발명에 따른 항체 내로 도입된다. 여기서 특정 위치는 상기 항체의 폴딩에 상당한 영향을 주지 않으며, 항원 결합 또는 반응기(effector) 기능을 상당히 변경시키지 않는 위치이다. 따라서 본 발명은 시스테인 이외의 적어도 하나의 아미노산이 시스테인에 의하여 치환된 본 발명에 따른 항체를 제공한다.
본원에서 기재된 인플루엔자 특이적 항체는 상이한(교차-) 결합 및 중화 능력을 갖는다. 본 발명에 따른 항체, 예를 들면 AT10_001, AT10_002, AT10_003, AT10_004 또는 AT10_005는 본 발명에 따른 또다른 항체와 조합하여 유리하게 사용될 수 있다. 한 구체예로서, 본 발명에 따른 항체는 적어도 하나의 다른 인플루엔자 A 서브타입을 결합 및/또는 중화할 수 있는 본 발명에 따른 또다른 항체와 조합된다. 다양한 인플루엔자 A 바이러스 서브타입을 결합 및/또는 중화시키는 본 발명에 따른 항체의 조합은 단일 처리에서 넓은 범위의 인플루엔자 A 서브타입에 대항할 수 있게 한다. 이러한 조합은 인플루엔자 바이러스의 넓은 범위를 대항하는데 유용하다. 또한, 본 발명에 따른 항체를 인플루엔자 A 바이러스 서브타입을 결합 및/또는 중화시킬 수 있는 공지의 항체와 조합하는 것이 유리하다. 이러한 조합은 예를 들면 인플루엔자 A 바이러스에 대한 더 강한 반응을 제공하고/제공하거나 더 넓은 범위의 인플루엔자 서브타입에 대한 반응을 제공한다. 그러나 또다른 예는 본 발명에 따른 항체 및 인플루엔자에 특이적인 공지된 항체의 조합이다. 또다른 구체예로서, 본 발명은 적어도 2개의 상이한 인플루엔자 A 바이러스 서브타입, 바람직하게는 적어도 3개의 인플루엔자 A 바이러스 서브타입, 더욱 바람직하게는 적어도 4개의 인플루엔자 A 서브타입에 대한 특이성을 갖는 인플루엔자 A 바이러스 이중특이적(bispecific) 항체를 제공한다. 본원에서 사용되는 용어 "인플루엔자 A 바이러스 이중특이적 항체"는 적어도 2개의 상이한 인플루엔자 A 바이러스 서브타입, 예를 들면 2개, 3개 또는 4개 서브타입에 동시에 결합할 수 있는 항체로서 정의되고, 또한 "본 발명에 따른 인플루엔자 A 바이러스 이중특이적 항체" 또는 "본 발명에 따른 이중특이적 항체"로 언급된다. 용어 "인플루엔자 A 바이러스 이중특이적 항체"는 또한 적어도 2개의 상이한 인플루엔자 A 바이러스 서브타입에 동시에 결합할 수 있는 능력을 보유한 이러한 인플루엔자 A 바이러스의 기능적 부분, 예를 들면 이중특이적 단쇄 가변성 단편(scFv), 이중특이적 Fab 단편 및 이중특이적 F(ab')2 단편을 포함한다. 또한, 본 발명에 따른 인플루엔자 A 바이러스 이중특이적 항체를 포함하는 약학적 조성물이 제공된다.
한 구체예로서, 본 발명에 따른 이중특이적 항체는 2개의 비-동일성 중쇄-경쇄 조합을 포함하며, 따라서 2개의 상이한 인플루엔자 A 바이러스 서브타입, 바람직하게는 2개의 상이한 HA서브타입을 인식하는 2개의 항원-결합 영역을 갖는다. 예를 들면, 일 구체예로서, 인플루엔자 A 바이러스 이중특이적 항체는 표 1에 기재된 본 발명에 따른 항체의 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 이중특이적 단쇄 가변성 단편(scFv), 이중특이적 Fab 단편 및 이중특이적 F(ab')2 단편은 예를 들면, 본 발명에 따른 항체의 scFv, Fab 또는 F(ab')2 단편 및 본 발명에 따른 또다른 항체의 cFv, Fab 또는 F(ab')2 단편을 포함한다. 바람직한 구체예로서, 본 발명에 따른 인플루엔자 A 바이러스 이중특이적 항체는 표 1에 기재된 AT10_001, AT10_002, AT10_003, AT10_004 및 AT10_005로 구성된 군에서 선택되는 2개의 항체의 중쇄 및 경쇄, 또는 scFv 또는 이것의, Fab 단편을 포함한다. 바람직하게는, 상기 이중특이적 항체는 항체 AT10_003 또는 AT10_005, 바람직하게는 항체 AT10_005의 경쇄 또는 중쇄, 및 항체 AT10_001, AT10_002 및 AT10_004로 구성된 군에서 선택되는 항체의 중쇄 및 경쇄를 포함한다.
또다른 구체예로서, 본 발명에 따른 2개의 항체는 서로 쌍을 이루거나 또는 본 발명에 따른 항체가 공지의 인플루엔자 특이적 항체와 쌍을 이룬다. 이는 바람직한 구체예로서 소르타제 촉매된 아미드전이반응에 의하여 이루어지며, 이는 본원에서 상술한 바와 같이 WO 2010/087994에 자세히 기재되어 있다. 이러한 목적을 위하여, 소르타제 촉매된 아미드전이반응은, 쌍을 이루는 양쪽 항체의 중쇄에서, 바람직하게는 중쇄의 C-말단 부분에서 소르타제 인식 부위(LPETGG)의 조작을 포함한다. 추가로 상기 항체는 통상적으로 GGGGS 서열 및, HIS 태그와 같은 정제 태그를 포함한다. 따라서, 본 발명에 따른 2개의 항체가 쌍을 이루는 경우 양쪽 상기 항체는 바람직하게는 상술한 바와 같이 WO 2010/087994에 자세히 기재된 바와 같이 조작된다. 이어서 소르타제 매개된 아미드전이반응이 바람직하게 수행된 후 클릭 케미스트리 링키지에 의하여 양쪽 항체가 이들의 중쇄에 의하여 커플링된다. 본원에서 설명한 바와 같이, "클릭 케미스트리 링키지"는 예를 들면, 알킨-함유 시약 및 예를 들면, 아지드-함유 시약과의 케미칼 커플링을 포함하고, 이들은 제1 항체의 중쇄 상에 소르타제 모티프에, 그리고 제1 항체에 커플링되는 제2 항체의 중쇄에 글리신의 첨가를 통한 소르타제에 의하여 첨가된다. 본 발명의 일 구체예는 합성 또는 재조합 다중결합(multimeric) 항체, 다중결합 면역글로불린 또는 이것의 기능적 등가물을 제공하며, 다음을 포함한다:
i) AT10_001 및 AT10_002 및 AT10_003 및 AT10_004 및 AT10_005으로 구성된 군에서 선택되는 항체의 적어도 2개, 바람직하게는 3개의 상이한 중쇄 CDR 서열 및 적어도 2개, 바람직하게는 3개의 상이한 경쇄 CDR 서열; 및
ii) 또다른 항체의 적어도 2개, 바람직하게는 3개의 상이한 중쇄 CDR 서열 및 적어도 2개, 바람직하게는 3개의 상이한 경쇄 CDR 서열.
반드시 필요한 것은 아니지만, 상기 다른 항체는 바람직하게는 또다른 인플루엔자 특이적 항체이다. 특히 바람직한 구체예로서, 본 발명에 따른 적어도 2개의 항체는 소르타제 촉매된 아미드전이반응에 의하여 서로 커플링됨으로써, 상기 적어도 2개의 항체는 바람직하게는 표 1에 기재된 AT10_001 및 AT10_002 및 AT10_003 및 AT10_004 및 AT10_005으로 구성된 군에서 선택된다.
따라서 본 발명의 하나의 바람직한 구체예는 합성 또는 재조합 다중결합 항체, 다중결합 면역글로불린 또는 이것의 기능적 등가물을 제공하며, 다음을 포함한다:
i) AT10_001 및 AT10_002 및 AT10_003 및 AT10_004 및 AT10_005로 구성된 군에서 선택되는 항체의 적어도 2개의 상이한 중쇄 CDR 서열 및 적어도 2개의 상이한 경쇄 CDR 서열; 및
ii) AT10_001 및 AT10_002 및 AT10_003 및 AT10_004 및 AT10_005로 구성된 군에서 선택되는 항체의 적어도 2개의 상이한 중쇄 CDR 서열 및 적어도 2개의 상이한 경쇄 CDR 서열,
여기서, i)에서 선택된 상기 항체는 ii)에서 선택된 상기 항체와는 상이하다.
바람직하게는, 본 발명에 따른 다중결합 항체, 다중결합 면역글로불린 또는 기능적 등가물은 본 발명에 따른 적어도 2개의 항체의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 및 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함한다. 또한, 본 발명은 합성 또는 재조합 다중결합 항체, 다중결합 면역글로불린 또는 이것의 기능적 등가물을 제공하고, 다음을 포함한다:
i) AT10_001 및 AT10_002 및 AT10_003 및 AT10_004 및 AT10_005로 구성된 군에서 선택되는 항체의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 및 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열; 및
ii) AT10_001 및 AT10_002 및 AT10_003 및 AT10_004 및 AT10_005로 구성된 군에서 선택되는 항체의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 및 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열,
여기서, i)에서 선택된 상기 항체는 ii)에서 선택된 상기 항체와는 상이하다.
일 구체예로서, 본 발명에 따른 다중결합 항체, 다중결합 면역글로불린 또는 기능적 등가물은 본 발명에 따른 적어도 2개의 항체의 중쇄 서열 및 경쇄 서열 또는 이들에 적어도 70% 동일한 서열을 포함한다. 본 발명은 또한 합성 또는 재조합 다중결합 항체, 다중결합 면역글로불린 또는 이것의 기능적 등가물을 제공하며, 다음을 포함한다:
i) AT10_001 및 AT10_002 및 AT10_003 및 AT10_004 및 AT10_005로 구성된 군에서 선택되는 항체의 중쇄 서열 및 경쇄 서열, 또는 이들에 70% 이상, 바람직하게는 80% 이상, 더욱 바람직하게는 85% 이상, 더욱 바람직하게는 86% 이상, 더욱 바람직하게는 87% 이상, 더욱 바람직하게는 88% 이상, 더욱 바람직하게는 89% 이상, 더욱 바람직하게는 90% 이상, 더욱 바람직하게는 91% 이상, 더욱 바람직하게는 92% 이상, 더욱 바람직하게는 93% 이상, 더욱 바람직하게는 94% 이상, 더욱 바람직하게는 95% 이상, 더욱 바람직하게는 96% 이상, 더욱 바람직하게는 97% 이상, 더욱 바람직하게는 98% 이상, 더욱 바람직하게는 99% 이상 동일성을 갖는 서열; 및
ii) AT10_001 및 AT10_002 및 AT10_003 및 AT10_004 및 AT10_005로 구성된 군에서 선택되는 항체의 중쇄 서열 및 경쇄 서열, 또는 이들에 70% 이상, 바람직하게는 80% 이상, 더욱 바람직하게는 85% 이상, 더욱 바람직하게는 86% 이상, 더욱 바람직하게는 87% 이상, 더욱 바람직하게는 88% 이상, 더욱 바람직하게는 89% 이상, 더욱 바람직하게는 90% 이상, 더욱 바람직하게는 91% 이상, 더욱 바람직하게는 92% 이상, 더욱 바람직하게는 93% 이상, 더욱 바람직하게는 94% 이상, 더욱 바람직하게는 95% 이상, 더욱 바람직하게는 96% 이상, 더욱 바람직하게는 97% 이상, 더욱 바람직하게는 98% 이상, 더욱 바람직하게는 99% 이상 동일성을 갖는 서열,
여기서, i)에서 선택된 상기 항체는 ii)에서 선택된 상기 항체와는 상이하다.
이러한 다중결합 항체, 다중결합 면역글로불린 또는 기능적 등가물은 통상적으로 헤테로 다중결합 복합체이며, 적어도 항체의 적어도 하나의 중쇄 및 또다른 항체의 적어도 하나의 중쇄를 포함한다. 일 구체예로서, 일 종류의 항체의 중쇄는 다른 종류의 항체의 중쇄와 쌍을 이룬다. 바람직한 구체예로서, 상기 헤테로 다중결합 복합체는 또다른 종류의 항체의 2개의 쌍을 이룬 중쇄에 커플링된, 일 종류의 항체의 2개의 쌍을 이룬 중쇄를 포함한다. 바람직하게는, 상기 항체의 상응하는 경쇄는 상기 쌍을 이룬 중쇄에 결합되어서, 2개의 커플링된 항체를 형성한다. 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "이중 항체(dimeric antiboy)"는 서로 커플링되는 2개의 항체를 의미한다(여기서 각각의 항체는 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄를 포함한다). 용어 "다중결합 항체(multimeric antibody)"는 서로 커플링되는 항체가 적어도 2개, 예를 들면, 2개, 3개, 4개 또는 5개를 의미한다. 용어 "다중결합 면역글로불린(multimeric immunoglobulin)"은 서로 커플링되는 적어도 2개의 면역글로불린 체인(예를 들면, 단일 도메인 항체, 단쇄 항체, 나노바디, 유니바디 또는 단쇄 가변성 단편(scFc))을 의미한다.
일 구체예로서, 항체 AT10_003 또는 AT10_005는 소르타제 촉매된 아미드전이반응에 의하여 AT10_001, AT10_002 및 AT10_004로 구성된 군에서 선택되는 항체와 커플링된다. 이러한 항체의 조합이 바람직하다. 왜냐하면 항체 AT10_003 및 AT10_005는 적어도 인플루엔자 A 바이러스 서브타입 H1 및 H5에 대한 특이성을 갖고, 항체 AT10_001, AT10_002 및 AT10_004는 적어도 인플루엔자 A 바이러스 서브타입 H3 및 H7에 대한 특이성을 갖으며, 높은 중화 능력에 의하여 적어도 H3N2를 중화시킬 수 있다. 따라서, 이러한 조합은 넓은 범위의 인플루엔자 A 바이러스 서브타입에 대한 활성을 제공한다. 바람직하게는, 항체 AT10_005는 소르타제 촉매된 아미드전이반응에 의하여 항체 AT10_001, AT10_002 또는 AT10_004 와 커플링 된다. 왜냐하면 항체 AT10_005는 높은 중화 능력에 의하여 적어도 H1N1 인플루엔자를 중화시킬 수 있다. 따라서 본 발명은 일 구체예로서 본 발명에 따른 인플루엔자 A 바이러스 이중특이적 항체를 제공하는데, 상기 서열은 바람직하게는 표 1에 기재된 바와 같은 항체 AT10_003 또는 항체 AT10_005, 바람직하게는 항체 AT10_005의 중쇄 및/또는 경쇄, 적어도 서열의 일부를 포함하고, 적어도 서열의 일부는 바람직하게는 표 1에 기재된 바와 같은 항체 AT10_001, AT10_002 또는 AT10_004의 중쇄 또는 경쇄를 포함함으로써, 상기 서열의 일부는 상기 항체의 서열의 70% 이상, 더욱 바람직하게는 75% 이상, 더욱 바람직하게는 80% 이상, 더욱 바람직하게는 85% 이상, 더욱 바람직하게는 90% 이상, 더욱 바람직하게는 95% 이상을 포함한다. 특히 바람직한 구체예로서, 본 발명에 따른 인플루엔자 A 바이러스 이중특이적 항체는 표 1에 기재된 항체 AT10_003 또는 항체 AT10_005의 전체 서열, 바람직하게는 항체 AT10_005를 포함하고, 표 1에 기재된 항체 AT10_001, AT10_002, 또는 AT10_004의 전체 서열을 필수적으로 포함한다. 예를 들면, 바람직하게는, 본 발명에 따른 인플루엔자 A 바이러스 이중특이적 항체는 항체 AT10_003 또는 항체 AT10_005의 중쇄 및 경쇄, 및 항체 AT10_001 또는 항체 AT10_002 또는 항체 AT10_004의 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 바람직하게는, 상기 항체는 본원에서 설명한 바와 같이 소르타제 촉매된 아미드전이반응에 의하여 커플링된다.
또다른 구체예로서, 항체 AT10_003은 소르타제 촉매된 아미드전이반응에 의하여 AT10_001, AT10_002, AT10_004 및 AT10_005로 구성된 군에서 선택되는 항체와 커플링된다. 이러한 항체의 조합은 AT10_003 에피토프가 HA 단백질의 HA1 서브유닛에 위치하고, 항체 AT10_001, AT10_002, AT10_004 및 AT10_005의 결합 에피토프가 적어도 부분적으로 단백질의 HA2 서브유닛에 위치하기 때문에 바람직하다. 따라서 이러한 조합은 HA 단백질내에서 상이한 에피토프를 표적화하고, 따라서 이러한 조합은 인플루엔자 A 바이러스에 대한 강한 반응을 제공한다. 따라서 본 발명은 일 구체예로서 본 발명에 따른 인플루엔자 A 바이러스 이중특이적 항체를 제공하며, 바람직하게는 표 1에 기재된 항체 AT10_003의 중쇄 및/또는 경쇄, 서열의 적어도 일부를 포함하고, 바람직하게는 표 1에 기재된 항체 AT10_001, AT10_002, AT10_004 및 AT10_005의 중쇄 및/또는 경쇄, 서열의 적어도 일부를 포함한다. 이에 따라 상기 서열의 일부는 바람직하게는 상기 항체의 서열의 70% 이상, 더욱 바람직하게는 75% 이상, 더욱 바람직하게는 80% 이상, 더욱 바람직하게는 85% 이상, 더욱 바람직하게는 90% 이상, 더욱 바람직하게는 95% 이상을 포함한다. 특히 바람직한 구체예로서, 본 발명에 따른 인플루엔자 A 바이러스 이중특이적 항체는 표 1에 기재된 항체 AT10_003의 전체 서열을 필수적으로 포함하고, 표 1에 기재된 항체 AT10_001, AT10_002, AT10_004 및 AT10_005의 전체 서열을 필수적으로 포함한다. 바람직하게는 상기 항체는 본원에서 설명된 바와 같이 소르타제 촉매된 아미드전이반응에 의하여 커플링된다.
한편, 본 발명의 또다른 구체예는 합성 또는 재조합 다중결합 항체, 다중결합 면역글로불린 또는 이것의 기능적 등가물을 제공하며, 다음을 포함한다:
i) 항체 AT10_002의 적어도 2개의 상이한 중쇄 CDR 서열 및 적어도 2개의 상이한 경쇄 CDR 서열; 및
ii) 항체 AT10_005의 적어도 2개의 상이한 중쇄 CDR 서열 및 적어도 2개의 상이한 경쇄 CDR 서열.
바람직하게는, 본 발명에 따른 상기 다중결합 항체, 다중결합 면역글로불린 또는 이것의 기능적 등가물은 다음을 포함한다:
i) 항체 AT10_002의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 및 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열; 및
ii) 항체 AT10_005의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 및 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열.
특히 바람직한 구체예로서, 본 발명에 따른 상기 다중결합 항체, 다중결합 면역글로불린 또는 이것의 기능적 등가물은 다음을 포함한다:
i) 항체 AT10_002의 중쇄 서열 및 경쇄 서열 또는 이들에 70% 이상, 바람직하게는 80% 이상, 더욱 바람직하게는 85% 이상, 더욱 바람직하게는 86% 이상, 더욱 바람직하게는 87% 이상, 더욱 바람직하게는 88% 이상, 더욱 바람직하게는 89% 이상, 더욱 바람직하게는 90% 이상, 더욱 바람직하게는 91% 이상, 더욱 바람직하게는 92% 이상, 더욱 바람직하게는 93% 이상, 더욱 바람직하게는 94% 이상, 더욱 바람직하게는 95% 이상, 더욱 바람직하게는 96% 이상, 더욱 바람직하게는 97% 이상, 더욱 바람직하게는 98% 이상, 더욱 바람직하게는 99% 이상 동일성을 갖는 서열; 및
ii) 항체 AT10_005의 중쇄 서열 및 경쇄 서열, 또는 이들에 70% 이상, 바람직하게는 80% 이상, 더욱 바람직하게는 85% 이상, 더욱 바람직하게는 86% 이상, 더욱 바람직하게는 87% 이상, 더욱 바람직하게는 88% 이상, 더욱 바람직하게는 89% 이상, 더욱 바람직하게는 90% 이상, 더욱 바람직하게는 91% 이상, 더욱 바람직하게는 92% 이상, 더욱 바람직하게는 93% 이상, 더욱 바람직하게는 94% 이상, 더욱 바람직하게는 95% 이상, 더욱 바람직하게는 96% 이상, 더욱 바람직하게는 97% 이상, 더욱 바람직하게는 98% 이상, 더욱 바람직하게는 99% 이상 동일성을 갖는 서열.
실시예에 나타난 바와 같이, 항체 AT10_002 및 AT10_005에 기초한 다중결합 항체 또는 면역글로불린은 인 비트로 및 인 비보에서 우수한 인플루엔자 중화 활성을 제공한다. AT10_002는 H3N2를 중화시킬 수 있고, AT10_005는 H1N1을 중화시킬 수 있기 때문에, 항체 AT10_002 및 AT10_005에 기초한 다중결합 항체 또는 면역글로불린은 H3N2 및 H1N1 모두를 중화시키기에 특히 적합하다. 또한 H1N1 인플루엔자 A 바이러스 및/또는 H3N2 인플루엔자 A 바이러스를 중화시키는 방법이 제공되며, 상기 방법은 항체 AT10_002 및 AT10_005의 적어도 2개, 바람직하게는 3개의 상이한 중쇄 CDR 서열 및 적어도 2개, 바람직하게는 3개의 상이한 경쇄 CDR 서열을 포함하는 상기 다중결합 항체, 다중결합 면역글로불린 또는 기능적 등가물과 H1N1 인플루엔자 A 바이러스 및/또는 상기 H3N2 인플루엔자 A 바이러스를 접촉시켜, 상기 바이러스의 중화를 일으키는 단계를 포함한다.
일 구체예로서, 본 발명에 따른 다중결합 항체, 다중결합 면역글로불린 또는 기능적 등가물은 이중 항체 또는 이중 면역글로불린이다. 그러나, 본 발명은 또한 기타 다중결합 항체 또는 면역글로불린, 예를 들면 삼중, 사중 또는 오중 항체 또는 면역글로불린을 포함한다.
또한, 의약 및/또는 예방적 제제의 용도로서 본 발명에 따른 다중결합 항체, 다중결합 면역글로불린 또는 기능적 등가물을 포함하는 분리된 또는 재조합 세포 또는 약학적 조성물뿐 아니라, 본 발명에 따른 합성 또는 재조합 다중결합 항체, 다중결합 면역글로불린 또는 기능적 등가물을 제공한다. 실시예에 나타난 바와 같이, 이러한 다중결합 항체 또는 면역글로불린은 인플루엔자 A 감염의 증상을 치료 및/또는 예방 및/또는 완화하기에 특히 적합하다. 따라서 본 발명은 인플루엔자 A 감염의 증상을 적어도 부분적으로 치료 및/또는 예방 및/또는 완화하기 위한 의약 및/또는 예방적 제제의 용도로서 본 발명에 따른 합성 또는 재조합 다중결합 항체, 다중결합 면역글로불린 또는 기능적 등가물을 제공할 뿐만 아니라, 본 발명에 따른 인플루엔자 A 바이러스 감염을 적어도 부분적으로 치료 및/또는 예방하기 위한 방법을 제공하며, 본 발명에 따른 치료적 유효량의 다중결합 항체, 다중결합 면역글로불린 또는 기능적 등가물 및/또는 세포 또는 본 발명에 따른 다중결합 항체, 다중결합 면역글로불린 또는 기능적 등가물을 포함하는 약학적 조성물을 필요시 개체에 투여하는 단계를 포함한다.
본 발명에 따른 다중결합 항체, 다중결합 면역글로불린 또는 기능적 등가물은 인플루엔자 A 바이러스의 진단 용도에 적합하다. 이는 예를 들면 본 발명에 따른 다중결합 항체, 다중결합 면역글로불린 또는 기능적 등가물과 샘플을 접촉시키고, 이어서 인플루엔자 A 바이러스가 다중결합 항체, 다중결합 면역글로불린 또는 기능적 등가물과 결합되었는지 여부를 결정함으로써 이루어진다. 본 발명은 따라서 인플루엔자 A 바이러스가 존재하는지 여부를 결정하는 방법을 제공하며, 다음 단계를 포함한다:
- 본 발명에 따른 다중결합 항체, 다중결합 면역글로불린 또는 기능적 등가물을 상기 샘플에 접촉시키는 단계,
- 상기 인플루엔자 A 바이러스가 존재한다면 상기 다중결합 항체, 다중결합 면역글로불린 또는 기능적 등가물과 결합시키는 단계, 및
- 인플루엔자 A 바이러스가 상기 다중결합 항체, 다중결합 면역글로불린 또는 기능적 등가물에 결합되었는지 여부를 결정함으로써 인플루엔자 A 바이러스가 상기 샘플에 존재하는지 여부를 결정하는 단계.
인플루엔자 A 감염의 진단 용도로서 본 발명에 따른 합성 또는 재조합 다중결합 항체, 다중결합 면역글로불린 또는 기능적 등가물이 제공된다.
분리되어 제조된 항체의 혼합물에 비하여 본 발명에 따른 다중결합 항체, 다중결합 면역글로불린 또는 기능적 등가물의 주요 장점은 약학적 용도로 본 발명에 따른 다중결합 항체, 다중결합 면역글로불린 또는 기능적 등가물에 대하여 단지 일회의 등록 과정이 필요하다는 사실이다. 한편, 항체의 혼합물은 복수의 등록 과정이 요구되고, 통상 각 개별 항체에 대한 절차 및 이러한 혼합물 전체에 대한 분리된 절차가 요구된다. 본 발명에 따른 다중결합 항체, 다중결합 면역글로불린 또는 기능적 등가물의 용도는 따라서 시간 및 비용면에서 효율적이다.
본 발명에 따른 항체는 인플루엔자 A 바이러스에 대항할 수 있다. 본 발명에 따른 항체는 의약 또는 예방적 제제의 용도에 특히 적합하다. 바람직하게는, 본 발명에 따른 항체는 인간 서열을 구성하는 것이 사용되어, 인간에 처치되었을 경우 부작용의 발생이 감소한다. 이러한 인간 서열은 인간으로부터 분리될 수 있거나 합성적으로 또는 재조합적으로 인간 항체의 서열에 기초하여 제조될 수 있다. 따라서 의약 및/또는 예방적 제제의 용도로서 본 발명에 따른 항체가 제공된다. 또한 의약 및/또는 예방적 제제의 용도로서 본 발명에 따른 핵산 분자 또는 이것의 기능적 등가물, 또는 상기 핵산 또는 기능적 등가물을 포함하는 본 발명에 따른 벡터가 제공된다. 본 발명에 따른 핵산 또는 기능적 등가물을 투여하면, 본 발명에 따른 항체 내로 숙주 시스템에 의하여 인 시츄(in situ ) 번역될 것이다. 본 발명에 따른 생산된 항체는 인플루엔자 A 감염을 예방하고/예방하거나 대항할 수 있다. 본 발명에 따른 항체는 특히 의약으로서의 용도에 적합하다. 왜냐하면 이들은 (이질아형-결합 항체로서 수개의 인플루엔자 A 바이러스 서브타입에 결합할 수 있기 때문이다. 특히 바람직한 구체예로서, 상기 항체는 항체 AT10_004, AT10_003, AT10_002, AT10_001, AT10_005, 또는 이것의 기능적 부분을 포함한다. 따라서, 의약 및/또는 예방적 제제의 용도로서 서열번호: 31의 중쇄 서열 및 서열번호: 36의 경쇄 서열을 포함하는 항체 AT10_004가 제공된다. 또한, 의약 및/또는 예방적 제제의 용도로서 서열번호: 32의 중쇄 서열 및 서열번호:37의 경쇄 서열을 포함하는 항체 AT10_003가 제공된다. 또한, 의약 및/또는 예방적 제제의 용도로서 서열번호: 33의 중쇄 서열 및 서열번호: 38의 경쇄 서열을 포함하는 항체 AT10_002가 제공된다. 또한, 의약 및/또는 예방적 제제의 용도로서 서열번호: 34의 중쇄 서열 및 서열번호: 39의 경쇄 서열을 포함하는 항체 AT10_001가 제공된다. 또한, 의약 및/또는 예방적 제제의 용도로서 서열번호: 35의 중쇄 서열 및 서열번호: 40의 경쇄 서열을 포함하는 항체 AT10_005가 제공된다.
더욱 바람직하게는, 의약 및/또는 예방적 제제의 용도로서 본 발명에 따른 상기 항체는 항체 AT10_002, AT10_004, AT10_001 및 AT10_005로 구성된 군에서 선택된다. 실시예에 나타난 바와 같이, 이러한 항체들은 인플루엔자에 대항하는데 특히 효과적이다. 가장 바람직하게는, 본 발명은 의약 및/또는 예방적 제제의 용도로서 AT10_002를 제공하며, 왜냐하면 이 항체는 인플루엔자에 대항하는데 매우 효과적이기 때문이다.
본 발명에 따른 항체 또는 본 발명에 따른 핵산 분자 또는 이것의 기능적 등가물은 바람직하게는 인플루엔자 A 바이러스 감염을 적어도 부분적으로 치료 및/또는 예방하는데 사용된다. 본원에서 사용된 바와 같이 "인플루엔자 A 바이러스 감염을 적어도 부분적으로 치료 및/또는 예방"은 인플루엔자 A 바이러스 감염에 대항하여 인플루엔자 A 바이러스 감염으로 야기된 증상을 완화시키고/거나 인플루엔자 A 바이러스 감염으로부터 야기된 염증에 대항하는 것을 포함한다. 인플루엔자 A 바이러스 감염으로 야기된 증상의 예로서 발열, 호흡기 증후군, 예컨대, 기침, 후두통, 콧물, 코막힘, 호흡 문제 및 폐렴, 근육통, 두통, 피로감 및 결막염을 포함하며 이에 한정되는 것은 아니다. 또한, 본 발명에 따른 항체 또는 본 발명에 따른 핵산 분자 또는 이것의 기능적 등가물 또는 본 발명에 따른 벡터가 인플루엔자 A 바이러스 감염을 적어도 부분적으로 치료 및/또는 예방하는 방법의 용도로 제공된다. 또한, 인플루엔자 A 바이러스 감염을 적어도 부분적으로 치료 및/또는 예방하기 위한 인플루엔자 의약 및/또는 예방적 제제의 제조를 위하여 본 발명에 따른 항체 또는 기능적 부분 또는 면역글로불린 체인 또는 기능적 등가물 또는 핵산 분자 또는 기능적 등가물 또는 본 발명에 따른 벡터의 용도가 제공된다. 바람직한 항체는 항체AT10_004, AT10_003, AT10_002, AT10_001 및 AT10_005이고, 표 1에 기재된 중쇄 및 경쇄 서열을 갖는다.
또한, 본 발명은 본 발명에 따른 항체 및/또는 본 발명에 따른 이중특이적 항체 및 약학적 허용가능한 담체, 희석제 및/또는 부형제를 포함하는 약학적 조성물을 제공한다. 또한, 본 발명에 따른 핵산 분자 또는 기능적 등가물, 또는 이러한 핵산 분자 또는 기능적 등가물을 포함하는 본 발명에 따른 벡터, 및 약학적으로 허용가능한 담체, 희석제 및/또는 부형제를 포함하는 약학적 조성물이 제공된다. 적절한 담체는 예로서 키홀 림펫 헤모시아닌(KLH), 혈청 알부민(예, BSA 또는 RSA) 및 오브알부민을 포함한다. 바람직한 구체예로서, 상기 적절한 담체는 식염수와 같은 용액을 포함한다. 바람직하게는, 본 발명에 따른 약학적 조성물은 인간에 사용하기 적절하다.
또한, 본 발명은 인플루엔자 A 바이러스 감염을 적어도 부분적으로 치료 및/또는 예방하는 방법을 제공하며, 본 발명에 따른 항체 및/또는 본 발명에 따른 이중특이적 항체, 및/또는 본 발명에 따른 핵산 분자또는 이것의 기능적 등가물 및/또는 본 발명에 따른 벡터, 및/또는 본 발명에 따른 약학적 조성물의 치료적 유효량으로 필요한 개체에 투여하는 단계를 포함한다. 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "개체(individual)"는 인간 또는 동물이고, 바람직하게는 인플루엔자 바이러스에 의하여 감염된 동물, 예를 들면 조류 및 포유류이다. 개체는 닭, 오리, 거위, 칠면조, 백조, 에뮤, 기니파울, 꿩, 인간, 돼지, 페렛, 물개, 토끼, 고양이, 개 및 말을 포함하며 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 바람직한 구체예로서, 개체는 인간이다.
인플루엔자 A 바이러스 감염을 적어도 부분적으로 치료 또는 예방하기 위하여, 본 발명에 따른 항체, 핵산 분자 또는 이것의 기능적 등가물, 벡터, 및/또는 약학적 조성물이 바람직하게는 인플루엔자 A 바이러스 감염이 일어나기 전에 개체에 투여된다. 또는, 본 발명에 따른 항체, 핵산 분자 또는 이것의 기능적 등가물, 벡터, 및/또는 약학적 조성물이 개체가 이미 감염된 경우에 투여된다. 이러한 경우에, 인플루엔자 A 바이러스 감염이 대항을 받으며, 인플루엔자 A 바이러스 감염으로부터 야기되는 증상이 완화되고/거나, 인플루엔자 A 바이러스 감염으로부터 야기되는 염증이 대항을 받는다. 상기 항체 또는 기능적 등가물은 합병증의 위험 증가를 갖는 개체, 예를 들면 병원치료중인 개체, 유아, 면역약화된 개체 및/또는 노령자에게 투여되는 것이 특히 바람직하다. 본 발명에 따른 항체, 핵산 분자 또는 이것의 기능적 등가물, 벡터 및/또는 약학적 조성물은 바람직하게는 일회 또는 그 이상 주입에 의하여 투여된다. 본 발명에 따른 항체 또는 이것의 적어도 2개의 조합 투여를 위한 통상적 용량은 체중 1kg 당 0.1 내지 10 mg 이다. 본 발명에 따른 항체는 예방 또는 치료적 용도로 약학적으로 허용가능한 담체, 희석제 및/또는 부형제와 혼합하는 것이 바람직하다.
본 발명에 따른 항체는 또한 진단적 용도에 특히 적합하다. 예를 들면 개체, 바람직하게는 인간이 인플루엔자 A 바이러스 감염으로 고통을 받는다면, 샘플, 예를 들면 타액, 가래, 혈액, 또는 조직 샘플을 상기 개체로부터 획득할 수 있다. 이어서, 상기 샘플을 인플루엔자 A 바이러스의 존재에 대하여 본 발명에 따른 항체를 이용하여 테스트할 수 있다. 바람직하게는, 상기 샘플은 본 발명에 따른 항체와 혼합하며, 인플루엔자 A 바이러스의 HA 단백질에 특이적으로 결합할 것이다. 샘플에서 인플루엔자 A 바이러스의 HA 단백질의 존재는 인플루엔자 A 바이러스 감염의 존재를 표시하는 것이다. 본 발명에 따른 항체에 결합된 HA 단백질을 포함하는 인플루엔자 A 바이러스 및/또는 인플루엔자 A 바이러스의 HA 단백질은 샘플로부터 분리될 수 있고, 당업계에 공지된 임의의 방법을 이용하여 검색될 수 있다. 상기 공지의 방법은 자성비드를 이용한 분리, 스트렙타비딘-코팅된 비드 또는 컬럼에 고정화된 2차 항체를 이용한 분리를 포함하나 이에 한정되는 것은 아니다. 대안적으로, 또는, 부가적으로 본 발명에 따른 항체는 상기 항체를 검색할 수 있기 위하여 표지되며, 예를 들면, 형광 표지, 또는 방사능 표지를 포함하나 이에 제한되는 것은 아니다. 대안적으로, 본 발명에 따른 항체는 상기 항체에 대하여 관련된 표지된 2차 항체를 이용하여 검색된다. 만일 상기 항체의 결합이 검색되면, 인플루엔자 A 바이러스의 HA 단백질이 존재하고, 이는 인플루엔자 A 바이러스 감염의 존재를 나타내는 것이다. 따라서 본 발명은 인플루엔자 A 바이러스 감염의 진단 용도로서 본 발명에 따른 항체를 제공한다.
따라서, 본 발명은 인플루엔자 A 바이러스가 샘플에 존재하는지 여부를 결정하는 방법을 제공하며, 다음 단계를 포함한다:
- 본 발명에 따른 항체와 상기 샘플을 접촉시키는 단계,
- 상기 인플루엔자 A 바이러스가 존재한다면 상기 항체와 결합하도록 하는 단계, 및
- 인플루엔자 A 바이러스가 상기 항체에 결합되었는지 여부를 결정하여 인플루엔자 A 바이러스의 존재 여부를 결정하는 단계.
바람직한 구체예로서, 본 발명은 개체가 인플루엔자 A 바이러스 감염으로 고통을 받는지 여부를 결정한다. 따라서, 개체가 인플루엔자 A 바이러스 감염으로 고통을 받는지 여부를 결정하는 방법이 제공되며, 다음을 포함한다:
- 본 발명에 따른 항체와 상기 개체의 샘플을 접촉시키는 단계,
- 상기 인플루엔자 A 바이러스가 존재한다면 상기 항체와 결합시키는 단계, 및
- 인플루엔자 A 바이러스가 상기 항체에 결합되었는지 여부를 결정하여 상기 개체가 인플루엔자 A 바이러스 감염으로부터 고통을 받는지 여부를 결정하는 단계.
바람직하게는 상기 개체는 인간이다.
또다른 바람직한 구체예로서, 본 발명은, 인플루엔자 A 바이러스 그룹 1 헤마글루티닌(H1/H5)의 A38, A40, A41, A42, A291, A292, A293, A318, B18, B19, B20, B21, B38, B41, B42, B45, B46, B48, B49, B52, B53, 및 B56 위치에서 아미노산과 상호작용할 수 있는, 분리된 합성 또는 재조합 항체 또는 이것의 기능적 부분 또는 면역글로불린 체인 또는 이것의 기능적 등가물을 제공한다. 이들은 항체 AT10_005와 상호작용하는 헤마글루티닌 아미노산이다. 상기 헤마글루티닌 아미노산과 특이적으로 상호작용할 수 있는 항체, 면역글로불린 또는 기능적 부분 또는 이것의 기능적 등가물이 제공된다.
또다른 구체예로서, 인플루엔자 A 바이러스 그룹 2 헤마글루티닌(H3/H7)의 A21, A324, A325, A327, B12, B14, B15, B16, B17, B18, B19, B25, B26, B30, B31, B32, B33, B34, B35, B36, B38, B146, B150, B153, 및 B154 위치에서 아미노산과 상호작용할 수 있는, 분리된 합성 또는 재조합 항체 또는 기능적 부분 또는 면역글로불린 체인 또는 이것의 기능적 등가물이 제공된다. 이들은 항체 AT10_004와 상호작용하는 헤마글루티닌 아미노산이다. 상기 헤마글루티닌 아미노산과 특이적으로 상호작용할 수 있는 항체, 면역글로불린 또는 기능적 부분 또는 이것의 기능적 등가물이 제공된다.
또다른 구체예로서, 인플루엔자 A 바이러스 그룹 2 헤마글루티닌(H3/H7)의 A38, A48, A275, A276, A277, A278, A289, A291, A318, B19, B20, B21, B36, B38, B39, B41, B42, B45, B46, B48, B49, B50, B52, B53, B56, B57, B58, B150 위치에서 아미노산과 상호작용할 수 있는, 분리된 합성 또는 재조합 항체 또는 기능적 부분 또는 면역글로불린 체인 또는 이것의 기능적 등가물이 제공된다. 이들은 항체 AT10_002와 상호작용하는 헤마글루티닌 아미노산이다. 상기 헤마글루티닌 아미노산과 특이적으로 상호작용할 수 있는 항체, 면역글로불린 또는 기능적 부분 또는 이것의 기능적 등가물이 제공된다.
헤마글루티닌에 대한 상술한 아미노산의 번호매김은 Wilson et al. 1981 Nature 289, 366-373 및 Nobusawa et al. 1991 Virology 182, 475-485에 따른다.
또다른 구체예는 인플루엔자 A 바이러스 헤마글루티닌 상의 동일한 에피토프의 적어도 일부에 대해 AT10_001 또는 AT10_002 또는 AT10_003 또는 AT10_004 또는 AT10_005와 경쟁할 수 있는 분리된 합성 또는 재조합 항체 또는 이것의 기능적 부분 또는 면역글로불린 체인 또는 이것의 기능적 등가물을 제공하고, 상기 항체, 면역글로블린, 기능적 부분 또는 등가물은 상기 인플루엔자 A 바이러스 헤마글루티닌에 대하여 적어도 동일한 친화도를 가지므로(통상적으로 AT10_001 또는 AT10_002 또는 AT10_003 또는 AT10_004 또는 AT10_005에 비교되면 동일 또는 그 이하의 Km 값을 갖음), 상기 인플루엔자 A 바이러스 헤마글루티닌과 AT10_001 또는 AT10_002 또는 AT10_003 또는 AT10_004 또는 AT10_005 간의 결합을 감소시킨다. 상기 에피토프는 바람직하게는 인플루엔자 A 바이러스 헤마글루티닌의 A38, A40, A41, A42, A291, A292, A293, A318, B18, B19, B20, B21, B38, B41, B42, B45, B46, B48, B49, B52, B53 및 B56 위치에서 아미노산을 포함한다. 또다른 바람직한 구체예로서, 상기 에피트포는 인플루엔자 A 바이러스 헤마글루티닌의 A21, A324, A325, A327, B12, B14, B15, B16, B17, B18, B19, B25, B26, B30, B31, B32, B33, B34, B35, B36, B38, B146, B150, B153, B154 위치에서 아미노산을 포함한다. 또다른 바람직한 구체예로서, 상기 에피토프는인플루엔자 A 바이러스 헤마글루티닌의 A38, A48, A275, A276, A277, A278, A289, A291, A318, B19, B20, B21, B36, B38, B39, B41, B42, B45, B46, B48, B49, B50, B52, B53, B56, B57, B58, B150 위치에서 아미노산을 포함한다.
본 발명은 인플루엔자 A 바이러스 감염에 대한 치료법을 제공한다.
도 1은 인플루엔자 바이러스의 도식이다(Subbarao K. and Joseph T. Nature Reviews Immunology 2007: 7, 267-278).
도 2는 Bcl6 및 Bcl-xL 형질도입된 폴리클론 배양된 B 세포와 함께 Alexa Fluor 647로 표지된 인플루엔자 H3(A/Wyoming/03/2003) 및 H7 (A/Netherlands/219/2003) HA 단백질의 배양 후 H3 및 H7 결합 B 세포의 세포 분류 결과이다.
도 3은 HA 형질감염된 293T 세포에 결합하는 항체에 관한 것이다. 293T 세포는 H1(A/NewCaledonia/20/199) , H3(A/Wisconsin/67/2005), H5(A/Thailand/Vietnam Consensus/2004) 및 H7( A/Netherlands/219/2003)의 HA를 암호화하는 DNA로 형질감염되고, mAb와 배양되었다. 항체 결합은 항-인간 IgG-PE로 검색되었다.
도4는 바이러스 감염된 세포에 결합하는 항체에 관한 것이다. MDCK-SIAT 세포는 인플루엔자 H1N1(A/Hawaii/31/2007) 및 H3N2(A/Netherlands/177/2008)로 감염되고 mAb로 배양되었다. 항체 결합은 항-인간 IgG-PE로 검색되었다.
도 5는 바이러스 감염된 세포에 결합하는 항체이다. MDCK 세포는 인플루엔자 H1N1 (A/Neth/602/2009), H3N2(A/Swine/St. Oedenrode/1996), 고병원성 H5N1 (A/Turkey/Turkey/2004), 고병원성 H7N7 (A/Ch/Neth/621557/03) 및 저병원성 H7N1 (A/Ch/Italy/1067/1999)로 감염되고, mAb로 배양되었다. 항체는 항-인간 IgG-PE로 검색되었다.
도 6은 항체 경쟁 분석에 관한 것이다. 표지된 항체 AT10_001, AT10_002 및 AT10-004는 비표지된 경쟁자 항체(A)의 존재 하에서 H3N2 (A/Netherlands/177/2008) 감염된 MDCK-SIAT 세포의 결합에 대하여 테스트되었다. 표지된 AT10_004는 또한 비표지된 경쟁자 항체(B)의 존재 하에서 H1N1 (A/Hawaii/31/2007) 감염된 MDCK-SIAT 세포의 결합에 대하여 테스트되었다. Rituximab(Ritux, CD20 항체)는 음성 대조구로서 사용되었다.
도 7은 인 비트로 pH-이동 실험에 의하여 상이한 HA 구조에 대한 AT 10 항체의 결합에 대한 것이다. 293T 세포는 H3(A/Wisconsin/67/2005)의 HA를 암호화하는 DNA로 형질감염되었고, 트립신-EDTA로 플라스틱으로부터 분리되었으며, 500 mM의 디티오트레이톨(DTT), PBS pH5 처리 또는 비처리된 것으로 두었다. 세포는 이어서 재조합 AT10_001, AT10_002, AT10_003 또는 AT10_004와 배양하였다. 항체 결합은 항-인간-IgG-PE를 이용하여 검색되었다.
도 8은 인플루엔자 A/HKx-31(H3N2)의 양을 점차로 증가시키면서 비강으로 챌린지시킨 C57B1/6J 마우스의 생존률(A) 및 체중 변화(B)를 보여준다.
도 9는 인플루엔자 A/HKx-31(H3N2)의 10 치사 용량 50(20,000 TOID50)으로 비강 챌린지 이전에 일일 1 또는 5 kg/체중의 항체 AT10_001, AT10_002 또는 AT10_004로 정맥 주입시킨 마우스의 생존률(A) 및 체중 변화(B)를 보여준다.
도 10은 인플루엔자 A/HKx-31(H3N2)의 10 치사 용량 50(20,000 TOID50)으로 비강 챌린지 이전, 또는 비강 챌린지 이후 2, 3, 또는 4일에 일일 1 또는 5 kg/체중의 항체 AT10_001, AT10_002 또는 AT10_004로 정맥 주입시킨 마우스의 생존률(A) 및 체중 변화(B)를 보여준다.
도 11은 H3 및 H1에 대한 BiFlu의 이중 특이성 및 BiFlu에서 카파 및 람다 경쇄의 존재를 보여주는 SPR 플롯이다. 항체 AT10_002(람다 경쇄), AT10_005(카파 경쇄) 및 BiFlu(AT10_002 및 AT10_005)는 센서 칩에 코팅된 항-IgG(A) 또는 항-람다(B)에 캡쳐되었다. 연이은 배양 싸이클에서 캡쳐된 항체는 헤마글루티닌 H3 및 H1, 및 카파 및/또는 람다에 대한 경쇄 항체에 결합하는 그들의 능력을 테스트하였다. SPR 이동의 증가는 캡쳐된 항체에 결합하는 단백질을 나타낸다.
도 12는 바이러스 감염된 세포에 결합하는 항체에 관한 것이다. MDCK-SIAT 세포는 인플루엔자 H1N1(A/Hawaii/31/2007) 및 H3N2(A/Netherlands/177/2008)로 감염되고, AT10_002, AT10_005 또는 BiFlu mAb의 다양한 농도로 배양되었다. 항체 결합은 항-인간 IgG-PE로 검색되었다.
도 13은 인플루엔자 H1N1(A/Hawaii/31/2007)(A) 및 H3N2( A/Netherlands/177/2008)(B)에 대한 항체 AT10_002, AT10_005 및 BiFlu의 중화 커브에 관한 것이다. 각 바이러스는 다양한 양의 항체와 배양되고 이어서 MDCK-SIAT 세포의 융합성 단일층에 첨가되었다. 24시간 배양 기간 후에, 세포를 세척하고, 고정하고 DAPI 및 인플루엔자 핵 단백질로 염색하였다. 감염된 세포의 백분율(무항체 대조구에 상대적임)이 시험된 항체의 각 농도에 대하여 나타난다.
도 14는 H1N1 인플루엔자 A/PR/8/34의 10 치사 용량 50으로 비강 챌린지 이전에 일일 1mg/kg 항체 AT10_001, AT10_002 또는 AT10_005 또는 Rituximab, 2mg/kg AT10_002/AT10_005 혼합(각 항체에 대한 1 mg/kg) 또는 2mg/kg BiFlu로 정맥 주입시킨 마우스의 생존률(A) 및 체중 변화(B)를 보여준다.
도 2는 Bcl6 및 Bcl-xL 형질도입된 폴리클론 배양된 B 세포와 함께 Alexa Fluor 647로 표지된 인플루엔자 H3(A/Wyoming/03/2003) 및 H7 (A/Netherlands/219/2003) HA 단백질의 배양 후 H3 및 H7 결합 B 세포의 세포 분류 결과이다.
도 3은 HA 형질감염된 293T 세포에 결합하는 항체에 관한 것이다. 293T 세포는 H1(A/NewCaledonia/20/199) , H3(A/Wisconsin/67/2005), H5(A/Thailand/Vietnam Consensus/2004) 및 H7( A/Netherlands/219/2003)의 HA를 암호화하는 DNA로 형질감염되고, mAb와 배양되었다. 항체 결합은 항-인간 IgG-PE로 검색되었다.
도4는 바이러스 감염된 세포에 결합하는 항체에 관한 것이다. MDCK-SIAT 세포는 인플루엔자 H1N1(A/Hawaii/31/2007) 및 H3N2(A/Netherlands/177/2008)로 감염되고 mAb로 배양되었다. 항체 결합은 항-인간 IgG-PE로 검색되었다.
도 5는 바이러스 감염된 세포에 결합하는 항체이다. MDCK 세포는 인플루엔자 H1N1 (A/Neth/602/2009), H3N2(A/Swine/St. Oedenrode/1996), 고병원성 H5N1 (A/Turkey/Turkey/2004), 고병원성 H7N7 (A/Ch/Neth/621557/03) 및 저병원성 H7N1 (A/Ch/Italy/1067/1999)로 감염되고, mAb로 배양되었다. 항체는 항-인간 IgG-PE로 검색되었다.
도 6은 항체 경쟁 분석에 관한 것이다. 표지된 항체 AT10_001, AT10_002 및 AT10-004는 비표지된 경쟁자 항체(A)의 존재 하에서 H3N2 (A/Netherlands/177/2008) 감염된 MDCK-SIAT 세포의 결합에 대하여 테스트되었다. 표지된 AT10_004는 또한 비표지된 경쟁자 항체(B)의 존재 하에서 H1N1 (A/Hawaii/31/2007) 감염된 MDCK-SIAT 세포의 결합에 대하여 테스트되었다. Rituximab(Ritux, CD20 항체)는 음성 대조구로서 사용되었다.
도 7은 인 비트로 pH-이동 실험에 의하여 상이한 HA 구조에 대한 AT 10 항체의 결합에 대한 것이다. 293T 세포는 H3(A/Wisconsin/67/2005)의 HA를 암호화하는 DNA로 형질감염되었고, 트립신-EDTA로 플라스틱으로부터 분리되었으며, 500 mM의 디티오트레이톨(DTT), PBS pH5 처리 또는 비처리된 것으로 두었다. 세포는 이어서 재조합 AT10_001, AT10_002, AT10_003 또는 AT10_004와 배양하였다. 항체 결합은 항-인간-IgG-PE를 이용하여 검색되었다.
도 8은 인플루엔자 A/HKx-31(H3N2)의 양을 점차로 증가시키면서 비강으로 챌린지시킨 C57B1/6J 마우스의 생존률(A) 및 체중 변화(B)를 보여준다.
도 9는 인플루엔자 A/HKx-31(H3N2)의 10 치사 용량 50(20,000 TOID50)으로 비강 챌린지 이전에 일일 1 또는 5 kg/체중의 항체 AT10_001, AT10_002 또는 AT10_004로 정맥 주입시킨 마우스의 생존률(A) 및 체중 변화(B)를 보여준다.
도 10은 인플루엔자 A/HKx-31(H3N2)의 10 치사 용량 50(20,000 TOID50)으로 비강 챌린지 이전, 또는 비강 챌린지 이후 2, 3, 또는 4일에 일일 1 또는 5 kg/체중의 항체 AT10_001, AT10_002 또는 AT10_004로 정맥 주입시킨 마우스의 생존률(A) 및 체중 변화(B)를 보여준다.
도 11은 H3 및 H1에 대한 BiFlu의 이중 특이성 및 BiFlu에서 카파 및 람다 경쇄의 존재를 보여주는 SPR 플롯이다. 항체 AT10_002(람다 경쇄), AT10_005(카파 경쇄) 및 BiFlu(AT10_002 및 AT10_005)는 센서 칩에 코팅된 항-IgG(A) 또는 항-람다(B)에 캡쳐되었다. 연이은 배양 싸이클에서 캡쳐된 항체는 헤마글루티닌 H3 및 H1, 및 카파 및/또는 람다에 대한 경쇄 항체에 결합하는 그들의 능력을 테스트하였다. SPR 이동의 증가는 캡쳐된 항체에 결합하는 단백질을 나타낸다.
도 12는 바이러스 감염된 세포에 결합하는 항체에 관한 것이다. MDCK-SIAT 세포는 인플루엔자 H1N1(A/Hawaii/31/2007) 및 H3N2(A/Netherlands/177/2008)로 감염되고, AT10_002, AT10_005 또는 BiFlu mAb의 다양한 농도로 배양되었다. 항체 결합은 항-인간 IgG-PE로 검색되었다.
도 13은 인플루엔자 H1N1(A/Hawaii/31/2007)(A) 및 H3N2( A/Netherlands/177/2008)(B)에 대한 항체 AT10_002, AT10_005 및 BiFlu의 중화 커브에 관한 것이다. 각 바이러스는 다양한 양의 항체와 배양되고 이어서 MDCK-SIAT 세포의 융합성 단일층에 첨가되었다. 24시간 배양 기간 후에, 세포를 세척하고, 고정하고 DAPI 및 인플루엔자 핵 단백질로 염색하였다. 감염된 세포의 백분율(무항체 대조구에 상대적임)이 시험된 항체의 각 농도에 대하여 나타난다.
도 14는 H1N1 인플루엔자 A/PR/8/34의 10 치사 용량 50으로 비강 챌린지 이전에 일일 1mg/kg 항체 AT10_001, AT10_002 또는 AT10_005 또는 Rituximab, 2mg/kg AT10_002/AT10_005 혼합(각 항체에 대한 1 mg/kg) 또는 2mg/kg BiFlu로 정맥 주입시킨 마우스의 생존률(A) 및 체중 변화(B)를 보여준다.
본 발명은 다음의 실시예에 의하여 추가적으로 설명된다. 이러한 실시예들은 본 발명의 범위를 제한하는 것이 아니며 단지 본 발명을 명확히 한다.
실시예
불멸화된
B 세포들의 제조
인간 기억 B 세포들을, Kwakkenbos 등 (Generation of stable monoclonal antibody-producing B cell receptor- positive human memory B cells by genetic programming. Nature Medicine (2010) vol. 16 (1) pp. 123-8 및 특허출원 WO 2007/067046)에 의해서 서술된 BCL6 / Bcl-xL 기술을 사용하여 불멸화하였다. 요약하면, 인플루엔자 백신화된 공여체로부터의 인간 기억 B 세포들을, BCL6 및 Bcl-xL를 함유하는 레트로바이러스 벡터로 형질도입시켰다. 형질도입된 B 세포들은, CD40 리간드 발현 L-세포들 및 인터루킨 (IL)-21을 함유하는 배양액 중에서 유지될 수 있다 (R&D systems).
이질아형
mAb
들 (
heterosubtypic
mAbs
)의 선별
이질아형 교차-결합 mAb들을 분비하는 B 세포들을 확인하기 위해서 2가지 방법들을 사용하였다.
i) 인플루엔자 H3 (A/Wyoming/03/2003) 및 H7 (A/Netherlands/219/2003) HA 단백질들 (Protein Sciences)을 Alexa Fluor 647 (Molecular Probes)로 표지하고, Bcl6 및 Bcl-xL 형질도입된 폴리클론 배양된 B 세포들과 함께 배양하였다. HA 결합 B 세포들을 FACSAria (도 2)에 의해서 웰 당 단일 세포로 분류하고, B 세포 클론들의 상등액이 ELISA에 의해서 HA 결합하거나 또는 H3N2 (A/Netherlands/177/2008) 감염된 세포들 및/또는 H7 (A/Netherlands/219/2003) 형질감염된 HEK 세포들에 결합하는 것으로 스크리닝되기 이전에 2 내지 3 주 동안 배양액 중에서 유지하였다.
ii) 세포들을, 예를 들어 웰 당 40개 세포들로 작은 풀들에 접종하고, 배양액 중에서 2-3 주 동안 유지하였다. 이러한 풀들의 상등액에 대해서 H7 형질감염된 HEK 세포들에 결합하는지를 스크리닝하였다. 이중 양성 테스트된 웰들의 B 세포들을 웰 당 1개 세포로 접종하였다. 이러한 모노클론 B 세포주들의 배양 상등액을 사용하여 ELISA에 의해서 HA 결합 여부를 스크리닝하는데 사용하였다.
1 HA 타입보다 많게 반응성을 나타내는 B 세포들을 더욱 배양하였으며, ELISA에 의한 HA 인식 (표 2) 및 HA 발현 HEK 세포들에 대한 결합 (도 3)에 대해서 특성화하였다.
HA
ELISA
교차-반응성 B 세포 클론들의 B 세포 상등액을 ELISA에 의해서 테스트함으로써 다양한 HA 항원들에 결합하는지 여부를 테스트하였다. H1 (A/New Caledonia/20/1999), H3 (A/Wyoming/03/2003), H5 (A/Vietnam/1203/2004) 및 H7 (A/Netherlands/219/2003) (Protein Sciences)의 재조합 HA를 ELISA 플레이트에 1 ㎍/ml로 코팅하였다. 코팅 이후에, 플레이트를 PBS 및 350 ㎕ 블록킹 버퍼로 1x 세척하고, PBS/4%Protivar를 첨가한 다음 실온에서 1시간 동안 배양하였다. 이어서, 플레이트를 PBST (PBS/0.05%Tween20)로 3x 세척하고, 항체/배양 상등액들을 웰들에 첨가하였다. 실온에서 1시간 동안 배양을 진행한 다음, 플레이트를 PBST로 3x 세척하였다. 이어서, 샘플들을 염소 항-인간 IgG-HRP 항체 (Jackson)와 함께 실온에서 1시간 동안 배양하였다. 결합된 항체들을 TMB (3,3',5,5' 테트라메틸벤지딘) 기질 완충용액을 사용하여 검출하였으며, H2SO4를 사용하여 반응을 중지시켰다. Envision (PerkinElmer) 상에서 OD 450nm를 측정하였다. AT10_001 및 AT10_002는 H3 및 H7 단백질들 양자 모두를 인식하였지만, H1 및 H5의 HA 단백질들은 인식하지 않았다. AT10_003은 H3, H5 및 H7 단백질들을 인식한 반면, AT10_004는 H1, H3 및 H7 단백질들을 인식하였다 (표 2).
항체 결합
HA
형질감염된 293T 세포들
세포 표면 발현된 HA에 대한 AT10 mAbs의 이질아형 결합을 테스트하기 위해서, 293T 세포들을 다른 전장 HA 구조체들로 형질감염시켰다. Fugene (Roche)을 사용하여, 293T 세포들을, H1 (A/New Caledonia/20/1999), H3 (A/Wisconsin/67/2005), H5 (A/Thailand/Vietnam Consensus/2004) 및 H7 (A/Netherlands/219/2003)의 HA를 암호화하는 DNA로 형질감염시켰다. 형질감염된 세포들을 IgG 항체들을 함유하는 B 세포 상등액과 함께 4℃에서 30분 동안 배양한 다음, 150 ㎕ PBS/2%FCS로 2x 세척하였다. 항체 결합은 항-인간 IgG-PE (Southern Biotech)로 검출하였으며, FACScanto (Becton, Dickinson and Company) 상에서 분석하였다 (도 3). 대조구으로서, 형질감염되지 않은 293T 세포들을 사용하였다. AT10_001 및 AT10_002는 H3 및 H7 양자 모두의 세포 표면 발현된 단백질들을 인식하였지만, H1 및 H5의 HA 단백질들은 인식하지 않았다. AT10_003은 H3, H5 및 H7 단백질들을 인식한 반면, AT10_004는 H1, H3 및 H7 HA 단백질들을 인식하였다.
선택된 항체들의
클로닝
RNeasy
미니 키트 (Qiagen)를 사용하여 전장 RNA를 분리하고, cDNA를 제조한 다음, PCR을 수행하고, 중 및 경쇄 가변 영역들을 pCR2.1 TA 클로닝 벡터 (Invitrogen) 내로 클로닝하였다. 역전사효소 또는 DNA 중합효소에 의해서 유도되는 돌연변이들을 배제하기 위해서, 몇몇 독립적인 클로닝 실험들을 수행하였다. 재조합 mAb를 제조하기 위해서, 인간 IgG1을 갖는 프레임 내에 중 및 경쇄 가변 영역들을 클로닝하고, 카파 불변 영역들을 pcDNA3.1 (Invitrogen) 기반의 벡터 내로 클로닝하였으며, 293T 세포들을 잠정적으로 감염시켰다. AKTA (GE healthcare)를 사용하여 배양 상등액으로부터 재조합 mAb를 정제하였다.
AT10
항체들의 교차 결합 특이성
다양한 HA 서브타입들에 결합하는 항체들의 능력을 테스트하기 위해서, 11개의 다른 재조합 HA 단백질들 (Sino Biological Inc and Protein Sciences)을 사용하였다. 이러한 HA 단백질들에 대한 반응성 (표 3)을 전술한 바와 같이 ELISA 중에서 테스트하였다. 어떠한 mAbs도 인플루엔자 B와 반응성을 보이지 않았다. AT10_001, AT10_002, AT10_003 및 AT10_004는 모든 인간 그룹 2 HA 단백질들에 대해서 결합하는 것으로 나타났다. AT10_001, AT10_003 및 AT10_004는 또한 돼지 H4N6 (A/Swine/Ontario/01911-1/1999)에 대한 반응성도 보였다. AT10_002 및 AT10_003은 오리 H10N3 (A/duck/Hong Kong/786/1979) 및 오리 H15N8 (A/duck/AUS/341/1983)을 인식하였으며, AT10_004는 H15N8 (A/duck/AUS/341/1983)에도 일부 반응성을 보였다. AT10_003은 H9N2 (A/Hong Kong/1073/1999) 및 H5N1 (A/Vietnam/1203/2004)로부터의 그룹 1 HA 분자들을 인식한 반면에, AT10_004는 H1N1 (A/California/07/2009) 및 H9N2 (A/Hong Kong/1073/1999)의 HA들에도 결합하는 것으로 나타났다. AT10_005는 테스트된 그룹 1 HA 단백질들에 배타적으로 결합하였다.
바이러스 감염된 세포들에 대한 항체 결합
AT10 항체들인 AT10_001, AT10_002, AT10_003 및 AT10_004의 바이러스 감염된 세포들에 대한 결합 능력을 테스트하기 위해서, 인플루엔자 H1N1 (A/Hawaii/31/2007) 및 H3N2 (A/Netherlands/177/2008) 감염된 세포들 (바이러스 균주들은 Department of Medical Microbiology, AMC, Amsterdam으로부터 구입)에 대한 FACS 분석을 수행하였다. MDCK-SIAT 세포들을 T175 배양 플라스크 중에서, DMEM/FCS/PS/G418 중의 80-100% 융합도 (confluency)로 성장시켰다. 세포층을 10 ml PBS로 2x 세척한 다음, 15 ml의 Optimem/PS/G418/Trypsin을 첨가하였다. 이어서, 0.5 ml의 100.000 TCID50 인플루엔자 바이러스 (H1N1 또는 H3N2)를 플라스크에 첨가하고, 세포들을 37℃에서 배양하였다. 24-48 시간 경과 후에, 세포들을 10 ml PBS로 2x 세척하고, Trypsin-EDTA를 사용하여 플라스틱으로부터 분리하였다. 세포들을 계수하고, 사용 이전까지 -150 ℃에서 냉동시켰다. 감염된 세포들을 해동한 다음, IgG 항체/B 세포 상등액과 함께 4℃에서 30분 동안 배양하고, 150 ㎕ PBS/2%FCS로 2x 세척하였다. 항체 결합을 항-인간 IgG-PE로 검출하였으며, FACScanto (Becton, Dickinson and Company) 상에서 분석하였다. 대조구로서, 비감염된 세포들을 사용하였다 (도 4). 모든 mAbs는 H3N2 감염된 세포들에 결합하였지만, 비감염된 세포들에는 결합하지 않았다. 항체 AT10_004 및 AT10_003은 H1N1 감염된 세포들에도 일부 결합 특성을 나타내었다.
유사한 실험들을 AT10 항체들인 AT10_001, AT10_002, AT10_003, AT10_004 및 AT10_005에 대해서, 인플루엔자 H1N1 (A/Neth/602/2009), H3N2 (A/Swine/St. Oedenrode/1996), 고병원성 H5N1 (A/Turkey/Turkey/2004), 고병원성 H7N7 (A/Ch/Neth/621557/03) 및 저병원성 H7N1 (A/Ch/Italy/1067/1999) 감염된 세포들 (Central Veterinary Institue, Lelystad)로 수행하였다. MDCK 세포들을 전술한 바와 같이 바이러스로 감염시켰으며, 세포들만을 4% 파라포름알데히드로 20 분 동안 4℃에서 고정시키고, PBS로 1x 세척한 다음, 동결시켰다. 대조구로서, 비-감염된 세포들을 사용하였다. FACS 염색 및 분석을 전술한 바와 같이 수행하였다 (도 5 및 표 4). AT10_001은 두 가지 H7 바이러스들 모두를 인식하였지만, H3N2 (A/Swine/St.Oedenrode/1996) 감염된 세포들을 인식하지는 못했다. AT10_001은 H1N1 (A/Neth/602/2009)에 대해서 일부 반응성을 나타내었다. 항체 AT10_002 및 AT10_004는 모든 3가지 그룹 2 인플루엔자로 감염된 세포 집단들을 인식하였으며, AT10_004는 또한 H5N1 (A/Turkey/Turkey/2004) 인플루엔자에 대해서도 일부 반응성을 나타내었다. AT10_003은 H3N2 (A/Swine/St.Oedenrode/1996) 및 H7N7 (A/Ch/Neth/621557/2003) 감염된 세포들에 대해서 일부 낮은 정도의 결합만을 나타내었다. AT10_005는 그룹 1 인플루엔자 감염된 세포들에 결합하였지만, 그룹 2 인플루엔자 감염된 세포들에는 결합하지 않았다.
바이러스 중화
획득한 항체들이 인플루엔자 A 바이러스 감염을 차단할 수 있는지 여부를 결정하기 위해서, 인 비트로 중화 분석을 수행하였다. 분석은 MDCK-SIAT 세포들 (Journal of Virology Aug. 2003; pp. 8418-25)에 대해서 수행되었다. MDCK-SIAT 세포들은 96 웰 플레이트 (CellCarrier Plate, PerkinElmer) 내의, DMEM/8%FCS/PS/G418 중에서 80-100% 융합도로 성장시켰다. 중화 분석은 FCS 또는 BSA 없이 Optimem/PS/G418/Trypsin 배지 중에서 수행하였다. 50 ㎕의 재조합 mAb를 50 ㎕의 H3N2 (A/Ned/177/2008) 또는 H1N1 (A/Hawaii/31/2007) 인플루엔자 바이러스 현탁액 (100TCID50/50 ㎕)과 혼합하고, 37 ℃에서 1 시간 동안 배양하였다. 이어서, 현탁액을 100 ㎕ Optimem/PS/G418/Trypsin 중의 MDCK-SIAT 세포들을 함유하는 96-웰 플레이트 내로 다중으로 전달하였다. 사용 이전에 MDCK-SIAT 세포들은 150 ㎕ PBS로 2회 세척하였다. 이어서 플레이트들을 실온에서 2500 rpm으로 15분 동안 원심분리하였고, 37℃/5% CO2 중에 보관하였다. 24시간 경과 이후에, 세포들을 PBS로 2회 세척하고, 실온에서 10분 동안 포르말린 (물 중의 37% 포름알데히드)으로 고정하고, 150 ㎕ PBS로 2회 세척하고, DAPI 및 인플루엔자 바이러스의 핵 단백질에 대한 항체 (NP-FITC, Abcam)로 실온에서 염색하였다. 30분 후에, 세포들을 150 ㎕의 PBS로 2회 세척하고, 100 ㎕의 PBS/50% 글리세롤을 웰들에 첨가하였다. MDCK-SIAT 세포들의 바이러스 감염을 측정하였으며, 20x 대물렌즈를 사용하여 Operetta (PerkinElmer) 상에서 분석하였다. mAbs의 중화 능력을 정량화하기 위해서, 감염된 세포들의 숫자를 계수하였다 (DAPI 및 NP-FITC에 대해서 양성) (표 5). IC50 수치들을 Prism 중에서 계산하였고, 수치들은 1개의 대표 실험으로부터 도출하였으며, 분석 지점들은 4중으로 수행하였다. AT10_001, AT10_002 및 AT10_004는 인 비트로에서 H3N2 (A/Ned/177/2008) 및 H3N2 HKX-31 인플루엔자 바이러스 감염의 억제 효능을 나타내었다. H1N1 (A/Hawaii/31/2007)의 중화는 AT10_001, AT10_002, AT10_003 및 AT10_004에 대해서는 관찰되지 않았다.
획득된 AT10 항체들이 다중 인플루엔자 A 바이러스 균주를 차단할 수 있는지 여부를 결정하기 위해서, 추가적인 인 비트로 중화 분석을 수행하였다. 인플루엔자 바이러스 A/swine/Neth/St. Oedenrode/96 (H3N2; de Jong et al. 1999), A/ck/Neth/621557/03 (H7N7; van der Goot et al. 2005), A/ck/Italy/1067/99 (H7N1), A/turkey/Turkey/05 (H5N1; Londt et al. 2008) 및 A/Neth/602/2009 (swine-origin H1N1; Munster et al. 2009)를 이러한 분석에서 사용하였다. Madin-Darby 개 신장 (MDCK) 세포들을, 5% FBS (Integro) 및 1% Pen 스트렙토마이신 (Gibco BRL Life Technologies)을 함유하는 Optimem (Gibco BRL Life Technologies) 중에서 배양하였다.
세포들을 96-웰 플레이트 중에 웰 당 3 x 104 세포들의 밀도로 접종하였으며, 37℃에서 밤새 배양하였다. 15 ㎍/ml의 농도로부터 출발하여 PBS 중에서 3 배의 연속적인 mAb 희석액들을 제조하였다. 리툭시맙 (Rituximab) mAb를 음대조구로 함께 사용하였다. 바이러스 희석액들은 항생제로 보충된 Optimem으로 이루어진 바이러스 감염 배지 중에서 제조하였으며, LPAI 바이러스의 경우에는, 1 ㎍/ml 트립신/TPCK (Sigma)에서 제조하였다. 각각의 mAb 희석액들을 동일한 부피의 바이러스와 혼합한 다음, 37℃에서 1시간 동안 배양하였다. 세포들을 PBS로 세척한 이후에, mAb/바이러스 혼합물 (~100-1000 TCID50)을 세포 단일층 상에 접종하였다. 세포들을 37℃에서 24-32시간 동안 배양하고, 이후 PBS로 2회 세척하고, 4% 포르말린을 사용하여 20분 동안 고정한 다음, PBS로 다시 세척하였다. 배지만으로 배양한 세포들을 음대조구로 포함시켰으며, 바이러스만으로 배양한 세포들을 양대조구로 포함시켰다. 분석은 4중으로 수행하였다. 세포들은 DAPI 및 인플루엔자 바이러스의 핵 단백질에 대한 항체 (NP-FITC, Abcam 또는 HB65에 이어서 염소-항-마우스 IgG Alexa-647, Invitrogen)로 1시간 동안 실온에서 염색하였다. 염색 이후에 세포들을 150 ㎕의 PBS로 2회 세척하고, 웰들에 100 ㎕의 PBS/50% 글리세롤을 첨가하였다. MDCK 세포들의 바이러스 감염을 측정하였으며, 10x 대물렌즈를 사용하여 Operetta (PerkinElmer) 상에서 분석하였다. mAb들의 중화 능력을 정량화하기 위해서, 감염된 세포들의 숫자를 계수하였다 (DAPI 및 NP-FITC/HB65-Alexa-647에 대해서 양성). IC50 수치들을 Prism에서 계산하였으며, 수치들은 1개의 대표 실험으로부터 얻었다. 결과를 표 7에 도시하였다. AT10_002 및 AT10_004는 인 비트로에서 그룹 2 인플루엔자 바이러스 감염의 억제 효능을 나타내었지만, 그룹 1 바이러스에 의한 감염을 예방하지는 않았다. 항체 AT10_005는 그룹 1 인플루엔자 A 바이러스들에 의한 감염을 예방하였지만, 그룹 2 바이러스들에 대해서는 아무런 효과가 없었다. 항체 CR8020 (WO 2010 130636)은 H3N2 A/Swine/Neth/St에 대해서 아무런 중화 능력을 나타내지 않았다. Oedenrode/96 및 H7N1 A/ck/Italy/1067/99는 15 ㎍/ml에서 IC50 수치를 나타낸 반면에, AT10_002 및 AT10_004는 4 ㎍/ml 미만의 IC50 수치를 나타내었다.
항체 경쟁
항체 AT10_001 및 AT10_003을 Alexa Fluor 555 (Molecular Probes)로 표지하였고, 항체 AT10_002 및 AT10_004를 Alexa Fluor 647 (Molecular Probes)로 표지하였다. 표지된 항체들에 대해서, 이들이 결합 능력을 유지하는지 여부를 결정하기 위해서 H3N2 (A/Netherlands/177/2008) 감염된 MDCK-SIAT 세포들에 대한 결합을 테스트하였다. 경쟁 실험을 위해서는, H3N2 (A/Netherlands/177/2008) 감염된 세포들을 비-표지된 경쟁 항체의 양을 증가시키면서 10분 동안 4℃에서 배양하였고, 다음으로 Alexa Fluor-표지된 항체를 첨가해 주었다. 세포-항체 혼합물을 4℃에서 15분 동안 더 배양하고, PBS/2%FCS로 2x 세척한 다음, Guava easyCyte 8 (Millipore) 상에서 분석하였다. AT10_001, AT10_002 및 AT10_004는 모두 HA 단백질의 유사한 영역에 결합하며, 그들 모두는 서로 다른 것들의 결합을 차단한다 (도 6A). 또한, 항체 경쟁을 H1N1 감염된 세포들 (A/Hawaii/31/2007)에 대해서 수행하였다. AT10_004-Alexa-647 항체 결합은 비표지된 AT10_004 및 AT10_005에 의해서 차단된다 (도 6B). AT10_005 항체는 그룹 1 HA 분자들의 줄기 영역을 인식한다. AT10_004는 결합에 있어서 AT10_005와 경쟁하기 때문에, AT10_004 역시 HA 줄기 영역을 인식하는 것으로 판단된다. AT10_001, AT10_002 및 AT10_004는 모두 HA 단백질 상의 유사한 영역에 결합하기 때문에 (도 6A), AT10_001 및 AT10_002 역시 줄기 영역 상에 그들의 결합 에피토프를 갖는다.
HA1
서브유닛
ELISA
HA1 서브유닛이 항체가 HA 단백질에 결합하는데 필수적인지 여부를 테스트하기 위해서, 서브유닛 특이적 ELISA를 수행하였다. 전장 H3 (A/Aichi/2/1968, 전장)의 재조합 HA 및 H3 HA1 서브유닛 (A/Aichi/2/1968, HA1 서브유닛, Met-1 - Arg 345)을 1 ㎍/ml로 ELISA 플레이트에 코팅하였다. 코팅 이후에, 플레이트를 PBS 및 300 ㎕의 블록킹 완충용액으로 1x 세척하고, PBS/4% Protivar를 첨가한 다음 실온에서 1시간 동안 배양하였다. 이어서, 플레이트를 PBST (PBS/0.05% Tween20)로 3x 세척하고, 재조합 항체들을 웰에 첨가하였다. 실온에서 1시간 동안 배양을 진행한 이후에, 플레이트를 PBST로 3x 세척하였다. 이어서, 샘플들을 염소 항-인간 IgG-HRP 항체 (Jackson)와 함께 실온에서 1시간 동안 배양하였다. 결합된 항체들은 TMB 기질 완충용액을 사용하여 검출하였으며, H2SO4를 사용하여 반응을 중단시켰다. OD 450nm를 Envision (PerkinElmer) 상에서 측정하였다 (표 6). AT10_001, AT10_002 및 AT10_004는 전장 H3 HA 단백질을 인식하였지만, 이러한 단백질의 HA1 서브유닛은 그렇지 않았으며, 이는 그 결합 에피토프가, 적어도 부분적으로는, 단백질의 HA2 서브유닛 상에 위치한다는 것을 의미한다. AT10_003은 전장 HA 단백질 및 HA1 서브유닛 모두를 인식하였으며, 이는 AT10_003 에피토프가 HA 단백질의 HA1 서브유닛 상에 위치한다는 것을 의미한다.
다양한
HA
형태에 대한
AT10
항체들의 결합
비리온의 식균성 흡수에 따라서, 엔도좀의 산성 환경은 바이러스막과 엔도좀 막의 HA-촉발 융합을 유발한다. 이러한 융합은 HA 단백질의 형태적 변화에 의해서 매개되는데 (낮은 pH에 의해서 촉발), 상기 형태는 융합 전 상태에서 융합 후 상태로 변화한다. HA의 어떠한 형태적 구조에 항체가 결합할 수 있는지를 테스트하기 위해서 인 비트로 pH-시프트 실험을 수행하였다.
Fugene (Roche)을 사용하여 293T 세포들을 H3의 HA를 암호화하는 DNA (A/Wisconsin/67/2005)로 형질감염시켰다. 형질감염 48시간이 경과한 후에, 트립신-EDTA를 사용하여 세포들을 수거하였으며, 추후 사용 이전까지 -150 ℃에서 보관하였다. pH-시프트 실험을 위해서, 세포들을 PBS로 2x 세척한 다음, 실온에서 PBS 중의 10 ㎍/ml 트립신-EDTA로 30분 동안 배양하였다. 세포들을 PBS로 2x 세척하고, 트립신 조건으로서 분획을 분리하였다. 잔류 세포들은 2개의 튜브들에 나누고, 500 mM 디티오쓰레이톨 (DTT)로 실온에서 20분 동안 처리하거나, 또는 37 ℃에서 PBS pH5로 5분 동안 배양하였다. 세포들을 PBS로 2x 세척하고, 재조합 AT10_001, AT10_002, AT10_003 또는 AT10_004와 함께 배양하였다. 항-인간-IgG-PE (southern Biotech) 항체를 사용하여 항체 결합을 검출하였으며, Guava easyCyte 8 (Millipore) (도 7) 상에서 분석하였다. AT10_001, AT10_002, AT10_003 및 AT10_004는 모두 트립신 처리된 세포들에 결합한다. AT10_001, AT10_002 및 AT10_004의 결합은 형질감염된 세포들을 pH5 완충용액으로 처리함으로써 상실되었으며, 이는 이러한 항체들이 HA 단백질의 융합 전 형태를 인식하지만, 융합 후 형태는 인식하지 못한다는 것을 의미한다. 세포들을 DTT로 처리하여 HA1 서브유닛이 HA2 서브유닛으로부터 분리되도록 유도하면, 이러한 항체의 결합에 아무런 영향을 미치지 않으며, 이는 결합 에피토프가 HA2 서브유닛 상에 위치한다는 것을 의미한다. AT10_003은 융합 전 및 융합 후 형태 모두를 인식하지만, 결합은 DTT 처리에 의해서 상실되며, 이는 결합 에피토프가 HA1 서브유닛이 존재하는 경우에만 활용가능하다는 점을 의미한다.
인 비보에서
AT10
항체들의
예방적
및
치료적
효능
AT10 항체들의 효능을 결정하기 위해서, 마우스 인플루엔자 감염 모델 중에서 테스트를 수행하였다. 수컷 C57Bl/6J 마우스 (그룹 당 4 마리)에 대해서 인플루엔자 A/HKx-31 (H3N2)의 양을 증가시키면서 비강내 감염시켰으며, 바이러스 투여량 반응을 측정하기 위해서 14일 동안 하루에 2회 체중 변화를 모니터링하였다. 인도적 종점으로서 25%의 체중 감소를 사용하였으며; 체중이 25% 이상 감소하는 마우스들은 연구로부터 제외하였다. 가장 높은 투여량 그룹에서는 (20000 TCID50), 모든 동물들이 8일 이내에 체중의 25%가 감소하였으나, 2000 TCID50 그룹에서는 단지 50%의 마우스들만이 이러한 체중 감소 정도에 도달하였다 (도 8). 이러한 결과에 기초하여, 10 LD50 (20,000 TCID50)의 바이러스 투여량을 후속 항체 실험들에서 사용하였다.
항체 AT10_001, AT10_002, AT10_004 및 음대조구 항체 (리툭시맙 Rituximab)의 인플루엔자 모델에서의 예방적 효능을 테스트하였다. 마우스에 정맥내로 1 또는 5 mg/kg 항체를 주사하였으며, 1일 후에 10 LD50 인플루엔자 A/HKx31로 감염시켰다. 실험이 종료된 이후에도 10일 동안 체중을 모니터링하였다. 모든 대조구 마우스들은 8주 이내에 25%의 체중 감소를 나타내었으며, 실험으로부터 제외되었다. 그러나, 예방적 AT10 항체를 투여받은 어떠한 마우스들도 실험으로부터 제외되지 않았으며, 이는 항체들의 보호적 효과를 입증하는 것이다 (P=<0.000.1, Mantel-Cox, 도 9A). 모든 AT10 항체 그룹들에 대해서, 투여량 의존적인 효과가 관찰될 수 있었는데, 예를 들어 1 mg/kg 항체의 투여량이 투여된 마우스들은 동일한 항체 5 mg/kg이 투여된 마우스들에 비해서 더욱 많은 체중 감소를 나타내었다 (도 9B, C, D). 1 mg/kg의 AT10_002로 처리하는 경우, 1 mg/kg의 AT10_001로 처리하는 경우에 비해서, 감염 4일째로부터 실험 종료시까지 더욱 현저한 보호성을 나타내었다 (P=<0.05, 2 way ANOVA). 1 mg/kg의 AT10_002를 투여한 마우스와 1 mg/kg의 AT10_004를 투여한 마우스의 체중 감소에 있어서는 그다지 현저한 차이점이 존재하지 않았으나, AT10_002의 보호 활성이 더욱 우수한 경향을 나타내는 점이 명확하게 관찰되었다. 체중 감소 그래프로부터, 항체의 활성의 하기와 같이 순위 매겨진다: AT10_002 > AT10_004 > AT10_001.
예방적 인플루엔자 실험에서 가장 우수한 보호 활성을 나타낸 AT10 항체는 AT10_002였으며, 이에 대해서 인플루엔자 모델에서 치료적 효능을 테스트하였다. 10 LD50 인플루엔자 A/HKx31로 감염시킨지 2일, 3일 또는 4일 경과 후에, 15 mg/kg의 항체로 마우스에 정맥내 주사하였다. 대조구로서, 10 LD50 인플루엔자 A/HKx31로 감염시키기 하루 전에, 15 mg/kg의 AT10_002 또는 음대조구 항체 (리툭시맙, 15 mg/kg)를 마우스에 주사하였다. 실험이 종료된 이후에 10일 동안 체중을 모니터링하였다. 결과를 도 10에 도시하였다. 리툭시맙을 투여한 모든 대조구 마우스들은 8.5일 이내에 25%의 체중 감소를 나타내었으며, 연구로부터 제외되었지만, 예방적 AT10_002 항체 (day -1)을 투여한 어떠한 마우스도 체중 감소를 나타내지 않았고, 연구로부터 제외되어야만 했다. 이러한 사실은 AT10_002 항체들의 보호적 효과를 확인해주는 것이다. 인플루엔자 감염 2일 또는 3일 후에 AT10_002를 정맥내 투여한 경우, 모든 마우스에서 치명적인 체중 감소를 예방하였으며, 이는 AT10_002 항체의 치료적 효과를 보여주는 것이다. AT10_002 항체로 감염 후 4일 시점에서 인플루엔자 감염된 마우스를 처리하는 것에 의해서 40%의 마우스들이 치명적 체중 감소로부터 보호되었다. 이러한 결과는 AT10_002 항체가 인플루엔자 감염 후 수 일이 지난 시점에서도 치사를 방지하기 위해서 사용될 수 있다는 점을 보여준다.
pan
-특이적 항-인플루엔자 A
IgG
다중결합 항체의 제조
대부분의 인플루엔자 A 바이러스들을 인식하는 다중결합 항체 복합체를 제조하기 위해서, WO 2010/087994에 상세하게 서술된 소르타제 (sortase) 기법을 사용하여 AT10_002 및 AT10_005를 함께 결합시켰다.
AT10_002 및 AT10_005를 연결하는 것을 가능케 하기 위해서, 소르타제 인식 부위 및 His6 태그를 함유한 태그로서 (ST로 명명) GGGGSLPETGGGHHHHHH 서열을 유전자 융합을 통해서 항체의 중사슬 중 C-말단에 부착시켰다.
소르타제 반응은, 60 μM의 소르타제 및 500 μM의 GGG-디벤조-아자시클로-옥틴 (DIBAC)를 함유한 반응 완충용액 (25 mM Tris, pH 7.5, 150 mM NaCl, 10 mM CaCl2) 2000 ㎕ 중에 10.0 mg AT10-002 ST 항체를 혼합함으로써 수행하였다.
유사하게, 10.0 mg AT10-005 ST 항체를 90 μM의 소르타제 및 1 mM의 GGG-아지드를 함유한 소르타제-완충용액 2000 ㎕와 혼합하였다.
두 샘플들 모두를 37 ℃에서 16시간 동안 배양하였다. 배양 후, 50 mM의 EDTA를 첨가함으로써 소르타제를 불활성화시켰다. 샘플을 겔 여과 컬럼에 로딩하기 이전에, 반응 혼합물을 원심분리하여 (3 분, 13.200 rpm) 응집물들을 펠렛화하였다. 2개의 소르타제-태그된 항체들에 대한 겔 여과 크로마토그래피를 HiLoad Superdex 200 16/60 컬럼 (GE Healthcare, Piscataway, NJ, United States), 커플링 완충용액 (25 mM Tris, pH 7.5 + 150 mM NaCl) 중에서 수행하였다. 샘플들을 로딩하기 이전에, 컬럼을 1.0 CV (컬럼 부피) 커플링 완충용액으로 평형화하였다. 로딩 이후에, 컬럼에 1.5 CV 평형화 완충용액을 흘려주었다. 다음으로, 정제된 항체들에 대해서 클릭-화학 커플링을 수행하였다. 3.0 mg AT10-002-DIBAC를 2.9 mg AT10-005-아지드와 혼합하고, 3.0 ml 커플링 완충용액 (25 mM Tris, pH 7.5, 150 mM NaCl) 중에서 25 ℃로 배양하였다. 16시간 경과 후, PBS (Fresenius Kabi, Bad Homburg, Germany) 중에서 샘플에 대한 겔 여과 (전술한 바와 같음)를 수행하였다. IgG 다이머들을 함유하는 분획들을 수집하고, 풀화한 다음, 50 kDa 컷-오프 멤브레인 AMICON 원심분리 필터 장치 (Millipore, Billerica, MA, United States)로 농축하였다.
BiFlu
제제에 대한 정량적
SPR
분석
다이머 BiFlu (예를 들어, AT10_002 (람다 경쇄) 및 AT10_005 (카파 경쇄) 양자 모두로 구성된 다이머)가 생성되었는지, 또한 제제가 AT10_002 AT10_005 헤테로다이머로 구성되는지 여부를 확인하기 위해서 BiFlu 제제에 대해서 표면 플라즈마 공명 (Surface plasma resonance (SPR)) 분석을 수행하였다.
SPR 분석은 종래 문헌에 서술된 바와 같이 (Lokate et al .,2007, J. Am. Chem. Soc. 129:14013-140318), IBIS MX96 SPR 영상화 시스템 (IBIS Technologies BV., Enschede, The Netherlands) 상에서 수행되었다. 요약하면, 하나의 SPR 사이클은 하나 또는 그 이상의 단계들로 구성되는데, 이러한 단계들에서 분석물들이 코팅된 센서 상으로 흘러내려진다. 이어서 재생 (regeneration) 단계가 수행되는데, 이러한 단계에서는 임의의 결합된 분석물이 센서로부터 제거된다. 하나의 실험에서 복수의 사이클들이 수행될 수 있다. 본 발명의 SPR 포획-결합 분석에서는, 관심대상이 되는 항체들이 먼저 이소타입-특이적 항체 (즉, 항-인간 IgG, 항-인간 카파 경쇄 또는 항-인간 람다 경쇄) 상에 포획되고, 이는 SPR 센서 상에 고정된 다음, 분석물과 함께 배양된다. 얻어진 데이터는 Sprint 소프트웨어 (version 1.6.8.0, IBIS Technologies BV, Enschede, The Netherlands)를 사용하여 분석하였다.
이소타입 특이적 항체들인 항-인간 IgG (Jackson Immunoresearch, West Grove, PA, USA), 항-인간 카파 경쇄 (Dako, Glostrup, Denmark) 및 항-인간 람다 경쇄 (Dako, Glostrup, Denmark)을, 커플링 완충용액 (10 mM NaAc, pH 4.5, 0.03 % Tween20) 중에서, 연속 흐름 마이크로스팟터 장치 (Wasatch Microfluidics, Salt Lake City, UT, USA)를 사용하여 센서 표면에 스팟팅함으로써, 아민-특이적 EasySpot 금-필름 겔-타입 SPR-칩 (Ssens BV, Enschede, The Netherlands) 상에 고정함으로써, SPR 센서를 코팅하였다.
45분 동안 스팟팅한 이후에, 센서를 0.1 M 에탄올아민, pH 8.5로 불활성화시키고, 시스템 완충용액 (PBS + 0.03 % Tween20 + 0.05 % NaN3)으로 3회 세척하였다. 분석을 개시하기 이전에, 커플링된 센서를 재생 완충용액 (10 mM glycine-HCl, pH 2)으로 2분 동안 배양한 다음, 시스템 완충용액으로 3회 세척하였다.
이어서, 코팅된 SPR chip을 AT10_002, AT10_005 (시스템 완충용액 중 2 ㎍/ml)와 함께, 또는 BiFlu (시스템 완충용액 중 4 ㎍/ml)와 함께 주사하고, 30분 동안 배양하였다. 이어서, 비-포획된 IgG를 시스템 완충용액과 함께 5분 동안 배양함으로써 제거하였다. 다음으로, 센서에 시스템 완충용액 중의 인플루엔자 H3-헤마글루티닌 단백질 (H3N2, Wyoming, 03/2003, Sino Biological inc., Beijing, P.R. China, 0.25 to 2.0 ㎍/ml)을 주사하고, 30분 동안 측정하여 결합을 측정하였다. 복합체의 분리를 측정하기 위해서, 센서를 시스템 완충용액으로 세척하고, 40분 동안 배양하였다. H3의 주사에 이어서, 전술한 바와 유사한 방식으로, 인플루엔자 H1-헤마글루티닌 (H1N1, New Caledonia, 20/1999, Sin Biological inc., Beijing, P.R. China, 1.0 ug/ml) 및 항-인간 경쇄 항체 (항-카파 또는 항-람다)를 주사하였다.
단일 항체들 및 BiFlu가 항-인간 IgG (도 11A) 및 항-람다 경쇄 (도 11B) 상에 포획되면, BiFlu는 단일 항체로서 H1 및 H3 양자 모두에 동일한 친화도로 결합한다. 더 나아가, 실험 결과는 BiFlu가 2개의 다른 경쇄들을 갖는 헤테로다이머인 것을 보여준다. 2개의 모노머 항체들 (AT10_002 및 AT10_005)은 오직 하나의 분석물에만 결합하고, 한가지 종류의 경쇄만을 갖는다.
종합하면, SPR 분석은 BiFlu가 AT10_002 및 AT10_005의 헤테로다이머로서, 단일 항체와 같이 H3 및 H1에 동일한 친화도로 결합한다는 점을 보여준다.
바이러스 감염된 세포들에 대한 항체 결합
BiFlu 항체들의 결합 능력이 유지되는지, 또한 BiFlu가 AT10_002 및 AT10_005의 조합 결합 특성들을 갖는지를 테스트하기 위해서, 인플루엔자 H1N1 (A/Hawaii/31/2007) 및 H3N2 (A/Netherlands/177/2008) 감염된 세포들에 대해서 FACS 분석을 수행하였다. 인플루엔자 A 감염된 MDCK-SIAT 세포들은 전술한 바와 같이 제조하였다. 감염된 세포들을 해동하고, 다른 농도의 AT10_002, AT10_005 또는 BiFlu 항체들과 함께 30 분 동안 4 ℃에서 배양하고, 150 ㎕ IMDM/2% FCS로 2x 세척하였다. 항체 결합은 항-인간 IgG-APC로 검출하였으며, Guava easyCyte 8HT (Millepore) 상에서 분석하였다. 결과들을 도 12에 도시하였다. BiFlu 및 AT10_005는 H1N1 감염된 세포들에 대해서 농도 의존적인 결합 특성을 나타내었지만, AT10_002는 이러한 세포들에 결합하지 않았다. H3N2 감염된 세포들은 BiFlu 및 AT10_002과 결합하지만, AT10_005 항체들과는 결합하지 않았다. 두 가지 바이러스 서브타입 모두에 대해서, BiFlu 항체들은, 관련된 단일 대조구 항체와 같이, 유사한 결합 친화도 (APC 신호의 MFI에 의해서 도시)를 나타내었다. 종합하면, 이러한 결과들은 BiFlu 항체가 AT10_002 및 AT10_005의 조합 특성들을 갖는다는 점을 보여준다.
바이러스 중화
BiFlu가 인플루엔자 A 바이러스 감염을 차단할 수 있는지 여부를 결정하기 위해서, 인 비트로 중화 분석을 수행하였다. 분석은 전술한 바와 같이 MDCK-SIAT 세포들에 대해서 수행되었다. mAbs의 중화능력을 정량화하기 위해서, 감염된 세포들 (DAPI 및 NP-FITC에 대해서 양성)을 계수하였다. 도 13에는 AT10_002, AT10_005 및 BiFlu의 H1N1 (A/Hawaii/31/2007) 및 H3N2 (A/Ned/177/2008)에 대한 중화 곡선을 도시하였다. BiFlu에 대해서 도시된 농도는 동일한 가능한 결합 기회를 표현할 수 있도록 조정하였다 (예를 들어, 도시된 농도는 실제 BiFlu 농도의 절반인데, 이는 BiFlu가 단일 항체들에 비해서 2배의 분자량을 갖기 때문이다). BiFlu는 H1N1 및 H3N2를 중화하고, 또한 그 관련된 단일 성분들도 중화한다.
인 비보에서
BiFlu
항체들의 예방 효율 (도 14)
AT10_002, AT10_005, BiFlu (AT10_002 - AT10_005 다이머) 항체들, AT10_002/AT10_005 혼합물 및 음대조구 항체 (리툭시맙)에 대해서 인플루엔자 모델에서의 예방적 효율을 테스트하였다. 수컷 C57Bl/6J 마우스 (그룹 당 6 마리)를 10 LD50 인플루엔자 A/HKx31 또는 10 LD50 H1N1 인플루엔자 A/PR/8/34로 비강내 감염시켰으며, 체중 변화를 10일 동안 모니터링하였다. 25%의 체중 감소를 인도적 종점으로 사용하였으며; 체중이 25%보다 더 많게 감소하는 마우스들은 연구로부터 제외하였다.
마우스들을 바이러스 감염 하루 이전에, 1 mg/kg AT10_002, 1 mg/kg AT10_005, AT10_002 및 AT10_005 각각 1 mg/kg의 혼합물, 2 mg/kg BiFlu 또는 1 mg/kg 리툭시맙 항체로 정맥내 주사하였다. 모든 대조구 마우스 (리툭시맙)는 8일 이내에 25%의 체중 감소를 나타내었으며, 연구로부터 제외되었다. H1N1 감염 모델에서, AT10_005 항체는 보호 효과를 나타내었는 바, 예를 들어 어떠한 마우스들도 연구로부터 제외되지 않았다. 더 나아가, BiFlu 제제 및 AT10_002/AT10_005 항체 혼합물이 투여된 경우도 보호되었다 (도 14). AT10_002/AT10_005 항체 혼합물이 투여된 군과 BiFlu가 투여된 군 사이에서는 체중 감소 면에서 어떠한 통계적 차이점도 관찰되지 않았다 (P>0.0 5, 2 way ANOVA). 유사한 결과들이 H3N2 인 비트로 모델에서도 얻어졌다. AT10_002 항체, 항체 혼합물 (AT10_002/AT10_005) 및 BiFlu는 H3N2 모델에서 보호 효과를 나타내었다. 종합하면, 이러한 데이터들은 BiFlu 항체 복합체가 인 비보에서 그 작용을 유지하며, 그 단일 성분들의 혼합물로서 유사한 보호 활성을 갖는다는 점을 의미한다.
항체
헤마글루티닌
상호작용에 관여하는 아미노산들을 결정하기 위한 단백질 모델링 (표 8, 9 및 10)
ClustalΩ에 의해서 다중 서열 정렬을 수행하였으며, EMBOSS의 일부인 showalign에 의해서 더욱 가공하였다. 모든 구조적 연구는 Pymol로 수행하였다. 최소화 (minimisation)는 포스 필드 (force field) CHARMM으로 소프트웨어 NAMD를 사용하여 수행하였다.
항체의 3D 모델을 구축하기 위한 첫 번째 단계는 최선의 3D 템플릿을 선택하는 것이다. 이는 단백질 데이터베이스 (PDB)에 존재하는 항체들의 모든 서열들의 데이터뱅크에 대해서 문의 서열의 글로벌 정렬 (Needleman and Wunsch)을 사용함으로써 수행하였다. 이어서, 서열 중에서 가장 높은 백분율의 상동성을 갖는 구조 중 하나의 서열을 선택하였다.
다음 단계는 치환이 발생된 영역을 발견하고, 최종 모델이 분석하고자 하는 항체를 닮게 되는 방식으로 서열 및 구조를 변형하는 것이다. 2가지 기법이 적용된다: 1) 아미노산의 치환, 이러한 방법은 주사슬을 제자리에 위치시키고, 곁사슬만을 대체하는 방법이다. 2) 루프의 그래프팅 (grafting), 이러한 방법은 주사슬을 변형하는 방법이며, 루프 중에 삽입 또는 결실이 존재하거나, 서열이 너무 멀거나, 또는 치환이 주사슬의 형태에 영향을 주는 경우, 예를 들어 글리신 또는 프롤린의 치환의 경우에 필요한 방법이다.
항체 AT10_005 및 AT10_004를 보유한 복합체 항체-헤마글루티닌을 제조하기 위해서, 템플릿으로서 실험적으로 결정된 복합체의 구조를 사용하였다. 항체의 모델을 결정학적으로 결정된 구조의 항체 상에 중첩시키고, 헤마글루티닌은 온전하게 유지하였다. AT10_002의 경우, 도킹 과정 (docking procedure)은: (i) 실제 결합이 테스트되는 영역을 제한하기 위해서 헤마글루티닌의 줄기를 분석, (ii) 지점 (i)의 나머지 영역 중 항체의 수동적 위치 선정, (iii) 구조에 대해서 짧은 접촉, 복합체 내에서 수소결합이 사라진 수소결합 가능기, 접촉 영역의 크기를 점검함으로써 복합체의 품질 평가.
AT10
_005:
AT10_005와 접촉하는 인플루엔자 A 바이러스 그룹 1 헤마글루티닌 (H1/H5)의 아미노산은: A38, A40, A41, A42, A291, A292, A293, A318, B18, B19, B20, B21, B38, B41, B42, B45, B46, B48, B49, B52, B53, B56이다.
AT10
_004:
AT10_004와 접촉하는 인플루엔자 A 바이러스 그룹 2 헤마글루티닌 (H3/H7)의 아미노산은: A21, A324, A325, A327, B12, B14, B15, B16, B17, B18, B19, B25, B26, B30, B31, B32, B33, B34, B35, B36, B38, B146, B150, B153, B154이다.
AT10
_002:
AT10_002와 접촉하는 인플루엔자 A 바이러스 그룹 2 헤마글루티닌 (H3/H7)의 아미노산은: A38, A48, A275, A276, A277, A278, A289, A291, A318, B19, B20, B21, B36, B38, B39, B41, B42, B45, B46, B48, B49, B50, B52, B53, B56, B57, B58, B150이다.
HA 분자에 대한 아미노산 넘버링은 하기 문헌에 따라서 수행하였다: Wilson et al. 1981 Nature 289, 366-373 and Nobusawa et al. 1991 Virology 182, 475-485.
항체-
헤마글루티닌
상호작용
CR6261 또는 F10 항체와 헤마글루티닌과의 복합체의 결정 구조에 의해서 알 수 있는 바와 같이, AT10_005는 보존된 소수성 포켓과 상호작용한다. 상기 상호작용은 이러한 포켓에 결합하는 모든 항체들의 경우처럼 주로 소수성이다.
AT10_004는, CR8020이 그 결정 복합체에서 헤마글루티닌과 상호작용하는 것과 같이, 동일한 베타 가닥과 상호작용하지만, AT10_004는, 여러 상호작용 중에서도, 헤마글루티닌의 베타 시트를 연장함으로써 더욱 강력한 방식으로 결합한다. 이러한 상호작용은 주사슬을 통해서 매개되며, 따라서 보존성이 존재하지 않는 경우에도, H1 및 H3 사이에서 교차-반응성을 가능케 한다 (이는 아미노산들 사이에서 주사슬이 보존되기 때문).
AT10_002는 새로운 방식에 의해서 보존된 소수성 패치와 상호작용하는데, 이는 VH의 CDR3를 제외하고는, 모든 상호작용이 VL 도메인으로부터 유래되기 때문이다.
[참조문헌]
Chen, Y., et al., (1999) J. Mol Biol 293:865-881
de Jong JC, van Nieuwstadt AP, Kimman TG, Loeffen WL, Bestebroer TM, Bijlsma K, Verweij C, Osterhaus AD, Class EC: Antigenic drift in swine influenza H3 haemagglutinins with implications for vaccination policy. Vaccine 1999, 17:1321-1328.
Kabat,E.A., Wu,T.T., Perry,H., Gottesman,K. and Foeller,C. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition. NIH Publication No. 91-3242
Kwakkenbos et al. (Generation of stable monoclonal antibody-producing B cell receptor- positive human memory B cells by genetic programming. Nature Medicine (2010) vol. 16 (1) pp. 123-8
Lokate et al .,2007, J. Am. Chem. Soc. 129:14013-140318
Londt BZ, Nunez A, Banks J, Nili H, Johnson LK, Alexander DJ: Pathogenesis of highly pathogenic avian influenza A/turkey/Turkey/1/2005 H5N1 in Pekin ducks (Anas platyrhynchos) infected experimentally. Avian Pathol 2008, 37:619-627.
van der Goot JA, Koch G, de Jong MC, van Boven M: Quantification of the effect of vaccination on transmission of avian influenza (H7N7) in chickens. Proc Natl Acad Sci U S A 2005, 102:18141-18146.
Munster VJ, de Wit E, van den Brand JM, Herfst S, Schrauwen EJ, Bestebroer TM, van de Vijver D, Boucher CA, Koopmans M, Rimmelzwaan GF: Pathogenesis and transmission of swine-origin 2009 A(H1N1) influenza virus in ferrets. Science 2009, 325:481-483.
Needleman SB, Wunsch CD: A general method applicable to the search for similarities in the amino acid sequence of two proteins. J Mol Biol. 1970 Mar;48(3):443-53.
Nobusawa E, Aoyama T, Kato H, Suzuki Y, Tateno Y, Nakajima K: Comparison of complete amino acid sequences and receptor-binding properties among 13 serotypes of hemagglutinins of influenza A viruses. Virology. 1991 Jun;182(2):475-85.
Subbarao K. and Joseph T. Nature Reviews Immunology 2007: 7, 267-278
Sui J, Hwang WC, Perez S, Wei G, Aird D, Chen LM, Santelli E, Stec B, Cadwell G, Ali M, Wan H, Murakami A, Yammanuru A, Han T, Cox NJ, Bankston LA, Donis RO, Liddington RC, Marasco WA: Structural and functional bases for broad-spectrum neutralization of avian and human influenza A viruses. Nat Struct Mol Biol. 2009 Mar;16(3):265-73. Epub 2009 Feb 22.
Throsby M, van den Brink E, Jongeneelen M, Poon LL, Alard P, Cornelissen L, Bakker A, Cox F, van Deventer E, Guan Y, Cinatl J, ter Meulen J, Lasters I, Carsetti R, Peiris M, de Kruif J, Goudsmit J: Heterosubtypic neutralizing monoclonal antibodies cross-protective against H5N1 and H1N1 recovered from human IgM+ memory B cells. PLoS One. 2008;3(12):e3942. Epub 2008 Dec 16.
Wilson IA, Skehel JJ, Wiley DC: Structure of the haemagglutinin membrane glycoprotein of influenza virus at 3 A resolution. Nature. 1981 Jan 29;289(5796):366-73.
Yoshida R, Igarashi M, Ozaki H, Kishida N, Tomabechi D, Kida H, Ito K, Takada A: Cross-protective potential of a novel monoclonal antibody directed against antigenic site B of the hemagglutinin of influenza A viruses. PLoS Pathog. 2009 Mar;5(3):e1000350. Epub 2009 Mar 20.
WO 2007/067046
WO 2009/115972
WO 2010/010466
WO 2010/130636
WO 2010/087994
WO 2007/067046
[표 1-1]
발명에 따른 바람직한 인플루엔자 A 바이러스 특이적 항체
[표1-2]
[표1-3]
[표1-4]
[표1-5]
[표 2]
이질아형(heterosubtype) 교차-결합 mAb를 분비하는 B 세포에 의한 재조합 인간 HA 인식
[표 3]
이질아형 교차-결합 mAb에 의한 인간, 돼지 및 오리의 인플루엔자 HA 단백질의 인식
[표 4]
바이러스 감염된 MDCK 세포에 결합하는 항체
[표 5]
재조합 항체에 의한 바이러스 감염된 MDCK-SIAT 세포의 인 비트로 인플루엔자 A 바이러스 중화
[표 6]
재조합 항체에 의한 재조합 HA 및 HA1 서브유닛 인식
[표 7]
재조합 항체에 의한 바이러스 감염된 MDCK 세포의 인 비트로 인플루엔자 A 중화
[표 8]
표적 서열(AT10_002)과 템플릿(2XZA 및 3TNN) 간에 치환이 일어나는 단편을 대체하는 서열의 선택(넘버링은 Kabat의 규칙을 따름)
[표 9]
표적서열(AT10_004)와 템플릿(3SDY) 간에 치환이 일어나는 단편을 대체하는 서열의 선택(넘버링은 Kabat의 규칙을 따름)
[표 10]
표적서열(AT10_005)와 템플릿(3QOT) 간에 치환이 일어나는 단편을 대체하는 서열의 선택(넘버링은 Kabat의 규칙을 따름)
Claims (38)
- 인 비트로 H3N2 인플루엔자 A 바이러스 중화 활성을 갖고, 그 IC50 값이 1 ㎍/㎖ 미만, 바람직하게는 0.7 ㎍/㎖ 미만, 더욱 바람직하게는 0.3 ㎍/㎖ 이하, 더욱 바람직하게는 0.2 ㎍/㎖ 미만을 가지며, 적어도 하나의 다른 인플루엔자 A 바이러스 서브타입에 특이적으로 결합할 수 있는, 분리된 합성 또는 재조합 항체 또는 이것의 기능적 부분 또는 면역글로불린 체인 또는 이것의 기능적 등가물.
- 제1항에 있어서, 상기 적어도 하나의 다른 인플루엔자 A 바이러스 서브타입은 그룹 2 인플루엔자 A 바이러스 서브타입인 항체 또는 기능적 부분 또는 면역글로불린 체인 또는 기능적 등가물.
- 제1항에 있어서, 상기 적어도 하나의 다른 인플루엔자 A 바이러스 서브타입은 그룹 1 인플루엔자 A 바이러스 서브타입인 항체 또는 기능적 부분 또는 면역글로불린 체인 또는 기능적 등가물.
- 하기 서열을 포함하는, 분리된 합성 또는 재조합 항체 또는 이것의 기능적 부분 또는 면역글로불린 체인 또는 이것의 기능적 등가물:
- 서열번호: 1-5로 구성된 군에서 선택되는 서열에 적어도 70% 동일한 서열을 포함하는 중쇄 CDR1 서열, 및/또는
- 서열번호: 6-10로 구성된 군에서 선택되는 서열에 적어도 70% 동일한 서열을 포함하는 중쇄 CDR2, 및/또는
- 서열번호: 11-15로 구성된 군에서 선택되는 서열에 적어도 70% 동일한 서열을 포함하는 중쇄 CDR3, 및/또는
- 서열번호: 16-20로 구성된 군에서 선택되는 서열에 적어도 70% 동일한 서열을 포함하는 경쇄 CDR1, 및/또는
- 서열번호: 21-25로 구성된 군에서 선택되는 서열에 적어도 70% 동일한 서열을 포함하는 경쇄 CDR2, 및/또는
- 서열번호: 26-30로 구성된 군에서 선택되는 서열에 적어도 70% 동일한 서열을 포함하는 경쇄 CDR3.
- 제4항에 있어서, 서열번호: 31-35로 구성된 군에서 선택되는 서열에 적어도 70% 동일한 서열을 포함하는 중쇄 서열을 갖고/갖거나, 서열번호: 36-40로 구성된 군에서 선택되는 서열에 적어도 70% 동일한 경쇄 서열을 갖는, 항체 또는 이것의 기능적 부분 또는 면역글로불린 체인 또는 이것의 기능적 등가물.
- 청구항 제4항 또는 제5항에 따른 항체 또는 이것의 기능적 부분 또는 면역글로불린 체인 또는 이것의 기능적 등가물의 적어도 하나의 CDR을 암호화하고, 적어도 15개 뉴클레오티드의 길이를 갖는, 분리된 합성 또는 재조합 핵산 분자 또는 이것의 기능적 등가물.
- 제6항에 있어서, 다음 서열로 구성된 군에서 선택되는 서열에 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 핵산 분자 또는 기능적 등가물:
-. 서열번호: 41-45, 및
-. 서열번호: 46-50, 및
-. 서열번호: 51-55, 및
-. 서열번호: 56-60, 및
-. 서열번호: 61-65, 및
-. 서열번호: 66-70.
- 제6항 또는 제7항에 있어서, 서열번호: 71-75로 구성된 군에서 선택되는 서열에 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하고/포함하거나, 서열번호: 76-80으로 구성된 군에서 선택되는 서열에 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는, 핵산 분자 또는 기능적 등가물.
- 제6항 내지 제8항 중 어느 한 항에 따른 핵산 분자 또는 기능적 등가물을 포함하는 벡터.
- 제6항 내지 제8항 중 어느 한 항에 따른 핵산 분자 또는 기능적 등가물 및/또는 제9항에 따른 벡터를 포함하는 분리된 또는 재조합 세포.
- 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 기능적 부분 또는 면역글로불린 체인 또는 기능적 등가물 또는 핵산 분자 또는 기능적 등가물 또는 벡터 및 약학적으로 허용가능한 담체, 희석제 및/또는 부형제를 포함하는 약학 조성물.
- 의약 및/또는 예방적 제제의 용도로서 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 기능적 부분 또는 면역글로불린 체인 또는 기능적 등가물 또는 핵산 분자 또는 이것의 기능적 등가물 또는 벡터.
- 인플루엔자 A 바이러스 감염을 적어도 부분적으로 치료 및/또는 예방하기 위한 의약 및/또는 예방적 제제의 용도로서 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 기능적 부분 또는 면역글로불린 체인 또는 기능적 등가물 또는 핵산 분자 또는 기능적 등가물 또는 벡터.
- 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 기능적 부분 또는 면역글로불린 체인 또는 기능적 등가물을 생산하는 방법으로서,
제6항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 핵산 분자 또는 기능적 등가물 또는 벡터를 갖는 세포를 제공하는 단계, 및
상기 세포가 상기 핵산 분자 또는 기능적 등가물 또는 벡터를 번역하도록 하여 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 따른 상기 항체 또는 기능적 부분 또는 면역글로불린 체인 또는 기능적 등가물을 생산하는 단계를 포함하고,
바람직하게는 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 따른 상기 항체 또는 기능적 부분 또는 면역글로불린 체인 또는 기능적 등가물을 수확, 정제 및/또는 분리하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
- 인플루엔자 A 바이러스 감염의 진단 용도로서 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 기능적 부분 또는 면역글로불린 체인 또는 기능적 등가물.
- 다음 단계를 포함하는, 인플루엔자 A 바이러스가 샘플에 존재하는지 여부를 결정하는 방법:
- 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 기능적 부분 또는 면역글로불린 체인 또는 기능적 등가물과 상기 샘플을 접촉시키는 단계,
- 존재한다면, 상기 인플루엔자 A 바이러스가 상기 항체 또는 기능적 부분 또는 면역글로불린 체인 또는 기능적 등가물과 결합하도록 하는 단계, 및
- 인플루엔자 A 바이러스가 상기 항체 또는 기능적 부분 또는 면역글로불린 체인 또는 기능적 등가물과 결합되었는지 여부를 결정하여 인플루엔자 A 바이러스가 샘플에 존재하는지 여부를 결정하는 단계.
- 인 비트로 H7N1 인플루엔자 A 바이러스 중화 활성을 갖고, 그 IC50 값이 5.0 ㎍/㎖ 미만, 바람직하게는 4.0 ㎍/㎖ 미만, 더욱 바람직하게는 1.0 ㎍/㎖ 미만, 더욱 바람직하게는 약 0.6 ㎍/㎖ 이하를 갖는, 분리된 합성 또는 재조합 항체 또는 이것의 기능적 부분 또는 면역글로불린 체인 또는 이것의 기능적 등가물.
- 인 비트로 H7N7 인플루엔자 A 바이러스 중화 활성을 갖고, 그 IC50 값은 0.5 ㎍/㎖ 미만, 더욱 바람직하게는 약 0.4 ㎍/㎖ 이하, 더욱 바람직하게는 약 0.2 ㎍/㎖ 이하, 가장 바람직하게는 약 0.1 ㎍/㎖ 이하를 갖는, 분리된 합성 또는 재조합 항체 또는 이것의 기능적 부분 또는 면역글로불린 체인 또는 이것의 기능적 등가물.
- 인 비트로 H1N1 인플루엔자 A 바이러스 중화 활성을 갖고, 그 IC50 값은 5.0 ㎍/㎖ 미만, 바람직하게는 4.0 ㎍/㎖ 미만, 더욱 바람직하게는 0.3 ㎍/㎖ 미만, 더욱 바람직하게는 약 2.7 ㎍/㎖ 이하를 갖는, 분리된 합성 또는 재조합 항체 또는 이것의 기능적 부분 또는 면역글로불린 체인 또는 이것의 기능적 등가물.
- 인 비트로 H5N1 인플루엔자 A 바이러스 중화 활성을 갖고, 그 IC50 값은 5.0 ㎍/㎖ 미만, 바람직하게는 4.0 ㎍/㎖ 미만, 더욱 바람직하게는 3.0 ㎍/㎖ 미만, 더욱 바람직하게는 2.0 ㎍/㎖ 미만, 더욱 바람직하게는 약 1.3 ㎍/㎖ 이하를 갖는, 분리된 합성 또는 재조합 항체 또는 이것의 기능적 부분 또는 면역글로불린 체인 또는 이것의 기능적 등가물.
- 제17항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 다른 인플루엔자 A 바이러스 서브타입과 특이적으로 결합할 수 있는 항체 또는 기능적 부분 또는 면역글로불린 체인 또는 기능적 등가물.
- i) AT10_001 및 AT10_002 및 AT10_003 및 AT10_004 및 AT10_005로 구성된 군에서 선택되는 항체의 적어도 2개의 상이한 중쇄 CDR 서열 및 적어도 2개의 상이한 경쇄 CDR 서열; 및
ii) AT10_001 및 AT10_002 및 AT10_003 및 AT10_004 및 AT10_005로 구성된 군에서 선택되는 항체의 적어도 2개의 상이한 중쇄 CDR 서열 및 적어도 2개의 상이한 경쇄 CDR 서열을 포함하고,
여기서, i)에서 선택된 상기 항체는 ii)에서 선택된 상기 항체와는 상이한 것을 특징으로 하는,
합성 또는 재조합 다중결합(multimeric) 항체, 다중결합 면역글로불린 또는 이것의 기능적 등가물.
- 제22항에 있어서,
i) AT10_001 및 AT10_002 및 AT10_003 및 AT10_004 및 AT10_005로 구성된 군에서 선택되는 항체의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 및 경쇄 CDR1, CDR2, CDR3 서열; 및
ii) AT10_001 및 AT10_002 및 AT10_003 및 AT10_004 및 AT10_005로 구성된 군에서 선택되는 항체의 중쇄 CDR1, CDR2, CDR3 및 경쇄 CDR1, CDR2, CDR3 서열을 포함하고,
여기서, i)에서 선택된 상기 항체는 ii)에서 선택된 상기 항체와는 상이한 것을 특징으로 하는,
다중결합 항체, 다중결합 면역글로불린 또는 기능적 등가물.
- 제22항 또는 제23항에 있어서,
i) AT10_001 및 AT10_002 및 AT10_003 및 AT10_004 및 AT10_005로 구성된 군에서 선택되는 항체의 중쇄 서열 및 경쇄 서열, 또는 이들에 적어도 70% 동일한 서열; 및
ii) AT10_001 및 AT10_002 및 AT10_003 및 AT10_004 및 AT10_005로 구성된 군에서 선택되는 항체의 중쇄 서열 및 경쇄 서열, 또는 이들에 적어도 70% 동일한 서열을 포함하고,
여기서, i)에서 선택된 상기 항체는 ii)에서 선택된 상기 항체와는 상이한 것을 특징으로 하는,
다중결합 항체, 다중결합 면역글로불린 또는 기능적 등가물.
- 제22항에 있어서,
i) 항체 AT10_002의 적어도 2개의 상이한 중쇄 CDR 서열 및 적어도 2개의 상이한 경쇄 CDR 서열; 및
ii) 항체 AT10_005의 적어도 2개의 상이한 중쇄 CDR 서열 및 적어도 2개의 상이한 경쇄 CDR 서열을 포함하는
다중결합 항체, 다중결합 면역글로불린 또는 이것의 기능적 등가물.
- 제22항 또는 제23항에 있어서,
i) 항체 AT10_002의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 및 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열; 및
ii) 항체 AT10_005의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 및 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는
다중결합 항체, 다중결합 면역글로불린 또는 기능적 등가물.
- 제22항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서,
i) 항체 AT10_002의 중쇄 서열 및 경쇄 서열, 또는 이들에 적어도 70% 동일한 서열; 및
ii) 항체 AT10_005의 중쇄 서열 및 경쇄 서열, 또는 이들에 적어도 70% 동일한 서열을 포함하는,
다중결합 항체, 다중결합 면역글로불린 또는 기능적 등가물.
- 제22항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 이중 합체(dimertic antibody)인 다중결합 항체, 다중결합 면역글로불린 또는 기능적 등가물.
- 제22항 내지 제28항 중 어느 한 항에 따른 다중결합 항체, 다중결합 면역글로불린 또는 기능적 등가물을 포함하는 분리된 또는 재조합 세포 또는 약학적 조성물.
- 의약 및/또는 예방적 제제의 용도로서 제22항 내지 제28항 중 어느 한 항에 따른 합성 또는 재조합 다중결합 항체, 다중결합 면역글로불린 또는 기능적 등가물.
- 인플루엔자 A 감염의 증상을 적어도 부분적으로 치료 및/또는 예방 및/또는 완화하기 위한 의약 및/또는 예방적 제제의 용도로서 제22항 내지 제28항 중 어느 한 항에 따른 합성 또는 재조합 다중결합 항체, 다중결합 면역글로불린 또는 기능적 등가물.
- 인플루엔자 A 감염의 진단 용도로서 제22항 내지 제28항 중 어느 한 항에 따른 합성 또는 재조합 다중결합 항체, 다중결합 면역글로불린 또는 기능적 등가물.
- 제22항 내지 제28항 중 어느 한 항에 따른 다중결합 항체, 다중결합 면역글로불린 또는 기능적 등가물 및/또는 제29항에 따른 약학적 조성물 또는 세포의 치료적 유효량을 필요한 개체에 투여하는 단계를 포함하는 인플루엔자 A 바이러스 감염을 적어도 부분적으로 치료 및/또는 예방하는 방법.
- 제22항 내지 제28항 중 어느 한 항에 따른 다중결합 항체, 다중결합 면역글로불린 또는 기능적 등가물과 H1N1 인플루엔자 A 바이러스 및/또는 H3N2 인플루엔자 A 바이러스를 접촉시킴으로써 상기 바이러스를 중화시키는 단계를 포함하는, H1N1 인플루엔자 A 바이러스 및/또는 H3N2 인플루엔자 A 바이러스를 중화시키는 방법.
- 인플루엔자 A 바이러스가 샘플에 존재하는지 여부를 결정하는 방법으로서,
- 제22항 내지 제28항 중 어느 한 항에 따른 다중결합 항체, 다중결합 면역글로불린 또는 기능적 등가물을 상기 샘플과 접촉시키는 단계,
- 상기 인플루엔자 A 바이러스가 존재한다면 상기 다중결합 항체, 다중결합 면역글로불린 또는 기능적 등가물과 결합하도록 하는 단계, 및
- 인플루엔자 A 바이러스가 상기 다중결합 항체, 다중결합 면역글로불린 또는 기능적 등가물에 결합되었는지 여부를 결정함으로써 상기 샘플에 인플루엔자 A 바이러스가 존재하는지 여부를 결정하는 단계를 포함하는 방법.
- 인플루엔자 A 바이러스 그룹 1 헤마글루티닌(H1/H5)의 A38, A40, A41, A42, A291, A292, A293, A318, B18, B19, B20, B21, B38, B41, B42, B45, B46, B48, B49, B52, B53, 및 B56 위치에서 아미노산과 상호작용할 수 있는, 분리된 합성 또는 재조합 항체 또는 이것의 기능적 부분 또는 면역글로불린 체인 또는 이것의 기능적 등가물.
- 인플루엔자 A 바이러스 그룹 2 헤마글루티닌(H3/H7)의 A21, A324, A325, A327, B12, B14, B15, B16, B17, B18, B19, B25, B26, B30, B31, B32, B33, B34, B35, B36, B38, B146, B150, B153, 및 B154 위치에서 아미노산과 상호작용할 수 있는, 분리된 합성 또는 재조합 항체 또는 기능적 부분 또는 면역글로불린 체인 또는 이것의 기능적 등가물.
- 인플루엔자 A 바이러스 그룹 2 헤마글루티닌(H3/H7)의 A38, A48, A275, A276, A277, A278, A289, A291, A318, B19, B20, B21, B36, B38, B39, B41, B42, B45, B46, B48, B49, B50, B52, B53, B56, B57, B58, B150 위치에서 아미노산과 상호작용할 수 있는, 분리된 합성 또는 재조합 항체 또는 기능적 부분 또는 면역글로불린 체인 또는 이것의 기능적 등가물.
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| US9969794B2 (en) | 2012-05-10 | 2018-05-15 | Visterra, Inc. | HA binding agents |
| DK3052192T3 (da) * | 2013-10-02 | 2020-09-28 | Medimmune Llc | Neutraliserende anti-influenza a-antistoffer og anvendelser deraf |
| JP6800751B2 (ja) | 2013-12-17 | 2020-12-16 | アイム・セラピューティクス・べー・フェー | 骨髄増殖性又はリンパ球増殖性疾患に対抗するための手段及び方法 |
| WO2015115892A1 (en) | 2014-01-31 | 2015-08-06 | Aimm Therapeutics B.V. | Means and methods for producing stable antibodies |
| KR101582490B1 (ko) * | 2014-04-14 | 2016-01-19 | 아이디바이오 주식회사 | 인플루엔자 바이러스의 다중 아형에 대한 교차 면역반응을 형성하는 신규한 재조합 바이러스 백신 |
| TWI702229B (zh) | 2014-12-19 | 2020-08-21 | 美商再生元醫藥公司 | 流行性感冒病毒血球凝集素之人類抗體 |
| US11524989B2 (en) | 2015-06-24 | 2022-12-13 | Kling Biotherapeutics B.V. | AML antigens and uses thereof |
| WO2017083627A1 (en) | 2015-11-13 | 2017-05-18 | Visterra, Inc. | Compositions and methods for treating and preventing influenza |
| CN106928350B (zh) * | 2015-12-30 | 2020-11-03 | 中国科学院天津工业生物技术研究所 | 一种流感病毒抗体、其制备方法及应用 |
| US11781112B2 (en) | 2016-03-06 | 2023-10-10 | Kareem Thomas Robinson | Method of generating antigen-specific immunological memory in a subject that rejects classical vaccines |
| US10738338B2 (en) | 2016-10-18 | 2020-08-11 | The Research Foundation for the State University | Method and composition for biocatalytic protein-oligonucleotide conjugation and protein-oligonucleotide conjugate |
| US20200231630A1 (en) * | 2017-09-28 | 2020-07-23 | The Children's Medical Center Corporation | Molecular grafting of complex, broadly neutralizing antibody epitopes |
| MA51681A (fr) | 2018-01-26 | 2021-05-05 | Regeneron Pharma | Anticorps humains contre l'hémagglutinine de la grippe |
| WO2020198329A1 (en) | 2019-03-25 | 2020-10-01 | Visterra, Inc. | Compositions and methods for treating and preventing influenza |
| CN115066439A (zh) | 2020-01-10 | 2022-09-16 | 科凌生物医疗有限公司 | 上皮钙黏素特异性抗体 |
| CN111298101B (zh) * | 2020-02-21 | 2023-05-30 | 佛山科学技术学院 | 一种抗菌肽pg-1在抑制禽流感病毒中的应用 |
| WO2022055243A1 (ko) * | 2020-09-08 | 2022-03-17 | 주식회사 노블젠 | 인플루엔자 a 바이러스에 대한 항바이러스용 조성물 |
Family Cites Families (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1264885A4 (en) | 2000-02-22 | 2007-02-21 | Med & Biological Lab Co Ltd | ANTIBODY LIBRARY |
| AU2003225976A1 (en) | 2002-03-26 | 2003-10-13 | Centocor, Inc. | Anti-tnf antibodies, compositions, methods and uses |
| CA2633157C (en) | 2005-12-09 | 2018-10-09 | Academisch Medisch Centrum Bij De Universiteit Van Amsterdam | Means and methods for influencing the stability of antibody producing cells |
| EP2450377A1 (en) | 2006-09-07 | 2012-05-09 | Crucell Holland B.V. | Human binding molecules capable of neutralizing influenza virus H5N1 and uses thereof |
| NO347649B1 (no) * | 2006-12-14 | 2024-02-12 | Regeneron Pharma | Humant antistoff eller antistoff fragment som spesifikt binder human deltaliknende ligand 4 (hDII4), nukleinsyremolekyl som koder for slike og vektor og vert-vektorsystemer, samt fremgangsmåte for fremstilling, sammensetning og anvendelse. |
| ITTO20080204A1 (it) | 2008-03-17 | 2009-09-18 | Pomona Biotechnologies Llc | Anticorpi monoclonali atti a reagire con una pluralita di sottotipi del virus influenzale a |
| US9340603B2 (en) | 2008-07-25 | 2016-05-17 | Institute For Research In Biomedicine | Neutralizing anti-influenza A virus antibodies and uses thereof |
| US8871207B2 (en) | 2008-07-25 | 2014-10-28 | Humabs, LLC | Neutralizing anti-influenza A virus antibodies and uses thereof |
| WO2010087994A2 (en) | 2009-01-30 | 2010-08-05 | Whitehead Institute For Biomedical Research | Methods for ligation and uses thereof |
| BRPI1012749B1 (pt) * | 2009-05-11 | 2022-01-11 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | Anticorpo monoclonal humano, seu uso e seu método de produção, imunoconjugado, e composição farmacêutica |
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